MXPA02009485A - Preparacion en polvo para administracion a traves de la mucosa, que comprende un farmaco de alto peso molecular y que muestra una estabilidad mejorada en almacenamiento. - Google Patents

Abstract

Una preparacion en polvo para administracion a traves de la mucosa que comprende un farmaco de alto peso molecular, un polimero cationico y, segun lo requerido, un polimero viscoso, que comprende ademas una cantidad efectiva de un aminoacido basico. La preparacion en polvo para administracion a traves de la mucosa tiene una estabilidad mejorada en almacenamiento para el farmaco de alto peso molecular mientras conserva una absorcion me j orada del farmaco a traves de la mucosa.

Description

PREPARACIÓN EN POLVO PARA ADMINISTRACIÓN A TRAVÉS DE LA MUCOSA, QUE COMPRENDE UN FÁRMACO DE ALTO PESO MOLECULAR Y QUE MUESTRA UNA ESTABILIDAD MEJORADA EN ALMACENAMIENTO CAMPO TÉ?NICO La presente invención se refiere a una preparación en polvo para administración a través de (la mucosa, que comprende un fármaco de alto peso molecular y un polimero catiónico, la preparación comprende además un aminoácido básico y presenta µna estabilidad mej orada en almacenamiento . En particular, la presente invención se refiere a una preparación de este tipo para su administración a través de la mucosa nasal . ANTECEDENTES DE ' LA TÉCNICA Hoy en dia, fármacos de alto peso molecular son administrados a través de una inyección ' intravenosa o subcutánea para I tratamiento . La . administración j de fármacos de alto peso ! molecular por inyección es difícil de efectuar por parte de los pacientes mismos y se > acompaña de dolor. Por consiguiente, se desea emplear lá administración a través de la mucosa como , un método alternativo y más fácil de administración. Ejemplos de administración a través de la mucosa incluyen la administración a través de la mucosa del tracto digestivo, por ejemplo estómago, intestino delgado, intestino grueso, y recto, así como de la nariz, ojos, boca, pulmón y vagina. La administración a través de la mucosa nasal, entre otras, está recibiendo mayor atención como método relativamente fácil de administración que permite una absorción rápida del fármaco y efectos confiables. El solicitante ha encontrado que la dificultad asociada con la absorción de un, fármaco de alto peso molecular, contenido en una preparación1 en polvo para administración a través de la mucosa y absorbida a través de la mucosa puede ser reducida significativamente proporcionando el fármaco de alto peso molecular con un polímero catiónico (y adicionalmente un polímero viscoso, en caso necesario) (solicitud internacional número: WO 00/02574,). El solicitante ha hecho desde aquel entonces un esfuerzo continuo para encontrar maneras de mejorar la estabilidad en almacenamiento de l'a preparación. Es por consiguiente un objeto de la presente invención ofrecer una preparación en polvo para administración a través I de la mucosa que comprende un fármaco de alto peso molecular y un polímero catiónico en donde la estabilidad en almacenamiento del fármaco de alto peso molecular es mejorada 1 mientras se conserva la mejor absorción a través de la mucosa 1 del fármaco de alto, peso molecular. COMPENDIO DE LA INVENCIÓN La presente invención se basa en el hecho que los inventores se dieron cuenta que, en una preparación en polvo para administración a través de la mucosa que comprende un fármaco de alto peso molecular y un polímero catiónico con una absorción mejorada a través de la mucosa, de conformidad con lo descrito en la Solicitud Internacional Número. WO 00/02574, la estabilidad en almacenamiento del fármaco puede ser mejorada de manera significativa e inesperada mediante la adición de una cantidad efectiva de aminoácido básico. La presente invención puede resumirse de la siguiente manera. La presente invención, en sus varias modalidades, ofrece una preparación en polvo para administración transmucosal, que comprende uno o varios fármacos de alto peso molecular y unp o varios polímeros catiónicos con una estabilidad mejorada en almace 1namiento, en donde la preparación comprende además por¡ lo menos un tipo de aminoácido básico o su sal farmacéuticamente aceptable. En ur(a primera modalidad de la presente invención, el i I aminoácido básico o su sal es histidina, arginina, lisina; I I una sal farmacéuticamente aceptable de la misma, ópticamente activa o inactiva, o bien un derivado de la misma. El aminoácido básico o su sal es de preferencia histidina,; argini'na o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma ópticamente activa o inactiva, y muy especialmente se trata de histidina o una sal farmacéuticamente activa de la misma ópticamente activa o inactiva. Como se emplea aquí, la expresión "ópticamente activa" se refiere a las propiedades de una estructura quiral . Una sustancia ópticamente activa tiene normalmente una configuración tridimensional D ó L ó S, ó R. Por otra parte, la expresión "ópticamente inactiva" se refiere a las propiedades de una estructura aquiral. En una segunda modalidad de la presente invención, la estabilidad mejorada en almacenamiento se caracteriza por un, contenido (de conformidad con análisis HPLC) del fármaco de alto peso molecular de no menos de 93%, de preferencia no menos que 96%, contra el valor de 100% en el punto inicial en una prueba de estabilidad en almacenamiento a una temperatura de 50° C durante 2 semanas. En una tercera modalidad de la presente ,' invención, el polímero catiónico se selecciona dentro del grupo que I consiste de copolímero de metacrilato de, aminoalquilo, dietiloaminoacetato de polvinilacetal, y poli-L-arginina. De i preferencia el polímero catiónico es ya sea un copolímero de metracrilato de aminoalquilo o dietilaminoacetato de polivinilacetal . Con mayor preferencia, el polímero catiónico es un copolímero de metacrilato de aminoalquilo . Como se emplea aquí, la expresión "polímero catiónico" se refiere a un polímero que tiene una estructura en donde una carga catiónica está presente en una unidad fundamental que constituye una estructura repetitiva, o bien en donde una carga catiónica se crea en la unidad fundamental cuando el polímero está disuelto . En una cuarta modalidad de la presente invención, la preparación comprende además uno o varios polímeros viscosos. El polímero viscoso se refiere a un polímero que presenta una viscosidad cuando está disuelto o hinchado. La hidroxipropilmetilcelulosa es un ejemplo de un polímero de este tipo. , En una quinta modalidad de la presente invención, el fármaco de alto peso moleculares un péptido fisiológicamente activo o una proteína (incluyendo anticuerpo, vacuna y antígeno) .

