NOUVEAUX DÉRIVÉS DE LA PODOPHYLLOTOXINE, LEUR PRÉPARATION ET LEUR APPLICATION EN THÉRAPEUTIQUE
La présente invention a pour objet des dérivés de podophyllotoxine, leur préparation et leur application en thérapeutique.
La présente invention a pour objet des composés répondant à la formule (I)
(I) dans laquelle
R peut représenter une formule (A1), (A2), (B1), (B2), (B3), (C), (D1), (D2), (E1), (E2), (F1) ou (F2) exposées ci-après : R représente
OH
(A1) ou (A2) où R2 représente un groupe
où R3 représente un groupe — O(C1-C4)alkyle ou un groupe phényle pouvant être substitué par un substituant choisi parmi un atome d'halogène ou un groupe méthoxy, où R17 représente un groupe pyridyle, un groupe (C1-C4)alkyle ou un groupe phényle éventuellement substitué par un atome d'halogène, un groupe - NO
2, un groupe hydroxy ou un groupe méthoxy, ou bien R représente
(B1) (B2)
où =X1— X2— représente =C— C— ; =C— C=C— , =N— C— ou =C— N=C— où R4 représente un groupe (C1-C4)alkyle, un atome d'hydrogène, un groupe hydroxy, un atome d'halogène ou un groupe -OR5, où R5 représente un groupe méthyle, un groupe -COCH3, un groupe Bn ou un groupe silyle tel que le triméthyl ou ter-butyl-diméthyl-silyle, où R6 représente un atome d'hydrogène ou un groupe (C1-C4)alkyle, et où p peut prendre la valeur de 0, 1 ou 2,
ou bien R représente
(C) où R7 représente un atome d'hydrogène, un groupe -NO2, un groupe hydroxy, un groupe -OBn, un atome d'halogène, un groupe (C1-C4)alcoxy, un groupe -NH2, un groupe -NHCOCH3, ou un groupe -NHBoc, où R8 représente un atome d'hydrogène ou un groupe (C1-C4)alkyle, où n peut prendre la valeur de 0, 1 , 2 ou 3 lorsque m est égal à 0 et n est égal à 0 lorsque m est égal à 1, ou bien R représente
(D1) ou (D2)
où z peut prendre la valeur de 0 ou 1, où, lorsque R12 représente un atome d'hydrogène, R9 représente un groupe méthyle, un groupe -OBn, un atome d'hydrogène, un groupe méthoxy ou un groupe hydroxy, R10 représente un groupe -OBn, un groupe hydroxy ou un groupe méthoxy et R11 représente un groupe méthoxy, un groupe -OBn, un groupe hydroxy ou un atome d'hydrogène, où R13 représente un groupe -CH2OH ou -NHBoc,
et où lorsque R12 représente un groupe -OBn, un groupe -OAc ou un groupe hydroxy, R9, R10 et R11 sont des atomes d'hydrogène, ou bien R représente
(E1) ou (E2)
où Y2 est un atome d'azote lorsque Y1 est un atome de carbone et Y2 est un atome de carbone lorsque Y1 est un atome d'azote ou bien Y1 et Y2 sont simultanément des atomes de carbone, et R14 représente un groupe hydroxy ou un atome d'hydrogène, ou bien R représente
(F1) ou (F2) où R15 représente un atome d'hydrogène, un atome d'halogène, un groupe -NHAc, un groupe -NHBoc, un groupe -NHCORι8, ou un groupe
où R16 est un groupe méthyle ou un atome d'hydrogène, où R18 est un groupe pyridyle, un groupe pyrazinyle, un groupe pyrimidinyle ou un groupe pyridazinyle, ces groupes pouvant être substitués par un groupe hydroxy, un groupe -OAc, un groupe (C1-C2)alcoxy, un groupe -OBn ou un groupe silyle tel que le triméthyl ou ter-butyl-diméthyl-silyle,
où R19 représente un atome d'hydrogène, un atome d'halogène, un groupe -NO
2, un groupe hydroxy, un groupe -NH
2, un groupe -NHAc ou un groupe méthoxy, et où Z1 et Z2 sont indépendamment l'un de l'autre un atome de soufre ou un atome d'azote.
