WO2001074397A1

WO2001074397A1 - Preparation en poudre destinee a etre administree par les muqueuses comprenant un medicament de forme polymere et presentant une stabilite de conservation amelioree

Info

Publication number: WO2001074397A1
Application number: PCT/JP2001/002555
Authority: WO
Inventors: Hideaki Nomura; Yosuke Ueki
Original assignee: Kirin Beer Kabushiki Kaisha
Priority date: 2000-03-31
Filing date: 2001-03-28
Publication date: 2001-10-11
Also published as: AU4458401A; EP1273306A4; CA2403962A1; US20050037084A1; EP1273306A1; MXPA02009485A; AU2001244584B2; CA2403962C; US7282219B2

Description

明細書改善された保存安定性を有する高分子医薬品含有粉末経粘膜投与用製剤発明の技術分野

本発明は、高分子医薬品およびカチオン性ポリマーを含有する粉末状経粘膜投与製剤において、塩基性アミノ酸を含有してなる改善された保存安定性を有する製剤、特に経鼻粘膜投与用製剤に関する。発明の背景

現在、高分子医薬品は治療に際し、静脈内あるいは皮下に対して注射による投与が行われている。しかし、注射による高分子医薬品の投与は患者自身が行うことが困難な上に苦痛を伴うことから、注射以外のよリ簡便な投与方法として経粘膜投与が望まれている。経粘膜投与の具体例としては、鼻粘膜、眼粘膜、口腔粘膜、肺粘膜、膣粘膜の他に、胃粘膜、小腸粘膜、大腸粘膜、直腸粘膜などの消化管粘膜からの投与を挙げることができる。中でも、鼻粘膜投与が速やかな薬物吸収と確実な効果がもたらされる比較的簡便な投与方法として注目されている。本出願人は先に、高分子医薬品を含有する粉末状経粘膜投与製剤において粘膜からの薬剤の難吸収性の問題を改善するために、高分子医薬品にカチオン性ポリマ一（必要によりさらに増粘性ポリマ一）を含有させることによって上記の難吸収性を著しく改善できることを見出した（国際出願 W0 00/02574)。

その後、製剤の保存安定性をさらに改善するべく鋭意検討を重ねてきた。すなわち、本発明の目的は、高分子医薬品およびカチオン性ポリマーを含有する従来の粉末状経粘膜投与製剤において、粘膜からの高分子医薬品の改善された吸収性を保持しつつ、さらに高分子医薬品の保存安定性が改善された製剤を提供することである。発明の概要

本発明者等は、国際出願 W0 00/02574に記載されるような改善された粘膜吸収性をもつ、高分子医薬品およびカチオン性ポリマーを含有する粉末状経粘膜投与製剤において、有効量の塩基性アミノ酸を加えることによって意外にも高分子医薬品の保存安定性を有意に向上させうることを見出し、本発明を完成させるに至つた。

すなわち、本発明は以下のように要約される。

本発明は、その態様において、高分子医薬品およびカチオン性ポリマ一を含有する粉末状経粘膜投与製剤において、少なくとも 1種の塩基性アミノ酸または医薬上許容可能なその塩を含有することを特徴とする、改善された保存安定性を有する粉末状経粘膜投与製剤を提供する。

本発明の第 1の実施態様において、塩基性アミノ酸またはその塩は、光学活性もしくは非光学活性のヒスチジン、アルギニンまたはリジン、あるいはそれらの医薬上許容可能な塩、あるいはそれらの誘導体である。塩基性アミノ酸またはその塩は、好ましくは光学活性もしくは非光学活性のヒスチジン、アルギニン、またはそれらの医薬上許容可能な塩、さらに好ましくは光学活性もしくは非光学活性のヒスチジンまたはその医薬上許容可能な塩である。

本明細書中、光学活性とは、キラルな構造特性を意味し、光学活性物質は通常

D体または L体あるいは S体または R体の立体配置を有する。一方、非光学活性とはアキラルな構造特性を意味する。

本発明の第 2の実施態様において、改善された保存安定性は、 50°Cで 2週間保存時の安定性試験において高分子医薬品の含有率（HPLC分析）が試験開始時の値を 100 %としたとき 93 %以上、好ましくは 96 %以上であることによって特徴付けられる。

本発明の第 3の実施態様において、カチオン性ポリマーは、アミノアルキルメタァクリレートコポリマ一、ポリビニルァセタ一ルジェチルアミノアセテート、およびポリ— L一アルギニンからなる群から選択され、好ましくはアミノアルキルメタァクリレートコポリマ一、ポリビニルァセタールジェチルアミノァセテ一トである。より好ましいカチオン性ポリマ一は、アミノアルキルメタァクリレートコポリマ一である。

