TW460459B - The preparation of 3-pyrroline-2-carboxylic acid derivatives - Google Patents

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A7 460459 B7 五、發明説明（1 ) 本發明係有關製備吡咯淋 2 -瘦酸衍生物之新穎方法° 以3，4 -去氫脯胺酸置換生物活性肽或肽模擬物中之脯胺 酸時，很少會喪失活性（A . Μ ·菲力斯（Felix)等人，Int. J. Pept. Prot. Res. 10. (1977) 299 ; C.R.包特斯（Botos)等人，J. Med. Chem. 22,（1979) 926 ; G.H.費雪（Fisher)，W.雷恩 (Ryan)，FEBS Lett. 107, (1979) 273);反之，有時候卻會提 高效果，同時降低毒性（G.H.費雪（Fisher)，W .雷恩（Ryan) FEBS Lett. 107. (1979) 273 ; S 納塔拉揚（Natarajan)等人， 述於E .葛洛斯（Gross)、J .麥恩霍福（Meienhofer)編輯，皮 爾斯化學公司（Pierce Chemical Company)之”肽之結構與生 物功能（Peptide，Structure and Biological Function ’ 1979 年，p.463)。 依文獻上所揭示之方法，以工業規模合成N -受保護之 3,4 -去氫脯胺酸之方法已有詳細説明，例如：依奇格夫 (Tchugaeff)法’由輕基捕胺酸進行熱順式消去反應，消去 S -甲基黃原酸酯。此方法之缺點在於大量使用甲基破， 且產生甲基硫醇及氧硫化碳（J.-R.杜梅（D〇rmay)等人’ Angew. Chem. 92. (1980) 761 ;胡本-惠爾（Houben-Weil) ’ 有機化學方法 (Methoden der Organischen Chemie)，Vol. 5/lb，126 (1972))。 吡咯-2-羧酸於發煙氫碘酸中’與碘化銹之還原作用亦 有問題，因爲大量使用氣態破化氫，且收量大幅下降，並 啓動大型聚合反應（J.W·史考特（Scott)等人，Synth. C ominini. 10(7)(1980) 529)° 換言之’受Boc保護之 4 -笨基 本紙張尺度適用中國國家樣準（CNS ) M規格（210XM7公釐） (讀先聞讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝. 訂 經濟部中央標準局員工消費合作社印繁 460459 A7 B7 五、發明説明（2 ) 亞涵酿基脯胺酸甲酯之消去反應在相當溫和之條件下進行 (J. -R.杜梅，Synthesis，£，（1982) 753)。該消去反應在室 溫下進行，且在高選擇性下產生A3_烯烴。熱順式消去反 應產生相當多量異構性△4烯烴。然而，二氧化站之消去 反應亦不利’因爲產生有毒之含硒殘質，在工廠規模之反 應中需要高成本之廢物處理，且先前消去之硒酸加至雙鍵 之加成反應亦不利，尤其當用於醫藥活性成份時，因爲極 少量之含硒化合物即會產生毒性。 N -經取代之3 ·甲確醯氧基吡咯啶可產生少量3 _吡咯琳 (T.烏諾（Uno)等人，j· Heterocycl. Chem. 24, (1987)1025)。 過去則從未説明由消去磺酸酯，例如：甲磺酸酯，來製造 3 -吡咯啉-2 -羧酸衍生物之方法。 文獻上曾揭示製備3 -吡咯啉-2-羧酸衍生物之方法則不 適合工業合成法。 本發明係有關製備式j 3 _吡咯啉_ 2 _羧酸衍生物之方法 ^------訂 {請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

R1 (I)， 經濟部中央標準局員工消费合作社印繁 其中

Rl爲H、Cl_C6·烷基、苄基、苯基上經取代之苄基、烯 丙氧援基、q-C6-烷氧羰基、芊氧羰基，其中苄基可 經OCH3自由基取代，或Ci_C4烷羰基，或 R1爲利用0末端連接之胺基酸殘基，且可於氮上烷基化 -5- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格 (210X297公釐） ^ 6045 9 A7 B7 五、發明説明（3 ) 或酿基化 且 R2 爲OH、CVC4-烷氧基、苄氧基或NR3R4， 其中R3與R4分別爲Η、CVCV烷基、苄基、苯基或吡 呢基’ R3與R4中之芳香系可經至多三個選自：甲基、 甲氧基、經基、氰基或南素中之相同或相異取代基取 代， 其係由式II化合物 ---------袭—I (請先閲讀背面之注意事項再填寫本I) Ο Ο (II). Ν J R1 經濟部中央標準局貝工消費合作社印裝 其中R1與R2如上述定義’且尺5爲(：1_<：6•烷基、芊基、三氟 甲基、莕基或苯基，其可未取代或經選自甲基、硝基或鹵 素之自由基取代， 藉由鹼之助，脱除磺酸殘基製成。 較佳R馬C1-C4-貌凝基、爷基、苯基上經取代之_基、 CVC6-虎氧碳基與爷氧凝基。若苄氧幾基經〇CH3取代時， 最好在對位上具有一個甲氧基。以Cl_c6_烷氧羰基特別 佳。 較佳R2自由基爲011與(：1彳4-烷氧基。 較佳R5自由基爲Ci-Ce-烷基與苄基，特定言之CrCr烷 基0 -6- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） A7 B7