Les composés de formule (I) peuvent comporter un ou plusieurs atomes de carbone asymétriques. Ils peuvent donc exister sous forme d'énantiomères ou de diasteréoisomères. Ces énantiomères, diastéréoisomères, ainsi que leurs mélanges, y compris les mélanges racémiques font partie de l'invention.
Les composés de l'invention peuvent exister à l'état de bases ou de sels d'addition à des acides.
Parmi les acides pharmaceutiquement acceptables on peut citer l'acide citrique, l'acide phosphorique, l'acide chlorhydrique ou encore l'acide malonique.
Dans le cadre de la présente invention, on entend par :
- un groupe alkyle, un groupe aliphatique saturé linéaire ou ramifié ; on peut notamment citer les groupes méthyle, éthyle, propyle, isopropyle, butyle, isobutyle, tertbutyle, pentyle, etc.
- un atome d'halogène, un fluor, un chlore, un brome ou un iode,
- « Bn » un groupe benzyle, • - « Ac » un groupe acétyle,
- « Boc » un groupe tert.butoxycarbonyle, - « Phe » un groupe phényle.
Parmi les composé de formule (I) objets de la présente invention on peut citer les composés préférés qui se définissent comme suit : R représente
(A1) ou (A2)
où R2 représente un groupe
où R3 représente un groupe — O(C1-C4)alkyle ou un groupe phényle,
ou bien R représente
(B1) (B2)
(B3)
OU =X1— X2— représente =C— C=C— , =N— C— ou =C— N=C— , où R4 représente un atome d'hydrogène ou un groupe hydroxy, où R6 représente un atome d'hydrogène, et où p prend la valeur de 0, ou bien R représente
(C)
où R7 représente un atome d'hydrogène ou un groupe -NO2, où R8 représente un atome d'hydrogène, et où n prend la valeur de 0 ou 1 et m est égal à 0,
ou bien R représente
(E1)
où Y2 est un atome d'azote et Y1 est un atome de carbone, et R14 représente un groupe hydroxy ou un atome d'hydrogène, ou bien R représente
(F1) ou (F2) où R15 représente un groupe
où R16 est un groupe méthyle ou un atome d'hydrogène, et où Z1 et Z2 sont indépendamment l'un de l'autre un atome de soufre ou un atome d'azote.
Parmi ces derniers composés préférés, on préfère tout particulièrement les composés de formule (I) suivants :
- Acide pyridine-2-carboxylique δ-oxo-Θ^SAδ-triméthoxy-phény -δ.δa.θ δa.θ- hexahydro-furo[3',4':6,7]naphtho[2,3-c][1,3]dioxol-5-ylester, [5R-(5α,5aα,8aβ,9α)], (composé n° 5 du tableau)
Acide 3-hydroxy-pyridine-2-carboxylique 8-oxo-9-(3,4,δ-triméthoxy-phényl)- δ.δa.θ.δ.δa.θ-hexahydro-furotS' 'iθJjnaphthop.S-c/ltl.Sjdioxol-δ-ylester, [δR-
(δα,δaα,δaβ,9α)], (composé n° 9 du tableau)
