TWI554759B - An immunochromatographic assay device, an immunochromatographic assay, and an immunochromatographic assay kit - Google Patents

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Description

免疫層析分析裝置、免疫層析分析方法以及免疫層析分析套組
本發明係關於一種免疫層析分析裝置、免疫層析分析方法以及免疫層析分析套組。
測定血液、尿等檢體中所含的各種成分，對於臨床上在把握患者的健康狀態方面極其重要，以往，對應這些成分採用了各種測定方法。其中已知一種免疫層析分析裝置以及分析方法是透過免疫反應使檢體中所含的被檢出物質呈色，並確認該呈色信號。
另一方面，2011年時，全世界的糖尿病患者有3億6600萬人，據預測，2030年將達到5億5200萬人(成人人口的約10%)。另外，據信所謂的糖尿病預備軍也有同等以上的人數。
以往是透過測定血糖值來進行糖尿病的診斷，但是近年來，由於糖結合至血中的血紅素的糖化血紅素、特別是血紅素β鏈的N末端纈氨酸殘基糖化的血紅素A1c(以下，稱為“HbA1c”)相對於總血紅素量的濃度能夠反映過去1至2個月的平均血糖值，因此可作為適於糖尿病的診斷或糖尿病的病程觀察的指標使用。
然而，以往HbA1c的測定係透過HPLC、毛細管電泳、酵素方法、免疫學測定方法等來實施，但是因為這些方法需要針對特定的裝置 或分析的專業知識，因此會有在小規模的醫院或家庭等地無法簡單獲知HbA1c的值的問題。
另外，由於HbA1c的血中濃度及血中成分存在個人差異，因此透過同時測定HbA1c以外的血紅素、並掌握HbA1c量相對於包含HbA1c和HbA1c以外的血紅素的總血紅素量的比率，來判斷糖尿病是陰性或陽性。
但在此情況下，由於需要透過上述方法分別測定HbA1c和HbA1c以外的血紅素，因此有測定的繁雜程度進一步提高的問題。
據此，如專利文獻1提出了一種簡單測定HbA1c的方法。這裡所使用的免疫層析分析裝置如第三圖(a)的截面圖、第三圖(b)的平面圖所示，在塑膠製黏合片a上沿裝置的長邊方向按順序分別設置樣本墊b、含有經標記物標記的顆粒標記抗體的墊c、抗體固定化膜f、吸水墊g，在抗體固定化膜f上分別設置塗布有抗HbA1c抗體的抗HbA1c抗體塗布部d、塗布有抗HbA0抗體的抗HbA0抗體塗布部e，從而構成免疫層析分析裝置30。
測定HbA1c的血中濃度時，如第四圖的流程圖所示，首先將所採集的血液和使血紅素β鏈的N末端露出於蛋白質表面的成分(N末端露出劑)進行混合(S401)，靜置幾分鐘，使HbA1c的抗原決定基在血紅素蛋白質的表面露出，而製備出樣本液(S402)。將適量的所得樣本液滴在樣本墊b上(S403)。
接著，進一步向樣本墊b滴加適量的展開液(S404)，使樣本液透過毛細管現象在抗體固定化膜f上展開(S405)。在抗體固定化膜f上展開的樣本液到達抗HbA1c抗體塗布部d後，在這裡僅有樣本液中的HbA1c會發生反應而被檢測到(S406)。
接著，進一步在抗體固定化膜f上展開的樣本液到達抗HbA0抗體塗布部e，僅有樣本液中的HbA0會發生反應，而被檢測到(S407)。其他血紅素不會反應，而會移動至吸水墊g上(S408)。藉此，分別檢測樣本液中的HbA0和HbA1c。
【先前技術文獻】
【專利文獻】
【專利文獻1】日本特開2012-251789號公報
然而，使用前述先前技術的免疫層析分析裝置時，因為具有將所採集的血液和使血紅素β鏈N末端露出於蛋白質表面的成分(N末端露出劑)混合的步驟(S401)、並靜置幾分鐘而製備出樣本液的步驟(S402)、將樣本液滴加在樣本墊b上的步驟(S403)、進一步另外準備展開液並將其滴加在樣本墊上的步驟(S404)，因此會有幾個問題：需要樣本液以及展開液2種液體並同時分別將它們滴加在樣本墊b上的問題，測定準備以及操作繁雜的問題，另外耗費測定時間的問題，效率性不佳的問題。
因此，本發明的目的在於提供一種免疫層析分析裝置、免疫層析分析方法以及免疫層析分析套組，其能夠解決上述以往的課題，無需繁雜的測定準備以及操作，可以在短測定時間內高效地測定血液、尿等多種檢體中所含的各種成分。
本發明人經過深入研究，結果發現，透過使添加了含有被檢 測物質之檢體的樣本添加部(樣本墊)包含陰離子型表面活性劑，可以解決上述以往的課題，從而完成了本發明。
亦即，本發明係如下所述。