本明細書中カチオン性ポリマ一とは、反復構造をなす基本単位の中にカチオンチャージを有する、あるいは溶解するとカチオンチャージを有するようになる構造をもつものをいう。

本発明の第 4の実施態様において、本発明の製剤はさらに増粘性ポリマーを含有する。増粘性ポリマーとは、溶解時または膨潤時に粘性をもつポリマーを指し、その具体例はヒドロキシプロピルメチルセルロースである。

本発明の第 5の実施態様において、高分子医薬品は、生理活性を有するぺプチドまたはタンパク質（抗体、ワクチンおよび抗原を含む）であり、具体的な例は顆粒球コロニー刺激因子、インシュリン、エリスロポエチン、成長ホルモンまたはィンフルェンザ抗原であるが、これらに限定されない。

本発明の第 6の実施態様において、本発明の製剤は経鼻投与用である。

本発明の第 7の実施態様において、本発明の製剤は賦形剤をさらに含む。ここで賦形剤とは、医薬品の製造の際に適当な硬さや形を与えるために処方に加えられる物質を指す。なお、本明細書は本願の優先権の基礎である日本国特許出願第 2000- 99213号の明細書に記載される内容を包含する。発明の詳細な説明

以下に、本発明を詳細に説明する。

本発明の粉末状経粘膜投与製剤は、高分子医薬品に賦形剤、カチオン性ポリマ一、および塩基性アミノ酸またはその塩、あるいは必要に応じてさらに増粘性ポリマー、必要に応じてさらに適当な添加剤を加え、凍結乾燥（フリーズドライ）あるいは噴霧乾燥（スプレードライ）することにより得ることができる。

本発明において用いられる高分子医薬品とは生理活性を有するぺプチドおよびタンパク質（抗体、ワクチン、抗原を含む）をさし、具体的には次のようなものが挙げられるが、これらに限定されない。カルシトニン、インシュリン、プロインシュリン、バソプレツシン、デスモプレシン、黄体形成ホルモン、黄体形成ホルモン放出ホルモン、ソマトスタチン、プロラクチン、グルカゴン、ガストリン、セクレチン、カリクレイン、ゥロキナーゼ、ニューロテンシン、エンケフアリン、キヨ一トルフィン、エンドルフィン、エンドセリン、アンギオテンシン、トランスフエリン、心房性ナトリウム利尿ペプチド、上皮細胞増殖因子、成長ホルモン、副甲状腺ホルモン、インタ一フエロン、インターロイキン、腫瘍壊死因子、白血病細胞阻止因子、血液幹細胞増殖因子、エリスロポエチン、顆粒球コロニー刺激因子（G-CSFという）、顆粒球マクロファージ刺激因子、マクロファージコロニー刺激因子、トロンボポェチン、スーパ一オキサイドデイスムターゼ、ティシュープラスミノ一ゲンァクチべ一ター、アンチトロンビン、血液凝固因子、抗 I g E 抗体、抗 I g A抗体、抗腫瘍抗体、腫瘍壊死因子抗体、抗インタ一ロイキン抗体、

H I V中和抗体、抗血小板抗体、抗肝炎ウィルス抗体、肝炎ワクチン、インフルェンザワクチン（インフルエンザ抗原）、百日咳ワクチン、ジフテリアワクチン、破傷風ワクチン、杉花粉あるいはぶたくさ花粉などの、抗原として作用しうるべプチドあるいはタンパク質およびそれらのハプテン結合物、さらにはそれらとァジュバントとの混合物など。また、上記例示の高分子医薬品よりも分子量の小さな医薬品に対しても、本発明はその粘膜、特に鼻粘膜からの吸収性をより増大させることが容易に推測され、本発明の適用が有用と考えられる。

本発明に用いることができる高分子医薬品の一つである G— C S Fの例としては、配列番号 1〜 3のアミノ酸配列で表されるヒト G— C S F活性を有するタンパク質、又はこれに糖鎖が結合された糖タンパク質を挙げることができる。更に同配列のアミノ酸配列の一部が改変（すなわち 1個以上のアミノ酸残基の置換、欠失、揷入、およびまたは付加をいう）された G— C S F活性を有する G— C

S F誘導体も本発明における G— C S Fに含まれる。これらの G— C S Fは、天然物から抽出 ·分離 ·精製するか、あるいは遺伝子組換えによって宿主細胞を形質転換して得た形質転換体をして生産せしめ、単離精製したものを使用することができる。宿主細胞としては大腸菌、哺乳動物細胞（C 1 2 7、 C H O細胞など）を挙げることができる。これらの詳細な製造方法については、例えば、特表昭 6 3— 5 0 0 6 3 6号公報や特開昭 6 2— 2 3 6 4 9 7号公報、特開昭 6 2—

