WO2013174017A1 - 制备全保护的肝素五糖的方法及其中间体 - Google Patents

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WO2013174017A1
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丁毅力
郭阳辉
白骅
吴迎秋
杨璇
晏青燕
柴健
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浙江海正药业股份有限公司
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    • C07H5/10—Compounds containing saccharide radicals in which the hetero bonds to oxygen have been replaced by the same number of hetero bonds to halogen, nitrogen, sulfur, selenium, or tellurium to sulfur, selenium or tellurium to sulfur

Definitions

  • the present invention relates to the field of chemical synthesis, and in particular to a method of preparing fully protected heparin pentasaccharide and an intermediate thereof.
  • BACKGROUND OF THE INVENTION Heparin was first isolated from animal livers by Jay McLean of Johns Hopkins University in 1916 and identified as an active component of anticoagulation (a: Chem. Ind. 1991, 2, 45 -50; b: Bull. Johns Hopkins Hosp. 1928, 42, 199), which is the most complex of the glycosaminoglycan (GAG) family. Heparin has been used in clinical treatment of antithrombotic and cardiovascular diseases for nearly 60 years. Its anticoagulant activity is the most intensive research and clarification of its many physiological activities, and contributes to low molecular weight heparin.
  • LMWH has been a versatile antithrombotic since the 1990s, replacing traditionally used antithrombotic agents (Blood, 1992, 79, 1-17).
  • the process of blood coagulation is the result of sequential activation of a series of clotting factors in plasma. Eventually, the inactive thrombin is converted into active thrombin, and the soluble fibrinogen is partially hydrolyzed to release insoluble fibrin.
  • Antithrombin III is an inhibitor of serine proteases during hemagglutination, especially thrombin Ila and Xa. Antithrombin III reacts slowly with thrombin, but in the presence of heparin, the reaction rate is increased by several thousand times, which can effectively inhibit the blood coagulation process.
  • Naturally derived heparin mainly extracted from animal viscera, is a complex mixture of different active polysaccharides, so it is difficult to control its effective dose during use, which may lead to dangerous side effects such as bleeding and thrombocytopenia.
  • heparin molecules also bind non-specifically to plasma proteins, leading to more complex complications.
  • LMWH low molecular weight heparin
  • Low molecular weight heparin is obtained by degrading intact heparin by chemical degradation, enzymatic degradation and gamma ray irradiation.
  • the compound of formula II was marketed as an anticoagulant drug in 2001, and the generic name is fondaparinux.
  • the structure of the compound of formula II has the following characteristics: It is formed by five monosaccharide fragments different from each other (or ⁇ glycosidic bonds are sequentially connected.
  • the five monosaccharide fragments constituting the compound formula II are respectively letters from right to left.
  • A, B, C, D and E In the pentasaccharide structure, there are free hydroxyl groups, sulfated hydroxyl groups, sulfated amino groups, wherein the fragments, C and E are glucosamine derivatives, and fragment B is iduroxaldehyde.
  • Acid derivative, fragment D It is a glucuronic acid derivative.
  • the protecting group should facilitate the formation of the correct glycosides in terms of regioselectivity and stereoselectivity.
  • the protecting group should be selected such that it can be sulfated at the desired position while the other hydroxyl groups are not sulfated;
  • the choice of protecting group should be beneficial to improve the reaction efficiency. In particular, the selectivity and yield of the glycosidation reaction.
  • the synthesis of fondaparinux is carried out by a fully protected pentasaccharide represented by formula III, wherein the protecting group is a hydroxy protecting group which needs to be removed in the first step, and may be an acetyl group or a benzoyl group, etc., and the removal of the protecting group the method requires removal process and the protecting group R 2 of the separate regions; protecting group R 2 in the third step is required to remove the hydroxyl protecting group may be benzyl; R 3 is the protecting group must be transformed into an amino group in a third step
  • the precursor may be an azide group or a benzyloxycarbonylamino group (-NHCbz).
  • the strategy can be divided into the following steps: In the first step, the five hydroxy protecting groups (s) which need to be sulfated in the fully protected pentasaccharide are selectively removed to expose them; the second step is to sulphate to modify the bare The third step is to remove the remaining six hydroxyl protecting groups (R 2 ), expose them, and remove the protecting group of the amino group, or convert the precursor of the amino group (R 3 ) into an amino group, revealing three Amino; The fourth step, selective sulfation of three bare amino groups. This process can be shown by the transformation of the following structure:
  • U.S. Patent No. 7,541, 144 to Alchemia, proposes a solution by first using a benzoyl group as a protecting group for the 2-position hydroxyl group of the D-segment, thereby controlling the coupling reaction as a "neighbor-involved" protecting group in the coupling reaction with the C-fragment.
  • the stereoselectivity is in the beta configuration, and then the benzoyl protecting group is removed at the EDC trisaccharide fragment stage and replaced with a benzyl group.
  • this method cannot use an acyl protecting group on the oxime fragment and the C fragment, and only the p-methoxybenzyl group can be used as a protecting group, and then the porphyrin can be removed when all the coupling reactions are completed to form a fully protected pentasaccharide. Oxybenzyl protecting group. Moreover, this method has two obvious disadvantages.
  • the p-methoxybenzyl protecting group on the oxime fragment and the c fragment has an effect on the glycosidation reaction, resulting in low yield, and the later the influence is greater, especially When the EDC trisaccharide moiety and the bismuth disaccharide moiety are glycosylated, the reaction yield is very low, and the purification is very difficult.
  • the addition of the reaction step in the later stage of the synthesis greatly affects the reaction yield and ease of operation of the entire reaction route. Therefore, it is very important to find a synthesis process with high reaction yield and simple separation and purification.
  • One object of the present invention is to provide a novel intermediate for the preparation of fully protected heparin pentasaccharide and a process for the preparation thereof, and a second object is to provide a process for the preparation of fully protected heparin pentasaccharide.
  • the present invention provides a novel intermediate for the preparation of fully protected heparin pentasaccharide: having the structure shown in formula V,
  • the stereochemistry of the configuration of the monosaccharide unit and the linkage between the monosaccharides is D-glucose-ct-l,4-D-glucuronic acid- ⁇ -1,4-D-glucose.
  • the present invention also provides another novel intermediate for the preparation of fully protected heparin pentasaccharide: having the structure shown in Formula VI:
  • the stereochemistry of the configuration of the monosaccharide unit and the linkage between the monosaccharides is D-glucose-ct-l,4-D-glucuronic acid- ⁇ -1,4-D-glucose.
  • the present invention provides a process for the preparation of a compound of formula V for the removal of a compound of formula IV
  • the three p-methoxybenzyl groups are removed.
  • the reagent used for the reaction may be 2,3-dichloro-5,6-dicyano-1, 4-benzoquinone, ammonium cerium nitrate or Strong protonic acid.
  • the strong protic acid is, for example, hydrochloric acid, trifluoroacetic acid or the like.
  • the compound of the formula IV in the above reaction is commercially available, and can also be obtained by the method of U.S. Patent No. 7,541, 144.
  • the invention also provides a process for the preparation of a compound of formula VI, wherein a compound of formula V is reacted with an acetylating reagent under basic conditions to protect three bare hydroxyl groups with an acetyl group to provide a compound of formula VI, which is :
  • the base of the reaction may be an organic base or an inorganic base.
  • the organic base is preferably pyridine or triethylamine
  • the inorganic base is preferably potassium carbonate, sodium carbonate, sodium hydrogencarbonate or the like.
  • the acetylating agent for the reaction is preferably acetic anhydride, acetyl chloride or the like.
  • the present invention provides a process for the preparation of a compound of the formula XVIII, wherein a compound of the formula VI and a compound of the formula X are subjected to glycosidation under conditions of glycosidic bond formation, and coupled to obtain a fully protected pentasaccharide ⁇ compound, which has the following formula:
  • the reagent for forming a glycosidic bond is preferably a reagent such as N-iodosuccinimide-trifluoromethanesulfonic acid, N-iodosuccinimide-silver trifluoromethanesulfonate or trifluoromethanesulfonate.
  • a compound of formula X can be prepared by the following method: methylating a compound of formula IX with a methylating agent to provide a compound of formula X, which is as follows:
  • the methylation reagent for the reaction is preferably diazomethane, trimethylsilyldiazomethane, methyl iodide, methyl bromide, methyl chloride or the like.
  • the compound of formula IX can be prepared by the following method:
  • the compound of formula VIA is oxidized by the action of an oxidizing agent and a catalyst to oxidize a naked primary hydroxyl group of the compound of the formula ⁇ to a carboxyl group to give a formula IX.
  • Compound, the reaction formula is as follows:
  • the oxidizing agent for the reaction is preferably iodobenzene diacetic acid, calcium hypochlorite, sodium hypochlorite or the like, and the catalyst for the reaction is preferably 2,2,6,6-tetramethylpiperidine-nitrogen-oxide.
  • the compound of formula VIA can be prepared by the following method:
  • the compound of formula W is removed by the action of a deacetylating reagent to provide a compound of formula VIII, which has the following formula:
  • the deacetylating agent for the reaction is preferably methanol of hydrogen chloride, ethanol solution of hydrogen chloride, methanol of triethylamine, ethanol solution of triethylamine, sodium methoxide or sodium ethoxide.
  • the compound of formula VD can be prepared by the following method: using a compound of formula XI and a hydrazine compound to undergo glycosidation under conditions of glycosidic bond formation, coupling to obtain a disaccharide Formula YD compound, the reaction formula is as follows:
  • the reagent for forming the glycosidic bond is preferably a reagent such as ruthenium-iodosuccinimide-succinimide-silver trifluoromethanesulfonate or trifluoromethanesulfonate.
  • the compound of formula XI can be prepared by reacting a compound of formula X III with an acetylating reagent under basic conditions to protect the two naked hydroxyl groups with an acetyl group to give a compound of XI.
  • the reaction formula is as follows:
  • the base in which the reaction is carried out may be an organic base or an inorganic base.
  • the organic base is preferably pyridine or triethylamine
  • the inorganic base is preferably potassium carbonate, sodium carbonate, sodium hydrogencarbonate or the like.
  • the acetylating agent for the reaction is preferably acetic anhydride, acetyl chloride or the like.
  • the compound of the formula XIII in the above reaction is commercially available, and can also be obtained by the method of U.S. Patent No. 7,541, 144.
  • the hydrazine compound can be prepared by the following method, which comprises the steps of:
  • the base in which the reaction is carried out is preferably sodium hydroxide, potassium hydroxide, calcium hydroxide or barium hydroxide.
  • the compound of formula X IV in this reaction is commercially available or can be prepared by the method of Carbohydrate Research, 1984, 130, 221.