1.一種免疫層析分析裝置，其包含樣本添加部、標記物保持部、擔載有檢測部的層析介質部和吸收部，其中，在前述樣本添加部中含有陰離子型表面活性劑，可將經檢體稀釋液稀釋之含有被檢測物質的檢體而得出的檢體含有液加以展開。
2.前述1中記載的免疫層析分析裝置，其中前述樣本添加部為選自由玻璃纖維、纖維素以及聚對苯二甲酸乙二醇酯所組成的群組中的一種。
3.前述1或2中記載的免疫層析分析裝置，其中在前述樣本添加部中含有8~800μg的前述陰離子型表面活性劑。
4.前述1~3中任一項記載的免疫層析分析裝置，其中前述被檢測物質為血液中的糖化蛋白質。
5.前述4中記載的免疫層析分析裝置，其中前述血液中的糖化蛋白質為HbA1c。
6.前述1~5中任一項記載的免疫層析分析裝置，其中前述陰離子型表面活性劑為十二烷基硫酸鈉(SDS)。
7.一種免疫層析分析方法，其使用免疫層析分析裝置來檢測檢體中所含的被檢測物質，前述免疫層析分析裝置包含含有陰離子型表面活性劑的樣本添加部、標記物保持部、擔載有檢測部的層析介質部和吸收部，前述免疫層析分析方法包含以下步驟(1)~(4)： (1)向樣本添加部中添加經檢體稀釋液稀釋之檢體而得出的檢體含有液的步驟；(2)透過標記物保持部中所保持的標記物識別被檢測物質的步驟；(3)將檢體以及標記物作為移動相在層析介質部中展開的步驟；(4)用檢測部檢測在移動相中展開後的被檢測物質的步驟。
8.前述7前述的方法，其中在前述檢體稀釋液中含有非離子型表面活性劑。
9.前述8前述的方法，其特徵在於，在前述檢體稀釋液中含有0.01~5質量%的前述非離子型表面活性劑。
10.前述7~9中任一項記載的方法，其中前述樣本添加部中含有8~800μg的前述陰離子型表面活性劑。
11.一種免疫層析分析套組，其由免疫層析分析裝置和用於稀釋檢體並將其展開的檢體稀釋液構成，前述免疫層析分析裝置包含樣本添加部、標記物保持部、擔載有檢測部的層析介質部和吸收部，其中前述檢體稀釋液中含有非離子型表面活性劑，並且前述樣本添加部中含有陰離子型表面活性劑。
由於本發明在樣本添加部中含有陰離子型表面活性劑，本發明的免疫層析分析裝置、免疫層析分析方法以及免疫層析分析套組不像先前技術那樣需要樣本液以及展開液2種液體，僅僅將經檢體稀釋液稀釋含有被檢測物質的檢體而得到的檢體含有液這一種液體滴加在樣本添加部即可。
亦即，在本發明中，由於在樣本添加部中含有陰離子型表面活性劑，因此在將檢體含有液加入到樣本添加部之前，可以不包含使被檢測物質的抗原決定基露出的步驟。因此，根據本發明，無需繁雜的測定準備以及操作，並且可以在短測定時間內高效地測定血液、尿等多種檢體中所含的各種成分。
1‧‧‧免疫層析分析裝置
11‧‧‧塑膠製黏合片
12‧‧‧樣本添加部
13‧‧‧標記物保持部
14‧‧‧層析介質部
15‧‧‧吸收部
16‧‧‧塗布有抗HbA1c抗體的抗HbA1c抗體塗布部
17‧‧‧塗布有抗血紅素抗體的抗血紅素抗體塗布部
18‧‧‧塗布有抗IgG抗體的抗IgG抗體塗布部
[第一圖]第一圖(a)以及第一圖(b)為用於說明本發明的免疫層析分析裝置的例子的示意圖，第一圖(a)為截面圖、第一圖(b)為平面圖。
[第二圖]第二圖為使用本發明的免疫層析分析套組來測定HbA1c相對於血中總血紅素量的濃度時的流程圖。
[第三圖]第三圖(a)以及第三圖(b)為用於說明習知技術的免疫層析分析裝置的示意圖，第三圖(a)為截面圖、第三圖(b)為平面圖。
[第四圖]第四圖為使用習知技術的免疫層析分析裝置來測定HbA1c相對於血中總血紅素量的濃度時的流程圖。
以下，將進一步詳細說明本發明。
本發明所用的檢體可以列舉諸如血液、血漿、血清之類的血液樣本、尿、唾液、脊髓液、汗、淚、羊水、乳頭分泌液、鼻涕、痰、鼻腔或咽頭拭液、來自皮膚的滲出液、來自組織或細胞以及糞便的萃取物等。
本發明的被檢測物質可列舉如α-胎蛋白(AFP)、癌胚抗原(CEA)等腫瘤標記物、鐵蛋白、***特異抗原(PSA)以及免疫球蛋白 G(IgG)等血清蛋白質、類風濕因子、生長激素(GH)以及促腎上腺皮質激素(ACTH)等激素相關物質、流感病毒、腺病毒、衣原體抗原、A群溶血性鏈球菌抗原等細菌抗原、以及衍生自血紅素的蛋白質等。
本發明的被檢測物質較佳為血液中的被檢測物質，可列舉如衍生自血紅素的蛋白質、血漿蛋白、脂蛋白、分泌蛋白、激素、補體、脂質、膽固醇、糖、其他生物體內成分、在生物體內投予的藥物及其代謝產物等。
