CN104546719B

CN104546719B - 一种载Z‑GP‑Dox的混合胶束制剂及其制备方法

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Publication number: CN104546719B
Application number: CN201410744379.7A
Authority: CN
Inventors: 杜军; 吴宝剑; 蔡绍晖; 张宇琛
Original assignee: Sun Yat Sen University
Current assignee: Sun Yat Sen University
Priority date: 2014-12-09
Filing date: 2014-12-09
Publication date: 2017-10-20
Anticipated expiration: 2034-12-09
Also published as: CN104546719A

Abstract

本发明公开了一种载Z‑GP‑Dox的混合胶束制剂及其制备方法。所述载Z‑GP‑Dox的混合胶束制剂由以下组成的各组分制得：0.10%～0.40%的Z‑GP‑Dox，0.62%～2.50%的磷脂，0.06% ～0.50%的表面活性剂，余量的注射溶剂。本发明仅使用两种两亲性分子作为混合胶束的组成材料，在保证少用辅料的原则下，制备出质量优良的载Z‑GP‑Dox混合胶束制剂，完全符合注射剂研发技术尽量少用辅料、处方以简单为宜的指导原则，提供了以混合胶束载药***作为Z‑GP‑Dox的静脉递送剂型解决方案，为提高Z‑GP‑Dox的表观水溶性及成药可能性打下技术基础。

Description

一种载Z-GP-Dox的混合胶束制剂及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种注射用混合胶束药物制剂，更具体地，涉及一种载Z-GP-Dox的混合胶束及其制备方法。

背景技术

成纤维细胞激活蛋白α（fibroblast activation protein-α， FAPα）是一种特异性表达于肿瘤间质的肿瘤相关成纤维细胞（carcinoma-associated fibroblasts， CAF）上的膜蛋白，它具有二肽酶活性，能够特异性识别以苄氧羰基（Z）封闭N端的甘氨酰脯氨酸二肽（N-carbobenzoxy-glycyl-proline, Z-GP），并发挥肽链端解酶活性水解Z-GP中脯氨酸C端形成的肽键。

阿霉素是临床上常用的广谱抗肿瘤药物，常用于治疗肝癌、胃癌、乳腺癌、肺癌、卵巢癌等。Z-GP-Dox（N-苄氧羰基-甘脯酰阿霉素）是一种阿霉素的前体药物，它可被肿瘤组织中的FAPα靶向识别并酶解释放母药阿霉素，以达到靶向治疗的目的。

Z-GP-Dox的分子式为C₄₂H₄₅N₃O₁₅，分子量为831.29，其结构式如式（Ⅰ）所示。

（Ⅰ）。

前期研究表明，Z-GP-Dox可以在FAPα的水解作用下有效地靶向释放母药阿霉素（Dox），从而产生显著的细胞毒作用；并进一步通过4T1乳腺癌荷瘤小鼠的体内药效学研究证实Z-GP-Dox具有良好的抗肿瘤活性。同时，根据小鼠急性毒性研究，静脉注射阿霉素的半数致死量约为13.4 mg/kg，而Z-GP-Dox在最大给药剂量25 mg/kg下（等摩尔于16.3 mg/kg的Dox剂量）没有发现动物致死情况，结果提示了Z-GP-Dox具有较高的安全性。

Z-GP-Dox完成了药效学、药代动力学、一般药理学等成药性评价主要内容，显示出了其良好的成药潜力，但其水溶性差是阻碍其成药的最大难题。Z-GP-Dox能溶于丙二醇、甲醇等部分有机溶剂，在注射用水或生理盐水中几乎不溶，前期研究中只能以丙二醇作为潜溶剂进行药物配制及给药。由于过量的丙二醇会产生刺激性及溶血等副作用，极大地限制了给药剂量。

据此，我们曾探索多种剂型以改善Z-GP-Dox的表观水溶性以适用于静脉注射，如开发Z-GP-Dox的纳米混悬剂、固体脂质纳米粒等剂型、通过聚氧乙烯蓖麻油增溶等，但存在颗粒粒径过大、辅料的毒副作用或未能达到理想的溶解度等问题。剂型问题成为了Z-GP-Dox研究的最大瓶颈，同时也影响了其后期的临床前研究及产品开发。