  • the azide transfer reagent of the reaction is preferably trifluoromethanesulfonyl azide or 1H-imidazole-1-sulfonyl azide hydrochloride;
  • the acid of the reaction is preferably acetic acid, trifluoroacetic acid or p-toluenesulfonic acid;
  • the base of the reaction may be an organic base or an inorganic base.
  • the organic base is preferably pyridine or triethylamine
  • the inorganic base is preferably potassium carbonate, sodium carbonate, sodium hydrogencarbonate or the like.
  • the benzoylating agent for the reaction is preferably benzoic anhydride, benzoyl chloride or the like.
  • the present invention also provides another novel intermediate for the preparation of fully protected heparin pentasaccharide: having the structure of formula IX:
  • the stereochemistry of the configuration of the monosaccharide unit and the linkage between the monosaccharides is L-iduronic acid-al,4-D-glucose.
  • the present invention provides a process for preparing a compound of the formula IX, which is obtained by oxidizing a compound of the formula VIA under the action of an oxidizing agent and a catalyst to oxidize a naked primary hydroxyl group of the compound of the formula VIA to a carboxyl group to obtain a compound of the formula IX.
  • the reaction formula is as follows:
  • the oxidizing agent for the reaction is preferably iodobenzene diacetic acid, calcium hypochlorite, sodium hypochlorite or the like, and the catalyst is preferably 2,2,6,6-tetramethylpiperidine-nitrogen-oxide.
  • the present invention also provides another novel intermediate for the preparation of fully protected heparin pentasaccharide: having the structure shown by formula W:
  • the stereochemistry of the configuration of the monosaccharide unit and the linkage between the monosaccharides is L-iduro-al, 4-D-glucose.
  • the present invention also provides a method for preparing a compound of the formula W, which is a compound of the formula XI and a formula (the compound is subjected to glycosidation under the conditions of glycosidic bond formation, and coupled to obtain a disaccharide W compound, the reaction
  • the formula is as follows:
  • the reagent for forming a glycosidic bond is preferably a reagent such as N-iodosuccinimide-trifluoromethanesulfonic acid, N-iodosuccinimide-silver trifluoromethanesulfonate or trifluoromethanesulfonate.
  • the present invention also provides another novel intermediate for the preparation of fully protected heparin pentasaccharide: having the knot of formula XI:
  • the present invention provides a process for the preparation of a compound of formula XI, which is prepared by reacting a compound of formula XIII with an acetylating reagent under basic conditions to protect two naked hydroxyl groups with an acetyl group to give a compound of formula XI. as follows:
  • the base of the reaction may be an organic base or an inorganic base.
  • the organic base is preferably pyridine or triethylamine
  • the inorganic base is preferably potassium carbonate, sodium carbonate, sodium hydrogencarbonate or the like.
  • the acetylating agent for the reaction is preferably acetic anhydride, acetyl chloride or the like.
  • the invention also provides a preparation method for preparing a hydrazine compound, which comprises the following steps:
  • the base of the reaction is preferably sodium hydroxide, potassium hydroxide, calcium hydroxide or barium hydroxide; the compound of formula X IV in the reaction is commercially available or can be found in Carbohydrate Research, 1984, 130 , 221 method of preparation;
  • the azide transfer reagent of the reaction is preferably trifluoromethanesulfonyl azide or 1H-imidazole-1-sulfonyl azide hydrochloride;
  • the acid of the reaction is preferably acetic acid, trifluoroacetic acid or p-toluenesulfonic acid;
  • the base of the reaction may be an organic base or an inorganic base.
  • the organic base is preferably pyridine, triethylamine, or the like.
  • the inorganic base is preferably potassium carbonate, sodium carbonate, sodium hydrogencarbonate or the like.
  • the benzoylating agent for the reaction is preferably benzoic anhydride, benzoyl chloride or the like.
  • the present invention replaces three p-methoxybenzyl protecting groups on the EDC trisaccharide fragment with an acetyl group, and then carries out a glycosidation coupling reaction between the EDC trisaccharide fragment and the BA disaccharide fragment, eliminating the
  • the reaction yield of the benzylic protecting group is unstable under the condition of glycosidation coupling reaction, and the problem of separation and purification is difficult, so that the reaction of EDC trisaccharide fragment and BA disaccharide fragment to prepare fully protected heparin pentasaccharide The rate is high, and the separation and purification are simple.
  • the present invention provides a novel method for synthesizing a hydrazine compound, i.e., a monosaccharide fragment A, such that in the process of synthesizing the monosaccharide fragment A, the amount of expensive and dangerous azide transfer reagent used is not greatly reduced, and The adverse effect of the benzyloxycarbonylamino group (CbzNH-) on the glycosidation reaction is avoided.
  • the intermediate can be purified by simple recrystallization during the synthesis process, which is simple in operation and low in cost, and is advantageous for mass production of the monosaccharide fragment A fragment.
  • the monosaccharide fragment B used in the present invention that is, the compound of the formula XI, has a simple synthesis process and low cost, and avoids the use of expensive reagents and highly toxic reagents.
  • the present invention also provides a novel method for synthesizing the BA disaccharide fragment represented by the formula W, and the two monosaccharide fragment B fragments and the fragment A have high yield in the glycosidation reaction, and are easily separated and purified. Moreover, in the disaccharide conversion process after completion of the glycosidation reaction, the difference between the acetyl group and the benzoyl group is skillfully utilized to selectively remove the acetyl group; and then selectively oxidize the exposed primary alcohol hydroxy group. Carboxylation, remethylation, complete disaccharide fragmentation
  • Embodiments of the invention disclose methods of preparing fully protected heparin pentasaccharides and intermediates thereof. Those skilled in the art can learn from the contents of this document and appropriately improve the process parameters. It is to be understood that all such alternatives and modifications are obvious to those skilled in the art and are considered to be included in the present invention.
  • the present invention has been described in terms of the preferred embodiments thereof, and it is obvious that those skilled in the art can change or modify and combine the products and methods described herein without departing from the scope of the invention. And applying the techniques of the present invention.
  • Example 1 p-Methylphenyl (2-azido-3,4-di-0-benzyl-2-deoxy-CI-D-glucopyranose) - ( 1 ⁇ 4)-0-(A Base 2, 3-di-O-benzyl- ⁇ -D-glucopyranurate Ml ⁇ 4)-0-2-azido-2-deoxy-1-thio- ⁇ /-D-pyridyl Preparation of glucosinolate (V)
  • Example 2 p-Methylphenyl (2-azido-3,4-di-0-benzyl-2-deoxy-ct-D-pyranose) Sugar) - ( 1 ⁇ 4)-0-(methyl 2, 3-di-O-benzyl- ⁇ -D-glucopyranurate Ml ⁇ 4)-0-2-azido-2- Preparation of deoxy-1-thio- ⁇ /-D-glucopyranoside (V)
  • Example 3 p-Methylphenyl (2-azido-3,4-di-0-benzyl-2-deoxy-ct-D-glucopyranose) - ( 1 ⁇ 4)-0-(A Base 2, 3-di-0-benzyl- ⁇ -D-glucopyranurate Ml ⁇ 4)-0-2-azido-2-deoxy-1-thio- ⁇ / ⁇ -D- Preparation of glucopyranoside (V)
  • the compound of formula IV 0.92 g dissolved in 10 ml of dichloromethane, ice-water bath, was added 1 ml of trifluoroacetic acid, maintaining the temperature until completion of the reaction, a saturated NaHC0 3 solution was added and the reaction mixture. Extracted twice with dichloromethane and the combined organic phase was washed with saturated NaHC0 3 solution, saturated brine, dried, and concentrated.
  • the product was purified by silica gel column chromatography (0.48 g). In order to confirm the structure of the compound, further purification by silica gel column chromatography gave the compound of the formula V in the ⁇ configuration, and the structure was characterized.
  • Example 4 p-Methylphenyl (6-0-acetyl-2-azido-3,4-di-O-benzyl-2-deoxy-ct-DB-pyranose)-(1 ⁇ 4 -0-(methyl 2, 3-di-O-benzyl- ⁇ -DB than glucopyrantonate) -(1 ⁇ 4)-0-3, 6-di-0-acetyl-2- Preparation of azido-2-deoxy-1-thio- ⁇ / ⁇ -D-glucopyranoside (VI)
  • Example 5 p-Methylphenyl (6-0-acetyl-2-azido-3,4-di-O-benzyl-2-deoxy-ct-DB-pyranose)-(1 ⁇ 4 -0-(methyl 2, 3-di-O-benzyl- ⁇ -DB than glucopyrantonate) -(1 ⁇ 4)-0-3, 6-di-0-acetyl-2- Preparation of azido-2-deoxy-1-thio- ⁇ / ⁇ -D-glucopyranoside (VI)
  • Example 13 Methyl 0-(4,6-di-O-acetyl-2-0-benzoyl-3-0-benzyl- ⁇ -L-pyranose Ml ⁇ 4)- Preparation of 2-azido-6-0-benzoyl-3-0-benzyl-2-deoxy-CI-D-glucopyranoside (VD)
  • Example 14 Methyl 0-(4,6-di-0-acetyl-2-0-benzoyl-3-0-benzyl-ct-L-pyranose Ml ⁇ 4)- Preparation of 2-azido-6-0-benzoyl-3-0-benzyl-2-deoxy-CI-D-glucopyranoside (VD)
  • the compound of the formula XI was 27. 0 g, the hydrazine compound of the formula 13.3 g, 25 g of 4A molecular sieve was dissolved in 0.3 liter of dichloromethane, and the reaction liquid was cooled to -5 ° C, and then 14.8 g of N- was added. Iodosuccinimide and 1.13 g of silver trifluoromethanesulfonate were stirred until the end of the reaction. The reaction was quenched by the addition of a saturated aqueous solution of sodium bicarbonate, and the organic layer was washed with saturated sodium chloride, dried and concentrated. Purification by column chromatography gave 29.3 g of solid.