其中，從本發明的效果的觀點出發，較佳為血液中的糖化白蛋白或糖化血紅素等糖化蛋白質，更佳為為HbA1c。以下將HbA1c作為被檢測物質，將HbA1c以外的血紅素作為成為判定陰性或者陽性的基準的物質，並以此為例進行說明，但本發明並不限於下述例子。
本發明的免疫層析分析裝置包含樣本添加部、標記物保持部、擔載有檢測部的層析介質部和吸收部。以下參照附圖對本發明的層析分析裝置進行說明。第一圖(a)以及第一圖(b)為用於說明本發明的免疫層析分析裝置的例子的示意圖，第一圖(a)為截面圖、第一圖(b)為平面圖。
如第一圖(a)以及第一圖(b)所示，在免疫層析分析裝置1中，在塑膠製黏合片11上沿套組的長邊方向依次分別設置樣本添加部12、含有經標記物標記的抗血紅素抗體的標記物保持部13、層析介質部14、吸收部15。
另外，在層析介質部14上分別設置有作為檢測部且塗布有抗HbA1c抗體的抗HbA1c抗體塗布部16、塗布有抗血紅素抗體的抗血紅素抗體 塗布部17、作為對照組的塗布有抗IgG抗體的抗IgG抗體塗布部18。
塑膠製黏合片11是構成免疫層析分析裝置1的基材，並且透過在一面上塗布黏合劑或者黏附膠帶而使一面變為黏合面，將下述的各構成部位的一部分或全部緊貼在該黏合面上。關於塑膠制黏合片11的材質，適當選擇對樣本具有不透性、非透濕性的材質即可。
樣本添加部12可以由具有以下性質的多孔片構成：其能夠迅速吸收下面前述的檢體含有液，但保持力弱、檢體含有液能夠快速地移動至抗原抗體反應區域。
該多孔片，可列舉由玻璃纖維、纖維素、聚對苯二甲酸乙二醇酯、聚氨酯、聚醋酸酯(polyacetate)、醋酸纖維素、硝基纖維素、尼龍、棉布等構成的墊、纖維以及膜等。其中，較佳為使用選自由玻璃纖維、纖維素以及聚對苯二甲酸乙二醇酯所組成的群組中的一種材質構成樣本添加部12。
樣本添加部12含有陰離子型表面活性劑。陰離子型表面活性劑可列舉如十二烷基硫酸鈉(SDS)等烷基硫酸鹽，聚氧乙烯月桂基醚硫酸鈉等聚氧乙烯烷基醚硫酸鹽，十二烷基苯磺酸鈉等烷基苯磺酸鹽，月桂醯基甲基丙氨酸、N-月桂醯基肌氨酸的鈉鹽等醯基氨基酸鹽，二烷基磺基琥珀酸鈉，β萘磺酸福馬林縮合物鈉鹽，以及特殊聚羧酸型高分子表面活性劑等。
在陰離子型表面活性劑中，從提高本發明的效果的觀點出發，更佳為十二烷基硫酸鈉(SDS)等烷基硫酸鹽。
樣本添加部12可含有如8~800μg，較佳為含有10~500μ g，更佳為含有16~480μg的陰離子型表面活性劑。另外，樣本添加部12可含有5~500μg/cm2，較佳為含有6~313μg/cm2，更佳為含有10~300μg/cm2的陰離子型表面活性劑。
為了保持樣本添加部12中陰離子型表面活性劑乾燥，可適當採用冷凍乾燥、熱風乾燥、自然乾燥等手段。
陰離子型表面活性劑具有使所採集之血液中的HbA1c的抗原決定基露出於血紅素蛋白質的表面的功能。具體而言，陰離子型表面活性劑係作為使血紅素β鏈N末端在蛋白質表面露出的成分(N末端露出劑)而發揮功效。
在本發明中，由於在樣本添加部12中含有陰離子型表面活性劑，因此在將後述檢體含有液加入到樣本添加部之前，可以不包含使被檢測物質的抗原決定基露出的步驟。
此時，在使用選自由玻璃纖維、纖維素以及聚對苯二甲酸乙二醇酯所組成的群組中的一種作為構成樣本添加部12的材料時，HbA1c和陰離子型表面活性劑的接觸效率變高，並且可獲得陰離子型表面活性劑作為N末端露出劑而有效發揮作用的效果。
另外，根據需要，還可向樣本添加部12中添加硫氰酸鈉、胍鹽酸鹽或者EDTA等各種添加劑。
標記物保持部13係用以保持如經標記物標記的抗血紅素抗體。標記物保持部13中的抗血紅素抗體可以與檢體含有液中的血紅素進行特異性結合。這種抗體可列舉多株抗體、或單株抗體等。單株抗體以及多株抗體或者其片段是習知且可取得的，並且可以透過習知的方法來製備。
產生抗體的動物種類可列舉如人、小鼠、大鼠、兔子、山羊等。免疫球蛋白可以是IgG、IgM、IgA、IgE或者IgD中任一種。
單株抗體可以透過常規方法，將經抗原免疫的小鼠的脾臟細胞與骨髓瘤細胞雜交，對產生目標抗體的雜交瘤進行篩選，而獲得從該雜交瘤中產生的單株抗體(參照Köhler及Milstein的技術[Nature 256(1975)495-497])。
多株抗體可以透過常規方法，利用抗原將產生動物(例如，人、小鼠、大鼠、兔子、山羊以及馬等)進行免疫獲得抗血清，再從該抗血清中分離目標抗體而獲得。
作為標記物，較佳為可以透過視覺確認著色的有色物質，並且可以適當採用業界周知的標記物。可列舉如金屬膠體粒子、非金屬膠體粒子、著色乳膠以及酶標記等，從標記的穩定性的觀點出發，較佳為不會隨著時間褪色的金屬膠體粒子。
