TW202222311A - 結合熱休克蛋白９０（ｈｓｐ９０）之共軛體和彼之調製劑 - Google Patents

結合熱休克蛋白９０（ｈｓｐ９０）之共軛體和彼之調製劑 Download PDF

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Abstract

已設計經由連接子附著至靶向部分(諸如結合熱休克蛋白90 (HSP90)之部分)的活性劑之共軛體及包含該共軛體之調製劑。亦提供製造及使用該共軛體和彼之調製劑之方法。

Description

結合熱休克蛋白９０（ＨＳＰ９０）之共軛體和彼之調製劑
本揭示概括關於治療性化合物。本揭示更特別地關於靶向熱休克蛋白(包括熱休克蛋白90 (HSP90))之化合物的用途，例如用於治療癌症。 [相關申請案之參考]
本揭示請求在2020年8月26日以HSP90-BINDING CONJUGATES AND FORMULATIONS THEREOF為標題申請之美國臨時專利申請案第63/070,418號及在2021年5月5日以HSP90-BINDING CONJUGATES AND FORMULATIONS THEREOF為標題申請之美國臨時專利申請案第63/184,348號之優先權，將每一該等內容以彼之全文併入本文以供參考。
熱休克蛋白90 (HSP90)為細胞內伴隨蛋白，其有助於蛋白質摺疊、穩定蛋白質對抗熱逆境且幫助蛋白質降解。其於許多類型的癌中被調升。許多Hsp90客戶蛋白常以突變形式過度表現於癌中且成為無限制的癌細胞增生及存活的原因。HSP90於癌組織中活化且潛伏在正常組織中。源自腫瘤細胞之HSP90對HSP90抑制劑具有比正常細胞中潛伏形式更高的結合親和性，容許HSP90抑制劑特異性靶向腫瘤細胞，在正常細胞中具有較低的HSP90功能抑制作用。再者，HSP90最近亦被鑑定為腫瘤入侵之重要的細胞外調介體。因此，HSP90被認為是抗癌藥物開發的主要治療靶標。在本技術中需要開發結合至HSP90之治療性化合物。
本申請案提供包含以連接子與靶向HSP90之部分偶合的活性劑之共軛體及包含此共軛體之醫藥組成物。在一些實施態樣中，共軛體抑制細胞中標靶蛋白之活性及功能。在一些實施態樣中，共軛體誘導標靶蛋白降解。在一些實施態樣中，活性劑為PI3K抑制劑，諸如但不限於PF-04979064、PQR514、BAY 80-6946 (柯潘利希布(Copanlisib))或彼等之片段/衍生物/類似物。
本揭示亦提供降解細胞中蛋白質、減少細胞增生及/或治療癌症之方法，其包含投予治療有效量的本揭示之共軛體。
亦提供包含該共軛體之醫藥組成物及製造和使用該共軛體之方法。
詳細說明
申請人已設計包含活性劑的靶向HSP90之共軛體及包含該共軛體之新穎粒子。此靶向可例如改進在位點上的活性劑量及降低對個體的活性劑毒性。本揭示的靶向HSP90之共軛體具有深入及快速的腫瘤穿透性且不需要受體內化作用。靶向HSP90之共軛體的高累積及長滯留時間使得能夠使用細胞毒性及非細胞毒性酬載，諸如化學治療劑、激酶抑制劑或免疫腫瘤學調節劑。
如本文所使用的「毒性」係指物質或組成物對細胞、組織有機體或細胞環境有害或有毒的能力。低毒性係指物質或組成物對細胞、組織有機體或細胞環境有害或有毒的能力降低。此降低的毒性或低毒性可相對於標準量測、相對於治療或相對於未治療。
毒性可另外相對於個體的體重減輕來測量，其中超過體重的15%、超過20%或超過30%之體重減輕為毒性的指標。亦可測量毒性的其他測度，諸如患者表現的測度，包括嗜睡及一般不適。嗜中性球減少症或血小板減少症亦可為毒性的測度。
毒性的藥理指標包括上升的AST/ALT含量、神經毒性、腎臟受損、GI受損及類似者。
共軛體係在投予粒子後釋放。經靶向之藥物共軛體係利用活性分子靶向與增強的滲透和滯留效應(EPR)及改進的粒子整體生物分布之組合以提供與投予經靶向之粒子或經囊封的未靶向之藥物相比而更大的功效及耐藥性。
另外，與單獨的活性劑之毒性相比，預期含有與活性劑連接的靶向HSP90之部分的共軛體對不過度表現HSP90之細胞的毒性降低。不承諾於任何特定的理論，申請人相信此特點是因為使經共軛之活性劑保留在正常細胞內比保留在腫瘤細胞內的能力降低。
本揭示之目的係提供用於時空藥物遞送的經改進之化合物、組成物及調製劑。
本揭示之另一目的係提供製造用於時空藥物遞送的經改進之化合物、組成物及調製劑之方法。
本揭示之又一目的係提供對有其需要的個體投予經改進之化合物、組成物及調製劑之方法。 I. 共軛體
共軛體包括以連接子附著至靶向部分(例如可結合至HSP90之分子)之活性劑或彼等之前藥。共軛體可為在單一活性劑與單一靶向部分之間的共軛體，例如具有結構X-Y-Z之共軛體，其中X為靶向部分，Y為連接子，及Z為活性劑。
在一些實施態樣中，共軛體含有超過一個靶向部分、超過一個連接子、超過一個活性劑或彼之任何組合。共軛體可具有任何數目的靶向部分、連接子及活性劑。共軛體可具有結構X-Y-Z-Y-X、(X-Y) n-Z、X-(Y-Z) n、X n-Y-Z、X-Y-Z n、(X-Y-Z) n、(X-Y-Z-Y) n-Z，其中X為靶向部分，Y為連接子，Z為活性劑，且n為介於1與50之間、介於2與20之間的整數，例如介於1與5之間。每次出現的X、Y和Z可相同或不同，例如共軛體可含有超過一種類型的靶向部分、超過一種類型的連接子及/或超過一種類型的活性劑。
共軛體可含有超過一個附著至單一活性劑之靶向部分。例如，共軛體可包括具有多個分別經由不同的連接子附著之靶向部分的活性劑。共軛體可具有結構X-Y-Z-Y-X，其中各X為可相同或不同的靶向部分，各Y為可相同或不同的連接子，及Z為活性劑。
共軛體可含有超過一個附著至單一靶向部分之活性劑。例如，共軛體可包括具有多個分別經由不同的連接子附著之活性劑的靶向部分。共軛體可具有結構Z-Y-X-Y-Z，其中X為靶向部分，各Y為可相同或不同的連接子，及各Z為可相同或不同的活性劑。 A. 活性劑
如本文所述之共軛體含有至少一種活性劑(第一活性劑)。共軛體可含有超過一個可相同或不同於第一活性劑的活性劑。活性劑可為治療劑、預防劑、診斷劑或營養劑。各種活性劑為本技術已知且可用於本文所述之共軛體中。活性劑可為蛋白質或肽、小分子、核酸或核酸分子、脂質、糖、醣脂、醣蛋白、脂蛋白或彼等之組合。在一些實施態樣中，活性劑為抗原、佐劑、放射活性物、成像劑(例如螢光部分)或多核苷酸。在一些實施態樣中，活性劑為有機金屬化合物。
在特定的實施態樣中，共軛體之活性劑包含約1%至約10%、或約10%至約20%、或約20%至約30%、或約30%至約40%、或約40%至約50%、或約50%至約60%、或約60%至約70%、或約70%至約80%、或約80%至約90%、或約90%至約99%之預定的莫耳重量百分比，使得共軛體之組分的莫耳重量百分比總和為100%。共軛體之活性劑的量亦可以相對於靶向配體的比例方式表示。例如，本發明之指導提供約10：1、9：1、8：1、7：1、6：1、5：1、4：1、3：1、2：1、1：1、1：2、1：3、1：4、1：5、1：6、1：7、1：8、1：9或1：10之活性劑對配體之比。
在一些實施態樣中，活性劑可為癌治療劑。癌治療劑包括例如死亡受體促效劑，諸如TNF相關之細胞凋亡誘導配體(TRAIL)、或Fas配體、或結合或活化死亡受體或以其他方式誘導細胞凋亡的任何配體或抗體。適合的死亡受體包括但不限於TNFR1、Fas、DR3、DR4、DR5、DR6、LTβR及彼等之組合。
癌治療劑(諸如化學治療劑、細胞激素、趨化激素和放射治療劑)可用作為活性劑。化學治療劑包括例如烷基化劑、抗代謝物、蒽環素、植物鹼、拓樸異構酶抑制劑和其他的抗腫瘤劑。此等藥劑通常影響細胞***或DNA合成及功能。可用作活性劑之治療劑的額外實例包括單株抗體和酪胺酸激酶抑制劑，例如伊馬替尼(imatinib)甲磺酸鹽，其直接靶向特定類型的癌中之分子異常(例如慢性骨髓性白血病、胃腸道基質瘤)。
化學治療劑包括但不限於順鉑(cisplatin)、卡鉑(carboplatin)、奧沙利鉑(oxaliplatin)、甲基二(氯乙基)胺(mechlorethamine)、環磷醯胺、氯芥苯丁酸、長春新鹼、長春鹼、溫諾平(vinorelbine)、長春地辛(vindesine)、紫杉醇(taxol)與其衍生物、艾來諾康(irinotecan)、拓普康(topotecan)、安沙吖啶(amsacrine)、依托泊苷(etoposide)、依托泊苷磷酸鹽、替尼泊苷(teniposide)、表鬼臼毒素(epipodophyllotoxin)、曲妥珠單抗(trastuzumab)、西妥昔單抗(cetuximab)和利妥昔單抗(rituximab)、貝伐單抗(bevacizumab)及彼等之組合。該等中之任一者可用作為共軛體中的活性劑。
在本揭示中使用之小分子活性劑(例如抗增生劑(細胞毒性劑和細胞生長抑制劑))包括細胞毒性化合物(例如廣效性)、血管生成抑制劑、細胞週期進展抑制劑、PBK/m-TOR/AKT路徑抑制劑、MAPK傳訊路徑抑制劑、激酶抑制劑、蛋白伴隨抑制劑、HDAC抑制劑、PARP抑制劑、Wnt/刺蝟傳訊路徑抑制劑、RNA聚合酶抑制劑和蛋白酶體抑制劑。在一些實施態樣中，活性劑為小分子活性劑、彼等之類似物、衍生物、前藥或醫藥上可接受之鹽。
廣效性細胞毒素包括但不限於DNA-結合或烷基化藥物、微管穩定和去穩定劑、鉑化合物及拓樸異構酶I或II抑制劑。
例示性結合DNA之藥物或烷基化藥物包括CC-1065與其類似物、蒽環素(多柔比星(doxorubicin)、泛艾黴素(epirubicin)、艾達黴素(idarubicin)、道諾黴素(daunorubicin))與其類似物、烷基化劑(諸如加利奇黴素(calicheamicin)、更生黴素(dactinomycine)、絲裂黴素(mitromycine)、吡咯并苯并二氮呯)及類似者。
例示性多柔比星類似物包括在Cohen等人之US 20140227299中所揭示之紐莫柔比星(nemorubicin)代謝物或類似的藥物部分，將其內容以彼之全文併入本文以供參考。
例示性CC-1065 類似物包括杜卡黴素(duocarmycin) SA、杜卡黴素CI、杜卡黴素C2、杜卡黴素B2、DU-86、KW-2189、比哲來新(bizelesin)、seco-阿朵來新(adozelesin)及那些在美國專利案號5,475,092、5,595,499、5,846,545、6,534,660、6,586,618、6,756,397和7,049,316中所述者。多柔比星與其類似物包括PNU-159682及那些在美國專利案號6,630,579中所述者，及在Cohen等人之US 20140227299所揭示之紐莫柔比星代謝物或類似藥物，將其內容以彼之全文併入本文以供參考。
利奇黴素包括那些在美國專利案號5,714,586和5,739,116中所述者。杜卡黴素包括那些在美國專利案號5,070,092、5,101,038、5,187,186、6,548,530、6,660,742和7,553,816 B2及Li等人之Tet Letts., 50:2932 - 2935 (2009)中所述者。吡咯并苯并二氮呯包括SG2057及那些在Denny, Exp. Opin. Ther. Patents., 10(4):459-474 (2000), Anti-Cancer Agents in Medicinal Chemistry, 2009, 9, 1-31、WO 2011/130613 A1、EP 2 789 622 A1、Blood 2013, 122, 1455、J. Antimicrob. Chemother. 2012, 67, 1683–1696、Cancer Res. 2004, 64, 6693-6699、WO 2013041606、US 8481042、WO 2013177481、WO 2011130613、WO 2011130598中所述者。
例示性微管穩定和去穩定劑包括紫杉烷(taxane)化合物(諸如太平洋紫杉醇(paclitaxel)、歐洲紫杉醇(docetaxel)、卡巴他賽(cabazitaxel))、類美登新(maytansinoid)、奧瑞他汀(auristatin)與其類似物、微管溶素(tubulysin) A和B 衍生物、長春花生物鹼(vinca alkaloid)衍生物、埃坡黴素(epothilone)、PM060184及念珠藻素(cryptophycin)。
例示性類美登新或類美登新類似物包括美登醇(maytansinol)與美登醇類似物、美登新(maytansine)或DM-1和DM-4及那些在美國專利案號5,208,020、5,416,064、6,333.410、6,441,163、6,716,821、RE39,151和7,276,497中所述者。在特定的實施態樣中，細胞毒性劑為類美登新、另一族群的抗微管蛋白劑(ImmunoGen, Inc.；亦參見Chari等人之1992, Cancer Res. 52: 127-131)、類美登新或類美登新類似物。適合的類美登新的實例包括美登醇與美登醇類似物。適合的類美登新係揭示於美國專利案號4,424,219、4,256,746、4,294,757、4,307,016、4,313,946、4,315,929、4,331,598、4,361,650、4,362,663、4,364,866、4,450,254、4,322,348、4,371,533、6,333,410、5,475,092、5,585,499和5,846,545中。
例示性奧瑞他汀包括奧瑞他汀E (亦稱為尾海兔素(dolastatin)-10之衍生物)、奧瑞他汀EB (AEB)、奧瑞他汀EFP (AEFP)、單甲基奧瑞他汀E (MMAE)、單甲基奧瑞他汀F (MMAF)、奧瑞他汀F和尾海兔素。適合的奧瑞他汀亦說明於美國公開案號2003/0083263、2011/0020343和2011/0070248；PCT申請公開案號WO 09/117531、WO 2005/081711、WO 04/010957、WO02/088172和WO01/ 24763；及美國專利案號7,498,298、6,884,869、6,323,315、6,239,104、6,124,431、6,034,065、5,780,588、5,767,237、5,665,860、5,663,149、5,635,483、5,599,902、5,554,725、5,530,097、5,521,284、5,504,191、5,410,024、5,138,036、5,076,973、4,986,988、4,978,744、4,879,278、4,816,444和4,486,414中，將該等揭示內容以彼之全文併入本文以供參考。
例示性微管溶素化合物包括在美國專利案號7,816,377、7,776,814、7,754,885；美國公開案號2011/ 0021568、2010/004784、2010/0048490、2010/00240701、2008/0176958；及PCT申請案號WO 98/13375、WO 2004/005269；WO 2008/138561、WO 2009/002993、WO 2009/055562、WO 2009/012958、WO 2009/026177、WO 2009/134279、WO 2010/033733、WO 2010/034724、WO 2011/017249、WO 2011/057805中所述之化合物，將該等揭示內容以彼之全文併入本文以供參考。
例示性長春花生物鹼包括長春新鹼、長春鹼、長春地辛和溫諾平(navelbine)(溫諾平(vinorelbine))。可在本揭示中使用之適合的長春花生物鹼亦揭示於美國公開案號2002/0103136和2010/0305149及美國專利案號7,303,749 Bl中，將該等揭示內容以彼之全文併入本文以供參考。
例示性埃坡黴素化合物包括埃坡黴素A、B、C、D、E和F與其衍生物。適合的埃坡黴素化合物與其衍生物說明於例如美國專利案號6,956,036、6,989,450、6,121,029、6,117,659、6,096,757、6,043,372、5,969,145和5,886,026；及WO 97/19086、WO 98/08849、WO 98/22461、WO 98/25929、WO 98/38192、WO 99/01124、WO 99/02514、WO 99/03848、WO 99/07692、WO 99/27890和WO 99/28324中，將該等揭示內容以彼之全文併入本文以供參考。
例示性念珠藻素化合物說明於美國專利案號6,680,311和6,747,021中，將該等揭示內容以彼之全文併入本文以供參考。
例示性鉑化合物包括順鉑(PLATINOL®)、卡鉑(PARAPLATIN®)、奧沙利鉑(ELOX ATINE®)、異丙鉑(iproplatin)、奧馬鉑(ormaplatin)和四鉑(tetraplatin)。
例示性拓樸異構酶I抑制劑包括喜樹鹼、喜樹鹼衍生物、喜樹鹼類似物和非天然喜樹鹼，諸如CPT-11 (艾來諾康)、SN-38、拓普康、9-胺基喜樹鹼、盧比替康(rubitecan)、吉馬替康(gimatecan)、卡瑞尼特辛(karenitecin)、席拉特康(silatecan)、勒托替康(lurtotecan)、依喜替康(exatecan)、第弗羅替康(diflomotecan)、貝羅替康(belotecan)、勒托替康(lurtotecan)和S39625。可在本揭示中使用之其他的喜樹鹼化合物包括那些在例如J. Med. Chem., 29:2358-2363 (1986)；J. Med. Chem., 23:554 (1980)；J. Med. Chem., 30: 1774 (1987)中所述者。
例示性拓樸異構酶II抑制劑包括阿柔萘非特(azonafide)和依托泊苷。
在DNA上起作用之額外的藥劑包括如在WO 200107711、WO 2003014127中所述之盧必奈克定(Lurbinectedin)(PM01183)、曲貝替定(Trabectedin)(亦稱為海鞘素(ecteinascidin) 743或ET-743)及類似物。
血管生成抑制劑包括但不限於MetAP2抑制劑。
例示性MetAP2抑制劑包括煙曲黴素醇(fumagillol)類似物，意指任何包括煙曲黴素(fumagillin)核心結構之化合物，包括抑制MetAP-2自蛋白質移除NH 2端蛋胺酸之能力的煙曲黴胺(fumagillamine)，如在Rodeschini等人之Org. Chem., 69, 357-373, 2004及Liu等人之Science 282, 1324-1327, 1998中所述。「煙曲黴素醇類似物」的非限制性實例揭示於Org. Chem., 69, 357, 2004；J.Org. Chem., 70, 6870, 2005；歐洲專利申請案0 354 787；Med. Chem., 49, 5645, 2006；Bioorg. Med. Chem., 11, 5051, 2003；Bioorg. Med. Chem., 14, 91, 2004；Tet. Lett. 40, 4797, 1999；W099/61432；美國專利案號6,603,812、5,789,405、5,767,293、6,566,541和6,207,704中。
例示性細胞週期進展抑制劑包括CDK抑制劑，諸如BMS-387032和PD0332991；Rho-激酶抑制劑，諸如GSK429286；檢查點激酶抑制劑，諸如AZD7762；極光激酶抑制劑，諸如AZD1152、MLN8054和MLN8237；PLK抑制劑，諸如BI 2536、BI6727 (瓦拉司替(Volasertib))、GSK461364、ON-01910 (埃斯特邦(Estybon))；及KSP抑制劑，諸如SB 743921、SB 715992 (依斯平希(ispinesib))、MK-0731、AZD8477、AZ3146和ARRY-520。