混合胶束（mixed micelles）是通过混合使用两种或以上不同的表面活性剂（如磷脂、胆盐等）制成的胶束***，具有热力学稳定性及良好的纳米效应，近年来正在成为一种用于递送难溶性药物的有效手段。就混合胶束而言，磷脂/胆盐是一个典型的使用组合，目前有两种此类混合胶束的产品成功上市，分别是罗氏公司（F. Hoffmann-La Roche Ltd.）生产的Konakion^®MM（维生素K₁）以及百特公司（Baxter International Inc.）生产的Cernevit^®（复合维生素）。

目前未见其他以混合胶束载药***作为Z-GP-Dox的静脉递送剂型解决方案的相关技术报道。

发明内容

本发明要解决的技术问题是针对现有Z-GP-Dox应用技术不足，提供一种载Z-GP-Dox的混合胶束制剂，实现以混合胶束载药***作为Z-GP-Dox的静脉递送剂型解决方案，提高Z-GP-Dox的表观水溶性及成药可能性。

本发明要解决的另一技术问题是提供所述载Z-GP-Dox的混合胶束制剂的制备方法，基于本发明制备方法能够制备出粒径合格、粒度分布均匀，物理性质稳定的混合胶束产品。

本发明要解决的还一技术问题是解决主药Z-GP-Dox的难溶性问题，提供一种Z-GP-Dox的静脉注射制剂。

本发明的目的通过以下技术方案予以实现：

提供一种载Z-GP-Dox的混合胶束制剂，其以两亲性的磷脂、表面活性剂两种胶束载体材料、注射溶剂和主药Z-GP-Dox组成。具体地，其由以下组成的各组分制得：0.10%～0.40%的Z-GP-Dox，0.62%～2.50%的磷脂，0.06% ～0.50%的表面活性剂，余量的注射溶剂，以上各组分的百分比例均按质量体积比（w/v）计算，质量单位为mg，体积单位为mL。

其中，所述两亲性的磷脂包括但不限于蛋黄卵磷脂、大豆磷脂、氢化蛋黄卵磷脂、氢化大豆磷脂、脑磷脂、肌醇磷脂、丝氨酸磷脂或多烯磷脂酰胆碱。优选磷脂酰胆碱含量大于97%的大豆磷脂。

所述表面活性剂包括但不限于胆盐、链长为8～18的饱和或不饱和脂肪酸盐中的一种，如油酸钠、胆酸钠或牛磺胆酸钠等。优选油酸钠。

所述注射溶剂可选择注射用水、注射用生理盐水、注射用5%葡萄糖水溶液或pH7.4 ~ 8.2的磷酸盐缓冲液中的一种。

本发明同时提供所述载Z-GP-Dox的混合胶束制剂的一种优选的制备方法，采用溶剂扩散-蒸发法制备，以磷脂及另一种表面活性剂共同作为胶束载体材料，将Z-GP-Dox包裹于疏水核内。包括以下步骤：

S1.将Z-GP-Dox、磷脂、表面活性剂充分溶解于有机溶剂中，形成溶液A；

S2.将S1所得溶液A缓慢滴加到高速搅拌的注射溶剂中，形成溶液B；

S3.减压蒸发除去S2所得溶液B中残留的有机溶剂并浓缩到适当的体积，获得载Z-GP-Dox的混合胶束制剂。

其中，S1所使用的磷脂包括但不限于蛋黄卵磷脂、大豆磷脂、氢化蛋黄卵磷脂、氢化大豆磷脂、脑磷脂、肌醇磷脂、丝氨酸磷脂或多烯磷脂酰胆碱中的一种。优选磷脂酰胆碱含量大于97%的大豆磷脂。