- Acide quinoline-2-carboxylique δ-oxo-9-(3,4,δ-triméthoxy-phényl)-δ,δa,6,3,δa,9- hexahydro-furo[3',4':6,7]naphtho[2,3-c][1 ,3]dioxol-δ-ylester[δR-(δα,5aα,δaβ,9α)], (composé n° 46 du tableau)
- Acide pyrazine-2-carboxylique δ-oxo-9-(3,4,δ-triméthoxy-phényl)-δ,δa,6,δ,δa,9- hexahydro-furo[3',4':6,7]naphtho[2,3-c |[1,3]dioxol-δ-ylester[δR-(δα,5aα,8aβ,9α)],
(composé n° 16 du tableau)
- Acide 1H-indole-2-carboxylique δ-oxo-9-(3,4,δ-triméthoxy-phényl)-δ,δa,6,8,8a,9- hexahydro-furo[3',4':6,7]naphtho[2,3-c][1 ,3]dioxol-δ-ylester, [δR-(δ ,δaα,8aβ,9α)], (composé n° 2 du tableau)
- Acide (1/-/-indol-3-yl)-acétique 8-oxo-9-(3,4,δ-triméthoxy-phényl)-δ,δa,6,8,8a,9- hexahydro-furo[3',4':6,7]naphtho[2,3-d][1 ,3]dioxol-δ-ylester, [δR-(δα,δaα,8aβ,9α)], (composé n° 26 du tableau)
Acide {2-[(pyrazine-2carbonyl)-amino]-thiazol-4-yl}-acétique 8-oxo-9-(3,4,δ- triméthoxy-phényl)-5,δa,6,δ,δa,9-hexahydro-furo[3',4':6,7]naphtho[2,3-cd[1 ,3]dioxol- δ-ylester, [δR-(5 ,δaα,8aβ,9α)], (composé n° 62 du tableau)
- Acide 1-oxy-nicotinique δ-oxo-9-(3,4,δ-triméthoxy-phényl)-δ,δa,6,8,8a,9- hexahydro-furo[3\4':6,7]naphtho[2,3-d][1 ,3]dioxol-δ-ylest.er, [δR-(δα,δaα,δaβ,9α)], (composé n° 20 du tableau)
Acide 7-nitro-1H-indole-2-carboxylique δ-oxo-9-(3,4,δ-triméthoxy-phényl)- δ,δa,6,δ,δa,9-hexahydro-furo[3',4':6,7]naphtho[2,3-cl[1 ,3]dioxol-δ-ylester, [δR-
(5α,δaα,δaβ,9α)], (composé n° 22 du tableau)
- Acide 3-pyridin-3-yl-acrylique 3-oxo-9-(3,4, 5-triméthoxy-phényl)-δ,δa, 6,8,8a, 9- hexahydro-furo[3',4':6,7]naphtho[2,3-c [1 ,3]dioxol-δ-ylester, [δR-(5α,δaα,8aβ,9α)], (composé n° 17 du tableau)
- Acide 4-hydroxy-quinoline-2-carboxylique δ-oxo-9-(3,4,δ-triméthoxy-phényl)- δ,δa,6,8,8a,9-hexahydro-furo[3',4':6,7]naphtho[2,3-c |[1,3]dioxol-δ-ylester[δR- (δα,δaα,8aβ,9α)], (composé n° 49 du tableau)
- Acide 3-(1-méthyl-1f/-imidazol-4-yl)-acrylique 8-oxo-9-(3,4,δ-triméthoxy-phényl)- δ,δa,6,δ,δa,9-hexahydro-furo[3',4':6,7]naphtho[2,3-c/][1 ,3]dioxo!-δ-yIester, [δR-
(5α,δa ,8aβ,9α)], (composé n° 19 du tableau)
- Acide (2-1ry-indol-3-yl-acétylamino)-acétique 8-oxo-9-(3,4,δ-triméthoxy-phényl)- δ,δa,6,δ,δa,9-hexahydro-furo[3',4':6,7]naphtho[2,3-cl[1,3]dioxol-δ-ylester[δR- (δα,δaα,8aβ,9α)], (composé n° 1 du tableau)
- Acide [(3S,2 ?)]3-benzoylamino-2-hydroxy-3-phényl-propionique δ-oxo-9-(3,4,δ- triméthoxy-phényl)-δ,δa,6,δ,δa,9-hexahydro-furo[3',4':6,7]naphtho[2,3-c][1 ,3]dioxol- δ-ylester, [δR-(δα,δaα,8aβ,9α)], (composé n° 3 du tableau)
- Acide [(3S,2f?)]3-tett-butoxycarbonylamino-2-hydroxy-3-phényl-propionique 8-oxo- Θ^S^.δ-triméthoxy-phény -δ.δa.e.δ.δa.θ-hexahydro-furotS'^'iδ/jnaphthop.S- c ][1 ,3]dioxol-δ-ylester, [5R-(δα,δaα,,δaβ,9α)] (composé n° 4 du tableau).