460459 第86110659號專利申請案 中文說明書修正頁(88年11月) 五、發明説明（4 化合物I在5-員環中具有—個不對稱碳原子且化合物 II具有二個不對稱碳原子β 化合物可呈消旋物、非對 映異構物之混合物、及純非對映異構物及純對映.異構物使 用。因此可依作為前體之化合物立體化學結構及反應 條件而定’得到消旋物或旋光型化合物I。 式II化合物可依文獻所揭示之方法製備（例如：DJ阿布 拉罕（Abraham)，M.莫可特夫（Mokotoff)，LKSheh) ’ J.E.希蒙斯（Simmons) ’ J. Med. Chem. 26(4)，（m3) 549)。 若112為Ci-C4-烷氧基或芊氧基時，當消去式n旋光化合 物之磺酸殘基，亦即-〇-S〇2-R5基困時，會發生消旋化反 應。結果產生3，4 -二氫脯胺酸之消旋性醋，即可繼續進行 酵素性消旋物解析反應，產生D -與L - 3，4 -去氫脯胺酸二 種衍生物（方法A ): 方法A V·.

{R5=CH3v = 0CE3) V SO—CH, Ο 經濟部中央標準局員工消費合作社印袈

Rt CO.CH,

Rl ζ5.‘. CO,CH.

Rl 該方法之特別佳具體實施例包括使用式11化合物，其中 本紙乐尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） Α7 Β7 年 460459 第86110659號專利申請案 中文說明書修正頁(88年11月） 五、發明説明（ ） -------------------1 R2為Ο Η，並固定羧酸殘基之絕對组態，亦即相當於r或s 组態’因此不會發生消旋化反應即可得到相應之g I羧酸 酯。（方法B ):

方法B (R5=CH3, R2 = OK)

非質子性溶劑適用於消去反應A與B，特定言之DMF、 二氧陸園、THF、DME、DMSO、CH3CN，溶劑可以包含少 量水或醇》 ' 依製法而定，可使用1.0至1·5當量鹼（方法A)或2.0至 3_〇當量磁(方法Β)，適合之驗為组、納、4甲、蘇·、絶、 鈣或鎂之氫化物、胺化物及醇鹽，但以鈉及鉀者較佳。鈉 之醇鹽為較適用之鹼，合適之醇鹽殘基為第一、第二及第 三醇。亦可使用三-、二-或單乙二醇單醚型之二元醇、三 元醇 '醚醇或胺基醇。較佳者可述及：三乙二醇單甲醚' 二乙二醇單甲醚或乙二醇單甲醚' 二甲胺乙醇或2 _[2_(二 甲胺基）乙氧基]乙醇》 磺酸酯基團之消去反應甚至可在_2〇。(：之溫度下進行。該 反應通常可在-20°C至+1〇〇。〇下進行。在-1CTC至60t：下較 佳。利用方法A，自相應之酯中消去磺酸酯基團之反應甚 至在-20°C下’於所產生之3}4-去氫脯胺酸酯之α碳原子 -8- 本紙張尺度適用中國國家榇準（CNS ) A4说格（210X297公釐） ---------t------ir------.# {請先閲讀背面之注意事項再填寫本萸) 經濟部中央標孪局貝工消費合作社印裝 A7 B7 460459 第86110659號專利申請案 中文說明書修正頁(88年11月） 五、發明説明（β ) Ο " 上會發生消旋化反應》 令人驚訝的是，特別佳之B項製法可使用式II.前體進 行，其中R2為0H ’且羧酸殘基呈厌或5组態，幾乎未進行 消旋化°此項製法較適用之鹼為氫化物、第—醇鹽、第— 謎醇鹽或第一胺基醇鹽》以2 -甲氧乙醇鹽、2-(2 -甲氧乙 氧基）乙醇鹽或2-(2 -二甲胺基）乙氧基]乙醇鹽特別適用。 每當量前體最好使用2·0至2.5當量鹼•方法B之較佳反應 溫度範圍為- HTC至+ 25°C。 消去反應所使用之鹼可呈固體形式送入反應混合物中， 但亦可於反應前，在原位製備》若例如：消去反應所使用 之鹼為2 -甲氧乙醇鈉時，此鹼宜由適當醇滴加至較強鹼之 鈉鹽如：氫化鈉、第三丁醇鈉、或雙（三甲矽烷基）胺化鈉 之溶液或懸浮液中，於原位製備《該反應可依半分段式進 行，其係由鹼溶液流入溶解之式11前體中，或較佳者，由 式11前體之溶液流入鹼之溶液或懸浮液中。 反應混合物可利用蒸餾法、萃取法、結晶法、層析法、 或其組合進行操作= 所需之對映異構物可由消旋性3,4-去氫脯胺酸與（+)-或（_ )-酒石酸反應而分離出（參見J.W.史考特（Scott)等人， Synthetic Communications 10 (1980) 529 及 U.S. 4，111,951)，或可在製備Boc-保護之胺基酸之後，與旋光 性1-(4-硝苯基）乙胺進行消旋物解析反應（U.S. 4,066/58， J.-U.卡爾（Kah〇，T.威蘭（Wieland) * Liebigs Ann. Chem. (1981) 1445) » -9- 本纸張尺度適用中國國家標準（0〜5)厶4規格{210><297公釐） (請先Μ讀背面之注意事項再填寫本頁)

