WO2013018894A1 - 癌の治療及び／又は予防用医薬組成物 - Google Patents

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文義 岡野
小林　真一
佳孝 南田
孝則 齋藤
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東レ株式会社
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    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C07K2317/732—Antibody-dependent cellular cytotoxicity [ADCC]

Definitions

  • the present invention relates to a novel pharmaceutical use of an antibody against CAPRIN-1 or a fragment thereof as a therapeutic and / or prophylactic agent for cancer.
  • Cancer is a disease that occupies the top cause of all deaths, and the current treatment is a combination of radiation therapy and chemotherapy, mainly surgery. Despite the recent development of new surgical methods and the discovery of new anti-cancer drugs, the therapeutic results of cancer have not improved much except for some cancers. In recent years, advances in molecular biology and cancer immunology have identified antibodies that react specifically with cancer, cancer antigens that are recognized by cytotoxic T cells, genes that encode cancer antigens, There is an increasing expectation for a specific cancer therapy targeting cancer antigens (Non-patent Document 1).
  • Non-Patent Documents 4 to 4 9
  • clinical studies of cell therapy using immune cells that specifically react with cancer antigens and cancer-specific immunotherapy such as vaccines containing cancer antigens are being conducted targeting a part of them.
  • Cytoplasmic- and propagation-associated protein 1 (CAPRIN-1) is expressed when quiescent normal cells are activated or undergo cell division, and forms RNA and intracellular stress granules within the cell to transport mRNA. It was known as an intracellular protein known to be involved in the regulation of translation, but was found to be specifically expressed on the surface of cancer cells, and as a target for antibody drugs for cancer treatment Research is ongoing (Patent Document 2).
  • An object of the present invention is to produce an antibody having antitumor activity superior to conventional antibodies targeting CAPRIN-1 that is specifically expressed on the surface of cancer cells, and as an agent for treating and / or preventing cancer. Is to provide a use.
  • the present invention has the following features.
  • the present invention relates to an antibody having immunological reactivity with a partial polypeptide of CAPRIN-1 having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 5, or an amino acid sequence having 80% or more sequence identity with the amino acid sequence, or a
  • the present invention provides a pharmaceutical composition for treating and / or preventing cancer, comprising a fragment and the active ingredient.
  • the cancer is breast cancer, renal cancer, pancreatic cancer, colon cancer, lung cancer, brain tumor, stomach cancer, cervical cancer, ovarian cancer, prostate cancer, bladder cancer, esophageal cancer, leukemia, lymphoma, fibrosarcoma, Mastocytoma or melanoma.
  • the antibody is a monoclonal antibody or a polyclonal antibody.
  • the antibody is a human antibody, a humanized antibody, a chimeric antibody, a single chain antibody, or a multispecific antibody (eg, bispecific antibody).
  • the antibody against CAPRIN-1 according to the present invention damages cancer cells. Therefore, antibodies against CAPRIN-1 are useful for the treatment and prevention of cancer.
  • the antibody according to the present invention is an antibody that recognizes and binds to a predetermined partial polypeptide of CAPRIN-1, and has antitumor activity. More specifically, the antibody according to the present invention is the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 5, or the amino acid sequence and 80% or more, preferably 85% or more, more preferably 90% or more, and still more preferably 95%.
  • An antibody that recognizes a partial polypeptide (CAPRIN-1 partial polypeptide) of CAPRIN-1 protein that is, has immunological reactivity) consisting of an amino acid sequence having the above sequence identity. In the present invention, it has been clarified that this antibody exhibits antitumor activity.
  • the present invention relates to all antibodies that bind to fragments of the CAPRIN-1 protein as described above and exhibit antitumor activity.
  • the antibody against CAPRIN-1 may be any kind of antibody as long as it can exhibit antitumor activity.
  • a recombinant antibody such as a synthetic antibody, a multispecific antibody (for example, a bispecific antibody).
  • Sex antibodies humanized antibodies, chimeric antibodies, single chain antibodies (scFv) and the like, human antibodies, and antibody fragments thereof, such as Fab, F (ab ′) 2 , Fv and the like.
  • the antibody according to the present invention is immunologically reactive with the CAPRIN-1 protein or a partial polypeptide thereof, that is, binds to the CAPRIN-1 protein through an antigen-antibody reaction, preferably specific to the CAPRIN-1 protein.
  • an antigen-antibody reaction preferably specific to the CAPRIN-1 protein.
  • “specifically binds to CAPRIN-1 protein” means that it specifically binds to CAPRIN-1 protein and does not substantially bind to other proteins.
  • the antibody according to the present invention is preferably a monoclonal antibody, but may be a polyclonal antibody as long as a homogeneous antibody can be stably produced.
  • a test subject is a human, in order to avoid or suppress rejection, it is desirable that it is a human antibody or a humanized antibody.
  • the antitumor activity of an antibody against the CAPRIN-1 polypeptide according to the present invention can be determined by examining the suppression of tumor growth in a cancer-bearing animal in vivo, as described later, or a tumor that expresses the polypeptide in vitro. It can be evaluated by examining whether cells show cytotoxic activity via immune cells or complement.
  • the subject to be treated and / or prevented for cancer in the present invention is a mammal such as a human, a pet animal, livestock, a sport animal, etc., and a preferred subject is a human.
  • the protein or fragment thereof used as a sensitizing antigen for obtaining an antibody against CAPRIN-1 according to the present invention is limited to the animal species from which it is derived, such as humans, dogs, cows, horses, mice, rats, chickens, etc. Not. However, it is preferable to select in consideration of compatibility with the parent cell used for cell fusion. In general, a protein derived from a mammal is preferable, and a protein derived from a human is particularly preferable. For example, when CAPRIN-1 is human CAPRIN-1, human CAPRIN-1 protein, a partial peptide thereof, cells expressing human CAPRIN-1 and the like can be used.
  • GenBank GenBank
  • FASTA Altschul et al., Nucleic Acids Res. 25: 3389-3402, 1997.
  • the base sequence or amino acid sequence of these ORFs or mature portions and 70% to 100%, preferably 80% to 100%, more preferably 90% to 100%, even more preferably 95% to 100%, such as 97% to 100%, 98% to 100%, 99% to 100% or 99.100%.
  • a nucleic acid or protein consisting of a sequence having 5% to 100% sequence identity is the target CAPRIN-1.
  • “% sequence identity” means an amino acid when two sequences are aligned (aligned) with the maximum similarity (or matching) with or without a gap. It means the percentage (%) of the same amino acid (or base) with respect to the total number of (or base).
  • an epitope As a fragment of the CAPRIN-1 protein, one containing an epitope (antigenic determinant) which is the smallest unit recognized by an antibody and having a length from the epitope amino acid length to the total length of the protein can be used.
  • An epitope refers to a polypeptide fragment that has antigenicity or immunogenicity in a mammal, preferably a human, and its minimum unit consists of about 7 to 12 amino acids, such as 8 to 11 amino acids.
  • the fragment of the CAPRIN-1 protein used for the production of the antibody according to the present invention is 80% or more, preferably 85% or more, of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 5 or the amino acid sequence recognized by the antibody of the present invention.
  • the amino acid sequence has a sequence identity of 90% or more, more preferably 95% or more, or consists of about 7 to 12 amino acids in the amino acid sequence, for example, 8 to 11 amino acids in a row.
  • a fragment containing at least an epitope is preferable.
  • polypeptide fragments containing human CAPRIN-1 protein and its partial peptides are synthesized according to chemical synthesis methods such as Fmoc method (fluorenylmethyloxycarbonyl method) and tBoc method (t-butyloxycarbonyl method), for example.
  • Fmoc method fluorenylmethyloxycarbonyl method
  • tBoc method t-butyloxycarbonyl method
  • the polynucleotide encoding the above-mentioned polypeptide can be easily prepared by a known genetic engineering technique or a conventional method using a commercially available nucleic acid synthesizer.
  • DNA containing the base sequence of the human CAPRIN-1 gene is prepared by performing PCR using a pair of primers designed to amplify the base sequence using human chromosomal DNA or cDNA library as a template. can do.
  • PCR reaction conditions can be set as appropriate. For example, using a heat-resistant DNA polymerase (eg, Taq polymerase, Pfu polymerase, etc.) and a Mg 2+ -containing PCR buffer, the reaction is performed at 94 ° C.
  • a heat-resistant DNA polymerase eg, Taq polymerase, Pfu polymerase, etc.
  • the reaction process consisting of seconds to 1 minute (annealing) and 2 minutes (extension) at 72 ° C. is defined as one cycle. For example, after 30 cycles, the reaction can be performed at 72 ° C. for 7 minutes. It is not limited.
  • the PCR method, conditions, etc. are described in, for example, Ausubel et al., Short Protocols in Molecular Biology, 3rd Edition, A compendium of Methods from Current Protocols in Molecular Biology (1995), J ing.
  • the cDNA library is preferably prepared from cells, organs or tissues expressing the CAPRIN-1 protein. Examples of such cells and tissues are cells or tissues derived from cancer or tumors such as testis, leukemia, breast cancer, lymphoma, brain tumor, lung cancer, pancreatic cancer, colon cancer.
  • the above-described operations such as probe or primer preparation, cDNA library construction, cDNA library screening, and target gene cloning are known to those skilled in the art.
  • the host cell into which the expression vector is introduced may be any cell as long as it can express the polypeptide.
  • prokaryotic cells include Escherichia coli
  • examples of eukaryotic cells include monkey kidney cells COS1.
  • Mammalian cells such as Chinese hamster ovary cell CHO, human embryonic kidney cell line HEK293, mouse embryonic skin cell line NIH3T3, budding yeast, yeast cells such as fission yeast, silkworm cells, Xenopus egg cells, etc. It is not limited.
  • the expression vector When a prokaryotic cell is used as a host cell, the expression vector includes an origin, promoter, ribosome binding site, multicloning site, terminator, drug resistance gene, auxotrophic complementary gene, etc. that can be replicated in the prokaryotic cell. Can be used. Examples of the expression vector for E. coli include pUC system, pBluescript II, pET expression system, pGEX expression system and the like.
  • a prokaryotic host cell is transformed with the vector, and the resulting transformant is cultured, the polypeptide encoded by the DNA is prokaryotic. It can be expressed in a host cell. In this case, the polypeptide can also be expressed as a fusion protein with another protein.
  • eukaryotic expression vectors having a promoter, a splicing region, a poly (A) addition site, and the like can be used as the expression vector.
  • expression vectors include pKA1, pCDM8, pSVK3, pMSG, pSVL, pBK-CMV, pBK-RSV, EBV vector, pRS, pcDNA3, pYES2, and the like.
  • a DNA encoding the above polypeptide is incorporated into such an expression vector, and after transforming a eukaryotic host cell with the vector, the resulting transformant is cultured, and the DNA encodes.
  • pIND / V5-His pFLAG-CMV-2, pEGFP-N1, pEGFP-C1, etc.
  • a His tag eg (His) 6 to (His) 10
  • FLAG tag eg (His) 10
  • myc tag eg (His) 6 to (His) 10
  • the polypeptide can be expressed as a fusion protein to which various tags such as HA tag and GFP are added.
  • a well-known method such as electroporation, calcium phosphate method, liposome method, DEAE dextran method, microinjection, virus infection, lipofection, binding to a cell membrane-permeable peptide, etc. can be used. .
  • the target polypeptide from the host cell can be performed by combining known separation operations. For example, treatment with denaturing agents and surfactants such as urea, sonication, enzyme digestion, salting out and solvent fractional precipitation, dialysis, centrifugation, ultrafiltration, gel filtration, SDS-PAGE, isoelectric focusing, Examples include, but are not limited to, ion exchange chromatography, hydrophobic chromatography, affinity chromatography, and reverse phase chromatography.
  • the antigen prepared as described above can be used as a sensitizing antigen as described later.
  • Antibodies are usually heteromultimeric glycoproteins containing at least two heavy chains and two light chains. Apart from IgM, immunoglobulins are approximately 150 kDa heterotetrameric glycoproteins composed of two identical light (L) chains and two identical heavy (H) chains. Typically, each light chain is linked to the heavy chain by one disulfide covalent bond, but the number of disulfide bonds between the heavy chains of different immunoglobulin isotypes varies. Each heavy and light chain also has intrachain disulfide bonds. Each heavy chain has at one end a variable domain (VH region) followed by several constant regions. Each light chain has a variable domain (VL region) and one constant region at the opposite end.
  • VH region variable domain
  • VL region variable domain
  • the constant region of the light chain is aligned with the first constant region of the heavy chain, and the light chain variable domain is aligned with the variable domain of the heavy chain.
  • the variable domain of an antibody confers binding specificity on the antibody by exhibiting specific variability, in which a specific region is called a complementarity determining region (CDR).
  • CDR complementarity determining region
  • the relatively conserved portion of the variable region is called the framework region (FR).
  • the complete heavy and light chain variable domains each contain 4 FRs linked by 3 CDRs.
  • the three CDRs are called CDRH1, CDRH2, CDRH3 from the N-terminal in the heavy chain, and similarly called CDRL1, CDRL2, CDRL3 in the light chain.
  • CDRH3 is most important for the binding specificity of the antibody to the antigen.
  • the CDRs of each chain are held together in a state closer to the FR region, and contribute to the formation of an antigen binding site of the antibody together with the CDR from the other chain.
  • the constant region does not contribute directly to the binding of the antibody to the antigen, but is involved in various effector functions such as antibody-dependent cellular cytotoxicity (ADCC), phagocytosis through binding to Fc ⁇ receptors,
  • Figure 6 shows half-life / clearance rate through neonatal Fc receptor (FcRn), complement dependent cytotoxicity (CDC) through the C1q component of the complement cascade.
  • the anti-CAPRIN-1 antibody in the present invention means an antibody having immunological reactivity with the full length of a CAPRIN-1 protein or a fragment thereof.
  • the anti-CAPRIN-1 antibody of the present invention is a partial polypeptide (CAPRIN-1 partial polypeptide) of CAPRIN-1 protein, which comprises an epitope comprising the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 5, or the amino acid sequence and
  • the antibody of the present invention is preferably the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 5 or the amino acid sequence of 80% or more, preferably 85% or more, more preferably 90% or more, and further preferably 95% or more.
  • An epitope consisting of about 7 to 12 consecutive amino acids, for example, 8 to 11 consecutive amino acids, in the amino acid sequence having sex is recognized.
  • This anti-CAPRIN-1 antibody of the present invention can specifically bind to full-length CAPRIN-1 protein.
  • the antibody of the present invention is a polypeptide comprising the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 5 among antibodies obtained using the CAPRIN-1 protein or a fragment thereof as an antigen, or 80% or more, preferably 85% of the amino acid sequence.
  • % Or more, more preferably 90% or more, and still more preferably 95% or more can be obtained by selecting an antibody that immunologically binds to a polypeptide consisting of an amino acid sequence having a sequence identity of 95% or more by a conventional method.
  • immunological reactivity means the property that an antibody binds to CAPRIN-1 antigen (full length of CAPRIN-1 protein or a partial polypeptide thereof) in vivo.
  • the function of damaging (eg, killing, suppressing, or regressing) tumor cells through such binding of the antibody of the present invention to CAPRIN-1 is exhibited.
  • the antibody of the present invention binds to the CAPRIN-1 protein and is used for tumors such as breast cancer, kidney cancer, pancreatic cancer, colon cancer (eg colon cancer), lung cancer, brain tumor, stomach cancer, cervical cancer, ovarian cancer, prostate cancer, bladder Cancer, esophageal cancer, leukemia, lymphoma, fibrosarcoma, mastocytoma or melanoma can be impaired.
  • tumors such as breast cancer, kidney cancer, pancreatic cancer, colon cancer (eg colon cancer), lung cancer, brain tumor, stomach cancer, cervical cancer, ovarian cancer, prostate cancer, bladder Cancer, esophageal cancer, leukemia, lymphoma, fibrosarcoma, mastocytoma or melanoma can be impaired.
  • the antibody of the present invention may be any kind (type) of antibody.
  • Examples of the types of antibodies of the present invention include monoclonal antibodies, polyclonal antibodies, synthetic antibodies, multispecific antibodies, human antibodies, humanized antibodies, chimeric antibodies, single chain antibodies, antibody fragments (eg, Fab and F (ab ′)) 2 , Fv) and the like.
  • the antibody may also be any class of immunoglobulin molecules, such as IgG, IgE, IgM, IgA, IgD and IgY, or any subclass, such as IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1, IgA2, and the like.
  • the antibody may be further modified by glycosylation, acetylation, formylation, amidation, phosphorylation, PEGylation, or the like.
  • the antibody is a monoclonal antibody
  • a breast cancer cell line SK-BR-3 expressing CAPRIN-1 is administered to the mouse for immunization, the spleen is extracted from the mouse, the cells are separated, A cell and a mouse myeloma cell are fused, and a clone producing an antibody having a cancer cell growth inhibitory action is selected from the obtained fused cells (hybridoma).
  • a clone producing an antibody that binds to a polypeptide consisting of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 5 or a polypeptide consisting of an amino acid sequence having 80% or more sequence identity with the amino acid sequence may be selected.
  • a monoclonal antibody-producing hybridoma having cancer cell growth inhibitory activity or a hybridoma producing a monoclonal antibody against the polypeptide of SEQ ID NO: 5 is isolated, the hybridoma is cultured, and the antibody is purified from the culture supernatant by a general affinity purification method.
  • the antibody of the present invention can be prepared.
  • a hybridoma producing a monoclonal antibody can also be produced, for example, as follows.
  • an animal is immunized with a sensitizing antigen according to a known method.
  • a sensitizing antigen is injected into a mammal intraperitoneally or subcutaneously.
  • the sensitizing antigen is diluted to an appropriate amount with PBS (Phosphate-Buffered Saline), physiological saline, or the like, and mixed with an appropriate amount of an ordinary adjuvant, for example, Freund's complete adjuvant, if necessary, and emulsified.
  • PBS Phosphate-Buffered Saline
  • physiological saline or the like
  • an ordinary adjuvant for example, Freund's complete adjuvant, if necessary, and emulsified.
  • the mammal is dosed several times every 4-21 days.
  • an appropriate carrier can be used during immunization with the sensitizing antigen.
  • immune cells are collected from the animal and subjected to cell fusion.
  • spleen cells can be mentioned.
  • mammalian myeloma cells can be used as the other parent cell to be fused with the immune cells.
  • the myeloma cells include various known cell lines such as P3U1 (P3-X63Ag8U1), P3 (P3x63Ag8.653) (J. Immunol. (1979) 123, 1548-1550), P3x63Ag8U. 1 (Current Topics in Microbiology and Immunology (1978) 81, 1-7), NS-1 (Kohler. G. and Milstein, C. Eur. J. Immunol. (1976) 6, 511-511) (Margulies.
  • the cell fusion between the immune cell and myeloma cell is basically performed by a known method, for example, the method of Kohler and Milstein et al. (Kohler, G. and Milstein, C. Methods Enzymol. (1981) 73, 3-46. ) And the like.
  • the cell fusion is performed, for example, in a normal nutrient culture medium in the presence of a cell fusion promoter.
  • a cell fusion promoter for example, polyethylene glycol (PEG), Sendai virus (HVJ), or the like is used as the fusion promoter, and an auxiliary agent such as dimethyl sulfoxide can be added and used to increase the fusion efficiency as desired.
  • the usage ratio of immune cells and myeloma cells can be arbitrarily set.
  • the number of immune cells is preferably 1 to 10 times that of myeloma cells.
  • the culture solution used for the cell fusion for example, RPMI1640 culture solution suitable for growth of the myeloma cell line, MEM culture solution, and other normal culture solutions used for this kind of cell culture can be used.
  • Serum replacement fluid such as fetal calf serum (FCS) can be used in combination.
  • a predetermined amount of the immune cells and myeloma cells are mixed well in the culture medium, and a PEG solution (for example, an average molecular weight of about 1000 to 6000) preliminarily heated to about 37 ° C. is usually 30 to 60% (
  • the desired hybridoma is formed by adding at a concentration of w / v) and mixing. Subsequently, it is preferable to remove cell fusion agents and the like which are undesirable for the growth of hybridomas by repeatedly adding an appropriate culture medium and centrifuging to remove the supernatant.
  • the hybridoma thus obtained is selected by culturing in a normal selective culture solution, for example, a HAT culture solution (a culture solution containing hypoxanthine, aminopterin and thymidine). Culturing with the HAT culture solution is continued for a sufficient time (usually several days to several weeks) for cells other than the target hybridoma (non-fusion cells) to die. Subsequently, the usual limiting dilution method is performed, and the hybridoma producing the target antibody is screened and single-cloned.
  • a normal selective culture solution for example, a HAT culture solution (a culture solution containing hypoxanthine, aminopterin and thymidine). Culturing with the HAT culture solution is continued for a sufficient time (usually several days to several weeks) for cells other than the target hybridoma (non-fusion cells) to die. Subsequently, the usual limiting dilution method is performed, and the hybridoma producing the target antibody is screened
  • human lymphocytes such as human lymphocytes infected with EB virus are sensitized in vitro with proteins, protein-expressing cells or lysates thereof. Lymphocytes can be fused with human-derived myeloma cells having permanent mitotic activity, for example, U266 (Registration No. TIB196) to obtain a hybridoma that produces a human antibody having a desired activity (for example, cell growth inhibitory activity).
  • a desired activity for example, cell growth inhibitory activity
  • the hybridoma producing the monoclonal antibody thus produced can be subcultured in a normal culture solution and can be stored for a long time in liquid nitrogen.
  • a desired antigen or a cell expressing the desired antigen is used as a sensitizing antigen and immunized according to a normal immunization method, and the resulting immune cell is fused with a known parent cell by a normal cell fusion method.
  • a hybridoma that produces the target monoclonal antibody can be prepared by screening monoclonal antibody-producing cells (hybridoma) by an ordinary screening method.
  • a polyclonal antibody can be obtained, for example, as follows.
  • the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 5 which is a fragment of CAPRIN-1, or 80% or more, preferably 85% or more, more preferably 90% or more, and even more preferably 95% or more of the amino acid sequence.
  • a polypeptide comprising an amino acid sequence having a property preferably a polypeptide comprising the amino acid sequence
  • a sensitizing antigen a mammal can be immunized to obtain serum.
  • anti-CAPRIN-1 polyclonal antibody By purifying these sera using, for example, ammonium sulfate precipitation, protein A, protein G column, DEAE ion exchange chromatography, affinity column coupled with CAPRIN-1 protein or synthetic peptide, anti-CAPRIN-1 polyclonal antibody is obtained.
  • the polyclonal antibody of the present invention includes an antibody obtained by immunizing a human antibody-producing animal (for example, mouse) with CAPRIN-1 protein.
  • human antibody-producing mice for example, KM mice (Kirin Pharma / Medarex) and Xeno mice (Amgen) are known (for example, International Publication Nos. WO02 / 43478, WO02 / 092812, etc.).
  • fully human polyclonal antibodies can be obtained from blood.
  • spleen cells can be removed from the immunized mouse and a human monoclonal antibody can be prepared by a fusion method with myeloma cells.
  • the antigen can be prepared according to, for example, a method using animal cells (Japanese Patent Publication No. 2007-530068), a method using baculovirus (eg, International Publication No. WO 98/46777).
  • immunization may be performed by binding to an immunogenic macromolecule such as albumin.
  • the antigen may be immunized by administration with an adjuvant.
  • the antibody of the present invention can also be obtained as a recombinant antibody produced by cloning the antibody gene from a hybridoma, incorporating it into an appropriate vector, introducing it into a host, and using a gene recombination technique.
  • a gene recombination technique for example, Carl, AK Borrebaeck, James, W. Larrick, THERAPEUTIC MONOCLONAL ANTIBODIES, Published in the United Kingdom by BIS 90BLILLABL
  • V region an antibody variable region
  • cDNA of an antibody variable region is synthesized from hybridoma mRNA using reverse transcriptase. If DNA encoding the V region of the target antibody is obtained, it is ligated with DNA encoding the desired antibody constant region (C region) and incorporated into an expression vector.
  • DNA encoding the V region of the antibody may be incorporated into an expression vector containing DNA of the antibody C region. It is incorporated into an expression vector so as to be expressed under the control of an expression control region such as an enhancer or promoter.
  • host cells can be transformed with this expression vector to express the antibody.
  • the anti-CAPRIN-1 antibody of the present invention is preferably a monoclonal antibody. However, it may be a polyclonal antibody, a genetically modified antibody (such as a chimeric antibody or a humanized antibody) and the like.
  • Monoclonal antibodies include human monoclonal antibodies, non-human animal monoclonal antibodies (eg mouse monoclonal antibodies, rat monoclonal antibodies, rabbit monoclonal antibodies, chicken monoclonal antibodies), chimeric monoclonal antibodies, and the like. Monoclonal antibodies are cultured hybridomas obtained by fusion of spleen cells and myeloma cells from non-human animals immunized with the CAPRIN-1 protein or fragments thereof (eg, mice, human antibody-producing mice, chickens, rabbits, etc.). Can be made.
  • a gene for a heavy chain variable region and a light chain variable region of a splenocyte of a non-human animal immunized with the CAPRIN-1 protein or a fragment thereof (eg, a mouse, a human antibody-producing mouse, a chicken, a rabbit, etc.) It can also be prepared by incorporating it into a phagemid vector and introducing it into Escherichia coli and expressing it as a single chain antibody via a helper phage.
  • a chimeric antibody is an antibody prepared by combining sequences derived from different animals, such as a mouse antibody heavy chain, light chain variable region and human antibody heavy chain, light chain constant region antibody, etc. .
  • a chimeric antibody can be prepared using a known method. For example, a DNA encoding an antibody V region and a DNA encoding a human antibody C region are ligated, incorporated into an expression vector, and introduced into a host. It is obtained by producing.
  • a monoclonal antibody having an antitumor effect and immunological reactivity with the CAPRIN-1 partial polypeptide consisting of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 5 is produced by the method described in the Examples below.
  • This monoclonal antibody has, for example, a heavy chain variable (VH) region having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 58, SEQ ID NO: 63, SEQ ID NO: 69 or SEQ ID NO: 77, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 23, a light chain variable (VL) region having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 53, SEQ ID NO: 62, SEQ ID NO: 65, SEQ ID NO: 73 or SEQ ID NO: 81.
  • VH heavy chain variable
  • VL light chain variable
  • This monoclonal antibody has CDR1, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 56, sequence represented by the amino acid sequence of SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 55, SEQ ID NO: 66 or SEQ ID NO: 74 in the VH region.
  • CDR2 represented by the amino acid sequence of No.
  • CDR2 represented by the amino acid sequence of SEQ ID NO: 71 or SEQ ID NO: 79, and SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 52, SEQ ID NO: 61, it may include a CDR3 represented by the amino acid sequence of SEQ ID NO: 72 or SEQ ID NO: 80.
  • a humanized antibody is a modified antibody also called a reshaped human antibody.
  • Humanized antibodies are constructed by transplanting CDRs of antibodies from immunized animals into the complementarity determining regions of human antibodies. The general gene recombination technique is also known.
  • a DNA sequence designed to link the CDR of a mouse antibody, rabbit antibody or chicken antibody and the framework region (FR) of a human antibody has a portion that overlaps the terminal portion. It is synthesized by PCR from several oligonucleotides prepared in (1). The obtained DNA is obtained by ligating with the DNA encoding the human antibody constant region, then incorporating it into an expression vector, introducing it into a host and producing it (European Patent Application Publication No. EP239400, International Publication No. WO96). No. 02576).
  • FR of a human antibody linked through CDR a complementarity determining region that forms a favorable antigen binding site is selected.
  • the amino acid of the framework region in the variable region of the antibody may be substituted so that the complementarity determining region of the reshaped human antibody forms an appropriate antigen binding site (Sato K. et al., Cancer Research). 1993, 53: 851-856). Moreover, you may substitute by the framework area
  • a region in which the complementarity determining region forms a favorable antigen binding site is selected. If necessary, the amino acid of the framework region in the variable region of the antibody may be substituted so that the complementarity determining region of the reshaped human antibody forms an appropriate antigen binding site (Sato K. et al., Cancer). Research 1993, 53: 851-856).
  • variable region e.g, FR
  • constant region amino acids in the variable region or constant region may be substituted with other amino acids.
  • Amino acid substitution is, for example, less than 15, less than 10, less than 8, less than 7, less than 6, less than 5, less than 4, less than 3, less than 2, or less than 2 amino acids, preferably 1 to 5 amino acids, more preferably 1 or 2 amino acids
  • the substituted antibody should be functionally equivalent to the unsubstituted antibody.
  • the substitution is preferably a conservative amino acid substitution, which is a substitution between amino acids with similar properties such as charge, side chain, polarity, aromaticity and the like.
  • Amino acids with similar properties include, for example, basic amino acids (arginine, lysine, histidine), acidic amino acids (aspartic acid, glutamic acid), uncharged polar amino acids (glycine, asparagine, glutamine, serine, threonine, cysteine, tyrosine), nonpolar It can be classified into sex amino acids (leucine, isoleucine, alanine, valine, proline, phenylalanine, tryptophan, methionine), branched chain amino acids (leucine, valine, isoleucine), aromatic amino acids (phenylalanine, tyrosine, tryptophan, histidine).
  • basic amino acids arginine, lysine, histidine
  • acidic amino acids aspartic acid, glutamic acid
  • uncharged polar amino acids glycine, asparagine, glutamine, serine, threonine, cysteine, tyrosine
  • modified antibody examples include antibodies bound to various molecules such as polyethylene glycol (PEG).
  • PEG polyethylene glycol
  • the substance to be bound is not limited. In order to obtain such a modified antibody, it can be obtained by chemically modifying the obtained antibody. These methods are already established in this field.
  • “functionally equivalent” means that the target antibody has the same biological or biochemical activity as the antibody of the present invention, specifically, a function of damaging a tumor, and is applied to humans. Sometimes refers to not essentially causing rejection. Examples of such activity include cell growth inhibitory activity or binding activity.
  • an antibody that recognizes the epitope of the CAPRIN-1 protein or a CAPRIN-1 fragment polypeptide containing the same can be obtained by methods known to those skilled in the art.
  • the epitope of the CAPRIN-1 protein recognized by the anti-CAPRIN-1 antibody having the cancer cell growth inhibitory effect obtained above is determined by an ordinary method (for example, epitope mapping or an epitope identification method described later). Determine the epitope of an antibody produced by using a polypeptide having an amino acid sequence contained in the epitope as an immunogen, or an antibody produced by a normal method, and select an antibody having the same epitope as the anti-CAPRIN-1 antibody It can be obtained by a method or the like.
  • epitope refers to a polypeptide fragment having antigenicity or immunogenicity in a mammal, preferably a human, and its minimum unit consists of about 7 to 12 amino acids, preferably 8 to 11 amino acids.
  • the antibody of the present invention is an antibody immunologically reactive with CAPRIN-1, or an antibody that specifically recognizes CAPRIN-1, or an antibody that specifically binds to CAPRIN-1, and which is against cancer. It is an antibody that exhibits cytotoxic activity or tumor growth inhibitory action.
  • the antibody is preferably an antibody having a structure such that little or no rejection is avoided in the animal to which it is administered. Examples of such antibodies include human antibodies, humanized antibodies, chimeric antibodies (eg, human-mouse chimeric antibodies), single chain antibodies, bispecific antibodies and the like when the target animal is human.
  • the heavy and light chain variable regions are derived from human antibodies, or the heavy and light chain variable regions are derived from non-human animal antibody complementarity determining regions (CDR1, CDR2 and CDR3).
  • CDR1, CDR2 and CDR3 non-human animal antibody complementarity determining regions
  • a framework region derived from a human antibody, or the variable regions of the heavy and light chains are derived from a non-human animal antibody, and the constant regions of the heavy and light chains are human antibodies. It is a recombinant antibody that is derived from.
  • Preferred antibodies are the previous two antibodies.
  • DNA encoding a monoclonal antibody against human CAPRIN-1 eg, human monoclonal antibody, mouse monoclonal antibody, rat monoclonal antibody, rabbit monoclonal antibody, chicken monoclonal antibody, etc.
  • DNA encoding the light chain variable region and heavy chain variable region of the antibody was prepared by RT-PCR method and the like, and Kabat EU numbering system (Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Institute, 5th Ed. of Health, Bethesda, Md. (1991)) to determine the sequence or sequences of the CDR1, CDR2, CDR3 of the variable region of the light and heavy chains based on.
  • DNA encoding each of these variable regions or DNA encoding each CDR can be obtained using a gene recombination technique (Sambrook et al., Molecular Cloning A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Press (1989)) or a DNA synthesizer. Make it.
  • the human monoclonal antibody-producing hybridoma is prepared by immunizing a human antibody-producing animal (eg, mouse) with human CAPRIN-1, and then fusing spleen cells excised from the immunized animal with myeloma cells. Can do.
  • DNA encoding the variable region and constant region of the light chain or heavy chain derived from a human antibody is prepared as necessary using a gene recombination technique or a DNA synthesizer.
  • the CDR coding sequence in the DNA encoding the variable region of the light chain or heavy chain derived from the human antibody is represented by a non-human animal (for example, mouse, rat, rabbit, chicken, etc.)
  • the humanized antibody is prepared by linking DNA obtained by replacing the CDR coding sequence of the derived antibody with the DNA encoding the constant region of the light chain or heavy chain derived from the human antibody, respectively. Can be prepared.
  • DNA encoding the light chain or heavy chain variable region of an antibody derived from a non-human animal eg, mouse, rat, rabbit, chicken, etc.
  • a DNA encoding a chimeric antibody can be prepared by ligating with a DNA encoding the constant region.
  • this antibody is an antibody in which a heavy chain variable region and a light chain variable region are linearly linked via a linker, DNA encoding the heavy chain variable region, DNA encoding the linker And a DNA encoding a light chain variable region can be combined to produce a DNA encoding a single chain antibody.
  • each of the heavy chain variable region and the light chain variable region is derived from a human antibody, or only the CDR depends on the CDR of an antibody derived from an animal other than a human (eg, mouse, rat, rabbit, chicken, etc.). It is derived from a substituted human antibody.
  • the linker is composed of 12 to 19 amino acids, and examples thereof include 15 amino acids (G 4 S) 3 (G.-B. Kim et al., Protein Engineering Design and Selection 2007, 20 (9): 425-432). .
  • this antibody is an antibody that can specifically bind to two different epitopes, such as DNA encoding heavy chain variable region A, light chain variable region B.
  • DNA, DNA encoding heavy chain variable region B, and DNA encoding light chain variable region A are joined in this order (however, DNA encoding light chain variable region B and DNA encoding heavy chain variable region B) Are linked via a DNA encoding a linker as described above), whereby a DNA encoding a bispecific antibody can be prepared.
  • each of the heavy chain variable region and the light chain variable region is derived from a human antibody, or only the CDR depends on the CDR of an antibody derived from an animal other than a human (eg, mouse, rat, rabbit, chicken, etc.). It is derived from a substituted human antibody.
  • Recombinant DNA produced as described above is incorporated into one or more appropriate vectors, introduced into host cells (eg, mammalian cells, yeast cells, insect cells, etc.), and (co) expressed
  • host cells eg, mammalian cells, yeast cells, insect cells, etc.
  • a recombinant antibody can be prepared (PJ Delves., ANTIBODY PRODUCTION ESSENTIAL TECHNIQUES., 1997 WILEY, P. Shepherd and C. Dean. SNT. W. Gododing., Monoclonal Antibodies: principals and practices., 1993 ACADEMI PRESS).
  • Examples of the antibody of the present invention produced by the above method include the following antibodies (a) to (g) obtained in Examples described later.
  • an antibody comprising a heavy chain variable region comprising the complementarity determining regions of SEQ ID NOs: 55, 56 and 57 and a light chain variable region comprising the complementarity determining regions of SEQ ID NOs: 59, 60 and 61 (eg, SEQ ID NO: 58 The heavy chain variable region of SEQ ID NO: 62 and the light chain variable region of SEQ ID NO: 62).
  • an antibody comprising a heavy chain variable region comprising the complementarity determining regions of SEQ ID NOs: 55, 56 and 57 and a light chain variable region comprising the complementarity determining regions of SEQ ID NOs: 59, 64 and 61 (eg, SEQ ID NO: 63 The heavy chain variable region and the light chain variable region of SEQ ID NO: 65).
  • an antibody comprising a heavy chain variable region comprising the complementarity determining regions of SEQ ID NOs: 66, 67 and 68 and a light chain variable region comprising the complementarity determining regions of SEQ ID NOs: 70, 71 and 72 (eg, SEQ ID NO: 69 The heavy chain variable region and the light chain variable region of SEQ ID NO: 73).
  • an antibody comprising a heavy chain variable region comprising the complementarity determining regions of SEQ ID NOs: 74, 75 and 76 and a light chain variable region comprising the complementarity determining regions of SEQ ID NOs: 78, 79 and 80 (eg, SEQ ID NO: 77 And a light chain variable region of SEQ ID NO: 81).
  • amino acid sequences shown in SEQ ID NOs: 6, 7 and 8, and SEQ ID NOs: 16, 17 and 18 are CDR1, CDR2 and CDR3 of heavy chain variable regions derived from mouse antibodies, respectively, and SEQ ID NOs: 10, 11 And 12, SEQ ID NOs: 20, 21, and 22, and SEQ ID NOs: 50, 51, and 52 are CDR1, CDR2, and CDR3 of the light chain variable region derived from a mouse antibody, respectively.
  • the amino acid sequences shown in SEQ ID NOs: 55, 56 and 57, SEQ ID NOs: 66, 67 and 68, and SEQ ID NOs: 74, 75 and 76 are CDR1, CDR2 and CDR3 of heavy chain variable regions derived from chicken antibodies.
  • amino acid sequences shown in 59, 60 and 61, SEQ ID NOs: 59, 64 and 61, SEQ ID NOs: 70, 71 and 72, and SEQ ID NOs: 78, 79 and 80 are CDR1, CDR2 and CDR3 of light chain variable regions derived from chicken antibodies. is there.
  • the humanized antibody, chimeric antibody, single chain antibody or bispecific antibody of the present invention is, for example, the following antibody.
  • the antibody (a) will be exemplified, but the same may be applied to the other antibodies (b) to (g).
  • variable region of the heavy chain comprises the amino acid sequence of SEQ ID NOs: 6, 7 and 8 and the amino acid sequence of the framework region derived from a human antibody
  • variable region of the light chain is the amino acid of SEQ ID NOs: 10, 11 and 12
  • An antibody comprising a sequence and an amino acid sequence of a framework region derived from a human antibody.
  • variable region of the heavy chain comprises the amino acid sequence of SEQ ID NOs: 6, 7 and 8 and the amino acid sequence of the framework region derived from a human antibody
  • constant region of the heavy chain comprises the amino acid sequence derived from a human antibody
  • light chain variable region comprises the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 10, 11 and 12 and the framework region derived from a human antibody
  • light chain constant region comprises the amino acid sequence derived from a human antibody. antibody.
  • variable region of the heavy chain comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 9
  • the constant region of the heavy chain comprises the amino acid sequence derived from a human antibody
  • variable region of the light chain comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 13
  • An antibody comprising a light chain constant region comprising an amino acid sequence derived from a human antibody.
  • human IgG1 heavy chain constant region has registration number J00228, human IgG2 Registration number J00230 for the heavy chain constant region, registration number X03604 for the human IgG3 heavy chain constant region, registration number K01316 for the human IgG4 heavy chain constant region, registration numbers V00557, X64135, X64133, etc. for the human light chain kappa constant region
  • sequences such as registration numbers X64132 and X64134 can be referred to.
  • the above antibody preferably has cytotoxic activity, and can thereby exert an antitumor effect.
  • a hybridoma capable of producing another human antibody or non-human animal antibody (eg, mouse antibody) against human CAPRIN-1 is prepared, and the monoclonal antibody produced by the hybridoma is recovered, and immunological binding to human CAPRIN-1 and It is determined whether or not the antibody is the target antibody using the cytotoxic activity as an index. After identifying the target monoclonal antibody-producing hybridoma, DNAs encoding the variable regions of the heavy and light chains of the target antibody were prepared from the hybridoma and sequenced as described above. Use for production.
  • the affinity constant Ka (k on / k off ) of the antibody of the present invention for the CAPRIN-1 protein or a fragment thereof is preferably at least 10 7 M ⁇ 1 , at least 10 8 M ⁇ 1 , at least 5 ⁇ 10 8 M ⁇ . 1 , at least 10 9 M ⁇ 1 , at least 5 ⁇ 10 9 M ⁇ 1 , at least 10 10 M ⁇ 1 , at least 5 ⁇ 10 10 M ⁇ 1 , at least 10 11 M ⁇ 1 , at least 5 ⁇ 10 11 M ⁇ 1 , At least 10 12 M ⁇ 1 , or at least 10 13 M ⁇ 1 .
  • the antibody of the present invention can be conjugated with an antitumor agent.
  • the bond between the antibody and the antitumor agent is a group reactive with an amino group, carboxyl group, hydroxy group, thiol group, etc. (for example, succinate imidyl group, formyl group, 2-pyridyldithio group, maleimidyl group, alkoxycarbonyl group). , A hydroxy group, etc.).
  • antitumor agents include the following antitumor agents known in the literature, such as paclitaxel, doxorubicin, daunorubicin, cyclophosphamide, methotrexate, 5-fluorouracil, thiotepa, busulfan, improsulfan, piperosulfan, benzodopa (benzodopa) ), Carbocone, methredopa, uredopa, uretopa, altreamine, triethylenemelamine, triethylenephosphoramide, triethylenethiophosphoramide, trimethylolothramine , Camptothecin, bryostatin, calistatin ( allystatin), cryptophycin 1, cryptophycin 8, dolastatin, duocarmycin, eleuterbin, panclastatin, sarcodictin, spongestatin, chlorambucil, chloronaphazine, cholophosphamide, estram Ifosfamide, mechlore
  • a higher therapeutic effect can be obtained by co-administering the antibody of the present invention and an antitumor agent.
  • This technique can be applied to cancer patients expressing CAPRIN-1 either before or after surgery. In particular, after surgery, cancer recurrence and longer survival can be obtained for cancers expressing CAPRIN-1, which have been treated with an antitumor agent alone.
  • antitumor agents used in combination administration with the antibody of the present invention include the following antitumor agents known in the literature, such as paclitaxel, doxorubicin, daunorubicin, cyclophosphamide, methotrexate, 5-fluorouracil, thiotepa, Busulfan, Improsulfan, Piposulfan, Benzodopa, Carbocon, Metredopa, Uredopa, Alteramine, Triethylenemelamine, Triethylenephosphoramide, Triethylenethiophosphoramide Trimethylolomeramine, bratacin, bratacinone, camptocete , Bryostatin, callystatin, cryptophysin 1, cryptophycin 8, dolastatin, duocarmycin, eleuterbin, panclatistatin, sarcodictin, spongestatin, chloramphazine, chloronaphazine, cholophosphamide ( chlorophosphamide), estramustine, pac
  • the antibodies of the present invention include radioactive substances such as 211 At, 131 I, 125 I, 90 Y, 186 Re, 188 Re, 153 SM, 212 Bi, 32 P, 175 Lu, 176 Lu, which are known in the literature. It is also possible to combine isotopes. It is desirable that the radioisotope is effective for tumor treatment and diagnosis. Such a radioisotope is also included in the antitumor agent in the present invention.
  • the antibody of the present invention uses the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 5 as an epitope.
  • One method for confirming the epitope for the antibody of the present invention is to immobilize the polypeptide of SEQ ID NO: 5 (epitope) on a plate and evaluate the reactivity of the antibody against this epitope.
  • the antibody of the present invention is allowed to react with a plate obtained by reacting and immobilizing the polypeptide of SEQ ID NO: 5 on a plate with an electrophilic functional group via a spacer such as oligoethylene glycol, and then reacted with HRP (Horseadish).
  • the reactivity of the antibody can be evaluated (the epitope of the antibody of the present invention can be confirmed) by reacting with a secondary antibody that binds to the antibody of the present invention labeled with Peroxidase) or the like.
  • the polypeptide of SEQ ID NO: 5 to be immobilized on the plate may be the present sequence itself or a partly modified polypeptide (N-terminal residue or C-terminal residue may contain several arbitrary amino acids or proteins such as KLH).
  • the modified MAP protein or a modified MAP protein or the like may be used, and the antibody of the present invention may be bound to any of these peptides.
  • the antibody of the present invention may not react with the polypeptide of SEQ ID NO: 5 by the above method (epitope cannot be confirmed).
  • the antigen-antibody complex is obtained by immunoprecipitation by reacting the antigen with the antibody under a solution condition in which the antigen and the antibody are likely to bind as described in Example 2, and then the portion bound to the antibody.
  • the epitope of the antibody of the present invention can be confirmed by separating the polypeptide and examining its amino acid sequence.
  • the epitope to which the antibody of the present invention reacts can be confirmed by the above method.
  • the anti-tumor effect on CAPRIN-1-expressing cancer cells by the anti-CAPRIN-1 antibody used in the present invention is considered to occur by the following mechanism: effector cell antibody-dependent cytotoxicity (ADCC) of CAPRIN-1-expressing cells And complement dependent cytotoxicity (CDC) of CAPRIN-1-expressing cells.
  • ADCC effector cell antibody-dependent cytotoxicity
  • CDC complement dependent cytotoxicity
  • the antitumor effect by the above mechanism correlates with the number of target molecules to which an antibody expressed on the cell surface of cancer cells binds (Niwa R., Clinical Cancer Research 2005 Mar 15; 11 ( 6): 2327-2336).
  • the number of target molecules expressed on the cell surface of cancer cells can be examined using an existing measurement kit that can measure the number of molecules on the cell surface.
  • the number of target molecules to which the antibody binds is caused to react with cancer cells using the antibody against the target molecule as a primary antibody, and with a calibration curve bead whose molecular number is known in advance, and with a fluorescently labeled anti-primary antibody,
  • the average fluorescence intensity of the sample can be measured, and a calibration curve can be obtained to know the number of target molecules.
  • the activity of the anti-CAPRIN-1 antibody used in the present invention is evaluated by the above-mentioned ADCC activity or CDC activity against cancer cells expressing CAPRIN-1 in vitro, as specifically shown in the Examples below. It can be evaluated by measuring or examining the number of CAPRIN-1 molecules expressed on the cell surface of cancer cells when the anti-CAPRIN-1 antibody of the present invention is used as a primary antibody.
  • the anti-CAPRIN-1 antibody used in the present invention binds to the CAPRIN-1 protein on cancer cells and exhibits an antitumor action due to the above activity, and thus is considered useful for the treatment or prevention of cancer. That is, the present invention provides a pharmaceutical composition for treating and / or preventing cancer comprising an anti-CAPRIN-1 antibody as an active ingredient.
  • the anti-CAPRIN-1 antibody is used for the purpose of administering it to the human body (antibody treatment), it is preferable to use a human antibody or a humanized antibody in order to reduce immunogenicity.
  • the antibody of the present invention has a high binding affinity
  • the binding constant (affinity constant) Ka (k on / k off ) is preferably at least 10 7 M ⁇ 1 , at least 10 8 M ⁇ 1 , At least 5 ⁇ 10 8 M ⁇ 1 , at least 10 9 M ⁇ 1 , at least 5 ⁇ 10 9 M ⁇ 1 , at least 10 10 M ⁇ 1 , at least 5 ⁇ 10 10 M ⁇ 1 , at least 10 11 M ⁇ 1 , at least 5
  • it has ⁇ 10 11 M ⁇ 1 , at least 10 12 M ⁇ 1 , or at least 10 13 M ⁇ 1 .
  • the number of CAPRIN-1 molecules is the same as the number of CAPRIN-1 molecules per cancer cell to which the antibody binds.
  • the number is 10 4 or more, preferably 10 5 or more.
  • a tumor (cancer cell) having a large number of CAPRIN-1 molecules on the cell surface is particularly preferred as a cancer to which the antibody of the present invention is administered.
  • ⁇ Binding to antigen-expressing cells The ability of an antibody to bind to CAPRIN-1 can be identified using binding assays such as those described in the Examples, such as ELISA, Western blotting, immunofluorescence and flow cytometry analysis.
  • Antibodies that recognize CAPRIN-1 are inoculated with tissue obtained from patients during surgery or cell lines expressing CAPRIN-1 naturally or after transfection by immunohistochemistry in a manner well known to those skilled in the art
  • tissue obtained from patients during surgery or cell lines expressing CAPRIN-1 naturally or after transfection by immunohistochemistry in a manner well known to those skilled in the art