Conformément à l'invention on peut préparer les composés de formule générale (I) selon le procédé qui suit.
Selon ce procédé et conformément au schéma de synthèse qui suit, on peut faire réagir le composé de formule (II), en présence : de l'acide commercial correspondant à l'acide que l'on désire utiliser pour la réaction de couplage ou acide préparé selon les méthodes classiques de la chimie organique, d'une quantité catalytique, stoechiométrique ou en présence d'un large excès de 4-pyridine diméthylaminopyridine (DMAP) ou d'hydroxybenzotriazole (HOBT) et d'un agent de couplage utilisé dans les réactions classiques de couplage de type peptidique ou
pour former des esters tel que l'EDCI (3-(3'-dimethylamino propyl)carbodiimidehydroch!oride ) ou la DCC (N,N'-dicyclohexylcarbodiimide) pour ne citer que les plus couramment utilisés dans la littérature, dans le dichlorométhane anhydre ou le chloroforme anhydre, à une température ambiante, pour obtenir le composé de formule (I).
Alternativement, on fait réagir le composé de formule (II), en présence du chlorure d'acyle correspondant à l'acide que l'on désire utiliser pour la réaction de couplage (le chlorure d'acyle étant obtenu selon les méthodes classiques de la chimie organique) dans le dichlorométhane anhydre ou le chloroforme anhydre en présence de pyridine ou triethylamine en quantité stochiométrique, à une température basse dans un premier temps puis en laissant revenir à température ambiante pour obtenir le composé de formule (I).
Encore alternativement on fait réagir le composé de formule (II), en présence de l'anhydride d'acide correspondant à l'acide que l'on désire utiliser pour la réaction de couplage en présence d'une base telle que la pyridine ou la triethylamine (l'anhydride étant obtenu selon les méthodes classiques de la chimie organique), à une température ambiante ou à reflux du solvant organique utilisé selon le degré d'avancement de la réaction (le plus souvent le dichlorométhane anhydre ou le chloroforme anhydre ), pour obtenir le composé de formule (I). Le composé de formule (II) est la podophyllotoxine, que l'on peut obtenir selon les techniques connues de l'homme du métier ou qui est disponible dans le commerce comme suit: schéma de synthèse
composé (II)
Les exemples suivants illustrent la présente invention. Les composés sont purifiés selon les techniques courantes de purification à savoir une colonne de silice SDS 60 ACC de granulométrie 3δ-70μm en utilisant la plupart du temps sauf contre- indication un mélange de solvant Heptane-Acétate d'éthyle dans des proportions qui varient selon le type de réaction. La plupart des intermédiaires de synthèses sont commerciaux ou nécessitent d'être préparé selon les méthodes classiques de la synthèse organique.
Exemple 1 Synthèse du dérivé acide pyridine-2-carboxylique 8-oxo-9-(3,4,5- triméthoxy-phénylJ-δjδa.e.S.δa.θ- exahydro-furoISΑ're lnaphthop^- cf][1,3]dioxol-5-ylester, [5R-(5α,5aα,8aβ,9 )]: (composé n°δ du tableau)
À une solution de 60 ml de dichlorométhane anhydre on additionne 246 mg d'acide pyridine-2-carboxylique (2 mmol). Une fois le composé dissous on additionne 122 mg de 4-dimethylaminopyridine (1mmol) ainsi que 333,4 mg de 1-(3- dimethylaminopropyl)-3-ethylcarbodiimide hydrochloride (2 mmol). La solution est agitée vigoureusement, une fois les produits dissous on observe que la solution vire au jaune foncé voire violet foncé, on additionne ensuite 414 mg de podophyllotoxine (1 mmol). On suit alors la disparition des produits de départ sur plaque chromatographique sur couche mince d'alumine oxyde ou de silice. Une fois la réaction terminée après disparition de la podophyllotoxine, le milieu réactionnel est lavé à l'eau. La phase organique est ensuite séchée sur MgSO , filtrée puis concentrée sous pression réduite. On obtient alors une huile que l'on sépare par chromatographie sur gel de silice avec un mélange de solvant heptane-acétate d'éthyle (60-40) permettant d'isoler le produit attendu sous forme d'une poudre blanchâtre.