I 、π 經濟部中央秣準局I工消费合作社印装 460459 第86110659號專利申請案 中文說明書修正頁(88年11月） 五、發明説明（7 ) 利用較佳製法B ’在未進行消旋化下，所製成之N -受保 護之3，4 -去氩脯胺酸宜與非對掌性胺形成銨鹽結晶純化。 特定^之’可呈二乙按鹽得到純型之L-boc-3,4 -去氫脯 胺酸。 因此本發明係有關式I V化合物

COOH

I 胺 (IV), (請先Μ讀背面之注意事項再填寫本頁) 其中R為胺基保護基’且胺為單燒胺、二烧胺或三規胺， 其中烷基含有1至4個碳原子，且可被c5_7-環烷基置換， 及其旋光性D與L型。R1為boc保護基較佳，且"胺"為二乙 胺或二環己胺較佳。 依製法A得到之酯可利用酵素如：脂酶、酯酶及蛋白酶， 極有效地部份裂解，產生游離酸之一種對映體，而其他對 映體則仍呈酯型。 該製法中可使用許多種酵素作為水解酶β以蛋白酶、酿 酶及特定Τ之，脂酶較適用。微生物性脂酶為特別適合之 脂酶’且可自例如：酵母或細菌中分離。其他特.別適合之 水解酶為可自Novo Nordisk得到之酵素商品（酵素

Toolbox)，特定言之脂酶SP 523、SP 524 ; SP 525、SP 526 l®Novozym 435。 尚可使用脂酶” Chirazyme L1至LS"'其可得自市售商品 (百靈藥廢（Boehringer Mannheim)，適用於根據本發明之 -10- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4現格（2丨0X297公釐） *π 經濟部中央橾準局員工消費合作社印裝 經濟部中央標準局負工消費合作社印裝 A7 B7 五、發明説明（8) 方法中。亦可使用酯酶（如：豬肝酯酶）。 酵素可呈原型或固定型使用。 酯之裂解係於pH 6至8之緩衝液中，且最好在室溫下進 行0 該新穎製法可依極簡單方式，製成化合物I。此點對製 備去氫脯胺酸衍生物而言特別重要，因爲其製法迄今仍非 常困難，且有時候，收率差。 旋光性N -受保護之3 -吡咯啉-2 羧酸衍生物特別適合依 新穎製法，得到游離酸型，或得到酯型，最後利用酵素釋 出游離酸。 若利用酵素處理法，由酯製備旋光性酸時，酯之對映體 之一通常仍不會改變。後者可例如：經鹼消旋化，並再進 行酵素性裂解。 本發明之優點在於首次在簡單且溫和條件下，同時在環 境可接受之反應條件下（即使爲工業規模生產）製備純立體 型之3,4 -去氫脯胺酸衍生物。令人驚訝的是，甚至在極 低溫度下仍可進行磺酸殘基之消去反應。 依新穎製法製得之物質極爲有利。其爲例如：用於製備 作爲凝血酶抑制劑之低分子量肽衍生物之有價値之中間物 (參見WO 94/29336)，且其中脯胺酸殘基被去氫脯胺酸殘 基置換。此外並發現，3,4 -去氫脯胺酸可用於抑制膠原 蛋白合成（US 4,066,658)。 根據本發明方法得到之粗產物特別有利於繼續加工，其 不需純化即可反應製備下一個用於製備肽衍生物之中間 -11 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公竣） III -裝 訂'" (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) ：-46045 9 A7 B7

