TW202342025A - Gpc3抗體藥物偶聯物及其用途 - Google Patents

Gpc3抗體藥物偶聯物及其用途 Download PDF

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張禹
花海清
朱忠遠
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Abstract

本發明提供了與GPC3特異性結合的抗GPC3抗體藥物偶聯物及其用途，其中所述抗GPC3抗體藥物偶聯物結構如式(I-1)所示。本發明的抗GPC3抗體藥物偶聯物具有更好的對腫瘤細胞的體外增殖的抑制活性以及更好的體內抑瘤效果。

Description

GPC3抗體藥物偶聯物及其用途
本申請要求申請日為2022/3/18的中國專利申請2022102734945的優先權以及申請日為2023/3/13的中國專利申請2023102386369的優先權。本申請引用上述中國專利申請的全文。
本發明提供了與GPC3特異性結合的抗體藥物偶聯物和包含其的組成物。還提供了使用本發明的抗體藥物偶聯物的方法和用途。
Glypican-3(磷脂醯肌醇聚醣-3，GPC3)是一種由580個胺基酸組成的70KD的膜蛋白，透過醣基磷脂醯肌醇(GPI)錨定在細胞表面；GPC3在細胞生長、細胞分化和細胞遷移中發揮重要作用。GPC3蛋白在胚胎組織(肝、腎和胎盤等)中表現，但由於DNA甲基化導致的表觀遺傳緘默化，成人組織中幾乎沒有GPC3的表現。然而免疫組織化學染色研究發現GPC3在＞70%的肝癌組織中特異性高表現，臨床研究也顯示GPC3的表現與HCC的臨床預後不良有關，因此GPC3有潛力作為肝癌治療的標靶分子。
國家癌症中心最新統計數據顯示，在所有惡性腫瘤中，我國肝癌發病率位居第五位，死亡率高居第二位。我國每年新發肝癌的病例數約占全球的一半，每年約有46萬的肝癌新發病例，但5年生存率僅10%，是惡性腫瘤中預後最差之一。早前對晚期肝癌患者的一線治療藥物/方案，主要為索拉非尼和系統化療，客觀緩解率較低、無惡化生存期(PFS)短、不良反應較大；近年來侖伐替尼、阿替珠單抗聯合貝伐單抗的治療方案將PFS延長近3個月，但復發或惡化後，肝癌的治療手段仍有限。標靶GPC3的臨床在研藥物種類多樣，包括單抗、雙抗、ADC、CAR-T細胞療法等。
Roche開發的anti-GPC3單抗Codrituzumab(研發代號GC33)是目前臨床進展最快的GPC3標靶分子，在治療晚期肝癌的Ib期臨床研究(NCT01507168)中，對GPC3高表現的患者群體顯示出疾病惡化延緩的趨勢，但在II期研究(NCT01507168)中沒有得到有統計意義的生存期改善療效，Roche因此暫停了對Codrituzumab的開發。科濟生物在2021年的ASCO會議上，報導了其GPC3-CART治療6名晚期肝癌患者，其中1人得到部分緩解，3人病情穩定，疾病控制率達到50%，中位無惡化生存期為4.2個月。鑒於單抗藥物抗腫瘤療效較弱、CAR-T細胞治療便利性較差，標靶GPC3的ADC藥物有其獨特的開發價值和臨床需求。
本發明所要解決的技術問題是為了克服現有技術中抗GPC3抗體藥物偶聯物少的缺陷，而提供了一種抗GPC3抗體藥物偶聯物及其製備方法和應用。本發明的抗GPC3抗體藥物偶聯物相較現有技術具有選自以下組的一種或多種優勢效果：(1)更好的對腫瘤細胞的體外增殖的抑制活性；(2)更好的標靶抑制性；(3)更好的血漿穩定性；(4)更好的體內抑瘤效果；(5)更好的旁觀毒殺效應(Bystander Effect)；(6)更好的抗轉運子轉運能力；(7)更好的體內腫瘤標靶能力；和(8)更好的良好的體內安全性。
本發明主要是透過以下技術手段解決上述技術問題的。
一方面，本申請提供一種抗GPC3抗體藥物偶聯物、其異構物、其藥學上可接受的鹽或其混合物，所述抗GPC3抗體藥物偶聯物結構如式(I)所示： Ab-(L-M-D) p(Ⅰ) 其中， L和M是連接子單元； D是細胞毒性藥物； p表示平均連接數，且p為1到10的整數或小數，優選為3-8的整數或小數； Ab為抗GPC3抗體或其抗原結合片段，其包含重鏈可變區和輕鏈可變區，所述重鏈可變區包含胺基酸序列分別如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3，和所述輕鏈可變區包含胺基酸序列分別如SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3。
一方面，本申請提供一種抗GPC3抗體藥物偶聯物、其異構物、其藥學上可接受的鹽或其混合物，所述抗GPC3抗體藥物偶聯物結構如式(I)所示： Ab-(L-M-D) p(Ⅰ) 其中， L是連接子單元； -M-D是細胞毒性藥物； p表示平均連接數，且p為1到10的整數或小數，優選為3-8的整數或小數； Ab為抗GPC3抗體或其抗原結合片段，其包含重鏈可變區和輕鏈可變區，所述重鏈可變區包含胺基酸序列分別如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3，和所述輕鏈可變區包含胺基酸序列分別如SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3。
一方面，本申請提供一種抗GPC3抗體藥物偶聯物、其異構物、其藥學上可接受的鹽或其混合物，其中所述抗GPC3抗體藥物偶聯物結構如式(I-1)所示： (I-1) 其中， M為-L 2-L 3-X-L 1-； L 2為-O-或-S-； L 3為-(C(R 1a)(R 1b)) m-，m為0、1、2或3，其中當L 3包含伸甲基單元時，所述L 3的0個或1個伸甲基單元可以被-C(O)-、或-C(S)-替代； L 1為-(C(R 2a)(R 2b)) n-，n選自1、2或3，其中當L 1可以包含伸甲基單元時，所述L 1的0個或1個伸甲基單元可以被-C(O)-、或-C(S)-替代； X為3到6員飽和的碳環基、3到6員飽和的雜環基或單鍵，所述3到6員飽和的碳環基和3到6員飽和的雜環基任選被1個或多個R 3a取代； 其中每個R 1a，R 1b，R 2a，R 2b，R 3a各自獨立地可以為氫、鹵素或被1個或多個R任選取代的C 1-6脂肪族基團； 其中每個R各自獨立地可以為氫或鹵素； L是連接子單元； p表示平均連接數，且p為1到10的整數或小數； Ab為抗GPC3抗體或其抗原結合片段。
在一些實施方式中，本發明所述3-6員飽和的雜環基中的雜原子選自N、O和S，雜原子數為1-3個。
在一些實施方式中，本發明所述抗GPC3抗體或其抗原結合片段包含重鏈可變區和輕鏈可變區，所述重鏈可變區包含胺基酸序列分別如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3，和所述輕鏈可變區包含胺基酸序列分別如SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3。
在一些實施方式中，本發明所述抗GPC3抗體或其抗原結合片段包含：胺基酸序列如SEQ ID NO:7所示或與其具有至少95%、96%、97%、98%或99%相同性的重鏈可變區，和胺基酸序列如SEQ ID NO:8所示或與其具有至少95%、96%、97%、98%或99%相同性的輕鏈可變區。
在一些實施方式中，本發明所述抗GPC3抗體或其抗原結合片段包含胺基酸序列如SEQ ID NO:7所示的重鏈可變區，和胺基酸序列如SEQ ID NO:8所示的輕鏈可變區。
在一些實施方式中，本發明所述抗GPC3抗體或抗原結合片段為鼠源抗體或其片段、嵌合抗體或抗原結合片段、人源化抗體或抗原結合片段、或全人抗體或抗原結合片段。
在一些實施方式中，本發明所述抗GPC3抗體或其抗原結合片段為人源化抗體或其片段。
在一些實施方式中，本發明所述抗GPC3抗體或其抗原結合片段為Fab、Fab'、Fab'-SH、Fv、scFv、F(ab') 2、sdAb、雙抗體或線性抗體。
在一些實施方式中，本發明所述抗GPC3抗體為單株抗體。
在一些實施方式中，本發明所述抗體為IgG1形式的抗體、IgG2形式的抗體、IgG3形式的抗體或IgG4形式的抗體。
在一些實施方式中，本發明所述抗體為IgG1形式的抗體。
在一些實施方式中，本發明所述抗GPC3抗體或其抗原結合片段包含：胺基酸序列如SEQ ID NO: 9所示或與其具有至少95%、96%、97%、98%或99%相同性的重鏈，和胺基酸序列如SEQ ID NO:10所示或與其具有至少95%、96%、97%、98%或99%相同性的輕鏈。
在一些實施方式中，本發明所述抗GPC3抗體或其抗原結合片段包含胺基酸序列如SEQ ID NO: 9所示的重鏈，和胺基酸序列如SEQ ID NO:10所示的輕鏈。
在一些實施方式中，本發明所述抗GPC3抗體藥物偶聯物、其異構物、其藥學上可接受的鹽或其混合物，其中所述的M，其L 2端與連接子單元L相連，L 1端與D相連。
在一些實施方式中，本發明L 2為-O-。
在一些實施方式中，本發明L 2為-S-。
在一些實施方式中，本發明所述抗GPC3抗體藥物偶聯物、其異構物、其藥學上可接受的鹽或其混合物，其中L 3為-(C(R 1a)(R 1b)) m-，其中，m為0、1、2或3；其中每個R 1a和R 1b各自獨立地可以為氫、鹵素或被1、2或3個R任選取代的C 1-6脂肪族基團；其中每個R各自獨立地可以為氫或鹵素。
在一些實施方式中，本發明所述抗GPC3抗體藥物偶聯物、其異構物、其藥學上可接受的鹽或其混合物，其中L 3為-(C(R 1a)(R 1b)) m-，其中，m為0、1、2或3；其中每個R 1a和R 1b各自獨立地為氫、甲基、乙基或丙基。
在一些實施方式中，本發明所述抗GPC3抗體藥物偶聯物、其異構物、其藥學上可接受的鹽或其混合物，其中L 3為-(C(R 1a)(R 1b)) m-，其中，m為0、1、2或3；其中每個R 1a和R 1b各自獨立地可以為氫、鹵素、CH 3或CH 2CH 3。
在一些實施方式中，本發明所述抗GPC3抗體藥物偶聯物、其異構物、其藥學上可接受的鹽或其混合物，其中L 3為單鍵、-CH 2-、-CH(CH 3)-、-C(CH 3) 2-、-CH 2CH 2-、-CH(CH 3)CH 2-或-C(CH 3) 2CH 2-。其中上述基團的左側優選與L 2相連。
在一些實施方式中，本發明所述抗GPC3抗體藥物偶聯物、其異構物、其藥學上可接受的鹽或其混合物，其中L 3為 、 、 或 。其中結構片段的左側優選與L 2相連。
在一些實施方式中，本發明所述抗GPC3抗體藥物偶聯物、其異構物、其藥學上可接受的鹽或其混合物，其中L 3為單鍵。
在一些實施方式中，本發明所述抗GPC3抗體藥物偶聯物、其異構物、其藥學上可接受的鹽或其混合物，其中X為任選被1、2或3個R 3a取代的3到6員飽和的碳環基或單鍵；其中每個R 3a各自獨立地可以為氫、鹵素或被1、2或3個R任選取代的C 1-6脂肪族基團；其中每個R各自獨立地可以為氫或鹵素。
在一些實施方式中，本發明所述抗GPC3抗體藥物偶聯物、其異構物、其藥學上可接受的鹽或其混合物，其中X為任選被1、2或3個R 3a取代的3到6員飽和的碳環基或單鍵；其中每個R 3a各自獨立地可以為氫、鹵素、CH 3或CH 2CH 3。
在一些實施方式中，本發明所述的抗GPC3抗體藥物偶聯物、其異構物、其藥學上可接受的鹽或其混合物，其中X為環丙基、環丁基、環戊基、環己基或單鍵。
在一些實施方式中，本發明所述的抗GPC3抗體藥物偶聯物、其異構物、其藥學上可接受的鹽或其混合物，其中X為 、 、 、 或單鍵。其中上述基團的右側優選與L 1相連。
在一些實施方式中，本發明所述的抗GPC3抗體藥物偶聯物、其異構物、其藥學上可接受的鹽或其混合物，其中X為單鍵。
在一些實施方式中，本發明所述的抗GPC3抗體藥物偶聯物、其異構物、其藥學上可接受的鹽或其混合物，其中X為 、 、 、 、 、 或 ；優選地，X為 、 或 。其中上述基團的右側優選與L 1相連。
在一些實施方式中，本發明所述的抗GPC3抗體藥物偶聯物、其異構物、其藥學上可接受的鹽或其混合物，其中所述-L 3-X-為：-(C(R 1a)(R 1b)) m-、3到6員飽和的碳環基或3到6員飽和的雜環基；其中，m為1、2或3，所述3到6員飽和的碳環基和3到6員飽和的雜環基任選被1、2或3個R 3a取代；其中，每個R 1a，R 1b，R 3a各自獨立地可以為氫、鹵素或可以被R任選取代的C 1-6脂肪族基團；其中每個R各自獨立地可以為氫或鹵素。
在一些實施方式中，本發明所述的抗GPC3抗體藥物偶聯物、其異構物、其藥學上可接受的鹽或其混合物，其中， 所述-L 3-X-為：-(C(R 1a)(R 1b)) m-或任選被1、2或3個R 3a取代的3到6員飽和的碳環基；例如，所述-L 3-X-為-(C(R 1a)(R 1b)) m-或任選被1、2或3個R 3a取代的環丙基、環丁基、環戊基或環己基；優選地，所述-L 3-X-為：-(C(R 1a)(R 1b)) m-或任選被1、2或3個R 3a取代的： 、 、 或 ； 所述m為1、2或3； R 1a各自獨立為鹵素或被1、2或3個R任選取代的C 1-6脂肪族基團，例如為甲基、乙基或丙基；R 1b，R 3a各自獨立地為氫、鹵素或被1、2或3個R任選取代的C 1-6脂肪族基團，例如為氫、甲基、乙基或丙基；R各自獨立地為氫或鹵素。
在一些實施方式中，本發明所述的抗GPC3抗體藥物偶聯物、其異構物、其藥學上可接受的鹽或其混合物，其中， 所述-L 3-X-選自：-(C(R 1a)(R 1b)) m-或任選被1、2或3個R 3a取代的3到6員飽和的碳環基；優選地，所述-L 3-X-為：-(C(R 1a)(R 1b)) m-、或任選被1、2或3個R 3a取代的 、 、 或 ；其中，m為1、2或3；R 1a各自獨立地為鹵素或被1、2或3個R任選取代的C 1-6脂肪族基團；R 1b，R 3a各自獨立為氫、鹵素或被1、2或3個R任選取代的C 1-6脂肪族基團；其中每個R各自獨立地可以為氫或鹵素。
在一些實施方式中，本發明所述的抗GPC3抗體藥物偶聯物、其異構物、其藥學上可接受的鹽或其混合物，其中所述-L 3-X-為： 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 或 。
在一些實施方式中，本發明所述的抗GPC3抗體藥物偶聯物、其異構物、其藥學上可接受的鹽或其混合物，其中所述-L 3-X-為： 、 、 或 。
在一些實施方式中，本發明所述抗GPC3抗體藥物偶聯物、其異構物、其藥學上可接受的鹽或其混合物，其中L 1為-C(R 2a)(R 2b)-、-C(R 2a)(R 2b)C(O)-或-C(O)-；其中每個R 2a，R 2b各自獨立地可以為氫、鹵素或被1、2或3個R任選取代的C 1-6脂肪族基團；其中每個R各自獨立地可以為氫或鹵素。
在一些實施方式中，本發明所述抗GPC3抗體藥物偶聯物、其異構物、其藥學上可接受的鹽或其混合物，其中L 1為-C(R 2a)(R 2b)-、-C(R 2a)(R 2b)C(O)-或-C(O)-；其中每個R 2a，R 2b各自獨立地可以為氫、甲基、乙基或丙基。
在一些實施方式中，本發明所述抗GPC3抗體藥物偶聯物、其異構物、其藥學上可接受的鹽或其混合物，其中L 1為-C(R 2a)(R 2b)-、-C(R 2a)(R 2b)C(O)-或-C(O)-；其中每個R 2a，R 2b各自獨立地可以為氫、鹵素、CH 3或CH 2CH 3。
在一些實施方式中，本發明所述抗GPC3抗體藥物偶聯物、其異構物、其藥學上可接受的鹽或其混合物，其中L 1為-CH 2C(O)-、-CH(CH 3)C(O)-或-C(O)-。
在一些實施方式中，本發明所述抗GPC3抗體藥物偶聯物、其異構物、其藥學上可接受的鹽或其混合物，其中L 1為-C(O)-。
在一些實施方式中，本發明所述抗GPC3抗體藥物偶聯物、其異構物、其藥學上可接受的鹽或其混合物，其中L 1為-CH 2C(O)-。
在一些實施方式中，本發明所述抗GPC3抗體藥物偶聯物、其異構物、其藥學上可接受的鹽或其混合物，其中 所述M為-L 2-L 3-X-L 1-； L 2為-O-； -L 3-X-為任選被1、2或3個R 3a取代的3到6員飽和的碳環基； L 1為-C(O)-； 其中每個R 3a各自獨立地可以為氫、鹵素或被1、2或3個R任選取代的C 1-6脂肪族基團； 其中每個R各自獨立地可以為氫或鹵素。
在一些實施方式中，本發明所述抗GPC3抗體藥物偶聯物、其異構物、其藥學上可接受的鹽或其混合物，其中 所述M為-L 2-L 3-X-L 1-； L 2為-O-； -L 3-X-為任選被1、2或3個R 3a取代的環丙基、環丁基、環戊基或環己基；優選地，所述-L 3-X-為：任選被1、2或3個R 3a取代的： 、 、 或 ； L 1為-C(O)-； 其中每個R 3a各自獨立地為氫、鹵素或被1、2或3個R任選取代的C 1-6脂肪族基團； 其中每個R各自獨立地為氫或鹵素。
在一些實施方式中，本發明所述抗GPC3抗體藥物偶聯物、其異構物、其藥學上可接受的鹽或其混合物，其中 所述M為-L 2-L 3-X-L 1-； L 2為-O-； -L 3-X-為任選被1、2或3個R 3a取代的 、 或 ；R 3a各自獨立為氫、鹵素或C 1-6脂肪族基團； L 1為-C(O)-。
在一些實施方式中，本發明所述抗GPC3抗體藥物偶聯物、其異構物、其藥學上可接受的鹽或其混合物，其中 所述M為-L 2-L 3-X-L 1-； L 2為-O-或-S-； -L 3-X-為-(C(R 1a)(R 1b)) m-，其中，m為1、2或3； L 1為-C(O)-； R 1a，R 1b，R 3a各自獨立地為氫、鹵素或被1、2或3個R任選取代的C 1-6脂肪族基團； R各自獨立地可以為氫或鹵素。
在一些實施方式中，本發明所述抗GPC3抗體藥物偶聯物、其異構物、其藥學上可接受的鹽或其混合物，其中 所述M為-L 2-L 3-X-L 1-； L 2為-O-或-S-； -L 3-X-為-(C(R 1a)(R 1b)) m-，其中，m為1、2或3； L 1為-CH 2C(O)-； R 1a各自獨立地為鹵素或被1、2或3個R任選取代的C 1-6脂肪族基團； R 1b，R 3a各自獨立地為氫、鹵素或被1、2或3個R任選取代的C 1-6脂肪族基團。 R各自獨立地可以為氫或鹵素。
在一些實施方式中，本發明所述抗GPC3抗體藥物偶聯物、其異構物、其藥學上可接受的鹽或其混合物，其中 所述M為-L 2-L 3-X-L 1-； L 2為-O-或-S-； -L 3-X-為-CH(CH 3)-、-C(CH 3) 2-或-C(CH 3)CH(CH 3)-； L 1為-CH 2C(O)-。
在一些實施方式中，本發明所述抗GPC3抗體藥物偶聯物、其異構物、其藥學上可接受的鹽或其混合物，其中所述的M，其L 2端與連接子單元L相連。
在一些實施方式中，本發明所述抗GPC3抗體藥物偶聯物、其異構物、其藥學上可接受的鹽或其混合物，其中所述-M-為： 、 、 、 、 、 、 、 、 或 。
在一些實施方案中，本發明所述抗GPC3抗體藥物偶聯物、其異構物、其藥學上可接受的鹽或其混合物，其中細胞毒性藥物-M-D 選自以下任一結構： 、 、 、 、 、 、 、 、 、 和 。