  • To test for reactivity with CAPRIN-1 from tissues obtained from animals bearing xenograft tissue, using paraformaldehyde or acetone-fixed cryosections or paraformaldehyde-embedded tissue sections Can do.
  • an antibody reactive to CAPRIN-1 can be stained by various methods. For example, it can be visualized by reacting horseradish peroxidase-conjugated goat anti-mouse antibody, goat anti-rabbit antibody or goat anti-chicken antibody.
  • the target of the pharmaceutical composition for the treatment and / or prevention of cancer of the present invention is not particularly limited as long as it is a cancer (cell) expressing the CAPRIN-1 gene.
  • tumor and cancer refer to malignant neoplasms and are used interchangeably.
  • the target cancer in the present invention is a cancer expressing a gene encoding CAPRIN-1 protein, preferably breast cancer, kidney cancer, pancreatic cancer, colon cancer, lung cancer, brain tumor, stomach cancer, cervical cancer Ovarian cancer, prostate cancer, bladder cancer, esophageal cancer, leukemia, lymphoma, fibrosarcoma, mastocytoma or melanoma.
  • These specific cancers include, for example, breast cancer, complex breast cancer, malignant mixed breast tumor, intraductal papillary carcinoma, lung adenocarcinoma, squamous cell carcinoma, small cell carcinoma, large cell carcinoma, neuroepithelial tissue Tumor glioma, ventricular ependymoma, neuronal tumor, fetal neuroectodermal tumor, schwannoma, neurofibroma, meningioma, chronic lymphocytic leukemia, lymphoma, gastrointestinal type Lymphoma, digestive lymphoma, small to medium cell lymphoma, cecal cancer, ascending colon cancer, descending colon cancer, transverse colon cancer, sigmoid colon cancer, rectal cancer, ovarian epithelial cancer, germ cell tumor, stromal cell tumor, Pancreatic duct cancer, invasive pancreatic duct cancer, adenocarcinoma of pancreatic cancer, acinar cell carcinoma, adenosquamous carcinoma, giant cell tumor,
  • mammals for example, mammals including primates, pet animals, livestock, sport animals, etc., and humans, dogs and cats are particularly preferable.
  • the antibody used in the present invention when used as a pharmaceutical composition, it can be formulated by methods known to those skilled in the art. For example, it can be used parenterally in the form of a sterile solution with water or other pharmaceutically acceptable liquid, or an injection of suspension.
  • a pharmacologically acceptable carrier or medium specifically, sterile water or physiological saline, vegetable oil, emulsifier, suspension agent, surfactant, stabilizer, flavoring agent, excipient, vehicle, preservative
  • a pharmaceutical preparation by combining with a binder or the like as appropriate and mixing in a unit dosage form generally required for pharmaceutical practice. The amount of active ingredient in these preparations is such that an appropriate dose within the indicated range can be obtained.
  • a sterile composition for injection can be formulated in accordance with normal pharmaceutical practice using a vehicle such as distilled water for injection.
  • Aqueous solutions for injection include, for example, isotonic solutions containing physiological saline, glucose and other adjuvants such as D-sorbitol, D-mannose, D-mannitol and sodium chloride.
  • Suitable solubilizers such as Alcohols, specifically ethanol, polyalcohols such as propylene glycol, polyethylene glycol, nonionic surfactants such as polysorbate 80 (TM), HCO-60 may be used in combination.
  • oily liquid examples include sesame oil and soybean oil, which may be used in combination with benzyl benzoate or benzyl alcohol as a solubilizing agent.
  • oily liquid examples include sesame oil and soybean oil, which may be used in combination with benzyl benzoate or benzyl alcohol as a solubilizing agent.
  • buffer for example, phosphate buffer, sodium acetate buffer, a soothing agent, for example, procaine hydrochloride, stabilizer, for example, benzyl alcohol, phenol, antioxidant.
  • the prepared injection solution is usually filled into a suitable ampoule.
  • Administration is oral or parenteral, preferably parenteral administration. Specific examples include injection, nasal administration, pulmonary administration, and transdermal administration. As an example of the injection form, it can be administered systemically or locally by, for example, intravenous injection, intramuscular injection, intraperitoneal injection, subcutaneous injection, or the like.
  • the administration method can be appropriately selected depending on the age, weight, sex, symptoms, etc. of the patient.
  • the dosage of the pharmaceutical composition containing the antibody or the polynucleotide encoding the antibody can be selected, for example, in the range of 0.0001 mg to 1000 mg per kg body weight. Alternatively, for example, the dose can be selected in the range of 0.001 to 100,000 mg / body per patient, but is not necessarily limited to these values.
  • the dose and administration method vary depending on the weight, age, sex, symptoms, etc. of the patient, but can be appropriately selected by those skilled in the art.
  • Cancer preferably breast cancer, kidney cancer, pancreatic cancer, colon cancer, lung cancer, brain tumor, stomach cancer, cervical cancer, ovarian cancer, by administering to a subject the above pharmaceutical composition containing the antibody of the present invention or a fragment thereof, Prostate cancer, bladder cancer, esophageal cancer, leukemia, lymphoma, fibrosarcoma, mastocytoma or melanoma can be treated and / or prevented.
  • a method for treating and / or preventing cancer comprising administering the pharmaceutical composition of the present invention to a subject in combination with an antitumor agent or a pharmaceutical composition containing an antitumor agent as exemplified above.
  • the antibody or fragment thereof of the present invention and the antitumor agent can be administered to a subject simultaneously or separately.
  • any pharmaceutical composition may be earlier or later, and the administration interval, dosage, administration route and frequency of administration can be appropriately selected by a specialist.
  • Another pharmaceutical dosage form to be administered at the same time includes, for example, a pharmaceutical composition obtained by mixing the antibody of the present invention or a fragment thereof and an antitumor agent in a pharmacologically acceptable carrier (or medium) and formulating it. Shall be included. Further, for any of the above pharmaceutical compositions and dosage forms containing an antitumor agent, the formulation, formulation, administration route, dose, cancer, etc. for the pharmaceutical composition and dosage form containing the antibody of the present invention The explanation can be applied.
  • the present invention provides a pharmaceutical combination for the treatment and / or prevention of cancer comprising the pharmaceutical composition of the present invention and a pharmaceutical composition comprising an antitumor agent as exemplified above, and administering the same
  • a method for treating and / or preventing cancer is also provided.
  • the present invention also provides a pharmaceutical composition for treating and / or preventing cancer comprising the antibody of the present invention or a fragment thereof and an antitumor agent together with a pharmacologically acceptable carrier.
  • the present invention further provides a DNA encoding the above-described antibody of the present invention or a fragment thereof (antibody-binding fragment).
  • DNA may be DNA encoding the heavy chain and / or light chain of the antibody, or may be DNA encoding the heavy chain variable region and / or light chain variable region of the antibody. .
  • DNA may also be DNA encoding each complementarity determining region of the antibody, alone or in combination.
  • Such DNA is, for example, in the case of the antibody (a), a DNA encoding a heavy chain variable region comprising a base sequence encoding the amino acid sequence of SEQ ID NO: 6, 7 and 8, SEQ ID NO: 10, 11 and 12 DNA encoding a light chain variable region including a base sequence encoding an amino acid sequence, and the like.
  • the sequences encoding the other regions of the antibody are It may be a sequence derived from another antibody.
  • other antibodies include antibodies derived from organisms other than humans, but those derived from humans are preferable from the viewpoint of reducing side effects. That is, in the above DNA, the regions encoding the heavy chain and light chain framework regions and the constant regions preferably include a base sequence encoding a corresponding amino acid sequence derived from a human antibody.
  • DNA encoding the antibody of the present invention is, for example, in the case of the antibody (a), a DNA encoding a heavy chain variable region comprising a base sequence encoding the amino acid sequence of SEQ ID NO: 9, a light chain variable
  • the region encoding the region includes DNA containing a base sequence encoding the amino acid sequence of SEQ ID NO: 13.
  • an example of the base sequence encoding the amino acid sequence of SEQ ID NO: 9 is the base sequence of SEQ ID NO: 14.
  • An example of the base sequence encoding the amino acid sequence of SEQ ID NO: 13 is the base sequence of SEQ ID NO: 15.
  • the regions encode the corresponding amino acid sequences derived from human antibodies (the amino acid sequences of the heavy chain and light chain constant regions). Preferably it comprises a sequence.
  • the DNA of these antibodies can be obtained, for example, by the above method or the following method.
  • total RNA is prepared from a hybridoma producing the antibody of the present invention using a commercially available RNA extraction kit, and cDNA is synthesized by reverse transcriptase using a random primer or the like.
  • the cDNA encoding the antibody is amplified by a PCR method using oligonucleotides having sequences conserved in the variable regions of the known mouse antibody heavy chain gene and light chain gene as primers.
  • the sequence encoding the constant region can be obtained by amplifying a known sequence by the PCR method.
  • the base sequence of DNA can be determined by a conventional method by incorporating it into a sequencing plasmid or phage.
  • the present invention further provides the following polypeptides and DNAs related to the antibodies (a) to (g).
  • polypeptide comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 53, SEQ ID NO: 62, SEQ ID NO: 65, SEQ ID NO: 73 and SEQ ID NO: 81, and DNA encoding the polypeptide (eg, sequence No. 15, DNA containing the nucleotide sequences of SEQ ID NO: 25 and SEQ ID NO: 54).
  • polypeptides and DNA can be prepared using gene recombination techniques as described above.
  • CAPRIN-1 partial polypeptide comprising the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 5 or an amino acid sequence having 80% or more sequence identity with the amino acid sequence.
  • the antibody or fragment thereof according to any one of (1) to (3) above, which is a human antibody, humanized antibody, chimeric antibody, single chain antibody or multispecific antibody.
  • a heavy chain variable region comprising the complementarity determining regions of SEQ ID NOs: 6, 7 and 8 and a light chain variable region comprising the complementarity determining regions of SEQ ID NOs: 10, 11 and 12, and a CAPRIN-1 protein
  • the antibody or fragment thereof according to any one of (1) to (4) above, which has immunological reactivity with.
  • (6) a heavy chain variable region comprising the complementarity determining regions of SEQ ID NOs: 16, 17, and 18 and a light chain variable region comprising the complementarity determining regions of SEQ ID NOs: 20, 21, and 22, and a CAPRIN-1 protein
  • the antibody or fragment thereof according to any one of (1) to (4) above, which has immunological reactivity with.
  • a heavy chain variable region comprising the complementarity determining regions of SEQ ID NOs: 6, 7 and 8 and a light chain variable region comprising the complementarity determining regions of SEQ ID NOs: 50, 51 and 52, and a CAPRIN-1 protein
  • the antibody or fragment thereof according to any one of (1) to (4) above, which has immunological reactivity with.
  • a heavy chain variable region comprising the complementarity determining regions of SEQ ID NOs: 55, 56 and 57 and a light chain variable region comprising the complementarity determining regions of SEQ ID NOs: 59, 60 and 61, and a CAPRIN-1 protein
  • the antibody or fragment thereof according to any one of (1) to (4) above, which has immunological reactivity with.
  • a heavy chain variable region comprising the complementarity determining regions of SEQ ID NOs: 74, 75 and 76 and a light chain variable region comprising the complementarity determining regions of SEQ ID NOs: 78, 79 and 80, and a CAPRIN-1 protein
  • the antibody or fragment thereof according to any one of (1) to (4) above, which has immunological reactivity with.
  • a pharmaceutical composition for treating and / or preventing cancer comprising the antibody or fragment thereof according to any one of (1) to (12) as an active ingredient.
  • the cancer is breast cancer, renal cancer, pancreatic cancer, colon cancer, lung cancer, brain tumor, stomach cancer, cervical cancer, ovarian cancer, prostate cancer, bladder cancer, esophageal cancer, leukemia, lymphoma, fibrosarcoma, mastocytoma or
  • a combined pharmaceutical for treatment and / or prevention of cancer comprising the pharmaceutical composition according to (13) or (14) above and a pharmaceutical composition containing an antitumor agent.
  • Example 1 CAPRIN-1 Expression Analysis in Each Tissue Expression of the CAPRIN-1 gene in dogs and human normal tissues and various cell lines was examined by RT-PCR according to Example 1 (4) of WO2010 / 016526. As a result, strong expression was observed in testis in healthy dog tissues, while expression was observed in canine breast cancer and adenocarcinoma tissues.
  • Example 2 Production of Mouse Monoclonal Antibody against CAPRIN-1 (1) Production of Mouse Monoclonal Antibody # 1 Equivalent amount of 100 ⁇ g of human CAPRIN-1 protein having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 2 prepared in Example 3 of WO2010 / 016526 It was mixed with MPL + TDM adjuvant (manufactured by Sigma), and this was used as an antigen solution per mouse. The antigen solution was administered into the abdominal cavity of a 6-week-old Balb / cc mouse (Japan SLC) and administered 7 times per week to complete immunization.
  • MPL + TDM adjuvant manufactured by Sigma
  • the obtained spleen cells and mouse myeloma cells SP2 / 0 purchased from ATCC were mixed at a ratio of 10: 1, and 200 ⁇ l of RPMI 1640 medium containing 10% FBS heated to 37 ° C. and PEG 1500 (Boehringer) PEG solution prepared by mixing 800 ⁇ l was added and allowed to stand for 5 minutes for cell fusion.
  • the cells were suspended in 150 ml of RPMI 1640 medium (HAT selective medium) containing 15% FBS to which 2% equivalent of Gibco's HAT solution was added, and a 96-well plate (Nunk) 100 ⁇ l per well of (made) was seeded on 15 plates.
  • RPMI 1640 medium HAT selective medium
  • Nunk 96-well plate
  • Hybridomas were selected using as an index the binding affinity of the antibody produced by the prepared hybridomas to the CAPRIN-1 protein.
  • 100 ⁇ l of 1 ⁇ g / ml of the CAPRIN-1 protein solution prepared in Example 3 of WO2010 / 016526 was added per well of a 96-well plate, and left at 4 ° C. for 18 hours. Each well was washed 3 times with PBS-T, and then added with 400 ⁇ l of 0.5% Bovine Serum Albumin (BSA) solution (manufactured by Sigma) per well and allowed to stand at room temperature for 3 hours.
  • BSA Bovine Serum Albumin
  • hybridomas were added to the plate so that the number was 0.5 per well of the 96-well plate and cultured. One week later, hybridomas forming a single colony in the well were observed. The cells in these wells were further cultured, and hybridomas were selected using the binding affinity of the antibody produced by the cloned hybridomas to the CAPRIN-1 protein as an index. 100 ⁇ l of 1 ⁇ g / ml of the CAPRIN-1 protein solution prepared in Example 3 of WO2010 / 016526 was added per well of a 96-well plate, and left at 4 ° C. for 18 hours.
  • TMB substrate solution manufactured by Thermo
  • 100 ⁇ l of TMB substrate solution 100 ⁇ l was added and allowed to stand for 15 to 30 minutes for color reaction.
  • 100 ⁇ l of 1N sulfuric acid was added per well to stop the reaction, and absorbance values at 450 nm and 595 nm were measured using an absorptiometer.
  • absorbance values at 450 nm and 595 nm were measured using an absorptiometer.
  • those showing reactivity on the cell surface of breast cancer cells expressing CAPRIN-1 were selected.
  • 10 6 human breast cancer cell lines MDA-MB-231V were centrifuged in a 1.5 ml microcentrifuge tube, and 100 ⁇ l of the culture supernatant of each hybridoma was added thereto, and 1 1 on ice. Let stand for hours. After washing with PBS, FITC-labeled goat anti-mouse IgG antibody (manufactured by Invitrogen) diluted 500-fold with PBS containing 0.1% FBS was added and allowed to stand on ice for 1 hour.
  • the fluorescence intensity was measured with a FACS caliber from Becton Dickinson.
  • the same operation as described above was performed using a serum of 6-week-old Balb / c mice that had not been treated in place of the antibody diluted 500-fold with a medium for hybridoma culture, and used as a control.
  • one monoclonal antibody (# 1) having a higher fluorescence intensity than the control, ie, reacting with the breast cancer cell surface was selected.
  • CAPRIN-1 epitope recognized by anti-CAPRIN-1 monoclonal antibody # 1 CAPRIN recognized using monoclonal antibody # 1 against CAPRIN-1 which reacts with the cell surface of cancer cells obtained in (1) ⁇ 1 epitope region was identified.
  • 100 ⁇ g of the CAPRIN-1 recombinant protein was dissolved in a lysis buffer containing no protein inhibitor and reacted with mouse monoclonal antibody # 1. Trypsin or chymotrypsin digestion enzyme was added to the solution, and a digestion reaction was performed at an appropriate temperature. After the reaction, protein G sepharose carrier was added and reacted, and the carrier was precipitated by centrifugation.
  • the peptide contained in the sample was detected by MS / MS analysis, and as a result, the partial sequence of CAPRIN-1 recognized by anti-CAPRIN-1 monoclonal antibody # 1 consists of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 5. The polypeptide has been identified.
  • each antibody contained in the culture supernatant of the prepared hybridoma and the CAPRIN-1 protein solution 1 ⁇ g / ml prepared in Example 3 of WO2010 / 016526 or the amino acid sequence of SEQ ID NO: 5 used as an immunogen and the carrier protein Antibodies were selected based on the reactivity of KLH with the fusion protein as an index.
  • 100 ⁇ l of a CAPRIN-1 protein solution 1 ⁇ g / ml prepared in Example 3 of WO2010 / 016526, 30 ⁇ g / ml of a fusion protein of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 5 and carrier protein KLH was added to each well of a 96-well plate. It left still at 4 degreeC for 18 hours.
  • Block Ace DS Pharma Biomedical solution was added per well and allowed to stand at room temperature for 3 hours. After removing the solution and washing the wells with PBS-T, 100 ⁇ l of each hybridoma culture supernatant obtained above was added per well and allowed to stand at room temperature for 2 hours. After washing each well with PBS-T, 100 ⁇ l of HRP-labeled anti-mouse IgG (H + L) antibody (manufactured by Invitrogen) diluted 5000 times with PBS was added per well and allowed to stand at room temperature for 1 hour.
  • HRP-labeled anti-mouse IgG (H + L) antibody manufactured by Invitrogen
  • TMB substrate solution manufactured by Thermo
  • 100 ⁇ l of TMB substrate solution manufactured by Thermo
  • 100 ⁇ l of 1N sulfuric acid was added per well to stop the reaction, and absorbance values at 450 nm and 595 nm were measured using an absorptiometer. As a result, a hybridoma producing an antibody having a high absorbance value was selected.
  • hybridomas were added to the plate so that the number was 0.3 per well of the 96-well plate and cultured. One week later, hybridomas forming a single colony in the well were observed. The cells of these wells are further cultured, and using the same method as described above using the binding affinity for the amino acid sequence of SEQ ID NO: 5 of the partial sequence of CAPRIN-1 of the antibody produced by the cloned hybridoma as an index, SEQ ID NO: A hybridoma producing an antibody against 5 amino acids was obtained.
  • the monoclonal antibodies produced by the obtained hybridomas those showing reactivity on the surface of breast cancer cells expressing CAPRIN-1 were selected.
  • 10 6 human breast cancer cell lines MDA-MB-231V were centrifuged in a 1.5 ml microcentrifuge tube, and 100 ⁇ l of the culture supernatant of each hybridoma was added thereto, and 1 1 on ice. Let stand for hours. After washing with PBS, FITC-labeled goat anti-mouse IgG antibody (manufactured by Invitrogen) diluted 500-fold with PBS containing 0.1% FBS was added and allowed to stand on ice for 1 hour.
  • mouse monoclonal antibodies # 2 and # 3 specifically react with the amino acid sequence of SEQ ID NO: 5, which is a partial sequence of CAPRIN-1 as an immunogen.
  • a solution containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 5 and a partial sequence of CAPRIN-1 not containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 5 prepared in a 0.1 M aqueous sodium carbonate solution at 30 ⁇ g / ml were respectively added to the 96-well plate immobilizer amino for ELISA (Nunk 100 ⁇ g / ml each, and allowed to react overnight at 4 ° C. to bind the peptides to the wells.
  • a 0.1 M sodium carbonate aqueous solution containing 10 mM ethanolamine was added to the well bound with the peptide and allowed to stand at room temperature for 1 hour. After removing the solution in the well, the plate was washed with PBS-T, and then 400 ⁇ l of Block Ace solution was added per well, and left at room temperature for 3 hours. After removing the solution in the well and washing with PBS-T, 50 ⁇ L of the culture supernatant containing mouse monoclonal antibody # 2 was added per well and allowed to react at room temperature for 1 hour.
  • the plate was washed with PBS-T, and 50 ⁇ l of HRP-labeled anti-mouse IgG (H + L) antibody (manufactured by Invitrogen) diluted 5000-fold with a block ace solution was added per well and allowed to stand at room temperature for 1 hour. After wells were washed thoroughly with PBS-T, 100 ⁇ l of TMB substrate solution (Thermo) was added per well and allowed to stand for 5 to 30 minutes for color reaction. After color development, 100 ⁇ l of 1N sulfuric acid per well was added to stop the reaction, and absorbance values at 450 nm and 595 nm were measured using an absorptiometer.
  • HRP-labeled anti-mouse IgG (H + L) antibody manufactured by Invitrogen
  • Example 3 Production of Chicken Monoclonal Antibody against CAPRIN-1
  • a chicken-derived monoclonal antibody using a fusion protein of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 5 identified in Example 2 (2) and the carrier protein KLH (Keyhole limpet haemoyanin) as an immunogen Antibodies were made. 300 ⁇ g of the above immunogen was mixed with an equal volume of Freund's complete adjuvant to obtain an antigen solution per chicken. Immunization was completed by administering the antigen solution into the abdominal cavity of a 7-week-old chicken and administering it 7 times every 4 weeks.
  • the obtained spleen cells were mixed with chicken myeloma cells lacking the light chain established by transformation from chickens using avian reticuloendotheliosis virus at a ratio of 5: 1.
  • a PEG solution prepared by mixing 200 ⁇ l of IMDM medium containing 10% FBS heated to 0 ° C.
  • Block Ace DS Pharma Biomedical solution was added per well and allowed to stand at room temperature for 3 hours. After removing the solution and washing the wells with PBS-T, 50 ⁇ l of each culture supernatant of the hybridoma obtained above was added per well and allowed to stand at room temperature for 1 hour. After washing each well with PBS-T, 100 ⁇ l of HRP-labeled anti-chicken IgY antibody (KPL) diluted 1000-fold with PBS was added and allowed to stand at room temperature for 1 hour. After the wells were washed 3 times with PBS-T, 50 ⁇ l of OPD substrate solution was added per well and allowed to stand for 5 to 15 minutes to perform a color reaction.
  • KPL HRP-labeled anti-chicken IgY antibody
  • the selected hybridomas were added to the plate so that the number was 0.5 per well of the 96-well plate and cultured. One week later, hybridomas forming a single colony in the well were observed. The cells of these wells are further cultured, and the binding protein of the antibody produced by the cloned hybridoma binds to the CAPRIN-1 protein or the fusion protein of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 5 used as an immunogen and the carrier protein BSA. A chicken monoclonal antibody was obtained using the reactivity as an index.
  • Example 4 Characterization of Selected Monoclonal Antibody (1) Characterization of Mouse Monoclonal Antibody Regarding the mouse monoclonal antibody obtained in Example 2, the gene encoding the variable region was determined according to the method described in Example 5 of WO2010 / 016526. An amplified fragment was obtained, and the gene sequence and its amino acid sequence were analyzed. The gene sequence encoding the heavy chain variable region of the mouse-derived monoclonal antibody # 1 obtained as a result is SEQ ID NO: 24, the amino acid sequence is SEQ ID NO: 19, and the gene sequence encoding the light chain variable region is SEQ ID NO: 25. And the amino acid sequence is shown in SEQ ID NO: 23.
  • the gene sequence encoding the heavy chain variable region of the obtained mouse-derived monoclonal antibody # 2 is represented by SEQ ID NO: 14, the amino acid sequence is represented by SEQ ID NO: 9, and the gene sequence encoding the light chain variable region is represented by SEQ ID NO: 15. And the amino acid sequence is shown in SEQ ID NO: 13.
  • the gene sequence encoding the heavy chain variable region of the obtained mouse-derived monoclonal antibody # 3 is represented by SEQ ID NO: 14, the amino acid sequence is represented by SEQ ID NO: 9, and the gene sequence encoding the light chain variable region is represented by SEQ ID NO: 54. And the amino acid sequence is shown in SEQ ID NO: 53.
  • mouse monoclonal antibody # 1 includes the heavy chain variable region of SEQ ID NO: 19 and the light chain variable region of SEQ ID NO: 23, and CDRs 1 to 3 in the heavy chain variable region are SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17, It was confirmed that CDR1 to 3 in the light chain variable region consisted of amino acid sequences of SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 21, and SEQ ID NO: 22, respectively.
  • mouse monoclonal antibody # 2 includes the heavy chain variable region of SEQ ID NO: 9 and the light chain variable region of SEQ ID NO: 13, of which CDRs 1 to 3 in the heavy chain variable region are SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7, It consisted of the amino acid sequence of No.
  • mouse monoclonal antibody # 3 comprises a heavy chain variable region of SEQ ID NO: 9 and a light chain variable region of SEQ ID NO: 53, of which CDR1-3 in the heavy chain variable region are SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7, It consists of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 8, and CDRs 1 to 3 in the light chain variable region were confirmed to consist of the amino acid sequences of SEQ ID NO: 50, SEQ ID NO: 51, and SEQ ID NO: 52, respectively.
  • Example 3 Characterization of chicken monoclonal antibody
  • the chicken monoclonal antibodies obtained in Example 3 can be varied according to the method described in Example 4 of WO2011 / 096519.
  • An amplified fragment of the gene encoding the region was obtained, and the gene and its amino acid sequence were analyzed.
  • the amino acid sequence of the heavy chain variable region of the resulting chicken monoclonal antibody # 1 is shown in SEQ ID NO: 58, and the amino acid sequence of the light chain variable region is shown in SEQ ID NO: 62.
  • the amino acid sequence of the heavy chain variable region of chicken monoclonal antibody # 2 is shown in SEQ ID NO: 63, and the amino acid sequence of the light chain variable region is shown in SEQ ID NO: 65.
  • the amino acid sequence of the heavy chain variable region of chicken monoclonal antibody # 3 is shown in SEQ ID NO: 69, and the amino acid sequence of the light chain variable region is shown in SEQ ID NO: 73.
  • the amino acid sequence of the heavy chain variable region of chicken monoclonal antibody # 4 is shown in SEQ ID NO: 77, and the amino acid sequence of the light chain variable region is shown in SEQ ID NO: 81.
  • chicken monoclonal antibody # 1 comprises the heavy chain variable region of SEQ ID NO: 58 and the light chain variable region of SEQ ID NO: 62, of which CDRs 1 to 3 in the heavy chain variable region are SEQ ID NO: 55, SEQ ID NO: 56, It was confirmed that CDR1 to 3 in the light chain variable region consisted of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 59, SEQ ID NO: 60, and SEQ ID NO: 61, respectively.
  • Chicken monoclonal antibody # 2 comprises the heavy chain variable region of SEQ ID NO: 63 and the light chain variable region of SEQ ID NO: 65, of which CDRs 1 to 3 in the heavy chain variable region are SEQ ID NO: 55, SEQ ID NO: 56, SEQ ID NO: 57, respectively. It was confirmed that CDRs 1 to 3 in the light chain variable region consisted of the amino acid sequences of SEQ ID NO: 59, SEQ ID NO: 64, and SEQ ID NO: 61, respectively.
  • Chicken monoclonal antibody # 3 comprises the heavy chain variable region of SEQ ID NO: 69 and the light chain variable region of SEQ ID NO: 73, of which CDR1-3 in the heavy chain variable region are SEQ ID NO: 66, SEQ ID NO: 67, SEQ ID NO: 68, respectively. It was confirmed that CDRs 1 to 3 in the light chain variable region consisted of the amino acid sequences of SEQ ID NO: 70, SEQ ID NO: 71, and SEQ ID NO: 72, respectively.
  • Chicken monoclonal antibody # 4 includes the heavy chain variable region of SEQ ID NO: 77 and the light chain variable region of SEQ ID NO: 81, of which CDRs 1 to 3 in the heavy chain variable region are SEQ ID NO: 74, SEQ ID NO: 75, SEQ ID NO: 76, respectively. It was confirmed that CDRs 1 to 3 in the light chain variable region consisted of the amino acid sequences of SEQ ID NO: 78, SEQ ID NO: 79, and SEQ ID NO: 80, respectively.
  • Example 5 Production of Polyclonal Antibody against CAPRIN-1 Partial Polypeptide Present on Cancer Cell Surface
  • anti-CAPRIN-1 monoclonal antibody Polypeptide comprising the epitope regions of # 1, # 2 and # 3 (CAPRIN-1-derived peptide represented by SEQ ID NO: 5), amino acid residue number 50-98 region in the amino acid sequence of human CAPRIN-1 of SEQ ID NO: 2 And a polypeptide of the amino acid residue number 233-305 region in SEQ ID NO: 2 were synthesized.
  • each 1 mg of these peptides was mixed with an equal volume of incomplete Freund's adjuvant (IFA) solution as an antigen, and this was administered subcutaneously to rabbits 4 times every 2 weeks. Thereafter, blood was collected to obtain an antiserum containing each polyclonal antibody. Further, these antisera were purified using a protein G carrier (manufactured by GE Healthcare Bioscience) and replaced with PBS to obtain a polyclonal antibody against a CAPRIN-1 partial polypeptide present on the surface of cancer cells. Further, a serum obtained by purifying rabbit serum not administered with an antigen in the same manner as described above using a protein G carrier was used as a control antibody.
  • IFA incomplete Freund's adjuvant
  • Example 6 Expression analysis of CAPRIN-1 protein on cancer cells
  • 8 types of human breast cancer cell lines ZR75-1, MCF7, T47D, SK-BR-3, MDA
  • -MB-157, BT-20, MDA-MB-231V, MRK-nu-1 were examined for whether CAPRIN-1 protein was expressed on the cell surface.
  • 5 ⁇ 10 5 cells of each human breast cancer cell line in which gene expression was observed were centrifuged in a 1.5 ml microcentrifuge tube.
  • the same operation as described above was performed using the control antibody prepared as described above in Example 5 instead of the polyclonal antibody against the CAPRIN-1-derived peptide, and used as a control.
  • the fluorescence intensity of the cells to which the anti-CAPRIN-1 antibody was added was 35% or more stronger than that of the control. This confirmed that the CAPRIN-1 protein was expressed on the cell membrane surface of the human cancer cell line.
  • the enhancement rate of the fluorescence intensity is represented by the increase rate of the average fluorescence intensity (MFI value) in each cell, and was calculated by the following calculation formula.
  • renal cancer cell lines Caki-1, Caki-2, A498), bladder cancer cell line (T24), ovarian cancer cell line (SKOV3), lung cancer cell line (QG56) Prostate cancer cell line (PC3), cervical cancer cell line (Hela), fibrosarcoma cell line (HT1080), two brain tumor cell lines (T98G, U87MG), stomach cancer cell line (MNK28), colon cancer cell line (Lovo) )
  • pancreatic cancer cell lines Capan-2, MIAPaCa-2, Panc-1, BxPC-3) were measured for fluorescence intensity, all of the cancer cells were 35% or more stronger than the control.
  • Monoclonal antibody against mouse 1 (mouse monoclonal antibody # 3)
  • the expression of CAPRIN-1 was also
  • Example 7 Immunohistochemical staining (1) Expression of CAPRIN-1 in mice and dog normal tissues
  • Mice (Balb / c, female) and dogs (beagle dog, female) were exsanguinated under ether anesthesia and ketamine / isoflurane anesthesia.
  • each organ stomach, liver, eyeball, thymus, muscle, bone marrow, uterus, small intestine, esophagus, heart, kidney, salivary gland, large intestine, mammary gland, brain, lung, skin, adrenal gland, ovary, pancreas, spleen, bladder )
  • Each organ was cut in PBS and fixed at reflux overnight with 0.1 M phosphate buffer (pH 7.4) containing 4% paraformaldehyde (PFA). The reflux solution is discarded, and the tissue surface of each organ is rinsed with PBS.
  • a PBS solution containing 10% sucrose is placed in a 50 ml centrifuge tube, and each tissue is placed therein and shaken at 4 ° C. for 2 hours using a rotor. That ’s it.
  • the solution was replaced with a PBS solution containing 20% sucrose and allowed to stand at 4 ° C. until the tissue was sunk, and then replaced with a PBS solution containing 30% sucrose and allowed to stand at 4 ° C. until the tissue was sunk.
  • the tissue was removed and the necessary part was cut out with a scalpel.
  • an OCT compound manufactured by Tissue Tek
  • Cryomold is placed on dry ice and rapidly frozen, then sliced into 10-20 ⁇ m using a cryostat (LEICA) and air-dried with a hair dryer for 30 minutes together with the slide glass, and the sliced tissue is placed.
  • a slide glass was prepared.
  • an operation of replacing PBS-T every 5 minutes in a staining bottle filled with PBS-T (physiological saline containing 0.05% Tween 20) was performed three times.
  • mice tissue was MOM mouse Ig blocking reagent (manufactured by VECTASTAIN), and the dog tissue was PBS containing 10% FBS.
  • Each -T solution was placed and allowed to stand at room temperature for 1 hour on a moist chamber.
  • Example 5 the solution prepared in Example 5 that reacts with the surface of cancer cells and is prepared with a polyclonal antibody against the CAPRIN-1-derived peptide (SEQ ID NO: 5) prepared at 10 ⁇ g / ml with a blocking solution is placed on the moist chamber at 4 ° C. Let stand under. After washing with PBS-T three times for 10 minutes, a MOM biotin-labeled anti-IgG antibody (manufactured by VECTASTAIN) diluted 250-fold with a blocking solution was placed and allowed to stand at room temperature for 1 hour in a moist chamber.
  • a MOM biotin-labeled anti-IgG antibody manufactured by VECTASTAIN
  • CAPRIN-1 prepared in Example 5 in the same manner as described above using specimens of various human cancer tissue arrays (manufactured by BIOMAX) embedded in paraffin Immunohistochemical staining using a polyclonal antibody against the derived peptide (SEQ ID NO: 5) was performed. As a result, CAPRIN-1 was expressed in esophageal cancer, colon cancer, rectal cancer, lung cancer, pancreatic cancer, renal cancer, bladder cancer and cervical cancer.
  • Example 8 Production of Human-Mouse Chimeric Monoclonal Antibody Purified after treating with restriction enzymes at both ends of the gene amplified fragment containing the heavy chain variable region of mouse monoclonal antibody # 2 represented by SEQ ID NO: 14 obtained in Example 4 and, already inserted in a conventional manner into already inserted pcDNA4 / myc-His (Invitrogen Corporation) vector H chain constant region of human IgG 1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 48 and leader sequence from a murine antibody.
  • both ends of the gene amplified fragment containing the light chain variable region of mouse monoclonal antibody # 2 represented by SEQ ID NO: 15 were purified after restriction enzyme treatment, and the mouse antibody-derived leader sequence and the amino acid sequence of SEQ ID NO: 49 were included.
  • the L chain constant region of human IgG 1 was already inserted in a conventional manner into already inserted pcDNA3.1 / myc-His (Invitrogen Corporation) vector.
  • the above recombinant vector into which the nucleotide sequence encoding the heavy chain variable region of mouse monoclonal antibody # 2 represented by SEQ ID NO: 14 was inserted, and the light chain variable region of mouse monoclonal antibody # 2 represented by SEQ ID NO: 15 The above recombinant vector in which a nucleotide sequence coding for was inserted into CHO-K1 cells (obtained from RIKEN Cell Bank). Specifically, 2 ⁇ 10 5 CHO-K1 cells cultured in Ham's F12 medium (manufactured by Invitrogen) containing 1 ml of 10% FBS per well of a 12-well culture plate were added to PBS ( ⁇ ).
  • OptiMEM manufactured by Invitrogen
  • Ham's F12 medium containing 1 ml of 10% FBS per well was added, and Polyfect Transfection Reagent (QIAGEN) (Made) 30 ⁇ l mixed was added.
  • CHO-K1 cells introduced with the above recombinant vector were cultured in Ham's F12 medium containing 10% FBS supplemented with 200 ⁇ g / ml zeocin (Invitrogen) and 200 ⁇ g / ml Geneticin (Roche).
  • Human-mouse chimeric monoclonal antibody # 1 having the variable region of mouse monoclonal antibody # 1 was seeded with CHO-K1 cells into which the above recombinant vector had been introduced so that there were 0.5 per well of the well plate.
  • a cell line stably producing # 1) was prepared.
  • Cell lines that stably produce human-mouse chimeric monoclonal antibody # 2 (# 2) and human-mouse chimeric monoclonal antibody # 3 (# 3) for mouse monoclonal antibodies # 2 and # 3 in the same manner as described above was made.
  • the prepared cell line was cultured for 5 days in 30 ml of OptiCHO medium (manufactured by Invitrogen) at 5 ⁇ 10 5 cells / ml in a 150 cm 2 flask and containing no serum, and cultures containing # 1, # 2, and # 3 A supernatant was obtained.
  • OptiCHO medium manufactured by Invitrogen
  • a mouse-derived anti-CAPRIN-1 monoclonal antibody described in WO2010 / 016526 which has the heavy chain variable region of SEQ ID NO: 26 and the light chain variable region of SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 28 Comparative antibody 2 having a heavy chain variable region and a light chain variable region of SEQ ID NO: 29, Comparative antibody 3 having a heavy chain variable region of SEQ ID NO: 30 and a light chain variable region of SEQ ID NO: 31, and heavy chain variable region of SEQ ID NO: 32 And Comparative antibody 4 having the light chain variable region of SEQ ID NO: 33, Comparative antibody 5 having the heavy chain variable region of SEQ ID NO: 34 and the light chain variable region of SEQ ID NO: 35, Heavy chain variable region of SEQ ID NO: 36 and SEQ ID NO: 37 Comparative antibody 6 having the light chain variable region of SEQ ID NO: 38, Comparative antibody 7 having the light chain variable region of SEQ ID NO: 39 and SEQ ID NO: 39, Heavy chain variable region of SEQ ID NO:
  • the cell line produced was cultured in 30 ml of OptiCHO medium (manufactured by Invitrogen) at 5 ⁇ 10 5 cells / ml in a 150 cm 2 flask for 5 days, and human- Culture supernatants containing mouse chimeric comparative monoclonal antibodies 1-11 were obtained.
  • OptiCHO medium manufactured by Invitrogen
  • Example 9 Production of Human-Chicken Chimeric Monoclonal Antibody
  • the chicken monoclonal antibody # 1 obtained in Example 3 was treated with the variable region of chicken monoclonal antibody # 1 according to the method described in Example 4 (2) of WO2011 / 096519
  • a cell line that stably produced chicken chimeric antibody # 1 was prepared.
  • the prepared cell line was cultured for 5 days using 30 ml of OptiCHO medium (Invitrogen) without serum at 5 ⁇ 10 5 cells / ml in a 150 cm 2 flask, and cultured on human chick chimera antibody # 1. I got Qing.
  • OptiCHO medium Invitrogen
  • CAPRIN-1 protein was examined above. 10 6 cells of each cell line were centrifuged in a 1.5 ml microcentrifuge tube. Each cell culture supernatant (100 ⁇ l) containing antibodies # 1, # 2 and # 3 and chicken monoclonal antibodies # 1, # 2, # 3 and # 4, respectively, was added and allowed to stand on ice for 1 hour. After washing with PBS, FITC-labeled goat anti-mouse IgG (H + L) antibody (Jackson ImmunoResearch) diluted with PBS containing 0.1% FBS was added to the mouse-derived antibody, and 0 was added to the chicken-derived antibody.
  • FITC-labeled goat anti-chicken IgG (H + L) antibody (manufactured by Southern Biotech) diluted 100-fold with PBS containing 1% FBS was added and allowed to stand at 4 ° C. for 30 minutes. After washing with PBS, the fluorescence intensity was measured with a FACS caliber from Becton Dickinson. As a negative control, a reaction with only a secondary antibody was used. As a result, the cells to which antibodies # 1, # 2 and # 3 and chicken monoclonal antibodies # 1 to # 4 were respectively added had a fluorescence intensity of 35% or more as compared with the negative control. From this, it was confirmed that the CAPRIN-1 protein was expressed on the cell membrane surface of the human cancer cell line.
  • the enhancement rate of the fluorescence intensity is represented by the increase rate of the average fluorescence intensity (MFI value) in each cell, and was calculated by the following calculation formula.
  • Example 11 Anti-tumor activity of antibody against CAPRIN-1-derived peptide (SEQ ID NO: 5) against cancer cells
  • a polyclonal antibody against other human CAPRIN-1-derived peptides (a polyclonal antibody against amino acid residues 50-98 in the amino acid sequence of human CAPRIN-1 prepared in Example 5 and amino acid residue 233- The polyclonal antibody against 305) was used as a negative control, and the control antibody derived from rabbit serum prepared in Example 5 was used for the same evaluation.
  • human breast cancer cell lines MCF7 human colorectal cancer cell line HCT-116, human pancreatic cancer cell line MIAPaCa-2, human kidney cancer cell line Caki-2, and human lung cancer cell line QG56 in which the expression of CAPRIN-1 has been confirmed
  • Six 50 ml centrifuge tubes were collected, 100 ⁇ Ci of chromium 51 was added, and the mixture was incubated at 37 ° C. for 2 hours. Thereafter, the plate was washed 3 times with RPMI 1640 medium containing 10% fetal bovine serum, and 2 ⁇ 10 3 pieces were added per well of a 96-well V-bottom plate.
  • polyclonal antibodies against the human CAPRIN-1-derived peptide shown in SEQ ID NO: 5 There are two types of polyclonal antibodies against the human CAPRIN-1-derived peptide shown in SEQ ID NO: 5 and other polyclonal antibodies against the above-mentioned other human CAPRIN-1-derived peptides (polyclonal against amino acid residues 50-98 of human CAPRIN-1).
  • Antibody and a polyclonal antibody against amino acid residue No. 233-305) were added in an amount of 1 ⁇ g each, and 4 ⁇ 10 5 lymphocytes separated from human peripheral blood according to a conventional method were added at 37 ° C., 5% CO 2. The cells were cultured for 4 hours under these conditions.
  • the amount of chromium (Cr) 51 in the culture supernatant released from the damaged cancer cells was measured, and the ADCC activity against the cancer cells by a polyclonal antibody against each human CAPRIN-1-derived peptide was calculated.
  • a polyclonal antibody obtained by immunizing a human CAPRIN-1 partial peptide having the amino acid sequences of amino acid residues 50-98 and amino acid residues 233-305 of human CAPRIN-1 a human breast cancer cell line
  • the activities of MCF7, human colon cancer cell line HCT-116, human pancreatic cancer cell line MIAPaCa-2, human kidney cancer cell line Caki-2, and human lung cancer cell line QG56 were each less than 10%.
  • the group to which a polyclonal antibody against the human CAPRIN-1-derived peptide shown in SEQ ID NO: 5 was added was confirmed to have a cytotoxic activity of 25% or more against any cancer cell line.
  • the negative control antibody was less than 4% active against any cancer cell. Therefore, it has been clarified that the antibody against CAPRIN-1 shown in SEQ ID NO: 5 exerts strong cytotoxic activity against cancer cells expressing CAPRIN-1.
  • the cytotoxic activity was obtained by mixing 2 ⁇ 10 3 cancer cell lines incorporating the antibody against CAPRIN-1 used in the present invention, lymphocytes and chromium 51 and culturing for 4 hours. This is the result of measuring the amount of chromium 51 released into the culture medium after culturing and showing the cytotoxic activity against the cancer cell line calculated by the following calculation formula * .
  • Cytotoxic activity (%) chromium 51 release from target cells upon addition of antibody against CAPRIN-1 and lymphocytes ⁇ chromium 51 release from target cells added with 1N hydrochloric acid ⁇ 100.
  • Hitrap Protein A Sepharose FF manufactured by GE Healthcare
  • human breast cancer cell lines MCF7, human colon cancer cell line HCT-116, human pancreatic cancer cell line MIAPaCa-2, human kidney cancer cell line Caki-2, and human lung cancer cell line QG56 were collected in a 50 ml centrifuge tube. 100 ⁇ Ci of chromium 51 was added and incubated at 37 ° C. for 2 hours. Thereafter, the cells were washed 3 times with RPMI 1640 medium containing 10% FBS, and 2 ⁇ 10 3 cells were added per well of a 96-well V-bottom plate to obtain target cells.
  • the purified antibody human-mouse chimeric monoclonal antibodies # 1, # 2 and # 3, human-chicken chimeric monoclonal antibodies # 1, # 2, # 3 and # 4, and the human-mouse chimera obtained in Example 8 were used.
  • a cell population containing human NK cells was separated from human peripheral blood lymphocyte cells prepared according to a conventional method and 1.3 ⁇ g of each of comparative monoclonal antibodies 1 to 11, and prepared according to a conventional method.
  • Cell populations containing human NK cells are prepared by using antibodies (anti-antibodies) labeled with FITC fluorescent dyes from human peripheral blood mononuclear cells separated using a specific gravity separation solution Histopaque (Sigma Aldrich) for the separation of peripheral blood mononuclear cells.
  • a negative control was added with an isotype control antibody.
  • the cytotoxic activity of the isotype control antibody and the human-mouse chimeric comparative monoclonal antibodies 1 to 11 was less than 5% for MCF7, less than 3% for HCT-116, and against MIAPaCa-2. 7%, less than 8% for Caki-2, and less than 5% for QG56, whereas human-mouse chimeric monoclonal antibody # 1 and human-chicken chimeric monoclonal antibodies # 1 to # 4 It was 30% or more for MCF7, 19% or more for HCT-116, 28% or more for MIAPaCa-2, 34% or more for Caki-2, and 10% or more for QG56.
  • human-mouse chimeric monoclonal antibodies # 2 and # 3 are 32% or more for MCF7, 18% or more for HCT-116, 32% or more for MIAPaCa-2, and 18% for Caki-2. % Or more and 10% or more with respect to QG56.
  • isotype control antibody and in the case of using comparative antibody 1 to comparative antibody 11 both were less than 4%, whereas human-mouse chimeric monoclonal antibodies # 1, # 2 and # 3, and human- Chicken chimera monoclonal antibodies # 1, # 2, # 3 and # 4 have cytotoxic activity of 10% or more.
  • the monoclonal antibodies # 1, # 2, # 3 and human-chicken chimeric monoclonal antibodies # 1, # 2, # 3 and # 4 against CAPRIN-1 expressed CAPRIN-1 by ADCC activity were shown to damage cancer cells compared to comparative antibodies 1-11. 4 was found to show strong cytotoxic activity against human cancer cells.
  • human-chicken chimeric monoclonal antibodies # 1, # 2, # 3 and # 4 human breast cancer cell lines MDA-MB-436, in which the expression of the CAPRIN-1 gene was confirmed in the same manner as described above, human kidney cancer cells The cytotoxic activity against strain Caki-1, human lung cancer cell line A549, human pancreatic cancer cell line Panc-1, and human colon cancer cell DLD-1 was evaluated. Further, human-chicken chimeric antibodies # 1 and # 2 against CAPRIN-1 described in Example 4 of WO2011 / 096517 were respectively used as comparative antibody 12 and comparative antibody 13, and against CAPRIN-1 described in Example 4 of WO2011 / 096519.
  • Human-chicken chimeric antibody # 1 was compared with comparative antibody 13, human-chicken chimeric antibody # 1, mouse monoclonal antibodies # 2, # 3, # 4, # 5 and # 5 against CAPRIN-1 described in Example 4 of WO2011 / 096528 6 are comparative antibody 14, comparative antibody 15, comparative antibody 16, comparative antibody 17, comparative antibody 18 and comparative antibody 19, mouse monoclonal antibodies # 1, # 2 and CAPRIN-1 described in Example 3 of WO2011 / 096533, respectively.
  • # 3 represents comparative antibody 20, comparative antibody 21 and comparative anti 22, WO2011 / 096 534 murine monoclonal antibodies # 1 to the caprin-1 described in Example 3, the # 2 and # 3, respectively compared antibody 23 was evaluated using as comparison the antibody 24 and Comparative antibodies 25.
  • the amount of chromium 51 in the culture supernatant released from the damaged tumor cells was measured, and the cytotoxic activity against cancer cells by the anti-CAPRIN-1 antibody was calculated.
  • MDA-MB-436, Caki-1, A549, and Panc-1 were also evaluated in the same manner as described above. As a result, the cytotoxic activity of the comparative antibodies 12 to 25 against MDA-MB-436 was 5% or less, whereas the human-chicken chimeric monoclonal antibodies # 1, # 2, # 3 and # 4 It showed 18% or more cytotoxic activity.
  • the cytotoxic activity of the comparative antibodies 12 to 25 against Caki-1 was 5% or less, whereas human-chicken chimeric monoclonal antibodies # 1, # 2, # 3 and # 4 had 14% or more cells. It showed disability activity.
  • the cytotoxic activity of the comparative antibodies 12 to 25 against A549 was 5% or less, whereas the human-chicken chimeric monoclonal antibodies # 1, # 2, # 3 and # 4 had a cytotoxic activity of 12% or more. showed that.
  • the cytotoxic activity of the comparative antibodies 12 to 25 against Panc-1 was 5% or less, whereas human-chicken chimeric monoclonal antibodies # 1, # 2, # 3 and # 4 had 18% or more cells. It showed disability activity.
  • the cytotoxic activity of the comparative antibodies 12 to 25 against DLD-1 was 7% or less, whereas human-chicken chimeric monoclonal antibodies # 1, # 2, # 3 and # 4 were 15% or more. Showed cytotoxic activity.
  • the cytotoxic activity is 2 ⁇ 10 3 cancer cell lines into which the antibody against CAPRIN-1 used in the present invention, lymphocyte (population containing NK cells) cells and chromium 51 are incorporated.
  • the mixture was cultured for 4 hours, and the amount of chromium 51 released into the culture medium after the culture was measured.
  • the results show the cytotoxic activity against cancer cell lines calculated by the following calculation formula * .
  • Cytotoxic activity (%) antibody against CAPRIN-1 and lymphocyte (population including NK cells) cells added with chromium 51 released from target cells ⁇ chromium from target cells with 1N hydrochloric acid added 51 free x 100.
  • Example 12 Number of molecules of CAPRIN-1 on the surface of various cancer cells recognized by anti-CAPRIN-1 monoclonal antibodies # 1, # 2 and # 3 Human breast cancer cell lines (ZR75-1, MCF7, T47D, SK-BR-3 MDA-MB-157, BT-20, MDA-MB-231V, MRK-nu-1), renal cancer cell line (Caki-1, Caki-2, A498, ACHN), bladder cancer cell line (T24), Ovarian cancer cell line (SKOV3), lung cancer cell line (QG56, A549), pancreatic cancer cell line (MIAPaCa-2, Capan-2), prostate cancer cell line (PC3), cervical cancer cell line (SW756), fibrosarcoma Cell lines (HT1080), brain tumor cell lines (T98G, U87MG, U251, SNB19, U373), gastric cancer cell lines (MNK28, MNK45), colon cancer cells Various cancers recognized by mouse monoclonal antibodies # 1, # 2, and # 3 obtained in Example 2 for strain
  • antibody mouse monoclonal antibodies # 1, # 2, # 3 and comparative antibody 1 to comparative antibody 11 were diluted in PBS to a final concentration of 5 ⁇ g / ml in each cell line, It was added to the cell line and allowed to react for 30 minutes. After washing with PBS, together with the calibration beads attached to the kit, the fluorescently labeled secondary antibody anti-mouse IgG antibody attached to the kit was added to each cell line and allowed to stand on ice for 45 minutes. After washing each cell line and calibration beads with PBS, the fluorescence intensity was measured with a FACS caliber manufactured by Becton Dickinson Co., Ltd., and each average fluorescence intensity value (mean) was obtained for all the antibodies.
  • a reaction with an isotype control antibody was used to obtain mean.
  • the number of molecules was calculated using each average fluorescence intensity value (mean) according to the method attached to the kit.
  • mouse monoclonal antibody # 1, antibody # 2, antibody # number of molecules caprin-1 in 3 recognizes various cancer cell surface, in all human cancer cells examined, one per 10 5 or more cells Met.
  • the comparative antibody 1-11 was less than 10 5 per cell.
  • the antibody of the present invention is useful for the treatment and / or prevention of cancer.