作為金屬膠體粒子，除金、鉑、銅、銀、及鈀膠體以外，還可使用其混合粒子，特別是以在適當的粒徑時呈現紅色的金膠體粒子較佳。
金屬膠體粒子的平均粒徑為如1~500nm，從獲得強烈色彩的方面考慮，較佳為10nm~150nm、更佳為為20~100nm的範圍內。作為非金屬膠體粒子，可列舉如硒膠體等。可以透過常規方法製備金屬膠體粒子以及非金屬膠體粒子，此時，調節粒徑以呈現所需色彩。另外，也可使用市售品。
關於著色乳膠，可列舉如利用使聚苯乙烯等高分子聚合物的顆粒呈現紅色或藍色的著色劑著色後的乳膠，並且可透過常規方法製備。 作為酶標記，可列舉如過氧化物酶、鹼性磷酸酶、葡萄糖氧化酶和半乳糖苷酶等。使用酶標記的情況下，使相對於該酶的基質以及根據需要的呈色試劑反應，透過該反應產生的呈色來進行檢測。
況且，可按照周知的手段製備經標記物標記的抗體。例如作為在抗體上擔載金膠體粒子的方法，可列舉如物理吸附或化學結合等周知的方法，具體而言，可以透過以下方法進行製備：向金顆粒以膠體狀分散的溶液中加入抗體，使之發生物理吸附，然後添加牛血清白蛋白溶液等阻斷蛋白，將未結合抗體的顆粒表面阻斷。另外，關於抗原抗體反應，可採用習知的三明治法、競爭法或其組合方法。
標記物保持部13的材質可列舉如玻璃纖維、纖維素、聚對苯二甲酸乙二醇酯、聚氨酯、聚醋酸酯、尼龍以及棉布等。
關於層析介質部14，只要是能夠透過毛細管現象吸收樣本檢體並使之移動的物質即可，可由如硝基纖維素、醋酸纖維素、尼龍、聚醚碸、聚乙烯醇、聚酯、玻璃纖維、聚烯烴、纖維素、及其混合纖維等構成。
設置在層析介質部14上的抗HbA1c抗體塗布部16、抗血紅素抗體塗布部17、抗IgG抗體塗布部18可以由如能夠擔載固定各自抗體的材料構成，該材料可列舉如硝基纖維素等。
關於吸收部15，可列舉具有迅速吸收過剩檢體含有液能力的材料，可使用纖維素纖維或者玻璃濾紙等。
接下來，說明本發明的免疫層析分析方法。本發明的免疫層析分析方法是使用上述說明的免疫層析分析裝置對檢體中所含的被檢測物質進行檢測的分析方法，其包含以下步驟(1)~(4)： (1)向樣本添加部中添加經檢體稀釋液稀釋之檢體而得出的檢體含有液的步驟；(2)透過標記物保持部中所保持的標記物來識別被檢測物質的步驟；(3)將檢體以及標記物作為移動相在層析介質部中展開的步驟；(4)用檢測部檢測在移動相中展開後的被檢測物質的步驟。
以下說明各個步驟。
在步驟(1)中，首先製備用檢體稀釋液稀釋檢體而得到的檢體含有液。檢體稀釋液可作為用於將步驟(3)中將檢體以及標記物作為移動相而在層析介質部中展開的展開液。從展開性良好並且不阻礙抗原抗體反應的觀點出發，檢體稀釋液較佳為含有非離子型表面活性劑。
作為非離子型表面活性劑，可列舉如聚氧乙烯烷基醚、聚氧乙烯/聚氧丙烯烷基醚、聚氧乙烯山梨糖醇酐脂肪酸酯、聚氧乙烯p-t-辛基苯基醚、聚氧乙烯p-t-壬基苯基醚、烷基聚葡萄糖苷、脂肪酸二乙醇醯胺以及烷基單甘油醚等。
檢體稀釋液舉例如以水為溶劑，並且可含有比例為如0.01~5質量%的非離子型表面活性劑，其比例較佳為0.03~3.0質量%，更佳為含有的比例為0.3~3.0質量%。另外，為了調整pH還可適當添加緩衝液類、無機鹽類等添加劑。
另外，從提高本發明的效果的觀點出發，較佳為樣本添加部12中所含有的陰離子型表面活性劑與檢體稀釋液中所含有的非離子型表面活性劑的百分比具有一定的比例，具體而言，該陰離子型表面活性劑：該非離子型表面活性劑(質量比)較佳為9：1~1：90，更佳為3：1~1：60，特佳為 1：2~1：50，最佳為1：2~1：34。
將前述獲得的檢體稀釋液與從患者採集的血液混合，而製備出檢體含有液，並將其滴在樣本添加部12上。況且，從患者採集血液的位置可列舉手指、牙齦、手臂靜脈以及耳朵等。
透過樣本添加部12中所含的陰離子型表面活性劑、血紅素β鏈N末端露出於蛋白質表面的情形，檢體含有液中所含的HbA1c可透過毛細管現象到達標記物保持部13。
在步驟(2)中，到達標記物保持部13的檢體含有液中的血紅素會與透過標記物標記的抗血紅素抗體發生抗原抗體反應，從而形成複合體。亦即，作為被檢測物質的HbA1c也會透過保持在標記物保持部13中的標記物而被識別出來。
在步驟(3)中，將檢體以及標記物(即檢體含有液、抗血紅素抗體與血紅素的複合體)作為移動相在層析介質部14中展開。此時，檢體含有液中所含的非離子型表面活性劑會使該展開的展開性達到較佳的狀態，另外，如上所述，它不會產生阻礙隨後抗原抗體反應的效果。