例示性PI3K/m-TOR/AKT傳訊路徑抑制劑包括肌醇磷脂3-激酶(PI3K)抑制劑、GSK-3抑制劑、ATM抑制劑、DNA-PK抑制劑和PDK-1抑制劑。
例示性PI3 激酶抑制劑係揭示於美國專利案號6,608,053中，且包括BEZ235、BGT226、BKM120、CAL101、CAL263、去甲氧基綠膠黴素(demethoxyviridin)、GDC-0941、GSK615、IC87114、LY294002、Palomid 529、哌立福新、PF-04691502、PX-866、SAR245408、SAR245409、SF1126、渥曼青黴素(Wortmannin)、XL147、XL765、GSK2126458 (歐米帕利希布)、GDC-0326、GDC-0032 (泰利斯布(Taselisib)、RG7604)、PF-05212384 (捷達特利斯(Gedatolisib)、PKI-587)、BAY 80-6946 (柯潘利希布)、PF-04691502、PF-04989216、PF-04979064、PI-103、PKI-402 VS-5584 (SB2343)、GDC-0941、NVP-BEZ235 (達托利希布(Dactoslisib))、BGT226、NVP-BKM120 (布帕利希布)、NVP-BYL719 (阿哌利希布)、GSK2636771、AMG-319、GSK2269557、PQR309、PQR514、PQR530、PWT143、TGR-1202 (RP5264)、PX-866、GDC-0980 (阿匹托利希布)、AZD8835、MLN1117、DS-7423、ZSTK474、CUDC-907、IPI-145 (INK-1197、杜維利希布)、AZD8186、XL147 (SAR245408)、XL765 (SAR245409)、CAL-101 (艾德拉利希布、GS-1101)、GS-9820 (阿卡利希布)和KA2237。
例示性AKT抑制劑包括但不限於AT7867、MK-2206、哌立福新、GSK690693、依帕他昔替(Ipatasertib)、AZD5363、TIC10、阿福替布(Afuresertib)、SC79、AT13148、PHT-427、A-674563和CCT128930。
例示性MAPK傳訊路徑抑制劑包括MEK、Ras、JNK、B-Raf和p38 MAPK抑制劑。
例示性MEK抑制劑係揭示於美國專利案號7,517,994中，且包括GDC-0973、GSK1120212、MSC1936369B、AS703026、R05126766和R04987655、PD0325901、AZD6244、AZD 8330及GDC-0973。
例示性B-raf抑制劑包括CDC-0879、PLX-4032和SB590885。
例示性B p38 MAPK抑制劑包括BIRB 796、LY2228820和SB202190。
受體酪胺酸激酶(RTK)為細胞表面受體，其常與刺激癌細胞失控增生及新血管生成之傳訊路徑相關聯。已鑑定許多過度表現或具有導致受體之組成性活化的突變之RTK，包括但不限於VEGFR、EGFR、FGFR、PDGFR、EphR和RET受體家族受體。例示性RTK特異性標靶包括ErbB2、FLT-3、c-Kit、c-Met和HIF。
ErbB2 受體(EGFR家族)之例示性抑制劑包括但不限於AEE788 (NVP-AEE 788)、BIBW2992 (阿法替尼(Afatinib))、拉帕替尼(Lapatinib)、埃羅替尼(Erlotinib)(塔西瓦(Tarceva))和吉非替尼(Gefitinib)(易瑞沙(Iressa))。
靶向超過一種傳訊路徑之例示性RTK抑制劑(經多重靶向之激酶抑制劑)包括靶向FGFR、FLT-3、VEGFR-PDGFR和Bcr-Abl受體之AP24534 (朋那替尼(Ponatinib))；靶向FLT-3和VEGFR- PDGFR受體之ABT-869 (里尼凡尼(Linifanib))；靶向VEGFR-PDGFR、Flt-1和VEGF受體之AZD2171；靶向VEGFR-PDGFR、FGFR、Flt-3和c-Kit受體之CHR-258 (多韋替尼(Dovitinib))。
例示性激酶抑制劑包括激酶ATM、ATR、CHK1、CHK2、WEE1和RSK之抑制劑。在一些實施態樣中，活性劑為ATR抑制劑，諸如但不限於柏唑色替(berzosertib)(VX-970、M6620或VE-822)、AZD6738或BAY1895344。
例示性蛋白伴隨抑制劑包括HSP90抑制劑。例示性HSP90抑制劑包括17AAG衍生物、BIIB021、BIIB028、SNX-5422、NVP-AUY-922和KW-2478。
例示性HDAC抑制劑包括貝利諾司他(Belinostat)(PXD101)、CUDC-101、多希諾司他(Doxinostat)、ITF2357 (吉威諾司他(Givinostat)、佳威諾司他(Gavinostat))、JNJ-26481585、LAQ824 (NVP-LAQ824、達希諾司他(Dacinostat))、LBH-589 (潘諾畢諾司他(Panobinostat))、MC1568、MGCD0103 (墨瑟提諾司他(Mocetinostat))、MS-275 (英提諾司他(Entinostat))、PCI-24781、派若沙米德(Pyroxamide)(NSC 696085)、SB939、翠丘司他(Trichostatin) A和佛瑞諾泰(Vorinostat) (SAHA)。
例示性PARP抑制劑包括依尼帕瑞(iniparib)(BSI 201)、奧拉帕瑞(olaparib)(AZD-2281)、ABT-888 (凡尼帕瑞(Veliparib))、AG014699、CEP 9722、MK 4827、KU-0059436 (AZD2281)、LT-673、3-胺基苯甲醯胺、A-966492和AZD2461。
例示性Wnt/刺蝟傳訊路徑抑制劑包括韋斯莫德吉(vismodegib)(RG3616/GDC-0449)、環帕胺(cyclopamine) (11-去氧芥芬鹼(deoxojervine))(刺蝟路徑抑制劑)和XAV-939 (Wnt路徑抑制劑)。
例示性RNA聚合酶抑制劑包括鵝膏蕈毒素(amatoxin)。例示性鵝膏蕈毒素包括a-瓢菌素、β-瓢菌素、γ-瓢菌素、ε-瓢菌素、鵝膏無毒環肽(amanullin)、二羥鵝膏毒肽羧酸(amanullic acid)、阿瑪米德(amaninamide)、鵝膏素(amanin)和鵝膏無毒環肽原(proamanullin)。
例示性蛋白酶體抑制劑包括硼替佐米(bortezomib)、卡非唑米(carfilzomib)、ONX 0912、CEP-18770和MLN9708。
在一個實施態樣中，本揭示之藥物為非天然喜樹鹼化合物、長春花生物鹼、激酶抑制劑(例如PI3激酶抑制劑(GDC-0941和PI-103))、MEK抑制劑、KSP抑制劑、RNA聚合酶抑制劑、PARP抑制劑、歐洲紫杉醇、太平洋紫杉醇、多柔比星、杜卡黴素、微管溶素、奧瑞他汀或鉑化合物。在特定的實施態樣中，藥物為SN-38、長春地辛、長春鹼、PI-103、AZD 8330、奧瑞他汀 E、奧瑞他汀F、杜卡黴素化合物、微管溶素化合物或ARRY-520之衍生物。
在另一實施態樣中，在本揭示中使用之藥物為二或更多種藥物之組合，諸如PI3激酶與MEK抑制劑、廣效性細胞毒性化合物與鉑化合物、PARP抑制劑與鉑化合物、廣效性細胞毒性化合物與PARP抑制劑。
活性劑可為癌治療劑。癌治療劑可包括死亡受體促效劑，諸如TNF相關之細胞凋亡誘導配體(TRAIL)、或Fas配體、或結合或活化死亡受體或以其他方式誘導細胞凋亡的任何配體或抗體。適合的死亡受體包括但不限於TNFR1、Fas、DR3、DR4、DR5、DR6、LTβR及彼等之組合。
活性劑可為DNA小溝結合劑，諸如盧貝替丁(lurbectidin)和推貝替丁(trabectidin)。
活性劑可為E3泛素接合酶抑制劑、去泛素化酶(adeubiquitinase)抑制劑或NFkB路徑抑制劑。
活性劑可為磷酸酶抑制劑，包括PTP1B、SHP2、LYP、FAP-1、CD45、STEP、MKP-1、PRL、LMWPTP或CDC25之抑制劑。
活性劑可為腫瘤代謝抑制劑，諸如GAPDH、GLUT1、HK II、PFK、GAPDH、PK、LDH或MCT之抑制劑。
活性劑可靶向表觀遺傳標靶，包括EZH2、MLL、DOT1樣蛋白(DOT1L)、含溴結構域蛋白4 (BRD4)、BRD2、BRD3、NUT、ATAD2或SMYD2。
活性劑可靶向身體的免疫系統以助於抗癌，包括靶向IDO1、IDO2、TDO、CD39、CD73、A2A拮抗劑、STING活化劑、TLR促效劑(TLR 1–13)、ALK5、CBP/EP300溴結構域、ARG1、ARG2、iNOS、PDE5、P2X7、P2Y11、COX2、EP2受體或EP4受體之分子。
活性劑可靶向Bcl-2、IAP或脂肪酸合成酶。
在一些實施態樣中，活性劑可為20-epi-l,25二羥基維生素D3、4-番薯酮醇(ipomeanol)、5-乙炔基尿嘧啶、9-二氫紫杉醇、阿比特龍(abiraterone)、阿西維星(acivicin)、阿柔比星(aclarubicin)、阿考達唑(acodazole)鹽酸鹽、阿克羅寧(acronine)、醯基富烯(acylfulvene)、阿地培諾(adecypenol)、阿朵來新、阿地白血球殺菌素(aldesleukin)、all-tk拮抗劑、六甲蜜胺(altretamine)、安莫司汀(ambamustine)、安波黴素(ambomycin)、阿美坦宗(ametantrone)乙酸鹽、阿米達(amidox)、阿米弗司汀(amifostine)、胺基格魯米特(aminoglutethimide)、胺基戊酮酸、安如比星(amrubicin)、安沙吖啶、阿那格雷(anagrelide)、阿那曲唑(anastrozole)、穿心蓮內酯(andrographolide)、血管生成抑制劑、拮抗劑D、拮抗劑G、安雷利斯(antarelix)、安曲黴素(anthramycin)、抗背側化形態生成蛋白質-1 (anti-dorsalizing morphogenetic protein-1)、抗***(antiestrogen)、抗瘤酮(antineoplaston)、反義寡核苷酸、甘胺酸阿非科林(aphidicolin glycinate)、細胞凋亡基因調節物、細胞凋亡調節劑、無嘌呤核酸、ARA-CDP-DL-PTBA、精胺酸脫胺基酶、天冬醯胺酸酶、曲林菌素(asperlin)、阿蘇拉林(asulacrine)、阿他美坦(atamestane)、阿莫司汀(atrimustine)、阿西那司坦汀1 (axinastatin 1)、阿西那司坦汀2、阿西那司坦汀3、阿扎胞苷(azacitidine)、阿扎司壯(azasetron)、阿扎毒素(azatoxin)、氮雜酪胺酸、阿扎替派(azetepa)、阿佐托黴素(azotomycin)、漿果赤黴素III (baccatin III)衍生物、巴拉諾(balanol)、巴馬司他(batimastat)、苯佐克洛林(benzochlorin)、苯佐地帕(benzodepa)、苯甲醯基星形孢菌素(benzoylstaurosporine)、β內醯胺衍生物、β-阿立辛(beta-alethine)、β克林黴素B (betaclamycin B)、樺木酸、BFGF抑制劑、比卡魯胺(bicalutamide)、比生群(bisantrene)、比生群鹽酸鹽、雙氮雜環丙烷基鯨胺(bisaziridinylspermine)、雙奈法德(bisnafide)、雙奈法德二甲磺酸鹽、比挫停A (bistratene A)、比哲來新、博來黴素(bleomycin)、博來黴素硫酸鹽、BRC/ABL拮抗劑、貝伏勒(breflate)、布喹那鈉(brequinar sodium)、溴匹立明(bropirimine)、布度鈦(budotitane)、補舒方(busulfan)、丁硫胺酸磺醯亞胺(buthionine sulfoximine)、卡巴他賽、放線菌素(cactinomycin)、卡泊三醇(calcipotriol)、卡弗汀C (calphostin C)、卡魯固酮(calusterone)、喜樹鹼、喜樹鹼衍生物、金絲雀痘IL-2、卡培他濱(capecitabine)、卡乙醯脲(caracemide)、卡貝替姆(carbetimer)、卡鉑、羧醯胺-胺基-***、羥基醯胺基***、卡瑞M3 (carest M3)、卡莫司汀(carmustine)、earn 700、軟骨衍生之抑制劑、卡柔比星(carubicin)鹽酸鹽、卡哲折來新(carzelesin)、酪蛋白激酶抑制劑、卡斯塔紐鯨胺(castano spermine)、色羅平B (cecropin B)、西地芬哥(cedefingol)、西曲瑞克(cetrorelix)、氯芥苯丁酸、克洛林(chlorin)、氯喹㗁啉磺醯胺(chloroquinoxaline sulfonamide)、西卡前列素(cicaprost)、西羅里黴素(cirolemycin)、順鉑、順紫質、克拉屈濱(cladribine)、可洛米芬(clomifene)類似物、克氯黴唑(clotrimazole)、科里黴素A (collismycin A)、科里黴素B、康瑞特司達汀A4 (combretastatin A4)、康瑞特司達汀類似物、科納吉尼(conagenin)、克蘭比西汀816 (crambescidin 816)、克里納托(crisnatol)、克里納托甲磺酸鹽、念珠藻素8、念珠藻素A衍生物、居拉辛A (curacin A)、環戊蒽醌(cyclopentanthraquinone)、環磷醯胺、環普拉壇(cycloplatam)、賽普黴素(cypemycin)、阿糖胞苷(cytarabine)、阿糖胞苷十八烷基磷酸鈉(cytarabine ocfosfate)、細胞溶解因子、喜多司他汀(cytostatin)、達卡巴仁(dacarbazine)、達昔單抗(dacliximab)、更生黴素、道諾黴素鹽酸鹽、德西他濱(decitabine)、脫氫戴得寧B (dehydrodidemnin B)、德舍瑞林(deslorelin)、右旋異弗醯胺(dexifosfamide)、右旋奧馬鉑(dexormaplatin)、右旋雷佐生(dexrazoxane)、右旋維拉帕米(dexverapamil)、地扎胍寧(dezaguanine)、地扎胍寧甲磺酸鹽、地吖醌(diaziquone)、代得寧B (didemnin B)、迪朵克斯(didox)、二乙基去甲鯨胺(diethylnorspermine)、二氫-5-阿扎胞苷(dihydro-5-azacytidine)、二㗁黴素(dioxamycin)、二苯基螺莫司汀(diphenyl spiromustine)、歐洲紫杉醇、二十二烷醇、多拉司瓊(dolasetron)、5'-去氧-5-氟尿苷(doxifluridine)、多柔比星、多柔比星鹽酸鹽、屈羅西芬(droloxifene)、屈羅西芬檸檬酸鹽、屈莫斯坦龍(dromostanolone)丙酸鹽、屈***酚(dronabinol)、達佐黴素(duazomycin)、杜卡黴素SA、依布硒(ebselen)、依考莫司汀(ecomustine)、依達曲沙(edatrexate)、依地福新(edelfosine)、依決洛單抗(edrecolomab)、依氟鳥胺酸(eflornithine)、依氟鳥胺酸鹽酸鹽、欖烯(elemene)、依沙蘆星(elsamitrucin)、乙嘧替氟(emitefur)、恩洛鉑(enloplatin)、恩普氨酯(enpromate)、依匹哌啶(epipropidine)、泛艾黴素(epirubicin)、泛艾黴素鹽酸鹽、愛普列特(epristeride)、厄布洛唑(erbulozole)、紅血球基因療法向量系統、依索比星(esorubicin)鹽酸鹽、雌莫司汀(estramustine)、雌莫司汀類似物、雌莫司汀磷酸鈉、***促效劑、***拮抗劑、依他硝唑(etanidazole)、依托泊苷、依托泊苷磷酸鹽、艾托卜寧(etoprine)、依西美坦(exemestane)、法屈唑(fadrozole)、法屈唑鹽酸鹽、法扎拉濱(fazarabine)、芬瑞替尼(fenretinide)、非格司亭(filgrastim)、非那斯特萊(finasteride)、夫拉平度(flavopiridol)、弗卓斯汀(flezelastine)、氟尿苷(floxuridine)、弗拉固酮(fluasterone)、福達拉濱(fludarabine)、福達拉濱磷酸鹽、氟道諾黴素(fluorodaunorunicin)鹽酸鹽、氟尿嘧啶(fluorouracil)、氟西他濱(flurocitabine)、福酚美克(forfenimex)、福美司坦(formestane)、磷喹酮(fosquidone)、福司曲星(fostriecin)、福司曲星鈉、福莫司汀(fotemustine)、莫特沙芬釓(gadolinium 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7)、洛鉑(lobaplatin)、龍布利新(lombricine)、洛美曲索(lometrexol)、洛美曲索鈉、洛莫司汀(lomustine)、氯尼達明(lonidamine)、洛索恩沖(losoxantrone)、洛索恩沖鹽酸鹽、洛伐他汀(lovastatin)、洛索立濱(loxoribine)、勒托替康(lurtotecan)、鎦特沙卟啉(lutetium texaphyrin)、萊索飛靈(lysofylline)、細胞溶解肽、美坦新(maitansine)、門諾他汀A (mannostatin A)、馬立馬司他(marimastat)、馬索羅酚(masoprocol)、馬司平(maspin)、馬曲來新(matrilysin)抑制劑、基質金屬蛋白酶抑制劑、美登新、類美登新、莫坦辛(mertansine)(DM1)、甲基二(氯乙基)胺鹽酸鹽、美雌酚(megestrol)乙酸鹽、美侖雌酚(melengestrol)乙酸鹽、黴法蘭(melphalan)、美諾加立(menogaril)、美布龍(merbarone)、巰基嘌呤、美特萊林(meterelin)、甲硫胺酸酶(methioninase)、胺甲喋呤、胺甲喋呤鈉、美托拉麥(metoclopramide)、美托普林(metoprine)、美妥替哌(meturedepa)、微藻蛋白激酶C抑制劑、MIF抑制劑、美服培酮(mifepristone)、米替福新(miltefosine)、米立司亭(mirimostim)、錯配雙股RNA、米丁度胺(mitindomide)、米托卡星(mitocarcin)、米托洛明(mitocromin)、米托潔林(mitogillin)、米托胍腙(mitoguazone)、米托雷托(mitolactol)、米托馬星(mitomalcin)、絲裂黴素、絲裂黴素類似物、米托萘胺(mitonafide)、米托司培(mitosper)、米托坦(mitotane)、米托毒素(mitotoxin)纖維母細胞生長因子-皂草素(saporin)、米托恩沖(mitoxantrone)、米托恩沖鹽酸鹽、莫法羅汀(mofarotene)、莫拉司亭(molgramostim)、單株抗體、人類絨膜促性腺素、單磷醯脂質a (monophosphoryl lipid a)/分枝桿菌(myobacterium)細胞壁SK、莫哌達醇(mopidamol)、多重抗藥性基因抑制劑、基於多重腫瘤抑制劑1之療法、芥子抗癌劑、美卡過氧化物B (mycaperoxide