Abstract

この発明は、癌細胞の表面に特異的に発現する癌抗原タンパク質を標的とした抗体及びその癌の治療及び／又は予防剤としての用途、具体的には、配列番号５で表されるアミノ酸配列又は該アミノ酸配列と８０％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列からなるＣＡＰＲＩＮ－１部分ポリペプチドと免疫学的反応性を有する抗体又はそのフラグメント、並びにそれを有効成分として含むことを特徴とする、癌の治療及び／又は予防のための医薬組成物を提供する。

Description

癌の治療及び／又は予防用医薬組成物
　本発明は、ＣＡＰＲＩＮ－１に対する抗体又はそのフラグメントの、癌の治療及び／又は予防剤等としての新規な医薬用途に関する。
　癌は全死亡原因の第一位を占める疾患であり、現在行われている治療は手術療法を主体に放射線療法と化学療法を組み合わせたものである。近年の新しい手術法の開発や新たな抗癌剤の発見にも関わらず、一部の癌を除いて、癌の治療成績はあまり向上していないのが現状である。近年、分子生物学や癌免疫学の進歩によって、癌に特異的に反応する抗体類、細胞障害性Ｔ細胞により認識される癌抗原類、癌抗原をコードする遺伝子類などが同定されており、癌抗原類をターゲットにした特異的癌治療法への期待が高まっている（非特許文献１）。
　癌治療法においては、副作用を軽減するため、その抗原として認識されるペプチド、ポリペプチド又はタンパク質は、正常細胞にはほとんど存在せず、癌細胞に特異的に存在していることが望ましい。１９９１年、ベルギー国Ｌｕｄｗｉｇ研究所のＢｏｏｎらは自己癌細胞株と癌反応性Ｔ細胞を用いたｃＤＮＡ発現クローニング法によりＣＤ８陽性Ｔ細胞が認識するヒトメラノーマ抗原ＭＡＧＥ１を単離した（非特許文献２）。その後、癌患者の生体内で自己の癌に反応して産生される抗体が認識する腫瘍抗原を遺伝子の発現クローニングの手法を取り入れて同定する、ＳＥＲＥＸ（ｓｅｒｏｌｏｇｉｃａｌ　ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ａｎｔｉｇｅｎｓ　ｂｙ　ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｃｌｏｎｉｎｇ）法が報告され（非特許文献３及び特許文献１）、この方法により、正常細胞にはほとんど発現がなく、癌に特異的に発現するいくつかの癌抗原が単離されている（非特許文献４～９）。さらに、その一部をターゲットにして、癌抗原に特異的に反応する免疫細胞を用いた細胞療法や、癌抗原を含むワクチンなどの癌特異的免疫療法の臨床試験が実施されている。
　一方、近年、癌細胞上の抗原タンパク質を標的にした、癌を治療するための各種抗体医薬が世の中に台頭してきた。癌特異的治療薬として一定の薬効が得られ注目されているが、標的となる抗原タンパク質の大部分は正常細胞にも発現するものであり、抗体投与の結果、癌細胞だけでなく、抗原が発現する正常細胞も障害されてしまい、その結果生じる副作用が問題になっている。従って、癌細胞表面に特異的に発現する癌抗原を同定し、それを標的とした抗体を医薬品として使用することができれば、より副作用の少ない抗体医薬による治療が可能になると期待される。
　Ｃｙｔｏｐｌａｓｍｉｃ－　ａｎｄ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｅｄ　ｐｒｏｔｅｉｎ　１（ＣＡＰＲＩＮ－１）は、休止期の正常細胞が活性化や細胞***を起こす際に発現し、また細胞内でＲＮＡと細胞内ストレス顆粒を形成してｍＲＮＡの輸送、翻訳の制御に関与することなどが知られている細胞内タンパク質として知られていたが、癌細胞の表面に特異的に発現することが見出され、癌治療のための抗体医薬のターゲットとして研究が進められている（特許文献２）。
米国特許第５６９８３９６号 ＷＯ２０１０／０１６５２６
秋吉毅，「癌と化学療法」、１９９７年、第２４巻、ｐ５５－５１９（癌と化学療法社、日本） Ｂｒｕｇｇｅｎ　Ｐ．　ｅｔ　ａｌ．，　Ｓｃｉｅｎｃｅ，　２５４：１６４３－１６４７（１９９１） Ｐｒｏｃ．　Ｎａｔｌ．　Ａｃａｄ．　Ｓｃｉ．　ＵＳＡ，　９２：１１８１０－１１８１３（１９９５） Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，７２：９６５－９７１（１９９７） Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ．，　５８：１０３４－１０４１（１９９８） Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，２９：６５２－６５８（１９９８） Ｉｎｔ．Ｊ．Ｏｎｃｏｌ．，１４：７０３－７０８（１９９９） Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ．，　５６：４７６６－４７７２（１９９６） Ｈｕｍ．　Ｍｏｌ．　Ｇｅｎｅｔ６：３３－３９，　１９９７
　本発明の目的は、癌細胞の表面に特異的に発現するＣＡＰＲＩＮ－１を標的とした、従来の抗体よりも抗腫瘍活性の優れた抗体を作出し、癌の治療及び／又は予防剤としての用途を提供することである。
　本発明は、以下の特徴を有する。
　本発明は、配列番号５で表されるアミノ酸配列、又は該アミノ酸配列と８０％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列を有するＣＡＰＲＩＮ－１の部分ポリペプチドと免疫学的反応性を有する抗体又はそのフラグメント、並びにそれを有効成分として含むことを特徴とする、癌の治療及び／又は予防のための医薬組成物を提供する。
　その一実施形態において、上記癌は、乳癌、腎癌、膵臓癌、大腸癌、肺癌、脳腫瘍、胃癌、子宮頸癌、卵巣癌、前立腺癌、膀胱癌、食道癌、白血病、リンパ腫、線維肉腫、肥満細胞腫又はメラノーマである。
　別の実施形態において、上記抗体は、モノクローナル抗体又はポリクローナル抗体である。
　別の実施形態において、上記抗体は、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、単鎖抗体、又は多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）である。
　本明細書は本願の優先権主張の基礎となる日本国特許出願2011-171300号の開示内容を包含する。
　本発明に係るＣＡＰＲＩＮ－１に対する抗体は、癌細胞を障害する。従って、ＣＡＰＲＩＮ－１に対する抗体は癌の治療や予防に有用である。
　本発明に係る抗体は、ＣＡＰＲＩＮ－１の所定の部分ポリペプチドを認識し結合する抗体であり、抗腫瘍活性を有する。本発明に係る抗体は、より具体的には、配列番号５で表されるアミノ酸配列、又は該アミノ酸配列と８０％以上、好ましくは８５％以上、より好ましくは９０％以上、さらに好ましくは９５％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列からなる、ＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質の部分ポリペプチド（ＣＡＰＲＩＮ－１部分ポリペプチド）を認識する（すなわち、免疫学的反応性を有する）抗体である。本発明では、この抗体が、抗腫瘍活性を示すことを明らかにした。本発明は、上記のようなＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質の断片に結合し、かつ、抗腫瘍活性を示すすべての抗体に関する。
　本発明に係る上記のＣＡＰＲＩＮ－１に対する抗体は、抗腫瘍活性を発揮しうる限りいかなる種類の抗体であってもよく、例えば、組換え抗体、例えば合成抗体、多重特異性抗体（例えば二重特異性抗体）、ヒト化抗体、キメラ抗体、単鎖抗体（ｓｃＦｖ）など、ヒト抗体、それらの抗体フラグメント、例えばＦａｂやＦ（ａｂ’）２、Ｆｖなどを含む。これらの抗体及びそのフラグメントはまた、当業者に公知の方法により調製することが可能である。本発明に係る抗体は、ＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質又はその部分ポリペプチドと免疫学的反応性を有する、すなわち、抗原－抗体反応を介してＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質と結合する、好ましくはＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質と特異的に結合することが望ましい。ここで、「ＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質と特異的に結合する」とは、ＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質に特異的に結合し、それ以外のタンパク質と実質的に結合しないことを意味する。本発明に係る抗体は、モノクローナル抗体であることが好ましいが、均質な抗体を安定に生産できるかぎり、ポリクローナル抗体であってもよい。また、被験者がヒトである場合には、拒絶反応を回避又は抑制するためにヒト抗体又はヒト化抗体であることが望ましい。
　本発明に係るＣＡＰＲＩＮ－１ポリペプチドに対する抗体の抗腫瘍活性は、後述するように、生体内で担癌動物に対する腫瘍増殖の抑制を調べることによって、あるいは、生体外で該ポリペプチドを発現する腫瘍細胞に対して、免疫細胞又は補体を介した細胞障害活性を示すか否かを調べることによって評価することができる。
　さらにまた、本発明における癌の治療及び／又は予防の対象である被験者は、ヒト、ペット動物、家畜類、競技用動物などの哺乳動物であり、好ましい被験者は、ヒトである。
　以下に、本発明についてより詳細に説明する。
＜抗体作製用抗原の作製＞
　本発明に係るＣＡＰＲＩＮ－１に対する抗体を取得するための感作抗原として使用されるタンパク質又はその断片は、ヒト、イヌ、ウシ、ウマ、マウス、ラット、ニワトリなど、その由来となる動物種に制限されない。しかし細胞融合に使用する親細胞との適合性を考慮して選択することが好ましく、一般的には、哺乳動物由来のタンパク質が好ましく、特にヒト由来のタンパク質が好ましい。例えば、ＣＡＰＲＩＮ－１がヒトＣＡＰＲＩＮ－１の場合、ヒトＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質やその部分ペプチド、ヒトＣＡＰＲＩＮ－１を発現する細胞などを用いることができる。
　ヒトＣＡＰＲＩＮ－１及びそのホモログの塩基配列及びアミノ酸配列は、例えばＧｅｎＢａｎｋ（米国ＮＣＢＩ）にアクセスし、ＢＬＡＳＴ、ＦＡＳＴＡなどのアルゴリズム（Ｋａｒｌｉｎ　ａｎｄ　Ａｌｔｓｃｈｕｌ，　Ｐｒｏｃ．　Ｎａｔｌ．　Ａｃａｄ．　Ｓｃｉ．　ＵＳＡ，　９０：５８７３－５８７７，１９９３；　Ａｌｔｓｃｈｕｌ　ｅｔ　ａｌ．，　Ｎｕｃｌｅｉｃ　Ａｃｉｄｓ　Ｒｅｓ．　２５：３３８９－３４０２，　１９９７）を利用することによって入手することができる。
　本発明では、ヒトＣＡＰＲＩＮ－１の塩基配列（配列番号１又は３）又はアミノ酸配列（配列番号２又は４）を基準とした場合、これらのＯＲＦ又は成熟部分の塩基配列又はアミノ酸配列と７０％～１００％、好ましくは８０％～１００％、より好ましくは９０％～１００％、さらに好ましくは９５％～１００％、例えば９７％～１００％、９８％～１００％、９９％～１００％又は９９．５％～１００％の配列同一性を有する配列からなる核酸又はタンパク質がターゲットのＣＡＰＲＩＮ－１になる。ここで、「％配列同一性」は、２つの配列を、ギャップを導入してか又はギャップを導入しないで、最大の類似度（又は一致度）となるようにアラインメント（整列）したとき、アミノ酸（又は塩基）の総数に対する同一アミノ酸（又は塩基）のパーセンテージ（％）を意味する。
　ＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質の断片としては、抗体が認識する最小単位であるエピトープ（抗原決定基）を含み、かつそのエピトープアミノ酸長～該タンパク質の全長未満の長さを有するものを使用できる。エピトープは、哺乳動物、好ましくはヒトにおいて、抗原性又は免疫原性を有するポリペプチド断片を指し、その最小単位は、約７～１２アミノ酸、例えば８～１１アミノ酸、からなる。本発明に係る抗体の作製に用いるＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質の断片は、本発明の抗体が認識する、配列番号５で表されるアミノ酸配列又は該アミノ酸配列と８０％以上、好ましくは８５％以上、より好ましくは９０％以上、さらに好ましくは９５％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、又はそれらのアミノ酸配列中の、連続する約７～１２アミノ酸、例えば連続する８～１１アミノ酸、からなるエピトープを少なくとも含む断片であることが好ましい。
　上記した、ヒトＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質やその部分ペプチドを含むポリペプチド断片は、例えば、Ｆｍｏｃ法（フルオレニルメチルオキシカルボニル法）、ｔＢｏｃ法（ｔ―ブチルオキシカルボニル法）等の化学合成法に従って合成することができる（日本生化学会編、生化学実験講座１、タンパク質の化学ＩＶ、化学修飾とペプチド合成、東京化学同人（日本）、１９８１年）。また、各種の市販のペプチド合成機を利用して常法により合成することもできる。
　また、公知の遺伝子工学的手法（Ｓａｍｂｒｏｏｋら，　Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｃｌｏｎｉｎｇ，　第２版，　Ｃｕｒｒｅｎｔ　Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ　ｉｎ　Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｂｉｏｌｏｇｙ　（１９８９），　Ｃｏｌｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　Ｈａｒｂｏｒ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　Ｐｒｅｓｓ、Ａｕｓｕｂｅｌら，　Ｓｈｏｒｔ　Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ　ｉｎ　Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｂｉｏｌｏｇｙ，　第３版，　Ａ　ｃｏｍｐｅｎｄｉｕｍ　ｏｆ　Ｍｅｔｈｏｄｓ　ｆｒｏｍ　Ｃｕｒｒｅｎｔ　Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ　ｉｎ　Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｂｉｏｌｏｇｙ　（１９９５），　Ｊｏｈｎ　Ｗｉｌｅｙ　＆　Ｓｏｎｓなど）を用いて、上記ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを調製し、該ポリヌクレオチドを発現ベクターに組み込んで宿主細胞に導入し、該宿主細胞中でポリペプチドを生産させることにより、目的とするヒトＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質やそのポリペプチド断片を得ることもできる。
　上記ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドは、公知の遺伝子工学的手法や市販の核酸合成機を用いた常法により、容易に調製することができる。例えば、ヒトＣＡＰＲＩＮ－１遺伝子の塩基配列を含むＤＮＡは、ヒト染色体ＤＮＡ又はｃＤＮＡライブラリーを鋳型として使用し、該塩基配列を増幅できるように設計した一対のプライマーを用いてＰＣＲを行うことにより調製することができる。ＰＣＲの反応条件は適宜設定することができ、例えば、耐熱性ＤＮＡポリメラーゼ（例えばＴａｑポリメラーゼ、Ｐｆｕポリメラーゼなど）及びＭｇ２＋含有ＰＣＲバッファーを用いて、９４℃で３０秒間（変性）、５５℃で３０秒～１分間（アニーリング）、７２℃で２分間（伸長）からなる反応行程を１サイクルとして、例えば３０サイクル行った後、７２℃で７分間反応させる条件などを挙げることができるが、これに限定されない。ＰＣＲの手法、条件等については、例えばＡｕｓｕｂｅｌら，　Ｓｈｏｒｔ　Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ　ｉｎ　Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｂｉｏｌｏｇｙ，　第３版，　Ａ　ｃｏｍｐｅｎｄｉｕｍ　ｏｆ　Ｍｅｔｈｏｄｓ　ｆｒｏｍ　Ｃｕｒｒｅｎｔ　Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ　ｉｎ　Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｂｉｏｌｏｇｙ　（１９９５），　Ｊｏｈｎ　Ｗｉｌｅｙ　＆　Ｓｏｎｓ（特に第１５章）に記載されている。
　また、ＣＡＰＲＩＮ－１遺伝子の塩基配列及びＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質のアミノ酸配列情報に基づいて、適当なプローブやプライマーを調製し、それを用いてヒトなどのｃＤＮＡライブラリーをスクリーニングすることにより、所望のＤＮＡを単離することができる。ｃＤＮＡライブラリーは、ＣＡＰＲＩＮ－１のタンパク質を発現している細胞、器官又は組織から作製することが好ましい。そのような細胞や組織の例は、精巣、白血病、乳癌、リンパ腫、脳腫瘍、肺癌、膵臓癌、大腸癌などの癌又は腫瘍に由来する細胞又は組織である。上記したプローブ又はプライマーの調製、ｃＤＮＡライブラリーの構築、ｃＤＮＡライブラリーのスクリーニング、並びに目的遺伝子のクローニングなどの操作は当業者に既知であり、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら，　Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｃｌｏｎｉｎｇ，　第２版，　Ｃｕｒｒｅｎｔ　Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ　ｉｎ　Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｂｉｏｌｏｇｙ　（１９８９）、Ａｕｓｂｅｌら（上記）等に記載された方法に準じて行うことができる。このようにして得られたＤＮＡから、ヒトＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質やその部分ペプチドをコードするＤＮＡを得ることができる。
　発現ベクターを導入する上記宿主細胞としては、上記ポリペプチドを発現可能な細胞であればいかなるものであってもよく、原核細胞の例としては大腸菌など、真核細胞の例としてはサル腎臓細胞ＣＯＳ１、チャイニーズハムスター卵巣細胞ＣＨＯ等の哺乳動物細胞、ヒト胎児腎臓細胞株ＨＥＫ２９３、マウス胎仔皮膚細胞株ＮＩＨ３Ｔ３、出芽酵母、***酵母等の酵母細胞、カイコ細胞、アフリカツメガエル卵細胞などが挙げられるが、これらに限定されない。
　宿主細胞として原核細胞を用いる場合、発現ベクターとしては、原核細胞中で複製可能なオリジン、プロモーター、リボソーム結合部位、マルチクローニングサイト、ターミネーター、薬剤耐性遺伝子、栄養要求性相補遺伝子、等を有する発現ベクターを用い得る。大腸菌用発現ベクターとしては、ｐＵＣ系、ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔＩＩ、ｐＥＴ発現システム、ｐＧＥＸ発現システムなどが例示できる。上記ポリペプチドをコードするＤＮＡをこのような発現ベクターに組み込み、該ベクターで原核宿主細胞を形質転換したのち、得られた形質転換体を培養すれば、前記ＤＮＡがコードしているポリペプチドを原核宿主細胞中で発現させることができる。この際、該ポリペプチドを、他のタンパク質との融合タンパク質として発現させることもできる。
　宿主細胞として真核細胞を用いる場合、発現ベクターとしては、プロモーター、スプライシング領域、ポリ（Ａ）付加部位等を有する真核細胞用発現ベクターを用い得る。そのような発現ベクターとしては、ｐＫＡ１、ｐＣＤＭ８、ｐＳＶＫ３、ｐＭＳＧ、ｐＳＶＬ、ｐＢＫ－ＣＭＶ、ｐＢＫ－ＲＳＶ、ＥＢＶベクター、ｐＲＳ、ｐｃＤＮＡ３、ｐＹＥＳ２等が例示できる。上記と同様に、上記ポリペプチドをコードするＤＮＡをこのような発現ベクターに組み込み、該ベクターで真核宿主細胞を形質転換したのち、得られた形質転換体を培養すれば、前記ＤＮＡがコードしているポリペプチドを真核宿主細胞中で発現させることができる。発現ベクターとしてｐＩＮＤ／Ｖ５－Ｈｉｓ、ｐＦＬＡＧ－ＣＭＶ－２、ｐＥＧＦＰ－Ｎ１、ｐＥＧＦＰ－Ｃ１等を用いた場合には、Ｈｉｓタグ（例えば（Ｈｉｓ）６～（Ｈｉｓ）１０）、ＦＬＡＧタグ、ｍｙｃタグ、ＨＡタグ、ＧＦＰなど各種タグを付加した融合タンパク質として、上記ポリペプチドを発現させることができる。
　発現ベクターの宿主細胞への導入は、電気穿孔法、リン酸カルシウム法、リポソーム法、ＤＥＡＥデキストラン法、マイクロインジェクション、ウイルス感染、リポフェクション、細胞膜透過性ペプチドとの結合、等の周知の方法を用いることができる。
　宿主細胞から目的のポリペプチドを単離精製するためには、公知の分離操作を組み合わせて行うことができる。例えば尿素などの変性剤や界面活性剤による処理、超音波処理、酵素消化、塩析や溶媒分別沈殿法、透析、遠心分離、限外ろ過、ゲルろ過、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、等電点電気泳動、イオン交換クロマトグラフィー、疎水クロマトグラフィー、アフニティークロマトグラフィー、逆相クロマトグラフィー等が挙げられるが、これらに限定されない。
　本発明に係る抗体を作製するため、以上のようにして作製した抗原を後述の通り感作抗原として用いることができる。
＜抗体の構造＞
　抗体（免疫グロブリン）は通常少なくとも２本の重鎖及び２本の軽鎖を含むヘテロ多量体糖タンパク質である。ＩｇＭは別として、免疫グロブリンは、２本の同一の軽（Ｌ）鎖及び２本の同一の重（Ｈ）鎖で構成される約１５０ｋＤａのヘテロ四量体糖タンパク質である。典型的には、それぞれの軽鎖は１つのジスルフィド共有結合により重鎖に連結されているが、種々の免疫グロブリンアイソタイプの重鎖間のジスルフィド結合の数は変動する。それぞれの重鎖及び軽鎖はまた鎖内ジスルフィド結合も有する。それぞれの重鎖は一方の端に可変ドメイン（ＶＨ領域）を有し、それにいくつかの定常領域が続く。それぞれ軽鎖は可変ドメイン（ＶＬ領域）を有し、その反対の端に１つの定常領域を有する。軽鎖の定常領域は重鎖の最初の定常領域と整列しており、かつ軽鎖可変ドメインは重鎖の可変ドメインと整列している。抗体の可変ドメインは特定の領域が相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる特定の可変性を示して抗体に結合特異性を付与する。可変領域の相対的に保存されている部分はフレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれている。完全な重鎖及び軽鎖の可変ドメインはそれぞれ３つのＣＤＲにより連結された４つのＦＲを含む。３つのＣＤＲは重鎖ではそのＮ末から順にＣＤＲＨ１，ＣＤＲＨ２，ＣＤＲＨ３、同様に軽鎖ではＣＤＲＬ１，ＣＤＲＬ２，ＣＤＲＬ３と呼ばれている。抗体の抗原への結合特異性には、ＣＤＲＨ３が最も重要である。また、各鎖のＣＤＲはＦＲ領域によって近接した状態で一緒に保持され、他方の鎖からのＣＤＲと共に抗体の抗原結合部位の形成に寄与する。定常領域は抗体が抗原に結合することに直接寄与しないが、種々のエフェクター機能、例えば、抗体依存性細胞性細胞障害活性（ＡＤＣＣ）への関与、Ｆｃγ受容体への結合を介した食作用、新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）を介した半減期／クリアランス速度、補体カスケードのＣ１ｑ構成要素を介した補体依存性細胞障害（ＣＤＣ）を示す。
＜抗体の作製＞
　本発明における抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体とは、ＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質の全長又はその断片と免疫学的反応性を有する抗体を意味する。特に本発明の抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体は、ＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質の部分ポリペプチド（ＣＡＰＲＩＮ－１部分ポリペプチド）でありエピトープを含む配列番号５で表されるアミノ酸配列からなるペプチド、又は該アミノ酸配列と８０％以上、好ましくは８５％以上、より好ましくは９０％以上、さらに好ましくは９５％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列からなるポリペプチドと免疫学的に結合する抗体である。本発明の抗体は、好適には、配列番号５で表されるアミノ酸配列又は該アミノ酸配列と８０％以上、好ましくは８５％以上、より好ましくは９０％以上、さらに好ましくは９５％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列中の、連続する約７～１２アミノ酸、例えば連続する８～１１アミノ酸、からなるエピトープを認識する。本発明のこの抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体は、全長ＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質と特異的に結合することができる。本発明の抗体は、ＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質又はその断片を抗原として得られた抗体の中から、配列番号５で表されるアミノ酸配列からなるポリペプチド、又は該アミノ酸配列と８０％以上、好ましくは８５％以上、より好ましくは９０％以上、さらに好ましくは９５％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列からなるポリペプチドと免疫学的に結合する抗体を常法により選択することによって取得することができる。
　ここで、「免疫学的反応性」とは、生体内で抗体とＣＡＰＲＩＮ－１抗原（ＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質の全長又はその部分ポリペプチド）とが結合する特性を意味する。本発明の抗体のＣＡＰＲＩＮ－１へのこのような結合を介して腫瘍細胞を障害（例えば、死滅、抑制又は退縮）する機能が発揮される。本発明の抗体は、ＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質と結合して腫瘍、例えば乳癌、腎癌、膵臓癌、大腸癌（例えば結腸癌）、肺癌、脳腫瘍、胃癌、子宮頸癌、卵巣癌、前立腺癌、膀胱癌、食道癌、白血病、リンパ腫、線維肉腫、肥満細胞腫又はメラノーマなどを障害することができる。
　本発明の抗体は、任意の種類（タイプ）の抗体であってよい。本発明の抗体の種類の例としては、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、合成抗体、多重特異性抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、単鎖抗体、抗体フラグメント（例えばＦａｂやＦ（ａｂ’）２、Ｆｖ）などを含む。また、抗体は、免疫グロブリン分子の任意のクラス、例えばＩｇＧ，ＩｇＥ，ＩｇＭ，ＩｇＡ，ＩｇＤ及びＩｇＹ、又は任意のサブクラス、例えばＩｇＧ１，ＩｇＧ２，ＩｇＧ３，ＩｇＧ４，ＩｇＡ１，ＩｇＡ２などである。
　抗体はさらに、グリコシル化の他に、アセチル化、ホルミル化、アミド化、リン酸化、又はペグ（ＰＥＧ）化などによって修飾されていてもよい。
　以下に、種々の抗体の作製例を示す。
　抗体が、モノクローナル抗体であるときには、例えば、ＣＡＰＲＩＮ－１を発現する乳癌細胞株ＳＫ－ＢＲ－３などをマウスに投与して免疫し、同マウスより脾臓を抽出し、細胞を分離の上、該細胞とマウスミエローマ細胞とを融合させ、得られた融合細胞（ハイブリドーマ）の中から、癌細胞増殖抑制作用を持つ抗体を産生するクローンを選択する。あるいは配列番号５で表されるアミノ酸配列からなるポリペプチド、又は該アミノ酸配列と８０％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列からなるポリペプチドと結合する抗体を産生するクローンを選択してもよい。癌細胞増殖抑制作用を持つモノクローナル抗体産生ハイブリドーマ又は配列番号５等のポリペプチドに対するモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマを単離し、当該ハイブリドーマを培養し、培養上清から一般的なアフィニティ精製法により抗体を精製することで、本発明の抗体を調製することが可能である。
　モノクローナル抗体を産生するハイブリドーマは、例えば以下のようにしても作製することができる。まず、公知の方法にしたがって、感作抗原を動物に免疫する。一般的方法として、感作抗原を哺乳動物の腹腔内又は皮下に注射することにより行われる。具体的には、感作抗原をＰＢＳ（Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ－Ｂｕｆｆｅｒｅｄ　Ｓａｌｉｎｅ）や生理食塩水等で適当量に希釈、懸濁したものに所望により通常のアジュバント、例えばフロイント完全アジュバントを適量混合し、乳化後、哺乳動物に４～２１日毎に数回投与する。また、感作抗原免疫時に適当な担体を使用することもできる。
　このように動物（典型的には、哺乳動物）を免疫し、血清中に所望の抗体レベルが上昇するのを確認した後に、動物から免疫細胞を採取し、細胞融合に付すが、好ましい免疫細胞としては、特に脾細胞が挙げられる。
　前記免疫細胞と融合される他方の親細胞として、例えば、哺乳動物のミエローマ細胞を用いることができる。このミエローマ細胞としては、公知の種々の細胞株、例えば、Ｐ３Ｕ１（Ｐ３－Ｘ６３Ａｇ８Ｕ１）、Ｐ３（Ｐ３ｘ６３Ａｇ８．６５３）（Ｊ．　Ｉｍｍｕｎｏｌ．　（１９７９）１２３，　１５４８－１５５０）、Ｐ３ｘ６３Ａｇ８Ｕ．１（Ｃｕｒｒｅｎｔ　Ｔｏｐｉｃｓ　ｉｎ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ　ａｎｄ　Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ　（１９７８）８１，　１－７）、ＮＳ－１（Ｋｏｈｌｅｒ．　Ｇ．　ａｎｄ　Ｍｉｌｓｔｅｉｎ，　Ｃ．　Ｅｕｒ．　Ｊ．　Ｉｍｍｕｎｏｌ．　（１９７６）６，　５１１－５１９）、ＭＰＣ－１１（Ｍａｒｇｕｌｉｅｓ．　Ｄ．Ｈ．　ｅｔ　ａｌ．，　Ｃｅｌｌ　（１９７６）８，　４０５－４１５）、ＳＰ２／０（Ｓｈｕｌｍａｎ，　Ｍ．　ｅｔ　ａｌ．，　Ｎａｔｕｒｅ　（１９７８）２７６，　２６９－２７０）、ＦＯ（ｄｅＳｔ．　Ｇｒｏｔｈ，　Ｓ．Ｆ．　ｅｔ　ａｌ．，　Ｊ．　Ｉｍｍｕｎｏｌ．　Ｍｅｔｈｏｄｓ　（１９８０）３５，　１－２１）、Ｓ１９４（Ｔｒｏｗｂｒｉｄｇｅ，　Ｉ．Ｓ．　Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．　（１９７８）１４８，　３１３－３２３）、Ｒ２１０（Ｇａｌｆｒｅ，　Ｇ．　ｅｔ　ａｌ．，　Ｎａｔｕｒｅ　（１９７９）２７７，　１３１－１３３）等が好適に使用される。
　前記免疫細胞とミエローマ細胞との細胞融合は、基本的には公知の方法、たとえば、ケーラーとミルステインらの方法（Ｋｏｈｌｅｒ，　Ｇ．　ａｎｄ　Ｍｉｌｓｔｅｉｎ，　Ｃ．　Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｅｎｚｙｍｏｌ．　（１９８１）７３，　３－４６）等に準じて行うことができる。
　より具体的には、前記細胞融合は、例えば細胞融合促進剤の存在下に通常の栄養培養液中で実施される。融合促進剤としては、例えばポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、センダイウイルス（ＨＶＪ）等が使用され、更に所望により融合効率を高めるためにジメチルスルホキシド等の補助剤を添加使用することもできる。
　免疫細胞とミエローマ細胞との使用割合は任意に設定することができる。例えば、ミエローマ細胞に対して免疫細胞を１～１０倍とするのが好ましい。前記細胞融合に用いる培養液としては、例えば、前記ミエローマ細胞株の増殖に好適なＲＰＭＩ１６４０培養液、ＭＥＭ培養液、その他、この種の細胞培養に用いられる通常の培養液が使用可能であり、さらに、牛胎児血清（ＦＣＳ）等の血清補液を併用することもできる。
　細胞融合では、前記免疫細胞とミエローマ細胞との所定量を前記培養液中でよく混合し、予め３７℃程度に加温したＰＥＧ溶液（例えば平均分子量１０００～６０００程度）を通常３０～６０％（ｗ／ｖ）の濃度で添加し、混合することによって目的とするハイブリドーマを形成する。続いて、適当な培養液を逐次添加し、遠心して上清を除去する操作を繰り返すことによりハイブリドーマの生育に好ましくない細胞融合剤等を除去することが好ましい。
　このようにして得られたハイブリドーマは、通常の選択培養液、例えばＨＡＴ培養液（ヒポキサンチン、アミノプテリン及びチミジンを含む培養液）で培養することにより選択される。上記ＨＡＴ培養液での培養は、目的とするハイブリドーマ以外の細胞（非融合細胞）が死滅するのに十分な時間（通常、数日～数週間）継続する。ついで、通常の限界希釈法を実施し、目的とする抗体を産生するハイブリドーマのスクリーニング及び単一クローニングを行う。
　また、ヒト以外の動物に抗原を免疫して上記ハイブリドーマを得る他に、ヒトリンパ球、例えばＥＢウイルスに感染したヒトリンパ球をｉｎ　ｖｉｔｒｏでタンパク質、タンパク質発現細胞又はその溶解物で感作し、感作リンパ球をヒト由来の永久***能を有するミエローマ細胞、例えばＵ２６６（登録番号ＴＩＢ１９６）と融合させ、所望の活性（例えば、細胞増殖抑制活性）を有するヒト抗体を産生するハイブリドーマを得ることもできる。
　このようにして作製されるモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマは、通常の培養液中で継代培養することが可能であり、また、液体窒素中で長期保存することが可能である。
　すなわち、所望の抗原や所望の抗原を発現する細胞を感作抗原として使用して、これを通常の免疫方法にしたがって免疫し、得られる免疫細胞を通常の細胞融合法によって公知の親細胞と融合させ、通常のスクリーニング法により、モノクローナルな抗体産生細胞（ハイブリドーマ）をスクリーニングすることによって目的のモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマを作製できる。
　本発明で使用可能な抗体の別の例がポリクローナル抗体である。ポリクローナル抗体は、例えば、次のようにして得ることができる。
　天然のＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質、あるいはＧＳＴなどとの融合タンパク質として大腸菌等の微生物において発現させた組換えＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質、又はその部分ペプチドをマウス、ヒト抗体産生マウス、ウサギ等の小動物に免疫し血清を得る。あるいは、ＣＡＰＲＩＮ－１の断片である、配列番号５で表されるアミノ酸配列若しくは該アミノ酸配列と８０％以上、好ましくは８５％以上、より好ましくは９０％以上、さらに好ましくは９５％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチド（好ましくは当該アミノ酸配列からなるポリペプチド）、又は、配列番号５で表されるアミノ酸配列若しくは該アミノ酸配列と８０％以上、好ましくは８５％以上、より好ましくは９０％以上、さらに好ましくは９５％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列中の連続する約７～１２アミノ酸、例えば連続する８～１１アミノ酸からなるエピトープを含む（好ましくは当該エピトープからなる）ポリペプチドを、感作抗原として、哺乳動物に免疫し、血清を得ることもできる。これらの血清を、例えば、硫安沈殿、プロテインＡ、プロテインＧカラム、ＤＥＡＥイオン交換クロマトグラフィー、ＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質や合成ペプチドをカップリングしたアフィニティーカラム等により精製することにより、抗ＣＡＰＲＩＮ－１ポリクローナル抗体を調製することができる。本発明のポリクローナル抗体には、ヒト抗体産生動物（例えば、マウス）にＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質を免疫して得られる抗体が含まれる。
　ここで、ヒト抗体産生マウスとしては、例えばＫＭマウス（キリンファーマ／Ｍｅｄａｒｅｘ）及びＸｅｎｏマウス（Ａｍｇｅｎ）が知られている（例えば、国際公開第ＷＯ０２／４３４７８号、同第ＷＯ０２／０９２８１２号など）。このようなマウスをＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質又はその断片で免疫するときには、完全ヒトポリクローナル抗体を血液から得ることができる。また、免疫後のマウスから脾臓細胞を取出し、ミエローマ細胞との融合法によりヒト型モノクローナル抗体を作製することができる。
　抗原の調製は、例えば、動物細胞を用いた方法（特表２００７－５３００６８）やバキュロウイルスを用いた方法（例えば、国際公開第ＷＯ９８／４６７７７号など）などに準じて行うことができる。抗原の免疫原性が低い場合には、アルブミン等の免疫原性を有する巨大分子と結合させ、免疫を行えばよい。抗原はアジュバントとともに投与して免疫してもよい。
　本発明の抗体は、さらにまた、その抗体遺伝子をハイブリドーマからクローニングし、適当なベクターに組み込んで、これを宿主に導入し、遺伝子組換え技術を用いて産生させた遺伝子組換え型抗体としても得ることができる（例えば、Ｃａｒｌ，　Ａ．Ｋ．　Ｂｏｒｒｅｂａｅｃｋ，　Ｊａｍｅｓ，　Ｗ．　Ｌａｒｒｉｃｋ，　ＴＨＥＲＡＰＥＵＴＩＣ　ＭＯＮＯＣＬＯＮＡＬ　ＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ，　Ｐｕｂｌｉｓｈｅｄ　ｉｎ　ｔｈｅ　Ｕｎｉｔｅｄ　Ｋｉｎｇｄｏｍ　ｂｙ　ＭＡＣＭＩＬＬＡＮ　ＰＵＢＬＩＳＨＥＲＳ　ＬＴＤ，　１９９０参照）。具体的には、ハイブリドーマのｍＲＮＡから逆転写酵素を用いて抗体の可変領域（Ｖ領域）のｃＤＮＡを合成する。目的とする抗体のＶ領域をコードするＤＮＡが得られれば、これを所望の抗体定常領域（Ｃ領域）をコードするＤＮＡと連結し、これを発現ベクターへ組み込む。又は、抗体のＶ領域をコードするＤＮＡを、抗体Ｃ領域のＤＮＡを含む発現ベクターへ組み込んでもよい。発現制御領域、例えば、エンハンサー、プロモーターの制御のもとで発現するよう発現ベクターに組み込む。次に、この発現ベクターにより宿主細胞を形質転換し、抗体を発現させることができる。