Ejemplos específicos incluyen, sin limitarse a .ellos, factor de estimulación de colonias ' de granulocit?s, insulina, eritropeyetina, hormona de crecimiento, y antígeno de la 1 influenza. ! I En una sexta modalidad e ,1a presente invención, la l preparación es adaptada para administración transnasal. En una séptima modalidad de ' la presente invención, la preparación comprende además umo o varios excipientes . El excipiente se refiere a una sustancia que se agrega a la fórmula con el objeto de proporcionar dureza, apropiada y forma adecuada durante la fabrica í ción de los fárpiacos . Esta especificación incluye una parte o la totalidad de los contenidos de conformidad con lo divulgado en la especificación de Solicitud de Patente Japonesa número 2000-99213, que es un documento de prioridad de, la presente invención . DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN La presente invención se describirá a continuación con detalles. La preparación en polvo para administración a través de la mucosa de conformidad con la presente invención puede obtenerse mediante la adición aun fármaco de alto peso molecular de un .excipiente, un polímero catiónico y un aminoácido básico o su sal, y además un polímero viscoso según lo necesario, y además un aditivo apropiado según lo necesario, y después liofilizació? o secado por rociado de la mezcla. ' Como se emplea' aquí, el fármaco de alto peso molecular se refiere a un péptido bioactivo y proteína (incluyendo anticuerpos, vacunas, y antígenos) . Ejemplos del • fármaco de alto peso molecular incluyen, sin limitarse a ellos: calcitonina, insulina, proinsulina, vasopresina, ' i desmopresina, hormona luteinizante, hormona de liberación de hormona luteinizante, somatostatina, prolactina, glucagón, gastrina, secreti?a, calicreína, ? uroquinasa, neurotensina, encefalina, quiotorfina, endorfina, endotelina, angiotensina, transferina, péptido natriurétíco atrial, factor de crecimiento epidérmico, hormona • de crecimiento, hormona paratiroidea, interferon, interleucina, factor de necrosis tumoral, factor de inhibición de , células leucémicas, factor de crecimiento de células madres sanguíneas, eritropoyetina, factor de estimulación de colonias de granulocitos (G-CSF) , factor de estimulación de colonias de granulocitos-macrófagos, factor de estimulación de colonias de macrófagos, trombopoyetina, dismutato de superóxido, activador de plasminógeno tisular, antitrombina, factor de coagulación de la sangre, anticuerpo anti-IgE, anticuerpo ánti-IgA, anticuerpo anti-tumor, anticuerpo de factor de .necrosis tumoral/ anticuerpo anti-interl encina, anticuerpo neutralizador del VIH, anticuerpo antiplaquetario, anticuerpo de v¿rus anti-hepat^tis, vacuna contra la hepatitis,, vacuna contra la influenza ' (antígeno de influenza) , vacuna, contra la tos ferina, vacuna contra la difteria, vacuna contra el tétanos, así como péptido o proteína, por ejemplo polen de cedr y polen de ambrosía que pueden1 funcionar como antígeno, un conjugado de un hapteno del mismo, y una mezcla de los i ' : mismos con un adyuvante. Puede fácilmente estimarse! que aún • i ' con ¡fármacos con un peso molecular menor que los jej emplos mencionados arriba de fármacos de alto peso molecular, la presente invención pµede incrementar ' su absorción a través de las membranas mucosas, especialmente mucosa nasal, y por consiguiente la presente invención se considera útil también en aplicaciones con un fármaco de bajo peso molecular'. Ejemplos de G-CSF que es uno de los fármacos de alto peso molecular que puede, utilizarse en la presente invención, incluyen una proteína con una actividad G-CSF de ser humano representada por secuencias de aminoácidos de SEQ ID NOS : 1- 3, o bien una glicoproteína en donde una o varias cadenas de azucares están unidas a la proteína. El G-CSF de conformidad con la presente invención incluye además derivados de G-CSF con actividad G-CSF en donde una parte de las secuencias de aminoácidos antes mencionadas ha sido podificada (es decir, por sustitución, deleción, inserción ,y/o adición de uno o varios residuos de aminoácidos) . Estos G-CSFs pueden ser extraídos, separados y purificados de materiales que ocurren naturalmente, o bien pueden ser ¡ producidos por un transformante obtenido, mediante la transformación de una 1 célula huésped por manipulación genética y después aislados y purificados. Ejemplos de la célula huésped incluye Escherichia coli y células de mamíferos (por ejemplo células 1 C127 y CHO) . Los métodos detallado^ de fabricación se propor?ionan, por ejemplo, en la solicitud de patente Japonesa abierta (Kohyo) No. 63-500636,, solicitud de patente Japonesa abierta (Kokai) Nos. 62-236497, 62-236488 y 63-267292, y estos métodos conocidos pueden ser empleados en la presente invención. El contenido del fármaco de alto peso molecular en la preparación en polvo para administratión a través de la mucosa de conformidad con la presente invención se encuentra normalmente dentro de un rango de 0.