S1所使用的表面活性剂包括但不限于胆盐、链长为8～18的饱和或不饱和脂肪酸盐中的一种，如油酸钠、胆酸钠或牛磺胆酸钠等，优选油酸钠。

S1所述的有机溶剂包括但不限于甲醇、乙醇、乙酸乙酯、丙酮或氯仿中的一种，优选乙醇。

S2中所述的注射溶剂可选择注射用水、注射用生理盐水、注射用5%葡萄糖水溶液或pH 7.4 ~ 8.2的磷酸盐缓冲液中的一种。

S3所述减压蒸发可以采用旋转蒸发仪进行。

基于本发明，可以解决主药Z-GP-Dox的难溶性问题，提供一种Z-GP-Dox的静脉注射制剂。

本发明具有如下有益效果：

本发明提供了一种载Z-GP-Dox的混合胶束制剂，本发明显著的有益效果之一在于：处方组成简单。本发明中除主药Z-GP-Dox之外，通过确定科学的组分和比例，实现了仅使用两种两亲性分子作为混合胶束的组成材料，在保证少用辅料的原则下，制备出质量优良的载Z-GP-Dox混合胶束制剂，完全符合注射剂研发技术的指导原则：注射剂处方在保证注射剂质量的条件下，尽量少用辅料，处方以简单为宜。本发明提供了以混合胶束载药***作为Z-GP-Dox的静脉递送剂型解决方案，为提高Z-GP-Dox的表观水溶性及成药可能性打下技术基础。

本发明的有益效果之二在于：基于本发明处方，本发明提供了合理的制备步骤及工艺，制备得到的混合胶束粒径较小，约86.6 nm左右，粒度分布均匀，PDI为0.269，Zeta电势为 -48.4 mV，外观形态为红色澄明悬液，具有明显的丁达尔现象，效果稳定。

进一步地，本发明采用脂肪酸盐作为共添加剂制备载Z-GP-Dox的混合胶束制剂，相对于现有技术常用的胆盐，脂肪酸盐（Sodium Aliphatate）的毒性更小，因此，成功提供应用脂肪酸盐与磷脂作为共添加剂制备可注射给药的混合胶束的技术方案，对载Z-GP-Dox的混合胶束的广阔的应用前景提供技术保障。

附图说明

图1 Z-GP-Dox混合胶束的粒径分布图。

图2 Z-GP-Dox混合胶束的透射电子显微镜图。

具体实施方式

下面结合具体实施例进一步说明本发明。以下实施例仅为示意性实施例，并不构成对本发明的不当限定，本发明可以由发明内容限定和覆盖的多种不同方式实施。除非特别说明，本发明采用的试剂、化合物和设备为本技术领域常规试剂、化合物和设备。

实施例1

本实施例提供一种载Z-GP-Dox的混合胶束制剂，其以两亲性的磷脂、表面活性剂两种胶束载体材料、注射溶剂和主药Z-GP-Dox组成。处方组成如下：

制备步骤如下：

S1.将Z-GP-Dox、大豆磷脂（磷脂酰胆碱含量大于98%）、油酸钠充分溶解于90%（w/v）的乙醇中，形成溶液A；

S2.将S1所得溶液A用微量注射泵将缓慢滴加到高速搅拌的注射用水中，形成溶液B；

S3. 采用旋转蒸发仪减压蒸发（37°C）除去S2所得溶液B中残留的乙醇并浓缩到原体积的75%左右，使Z-GP-Dox浓度在2.5 mg/mL以上，获得载Z-GP-Dox的混合胶束制剂。

产品外观：红色澄明悬液，具有明显的丁达尔现象。

粒径：平均粒径76.91 nm，ξ电势：-27.5 mv。

实施例2

制备步骤如下：

S1.将Z-GP-Dox、蛋黄卵磷脂、油酸钠充分溶解于90%（w/v）的乙醇中，形成溶液A；

S2.用微量注射泵将S1所得溶液A缓慢滴加到高速搅拌的注射用生理盐水中，形成溶液B；

产品外观：红色透明悬液，具有明显的丁达尔现象。

粒径：平均粒径78.82 nm，ξ电势：-29.3 mv。

实施例3

制备步骤如下：

S1.将Z-GP-Dox、氢化大豆磷脂、胆酸钠充分溶解于90%乙醇中，形成溶液A；

S2. 用微量注射泵将S1所得溶液A缓慢滴加到高速搅拌的注射用5%葡萄糖水溶液中，形成溶液B；

产品外观：红色透明悬液，具有明显的丁达尔现象。

粒径：平均粒径72.76 nm，ξ电势：-26.8 mv。

实施例4

制备步骤如下：

S1.将Z-GP-Dox、二硬脂酰基磷脂酰胆碱、牛磺胆酸钠充分溶解于90%乙醇中，形成溶液A；

S2.用微量注射泵将S1所得溶液A缓慢滴加到高速搅拌的pH 7.4 ~ 8.2的磷酸盐缓冲液中，形成溶液B；

S3. 采用旋转蒸发仪减压蒸发（37°C）除去S2所得溶液B中残留的90%乙醇并浓缩到原体积的75%左右，使Z-GP-Dox浓度在2.5 mg/mL以上，获得载Z-GP-Dox的混合胶束制剂。

