TWI813986B - 包含半乳寡醣或半乳寡醣和膠原蛋白三肽以改善免疫功能及皮膚狀況的功能性食品組合物和化妝品組合物 - Google Patents

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Abstract

本發明涉及一種用於改善免疫功能或發炎的功能性食品組合物，其含有半乳寡醣作為其活性成分。本發明還涉及一種用於改善皮膚狀況、免疫功能或腸道菌相的功能性食品組合物，其含有半乳寡醣和膠原蛋白三肽作為活性成分。本發明還涉及一種用於改善皮膚狀況的化妝品組合物，其含有半乳寡醣或半乳寡醣和膠原蛋白三肽作為活性成分。本發明的組合物可有效用於上述用途。

Description

包含半乳寡醣或半乳寡醣和膠原蛋白三肽以改善免疫功能及皮膚狀況的功能性食品組合物和化妝品組合物
本發明涉及一種用於改善免疫功能和改善皮膚狀況的食品組合物和化妝品組合物，其含有半乳寡醣或半乳寡醣和膠原蛋白三肽。
皮膚老化是由構成皮膚的細胞其恢復能力下降引起的。皮膚老化可分為隨著老化而發生的內在老化和由長期暴露於紫外線中所引起的外在老化(例如光老化)。內在老化的特點是，細胞數量減少導致細胞外基質蛋白纖維的合成和彈性下降，以及皮膚細胞水分散失導致角質層結構發生變化，從而出現細紋、皮下脂肪層減少、皮膚水分減少等臨床特徵。在外在老化中，因紫外線刺激所產生的活性氧類(reactive oxygen species，ROS)將促進炎性細胞激素的產生，導致形成深厚的皺紋、皮膚乾燥、彈性下降等症狀。已知除非充分去除內在和外在老化中產生的活性氧類，否則其會中斷皮膚的恢復能力而加速皮膚老化。
非專利文獻
Hong et al., Korean J Food Sci Anim Resour. 2015; 35(3): 413-420.
本發明的發明人持續在研究確認半乳寡醣和半乳寡醣與膠原蛋白三肽的混合物對皮膚的各種作用及其作用機制。因此，他們證實了半乳寡醣具有免疫功能改善和抗炎或抗氧化的作用，以及半乳寡醣與膠原蛋白三肽的混合物具有免疫功能改善、抗炎、抗氧化、皺紋或彈性改善、皮膚保濕和光老化抑制的作用，最終完成了本發明。
本發明涉及提供一種用於改善發炎及免疫功能的食品組合物，其含有半乳寡醣作為其活性成分。
本發明亦涉及提供一種含有半乳寡醣和膠原蛋白三肽作為其活性成分的食品組合物。
本發明還涉及提供一種用於改善皮膚狀況的化妝品組合物，其含有半乳寡醣或半乳寡醣和膠原蛋白三肽作為其活性成分。
一方面，本發明提供一種食品組合物可促進免疫功能與改善發炎反應，其含有半乳寡醣作為其活性成分。
於本發明中，「半乳寡醣(galacto-oligosaccharide, GOS)」意指一種包含半乳寡醣之多樣性醣類的混合物。該半乳寡醣可包含：一單醣，如葡萄糖和半乳糖；一雙醣，如半乳糖二糖、乳糖和異乳糖；一三醣，包含半乳糖基乳糖(galactosyllactose)；以及一四醣、更高聚的半乳寡醣。該半乳糖二糖可包含4-β-半乳糖二糖和 6-β-半乳糖二糖。該異乳糖可包含6-半乳糖基-葡萄糖。該半乳糖基乳糖可包含3'-半乳糖基乳糖、4'-半乳糖基乳糖、6'-半乳糖基乳糖、4-β-二半乳糖基乳糖、4-β-三半乳糖基乳糖、4-β-四半乳糖基乳糖等。
具體來說，於本發明中所使用到的半乳寡醣包含：一雙醣，如半乳糖二糖和異乳糖，以及一三醣或包含半乳糖基乳糖之更高聚的半乳糖基乳寡糖。
該半乳寡醣可由基於酸酐的17-25 %之雙醣、26-36 %之三醣、16-30 %之四醣所組成，並且該半乳寡醣不包含基於酸酐之單醣葡萄糖及半乳糖，且之二糖乳糖佔70-80 %。
該半乳寡醣為一不易消化的益生菌且已知可藉由促進消化以及協助腸道內有益菌相的生長來提升免疫力。
於本案中，「膠原蛋白三肽(collagen tripeptide, CTP)」意指由三個胺基酸組成之最小單位的膠原蛋白，不同於一般的膠原蛋白，CTP更容易被腸道所吸收。膠原蛋白三肽具有使如傷口與骨折癒合、韌帶強化等的生物活性，因此被作為食品補充劑。
於本案中，「抗發炎(anti-inflammatory)」或「發炎改善(緩解) (inflammation-improving (alleviating))」功效意指可舒緩發炎的效果。發炎是身體組織對抗有害刺激如組織變性、循環障礙、滲出和組織增生同時發生時之複雜生物反應的一部分。更具體來說，發炎是先天性免疫反應的一部分，而發炎反應是一種非特異性防禦機制，可創造出一種經由受損組織或傷口部位滲入的微生物不利其生存的環境。在發炎反應中，負責初期免疫反應的白血球會聚集並表現細胞激素。因此，細胞激素的胞內表現程度是發炎反應活化的指標。該與發炎反應活化有關的細胞激素包含IL-6、IL-12、 TNF-α等，因此該等細胞激素亦可作為發炎反應相關的免疫標誌物。
IL-6(白血球介素6)為一種細胞激素，其可在許多疾病，如糖尿病、動脈硬化、SLE、多發性骨髓瘤、***癌、***、類風濕性關節炎等，促進發炎反應以及抗自體免疫反應；IL-12為一種白血球介素，可由諸如樹突細胞、巨噬細胞、嗜中性球細胞等細胞於回應抗原性刺激時所自然產生，其為一種在各種發炎疾病中作用的細胞激素；TNF-α(腫瘤壞死因子α)是一種細胞激素，其在全身性發炎反應中發生作用，尤其在包含急性發炎反應的發炎反應中扮演一個重要的角色。
現已習知重複受紫外線刺激會產生活性氧物質 (oxygen species, ROS)，而該物質可通過促進促炎細胞激素的產生與活化多個信號系統使發炎反應增強。
於本案所公開的實施例中，本案中的半乳寡醣在抑制發炎細胞激素如IL-6、IL-12 以及 TNF-α之分泌，具有優越的效果，因此該半乳寡醣可被有效地應用於食品組合物中，用來改善免疫功能與發炎反應。而該半乳寡醣也可用來防止因過度發炎反應產生或因過度免疫反應所造成的延遲恢復，並促進傷口或疾病的恢復。本案中所提到的免疫功能或發炎的改善意指改善皮膚的免疫功能或皮膚的發炎反應，但並不限於此。
與發炎相關的皮膚性疾病包含但不限於異位性皮膚炎、接觸性皮膚炎、脂漏性皮膚炎、乾癬、因輻射、化學品、燒傷等引起的紅斑病、酸燒傷、紫外線燒傷、水皰性皮膚病、苔蘚、過敏性搔癢、酒渣鼻、尋常型天皰瘡、多形性滲出性紅斑、 結節性紅斑、龜頭炎、外陰炎、發炎性脫髮如斑禿、皮膚T細胞淋巴瘤等。與發炎相關的皮膚病症狀包括但不限於紅斑、丘疹、水皰、過度角化、搔癢等。
與發炎相關的疾病並不限於皮膚病，且可包含如口腔炎、血管炎、心內膜炎、骨關節炎、類風濕性關節炎、口腔炎、發炎性腸道疾病等。具體來說，發炎性腸道疾病可選自由潰瘍性結腸炎、克隆氏症、腸***、不確定性結腸炎、細菌性腸炎、病毒性腸炎、阿米巴性結腸炎、出血性直腸潰瘍、缺血性結腸炎和腸結核等的疾病所組成之群組，但並不限於此。更具體來說，該發炎性腸道疾病為潰瘍性結腸炎或克隆氏症。
於本案中亦提供一種食品組合物可用來改善皮膚狀況，其包含半乳寡醣以及膠原蛋白三肽作為活性成分。
因此於本案中，本案提供一種食品組合物可用來滋潤肌膚，其包含半乳寡醣以及膠原蛋白三肽作為活性成分。
維持肌膚滋潤是藉由保持表皮角質層中所擁有的水分來達成，其中該表皮角質層指的是皮膚的最外層，而膠原蛋白則存在於真皮層中。而角質層的含水量是由皮脂膜(即一由表皮所產生的脂質混合物)，以及存在於角質層中的水溶性成分天然保濕因子(natural moisturizing factors, NMFs)所決定。健康表皮的角質層含水量為15-20 %，所以若角質層中的含水量不及10 %或更低，皮膚將變得乾燥、皺紋增多，並伴隨著肌膚光澤與彈性的流失。
於本案中，「膠原蛋白」又可稱為膠原纖維，為構成細胞外基質的主要成分，佔真皮的 85-90 %。膠原蛋白是由纖維母細胞以原膠原形式所產生的蛋白質，新合成的原膠原可經由酶促反應而分泌到皮膚細胞的細胞外間隙，形成具有三重螺旋結構的微纖維，當該微纖維與富含亮氨酸的微小蛋白聚醣結合形成原纖維，此過程便稱作原纖維生成。可經由聚集該已形成之原纖維來形成膠原纖維，從而增加皮膚的強度和彈性。第一型膠原蛋白是皮膚中含量最豐富的膠原蛋白，其主要功能為提供皮膚機械強度、彈性、與結締組織結合、支持細胞粘附以及誘導細胞***和分化等。
於本發明實施例中，本發明的半乳寡醣與膠原蛋白三肽的混合物可提供攝入該混合物後增加其真皮層中膠原蛋白含量的效用。如同本發明所公開的具體實施例，透過監測紫外線照射前後含水量變化的結果，可知經施以GOS 和 CTP 且其GOS/CTP 重量比為 3:1-1:3 的膠原蛋白處理組，相較於NOR組，其膠原蛋白含量大幅改善，且與單獨使用 GOS 或 CTP之組別， 可見在膠原蛋白含量上，GOS 與 CTP具協同作用。