接著，在步驟(4)中，在層析介質部14中展開且作為移動相中之被檢測物質的HbA1c會到達抗HbA1c抗體塗布部16，在通過那裡時，HbA1c會與抗HbA1c抗體反應而被固定住。HbA1c以外的血紅素以及檢體含有液不會與抗HbA1c抗體塗布部16反應而會通過此區，但到達抗血紅素抗體塗布部17時，HbA1c以外的血紅素會與抗血紅素抗體反應而被固定住。
況且，未與抗原反應的標記物或在抗體塗布部16以及17處未反應的標記物會在抗IgG抗體塗布部18處與抗IgG抗體反應而被固定住，並 且作為顯示展開步驟正常進行的對照組而呈色。
其它樣本液成分不會發生反應而移動至吸收部15為止。由此，可確認各塗布部中由HbA1c以及HbA1c以外的血紅素的存在所引起的呈色信號。況且，抗HbA1c抗體以及抗血紅素抗體可以是前述單株抗體、多株抗體中的任一種。
血中成分存在個人差異，如果只簡單地透過使HbA1c呈色而確認其強度的話，不容易進行糖尿病的判定。因此，可以使HbA1c以及HbA1c以外的血紅素同時呈色，比較兩者的呈色程度來進行這樣的判斷。
具體而言，例如比較HbA1c以及HbA1c以外的血紅素的呈色信號，在HbA1c的呈色信號比HbA1c以外的血紅素的呈色信號更強的情況下，即可判定為陽性。相反地，在HbA1c的呈色信號與HbA1c以外的血紅素的呈色信號相同或者較之更弱的情況下，即可判定為陰性。
本發明的免疫層析分析套組係由本發明的免疫層析分析裝置以及檢體稀釋液所構成，該免疫層析分析裝置包含含有上述陰離子型表面活性劑的樣本添加部12、標記物保持部13、擔載有檢測部的層析介質部14和吸收部15；前述檢體稀釋液係用於將前述檢體稀釋並展開，且含有非離子型表面活性劑。
第二圖為使用本發明的免疫層析分析套組測定HbA1c相對於血中總血紅素量的濃度時的流程圖。
如第二圖的流程圖所示，首先混合所採集的血液和檢體稀釋液，而製備出檢體含有液(S201)。將適量的所得檢體含有液滴在樣本添加部12上(S202)。接著，使檢體含有液透過毛細管現象在標記物保持部13上 展開(S203)。在標記物保持部13上展開的檢體含有液到達層析介質部14上擔載的抗HbA1c抗體塗布部16，在此，只有樣本中的HbA1c會發生反應而被檢測到(S204)。
接著，在層析介質部14上進一步展開的檢體含有液到達抗血紅素抗體塗布部17，檢體含有液中在抗HbA1c抗體塗布部16處未反應的血紅素會發生反應，而被檢測到(S205)。其他樣本液成分不反應而移動至吸收部15(S206)。藉此，分別檢測到樣本液中的HbA1c以外的血紅素以及HbA1c。
本發明中，由於作為N末端露出劑的陰離子型表面活性劑係包含在樣本添加部12中，因此不需要像先前技術那樣去準備含有N末端露出劑的樣本液以及展開液這2種液體並將這2種液體分別向樣本添加部12滴加。
據此，本發明無需繁雜的測定準備以及操作，並且可以在短測定時間內高效地測定血液、尿等多種檢體中所含的各種成分。
【實施例】
以下，透過實施例和比較例進一步說明本發明，但本發明並不受以下實施例限制。
實施例1
按照下面的順序製作如第一圖(a)以及第一圖(b)所示的免疫層析分析裝置1。
(1)樣本添加部12的製作
向玻璃纖維墊(公司製，商品名：玻璃纖維結合墊(conjugate pad)，尺寸縱向32mm(檢體含有液展開方向)、橫向150mm，厚度0.43mm)上，以60μg/cm2的比例均勻添加十二烷基硫酸鈉(SDS)，在50℃下乾燥4小時，藉此製作出樣本添加部12。
(2)抗HbA1c抗體塗布部16、抗血紅素抗體塗布部17、抗IgG抗體塗布部18的製作
使用由硝基纖維素製成的片材(公司製，商品名：HF12250mm×25mm)作為膜。用含有5質量%的蔗糖以及5質量%的異丙醇的10mM磷酸緩衝液(pH7.4)將抗HbA1c單株抗體、抗血紅素單株抗體或抗IgG單株抗體稀釋成1.0mg/ml的濃度，透過抗體塗布機(BioDot公司製)將150μL該稀釋後的溶液在膜上以1mm的寬度塗布至各自的位置，使之在50℃下乾燥30分鐘，並在室溫下乾燥一晚，藉此在層析介質部14上分別設置抗HbA1c抗體塗布部16、抗血紅素抗體塗布部17、抗IgG抗體塗布部18。
(3)標記物溶液的製備
向0.5mL金膠體懸濁液(田中貴金屬工業株式會社製：平均粒徑40nm)中，加入0.1mL以Tris緩衝液(pH8.5)稀釋為0.1mg/mL濃度的抗血紅素單株抗體，於室溫下靜置10分鐘。接著，加入含有0.01質量%的PEG-SH(日本油脂株式會社製、商品名：SUNBRIGHT ME-200SH、分子量20000)的Tris緩衝液(pH8.5)0.1ml(添加後的PEG-SH濃度：0.001質量%)，室溫下靜置10分鐘。接著，充分攪拌後，在8000×g下進行離心分離15分鐘，除去上清液後，加入含有1質量%的牛血清白蛋白的磷酸緩衝液(pH7.4)0.1ml，而製備出標記物溶液。