在一些實施方式中，本發明所述抗GPC3抗體藥物偶聯物、其異構物、其藥學上可接受的鹽或其混合物，其中所述L為-L a-L b-L c-， 所述-L a-為 或 ， 其中，W為-(C(R wa)(R wb)) wn-，Y為-(OCH 2CH 2) yn-O yp-，Z為-(C(R za)(R zb)) zn； 其中wn為1、2、3或6， W的0個或1個伸甲基單元各自獨立地被-Cyr-、-N(R wx)C(O)-、-C(O)N(R wx)-、或-C(O)-替代； 其中yn為0、4或8，yp為0或1； 其中zn為1、2或3， Z的1個伸甲基單元各自獨立地被-Cyr-、-N(R zx)C(O)-、-C(O)N(R zx)-、或-C(O)-替代； -Cyr-為3到10員飽和的伸碳環基，其中所述-Cyr-是未取代的或獨立地被1到3個取代基R cx取代； 其中每個R wa，R wb，R za，R zb，R wx，R zx，R cx各自獨立地為氫、鹵素、-OR r或被R r任選取代的C 1-6脂肪族基團； 其中每個R r各自獨立地為氫、鹵素或C 1-6脂肪族基團； 所述-L b-為由2到7個胺基酸構成的胜肽殘基，所述-L b-的胜肽殘基為由選自以下組中的胺基酸形成的胜肽殘基：***酸、甘胺酸、丙胺酸、纈胺酸、瓜胺酸、離胺酸、絲胺酸、麩胺酸和天冬胺酸；優選地，-L b-表示由2到4個胺基酸構成的胜肽殘基，所述-L b-的胜肽殘基為由選自以下組中的胺基酸形成的胜肽殘基：***酸、甘胺酸、丙胺酸、纈胺酸、瓜胺酸和離胺酸； 所述-L c-為 ， 其中R L1、R L2各自獨立地選自以下組：氫、鹵素、-OH和C 1-6脂肪族基團。
在一些實施方式中，本發明所述抗GPC3抗體藥物偶聯物、其異構物、其藥學上可接受的鹽或其混合物，其中所述L為-L a-L b-L c-， 所述-L a-為 或 ， 其中，W為-(C(R wa)(R wb)) wn-，Y為-(OCH 2CH 2) yn-O yp-，Z為-(C(R za)(R zb)) zn； 其中wn為1、2、3或6， W的0個或1個伸甲基單元各自獨立地被-Cyr-、-N(R wx)C(O)-、-C(O)N(R wx)-、或-C(O)-替代； 其中yn為0、4或8，yp為0或1； 其中zn為1、2或3， Z的1個伸甲基單元各自獨立地被-Cyr-、-N(R zx)C(O)-、-C(O)N(R zx)-、或-C(O)-替代； -Cyr-為3到10員飽和的伸碳環基，其中所述-Cyr-是未取代的或獨立地被1到3個取代基R cx取代； 其中每個R wa，R wb，R za，R zb，R wx，R zx，R cx各自獨立地為氫、鹵素、-OR r或被R r任選取代的C 1-6脂肪族基團； 其中每個R r各自獨立地為氫、鹵素或C 1-6脂肪族基團； 所述-L b-選自以下組： 、 、 、 、 、 和 ； 所述-L c-為 ， 其中R L1、R L2各自獨立地選自以下組：氫、鹵素、-OH和C 1-6脂肪族基團。
在一些實施方式中，本發明所述抗GPC3抗體藥物偶聯物、其異構物、其藥學上可接受的鹽或其混合物，其中所述-L a-為 或 ；優選為 。
在一些實施方式中，本發明所述抗GPC3抗體藥物偶聯物、其異構物、其藥學上可接受的鹽或其混合物，其中所述-L b-為 或 ；優選為 。
在一些實施方式中，本發明所述抗GPC3抗體藥物偶聯物、其異構物、其藥學上可接受的鹽或其混合物，其中所述-L c-為 。
在一些實施方式中，本發明所述抗GPC3抗體藥物偶聯物、其異構物、其藥學上可接受的鹽或其混合物，其中所述的連接子單元L，其L a端與Ab相連，L c端與連接子單元M相連。
在一些實施方式中，本發明所述抗GPC3抗體藥物偶聯物、其異構物、其藥學上可接受的鹽或其混合物，其中所述的連接子單元L，其L a端與Ab相連，L c端與M相連。
在一些實施方式中，本發明所述抗GPC3抗體藥物偶聯物、其異構物、其藥學上可接受的鹽或其混合物，其中所述L為 。
在一些實施方式中，本發明所述的抗GPC3抗體藥物偶聯物、其異構物、其藥學上可接受的鹽或其混合物，其中所述L為 。
在一些實施方式中，本發明所述抗GPC3抗體藥物偶聯物、其異構物、其藥學上可接受的鹽或其混合物，其中-L-M-D 選自以下任一結構： 、 、 和 。
在一些實施方式中，本發明所述抗GPC3抗體藥物偶聯物、其異構物、其藥學上可接受的鹽或其混合物，其中所述抗GPC3抗體藥物偶聯物結構如式(Ⅱ-1)或(Ⅱ-2)所示： (Ⅱ-1)或 (Ⅱ-2)， 其中， Ab、L 2、X、p和L 3分別如本發明任一項所定義。
在一些實施方式中，本發明所述抗GPC3抗體藥物偶聯物、其異構物、其藥學上可接受的鹽或其混合物，其中所述抗GPC3抗體藥物偶聯物結構如式(Ⅱ-1)或(Ⅱ-2)所示： (Ⅱ-1)或 (Ⅱ-2)， 其中， p表示平均連接數，且p為1到10的整數或小數，優選為3-8的整數或小數； Ab為如本發明任一實施方案所述的抗GPC3抗體或其抗原結合片段； L 2為-O-或-S-； X為任選被1、2或3個R 3a取代的3到6員飽和的碳環基；優選地，X為任選被1、2或3個R 3a取代的: 、 或 ； L 3為-C(R 1a)(R 1b)-CH 2-或-C(R 1a)(R 1b)C(R 1a)(R 1b)-CH 2-； R 1a各自獨立為鹵素或被1、2或3個R任選取代的C 1-6脂肪族基團； R 1b，R 3a各自獨立為氫、鹵素或被1、2或3個R任選取代的C 1-6脂肪族基團； 其中每個R各自獨立地可以為氫或鹵素。
在一些實施方式中，本發明所述抗GPC3抗體藥物偶聯物、其異構物、其藥學上可接受的鹽或其混合物，其中所述抗GPC3抗體藥物偶聯物結構如式(Ⅱ-1)或(Ⅱ-2)所示： (Ⅱ-1)或 (Ⅱ-2)， 其中， p表示平均連接數，且p為1到10的整數或小數，優選為3-8的整數或小數； Ab為如本發明任一實施方案所述的抗GPC3抗體或其抗原結合片段； L 2為-O-或-S-； X為 、 、 、 、 或 ； L 3為-CH(CH 3)CH 2-或-C(CH 3) 2CH 2-。
在一些實施方式中，本發明所述抗GPC3抗體藥物偶聯物、其異構物、其藥學上可接受的鹽或其混合物，其中所述抗GPC3抗體藥物偶聯物選自以下結構式： 、 、 、 、 、 、 、 、 和 ， 其中， p表示平均連接數，且p為1到10的整數或小數，優選為3-8的整數或小數； Ab為如本發明任一實施方案所述的抗GPC3抗體或其抗原結合片段。
在又一個方面，本發明提供了一種抗GPC3抗體藥物偶聯物、其異構物、其藥學上可接受的鹽或其混合物，其中所述抗GPC3抗體藥物偶聯物選自： 、 、 、 、 、 和 ， 其中， p表示平均連接數，且p為1到10的整數或小數，優選為3-8的整數或小數。
本發明中，所述DB1001為抗GPC3抗體，所述抗GPC3的重鏈胺基酸序列如SEQ ID NO.:9所示，輕鏈胺基酸序列如SEQ ID NO.:10所示。
在一些實施方式中，本發明所述平均連接數p可以為2到8的整數或小數。例如，所述平均連接數p可以為3到8的整數或小數。例如，所述平均連接數p可以為1到2、2到3、3到4、4到5、5到6、6到7、7到8、8到9、9到10的整數或小數。例如，平均連接數p為7.51或7.72。
在又一個方面，本發明提供了一種抗GPC3抗體藥物偶聯物、其異構物、其藥學上可接受的鹽或其混合物，其中所述抗GPC3抗體藥物偶聯物選自以下任一結構(p表示平均連接數)： 和 ， 其中，所述DB1001為抗GPC3抗體，所述抗GPC3的重鏈胺基酸序列如SEQ ID NO.:9所示，輕鏈胺基酸序列如SEQ ID NO.:10所示。
在又一個方面，本發明提供了一種藥物組成物，其包含如本發明任一項所述的抗GPC3抗體藥物偶聯物、其異構物、其藥學上可接受的鹽或其混合物，和藥學上可接受的載劑或賦形劑。
在又一個方面，本發明提供了如本發明任一項所述的抗GPC3抗體藥物偶聯物、其異構物、其藥學上可接受的鹽或其混合物或藥物組成物在製備用於治療和/或預防GPC3媒介的疾病或病症的藥物中的用途，優選地，所述疾病或病症為癌症，例如，GPC3陽性表現的癌症。
在又一個方面，本發明提供了一種治療和/或預防GPC3媒介的疾病或病症的方法，其包括向有需要的受試者施用如本發明任一項所述的抗GPC3抗體藥物偶聯物、其異構物、其藥學上可接受的鹽或其混合物或如本發明任一項所述的藥物組成物，優選地，所述疾病或病症為癌症，例如，GPC3陽性表現的癌症。
在又一個方面，本發明提供了如本發明任一項所述的抗GPC3抗體藥物偶聯物、其異構物、其藥學上可接受的鹽或其混合物或如本發明任一項所述的藥物組成物，其用於治療和/或預防GPC3媒介的疾病或病症，優選地，所述疾病或病症為癌症，例如，GPC3陽性表現的癌症。
在一些實施方式中，本發明所述癌症選自肝癌、乳腺癌、卵巢癌、***癌、胰腺癌、腎癌、肺癌、胃癌、結腸癌、膀胱癌、食管癌、子宮頸癌、膽囊癌、膠質母細胞瘤和黑色素瘤。
在又一個方面，本發明提供了一種藥物組合，其包含如本發明任一項所述的抗體藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽或如本發明任一項所述的藥物組成物，以及一種或多種另外的治療劑。
在又一個方面，本發明提供了一種試劑盒，其包括如本發明任一項所述的抗體藥物偶聯物、或 如本發明任一項所述的藥物組成物。 術語定義
除非另有說明，本發明的實施將採用分子生物學(包括重組技術)、微生物學、細胞生物學、生物化學和免疫學的常規技術，這些都在本領域的技術範圍內。
在本發明中，為了可以更容易地理解本發明，某些科技術語具體定義如下。除非本文其它部分另有明確定義，否則本文所用的科技術語都具有本發明所屬領域普通技術人員通常理解的含義。關於本領域的定義及術語，專業人員具體可參考Current Protocolsin Molecular Biology (Ausubel)。胺基酸殘基的縮寫是本領域中所用的指代20個常用L-胺基酸之一的標準3字母和/或1字母代碼。本文(包括申請專利範圍)所用單數形式包括其相應的複數形式，除非文中另有明確規定。
在本發明中，術語“約”通常是指在指定數值以上或以下0.5%-10%的範圍內變動，例如在指定數值以上或以下0.5%、1%、1.5%、2%、2.5%、3%、3.5%、4%、4.5%、5%、5.5%、6%、6.5%、7%、7.5%、8%、8.5%、9%、9.5%、或10%的範圍內變動。
在本發明中，術語“抗體”是指具有所需生物活性的任何形式的抗體。因此，其以最廣義使用，具體包括但不限於單株抗體(包括全長單株抗體)、多株抗體、多特異性抗體(例如雙特異性抗體)、人源化抗體、全人抗體、嵌合抗體和駱駝源化單結構域抗體。
在本發明中，術語“單株抗體”是指獲自基本均質抗體群的抗體，即組成該群的各個抗體除可少量存在的可能天然存在的突變之外是相同的。單株抗體是高度特異性的，針對單一抗原表位。相比之下，常規(多株)抗體製備物通常包括大量針對不同表位(或對不同表位有特異性)的抗體。修飾語“單株”表明獲自基本均質抗體群的抗體的特徵，且不得解釋為需要透過任何特定方法產生抗體。
在本發明中，術語“全長抗體”，是指在天然存在時包含四條肽鏈的免疫球蛋白分子：兩條重(H)鏈(全長時約50-70kDa)和兩條輕(L)鏈(全長時約25kDa)透過二硫鍵互相連接。每一條重鏈由重鏈可變區(在本文中縮寫為VH)和重鏈恆定區(在本文中縮寫為CH)組成。重鏈恆定區由3個結構域CH1、CH2和CH3組成。每一條輕鏈由輕鏈可變區(在本文中縮寫為VL)和輕鏈恆定區組成。輕鏈恆定區由一個結構域CL組成。VH和VL區可被進一步細分為具有高可變性的互補決定區(CDR)和其間隔以更守恆的稱為框架區(FR)的區域。每一個VH或VL區由按下列順序：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4從胺基末端至羧基末端排列的3個CDR和4個FR組成。重鏈和輕鏈的可變區含有與抗原相互作用的結合結構域。抗體的恆定區可媒介免疫球蛋白對宿主組織或因子(包括免疫系統的各種細胞(例如，效應細胞)和典型補體系統的第一組分(Clq)的結合。
在本發明中，術語“CDR”是指抗體可變序列內的互補決定區。在重鏈和輕鏈的各個可變區中存在3個CDR，其對於各個重鏈和輕鏈可變區被命名為HCDR1、HCDR2和HCDR3或LCDR1、LCDR2和LCDR3。本發明的所述抗體的可變區CDR的精確胺基酸序列邊界可使用許多公知的方案的任何方案來確定，包括基於抗體的三維結構和CDR環的拓撲學的Chothia(Chothia等人.(1989)Nature 342:877-883；Al-Lazikani等人,“Standard conformations for the canonical structures of immunoglobulins”,Journal of Molecular Biology,273,927-948(1997))基於抗體序列可變性的Kabat(Kabat等人,Sequences of Proteins of Immunological Interest，第4版，U.S. Department of Health and Human Services,National Institutes of Health(1987))，AbM(University of Bath)，Contact(University College London)，國際ImMunoGeneTics database(IMGT) (1999 Nucleic Acids Research,27,209-212)，以及基於利用大量晶體結構的近鄰傳播聚類(affinity propagation clustering)的North CDR定義。本發明抗體的CDR可以由本領域的技術人員根據本領域的任何方案(例如不同的劃分系統或組合)確定邊界。
應該注意，基於不同的劃分系統獲得的同一抗體的可變區的CDR的邊界可能有所差異。即不同劃分系統下定義的同一抗體可變區的CDR序列有所不同。因此，在涉及用本發明定義的具體CDR序列限定抗體時，所述抗體的範圍還涵蓋了這樣的抗體，其可變區序列包含所述的具體CDR序列，但是由於應用了不同的方案(例如不同的劃分系統或組合)而導致其所聲稱的CDR邊界與本發明所定義的具體CDR邊界不同。
在本發明中，術語抗體(“親代抗體”)的“抗原結合片段”包括抗體的片段或衍生物，通常包括親代抗體的抗原結合區或可變區(例如一個或多個CDR)的至少一個片段，其保持親代抗體的至少一些結合特異性。抗體結合片段的實例包括但不限於Fab，Fab'，F(ab')2和Fv片段；雙抗體；線性抗體；單鏈抗體分子，例如scFv；由抗體片段形成的奈米抗體(nanobody)和多特異性抗體。當抗原的結合活性在莫耳濃度基礎上表示時，結合片段或衍生物通常保持其抗原結合活性的至少10%。優選結合片段或衍生物保持親代抗體的抗原結合親和力的至少20%、50%、70%、80%、90%、95%或100%或更高。還預期抗體的抗原結合片段可包括不明顯改變其生物活性的守恆或非守恆胺基酸取代(稱為抗體的“守恆變異體”或“功能守恆變異體”)。
在本發明中，術語“嵌合抗體”是具有第一抗體的可變結構域和第二抗體的恆定結構域的抗體，其中第一抗體和第二抗體來自不同物種。通常，可變結構域獲自齧齒動物等的抗體(“親代抗體”)，而恆定結構域序列獲自人抗體，使得與親代齧齒動物抗體相比，所得嵌合抗體在人受試者中誘導不良免疫反應的可能性較低。
在本發明中，術語“人源化抗體”是指含有來自人和非人(例如小鼠、大鼠)抗體的序列的抗體形式。一般而言，人源化抗體包含基本所有的至少一個、通常兩個可變結構域，其中所有或基本所有的高度變異環相當於非人免疫球蛋白的高度變異環，而所有或基本所有的框架區(FR)是人免疫球蛋白序列的框架區。人源化抗體任選可包含至少一部分的人免疫球蛋白恆定區(Fc)。
在本發明中，術語“全人抗體”是指只包含人免疫球蛋白蛋白質序列的抗體。如在小鼠中、在小鼠細胞中或在來源於小鼠細胞的融合瘤中產生，則全人抗體可含有鼠醣鏈。同樣，“小鼠抗體”是指僅包含小鼠免疫球蛋白序列的抗體。或者，如果在大鼠中、在大鼠細胞中或在來源於大鼠細胞的融合瘤中產生，則全人抗體可含有大鼠醣鏈。同樣，“大鼠抗體”是指僅包含大鼠免疫球蛋白序列的抗體。
在本發明中，術語“同種型”抗體是指由重鏈恆定區基因提供的抗體種類(例如，IgM、IgE、IgG諸如 IgGl、IgG2或IgG4)。同種型還包括這些種類之一的修飾形式，其中修飾已被產生來改變Fc功能，例如以增強或減弱效應子功能或對Fc受體的結合。
在本發明中，術語“Fc區”用於定義包含至少一部分恆定區的免疫球蛋白重鏈的C端區域。該術語包括天然序列Fc區和變異Fc區。在一些實施方案中，人IgG重鏈Fc區從Cys226或Pro230延伸至重鏈的羧基末端。但是，Fc區的C端離胺酸(Lys447)可能存在或不存在(此段中的編號是根據EU編號系統，也稱為EU索引，如Rabat等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD, 1991)。
在本發明中，術語“交叉反應”指的是對人類、猴、和/或鼠源(小鼠或大鼠)相同靶分子的抗原片段的結合。因此，“交叉反應”應被理解為與在不同物種中表現的相同分子X的種屬間反應。識別人GPC3R、猴、和/或鼠GPC3R(小鼠或大鼠)的單株抗體的交叉反應特異性可透過FACS分析確定。
在本發明中，術語“親和力”或“結合親和力”指反映結合成對的成員之間相互作用的固有結合親和力。分子X對其配偶物Y的親和力可以通常由平衡解離常數(KD)代表，平衡解離常數是解離速率常數和結合速率常數(分別是kdis和kon)的比值。親和力可以由本領域已知的常見方法測量。用於測量親和力的一個具體方法是本文中的ForteBio動力學結合測定法。
在本發明中，術語“不結合”蛋白或細胞是指，不與蛋白或細胞結合，或者不以高親和力與其結合，即結合蛋白或細胞的K D為1.0×10 -6M或更高，更優選1.0×10 -5M或更高，更優選1.0×10 -4M或更高、1.0×10 -3M或更高，更優選1.0×10 -2M或更高。
在本發明中，術語“高親和性”對於IgG抗體而言，是指對於抗原的K D為1.0×10 -6M或更低，優選5.0×10 -8M或更低，更優選1.0×10 -8M或更低、5.0×10 -9M或更低，更優選1.0×10 -9M或更低。對於其他抗體亞型，“高親和性”結合可能會變化。例如，IgM亞型的“高親和性”結合是指K D為10 -6M或更低，優選10 -7M或更低，更優選10 -8M或更低。
在本發明中，術語“細胞毒性藥物”通常指毒性藥物，所述細胞毒性藥物可以在腫瘤細胞內具有較強破壞其正常生長的化學分子。細胞毒性藥物可以在足夠高的濃度下殺死腫瘤細胞。所述“細胞毒性藥物”可以包括毒素，如細菌、真菌、植物或動物來源的小分子毒素或酶活性毒素，放射性同位素(例如At 211、I 131、I 125、Y 90、Re 186、Re 188、Sm 153、Bi 212、P 32或Lu的放射性同位素)，毒性藥物，化療藥物，抗生素和核溶酶，例如，可以是毒性藥物，包括但不限於喜樹鹼衍生物，例如，可以是喜樹鹼衍生物依沙替康(化學名：(1S,9S)-1-胺基-9-乙基-5-氟-2,3-二氫-9-羥基-4-甲基-1H,12H-苯并[de]吡喃并[3’,4’:6,7]咪唑并[1,2-b]喹啉-10,13(9H,15H)-二酮)。
在本發明中，術語“連接子單元”或“連接子結構”通常指一端與配體連接而另一端與細胞毒性藥物相連的化學結構片段或鍵，也可以連接其他連接子後再與細胞毒性藥物相連。所述直接或間接連接配體可以是指所述基團透過共價鍵直接連接配體，也可以是透過連接子結構連接配體。例如，連接子結構可以是本發明所述的-Lax-Lb-Lc-和或-La-Lb-Lc-所示的結構。例如，可以使用包含酸不穩定連接子結構(例如腙)、蛋白酶敏感(例如胜肽酶敏感) 連接子結構、光不穩定連接子結構、二甲基連接子結構、或含二硫化物連接子結構的化學結構片段或鍵作為連接子結構。
