TWI803447B

TWI803447B - 為ｔ細胞療法而調理患者的方法

Info

Publication number: TWI803447B
Application number: TW105116879A
Authority: TW
Inventors: 亞卓恩巴特; 傑佛瑞維卓瑞克; 威廉高; 拉胡爾簡; 詹姆士葛陳德費; 史蒂芬羅森柏格
Original assignee: 美商凱特製藥公司; 美國聯邦健康暨人群服務部
Priority date: 2015-05-28
Filing date: 2016-05-30
Publication date: 2023-06-01
Also published as: DOP2017000271A; IL284173B1; SG10201913613SA; IL255887B; IL284173A; US10322146B2; MX2023000051A; MX2023000049A; EP3851110A1; US20160346326A1; WO2016191756A1; KR102349677B1; US9855298B2; SG10201913604TA; TW202319057A; AU2016268864B2; PH12017502154A1; CN107921066A; AU2022224754A1; KR20220008388A

Abstract

本發明提供在有其需要的患者中增加T細胞療法效力之方法。本發明包括在T細胞療法前調理患者的方法，其中該調理包含投予環磷醯胺與氟達拉濱(fludarabine)之組合物。

Description

為T細胞療法而調理患者的方法

[政府權利聲明]

在執行同美國國家癌症研究院(National Cancer Institute(NCI))，美國衛生與人群服務部(the Department of Health and Human Services)的一個機關，訂立之合作研究發展協議(Cooperative Research and Development Agreement)期間作出了本發明。美國政府擁有本發明中的某些權利。

本發明係關於預先調理需要腫瘤治療(例如T細胞療法)之患者的方法。尤其，本發明係關於一種改良T細胞療法(包括工程化CAR T細胞療法)效力的方法，藉由首先對需要T細胞療法之患者投予調理性化療方案，該調理性化療方案包含環磷醯胺與氟達拉濱(fludarabine)。

人類癌症在本質上是由發生基因轉換或非遺傳性轉換而變成異常癌細胞之正常細胞組成。在這情況下，癌細胞開始表現不同於正常細胞所表現的蛋白質及其他抗原。人體先天免疫系統可將這些異常腫瘤抗原用來特異性靶向與殺死癌細胞。然而，癌細胞使用各種機制來阻止免疫細胞(例如T淋巴球與B淋巴球)成功靶向癌細胞。

人類T細胞療法依靠經濃化或經改造的T細胞以靶向及殺死患者中癌細胞。已發展出各種技術來濃化能靶向腫瘤抗原之天然T細胞或基因改造的T細胞濃度以特異性靶向已知癌抗原。已經證明這些療法在腫瘤大小與患者存活期上有適度(儘管大有可為)的效果。然而，已經證明很難預測給定T細胞療法在每一個患者中是否有效。

環磷醯胺可單獨投予或與其他藥劑(包括卡氮芥(BCNU)與依托泊苷(VP-16))合併投予。就單一藥物療法而論，可藉由靜脈注射(IV)在40至50mg/kg(1.5至1.8g/m²)下按照10至20mg/kg/日投予環磷醯胺2至5日。

新近研究已經指出在T細胞輸注前用一或多種免疫抑制化療藥預先調理患者可增加經移植之T細胞的有效性。Rosenberg et al.,Clin.Cancer.Res.(2011)。然而，現行方法依靠高劑量毒性且非特異性藥物，該毒性且非特異性藥物導致疼痛及有時會致死之不良事件。所以，仍然需要辨識出用於經改良的T細胞療法之有效預先調理方案。

本揭示提供一種調理需要T細胞療法之患者的方法，該方法包含對該患者投予劑量在200mg/m²/日至2000mg/m²/日之間的環磷醯胺及劑量在20mg/m²/日至900mg/m²/日之間的氟達拉濱。

本揭示另外提供一種使需要T細胞療法之患者的內源淋巴球減少之方法，該方法包含對該患者投予劑量在200mg/m²/日至2000mg/m²/日之間的環磷醯胺及劑量在20mg/m²/日至900mg/m²/日之間的氟達拉濱。

本揭示還提供一種使需要T細胞療法之患者中的體內恆定性細胞激素之血清量增加的方法，該方法包含對該患者投予劑量在200mg/m²/日至2000mg/m²/日之間的環磷醯胺及劑量在20mg/m²/日至900mg/m²/日之間的氟達拉濱。

在某些實施方式中，該體內恆定性細胞激素包含介白素7(IL-7)、介白素15(IL-15)、介白素10(IL-10)、介白素5(IL-5)、γ誘導蛋白10(IP-10)、介白素8(IL-8)、單核球趨化性蛋白1(MCP-1)、胎盤生長因子(PLGF)、C-反應蛋白(CRP)、可溶性細胞間黏著分子1(sICAM-1)、可溶性血管黏著分子1(sVCAM-1)、或其任何組合。

本揭示還提供一種使需要T細胞療法之患者中經投予之T細胞效應功能(effector function)強化的方法，該方法包含對該患者投予劑量在200mg/m²/日至2000mg/m²/日之間的環磷醯胺及劑量在20mg/m²/日至900mg/m²/日之間的氟達拉濱。

本揭示還提供一種使需要T細胞療法之患者中抗原呈現細胞活化與/或有效性強化之方法，該方法包含對該患者投予劑量在200mg/m²/日至2000mg/m²/日之間的環磷醯胺及劑量在20mg/m²/日至900mg/m²/日之間的氟達拉濱。

在某些實施方式中，該T細胞療法係選自腫瘤浸潤淋巴球(TIL)免疫療法、自體細胞療法、工程化(engineered)自體細胞療法(eACT)、與同種異體T細胞移植法。

本揭示還提供一種治療患有淋巴瘤之患者的方法，該方法包含在對該患者投予治療有效量的工程化CAR T細胞前，每日對該患者投予約500mg/m²/日之環磷醯胺及約60mg/m²/日的氟達拉濱投予三日，其中該工程化CAR T細胞表現嵌合抗原受體，該嵌合抗原受體結合至CD19及另外包含CD28共刺激功能域與CD3ζ訊息傳遞區。

本揭示還提供一種治療患有淋巴瘤之患者的方法，該方法包含(i)對該患者投予約200mg/m²/日的環磷醯胺及約20mg/m²/日的氟達拉濱，和(ii)對該患者投予治療有效量的工程化CAR T細胞，其中該工程化CAR T細胞表現嵌合抗原受體，該嵌合抗原受體結合至CD19及另外包含CD28共刺激功能域與CD3ζ訊息傳遞區。

本揭示還提供一種治療患有淋巴瘤之患者的方法，該方法包含(i)對該患者投予約300mg/m²/日的環磷醯胺及約30mg/m²/日的氟達拉濱，和(ii)對該患者投予治療有效量的工程化CAR T細胞，其中該工程化CAR T細胞表現嵌合抗原受體，該嵌合抗原受體結合至CD19及另外包含CD28共刺激功能域與CD3ζ訊息傳遞區。

本揭示還提供一種治療患有淋巴瘤之患者的方法，該方法包含(i)對該患者投予約300mg/m²/日的環磷醯胺及約60mg/m²/日的氟達拉濱，和(ii)對該患者投予治療有效量的工程化CAR T細胞，其中該工程化CAR T細胞表現嵌合抗原受體，該嵌合抗原受體結合至CD19及另外包含CD28共刺激功能域與CD3ζ訊息傳遞區。

本揭示還提供一種治療患有淋巴瘤之患者的方法，該方法包含(i)對該患者投予約500mg/m²/日的環磷醯胺及約60mg/m²/日的氟達拉濱，和(ii)對該患者投予治療有效量的工程化CAR T細胞，其中該工程化CAR T細胞表現嵌合抗原受體，該嵌合抗原受體結合至CD19及另外包含CD28共刺激功能域與CD3ζ訊息傳遞區。

本揭示還提供一種治療患有淋巴瘤之患者的方法，該方法包含對該患者投予治療有效量的工程化CAR T細胞，其中該患者已經投予約500mg/m²/日的環磷醯胺及約60mg/m²/日的氟達拉濱所調理，及其中該工程化CAR T細胞表現嵌合抗原受體，該嵌合抗原受體結合至CD19及另外包含CD28共刺激功能域與CD3ζ訊息傳遞區。

本揭示還提供一種套組，其包含(i)環磷醯胺、(ii)氟達拉濱、與(iii)在療法前，每日對需要工程化CAR T細胞療法的患者投予劑量在200mg/m²/日至2000mg/m²/日之間的環磷醯胺及劑量在20mg/m²/日至900mg/m²/日之間的氟達拉濱投予三日的指示說明書。

圖1，經CAR工程化之T細胞示意圖，顯示一種示範性經CAR工程化之T細胞及其構建的示意圖。在此示範性工程化CAR T細胞中，該靶結合功能域包含抗體衍生scFv功能域，該共刺激功能域是從CD28衍生，及該必需活化功能域是從CD3ζ(zeta)衍生。病毒載體可攜帶CAR載體構築體然後合併到T細胞基因組中。然後該CAR構築體可被T細胞表現為跨膜蛋白。

圖2A，對在B細胞惡性腫瘤中抗CD19 CAR+T細胞的最佳反應，與圖2B，對在B細胞惡性腫瘤中抗CD19 CAR+T細胞的患者反應，顯示在用抗CD-19 CAR+T細胞治療後的患者疾病反應。患有B細胞惡性腫瘤之患者的最佳反應請參見圖2A，以疾病症狀中的變化百分比表示。虛線條指示完全反應(CR)。陰影條指示部分反應。白色條指示穩定疾病(SD)。黑色條指示進行性疾病(PD)。圖2B顯示在CAR+T細胞輸注後數月之患者疾病反應。實心黑色條指示部分反應(PR)，與灰色條指示完全反應(CR)。在標記「PD」之條中的斷裂處指示患者經歷進行性疾病。倒三角表示T細胞輸注時間。實心圓指示B 細胞恢復時間。白色圓指示CAR+T細胞從患者血液中廓清之時間。水平箭頭指示患者之反應是持續的。

圖3提供1期臨床試驗之樣品示範圖，其係關於確定用500mg/m²/日環磷醯胺、30mg/m²/日氟達拉濱、與2×10⁶個抗-CD19 CAR+T細胞/kg治療患者的安全性、效力、與劑量限制性毒性。

圖4A至圖4H，在調理前與後選定細胞激素之血清量，顯示在用300mg/m²/日環磷醯胺及30mg/m²/日氟達拉濱調理前與後選定細胞激素被分析物之血清量。顯示下列在投予300mg/m²環磷醯胺及30mg/m²氟達拉濱前與後的血清量：介白素15(IL-15；圖4A)、單核球趨化性蛋白1(MCP-1；圖4B)、γ誘導蛋白10(IP-10；圖4C)、胎盤生長因子(PLGF；圖4D)、可溶性細胞間黏著分子1(sICAM-1；圖4E)、C-反應蛋白(CRP；圖4F)、血管內皮生長因子D(VEGF-D；圖4G)、與巨噬細胞發炎蛋白1β(MIP-1b；圖4H)。投予前血清是在投予T細胞療法前的第-12至-5日之間採集，及投予後血清是在第0日採集(圖4A至圖4H)。

圖5A至圖5H，在調理前與後選定細胞激素之血清量，顯示在用300mg/m²/日環磷醯胺與30mg/m²/日氟達拉濱調理後，在對後續T細胞療法有反應或沒有反應的患者中的選定細胞激素被分析物之血清量的倍數變化。顯示有反應者及無反應者的IL-15(圖5A)、MCP-1(圖5B)、IP-10(圖5C)、PLGF(圖5D)、sICAM-1(圖5E)、 CRP(圖5F)、VEGF(圖5G)、與MIP-1b(圖5H)之血清量的倍數變化。水平線指示平均值(圖5A至圖5H)。圖5A顯示個別患者IL-15變化，及在各數據點旁邊把各患者之疾病反應性標示為部分反應(PR)、完全反應(CR)、穩定疾病(SD)、或進行性疾病(PD)。

圖6A至圖6V，選定細胞激素之患者血清量分析，顯示對在第0日接受T細胞療法前被投予300mg/m²/日環磷醯胺與30mg/m²/日氟達拉濱之患者在第-10日至第18日不同時間點測得之選定細胞激素被分析物之血清濃度。顯示顆粒球巨噬細胞集落刺激因子(GM-CSF；圖6A)、IL-2(圖6B)、MCP-1(圖6C)、IL-6(圖6D)、IL-10(圖6E)、MCP-4(圖6F)、CRP(圖6G)、干擾素γ(IFNγ；圖6H)、顆粒酶A(圖6I)、IL-15(圖6J)、IL-5(圖6K)、顆粒酶B(圖6L)、IL-8(圖6M)、IP-10(圖6N)、MIP-1b(圖6O)、PLGF(圖6P)、IL-16(圖6Q)、胸腺及活化調節趨化因子(TARC；圖6R)、伊紅趨素-3(圖6S)、sICAM-1(圖6T)、可溶性血管黏著分子1(sVCAM-1；圖6U)、與(SAA；圖6V)的血清濃度。

圖7A至圖7I，在用300mg/m²/日環磷醯胺與30mg/m²/日氟達拉濱調理前與後選定細胞激素之血清量，顯示在投予300mg/m²/日環磷醯胺與30mg/m²/日氟達拉濱前與後測得之選定細胞激素被分析物的血清濃度。投予後血清是在正要T細胞輸注前採集。顯示IL-15(圖 7A)、IL-7(圖7B)、PLGF(圖7C)、CRP(圖7D)、IL-5(圖7E)、IL-10(圖7F)、MCP-1(圖7G)、IP-10(圖7H)、與sICAM-1(圖7I)之血清濃度。每個數據點代表一個患者。水平條顯示平均值(圖7A至圖7I)。將威爾科克森配對組符號等級檢定(Wilcoxon matched-pairs signed rank test)的P值應用於在調理前與後被測量之被分析物，及顯示對應的P值(圖7A至圖7I)。某些IL-7值大於定量的上限(ULOQ；圖7B)。

圖8A至圖8L，利用經K562細胞刺激的抗-CD19 CAR+T細胞之細胞激素體外產生，顯示相較於經K562細胞刺激之後的負控制組(K562-NGFR)，CD19 CAR+T細胞產生的各種細胞激素被分析物(K562-CD19)之體外產生。顯示用於控制組與抗CD19 CAR+T細胞，GM-CSF(圖8A)、IL-2(圖8B)、IFNγ(圖8C)、IL-5(圖8D)、IL-4(圖8E)、IL-13(圖8F)、腫瘤壞死因子α(TNFα；圖8G)、IL-6(圖8H)、顆粒酶B(圖8I)、MIP-1β(圖8J)、MIP-1α(圖8K)、與可溶性CD137(圖8L)濃度。據此來標記T1、T2、與免疫體內恆定性細胞激素(圖8A至圖8F)及促發炎細胞激素與趨化因子(圖8G至圖8L)。將產品T細胞與K562-CD19或控制組K562-NGFR細胞共培養及測量在培養基中的所列舉之被分析物濃度來採集輸注前的數據(圖8A至圖8L)。

圖9A至圖9C，在與靶抗原結合後由抗CD19 CAR+T細胞誘發活化標記，顯示與負控制組(K562-NGFR) 相比，在與靶抗原結合後表現各種細胞激素之抗CD19 CAR+T細胞(K562-CD19)百分比。顯示表現CD107α(圖9A)、4-1BB(圖9B)、與程序性死亡1(PD-1；圖9C)的細胞百分比。將產品T細胞與K562-CD19或控制組K562-NGFR細胞共培養及測量在培養基中的選定活化標記濃度來採集輸注前的數據(圖9A至圖9C)。所顯示之P值指示將K562-CD19試驗細胞與K562-NGFR負控制組細胞相比較的成對T檢定結果(圖9A至圖9C)。

圖10，產品T細胞的亞群組成，說明從製造時間(日數)來看的產品T細胞與末梢血液淋巴球(PBL)之各種特性。該數據包括在產品對PBL中被檢測到的抗CD19 CAR+T細胞百分比；在產品對PBL中之CD8對CD4比值；在抗CD19 CAR+ CD8+T細胞族群中初始中央記憶型T細胞(Tcm)、效應記憶型T細胞(Tem)、與效應T細胞(Teff)的相對出現率；及在抗CD19 CAR+ CD4+T細胞族群中初始中央記憶型T細胞(Tcm)、效應記憶型T細胞(Tem)、與效應T細胞(Teff)之相對出現率(圖10)。在抗CD19 CAR+T細胞上進行輸注前產品T細胞及血液中增殖高峰期間的PBL之表現型分析(圖10)。p值代表在製造時間與T細胞亞群組成之間的關聯之等級檢定結果。

圖11A至圖11G顯示在根據本發明調理NHL患者後觀察到之細胞激素、趨化因子與其他標記的表現概況。顯示IL-15(圖11A)、CRP(C-反應蛋白；圖11B)、IL-16(圖11C)、IL-7(圖11D)、PLGF(胎盤生長因子；圖 11E)、穿孔素(圖11F)、及MCP-1(單核球化學吸引因子(chemoattractant)蛋白-I；圖11G)的表現。

圖12描述在用根據本發明的環磷醯胺與氟達拉濱調理後在細胞激素、趨化因子與其他標記中觀察到之變化的量化。

圖13A至圖13B顯示在與客觀反應有關聯的調理性化療後循環IL-15與穿孔素之變化倍數。p值不作倍數調整。在CAR T細胞輸注前所測得之標記上執行分析。

圖14描述細胞激素、趨化因子與效應分子之生物標記分析。將標記用威爾科克森符號等級檢定在各類生物標記內按照從低至高的p值來排序。呈現在大多數患者中經修飾且p值<0.05的標記。在所測得之41個標記中只有7個在大多數患者中顯出變化且與p值<0.05相關。在CAR T細胞輸注前在所測得之標記上執行分析。

圖15A至圖15H描述免疫體內恆定性、發炎與調節性細胞激素、趨化因子與免疫效應分子之逐次誘發及廓清。顯示出代表性標記。在所測得之41個標記中總共有22個顯示在至少50%患者中在CAR T細胞治療後比基線值提高至少2倍，該22個標記是IL-15、IL-7、IL-2、顆粒酶B、顆粒酶A、CRP、IL-6、GM-CSF、IL-5、IFNg、IL-10、MCP-1、MCP-4、IP-10、IL-8、TARC、MIP1a、MIP1b、PLGF、VEGF-D、sICAM-1與FGF-2。對免疫體內恆定性細胞激素與趨化因子而言，在第3至4日觀察到高峰。

圖16A至圖16H描述免疫體內恆定性、發炎與調節性細胞激素、趨化因子與免疫效應分子之逐次誘發及廓清。顯示出代表性標記。在所測得之41個標記中總共有22個顯示在至少50%患者中在CAR T細胞治療後比基線值提高至少2倍，該22個標記是IL-15、IL-7、IL-2、顆粒酶B、顆粒酶A、CRP、IL-6、GM-CSF、IL-5、IFNg、IL-10、MCP-1、MCP-4、IP-10、IL-8、TARC、MIP1a、MIP1b、PLGF、VEGF-D、sICAM-1與FGF-2。對免疫調節性細胞激素與趨化因子而言，在第5至7日觀察到高峰。「ULOQ」：定量的上限。

圖17顯示由根據本發明之抗CD19 CAR T細胞誘發的治療相關生物標記與臨床反應之變化。在CAR T細胞治療後之標記量對基線值(預先調理)的最大倍數變化。每一條線代表一個個體。使用威爾科克森秩和檢定(Wilcoxon rank-sum test)對經評估之所有41個標記比較有反應者組對無反應者組的最大倍數變化值。p值不經倍數調整，及只顯示p<0.10的生物標記：用於IL-7與sICAM-1的p值<0.05。這關聯也適用於在IL-7(p=0.0165)、IL-15(p=0.0314)與IL-15(p=0.041)之絕對量中的變化。

圖18A至18G，低劑量調理使細胞激素、趨化因子、促發炎標記提高及調節穿孔素量*，顯示在用環磷醯胺與氟達拉濱調理前與後之被分析物中量的變化。圖18A至圖18F顯示下列之前量與後量：IL-15(圖18A)、 IP-10(圖18B)、CRP(圖18C)、IL-7(圖18D)、MCP-1(圖18E)、與穿孔素(圖18F)。圖18G總結了在各種被分析物之血清量中的變化及對應的p值。

圖19A至圖19D，IL-15、IP-10與穿孔素之調理相關的調節，顯示對IL-15(圖19A)、IP-10(圖19B)、與穿孔素(圖19C)而言，在調理後之被分析物量中的變化及對CAR T細胞療法的客觀反應之間的關聯。圖19D總結了在圖19A至圖19C每一者中所提供的數據之統計顯著性。

本發明係關於調理需要T細胞療法(例如工程化CAR T細胞療法，其例如自體細胞療法(eACT^TM))之患者的方法，該方法包含在投予T細胞療法前投予環磷醯胺與氟達拉濱。在T細胞療法前用這些劑量之環磷醯胺與氟達拉濱預先調理患者使內源淋巴球數量減少及使存在於患者中的體內恆定性細胞激素與/或促免疫因子之血清量增加，以改良T細胞療法效力。一旦對患者投予，這預先調理便為經移植的T細胞之增生創造更合宜的微環境。以此處所述之劑量預先調理出人意外地使內源淋巴球數量減少，同時使和環磷醯胺與氟達拉濱治療有關聯的毒性減到最少。本發明係關於使在T細胞療法前用於預先調理之環磷醯胺與氟達拉濱劑量減少。投予特異劑量之環磷醯胺與氟達拉濱誘發對經移植的T細胞最合宜之細胞激素有效性，同時提供對接受T細胞療法的患者而言較低的總體毒性。

定義

為了可以更容易理解本發明，首先對某些術語加以定義。除了此處另外特意提供外，在本申請案中所用的下列術語中每一者應該具有下述意義。額外之定義在本申請案中被明示。

本發明所用之術語「與/或」被理解為在有或無另一者情況下，二種具體指定的特徵或成分中每一者的特異揭示。所以，在此處之詞組例如「A與/或B」中所用的術語「與/或」旨在包括「A與B」、「A或B」、「A」(單獨)、與「B」(單獨)。同樣，在詞組例如「A、B、與/或C」中所用的術語「與/或」旨在包含下列態樣中每一者：A、B、與C；A、B、或C；A或C；A或B；B或C；A與C；A與B；B與C；A(單獨)；B(單獨)；與C(單獨)。

請理解，在態樣是用術語「包含」來描述之情況下，另提供其他用術語「是由~組成」與/或「實質上是由~組成」描述的類似態樣。

除非另外定義，否則此處所用之一切技術術語與科學術語具有與本揭示有關的技術領域中具有一般技術者所一般理解之相同的意義。例如，the Concise Dictionary of Biomedicine and Molecular Biology,Juo, Pei-Show,2nd ed.,2002,CRC Press；The Dictionary of Cell and Molecular Biology,3rd ed.,1999,Academic Press；與the Oxford Dictionary Of Biolchemistry And Molecular Biology,Revised,2000,Oxford University Press為習知技藝者提供許多本發明所用之術語的通用詞典。

單位、字首、與符號以其之Syst è me International de Unites(SI)接受的形式表示。數值範圍包括限定該範圍之數字在內。此處提供的標題不是可藉由參考整個說明書而得知的本發明各種態樣的局限。所以，下列所定義之術語藉由參考整個說明書被更完整地定義。

術語「活化」乃指免疫細胞(例如T細胞)之狀態，該免疫細胞被充分刺激以誘發可檢測的細胞增生。活化也可以和被誘發之細胞激素產生與可檢測的效應功能有關聯。此外，術語「經活化的T細胞」還指發生細胞***之T細胞。

「投予」乃指使用該領域之習知技藝者熟知的各種方法及遞輸系統中任一者將藥劑物理性導入個體。用於此處所揭示之調合物的示範性給藥途徑包括靜脈內、肌內、皮下、腹膜內、脊柱內、或其他非腸道給藥途徑(例如，利用注射或輸注)。此處所用之詞組「非腸道投予」意指腸內與局部投予以外的給藥模式(通常利用注射)，及包括但不限於：靜脈內、肌內、動脈內、腦脊髓膜內、***內、病灶內、囊內、眶內、心內、皮內、腹膜內、經氣管、皮下、表皮下、關節內、囊下、蜘蛛膜下、脊椎內、硬膜外與胸骨內注射及輸注，及體內電穿孔法。在某些實施方式中，利用經腸道途徑(例如口服)投予調合物。其他經腸道途徑包括局部、表皮、或黏膜給藥途徑，例如鼻內、***、直腸、舌下、或局部投予。還可以，例如，一次、複數次、與/或長時間投予。

此處所用之「不良事件」(AE)係和該醫療的使用有關聯之任何不利的且通常為非計畫或不良之徵象(包括異常實驗結果)、症狀、醫學上的出現率、或疾病。不良事件之定義包括已存在的醫療狀況惡化。惡化指示已存在的醫療狀況之嚴重程度、頻率、與/或持續時間增加，或和更惡化的結果有關聯。

