WO2009115053A1

WO2009115053A1 - 可注射用缓释药物制剂及其制备方法

Info

Publication number: WO2009115053A1
Application number: PCT/CN2009/070913
Authority: WO
Inventors: 刘克良; 全东琴; 梁远军; 孟庆斌; 王晨宏; 何军林; 贾启燕; 李思成
Original assignee: 中国人民解放军军事医学科学院毒物药物研究所; 成都一平医药科技发展有限公司
Priority date: 2008-03-20
Filing date: 2009-03-20
Publication date: 2009-09-24
Also published as: WO2009114959A1; CN102036653A; US20110091420A1; CN102036653B

Description

可注射用緩释药物制剂及其制备方法相关申请的引用

本申请要求于 2008年 3月 20 日提交的题为 "可注射用緩释制剂及其制备方法" 并且申请号为 PCT/CN2008/000551的国际申请的全部权益，在此将该申请的全部内容并入本文作为参考。技术领域

本发明涉及緩释药物组合物，尤其是亲水性生物药物如肽、蛋白、核酸及糖类等药物的緩释组合物。本发明还涉及由所述緩释药物组合物制备的可注射用緩释药物制剂以及所述可注射用緩释药物制剂的制备方法。背景技术

随着生物技术的高速发展，生物药物如肽、蛋白、核酸及糖类等药物正在成为一类很重要的治疗剂。

尽管其生物药物的疗效早已为临床所证实，但与小分子药物相比，这类药物稳定性差、易失活。而且这类药物多属于亲水性大分子物质，月旨 / 水分配系数小，不易被亲脂性膜所摄取而导致很难通过生物屏障。因此生物药物的口服生物利用度通常较低。

因而，对生物药物而言，较好的给药途径是通过非肠道用药如注射。但是，对于需维持一定的血药浓度的患者，这种给药方式需反复进行。因此，近年来开发了生物药物的緩释制剂，旨在提高给药的合理性和效率。

将药物以油性溶剂为溶媒制成混悬液或溶液具有緩释效果。然而当具有较高水溶性的药物如生物药物混悬或部分溶解在油相中时，药物到达油 I 水界面后易进入水相中。因此对于具有较高水溶性或强极性的生物药物来说，采用单纯油性混悬剂很难达到理想的緩释效果。

在一些治疗领域中，脂质体已被成功地用作生物药物的释药载体。但脂质体作为緩释体系仍有一些问题需要解决，如在某些情况下緩释效果不理想、包封率较低、物理及化学稳定性差等。

虽然对肽、蛋白、核酸及糖类药物的緩释制剂研究已取得了长足的进展，并且已有成功的注射用緩释制剂上市，但现有技术中的这类制剂由于其生产工艺复杂，操作要求严格，从而存在不同的问题需要解决。

因此，仍然需要开发出各种新的緩释药物制剂，以适应不同治疗目的的要求。发明内容

一方面，本发明涉及一种緩释药物组合物，该组合物包含治疗有效量的活性成分，两亲性分子，难溶于水的有机酸和 /或其盐，以及油性溶剂。

另一方面，本发明涉及由上述緩释药物组合物制备的可注射用緩释药物制剂。

另一方面，本发明提供所述可注射用緩释药物制剂的制备方法，其包括：

(1) 将活性成分溶解或分散在水性溶剂中；

(2) 将两亲性分子和难溶于水的有机酸和 /或其盐溶解或分散在有机溶剂中；

(3) 将步骤 (1)得到的活性成分水性混合液分散于步骤 (2)得到的有机混合液中；

(4) 由步骤 (3)制得的混合液中除去有机溶剂；

(5) 将步骤 (4)得到的产物干燥形成固体；以及

(6) 将步骤 (5)得到的固体溶解或分散于油性溶剂中。

另一方面，本发明提供可注射用緩释药物制剂，其包含治疗有效量的活性成分、两亲性分子、难溶于水的有机酸和 /或其盐、油性溶剂，所述可注射用緩释药物制剂通过下列步骤制备：

(1) 将活性成分溶解或分散在水性溶剂中；

(4) 由步骤 (3)得到的混合液中除去有机溶剂；

(5) 将步骤 (4)得到的产物干燥形成固体；以及

(6) 将步骤 (5)得到的固体溶解或分散于油性溶剂中。

本发明再一方面是提供对个体病症的治疗方法，包括对所述个体给予治疗有效量的本发明的药物组合物或緩释药物制剂。

本发明的緩释药物制剂对亲水性生物药物，特别是肽、蛋白、核酸及糖类等药物具有较好的緩释作用。具体实施方式

本发明的一方面涉及一种緩释药物组合物，该组合物包含治疗有效量的活性成分，两亲性分子，难溶于水的有机酸和 /或其盐。

可用于本发明组合物中的活性成分为亲水性药物，其包括但不限于下列药物：

肽、蛋白类药物，例如诸如促肾上腺皮质激素、促胃液素、加压素、催产素、促黑素等的垂体多肽；诸如促胰液素、胃泌素、胆嚢收缩素、抑胃素、血管活性肠肽、胰多肽、神经降压肽、蛙皮肽等的消化道多肽；诸如促曱状腺素释放激素、 ***释放激素、生长抑素、生长激素释放激素、促黑细胞激素抑制激素等的下丘脑多肽；诸如脑啡肽、新啡肽、内啡肽、记忆肽等的脑多肽；诸如血管紧张肽 I、 II、 III等的激肽；谷胱甘肽；降钙素；睡眠肽；松果肽；血活素；胸腺素；胸腺五肽；奥曲肽；艾塞那肽；普兰林肽；纤维蛋白；纤维蛋白原；胃膜素；明胶；明胶海绵；精蛋白；抑素；唾液素；腮腺素；水蛭素；肝细胞生长因子；亮丙瑞林 (Leuprorelin); 曲普瑞林 (Triptorelin); 那法瑞林 (Nafarelin); 戈舍瑞林 (Goserelin); 布舍瑞林 (Buserelin); 牛血清白蛋白；胰岛素；红细胞生成素 (EPO); 肿瘤坏死因子；疫苗；生长素；胰高血糖素；血清白蛋白；丙种球蛋白；胰蛋白酶抑制剂；促红细胞生长素；干扰素；白介素；集落刺激因子 (GM-CSF); 促黄体激素、植物凝集素、天花粉蛋白、植物毒蛋白；抗体类等；

