TWI343384B - Halogenated 3-oxohexahydrofuro (3,2-b)pyrrole cathepsin k inhibitors - Google Patents

Description

1343384 九、發明說明： 【發明所屬之技術領域】 本發明係關於半胱胺酸蛋白酶之抑制劑，尤其是木瓜蛋 白酶總科之抑制劑。本發明提供用於預防或治療起源於生 理蛋白酶（諸如組織蛋白酶κ)失衡之病症的新穎化合物。 【先前技術】 半胱胺酸蛋白酶之木瓜蛋白酶總科係廣泛分佈於各種種 類中’包括哺乳動物、無脊椎動物、原生動物、植物及細 > 菌°大量哺乳動物組織蛋白酶類（包括組織蛋白酶b、f、h、 κ、L、〇及S)已經歸因於此總科，且其活性之不適當調節 已涉及大量代謝障礙’包括關節炎、肌肉萎縮症、發炎、 絲球體腎炎及腫瘤侵入。致病組織蛋白酶（如酶類）包括細菌 牙酿卟淋單胞菌、遽疾鐮狀單胞菌I、II、III以及下列等等， 及來自肺炎肺囊蟲（Pneumocystis carinii)、克氏及布魯氏錐 蟲、fusicuUta短膜蟲 '血吸蟲科之半胱胺酸蛋白酶。 > 組織蛋白酶K之不適當調節已涉及大量病症，包括骨質疏 鬆症、牙齦疾病（諸如牙齦炎及牙周炎）、佩吉特（paget)氏 病、惡性高鈣血及代謝骨疾病。由於其在骨關節炎滑膜之 破軟骨細胞内含量增高，組織蛋白酶κ涉及特徵為過度軟骨 或基體降級之疾病，諸如骨關節炎及類風濕性關節炎。轉 移性贅生性細胞通常表現高含量之蛋白水解酶類（其使週 圍基體降級），且因此組織蛋白酶K之抑制可輔助治療瘤形 成。 國際專利申請案第W002057270號揭示式I化合物 98786.doc 1343384

，、中，乏對應於二肽半胱胺酸蛋白酶抑制劑之 P3及P2’ Z尤其為〇、S、亞甲基或-NR-，R1為烧基芳基等， 且P1及Q1各自為亞甲基’其係、視情況經各種碳鏈及環狀基 團取代。據稱該等化合物用於治療諸如錐蟲之原生動物感 染。 吾人現已發現，在一特別環位置引進_素原子產生在抗 組織蛋白酶K能力上的數量級提高。 【發明内容】 根據本發明’提供式II化合物：

其中 R1及R2之一個為鹵基且另一個為Η或鹵基； R為Ci-Cs直鏈或支鏈、視情況氟化之烷基； R為Η ;或 R3與R4及相鄰主鏈碳一起定義： 螺-Cs-C：7環烧基’其係視情況經1至3個選自鹵基、經 基、C,-C4烧基或c 1-C：4鹵代烷基之取代基取代；或係視产 98786.doc 況以一亞甲基橋接；或 C4-C6飽和雜環，其具有一選自〇' NRa、s、s(=⑺2之 雜原子；其中Ra為Η、CVC4烷基或CH3C(=0)-; R5係獨立選自Η或甲基； Ε 為-C(=0)-、-S卜〇)m_、_NR5s(=〇)m、_nr5c(=〇)、 -〇C(=0).; R0為穩定、視情況經取代之單環或雙環、碳環或雜環， 其中該環或各個環具有4、5或6個環原子及〇至3個選自 S ' 0及N之雜原子且其中該等可選取代基包括丨至]個選 自Κ·7之成員； R7係獨立選自齒基、氧基、腈、硝基、Ci_C4烷基、_NRaRb' -XNRbR9、-NRbC】-C4烧基 R9、NH2CO-、X-R9、X-〇_R9、 O-X-R、X-C(=〇)R9、x_(c=〇)NRaR9、x_NRbC( = 0)R9、 X-NHSOmR ' X-S(=0)mR9 > X-C(=〇)〇R9 ^ X-NRbC (=0)0R9 ； R9獨立為H、C,-C4烷基、CrC6環烷基、吡咯啶基、六氫 吼咬基、嗎琳基、硫代嗎啉基、六氫吡嗪基、吲哚啉基、 哌喃基、硫代哌喃基、呋喃基、噻吩基、吡咯基、噁唑 基、異°惡β生基、售。坐基、咪哇基、n比咬基、嘴咬基、。比 嗓基、吲β朵基、苯基’其中任—個視情況經R 1 〇取代； R10 係獨立選自羥基、-X-R9、-XNRaRb、_XNRbR9、 -NRbCi-C〗烧基R9、硝基、氰基、羧基、氧基、d-C4烷 基、C1-C4-烧氧基、C1-C4烧S盡基、胺甲醯基； X獨立為一鍵或CVC4烧基； 98786.doc 1343384

Rb係選自Η、Ci-C4烷基； m獨立為〇、1或2 ; 及其醫藥上可接受之鹽類。 無論如何不希望束縛於理論或歸屬於特定變數之試探性 結合模式’本文所使用之PI、Ρ2及Ρ3係僅為提供便利，且 有其驾知忍義’且據信指示分別填充該酶之S 1、μ及§3 亞部位的抑制劑之彼等部分，其中S1鄰近該分解部位且s3 遠離該分解部位。 该P 1基團之立體化學較佳係如以下部分結構所描述：

R及/或R2之鹵素較佳為氣且最佳為氟。目前較佳R2為齒 基、尤其為氟且R1為Η，但本發明擴展至其中Ri為齒基、尤 鲁其為F且R2為Η或R1及R2各自為F之化合物。 應理解，該Ρ1基團可以替代形式存在，諸如

R1 R2 HO ΟΗ 且本發明擴展至全部該等替代形式 該Ρ2基團之立體化學較佳對應 於如以下部分結構所描 述 98786.doc -10- 1343384 之L-胺基酸：

R5 Ο 但本發明亦擴展至D_異構體。 本發明亦包括全部異構體及處於其它對掌中心之對掌異 構物。 目前較佳P2基團包括彼等其中R4為Η且其中R3為異丁基

之基團。進一步較佳P2基團為高第三丁基，意即 -CH2C(CH3)3。 替代性較佳P2基團包括彼等其中R3及R4—起定義螺環院 基（諸如環戊基、環庚基及尤其環己基）之基團。 若—P2環烷基經取代，則該取代通常為至該主鏈之連接 的對位。代表性取代基包括單氟、二氟、單羥基、偕羥基 及甲基取代基、單曱基或偕甲基。 替代性P2基團包括彼等其中R3及R4 一起定義6員飽和雜

衣之基團’其中—選自〇、s、s(=0)2或NRx(其中X為Η或甲 基)之雜原子位於對應於至該主鏈之附著點的對位或間位 之位置。

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1343384 較佳E基團包括-S( = 0)m-、尤其為-S( = 0)2-，且最佳為 -C( = 0)-。 98786.doc •12- (¾ 1343384 R6通常為5或尤其6個環原子之單環，或包含一稠合至4、 5或6員環之6員環的雙環結構。 R6通常包括飽和或不飽和雜環或飽和或不飽和碳環，其 中任個係視情況如以上所描述經取代。例示性變數包括 C3·8環烷基、笨基、苄基、四氫萘基、茚基、二氫茚基、雜 環，諸如來自氮雜環庚烷基、氮雜環辛基、吡咯啶基、六 氫吡啶基、嗎啉基、硫代嗎啉基、六氫吡嗪基、吲哚啉基、 哌喃基、四氫哌喃基、四氫硫代哌喃基、硫代哌喃基、呋 喃基、四氫呋喃基、噻吩基、吡咯基、噁唑基、異噁唑基、 噻唑基、咪唑基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、嗒嗪基、四 唑基、吼唑基、吲哚基、笨幷呋喃基、笨幷噻吩基、笨幷 咪唑基、苯幷噻唑基、笨幷噁唑基、笨幷異噁唑基、喹啉 基、四氫喹淋基 '異喹琳基、四氫異喹琳基、喹唑啉基、 四氫喹唑啉基及喹喏啉基者，其中任一個係可如以上所描 述經取代。 因此該飽和雜環包括諸如以下之基團：吡咯啉基、吡0各 啶基、吼唑啉基、吡唑啶基、六氫吡啶基、嗎啉基、硫代 嗎啉基、哌喃基、硫代哌喃基、六氫吡嗪基、吲哚啉基、 氮咀基、四氫哌喃基、四氫硫代哌喃基、四氫呋喃基、六 氫嘧啶基、六氫嗒嗪基、1，4,5,6-四氫嘧啶基胺、二氫惡唑 基、1，2-硫氮雜環己炫基-1，1_二氧化物、ι，2,6_硫二氮雜環 己烷基-1，1 -二氡化物、異噻唑烷基_ 1,〖_二氧化物及咪唑啶 基-2,4-二酮，而該不飽和雜環包括諸如以下之基團：呋喃 基、噻吩基、吡咯基、噁唑基、噻唑基、味唑基、吡唑基、 98786.doc -13- 1343384 異°惡。坐基、異嗟。坐基、°惡二吐基、二°坐基、四β坐基、β塞二 。圭基、处咬基、塔°秦基、喊咬基、β比嗪基、叫丨嗪基、0引0朵 基、異吲哚基。在各個情況中’該雜環係可與一苯基環縮 合以形成一雙環系統。 較佳單環R6基團包括經取代吡啶基、經取代嘯咬基、經 取代苯基，尤其經環基團取代之本基’諸如吨η各咬_1_基、 六氫°比咬-1-基、4-甲基六氫°比咬-1-基、4-(六氫„比咬·3·基 甲基）·六氫0比咬-1 -基、嗎琳-4-基、4-甲基六氫η比嗓_ 1 •基、 ® 2-嗎琳-4-基-乙胺基、2-嗎淋-4-基-乙基氧基、1_8比咬_2_基 甲基胺基、六氫吡嗪-1-基、六氫吡啶-4-基或以Ra Ν_取代 之Ν六氣att*D秦基或以-NRaRb 4-取代之六氫比咬·ι·基。苯基 R6係於3或4位（對位或間位）便利地取代，例如以該環基團取 代。 單環R6(諸如苯基）之替代性環取代基包括諸如苯基之芳 基或諸如嘆吩、呋喃基、***、噻唑、二唑、吡唑或吡洛 φ 啶之5或6員雜芳基。本文青睞之環取代基包括噻唑_2-基、 吡啶-3-基及尤其吡啶·2-基、噻吩_2_基或噻唑_5_基。此環 . 取代基（意即R7)通常係直接鍵結至該Μ種類（意即χ為一 鍵）仁亦可（例如）包含諸如-ΝΗ-、-N(Me)、、 偶N(Me)·之胺間隔基、諸如偶_之Ci_c成基間隔基或 諸如乙基氧基之q-C3-烷氧基間隔基。 緊接的該前述段中r6$ # # t , u Y之任何裱取代基係可如以上所描述 經R取代。例如___諸如β实地| η - 基坐基之雜環R7基團係可以諸如甲 基之Ci-C4烷基取代。 98786.doc -14- 1343384 較佳地，緊接的該等前述段中尺6之任何環取代基自身係 可以環基團取代（即R7包括一R9部分），通常為—諸如六氫吼 啶、六氫吡嗪或嗎啉之飽和雜環基團，該飽和環基團係視 情況（例如）經CVC3烷基、氟、二氟、Ci_C3烷氧基4Ci_C3 烷氧基CrC3烷基取代。如R7之定義中所提供，此飽和環基 團（意即R9)係可藉由X(舉例而言^ —匕烷基）、胺（舉例而言 -NH-)、醯胺、磺醯胺等自該汉6基團間隔，但通常係直接或 經由亞甲基鍵結。 根據緊接的該前述段之代表性R9基團包括雜環，諸如。比 咯啶-1-基、六氫吡啶-1-基、4_甲基六氫吡啶_丨_基、4_(六 氫吡啶-3-基甲基）_六氫吡啶_丨_基、嗎啉_4_基、4_甲基六氫 吡嗪-1-基、2-嗎啉-4-基·乙胺基、2-嗎啉_4-基-乙基氧基、 1-吡啶-2-基甲基胺基、六氫吡嗪_丨_基、六氫吡啶_4_基或以

Ra N-取代之N-六氫吡嗪基或以_NRaRb 4_取代之六氫吡啶 -1-基。 目則較佳R9取代基包括4-取代之六氫吡嗪-4-基，諸如4- 甲基-六氫吡嗪-4-基或4-甲基氧基乙基_六氫吡嗪-4-基、六 氮吼咬-1-基甲基，其係視情況經氟或二氟或嗎啉基甲基4_ 取代。 單環R6(諸如笨基）之替代性較佳取代基包括_NRaRb、 _CH2NRaRb、Ci_C4直鏈或支鏈烷基或-0-R9。 因此代表性R6基團包括： 98786.doc •15· 1343384

其中Rq及Rq·係獨立選自Η、CVC4烷基或（VC4烷醯基，或 一起定義一不飽和5-7員環，諸如六氫吡啶、六氫吡嗪或嗎 啉，其依次係可以對應於R1G之基團、尤其Ci-q烷基、氟或

二氟取代。 目前較佳R6基團包括

98786.doc • 16· 之代表性雙環基團包括萘基、尤其萘_2_基；笨幷 二氧雜戊烯基、尤其苯幷Π，3]二氧雜戊烯_5_基，笨幷呋喃 基、尤其笨幷呋喃-2-基及尤其經Cl_C6烷氧基取代之笨幷呋 南基、更尤其5-(2-六氫吡嗪-4-羧酸第三丁酯·乙氧基）笨幷 呋喃-2-基、5_(2_嗎啉_4_基·乙氧基）_笨幷呋喃_2_基、5_(2_ 六氫吡嗪小基-乙氡基）苯幷呋喃基、5_(2-環己基乙氧 2)-笨幷呋喃-2-基；7-甲氧基_笨幷呋喃_2_基、5_甲氧基_ 笨幷夫喘-2-基、5,6-二曱氧基·笨幷咬喊_2_基、尤其經齒素 二代之笨幷》夫喃基、更尤夫喃_2基、5,6•二氣· 笨幷咬^2-基、尤其經Cl_(^基取代之笨幷^基、最尤 八甲基笨幷呋喃-2_基；笨幷[b]噻吩基、尤其笨幷[b]噻 % 2-基，尤其經^^6烷氧基取代之笨幷[b]噻吩基、更尤 其5’6'二甲氧基·苯幷[b]嗟吩·2_基、啥琳基、尤#啥淋-2_ 基H3-基、喧琳_4.基、喧琳_6•基及喧琳_s•基；啥嘴 啉基、尤*喹喏啉_2_基；以·嗉啶基、尤其1，8-嗉啶-2-基; 引°木基、尤其吲哚·2_基、尤其吲哚冬基、吲^朵_5_基、尤其 1。6烧基取代之。弓| β朵基、更尤其Ν-甲基。弓卜朵·2_基；。夫响 [’]比咬基、尤其°夫°南[3,2-bp比咬-2-基及經Crc6-烧基取 夫南[3,2_b]°比咬基、尤其3-甲基夫喃[3,2-b]吼啶-2-基，嚷吩幷[3,2-b]嘆吩、尤其㈣幷[3,2b]n塞吩_2_基、更 98786.doc 1343384 尤其經C!-C6炫基取代之嘆吩幷[3,2-b]〇塞吩_2_基、更尤其5_ 第三丁基_3·甲基噻吩幷[3,2-b]噻吩·2_基。 受青睞之R6基團包括雙環，諸如萘基、喹諾基、苯幷呋 喃基、苯幷噻吩基、吲哚基及吲哚啉基，尤其其中該連接 係連接至該環之2位置。受青睞的雙環…基團之取代基包括 吡咯啶-1-基、六氫吡啶-1-基、4-甲基六氫吡啶_丨_基、4·(六 氫吡啶-3-基甲基）-六氫吡啶-ΐ_基、嗎啉_4_基' 4曱基六氫 吡嗪-1-基、2-嗎啉-4-基-乙胺基、2_嗎啉_4_基_乙基氧基、 1-吡啶-2-基甲基胺基、六氫吡嗪_丨_基、六氫吡啶_4_基或以 Ra Ν-取代之Ν·六氫吡嗪基或w_NRaRb 4取代之六氫吡啶 -1-基。尤其受青睞之取代基、尤其與苯幷呋喃基接合者包 括2-嗎啉-4-基-乙基氧基及N_甲基-六氫吡啶_4_基氧基及彼 等以下所定義之基團。 目前受青睞之雙環R6基團係視情況經苯幷噻唑基或笨幷 呋喃基或笨幷噁唑基取代，包括彼等其中該取代基為_〇R9 或-NRbR9之基團。例如，受青睞之R6基團包括笨幷呋喃_2_ 基，其係經飽和雜環（諸如六氫吡啶、六氫吡嗪或嗎啉，其 係視情況經Ci-C3烷基取代及/或藉由氧基、甲基氧基或乙基 氧基自該苯幷呋喃基間隔）於5位未取代或取代。尤其受青 昧之笨幷呋喃基R6基團因此包括： 98786.doc -18- 1343384

χ通常係亞甲基或尤其係一鍵。

(其中04)自身或在化合物表達式（諸如c山 烷氧基)中包括甲基、乙基、正丙基、異丙基正丁基異 丁基、第一丁基、第三丁基、環丙基、甲基環丙基及類似 物，其依η之其它值而以類似方式擴展。例如C5烷基包括高 第三丁基（-CH2C(CH3)3)。 鹵素或鹵基包括溴、氣及尤其氟。 鹵代烷基意謂如以上所定義之烷基，其中至少一個碳原

子具有1至3個鹵素原子、較佳為氟原子。代表性齒代烧基 包括氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、2-氟乙基、2,2-二敦乙 基、2,2,2-三氟乙基及類似物。 本文所採用之P 1基本組份代表新穎化合物且形成本發明 之一額外態樣。因此，本發明之此進一步態樣提供下式之 化合物 98786.doc •19- ⑧ 1343384

其中R1及R2係如以上所定義且pg為如以下所定義之氮保 護基團’尤其為曱醯基、乙醯基、笨甲醯基、三甲基乙醯 基、第三丁基乙醯基、苯基磺醯基、苄基、苐基甲氧基羰 基、第三丁氧基-羰基（BOC)及苄氧基羰基（Cbz)e本發明之 此態樣進一步包括相應之未保護胺（意即PG=H)。 本發明之此態樣之較佳實施例包括下式之化合物

H F

其中PG係如以上所定義。

本發明進一步包含如以下實例所闡釋之各種新穎Ρ3基本 組份作為該酸或以羧基保護基團保護。 本發明之受青睞之化合物包括彼等藉由自各個表A、Β及 C中獨立選擇Ρ3 ' Ρ2及Ρ1成員來形成之排列。

98786.doc · 20 —^ 1343384 表B P2基團

〇 Λ 〇 〇 Η ϋ 表C P3基團 〇 —Ν( Η^ν 〇 〇 0 -21 - 98786.doc 1343384

98786.doc •11 · 1343384

98786.doc •23 ·

本發明之化合物可形成鹽，苴 式I!化合物之合適醫藥上可接：、/成本發明之額外態樣。 •樂上了接文之鹽㊁4^ » 之鹽，其包括（但不限於W於趟 匕括有機酸、尤其緩酸 1氏於）乙酸鹽、三麝7 糠酸鹽、檸檬酸鹽 一 文现、乳酸鹽、葡 間石g变鹽、順丁说- 烯一酸鹽、蘋果酸鹽、 98786.doc -24- 1343384 泛酸鹽、經乙項酸鹽、己二酸鹽、海藻酸鹽、天冬胺酸鹽、 苯曱酸鹽、丁酸鹽、二葡糖酸鹽、環戊酸鹽、葡糖庚酸鹽、 甘油磷酸鹽、草酸鹽、庚酸鹽、己酸鹽、反丁烯二酸鹽、 煙酸鹽、棕櫊酸鹽、果膠酸鹽、3-苯丙酸鹽、苦味酸鹽、 特戊酸鹽、丙酸鹽、酒石酸鹽、乳糖酸鹽、pivolate、樟腦 酸鹽、十一烷酸鹽及琥珀酸鹽，有機磺酸，諸如曱磺酸鹽、 乙確酸鹽' 2-羥基乙磺酸鹽、樟腦靖酸鹽、2-萘磺酸鹽、苯 磺酸鹽、對氣苯磺酸鹽及對甲苯磺酸鹽；及無機酸，諸如 氣化氫、溴化氫、碘化氫、硫酸鹽、硫酸氫鹽、半硫酸鹽、 硫氟酸鹽、過硫酸鹽、磷酸及磺酸。該等式Π化合物在某些 情況下係可作為水合物隔離。 應理解’本發明擴展至前藥、溶劑合物、錯合物及活體 内釋放式II化合物之其它形式。 雖有可能單獨投予該活性劑，較佳將其作為醫藥調配物 之部分引入。該調配物將包括該以上定義之活性劑與一或 多種可接受載劑/賦形劑及視情況之其它治療成份。該（等） 載劑必須為可接受，即能夠與該調配物之其它成份相容且 對受體無毒害。 該等調配物包括彼等適合於經直腸、經鼻、經局部（包括 、·ΐ·頰及[舌下）、經***或非經腸（包括經皮下、經肌肉内、 經靜脈内及經皮内）投藥之調配物，但較佳該調配物為經口 投予調配物。該等調配物係可便利地以單位劑型存在，舉 例而言錠劑及持續釋放膠囊，且係可藉由任何藥劑學技術 熟知之方法製備。 98786.doc •25- 步η:包括Γ以上定義之活性劑與栽劑達到締合之 4。通常’t"調配物係如下製備：均句及 活性劑與液體載劑或精細分割之固體載劑或兩者締合，^ 然後右必要則使該產品成形。本發明擴展至製備醫藥組人 物之方法’其包含使式„化合物或其醫藥上可接受之鹽與； 樂上可接受之載劑或媒劑接合或締合。若醫藥調配物之製 造涉及醫藥賦形劑及該活性成份（鹽形式）之緊密混合，則铁 後經常較佳使用本質上非驗性（意即酸性或中性）之賦形劑: 本發明中經口投藥之調配物係可作為離散單位（諸如膠 囊、扁囊劑或錠劑，其各自包含預訂量之該活性劑）存在； 作為粉末或顆粒；作為該活性劑於水成液或非水成液之溶 液或懸洋液；或作為水包油液體乳液或油包水液體乳液或 作為丸劑等。 關於經口投藥之組合物（舉例而言錠劑或膠囊），術語合 適載劑包括諸如共同賦形劑之媒劑，舉例而言黏合劑，例 如糖漿、***樹膠、明膠、山梨糖醇、黃耆膠、聚乙烯 吡咯烷酮（Povidone)、甲基纖維素、乙基纖維素、綾曱基纖 維素鈉、羥基丙基甲基纖維素、蔗糖及澱粉；填充劑及載 劑，例如玉米殿粉、明膠、乳糖、蔗糖、微晶纖維素、高 領土、甘露糖醇、碟酸二的、氣化鈉及褐藻酸；及潤滑劑， 諸如硬脂酸鎂、硬脂酸鈉及其它金屬硬脂酸鹽、硬脂酸甘 油醋硬脂酸、聚矽氧流體、滑石粉蠟、油，及矽膠。亦可使 用芳香劑，諸如薄荷油、冬綠油、櫻桃芳香劑或類似物。 可能需要添加染色劑使該劑型容易辨識D亦可藉由此項技 98786.doc • 26· 1343384 術熟知之方法塗佈錠劑。 =劑係可視情況與-或多種配合劑—起藉由壓縮或造型 :造。壓縮鍵劑係可藉由在合適機器中I縮自由流動形 ’(諸如粉末或顆粒)之該活性劑來製備，其視情況盥黏人 劑、潤滑劑、惰性稀釋劑、防腐劑、界面活性劑或分散舞二 造型鍵_可藉由在合適機器中將以惰性液體稀釋劑潤飾 之該粉末化合物的混合物造型來製造。該等錠劑係可視情

況經塗佈或刻痕’且係可調配以提供該活性 ： 控制之釋放。 又又 適於經口投藥之其它調配物包括***鍵，其在調味基（通 常為蔗糖及***樹膠或黃耆膠）中包含該活性劑；片劑， 其在惰性基(諸如明膠及甘油’或蔗糖及***樹膠)中包含 該活性劑；及漱劑’其在合適液體載劑中包含該活性劑。 本發明之化合物或調配物之合適劑量將視指示及患者而 定，且係容易藉由習知動物試驗測定。提供量級"卜⑽