(4)免疫層析分析裝置1的製作
向220μl上述製備的標記物溶液中添加含有25質量%的海藻糖水溶液的磷酸緩沖液(pH9.0)100μl，將此溶液均匀地添加至8mm×100mm的玻璃纖維墊(公司製)上後，以真空乾燥機使之乾燥，而製備出標記物保持部13。接著，向塑膠製黏合片11上黏合上面製備的樣本添加部12、經標記物標記的標記物保持部13、層析介質部14，進一步黏合通用的吸收部15，用切割機將寬度裁斷為5mm，藉此製作出免疫層析分析裝置1。此時，每個裝置含有的SDS的量為96μg。
依照下面的配方，攪拌各成分，而製備出檢體稀釋液。
作為非離子型表面活性劑的TritonX-100(SIGMA公司製，商品名)與Tween20(和光純藥株式會社製、商品名)的質量比為1：5的混合物：
1.2質量%
作為緩衝液的Bicine緩衝液：50mM
作為無機鹽的氯化鉀：0.6質量%
作為添加劑的酪蛋白鈉：2.0質量%
餘量：水
樣品的採集
透過分別穿刺健康成年男性以及糖尿病男性患者的指尖來採集具有各種HbA1c濃度的血液。
檢體含有液的製備
將前述血液和前述檢體稀釋液以前者：後者(容量比)為1：1000混合，而製備出檢體含有液。
免疫層析分析的實施
向如上所述製作得出的免疫層析分析裝置1的樣本添加部12上供給110μl前述檢體含有液，10分鐘後，透過目視確認抗HbA1c抗體塗布部16的紅色的呈色信號。結果顯示於表1中。
其中，表中的評價基準如下。
-：未能確認有紅色呈色
±：雖然能夠確認有紅色的呈色，但顏色非常淡
+：能夠確認有紅色呈色
++：能夠確認有強的紅色的呈色
+++：能夠確認有非常強的紅色的呈色
實施例2
除了將實施例1中構成樣本添加部12的材料從玻璃纖維墊變更為纖維素纖維墊(旭化成公司製，商品名SR-601)以外，重複實施例1。結果顯示於表1中。
實施例3
除了將實施例1中構成樣本添加部12的材料從玻璃纖維墊變更為聚對苯二甲酸乙二醇酯(PET)墊(旭化成公司製，商品名 A-01)以外，重複實施例1。結果顯示於表1中。
實施例4
除了將實施例1中構成樣本添加部12的材料從玻璃纖維墊變更為硝基纖維素膜(公司製，商品名HF120)以外，重複實施例1。結果顯示於在表1中。
參考例1
除了在實施例1中，使用未添加SDS的樣本添加部，並且分別向樣本添加部12滴加10μl樣本液和100μl的具有下述組成的展開液以外，重複實施例1，其中該樣本液係透過向具有下述組成之含有N末端露出劑的萃取液中添加血液並靜置2分鐘而製備得出。結果顯示於表1中。
(萃取液的組成)
作為陰離子型表面活性劑的十二烷基硫酸鈉：1.0質量%
作為添加劑的硫氰酸鈉：100mM
作為添加劑的EDTA：5mM
餘量：水
(展開液的組成)
作為非離子型表面活性劑的TritonX-100(SIGMA公司製，商品名)與Tween20(和光純藥株式會社制、商品名)的質量比為1：5的混合物：
1.2質量%
作為緩衝液的Bicine緩衝液：50mM
作為無機鹽的氯化鉀：0.6質量%
作為添加劑的酪蛋白鈉：2.0質量%
餘量：水
參考例2
除了在參考例1中不使用萃取液，並且向展開液中添加血液以外，重複參考例1。結果顯示於表1中。
參考例3~5
除了在參考例1中不使用萃取液，並且向展開液中添加表1所示濃度的SDS以及血液以外，重複參考例1。結果顯示於表1中。
實施例5~8
除了將實施例1中向樣本添加部12添加的每一裝置中的SDS含量以及檢體稀釋液中含有的非離子型表面活性劑的含有率變更為表2中記載的值以外，重複實施例1。結果顯示於表2中。
從表1以及表2的結果可知，透過使用本發明的免疫層析分析裝置，無需先前技術的參考例1那樣使用樣本液以及展開液兩種液體，僅向樣本添加部添加檢體含有液一種液體即可，並且無需繁雜的測定準備以及 操作，即可與先前技術的參考例1相同地在短測定時間內高效地測定血液、尿等多種檢體中所含的各種成分。
參考例2為使用未添加SDS的樣本添加部，並且僅使用展開液的例子，因此即使HbA1c的濃度高，呈色的程度卻弱。
參考例3~5為使用未添加SDS的樣本添加部，並且向展開液中添加SDS的例子，雖然與參考例2相比，呈色的程度有改善，但依然未能達到令人滿意的水準。