術語「抗體」(Ab)包括但不限於特異性結合至抗原之糖蛋白免疫球蛋白。通常，抗體可包含通過二硫鍵互連的至少二個重(H)鏈及二個輕(L)鏈，或其抗原結合部分。每一H鏈包含一個重鏈可變區(此處縮寫成VH)及一個重鏈恆定區。該重鏈恆定區包含三個恆定域CH1、CH2與CH3。每一輕鏈包含一個輕鏈可變區(此處縮寫成VL)及一個輕鏈恆定區。該輕鏈恆定區包含一個恆定域CL。VH區與VL區可進一步分成高度可變區(稱為互補決定區(CDR))與保留區(稱為框架區(FR))。每一VH與VL包含三個CDR及四個FR，按照下列順序從胺基端排到羧基端：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。重鏈可變區與輕鏈可變區含有和抗原交互作用的結合功能域。Ab之恆定區可媒介免疫球蛋白結合至宿主組織或因子，其包括各種免疫系統之細胞(例如效應細胞)與典型補體系統的第一成分(C1q)。

免疫球蛋白可從眾所皆知的同型得到，該同型包括但不限於IgA、分泌性IgA、IgG、與IgM。IgG亞類也是該技術領域中熟知的且包括但不限於人IgG1、IgG2、IgG3、與IgG4。「同型」乃指重鏈恆定區基因編碼的Ab類或亞類(例如IgM或IgG1)。術語「抗體」包括，例如，天然Ab與非天然Ab；單株Ab與多株Ab；嵌合Ab與擬人化Ab；人Ab或非人Ab；全合成Ab；和單鏈Ab。可利用重組方法將非人Ab擬人化以減少其在人體內的免疫原性。在不明確說明時，除非另行指出，否則術語「抗體」還包括上述免疫球蛋白中任一者的抗原結合片段或抗原結合部分，及包括單價與雙價片段或部分，和單鏈Ab。

「抗原結合分子」或「抗體片段」乃指少於全部的抗體之任何部分。抗原結合分子可包括抗原性互補決定區(CDR)。抗體片段實例包括但不限於Fab、Fab'、F(ab')2、Fv片段、dAb、線性抗體、scFv抗體、與由抗原結合分子形成的多特異性抗體。

「抗原」乃指任何可誘發免疫反應或能被抗體結合的分子。免疫反應可包含抗體產生或特異免疫機能健全之細胞活化，或二者。該領域之習知技藝者會輕易地理解到任何巨分子(包括差不多所有的蛋白質或肽)可具有抗原的作用。抗原可被內源表現(即被基因體DNA表現)，或可被重組表現。抗原可對某些組織(例如癌細胞)具特異性，或可被廣泛地表現。此外，較大分子之片段可具有抗原的作用。在一個實施方式中，抗原是腫瘤抗原。

術語「自體的」乃指由一個體衍生之任何物質，該物質後來又被導入同一個體。例如，此處所述之工程化自體細胞療法(eACT^TM)包含從患者採集淋巴球，然後將該淋巴球工程化以表現(例如)CAR構築體，及然後投予回同一患者。

術語「同種異體的」乃指由一個體衍生之任何物質，該物質後來被導入同種的另一個體，例如同種異體T細胞移植法。

「癌」乃指許多特徵為身體中異常細胞失控生長之各種疾病。失控的細胞***與生長導致侵襲鄰近組織及還可以透過淋巴系統或血流轉移到身體之遠距部分的惡性腫瘤形成。「癌」或「癌組織」可包括腫瘤。可利用本發明之方法治療的癌實例包括但不限於免疫系統癌症，其包括淋巴瘤、白血病、與其他白血球惡性腫瘤。在某些實施方式中，可利用本發明之方法使由下列衍生的腫瘤大小減少：例如骨癌、胰腺癌、皮膚癌、頭或頸癌、皮膚或眼球內惡性黑色素瘤、子宮癌、卵巢癌、直腸癌、肛門部癌、胃癌、睪丸癌、子宮癌、輸卵管癌、子宮內膜癌、子宮頸癌、***癌、陰門癌、何杰金(Hodgkin)氏病、非何杰金氏淋巴瘤(NHL)、原發性縱膈腔大B細胞淋巴瘤(PMBC)、瀰漫性大型B細胞淋巴瘤(DLBCL)、濾泡性淋巴瘤(FL)、轉化濾泡性淋巴瘤、脾邊緣區淋巴瘤(SMZL)、食道癌、小腸癌、內分泌系統癌、甲狀腺癌、副甲狀腺癌、腎上腺癌、軟組織肉瘤、尿道癌、陰莖癌、慢性或急性白血病、急性骨髓性白血病、慢性骨髓性白血病、急性淋巴母細胞白血病(ALL)(包括非T細胞ALL)、慢性淋巴球性白血病(CLL)、兒童實性瘤、淋巴球性淋巴瘤、膀胱癌、腎或輸尿管癌、腎盂癌、中樞神經系統(CNS)癌瘤、原發性CNS淋巴瘤、腫瘤血管生成、脊髓軸瘤、腦幹膠質瘤、垂體腺瘤、卡波西氏(Karposi's)肉瘤、表皮樣癌、鱗狀細胞癌、T細胞淋巴瘤、環境誘發性癌(包括石綿誘發性癌)、其他B細胞惡性腫瘤、及以上癌之組合。特定癌症可對化療或放射治療有反應，或該癌症可為難治性癌症。難治性癌症乃指不可進行手術改善之癌症及一開始對化療或放射治療無反應的癌症，或該癌症隨時間而變得沒有反應。

此處所用之「抗腫瘤效應」乃指可以下列形式存在的生物效應：腫瘤體積減少、腫瘤細胞數量減少、腫瘤細胞增生減少、轉移數量減少、總存活期或無進行性疾病存活期增加、預期壽命增加、或和腫瘤有關聯的各種身體症狀改善。抗腫瘤效應還可指預防腫瘤出現(例如疫苗)。

此處所用之「無進行性疾病存活期」(可縮寫成PFS)乃指從治療日到進行性疾病日(根據the revised IWG Response Criteria for Malignant Lymphoma)或任何原因的死亡日之時間。

藉由測量在放射線照片上之惡性病灶或其他方法來評估「進行性疾病」，其不應被報告為不良事件。在沒有徵象與症狀情況下因進行性疾病造成的死亡應被報告為原發腫瘤型(例如DLBCL)。

此處所用之「治療反應時間」(可縮寫成DOR)乃指從個體的第一客觀反應到經確定之進行性疾病(根據the revised IWG Response Criteria for Malignant Lymphoma)日或死亡日的時間。

此處所用之術語「總存活期」(可縮寫成OS)是指從治療日到死亡日之時間。

此處所用之「細胞激素」乃指一個細胞對接觸特異性抗原作出反應所釋放的非抗體蛋白，其中該細胞激素與第二個細胞交互作用以媒介在該第二個細胞中的反應。細胞激素可被細胞內源性表現及可對個體投予。細胞激素可被免疫細胞(包括巨噬細胞、B細胞、T細胞、與肥胖細胞)釋放以擴展免疫反應。細胞激素可誘發在受贈細胞中的各種反應。細胞激素可包括體內恆定性細胞激素、趨化因子、促發炎細胞激素、效應子、與急性期蛋白。例如，體內恆定性細胞激素(包括介白素(IL)7與IL-15)促進免疫細胞存活與增生，及促發炎細胞激素可促進發炎反應。體內恆定性細胞激素實例包括但不限於：IL-2、IL-4、IL-5、IL-7、IL-10、IL-12p40、IL-12p70、IL-15、與干擾素(IFN)γ。促發炎細胞激素實例包括但不限於：IL- 1a、IL-1b、IL-6、IL-13、IL-17a、腫瘤壞死因子(TNF)-α、TNF-β、纖維母細胞生長因子(FGF)2、顆粒球巨噬細胞集落刺激因子(GM-CSF)、可溶性細胞間黏著分子1(sICAM-1)、可溶性血管黏著分子1(sVCAM-1)、血管內皮生長因子(VEGF)、VEGF-C、VEGF-D、與胎盤生長因子(PLGF)。效應子實例包括但不限於顆粒酶A、顆粒酶B、可溶性Fas配體(sFasL)、與穿孔素。急性期蛋白實例包括但不限於C-反應蛋白(CRP)與血清澱粉樣蛋白A(serum amyloid A(SAA))。

「趨化因子」是細胞激素的一型，其媒介細胞趨化性或定向運動。趨化因子實例包括但不限於：IL-8、IL-16、伊紅趨素、伊紅趨素3、巨噬細胞衍生趨化因子(MDC或CCL22)、單核球趨化性蛋白1(MCP-1或CCL2)、MCP-4、巨噬細胞發炎蛋白1α(MIP-1α，MIP-1a)、MIP-1β(MIP-1b)、γ誘導蛋白10(IP-10)、與胸腺及活化調節趨化因子(TARC或CCL17)。

本發明之被分析物與細胞激素的其他實例包括但不限於：趨化因子(C-C模體)配體(CCL)1、CCL5、單核球特異性趨化因子3(MCP-3或CCL7)、單核球化學吸引因子蛋白2(MCP-2或CCL8)、CCL13、IL-1、IL-3、IL-9、IL-11、IL-12、IL-14、IL-17、IL-20、IL-21、顆粒球集落刺激因子(G-CSF)、白血病抑制因子(LIF)、制瘤素M(OSM)、CD154、淋巴毒素(LT)β、4-1BB配體(4- 1BBL)、增生誘發配體(APRIL)、CD70、CD153、CD178、糖皮質素誘發性TNFR相關配體(GITRL)、腫瘤壞死因子超家族成員14(TNFSF14)、OX40L、TNF-與ApoL-相關白血球表現性配體1(TALL-1)、或TNF相關細胞凋亡誘發配體(TRAIL)。

此處將術語「血清量」與「血清濃度」替換使用且乃指在個體血清中的被分析物量。使用該領域內已知的任何方法可測量給定被分析物之血清量。例如，使用酵素免疫吸附法(ELISA)可測量細胞激素之血清量。在一個特定實施方式中，使用EMDmillipore LUMINEX® xMAP®多重測定法可測量細胞激素之血清量。

此處所用之「給藥間距」意指對個體投予多重劑量的此處所揭示之調合物中間所經過的時間。所以，給藥間距可被指示為範圍。

此處所述之劑量可以「以重量為基礎計的劑量」或「以體表面積(BSA)為基礎計的劑量」表示。以重量為基礎計的劑量是以患者體重為基礎計所計算出之對患者投予的劑量，例如mg/kg。以BSA為基礎計的劑量是以患者之表面積為基礎計所計算出之對患者投予的劑量，例如mg/m²。對人類給藥而言，把以重量為基礎計的劑量乘37或把以BSA為基礎計的劑量除以37可將這二種劑量量測形式轉換。例如，對人類個體投予60mg/kg之劑量相當於對同一個體投予2220mg/m²之劑量的同一藥物。

此處所用之術語「給藥次數」乃指在給定時間內投予此處所揭示之調合物劑量的頻率。給藥次數可被指示為每給定時間內劑量數。例如，可以按照下列來投予環磷醯胺：連續5日每日投予一次劑量、連續4日每日投予一次劑量、連續3日每日投予一次劑量、連續2日每日投予一次劑量、或1日投予一次劑量。在某些實施方式中，按照連續3日每日投予一次劑量或連續2日每日投予一次劑量來投予環磷醯胺。可以按照下列來投予氟達拉濱：連續8日每日投予一次劑量、連續7日每日投予一次劑量、連續6日每日投予一次劑量、連續5日每日投予一次劑量、連續4日每日投予一次劑量、連續3日每日投予一次劑量、連續2日每日投予一次劑量、或1日投予一次劑量。在其他實施方式中，按照連續5日每日投予一次劑量或連續3日每日投予一次劑量來投予氟達拉濱。

藥物或治療劑的「治療有效量」、「治療劑量」、「有效量」、或「治療有效劑量」是當單獨使用與另一種治療劑併用時保護個體免於發病或促進疾病消退(證據是疾病症狀嚴重程度減少、疾病無症狀期之頻率與持續時間增加)、或預防由疾病痛苦造成的病弱或失能之任何量。藉由將熟練醫師熟悉的各種方法用於，例如，在臨床試驗期間之人類個體，預示出在人類中的效力之動物模型系統，或藉由分析在體外測定中的藥劑之活性可評估治療劑促進疾病消退的能力。

此處所用之術語「淋巴球」包括自然殺手(NK)細胞、T細胞、或B細胞。NK細胞是細胞毒性(胞毒性)淋巴球的一型，其代表先天免疫系統的一種主要成分。NK細胞排斥腫瘤與受病毒感染之細胞。NK細胞透過細胞凋亡或程式性細胞死亡方法來運作。NK細胞被稱為「自然殺手」是因為其不需要活化就能殺死細胞。T細胞在細胞媒介免疫(不涉及抗體)中起著主要作用。T細胞的T細胞受體(TCR)使得T細胞與其他淋巴球型不同。胸腺，一種免疫系統之特化器官，是T細胞成熟的主要因素。T細胞有下列六個型：輔助T細胞(例如CD4+細胞)、細胞毒性T細胞(也稱為TC、細胞毒性T淋巴球、CTL、T-殺手細胞、溶細胞性T細胞、CD8+T細胞、或殺手T細胞)、記憶T細胞((i)幹記憶T_SCM細胞(類似初始細胞)是CD45RO-、CCR7+、CD45RA+、CD62L+(L-選擇素)、CD27+、CD28+、與IL-7Rα+，但是也表現大量的CD95、IL-2Rβ、CXCR3、與LFA-1，及顯出很多有記憶細胞特色的功能屬性)；(ii)中央記憶T_CM細胞表現L-選擇素和CCR7，其分泌IL-2，但不產生IFNγ或IL-4；與(iii)效應記憶T_EM細胞不表現L-選擇素或CCR7，但產生像IFNγ與IL-4的效應細胞激素)、調節T細胞(Treg、抑制T細胞、或CD4+CD25+調節T細胞)、自然殺手T細胞(NKT)及γδT細胞。另一方面，B細胞在體液免疫(涉及抗體)中起著主要作用。B細胞產生抗體與抗原及具有抗原呈現細胞(APC)作用和在被抗原交互作用活化後轉變成記憶B細胞。對哺乳動物而言，在骨髓中形成未成熟B細胞，這是其名稱的由來。

術語「基因工程化的」或「工程化的」乃指改造細胞之基因組的方法，其包括但不限於刪除編碼區或非編碼區或其一部分，或***編碼區或其一部分。在某些實施方式中，經改造的細胞是淋巴球(例如T細胞)，其可從患者或供體得到。可將細胞改造以表現外源性構築體，例如嵌合抗原受體(CAR)或T細胞受體(TCR)，其被接入細胞之基因組中。

「免疫反應」乃指免疫系統之細胞(例如T淋巴球、B淋巴球、自然殺手(NK)細胞、巨噬細胞、嗜酸性白血球、肥胖細胞、樹狀細胞、與嗜中性白血球)及由這些細胞或肝臟中任一者產生的可溶性巨分子(包括Ab、細胞激素、與補體)的作用，其引起選擇性靶向、結合至、破壞、消滅、與/或消除入侵之病原體的有脊椎體、受病原體感染之細胞或組織、癌細胞或其他異常細胞，或在自體免疫或病理性發炎、正常人類細胞或組織情況下的作用。

術語「免疫療法」乃指利用包含誘發、強化、抑制、或改良免疫反應的方法來治療受疾病之苦或有得到或體驗到疾病復發的風險之個體。免疫療法實例包括但不限於T細胞療法。T細胞療法可包括過繼性T細胞療法、腫瘤浸潤淋巴球(TIL)免疫療法、自體細胞療法、工程化自體細胞療法(eACT)、與同種異體T細胞移植法。然而，該領域之習知技藝者能理解此處所揭示的調理方法會強化任何T細胞移植療法之有效性。T細胞療法實例之描述請參見：U.S.Patent Publication Nos.2014/0154228與2002/0006409，U.S.Patent No.5,728,388與International Publication No.WO 2008/081035。

免疫療法之T細胞可以來自該領域中熟知的任何來源。例如，T細胞可以從造血幹細胞群體在體外分化，或可以從個體得到T細胞。可以從下列得到T細胞：末梢血液單核球細胞、骨髓、淋巴結組織、臍帶血、胸腺組織、來自感染位置的組織、腹水、胸膜滲出液、脾組織、與腫瘤。此外，T細胞可以由一或多種該領域中可得到之T細胞株衍生。使用習知技藝者熟知的某些技術(例如FICOLL^TM分離與/或血球分離法)從個體採集之單位血液也可以得到T細胞。另外的單離用於T細胞療法之T細胞的方法之揭示請參見U.S.Patent Publication No.2013/0287748，以引用方式將其全部內容併入本案作為參考。

術語「工程化自體細胞療法」(可縮寫成「eACT^TM」，也稱為過繼性細胞轉移法)是一種藉以採集患者T細胞及接著基因改造以辨識及靶向在一或多種特異腫瘤細胞或惡性腫癌的細胞表面上表現的一或多種抗原之方法。可將T細胞工程化以表現，例如，嵌合抗原受體(CAR)或T細胞受體(TCR)。將CAR陽性(+)T細胞工程化以表現細胞外單鏈變異片段(scFv)，其對連結至細胞內訊息傳遞部分的特定腫瘤抗原具有特異性，該細胞內訊息傳遞部分包含一個共刺激功能域與一個活化功能域。該共刺激功能域可以由(例如)CD28衍生，及該活化功能域可以由(例如)CD3ζ衍生(圖1)。在某些實施方式中，將CAR設計成具有二、三、四、或更多個共刺激功能域。可將CAR scFv設計成靶向(例如)CD19，該CD19是在B細胞譜系中的細胞所表現之跨膜蛋白，該B細胞譜系包括一切正常B細胞與B細胞惡性腫瘤(包括但不限於NHL、CLL、與非T細胞ALL)。CAR+T細胞療法與構築體實例之描述請參見U.S.Patent Publication Nos.2013/0287748、2014/0227237、2014/0099309、與2014/0050708，以引用方式將其全部內容併入本案作為參考。

此處所用之「患者」包括患癌症(例如淋巴瘤或白血病)的人。此處將術語「個體」與「患者」替換使用。

術語「肽」、「多肽」、與「蛋白質」被替換使用，及乃指由肽鍵共價鍵聯之胺基酸殘基組成的化合物。蛋白質或肽必須含有至少二種胺基酸，及胺基酸之最大數量不受限制且可包含蛋白質或肽的序列。多肽包括任何肽或蛋白質，其包含藉由肽鍵彼此連接的二或多種胺基酸。此處所用之術語乃指短鏈(通常也稱為肽、寡肽、與寡聚物)及長鏈(通常也稱為蛋白質)。「多肽」包括，例如，生物活性片段、實質同源多肽、寡肽、同質二聚體、異二聚體、多肽變異體、經改造多肽、衍生物、類似物、融合蛋白等。多肽包括天然肽、重組肽、合成肽、或其組合。

此處所用之「刺激」乃指由刺激分子與其配體結合所誘發的原初反應，其中該結合媒介訊息傳遞事件。「刺激分子」是T細胞上的分子(例如T細胞受體(TCR)/CD3複合體)，其與存在於抗原呈現細胞上的同源刺激配體特異性結合。「刺激配體」是一種配體，當存在於抗原呈現細胞(例如APC、樹狀細胞、B細胞等)上時可與T細胞上之刺激分子特異性結合，藉此由T細胞媒介原初反應，其包括但不限於活化、免疫反應啟動、增生等。刺激配體包括但不限於具有肽的MHC Class I分子、抗CD3抗體、超促效劑抗CD28抗體、與超促效劑抗CD2抗體。

此處所用之「共刺激訊息」乃指一個訊息和初始訊息合併(例如TCR/CD3接合)而導致T細胞反應，例如但不限於關鍵分子的增生與/或上調或下調。

此處所用之「共刺激配體」包括抗原呈現細胞上的分子，其與T細胞上的同源共刺激分子特異性結合。共刺激配體之結合提供一種媒介T細胞反應(包括但不限於增生、活化、分化等)的訊息。共刺激配體誘發一種由刺激分子提供之除初始訊息以外的訊息，例如，由T細胞受體(TCR)/CD3複合體與具有肽之主要組織相容性複合體(MHC)分子結合所提供的訊息。共刺激配體可包括但不限於：CD7、B7-1(CD80)、B7-2(CD86)、程序性死亡(PD)L1、PD-L2、4-1BB配體、OX40配體、可誘發共刺激配體(ICOS-L)、細胞間黏著分子(ICAM)、CD30配體、CD40、CD70、CD83、人類白血球抗原G(HLA-G)、MHC class I鏈相關蛋白質A(MICA)、MHC class I鏈相關蛋白質B(MICB)、疱疹病毒進入媒介(HVEM)、淋巴毒素β受體、3/TR6、類免疫球蛋白轉錄本(ILT)3、ILT4、結合Toll配體受體的促效劑或抗體、與B7-H3特異性結合之配體。共刺激配體包括但不限於與存在於T細胞上的共刺激分子特異性結合之抗體，例如但不限於：CD27、CD28、4-1BB、OX40、CD30、CD40、PD-1、ICOS、淋巴球功能相關抗原1(LFA-1)、CD2、CD7、腫瘤壞死因子超家族成員14(TNFSF14或LIGHT)、自然殺手細胞受體C(NKG2C)、B7-H3、及與CD83特異性結合的配體。

「共刺激分子」是一種T細胞上的結合伴體，其與共刺激配體特異性結合，藉此由T細胞媒介共刺激反應(例如但不限於增生)。共刺激分子包括但不限於：CD27、CD28、4-1BB、OX40、CD30、CD40、CD83、PD-1、ICOS、LFA-1、CD2、CD7、TNFSF14(LIGHT)、NKG2C、B7-H3、MHC class I分子、B-與T-淋巴球衰減因子(BTLA)、與Toll配體受體。

此處術語「調理」與「預先調理」被替換使用且指示為需要T細胞療法之患者準備好合適的狀態。此處所用之調理包括但不限於：在調理後使內源淋巴球數量減少、除去細胞激素積儲、增加一或多種體內恆定性細胞激素或促發炎因子的血清量、強化所投予之T細胞效應功能、在T細胞療法前強化抗原呈現細胞活化與/或有效性、或其任何組合。在一個實施方式中，「調理」包含增加一或多種細胞激素之血清量，該細胞激素例如介白素7(IL-7)、介白素15(IL-15)、介白素10(IL-10)、介白素5(IL-5)、γ誘導蛋白10(IP-10)、介白素8(IL-8)、單核球趨化性蛋白1(MCP-1)、胎盤生長因子(PLGF)、C-反應蛋白(CRP)、可溶性細胞間黏著分子1(sICAM-1)、可溶性血管黏著分子1(sVCAM-1)、或其任何組合物。在另一個實施方式中，「調理」包含增加IL-7、IL-15、IP-10、MCP-1、PLGF、CRP、或其任何組合物之血清量。

此處將術語「減少(reducing)」與「減少(decreasing)」替換使用且指示比原本少的任何變化。「減少(reducing)」與「減少(decreasing)」是需要在測量前與後之間作比較的相對詞。「減少(reducing)」與「減少(decreasing)」包括完全耗盡。

「治療(treatment)」或「治療(treating)」個體乃指對該個體執行任何型式之干預或程序或投予活性藥劑，目的是反轉、緩和、改善、抑制、減緩、或預防和疾病有關聯之症狀、併發症、或狀態、或生物化學指標徵候的發作、進展、發展、嚴重程度或復發。在一個實施方式中，「治療(treatment)」或「治療(treating)」包括部分緩解。在另一個實施方式中，「治療(treatment)」或「治療(treating)」包括完全緩解。

若干中擇一的(例如，或)之使用是指供選擇者中的一者、二者或其任何組合。此處所用之不定冠詞「一(a)」或「一(an)」是指任何詳述或列舉之成分中的「一或多者」。

術語「約」或「包含(comprising essentially of)」乃指在該領域中具有一般技術者所測定之特定值或組成的可接受誤差範圍內的值或組成，該值或組成一部分取決於如何測量或測定到該值或組成，即測量系統之限制。例如，「約」或「包含(comprising essentially of)」可意指按照在該領域中的實作之標準偏差在1以內或多於1。或者，「約」或「包含(comprising essentially of)」可意指至多10%(即±10%)的範圍。例如，約3mg可包括在2.7mg與3.3mg(10%)之間的任何數目。另外，特別地，就生物系統或程序而言，該術語可意指至多一個數量級或至多5倍的值。當在申請案與申請專利範圍中提供特定值或組成時，除非另外指出，否則「約」或「包含(comprising essentially of)」之意思應假定為在該特定值或組成的可接受誤差範圍內。