μΜ、更佳0,01-10 μΜ、諸如〇⑷_之細胞内（以抑制該 木瓜蛋白酶總科之生理蛋白酶）濃度的劑量為通常所需要 的且其可達成。 本發明之化合物係藉由多種溶液及固相化學製備。 該等化合物通常係作為反射該終點產物抑制劑之Η、ρ2 及Ρ3部分的基本組份製備。無論如何不希望束缚於理論或 歸屬於特定變數之試探性結合模式，此處所使用之該等名 義上之概念PI、Ρ2及Ρ3係僅為便利提供，且大體上具有其 習知Schlecter & Berger意義，且指示據信分別填充該酶之 98786.doc -11 · CD』 1343384 S1、S2及S3亞部位的該抑制劑之彼等部分，其中s 1鄰近該 分解部位且S3遠離該分解部位。藉由式〖定義之化合物係涵 蓋於本發明之範_，不管結合模式。 廣泛而s ’ s亥P1基本組份將為一 ν·保護之6_氟_3-氧基_ 八氩-11夫喃[3,2-1?]°比各’ P2將為N-保護之胺基酸，而p3通常 包括一封端基團，諸如一經取代雜芳基或芳基部分。 該等合適保護之個別基本組份係可首先製備且隨後一起 _ 偶合，意即P2+P1— P2-P1。或者，該等基本組份之前驅體 係可一起偶合，且於該抑制劑序列之合成之稍後階段修 飾。所要結構的其它基本組份、基本組份之前驅體或預製 較大片段係可然後偶合至該增長鏈’舉例而言R3_E_p2*+ pi—R3-E-P2-P1 或 R3-E*+P2_P1—r3_e_P2_Pi，其中*指示活 化形式。 兩胺基酸、一胺基酸及一肽或兩狀片段之間的偶合係可 使用標準偶合程序進行，諸如疊氮化合物方法、混合碳酸_ • 羧酸酐（氣甲酸異丁酯）方法、碳化二醯亞胺（二環己基碳化 二醯亞胺、二異丙基碳化二醯亞胺或水溶性碳化二醯亞胺） 方法、活性酯（對硝基笨酯、N_羥基琥珀醯亞胺酯）方法、 伍德沃德（Woodward)試劑K方法、羰基二咪唑方法、磷試劑 或氧化-還原法。某些此等方法（尤其該碳化二醯亞胺方法） 係可藉由添加1-羥基笨幷***或4_DMAp來提高。此等偶合 反應係可以溶液（液相）或固相來執行。 更明確而言，該偶合步驟涉及一種反應物之游離羧基與 另一反應物之游離胺基在偶合劑存在下脫水偶合以形成鍵 98786.doc 28 ⑩ 聯醯胺鍵。該等偶合劑之描述係見於肽化學普通教科書 中’例如 M. Bodanszky，"Peptide Chemistry”，第二修訂版， Springer-Verlag，Berlin, Germany，（1993)，下文簡單稱作

Bodanszky，其内容係以引用之方式併入本文。合適偶合劑 之實例為Ν，Ν·-二環己基碳化二醯亞胺、ν，ν，-二環己基碳化 二醯亞胺或Ν-乙基-Ν，-[(3-二甲基胺基）丙基]碳化二醯亞胺 存在下的1-經基笨幷***。一實際及有用偶合劑為市售之 (苯幷三吐-1-基氧基）叁-(二甲基胺基）六氟磷酸鎖自身或在 1-經基苯幷三。坐或4-DMAP存在下。另一實際及有用偶合劑 為市售之四氟硼酸2-(1Η-苯幷***-1-基）·ν，Ν，Ν，，Ν·-四甲基 脲鐺。又一實際及有用偶合劑為市售之六氟磷酸〇_(7_氮雜 笨幷三0坐-1-基）·Ν，Ν，Ν’，Ν’ -四甲基腺钂。 該偶合反應係於惰性溶劑中進行，舉例而言二氣甲烷、 乙腈或二甲基曱醯胺。添加過量三級胺（舉例而言二異丙基 乙胺、Ν-曱基嗎啉、Ν-曱基吡咯啶或4-DMAP)以維持該反 應混合物於約8之pH值。該反應溫度通常自〇°C及50°c之間 變動且該反應時間通常自1 5分鐘至24小時變動。 在該等偶合反應中通常必須保護該組成非自然胺基酸之 官能基以避免不想要之鍵形成。該等可使用之保護基團係 列 /月單於 Greene ， "Protective Groups in Organic

Chemistry，John Wiley & Sons, New York (1981)及"The Peptides: Analysis，Synthesis，Biology” ’ 第三卷，Academic

Press, New York (198〇，下文簡單稱作Greene，其揭示内 容係以引用之方式併入本文。 98786.doc -29· 1343384 C-末端殘基之α-羧基通常係作為酯保護，其係可分解以 生成緩酸。可使用之保護基團包括丨）烷基酯，諸如曱基、 三曱基甲矽烷基及第三丁基，2)芳烷基酯，諸如苄基及經 取代苄基，或3)可藉由弱驗或弱還原手段分解之酯，諸如 三氣乙基及笨甲醯甲基酯。 待偶合之各個胺基酸的α_胺基通常為N_保護。可使用此 項技術中已知之任何保護基團。該等基團之實例包括：i) 醯基’諸如甲醯基、三氟乙醯基、酞醯基及對甲笨磺醯基； 2)芳族胺基甲酸酯基團，諸如苄氧基羰基^匕或乙）及經取 代之苄氧基羰基及9-荞基曱基氧基羰基（Fm〇c); 3)脂族胺基 甲酸酯基團’諸如第三丁氧基羰基（Boc)、乙氧基羰基、二 異丙基曱氧基羰基及烯丙氡基羰基；4)環烷基胺基甲酸酯 基團，諸如環戊氧基羰基及金剛烷氧基羰基；5)烷基，諸 如三笨基甲基及苄基；6)三烷基甲矽烷基，諸如三曱基曱 矽烷基；及7)含硫基團’諸如苯基硫代羰基及二硫代琥珀 酿基。違較佳α -胺基保遵基團為b〇c或Fmoc。許多供狀合成 的合適保護之胺基酸衍生物係市售。 έ玄(X -胺基保邊基團通常係在該下一偶合步驟之前分解。 當使用該Boc基圓時’精選的方法為三氟乙酸（純的或在二 氣甲烷中）或HC1(在二噁烷或乙酸乙酯中）。然後在該偶合之 前或就地以鹼性溶液（諸如水緩衝劑或於二氣甲烷或乙腈 或二曱基甲醯胺中之三級胺）中和所得之銨鹽。當使用Fmoc 基團時，精選的6式劑為於一甲基甲酿胺中之六氯ϋ比咬或經 取代之六氫吼啶’但可使用任何二級胺。去保護係於介於〇 98786.doc •30- 1343384 °C及室溫之間的溫度下進行，通常為2〇-22°C。 任何具有側鏈官能度之自然或非自然胺基酸將通常係於 該肽之製備中使用任何以上所描述之基團保護。熟習此項 技術者將理解此等側鏈官能度之合適保護基團的選擇及使 用視該胺基酸及該肽中其它保護基團之存在而定。在該等 保護基團之選擇中，需要該基團不會在該去保護及該α-胺 基之偶合中被移除。

例如’當使用B〇c作為α·胺基保護基團時，下列側鏈保護 基團合適：可使用對甲苯磺醯基部分保護胺基酸（諸如Lys 及Arg)之胺基側鏈；可使用乙醯胺基曱基、苄基（Bn)或第 二丁基磺醯基部分保護半胱胺酸之含硫側鏈；可使用苄基 (Bn)醚保護絲胺酸、酥胺酸或羥基脯胺酸之含羥基側鏈； 且可使用¥ &喊保護天冬胺酸及麵胺酸之含緩基側鏈。 當選擇Fmoc供α-胺保護時，基於第三丁基之保護基團通 常可接受。例如，可使用B〇c用於離胺酸及精胺酸，第三丁

基喊用於絲胺酸、穌胺酸及羥基脯胺酸及第三丁酯用於天 ;胺^及麵胺gt。通常使用三苯基甲基（τ出yi)部分保護半 胱胺酸之含硫側鏈。 -旦完成該抑制劑序列，以藉由保護基困之選擇規定之 方式移S任何保4基團。此等程序係熟習此項技術者所熟 知。 通式II之化合物之公占由 、^ 成中第—階段通常為於官能化P1基 本組伤之喊中的製備。可使用根據本發明之化合物的不 同命名法。為了便利本文通常將使用碳水合物命名法。至 98786.doc 雙％ P1基團之典型流程起始於合適保護之中間體的閉環作 用，該中間體係可由4步得自1，2:5,6-二-〇·亞異丙基_D_別呋 喃醣（allofuranose)，如 Mayer zum Reckendorf，Chem. Ber. 101 (1968)，3802-3807所描述，得到3S，4R立體化學之前驅 體。

流程1. a)H2、Pd/C、甲醇。b)氣甲酸苄酯、吡啶、二氣 甲烷 在流程1中，衍生物〗之疊氮基團係還原至游離胺，例如 藉由催化氫化使用披鈀木炭或其它合適催化劑，在諸如醇 (如乙醇或甲醇）之合適溶劑中。該獲得之親核性氮自發或視 情況在合適鹼（諸如三乙胺或乙酸鈉）存在下與該c_6位置反 應形成5,5-雙環。於C-6之離去基係不限於磺酸酯，但貫穿 根據本發明之化合物之合成中亦可使用其它離去基（諸如 鹵素）。亦可藉由由文獻已知之其它方法執行該疊氤基團至 胺之還原，諸如以三烷基或三芳基膦處理該疊氮衍生物’ 隨後將該形成之亞胺衍生物水解。該閉環作用後，可以諸 如胺基甲酸酯（如化合物3之胺基甲酸节酯）之合適保護基團 98786.doc •32- 1343384 或任何其它通常不被酸分解之類似保護基團將該胺N-保 s蔓。合適保護基團可見於：pr〇tective groups in organic chemistry ’ 第三版，P99, Theodora W. Greene 及 Peter G. Μ· Wuts (Wiley&sons)。 對3R，4S雙環，可使用類似方法，其起始於3_疊氮基_3_ 去氧-1，2:5,6-二-〇-亞異丙基-D-古羅呋喃醣，其係可如

Tetrahedron Asymmetry，10 (1999) 185 5-1859所描述製備。

然後可如流程2所描述處理此中間體。

/’il程2，a)含水乙酸。b)對甲笨績g盘氣、〇比咬、DCM，c) H2、 Pd/C '甲醇。d)氯甲酸苄酯、D比咬、二氣甲烧。 化合物4係可以弱酸（諸如稀釋之乙酸或類似物，其可選 擇性水解化合物4之5，6-縮醛）處理以得到二醇。該第一醇係 可選擇性與烷基-或芳基磺醯氣（如對曱苯磺醯氣）反應以得 到化合物5。衍生物5之疊氮基團係經還原至游離胺，例如 藉由使用披把木反或其它合適催化劑，在諸如醇（如乙醇戈 甲醇）之合適溶劑中催化氫化。該獲得之親核性氮自發或視 98786.doc •33· 1343384 情況在合適驗（諸如二乙胺或乙酸納）存在下與該C_6位置反 應形成5，5 -雙環，其係可以合適保護基團（諸如其胺基曱酸 苄酯（Cbz))N-保護以生成化合物6。 或者3-疊I基-3 -去氧^1,2:5，6 -二-〇-亞異丙基_d·艾杜咬 喃醣（Bull. Chem. Soc. Japan, 57，1(1984)，237-241)可為用 於根據流程3之3R，4S雙環的合適起始物質。

流程3. a)含水乙酸。b)對甲苯磺醯氣、吡啶、dcM，c) h2、 Pd/C、曱醇。d)氣甲酸苄酯、π比咬、二氣甲烧。 化合物6係可以弱酸（諸如稀釋之乙酸或類似物，其可選 擇性水解化合物6之5,6_縮醛）處理以得到二醇。該第一醇係 可選擇性與烷基-或芳基磺醯氣（如對甲笨磺醯氣）反應以得 到化D物7。衍生物7之疊氮基團係經還原至游離胺，例如 藉由催化氫化使用披⑱木炭或其它合適催化劑，在諸如醇 (如乙醇或甲醇）之合適溶劑巾。該獲得之親核性氮自發或視 凊况在口適鹼（諸如三乙胺或乙酸鈉）存在下與該C-6位置反 98786.doc

(S -34- 1343384 〜形成5，5 -雙環，其係可以合適保護基團（諸如其胺基甲酸 节錯（Cbz))N-保護以生成化合物8。 該閉環作用係不限於以上所顯示之該等基質，但係亦< 應用至如流程4所描述之衍生物。

流程4. a)疊氮還原至胺隨後閉環作用。…胺保護。 流程4中Rx係可選自曱基、三氟甲基、對甲基笨基或存在 於容易得到之烷基磺醯齒之類似殘基，較佳適於二醇之第 一醇上的區域選擇性反應之大體積RX，如Chem. Ber. 1〇1 (1968)，3 802-3 807所描述<»111’及1^’為所定義之1^丨及&2。巧 可為諸如胺基甲酸酯（如胺基甲酸苄酯）之合適保護基團或 通常不被酸分解之任何類似保護基團。 該閉壤反應之進一步基質可為流程5所描述之化合 98786.doc -35- 1343384

流程5. a)疊氮還原至胺隨後閉環作用。b)胺保護（可選p 流程5中RX係可選自甲基、三氣甲基 '對甲基苯基或存在 於容易得到之烷基磺醯氣之類似殘基，較佳適於二醇之第 一醇上的區域選擇性反應之大體積Rx，如Chem Ber. 101 (1968)，3 802-3 807所描述。R1’及R2’為所定義之RjR2。Ry

可為氫或羥基保護性基團’較佳為醚型保護性基團^ Ry較 佳為氫。PG可為諸如胺基曱酸酯之合適Ν·保護基團或通常 不被酸分解之任何類似保護基團，對於流程5中的衍生物， Ry通常為氫。 獲得5,5-雙環之其它方法係藉由G Lin及z. Shi，

Tetrahedron，53, 4，1369-1382, 1997所揭示。 流程1所得到之5,5_雙環化合物之進一步修飾係略述於流 程6中。 98786.doc -36· 1343384

BnO h ◊ e 丨 ^ ^OAc ^°11 V/OAc 〇 12

流程 6. a)苄溴、氫化鈉、DMF。b)BF3.Et20、Et3SiH、DCM。 c)H2、Pd/C、B0C2O、1:1 EtOAc-EtOH。d)0比咬、乙酸針。 e)H2 ' Pd/C ' EtOAc 化合物9係以合適酸穩定保護基團保護，諸如經取代之甲 基醚、尤其苄基醚，此係藉由在所要之烷基化試劑（諸如苄 鹵、尤其苄溴）存在下於非質子溶劑（諸如N，N_二甲基甲醯胺 (DMF))中以驗（諸如氫化鈉或氫氧化納）處理該單醇9。然後 根據 G. J. Ewing及 M. J. Robins，〇rg. Lett. 1, 4，1999,

635-636或彼處之參考所描述之方法將所得到之物質還原 至化合物1 0。該還原較佳係在諸如三烷基矽烷之還原劑存 在下以過量醚合三氟化硼、尤其在諸如二氣甲烷之合適無 質子溶劑中以過量三乙基矽烷執行。化合物1〇之催化氫化 使用例如披鈀木炭，於氫氣氛中在合適溶劑或溶劑混合物 (諸如乙酸乙酯-乙醇）中，二碳酸二_第三丁酯存在下，隨後 在吡啶中以乙酸酐處理該產物，得到中間體u。藉由如以 上所描述之重複催化氫化，得到單醇12。 可將氟引入化合物12，且然後根據流程7將該雙環化合物 98786.doc •37· 1343384 N-去保護。

流程7. a)Deoxo-Fluor®、二氣甲烷。b)甲醇之曱氧化鈉。 c) 1:1二氣甲烷-三氟乙酸。 化合物13係可以氟化劑（諸如[三氟化雙_(2_甲氧基乙基） 胺基硫](Deoxo-Fluor®))或類似氟化劑（諸如三氟化二乙胺 基硫（DAST))處理，其生成產物丨4，c_5組態反轉。然後藉 由（例如）以甲醇之甲氧化鈉或任何類似鹼溶液、以諸如氫氧 化鈉或碳酸鈉之無機鹼處理將化合物14去乙醯化，隨後使 用諸如一氣甲烷_三氟乙酸溶液之酸性條件或其它方法（其 係可見於 Protective Groups in Organic Chemistry，第三版， 1999，Theodora W. Greene及 Peter G. M. Wuts (Wiley &

Sons))將其N-去保護。 或者及差向異構之氟係可藉由根據流程8處理以上之衍 生物9來得到。 98786.doc -38- 1343384

程8. a)偶氮二羧酸二異丙酯、苯甲酸、PPh3、THF。 b)

甲醇之甲氧化納。c)节漠、氫化鈉、DMF。d)BF3.Et2〇、 Et3SiH、二氣甲烷。e)H2、Pd/C、Boc20、1:1 EtOAc-EtOH。 f)吡啶、乙酸酐。g)H2、Pd/C、EtOAc。h)Deoxo-Fluor®、 二氣甲烷。i)甲醇之甲氧化鈉。j) 1:1二氣甲烷-三氟乙酸。 C-5組態之反轉係可藉由在Mitsunobo條件下處理化合物 16來完成，其生成笨甲酸酯。以甲醇之曱氧化鈉來酯水解、 然後以苄溴處理該單醇，提供苄基保護之差向異構體17。 流程8中反應步驟d-j係如流程6及7所描述。 至”二氟衍生物"（其中R1及R2為氟）之另一路線係顯示於 流程9。 98786.doc •39· 1343384

BnO. OH

f，g

BocHN A〇B"

O

26

j，k

i,n

流程9. a)苄溴、氫化鈉、DMF。b)Et3SiH、BF3.Et20或三 氟甲磺酸三曱基甲矽烷酯、DCM。c)H2、Pd/C、Boc2〇、 EtOAc-EtOH。d)苯甲醯氣、吡啶、DCM。e)H2、Pd/C、EtOAc。 f)Bu2SnO、甲苯、回流°g)苄漠、氟化铯、DMF°h)Dess-Martin 高蛾烧。i)Deoxo-Fluor®或三氟化二乙胺基硫、DCM。】）甲 醇之曱氧化鈉。k)H2、Pd/C、EtOAc。1)對曱笨磺醯氣、吡 98786.doc -40- 1343384 咬、DCM.m)DCM'三氟乙酸。n)三乙胺、二氣甲院。 州基本組份之合成係可起始於化合物21(3_疊氮基_3_ 去氧-1，2·〇-亞異丙基-D_別咳喃酸），其係藉由_

Reckendorf，Chem. Ber. 101 (1968)，3802 3807 所描述。於非 質子極性溶劑（諸如N’N_二甲基甲酿胺）中㈣（諸如氮化納 或氫氧化鋼）存在下以爷基化試劑（如节漠或节氣）處理化合 物2卜生成衍生物22。然後在非質子溶劑（諸如二氣甲烧）

中以二烧基石夕炫（諸如三乙基石夕院）、以過量路易斯酸（諸如 越合三氟化蝴或三氟甲續酸三子基甲彻)處理化合物 22。 然後在碳酸二第三丁醋存在下藉由使用例如披把木炭 催化氫化來選擇性還原該所得之疊氮化物，得到化合物

23。 或者可以其它由文獻已知之方法（諸如三苯基麟水）還 原該疊氮化物，然後保護’生成合適之胺基甲酸酯。為避 免以下步驟之區域選擇性問題，可在純有⑽（諸如吼咬或 三乙胺）或非質子溶劑（諸如二氣曱烷）及鹼之混合物中、以 諸如醯基氣之醯化劑或酸酐（諸如笨甲醯氣）處理化合物 23，生成化合物24。如以上所描述將化合物24催化氫化， 生成二醇25。於化合物25之第一醇之選擇性苄基化係可藉 由若干由文獻已知之方法來完成。在流程9中，在諸如甲笨 之合適溶劑中以氧化二丁基錫回流該二醇，形成錫縮醛。 然後可在DMF中將該錫縮醛與稍過量之苄溴及氟化铯反 應，生成所要之化合物26。在二氣T烷中以諸如Dess-Martin 高碘烷之合適氧化劑氧化26，將該第二醇轉化至酮化合物 27，其適於轉化至二氟化物28。此係可藉由在非質子溶劑 98786.doc 1343384 (諸如二氣甲烷或1,2-二氣乙烷）中以過量氟化劑（諸如

Deoxo- Fluor®)或三氟化二乙胺基硫（DAST)處理化合物27 來完成。化合物28之笨曱酸酯係可以鹼（諸如甲醇之甲氧化 鈉）分解’然後使用催化氫化去苄基，得到二醇29。於第一 醇選擇性引入磺酸酯係可如下完成：在合適溶劑（諸如二氣 甲烷）中於鹼（諸如吡啶）存在下以稍過量之烷基·或芳基磺 酿氣處理該化合物29 ’在降低溫度下添加該磺醯化劑且緩 忮升尚至室溫，其生成單醇3〇。於酸性條件下（諸如二氣甲 烷-二氟乙酸之混合物）處理化合物3〇釋放胺，且以鹼（諸如 三乙胺）處理該產物促進内部閉環作用，其生成基本組份 31。 至5,5-雙環之替代性路線係顯示於流程⑺及丨丨中。

Pg 34 流程10. a)氟化劑。 保護。c)還原劑。

b)胺還原或N-去保護，視情況隨後N_ 在流程Η)中，諸如化合物32(如以上所描述或以此項技術 中眾所熟知之方法可得到）之衍生物（c_3及a之取代基為 頃式關係、Lg為諸如i素或續酸酿之離去基μ等同於疊氮 98786.doc

-42- 1343384 或以合適N -保護基團保護之氮）係可以如以上所提及之氟 化劑處理’產生化合物3 3。以還原該疊氤或藉由合適去保 護方法釋放該屏蔽之胺後，該胺可對C-6進行分子内進攻， 產生具有結構34之5,5-雙環，其係可視情況N-保護（pg=保 邊基團或氬）。以諸如以上所描述之還原劑或類似還原劑還 原C-1 ’將生成基本組份35。 在流程11中描述至二氟-5,5-雙環之替代性路線。

流程11 · a)氧化。b)氟化劑。c)疊氮還原或N-去保護，視 情況隨後N-保護。d)還原劑。 在流程11中，化合物36(如以上所描述或以此項技術中眾 所熟知之方法可得到）（C-3及C-4取代基為順式關係、Lg為 諸如il素或磺酸酯之離去基且r等同於疊氮或以合適N保 護基團保護之氮）係可以Swern型反應或其它合適方法氧 化，其可生成化合物37。以過量之如以上所提及之氟化劑 處理根據流程11之化合物37，生成化合物38。以還原該疊 氮或藉由合適去保護方法釋放該屏蔽之胺後，該胺可對c_6 進行分子内進攻，產生含結構39之5,5_雙環，其係可視情況 98786.doc

-43- 1343384 N-保護（Pg=保護基團或氫）。以諸如以上所描述之還原劑 或類似還原劑還原C-1，生成基本組份40。 至其中R1或R2為鹵素（諸如氣）之化合物之便利路線係描 述於流程12中。

流程12

a)亞硫醯氣。b)甲醇之甲氧化鈉。c)i:i二氣甲烷·三氟乙 酸。d)亞項醯氣、吡啶。 然後藉由習知溶液或固相反應以該自然或非自然p2胺基 酸及該P3基團延長該！>丨基本組份，諸如彼等以下所略述或 例示者，或WOOO/69855或W002/057270所揭示者。p2及p3 基團係作為對掌異構物市售或係可由外消旋物解析或係使 用熟習此項技術者所已知之簡單化學轉換得到。例如，4_(曱 基·六氫吡嗪-1-基）_笨甲酸係可使用Buchwald化學（s. L.