CO.——NH——CH2——X Rl 11τ>

其中R1如上述定義，且X爲 R6 ——CN, —(^J)— CN 或 (Ρ = H, CH3, 〇CH3, OH 或由素 其製法係由化合物Ϊ於鹼（如：三乙胺或二異丙基乙胺）或 縮合劑（如：pp A、特戊醯氣或二環己基碳化二亞胺/羥基琥 拍酿亞胺）之存在下活化，隨後與h2N_CH2_x連接，產生 式III化合物。該反應宜於溶劑中如：二氣甲燒、THF、二 氧陸園、第三丁基甲基醚、〇 ME或乙腈中，於-20至+30。 下進行。 實例 實例中採 B n s = Β 〇 c = DIPEA = DUE = DMF = K O t B u = -12- 本紙張从適财_家縣（CNS > Α4· ( 21GX297公釐） --------政------，玎---；---、 f請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 用下列縮寫： 苄磺醯基 第三丁氧羰基 一異丙基乙胺 二甲氧乙烷 二甲基甲醯胺 第三丁醇鉀 經濟部中央標準局員工消費合作社印策 460459 A7 B7 經濟部中央標隼局員工消费合作社印装 五、發明説明（1Q) Ms =甲磺醢基 PP A =丙磷酸酐 Pro =脯胺酸 Pyr =3,4-去氫脯胺酸 RT =室溫 THF =四氫吱喃 A.起始物之製法a) Boc-(L)-(4-MsO)-Pro-OCH3 與 Boc-(L)-(4-Bns〇)-Pro-OCH3: 由（4R)-N-Boc-4-^基-(L)·脯胺酸甲醋與甲確酷氣反 應’產生（4R)-N-Boc-4·甲績酷氧基_(l)_脯胺酸甲醋 (D.J，阿布拉罕，M.莫可特夫，L·謝，JE希蒙 斯，Med· Chem，26(4)，（1983) 549)。類似與甲磺 醯氮之反應，使用芊磺醯氯製得（4R)-N-Boc-4-苄磺 酿氧基-(L)-脯胺酸甲酯，自乙醇中再結晶後，收率 76%。iH-NMR (CDC13，d ppm):7.40 與 7.28 (s，5H, 芳香系），4.95 與 4.85 (m，1H，O-CH)，4.40 (s，2H, S02-CH2)，4.4-4.25 (1H，N-CH)，3_72與 3.71 (s，3H, C02CH3) ’ 3.7-3.50 (2H, N-CH2)，2.53-1.95 (2H, CH2, 1.45 與 1.42 (s，9H，Boc) ; (2種幾何異構物）。 b) (4R)-N-Boc-(4-MsO)-Pro-OH: 取 l86克（575 毫莫耳）Boc-(L)-(4-MsO)-Pro-OCH3 甲酯 於5 0 0毫升二氧陸園及1150毫升1NNaOH中，於0°C 下水解2.5小時。以醚萃取後，以2 N鹽酸調整水相 -13 - (請先聞讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂. & 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 46045 9 經濟部中央標準局員工消費合作杜印装 A7 B7 五、發明説明（11) 至pH 3，以乙酸乙酯萃取產物。經Na2S04脱水，並 完全汽提排出溶劑，產生1 6 3克（9 2 % )黃色油，純 度9 4 %。產物緩緩固化； [a]D22 = -50.5° (c=1.01 ; MeOH);自二異丙醚中結晶 後 'H-NMR (CDC13，d ppm):約 9-8 (COOH)，5.35-5.20 (m，1H，O-CH)，4.60-4.40 (1H, N-CH)，3.95-3.65 (2H, N-CH2)，3.08 (s, 3H，S02CH3)，2.85-2,25 (2H, CH2)，1.50 與 1.40 (s，9H，Boc) ; (2 種幾何異構物） B.終產物之製法 實例1

Boc-(D/L)-Pyr-OCH3之製法： a)取 100克（309毫莫耳）Boc-(L)-(4-MsO)-Pro-OCH3溶於 600毫升無水DMF中。於0-5°C下，於1小時期間， 滴加含36.45克（325毫莫耳）KOtBu之300毫升無水 DMF溶液，績於0至5°C下攪拌30分鐘，於RT下撥 拌2小時。混合物倒入冰-水中，以醚/乙酸乙酯 5 : 1萃取3次，有機相以水再洗滌一次。經Na2S04 脱水，於35°C下，完全汽提排除溶劑。得到6 8克粗 酯，於100-102°C及1 .7毫巴下蒸餾。所得無色油會 固化（收率5 6 % )。 ^-NMR (CDC13, ^ ppm): 6.05-5.95 (m, 1H, -CH=CH- )’ 5.80-5.67 (m，1H, -CH=QH·)，5.05 與 4.98 (m, 1H, N-CH)，4.35-4.15 (m, 2H, N-CH2)，3.75與 3.74 (s，3H， -14- 本紙張尺度逋用中國國家標準（CNS ) Α4規格（2!〇X 297公釐） ^^^^1 tt- *f^n n I Erl· ^^1 (請先閔讀背面之注意事項再填寫本頁)