  • Example 16 Methyl CK2-0-benzoyl-3-0-benzyl-ct-LB than iduronic acid)-(l ⁇ 4)-2-nitro-6-0-benzene Preparation of formyl-3-0-benzyl-2-deoxy- a - D -glucopyranoside ( ⁇ )
  • Example 17 Methyl CK2-0-benzoyl-3-0-benzyl-ct-LB than iduronic acid)-(1 ⁇ 4)-2-nitro-6-0-benzene Preparation of formyl-3-0-benzyl-2-deoxy- a - D -glucopyranoside ( ⁇ )
  • Example 18 Methyl 0-(methyl 2-0-benzoyl-3-0-benzyl-CI-L-pyraniduronate Ml ⁇ 4)-2-azido- Preparation of 6-0-benzoyl-3-0-benzyl-2-deoxy-aD-glucopyranoside (X)
  • Example 20 Methyl 0-(6-0-acetyl-2-azido-3,4-di-0-benzyl-2-deoxy-ct-DB than glucopyranin) -(1 ⁇ 4 -0-(methyl 2, 3-di-O-benzyl- ⁇ -D-glucopyranurodate) -(1 ⁇ 4)-0-(3,6-di-O-acetyl- 2-azido-2-deoxy-ct-DB-pyrrolidine)-(1 ⁇ 4)-0-(methyl 2-0-benzoyl-3-0-benzyl-CI-L-pyran Preparation of iduronate Ml ⁇ 4)-2-azido-6-0-benzoyl-3-0-benzyl-2-deoxy- ⁇ -D-glucopyranoside (XV)

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Abstract

一种化学合成药物中间体的工艺，特别是一种抗凝血药物磺达肝癸钠中间体全保护肝素五糖的合成新工艺及新的中间体被公开，该工艺反应效率高，反应操作简单，反应中间体易纯化，适合全保护肝素五糖工业化生产。

Description

制备全保护的肝素五糖的方法及其中间体
技术领域 本发明涉及化学合成领域，具体涉及制备全保护的肝素五糖的方法及其中间 体。 背景技术 肝素是 1916年由约翰霍普金斯大学的 Jay McLean最先从动物肝脏中分离得 至 lj， 并鉴定出其是抗凝血的有效成份 （a: Chem. Ind. 1991, 2, 45-50; b: Bull. Johns Hopkins Hosp. 1928, 42, 199)， 它是糖胺聚糖（glycosaminoglycan, GAG)家族中结 构最复杂的一种。 肝素应用于临床治疗抗血栓及心血管疾病己有近六十年历史， 其抗凝活性是其诸多生理活性中得到最深入研究和阐明的，并促成低分子量肝素
(LMWH)从 90年代开始成为通用的抗血栓剂， 取代传统上临床使用的抗血栓剂 (Blood, 1992,79, 1-17)。血液凝固过程是血浆中一系列的凝结因子依次活化的结 果，最终将无活性的凝血酶转化为有活性的凝血酶， 将可溶性的纤维蛋白原发生 部分蛋白水解，释放出不溶性的纤维蛋白而引起血液凝固。抗凝血酶 III (ATIII) 是血凝过程中丝氨酸蛋白酶，尤其是凝血酶 Ila及 Xa的抑制剂。抗凝血酶 III与凝 血酶的反应速度较慢， 但在肝素存在的条件下， 反应速度增加几千倍， 能够有效 地抑制凝血过程。
天然来源的肝素， 主要是从动物内脏中提取， 是一个由不同活性多糖组成的 复杂混合物， 因此在使用过程中难以控制其有效剂量， 易引发危险的副反应， 如 出血、 血小板减少等。 同时， 肝素分子也会与血浆蛋白发生非特异性结合， 导致 更复杂的并发症。 在 20世纪八十年代末， 低分子肝素 （LMWH) 的出现使得抗 血栓治疗的效果得以提高。低分子肝素是将完整肝素通过化学降解、酶降解和伽 马射线照射降解的方法得到。但是令人不安的是， 由于肝素和低分子肝素的动物 源性， 会有交叉物种病毒感染的潜在危险， 这使得其应用存在很大的风险。避免 交叉物种污染的最有效手段就是通过化学合成方法制备肝素类化合物。
在上世纪八十年代中期， Sinay等人 （Carbohydr. Res. 1984， 132， C5-C9, Carbohydr. Res. 1986， 147. 221 -236) 和 Boeckel等人 (J. Carbohydr. Chem. 1985， 4， 293-321.)先后完成了抗凝五糖（式 I ) 的全合成工作。但在最终脱保护期间， 五 糖的还原端半縮醛能够发生分子间反应生成稳定的二聚体或三聚体，从而导致反 应效率非常低下。
Figure imgf000003_0001
在解决这个问题的过程中发现用甲基封端的五糖（式 II )可避免合成过程中 还原反应时二聚体或三聚体生成的问题（Carbohydr. Res. 1987. 167. 67-75 ),提高 其合成效率。而且经过生物活性测试表明， 还原端用甲基保护的肝素五糖保留了 生物活性。
Figure imgf000003_0002
II
式 II化合物于 2001年作为抗凝血药物上市销售， 通用名为磺达肝癸钠
(Fondaparimix sodmm ), 化学名称为： 甲基 0_ (2-脱氧 -6-0-磺酸基 -2-磺酰胺 基 - α -D-吡喃葡萄糖 ) - (1→4) -0- ( -0-吡喃葡萄糖醛酸) - (1→4) -0- (2-脱氧 -3， 6-0-二磺酸基 -2-磺酰胺基- a -D-吡喃葡萄糖) - (1—4) _0_ (2_0_磺酸基
- a -L-吡喃艾杜糖醛酸) - (1→4) -2-脱氧 -6-0-磺酸基 -2-磺酰胺基- a _D_吡喃葡 萄糖苷十钠盐。
分析化合物式 II的结构有如下特征： 它由互不相同的五个单糖片断通过 (或 β糖苷键依次连接而成。构成化合物式 II中的五个单糖片段从右至左分别用字母 A、 B、 C, D和 E表示。 五糖结构中， 存在游离的羟基、 硫酸化的羟基、 硫酸化的 氨基， 其中片断 、 C和 E是葡萄糖胺衍生物， 片断 B是艾杜糖醛酸衍生物， 片断 D 是葡萄糖醛酸衍生物。 因此， 在其合成设计中必须考虑使用合适的保护基， 以达 到以下要求： （1 )在糖苷键的形成反应过程中， 保护基应该在区域选择性和立体 选择性方面有利于形成正确的糖苷键； （2)保护基的选择应该可以使得在需要的 位置进行硫酸化， 同时其他羟基不被硫酸化； （3) 由于该化合物的合成路线非常 长，保护基的选择应该有利于提高反应效率，特别是糖苷化反应的选择性和产率。
在以前文献报道的合成策略中都采用了类似的保护基、脱保护基和修饰方案 来完成式 II所示磺达肝癸钠的合成工作。如通过式 III所示全保护的五糖合成磺达 肝癸钠， 其中， 保护基 是在第一步需要脱除的羟基保护基， 可以是乙酰基或苯 甲酰基等， 保护基 的脱除方法需要和保护基 R2的脱除方法区分开来； 保护基 R2是需要在第三步脱除的羟基保护基， 可以是苄基； 保护基 R3是需要在第三步转 化为氨基的前体， 可以是叠氮基或苄氧羰基氨基 （-NHCbz)。
Figure imgf000004_0001
III
该策略可以分为以下几个步骤： 第一步， 选择性脱除全保护的五糖中需要硫 酸化修饰的五个羟基保护基（ )， 使其裸露； 第二步， 硫酸化修饰裸露的羟基; 第三步， 脱除剩余六个羟基的保护基（R2)， 使其裸露， 并且脱除氨基的保护基， 或者使氨基的前体（R3)转化为氨基， 裸露出三个氨基； 第四步， 选择性硫酸化 三个裸露的氨基。 该过程可以用以下结构式的转化所示：
Figure imgf000005_0001
Fondaparinux Sodium 当然， 该策略也存在一些缺陷。 磺达肝癸钠分子结构中 D片段与 C片段是通 过 β-糖苷键连接的， 而在合成全保护的五糖时， D片段与 C片段进行连接时的糖 苷化反应存在 (X-糖苷化和 β-糖苷化的立体选择性， 在 D片段的端差异构体碳原子 上分别形成 (X-糖苷键和 β-糖苷键。 人们一直在寻找途径试图解决这个难题。
1984年， Sinay等人报道通过六天的反应以 50%的产率合成 β-糖苷键偶联的 DC二糖片断 （Carbohydrate Research, 1984， 132， C5-C9), 美国专利 US4818816报 道了相同的结果。 1991年， Sanofi报道了类似的结果， 其产率为 51%， D片段上 端差异构体碳上的 α/β比例为 l/12(Bioorg. Med. Chem. Lett., 1991, 1, 2, 99-102)。其 反应产率低， 分离纯化困难， 而且存在一定比例的端差异构体， 也给分离纯化带 来极大的困难。 而后由 Kuzuhara提出 （Carbohydrate Research, 1985， 141， 273 )， 并由 Petitou简化步骤的另一方法直接使用纤维二糖作为 DC片段的起始原料 (Bioorg. Med. Chem. Lett., 1991, 1, 2, 95-98)， 经过一些化学转化合成 DC二糖片 断。 该方法利用纤维二糖中已有的 β _ ( 1→4)糖苷键， 减少了一步糖苷化反应， 但其保护基操作步骤繁琐， 线形路线长， 总产率低， 分离纯化同样困难。
Alchemia公司的美国专利 US7541445提出一个解决办法，先用苯甲酰基作为 D 片段 2-位羟基的保护基， 这样在与 C片段进行偶联反应时能够作为 "邻基参与" 保护基控制偶联反应立体选择性为 β构型， 然后在 EDC三糖片断阶段脱去苯甲酰 基保护基，换成苄基保护。然而这一方法在 Ε片段和 C片段上不能使用酰基保护基， 只能使用对甲氧基苄基作为保护基，然后在全部的偶联反应完成形成全保护的五 糖时， 脱除对甲氧基苄基保护基。 而且这一方法有两个明显的缺点， 其一是 Ε片 段和 c片段上的对甲氧基苄基保护基对糖苷化反应产生影响， 造成产率低下， 而 且越到后期影响越大， 特别是在 EDC三糖片断和 ΒΑ二糖片断进行糖苷化反应连接 时， 反应产率非常低， 纯化十分困难； 其二是全保护的五糖完成后， 需要多一步 反应脱除对甲氧基苄基，而在合成后期增加的反应步骤会极大地影响整条反应路 线的反应产率和操作的方便性。 因此， 寻找一条反应产率高， 分离纯化简单的合 成工艺就显得十分重要。 发明内容 本发明目的之一是提供制备全保护的肝素五糖的新中间体及其制备方法， 目 的之二是提供一种制备全保护肝素五糖的方法。
本发明提供了制备全保护的肝素五糖的新中间体： 具有式 V所示结构，
Figure imgf000006_0001
其中， 单糖单元的构型以及各单糖之间连接键的立体化学为 D-葡萄糖 -ct-l，4-D-葡萄糖醛酸- β -1， 4-D-葡萄糖。
本发明还提供了制备全保护的肝素五糖的另一新中间体： 具有式 VI所示结 构：
Figure imgf000007_0001
其中， 单糖单元的构型以及各单糖之间连接键的立体化学为 D-葡萄糖 -ct-l，4-D-葡萄糖醛酸- β -1， 4-D-葡萄糖。
本发明提供了一种制备式 V化合物的方法，为将式 IV化合物脱除
基苄基， 得到式 V化合物， 该反应式如下：
Figure imgf000007_0002
其中，在具体实施方式中脱除三个对甲氧基苄基该反应所用的试剂可以是 2， 3-二氯 -5， 6-二氰基 -1， 4-苯醌、 硝酸铈铵或者强质子酸。 进一步的， 所述强质 子酸为如盐酸、 三氟乙酸等。
上述反应中的式 IV化合物可以通过商业渠道购买得到， 也可参考美国专利 US7541445的方法制备得到。
本发明还提供了一种制备式 VI化合物的方法，为将式 V化合物在碱性条件下 与乙酰化试剂反应， 将三个裸露的羟基用乙酰基保护， 得到式 VI化合物， 该反应 式如下：