在本發明中，術語某個結構“任選地與其它分子部分相連接”通常是指該結構不與任何其它化學結構相連接，或者該結構與一個或多個不同於該結構的其它化學結構(例如本發明所述的配體)相連接(例如，透過化學鍵連接、或透過連接子結構連接)。
在本發明中，術語“配體-藥物偶聯物”通常是指配體透過穩定的連接單元與具有生物活性的細胞毒性藥物相連。在本發明中“配體-藥物偶聯物”可以為抗體-藥物偶聯物(antibody drug conjugate，ADC)，所述ADC可以是指把單株抗體或者抗體片段透過穩定的連接單元與具有生物活性的細胞毒性藥物相連。
在本發明中，術語“伸甲基”通常是指1個碳原子的基團除去兩個氫原子所衍生的殘基。伸甲基可以是取代的或非取代的，替代或者非替代的。術語“伸烷基”通常指飽和的直鏈或支鏈脂肪族烴基，其具有2個從母體烷的相同碳原子或兩個不同的碳原子上除去兩個氫原子所衍生的殘基，其可以為包含1至20個碳原子的直鏈或支鏈基團，例如含有1至12個碳原子，例如含有1至6個碳原子的伸烷基。伸烷基的非限制性實例包括但不限於伸甲基(-CH 2-)、1,1-伸乙基(-CH(CH 3)-)、1,2-伸乙基(-CH 2CH 2)-、1,1-伸丙基(-CH(CH 2CH 3)-)、1,2-伸丙基(-CH 2CH(CH 3)-)、1,3-伸丙基(-CH 2CH 2CH 2-)、1,4-伸丁基(-CH 2CH 2CH 2CH 2-)和1,5-伸丁基(-CH 2CH 2CH 2CH 2CH 2-)等。伸烷基可以是取代的或非取代的，替代或者非替代的，例如當被取代時，取代基可以在任何可使用的連接點上被取代，所述取代基優選獨立地任選選自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基胺基、鹵素、巰基、羥基、硝基、氰基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基、環烷氧基、雜環烷氧基、環烷硫基、雜環烷硫基和氧代基中的一個或多個取代基所取代，例如可以是氫、氕、氘、氚、鹵素、-NO 2、-CN、-OH、-SH、-NH 2、-C(O)H、-CO 2H、-C(O)C(O)H、-C(O)CH 2C(O)H、-S(O)H、-S(O) 2H、-C(O)NH 2、-SO 2NH 2、-OC(O)H、-N(H)SO 2H、或C 1-6脂肪族基團。
在本發明中，術語“伸雜環基”或“雜環基”通常是指穩定的不具有芳香性的3員-7員單環結構，融合的7員-10員雙環雜環結構或橋聯的6員-10員雙環雜環結構，這些環狀結構即可以是飽和的，也可以是部分飽和的，除碳原子外，這些環狀結構中還含有一個或多個雜原子，其中雜原子可以選自以下組：氧、硫和氮。例如是含有1-4個上述定義的雜原子。當用來表示雜環環狀結構上的原子時，術語“氮”可以包括發生過取代反應的氮。伸雜環基可以是取代的或非取代的。
在本發明中，術語“伸碳環基”通常是指具有兩個從碳環的相同碳原子或兩個不同的碳原子上除去兩個氫原子所衍生的殘基。術語“碳環”通常指飽和或部分不飽和單環或多環環狀烴，碳環包含3至20個碳原子，可以包含3至12個碳原子，可以包含3至10個碳原子，可以包含3至8個碳原子，例如包含3至6個碳原子。單環碳環的非限制性實例包括環丙烷、環丁烷、環戊烷、環戊烯、環己烷、環己烯、環己二烯、環庚烷、環庚三烯、環辛烷等；多環碳環可以包括螺環、稠環和橋環的碳環。例如，“3到6員飽和的碳環基”包括環丙基、環丁基、環戊基、環己基、伸環丙基、伸環丁基、伸環戊基或伸環己基。碳環基和伸碳環基可以是取代的或非取代的，例如可以被一個或多個鹵素、C 1-6脂肪族基團或被鹵素取代的C 1-6脂肪族基團所取代。
在本發明中，術語“部分不飽和的”通常是指環狀結構中環分子間至少含一個雙鍵或三鍵。術語“部分不飽和”涵蓋帶有多處不飽和的環狀結構，但並非意在包括本發明所定義的芳環或雜芳環。術語"不飽和的"表示部分具有一個或多個不飽和度。
在本發明中，術語“鹵素”通常是指氟、氯、溴、碘，例如可以是氟、氯。
在本發明中，術語“脂肪族基團”通常是指具有1-12個碳原子的直鏈烴、支鏈烴或環狀結構的烴，這些烴或者是完全飽和烴；或者帶有一個或多個不飽和單元，但不飽和單元不是芳香類基團。例如，適用的脂肪族基團可以包括取代的或未取代的直鏈、支鏈或環狀結構的烷基、烯基、炔基以及這些基團的混合物；比如是(環烷基)烷基、(環烯基) 烷基或(環烷基) 烯基。例如，脂肪族基團具有1-12、1-8、1-6、1-4或1-3個碳原子。例如，“C 1-6脂肪族基團”指的是具有1-6個碳原子的如上所述的脂肪族基團，包括但不限於具有1-6個碳原子的直鏈、支鏈或環狀結構的烷基、烯基或炔基，例如甲基、乙基、丙基、異丙基、正丁基、異丁基、叔丁基、戊基、己基等。
在本發明中，術語“任選”或“任選地”通常意味著隨後所描述的事件或環境可以但不必發生，該說明包括該事件或環境發生或不發生地場合。例如，“任選被烷基取代的雜環基團”意味著烷基可以但不必須存在，該說明可以包括雜環基團被烷基取代的情形和雜環基團不被烷基取代的情形。
在本發明中，術語“取代的”通常指基團中的一個或多個氫原子，例如為最多5個，例如為1～3個氫原子彼此獨立地被相應數目的取代基取代。取代基僅處在它們的可能的化學位置，本領域技術人員能夠在不付出過多努力的情況下確定(透過實驗或理論)可能或不可能的取代。例如，具有游離氫的胺基或羥基與具有不飽和(如烯屬)鍵的碳原子結合時可能是不穩定的。
在本發明中，術語0個或多個(例如，0個或至少1個、0個或1個、0個)伸甲基單元被“替代”通常指當所述結構包含1個或多個伸甲基單元時，所述一個或多個伸甲基單元可以不被替代，或被一個或多個不是伸甲基的基團(例如-NHC(O)-、-C(O)NH-、-C(O)-、-OC(O)-、-C(O)O-、-NH-、-O-、-S-、-SO-、-SO 2-、-PH-、-P(=O)H-、-NHSO 2-、-SO 2NH-、-C(＝S)-、-C(＝NH)-、-N＝N-、-C＝N-、-N＝C-或-C(＝N 2)-)所替代。
在本發明中，基團中的一個或多個氫原子，例如為最多5個，例如為1～3個氫原子彼此獨立地被相應數目的取代基取代。取代基僅處在它們的可能的化學位置，本領域技術人員能夠在不付出過多努力的情況下確定(透過實驗或理論)可能或不可能的取代。例如，具有游離氫的胺基或羥基與具有不飽和(如烯屬)鍵的碳原子結合時可能是不穩定的。
在本發明中，術語“藥學上可接受的鹽”或“可藥用鹽”通常是指本發明藥物偶聯物的鹽，這類鹽用於哺乳動物體內時可以具有安全性和/或有效性，且可以具有應有的生物活性，本發明抗體藥物偶聯物可以與酸形成鹽，藥學上可接受的鹽的非限制性實例包括：鹽酸鹽、氫溴酸鹽、氫碘酸鹽、硫酸鹽、硫酸氫鹽、檸檬酸鹽、乙酸鹽、琥珀酸鹽、抗壞血酸鹽、草酸鹽、硝酸鹽、梨酸鹽、磷酸氫鹽、磷酸二氫鹽、水楊酸鹽、檸檬酸氫鹽、酒石酸鹽、馬來酸鹽、富馬酸鹽、甲酸鹽、苯甲酸鹽、甲磺酸鹽、乙磺酸鹽、苯磺酸鹽、對甲苯磺酸鹽。
在本發明中，術語“溶劑化物”或“溶劑化合物”通常是指本發明的藥物偶聯物與一種或多種溶劑分子形成可藥用的溶劑化物，溶劑分子的非限制性實例包括水、乙醇、乙腈、異丙醇、DMSO、乙酸乙酯。
在本發明中，術語“載藥量”通常是指每個配體上加載的細胞毒性藥物平均數量，也可以表示為細胞毒性藥物和抗體量的比值，細胞毒性藥物載量的範圍可以是每個配體(Ab)連接0-12個，例如1-10個細胞毒性藥物。在本發明的實施方式中，載藥量表示為Na，例示性的可以為1，2，3，4，5，6，7，8，9，10的平均值。可用常規方法如UV/可見光光譜法，質譜，ELISA試驗和HPLC特徵鑒定偶聯反應後每個ADC分子的載藥量。
在本發明中，術語“藥學上可接受的載劑”是指藥物製劑或組成物中除活性成分以外的對受試者無毒的成分。藥學上可接受的載劑包括但不限於緩衝劑，賦形劑，穩定劑或防腐劑。
在本發明中，術語“包含”通常是指包括明確指定的特徵，但不排除其他要素。術語“以上”、“以下”通常是指包含本數的情況。
在本發明中，術語“受試者”包括任何人或非人動物。術語“非人動物”包括所有脊椎動物，例如哺乳動物和非哺乳動物，諸如非人靈長類動物、綿羊、狗、貓、馬、牛、雞、兩棲動物、爬行動物等。如本文中所用，術語“cyno”或“食蟹猴”是指食蟹猴。
在本發明中，術語“聯合”一種或多種其它治療劑的施用包括同時(共同)施用和任意次序的連續施用。
在本發明中，術語“治療有效量”、“治療有效劑量”和“有效量”是指本發明的GPC3抗體或其抗原結合片段當單獨或與其它治療藥物組合給予細胞、組織或受試者時，有效預防或改善一種或多種疾病或病況的症狀或該疾病或病況的發展的量。治療有效劑量還指足以導致症狀改善的抗體或其抗原結合片段的量，例如治療、治癒、預防或改善相關醫學病況或者提高這類病況的治療、治癒、預防或改善的速度的量。當對個體施用單獨給予的活性成分時，治療有效劑量僅是指該成分。當組合施用時，治療有效劑量是指引起治療效果的活性成分的綜合量，不論是組合、依次給予還是同時給予。治療劑的有效量將導致診斷標準或參數提高至少10%，通常至少20%，優選至少約30%，更優選至少40%，最優選至少50%。
在本發明中，術語“癌症”在本文中用於指表現出異常高位準的增殖和生長的一組細胞。癌症可能是良性的(也稱為良性腫瘤)，惡性前或惡性。癌細胞可以是實體癌細胞或白血病癌細胞。本文使用的術語“腫瘤”是指包含癌症的一個或多個細胞。
在本發明中，術語“腫瘤生長”在本文中用於指代包含癌症的一種或多種細胞的增殖或生長，其導致癌症的大小或程度的相應增加。 抗 GPC3 抗體
在本發明中，術語“GPC3”包括由細胞天然表現的GPC3的任何變異體或同種型。GPC3或其任何變異體或同種型可從天然表現它們的細胞或組織中分離而得，或使用本領域通用以及本文所述的那些技術透過重組技術產生。優選地，抗GPC3抗體標靶具有正常醣基化模式的人源GPC3。
在本發明中，術語“抗GPC3抗體”、“抗GPC3”、“GPC3抗體”或“結合GPC3的抗體”是指能夠以足夠的親合力結合GPC3蛋白或其片段以致所述抗體可以用作標靶GPC3中的診斷劑和/或治療劑。
本發明所述的抗GPC3抗體或其抗原結合片段參考WO2006006693中描述的抗GPC3抗體或其抗原結合片段。
在一些實施方案中，在本發明的藥物偶聯物、組成物、用途或方法中使用的抗體的CDR序列包含胺基酸序列分別如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3，和包含胺基酸序列分別如SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3。
在一些實施方案中，在本發明的藥物偶聯物、組成物或用途中使用的抗體的可變區序列包括胺基酸序列如SEQ ID NO:7所示的重鏈可變區，和胺基酸序列如SEQ ID NO:8所示的輕鏈可變區。
在一些實施方案中，在本發明的藥物偶聯物、組成物、用途或方法中使用的抗體包括胺基酸序列如SEQ ID NO: 9所示的重鏈，和胺基酸序列如SEQ ID NO: 10所示的輕鏈。在一些實施方案中，在本發明的藥物偶聯物、組成物、用途或方法中使用的抗體為抗GPC3抗體 DB1001。
抗GPC3抗體 DB1001的可變區胺基酸序列如下，CDR區依照IMGT編號規則確定。
DB1001重鏈可變區： QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYEMHWVRQAPGQGLEWMGALDPKTGDTAYSQKFKGRVTLTADKSTSTAYMELSSLTSEDTAVYYCTRFYSYTYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:7) HCDR1:DYEMH(SEQ ID NO:1) HCDR2:ALDPKTGDTAYSQKFKG(SEQ ID NO:2) HCDR3:FYSYTY(SEQ ID NO:3)
DB1001輕鏈可變區： DVVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLVHSNRNTYLHWYLQKPGQSPQLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCSQNTHVPPTFGQGTKLEIK(SEQ ID NO:8) LCDR1:RSSQSLVHSNRNTYLH(SEQ ID NO:4) LCDR2:KVSNRFS(SEQ ID NO:5) LCDR3:SQNTHVPPT(SEQ ID NO:6)
DB1001重鏈(IgG1)胺基酸序列 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYEMHWVRQAPGQGLEWMGALDPKTGDTAYSQKFKGRVTLTADKSTSTAYMELSSLTSEDTAVYYCTRFYSYTYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO:9)
DB1001輕鏈(Kappa)胺基酸序列 DVVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLVHSNRNTYLHWYLQKPGQSPQLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCSQNTHVPPTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ ID NO:10)
可採用用於產生抗體的任何合適方法來產生本發明的抗體。任何合適形式的GPC3都可用作產生抗體的免疫原(抗原)。透過舉例而非限制，任何GPC3變異體或其片段都可用作免疫原。在一些實施方式中，產生鼠源的單株抗人GPC3抗體的融合瘤細胞可透過本領域公知的方法產生。來源於齧齒動物(如小鼠)的抗體在體內用作治療藥物時可能引起不需要的抗體免疫原性，重複使用導致人體產生針對治療性抗體的免疫反應，這類免疫反應至少導致喪失治療功效，而嚴重的則導致潛在致死過敏反應。降低齧齒動物抗體的免疫原性的一種方法包括嵌合抗體的產生，其中將小鼠可變區與人恆定區融合(Liu等(1987)Proc. Natl. Acad. Sci. USA 84:3439-43)。然而，嵌合抗體中的完整齧齒動物可變區的保留仍可能在患者中引起有害的免疫原性。將齧齒動物可變結構域的互補決定區(CDR)環移植到人框架上(即人源化)已被用於進一步將齧齒動物序列減至最低(Jones等(1986)Nature 321 :522；Verhoeyen等(1988)Science 239:1534)。
在一些實施方式中，本發明所述的嵌合或人源化抗體可基於所製備的鼠單株融合瘤抗體的序列來製備。編碼重鏈和輕鏈免疫球蛋白的DNA可以從目標鼠融合瘤中獲得，並且使用標準分子生物學技術進行工程改造以包含非鼠(例如人)免疫球蛋白序列。
在一些實施方式中，本發明所述的嵌合GPC3抗體，可使用本領域已知的方法將融合瘤來源的免疫球蛋白重鏈和輕鏈可變區與人IgG恆定區有效連接(參見例如屬於Cabilly等人的美國專利No.4,816,567)，獲得嵌合型重鏈和嵌合型輕鏈來製備。在一些實施方式中，本發明的嵌合抗體包含的恆定區可選自任何人IgG亞型，如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4，優選IgG4。
在一些實施方式中，本發明的嵌合GPC3抗體可由嵌合型輕鏈與嵌合型重鏈表現質體“混合和匹配”轉染表現細胞獲得，此類“混合和匹配”的抗體的GPC3結合可使用上述結合測定和其它常規結合測定(例如，ELISA)來進行測試。
本發明所述的人源化抗體，可以使用本領域已知的方法將鼠源CDR區***人種系框架區。參見Winter等人的美國專利No. 5,225,539及Queen等人的美國專利No. 5,530,101；5,585,089；5,693,762和6,180,370。
在一些實施方式中，胺基酸變化包括胺基酸缺失、***或置換。在一些實施方式中，本發明的抗GPC3抗體或其抗原結合片段包括具有已透過胺基酸缺失、***或置換突變的，但仍與上述抗體(特別地在上述序列中描繪的CDR區中)有至少約90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同性的胺基酸序列的那些抗體。在一些實施方式中，本發明的抗體與具體序列中描繪的CDR區相比較時，在CDR區中已透過胺基酸缺失、***或置換的胺基酸突變不超過1、2、3、4或5個。
在一些實施方式中，可在本文中所提供抗體的Fc區中引入一個或多個胺基酸修飾，以此產生Fc區變異體。Fc區變異體可包含在一或多個胺基酸位置處包含胺基酸修飾(例如置換)的人Fc區序列(例如人IgG1、IgG2、IgG3或IgG4 Fc區)。
在一些實施方式中，可能需要產生經半胱胺酸工程改造的抗體，例如“硫代MAb”，其中抗體的一或多個殘基經半胱胺酸殘基置換。
在一些實施方式中，本文中所提供的抗體可進一步經修飾為含有本領域中已知且輕易獲得的其他非蛋白質部分。適合抗體衍生作用的部分包括，但不限於，水溶性聚合物。水溶性聚合物的非限制性實例包括，但不限於，聚乙二醇(PEG)、乙二醇/丙二醇共聚物、羧甲基纖維素、葡聚醣、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚-1，3-二烷、聚-1，3，6-三烷、乙烯/馬來酸酐共聚物、聚胺基酸(均聚物或無規共聚物)、及葡聚醣或聚(n-乙烯基吡咯烷酮)聚乙二醇、丙二醇均聚物、聚環氧丙烷/氧化乙烯共聚物、聚氧乙基化多員醇(例如甘油)、聚乙烯醇、及其混合物。 藥物偶聯物
本發明提供一種抗GPC3抗體藥物偶聯物、其異構物、其藥學上可接受的鹽或其混合物，其中所述抗GPC3抗體藥物偶聯物結構如式(I-1)所示： (I-1)， M為-L 2-L 3-X-L 1-； L 2為-O-或-S-； L 3為-(C(R 1a)(R 1b)) m-，m為0、1、2或3，其中當L 3包含伸甲基單元時，所述L 3的0個或1個伸甲基單元可以被-C(O)-、或-C(S)-替代； L 1為-(C(R 2a)(R 2b)) n-，n為1、2或3，其中當L 1可以包含伸甲基單元時，所述L 1的0個或1個伸甲基單元可以被-C(O)-、或-C(S)-替代； X為3到6員飽和的碳環基、3到6員飽和的雜環基或單鍵，所述3到6員飽和的碳環基和3到6員飽和的雜環基任選被1個或多個R 3a取代； 其中每個R 1a，R 1b，R 2a，R 2b，R 3a各自獨立地可以為氫、鹵素或被1個或多個R任選取代的C 1-6脂肪族基團； 其中每個R各自獨立地可以為氫或鹵素； L是連接子單元； p表示平均連接數，且p為1到10的整數或小數，優選為3-8的整數或小數； Ab為抗GPC3抗體或其抗原結合片段。
在一些實施方式中，本發明所述抗GPC3抗體或其抗原結合片段包含重鏈可變區和輕鏈可變區，所述重鏈可變區包含胺基酸序列分別如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3,和所述輕鏈可變區包含胺基酸序列分別如SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3；優選地，本發明所述抗GPC3抗體或其抗原結合片段包含：胺基酸序列如SEQ ID NO:7所示的重鏈可變區，和胺基酸序列如SEQ ID NO:8所示的輕鏈可變區；更優選地，本發明所述抗GPC3抗體或其抗原結合片段包含：胺基酸序列如SEQ ID NO: 9所示的重鏈，和胺基酸序列如SEQ ID NO:10所示的輕鏈。