　本発明の抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体は、モノクローナル抗体であることが好ましい。しかし、ポリクローナル抗体、遺伝子改変抗体（キメラ抗体、ヒト化抗体など）などであってもよい。
　モノクローナル抗体には、ヒトモノクローナル抗体、非ヒト動物モノクローナル抗体（例えばマウスモノクローナル抗体、ラットモノクローナル抗体、ウサギモノクローナル抗体、ニワトリモノクローナル抗体など）、キメラモノクローナル抗体などが含まれる。モノクローナル抗体は、ＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質又はその断片で免疫したヒト以外の動物（例えば、マウス、ヒト抗体産生マウス、ニワトリ、ウサギなど）からの脾細胞とミエローマ細胞との融合によって得られたハイブリドーマを培養することによって作製されうる。あるいは、ＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質又はその断片で免疫したヒト以外の動物（例えば、マウス、ヒト抗体産生マウス、ニワトリ、ウサギなど）の脾細胞の重鎖可変領域ならびに軽鎖可変領域の遺伝子を、リンカーを介してファージミドベクターに組み入れて大腸菌に導入し、ヘルパーファージを介して単鎖型抗体として発現させることによっても作製されうる。キメラ抗体は、異なる動物由来の配列を組み合わせて作製される抗体であり、例えば、マウス抗体の重鎖、軽鎖の可変領域とヒト抗体の重鎖、軽鎖の定常領域からなる抗体などである。キメラ抗体の作製は公知の方法を用いて行うことができ、例えば、抗体Ｖ領域をコードするＤＮＡとヒト抗体Ｃ領域をコードするＤＮＡとを連結し、これを発現ベクターに組み込んで宿主に導入し産生させることにより得られる。
　なお、後述の実施例に記載の方法により、抗腫瘍効果を有する、配列番号５で表されるアミノ酸配列からなるＣＡＰＲＩＮ－１部分ポリペプチドと免疫学的反応性を有するモノクローナル抗体が作製される。このモノクローナル抗体は、例えば、配列番号９、配列番号１９、配列番号５８、配列番号６３、配列番号６９又は配列番号７７のアミノ酸配列を有する重鎖可変（ＶＨ）領域と、配列番号１３、配列番号２３、配列番号５３、配列番号６２、配列番号６５、配列番号７３又は配列番号８１のアミノ酸配列を有する軽鎖可変（ＶＬ）領域とを含むものである。本モノクローナル抗体は、該ＶＨ領域に配列番号６、配列番号１６、配列番号５５、配列番号６６又配列番号７４のアミノ酸配列で表されるＣＤＲ１、配列番号７、配列番号１７、配列番号５６、配列番号６７又は配列番号７５のアミノ酸配列で表されるＣＤＲ２、及び配列番号８、配列番号１８、配列番号５７、配列番号６８又は配列番号７６のアミノ酸配列で表されるＣＤＲ３を含み、該ＶＬ領域に、配列番号１０、配列番号２０、配列番号５０、配列番号５９、配列番号７０又は配列番号７８のアミノ酸配列で表されるＣＤＲ１、配列番号１１、配列番号２１、配列番号５１、配列番号６０、配列番号６４、配列番号７１又は配列番号７９のアミノ酸配列で表されるＣＤＲ２、及び配列番号１２、配列番号２２、配列番号５２、配列番号６１、配列番号７２又は配列番号８０のアミノ酸配列で表されるＣＤＲ３を含みうる。
　ヒト化抗体は、再構成（ｒｅｓｈａｐｅｄ）ヒト抗体とも称される改変抗体である。ヒト化抗体は、免疫動物由来の抗体のＣＤＲを、ヒト抗体の相補性決定領域へ移植することによって構築される。その一般的な遺伝子組換え手法も知られている。
　具体的には、例えばマウス抗体、ウサギ抗体やニワトリ抗体のＣＤＲとヒト抗体のフレームワーク領域（ｆｒａｍｅｗｏｒｋ　ｒｅｇｉｏｎ；　ＦＲ）を連結するように設計したＤＮＡ配列を、末端部にオーバーラップする部分を有するように作製した数個のオリゴヌクレオチドからＰＣＲ法により合成する。得られたＤＮＡを、ヒト抗体定常領域をコードするＤＮＡと連結し、次いで発現ベクターに組み込んで、これを宿主に導入し産生させることにより得られる（欧州特許出願公開第ＥＰ２３９４００号、国際公開第ＷＯ９６／０２５７６号参照）。ＣＤＲを介して連結されるヒト抗体のＦＲは、相補性決定領域が良好な抗原結合部位を形成するものが選択される。必要に応じ、再構成ヒト抗体の相補性決定領域が適切な抗原結合部位を形成するように抗体の可変領域におけるフレームワーク領域のアミノ酸を置換してもよい（Ｓａｔｏ　Ｋ．　ｅｔ　ａｌ．，　Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　１９９３，　５３：　８５１－８５６）。また、様々なヒト抗体由来のフレームワーク領域に置換してもよい（国際公開第ＷＯ９９／５１７４３号参照）。
　ＣＤＲを介して連結されるヒト抗体のフレームワーク領域は、相補性決定領域が良好な抗原結合部位を形成するものが選択される。必要に応じ、再構成ヒト抗体の相補性決定領域が適切な抗原結合部位を形成するように、抗体の可変領域におけるフレームワーク領域のアミノ酸を置換してもよい（Ｓａｔｏ　Ｋ．　ｅｔ　ａｌ．，　Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　１９９３，　５３：　８５１－８５６）。
　キメラ抗体やヒト化抗体を作製した後に、可変領域（例えば、ＦＲ）や定常領域中のアミノ酸を他のアミノ酸で置換等してもよい。
　アミノ酸の置換は、例えば１５未満、１０未満、８以下、７以下、６以下、５以下、４以下、３以下、又は２以下のアミノ酸、好ましくは１～５アミノ酸、より好ましくは１又は２アミノ酸、の置換であり、置換抗体は、未置換抗体と機能的に同等であるべきである。置換は、保存的アミノ酸置換が望ましく、これは、電荷、側鎖、極性、芳香族性などの性質の類似するアミノ酸間の置換である。性質の類似したアミノ酸は、例えば、塩基性アミノ酸（アルギニン、リジン、ヒスチジン）、酸性アミノ酸（アスパラギン酸、グルタミン酸）、無電荷極性アミノ酸（グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、トレオニン、システイン、チロシン）、無極性アミノ酸（ロイシン、イソロイシン、アラニン、バリン、プロリン、フェニルアラニン、トリプトファン、メチオニン）、分枝鎖アミノ酸（ロイシン、バリン、イソロイシン）、芳香族アミノ酸（フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、ヒスチジン）などに分類しうる。
　抗体修飾物としては、例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）等の各種分子と結合した抗体を挙げることができる。本発明の抗体修飾物においては、結合される物質は限定されない。このような抗体修飾物を得るには、得られた抗体に化学的な修飾を施すことによって得ることができる。これらの方法はこの分野において既に確立されている。
　ここで「機能的に同等」とは、対象となる抗体が本発明の抗体と同様の生物学的あるいは生化学的活性、具体的には腫瘍を障害する機能、を有すること、ヒトへの適用時に拒絶反応を本質的に起こさないことなどを指す。このような活性としては、例えば、細胞増殖抑制活性、あるいは結合活性を例示することができる。
　あるポリペプチドと機能的に同等なポリペプチドを調製するための、当業者によく知られた方法としては、ポリペプチドに変異を導入する方法が知られている。例えば、当業者であれば、部位特異的変異誘発法（Ｈａｓｈｉｍｏｔｏ－Ｇｏｔｏｈ，　Ｔ．　ｅｔ　ａｌ．，　（１９９５）　Ｇｅｎｅ　１５２，　２７１－２７５、Ｚｏｌｌｅｒ，　ＭＪ．，　ａｎｄ　Ｓｍｉｔｈ，　Ｍ．　（１９８３）　Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｅｎｚｙｍｏｌ．　１００，　４６８－５００、Ｋｒａｍｅｒ，　Ｗ．　ｅｔ　ａｌ．，　（１９８４）　Ｎｕｃｌｅｉｃ　Ａｃｉｄｓ　Ｒｅｓ．　１２，　９４４１－９４５６、Ｋｒａｍｅｒ，　Ｗ．　ａｎｄ　Ｆｒｉｔｚ，　ＨＪ．，　（１９８７）　Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｅｎｚｙｍｏｌ．　１５４，　３５０－３６７、Ｋｕｎｋｅｌ，　ＴＡ．，　（１９８５）　Ｐｒｏｃ．　Ｎａｔｌ．　Ａｃａｄ．　Ｓｃｉ．　ＵＳＡ．　８２，　４８８－４９２、Ｋｕｎｋｅｌ　（１９８８）　Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｅｎｚｙｍｏｌ．　８５，　２７６３－２７６６）などを用いて、本発明の抗体に適宜変異を導入することにより、該抗体と機能的に同等な抗体を調製することができる。
　上記ＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質のエピトープ又はそれを含むＣＡＰＲＩＮ－１断片ポリペプチドを認識する抗体は、当業者に公知の方法により得ることが可能である。例えば、上記で得られる癌細胞増殖抑制作用を有する抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体が認識するＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質のエピトープを通常の方法（例えば、エピトープマッピングや後述にあるエピトープの同定の方法など）により決定し、該エピトープに含まれるアミノ酸配列を有するポリペプチドを免疫原として抗体を作製する方法や、通常の方法で作製された抗体のエピトープを決定し、抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体とエピトープが同じ抗体を選択する方法などにより得ることができる。ここで、「エピトープ」は、哺乳動物、好ましくはヒトにおいて、抗原性又は免疫原性を有するポリペプチド断片を指し、その最小単位は、約７～１２アミノ酸、好ましくは８～１１アミノ酸からなる。
　本発明の抗体は、ＣＡＰＲＩＮ－１と免疫学的反応性を有する抗体、あるいは、ＣＡＰＲＩＮ－１を特異的に認識する抗体、あるいは、ＣＡＰＲＩＮ－１と特異的に結合する抗体であって、癌に対する細胞障害活性、又は腫瘍増殖抑制作用、を示す抗体である。該抗体は、それを投与する対象動物において拒絶反応がほとんど又はまったく回避されるような構造をもつ抗体であることが好ましい。そのような抗体としては、例えば対象動物がヒトである場合、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体（例えばヒト－マウスキメラ抗体）、単鎖抗体、二重特異性抗体などが挙げられる。これらの抗体は、重鎖及び軽鎖の可変領域がヒト抗体由来のものであるか、あるいは、重鎖及び軽鎖の可変領域が非ヒト動物抗体由来の相補性決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３）とヒト抗体由来のフレームワーク領域からなるものであるか、あるいは、重鎖及び軽鎖の可変領域が非ヒト動物抗体由来のものであり、かつ、重鎖及び軽鎖の定常領域がヒト抗体由来のものである組換え型抗体である。好ましい抗体は、前２つの抗体である。
　これらの組換え型抗体は、次のようにして作製することができる。ハイブリドーマなどの抗体産生細胞からヒトＣＡＰＲＩＮ－１に対するモノクローナル抗体（例えば、ヒトモノクローナル抗体、マウスモノクローナル抗体、ラットモノクローナル抗体、ウサギモノクローナル抗体、ニワトリモノクローナル抗体など）をコードするＤＮＡをクローニングし、これを鋳型にして該抗体の軽鎖可変領域及び重鎖可変領域をコードするＤＮＡをＲＴ－ＰＣＲ法等により作製し、Ｋａｂａｔ　ＥＵ　ｎｕｍｂｅｒｉｎｇ　ｓｙｓｔｅｍ（Ｋａｂａｔら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ　ｏｆ　Ｐｒｏｔｅｉｎｓ　ｏｆ　Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，　５ｔｈＥｄ．　Ｐｕｂｌｉｃ　Ｈｅａｌｔｈ　Ｓｅｒｖｉｃｅ，　Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　ｏｆ　Ｈｅａｌｔｈ，　Ｂｅｔｈｅｓｄａ，　Ｍｄ．　（１９９１））に基づいて軽鎖及び重鎖の各可変領域の配列又は各ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、ＣＤＲ３の配列を決定する。
　さらに、これらの各可変領域をコードするＤＮＡ又は各ＣＤＲをコードするＤＮＡを、遺伝子組換え技術（Ｓａｍｂｒｏｏｋら，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｃｌｏｎｉｎｇ　Ａ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　Ｍａｎｕａｌ，　Ｃｏｌｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　Ｈａｒｂｏｒ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　Ｐｒｅｓｓ　（１９８９））又はＤＮＡ合成機を用いて作製する。ここで、上記ヒトモノクローナル抗体産生ハイブリドーマは、ヒト抗体産生動物（例えば、マウス）にヒトＣＡＰＲＩＮ－１を免疫したのち、該免疫動物から切除した脾細胞とミエローマ細胞とを融合させることによって作製することができる。これとは別に、必要に応じて、遺伝子組換え技術又はＤＮＡ合成機を用いてヒト抗体由来の軽鎖又は重鎖の可変領域及び定常領域をコードするＤＮＡを作製する。
　ヒト化抗体の場合には、ヒト抗体由来の軽鎖又は重鎖の可変領域をコードするＤＮＡ中のＣＤＲコーディング配列を、それらに対応する、ヒト以外の動物（例えばマウス、ラット、ウサギ、ニワトリなど）由来の抗体のＣＤＲコーディング配列と置換したＤＮＡを作製し、それによって得られたＤＮＡをそれぞれ、ヒト抗体由来の軽鎖又は重鎖の定常領域をコードするＤＮＡと連結することによって、ヒト化抗体をコードするＤＮＡを作製することができる。
　キメラ抗体の場合には、ヒト以外の動物（例えばマウス、ラット、ウサギ、ニワトリなど）由来の抗体の軽鎖又は重鎖の可変領域をコードするＤＮＡをそれぞれ、ヒト抗体由来の軽鎖又は重鎖の定常領域をコードするＤＮＡと連結することによって、キメラ抗体をコードするＤＮＡを作製することができる。
　単鎖抗体の場合には、この抗体は重鎖可変領域と軽鎖可変領域とをリンカーを介して直線状に連結された抗体であり、重鎖可変領域をコードするＤＮＡ、リンカーをコードするＤＮＡ、及び軽鎖可変領域をコードするＤＮＡを結合することによって単鎖抗体をコードするＤＮＡを作製することができる。ここで、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域はいずれも、ヒト抗体由来のものであるか、あるいは、ＣＤＲのみヒト以外の動物（例えばマウス、ラット、ウサギ、ニワトリなど）由来の抗体のＣＤＲによって置換されたヒト抗体由来のものである。また、リンカーは、１２～１９アミノ酸からなり、例えば１５アミノ酸の（Ｇ４Ｓ）３（Ｇ．　-Ｂ．　Ｋｉｍら，Ｐｒｏｔｅｉｎ　Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ　Ｄｅｓｉｇｎ　ａｎｄ　Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ　２００７，　２０（９）：　４２５－４３２）が挙げられる。
　二重特異性抗体（ｄｉａｂｏｄｙ）の場合には、この抗体は２つの異なるエピトープと特異的に結合可能な抗体であり、例えば重鎖可変領域ＡをコードするＤＮＡ、軽鎖可変領域ＢをコードするＤＮＡ、重鎖可変領域ＢをコードするＤＮＡ、及び軽鎖可変領域ＡをコードするＤＮＡをこの順序で結合する（ただし、軽鎖可変領域ＢをコードするＤＮＡと重鎖可変領域ＢをコードするＤＮＡとは上記のようなリンカーをコードするＤＮＡを介して結合される。）ことによって二重特異性抗体をコードするＤＮＡを作製することができる。ここで、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域はいずれも、ヒト抗体由来のものであるか、あるいは、ＣＤＲのみヒト以外の動物（例えばマウス、ラット、ウサギ、ニワトリなど）由来の抗体のＣＤＲによって置換されたヒト抗体由来のものである。
　上記のようにして作製された組換えＤＮＡを、１つ又は複数の適当なベクターに組み込み、これを宿主細胞（例えば、哺乳動物細胞、酵母細胞、昆虫細胞など）に導入し、（共）発現させることによって組換え型抗体を作製することができる（Ｐ．Ｊ．　Ｄｅｌｖｅｓ．，　ＡＮＴＩＢＯＤＹ　ＰＲＯＤＵＣＴＩＯＮ　ＥＳＳＥＮＴＩＡＬ　ＴＥＣＨＮＩＱＵＥＳ．，　１９９７　ＷＩＬＥＹ、Ｐ．　Ｓｈｅｐｈｅｒｄ　ａｎｄ　Ｃ．　Ｄｅａｎ．，　Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ　Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ．，　２０００　ＯＸＦＯＲＤ　ＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ　ＰＲＥＳＳ；　Ｊ．Ｗ．　Ｇｏｄｉｎｇ．，　Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ　Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：　ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ　ａｎｄ　ｐｒａｃｔｉｃｅ．，　１９９３　ＡＣＡＤＥＭＩＣ　ＰＲＥＳＳ）。
　上記の方法によって作製される本発明の抗体としては、例えば後述の実施例で取得された以下の（ａ）から（ｇ）の抗体が挙げられる。
　（ａ）配列番号６、７及び８の相補性決定領域を含む重鎖可変領域と配列番号１０、１１及び１２の相補性決定領域を含む軽鎖可変領域とを含む抗体（例えば、配列番号９の重鎖可変領域及び配列番号１３の軽鎖可変領域で構成される抗体）。
　（ｂ）配列番号１６、１７及び１８の相補性決定領域を含む重鎖可変領域と配列番号２０、２１及び２２の相補性決定領域を含む軽鎖可変領域とを含む抗体（例えば、配列番号１９の重鎖可変領域及び配列番号２３の軽鎖可変領域で構成される抗体）。
　（ｃ）配列番号６、７及び８の相補性決定領域を含む重鎖可変領域と配列番号５０、５１及び５２の相補性決定領域を含む軽鎖可変領域とを含む抗体（例えば、配列番号９の重鎖可変領域及び配列番号５３の軽鎖可変領域で構成される抗体）。
　（ｄ）配列番号５５、５６及び５７の相補性決定領域を含む重鎖可変領域と配列番号５９、６０及び６１の相補性決定領域を含む軽鎖可変領域とを含む抗体（例えば、配列番号５８の重鎖可変領域及び配列番号６２の軽鎖可変領域で構成される抗体）。
　（ｅ）配列番号５５、５６及び５７の相補性決定領域を含む重鎖可変領域と配列番号５９、６４及び６１の相補性決定領域を含む軽鎖可変領域とを含む抗体（例えば、配列番号６３の重鎖可変領域及び配列番号６５の軽鎖可変領域で構成される抗体）。
　（ｆ）配列番号６６、６７及び６８の相補性決定領域を含む重鎖可変領域と配列番号７０、７１及び７２の相補性決定領域を含む軽鎖可変領域とを含む抗体（例えば、配列番号６９の重鎖可変領域及び配列番号７３の軽鎖可変領域で構成される抗体）。
　（ｇ）配列番号７４、７５及び７６の相補性決定領域を含む重鎖可変領域と配列番号７８、７９及び８０の相補性決定領域を含む軽鎖可変領域とを含む抗体（例えば、配列番号７７の重鎖可変領域及び配列番号８１の軽鎖可変領域で構成される抗体）。
　ここで、配列番号６、７及び８、配列番号１６、１７及び１８に示すアミノ酸配列は、それぞれ、マウス抗体由来の重鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３であり、また、配列番号１０、１１及び１２、配列番号２０、２１及び２２、配列番号５０、５１及び５２に示すアミノ酸配列はそれぞれ、マウス抗体由来の軽鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３である。配列番号５５、５６及び５７、配列番号６６、６７及び６８、並びに配列番号７４、７５及び７６に示すアミノ酸配列はニワトリ抗体由来の重鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３であり、また、配列番号５９、６０及び６１、配列番号５９、６４及び６１、配列番号７０、７１及び７２、並びに配列番号７８、７９及び８０に示すアミノ酸配列はニワトリ抗体由来の軽鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３である。
　また、本発明のヒト化抗体、キメラ抗体、単鎖抗体又は二重特異性抗体は、例えば以下の抗体である。以下には抗体（ａ）について例示するが、他の抗体（ｂ）～（ｇ）についても同様の態様があり得る。
　（ｉ）重鎖の可変領域が配列番号６、７及び８のアミノ酸配列及びヒト抗体由来のフレームワーク領域のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖の可変領域が配列番号１０、１１及び１２のアミノ酸配列及びヒト抗体由来のフレームワーク領域のアミノ酸配列を含む抗体。
　（ｉｉ）重鎖の可変領域が配列番号６、７及び８のアミノ酸配列及びヒト抗体由来のフレームワーク領域のアミノ酸配列を含み、かつ、重鎖の定常領域がヒト抗体由来のアミノ酸配列を含み、並びに、軽鎖の可変領域が配列番号１０、１１及び１２のアミノ酸配列及びヒト抗体由来のフレームワーク領域のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖の定常領域がヒト抗体由来のアミノ酸配列を含んでなる抗体。
　（ｉｉｉ）重鎖の可変領域が配列番号９のアミノ酸配列を含み、かつ、重鎖の定常領域がヒト抗体由来のアミノ酸配列を含む、並びに、軽鎖の可変領域が配列番号１３のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖の定常領域がヒト抗体由来のアミノ酸配列を含んでなる抗体。
　なお、ヒト抗体重鎖及び軽鎖の定常領域及び可変領域の配列は、例えばＮＣＢＩ（米国：ＧｅｎＢａｎｋ、ＵｎｉＧｅｎｅなど）から入手可能であり、例えばヒトＩｇＧ１重鎖定常領域については登録番号Ｊ００２２８、ヒトＩｇＧ２重鎖定常領域については登録番号Ｊ００２３０、ヒトＩｇＧ３重鎖定常領域については登録番号Ｘ０３６０４、ヒトＩｇＧ４重鎖定常領域については登録番号Ｋ０１３１６、ヒト軽鎖κ定常領域については登録番号Ｖ００５５７、Ｘ６４１３５、Ｘ６４１３３など、ヒト軽鎖λ定常領域については登録番号Ｘ６４１３２、Ｘ６４１３４などの配列を参照することができる。
　上記抗体は、好ましくは、細胞障害活性を有しており、これによって抗腫瘍効果を発揮することができる。
　また、上記抗体における重鎖及び軽鎖の可変領域やＣＤＲの特定の配列は、単に例示を目的としたものであり、特定の配列に限定されないことは明らかである。ヒトＣＡＰＲＩＮ－１に対する別のヒト抗体又は非ヒト動物抗体（例えばマウス抗体）を産生しうるハイブリドーマを作製し、ハイブリドーマが産生するモノクローナル抗体を回収し、ヒトＣＡＰＲＩＮ－１との免疫学的結合性及び細胞障害活性を指標として目的の抗体であるか否かを判定する。それによって目的のモノクローナル抗体産生ハイブリドーマを識別したのち、上記のとおり、該ハイブリドーマから目的の抗体の重鎖及び軽鎖の可変領域をコードするＤＮＡを作製し配列決定し、該ＤＮＡを別の抗体の作製のために利用する。
　さらに上記抗体は、ＣＡＰＲＩＮ－１を特異的に認識するという特異性を有する限り、上記（ａ）～（ｇ）の各抗体の特にＣＤＲ以外の領域、例えばフレームワーク領域の配列及び／又は定常領域の配列において、１若しくは数個のアミノ酸の置換、欠失又は付加があってもよい。ここで数個とは、好ましくは２～５個、より好ましくは２個又は３個を意味する。
　本発明の抗体の、ＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質又はその断片に対する親和定数Ｋａ（ｋｏｎ／ｋｏｆｆ）は、好ましくは、少なくとも１０７Ｍ－１、少なくとも１０８Ｍ－１、少なくとも５×１０８Ｍ－１、少なくとも１０９Ｍ－１、少なくとも５×１０９Ｍ－１、少なくとも１０１０Ｍ－１、少なくとも５×１０１０Ｍ－１、少なくとも１０１１Ｍ－１、少なくとも５×１０１１Ｍ－１、少なくとも１０１２Ｍ－１、あるいは、少なくとも１０１３Ｍ－１である。
　本発明の抗体は、抗腫瘍剤とコンジュゲートすることができる。抗体と抗腫瘍剤との結合は、アミノ基、カルボキシル基、ヒドロキシ基、チオール基などと反応性の基（例えば、コハク酸イミジル基、ホルミル基、２－ピリジルジチオ基、マレイイミジル基、アルコキシカルボニル基、ヒドロキシ基など）をもつスペーサーを介して行うことができる。
　抗腫瘍剤の例は、文献等で公知の下記の抗腫瘍剤、すなわち、パクリタキセル、ドキソルビシン、ダウノルビシン、シクロホスファミド、メトトレキサート、５－フルオロウラシル、チオテパ、ブスルファン、インプロスルファン、ピポスルファン、ベンゾドーパ（ｂｅｎｚｏｄｏｐａ）、カルボコン、メツレドーパ（ｍｅｔｕｒｅｄｏｐａ）、ウレドーパ（ｕｒｅｄｏｐａ）、アルトレートアミン（ａｌｔｒｅｔａｍｉｎｅ）、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホラミド、トリエチレンチオホスホラミド（ｔｒｉｅｔｈｉｌｅｎｅｔｈｉｏｐｈｏｓｐｈｏｒａｍｉｄｅ）、トリメチローロメラミン（ｔｒｉｍｅｔｈｙｌｏｌｏｍｅｌａｍｉｎｅ）、ブラタシン、ブラタシノン、カンプトセシン、ブリオスタチン、カリスタチン（ｃａｌｌｙｓｔａｔｉｎ）、クリプトフィシン１、クリプトフィシン８、ドラスタチン、ズオカルマイシン、エレウテロビン、パンクラチスタチン、サルコジクチン（ｓａｒｃｏｄｉｃｔｙｉｎ）、スポンジスタチン、クロランブシル、クロロナファジン（ｃｈｌｏＲＮＡｐｈａｚｉｎｅ）、コロホスファミド（ｃｈｏｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、メクロレタミンオキシドヒドロクロリド、メルファラン、ノベンビチン（ｎｏｖｅｍｂｉｃｈｉｎ）、フェネステリン（ｐｈｅｎｅｓｔｅｒｉｎｅ）、プレドニムスチン（ｐｒｅｄｎｉｍｕｓｔｉｎｅ）、トロフォスファミド（ｔｒｏｆｏｓｆａｍｉｄｅ）、ウラシルマスタード、カルムスチン、クロロゾトシン（ｃｈｌｏｒｏｚｏｔｏｃｉｎ）、フォテムスチン（ｆｏｔｅｍｕｓｔｉｎｅ）、ロムスチン、ニムスチン、ラニムスチン、カリケアマイシン（ｃａｌｉｃｈｅａｍｉｃｉｎ）、ダイネマイシン、クロドロネート、エスペラマイシン、アクラシノマイシン、アクチノマイシン、オースラマイシン（ａｕｔｈｒａｍｙｃｉｎ）、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン（ｃａｃｔｉｎｏｍｙｃｉｎ）、カラビシン（ｃａｒａｂｉｃｉｎ）、カルミノマイシン、カルジノフィリン（ｃａｒｚｉｎｏｐｈｉｌｉｎ）、クロモマイシン、ダクチノマイシン、デトルビシン（ｄｅｔｏｒｂｉｃｉｎ）、６－ジアゾ－５－オキソ－Ｌ－ノルロイシン、アドリアマイシン（ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ）、エピルビシン、エソルビシン、イダルビシン、マーセロマイシン（ｍａｒｃｅｌｌｏｍｙｃｉｎ）、マイトマイシンＣ、マイコフェノール酸（ｍｙｃｏｐｈｅｎｏｌｉｃ　ａｃｉｄ）、ノガラマイシン（ｎｏｇａｌａｍｙｃｉｎ）、オリボマイシン（ｏｌｉｖｏｍｙｃｉｎｓ）、ペプロマイシン、ポトフィロマイシン（ｐｏｔｆｉｒｏｍｙｃｉｎ）、ピューロマイシン、ケラマイシン（ｑｕｅｌａｍｙｃｉｎ）、ロドルビシン（ｒｏｄｏｒｕｂｉｃｉｎ）、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン（ｔｕｂｅｒｃｉｄｉｎ）、ウベニメクス、ジノスタチン（ｚｉｎｏｓｔａｔｉｎ）、ゾルビシン（ｚｏｒｕｂｉｃｉｎ）、デノプテリン（ｄｅｎｏｐｔｅｒｉｎ）、プテロプテリン（ｐｔｅｒｏｐｔｅｒｉｎ）、トリメトレキセート（ｔｒｉｍｅｔｒｅｘａｔｅ）、フルダラビン（ｆｌｕｄａｒａｂｉｎｅ）、６－メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニン、アンシタビン、アザシチジン（ａｚａｃｉｔｉｄｉｎｅ）、６－アザウリジン（ａｚａｕｒｉｄｉｎｅ）、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン（ｅｎｏｃｉｔａｂｉｎｅ）、フロキシウリジン（ｆｌｏｘｕｒｉｄｉｎｅ）；アンドロゲン類、例えばカルステロン（ｃａｌｕｓｔｅｒｏｎｅ）、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトン（ｔｅｓｔｏｌａｃｔｏｎｅ）、アミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタン、フロリン酸（ｆｒｏｌｉｎｉｃ　ａｃｉｄ）、アセグラトン、アルドホスファミドグリコシド、アミノレブリン酸、エニルウラシル、アムサクリン（ａｍｓａｃｒｉｎｅ）、ベストラブシル（ｂｅｓｔｒａｂｕｃｉｌ）、ビサントレン（ｂｉｓａｎｔｒｅｎｅ）、エダトラキセート（ｅｄａｔｒａｘａｔｅ）、デフォファミン（ｄｅｆｏｆａｍｉｎｅ）、デメコルシン（ｄｅｍｅｃｏｌｃｉｎｅ）、ジアジコン（ｄｉａｚｉｑｕｏｎｅ）、エルフォルニチン　（ｅｌｆｏｒｎｉｔｈｉｎｅ）、酢酸エリプチニウム（ｅｌｌｉｐｔｉｎｉｕｍ）、エポチロン（ｅｐｏｔｈｉｌｏｎｅ）、エトグルシド（ｅｔｏｇｌｕｃｉｄ）、レンチナン、ロニダミン（ｌｏｎｉｄａｍｉｎｅ）、メイタンシン（ｍａｙｔａｎｓｉｎｅ）、アンサミトシン（ａｎｓａｍｉｔｏｃｉｎｅ）、ミトグアゾン（ｍｉｔｏｇｕａｚｏｎｅ）、ミトキサントロン、モピダンモール（ｍｏｐｉｄａｎｍｏｌ）、ニトラエリン（ｎｉｔｒａｅｒｉｎｅ）、ペントスタチン、フェナメット（ｐｈｅｎａｍｅｔ）、ピラルビシン、ロソキサントロン（ｌｏｓｏｘａｎｔｒｏｎｅ）、ポドフィリン酸（ｐｏｄｏｐｈｙｌｌｉｎｉｃ　ａｃｉｄ）、２－エチルヒドラジド、プロカルバジン、ラゾキサン（ｒａｚｏｘａｎｅ）、リゾキシン、シゾフィラン、スピロゲルマニウム（ｓｐｉｒｏｇｅｒｍａｎｉｕｍ）、テニュアゾン酸（ｔｅｎｕａｚｏｎｉｃ　ａｃｉｄ）、トリアジコン（ｔｒｉａｚｉｑｕｏｎｅ）、ロリジン（ｒｏｒｉｄｉｎｅ）Ａ、アングイジン（ａｎｇｕｉｄｉｎｅ）、ウレタン、ビンデシン、ダカーバジン、マンノムスチン（ｍａｎｎｏｍｕｓｔｉｎｅ）、ミトブロニトール、ミトラクトール（ｍｉｔｏｌａｃｔｏｌ）、ピポブロマン（ｐｉｐｏｂｒｏｍａｎ）、ガシトシン（ｇａｃｙｔｏｓｉｎｅ）、ドキセタキセル、クロランブシル、ゲムシタビン（ｇｅｍｃｉｔａｂｉｎｅ）、６－チオグアニン、メルカプトプリン、シスプラチン、オキサリプラチン、カルボプラチン、ビンブラスチン、エトポシド、イホスファミド、マイトキサントロン、ビンクリスチン、ビノレルビン、ノバントロン（ｎｏｖａｎｔｒｏｎｅ）、テニポシド、エダトレキセート（ｅｄａｔｒｅｘａｔｅ）、ダウノマイシン、アミノプテリン、キセローダ（ｘｅｌｏｄａ）、イバンドロナート（ｉｂａｎｄｒｏｎａｔｅ）、イリノテカン、トポイソメラーゼインヒビター、ジフルオロメチロールニチン（ＤＭＦＯ）、レチノイン酸、カペシタビン（ｃａｐｅｃｉｔａｂｉｎｅ）、並びにそれらの薬学的に許容可能な塩又は誘導体を包含する。
　また、本発明の抗体と、抗腫瘍剤を併用投与することで、より高い治療効果を得ることができる。本手法は、ＣＡＰＲＩＮ－１が発現している癌患者に対して、外科的手術前後どちらにおいても適応できる。特に手術後に、従来抗腫瘍剤単独で処置されていたＣＡＰＲＩＮ－１が発現している癌に対して、より高い癌再発防止や生存期間の延長が得られる。
　本発明の抗体との併用投与に用いられる抗腫瘍剤の例は、文献等で公知の下記の抗腫瘍剤、すなわち、パクリタキセル、ドキソルビシン、ダウノルビシン、シクロホスファミド、メトトレキサート、５－フルオロウラシル、チオテパ、ブスルファン、インプロスルファン、ピポスルファン、ベンゾドーパ（ｂｅｎｚｏｄｏｐａ）、カルボコン、メツレドーパ（ｍｅｔｕｒｅｄｏｐａ）、ウレドーパ（ｕｒｅｄｏｐａ）、アルトレートアミン（ａｌｔｒｅｔａｍｉｎｅ）、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホラミド、トリエチレンチオホスホラミド（ｔｒｉｅｔｈｉｌｅｎｅｔｈｉｏｐｈｏｓｐｈｏｒａｍｉｄｅ）、トリメチローロメラミン（ｔｒｉｍｅｔｈｙｌｏｌｏｍｅｌａｍｉｎｅ）、ブラタシン、ブラタシノン、カンプトセシン、ブリオスタチン、カリスタチン（ｃａｌｌｙｓｔａｔｉｎ）、クリプトフィシン１、クリプトフィシン８、ドラスタチン、ズオカルマイシン、エレウテロビン、パンクラチスタチン、サルコジクチン（ｓａｒｃｏｄｉｃｔｙｉｎ）、スポンジスタチン、クロランブシル、クロロナファジン（ｃｈｌｏＲＮＡｐｈａｚｉｎｅ）、コロホスファミド（ｃｈｏｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、メクロレタミンオキシドヒドロクロリド、メルファラン、ノベンビチン（ｎｏｖｅｍｂｉｃｈｉｎ）、フェネステリン（ｐｈｅｎｅｓｔｅｒｉｎｅ）、プレドニムスチン（ｐｒｅｄｎｉｍｕｓｔｉｎｅ）、トロフォスファミド（ｔｒｏｆｏｓｆａｍｉｄｅ）、ウラシルマスタード、カルムスチン、クロロゾトシン（ｃｈｌｏｒｏｚｏｔｏｃｉｎ）、フォテムスチン（ｆｏｔｅｍｕｓｔｉｎｅ）、ロムスチン、ニムスチン、ラニムスチン、カリケアマイシン（ｃａｌｉｃｈｅａｍｉｃｉｎ）、ダイネマイシン、クロドロネート、エスペラマイシン、アクラシノマイシン、アクチノマイシン、オースラマイシン（ａｕｔｈｒａｍｙｃｉｎ）、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン（ｃａｃｔｉｎｏｍｙｃｉｎ）、カラビシン（ｃａｒａｂｉｃｉｎ）、カルミノマイシン、カルジノフィリン（ｃａｒｚｉｎｏｐｈｉｌｉｎ）、クロモマイシン、ダクチノマイシン、デトルビシン（ｄｅｔｏｒｂｉｃｉｎ）、６－ジアゾ－５－オキソ－Ｌ－ノルロイシン、アドリアマイシン（ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ）、エピルビシン、エソルビシン、イダルビシン、マーセロマイシン（ｍａｒｃｅｌｌｏｍｙｃｉｎ）、マイトマイシンＣ、マイコフェノール酸（ｍｙｃｏｐｈｅｎｏｌｉｃ　ａｃｉｄ）、ノガラマイシン（ｎｏｇａｌａｍｙｃｉｎ）、オリボマイシン（ｏｌｉｖｏｍｙｃｉｎｓ）、ペプロマイシン、ポトフィロマイシン（ｐｏｔｆｉｒｏｍｙｃｉｎ）、ピューロマイシン、ケラマイシン（ｑｕｅｌａｍｙｃｉｎ）、ロドルビシン（ｒｏｄｏｒｕｂｉｃｉｎ）、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン（ｔｕｂｅｒｃｉｄｉｎ）、ウベニメクス、ジノスタチン（ｚｉｎｏｓｔａｔｉｎ）、ゾルビシン（ｚｏｒｕｂｉｃｉｎ）、デノプテリン（ｄｅｎｏｐｔｅｒｉｎ）、プテロプテリン（ｐｔｅｒｏｐｔｅｒｉｎ）、トリメトレキセート（ｔｒｉｍｅｔｒｅｘａｔｅ）、フルダラビン（ｆｌｕｄａｒａｂｉｎｅ）、６－メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニン、アンシタビン、アザシチジン（ａｚａｃｉｔｉｄｉｎｅ）、６－アザウリジン（ａｚａｕｒｉｄｉｎｅ）、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン（ｅｎｏｃｉｔａｂｉｎｅ）、フロキシウリジン（ｆｌｏｘｕｒｉｄｉｎｅ）、カルステロン（ｃａｌｕｓｔｅｒｏｎｅ）、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトン（ｔｅｓｔｏｌａｃｔｏｎｅ）、アミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタン、フロリン酸（ｆｒｏｌｉｎｉｃ　ａｃｉｄ）、アセグラトン、アルドホスファミドグリコシド、アミノレブリン酸、エニルウラシル、アムサクリン（ａｍｓａｃｒｉｎｅ）、ベストラブシル（ｂｅｓｔｒａｂｕｃｉｌ）、ビサントレン（ｂｉｓａｎｔｒｅｎｅ）、エダトラキセート（ｅｄａｔｒａｘａｔｅ）、デフォファミン（ｄｅｆｏｆａｍｉｎｅ）、デメコルシン（ｄｅｍｅｃｏｌｃｉｎｅ）、ジアジコン（ｄｉａｚｉｑｕｏｎｅ）、エルフォルニチン　（ｅｌｆｏｒｎｉｔｈｉｎｅ）、酢酸エリプチニウム（ｅｌｌｉｐｔｉｎｉｕｍ）、エポチロン（ｅｐｏｔｈｉｌｏｎｅ）、エトグルシド（ｅｔｏｇｌｕｃｉｄ）、レンチナン、ロニダミン（ｌｏｎｉｄａｍｉｎｅ）、メイタンシン（ｍａｙｔａｎｓｉｎｅ）、アンサミトシン（ａｎｓａｍｉｔｏｃｉｎｅ）、ミトグアゾン（ｍｉｔｏｇｕａｚｏｎｅ）、ミトキサントロン、モピダンモール（ｍｏｐｉｄａｎｍｏｌ）、ニトラエリン（ｎｉｔｒａｅｒｉｎｅ）、ペントスタチン、フェナメット（ｐｈｅｎａｍｅｔ）、ピラルビシン、ロソキサントロン（ｌｏｓｏｘａｎｔｒｏｎｅ）、ポドフィリン酸（ｐｏｄｏｐｈｙｌｌｉｎｉｃ　ａｃｉｄ）、２－エチルヒドラジド、プロカルバジン、ラゾキサン（ｒａｚｏｘａｎｅ）、リゾキシン、シゾフィラン、スピロゲルマニウム（ｓｐｉｒｏｇｅｒｍａｎｉｕｍ）、テニュアゾン酸（ｔｅｎｕａｚｏｎｉｃ　ａｃｉｄ）、トリアジコン（ｔｒｉａｚｉｑｕｏｎｅ）、ロリジン（ｒｏｒｉｄｉｎｅ）Ａ、アングイジン（ａｎｇｕｉｄｉｎｅ）、ウレタン、ビンデシン、ダカーバジン、マンノムスチン（ｍａｎｎｏｍｕｓｔｉｎｅ）、ミトブロニトール、ミトラクトール（ｍｉｔｏｌａｃｔｏｌ）、ピポブロマン（ｐｉｐｏｂｒｏｍａｎ）、ガシトシン（ｇａｃｙｔｏｓｉｎｅ）、ドキセタキセル、クロランブシル、ゲムシタビン（ｇｅｍｃｉｔａｂｉｎｅ）、６－チオグアニン、メルカプトプリン、シスプラチン、オキサリプラチン、カルボプラチン、ビンブラスチン、エトポシド、イホスファミド、マイトキサントロン、ビンクリスチン、ビノレルビン、ノバントロン（ｎｏｖａｎｔｒｏｎｅ）、テニポシド、エダトレキセート（ｅｄａｔｒｅｘａｔｅ）、ダウノマイシン、アミノプテリン、キセローダ（ｘｅｌｏｄａ）、イバンドロナート（ｉｂａｎｄｒｏｎａｔｅ）、イリノテカン、トポイソメラーゼインヒビター、ジフルオロメチロールニチン（ＤＭＦＯ）、レチノイン酸、カペシタビン（ｃａｐｅｃｉｔａｂｉｎｅ）、並びにそれらの薬学的に許容可能な（公知の）塩又は（公知の）誘導体も包含する。上記の内、特にシクロホスファミド、パクリタキセル、ドキセタキセル、ビノレルビンが好ましく用いられる。
　あるいは、本発明の抗体には、文献等で公知の、２１１Ａｔ、１３１Ｉ、１２５Ｉ、９０Ｙ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、１５３ＳＭ、２１２Ｂｉ、３２Ｐ、１７５Ｌｕ、１７６Ｌｕなどの放射性同位体を結合することも可能である。放射性同位体は、腫瘍の治療や診断のために有効なものが望ましい。このような放射性同位体も、本発明における抗腫瘍剤に含まれる。
＜エピトープの同定＞