此處所述之任何濃度範圍、百分比範圍、比例範圍或整數範圍應理解為包括在所述範圍內之任何整數及，在合適情況下，其分數(例如整數的十分之一與百分之一)之值，除非另外指出。

在下列小節中更詳細地描述本發明之各種態樣。

發明之方法

本發明係關於調理需要T細胞療法之患者的方法，該方法包含對該患者投予環磷醯胺及氟達拉濱。本發明顯示用劑量在約200mg/m²/日至約2000mg/m²/日之間的環磷醯胺及劑量在約20mg/m²/日至約900mg/m²/日之間的氟達拉濱調理患者強化後續對該患者投予之T細胞療法有效性，同時減少和環磷醯胺與/或氟達拉濱劑之較高量有關聯的不良事件出現率與/或嚴重程度。

本發明確定在投予T細胞療法前投予環磷醯胺與氟達拉濱使內源淋巴球數量減少。被減少的內源淋巴球可包括但不限於：內源調節T細胞、B細胞、自然殺手細胞、CD4+T細胞、CD8+T細胞、或其任何組合物，該內源淋巴球可抑制經過繼性轉移之T細胞的抗腫瘤效應。內源淋巴球會與經過繼性轉移之T細胞競爭使用抗原與支持細胞激素。用環磷醯胺與氟達拉濱預先治療除去了此一競爭，導致內源性細胞激素量增加。一旦對患者投予經過繼性轉移之T細胞，該T細胞便暴露於增加的內源體內恆定性細胞激素或促發炎因子量。此外，環磷醯胺與氟達拉濱治療會引起腫瘤細胞死亡，導致在患者血清中的腫瘤抗原增加。這會強化在接受T細胞療法前在患者中的抗原呈現細胞活化與/或有效性。在不受任何理論束縛下，用環磷醯胺與氟達拉濱調理透過引入能有利於T細胞之體內恆定性增殖、活化與運輸的分子來改良免疫環境。

先前研究使用環磷醯胺與氟達拉濱之高劑量來減少內源淋巴球數量。然而，這些嚴酷的調理方案和嚴重且可能致命之不良事件有關聯。出人意外地，我們發現本方法可增加經過繼性轉移的T細胞有效性，同時減少不良事件之出現率與嚴重程度。

在某些實施方式中，投予環磷醯胺與氟達拉濱使內源淋巴球減少。在某些實施方式中，投予環磷醯胺與氟達拉濱增加體內恆定性細胞激素有效性。在某些實施方式中，投予環磷醯胺與氟達拉濱強化在該調理後所投予之T細胞效應功能。在某些實施方式中，投予環磷醯胺與氟達拉濱強化抗原呈現細胞活化與/或有效性。

在一個實施方式中，本發明包括一種調理需要T細胞療法之患者的方法，該方法包含對該患者投予劑量在約200mg/m²/日至約2000mg/m²/日之間的環磷醯胺及劑量在約20mg/m²/日至約900mg/m²/日之間的氟達拉濱。在另一個實施方式中，本發明包括一種調理需要T細胞療法之患者的方法，該方法包含對該患者投予劑量在約200mg/m²/日至約2000mg/m²/日之間(例如200mg/m²/日、300mg/m²/日、或500mg/m²/日)的環磷醯胺及劑量在約20mg/m²/日至約900mg/m²/日之間(例如20mg/m²/日、25mg/m²/日、30mg/m²/日、或60mg/m²/日)的氟達拉濱，其中該患者在投予該環磷醯胺與氟達拉濱後顯出IL-7、IL-15、IL-10、IL-5、IP-10、IL-8、MCP-1、PLGF、CRP、sICAM-1、sVCAM-1、或其任何組合(例如IL-15、IP-10與/或IL-7)之增加的血清量，或顯出穿孔素與/或MIP-1b之減少的血清量。在一個實施方式中，本發明包括一種調理需要T細胞療法之患者的方法，該方法包含對該患者投予劑量在約1110mg/m²/日至約2000mg/m²/日之間的環磷醯胺及劑量在約20mg/m²/日至約900mg/m²/日之間(例如20mg/m²/日、25mg/m²/日、30mg/m²/日、或60mg/m²/日)的氟達拉濱。在另一個實施方式中，本發明包括一種調理需要T細胞療法之患者的方法，該方法包含對該患者投予劑量在約1110mg/m²/日至約2000mg/m²/日之間的環磷醯胺及劑量在約20mg/m²/日至約900mg/m²/日之間(例如20mg/m²/日、25mg/m²/日、30mg/m²/日、或60mg/m²/日)的氟達拉濱，其中該患者在投予該環磷醯胺與氟達拉濱後顯出IL-7、IL-15、IL-10、IL-5、IP-10、IL-8、MCP-1、PLGF、CRP、sICAM-1、sVCAM-1、或其任何組合(例如IL-15、IP-10與/或IL-7)之增加的血清量，或顯出穿孔素與/或MIP-1b之減少的血清量。在一個實施方式中，本發明包括一種調理需要T細胞療法之患者的方法，該方法包含對該患者投予劑量等於或高於約30mg/kg/日且低於60mg/kg/日的環磷醯胺及劑量在約20mg/m²/日至約900mg/m²/日之間(例如20mg/m²/日、25mg/m²/日、30mg/m²/日、或60mg/m²/日)的氟達拉濱。

在另一個實施方式中，本發明包括一種使需要T細胞療法之患者中的內源淋巴球減少或耗損的方法，該方法包含對該患者投予劑量在約200mg/m²/日至約 2000mg/m²/日之間的環磷醯胺及劑量在約20mg/m²/日至約900mg/m²/日之間的氟達拉濱。在另一個實施方式中，本發明包括一種使需要T細胞療法之患者中的內源淋巴球減少或耗損的方法，該方法包含對該患者投予劑量在約200mg/m²/日至約2000mg/m²/日之間(例如200mg/m²/日、300mg/m²/日、或500mg/m²/日)的環磷醯胺及劑量在約20mg/m²/日至約900mg/m²/日之間(例如20mg/m²/日、25mg/m²/日、30mg/m²/日、或60mg/m²/日)的氟達拉濱，其中該患者在投予該環磷醯胺與氟達拉濱後顯出IL-7、IL-15、IL-10、IL-5、IP-10、IL-8、MCP-1、PLGF、CRP、sICAM-1、sVCAM-1、或其任何組合(例如IL-15、IP-10與/或IL-7)之增加的血清量，或顯出穿孔素與/或MIP-1b之減少的血清量。在一個實施方式中，本發明包括一種使需要T細胞療法之患者中的內源淋巴球減少或耗損的方法，該方法包含對該患者投予劑量在約1110mg/m²/日至約2000mg/m²/日之間的環磷醯胺及劑量在約20mg/m²/日至約900mg/m²/日之間(例如20mg/m²/日、25mg/m²/日、30mg/m²/日、或60mg/m²/日)的氟達拉濱，其中該患者在投予該環磷醯胺與氟達拉濱後顯出IL-7、IL-15、IL-10、IL-5、IP-10、IL-8、MCP-1、PLGF、CRP、sICAM-1、sVCAM-1、或其任何組合(例如IL-15、IP-10與/或IL-7)之增加的血清量，或顯出穿孔素與/或MIP-1b之減少的血清量。在一個實施方式中，本發明包括一種使需要T細胞療法之患者中的內源淋巴球減少或耗損的方法，該方法包含對該患者投予劑量等於或高於約30mg/kg/日且低於60mg/kg/日的環磷醯胺及劑量在約20mg/m²/日至約900mg/m²/日之間(例如20mg/m²/日、25mg/m²/日、30mg/m²/日、或60mg/m²/日)的氟達拉濱，其中該患者在投予該環磷醯胺與氟達拉濱後顯出IL-7、IL-15、IL-10、IL-5、IP-10、IL-8、MCP-1、PLGF、CRP、sICAM-1、sVCAM-1、或其任何組合(例如IL-15、IP-10與/或IL-7)之增加的血清量，或顯出穿孔素與/或MIP-1b之減少的血清量。

在其他實施方式中，本發明包括一種使需要T細胞療法之患者中的體內恆定性細胞激素有效性增加的方法，該方法包含對該患者投予劑量在約200mg/m²/日至約2000mg/m²/日之間(例如200mg/m²/日、300mg/m²/日、或500mg/m²/日)的環磷醯胺及劑量在約20mg/m²/日至約900mg/m²/日之間(例如20mg/m²/日、25mg/m²/日、30mg/m²/日、或60mg/m²/日)的氟達拉濱。在另一個實施方式中，本發明包括一種使需要T細胞療法之患者中的體內恆定性細胞激素有效性增加的方法，該方法包含對該患者投予劑量在約200mg/m²/日至約2000mg/m²/日之間(例如200mg/m²/日、300mg/m²/日、或500mg/m²/日)的環磷醯胺及劑量在約20mg/m²/日至約900mg/m²/日之間(例如20mg/m²/日、25mg/m²/日、30mg/m²/日、或60mg/m²/日)的氟達拉濱，其中該患者在投予該環磷醯胺與氟達拉濱後顯出IL-7、IL-15、IL-10、IL-5、IP-10、IL-8、MCP-1、 PLGF、CRP、sICAM-1、sVCAM-1、或其任何組合(例如IL-15、IP-10與/或IL-7)之增加的血清量，或顯出穿孔素與/或MIP-1b之減少的血清量。在一個實施方式中，本發明包括一種使需要T細胞療法之患者中的體內恆定性細胞激素有效性增加的方法，該方法包含對該患者投予劑量在約1110mg/m²/日至約2000mg/m²/日之間的環磷醯胺及劑量在約20mg/m²/日至約900mg/m²/日之間(例如20mg/m²/日、25mg/m²/日、30mg/m²/日、或60mg/m²/日)的氟達拉濱，其中該患者在投予該環磷醯胺與氟達拉濱後顯出IL-7、IL-15、IL-10、IL-5、IP-10、IL-8、MCP-1、PLGF、CRP、sICAM-1、sVCAM-1、或其任何組合(例如IL-15、IP-10與/或IL-7)之增加的血清量，或顯出穿孔素與/或MIP-1b之減少的血清量。在一個實施方式中，本發明包括一種使需要T細胞療法之患者中的體內恆定性細胞激素有效性增加的方法，該方法包含對該患者投予劑量等於或高於約30mg/kg/日且低於60mg/kg/日的環磷醯胺及劑量在約20mg/m²/日至約900mg/m²/日之間(例如20mg/m²/日、25mg/m²/日、30mg/m²/日、或60mg/m²/日)的氟達拉濱，其中該患者在投予該環磷醯胺與氟達拉濱後顯出IL-7、IL-15、IL-10、IL-5、IP-10、IL-8、MCP-1、PLGF、CRP、sICAM-1、sVCAM-1、或其任何組合(例如IL-15、IP-10與/或IL-7)之增加的血清量，或顯出穿孔素與/或MIP-1b之減少的血清量。

在一個特定實施方式中，本發明包括一種使需要T細胞療法之患者中經投予之T細胞效應功能強化的方法，該方法包含對該患者投予劑量在約200mg/m²/日至約2000mg/m²/日之間(例如200mg/m²/日、300mg/m²/日、或500mg/m²/日)的環磷醯胺及劑量在約20mg/m²/日至約900mg/m²/日之間(例如20mg/m²/日、25mg/m²/日、30mg/m²/日、或60mg/m²/日)的氟達拉濱。在另一個實施方式中，本發明包括一種使需要T細胞療法之患者中經投予之T細胞效應功能強化的方法，該方法包含對該患者投予劑量在約200mg/m²/日至約2000mg/m²/日之間(例如200mg/m²/日、300mg/m²/日、或500mg/m²/日)的環磷醯胺及劑量在約20mg/m²/日至約900mg/m²/日之間(例如20mg/m²/日、25mg/m²/日、30mg/m²/日、或60mg/m²/日)的氟達拉濱，其中該患者在投予該環磷醯胺與氟達拉濱後顯出IL-7、IL-15、IL-10、IL-5、IP-10、IL-8、MCP-1、PLGF、CRP、sICAM-1、sVCAM-1、或其任何組合(例如IL-15、IP-10與/或IL-7)之增加的血清量，或顯出穿孔素與/或MIP-1b之減少的血清量。在一個實施方式中，本發明包括一種使需要T細胞療法之患者中經投予之T細胞效應功能強化的方法，該方法包含對該患者投予劑量在約1110mg/m²/日至約2000mg/m²/日之間的環磷醯胺及劑量在約20mg/m²/日至約900mg/m²/日之間(例如20mg/m²/日、25mg/m²/日、30mg/m²/日、或60mg/m²/日)的氟達拉濱，其中該患者在投予該環磷醯胺與氟達拉濱後顯出IL-7、IL-15、IL-10、IL-5、IP-10、IL-8、MCP-1、 PLGF、CRP、sICAM-1、sVCAM-1、或其任何組合(例如IL-15、IP-10與/或IL-7)之增加的血清量，或顯出穿孔素與/或MIP-1b之減少的血清量。在一個實施方式中，本發明包括一種使需要T細胞療法之患者中經投予之T細胞效應功能強化的方法，該方法包含對該患者投予劑量等於或高於約30mg/kg/日且低於60mg/kg/日的環磷醯胺及劑量在約20mg/m²/日至約900mg/m²/日之間(例如20mg/m²/日、25mg/m²/日、30mg/m²/日、或60mg/m²/日)的氟達拉濱，其中該患者在投予該環磷醯胺與氟達拉濱後顯出IL-7、IL-15、IL-10、IL-5、IP-10、IL-8、MCP-1、PLGF、CRP、sICAM-1、sVCAM-1、或其任何組合(例如IL-15、IP-10與/或IL-7)之增加的血清量，或顯出穿孔素與/或MIP-1b之減少的血清量。

在某些實施方式中，本發明包括一種使需要T細胞療法之患者中抗原呈現細胞活化與/或有效性強化之方法，該方法包含對該患者投予劑量在約200mg/m²/日至約2000mg/m²/日之間(例如200mg/m²/日、300mg/m²/日、或500mg/m²/日)的環磷醯胺及劑量在約20mg/m²/日至約900mg/m²/日之間(例如20mg/m²/日、25mg/m²/日、30mg/m²/日、或60mg/m²/日)的氟達拉濱。在另一個實施方式中，本發明包括一種使需要T細胞療法之患者中抗原呈現細胞活化與/或有效性強化之方法，該方法包含對該患者投予劑量在約200mg/m²/日至約2000mg/m²/日之間(例如200mg/m²/日、300mg/m²/日、或500mg/m²/日)的環磷醯胺及劑量在約20mg/m²/日至約900mg/m²/日之間(例如20mg/m²/日、25mg/m²/日、30mg/m²/日、或60mg/m²/日)的氟達拉濱，其中該患者在投予該環磷醯胺與氟達拉濱後顯出IL-7、IL-15、IL-10、IL-5、IP-10、IL-8、MCP-1、PLGF、CRP、sICAM-1、sVCAM-1、或其任何組合(例如IL-15、IP-10與/或IL-7)之增加的血清量，或顯出穿孔素與/或MIP-1b之減少的血清量。在一個實施方式中，本發明包括一種使需要T細胞療法之患者中抗原呈現細胞活化與/或有效性強化之方法，該方法包含對該患者投予劑量在約1110mg/m²/日至約2000mg/m²/日之間的環磷醯胺及劑量在約20mg/m²/日至約900mg/m²/日之間(例如20mg/m²/日、25mg/m²/日、30mg/m²/日、或60mg/m²/日)的氟達拉濱，其中該患者在投予該環磷醯胺與氟達拉濱後顯出IL-7、IL-15、IL-10、IL-5、IP-10、IL-8、MCP-1、PLGF、CRP、sICAM-1、sVCAM-1、或其任何組合(例如IL-15、IP-10與/或IL-7)之增加的血清量，或顯出穿孔素與/或MIP-1b之減少的血清量。在一個實施方式中，本發明包括一種使需要T細胞療法之患者中抗原呈現細胞活化與/或有效性強化之方法，該方法包含對該患者投予劑量等於或高於約30mg/kg/日且低於60mg/kg/日的環磷醯胺及劑量在約20mg/m²/日至約900mg/m²/日之間(例如20mg/m²/日、25mg/m²/日、30mg/m²/日、或60mg/m²/日)的氟達拉濱，其中該患者在投予該環磷醯胺與氟達拉濱後顯出IL-7、IL-15、IL-10、IL-5、IP-10、IL- 8、MCP-1、PLGF、CRP、sICAM-1、sVCAM-1、或其任何組合(例如IL-15、IP-10與/或IL-7)之增加的血清量，或顯出穿孔素與/或MIP-1b之減少的血清量。

本發明之方法包括在T細胞療法前投予環磷醯胺與氟達拉濱。可調整各成分的投予時機使效應達到最大。如此處所述，將投予T細胞療法之日指定為第0日。在投予T細胞療法前的任何時候可投予環磷醯胺與氟達拉濱。在某些實施方式中，在投予T細胞療法前至少7日、至少6日、至少5日、至少4日、至少3日、至少2日、或至少1日開始投予環磷醯胺與氟達拉濱。在其他實施方式中，在投予T細胞療法前至少8日、至少9日、至少10日、至少11日、至少12日、至少13日、或至少14日開始投予環磷醯胺與氟達拉濱。在一個實施方式中，在投予T細胞療法前7日開始投予環磷醯胺與氟達拉濱。在另一個實施方式中，在投予T細胞療法前5日開始投予環磷醯胺與氟達拉濱。

在一個特定實施方式中，在投予T細胞療法前約7日開始投予環磷醯胺，及在投予T細胞療法前約5日開始該投予氟達拉濱。在另一個實施方式中，在投予T細胞療法前約5日開始投予環磷醯胺，及在投予T細胞療法前約5日開始該投予氟達拉濱。

可調整各成分之投予時機使效應達到最大。通常，可每日投予環磷醯胺與氟達拉濱。在某些實施方式中，每日投予環磷醯胺及氟達拉濱投予約2日、約3日、約4日、約5日、約6日、或約7日。在一個特定實施方式中，每日投予環磷醯胺投予2日，及每日投予氟達拉濱劑量投予5日。在另一個實施方式中，每日投予環磷醯胺及氟達拉濱投予約3日。

如此處所述，將對患者投予T細胞療法之日指定為第0日。在某些實施方式中，在第0日前的第7日與第6日(即第-7日與第-6日)對患者投予環磷醯胺。在其他實施方式中，在第-5、-4、與-3日對患者投予環磷醯胺。在某些實施方式中，在第-5、-4、-3、-2、與-1日對患者投予氟達拉濱。在其他實施方式中，在第-5、-4、與-3日對患者投予氟達拉濱。

可在同日或不同日投予環磷醯胺與氟達拉濱。如果在同日投予環磷醯胺與氟達拉濱，則可在氟達拉濱前或後投予環磷醯胺。在一個實施方式中，在第-7與-6日對患者投予環磷醯胺，及在第-5、-4、-3、-2、與-1日對患者投予氟達拉濱。在另一個實施方式中，在第-5、-4、與-3日對患者投予環磷醯胺，及在第-5、-4、與-3日對患者投予氟達拉濱。

在某些實施方式中，可同時投予或依序投予環磷醯胺及氟達拉濱。在一個實施方式中，在投予氟達拉濱前對患者投予環磷醯胺。在另一個實施方式中，在投予氟達拉濱後對患者投予環磷醯胺。

可利用任何途徑(包括靜脈注射(IV))投予環磷醯胺與氟達拉濱。在某些實施方式中，在下列時間內利用 IV投予環磷醯胺：約30分鐘、約35分鐘、約40分鐘、約45分鐘、約50分鐘、約55分鐘、約60分鐘、約90分鐘、約120分鐘。在某些實施方式中，在下列時間內利用IV投予氟達拉濱：約10分鐘、約15分鐘、約20分鐘、約25分鐘、約30分鐘、約35分鐘、約40分鐘、約45分鐘、約50分鐘、約55分鐘、約60分鐘、約90分鐘、約120分鐘。

在某些實施方式中，在投予環磷醯胺與氟達拉濱後對患者投予T細胞療法。在某些實施方式中，該T細胞療法包含過繼性細胞療法。在某些實施方式中，過繼性細胞療法係選自腫瘤浸潤淋巴球(TIL)免疫療法、自體細胞療法、工程化自體細胞療法(eACT)、與同種異體T細胞移植法。在一個特定實施方式中，eACT包含投予工程化抗原特異性嵌合抗原受體(CAR)陽性(+)T細胞。在另一個實施方式中，eACT包含投予工程化抗原特異性T細胞受體(TCR)陽性(+)T細胞。在某些實施方式中，工程化T細胞治療患者中的腫瘤。

在一個特定實施方式中，本發明包括一種調理需要T細胞療法之患者的方法，該方法包含對該患者投予劑量約500mg/m²/日的環磷醯胺及劑量約60mg/m²/日的氟達拉濱，其中在第-5、-4、與-3日投予環磷醯胺，及其中在第-5、-4、與-3日投予氟達拉濱。在另一個實施方式中，本發明包括一種調理需要T細胞療法之患者的方法，該方法包含對該患者投予劑量約500mg/m²/日的環磷醯胺及劑量約60mg/m²/日的氟達拉濱，其中在第-7與-6日投予環磷醯胺，及其中在第-5、-4、-3、-2、與-1日投予氟達拉濱。在另一個實施方式中，本發明包括一種調理需要T細胞療法之患者的方法，該方法包含對該患者投予劑量約500mg/m²/日的環磷醯胺及劑量約30mg/m²/日的氟達拉濱，其中在第-7與-6日投予環磷醯胺，及其中在第-5、-4、-3、-2、與-1日投予氟達拉濱。在另一個實施方式中，本發明包括一種調理需要T細胞療法之患者的方法，該方法包含對該患者投予劑量約300mg/m²/日的環磷醯胺及劑量約60mg/m²/日的氟達拉濱，其中在第-7與-6日投予環磷醯胺，及其中在第-5、-4、-3、-2、與-1日投予氟達拉濱。

在此處所述之方法中可包括各種其他干預。例如，眾所周知，環磷醯胺與氟達拉濱在投予後可能引起患者中的不良事件。本發明之範圍包括還可對患者投予組成物以使這些不良事件中的某些事件減少。在某些實施方式中，該方法另外包含對患者投予生理鹽水。可在投予環磷醯胺與/或氟達拉濱前或後，或在投予環磷醯胺與/或氟達拉濱前與後對患者投予生理鹽水。在某些實施方式中，可在投予環磷醯胺與/或氟達拉濱同時投予生理鹽水。在一個特定實施方式中，在每個輸注日在投予環磷醯胺與/或氟達拉濱前，及在投予環磷醯胺與/或氟達拉濱後對患者投予生理鹽水。

可利用任何途徑(包括靜脈注射或口服)對患者投予生理鹽水。在某些實施方式中，該方法包含投予約0.1L、約0.2L、約0.3L、約0.4L、約0.5L、約0.6L、約0.7L、約0.8L、約0.9L、約1L、約1.1L、約1.2L、約1.3L、約1.4L、約1.5L、約1.6L、約1.7L、約1.8L、約1.9L、或約2.0L生理鹽水。可將生理鹽水的NaCl溶解成約0.1%、約0.2%、約0.3%、約0.4%、約0.5%、約0.6%、約0.7%、約0.8%、約0.9%、約1.0%、約1.1%、約1.2%、約1.3%、約1.4%、約1.5%、約1.6%、約1.7%、約1.8%、約1.9%、或約2.0%的最終濃度。在一個實施方式中，該方法包含對患者投予1.0L的0.9% NaCl生理鹽水。在一個特定實施方式中，該方法包含在每個輸注日在投予環磷醯胺與/或氟達拉濱前，及在投予環磷醯胺與/或氟達拉濱後對患者投予1.0L的0.9% NaCl生理鹽水。

另外，還可對患者投予佐劑與賦形劑。例如，美司鈉(mesna，2-巰基乙烷磺酸鈉)是一種具有解毒劑作用以抑制在用環磷醯胺治療後可能發生的***與血尿之佐劑。環磷醯胺在體內會被轉化為尿毒性代謝產物(例如丙烯醛)。藉由美司鈉的巰基與乙烯基反應將這些代謝產物解毒。美司鈉還使尿液中半胱胺酸增加。在某些實施方式中，該方法另外包含對患者投予美司鈉。可在投予環磷醯胺與/或氟達拉濱前，及在投予環磷醯胺與/或氟達拉濱後，或在投予環磷醯胺與/或氟達拉濱前與後投予美司鈉。在一個實施方式中，靜脈注射或口服(經口)美司鈉。例如，可將口服美司鈉與口服環磷醯胺一起投予。