核酸类药物，例如 DNA片段如含 33个碱基对的 DNA片段、化学修饰的 DNA片段如硫代的 DNA片段、 RNA片段、化学修饰的 RNA片段、聚肌苷酸、巯基聚胞苷酸、 cAMP、 CTP、 CDP-胆碱、 GMP、 IMP, AMP, 肌苷、 UTP、 NAD、 NADP、 2-曱巯基呋喃肌苷酸、双曱酰 cAMP、 6-巯基嘌呤、 6-巯基嘌呤核苷、 6-硫代嘌呤、 5-氟尿嘧啶、呋喃氟尿嘧啶、 2-脱氧核苷、盐酸阿糖胞苷、抗毒酶质粒基因等；

糖类、非肽类非核酸类有机分子药物，例如诸如肝素、鹿茸多糖、刺参多糖、壳聚多糖、右旋糖苷、蘑菇多糖、银耳多糖、茯苓多糖、灵芝多糖等的多糖类药物；诸如盐酸纳曲酮、盐酸***、盐酸米托恩醌、醋酸可的松等的化学合成药物等。

在某些优选实施方案中，本发明组合物中的活性成分可包括肽、蛋白类药物。在某些更优选的实施方案中，本发明组合物中的活性成分可以选自胸腺五肽、牛血清白蛋白、艾塞那肽、普兰林肽、生长抑素、 ω-干扰素、奥曲肽、鮭鱼降钙素、胰岛素。

在某些优选实施方案中，本发明组合物中的活性成分可为核酸类药物。在某些更优选的实施方案中，可用于本发明组合物中的活性成分选自寡聚核苷酸。

在某些优选实施方案中，本发明组合物中的活性成分可为糖类、非肽类非核酸类有机药物。在某些更优选的实施方案中，可用于本发明组合物中的活性成分选自盐酸纳曲酮。在本发明的某些实施方案中，所述活性成分可以是其药物可接受的盐或其它 †生物。

所述活性成分的药物可接受的盐为本领域所属技术人员所熟知的那些，包括与酸或碱加成的例性的酸包括无机酸例如盐酸、硫酸、磷酸、氢溴酸、硼酸、磷酸等；有机酸例如乙酸、马来酸、酒石酸、水杨酸、枸橼酸、苯曱酸、双羟蔡酸、磺酸等。示例性的碱包括无机碱和有机碱。衍生自无机碱的盐是本领域所属技术人员所熟知的那些，包括但不限于铵、钠、钾、钙及镁盐等。衍生自有机碱的盐包括但不限于异丙胺、二乙胺、乙二胺、乙醇胺、二乙醇胺、三曱胺、二环己基胺、胆碱及咖啡因等的盐。

在某些优选实施方案中，本发明组合物中的活性成分可为醋酸亮丙瑞林、醋酸曲普瑞林。

所述活性成分的药物可接受的其它衍生物为本领域所属技术人员所熟知的那些，包括但不限于其前药。

"前药" 是指可在生理条件下或通过溶剂分解转化成药物活性成分的化合物。因此，术语 "前药" 是指本发明的组合物中所述活性成分的药物

；的醇官能团的乙酸酷、、酸酷、苯曱酸酷、騎酸酷：橫酸酷衍生物等胺官能团的酰胺衍生物等；羧酸官能团的酯、酰胺衍生物等。

本发明组合物中含有活性成分的量以达到治疗有效量为基准。

"治疗有效量" 是指本发明组合物中活性成分的量，当其被给予哺乳动物，优选为人时，足以在所述哺乳动物，优选为人中实现待治疗 /预防的疾病或疾病状态的治疗 /预防。构成 "治疗有效量" 的本发明组合物中活性成分的量，根据活性成分的种类、疾病状态及其严重性以及给药对象的条件如年龄、体重等而改变，但可常规地由本领域一般技术人员根据其自有知识及本申请公开内容而决定。

活性成分可以是单一药物，也可以是一种或多种制药上相容药物的组合。

本发明组合物中含有活性成分的量通常为基于组合物总量的约 0.0001 %至约 50% (重量百分比， w/w)。在某些实施方案中，本发明组合物中含有活性成分的量为基于组合物总量的约 0.0005%至约 30% (w/w)。在某些实施方案中，本发明组合物中含有活性成分的量为基于组合物总量的约 0.0005%至约 10% (w/w)。在某些实施方案中，本发明组合物中含有活性成分的量为基于组合物总量的约 0.0005%至约 5% (w/w)。

本发明的两亲性分子可以是任何既具有亲水基团又具有疏水基团的分肪酸或脂肪醇。

在某些优选实施方案中，本发明使用的两亲性分子可为表面活性剂。本发明中所使用的表面活性剂可以是制药领域常用的离子型表面活性剂和非离子型表面活性剂。

离子型表面活性剂包括阴离子表面活性剂、阳离子表面活性剂和两性表面活性剂。

在本发明的某些实施方案中，对于离子型表面活性剂，优选使用水溶解性较小的那些。

示例性的离子型表面活性剂包括但不限于诸如脂肪酸盐类、硫酸化物、磺酸化物等的阴离子型表面活性剂；诸如季铵类化合物等的阳离子型表面活性剂；以及诸如氨基酸类、甜菜碱类等的两性离子型表面活性剂。

示例性的非离子型表面活性剂包括但不限于聚乙二醇类，例如脂肪醇聚氧乙烯醚 (AEO)、烷基酚聚氧乙烯醚、脂肪酸聚氧乙烯酯、聚氧乙烯脂肪胺、环氧乙烷 -环氧丙烷嵌段共聚醚等；多元醇类，例如一元醇酯、乙二醇酯、甘油酯、新戊基型多元醇酯、山梨醇酯、失水山梨醇酯、糖酯、烷基糖苷等；含氮非离子表面活性剂，例如烷基醇酰胺、氧化胺等；以及甾醇衍生的非离子表面活性剂。