Buchwald & J. p. Wolfe，Journal of Organic Chemistry，2000, 65, 1 144)得到且隨後精製。其它P3核心（諸如4_(1_六氫„比啶 98786.doc -44· 1343384 -4-基）-笨甲酸）係使用弗裏得-誇夫特（Friedei_Crafts)醯化 反應由1-(4-苯基-六氫吡啶-丨·基）·乙酮製備，且隨後使用熟 習此項技術者所已知之標準化學轉換精製。或者，其它P3 部分（諸如5-[2-(4-嗎啉基）乙氧基]·2·苯幷呋喃-2-羧酸）係使 用固相 Mitsunobu反應製備，如 l. S. Richter & T. R. Gadek 於 Tetrahedron Lett” 1994, 35, 4705 所詳細描述。

流程13,環酮之典型延長 胺基甲酸酯化合物（意即E為_OC( = 〇)_)係可（例如）藉由& 醇與P2胺基酸之異氰酸酯反應來形成。該異氰酸酯或等價 反應性中間物係可藉由P2-胺基酸之胺基與光氣或碳酸二 硝基笨酯在合適鹼（舉例而言三乙胺）存在下反應來形成。或 98786.doc -45- 1343384 者其係可藉由P2胺基酸之胺基與合 而言 喝虱甲酸酯（舉例 氣甲酸苄酯）反應來形成。 石黃酿胺衍生物（意即E = S( = 0)2-)係可 ”节J错由p2胺基酸之胺 基與合適磺醯氯於溶劑（諸如二氣甲烷）中在合適鹼（諸如三 乙胺或二甲胺基°比咬）存在下反應來製備。 硫醯胺衍生物（意即E = NRaS(=0)2-)係可如下來製備人

適Re胺於硫醯氣溶劑中反應，隨後該形成之胺續酿氣衍生 物與該以上所提及之I胺基酸之胺基於溶劑（諸如二氣甲 烷）中在合適鹼（諸如三乙胺）存在下反應。 或者該P1基本組份如該羥基係可延長且隨後氧化，如济 程14及實例中所顯示。 98786.doc 46- 1343384

R

Η ο R2 1. DCM^TA或其它保護 2 .臨胺偶合 3. 去保護 4. 醯胺偶合

R2

〇

流程14 ’經基化p 1基本組份之典型延長 本文所使用之術語"N-保護基團，，或"N_保護”意謂彼等用 以保護胺基酸或肽之N-端或保護胺基防止合成程序期間不 需要之反應的基團。一般使用之N-保護基團係揭示於 Greene > "Protective Groups in Organic Synthesis"(J〇hr Wiley & Sons，New York，1981) ’其係以引用之方式併入本 文。N-保護基團包括醯基，諸如甲酿基 '乙醯基、丙酿基、 特戊醯基、第三丁基乙醯基、2-氣乙醯基、2-溴乙醯基、三 98786.doc -47- 1343384 氟乙醯基、三氣乙醯基、酞醯基、鄰硝基笨氧基乙醯基、 氣丁醯基、苯甲醯基、4-氣苯甲醯基、4_溴苯曱醯基、4_ 硝基苯曱醯基及類似基團；磺醯基，諸如苯磺醯基、對曱 笨磺醯基及類似基團，胺基甲酸酯形成基團，諸如苄氧基 羰基、對氣苄氧基羰基、對曱氧基节氧基羰基、對硝基苄 氧基羰基、2-硝基苄氧基羰基、對溴苄氧基羰基、3,4-二甲 氧基苄氧基羰基、4-曱氧基苄氧基羰基、2_硝基_4,5_二甲 氧基苄氧基羰基、3,4,5-三甲氧基苄氧基羰基、丨_(對聯笨 基）-1-曱基乙氧基羰基、α，α·二甲基-3,5-二甲氧基苄氧基羰 基、二苯甲氧基幾基、第三丁氧基_羰基 '二異丙基甲氧基 羰基、異丙氧基羰基、乙氧基羰基、曱氧基羰基、烯丙氧 基Ik基、2,2,2 -二乳乙基乳基幾基、苯氧基幾基、硝基笨 氧基羰基、苐基-9-曱氧基羰基、環戊氧基羰基、金剛烷氧 基羰基、環己氧基羰基、苯基硫代羰基及類似基團；烷基， 諸如节基、三苯基甲基、苄氧基甲基及類似基團；及甲石夕 烧基’諸如三甲基曱石夕烧基及類似物。受青睞之N·保護笑 團包括曱醯基、乙醯基、苯甲醯基、特戊醯基、第三丁基 乙醯基、苯磺醯基、苄基、第三丁氧基·羰基（B〇C)及苄氧 基羰基（Cbz)。 經基及/或羧基保護基團係亦於如上Greene中廣泛評 論，且包括醚’諸如甲基醚，經取代甲基醚，諸如甲氧基 甲基、甲硫基甲基、苄氧基甲基、第三丁氧基甲基、2_甲 氧基乙氧基甲基及類似基團，曱矽烷基醚，諸如三甲基甲 石夕烧基（TMS)、第三丁基二甲基甲矽烷基（Tbdms)、三节基 98786.doc •48· 1343384

曱矽烷基、三苯基曱矽烷基、第三丁基二苯基甲矽烷基、 三異丙基甲矽烷基及類似基團，經取代乙基醚，諸如1-乙 氧基甲基、1-甲基-1-甲氧基乙基、第三丁基、烯丙基、苄 基、對曱氧基苄基、二笨基甲基、三苯基甲基及類似基團， 芳烷基’諸如三笨甲基及pixyl(9-羥基-9-苯基I»山P星衍生物， 尤其氣化物）。酯經基保護基團包括酯，諸如甲酸酯、甲酸 苄酯、氯代乙酸酯、乙酸甲氧酯、乙酸苯氧酯、特戊酸酯、 金剛烷酸酯、菜酸酯、苯曱酸酯及類似物^碳酸酯羥基保 護基團包括甲基乙烯基、烯丙基、桂皮基、苄基及類似物。 【實施方式】 現將以舉例說明之方式僅參考下列實例描述本發明之各 種貫施例。 實例1 P1基本組份之構造 步驟a)

Cbz-Cl, Pyr, DMAP DCM 98786.doc .49 1343384 在輕微正壓下將54( 5.2 g，13.0 mmol)、披把木炭（1〇%， Acros，0.66 g)於甲醇中氫化。經1小時之時期將氮改變3 次，TLC(石油醚-乙酸乙酯7:3及二氣曱烷-甲醇9:1，以海酸 銨-硫酸铈染色）指示該起始物質完全轉換至主要非uv活性 斑點’其使A M C及某些較弱較南移動斑點（二氣曱烧_甲醇 9:1)變色。然後經由矽藻土過濾該反應混合物且濃縮，其生 成粗產物55 ^ 向0°C下的該殘餘物於二氣甲烷（60 ml)及吡咬（3.2 ml，40 mmol)之懸浮液中添加氣甲酸苄酯（0.93 ml，6.5 mmol)。室 溫下搜拌該反應混合物2小時，其後於〇 下添加額外吼咬 (3 ml)及氣甲酸苄酯（0.8 ml)。然後室溫下攪拌該反應混合 物隔夜，然後以二氣甲炫>(100 ml)稀釋，依次以1 μ硫酸水 溶液（2x50 ml)及1 Μ碳酸氫鈉水溶液（1x50 ml)洗滌，然後 乾燥（硫酸鈉），過濾且濃縮至矽石上。於石油醚中使用乙酸 乙酯 1:4(350 ml)、2:3(250 ml)、1:1(250 ml)、3:2(250 ml) 及3:1 (150 ml)急驟層析（直徑：4 cm，YMC-凝膠：50 g，填 充溶離劑：乙酸乙酯於石油驗中1 :4)該殘餘物，真空中乾燥 隔仪後生成泡沐狀糖漿之化合物5 6 (2.7 1 g，8.1 m m ο 1，兩 步後62%)。 NMR 資料（400 MHz，CDC13): *H，1.33, 1.52 (2 s，6H， C(CH3)2), 2.34 (2 d, 1H, -〇H), 3.04 (m, 1H, H-6a), 3.97 (m, 1H, H-6b), 4.19 (m, 1H, H-5), 4.33 (m, 1H, H-3), 4.68, 4.84 (2 d, 1H, H-2), 4.79 (t, 1H, H-4), 5.08-5.24 (m, 2H, CH2Ph), 5.86 (br s, 1H, H-l), 7.30-7.42 (m, 5H, Ar-H) 〇 98786.doc -50- ㈤ 1343384

在5分鐘内向氬化鈉（60%，礦物油中，Aldrich，0.34 g， 8.4 mmol)及化合物56(2.17 g，6.47 mmol)於二甲基甲醯胺

(30 ml)中之攪拌懸浮液中添加苄溴（〇 81 mm〇i，6.8 mmol)。授拌1小時後（tlc :乙酸乙酯於石油醚2:3)，添加 甲醇（大約2 ml)以破壞過量試劑，然後立即在乙酸乙酯（1 8〇 ml)及水（150 ml)之間分溶。將有機層以水洗滌（3χ1〇〇 ml)， 然後乾燥（硫酸納），過遽且濃縮至石夕石上。使用乙酸乙醋於 石油醚 1··4(1〇〇 ml)、3:7(250 ml)及 2··3(250 ml)急驟層析（直 徑：4 cm，YMC-凝膠：40 g ’填充溶離劑：乙酸乙酯於石 油趟1:4)該殘餘物，真空中乾燥隔夜後生成無色糖聚（27 g，6.35 mmol，98%)。

NMR 資料（400 MHz，CDC13): *Η，1.31 (s，3H，C(Ch3) (CH3)), 1.51 (d, 3H, C(CH3)(CH3)), 3.29 (m, 1H, H-6a), 3.78-3.96 (m，2H, H-5及 H-6b), 4.22 (dd, 1H, H-3), 4.64 4-84 (2 M，4H，H-2, H-4及 CH2Ph)，5.07-5.22 (m，ih，CH2ph)， 5.94 (m，1H，H-l)，7.28-7.39 (m，10H，Ar-H)。 步驟c) 98786.doc di 1343384

BnQ

Et^SiH, BF^xEtoO DCM, 24 h, rt 6〇% (X0、58

向於〇C之化合物7(2.635 g，6.19 mmol)於二氣甲烧（28 ml) 及三乙基石夕院（9.9 ml，61.9 mmol)之攪拌溶液一次添加醚合 三氟化硼（7.9 nU’ 61.9 mmol)。然後在室溫下攪拌該反應混 合物24小時（TLC :石油趟-乙酸乙酯4:1及乙酸乙酷-甲笨 3:2) ’然後小心添加1 μ碳酸氫鈉水溶液（40 ml)及一些固體 碳酸氫鈉直至停止起泡。在二氣甲烷（100 ml)及水（1〇〇 ml) 之間分 >谷5玄所传之混合物。將有機層以1 Μ碳酸氮納水溶液 (1Μ00 ml)及鹽水（lxioo mi)洗滌，然後乾燥（硫酸鈉），過 濾且濃縮至矽石上。使用乙酸乙酯於甲苯3:2(750 ml)急驟 層析（直徑：4 cm，YMC-凝膠：48 g，填充溶離劑：乙酸乙

酯-甲苯3:2)該殘餘物，生成根據TLC約85-90%純度之無色 硬糖漿（1.38 g，3.74 mmol，60%)。LR-MS : C21H24N05計 算值 370.2。實驗值：370.0 [M+H]。 步驟d)

BnCl a) H?, Pd7C> Boc20 V<〇n) b) Pyr/Ac20 , >L〇 人〇 60 80% 於輕微過壓下將化合物58(1.38 g，3.74 mmol)、披鈀木炭 (Acros，10%，0,12 g)及二碳酸二第三丁酯（0.82 g，3.7 mmol) 98786.doc -52- 1343384

於乙酸乙酯（50 ml)之混合物氫化。經1小時之時期將氫改變 2次且藉由LC-MS監視該反應。1小時後，添加額外之披纪 木炭（〇.. 1 g)且以氫氣處理該反應混合物再1小時。然後經由 矽藻土過濾該反應混合物且濃縮。以2:1吡啶-乙酸酐（18 ml) 處理該殘餘物隔夜’且然後濃縮。將該殘餘物再溶解於二 氣甲烷（60 ml)且依次以1 Μ硫酸水（2x40 ml)及1 Μ碳酸氫鈉 水溶液（1x40 ml)洗滌，且然後乾燥（硫酸鈉），過濾且濃縮。 使用乙酸乙酯於甲苯h4(200 ml)及1:3(150 ml)中急驟層析 (直徑：3 cm，YMC-凝膠：20 g，填充溶離劑：乙酸乙酯於 甲苯1:4)該殘餘物（溶解於甲苯-乙酸乙酯4:1)，真空中乾燥 隔夜後生成無色糖漿（1.13 g，3.0 mmol，80%)。

NMR資料（400 MHz，CDC13): iH, 1.45 (s，9H，C(CH3)3)， 2.08 (s, 3H, COCH3), 3.10 (m, 1H, H-6a), 3.74-3.99 (m, 3H, H-la，H-5及 H-6b), 4.11 (m，1H，H-lb)，4.16-4.74 (m，4H H-3 H-4及 CH2Ph)，5.31 (m，1H，H-2)，7.28-7.40 (m, 5H，Ar-H)。 步驟e)

在輕微過壓下將化合物60(1.08 g，2·86 mmol)及彼鈀木炭 (1 〇0/。’ 0.15 g)於乙酸乙酯（30 ml)中之混合物氫化2小時 (TLC :甲苯-乙酸乙酯4:1及1:1)’然後經由石夕藻土過遽且漢 縮。將該混合物自二氣甲烷（3xlO ml)濃縮，然後溶解於二 98786.doc -53· 1343384 氣甲炫’且在o°c下向該溶液添加 胺基硫（50%、於 THF，2.12 ml， 夜後，添加額外之三氣化雙·（2_甲氧基乙基）胺基硫（5〇%、 於THF，2 ml)，且將該反應混合物在室溫下攪拌再一夜 (TLC:甲苯-乙酸乙醋1:1，節三_染色），且小心添加i m 碳酸氫鈉水溶液直至停止起泡。以二氣曱烷（5〇 稀釋該

所知之混合物，且以1 Μ碳酸氫鈉水溶液（40 ml)洗滌有機層 一次，然後乾燥（硫酸鈉），過濾且濃縮。使用甲苯_乙酸乙 酯4:1急驟層析（直徑：3 cm，矽石：乃g，填充溶離劑：曱 笨-乙酸乙酯4:1該殘餘物（溶解於甲苯-乙酸乙酯4:1)，真空 中乾燥隔夜後生成無色糖漿之化合物62(〇 49 g，丨7 mm〇1， 59%)。自該反應混合物可回收某些起始物質及硫中間物。 LR-MS : C9H13FN05 計算值：234.卜實驗值：234.0 [M+2H- 第三丁基]。 實例2

三氟化雙-(2-f氧基乙基） 2當量）。在室溫下攪拌隔 以典型P2延長

步驟a)P

e) NaOMe > f) DCM-TFA 88%

向化合物62(0.49 g，1.7 mmol)於甲醇（9.5 ml)之溶液添加 0.5 Μ甲醇之甲氧化鈉（1 ml)，然後在室溫下攪拌30分鐘 (TLC :甲苯-乙酸乙酯3 :2，茚三酮染色）。小心添加甲醇洗 98786.doc •54· 1343384 滌之Dowex W X 8(50-1 00目，H + -形式）（藉由pH試紙監視pH) 直至中性’然後過滤該混合物且漢縮。將殘餘物溶解於二 氣甲烷，且在o°c下添加三氟乙酸。然後將該反應混合物在 室溫下攪拌55分鐘（TLC:二氣甲烷-甲醇9:卜節三酮染色）， 然後濃縮。使用甲醇於二氣曱烷5:95(1 50 ml)、7:93(100 ml) 及1:9(200 ml)管柱層析（直徑：2 cm，石夕石：15 g，填充溶 離劑：二氣甲烷-曱醇95:5)該殘餘物（溶劑於二氣甲院_曱醇 95:5)，生成硬糖漿，其靜置後結晶（〇 39 g，丨5〇 mm〇1， 88%) » NMR資料（400 MHz, DMSO-d6):】H，3.34, 3_44 (2 dd，1H， H-6a)，3·60-3_70 (m，2H，H-la及 H-6b)，3,89 (dd，1H，H-lb)， 4.15 (d, 1H, H-3), 4.51 (br s, 1H, H-2), 4.76 (dd, 1H, H-4), 5.26 (dd, Jh,f=48.3 Hz，H-5) o 步驟b)

向化合物 64(0.34 g ’ 1.30 mmol)、N-乙基-N，-(3-二甲基胺 基丙基）碳化二醯亞胺鹽酸鹽（0·28 g，！ 43 mm〇〇、丨_羥基 苯幷***水合物（〇·22 g)及N-(第三丁氧基羰基）_L_白胺酸 單水合物（0.34 g，1.37 mmol)於DMF(l〇 ml)之攪拌溶液添 加三乙胺（0.54 m卜3.9 mmol)，然後在室溫下攪拌24小時。 將該反應混合物於10%檸檬酸水溶液（3〇 ml)及乙酸乙酯（1〇 98786.doc -55- 1343384 ml)之間分溶。以乙酸乙酷（3M0mi)萃取水層，然後組合有 機層，且依次以水（1x20 ml)及1 Μ碳酸氫鈉水溶液（3x2〇 ml) 洗滌，然後乾燥（硫酸鈉），過濾且濃縮至矽石上。以於石油 醚中之乙酸乙酯（40-60%，逐步梯度溶離）急驟層析該殘餘 物’生成無色非晶固體之15(0.35 2,〇_98„1111()丨，75%)。 LR-MS . C13H22FN2O5 计算值：305.1。實驗值：305.1 [M+2H-第三丁基]。 實例3

以典型P3延長

在0C下向化合物65(0.11 g’ 0.31 mmol)於二氣甲烧（2 ml)

中之溶液添加三氟乙酸（2 ml) ’然後在室溫下攪拌45分鐘。 然後濃縮該反應混合物，且以甲笨共濃縮。向該殘餘物、 N-乙基-N'-(3-二甲基胺基丙基）碳化二酿亞胺鹽酸鹽（〇 〇64 g，0.34 mmol)、1-羥基笨幷***水合物（0 05 1 g)及笨幷[b] 呋喃-2-羧酸（0.052 g ’ 0.32 mmol)於DMF(3 ml)之懸浮液添 加三乙胺（0.1 3 ml ’ 0.9 mmol)，然後在室溫下攪拌24小時。 然後濃縮該反應混合物。將該殘餘物在1 0%檸檬酸水溶液 (30 ml)及乙酸乙酯（10 ml)之間分溶。以乙酸乙酯（2xl〇 ml) 萃取水層’然後組合有機層’且依次以水（丨x 1 〇 ml)及1 M 碳酸氫納水溶液（3 X 1 〇 ml)洗蘇，然後乾燥（硫酸鈉），過遽 98786.doc • 56- 1343384 且濃縮至石夕石上。以於石油喊中之乙酸乙酯（50-60%，逐步 梯度溶離）急驟層析該殘餘物，生成無色玻璃狀固體之 66(0.11 g » 0.27 mmol > 89%) 〇 LR-MS : C2iH26FN205計算值：405.2。實驗值：405.1。 [M + H]。 實例4 P1酮之氧化

室溫下向化合物66(0.10 g，0.25 mm〇1)於二氣甲烷（4ml) 之攪拌溶液添加Dess-Martin高碘烷（012 g，0.28 mm〇丨）〇 攪拌90分鐘後，將該反應混合物以二氣甲烷（1〇出丨）溶離， 以1:

石反鲛氫鈉水浴液-1 0%硫代硫酸鈉水（4 χ 1 〇 洗 滌，然後乾燥（硫酸鈉），過濾且濃縮至矽石上。以於石油醚 之乙酸乙酯(50-60。/。’逐步梯度溶離)急驟層析該殘餘物， 生成無色泡沐之67(0.072 g，〇,18 _〇卜71%)。獲得幾何 異構體(旋轉異構體)及其水合物之混合物的化合物… LR-ms:C2,H24FN2〇5計算值：4〇32。實驗值：4〇3〇 [_]。67之_型之職樣品係如下獲得：將5叫化合物 67(幾何異構體及水合物形式比例為水合物峨4之混合物) 冷解於DMSQ-d6，然後在麵裝置中加熱高達刚。c且然後 98786.doc -57· 1343384 使其達到5〇t：，於是NMR指示僅痕量水合物形式且旋轉異 構體之比例為2:1。 NMR資料（5〇〇 MHz，DMS0-d6, 50。〇:巾，0.90-1.04 (m， 4XCH3，主要及次要形式），1.39-1.82 (m，2xCH2CH(CH3)2 及 2><(^2(：?1(<：^13)2，主要及次要形式），3 56 (〇1，士6&，次要）， 3.82 (m，H-6A，主要），3.97-4.25 (m，4xH-l，主要及次要形 式及 H-6b，次要），4.37 (dd，H-6b，主要），4.62 (d，H-3，次 要），4.79 (m，H，主要），4.84 (d，H-3，主要），4,94 (m，H-4, 主要），5.12 (m，H-4,次要），5.15-5.34 (m，H-5 主要及 H-5次 要 ’ Η次要，JH F " = 49.1 Hz，JH，F * #=49.4 Hz)，7.35 (t，1H，

Ar-H), 7.47 (t, 1H, Ar-H), 7.57-7.70 (m, 2H, Ar-H), 7.78 (d, lH，Ar-H)，8.18(d，-NH，次要），8.70 (d，-NH，主要）。 實例S 替代性P3 步驟a)

在〇°C向化合物55(0.11 g，0.32 mmol)於二氣甲烷（2 mi) 之溶液添加三氟乙酸（2 ml)。在室溫下搜拌45分鐘後（Tlc : 石油趟-乙酸乙g旨1:1及乙酸乙自旨-甲醇·乙酸·水40.3:3.2)，將 該反應混合物濃縮且自甲苯（3x5 ml)共濃縮。向該殘餘物、 4-(一 甲基胺基）苯曱随（0.055 g’ 0.33 mmol)、N-乙基-N'-(3- 98786.doc ·58· 一甲基胺基丙基）碳化二醯亞胺鹽酸鹽（〇 〇67 g , 〇 35 mm〇1) 及h蛵基苯幷***水合物（0·053 g)於DMF(3 ml)之懸浮液添 加二乙胺（0.13 ml，0.95 mmol)，然後在室溫下濃縮隔夜 (TLC :石油醚-乙酸乙酯2:3及乙酸乙酯-甲醇-乙酸水 4〇·3·3:2)'然後將該反應混合物濃縮，在8% κη2Ρ04水（30 ml)及乙醆乙酯（1〇 ml)之間分溶。以乙酸乙酯（3xl〇 ml)萃取 水層’且以水（1x10 „1丨）及1 M碳酸氫鈉水溶液（3χ1〇 ml)洗 務混合有機層，然後乾燥（硫酸鈉），過濾且濃縮。將該殘餘 物再溶解於二氣曱烷且濃縮至矽石上。急驟層析（直徑：2 cm ’石夕石：8 g，填充溶離劑：石油醚-乙酸乙酯丨：丨）該殘餘 物（逐步梯度溶離，乙酸乙酯於石油醚中5〇_1〇〇0/〇)，生成無 色泡床（0· 1 〇 g，0.25 mmol，80%)。 LR-MS : C21H31FN304 計算值：408.2。實驗值： 408.1[M + H]。 步驟b)

在室溫下向單醇68(0.096 g，0.24 mol)於二氣甲烧之搜拌 溶液添加Dess-Martin高碘烷（〇_ii g，0.26 mmol)。該反應 混合物變紅且攪拌大約3 5分鐘後（TLC :石油醚-乙酸乙酯 2:3)，將該反應混合物以二氣曱烷（1〇 ml)稀釋，以1:1 1 Μ 碳酸氫鈉水溶液-10°/。硫代硫酸鈉（4x10 ml)洗滌，然後乾燥 98786.doc •59- (硫酸鈉）’過濾且濃縮至矽石上。急驟層析（直徑：2 cm， 石夕石.7 g，填充溶離劑：石油醚-乙酸乙酯丨：丨）該殘餘物（逐 步梯度溶離’乙酸乙酯於石油醚中5〇-1〇〇%),生成無色泡 沐(0.039 g，〇、i〇 mmo卜 41%)。 LR-MS ·· C21H27FN304 計算值：404.2。實驗值·· 404.1 [M-H] 〇 實例6 替代性P3 步驟a)

在0°C向化合物55(0.12 g，0.32 mmol)於二氣甲烧（2 ml) 中之溶液添加三氟乙酸（2 ml)，然後在室溫下攪拌45分鐘。 然後將該反應混合物濃縮且以甲苯（3x5 ml)共濃縮。向該殘 餘物、N-乙基-N'-(3-二甲基胺基丙基）碳化二醯亞胺鹽酸鹽 (0.068 g，0.36 mmol)、1-羥基苯幷***水合物（0.055 g)及 4-苯氧基苯甲酸（0.073 g，0.34 mmol)於DMF(3 ml)之懸浮液 添加三乙胺（0.14 ml，0·97 mmol)，然後在室溫下攪拌24小 時。然後濃縮該反應混合物。將該殘餘物在1 0%檸檬酸水 溶液（3 0 ml)及乙酸乙酯（1〇 ml)之間分溶。以乙酸乙酯（2x10 ml)萃取水層，然後混合有機層，且依次以水（1 X 1 〇 mi)及1 Μ 碳酸氫鈉水（3 X 1 〇 ml)洗滌，然後乾燥（硫酸鈉），過濾且濃 98786.doc -60- 1343384 縮至矽石上。以1 ·· 1乙酸乙酯於石油醚急驟層析該殘餘物’ 生成無色硬糖漿（0.14 g，0.30 mmol，91%)。 LH-MS : C25H3qFN205 計算值：457.2。實驗值：457·2 [Μ+Η]。 步驟b)

室溫下向該單醇（〇.128§，0.2 8 111111〇〇於二氯甲烷（4 1111)