Ü1% peso/peso a 90% peso/peso, de preferencia de 0.1% peso/peso a 50% peso/peso. Como se emplea aquí, la expresión % peso/peso se refiere a la proporción (porcentaje en peso) entre el componente aditivo y el peso entero de la preparación. Como se emplea aquí, el Ipolímero catiónico se refiere a un polímero con una estructura tal que una carga de cationes esté presente en una unidad fundamental que constituye una estructura repetitiva o b,ien de tal manera que una carga de catión sea creada en la unidad fundamental cuando se disuelve el polímero . El polímero catiónico utilizado en la presente invención no se limita a, ningún polímero particular en la medida e que puede proporcionar el efecto de facilitar la absorción del fármaco de alto peso molecular a través de la membrana mucosa. Ejemplos concretos incluyen copolímero de metacrilato de amir^oalquilo, dietilaminoacetato de polivinilacetal y poli-L-aJrginina. Copolímeros de metacrilato de aminoalquilo están disponibles por ejemplo en Rohm Pharma bajo las ' marcas comerciales Eudragit E y Eudragit RS . Eudragit E es un copolímero de metacrilato de metilo, metacrilato de butilo, y metacrilato de dimetilaminoetilo, con un peso molecular promedio de 150, 000. El dietilaminoacetato de polivinilacetal está disponible por ejemplo en Sankyo (K.K. ) ' bajo la marca comercial AEA. Se trata de un copolímero en donde un compuesto acetal obtenido por deshidratación de alcohol polivinílico y acetaldehído, y ácido dietila inoacético están unidos a través de una parte de grupos, hidroxilo del ' compuesto acetal para formar un enlace éster, con un peso molecular promedio de 65, 000. Una poli-L-arginina es un copolímero de L-arginina y puede tener un peso molecular promedio dentro de un rango de 1, 000 a 1,000,000, ,de preferencia de 12,100 a 92,000, y con mayor preferencia1 92,000. La poli-L-arginina está disponible en Sigma Chemipal Co. El contenido del polímero catiónico en la preparación en polvo para administración a través de la mucosa de conformidad con la presente invención se encuentra normalmente, dentro de un rango de 0.1 a 90% peso/peso, de preferencia.de 1 a 50% peso/peso. Como se emplea aquí, el aminoácido básico es de conformidad con lo definido arriba. Ejemplos concretos incluyen histidina L ó D, S ó R y DL, arginina y lisina, una sal farmacéutic?nente aceptable de los mismos, y un derivado de los mismos.i Ejemplos de la sal farmacéuticamente aceptable I incluyen sales con ácidos inorgánicos tales como ácido clorhídrico/ ácido sulfúrico y ácido fosfórico y sales con ácidos orgáhicos tales como ácido acético, ácido butírico, ácido succí'nico, ácido tartárico, ácido cítrico, y ácido málico . Ejemplos del derivado incluyen metilhistidina, histidina metiléster, acetil histidina, acetil lisina, hidroxilisiria, y acetilisina metil éster. El contenido del aminoácido básico o su sal en la preparación en polvo para administración transmucosal de conformidad con la presente invención se encuentra normalmente dentro de un rango de 0.1 a 10% peso/peso, de preferencia de 0.1 a 5% peso/peso . Otros rangos pueden utilizarse en la medida en que pueden asegurar la mejora de la estabilidad en almacenamiento del fármaco de alto peso molecular. Como se emplea aquí, el polímero viscoso se refiere a un polímero que presenta viscosidad cuando está disuelto o hinchado . El polímero viscoso utilizado en la presente invención puede ser de cualquier tipo en la medida en que puede incrementar, cuando se utilice en combinación con el , polímero catiónico, la absorción del fármaco de alto peso molecular en comparación en el caso en el cual el ' polímero catiónico es utilizado solo . Ej emplos específicos de tal polímero de este tipo incluyen hidroxipropil metilcelulosa, hidroxipropil celulosa, polímero de carboxiviniio, 'polvo de i ¡ agar, y polvo de goma arábiga. El contenido del polímero viscoso en la preparación en polvo para administración a través de la mucosa de conformidad con la presente invención se encuentra normalmente dentro de un rango de 0.1 a 90% peso/peso, de preferencia de 1 a 50% peso/peso. , El excipiente utilizado en la presente invención está representado por sacáridos, ejemplos de los cuales incluyen xilitol, fructosa, sorbitol, lactosa, inositol, sucrosa, y manitol. Otros ejemplos de los excipientes incluyen almidones, minerales, ácidos orgánicos y aminoácidos. Los almidones incluyen almidón de maíz, almidón de trigo, y almidón de papa. Los minerales incluyen fosfato de calcio, hidrogenfosfato de calcio, hidrogenfosfato disódico, dihidrogenfosfato de sodio, carbonato de magnesio, cloruro de sodio y sulfato de calcio. Los ácidos orgánicos incluyen ácido succínico, ácido tartárico, ácido cítrico^ ácido fumárico, ácido málico, ácido glucónico, ácido glucurónico, y sal de los mismos. Los aminoácidos incluyen D- y L-metionina, L~fenilalanina y ácido L-glutámico. El contenido del excipiente en la preparación en po,lvo para administración a través de la mucosa de conformidad con la presente invención se encuentra normalmente dentro de un rango de 1 a 90% peso/peso, de preferencia de 5 a 80% peso/peso. En la presente invención, un aditivo, \ por ejemplo lubricante puede utilizarse según lo necesario. 