於本發明另一實施例中，本發明的半乳寡醣與膠原蛋白三肽的混合物經攝入後，具有維持高含水量和減少經皮水分散失的作用。此處，「經皮水分散失 (transepidermal water loss, TEWL)」 意指皮膚水分流失。而經皮水分散失數值的增加，意味著皮膚的保濕功能下降，也意味著皮膚的內在屏障功能同時受到破壞。
於本發明實施例中，半乳寡醣與膠原蛋白三肽之重量比可為1-10:1-10。更具體來說，該重量比可為但不限於1-10:1-10，1:1-10， 1-10:1， 1-5:1-5， 1:1-5， 1-5:1,，1-3:1-3，1:1-3， 1-3:1， 1:10， 1:5， 1:3， 1:2， 1:1， 10:1， 5:1， 3:1 或 2:1，但作為本案組合物之活性成分，該半乳寡醣與膠原蛋白三肽的重量比與本發明功能性食品組合物的用途無關。
如同本發明所公開的具體實施例，透過監測紫外線照射前後含水量變化的結果，可知在GOS/CTP之重量比為 1:1的組別中，其含水量具有顯著性地增加，且所有樣品施用組之經皮水分散失情形亦顯著地降低。與單獨使用 GOS 或 CTP 的組別相比，所有使用 GOS/CTP重量比為 3:1-1:3 之處理組都顯示出因GOS與CTP的協同作用而表現出經皮水分散失減少的效果。
存在於皮膚中的透明質酸是由成纖維細胞和角質細胞所產生，其可吸收大量的水分，並藉由與其重量1,000倍之水結合來調節皮膜屏障，且通過與細胞外基質進行水合作用來維持體內組織中的水分平衡。透明質酸不僅存在於真皮層中，亦存在於表皮的細胞間隙中，特別是在棘狀層中，但並不存在於角質層和顆粒層中。
透明質酸酶(Hyaluronidase, HYAL)是一種透明質酸(玻尿酸)的水解酶，為一種皮膚保濕因子。
如同本發明所公開的具體實施例，透過監測透明質酸酶HYAL的基因表現程度，可知在暴露於紫外線的控制組中，HYAL的基因表現程度顯著增加，並在施用組合物的所有組別中降低。特別地，與單獨用GOS或CTP處理的組別相比，含有重量比為3:1、1:1或1:3的GOS和CTP組合物其在降低HYAL表現量展現了協同作用。
因此，本案中的半乳寡醣和膠原三肽的混合物具有非常優異的皮膚保濕效果，故可被有效地應用在食品組合物中以達到皮膚保溼。
另一方面，本發明提供了一種食品組成物可用來舒緩或減輕皮膚的刺激，其中包含半乳寡醣(GOS)和膠原蛋白三肽(CTP)作為活性成分。
於本發明中，「皮膚舒緩」意指賦予皮膚清涼感和減輕皮膚紅斑/熱痛的效果。
於本發明中，「減輕皮膚刺激」意指降低皮膚施加外在或內在之刺激的反應，例如降低因紫外線照射而產生的發炎、紅斑或熱痛的反應。
如同本發明所公開的具體實施例，透過對半乳寡醣及膠原蛋白三肽的施用，可使得因紫外線照射致使發炎之相關免疫標誌細胞激素IL-6、IL-12和TNF-α的表現顯著降低。 特別是GOS/CTP重量比為 1:3之處理組其在紅斑值評估中表現出優異的紅斑減少效果。
因此，本發明中的半乳寡醣與膠原蛋白三肽可被有效地應用在食品組合物的成分中，達到皮膚舒緩或是減輕皮膚刺激之效。
於本發明的另一方面，本發明提供了一種包含以半乳寡醣及膠原蛋白三肽作為活性成分的食品組成物，可用來改善皮膚皺紋。
當皮膚暴露於紫外線的照射下，會促使皮膚組織的物理及化學性質改變，導致上皮細胞增生、色素沉澱、因過多活性氧物質產生致使的DNA損傷、多種酶和蛋白質的異常活化等。該皮膚組織的改變會破壞正常皮膚組織調節外界物質進入皮膚之吸收和水分蒸發的屏蔽功能，且會增加皮膚厚度並破壞真皮層結構，最終導致皮膚皺紋的形成。
於本案中，「改善皺紋」的功效意指防止或抑制皮膚形成皺紋，或是緩解已形成的皺紋。
如同本發明所公開的具體實施例，與控制組相比，施用本發明的半乳寡醣和膠原三肽混合物顯著降低了皺紋形成指數(皺紋面積和最大皺紋深度)。在使用GOS和CTP重量比為1:3-1:1的組合物處理組中，其最大皺紋深度協同性地減少，而在GOS和CTP重量比為1:3-1:3的組合物處理組中，其皺紋面積協同性地減少。因此，本發明的組合物可有效地作為食品組合物來改善皮膚皺紋。
於本發明的另一方面，本發明提供了一種食品組成物可抑制因紫外線照射所產生的皮膚受損，其中該食品組合物含有半乳寡醣(GOS)和膠原蛋白三肽(CTP)作為活性成分。
如同前述所言，紫外線照射皮膚會促使皮膚組織受損，因此長時間讓皮膚組織曝曬於紫外線之下將導致表皮厚度增加2到3倍、表皮層棘細胞增多、角質細胞多型化等。在光老化過程中，隨著角質層的增加，皮膚厚度將隨之增加以保護皮膚的真皮層。因此，因紫外線等所引起的皮膚厚度增加意味著皮膚受損情況嚴重。
如同本發明所公開的具體實施例，透過本發明含有半乳寡醣及膠原蛋白三肽組合物的施用可顯著降低因紫外線照射所引起的表皮厚度增加。特別地，經證實，與單獨用GOS或CTP處理的組別相比，施用包含重量比為1:1或3:1的GOS和CTP組合物進行處理，顯示其在降低表皮厚度上的協同作用。因此，本發明的組合物特別在GOS和CTP組合物其重量比為1:1-3:1的情形下，表現出抑制因紫外線所引起的皮膚損傷之協同效果。
於本發明的另一方面，本發明提供了一種抑制光老化的食品組合物，其含有半乳寡醣(GOS)和膠原三肽(CTP)作為活性成分。
來自陽光的紫外線刺激會產生活性氧物質(reactive oxygen species, ROS)，並藉由促進促炎細胞激素的產生來活化各種信息系統。此外，其還可透過活化AP-1和抑制TGF-β、TGF-α來減少真皮層主要成分的第一型膠原蛋白和第三型膠原蛋白的合成，AP-1和NF-κβ的活化會促進MMPs之活化，特別是MMP-1、MMP-3 和 MMP-9，使得真皮層中的結締組織降解。
膠原蛋白是真皮層的主要成分，也是皮膚抵禦紫外線的保護標誌，對於保持皮膚組織的彈性和強度很重要。而第一型膠原蛋白(COL1a1)佔了總膠原蛋白含量的80-85 %。
MMP(基質金屬蛋白酶)是一種膠原蛋白降解酶，隨著MMP活性的增加而促進膠原蛋白的降解。紫外線藉由增加部分MMP的表現使膠原蛋白的降解增加，並且藉由真皮層結構的破壞誘使皮膚產生皺紋(老化)。
MMP是膠原蛋白降解的代表性酵素，而TIMP(金屬蛋白酶的組織抑製劑)則是抑制MMP活性的抑制劑。
如同本發明所公開的具體實施例，真皮層中的膠原蛋白含量在所有樣品組中均增加。與單獨施用CTP的組別相比，單獨施用GOS或施用重量比為1:3-3:1的GOS/CTP混合物的組別其膠原蛋白的含量均顯著性地協同增加，特別是以施用GOS/CTP之重量比為1:3 的組別其呈現出最為顯著的效果。
如同本發明所公開的另一具體實施例，藉由施用含有1:1或3:1比例的GOS和CTP組合物，真皮層中膠原蛋白降解酶MMPs、MMP2、MMP3、MMP9和MMP13的mRNA表現量顯著地降低。
如同本發明所公開的具體實施例，經測定真皮層中膠原蛋白降解酶抑製劑TIMP1和TIMP2的基因表現量結果，在給予含有重量比為1:3-3:1的GOS和CTP組合物的組別中，TIMP1和TIMP2的表現量有所增加。
因此，可證實當GOS/CTP的重量比為1:3-3:1，更具體地為1:1-3:1時，本發明抑制光老化組合物可產生具有抑制光老化的協同作用。
在其他方面，本發明提供了一種可改善皮膚彈性的食品組合物，其含有半乳寡醣(GOS)和膠原三肽(CTP)作為活性成分。
眾所周知，光老化或內在的老化反應與真皮層中形成網絡結構的彈性蛋白減少和皮膚的彈性下降有密切關聯。
彈性蛋白是一種彈性纖維，約佔真皮層的3-4%，其可影響皮膚的彈性。當表現彈性蛋白的基因時，就會合成一種稱為彈性蛋白原的蛋白質，而當彈性蛋白原與另一彈性蛋白原聚集時，最終將形成彈性蛋白。
如同本發明所公開的具體實施例，經調查真皮層中彈性蛋白纖維的含量，本發明中含有半乳寡醣和膠原三肽的組合物在所有重量比下與控制組相比增加了彈性蛋白纖維的含量。特別地，與單獨施用GOS或CTP的組別相比，施用具有1:3或3:1重量比的GOS/CTP組合物之組別其在彈性蛋白纖維的增加方面表現出協同效應。
眾所周知，皮膚彈性與真皮層中膠原蛋白的含量有關，而在所有樣品組別中都證實了膠原含量增加。而與單獨給予CTP的組別相比，單獨給予GOS或以重量比1:3-3:1給予GOS和CTP的組別其膠原蛋白的含量皆顯著地協同增加，特別是GOS和CTP以1:3的比例施用的組別其呈現出最顯著的效果。
因此，本發明之半乳寡醣和膠原三肽混合物可被有效地作為食品組合物應用於改善皮膚彈性，其中GOS/CTP的重量比具體可為為1:3-3:1，優選為1:3或3:1。
