TWI541016B - The use of polyoxymethyl flavonoids - Google Patents

Description

多甲氧基黃酮類之用途

本發明係關於一種黃嘌呤氧化酶抑制劑，其係來自天然物質，安全性高，並具有優異的黃嘌呤氧化酶抑制活性。

近年來，飲食生活日趨豐裕，隨著高卡路里、高蛋白、高脂肪食品的攝取量增加，高尿酸血症或痛風等因嘌呤體代謝異常所致的疾病也隨之增加。在生物體內，核酸會被代謝而經嘌呤體、次黃嘌呤、黃嘌呤而變成尿酸，並***於尿中。通常，尿酸之產生與***會呈現均衡，血液中的尿酸值保持於低值，但若尿酸之產生過剩、***降低，則會引起尿酸值異常地變高的高尿酸血症。進而，所蓄積的尿酸會變成鈉鹽，並結晶化而沈積於關節內面，如此則會變成痛風，而發生痛風結節、關節機能障礙、關節變形、伴隨著劇痛之發作等。

在上述核酸之代謝中，黃嘌呤氧化酶，因為關係到次黃嘌呤至黃嘌呤之變換、及黃嘌呤至尿酸之變換，所以藉由抑制黃嘌呤氧化酶，而可使尿酸之產生量減少。作為具有此種黃嘌呤氧化酶抑制作用的藥物，係使用異嘌呤醇。另一方面，從高尿酸血症或痛風之預防的觀點而言，較期望是能日常性地攝取而控制尿酸值，所以對於安全性較高的來自植物的成分也有所探討，例如，已有報告指出，來自大花紫薇(Lagerstroemia speciosa L.)、及西洋夏雪草(Filipendula ulmaria Maxim.)的成分具有黃嘌呤氧化酶抑制活性(專利文獻1及2)。

[專利文獻1]　日本專利特開2000-291088號公報

[專利文獻2]　日本專利特開2002-145875號公報

本發明係提供一種新穎的黃嘌呤氧化酶抑制劑，其安全性高，能藉由日常性地持續攝取而有效地抑制黃嘌呤氧化酶，並有效地預防及治療高尿酸血症及痛風。

本發明者專心進行了研究，結果發現扁實檸檬(Citrus depressa Hayata)的榨汁或抽出物具有優異的黃嘌呤氧化酶抑制作用，進而發現該榨汁或抽出物的黃嘌呤氧化酶抑制作用係由其所含有的異甜橙素(isosinensetin)、甜橙素(sinensetin)及檸檬黃素(hesperidin)等多甲氧基黃酮類所發揮，而完成了本發明。

亦即，本發明係一種黃嘌呤氧化酶抑制劑，其係以扁實檸檬的榨汁或抽出物作為有效成分。

又，本發明係一種飲食品，其含有上述黃嘌呤氧化酶抑制劑。

進而，本發明係一種高尿酸血症之預防及治療劑、或痛風之預防及治療劑，其係黃嘌呤氧化酶抑制劑。

本發明之黃嘌呤氧化酶抑制劑，因為安全性高且能藉由日常性地攝取而有效地使血液中尿酸值降低，所以對於高尿酸血症或痛風具有優異的預防及治療效果。

[實施發明的較佳形態]

本發明的黃嘌呤氧化酶抑制劑，是使用扁實檸檬(Citrus depressa Hayata)作為原料，並且是以扁實檸檬的榨汁或抽出物作為有效成分。扁實檸檬的榨汁，可以是從果實直接榨汁而得者(一次榨汁)，也可以是從榨汁殘渣再次榨汁者(二次榨汁)，但二次榨汁因為黃嘌呤氧化酶抑制活性高，所以較佳。榨汁的製造，可依照一般方法來進行，例如可使用螺旋壓榨機、離心壓榨機、帶式壓榨機(belt-press)等公知的裝置。

另一方面，扁實檸檬的抽出物，是藉由抽出溶劑而將扁實檸檬之果皮、果粒、榨汁殘渣進行抽出而成者。作為抽出溶劑，以水性溶劑為佳，可例示如：水、乙醇、甲醇等醇類；丙酮等酮類、乙酸乙酯等酯類、以及此等之混合液等。此等之中，從作為食品使用的觀點而言，以含水乙醇、乙醇為佳。抽出操作，通常是使用相對於扁實檸檬為1～10倍容量左右的水性溶劑，以溫度為4～80℃、時間為1~24小時左右進行即可。