在一些實施方式中，本發明所述抗GPC3抗體藥物偶聯物、其異構物、其藥學上可接受的鹽或其混合物，其中，L 3為-(C(R 1a)(R 1b)) m-，其中，m為0、1、2或3；其中每個R 1a，R 1b各自獨立地可以為氫、鹵素或被R任選取代的C 1-6脂肪族基團，其中每個R各自獨立地可以為氫或鹵素；優選地，L 3為-(C(R 1a)(R 1b)) m-，其中，m為0、1、2或3；其中每個R 1a和R 1b各自獨立地可以為氫、鹵素、CH 3或CH 2CH 3；優選地，L 3為單鍵、-CH 2-、-CH(CH 3)、-C(CH 3) 2、-CH 2CH 2-、-CH(CH 3)CH 2-或-C(CH 3) 2CH 2-。
在一些實施方式中，本發明所述抗GPC3抗體藥物偶聯物、其異構物、其藥學上可接受的鹽或其混合物，其中，L 1為-(C(R 2a)(R 2b)) n-，n為1、2或3,其中當L 1可以包含伸甲基單元時，所述L 1的0個或1個伸甲基單元可以被-C(O)-、或-C(＝S)-替代；其中每個R 2a，R 2b各自獨立可以為氫、鹵素或被R任選取代的C 1-6脂肪族基團；其中每個R各自獨立地可以為氫或鹵素；優選地，L 1為-C(R 2a)(R 2b)-、-C(R 2a)(R 2b)C(O)-或-C(O)-；其中每個R 2a和R 2b各自獨立可以為氫、鹵素、CH 3或CH 2CH 3；更優選地，L 1為-CH 2-、-CH 2C(O)-、-CH(CH 3)C(O)-或-C(O)-；更優選地，L 1為-CH 2C(O)-；更優選地，L 1為-C(O)-。
在一些實施方式中，本發明所述抗GPC3抗體藥物偶聯物、其異構物、其藥學上可接受的鹽或其混合物,其中，X為3到6員飽和的碳環基、3到6員飽和的雜環基或單鍵，所述3到6員飽和的碳環基和3到6員飽和的雜環基任選被1、2或3個R 3a取代；其中每個R 3a各自獨立地可以為氫、鹵素或被1、2或3個R任選取代的C 1-6脂肪族基團，其中每個R各自獨立地可以為氫或鹵素；優選地，X為任選被1、2或3個R 3a取代的3到6員飽和的碳環基或單鍵；其中每個R 3a各自獨立地可以為氫、鹵素、CH 3或CH 2CH 3；更優選地，X為 、 、 或單鍵。
在一些實施方式中，本發明所述的抗GPC3抗體藥物偶聯物、其異構物、其藥學上可接受的鹽或其混合物,其中所述-L 3-X-為：-(C(R 1a)(R 1b)) m-、3到6員飽和的碳環基或3到6員飽和的雜環基；其中，m為1、2或3，所述3到6員飽和的碳環基和3到6員飽和的雜環基任選被1、2或3個R 3a取代；其中，每個R 1a，R 1b，R 3a各自獨立地可以為氫、鹵素或可以被R任選取代的C 1-6脂肪族基團，其中每個R各自獨立地可以為氫或鹵素； 優選地，-L 3-X-為：-(C(R 1a)(R 1b)) m-和任選被1、2或3個R 3a取代的3到6員飽和的碳環基；其中，m為1、2或3；其中，R 1a各自獨立地為鹵素或被1、2或3個R任選取代的C 1-6脂肪族基團；R 1b，R 3a各自獨立地為氫、鹵素或被1、2或3個R任選取代的C 1-6脂肪族基團；每個R各自獨立地可以為氫或鹵素； 更優選地，-L 3-X-為： 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 或 。
在一些實施方式中，本發明所述抗GPC3抗體藥物偶聯物、其異構物、其藥學上可接受的鹽或其混合物，其中 所述M為-L 2-L 3-X-L 1-； L 2為-O-； -L 3-X-為任選被1、2或3個R 3a取代的3到6員飽和的碳環基；優選地，-L 3-X-為任選被1、2或3個R 3a取代的： 、 、 或 ；優選地，-L 3-X-為 、 、 、 、 或 。 L 1為-C(R 2a)(R 2b)-、-C(R 2a)(R 2b)C(O)-或-C(O)-；優選地，L 1為-C(O)-； 其中每個R 2a，R 2b，R 3a各自獨立地為氫、鹵素或可以被R任選取代的C 1-6脂肪族基團； 其中每個R各自獨立地可以為氫或鹵素。
在一些實施方式中，本發明所述抗GPC3抗體藥物偶聯物、其異構物、其藥學上可接受的鹽或其混合物，其中 所述M為-L 2-L 3-X-L 1-； L 2為-O-或-S-；優選地，L 2為-O-；優選地，L 2為-S-； -L 3-X-為-(C(R 1a)(R 1b)) m-，其中，m為1、2或3；優選地，-L 3-X-為 、 、 、 或 ；優選地，-L 3-X-為 、 或 。 L 1為-C(R 2a)(R 2b)-、-C(R 2a)(R 2b)C(O)-或-C(O)-；優選地，L 1為-CH 2C(O)-； 其中R 1a各自獨立地為鹵素或被1、2或3個R任選取代的C 1-6脂肪族基團；R 1b、R 3a各自獨立為氫、鹵素或被1、2或3個R任選取代的C 1-6脂肪族基團； 其中每個R各自獨立地可以為氫或鹵素。
在一些優選地實施例中，本發明所述抗GPC3抗體藥物偶聯物、其異構物、其藥學上可接受的鹽或其混合物,其中所述-M-為： 、 、 、 、 、 、 、 、 或 。
在一些實施方式中，本發明所述抗GPC3抗體藥物偶聯物、其異構物、其藥學上可接受的鹽或其混合物，其中所述L為-L a-L b-L c-， 所述-L a-為 或 ， 其中，W為-(C(R wa)(R wb)) wn-，其中wn為1、2、3或6，W的0個或1個伸甲基單元各自獨立地被-Cyr-、-N(R wx)C(O)-、-C(O)N(R wx)-、或-C(O)-替代；優選地，W為-(C(R wa)(R wb)) 2-或-(C(R wa)(R wb)) 3-；優選地，W為-CH 2CH 2CH 2-或-CH 2CH 2-； Y為-(OCH 2CH 2) yn-O yp-，其中yn為0、4或8，yp為0或1；優選地，Y為單鍵； Z為-(C(R za)(R zb)) zn，其中zn為1、2或3，Z的1個伸甲基單元各自獨立地被-Cyr-、-N(R zx)C(O)-、-C(O)N(R zx)-、或-C(O)-替代，-Cyr-為3到10員飽和的伸碳環基，其中所述-Cyr-是未取代的或獨立地被1到3個取代基R cx取代；優選地，Z為-(C(R wa)(R wb)) 2C(O)-或-(C(R wa)(R wb)) 3C(O)-；優選地，Z為-CH 2CH 2CH 2C(O)-或CH 2CH 2C(O)-； 其中每個R wa、R wb、R za、R zb、R wx、R zx和R cx各自獨立地為氫、鹵素、-OR r或被R r任選取代的C 1-6脂肪族基團； 其中每個R r各自獨立地為氫、鹵素或C 1-6脂肪族基團； 優選地，所述-L a-為 或 ，優選為 ； 所述-L b-表示由2到4個胺基酸構成的胜肽殘基，所述-L b-的胜肽殘基為由選自以下組中的胺基酸形成的胜肽殘基：***酸、甘胺酸、丙胺酸、纈胺酸、瓜胺酸和胺離胺酸； 優選地，-L b-選自以下組： 、 、 、 、 、 和 ；優選地；所述-L b-為 或 ；優選-L b-為 ； 所述-L c-為 ，其中R L1、R L2各自獨立地選自以下組：氫、鹵素、-OH和C 1-6脂肪族基團；優選地，所述-L c-為 。
在一些特別優選地實施例中，本發明所述抗GPC3抗體藥物偶聯物、其異構物、其藥學上可接受的鹽或其混合物,其中所述L為 。
在一些實施方式中，本發明所述抗GPC3抗體藥物偶聯物、其異構物、其藥學上可接受的鹽或其混合物,其中所述抗GPC3抗體藥物偶聯物結構如式(Ⅱ-1)或(Ⅱ-2)所示： (Ⅱ-1)或 (Ⅱ-2)， 其中， L 2為-O-或-S-；優選地，L 2為-O-，優選地，L 2為-S-， X為任選被1、2或3個R 3a取代的3到6員飽和的碳環基；優選地，X為任選被1、2或3個R 3a取代的 、 或 ；優選地，X為 、 或 ； L 3為-C(R 1a)(R 1b)-或-C(R 1a)(R 1b)C(R 1a)(R 1b)-， 其中R 1a各自獨立為鹵素或被1、2或3個R任選取代的C 1-6脂肪族基團；R 1b、R 3a各自獨立地為氫、鹵素或被1、2或3個R任選取代的C 1-6脂肪族基團；R各自獨立地可以為氫或鹵素；優選地，L 3為-CH(CH 3)-、-C(CH 3) 2-、-CH(CH 3)CH 2-或-C(CH 3) 2CH 2-； p表示平均連接數，且p為1到10的整數或小數，優選為3-8的整數或小數； Ab為抗GPC3抗體或其抗原結合片段，其包含重鏈可變區和輕鏈可變區，所述重鏈可變區包含胺基酸序列分別如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3,和所述輕鏈可變區包含胺基酸序列分別如SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3；優選地，本發明所述抗GPC3抗體或其抗原結合片段包含：胺基酸序列如SEQ ID NO:7所示的重鏈可變區，和胺基酸序列如SEQ ID NO:8所示的輕鏈可變區；更優選地，本發明所述抗GPC3抗體或其抗原結合片段包含：胺基酸序列如SEQ ID NO: 9所示的重鏈，和胺基酸序列如SEQ ID NO:10所示的輕鏈。
在一些實施方式中，本發明所述平均連接數p可以為2到8的整數或小數。例如，所述平均連接數n可以為3到8的整數或小數。例如，所述平均連接數n可以為1到2、2到3、3到4、4到5、5到6、6到7、7到8、8到9、9到10的整數或小數。 藥物組成物和藥物製劑
在又一個方面，本發明提供了一種藥物組成物，其包含如本發明任一項所述的抗GPC3抗體藥物偶聯物、其異構物、其藥學上可接受的鹽或其混合物，和藥學上可接受的載劑或賦形劑。
應理解，本發明提供的抗GPC3抗體藥物偶聯物或、其異構物、其藥學上可接受的鹽或其混合物，或其藥物組成物可以整合製劑中合適的運載劑、賦形劑和其他試劑以聯合給藥，從而提供改善的轉移、遞送、耐受等。
本發明中，術語“藥物組成物”指這樣的製劑，其允許包含在其中的活性成分的生物學活性有效的形式存在，並且不包含對施用所述製劑的受試者具有不可接受的毒性的另外的成分。
可以透過將具有所需純度的本發明的抗GPC3抗體藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽與一種或多種任選的藥用佐劑(Remington's Pharmaceutical Sciences，第16版，Osol, A.編輯(1980))混合來製備包含本文所述的抗GPC3抗體的藥物製劑，優選地以水溶液或凍乾製劑的形式。
本發明的藥物組成物或製劑還可以包含一種或多種其它活性成分，所述活性成分是被治療的特定適應證所需的，優選具有不會不利地影響彼此的互補活性的那些活性成分。在一些實施方式中，其它的活性成分為化療劑、免疫檢查點抑制劑、生長抑制劑、抗生素或已知的各種抗腫瘤或抗癌劑，所述活性成分以對於目的用途有效的量合適地組合存在。在一些實施方式中，本發明的藥物組成物還包含編碼抗GPC3抗體的多核苷酸的組成物。
在又一個方面，本發明提供了一種藥物組合，其包含如本發明任一項所述的抗體藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽或本發明任一項所述的藥物組成物，以及一種或多種另外的治療劑。
在又一個方面，本發明提供了一種試劑盒，其包括如本發明任一項所述的抗體藥物偶聯物或、其異構物、其藥學上可接受的鹽或其混合物或本文所述的藥物組成物，優選其進一步包括給藥裝置。 醫藥用途
在又一個方面，本發明提供了如本發明任一項所述的抗體藥物偶聯物、其異構物、其藥學上可接受的鹽或其混合物，或本發明任一項所述的藥物組成物在製備用於治療和/或預防GPC3媒介的疾病或病症的藥物中的用途，優選地，所述疾病或病症為癌症。
在又一個方面，本發明提供了如本發明任一項所述的抗體藥物偶聯物、其異構物、其藥學上可接受的鹽或其混合物，或本發明任一項所述的藥物組成物，其用於治療和/或預防GPC3媒介的疾病或病症，優選地，所述疾病或病症為癌症。
在又一個方面，本發明提供了一種治療和/或預防GPC3媒介的疾病或病症的方法，其包括向有需要的受試者施用如本發明任一項所述的抗體藥物偶聯物、其異構物、其藥學上可接受的鹽或其混合物，或本發明任一項所述的藥物組成物，優選地，所述疾病或病症為癌症。
在一些實施方式中，所述癌症選自乳腺癌、卵巢癌、***癌、胰腺癌、腎癌、肺癌、肝癌、胃癌、結腸癌、膀胱癌、食管癌、子宮頸癌、膽囊癌、膠質母細胞瘤和黑色素瘤。
在一些實施方式中，本發明給藥方式包括但不限於口服、靜脈內、皮下、肌內、動脈內、關節內(例如在關節炎關節中)、透過吸入、氣霧劑遞送或腫瘤內給予等。
在一些實施方式中，本發明提供了向受試者聯合施用治療有效量的一種或多種療法(例如治療方式和/或其它治療劑)。在一些實施方式中，所述療法包括手術治療和/或放射療法。
在一些實施方式中，本發明提供的方法或用途還包括向個體施用一種或多種療法(例如治療方式和/或其它治療劑)。可以單獨或與療法中的其它治療劑組合使用本發明的抗體藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽。例如，可以與至少一種另外的治療劑共施用。
本發明所述的藥物偶聯物可以具有對腫瘤細胞的體外增殖的抑制活性。所述抑制活性可以是本發明的藥物偶聯物加入腫瘤細胞的培養基中，相比於加入陰性對照或者對照藥物，所述腫瘤細胞細胞增殖能力下降1%以上、2%以上、4%以上、5%以上、8%以上、10%以上、15%以上、18%以上、20%以上、25%以上、40%以上、50%以上、60%以上、70%以上、80%以上、90%以上、或95%以上。例如，所述抑制活性可以是對於腫瘤細胞的IC50值(nM)可以為10000以下、5000以下、4000以下、3000以下、2000以下、1000以下、500以下、400以下、300以下、200以下、150以下、120以下、110以下、100以下、99以下、98以下、97以下、95以下、90以下、80以下、75以下、70以下、65以下、62以下、60以下、50以下、40以下、30以下、25以下、23以下、22以下、20以下、19以下、18以下、18.5以下、17以下、15以下、12以下、10以下、9以下、8.5以下、7以下、6.7以下、6以下、5.9以下、5.5以下、5.0以下、4.8以下、4.5以下、4.4以下、4以下、3.5以下、3以下、2.5以下、2以下、1.5以下、1.0以下、0.5以下、0.3以下、0.29以下、0.25以下、0.21以下、0.20以下、0.18以下、0.17以下、0.15以下、0.12以下、0.10以下、0.09以下、0.08以下、0.07以下、0.06以下、0.05以下、0.04以下、0.03以下、0.02以下或0.01以下。例如，所述腫瘤細胞可以包括但不限於固態腫瘤細胞，例如所述腫瘤細胞包括但不限於胃癌細胞、或乳腺癌細胞、肝癌細胞。
本發明所述的藥物偶聯物可以具有標靶抑制性。所述標靶抑制性可以是本發明的藥物偶聯物加入特定靶標高表現的腫瘤細胞的培養基中，相比於加入陰性對照或者對照藥物，所述特定靶標高表現的腫瘤細胞細胞增殖能力下降1%以上、2%以上、4%以上、5%以上、8%以上、10%以上、15%以上、18%以上、20%以上、25%以上、40%以上、50%以上、60%以上、70%以上、80%以上、90%以上、或95%以上。例如，所述標靶抑制性可以是對於特定靶標高表現的腫瘤細胞的IC50值(nM)可以為10000以下、5000以下、4000以下、3000以下、2000以下、1000以下、500以下、400以下、300以下、200以下、185以下、150以下、120以下、110以下、100以下、99以下、98以下、97以下、95以下、91以下、80以下、74以下、70以下、65以下、62以下、60以下、50以下、40以下、30以下、25以下、23以下、22以下、20以下、19以下、18以下、18.5以下、17以下、15以下、12以下、10以下、9以下、8.5以下、7以下、6.7以下、6以下、5.9以下、5.5以下、5.0以下、4.8以下、4.5以下、4.4以下、4以下、3.5以下、3以下、2.5以下、2以下、1.5以下、1.0以下、0.5以下、0.3以下、0.29以下、0.25以下、0.21以下、0.20以下、0.18以下、0.17以下、0.15以下、0.12以下、0.10以下、0.09以下、0.08以下、0.07以下、0.06以下、0.05以下、0.04以下、0.03以下、0.02以下或0.01以下。例如，所述特定靶標高表現的腫瘤細胞可以包括但不限於固態腫瘤細胞，例如所述特定靶標高表現的腫瘤細胞包括但不限於胃癌細胞、或乳腺癌細胞、肝癌細胞。
本發明所述的藥物偶聯物可以具有血漿穩定性。所述血漿穩定性可以是本發明的藥物偶聯物加入血漿中，所述藥物偶聯物釋放的細胞毒性藥物在1天、3天、5天、7天、14天、20天或30天的釋放率不超過50%、不超過40%、不超過30%、不超過20%、不超過10%、不超過7%、不超過5%、不超過4%、不超過3%、不超過2%、不超過1.9%、不超過1.8%、不超過1.7%、不超過1.6%、不超過1.5%、不超過1.4%、不超過1.3%、不超過1.2%、不超過1.1%、不超過1.0%、不超過0.9%、不超過0.8%、不超過0.7%、不超過0.6%、不超過0.5%、不超過0.4%、不超過0.3%、不超過0.2%或不超過0.1%。
本發明所述的藥物偶聯物可以具有體內抑瘤效果。所述抑瘤效果可以是本發明的藥物偶聯物施用於動物，相比於加入陰性對照或者對照藥物，所述動物的腫瘤在1天、3天、5天、7天、14天、20天、21天或30天的體積減少1%以上、2%以上、4%以上、5%以上、8%以上、10%以上、15%以上、18%以上、20%以上、25%以上、40%以上、50%以上、55%以上、60%以上、70%以上、73%以上、75%以上、80%以上、90%以上、或95%以上，或者相比於施用陰性對照或者對照藥物，所述動物的腫瘤在1天、3天、5天、7天、14天、20天、21天或30天的體積減少1.1倍以上，1.3倍以上，1.5倍以上，兩倍以上，三倍以上，五倍以上，十倍以上，二十倍以上，二十二倍以上，三十倍以上，五十倍以上，一百倍以上，五百倍以上，一千倍以上，或一千五百倍以上。所述動物可以包括但不限於哺乳動物，例如所述動物可以包括但不限於貓、狗、馬、豬、奶牛、羊、兔、小鼠、大鼠、猴或人。所述施用可以包括但不限於口服、靜脈注射、靜脈滴注、腹腔注射、或局部給藥。