B)、分枝桿菌細胞壁萃取物、黴酚酸、米瑞普龍(myriaporone)、N-乙醯基地那林(n-acetyldinaline)、那法瑞林(nafarelin)、納瑞斯提(nagrestip)、納洛酮(naloxone)/噴他佐辛(pentazocine)、納帕文(napavin)、納帖平(naphterpin)、那托司亭(nartograstim)、奈達鉑(nedaplatin)、紐莫柔比星、紐立膦酸(neridronic acid)、中性內肽酶、尼魯米特(nilutamide)、尼沙黴素(nisamycin)、一氧化氮調節劑、氮氧化物抗氧化劑、奈曲林(nitrullyn)、諾考達唑(nocodazole)、諾加黴素(nogalamycin)、n-取代之苯甲醯胺、06-苯甲基鳥嘌呤、體抑素胜肽(octreotide)、歐基西農(okicenone)、寡核苷酸、奧那司酮(onapristone)、歐丹西挫(ondansetron)、歐拉星(oracin)、口服細胞激素誘導物、奧馬鉑、奧沙特隆(osaterone)、奧沙利鉑、奧沙諾黴素(oxaunomycin)、奧昔舒侖(oxisuran)、太平洋紫杉醇、太平洋紫杉醇類似物、太平洋紫杉醇衍生物、帕勞胺(palauamine)、棕櫚醯基利索新(palmitoylrhizoxin)、帕米膦酸(pamidronic acid)、人參炔三醇(panaxytriol)、帕諾米芬(panomifene)、帕拉巴汀(parabactin)、帕折普汀(pazelliptine)、培加帕酶(pegaspargase)、皮地新(peldesine)、培利黴素(peliomycin)、戊莫司汀(pentamustine)、多戊糖多硫酸鈉(pentosan polysulfate sodium)、噴托他汀(pentostatin)、噴曲唑(pentrozole)、培洛黴素(peplomycin)硫酸鹽、全氟溴烷(perflubron)、培弗醯胺(perfosfamide)、紫蘇醇(perillyl alcohol)、芬納齊諾黴素(phenazinomycin)、乙酸苯酯、磷酸酶抑制劑、必醫你舒(picibanil)、毛果芸香鹼鹽酸鹽、哌泊溴烷(pipobroman)、哌泊舒凡(piposulfan)、吡柔比星(pirarubicin)、比曲克辛(piritrexim)、比羅恩沖(piroxantrone)鹽酸鹽、帕斯婷A (placetin A)、帕斯婷B、血漿蛋白原活化因子抑制劑、鉑(IV)錯合物、鉑化合物、鉑-三胺錯合物、普卡黴素(plicamycin)、普洛美坦(plomestane)、泡非美鈉(porfimer sodium)、波弗黴素(porfiromycin)、潑尼莫司汀(prednimustine)、丙卡巴肼(procarbazine)鹽酸鹽、丙基雙吖啶酮、***素J2、***癌抗雄激素、蛋白酶體抑制劑、基於蛋白質A之免疫調節劑、蛋白激酶C抑制劑、蛋白酪胺酸磷酸酶抑制劑、嘌呤核苷磷酸化酶抑制劑、嘌黴素、嘌黴素鹽酸鹽、紫色寧、吡唑呋喃菌素(pyrazofurin)、吡唑并吖啶(pyrazoloacridine)、吡哆醛化血紅素聚氧乙烯共軛體(pyridoxylated hemoglobin polyoxy ehylene conjugate)、RAF拮抗劑、雷替曲塞(raltitrexed)、雷莫司瓊(ramosetron)、RAS法尼基(farnesyl)蛋白轉移酶抑制劑、RAS抑制劑、RAS-GAP抑制劑、去甲基瑞替立汀(retelliptine demethylated)、依替膦酸錸RE 186 (rhenium RE 186 etidronate)、利索新(rhizoxin)、利波腺苷(riboprine)、核糖酵素、RII視黃醯胺(RII retinamide)、RNAi、羅谷亞胺(rogletimide)、羅希土鹼(rohitukine)、羅莫肽(romurtide)、羅喹美克(roquinimex)、羅比吉農Bl (rubiginone Bl)、如伯西(ruboxyl)、沙芬戈(safingol)、沙芬戈鹽酸鹽、山托平(saintopin)、沙克努(sarcnu)、肌植醇A (sarcophytol A)、沙格司亭(sargramostim)、SDI 1模擬物、司莫司汀(semustine)、老化衍生之抑制劑第1型、正義股寡核苷酸、siRNA、信號傳導抑制劑、信號傳導調節劑、辛曲秦(simtrazene)、單鏈抗原結合蛋白、西佐非蘭(sizofiran)、索布佐生(sobuzoxane)、硼卡鈉(sodium borocaptate)、苯乙酸鈉、索弗羅(solverol)、體介素結合蛋白、索納明(sonermin)、司帕弗酸鈉(sparfosate sodium)、司帕弗酸(sparfosic acid)、司帕黴素(sparsomycin)、史匹卡黴素D (spicamycin D)、螺鍺(spirogermanium)鹽酸鹽、螺莫司汀(spiromustine)、螺鉑(spiroplatin)、脾五肽(splenopentin)、海綿他汀第1型(spongistatin 1)、角鯊胺(squalamine)、幹細胞抑制劑、幹細胞***抑制劑、史提皮醯胺(stipiamide)、鏈黴黑素(streptonigrin)、鏈佐黴素(streptozocin)、溶基質素(stromelysin)抑制劑、斯非諾新(sulfinosine)、斯洛非納(sulofenur)、超活性激脈腸肽拮抗劑、蘇拉第達(suradista)、蘇拉明(suramin)、苦馬豆素(swainsonine)、合成醣胺聚醣、他利黴素(talisomycin)、他莫司汀(tallimustine)、泰莫西芬甲基碘化物(tamoxifen methiodide)、牛磺莫司汀(tauromustine)、他扎羅汀(tazarotene)、特寇加藍鈉(tecogalan sodium)、替加弗(tegafur)、碲吡鹽(tellurapyrylium)、端粒酶(telomerase)抑制劑、替洛恩沖(teloxantrone)鹽酸鹽、替莫泊芬(temoporfin)、替莫唑胺(temozolomide)、替尼泊苷、特拉昔龍(teroxirone)、睪內酯(testolactone)、四氯十氧化物(tetrachlorodecaoxide)、替唑明(tetrazomine)、噻立拉斯汀(thaliblastine)、沙力度胺(thalidomide)、硫咪嘌呤(thiamiprine)、噻考瑞林(thiocoraline)、硫鳥嘌呤(thioguanine)、噻替哌(thiotepa)、促血小板生成素(thrombopoietin)、促血小板生成素模擬物、胸腺法新(thymalfasin)、胸腺生成素(thymopoietin)受體促效劑、胸腺曲南(thymotrinan)、促甲狀腺素、噻唑呋林(tiazofurin)、乙基初卟啉錫(tin ethyl etiopurpurin)、替拉札明(tirapazamine)、二氯環戊二烯鈦(titanocene dichloride)、拓普康鹽酸鹽、托升汀(topsentin)、托瑞米芬(toremifene)、托瑞米芬檸檬酸鹽、全能幹細胞因子、轉譯抑制劑、曲托龍(trestolone)乙酸鹽、視網酸、三乙醯基尿苷(triacetyluridine)、曲西立濱(triciribine)、曲西立濱磷酸鹽、三甲曲沙(trimetrexate)、三甲曲沙葡萄糖醛酸鹽、曲托瑞林(triptorelin)、托匹司瓊(tropisetron)、妥布氯唑(tubulozole)鹽酸鹽、妥羅雄脲(turosteride)、酪胺酸激酶抑制劑、酪胺酸磷酸化抑制劑(tyrphostin)、UBC抑制劑、烏苯美司(ubenimex)、尿嘧啶氮芥(uracil mustard)、烏瑞替派(uredepa)、泌尿生殖竇衍生之生長抑制因子、尿激酶受體拮抗劑、伐普肽(vapreotide)、法端歐林B (variolin B)、法雷鎖(velaresol)、凡拉明(veramine)、凡啶(verdins)、維替泊芬(verteporfin)、長春鹼硫酸鹽、長春新鹼硫酸鹽、長春地辛、長春地辛硫酸鹽、長春匹定(vinepidine)硫酸鹽、長春甘酯(vinglycinate)硫酸鹽、長春羅辛(vinleurosine)硫酸鹽、溫諾平、溫諾平酒石酸鹽、長春羅定(vinrosidine)硫酸鹽、文沙汀(vinxaltine)、硫酸長春利定(vinzolidine)硫酸鹽、文塔新(vitaxin)、伏羅唑(vorozole)、扎諾特隆(zanoterone)、增尼鉑(zeniplatin)、鎖拉寇(zilascorb)、淨諾他汀(zinostatin)、淨諾他汀司替馬拉莫(zinostatin stimalamer)或佐柔比星(zorubicin)鹽酸鹽。
活性劑可為含有一或多個金屬中心之無機或有機金屬化合物。在一些實例中，化合物含有一個金屬中心。活性劑可為例如鉑化合物、釕化合物(例如反式-[RuCl 2(DMSO) 4]或反式-[RuCl 4(咪唑) 2等)、鈷化合物、銅化合物或鐵化合物。
在一些實施態樣中，活性劑為小分子。在一些實施態樣中，活性劑為小分子細胞毒素。在一個實施態樣中，活性劑為卡巴他賽或其類似物、衍生物、前藥或醫藥上可接受之鹽。在另一實施態樣中，活性劑為莫坦辛(DM1)或DM4或彼等之類似物、衍生物、前藥或醫藥上可接受之鹽。DM1或DM4係藉由結合至微管蛋白而抑制微管之組合。DM1之結構顯示如下：
Figure 02_image001
。
在一些實施態樣中，活性劑Z為單甲基奧瑞他汀E (MMAE)或其類似物、衍生物、前藥或醫藥上可接受之鹽。MMAE之結構顯示如下：
Figure 02_image003
。
在一些實施態樣中，活性劑 Z為序列選擇性DNA小溝結合交聯劑。例如，Z可為吡咯并苯并二氮呯(PBD)、PBD二聚物或彼等之類似物、衍生物、前藥或醫藥上可接受之鹽。PBD和PBD二聚物之結構顯示如下：
Figure 02_image005
，
Figure 02_image007
。
在一些實施態樣中，活性劑 Z為拓樸異構酶I抑制劑，諸如喜樹鹼、艾來諾康、SN-38或彼等之類似物、衍生物、前藥或醫藥上可接受之鹽。
Figure 02_image009
在WO2013158644、WO2015038649、WO2015066053、WO2015116774、WO2015134464、WO2015143004、WO2015184246 (將每一該等內容以彼之全文併入本文以供參考)中所揭示之任何細胞毒性部分可用作為本揭示之共軛體中的活性劑，諸如苯達莫斯汀(bendamustine)、VDA、多柔比星、培美曲塞(pemetrexed)、佛瑞諾泰、來那度麥德(lenalidomide)、歐洲紫杉醇、17-AAG、5-FU、阿比特龍、克唑替尼(crizotinib)、KW-2189、BUMB2、DC1、CC-1065、阿朵來新或彼等之衍生物/類似物。
在一些實施態樣中，活性劑為拓樸異構酶抑制劑。在一些實施態樣中，拓樸異構酶抑制劑為拓樸異構酶I抑制劑，包括但不限於艾來諾康、拓普康、喜樹鹼、第弗羅替康和拉梅拉素D及彼等之片段/衍生物/類似物。在一些實施態樣中，拓樸異構酶抑制劑為拓樸異構酶II抑制劑，諸如依托泊苷(VP-16)、替尼泊苷、多柔比星、道諾黴素、米托恩沖、安沙吖啶、橢圓玫瑰樹鹼(ellipticine)、金精三羧酸(aurintricarboxylic acid)和HU-331及彼等之片段/衍生物/類似物。 PI3K抑制劑
PI3K/AKT/mTOR傳訊網絡(PI3K路徑)控制癌的大部分標誌：細胞週期、存活、代謝、移動及基因組穩定性。PI3K路徑為人類癌中最常改變的路徑。PI3K活化係通過PIK3CA突變或擴增及功能性腫瘤抑制因子PTEN的喪失而與癌症直接連結。PIK3CA基因為第二最常突變的致癌基因。PTEN為最常突變的腫瘤抑制基因之一。路徑抑制劑在異種移植模式中展示出抗腫瘤功效，但毒性限制患者的臨床利益。PI3K抑制劑與靶向HSP90之部分共軛提供以降低的毒性於腫瘤中遞送具有充足的PI3K抑制之PI3K抑制劑之方法。
包含PI3K抑制劑之共軛體可用於治療血液系統惡性腫瘤及實體腫瘤。在一些實施態樣中，包含PI3K抑制劑之共軛體係用於治療結腸直腸癌、多發性骨髓瘤、白血病、淋巴瘤、結腸癌、胃癌、腎癌、肺癌或乳癌，包括轉移性乳癌。在一些實施態樣中，包含PI3K抑制劑之共軛體係用於治療經PIK3CA改變之癌或HER2陽性癌。
任何PI3K抑制劑可用作為活性劑。在一些實施態樣中，PI3K抑制劑可為小分子。非限制性實例包括PQR514、PQR530、PF-04979064、BAY 80-6946 (柯潘利希布)、歐米帕利希布(GSK2126458、GSK458)、PF-04691502、PI-103、BGT226 (NVP-BGT226)、阿匹托利希布(GDC-0980、RG7422)、杜維利希布(IPI-145、INK1197)、AZD8186、皮拉利希布(XL147)、PIK-93、艾德拉利希布(GS-1101)、MLN1117、VS-5584、SB2343、GDC-0941、BM120、NVP-BKM120、布帕利希布、AZD8835、XL765 (SAR245409)、GS-9820阿卡利希布、GSK2636771、AMG-319、IPI-549、哌立福新、阿哌利希布、TGR 1202 (RP5264)、PX-866、AMG-319、GDC-0980、GDC-0941、Sanofi XL147、XL499、XL756、XL147、PF-46915032、BKM 120、CAL 263、SF1126、PX-886、KA2237、雙重PI3K抑制劑(例如Novartis BEZ235)、異喹啉酮或彼等之片段/衍生物/類似物。
在一些實施態樣中，PI3K抑制劑可為PI3K的δ及γ同型異構體之抑制劑。在一些實施態樣中，PI3K抑制劑為PI3K的α同型異構體之抑制劑。在其他的實施態樣中，PI3K抑制劑為PI3K的一或多種α、β、δ及γ同型異構體之抑制劑。PI3K抑制劑的非限制性實例包括在US 9,546,180 (Infinity Pharmaceuticals)、WO 2009088990 (Intellikine Inc.)、WO 2011008302 (Intellikine Inc.)、WO 2010036380 (Intellikine Inc.)、WO 2010/006086 (Intellikine Inc.)、WO 2005113556 (Icos Corp.)、US 2011/0046165 (Intellikine Inc.)或US 20130315865 (Pfizer)中所揭示之化合物，將每一該等內容以彼之全文併入本文以供參考。
在一些實施態樣中，本揭示之共軛體包含PQR514或其片段/衍生物/類似物、PF-04979064或其片段/衍生物/類似物、歐米帕利希布(GSK458)或其片段/衍生物/類似物、BAY 80-6946 (柯潘利希布)或其片段/衍生物/類似物、PQR530或其片段/衍生物/類似物、PF-04691502或其片段/衍生物/類似物、PI-103或其片段/衍生物/類似物、BGT226 (NVP-BGT226)或其片段/衍生物/類似物、阿匹托利希布(GDC-0980、RG7422)或其片段/衍生物/類似物、杜維利希布(IPI-145、INK1197)或其片段/衍生物/類似物、AZD8186或其片段/衍生物/類似物、皮拉利希布(XL147)或其片段/衍生物/類似物和PIK-93或其片段/衍生物/類似物。
Figure 02_image011
Figure 02_image013
Figure 02_image015
Figure 02_image017
本揭示之共軛體特別地可包含連接至PQR514或其片段/衍生物/類似物、PF-04979064或其片段/衍生物/類似物、BAY 80-6946 (柯潘利希布)或其片段/衍生物/類似物的靶向HSP90之部分。
在一些實施態樣中，本揭示之共軛體包含PQR514或其片段/衍生物/類似物，諸如
Figure 02_image019
Figure 02_image021
在一些實施態樣中，本揭示之共軛體包含PI3K/mTOR雙重抑制劑。在一些實施態樣中，本揭示之共軛體包含PF-04979064或其片段/衍生物/類似物，諸如
Figure 02_image023
Figure 02_image025
在一些實施態樣中，本揭示之共軛體包含柯潘利希布或其片段/衍生物/類似物，諸如
Figure 02_image027
Figure 02_image029
Figure 02_image031
在一些實施態樣中，本揭示之共軛體包含苯并氧氮雜環庚烷(benzoxazepine)基團，諸如GDC-0077
Figure 02_image033
(伊納利希布(Inavolisib))、GDC-0326
Figure 02_image035
或彼等之片段/衍生物/類似物，諸如：
Figure 02_image037
。 B. 靶向HSP90之部分
如本文所述之靶向配體(亦稱為靶向部分)包括可結合一或多種HSP90蛋白之任何分子。此等靶向配體可為肽、抗體模擬物、核酸(例如適配體)、多肽(例如抗體)、醣蛋白、小分子、碳水化合物或脂質。
靶向部分X可為任何結合HSP90之部分，諸如但不限於天然化合物(例如格爾德黴素(geldanamycin)和根赤殼菌素(radicicol))及合成化合物，諸如格爾德黴素類似物17-AAG (亦即17-烯丙基胺基格爾德黴素)、嘌呤支架HSP90抑制劑系列，包括PU24FC1 (He H.等人之 J. Med. Chem., vol.49:381 (2006)，將其內容以彼之全文併入本文以供參考)、BIIB021 (Lundgren K.等人之 Mol. Cancer Ther., vol.8(4):921 (2009)，將其內容以彼之全文併入本文以供參考)、4,5-二芳基吡唑(Cheung K.M.等人之 Bioorg. Med. Chem. Lett., vol.15:3338 (2005)，將其內容以彼之全文併入本文以供參考)、3-芳基,4-甲醯胺吡唑(Brough P.A.等人之Bioorg. Med. Chem. Lett., vol.15: 5197 (2005)，將其內容以彼之全文併入本文以供參考)、4,5-二芳基異㗁唑(Brough P.A.等人之 J. Med. Chem., vol.51:196 (2008)，將其內容以彼之全文併入本文以供參考)、3,4-二芳基吡唑間苯二酚衍生物(Dymock B.W.等人之 J. Med. Chem., vol.48:4212 (2005)，將其內容以彼之全文併入本文以供參考)、噻吩并[2,3-d]嘧啶(VERNALIS等人之WO2005034950，將其內容以彼之全文併入本文以供參考)、Giannini等人之EP2655345中的式I之芳基***衍生物(將其內容以彼之全文併入本文以供參考)或結合HSP90之配體或彼等之衍生物/類似物的任何其他實例。
在一些實施態樣中，靶向部分可為肽，諸如雙環肽或經修飾之雙環肽。在一些實施態樣中，靶向部分為如EP2474613 (將其內容以彼之全文併入本文以供參考)中所揭示之具有(X)lC(X)mC(X)nC(X)o之序列的肽，其中C為半胱胺酸，X代表隨機胺基酸，m和n為介於1與20之間的數字，其定義***多肽片段之長度，且l和o為介於0與20之間的數字，其定義側接多肽片段之長度。在一些實施態樣中，靶向部分包含至少2個共價連結至二或更多個胺基酸殘基上的參-(溴甲基)苯(TBMB)之多肽，如US8680022和US8778844中所揭示，將每一該等內容以彼之全文併入本文以供參考。