於本發明的另一方面，本發明提供了一種用於改善免疫功能和發炎症狀的食品組合物，其含有半乳寡醣(GOS)和膠原三肽(CTP)作為活性成分。
於本發明的另一方面，本發明提供了一種用於改善免疫功能或改善腸道菌相的食品組合物，其含有半乳寡醣(GOS)和膠原三肽(CTP)作為活性成分。
於本發明中，改善發炎反應(改善發炎或抗發炎作用)與本發明中描述關於改善免疫功能和改善發炎的食品組合物一致，其中該食品組合物含有半乳寡醣作為活性成分。
於本發明中，術語「免疫」意指身體將由外部侵入的物質或生物視為外來物質並以自體防禦系統進行代謝的過程。雖然免疫可提供免受外部刺激或病原微生物入侵之傷害的保護，但它也可透過如發炎反應引起組織的損傷。免疫功能的改善是指調節免疫功能的變化或使其恢復到正常狀態，其可分為過敏性免疫反應的緩解或免疫功能的增強。過敏性免疫反應的緩解意指藉由抑制由外來物質所引起的過敏反應，或由自身抗原或者是經修飾的自身抗原所引起的不欲之增強性免疫反應。
於本發明實施例中，「免疫功能的改善」意指過度免疫反應的緩解，而過度免疫反應的緩解包含器官移植的排斥、過敏、發炎、發炎性疾病或自身免疫疾病的緩解。
於本發明中，器官移植的排斥具體可為因心臟、肺、腎、胰臟、皮膚、大小腸(腸)或角膜移植後所發生的急性或慢性移植排斥反應，或是因骨髓移植所發生的移植物對抗宿主疾病，特別可為T細胞介導的移植排斥反應。
於本發明中，過敏、自體免疫疾病、發炎症狀或是發炎性疾病可選自由下列所組成之群組：皮膚過敏、鼻過敏、支氣管過敏、食物過敏、敗血症、動脈硬化、菌血症、全身性發炎反應症候群、多重器官功能衰竭症候群、骨質疏鬆症、牙周炎、系統性紅斑狼瘡、類風濕性關節炎、骨關節炎、幼年型慢性關節炎、脊柱關節病、多發性硬化症、系統性硬化症、特發性炎症性肌病、乾燥症候群、系統性血管炎、類肉瘤病、自體免疫溶血性貧血、自發性血小板缺乏紫斑症、糖尿病、細胞介導免疫性腎臟病、中樞神經系統或周圍神經系統脫髓鞘病、脫髓鞘性神經炎、格林─巴利症候群、慢性脫髓鞘性神經炎、肝膽疾病、傳染性或自身免疫性慢性活動性肝炎、原發性膽汁性肝硬化、肉芽腫性肝炎、硬化性膽管炎、細胞激素風暴、發炎性腸道疾病(inflammatory bowel disease，IBD)、潰瘍性結腸炎、克隆氏症、大腸激躁症、麩質過敏症、惠氏病、自身免疫性或免疫介導性皮膚病、大皰性皮膚病、多形性紅斑、接觸性皮膚炎、乾癬、過敏性疾病、哮喘、過敏性鼻炎、異位性皮膚炎、搔癢、食物過敏、痤瘡、蕁麻疹、肺免疫性疾病、嗜酸性球性肺炎、特發性肺纖維化和過敏性肺炎，但並不限於此。
於本發明中，術語「搔癢」意指一種令人不快的感覺，會引起抓撓或摩擦皮膚的慾望。而搔癢大致上可分為因皮膚性疾病所引起的搔癢和因內科疾病所引起的搔癢。因皮膚性疾病所引起的搔癢包括異位性皮膚炎、蕁麻疹、乾癬、天皰瘡、乾皮病、慢性單純苔蘚、結節性癢疹、苔癬等所引起的搔癢感。因內科性疾病所引起的搔癢包括甲狀腺疾病引起的搔癢、激素紊亂如糖尿病等引起的搔癢、慢性腎功能衰竭或血液透析引起的腎搔癢或***搔癢、白血病、淋巴瘤等引起的腫瘤性搔癢、膽汁淤積性搔癢、移植物對抗宿主病引起的搔癢、貧血或代謝疾病引起的搔癢、後天免疫缺乏症候群引起的搔癢等。
與免疫反應緩解辨識功能相關的生物標記包括免疫球蛋白E (IgE)、***素、白三烯、組織胺、NO、iNOS、COX2、細胞激素(TNF、IL、IFN)等。
含有本發明以半乳寡醣和膠原三肽作為活性成分的食品組合物在降低發炎性細胞激素IL-6、IL-12和TNF-α的表現效果上具有優異的效果。IL-6已知是一種與皮膚搔癢有關的細胞激素，因此，本發明的組合物可用於預防、改善或治療搔癢；IL-12已知在皮膚的各種發炎反應中有所增加，包括異位性皮炎、過敏性接觸性皮膚炎等；而TNF-α則被稱作細胞激素，其不僅在異位性皮炎、乾癬等皮膚病中可誘使發炎症狀的產生，亦可於類風濕性關節炎等中發現其蹤跡。
如同本發明所公開的具體實施例，與單獨施用GOS或CTP 的組別相比，GOS和CTP的混合物在GOS/CTP重量比為1:3、1:1或3:1時顯示出協同作用，可減少發炎性細胞激素的分泌。因此，本發明的組合物可有效地作為用於改善免疫功能或改善發炎(抗發炎)的組合物。
於本發明的另一實施例中，免疫功能的改善包括腸道免疫功能的改善。而腸道免疫功能的改善是指通過減少腸道中的有害細菌和增加腸道中的乳酸菌等有益細菌來達成。
於本發明的另一實施例中，腸道菌相的改善是指降低厚壁菌(Firmicutes )門中的細菌與擬桿菌(Bacteroidetes )門中的細菌比例。
於本發明的另一實施例中，腸道菌相的改善是指腸道內雙歧桿菌屬(Bifidobacterium )細菌的增加。
如同本發明所公開的實施例，本發明的GOS或GOS和CTP的混合物可用來作為改善腸道菌相的組合物，因其降低了腸道中厚壁菌門中的細菌與擬桿菌門中的細菌比例，並增加了雙歧桿菌屬中的乳酸菌。
於本發明實施例中，腸道內短鏈脂肪酸的增加可支持腸道菌相的改善。眾所周知，腸道內的微生物藉由在腸道內發酵膳食纖維來產生短鏈脂肪酸，其中常見為乙酸、丙酸和丁酸，而短鏈脂肪酸可被腸道黏膜迅速吸收作為大腸黏液細胞的主要能量來源(Thompson DB, 2000)。
如同本發明所公開的具體實施例，由於本發明的GOS或GOS和CTP的混合物增加了腸道中總短鏈脂肪酸和單個短鏈脂肪酸(乙酸、丁酸、戊酸等)，因此可看出本發明藉由增加乳酸菌和減少腸道中的有害細菌的數量來達到改善腸道免疫功能與腸道菌相之效。
於本發明中，該食品組合物可作為食品添加劑或功能性保健食品。而該食品可以是粉末、顆粒、片劑、膠囊、飲料等形式，具體而言可以是飲料、肉類、巧克力、甜食、比薩、泡麵、其他類型的麵條、口香糖、冰淇淋 、酒精飲料、複合維生素或保健品。
本發明的GOS和CTP的混合物在食品組合物中的含量可以根據食品的類型、用途等而適當地控制，而不具有特殊限制。例如，GOS和CTP的含量可以是基於食品總重量的0.001-30 wt%或0.01-20 w%，且可以是0.001-15 g、0.02-10 g或0.3-1 g/100 mL用於健康飲料的組合物，但並不限於此。
當本發明含有GOS和CTP混合物的組合物用於製備食品組合物時，其除了包含可作為活性成分的GOS和CTP混合物外，還可包含其他常見於食品製備的添加成分。而額外添加的成分包括如蛋白質、碳水化合物、脂肪、營養物、調味品和調味劑。其中碳水化合物實際上可包含糖，例如單醣(例如葡萄糖、果糖等)、二醣(例如麥芽糖、蔗糖、寡糖等)，或多醣(例如糊精、環糊精等)和糖醇(例如木糖醇、山梨糖醇、赤藻糖醇等)。其中調味劑可以是天然調味劑(索馬甜、甜菊提取物(例如萊鮑迪甙A、甘草甜素等))或合成調味劑(糖精、阿斯巴甜等)。例如，當本發明的食品組合物製備為飲料時，其除了包含本發明的活性成分外，亦可進一步包含檸檬酸、果糖漿、糖、葡萄糖、乙酸、蘋果酸、水果果汁、杜仲提取物、大棗提取物、甘草提取物等。
於本發明的另一方面，本發明提供了一種用於改善皮膚狀況的化妝品組合物，其包含 i)半乳寡醣(GOS)或 ii)半乳寡醣和膠原三肽(CTP)。
作為本發明活性成分的半乳寡醣(GOS)或半乳寡醣和膠原三肽(CTP)表現出顯著降低與發炎反應相關的細胞激素表現和降低經皮水分散失、紅斑值等，因此，本發明的組合物具有增強皮膚屏障功能、保護皮膚免受刺激和減輕皮膚刺激的優越效果。
而本發明的皮膚狀況改善與前述關於組合物的描述內容相同。
於本發明實施例中，本發明的組合物除了含有半乳寡醣(GOS)或半乳寡醣和膠原三肽(CTP)作為活性成分外，還可包含化妝品組合物中常用的成分，例如常見的佐劑，如抗氧化劑、穩定劑、助溶劑、維生素、色素或香料和載體。
作為載體，可使用但不限於純水、一元醇(乙醇或丙醇)、多元醇(甘油、1,3-丁二醇或丙二醇)、高級脂肪酸(棕櫚酸或亞麻酸)、油或脂肪(小麥胚芽油、山茶油、荷荷巴油、橄欖油、角鯊烯、葵花籽油、夏威夷豆油、酪梨油、氫化大豆卵磷脂或脂肪酸甘油酯)。若有需要，則可進一步加入表面活性劑、殺菌劑、抗氧化劑、紫外線吸收劑、抗發炎劑或涼感劑。
作為表面活性劑，可使用聚氧乙烯、氫化蓖麻油、聚氧乙烯油基醚、聚氧乙烯單油酸酯、聚氧乙烯單硬脂酸甘油酯、脫水山梨糖醇單硬脂酸酯、聚氧乙烯脫水山梨糖醇單油酸酯、蔗醣脂肪酸酯、單月桂酸六甘油酯、聚氧乙烯還原羊毛脂、POE、甘油異戊二酸酯、二戊二酸甘油酯、N-乙醯谷胺醯胺、異硬脂酯等。