'Ejemplos de lubricante i incluyen estearato de magnesio, ácido' esteárico y talco. El l ! contenido del aditivo en la preparación en polvo para administración transmucosal de conformidad con la presente invención es normalmente dentro de un rango de 0.01 a 90% peso/peso, de preferencia de 0.05 a 50% peso/peso. La preparación en polvo para administración a través de la mucosa de conformidad con la presente invención puede prepararse mediante la mezcla, por ejemplo, de una solución (amortiguador) que contiene un fármaco de alto peso mqlecular con una solución (amortiguador) en donde un polímero catiónico, un aminoácido básico o su sal, un excipiente, por ejemplo sucrosa y manitol y, si se requiere, un polímero viscoso, han sido disueltos de antemano. La mezcla es secada por rociado después con el objeto de obtener un polvo. Una cantidad necesaria del polvo obtenido puede ser pesada y llenada en una cápsula para obtener una, preparación en polvo. El polvo de la preparación fabricado de esta manera tiene normalmente un tamaño de partículas (diámetro) dentro de un rango de 0.1 a 500 µm, de preferencia de 5 a 100 µm. 1 La encapsulación hace fácil el manejo, de la preparación en polvo para administración a través de la mucosa. Ejemplos de materiales para la cápsula incluyen gelatina, hidroxipropil metilcelulosa, metilcelúlosa, y almidón. A estos materiales, se puede agregar gliqerijna, sorbitol, carragenano, poliétilen glicol, goma arábiga o 'similar con el objeto de incrementar i la plasticidad. ' ! Como aditivo adicional, ise puede agregar uno o varios de los siguientes: cloruro de potasio, sucrosa, agente colorante y óxido de titanio. La preparación en polvo para administración transmucosal de conformidad con la presente invención puede ser administrada a la mucosa del paciente cuando se requiere o bien a intervalos apropiados de administración. Ejemplos de mucosa incluyen las mucosas de la nariz, ojo, foca, pulmón, vagina y tracto digestivo, por ejemplo estómago, intestino delgado, intestino grueso y recto. Cuando la preparación de conformidad con la presente invención se administra a través de la nariz, por ejemplo, una cápsula que contiene • la preparación en polvo puede ser colocada en un aparato de minirociado (pulverizador) . Se corta un orifico en , la cápsula, la boquilla del pulverizador es insertada en una o ambas narices y la preparación en polvo puede ser rociada, en la cavidad nasal oprimiendo la bola de caucho mientras se efectúa inhalación a través de la nariz . Una preparación que contiene ,un factor de estimulación de colonias , de granulocitos como ingrediente activo puede ser administrada a un paciente una a cuatro veces al día, y en la cantidad , de ingredient activo de 1 a 500 µg/kg/día y de preferencia dé 5 I i a 100 µg/kg/día. Una preparación que contiene insulina cfmo ingrediente activo puede ser administrada a un paciente , de ' ! una a cuatro veces al día, y en la cantidad del ingrediente activo de ¡¡ 1 a 100 U/kgI/día de preferencia de 0.5 a ,20 U/kg/día. Una preparación que comprende eritropoyetina co o ingrediente activo puede ser administrada a un paciente [de uno a cuatro veces, al día,, y en la cantidad del ingrediente activo de 50 a 50,000 UÍ/kg/día, de preferencia de 200' a 8,000 Úl/ g/día. Una preparación que comprende hormona de crecimiento como ingrediente activo puede ser administrada a un paciente de uno a cuatjro veces al día, y en la cantidad del ingrediente activo de 0.1 a 50 Ul/kg/día, de preferencia de 0.4 a 15 Ul/kg/día. Una preparación que. comprende antígéno de influenza como ingrediente activo puede ser administrada a un sujeto de uno a cuatro veces al día a intervalos de 2 a 6 semanas, y en la cantidad de ingrediente activo de 0.5 a 200 CCA/kg/día, de preferencia de 2 a 40 CCA/kg/día . Como se describió arriba, la presente invención se caracteriza porque, en la preparación ,en polvo para 1 administración transmucosal que comprende un I fármaco de alto ! peso molecular y un polímero catiónico con una absorción mucosal mejorada, la estabilidad en almacenamiento de fármaco de alto peso' molecular es mejorada a un nivel práctico. En ' cuando a este aspecto, la presente invención es una mejora en i comparación con la invención divulgada en la solicitud Internacional del solicitante WO 00/02574. Por consiguiente, 1 los varios ejemplos específicos divulgados n l solicitud I i internacional mencionada arriba pueden también aplicarse a la ¡ presente invención y por consiguiente todos, los contenidos • divulgados ahí se incorporan en la presente especificación. j Ejemplos Mientras la invención se describirá a través de ejemplos específicos, se entenderá que el alcance de la invención no se limita a estos ejemplos, i El aminoácido básico, polímero catiónico, sucrosa, D-manitol, hidroxipropil, metilcelulosa, hialuronato sódico, y los componentes de las soluciones amortiguadoras (componentes de amortiguación) que fueron utilizados en los siguientes ejemplos y en los ejemplos comparativos son los siguientes : Aminoácido básico , Hidrocloruro de L-arginina (Aj inomoto) L-histidina (Ajinomoto) , Hidrocloruro de L-lisina (Ajinomoto) Polímero catiónico , Copolímero de metacrilato de aminoalquilo E (Rohm Pharma, nombre comercial: Eudragit El00) D-manitol (Kao, Nikkyoku Mannitol Kao) ' Hidroxipropilmetilcelulosa (Shin-Etsu Chemical, nombre commercial: Metolose 60SII4000) Componentes del amortiguador Ácido cítrico '(Toyo Seiyaku Kasei), ácido fosfórico (Kokusan Kagaku) ¡ El factor de estimulación de cplonias de granulocitos (G-CSF) I utilizado como fármaco de jalto peso molecular en los siguientes ejemplos es un polipéptido con la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ÍD NO.: 1 (véase Solicitud de Patente Japonesa Abierta (Koh'yo) No. 63-500636), producido ! por Escherichia coli modificado genéticamente. El G-CSF • obtenido de esta forma fue concentrado y después la solución de amortiguador fue sustituida, obteniéndose de esta forma una solución de amortiguador de G-CSF. Ejemplo 1 Una solución de amortiguador de D-manitol, hidrocloruro de L- arginina, hidroxipropil metilcelulosa (HPMC) y copolímero de metacrilato de aminoalquilo (Eudragit ElOO) fue agregada a una solución de amortiguador de factor de estimulación de colonias de granulocitos (G-CSF) . Después de ajustar el pH a 5.0, la mezcla fue secada por rociado con el objeto de obtener una preparación en polvo de la siguiente formula: G-CSF 2.5% peso/peso Eudragit ElOO 7.5% peso/peso HPMC 10.0% peso/peso Hidrocloruro, de L-arginina 5.0% peso/peso D-manitol 71.9% peso/peso Componentes de amortiguador Cantidad adecuada Total ' 100.0% peso/peso Ejemplo 2 ¡ Una solución de amortiguador de D-manitol, hidrocloruro de L- I lisina, hidroxipropil metilcelulosa (HPMC) y copolímero de metacrilato de aminoalquilo (Eudragit ElOO) fue agregada a una solución de ' amortiguador de factor de estimulación de colonias de granulocitos (G-CSF) . Después de ajustar el pH a 5.0, la mezcla fue secada por rociado con el objeto de obtener una preparación en polvo con la siguiente formula: G-CSF ' 2.5% peso/peso Eudragit E100 7.5% peso/peso HPMC 10.0% peso/peso Hidrocloruro' de L-lisina 5.0% peso/peso D-manitol 71.9% peso/peso i Componentes de amortiguador Cantidad adecuada Total 100.0% peso/peso Ejemplo 3 Una solución de amortiguador de D-manitol, L-histidina, hidroxipropil metilcelulosa (HPMC) y copolímero . de metacrilato de aminoalquilo (Eudragit ElOO) fue agregada a una solución de amortiguador de factor de estimulación de colonias de granulocitos (G-CSF) . Después de ajustar el pH a 5.0, la mezcla fue secada por rociado con el objeto de obt Iener una preparación en polvo con la siguiente formula:I G-CSF 2.5% peso/peso ; • Eudragit ElOO 7.5% peso/peso I HPMC 10.0% peso/peso I | L-histidina 5.0% peso/peso I D-manitol 70.8% peso/peso > Componentes de amortiguador Cantidad adecuada ' ' Total 100.0% peso/peso Ejemplo Comparativo 1 Una solución de amortiguador de D-manitol, hidroxipropilmetilcelulosa (HPMC) y copolímero de metacrilato de aminoalquilo (Eudragit ElOO) fue agregada a , i una solución de amortiguador de factor de estimulación de colonias de granulocitos (G-CSF) . Después de ajustar el pH a 5.0, la mezcla fue secada por rociado con el objetó de obtener una preparación en polvo con la siguiente formula: G-CSF 2.5% peso/peso Eudragit ElOO 7.5% peso/peso HPMC 10.0% peso/peso D-manitol 75.7% peso/peso Componentes de amortiguador Cantidad adecuada Total 100. 0% peso/peso Experimento 1 Pruebas fueron efectuadas para examinar la , estabilidad de , G-CSF en los polvos secados por rociado de conformidad con los I Ejemplos 1-3 y Ejemplo Comparativo 1. Como modo de empaquetado para las pruebas de estabilida ¡ d, un empaquetado de tipo almohada elaborado de aluminio y que contenía un agente secante fue empleado, el empaquetado de tipo almohada i alojando cápsulas empacadas en PTP llenadas con los polvos a probar. La temperatura de almacenamiento ¡fue de 50°C y el periodo de almacenamiento fue de 2 semanas. La estabilidad de G-CSF en el polvo fue evaluada con base e^i el porcentaje de las áreas de pico de G-CSF en el área de pico total al momento del análisis a través de HPLC de intercambio de iones catiónicos. Las condiciones de análisis para el HPLC de intercambio de iones catiónicos fueron las siguientes. Condiciones de Análisis por HPLC Columna utilizada: Toso TSK gel SP-NPR Fase Móvil A: una solución de ácido acético 20 mM (pH=5.4) Fase Móvil B: una solución de ácido acético 20 mM y cloruro de sodio 100 mM (pH= 5.4) Condiciones de gradiente Tiempo (minutos) Fase Móvil A Fase Móvil B 0 100% 0% 2 100% 0% 28 35% 65% 31 0% 100% 35 0% 100% 37 100% 0% 40 100% 0% La Tabla I muestra los resultados del análisis por HPLC de intercambio de iones catiónicos de los siete tipos de polvos I mencionados arriba (los valores en la tabla son porcentajes de área de tipo de G-CSF en el área de pico total] Los resultados indicají que cada uno de los Ejemplo 1-3 tiene una mejor estabilidad para G-CSF que el Ejemplo Comparativo 1. Entre estos, el h^idrocloruro de L-arginina (Ejemplo 1) y la L-histidina (Ejemplo 3) tienen un efecto de estabilización de G-CSF sobresaliente . Tabla 1. Resultados del análisis de estabilidad en almacenamiento de ¡G-CSF Preparación Ejemplo Ejemplo , Ejemplo Ejemplo en polvo 1 2 3 comparativo En el punto 98.6% 98.4% ' 98.4% 98.8% Inicial Después de 93.5% 91.5% 94.9% 85.9% , 2 semanas a una , temperatura .de ,50° C Ejemplo 4 Una solución de amortiguador de D-manitol, L-histidina, hidroxipropilmetilcelulosa (HPMC) y copolímero de metacrilato de .aminoalquilo (Eúdragit ElOO) fue agregada a una solución ! de ' amortiguador de factor de estimulación de colonias de i > granulocitos (G-CSF) . Después de ajustar el pH a 4.0, la mezcla fue secada por rociado con- el objeto de obtener una preparación en polvo con la siguiente formula: ¡ ' G-CSF ; 2.5% peso/peso I I ! ¡ Eudragit ElOO 5.0% peso/peso i HPMC 5.0% peso/peso ¡ L-histidina 0.5% peso/peso 1 D-manitpl 85.3% peso/peso Componentes de amortiguador Cantidad adecuada. ! Total . 