本發明所述的藥物偶聯物可以具有旁觀毒殺效應(Bystander Effect)。所述旁觀毒殺效應可以是本發明的藥物偶聯物對特定靶標低表現的腫瘤細胞的細胞增殖無明顯抑制作用，而在特定靶標低表現的腫瘤細胞與特定靶標高表現的腫瘤細胞共培養中，本發明的藥物偶聯物可以同時抑制特定靶標低表現的腫瘤細胞與特定靶標高表現的腫瘤細胞的細胞增殖。例如，在特定靶標低表現的腫瘤細胞與特定靶標高表現的腫瘤細胞共培養中，所述抑制活性可以是對於特定靶標低表現的腫瘤細胞的IC50值(nM)可以為10000以下、5000以下、4000以下、3000以下、2000以下、1000以下、500以下、400以下、300以下、200以下、185以下、150以下、120以下、110以下、100以下、99以下、98以下、97以下、95以下、91以下、80以下、74以下、70以下、65以下、62以下、60以下、50以下、40以下、30以下、25以下、23以下、22以下、20以下、19以下、18以下、18.5以下、17以下、15以下、12以下、10以下、9以下、8.5以下、7以下、6.7以下、6以下、5.9以下、5.5以下、5.0以下、4.8以下、4.5以下、4.4以下、4以下、3.5以下、3以下、2.5以下、2以下、1.5以下、1.0以下、0.5以下、0.3以下、0.29以下、0.25以下、0.21以下、0.20以下、0.18以下、0.17以下、0.15以下、0.12以下、0.10以下、0.09以下、0.08以下、0.07以下、0.06以下、0.05以下、0.04以下、0.03以下、0.02以下或0.01以下。所述特定靶標低表現的腫瘤細胞與特定靶標高表現的腫瘤細胞相比，所述特定靶標的表現可以是降低1%以上、2%以上、4%以上、5%以上、8%以上、10%以上、15%以上、18%以上、20%以上、25%以上、40%以上、50%以上、60%以上、70%以上、80%以上、90%以上、或95%以上。例如，所述特定靶標高表現的腫瘤細胞可以包括但不限於固態腫瘤細胞，例如所述特定靶標高表現的腫瘤細胞包括但不限於胃癌細胞、或乳腺癌細胞，例如所述特定靶標高表現的腫瘤細胞可以包括但不限於HCC1569細胞或MDA-MB-453細胞。例如，所述特定靶標低表現的腫瘤細胞可以包括但不限於固態腫瘤細胞。
本發明所述的藥物偶聯物可以具有抗轉運子轉運能力。所述抗轉運能力可以是相比於轉運受質的標準品，本發明所述藥物偶聯物的外排比降低1%以上、2%以上、4%以上、5%以上、8%以上、10%以上、15%以上、18%以上、20%以上、25%以上、40%以上、50%以上、60%以上、70%以上、80%以上、90%以上、或95%以上。例如，所述外排比的測試可以為本領域人員常用方法，或記載在本發明的實施例之中。
本發明所述的藥物偶聯物可以具有體內腫瘤標靶能力。所述體內標靶能力可以是指將用訊號物質標記的所述藥物偶聯物施用於動物，所述標記的藥物偶聯物在動物的腫瘤組織的分佈，相較於其他組織和器官，可以是分佈增加1%以上、2%以上、4%以上、5%以上、8%以上、10%以上、15%以上、18%以上、20%以上、25%以上、40%以上、50%以上、60%以上、70%以上、80%以上、90%以上、或95%以上，或者可以是分佈增加1.1倍以上，1.3倍以上，1.5倍以上，兩倍以上，三倍以上，五倍以上，十倍以上，二十倍以上，二十二倍以上，三十倍以上，五十倍以上，一百倍以上，五百倍以上，一千倍以上，或一千五百倍以上。所述訊號物質可以是放射性物質，例如所述訊號物質包括但不限於125I。所述動物可以包括但不限於哺乳動物，例如所述動物可以包括但不限於貓、狗、馬、豬、奶牛、羊、兔、小鼠、大鼠、猴或人。所述施用可以包括但不限於口服、靜脈注射、靜脈滴注、腹腔注射、或局部給藥。所述組織或器官可以包含但不限於心、肝、脾、肺、腎、腦、或骨髓。
本發明所述的藥物偶聯物可以具有良好的體內安全性。所述體內安全性可以是本發明的藥物偶聯物在施用於動物後，所述動物的體內游離毒素釋放率不超過50%、不超過40%、不超過30%、不超過20%、不超過10%、不超過7%、不超過5%、不超過4%、不超過3%、不超過2%、不超過1.9%、不超過1.8%、不超過1.7%、不超過1.6%、不超過1.5%、不超過1.4%、不超過1.3%、不超過1.2%、不超過1.1%、不超過1.0%、不超過0.9%、不超過0.8%、不超過0.7%、不超過0.6%、不超過0.5%、不超過0.4%、不超過0.3%、不超過0.2%或不超過0.1%。例如，所述體內安全性可以是在動物不產生毒性表現的情況下本發明所述藥物偶聯物的施用濃度可以是0.5mg/kg以上、1mg/kg以上、2mg/kg以上、3mg/kg以上、4mg/kg以上、5mg/kg以上、10mg/kg以上、20mg/kg以上、30mg/kg以上、50mg/kg以上、70mg/kg以上、100mg/kg以上、200mg/kg以上、500mg/kg以上、或1000mg/kg以上。例如所述動物可以包括但不限於貓、狗、馬、豬、奶牛、羊、兔、小鼠、大鼠、猴或人。所述施用可以包括但不限於口服、靜脈注射、靜脈滴注、腹腔注射、或局部給藥。
本發明的積極進步效果在於： 本發明抗GPC3抗體藥物偶聯物中，抗GPC3抗體或其抗原結合片段透過連接子單元與具有生物活性的細胞毒性藥物相連，抗體藥物偶聯物轉移至腫瘤細胞後，連接子被切斷，游離出細胞毒性藥物H-M-D(例如小分子化合物製備例1-製備例9)。本發明細胞毒性藥物對NCI-N87細胞、JIMT-1細胞、Colo205細胞和MDA-MB-231細胞具有明顯增強的增殖抑制活性，能發揮優異的抗腫瘤作用。
本發明抗GPC3抗體藥物偶聯物對GPC3陽性表現細胞Huh7和HepG2具有明顯增強的增殖抑制活性；本發明抗GPC3抗體藥物偶聯物對HepG2荷瘤小鼠和Huh7荷瘤小鼠具有顯著增強的抗腫瘤活性。
因此，本發明在GPC3的陽性表現疾病(例如癌症)方面有著良好的應用前景。
具體實施方式
以下由特定的具體實施例說明本申請發明的實施方式，熟悉此技術的人士可由本說明書所公開的內容容易地瞭解本申請發明的其他優點及效果。 樣品檢測 1. ADC DAR 值分析方法 – HIC-HPLC( 疏水層析法 )
高效液相層析儀：沃特世e2965高效液相層析系統。 層析管柱：Thermo MAbPac TMHIC-Butyl (4.6×100 mm, 5μm) ； 流動相A：1.5 M (NH 4) 2SO 4+ 50 mM K 2HPO 4(pH 7.0)； 流動相B：50 mM K 2HPO 4(pH 7.0)/異丙醇(75:25 V/V)； 按照以下洗提程序進行洗提，
時間 流動相B
0-2 min 0%-10%
2-22 min 10%-65%
22-24 min 65%-100%
24-26 min 100%-0%
26-30 min 0%
檢測條件：設置流動相流速為1ml/min，檢測波長為280nm，柱溫30℃。 2. SEC 純度分析 – SEC-HPLC( 分子篩析層析法 )
高效液相層析儀：1260安捷倫液相層析儀。 層析管柱：Waters Xbridge BEH200 SEC (7.8×300 mm, 3.5 μm) 流動相：50mM NaH 2PO 4+ 200mM 精胺酸 (pH 6.80) +10% 異丙醇
時間 流動相
0-30 min 100%
檢測條件：設置流動相流速為0.5ml/min，檢測波長為280nm，柱溫30℃。
本發明包括所敘述特定實施方式的所有組合。本發明的進一步實施方式及可應用性的完整範疇將自下文所提供的詳細描述變得顯而易見。然而，應理解，儘管詳細描述及特定實施例指示本發明的優選實施方式，但僅以說明的方式提供這些描述及實施例，因為本發明的精神及範疇內的各種改變及修改將自此詳細描述對熟悉此項技術者變得顯而易見。出於所有目的，包括引文在內的本文所引用的所有公開物、專利及專利申請將以引用的方式全部併入本文。 實施例
提供以下實施例以證明並進一步解釋本發明的一些優選的實施方式和方面，不應被解釋為限制其範圍。 實施例 1 ：抗 GPC3 抗體
本發明的抗體參照WO2006006693製備，其中，抗GPC3抗體 DB1001的可變區胺基酸序列如下，CDR區依照IMGT編號規則確定。
DB1001重鏈可變區： QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFT DYEMH WVRQAPGQGLEWMG ALDPKTGDTAYSQKFKG RVTLTADKSTSTAYMELSSLTSEDTAVYYCTR FYSYTY WGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:7) HCDR1: DYEMH (SEQ ID NO:1) HCDR2: ALDPKTGDTAYSQKFKG (SEQ ID NO:2) HCDR3: FYSYTY (SEQ ID NO:3)
DB1001輕鏈可變區： DVVMTQSPLSLPVTPGEPASISC RSSQSLVHSNRNTYLH WYLQKPGQSPQLLIY KVSNRFS GVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYC SQNTHVPPT FGQGTKLEIK(SEQ ID NO:8) LCDR1: RSSQSLVHSNRNTYLH (SEQ ID NO:4) LCDR2: KVSNRFS (SEQ ID NO:5) LCDR3: SQNTHVPPT (SEQ ID NO:6)
根據以上序列，設計引物PCR搭建得到VH/VK基因片段，獲得可變區。抗體可變區再與恆定區基因片段進行同源重組，建構DB1001完整抗體序列。經過轉染CHO細胞後，按照常規表現純化方法得到抗體DB1001。
DB1001重鏈(IgG1)胺基酸序列 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYEMHWVRQAPGQGLEWMGALDPKTGDTAYSQKFKGRVTLTADKSTSTAYMELSSLTSEDTAVYYCTRFYSYTYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO:9)
DB1001輕鏈(Kappa)胺基酸序列 DVVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLVHSNRNTYLHWYLQKPGQSPQLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCSQNTHVPPTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ ID NO:10) 實施例 2 ：抗 GPC3 抗體藥物偶聯物 (ADC) 的製備 2.1 、毒素 (payload) 的製備
製備例 1
第一步： 在氮氣保護下，在0℃下向KI4 (900 mg，1.69 mmol)，HATU (691 mg，1.88 mmol)，3a (320 mg，2.00 mmol) 的DMF(18 mL)溶液中加入DIEA  (500 mg，3.87 mmol)。並在25℃攪拌3小時。TLC (EA) 顯示原料反應完全。將反應液滴加到320 mL去離子水中，過濾，得灰色固體850 mg，產率：87%。
第二步： 向3b (100 mg，0.174 mmol)的MeOH/DCM (1/1，3 mL)中加入NaHCO3 (42 mg，0.50 mmol)固體並在25℃攪拌3小時，TLC(EA)顯示反應完全，將反應液過濾，低溫旋轉乾燥後，用aq.HCl (0.5 M，10 mL)打漿後過濾，經prep-HPLC(0.1%TFA）製備後凍乾得到15毫克灰色固體。產率：16%。
MS m/z (ESI)：534 [M+1]。
H-NMR (400 MHz，DMSO-D)：8.45(d, 1H), 7.81 (d, 1H), 7.32 (s, 1H), 6.52 (m, 1H), 5.58-5.56 (m, 1 H), 5.44 (s, 2H), 5.14 (dd, 2 H), 3.96 (m, 1H), 3.48 (m, 1H), 3.19 (m, 2H), 2.53-2.28 (m, 3H), 2.48 (s, 3H), 2.20-2.00(m, 4H), 1.95-1.80 (m, 2H), 0.89 (t, 3H)。
製備例 2
第一步： 在氮氣保護下，在0℃下向KI 4 (1.00 g，1.88 mmol)，HATU (691 mg，1.88 mmol)，4a (310 mg，1.88 mmol) 的DMF(18 mL)溶液中加入DIEA  (486 mg，3.76 mmol)。並在25℃攪拌3小時。TLC (EA) 顯示原料反應完全。將反應液滴加到320 mL去離子水中，過濾，得灰色固體910 mg，產率：84%。
第二步： 向4b (100 mg，1.58 mmol)的MeOH/DCM (1/1，3 mL)中加入NaHCO3 (42 mg，0.50 mmol)固體並在25℃攪拌3小時，TLC(EA)顯示反應完全，將反應液過濾，低溫旋轉乾燥後，用aq.HCl (0.5 M，10 mL)打漿後過濾，經prep-HPLC(0.1%TFA)製備凍乾得13毫克黃色固體，產率：14%。
MS m/z (ESI)：534 [M+1]。
H-NMR (400 MHz，DMSO-D)：8.39 (d, 1H), 7.77 (d, 1H), 7.29 (s, 1H), 6.52 (m, 1H), 5.58-5.54 (m, 1 H), 5.41 (s, 2H), 5.18-5.06 (m, 3H), 4.39-4.33 (m, 1H), 3.19-3.07 (m, 2H), 2.97-2.82 (m, 1H), 2.49-2.36 (m, 2H), 2.38 (s, 3H), 2.20-1.96 (m, 4H), 1.93-1.79 (m, 2H), 0.87 (t, 3H)。
製備例 3
在氮氣保護下，向KI4 (100 mg，0.188 mmol)，HATU (86 mg，0.23 mmol)，7a (22 mg，0.21 mmol) 的DMF(2 mL)溶液中滴加DIEA(61 mg，0.47 mmol)，加完後在25℃反應2.5小時。LCMS顯示原料反應完全。將反應液加入到20mL水中，有固體析出，過濾得到13 mg，產率：11%。
MS m/z (ESI)：522 [M+1]。
H-NMR (400 MHz，DMSO-D)：8.44 (d, 1H), 7.80 (d, 1H), 7.32(s, 1H), 6.54 (m, 1H), 5.60-5.50 (m, 1 H), 5.44 (s, 2H), 5.22 (dd, 2H), 4.10-4.00 (m, 1H), 3.30-3.17 (m, 2H), 2.41 (s, 3H), 2.38-2.10 (m, 4H), 1.96-1.80 (m, 2H), 1.11 (d, 3H), 0.89 (t, 3H)。
製備例 4
在氮氣保護下，向KI4 (100 mg，0.188 mmol)，HATU (86 mg，0.23 mmol)，8a (24 mg，0.21 mmol) 的DMF(1 mL)溶液中滴加DIEA(61 mg，0.47 mmol)的DMF (1mL)溶液，加完後在25℃反應3小時。TLC(EA)顯示原料反應完全。將反應液製備得黃色固體17 mg，產率：17%。
MS m/z (ESI)：536 [M+1]。
H-NMR (400 MHz，DMSO-D)：8.42 (d, 1H), 7.79 (d, 1H), 7.30(s, 1H), 6.53 (m, 1H), 5.59-5.55 (m, 1 H), 5.42 (s, 2H), 5.22 (dd, 2H), 4.69 (s, 1H), 3.20-3.11 (m, 2H), 2.39 (sc, 3H), 2.29 (s, 2H), 2.20-2.08 (m, 2H), 1.19 (d, 6H), 0.87 (t, 3H)。
製備例 5
第一步： 氮氣保護下，向KI4(100 mg，0.19 mmol)，HATU(85.7 mg，0.23 mmol)，23a(21.5 mg，0.21 mmol)的DMF(2 mL)溶液中滴加DIEA(60.6 mg，0.47 mmol)，加完後在0 ℃反應2 小時。LCMS顯示原料反應完全。將反應液滴加到20 mL水中攪拌，析出固體後過濾，得60.2 mg灰色固體P-III-30，產率：61%。MS-ESI: m/z 522.2 [M+H]+。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.42 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 7.79 (d, J = 11.0 Hz, 1H), 7.30 (s, 1H), 6.53 (s, 1H), 5.62 – 5.53 (m, 1H), 5.42 (s, 2H), 5.30 – 5.16 (m, 2H), 4.63 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 4.09 – 3.99 (m, 1H), 3.22 – 3.11 (m, 2H), 2.40 (s, 3H), 2.28 (dd, J = 13.7, 7.2 Hz, 1H), 2.22 – 2.08 (m, 3H), 1.94 – 1.78 (m, 2H), 1.08 (d, J = 6.1 Hz, 3H), 0.87 (t, J = 7.3 Hz, 3H)。
製備例 6
第一步： 將24a(19.6 mg，0.188 mmol)，KI4(100 mg，0.188 mmol)，DIEA(60.7 mg，0.47 mmol)加入三口瓶(100 mL)中，加入DMF(2 mL)溶解，N2保護置換三次並在0 ℃攪拌加入HATU(85.9 mg，0.226 mmol)，0 ℃反應2小時。TLC(DCM:MeOH = 10:1)顯示反應結束。將反應液加入水(20 mL)析出灰色固體，凍乾再進行製備盤純化(EA:MeOH = 10:1)得54.5 mg淡黃色色固體P-III-31，產率：56%。MS-ESI: m/z 522.5 [M+H]+。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.44 (dd, J = 8.7, 2.9 Hz, 1H), 7.78 (dd, J = 10.9, 2.6 Hz, 1H), 7.30 (s, 1H), 6.53 (s, 1H), 5.60 – 5.51 (m, 1H), 5.42 (s, 2H), 5.21 (dd, J = 10.9, 3.4 Hz, 2H), 4.66 (dd, J = 13.1, 4.7 Hz, 1H), 4.10 – 3.98 (m, 1H), 3.21 – 3.10 (m, 2H), 2.39 (s, 3H), 2.34 – 2.05 (m, 4H), 1.93 – 1.77 (m, 2H), 1.08 (dd, J = 6.2, 1.6 Hz, 3H), 0.87 (t, J = 7.3 Hz, 3H)。
製備例 7
第一步 取KI4(50 mg，0.094 mmol)，25a(11 mg，0.094 mmol)，HATU(39 mg，0.103 mmol)加入DMF(3 mL)中，氮氣置換後加入DIEA(30 mg，0.235 mmol)，25 ℃下反應1.5小時後LCMS顯示反應結束。將反應液滴入處於攪拌狀態下的水(50 mL)中，加完後靜置5分鐘，過濾，濾餅凍乾後得20 mg灰色固體25，產率：40%。
MS-ESI: m/z 534.3 [M+H]+。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.26 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 7.72 (d, J = 10.9 Hz, 1H), 7.28 (s, 1H), 6.51 (s, 1H), 6.12 (s, 1H), 5.59 – 5.50 (m, 1H), 5.40 (s, 2H), 5.15 (d, J = 18.8 Hz, 1H), 4.98 (d, J = 19.0 Hz, 1H), 3.28 – 3.16 (m, 1H), 3.15 – 3.02 (m, 1H), 2.74 – 2.52 (m, 2H), 2.36 (s, 3H), 2.24 – 2.04 (m, 4H), 1.92 – 1.79 (m, 4H), 0.86 (t, J = 7.3 Hz, 3H)。