Spectre de Masse (ESI / SM) : m/z = 641 [M+Na]+
Exemple 2 acide quinoline-2-carboxylique 8-oxo-9-(3,4,5-triméthoxy-phényl)- δ.δa.β.S.δa.θ-hexa ydro-furotS'^'ie Jnapht op.S- Jtl.Sldioxol-δ-ylesterïδR- (δα,δaα,8aβ,9α)]: (composé n°46 du tableau)
À une solution de 60 ml de dichlorométhane anhydre on additionne 346 mg d'acide de quinoline-2-carboxylique (2 mmol). Une fois le composé dissous on additionne 122 mg de 4-dimethylaminopyridine (1mmol) ainsi que 383,4 mg de 1-(3- dimethylaminopropyl)-3-ethylcarbodiimide hydrochloride (2 mmol). La solution est agitée vigoureusement, une fois les produits dissous on observe que la solution vire à l'orange foncé voire violet foncé, on additionne ensuite 414 mg de podophyllotoxine (1 mmol). On suit alors la disparition des produits de départ sur plaque chromatographique sur couche mince d'alumine oxyde ou de silice. Une fois la réaction terminée après disparition de la podophyllotoxine, le milieu réactionnel est lavé à l'eau. La phase organique est ensuite séchée sur MgSO , filtrée puis concentrée sous pression réduite. On obtient alors une huile que l'on sépare par chromatographie sur gel de silice avec un mélange de solvant heptane-Acétate d'éthyle (60-40) permettant d'isoler le produit attendu sous forme d'une poudre blanchâtre.
Spectre de Masse (ESI / SM) : m/z = δ92 [M+Na]+
Exemple 3 Acide pyrazine-2-carboxylique 8-oxo-9-(3,4,δ-triméthoxy-phényl)- δ.δa.β.δjSa.θ-hexahydro-furofS'^'iβ lnaphthoP.S-cqtl.Sl ioxol-δ-ylester, [δR- (δα,δaα,8aβ,9α)]: (composé n°16 du tableau)
À une solution de δO ml de dichlorométhane anhydre on additionne 248 mg d'acide de pyrazine-2-carboxylique (2 mmol). Une fois le composé dissous on additionne 122 mg de 4-dimethylaminopyridine (1mmol) ainsi que 383,4 mg de 1-(3- diméthylaminopropyl)-3-ethylcarbodiimide hydrochloride (2 mmol). La solution est agitée vigoureusement, une fois les produits dissous on observe que la solution vire au jaune, on additionne ensuite 414 mg de podophyllotoxine (1 mmol). On suit alors la disparition des produits de départ sur plaque chromatographique sur couche mince d'alumine oxyde ou de silice. Une fois la réaction terminée après disparition de la podophyllotoxine, le milieu réactionnel est lavé à l'eau. La phase organique est ensuite séchée sur MgSO4, filtrée puis concentrée sous pression réduite. On obtient alors une huile que l'on sépare par chromatographie sur gel de silice avec un mélange de solvant heptane-acétate d'éthyle (60-40) permettant d'isoler le produit attendu sous forme d'une poudre blanchâtre.