100.0% peso/peso ' E emplo 5 i i Una solución de ,amortiguador de D-manitol, L-histidina, hidroxipropilmetilcelulosa (HPMC) y copolímero de métacrilato de 'aminoalquilo (Eudragit ElOO) fue agregada a una solución de amortiguador de factor de estimulación de colonias de granulocitos (G-CSF). Después de ajustar el pH a 4.0, la mezcla fue secada por rociado con el objeto de obtener una preparación en polvo con la siguiente formula: G-CSF 2.5% peso/peso Eudragit ElOO 5.0% peso/peso HPMC 5.0% peso/peso L-histidina 1.0% peso/peso D-manitol 84.5% peso/peso ' Componentes de amortiguador Cantidad adecuada Total 100.0% peso/peso Ejemplo 6 Una solución de amortiguador de D-manitol, L-histidina, hidroxipropilmetilcelulosa (HPMC) y ¿opolímero de metacrilato de aminoalquilo (Eudragit ElOO) fue ¡ agregada a una solución i de amortiguador de • factor de estimulación de colonias de granulocitos (G-CSF) . Después de ajustar el pH a 4.0, la mezcla fue secada por rociado con el objeto de obtener una preparación en polvo con la siguiente formula: ! G-CSF 2.5% peso/peso .Eudragit ElOO 5.0% peso/peso HPMC 5.0% peso/peso L-histidina 2.0% peso/peso D-manitol 83.4% peso/peso Componentes de amortiguador Cantidad adecuada Total ' 100.0% peso/peso Ejemplo 7 Una solución de amortiguador de D-manitol, L-histidina, hidroxipropilmetilcelulosa (HPMC) y copolímero de metacrilato de aminoalquilo (Eudragit ElOO) fue agregada a una solución de amortiguador de factor de estimulación de colonias de granulocitos (G-CSF). Después de ajustar el pH a 4.0, la 1 mezcla fue secada por rociado con el obj eto de obtener una preparación en polvo con la siguiente formula : G-CSF 2.5% peso/peso Eudragit ElOO 5.0% peso/peso HPMC 5.0% peso/peso L-histidina 5.0% peso/peso D-manitol 79.7% peso/peso Componentes de amortiguador Cantidad adecuada Total 100.0% peso/peso Ej emplo Comparativo 2 Una solución de ¡ amortiguador de D-manitol, hidroxipropilmetilcelul?sa (HPMC) y copolímero de metacrilato de aminoalquilo (Eudragit ElOO) fue agregada a una solución de amortiguador de factor de estimulación de colonias de granulocitos (G-CSF) . Después de ajustar el pH a 4.0, la mezcla fue secada por rociado con el objeto de obtener una preparación' en polvo con la siguiente formula: G-CSF > 2.5% peso/peso Eudragit ElOO 5.0% peso/peso HPMC 5.0% peso/peso D-manitol 85.5% peso/peso Componentes de amortiguador Cantidad adecuada Total 100.0% peso/peso Experimento 2 Pruebas fueron realizadas para examinar la estabilidad de G- CSF en los polvos secados por rociado de conformidad con los Ejemplos 4-7 y Ejemplo Comparativo 2. Como modo de empaquetado para las pruebas de estabilidad, se utilizó un empaquetado de tipo almohada elaborado de aluminio y que contenía un agente de secado, el empaquetado de tipo almohada alojaba , cápsulas empaquetadas en PTP llenadas con los polvos a probar La temperatura de almacenamiento fue de 50°C y el periodo fue de 2 semanas. La estabilidad de G-CSF en los polvos fue evaluada con base en el porcentaje del área de pico de >G-CSF en el área de pico total al momento del análisis a través de HPLC por intercambio de iones catiónicos. La HPLC de intercambio de iones catiónicos fue efectuada, bajo las mismas condiciones que en el experimento 1. La tabla '2 muestra los resultados del análisis por HPLC de intercambio de iones catiónicos de los cinco tipos de polvos mencionados arriba (los valores en la Tabla son los porcentajes del área de pico de G-CSF en el área de pico total) . Los resultados indican que cada uno de los ejemplos 4-7 tiene una estabilidad de G-CSF mejorada en comparación con el ejemplo comparativo, que no contiene L-histidina. Los resultados indican también que la estabilidad de G-CSF tiende a incrementarse con una cantidad creciente de L-histidina agregada. Tabla 2. Resultados del análisis de estabilidad de almacenamiento de G-CSF Preparación Ejemplo Ejemplo Ejemplo Ejemplp Ejemplo de polvo 4 5 6 Compara tivo 2 En el punto 97.2% 96.8% 96.9% 96.5% 95.6% Inicial Después de 2 91.8% 92.7% 93.1% 93 .6Í 87.3% Semanas a una ! Temperatura ¡ de 50°C i Ejemplo 8 ¡ Una solución de amortiguador de D-manitol, L-histidina, y copolímero de metacrilato de aminoalquilo {Eudragit ElOO) fue I agregada a una solución de amortiguador de ¡factor de estimulación de colonias de granulocitos (G-CSF) . Después de I ajustar el pH a 4.0, la mezcla fue secada por rociado con el objeto de obtener una preparación en polvo con la siguiente fórmula: G-CSF 10.0% Peso/Peso Eudragit ElOO 5.0% Peso/Peso L-histidina 1.0% Peso/Peso D-manitol 79.8% Peso/Peso Componentes de Amortiguador Cantidad adecuada Total , 100.0% Peso/Peso Ejemplo 9 Una solución de amortiguador de D-manitol, L-histidina, y 1 1 copolímero de metacrilato de aminoalquilo (Eudragit ElOO) . Fue agregada a una solución de amortiguador del 'factor de estimulación de colonias de granulocitos (G-CSF) . Después de ajustar el pH a 4.0, la mezcla fue secada por rociado con el objeto de obtener una preparación en polvo con la siguiente 1 fórmula: i G-CSF ! 10.0% Peso/Peso Eudragit ElOO ¡ 5.0% Peso/Peso L-histidina 2.0% Peso/Peso D-manitol 78.8% Peso/Peso Componentes de Amortiguador Cantidad adecuada Total 100.0% Peso/Éeso Ejemplo 10 Una solución de amortiguador de D- manitol, L-histidina, y I copolímero de metacrilato de aminoalquilo (Eudragit ElOO) .