外观：红色透明悬液，具有明显的丁达尔现象。

粒径：平均粒径92.11 nm，ξ电势：-31.4 mv。

实施例5

制备步骤如下：

S1.将Z-GP-Dox、脑磷脂、油酸钠充分溶解于90%乙醇中，形成溶液A；

S2.用微量注射泵将S1所得溶液A缓慢滴加到高速搅拌的注射用水中，形成溶液B；

S3.采用旋转蒸发仪减压蒸发（37°C）除去S2所得溶液B中残留的乙酸乙酯并浓缩到原体积的75%左右，使Z-GP-Dox浓度在2.5 mg/mL以上，获得载Z-GP-Dox的混合胶束制剂。

外观：红色透明悬液，具有明显的丁达尔现象。

粒径：平均粒径82.54 nm，ξ电势：-33.6 mv。

实施例6 稳定性试验

以实施例1～实施例5制得的载Z-GP-Dox混合胶束制剂为例进行的长期稳定性实验结果如表1所示：

表1 稳定性实验结果

实施例7

本实施例基于实施例1所述方法，对组成中药物与磷脂的比例、油酸钠与磷脂的比例、外水相和有机相的比例进行大量实验，表2为实验结果：

表2

按照表1中处方制备得到的载Z-GP-Dox混合胶束制剂均为红色澄明悬液，载Z-GP-Dox混合胶束的平均粒径大小、ξ电势及12个月的稳定性实验结果见表3所示：

表3

由表2实验结果可知，采用本发明方法制备的载Z-GP-Dox混合胶束的粒度分布比较均匀，均为红色澄明悬液，经过12个月的稳定性试验结果均表明本发明的效果稳定，可操作性较强，处方和工艺可控可调，保证了制剂质量的可靠性和临床用药的安全性。

Claims

1.一种载Z-GP-Dox的混合胶束制剂，其特征在于，其由以下组成的各组分制得：0.10％～0.40％的Z-GP-Dox，0.62％～2.50％的磷脂，0.06％～0.50％的表面活性剂，余量的注射溶剂，以上各组分的百分比例均按质量体积比计算；

其中，所述磷脂为蛋黄卵磷脂、大豆磷脂、氢化蛋黄卵磷脂、氢化大豆磷脂、脑磷脂、肌醇磷脂、丝氨酸磷脂或多烯磷脂酰胆碱；

所述表面活性剂为油酸钠；

所述注射溶剂为注射用水、注射用生理盐水、注射用5％葡萄糖水溶液或pH7.4～8.2的磷酸盐缓冲液中的一种。

2.根据权利要求1所述载Z-GP-Dox的混合胶束制剂，其特征在于，所述磷脂为磷脂酰胆碱含量大于97％的大豆磷脂。

3.权利要求1或2所述载Z-GP-Dox的混合胶束制剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

4.根据权利要求3所述载Z-GP-Dox的混合胶束制剂的制备方法，其特征在于，S1所述磷脂为蛋黄卵磷脂、大豆磷脂、氢化蛋黄卵磷脂、氢化大豆磷脂、脑磷脂、肌醇磷脂、丝氨酸磷脂或多烯磷脂酰胆碱；所述表面活性剂为油酸钠；

S2所述注射溶剂为注射用水、注射用生理盐水、注射用5％葡萄糖水溶液或pH 7.4～8.2的磷酸盐缓冲液中的一种。

5.根据权利要求3所述载Z-GP-Dox的混合胶束制剂的制备方法，其特征在于，S1所述的有机溶剂为甲醇、乙醇、乙酸乙酯、丙酮或氯仿中的一种。

6.根据权利要求5所述载Z-GP-Dox的混合胶束制剂的制备方法，其特征在于，S1所述的有机溶剂为乙醇；

S2中所述的注射溶剂为注射用水、注射用生理盐水、注射用5％葡萄糖水溶液或pH 7.4～8.2的磷酸盐缓冲液中的一种。

7.一种含有权利要求3所述制备方法制备得到的Z-GP-Dox混合胶束的静脉注射制剂。