Spectre de Masse (ESI / SM) : m/z = 643 [M+Na]+
Exemple 4 acide 1r/-indole-2-carboxylique 8-oxo-9-(3,4,δ-triméthoxy-phényl)- δ.δa.θ^.δa.θ-hexahydro-furoP'^'iθ lnaphthop^-cGtl^ldioxol-δ-ylester, [δR- (δα,δa ,8aβ,9α)]: (composé n°21 du tableau)
À une solution de 50 ml de dichlorométhane anhydre on additionne 322 mg d'acide 1H-indole-2-carboxylique (2 mmol). Une fois le composé dissous on additionne 122 mg de 4-diméthylaminopyridine (1 mmol) ainsi que 383,4 mg de 1-(3- dimethylaminopropyl)-3-ethylcarbodiimide hydrochloride (2 mmol). La solution est agitée vigoureusement, une fois les produits, on additionne ensuite 414 mg de podophyllotoxine (1 mmol). On suit alors la disparition des produits de départ sur plaque chromatographique sur couche mince d'alumine oxyde ou de silice. Une fois la réaction terminée après disparition de la podophyllotoxine, le milieu réactionnel est lavé à l'eau. La phase organique est ensuite séchée sur MgSO4, filtrée puis concentrée sous pression réduite. On obtient alors une huile que l'on sépare par chromatographie sur gel de silice avec un mélange de solvant heptane-acétate d'éthyle (60-40) permettant d'isoler le produit attendu sous forme d'une poudre légèrement jaunâtre.
Spectre de Masse (ESI / SM) : m/z = 580 [M+Na]+
Exemple δ acide (1H-indol-3-yI)-acétique 8-oxo-9-(3,4,δ-triméthoxyphényl)- δ,δa,6,8,δa,9-hexahydro-furo^4^6 ]naphtho[2,3-ol[1,3]dioxol-δ-yIester, [5R- (δα,δaα,8aβ,9α)]: (composé n°26 du tableau)
À une solution de δO ml de dichlorométhane anhydre on additionne 360 mg d'acide de 1H-indole-3-acétique (2 mmol). Une fois le composé dissous on additionne 122 mg de 4-Dimethylaminopyridine (1 mmol) ainsi que 383,4 mg de 1-(3- Dimethylaminopropyl)-3-ethylcarbodiimide hydrochloride (2 mmol). La solution est agitée vigoureusement, une fois les produits dissous, on additionne ensuite 414 mg de podophyllotoxine (1mmol). On suit alors la disparition des produits de départ sur plaque chromatographique sur couche mince d'alumine oxyde ou de silice. Une fois la réaction terminée après disparition de la podophyllotoxine, le milieu réactionnel est lavé à l'eau. La phase organique est ensuite séchée sur MgSO4, filtrée puis
concentrée sous pression réduite. On obtient alors une huile que l'on sépare par chromatographie sur gel de silice avec un mélange de solvant heptane-acétate d'éthyle (60-40) permettant d'isoler le produit attendu sous forme d'une poudre légèrement jaunâtre.
Spectre de Masse (ESI / SM) : m/z = 694 [M+Na]+
Exemple 6 acide {2-[(pyrazine-2carbonyl)-amino]-thiazol-4-yl}-acétique δ-oxo-9- (S^.δ-triméthoxyphénylJ-δjδa.θ.δ.δa.θ-hexahydro-furoP'^'iβ lnaphthop.S- d][1,3]dioxol-δ-yIester, [δR-(δα,δaα,δaβ,9α)]: (composé n°64 du tableau)
Etapel : Préparation du dérivé acide {2-[(pyrazine-2carbonyl)-amino]-thiazol-4-yl}- acétique ethyl ester
À une solution de 1,24g d'acide de 2-pyrazine carboxylic acid (10 mmol) dissous dans 100 ml de dichlorométhane anhydre on additionne 366 mg de 4- Dimethylaminopyridine (3 mmol) ainsi que 1,91g de 1-(3-dimethylaminopropyl)-3- ethylcarbodiimide hydrochloride (10 mmol). La solution est agitée vigoureusement pendant une demi-heure, on additionne alors 930mg de éthyl 2-amino-4- thiazoleacétate(5 mmol) et on laisse à température ambiante pendant 24 heures. Au cours des 24 heures on suit la disparition du dérivé éthyl 2-amino-4-thiazoleacétate sur plaque de chromatographie sur couche mince, une fois la réaction terminée on évapore sous pression réduite le mélange réactionnel. On isole, le dérivé acide {2- [(yrazine-2carbonyl)-amino]-thiazol-4-yl}-acétique acid ethyl ester, par chromatographie sur colonne de silice, que l'on saponifie immédiatement selon les techniques usuelles de la chimie organique pour obtenir le dérivé acide {2- [(pyrazine-2carbonyl)-amino]-thiazol-4-yl}-acétique après purification.