此外，在此處所述之方法中還可對患者投予外源性細胞激素。如上述，假設減少內源淋巴球數量使內源性分子(例如細胞激素)之生物可用率增加，可有利於經過繼性轉移的T細胞之增殖、活化與運輸。所以，可對患者投予各種細胞激素。在一個實施方式中，該方法另外包含投予一或多劑的IL-2、IL-15、IL-7、IL-10、IL-5、IP-10、IL-8、MCP-1、PLGF、CRP、sICAM-1、sVCAM-1、或其任何組合。在一個特定實施方式中，該方法包含投予一或多劑IL-2。IL-2劑量可為至少約10,000IU/kg、至少約50,000IU/kg、至少約100,000IU/kg、至少約200,000IU/kg、至少約400,000IU/kg、至少約600,000IU/kg、至少約700,000IU/kg、至少約800,000IU/kg、或至少約1,000,000IU/kg。

環磷醯胺與氟達拉濱

環磷醯胺(ENDOXAN®、CYTOXAN®、PROCYTOX®、NEOSAR®、REVIMMUNE®、CYCLOBLASTIN®)是一種具有強力免疫抑制活性的氮芥衍生物烷化劑。環磷醯胺具有抗腫瘤藥作用，及被用來治療各種癌症，包括淋巴瘤、多發性骨髓瘤、白血病、蕈狀肉芽腫、神經胚細胞瘤、卵巢癌、眼癌、與乳癌、及自體免疫疾病。

一旦對患者投予，環磷醯胺便在肝臟內被轉變成丙烯醛與磷醯胺。將烷基加到在咪唑的7號氮原子位置之DNA的鳥嘌呤鹼基使這些代謝產物在靜止細胞與***細胞中一起與DNA交聯。所以，DNA複製被抑制而導致細胞死亡。

在本發明中，可根據所欲效果來調整環磷醯胺劑量，例如，以調節內源淋巴球減少與/或控制不良事件之嚴重程度。例如，環磷醯胺劑量可高於約300mg/m²/日且低於約900mg/m²/日。在某些實施方式中，環磷醯胺劑量是約350mg/m²/日至約2000mg/m²/日、至少約400mg/m²/日至約2000mg/m²/日、約450mg/m²/日至約2000mg/m²/日、約500mg/m²/日至約2000mg/m²/日、約550mg/m²/日至約2000mg/m²/日、或約600mg/m²/日至約2000mg/m²/日。在另一個實施方式中，環磷醯胺劑量是約350mg/m²/日至約1500mg/m²/日、約350mg/m²/日至約1000mg/m²/日、約400mg/m²/日至約900mg/m²/日、約450mg/m²/日至約800mg/m²/日、約450mg/m²/日至約700mg/m²/日、約500mg/m²/日至約600mg/m²/日、或約300mg/m²/日至約500mg/m²/日。在某些實施方式中，環磷醯胺劑量是約350mg/m²/日、約400mg/m²/日、約450mg/m²/日、約500mg/m²/日、約550mg/m²/日、約600mg/m²/日、約650mg/m²/日、約700mg/m²/日、約800mg/m²/日、約900mg/m²/日、或約1000mg/m²/日。在一個特定實施方式中，環磷醯胺劑量是約200mg/m²/日。在一個特定實施方式中，環磷醯胺劑量是約300mg/m²/日。在另一個實施方式中，環磷醯胺劑量是約500mg/m²/日。在其他實施方式中，環磷醯胺劑量是約200mg/m²/日至約2000mg/m²/日、約300mg/m²/日至約2000mg/m²/日、約400mg/m²/日至約2000mg/m²/日、約500mg/m²/日至約2000mg/m²/日、約600mg/m²/日至約2000mg/m²/日、約700mg/m²/日至約2000mg/m²/日、約800mg/m²/日至約2000mg/m²/日、約900mg/m²/日至約2000mg/m²/日、約1000mg/m²/日至約2000mg/m²/日、約1100mg/m²/日至約2000mg/m²/日、約1200mg/m²/日至約2000mg/m²/日、約1300mg/m²/日至約2000mg/m²/日、約1400mg/m²/日至約2000mg/m²/日、約1500mg/m²/日至約2000mg/m²/日、約1600mg/m²/日至約2000mg/m²/日、約1700mg/m²/日至約2000mg/m²/日、約1800mg/m²/日至約2000mg/m²/日、約1900mg/m²/日至約2000mg/m²/日、約200mg/m²/日至約1900mg/m²/日、約400mg/m²/日至約1800mg/m²/日、約500mg/m²/日至約1700mg/m²/日、約600mg/m²/日至約1600mg/m²/日、約700mg/m²/日至約1500mg/m²/日、約800mg/m²/日至約1400mg/m²/日、約900mg/m²/日至約1300mg/m²/日、約1000mg/m²/日至約1200mg/m²/日、約1100mg/m²/日至約1200mg/m²/日、或約1110mg/m²/日至約1150mg/m²/日。

氟達拉濱鹽酸鹽(FLUDARA®)是一種合成嘌呤核苷，其不同於生理核苷之處在於醣部分是***糖而不是核糖或去氧核醣。氟達拉濱具有嘌呤拮抗劑抗代謝物作用，及被用來治療各種血液惡性腫瘤，包括各種淋巴瘤與白血病。

一旦對患者投予，氟達拉濱便被快速脫磷酸化成2-氟-ara-A，然後在細胞內被去氧胞苷激酶磷酸化成活性三磷酸鹽2-氟-ara-ATP。然後此代謝產物干擾DNA複製(像是抑制DNA聚合酶α、核糖核苷酸還原酶、與DNA引發酶)，從而抑制DNA合成。所以，投予氟達拉濱導致***細胞中的細胞死亡增加。

在本發明中，還可根據所欲效果來調整氟達拉濱劑量。例如，氟達拉濱劑量可高於30mg/m²/日且低於900mg/m²/日。在某些實施方式中，氟達拉濱劑量可為約35mg/m²/日至約900mg/m²/日、約40mg/m²/日至約900mg/m²/日、約45mg/m²/日至約900mg/m²/日、約50mg/m²/日至約900mg/m²/日、約55mg/m²/日至約900mg/m²/日、或約60mg/m²/日至約900mg/m²/日。在其他實施方式中，氟達拉濱劑量是約35mg/m²/日至約900mg/m²/日、約35mg/m²/日至約800mg/m²/日、約35mg/m²/日至約700mg/m²/日、約35mg/m²/日至約600mg/m²/日、約35mg/m²/日至約500mg/m²/日、約35mg/m²/日至約400mg/m²/日、約35mg/m²/日至約300mg/m²/日、約35mg/m²/日至約200mg/m²/日、約35mg/m²/日至約100mg/m²/日、約40mg/m²/日至約90mg/m²/日、約45mg/m²/日至約80mg/m²/日、約45mg/m²/日至約70mg/m²/日、或約50mg/m²/日至約60 mg/m²/日。在某些實施方式中，氟達拉濱劑量是約35mg/m²/日、約40mg/m²/日、約45mg/m²/日、約50mg/m²/日、約55mg/m²/日、約60mg/m²/日、約65mg/m²/日、約70mg/m²/日、約75mg/m²/日、約80mg/m²/日、約85mg/m²/日、約90mg/m²/日、約95mg/m²/日、約100mg/m²/日、約200mg/m²/日、或約300mg/m²/日。在其他實施方式中，氟達拉濱劑量是約110mg/m²/日、120mg/m²/日、130mg/m²/日、140mg/m²/日、150mg/m²/日、160mg/m²/日、170mg/m²/日、180mg/m²/日、或190mg/m²/日。在某些實施方式中，氟達拉濱劑量是約210mg/m²/日、220mg/m²/日、230mg/m²/日、240mg/m²/日、250mg/m²/日、260mg/m²/日、270mg/m²/日、280mg/m²/日、或290mg/m²/日。在一個特定實施方式中，氟達拉濱劑量是約20mg/m²/日。在一個特定實施方式中，氟達拉濱劑量是約30mg/m²/日。在另一個實施方式中，氟達拉濱劑量是約60mg/m²/日。在另一個實施方式中，氟達拉濱劑量是約25mg/m²/日。

可將環磷醯胺與氟達拉濱劑量一起或獨立地升高或降低。例如，可增加環磷醯胺劑量，同時減少氟達拉濱劑量，及可減少環磷醯胺劑量，同時增加氟達拉濱劑量。或者，可將環磷醯胺與氟達拉濱劑量一起增加或減少。

在某些實施方式中，環磷醯胺劑量是100mg/m²/日(或約110mg/m²/日、120mg/m²/日、130mg/m²/ 日、或140mg/m²/日)及氟達拉濱劑量是5mg/m²/日、10mg/m²/日、15mg/m²/日、20mg/m²/日、25mg/m²/日、30mg/m²/日、35mg/m²/日、40mg/m²/日、45mg/m²/日、50mg/m²/日、55mg/m²/日、60mg/m²/日、65mg/m²/日、70mg/m²/日、或75mg/m²/日。

在某些實施方式中，環磷醯胺劑量是150mg/m²/日(或160mg/m²/日、170mg/m²/日、180mg/m²/日、或190mg/m²/日)及氟達拉濱劑量是5mg/m²/日、10mg/m²/日、15mg/m²/日、20mg/m²/日、25mg/m²/日、30mg/m²/日、35mg/m²/日、40mg/m²/日、45mg/m²/日、50mg/m²/日、55mg/m²/日、60mg/m²/日、65mg/m²/日、70mg/m²/日、或75mg/m²/日。

在某些實施方式中，環磷醯胺劑量是約200mg/m²/日(或210mg/m²/日、220mg/m²/日、230mg/m²/日、或240mg/m²/日)及氟達拉濱劑量是5mg/m²/日、10mg/m²/日、15mg/m²/日、20mg/m²/日、25mg/m²/日、30mg/m²/日、35mg/m²/日、40mg/m²/日、45mg/m²/日、50mg/m²/日、55mg/m²/日、60mg/m²/日、65mg/m²/日、70mg/m²/日、或75mg/m²/日。

在某些實施方式中，環磷醯胺劑量是250mg/m²/日(或260mg/m²/日、270mg/m²/日、280mg/m²/日、或290mg/m²/日)及氟達拉濱劑量是5mg/m²/日、10mg/m²/日、15mg/m²/日、20mg/m²/日、25mg/m²/日、30mg/m²/日、35mg/m²/日、40mg/m²/日、45mg/m²/日、50 mg/m²/日、55mg/m²/日、60mg/m²/日、65mg/m²/日、70mg/m²/日、或75mg/m²/日。

在某些實施方式中，環磷醯胺劑量是300mg/m²/日(或310mg/m²/日、320mg/m²/日、330mg/m²/日、或340mg/m²/日)及氟達拉濱劑量是5mg/m²/日、10mg/m²/日、15mg/m²/日、20mg/m²/日、25mg/m²/日、30mg/m²/日、35mg/m²/日、40mg/m²/日、45mg/m²/日、50mg/m²/日、55mg/m²/日、60mg/m²/日、65mg/m²/日、70mg/m²/日、或75mg/m²/日。

在某些實施方式中，環磷醯胺劑量是350mg/m²/日(或360mg/m²/日、370mg/m²/日、380mg/m²/日、或390mg/m²/日)及氟達拉濱劑量是5mg/m²/日、10mg/m²/日、15mg/m²/日、20mg/m²/日、25mg/m²/日、30mg/m²/日、35mg/m²/日、40mg/m²/日、45mg/m²/日、50mg/m²/日、55mg/m²/日、60mg/m²/日、65mg/m²/日、70mg/m²/日、或75mg/m²/日。

在某些實施方式中，環磷醯胺劑量是400mg/m²/日(或410mg/m²/日、420mg/m²/日、430mg/m²/日、或440mg/m²/日)及氟達拉濱劑量是5mg/m²/日、10mg/m²/日、15mg/m²/日、20mg/m²/日、25mg/m²/日、30mg/m²/日、35mg/m²/日、40mg/m²/日、45mg/m²/日、50mg/m²/日、55mg/m²/日、60mg/m²/日、65mg/m²/日、70mg/m²/日、或75mg/m²/日。

在某些實施方式中，環磷醯胺劑量是450 mg/m²/日(或460mg/m²/日、470mg/m²/日、480mg/m²/日、或490mg/m²/日)及氟達拉濱劑量是5mg/m²/日、10mg/m²/日、15mg/m²/日、20mg/m²/日、25mg/m²/日、30mg/m²/日、35mg/m²/日、40mg/m²/日、45mg/m²/日、50mg/m²/日、55mg/m²/日、60mg/m²/日、65mg/m²/日、70mg/m²/日、或75mg/m²/日。

在某些實施方式中，環磷醯胺劑量是500mg/m²/日(或510mg/m²/日、520mg/m²/日、530mg/m²/日、或540mg/m²/日)及氟達拉濱劑量是5mg/m²/日、10mg/m²/日、15mg/m²/日、20mg/m²/日、25mg/m²/日、30mg/m²/日、35mg/m²/日、40mg/m²/日、45mg/m²/日、50mg/m²/日、55mg/m²/日、60mg/m²/日、65mg/m²/日、70mg/m²/日、或75mg/m²/日。

在某些實施方式中，環磷醯胺劑量是550mg/m²/日(或560mg/m²/日、570mg/m²/日、580mg/m²/日、或590mg/m²/日)及氟達拉濱劑量是5mg/m²/日、10mg/m²/日、15mg/m²/日、20mg/m²/日、25mg/m²/日、30mg/m²/日、35mg/m²/日、40mg/m²/日、45mg/m²/日、50mg/m²/日、55mg/m²/日、60mg/m²/日、65mg/m²/日、70mg/m²/日、或75mg/m²/日。

在某些實施方式中，環磷醯胺劑量是600mg/m²/日(或610mg/m²/日、620mg/m²/日、630mg/m²/日、或640mg/m²/日)及氟達拉濱劑量是5mg/m²/日、10mg/m²/日、15mg/m²/日、20mg/m²/日、25mg/m²/日、30 mg/m²/日、35mg/m²/日、40mg/m²/日、45mg/m²/日、50mg/m²/日、55mg/m²/日、60mg/m²/日、65mg/m²/日、70mg/m²/日、或75mg/m²/日。

在某些實施方式中，環磷醯胺劑量是650mg/m²/日(或660mg/m²/日、670mg/m²/日、680mg/m²/日、或690mg/m²/日)及氟達拉濱劑量是5mg/m²/日、10mg/m²/日、15mg/m²/日、20mg/m²/日、25mg/m²/日、30mg/m²/日、35mg/m²/日、40mg/m²/日、45mg/m²/日、50mg/m²/日、55mg/m²/日、60mg/m²/日、65mg/m²/日、70mg/m²/日、或75mg/m²/日。

在某些實施方式中，環磷醯胺劑量是700mg/m²/日(或710mg/m²/日、720mg/m²/日、730mg/m²/日、或740mg/m²/日)及氟達拉濱劑量是5mg/m²/日、10mg/m²/日、15mg/m²/日、20mg/m²/日、25mg/m²/日、30mg/m²/日、35mg/m²/日、40mg/m²/日、45mg/m²/日、50mg/m²/日、55mg/m²/日、60mg/m²/日、65mg/m²/日、70mg/m²/日、或75mg/m²/日。

在某些實施方式中，環磷醯胺劑量是750mg/m²/日(或760mg/m²/日、770mg/m²/日、780mg/m²/日、或790mg/m²/日)及氟達拉濱劑量是5mg/m²/日、10mg/m²/日、15mg/m²/日、20mg/m²/日、25mg/m²/日、30mg/m²/日、35mg/m²/日、40mg/m²/日、45mg/m²/日、50mg/m²/日、55mg/m²/日、60mg/m²/日、65mg/m²/日、70mg/m²/日、或75mg/m²/日。

在某些實施方式中，環磷醯胺劑量是800mg/m²/日(或810mg/m²/日、820mg/m²/日、830mg/m²/日、或840mg/m²/日)及氟達拉濱劑量是5mg/m²/日、10mg/m²/日、15mg/m²/日、20mg/m²/日、25mg/m²/日、30mg/m²/日、35mg/m²/日、40mg/m²/日、45mg/m²/日、50mg/m²/日、55mg/m²/日、60mg/m²/日、65mg/m²/日、70mg/m²/日、或75mg/m²/日。

在某些實施方式中，環磷醯胺劑量是850mg/m²/日(或860mg/m²/日、870mg/m²/日、880mg/m²/日、或890mg/m²/日)及氟達拉濱劑量是5mg/m²/日、10mg/m²/日、15mg/m²/日、20mg/m²/日、25mg/m²/日、30mg/m²/日、35mg/m²/日、40mg/m²/日、45mg/m²/日、50mg/m²/日、55mg/m²/日、60mg/m²/日、65mg/m²/日、70mg/m²/日、或75mg/m²/日。

在某些實施方式中，環磷醯胺劑量是900mg/m²/日(或910mg/m²/日、920mg/m²/日、930mg/m²/日、或940mg/m²/日)及氟達拉濱劑量是5mg/m²/日、10mg/m²/日、15mg/m²/日、20mg/m²/日、25mg/m²/日、30mg/m²/日、35mg/m²/日、40mg/m²/日、45mg/m²/日、50mg/m²/日、55mg/m²/日、60mg/m²/日、65mg/m²/日、70mg/m²/日、或75mg/m²/日。

在某些實施方式中，環磷醯胺劑量是950mg/m²/日(或960mg/m²/日、970mg/m²/日、980mg/m²/日、或990mg/m²/日)及氟達拉濱劑量是5mg/m²/日、10 mg/m²/日、15mg/m²/日、20mg/m²/日、25mg/m²/日、30mg/m²/日、35mg/m²/日、40mg/m²/日、45mg/m²/日、50mg/m²/日、55mg/m²/日、60mg/m²/日、65mg/m²/日、70mg/m²/日、或75mg/m²/日。

在某些實施方式中，環磷醯胺劑量是1000mg/m²/日(或1010mg/m²/日、1020mg/m²/日、1030mg/m²/日、或1040mg/m²/日)及氟達拉濱劑量是5mg/m²/日、10mg/m²/日、15mg/m²/日、20mg/m²/日、25mg/m²/日、30mg/m²/日、35mg/m²/日、40mg/m²/日、45mg/m²/日、50mg/m²/日、55mg/m²/日、60mg/m²/日、65mg/m²/日、70mg/m²/日、或75mg/m²/日。

在其他實施方式中，環磷醯胺劑量是在100mg/m²/日至650mg/m²/日之間，及氟達拉濱劑量是在10mg/m²/日至50mg/m²/日之間。在其他實施方式中，環磷醯胺劑量是在150mg/m²/日至600mg/m²/日之間，及氟達拉濱劑量是在20mg/m²/日至50mg/m²/日之間。在其他實施方式中，環磷醯胺劑量是在200mg/m²/日至550mg/m²/日之間，及氟達拉濱劑量是在20mg/m²/日至40mg/m²/日之間。在其他實施方式中，環磷醯胺劑量是在250mg/m²/日至550mg/m²/日之間，及氟達拉濱劑量是在15mg/m²/日至45mg/m²/日之間。

在某些實施方式中，環磷醯胺劑量是1000mg/m²/日，及氟達拉濱劑量是60mg/m²/日、65mg/m²/日、70mg/m²/日、75mg/m²/日、80mg/m²/日、85mg/m²/ 日、90mg/m²/日、95mg/m²/日、100mg/m²/日、105mg/m²/日、110mg/m²/日、115mg/m²/日、120mg/m²/日、125mg/m²/日、130mg/m²/日、135mg/m²/日、140mg/m²/日、145mg/m²/日、150mg/m²/日、155mg/m²/日、160mg/m²/日、165mg/m²/日、170mg/m²/日、175mg/m²/日、180mg/m²/日、185mg/m²/日、190mg/m²/日、195mg/m²/日、200mg/m²/日、205mg/m²/日、210mg/m²/日、215mg/m²/日、220mg/m²/日、225mg/m²/日、230mg/m²/日、235mg/m²/日、240mg/m²/日、245mg/m²/日、或250mg/m²/日。

在某些實施方式中，環磷醯胺劑量是200mg/m²/日及氟達拉濱劑量是20mg/m²/日。在某些實施方式中，環磷醯胺劑量是200mg/m²/日及氟達拉濱劑量是30mg/m²/日。在某些實施方式中，環磷醯胺劑量是300mg/m²/日及氟達拉濱劑量是30mg/m²/日。在其他實施方式中，環磷醯胺劑量是300mg/m²/日及氟達拉濱劑量是60mg/m²/日。在其他實施方式中，環磷醯胺劑量是500mg/m²/日及氟達拉濱劑量是30mg/m²/日。在又其他實施方式中，環磷醯胺劑量是500mg/m²/日及氟達拉濱劑量是60mg/m²/日。在某些實施方式中，環磷醯胺劑量是約1110mg/m²/日及氟達拉濱劑量是25mg/m²/日。在某些實施方式中，環磷醯胺劑量是約2000mg/m²/日及氟達拉濱劑量是25mg/m²/日。在某些實施方式中，環磷醯胺劑量是30mg/m²/日及氟達拉濱劑量是25mg/m²/日。

T細胞療法

本發明提供對患者投予環磷醯胺與氟達拉濱來調理患者以強化T細胞療法有效性的方法。通常由於調理方案可以透過引入能有利於T細胞之體內恆定性增殖、活化與運輸的分子來改良免疫環境，所以各種不同的T細胞療法可以從此處所述之調理方法獲益。該領域之習知技藝者會理解可以將該調理方案施加於任何治療患者的方法，該方法包含對該患者投予一或多種T細胞。

例如，及在沒有限制下，此處所述之調理方案可以強化T細胞療法有效性，該T細胞療法可為選自由下列所組成的群組之過繼性T細胞療法：腫瘤浸潤淋巴球(TIL)免疫療法、自體細胞療法、工程化自體細胞療法(eACT)、同種異體T細胞移植法、非T細胞移植法、與其任何組合。過繼性T細胞療法大體上包括將能識別且結合至腫瘤細胞之自體或同種異體T細胞選出、在體外濃化、及對患者投予的任何方法。TIL免疫療法是一種過繼性T細胞法，其中將能浸潤腫瘤組織的淋巴球單離、在體外濃化、及對患者投予。TIL細胞可為自體的或同種異體的。自體細胞療法是一種過繼性T細胞療法，其包含從患者中單離能靶向腫瘤細胞之T細胞、在體外將該T細胞濃化、及將該T細胞投予回同一患者。同種異體T細胞移植法可包括在生體外(ex vivo)增殖的天然T細胞或基因工程化T細胞。如上面詳細說明的，工程化自體細胞療法是一種過繼性T細胞療法，其中將患者之淋巴球單離、基因改造以表現腫瘤靶向分子、在體外增殖、及投予回同一患者。非T細胞移植法可包括利用非T細胞(例如但不限於自然殺手(NK)細胞)的自體或同種異體療法。

在一個特定實施方式中，本發明之T細胞療法是工程化自體細胞療法(eACT^TM)。根據此實施方式，該方法可包括在投予環磷醯胺及氟達拉濱前從該患者採集血球。然後將經單離血球(例如T細胞)工程化以表現嵌合抗原受體(「工程化CAR T細胞」)或T細胞受體(「工程化TCR T細胞」)。在一個特定實施方式中，在投予環磷醯胺及氟達拉濱後對該患者投予工程化CAR T細胞或工程化TCR T細胞。在某些實施方式中，工程化T細胞治療患者中的腫瘤。

在一個實施方式中，可將T細胞工程化以表現嵌合抗原受體。該嵌合抗原受體可包含至腫瘤抗原的結合分子。該結合分子可為其抗體或抗原結合分子。例如，該抗原結合分子可選自scFv、Fab、Fab'、Fv、F(ab')2、與dAb、及其任何片段或組合。

嵌合抗原受體可另外包含絞鏈區。該絞鏈區可由下列的絞鏈區衍生：IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、IgD、IgE、IgM、CD28、或CD8α。在一個特定實施方式中，該絞鏈區是由IgG4之絞鏈區衍生。

嵌合抗原受體還可包含跨膜功能域。跨膜功能域可為任何跨膜分子(在免疫細胞上的輔受體)之跨膜功能域或免疫球蛋白超家族一員的跨膜功能域。在某些實施方式中，該跨膜功能域係由下列的跨膜功能域衍生：CD28、CD8α、CD4、或CD19。在一個特定實施方式中，該跨膜功能域包含由CD28跨膜功能域衍生之功能域。

嵌合抗原受體可另外包含一或多種共刺激訊息傳遞區。例如，共刺激訊息傳遞區可為CD28、OX-40、41BB、CD27、可誘發T細胞共刺激因子(ICOS)、CD3γ、CD3δ、CD3ε、CD247、Igα(CD79a)、或Fcγ受體的訊息傳遞區。在一個特定實施方式中，該共刺激訊息傳遞區是CD28訊息傳遞區。