Figure imgf000008_0001
该反应的碱可以是有机碱或无机碱。其中有机碱优选吡啶、三乙胺等， 所述 无机碱优选碳酸钾、 碳酸钠、 碳酸氢钠等。 该反应的乙酰化试剂优选乙酸酐、 乙 酰氯等。
本发明提供了一种制备式 XVIII化合物的方法，由式 VI化合物和式 X化合物在 糖苷键形成的条件下， 进行糖苷化反应， 偶联得到全保护五糖式 χνιπ化合物， 该 反应式如下：
Figure imgf000008_0002
其中形成糖苷键的反应试剂优选 N-碘代琥珀酰亚胺-三氟甲烷磺酸、 N-碘代 琥珀酰亚胺 -三氟甲烷磺酸银、 三氟甲烷磺酸酯等试剂。
式 X 1 化合物可以参照文献 （Carbohydrate Research, 1987, 167, 67) 的方法 进一步合成磺达肝癸钠。
在进一步的实施方案中， 式 X化合物可以通过以下方法进行制备： 将式 IX化 合物与甲基化试剂进行甲酯化反应， 得到式 X化合物， 该反应式如下：
Figure imgf000009_0001
其中该反应的甲基化试剂优选重氮甲烷、三甲基硅重氮甲烷、碘甲烷、 溴甲 烷、 氯甲烷等。
在更进一步的实施方案中， 式 IX化合物可以通过以下方法进行制备： 式 VIA化 合物在氧化剂和催化剂的作用下经氧化反应， 将式 νιπ化合物中裸露的一级醇羟 基氧化成羧基， 得到式 IX化合物， 该反应式如下：
Figure imgf000009_0002
其中该反应的氧化剂优选碘苯二乙酸、 次氯酸钙、 次氯酸钠等， 该反应的 催化剂优选 2，2，6，6-四甲基哌啶-氮-氧化物。
在更进一步的实施方案中， 式 VIA化合物可以通过以下方法进行制备： 将式 W 化合物在脱乙酰基试剂的作用下脱除乙酰基保护基，得到式 VIII化合物， 该反应式 如下：
Figure imgf000009_0003
其中该反应的脱乙酰基试剂优选氯化氢的甲醇、氯化氢的乙醇溶液、三乙胺 的甲醇、 三乙胺的乙醇溶液、 甲醇钠或乙醇钠。
在更进一步的实施方案中， 式 VD化合物可以通过以下方法进行制备： 使用式 XI化合物和式 ΧΠ化合物在糖苷键形成的条件下，进行糖苷化反应， 偶联得到二糖 式 YD化合物， 该反应式如下：
Figure imgf000010_0001
其中形成糖苷键的反应试剂优选 Ν-碘代琥珀酰亚胺- 琥珀酰亚胺 -三氟甲烷磺酸银、 三氟甲烷磺酸酯等试剂。
在更进一步的实施方案中， 式 XI化合物可以通过以下方法进行制备： 由式 X III化合物在碱性条件下与乙酰化试剂反应，将两个裸露的羟基用乙酰基保护， 得 XI化合物， 该反应式如下：
Figure imgf000010_0002
其中该反应的碱可以是有机碱或无机碱。其中所述有机碱优选吡啶、三乙胺 等， 所述无机碱优选碳酸钾、 碳酸钠、 碳酸氢钠等。 该反应的乙酰化试剂优选乙 酸酐、 乙酰氯等。
上述反应中的式 XIII化合物可以通过商业渠道购买得到，也可参考美国专利 US7541445的方法制备得到。
在更进一步的实施方案中， 式 ΧΠ化合物可以通过以下方法进行制备， 其包括 以下步骤：
1) 将式 X IV化合物用强碱处理， 将苄氧羰基 （-cbz) 脱除， 裸露出氨基， 得到式 X V化合物， 该反应式如下：
Figure imgf000010_0003
其中该反应的碱优选氢氧化钠、 氢氧化钾、 氢氧化钙或氢氧化钡。 该反应中的式 X IV化合物可以通过商业渠道购买得到， 也可参考文献 Carbohydrate Research, 1984, 130, 221的方法制备。
2) 式 X V化合物与叠氮转移试剂反应， 将式 X V化合物中裸露的氨基转化 ， 得到式 XVI化合物， 该反应式如下：
Figure imgf000011_0001
其中该反应的叠氮转移试剂优选三氟甲烷磺酰叠氮或 1H-咪唑 -1-磺酰基叠 氮盐酸盐；
3) 将式 XVI化合物在酸性条件下将亚苄基脱除， 得到式 XW化合物， 该反 应式如下：
Figure imgf000011_0002
其中该反应的酸优选乙酸、 三氟乙酸或对甲苯磺酸；
4) 将式 XW化合物在碱性条件下与苯甲酰化试剂反应， 将一级醇羟基用苯 甲酰基保护， 得到式 ΧΠ化合物， 该反应式如下：
Figure imgf000011_0003
该反应的碱可以是有机碱或无机碱。 其中所述有机碱优选吡啶、 三乙胺等， 所述无机碱优选碳酸钾、碳酸钠、碳酸氢钠等。 该反应的苯甲酰化试剂优选苯甲 酸酐、 苯甲酰氯等。
本发明还提供了制备全保护的肝素五糖的另一新中间体： 具有式 IX所示结 构：
Figure imgf000012_0001
其中， 单糖单元的构型以及各单糖之间连接键的立体化学为 L-艾杜糖醛酸 -a-l，4-D-葡萄糖。 同时本发明提供了一种制备式 IX化合物的方法，为式 VIA化合物在氧化剂和催 化剂的作用下经氧化反应， 将式 VIA化合物中裸露的一级醇羟基氧化成羧基， 得 到式 IX化合物， 该反应式如下：
Figure imgf000012_0002
其中该反应的氧化剂优选碘苯二乙酸、 次氯酸钙、 次氯酸钠等， 催化剂优 选 2，2，6，6-四甲基哌啶-氮 -氧化物等。
本发明还提供了制备全保护的肝素五糖的另一新中间体： 具有式 W所示结 构：
Figure imgf000012_0003
其中， 单糖单元的构型以及各单糖之间连接键的立体化学为 L-艾杜糖 -a-l，4-D-葡萄糖。
同时本发明还提供了一种制备式 W化合物的方法，为使用式 XI化合物和式) (Π 化合物在糖苷键形成的条件下， 进行糖苷化反应， 偶联得到二糖式 W化合物， 该 反应式如下：
Figure imgf000013_0001
其中形成糖苷键的反应试剂优选 N-碘代琥珀酰亚胺-三氟甲烷磺酸、 N-碘代 琥珀酰亚胺 -三氟甲烷磺酸银、 三氟甲烷磺酸酯等试剂。
本发明还提供了制备全保护的肝素五糖的另一新中间体： 具有式 XI所示结 ：
Figure imgf000013_0002
本发明提供了一种制备式 XI化合物的方法， 以式 XIII化合物为原料， 在碱性 条件下与乙酰化试剂反应， 将两个裸露的羟基用乙酰基保护， 得到式 XI化合物， 该反应式如下：
Figure imgf000013_0003
该反应的碱可以是有机碱或无机碱。 其中所述有机碱优选吡啶、 三乙胺等， 所述无机碱优选碳酸钾、碳酸钠、碳酸氢钠等。该反应的乙酰化试剂优选乙酸酐、 乙酰氯等。
本发明还提供了一种制备式 ΧΠ化合物的制备方法， 其包括以下步骤：
1) 将式 X IV化合物用强碱处理， 将苄氧羰基 （-cbz) 脱除， 裸露出氨基， 得到式 X V化合物， 该反应式如下： CbzHN
OMe
XIV 0Me X V 其中该反应的碱优选氢氧化钠、 氢氧化钾、 氢氧化钙或氢氧化钡； 该反应中 的式 X IV化合物可以通过商业渠道购买得到， 也可参考文献 Carbohydrate Research, 1984, 130, 221的方法制备；
2) 式 X V化合物与叠氮转移试剂反应， 将式 X V化合物中裸露的氨基转化
XVI化合物， 该反应式如下：
Figure imgf000014_0001
X V mc XVI
其中该反应的叠氮转移试剂优选三氟甲烷磺酰叠氮或 1H-咪唑 -1-磺酰基叠 氮盐酸盐；
3) 将式 XVI化合物在酸性条件下将亚苄基脱除， 得到式 XW化合物， 该反 应式如下：
Figure imgf000014_0002
其中该反应的酸优选乙酸、 三氟乙酸或对甲苯磺酸；
4) 将式 XW化合物在碱性条件下与苯甲酰化试剂反应， 将一级醇羟基用苯 甲酰基保护， 得到式 ΧΠ化合物， 该反应式如下：
Figure imgf000014_0003
该反应的碱可以是有机碱或无机碱。 其中所述有机碱优选吡啶、 三乙胺等， 所述无机碱优选碳酸钾、碳酸钠、碳酸氢钠等。 该反应的苯甲酰化试剂优选苯甲 酸酐、 苯甲酰氯等。
相对于现有技术， 本发明的优点在于：
本发明将 EDC三糖片段上的三个对甲氧基苄基保护基换成乙酰基保护， 然后 再进行 EDC三糖片段与 BA二糖片断的糖苷化偶联反应， 消除了由于对甲氧基苄基 保护基在糖苷化偶联反应条件下不稳定造成的反应产率低， 分离纯化困难等问 题，使得 EDC三糖片段和 BA二糖片断的糖苷化制备全保护肝素五糖的反应产率高， 分离纯化简单。
而且， 本发明提供了新的方法合成式 ΧΠ化合物即单糖片段 A， 使得在合成单 糖片段 A的过程中， 不但大大减少了所使用的昂贵而且危险的叠氮转移试剂的用 量， 而且既避免了苄氧羰基胺基（CbzNH- )对糖苷化反应的不利影响。 合成过程 中能够通过简单的重结晶纯化中间体， 操作简单、 成本低廉， 有利于单糖片段 A 片段的大规模生产。
本发明所使用的单糖片段 B即式 XI化合物合成过程简单， 成本低廉， 避免了 昂贵试剂及剧毒试剂的使用。
本发明还提供新的方法合成式 W所示 BA二糖片断， 两个单糖片段 B片段和片 段 A在进行糖苷化反应时产率高， 容易分离纯化。 而且在糖苷化反应完成后的二 糖转化过程中， 巧妙地利用乙酰基和苯甲酰基两者之间的差别， 选择性地将乙酰 基脱除； 然后选择性将裸露的一级醇羟基氧化成羧基， 再甲酯化， 完成二糖片断
BA的合成。 整个合成过程路线短， 选择性好， 产率高。 具体实施方式 本发明实施例公开了制备全保护的肝素五糖的方法及其中间体。本领域技术 人员可以借鉴本文内容， 适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是， 所有类似 的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的， 它们都被视为包括在本发 明。本发明已经通过较佳实施例进行了描述， 相关人员明显能在不脱离本发明内 容、精神和范围内对本文所述的产品与方法进行改动或适当变更与组合， 来实现 和应用本发明技术。
为了进一步理解本发明， 下面结合实施例对本发明进行详细说明。
实施例一： 对甲基苯基 （2-叠氮基 -3， 4-二 -0-苄基 -2-脱氧 -CI-D-吡喃葡萄 糖) - (1→4)-0-(甲基 2， 3-二 -0-苄基 -β-D-吡喃葡萄糖醛酸酯 Ml→4)-0-2-叠氮基 -2-脱氧 -1-硫代 -α/ -D-吡喃葡萄糖苷 （V ) 的制备
Figure imgf000016_0001
将式 IV化合物 8.4克溶于 80毫升二氯甲烷和 8毫升水的混合溶液中， 冰水浴冷 却， 加入 2， 3-二氯 -5， 6-二氰基 -1， 4-苯醌 6.0克。 自然升温反应至反应结束， 加入饱和 NaHC03溶液淬灭反应，分液，水相用二氯甲烷萃取一次。合并有机相， 依次用饱和 NaHC03溶液， 饱和食盐水洗涤， 干燥， 浓縮。 硅胶柱层析纯化得产 物 5.0克。 为确证化合物结构， 进一步进行硅胶柱层析纯化得到 α构型的式 V化 合物， 进行结构表征。
α构型的式 V化合物的 MS、 1H NMR测定数据： ESI-MS(m/z): 1066[M+NH4]+, 1021[M-N2+H]+; 1H NMR(400 MHz, CDC13): δ 7.37-7.25(m, 22 H)， 7.13(d, J = 8.0 Hz, 2 H)， 5.51(d, / = 3.6 Hz, 1 H)， 5.42(d， / = 5.6 Hz, 1 H)， 4.96(d， / = 10.8 Hz, 1 H)， 4.89-4.76(m, 6 H)， 4.65(d， / = 10.8 Hz, 1 H)， 4.58(d， / = 8.0 Hz, 1 H)， 4.18-4.06(m, 3 H)， 3.94-3.63(m, 10 H)， 3.79(s, 3 H)， 3.54(t, / = 8.4 Hz, 2 H)， 3.44(dt, /； = 10.0 Hz, J2 = 2.8 Hz, 1 H)， 3.25(dd, /； = 10.4 Hz, J2 = 4.0 Hz, 1 H)， 2.33(s, 3 H)， 1.67(dd, /； = 8.8 Hz, J2 = 4.8 Hz, 1 H)， 1.58(dd， /； = 8.8 Hz, J2 = 4.4 Hz, 1 H).