雖然使用特定的方式對本發明進行詳細說明，但對本領域技術人員來說，顯然具有在不脫離本發明的意圖和範圍內進行各種變更和變形的可能性。況且，本申請案係以於2014年4月25日提交的日本專利申請(特願2014-091510)為基礎，其全部內容係透過引用方式併入本文。
1‧‧‧免疫層析分析裝置
11‧‧‧塑膠製黏合片
12‧‧‧樣本添加部
13‧‧‧標記物保持部
14‧‧‧層析介質部
15‧‧‧吸收部
16‧‧‧塗布有抗HbA1c抗體的抗HbA1c抗體塗布部
17‧‧‧塗布有抗血紅素抗體的抗血紅素抗體塗布部
18‧‧‧塗布有抗IgG抗體的抗IgG抗體塗布部

Claims (4)

  1. 一種免疫層析分析方法，其使用免疫層析分析裝置來檢測在經含有非離子性表面活性劑的檢體稀釋液稀釋之檢體中所含的血液中的糖化蛋白質，前述免疫層析分析裝置包含含有陰離子型表面活性劑的樣本添加部、標記物保持部、擔載有檢測部的層析介質部和吸收部；其中在前述檢體稀釋液中含有0.3~3.0質量%的前述非離子型表面活性劑；在前述樣本添加部中含有16~480μg的前述陰離子型表面活性劑；而前述免疫層析分析方法包含以下步驟(1)~(4)(但不包含在將檢體含有液加入到樣本添加部之前使被檢測物質的抗原決定基露出的步驟)：(1)僅向樣本添加部中添加經檢體稀釋液稀釋之檢體而得出檢體含有液這一種液體的步驟；(2)透過標記物保持部中所保持的標記物來識別被檢測物質的步驟；(3)將檢體以及標記物作為移動相而在層析介質部中展開的步驟；(4)用檢測部檢測在移動相中展開後的被檢測物質的步驟。
  2. 如申請專利範圍第1項的免疫層析分析方法，其中前述樣本添加部的材質為玻璃纖維。
  3. 一種免疫層析分析套組，其由免疫層析分析裝置和用於將檢體稀釋後之檢體含有液這一種液體展開的檢體稀釋液所構成，前述免疫層析分析裝置包含樣本添加部、標記物保持部、擔載有檢測部的層析介質部和吸收部；其中 前述檢體中所含的被檢測物質為血液中的糖化蛋白質；前述檢體稀釋液中含有0.3~3.0質量%的非離子型表面活性劑；前述樣本添加部中含有16~480μg的陰離子型表面活性劑；且前述檢體稀釋液中不包含使被檢測物質的抗原決定基露出的物質。
  4. 如申請專利範圍第3項的免疫層析分析套組，其中前述樣本添加部的材質為玻璃纖維。
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Families Citing this family (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP5775197B1 (ja) * 2014-04-30 2015-09-09 田中貴金属工業株式会社 免疫クロマト分析キット及び免疫クロマト分析方法
JP6675834B2 (ja) * 2015-05-21 2020-04-08 デンカ生研株式会社 イムノクロマト試験片及びそれを用いたイムノクロマト法
US11168349B2 (en) * 2016-07-29 2021-11-09 Hitachi Chemical Diagnostics Systems Co., Ltd. Method for measuring glycated hemoglobin
KR102300483B1 (ko) 2017-04-06 2021-09-10 아사히 가세이 가부시키가이샤 친수화 착색 셀룰로오스 미립자
JP7352831B2 (ja) * 2018-01-09 2023-09-29 東洋紡株式会社 イムノクロマト試験片および測定キットおよび測定方法
EP3739337A4 (en) * 2018-01-11 2021-11-24 Toyobo Co., Ltd. DILUTION LIQUID FOR MEASUREMENT SAMPLE, KIT AND MEASUREMENT PROCEDURE
CN109540846B (zh) * 2019-01-04 2022-04-12 无锡博慧斯生物医药科技有限公司 一种测量糖化的蛋白质的方法
CN114280312B (zh) * 2020-09-27 2023-09-15 河北特温特生物科技发展有限公司 一种用于免疫荧光层析检测的全血分离膜及其制备方法和应用