製備例 8
第一步 取KI4(100 mg，0.188 mmol)，11a(33 mg，0.188 mmol)，HATU(77 mg，0.203 mmol)加入DMF(3 mL)中，氮氣置換後加入DIEA(73 mg，0.564 mmol)，25 ℃下反應1.5小時後LCMS顯示反應結束。將反應液滴入處於攪拌狀態下的水(50 mL)中，加完後靜置5分鐘，過濾，濾餅凍乾後得80 mg灰色固體11b，產率：72%。MS-ESI: m/z 592.4 [M+H]+。
第二步 取27b(80 mg，0.135 mmol)溶於DCM(2 mL)中，N2置換後降溫至0 ℃，加入TFA(0.5 mL)，0 ℃下反應1.5小時後LCMS顯示反應結束。將反應液低溫旋轉乾燥，經PTLC純化後加乙腈和水凍乾得25 mg白色固體，產率：36%。
MS-ESI: m/z 508.3 [M+H]+。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.44 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 7.79 (d, J = 11.0 Hz, 1H), 7.30 (s, 1H), 6.53 (s, 1H), 5.60 – 5.53 (m, 1H), 5.42 (s, 2H), 5.28 – 5.15 (m, 2H), 4.59 (t, J = 5.1 Hz, 1H), 3.72 – 3.63 (m, 2H), 3.21 – 3.12 (m, 2H), 2.40 (s, 3H), 2.32 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 2.21 – 2.06 (m, 2H), 1.92 – 1.79 (m, 2H), 0.87 (t, J = 7.3 Hz, 3H)。
製備例 9 ：DXd 參照專利“CN104755494A”中說明書第183頁的實施例75提供的方法合成DXd。
參照例 1
第一步 取KI4(50 mg，0.094 mmol)，26a(18 mg，0.094 mmol)，HATU(39 mg，0.103 mmol)加入DMF(3 mL)中，氮氣置換後加入DIEA(48 mg，0.376 mmol)，25 ℃下反應1.5小時後LCMS顯示反應結束。將反應液滴入處於攪拌狀態下的水(50 mL)中，加完後靜置5分鐘，過濾，濾餅凍乾後得30 mg灰色固體26b，產率：52%。MS-ESI: m/z 607.4 [M+H]+。
第二步 取26b(30 mg，0.049 mmol)溶於DCM(2 mL)中，N2置換後降溫至0 ℃，加入TFA(0.5 mL)，0 ℃下反應1.5小時後LCMS顯示反應結束。將反應液低溫旋轉乾燥，用DCM帶一次後加乙腈和水凍乾得20 mg黃色固體，產率：80%。
MS-ESI: m/z 507.1 [M+H]+。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.67 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 7.86 – 7.66 (m, 4H), 7.32 (s, 1H), 6.56 (brs, 1H), 5.63 – 5.54 (m, 1H), 5.43 (s, 2H), 5.29 (d, J = 18.9 Hz, 1H), 5.22 (d, J = 18.9 Hz, 1H), 3.23 – 3.15 (m, 2H), 3.13 – 3.03 (m, 2H), 2.57 – 2.51 (m, 2H), 2.43 – 2.38 (m, 3H), 2.27 – 2.08 (m, 2H), 1.94 – 1.78 (m, 2H), 0.87 (t, J = 7.3 Hz, 3H)。 2.2 、連接子 - 毒素（ linker-payload ）的製備
連接子 - 毒素X1
第一步 氮氣保護下，向27a (5.00 g，43.0 mmol)，NaHCO3(10.9 g，129 mmol) 的DMF(50 mL)溶液中滴加苄溴(11.0 g，64.6 mmol)，並在25℃反應17小時。TLC (PE/EA= 2/1)顯示反應完全，將反應液加入到500 mL水中，用EA(250 mL)萃取兩遍，分液後經飽和氯化鈉水溶液(500 mL)洗滌，無水Na2SO4乾燥，濃縮通過管柱(PE:EA=3:2)得5.1 g無色液體，產率：57.1%。
第二步 氮氣保護下，向KI2 (4.00 g，10.9 mmol)，TsOH(800 mg，4.65 mmol) 的THF(30 mL)溶液中，在0℃下，滴加27b (4.50 g，21.8 mmol)的THF (10 mL) 溶液，並在25℃反應2小時。TLC (PE/EA = 1/2)顯示反應完全，將反應液加入到200 mL水中，用EA (200 mL)萃取兩次分液，無水Na2SO4乾燥，濃縮通過管柱(PE/EA=3/2)得白色固體1.56g，產率：26%。
第三步 氫氣環境下，在0℃下，向27c (800mg，1.55mmol)的EtOH (8 mL)和EA(8 mL)混合溶液中加入Pd/C (80 mg)，在0℃攪拌2.5小時。LCMS顯示反應完全。反應液經矽藻土過濾，用EA(200 mL)洗滌濾餅濃縮後用THF(20 mL)溶解旋轉乾燥得白色固體600 mg，產率：91%。
第四步 氮氣保護下，在0℃下，向27d (220mg，0.515mmol)，HY-13631A (250 mg，0.47mmol)和HATU (214mg，0.56mmol)的DMF(6 mL)溶液中加入DIEA(152mg，1.18mmol)，並在0℃反應2小時。LCMS顯示反應完全。將反應液加入檸檬酸水溶液(pH = 4)(150 mL)中，過濾，並用175 mL水洗滌濾餅，濾乾，用油泵拉乾得棕色固體260mg，產率：66%。
第五步 氮氣保護下，在0℃下，向27e (260 mg，0.309 mmol)的DCM(30 mL)溶液中滴加二乙胺(8 mL)，並在0℃反應3小時。LCMS顯示反應完全。將反應液加入0℃的石油醚溶液(600 mL)中，有固體析出，靜置待固體吸附於瓶底後，倒出溶液，用油泵拉乾，得棕色固體90mg，產率：47.1%。
第六步 氮氣保護下，在0℃下，向27f (90 mg，0.13 mmol)，KI-1 (92 mg，0.19 mmol ) 和DIEA(50 mg，0.39 mmol)的DMF(2.5 mL)溶液中加入HATU (74 mg，0.19 mmol)並在0℃反應2小時。LCMS顯示基本反應結束。在0℃下，將反應液加入PH=4的檸檬酸水溶液(30 mL)中，有絮狀固體析出，過濾，經製備盤(DCM/MecOH=10/1)得9.2 mg淡黃色固體X1，產率：6%。
MS m/z (ESI)：1074 [M+1]。
H-NMR (400 MHz，MeOD)：7.65 (d, 1H), 7.62 (s, 1H), 7.30-7.21(m, 5H), 6.79 (s, 2H), 5.69-5.65 (m, 1 H), 5.57 (d, 1H), 5.43-5.10 (m, 3H), 4.70 (d, 2H), 4.48-4.39 (m, 2H), 4.10-4.05 (m, 1H), 4.01-3.75 (m, 5H),3.46 (t, 2H), 3.22-3.15 (m, 2H), 3.07-3.00 (m, 1H), 2.75 (m, 1H), 2.62 (m, 1H), 2.45 (s, 3H), 2.37-2.20 (m, 6H), 2.10-2.02 (m, 2H), 2.00-1.92 (m, 2H) 1.68-1.57 (m, 6H), 1.01 (t, 3H)。
連接子 - 毒素X2
第一步 將34a(5 g，48.0 mmol)、K2CO3(19.9 g，144.0 mmol) 溶於DMF(20 mL)中，滴加苄溴(12.3 g，72.0 mmol)，25 ℃下反應17小時。TLC(PE/EA = 3/1)檢測原料反應完全。將反應液加入水(200 mL)中、用EA(250 mL)萃取分液，用飽和NaCl洗滌，無水Na2SO4乾燥後濃縮通過管柱(PE:EA = 2:1)得8.7 g無色液體34b，產率93%。MS-ESI: m/z 195.1 [M+H]+。
第二步 取34c(7.3 g，19.8 mmol)、TsOH(1.46 g，8.5 mmol)溶於THF(20 mL)中，氮氣保護並降溫至0℃，滴加43b(7.7 g，39.6 mmol)的THF(10 mL)溶液，加完後0 ℃反應2小時。TLC(PE/EA = 2/1)顯示原料大部分反應。將反應液倒入100 mL水中，DCM(100 mL)萃取，分液並用飽和NaCl洗滌，無水Na2SO4乾燥後通過管柱(PE/EA = 1/1)，得3.9 g無色稠狀物34d，產率：39%。MS-ESI: m/z 503.3 [M+H]+。
第三步 氫氣環境下，在0 ℃下，向34d(1.9 g，3.78 mmol)的EtOH(100 mL)和EA(100 mL)混合溶液中加入Pd/C(1 g，10 wt.%)，在0℃反應3 小時。TLC(PE/EA = 2/1)顯示反應完全。反應液經矽藻土過濾，用EA/EtOH(1:1，100 mL×3)洗滌濾餅，濾液濃縮，並用THF(50 mL×3)溶解旋轉乾燥並重複三次得1 g灰色固體34e，產率：64%。MS-ESI: m/z 435.2 [M+Na]+。
第四步 在氮氣保護下，0℃下向34e(426 mg，1.03 mmol)，KI4(500 mg，0.94 mmol)和HATU(429 mg，1.13 mmol)的DMF(20 mL)溶液中滴加DIEA(303 mg，2.35 mmol)，加完後在0 ℃反應2小時。LCMS顯示反應結束。將反應液滴到300 mL水中，攪拌後靜置5分鐘，過濾，濾餅用DCM/MeOH(10:1，100 mL)的溶液溶解後，乾燥旋轉乾燥拌樣，柱層析(EA:MeOH = 30:1)得600 mg黃色固體34f，產率：77%。MS-ESI: m/z 830.3 [M+H]+。
第五步 氮氣保護下，在0℃下，向34f(150 mg，0.18 mmol)的DCM(5 mL)溶液中滴加二乙胺(5 mL)，並在0℃反應2 小時。LCMS顯示反應完全。將石油醚溶液(100 mL×6)加入反應液中，有固體析出，靜置待固體沉澱後，倒出溶液，再用油泵拉乾，得120 mg白色粉末34g，LCMS顯示產物含量為70%，產率：76%。MS-ESI: m/z 608.3 [M+H]+。
第六步 在氮氣保護下，向34g(60 mg，0.099 mmol)、43h(51 mg，0.108 mmol)、和DIEA(32 mg，0.25 mmol)的DMF(1 mL)溶液中在0℃下加入HATU(45 mg，0.118 mmol)的DMF(1 mL)溶液，並在0℃下反應2小時。LCMS顯示原料反應完全。將反應液直接過反相柱，洗提劑((MeCN/MeOH=1/1)：H2O=60%：40%)，純化得14.8 mg黃色固體X2，產率14%。
MS-ESI: m/z 1062.4 [M+H]+。
1H NMR (400 MHz, Methanol-d4) δ 7.69 – 7.61 (m, 2H), 7.22 – 7.16 (m, 2H), 7.16 – 7.09 (m, 3H), 6.76 (s, 2H), 5.70 – 5.64 (m, 1H), 5.60 (d, J = 16.4 Hz, 1H), 5.40 – 5.31 (m, 2H), 5.26 (d, J = 19.0 Hz, 1H), 4.65 – 4.50 (m, 7H), 4.25 – 4.16 (m, 1H), 3.87 (d, J = 16.7 Hz, 1H), 3.83 – 3.76 (m, 3H), 3.72 (d, J = 17.0 Hz, 2H), 3.44 (t, J = 7.1 Hz, 2H), 3.25 – 3.17 (m, 2H), 3.10 – 3.02 (m, 1H), 2.92 – 2.83 (m, 1H), 2.45 – 2.39 (m, 5H), 2.32 – 2.20 (m, 5H), 1.97 – 1.89 (m, 2H), 1.63 – 1.50 (m, 4H), 1.34 – 1.20 (m, 6H), 0.99 (t, J = 7.3 Hz, 3H)。
連接子 - 毒素X3
第一步 向32a(2.00 g，6.6 mmol)，K2CO3(1.82 g，13.2 mmol)的MeCN(20 mL)中加入溴丙烯(960 mg，7.92 mmol)， 在20 ℃下攪拌5小時。TLC(PE/EA = 1/2)顯示反應結束。將反應液倒入水100 mL中，將pH值調至5，用EA(100 mL)萃取三次，無水硫酸鈉乾燥，旋轉乾燥通過管柱純化(PE/EA = 2/1)得1.83 g白色固體32b，產率：81%。
第二步 向32b(1.38 g，4.02 mmol)的DCM(10 mL)中加入TFA(10 mL)，在25 ℃下攪拌17小時。TLC(PE/EA = 1/3)顯示反應結束。將反應液旋轉乾燥得0.91 g黃色粘狀物32c，產率不計。
第三步 向32c(910 mg，4.87 mmol)，NaHCO3(613 mg，7.3 mmol)的DME/H2O(20 mL/10 mL)中加入41d(1.92 g，4.87 mmol)，在25 ℃下攪拌3小時。TLC(DCM/MeOH = 1/1)顯示反應結束。將反應液倒入水100mL中，用aq.HCl(1 N)將pH值調至5，用EA(150 mL)萃取兩次，無水硫酸鈉乾燥，旋轉乾燥通過管柱純化(DCM/MeOH = 20/1)得1.53 g白色固體32e，產率：67%。MS-ESI: m/z 467.4 [M+H]+。
第四步 向32f(3 g，5.83 mmol)的MeOH(50 mL)中加入Pd/C(600 mg)，在25 ℃在氫氣球下攪拌5小時。TLC(EA)顯示反應結束。將反應液過濾旋轉乾燥得1.9 g白色固體32g，產率：77%。
第五步 向32g(789 mg，1.86 mmol)，KI4(900 mg，1.69 mmol)，三乙胺(342 mg，3.38 mmol)的DMF(10 mL)中加入HATU(707 mg，1.86 mmol)，在0 ℃下攪拌3.5小時。TLC(EA)顯示反應結束。將反應液倒入H2O(80 mL)，用EA(100 mL)萃取兩次，無水硫酸鈉乾燥，旋轉乾燥通過管柱純化(EA)得1.186 g白色固體32h，產率：83%。MS-ESI: m/z 842.3 [M+H]+。
第六步 將32h(1.186 g，1.41 mmol)的DCM/二乙胺(20 mL，20/1)在25 ℃下攪拌17小時。TLC(DCM/MeOH = 10/1)顯示反應結束。將反應液倒入石油醚(200 mL)中過濾得768 mg白色固體32i，產率：88%。MS-ESI: m/z 620.3 [M+H]+。
第七步 向32i(676 mg，1.09 mmol)，32e(508 mg，1.09 mmol)，DIEA(423 mg，3.27 mmol)的DMF(10 mL)中加入HATU(414 mg， 1.09 mmol)， 在20 ℃下攪拌17小時。TLC(PE/EA = 1/5)顯示反應結束。將反應液倒入水中(30 mL)過濾，濾餅通過管柱純化(DCM/MeOH = 50/1)511 mg白色固體32j，產率：44%。MS-ESI: m/z 1068.3 [M+H]+。
第八步 將32j(482 mg，0.451 mmol)的二乙胺/DCM(10 mL，1/5)的溶液在10 ℃下攪拌17小時。TLC(EA)顯示反應結束。將反應液倒入PE(300 mL)中過濾得301 mg白色固體32k，產率不計。
第九步 向32k(301 mg，0.356 mmol)，Pd(PPh3)4(82 mg，0.071 mmol)的THF(5 mL)中加入嗎啡啉(93 mg，1.07 mmol)， 在25 ℃下攪拌5小時。LCMS顯示反應結束。將反應液製備得108 mg白色固體32l，產率：38%。MS-ESI: m/z 806.3 [M+H]+。
第十步 向32l(108 mg，0.134 mmol)，三乙胺(41 mg，0.402 mmol)的THF(2 mL)和DMF(2 mL)中加入溴乙醯溴(27 mg，0.134 mmol)，在0 ℃下攪拌1小時。TLC(DCM/MeOH = 10/1)顯示反應結束。將反應液直接製備得15 mg白色固體X3，產率：12%。
MS-ESI: m/z 926.3 [M+H]+。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12.11 (s, 1H), 8.54 – 8.42 (m, 3H), 8.27 – 8.16 (m, 2H), 7.78 (d, J = 11.0 Hz, 1H), 7.30 (s, 1H), 6.53 (s, 1H), 5.61 – 5.51 (m, 1H), 5.42 (s, 2H), 5.20 – 5.05 (m, 2H), 4.56 – 4.42 (m, 2H), 4.32 – 4.22 (m, 1H), 3.96 – 3.87 (m, 3H), 3.79 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 3.70 (d, J = 5.9 Hz, 2H), 3.25 – 3.08 (m, 2H), 2.61 – 2.53 (m, 2H), 2.45 – 2.36 (m, 4H), 2.36 – 2.22 (m, 3H), 2.20 – 2.03 (m, 4H), 1.99 – 1.68 (m, 4H), 0.87 (t, J = 7.3 Hz, 3H)。
連接子 - 毒素 X4
第一步 向33a(2.00 g，2.58 mmol)的MeOH(20 mL)中加入Pd/C(400 mg，10 wt.%)，在20 ℃下攪拌5小時。TLC(EA)顯示反應結束。將反應液過濾旋轉乾燥得1.3 g白色固體33b，產率：74%。
第二步 向33b(0.55 g，0.802 mmol)，KI4(427 mg，0.802 mmol)和DIPEA(310 mg，2.40 mmol)的DMF(5 mL)中加入HATU(305 mg，0.802 mmol)， 在0 ℃下攪拌2小時。TLC(DCM/MeOH = 1/10)顯示反應結束。將反應液倒入水(40 mL)中，過濾得粗產物，經過管柱純化(DCM/MeOH = 20/1)得360 mg黃色固體33c，產率41%。
第三步 向33c(360 mg，0.326 mmol)的DCM(10 mL)中加入二乙胺(2 mL)。在25 ℃下攪拌17小時。TLC(DCM/MeOH = 5/1)顯示反應結束。將反應液倒入PE(100Ml)中，過濾得205 mg白色固體33d，產率：71%。MS-ESI: m/z 881.3 [M+H]+。