作為殺菌劑，可使用檜醇、三氯沙、葡萄糖酸氯己定、苯氧乙醇、間苯二酚、異丙基甲基苯酚、甘菊烯、水楊酸、吡啶硫酮鋅等。
作為抗氧化劑，可使用丁基羥基茴香醚、沒食子酸、沒食子酸丙酯和異抗壞血酸中的任一種。
作為紫外線吸收劑，可使用二羥基二苯甲酮、黑色素、對胺基苯甲酸乙酯、對二甲胺基苯甲酸2-乙基己酯、辛諾酯、對甲氧基肉桂酸2-乙基己酯、2-(2-羥基-5-甲基苯基)苯並***等二苯甲酮，尿刊酸、金屬氧化物微粒等。
作為抗炎劑，可使用甘草次酸二鉀、尿囊素等。並且，作為涼味劑，可使用辣椒酊、1-薄荷醇等。
於本發明的另一實施例中，本發明的化妝品組合物可製備為選自以下的任何形式所組成之群組，包含溶液、皮膚軟膏、凝膠、乳霜、泡沫、滋養乳液、化妝水、面膜、潤膚水、乳液、底妝、精華液、安瓶、護髮素、頭皮護理、生髮水、頭髮護理、護髮乳、染髮液、洗髮精、頭髮滋養乳液、髮膠、髮蠟、頭髮定型噴霧、染髮劑、肥皂、洗面乳、液體清潔劑、沐浴用品、防曬乳、助曬油、懸浮劑、軟膏、粉末、含表面活性劑的洗面乳、油精、粉底、粉底液、粉膏，貼片和噴霧劑，但並不限於此。
於本發明的另一方面，本發明提供了一種改善皮膚狀況的方法，其包括將含有 i)半乳寡醣(GOS)或 ii)半乳寡醣糖和膠原三肽(CTP)本發明組合物施用於使用者的步驟。
皮膚狀態的改善意指皮膚保濕、皮膚舒緩、減輕皮膚刺激、改善皮膚皺紋、抑制紫外線引起的皮膚損傷、抑制光老化、改善皮膚彈性或抗發炎作用，但並不限於此。
本發明中使用的術語「投予」或「施用」意指將治療有效量的本發明組合物直接給予患有疾病的使用者。
此外，本發明中使用的術語「使用者」意指哺乳動物，包括人、小鼠、大鼠、豚鼠、狗、貓、馬、牛、豬、猴、黑猩猩、狒狒、恒河猴等。更具體而言，於本發明中所指的使用者意指人類。
本發明改善皮膚狀況的方法包括施用根據本發明食物組合物的步驟，而此處為避免對食物成分的描述過於冗長因此予以省略。
有益功效 本發明提供了一種功能性食品組合物，其包含半乳寡醣(GOS)或半乳寡醣(GOS)和膠原三肽(CTP)作為活性成分。由於本發明的組合物顯示出可抑制光老化、改善皮膚皺紋或皮膚彈性、抗氧化作用、抗發炎作用及皮膚保濕作用的優異效果，因此可有效地作為功能性食品組合物。
發明實施例 以下，將藉由更詳細地實施例來描述本發明。然以下的實施例僅用於更具體地說明本發明，使所屬技術領域中具有通常知識者可清楚了解本發明的技術內容，但本發明的保護範圍並不限於以下的實施例內容。
實施例
於整份說明書中，除非另有敘明，用於描述特定物質濃度的「%」意指固體/固體的(重量/重量)%，固體/液體的(重量/體積)%和液體/液體的(體積/體積)%。
材料與試劑
半乳寡醣(GOS)和膠原三肽(CTP)是由Neo Crema所捐贈。半乳寡醣是由0.5%的葡萄糖、1.8%的半乳糖、21.7%的乳糖、20.4%的二醣、30.6%的三醣和25.0%的四醣或更高的寡醣所組成。本發明之公開實施例中所使用的GOS和CTP為單獨或以各種混合比例的組合方式溶解在蒸餾水中。
實驗動物的處理
於本實施例中共有7個試驗組(每組共6隻動物)，分為正常控制組(正常，非經UVB誘導)、陰性控制組(對照，經UVB照射)、GOS單一處理組(GOS 200 mg/ kg，經UVB 照射)、CTP單一處理組(CTP 200 mg/kg，經UVB 照射)、GOS/CTP 1:3處理組(GOS/CTP 50：150 mg/kg，經UVB照射)， GOS/CTP 1:1處理組(100：100 mg/kg，經UVB 照射)和GOS/CTP 3:1之處理組(GOS/CTP 150:50 mg/kg，經UVB 照射)。
於本發明中使用自Orient Bio購得之SKH-1無毛雄性小鼠(SkH：HR-1)(以下簡稱為小鼠)作為實驗動物，並將小鼠保持在 22 ± 2 ℃和 50 ± 10 %的相對濕度，在12 小時/晝夜循環下，使其自由進食和飲水。
根據「實驗動物護理和使用指南 (NRC)」，所有實驗均在高麗大學機構動物護理委員會的批准下進行。
待小鼠適應一周後，使用紫外線照射設備(BLX-254；Vilber Lourmat，法國)配備 UVB-UV 燈 (T-8M，Vilber Lourmat，法國)對除正常控制組(NOR)之外的六組小鼠其背部皮膚進行紫外線照射長達8週，每週3次，以誘導其皮膚產生光老化現象(Hong et al., 2015)。而UV光的照射量是藉由UV光度計(UV-340；Lutron，台灣)之使用來測量，再根據UV照射設備內部的照射量來調節UVB照射量。UVB照射量將根據下表1所述來進行調整。
[表1]
星期 1 2 3 4-8
UVB 照射量 1 MED 2 MED 3 MED 4 MED
*1 MED = 75 mJ/ cm2
自紫外線照射開始的 8 週內，正常控制組(NOR)和陰性控制組(CON)僅口服飲用水，並於樣品處理體重測量後給予口服不同濃度的樣品和飲用水的混合物，最後於紫外線照射和施用GOS、CPT或混合物樣品的 8 週後將小鼠犧牲。
實施例 1：飲水量和飼料攝入量
為了分析本發明所揭露之組合物對小鼠飲水量及飼料攝入量的影響，因此在每週一次紫外線照射後的樣品施用期間，對小鼠的飲水量及飼料攝入量進行測量。
圖1a示出本發明試驗組的飼料攝取量。
圖1b示出本發明試驗組的水攝取量。
如圖1a所示，GOS/CTP 3:1 組的小鼠其食物攝入量為 19.14 g/天，高於所有測試組的平均食物攝入量(16.62 g/天)，然各組之間未呈現顯著差異。
如圖 1b 所示，與 NOR 組相比，除經UVB照射之GOS/CTP 1:1 組外，所有樣品施用組的飲水量均增加。其中，以GOS/CTP 1:3 組的飲水量顯著增加，為 18.36 mL/天(p ＜ 0.05)。
實施例 2：保水能力、經皮水分散失 (TEWL)和紅斑之評估
為了分析本發明所揭露之組合物對皮膚狀況的影響，使用Multi Probe Adapter® MPA 6對經UV照射的小鼠其背側皮膚進行保水能力、經皮水分散失量(TEWL)和紅斑的測量(Courage und Khazaka，德國)。於開始進行紫外線照射前，先對所有組別進行其保水能力、經皮水分散失量(TEWL)和紅斑的測量。而為了研究NOR組和CON組之間是否存在顯著差異，將自NOR組和CON組經紫外線照射後4週，並以1週為間隔的方式進行皮膚狀況的測量。最後，於小鼠犧牲的前一天進行最後一次的皮膚狀況測量，並將該測量結果與紫外線照射前的結果進行比較。
保水能力
圖2a示出本發明試驗組的保水能力。
圖2b示出本發明試驗組的保水能力的變化。
如圖2a所示，陰性控制組(CON)的保水能力較正常控制組(NOR)顯著降低約1.61倍，且各樣品施用組的保水能力均較CON組有所增加，特別是GOS 組和 GOS/CTP 1:1 組的保水能力呈現顯著增加(p ＜ 0.05)。
此外如圖2b所示，比較UV照射前後的保水能力變化時，CON組與NOR組相比其保水能力呈現顯著降低；而CTP單處理組和GOS/CTP 1:1組的保水能力則呈現顯著變化，特別是GOS/CTP 1:1 組與 NOR組相比呈現出保水能力的變化(p ＜ 0.05)。
經皮水分散失
圖3a示出本發明試驗組的經皮水分散失。
圖3b示出本發明試驗組的經皮水分散失的變化。
如圖3a所示，與正常控制組(NOR)相比，陰性控制組(CON)的經皮水分散失量顯著增加約3.99倍(p ＜ 0.05)；與CON組相比，所有樣品施用組的經皮水分散失均顯著減少，特別是GOS/CTP 1:1處理組其經皮水分散失降低至與NOR組相當的量(p ＜ 0.05)。
此外如圖3b所示，比較UV照射前後經皮水分散失的變化時，除NOR組外，所有UVB照射組之經皮水分散失均呈現增加態樣；與CON組相比，所有樣品施用組均呈現顯著降低(p ＜ 0.05)。
紅斑指數
如圖 4a 所示，與 NOR 組相比，CON 組的紅斑值顯著增加約 1.60 倍(p ＜ 0.05)； 與CON相比，樣品施用組的紅斑值並未觀察到顯著差異。
此外如圖4b所示，比較UV照射前後紅斑值的變化時，除NOR之外的所有UVB照射組中的紅斑值都呈現顯著增加(p ＜ 0.05)。而GOS和CTP單次施用組和GOS/CTP 1:3混合組與CON組相比均呈現紅斑值下降現象，但其差異並不顯著。
經上述結果可證實，與GOS的攝入量相比，相較於單獨攝入GOS或CTP，攝入1:1或3:1的GOS/CTP混合物其在保水能力、經皮水分散失和紅斑值方面其呈現的結果均為正面。由此可知，本發明的GOS和CTP混合物可以防止因紫外線所引起的經皮水分散失和皮膚屏障損傷，維持正常的皮膚屏障功能。