在某些实施方案中，本发明所使用的表面活性剂可为磷脂类。可用于本发明的磷脂类选自天然磷脂类，包括但不限于磷脂酸、磷脂酰甘油 (PG)、心磷脂、磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰丝氨酸 (PS)、磷脂酰肌醇 (PI)、缩醛磷脂类、醚脂质类、脑磷脂 (PE)、大豆卵磷脂（SPC)或蛋黄卵磷脂 (EPC)、磷脂醇 (PA)、神经鞘磷脂（SPH)、半乳糖脑苷脂、葡萄糖脑苷脂、脑硫脂、神经节苷脂等；合成磷脂，包括但不限于二棕榈酰磷脂酰胆碱 (DPPC)、二硬脂酰磷脂酰胆碱 (DSPC)、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺 (DSPE)、氢化大豆卵磷脂（HSPC)、 PEG化二硬脂酰磷脂酰乙醇胺 (DSPE-PEG)等。在某些优选实施方案中，所述磷脂为蛋黄卵磷脂 (EPC)或氢化大豆卵磷脂 (HSPC)。

在某些实施方案中，本发明所使用的表面活性剂可为胆固醇类。在某些优选的实施方案中，本发明所使用的表面活性剂为胆固醇。

本发明组合物中所加入的两亲性分子可以是上述表面活性剂的一种或其多种组合形成的混合物。

在某些实施方案中，本发明所使用的表面活性剂还可为蛋黄卵磷脂 (EPC)与胆固醇的混合物。

所述组合物中具体两亲性分子的选择取决于多种因素，如活性分子的种类、极性及 pH值、组合物中可能存在的其它添加剂的种类和浓度等。但是，本领域所属技术人员可根据组合物的具体情况予以掌握。所述具体两亲性分子的选择和加入量以可形成脂质-药物复合微粒为准。

通常具体两亲性分子的加入量为基于组合物总量的约 0.0001%至约 30.0% (重量百分比， w/w)。在某些实施方案中，两亲性分子的加入量为基于组合物总量的约 0.005%至约 20% (w/w)。在某些实施方案中，两亲性分子的加入量为基于组合物总量的约 0.005%至约 10% (w/w)。

在本发明的緩释药物组合物中，除加入两亲性分子之外，还加入了难溶于水的有机酸和 /或其盐。由此，显著地改善了緩释性能。虽然未经理论上验证，但可以预测，一方面，活性成分与难溶于水的有机酸和 /或其盐分子间通过静电力、疏水作用、配位键结合增加活性成分的亲脂性和稳定性，从而延緩药物的释放。另一方面，组合物中加入难溶于水的有机酸和 /或其盐有助于形成的脂质 -药物复合物在油性溶剂中分散。

在一些实施方案中，难溶于水的有机酸和 /或其盐优选是在制药环境下为固态的那些。在一些实施方案中，优选使用有机酸盐。

本文所用的术语 "难溶于水" 是指所述有机酸或其盐在室温下每 100 g 水中的溶解度小于或等于 1 g。

在某些实施方案中，本发明组合物中所使用的难溶于水的有机酸可选自脂肪酸或芳香酸。

示例性的有机酸包括但不限于含 10个碳原子以上的饱和或不饱和的脂肪酸如月桂酸、豆蔻酸、棕榈酸、油酸、亚油酸、亚麻酸、硬脂酸、软脂酸、花生四烯酸等。示例性的芳香酸如双羟蔡酸。

所述难溶于水的有机酸盐可以选自所述难溶于水的有机酸的各种盐，包括但不限于钙、镁、钡、锰、铁、铜、辞和铝盐等，也可以为其它任意有机酸所形成的盐，条件是其难溶于水并须是药物可接受的（无毒)。

在本发明的组合物中，可使用难溶于水的有机酸、难溶于水的有机酸盐或者其混合物。

在某些实施方案中，所述难溶于水的有机酸和 /或其盐可以是一种或多种的组合。

所述难溶于水的有机酸和 /或其盐的具体加入量通常为基于组合物总量的约 0.0001%至约 30% (重量百分比， w/w)。在某些实施方案中，所述难溶于水的有机酸和 /或其盐的具体加入量为基于组合物总量的约 0.005%至约 20% (w/w)。在某些实施方案中，所述难溶于水的有机酸和 /或其盐的具体加入量为基于组合物总量的约 0.005%至约 10% (w/w)。

本发明的緩释药物组合物中，还可以包含药物可接受的载体或赋形剂。优选地，所述载体或赋形剂为油性溶剂。

本发明组合物中的油性溶剂为本领域所属技术人员所熟知的制药领域中常用的那些。示例性的油性溶剂包括但不限于天然植物油如大豆油、茶油、芝麻油、大蒜油、核桃油、橄榄油、玉米油、花生油、椰子油、棉籽油、蓖麻油等；精制植物油；长链或中链脂肪酸甘油酯；肉豆蔻异丙酯；油酸乙酯；聚氧乙烯油酸甘油三酯；白油；以及苯曱酸苄酯等。

在某些实施方案中，所述油性溶剂可以是上述一种或多种的组合。在某些优选实施方案中，所述油性溶剂使用大豆油、长链或中链脂肪酸甘油酯。

油性溶剂的量要求并不严格，本领域所属技术人员可根据具体剂型选择适当的量。通常可为占组合物重量的约 5%至约 99% (重量百分比， w/w)。在某些实施方案中，所述油性溶剂的加入量为基于组合物总量的约 30%至约 99% (w/w)。在某些实施方案中，所述油性溶剂的加入量为基于组合物总量的约 60%至约 99% (w/w)。

在某些实施方案中，本发明的緩释制剂中还可包含增稠剂。可用于本发明的增稠剂包括高分子聚合物如 PCL、 PLGA、 PLA等。所述增稠剂的加入量为基于所述緩释制剂总量的约 0.05%至约 10% (w/w) , 优选约 0.5%至约 3.0% (w/w) o

在某些实施方案中，本发明的緩释制剂中还可包含抗氧化剂，以保证注射用油的稳定性。可用于本发明的抗氧化剂可选自 VE (维生素 E), BHT (二叔丁基曱基苯酚）， BHA (叔丁基羟基茴香醚)或其混合物等。所述抗氧剂的加入量为基于所述緩释制剂总量的约 0.01%至约 2.0% (w/w) , 优选约 0.05%至约 1.0% (w/w)。

本领域技术人员可以理解，本发明组合物中的活性成分，两亲性分子，难溶于水的有机酸和 /或其盐，以及油性溶剂的种类和含量可根据上述范围进行任意组合，只要可实现本发明的目的即可。