第四步 向33d(205 mg，0.233 mmol)和三乙胺(118 mg，1.17 mmol)的DMF(1 mL)和水(1 mL)中加入溴乙醯溴(94 mg，0.446 mmol)的THF(2 mL)溶液，並在0度攪拌1小時，反應液直接製備得15 mg白色固體X4，產率：6%。
MS-ESI: m/z 1001.2 [M+H]+。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.57 – 8.50 (m, 1H), 8.50 – 8.43 (m, 2H), 8.35 – 8.29 (m, 1H), 8.19 – 8.12 (m, 2H), 7.80 (d, J = 10.8 Hz, 1H), 7.27 – 7.14 (m, 7H), 6.53 (s, 1H), 5.59 – 5.51 (m, 1H), 5.44 – 5.39 (m, 2H), 5.20 – 5.07 (m, 2H), 4.56 – 4.44 (m, 3H), 3.92 (s, 3H), 3.80 – 3.68 (m, 5H), 3.41 (s, 1H), 3.21 – 3.12 (m, 2H), 2.83 – 2.74 (m, 1H), 2.58 – 2.55 (m, 3H), 2.39 (s, 4H), 2.18 – 2.03 (m, 4H), 1.93 – 1.78 (m, 2H), 0.87 (t, J = 7.3 Hz, 3H)。 2.3 、抗 GPC3 抗體藥物偶聯物的製備 抗體藥物偶聯物 ADC DB1001-X1 的製備
用超純水分別配製還原劑和保護劑如下：2 mg/ml TCEP (Tris-2- carboxyethyl-phosphine，廠家：Thermo)水溶液和100 mmol/L EDTA(乙二胺四乙酸二鈉，廠家：Sigma)水溶液。
將Linker-payload X1溶於乾燥的DMA(N,N-Dimethylacetamide，二甲基乙醯胺，廠家：國藥集團)，配製成10 mg/mL的linker-payload DMA溶液。
取20 mg 6.28 mg/ml的DB1001單抗置於50 ml離心管，加入30mM His-HAc, pH5.5緩衝液稀釋抗體濃度至3 mg/ml，按照反應液總體積5%加入100 mM EDTA水溶液，震盪混勻後加入2 mg/ml TCEP水溶液進行抗體還原，TCEP與抗體的莫耳比18:1，震盪混勻後置於製冷型恆溫混勻儀上反應，37℃，2h。按照藥物與抗體終濃度莫耳比12:1加入前述Linker-payload的DMA溶液，按照反應液總體積10%補充DMA，震盪混勻後置於製冷型恆溫混勻儀上反應，4℃，1h。用超濾管(MWCO 30KD，廠家：密理博)置換樣品保存buffer，先用含有10% DMSO的30mM His-HAc, pH5.5緩衝液超濾3次，再用無DMSO的30mM His-HAc, pH5.5超濾6次，最終用0.2 μm PES膜過濾除菌，得到抗體藥物偶聯物DB1001-X1 12.7 mg，濃度5.59 mg/mL，產率63.5%。
經HIC檢測，抗體藥物偶聯物DB1001-X1的載藥量(DAR)為7.51，SEC純度為100%。 抗體藥物偶聯物 ADC DB1001-X2 的製備
用超純水分別配製還原劑和保護劑如下：2 mg/ml TCEP (Tris-2- carboxyethyl-phosphine，廠家：Thermo)水溶液和100 mmol/L EDTA(乙二胺四乙酸二鈉，廠家：Sigma)水溶液。
將Linker-payload X2溶於乾燥的DMA(N,N-Dimethylacetamide，二甲基乙醯胺，廠家：國藥集團)，配製成10 mg/mL的linker-payload DMA溶液。
取20 mg 6.28 mg/ml的DB1001單抗置於50 ml離心管，加入30mM His-HAc, pH5.5緩衝液稀釋抗體濃度至3 mg/ml，按照反應液總體積5%加入100 mM EDTA水溶液，震盪混勻後加入2 mg/ml TCEP水溶液進行抗體還原，TCEP與抗體的莫耳比18:1，震盪混勻後置於製冷型恆溫混勻儀上反應，37℃，2h。按照藥物與抗體終濃度莫耳比12:1加入前述Linker-payload的DMA溶液，按照反應液總體積10%補充DMA，震盪混勻後置於製冷型恆溫混勻儀上反應，4℃，1h。用超濾管（MWCO 30KD，廠家：密理博）置換樣品保存buffer，先用含有10% DMSO的30mM His-HAc, pH5.5緩衝液超濾3次，再用無DMSO的30mM His-HAc, pH5.5超濾6次，最終用0.2 μm PES膜過濾除菌，得到抗體藥物偶聯物DB1001-X2 14.3 mg，濃度6.71 mg/mL，產率71.5%。
經HIC檢測，抗體藥物偶聯物DB1001-X1的載藥量(DAR)為7.72，SEC純度為99.3%。 抗體藥物偶聯物 ADC DB1001-Deruxtecan 的製備
連接子-細胞毒素為Deruxtecan(CAS 1599440-13-7，購自上海皓元化學科技有限公司)，抗體為本發明抗體DB1001。參照本發明實施例2.3的方法得到DB1001-Deruxtecan。 實施例 3 ：生物活性測試 3.1 、小分子化合物 ( 毒素 ) 對腫瘤細胞體外增殖抑制測試
測試目的 為了檢測藥物化合物，對NCI-N87，JIMT-1和MBA-MB-231腫瘤細胞體外增殖的抑制活性。以不同濃度的化合物體外處理細胞，經6天培養後，採用CTG(CellTiter-Glo® Luminescent Cell Viability Assay，Promega，貨號：G7558)試劑對細胞的增值進行檢測，根據IC 50值評價該化合物的體外活性。
1、細胞培養：NCI-N87 / JIMT-1 / MBA-MB-231用10% FBS RPMI-1640培養基培養。
2、細胞準備：取對數生長期的NCI-N87 / JIMT-1 / MBA-MB-231 細胞，用PBS洗滌1次之後，加入2-3 mL胰蛋白酶消化2-3 min，待細胞消化完全後，加入10-15 mL細胞培養液，將經過消化的細胞洗提下來，1000 rpm離心5 min，棄上清液，接著加入10-20 mL細胞培養液將細胞重新懸浮，製成單細胞懸浮液。
3、細胞平盤培養：將NCI-N87 / JIMT-1 / MBA-MB-231單細胞懸浮液混勻，用細胞培養液分別調整活細胞密度至6x10 4cells/ml，將密度調整過後的細胞懸浮液混勻，以50 ul/孔加入9 6孔細胞培養盤。將培養盤在培養箱培養18小時(37℃，5% CO 2)。
4、化合物準備：用DMSO溶解化合物，配製成初始濃度為10 mM的存儲液。 小分子化合物共8個濃度，分別為：300，100，30，10，3，1，0.3，0.1nM。
5、加樣操作：向培養盤中加入配置的不同濃度的待測樣品，每個樣品兩複孔。將培養盤在培養箱培育6天(37℃，5% CO 2)。
6、顯色操作：取出96孔細胞培養盤，向每孔加入50ul CTG試劑，室溫培育10分鐘。
7、培養盤讀取操作：取出96孔細胞培養盤，置於培養盤讀取儀中，用培養盤讀取儀測定化學發光。
數據分析：用Microsoft Excel，Graphpad Prism 5對數據進行處理分析。 表1 本申請中的小分子化合物對腫瘤細胞體外增殖抑制的IC 50值。
化合物編號 NCI-N87 JIMT-1 MDA-MB-231
IC50 (nM) IC50 (nM) IC50 (nM)
製備例7 - 23.1 -
P-II-3 9.558 5.0 9.4
P-II-4 8.032 6.6 7.6
“-”：未檢測。
結論：根據表1的結果，本申請藥物偶聯物的毒素對NCI-N87細胞、JIMT-1和MDA-MB-231細胞具有明顯增強的增殖抑制活性。 3.2 、小分子化合物 ( 毒素 ) 對腫瘤細胞體外增殖抑制測試
測試目的 為了檢測藥物化合物，對NCI-N87細胞，JIMT-1和MBA-MB-231腫瘤細胞體外增殖的抑制活性。以不同濃度的化合物體外處理細胞，經6天培養後，採用CTG(CellTiter-Glo®LuminescentCellViabilityAssay，Promega，貨號：G7558)試劑對細胞的增值進行檢測，根據IC 50值評價該化合物的體外活性。
1、細胞培養：NCI-N87/JIMT-1/MBA-MB-231用10%FBS RPMI-1640培養基培養。
2、細胞準備：取對數生長期的NCI-N87/JIMT-1/MBA-MB-231細胞，用PBS洗滌1次之後，加入2-3 mL胰蛋白酶消化2-3 min，待細胞消化完全後，加入10-15 mL細胞培養液，將經過消化的細胞洗提下來，1000 rpm離心5 min，棄上清液，接著加入10-20 mL細胞培養液將細胞重新懸浮，製成單細胞懸浮液。
3、細胞平盤培養：將NCI-N87/JIMT-1/MBA-MB-231單細胞懸浮液混勻，用細胞培養液分別調整活細胞密度至6x10 4cells/mL，將密度調整過後的細胞懸浮液混勻，以50 uL/孔加入96孔細胞培養盤。將培養盤在培養箱培養18小時(37℃，5% CO 2)。
4、化合物準備：用DMSO溶解化合物，配製成初始濃度為10mM的存儲液。 小分子化合物共8個濃度，分別為：300，100，30，10，3，1，0.3，0.1 nM。
5、加樣操作：向培養盤中加入配置的不同濃度的待測樣品，每個樣品兩複孔。將培養盤在培養箱培育6天(37℃，5% CO 2)。
6、顯色操作：取出96孔細胞培養盤，向每孔加入50 uL CTG試劑，室溫培育10分鐘。
7、培養盤讀取操作：取出96孔細胞培養盤，置於培養盤讀取儀中，用培養盤讀取儀測定化學發光。 數據分析：用MicrosoftExcel，GraphpadPrism5對數據進行處理分析。
8、數據分析：細胞存活率用公式：V sample/V vehicle controlx 100% 計算。其中V sample為藥物處理組的讀數，V vehicle control為溶劑對照組的平均值。應用GraphPad Prism 軟體, 使用非線性回歸模型繪製S型劑量-存活率曲線並計算IC 50值。 表2 本申請中的小分子化合物對NCI-N87、JIMT-1和MDA-MB-231細胞體外增殖抑制的IC 50值
化合物編號 NCI-N87 JIMT-1 MDA-MB-231
IC50 (nM) IC50 (nM) IC50 (nM)
參照例1 - 36.2 -
P-III-20 5.888 4.351 6.65
P-III-21 4.755 2.874 2.88
“-”：未檢測
結論：根據表2的結果，本申請中藥物偶聯物的毒素對NCI-N87、JIMT-1和MDA-MB-231細胞具有明顯增強的增殖抑制活性。 3.3 、小分子化合物 ( 毒素 ) 對腫瘤細胞體外增殖抑制測試
測試目的 為了檢測藥物化合物，對NCI-N87細胞和Colo205腫瘤細胞體外增殖的抑制活性。以不同濃度的化合物體外處理細胞，經6天培養後，採用CTG(CellTiter-Glo®LuminescentCellViability Assay，Promega，貨號：G7558)試劑對細胞的增值進行檢測，根據IC 50值評價該化合物的體外活性。
1、細胞培養：NCI-N87/Colo205用10% FBS RPMI-1640培養基培養。
2、細胞準備：取對數生長期的NCI-N87/Colo205細胞，用PBS洗滌1次之後，加入2-3 mL胰蛋白酶消化2-3 min，待細胞消化完全後，加入10-15 mL細胞培養液，將經過消化的細胞洗提下來，1000 rpm離心5 min，棄上清液，接著加入10-20 mL細胞培養液將細胞重新懸浮，製成單細胞懸浮液。
3、細胞平盤培養：將NCI-N87/Colo205單細胞懸浮液混勻，用細胞培養液分別調整活細胞密度至6x10 4cells/mL，將密度調整過後的細胞懸浮液混勻，以50 ul/孔加入96孔細胞培養盤。將培養盤在培養箱培養18小時(37℃，5% CO 2)。
4、化合物準備：用DMSO溶解化合物，配製成初始濃度為10 mM的存儲液。 小分子化合物共8個濃度，分別為：300，100，30，10，3，1，0.3，0.1 nM。
5、加樣操作：向培養盤中加入配置的不同濃度的待測樣品，每個樣品兩複孔。將培養盤在培養箱培育6天(37℃，5% CO 2)。
6、顯色操作：取出96孔細胞培養盤，向每孔加入50 Ul CTG試劑，室溫培育10分鐘。
7、培養盤讀取操作：取出96孔細胞培養盤，置於培養盤讀取儀中，用培養盤讀取儀測定化學發光。
數據分析：用MicrosoftExcel，GraphpadPrism5對數據進行處理分析。 表3 本申請中的小分子化合物對NCI-N87和Colo205細胞體外增殖抑制的IC 50值。
化合物編號 Abs-IC 50(nM)
P-III-30 參照例1 製備例8 製備例9
Colo205 102.9 ＞1000 - 294.3
NCI-N87 6.5 ＞300 15.1 13.9
結論：根據表3的結果，本申請藥物偶聯物的毒素對NCI-N87和Colo205細胞具有明顯增強的增殖抑制活性。 實施例 4 ：抗體藥物偶聯物對腫瘤細胞體外增殖抑制測試 4.1 、 DB1001 和 DB1001-X1 的體外增殖抑制測試
採用CellTiter-Glo ®化學發光細胞存活率檢測法(即CTG方法)評估anti-GPC3裸抗DB1001、anti-GPC3 ADC DB1001-X1在GPC3陽性表現的人肝癌細胞HepG2及Huh7中處理7天，對細胞增殖的抑制作用。
收集對數生長期細胞，以4000個/孔(HepG2細胞)、6000個/孔(HuH7)的密度平盤培養，細胞盤放入37℃、5% CO 2培養箱培養過夜。實驗第二天，將DB1001、DB1001-X1用完全培養基按3倍稀釋，獲得9個濃度梯度(以300nM的最高濃度開始)藥物後，50μL/孔加入細胞培養盤中，完全培養基作為空白對照，設置3個複孔；繼續於37°C、5%CO 2培養箱內培育7天。培育結束，取出細胞培養盤，平衡至室溫後，每孔加入50μL CTG檢測試劑(Promega，Cat#: G7573)，震盪混勻後放置於暗處靜置10分鐘後，利用培養盤讀取儀檢測讀取訊號值。應用GraphPad Prism軟體，使用非線性回歸模型繪製S型劑量-反應曲線並計算IC 50值。細胞存活率計算公式=(Lum 待測藥-Lum 空白對照)/(Lum 溶劑空白對照-Lum 空白對照)×100%。實驗結果如下表所示： 表4：抗體、抗體偶聯藥物對人肝癌細胞的增殖抑制活性
細胞 藥物 細胞毒殺IC 50(nM)
Huh7 (GPC3+) DB1001-X1 0.65
DB1001 ＞300
HepG2 (GPC3+) DB1001-X1 2.63
DB1001 ＞300
結論：根據表4的結果，本申請抗體藥物偶聯物DB1001-X1對GPC3陽性表現細胞Huh7和HepG2具有明顯的增殖抑制活性；並且顯著優於抗體DB1001。 4.2 、 DB1001-X1 和 DB1001-X2 的體外增殖抑制測試
採用CTG法評估anti-GPC3 ADC DB1001-X1和DB1001-X2在GPC3陽性表現的人肝癌細胞HepG2、Huh7中處理6天，對細胞增殖的抑制作用。
收集對數生長期細胞，以5000個/孔(HepG2細胞)、5000個/孔(HuH7)的密度平盤培養，細胞盤放入37℃、5% CO 2培養箱培養過夜。實驗第二天，將DB1001-X1、DB1001-X2用完全培養基按3倍稀釋，獲得9個濃度梯度(以1000nM的最高濃度開始)藥物後，50μL/孔加入細胞培養盤中，完全培養基作為空白對照，設置3個複孔；繼續於37°C、5%CO 2培養箱內培育7天。培育結束，取出細胞培養盤，平衡至室溫後，每孔加入50μL CTG檢測試劑(Promega, Cat#: G7573)，震盪混勻後放置於暗處靜置10分鐘後，利用培養盤讀取儀檢測讀取訊號值。應用GraphPad Prism軟體，使用非線性回歸模型繪製S型劑量-反應曲線並計算IC 50值。細胞存活率計算公式=(Lum 待測藥-Lum 空白對照)/(Lum 溶劑空白對照-Lum 空白對照)×100%。實驗結果如下表所示： 表5 抗體、抗體偶聯藥物對人肝癌細胞的增殖抑制活性
細胞 藥物 細胞毒殺IC 50(nM)
Huh7 (GPC3+) DB1001-X1 4.29
DB1001-X2 3.91
HepG2 (GPC3+) DB1001-X1 8.37
DB1001-X2 7.02
結論：根據表5的結果，本申請抗體藥物偶聯物DB1001-X1和DB1001-X2對GPC3陽性表現細胞Huh7和HepG2具有明顯增強的增殖抑制活性。 實施例 5 ：抗體藥物偶聯物體內腫瘤抑制測試
為研究DB1001-X1對體內形成腫瘤的抑制作用，在小鼠體內用GPC3陽性表現的人肝癌細胞HepG2或Huh7形成移植瘤後，評估DB1001-X1的抗腫瘤效果。 5.1 、抗體藥物偶聯物對 HepG2 荷瘤小鼠藥效評價
1. 受試藥物及材料 空白對照組(對照組)：生理鹽水 DB1001-X1(治療組)：10mg/kg DB1001(治療組)：10mg/kg
2. 配製方法：所有樣品均用生理鹽水稀釋配製。
3. 試驗動物：8周齡的雌性BALB/c小鼠，購自集萃藥康生物技術有限公司。
4. 試驗方法： 將1×10 7個HepG2細胞接種於8周齡的雌性BALB/c裸小鼠右前肩胛處皮下，當腫瘤長至約110mm³，對荷瘤小鼠進行StudyDirectorTM隨機分組，並於當天(第0天)開始透過靜脈(i.v.)注射DB1001及DB1001-X1給藥，共注射1次，給藥21天後結束實驗。每週測量2 次瘤體積和體重，記錄數據。
溶劑對照組或治療組每組6隻小鼠。透過測量腫瘤體積計算抑瘤率。抑瘤率(TGI%)=100% -(測量當天治療組腫瘤體積-第0天治療組腫瘤體積)/(測量當天對照組腫瘤體積-第0天對照組腫瘤體積)。 表6 抗體藥物偶聯物對HepG2荷瘤小鼠的體內腫瘤抑制效果
治療組 D13抑瘤率 D16抑瘤率 D20抑瘤率
DB1001 6.65% 0.13% -11.97%
DB1001-X1 98.90% 94.97% 86.44%
實驗結果如圖1及表6所示，本申請抗GPC3裸抗DB1001單次給藥沒有顯著的抑瘤作用。抗體藥物偶聯物DB1001-X1單次給藥後表現出顯著增強的抗腫瘤活性。 5.2 、抗體藥物偶聯物對 Huh7 荷瘤小鼠藥效評價
1. 受試藥物及材料 空白對照組(對照組)：生理鹽水 DB1001-X1(治療組)：3mg/kg DB1001-X1(治療組)：10mg/kg
2. 配製方法：所有樣品均用生理鹽水稀釋配製。
3. 試驗動物：8周齡的雌性BALB/c小鼠，購自集萃藥康生物技術有限公司。
4. 試驗方法： 將5×10 6個Huh7細胞接種於8周齡的雌性BALB/c裸小鼠右前肩胛處皮下，當腫瘤長至約130mm³，對荷瘤小鼠進行StudyDirectorTM隨機分組，並於當天(第0天)開始透過靜脈注射(i.v.)給藥DB1001-X1(3mg/kg)及DB1001-X1(10mg/kg)，共給藥1次，給藥21天後結束實驗。每週測量2 次瘤體積和體重，記錄數據。
溶劑對照組或給藥組每組6隻小鼠。透過測量腫瘤體積計算抑瘤率。抑瘤率(TGI%)=100% -(測量當天治療組腫瘤體積-第0天治療組腫瘤體積)/(測量當天對照組腫瘤體積-第0天對照組腫瘤體積)。 表7 抗體藥物偶聯物對Huh7荷瘤小鼠的體內腫瘤抑制效果
治療組 D14抑瘤率 D17抑瘤率 D21抑瘤率
DB1001-X1, 3mpk 63.83% 63.59% 59.76%