　本発明の抗体は、以下の実施例に示されるように、配列番号５で示されるアミノ酸配列をエピトープとする。本発明の抗体に対するエピトープを確認する方法の一つとして、配列番号５のポリペプチド（エピトープ）をプレートに固定化して、本エピトープに対する抗体の反応性を評価する方法があげられる。具体的には、オリゴエチレングリコールなどのスペーサーを介して吸電子性官能基が付いたプレートに配列番号５のポリペプチドを反応させて固定化したものに本発明の抗体を反応させ、ＨＲＰ（Ｈｏｒｓｅｒａｄｉｓｈ　Ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ）などで標識された、本発明の抗体に結合する二次抗体を反応させることで、抗体の反応性を評価（本発明の抗体のエピトープを確認）することができる。なお、プレートに固定化する配列番号５のポリペプチドは、本配列そのもの、または、一部修飾されたもの（Ｎ末端残基やＣ末端残基に数個の任意のアミノ酸やＫＬＨなどのタンパク質が修飾されたもの、あるいはＭＡＰタンパク質にポリペプチドを修飾したものなど）が用いられ、これらいずれかのペプチドに対して本発明の抗体が結合すればよい。
　一方、本発明の抗体であっても上記方法で配列番号５のポリペプチドに反応しない（エピトープを確認できない）場合がある。その場合には、実施例２に記載のように抗原と抗体が結合しやすい溶液条件下で抗原と抗体を反応させ免疫沈降法によって抗原－抗体複合体を取得した後、抗体に結合した部分のポリペプチドを分離して、そのアミノ酸配列を調べることで本発明の抗体のエピトープを確認することができる。なお、抗原は、前記の配列番号５のポリペプチドそのもの、一部修飾されたもの、またはＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質でも、上記方法で本発明の抗体が反応するエピトープが確認されればよい。
＜抗腫瘍効果＞
　本発明で用いられる抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体によるＣＡＰＲＩＮ－１発現癌細胞に対する抗腫瘍効果は、以下の機序により起こると考えられる：ＣＡＰＲＩＮ－１発現細胞のエフェクター細胞抗体依存的細胞障害性（ＡＤＣＣ）、及びＣＡＰＲＩＮ－１発現細胞の補体依存的細胞障害性（ＣＤＣ）。但しこの機序により本発明の範囲を限定することは意図しない。
　また、上記機序による抗腫瘍効果は、癌細胞の細胞表面に発現する抗体が結合する標的分子の数に相関することが知られている（Ｎｉｗａ　Ｒ．，　Ｃｌｉｎｉｃａｌ　Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　２００５　Ｍａｒ　１５；１１（６）：２３２７－２３３６）。癌細胞の細胞表面に発現する標的分子の数は、細胞表面の分子数を測定できる既存の測定キットを用いて調べることが可能である。すなわち、抗体が結合する標的分子の数は、標的分子に対する抗体などを一次抗体として癌細胞に反応させ、予め分子数が知られた検量線ビーズと共に、蛍光標識された抗一次抗体を反応させ、サンプルの平均蛍光強度を測定し、検量線を得て標的分子の数を知ることができる。
　従って、本発明で用いられる抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体の活性評価は、以下実施例に具体的に示されるように、生体外でＣＡＰＲＩＮ－１を発現する癌細胞に対して上記ＡＤＣＣ活性又はＣＤＣ活性を測定すること、あるいは本発明にある抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体を一次抗体として用いた場合の癌細胞の細胞表面に発現するＣＡＰＲＩＮ－１分子の数を調べることで評価することができる。
　本発明で用いられる抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体は、癌細胞上のＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質と結合し、上記活性によって、抗腫瘍作用を示すことから、癌の治療あるいは予防に有用であると考えられる。すなわち本発明は、抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体を有効成分とする、癌の治療及び／又は予防のための医薬組成物を提供する。抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体を人体に投与する目的（抗体治療）で使用する場合には、免疫原性を低下させるため、ヒト抗体やヒト化抗体にすることが好ましい。
　なお、抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体と癌細胞表面上のＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質との結合親和性が高い程、抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体による、より強い抗腫瘍活性が得られる。従って、本発明の抗体は、ＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質と高い結合親和性を有するため、より強い抗腫瘍効果が期待でき、癌の治療及び／又は予防を目的とした医薬組成物として適応することが可能になる。本発明の抗体は、高い結合親和性として、前述したように、結合定数（親和定数）Ｋａ（ｋｏｎ／ｋｏｆｆ）が、好ましくは、少なくとも１０７Ｍ－１、少なくとも１０８Ｍ－１、少なくとも５×１０８Ｍ－１、少なくとも１０９Ｍ－１、少なくとも５×１０９Ｍ－１、少なくとも１０１０Ｍ－１、少なくとも５×１０１０Ｍ－１、少なくとも１０１１Ｍ－１、少なくとも５×１０１１Ｍ－１、少なくとも１０１２Ｍ－１、あるいは、少なくとも１０１３Ｍ－１を有することが好ましい。
　また、抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体と結合する癌細胞表面上のＣＡＰＲＩＮ－１分子の数が多い程、抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体による、より強い抗腫瘍活性が得られる。抗腫瘍効果を期待するためには、ＣＡＰＲＩＮ－１分子の数は、本発明の抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体を測定に用いた場合に、該抗体が結合する癌細胞１個当たりのＣＡＰＲＩＮ－１分子の数が１０４個以上、好ましくは１０５個以上が望ましい。細胞表面上のＣＡＰＲＩＮ－１分子の数が多い腫瘍（癌細胞）が、本発明の抗体の投与対象となる癌として特に好ましい。
＜抗原発現細胞への結合＞
　抗体がＣＡＰＲＩＮ－１に結合する能力は、実施例で述べられるようなたとえばＥＬＩＳＡ、ウエスタンブロット法、免疫蛍光及びフローサイトメトリー分析などを用いた結合アッセイを利用して特定することができる。
＜免疫組織化学染色＞
　ＣＡＰＲＩＮ－１を認識する抗体は、当業者に周知の方法での免疫組織化学により、外科手術の間に患者から得た組織や、自然に又はトランスフェクション後にＣＡＰＲＩＮ－１を発現する細胞系を接種した異種移植組織を担持する動物から得た組織から、パラホルムアルデヒド又はアセトン固定した凍結切片又はパラホルムアルデヒドで固定したパラフィン包埋した組織切片を使用して、ＣＡＰＲＩＮ－１との反応性に関して試験することができる。
　免疫組織化学染色のため、ＣＡＰＲＩＮ－１に対して反応性のある抗体を、様々な方法で染色させることができる。例えば、ホースラディッシュペルオキシダーゼ複合ヤギ抗マウス抗体、ヤギ抗ウサギ抗体やヤギ抗ニワトリ抗体を反応させることにより、可視化することができる。
＜医薬組成物、及び癌の治療及び／又は予防方法＞
　本発明の癌の治療及び／又は予防のための医薬組成物の標的は、ＣＡＰＲＩＮ－１遺伝子を発現する癌（細胞）であれば特に限定されない。
　本明細書で使用される「腫瘍」及び「癌」という用語は、悪性新生物を意味し、互換的に使用される。
　本発明において対象となる癌としては、ＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質をコードする遺伝子を発現している癌であり、好ましくは、乳癌、腎癌、膵臓癌、大腸癌、肺癌、脳腫瘍、胃癌、子宮頸癌、卵巣癌、前立腺癌、膀胱癌、食道癌、白血病、リンパ腫、線維肉腫、肥満細胞腫又はメラノーマである。
　これらの特定の癌には、例えば、乳腺癌、複合型乳腺癌、乳腺悪性混合腫瘍、乳管内乳頭状腺癌、肺腺癌、扁平上皮癌、小細胞癌、大細胞癌、神経上皮組織性腫瘍である神経膠腫、脳室上衣腫、神経細胞性腫瘍、胎児型の神経外胚葉性腫瘍、神経鞘腫、神経線維腫、髄膜腫、慢性型リンパ球性白血病、リンパ腫、消化管型リンパ腫、消化器型リンパ腫、小～中細胞型リンパ腫、盲腸癌、上行結腸癌、下行結腸癌、横行結腸癌、Ｓ状結腸癌、直腸癌、卵巣上皮癌、胚細胞腫瘍、間質細胞腫瘍、膵管癌、浸潤性膵管癌、膵臓癌の腺癌、腺房細胞癌、腺扁平上皮癌、巨細胞腫、膵管内乳頭粘液性腫瘍、粘液性嚢胞腺癌、膵芽腫、漿液性嚢胞腺癌、固体乳頭状癌、ガストリノーマ、グルカゴノーマ、インスリノーマ、多発性内分泌腺腫症１（Ｗｅｒｍｅｒ症候群）、非機能性島細胞腫、ソマトスタチノーマ、ＶＩＰ産生腫瘍が包含されるが、これらに限定されない。
　また、対象となる好ましい被験者（患者）は、哺乳動物であり、例えば霊長類、ペット動物、家畜類、競技用動物などを含む哺乳動物であり、特にヒト、イヌ及びネコが好ましい。
　本発明で用いられる抗体を医薬組成物として用いる場合には、当業者に公知の方法で製剤化することが可能である。例えば、水若しくはそれ以外の薬学的に許容し得る液との無菌性溶液、又は懸濁液剤の注射剤の形で非経口的に使用できる。例えば、薬理学上許容される担体又は媒体、具体的には、滅菌水や生理食塩水、植物油、乳化剤、懸濁剤、界面活性剤、安定剤、香味剤、賦形剤、ベヒクル、防腐剤、結合剤などと適宜組み合わせて、一般に認められた製薬実施に要求される単位用量形態で混和することによって製剤化することが考えられる。これら製剤における有効成分量は指示された範囲の適当な用量が得られるようにするものである。
　注射のための無菌組成物は注射用蒸留水のようなベヒクルを用いて通常の製剤実施に従って処方することができる。
　注射用の水溶液としては、例えば生理食塩水、ブドウ糖やその他の補助薬を含む等張液、例えばＤ－ソルビトール、Ｄ－マンノース、Ｄ－マンニトール、塩化ナトリウムが挙げられ、適当な溶解補助剤、例えばアルコール、具体的にはエタノール、ポリアルコール、例えばプロピレングリコール、ポリエチレングリコール、非イオン性界面活性剤、例えばポリソルベート８０（ＴＭ）、ＨＣＯ－６０と併用してもよい。
　油性液としてはゴマ油、大豆油があげられ、溶解補助剤として安息香酸ベンジル、ベンジルアルコールと併用してもよい。また、緩衝剤、例えばリン酸塩緩衝液、酢酸ナトリウム緩衝液、無痛化剤、例えば、塩酸プロカイン、安定剤、例えばベンジルアルコール、フェノール、酸化防止剤と配合してもよい。調製された注射液は通常、適当なアンプルに充填させる。
　投与は、経口又は非経口であり、好ましくは非経口投与であり、具体的には、注射剤型、経鼻投与剤型、経肺投与剤型、経皮投与型などが挙げられる。注射剤型の例としては、例えば、静脈内注射、筋肉内注射、腹腔内注射、皮下注射などにより全身又は局部的に投与することができる。
　また、患者の年齢、体重、性別、症状などにより適宜投与方法を選択することができる。抗体又は抗体をコードするポリヌクレオチドを含有する医薬組成物の投与量としては、例えば、一回につき体重１ｋｇあたり０．０００１ｍｇから１０００ｍｇの範囲で選ぶことが可能である。あるいは、例えば、患者あたり０．００１～１０００００ｍｇ／ｂｏｄｙの範囲で投与量を選ぶことができるが、これらの数値に必ずしも制限されるものではない。投与量、投与方法は、患者の体重、年齢、性別、症状などにより変動するが、当業者であれば適宜選択することが可能である。
　本発明の抗体又はそのフラグメントを含む上記の医薬組成物を被験者に投与することによって癌、好ましくは、乳癌、腎癌、膵臓癌、大腸癌、肺癌、脳腫瘍、胃癌、子宮頸癌、卵巣癌、前立腺癌、膀胱癌、食道癌、白血病、リンパ腫、線維肉腫、肥満細胞腫又はメラノーマを治療及び／又は予防することができる。
　さらに、本発明の医薬組成物を、上で例示したような抗腫瘍剤又は抗腫瘍剤を含む医薬組成物と組み合わせて、被験者に併用投与することを含む、癌の治療及び／又は予防方法も本発明に包含される。本発明の抗体又はそのフラグメントと抗腫瘍剤は、同時に、又は、別々に被験者に投与されうる。別々に投与する場合には、いずれの医薬組成物が先であっても又は後であってもよく、それらの投与間隔、投与量、投与経路及び投与回数は、専門医によって適宜選択されうる。同時に投与する別の医薬剤型には、例えば、本発明の抗体又はそのフラグメントと抗腫瘍剤を、薬理学上許容される担体（又は媒体）中で混合し製剤化して得られる医薬組成物も包含されるものとする。また、抗腫瘍剤を含有する上記医薬組成物及び剤型のいずれに対しても、本発明の抗体を含有する医薬組成物及び剤型についての処方、製剤化、投与経路、用量、癌などの説明を適用しうる。
　したがって、本発明は、本発明の医薬組成物と、上で例示したような抗腫瘍剤を含む医薬組成物とを含む、癌の治療及び／又は予防のための組み合わせ医薬品及びそれを投与することを含む、癌の治療及び／又は予防方法も提供する。また、本発明は、本発明の抗体又はそのフラグメントと抗腫瘍剤とを、薬理学上許容される担体とともに含む、癌の治療及び／又は予防のための医薬組成物も提供する。
＜ポリペプチド及びＤＮＡ＞
　本発明はさらに、本発明の上記抗体又はそのフラグメント（抗体結合フラグメント）をコードするＤＮＡも提供する。そのようなＤＮＡは、上記抗体の重鎖及び／又は軽鎖をコードするＤＮＡであってもよいし、上記抗体の重鎖可変領域及び／又は軽鎖可変領域をコードするＤＮＡであってもよい。そのようなＤＮＡはまた、上記抗体の各相補性決定領域を単独で又は組み合わせてコードするＤＮＡであってもよい。そのようなＤＮＡは、例えば、上記抗体（ａ）の場合、配列番号６、７及び８のアミノ酸配列をコードする塩基配列を含む重鎖可変領域をコードするＤＮＡ、配列番号１０、１１及び１２のアミノ酸配列をコードする塩基配列を含む軽鎖可変領域をコードするＤＮＡ、などを含む。
　これらの配列のＤＮＡによってコードされる相補性決定領域（ＣＤＲ）が抗体の特異性を決定する領域であるため、抗体のそれ以外の領域（すなわち、定常領域及びフレームワーク領域）をコードする配列は他の抗体由来の配列であってもよい。ここで他の抗体とはヒト以外の生物由来の抗体も含むが、副作用低減の観点からはヒト由来のものが好ましい。すなわち、上記のＤＮＡでは、重鎖及び軽鎖の各フレームワーク領域及び各定常領域をコードする領域がヒト抗体由来の対応アミノ酸配列をコードする塩基配列を含むことが好ましい。
　さらに、本発明の抗体をコードするＤＮＡの別の例は、例えば上記抗体（ａ）の場合、配列番号９のアミノ酸配列をコードする塩基配列を含む重鎖可変領域をコードするＤＮＡ、軽鎖可変領域をコードする領域が配列番号１３のアミノ酸配列をコードする塩基配列を含むＤＮＡなどである。ここで、配列番号９のアミノ酸配列をコードする塩基配列の例は、配列番号１４の塩基配列である。また、配列番号１３のアミノ酸配列をコードする塩基配列の例は、配列番号１５の塩基配列である。これらのＤＮＡでも、重鎖及び軽鎖の各定常領域をコードする領域を含む場合、その領域がヒト抗体由来の対応アミノ酸配列（重鎖及び軽鎖の各定常領域のアミノ酸配列）をコードする塩基配列を含むことが好ましい。
　これら抗体のＤＮＡは、例えば上記の方法又は以下の方法で得ることができる。まず、本発明の抗体を産生するハイブリドーマから、市販のＲＮＡ抽出キットを用いて全ＲＮＡを調製し、ランダムプライマー等を用いて逆転写酵素によりｃＤＮＡを合成する。次いで既知のマウス抗体重鎖遺伝子及び軽鎖遺伝子の各可変領域においてそれぞれ保存されている配列のオリゴヌクレオチドをプライマーに用いたＰＣＲ法によって、抗体をコードするｃＤＮＡを増幅させる。定常領域をコードする配列については、既知の配列をＰＣＲ法で増幅することによって得ることができる。ＤＮＡの塩基配列は、配列決定用プラスミド又はファージに組み込むなどして、常法により決定することができる。
　本発明は更に、上記抗体（ａ）から（ｇ）に関わる以下のポリペプチド及びＤＮＡも提供する。
　（ｉ）配列番号９、配列番号１９、配列番号５８、配列番号６３、配列番号６９及び配列番号７７のアミノ酸配列を含むポリペプチド、並びに該ポリペプチドをコードするＤＮＡ（例えば、配列番号１４及び配列番号２４の塩基配列を含むＤＮＡ）。
　（ｉｉ）配列番号１３、配列番号２３、配列番号５３、配列番号６２、配列番号６５、配列番号７３及び配列番号８１のアミノ酸配列を含むポリペプチド、並びに該ポリペプチドをコードするＤＮＡ（例えば、配列番号１５、配列番号２５及び配列番号５４の塩基配列を含むＤＮＡ）。
　（ｉｉｉ）配列番号６、７及び８、配列番号１６、１７及び１８、配列番号５５、５６及び５７、配列番号６６、６７及び６８、並びに配列番号７４、７５及び７６に示すアミノ酸配列からなる群から選択される、重鎖ＣＤＲポリペプチド、及び該ポリペプチドをコードするＤＮＡ。
　（ｉｖ）配列番号１０、１１及び１２、配列番号２０、２１及び２２、配列番号５０、５１及び５２、配列番号５９、６０及び６１、配列番号５９、６４及び６１、配列番号７０、７１及び７２、並びに配列番号７８、７９及び８０に示すアミノ酸配列から選択される、軽鎖ＣＤＲポリペプチド、及び該ポリペプチドをコードするＤＮＡ。
　これらのポリペプチド及びＤＮＡは、上記のとおり、遺伝子組換え技術を用いて作製することができる。
＜本発明の要約＞
　上で説明した本発明を以下に要約する。
　（１）配列番号５で表されるアミノ酸配列又は該アミノ酸配列と８０％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列からなるＣＡＰＲＩＮ－１部分ポリペプチドと免疫学的反応性を有する、抗体又はそのフラグメント。
　（２）ＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質を発現する癌細胞に対し細胞障害活性を有する、上記（１）に記載の抗体又はそのフラグメント。
　（３）前記抗体が、モノクローナル抗体又はポリクローナル抗体である、上記（１）又は（２）に記載の抗体又はそのフラグメント。
　（４）ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、単鎖抗体又は多重特異性抗体である、上記（１）～（３）のいずれかに記載の抗体又はそのフラグメント。
　（５）配列番号６、７及び８の相補性決定領域を含む重鎖可変領域と配列番号１０、１１及び１２の相補性決定領域を含む軽鎖可変領域とを含み、かつ、ＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質と免疫学的反応性を有する、上記（１）～（４）のいずれかに記載の抗体又はそのフラグメント。
　（６）配列番号１６、１７及び１８の相補性決定領域を含む重鎖可変領域と配列番号２０、２１及び２２の相補性決定領域を含む軽鎖可変領域とを含み、かつ、ＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質と免疫学的反応性を有する、上記（１）～（４）のいずれかに記載の抗体又はそのフラグメント。
　（７）配列番号６、７及び８の相補性決定領域を含む重鎖可変領域と配列番号５０、５１及び５２の相補性決定領域を含む軽鎖可変領域とを含み、かつ、ＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質と免疫学的反応性を有する、上記（１）～（４）のいずれかに記載の抗体又はそのフラグメント。
　（８）配列番号５５、５６及び５７の相補性決定領域を含む重鎖可変領域と配列番号５９、６０及び６１の相補性決定領域を含む軽鎖可変領域とを含み、かつ、ＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質と免疫学的反応性を有する、上記（１）～（４）のいずれかに記載の抗体又はそのフラグメント。
　（９）配列番号５５、５６及び５７の相補性決定領域を含む重鎖可変領域と配列番号５９、６４及び６１の相補性決定領域を含む軽鎖可変領域とを含み、かつ、ＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質と免疫学的反応性を有する、上記（１）～（４）のいずれかに記載の抗体又はそのフラグメント。
　（１０）配列番号６６、６７及び６８の相補性決定領域を含む重鎖可変領域と配列番号７０、７１及び７２の相補性決定領域を含む軽鎖可変領域とを含み、かつ、ＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質と免疫学的反応性を有する、上記（１）～（４）のいずれかに記載の抗体又はそのフラグメント。
　（１１）配列番号７４、７５及び７６の相補性決定領域を含む重鎖可変領域と配列番号７８、７９及び８０の相補性決定領域を含む軽鎖可変領域とを含み、かつ、ＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質と免疫学的反応性を有する、上記（１）～（４）のいずれかに記載の抗体又はそのフラグメント。
　（１２）抗腫瘍剤がコンジュゲートされた、上記（１）～（１１）のいずれかに記載の抗体又はそのフラグメント。
　（１３）上記（１）～（１２）のいずれかに記載の抗体又はそのフラグメントを有効成分として含むことを特徴とする、癌の治療及び／又は予防のための医薬組成物。
　（１４）前記癌が乳癌、腎癌、膵臓癌、大腸癌、肺癌、脳腫瘍、胃癌、子宮頸癌、卵巣癌、前立腺癌、膀胱癌、食道癌、白血病、リンパ腫、線維肉腫、肥満細胞腫又はメラノーマである、上記（１３）に記載の医薬組成物。
　（１５）上記（１３）又は（１４）に記載の医薬組成物と、抗腫瘍剤を含む医薬組成物とを含んでなる、癌の治療及び／又は予防のための組み合わせ医薬品。
　（１６）上記（１）～（１１）のいずれかに記載の抗体又はそのフラグメントをコードするＤＮＡ。
　（１７）上記（１）～（１２）のいずれかに記載の抗体若しくはそのフラグメント、（１３）若しくは（１４）に記載の医薬組成物、又は上記（１５）に記載の組み合わせ医薬品を、被験者に投与することを含む、癌の治療及び／又は予防方法。
　以下、本発明を実施例に基づきより具体的に説明するが、本発明の範囲はこれらの具体例によって制限されないものとする。
　実施例１　各組織でのＣＡＰＲＩＮ－１発現解析
　ＣＡＰＲＩＮ－１遺伝子のイヌ及びヒトの正常組織及び各種細胞株における発現をＷＯ２０１０／０１６５２６の実施例１（４）に従ってＲＴ－ＰＣＲ法により調べた。その結果、健常なイヌ組織では精巣に強い発現が見られ、一方イヌ乳癌及び腺癌組織で発現が見られた。さらに、ヒト組織での発現を併せて確認したところ、イヌＣＡＰＲＩＮ－１遺伝子と同様、正常組織で発現が確認できたのは精巣のみだったが、癌細胞ではヒト乳癌細胞株８種（ＺＲ７５－１、ＭＣＦ７、Ｔ４７Ｄ、ＳＫ－ＢＲ－３、ＭＤＡ－ＭＢ－１５７、ＢＴ－２０、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１Ｖ、ＭＲＫ－ｎｕ－１）及び膵臓癌細胞株４種（Ｃａｐａｎ－２、ＭＩＡＰａＣａ－２、Ｐａｎｃ－１、ＢｘＰｃ－３）など、多種類の癌細胞株で発現が検出された。この結果から、ＣＡＰＲＩＮ－１は精巣以外の正常組織では発現が見られず、一方、乳癌細胞株及び膵臓癌細胞株に発現していることが確認された。
　実施例２　ＣＡＰＲＩＮ－１に対するマウスモノクローナル抗体の作製
　（１）マウスモノクローナル抗体＃１の作製
　ＷＯ２０１０／０１６５２６の実施例３で調製した配列番号２のアミノ酸配列を有するヒトＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質１００μｇを等量のＭＰＬ＋ＴＤＭアジュバント（シグマ社製）と混合し、これをマウス１匹当たりの抗原溶液とした。抗原溶液を６週齢のＢａｌｂ／ｃｃマウス（日本ＳＬＣ社製）の腹腔内に投与後、１週間毎に７回投与を行い、免疫を完了した。最後の免疫から３日後に摘出したそれぞれの脾臓を滅菌した２枚のスライドガラスに挟んで擦り潰し、ＰＢＳ（－）（日水社製）を用いて洗浄し１５００ｒｐｍで１０分間遠心して上清を除去する操作を３回繰り返して脾臓細胞を得た。得られた脾臓細胞とマウスミエローマ細胞ＳＰ２／０（ＡＴＣＣから購入）とを１０：１の比率にて混和し、そこに３７℃に加温した１０％　ＦＢＳを含むＲＰＭＩ１６４０培地２００μｌとＰＥＧ１５００（ベーリンガー社製）８００μｌを混和して調製したＰＥＧ溶液を加えて５分間静置して細胞融合を行った。１７００ｒｐｍで５分間遠心し、上清を除去後、Ｇｉｂｃｏ社製のＨＡＴ溶液を２％当量加えた１５％　ＦＢＳを含むＲＰＭＩ１６４０培地（ＨＡＴ選択培地）１５０ｍｌで細胞を懸濁し、９６穴プレート（ヌンク社製）の１ウェル当たり１００μｌずつ、プレート１５枚に播種した。７日間、３７℃、５％　ＣＯ２の条件で培養することで、脾臓細胞とミエローマ細胞が融合したハイブリドーマを得た。
　作製したハイブリドーマが産生する抗体のＣＡＰＲＩＮ－１タンパクに対する結合親和性を指標にハイブリドーマを選抜した。ＷＯ２０１０／０１６５２６の実施例３で調製したＣＡＰＲＩＮ－１タンパク溶液１μｇ／ｍｌを９６穴プレート１ウェル当たりに１００μｌ添加し、４℃にて１８時間静置した。各ウェルをＰＢＳ－Ｔで３回洗浄後、０．５％　Ｂｏｖｉｎｅ　Ｓｅｒｕｍ　Ａｌｂｕｍｉｎ（ＢＳＡ）溶液（シグマ社製）を１ウェル当たり４００μｌ添加して室温にて３時間静置した。溶液を除いて、１ウェル当たり４００μｌのＰＢＳ－Ｔでウェルを３回洗浄後、上記で得られたハイブリドーマの各培養上清を１ウェル当たり１００μｌ添加し、室温にて２時間静置した。ＰＢＳ－Ｔで各ウェルを３回洗浄した後、ＰＢＳで５０００倍に希釈したＨＲＰ標識抗マウスＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）抗体（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社製）を１ウェル当たり１００μｌ添加して室温にて１時間静置した。ＰＢＳ－Ｔでウェルを３回洗浄した後、ＴＭＢ基質溶液（Ｔｈｅｒｍｏ社製）を１ウェル当たり１００μｌ添加して１５～３０分間静置して発色反応を行った。発色後、１規定硫酸を１ウェル当たり１００μｌ添加して反応を停止させ吸光度計を用いて４５０ｎｍと５９５ｎｍの吸光度値を測定した。その結果、吸光度値が高かった抗体を産生するハイブリドーマを複数個選抜した。
　選抜したハイブリドーマを９６穴プレート１ウェル当たりに０．５個となるようにプレートに添加し培養した。１週間後、ウェル中に単一のコロニーを形成しているハイブリドーマが観察された。それらウェルの細胞をさらに培養して、クローニングされたハイブリドーマが産生する抗体のＣＡＰＲＩＮ－１タンパクに対する結合親和性を指標にハイブリドーマを選抜した。ＷＯ２０１０／０１６５２６の実施例３で調製したＣＡＰＲＩＮ－１タンパク溶液１μｇ／ｍｌを９６穴プレート１ウェル当たりに１００μｌ添加し、４℃にて１８時間静置した。各ウェルをＰＢＳ－Ｔで３回洗浄後、０．５％　ＢＳＡ溶液を１ウェル当たり４００μｌ添加して室温にて３時間静置した。溶液を除いて、１ウェル当たり４００μｌのＰＢＳ－Ｔでウェルを３回洗浄後、上記で得られたハイブリドーマの各培養上清を１ウェル当たり１００μｌ添加し、室温にて２時間静置した。ＰＢＳ－Ｔで各ウェルを３回洗浄後、ＰＢＳで５０００倍に希釈したＨＲＰ標識抗マウスＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）抗体（インビトロジェン社製）を１ウェル当たり１００μｌ添加して室温にて１時間静置した。ＰＢＳ－Ｔでウェルを３回洗浄した後、ＴＭＢ基質溶液（Ｔｈｅｒｍｏ社製）を１ウェル当たり１００μｌ添加して１５～３０分間静置して発色反応を行った。発色後、１規定硫酸を１ウェル当たり１００μｌ添加して反応を停止させ吸光度計を用いて４５０ｎｍと５９５ｎｍの吸光度値を測定した。その結果、ＣＡＰＲＩＮ－１タンパクに反応性を示すモノクローナル抗体を産生する８８個のハイブリドーマ株を得た。
　次にそれらモノクローナル抗体の内、ＣＡＰＲＩＮ－１を発現する乳癌細胞の細胞表面に反応性を示すものを選抜した。具体的には、１０６個のヒト乳癌細胞株ＭＤＡ－ＭＢ－２３１Ｖを１．５ｍｌ容のミクロ遠心チューブにて遠心分離し、これに上記各ハイブリドーマの培養上清１００μｌを添加し、氷上で１時間静置した。ＰＢＳで洗浄した後、０．１％ＦＢＳを含むＰＢＳで５００倍希釈したＦＩＴＣ標識ヤギ抗マウスＩｇＧ抗体（インビトロジェン社製）を添加し、氷上で１時間静置した。ＰＢＳで洗浄後、ベクトンディッキンソン株式会社のＦＡＣＳキャリバーにて蛍光強度を測定した。一方、上記と同様の操作を、抗体の代わりに何も処理していない６週齢のＢａｌｂ／ｃマウスの血清をハイブリドーマ培養用培地で５００倍希釈したものを用いて行い、コントロールとした。その結果、コントロールに比べて蛍光強度が強い、すなわち、乳癌細胞の細胞表面に反応するモノクローナル抗体１個（＃１）を選抜した。
　（２）抗ＣＡＰＲＩＮ－１モノクローナル抗体＃１が認識するＣＡＰＲＩＮ－１エピトープの同定
　（１）で取得した、癌細胞の細胞表面に反応するＣＡＰＲＩＮ－１に対するモノクローナル抗体＃１を用いて、認識するＣＡＰＲＩＮ－１エピトープ領域の同定を行った。ＣＡＰＲＩＮ－１組換えタンパク質１００μgをタンパク質阻害剤を含まない溶解バッファーに溶解し、マウスモノクローナル抗体＃１と反応させた。その溶液に、トリプシン又はキモトリプシン消化酵素を加え、適正温度にて消化反応を行った。反応後プロテインＧセファロース担体を加えて反応させて遠心操作により担体を沈殿させた。上清を除去した後、溶解バッファーとＰＢＳで洗浄して０．１％の蟻酸に溶解させ、その上清を回収した。回収した上清サンプルを逆相カラム（ＨＬＢ　Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　Ｃａｒｔｒｉｄｇｅ（ＯＡＳＩＳ社））にかけて、抗体を除去したサンプル溶液を得た。得られたサンプルを逆相液体クロマトグラフィー（クロマトグラフィーナノシステム（ＫＹＡ社）を用いてペプチドのみが含まれた溶液を回収し、タンデム型質量分析計ｑｕａｄｒｕｐｏｌｅ－ＴＯＦ　ｍａｓｓ　ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｅｒ（Ｗａｔｅｒｓ－Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ社）に導入してＭＳ／ＭＳ解析を行い、サンプル内に含まれるペプチドを検出した。その結果、抗ＣＡＰＲＩＮ－１モノクローナル抗体＃１が認識するＣＡＰＲＩＮ－１の部分配列として、配列番号５のアミノ酸配列からなるポリペプチドが同定された。
　（３）マウスモノクローナル抗体＃２、＃３の作製
　（１）と同様の方法で、（２）で同定した配列番号５のアミノ酸配列とキャリアタンパク質のＫＬＨ（Ｋｅｙｈｏｌｅ　ｌｉｍｐｅｔ　ｈａｅｍｏｃｙａｎｉｎ）との融合タンパク質を免疫原として、等量のアジュバント剤ＴｉｔｅｒＭａｘ　Ｇｏｌｄ（登録商標）（ＣｙｔＲｘ社）と混合して７日間隔でマウスの皮下に１回あたり２０μg投与した。合計４回の投与を行った後、最終免疫から３日後のマウスから脾臓細胞を得て、上記（１）と同様の方法にてマウスミエローマ細胞と融合してハイブリドーマを作製した。その後、作製したハイブリドーマの培養上清中に含まれる各抗体とＷＯ２０１０／０１６５２６の実施例３で調製したＣＡＰＲＩＮ－１タンパク溶液１μｇ／ｍｌ又は免疫原として用いた配列番号５のアミノ酸配列とキャリアタンパク質のＫＬＨとの融合タンパク質との反応性を指標に抗体を選抜した。ＷＯ２０１０／０１６５２６の実施例３で調製したＣＡＰＲＩＮ－１タンパク溶液１μｇ／ｍｌと配列番号５のアミノ酸配列とキャリアタンパク質のＫＬＨとの融合タンパク質３０μg／ｍｌをそれぞれ９６穴プレート１ウェル当たりに１００μｌ添加して４℃にて１８時間静置した。各ウェルをＰＢＳ－Ｔで洗浄後、ブロックエース（ＤＳファーマバイオメディカル社）溶液を１ウェル当たり４００μｌ添加して室温にて３時間静置した。溶液を除いて、ＰＢＳ－Ｔでウェルを洗浄後、上記で得られたハイブリドーマの各培養上清を１ウェル当たり１００μｌ添加し、室温で２時間静置した。ＰＢＳ－Ｔで各ウェルを洗浄した後、ＰＢＳで５０００倍に希釈したＨＲＰ標識抗マウスＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）抗体（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社製）を１ウェル当たり１００μｌ添加して室温にて１時間静置した。ＰＢＳ－Ｔでウェルを洗浄した後、ＴＭＢ基質溶液（Ｔｈｅｒｍｏ社製）を１ウェル当たり１００μｌ添加して５～３０分間静置して発色反応を行った。発色後、１規定硫酸を１ウェル当たり１００μｌ添加して反応を停止させ、吸光度計を用いて４５０ｎｍと５９５ｎｍの吸光度値を測定した。その結果、吸光度値が高かった抗体を産生するハイブリドーマを選抜した。
　選抜したハイブリドーマを９６穴プレート１ウェル当たりに０．３個となるようにプレートに添加し培養した。１週間後、ウェル中に単一のコロニーを形成しているハイブリドーマが観察された。それらウェルの細胞をさらに培養して、クローニングされたハイブリドーマが産生する抗体のＣＡＰＲＩＮ－１の部分配列の配列番号５のアミノ酸配列に対する結合親和性を指標に上記と同様の方法を用いて、配列番号５のアミノ酸に対する抗体を産生するハイブリドーマを得た。
　得られたハイブリドーマが産生するモノクローナル抗体の内、ＣＡＰＲＩＮ－１を発現する乳癌細胞の細胞表面に反応性を示すものを選抜した。具体的には、１０６個のヒト乳癌細胞株ＭＤＡ－ＭＢ－２３１Ｖを１．５ｍｌ容のミクロ遠心チューブにて遠心分離し、これに上記各ハイブリドーマの培養上清１００μｌを添加し、氷上で１時間静置した。ＰＢＳで洗浄した後、０．１％ＦＢＳを含むＰＢＳで５００倍希釈したＦＩＴＣ標識ヤギ抗マウスＩｇＧ抗体（インビトロジェン社製）を添加し、氷上で１時間静置した。ＰＢＳで洗浄後、ベクトンディッキンソン株式会社のＦＡＣＳキャリバーにて蛍光強度を測定した。一方、上記と同様の操作を、抗体の代わりに何も処理していない６週齢のＢａｌｂ／ｃマウスの血清をハイブリドーマ培養用培地で５００倍希釈したものを用いたサンプル、及び二次抗体のみを反応させたサンプルを陰性コントロールとして行った。その結果、陰性コントロールに比べて蛍光強度が強い、すなわち、乳癌細胞の細胞表面に反応するモノクローナル抗体２個（＃２及び＃３）を得た。
　得られたマウスモノクローナル抗体＃２及び＃３が免疫原であるＣＡＰＲＩＮ－１の部分配列である配列番号５のアミノ酸配列に特異的に反応することを調べた。０．１Ｍの炭酸ナトリウム水溶液で３０μg／ｍｌに調製した配列番号５のアミノ酸配列を含む溶液及び配列番号５のアミノ酸配列を含まないＣＡＰＲＩＮ－１の部分配列をそれぞれＥＬＩＳＡ用９６ウェルプレートイモビライザーアミノ（ヌンク社）に１００μg／ｍｌずつ添加して、４℃にて一昼夜反応させてペプチドをウェルに結合させた。ペプチドが結合したウェルに１０ｍＭエタノールアミンを含む０．１Ｍ炭酸ナトリウム水溶液を添加して室温で１時間静置した。ウェル内の溶液を除去後、ＰＢＳ－Ｔで洗浄したのち、ブロックエース溶液を１ウェル当たり４００μｌ添加して室温にて３時間静置した。ウェル内の溶液を除去し、ＰＢＳ－Ｔで洗浄後、マウスモノクローナル抗体＃２を含む培養上清を１ウェルあたりに５０μＬ添加して、室温にて１時間反応させた。その後ＰＢＳ－Ｔで洗浄して、ブロックエース溶液で５０００倍に希釈したＨＲＰ標識抗マウスＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）抗体（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社製）を１ウェル当たり５０μｌ添加して室温にて１時間静置した。ＰＢＳ－Ｔでウェルを十分に洗浄した後、ＴＭＢ基質溶液（Ｔｈｅｒｍｏ社製）を１ウェル当たり１００μｌ添加して５～３０分間静置して発色反応を行った。発色後、１規定硫酸を１ウェル当たり１００μｌ添加して反応を停止させ、吸光度計を用いて４５０ｎｍと５９５ｎｍの吸光度値を測定したところ、配列番号５のアミノ酸配列を含まないＣＡＰＲＩＮ－１の部分配列には全く反応せず、配列番号５のアミノ酸配列のみにマウスモノクローナル抗体＃２及び＃３は特異的に反応した。したがって、配列番号５のポリペプチドが抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体＃２、＃３のエピトープ領域を含んでいることが確認された。
　実施例３　ＣＡＰＲＩＮ－１に対するニワトリモノクローナル抗体の作製
　実施例２（２）で同定した配列番号５のアミノ酸配列とキャリアタンパク質のＫＬＨ（Ｋｅｙｈｏｌｅ　ｌｉｍｐｅｔ　ｈａｅｍｏｃｙａｎｉｎ）との融合タンパク質を免疫原として、ニワトリ由来のモノクローナル抗体を作製した。上記免疫原３００μｇを等量のフロイントの完全アジュバントと混合し、これをニワトリ１羽当たりの抗原溶液とした。抗原溶液を７週齢のニワトリの腹腔内に投与後、４週間毎に７回投与を行い免疫を完了した。最後の免疫から４日後に摘出したそれぞれの脾臓を滅菌した２枚のスライドガラスに挟んで擦り潰し、ＰＢＳ（－）（日水社製）を用いて洗浄し１５００ｒｐｍで１０分間遠心して上清を除去する操作を３回繰り返して脾臓細胞を得た。得られた脾臓細胞と、鳥類細網内皮症ウイルスを用いてニワトリから形質転換法により樹立した、軽鎖が欠損しているニワトリミエローマ細胞とを５：１の比率にて混和し、そこに３７℃に加温した１０％　ＦＢＳを含むＩＭＤＭ培地２００μｌとＰＥＧ１５００（ベーリンガー社製）８００μｌを混和して調製したＰＥＧ溶液を加えて５分間静置して細胞融合を行った。１７００ｒｐｍで５分間遠心し、上清を除去後、Ｇｉｂｃｏ社製のＨＡＴ溶液を２％当量加えた１０％　ＦＢＳを含むＩＭＤＭ培地（ＨＡＴ選択培地）３００ｍｌで細胞を懸濁し、９６穴プレート（ヌンク社製）の１ウェル当たり１００μｌずつ、プレート３０枚に播種した。７日間、３７℃、５％　ＣＯ２の条件で培養することで、脾臓細胞とニワトリミエローマ細胞が融合したハイブリドーマを得た。その後、作製したハイブリドーマの培養上清中に含まれる各抗体と、ＷＯ２０１０／０１６５２６の実施例３に記載のようにして調製したＣＡＰＲＩＮ－１タンパク溶液又は免疫原として用いた配列番号５のアミノ酸配列とキャリアタンパク質のＢＳＡとの融合タンパク質との反応性を指標に抗体を選抜した。具体的には、ＷＯ２０１０／０１６５２６の実施例３で調製したＣＡＰＲＩＮ－１タンパク溶液１μｇ／ｍｌ、及び配列番号５のアミノ酸配列とキャリアタンパク質のＢＳＡとの融合タンパク質１μg／ｍｌをそれぞれ９６穴プレート１ウェル当たりに５０μｌ添加して４℃にて１８時間静置した。各ウェルをＰＢＳ－Ｔで洗浄後、ブロックエース（ＤＳファーマバイオメディカル社）溶液を１ウェル当たり３００μｌ添加して室温にて３時間静置した。溶液を除いて、ＰＢＳ－Ｔでウェルを洗浄後、上記で得られたハイブリドーマの各培養上清を１ウェル当たり５０μｌ添加し、室温で１時間静置した。ＰＢＳ－Ｔで各ウェルを洗浄した後、ＰＢＳで１０００倍に希釈したＨＲＰ標識抗ニワトリＩｇＹ抗体（ＫＰＬ社製）を１ウェル当たり１００μｌ添加して室温にて１時間静置した。ＰＢＳ－Ｔでウェルを３回洗浄した後、ＯＰＤ基質溶液を１ウェル当たり５０μｌ添加して５～１５分間静置して発色反応を行った。発色後、２規定硫酸を１ウェル当たり５０μｌ添加して反応を停止させ吸光度計を用いて４９０ｎｍと６３０ｎｍの吸光度値を測定した。その結果、吸光度値が高かった抗体を産生するハイブリドーマを複数個選抜した。