2 3 6 4 8 8号公報、および特開昭 6 3 - 2 6 7 2 9 2号公報に記載されており、本発明において利用可能である。

本発明の粉末状経粘膜投与製剤における高分子医薬品の含有率は、通常 0 . 0 1〜9 0 W/W %、好ましくは 0 . 1〜5 0 WZW %である。本明細書中 WZ W%とは、製剤の全重量に対する添加成分の割合（重量％) を意味する。

本発明において用いられるカチオン性ポリマーとは、反復構造をなす基本単位の中にカチオンチャージを有する、あるいは溶解するとカチオンチャージを有するようになる構造をもつものをいう。本発明において用いられるカチオン性ポリマ一は、粘膜からの高分子医薬品の吸収を促進する効果をもつものであればいずれのものでもよい。具体的には、アミノアルキルメタァクリレートコポリマ一、ポリビニルァセタ一ルジェチルアミノアセテート、ポリ一 L—アルギニンなどを用いることができる。アミノアルキルメタァクリレートコポリマ一は、例えば、 Rohm Pharma から商品名オイドラギット Eおよびオイドラギット R Sとして入手することができる。オイドラギット Eは、メタアクリル酸メチルとメタアクリル酸ブチルおよびメタァクリル酸ジメチルアミノエチルの共重合体であり、平均分子量は 150， 000である。ポリビニルァセタールジェチルァミノアセテートは、例えば、三共（株式会社）から商品名 A E Aとして入手することができるが、これは、ポリビニルアルコールとァセトアルデヒドを脱水して得たァセタールおよび水酸基の一部にジェチルアミノ酢酸をエステル結合させて得られる平均分子量 65, 000の重合体である。ポリ— L—アルギニンは、 L _アルギニンの重合体であリ、平均分子量としては 1000〜1，000，000 のものが挙げられるが、好ましくは 12， 100〜92，000であるとよく、より好ましくは 92， 000である。ポリ— L—アルギニンは、シグマから入手することができる。本発明の粉末状経粘膜投与製剤におけるカチオン性ポリマーの含有率は、通常 0 . 1〜9 0 WZW%、好ましくは 1 〜 5 0 WZW%である。

本発明において用いられる塩基性ァミノ酸とは上記定義のとおリであり、具体的にはヒスチジン、アルギニンおよびリジンの Lまたは D体、 Sまたは R体、 DL体、あるいはそれらの医薬上許容可能な塩、あるいはそれらの誘導体を挙げることができる。医薬上許容可能な塩としては例えば、塩酸、硫酸、リン酸などの無機酸との塩、あるいは酢酸、酪酸、コハク酸、酒石酸、クェン酸、リンゴ酸などの有機酸との塩を挙げることができる。さらに該誘導体の例としてメチルヒスチジン、ヒスチジンメチルエステル、ァセチルヒスチジン、ァセチルリジン、ヒドロキシリジン、およびァセチルリジンメチルエステル等を挙げることができる。本発明の粉末状経粘膜投与製剤における塩基性アミノ酸またはその塩の含有率は、通常

0. 1〜10. 0WZW %、好ましくは0. 5〜5. 0\ \¥%でぁるが、高分子医薬品の保存安定性効果が達成される限り上記の特定範囲に限定されない。

本発明において用いられる増粘性ポリマーとは、溶解時あるいは膨潤時に粘性をもつポリマ一をさす。本発明において用いられる増粘性ポリマ一は、カチオン性ポリマ一と併用された時に、カチオン性ポリマーが単独で用いられた時よリも、高分子医薬品の吸収が増大するものであればよい。具体的には、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、カルボキシビニルポリマ一、カンテン末、アラビアゴム末などを用いることができる。本発明の粉末状経粘膜投与製剤における増粘性ポリマーの含有率は、通常 0 . 1〜9 0 WZW%、好ましくは 1〜 5 O WZW%である。