Fue agregada a una solución de amortiguador del factor de estimulación de colonias de granulocitos (G-CSF) . Después de ajustar el pH a 4 . 0, la mezcla fue secada por rociado con el objeto de obtener una preparación en polvo con la siguiente fórmula : G-CSF 10.0% Peso/Peso Eudragit ElOO 5.0% Peso/Peso L-histidina , 5.0% Peso/Peso D-manitol 75. 8% Peso/Peso Componentes de Amortiguador Cantidad adecuada Total [ , 100. 0% Peso/Peso Ej emplo Comparativo 3 Una solución de amortiguador de D-manitol, y copolímero de I ' metacrilato de aminoalquilo (Eudragit ElOO ) . Fue agregada a una solución de factor de estimulación de colonias de granulocitos (G-CSF) . Después de aju istar el pH a 4 ' . 0, la i mezcla fue secada por' rociado con el; objeto de obtener una preparación en polvo cfn la siguiente fórmula: G-CSF 10.0% Peso/Peso Eudragit E10Q 5.0% Peso/Peso D-manitol 80.8% Peso/Peso Componentes de Amortiguador ' Cantidad adecuada Total ¡ 100.0% Peso/Peso Experimento 3 Pruebas fueron realizadas para examinar la estabilidad de G- CSF en los polvos secados por rociado de conformidad con los Ej emplos 8-10 y con el Ej emplo Comparativo 3. Como modo de empaquetado para las pruebas de estabilidad, se utilizó un empaquetado de tipo almohada elaborado de aluminio y que contenía un agente secante, el empaquetado de tipo almohada alojaba cápsulas empaquetadas en PTP llenadas con los polvos a probar. La temperatura de prueba fue de 50°C y el periodo de prueba fue de dos semanas. La estabilidad de G-CSF en los polvos fue evaluada con base en el porcentaje del área de pico de impureza en el área de pico total al momento del análisis a través HPLC, de fase reversa y HPLC de filtración en gel. i Las condiciones1 de análisis para HPLC de fase reversa y HPLC de filtración en gel son las siguientes: Condiciones de Análisis, de HPLC de Fase Reversa Columna1 utilizada: ChemcoPak NUCLEOSIL 300-10C8 4' (4.6 1 ' ' mmlD?25 cm) ! • 1 ' : Fase móvil A: 30% de l^propanol, y ácido trifluoroacético al ' I 1 0 . 1% ; j , ' • ; Fase móvil B: 80% de 1-propanol, y ácido trifluoroacético al 0.1%, ¡ . ' ¡ Condiciones de gradiente Tiempo (minutos) Fase móvil A Fase móvil B 20 ¡0 90% 10% ¡2 90% 10% 13 70% 30% 15 0% 100% 18 0% t 100% 20 90% , 10% Condiciones de análisis de HPLC de filtración en gel Columna utilizada : TSK-GEL G3000SW (7.5 mm 1DX60 cm) Fase móvil : Una solución de ácido acético 10 mM, cloruro de sodio al 0.58%, y dodeciisulfato de sodio , al 0.3% (pH=5. 5) Las tablas 3 y 4 muestran los resultados de análisis de HPLC de fase reversa y análisis HPLC de filtración en gel de los cuatro tipos de polvo mencionados arriba ,(los valores en las tablas son porcentajes del área de picoi de impureza en el 1 área de pico total) . Los resultados indican que en todos los Ejemplos 8-10, la estabilidad de G-CSF es mejorada en comparación con el Ej emplo Comparativo 3, , que no contiene L- 1 • ' histidina. Los resultados indican también que el incremento en la cantidad de L-histidina que se agrega tiende a evitar el incremento de la cantidad de impurezas después de dos semanas a una temperatura de 50 C, aún cuando esto eleva de alguna manera la cantidad de impurezas en ¡el punto inicial. Tabla 3. Resultados de análisis por HPLC de fase reversa. Preparación Ejemplo Ejemplo Ejemplo Ejemplo de polvo • 8 9 10 Compara 1 tivo 3 En el pun^o 0.96% 1.08% 1.15% 1.22% Inicial Después de 2 1.85% 1.78% 1.51% 2.49% Semanas a 50°C Tabla 4. Resultados de análisis por PHLC de filtración en gel Preparación Ejemplo Ejemplo Ejemplo 1 Ejemplo de polvo 8 9 10 Compara tivo 3 En el punto 0.93% , 0.97% 1.36% 1.30% Inicial 1 Después de 2 1.52% 1.41% 1.29% 2.34% Semanas a 50°C 1 EXPLOTACIÓN INDUSTRIAL De conformidad con la presente invención, se agrega una cantidad efectiva de aminoácido básico a una preparación de polvo para administración a través de la mucosa, que comprende un fármaco de al£o peso molecular y un polímero catiónico (particularmente, i copolímero de metacrilato de I aminoalquilo o bien dietilair inoacetato de polivinil acetal) . Esto mejora la estabilidad en almacenamiento del fármaco de alto peso molecular en la preparación de manera significativa y hasta un nivel práctico, mientras permite que el fármaco de alto peso molecular pueda • ser absorbido efectivamente a través de la mucosa . ¡ Texto Libre de la Lista de Secuencias SEQ ID NO: 1 Descripción de una secuencia artificial: Una secuencia de aminoácidos que comprende un residuo Met en la posición -1 de G-CSF de ser humano que ocurre naturalmente.

SEQ ID NO: 2 Descripción de una secuencia: una secuencia de aminoácidos de, G-CSF de ser humano que ocurre naturalmente. SEQ ID NO. 3 Descripción de una secuencia artificial: Una secuencia de aminoácidos que comprende un residuo de Met en la posición -1' de G-CSF de ser humano natural, que comprende además los residuos Ala, Thr, Tyr, Arg, y Ser sustituidos por un residuo Thr en la posición +1, un residuo Leu en la posición +3, un residuo Gly en la posición +4, un residuo Pro en la posición +5, y un residuo Cys en la posición +17, ' respectivamente. • Todas las publicaciones, patentes y solicitudes de patente mencionada aquí se incorporan por referencia en su totalidad. i Se entenderá que mientras varios cambios y modificaciones pueden efectuarse sin salirse del espíritu y alcance de la I presente invención de conformidad con lo establecido en las I reivindicaciones adjuntas, tales cambios y modificaciones dentro del rango de equivalencia están incluidos dentro del alcance de la presente invención.

LISTA DE SECUENCIAS <110> Kirin Beer Kabushiki Kaisha . <120> Preparación en polvo para administración a través de 1 la mucosa, que comprende un fármaco de alto peso molecular y que muestra una estabilidad mejorada en almacenamiento <130> PII-1192-PCT <140> PCT/JP01/02555 <141> 2001-03-28 , <150> JP 2000-99213 ¡ <?l51> 2000-03-31 ¡ <jl60> 3 ' ! ' <170> Patentln Ve=>r. 2 .0 '. ' • , • ' I <210> 1 1 . ¡ ; <^211> 175 ! \ <C>212> PRT ' ¡ i <0213> Secuencia Artificial 1 <220> ' <223> Descripción de una secuencia artificial: Una secuencia dé aminoácidos que comprende un residuo Met en la posición -1 con relación a G-CSF de ser humano que ocurre naturalmente . <100> 1 i ' Met Thr Pro Leu Gjy Pro Ala Ser Ser Lou Pro Gln Ser Phe Leu Leu -1 +1 5 10 15 ,Lys Cys Lou Glu Gln Val ?rc Lys Tle Gln Gly Asp Gly Ala Ala Leu ; 20 25 30 Gln Glu Lys Leu Cys Ala Thr Tyr Lys Leu Cys His Pro Glu Glu Leu 35 40 45 Val Leu Leu Gly His Ser Leu Gly lie Pro Trp Ala Pro Lou Ser Ser 50 55 60 Cys Pro Ser Gln Ala Leu Gln Leu Ala Gly Cys Leu Ser Gln Leu His 65 70 75 Ser Gly Leu Phe Leu Tyr Gln Gly Leu Leu Gln Ala Leu Glu Gly He 80 85 90 , 95 Ser Pro Glu Leu Gly Pro Thr Leu ?sp Thr Leu Gln Leu Asp Val Ala 100 105 110 Asp Phe ?la Thr Thr He Trp Gln Gln Met Glu Glu Leu Gly Met Ala 115 120 ' 125 ' .