在一些實施態樣中，結合HSP90之部分可為含有三個雜原子的雜環衍生物。MATULIS等人之WO2009134110 (將其內容以彼之全文併入本文以供參考)揭示4,5-二芳基噻二唑，其展示良好的HSP90結合親和性。儘管彼等具有相當適度的細胞生長抑制作用，但是彼等可用作為本揭示之共軛體中結合HSP90之部分。另一類別的氮雜-雜環加成物(亦即***衍生物或彼之類似物)可用作為本揭示之共軛體中結合HSP90之部分。例如，1,2,4-***支架經大量記載為具有HSP90抑制性質。BURLISON等人之WO2009139916 (Synta Pharmaceuticals Corp.)(將其內容以彼之全文併入本文以供參考)揭示以高微莫耳濃度抑制HSP90之三環1,2,4-***衍生物。在WO2009139916中所揭示之任何三環1,2,4-***衍生物或彼等之衍生物/類似物可用作為本揭示之共軛體中結合HSP90之部分。在WO 2010017479和WO 2010017545 (Synta Pharmaceuticals Corp.)(將該等內容以彼之全文併入本文以供參考)中所揭示的任何經三取代之1,2,4-***衍生物或彼等之衍生物/類似物可用作為本揭示之共軛體中結合HSP90之部分。在另一實例中，在WO2006055760 (Synta Pharmaceuticals Corp.)(將其內容以彼之全文併入本文以供參考)中所揭示之稱為加尼特斯皮(Ganetespib)的含***酮(triazolone)之HSP90抑制劑(先前被稱為STA-9090或其高可溶性磷酸鹽前藥STA-1474)或其衍生物/類似物可用作為本揭示之共軛體中結合HSP90之部分。
Figure 02_image039
在一些實施態樣中，加尼特斯皮或其衍生物/類似物可用作為靶向部分。加尼特斯皮衍生物/類似物的非限制性實例顯示如下。
Figure 02_image041
Figure 02_image043
Figure 02_image045
Figure 02_image047
在一些實施態樣中，歐那利斯皮(Onalespib) (AT13387)或其衍生物/類似物可用作為本揭示之共軛體中的靶向部分。歐那利斯皮及歐那利斯皮衍生物/類似物的非限制性實例顯示如下。
Figure 02_image049
Figure 02_image051
在一些實施態樣中，靶向HSP90之部分包含
Figure 02_image053
bdbm50401335 (TM10)或其片段/衍生物/類似物。
在WO2013158644、WO2015038649、WO2015066053、WO2015116774、WO2015134464、WO2015143004、WO2015184246 (將該等內容以彼之全文併入本文以供參考)中所揭示之任何HSP90配體或HSP90抑制劑或彼等之衍生物/類似物可用作為本揭示之共軛體中結合HSP90之部分，諸如： 式I
Figure 02_image055
，其中R1可為烷基、芳基、鹵化物、甲醯胺或磺醯胺；R2可為烷基、環烷基、芳基或雜芳基，其中當R2為6員芳基或雜芳基時，則R2係在相對於***環上的連接點之3和4位置上通過其附著之連接子L取代；且R3可為SH、OH、-CONHR4、芳基或雜芳基，其中當R3為6員芳基或雜芳基時，則R3係在3或4位置上經取代； 式II
Figure 02_image057
，其中R1可為烷基、芳基、鹵基、甲醯胺基、磺醯胺基；且R2可為視需要地經取代之烷基、環烷基、芳基或雜芳基。此等化合物的實例包括5-(2,4-二羥基-5-異丙基苯基)-N-(2-嗎啉基乙基)-4-(4-(嗎啉基甲基)苯基)-4H-1,2,4-***-3-甲醯胺和5-(2,4-二羥基-5-異丙基苯基)-4-(4-(4-甲基哌𠯤-1-基)苯基)-N-(2,2,2-三氟乙基)-4H-1,2,4-***-3-甲醯胺； 式III
Figure 02_image059
，其中X、Y和Z可獨立為CH、N、O或S(具有適當的取代且滿足對應之原子的價位及環的芳族性)；R1可為烷基、芳基、鹵化物、甲醯胺基或磺醯胺基；R2可為經取代之烷基、環烷基、芳基或雜芳基，其中連接子L可直接連接或連接至該等環上的延伸取代；R3可為可以效應子部分連接之SH、OH、NR4R5和-CONHR6；R4和R5可獨立為H、烷基、芳基或雜芳基；且R6可為具有最少一個可以效應子部分連接之官能基的烷基、芳基或雜芳基；或 式IV
Figure 02_image061
，其中R1可為烷基、芳基、鹵基、甲醯胺基或磺醯胺基；R2和R3獨立為視需要地經羥基、鹵素、C1-C2烷氧基、胺基、單-和二-C1-C2烷基胺基中之一或多者取代之C1-C5烴基；5-至12-員芳基或雜芳基；或取R2及R3與彼等連接之氮原子一起形成4-至8-員單環狀雜環基，其中最多5個環員係選自O、N和S。此等化合物的實例包括AT-13387。
靶向HSP90之部分可為加尼特斯皮、露米奈斯皮(Luminespib)(AUY-922、NVP-AUY922)、Debio-0932、MPC-3100、歐那利斯皮(AT-13387)、SNX-2112、17-胺基-格爾德黴素氫醌、PU-H71、AT13387或彼等之衍生物/類似物。
Figure 02_image063
Figure 02_image065
Figure 02_image067
靶向HSP90之部分可為SNX5422 (PF-04929113)或在US 8080556(Pfizer)、WO2008096218 (Pfizer)、WO2006117669(Pfizer)、WO2008059368(Pfizer)、WO2008053319(Pfizer)、WO2006117669(Pfizer)、EP1885701(Novartis)、EP1776110(Novartis)、EP2572709 (Novartis)、WO2012131413(Debiopharm)或WO2012131468 (Debiopharm)中所揭示之任何其他的HSP90抑制劑，將每一該等內容以彼之全文併入本文以供參考。
Figure 02_image069
靶向HSP90之部分亦可為PU-H71 (經 124I放射標記而用於PET成像之HSP90抑制劑)或其衍生物/類似物。
包含SNX-2112、17-胺基-格爾德黴素氫醌、PU-H71或AT13387之共軛體可具有結構：
Figure 02_image071
Figure 02_image073
。
在一些實施態樣中，靶向HSP90之部分包含山沙維麥德(Sansalvamide) A衍生物。山沙維麥德A (San A)為自海羊真菌單離且結合至HSP90之環五肽。在Alexander等人之 J Med Chem., vol.52(24):7927 (2009)(將其內容以彼之全文併入本文以供參考)中所揭示之任何二-山沙維麥德A衍生物(經二聚合之San A分子)(例如在Alexander之圖1中的二-San A分子)可用作為本揭示之共軛體的靶向部分。
在一些實施態樣中，靶向HSP90之部分包含在US7544672中(CONFORMA THERAPEUTICS)(將其內容以彼之全文併入本文以供參考)所揭示之炔基吡咯并[2,3-d]嘧啶及相關之類似物，諸如HSP90抑制劑。在一些實施態樣中，靶向HSP90之部分包含在WO2010117425 Biogen) (將其內容以彼之全文併入本文以供參考)中揭示之任何HSP90抑制劑。 細胞外HSP90 (eHSP90)
在正常的細胞中，當細胞在逆境下(諸如熱、藥物、細胞激素、UV及/或γ射線)，發生HSP90之分泌。細胞外HSP90 (eHSP90)的主要功能係藉由促進在受損組織的邊緣之細胞遷移至受損區域而幫助組織修復。然而，在腫瘤中，持續活化的致癌基因甚至沒有任何逆境亦觸發HSP90分泌。以腫瘤eHSP90α分泌之Hsp90在入侵和轉移期間促進腫瘤及腫瘤基質細胞遷移。HSP90α之細胞外促進功能係取決於HSP90表面上的115-胺基酸片段(F-5)而定(Li等人之 Int Rev Cell Mol Biol., vol.303:203-235 (2013)，將其內容以彼之全文併入本文以供參考)。已顯示eHSP90存在於腫瘤細胞的表面上且亦能夠被內化(Crowe等人之 ACS Chem. Biol., vol.12:1047-1055 (2017))。在腫瘤細胞中eHSP90之表面表現因此代表選擇性地引導至腫瘤的治療多於健康的細胞之標靶。因此，eHSP90 (特別為eHSP90α)可為治療腫瘤的良好標靶。
eHSP90之表現可使用本技術中已知的方法測量，諸如ELISA、RIA、EIA、夾心式檢定法、西方墨點分析、免疫染色、流動式細胞測量術和免疫組織學染色。
在一些實施態樣中，靶向部分選擇性地結合至eHSP90。在一些實施態樣中，靶向部分結合至eHSP90之F-5區域。
在一些實施態樣中，靶向部分具有低的細胞滲透性且偏好結合至細胞表面eHSP90。在一些實施態樣中，靶向部分為細胞不可滲透的且僅結合至eHSP90。在一些實施態樣中，包含靶向部分之共軛體具有低的細胞滲透性或為細胞不可滲透的。
如Haystead等人之WO2017184956 (Duke University)所揭示，HS-131 (100)為螢光特異性小分子Hsp90抑制劑。其為細胞不可滲透的且僅結合至eHsp90。為了分析eHsp90在轉形細胞中內化作用，將五種同基因細胞系(67NR、168FARN、4T07和4T1)自單一自發性***腫瘤單離。當注射至小鼠中時，該等細胞展現不同程度的轉移性疾病。100在4T1細胞(五種細胞系中最具攻擊性)中具有比轉移較少的細胞系更高的內化程度。
100個經處理之細胞的高解析共焦影像顯露在細胞表面上及細胞本身內部二者顯著的斑點形成，以及在整個細胞內漫射的螢光。細胞內的斑點累積為時間依賴性。以100 處理之細胞經晶格層光顯微鏡之實時成像顯示斑點在整個細胞內移動，與主動運輸一致。使用單獨的Hsp90抗體未顯露出斑點。
在細胞中的研究示意侵襲性腫瘤細胞系幾乎僅僅表現eHsp90。以100在腫瘤細胞(諸如神經膠母細胞瘤、非小肺、***和黑色素瘤細胞系)中的進一步研究示意eHsp90之表現常見於具有侵襲性惡性細胞表型之細胞。
在一些實施態樣中，靶向部分包含HS-23、HS-131 (揭示於Crowe等人之 ACS Chem. Biol., vol.12:1047-1055 (2017)中，將其內容以彼之全文併入本文以供參考)或DMAG-N-氧化物(對Tsutsumi之 Oncogene, vol.27(17): 2478-2487 (2008)中所揭示之17-AAG為細胞不可滲透的，將其內容以彼之全文併入本文以供參考)或彼等之類似物/衍生物，具有顯示於下的結構。
Figure 02_image075
Figure 02_image077
Figure 02_image079
在一些實施態樣中，靶向部分包含BIIB021 (二氫吡咯并嘧啶)或在WO2010117425中所揭示之任何化合物及彼等之片段/類似物/衍生物，諸如WO2010117425之式I或式II化合物或表2中的化合物，且具有顯示於下的結構：
Figure 02_image081
。
在一些實施態樣中，靶向部分包含結合至人類細胞外Hsp90之抗體或抗體片段。例如，靶向部分可為US7959915 (Tufts University)(將其內容以彼之全文併入本文以供參考)中所揭示之單株抗體，諸如mAb1.5.1。在另一實例中，靶向部分可為US20110280881 (Riken Corp.)(將其內容以彼之全文併入本文以供參考)中所揭示之抗HSP90單株抗體，其中抗體結合至包含選自胺基酸序列VX1X2EX3PPLEGDX4 (其中彼此可相同或不同的X1至X4之各者代表任意的胺基酸)(在US20110280881中的SEQ ID NO：1)或胺基酸序列HX5IX6ETLRQKAE (其中彼此可相同或不同的X5至X6之各者代表任意的胺基酸)(在US20110280881中的SEQ ID NO：2)之胺基酸序列的抗原決定區，且其中抗體辨識出細胞表面HSP90。
在特定的實施態樣中，共軛體之靶向部分或部分類係以約0.1 %至約10%、或約1%至約10%、或約10%至約20%、或約20%至約30%、或約30%至約40%、或約40%至約50%、或約50%至約60%、或約60%至約70%、或約70%至約80%、或約80%至約90%、或約90%至約99%之預定的莫耳重量百分比存在，使得共軛體之組分的莫耳重量百分比總和為100%。共軛體之靶向部分的量亦可以相對於活性劑之比例方式表示，例如約10：1、9：1、8：1、7：1、6：1、5：1、4：1、3：1、2：1、1：1、1：2、1：3、1：4、1：5、1：6、1：7、1：8、1：9或1：10之配體對活性劑之比。 C. 連接子
共軛體含有一或多個附著活性劑及靶向部分之連接子。連接子Y結合至一或多個活性劑及一或多個靶向配體以形成共軛體。連接子Y係藉由獨立地選自下列的官能基附著至靶向部分X及活性劑Z：酯鍵、二硫化物、醯胺、醯腙、醚、胺甲酸酯、碳酸酯和脲。另一選擇地，連接子可藉由諸如以硫醇與順丁烯二醯亞胺、疊氮化物及炔之間的共軛體所提供之不可切割的基團附著至靶向配體或活性藥物。連接子係獨立地選自由下列所組成之群組：烷基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基，其中烷基、烯基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基中之各者視需要地經一或多個基團取代，各基團係獨立地選自鹵素、氰基、硝基、羥基、羧基、胺甲醯基、醚、烷氧基、芳氧基、胺基、醯胺、胺甲酸酯、烷基、烯基、炔基、芳基、芳基烷基、環烷基、雜芳基、雜環基，其中羧基、胺甲醯基、醚、烷氧基、芳氧基、胺基、醯胺、胺甲酸酯、烷基、烯基、炔基、芳基、芳基烷基、環烷基、雜芳基或雜環基中之各者視需要地經一或多個基團取代，各基團係獨立地選自鹵素、氰基、硝基、羥基、羧基、胺甲醯基、醚、烷氧基、芳氧基、胺基、醯胺、胺甲酸酯、烷基、烯基、炔基、芳基、芳基烷基、環烷基、雜芳基、雜環基。
在一些實施態樣中，連接子包含可切割的官能基，其為可切割的。可切割的官能基可於活體內水解或可經設計以例如組織蛋白酶B經酶水解。如本文所使用之「可切割的」連接子係指可經物理或化學切割的任何連接子。物理切割的實例可為以光、放射活性物發射或熱切割，而化學切割的實例包括以還原-氧化反應、水解、pH依賴性切割或以酶切割。例如，可切割的官能基可為二硫化物鍵或胺甲酸酯鍵。
在一些實施態樣中，連接子之烷基鏈可視需要地經一或多個原子或選自–O-、-C(=O)-、-NR、-O-C(=O)-NR-、-S-、-S-S-之基團中斷。連接子可選自琥珀酸、戊二酸或二乙醇酸之二甲酸酯衍生物。在一些實施態樣中，連接子Y可為X’-R 1-Y’-R 2-Z’，且共軛體可為根據式Ia之化合物：
Figure 02_image083
其中X為上文定義之靶向部分；Z為活性劑；X’、R 1、Y’、R 2和Z’係如本文所定義。
X’是不存的在或獨立地選自羰基、醯胺、脲、胺基、酯、芳基、芳基羰基、芳氧基、芳基胺基、一或多種天然或非天然胺基酸、硫基或琥珀醯亞胺基；R 1和R 2是不存的或由烷基、經取代之烷基、芳基、經取代之芳基、聚乙二醇(2個30個單元)所組成；Y’是不存在的、經取代或未經取代之1,2-二胺基乙烷、聚乙二醇(2至30個單元)或醯胺；Z’是不存的在或獨立地選自羰基、醯胺、脲、胺基、酯、芳基、芳基羰基、芳氧基、芳基胺基、硫基或琥珀醯亞胺基。在一些實施態樣中，連接子可容許一個活性劑分子連接至二或更多個配體或一個配體連接至二或更多個活性劑分子。
在一些實施態樣中，連接子Y可為A m，且共軛體可為根據式Ib之化合物：
Figure 02_image085
其中A係如本文所定義，m=0至20。
在式Ia中的A為間隔單元、不存在的或獨立地選自下列的取代基。各取代基的虛線代表具有X、Z或另一獨立選擇的A單元之取代位點，其中X、Z或A可附著在取代基的任一側上：
Figure 02_image087
Figure 02_image089
，其中z = 0至40，R為H或視需要地經取代之烷基，且R’為天然或非天然胺基酸中發現的任何側鏈。
在一些實施態樣中，共軛體可為根據式Ic之化合物：
Figure 02_image091
其中A係如上文所定義，m=0至40，n=0至40，x=1至5，y=1至5，且C為本文定義之支鏈元素。
在式Ic中的C為含有3至6個用於共價附著間隔單元、配體或活性藥物之選自胺、羧酸、硫醇或琥珀醯亞胺的官能基之支鏈單元，包括胺基酸，諸如離胺酸、2,3-二胺基丙酸、2,4-二胺基丁酸、麩胺酸、天冬胺酸和半胱胺酸。 共軛體的非限制性實例 作為活性劑的PI3K抑制劑
在一些實施態樣中，活性劑Z為PI3K抑制劑及靶向HSP90之部分X係選自由下列所組成之群組：TM1、TM2、TM3、TM4、TM5、TM6、TM7、TM8、TM10、TM11、TM12及彼等之片段/衍生物/類似物，其中活性劑Z及靶向部分X係與連接子連接。在一些實施態樣中，連接子為可切割的。在一些實施態樣中，連接子為不可切割的。
在一些實施態樣中，本揭示之共軛體包含柯潘利希布或其片段/衍生物/類似物，諸如P7或其片段、P8或其片段、P9或其片段、P10或其片段、P11或其片段或P12或其片段。非限制性實例包括：
Figure 02_image093
Figure 02_image095
Figure 02_image097
Figure 02_image099
Figure 02_image101
包含連接至柯潘利希布或其片段/衍生物/類似物的靶向HSP90之部分的共軛體之額外實例包括：
Figure 02_image103
Figure 02_image105
Figure 02_image107
Figure 02_image109
Figure 02_image111
Figure 02_image113
Figure 02_image115
Figure 02_image117
Figure 02_image119
在一些實施態樣中，本發明之共軛體包含作為活性劑之柯潘利希布或其片段/衍生物/類似物，及作為靶向部分之BIIB021或其片段/衍生物/類似物。非限制性實例包括C53、C54、C62、C75、C76和C77。
在一些實施態樣中，本發明之共軛體包含作為活性劑之柯潘利希布或其片段/衍生物/類似物，及作為靶向部分之加尼特斯皮或其片段/衍生物/類似物 。非限制性實例包括C48、C49、C50、C51、C52、C56、C57、C58、C59、C60、C61、C63、C64、C65、C66、C67、C68、C69、C70、C71、C72、C73和C74。
在一些實施態樣中，本揭示之共軛體包含PF-04979064或其片段/衍生物/類似物，諸如P4或其片段、P5或其片段或P6或其片段。非限制性實例包括：
Figure 02_image121
Figure 02_image123
Figure 02_image125
Figure 02_image127
Figure 02_image129
Figure 02_image131
Figure 02_image133
Figure 02_image135
包含連接至PF-04979064或其片段/衍生物/類似物的靶向HSP90之部分的共軛體的額外實例包括：
Figure 02_image137
Figure 02_image139
Figure 02_image141
Figure 02_image143
在一些實施態樣中，本發明之共軛體包含作為活性劑的PF-04979064或其片段/衍生物/類似物，及作為靶向部分之BIIB021或其片段/衍生物/類似物。非限制性實例包括C81、C82和C83。
在一些實施態樣中，本發明之共軛體包含作為活性劑的PF-04979064或其片段/衍生物/類似物，及作為靶向部分之加尼特斯皮或其片段/衍生物/類似物。非限制性實例包括C78、C79、C80、C84、C85、C86和C87。