在本发明的某些实施方案中，所述緩释药物组合物包含约 1 μ_β至约 500 mg肽、蛋白类药物，约 1 至约 300 mg表面活性剂，约 1 至约 300 mg含

10个碳原子以上的饱和或不饱和脂肪酸，约 1 g天然植物油。

在本发明的某些实施方案中，所述緩释药物组合物包含约 5 μ_β至约 300 mg肽、蛋白类药物的药物可接受的盐，约 50 至约 200 mg表面活性剂，约 50 至约 200 mg含 10个碳原子以上的饱和或不饱和脂肪酸的难溶于水的盐，约 1 g长链或中链脂肪酸甘油酯。

在本发明的某些优选实施方案中，所述緩释药物组合物包含约 5 μ_β至约 lOO mg肽、蛋白类药物，约 50 至约 100 mg磷脂类表面活性剂，约 50 至约 100 mg含 10个碳原子以上的饱和或不饱和脂肪酸，约 1 g长链或中链脂肪酸甘油酯。在本发明的某些优选实施方案中，所述緩释药物组合物包含约 5 μ_β至约 50 mg核酸类药物，约 1 至约 300 mg磷脂类表面活性剂，约 1 至约 300 mg难溶于水的芳香酸，约 1 g长链或中链脂肪酸甘油酯。

在本发明的某些优选实施方案中，所述緩释药物组合物包含约 1 至约 500 mg糖类或非肽类非核酸类有机药物，约 50 μ_β至约 200 mg磷脂类表面活性剂，约 50 至约 200 mg含 10个碳原子以上的饱和或不饱和的脂肪酸的盐，约 1 g天然植物油。

在本发明的某些实施方案中，所述緩释药物组合物包含约 1 μ_β至约 500 mg鮭鱼降钙素，约 1 至约 200 mg天然磷脂，约 1 至约 50 mg胆固醇，约 1 至约 300 mg难溶于水的含 10个碳原子以上的饱和或不饱和的脂肪酸的盐，约 l g油性溶剂。

在本发明的某些实施方案中，所述緩释药物组合物包含约 1 μ_β至约 500 mg艾塞那肽，约 1 至约 200 mg天然磷脂，约 1 至约 50 mg胆固醇，约 1 至约 300 mg难溶于水的含 10个碳原子以上的饱和或不饱和的脂肪酸的盐，约 l g油性溶剂。

在本发明的某些实施方案中，所述緩释药物组合物包含约 1 μ_β至约 500 mg胰岛素，约 1 至约 200 mg天然磷脂，约 1 至约 50 mg胆固醇，约 1 至约 300 mg难溶于水的含 10个碳原子以上的饱和或不饱和的脂肪酸的盐，约 1 g油性溶剂。

、、本发明另" 面涉及由 _ ^述緩释药物组合制备的緩释药物制剂。所所述緩释药物制剂为可注射用緩释药物制剂。本领域技术人员应当理解，当所述緩释药物制剂通过注射方式给药时，所述制剂中的各种成分均应当是可注射用成分。

本发明另一方面提供緩释药物制剂的制备方法，包括：

(1) 将活性成分溶解或分散在水性溶剂中；

(4) 由步骤 (3)制得的混合液中除去有机溶剂；

(5) 将步骤 (4)得到的产物干燥形成固体；以及

(6) 将步骤 (5)中得到的固体溶解或分散于油性溶剂中。

可以理解，上述制备方法中的步骤 (1)、（2)并非需要按其次序进行。步骤（1)中所用的水性溶剂包括但不限于水、 0.9%氯化钠水溶液及任何制药上适当的水性緩沖溶液。在某些优选实施方案中，使用注射用水作为水性溶剂。在某些优选实施方案中，使用 PBS緩沖溶液作为水性溶剂。

步骤 (2)中所用的有机溶剂可选自任何对两亲分子和难溶于水的有机酸和 /或其盐具有较好溶解度，并且沸点较低、容易除去的有机溶剂。示例性的上述有机溶剂包括但不限于二氯曱烷、氯仿、 ***、乙醇、曱醇、正丙醇、异丙醇、正丁醇、叔丁醇、丙酮、乙腈、乙酸乙酯。根据所用的两亲性分子和难溶于水的有机酸和 /或其盐的不同结构，可选择不同的有机溶剂。溶剂的选择是本领域技术人员熟知的。在某些优选实施方案中，使用二氯曱烷作为有机溶剂。

在步骤 (3)中，脂质-药物复合微粒的制备可根据活性成分的性质采用超声波分散法、逆向蒸发法、薄膜分散法、注入法、 MVL制备法、 pH梯度法、硫酸铵梯度法或二次包封工艺等制备工艺将活性药物较完全地包封于脂质 -药物复合微粒中。在该步骤中，很重要是将水性溶液与有机溶液的均匀混合与分散。在某些优选实施方案中，采用超声波分散法。

在步骤 (3)中，根据所用两亲性分子的种类、所用有机溶剂的沸点选择操作温度。通常制备过程是在如 -40。C至 45。C的温度下进行。在某些实施方案中，选用两亲性分子 HSPC时，可在 40°C至 45°C下进行。

在步骤 (4)中，优选采用减压蒸发的方法除去有机溶剂以防止制剂中的活性成分在较高温度下被破坏。

在某些优选实施方案中，可向除去溶剂后的固体中加入适量水进行分散制得均匀混悬液，然后再进行步骤 (5)的干燥。

步骤 (5)中的干燥过程可采用冷冻干燥、喷雾干燥或其它适当的干燥方法。干燥后的组合物以固体形式存在。

在冷冻干燥法中，为了降低冷冻和融化过程对脂质 -药物复合微粒的损害，减少冷冻干燥过程中药物的渗漏，通常需使用冻干支持剂。支持剂的作用不仅能够减少冷冻干燥过程中双分子层膜的破裂，而且还使得包有药物的冻干脂质微粒易于分散在油性介质中。但在本发明的技术方案中，加入难溶于水的有机酸盐，除可起到以上所述作用外，可起到冻干支持剂的作用。因此在本发明的某些实施方案中，可不需另外加入冻干支持剂。

将上述步骤 (5)中得到的固体溶解或分散于油性溶剂中形成溶液或油性混悬液。

在上述制备方法中，所述緩释药物制剂优选为可注射用緩释制剂。本发明可用于生物药物，也可用于任何亲水性可注射用药物如小分子化合物。尤其适用于强极性、水溶性好、在水中不稳定的肽、蛋白类、核酸及糖类药物。我们采用这项技术制备了多种肽、蛋白、核酸类药物的緩释制剂，在体外达到 3至 7天的緩释效果。这种新型緩释药物制剂优选可以肌肉或皮下注射给药，能够在 3天至 7天内维持释放有效活性成分。

下面以具体实施例对本发明进行进一步说明。必须理解，这些实施例并不构成对本发明范围的任何限制。实施例材料与试剂

活性成分

醋酸亮丙瑞林：由发明人的实验室按照文献方法（J. A.