本発明において用いられる賦形剤は糖類に代表されるが、このような糖類としては、キシリトール、フルクト一ス、ソルビトール、ラクト一ス、イノシトール、シュクロース、マンニトール等などがあげられる。その他にも、賦形剤としては、デンプン類、無機質類、有機酸類、アミノ酸類などが挙げられる。デンプン類としては、トウモロコシデンプン、小麦デンプン、バレイショデンプンなどが含まれる。無機質類としては、リン酸カルシウム、リン酸水素カルシウム、リン酸水素 2ナトリウム、リン酸二水素ナトリウム、炭酸マグネシウム、塩化ナトリウム、硫酸カルシウムなどが含まれる。有機酸類としては、コハク酸、酒石酸、クェン酸、フマル酸、リンゴ酸、ダルコン酸、グルクロン酸およびその塩などが含まれる。アミノ酸類としては、 D , L—メチォニン、 L—フエ二ルァラニン、 L—グルタミン酸などが含まれる。本発明の粉末状経粘膜投与製剤における賦形剤の含有率は、通常 1〜9 0 W_/ W%、好ましくは 5〜8 0 W/W%である。

本発明では必要に応じて滑沢剤などの添加剤を用いる。滑沢剤としては、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、タルクなどが含まれる。本発明の粉末状経粘膜投与製剤における添加剤の含有率は、通常 0. 01〜90WZW%、好ましくは 0. 05〜50W/W%である。

本発明の粉末状経粘膜投与製剤は例えば高分子医薬品を含む（緩衝）溶液と、あらかじめカチオン性ポリマ一、塩基性アミノ酸またはその塩、およびシュクロース、マンニトール等の賦形剤、あるいは必要により増粘性ポリマーを溶解させておいた（緩衝）溶液を混合する。これを噴霧乾燥し、粉末を得る。得られた粉末を必要量秤量し、カプセルに充填して粉末状経粘膜投与製剤を得ることもできる。上記のようにして製造された経粘膜投与製剤の粉末は、通常 0. 1〜500 111の粒径（直径）を有し、好ましくは、 5〜100 mの粒径を有する。

経粘膜投与製剤の粉末は力プセル化されていると取扱が容易になるが、この場合カプセル基剤の材料としては、ゼラチン、ヒドロキシプロピルメチルセル口一ス、メチルセルロース、デンプンなどを挙げることができ、これらの材料にダリセリン、ソルビトール、カラギーナン、ポリエチレングリコ一ル、アラビアゴムなどを添加して、塑性を増加させてもよい。

さらなる添加剤として、塩化カリウム、シュクロース、着色剤、酸化チタンなどの 1種以上を添加してもよい。

本発明の粉末状経粘膜投与製剤は、必要時にあるいは適当な投与頻度で、患者の粘膜に投与することができる。粘膜の具体例としては、鼻粘膜の他に眼粘膜、口腔粘膜、肺粘膜、膣粘膜、また、胃粘膜、小腸粘膜、大腸粘膜、直腸粘膜などの消化管粘膜を挙げることができる。例えば、本発明の製剤を経鼻投与する場合には、粉末状製剤を内包するカプセルを小型噴霧器（パブライザ一）にセットし、カプセルに穴をあけた後、ノズルを鼻孔に揷入し、鼻で息を吸いながら、ゴム球を押さえることにより、鼻腔内に粉末状製剤を噴霧すればよい。顆粒球コロニー刺激因子を有効成分として含有する製剤は、一日 1〜4回、有効成分の量にして

1〜500 g/kg/日、好ましくは 5〜100 g/kg/日の量で、患者に投与すればよい。インシュリンを有効成分として含有する製剤は、一日 1〜4回、有効成分の量にして 0. 1〜100 U/kg/曰、好ましくは 0. 5〜20 U/kg/日の量で、患者に投与すればよい。エリスロポエチンを有効成分として含有する製剤は、一日 1〜4回、有効成分の量にして 50〜50，000 IU/kg/日、好ましくは 200〜8，000 IU/kg/日の量で、患者に投与すればよい。成長ホルモンを有効成分として含有する製剤は、一日 1〜4回、有効成分の量にして 0. 1〜50 IU/kg/日、好ましくは 0. 4〜15 IU/kg/ 日の量で、患者に投与すればよい。インフルエンザ抗原を有効成分として含有する製剤は、一日 1〜4回、 2週〜 6週の間隔をあけて、有効成分の量にして 0. 5 〜200 CCA/kg/日、好ましくは 2〜40 CCA/kg/日の量で、対象者に投与すればよい。なお、本発明は上述のとおり、高分子医薬品およびカチオン性ポリマーを含有する改善された粘膜吸収性をもつ粉末状経粘膜投与製剤において高分子医薬品の保存安定性を実用レベルにまで改善したことにその特徴を有している。この点で本発明は本出願人による国際出願 W0 00/02574に開示される発明の改良発明であリ、したがって当該国際出願に記載される種々の具体的例示は本発明にも適用可能であリ、その開示のすべてを本明細書に取リ入れるものとする。実施例