在一些實施態樣中，活性劑 Z包含PQR514或其片段/衍生物/類似物，諸如P1或其片段、P2或其片段或P3或其片段。非限制性實例包括：
Figure 02_image145
Figure 02_image147
Figure 02_image149
包含連接至PQR514或其片段/衍生物/類似物的靶向HSP90之部分的共軛體的額外實例包括：
Figure 02_image151
Figure 02_image153
Figure 02_image155
Figure 02_image157
Figure 02_image159
Figure 02_image161
Figure 02_image163
Figure 02_image165
在一些實施態樣中，本發明之共軛體包含作為活性劑的PQR514或其片段/衍生物/類似物，及作為靶向部分之BIIB021或其片段/衍生物/類似物。非限制性實例包括C88、C89、C90、C91、C92、C93、C94、C95、C96、C98、C99、C100、C101、C104、C106、C107、C108、C109、C110、C111、C112、C113、C114、C115、C116和C120。
在一些實施態樣中，本發明之共軛體包含作為活性劑的PQR514或其片段/衍生物/類似物，及作為靶向部分之加尼特斯皮或其片段/衍生物/類似物。非限制性實例包括C102和C103。
在一些實施態樣中，活性劑Z包含GDC-0326或其片段/衍生物/類似物。非限制性實例包括：
Figure 02_image167
Figure 02_image169
在一些實施態樣中，本發明之共軛體包含作為活性劑的GDC-0326或其片段/衍生物/類似物，及作為靶向部分之BIIB021或其片段/衍生物/類似物。非限制性實例包括C119。
在一些實施態樣中，本發明之共軛體包含作為活性劑的GDC-0326或其片段/衍生物/類似物，及作為靶向部分之加尼特斯皮或其片段/衍生物/類似物。非限制性實例包括C117和C118。 D. 藥物動力學調節單元
本揭示之共軛體可另包含至少一種連接至與蛋白質或工程化蛋白質或彼等之衍生物/類似物/模擬物上的官能基反應之反應基團的外部連接子，或包含至少一種連接至藥物動力學調節單元的外部連接子。連接共軛體及反應基團或藥物動力學調節單元的外部連接子可為容許共軛體釋放之可切割的連接子。於是，共軛體可在需要時自蛋白質或藥物動力學調節單元分離。
在WO2017/197241 (將其內容以彼之全文併入本文以供參考)中所揭示之任何反應基團或PMU (諸如包含聚合物之PMU)可附著至本揭示之共軛體。 E. 滲透性調節單元
本揭示之共軛體可另包含至少一種滲透性調節單元。在一些實施態樣中，滲透性調節單元係附著至共軛體之酬載，其中滲透性調節單元調控酬載之細胞膜滲透性。在一些實施態樣中，滲透性調節單元降低酬載之滲透性。不想受任何理論的束縛，一旦酬載自共軛體釋放，則附著至酬載之滲透性調節單元降低酬載之細胞膜滲透性、增加酬載在標靶細胞中的滯留時間、改進酬載之細胞內累積及改進其功效。
在一些實施態樣中，滲透性調節單元對共軛體之滲透性或靶向部分之結合能力沒有不利的衝擊。在一些實施態樣中，滲透性調節單元僅在酬載自共軛體釋放後具有活性，例如在切割酬載與靶向部分之間可切割的連接子後。
在一些實施態樣中，滲透性調節單元為經共價附著至共軛體之酬載的官能基。在一些實施態樣中，滲透性調節單元為酬載的主要部分。
在一些實施態樣中，滲透性調節單元係經由外部連接子附著至酬載。外部連接子可為不可切割的連接子。
通過生物細胞膜的酬載之被動滲透係強力取決於分子之物理化學特性。影響細胞膜滲透的重要因素包括分子之酸-鹼特徵(其在特定的pH下影響分子之電荷)、其親脂性(親脂性影響分子在水性與脂質環境之間的分配)及其溶解度。為了使酬載為可滲透的，在疏水性與親水性之間應有適當的平衡。在一些實施態樣中，滲透性調節單元具有親水性。在一些實施態樣中，滲透性調節單元具有疏水性。在一些實施態樣中，滲透性調節單元具有極性。在一些實施態樣中，滲透性調節單元在生理pH下帶電荷。例如，滲透性調節單元可帶正電荷、帶負電荷或多個電荷之組合。
滲透性調節單元的非限制性實例包括具有至少一個氮的官能基，諸如哌𠯤官能基。 II. 調製劑
在一些實施態樣中，將組成物投予人類、人類患者或個體。出於本揭示之目的，詞組「活性成分」通常係指如本文所述欲遞送之共軛體。
儘管本文所提供之醫藥組成物的說明主要指向適合投予人類的醫藥組成物，但熟習本技術領域者應理解此等組成物通常適合投予任何其他動物，例如投予非人類動物，例如非人類哺乳動物。為了使得組成物適合投予各種動物，對適合投予人類之醫藥組成物進行修飾是完全可理解的，且一般熟習本技術的獸醫藥理學家僅以常規實驗(若有的話)即可設計及/或執行此等修飾。預期以醫藥組成物投予的個體包括但不限於人類及/或其他靈長類動物；哺乳動物，包括商業相關的哺乳動物，諸如牛、豬、馬、綿羊、貓、狗、小鼠及/或大鼠；及/或鳥類，包括商業相關的鳥類，諸如家禽、雞、鴨、鵝及/或火雞。
本文所述之醫藥組成物的調製劑可以藥理學技術中已知或隨後發展的任何方法製備。此等製備方法通常包括使活性成分與賦形劑及/或一或多種其他的輔助成分締合及接著若必要及/或需要時將產物分隔、成型及/或包裝成所欲單一或多劑量單位。
依照本揭示之醫藥組成物可以單一單位劑量及/或以複數個單一單位劑量之散裝形式製備、包裝或銷售。如本文所使用之「單位劑量」為包含預定量的活性成分之醫藥組成物的個別量。活性成分量通常等於可投予個體的活性成分劑量及/或此劑量的合宜分量，例如此劑量的一半或三分之一。
在依照本揭示之醫藥組成物中的活性成分、醫藥上可接受的賦形劑及/或任何額外的成分之相對量係取決於受治療之個體的特質、體形及/或病症及另外取決於欲投予組成物之途徑而改變。以實例說明，組成物可包含介於0.1%與100%之間，例如介於.5與50%之間、介於1至30%之間、介於5至80%之間、至少80% (w/w)的活性成分。
本揭示之共軛體可使用一或多種賦形劑調製，以：(1)增加穩定性；(2)允許持續或延緩釋放(例如自單順丁烯二醯亞胺之貯庫調製劑釋放)；(3)改變生物分布(例如使單順丁烯二醯亞胺化合物靶向特定的組織或細胞類型)；(4)改變單順丁烯二醯亞胺化合物於活體內的釋放輪廓。賦形劑的非限制性實例包括任何及所有的溶劑、分散介質、稀釋劑或其他的液體媒劑、分散或懸浮助劑、表面活性劑、等滲壓劑、增稠或乳化劑及防腐劑。本揭示之賦形劑亦可包括而不限於類脂質(lipidoid)、脂質體、脂質奈米粒子、聚合物、脂質複合物(lipoplex)、核-殼奈米粒子、肽、蛋白質、玻尿酸酶、奈米粒子模擬物及彼等之組合。因此，本揭示之調製劑可包括一或多種賦形劑，各者的量一起增加單順丁烯二醯亞胺化合物的穩定性。 賦形劑
醫藥調製劑可另包含適合於所欲特定劑型之醫藥上可接受的賦形劑，如本文所使用之賦形劑包括任何及所有的溶劑、分散介質、稀釋劑或其他的液體媒劑、分散或懸浮助劑、表面活性劑、等滲壓劑、增稠或乳化劑、防腐劑、固體黏合劑、潤滑劑及類似者。Remington’s The Science and Practice of Pharmacy，第21版，A. R. Gennaro (Lippincott, Williams & Wilkins, Baltimore, MD, 2006；以其全文併入本文以供參考)揭示在調製醫藥組成物所使用之各種賦形劑及用於其製備之已知的技術。除非任何慣例的賦形劑介質與物質或彼等之衍生物不相容，諸如產生任何非所欲生物效應或在其他方面以有害的方式與醫藥組成物的任何其他組分相互作用，否則其用途皆涵蓋在本揭示之範疇內。
在一些實施態樣中，醫藥上可接受的賦形劑具有至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%純度。在一些實施態樣中，賦形劑經批准用於人類及獸醫用途。在一些實施態樣中，賦形劑係經美國食品及藥物管理局(United States Food and Drug Administration)批准。在一些實施態樣中，賦形劑為醫藥級。在一些實施態樣中，賦形劑符合美國藥典(United States Pharmacopoeia (USP))、歐洲藥典(European Pharmacopoeia (EP))、英國藥典(British Pharmacopoeia)及/或國際藥典(International Pharmacopoeia)的標準。
用於製造醫藥組成物之醫藥上可接受的賦形劑包括但不限於惰性稀釋劑、分散及/或造粒劑、表面活性劑及/或乳化劑、崩散劑、黏合劑、防腐劑、緩衝劑、潤滑劑及/或油。此等賦形劑可視需要地包括在醫藥組成物中。
例示性稀釋劑包括但不限於碳酸鈣、碳酸鈉、磷酸鈣、磷酸二鈣、硫酸鈣、磷酸氫鈣、磷酸鈉、乳糖、蔗糖、纖維素、微晶纖維素、高嶺土、甘露醇、山梨醇、肌醇、氯化鈉、乾燥澱粉、玉米澱粉、糖粉等及/或彼等之組合。
例示性造粒及/或分散劑包括但不限於馬鈴薯澱粉、玉米澱粉、樹薯澱粉、乙醇酸澱粉鈉、黏土、海藻酸、瓜爾膠、柑橘渣、洋菜、膨土、纖維素和木製品、天然海綿、陽離子交換樹脂、碳酸鈣、矽酸鹽、碳酸鈉、經交聯之聚(乙烯吡咯啶酮)(crospovidone)、羧甲基澱粉鈉(乙醇酸澱粉鈉)、羧甲基纖維素、經交聯之羧甲基纖維素鈉(croscarmellose)、甲基纖維素、預糊化澱粉(澱粉1500)、微晶澱粉、不溶於水之澱粉、羧甲基纖維素鈣、矽酸鎂鋁(VEEGUM®)、月桂基硫酸鈉、四級銨化合物等及/或彼等之組合。
例示性表面活性劑及/或乳化劑包括但不限於天然乳化劑(例如***膠、洋菜、海藻酸、海藻酸鈉、黃蓍樹膠、軟骨泥(chondrux)、膽固醇、黃原膠、果膠、明膠、蛋黃、酪蛋白、羊毛脂、膽固醇、蠟和卵磷脂)、膠態黏土(例如膨土[矽酸鋁]和VEEGUM® [矽酸鎂鋁])、長鏈胺基酸衍生物、高分子量醇(例如硬酯醇、鯨臘醇、油醇、三乙酸甘油單硬脂酸酯、乙二醇二硬脂酸酯、單硬脂酸甘油酯和丙二醇單硬脂酸酯、聚乙烯醇)、卡波姆(carbomer)(例如聚羧乙烯(carboxy polymethylene)、聚丙烯酸、丙烯酸聚合物和羧乙烯基聚合物)、鹿角菜膠、纖維素衍生物(例如羧甲基纖維素鈉、粉末狀纖維素、羥甲基纖維素、羥丙基纖維素、羥丙基甲基纖維素、甲基纖維素)、山梨醇酐脂肪酸酯(例如聚氧乙烯山梨醇酐單月桂酸酯[TWEEN®20]、聚氧乙烯山梨醇酐[TWEEN®60]、聚氧乙烯山梨醇酐單油酸酯[TWEEN®80]、山梨醇酐單棕櫚酸酯[SPAN®40]、山梨醇酐單硬脂酸酯[SPAN®60]、山梨醇酐三硬脂酸酯[SPAN®65]、單油酸甘油酯、山梨醇酐單油酸酯[SPAN®80])、聚氧乙烯酯(例如聚氧乙烯單硬脂酸酯[MYRJ®45]、聚氧乙烯氫化蓖麻油、聚氧乙基化蓖麻油、聚甲醛硬脂酸酯和SOLUTOL®)、蔗糖脂肪酸酯、聚乙二醇脂肪酸酯(例如CREMOPHOR®)、聚氧乙烯醚(例如聚氧乙烯月桂醚[BRIJ®30])、聚(乙烯吡咯啶酮)、二乙二醇單月桂酸酯、三乙醇胺油酸酯、油酸鈉、油酸鉀、油酸乙酯、油酸、月桂酸乙酯、月桂基硫酸鈉、PLUORINC®F 68、POLOXAMER®188、溴化鯨蠟基三甲銨(cetrimonium bromide)、氯化鯨蠟基吡啶鎓、氯化烷基二甲基苯甲銨(benzalkonium chloride)、多庫酯鈉(docusate sodium)等及/或彼等之組合。
例示性黏合劑包括但不限於澱粉(例如玉米澱粉和澱粉糊)、明膠、糖(例如蔗糖、葡萄糖、右旋糖、糊精、糖蜜、乳糖、乳糖醇、甘露醇)、天然和合成膠(例如***膠、海藻酸鈉、鹿角菜(Irish moss)萃取物、潘瓦膠(panwar gum)、甘地膠(ghatti gum)、洋車前子果殼(isapol husks)膠漿、羧甲基纖維素、甲基纖維素、乙基纖維素、羥乙基纖維素、羥丙基纖維素、羥丙基甲基纖維素、微晶纖維素、乙酸纖維素、聚(乙烯吡咯啶酮)、矽酸鎂鋁(Veegum®)和落葉松***半乳聚糖(larch arabogalactan))、海藻酸鹽、聚環氧乙烷、聚乙二醇、無機鈣鹽、矽酸、聚甲基丙烯酸酯、蠟、水、醇等及彼等之組合。
例示性防腐劑可包括但不限於抗氧化劑、螯合劑、抗微生物防腐劑、抗真菌防腐劑、醇防腐劑、酸性防腐劑及/或其他防腐劑。例示性抗氧化劑包括但不限於α生育酚、抗壞血酸、棕櫚酸抗壞血酯(acorbyl palmitate)、丁基化羥基茴香醚、丁基化羥基甲苯、單硫甘油、偏二亞硫酸鉀、丙酸、五倍子酸丙酯、抗壞血酸鈉、亞硫酸氫鈉、偏二亞硫酸鈉及/或亞硫酸鈉。例示性螯合劑包括乙二胺四乙酸(EDTA)、檸檬酸單水合物、乙二胺四乙酸二鈉、乙二胺四乙酸二鉀、乙二胺四乙酸、反丁烯二酸、蘋果酸、磷酸、乙二胺四乙酸鈉、酒石酸及/或乙二胺四乙酸三鈉。例示性抗微生物防腐劑包括但不限於氯化烷基二甲基苯甲銨、氯化苯銨(benzethonium chloride)、苯甲醇、泊諾帕(bronopol)、溴化十六基三甲銨、氯化鯨蠟基吡啶鎓、氯己定(chlorhexidine)、氯丁醇、氯甲酚、氯二甲酚、甲酚、乙醇、甘油、赫西替定(hexetidine)、咪唑啶脲(imidurea)、酚、苯氧基乙醇、苯乙醇、硝酸苯基汞、丙二醇及/或乙汞硫柳酸鈉。例示性抗真菌防腐劑包括但不限於對羥苯甲酸丁酯、對羥苯甲酸甲酯、對羥苯甲酸乙酯、對羥苯甲酸丙酯、苯甲酸、羥基苯甲酸、苯甲酸鉀、山梨酸鉀、苯甲酸鈉、丙酸鈉及/或山梨酸。例示性醇防腐劑包括但不限於乙醇、聚乙二醇、酚、酚化合物、雙酚、氯丁醇、羥基苯甲酸酯及/或苯乙醇。例示性酸性防腐劑包括但不限於維生素A、維生素C、維生素E、β-胡蘿蔔素、檸檬酸、乙酸、去氫乙酸、抗壞血酸、山梨酸及/或植酸。其他的防腐劑包括但不現於生育酚、生育酚乙酸酯、甲磺酸去鐵胺(deteroxime mesylate)、溴化鯨蠟基三甲銨、丁基化羥基茴香醚(BHA)、丁基化羥基甲苯(BHT)、乙二胺、月桂基硫酸鈉(SLS)、月桂醚硫酸鈉(SLES)、亞硫酸氫鈉、偏二亞硫酸鈉、亞硫酸鉀、偏二亞硫酸鉀、GLYDANT PLUS®、PHENONIP®、對羥苯甲酸甲酯、GERMALL®115、GERMABEN®II、NEOLONE™、KATHON™及/或EUXYL®。
例示性緩衝劑包括但不限於檸檬酸鹽緩衝溶液、乙酸鹽緩衝溶液、磷酸鹽緩衝溶液、氯化銨、碳酸鈣、氯化鈣、檸檬酸鈣、葡乳醛酸鈣(calcium glubionate)、葡庚糖酸鈣(calcium gluceptate)、葡萄糖酸鈣、D-葡萄糖酸、甘油磷酸鈣、乳酸鈣、丙酸、乙醯丙酸鈣、戊酸、磷酸氫二鈣、磷酸、磷酸三鈣、氫氧化磷酸鈣、乙酸鉀、氯化鉀、葡萄糖酸鉀、鉀混合物、磷酸氫二鉀、磷酸二氫鉀、磷酸鉀混合物、乙酸鈉、碳酸氫鈉、氯化鈉、檸檬酸鈉、乳酸鈉、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉、磷酸鈉混合物、緩血酸胺(tromethamine)、氫氧化鎂、氫氧化鋁、海藻酸、無熱原水、等滲壓鹽水、林格氏液(Ringer's solution)、乙醇等及/或彼等之組合。
例示性潤滑劑包括但不限於硬脂酸鎂、硬脂酸鈣、硬脂酸、二氧化矽、滑石、麥芽、蘿酸甘油酯、氫化植物油、聚乙二醇、苯甲酸鈉、乙酸鈉、氯化鈉、白胺酸、月桂基硫酸鎂、月桂基硫酸鈉等及彼等之組合。
例示性油包括但不限於扁桃(almond)油、杏仁(apricot kernel)油、酪梨油、棕櫚仁油(babassu)、佛手柑油、黑加侖籽(black current seed)油、琉璃苣油、杜松油、黃金菊油、芥花油、香菜油、巴西棕櫚油、蓖麻油、肉桂油、可可脂油、椰子油、鱈魚肝油、咖啡油、玉米油、棉籽油、鴯鶓油、桉樹油、月見草油、魚油、亞麻籽油、香葉草醇油、葫蘆油、葡萄籽油、榛果油、牛膝草油、肉豆蔻酸異丙酯油、荷荷芭(jojoba)油、夏威夷果油、醒目薰衣草(lavandin)油、薰衣草(lavender)油、檸檬油、山胡椒油、夏威夷豆(macademia nut)油、錦葵油、芒果籽油、白芒花籽(meadowfoam seed)油、貂油、肉荳蔻油、橄欖油、橙油、大西洋胸棘鯛(orange roughy)油、棕櫚油、棕櫚果仁(palm kernel)油、桃仁油、花生油、罌粟籽油、南瓜籽油、菜籽油、米糠油、迷迭香油、紅花油、檀香木油、山茶(sasquana)油、歐洲薄荷油、沙棘油、芝麻油、牛油樹脂、聚矽氧油、大豆油、葵花油、茶樹油、薊油、樁油、香根草油、胡桃和小麥胚芽油。例示性油包括但不限於硬脂酸丁酯、辛酸三甘油酯、癸酸三甘油酯、環甲聚矽氧烷(cyclomethicone)、癸二酸二乙酯、二甲聚矽氧烷(dimethicone) 360、肉豆蔻酸異丙酯、礦油、辛基十二醇、油醇、聚矽氧油及/或彼等之組合。
根據調製者的判斷，諸如可可脂和栓劑蠟、著色劑、包膜劑、甜味劑、調味劑及/或芳香劑之賦形劑可存在於組成物中。 投予
本揭示之共軛體可以得到治療有效結果的任何途徑投予。該等途徑包括但不限於經腸、胃腸、硬膜外、經口、經皮、硬膜外(硬膜周圍)、腦內(至大腦內)、腦室內(至腦室內)、皮上(施予皮膚上)、皮內(至皮膚本身內)、皮下(在皮膚下)、鼻腔投予(通過鼻子)、靜脈內(至靜脈內)、動脈內(至動脈內)、肌肉內(至肌肉內)、心內(至心臟內)、骨內輸注(至骨髓內)、鞘內(至脊管內)、腹膜內(輸注或注射至腹膜內)、膀胱內輸注、玻璃體內(通過眼睛)、海綿體內注射(至陰莖基部內)、***內投予、子宮內、羊膜外(extra-amniotic)投予、經皮(通過完整皮膚擴散而於全身性分布)、經黏膜(通過黏膜擴散)、吸入(鼻吸(snorting))、舌下、唇下、灌腸、眼滴劑(至眼結膜上)或耳滴劑。在特定的實施態樣中，組成物可容許彼等穿過血腦障壁、血管障壁或其他上皮障壁的方式投予。
本文所述之調製劑含有有效量的共軛體於適合投予有其需要之個體的醫藥載劑中。調製劑可以非經腸(例如以注射或輸注)投予。調製劑或其變型可以任何方式投予，包括經腸、局部(例如至眼睛)或經由肺部投予。在一些實施態樣中，調製劑係局部投予。 A. 非經腸調製劑
共軛體可經調製以溶液、懸浮液或乳液形式用於非經腸遞送(諸如注射或輸注)。調製劑可經全身性、區域性或直接投予欲治療之器官或組織。
非經腸調製劑可使用本技術中已知的技術製備成水性組成物。此等組成物通常可製備成可注射調製劑，例如溶液或懸浮液；適合在注射前添加重組介質而用於製備溶液或懸浮液之固體形式；乳液，諸如油包水型(w/o)乳液、水包油型(o/w)乳液和其微乳液、脂質體或乳液體(emulsome)。
載劑可為含有例如下列者之溶劑或分散介質：水、乙醇、一或多種多元醇(例如甘油、丙二醇和液態聚乙二醇)、油(諸如植物油，例如花生油、玉米油、芝麻油等)及彼等之組合。適當的流動性可藉由例如使用包膜(諸如卵磷脂)、在分散液的例子中藉由維持所需之粒度及/或藉由使用界面活性劑來維持。在一些例子中，包括等滲壓劑，例如一或多種糖、氯化鈉或本技術中已知的其他適合的劑。
共軛體的溶液及分散液可在水或其他的溶劑或分散介質中與一或多種醫藥上可接受的賦形劑(包括但不限於界面活性劑、分散劑、乳化劑、pH調整劑及彼等之組合)適當地混合而製得。
適合的界面活性劑可為陰離子、陽離子、兩性或非離子表面活性劑。適的陰離子界面活性劑包括但不限於那些含有羧酸根、磺酸根和硫酸根離子者。陰離子界面活性劑的實例包括長鏈烷基磺酸及烷基芳基磺酸之鈉鹽、鉀鹽、銨鹽，諸如十二烷基苯磺酸鈉；二烷基磺琥珀酸鈉，諸如十二烷基苯磺酸鈉；二烷基磺琥珀酸鈉，諸如雙(2-乙基硫氧基)磺琥珀酸鈉；及烷基硫酸鹽，諸如月桂基硫酸鈉。陽離子界面活性劑包括但不限於四級銨化合物，諸如氯化烷基二甲基苯甲銨、氯化苯銨、溴化鯨蠟基三甲銨、氯化硬脂基二甲基苯甲銨、聚氧乙烯和椰油胺。非離子界面活性劑的實例包括乙二醇單硬脂酸酯、丙二醇肉豆蔻酸酯、單硬脂酸甘油酯、硬脂酸甘油酯、聚甘油基-4-油酸酯、山梨醇酐丙烯酸酯、蔗糖丙烯酸酯、PEG-150月桂酸酯、PEG-400單月桂酸酯、聚氧乙烯單月桂酸酯、聚山梨醇酯、聚氧乙烯辛基苯醚、PEG-1000鯨蠟醚、聚氧乙烯十三烷醚、聚丙二醇丁醚、Poloxamer® 401、硬脂醯基單異丙醇醯胺和聚氧乙烯氫化牛脂醯胺。兩性界面活性劑的實例包括N-十二烷基-β-丙胺酸鈉、N-月桂基-β-亞胺基二丙酸鈉、肉豆蔻兩性乙酸鹽(myristoamphoacetate)、月桂基甜菜鹼和月桂基磺基甜菜鹼(lauryl sulfobetaine)。