在一個實施方式中，該嵌合抗原受體另外包含CD3ζ訊息傳遞功能域。

可將嵌合抗原受體工程化以靶向特定腫瘤抗原。在某些實施方式中，該腫瘤抗原係選自CD19、CD20、ROR1、CD22、癌胚抗原、α-胎兒蛋白、CA-125、5T4、MUC-1、上皮腫瘤抗原、***特異性抗原、黑色素瘤相關抗原、突變p53、突變ras、HER2/Neu、葉酸結合蛋白、HIV-1外套膜糖蛋白gp120、HIV-1外套膜糖蛋白gp41、GD2、CD123、CD33、CD138、CD23、CD30、CD56、c-Met、間皮素(mesothelin)、GD3、HERV-K、IL-11Rα、κ鏈、λ鏈、CSPG4、ERBB2、EGFRvIII、VEGFR2、HER2-HER3組合、HER1-HER2組合、及其任何組合。在一個特定實施方式中，該腫瘤抗原是CD19。

在另一個實施方式中，該T細胞療法包含對患者投予表現T細胞受體之工程化T細胞(「工程化TCR T細胞」)。該T細胞受體(TCR)可包含至腫瘤抗原的結合分子。在某些實施方式中，該腫瘤抗原係選自由下列所組成之群組：CD19、CD20、ROR1、CD22、癌胚抗原、α-胎兒蛋白、CA-125、5T4、MUC-1、上皮腫瘤抗原、***特異性抗原、黑色素瘤相關抗原、突變p53、突變ras、HER2/Neu、葉酸結合蛋白、HIV-1外套膜糖蛋白gp120、HIV-1外套膜糖蛋白gp41、GD2、CD123、CD33、CD138、CD23、CD30、CD56、c-Met、間皮素(mesothelin)、GD3、HERV-K、IL-11Rα、κ鏈、λ鏈、CSPG4、ERBB2、EGFRvIII、VEGFR2、HER2-HER3組合、HER1-HER2組合、及其任何組合。

在一個實施方式中，該TCR包含至病毒致癌基因的結合分子。在一個特定實施方式中，該病毒致癌基因係選自人類乳突病毒(HPV)、艾司坦-巴爾病毒(EBV)、與人類嗜T淋巴球病毒(HTLV)。

在又一個實施方式中，該TCR包含至睪丸、胎盤、或胎兒腫瘤抗原的結合分子。在一個特定實施方式中，該睪丸、胎盤、或胎兒腫瘤抗原係選自由下列所組成之群組：NY-ESO-1、滑膜肉瘤X斷點2(SSX2)、黑色素瘤抗原(MAGE)、及其任何組合。

在另一個實施方式中，該TCR包含至譜系特異性抗原的結合分子。在一個特定實施方式中，該譜系特異性抗原係選自由下列所組成之群組：由T細胞識別之黑色素瘤抗原1(MART-1)、gp100、***特異性抗原(PSA)、***特異性膜抗原(PSMA)、與***幹細胞抗原(PSCA)、及其任何組合。

在一個實施方式中，該T細胞療法包含對患者投予工程化CAR T細胞，該工程化CAR T細胞表現嵌合抗原受體，該嵌合抗原受體結合至CD19及另外包含CD28共刺激功能域與CD3ζ訊息傳遞區。在一個特定實施方式中，該T細胞療法包含對患者投予KTE-C19。

本發明所包括的T細胞療法包含將T細胞轉移至患者。可在治療有效量下投予T細胞。例如，治療有效量之T細胞(例如，工程化CAR+T細胞或工程化TCR+T細胞)可為至少約10⁴個細胞、至少約10⁵個細胞、至少約10⁶個細胞、至少約10⁷個細胞、至少約10⁸個細胞、至少約10⁹個細胞、或至少約10¹⁰個細胞。在另一個實施方式中，治療有效量之T細胞(例如，工程化CAR+T細胞或工程化TCR+T細胞)是約10⁴個細胞、約10⁵個細胞、約10⁶個細胞、約10⁷個細胞、或約10⁸個細胞。在一個特定實施方式中，治療有效量之T細胞(例如，工程化CAR+T細胞或工程化TCR+T細胞)是約1×10⁵個細胞/kg、約2×10⁵個細胞/kg、約3×10⁵個細胞/kg、約4×10⁵個細胞/kg、約5×10⁵個細胞/kg、約6×10⁵個細胞/kg、約7×10⁵個細胞/kg、約8×10⁵個細胞/kg、約9×10⁵個細胞/kg、約1×10⁶個細胞/kg、約2×10⁶個細胞/kg、約3×10⁶ 個細胞/kg、約4×10⁶個細胞/kg、約5×10⁶個細胞/kg、約6×10⁶個細胞/kg、約7×10⁶個細胞/kg、約8×10⁶個細胞/kg、約9×10⁶個細胞/kg、約1×10⁷個細胞/kg、約2×10⁷個細胞/kg、約3×10⁷個細胞/kg、約4×10⁷個細胞/kg、約5×10⁷個細胞/kg、約6×10⁷個細胞/kg、約7×10⁷個細胞/kg、約8×10⁷個細胞/kg、或約9×10⁷個細胞/kg。在一個特定實施方式中，治療有效量之T細胞(例如，工程化CAR+T細胞或工程化TCR+T細胞)是約2×10⁶個細胞/kg。

在其他實施方式中，治療有效量之T細胞(例如，工程化CAR+T細胞或工程化TCR+T細胞)是從約1.0×10⁵個細胞/kg至約2×10⁸個細胞/kg、從約2.0×10⁵個細胞/kg至約2×10⁸個細胞/kg、從約3.0×10⁵個細胞/kg至約2×10⁸個細胞/kg、從約4.0×10⁵個細胞/kg至約2×10⁸個細胞/kg、從約5.0×10⁵個細胞/kg至約2×10⁸個細胞/kg、從約6.0×10⁵個細胞/kg至約2×10⁸個細胞/kg、從約7.0×10⁵個細胞/kg至約2×10⁸個細胞/kg、從約8.0×10⁵個細胞/kg至約2×10⁸個細胞/kg、從約9.0×10⁵個細胞/kg至約2×10⁸個細胞/kg、從約0.5×10⁶個細胞/kg至約2×10⁸個細胞/kg、從約2×10⁶個細胞/kg至約9×10⁷個細胞/kg、從約3×10⁶個細胞/kg至約9×10⁷個細胞/kg、從約4×10⁶個細胞/kg至約9×10⁷個細胞/kg、從約5×10⁶個細胞/kg至約9×10⁷個細胞/kg、從約6×10⁶個細胞/kg至約9×10⁷個細胞/kg、從約7×10⁶個細胞/kg至約9×10⁷個細胞/kg、從約8× 10⁶個細胞/kg至約9×10⁷個細胞/kg、從約9×10⁶個細胞/kg至約9×10⁷個細胞/kg、從約1×10⁷個細胞/kg至約9×10⁷個細胞/kg、從約2×10⁷個細胞/kg至約9×10⁷個細胞/kg、從約3×10⁷個細胞/kg至約9×10⁷個細胞/kg、從約4×10⁷個細胞/kg至約9×10⁷個細胞/kg、從約5×10⁷個細胞/kg至約9×10⁷個細胞/kg、從約6×10⁷個細胞/kg至約9×10⁷個細胞/kg、從約7×10⁷個細胞/kg至約9×10⁷個細胞/kg、從約8×10⁷個細胞/kg至約9×10⁷個細胞/kg、從約2×10⁶個細胞/kg至約8×10⁷個細胞/kg、從約2×10⁶個細胞/kg至約7×10⁷個細胞/kg、從約2×10⁶個細胞/kg至約6×10⁷個細胞/kg、從約2×10⁶個細胞/kg至約5×10⁷個細胞/kg、從約2×10⁶個細胞/kg至約4×10⁷個細胞/kg、從約2×10⁶個細胞/kg至約3×10⁷個細胞/kg、從約2×10⁶個細胞/kg至約2×10⁷個細胞/kg、從約2×10⁶個細胞/kg至約1×10⁷個細胞/kg、從約2×10⁶個細胞/kg至約9×10⁶個細胞/kg、從約2×10⁶個細胞/kg至約8×10⁶個細胞/kg、從約2×10⁶個細胞/kg至約7×10⁶個細胞/kg、從約2×10⁶個細胞/kg至約6×10⁶個細胞/kg、從約2×10⁶個細胞/kg至約5×10⁶個細胞/kg、從約2×10⁶個細胞/kg至約4×10⁶個細胞/kg、從約2×10⁶個細胞/kg至約3×10⁶個細胞/kg、從約3×10⁶個細胞/kg至約8×10⁷個細胞/kg、從約4×10⁶個細胞/kg至約7×10⁷個細胞/kg、從約5×10⁶個細胞/kg至約6×10⁷個細胞/kg、從約6×10⁶個細胞/kg至約5×10⁷個細胞/kg、從約7×10⁶個細胞/kg至約4×10⁷個細胞/kg、從約8× 10⁶個細胞/kg至約3×10⁷個細胞/kg、或從約9×10⁶個細胞/kg至約2×10⁷個細胞/kg。在一個實施方式中，治療有效量之工程化CAR T細胞是從約0.8×10⁶個細胞/kg至約1.2×10⁶個T細胞/kg。在一個特定實施方式中，治療有效量之工程化CAR T細胞是2.0×10⁵個細胞/kg。在一個特定實施方式中，治療有效量之工程化CAR T細胞是1.0×10⁶個細胞/kg。

細胞激素量

本發明描述一種調理需要T細胞療法之患者的方法，該方法包含對該患者投予環磷醯胺及氟達拉濱。在投予T細胞療法前投予環磷醯胺與氟達拉濱使內源性細胞激素量增加，以有利於T細胞之體內恆定性增殖、活化與運輸的方式改良免疫環境。一旦對患者投予經過繼性轉移之T細胞，該T細胞便暴露於增加的內源性細胞激素量。

在投予環磷醯胺與氟達拉濱後可在患者血清中將各種細胞激素濃化。在某些實施方式中，該患者在投予環磷醯胺及氟達拉濱與/或T細胞療法後顯出增加的細胞激素或促發炎因子血清濃度，該細胞激素或促發炎因子選自：介白素(IL)15、IL-7、IL-10、IL-5、IL-8、IL-1、IL-1b、IL-2、IL-3、IL-4、IL-6、IL-9、IL-11、IL-12、IL-12p40、IL-12p70、IL-13、IL-14、IL-16、IL-17、IL-17a、IL-20、IL-21、顆粒球巨噬細胞集落刺激因子(GM- CSF)、顆粒球集落刺激因子(G-CSF)、單核球趨化性蛋白1(MCP-1)、MCP-4、γ誘導蛋白10(IP-10)、胎盤生長因子(PLGF)、可溶性細胞間黏著分子1(sICAM-1)、可溶性血管黏著分子1(sVCAM-1)、C-反應蛋白(CRP)、血管內皮生長因子(VEGF)、VEGF-C、VEGF-D、巨噬細胞發炎蛋白1β(MIP-1β，MIP-1b)、白血病抑制因子(LIF)、制瘤素M(OSM)、干擾素(IFN)α、IFN-β、IFN-γ、腫瘤壞死因子(TNF)α、TNF-β、CD154、淋巴毒素(LT)β、4-1BB配體(4-1BBL)、增生誘發配體(APRIL)、CD70、CD153、CD178、糖皮質素誘發性TNFR相關配體(GITRL)、腫瘤壞死因子超家族成員14(TNFSF14)、OX40L、TNF-與ApoL-相關白血球表現性配體1(TALL-1)、TNF相關細胞凋亡誘發配體(TRAIL)、趨化因子(C-C模體)配體(CCL)1、巨噬細胞發炎蛋白1α(MIP-1a或CCL3)、CCL5、單核球特異性趨化因子3(MCP-3或CCL7)、單核球化學吸引因子(chemoattractant)蛋白2(MCP-2或CCL8)、CCL13、胸腺及活化調節趨化因子(TARC或CCL17)、CCL22、FGF2、伊紅趨素、MDC、granzine A、granzine B、穿孔素、SAA、MCP-4、及其任何組合。在某些實施方式中，該患者在投予環磷醯胺及氟達拉濱後顯出IL-15與/或IP-10之增加的血清量。在某些實施方式中，該患者在投予環磷醯胺及氟達拉濱後顯出穿孔素之減少的血清量。

在某些實施方式中，本發明包括一種使需要T細胞療法之患者中的體內恆定性細胞激素有效性增加的方法。在某些實施方式中，該體內恆定性細胞激素是介白素7(IL-7)、介白素15(IL-15)、介白素10(IL-10)、介白素5(IL-5)、γ誘導蛋白10(IP-10)、介白素8(IL-8)、單核球趨化性蛋白1(MCP-1)、胎盤生長因子(PLGF)、C-反應蛋白(CRP)、可溶性細胞間黏著分子1(sICAM-1)、可溶性血管黏著分子1(sVCAM-1)、或其任何組合物。

在一個實施方式中，該患者中IL-7血清量在投予環磷醯胺及氟達拉濱後比在投予前的IL-7血清量增加到至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少10倍、至少15倍、至少20倍、至少25倍、至少30倍、至少35倍、至少40倍、至少45倍、至少50倍、至少60倍、至少70倍、至少80倍、或至少90倍。在一個特定實施方式中，IL-7量比在投予環磷醯胺及氟達拉濱前的IL-7血清量增加至少約2倍。在另一個實施方式中，對該患者投予外源IL-7使IL-7量增加。在一個特定實施方式中，對該患者投予環磷醯胺、氟達拉濱、與外源IL-7使IL-7量增加。

在一個實施方式中，該患者中IL-15血清量在投予環磷醯胺及氟達拉濱後比在投予前的IL-15血清量增加到至少5倍、至少10倍、至少15倍、至少20倍、至少25倍、至少30倍、至少35倍、至少40倍、至少45倍、至少50倍、至少60倍、至少70倍、至少80倍、或至少90倍。在一個特定實施方式中，IL-15量比在投予環磷醯胺及氟達拉濱前之IL-15血清量增加至少約10倍。在另一個實施方式中，IL-15量比在投予環磷醯胺及氟達拉濱前的IL-15血清量增加至少約20倍。在另一個實施方式中，IL-15量比在投予環磷醯胺及氟達拉濱前之IL-15血清量增加至少約30倍。在另一個實施方式中，對該患者投予外源IL-15使IL-15量增加。在一個特定實施方式中，對該患者投予環磷醯胺、氟達拉濱、與外源IL-15使IL-15量增加。

在一個實施方式中，該患者中IL-10血清量在投予環磷醯胺及氟達拉濱後比在投予前的IL-10血清量增加到至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、或至少20倍。在一個特定實施方式中，IL-10量比在投予環磷醯胺及氟達拉濱前之IL-10血清量增加至少約2倍。在另一個實施方式中，IL-10量比在投予環磷醯胺及氟達拉濱前的IL-10血清量增加至少約3倍。在另一個實施方式中，IL-10量比在投予環磷醯胺及氟達拉濱前之IL-10血清量增加至少約5倍。在另一個實施方式中，IL-10量比在投予環磷醯胺及氟達拉濱前的IL-10血清量增加至少約20倍。在另一個實施方式中，對該患者投予外源IL-10使IL-10量增加。在一個特定實施方式中，對該患者投予環磷醯胺、氟達拉濱、與外源IL-10使IL-10量增加。

在一個實施方式中，該患者中IL-5血清量在投予環磷醯胺及氟達拉濱後比在投予前的IL-5血清量增加到至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少15倍、至少20倍、至少30倍、至少40倍、至少50倍、至少60倍、至少70倍、至少80倍、至少90倍、或至少100倍。在一個特定實施方式中，IL-5量比在投予環磷醯胺及氟達拉濱前之IL-5血清量增加至少約5倍。在另一個實施方式中，IL-5量比在投予環磷醯胺及氟達拉濱前的IL-5血清量增加至少約10倍。在另一個實施方式中，IL-5量比在投予環磷醯胺及氟達拉濱前之IL-5血清量增加至少約30倍。在另一個實施方式中，IL-5量比在投予環磷醯胺及氟達拉濱前的IL-5血清量增加至少約100倍。在另一個實施方式中，對該患者投予外源IL-5使IL-5量增加。在一個特定實施方式中，對該患者投予環磷醯胺、氟達拉濱、與外源IL-5使IL-5量增加。

在一個實施方式中，該患者中IP-10血清量在投予環磷醯胺及氟達拉濱後比在投予前的IP-10血清量增加到至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少15倍、至少20倍、或至少30倍。在一個特定實施方式中，IP-10量比在投予環磷醯胺及氟達拉濱前之IP-10血清量增加至少約2倍。在另一個實施方式中，IP-10量比在投予環磷醯胺及氟達拉濱前的IP-10血清量增加至少約3倍。在另一個實施方式中，IP-10量比在投予環磷醯胺及氟達拉濱前之IP-10血清量增加至少約4倍。在另一個實施方式中，IP-10量比在投予環磷醯胺及氟達拉濱前的IP-10血清量增加至少約7倍。在另一個實施方式中，對該患者投予外源IP-10使IP-10量增加。在一個特定實施方式中，對該患者投予環磷醯胺、氟達拉濱、與外源IP-10使IP-10量增加。

在一個實施方式中，該患者中IL-8血清量在投予環磷醯胺及氟達拉濱後比在投予前的IL-8血清量增加到至少2倍、至少5倍、至少10倍、至少15倍、至少20倍、至少25倍、至少30倍、至少35倍、至少40倍、至少45倍、至少50倍、至少60倍、至少70倍、至少80倍、至少90倍、或至少100倍。在一個特定實施方式中，IL-8量比在投予環磷醯胺及氟達拉濱前之IL-8血清量增加至少約2倍。在另一個實施方式中，IL-8量比在投予環磷醯胺及氟達拉濱前的IL-8血清量增加至少約5倍。在另一個實施方式中，IL-8量比在投予環磷醯胺及氟達拉濱前之IL-8血清量增加至少約10倍。在另一個實施方式中，IL-8量比在投予環磷醯胺及氟達拉濱前的IL-8血清量增加至少約20倍。在另一個實施方式中，IL-8量比在投予環磷醯胺及氟達拉濱前之IL-8血清量增加至少約40倍。在另一個實施方式中，IL-8量比在投予環磷醯胺及氟達拉濱前的IL-8血清量增加至少約60倍。在另一個實施方式中，對該患者投予外源IL-8使IL-8量增加。在一個特定實施方式中，對該患者投予環磷醯胺、氟達拉濱、與外源IL-8使IL-8量增加。

在一個實施方式中，該患者中MCP-1血清量在投予環磷醯胺及氟達拉濱後比在投予前的MCP-1血清量增加到至少1.5倍、至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少15倍、或至少20倍。在一個特定實施方式中，MCP-1量比在投予環磷醯胺及氟達拉濱前之MCP-1血清量增加至少約2倍。在另一個實施方式中，MCP-1量比在投予環磷醯胺及氟達拉濱前的MCP-1血清量增加至少約3倍。在另一個實施方式中，MCP-1量比在投予環磷醯胺及氟達拉濱前之MCP-1血清量增加至少約5倍。在另一個實施方式中，MCP-1量比在投予環磷醯胺及氟達拉濱前的MCP-1血清量增加至少約7倍。在另一個實施方式中，對該患者投予外源MCP-1使MCP-1量增加。在一個特定實施方式中，對該患者投予環磷醯胺、氟達拉濱、與外源MCP-1使MCP-1量增加。

在一個實施方式中，該患者中PLGF血清量在投予環磷醯胺及氟達拉濱後比在投予前的PLGF血清量增加到至少1.5倍、至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少10倍、至少15倍、至少20倍、至少25倍、至少30倍、至少35倍、至少40倍、至少45倍、至少50倍、至少60倍、至少70倍、至少80倍、至少90倍、或至少100倍。在一個特定實施方式中，PLGF量比在投予環磷醯胺及氟達拉濱前之PLGF血清量增加至少約 1.5倍。在另一個實施方式中，PLGF量比在投予環磷醯胺及氟達拉濱前的PLGF血清量增加至少約2倍。在另一個實施方式中，PLGF量比在投予環磷醯胺及氟達拉濱前之PLGF血清量增加至少約3倍。在另一個實施方式中，對該患者投予外源PLGF使PLGF量增加。在一個特定實施方式中，對該患者投予環磷醯胺、氟達拉濱、與外源PLGF使PLGF量增加。

在一個實施方式中，該患者中CRP血清量在投予環磷醯胺及氟達拉濱後比在投予前的CRP血清量增加到至少1.5倍、至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少約9倍、至少10倍、至少15倍、至少20倍、至少25倍、至少30倍、至少35倍、至少40倍、至少45倍、至少50倍、至少60倍、至少70倍、至少80倍、至少90倍、或至少100倍。在一個特定實施方式中，CRP量比在投予環磷醯胺及氟達拉濱前之CRP血清量增加至少約1.5倍。在另一個實施方式中，CRP量比在投予環磷醯胺及氟達拉濱前的CRP血清量增加至少約2倍。在另一個實施方式中，CRP量比在投予環磷醯胺及氟達拉濱前之CRP血清量增加至少約5倍。在另一個實施方式中，CRP量比在投予環磷醯胺及氟達拉濱前之CRP血清量增加至少約9倍。在另一個實施方式中，CRP量比在投予環磷醯胺及氟達拉濱前之CRP血清量增加至少約10倍。在另一個實施方式中，CRP量比在投予環磷醯胺及氟達拉濱前之CRP血清量增加至少約25倍。在另一個實施方式中，對該患者投予外源CRP使CRP量增加。在一個特定實施方式中，對該患者投予環磷醯胺、氟達拉濱、與外源CRP使CRP量增加。

在一個實施方式中，該患者中sICAM-1血清量在投予環磷醯胺及氟達拉濱後比在投予前的sICAM-1血清量增加到至少1.5倍、至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少15倍、至少20倍、至少25倍、或至少30倍。在一個特定實施方式中，sICAM-1量比在投予環磷醯胺及氟達拉濱前之sICAM-1血清量增加至少約1.5倍。在另一個實施方式中，sICAM-1量比在投予環磷醯胺及氟達拉濱前的sICAM-1血清量增加至少約2倍。在另一個實施方式中，sICAM-1量比在投予環磷醯胺及氟達拉濱前之sICAM-1血清量增加至少約3倍。在另一個實施方式中，sICAM-1量比在投予環磷醯胺及氟達拉濱前之sICAM-1血清量增加至少約4倍。在另一個實施方式中，對該患者投予外源sICAM-1使sICAM-1量增加。在一個特定實施方式中，對該患者投予環磷醯胺、氟達拉濱、與外源sICAM-1使sICAM-1量增加。

在一個實施方式中，該患者中sVCAM-1血清量在投予環磷醯胺及氟達拉濱後比在投予前的sVCAM-1血清量增加到至少1.5倍、至少2倍、至少2.5倍、至少3倍、至少3.5倍、至少4倍、至少4.5倍、或至少5倍。在一個特定實施方式中，sVCAM-1量比在投予環磷醯胺及氟達拉濱前之sVCAM-1血清量增加至少約1.5倍。在另一個實施方式中，sVCAM-1量比在投予環磷醯胺及氟達拉濱前的sVCAM-1血清量增加至少約2倍。在另一個實施方式中，sVCAM-1量比在投予環磷醯胺及氟達拉濱前之sVCAM-1血清量增加至少約3倍。在另一個實施方式中，對該患者投予外源sVCAM-1使sVCAM-1量增加。在一個特定實施方式中，對該患者投予環磷醯胺、氟達拉濱、與外源sVCAM-1使sVCAM-1量增加。

在某些實施方式中，可把在投予環磷醯胺及氟達拉濱後的一或多種細胞激素量用來預測患者對T細胞療法將如何反應。例如，在投予環磷醯胺及氟達拉濱後特定細胞激素增加可指出患者較有可能對T細胞療法有反應。在另一個實例中，在投予環磷醯胺及氟達拉濱後特定細胞激素量減少或無變化可指出患者較不可能對T細胞療法有反應。也可能在投予環磷醯胺及氟達拉濱後一或多種細胞激素增加而一或多種不同的細胞激素減少可指出患者較有可能或較不可能對T細胞療法有反應。以該方式，患者的細胞激素剖析可指示對T細胞療法之反應性。

在某些實施方式中，在投予環磷醯胺及氟達拉濱後IL-15量增加多於約3倍、多於約4倍、多於約5倍、多於約10倍、多於約15倍、或多於約20倍指出患者較有可能對T細胞療法有反應。在其他實施方式中，在投予環磷醯胺及氟達拉濱後IP-10量增加多於約2倍、多於約3倍、多於約4倍、多於約5倍、或多於約6倍指出患者較有可能對T細胞療法有反應。在又一個實施方式中，在投予環磷醯胺及氟達拉濱後MIP-1b量減少指出患者較不可能對T細胞療法有反應。

在某些實施方式中，在投予環磷醯胺及氟達拉濱前的一或多日及在從投予環磷醯胺及氟達拉濱日至投予環磷醯胺及氟達拉濱後的21日期間選出之一或多日測量任何一或多種細胞激素之血清量。