之授拌溶液添加Dess-Martin高蛾炫（0.12 g，0.28 mmol)。 授拌90分鐘後’將該反應混合物以二氣甲烷（1〇 ^1)稀釋， 以1:1 1 Μ碳酸氫鈉水溶液-ίο%硫代硫酸鈉水（4xl〇 mi)洗 蘇’然後乾燥（硫酸鈉）且濃縮至矽石上。以於石油喊中之乙 酸乙酯（50-60% ’逐步梯度溶離）急驟層析該殘餘物，生、 無色泡沫之 71(0.072 g，0.18 mmol，71%)。 455.1 LR-MS : C21H28FN205 計算值：455.2。實驗值 [M+H]。 實例7 替代性P1差向異構體

98786.doc • 61 - 1343384 步驟a) sM〇4- 〇 人。Λ" 72 室溫下向化合物（60)(1.58 g ’ 4.19 mmol)於甲醇中（2〇 ml) 之攪拌溶液添加0.5 Μ曱氧化鈉於甲醇中（5 ml)之溶液，然 後攪拌40分鐘。然後將該反應混合物以Dowex 5〇 wx 8(H+_ 形式）中和’過遽’添加三乙胺直至微驗性，然後濃縮且自 甲本濃縮（2x20 mL)e在0°C向該殘餘物及味嗤（q,43 g，6,28 mmol)於DMF( 1 0 mL)中之攪拌溶液添加第三丁基二曱基氣 矽烷（0.76 g ’ 5.02 mmol) ’然後在室溫下攪拌隔夜。然後將 該反應混合物以乙酸乙酯（100 mL)稀釋，依次以1 〇%檸檬酸 水溶液（3x50 mL)及1 Μ碳酸氫鈉水溶液（3x50 mL)洗滌，乾 燥（硫酸鈉），過濾且濃縮至矽石上。管柱層析（逐步梯度溶 離，於曱笨之乙酸乙酯，5-20%)該殘餘物，產出糖漿之完 全保護之中間物（1.86 g)。在輕微過壓下將彼把木炭 (Aldrich 10。/。，0.28 g)及該以上所獲得之中間物（1.80 g，4.00 mmol)於乙酸乙酯（40 mL)中的混合物氫化1小時，然後經由 矽藻土過濾且濃縮。該物質真空中乾燥後結晶產出針狀之 72(1.34 g，90%)。

NMR資料（400 MHz，CDC13): 'Η，δ 0.14 (m，6H, Si(CH3)2)， 0-90 (m，9H，SiC(CH3)3)，1·48 (m，9H，C(CH3)3), 2.53 (m，1H， OH), 2.78 (dd, 1H, - Η-6Λ), 3.67-4.05 (m> 3H, H-iA, H-1B 98786.doc •62- 1343384 及 H-6B)，4.05-4.21 (m，2H，H-3及 H-5), 4.35-4.50 (2 brs，1H， H-2)，4.57 (m，1H，H-4)。 步驟b)

O

在〇°C經20分鐘内向（72)(l，〇68 g，2.97 mmol)、苯甲酸 (0.50 g，4‘46 mmol)及三笨基膦（1.17 g，4 46 麵〇1)於 THF(15 mL)巾之麟溶液逐滴添加二異丙基偶氮二敌酸 (0.88 mL，4·46麵〇1)於THF(5 mL)中之溶液。然後將該反 應混合物在室溫下㈣隔夜，然後濃縮至碎石上。使用石 油謎-乙酸乙較丨溶離劑急驟層析該殘餘物，生成&色 (1.34 g，97%)。 .’、 7 ， / ♦ 1 ^m, OH,

Si(CH3)2), 0.90 (s, 9H, SiC(CH3)3)5 1.42^ 56 (m 9H C(C_，3.48 〇n，1H，Η·6Α)，3 7(M 〇i ㈨ 3H H ， H-1B，H-6B次要及主要），4 21，4 ’ ， 1H，H-3)，4.44, 4,56(2brs，lH，H-2)，4.72(m，m ”，5.34 (d，1H H-S、 7.45 (t, 2H, Ar-H), 7.58 (t 1H Ar C . 5

U, 1H, Ar-H), 8.00 (d? 2H 步驟c) ；

H

98786.doc -63 - 74 1343384 在室溫下向（73)0.34 g，2·89 mm〇1)於甲醇（6 mL)中之攪 拌溶液添加〇·5 Μ甲氧化鈉於甲醇中之溶液（6 mL)，然後攪 拌1 5分鐘。然後將泫反應混合物以D〇wex 5〇 8(H+_形式） 中和且過滤。向辕所得之溶液添加類似如以上獲得、起始 於（11)(0.187 g，0.40 mmol)之溶液，然後濃縮。使用甲笨- 乙酸乙酯3:2溶離劑急驟層析該殘餘物，生成無色糖聚之 74 ’其真空中乾燥後結晶（丨.091 g，92%)。 NMR 資料（400 MHz，CDC13): 1H, δ 0.06-0.20 (m，6H，

Si(CH3)2), 0.89 (s, 9H, SiC(CH3)3), 1.42-1.54 (m, 9H, C(CH3)3)，2.03 (brs, 1H, OH), 3.28 (dd, 1H，H-6A) 3.53-3.79 (m，3H，H-1A，H-1B，H-6B)，4.19及 4,34-4.56 (2 m 4H, H-2, H-3, H-4及 H-5)。 步驟d)

在室溫下在塗佈聚四氟乙稀之燒瓶中向（74)(〇428 g， 1·19 mmol)於二氣甲烷（10 mL)之攪拌溶液添加De〇x〇 fluor(5 0%於THF，0.5 3 mL)，導致輕微溫度上升。在室溫 下攪拌該反應混合物72小時，然後以二氣甲烷（2〇 mL)稀 釋’以1 Μ碳酸氫鈉水（2x20 mL)洗滌，乾燥（硫酸鈉），過濾 且濃縮至石夕石上。使用石油醚·乙酸乙酯9:1作為溶離劑急驟 層析該殘餘物，生成無色油之（IV)(0.U8 g，27%)。 98786.doc • 64· 1343384 NMR 資料（400 MHz，CDC13): 1Η，δ 0.08-0.20 (m，6H，

Si(CH3)2)，0.89 (s, 9H, SiC(CH3)3), 1.42-1.53 (m, 9H, C(CH3)3), 3.26^3.36 (2 dd, 1H, H-6A), 3.64 (m, 1H, H-1A), 3.73-4.04 (m, 3H, H-1B, H-6B), 4.20 (dd, 1H, H-3*), 4.40, 4.51 (2 s, 1H, H-2), 4.69 (m, 1H, H-4*) 4.86, 4.98 (2 brs, 1H, H-5)。*不可交換。 步驟e)

向（75)(0.229 g，0.63 mmol)於THF(8 mL)中之攪拌溶液添 加於THF中之1 Μ氟化四丁基銨（0.70 mL)然後在室溫下攪 拌40分鐘。然後將該反應混合物濃縮至矽石上。使用甲苯· 乙酸乙酯1:1作為溶離劑管柱層析該殘餘物，生成無色硬糖 漿之 75(0.150 g，96%)。 NMR 資料（400 MHz, CDCI3): 1H，δ 1.46-1.53 (m 9Η C(CH3)3)，2.70 (d，0.3Η，OH-次要），3.26-3.46 (m, 1.7Η H-6A及 OH-主要），3.75-4.04 (m，3H, H-1A, H-1B及H-6B)， 4_29, 4.34 (2d，1H，H-3* 次要及主要），4_43, 4 5〇 (2 brs，m， H-2 次要及主要），4·74 (m，1H，H-4*)，4.89, 5.02 brs，1H， H-5)。 步驟f) 98786.doc 65· 1343384

在 〇 C 向（75)(0.099 g，0.40 mm〇l)於二氣甲烷中（2 mL)之 溶液添加三氟乙酸（2 mL)，然後在室溫下攪拌35分鐘，然 後濃縮，且自甲苯（3χ5 mL)濃縮。向該殘餘物、丨_羥基笨

幷二0坐水合物（0.067 g，0.44 mmol)、N-乙基 _n'-(3-二甲基 胺基丙基）碳化二醯亞胺xHCl(0.084 g，0.44 mmol)及N-(第 二丁氧基幾基）-L-白胺酸單水合物（〇.i〇5 g，〇 a mm〇i)於 DMF中（4 mL)之懸浮液添加三乙胺（0.17 mL，12 mm〇1)， 然後在室溫下攪拌隔夜。然後將該反應濃縮至一半體積， 以乙酸乙酯（25 mL)稀釋，依次以1〇。/。檸檬酸水溶液（3><15 mL)及1 Μ碳酸氫鈉水（3x15 mL)洗滌，乾燥（硫酸鈉），過淚 且濃縮。使用乙酸乙酯-甲苯3 :2管柱層析該殘餘物，產出無 色硬糖漿之（76)(0.137 g，95%)。

NMR 資料（400 MHz，CDC13，選擇訊號）：1Η，δ ο』、} 〇1 (m，6Η，C(CH)2)，4.98, 5.07 (2 dd，1Η，Η-5主要及Η-5次要）。 LR-MS : C17H30FN2O5計算值：361.2。實驗值：361 1 [M+H]。

步驟g) 在〇°C下向（76)(0.137 g，0.38 mmol)於二氣曱炫中之溶液 98786.doc -66· 添加TFA ’然後室溫下攪拌3 0分鐘，然後濃縮且自甲笨濃縮 (3x5 mL)。向該殘餘物、1-羥基苯幷***水合物（0.064 g， 0.42 mmol)、N-乙基-Ν’-(3·二甲基胺基丙基）碳化二醯亞胺 xHCl(0.080 g，0.42 mmol)及苯幷[b]呋喃-2-羧酸（0.065 g， 0.40 mmol)於DMF(3 mL)中之懸浮液添加三乙胺（0.16 mL， 1.2 mmol) ’然後室溫下攪拌隔夜。然後將該反應濃縮至一 半體積，以乙酸乙酯（25 mL)稀釋，依次以1 〇%檸檬酸水溶 液（3x15 mL)及1 Μ碳酸氫鈉水溶液（3x15 mL)洗滌，乾燥（硫 酸鈉），過濾且濃縮。使用乙酸乙酯-甲苯3:2管柱層析該殘 餘物，產出無色硬糖漿之（77)(0.148 g，96%)。 LR-MS : C2iH26FN205 計算值：405.2。實驗值：405.1 [M+H]。 步驟h)

室溫下向（77)(0.148 g，0.37 mmol)於二氣曱炫之授拌溶 液添加 Dess-Martin 高破烧（0.171 g，0.40 mmol)。搜拌 2 小 時後，將該反應混合物以二氣曱烧（20 mL)稀釋，然後以1:1 1 Μ碳酸氫鈉水溶液/10%硫代硫酸鈉水溶液（3>〇2 mL)洗 蘇’乾燥（硫酸納）’過遽且濃縮。管柱層析該殘餘物（逐步 梯度溶離，於甲苯之乙酸乙酯，40-50%)，產出無色泡沐之 (VIII)(0.105 g，71%)。 NMR 資料（100 MHz, CDC13，選擇訊號）：uc，δ 2〇6 7及 98786.doc • 67· 1343384 206.5(C=0主要及次要）。 LR-MS : C21H24FN205 計算值·· 403.2。實驗值：4〇3 [M+HJ。 實例8 額外組織蛋白酶K抑制劑 下表所指述之化合物8>1 - 8_13 & 8·15 — 82〇係藉由使用 以下略述之固相方法學將該表所逐條列舉的該等Ν保

Ρ2及Ρ3酸成功偶合至實例1之該Η基本組份來合成。化：2 8_14係於如以下所略述之溶液相 ° , 成。不谷易仔自商辈 來源的Ρ2及Ρ3基本組份之構造如下所示。 两業 表1 序號 _ 結構 ' ----~~_ P2 —P3某木組份 MS資料 U r 8.1 A Α〇2〇 301 [M+H]+ U f 8.2 0 A o 353 [M+H]+ ______ 8.3 0 A 0 0〆 353 [M+H]+

98786.doc -68- 1343384

8.4 A Or1- 363 [M+H]+ 8.5 A 383 [M+H]+ 8.6 A 402 [M+H]+ 8.7 A 405 [M十H]+ 8.8 A 416 [M+H]+ 98786.doc -69- ⑧ 1343384

8.9 A rYaX〇H BocN^^J 419 [M+H]+ 8.10 A 420 [M+H]+ 8.11 A d^0H 433 [M+H]+ 8.12 人 χ/ίφ Η A 人 jC^h H 435 [M+H]+ 453 [M+18]+ 8.13 ^0 A 464 [M+H]+ 98786.doc -70- (Di 1343384

8.14 (X。又 ίφ B - 393 [M+H]+ 8.15 yO1料 A 542 [M+H]+ 560 [M+18]+ 8.16 料 ο A °0N 544 [M+H]+ 562 [M+18]+ 8.17 Fp ^ 〇y A 566 [M+H]+ 584 [M+18]+ 8.18 f3c/^ A ^-qV^oh f3c>/^ 598 [M+H]+ 616 [M+18]+ 8.19 、〇〆科 A 、〇V^H 545 [M+H]+ 563 [M+18]+ 98786.doc -71 - 1343384 8.20 、〇〆科 c 'Oiy0^ 556 [M+H]+ 574 [M+18]+ 8.21 A ^〇^OH 588 [M+H]+ 606 [M+18]+ 8.22 A O是 489 [M+18-嗎啉Γ 471 [M+H-嗎琳Γ 8.23 A cr^〇H 472 [M+H]+ 490 [M+18]+ 8.24 〇 。 A ρΛΗ 〇 446 [M+H]+ 464 [M+18]+ 8.25 。〇之。 A O是 560 [M+18]+ 473 [M+H-嗎蛛Γ 98786.doc •72- 1343384

8.26 A ^jO1。 [M+H】+ 470 [M+18]+ 488 8.27 A Kt^h ~N\ s-^ [M+H]+ 517 [M+18]+ 488 8.28 f N」 A N」 [M+H]+ 455 [M+18]+ 473 8.29 /V^X^0 K N\ A \ [M+H]+ 469 [M+18]+ 487 8.30 JlY^X^0 VNx A n^C^H [M+H]+ 469 [M+18]+ 487 8.31 部 A <'^^H [M+H]+ 457 [M+18]+ 475 98786.doc -73- 1343384

8.32 部 \ A \ [M+H]+ 471 [M+18]+ 489 8.33 A 0 (J [M+H】+ 483 [M+18]+ 501 8.34 A H [M 十 H]+ 517 [Μ+18Γ 535 8.35 七〆料 A [M-H]· 529 [M+18]+ 549 8.36 A /C^O^H [M+H]+ 532 [M+18]+ 550 8.37 A [M+H]+ 546 [M+18]+ 564 8.38 Η Ν—"1 A 山〆。H Η N—1 [M+H]+ 504 [M+18]+ 521 98786.doc • 74- 1343384 8.39 A [M+H]+ 445 [M+18]+ 463 8.40 山〆料 H S—J A H S-^ [Μ+ΗΓ 503 [M+18]+ 521 8.41 A [M+H]+ 533 [M+18]+ 551 8.42 料 A [M+H]+ 547 [M+18]+ 565 8.43 场 A [M+H]+ 532 [M+18】+ 550 8.44 ^01场 °0N A o 489 [M+18-嗎淋Γ 471 [M+H-嗎啉Γ 98786.doc - 75 - 1343384

8.45 。〇 A 。〇 560 [M+1S]+ 473 [Μ+Η- 嗎《#]+ 8.46 换 A 、〇1户 [Μ+Η]+ 533 [Μ+18Γ 551 8.47 A [μ+ηΓ 531 [Μ+18]+ 549 8.48 A 〇^ΟΗ [Μ+ΗΓ 529 [Μ+18]+ 547 8.49 0 0 A >^0Η [Μ+ΗΓ 489 [Μ+Ι8Γ 507 8.50 Υ^Λ A [Μ+Η]+ 531 [Μ+18]+ 549 98786.doc -76- 1343384

8.51 Η 0 0 A [M+H]+ 475 [M+18]+ 493 8.52 F WN-fNjT^ 00 A [M+H]+ 565 [M+18]+ 583 8.53 Η Y^SJ^ A r^〇H [M+H]+ 503 [M+18]+ 521 8.54 機 A 一 [M+H]+ 544 [M+18f 562 8.55 A [M+H]+ 503 [M+18]+ 521 8.56 H〇v^ 雜 A ηνΟυν_/^〇η NA 8.57 、〇V^ 换 A 、〇V^H [M+H]* 543 [M+18]+ 561 98786.doc •77- ⑧ 1343384

8.58 H ^捣 0 0 N A (y^〇H NA 8.59 0 0 A [M+H]+ 538 [M+18f 556 8.60 η jo1 揭 A a# [M+H]+ 529 [M+18]+ 547 8.61 H A [M+H]+ 501 [M+18]+ 519 8.62 〇〇 A [M+H]+ 515 [M+18]+ 533 8.63 雜 A S j NA 98786.doc -78 - ⑧ 1343384

8.64 A 、〇〆 [Μ+ΗΓ 538 [Μ+18Γ 556 8.65 A [M+H]+ 525 [M+18]+ 543 8.66 、〇〆雜 0」 A 0 NA 8.67 、〇〆邻 A N J NA P2基本組份 A B c Λ Fmoc、NA^〇n H〇 CBZ^^〇H 0 Fmoc^^^xOH 0

8」-8.13 & 8.15 - 8.67之固相合成通常係使用Murphy's 連接方法學使用如WO02/88106所描述之已知化學進行。

FmocNH雙環之酮官能係衍生作為酸不穩定之縮胺基腺，其 提供緩醆用於使用HBTU、HOBt及NMM連接至胺甲基官能 化之聚合物載體樹脂。移除Fmoc後’該對應之p2 Fm〇c酸 係偶合於㈣對㈣執行之處。偶合係首先進行8小時，且 98786.doc *79- 1343384 然後以新鮮έ式劑重複隔仪。移除F m 〇 c後，使用標準偶合條 件引進該等P3酸。由該樹脂洗滌、乾燥及切除提供粗製的 所想要之物質，其係藉由管柱層析或製備hplc純化。以下 描述需要修改程序之化合物。 111-吲哚-2_叛酸[1-(6-氟-3-氧基_六氩11夫味幷[3,2_5丨*比洛_4-羰基）·3·甲基-丁基卜醯胺（實例8.6) 向樹脂結合之H2N-L-Leu-Pl(150 mg，0.03 mmol)添加。引 0朵-2-羧酸（24.2 mg ’ 0.15 mmol)於 DMF( 1.0 mL)中之溶液。 然後添加1,3 -二異丙基碳化二醯亞胺（19 mg，0.15 mmol)及 1-羥基苯幷三唾水合物（23 mg，0.1 5 mmol)於DMF(1 mL)中 之溶液。將該反應攪動隔夜’且然後以DMF(7xl0 mL)、