作為本發明的扁實檸檬抽出物，可直接使用藉由上述抽出溶劑之抽出液，亦可使用進而將該抽出液以合成吸附樹脂來處理而獲得之吸附區分物(fraction)。此種吸附區分物因為黃嘌呤氧化酶抑制活性高，所以較佳。合成樹脂吸附區分物，例如可藉由下述而獲得：將上述抽出液應用於充填有合成吸附樹脂的管柱之後，視需要而以水等來清洗該樹脂，接著再以有機溶劑或含水有機溶劑來溶出。

作為上述合成吸附樹脂，可例示如：苯乙烯二乙烯苯系、甲基丙烯酸酯系等，作為其市售品，在苯乙烯二乙烯苯系例如可舉出：DIAION HP-20(三菱化學股份有限公司製造)、DIAION HP-21(三菱化學股份有限公司製造)等，在甲基丙烯酸酯系則例如可舉出：DIAION HP2MG(三菱化學股份有限公司製造)等。此等之中，從適用範圍廣、可用於食品、醫藥品之分離的觀點而言，又以苯乙烯二乙烯苯系的合成吸附樹脂為佳，並以使用DIAION HP-20較合適。

作為用以從上述合成吸附樹脂中溶出吸附區分物的有機溶劑或含水有機溶劑，可使用甲醇、乙醇、丙酮、及此等與水之混合液等。此等之中，以乙醇、甲醇、或此等與水之混合液為佳。例如，使用DIAION HP-20(三菱化學股份有限公司製造)作為合成吸附樹脂時，使用40~95%的乙醇水來將吸附成分溶出即可。

作為上述扁實檸檬的抽出物的較佳例，可舉出：藉由濃度為5～60%的乙醇水來對榨汁殘渣進行抽出之抽出物、或進而將此抽出物以合成吸附樹脂處理而獲得之吸附區分物。

上述扁實檸檬的榨汁或抽出物，可直接使用，亦可視需要而使用蒸餾器或冷凍乾燥機等來濃縮或乾燥、粉末化。又，視需要而亦可藉由：管柱層析、批次法、液液分配(liquid-liquid distribution)等一般使用的分離純化手段來進而純化。

管柱層析，可將合成吸附樹脂、矽膠、ODS(碳十八管柱)等作為載體，而將該等單獨或組合使用。合成吸附樹脂方面，可例示如：苯乙烯二乙烯苯系、甲基丙烯酸酯系等，作為其市售品，在苯乙烯二乙烯苯系例如可舉出：DIAION HP-20(三菱化學股份有限公司製造)、DIAION HP-21(三菱化學股份有限公司製造)等。矽膠方面，市售品可例示如矽膠60(默克公司製造)等。ODS方面，市售品可例示如Wakosil-II 5C₁₈ HG(和光純藥工業股份有限公司)等。

作為從上述載體溶出之移動相，可舉出：甲醇、乙醇、乙酸乙酯、己烷、乙腈等。

如此般藉由管柱層析等分離純化手段，來將上述扁實檸檬的榨汁或抽出物進行分劃，並將其黃嘌呤氧化酶抑制活性作為指標而進行純化，藉此獲得含有各種多甲氧基黃酮類的區分物。多甲氧基黃酮類之中，以下述式(1)或(2)所示之化合物為佳。

[化學式1]

(式中，R¹表示氫原子、甲氧基或羥基，R²～R⁵獨立表示氫原子或甲氧基)

[化學式2]

作為上述式(1)的多甲氧基黃酮類，例如可例示：異甜橙素、甜橙素、[3’-羥基-5,6,4’-三甲氧基黃酮]、[5,6,7,8-四甲氧基黃酮]等。又，上述式(2)之化合物為檸檬黃素。可以從上述區分物進而進行純化，而將各化合物單離。此等化合物因為分別具有黃嘌呤氧化酶抑制活性，所以可將此等之1種或2種以上作為本發明的黃嘌呤氧化酶抑制劑的有效成分。異甜橙素、甜橙素、檸檬黃素、[3’-羥基-5,6,4’-三甲氧基黃酮]、及[5,6,7,8-四甲氧基黃酮]，可以是從上述扁實檸檬的榨汁或抽出物單離或純化而成者，又，亦可以是從扁實檸檬以外的植物抽出而成者，進而亦可以是合成而成者。此等之中，又因為黃嘌呤氧化酶抑制活性較高，而以異甜橙素、甜橙素、檸檬黃素較適合。

異甜橙素、甜橙素、[3’-羥基-5,6,4’-三甲氧基黃酮]、[5,6,7,8-四甲氧基黃酮]，係下述式3～6所示之化合物。

[化學式3]

[化學式4]

[化學式5]

[化學式6]