以下、本発明を実施例により具体的に説明するが、本発明の範囲はこれらの実施例に限定されることはない。

以下の実施例および比較例において使用した塩基性アミノ酸、カチオン性ポリマー、シュクロ一ス、 D—マンニトール、ヒドロキシプロピ^/メチルセルロース、ヒアルロン酸ナトリウム、それらの緩衝溶液の成分（緩衝成分）は以下のとおりである。

塩基性アミノ酸

L-アルギニン塩酸塩（味の素）

L-ヒスチジン（味の素）

L-リジン塩酸塩（味の素）

カチオン性ポリマ一

アミノアルキルメタァクリレートコポリマー E (Rohm Pharma社、商品名：オイドラギット（Eudragi t) E100)

D—マンニトール（花王ニッキョクマンニトールカオ一）

ヒドロキシプロピルメチルセルロース（信越化学、商品名：

メトローズ 60SH4000)

緩衝成分

クェン酸（東洋製薬化成）、リン酸（国産化学）

以下の実施例で用いた高分子医薬品として顆粒球コロニー刺激因子（G— C S F) は、遺伝子組換え大腸菌により産生された、配列番号 1に記載のアミノ酸配列を有するポリペプチドである（特表昭 63-500636号公報参照）。また、こうして得られた G— C S Fを濃縮、緩衝液置換をして G— C S F緩衝液を得た。

く実施例 1〉

顆粒球コロニー刺激因子（G— C S F) の緩衝溶液に D_マンニトールおよび L—アルギニン塩酸塩およびヒドロキシプロピルメチルセルロース（HPMC) およびァミノアルキルメタァクリレートコポリマ一（オイドラギット E 1 00) の緩衝溶液を加え、 PH= 5. 0に調整した後噴霧乾燥し、以下の処方の粉末製剤を得た。

G-C S F 2. 5 W/W%

オイドラギット E 1 00 7. 5 W/W%

H PMC 1 0. ow/w%

L—アルギニン塩酸塩 5. 0W/W%

D—マンニトーソレ 7 1. 9 W/W%

緩衝成分

1 00. ow/w% く実施例 2〉

顆粒球コロニー刺激因子（G— C S F) の緩衝溶液に D—マンニトールおよび L—リジン塩酸塩およびヒドロキシプロピルメチルセルロース（HPMC) およびァミノアルキルメタァクリレートコポリマ一（オイドラギット E 1 00) の緩衝溶液を加え、 PH= 5. 0に調整した後噴霧乾燥し、以下の処方の粉末製剤を得た。

G-C S F 2. 5W/W%

オイドラギット E 1 00 7. 5WZW%

HPMC 1 0. Lーリジン塩酸塩 5. 0W/W%

D—マンニトール 7 1. 9W/W%

緩衝成分

1 00. 0W/W% く実施例 3 >

顆粒球コロニー刺激因子（G— C S F) の緩衝溶液に D—マンニトールおよび L—ヒスチジンおよびヒドロキシプロピルメチルセルロース（HPMC) およびァミノアルキルメタァクリレ一トコポリマ一（オイドラギット E 1 00) の緩衝溶液を加え、 pH= 5. 0に調整した後噴霧乾燥し、以下の処方の粉末製剤を得た。

G-C S F 2. 5W/W%

オイドラギット E 1 00 7. 5W/W%

HPMC 1 0. ow/w%

L—ヒスチジン 5. 0 W/W%

D—マンニトール 70. 8 W/W%

緩衝成分

1 00. ow/w%

〈比較例 1〉

顆粒球コロニー刺激因子（G— C S F) の緩衝溶液に D—マンニトールおよびヒドロキシプロピルメチルセルロース（HPMC) およびアミノアルキルメタァクリレ一トコポリマ一（オイドラギット E 1 00) の緩衝溶液を加え、 pH = 5. 0に調整した後噴霧乾燥し、以下の処方の粉末製剤を得た。

G— C S F 2. 5W/W%

オイドラギット E 1 00 7. 5W/W%

HPMC 1 0. D—マンニトール 75. 7 W/W%

緩衝成分

1 00. ow/w% く実験例 1〉

噴霧乾燥により調製した実施例 1〜 3および比較例 1粉末中の G— C S F安定性試験を実施した。安定性試験時の包装形態として、試験粉末をカプセルに充填したものを PTP包装後、乾燥剤と共にアルミピロ一を選択した。また、保存温度および期間は 50°〇 · 2週間に設定した。粉末中の G— C S F安定性は、陽ィオン交換 H P L Cを用いて分析した際の総ピーク面積中の G_C S Fピーク面積％を用いて評価した。尚、陽イオン交換 HPLCの分析条件は下記の通りである。