、1T Λξ. 460459 經濟部中央樣準局員工消f合作社印製 A7 B7 _五、發明説明（12) C02CH3)，1.47與 1.43 (Ss 9H，Boc) ; (2種幾何異構物） b) 由芊磺酸酯Boc-(L)-(4-BnsO)-Pro-OCH3亦得到相同 化合物（Boc-(D/L)-Pyr-〇CH3)。取 5 克（12.5 毫莫耳） 該芊磺酸酯之50毫升無水DMF溶液，滴加至-l〇°C 下，含0.5克（12.5毫莫耳）NaH之10毫升無水DMF懸 浮液中，然後於RT下攪拌一夜，類似a)中甲磺酸 酯之消去反應進行操作，得到2.2克粗酯。產物經 矽膠管柱層析純化（移動相：乙酸乙酯/己烷2:3)。 然而最好進行蒸餾法，因爲發色團微弱。 實例2 Boc-(L)-Pyr-OH之製法： a)取 50.0克（161.6毫莫耳）Boc-(L)-(4-MsO)-Pro-OH溶於 650毫升DME中（其中添加25毫莫耳水），於45分鐘 内滴加至室溫下，含14.5克5 5-65〜811(約3 64毫莫 耳）之400毫升DME中，在未冷卻下，溫度上升至約 30°C。混合物於R T下再攪拌1 5小時後，於5 0 °C下 攪拌1小時，隨後倒入冰-水中，以醚/乙酸乙酯 2 : 1洗滌3次。水相以2 N鹽酸酸化至pH 2，以乙酸 乙酯萃取產物。經Na2S04脱水，完全汽提排除溶 劑，產生3 6克粗物質之黃色油，其中含7 0 %產 物。發現產物/前體比例爲97:3 (HPLC:水/乙腈8:2 + 0.1% TFA ;默克（®)Purospher RP-18e ;於 210.4 nm 下 檢測），且對映異構物比例（L):(D)爲90:10。當酸性 基團與3 -吡啶甲基胺衍生物偶合後，於對掌性 -15- — I I I 裝 I I I I —訂— I . (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4规格（210X297公釐） 4 6 0 4 5 A7 B7 經濟部中央標準局貝工消費合作社印聚 五、發明説明（13) HPLC管柱上檢測對映異構物部份爲Boc-3，4-去氫脯 胺酸3 -吡啶甲基醯胺。先前之檢測顯示，偶合作用 發生時並未出現消旋化。 依類似反應，但改用3當量NaH，並於RT下攪拌4 小時，產生65%產物（產物：前髏=94:6， (L):(D)=96:4)。 'H-NMR (CDC13, δ ppm):10.5-9.5 (COOH) » 6.10-5.90 (1H, -CH=CH-) » 5.88-5.70 (1H, -CH=CH-) > 5.12-4.95 (1H, N-CH) » 4.30-4.15 (2H, N-CH2) * 1.55-1.35 (9H, Boc) ; (2種幾何異構物） 依傳統之消旋物解析法，使Boc-3,4-去氫脯胺酸 與（+ )-去氫松香胺呈相應銨鹽自丙酮中結晶，不需 再結晶，且消去胺後，分離出Boc-(L)-3,4-去氫脯胺 酸，純度8 5 %，對映異構物比例（L):(D)=96:4。 b 添加46.2克等三戊醇鈉（398.5毫莫耳）至150毫升THF 中。然後於10°C下，添加32,9克2-甲氧乙醇（429.5 毫克）。在不使内溫超過8至10 °C下，滴加含5 0克 Boc-(L)-(4-MsO)-Pro-OH (159‘4 毫莫耳）之 1〇〇 毫升 THF溶液。添加結束後，混合物於l〇°C下再攪拌2 0 小時。於5至10°C下添加300毫升冰-水後，以5 0毫 升甲基第三丁基醚萃取一次，然後以鹽酸酸化至pH 2。以二氣甲烷萃取粗產物，待蒸發排除溶劑後， 分離出黃色油。重40.9克，經HPLC分析法，以内標 準校正（初梯度溶液水（0.1 % H3P04) /乙腈70:30 ;管 -16- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4現格（210X297公釐> ^ia— I 1^1 m ^^^1 UK— n^i (請先閱讀背面之注項再填寫本頁) 460459 經濟部中央標率局員工消費合作社印裝 A7 B7 五、發明説明（14) 柱：Prodigy (ODS3) 100A ;於 210 nm 下檢測），判斷 其中有1 8克爲Boc-(L)-3,4-去氫脯胺酸。同樣地由 HPLC分析法（己烷/異丙醇8.75:1.25，〇.ι〇/〇 HC00H ;管柱：Chiracel 0D於 230 nm下檢測），判 斷（L):(D)對映異構物比例爲99:1。 取 7 0 克 Boc-(L)-(4-MsO)-Pro-OH ( 224 毫莫耳）於類 似條件下反應。以二氣甲烷萃取後，粗產物利用蒸 餾溶劑交換法，轉移至220毫升甲基第三丁基趣 中，添加16.5克二乙胺（224毫莫耳），使其中所含之 Boc-(L)-3,4-去氫脯胺酸呈二乙銨鹽沈澱析出。得到 23.8克此鹽。依上述HPLC分析法無法測得依此方式 沈澱得到之產物中之（D )對映異構物。 ^-NMR (DMS0, δ ppm):5.86-5.67 (2H, -CH=CH~)， 4.6-4.5 (N-CH)，4.1-3.9 (N-CH2)，2.88-2.7 (4H q， NCH2CH3)，1.45-1.25 (9H，2種幾何異構物），1,2-1.05 (6H, NCH2CH3) [λ]022 = -240.1 ° (C=1‘08，MeOH)