Vilchez-Martinez, et al. Biochem. Biophys. Res. Commun. 1974, 59: 1226)合成， HPLC纯度〉 98% ;

盐酸纳曲酮：中国华素制药赠送；

胸腺五肽：由发明人的实验室按照文献方法（G. Goldstein, et al. Science 1979, 204: 1309)合成， HPLC纯度 >98% ;

牛血清白蛋白：购自美国 Sigma公司；

D33 : 含 33个碱基对的 DNA片段： 5，-d(TGC TCT CCA GGC TAG CTA CAA CGA CCT GCA CCT)-3，，由发明人的实验室按照文献方法 (Naruhisa Ota, et al. Nucleic Acid Research, 1998, 26(4):3385)合成, HPLC纯度 >98% ; D33的合成中所用的碱基对均购自 Proligo公司；

艾塞那肽：由发明人的实验室按照文献方法 (US 6528486)合成， HPLC 纯度 >98%；

普兰林肽：由发明人的实验室按照文献方法 (US 5998367)合成， HPLC 纯度 >98%；

醋酸曲普瑞林：由发明人的实验室按照文献方法 (D. H. Coy, et al. J

Med. Chem. 1976, 19:423)合成， HPLC纯度 >98% ;

生长抑素：由发明人的实验室按照文献方法 (A. M. Felix, et al. Int. J. Peptide Protein Res. 1980, 15 :342)合成， HPLC纯度〉 98% ;

ω-干扰素：中国西南药业赠送；

奥曲肽：由发明人的实验室按照文献方法（W. Bauer, et al. Life Sci.

1982, 3 1 : 1 133)合成， HPLC纯度〉 98% ;

鮭鱼降钙素：由发明人的实验室按照文献方法 (US 3926938)合成， HPLC纯度〉 98%;

胰岛素：购自中国通化东宝药业股份有限公司；

两亲分子蛋黄卵磷脂 (EPC)、氢化大豆卵磷脂 (HSPC)、胆固醇：均购自中国上海东尚实业有限公司；

司盘 85 (Span 85): 购自美国 Fisher公司；

脂肪酸及其盐

硬脂酸铝：购自中国上海邦成化工有限公司；

硬脂酸：购自中国北京顺义李遂化工厂；

油酸：购自中国北京金龙化学试剂有限公司；

硬脂酸辞：购自中国天津市朗湖化工有限公司；

油性溶剂

注射用中链油、注射用大豆油，均购自中国铁岭北亚药用油有限公司；其它试剂

***：购自中国天津市化学试剂三厂；

曱醇、二氯曱烷：购自中国北京化工厂；

PBS緩沖溶液：按照中国药典 2005附录配制；

注射用水：购自中国北京市亚华医药有限公司。体外累积幹放的测定

取活性成分对照品加水配制成浓度分别为 10 g/mL、 20 g/mL、 30 g/mL、 50 g/mL、 100 g/mL、 200 g/mL的标准活性成分溶液，采用福林酚法测定吸光度 A, 以吸光度 A对浓度进行回归，建立标准曲线回归方程。

取制备的緩释药物制剂适量置于 50 mL具塞锥形瓶中，并向其中加入 10 mL pH 7.10的磷酸盐緩沖溶液。将锥形瓶置于 37±1。C恒温摇床中振荡，振荡频率为 70 r/m。分别于不同时间点定量取液 200 L, 同时补入 pH 7.10 的磷酸盐緩沖溶液 200 L。在 12,000 r/m条件下离心 10分钟，取上清液，作为样品溶液。同法测定样品溶液的吸光度，代入回归方程计算即得样品溶液中活性成分的浓度。

将计算的累积药物量与加入药物总量相比计算药物累积释放百分数。实施例 1

可注射用醋酸亮丙瑞林緩释制剂的制备及緩释效果

将 1 mg醋酸亮丙瑞林溶于 5 mL pH 7.0的 10 mmol/L PBS緩沖溶液中，作为水相。将 20 mg蛋黄卵磷脂 (EPC)、 5 mg胆固醇以及 20 mg硬脂酸铝溶于 20 mL*** -曱醇（10: 1)混合溶剂中，作为有机相。在 30。C和充分搅拌下将上述水相緩慢滴加入上述有机相中，然后在水浴型超声仪上超声处理至形成均匀乳液体系。将混合液减压蒸出有机溶剂后加入适量水并分散均匀，得到的混悬液进行冷冻干燥除去水份。向得到的固体产物中加入 1 g注射用中链油，搅拌使之分散均匀。

按照上述体外累积释放的测定方法，测定制得的醋酸亮丙瑞林緩释制剂在 7天内的体外累积释放结果，如下所示：

1天 3天 5天 7天

20.6% 37.4% 76.0% 94.0%

实施例 2

可注射用盐酸纳曲酮緩释制剂的制备及緩幹效果

将 2 mg盐酸纳曲酮溶于 5 mL注射用水中，作为水相。将 20 mg氢化大豆卵磷脂 (HSPC)、 5 mg胆固醇以及 20 mg硬脂酸铝溶于 20 mL二氯曱烷中，作为有机相。在 44。C和充分搅拌下将上述水相緩慢滴加入上述有机相中，