調製劑可含有防腐劑以防止微生物生長。適合的防腐劑包括但不限於對羥苯甲酸酯、氯丁醇、酚、山梨酸和乙汞硫柳酸鈉。調製劑亦可含有抗氧化劑以防止活性劑降解。
調製劑通常在重組時經緩衝至3至8之pH而用於非經腸投予。適合的緩衝劑包括但不限於磷酸鹽緩衝劑、乙酸鹽緩衝劑和檸檬酸鹽緩衝劑。若使用10%之蔗糖或5%之右旋糖，則可能不需要緩衝劑。
水溶性聚合物經常被用於非經腸投予之調製劑中。適合的水溶性聚合物包括但不限於聚乙烯吡咯啶酮、聚葡萄糖、羧甲基纖維素和聚乙二醇。
無菌可注射溶液可藉由將所需量的共軛體與上文列示之賦形劑中之一或多者在適當的溶劑或分散介質中合併，若需要時接著藉由過濾滅菌而製得。分散液通常係藉由將各種經滅菌之共軛體併入含有基礎分散介質及來自那些上文列示之所需的其他成分之滅菌媒劑中而製得。在用於製備無菌可注射溶液之無菌粉末的例子中，製備方法的實例包括真空乾燥及冷凍乾燥技術，該等技術係自其先前經滅菌過濾之溶液得到粒子加上任何額外的所欲成分之粉末。粉末可以使粒子呈多孔本性的此等方式製備，其可增加粒子的溶解作用。在本技術中已知製造多孔粒子之方法。
用於非經腸投予之醫藥調製劑可呈自一或多種聚合物-藥物共軛體所形成之共軛體無菌水溶液或懸浮液的形式。可接受的溶劑包括例如水、林格氏液、磷酸鹽緩衝之鹽水(PBS)和等滲壓氯化鈉溶液。調製劑亦可為非經腸可接受的無毒性稀釋劑或溶劑(諸如1,3-丁二醇)中的無菌溶液、懸浮液或乳液。
在一些事例中，調製劑係呈液體形式分配或包裝。另一選擇地，用於非經腸投予之調製劑可呈固體包裝，其係例如藉由將適合的液體調製劑凍乾而獲得。固體可在投予前以適當載劑或稀釋劑重組。
用於非經腸投予之溶液、懸浮液或乳液可經維持適合於眼部投予之pH所必要的有效量緩衝液緩衝。適合的緩衝液為那些熟習本技術領域者所熟知，且有用的緩衝液的一些實例為乙酸鹽、硼酸鹽、碳酸鹽、檸檬酸鹽和磷酸鹽緩衝劑。
用於非經腸投予之溶液、懸浮液或乳液亦可含有一或多種張力劑以調整調製劑之等滲壓範圍。適合的張力劑為那些熟習本技術領域者所熟知，且一些實例包括甘油、蔗糖、右旋糖、甘露醇、山梨醇、氯化鈉和其他的電解質。
用於非經腸投予之溶液、懸浮液或乳液亦可含有一或多種防腐劑以防止眼用製劑的細菌污染。適合的防腐劑為本技術中已知且包括聚六亞甲基雙胍(PHMB)、氯化烷基二甲基苯甲銨(BAK)、經穩定之氧氯複合物(oxychloro complexe)(另外亦稱為Purite®)、苯基乙酸汞、氯丁醇、山梨酸、氯己定、苯甲醇、對羥苯甲酸酯、乙汞硫柳酸鈉及彼之混合物。
用於非經腸投予之溶液、懸浮液或乳液亦可含有一或多種本技術已知的賦形劑，諸如分散劑、潤濕劑和及懸浮劑。 B. 黏膜用局部調製劑
共軛體可經調製而用於局部投予黏膜表面。適合於局部投予之劑型包括乳霜、軟膏、油膏、噴劑、凝膠、洗劑、乳液、液體和經皮貼片。調製劑可經調製而用於經黏膜上皮或內皮投予。組成物含有一或多種化學穿透增強劑、膜滲透性劑、膜輸送劑、軟化劑、界面活性劑、穩定劑及彼等之組合。在一些實施態樣中，共軛體可作為液體調製劑(諸如溶液或懸浮液)、半固體調製劑(諸如洗劑或軟膏)或固體調製劑投予。在一些實施態樣中，共軛體經調製成液體(包括溶液和懸浮液，諸如眼滴劑)或半固體調製劑而用於黏膜，諸如眼睛或***或直腸。
「界面活性劑」為降低表面張力且從而增加產品之乳化、發泡、分散、擴展及潤濕特性的表面活性劑。適合非離子界面活性劑包括乳化蠟、單油酸甘油酯、聚氧乙烯烷基醚、聚氧乙烯蓖麻油衍生物、聚山梨醇酯、山梨醇酐酯、苯甲醇、苯甲酸苯甲酯、環糊精、甘油單硬脂酸酯、泊洛沙姆(poloxamer)、普維酮(povidone)及彼等之組合。在一個實施態樣中，非離子界面活性劑為硬酯醇。
「乳化劑」為促進一種液體懸浮於另一液體中且促進油與水形成穩定的混合物或乳液之表面活性物質。常用的乳化劑為：金屬皂、特定的動物和植物油及各種極性化合物。適合的乳化劑包括***膠、陰離子乳化蠟、硬脂酸鈣、卡波姆、鯨蠟硬脂醇、鯨臘醇、膽固醇、二乙醇胺、乙二醇棕櫚硬脂酸酯、甘油單硬脂酸酯、單油酸甘油酯、羥丙基纖維素、羥丙基甲基纖維素(hypromellose)、羊毛脂(含水)、羊毛脂醇、卵磷脂、中鏈三甘油酯、甲基纖維素、礦油和羊毛脂醇、磷酸二氫鈉、單乙醇胺、非離子乳化蠟、油酸、泊洛沙姆、泊洛沙姆類、聚氧乙烯烷基醚、聚氧乙烯蓖麻油衍生物、聚氧乙烯山梨醇酐脂肪酸酯、聚氧乙烯硬脂酸酯、丙二醇海藻酸酯、自乳化單硬脂酸甘油酯、檸檬酸鈉去水物、月桂基硫酸鈉、山梨醇酐酯、硬脂酸、葵花油、黃蓍樹膠、三乙醇胺、黃原膠及彼等之組合。在一個實施態樣中，乳化劑為甘油硬脂酸酯。
適合的穿透增強劑類別為本技術中已知且包括但不限於脂肪醇、脂肪酸酯、脂肪酸、脂肪醇醚、胺基酸、磷脂、卵磷脂、膽酸鹽、酶、胺和醯胺、複合劑(脂質體、環糊精、經修飾之纖維素和二醯亞胺)、巨環(諸如巨環內酯、酮和酐)及環脲、界面活性劑、N-甲基吡咯啶酮與其衍生物、DMSO和相關化合物、離子化合物、氮酮(azone)和相關化合物及溶劑(諸如醇、酮、醯胺、多元醇，例如二醇)。在本技術中已知該等類別的實例。 給藥
本揭示提供包含將含有如本文所述之共軛體的共軛體投予有其需要的個體之方法。含有如本文所述之共軛體的共軛體可使用有效預防或治療或成像疾病、疾患及/或病症(例如與工作記憶缺損相關之疾病、疾患及/或病症)的任何量及任何投予途徑投予個體。所需之精確量係取決於個體的物種、年齡和一般狀態、疾病的嚴重性、特定的組成物、其投予模式、其活性模式及類似者而於個體之間不同。
依照本揭示之組成物通常經調製成容易投予及劑量均勻的單位劑型。然而，應理解本揭示之組成物的總日使用量可由主治醫師在健全的醫學判斷範圍內決定。用於任何特別的患者之特定的治療有效劑量、預防有效劑量或適當的成像劑量水平係取決各種因素而定，包括正治療之疾患和疾患的嚴重性；所使用之特定化合物的活性；所使用之特定組成物；患者的年齡、體重、一般健康、性別和飲食；所使用之特定化合物的投予時間、投予途徑和***速率；治療的持續時間；與所使用之特定化合物的組合或巧合使用之藥物；及在醫療技術中熟知的類似因素。
在一些實施態樣中，依照本揭示之組成物可以每日遞送下列充足量的劑量水平投予：約0.0001 mg/kg至約100 mg/kg、約0.001 mg/kg至約0.05 mg/kg、約0.005 mg/kg至約0.05 mg/kg、約0.001 mg/kg至約0.005 mg/kg、約0.05 mg/kg至約0.5 mg/kg、約0.01 mg/kg至約50 mg/kg、約0.1 mg/kg至約40 mg/kg、約0.5 mg/kg至約30 mg/kg、約0.01 mg/kg至約10 mg/kg、約0.1 mg/kg至約10 mg/kg、或約1 mg/kg至約25 mg/kg、約25 mg/kg至約50 mg/kg、約50 mg/kg至約100 mg/kg、約100 mg/kg至約125 mg/kg、約125 mg/kg至約150 mg/kg、約150 mg/至約175 mg/kg、約175 mg/kg至約200 mg/kg、約200 mg/kg至約250 mg/kg個體體重，一天一或多次以獲得所欲治療、診斷、預防或成像效應。所欲劑量可遞送一天三次、一天兩次、一天一次、每隔一天一次、每三天一次、每週一次、每兩週一次、每三週一次或每四週一次。在一些實施態樣中，所欲劑量可使用多次投予(例如二、三、四、五、六、七、八、九、十、十一、十二、十三、十四或更多次投予)遞送。當使用多次投予時，可使用分次給藥方案，諸如那些本文所述者。
在醫藥組成物中的本揭示之共軛體濃度可介於約0.01 mg/mL至約50 mg/mL、約0.1 mg/mL至約25 mg/mL、約0.5 mg/mL至約10 mg/mL或約1 mg/mL至約5 mg/mL之間。
如本文使用之「分次劑量」為單一單位劑量或分成二或更多劑量的總日劑量，例如投予二或更多次的單一單位劑量。如本文所使用之「單一單位劑量」為以一個劑量/一次/單一途徑/單一接觸點投予(亦即單一投予事件)的任何治療劑量。如本文使用之「總日劑量」為在24小時期間給予或處方之量。其可作為單一單位劑量投予。在一個實施態樣中，本揭示之單順丁烯二醯亞胺化合物係以分次劑量投予個體。單順丁烯二醯亞胺化合物可以僅調製於緩衝劑中或調製於本文所述之調製劑中。 劑型
本文所述之醫藥組成物可經調製成本文所述之劑型，諸如局部、鼻腔內、氣管內或可注射劑型(例如靜脈內、眼內、玻璃體內、肌肉內、心內、腹膜內和皮下)。 液體劑型
用於非經腸投予之液體劑型包括但不限於醫藥上可接受的乳液、微乳液、溶液、懸浮液、糖漿及/或酏劑。除了活性成分以外，液體劑型可包含本技術中常用的惰性稀釋劑，包括但不限於水或其他溶劑、增溶劑和乳化劑，諸如乙醇、異丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苯甲醇、苯甲酸苯甲酯、丙二醇、1,3-丁二醇、二甲基甲醯胺、油(特別為棉籽油、花生油、玉米油、胚芽油、橄欖油、蓖麻油和芝麻油)、甘油、四氫糠醇、聚乙二醇和山梨醇酐之脂肪酸酯及彼之混合物。在用於非經腸投予之特定的實施態樣中，組成物可與增溶劑混合，諸如CREMOPHOR®、醇、油、改質油、二醇、聚山梨醇酯、環糊精、聚合物及/或彼等之組合。 可注射劑型
可注射製劑(例如無菌可注射水性或含油懸浮液)可根據已知的技術調製，且可包括適合的分散劑、潤濕劑及/或懸浮劑。滅菌可注射製劑可為在非經腸可接受的無毒性稀釋劑及/或溶劑中的無菌可注射溶液、懸浮液及/或乳液，例如在1,3-丁二醇中的溶液。在可使用的可接受的媒劑及溶劑之中，該等包括但不限於水、林格氏液、U.S.P.和等滲壓氯化鈉溶液。無菌的不揮發油照慣例用作為溶劑或懸浮介質。出於此目的，可使用任何無刺激性的不揮發油，包括合成單甘油酯或二甘油酯。脂肪酸(諸如油酸)可用於可注射劑型之製備。
可將注射調製劑滅菌，例如藉由通過保留細菌之過濾器過濾，及/或藉由併入呈無菌固體組成物形式的滅菌劑，其在使用前可溶解或分散於無菌水或其他的無菌可注射介質中。
為了延長活性成分的效應，可能希望減慢自皮下或肌內注射之活性成分的吸收。這可藉由使用具有差的水溶性之晶形或非晶形材料的液體懸浮液而達成。單順丁烯二醯亞胺化合物的吸收速率接著取決於其溶解速率而定，該溶解速率依次可取決於晶體大小和結晶形式而定。另一選擇地，延緩非經腸投予之單順丁烯二醯亞胺化合物的吸收可藉由將單順丁烯二醯亞胺溶解或懸浮於油性媒劑中而達成。可注射的貯庫形式係藉由在生物可降解的聚合物(諸如聚***酯-聚乙交酯)中形成單順丁烯二醯亞胺化合物之微膠囊基質而製得。單順丁烯二醯亞胺化合物的釋放速率可取決於單順丁烯二醯亞胺化合物對聚合物之比及所使用之特定聚合物的本性來控制。其他生物可降解的聚合物之實例包括但不限於聚(原酯)和聚(酐)。可注射的貯庫型調製劑可藉由將單順丁烯二醯亞胺化合物截留在與體組織可相容的脂質體或微乳液中而製得。 肺部用劑型
用於肺部遞送的本文所述之調製劑亦可用於經鼻腔內遞送醫藥組成物。適合於鼻腔內投予之另一調製劑可為包含活性成分且具有約0.2 µm至500 µm之平均粒子的粗粉末。此種調製劑可採用嗅吸的方式投予，亦即自保持在靠近鼻子的粉末容器通過鼻道快速吸入。
適合於鼻腔投予之調製劑可例如包含約少至0.1% (w/w)及多至100% (w/w)之活性成分，且可包含本文所述之額外的成分中之一或多者。可製備、包裝及/或銷售適合於頰內投予之調製劑的醫藥組成物。此等調製劑可呈例如使用慣例的方法製成之錠劑及/或菱形錠形式，且可例如含有約0.1%至20% (w/w)之活性成分，其中其餘部分可包含經口可溶解及/或可降解的組成物及視需要的本文所述之額外的成分中之一或多者。另一選擇地，適合於頰內投予之調製劑可包含粉末及/或氣霧化及/或霧化溶液及/或懸浮液，其包含活性成分。此等粉末化、氣霧化及/或氣霧化調製劑在分散時具有在約0.1 nm至約200 nm之範圍內的平均粒子及/或液滴大小，且可另包含本文所述之任何額外的成分中之一或多者。
調製及/或製造醫藥劑的一般考量可見於例如Remington: The Science and Practice of Pharmacy，第21版，Lippincott Williams & Wilkins, 2005 (以其全文併入本文以供參考)。 包膜或殼
錠劑、糖衣錠、膠囊、丸劑及顆粒的固體劑型可以包膜及殼製備，諸如腸衣包膜和醫藥調製技術中熟知的其他包膜。該等劑型可視需要地包含失透劑且可具有使其僅在或優先在腸道的特定部分中視需要地以延遲方式釋放活性成份的組成物。可使用之包埋組成物的實例包括聚合物質和蠟。類似型式的固體組成物可用作為使用諸如乳糖(lactose或milk sugar)以及高分子量聚乙二醇及類似者之賦形劑的軟及硬填充式明膠膠囊中的填料。 III. 使用共軛體及調製劑之方法
在適當時，可投予如本文所述之共軛體或調製劑以治療任何過度增生性疾病、代謝性疾病、傳染病或癌症。調製劑可藉由注射、經口或局部投予，通常投予黏膜表面(肺、鼻、口、頰內、舌下、***、直腸)或投予眼睛(眼內或經眼)。
在各種實施態樣中，提供治療患有癌症的個體之方法，其中該方法包含將治療有效量的如本文所述之共軛體、彼等之鹽形式或包含該共軛體之調製劑投予患有癌症、疑似患有癌症或易罹癌之個體。根據本揭示，癌症包含以失控的細胞增生(例如過度增生)為特徵的任何疾病或病。癌可以腫瘤為特徵，例如實體腫瘤或任何贅生物。
在一些實施態樣中，癌為實體腫瘤。大型藥物分子在實體腫瘤中的穿透性受限制。大型藥物分子具有緩慢的穿透性。另一方面，小分子(諸如本揭示之共軛體)可迅速且更深入地穿透實體腫瘤。關於藥物的穿透深度，儘管較大的分子具有更耐久的藥物動力學，但穿透得較少。小分子(諸如本揭示之共軛體)穿透得較深。Dreher等人(Dreher等人之 JNCI, vol.98(5):335 (2006)，將其內容以彼之全文併入以供參考)研究具有不同大小的聚葡萄糖至腫瘤異種移植物中的穿透性。如Dreher之圖6及表1所彙總，具有3.3 kDa或10 kDa之分子量的聚葡萄糖顯示迅速深入穿透至腫瘤組織中(自腫瘤之血管表面起＞35um)。然而，40 kDa、70 kDa或2 mDa大小之聚葡萄糖的穿透遠少於3.3 kDa或10 kDa之聚葡萄糖。70 kDa之聚葡萄糖僅到達自腫瘤之血管表面起約15 um處。本揭示之共軛體具有相當於3.3 kDa及10 kDa之聚葡萄糖的分子量，而抗體藥物共軛體具有至少與70 kDa之聚葡萄糖一樣大的分子量。因此，本揭示之共軛體可深入且迅速地穿透至實體腫瘤的核心/中心。
在一個實施態樣中，本揭示之共軛體係自腫瘤之血管表面起到達實體腫瘤內至少約25 µm、約30 µm、約35 µm、約40 µm、約45 µm、約50 µm、約75 µm、約100 µm、約150 µm、約200 µm、約250 µm、約300 µm、約400 µm、約500 µm、約600 µm、約700 µm、約800 µm、約900 µm、約1000 µm、約1100 µm、約1200 µm、約1300 µm、約1400 µm或約1500 µm。零距離經定義為腫瘤之血管表面，且大於零的每一距離經定義為以三維量測而最接近於血管表面的距離。
在另一實施態樣中，本揭示之共軛體穿透至腫瘤的核心。如本文所使用之腫瘤的「核心」係指腫瘤的中心區域。自腫瘤之核心區域的任何部分至腫瘤之血管表面的距離係介於腫瘤之長度或寬度的約30%至約50%之間。自腫瘤之核心區域的任何部分至腫瘤之中心點的距離小於腫瘤之長度或寬度的約20%。腫瘤之核心區域大略為腫瘤的中心1/3。
在另一實施態樣中，本揭示之共軛體穿透至實體腫瘤的中間。如本文所使用之腫瘤的「中間」係指腫瘤的中間區域。自腫瘤之中間區域的任何部分至腫瘤之血管表面的距離係介於腫瘤之長度或寬度的約15%與約30%之間。自腫瘤之中間區域的任何部分至腫瘤之中心點的距離係介於腫瘤之長度或寬度的約20%至約35%。腫瘤之中間區域大略介於腫瘤的中心1/3與腫瘤的外側1/3之間。
在一些實施態樣中，個體在其他方面可能沒有以共軛體或調製劑治療的適應症。在一些實施態樣中，該方法包括使用癌細胞，包括但不限於哺乳動物癌細胞。在一些事例中，哺乳動物癌細胞為人類癌細胞。
在一些實施態樣中，已發現本揭示指導之共軛體或調製劑抑制癌及/或腫瘤生長。彼等亦可降低包括細胞增生、入侵及/或轉移，從而使彼等有用於癌症治療。
在一些實施態樣中，本揭示指導之共軛體或調製劑可用於阻止腫瘤或癌生長，及/或阻止腫瘤或癌轉移。在一些實施態樣中，本揭示指導之組成物可用於縮小或破壞癌。
在一些實施態樣中，本文所提供之共軛體或調製劑有用於抑制癌細胞增生。在一些實施態樣中，本文所提供之共軛體或調製劑有用於抑制細胞增生，例如抑制細胞增生速率、阻止細胞增生及/或誘導細胞死亡。如本文所述之共軛體或調製劑通常可抑制癌細胞增生或同時抑制癌細胞增生及/或誘導癌細胞死亡。在一些實施態樣中，與未治療之細胞相比，細胞增生在以本揭示之共軛體或調製劑治療後減少至少約25%、約50%、約75%或約90%。在一些實施態樣中，與未治療之細胞相比，細胞週期停止標記磷酸化組蛋白(phospho histone) H3 (PH3或PHH3)在以本揭示之共軛體或調製劑治療後增加至少約50%、約75%、約100%、約200%、約400%或約600%。在一些實施態樣中，與未治療之細胞相比，細胞凋亡標記切割之半胱天冬酶-3 (CC3)在以本揭示之共軛體或調製劑治療後增加至少50%、約75%、約100%、約200%、約400%或約600%。
此外，在一些實施態樣中，本揭示之共軛體或粒子有效抑制多種類型之腫瘤中的腫瘤生長，不論是否以大小淨值(重量、表面積或體積)或隨著時間的生長速率來測量。
在一些實施態樣中，腫瘤大小在以本揭示之共軛體或調製劑治療後縮小約60%或更多。在一些實施態樣中，以重量及/或面積及/或體積量測之腫瘤大小縮小至少約20%、至少約30%、至少約40%、至少約50%、至少約60%、至少約70%、至少約80%、至少約90%、至少約95%、至少約96%、至少約97%、至少約98%、至少約99%、至少約100%。
以本揭示指導之方法可治療的癌症通常發生在哺乳動物中。哺乳動物包括例如人類、非人類靈長類動物、狗、貓、大鼠、小鼠、兔、雪貂、天竺鼠、馬、豬、綿羊、山羊和牛。在各種實施態樣中，癌包括但不限於聽覺神經瘤、急性白血病、急性淋巴球性白血病、急性骨髓細胞白血病(單核細胞、成髓細胞、腺癌、血管肉瘤、星狀細胞瘤、骨髓單核球和前髓細胞)、急性T細胞白血病、基底細胞癌、膽管癌、膀胱癌、腦癌、乳癌、枝氣管癌、子宮頸癌、軟骨肉瘤、脊索瘤、絨毛膜癌、慢性白血病、慢性淋巴球性白血病、慢性骨髓細胞(粒細胞)白血病、慢性骨髓性白血病、結腸癌、結腸直腸癌、顱咽管瘤、囊腺癌、瀰漫性大型B細胞淋巴瘤、伯基特氏(Burkitt’s)淋巴瘤、異常增生性改變(發育不良和化生)、胚胎癌、子宮內膜癌、內皮肉瘤、室管膜瘤、上皮癌、紅血球性白血病、食道癌、***受體陽性乳腺癌、原發性血小板增多症、尤文氏(Ewing’s)腫瘤、纖維肉瘤、濾泡性淋巴瘤、生殖細胞睾丸癌、膠質瘤、重鏈疾病、血管母細胞瘤、肝癌、肝細胞癌、激素不敏感性***癌、平滑肌肉瘤、脂肪肉瘤、肺癌、淋巴結內皮細胞瘤、***肉瘤、成淋巴細胞白血病、淋巴瘤(霍奇金氏(Hodgkin’s)和非霍奇金氏)，膀胱、***、結腸、肺、卵巢、胰臟、***、皮膚和子宮的惡性腫瘤和過度增生性疾病，T細胞或B細胞起源的淋巴惡性腫瘤、白血病、淋巴瘤、髓質癌、神經管胚細胞瘤、黑色素瘤、腦膜瘤、中皮瘤、多發性骨髓瘤、骨髓性白血病、骨髓瘤、黏液瘤、神經母細胞瘤、非小細胞肺癌、寡樹突細胞瘤、口腔癌、成骨肉瘤、卵巢癌、胰臟癌、乳頭狀腺癌、乳頭狀癌、松果體瘤、真性紅細胞增多症、***癌、直腸癌、腎細胞癌、視網膜母細胞瘤、橫紋肌肉瘤、肉瘤、皮脂腺癌、精原細胞瘤、皮膚癌、小細胞肺癌、實體腫瘤(癌和肉瘤)、小細胞肺癌、胃癌、鱗狀細胞癌、滑膜瘤、汗腺癌、甲狀腺癌、瓦爾登斯特倫氏(Waldenstrom’s)巨球蛋白血症、睾丸腫瘤、子宮癌和威爾姆斯(Wilms’)瘤。其他的癌包括原發癌、轉移性癌、口咽癌、下咽癌、肝癌、膽囊癌、膽管癌、小腸癌、泌尿道癌、腎癌、尿道上皮癌、女性生殖道癌、子宮癌、妊娠滋養細胞疾病、男性生殖道癌、精囊癌、睾丸癌、生殖細胞腫瘤、內分泌腺腫瘤、甲狀腺癌、腎上腺癌、腦垂體癌、血管瘤、源於骨和軟組織之肉瘤、卡波西氏(Kaposi’s)肉瘤、神經癌、眼癌、腦膜癌、膠質母細胞瘤、神經瘤、神經母細胞瘤、神經鞘瘤、源於造血系統惡性腫瘤之實體腫瘤(諸如白血病)、轉移性黑色素瘤、復發性或持續性卵巢上皮癌、輸卵管癌、原發性腹膜癌、胃腸道基質瘤、結腸直腸癌、胃癌、黑色素瘤、多形性膠質母細胞瘤、非鱗狀非小細胞肺癌、惡性膠質瘤、上皮性卵巢癌、原發性腹膜漿液性癌、轉移性肝癌、神經內分泌癌、難治性惡性腫瘤、三陰性乳癌、HER2擴增型乳癌、鼻咽癌、口腔癌、膽道癌、肝細胞癌、頭頸部鱗狀細胞癌(SCCHN)、非甲狀腺髓質癌、復發性多形性膠質母細胞瘤、神經纖維瘤第1型、CNS癌、脂肪肉瘤、平滑肌肉瘤、唾液腺癌、黏膜黑色素瘤、肢端/點狀惡性黑色素瘤、副神經節瘤、嗜鉻細胞瘤、晚期轉移性癌、實體腫瘤、三陰性乳癌、結腸直腸癌、肉瘤、黑色素瘤、腎癌、子宮內膜癌、甲狀腺癌、橫紋肌肉瘤、多發性骨髓瘤、卵巢癌、膠質母細胞瘤、胃腸道間質瘤、套細胞淋巴瘤和難治性惡性腫瘤。