熔點：130-133°C c)添加10·52克雙（三甲矽烷基）胺化鈉（57.4毫莫耳）至 2 5毫升THF中，於冷卻下，以1 5分鐘時間滴加含 8.25克2-[2-(二甲胺基）乙氧基]乙醇（62毫莫耳）之 1 5毫升THF溶液後，於RT下攪拌3 0分鐘。然後於 •5°C 下，取7.1 克 Boc-(L)-(4-MsO)-Pro-OH(23.0 毫莫 耳）溶於15毫升THF中，以20分鐘時間滴加，混合 -17- 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS > A4規格（210X297公釐） ---------•敎------钉------1 斗 f請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁j 4 6045 9 經濟部中央揉準局員工消費合作社印製 A7 B7_五、發明説明（15 ) 物於-5 C下攪掉1小時，於〇°C下措拌2小時，於 RT下擾拌一夜。倒至125克冰水上，以甲基第三 丁基酿萃取4次，水相以60毫升10%強度檸檬酸酸 化至pH 2.2,於RT下攪拌一夜。以甲基第三丁基醚 萃取反應溶液3次後，收集之有機相依序以水，飽 和鹽水及水洗滌，以硫酸鎂脱水，及減壓濃縮。得 到4‘ 1克Boc-(L)-3,4-去氫脯胺酸粗產物溶於20毫升 甲基第三丁基謎中，滴加含1.35克二乙胺（18.52毫 莫耳）之10毫升甲基第三丁基醚溶液。添加石油 醚，使鹽完全沈澱。抽吸過濾產物，乾燥，產生 4.0克Boc-(L)-3,4-去氫脯胺酸。自母液中亦得到第 二批0.3克晶體’此表示所需產物之總收率爲 66%。 實例3 Boc-(D，L)-Pyr-OH之製法： 滴加13克異丙醇（215毫莫耳）至冷卻下含8克60% NaH(200毫莫耳）之150毫升DME中。待H2停止釋 出後，於0°C 下，添加含25 克 Boc-(L)-(4-MsO)-Pro-OH (80毫莫耳）之1 00毫升DME溶液。於〇°C下1小 時後’於20 C下加溫20小時，添加150毫升水，以 甲基第三丁基醚萃取一次後，以鹽酸酸化至pH 2， 並以二氣甲烷萃取。產物重爲17克。由HPLC分析 法（己烷 / 異丙醇 8.75:1.25，0,1% HCOOH ;管 柱：Chirancel OD ’·於230 nm下檢測）判定（L):(D)對映 -18 - I I * n I H ^'" (請先閲讀背面之注^^項再填寫本頁〕 本紙杀尺度適用中國國家揉準（CNS ) A4規格（2丨0 X 297公釐） A7 460459 B7 五、發明説明（16 ) 異構物比例爲57:43。 實例4 ---- - n I I I - XT *τ (請先閱讀背面之注項再填寫本頁)