　選抜したハイブリドーマを９６穴プレート１ウェル当たりに０．５個となるようにプレートに添加し培養した。１週間後、ウェル中に単一のコロニーを形成しているハイブリドーマが観察された。それらウェルの細胞をさらに培養して、クローニングされたハイブリドーマが産生する抗体のＣＡＰＲＩＮ－１タンパクに対する結合親和性又は免疫原として用いた配列番号５のアミノ酸配列とキャリアタンパク質のＢＳＡとの融合タンパク質との反応性を指標にニワトリモノクローナル抗体を得た。
　次にそれらモノクローナル抗体の内、ＣＡＰＲＩＮ－１が発現する乳癌細胞の細胞表面に反応性を示すものを選抜した。具体的には、２×１０５個のヒト乳癌細胞株ＭＤＡ－ＭＢ－２３１Ｖを１．５ｍｌ容のミクロ遠心チューブにて遠心分離し、これに上記各ハイブリドーマの培養上清５０μｌを添加し、氷上で１時間静置した。ＰＢＳで洗浄した後、０．５％　ＦＢＳを含むＰＢＳで１００倍希釈したＦＩＴＣ標識ヤギ抗ニワトリＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）抗体（ＳｏｕｔｈｅｒｎＢｉｏｔｅｃｈ社製）を添加し、氷上で１時間静置した。ＰＢＳで洗浄後、ベクトンディッキンソン株式会社のＦＡＣＳキャリバーにて蛍光強度を測定した。一方、上記と同様の操作を、ハイブリドーマ培養用培地を用いて行い、陰性コントロールのサンプルとした。その結果、コントロールに比べて蛍光強度が強い、すなわち、ＣＡＰＲＩＮ－１を発現する乳癌細胞の細胞表面に反応するニワトリモノクローナル抗体４個（ニワトリモノクローナル抗体＃１、＃２、＃３、＃４）を選抜した。これらの抗体は乳癌細胞の細胞表面上に発現したＣＡＰＲＩＮ－１と結合できる。
　実施例４　選抜したモノクローナル抗体の特徴付け
　（１）マウスモノクローナル抗体の特徴付け
　実施例２で得られたマウスモノクローナル抗体について、ＷＯ２０１０／０１６５２６の実施例５に記載の方法に従って可変領域をコードする遺伝子の増幅断片を取得し、遺伝子配列並びにそのアミノ酸配列を解析した。その結果得られたマウス由来モノクローナル抗体＃１の重鎖可変領域をコードする遺伝子配列を配列番号２４に、及びアミノ酸配列を配列番号１９に、軽鎖可変領域をコードする遺伝子配列を配列番号２５に、及びアミノ酸配列を配列番号２３に示す。また、得られたマウス由来モノクローナル抗体＃２の重鎖可変領域をコードする遺伝子配列を配列番号１４に、及びアミノ酸配列を配列番号９に、軽鎖可変領域をコードする遺伝子配列を配列番号１５に、及びアミノ酸配列を配列番号１３に示す。さらにまた、得られたマウス由来モノクローナル抗体＃３の重鎖可変領域をコードする遺伝子配列を配列番号１４に、及びアミノ酸配列を配列番号９に、軽鎖可変領域をコードする遺伝子配列を配列番号５４に、及びアミノ酸配列を配列番号５３に示す。
　すなわち、マウスモノクローナル抗体＃１は配列番号１９の重鎖可変領域と配列番号２３の軽鎖可変領域を含み、そのうち、重鎖可変領域中のＣＤＲ１～３がそれぞれ配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８のアミノ酸配列からなり、軽鎖可変領域中のＣＤＲ１～３がそれぞれ配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２のアミノ酸配列からなることが確認された。また、マウスモノクローナル抗体＃２は配列番号９の重鎖可変領域と配列番号１３の軽鎖可変領域を含み、そのうち、重鎖可変領域中のＣＤＲ１～３がそれぞれ配列番号６、配列番号７、配列番号８のアミノ酸配列からなり、軽鎖可変領域中のＣＤＲ１～３がそれぞれ配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２のアミノ酸配列からなることが確認された。さらにまた、マウスモノクローナル抗体＃３は配列番号９の重鎖可変領域と配列番号５３の軽鎖可変領域を含み、そのうち、重鎖可変領域中のＣＤＲ１～３がそれぞれ配列番号６、配列番号７、配列番号８のアミノ酸配列からなり、軽鎖可変領域中のＣＤＲ１～３がそれぞれ配列番号５０、配列番号５１、配列番号５２のアミノ酸配列からなることが確認された。
　（２）ニワトリモノクローナル抗体の特徴付け
　実施例３で得られたニワトリモノクローナル抗体（ニワトリモノクローナル抗体＃１、＃２、＃３、＃４）について、ＷＯ２０１１／０９６５１９の実施例４に記載の方法に従って可変領域をコードする遺伝子の増幅断片を取得し、遺伝子並びにそのアミノ酸配列を解析した。その結果得られたニワトリモノクローナル抗体＃１の重鎖可変領域のアミノ酸配列を配列番号５８に、軽鎖可変領域のアミノ酸配列を配列番号６２に示す。ニワトリモノクローナル抗体＃２の重鎖可変領域のアミノ酸配列を配列番号６３に、軽鎖可変領域のアミノ酸配列を配列番号６５に示す。ニワトリモノクローナル抗体＃３の重鎖可変領域のアミノ酸配列を配列番号６９に、軽鎖可変領域のアミノ酸配列を配列番号７３に示す。ニワトリモノクローナル抗体＃４の重鎖可変領域のアミノ酸配列を配列番号７７に、軽鎖可変領域のアミノ酸配列を配列番号８１に示す。
　すなわち、ニワトリモノクローナル抗体＃１は配列番号５８の重鎖可変領域と配列番号６２の軽鎖可変領域を含み、そのうち、重鎖可変領域中のＣＤＲ１～３がそれぞれ配列番号５５、配列番号５６、配列番号５７のアミノ酸配列からなり、軽鎖可変領域中のＣＤＲ１～３がそれぞれ配列番号５９、配列番号６０、配列番号６１のアミノ酸配列からなることが確認された。ニワトリモノクローナル抗体＃２は配列番号６３の重鎖可変領域と配列番号６５の軽鎖可変領域を含み、そのうち、重鎖可変領域中のＣＤＲ１～３がそれぞれ配列番号５５、配列番号５６、配列番号５７のアミノ酸配列からなり、軽鎖可変領域中のＣＤＲ１～３がそれぞれ配列番号５９、配列番号６４、配列番号６１のアミノ酸配列からなることが確認された。ニワトリモノクローナル抗体＃３は配列番号６９の重鎖可変領域と配列番号７３の軽鎖可変領域を含み、そのうち、重鎖可変領域中のＣＤＲ１～３がそれぞれ配列番号６６、配列番号６７、配列番号６８のアミノ酸配列からなり、軽鎖可変領域中のＣＤＲ１～３がそれぞれ配列番号７０、配列番号７１、配列番号７２のアミノ酸配列からなることが確認された。ニワトリモノクローナル抗体＃４は配列番号７７の重鎖可変領域と配列番号８１の軽鎖可変領域を含み、そのうち、重鎖可変領域中のＣＤＲ１～３がそれぞれ配列番号７４、配列番号７５、配列番号７６のアミノ酸配列からなり、軽鎖可変領域中のＣＤＲ１～３がそれぞれ配列番号７８、配列番号７９、配列番号８０のアミノ酸配列からなることが確認された。
　実施例５　癌細胞表面上に存在するＣＡＰＲＩＮ－１の部分ポリペプチドに対するポリクローナル抗体の作製
　癌細胞表面上に存在するＣＡＰＲＩＮ－１の部分ポリペプチドに対するポリクローナル抗体を得るために、抗ＣＡＰＲＩＮ－１モノクローナル抗体＃１、＃２及び＃３のエピトープ領域を含むポリペプチド（配列番号５で示されるＣＡＰＲＩＮ－１由来ペプチド）、配列番号２のヒトＣＡＰＲＩＮ－１のアミノ酸配列中のアミノ酸残基番号５０－９８領域のポリペプチドおよび配列番号２中のアミノ酸残基番号２３３－３０５領域のポリペプチドを合成した。これらのペプチド１ｍｇずつを抗原として、等容量の不完全フロイントアジュバント（ＩＦＡ）溶液と混合し、これを２週間毎に４回、ウサギの皮下に投与を行った。その後血液を採取し、各ポリクローナル抗体を含む抗血清を得た。さらにこれら抗血清をプロテインＧ担体（ＧＥヘルスケアバイオサイエンス社製）を用いて精製しＰＢＳで置換することにより、癌細胞表面上に存在するＣＡＰＲＩＮ－１の部分ポリペプチドに対するポリクローナル抗体を得た。また、抗原を投与していないウサギの血清を上記と同様にしてプロテインＧ担体を用いて精製したものをコントロール抗体とした。
　実施例６　癌細胞上でのＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質の発現解析
　次にＣＡＰＲＩＮ－１遺伝子の発現が多く確認されたヒト乳癌細胞株８種（ＺＲ７５－１、ＭＣＦ７、Ｔ４７Ｄ、ＳＫ－ＢＲ－３、ＭＤＡ－ＭＢ－１５７、ＢＴ－２０、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１Ｖ、ＭＲＫ－ｎｕ－１）について、その細胞表面上にＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質が発現しているかどうかを調べた。上記で遺伝子発現が認められた各ヒト乳癌細胞株それぞれ５×１０５細胞を１．５ｍｌのミクロ遠心チューブにて遠心分離した。これに本実施例５で上記の通り調製したＣＡＰＲＩＮ－１由来ペプチドに対するポリクローナル抗体２μｇ（５μｌ）を添加し、さらに９５μｌの０．１％牛胎児血清を含むＰＢＳを添加して混ぜ、氷上で１時間静置した。ＰＢＳで洗浄した後、２μｌのＡｌｅｘａ４８８標識Ｇｏａｔ ａｎｔｉ－ｒａｂｂｉｔ　ＩｇＧ抗体（インビトロジェン社製）及び９８μｌの０．１％　牛胎児血清（ＦＢＳ）を含むＰＢＳを添加して混ぜ、氷上で３０時間静置した。ＰＢＳで洗浄後、ベクトンディッキンソン株式会社のＦＡＣＳキャリバーにて蛍光強度を測定した。一方、上記と同様の操作を、ＣＡＰＲＩＮ－１由来ペプチドに対するポリクローナル抗体の代わりに本実施例５で上記の通り調製したコントロール抗体を用いて行い、コントロールとした。その結果、抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体を添加された細胞は、コントロールに比べて、いずれの癌細胞も蛍光強度が３５％以上強かった。このことから、上記ヒト癌細胞株の細胞膜表面上にＣＡＰＲＩＮ－１タンパクが発現していることが確認された。なお、上記蛍光強度の増強率は、各細胞における平均蛍光強度（ＭＦＩ値）の増加率にて表され、以下の計算式により算出した。
　平均蛍光強度の増加率（蛍光強度の増強率）（％）＝（（抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体を反応させた細胞のＭＦＩ値）－（コントロールＭＦＩ値））÷（コントロールＭＦＩ値）×１００。
　また、同様の上記手法を用いて、腎癌細胞株３種（Ｃａｋｉ－１，Ｃａｋｉ－２，Ａ４９８）、膀胱癌細胞株（Ｔ２４）、卵巣癌細胞株（ＳＫＯＶ３）、肺癌細胞株（ＱＧ５６）、前立腺癌細胞株（ＰＣ３）、子宮頸癌細胞株（Ｈｅｌａ）、線維肉腫細胞株（ＨＴ１０８０）、脳腫瘍細胞株２種（Ｔ９８Ｇ，Ｕ８７ＭＧ）、胃癌細胞株（ＭＮＫ２８）、大腸癌細胞株（Ｌｏｖｏ）、膵臓癌細胞株（Ｃａｐａｎ－２、ＭＩＡＰａＣａ－２、Ｐａｎｃ－１、ＢｘＰＣ－３）について蛍光強度を測定したところ、コントロールに比べていずれの癌細胞も蛍光強度が３５％以上強かった。
　なお、本結果は、実施例２で取得された配列番号１９の重鎖可変領域と配列番号２３の軽鎖可変領域を有するＣＡＰＲＩＮ－１に対するモノクローナル抗体（マウスモノクローナル抗体＃１）又は配列番号９の重鎖可変領域と配列番号１３の軽鎖可変領域を有するＣＡＰＲＩＮ－１に対するモノクローナル抗体（マウスモノクローナル抗体＃２）又は配列番号９の重鎖可変領域と配列番号５３の軽鎖可変領域を有するＣＡＰＲＩＮ－１に対するモノクローナル抗体（マウスモノクローナル抗体＃３）、実施例３で取得された配列番号５８の重鎖可変領域と配列番号６２の軽鎖可変領域を有するＣＡＰＲＩＮ－１に対するニワトリモノクローナル抗体＃１、配列番号６３の重鎖可変領域と配列番号６５の軽鎖可変領域を有するＣＡＰＲＩＮ－１に対するニワトリモノクローナル抗体＃２、配列番号６９の重鎖可変領域と配列番号７３の軽鎖可変領域を有するＣＡＰＲＩＮ－１に対するニワトリモノクローナル抗体＃３、配列番号７７の重鎖可変領域と配列番号８１の軽鎖可変領域を有するＣＡＰＲＩＮ－１に対するニワトリモノクローナル抗体＃４（ニワトリモノクローナル抗体＃１～＃４）を用いた場合もＣＡＰＲＩＮ－１の発現が確認された。
　実施例７　免疫組織化学染色
　（１）　マウス及びイヌ正常組織におけるＣＡＰＲＩＮ－１の発現
　マウス（Ｂａｌｂ／ｃ、雌）及びイヌ（ビーグル犬、雌）をエーテル麻酔下及びケタミン／イソフルラン麻酔下で放血させ、開腹後、各臓器（胃、肝臓、眼球、胸腺、筋肉、骨髄、子宮、小腸、食道、心臓、腎臓、唾液腺、大腸、乳腺、脳、肺、皮膚、副腎、卵巣、膵臓、脾臓、膀胱）をそれぞれＰＢＳの入った１０ｃｍディッシュに移した。ＰＢＳ中で各臓器を切り開き、４％ｐａｒａｆｏｒｍａｌｄｅｈｙｄｅ（ＰＦＡ）を含む０．１Ｍ　リン酸緩衝液（ｐＨ７．４）で一晩還流固定した。還流液を捨て、ＰＢＳで各臓器の組織表面をすすぎ、１０％ショ糖を含むＰＢＳ溶液を５０ｍｌ容の遠心チューブに入れ、その中に各組織を入れて４℃で２時間ローターを用いて振とうした。２０％　ショ糖を含むＰＢＳ溶液に入れ替え、４℃で組織が沈むまで静置後、３０％　ショ糖を含むＰＢＳ溶液に入れ替え、４℃で組織が沈むまで静置した。組織を取り出し、必要な部分を手術用メスで切りだした。次に、ＯＣＴコンパウンド（Ｔｉｓｓｕｅ　Ｔｅｋ社製）をかけて組織表面になじませた後、クライオモルドに組織を配置した。ドライアイスの上にクライオモルドをおいて急速凍結させた後、クライオスタット（ＬＥＩＣＡ社製）を用いて１０～２０μｍに薄切し、スライドガラスごとヘアードライアーで３０分間風乾し、薄切組織がのったスライドガラス作製した。次にＰＢＳ－Ｔ（０．０５％　Ｔｗｅｅｎ２０を含む生理食塩水）を満たした染色瓶に入れて５分ごとにＰＢＳ－Ｔを入れ替える操作を３回行った。切片周囲の余分な水分をキムワイプでふき取り、ＤＡＫＯＰＥＮ（ＤＡＫＯ社製）で囲んだ後、ブロッキング液として、マウス組織はＭＯＭマウスＩｇブロッキング試薬（ＶＥＣＴＡＳＴＡＩＮ社製）を、イヌ組織は１０％　ＦＢＳを含むＰＢＳ－Ｔ溶液をそれぞれのせ、モイストチャンバー上で室温で１時間静置した。
　次に、実施例５で作製した、癌細胞表面に反応する、ＣＡＰＲＩＮ－１由来ペプチド（配列番号５）に対するポリクローナル抗体をブロッキング液で１０μｇ／ｍｌに調製した溶液をのせ、モイストチャンバー内で４℃下で一晩静置した。ＰＢＳ－Ｔで１０分間３回洗浄を行った後、ブロッキング液で２５０倍に希釈したＭＯＭビオチン標識抗ＩｇＧ抗体（ＶＥＣＴＡＳＴＡＩＮ社製）をのせ、モイストチャンバー内で室温で１時間静置した。ＰＢＳ－Ｔで１０分間３回洗浄を行った後、アビジンービオチンＡＢＣ試薬（ＶＥＣＴＡＳＴＡＩＮ社製）をのせ、モイストチャンバー内で室温で５分間静置した。ＰＢＳ－Ｔで１０分間３回洗浄を行った後、ＤＡＢ発色液（ＤＡＢ　１０ｍｇ＋３０％Ｈ２Ｏ２　１０μｌ／０．０５Ｍ　Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ（ｐＨ７．６）５０ｍｌ）をのせ、モイストチャンバー内で室温で３０分間静置した。蒸留水でリンスし、ヘマトキシリン試薬（ＤＡＫＯ社製）を載せて室温で１分間静置後、蒸留水でリンスした。７０％、８０％、９０％、９５％、１００％の各エタノール溶液に順番に１分間ずつ入れた後、キシレン中で一晩静置した。スライドガラスを取り出し、Ｇｌｙｃｅｒｇｅｌ　Ｍｏｕｎｔｉｎｇ　Ｍｅｄｉｕｍ（ＤＡＫＯ社製）で封入後、観察を行った。その結果、ＣＡＰＲＩＮ－１は、唾液腺、腎臓、結腸、胃の各組織において細胞内で僅かに発現が認められたが、細胞表面での発現は認められず、また、その他の臓器由来の組織では全く発現が認められなかった。
　（２）　イヌ乳癌組織におけるＣＡＰＲＩＮ－１の発現
　病理診断で悪性乳癌と診断されたイヌの凍結された乳癌組織を用いて、上述と同様の方法で凍結切片スライド作製及び実施例５で作製したＣＡＰＲＩＮ－１由来ペプチド（配列番号５）に対するポリクローナル抗体を用いた免疫組織化学染色を行った結果、イヌ乳癌組織においてＣＡＰＲＩＮ－１の発現が確認された。
　（３）　ヒト各種癌組織におけるＣＡＰＲＩＮ－１の発現
　パラフィン包埋されたヒト各種癌組織アレイ（ＢＩＯＭＡＸ社製）の検体を用いて、上述と同様の方法で、実施例５で作製したＣＡＰＲＩＮ－１由来ペプチド（配列番号５）に対するポリクローナル抗体を用いた免疫組織化学染色を行った。その結果、ＣＡＰＲＩＮ－１は食道癌、結腸癌、直腸癌、肺癌、膵臓癌、腎癌、膀胱癌及び子宮頸癌で発現が認められた。
　実施例８　ヒト－マウスキメラモノクローナル抗体の作製
　実施例４で得られた、配列番号１４で示されるマウスモノクローナル抗体＃２の重鎖可変領域を含んだ遺伝子増幅断片の両端を制限酵素処理した後精製し、マウス抗体由来のリーダー配列と配列番号４８のアミノ酸配列を含むヒトＩｇＧ１のＨ鎖定常領域を既に挿入済みのｐｃＤＮＡ４／ｍｙｃ－Ｈｉｓ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社製）ベクターへ常法に従って挿入した。また、配列番号１５で示されるマウスモノクローナル抗体＃２の軽鎖可変領域を含んだ遺伝子増幅断片の両端を制限酵素処理した後精製し、マウス抗体由来のリーダー配列と配列番号４９のアミノ酸配列を含むヒトＩｇＧ１のＬ鎖定常領域を既に挿入済みのｐｃＤＮＡ３．１／ｍｙｃ－Ｈｉｓ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社製）ベクターへ常法に従って挿入した。
　次に、配列番号１４で示されるマウスモノクローナル抗体＃２の重鎖可変領域をコードするヌクレオチド配列が挿入された上記組換えベクターと、配列番号１５で示されるマウスモノクローナル抗体＃２の軽鎖可変領域をコードするヌクレオチド配列が挿入された上記組換えベクターをＣＨＯ－Ｋ１細胞（理研セルバンクより入手）に導入した。具体的には、１２穴培養プレートの１ウェル当たりに１ｍｌの１０％　ＦＢＳを含むＨａｍ’ｓ　Ｆ１２培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社製）で培養された２×１０５個のＣＨＯ－Ｋ１細胞をＰＢＳ（－）で洗浄したのちに、１ウェル当たり１ｍｌの１０％　ＦＢＳを含むＨａｍ’ｓ　Ｆ１２培地を新たに加えたウェルに３０μｌのＯｐｔｉＭＥＭ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社製）に溶解した上記各ベクター２５０ｎｇとＰｏｌｙｆｅｃｔ　ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ　ｒｅａｇｅｎｔ（ＱＩＡＧＥＮ社製）３０μｌとを混合したものを添加した。上記組換えベクターを導入したＣＨＯ－Ｋ１細胞を、２００μｇ／ｍｌゼオシン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社製）並びに２００μｇ／ｍｌジェネチシン（ロシュ社製）を添加した１０％　ＦＢＳを含むＨａｍ’ｓＦ１２培地で培養したのち、９６ウェルプレートの１ウェル当たりに０．５個となるように上記組換えベクターを導入したＣＨＯ－Ｋ１細胞を播種して、マウスモノクローナル抗体＃１の可変領域を有するヒト－マウスキメラモノクローナル抗体＃１（＃１）を安定的に産生する細胞株を作製した。上記方法と同様にして、マウスモノクローナル抗体＃２及び＃３についてもヒト－マウスキメラモノクローナル抗体＃２（＃２）及びヒト－マウスキメラモノクローナル抗体＃３（＃３）を安定的に産生する細胞株を作製した。
　作製した細胞株を１５０ｃｍ２フラスコを用いて５×１０５個／ｍｌで血清を含まないＯｐｔｉＣＨＯ培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社製）３０ｍｌを用いて５日間培養し、＃１、＃２、＃３を含む培養上清を得た。
　また、比較抗体として、ＷＯ２０１０／０１６５２６に記載されるマウス由来の抗ＣＡＰＲＩＮ－１モノクローナル抗体で配列番号２６の重鎖可変領域と配列番号２７の軽鎖可変領域を有する比較抗体１、配列番号２８の重鎖可変領域と配列番号２９の軽鎖可変領域を有する比較抗体２、配列番号３０の重鎖可変領域と配列番号３１の軽鎖可変領域を有する比較抗体３、配列番号３２の重鎖可変領域と配列番号３３の軽鎖可変領域を有する比較抗体４、配列番号３４の重鎖可変領域と配列番号３５の軽鎖可変領域を有する比較抗体５、配列番号３６の重鎖可変領域と配列番号３７の軽鎖可変領域を有する比較抗体６、配列番号３８の重鎖可変領域と配列番号３９の軽鎖可変領域を有する比較抗体７、配列番号４０の重鎖可変領域と配列番号４１の軽鎖可変領域を有する比較抗体８、配列番号４２の重鎖可変領域と配列番号４３の軽鎖可変領域を有する比較抗体９、配列番号４４の重鎖可変領域と配列番号４５の軽鎖可変領域を有する比較抗体１０、配列番号４６の重鎖可変領域と配列番号４７の軽鎖可変領域を有する比較抗体１１についても上記と同様にして、ヒト－マウスキメラ比較抗体１～１１をそれぞれ安定的に産生する細胞株を作製し、作製した細胞株を１５０ｃｍ２フラスコを用いて５×１０５個／ｍｌで血清を含まないＯｐｔｉＣＨＯ培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社製）３０ｍｌを用いて５日間培養し、ヒト－マウスキメラ比較モノクローナル抗体１～１１を含む培養上清を得た。
　実施例９　ヒト－ニワトリキメラモノクローナル抗体の作製
　実施例３で得たニワトリモノクローナル抗体＃１についてＷＯ２０１１／０９６５１９の実施例４（２）に記載の方法に従ってニワトリモノクローナル抗体＃１の可変領域を有するヒト－ニワトリキメラ抗体＃１を安定的に産生する細胞株を作製した。作製した細胞株を１５０ｃｍ２フラスコを用いて５×１０５個／ｍｌで血清を含まないＯｐｔｉＣＨＯ培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社製）３０ｍｌを用いて５日間培養し、ヒト－ニワトリキメラ抗体＃１を含む培養上清を得た。
　ニワトリモノクローナル抗体＃２、＃３及び＃４についても同様の手法を用いて、それぞれヒト－ニワトリキメラ抗体＃２～＃４を安定的に産生する細胞株を作製し、作製した細胞株を用いて、ヒト－ニワトリキメラ抗体＃１、＃２、＃３及び＃４を含む培養上清をそれぞれ得た。
　実施例１０　マウスモノクローナル抗体＃１、＃２及び＃３とニワトリモノクローナル抗体＃１、＃２、＃３及び＃４を用いた各種癌細胞表面でのＣＡＰＲＩＮ－１の発現
　次にＣＡＰＲＩＮ－１遺伝子の発現が確認されたヒト乳癌細胞株（ＺＲ７５－１、ＭＣＦ７、Ｔ４７Ｄ、ＳＫ－ＢＲ－３、ＭＤＡ－ＭＢ－１５７、ＢＴ－２０、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１Ｖ、ＭＲＫ－ｎｕ－１）、腎癌細胞株（Ｃａｋｉ－１、Ｃａｋｉ－２、Ａ４９８、ＡＣＨＮ）、膀胱癌細胞株（Ｔ２４）、卵巣癌細胞株（ＳＫＯＶ３）、肺癌細胞株（ＱＧ５６、Ａ５４９）、膵臓癌細胞株（Ｃａｐａｎ－２、ＭＩＡＰａＣａ－２）、前立腺癌細胞株（ＰＣ３）、子宮頸癌細胞株（ＳＷ７５６）、線維肉腫細胞株（ＨＴ１０８０）、脳腫瘍細胞株（Ｔ９８Ｇ、Ｕ８７ＭＧ、Ｕ２５１、ＳＮＢ１９、Ｕ３７３）、胃癌細胞株（ＭＮＫ２８、ＭＮＫ４５）、大腸癌細胞株（ＨＴ２９、Ｌｏｖｏ、ＣａＣｏ２、ＳＷ４８０、ＨＣＴ１１６）、白血病細胞株（ＡＭＬ５）、リンパ腫細胞株（Ｒａｍｏｓ）について、実施例２で得られた＃１、＃２及び＃３、並びに実施例３で得られたニワトリモノクローナル抗体＃１、＃２、＃３及び＃４をそれぞれ含む培養上清を用いて、各細胞の細胞表面上でのＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質の発現を調べた。各細胞株それぞれ１０６細胞を１．５ｍｌ容のミクロ遠心チューブにて遠心分離した。抗体＃１、＃２及び＃３、並びにニワトリモノクローナル抗体＃１、＃２、＃３及び＃４をそれぞれ含む各細胞培養上清（１００μｌ）を添加し、氷上で１時間静置した。ＰＢＳで洗浄した後、マウス由来の抗体には０．１％　ＦＢＳを含むＰＢＳで希釈したＦＩＴＣ標識ヤギ抗マウスＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ　ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ社製）を添加し、ニワトリ由来の抗体には０．１％　ＦＢＳを含むＰＢＳで１００倍希釈したＦＩＴＣ標識ヤギ抗ニワトリＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）抗体（ＳｏｕｔｈｅｒｎＢｉｏｔｅｃｈ社製）を添加して４℃で３０分間静置した。ＰＢＳで洗浄後、ベクトンディッキンソン株式会社のＦＡＣＳキャリバーにて蛍光強度を測定した。陰性コントロールには二次抗体のみを反応したものを用いた。その結果、抗体＃１、＃２及び＃３、並びにニワトリモノクローナル抗体＃１～＃４をそれぞれ添加した細胞は、陰性コントロールに比べて、いずれも蛍光強度が３５％以上強かった。このことから、上記ヒト癌細胞株の細胞膜表面上にＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質が発現していることが確認された。なお、上記蛍光強度の増強率は、各細胞における平均蛍光強度（ＭＦＩ値）の増加率にて表され、以下の計算式により算出した。
　平均蛍光強度の増加率（蛍光強度の増強率）（％）＝（（抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体を反応させた細胞のＭＦＩ値）－（コントロールＭＦＩ値））÷（コントロールＭＦＩ値）×１００。
　実施例１１　ＣＡＰＲＩＮ－１由来ペプチド（配列番号５）に対する抗体の癌細胞に対する抗腫瘍活性
　配列番号５に示すＣＡＰＲＩＮ－１由来ペプチドに対する抗体のＣＡＰＲＩＮ－１を発現する癌細胞に対する細胞障害性の強さを評価するために、ＡＤＣＣ活性を測定した。実施例５で調製した配列番号５に示すペプチドに対するポリクローナル抗体を用いて評価を行った。比較する抗体として、その他のヒトＣＡＰＲＩＮ－１由来ペプチドに対するポリクローナル抗体（実施例５で調製した、ヒトＣＡＰＲＩＮ－１のアミノ酸配列中のアミノ酸残基番号５０－９８に対するポリクローナル抗体とアミノ酸残基番号２３３－３０５に対するポリクローナル抗体）を用い、陰性コントロールとして、実施例５で調製したウサギ血清由来のコントロール抗体を用いて同様に評価した。
　ＣＡＰＲＩＮ－１の発現が確認されているヒト乳癌細胞株ＭＣＦ７、ヒト大腸癌細胞株ＨＣＴ－１１６、ヒト膵臓癌細胞株ＭＩＡＰａＣａ－２、ヒト腎臓癌細胞株Ｃａｋｉ－２、ヒト肺癌細胞株ＱＧ５６を１０６個５０ｍｌ容の遠心チューブに集め、１００μＣｉのクロミウム５１を加え３７℃で２時間インキュベートした。その後１０％　牛胎児血清を含むＲＰＭＩ１６４０培地で３回洗浄し、９６穴Ｖ底プレート１穴あたり２×１０３個ずつ添加した。これに、上記配列番号５に示すヒトＣＡＰＲＩＮ－１由来ペプチドに対するポリクローナル抗体および上記にあるその他のヒトＣＡＰＲＩＮ－１由来ペプチドに対するポリクローナル抗体２種類（ヒトＣＡＰＲＩＮ－１のアミノ酸残基番号５０－９８に対するポリクローナル抗体とアミノ酸残基番号２３３－３０５に対するポリクローナル抗体）をそれぞれ１μｇづつ添加し、さらにヒトの末梢血から定法に従って分離したリンパ球を４×１０５個ずつ添加して、３７℃、５％　ＣＯ２の条件下で４時間培養した。培養後、障害を受けた癌細胞から放出される培養上清中のクロミウム（Ｃｒ）５１の量を測定し、各ヒトＣＡＰＲＩＮ－１由来ペプチドに対するポリクローナル抗体による癌細胞に対するＡＤＣＣ活性を算出した。その結果、ヒトＣＡＰＲＩＮ－１のアミノ酸残基番号５０－９８およびアミノ酸残基番号２３３－３０５のアミノ酸配列を有するヒトＣＡＰＲＩＮ－１部分ペプチドを免疫して得たポリクローナル抗体の場合にはヒト乳癌細胞株ＭＣＦ７、ヒト大腸癌細胞株ＨＣＴ－１１６、ヒト膵臓癌細胞株ＭＩＡＰａＣａ－２、ヒト腎臓癌細胞株Ｃａｋｉ－２、ヒト肺癌細胞株ＱＧ５６における活性は、いずれの抗体もそれぞれ１０％未満であったのに対して、配列番号５に示すヒトＣＡＰＲＩＮ－１由来ペプチドに対するポリクローナル抗体を添加した群はいずれの癌細胞株に対しても２５％以上の細胞障害活性が確認された。陰性コントロールの抗体は、いずれの癌細胞に対しても４％未満の活性であった。従って、配列番号５に示すＣＡＰＲＩＮ－１に対する抗体は、ＣＡＰＲＩＮ－１を発現する癌細胞に対して、強い細胞障害活性を発揮することが明らかになった。
　なお、細胞障害活性は、上記のように、本発明で用いられるＣＡＰＲＩＮ－１に対する抗体、リンパ球及びクロミウム５１を取り込ませた２×１０３個の各癌細胞株を混合して４時間培養し、培養後培地に放出されたクロミウム５１の量を測定して、以下計算式＊により算出した癌細胞株に対する細胞障害活性を示した結果である。
　＊式：細胞障害活性（％）＝ＣＡＰＲＩＮ－１に対する抗体及びリンパ球を加えた際の標的細胞からのクロミウム５１遊離量÷１Ｎ塩酸を加えた標的細胞からのクロミウム５１遊離量×１００。
　実施例８で得た、ヒト－マウスキメラモノクローナル抗体＃１、＃２、及び＃３と、実施例９で得た、ヒト－ニワトリキメラモノクローナル抗体＃１、＃２、＃３及び＃４のヒト癌細胞に対する細胞障害活性を評価した。＃１、＃２及び＃３、並びにヒト－ニワトリキメラモノクローナル抗体＃１、＃２、＃３及び＃４を産生する各細胞培養上清をＨｉｔｒａｐ　ＰｒｏｔｅｉｎＡ　ＳｅｐｈａｒｏｓｅＦＦ（ＧＥヘルスケア社製）を用いて精製し、ＰＢＳ（－）に置換して０．２２μｍのフィルター（ミリポア社製）で濾過したものを活性測定用の抗体として用いた。１０６個のヒト乳癌細胞株ＭＣＦ７、ヒト大腸癌細胞株ＨＣＴ－１１６、ヒト膵臓癌細胞株ＭＩＡＰａＣａ－２、ヒト腎臓癌細胞株Ｃａｋｉ－２、ヒト肺癌細胞株ＱＧ５６を５０ｍｌ容の遠心チューブに集め、１００μＣｉのクロミウム５１を加え３７℃で２時間インキュベートした。その後１０％　ＦＢＳを含むＲＰＭＩ１６４０培地で３回洗浄し、９６穴Ｖ底プレート１穴あたり２×１０３個ずつ添加して標的細胞とした。これに、上記精製抗体ヒト－マウスキメラモノクローナル抗体＃１、＃２及び＃３、ヒト－ニワトリキメラモノクローナル抗体＃１、＃２、＃３及び＃４、並びに実施例８で得たヒト－マウスキメラ比較モノクローナル抗体１～１１をそれぞれ１．３μｇ添加し、さらに定法に従って調製した、ヒト末梢血リンパ球細胞から定法を用いてヒトＮＫ細胞を含む細胞集団を分離した。ヒトＮＫ細胞を含む細胞集団は、末梢血単核球細胞分離用の比重分離液Ｈｉｓｔｏｐａｑｕｅ（シグマアルドリッチ社）を用いて分離したヒト末梢血単核球細胞をＦＩＴＣ蛍光色素で標識された抗体（抗ヒトＣＤ３抗体、抗ヒトＣＤ２０抗体、抗ヒトＣＤ１９抗体、抗ヒトＣＤ１１ｃ抗体、抗ＨＬＡ－ＤＲ抗体（ベクトンアンドディッキンソン社））で反応させ、セルソーター（ＦＡＣＳ　Ｖａｎｔａｇｅ　ＳＥ（ベクトンアンドディッキンソン社））を用いて、上記抗体で染まらないＮＫ細胞を含んだ細胞集団を分離したもの、又はヒトＮＫ細胞分離キット（ミルテニー社製）を用いて分離したものを用いた。分離したＮＫ細胞を含んだ細胞を１ウェル当たり２×１０５個添加して、３７℃、５％　ＣＯ２の条件下で４時間培養した。培養後、障害を受けた腫瘍細胞から放出される培養上清中のクロミウム５１の量を測定し、抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体による癌細胞に対する細胞障害活性を算出した。陰性コントロールにはアイソタイプコントロール抗体を添加したものを用いた。その結果、アイソタイプコントロール抗体を用いた場合及びヒト－マウスキメラ比較モノクローナル抗体１～１１の細胞障害活性は、ＭＣＦ７に対して５％未満、ＨＣＴ－１１６に対して３％未満、ＭＩＡＰａＣａ－２に対して７％、Ｃａｋｉ－２に対して８％未満、ＱＧ５６に対して５％未満であったのに対して、ヒト－マウスキメラモノクローナル抗体＃１、ヒト－ニワトリキメラモノクローナル抗体＃１～＃４はＭＣＦ７に対して３０％以上、ＨＣＴ－１１６に対して１９％以上、ＭＩＡＰａＣａ－２に対して２８％以上、Ｃａｋｉ－２に対して３４％以上、ＱＧ５６に対して１０％以上であった。また、ヒト－マウスキメラモノクローナル抗体＃２及び＃３は、ＭＣＦ７に対して３２％以上、ＨＣＴ－１１６に対して１８％以上、ＭＩＡＰａＣａ－２に対して３２％以上、Ｃａｋｉ－２に対して１８％以上、ＱＧ５６に対して１０％以上であった。同様に、他の癌細胞、乳癌細胞株ＺＲ７５－１、Ｔ４７Ｄ、Ｈｓ５７８Ｔ、ＢＴ－２０、ＳＫ－ＢＲ－３、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１Ｖ、ＭＲＫ－ｎｕ－１、グリオーマ細胞株Ｔ９８Ｇ、Ｕ３７３、肺癌細胞株Ａ５４９、腎臓癌細胞株Ｃａｋｉ－１、ＡＣＨＮ、子宮頸癌細胞株ＳＷ７５６、膀胱癌細胞株Ｔ２４、胃癌細胞株ＭＫＮ２８、ＭＫＮ４５、大腸癌細胞株ＳＷ４８０、白血病細胞株ＡＭＬ５及びリンパ腫細胞株Ｒａｍｏｓについて、アイソタイプコントロール抗体を用いた場合及び比較抗体１～比較抗体１１を用いた場合はいずれも４％未満であったのに対し、ヒト－マウスキメラモノクローナル抗体＃１、＃２及び＃３、並びにヒト－ニワトリキメラモノクローナル抗体＃１、＃２、＃３及び＃４は細胞障害活性が１０％以上認められた。以上の結果より、取得したＣＡＰＲＩＮ－１に対するモノクローナル抗体＃１、＃２、＃３、ヒト－ニワトリキメラモノクローナル抗体＃１、＃２、＃３及び＃４は、ＡＤＣＣ活性によってＣＡＰＲＩＮ－１を発現する癌細胞を障害することが示され、比較抗体１～１１に比べてヒト－マウスキメラモノクローナル抗体＃１、＃２及び＃３、並びにヒト－ニワトリキメラモノクローナル抗体＃１、＃２、＃３及び＃４は、ヒト癌細胞に対して強い細胞障害活性を示すことが明らかになった。
　また、ヒト－ニワトリキメラモノクローナル抗体＃１、＃２、＃３及び＃４について、上記と同様にしてＣＡＰＲＩＮ－１遺伝子の発現が確認されたヒト乳癌細胞株ＭＤＡ－ＭＢ－４３６、ヒト腎臓癌細胞株Ｃａｋｉ－１、ヒト肺癌細胞株Ａ５４９、ヒト膵臓癌細胞株Ｐａｎｃ－１、ヒト大腸癌細胞ＤＬＤ－１に対する細胞障害活性を評価した。また、ＷＯ２０１１／０９６５１７の実施例４に記載のＣＡＰＲＩＮ－１に対するヒト－ニワトリキメラ抗体＃１及び＃２をそれぞれ比較抗体１２及び比較抗体１３、ＷＯ２０１１／０９６５１９の実施例４に記載のＣＡＰＲＩＮ－１に対するヒト－ニワトリキメラ抗体＃１を比較抗体１３、ＷＯ２０１１／０９６５２８の実施例４に記載のＣＡＰＲＩＮ－１に対するヒト－ニワトリキメラ抗体＃１、マウスモノクローナル抗体＃２、＃３、＃４、＃５及び＃６をそれぞれ比較抗体１４、比較抗体１５、比較抗体１６、比較抗体１７、比較抗体１８及び比較抗体１９、ＷＯ２０１１／０９６５３３の実施例３に記載のＣＡＰＲＩＮ－１に対するマウスモノクローナル抗体＃１、＃２及び＃３をそれぞれ比較抗体２０、比較抗体２１及び比較抗体２２、ＷＯ２０１１／０９６５３４の実施例３に記載のＣＡＰＲＩＮ－１に対するマウスモノクローナル抗体＃１、＃２及び＃３をそれぞれ比較抗体２３、比較抗体２４及び比較抗体２５として用いて評価した。具体的には、ヒト大腸癌細胞株ＤＬＤ－１を５０ｍｌ容の遠心チューブに１０６個集め、１００μＣｉのクロミウム５１を加え３７℃で１時間インキュベートした。その後１０％　ＦＢＳを含むＲＰＭＩ１６４０培地で３回洗浄し、９６穴Ｖ底プレート１穴あたり２×１０３個ずつ添加して標的細胞とした。次にヒト－ニワトリキメラモノクローナル抗体＃１～＃４及び比較抗体１２～２５をそれぞれ１ウェル当たりに１μｇ添加し、さらに定法に従って調製したヒトＮＫ細胞を含む細胞集団を１ウェル当たり１０５個添加して、３７℃、５％　ＣＯ２の条件下で４時間培養した。培養後、障害を受けた腫瘍細胞から放出される培養上清中のクロミウム５１の量を測定し、抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体による癌細胞に対する細胞障害活性を算出した。ＭＤＡ－ＭＢ－４３６、Ｃａｋｉ－１、Ａ５４９、Ｐａｎｃ－１についても上記と同様の方法で評価を行った。その結果、ＭＤＡ－ＭＢ－４３６に対する比較抗体１２～２５の細胞障害活性はいずれも５％以下であったのに対して、ヒト－ニワトリキメラモノクローナル抗体＃１、＃２、＃３及び＃４は１８％以上の細胞障害活性を示した。Ｃａｋｉ－１に対する比較抗体１２～２５の細胞障害活性はいずれも５％以下であったのに対して、ヒト－ニワトリキメラモノクローナル抗体＃１、＃２、＃３及び＃４は１４％以上の細胞障害活性を示した。Ａ５４９に対する比較抗体１２～２５の細胞障害活性はいずれも５％以下であったのに対して、ヒト－ニワトリキメラモノクローナル抗体＃１、＃２、＃３及び＃４は１２％以上の細胞障害活性を示した。Ｐａｎｃ－１に対する比較抗体１２～２５の細胞障害活性はいずれも５％以下であったのに対して、ヒト－ニワトリキメラモノクローナル抗体＃１、＃２、＃３及び＃４は１８％以上の細胞障害活性を示した。また、ＤＬＤ－１に対する比較抗体１２～２５の細胞障害活性はいずれも７％以下であったのに対して、ヒト－ニワトリキメラモノクローナル抗体＃１、＃２、＃３及び＃４は１５％以上の細胞障害活性を示した。
　なお、細胞障害活性は、上記のように、本発明で用いられるＣＡＰＲＩＮ－１に対する抗体、リンパ球（ＮＫ細胞を含む集団）細胞及びクロミウム５１を取り込ませた２×１０３個の各癌細胞株を混合して４時間培養し、培養後培地に放出されたクロミウム５１の量を測定して、以下計算式＊により算出した癌細胞株に対する細胞障害活性を示した結果である。
　＊式：細胞障害活性（％）＝ＣＡＰＲＩＮ－１に対する抗体及びリンパ球（ＮＫ細胞を含む集団）細胞を加えた際の標的細胞からのクロミウム５１遊離量÷１Ｎ塩酸を加えた標的細胞からのクロミウム５１遊離量×１００。
　実施例１２　抗ＣＡＰＲＩＮ－１モノクローナル抗体＃１、＃２及び＃３が認識する各種癌細胞表面でのＣＡＰＲＩＮ－１の分子数
　ヒト乳癌細胞株（ＺＲ７５－１、ＭＣＦ７、Ｔ４７Ｄ、ＳＫ－ＢＲ－３、ＭＤＡ－ＭＢ－１５７、ＢＴ－２０、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１Ｖ、ＭＲＫ－ｎｕ－１）、腎癌細胞株（Ｃａｋｉ－１、Ｃａｋｉ－２、Ａ４９８、ＡＣＨＮ）、膀胱癌細胞株（Ｔ２４）、卵巣癌細胞株（ＳＫＯＶ３）、肺癌細胞株（ＱＧ５６、Ａ５４９）、膵臓癌細胞株（ＭＩＡＰａＣａ－２、Ｃａｐａｎ－２）、前立腺癌細胞株（ＰＣ３）、子宮頸癌細胞株（ＳＷ７５６）、線維肉腫細胞株（ＨＴ１０８０）、脳腫瘍細胞株（Ｔ９８Ｇ、Ｕ８７ＭＧ、Ｕ２５１、ＳＮＢ１９、Ｕ３７３）、胃癌細胞株（ＭＮＫ２８、ＭＮＫ４５）、大腸癌細胞株（ＨＴ２９、Ｌｏｖｏ、ＣａＣｏ２、ＳＷ４８０、ＨＣＴ１１６）、白血病細胞株（ＡＭＬ５）、リンパ腫細胞株（Ｒａｍｏｓ）について、実施例２で得たマウスモノクローナル抗体＃１、＃２及び＃３が認識する各種癌細胞表面でのＣＡＰＲＩＮ－１分子の数を分子数測定キット“ＱＩＦＩＫＩＴ”（ＤＡＫＯ社製）を用いて調べた。同様にして、モノクローナルである比較抗体１～１１についても各種癌細胞表面でのＣＡＰＲＩＮ－１分子の数を調べた。
　具体的には、添付プロトコールに従い、各細胞株に抗体マウスモノクローナル抗体＃１、＃２、＃３及び比較抗体１～比較抗体１１を最終濃度が５μｇ／ｍｌとなるようにＰＢＳで希釈し、各細胞株に添加して３０分反応させた。ＰＢＳで洗浄した後、キットに添付の検量ビーズとともに各細胞株へキットに添付の蛍光標識された二次抗体抗マウスＩｇＧ抗体を添加して氷上で４５分間静置した。各細胞株及び検量ビーズをＰＢＳで洗浄後、ベクトンディッキンソン株式会社のＦＡＣＳキャリバーにて蛍光強度を測定して全ての上記抗体について各平均蛍光強度値（ｍｅａｎ）を得た。陰性コントロールにはアイソタイプコントロール抗体を反応させたものを用い、ｍｅａｎを得た。各平均蛍光強度値（ｍｅａｎ）を用いてキットに添付の方法に従い分子数を算出した。その結果、マウスモノクローナル抗体＃１、抗体＃２、抗体＃３が認識する各種癌細胞表面でのＣＡＰＲＩＮ－１の分子数は、調べたすべてのヒト癌細胞において、細胞１個当たり１０５個以上であった。一方、比較抗体１～１１については細胞１個当たり１０５個より少なかった。
　本発明の抗体は、癌の治療及び／又は予防のため有用である。
　本明細書で引用した全ての刊行物、特許及び特許出願をそのまま参考として本明細書にとり入れるものとする。