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2007061793A2 (en) * 2005-11-18 2007-05-31 THE GOVERNMENT OF THE UNITED STATES OF AMERICA as represented by THE SECRETARY OF THE DEPARTMENT OF HEALTH AND HUMAN SCIENCES, CENTERS FOR DISEASE CONTROL AND PREVENTION Modified cardiolipin and uses therefor
US20110003320A1 (en) * 2008-03-06 2011-01-06 Daisuke Ito Immunoassay method and kit and developing solvent therefor

Family Cites Families (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20030180967A1 (en) * 2002-03-19 2003-09-25 Matsushita Electric Industrial Co., Ltd. Immunoassay method, test strip for use therein, and immunoassay apparatus
JP2003344397A (ja) * 2002-03-19 2003-12-03 Matsushita Electric Ind Co Ltd 免疫学的測定方法、それに用いる試験片、および免疫学的測定装置
ES2335011T3 (es) * 2003-05-27 2010-03-18 Mitsubishi Kagaku Iatron, Inc. Procedimiento inmunocromatografico.
AU2005203321A1 (en) * 2004-08-03 2006-02-23 Axis-Shield Diagnostics Limited Assay
US20110160090A1 (en) * 2008-05-05 2011-06-30 Los Alamos National Laboratory Nanocrystal-Based Lateral Flow Microarrays and Low-Voltage Signal Detection Systems
EP2350671A1 (en) * 2008-10-24 2011-08-03 Boditechmed Inc. System for the quantitative measurement of glycohemoglobin and a method for measuring the content of glycohemoglobin using the same
US9341633B2 (en) * 2008-12-11 2016-05-17 Sekisui Medical Co., Ltd. Method for pre-treating sample containing glycated hemoglobin
JP5852329B2 (ja) * 2011-05-31 2016-02-03 積水メディカル株式会社 ＨｂＡ１ｃの免疫学的測定方法
JP5775197B1 (ja) * 2014-04-30 2015-09-09 田中貴金属工業株式会社 免疫クロマト分析キット及び免疫クロマト分析方法

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2007061793A2 (en) * 2005-11-18 2007-05-31 THE GOVERNMENT OF THE UNITED STATES OF AMERICA as represented by THE SECRETARY OF THE DEPARTMENT OF HEALTH AND HUMAN SCIENCES, CENTERS FOR DISEASE CONTROL AND PREVENTION Modified cardiolipin and uses therefor
US20110003320A1 (en) * 2008-03-06 2011-01-06 Daisuke Ito Immunoassay method and kit and developing solvent therefor

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