實施例 3：器官重量
為了分析本發明所揭露之組合物對器官重量的影響，在小鼠攝入GOS和CTP樣品後，將器官(肝臟、心臟、腎臟和脾臟)取出並進行秤重。而該取出器官並進行秤重的時間是於實驗結束時，並將取出的肝臟、心臟、腎臟和脾臟的重量()mg)與各試驗組小鼠的體重(g)進行標準化。該結果如表2所示。
[表 2]
體重mg/g 肝臟 心臟 腎臟 脾臟
NOR 5.59 ± 0.18 0.50 ± 0.03 2.08 ±0.12 0.27 ± 0.02
CON 5.86 ± 0.13 0.60 ± 0.05 1.97 ± 0.11 0.34 ± 0.02
GOS 5.49 ± 0.31 0.50 ± 0.01 1.93 ± 0.09 0.31 ± 0.03
CTP 4.94 ± 0.16 0.48 ± 0.01 1.91 ± 0.06 0.14 ± 0.01
1:3 5.27 ± 0.33 0.56 ± 0.01 2.08 ± 0.10 0.12 ± 0.01
1:1 5.14 ± 0.10 0.50 ± 0.02 1.92 ± 0.07 0.12 ± 0.01
3:1 4.37 ± 0.25 0.46 ± 0.03 1.76 ± 0.10 0.11 ± 0.01
如表2所示，各試驗組間之腎臟、脾臟重量彼此間無呈現顯著差異，雖然肝臟和心臟間的重量略呈現顯著差異，但與 NOR 組相比並無差異。
實施例 4：皮膚目視檢查與皮膚黴菌分析
為了分析本發明所揭露之組合物對皺紋改善的效果，以下對小鼠的背部皮膚進行成像分析，而成像分析方式是使用Visioline (VL650；CK Electronic GmbH，Germany)的複製品來進行小鼠背部皮膚之皺紋面積、數量、長度、深度等的分析。該分析結果如圖5和圖6a-6b所示。
如同圖6a-6b所示之結果，與正常控制組(NOR)相比，陰性控制組(CON)其皺紋的面積和深度呈現顯著增加(p ＜ 0.05)；此外與CON組相比，藉由本發明所揭露之組合物的施用顯著降低皺紋指數， 特別是GOS/CTP 1:3之混合物處理組其皺紋面積和最大深度皆顯著降低(p ＜ 0.05)。
因此，以上分析結果證實藉由對本發明所揭露之的GOS和GOS與CTP的混合組合物的攝入，可有效地達到對由UVB所引起的皺紋形成的抑制，特別是攝入GOS與CTP為1:3的混合物後，皺紋改善效果顯著。
經上述結果可證實，雖然單獨攝入GOS 或 CTP 可減少因紫外線形成的皮膚皺紋，但以1:3的比例攝入GOS和CTP時，其減少因光老化而形成的皮膚皺紋效果最為顯著。
實施例 5：皮膚組織病理學分析—測量表皮厚度和膠原蛋白的表現情形
為了分析本發明所揭露之組合物對表皮厚度和膠原蛋白表現情形的影響，將紫外線照射在已施用本發明之組合物後，取小鼠的背部皮膚並浸入10%福馬林中進行蘇木素和伊紅(H&E)染色，透過研究小鼠背部皮膚之組織病理學變化和免疫組織化學 (IHC)以研究其真皮中所存在的膠原蛋白。 而該經染色的組織使用光學顯微鏡進行成像並分析。
如圖 7-8 所示，從 H&E 之染色結果可證實，與正常控制組 (NOR)相比，UVB 照射組的表皮厚度呈現顯著增加(p ＜ 0.05)；此外與CON組相比，所有樣品施用組的表皮厚度均呈現顯著降低， 特別是與單獨用 GOS 或 CTP 處理的組相比，GOS/CTP 1:1 和 3:1混合物組其表皮厚度呈現顯著降低(p ＜ 0.05)。
透過對皮膚組織之病理觀察，紫外線照射組的表皮厚度較控制組增加約4倍，GOS和CTP混合處理組的表皮厚度較控制組減少；與單獨使用 GOS 或 CTP 處理的組別相比，使用 GOS 和 CTP 混合物之處理組其表皮厚度變薄(圖7-8)。
此外，從膠原蛋白的IHC染色結果可證實，與正常控制組(NOR)相比，陰性控制組(CON)於真皮中的膠原含量顯著降低(p ＜ 0.05)；與CON組相比，所有樣品施用組的真皮中膠原蛋白含量呈現顯著增加，特別是於GOS/CTP 1:3 混合物處理組中，其真皮中的膠原蛋白含量增加最為顯著(p ＜ 0.05)。
實施例 6：彈性蛋白的測量
彈性蛋白是皮膚真皮層中的成分，是一種可影響皮膚組織彈性的彈性物質，因此皮膚受光老化將會減少彈性蛋白的數量和直徑，從而降低皮膚彈性。而為了分析本發明所揭露之組合物對皮膚彈性的影響，以下將從每個測試組中取出約10mg的皮膚組織並通過Fastin彈性蛋白測定法來測量皮膚組織中彈性蛋白的含量(F2000; Biocolor, UK)。
如圖11所示，與CON組相比，施用本發明所揭露之組合物的所有組別皆呈現出彈性蛋白含量的增加，特別是與 CON 組相比，經GOS/CTP 3:1 混合物之處理其呈現顯著增加(p ＜ 0.05)。
經上述結果可證實，不僅於本發明所揭露之單獨含有GOS的組合物，含有GOS和CTP的組合物，特別是含有3:1混合比之GOS和CTP組合物，其皆可藉由口服的方式，通過增加因紫外線而降低的彈性蛋白含量，從而改善皮膚真皮層的網絡結構，達到增強皮膚彈性的效果。
實施例 7：以qRT-PCR分析皮膚相關基因的表現程度
為了分析本發明所揭露之組合物對皮膚相關基因表現的影響，以下將第一型膠原蛋白、MMP(基質金屬蛋白酶)2/3/9、TIMP1/2、透明質酸酶(HYAL)的基因表現情形 NF-K 與 GAPDH進行了比較。
具體而言，從施用本發明所揭露之組合物的測試組小鼠中取出約100mg的皮膚組織並使用TRIzol試劑分離出總體RNA。接著於分離出之RNA中加入 50 μM Oligo-(dT) 引子和 10 mM dNTP 混合物後，在 65 ºC 下反應 5 分鐘。接著加入 5x RT 緩衝液、0.1 M DTT、RNaseOUT、SuperScript III 和 25 mM MgCl2 的混合物，首先在 50 ºC 下進行反應50分鐘，然後在 85 ºC 下進行反應5分鐘。接著加入RNase H後，mRNA將於37℃中反應20分鐘，合成出cDNA。 接著將 1 μL 的合成cDNA 與引子、SYBR green 基因表現預混溶液和 DEPC 水進行混合後執行 qPCR。而於每個目標基因中所使用到的引子如下表3所描述，當中每個目標基因的表現程度是以相對於NOR組的基因表現程度來進行表示。
[表 3]
目標基因   PCR 引子序列 (5’→3’) SEQ ID NO
MMP2 F CAA GGA TGG ACT CCT GGC ACA T 1
R TAC TCG CCA TCA GCG TTC CCA T 2
MMP3 F TTC TGG GCT ATA CGA GGG CA 3
R CTT CTT CAC GGT TGC AGG GA 4
MMP9 F GCT GAC TAC GAT AAG GAC GGC A 5
R TAG TGG TGC AGG GAG AGT AGG A 6
TIMP1 F TCT TGG TTC CCT GGC GTA CTC T 7
R GTG AGT GTC ACT CTC CAG TTT GC 8
TIMP12 F AGC CAA AGC AGT GAG CGA GAA G 9
R GCC GTG TAG ATA AAC TCG ATG TC 10
COL1a1 F CCT CAG GGT ATT GCT GGA CAA C 11
R GAG AAG GAC CTT GTT TGC CAG G 12
HYAL F AAG TAC CAA GGA ATC ATG GG 13
R CTC AGG ATA ACT TGG ATG GC 14
NF-κB F TTG TGC CAA GAG TGA TGA CG 15
R CTG AAA TCC CAT GTC CTG CT 16
GAPDH F CAT CAC TGC CAC CCA GAA GAC TG 17
R ATG CCA GTG AGC TTC CCG TTC AG 18
金屬蛋白酶 (MMP)
如同測量膠原降解酶MMP 2的基因表現程度結果所示，與NOR 組相比，CON 組之膠原降解酶MMP 2的基因表現程度增加了約1.21 倍，所有樣品施用組之MMP 2 表現程度均降低(圖 12)，特別是與CON相比，單獨施用GOS或CTP或施用GOS/CTP 3:1混合物之處理組其膠原降解酶MMP 2的基因表現程度呈現顯著降低(p ＜ 0.05)。
如同測量 MMP 3 基因表現程度的結果所示，與 CON 組相比，單獨使用 GOS 或 3:1 GOS/CTP 混合物之處理組其 MMP 3 的表現程度降低，然未觀察到顯著差異(圖 13)。