在一個實施態樣中，如本文所述之共軛體或調製劑係用於治療小細胞肺癌。患有肺癌的患者中約12%至15%患有小細胞肺癌。轉移性小細胞肺癌的存活率低。在診斷後五年存活率低於5%。美國的小細胞肺癌發生率為約26000至30000人。
在一些實施態樣中，如本文所述之共軛體或調製劑係用於治療患有表現或過度表現HSP90之腫瘤的患者。
本揭示之共軛體或調製劑的特點為對有機體相對低的毒性，且保持抑制(例如減慢或停止)腫瘤生長的功效。如本文所使用之「毒性」係指物質或組成物對細胞、組織有機體或細胞環境有害或有毒的能力。低毒性係指物質或組成物對細胞、組織有機體或細胞環境有害或有毒的能力降低。此降低的毒性或低毒性可相對於標準量測、相對於治療或相對於未治療。例如，本揭示之共軛體或調製劑可具有比單獨投予之活性劑部分Z更低的毒性。包含DM1之共軛體的毒性比單獨投予之DM1更低。
毒性可另外相對於個體的體重減輕來測量，其中超過體重的15%、超過20%或超過30%之體重減輕為毒性的指標。亦可測量毒性的其他測度，諸如患者表現測度，包括嗜睡及一般不適。嗜中性球減少症、血小板減少症、白血球(WBC)數、全血球(CBC)數亦可為毒性的測度。毒性的藥理指標包括上升的轉胺酶(AST/ALT)含量、神經毒性、腎臟受損、GI受損及類似者。在一個實施態樣中，本揭示之共軛體或調製劑不引起個體顯著的體重變化。在以本揭示之共軛體或調製劑治療後，個體減少的體重少於約30%、約20%、約15%、約10%或約5%。在另一實施態樣中，本揭示之共軛體或調製劑不引起個體之AST/ALT含量顯著的增加。在以本揭示之共軛體或調製劑治療後，個體增加的AST或ALT含量少於約30%、約20%、約15%、約10%或約5%。在又另一實施態樣中，在以本揭示之共軛體或調製劑治療後，本揭示之共軛體或調製劑不引起個體之CBC或WBC計數顯著的變化。在以本揭示之共軛體或調製劑治療後，個體減少的CBC或WBC含量少於約30%、約20%、約15%、約10%或約5%。
在一些實施態樣中，本揭示之共軛體或調製劑係與至少一種額外的活性劑組合。活性劑可為任何適合的藥物。共軛體及至少一種額外的活性劑可同時、依序或以任何順序投予。共軛體及至少一種額外的活性劑可以不同的劑量、以不同的給藥頻率或經由不同的途徑投予，端取哪一種適合。額外的活性劑可選自本文所述之任何活性劑，諸如用於治療癌症的藥物。其亦可為癌症狀緩解藥物。症狀緩解藥物的非限制性實例包括：體抑素肽或蘭瑞肽；干擾素、賽庚啶(cypoheptadine)或任何其他的抗組織胺。在一些實施態樣中，本揭示之共軛體或調製劑與額外的活性劑不具有藥物-藥物干擾。在一個實施態樣中，本揭示之共軛體或調製劑不抑制細胞色素P450(CYP)同功酶。CYP同功酶可包括CYP3A4咪達唑侖(Midazolam)、CYP3A4睪固酮、CYP2C9、CYP2D6、CYP1A2、CYP2C8、CYP2B6和CYP2C19。額外的活性劑可伴隨本揭示之共軛體或調製劑投予。
在另一實例中，本揭示之共軛體或調製劑可與適當劑量的化學治療劑(諸如絲裂黴素C、長春鹼和順鉑)組合(參見Ellis等人之 Br J Cancer, vol.71(2): 366–370 (1995)，將其內容以彼之全文併入本文以供參考)。
在又另一實例中，患者可先接受醫藥有效劑量的未經共軛之活性劑，繼而接受醫藥有效劑量的包含相同活性劑之共軛體。
如本文所述之共軛體或調製劑或含有如本文所述之共軛體或調製劑之調製劑可用於選擇性組織遞送治療劑、預防劑或診斷劑至有其需要的個體或患者。例如，本揭示之共軛體或調製劑係用於遞送酬載至選擇性組織。該等組織可為腫瘤組織。劑量方案可經調整以提供最適化所欲反應(例如治療或預防反應)。例如，可投予單一濃注劑量(bolus)，可隨時間投予數個分次劑量，或劑量可根據治療情況的緊急程度之指示而依比例減少或增加。如本文所使用之單位劑型係指適合作為欲治療之哺乳動物個體的單位劑量之物理分離單元；各單位含有經計算以得到所欲治療之預定量的活性化合物。
在一些實施態樣中，本揭示之共軛體可另包含至少一種經共價修飾標靶蛋白之反應性官能基。反應性官能基可為連接子、酬載或結合HSP90之配體的的一部分。若為連接子的一部分，則共價修飾步驟可與連接子的切割相關聯。在一些實施態樣中，本揭示之共軛體經共價修飾標靶蛋白。
標靶蛋白之共價修飾可為可逆的或不可逆的。共價修飾可發生在標靶蛋白中的親脂性胺基酸上。經修飾之胺基酸可為半胱胺酸、絲胺酸、蘇胺酸、離胺酸、精胺酸、酪胺酸、組胺酸或色胺酸。經共價修飾之胺基酸可為PI3Kα中的半胱胺酸862、BTK中的半胱胺酸481、EGFR中的半胱胺酸797或激酶半胱胺酸組(cysteinome)之任何成員，如Liu等人在Chemistry & Biology 20, February 21, 2013中所述，將其內容以彼之全文併入本文以供參考。 作為蛋白水解靶向之嵌合體(PROTAC)的共軛體
蛋白水解靶向之嵌合體(PROTAC)已成為小型生物技術及大型製藥業的主要焦點，作為影響標靶蛋白之新方式。該等PROTAC分子經常為結合至關注之蛋白質的配體(POI 配體)及結合至E3接合酶的配體(E3配體)之共軛體。POI配體及E3配體係通常交叉連接子連接。PROTAC招募POI至E3接合酶。將泛素(Ub)添加至POI Lys殘基中。將經Ub標識之POI以蛋白酶體降解。因此，PROTAC誘導標靶蛋白被降解而不是(或另外)被抑制。這開啟殺死蛋白質活性之替代方式，以增強對路徑的影響或靶向先前不可成藥的標靶(undruggable target)。然而，PROTAC的挑戰包括尋找組織選擇性E3接合酶(該類別僅~600個成員)。
驚訝的是本揭示之共軛體(包括但不限於包含PI3K抑制劑的結合HSP90之共軛體)誘導腫瘤細胞中標靶蛋白(諸如腫瘤細胞中PI3K蛋白)降解。如本文所使用之標靶蛋白係指以本揭示之共軛體調控(例如調升或抑制其功能或活性)之蛋白質。在特定的事例中，共軛體之標靶蛋白不為HSP90之客戶蛋白且標靶蛋白的降解不以HSP90驅動。在特定的事例中，活性劑之標靶蛋白為HSP90之客戶蛋白(諸如但不限於HER2)且活性劑之標靶蛋白的降解比以單獨的結合HSP90之靶向配體所達成的降解或比以未結合HSP90之對照物所達成的降解更高。
不想受任何理論的束縛，本揭示之共軛體結合至HSP90，若摺疊停頓，則HSP90與E3泛素接合酶締合以降解酬載之標靶蛋白。例如，包含PI3K抑制劑的結合HSP90之共軛體可使PI3K泛素化且誘導PI3K降解。
在一些實施態樣中，本揭示之共軛體誘導細胞中活性劑之標靶蛋白降解。在一些實施態樣中，本揭示之共軛體誘導細胞中活性劑之標靶蛋白降解且抑制細胞中活性劑之標靶蛋白活性及/或功能。標靶蛋白的降解及標靶蛋白的抑制可以本技術中已知的任何方法測量。在一些實施態樣中，細胞為腫瘤細胞。
在一些實施態樣中，當共軛體之標靶蛋白為HSP90客戶蛋白(諸如但不限於HER2)時，標靶蛋白的降解水平比以單獨的結合HSP90之靶向配體所達成的降解或比以未結合HSP90之對照物所達成的降解高約20%、約30%、約40%、約50%、約60%、約70%或約80%。在其中共軛體之標靶蛋白不為HSP90客戶蛋白的其他實施態樣中，與媒劑或未經處理或其他適當的對照物相比，標靶蛋白的降解水平為20%、約30%、約40%、約50%、約60%、約70%或約80%。
在一些實施態樣中，本揭示之共軛體為雙功能。彼等誘導至少一種HSP90客戶蛋白(諸如HER2)降解且彼等誘導活性劑之標靶蛋白降解，其中活性劑之標靶蛋白不為HSP90客戶蛋白。
在一些實施態樣中，本揭示之共軛體誘導細胞中PI3K降解。在一些實施態樣中，本揭示之共軛體誘導腫瘤細胞中PI3K降解且抑制腫瘤細胞中PI3K活性及/或功能。PI3K的降解及PI3K的抑制可以本技術中已知的任何方法測量。在一些實施態樣中，細胞為腫瘤細胞。
在一些實施態樣中，共軛體之連接子為不可切割的。
在一些實施態樣中，共軛體具有低滲透性。 IV. 套組及裝置
本揭示提供各種用於方便及/或有效地進行本揭示之方法的套組及裝置。套組通常包含充足的組分量及/或數目以容許使用者執行多次的個體治療及/或執行多次實驗。
在一個實施態樣中，本揭示提供用於試管內或活體內抑制腫瘤細胞生長之套組，其包含本揭示之共軛體及/或粒子或視需要地與任何其他活性劑組合的本揭示之共軛體及/或調製劑之組合。
套組可進一步包含包裝及用法說明及/或用於形成調製組成物之遞送劑。遞送劑可包含鹽水、緩衝溶液或本文所揭示之任何遞送劑。可改變各組分的量以賦予一致、可重現的較高濃度之鹽水或簡單的緩衝液調製劑。亦可改變組分以增加共軛體及/或調製劑在緩衝溶液中經一段時期及/或在各種條件下的穩定性。
本揭示提供可併入本揭示之共軛體及/或調製劑的裝置。該等裝置含有能立即遞送至有其需要的個體(諸如人類患者)之穩定的調製劑。在一些實施態樣中，個體患有癌症。
裝置的非限制性實例包括泵、導管、針、經皮貼片、加壓嗅吸遞送裝置、離子電泳法裝置、多層微流體裝置。裝置可根據單次、多次或分次給藥方案而用於遞送本揭示之共軛體及/或調製劑。裝置可穿過生物組織、皮內、皮下或肌肉內而用於遞送本揭示之共軛體及/或調製劑。 V. 定義
如本文所使用之術語「化合物」意在包括所描述之結構的所有立體異構物、幾何異構物、互變異構物及同位素。在本發明申請案中，化合物可與共軛體交換使用。因此，如本文所使用之共軛體亦意在包括所描述之結構的所有立體異構物、幾何異構物、互變異構物及同位素。
本文所述之化合物可為不對稱(例如具有一或多個立構中心)。除非另有其他的指示，否則意欲包括所有的立體異構物，諸如鏡像異構物和非鏡像異構物。含有經不對稱取代之碳原子的本揭示之化合物可以光學活性或消旋物形式分離。在本技術中已知如何自光學活性起始材料製備光學活性形式之方法，諸如藉由消旋混合物之解析或藉由立體選擇性合成。烯烴(C=N雙鍵)及類似者的許多幾何異構物亦可存在本文所述之化合物中，且所有此等穩定的異構物均涵蓋在本揭示中。說明本揭示之化合物的順式及反式幾何異構物，且可將彼等分離成異構物之混合物或經分離之異構物形式。
本揭示之化合物亦包括互變異構物形式。互變異構物形式係起因於單鍵與相鄰的雙鍵互換及質子的伴隨遷移。互變異構物形式包括質子轉移互變異構物，其為具有相同的實驗式及總電荷之異構物質子化狀態。質子轉移互變異構物的實例包括酮-烯醇對、醯胺-醯亞胺酸對、內醯胺-內醯亞胺對、醯胺-醯亞胺酸對、烯胺-亞胺對且其中質子可佔據雜環系統之二或更多個位置的環狀形式，諸如1H-和3H-咪唑、1H-、2H-和4H-1,2,4-***、1H-和2H-異吲哚及1H-和2H-吡唑。互變異構物形式可呈平衡狀態或藉由適當的取代而立體地鎖成一種形式。
本揭示之化合物亦包括出現在中間物或最終化合物中的原子之所有的同位素。「同位素」係指具有相同的原子序但由於核中不同的中子數所致之不同的質量數之原子。例如，氫之同位素包括氚及氘。
本揭示之化合物及鹽可藉由例行的方法與溶劑或水分子組合以形成溶劑合物及水合物而製得。
如本文所使用之術語「個體」或「患者」係指可出於例如實驗、治療、診斷及/或預防目的而投予共軛體之任何有機體。典型的個體包括動物(例如哺乳動物，諸如小鼠、大鼠、兔、天竺鼠、牛、豬、綿羊、馬、狗、貓、倉鼠、駱馬、非人類靈長類動物和人類)。
如本文所使用之術語「治療」或「預防」可包括預防在可能易罹患疾病、疾患及/或病症但尚未被確診為患有疾病、疾患或病症之動物中發生的疾病、疾患或病症；抑制疾病、疾患或病症，例如阻礙其進程；及緩解疾病、疾患或病症，例如引起疾病、疾患及/或病症消退。治療疾病、疾患或病症可包括改善特定的疾病、疾患或病症中至少一種症狀，即使根本的病理生理未受影響，諸如藉由投予止痛劑治療個體的疼痛，儘管此種藥劑不治療疼痛的原因。
如本文所使用之「標靶」應意指經靶向之構築體結合之位點。標靶可於活體內或試管內。在特定的實施態樣中，標靶可為白血病或腫瘤(例如腦、肺(小細胞和非小細胞)、卵巢、***、***及結腸之腫瘤，以及其他的惡性腫瘤及肉瘤)中發現的癌細胞。在又其他的實施態樣中，標靶可指靶向部分或配體結合之分子結構，諸如不全抗原、抗原決定區、受體、dsDNA片段、碳水化合物或酶。標靶可為組織類型，例如神經元組織、腸組織、胰臟組織、肝、腎、***、卵巢、肺、骨髓或***組織。
可用作為方法或共軛體或調製劑之標靶的「標靶細胞」通常為動物細胞，例如哺乳動物細胞。本揭示之方法可用於試管內(亦即在細胞培養物中)或活體內修飾活細胞的細胞功能，其中細胞構成動物組織的一部分或以其他方式存在動物組織中。因此，標靶細胞可包括例如血液、淋巴組織、消化道內襯細胞(諸如口腔和咽部黏膜)、形成小腸絨毛之細胞、大腸內襯細胞、動物的呼吸系統(鼻道/肺)內襯細胞(其可藉由吸入本揭示主題而接觸)、皮膚/表皮細胞、***和直腸細胞、內臟器官之細胞(包括胎盤細胞和所謂的血/腦障壁細胞)等。標靶細胞通常表現至少一種類型的HSP90。在一些實施態樣中，標靶細胞可為表現HSP90之細胞且以本文所述之共軛體靶向，且靠近以共軛體之活性劑釋放而受影響的細胞。例如，在腫瘤附近表現HSP90之血管可為標靶，而在位點上釋放之活性劑會影響腫瘤。
術語「治療效應」係經本技術辨識且係指由藥理活性物質在動物，特別為哺乳動物，且更特別為人類中引起的局部或全身性效應。術語因此意指意欲用於診斷、治癒、減輕、治療或預防疾病、疾患或病症之任何物質，以增強動物(例如人類)之所欲身體或精神發展及狀況。
術語「調節」係經本技術辨識且係指調升(亦即活化或刺激)、調降(亦即抑制或制止)反應或此二者之組合或分開。調節通常係與可相對於經治療之實體的內部或外部之基線或參考物相比。
如本文所使用之「非經腸投予」意指藉由除了通過消化道(腸道)或非侵入式局部途徑以外的任何方法投予。例如，非經腸投予可包括經靜脈內、皮內、腹膜內、胸膜內、氣管內、骨內、腦內、鞘內、肌肉內、皮下、結膜下(subjunctivally)、藉由注射及藉由輸注投予患者。
如本文所使用之「局部投予」意指非侵入式投予皮膚、孔口或黏膜。局部投予可經局部遞送，亦即治療劑可在遞送區域提供局部效應，而無需全身性暴露或具有最小的全身性暴露。一些局部用調製劑可提供全身性效應，例如經由吸附至個體的血流內。局部投予可包括但不限於皮膚和經皮投予、頰內投予、鼻腔內投予、***內投予、膀胱內投予、眼睛投予及直腸投予。
如本文所使用之「腸道投予」意指通過胃腸道而經由吸收投予。腸道投予可包括經口和舌下投予、胃部投予或直腸投予。
如本文所使用之「肺部投予」意指藉由吸入而投予肺或氣管內投予。如本文所使用之術語「吸入」係指攝入空氣至肺泡內。攝入空氣可通過口或鼻發生。
如本文可交換使用之術語「充足」及「有效」係指達成一或多種所欲結果所需要的量(例如質量、體積、劑量、濃度及/或時期)。「治療有效量」為實現可測量的至少一種症狀或特定的病症或疾患之改進或預防、實現可測量的提高之壽命預期性或概括改進患者的生活品質所需的至少最低濃度。治療有效量因此取決於特定的生物活性分子及欲治療之特定的病症或疾患而定。在本技術中已知許多活性劑(諸如抗體)的治療有效量。本文所述之例如用於治療特定的疾患之化合物及組成物的治療有效量可由熟習本技術領域者(諸如醫師)熟知的技術測定。
如本文可交換使用之術語「生物活性劑」及「活性劑」包括而不限於在體內局部或全身性作用的生理或藥理活性物質。生物活性劑為用於治療之物質(例如治療劑)、預防之物質(例如預防劑)、診斷之物質(例如診斷劑)、治癒或減輕疾病或病之物質、影響身體結構或功能之物質或在置於預定的生理環境後變成生物活性或更具活性之前藥。