<<11?1^〇分析条件>>

使用カラム：東ソ一 T SKg e l S P-NPR

移動相 A _: 2 OmM酢酸水溶液（p H= 5. 4)

移動相 B ： 2 OmM酢酸、 1 00 mM塩化ナトリゥム水溶液（pH 5. 4) グラジェント条件

時間〈分〉移動相 A 移動相 B

0 1 00 % 0 %

2 1 00 % 0 %

28 35 % 65 %

3 1 0% 1 00 %

35 0% 1 00 %

37 1 00 % 0 %

40 1 00 % 0 % 以上 7粉末の陽イオン交換 HP L C分析結果は表 1の通りである（表中の値は総ピーク面積中の G— C S Fピークの面積％)。その結果、実施例 1— 3のいずれも比較例 1に比べ G— C S Fの安定性が向上していることが判明した。中でも L一アルギニン塩酸塩（実施例 1 ) および L一ヒスチジン（実施例 3) の G— C S F安定化作用が顕著であった。表 1 G— C S Fの保存安定性分析結果

く実施例 4〉

顆粒球コロニー刺激因子（G— C S F) の緩衝溶液に D_マンニトールおよび L一ヒスチジンおよびヒドロキシプロピルメチルセルロース（HPMC) およびァミノアルキルメタァクリレ一トコポリマ一（オイドラギット E 1 00) の緩衝溶液を加え、 pH = 4. 0に調整した後噴霧乾燥し、以下の処方の粉末製剤を得た。

G— C S F 2. 5 W/W%

オイドラギット E 1 00 5. 0 W/W%

H PMC 5. 0 W/W%

L—ヒスチジン 0. 5 W/W%

D—マンニトール 85. 3 W/W%

緩衝成分

1 00. 0 W/W% く実施例 5〉

顆粒球コロニー刺激因子（G— C S F) の緩衝溶液に D—マンニトールおよび L—ヒスチジンおよびヒドロキシプロピルメチルセルロース（HPMC) およびァミノアルキルメタァクリレ一トコポリマー（オイドラギット E 1 00 ) の緩衝溶液を加え、 p H = 4. 0に調整した後噴霧乾燥し、以下の処方の粉末製剤を得た。 G-C S F 2. 5 W/W%

オイドラギット E 1 0 0 5. 0 W/W%

H PMC 5.

L—ヒスチジン 1.

D—マンニトール 84. 5 W/W%

緩衝成分適量

1 0 0. 0W/W% く実施例 6〉

顆粒球コロニー刺激因子（G— C S F) の緩衝溶液に D—マンニトールおよび L—ヒスチジンおよびヒドロキシプロピルメチルセルロース（H PMC) およびアミノアルキルメタァクリレートコポリマー（オイドラギット E 1 0 0) の緩衝溶液を加え、 P H = 4. 0に調整した後噴霧乾燥し、以下の処方の粉末製剤を得た。

G- C S F 2 5 W/W%

オイドラギット E 1 0 0 5 0 W/W%

H PMC 5 0 W/W%

L—ヒスチジン 2 0W/W%

D—マンニトール 8 3 4WZW%

緩衝成分

1 0 0. 0 W/W%

く実施例 7 >

顆粒球コロニー刺激因子（G— C S F) の緩衝溶液に D—マンニトールおよび

L—ヒスチジンおよびヒドロキシプロピルメチルセルロース（HPMC) およびァミノアルキルメタァクリレートコポリマ一（オイドラギット E 1 0 0 ) の緩衝溶液を加え、 p H = 4. 0に調整した後噴霧乾燥し、以下の処方の粉末製剤を得た <

G— C S F 2. 5 W/W%

オイドラギット E 1 00 5. 0W/W%

H PMC 5. 0W/W%

L一ヒスチジン 5. 0W/W%

D—マンニトール 7 9. 7 W/W%

緩衝成分

1 00. 0 w/w% く比較例 2 >

顆粒球コロニー刺激因子（G— C S F) の緩衝溶液に D—マンニトールおよびヒドロキシプロピルメチルセルロース（HPMC) およびアミノアルキルメタァクリレートコポリマー（オイドラギット E 1 00) の緩衝溶液を加え、 ρ Η = 4· 0に調整した後噴霧乾燥し、以下の処方の粉末製剤を得た。