本發明之一個實施方式包括一種使需要T細胞療法之患者中的體內恆定性細胞激素有效性增加的方法。本發明之另一個實施方式包括一種改良T細胞療法的效果之方法，該方法包含對患者投予使選自下列的一或多種體內恆定性細胞激素、促發炎細胞激素或趨化因子量增加之治療：IL-15、IL-7、IL-10、IL-5、IP-10、IL-8、MCP-1、PLGF、CRP、sICAM-1、與sVCAM-1。該領域之習知技藝者會認識到可利用許多不同方法使體內恆定性細胞激素量增加，該方法包括但不限於：如此處所述之使用環磷醯胺及氟達拉濱、對患者投予一或多種外源性細胞激素、投予誘發一或多種內源性細胞激素的表現或防止其降解之一或多種組成物、投予一或多種能表現一或多種重組細胞激素的轉基因細胞、及具有使患者中內源性細胞激素量增加之效果的任何其他方法。

在某些實施方式中，本發明包括一種調理需要T細胞療法之患者的方法，該方法包含對患者投予環磷醯胺與氟達拉濱及一或多劑的經單離或重組細胞激素。該經單離或重組細胞激素可為任何細胞激素。在一個實施方式中，該細胞激素是體內恆定性細胞激素。在另一個實施方式中，該細胞激素是促發炎細胞激素。在又一個實施方式中，該細胞激素是趨化因子。在一個特定實施方式中，該調理需要T細胞療法之患者的方法包含對患者投予環磷醯胺與氟達拉濱及一或多劑的經單離或重組細胞激素，其中該細胞激素係選自IL-2、IL-15、IL-7、IL-10、IL-5、IP-10、IL-8、MCP-1、PLGF、CRP、sICAM-1、sVCAM-1、及其任何組合(例如IL-15、IL-7、IP-10、MCP-1、CRP、與PLGF)。該一或多劑的經單離或重組細胞激素可在T細胞療法前、或在T細胞療法後、或其任何組合投予。

在一個實施方式中，該調理需要T細胞療法之患者的方法包含對患者投予環磷醯胺與氟達拉濱及一或多劑IL-2。在某些實施方式中，該IL-2劑量是至少約10,000IU/kg、至少約50,000IU/kg、至少約100,000IU/kg、至少約200,000IU/kg、至少約400,000IU/kg、至少約600,000IU/kg、至少約700,000IU/kg、至少約800,000IU/kg、或至少約1,000,000IU/kg。在一個實施方式中，該IL-2劑量是至少約700,000IU/kg。在一個特定實施方式中，該IL-2劑量是約720,000IU/kg。在某些實施方式中，每8小時對患者投予IL-2直到15劑或毒性阻礙額外的給藥為止。

癌症治療

本發明之方法可被用來治療個體中的癌症、使腫瘤大小減少、殺死腫瘤細胞、防止腫瘤細胞增生、防止腫瘤生長、從患者消除腫瘤、防止腫瘤復發、防止腫瘤轉移、誘發患者中的緩解、或其任何組合。在某些實施方式中，該方法誘發完全反應。在其他實施方式中，該方法誘發部分反應。

可治療之癌症包括未血管化的、尚未實質血管化的、或血管化的腫瘤。該癌症還可包括實性瘤或非實性瘤。在某些實施方式中，該癌症可選自由下列衍生之腫瘤：骨癌、胰腺癌、皮膚癌、頭或頸癌、皮膚或眼球內惡性黑色素瘤、子宮癌、卵巢癌、直腸癌、肛門部癌、胃癌、睪丸癌、子宮癌、輸卵管癌、子宮內膜癌、子宮頸癌、***癌、陰門癌、何杰金(Hodgkin)氏病、富T細胞B細胞淋巴瘤(TCRBCL)、原發性縱膈腔大B細胞淋巴瘤(PMBCL)、非何杰金氏淋巴瘤、食道癌、小腸癌、內分泌系統癌、甲狀腺癌、副甲狀腺癌、腎上腺癌、軟組織肉瘤、尿道癌、陰莖癌、慢性或急性白血病、急性骨髓性白血病、慢性骨髓性白血病、急性淋巴母細胞白血病、慢性淋巴球性白血病、兒童實性瘤、淋巴球性淋巴瘤、膀胱癌、腎或輸尿管癌、腎盂癌、中樞神經系統(CNS)癌瘤、原發性CNS淋巴瘤、腫瘤血管生成、脊髓軸瘤、腦幹膠質瘤、垂體腺瘤、卡波西氏(Karposi's)肉瘤、表皮樣癌、鱗狀細胞癌、T細胞淋巴瘤、環境誘發性癌(包括石綿誘發性癌)、及以上癌之組合。

在一個實施方式中，該方法可被用來治療腫瘤，其中該腫瘤是淋巴瘤或白血病。淋巴瘤與白血病是特異性侵襲淋巴球之血液癌。血液中的一切白血球起源於一種在骨髓中發現之多潛能造血幹細胞。此幹細胞產生骨髓前驅細胞與淋巴前驅細胞，然後衍生在體內發現的各種白血球。起源於骨髓前驅細胞之白血球包括T淋巴球(T細胞)、B淋巴球(B細胞)、自然殺手細胞、與漿細胞。起源於淋巴前驅細胞的白血球包括巨核細胞、肥胖細胞、嗜鹼細胞、嗜中性白血球、嗜酸性白血球、單核球、與巨噬細胞。淋巴瘤與白血病可侵襲患者中的這些細胞種類中一或多者。

通常，淋巴瘤可分成至少二個子群：何杰金(Hodgkin)氏淋巴瘤與非何杰金氏淋巴瘤。非何杰金氏淋巴瘤(NHL)是在B淋巴球、T淋巴球或自然殺手細胞中起源之癌症的一個異質群。在美國，B細胞淋巴瘤相當於被報告病例的80至85%。在2013年，估計發生大約69,740個新NHL病例與超過19,000個與此疾病有關之死亡例。非何杰金氏淋巴瘤是最盛行的血液惡性腫瘤且為男性與女性新增癌症病例之第七位及佔所有新增癌症病例的4%和佔與癌症有關之死亡例的3%。

瀰漫性大型B細胞淋巴瘤(DLBCL)是最常見之NHL亞類，佔NHL病例的約30%。在美國，每年有約22,000個新增DLBCL確診病例。該新增DLBCL確診病例被分類為侵襲性淋巴瘤，其中大多數患者被傳統化療法治癒(NCCN guidelines NHL 2014)。

用於DLBCL的一線療法典型上包括利用利妥昔單抗(rituximab)之含蒽環類抗生素的方案，例如R-CHOP(利妥昔單抗(rituximab)、環磷醯胺、阿黴素(doxorubicin)、長春新鹼(vincristine)、與強體松(prednisone))，該方案具有約80%之客觀反應率及約50%的完全反應率(Coiffier 2002)，其中在R-CHOP後約1/3的患者有初始療法難治之症或復發(Sehn 2005)。在對一線療法有反應後又復發的患者而言，約40至60%之患者可用額外的化療法達到第二次反應。用於自體幹細胞移植(ASCT)合格患者的二線療法照護標準包括利妥昔單抗(rituximab)及組合療法，例如R-ICE(利妥昔單抗(rituximab)、異環磷醯胺(ifosamide)、卡鉑(carboplatin)、與依托泊苷(etoposide))及R-DHAP(利妥昔單抗(rituximab)、***(dexamethasone)、阿糖胞苷(cytarabine)、與順鉑(cisplatin))，各具有約63%之客觀反應率及約26%的完全反應率(Gisselbrecht 2010)。對二線療法有反應且被認為足夠適合移植之患者接受利用高劑量化療及ASCT的加強療法，該加強療法在經移植的患者中有約一半是治癒的(Gisselbrecht 2010)。ASCT失敗之患者有很差的預後且沒有治癒方法。

原發性縱膈腔大B細胞淋巴瘤(PMBCL)具有與DLBCL不同的臨床表現、病理特徵、與分子特徵。 PMBCL被認為起源於胸腺(骨髓)B細胞及相當於被診斷為DLBCL的患者之約3%。PMBCL典型上出現在40歲的青壯年人口而以女性稍多。基因表現剖析暗示在與何杰金(Hodgkin)氏淋巴瘤重疊之PMBCL中被解除管制的途徑。PMBCL初始療法通常包括利用利妥昔單抗(rituximab)之含蒽環類抗生素的方案，例如輸注劑量調整型依托泊苷(etoposide)、阿黴素(doxorubicin)、環磷醯胺、長春新鹼(vincristine)、強體松(prednisone)與利妥昔單抗(rituximab)、及利用或沒利用相關領域的放射治療。

濾泡性淋巴瘤(FL)，一種B細胞淋巴瘤，是最常見之NHL的惰性(生長緩慢)型，佔所有NHL病例的約20%至30%。某些FL患者會組織轉化(TFL)為更具侵襲性及與差的結果有關聯之DLBCL。在未來數年內組織轉化風險持續下降情況下，在15年內以約3%的年增率發生組織轉化為DLBCL。組織轉化之生物機制仍未知。TFL的初始治療雖然受到先前濾泡性淋巴瘤治療影響，但是通常包括利用利妥昔單抗(rituximab)之含蒽環類抗生素的方案，以消除該疾病之侵襲性成分。

用於復發/難治性PMBCL與TFL之治療方法類似DLBCL。由於這些疾病的盛行率低，所以不曾對這些患者群體進行大範圍前瞻性隨機研究。患有化療難治之症的患者具有與難治性DLBCL類似或更差的預後。

總的來說，患有難治性侵襲性NHL(例如DLBCL、PMBCL與TFL)之個體有較多未滿足的醫藥需求及在這些群體中被批准利用新穎治療作進一步研究。

因此，在某些實施方式中，該方法可被用來治療淋巴瘤或白血病，其中該淋巴瘤或白血病是B細胞惡性腫瘤。在某些實施方式中，該淋巴瘤或白血病係選自：B細胞慢性淋巴球性白血病/小細胞淋巴瘤、B細胞幼淋巴球性(B-cell prolymphocytic)白血病、淋巴漿細胞性淋巴瘤(例如瓦登斯特隆氏巨球蛋白血症(Waldenström macroglobulinemia))、脾邊緣區淋巴瘤、毛樣細胞性白血病、漿細胞瘤(例如漿細胞骨髓瘤(即多發性骨髓瘤)或漿細胞瘤)、結外邊緣區B細胞淋巴瘤(例如MALT淋巴瘤)、結內邊緣區B細胞淋巴瘤、濾泡性淋巴瘤(FL)、轉化濾泡性淋巴瘤(TFL)、原發性皮膚濾泡中心性淋巴瘤、套細胞淋巴瘤、瀰漫性大型B細胞淋巴瘤(DLBCL)、艾司坦-巴爾病毒陽性DLBCL、淋巴瘤樣肉芽腫、原發性縱膈腔(胸腺)大B細胞淋巴瘤(PMBCL)、血管內大B細胞淋巴瘤、ALK+大B細胞淋巴瘤、漿母細胞性淋巴瘤、原發性滲出性淋巴瘤、起自HHV8相關多中心性Castleman氏病的大B細胞淋巴瘤、Burkitt氏淋巴瘤/白血病、T細胞幼淋巴球性白血病、T細胞大顆粒淋巴球性白血病、侵襲性NK細胞白血病、成人T細胞白血病/淋巴瘤、結外NK/T細胞淋巴瘤、腸病變相關T細胞淋巴瘤、肝脾T細胞淋巴瘤、胚母(blastic)NK細胞淋巴瘤、蕈狀肉芽腫/塞扎萊(Sezary)症候群、原發性皮膚型未分化(anaplastic)大細胞淋巴瘤、淋巴瘤樣丘疹、周邊型T細胞淋巴瘤、血管免疫母細胞性 T細胞淋巴瘤、未分化(anaplastic)大細胞淋巴瘤、B淋巴母細胞白血病/淋巴瘤、帶有再發性基因異常之B淋巴母細胞白血病/淋巴瘤、T淋巴母細胞白血病/淋巴瘤、及何杰金(Hodgkin)氏淋巴瘤。在某些實施方式中，該癌症是一或多種先前治療難治的，與/或該癌症在一或多種先前治療後又復發。

在某些實施方式中，該癌症係選自濾泡性淋巴瘤、轉化濾泡性淋巴瘤、瀰漫性大型B細胞淋巴瘤、與原發性縱膈腔(胸腺)大B細胞淋巴瘤。在一個特定實施方式中，該癌症是瀰漫性大型B細胞淋巴瘤。

在某些實施方式中，該癌症是下列中一或多者難治的或該癌症在下列中一或多者治療後又復發：化療法、放射療法、免疫療法(包括利用抗體與/或抗體藥物共軛體的T細胞療法與/或治療)、自體幹細胞移植法、及其任何組合。在一個特定實施方式中，該癌症是難治性瀰漫性大型B細胞淋巴瘤。

在一個特定實施方式中，本發明包括一種治療患有淋巴瘤之患者的方法，該方法包含在對該患者投予治療有效量的工程化CAR細胞前，每日對該患者投予此處所述之任何劑量(例如約200mg/m²/日、約300mg/m²/日、約400mg/m²/日、約500mg/m²/日、約600mg/m²/日、約700mg/m²/日、約800mg/m²/日、或約900mg/m²/日)的環磷醯胺及此處所述之任何劑量(例如約20mg/m²/日、約25mg/m²/日、約30mg/m²/日、約35mg/m²/日、約40mg/m²/日、約45mg/m²/日、約50mg/m²/日、約55mg/m²/日、約60mg/m²/日)的氟達拉濱投予3日，其中該工程化CAR細胞表現嵌合抗原受體，該嵌合抗原受體結合至CD19及另外包含CD28共刺激功能域與CD3ζ訊息傳遞區。

在另一個實施方式中，本發明包括一種治療患有淋巴瘤之患者的方法，該方法包含(i)對該患者投予此處所述之任何劑量(例如約200mg/m²/日、約300mg/m²/日、約400mg/m²/日、約500mg/m²/日、約600mg/m²/日、約700mg/m²/日、約800mg/m²/日、或約900mg/m²/日)的環磷醯胺及此處所述之任何劑量(例如約20mg/m²/日、約25mg/m²/日、約30mg/m²/日、約35mg/m²/日、約40mg/m²/日、約45mg/m²/日、約50mg/m²/日、約55mg/m²/日、約60mg/m²/日)的氟達拉濱，和(ii)對該患者投予治療有效量的工程化CAR細胞，其中該工程化CAR細胞表現嵌合抗原受體，該嵌合抗原受體結合至CD19及另外包含CD28共刺激功能域與CD3ζ訊息傳遞區。

在又一個實施方式中，本發明包括一種治療患有淋巴瘤之患者的方法，該方法包含對該患者投予治療有效量的工程化CAR細胞，其中已經投予此處所述之任何劑量(例如約200mg/m²/日、約300mg/m²/日、約400mg/m²/日、約500mg/m²/日、約600mg/m²/日、約700mg/m²/日、約800mg/m²/日、或約900mg/m²/日)的環磷醯胺及此處所述之任何劑量(例如約20mg/m²/日、約25 mg/m²/日、約30mg/m²/日、約35mg/m²/日、約40mg/m²/日、約45mg/m²/日、約50mg/m²/日、約55mg/m²/日、約60mg/m²/日)的氟達拉濱來調理該患者，及其中該工程化CAR細胞表現嵌合抗原受體，該嵌合抗原受體結合至CD19及另外包含CD28共刺激功能域與CD3ζ訊息傳遞區。

套組

本發明之範圍還包括套組(例如藥學套組)，其包含用於T細胞療法之預先調理的環磷醯胺與氟達拉濱。套組典型上包括指示該套組內容物之既定用途及使用說明的標籤。術語「標籤」包括在該套組上或連同該套組被供應的，或該套組所附有的任何書寫或記錄材料。

在某些實施方式中，本發明提供一種調理需要T細胞療法之患者的套組，該套組包含：(i)環磷醯胺、(ii)氟達拉濱、與(iii)在工程化CAR細胞療法前，每日對需要該療法的患者投予此處所述之任何劑量(例如在200mg/m²/日至2000mg/m²/日之間)的環磷醯胺及此處所述之任何劑量(例如在20mg/m²/日至900mg/m²/日之間)的氟達拉濱投予三日的指示說明書。

在其他實施方式中，本發明提供一種調理需要T細胞療法之患者的套組，該套組包含：(i)環磷醯胺、(ii)氟達拉濱、與(iii)在工程化CAR細胞療法前的第-7至-6日每日對需要該療法之患者投予此處所述的任何劑量 (例如在200mg/m²/日至2000mg/m²/日之間)的環磷醯胺投予二日，及在第-5至-1日每日對該患者投予此處所述之任何劑量(例如在20mg/m²/日至900mg/m²/日之間)的氟達拉濱投予五日的指示說明書。

在其他實施方式中，本發明提供一種調理需要T細胞療法之患者的套組，該套組包含：(i)環磷醯胺、(ii)氟達拉濱、與(iii)在工程化TCR細胞療法前，每日對需要該療法的患者投予此處所述之任何劑量(例如在200mg/m²/日至2000mg/m²/日之間)的環磷醯胺及此處所述之任何劑量(例如在20mg/m²/日至900mg/m²/日之間)的氟達拉濱投予三日的指示說明書。

在其他實施方式中，本發明提供一種調理需要T細胞療法之患者的套組，該套組包含：(i)環磷醯胺、(ii)氟達拉濱、與(iii)在工程化TCR細胞療法前的第-7至-6日每日對需要該療法之患者投予此處所述的任何劑量(例如在200mg/m²/日至2000mg/m²/日之間)的環磷醯胺投予二日，及在第-5至-1日每日對該患者投予此處所述之任何劑量(例如在20mg/m²/日至900mg/m²/日之間)的氟達拉濱投予五日的指示說明書。

在某些實施方式中，本發明提供一種調理需要T細胞療法之患者的套組，該套組包含：(i)環磷醯胺、(ii)氟達拉濱、與(iii)在工程化CAR細胞療法前，每日對需要該療法之患者投予劑量為300mg/m²/日的環磷醯胺及劑量為30mg/m²/日之氟達拉濱投予三日的指示說明書。

在其他實施方式中，本發明提供一種調理需要T細胞療法之患者的套組，該套組包含：(i)環磷醯胺、(ii)氟達拉濱、與(iii)在工程化CAR細胞療法前的第-7至-6日每日對需要該療法之患者投予劑量為300mg/m²/日的環磷醯胺投予二日，及在第-5至-1日每日對該患者投予劑量為30mg/m²/日之氟達拉濱投予五日的指示說明書。

在其他實施方式中，本發明提供一種調理需要T細胞療法之患者的套組，該套組包含：(i)環磷醯胺、(ii)氟達拉濱、與(iii)在工程化TCR細胞療法前，每日對需要該療法之患者投予劑量為500mg/m²/日的環磷醯胺及劑量為30mg/m²/日之氟達拉濱投予三日的指示說明書。

在其他實施方式中，本發明提供一種調理需要T細胞療法之患者的套組，該套組包含：(i)環磷醯胺、(ii)氟達拉濱、與(iii)在工程化TCR細胞療法前的第-7至-6日每日對需要該療法之患者投予劑量為500mg/m²/日的環磷醯胺投予二日，及在第-5至-1日每日對該患者投予劑量為30mg/m²/日之氟達拉濱投予五日的指示說明書。

在某些實施方式中，本發明提供一種調理需要T細胞療法之患者的套組，該套組包含：(i)環磷醯胺、(ii)氟達拉濱、與(iii)在工程化CAR細胞療法前，每日對需要該療法之患者投予劑量為300mg/m²/日的環磷醯胺及劑量為60mg/m²/日之氟達拉濱投予三日的指示說明書。

在其他實施方式中，本發明提供一種調理需要T細胞療法之患者的套組，該套組包含：(i)環磷醯胺、 (ii)氟達拉濱、與(iii)在工程化CAR細胞療法前的第-7至-6日每日對需要該療法之患者投予劑量為300mg/m²/日的環磷醯胺投予二日，及在第-5至-1日每日對該患者投予劑量為60mg/m²/日之氟達拉濱投予五日的指示說明書。

在其他實施方式中，本發明提供一種調理需要T細胞療法之患者的套組，該套組包含：(i)環磷醯胺、(ii)氟達拉濱、與(iii)在工程化TCR細胞療法前，每日對需要該療法之患者投予劑量為500mg/m²/日的環磷醯胺及劑量為60mg/m²/日之氟達拉濱投予三日的指示說明書。

在其他實施方式中，本發明提供一種調理需要T細胞療法之患者的套組，該套組包含：(i)環磷醯胺、(ii)氟達拉濱、與(iii)在工程化TCR細胞療法前的第-7至-6日每日對需要該療法之患者投予劑量為500mg/m²/日的環磷醯胺投予二日，及在第-5至-1日每日對該患者投予劑量為60mg/m²/日之氟達拉濱投予五日的指示說明書。

在某些實施方式中，該套組另外包含生理鹽水及在投予環磷醯胺與/或氟達拉濱前或後、或在投予環磷醯胺與/或氟達拉濱前與後對該患者投予該生理鹽水的指示說明書。在某些實施方式中，該套組另外包含美司鈉(mesna)及在投予環磷醯胺與/或氟達拉濱前、在投予環磷醯胺與/或氟達拉濱後、或在投予環磷醯胺與/或氟達拉濱前與後對該患者投予該美司鈉的指示說明書。

使用生物標記之診斷

本發明還包括識別適合T細胞療法之個體的方法。在一個實施方式中，本發明包括一種用於治療適合T細胞療法之患者中的癌症之方法，該方法包含對該患者投予劑量在200mg/m²至2000mg/m²之間(例如200mg/m²、300mg/m²、400mg/m²、500mg/m²、600mg/m²、700mg/m²、800mg/m²、900mg/m²、1000mg/m²、或1110mg/m²)的環磷醯胺及劑量在20mg/m²至900mg/m²之間(例如20mg/m²、25mg/m²、30mg/m²、35mg/m²、40mg/m²、45mg/m²、或50mg/m²)的氟達拉濱來預先調理該患者，其中在該患者顯出IL-15、IP-10、與/或IL-7之增加的血清量，與/或顯出穿孔素之減少的血清量後再用T細胞療法治療。在另一個實施方式中，本發明包括一種用於治療適合T細胞療法之患者中的癌症之方法，該方法包含(i)對該患者投予劑量在200mg/m²至2000mg/m²之間(例如200mg/m²、300mg/m²、400mg/m²、500mg/m²、600mg/m²、700mg/m²、800mg/m²、900mg/m²、1000mg/m²、或1110mg/m²)的環磷醯胺及劑量在20mg/m²至900mg/m²之間(例如20mg/m²、25mg/m²、30mg/m²、35mg/m²、40mg/m²、45mg/m²、或50mg/m²)的氟達拉濱來預先調理該患者，及(ii)在該患者顯出IL-15、IP-10、與/或IL-7之增加的血清量，與/或顯出穿孔素之減少的血清量後再投予T細胞療法。在其他實施方式中，本發明係關於一種用於治療適合T細胞療法之患者中的癌症之方法，該方法包含(i)對該患者投予劑量在 200mg/m²至2000mg/m²之間(例如200mg/m²、300mg/m²、400mg/m²、500mg/m²、600mg/m²、700mg/m²、800mg/m²、900mg/m²、1000mg/m²、或1110mg/m²)的環磷醯胺及劑量在20mg/m²至900mg/m²之間(例如20mg/m²、25mg/m²、30mg/m²、35mg/m²、40mg/m²、45mg/m²、或50mg/m²)的氟達拉濱來預先調理該患者，(ii)在(i)中的投予後，當該患者未顯出IL-15、IP-10、與/或IL-7之足夠的血清量時，投予額外量之環磷醯胺與/或氟達拉濱或投予IL-15、IP-10、與/或IL-7，及(iii)在(ii)中的投予後，在該患者顯出IL-15、IP-10、與/或IL-7之增加的血清量後再投予T細胞療法。在某些實施方式中，當該患者顯出至少一種選自由MCP-1、CRP、PLGF、IP-10、及其任何組合所組成的群組之額外的細胞激素之增加的血清量時對該患者投予T細胞療法。