Claims (17)

  1. 　配列番号５で表されるアミノ酸配列又は該アミノ酸配列と８０％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列からなるＣＡＰＲＩＮ－１部分ポリペプチドと免疫学的反応性を有する、抗体又はそのフラグメント。
  2. 　ＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質を発現する癌細胞に対し細胞障害活性を有する、請求項１に記載の抗体又はそのフラグメント。
  3. 　前記抗体が、モノクローナル抗体又はポリクローナル抗体である、請求項１又は２に記載の抗体又はそのフラグメント。
  4. 　ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、単鎖抗体又は多重特異性抗体である、請求項１～３のいずれか１項に記載の抗体又はそのフラグメント。
  5. 　配列番号６、７及び８の相補性決定領域を含む重鎖可変領域と配列番号１０、１１及び１２の相補性決定領域を含む軽鎖可変領域とを含み、かつ、ＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質と免疫学的反応性を有する、請求項１～４のいずれか１項に記載の抗体又はそのフラグメント。
  6. 　配列番号１６、１７及び１８の相補性決定領域を含む重鎖可変領域と配列番号２０、２１及び２２の相補性決定領域を含む軽鎖可変領域とを含み、かつ、ＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質と免疫学的反応性を有する、請求項１～４のいずれか１項に記載の抗体又はそのフラグメント。
  7. 　配列番号６、７及び８の相補性決定領域を含む重鎖可変領域と配列番号５０、５１及び５２の相補性決定領域を含む軽鎖可変領域とを含み、かつ、ＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質と免疫学的反応性を有する、請求項１～４のいずれか１項に記載の抗体又はそのフラグメント。
  8. 　配列番号５５、５６及び５７の相補性決定領域を含む重鎖可変領域と配列番号５９、６０及び６１の相補性決定領域を含む軽鎖可変領域とを含み、かつ、ＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質と免疫学的反応性を有する、請求項１～４のいずれか１項に記載の抗体又はそのフラグメント。
  9. 　配列番号５５、５６及び５７の相補性決定領域を含む重鎖可変領域と配列番号５９、６４及び６１の相補性決定領域を含む軽鎖可変領域とを含み、かつ、ＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質と免疫学的反応性を有する、請求項１～４のいずれか１項に記載の抗体又はそのフラグメント。
  10. 　配列番号６６、６７及び６８の相補性決定領域を含む重鎖可変領域と配列番号７０、７１及び７２の相補性決定領域を含む軽鎖可変領域とを含み、かつ、ＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質と免疫学的反応性を有する、請求項１～４のいずれか１項に記載の抗体又はそのフラグメント。
  11. 　配列番号７４、７５及び７６の相補性決定領域を含む重鎖可変領域と配列番号７８、７９及び８０の相補性決定領域を含む軽鎖可変領域とを含み、かつ、ＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質と免疫学的反応性を有する、請求項１～４のいずれか１項に記載の抗体又はそのフラグメント。
  12. 　抗腫瘍剤がコンジュゲートされた、請求項１～１１のいずれか１項に記載の抗体又はそのフラグメント。
  13. 　請求項１～１２のいずれか１項に記載の抗体又はそのフラグメントを有効成分として含むことを特徴とする、癌の治療及び／又は予防のための医薬組成物。
  14. 　前記癌が乳癌、腎癌、膵臓癌、大腸癌、肺癌、脳腫瘍、胃癌、子宮頸癌、卵巣癌、前立腺癌、膀胱癌、食道癌、白血病、リンパ腫、線維肉腫、肥満細胞腫又はメラノーマである、請求項１３に記載の医薬組成物。
  15. 　請求項１３又は１４に記載の医薬組成物と、抗腫瘍剤を含む医薬組成物とを含んでなる、癌の治療及び／又は予防のための組み合わせ医薬品。
  16. 　請求項１～１１のいずれか１項に記載の抗体又はそのフラグメントをコードするＤＮＡ。
  17. 　請求項１～１２のいずれか１項に記載の抗体若しくはそのフラグメント、請求項１３若しくは１４に記載の医薬組成物、又は請求項１１に記載の組み合わせ医薬品を、被験者に投与することを含む、癌の治療及び／又は予防方法。
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ES12820596.0T ES2634249T3 (es) 2011-08-04 2012-08-03 Composición farmacéutica para el tratamiento y/o la profilaxis del cáncer
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CA2844042A CA2844042C (en) 2011-08-04 2012-08-03 Pharmaceutical composition for treatment and/or prophylaxis of cancer
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JP2012543824A JP6070191B2 (ja) 2011-08-04 2012-08-03 癌の治療及び／又は予防用医薬組成物
KR1020147005881A KR101979208B1 (ko) 2011-08-04 2012-08-03 암의 치료 및/또는 예방용 의약 조성물
US14/236,793 US9273128B2 (en) 2011-08-04 2012-08-03 Pharmaceutical composition for treatment and/or prophylaxis of cancer
PL12820596T PL2740796T3 (pl) 2011-08-04 2012-08-03 Kompozycja farmaceutyczna do leczenia nowotworu i/lub zapobiegania nowotworowi
MX2014001375A MX351682B (es) 2011-08-04 2012-08-03 Composicion farmaceutica para el tratamiento y/o prevencion del cancer.
RU2014108044A RU2641260C2 (ru) 2011-08-04 2012-08-03 Фармацевтическая композиция для лечения и профилактики злокачественной опухоли
EP12820596.0A EP2740796B1 (en) 2011-08-04 2012-08-03 Pharmaceutical composition for treatment and/or prophylaxis of cancer
EP17163690.5A EP3351630B1 (en) 2011-08-04 2012-08-03 Pharmaceutical composition comprising anti caprin-1 antibodies for treating and/or preventing cancer
PL17163690T PL3351630T3 (pl) 2011-08-04 2012-08-03 Kompozycja farmaceutyczna zawierająca przeciwciała przeciwko CAPRIN-1 do leczenia nowotworu i/lub zapobiegania nowotworowi
DK12820596.0T DK2740796T3 (en) 2011-08-04 2012-08-03 Pharmaceutical composition for the treatment and / or prevention of cancer