如同測量作為皮膚組織細胞外基質降解能力之標誌物MMP 9的基因表現程度之結果所示，與NOR組相比，CON組呈現約6.31倍的顯著增加情形； 與CON組相比，所有樣品施用組都呈現顯著降低對MMP 9基因表現程度(p＜0.05，圖14)。在樣品施用組中，與單獨用GOS或CTP處理的組相比，GOS/CTP混合物處理組其MMP 9基因表現程度降低，特別是與 CON 相比，施 用GOS/CTP 3:1 混合物進行處理之組其MMP 9基因表現程度顯著降低至與 NOR 組近似的程度(p ＜ 0.05)。
與NOR組相比，CON組之MMP 13的基因表現程度顯著增加約5.42倍；與CON組相比，所有樣品施用組中其MMP 13的基因表現程度均顯著下降(p＜0.05，圖15)；特別是與 CON 相比，GOS/CTP 3:1 混合物進行處理之組其MMP 13的基因表現程度顯著降低至與 NOR 組近似的程度(p ＜ 0.05)。
經上述結果可證實，通過施用GOS和CTP的混合物處理而不是單獨施用GOS或CTP進行處理，其可降低因光老化所誘導的MMP表現情形， 特別是在因光老化引起皺紋形成過程中扮演重要作用的 MMP-13 基因的表現，於 GOS/CTP 1:1 處理組中呈現顯著降低。
金屬蛋白酶組織抑製劑 (TIMP)
如同測量TIMP 1的基因表現程度的結果所示，與CON組相比，在所有樣品施用組中TIMP 1的表現程度顯著增加(p＜0.05，圖16)，特別是與CON相比，在單獨施用GOS或CTP或GOS/CTP 1:3混合物處理組中，其TIMP 1表現程度顯著增加(p＜0.05，圖16)。
與CON組相比，樣品處理組中其TIMP 2的基因表現程度增加，然未呈現顯著差異(圖17)。
經上述結果可證實，本發明含有GOS或GOS和CTP的組合物可藉由促進TIMP 1的表現、抑制MMP的活性以及減少細胞外基質蛋白的降解，來達到抑制因光老化所引起的皺紋形成。
第一型膠原蛋白(COL1a1)
如同圖18測量COL1a1基因表現程度的結果所示，CON組與NOR組兩者於COL1a1基因表現的程度上並無差異。同時，施用本發明所揭露之組合物處理組顯示其在COL1A1的基因表現程度上有所增加， 特別是與 CON 組相比，施用 GOS/CTP 1:3 混合物組合物處理後其第一型膠原蛋白的表現程度顯著增加約 1.22 倍(p ＜ 0.05)。
第一型膠原蛋白是皮膚結締組織中，細胞外基質蛋白質中含量最高者，其他細胞外基質蛋白質包括彈性蛋白、纖連蛋白、整聯蛋白、原纖維蛋白、蛋白聚醣等。 新合成的原膠原會藉由酶促反應分泌到皮膚細胞的細胞外空間，形成具有三重螺旋結構的微纖維，通過膠原纖維的形成，可賦予皮膚緊緻和彈性。
若真皮層中的膠原纖維因光老化或內在老化而有所減少，皺紋將隨著皮膚組織的塌陷而形成，致使皮膚凹陷和彈性下降。
由上述試驗結果可預期，施用含有本發明所揭露之GOS或GOS和CTP的組合物進行處理，其將透過增加第一型膠原蛋白的基因表現程度來有效地改善皺紋生成與增強皮膚彈性。
透明質酸酶 (HYAL)
圖19為本發明所揭露之各試驗組其皮膚組織中透明質酸酶mRNA的表現程度。
如同測量透明質酸酶HYAL基因表現程度的結果所示，與NOR組相比，CON組的基因表現呈度顯著增加約1.30倍，且在所有組合物施用組中均降低(圖19)。 特別是與CON組相比，通過施用GOS/CTP 1:3混合組合物處理後，其HYAL表現程度顯著降低約0.61倍(p ＜ 0.05)。
實施例 8：以 ELISA 分析發炎細胞激素
為了分析本發明所揭露之組合物對免疫功能改善或抗發炎作用的影響，以下將透過 ELISA 試劑的使用，從各試驗組中取出大鼠的皮膚組織並測量其發炎細胞激素IL-6、IL-12和TNF-α的含量(BD Biosciences，San Jose，CA)。以下測量方式是以BCA法分析每毫克蛋白質中炎性細胞激素的含量來進行。
如圖20所示，與正常控制組(NOR)相比，陰性控制組(CON)中的白血球介素6(IL-6)呈現顯著增加；與 CON 相比，GOS/CTP 1:3 混合物處理組其IL-6 含量則下降(p ＜ 0.05)。
此外如圖21所示，與正常控制組 (NOR) 相比，陰性控制組 (CON)中之白血球介素 12 (IL-12) 的含量呈現顯著增加；且與 CON 相比，所有組合物施用組中的白介素 12 (IL-12) 其含量皆顯著降低 (p ＜ 0.05)。因此對於所有混合組合物而言，其在使IL-12減少分泌方面的協同效果是可被證實的，特別是GOS/CTP 1:3 混合物處理組其 IL-12 含量下降的幅度最大。
如圖如圖 22 所示，與正常控制組 (NOR) 相比，陰性控制組 (CON) 中的 TNF-α 顯著增加 (p ＜ 0.05)；此外與正常控制組(NOR)相比，所有組合物施用組的TNF-α含量均呈現顯著降低。因此證實了所有混合組合物其在降低TNF-α的表現方面的協同效果，特別是在 GOS/CTP 混合物施用組中顯示出顯著的效果(p ＜ 0.05)。
經上述結果可證實，在所有組合物施用組中，促炎細胞激素IL-6、IL-12和TNF-α皆減少， 特別是當 GOS 和 CTP 一起施用時，由此證實細胞激素減少與GOS 和 CTP的協同作用。因此，因本發明含有GOS或GOS和CTP的組合物可有效地減少發炎反應，故可作為用於改善免疫功能的組合物或抗發炎組合物。
於本發明實施例中，抗發炎組合物在1:3-3:1的所有GOS/CTP比例中表現出協同作用。
實施例 9：以 GC 分析短鏈脂肪酸 (SCFA)
首先以甲醇萃取小鼠闌尾中的SCFA，再以配備有GC管柱(DB-FFAP 123-3253, 50 m x 0.32 mm x 0.50 μM)之氣相色譜儀進行分析(Agilent Technologies, CA, USA)。柱溫會在 100 ºC 之環境下維持 1 分鐘，並以 8/min 的速率升溫至 180 ºC，然後再以 20 ºC/min 的速率升溫至 200 ºC，最後在 200 ºC 之環境下維持 5 分鐘。附錄中 SCFA 的含量為使用標準乙酸、丙酸和丁酸來進行分析。
GC分析結果如圖23-27所示。
藉由氣相色譜分析GOS和CTP樣品對短鏈脂肪酸產生的影響，與正常控制組(NOR)相比，陰性控制組(CON)其乙酸顯著降低(圖23)；同時，與 CON 組相比，GOS/CTP 1:1 混合物處理組其乙酸呈現顯著增加(p ＜ 0.05)。
與正常控制組(NOR)相比，陰性控制組(CON)中的丙酸含量降低，然並無顯著差異(圖24)；與CON組相比，GOS和CTP單一處理組其丙酸含量增加，但然並無顯著差異。
與正常控制組(NOR)相比，陰性控制組(CON)中的丁酸含量降低(圖25)；與CON組相比，除GOS/CTP 3:1混合物處理組外的其他組其丁酸含量均增加， 特別是GOS和CTP單一處理組呈現顯著增加(p ＜ 0.05)。
與正常控制組(NOR)相比，陰性控制組(CON)中的戊酸含量降低(圖26)；在樣品處理組中與CON相比，CTP單一處理組的戊酸含量顯著增加(p ＜ 0.05)。
與正常控制組(NOR)相比，陰性控制組(CON)的總短鏈脂肪酸含量顯著降低；與CON組相比，GOS單一處理組呈現顯著提升(p＜0.05)，CTP單一處理組和GOS/CTP 1:1混合物處理組則呈現增加(圖27)。
眾所周知，腸道微生物可藉由在腸道內發酵膳食纖維來產生短鏈脂肪酸，主要是乙酸、丙酸和丁酸，而產生之短鏈脂肪酸則可被腸道黏膜迅速吸收，作為大腸黏液細胞的主要能量來源(Thompson DB, 2000)。
經上述實驗可證實皮膚老化與腸道微生物之間的關係，因光老化顯著降低了短鏈脂肪酸。而透過對GOS和CTP的攝入可逆轉短鏈脂肪酸的降低，改善腸道環境並提供了皮膚保護作用。以下將接著透過對腸道菌相的變化分析來評估GOS和CTP的攝入對腸道環境變化的影響。
實施例 10：腸道菌相變化分析