本發明另外提供一種用於識別適合T細胞療法之患者的方法，該方法包含對該患者投予劑量在200mg/m²至2000mg/m²之間(例如200mg/m²、300mg/m²、500mg/m²、400mg/m²、600mg/m²、700mg/m²、800mg/m²、900mg/m²、1000mg/m²、或1110mg/m²)的環磷醯胺及劑量在20mg/m²至900mg/m²之間(例如20mg/m²、25mg/m²、30mg/m²、35mg/m²、40mg/m²、45mg/m²、或50mg/m²)的氟達拉濱，其中在該患者顯出IL-15、IP-10、與/或IL-7之增加的血清量，與/或顯出穿孔素之減少的血清量後再用T細胞療法治療。在其他實施方式中，本發明之方法是識別適合T細胞療法的患者，該方法包含(i)對該患者投予劑量在200mg/m²至2000mg/m²之間(例如200mg/m²、300mg/m²、400mg/m²、500mg/m²、600mg/m²、700mg/m²、800mg/m²、900mg/m²、1000mg/m²、或1110mg/m²)的環磷醯胺及劑量在20mg/m²至900mg/m²之間(例如20mg/m²、25mg/m²、30mg/m²、35mg/m²、40mg/m²、45mg/m²、或50mg/m²)的氟達拉濱，及(ii)在該患者顯出IL-15、IP-10、與/或IL-7之增加的血清量，與/或顯出穿孔素之減少的血清量後再投予T細胞療法。在其他實施方式中，本發明係關於一種用於識別適合T細胞療法之患者的方法，該方法包含(i)對該患者投予劑量在200mg/m²至2000mg/m²之間(例如200mg/m²、300mg/m²、400mg/m²、500mg/m²、600mg/m²、700mg/m²、800mg/m²、900mg/m²、1000mg/m²、或1110mg/m²)的環磷醯胺及劑量在20mg/m²至900mg/m²之間(例如20mg/m²、25mg/m²、30mg/m²、35mg/m²、40mg/m²、45mg/m²、或50mg/m²)的氟達拉濱，(ii)當該患者未顯出IL-15、IP-10、與/或IL-7之足夠的血清量時，投予額外量之環磷醯胺或氟達拉濱或投予有效量的IL-15、IP-10、與/或IL-7，及(iii)在該患者顯出IL-15、IP-10、與/或IL-7之增加的血清量後再投予T細胞療法。在某些實施方式中，當該患者顯出至少一種選自由MCP-1、CRP、PLGF、IP-10、及其任何組合所組成的群組之額外的細胞激素之增加的血清量時對該患者投予T細胞療法。

本發明之方法另外包含測量IL-15、IP-10、穿孔素、與/或IL-7的血清量。在一個實施方式中，該患者中IL-7血清量在投予環磷醯胺及氟達拉濱後比在投予前的IL-7血清量增加到至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少10倍、至少15倍、至少20倍、至少25倍、至少30倍、至少35倍、至少40倍、至少45倍、至少50倍、至少60倍、至少70倍、至少80倍、或至少90倍。在另一個實施方式中，該患者中IL-15血清量在投予環磷醯胺及氟達拉濱後比在投予前的IL-15血清量增加到至少5倍、至少10倍、至少15倍、至少20倍、至少25倍、至少30倍、至少35倍、至少40倍、至少45倍、至少50倍、至少60倍、至少70倍、至少80倍、或至少90倍。

在其他實施方式中，該患者中MCP-1血清量在投予劑量在200mg/m²至2000mg/m²之間(例如200mg/m²、300mg/m²、400mg/m²、500mg/m²、600mg/m²、700mg/m²、800mg/m²、900mg/m²、1000mg/m²、或1110mg/m²)的環磷醯胺及劑量在20mg/m²至900mg/m²之間(例如20mg/m²、25mg/m²、30mg/m²、35mg/m²、40mg/m²、45mg/m²、或50mg/m²)的氟達拉濱後比在投予前的MCP-1血清量增加至少1.5倍、至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少15倍、或至少 20倍。在某些實施方式中，該患者中PLGF血清量在投予環磷醯胺及氟達拉濱後比在投予前的PLGF血清量增加到至少1.5倍、至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少10倍、至少15倍、至少20倍、至少25倍、至少30倍、至少35倍、至少40倍、至少45倍、至少50倍、至少60倍、至少70倍、至少80倍、至少90倍、或至少100倍。在某些實施方式中，該患者中CRP血清量在投予環磷醯胺及氟達拉濱後比在投予前的CRP血清量增加到至少1.5倍、至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少約9倍、至少10倍、至少15倍、至少20倍、至少25倍、至少30倍、至少35倍、至少40倍、至少45倍、至少50倍、至少60倍、至少70倍、至少80倍、至少90倍、或至少100倍。在其他實施方式中，該患者中IP-10血清量在投予環磷醯胺及氟達拉濱後比在投予前的IP-10血清量增加到至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少15倍、至少20倍、或至少30倍。

下列實施例是用來進一步說明本發明而不應將其理解成是對本發明的進一步限制。本申請案中所引用之一切參考資料的內容以引用方式被明確地併入本案作為參考。

[實施例] 實施例1

設計一項臨床1/2期、單臂、非盲試驗以測定對患B細胞惡性腫瘤的個體投予的抗CD19 CAR+T細胞的安全性與可行性。

簽署知後同意書且符合研究資格之個體參加研究並接受白血球分離以得到用於產生抗CD19 CAR+T細胞的PBMC。在入院前用調理性化療治療個體為在第0日之抗CD19 CAR+T細胞單一輸注做準備。然後在抗CD19 CAR+T細胞輸注後3小時，對某些個體用介白素2治療(只有第1組)。若在第一次輸注後有部分反應(PR)或完全反應(CR)然後進行性疾病的反應，則用第二劑抗CD19 CAR+T細胞再治療。

有三組個體參加。第1組包括8個個體(其中1個個體經再治療)，給藥在從3×10⁶個至30×10⁶個抗CD19 CAR+T細胞/kg範圍內的抗CD19 CAR+T細胞。抗CD19 CAR+T細胞之給藥之後的調理方案由下述組成：60至120mg/kg(2220至4440mg/m²)的高劑量環磷醯胺二日，接著25mg/m²的氟達拉濱五日。在投予抗CD19 CAR+T細胞後對這些個體亦接受720,000IU/kg之高劑量介白素2(IL-2)(每8小時直到15劑或毒性阻礙另外的給藥為止)以刺激其增生。

第2組包括15個個體(其中2個個體來自第1組且經再治療)，其接受變化劑量的抗CD19 CAR+T細胞投予1×10⁶個至5×10⁶個抗CD19 CAR+T細胞/kg，接著接受高劑量環磷醯胺與氟達拉濱但不投予介白素2。

第3組包括11個個體，其接受300mg/m²的環磷醯胺及30mg/m²的氟達拉濱之減少調理方案，2者投予3並發日但不投予IL-2。這些個體之前面7個與後面4個分別接受1×10⁶個抗CD19 CAR+T細胞與2×10⁶個抗CD19 CAR+T細胞的抗CD19 CAR+T細胞輸注。

人口統計

個體人口統計特徵與疾病特性請參見表1。32個個體參加，其中19個個體(59%)患DLBCL或PMBCL，7個個體(22%)患CLL，及6個個體(19%)患其他惰性NHL(包括惰性濾泡性淋巴瘤與脾邊緣區淋巴瘤)。大多數個體患難治之症(84%)，且已經接受3種先前一線治療的中位數。所有患侵襲性NHL之個體先前接受過抗CD20治療、鉑合併化療，及95%先前接受過以蒽環類為基礎的化療。

藥物動力學

使用qPCR分析評估在第0日初次投予後在各種時間點在末梢血液中的抗CD19 CAR+T細胞數量，及利用對於存在於抗CD19 CAR構築體中的scFv具有特異性之抗體試劑藉由流動式細胞測量術所產生的標準曲線確認(Kochenderfer et al.,"B-cell depletion and remissions of malignancy along with cytokine-associated toxicity in a clinical trial of anti-CD19 chimeric-antigen-receptor- transduced T cells," Blood 119：2709-20(2012))。

在第1組中，輸注從3×10⁶個至30×10⁶個抗CD19 CAR+T細胞/kg。在前面6個個體中，在輸注後2週內檢測出血液循環中之抗CD19 CAR+T細胞在較高的量，達到總PBMC的至多0.02至1%，然後快速衰退及在50日後不可測。個體7與8，其被給藥最高數量之抗CD19 CAR+T細胞(分別是28×10⁶個與30×10⁶個抗CD19 CAR+T細胞/kg)，具有達到總PBMC的抗CD19 CAR+T細胞之>10%的較高之高峰百分率，及在血液中抗CD19 CAR+T細胞的較長期持久性(分別是>130與180日)。

在第2組中(沒有介白素2治療)，在2週內抗CD19 CAR+T細胞在末梢血液中顯示類似的增殖，然後衰退及在數週內從血液循環中完全消失(表2)。

總的來說，在抗CD19 CAR+T細胞之劑量與其在末梢血液中的增殖與持久性之間沒有明顯的關係。同樣，至今在抗CD19 CAR+T細胞之劑量、抗CD19 CAR+T細胞在血液中的增殖或持久性、及與此治療有關的臨床反應或毒性之間沒有明顯的關係。

在第1與2組中，在輸注後7至14日的第一期增殖後，抗CD19 CAR+T細胞沒有第二期增殖。至今，沒有證據顯示在受試個體中致癌轉化歸因於CAR表現反轉錄病毒的基因組***。第3組結果在數據截止時尚不可得。

效力

臨床醫師對32個個體評估安全性及對29個個體評估效力。可評估效力的29個個體的總反應率是76%。在29個個體中有11個(38%)達到CR及11/29個個體(38%)達到PR(圖2A與圖2B；表3)。

在29個可評估之個體中有16個(55%)自其第一次治療保持反應，有12個個體(包括經再治療的個體)的治療反應持續時間超過1年(表3)。將3個有反應個體在進展後再治療，全部都有持續之反應(17.4個月至52.2個月以上)。

如表3中指示，在19個患難治性侵襲性DLBCL/PMBCL的個體中有17個可評估疾病反應(有1個個體不可評估；1個個體尚未被評估)。在這17個個體中，有11個(65%)有反應而有6/17個體(35%)達到CR。反應中位數持續時間是7.3個月。

在7個患CLL之可評估個體中有6個(86%)有反應，有4/7個體(57%)達到CR(表3)。反應中位數持續時間是22.2個月，有4/7個體(57%)仍有反應，包括有3個持續有反應超過27個月(表3)。

在5個患惰性NHL之可評估個體中有5個(100%)有反應，有1/5個(20%)達到CR。反應中位數持續時間是18.8個月(表3)。有5個個體(5/5；100%)持續有反應，其中有2個有反應超過45個月(表4)。

安全性 不良事件

用抗CD19 CAR+T細胞治療32個個體，在最後一個個體治療時仍沒有報告不良事件。整體安全性總結包括32個經治療之個體全部。根據群組的總結包括個體1010003與1010004兩次的安全資料，一次是當這些個體在第1組中被治療時及第二次是當這些個體在第2組中被治療時(用抗CD19 CAR+T細胞再治療)。

不良事件總結

不良事件總結請參見表4。總的來說，31個個體(97%)經歷任何不良事件，0個個體(0%)經歷最差之第3級，29個個體(91%)經歷最差的第4級，及2個個體(6%)有致死性不良事件。20個個體(63%)經歷抗CD19 CAR+T細胞相關之不良事件；6個個體(19%)經歷最差的第3級，8個個體(25%)經歷最差之第4級，及沒有個體經歷第5級事件。16個個體(50%)經歷嚴重不良事件；3個個體(9%)經歷最差的第3級，9個個體(28%)經歷最差之第4級，及2個個體(6%)經歷最差的第5級。

劑量限制性毒性

在第1、2與3組中的DLT發生率分別是38%、40%、與0%。除個體1010002之外，DLT主要是神經毒性，2例的高肌酸酐，及1例之缺氧症與低血壓中的每一者。表6提供DLT列表。在第3組中沒有報告DLT。在第3組中的調理方案是用2×10⁶個抗CD19 CAR+T細胞/kg研究。

細胞激素釋放症候群

在結合CD19標靶後經活化之T細胞誘發細胞激素釋放。使用廣泛檢索策略，可歸因於CRS的治療時突發性不良事件包括發燒、發熱性嗜中性減少症、低血壓、急性血管滲漏症候群、高肌酸酐、腎功能衰竭、缺氧症、與胸膜積水。28個個體(88%)報告可歸因於細胞激素釋放之不良事件，其中24個個體(75%)報告一個

第3級事件，及6個個體(19%)經歷嚴重事件。起因於協同治療(例如IL-2(用於第1組)與調理性化療(引起發熱性嗜中性低下症))的不良事件可能混淆此分析。

CRS之臨床表現典型上在抗CD19 CAR+T細胞輸注後的第一週內出現，而在第3組個體中較不常見。在第3組之11個個體中只有1個經歷第3級低血壓，及4個經歷第3級發燒。只有在第1與2組個體中報告急性血管滲漏症候群、少尿症、高肌酸酐、與腎功能衰竭事件。

神經性不良事件

在三組中都觀察到神經性不良事件，主要是失語症/言語障礙症、錯亂、運動神經病變及嗜眠症。13個個體(41%)有嚴重的

第3級神經毒性，及11個個體(34%)經歷嚴重事件。

因神經毒性而死亡的個體在病毒性A型流行性感冒感染情況下有CNS腦血管缺血事件。研究員認為這事件與抗CD19 CAR+T細胞無關。

對神經性不良事件而言，5個有神經毒性事件的個體(16%)為了保護氣道而需要機械換氣法；這些個體全都在第1與2組。在第3組中沒有個體***管。

神經性不良事件在抗CD19 CAR+T細胞輸注後的第2至17日之間有6日之中位數發病時間(除在1個個體中出現第4級脊髓炎之外)，及在抗CD19 CAR+T細胞輸注後的第110日發病。考慮到發病時間、表現與腦部MRI發現，研究員認為這事件與氟達拉濱有關而非歸因於抗CD19 CAR+T細胞。神經性不良事件消退成第1級或更好之中位數時間是輸注後14日。

死亡

2個個體在化療與抗CD19 CAR+T細胞輸注30日內死亡。個體2在研究中治療後18日死亡，死因是腦梗塞併發病毒性肺炎、A型流行性感冒感染、大腸桿菌感染、呼吸困難、與缺氧症。個體11患有PMBCL合併廣泛纖維化縱膈腔淋巴瘤，在研究中治療後16日死亡。在驗屍時未確定死因及該驗屍報告作成結論，死因很可能是心律不整合併PMBCL侵犯縱膈腔。研究員認為無一事件與抗CD19 CAR+T細胞有關。

實施例2

對選定患者投予調理性化療法，該調理性化療法包含300mg/m²/日的環磷醯胺及30mg/m²/日的氟達拉濱。從第-5至-3日投予該調理性化療法投予三日。在第0日，第一亞群患者(患者22至28)(表6)接受10日製造的新鮮抗CD19 CAR+T細胞，及第二亞群患者(患者29至32)接受6日製造的經冷凍保存抗CD19 CAR+T細胞。

利用使用Millipore HCD8MAG15K17PMX套組(T1、T2、免疫調節性細胞激素、趨化因子、免疫效應子)的luminex來試驗患者血清。在調理前與後測量下列的量：介白素15(IL-15)、單核球趨化性蛋白1(MCP-1)、γ誘導蛋白10(IP-10)、胎盤生長因子(PLGF)、可溶性細胞間黏著分子1(sICAM-1)、C-反應蛋白(CRP)、血管內皮生長因子D(VEGF-D)、巨噬細胞發炎蛋白1β(MIP-1β)。

在患者22至28中，患者22至25與27顯示至少部分反應，及患者26與28顯示在治療後進行性疾病。對患者22至26而言，IL-15、MCP-1、與PLGF量顯示在患者血清中至少有些增加(圖4A、圖4B、與圖4D)，而IP-10、sICAM-1、CRP、VEGF-D、與MIP-1β量在某些患者中增加及在其餘患者中保持穩定或減少(圖4C與圖4E至圖4H)。對患者27與28只測量IL-15(圖4A)。

在有反應患者(有部分反應或完全反應)與無反應患者(有進行性疾病)之間觀察到標記量有些差異。相對於基線值而言，IL-15量在有反應患者中平均增加到約35倍(從增加到約10倍至增加到約55倍不等)，而在無反應患者中的IL-15量各增加到少於約10倍(圖5A)。MCP-1量在有反應患者中平均增加到約5倍(從增加到約2倍至增加到約7倍不等)，而在無反應患者(患者26)中的MCP-1量增加到少於4倍(圖5B)。IP-10量在有反應患者中平均增加到約3.5倍(從增加到約2倍至增加到約7倍不等)，而在無反應患者中的IP-10之血清量實質上沒有變化(圖5C)。PLGF量在有反應患者中平均增加到約30倍(從稍微增加到約2倍或更少至增加到約100倍以上不等)，而在無反應患者中的血清PLGF之量只有稍微增加(圖5D)。sICAM-1量在有反應患者中平均增加到約3倍(從實質上沒有變化至增加到約4.5倍不等)，而在無反應患者中的sICAM-1之血清量實質上沒有變化(圖5E)。CRP量在有反應患者中平均增加到約10倍(從實質上沒有變化至增加到約25倍不等)，而在無反應患者中的CRP之血清量實質上沒有變化(圖5F)。VEGF-D量在有反應患者中平均增加到約3倍(從實質上沒有變化至增加到約6倍不等)，而在無反應患者中的VEGF-D之血清量實質上沒有變化(圖5G)。MIP-1β之血清量在有反應患者中平均增加到約1.5倍(從實質上沒有變化至增加到約3倍不等)，而在無反應患者中的MIP-1β之血清量減少約50%(圖5H)。

對患者30至33投予6日製造的經冷凍保存細胞，在選定之第-6日至第18日選定之日子測量下列的量：各種發炎細胞激素、趨化因子、效應子、發炎標記、與黏著分子，其包括顆粒球巨噬細胞集落刺激因子(GM-CSF)、干擾素γ(IFNγ或IFNG)、介白素10(IL-10)、IL-15、介白素2(IL-2)、介白素5(IL-5)、介白素6(IL-6)、介白素8(IL-8)、IP-10、MCP-1、MIP-1β、血清顆粒酶A(GRNZA)、血清顆粒酶B(GRNZB)、PLGF、CRP、單核球趨化性蛋白4(MCP-4)、介白素16(IL-16)、胸腺及活化調節趨化因子(TARC)、伊紅趨素-3(Eotaxin-3)、sICAM-1、可溶性血管黏著分子1(sVCAM-1)、與血清澱粉樣蛋白A(SAA)(圖6A至圖6V)。

實施例3

為改良在實施例1之第3組中觀察到的淋巴球耗損之深度與持續期間，將A1組中的調理性化療劑量增加到500mg/m²的環磷醯胺及30mg/m²的氟達拉濱，連同目標劑量2×10⁶個抗CD19 CAR+T細胞/kg投予3日。用於此方案(A1組)之環磷醯胺劑量比實施例1的第2組30mg/kg的環磷醯胺調理方案(劑量限制性毒性發生率為29%)低了約38%，氟達拉濱劑量與實施例1之第3組的一樣低。

根據DLT發生率與受益性-危險性評估來評估較高的調理性化療劑量與/或變動之抗CD19 CAR+T細胞劑量。CAR載體構築體與實施例1中所述的構築體相同。本實施例描述被設計來檢定利用快速、封閉及無珠(bead-less)程序產生之抗CD19 CAR+T細胞的安全性與效力。封閉該程序保留T細胞產品之特性。

研究設計

執行一項臨床1/2期多中心、開放性標籤研究以評估在患有難治性NHL之個體中的KTE-C19之安全性及效力。本研究會分成被命名為第1期與第2期的二個不同期。

在第1期期間內，有約6至24個患有DLBCL、PMBCL或TFL之個體參加以評估KTE-C19方案的安全性。研究主辦者內部的安全審查小組(SRT)將審查安全性資料及作出建議在第1期進一步研究與進展到第2期，如圖3所示。

在第2期期間內，個體參加被命名為第1組與第2組的二個不同組。第1組納入患有難治性DLBCL之成年個體，及第2組納入患有難治性PMBCL與TFL之成年個體。TFL被定義為接受用於濾泡性淋巴瘤的先前化療之個體。

不受研究的期別支配，各個體會按照相同研究療程及程序要求。各個體會進行下列研究期間：篩選/白血球分離期；調理性化療期；研究用產品(IP)治療期；治療後評估期；長期追蹤期。

研究期間

對各個體而言，參加期間包括28日的篩選期、5至7日的調理性化療治療期、KTE-C19治療期(包括7日的院內恢復期)、治療後評估期、及長期追蹤期(存活期監測至多15年)。

在治療後3個月會追蹤個體之一切不良事件。在3個月後，會按照評估量表(SOA)中略述的不時監測個體之目標不良事件/嚴重不良事件(例如血液疾病、神經疾病、次發性惡性腫瘤、感染或自體免疫疾病)及在個體血液中的具複製力之反轉錄病毒(RCR)。延長追蹤的要求是根據在經治療個體中的基因轉移載體之潛在持久性。

研究完成被定義為最後的個體完成長期追蹤期回診、被認為失去追蹤、撤回同意、或死亡。當在第2期之第1組中的所有個體及全體研究群體分別已完成6個月之疾病反應評估、失去追蹤、從研究中退出、或死亡(不論何者先發生)時，將進行主要分析。

個體資格

用於個體之納入標準包括：a)組織學檢查證實為侵襲性B細胞NHL，包括下列由WHO 2008定義的種類：DLBCL(不另加規定)、富T細胞/組織細胞的大型B細胞淋巴瘤、慢性炎相關DLBCL、老人艾司坦-巴爾病毒(EBV)+DLBCL、原發性縱膈腔(胸腺)大B細胞淋巴瘤、或濾泡性淋巴瘤轉化DLBCL；b)化療難治之症，被定義為下列的一或多者：對含有最新式化療法之方案有最佳反應的穩定疾病(穩定疾病期間必須

12個月)或進行性疾病；及先前自體SCT的疾病進展或復發

12個月；c)個體先前必須接受過適當療法(至少包括抗CD20單株抗體，除非研究員確定腫瘤是CD20陰性)及含有蒽環類之化療方案；d)患有轉化FL之個體先前必須接受過濾泡性淋巴瘤化療法且後來在轉化DLBCL後患有化療難治之症；e)至少1個可測病灶(根據修改之IWG Response Criteria for Malignant Lymphoma)；只有在完成放射治療後進展已被記載時，才會認為先前經放射線照射過的病灶可測得；f)腦部MRI顯示沒有中樞神經系統淋巴瘤存在的證據；g)在個體計畫白血球分離時，從先前任何放射治療或全身性治療起必須已經過大於或等於2週；h)由於先前療法造成之毒性必須是穩定的或回復至

第1級(除臨床上不顯著的毒性(例如毛髮脫落)外)；i)個體必須年滿18歲；j)美國東岸癌症臨床研究合作組織(ECOG)日常體能狀態評估得分為0或1；k)個體必須有下列實驗室值：i)ANC

1000/μL；ii) 血小板數

50,000個/μL；iii)適當腎、肝、與心臟功能，定義為血清肌酸酐

1.5mg/dL，血清ALT/AST

2.5 ULN，與總膽紅素

1.5mg/dl，除了患有捷倍耳氏(Gilbert's)症候群之個體以外；及iv)左心室射出率

50%且沒有心包滲液(利用ECHO測定)存在的證據；及l)具生育能力婦女必須血清或尿液懷孕試驗是陰性的。

用於個體之排除標準包括：a)除非黑色素瘤的皮膚癌或原位癌(例如子宮頸癌、膀胱癌、乳癌)或濾泡性淋巴瘤之外的惡性腫瘤病史，除非疾病消失至少3年；b)CLL之Richter氏轉化病史；c)在簽署知後同意書6週內自體幹細胞移植；d)同種異體幹細胞移植法病史；e)先前CD19標靶療法(除在本研究中接受過KTE-C19且符合再治療資格之個體外)；f)先前嵌合抗原受體療法或其他基因改造的T細胞療法；g)歸因於胺基糖苷之嚴重立即型過敏反應病史；h)臨床上顯著的主動感染(例如允許單純UTI，細菌性咽炎)或目前接受IV抗生素或在參加前7日內接受過IV抗生素(允許預防性抗生素、抗病毒藥物與抗黴菌藥物)；i)受HIV、B型肝炎病毒(HBsAg陽性)或C型肝炎病毒(抗HCV陽性)感染之已知病史；j)患有可檢測的腦脊髓液惡性腫瘤細胞或腦部轉移之個體，或有腦脊髓液惡性腫瘤細胞或腦部轉移病史之個體；k)癲癇、腦血管缺血/出血、失智症、小腦疾病、或任何自體免疫疾病合併CNS侵犯之病史；l)患有心房或心室淋巴瘤侵犯之個體；m)需要起因於腫瘤塊效應(例如腸阻塞或血管壓迫)的緊急療法；n)原發性免疫缺陷；o)很可能妨礙研究治療之安全性或效力的評估之任何醫療狀況；量及用於患有腎上腺機能不全之個體的生理替代劑量之局部與吸入性皮質類固醇；不允許大於或等於5mg/日的強體松(prednisone)之皮質類固醇劑量或等劑量的其他皮質類固醇；q)對任何在本研究中使用的藥劑有嚴重立即型過敏反應之病史；r)在調理方案開始前