的混液进行冷冻干燥去水份向得到的固产物中加入 1 g注射用中链油，搅拌使之分散均匀。

按照上述体外累积释放的测定方法，测定制得的盐酸纳曲酮緩释制剂在 7天内的体外累积释放结果，如下所示：

1天 3天 5天 7天

35.9% 56.4% 78.2% 96.3%

实施例 3

可注射用寡聚核苷酸緩释制剂的制备及緩释效果

将 2 mg D33溶于 5 mL注射用水中，作为水相。将 20 mg EPC、 5 mg胆固醇以及 20 mg硬脂酸铝溶于 20 mL二氯曱烷中，作为有机相。在 30。C和充分搅拌下将上述水相緩慢滴加入上述有机相中，然后在水浴型超声仪上超声处理至形成均勾乳液体系。将混合液减压蒸出有机溶剂。将得到的混悬液进行冷冻干燥除去水份。向得到的固体产物中加入 1 g注射用中链油，搅拌使之分散均匀。

按照上述体外累积释放的测定方法，测定制得的寡聚核苷酸緩释制剂在 7天内的体外累积释放结果，如下所示：

1天 3天 5天 7天

38.8% 48.2% 54.1% 64.7%

实施例 4

按照与实施例 1相同的操作，使用不同的两亲性分子、不同的难溶于水的有机酸或盐以及不同制备条件，制备了不同活性成分的緩释制剂，如表 1 所示。并测定了其 7天内的体外累积释放结果，如表 2所示。表 1 不同活性成分的緩释制剂

活性成分难溶于水的有机有机溶剂油 <] "生溶实验两亲性分子水相溶剂及其加入水相 /有机相

及其加入酸或盐及其加入及其加入及其加编号及其加入量里混合温度 (；。 C)

里里里里醋酸亮丙 EPC 20 mg 硬脂酸注射用水注射用

1 20

瑞林 2 mg 胆固醇 5 mg 5 mg 20 mL 5 mL 豆油 1 醋酸亮丙 EPC 20 mg 油酸二氯曱烷 10 mmol/L pH 7.0 注射用

2 30

瑞林 2 mg 胆固醇 5 mg 5 mg 20 mL PBS緩沖溶液 5 mL 豆油 1 胸腺五肽 HSPC 20 mg 硬脂酸辞二氯曱烷 10 mmol/L pH 7.0 注射用

3 44

1 mg 胆固醇 5 mg 20 mg 20 mL PBS緩沖溶液 5 mL 链油 1 牛血清白 EPC 20 mg 硬脂酸铝二氯曱烷注射用水注射用

4 30

蛋白 1 mg 胆固醇 5 mg 25 mg 20 mL 5 mL 链油 1 醋酸亮丙司盘 85 20 mg 硬脂酸铝 10 mmol/L pH 7.0 注射用

5 20

瑞林 1 mg 胆固醇 5 mg 25 mg 20 mL PBS緩沖溶液 5 mL 豆油 1 艾塞那肽 EPC 20 mg 硬脂酸辞二氯曱烷注射用水注射用

6 30

2 mg 胆固醇 5 mg 20 mg 20 mL 5 mL 链油 1 普兰林肽 EPC 20 mg 硬脂酸铝二氯曱烷注射用水注射用

7 30

2 mg 胆固醇 5 mg 20 mg 20 mL 5 mL 链油 1

表 2 不同緩释药物制剂体外释放结果

表 2的数据表明通过本发明的方法制备的緩释药物制剂对多种活性成分具有很好的緩释作用。实施例 5

使用醋酸亮丙瑞林作为活性成分，采用与实验 1相同的制备条件，使用不同量的硬脂酸铝，制备了緩释药物制剂并测定了其体外累积释放结果，列于表 3和表 4。表 3 醋酸亮丙瑞林緩释制剂

表 4 醋酸亮丙瑞林緩释制剂体外累积释放结果

1 53.4 69.7 84.1 99.8

2 20.6 37.4 76.0 94.0

3 17.2 41.6 76.7 100.0 在制剂中加入少量硬脂酸铝，可改善药物的释放性能，但硬脂酸铝的加入量过高，反而会使药物的释放性能下降。

实施例 6

考察了制备方式对醋酸亮丙瑞林体外緩释效果的影响。

不经过制备过程，将两亲性分子 (如 EPC、司盘 85)直接加入油性溶剂中，再加入活性药物，分散均匀，用相同的方法测定药物体外累积释放。结果表明，活性药物在一天内已释放 90%以上，比经过制备过程得到的制剂的緩释效果显著下降。结果见表 5。

结果显示，通过本发明的制备过程，得到的制剂稳定性更高，緩释效果更好。

实施例 7

考察了降钙素緩释制剂对去卵巢大鼠骨密度的影响。

所用动物为 wiste雌性大鼠，体重 160-200 g。所用仪器为美国通用公司生产的骨密度仪 (LUNAR)。

实验步骤：采用噻胺酮麻醉复方肌肉注射（10 mg/kg)进行麻醉，腹部去毛，沿下腹正中线剪开，游离大鼠双侧卵巢并切除，然后缝合腹部肌肉和皮肤。术后肌肉注射青霉素， 2次 /日，连续 3天。术后第 3天以 8 g/kg的剂量单次皮下注射给予实施例 4中制备的制剂 12。分别在给药后第 3、 4周测量腰推骨密度，并与未切除卵巢的假手术组以及切除卵巢但未注射降钙素制剂的模型组进行比较。

结果显示，在给药后第 3周和第 4周时，大鼠腰推骨密度与模型组比较明显增加 (p<0.05)。表 6 降钙素緩释制剂对去卵巢大鼠骨密度的影响

注： ^# ρ<0.05、 ^## ρ<0.01与假手术组比较； * ρ<0.05与模型组比较； η=8 实施例 8

考察了艾塞那肽緩释制剂对小鼠血糖浓度的影响。

使用艾塞那肽作为活性成分，注射用水作为水相溶剂，二氯曱烷作为有机溶剂，并且使用如表 7所示的成分，按照与实施例 1类似的操作，制备了艾塞那肽緩释制剂。表 7 艾赛那肽緩释制剂

所用动物为雄性 KK-Ay小鼠， 8-10周，饲养于符合相应标准的条件下。动物分组与药物处理

将 KK-Ay小鼠按体重和血糖值随机分为溶剂对照组、阳性对照组、制剂 1组、制剂 2组、制剂 3组，每组 5只动物。

溶剂对照组：给予注射用中链油，采用单剂量肌肉注射 100 μΐ/每只，双侧后腿各注射 50 μΐ;

阳性对照组：给予艾塞那肽在 PBS緩沖液中溶液，采用颈部皮下给药，每天下午 5:30给药 0.06 g/100 μΐ;