Etape2 Préparation du dérivé acide {2-[(pyrazine-2carbonyl)-amino]-thiazol-4-yl}- acétique δ-oxo-9-(3,4,5-triméthoxy-phényl)-δ,δa,6,8,8a,9-hexahydro-furo[3',4':6,7] naphto [2,3-d][1 ,3]dioxol-δ-ylester, [δR-(5a,δaa,8ab,9a)]:
À une solution de 528 mg d'acide {2-[(Pyrazine-2carbonyl)-amino]-thiazoi-4-yI}- acetique (2 mmol) dissous dans δO ml de dichlorométhane anhydre on additionne 122 mg de 4-dimethylaminopyridine (1 mmol) ainsi que 3δ3,4 mg de 1-(3-
dimethylaminopropyl)-3-ethylcarbodiirnide hydrochloride (2mmol). La solution est agitée vigoureusement, une fois les produits dissous, on additionne ensuite 414 mg de podophyllotoxine (Immol). On suit alors la disparition des produits de départ sur plaque chromatographique sur couche mince d'alumine oxyde ou de silice. Une fois la réaction terminée après disparition de la podophyllotoxine, le milieu réactionnel est lavé à l'eau. La phase organique est ensuite séchée sur MgSO4, filtrée puis concentrée sous pression réduite. On obtient alors une huile que l'on sépare par chromatographie sur gel de silice avec un mélange de solvant heptane-acétate d'éthyle (60-40) permettant d'isoler le produit attendu sous forme d'une poudre blanchâtre.
Spectre de Masse (ESI / SM) : m/z = 683 [M+Na]+
Le tableau qui suit illustre les structures chimiques et les propriétés physiques de quelques composés de l'invention.
Tableau
(
Les composés de l'invention ont fait l'objet d'essais pharmacologiques permettant de déterminer leur effet cytotoxique.
Des essais ont consisté à mesurer l'activité cytotoxique in vitro des composés de l'invention sur des lignées cellulaires tumorales humaines d'origine différentes et notamment la lignée A549, HT-29, KB, KB-VM4, KB-VP2, MDA-MB- 231et SK-N-SH.
Les cellules sont maintenues en culture dans un milieu DMEM (Life Technologies) contenant 10% de sérum de vœu fœtal (SVF) et 2 mM de L- Glutamine (Life Technologies).
Méthodologie
La méthodologie qui est décrite ci-après est notamment détaillée dans Landegren U. « Measurement of cell numbers by means of the endogenous enzyme hexosaminidase. Applications to détection of lymphokines and cell surface antigens. » Journal of Immunological Methods, 67, 379(1984).
Les cellules sont incubées dans un milieu DMEM (Life Technologies) contenant 10% de SVF et 2 mM de L-Glutamine (Life Technologies). Après 24 heures d'incubation, les différents composés à tester sont ajoutés dans le milieu à différentes concentrations. Les cellules sont incubées pendant 3 jours à 37°C dans une étuve humide sous 6% de CO2. La viabilité cellulaire est analysée par un essai colorimétrique mesurant l'activité de l'hexosaminidase endogène. Après lavage des cellules au PBS, une solution contenant le substrat de l'hexosaminidase (p- nitrophényl-N-acétyl-β-D-glucosaminide (Sigma) à 3,76 mM, citrate de sodium à 60 mM (pH 5), Triton X-100 à 0,26%), est déposée dans chaque puits. Les cellules sont mises à incuber à 37°C pendant 60 minutes, puis la réaction enzymatique est bloquée par addition d'un tampon (pH 10,4) contenant de la Glycine (50 mM) et de l'EDTA (5 mM). L'absorbance est ensuite mesurée dans un spectrophotomètre à 405 nm.