Boc-(D/L)-Pyr-OCH3形成 Boc_(L)-Pyr-OH之酵素裂解法： 取含5.68克（25毫莫耳）8〇〇(0/1〇-?丫1"-0(：113之1〇〇毫升 磷酸鹽緩衝液（pH 7.0)與1 5毫升THF與3.12克® Novozym 435於RT下振盪2 4小時。此期間，添加IN NaOH，調回 p Η至原來數値。由消耗氫氧化鈉溶液之情形追踪反應 過程。滤除固體，濾液經IN NaOH調至pH 10，以乙酸 乙酯/醚1:1萃取未反應之對映體B〇c-(D)-Pyr-OCH3。水 相以1N鹽酸調至pHl，以乙酸乙酯萃取產物Boc-(L)-卩丫|*-0113次，得到2.14克產物，自甲苯/己烷或醚/己 烷中結晶。結晶後，產物之旋光度爲[a ]D22=-273.8 ° (c=1.03 ;甲醇）（文獻：[a ]D25=272。（c=1.0 ;甲醇）J.-U. 卡爾，T .威蘭，Liebigs Ann. Chem.基，（1981)，1445)。 應用實例1 經濟部中央標準局員工消費合作社印裝 H-(L)-Pyr 6-胺甲醯基吡啶甲基醯胺二鹽酸鹽之製法： 滴加5.3毫升（30.3毫莫耳）DIPEA至-10Ό下，含1.5克實 例2粗產物Boc-Pyr-OH之30毫升二氣甲燒中，5分鐘後， 添加1.58克（7.0毫莫耳）6-胺甲醯基_3_吡啶曱基醯胺二鹽 酸鹽，再過5分鐘後，添加含5.7毫升（7.9毫莫耳）PPA (50%強度之乙酸乙酯溶液）之5毫升二氣甲烷。使反應混 合物以1小時時間，自-1 〇eC回溫至〇 X：，然後以二氣甲烷 稀釋，依序以飽和NaHC03溶液、5%強度檸檬酸及飽和鹽 -19- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) X4規格（2丨〇x297公羞） A7 B7 經濟部中央標準局貝工消費合作社印製 五、發明説明（1?) 水洗滌。有機相經NajO4脱水，完全汽提排除溶劑，產生 1 · 8克粗產物B〇c_(L)-Pyr-6·胺甲醯基_3_吡啶甲基醯胺， 於30毫升〇.9M HC1異丙醇溶液中，於50χ下攪拌5〇分 鐘。抽吸過濾排除此期間所形成之沈澱，溶於少量曱醇 中’經異丙醇沈;殿’再排除一次。於45t下減恩乾燥，產 生2.0克H-(L)-Pyr6-胺甲醯基-3-吡啶甲基醯胺二鹽酸鹽之 白色粉末（純度 95%) ; (L):(D)>99:1。 111"^111(〇148〇-<16，{^卩卩111):10.9與8.9(各111，->〇12·®)， 9,77 (t，1H，CO-NH)，8.60，8.10 與 8_00 (各 1H，芳香系 H)，8‘25與 7‘75 (各 1H, OC-NH2)，6.03 (s, 2H，-CH=CH-)， 5.10 (1H, N-CH-CO) 4.47 (d, 2H, CH2) 4.00 (2H, CH2) 應用實例2 H-(L)-Pyr 4-CN-爷基酿胺鹽酸鹽之製法： 取10.0克粗產物Boc-Pyr-OH與6.2克對氰基芊胺依應用 實例1反應。操作後，產生14.7克粗產物8〇〇(1^邛丫【4-0^-苄基醯胺，於230毫升1MHC1之異丙醇溶液中，於50°C下 攪拌2小時。溶液冷卻至R T，物質開始緩緩沈澱。抽吸過 濾排除固體。得到3.7克H-(L)-Pyr 4-CN-芊基醯胺鹽酸鹽白 粉末（純度 96%; (L):(D)>99:1)。 ㊉ W-NMR (DMSO-d6，β ppm) ; 10‘9與 8.9 (各 1H，-NH2-) ’ 7.82與 7.47 (各 2H，芳香系 Η)，6,02 (s，2H，-CH=-CH-) ’ 5.10 (1H, N-CH-CO) 4.45 (d, 2H, CH2) 4.02 (2H, CH2) -20 紙張尺度適用中國國家標準（CNS )八娜（210X297公釐) ----------装------訂------4. (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

Claims (1)

1. 正充修補 ΊΓ日 2. 12 9.年一^?— S 8 8 Do ABCD 4 6 0杂§51¾659號專利申請案 中文_請專利範I

   1. 一種製備式I 3 -吡咯'林-2 -叛酸衍生物之方法

   其 R1 中 且 R2 為Η、Ci-Cg -燒基、爷基、苯基上經取代之节基、烯' 丙氧羰基、Ci-Cp烷氧羰基、苄氧羰基，其中爷基可 經OCH3自由基取代’jQ-Cj-烷羰基； 為OH、CrCV燒氧基、苄氧基或NR3R4， 其中R3與R4分別為Η、CVC4·烷基 '苄基、苯基或吡 症基，R3與R4中之芳香系可經至多三個選自·甲基、 甲氧基、輕基、氰基或南素中之相同或相異取代基 取代， 此法包括由式1.1化合物 u I ^^1 1 — .^1 I - - I - L - I I -- 4rSJ (锖先M讀背面之注意事項存填寫本X.) 經濟部中央摞率扃貝工消費合作社印製 S〇i——R5