本發明的黃嘌呤氧化酶抑制劑，可藉由下述而獲得：將上述扁實檸檬的榨汁、抽出物或其所含之異甜橙素、甜橙素、檸檬黃素、[3’-羥基-5,6,4’-三甲氧基黃酮]、[5,6,7,8-四甲氧基黃酮]等多甲氧基黃酮類，依照公知的製劑學製法，添加藥理學上可容許的載體、賦形劑、結合劑、崩解劑、潤滑劑等而加以製劑。製劑時所使用的載體或賦形劑，例如可使用：乳糖、葡萄糖、糊精、澱粉、結晶纖維素等。作為結合劑，例如可使用：澱粉、明膠、***膠粉末、羥基丙基纖維素等；作為崩解劑，例如可使用：澱粉、洋菜、纖維素類等；作為潤滑劑，例如可使用：硬脂酸鎂、滑石、硬脂酸鈣、硬脂酸甘油單酯等。

作為本發明的黃嘌呤氧化酶抑制劑的形態，可作成下述形態而利用：錠劑、散劑、膠囊、顆粒劑、丸劑等固形劑；或懸浮劑、乳劑、糖漿等液劑。

使用扁實檸檬抽出物作為有效成分時，相對於全體製劑，換算為乾燥物以調配2～80%為佳，更佳為20～40%。又，將上述異甜橙素、甜橙素、檸檬黃素等多甲氧基黃酮類作為有效成分時，可單獨調配其中的1種，亦可組合調配2種以上，相對於全體製劑，以調配0.1～50%為佳，更佳為1～10%。

本發明的黃嘌呤氧化酶抑制劑的有效投予量，可根據患者的年齡、體重、症狀等而適當設定，例如將異甜橙素作為有效成分時，設為成人每日1300～2000mg左右即可。

如此獲得的本發明的黃嘌呤氧化酶抑制劑，可有效地抑制與在核酸之代謝過程中從次黃嘌呤變換為黃嘌呤、及從黃嘌呤變換為尿酸相關的黃嘌呤氧化酶，而可抑制尿酸的產生。另一方面，檸檬酸鹽製劑係作為高尿酸血症及痛風的治療劑而使用於臨床上。溶解於血液中的尿酸是取決於尿液的pH值，在酸性區域中溶解度低，在中性區域則變高。檸檬酸鹽製劑是藉檸檬酸循環而被代謝並生成重碳酸離子，其在體內作為鹼而發揮作用，以將尿液鹼性化，藉此促進尿酸的***。扁實檸檬因為含有許多檸檬酸，所以亦具有使尿液之pH值降低而促進尿酸之***的作用，再配合上述黃嘌呤氧化酶抑制作用，而可期待具有加倍的高尿酸血症及痛風的預防及治療效果。

又，藉由直接添加上述黃嘌呤氧化酶抑制劑、或再加入各種營養成分而添加至公知的飲食品，而可作為對高尿酸血症及痛風之預防及治療具有作用的飲食品。作為飲食品的較佳例，可例示：果汁飲料、清涼飲料、濃縮飲料、營養飲料、酒精飲料、口香糖、糖果等。

[實施例]

以下舉出實施例以更詳細地說明本發明，但本發明並不受此等實施例之任何限定。

實施例1

扁實檸檬榨汁的製造：

將扁實檸檬的果實以帶式壓榨機加以榨汁，而獲得一次果汁。進而，將該榨汁渣滓以螺旋壓榨機(SRE-150S，信和工程(Shinwa Engineering)股份有限公司)再次壓榨，而獲得二次榨汁。對於該二次榨汁進行檸檬酸含量之測定，結果為1.66%(w/v)。檸檬酸含量是藉由酸滴定來測定酸度，再換算為檸檬酸而求得(檸檬酸換算係數為0.0064)。

試驗例1

黃嘌呤氧化酶抑制活性的測定：

對於實施例1所獲得之扁實檸檬的一次果汁及二次榨汁，變更黃嘌呤氧化酶分析套組(Xanthine Oxidase Assay Kit)(Funakoshi Co.,Ltd.)而測定黃嘌呤氧化酶抑制活性。亦即，混合50μl之試料與50μl之藉由XO樣品緩衝液(XO Sample Buffer)製備的黃嘌呤氧化酶(0.1 mU/ml)。於其中添加50μl之藉由XO分析緩衝液(XO Assay Buffer)、檢測劑(Detector)及辣根過氧化酶(Horseradish Peroxidase)所製備的反應試液，於37℃使其反應45分鐘，再藉螢光分光光度計，以激發波長540 nm、螢光波長590 nm來測定。對照組係使用XO樣品緩衝液來取代試料溶液，並且作為各空白組(blank)而添加XO樣品緩衝液以取代酵素溶液，並進行同樣的操作。如上述般進行測定並藉由下述式來求取抑制率，結果平均每5,000μg/ml之果汁中，一次果汁為41.4%、二次榨汁為65.8%。