制剂 1组、制剂 2组、制剂 3组：分别给予上表中的制剂 1、 2、 3 , 采用单剂量肌肉注射 100 μΐ/每只，双侧后腿各注射 50 μ1。

每日上午 8:30-9:00监测血糖变化。在药第 8天时，增量给药一次，制剂 1组、制剂 2组、制剂 3组每只给 4 g/100 μΐ,阳性对照组每只给 0.6 g/100 μ1。从第 9日阳性对照药给 0.18 g/100 μΐ, 每日分两次给药。

测定了给药后 17-41天 KK-Ay小鼠禁食 4 h的血糖量 (表 8)以及给药后第 35天 KK-Ay小鼠禁食 12 h的血糖量 (表 9)。从实验结果可以看出，制剂 1、 2、 3均表现出明显的、持续性的降低禁食后 4小时、 12小时 KK-Ay小鼠血糖的效应，可持续至给药后 24-27天，其中制剂 2的作用更为明显。表 8 给药后 17至 32天 KK-Ay小鼠禁食 4 h的血糖值

表 9. 给药后第 35天 KK-Ay小鼠禁食 12 h的血糖值

* p<0.05 , ** p<0.01 , 与对照组比此外，制剂 2、 3在给药首日表现出明显的抑制进食量的作用（该药物特有的）。在整个试验过程中，制剂 2表现出与阳性对照药物类似的进食抑制作用。

实施例 9

考察了胰岛素緩释制剂的体外释放及体内药效。

使用如表 10所示的溶剂量，按照与实施例 1类似的操作，使用 5.0 mg 胰岛素、 20 mg蛋黄卵磷脂、 10 mg胆固醇、 20 mg硬脂酸铝以及 1 g注射用中链油制备了胰岛素緩释制剂，并测定了其体外释放累积释放结果 (表 11)。表 10 胰岛素緩释制剂

表 11. 胰岛素緩释制剂体外累积释放结果

表 1 1的数据表明，所测试的制剂在体外至少可在 9天内緩慢释放。胰岛素緩释制剂体内药效

实验方法：基本根据文献方法 (宋立江等，一种降糖保健品胶嚢对模型小鼠的作用观察，中华医学研究杂志， 6(1):53-55 , 2006)。小鼠禁食给水 24小时，腹腔注射链脲霉素 160mg/kg。 72小时测空腹 6小时血糖值，血糖 15-30 mmol/L者为造模合格，均匀分到各组。第四日分别皮下注射胰岛素制剂 1-8 , 对照组只给辅料。注射后，分别在 3、 24小时， 3日， 5日， 7日， 9日，禁食给水 6小时后测血糖 1次。所有动物均用断尾采血 1滴加在美国强生集团理康公司稳捷基础型血糖监测仪葡萄糖氧化酶法试纸上测血糖水平。结果如下表 12-13所示。表 12 胰岛素緩释制剂治疗小鼠链脲霉素糖尿病的效果

*P<0.05 由表 12的结果可见，胰岛素制剂 1皮下注射剂量 10 U/kg和 30 U/kg, 降血糖作用高峰在 24 h, 作用持续约 9-14 曰。表 13 不同胰岛素緩释制剂治疗小鼠链脲霉素糖尿病的效果

*P<0.05 , 与模型对照比由表 13的结果可见，处方 3明显降糖作用可持续到 1天，处方 2明显降糖作用可持续到 3天，处方 5明显降糖作用可持续到 7天。本领域技术人员可以理解，本文中所用的 "例如" 、 "诸如" 均表示 "包括但不限于" 。

虽然本发明已通过上述具体实施方式和具体说明予以描述，但并不以此作为限制。本领域所属技术人员可以根据本申请的公开，在不违背本发明精神的情况下对上述实施方式中的技术特征进行改进和变换，这些改进和变换都应属于本发明的范围。

Claims

权利要求书

1. 緩释药物组合物，其包含治疗有效量的活性成分、两亲性分子、难溶于水的有机酸和 /或其盐、油性溶剂。

2. 如权利要求 1所述的緩释药物组合物，其中所述活性成分是亲水性药物。

3. 如权利要求 2所述的緩释药物组合物，其中所述亲水性药物选自肽、蛋白类药物；核酸类药物；糖类、非肽类非核酸类有机分子药物；或其混合物。

4. 如权利要求 3所述的緩释药物组合物，其中所述肽、蛋白类药物选自：诸如促肾上腺皮质激素、促胃液素、加压素、催产素、促黑素等的垂体多肽；诸如促胰液素、胃泌素、胆嚢收缩素、抑胃素、血管活性肠肽、胰多肽、神经降压肽、蛙皮肽等的消化道多肽；诸如促曱状腺素释放激素、 ***释放激素、生长抑素、生长激素释放激素、促黑细胞激素抑制激素等的下丘脑多肽；诸如脑啡肽、新啡肽、内啡肽、记忆肽等的脑多肽；诸如血管紧张肽 I、 II、 III等的激肽；谷胱甘肽；降钙素；睡眠肽；松果肽；血活素；胸腺素；胸腺五肽；奥曲肽；艾塞那肽；普兰林肽；纤维蛋白；纤维蛋白原；胃膜素；明胶；明胶海绵；精蛋白；抑素；唾液素；腮腺素；水蛭素；肝细胞生长因子；亮丙瑞林 (Leuprorelin); 曲普瑞林 (Triptorelin); 那法瑞林 (Nafarelin); 戈舍瑞林 (Goserelin); 布舍瑞林 (Buserelin); 牛血清白蛋白；胰岛素；红细胞生成素 (EPO); 肿瘤坏死因子；疫苗；生长素；胰高血糖素；血清白蛋白；丙种球蛋白；胰蛋白酶抑制剂；促红细胞生长素；干扰素；白介素；集落刺激因子 (GM-CSF); 促黄体激素、植物凝集素、天花粉蛋白、植物毒蛋白；抗体类。