DB1001-X1, 10mpk 97.09% 94.70% 89.94%
實驗結果如圖2及表7所示。抗體藥物偶聯物DB1001-X1單次給藥後表現出顯著的劑量依賴性抑瘤活性。 5.3 、抗體藥物偶聯物對 HepG2 荷瘤小鼠藥效評價
(1) 受試藥物及材料 空白對照組(對照組)：生理鹽水 DB1001-Deruxtecan(治療組)：1mg/kg DB1001-X2(治療組)：1mg/kg DB1001-Deruxtecan(治療組)：3mg/kg DB1001-X2(治療組)：3mg/kg
(2) 配製方法：所有樣品均用生理鹽水稀釋配製。
(3) 試驗動物：8周齡的雌性BALB/c小鼠，購自集萃藥康生物技術有限公司。
(4) 試驗方法： 將1×10 7個HepG2細胞接種於8周齡的雌性BALB/c裸小鼠右前肩胛處皮下，當腫瘤長至約110mm³，對荷瘤小鼠進行StudyDirectorTM隨機分組，並於當天(第0天)開始透過靜脈(i.v.)注射DB1001-X1及DB1001-X2給藥，共注射1次，給藥21天後結束實驗。每週測量2次瘤體積和體重，記錄數據。
透過測量腫瘤體積計算抑瘤率。抑瘤率(TGI%)=100% -(測量當天治療組腫瘤體積-第0天治療組腫瘤體積)/(測量當天對照組腫瘤體積-第0天對照組腫瘤體積)。 表8 DB1001-Deruxtecan和DB1001-X2對HepG2荷瘤小鼠的體內腫瘤抑制效果
治療組 抑瘤率 TGI%
DB1001-Deruxtecan, 1mpk +
DB1001-Deruxtecan, 3mpk ++
DB1001-X2, 1mpk ++
DB1001-X2, 3mpk +++
+：TGI＜50% ++：60≤TGI%＜75% +++：TGI%≥80%
實驗結果表明，本申請抗體藥物偶聯物單次給藥後表現出顯著增強的抗腫瘤活性。 5.4 、抗體藥物偶聯物對 Huh7 荷瘤小鼠藥效評價
(1) 受試藥物及材料 空白對照組(對照組)：生理鹽水 DB1001-Deruxtecan(治療組)：1mg/kg DB1001-X2(治療組)：1mg/kg DB1001-Deruxtecan(治療組)：3mg/kg DB1001-X2(治療組)：3mg/kg
(2) 配製方法：所有樣品均用生理鹽水稀釋配製。
(3) 試驗動物：8周齡的雌性雌性BALB/c裸小鼠，購自集萃藥康生物技術有限公司。
(4) 試驗方法： 將5×10 6個Huh7細胞接種於8周齡的雌性BALB/c裸小鼠右前肩胛處皮下，當腫瘤長至約110mm³，對荷瘤小鼠進行StudyDirectorTM隨機分組，並於當天(第0天)開始透過靜脈(i.v.)注射DB1001-X1及DB1001-X2給藥，共注射1次，給藥21天後結束實驗。每週測量2 次瘤體積和體重，記錄數據。
透過測量腫瘤體積計算抑瘤率。抑瘤率(TGI%)=100% -(測量當天治療組腫瘤體積-第0天治療組腫瘤體積)/(測量當天對照組腫瘤體積-第0天對照組腫瘤體積)。 表9 DB1001-Deruxtecan和DB1001-X2對Huh7荷瘤小鼠的體內腫瘤抑制效果
治療組 抑瘤率 TGI%
DB1001-Deruxtecan, 1mpk +
DB1001-Deruxtecan, 3mpk ++
DB1001-X2, 1mpk ++
DB1001-X2, 3mpk +++
+：TGI＜50% ++：60≤TGI%＜75% +++：TGI%≥80%
實驗結果表明，本申請抗體藥物偶聯物單次給藥後表現出顯著增強的抗腫瘤活性。
雖然以上描述了本發明的具體實施方式，但是本領域的技術人員應當理解，這些僅是舉例說明，在不背離本發明的原理和實質的前提下，可以對這些實施方式做出多種變更或修改。因此，本發明的保護範圍由所附申請專利範圍限定。
圖1：抗體藥物偶聯物對人肝癌細胞HepG2荷瘤小鼠的抗腫瘤體內藥效。 圖2：抗體藥物偶聯物對人肝癌細胞Huh7荷瘤小鼠的抗腫瘤體內藥效。
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Claims (35)

  1. 一種抗GPC3抗體藥物偶聯物、其異構物、其藥學上可接受的鹽或其混合物，所述抗GPC抗體藥物偶聯物結構如式(I-1)所示： (I-1) 其中， M為-L 2-L 3-X-L 1-； L 2為-O-或-S-； L 3為-(C(R 1a)(R 1b)) m-，m為0、1、2或3，其中當L 3包含伸甲基單元時，所述L 3的0個或1個伸甲基單元可以被-C(O)-、或-C(S)-替代； L 1為-(C(R 2a)(R 2b)) n-，n為1、2或3，其中當L 1包含伸甲基單元時，所述L 1的0個或1個伸甲基單元被-C(O)-、或-C(S)-替代； X為3到6員飽和的碳環基、3到6員飽和的雜環基或單鍵，所述3到6員飽和的碳環基和3到6員飽和的雜環基任選被1個或多個R 3a取代； 其中每個R 1a，R 1b，R 2a，R 2b，R 3a各自獨立地為氫、鹵素或被1個或多個R任選取代的C 1-6脂肪族基團； 其中每個R各自獨立地為氫或鹵素； L是連接子單元； p表示平均連接數，且p為1到10的整數或小數； Ab為抗GPC3抗體或其抗原結合片段。
  2. 如請求項1所述的抗GPC3抗體藥物偶聯物、其異構物、其藥學上可接受的鹽或其混合物，其中所述抗GPC3抗體或其抗原結合片段包含重鏈可變區和輕鏈可變區，所述重鏈可變區包含胺基酸序列分別如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3，和所述輕鏈可變區包含胺基酸序列分別如SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3。
  3. 如請求項1或2所述的抗GPC3抗體藥物偶聯物、其異構物、其藥學上可接受的鹽或其混合物，其中所述抗GPC3抗體或其抗原結合片段包含：胺基酸序列如SEQ ID NO:7所示或與其具有至少95%、96%、97%、98%或99%相同性的重鏈可變區，和胺基酸序列如SEQ ID NO:8所示或與其具有至少95%、96%、97%、98%或99%相同性的輕鏈可變區。
  4. 如請求項1或2所述的抗GPC3抗體藥物偶聯物、其異構物、其藥學上可接受的鹽或其混合物，其中所述抗GPC3抗體或其抗原結合片段為鼠源抗體或其片段、嵌合抗體或其片段、人源化抗體或其片段。
  5. 如請求項1或2所述的抗GPC3抗體藥物偶聯物、其異構物、其藥學上可接受的鹽或其混合物，其中所述抗GPC3抗體或其抗原結合片段為Fab、Fab'、Fab'-SH、Fv、scFv、F(ab') 2、sdAb、雙抗體或線性抗體。
  6. 如請求項1或2所述的抗GPC3抗體藥物偶聯物、其異構物、其藥學上可接受的鹽或其混合物，其中所述抗體為IgG1形式的抗體、IgG2形式的抗體、IgG3形式的抗體或IgG4形式的抗體。
  7. 如請求項1或2所述的抗GPC3抗體藥物偶聯物、其異構物、其藥學上可接受的鹽或其混合物，其中所述抗GPC3抗體或其抗原結合片段包含：胺基酸序列如SEQ ID NO: 9所示或與其具有至少95%、96%、97%、98%或99%相同性的重鏈，和胺基酸序列如SEQ ID NO: 10所示或與其具有至少95%、96%、97%、98%或99%相同性的輕鏈。
  8. 如請求項1-7中任一項所述的抗GPC3抗體藥物偶聯物、其異構物、其藥學上可接受的鹽或其混合物，其中p為3-8的整數或小數。
  9. 如請求項1-7中任一項所述的抗GPC3抗體藥物偶聯物、其異構物、其藥學上可接受的鹽或其混合物，其中L 3為-(C(R 1a)(R 1b)) m-，其中，m為0、1、2或3； 其中每個R 1a和R 1b各自獨立地為氫、鹵素或被1、2或3個R任選取代的C 1-6脂肪族基團，優選為氫、甲基、乙基或丙基； 其中每個R各自獨立地為氫或鹵素。
  10. 如請求項9所述的抗GPC3抗體藥物偶聯物、其異構物、其藥學上可接受的鹽或其混合物，其中L 3為單鍵、-CH 2-、-CH(CH 3)-、-C(CH 3) 2-、-CH 2CH 2-、-CH(CH 3)CH 2-或-C(CH 3) 2CH 2-。
  11. 如請求項1-7中任一項所述的抗GPC3抗體藥物偶聯物、其異構物、其藥學上可接受的鹽或其混合物，其中X為任選被1、2或3個R 3a取代的3到6員飽和的碳環基或單鍵； 其中每個R 3a各自獨立地為氫、鹵素或被1、2或3個R任選取代的C 1-6脂肪族基團； 其中每個R各自獨立地為氫或鹵素。
  12. 如請求項11所述的抗GPC3抗體藥物偶聯物、其異構物、其藥學上可接受的鹽或其混合物，其中X為3到6員飽和的碳環基或單鍵，優選為環丙基、環丁基、環戊基、環己基或單鍵，更優選為 、 、 、 或單鍵。
  13. 如請求項1-7中任一項所述的抗GPC3抗體藥物偶聯物、其異構物、其藥學上可接受的鹽或其混合物，其中-L 3-X-為：-(C(R 1a)(R 1b)) m-、3到6員飽和的碳環基或3到6員飽和的雜環基； 其中，m為1、2或3，所述3到6員飽和的碳環基和3到6員飽和的雜環基任選被1、2或3個R 3a取代； 其中，每個R 1a，R 1b，R 3a各自獨立地為氫、鹵素或可以被1、2或3個R任選取代的C 1-6脂肪族基團； 其中每個R各自獨立地為氫或鹵素。
  14. 如請求項13所述的抗GPC3抗體藥物偶聯物、其異構物、其藥學上可接受的鹽或其混合物，其中，所述-L 3-X-為：-(C(R 1a)(R 1b)) m-或任選被1、2或3個R 3a取代的3到6員飽和的碳環基；例如，所述-L 3-X-為-(C(R 1a)(R 1b)) m-或任選被1、2或3個R 3a取代的環丙基、環丁基、環戊基或環己基；優選地，所述-L 3-X-為：-(C(R 1a)(R 1b)) m-或任選被1、2或3個R 3a取代的： 、 、 或 ； 所述m為1、2或3； R 1a各自獨立地為鹵素或被1、2或3個R任選取代的C 1-6脂肪族基團，例如為甲基、乙基或丙基；R 1b，R 3a各自獨立地為氫、鹵素或被1、2或3個R任選取代的C 1-6脂肪族基團，例如為氫、甲基、乙基或丙基；R各自獨立地為氫或鹵素。
  15. 如請求項14所述的抗GPC3抗體藥物偶聯物、其異構物、其藥學上可接受的鹽或其混合物，其中所述-L 3-X-為： 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 或 。
  16. 如請求項1-7中任一項所述的抗GPC3抗體藥物偶聯物、其異構物、其藥學上可接受的鹽或其混合物，其中L 1為-C(R 2a)(R 2b)-、-C(R 2a)(R 2b)C(O)-或-C(O)-； 其中每個R 2a，R 2b各自獨立地為氫、鹵素或被R任選取代的C 1-6脂肪族基團，優選為氫、甲基、乙基或丙基； 其中每個R各自獨立地為氫或鹵素。
  17. 如請求項16所述的抗GPC3抗體藥物偶聯物、其異構物、其藥學上可接受的鹽或其混合物，其中L 1為-CH 2C(O)-、-CH(CH 3)C(O)-或-C(O)-。
  18. 如請求項1-17中任一項所述的抗GPC3抗體藥物偶聯物、其異構物、其藥學上可接受的鹽或其混合物，其中， 所述M為-L 2-L 3-X-L 1-； L 2為-O-； -L 3-X-為任選被1、2或3個R 3a取代的3到6員飽和的碳環基；或者，-L 3-X-為任選被1、2或3個R 3a取代的環丙基、環丁基、環戊基或環己基；優選地，所述-L 3-X-為：任選被1、2或3個R 3a取代的： 、 、 或 ； L 1為-C(O)-； 其中每個R 3a各自獨立地為氫、鹵素或可以被R任選取代的C 1-6脂肪族基團； 其中每個R各自獨立地為氫或鹵素。
  19. 如請求項18所述的抗GPC3抗體藥物偶聯物、其異構物、其藥學上可接受的鹽或其混合物，其中， 所述M為-L 2-L 3-X-L 1-； L 2為-O-； -L 3-X為： 、 、 、 、 或 ； L 1為-C(O)-。
  20. 如請求項1-17中任一項所述的抗GPC3抗體藥物偶聯物、其異構物、其藥學上可接受的鹽或其混合物，其中， M為-L 2-L 3-X-L 1-； L 2為-O-； -L 3-X-為-(C(R 1a)(R 1b)) m-，其中，m為1、2或3； L 1為-CH 2C(O)-； 其中R 1a各自獨立地為鹵素或被1、2或3個R任選取代的C 1-6脂肪族基團；R 1b，R 3a各自獨立地為氫、鹵素或被1、2或3個R任選取代的C 1-6脂肪族基團； 其中每個R各自獨立地為氫或鹵素。
  21. 如請求項20所述的抗GPC3抗體藥物偶聯物、其異構物、其藥學上可接受的鹽或其混合物，其中， M為-L 2-L 3-X-L 1-； L 2為-O-； -L 3-X-為 、 、 、 或 ； L 1為-CH 2C(O)-。
  22. 如請求項21所述的抗GPC3抗體藥物偶聯物、其異構物、其藥學上可接受的鹽或其混合物，其中， M為-L 2-L 3-X-L 1-； L 2為-O-； -L 3-X-為 、 或 ； L 1為-CH 2C(O)-。
  23. 如請求項1-17中任一項所述的抗GPC3抗體藥物偶聯物、其異構物、其藥學上可接受的鹽或其混合物，其中-M-為： 、 、 、 、 、 、 、 、 或 。
  24. 如請求項1-23中任一項所述的抗GPC3抗體藥物偶聯物、其異構物、其藥學上可接受的鹽或其混合物，其中所述L為-L a-L b-L c-， 所述-L a-為 或 ， 其中，W為-(C(R wa)(R wb)) wn-，Y為-(OCH 2CH 2) yn-O yp-，Z為-(C(R za)(R zb)) zn； 其中wn為1、2、3或6， W的0個或1個伸甲基單元各自獨立地被-Cyr-、-N(R wx)C(O)-、-C(O)N(R wx)-、或-C(O)-替代； 其中yn為0、4或8，yp為0或1； 其中zn為1、2或3， Z的1個伸甲基單元各自獨立地被-Cyr-、-N(R zx)C(O)-、-C(O)N(R zx)-、或-C(O)-替代； -Cyr-為3到10員飽和的伸碳環基，其中所述-Cyr-是未取代的或獨立地被1到3個取代基R cx取代； 其中每個R wa，R wb，R za，R zb，R wx，R zx，R cx各自獨立地為氫、鹵素、-OR r或被R r任選取代的C 1-6脂肪族基團； 其中每個R r各自獨立地為氫、鹵素或C 1-6脂肪族基團； 所述-L b-表示由2到4個胺基酸構成的胜肽殘基，所述-L b-的胜肽殘基為由選自以下組中的胺基酸形成的胜肽殘基：***酸、甘胺酸、丙胺酸、纈胺酸、瓜胺酸和胺離胺酸； 所述-L c-為 ， 其中R L1、R L2各自獨立地選自以下組：氫、鹵素、-OH和C 1-6脂肪族基團。
  25. 如請求項24所述的抗GPC3抗體藥物偶聯物、其異構物、其藥學上可接受的鹽或其混合物，其中所述-L a-為 或 。
  26. 如請求項24所述的抗GPC3抗體藥物偶聯物、其異構物、其藥學上可接受的鹽或其混合物，其中所述-L b-選自以下組： 、 、 、 、 、 和 ； 優選地，所述-L b-為 或 。
  27. 如請求項24所述的抗GPC3抗體藥物偶聯物、其異構物、其藥學上可接受的鹽或其混合物，其中所述-L c-為 。
  28. 如請求項24-27中任一項所述的抗GPC3抗體藥物偶聯物、其異構物、其藥學上可接受的鹽或其混合物，其中所述L為 。
  29. 如請求項24-27中任一項所述的抗GPC3抗體藥物偶聯物、其異構物、其藥學上可接受的鹽或其混合物，其中所述L為 。
  30. 如請求項1-29中任一項所述的抗GPC3抗體藥物偶聯物、其異構物、其藥學上可接受的鹽或其混合物，其中所述抗GPC3抗體藥物偶聯物結構如式(Ⅱ-1)或(Ⅱ-2)所示： (Ⅱ-1)或 (Ⅱ-2)， 其中， p如請求項1或8所述； Ab如請求項1-7中任一項所述； L 2為-O-或-S-；優選為-O-； X為任選被1、2或3個R 3a取代的3到6員飽和的碳環基；優選地，所述X為任選被1、2或3個R 3a取代的： 、 、 或 ； L 3為-C(R 1a)(R 1b)-CH 2-或-C(R 1a)(R 1b)C(R 1a)(R 1b)-CH 2-； R 1a各自獨立地為鹵素或被1、2或3個R任選取代的C 1-6脂肪族基團；R 1b，R 3a各自獨立地為氫、鹵素或被1、2或3個R任選取代的C 1-6脂肪族基團；R各自獨立地為氫或鹵素。
  31. 如請求項1-30中任一項所述的抗GPC3抗體藥物偶聯物、其異構物、其藥學上可接受的鹽或其混合物，其中所述抗GPC3抗體藥物偶聯物選自以下結構式： 、 、 、 、 、 、 、 、 和 ， 其中， p如請求項1或8所述； Ab如請求項1-7中任一項所述。
  32. 一種抗GPC3抗體藥物偶聯物、其異構物、其藥學上可接受的鹽或其混合物，其中所述抗GPC3抗體藥物偶聯物選自： 、 、 、 、 、 和 ， 其中， p表示平均連接數，且p為1到10的整數或小數，優選為3-8的整數或小數。
  33. 一種藥物組成物，其包含如請求項1-32中任一項所述的抗GPC3抗體藥物偶聯物、其異構物、其藥學上可接受的鹽或其混合物，和藥學上可接受的載劑或賦形劑。
  34. 如請求項1-32中任一項所述的抗GPC3抗體藥物偶聯物、其異構物、其藥學上可接受的鹽或其混合物或請求項33所述的藥物組成物在製備用於治療和/或預防GPC3媒介的疾病或病症的藥物中的用途，優選地，所述疾病或病症為癌症；更優選地，所述癌症選自乳腺癌、卵巢癌、***癌、胰腺癌、腎癌、肺癌、肝癌、胃癌、結腸癌、膀胱癌、食管癌、子宮頸癌、膽囊癌、膠質母細胞瘤和黑色素瘤。
  35. 一種治療和/或預防GPC3媒介的疾病或病症的方法，其包括向有需要的受試者施用如請求項1-32中任一項所述的抗GPC3抗體藥物偶聯物、其異構物、其藥學上可接受的鹽或其混合物或請求項33所述的藥物組成物，優選地，所述疾病或病症為癌症；更優選地，所述癌症選自乳腺癌、卵巢癌、***癌、胰腺癌、腎癌、肺癌、肝癌、胃癌、結腸癌、膀胱癌、食管癌、子宮頸癌、膽囊癌、膠質母細胞瘤和黑色素瘤。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
TWI693073B (zh) * 2012-12-21 2020-05-11 日商中外製藥股份有限公司 對ｇｐｃ３標的治療劑療法為有效之患者投與的ｇｐｃ３標的治療劑
CN110577600B (zh) * 2018-06-07 2021-05-04 中国科学院上海药物研究所 靶向gpc3的抗体-药物偶联物及其制备方法和用途
CN114341162A (zh) * 2019-07-10 2022-04-12 赛博克萨2公司 作为治疗剂的细胞毒素的肽缀合物
CN113444179B (zh) * 2020-03-26 2022-09-02 苏州普乐康医药科技有限公司 一种抗gpc3抗体和包含该抗体的药物组合物
CN116199739A (zh) * 2020-09-30 2023-06-02 映恩生物制药（苏州）有限公司 一种抗肿瘤化合物及其制备方法和应用
JP2023552290A (ja) * 2020-11-19 2023-12-15 アーディアジェン コーポレーション Ｇｐｃ３結合剤、そのコンジュゲートおよびその使用方法
CN115429894A (zh) * 2021-06-02 2022-12-06 上海翰森生物医药科技有限公司 配体-药物偶联物、其制备方法及其医药用途

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