实施例二： 对甲基苯基 （2-叠氮基 -3， 4-二 -0-苄基 -2-脱氧 -ct-D-吡喃葡萄 糖) - (1→4)-0-(甲基 2， 3-二 -O-苄基 -β-D-吡喃葡萄糖醛酸酯 Ml→4)-0-2-叠氮基 -2-脱氧 -1-硫代 -α/ -D-吡喃葡萄糖苷 （V ) 的制备
Figure imgf000017_0001
将式 IV化合物 3.8克溶于 40毫升乙腈和 2毫升水的混合溶液中， 冰水浴冷 却， 加入硝酸铈铵 6.6克， 保持温度至反应结束， 加入饱和 NaHC03溶液淬灭反 应。 用二氯甲烷萃取两次， 合并有机相， 依次用饱和 NaHC03溶液， 饱和食盐水 洗涤， 干燥， 浓縮。 硅胶柱层析纯化得产物 2.1克。 为确证化合物结构， 进一步 进行硅胶柱层析纯化得到 α构型的式 V化合物， 进行结构表征。
α构型的式 V化合物的 MS、 1H NMR测定数据： ESI-MS(m/z): 1066[M+NH4]+, 1021[M-N2+H]+; 1H NMR(400 MHz, CDC13): δ 7.37-7.25(m, 22 H)， 7.13(d, J = 8.0 Hz, 2 H)， 5.51(d, / = 3.6 Hz, 1 H)， 5.42(d， / = 5.6 Hz, 1 H)， 4.96(d， / = 10.8 Hz, 1 H)， 4.89-4.76(m, 6 H)， 4.65(d， / = 10.8 Hz, 1 H)， 4.58(d， / = 8.0 Hz, 1 H)， 4.18-4.06(m, 3 H)， 3.94-3.63(m, 10 H)， 3.79(s, 3 H)， 3.54(t, / = 8.4 Hz, 2 H)， 3.44(dt, /； = 10.0 Hz, J2 = 2.8 Hz, 1 H)， 3.25(dd, /； = 10.4 Hz, J2 = 4.0 Hz, 1 H)， 2.33(s, 3 H)， 1.67(dd, /； = 8.8 Hz, J2 = 4.8 Hz, 1 H)， 1.58(dd， = 8.8 Hz, J2 = 4.4 Hz, 1 H).
实施例三： 对甲基苯基 （2-叠氮基 -3， 4-二 -0-苄基 -2-脱氧 -ct-D-吡喃葡萄 糖) - (1→4)-0-(甲基 2， 3-二 -0-苄基 -β-D-吡喃葡萄糖醛酸酯 Ml→4)-0-2-叠氮基 -2-脱氧 -1-硫代 -α/β-D-吡喃葡萄糖苷 （V ) 的制备
Figure imgf000018_0001
将式 IV化合物 0.92克溶于 10毫升二氯甲烷， 冰水浴冷却， 加入 1毫升三氟 乙酸， 保持温度至反应结束， 加入饱和 NaHC03溶液中和反应混合物。用二氯甲 烷萃取两次， 合并有机相， 依次用饱和 NaHC03溶液， 饱和食盐水洗涤， 干燥， 浓縮。 硅胶柱层析纯化得产物 0.48 克。 为确证化合物结构， 进一步进行硅胶柱 层析纯化得到 α构型的式 V化合物， 进行结构表征。
α构型的式 V化合物的 MS、 1H NMR测定数据： ESI-MS(m/z): 1066[M+NH4]+, 1021[M-N2+H]+; 1H NMR(400 MHz, CDC13): δ 7.37-7.25(m, 22 H)， 7.13(d, J = 8.0 Hz, 2 H)， 5.51(d， / = 3.6 Hz, 1 H)， 5.42(d， / = 5.6 Hz, 1 H)， 4.96(d， / = 10.8 Hz, 1 H)， 4.89-4.76(m, 6 H)， 4.65(d， / = 10.8 Hz, 1 H)， 4.58(d， / = 8.0 Hz, 1 H)， 4.18-4.06(m, 3 H)， 3.94-3.63(m, 10 H)， 3.79(s, 3 H)， 3.54(t, / = 8.4 Hz, 2 H)， 3.44(dt, /； = 10.0 Hz, J2 = 2.8 Hz, 1 H)， 3.25(dd, /； = 10.4 Hz, J2 = 4.0 Hz, 1 H)， 2.33(s, 3 H)， 1.67(dd, /； = 8.8 Hz, J2 = 4.8 Hz, 1 H)， 1.58(dd， = 8.8 Hz, J2 = 4.4 Hz, 1 H).
实施例四： 对甲基苯基 （6-0-乙酰基 -2-叠氮基 -3， 4-二 -0-苄基 -2-脱氧 -ct-D-B比喃 葡萄糖 )-(1→4)-0- (甲基 2， 3-二 -0-苄基 -β-D-B比喃葡萄糖醛酸酯) -(1→4)-0-3， 6- 二 -0-乙酰基 -2-叠氮基 -2-脱氧 -1-硫代 -α/β-D-吡喃葡萄糖苷 （VI) 的制备
Figure imgf000019_0001
将式 V化合物 7.9克溶于 100毫升二氯甲烷中， 加入 6.3毫升吡啶和 0.3克 对二甲基氨基吡啶。 冰水浴冷却后， 滴加 7.7毫升乙酸酐。 滴毕， 自然升至室温 反应至反应结束。 加入饱和碳酸氢钠溶液调 pH至弱碱性， 分出有机相， 水相用 二氯甲烷萃取， 合并有机相， 依次用 10% 盐酸溶液， 水和饱和食盐水洗涤。 分 出有机相， 用无水硫酸钠干燥， 浓縮。 硅胶柱层析得产品 7.9 克。 为确证化合物 结构， 进一步进行硅胶柱层析纯化得到 α构型的式 VI化合物， 进行结构表征。 α构型的式 VI化合物的 MS、 1H NMR测定数据： ESI-MS(m/z): 1192[M+NH4]+, 1147[M-N2+H]+; 1H NMR(400 MHz, CDC13): δ 7.37-7.23(m, 22 H)， 7.11(d, J = 7.6 Hz, 2 H)， 5.51(d， / = 4.0 Hz, 1 H)， 5.46(d， / = 5.6 Hz, 1 H)， 5.31(t, / = 10.0 Hz, 1 H)， 4.99(d， J = 10.8 Hz, 1 H)， 4.87-4.80(m, 5 H)， 4.75(d, / = 11.6 Hz, 1 H)， 4.55(d， J = 11.6 Hz, 1 H)， 4.38-4.35(m, 1 H)， 4.32(d, J = 8.0 Hz, 1 H)， 4.28-4.17(m, 4 H)， 4.06(t， J = 9.2 Hz, 1 H)， 3.94(dd, = 10.8 Hz, J2 = 5.6 Hz, 1 H)， 3.87-3.84(m, 2 H)， 3.76(s, 3 H)， 3.74-3.65(m, 2 H)， 3.51-3.44(m, 3 H)， 3.27(dd, /； = 10.4 Hz, J2 = 4.0 Hz, 1 H)， 2.33(s, 3 H)， 2.08(s, 3 H)， 2.03(s, 3 H)， 2.00(s, 3 H).