5. 如权利要求 3所述的緩释药物组合物，其中所述核酸类药物包括：

DNA片段如含 33个碱基对的 DNA片段、化学修饰的 DNA片段如硫代的 DNA片段、 RNA片段、化学修饰的 RNA片段、聚肌苷酸、巯基聚胞苷酸、 cAMP、 CTP、 CDP-胆碱、 GMP、 IMP, AMP, 肌苷、 UTP、 NAD、 NADP、 2-曱巯基呋喃肌苷酸、双曱酰 cAMP、 6-巯基嘌呤、 6-巯基嘌呤核苷、 6-硫代嘌呤、 5-氟尿嘧啶、呋喃氟尿嘧啶、 2-脱氧核苷、盐酸阿糖胞苷、抗毒酶质粒基因。

6. 如权利要求 3所述的緩释药物组合物，其中所述糖类、非肽类非核酸类有机分子药物选自诸如肝素、鹿茸多糖、刺参多糖、壳聚多糖、右旋糖苷、蘑菇多糖、银耳多糖、茯苓多糖、灵芝多糖等的多糖类药物；诸如盐酸纳曲酮、盐酸***、盐酸米托恩醌、醋酸可的松等的化学合成药物。

7. 如权利要求 1至 6中任一权利要求所述的緩释药物组合物，其中所述活性成分的量基于所述緩释药物制剂总量为约 0.0001%至约 50% (重量百分比， w/w) , 尤其是约 0.0005%至约 30% (w/w) , 尤其是约 0.0005%至约 10% (w/w) , 尤其是约 0.0005%至约 5% (w/w)。

8. 如权利要求 1至 7中任一权利要求所述的緩释药物组合物，其中所述两亲性分子为表面活性剂。

9. 如权利要求 1至 8中任一权利要求所述的緩释药物组合物，其中所述表面活性剂为非离子表面活性剂。

10. 如权利要求 9所述的緩释药物组合物，其中所述非离子表面活性剂选自：聚乙二醇类，例如脂肪醇聚氧乙烯醚 (AEO)、烷基酚聚氧乙烯醚、脂肪酸聚氧乙烯酯、聚氧乙烯脂肪胺、环氧乙烷 -环氧丙烷嵌段共聚醚等；多元醇类，例如一元醇酯、乙二醇酯、甘油酯、新戊基型多元醇酯、山梨醇酯、失水山梨醇酯、糖酯、烷基糖苷等；含氮非离子表面活性剂，例如烷基醇酰胺、氧化胺等；以及甾醇衍生的非离子表面活性剂。

1 1. 如权利要求 1至 8中任一权利要求所述的緩释药物组合物，其中所述表面活性剂为磷脂类。

12. 如权利要求 1 1所述的緩释药物组合物，其中所述磷脂类选自：天然磷脂类，包括但不限于磷脂酸、磷脂酰甘油 (PG)、心磷脂、磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰丝氨酸 (PS)、磷脂酰肌醇 (PI)、缩醛磷脂类、醚脂质类、脑磷脂 (PE)、大豆卵磷脂（SPC)或蛋黄卵磷脂 (EPC)、磷脂醇 (PA)、神经鞘磷脂 (SPH)、半乳糖脑苷脂、葡萄糖脑苷脂、脑硫脂、神经节苷脂等；合成磷脂，包括但不限于二棕榈酰磷脂酰胆碱 (DPPC)、二硬脂酰磷脂酰胆碱 (DSPC)、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺 (DSPE)、氢化大豆卵磷脂 (HSPC)、磷脂酰丝氨酸 (PS)、 PEG化二硬脂酰磷脂酰乙醇胺 (DSPE-PEG)。

13. 如权利要求 12所述的緩释药物组合物，其中所述磷脂类选自蛋黄卵磷脂 (EPC)或氢化大豆卵磷脂 (HSPC)。

14. 如权利要求 1至 8中任一权利要求所述的緩释药物组合物，其中所述表面活性剂为胆固醇类。

15. 如权利要求 1至 8中任一权利要求所述的緩释药物组合物，其中所述表面活性剂为非离子表面活性剂、磷脂类、胆固醇类的任意混合物。

16. 如权利要求 1至 15中任一权利要求所述的緩释药物组合物，其中所述两亲性分子的量基于所述緩释药物组合物总量为约 0.0001%至约 30.0% (重量百分比， w/w) , 尤其是约 0.005%至约 ²0% (w/w) , 尤其是约 0.005%至约 10% (w/w)。

17. 如权利要求 1至 16中任一权利要求所述的緩释药物组合物，其中所述难溶于水的有机酸和 /或其盐选自月桂酸、豆蔻酸、棕榈酸、油酸、亚油酸、亚麻酸、硬脂酸、软脂酸、花生四烯酸、双羟蔡酸和 /或其盐。

18. 如权利要求 17所述的緩释药物组合物，其中所述难溶于水的有机酸盐选自所述难溶于水的有机酸的钙、镁、钡、锰、铁、铜、辞或铝盐。

19. 如权利要求 1至 18中任一权利要求所述的緩释药物组合物，其中所述难溶于水的有机酸和 /或其盐的量基于所述緩释药物组合物总量为约 0.0001%至约 30% (重量百分比， w/w) , 尤其是约 0.005%至约 20% (w/w) , 尤其是约 0.005%至约 10% (w/w)。

20. 如权利要求 1至 19中任一权利要求所述的緩释药物组合物，其中所述油性溶剂选自可注射用天然植物油、精制植物油、长链或中链脂肪酸甘油酯、苯曱酸苄酯、以及其多种的混合物，并且优选选自可注射用大豆油、长链或中链脂肪酸甘油酯。

21. 緩释药物制剂，其是由如权利要求 1-20中任一权利要求所述的緩释药物组合物制备的。

22. 如权利要求 21所述的緩释药物制剂，其为可注射用緩释药物制剂。

23. 緩释药物制剂的制备方法，包括：

(1) 将活性成分溶解或分散在水性溶剂中；

(4) 由步骤 (3)得到的混合液中除去有机溶剂；

(5) 将步骤 (4)得到的产物干燥形成固体；以及

(6) 将步骤 (5)得到的固体溶解或分散于油性溶剂中。

24. 如权利要求 23所述的制备方法，其中在所述步骤 (4)中除去有机溶剂后加入适量水进行分散制得均匀混悬液。

25. 如权利要求 23或 24所述的制备方法，其中所述步骤 (5)中采用冷冻干燥方法进行干燥。

26. 如权利要求 23-25中任一权利要求所述的制备方法，其中所述緩释药物制剂为可注射用緩释药物制剂。