MeOH(5xlO mL)及TBME(5xl0 mL)洗滌。真空乾燥17小時 後’藉由懸浮於10 mL之95: 5 TFA:水45分鐘而自該樹脂分 解該產物。然後在N2流中濃縮該濾出液，藉由半製備HPLC 純化’且然後凍乾以生成白色固體之該標題化合物。藉由 HPLC、HNMR及MS表徵化合物，其顯示酮及水合物形式 兩者都存在。 4-六氩吡啶-4-基笨甲酸（實例8.9) 將4 -本基六氫。比咬（ι〇·〇 g，62 mmol)及°比咬（5.74 mL，71 mmol)溶解於DCM(80 mL)且冷卻至〇°C。逐滴添加乙醯氣 (4·00 mL，71 mmol)於DCM(20 mL)之溶液至該以上溶液。 然後在室溫下攪拌該混合物2小時，且當藉由卟比認為結束 時’以水萃取’乾燥且在真空中濃縮以產出淡黃色油（丨〇 6 g ’ 84%) ’其靜置後固化且係不經進一步純化而使用。將該 98786.doc ⑧ -80 - 黃油（10·6 g，52.2 mmol)溶解於DCM且冷卻至-78°C且以乙 二醯氯（18.3 mL，209 mmol)逐滴處理，隨後分部分添加氣 化鋁（20.9 g，157 mmol)。當添加完畢時，將該燒瓶放置於 冰鹽浴，且於-20aC攪拌該混合物3小時，且然後在室溫下 攪拌隔夜。然後將該混合物傾入冰水且以〇CM( 100 mLX 3) 萃取，乾燥且在真空中濃縮。將該殘餘物溶解於氫氧化鈉 水溶液（2N)，且在0°C下添加HC1(6N)以酸化該溶液至pH 5。濾除該沉澱（7.9 g)且以水（200 mL)洗滌*然後將該殘餘 物懸浮於6N HC1且加熱回流1 8小時。蒸發溶劑且自乙醇再 結晶該殘餘物。濾除晶體且提供該標題化合物（5.〇5 g， 63%) ° 4-(5-六氩吡啶-1-基甲基-噻吩-2-基）苯甲酸（實例8.15) 將5-溴-2-噻吩曱醛（10 mm〇i)及六氫吡啶（1〇 mmol)混合 於THF(10 mL) ’且添加二氣化二丁基錫（0 2 mmol)。在室溫 下授拌5分鐘後’添加笨基叾夕院（11 mrn〇l)且使該反應於在 室溫下又攪拌1 7小時。然後在真空中濃縮該反應且藉由急 驟層析（石夕膠’ DCM)純化該殘餘物，生成金色油之1 _(5_漬_ 噻吩-2-基甲基）-六氩°比咬：MS ES+中m/z=260，262，其係 直接用於隨後步驟中。將包含一磁性攪拌棒之反應管馈入 以4-羧笨基蝴酸（0.05 mmol)、噻吩溴（0.05 mm〇l)、Pd (PPh3)4(0.025 mmol)、乙腈（2 mL)及 1 M Na2C〇3(含水）（2 mL)。然後將該反應管密封且藉由微波輻射（丨〇〇 w，4分鐘） 加熱至1 5 0 °C且保持於彼溫度1 〇分鐘。使其冷卻至室溫後， 以1 M HC1將該反應酸化至pH 1且濾除該所得之沉澱。然後 98786.doc * 81 - 吏此粗產物經過矽石塞以移除任何無機種類，且濃縮以生 成褐色粉末之該標題化合物：MS ES+tm/z=304,其係藉 由hplc及MS表徵且係不經任何進—步純化而用於下—步 驟。 4 (5-馬啉-4-基曱基-噻吩_2_基）苯甲酸（實例816) 為合成4-(5-嗎啉-4-基甲基-噻吩_2_基）苯甲酸，在先前實 驗中六氫吡啶係藉由嗎啉取代。 5·[2-(4,4·二氟-六氫吡啶·^基）·乙氧基卜苯幷呋喃·2·羧酸 (實例8.17) 向4,4-二氟六氫吡啶鹽酸鹽（丨g，6.3 mmol)於THF(20 mL) 中之溶液添加溴乙酸甲酯（0.63 mL，6,6 mmol)及三乙胺 (2.65 mL ’ 19_0 mmol)。加熱回流該反應4小時。以水（50 mL) 稀釋該反應，且以乙酸乙酯（3x20 mL)萃取該產物。將組合 有機部分以鹽水洗滌，於硫酸鎂上乾燥且在真空中濃縮， 產生褐色油之（4,4-二氟六氫吡啶-1-基）乙酸甲酯（1.17 g， 96%)。MS 194 (M+H)+。在 〇°C 下向（4,4-二氟六氫吡啶-1·基） 乙酸甲酯（1 · 17 g，6.1 mmol)於THF(1 5 mL)中之溶液分份添 加氫化鋁鋰（0,46 g，12.2 mmol)。一旦沸騰已停止，將該反 應於60°C下加熱1,5小時。以水（1〇 mL)隨後以氫氧化鈉溶液 (2N，10 mL)然後再以水（10 mL)中止該反應。過濾該反應 且以乙酸乙酯（3x20 mL)萃取該濾出液。將混合有機部分以 鹽水洗滌，於硫酸鎂上乾燥且在真空中濃縮’產生褐色油 之2-(4,4-二氟六氫吡啶-1-基）-乙醇（0.99 g ’ 99%)。MS 166 (M+H)+。向偶氮二羧酸二異丙酯（0.36 mL’ 182 mmol)於 98786.doc •82· 1343384 DCM(20 mL)中之溶液添加聚合物載體之三苯基鱗（728 mg，2.18 mmol)。在室溫下攪拌該反應1〇分鐘。添加5·羥 基苯幷呋喃-2-羧酸乙酯（0.25 g，1.21爪爪“^及厂^’心二氟 六氫。比啶-1-基）-乙醇（2 10 mg，1.27 mmol)，且在室溫下授 拌該反應16小時。過濾該反應且在真空中濃縮該濾出液。 在石夕石上以於正庚烧之50%第三丁基曱基醚溶離來純化該 產物’產生黃色固體之5-[2-(4,4-二氟六氫吡啶· 1_基）乙氧基] 笨幷呋喃-2-羧酸乙酯（3 75 11^，8 8%)。¥5 354 (1^+11)+。向 5-[2-(4,4-二氟六氫《I比咬-1-基）乙氧基]笨幷咬喃_2竣酸乙 S 旨（375 mg ’ 1.06 mmol)於 THF(5 mL)及水（1 mL)中之溶液添 加氫氧化裡（34 mg ’ 2.12 mmol)。在室溫下攪拌該反應16 小時。在真空中移除THF且在凍乾器中乾燥該剩餘水溶液 隔夜’產生褐色固體之該粗製標題化合物Ms 326 (M+H， 5 · 3分鐘）且其係不經任何進一步純化而用於偶合至 H2N-Leu-Pl 〇 5-【2-(4-三氟甲基-六氩吡啶-i_基）·乙氧基】·苯幷呋喃_2•羧 酸（實例8.18) 向4-二氟甲基六氫吡啶鹽酸鹽（1 g，5.3 mmol)於THF(20 mL)中之溶液添加漠乙酸甲醋（〇·52 mL，5.5 mmol)及三乙胺 (2_2 mL，1 5.8 mmol)。將該反應加熱回流4小時且然後以水 (5 0 mL)稀釋’且以乙酸乙酯（3X20 mL)萃取該產物。將混合 有機部分以鹽水洗滌，於硫酸鎂上乾燥且在真空中濃縮， 產生褐色油之（4-三氟甲基六氫吡啶-i_基）乙酸甲酯（119 g ’ 98%)。Ms 226 (m+H)+。在(TC下向（4-三氟甲基六氫吡 98786.doc ⑧ -83 - 1343384 咬-1-基）乙酸甲酯（1.19 g，5.3 mmol)於THF(15 mL)中之溶 液分份添加氩化铭链（0.4 g，10.6 mmol)。一旦沸騰已停止， 將該反應於60°C下加熱1.5小時。以水（10 mL)隨後以氫氧化 鈉溶液（2N，1 〇 mL)然後再以水（1 〇 mL)中止該反應9過渡 該反應且以乙酸乙酯（3x20 mL)萃取該濾出液。將混合有機 部分以鹽水洗滌’於硫酸鎂上乾燥且在真空中濃縮，產生 褐色油之2-(4-三氟甲基六氫〇比啶-1·基）_乙醇（1〇 g，99〇/〇)。 MS 198 (M+H)+。向偶氮二羧酸二異丙酯（〇 58 mL，2.28 mmol)於DCM(20 mL)中之溶液添加聚合物載體之三苯基膦 (1· 14 g ’ 3.4 mmol)。將該反應在室溫下攪拌分鐘D添加 5-羥基苯幷呋喃-2-羧酸乙酯（0.47 g，2.3 mmol)及2-(4-三氟 甲基六氫°比咬-1-基）-乙醇（〇·45 g ’ 2.28 mmol)，且在室溫下 攪拌該反應16小時。過濾該反應且在真空中濃縮該濾出 液。在石夕石上以於正庚烷之50%第三丁基甲基醚溶離來純 化該產物，產生黃色固體之5·[2-(4-三氟甲基六氫吡啶-卜 基）乙氧基]本幷吱0南-2-緩酸乙醋（548 mg，62%)。MS 386 (Μ +H)+。向5-[2-(4•三氟甲基六氫吡啶_丨_基）乙氧基]苯幷呋喃 -2-羧酸乙酯（548 mg，1.42 mmol)於 THF(5 mL)及水（1 mL) 中之/谷液添加風氧化經（45 mg，2，84 mmol)。在室溫下搜拌 該反應16小時。在真空中移除THF且在凍乾器中乾燥該剩 餘水溶液隔夜，產生褐色固體之該粗製標題化合物。MS358 (M+H)+。其係直接用於與H2N_Leu pi偶合。 心[2-(4甲基六氩，比嗪+基）嘴唑_4基卜苯甲酸（實例819 & 8.20) 98786.doc •84· 1343384 在室溫下向於THF(30 mL)中之硫代擬基二咪唆（2 g，11 5 mmol)逐滴添加N-甲基六氫吡唤（1_00 g，1〇 mm〇丨）。將該反 應在室溫下攪拌2小時且然後於55°C下攪拌1小時。將該反 應冷卻至室溫且在真空中移除20 mL THF。添加於Me0H中 之2MNH3(l〇 mL)且攪拌該反應15小時。添加其它於Me〇H 中之2M NHdlO mL)且將該反應於55°C下維持8小時。觀察 到淺黃色沉澱（1.00 g)且將其濾除，乾燥且直接用於下一步 驟。將該硫脲（0.84 g ’ 5·2 mmol)溶解於EtOH(30 mL)且添 加4-(2-溴-乙酿基）-笨曱酸（1.28 g’ 5.2 mmol)。將該反應加 熱回流3小時。將該反應冷卻至室溫且濾除固體。以Et2〇洗 滌該固體且徹底乾燥。此程序提供淺黃色固體之該標題化 合物（1.23 g，77%)。 U-(6-氟-3-氧基-六氩-呋喃幷【3,2-b]«比咯羰基）_環己基卜 胺基甲酸9H-g-9-基甲酯（實例8.20) 將Fmoc-Ι-胺基-1-環己烷羧酸（0.300 mg，〇.82 mm〇l)溶解 於 DCM(8 mL)且添加DAST(1 mL，8·2 mmol)。1·5小時後， 起始物質消耗’且小心逐滴添加H2〇(5 mL)。移除有機層， 乾燥（NazSO4)且在真空中濃縮，產出淡褐色固體（〇 287 g， 96°/〇)。在下一步驟中使用粗製的此物質。將（1_氟羰基_環己 基）-胺基甲酸9H-苐-9-基甲基酯（0.050 g，0.135 mmol)溶解 於DMF(1 mL),且將其添加至於DMF(1 mL)之H2N-P1。添 加ΝΜΜ(0·027 g，0.27 mmol)且使該反應隔夜。濾除該樹脂 以移除剩餘試劑且添加新鮮試劑且重複該反應另外24小 時。以DMF(10 mLxlO)及DCM(10 mLxlO)洗滌後’得到該 98786.doc -85- 1343384 標題化合物（負載等價於50%產率），其結合至樹脂。 [1-(6-氟-3-氧基-六氩-呋喃幷[3,2-b]吡咯-4-羰基）-3-甲基-丁基卜胺基甲酸苄酯（實例8.14)

實例8.14係以溶液而非固相製備。在0°C下將6·氟-3-羥基 -六氫-呋喃幷[3，2-b]吡咯-4-羧酸第三丁酯（0.200 g，0.81 mmol)溶解於DCM(4 mL)且添加TFA(4 mL)。在0-4t：下攪拌 1小時後，在真空中蒸發溶劑且將該殘餘物置於高真空下4 小時，以產出褐色油。將該殘餘物溶解於DMF(5 mL),且 添加 WSC.HC1(171 mg，0.89 mmol)、HOBt(l37 mg，1.01 mmol)、Cbz-Leu-OH(226 mg，0.85 mmol)及 Et3N(337 μΐ， 2.43 mmol)。室溫下攪拌隔夜後，將該反應混合物在真空中 濃縮，溶解於EtOAc(10 mL),以H20(5 mL)及飽和NaHC03 溶液（5 mL)洗滌，乾燥（Na2S04)且真空蒸發，產出無色油 (242 mg ; [M+H]+ 395)。將[1-(6-氟-3-羥基-六氫-呋喃幷 [3，2-b]吡咯-4-羰基）-3-甲基-丁基]-胺基甲酸苄酯（242 mg， 0.62 mmol)溶解於乾燥DCM(8 mL)且添加Dess-Martin高碘 烷（26 1 mg，0.62 mmol)。該反應立即變為淺褐色。在室溫 下攪拌2.5小時後’將該黃色溶液以〇〇1^(8|111〇稀釋，且以 飽和NaHC〇3溶液（5 mL)洗滌，乾燥（Na2S04)且在真空中蒸 發，產出黃色殘餘物。藉由管柱層析（EtO Ac :庚烷1:2)純 98786.doc -86· ⑧ 1343384 化，生產無色油之該標題化合物147 mg ; [M+H]+ 393。 4-硫代胺甲醯基-六氫吡嗪·ι_羧酸第三丁酯（實例8,21) 向六氩吡嗪-1·羧酸第三丁酯（32.2 mmol)於四氬呋喃（60 ml)中之溶液添加硫代羰基二咪唑（37.0 mm〇l)。在室溫下攪 拌該反應2小時，然後於55。(：下加熱1小時。將該反應在真 空中濃縮至大約一半體積，且添加甲醇之氨（7N，107.4 mmol)。將該反應於55°C下加熱16小時。在真空中濃縮該反 應至大約一半體積且冷卻至〇°C，此時該產物由溶液沉澱 出。藉由過濾收集該產物，產生白色固體之該標題化合物 (3.3 g)〇 1H NMR (400 MHz, d6-DMSO)1.40 (9H, s), 3.32 (4H, s)，3.71 (4H, s), 7.42 (lH，s)。 4-[4-(4_羧基·苯基）-噻唑_2·基卜六氩吹唤_1_叛酸第三丁酯 向4-硫代胺甲醯基-六氫吡嗪·ι_羧酸第三丁酯（13 3 mmol) 於乙醇（60 ml)中之懸浮液添加4-(2-溴乙酿基）-笨甲酸（13.3 mmol)及4-甲基嗎淋（13.9 mmol)。將該反應在回流下力σ熱 2·5小時。在真空中濃縮該反應且以水（2〇〇 ml)洗滌該固 體，產生白色固體之該標題化合物（3.9 g)。1H NMR (400 MHz, CDC13) 1.45 (9H, s), 3.58 (8H, m), 4.86 (1H, s), 6.95 (1H, s), 7.97 (2H, d，J 8 Hz)，8.1 (2H，d，J 8Hz)。 4-{2-[4-(2-甲氧基-乙基）-六氩》比嗓·ι_基卜嗔峻_4基卜苯甲 酸 將4-[4-(4-羧基-笨基）-噻唑-2-基]-六氫吡嗪_丨_羧酸第三 丁酯（5.0 mmol)溶解於二噁烷中之鹽酸（4N , 25 ml)中且在 室溫下攪拌該反應2小時。在真空中濃縮該反應，產生4·(2_ -87- 98786.doc ⑧ 六氫吼嗓-1-基-噻唑-4-基）_笨甲酸。將三甲氧基乙烷（6 5 mmol)溶解於鹽酸水溶液（1N，^1)且將該反應於50°C下 加熱1.5小時。使該反應冷卻至室溫且然後添加4-(2-六氫吡 嗪-1-基-噻唑-4-基）-苯甲酸（5.0 mmol)於乙腈（25 ml)及乙酸 納緩衝劑（1N ’ pH 5.5 ’ 10 ml)中之懸浮液。在室溫下攪拌 該反應1.5小時。添加氰基氫硼化鈉（6.5 m〇i)且在室溫下攪 拌該反應16小時。在真空中濃縮該反應且藉由急驟層析（矽 膠’於二氣甲烷中之1 〇%甲醇）純化該產物，生成無色油之 該標題產物（0.9 g) » MS ES+中 m/z=348 (100% M+H)。 4-[1-(5-溴-嘍吩-2-基）-乙基]•嗎啉（實例8.22) 向嗎啉（1.20 mmol)於異丙氧化鈦（iv)(l.95 mmol)中之溶 液添加2-乙醯基-5-溴噻吩（1.20 mmol)。在微波中將該反應 於150C下加熱5分鐘》添加氩棚化鈉（1.95 mmol)且在室溫 下攪拌該反應16小時。以氩氡化鈉溶液（2N，10 ml)稀釋該 反應且藉由過濾移除形成之固體。以乙酸乙酯（3X20 ml)萃 取濾出液。將混合有機層以鹽水洗滌且於硫酸鎂上乾燥。 藉由急驟層析（矽膠，10-20%乙酸乙酯（於異己烷中））純化該 產物，生成褐色油該標題產物：MS ES+中m/z=276 (100%, M+H), 278 (100%，M+H)。 4-[5-(1-嗎啉-4-基-乙基）-噻吩_2-基】-苯甲酸 將 4-[1-(5-漠.-0¾ 吩-2-基）-乙基]-嗎琳（0.36 mmol)、4 -曱氧 基幾基笨基蝴酸（0.43 mmol)及碳酸鈉（1.09 mmol)懸浮於二 噁烷：水（2 ml ’ 2 :1)。將氮氣鼓泡經由該反應5分鐘，然後 添加肆（三苯基膦）纪（0)(0.04 mmol)。在微波中將該反應於 98786.doc -88 - 1343384 1 50°C下加熱1 0分鐘。在真空中濃縮該反應，且藉由純化該 產物急驟層析（矽膠，於二氣甲烷中之1 〇%甲醇），生成褐色 油之該標題產物：MS ES+中 m/z=318 (50% Μ+Η), 231 (100%，M+H-嗎啉）。 4-{[(1_甲基咪唑-2-基）曱基]胺基}笨甲酸（實例8.23) 將1-甲基-2-咪°坐叛链（5,0 mmol)及曱基-4-胺基苯甲酸酯 (5‘0 mmol)混合於MeOH(7 mL)中。添加乙酸（0_3 mL)且在室 溫下攪拌該混合物30分鐘。將該反應混合物冷卻，添加氣 基氫硼化鈉（5.0 mmol)且使該反應在室溫下攪拌另外1 7小 時。然後在真空下濃縮該反應混合物且在H20及EtOAc之間 分溶。以EtOAc萃取水層，且以H20 '鹽水洗滌組合有機層， 經MgSCU乾燥且真空下移除溶劑。藉由急驟層析（矽膠，於 DCM中之5% MeOH)純化該殘餘物，生成淺黃色固體之 4-{[(1-甲基咪唑-2-基）甲基]胺基}笨曱酸甲酯：MS ES+中 m/z=246，其係直接用於隨後步驟。 向甲酯（2.5 mmol)於1，4-二噁烷（5 mL)之溶液添加1 Μ ΚΟΗ水溶液（5.5 mmol) ’且攪拌該反應混合物1 8小時。以1 Μ MCI將該反應混合物中和至ρΗ 7且藉由1^2流濃縮。將該產物 再懸浮於水中且凍乾以生成白色固體之4- {[(1 -甲基咪唑-2-基）甲基]胺基}苯曱酸：MS ES+中m/z 232，其係直接用於 隨後步驟中。 4-丨5-(1-嗎啉―4·基-乙基）·呋喃·2·基]-苯甲酸（實例8.25) 將2 -乙酿基。夫喃（2 0 m m ο 1)及嗎琳（2 0 m m ο 1)添加至純異 丙氧化鈦（3 2 mmol)，且在室溫下於N2攪拌該反應3小時。 98786.doc 〇〇 1343384 然後添加甲醇（90 ml)，隨後小心分份添加NaBH4(32 mm〇1)。在室溫下攪拌10分鐘後，藉由添加0.1 M NaOH中 止该反應且經由矽藻土墊過濾該所得之混合物。以DCM兩 次萃取遽出液’經Na2S〇4乾燥且在真空中濃縮。急驟層析 該殘餘物（石夕膠，5至20% EtOAc於庚烷），產生金色油之4-( 1 -咬喃-2-基-乙基）_ 嗎啉：ms ES+中 m/z=182 [M+H]+，2,76 mmol，14%產率。 在〇 C下將4-(1-°夫味-2 -基-乙基）-嗎淋（i.i mmol)溶解於 DCM(5 ml)且攪拌。將氮氣經過該反應容器且經由一 Dreschel瓶鼓泡逸出’該Dreschel瓶含有飽和硫代硫酸鈉水 溶液，同時逐滴添加溴（於2 ml DCM中之1.54 mmol)。添加 後’將該反應在室溫下攪拌2小時，然後以更多DCM稀釋， 以2M NazCO3溶液兩次洗滌，經Na2S〇4乾燥且在真空中濃 縮。藉由急驟層析（矽膠，5至10% EtOAc於己烷）純化後， 得到金色油之4-[1-(5-溴-呋喃-2-基）-乙基]-嗎啉：MS ES + 中 m/z=260，262 [M+H]+，0.46 mmol，42%產率。 將4-[1-(5->臭-β夫喃-2·基）-乙基]-嗎琳（0.54 mmol)溶解於7 ml甲笨，且將4-敌曱基苯基蝴酸（0.54 mmol)作為於〇 7mi Et0H中之溶液添加。添加12ml之2MNa2C03水溶液，隨後 Pd(PPh3)4(〇.〇54 mmol)。在氮氣氛下於70°C攪拌反應17小 時，且然後使其冷卻至室溫且以DCM(x2)萃取。以鹽水洗 滌組合有機層’在真空中濃縮且藉由急驟層析（矽膠， 20-50% EtOAc於己烷）純化該殘餘物。此提供粉末狀灰色固 體之純4-[5-(1-嗎啉-4-基-乙基）-呋喃-2-基]-苯甲酸甲醋： 98786.doc -90- ⑧ 1343384 MSES+中 m/Z=316[M+H]+’ 〇.〇8_〇1，15%產率。 將此醋（0.08 mmol)在丨8% HC1中於贼下加熱2小時，此 時HPLC顯示全部起始物質已經水解。冷卻該反應且藉由過 Μ集ό & ID體的由溶液沉澱出之該產物’且將其直接用 於下一步驟。 4-(2甲基吡啶·3-基氧基）_苯甲酸（實例8 26) 向含有磁性攪拌棒之反應管饋入_4·氟笨甲酸乙酯（1 mmol)、2-曱基-3-吡啶酚（1.〇 mm〇1)、碳酸鉀（1 〇8 mm〇i)及 DMF(2 ml)。然後將該反應管密封且藉由微波輻射（i〇〇w， 4分鐘）將其加熱至i5(TC且於該溫度下保持8〇分鐘。過濾該 溶液以移除不溶性碳酸鉀且然後在真空中濃縮。藉由製備 HPLC純化該殘餘物且凍乾以生成白色固體之4 (2•甲基_〇比 咬-3-基氧基）-苯曱酸乙酯，其係藉由於i5〇t：微波輻射 (200W)加熱3分鐘之6NHC1水溶液水解。將該溶液凍乾，生 成白色粉末的63 mg標題化合物之鹽酸鹽，Ms ES+中 m/z=229，其係藉由HPLC及MS表徵。 4-[2-(1-一甲基胺基-乙基卜嘆嗤-4-基卜苯甲酸（實例8.27) 4-{2-[1-(第三丁氧基羰基-甲基·胺基）_乙基】_噻唑_4基卜苯 甲酸甲酯 將 Boc-L-NMe-丙胺酸-〇H( 1.0 g，4.92 mmol)溶解於二 〇惡 烷（10 ml),且向此添加吡啶（〇‘25 ml)、二碳酸二第三丁酷 (1.4 g，6.4 mmol)及碳酸氫銨（0.49 g，6·2 mmol)。授拌 1 8 小時後，在真空中濃縮該粗反應混合物且將其再懸浮於乙 酸乙酯。以1 M KHS〇4洗滌此且經硫酸鎂乾燥有機層。濃 98786.doc ⑧ 91 縮後得到澄清油（ο.79 g)。將此溶解於乙二醇二甲喊（1 o ml) 且向此添加！^你叫〇11，8試劑（4.31晒〇丨，174§)。在室溫下 攪拌3小時後，在真空中濃縮該反應混合物且將該殘餘物再 懸汙於乙酸乙酯。以1 M NhCO]洗滌此且經硫酸鎂乾燥有 機層。濃縮後，得到黃色油。將其藉由急驟層析（庚烷/乙酸 乙酯）來純化，生成白色固體（〇73 g)e將其溶解於乙醇（1〇 ml)且添加4-(2-溴-乙醯基）-笨曱酸曱酯（3 34 mm〇i，0.86 g)。將該反應在5(TC加熱一小時。該粗產物係藉由急驟層 析（庚烧/乙酸乙酯）純化，生成白色固體（〇 39 g)。ESMS (M+H=377.23)。 4-【2-(1-二曱基胺基-乙基）_嘆嗅_4基】苯甲後 以於二噁烷中之4N HC1溶液將4-{2-[1-(第三丁氧基羰基 -甲基·胺基）-乙基]-噻唑-4-基} •笨曱酸甲酯去保護1小時。 在真空中移除溶劑且將殘餘物凍乾，得到白色固體，其係 如下曱基化。在曱醇（2 ml)及乙酸鈉緩衝劑（in，pH 5.5，1 ml)中將4-[2-(1-甲基胺基-乙基）_噻唑-4 _基]-苯甲酸甲酯 (0.44 mmol)與曱醛（1.1當量）攪拌一小時。添加氰基氫硼化 鈉（0.49 mmol)且在室溫下攪拌該反應2小時。在真空中濃縮 該反應且以EtOAc萃取該殘餘物且以1 μ碳酸鈉水溶液洗 滌。將有機層在真空中濃縮且藉由於丨5〇。〇微波輻射（2〇〇 W) 加熱3分知之6 N H C丨水溶液水解。將該溶液;東乾’生成白色 粉末的134 mg標題化合物之鹽酸鹽，MS ES+中m/z=277， 其係措由Η P L C及M S表徵。 Ε-4-丨2-(1Η-咪唑-4-基）-乙烯基卜苯甲酸（實例8.28) 98786.doc -92- 1343384 將於聚合物載體上之溴化{4_(甲氧基羰基）苄基（三笨基W 鱗、苯甲酸甲基-4-漠甲醋（26mm〇1)添加至4.4gps三苯膦 樹脂（Fluka，3 mmolg•丨）於40 ml iDMF中之懸浮液。將該 溶液於65 t下溫和攪拌48小時。以DMF(4x4〇出丨）' DCM(4x40 ml)及TBME(2x4〇 mi)洗滌該鐫樹脂且在真空中 乾燥18小時。 Ε-4-[2-(1Η-咪唑-4-基）-乙烯基]-笨曱酸 向含有磁性攪拌棒之反應管饋入丨_甲基·1H_咪唑-2_甲醛 (1.5 mmol)、碳酸鉀（2.1 mm〇i)、於聚合物載體之溴化（4_(甲 氧基羰基）苄基（三苯基）}鱗（1.5 mm〇i)及甲醇（4 mi)e然後將 該反應管密封且藉由微波輻射（丨〇〇 w , 3分鐘）將其加熱至 15 0 C，且在忒度下保持5分鐘。將該溶液過遽移除不溶 性碳酸鉀且然後在真空中濃縮。該殘餘物係藉由製備HPlC 純化且凍乾以生成白色固體之Ε·4·[2-(1-甲基-1H-咪唑-2-基）-乙烯基]-笨曱酸甲酯，其係藉由於150°C下微波輻射（2〇〇 W)加熱3分鐘之6N HC1水溶液水解。將該溶液凍乾，生成 白色粉末的90 mg標題混合物之鹽酸鹽，ms ES+中 m/z=2 15，其係藉由HPLC及MS表徵。 Ε·4-[2-(1-甲基-1H-咪唑基）-乙烯基]·笨甲酸（實例8.29) 與實例8.28相同。使用1 _甲基_ 1 Η·咪唑_2_甲醛作為醛。 得到白色粉末的標題混合物，MS ES+中m/z=229，其係藉 由HPLC及MS表徵。 Ε-4·[2-(3-Τ基-3H-咪嗤+基）·乙稀基卜苯甲陵（實例8 3〇) 與實例8.28相同。使用3-甲基-3Η-咪唑-4-甲醛作為醛。 98786.doc -93- ⑧ 1343384 仔到白色粉末的標題混合物，MS ES+中m/z=229，其係藉 由HPLC及MS表徵。 4-[2-(111-咪嗤-4-基）-乙基卜笨甲後（實例8.31) E-4-[2-(l-甲基-1H-咪唑-2-基）-乙烯基]-笨甲酸甲酯係使 用Pd/C(基質重量之10〇/〇)氫化，於異丙醇中之曱酸敍（5當量） 係藉由於1 5 0 C下微波輻射（200 W)加熱5分鐘。將該溶液經 由矽藻土過濾以移除不溶性催化劑，以水稀釋且凍乾以移 除過量甲酸銨。該所得到之固體係藉由於丨5(rc下微波輻射 (200 W)加熱3分鐘之6N HC1水溶液水解。將該溶液;東乾， 生成白色粉末的標題混合物之鹽酸鹽，MS ES+中 m/z=217 ’其係藉由HPLC及MS表徵。 甲基-1H-咪唑-2-基）-乙基】-苯甲酸（實例8.32) 與實例8.3 1相同。使用作為4-[2-(1-甲基-1H-咪唾-2-基）-乙烯基]-苯甲酸甲酯（實例8.29)作為甲酯。得到白色粉末的 標題混合物，MS ES+中m/z=23 1 ’其係藉由HPLC及MS表徵。 4-甲基（吡啶-2-基）胺基甲基苯甲睃鉀（實例8.33) 將2-甲基胺基〇比咬（1 〇 mm〇i)及甲酿基苯甲酸甲酯（J 〇 mmol)混合於THF(2 mL)且添加二氣二丁基錫（〇」mm〇i)。 在室溫下攪拌1 〇分鐘後’添加苯基矽烷（丨丨mmol)且使反應 混合物在室溫下攪拌另外1 7小時《然後藉由％流濃縮反應 混合物且藉由急驟層析（矽膠，庚烷：Et0Ac)純化殘餘物， 生成黃色油之4-[甲基（吡啶-2-基）胺基]甲基苯甲酸甲酯， MS ES+中m/z=257，其係直接用於隨後步驟。 向甲酯（0.27 mmol)於1，4-二噁烷（0.6 mL)之溶液添加1 Μ 98786.doc • 94- ⑧ 1343384 KOH水溶液（0.59 mmol)且攪拌該反應混合物18小時。藉由 A流濃縮該反應混合物，再懸浮於水中且將產物；;東乾以生 成灰白色固體之4-曱基（吡啶-2-基）胺基曱基笨甲酸鉀，MS ES+中m/z = 243，其係直接用於隨後步驟。 4-(2-{l(S)-【（第三丁氧基羰基）（甲基）胺基】乙基卜5_甲基 -1，3-噻唑-4-基）苯甲酸鈉（實例8.34) 將4-丙醯基苯甲酸乙酯（2.0 mmol)、氫化三溴化吼洛坑銅 (2.1111111〇1)及2-吡咯烷酮（2.2 111111〇1)在丁^^(20〇11〇中於50。〇 下加熱2.5小時。將該混合物冷卻、過濾、在真空中濃縮且 在Ηβ及MTBE之間分溶殘餘油。WMTBE萃取水層，且以 飽和焦亞硫酸鈉溶液、H20、鹽水洗滌組合有機層，經MgS04 乾燥且在真空下移除溶劑。藉由急驟管柱層析（9:丨i己烷： MTBE)純化該殘餘物’產出澄清油之4(2，-溴丙醯基）苯曱酸 乙酯。 將4(2'-溴丙醯基）苯曱酸乙酯（0.5 mmol)、BOC(Me)Ala硫 代酿胺（0.5 mmol)及 ΝΜΜ(0·5 mmol)在 EtOH(2 mL)中於 80 °C下加熱3小時。冷卻該混合物，藉由n2流濃縮且在h2〇及 MTBE之間分溶該粗產物。以MTBE萃取水層，且以1 Μ khso4、鹽水洗滌組合有機層兩次，經MgS〇4乾燥且真空 移除溶劑’生成黃色油。藉由急驟管柱層析（9:1 i己烷：Et〇Ac) 純化該殘餘物，產出亮黃色溶離份靜置若干小時後，此 溶離份去色且藉由急驟管柱層析（9:11己烷：EtOAc)分離澄 清油之4-(2-{1(S)·[(第三丁氡基羰基）（曱基）胺基]乙基卜5_ 甲基-1，3-°塞唑_4_基）苯曱酸乙酯：ms ES+中m/z=405 (MH+) 98786.doc ⑧ -95· 1343384 及 349 (M-BOC+)。 向乙酯（0.24 mmol)於1,4-二噁烷（5 mL)及水（1 mL)中之 溶液添加1 M NaOH(0,53 mL)，且攪拌該反應混合物18小 時。在真空下濃縮該反應混合物，將產物再懸浮於水且床 乾’生成白色固體之4-(2-{l(S)-[(第三丁氧基羰基）（甲基） 胺基]乙基}-5-甲基-1，3-噻唑-4-基）苯甲酸鈉：MS ES+中m/z 3 77 (MH+)及321 (M-BOC + )，其係直接用於隨後步驟中。 4-{2-[1(8)-(二甲基胺基）乙基]-5-甲基-1，3-雀嗅-4-基}苯甲 酸鋰（實例8.35) 4-(2-{l(SH(第三丁氧基羰基）（甲基）胺基]乙基}_5·甲基 -1，3-〇塞唑-4-基）笨甲酸乙酯係如先前所描述製備。 向BOC-保護之胺（0.25 mmol)於1,4-二噁烧（3 mL)中之溶 液添加於二噁烷（4 mL)中之4M HC1，且攪拌該反應混合物2 小時。在真空下;農縮該反應混合物，產出黏性淺黃色油。 將該油溶解於1:1 H2〇:MeCN且床乾，產出4-{2-[l(S)-(甲基 胺基）乙基]-5 -曱基-1,3-°塞°坐-4-基}苯甲酸乙醋之鹽酸鹽。 藉由添加AcOH至1 M NaOAc直至達到pH 5.5來製備一 pH 5.5緩衝劑。將該胺鹽酸鹽（0.28 mmol)溶解於1:1緩衝 劑：MeOH(4 mL)且添加曱搭（於水之37重量％ ; 〇.3 1 mmol)。 搜拌該混合物1小時且然後分份添加氰基氫棚化納（〇. 3 1 mmol)。1小時後’藉由N2流濃縮該反應混合物。在飽和 NaHC〇3水及EtOAc之間分溶該殘餘物。以Et〇Ac萃取水 層，且以H2〇、鹽水洗務組合有機層，經Na2S〇4乾燥且在 真空下移除溶劑。藉由製備HPLC(0.1% H20中之TFA:MeCN) 98786.doc - 96 - ⑧ 1343384 純化該殘餘物》在飽和NaHC03水及EtOAc之間分溶該等混 合HPLC溶離份。以EtOAc萃取水層，且以鹽水洗滌該等混 合組合有機層，經Na2S04乾燥且在真空下移除溶劑。EtOAc 之不存在係藉由1 H-NMR證實。