(黃嘌呤氧化酶抑制率)

抑制率(%)=[(A-B)-(C-D)]/(A-B)×100

其中，A：對照溶液在590 nm中之螢光度、B：對照溶液空白組在590 nm中之螢光度、C：試料溶液在590 nm中之螢光度、D：試料溶液空白組在590 nm中之螢光度。

實施例2

扁實檸檬抽出物的製造(1)：

於277 kg之扁實檸檬榨汁殘渣中添加560L之50%乙醇，靜置過夜(overnight)再進行抽出。藉由過濾器進行過濾後，將藉由超高速離心而澄清者作為抽出液。將抽出液供應至DIAION HP20管柱(15L)，而獲得未吸附之通透液、與95%乙醇溶出液(70L)。將此95%乙醇溶出液藉蒸發器(EVAPOR)濃縮至15L而獲得吸附區分物。

實施例3

扁實檸檬抽出物的製造(2)：

將8 g之實施例2所獲得之吸附區分物，溶解於水與乙醇之混合溶劑，再使其通入至DIAION HP20層析管柱(5.9×25 cm)。接著，階段性地通入：20%、40%、60%、80%、95%之乙醇、丙酮，將管柱通透液每1000 mL進行分取，而分劃為6份區分物，將各區分物從最初的通透液起依序編號(Fr. 1～6)。對於各區分物，與試驗例1同樣地測定黃嘌呤氧化酶抑制活性。結果顯示於第1圖。將抑制活性最強的Fr. 4(932 mg)以矽膠層析管柱(4.8×17 cm，溶劑系為己烷/乙酸乙酯、及乙酸乙酯/甲醇)來分劃為8份區分物(Fr. 4-1～4-8)，而獲得抑制活性強的Fr. 4-7(383 mg)。將Fr. 4-7再次以矽膠層析管柱(2.6×15 cm，溶劑系為乙酸乙酯/甲醇)來分劃為7份區分物(Fr. 4-7--1～4-7-7)，而獲得抑制活性強的Fr. 4-7-2(66 mg)。進而將Fr. 4-7-2用Wakosil-II 5C₁₈ HG(10×250 mm)藉由HPLC(高效能液相色層分析)來分劃(Fr. 4-7-2-1～4-7-2-4)，結果獲得具有抑制活性的Fr. 4-7-2-3(6 mg)。對於此區分物，藉由NMR(核磁共振光譜)及MS(質譜分析)之分析來鑑別異甜橙素。同樣地從Fr. 5、Fr. 1及Fr. 4分劃純化，而分離出甜橙素、檸檬黃素及[3’-羥基-5,6,4’-三甲氧基黃酮]。異甜橙素、甜橙素、檸檬黃素之IC₅₀(50%抑制濃度)顯示於下述表1。

配方例1

含扁實檸檬二次榨汁之飲料的製備：

製備下述配方之飲料。

[產業上之可利用性]

本發明的黃嘌呤氧化酶抑制劑，其安全性高，能藉由日常性地攝取而控制血液中的尿酸值，所以作為用於預防及治療高尿酸血症或痛風的醫藥或食品而具有作用。

第1圖是顯示在實施例2中將扁實檸檬抽出液的合成樹脂吸附區分物，以管柱層析來分劃而得之區分物的黃嘌呤氧化酶抑制活性的圖。

Claims (9)

1. 一種多甲氧基黃酮類之用途，其係用於製備預防或治療高尿酸血症之藥物，其中該多甲氧基黃酮類係含有異甜橙素或甜橙素、以及式(2)所示之化合物：
2. 一種多甲氧基黃酮類之用途，其係用於製備預防或治療痛風之藥物，其中該多甲氧基黃酮類係含有異甜橙素或甜橙素、以及式(2)所示之化合物：
3. 如申請專利範圍第1或2項所述之多甲氧基黃酮類之用途，其中該多甲氧基黃酮類是從扁實檸檬榨汁殘渣的抽出物而獲得。
4. 如申請專利範圍第3項所述之多甲氧基黃酮類之用途，其中該多甲氧基黃酮類是將扁實檸檬榨汁殘渣的水性溶劑抽出物以合成吸附樹脂來處理而獲得之吸附區分物。
5. 如申請專利範圍第4項所述之多甲氧基黃酮類之用途，其中該合成吸附樹脂是DIAION(註冊商標)HP20。
6. 一種異甜橙素之用途，其係用於製備預防或治療高尿酸血症之藥物。
7. 一種異甜橙素之用途，其係用於製備預防或治療痛風之藥物。
8. 一種甜橙素之用途，其係用於製備預防或治療高尿酸血症之藥物。
9. 一種甜橙素之用途，其係用於製備預防或治療痛風之藥物。