实施例五： 对甲基苯基 （6-0-乙酰基 -2-叠氮基 -3， 4-二 -0-苄基 -2-脱氧 -ct-D-B比喃 葡萄糖 )-(1→4)-0- (甲基 2， 3-二 -0-苄基 -β-D-B比喃葡萄糖醛酸酯) -(1→4)-0-3， 6- 二 -0-乙酰基 -2-叠氮基 -2-脱氧 -1-硫代 -α/β-D-吡喃葡萄糖苷 （VI) 的制备
Figure imgf000020_0001
将式 V化合物 3.38克溶于 20毫升乙腈中， 加入 2.05克碳酸钠和 1.64克乙 酸酐。 室温搅拌至反应结束。 加入稀盐酸调中和过量的碳酸钠， 过滤， 浓縮。 油 状混合物用乙酸乙酯溶解， 饱和食盐水洗涤。 用无水硫酸钠干燥， 浓縮。 硅胶柱 层析得产品 3.1 克。为确证化合物结构， 进一步进行硅胶柱层析纯化得到 α构型 的式 VI化合物， 进行结构表征。
α构型的式 VI化合物的 MS、 1H NMR测定数据： ESI-MS(m/z): 1192[M+NH4]+, 1147[M-N2+H]+; 1H NMR(400 MHz, CDC13): δ 7.37-7.23(m, 22 H)， 7.11(d, J = 7.6 Hz, 2 H)， 5.51(d， / = 4.0 Hz, 1 H)， 5.46(d， / = 5.6 Hz, 1 H)， 5.31(t, / = 10.0 Hz, 1 H)， 4.99(d， J = 10.8 Hz, 1 H)， 4.87-4.80(m, 5 H)， 4.75(d, / = 11.6 Hz, 1 H)， 4.55(d， J = 11.6 Hz, 1 H)， 4.38-4.35(m, 1 H)， 4.32(d, J = 8.0 Hz, 1 H)， 4.28-4.17(m, 4 H)， 4.06(t， J = 9.2 Hz, 1 H)， 3.94(dd, /； = 10.8 Hz, J2 = 5.6 Hz, 1 H)， 3.87-3.84(m, 2 H)， 3.76(s, 3 H)， 3.74-3.65(m, 2 H)， 3.51-3.44(m, 3 H)， 3.27(dd, /； = 10.4 Hz, J2 = 4.0 Hz, 1 H)， 2.33(s, 3 H)， 2.08(s, 3 H)， 2.03(s, 3 H)， 2.00(s, 3 H).
实施例六： 对甲基苯基 4， 6-二 -O-乙酰基 -2-0-苯甲酰基 -3-0-苄基 -1-硫代 -β-L- 吡喃艾杜糖苷 （XI) 的制备
Figure imgf000020_0002
将式 XIII化合物 476 克溶解于 4.5升二氯甲烷中， 依次加入 470毫升吡啶、 12克对二甲基氨基吡啶。 冰水浴冷却， 缓慢滴加 234毫升乙酸酐。 滴毕， 自然 升至室温反应至反应结束，减压浓縮除去低沸点溶剂。加入二氯甲烷稀释浓縮液， 依次用水、 10%柠檬酸溶液、 饱和碳酸氢钠溶液、 饱和氯化钠溶液洗涤。 干燥， 浓縮， 柱层析纯化得白色固体 440克。
式 XI化合物的 MS、 1H NMR 测定数据： ESI-MS(m/z): 587[M+Na]+; 1H NMR(400 MHz, CDC13): δ 8.11(d, / = 7.6 Hz, 2 H)， 7.62-7.34(m, 10 H)， 7.16(d, / = 8.0 Hz, 2 H)， 5.61(s, 1 H)， 5.50(s， 1 H)， 5.18-5.15(m, 1 H)， 5.04(s, 1 H)， 4.97(d, / = 12.0 Hz, 1 H)， 4.81(d， / = 12.0 Hz, 1 H)， 4.38-4.28(m, 2 H)， 3.96(s, 1 H)， 2.36(s, 3 H)， 2.11(s, 3 H), 1.99(s, 3 H).
实施例七： 对甲基苯基 4， 6-二 -0-乙酰基 -2-0-苯甲酰基 -3-0-苄基 -1-硫代 -β-L- 吡喃艾杜糖苷 （XI ) 的制备
Figure imgf000021_0001
将式 XIII化合物 15.5 克溶解于 200毫升乙腈中， 依次加入碳酸钠 30.75克 和乙酸酐 24.6克。 室温搅拌至反应结束。 加入稀盐酸调中和过量的碳酸钠， 过 滤， 浓縮。 油状混合物用乙酸乙酯溶解， 饱和食盐水洗涤。 用无水硫酸钠干燥， 浓縮。 柱层析纯化得白色固体 11.6克。
式 XI化合物的 MS、 1H NMR 测定数据： ESI-MS(m/z): 587[M+Na]+; 1H
NMR(400 MHz, CDC13): δ 8.11(d, / = 7.6 Hz, 2 H)， 7.62-7.34(m, 10 H)， 7.16(d, / = 8.0 Hz, 2 H)， 5.61(s, 1 H)， 5.50(s， 1 H)， 5.18-5.15(m, 1 H)， 5.04(s, 1 H)， 4.97(d, / = 12.0 Hz, 1 H)， 4.81(d， / = 12.0 Hz, 1 H)， 4.38-4.28(m, 2 H)， 3.96(s, 1 H)， 2.36(s, 3 H)， 2.11(s, 3 H), 1.99(s, 3 H).
实施例八： 甲基 2-氨基 -3-0-苄基 -4， 6-0-亚苄基 -2-脱氧 -ct-D-B比喃葡萄糖苷 （ X V )
Figure imgf000022_0001
将式 X IV化合物 300克溶解于到 3升乙二醇单甲醚中， 然后加入 400克氢氧 化钾， 升温至 100度反应。 至反应完全， 减压除去大部分溶剂。 缓慢倾入 4升水 中， 过滤， 收集固体。 该粗品用乙酸乙酯溶解， 用水洗涤， 干燥， 减压浓縮并重 结晶得到产品为棕色色固体 210克， 少量产品通过柱层析纯化后做结构表征。
式 X V化合物的 MS、 1H NMR测定数据： ESI-MS(m/z): 372[M+H]+; 1H NMR(400 MHz, CDC13): δ 7.52-7.50(m, 2 H)， 7.41-7.30(m, 8 H)， 5.60(s, 1 H)， 5.02(d / = 11.2 Hz, 1 H)， 4.76(d, / = 4.0 Hz, 1 H)， 4.70(d, / = 11.2 Hz, 1 H)， 4.30(dd, /； = 9.6 Hz, J2 = 4.4 Hz, 1 H)， 3.87-3.76(m, 2 H)， 3.65(m, 2 H)， 3.41(s, 3 H)， 2.86(dd, = 8.8 Hz, /2 = 3.6 Hz, 1 H).
实施例九： 甲基 2-叠氮基 -3-0-苄基 -4， 6-0-亚苄基 -2-脱氧 -ct-D-吡喃葡萄糖苷（ X
Figure imgf000022_0002
将式 X V化合物 37.2克溶于 500毫升甲醇中， 加入 0.4克五水硫酸铜， 27.6 克碳酸钾， 在冰水浴冷却下分批加入 37克 1H-咪唑 -1-磺酰基叠氮盐酸盐。 加完 后撤去冰水浴， 室温下搅拌至反应完全。 减压浓縮， 浓縮液加水稀释， 冰浴下加 入稀盐酸调节 PH值到弱酸性。 用乙酸乙酯萃取， 干燥， 过滤， 浓縮得到粗品。 用甲醇打浆， 过滤收集固体， 得白色固体 26 克。 少量产品通过柱层析纯化后做 结构表征。
式 X VI化合物的 MS、 1H NMR测定数据： ESI-MS(m/z): 398[M+H]+; 1H NMR(400 MHz, CDC13): δ 7.52-7.29(m, 10 H)， 5.61(s， 1 H)， 4.96(d， / = 11.2 Hz, 1 H)， 4.82(d, / = 11.2 Hz, 1 H)， 4.80(s， 1 H)， 4.32(dd, /； = 10.0 Hz, J2 = 4.8 Hz, 1 H)， 4.07(d， / = 9.2 Hz, 1 H)， 3.88(dd, /； = 10.0 Hz, J2 = 4.8 Hz, 1 H)， 3.81-3.70(m, 2 H) 3.47-3.44(m, 1 H), 3.46(s, 3 H).
实施例十： 甲基 2-叠氮基 -3-0-苄基 -4， 6-0-亚苄基 -2-脱氧 -ct-D-吡喃葡萄糖苷（ X
Figure imgf000023_0001
将式 X V化合物 18.0克溶于 200毫升甲醇和 10毫升水中， 加入 0.2克五水 硫酸铜， 13.0克碳酸钾， 在冰水浴冷却下滴加三氟甲烷磺酰叠氮的二氯甲烷溶液 120毫升 （1 mol/L)o 加完后撤去冰水浴， 室温下搅拌至反应完全。 减压浓縮， 浓縮液加水稀释， 用乙酸乙酯萃取， 干燥， 过滤， 浓縮得到粗品。 用甲醇打浆， 过滤收集固体， 得白色固体 10.4 克。 少量产品通过柱层析纯化后做结构表征。 式 XVI化合物的 MS、 1H NMR测定数据： ESI-MS(m/z): 398[M+H]+; 1H NMR(400 MHz, CDC13): δ 7.52-7.29(m, 10 H)， 5.61(s， 1 H)， 4.96(d， / = 11.2 Hz, 1 H)， 4.82(d, J = 11.2 Hz, 1 H)， 4.80(s, 1 H)， 4.32(dd, /； = 10.0 Hz, J2 = 4.8 Hz, 1 H)， 4.07(d， / = 9.2 Hz, 1 H)， 3.88(dd, = 10.0 Hz, J2 = 4.8 Hz, 1 H)， 3.81-3.70(m, 2 H)， 3.47-3.44(m, 1 H)， 3.46(s, 3 H).
实施例十一： 甲基 2-叠氮基 -3-0-苄基 -2-脱氧 -ct-D-吡喃葡萄糖苷 （XVD) 的制备
Figure imgf000023_0002
将式 XVI化合物 50克溶于 700毫升二氯甲烷中，加入 15毫升水， 在冰水浴 下， 将 75毫升三氟乙酸滴加到反应体系中， 搅拌至反应结束。 在冰水浴下， 将 30%的氢氧化钠溶液滴入反应体系， 控制 PH值 11〜13， 用二氯甲烷萃取两次， 有机相用污水硫酸钠干燥， 过滤， 将滤液浓縮， 重结晶得产品 33克。 式 X VII化合物的 MS、 1H NMR测定数据： ESI-MS(m/z): 282[M-N2+H]+; 1H NMR(400 MHz, CDC13): δ 7.42-7.30(m, 5 H)， 4.94(d， / = 10.8 Hz, 1 H)， 4.79(d, / = 11.2 Hz, 1 H)， 4.77(s, 1 H)， 3.84-3.79(m, 3 H)， 3.67-3.63(m, 2 H)， 3.42(s, 3 H)， 3.33(dd, = 10.0 Hz, J2 = 3.2 Hz, 1 H)， 3.10(br, 1 H)， 2.49(br, 1 H).