將該乙酯（0·19 mmol)溶解於1:1 Η20··1，4-二噁烷（8 mL)且 添加1 M LiOH(0.42 mL)且攪拌該反應混合物17小時。藉由 添加1 M HC1將該反應混合物調節至PH 8。將該混合物在真 空下濃縮，再懸浮於1:1 H20:MeCN且凍乾，生成白色固體 之4-(2-{ 1(S)·[(二甲基）胺基]乙基卜5 -甲基-1,3-噻唑-4-基） 苯曱酸經：MS ES+中m/z 291 (MH + )且其係直接用於隨後步 驟中。 5-(4-甲基·嗎琳-2-基甲氧基）-苯幷呋喃叛酸（實例8.36) 將5 -甲氧基表幷。夫β南緩酸乙醋（22.7 mmol)溶解於二氣甲 烷（20 ml)，且添加三溴化硼甲硫醚錯合物於二氣甲烷（681 mmol)之1 ·〇 Μ溶液。將該混合物加熱回流隔夜。在真空下

蒸發溶劑且藉由急驟層析純化殘餘物以得到白色固體之 羥基笨幷呋喃羧酸乙酯。 夺二本基膦聚合物結合物（8.96 mm〇〇懸浮於無水二氣可 =(2〇 然後添加偶i二緩酸二異丙酷（7 76贿•名 至溫下授拌該混合物15分鐘。錢經5分鐘添加5·經基笨本 呋錢酸乙醋(5 ·97 _丨)，隨後亦經5分鐘添加㈣:以^ 嗎淋竣酸（5.97 _Gl)。在室溫下攪拌該混合物隔夜。 空下瘵發溶劑且藉由急驟層析純化該殘餘物， 之5-(4-B〇d琳、2·基甲氧基） 于4 4 用z羧醆乙酯：M: 98786.doc -97· 1343384 ES+ 中 m/z = 406。 5-(4-Boc-嗎啉-2-基甲氧基）-笨幷呋喃-2-羧酸乙酯（2.47 mmol)溶解於30 ml的鹽酸於二噁烷中之4.0 Μ溶液，且在室 溫下攪拌1小時。在真空下移除溶劑後，將所得之胺溶解於 無水二氣甲烷且添加Ν_甲基嗎啉（5.67 mm〇l)且在室溫下授 拌5分鐘。然後添加氣甲酸烯丙酯（2.71 mmol)且在惰性氣氛 中在室溫下攪拌該混合物隔夜。將該混合物以鹽酸之1 .〇 Μ 溶液、水洗滌’經Na2S〇4乾燥且在真空中蒸發溶劑。藉由 急驟層析純化殘餘物，產生白色固體之5_(4_alloc•嗎啉 基甲氧基）-苯幷0夫味-2-叛酸乙醋：MS ES +中111/2=390。 將5-(4-alloc-嗎啉-2-基曱氧基）-笨幷呋喃-2-羧酸乙酯 (2_09 mmol)溶解於3 ml四氫呋喃。然後添加3 ml的氫氧化 鋰之1.0 Μ溶液且在室溫下攪拌該混合物隔夜。真空移除四 氫呋喃後，以鹽酸之1 Μ溶液將該混合物酸化至剛果紅，以 二氣曱烷萃取，以水洗滌，經Na2S04乾燥，且真空移除溶 劑’產生白色固體之5-(4-all〇C-嗎啉-2-基曱氧基）-苯幷呋喃 -2-羧酸。 然後將5-(4-Alloc-嗎琳-2-基曱氧基）_苯幷呋喃-2_羧酸（3 當量）結合至肽上，如先前所描述（600 mg ; 0.32 mmol/g)與 HBTU(3當量）' HOBt(3當量）及NMM(6當量）在DMF中於室 溫下隔夜。Alloc基團係如下移除：（i)DCM(4xl分鐘）；（2) 硼烷二曱胺錯合物（40當量）、肆（三笨基膦）鈀（〇)(〇1當 量）（於無水DCM中（2^5分鐘））；（3)DCM(3xl分鐘）； (4)DMF(3xl 分鐘）；（5)二噁烷·水（9:l)(3xl 分鐘）；（6)DMF(3 98786.doc -98· ⑧ 1343384 xl 分鐘）；（7)MeOH(3xl 分鐘）；（8)DCM(3xl 分鐘），且該肽 樹脂係以二氣二丁基錫（5當量）、苯基矽烷（5當量）及甲醛於 水之37°/。溶液（5當量）在THF中室溫處理2小時。此程序之備 忘錄係如一般協議所描述來進行。 3-甲基-5-(4-甲基-嗎啉-2-基曱氧基）-苯幷呋喃-2-羧酸（實 例 8.37) 將4-曱氧基笨酚（0.119 mol)溶解於乾燥曱笨且以氫化鈉 (0.120 mol)在室溫下處理60小時。將該苯酚鈉溶液加熱至 + 100°C且添加α-氣乙醯乙酸酯（0.09 mol)。在+110°C下攪拌 另外4小時後，將該混合物冷卻至室溫，以水及鹽水洗滌， 經NaJO4乾燥，且在真空中蒸發溶劑，產生暗褐色油之粗 製ct-(4-甲氧基苯氧基）乙醯乙酸酯。室溫下將磷酸（0.22 mol) 與P2〇5(0.35 mol)混合且在+ 130°C下攪拌4小時。使該混合 物冷卻至+1 00°C ’緩慢添加該乙醯乙酸酯，且於該溫度下 保持2小時。冷卻至室溫後’小心添加冰至該授拌之溶液， 以甲苯萃取，在真空中濃縮且藉由於矽石上急驟層析來純 化’產生白色固體之3-甲基-5-甲氧基苯幷呋喃羧酸乙酯： MS ES+中 m/z=235 〇 將3 -甲基-5 -甲氧基笨幷呋喃羧酸乙酯（8 53 mm〇丨）溶解於 二氣甲烷（1 0 ml)，且添加三溴化硼甲硫醚錯合物於二氣甲 烷之1.0 Μ溶液（25.59 mmol)。將該混合物加熱回流隔夜。 在真空下蒸發溶劑，且藉由急驟層析純化殘餘物，得到白 色固體之3-甲基-5-羥基笨幷呋喃羧酸乙酯。 將二笨基膦聚合物結合物（1.37 mm〇 1)懸浮於無水二氯甲 98786.doc ^

(D 烧（1 0 ml)，然後添加偶氮二叛酸二異丙酯（i. i 8 mmol)，且 在室溫下攪拌該混合物1 5分鐘。然後經5分鐘添加3-曱基-5-經基本幷。夫喃緩酸乙酯（0.9 1 mmol)，隨後亦經5分鐘添加 4-N-boc-3-嗎啉羧酸（0.91 mmol)。在室溫下攪拌該混合物隔 夜°真空蒸發溶劑且藉由急驟層析純化殘餘物，得到澄清 油之3-曱基-5-(4-B〇C-嗎啉-2-基甲氧基）-苯幷呋喃-2-羧酸 己 i旨.MS ES+中 m/z=419。 將3·甲基_5-(4-B〇C-嗎啉-2-基曱氧基）-苯幷呋喃-2-羧酸 乙酯（1.05 mmol)溶解於30 ml的4.0 Μ之鹽酸於二噁烷中之 溶液，且在室温下攪拌1小時。真空移除溶劑後，將該所得 之fee溶解於2 0 m 1的曱醇昆合物2至1及經緩衝的乙酸及乙 酸納之溶液（pH=5.3)。添加甲醛於水之37%溶液（1.16 mmol) 且在室溫下攪拌該混合物1小時。然後添加氰基氫硼化鈉 (1.16 mmol)且在室溫下攪拌該混合物隔夜，在真空下移除 甲醇且藉由凍乾消除水。藉由急驟層析純化該固體，產生 白色固體之3-甲基-5-(4-甲基-嗎啉-2-基曱氧基）_苯幷呋喃 -2-緩酸乙 S旨 _ MSES +中 m/z = 334。 將3-甲基-5-(4-甲基-嗎啉-2-基曱氧基）_笨幷呋喃_2-羧酸 乙醋（0.12 mmol)溶解於300 μ丨四氫呋喃。然後添加3〇()|^的 氫氧化裡之1.0 Μ溶液且在室溫下攪拌該混合物3小時。真 空移除四氫呋喃且藉由凍乾消除水，產生白色固體之標題 化合物：MSES-中 m/z=304。 4-[2-(1甲基胺基-乙基）-嘆唾-5-基】-苯甲駿链鹽（實例 8.38) 98786.doc -100- 1343384 4-(2-疊氮基-乙醯基）-苯甲酸甲酯 將4-(2-溴-乙醯基）-苯甲酸甲酯（15,5 mmol)溶解於乙醇 (120 ml)及乙酸（4.8 ml)。添加疊氮鈉（31 mmol) ’且在4。(：下 攪拌該反應隔夜。移除乙醇，且以乙酸乙酯（1〇〇 ml)稀釋該 混合物。以飽和碳酸氫鈉（2x50 ml)洗滌有機層且乾燥 (MgS〇4)。在真空下移除溶劑，生成黃色固體，其係自乙醇 再結晶以生成淺黃色固體之標題化合物（2.6 g)。IR 2117cm·〗 4-(2-胺基-乙醯基）-苯曱酸甲酯鹽酸鹽。 將4-(2-疊氮基-乙醯基）-苯甲酸甲酯（6.53 mmol)懸浮於 曱醇（30 ml)且添加鹽酸水（6.53 mmol，1 M)。添加催化劑 量之披鈀木炭（10%重量），且在氫氣氛中將該反應攪拌3小 時。過濾該反應且在真空中移除溶劑，生成黃色固體之標 題化合物（1·3 g): MS ES+中m/z=194，其係不純化而用於下 一步驟中。 4-{2-[2-(S)-(第三丁氧基羰基-甲基-胺基）-丙醯基胺基]-乙醯基}-苯甲酸甲酯。 將4-(2 -胺基-乙酿基）-苯曱酸甲醋鹽酸鹽（2.22 mmol)、 \¥呂(：.11(：1(2.44 111111〇1)、8〇〇-1^-曱基-(1〇-丙胺酸（2.44 111111〇1) 及HOBt(2.77 mmol)懸浮於二氣甲烷（1〇 ml)。添加 NMM(2.44 mmol)且攪拌該反應2小時。以乙酸乙酯（50 ml) 稀釋該反應且以10%檸檬酸（2x25 ml)及飽和碳酸氫鈉 (2x25 ml)洗滌。乾燥有機層（MgS04)，且在真空中移除溶 劑’生成褐色油殘餘物。藉由以1 〇_50%乙酸乙酯/異己炫溶 98786.doc -101 - ⑧ 1343384 離矽石層析，生成淺黃色油之標題化合物（620 mg): MS £S + 中 m/z=379 。 4-{2-(S)-[l-(第三丁氧基羰基-甲基-胺基）乙基]噻唑_5_ 基}-苯甲酸甲酯。 將4-{2-[2-(S)·(第三丁氧基羰基-甲基-胺基）·丙醯基胺 基]-乙醯基}-苯甲酸甲酯（1.65 mmol)溶解於乾燥THF且添 加Lawesson’s試劑（2.5 mmol)。將該反應加熱回流5小時且冷 卻至室溫。在真空中移除溶劑且將該殘餘物溶解於乙酸乙 酯（100 ml)。以1〇%檸檬酸（2x50 ml)及飽和碳酸氫鈉（2χ5〇 ml)洗滌有機層且乾燥（MgS〇4)。在真空中移除溶劑，生成 只色油殘餘物’其係藉由石夕石層析來純化以生成淺黃色固 體之標題化合物（5 70 mg)。lHNMR(CDCl3,400 MHz)1.5(s， 9H), 1.6 (d, 7Hz), 2.8 (brs, 3H), 3.9 (s, 3H), 5.6 (brm, 1H), 7.6 (m，2H)，7.9 (s，1H)，8.0 (m，2H)。 4-{2-(S)-[ 1-(第三丁氧基羰基-甲基-胺基）_乙基]噻唑5-基}-笨曱酸 將4-{2-(S)-[l-(第三丁氧基羰基-甲基-胺基）_乙基]•噻唑 -5-基}-苯曱酸甲酯（〇_75 mmol)溶解於曱醇（1〇 且添加氫 氧化經（10ml，1M)。在室溫下攪拌該反應隔夜且在真空中 移除甲醇。以1 Μ鹽酸使該水溶液至ph=3且以乙酸乙酯 (2x50 ml)萃取。乾燥有機層（MgS〇4)且真空移除溶劑，生成 灰白色粉末’其係藉由以50-80%乙酸乙酯/異己烷溶離矽石 層析來純化。該標題化合物係作為白色粉末得到（252 mg) MS ES+中 m/z=363 〇 98786 doc - HP . 1343384 4-[2-(8)-(1-二曱基胺基-乙基）-噻唑-5_基]-笨甲酸甲醋。 將4-{2-(S)-[l-(第三丁氧基羰基·甲基-胺基）_乙基]•噻唑 -5-基}-笨甲酸（0.75 mmol)溶解於 50% TFA/DCM(2 ml)且授 拌1小時。真空移除溶劑，且將該殘餘物放置於高真空3小 時以生成淡褐色油殘餘物。將該殘餘物溶解於甲醇（2 ml) 且添加緩衝劑（1 ml，1 Μ乙酸鈉/乙酸，pH=5 ·5)。添加甲酸 (0.83 mmol，37重量％，於水中）且攪拌該反應3〇分鐘。添 加氰基氫硼化鈉（0.83 mmol)且在室溫下攪拌該反應隔夜。 在真空中移除曱醇且以飽和碳酸氩鈉（25 ml)稀釋該水溶 液。以乙酸乙酯（2x25 ml)萃取水層且乾燥有機層（MgS04)。 在真空中移除溶劑且藉由矽石層析純化殘餘物，生成灰白 色固體之標題化合物（158 mg)。1H NMR (CD3OD，400 MHz) 1.5 (d, J 7Hz), 2.3 (s, 6H), 3.9 (s, 3H), 3.95 (q, J 7Hz), 7.7 (m，2H), 8.0 (m, 3H)。 4- [2-(l-二曱基胺基-乙基）_噻唑_5_基]_苯曱酸鋰鹽。 將4-{2-(S)-[l-(第三丁氧基羰基·甲基-胺基乙基噻唑 •5·基卜笨曱酸（〇‘54 mm〇i)溶解於甲醇（2 mi)且添加氫氧化 經（0.54 mmol’ 1 μ)。授拌該反應隔夜且在真空中移除甲 醇。以水（5 ml)稀釋該殘餘物且以乙酸乙酯萃取水層。將水 層束乾以生成灰白色固體之標題化合物（143 mg)，其係不進 一步純化用於下一步驟中MS ES+中m/z=277。 5-N，N-二曱基胺基_1H吲哚_2_羧酸（實例8.39) 5- 胺基-1H-吲哚_2-羧酸乙酯。 將5-硝基-1H-吲哚-2-羧酸乙酯（14.9 mmol)懸浮於丙酮 98786.doc Λ 1343384 (50 ml)，且將其添加至氣化鈦（ΙΙΙ)(91以，>1〇%於2 M鹽酸 t )及乙酸銨（265 m卜4 Μ)之混合物。將該反應攪拌2小時 且以飽和碳酸氫鈉中和。以乙酸乙酯（100 m〖）萃取該混合物 且乾燥有機層（MgS〇4)。在真空中移除溶劑，生成淡褐色固 體’其係藉由矽石層析來純化以生成灰白色固體之標題化 合物（1.57 g) MS ES+ 中 m/z=205。 5-N，N-二甲基胺基-in-吲哚-2-羧酸乙酯 將5-胺基-114-»引°朵-2-叛酸乙醋（7.7 mmol)溶解於乙腈（3〇 ml)且添加甲酿（19_2 mmol ’ 37%重量於水中）。添加氛基氮 硼化鈉（7.7 mmol)且在室溫下攪拌該反應隔夜。真空移除乙 腈且藉由矽石層析純化該殘餘物，生成淡褐色固體之標題 化合物（244 mg)。MS ES+ 中 m/z=233。 5-N，N-二甲基胺基-1H-吲哚-2-羧酸 將5-N，N-二甲基胺基-1H-吲哚-2-羧酸乙酯（1.05 mm〇i)懸 浮於乙醇（1 ml)且添加氫氧化鋰（1.2 ml，1 Μ於水中）。在室 溫下攪拌該反應隔夜。以1 Μ鹽酸使該溶液至ρΗ=7且在真 空中移除乙醇。以乙酸乙酯萃取水層且乾燥有機層 (MgS〇4)。在真空中移除乙酸乙酯，生成褐色粉末之標題化 合物（75 mg)，其係不純化用於下一步驟中。ms ES+中 m/z=205 ° 4-{2-丨1-(第三丁氡基叛基-甲基·胺基）_乙基卜嘴唾_4基丨苯 甲酸（實例8·4〇) 將 Boc-L-NMe-丙胺酸-〇H(1.〇 g，4.92 mmol)溶解於二嗓 烷（10 ml)且向此添加吡啶（0.25 ml)、二碳酸二-第三丁酷 98786.doc - 104 - ⑧ 1343384 (1.4 g，6.4 mmol)及碳酸氩銨（0.49 g，6.2 mmol)。授拌 18 小時後，在真空中濃縮該粗反應混合物且將其再懸浮於乙 酸乙酯中。以1 M KHS〇4洗滌此且經硫酸鎂乾燥有機層。 濃縮後得到澄清油（0·79 g)。將此溶解於乙二醇二甲醚（1 〇 ml)且向此添加Lawesson’s試劑（4.3 1 mmol Μ .74 g) «在室溫 下攪拌3小時後，在真空中濃縮該反應混合物且將該殘餘物 再懸浮於乙酸乙酯中。以1 M Na2C03洗滌此且經硫酸鎂乾 燥有機層。濃縮後得到黃色油。此係藉由急驟層析（庚烧/ 乙酸乙酯）純化以生成白色固體（0.73 g)。將其溶解於乙醇 (10 ml))且添加4-(2-溴-乙醯基）苯甲酸曱酯（3,34 mm〇卜 0.86 g)。將此反應於50°C加熱一小時。藉由急驟層析（庚烧 /乙酸乙酯）純化該粗產物’以生成白色固體（0.39 g)。ESMS (M+H=377.23) ’其係隨後水解至相應之酸。 4-[2-(1-二甲基胺基-2 -甲氧基-乙基）-嘴嗅-4-基]-苯甲酸（實 例 8.41) 將 Boc-L-絲胺酸（OMe)-OH(2.4 g，6.0 mmol)溶解於二口惡 烷（20 ml)且向此添加吡啶（0.31 ml)、二碳酸二-第三丁醋 (1.7 g，7.8 mmo丨）及碳酸氫銨（0.62 g，7.2 mmol)。攪拌 18 小時後’在真空中濃縮該粗反應混合物且將其再懸浮於乙 酸乙酯中。以1 M KHSO4洗滌此且經硫酸鎂乾燥有機層。 濃縮後，藉由急驟層析純化該粗產物，產生〇 55呂澄清油。 將此/谷解於乙一醇一甲越（20 ml)且向此添加Lawesson's試 劑（2.78 mmol)。在室溫下攪拌3小時後，在真空和濃縮該反 應混合物且藉由急驟層析（矽膠，DCM)純化該殘餘物，生 98786.doc . [qj ⑧ 成黃色油（2·甲氧基-1-硫代胺曱醯基-乙基）-胺基甲酸第三 丁酯（0.49 g)。 將該酯（〇_25 g’ 1.07 mmol)溶解於乙醇（1〇 ml)且添加4-(2- 溴-乙酿基）-苯甲酸甲酯（1.18 mmol，0_30 g)。將該反應於 5〇°C下加熱一小時。藉由製備HPLC(MeCN/H20)純化該粗 產物，產生0.138 g黃色固體。經由以4 M HC1/二噁烷處理 一小時移除Boc基團，其後在真空中濃縮該反應混合物。然 後將該游離胺（0.093 g，0.265 mmol)二曱基化。將粗HC1鹽 溶解於5 ml甲醇且以2.5 ml pH 5.5乙酸鈉/乙酸緩衝。添加 曱醛（0,58 mmol)且攪拌該反應一小時。然後添加氰基氫硼 化鈉（0.58 mmol，0.036 g)且將該反應攪拌另外三十分鐘。 在真空中濃縮該反應混合物且藉由製備HPLC純化，產生6〇 mg黃色固體。最後’以1 M LiOH(5ml)及二噁烷（5 ml)在室 溫下水解該甲酯兩小時。在真空中濃縮該反應混合物且由 水凍乾’產生62 mg的作為經鹽之所要之酸^ eSMs (M+H=307.04) 4-[2-(4-氟-1-甲基_α比咯咬_2_基）_噻嗤·4·基】-苯甲酸（實例 8.42) 以4 M HC1/二噁烷（10 ml)處理4-氟-2-[4-(4-甲氧基羰基_ 苯基）-噻唑-2-基]-吡咯啶-1_羧酸第三丁酯（0.丨g)2小時。然 後在真空中濃縮該反應混合物且由水凍乾，產生黃色固體 (〇· 8 g)。將該粗HC1鹽溶解於5 ml甲醇且以2.5 ml pH 5.5乙 酸鈉/乙酸緩衝。添加甲醛（0.38 mmol，0.0032 ml)且攪拌該 反應一小時。然後添加氰基氫硼化鈉（0.38 mmol，0.024 g) 98786.doc -106- 且將該反應攪拌另外三十分鐘。在真空中濃縮該反應混合 物且將該殘餘物再懸浮於乙酸乙酯中。以i M Na2C〇3洗務 此且經硫酸鎂乾燥該有機層。濃縮後，得到黃色固體（〇 〇75 g)。最後’以1 M LiOH(5 ml)及二嗯炫：（5 ml)室溫水解該曱 酯兩小時。在真空中濃缩該反應混合物且由水洗乾，產生 62 mg的作為鋰鹽之所要之酸。ESMS (M+H=3 06.8 8) 2-【4-(4·敌基-苯基）-雀峻-2-基]-4-氟-"比嘻咬缓酸（實例 8.43) 2-[4-(4·叛基-苯基）-售嗤-2-基】·4 -氣比嘻咬-i_叛後第三丁 基酯將該醯胺（0.32 g’ 1.37 mmol)溶解於乙二醇二甲_(1〇 ml)且向此添加Lawesson’s試劑（0·61 g，1.5 mmol)。在室溫 下搜拌3小時後’在真空中濃縮該反應混合物且將殘餘物再 懸浮於乙酸乙酯。將其以1 M NazCO3洗滌經硫酸鎮乾燥有 機層。濃縮後得到黃色油。此係藉由急驟層析（庚院/乙酸已 酯）純化’以生成白色固體（0.36 g)。將此溶解於乙醇〇〇 ml) 且添加4-(2-溴-乙醯基）-笨甲酸甲酯（0.41 g，ι·59 mmol)。 將該反應於50°C下加熱一小時。藉由急驟層析（庚烧/乙酸乙 酯）純化該粗產物，生成白色固體（〇_34 g)。然後以丨M LiOH(l〇 ml)及二噁烷（10 ml)處理該曱酯3小時。定量水解 後’在真空中濃縮粗產物且將殘餘物再懸浮於乙酸乙醋。 以1 M KHSO4洗滌此且經硫酸鎂乾燥有機層。在真空中濃 縮後，由乙腈/水;東乾該產物，產生白色固體之標題化合物 (0-32 g) 〇 ESMS (M+H=393.03)。 5-(4-Ν·曱基嗎啉基-2S-甲基氧基）苯幷呋喃羧酸鋰（實例 98786.doc -107- 1343384 8.36作為單一對掌異構物） 5-(4-b〇C-嗎啉-2R-甲基氧基）笨幷呋喃羧酸乙酯。 根據Heterocycles，1993 35, 1〇5_109所描述之方法製備 4-Boc-2R-羥曱基嗎啉。向聚合物載體之三笨基膦（2j爪爪〇1) 及羥曱基嗎啉（1.2 mmol)於乾燥二氣甲烷（5 ml)中之混合物 室溫添加乙基-5-羥基笨幷呋喃_2•羧酸（1 2 mm〇1)及 DIAD(1.2 mmol)。將該混合物攪拌另外16小時，過濾，以 乾燥二氣甲烷（5 ml)稀釋且在室溫下攪拌另—16小時。過 濾，在真空中濃縮且藉由於矽石上急驟層析（乙酸乙酯，己 院）純化，產生油之乙基-5-(4-boc-嗎琳-2R-甲基氧基）笨幷 吱喃叛酸酯（0.3 mmol), MS ES+ 中 m/z=406。 5-(4-N-甲基嗎琳-2R-曱基氧基）笨幷β夫喃緩酸鐘 將乙基-5-(4-boc-嗎啉-2R-甲基氧基）苯幷呋喃羧酸酯（〇 3 mmol)溶解於二噁烷中之HC1(4 Μ，15 ml)，在室溫下搜掉4 小時，在真空中濃縮至淺黃色油。將該粗苯幷呋喃鹽酸鹽 (0.3 mmol)及甲醛（0.35 mmol)混合於THF(5 mL)且添加二氣 二丁基錫（0.05 mmol) 〇在室溫下攪拌5分鐘後，添加笨基石夕 烷（0.6 mmol)且使該反應在室溫下攪拌另外1 7小時。然後在 真空中濃縮該反應且藉由急驟層析（石夕膠，乙酸乙g旨，異丙 醇，三乙胺）純化殘餘物，生成澄清油之乙基-5-(4-N-甲基 嗎啉-2R-曱基氧基）笨幷呋喃羧酸酯：MS ES+中m/z=320。 向於5 ml二噁烷中之乙基-5-(4-N-甲基嗎啉-2R-曱基氧基） 苯幷咬喃羧酸酯（0.6 mmol)添加於1 ml水中之LiOH(0.6 mmol)。將該混合物回流16小時’在真空中濃縮，生成白色 98786.doc • 108 · 1343384 固體之5-(4養曱基嗎啉·2R-曱基氧基）笨幷呋喃羧酸經：ms ES+ 中 m/z 292。 5-(4-N-甲基嗎啉-2S-曱基氧基）苯幷呋喃羧酸鋰 S-異構體：MS ES+中m/Z 292係作為白色固體白色固體根 據用以製備R·異構體之方法、但以4_B〇e_2S-羥曱基嗎淋取 代4-Boc-2R-羥甲基嗎啉來製備。 4-(3-甲基-5-嗎啉_4-基甲基-嘍吩-2_基卜苯甲酸（實例8.44)