首先以i-genomic clinic DNA萃取試劑萃取小鼠闌尾，接著依照Illumina 16S V3-V4之放大操作說明構建出16S rRNA定序庫(Illumina, San Diego, CA, USA)。待放大自第一次聚合酶鏈鎖反應 (PCR-1)萃取出的DNA其16S rRNA V3-V4 區域後，接著以Agencourt AMPure XP 洗珠將PCR 產物進行純化 (Beckman Coulter, Inc., Pasadena, CA, USA)以及以擴增子進行放大。將最終的擴增子定序庫以 v3 600 循環試劑在 Illumina MiSeq 上進行定序，並以 PCR 產物作為具有 Illumina 雙索引接頭序列的第二次 PCR (PCR-II) 的模板。接著使用QIIME 2軟體分析序列數據後再進行質量過濾。而為了消除均聚物，使用 QIIME 管線將序列錯誤率降至最低，然後透過 UCLUST 以 97.0 % 的相似度來篩選代表序列並將其叢集為操作分類單元 (OTU)。於α多樣性分析中，包含豐富度、香農指數以及基於豐度的覆蓋率估計器 (ACE的分析項目。以UniFrac 度量距離分析來分析組內和組間的β多樣性，並以主坐標分析 (PCoA) 來進行結果分析。透過皮爾森積差相關分析(Pearson’s correlation)來證實腸道菌相組成 (OTU) 與參數之間的關聯性。以K-W 檢定(Kruskal-Wallis test)來分析腸道菌相中α多樣性和相對豐度的差異，並以 ANOSIM 和置换多元方差分析(Permutational multivariate analysis of variance, PERMANOVA) 來分析 β 多樣性的差異。
[表 4] 微生物組分析(α多樣性總結)
樣品名稱 OTUs ACE CHAO Jackknife
NOR1 595 683.32 667.23 705.13
NOR2 658 706.74 699.64 737
NOR3 712 773.93 759.5 807
CON1 592 653.31 642.7 682
CON2 742 827.06 804.16 854
CON3 727 806.72 802.37 838.69
GOS1 624 695.04 684.6 726
GOS12 613 681.21 670.99 708
GOS13 677 747.72 745.24 778.55
CTP1 611 688.92 677.25 717
CTP2 665 723.52 722.55 752
CTP3 733 821.20 816.38 852.19
GOS/CTP 1:3 (1) 606 679.37 678.14 710.12
GOS/CTP 1:3 (2) 723 776.36 759.4 804
GOS/CTP 1:3 (3) 570 655.82 693.68 805.62
GOS/CTP 1:1 (1) 608 691.31 680.27 714.72
GOS/CTP 1:1 (2) 663 732.80 729.23 757.65
GOS/CTP 1:1 (3) 688 780.67 790.06 833.56
GOS/CTP 3:1 (1) 610 702.50 704.25 730.08
GOS/CTP 3:1 (2) 640 700.14 697.55 727
GOS/CTP 3:1 (3) 675 741.76 744.42 777.07
NOR：正常組； CON：UVB-控制組。 數據呈現：平均值 ± 標準誤差 (n = 6)，不同字母表示其Tukey檢驗在 p ＜ 0.05 處存在顯著差異。
[表 5]
樣品名稱 NPShannon Shannon Simpson 系統演化多樣性 Good’s coverage of library (%)
NOR1 4.03 4.01 0.06 803 99.71
NOR2 4.15 4.15 0.05 927 99.89
NOR3 4.04 4.02 0.09 920 99.83
CON1 4.51 4.49 0.03 794 99.75
CON2 4.32 4.31 0.05 930 99.81
CON3 4.26 4.25 0.06 928 99.82
GOS1 4.39 4.37 0.04 827 99.71
GOS12 3.66 3.65 0.09 872 99.86
GOS13 3.91 3.9 0.08 911 99.86
CTP1 4.26 4.25 0.06 856 99.71
CTP2 4.2 4.19 0.05 931 99.89
CTP3 4.42 4.41 0.04 968 99.81
GOS/CTP 1:3 (1) 4.55 4.53 0.03 821 99.72
GOS/CTP 1:3 (2) 4.71 4.7 0.02 989 99.89
GOS/CTP 1:3 (3) 3.36 3.35 0.1 788 99.78
GOS/CTP 1:1 (1) 4.64 4.62 0.03 825 99.71
GOS/CTP 1:1 (2) 4.49 4.49 0.04 959 99.88
GOS/CTP 1:1 (3) 4.65 4.64 0.03 937 99.81
GOS/CTP 3:1 (1) 4.08 4.06 0.07 833 99.71
GOS/CTP 3:1 (2) 4.07 4.06 0.06 885 99.87
GOS/CTP 3:1 (3) 3.69 3.68 0.1 905 99.83
NOR：正常組； CON：UVB-控制組。 數據呈現：平均值 ± 標準誤差 (n = 6)，不同字母表示其Tukey檢驗在 p ＜ 0.05 處存在顯著差異。
表 4 和表 5 顯示出共 21 個樣本之 α多樣性分析結果，平均值於 OTU分析中為653.90、ACE分析中為727.12、CHAO分析中為722.38、Jackknife分析中為762.73、NPShannon分析中為4.21、Shannon分析中為4.20、Simpson分析中為0.06、系統發育多樣性(phylogenetic diversity)分析中為886.14，定序庫的Good's coverage則為99.80(%)。
細菌屬群落比較
對細菌屬之群落進行分析後共確定出470個類群，以下以圖28呈現之50個具有代表性的類群進行說明，於樣品中所觀察到的細菌屬群落如下：
艾克曼菌屬(Akkermansia)、PAC000661_g、真細菌屬(Eubacterium)_g23、PAC000664_g、PAC000198_g、孢桿菌屬(Sporobacter)、 類桿菌屬(Bacteroides)、乳桿菌屬( Lactobacillus)、假普氏梭桿菌屬(Pseudoflavonifractor)、 真細菌屬(Eubacterium)_g17, PAC002367_g, 普氏菌屬(Parabacteroides)、顫桿菌屬(Oscillibacter)、 瘤胃球屬(Ruminococcus)。
在前20個分類群中，於10個樣本中檢出10 %或更高比例的屬為疣微菌(Verrucomicrobia )門的Akkermansia 屬(N1, CTP1, CTP2, CTP3, GOS/CTP 1:3 (1), (3), GOS/CTP 1:1 (1), (2), GOS/CTP 3:1 (1), (3))；而在 GOS/CTP 1:3 (3) 樣本中的比例為 22.77 % 或更高；同時，在 CON 樣品中檢測到該屬的最低比例為 0.2 % 或更低。
在 7 個樣本中檢出 10 % 或更高比例的屬為擬桿菌(Bacteroides )屬 (N2, GOS1, 2, CTP3, GOS/CTP 1:3 (3), GOS/CTP 3:1 (1), (3))，與Akkermansia 屬一樣，在 GOS/CTP 1:3 (3) 樣品中檢測到的比例最高為 28.73%；在 CON1 中檢測到的比例最低為 3.11%。
樣本間關係比較
PCoA 分析
為了分析GOS和CTP與皮膚和腸道功能微生物相間的關係，使用UniFrac距離度量對21個樣本之細菌屬群落進行主坐標分析(PCoA)(見圖29)，分析結果呈現21個樣本的細菌群落分散，並無形成特定的群體。
UPGMA分析
透過UPGMA聚類分析(圖30)可辨認出近似和相異的細菌群落組成。於NOR、CON 和 GOS 組中，特別是 NOR 和 GOS 組顯示出近似的細菌群落組成；此外CTP組和GOS/CTP混合組亦顯示出近似的細菌群落組成。
腸道菌相變化
擬桿菌門(Bacteroidetes )和厚壁菌門(Firmicutes )的變化