6週的活毒疫苗；s)懷孕或母乳哺育的具生育能力婦女，由於該準備性化療對胎兒或嬰兒的潛在危險效果；已接受絕育手術或停經至少2年的婦女不被認為具生育能力；t)從簽署同意書開始到KTE-C19完成後6個月期間無意願實施節育的男性與女性個體；及 u)研究員判斷個體不太可能完成所有操作程序需要的研究回診或程序，包括追蹤回診或服從參與研究的需要。

此外，還會對血液樣本與腫瘤樣本進行生物標記分析以評估用於KTE-C19之預測性及藥效指標。也可評估在侵襲性NHL中的預後指標。將基線白血球分離與最終KTE-C19樣本積存及可利用免疫表現型與/或基因表現剖析來分析。可將剩餘樣本儲存用於未來DNA、RNA、或蛋白質指標之探索分析。將收集歸檔的腫瘤組織做為中央路徑審查之依據。另外的分析法可包括CD19表現、基因表現剖析、與DNA變異分析。可將剩餘腫瘤樣本儲存用於未來DNA、RNA、或蛋白質指標之探索分析。

治療操作程序 排程

利用白血球分離法從個體得到白血球(12至15升血球分離，目標是靶向用於製造KTE-C19的約5x10⁹至10x10⁹個單核細胞)。將各個體之經白血球分離產物處理以濃化含有T細胞的PBMC群落。接著將T細胞刺激來增殖及經由反轉錄病毒載體轉導T細胞以導入CAR基因。接著使T細胞增殖與冷凍保存以產生研究用藥品。在完成各個體的調理性化療方案後，個體將個別接受KTE-C19輸注。

研究療程

個體將接受非骨髓催毀性調理方案(由環磷醯胺與氟達拉濱組成)以誘發淋巴球耗損及創造對KTE-C19體內增殖來說合宜之環境。在第-5日(或對於B組是第-7日)至第-1日為個體開始利用環磷醯胺與氟達拉濱的調理性化療。該5日調理性化療方案是在門診時投予。該7日調理性化療方案可以門診病人或住院病入方案投予，根據研究員的裁量。

第1期：

在A1與A2組中，個體將接受下列5日調理性化療方案：在輸注日在投予環磷醯胺前先靜脈輸注1L的0.9% NaCl生理鹽水；接著在第-5、-4、與-3日在60分鐘內靜脈輸注500mg/m²環磷醯胺；接著在第-5、-4、與-3日在30分鐘內靜脈輸注30mg/m²氟達拉濱；接著在氟達拉濱輸注完畢時加輸注1L的0.9% NaCl生理鹽水(圖3)。在某些案例中，根據院內準則可添加美司鈉(mesna)(2-巰基乙院磺酸鈉)。

在A3組中，個體將接受下列5日化療方案：在輸注日在投予環磷醯胺前先靜脈輸注1L的0.9% NaCl生理鹽水；接著在第-5、-4、與-3日在60分鐘內靜脈輸注300mg/m²環磷醯胺；接著在第-5、-4、與-3日在30分鐘內靜脈輸注30mg/m²氟達拉濱；接著在氟達拉濱輸注完畢時加輸注1L的0.9% NaCl生理鹽水。在某些案例中，根據院內準則可添加美司鈉。

對參加A1、A2或A3組的個體而言，在KTE-C19輸注(第0日)前的第-2與-1日是休息日。

在B1與B2組中，個體將接受下列7日化療方案：靜脈輸注0.9% NaCl生理鹽水，建議為2.6ml/kg/hr(最大值200ml/hr)，按照從環磷醯胺輸注前的11小時開始連續輸注到最後之環磷醯胺輸注後的24小時為止來投予；在第-7與-6日在120分鐘內靜脈輸注30mg/kg(1110mg/m²)環磷醯胺；接著在第-5、-4、-3、-2與-1日在30分鐘內靜脈輸注25mg/m²氟達拉濱。在某些案例中，根據院內準則可添加美司鈉。

對參加B1或B2組的個體而言，在化療最後一日(第-1日)與KTE-C19輸注(第0日)之間沒有休息日。

對KTE-C19而言，在A1、A3或B1組中的個體將接受由下列組成之KTE-C19治療：一次靜脈輸注CAR轉導之自體T細胞，目標劑量為2×10⁶個抗CD19 CAR+T細胞/kg(±20%；從1.6x10⁶個抗CD19 CAR+T細胞/kg至2.4×10⁶個抗CD19 CAR+T細胞/kg)。可投予最小劑量之1×10⁶個抗CD19 CAR+T細胞/kg。對體重超過100kg的個體而言，要投予最大平坦劑量之2×10⁸個抗CD19 CAR+T細胞/kg。

在A2或B2組中的個體將接受由下列組成之KTE-C19治療：一次靜脈輸注CAR轉導之自體T細胞，目標劑量為1×10⁶個抗CD19 CAR+T細胞/kg(±20%；從0.8×10⁶個抗CD19 CAR+T細胞/kg至1.2×10⁶個抗CD19 CAR+T細胞/kg)。可投予最小劑量之0.5×10⁶個抗CD19 CAR+T細胞/kg。對體重超過100kg的個體而言，要投予最大平坦劑量之1×10⁸個抗CD19 CAR+T細胞/kg。

第2期：

將在第1期中被SRT確定是安全的KTE-C19方案轉到本研究的第2期部分。

再治療

達到PR或CR的個體如果後來進行性疾病(及尚未能確定該復發是C19癌細胞)的話，可以接受第二次調理性化療與KTE-C19療程。要符合第二次療程的資格，個體應該被再次評估且繼續符合原先研究資格標準(除和先前CAR療法有關之排除標準外)，且應該未接受過後續用於治療淋巴瘤的化療。另外，和氟達拉濱或環磷醯胺有關之任何毒性應該是穩定的且在再治療前回復至第1級以下(除毛髮脫落外)。一個個體最多可有一次再治療療程。參加2期之個體將接受同一KTE-C19方案。參加第1期的個體將接受為第2期所選定之KTE-C19方案。如果尚未選定該第2期方案，則個體將接受被SRT確定是安全的最後KTE-C19方案。

在第1期經歷DLT或在第2期經歷可相提並論的毒性之個體不符合再治療資格。另外，如果個體具有已知的中和性抗體，則該個體不符合再治療資格。然而，如果發展出非中和性HAMA或HABA抗體，則個體在符合該資格標準情況下可被再治療。

治療後評估

在完成KTE-C19輸注及出院(典型上在第8日)後，在治療後評估期間會追蹤所有個體。從第0日(KTE-C19輸注)算起，個體將在第2週、第4週(±3日)、第2個月(±1週)、與第3個月(±1週)回診。評估可以包括MMSE(簡易智能狀態測驗)；用於疾病評估的PET-CT；理學檢查與生命徵象；實驗室醫學，包括Chemistry Panel、CBC with differential、對所有具生育能力的婦女的β-HCG懷孕試驗(血清或尿液)、抗KTE-C19抗體、淋巴球亞群、細胞激素量、抗CD19 CAR+T細胞、與具複製力之反轉錄病毒(RCR)分析；不良事件/嚴重不良事件報告；合併用藥文件製作；及為簽署同意書可選擇部分的個體採集新鮮腫瘤樣本。

首先利用PCR分析法(配合以流動式細胞測量術)監測血液中的轉導抗CD19 CAR+T細胞之存在、增殖、持久性、與免疫表現型。也評估血液中的細胞激素之血清量。在試片中可包括下列細胞激素：促發炎與免疫調節性細胞激素IL-6、TNFα、IL-8、IL-1、IL-2、GM-CSF、IL-15、IL-17a、IFNγ、IL-12p40/p70；免疫效應分子顆粒酶A、B、穿孔素、sFasL；急性期反應CRP、SAA與趨化因子MIP-1α、MIP-3α、IP-10、伊紅趨素、MCP-4的相關物。當KTE-C19包含反轉錄病毒載體轉導之T細胞時，也監測被治療患者血液中的具複製力之反轉錄病毒(RCR)的存在。

如果個體符合用KTE-C19再治療之資格，則將再治療前的最後一次掃瞄作為評估對再治療之反應的基線值。

在治療後評估期間內的任何時候，如果個體在治療後沒有好轉(即CR或PR)或在有反應後又進展，則該個體直接進入第3個月回診且在長期追蹤期內就疾病結果而被追蹤。

在長期追蹤期內追蹤所有個體之存活期與疾病狀態，如果是適合的話。個體在完成治療後評估期的第3個月回診後將開始長期追蹤期(不管他們是否在治療後好轉或由於進行性疾病而直接進入第3個月回診)。從第0日(KTE-C19輸注)算起到第18個月，個體將每3個月(±2週)回診；在第24個月至第60個月之間每6個月(±1個月)回診；及從第6年(第72個月)(±3個月)開始到第15年，個體將每年回診一次。在這次回診時將完成下列程序：理學檢查；PET-CT掃描；疾病評估；實驗室醫學，包括CBC with differential、抗KTE-C19抗體、淋巴球亞群、抗CD19 CAR+T細胞、與RCR分析；目標不良事件/嚴重不良事件報告(24個月內或到進行性疾病為止，不論何者先發生)，包括神經疾病、血液疾病、感染、自體免疫疾病、與次發性惡性腫瘤；目標合併用藥文件製作(在進行性疾病後的2年內)，包括γ球蛋白、免疫抑制劑、抗感染劑、疫苗接種、與用於治療進行性疾病的任何療法。

評估會包括頸、胸部、腹部與骨盆之PET-CT掃描，連同疾病的一切其餘部位之適當影像。個體將會有第一份在KTE-C19輸注後4週及如上述定期的KTE-C19輸注後計畫PET-CT腫瘤評估。

對為CR進行評估之個體進行骨髓穿刺活檢。根據修改之IWG Response Criteria for Malignant Lymphoma，只有當個體在治療前就患有淋巴瘤侵犯骨髓時或如果在末梢血球計數或血塗片中的新異常導致臨床上診斷為淋巴瘤侵犯骨髓時，才應該進行骨髓穿刺活檢。骨髓穿刺活檢必須顯示在型態上沒有疾病存在之證據，或者如果在型態上不能確定，則在免疫組織化學上必須是陰性的，以把CR指定給治療。

研究之終點 主要終點

第1期之主要終點是發生不良事件(被定義為劑量限制性毒性(DLT))。第2期之主要終點是客觀反應率(ORR)，被定義為由研究員根據修改之IWG Response Criteria for Malignant Lymphoma確定的完全反應或部分反應發生率。在分析截止日期前不符合客觀反應標準之所有個體將被認為是無反應者。

次要終點

將第1期個體中的客觀反應率作出總結。根據IRRC測定第2期個體中的客觀反應率，其被定義為由IRRC根據修改之IWG Response Criteria for Malignant Lymphoma確定之完全反應或部分反應的發生率。在分析截止日期前不符合客觀反應標準之所有個體將被認為是無反應者。經歷客觀反應的個體之治療反應時間(DOR)定義為該個體的第一次客觀反應或死亡(不論原因)之日期，該第一次客觀反應隨後根據修改之IWG Response Criteria for Malignant Lymphoma被確定為進行性疾病。在分析資料截止日期前不符合進展標準或死亡之個體將在其最後可評估的疾病評估日被審查及將其反應用進展中表示。

劑量限制性毒性(DLT)

劑量限制性毒性被定義為下列在KTE-C19輸注後30日內發病之KTE-C19相關事件：

a)從細胞轉移日起持續21日以上的第4級嗜中性白血球減少症。

b)從細胞轉移日起持續35日以上的第4級血小板減少症。

c)任何需要插管的KTE-C19相關不良事件(包括為了保護氣道而需要插管之第4級錯亂)被認為是DLT。

d)持續3日以上的其他一切3級毒性及一切第4級毒性，除下列被認為不是DLT之狀況外：i)在2週內消退至第1級或更少及在4週內消退至基線值的失語症/言語障礙症或錯亂/認知障礙；ii)第3級發燒；iii)骨髓抑制(包括在血小板數少於50×10⁹個/L之條件成立下流血及在嗜中性白血球減少症之條件成立下確定細菌感染)，被定義為淋巴球減少症、血紅素減少、嗜中性白血球減少症、血小板減少症，除非嗜中性白血球減少症與血小板減少症符合上述DLT定義；iv)在細胞輸注之2小時內發生的立即型過敏反應(與細胞輸注有關)，其可用標準療法在細胞輸注之24小時內回復至第2級或更少；及v)第3或第4級低γ球蛋白血症。

將CRS根據修訂版分級系統(Lee 2014)分級。將歸因於CRS的不良事件對應到總CRS分級評估來確定DLT。

在第1期期間內，約6至24個患有DLBCL、PMBCL、或TFL的個體參加以評估KTE-C19方案之安全性。在完成各自的KTE-C19輸注後30日內為DLT而評估各組個體。如果6個個體之DLT發生率

1，則可探索B1組或該研究可進入試驗的第2期。這個決定係根據總受益性/危險性比與可用的生物標記資料。

然而，如果6個個體中有2個在第1期期間內出現操作程序所定義之DLT，則SRT可建議加入每組各3個個體的2個組(總計至多12個個體)，所投予之劑量與第一批6個個體一樣。在此情況下，如果9個個體中有

2個或如果12個個體中有

3個出現DLT，則發展到另一組或進入研究的第2期。

如果個體之DLT發生率>2/6、>3/9、或>4/12個，則可在另外的6至12個個體中探索其他KTE-C19方案(圖3)。相同DLT規則如上述地適用。

實施例4

經由攜帶抗CD19 CAR構築體基因之g-鼠類反轉錄病毒轉導自體淋巴球，接著增殖達到所欲細胞劑量而產生T細胞產品。在收集時或在與CD19+細胞共同培養後對共同培養液的上清液進行流動式細胞測量術與多重細胞激素分析法來評估抗CD19 CAR+T細胞產品。用K562-CD19細胞或K562-NGFR控制組細胞在效能子對靶細胞比例為1：1下進行CAR+T細胞共同培養液之產品特性分析。標準培養時間是18小時。用環磷醯胺與氟達拉濱調理患有復發/難治性B細胞惡性腫瘤的患者，接著投予抗CD19 CAR+T細胞。

使用EMDmillipore Luminex® xMAP®多重分析法測量細胞激素量與趨化因子量。使用Luminex 200^TM儀器與xPONENT® 3.1數據分析軟體進行數據擷取與分析。對IL-7而言，在純淨樣本下根據製造業者之指導方針使用人IL-7 Quantikine HS ELISA Kit(HS750)。利用定量PCR分析法測量循環中CAR T細胞的頻率。對患者投予預先調理方案，該方案包含在第-5與-4日投予300mg/m²環磷醯胺及在第-5、-4、與-3日投予30mg/m²氟達拉濱。在下列日期採集患者血清：在第-12至-5日之間投予環磷醯胺與氟達拉濱前(「前」)、在第0日之間投予CAR+T細胞前(「後」)、及在投予CAR+T細胞後至第18日之間的選定日。在調理前與後及在投予CAR+T細胞後之選定日測量GM-CSF、IL-2、MCP-1、IL-6、IL-10、MCP-4、CRP、IFNγ、顆粒酶A、IL-15、IL-5、顆粒酶B、IL-8、IP-10、MIP-1b、PLGF、IL-16、TARC、伊紅趨素3、sICAM-1、sVCAM-1、與SAA血清濃度，如圖6所示。發現在用300mg/m²環磷醯胺及30mg/m²氟達拉濱調理後，患者血清中的某些細胞激素濃度增加(圖7A至圖7I及圖18A至圖18E)。尤其，在用環磷醯胺及氟達拉濱調理後，IL-15、IL-7、PLGF、CRP、與MCP-1濃度顯著增加(圖7A至圖7D、圖7G、圖18A、及圖18C至圖18E)。也觀察到IL-5、IL-10、IP-10、與sICAM-1濃度增加(圖7E至圖7F、圖7H至圖7I、與圖18B)。相反地，發現在用環磷醯胺及氟達拉濱調理後穿孔素減少(圖18F)。觀察到在預先調理後，各種其他被分析物之血清濃度增加或減少，如圖18G所示。治療另外的患者，及其結果請參見圖11至圖17。此外，發現在預先調理後，IL-15(圖19A)與IP-10(圖19B)之增加的血清量及穿孔素(圖19C)之減少的血清量與經CAR T細胞治療之患者中的正向客觀反應顯著相關。

分別藉由流動式細胞測量術及多重細胞激素分析法評估CAR+T細胞輸注後之末梢血液淋巴球(PBL)與血清。將輸注前抗CD19 CAR+T細胞的細胞激素生產與K562-NGFR負控制組作比較(圖8)。在T1、T2、及免疫體內恆定性細胞激素GM-CSF、IL-2、IFNγ、IL-5、IL-4、與IL-13、及促發炎細胞激素與趨化因子TNFα、IL-6、顆粒酶B、MIP-1b(β)、MIP-1a(α)、及SCD137濃度方面，抗CD19 CAR+T細胞樣本比負控制組更高(圖8A至圖8L)。此外，靶抗原與輸注前T細胞產品結合導致可調節活性的受體(例如CD107a(α)、401BB、與PD-1)上調(圖9A至圖9C)。

在BD FACSCanto II(利用FlowJo軟體作數據擷取與分析)上進行多色流動式細胞測量術。較短之製造程序產生具有CD4+、初始及中央記憶T細胞較高表達的CAR+T細胞產品(圖10)。輸注後CAR+T細胞顯出多元化亞群組成，其主要包含已分化T細胞及一些中央記憶或初始T細胞(圖10)。

抗CD19 CD28ζ CAR+T細胞是臨床上有效的及誘發在淋巴瘤與白血病中的持續反應。持續臨床反應可在循環中沒有耐久CAR+T細胞情形下出現而使正常B細胞能恢復。用環磷醯胺及氟達拉濱調理透過引入能有利於T細胞之體內恆定性增殖、活化及運輸的分子來改良免疫環境。CAR+T細胞治療導致治療後3週內循環細胞激素與趨化因子快速升高且隨後消退。

實施例5

進行研究以檢定用非清髓性調理方案治療個體之安全性及效力，該調理方案係由劑量大於或等於300mg/m²的環磷醯胺及劑量大於或等於30mg/m²的氟達拉濱組成。這些調理性化療劑之劑量被用來進一步誘發淋巴球耗損及創造對KTE-C19體內增殖更合宜的環境。

參加之個體接受白血球分離以得到用於產生抗CD19 CAR+T細胞的PBMC。然後個體接受調理性化療，該調理性化療包含在第-5至-3日投予500mg/m²/日的環磷醯胺及60mg/m²/日的氟達拉濱。在第0日，個體藉由IV接受抗CD19 CAR+T細胞/kg劑量。個體可接受2x10⁶個抗CD19 CAR+T細胞/kg(±20%)作為起始劑量，接著可根據個體反應性增加或減少劑量。

在調理性化療及投予抗CD19 CAR+T細胞後，監測個體的副作用、細胞激素之血清量、T細胞數、及疾病反應。在調理前與後測量下列之血清量以確定該調理性化療效果：各種發炎細胞激素、趨化因子、效應子、發炎標記、與黏著分子，其包括但不限於IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-10、IL-15、IL-16、IL-21、MCP-1、IP-10、PLGF、sICAM-1、CRP、VEGF、VEGF-C、VEGF-D、sVCAM-1、MIP-1β、FGF2、IL-1b、伊紅趨素、GM-CSF、IFNγ、IL-12p40、MDC、IL-12p70、 IL-13、IL-17A、MIP-1a、TNFa、TNFb、顆粒酶A、顆粒酶B、穿孔素、SAA、MCP-4、與TARC。在投予環磷醯胺、氟達拉濱、與抗CD19 CAR+T細胞中的每一者前或後採集血清，及將所有血清量與在調理性化療前的血清量作比較。將疾病反應性與各患者的調理後細胞激素剖析作比較以識別出在疾病反應性與調理後一或多種細胞激素量之間的任何關聯。

嚴密監測副作用出現率以確定環磷醯胺與氟達拉濱之最大耐受劑量。視需要可醫學控制副作用。可增加或減少環磷醯胺與氟達拉濱中一或二者劑量以改良臨床療效及限制副作用。顯出最初部分反應接著進行性疾病的任何個體可接受在相同或不同環磷醯胺與/或氟達拉濱量下的第二次治療。在此專利申請案中，在小括號中註明作者名稱與日期、或專利編號、或專利公告編號來引用各種發表。在專利申請範圍前面的說明書末尾可發現這些公告之完全引用。將這些公告的揭示以引用方式將其全部內容併入本申請案作為參考以更完全地說明截至此處所描述及主張的發明日期為止該領域之習知技藝者熟知的技術狀態。然而，此處引用的參考資料不應被理解成承認該參考資料是本發明之先前技術。此處描述的各種態樣、實施方式、及選項皆可被結合於任何與全部變型中。

本專利說明書中提到的一切公告、專利、或專利申請案以引用方式將其內容併入本案作為參考，在某種程度上彷彿個別公告、專利、或專利申請案被具體且逐個地指明併入本案作為參考。然而，此處引用的參考資料不應被理解成承認該參考資料是本發明之先前技術。

現在已概括描述完本發明，藉由參考此處提供之實施例可得到進一步的理解。這些實施例僅用於說明而非加以限制。

Claims

一種表現抗-CD19 CAR的CAR-T細胞用於製造治療已暴露於在500mg/m²/日至600mg/m²/日之間的環磷醯胺的一或多個劑量及在20mg/m²/日至30mg/m²/日之間的氟達拉濱(fludarabine)的一或多個劑量的B細胞淋巴瘤之藥劑之用途，其中已每日投予該環磷醯胺三天。
如申請專利範圍第1項之用途，其中該腫瘤經工程化CAR T細胞的治療有效量治療。
如申請專利範圍第2項之用途，其中該工程化嵌合抗原受體(CAR)T細胞的該治療有效量是約1 x 10⁶或約2 x 10⁶個細胞/kg。
如申請專利範圍第1至3項中任一項之用途，其中已每日投予氟達拉濱的劑量2至5天。
如申請專利範圍第1至3項中任一項之用途，其中在投予該T細胞療法(第0天)之前，已投予該環磷醯胺的劑量及/或該氟達拉濱的劑量至少三天。
如申請專利範圍第1至3項中任一項之用途，其中相較於治療該腫瘤之前的血清量，帶有該腫瘤的患者呈現選自下列的體內恆定性細胞激素增加的血清濃度：介白素7(IL-7)、介白素15(IL-15)、介白素10(IL-10)、介白素5(IL-5)、γ誘導蛋白10(IP-10)、介白素8(IL-8)、單核球趨化性蛋白1(MCP-1)、胎盤生長因子(PLGF)、C-反應蛋白(CRP)、可溶性細胞間黏著分子1(sICAM-1)、可溶性血管黏著分子1(sVCAM-1)、或其任何組合。
如申請專利範圍第6項之用途，其中該體內恆定性細胞激素係選自IL-10、IL-5、IP-10、MCP-1、PLGF、CRP、sICAM-1、或其任何組合。
如申請專利範圍第1至3項中任一項之用途，其中(a)已在同一日每日投予該環磷醯胺的劑量及該氟達拉濱的劑量，(b)在該氟達拉濱的劑量之前至少約一天，已投予該環磷醯胺的劑量，或(c)在該環磷醯胺的劑量之前至少約一天，已投予該氟達拉濱的劑量。
如申請專利範圍第1至3項中任一項之用途，其中該環磷醯胺的劑量為約600mg/m²/日。
如申請專利範圍第1至3項中任一項之用途，其中該環磷醯胺的劑量為約500mg/m²/日。
如申請專利範圍第1至3項中任一項之用途，其中該腫瘤為瀰漫性大型B細胞淋巴瘤(DLBCL)、原發性縱膈腔大B細胞淋巴瘤(PMBCL)、濾泡性淋巴瘤(FL)、或白血病。
如申請專利範圍第1至3項中任一項之用途，其中每日投予約500mg/m²/日之環磷醯胺的劑量與約30mg/m²/日之氟達拉濱的劑量三天。
如申請專利範圍第4項之用途，其中每日投予約500mg/m²/日之環磷醯胺的劑量與約30mg/m²/日之氟達拉濱的劑量三天。
如申請專利範圍第5項之用途，其中每日投予約500mg/m²/日之環磷醯胺的劑量與約30mg/m²/日之氟達拉濱的劑量三天。
如申請專利範圍第6項之用途，其中每日投予約500mg/m²/日之環磷醯胺的劑量與約30mg/m²/日之氟達拉濱的劑量三天。
如申請專利範圍第7項之用途，其中每日投予約500mg/m²/日之環磷醯胺的劑量與約30mg/m²/日之氟達拉濱的劑量三天。
如申請專利範圍第8項之用途，其中每日投予約500mg/m²/日之環磷醯胺的劑量與約30mg/m²/日之氟達拉濱的劑量三天。
如申請專利範圍第11項之用途，其中每日投予約500mg/m²/日之環磷醯胺的劑量與約30mg/m²/日之氟達拉濱的劑量三天。