將5-溴_4-甲基-嘍吩-2·羧酸曱酯（8.51 mmol)溶解於 EtOH(100 ml)且添加 NaOH(42,5 mm〇l)(作為於水中 M 溶液）。將反應於80°C下加熱2小時，其後已消耗全部起始 物質。然後在真空中濃縮反應且將殘餘物溶解於Dcm且已1 M HC1震盪。然後過濾所得之兩相混合物且以己烷洗滌濾出 物且在真空下乾燥。其生成灰白色固體之5_溴_4•甲基噻吩 -2-羧酸：MS ΑΡ-中 m/z=219, 221 [M-Η]·, 6.79 mmol，80%。 將5-溴-4-甲基吩-2-竣酸（6.79 mmol)溶解於30 ml DMF且添加嗎啉（7.47 mmol)、WSC.HC1(7.47 mmol)及 HOBt(7.47 mmol)。在室溫下攪拌反應17小時且然後以 EtOAc稀釋，以1 M HC1及鹽水洗滌，經NazSCU乾燥且在真 1中）辰細。急驟層析s玄殘餘物（石夕膠，33-50% EtOAc於己 烷），生成淡金色油之（5-溴-4-甲基·噻吩-2-基）-嗎啉基- 甲酮：MS ES+ 中 m/z=290, 292 [M + H] + , 4.67 mmol，690/〇。 將（5-漠-4-曱基-嗟吩-2-基）-嗎啉-4-基-甲酮（1,78 mmol) 添加至包含lMTHF·BH3於THF中之錯合物（4.45nm0l)的 燒瓶中。在N2下回流攪拌反應2.5小時。然後添加甲醇直至 98786.doc ⑧ -109· 1343384 氣體停止生成，隨後添加i 〇 ml 1 μ NaOH且回流攪拌該反 應另外7小時。將該混合物冷卻至室溫且以Et〇Ac萃取。在 真空中濃縮此萃取液且將該殘餘物溶解於i M HC1且以 EtOAc洗滌。然後以1 MNaOH鹼化酸層且以EtOAc萃取回。 移除溶劑’生成無色油之4_(5_溴_4·曱基·噻吩·2_基曱基）_ 嗎琳：MS ES+ 中 m/z=276, 278 [Μ+Η] +，0.98 mmol，55%。

將4-(5-溴-4-曱基-噻吩_2-基曱基）-嗎啉（〇·98 mmol)溶解 於10 ml甲苯且添加4-鲮甲基苯基關酸（0.98 mm〇1)(作為於1 ml EtOH中之溶液）。添加6 ml 2 M Na2C03水溶液，隨後 Pd(PPh3)4(0.098 mmol)。在氮氣氛下於70°c攪拌反應17小 時’且然後冷卻至室溫且以DCM萃取（χ2)。以鹽水洗滌組 合有機層，在真空中濃縮且藉由急驟層析（矽石，33_99〇/〇 EtO Ac於己烧中）純化該殘餘物。此提供蠟狀白色固體之純 4-(3-甲基-5-嗎啉-4-基甲基-噻吩_2-基）_苯甲酸甲酯：MS ES+中 m/z=332 [M + H]+，0.090 mmo卜 9%。 將此酯（0_09mm〇l)在18%HC1中於7〇t下加熱2小時，此 時HPLC顯示全部起始物質已水解。冷卻該反應且藉由過濾 收集作為白色固體的由溶液沉澱之該產物。此係不經進一 步純化而使用標準程序偶合。 3-甲基-4-(5-嗎啉-4·基甲基-呋喃_2_基）_苯甲酸（實例8.45) 向一三頸瓶饋入4-溴-3-曱基苯甲酸甲酯（2 18 mm〇i)、雙 (頻哪基）二硼（2.29爪111〇1)、乙醆鈀（0.065 111〇1〇丨）、乙酸鉀 (6.54 mmol)及DMF(1〇 ml)。藉由鼓泡經K氣3〇分鐘使該溶 液脫氣，且然後將其在N2下於8〇t：加熱3小時。然後將反應 -110· 98786.doc ⑧ 1343384 冷邠至至溫且添加4-(5_溴-呋喃-2-基甲基）-嗎啉（2.18 mmol)、碳酸铯（3,27 mm〇1epd(pph3)4(〇 〇65 。將該 反應加熱至80 C且攪拌另外1 7小時。然後以Et〇Ac&水稀釋 混合物且經由矽藻土墊過濾以移除黑色微粒。分離有機 層，以鹽水洗滌，且經NkSO4乾燥且在真空中濃縮。急驟 層析该殘餘物（矽石，10·99% Et〇AeK己烷中），生成灰色 粉末狀固體之3-曱基_4_(5_嗎啉_4_基甲基_呋喃_2基）_苯甲 酸甲 S旨：MS ES+中 m/z=316 [M+H]+，0.51 mmo卜 23%。 將此酯（0,51 mmol)在18%HC1中於7〇t下加熱2小時，此 時HPLC顯示全部起始物質已水解。冷卻該反應且藉由過濾 收集白色固體的由溶液沉澱之該產物。此係不經進一步純 化而使用標準程序偶合。 4-丨5-甲基-2-(4-甲基-六氫吡嗪_1_基）_噻唑_心基卜苯甲酸（實 例8.46) 室溫下將於DMF( 1 0 mL)中之4-丙醯基苯曱酸（890 mg，5 mmol)、NaHC03(1.26 g，15 mmol)及埃甲烧（935 μί，15 mmol) 授拌隔夜。以飽和NaCl水溶液（50 mL)稀釋該混合物且以趟 萃取（3x50 mL)。以水（50 mL)洗滌有機相，乾燥且蒸發。急 驟層析（90 g<5夕耀，2/1石油醚-EtO Ac)，生成4-丙醯基-笨甲 酸甲酯之白色固體（744 mg，77%)。 1H NMR (CDC13, 400 ΜΗζ) δ 1.24 (t，3H，J = 7 Hz)，3.03 (q， 2H，J = 7 Hz)，3.95 (s，3H)，8.0及 8.12 (ABq，4H) 將於THF(38 mL)中之4·丙醯基-苯甲酸甲酯（744 mg，3.87 mmol)、氫化三溴化吡咯啶酮（1.98 g)及2-α比咯烷酮（380 98786.doc -Ill - mg，4.5 mmol)在氮下於50°C下加熱3小時。將該混合物冷 卻、過濾、濃縮且然後再溶解於醚（50 mL)。依次以水（20 mL)、飽和硫代硫酸鈉水（20 mL)、飽和NaCl水（20 mL)及水 (20 mL)洗滌該醚溶液’乾燥且蒸發，生成黃色油之粗4_(2-溴-丙醯基）-笨曱酸甲酯（1.025 g)，其係直接用於Hantzsch 偶合。此物質含有9 1 %所需要之溴代酮、5%的起始物質及 4%的4-溴-1 - 丁醇，如藉由1H NMR所測定。 1Η NMR (CDC13, 400 MHz) δ 1.92 (d, 3H, J=7 Hz), 3.96 (s, 3 H)，5.28 (q, 1H，J=7 Hz), 8·07及 8.14 (ABq, 4 H) 將全部以上4 - (2 -漠-丙醯基）-笨甲酸甲I旨及六氫〇比。秦_ i _ 敌酸第三丁酯（J· Med. Chem.，1998, 5037-5054，917 mg， 3.73 mmol)在N2下、36 mL THF中於70°C回流2小時。過濾 沉澱物且蒸發濾出液，生成黃色固體。急驟管柱層析（矽 石’ 5/1石油醚-EtO Ac)，生成作為淺黃色固體的624 mg之 4-[4-(4-甲氧基幾基-苯基）-5 -曱基-°¾吐-2-基]-六氫比唤-1_ 羧酸第三丁酯。管柱層析該沉澱（矽石，2/1石油醚-EtOAc)， 生成32 mg更多化合物。總產率為44%。 1H NMR (CDC13, 400 ΜΗζ)δ 1.46 (s, 9H), 2.43 (s, 3H), 3.42,（m，4H)，3.54 (m，4H)，3.90 (s，3H)，7.68及 8.04 (ABq， 4H)。 將以上甲酯（564 mg，1.35 mmol)與 1.35 mL 2N NaOH、5 mL THF及3.65 mL水於60°C下加熱4小時。蒸發該反應混合 物’傾入20 mL飽和NaCl水及20 mL CH2C12，且然後在冰浴 中以5%檸檬酸酸化至pH 3。分離各層且以2χ 10 mL CH2C12 98786.doc •112· 1343384 進一步萃取有機相。組合有機相，以水（1 0 mL)洗滌，乾燥 且蒸發，生成淺黃色固體之4-[4-(4-羧基-苯基）·5-甲基-噻唑 -2-基]-六氫吡嗪-1-羧酸第三丁酯（537 mg，98%)。 1H NMR (CDC13, 400 ΜΗζ) δ 1.48 (s，9H)，2.47 (s，3H)， 3.47 (m，4Η)，3.57 (m，4Η)，7.74及 8.12 (ABq，4Η)。 13C NMR (CDC13, 100 MHz) δ ppm: 12.6, 28.3, 42.8, 48.1, 80.3, 119.1, 127.8, 128.2, 130.1, 140.5, 145.6, 154.6, 167.2, 171.4。 LCMS: (M + H)+ 404,（M-H)· 402。 將4-[4-(4-叛基-苯基）-5 -甲基-嗟唑-2-基]-六氫吼唤-1-竣 酸第三丁酯（0.421 mmol)溶解於1，4-二。惡烧中之4M HC1 中’且在室溫下揽拌1小時。然後真空移除溶劑，且將殘餘 物4-(5-甲基-2-六氫吡嗪-1-基-噻唑·4-基）_苯曱酸懸浮於甲 醇（10 ml)且以AcOH/AcONa緩衝劑（pH〜5.5，5 ml)及甲搭 (0.547 mmol)處理。在室溫下攪拌該反應混合物1小時，然 後以NaCNBH3(0.547 mmol)處理，且在室溫下攪拌隔夜。然 後真空移除溶劑且藉由管柱層析純化該殘餘物，產出標題 化合物（0.403 mmol，95%)。MS(ES) m/z 318 (1〇〇%， [M+H] + )。 ’ 4-(2-嗎啉基-噻唑_心基）·苯甲酸（實例ία) 將4-(2-溴乙醯基）苯甲酸〇 23晒〇丨）及^嗎啉硫代甲醞 胺（1.23 _卜 J. Med. Chem 1998, 41，5〇37-5〇54)混合於 ΓΓ10 ΓL) ’ ^後回流3 ·5小時。’然後使該反應混合物達到 至狐且错由過渡收集所得到之沉殿且以4份二乙越洗條。該 98786.doc -113 - 粗產物係由熱的1:1 EtOH-EtOAc結晶以生成無色針狀之初 產品（0.16 g ’ 0.55 mmol)。1H NMR (DMSO-d6，400 ΜΗζ) δ 7.94 (4Η, m), 7.49 (1Η, s), 3.72 (4H, m), 3.44 (4H, m) « 4·(2-六氩吡啶-1-基·噻唑·4·基）·苯甲酸（實例8 48) 將4-(2-漠乙醒基）笨甲酸（1.23 mmol)及1 -六氫η比咬硫代 甲醯胺（1 ·23 mmo 1)混合於THF( 10 mL)，然後回流3小時。然 後使該反應混合物達到室溫且藉由過濾收集所得到之沉澱 物且以3份之一乙喊洗蘇。該粗產物係由熱的1:1 EtOH-EtOAc結晶以生成無色針狀之初產品（0.28 g，0.95 mmol)。1H NMR (DMSO-d6, 400 ΜΗζ) δ 7.93 (4H，m), 7.40 (1H, s), 3.48 (4H, m), 1.60 (6H, m) 〇 4-(2-二甲基胺基-噻唑-4-基）-苯甲酸（實例8.49) 在室溫下向硫代羰基二咪唑（44.9 mmol)於THF(40 mL)中 之攪拌混合物分份添加於THF中之2 Μ二甲胺（44 mmol)，且 觀察到溫度上升。添加完畢40分鐘後，將該反應混合物於 5 5 °C加熱1小時，然後使其重新達到室溫。然後在真空中濃 縮該反應且藉由急驟層析（矽膠’石油醚_EtOAc)純化殘餘 物’生成中間物咪唑-1 ·硫代碳酸。二曱基曱醯胺。以新鮮 製備的氨於甲醇中之飽和溶液（4〇 ml)處理此物質60小時， 然後在真空中漢縮，且將沉澱之殘餘物懸浮於二乙趟且藉 由過濾收集。將該沉澱以二***洗滌且空氣乾燥，生成微 黃色固體（1.71 g，16.4 mmol)，其係用於隨後步驟。將4·(2_ 溴乙醯基）苯甲酸（1.23 mmol)及1 -六氫吡啶硫代曱醯胺 (1.23 mmol)混合於THF( 1 0 mL)中，然後回流3小時。然後使 98786.doc • 114- 1343384