Applications Claiming Priority (2)

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US (1) US9273128B2 (ja)
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KR (1) KR101979208B1 (ja)
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AU (1) AU2012290957B2 (ja)
BR (1) BR112014002608A2 (ja)
CA (1) CA2844042C (ja)
DK (2) DK2740796T3 (ja)
ES (2) ES2634249T3 (ja)
HU (2) HUE033149T2 (ja)
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PL (2) PL2740796T3 (ja)
PT (2) PT2740796T (ja)
RU (1) RU2641260C2 (ja)
WO (1) WO2013018894A1 (ja)

Cited By (39)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2013125640A1 (ja) * 2012-02-21 2013-08-29 東レ株式会社 癌の治療及び／又は予防用医薬組成物
WO2013147169A1 (ja) 2012-03-30 2013-10-03 東レ株式会社 肝臓癌の治療及び／又は予防用医薬組成物
WO2013147176A1 (ja) 2012-03-30 2013-10-03 東レ株式会社 胆嚢癌の治療及び／又は予防用医薬組成物
US8709418B2 (en) 2010-02-04 2014-04-29 Toray Industries, Inc. Pharmaceutical composition for treating CAPRIN-1 expressing cancer
US8828398B2 (en) 2010-02-04 2014-09-09 Toray Industries, Inc. Pharmaceutical composition for treating and/or preventing cancer
US8911740B2 (en) 2010-02-04 2014-12-16 Toray Industries, Inc. Pharmaceutical composition for treating and/or preventing cancer
US8937160B2 (en) 2010-02-04 2015-01-20 Toray Industries, Inc. Pharmaceutical composition for treating and/or preventing cancer
WO2015020212A1 (ja) 2013-08-09 2015-02-12 東レ株式会社 癌の治療及び／又は予防用医薬組成物
JPWO2013018886A1 (ja) * 2011-08-04 2015-03-05 東レ株式会社 膵臓癌の治療及び／又は予防用医薬組成物
US9115200B2 (en) 2010-02-04 2015-08-25 Toray Industries, Inc. Pharmaceutical composition for treating cancer using a monoclonal antibody having immunological reactivity with CAPRIN-1
US9175074B2 (en) 2011-08-04 2015-11-03 Toray Industries, Inc. Pharmaceutical composition for treatment and/or prophylaxis of cancer
US9180187B2 (en) 2010-02-04 2015-11-10 Toray Industries, Inc. Medicament for treating and/or preventing cancer
US9180188B2 (en) 2011-08-04 2015-11-10 Toray Industries, Inc. Pharmaceutical composition for treatment and/or prophylaxis of cancer
US9181334B2 (en) 2011-08-04 2015-11-10 Toray Industries, Inc. Pharmaceutical composition for treatment and/or prophylaxis of cancer
US9181348B2 (en) 2011-08-04 2015-11-10 Toray Industries, Inc. Pharmaceutical composition for treatment and/or prophylaxis of cancer
US9260513B2 (en) 2012-02-21 2016-02-16 Toray Industries, Inc. Pharmaceutical composition for treatment and/or prevention of cancer
US9273128B2 (en) 2011-08-04 2016-03-01 Toray Industries, Inc Pharmaceutical composition for treatment and/or prophylaxis of cancer
US9273130B2 (en) 2012-02-21 2016-03-01 Toray Industries, Inc. Pharmaceutical composition for treatment and/or prevention of cancer
US9416192B2 (en) 2008-08-05 2016-08-16 Toray Industries, Inc. Pharmaceutical composition for treatment and prevention of cancers
US9573993B2 (en) 2012-02-21 2017-02-21 Toray Industries, Inc. Pharmaceutical composition for treatment of cancer comprising an anti-CAPRIN-1 peptide antibody
US9753038B2 (en) 2012-07-19 2017-09-05 Toray Industries, Inc. Method for detecting cancer via measurement of caprin-1 expression level
US9772332B2 (en) 2012-07-19 2017-09-26 Toray Industries, Inc. Method for detecting CAPRIN-1 in a biological sample
US9796775B2 (en) 2011-08-04 2017-10-24 Toray Industries, Inc. Method for detecting pancreatic cancer
WO2018079740A1 (ja) 2016-10-28 2018-05-03 東レ株式会社 癌の治療及び／又は予防用医薬組成物
WO2019189780A1 (ja) 2018-03-30 2019-10-03 東レ株式会社 癌の治療及び／又は予防用医薬組成物
JP2020509057A (ja) * 2017-03-04 2020-03-26 国立大学法人京都大学 治療用ペプチド
WO2021182570A1 (ja) 2020-03-12 2021-09-16 東レ株式会社 癌の治療及び／又は予防のための医薬品
WO2021182574A1 (ja) 2020-03-12 2021-09-16 東レ株式会社 癌の治療及び／又は予防のための医薬品
WO2021182572A1 (ja) 2020-03-12 2021-09-16 東レ株式会社 癌の治療及び／又は予防のための医薬品
WO2021182573A1 (ja) 2020-03-12 2021-09-16 東レ株式会社 癌の治療及び／又は予防のための医薬品
WO2021182571A1 (ja) 2020-03-12 2021-09-16 東レ株式会社 癌の治療及び／又は予防のための医薬品
US11137401B2 (en) 2008-08-05 2021-10-05 Toray Industries, Inc. Method for detecting cancer using CAPRIN-1 as a marker
WO2022270524A1 (ja) 2021-06-23 2022-12-29 東レ株式会社 癌の治療及び／又は予防のための医薬品
WO2022270523A1 (ja) 2021-06-23 2022-12-29 東レ株式会社 癌の治療及び／又は予防のための医薬品
WO2023008461A1 (ja) 2021-07-27 2023-02-02 東レ株式会社 癌の治療及び／又は予防のための医薬品
WO2023008462A1 (ja) 2021-07-27 2023-02-02 東レ株式会社 癌の治療及び／又は予防のための医薬品
WO2023008459A1 (ja) 2021-07-27 2023-02-02 東レ株式会社 癌の治療及び／又は予防のための医薬品
WO2023033129A1 (ja) 2021-09-03 2023-03-09 東レ株式会社 癌の治療及び／又は予防用医薬組成物
WO2024005123A1 (ja) * 2022-06-30 2024-01-04 東レ株式会社 癌の治療及び／又は予防用医薬組成物

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US10509038B2 (en) * 2016-03-14 2019-12-17 Curemeta Therapeutics, Llc Podocalyxin and TRA-related antibody, methods of preparation and uses as an anti-cancer therapeutic agent
WO2018009916A1 (en) 2016-07-07 2018-01-11 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Antibody adjuvant conjugates
WO2020190725A1 (en) 2019-03-15 2020-09-24 Bolt Biotherapeutics, Inc. Immunoconjugates targeting her2

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2010016526A1 (ja) * 2008-08-05 2010-02-11 東レ株式会社 癌の治療及び予防用医薬組成物
WO2010016527A1 (ja) * 2008-08-05 2010-02-11 東レ株式会社 癌の検出方法
WO2010016525A1 (ja) * 2008-08-05 2010-02-11 東レ株式会社 免疫誘導剤

Family Cites Families (63)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5698396A (en) 1995-06-07 1997-12-16 Ludwig Institute For Cancer Research Method for identifying auto-immunoreactive substances from a subject
US20030118599A1 (en) 1999-04-02 2003-06-26 Corixa Corporation Compositions and methods for the therapy and diagnosis of lung cancer
KR20070112860A (ko) 1998-07-14 2007-11-27 코릭사 코포레이션 전립선 종양 단백질의 분리된 면역원성 부위 및 이를사용하여 전립선암을 진단하는 방법
RU2234942C2 (ru) 1998-07-14 2004-08-27 Корикса Корпорейшн Выделенный опухолевый полипептид предстательной железы и кодирующий его полинуклеотид
US6969518B2 (en) 1998-12-28 2005-11-29 Corixa Corporation Compositions and methods for the therapy and diagnosis of breast cancer
WO2000052204A2 (en) 1999-02-22 2000-09-08 Orntoft Torben F Gene expression in bladder tumors
WO2000060077A2 (en) 1999-04-02 2000-10-12 Corixa Corporation Compounds for therapy and diagnosis of lung cancer and methods for their use
US6444425B1 (en) 1999-04-02 2002-09-03 Corixa Corporation Compounds for therapy and diagnosis of lung cancer and methods for their use
US6949245B1 (en) 1999-06-25 2005-09-27 Genentech, Inc. Humanized anti-ErbB2 antibodies and treatment with anti-ErbB2 antibodies
EP1224285A4 (en) 1999-10-29 2004-12-08 Human Genome Sciences Inc 27 HUMAN SECRETED PROTEINS
US20020006404A1 (en) 1999-11-08 2002-01-17 Idec Pharmaceuticals Corporation Treatment of cell malignancies using combination of B cell depleting antibody and immune modulating antibody related applications
PL366626A1 (en) 2000-03-29 2005-02-07 Corixa Corporation Compositions and methods for the therapy and diagnosis of lung cancer
US7919467B2 (en) 2000-12-04 2011-04-05 Immunotope, Inc. Cytotoxic T-lymphocyte-inducing immunogens for prevention, treatment, and diagnosis of cancer
US20040029114A1 (en) 2001-01-24 2004-02-12 Eos Technology, Inc. Methods of diagnosis of breast cancer, compositions and methods of screening for modulators of breast cancer
RU2306952C2 (ru) 2001-01-31 2007-09-27 Байоджен Айдек Инк. Лечение в-клеточных злокачественных опухолей с использованием комбинации применений, связанных с антителами, уменьшающими количество b-клеток, и с иммуномодулирующими антителами
AU2002311787A1 (en) 2001-03-28 2002-10-15 Zycos Inc. Translational profiling
WO2002083070A2 (en) 2001-04-10 2002-10-24 Corixa Corporation Compounds for immunotherapy and diagnosis of colon cancer and methods for their use
AU2002311909A1 (en) 2001-05-11 2002-11-25 Corixa Corporation Compositions and methods for the therapy and diagnosis of lung cancer
US20030190640A1 (en) 2001-05-31 2003-10-09 Mary Faris Genes expressed in prostate cancer
US20040142325A1 (en) 2001-09-14 2004-07-22 Liat Mintz Methods and systems for annotating biomolecular sequences
WO2003072035A2 (en) 2002-02-22 2003-09-04 Genentech, Inc. Compositions and methods for the treatment of immune related diseases
US20050003390A1 (en) 2002-05-17 2005-01-06 Axenovich Sergey A. Targets for controlling cellular growth and for diagnostic methods
US20040126379A1 (en) 2002-08-21 2004-07-01 Boehringer Ingelheim International Gmbh Compositions and methods for treating cancer using cytotoxic CD44 antibody immunoconjugates and chemotherapeutic agents
EP2314676A1 (en) 2002-11-26 2011-04-27 Genentech, Inc. Compositions and methods for the treatment of immune related diseases
WO2004076682A2 (en) 2003-02-26 2004-09-10 Surromed, Inc. Targets for controlling cellular growth and for diagnostic methods
AU2004235382A1 (en) 2003-04-29 2004-11-11 Wyeth Methods for diagnosing AML and MDS differential gene expression
JP2007516693A (ja) 2003-06-09 2007-06-28 ザ・リージェンツ・オブ・ザ・ユニバーシティ・オブ・ミシガン 癌の治療および診断のための組成物および方法
WO2005007830A2 (en) 2003-07-14 2005-01-27 Mayo Foundation For Medical Education And Research Methods and compositions for diagnosis, staging and prognosis of prostate cancer
US20050032113A1 (en) 2003-07-17 2005-02-10 Mitsubishi Pharma Corporation Membrane protein library for proteome analysis and method for preparing same
CA2553826A1 (en) 2004-01-26 2005-12-08 Debiovision Inc. Neoplasm-specific polypeptides and their uses
JP4734319B2 (ja) 2004-03-19 2011-07-27 イムクローン・リミテッド・ライアビリティ・カンパニー ヒト抗上皮成長因子受容体抗体
WO2005100998A2 (en) 2004-04-16 2005-10-27 Europroteome Ag Membrane markers for use in cancer diagnosis and therapy
WO2006002378A2 (en) 2004-06-23 2006-01-05 Avalon Pharmaceuticals Determining cancer-linked genes and therapeutic targets using molecular cytogenetic methods
US7449184B2 (en) 2005-01-21 2008-11-11 Genentech, Inc. Fixed dosing of HER antibodies
US7858324B2 (en) 2005-02-18 2010-12-28 Children's Medical Center Corporation Cyr61 as a biomarker for diagnosis and prognosis of cancers of epithelial origin
KR101310000B1 (ko) 2005-03-11 2013-09-25 싸이퍼젠 바이오시스템즈, 인코포레이티드 난소암 및 자궁내막암에 대한 바이오마커 : 헵시딘
JP2006316040A (ja) 2005-05-13 2006-11-24 Genentech Inc Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）補助療法
US8014957B2 (en) 2005-12-15 2011-09-06 Fred Hutchinson Cancer Research Center Genes associated with progression and response in chronic myeloid leukemia and uses thereof
CA2642342A1 (en) 2006-02-14 2007-08-23 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Compositions, kits, and methods for identification, assessment, prevention, and therapy of cancer
US20080131428A1 (en) * 2006-02-24 2008-06-05 Arius Research, Inc. Cytotoxicity mediation of cells evidencing surface expression of TROP-2
US20100015724A1 (en) 2006-08-17 2010-01-21 Peter Hornbeck Lysine acetylation sites
US20080107668A1 (en) 2006-08-30 2008-05-08 Immunotope, Inc. Cytotoxic t-lymphocyte-inducing immunogens for prevention, treatment, and diagnosis of cancer
US7615349B2 (en) 2006-09-07 2009-11-10 H. Lee Moffitt Cancer Center And Research Institute, Inc. Melanoma gene signature
WO2008059252A2 (en) 2006-11-15 2008-05-22 Oxford Biomedica (Uk) Limited Methods and composition fro t cell receptors which recognize 5t4 antigen
CN101836116A (zh) 2007-10-25 2010-09-15 东丽株式会社 癌的检测方法
JP5663834B2 (ja) 2008-03-14 2015-02-04 東ソー株式会社 遺伝子組換え抗体の製造方法
EP3692988A3 (en) 2008-03-18 2020-10-14 Genentech, Inc. Combinations of an anti-her2 antibody-drug conjugate and 5-fu, anti-vegf antibody, carboplatin or abt-869 and methods of use
PT2467401T (pt) 2009-08-19 2017-04-26 Merck Patent Gmbh Anticorpos para a deteção de complexos de integrina em material ffpe
CA2773240C (en) 2009-09-22 2015-11-10 Volker Sandig Process for producing molecules containing specialized glycan structures
RU2418587C1 (ru) * 2010-01-21 2011-05-20 Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Нижегородская государственная медицинская академия Федерального Агентства по здравоохранению и социальному развитию" (ГОУ ВПО "НижГМА Росздрава") Способ лечения злокачественных опухолей головного мозга
AU2011211682B2 (en) * 2010-02-04 2015-08-13 Toray Industries, Inc. Pharmaceutical composition for treating and/or preventing cancer
JP5923984B2 (ja) 2010-02-04 2016-05-25 東レ株式会社 癌の治療及び／又は予防のための医薬品
CN102821788B (zh) 2010-02-04 2016-11-16 东丽株式会社 癌的治疗和/或预防用药物组合物
KR101758117B1 (ko) 2010-02-04 2017-07-14 도레이 카부시키가이샤 암의 치료 및/또는 예방용 의약 조성물
MX342291B (es) 2010-02-04 2016-09-23 Toray Industries Composicion farmaceutica para el tratamiento y/o prevencion del cancer.
PL2532743T3 (pl) 2010-02-04 2015-09-30 Toray Industries Kompozycja farmaceutyczna do leczenia i/lub zapobiegania raka
KR101271964B1 (ko) 2010-07-08 2013-06-07 강원대학교산학협력단 담낭암 치료용 약제학적 조성물 및 이를 이용한 담낭암의 성장, 전이 억제 및 치료 방법
KR101576174B1 (ko) 2010-07-26 2015-12-09 르 라보레또레 쎄르비에르 간암 요법을 위한 방법 및 조성물
US9409993B2 (en) 2011-08-04 2016-08-09 Toray Industries, Inc. Pharmaceutical composition for treatment and/or prevention of pancreatic cancer
KR101979208B1 (ko) 2011-08-04 2019-05-16 도레이 카부시키가이샤 암의 치료 및/또는 예방용 의약 조성물
HUE033628T2 (en) 2011-08-04 2017-12-28 Toray Industries Method for detecting pancreatic cancer
DK2832366T3 (en) * 2012-03-30 2018-01-22 Toray Industries PHARMACEUTICAL COMPOSITION FOR TREATMENT AND / OR PREVENTION OF Gallbladder cancer
US9416193B2 (en) 2012-03-30 2016-08-16 Toray Industries, Inc. Pharmaceutical composition for treatment and/or prevention of liver cancer

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2010016526A1 (ja) * 2008-08-05 2010-02-11 東レ株式会社 癌の治療及び予防用医薬組成物
WO2010016527A1 (ja) * 2008-08-05 2010-02-11 東レ株式会社 癌の検出方法
WO2010016525A1 (ja) * 2008-08-05 2010-02-11 東レ株式会社 免疫誘導剤

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
ELLIS J.A. ET AL.: "Identification and Characterization of a Novel Protein (p137) Which Transcytoses Bidirectionally in Caco-2 Cells.", J.BIOL.CHEM., vol. 270, no. 35, 1995, pages 20717 - 20723, XP008143762 *
See also references of EP2740796A4 *

Cited By (47)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US9416192B2 (en) 2008-08-05 2016-08-16 Toray Industries, Inc. Pharmaceutical composition for treatment and prevention of cancers
US11137401B2 (en) 2008-08-05 2021-10-05 Toray Industries, Inc. Method for detecting cancer using CAPRIN-1 as a marker
US9982059B2 (en) 2008-08-05 2018-05-29 Toray Industries, Inc. Pharmaceutical composition for treatment and prevention of cancers
US9180187B2 (en) 2010-02-04 2015-11-10 Toray Industries, Inc. Medicament for treating and/or preventing cancer
US8828398B2 (en) 2010-02-04 2014-09-09 Toray Industries, Inc. Pharmaceutical composition for treating and/or preventing cancer
US8911740B2 (en) 2010-02-04 2014-12-16 Toray Industries, Inc. Pharmaceutical composition for treating and/or preventing cancer
US8937160B2 (en) 2010-02-04 2015-01-20 Toray Industries, Inc. Pharmaceutical composition for treating and/or preventing cancer
US8709418B2 (en) 2010-02-04 2014-04-29 Toray Industries, Inc. Pharmaceutical composition for treating CAPRIN-1 expressing cancer
US9416191B2 (en) 2010-02-04 2016-08-16 Toray Industries, Inc. Pharmaceutical composition for treatment and/or prevention of cancer
US9115200B2 (en) 2010-02-04 2015-08-25 Toray Industries, Inc. Pharmaceutical composition for treating cancer using a monoclonal antibody having immunological reactivity with CAPRIN-1
US9181348B2 (en) 2011-08-04 2015-11-10 Toray Industries, Inc. Pharmaceutical composition for treatment and/or prophylaxis of cancer
US9409993B2 (en) 2011-08-04 2016-08-09 Toray Industries, Inc. Pharmaceutical composition for treatment and/or prevention of pancreatic cancer
US9180188B2 (en) 2011-08-04 2015-11-10 Toray Industries, Inc. Pharmaceutical composition for treatment and/or prophylaxis of cancer
US9796775B2 (en) 2011-08-04 2017-10-24 Toray Industries, Inc. Method for detecting pancreatic cancer
US9175074B2 (en) 2011-08-04 2015-11-03 Toray Industries, Inc. Pharmaceutical composition for treatment and/or prophylaxis of cancer
US9181334B2 (en) 2011-08-04 2015-11-10 Toray Industries, Inc. Pharmaceutical composition for treatment and/or prophylaxis of cancer
JPWO2013018886A1 (ja) * 2011-08-04 2015-03-05 東レ株式会社 膵臓癌の治療及び／又は予防用医薬組成物
US9273128B2 (en) 2011-08-04 2016-03-01 Toray Industries, Inc Pharmaceutical composition for treatment and/or prophylaxis of cancer
US9573993B2 (en) 2012-02-21 2017-02-21 Toray Industries, Inc. Pharmaceutical composition for treatment of cancer comprising an anti-CAPRIN-1 peptide antibody
US9273130B2 (en) 2012-02-21 2016-03-01 Toray Industries, Inc. Pharmaceutical composition for treatment and/or prevention of cancer
US9266958B2 (en) 2012-02-21 2016-02-23 Toray Industries, Inc. Pharmaceutical composition for treatment and/or prevention of cancer
WO2013125640A1 (ja) * 2012-02-21 2013-08-29 東レ株式会社 癌の治療及び／又は予防用医薬組成物
US9260513B2 (en) 2012-02-21 2016-02-16 Toray Industries, Inc. Pharmaceutical composition for treatment and/or prevention of cancer
WO2013147169A1 (ja) 2012-03-30 2013-10-03 東レ株式会社 肝臓癌の治療及び／又は予防用医薬組成物
WO2013147176A1 (ja) 2012-03-30 2013-10-03 東レ株式会社 胆嚢癌の治療及び／又は予防用医薬組成物
US9428581B2 (en) 2012-03-30 2016-08-30 Toray Industries, Inc. Pharmaceutical composition for treatment and/or prevention of gallbladder cancer
US9416193B2 (en) 2012-03-30 2016-08-16 Toray Industries, Inc. Pharmaceutical composition for treatment and/or prevention of liver cancer
US9753038B2 (en) 2012-07-19 2017-09-05 Toray Industries, Inc. Method for detecting cancer via measurement of caprin-1 expression level
US9772332B2 (en) 2012-07-19 2017-09-26 Toray Industries, Inc. Method for detecting CAPRIN-1 in a biological sample
US9862774B2 (en) 2013-08-09 2018-01-09 Toray Industries, Inc. Pharmaceutical composition for treatment and/or prevention of cancer
WO2015020212A1 (ja) 2013-08-09 2015-02-12 東レ株式会社 癌の治療及び／又は予防用医薬組成物
KR20160038892A (ko) 2013-08-09 2016-04-07 도레이 카부시키가이샤 암의 치료 및/또는 예방용 의약 조성물
WO2018079740A1 (ja) 2016-10-28 2018-05-03 東レ株式会社 癌の治療及び／又は予防用医薬組成物
JP2020509057A (ja) * 2017-03-04 2020-03-26 国立大学法人京都大学 治療用ペプチド
WO2019189780A1 (ja) 2018-03-30 2019-10-03 東レ株式会社 癌の治療及び／又は予防用医薬組成物
WO2021182571A1 (ja) 2020-03-12 2021-09-16 東レ株式会社 癌の治療及び／又は予防のための医薬品
WO2021182572A1 (ja) 2020-03-12 2021-09-16 東レ株式会社 癌の治療及び／又は予防のための医薬品
WO2021182573A1 (ja) 2020-03-12 2021-09-16 東レ株式会社 癌の治療及び／又は予防のための医薬品
WO2021182574A1 (ja) 2020-03-12 2021-09-16 東レ株式会社 癌の治療及び／又は予防のための医薬品
WO2021182570A1 (ja) 2020-03-12 2021-09-16 東レ株式会社 癌の治療及び／又は予防のための医薬品
WO2022270524A1 (ja) 2021-06-23 2022-12-29 東レ株式会社 癌の治療及び／又は予防のための医薬品
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