G- C S F 2. 5W/W%

オイドラギット Ε 1 00 5. 0W/W%

HPMC 5. 0W/W%

D—マンニトール 85. 5W/W%

緩衝成分

1 00. 0W/W%

〈実験例 2〉

噴霧乾燥により調製した実施例 4〜 7および比較例 2粉末中の G— C S F安定性試験を実施した。安定性試験時の包装形態として、試験粉末をカプセルに充填したものを P TP包装後、乾燥剤と共にアルミピロ一を選択した。また、保存温度および期間は 50°C ' 2週間に設定した。粉末中の G— C S F安定性は、陽ィオン交換 H P L Cを用いて分析した際の総ピーク面積中の G— C S Fピーク面積％を用いて評価した。尚、陽イオン交換 H PLCは実験 1と同一条件で実施した。

以上 5粉末の陽イオン交換 H P L C分析結果は表 2の通りである（表中の値は総ピーク面積中の G— C S Fピークの面積％)。その結果、実施例 4— 7のいずれにおいても、 L—ヒスチジンを含有しない比較例 2に比べ G— C S Fの安定性が向上していることが判明した。また、 L—ヒスチジンの添加量を増やすに従い、 G— C S Fの安定性が向上する傾向が認められた。表 2 G-C S Fの保存安定性分析結果

く実施例 8 >

顆粒球コロニー剌激因子（G— C S F) の緩衝溶液に D—マンニトールおよび L—ヒスチジンおよびアミノアルキルメタァクリレートコポリマ一（オイドラギット E 1 00) の緩衝溶液を加え、 p H = 4. 0に調整した後噴霧乾燥し、以下の粉末処方を得た。

G- C S F 1 0. 0 w/w%

オイドラギット E 1 00 5. 0W/W%

L一ヒスチジン 1. 0 w/w%

D—マンニト一ソレ 7 9. 8W/W%

緩衝成分

1 00. ow/w% く実施例 9〉

顆粒球コロニー刺激因子（G— C S F) の緩衝溶液に D—マンニトールおよび L—ヒスチジンおよびアミノアルキルメタァクリレ一トコポリマー（オイドラギット E 1 0 0) の緩衝溶液を加え、 p H = 4. 0に調整した後噴霧乾燥し、以下の粉末処方を得た。

G- C S F 1 0. 0 w/w%

オイドラギット E 1 0 0 5. 0W/W%

L—ヒスチジン 2. 0 W/W%

D—マンニトール 7 8. 8W/W%

緩衝成分

1 0 0. 0W/W% く実施例 1 0〉

顆粒球コロニー刺激因子（G— C S F) の緩衝溶液に D—マンニトールおよび L—ヒスチジンおよびアミノアルキルメタァクリレートコポリマー（オイドラギット E 1 0 0) の緩衝溶液を加え、 p H = 4. 0に調整した後噴霧乾燥し、以下の粉末処方を得た。

G-C S F 1 0. ow/w%

オイドラギット E 1 0 0 5. 0 W/W%

L—ヒスチジン 5. 0WZW%

D—マンニトール 7 5. 8 WZW%

緩衝成分

1 0 0. 0 W/W% く比較例 3 >

顆粒球コロニー刺激因子（G— C S F) の緩衝溶液に D—マンニトールおよびァミノアルキルメタァクリレートコポリマ一（オイドラギット E 1 0 0) の緩衝溶液を加え、 p H = 4. 0に調整した後噴霧乾燥し、以下の粉末処方を得た <

G- C S F 1 0. 0 w/w%

オイドラギット E 1 00 n w /wo,

D—マンニトール 80. 8W/W%

緩衝成分

1 00. OW/W%

〈実験例 3〉

噴霧乾燥により調製した実施例 8〜 1 0および比較例 3の粉末中の G— C S F 安定性試験を実施した。安定性試験時の包装形態として、試験粉末をカプセルに充填したものを P TP包装後、乾燥剤と共にアルミピロ一を選択した。また、保存温度および期間は 50°C . 2週間に設定した。粉末中の G— C S F安定性は、逆相 HP LCならびにゲルろ過 HP LCを用いて分析した際の総ピーク面積中の不純物ピーク面積％を用いて評価した。なお、逆相 HPLCならびにゲルろ過 H P LCの分析条件は下記の通りである。

<<逆相 H P L C分析条件 >〉

使用カラム： Ch emc o P a k NUCLEO S I L 300 - 1 0 C 8 4

(4. 6mm I D X 25 c m)