測量口服GOS/CTP 混合物之小鼠其擬桿菌門和厚壁菌門的變化(圖 31-33)。人類腸道菌相包括 50 多個不同的門和 1000 多個不同的種，當中主要的五個門為乳桿菌屬(Lactobacillus )的厚壁菌門(Firmicutes )、擬桿菌門(Bacteroidetes )；長雙歧桿菌(Bidifobacterium )所屬的放線菌門(Actinobacteria )、變形菌門(Proteobacteria )和疣微菌門(Verrucomicrobia )。當中擬桿菌門和厚壁菌門為兩大主要的菌門，佔正常人體腸道微生物的80%以上。此外，儘管人體腸道中的微生物具有多樣性，然於所有個體中僅存在18 種關鍵菌種。另於人體中之兩大主要菌門其比例將因人而異，因厚壁菌門與擬桿菌門間的比例變化與疾病的發生有關。
厚壁菌門/擬桿菌門(Firmicutes/Bacteroidetes , F/B)的比值可作為分析腸道菌相其多樣性增加或減少的標的。大腸激躁症的患者其腸道微生物多樣性低，於這些患者中，其長雙歧桿菌和乳桿菌減少；費米剋菌(Fermicutes )與擬桿菌之比例增加(Kim et al., 2013; Hong and Rhee, 2014; Tojo et al., 2014; Dupont, 2014)。
在單獨口服 GOS 或 CTP 或 GOS/CTP 混合物的光老化模型中，GOS 的施用可減少厚壁菌門以及使厚壁菌門/擬桿菌門(F/B)的比例降低。CTP 的施用則增加了F/B 比，但與 CON 相比並無呈現顯著差異。於 GOS/CTP 混合物中，其F/B 比隨著 GOS 濃度的增加而降低。因此該結果說明了透過對GOS的施用可改善腸道環境。
乳酸菌的變化
依據對GOS/CTP 的攝入量來進行腸道微生物中乳酸菌的變化測量。乳酸桿菌和長雙歧桿菌被認定為主要的乳酸菌，透過對GOS的施用增加了長雙歧桿菌於腸道中的量；同時，與 CON 組相比，透過對GOS/CTP 1:3 混合物的施用亦顯著增加了長雙歧桿菌於腸道中的量(p ＜ 0.05)。然而於各組間其腸道中之乳酸桿菌屬乳酸菌種的變化並無呈現顯著差異。故透過對GOS的施用可增加乳桿菌屬之菌種。於 GOS/CTP 混合物中，除了 1:1 施用組外，與 CON 組相比，儘管並無顯著差異，其餘施用組之菌種相反地皆減少。
人體腸道微生物的變化
於人腸道中所觀察到的代表性微生物變化測量結果如圖38-46所示。
測量人類腸道中微生物門和家族的變化。變形菌門的微生物在健康腸道中的含量很低，其可通過GOS/CTP 混合物的施用而有所提升，特別是與 CON 組相比，於GOS/CTP 1:3 混合物組中其呈現顯著增加(p ＜ 0.05)。克里斯滕氏菌科(Christensenellaceae )主要可在瘦小的雙胞胎中觀察到，而據報導指出，被餵食高脂飲食的小鼠其在服用克里斯滕氏菌科後體重並未增加，然而與正常控制組(NOR)相比，樣品處理組其克里斯滕氏菌科減少。眾所周知，腸道微生物的多樣性在個體衰老的過程中將逐漸下降(O'Toole and Claesson, 2010)，致使其體內的微生物數量將減少。換句話說，隨著個體的衰老其體內之長雙歧桿菌科(Bifidobacteriaceae )微生物數量將減少，腸桿菌科(Enterobacteriaceae )微生物數量將增加(Woodmansey, 2007; Claesson et al., 2011)。
本發明所揭露之GOS/CTP混合物施用組，特別是混合比為1:3和3:1之組別顯示出腸桿菌科細菌的減少。
圖38-42顯示了本發明所揭露之測試組其腸道微生物門和家族的分佈情形。
一般而言，具有低數量之變形菌和高數量擬桿菌(Bacteriordes )、普羅沃氏菌(Provotella )和瘤胃球菌(Ruminococcus )的腸道微生物組合被認為是健康情形(Kim et al., 2013; Tojo et al., 2014)。擬桿菌門是由擬桿菌屬、普氏菌屬和木桿菌所屬組成，其可降解各種聚醣複合物。而透過GOS和CTP的施用通常可使瘤胃球菌的數量增加， 特別是將GOS/CTP 1:1 混合物施用組與 NOR 組進行相比後，其瘤胃球菌數量呈現顯著增加(p ＜ 0.05)。
通常個體會根據其大腸中的主要細菌種類分佈狀況來進行分類(腸型分析)。腸型 1 的特點是其擬桿菌含量高；腸型 2 的特點是其普氏菌含量高；腸型 3 的特點是其瘤胃球菌含量高。但已知腸型的分佈方式會因食物的攝入量、遺傳變異和居住地而有所差異，使得腸型分析之分析意義仍存有爭議(Bennet et al., 2015; Eupont, 2014)。
由人體腸道中觀察到的代表性微生物(菌屬)的變化測量結果如圖43-46所示。與 NOR 組相比，UV 控制組 (CON) 中的Akkermansia 減少，並於樣品處理組中增加到與 NOR 組相當的程度。而Blautia 在 CON 組中則呈現顯著增加，然在大多數樣本處理組中呈現減少態樣。觀察樣品組間其擬桿菌和梭菌(Clostridium )的數量差異並未觀察到顯著差異。腸道菌相的變化取決於 GOS/CTP 混合物的攝入量，因此透過改變GOS的施用策略可些微改善厚壁菌門/擬桿菌門的數量比值，且在GOS/CTP混合物施用組中另可觀察到其乳酸菌數量的增加，顯示其在光老化模型中可達到改善皮膚的功效。
無。
圖1a示出本發明試驗組的飼料攝取量。
圖1b示出本發明試驗組的水攝取量。
圖2a示出本發明試驗組的保水能力。
圖2b示出本發明試驗組的保水能力的變化。
圖3a示出本發明試驗組的經皮水分散失。
圖3b示出本發明試驗組的經皮水分散失的變化。
圖4a示出本發明試驗組的紅斑指數。
圖4b示出本發明試驗組的紅斑指數的變化。
圖5示出本發明試驗組的小鼠背部皮膚觀察結果。
圖6a示出本發明試驗組的總皺紋面積。
圖6b示出本發明試驗組的最大皺紋深度。
圖7示出用H&E對本發明試驗組的小鼠皮膚進行染色的結果。
圖8示出本發明試驗組的小鼠皮膚在H&E染色後測量表皮厚度的結果。
圖9示出本發明試驗組的小鼠皮膚中的膠原蛋白經IHC染色的結果。
圖10示出本發明試驗組的小鼠皮膚經IHC染色後測定小鼠皮膚中的膠原蛋白量的結果。
圖11示出本發明試驗組的小鼠真皮中的彈性蛋白量的測定結果。
圖12-15示出本發明試驗組的皮膚組織中MMP2/3/9/13的mRNA表現量。
圖16和圖17示出本發明試驗組的皮膚組織中TIMP1和TIMP2的mRNA表現量。
圖18示出本發明試驗組的皮膚組織中第一型膠原蛋白(COL1a1)的mRNA表現量。
圖19示出本發明試驗組的皮膚組織中透明質酸酶的mRNA表現量。
圖20-22示出本發明試驗組的皮膚組織中分泌的發炎細胞激素量(圖20：IL-6，圖21：IL-12，圖22：TNF-α)。
圖23-27示出本發明試驗組的皮膚組織中的短鏈脂肪酸(SCFAs)的含量 (圖23：乙酸，圖24：丙酸，圖25：丁酸，圖26 ：戊酸，圖27：總SCFA)。
圖28示出腸道中具GOS功能的微生物在屬水平上的分佈。
圖29示出本發明試驗組的皮膚和腸道功能微生物群落分析的主坐標分析(PCoA)聚類分析結果。
圖30示出本發明試驗組的皮膚和腸道功能微生物群落分析的UPGMA群聚關係分析結果。
圖31-33示出本發明試驗組的腸道微生物群落中擬桿菌門和厚壁菌門的分佈。
圖34-37示出本發明試驗組的腸道微生物群落中擬桿菌門和厚壁菌門的分佈。
圖38-42示出本發明試驗組的腸道微生物群落中各門和各科的分佈。
圖43-46示出本發明試驗組的腸道微生物群落中各屬的分佈。
無。
Figure 12_A0101_SEQ_0001
Figure 12_A0101_SEQ_0002
Figure 12_A0101_SEQ_0003
Figure 12_A0101_SEQ_0004
Figure 12_A0101_SEQ_0005

Claims (4)

  1. 一種半乳寡醣(galacto-oligosaccharide，GOS)及膠原蛋白三肽(collagen tripeptide，CTP)之用途，其係用以製備用於抑制紫外線引起的皮膚皺紋及光老化之食品組合物，其中該食品組合物包含重量比為1：3之GOS及CTP。
  2. 一種半乳寡醣(galacto-oligosaccharide，GOS)及膠原蛋白三肽(collagen tripeptide，CTP)之用途，其係用以製備改善腸道菌相之食品組合物。
  3. 如請求項2所述之用途，其中所述改善腸道菌相係降低腸道中厚壁菌門(Firmicutes)細菌與擬桿菌門(Bacteroidetes)細菌的比例。
  4. 如請求項2所述之用途，其中所述改善腸道菌相係增加雙歧桿菌屬(Bifidobacterium)細菌。
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