   t-I) 其中R1與R2如上述定義，且R5為Ci-CV烷基、罕基、三 氟甲基、莕基或苯基，其可未取代或經選自甲基、确基 或鹵素之自由基取代， 本紙伕尺度適用申國國家揉準{ CNS ) A4见格（210X297公釐） 4 6 0 4-5 9 ABCD 夂、申請專利範圍 藉由鹼之助’脫除磺酸殘基製成。 2. 根據申請專利範園第1項之方法，其係製備旋光性3 _吡 洛琳-2 -羧酸’其中藉由鹼之助，自式π化合物，其中 R1與R3如上述定義，且R2為（^/厂烷氧基或芊氧基，消 去碍酸殘基，依此方式所得之消旋性酯經脂酶、酯酶以 及蛋白酶等酵素處理，釋出旋光性游離酸，且適當時呈 銨鹽型式分離。 3. 根據申請專利範圍第1項之方法，其係製備旋光性3 _ ^比 洛啉-2 -羧酸，其中藉由鹼之助，自式Π化合物，其中 羧酸殘基呈（R)或（S)組態，R1與R5如上述定義，且民2為 OH ’消去續酸殘基，且若需要時，使依此方式得到之 產物轉化成銨鹽，用於純化及分離》 4. 一種製備式丨Π化合物之方法 CO — NH — CH2— X 其中 R1如上达定義，互 >；爲

   (請先閲讀背面之注$項再填寫本頁) 裝 訂 經濟部中央標率局貝工消費合作社印裝 /ΓΝ /Γ~^' 〇 ck, —〈〉— cn 〇r = H, C：-：,, 〇ch3/ 〇,h 成 έ 素 卜 其包括由根據申請專利範圍第1，2或3項製備之化合物 與 NH2-CH2-X反應。

   ，2- 本纸乐足度適用中國國家榇準（〇阳）人4况格（2!0\ 297公釐） 9 5 4 ο 6 1*- ABCD 申請專利範圍 5. —種式I V化合物 〇- COOH N I R1 (IV), 其係根據申請專利範圍第1至4項中任一項之方法所製 得， 其中R1為胺基保護基團，且胺為單-，二-或三烷胺，其 中烷基含有1至4個碳原子且可被C5_7-環烷基置換。 6. 根據申請專利範圍第5項之式I V化合物，其中R1為Boc 保護基團，且胺為二乙胺或二環己胺。 7. 根據申請專利範圍第5或6項之化合物，其係呈D型。 8. 根據申請專利範圍第5或6項之化合物，其係呈L型。 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 、1T 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 -3- 本紙張又度逋用中國國家標準（CNS ) Α4见格（210X2?7公釐） A7 B7

   460459 第86110659號專利申請案 中文說明書修正頁(88年11月) 五、發明説明（4 化合物I在5-員環中具有—個不對稱碳原子且化合物 II具有二個不對稱碳原子β 化合物可呈消旋物、非對 映異構物之混合物、及純非對映異構物及純對映.異構物使 用。因此可依作為前體之化合物立體化學結構及反應 條件而定’得到消旋物或旋光型化合物I。 式II化合物可依文獻所揭示之方法製備（例如：DJ阿布 拉罕（Abraham)，M.莫可特夫（Mokotoff)，LKSheh) ’ J.E.希蒙斯（Simmons) ’ J. Med. Chem. 26(4)，（m3) 549)。 若112為Ci-C4-烷氧基或芊氧基時，當消去式n旋光化合 物之磺酸殘基，亦即-〇-S〇2-R5基困時，會發生消旋化反 應。結果產生3，4 -二氫脯胺酸之消旋性醋，即可繼續進行 酵素性消旋物解析反應，產生D -與L - 3，4 -去氫脯胺酸二 種衍生物（方法A ): 方法A V·. {R5=CH3v = 0CE3) V SO—CH, Ο 經濟部中央標準局員工消費合作社印袈 Rt CO.CH,

   Rl ζ5.‘. CO,CH. Rl 該方法之特別佳具體實施例包括使用式11化合物，其中 本紙乐尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） 正充修補 ΊΓ日 2. 12 9.年一^?— S 8 8 Do ABCD 4 6 0杂§51¾659號專利申請案 中文_請專利範I

   1. 一種製備式I 3 -吡咯'林-2 -叛酸衍生物之方法

   其 R1 中 且 R2 為Η、Ci-Cg -燒基、爷基、苯基上經取代之节基、烯' 丙氧羰基、Ci-Cp烷氧羰基、苄氧羰基，其中爷基可 經OCH3自由基取代’jQ-Cj-烷羰基； 為OH、CrCV燒氧基、苄氧基或NR3R4， 其中R3與R4分別為Η、CVC4·烷基 '苄基、苯基或吡 症基，R3與R4中之芳香系可經至多三個選自·甲基、 甲氧基、輕基、氰基或南素中之相同或相異取代基 取代， 此法包括由式1.1化合物 u I ^^1 1 — .^1 I - - I - L - I I -- 4rSJ (锖先M讀背面之注意事項存填寫本X.) 經濟部中央摞率扃貝工消費合作社印製 S〇i——R5

   t-I) 其中R1與R2如上述定義，且R5為Ci-CV烷基、罕基、三 氟甲基、莕基或苯基，其可未取代或經選自甲基、确基 或鹵素之自由基取代， 本紙伕尺度適用申國國家揉準{ CNS ) A4见格（210X297公釐）