移動相 A : 30 % 1—プロパノール、 0. 1 %トリフルォロ酢酸

移動相 B ： 80 % 1—プロパノール、 0. 1 %トリフルォロ酢酸

グラジェント条件

時間（分）移動相 A 移動相 B

0 90 % 1 0 %

2 90 % 1 0 %

1 3 70 % 30 %

1 5 0 % 1 00%

1 8 0 % 1 00% 20 90 % 1 o%

<<ゲルろ過 H P L C分析条件 >〉

使用カラム： T S K— G E L G 3000 SW (7. 5mm I D X 60 c m) 移動相： l OmM酢酸、 0. 58%塩化ナトリウム、 0. 3%ドデシル硫酸ナトリゥム水溶液（p H = 5. 5) 以上 4粉末の逆相 H P L Cならびにゲルろ過 H P L C分析結果は表 3ならびに表 4の通りである（表中の値は総ピーク面積中の不純物ピーク面積％)。その結果、実施例 8〜 1 0のいずれにおいても、 L—ヒスチジンを含有しない比較例 3 に比べ G—C S Fの安定性が向上していることが判明した。また、 L—ヒスチジンの添加量を増やすに従い、若干安定性試験開始時の不純物は増加するが、 5 0°C · 2週間経過時の不純物増加を抑制する傾向が認められた。表 3 逆相 H P L Cによる分析結果

産業上の利用可能性

本発明により、高分子医薬品およびカチオン性ポリマー（特にアミノアルキルメタァクリレートコポリマーまたはポリビニルァセタールジェチルァミノァセテ —ト）を含む粉末状経粘膜投与製剤において、塩基性アミノ酸を有効量加えることによって、効果的に粘膜から高分子医薬品を吸収させるのみならず当該製剤中の高分子医薬品の保存安定性を有意にかつ実用レベルにまで改善させることが可能になった。配列表フリーテキスト

配列番号 1 一人工配列の説明：天然型ヒト G- CSFの- 1位に Met残基を有するァミノ酸配列。

配列番号 2—配列の説明：天然型ヒト G-CSFのアミノ酸配列。

配列番号 3—人工配列の説明：天然型ヒト G-CSFの- 1位に Met残基を有し、かつ + 1位の Thr残基、 + 3位の Leu残基、 + 4位の Gly残基、 + 5位の Pro残基、および +17位の Cys残基に換えて、それぞれ Al a残基、 Thr残基、 Tyr残基、 Arg残基、および Ser残基を有するアミノ酸配列。本明細書中で引用した全ての刊行物の全体を参考として本明細書に組み入れるものとする。また、本発明においては、添付の請求の範囲に記載される発明の範囲を逸脱しない限り種々の変更および変形が可能であるが、本発明はこのような均等の範囲内の変更および変形も包含するものとする。

Claims

請求の範囲

1 . 高分子医薬品およびカチオン性ポリマーを含有する粉末状経粘膜投与製剤において、少なくとも 1種の塩基性アミノ酸または医薬上許容可能なその塩を含有することを特徴とする、改善された保存安定性を有する粉末状経粘膜投与製剤。

2 . 塩基性アミノ酸またはその塩が、光学活性もしくは非光学活性のヒスチジン、アルギニンまたはリジン、あるいはそれらの医薬上許容可能な塩、あるいはそれらの誘導体である請求項 1に記載の製剤。

3 . 塩基性アミノ酸またはその塩が、光学活性もしくは非光学活性のヒスチジン、アルギニン、またはそれらの医薬上許容可能な塩である請求項 1に記載の製剤。

4 . 塩基性アミノ酸またはその塩が、光学活性もしくは非光学活性のヒスチジンまたはその医薬上許容可能な塩である請求項 1に記載の製剤。

5 . 50°Cで 2週間保存時の安定性試験において、高分子医薬品の含有率（HPLC 分析）が試験開始時の値を 100%としたとき 93%以上、好ましくは 96%以上である請求項 1〜 4のいずれかに記載の製剤。

6 . カチオン性ポリマ一が、アミノアルキルメタァクリレートコポリマー、ポリビニルァセタールジェチルアミノアセテート、およびポリ一 L—アルギニンからなる群から選択される請求項 1に記載の製剤。

7 . さらに増粘性ポリマーを含有する請求項 1〜 6のいずれかに記載の製剤。

8 . 増粘性ポリマーが、ヒドロキシプロピルメチルセルロースである請求項 7 に記載の製剤。

9 . 高分子医薬品が、生理活性を有するペプチドまたはタンパク質である請求項 1に記載の製剤。

1 0 . 生理活性を有するペプチドまたはタンパク質が、顆粒球コロニー刺激因子である請求項 9に記載の製剤。

1 1 . 経鼻投与用製剤である請求項 1〜10のいずれかに記載の製剤。

1 2 . 賦形剤をさらに含む請求項 1〜1 1のいずれかに記載の製剤。