实施例十二： 甲基 2-叠氮基 -6-0-苯甲酰基 -3-0-苄基 -2-脱氧 -ct-D-吡喃葡萄糖苷 ( ΧΠ ) 的制备
Figure imgf000024_0001
在三口瓶中，将式 X VII化合物 50克溶于 400毫升二氯甲烷中， 加入 70毫升 吡啶， 然后在冰水浴冷却下， 滴入 21毫升苯甲酰氯， 滴毕自然升温反应。 至反 应完全， 加水淬灭反应， 分液， 水相用二氯甲烷萃取， 合并有机相， 依次用饱和 碳酸氢钠水溶液、 2%盐酸溶液洗涤。 然后用无水硫酸钠干燥， 过滤， 将滤液浓 縮， 重结晶得产品 57克。
式) (Π化合物的 MS、 1H NMR测定数据： ESI-MS(m/z): 386[M-N2+H]+; 1H NMR(400 MHz, CDC13): δ 8.03(d, J = 8.0 Hz, 2 H)， 7.58-7.28(m, 8 H)， 4.92(d, J = 10.8 Hz, 1 H)， 4.84-4.80(m, 2 H)， 4.71(dd, /； = 12 Hz, J2 = 4.0 Hz, 1 H)， 4.48(d， J = 12 Hz, 1 H)， 3.89-3.82(m, 2 H)， 3.57(td, /； = 9.2 Hz, J2 = 3.6 Hz, 1 H)， 3.44(s, 3 H)， 3.36(dd, Ji = 10.0 Hz, J2 = 3.2 Hz, 1 H)， 2.90(d， / = 3.6 Hz, 1 H).
实施例十三： 甲基 0-(4， 6-二 -O-乙酰基 -2-0-苯甲酰基 -3-0-苄基 -α-L-吡喃艾杜 糖 Ml→4)-2-叠氮基 -6-0-苯甲酰基 -3-0-苄基 -2-脱氧 -CI-D-吡喃葡萄糖苷 （VD ) 的 制备
Figure imgf000024_0002
氮气保护下， 将式 XI化合物 102克、 式 ΧΠ化合物 69克、 4A分子筛 100克溶 解于 1.3升二氯甲烷中， 将反应液冷却至 -20°C后， 加入 67克 N-碘代琥珀酰亚胺 和 4.42克三氟甲烷磺酸， 搅拌至反应结束。 加入饱和碳酸氢钠溶液淬灭反应， 分液， 有机相用饱和氯化钠溶液洗涤， 干燥， 浓縮。 柱层析纯化得固体 133克。
式 VD化合物的 MS、 1H NMR 测定数据： ESI-MS(m/z): 876[M+Na]+; 1H NMR(400 MHz, CDC13): δ 8.04(d， J = 7.6 Hz, 2 H)， 7.97(d, J = 7.2 Hz, 2 H)， 7.59-7.20(m, 16 H)， 5.27(s, 1 H)， 5.18(s, 1 H)， 4.90-4.64(m, 8)， 4.48(dd， /； = 12.4 Hz, J2 = 3.2 Hz, 1 H)， 4.06-3.84(m, 6 H)， 3.45-3.41(m, 4 H)， 1.98(s, 3 H)， 1.91(s, 3 H).
实施例十四： 甲基 0-(4， 6-二 -0-乙酰基 -2-0-苯甲酰基 -3-0-苄基 -ct-L-吡喃艾杜 糖 Ml→4)-2-叠氮基 -6-0-苯甲酰基 -3-0-苄基 -2-脱氧 -CI-D-吡喃葡萄糖苷 （VD ) 的 制备
Figure imgf000025_0001
氮气保护下， 将式 XI化合物 27. 0克、 式 ΧΠ化合物 18. 3克、 4A分子筛 25克 溶解于 0.3升二氯甲烷中， 将反应液冷却至 -5 °C后， 加入 14.8克 N-碘代琥珀酰 亚胺和 1.13 克三氟甲烷磺酸银， 搅拌至反应结束。 加入饱和碳酸氢钠溶液淬灭 反应， 分液， 有机相用饱和氯化钠溶液洗涤， 干燥， 浓縮。 柱层析纯化得固体 29.3克。
式 VD化合物的 MS、 1H NMR 测定数据： ESI-MS(m/z): 876[M+Na]+; 1H NMR(400 MHz, CDC13): δ 8.04(d， J = 7.6 Hz, 2 H)， 7.97(d, J = 7.2 Hz, 2 H)， 7.59-7.20(m, 16 H)， 5.27(s, 1 H)， 5.18(s, 1 H)， 4.90-4.64(m, 8)， 4.48(dd， /； = 12.4 Hz, J2 = 3.2 Hz, 1 H)， 4.06-3.84(m, 6 H)， 3.45-3.41(m, 4 H)， 1.98(s, 3 H)， 1.91(s, 3 H). 实施例十五： 甲基 0-(2-0-苯甲酰基 -3-0-苄基 -ct-L-B比喃艾杜糖 )-(1→4)-2-叠氮基 -6-0-苯甲酰基 -3-0-苄基 -2-脱氧 -ct-D-B比喃葡萄糖苷 （V 的制备
Figure imgf000026_0001
将式 YD化合物 46.7克溶解于 0.2Μ的氯化氢甲醇溶液 500毫升，室温搅拌至 反应结束。 冰水浴下， 滴加三乙胺淬灭反应。 将反应液减压浓縮后， 用乙酸乙酯 溶解， 依次用水、 饱和氯化钠水溶液洗涤。 无水硫酸钠干燥， 浓縮。 柱层析纯化 得油状产品 37克。
式 VIII化合物的 MS、 1H NMR 测定数据： ESI-MS(m/z): 792[M+Na]+; 1H NMR(400 MHz, CDC13): δ 8.00(d， J = 7.2 Hz, 2 H)， 7.94(d, J = 7.2 Hz, 2 H)， 7.57-7.25(m, 16 H), 5.22(s, 1 H), 5.13(s, 1 H), 4.90-4.79(m, 4 H), 4.68-4.63(m, 2 H), 4.49(dd， = 12.4 Hz, J2 = 3.2 Hz, 1 H)， 4.28(t, J = 4.8 Hz, 1 H)， 4.06-4.02(m, 2 H)， 3.91-3.83(m, 2 H)， 3.67(s, 1 H)， 3.52(dd, /； = 10.0 Hz, J2 = 3.6 Hz, 1 H)， 3.47(s, 3 H)， 3.33(dd, = 12.0 Hz, J2 = 6.4 Hz, 1 H)， 3.20(dd, = 12.0 Hz, J2 = 4.8 Hz, 1 H).
实施例十六： 甲基 CK2-0-苯甲酰基 -3-0-苄基 -ct-L-B比喃艾杜糖醛酸 )-(l→4)-2- 氮基 -6-0-苯甲酰基 -3-0-苄基 -2-脱氧 -a-D-吡喃葡萄糖苷 （ΐχ ) 的制备
Figure imgf000026_0002
将式 VIII化合物 20克溶解于 150毫升二氯甲烷和 50毫升水的混合物中，并水 浴冷却。加入 20克碘苯二乙酸和 0.78克 2，2，6，6-四甲基哌啶-氮-氧化物， 搅拌 至反应结束。加入 20毫升硫代硫酸钠饱和溶液， 搅拌 30分钟。 分液， 水相用二 氯甲烷萃取， 合并有机相， 用饱和氯化钠溶液洗涤， 无水硫酸钠干燥， 浓縮。 得 油状粗品 31克， 未经纯化直接用于下一步反应。 式 IX化合物的 MS测定数据： ESI-MS(m/z): 806[M+Na:
实施例十七： 甲基 CK2-0-苯甲酰基 -3-0-苄基 -ct-L-B比喃艾杜糖醛酸 )-(1→4)-2- 氮基 -6-0-苯甲酰基 -3-0-苄基 -2-脱氧 -a-D-吡喃葡萄糖苷 （ΐχ ) 的制备
Figure imgf000027_0001
将式 VIII化合物 11.2克溶解于 25毫升二氯甲烷和 25毫升饱和碳酸氢钠 -碳酸 钠水溶液的混合物中， 并水浴冷却。依次加入溴化钾 0.69克、四丁基溴化铵 0.33 克和 2，2，6，6-四甲基哌啶 -氮-氧化物 0.04克， 分批加入次氯酸钙 5.0克，搅拌 至反应结束。加入 20毫升硫代硫酸钠饱和溶液， 搅拌 30分钟。 分液， 水相用二 氯甲烷萃取， 合并有机相， 用饱和氯化钠溶液洗涤， 无水硫酸钠干燥， 浓縮。 得 油状粗品 7.8克， 未经纯化直接用于下一步反应。
式 IX化合物的 MS测定数据： ESI-MS(m/z): 806[M+Na]+.
实施例十八： 甲基 0- (甲基 2-0-苯甲酰基 -3-0-苄基 -CI-L-吡喃艾杜糖醛酸 酯 Ml→4)-2-叠氮基 -6-0-苯甲酰基 -3-0-苄基 -2-脱氧 -a-D-吡喃葡萄糖苷 （X ) 的 制备
Figure imgf000027_0002
将式 IX化合物粗品 31克（来自 实施例十六）和 17.75克碘甲烷溶于乙腈中， 加入 12.5 克碳酸氢钾， 搅拌至反应完全。 减压浓縮， 乙酸乙酯溶解后， 依次用 水、 饱和氯化钠溶液洗涤， 无水硫酸钠干燥， 浓縮。 柱层析纯化得固体 17克。
式 X化合物的 MS、 1H NMR测定数据： ESI-MS(m/z): 770[M-N2+H]+; 1H NMR(400 MHz, CDC13): δ 8.04(d， J = 7.2 Hz, 2 H)， 7.92(d, J = 7.2 Hz, 2 H)， 7.57-7.23(m, 16 H)， 5.37(s, 1 H)， 5.21(s, 1 H)， 4.97(d， / = 2.4 Hz, 1 H)， 4.84-4.77(m, 4 H)， 4.73(d， / = 5.6 Hz, 1 H)， 4.69(d， /= 6.4 Hz, 1 H)， 4.49(dd， = 12.4 Hz, J2 = 4.0 Hz, 1 H), 4.06-4.00(m, 3 H), 3.92-3.86(m, 2 H), 3.49-3.46(m, 1 H), 3.46(s, 3 H), 3.44(s, 3 H)， 2.66(d, J = 10.8 Hz, 1 H).