S玄反應’/心合物達到室溫且藉由過渡枚集所得到之沉殿且以 3伤.一乙鍵洗務。6玄粗產物係由熱1:1 EtOH-EtOAc结晶以生 成無色針狀之初產品（0.1 g，0.40 mmol)。1H NMR (DMSO-d6,400 MHz) δ 7.94 (4Η, m), 7.37 (1Η, s), 3.11 (6H, m)。 4-[2-(異丙基-甲基·胺基）-5-甲基-噻唑_4基】苯甲酸（實例 8.50) 在0°C下向4-丙醯基苯曱酸（11·2 mrn〇i)、节醇（1」mL， 10.7 mmol)及二甲胺基吡啶（0.14 g，丨」mm〇1)於二氣曱烷 (90 ml)之溶液添加N-乙基-N'-(3-二曱基胺基丙基）碳化二 醯亞胺xHCl(2.4 g，12.3 mmol)，然後在室溫下攪拌隔夜。 然後以DCM稀釋該所得之溶液’依次以丨〇。/()檸檬酸水溶液 及飽和碳酸氫納水溶液洗滌’然後乾燥（Na2S〇4)，過濾且 在真空中 >辰结。急驟層析該殘餘物（石夕膠，石油醚_Et〇Ac)， 生成無色油’其靜置後結晶（2，67 g)。將以上該苄酯之一部 分（1 g，3_73 mmol)與 2-吡咯烷酮（0,37 g，4·33 mm〇丨）及三 >臭化吡咯啶酮氫（1.85 g，3.73 mmol)在THF中回流1.5小時。 使所得之反應混合物達到室溫，然後以Et〇Ac稀釋，依次以 水、10%硫代硫酸鈉水溶液、飽和碳酸氫鈉水溶液及鹽水 洗滌，然後乾燥（NazS〇4)，過濾且在真空中濃縮。將由以 上所得到之溴化物直接在THF(20 mL)中與異丙基硫代甲醯 胺（0.44 g，3.73 mmol)混合且回流隔夜，然後濃縮至矽石 上。急驟層析該殘餘物（矽膠，石油醚_Et〇 Ac_Et3N)，生成 淺紅色油（1 _ 2 8 g ’ 3 · 4 9 m m ο 1)。 98786.doc -115- 1343384 在0°C下向以上所得到之該噻唑衍生物（0.250 g，0.68 mmol)於乙腈（7 mL)、乙酸（1.3 mL)及37%甲醛水（2 mL)之攪 拌溶液添加氰基氫硼化鈉（0.09 g)，然後在室溫下攪拌隔 夜。添加額外氰基氫硼化鈉（0.08 g)，且攪拌額外2小時後， 以水稀釋該反應混合物，使用〇·5 Μ碳酸鈉水中和，然後以 二氣甲烷萃取。收集二氯甲烷層，乾燥（Na2S04),過濾且濃 縮。急驟層析（咳膠，石油趟-EtOAc)該殘餘物，生成微黃 色結晶固體（0.115 g)。1H NMR (CDC13, 400 ΜΗζ，）δ 8.09 (2Η, d), 7.72 (2H, d), 7.27-7.32 (5H, m), 5.38 (2H, s), 4.27 (1H，m)，2.9 2 (3 H, s)，2.4 2 (3 H，s)，1.2 2 (6 H, d)。藉由在 THF(2 mL)中於6(TC下以1 MUOH水（1.3 mL)隔夜處理來水 解來自以上之該苄酯（〇·25 g，0.66 mmol)。然後以l 〇%檸:檬 酸水溶液使所得到之溶液輕微酸性且使用二氣曱烷萃取。 然後乾燥有機層（NajO4)，過渡且濃縮。管柱層析該殘餘 物（矽膠，二氣曱烷-甲醇），生成作為結晶固體之標題化合 物（〇·19 g)，MS ES+中 m/z=3(M，其係藉由 hplc 及 MS 表徵。 4·(2_甲基胺基-噻唑-4-基）·苯甲酸（實例8·51) 向25 ml乙醇添加4-(2-溴乙醯基）苯甲酸（486 mg，2 m莫耳） 及N-甲基硫脲（18〇 mg，2 m莫耳）。將該反應混合物回流3 小時且TLC顯示起始物質消失及螢光產物形成。於冰上冷 卻。亥反應。過濾收集該產物且以預冷卻至〇(>c之乙醇兩次洗 滌（2x3 ml)，陂後以二乙蜮洗滌。乾燥後，得到486 產物。 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7.97 (2Η, d), 7.89 (2H, d), 7.32 (1H，s)，2.96 (3H，s)。 98786.doc •116· 1343384 4-[2-(4,4-二氟·六氩吡啶基）·噻唑_4基】苯甲酸（實例 8.52) 在〇°C下將於丙_(1〇 mi)之4,4-二氟六氫吡啶（鹽酸鹽， 1.57 g 10 m莫耳）及一異丙基乙胺（1.74 ml，1〇 m莫耳）緩 慢滴入乙氧基羰基異硫氰酸鹽（1.02 m丨，1〇 m莫耳）於丙酮 (10 ml)之混合物》當添加完畢時，在室溫下保持攪拌該反 應一小時。添加3N鹽酸（1 5 ml)且以乙酸乙酯萃取該反應混 合物。在真空中濃縮有機相。 •向該殘餘物添加濃鹽酸（20 ml)且將該反應於8〇t：保持5 小時。添加水（30 ml)至該反應。以碳酸銨中和後，以乙酸 乙酯萃取該反應混合物。以水洗滌有機相且真空乾燥，得 到粗製中間物4,4-二氟-六氫吡啶-丨_硫代碳酸醯胺（丨2 j g)。將來自以上之該殘餘物（36〇 mg，2 m莫耳）及4(2_溴乙 酿基）苯甲酸（486 mg ’ 2m莫耳）在THF(20 ml)中回流5小時。 TLC顯示起始物質消失及螢光產物形成。於冰上冷卻該反 φ 應。藉由過濾收集該固體。自乙醇再結晶該產物（380 mg)。 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7.96 (4Η, m), 7.51 (1H, s), 3.66 (4H, m)2.12 (4H，m)。 實例8.5 3-8.61及8.63中下列標題化合物之產率通常介於 30及90°/。之間。 4-(2-異丙基胺基·嘍唑_4•基）苯甲酸（實例8·53) 將異丙基-硫脲（2.47 mm〇i)及4-(2-溴-乙醯基）-苯甲酸 (2.47 mmol)混合於THF (12 mL)。在室溫下攪拌5分鐘後， 將该混合物於8〇°C下加熱2小時。減少體積至5 mL且然後將 98786.doc -117- 1343384 該混合物冷卻至-20°C且過濾。以少量二***洗滌該固體且 乾燥，MS ES+中m/z=263.1，其係藉由hplc及MS表徵且不 經任何進一步純化而用於下一步驟中。 3-[2-(4-甲基-六氩比嗪-1-基）-噻唑-4-基卜苯甲酸（實例8.54) 將4-甲基-六IL °比°秦-1 -硫代碳酸醢胺（2.47 mmol)及3-(2-溴-乙醯基）-苯甲酸（2.47 111111〇1)混合於1^?(12 1111〇。在室溫 下攪拌5分鐘後’將該混合物於80°C加熱2小時。然後將該 混合物冷卻至室溫且過濾。以少量二***洗滌該固體且乾 燥，MS ES+中m/z=304.1，其係藉由hplc及MS表徵且不經 任何進一步純化而用於下一步驟中。 3- (2-異丙基胺基·•噻唑-4-基）-苯甲睃（實例8.5S) 將異丙基-硫腺（2.47 mmol)及3-(2-溴-乙醯基）-苯甲酸 (2.47 mmol)混合於THF( 12 mL)。在室溫下攪拌5分鐘後，將 該混合物於80°C下加熱2小時。減少體積至5 mL且然後將該 混合物冷卻至-20°C且過濾。以少量二***洗滌該固體且乾 燥，MS ES+中m/z=263.1，其係藉由hplc及MS表徵且不經 任何進一步純化而用於下一步驟中。 4- (2_六氩吡啶·4·基-噻唑基）-苯甲睃（實例8.56) 將4-硫代胺甲醯基-六氫吡啶-1_羧酸第三丁酯（2 47 mm〇1) 及4-(2- >臭-乙酿基）-苯甲酸（2.47 mmol)混合於thF( 12 mL)。在室溫下攪拌5分鐘後，將該混合物於8〇〇c加熱2小 時。減少體積至5 mL且添加二***（5 mL)。然後將該混合 物冷卻至-20°C且過濾。以少量二***洗滌該固體且乾燥， MS ES+中m/z = 289.1，其係藉由hplc及MS表徵且不經任何 98786.doc I 丨 8 ⑧ 進一步純化而用於下一步驟中》 4-[2-(1-甲基-六氩吡啶-4-基）-噻唑-4-基】-苯甲酸（實例8.57) 向4-(2 -六氩。比咬-4 -基-嗟°坐-4-基）-笨甲酸（1 mmol)於乙 酸（0.5 mL)、曱醇（3 mL)及四氫呋喃（4.5 mL)之溶液添加甲 醛（含37%水，300 mL)及聚苯乙烯結合之氰基氫硼化物（2,36 mmol/g，900 mg)。然後將該研磨漿在室溫下攪拌16小時。 然後過濾該研磨漿且以甲醇（2 mL)洗滌該樹脂。將該溶液 在真空中濃縮至乾燥，MSES +中m/z=3 03.1，其係藉由hplc 及MS表徵且不經任何進一步純化而用於下一步驟中。 4-[2-(。比啶-3-基胺基）-嘍唑-4-基卜苯甲酸（實例8.58) 將°比咬-3-基-硫腺（2.06 mmol)及4-(2-溴-乙酿基）_苯甲酸 (2.06 mmol)混合於THF( 12 mL)。在室溫下授拌5分鐘後，將 該混合物於8 0 °C加熱2小時。然後將該混合物冷卻至室溫且 過濾。以少量二***洗滌該固體且乾燥，MS ES+中 m/z=298.0，其係藉由hplc及MS表徵且不經任何進一步純化 而用於下一步驟中。 4-[2-(吡啶-2_基胺基）-噻唑-4-基卜苯甲酸（實例8.59) 將吡啶-2-基-硫脲（2,06 mmol)及4-(2-溴·乙醯基）_苯曱酸 (2.06 mmol)混合於THF( 12 mL)。在室溫下攪拌5分鐘後，將 該混合物於80°C加熱2小時。然後將該混合物冷卻至室溫且 過濾。以少量二***洗滌該固體且乾燥，MS ES+中 m/z=298.0，其係藉由hplc及MS表徵且不經任何進一步純化 而用於下一步驟中。 4-(2-環戊基胺基-噻唑-4-基）-苯甲酸（實例8.60) 98786.doc -119- 1343384 將於氨（37%於水中，8 mL)中及甲醇（32 mL)中之異硫氰 基-裱戊烷（4 g)攪拌16小時，過濾且乾燥。將環戊基_硫脲 (2.06 mmol)及4-(2·溴-乙醯基）_苯甲酸（2〇6 合於 THF( 12 mL)。在至溫下攪拌5分鐘後，將該混合物於8〇。匸加 熱2小時。然後將該混合物冷卻至室溫且過濾。以少量二乙 鍵洗蘇s玄固體且乾燥’ MS ES +中m/z=289.05，其係藉由hplc 及M S表徵且不經任何進一步純化而用於下一步驟中。 4-(2·環丙基胺基-噻唑-4-基）-笨甲酸（實例861) 在〇°C下將異硫氰基-環丙烷（4 g)與氨（37%於水中，8 mL) 及甲醇（32 mL)混合且然後在室溫下攪拌丨6小時，然後將該 混合物冷卻至〇°C，過濾，以少許水洗滌且乾燥。將環丙基 -硫脲（2.06 mmol)及4-(2-溴-乙醯基）_苯曱酸（2.06 mmol)混 合於THF( 12 mL)中。在室溫下攪拌5分鐘後，將該混合物於 80°C加熱2小時。然後將該混合物冷卻至室溫且過滤。以少 量二***洗滌該固體且乾燥，MS ES+中m/z=261.0，其係藉 由hplc及MS表徵且不經任何進一步純化而用於下一步驟 中〇 4-[2-(環丙基-甲基-胺基）-噻唑-4-基】-苯甲酸（實例8.62) 將4-(2-環丙基胺基-噻唑-4-基）-苯甲酸（1.98 mmol)、甲基 峨（4.36 mmol)及碳酸鉀混合於DMF(20 mL)中，且在室溫下 攪拌72小時。將該混合物濃縮至乾燥且在二氣甲烷及水之 間分溶。乾燥有機層（MgS〇4)且濃縮至乾燥。將此固體與 THF(4 mL)、甲醇（2 mL)及 IN LiOH(3 mmol)混合且於 5〇。〇 下加熱1小時。然後將該混合物冷卻至室溫且添加IN HC1 98786.doc - 120- 1343384 直至pH 4。在真空中濃縮該混合物’然後將所得到之殘餘 物再溶解於二氣甲烷-甲醇且濃縮至矽石上。急驟層析該殘 餘物（矽膠，二氣甲烷-甲醇）’生成作為灰白色固體至標題

化合物（0.1 g)，MS ES+中 m/z=275.0，其係藉由 hplc及MS 表徵。 4-[2-(1-甲基-吡咯啶-3-基）-嘍唑-5-基】-苯甲酸（實例8.63) 將3-硫代胺甲醯基-吡咯啶-1-羧酸第三丁酯（2 47 mmol)、4-(2-溴·乙醯基）·苯甲酸（2.47 mmol)混合於THF(12 mL)中。在室溫下攪拌5分鐘後’將該混合物於8(rc加熱1 小時。然後將該混合物冷卻至室溫且過濾。以少量二乙崎 洗條該固體且乾燥，MS ES+中m/z=304.1。然後將此固體昆 合於二氣甲烷-三氟乙酸（2:1)且室溫保持20分鐘。將該混合 物濃縮至接近乾燥且濃縮一次係來自二氣甲院且依次係來 自於二***中之IN HC1。將剩餘固體與乙酸（0_5 mL)、曱醇 (3 mL)及四氫呋喃（4.5 mL)混合，且添加曱醛（含37%水，3〇〇 〇11^)及5^苯乙稀結合之氰基氫娜化物（2 % mmol/g，900 mg)。然後將该研磨漿在室溫下攪拌丨6小時。然後過濾該研 磨漿且以甲醇（2 mL)洗滌該樹脂。將該溶液在真空中濃縮 至乾燥，MS ES+中m/z = 289.〇 ,其係藉*hplc&MS表徵且 不經任何進一步純化而用於下一步驟中。 2-(1-甲基六氩吡嗪-4-基）-6-(4-羧笨-丨-基）·吡啶鹽酸鹽（實 例 8.64) 將2.6-二溴吡啶（11.8 g，50 mm〇1)溶解於二曱基曱醯胺 (50 ml)且添加1-甲基六氫吡嗪（5 〇 g，5〇 mm〇1)及碘化鈉 98786.doc -121 . (0·6 g)。然後將該溶液於8(rc下加熱30分鐘，然後使其達到 至/凰且以乙酸乙酯及水稀釋。小心萃取水層且收集有機 層乾燥（Na2S〇4)且濃縮。於矽石（以乙酸乙酯填充）上使用 乙馱乙酯-曱醇_三乙胺2〇:2:丨作為溶離劑急驟層析該殘餘 物。收集純淨溶離份且濃縮。 將1.54 g該殘餘物溶解於二甲氧基甲烷（48 m丨）且添加肆 二苯基膦鈀（0)(5.0 g)。將該溶液脫氣且在Nz下攪拌15分 鐘。添加4-乙氧基羰基苯基_酸（1 16 g)，隨後添加刊mi丄 酸氫鈉水溶液。再次將該溶液脫氣且加熱至回流且攪 拌12小時。過濾該溶液且以乙酸乙酯及二甲氧基甲烷小心 萃取過濾餅。蒸發萃取液且藉由於矽石（以乙酸乙酯填充） 上使用乙酸乙酯-甲醇-三乙胺2〇:2:1作為溶離劑急驟層析 純化。收集純淨溶離份且濃縮。將殘餘物溶解於3〇ml濃鹽 酸且回流12小時。蒸發該溶液，產生固體之標題化合物。 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 2.7 (3Η, m), 3.3 (4H, m), 4.5 (4H, m), 7.0 (1H, m), 7.4 (1H, m), 7.8 (1H, m), 8.0 (1H, m)，8.15 (1H, m), 11.5 (1H，bs)。 4·(6-嗎啉-4-基·吡啶·2-基）·苯甲酸鹽酸鹽（實例8 65) 將2.6-二溴吡啶（2‘0 g)溶解於二甲氧基甲烷及嗎啉（4 〇 ml)中且添加碘化鈉（0.3 g)。然後將該溶液加熱回流丨小時， 然後使其達到室溫。將所得到之溶液以乙酸乙醋稀釋，以 水洗滌，然後乾燥（NhSO4)，過濾且濃縮。使用逐步梯度 溶離（乙酸乙酿在己炫中20-33。/。）急驟層析該殘餘物。濃縮 純淨溶離份，且然後使其進行如實例8·64所描述之suzuki 98786.doc • 122- 1343384 偶合’然後如以上所描述藉由急驟層析純化。收集且濃縮 純“離份’然後將殘餘物溶解於3〇 m丨濃鹽酸且回流1小 時。条發所得到之溶液，產生固冑之標題化合物。败 (400 MHz, DMSO-d6) δ 3.6 (4Η, m), 3.7 (4H, m), 6.9 (1H, m) 7.3 (1H, m)，7.7 (1H，M), 7.9 (2H，m)，8.1 (2H，m)。 實例9 N-l(lS)小((3aS，6S，6aS)H3-氧基-六氣-咬味幷【3,2_b] 吡咯-4-羰基）-3-甲基-丁基丨_4_丨5_甲基-2_(4甲基_六氫吡嗪 -1-基）-噻唑-4-基】-苯甲醯胺之流體相合成

i)4M HCM，於二噁烷令 ii)Cbz-Leu-OH，WSC，HOBt，DCM iii)Dess-Martin 試劑，DCM iv)l，l，2 -三甲氧基乙烧’對 -TsOH，MeOH，60。(： v)H2/Pd(C)vi)RCOOH，WSC，HOBt ’

DCM vii)TFA a) [(lS)-l-((3R，3aR，6S，6aS)-6-氟-3·羥基-六氫-呋喃幷 98786.doc -123 - ⑧ 1343384 [3,2-b]°比。各-4-幾基）-3 -曱基-丁基]-胺基甲酸节g旨（2·) 將（3R，3aR，6S，6aS)-6 -氟-3-經基-六氫夫喃幷[3,2-b]°比嘻 -4-羧酸第三丁酯（l’）（20.24 mmol)溶解於ι，4_二-惡烷中之4M HC丨中，且在室法下搜拌1小時。然後在真空下移除溶劑， 且將殘餘物懸浮於二氣曱烧（50 ml)中，a&Cbz-Leu-OH(20.24 mmol)'WSC HC1(22.26 mmol)'HOBt(22.26 mmol) 及NMM(40.48 mmol)處理。在室溫下攪拌該反應混合物隔 夜，然後以飽和NaHCCh水洗滌，乾燥且濃縮。藉由管柱層 析（乙酸乙酯-己烷1:1，Rf 0,23)純化殘餘物，產出化合物 2(15,62 mmol，77%)。MS(ES)m/z 395 (100〇/〇，[M+H] + )。 b) [(18)-1-((338,68,6&8)-6-氟-3-氧基-六氫-呋喃幷[3,2-13] 。比咯-4-羰基）-3-甲基-丁基]-胺基甲酸苄酯（3·) 以 Dess-Martin 高蛾酿I (15.61 mmol)處理化合物 2’（ 15.61 mmol)於二氣曱烷（70 ml)中之溶液，且在室溫下授拌該反應 混合物隔夜。然後以飽和NaHC Ο 3水洗條該溶液，乾燥且漢 縮，且藉由管柱層析（乙酸乙酯-己烷1:1，Rf 0.37)純化，產 出化合物3(9.38!11111〇1’60%)。1^8(£3)111/7 393 (15〇/0，[1^+叫 + )， 411 (100%，[ΜΗ+Η20] + )。 c) [(lS)-l-((3aS，6S，6aS)-6-氟-3,3-二曱氧基-六氫-呋喃幷 [3，2-b]吼咯-4-羰基）-3-甲基-丁基]-胺基曱酸节酯（4·) 以1，1，2-三甲基原甲酸酯（24 ml)及對-TsOH(催化量）處理 化合物3’（8_49 mmol)於無水甲醇（50 ml)之溶液，且於60°c 攪拌3小時。然後將該反應混合物冷卻至室溫，真空移除溶 劑，且藉由管桎層析純化殘餘物，產出化合物4·(7.42 -124 - 98786.doc ⑧ mmo卜 87%)。MS(ES) m/z 439 (100%, [M+H]+)。 d) N-[(lS)-l-((3aS，6S，6aS)-6-氟-3,3-二甲氧基-六氫-呋喃 幷[3，2-b]吡咯-4-羰基）-3-甲基-丁基]-4-[5-甲基-2-(4-甲基_ 六氫0比嗪-1-基）-噻唑-4-基]-苯甲醯胺（5，） 將化合物4’（0.625 mmol)溶解於乙醇（15 ml)，且以催化量 之Pd( 10%重量Pd於碳）處理《在氫氣氛中攪拌該反應3_4小 時。然後經由石夕藻土餅過渡該反應混合物，且以乙醇洗條 該餅，混合有機萃取液且在真空中濃縮。然後將殘餘物溶 解於二氣甲烷（15 ml)且以4-[5-曱基-2-(4-曱基-六氫吡嗪 基）-噻唑-4-基]-苯曱酸（0.60 mmol)、WSC HC1(0.625 mmol) 及HOBt(0.62 5 mmol)處理。藉由HPLC監視該反應混合物。 當該反應已完成（4小時）時，以飽和NaHC03水洗滌該有機溶 液，乾燥且濃縮，且藉由製備HPLC純化殘餘物，產出化合 物 5(0.30 mmol，50%)。MS(ES) m/z 604 (100% [M+H] + )。 e) 义[(15)-1-((338,68,6&5)-6-氟-3-氧基-六氫-呋喃幷[3,2-1)] °比咯-4-羰基）-3-甲基-丁基]-4-[5-甲基-2-(4-曱基-六氫吡嗪 -1-基）-噻唑-4-基]-苯甲醯胺（6·) 將化合物5'(0.21 mmol)溶解於純淨三氟乙酸（2 ml)且在 室溫下攪拌。藉由HPLC緊密監視該反應以避免該三級醯胺 之分解。一旦起始物質消失後（3小時45分鐘）就在氮氣流中 移除TFA ’且將該殘餘物在乙酸乙酯及飽和NaHC03水之間 分溶’乾燥有機萃取液且在真空中濃縮，且將該殘餘物溶 解於乙腈-水1:1(2 ml)且凍乾隔夜，產出白色固體之化合物 6'(0.20 mmo卜 94%)。MS(ES) m/z 558 (10%, [M+H]+), 576 98786.doc -125, (100%，[ΜΗ+Η20] + )。 生物實例 組織蛋白酶K蛋白水解催化活性之測定 組織蛋白酶K之便利檢定係使用人類重組酶進行，諸如 PDB所描述者。 ID BC016058 標準；mRNA ; HUM ; 1699 BP。 DE智人組織蛋白酶K(密骨發育障礙），mRNA(cDNA純系 MGC:23107 RX MEDLINE; RX PUBMED: 12477932 〇 DR RZPD; IRALp962G1234 ° DR SWISS-PROT; P43235。 該重組組織蛋白酶K係可表現於多種市售表現系統，其包 括E coli、Pichia及Baculovirus系統。該純化之酶係可藉由 以習知方法移除該前序列（prosequence)來活化。 測定動力學常數之標準檢定條件使用螢光肽基質，通常 為 H-D-Ala-Leu-Lys-AMC，且係測定於 100 mM Mes/Tris、 pH 7.0，其含有1 mM EDTA及10 mM 2-巯基乙醇和100 mM 磷酸鈉、1〇1]^£0丁八、0_1%?£04000 卩^16.5或10〇111\1乙酸 鈉、卩115.5，其含有5 111]^£0丁八及2〇1111^半胱胺酸，在各個 情況中視情況含1 M DTT作為穩定劑。所使用之酶濃度為5 ηΜ。儲備基質溶液係以10 mM製備於DMSO中。篩選係於 60 μΜ之固定基質濃度中進行且詳細動力學研究為自250 μΜ基質之雙倍稀釋液。保持該檢定中總DMSO濃度低於 3%。全部檢定係於週圍溫度下執行。產物螢光（390 nm下激 98786.doc • 126- 1343384 發 ’ 460 nm下發射）係以 Labsystems Fluoroskan Ascent螢光 板讀數器監視。產物發展曲線係隨AMC產物之生成經1 5分 鐘產生。 抑制研究 以測試化合物之可變化濃度使用以上檢定來筛選潛在抑 制劑。藉由添加酶至經緩衝的基質及抑制劑之溶液來引發 反應。根據方程1計算Ki值。 vo + s (1) 其中V0為該反應之速度，v為最大速度，s為基質濃度， Michaelis常數KM，且I為抑制劑濃度。 化合物 於P1基團中帶有區別性鹵素取代基之本發明化合物係相 對於HWO 02057270之之個體化化合物來檢定〇

組織蛋白 酶 Κ Κ1 nM

CT V 0 66! 先前技術：w〇〇2〇57270之實例1〇 98786.doc •127· 1343384

*注意WO 02057270中指千的生义从七儿人仏 τ和不的先刖技術化合物之Ki效力低

0.1微莫耳’而該等以上試驗反映出在該相同檢定系統中精 確之並排試驗。 98786.doc 128-

Claims (1)

1. ^43384

   " 第094100535號專利申請索 中文申請專利範圍替換本(99年9月） 十、申請專利範圍： 一種式II之化合物，

   Ή之一個為_基且該另—個為时函基； R3為（:心直鏈或支鏈、視情況氣化之烧基； R4 為 Η ; V係為經噻唑基、5_甲基-噻唑基或噻吩基取代之苯基， 其中5亥噻唑基' 5_甲基-噻唑基或噻吩基係經取代基取 代，其取代基係選自下列之群：嗎啉基、嗎啉基甲基_、 六氫呲啶基、六氫吡啶基甲基_、六氫吡嗪基、六氫。比嗪 基甲基取代，其中任一個係視情況經Ci_c3烷基、氟、二 氟或Ci-C3烷基-O-Ci-C3烷基-取代；或其醫藥上可接受之 鹽或其溶劑化物。 2·如請求項1之化合物’其中R2為鹵基且尺1為Η。 3. 如請求項2之化合物，其中R2為氟。 4. 如請求項1之化合物’其中R3為Cl_c4支鏈烷基。 5. 如請求項4之化合物，其中R3為異丁基。 6. 如請求項1之化合物’其中該苯基係經噻唑_4_基、5-甲基 °塞唑-4-基或噻吩-2-基取代，其中該噻唑基、5 -甲基-嘍冰 基或噻吩基係經取代基取代，其取代基係選自下列& 98786-99090l.doc 1343384 群：嗎啉基、嗎啉基甲基、六氫吡啶基、六氫η比 基·、六氫吡嗪基、六氫吡嗪基甲基取代，其中任一土 / 視情況經6<3烷基、氟、二氟*Ci_C3烷 個係 -取代。 -Ci-c3燒基 7. 如請求項1之化合物，其中該噻唑基、5_甲基噻唑美或窠 吩基之該取代基為經甲基取代之六氫呲啶 又、經广C 烷基或甲基氧基乙基-予以N-取代之六氫吡嗪基，'或未^ 取代或經氟或二氟4-取代之六氫吡咬-1 _基甲茂。 8. 如請求項1之化合物，其係選自

   98786-990901.doc -2- 1343384

   或任一彼等化合物之醫藥上可接受之鹽。 9.如請求項8之化合物，其具有下式

   或其醫藥上可接受之鹽。 98786-990901.doc 预3384 1 Ο. —種化合物係選自

   〇

   丨或

   〇

   ，或

   0

   或任一彼等化合物之醫藥上可接受之鹽。 定義 11‘一種醫藥組合物，其包含如請求項中任—項 之化合物及其醫藥上可接受之載劑或稀釋^所 】2·如請求項1至1〇中任—項之化合物， 蛋白義調介之病症的藥物使用。㈣為^由組键 A 一種如請求項β1〇中任一項之化 藥物之用途，其令該病症係選自：製備治療病症之 骨質疏鬆症， 牙齦疾病， 佩吉特氏（Paget's)病 惡性高鈣血， 代謝骨疾病， 98786-99090I.doc 1343384 特徵為過度軟骨或基體降級之疾病， 骨癌，包括瘤形成， 疼痛。 14. 15. 16. 如請求項13之用途，其中該牙齦疾病為牙齦炎或牙周炎。 如請求項丨3之用途’其中該特徵為過度軟骨或基體：級 之疾病為骨關節炎及類風濕性關節炎。 t請求項1至10中任-項之化合物，其係作為治療病症之 藥物之用途，其中該病症係選自：

   骨質疏鬆症， 牙齦疾病， 佩吉特氏（Paget’s)病， 惡性南飼血， 代謝骨疾病， 特徵為過度軟骨或基體降級之疾病， 骨癌’包括瘤形成， 疼痛。 17.:請求項16之化合物’其中該牙齦疾病為牙銀炎或牙周 二=項16之化合物’其中該特徵為過度軟骨或基體降 、，及之疾病為骨關節炎及類風濕性關節炎。 98786-990901.doc