Pro Ala Leu Gln Pro Thr Gln Gly ?la Met Pro A¡la Phe Ala Ser Ala 130 135 140 ' ' i Phe Gln Arg Arg Ala Gly Gly Val Lou Val ?la Ser His Leu Gln Ser. 145 150 ld5 Phe Leu Glu Val Ser Tyr Arg Val Leu Arg His Lp? Ala Gln Pro ', 160 165 170 <210> 2 I ' <211> 174 ¡ <t212> PRT <213> Homo sapiens <220> ¡ <223> Descripción de una secuencia: una secuencia de aminoácidos de G-CSF de ser humano que ocurre naturalmente. <400> 2 Thr Pro Leu Gly Pro Ala Ser Ser Leu Pro Gln Ser Phe Leu Leu 1 5 10 15 Cys Leu Glu Gln Val Arg Lys He Gln Gly Asp Gly Ala ?la Leu 20 25 30 Glu Lys Leu Cys Ala Thr Tyr Lys Leu Cys His Pro Glu Glu Leu ' 35 40 45 Leu Leu Gly His Ser Leu Gly He Pro frp Ala Pro Leu Ser Ser 50 ¡ 55 60 Pro Ser Gln ?la Leu Gln Leu Ala Gly Cys Leu Ser Gln Leu His 65 , 70 75 Gly Leu Phe Leu Tyr¡Gln Gly Leu Leu Gln ?la Leu Glu Gly He 85 90 95 Pro Glu Leu Gly Pro ¡Thr Leu Asp Thr Leu Gln Leu Asp Val ?la ' ! íoo ! 1 ios po Phe Ala Thr Thr He Trp Glp Gln Met Glu Glu Leu Gly Met Ala ¡ 115 i 120 , 125 ?*a Leu Gln Pro Thr pin Gly ?la Met Pro Ala Phe Ala Ser Ala i ' 130 135 , 140 i Gln Arg Arg Ala Gly Gly Val Leu Val Ala Ser His Leu Gln Ser Leu Glu Val Ser Tyr ?rg Val Leu Arg His Leu Ala Glp Pro 165 170 <210> 3 <211> 175 <212> PRT <213> Secuencia Artificial <220> <223> Descripcion.de una secuencia artificial: Una secuencia de aminoácidos que comprende un residuo Met en la posición -1' y los residuos Ala, Thr, Tyr, Arg, y Ser sustituidos por un residuo Thr en la posición +1, un residuo Leu en la posición1 +3, un residuo Gly en la posición +4, un residuo Pro en la, posición +5, y un residuo Cys en la posición +17, respectivamente, con relación a G-CSF de ser humano que. ocurre naturalmente. , <400> 3 ' Met A¡la Pro -1 1 Lys Ser Leu Gln Glu Lys ! - Val Le.u Leu i 50 60 Cys Pro Ser Gln Ala Leu in Leu Ala Gly Cys i Leu Ser Gln Leu Hi; 65 !70 75 Ser Gly Leu Phe Leu Tyr Gln Gly Leu Leu Gln Ala Leu Glu Gly lie 80 85 90 95 Ser Pro. Glu Leu Gly Pro Thr Leu Asp Thr Leu Gln Leu ?sp Val Ala ¡ 100 105 110 Asp Phe Ala Thr Thr He Trp Gln Gln Met Glu Glu Lou Gly Met ? 115 120 125 Pro Ala Leu Gln Pro Thr Gln Gly ?la Met Pro Ala Phe Ala Ser ? 130 135 140 Phe Gln Arg Arg Ala Gly Gly Val Leu Val Ala Ser His Leu Gln S 145 150 155 Phe Leu Glu Val Ser Tyr ?rg Val Leu Arg His Leu ?la Gln Pro 160 165 J7Q 10 15 io 25

Claims (1)

1. REIVINDICACIONES Una preparación en polvo para administración a través de la mucosa con una estabilidad mejorada en almacenamiento que comprende un fármaco de alto peso molecular y un polímero ' catiónico, la preparación comprende además por lo menos un tipo de aminoácido básico o su sal farmacéuticamente aceptable. La preparación de conformidad con la reivindicación 1, en donde el aminoácido básico o su sal es histidina, arginina, lisina, una sal .farmacéuticamente aceptable de la misma, ópticamente activa o inactiva, o un derivado de la misma. La preparación de conformidad con la reivindicación 1, en donde el aminoácido básico o su sal es histidina, arginina, una sal farmacéuticamente aceptable de la I misma, activa o inactiva. La preparación de conformidad con la reivindicación 1, en donde el aminoácido básióo o su sal es histidina, o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma, activa o inactiva. La preparación de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones 1-4, en donde el contenido de fármaco de alto peso molecular no es menos que 93%, de preferencia no es menos que' 96% según lo analizado por HPLC, en una prueba de estabilidad en almacenamiento a una temperatura de 50°C durante dos semanas, contra el valor de 100% en el punto inicial. 6. La preparación de conformidad con la reivindicación 1, en donde el polímero catiónico se selecciona dentro del grupo que consiste de copolímero de metacrilato de aminoalquilo, dietilaminoacetato de polivinilacetal y poli-L-arginina . 7. La preparación de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones 1-6, que comprende además un polímero viscoso. , 8. La preparación' I de conformidad con la reivindicación 7, en donde ' el polímero viscoso es < hidroxipropilmetilcelulosa. 9. La preparación ¡ de conformidad con la reivindicación 1, en donde el fármaco de alto peso molecular es una 1 proteína o péptido bioactivo . 10. La preparación . de conformidad con la reivindicación 9, ' en donde la prOteína o péptido bioactivo es un factor de estimulación de colonias de granulocitos . I 11. La preparación , de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones 1-10, en donde la preparación es adaptada para administración intranasal. 12. La preparación de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones 1-11, que comprende además un excipiente. '