实施例十九： 甲基 O- (甲基 2-0-苯甲酰基 -3-0-苄基 -ct-L-吡喃艾杜糖醛酸 酯 Ml→4)-2-叠氮基 -6-0-苯甲酰基 -3-0-苄基 -2-脱氧 -CI-D-吡喃葡萄糖苷 （X ) 的 制备
Figure imgf000028_0001
将式 IX化合物粗品 7. 8克 （来自实施例十七） 溶解于 50毫升***中， 缓慢 滴入 1 mol/L的重氮甲烷-***溶液 25毫升， 搅拌至反应完全。加入乙酸 1.4克， 继续搅拌两小时， 减压浓縮， 乙酸乙酯溶解后， 依次用饱和碳酸氢钠水溶液、 饱 和氯化钠溶液洗涤， 无水硫酸钠干燥， 浓縮。 柱层析纯化得固体 6.3克。
式 X化合物的 MS、 1H NMR测定数据： ESI-MS(m/z): 770[M-N2+H]+; 1H NMR(400 MHz, CDC13): δ 8.04(d， J = 7.2 Hz, 2 H)， 7.92(d, J = 7.2 Hz, 2 H)， 7.57-7.23(m, 16 H)， 5.37(s, 1 H)， 5.21(s, 1 H)， 4.97(d， / = 2.4 Hz, 1 H)， 4.84-4.77(m, 4 H)， 4.73(d， / = 5.6 Hz, 1 H)， 4.69(d， /= 6.4 Hz, 1 H)， 4.49(dd， /； = 12.4 Hz, J2 = 4.0 Hz, 1 H), 4.06-4.00(m, 3 H), 3.92-3.86(m, 2 H), 3.49-3.46(m, 1 H), 3.46(s, 3 H), 3.44(s, 3 H)， 2.66(d, J = 10.8 Hz, 1 H).
实施例二十： 甲基 0-(6-0-乙酰基 -2-叠氮基 -3， 4-二 -0-苄基 -2-脱氧 -ct-D-B比喃葡 萄糖) -(1→4)-0- (甲基 2， 3-二 -0-苄基 -β-D-吡喃葡萄糖醛酸酯) -(1→4)-0-(3，6-二 -0-乙酰基 -2-叠氮基 -2-脱氧 -ct-D-B比喃葡萄糖 )-(1→4)-0- (甲基 2-0-苯甲酰基 -3-0- 苄基 -CI-L-吡喃艾杜糖醛酸酯 Ml→4)-2-叠氮基 -6-0-苯甲酰基 -3-0-苄基 -2-脱氧 -α-D-吡喃葡萄糖苷 （XV 的制备
Figure imgf000029_0001
氮气保护下， 将式 I化合物 13克、 式 X化合物 8. 8克、 4A分子筛 13克溶 解于 200毫升二氯甲烷中， 将反应液冷却至 -20°C后， 加入 4. 48克 N-碘代琥珀 酰亚胺和 0. 9克三氟甲烷磺酸，搅拌至反应结束。加入饱和碳酸氢钠溶液淬灭反 应， 分液， 有机相用饱和氯化钠溶液洗涤， 干燥， 浓縮。 柱层析纯化得固体 16.0 克。
式 XVIII化合物的 MS、 1H NMR测定数据： ESI-MS(m/z): 1820[M-N2+H]+, 1865[M+NH4]+; 1H NMR(400 MHz, CDC13): δ 8.10(d， J = 7.2 Hz, 2 H)， 8.01(d， J = 7.2 Hz, 2 H)， 7.53-7.17(m, 36 H)， 5.73(d, J = 6.0 Hz, 1 H)， 5.50(d， J = 3.6 Hz, 1 H)， 5.35-5.26(m， 2 H)， 5.11(d， / = 3.6 Hz, 1 H)， 4.98(d， / = 4.0 Hz, 1 H)， 4.96(d， / = 4.0 Hz, 1 H)， 4.86-4.53(m, 13 H)， 4.47-4.42(m, 2 H)， 4.35(d, J = 7.6 Hz, 1 H)， 4.28-4.12(m, 5 H)， 4.06-3.97(m, 3 H)， 3.92-3.80(m, 4 H)， 3.74(s, 3 H)， 3.72-3.66(m, 2 H)， 3.54(s, 3 H)， 3.50-3.49(m, 2 H)， 3.44-3.39(m, 2 H)， 3.35(s, 3 H)， 3.28-3.19(m, 2 H).
对所公开的实施例的上述说明，使本领域专业技术人员能够实现或使用本发 明。对这些实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的， 本 文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下，在其它实施 例中实现。 因此， 本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例， 而是要符合与 本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。
+

Claims

种式 V所示化合物，
Figure imgf000030_0001
其中， 单糖单元的构型以及各单糖之间连接键的立体化学为 D-葡萄糖 -ct-l，4-D- 葡萄糖醛酸- β -1， 4-D-葡萄糖。
2. 一种式 VI所示化合物，
Figure imgf000030_0002
其中， 单糖单元的构型以及各单糖之间连接键的立体化学为 D-葡萄糖 -ct-l，4-D- 葡萄糖醛酸- β -1， 4-D-葡萄糖。
3. 一种制备式 V化合物的方法， 其特征在于： 将式 IV化合物脱除三个对甲氧基 苄基， 得到式 V化合物：
Figure imgf000030_0003
4. 一种制备式 VI化合物的方法， 其特征在于： 将式 V化合物在碱性条件下与乙 酰化试剂反应， 将三个裸露的羟基用乙酰基保护， 得到式 VI化合物：
Figure imgf000031_0001
5. 根据权利要求 4所述的方法， 其特征在于： 所述碱选自有机碱或无机碱， 所 述有机碱选自吡啶或三乙胺， 所述无机碱选自碳酸钾、碳酸钠或碳酸氢钠， 所述 乙酰化试剂选自乙酸酐或乙酰氯。
6. 一种制备式 XVIII化合物的方法， 其特征在于： 由式 VI化合物和式 X化合物在 糖苷键形成的条件下， 进行糖苷化反应， 偶联得到全保护五糖式 χνιπ化合物：
Figure imgf000031_0002
XVIE
7. 根据权利要求 6的方法， 其特征在于： 所述式 X化合物由式 IX化合物与甲基 化试剂进行甲酯化反应得到：
Figure imgf000031_0003
8. 根据权利要求 7所述的方法， 其特征在于所述甲基化试剂选自重氮甲烷、 甲基硅重氮甲烷、 碘甲烷、 溴甲烷或氯甲烷。
9. 根据权利要求 7的方法， 其特征在于： 所述式 IX化合物由式 VIII化合物在氧化 剂和催化剂的作用下经氧化反应， 将式 νιπ化合物中裸露的一级醇羟基氧化成羧 基得到：
Figure imgf000032_0001
10. 根据权利要求 9所述的方法， 其特征在于所述氧化剂选自碘苯二乙酸、 次氯 酸钙或次氯酸钠， 所述催化剂为 2，2，6，6-四甲基哌啶-氮-氧化物。
11. 根据权利要求 9的方法， 其特征在于： 所述式 VIII化合物由式 W化合物在脱乙 酰基试剂的作用下脱除乙酰基保护基得到：
Figure imgf000032_0002
12. 根据权利要求 11所述的方法， 其特征在于所述脱乙酰基试剂选自氯化氢的 甲醇、氯化氢的乙醇溶液、三乙胺的甲醇、三乙胺的乙醇溶液、 甲醇钠或乙醇钠。
13. 根据权利要求 11的方法， 其特征在于： 所述式 W化合物由式 XI化合物和式 ΧΠ化合物在糖苷键形成的条件下进行糖苷化反应偶联得到：
Figure imgf000032_0003
14. 根据权利要求 13的方法， 其特征在于： 所述式 XI化合物由式 XIII化合物在 碱性条件下与乙酰化试剂反应将两个裸露的羟基用乙酰基保护得到：
Figure imgf000033_0001
15. 根据权利要求 14的方法， 其特征在于所述碱选自有机碱或无机碱， 所述有 机碱选自吡啶或三乙胺， 所述无机碱选自碳酸钾、碳酸钠或碳酸氢钠， 所述乙酰 化试剂选自乙酸酐或乙酰氯。
16. 根据权利要求 13的方法， 其特征在于： 所述的式 ΧΠ化合物的制备方法包括 以下步骤：
1) 将式 X IV化合物用强碱处理， 将苄氧羰基 （-cbz) 脱除， 裸露出氨基， 得到式 X V化合物：
Figure imgf000033_0002
2) 式 X V化合物与叠氮转移试剂反应， 将式 X V化合物中裸露的氨基转化 ， 得到式 XVI化合物：
Figure imgf000033_0003
3) 将式 XVI化合物在酸性条件下将亚苄基脱除， 得到式 XW化合物:
Figure imgf000033_0004
4) 将式 XW化合物在碱性条件下与苯甲酰化试剂反应， 将一级醇羟基用苯 甲酰基保护， 得到式 ΧΠ化合物：
Figure imgf000034_0001
种式 IX所示化合物，
Figure imgf000034_0002
其中， 单糖单元的构型以及各单糖之间连接键的立体化学为 L-艾杜糖醛酸
-a-l，4-D-葡萄糖。
18. 一种制备式 IX化合物的方法， 其特征在于： 式 V1D化合物在氧化剂和催化剂的 作用下经氧化反应，将式 化合物中裸露的一级醇羟基氧化成羧基， 得到式 IX 化合物：
Figure imgf000034_0003
种式 VD所示化合物,
Figure imgf000034_0004
其中， 单糖单元的构型以及各单糖之间连接键的立体化学为 L-艾杜糖 -a-l,4-D-
20. 一种制备式 W化合物的方法， 其特征在于： 式 XI化合物和式 ΧΠ化合物在糖苷 键形成的条件下， 进行糖苷化反应， 偶联得到式 VE化合物：
Figure imgf000035_0001
种式 XI所示化合物，
Figure imgf000035_0002
22. 一种制备式 XI化合物的方法， 其特征在于： 以式 XIII化合物为原料， 在碱性 条件下与乙酰化试剂反应，将式 XIII化合物两个裸露的羟基用乙酰基保护， 得到 式 XI化合物：
Figure imgf000035_0003
23. 一种制备式 ΧΠ化合物的制备方法， 其特征在于包括以下步骤：
1) 将式 X IV化合物用强碱处理， 将苄氧羰基 （-cbz) 脱除， 裸露出氨基， 得到式 X V化合物：
Figure imgf000035_0004
2) 式 X V化合物与叠氮转移试剂反应， 将式 X V化合物中裸露的氨基转化 为叠氮基， 得到式 XVI化合物： OMe OMe
X V mc XVI
3) 将式 XVI化合物在酸性条件下将亚苄基脱除， 得到式 XW化合物:
Figure imgf000036_0001
4) 将式 XW化合物在碱性条件下与苯甲酰化试剂反应， 将一级醇羟基用苯 甲酰基保护， 得到式 ΧΠ化合物：
Figure imgf000036_0002
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