Résultats
L'activité est donnée par la concentration qui inhibe de 50% la survie cellulaire.
Les Cl50 des composés de l'invention les plus actifs sont comprises entre 10 nM et 100 nM.
Il apparaît donc que les composés de l'invention ont une activité anticancéreuse.
Les composés de l'invention peuvent donc être utilisés pour la préparation de médicaments anticancéreux, ces médicaments trouvent leur emploi en thérapeutique notamment dans le traitement du cancer colorectal, du poumon, de la sphère ORL, du sein ou cérébral.
Selon un autre de ses aspects, la présente invention concerne des compositions pharmaceutiques renfermant en tant que principe actif, un composé selon l'invention.
Ainsi, ces compositions pharmaceutiques contiennent une dose efficace d'un composé selon l'invention, et un ou plusieurs excipients pharmaceutiques convenables.
Lesdits excipients sont choisis selon la forme pharmaceutique et le mode d'administration souhaité.
Dans les compositions pharmaceutiques de la présente invention pour l'administration orale, sublinguale, sous-cutanée, intramusculaire, intra-veineuse, topique, intratrachéale, intranasale, transdermique ou rectale, le principe actif de formule (I) ci-dessus son sel ou hydrate éventuel, peut être administré sous forme unitaire d'administration, en mélange avec des excipients pharmaceutiques classiques, aux animaux et aux êtres humains pour la prophylaxie ou le traitement des troubles ou des maladies ci-dessus. Les formes unitaires d'administration appropriées comprennent les formes par voie orale telles que les comprimés, les gélules, les poudres, les granules et les solutions ou suspensions orales, les formes d'administration sublinguale, buccale, intratrachéale, intranasale, les formes d'administration sous-cutanée, intramusculaire ou intraveineuse et les formes d'administration rectale. Pour l'application topique, on peut utiliser les composés selon l'invention dans des crèmes, pommades ou lotions.
Par voie orale, la dose de principe actif administrée par jour peut atteindre 40 mg/kg, en une ou plusieurs prises. Par voie parentérale, elle peut atteindre 40 mg/kg/jour et par voie rectale 30 mg/kg/jour. II peut y avoir des cas particuliers où des dosages plus élevés ou plus faibles sont appropriés, de tels dosages appartiennent également à l'invention. Selon la pratique habituelle, le dosage approprié à chaque patient est déterminé par le médecin selon le mode d'administration, le poids et la réponse dudit patient.
Lorsqu'on prépare une composition solide sous forme de comprimés, on mélange l'ingrédient actif principal avec un excipient pharmaceutique, tel que la gélatine, l'amidon, le lactose, le stéarate de magnésium, le talc, la gomme arabique ou analogues. On peut enrober les comprimés de saccharose, d'un dérivé cellulosique, ou d'autres matières. Les comprimés peuvent être réalisés par
différentes techniques, compression directe, granulation sèche, granulation humide ou fusion à chaud.
On obtient une préparation en gélules en mélangeant l'ingrédient actif avec un diluant et en versant le mélange obtenu dans des gélules molles ou dures.
Pour une administration parentérale, on peut utiliser des suspensions aqueuses, des solutions salines isotoniques ou des solutions stériles et injectables qui contiennent des agents de dispersion et/ou des mouillants pharmacologiquement compatibles, par exemple le propylèneglycol ou le butylèneglycol.
La présente invention selon un autre de ses aspects, concerne également une méthode de traitement des pathologies ci-dessus indiquées qui comprend l'administration d'un composé selon l'invention ou un de ses sels pharmaceutiquement acceptables.