術語「前藥」係指在試管內及/或活體內轉化成生物活性形式之藥劑，包括有機小分子、肽、核酸或蛋白質。可使用前藥，因為彼等在一些情況下比親體化合物(活性化合物)更容易投予。例如，前藥可藉由經口投予而為生物可利用的，而親體化合物則不然。與親體藥物相比，前藥亦可在醫藥組成物中具有改進的溶解度。前藥亦可具有比親體藥物更低的毒性。前藥可以各種機制轉化成親體藥物，包括酶醋過程和代謝水解。Harper, N.J.之(1962) Drug Latentiation in Jucker, ed. Progress in Drug Research, 4:221-294；Morozowich等人之(1977) Application of Physical Organic Principles to Prodrug Design in E. B. Roche ed. Design of Biopharmaceutical Properties through Prodrugs and Analogs, APhA；Acad. Pharm. Sci.；E. B. Roche編輯之(1977) Bioreversible Carriers in Drug in Drug Design, Theory and Application, APhA；H. Bundgaard編輯之(1985) Design of Prodrugs, Elsevier；Wang等人之(1999) Prodrug approaches to the improved delivery of peptide drug, Curr. Pharm. Design. 5(4):265-287；Pauletti等人之(1997) Improvement in peptide bioavailability: Peptidomimetics and Prodrug Strategies, Adv. Drug. Delivery Rev. 27:235-256；Mizen等人之(1998) The Use of Esters as Prodrugs for Oral Delivery of β-Lactam antibiotics, Pharm. Biotech. 11:345-365；Gaignault等人之(1996) Designing Prodrugs and Bioprecursors I. Carrier Prodrugs, Pract. Med. Chem. 671-696；M. Asgharnejad (2000). Improving Oral Drug Transport Via Prodrugs, in G. L. Amidon, P. I. Lee和E. M. Topp編輯之 Transport Processes in Pharmaceutical Systems, Marcell Dekker, p. 185-218；Balant等人之(1990) Prodrugs for the improvement of drug absorption via different routes of administration, Eur. J. Drug Metab. Pharmacokinet., 15(2): 143-53；Balimane和Sinko (1999) Involvement of multiple transporters in the oral absorption of nucleoside analogues, Adv. Drug Delivery Rev., 39(1-3):183-209；Browne (1997). Fosphenytoin (Cerebyx), Clin. Neuropharmacol. 20(1): 1-12；Bundgaard (1979) Bioreversible derivatization of drugs--principle and applicability to improve the therapeutic effects of drugs, Arch. Pharm. Chemi. 86(1): 1-39；H. Bundgaard編輯之(1985) Design of Prodrugs, New York: Elsevier；Fleisher等人之(1996) Improved oral drug delivery: solubility limitations overcome by the use of prodrugs, Adv. Drug Delivery Rev. 19(2): 115-130；Fleisher等人之(1985) Design of prodrugs for improved gastrointestinal absorption by intestinal enzyme targeting, Methods Enzymol. 112: 360-81；Farquhar D.等人之(1983) Biologically Reversible Phosphate-Protective Groups, J. Pharm. Sci., 72(3): 324-325；Han, H.K.等人之(2000) Targeted prodrug design to optimize drug delivery, AAPS PharmSci., 2(1): E6；Sadzuka Y. (2000) Effective prodrug liposome and conversion to active metabolite, Curr. Drug Metab., 1(1):31-48；D.M. Lambert (2000) Rationale and applications of lipids as prodrug carriers, Eur. J. Pharm. Sci., 11 Suppl. 2:S15-27；Wang, W. 等人之(1999) Prodrug approaches to the improved delivery of peptide drugs. Curr. Pharm. Des., 5(4):265-87。
如本文所使用之術語「生物可相容的」係指對接受者通常為無毒的且不引起接受者任何顯著的副作用之材料連同其任何代謝物或降解產物。一般而言，生物可相容的材料為在投予患者時不誘出顯著的發炎或免疫反應之材料。
如本文所使用之術語「生物可降解的」通常係指在生理條件下降解或侵蝕成能被個體代謝、消除或排出之較小的單元或化學物種之材料。降解時間為組成物及形態的函數。降解時間可自數小時至數週。
如本文所使用之術語「醫藥上可接受的」係指依照諸如美國食品及藥物管理局之機構的指南，在健全的醫學判斷範圍內適合與人類及動物接觸使用而無過度毒性、刺激、過敏反應或與合理的利益/風險比相稱的其他問題或併發症之化合物、材料、組成物及/或劑型。如本文所使用之「醫藥上可接受的載劑」係指促進組成物於活體內遞送之醫藥調製劑的所有組分。醫藥上可接受的載劑包括但不限於稀釋劑、防腐劑、黏合劑、潤滑劑、崩散劑、膨脹劑、填充劑、穩定劑及彼等之組合。
如本文所使用之術語「分子量」通常係指材料之質量或平均質量。若為聚合物或寡聚物，則分子量可指總體聚合物之相對平均鏈長或相對鏈質量。事實上，聚合物及寡聚物之分子量可以各種方式評估及特徵化，包括凝膠滲透層析術(GPC)或毛細管黏度測定法。GPC分子量係以重量平均分子量(M w)而非數量平均分子量(M n)記述。毛細管黏度測定法係使用特別設定的濃度、溫度及溶劑條件自稀釋的聚合物溶液所測定之固有黏度提供分子量之估計值。
如本文所使用之術語「小分子」通常係指分子量少於2000 g/mol、少於1500 g/mol、少於1000 g/mol、少於800 g/mol或少於500 g/mol之有機分子。小分子為非聚合物及/或非寡聚物。
如本文所使用之術語「親水性」係指具有與水輕易地相互作用的強極性基團之物質。
如本文所使用之術語「疏水性」係指對水缺乏親和性；具有排斥且不吸收水以及不溶解於水中或不與水混合的傾向之物質。
如本文所使用之術語「親脂性」係指對脂質具有親和性之化合物。
如本文所使用之術語「兩親性」係指組合親水性與親脂性(疏水性)之分子。如本文所使用之「兩親性材料」係指含有疏水性或更疏水性寡聚物或聚合物(例如生物可降解的寡聚物或聚合物)及親水性或更親水性寡聚物或聚合物之材料。
如本文所使用之術語「靶向部分」係指結合或定位至特定場域之部分。該部分可為例如蛋白質、核酸、核酸類似物、碳水化合物或小分子。場域可為組織、特定的細胞類型或亞細胞區室。在一些實施態樣中，靶向部分可特異性地結合至經選擇之分子。
如本文所使用之術語「反應性偶合基團」係指能夠與第二官能基反應以形成共價鍵之任何化學官能基。反應性偶合基團之選擇係在那些熟習本技術領域者的能力範圍內。反應性偶合基團的實例可包括包括一級胺(-NH 2)及胺反應性連接基團，諸如異硫氰酸酯、異氰酸酯、醯基疊氮化物、NHS酯、磺醯氯、醛、乙二醛、環氧化物、環氧乙烷、碳酸酯、芳基鹵化物、醯亞胺酯、碳二醯亞胺、酐和氟苯酯。大部分的該等基團係藉由醯化或烷基化共軛至胺。反應性偶合基團的實例可包括醛(-COH)及醛反應性連接基團，諸如醯肼、烷氧基胺和一級胺。反應性偶合基團的實例可包括巰基(-SH)及氫硫基反應性基團，諸如順丁烯二醯亞胺、鹵乙醯基和吡啶基二硫化物。反應性偶合基團的實例可包括光反應性偶合基團，諸如芳基疊氮化物或二氮雜環丙烷。偶合反應可包括使用觸媒、熱、pH緩衝劑、光或彼等之組合。
如本文所使用之術語「保護基」係指可添加至及/或取代另一所欲官能基以保護所欲官能基免於特定的反應條件，且選擇性地移除及/或置換以去保護或暴露所欲官能基之官能基。保護基為熟習本技術領域者所知。適合的保護基可包括那些在Greene and Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, (1991)中所述者。酸敏感性保護基包括二甲氧基三苯甲基(DMT)、三級丁基胺甲酸酯(tBoc)和三氟乙醯基(tFA)。鹼敏感性保護基包括9-茀基甲氧基羰基(Fmoc)、異丁基(iBu)、苯甲醯基(Bz)和苯氧基乙醯基(pac)。其他的保護基包括乙醯胺基甲基、乙醯基、三級戊氧基羰基、苯甲基、苯甲氧基羰基、2-(4-聯苯基)-2-丙氧基羰基、2-溴苯甲氧基羰基、三級丁基、三級丁氧基羰基、1-碳苯并草醯胺基-2,2.2-三氟乙基、2,6-二氯苯甲基、2-(3,5-二甲氧基苯基)-2-丙氧基羰基、2,4-二硝苯基、二硫雜琥珀醯基、甲醯基、4-甲氧基苯磺醯基、4-甲氧基苯甲基、4-甲基苯甲基、鄰-硝苯基次磺醯基(o-nitrophenylsulfenyl)、2-苯基-2-丙氧基羰基、α-2,4,5-四甲基苯甲氧基羰基、對-甲苯磺醯基、𠮿基、苯甲酯、N-羥基琥珀醯亞胺酯、對-硝基苯甲酯、對-硝基苯酯、苯酯、對-硝基碳酸酯、對-硝基苯甲基碳酸酯、三甲基矽基和五氯苯酯。
如本文所使用之術語「活化酯」係指羧酸之烷酯，其中烷基為使得羰基易遭受攜有胺基之分子親核攻擊之良好的脫離基。活化酯因此易遭受胺解且與胺反應以形成醯胺。活化酯含有羧酸酯基-CO 2R，其中R為脫離基。
術語「烷基」係指飽和脂族基團之基，包括直鏈烷基、支鏈烷基、環烷基(脂環基)、經烷基取代之環烷基和經環烷基取代之烷基。
在一些實施態樣中，直鏈或支鏈烷基具有30個或更少的碳原子於其主鏈中(例如直鏈為C 1-C 30，支鏈為C 3-C 30)、20個或更少、12個或更少或7個或更少的碳原子。同樣地，在一些實施態樣中，環烷基具有3至10個碳原子於其環結構中，例如具有5、6或7個碳原子於環結構中。如整篇說明書、實施例及申請專利範圍中所使用之術語「烷基」(或「低碳烷基」)意欲包括「未經取代之烷基」及「經取代之烷基」二者，後者係指烷基部分具有一或多個置換在烴主鏈的一或多個碳上的氫之取代基。此等取代基包括但不限於鹵素、羥基、羰基(諸如羧基、烷氧基羰基、甲醯基或醯基)、硫羰基(諸如硫酯、硫乙酸酯或硫甲酸酯)、烷氧基、磷醯基、磷酸酯、膦酸酯、次膦酸酯、胺基、醯胺基、脒、亞胺、氰基、硝基、疊氮基、氫硫基、烷硫基、硫酸酯、磺酸酯、胺磺醯基、磺醯胺基、磺醯基、雜環基、芳烷基或芳族或雜芳族部分。
除非另有其他的碳數目指定，否則如本文所使用之「低碳烷基」意指如上文所定義之烷基，但是其具有1至10個碳原子或1至6個碳原子於其主鏈結構中。同樣地，「低碳烯基」及「低碳炔基」具有類似的鏈長度。在一些實施態樣中，烷基為低碳烷基。在一些實施態樣中，本文標示為烷基之取代基為低碳烷基。
那些熟習本技術領域者應理解在烴鏈上經取代之部分若適當時本身可經取代。例如，經取代之烷基的取代基可包括鹵素、羥基、硝基、硫醇、胺基、疊氮基、亞胺基、醯胺基、磷醯基(包括膦酸酯和次膦酸酯)、磺醯基(包括硫酸酯、磺醯胺基、胺磺醯基和磺酸酯)及矽基，以及醚、烷硫基、羰基(包括酮、醛、羧酸酯和酯)、-CF 3、-CN及類似者。環烷基可以相同的方式經取代。
如本文所使用之術語「雜烷基」係指含有至少一個雜原子的直鏈或支鏈、或環狀含碳基團或彼等之組合。適合的雜原子包括但不限於O、N、Si、P、Se、B和S，其中磷及硫原子視需要地經氧化，及氮雜原子視需要地經四級化。雜烷基可經取代，如上文就烷基所定義。
術語「烷硫基」係指具有附著至其之硫基團的如上文所定義之烷基。在一些實施態樣中，「烷硫基」部分係以-S-烷基、-S-烯基及-S-炔基中之一者表示。代表性烷硫基包括甲硫基和乙硫基。術語「烷硫基」亦包含環烷基、烯烴基和環烯烴基和炔烴基。「芳硫基」係指芳基或雜芳基。烷硫基可經取代，如上文就烷基所定義。
術語「烯基」及「炔基」係指具有類似於上述烷基的長度及可能的取代，但是分別含有至少一個雙鍵或三鍵的不飽和脂族基團。
如本文所使用之術語「烷氧基(alkoxyl或alkoxy)」係指具有附著至其之氧基團的如上文所定義之烷基。代表性烷氧基包括甲氧基、乙氧基、丙氧基和三級丁氧基。「醚」為兩個以氧共價連接之烴。因此，使得烷基成為醚之烷基的取代基為或類似於烷氧基，諸如可以-O-烷基、-O-烯基和-O-炔基中之一者表示。芳氧基可以-O-芳基或O-雜芳基表示，其中芳基及雜芳基係如下文所定義。烷氧基及芳氧基可經取代，如上文就烷基所述。
術語「胺」及「胺基」係經本技術辨識且係指未經取代及經取代之胺二者，例如可以下列通式表示之部分：
Figure 02_image171
其中R 9、R 10和R' 10各自獨立地代表氫、烷基、烯基、-(CH 2) m-R 8，或採R 9和R 10與彼等所附著之N原子一起完成具有4至8個原子於環結構中的雜環；R 8代表芳基、環烷基、環烯基、雜環或多環；且m為0或在1至8之範圍內的整數。在一些實施態樣中，R 9或R 10中僅有一者可為羰基，例如R 9、R 10與氮不一起形成醯亞胺。在又其他的實施態樣中，術語「胺」不包含醯胺，例如其中R 9和R 10中之一者代表羰基。在額外的實施態樣中，R 9和R 10(及隨意的R' 10)各自獨立地代表氫、烷基或環烷基、烯基或環烯基或炔基。因此，如本文所使用之術語「烷基胺」意指具有附著至其之經取代(如上文就烷基所述)或未經取代之烷基的如上文所定義之胺基團，亦即R 9和R 10中至少一者為烷基。
術語「醯胺基」係經本技術辨識為經胺基取代之羰基且包括可以下列通式表示的部分：
Figure 02_image173
其中R 9和R 10係如上文所定義。
如本文所使用之「芳基」係指C 5-C 10-員芳族、雜環、稠合芳族、稠合雜環、雙芳族或雙雜環系統。廣義地定義，如本文所使用之「芳基」包括5-、6-、7-、8-、9-和10-員單環芳族基團，其可包括0至4個雜原子，例如苯、吡咯、呋喃、噻吩、咪唑、㗁唑、噻唑、***、吡唑、吡啶、吡𠯤、嗒𠯤和嘧啶及類似者。具有雜原子於環結構中的該等芳基亦可稱為「芳基雜環」或「雜芳族」。芳族環可在一或多個環位置經一或多個取代基取代，包括但不限於鹵素、疊氮化物、烷基、芳烷基、烯基、炔基、環烷基、羥基、烷氧基、胺基(或四級胺基)、硝基、氫硫基、亞胺基、醯胺基、膦酸酯、次膦酸酯、羰基、羧基、矽基、醚、烷硫基、磺醯基、磺醯胺基、酮、醛、酯、雜環基、芳族或雜芳族部分、-CF 3、-CN及彼等之組合。
術語「芳基」亦包括具有二或更多個環狀環的多環狀環系統，其中二或更多個碳為兩個相鄰的環共有(亦即「稠合環」)，其中環中至少一者為芳族，例如其他的環狀環或環類可為環烷基、環烯基、環炔基、芳基及/或雜環。雜環狀環的實例包括但不限於苯并咪唑基、苯并呋喃基、苯并硫代呋喃基、苯并苯硫基、苯并㗁唑基、苯并㗁唑啉基、苯并噻唑基、苯并***基、苯并四唑基、苯并異㗁唑基、苯并異噻唑基、苯并咪唑啉基、咔唑基、4aH咔唑基、咔啉基、苯并二氫哌喃基、苯并哌喃基、㖕啉基、十氫喹啉基、2 H,6 H-1,5,2-二噻𠯤基、二氫呋喃并[2,3b]四氫呋喃、呋喃基、呋呫基、咪唑啶基、咪唑啉基、咪唑基、1H-吲唑基、吲哚烯基(indolenyl)、吲哚啉基、吲哚𠯤基、吲哚基、3H-吲哚基、靛紅醯基(isatinoyl)、異苯并呋喃基、異苯并二氫哌喃基、異吲唑基、異吲哚啉基、異吲哚基、異喹啉基、異噻唑基、異㗁唑基、甲二氧基苯基、嗎啉基、㖠啶基、八氫異喹啉基、㗁二唑基、1,2,3-㗁二唑基、1,2,4-㗁二唑基、1,2,5-㗁二唑基、1,3,4-㗁二唑基、㗁唑啶基、㗁唑基、吲哚酮基、嘧啶基、啡啶基、啡啉基、啡𠯤基、啡噻𠯤基、啡㗁噻基、啡㗁𠯤基、酞𠯤基、哌𠯤基、哌啶基、哌啶酮基、4-哌啶酮基、向日葵基、喋啶基、嘌呤基、哌喃基、吡𠯤基、吡唑啶基、吡唑啉基、吡唑基、嗒𠯤基、吡啶并㗁唑、吡啶并咪唑、吡啶并噻唑、吡啶基(pyridinyl)、吡啶基(pyridyl)、嘧啶基、吡咯啶基、吡咯啉基、2H-吡咯基、吡咯基、喹唑啉基、喹啉基、4H-喹𠯤基、喹㗁啉基、昆啶基、四氫呋喃基、四氫異喹啉基、四氫喹啉基、四唑基、6H-1,2,5-噻二𠯤基、1,2,3-噻二唑基、1,2,4-噻二唑基、1,2,5-噻二唑基、1,3,4-噻二唑基、噻嗯基、噻唑基、噻吩基、噻吩并噻唑基、噻吩并㗁唑基、噻吩并咪唑基、苯硫基和𠮿基。環中之一或多者可經取代，如上文就「芳基」所定義。
如本文所使用之術語「芳烷基」係指經芳基(例如芳族或雜芳族基團)取代之烷基。
如本文所使用之術語「碳環」係指其中環之各原子為碳的芳族或非芳族環。
如本文所使用之「雜環(Heterocycle或Heterocyclic)」係指之環狀基團，其為經由環碳或氮附著之含有3至10個環原子(例如5至6個環原子)的單環狀或雙環狀環，由碳及1至4個各自選自由非過氧化氧、硫和N(Y)(其中Y不存在或為H、O、(C 1-C 10)烷基、苯基或苯甲基)所組成之群組的雜原子所組成、及視需要地含有1至3個雙鍵、及視需要地經一或多個取代基取代。雜環狀環的實例包括但不限於苯并咪唑基、苯并呋喃基、苯并硫代呋喃基、苯并苯硫基、苯并㗁唑基、苯并㗁唑啉基、苯并噻唑基、苯并***基、苯并四唑基、苯并異㗁唑基、苯并異噻唑基、苯并咪唑啉基、咔唑基、4aH-咔唑基、咔啉基、苯并二氫哌喃基、苯并哌喃基、㖕啉基、十氫喹啉基、2 H,6 H-1,5,2-二噻𠯤基、二氫呋喃并[2,3- b]四氫呋喃、呋喃基、呋呫基、咪唑啶基、咪唑啉基、咪唑基、1H-吲唑基、吲哚烯基、吲哚啉基、吲哚𠯤基、吲哚基、3H-吲哚基、靛紅醯基、異苯并呋喃基、異苯并二氫哌喃基、異吲唑基、異吲哚啉基、異吲哚基、異喹啉基、異噻唑基、異㗁唑基、甲二氧基苯基、嗎啉基、㖠啶基、八氫異喹啉基、㗁二唑基、1,2,3-㗁二唑基、1,2,4-㗁二唑基、1,2,5-㗁二唑基、1,3,4-㗁二唑基、㗁唑啶基、㗁唑基、氧雜環庚基(oxepanyl)、氧雜環丁基、吲哚酮基、嘧啶基、啡啶基、啡啉基、啡𠯤基、啡噻𠯤基、啡㗁噻基、啡㗁𠯤基、酞𠯤基、哌𠯤基、哌啶基、哌啶酮基、4-哌啶酮基、向日葵基、喋啶基、嘌呤基、哌喃基、吡𠯤基、吡唑啶基、吡唑啉基、吡唑基、嗒𠯤基、吡啶并㗁唑、吡啶并咪唑、吡啶并噻唑、吡啶基(pyridinyl)、吡啶基(pyridyl)、嘧啶基、吡咯啶基、吡咯啉基、2H-吡咯基、吡咯基、喹唑啉基、喹啉基、4H-喹𠯤基、喹㗁啉基、昆啶基、四氫呋喃基、四氫異喹啉基、四氫哌喃基、四氫喹啉基、四唑基、6 H-1,2,5-噻二𠯤基、1,2,3-噻二唑基、1,2,4-噻二唑基、1,2,5-噻二唑基、1,3,4-噻二唑基、噻嗯基、噻唑基、噻吩基、噻吩并噻唑基、噻吩并㗁唑基、噻吩并咪唑基、苯硫基及𠮿基。雜環基團可在一或多個位置上經一或多個取代基取代，如上文就烷基及芳基所定義，例如經鹵素、烷基、芳烷基、烯基、炔基、環烷基、羥基、胺基、硝基、氫硫基、亞胺基、醯胺基、磷酸酯、膦酸酯、次膦酸酯、羰基、羧基、矽基、醚、烷硫基、磺醯基、酮、醛、酯、雜環基、芳族或雜芳族部分、-CF 3和-CN取代。
術語「羰基」係經本技術辨識且包括可以下列通式表示的此等部分：
Figure 02_image175
其中X為鍵或代表氧或硫，且R 11代表氫、烷基、環烷基、烯基、環烯基或炔基，R' 11代表氫、烷基、環烷基、烯基、環烯基或炔基。在X為氧，且R 11或R' 11不為氫的情況下，上式代表「酯」。在X為氧，且R 11係如上文所定義的情況下，此部分在本文被稱為羧基，且特別地當R 11為氫時，則上式代表「羧酸」。在X為氧，且R' 11為氫的情況下，上式代表「甲酸酯」。在上式之氧原子通常經硫置換的情況下，上式代表「硫代羰基」。在X為硫，且R 11或R' 11不為氫的情況下，上式代表「硫酯」。在X為硫，且R 11為氫的情況下，上式代表「硫代羧酸」。在X為硫，且R' 11為氫的情況下，上式代表「硫甲酸酯」。另一方面，在X為鍵，且R 11不為氫的情況下，上式代表「酮」基。在X為鍵，且R 11為氫的情況下，上式代表「醛」基。
如本文所使用之術語「單酯」係指二羧酸之類似物，其中羧酸之一經官能化為酯及其他羧酸為游離羧酸或羧酸之鹽。單酯的實例包括但不限於琥珀酸、戊二酸、己二酸、辛二酸、癸二酸、壬二酸、草酸和順丁烯二酸之單酯。
如本文所使用之術語「雜原子」意指除了碳或氫以外的任何元素之原子。雜原子的實例為硼、氮、氧、磷、硫和硒。其他有用的雜原子包括矽和砷。
如本文所使用之術語「硝基」意指-NO 2；術語「鹵素」指明-F、-Cl、-Br或-I；術語「氫硫基」意指 -SH；術語「羥基」意指-OH；及術語「磺醯基」意指   -SO 2-。
如本文所使用之術語「經取代」係指本文所述之化合物的所有可允許的取代基。最廣義而言，可允許的取代基包括有機化合物之非環和環狀、支鏈和非支鏈、碳環和雜環、芳族和非芳族取代基。例示性取代基包括但不限於鹵素、羥基或含有任何數目的碳原子(例如1至14個碳原子)之任何其他有機群組，且視需要地包括在直鏈、支鏈或環狀結構格式中的一或多個雜原子，諸如氧、硫或氮群組。代表性取代基包括烷基、經取代之烷基、烯基、經取代之烯基、炔基、經取代之炔基、苯基、經取代之苯基、芳基、經取代之芳基、雜芳基、經取代之雜芳基、鹵基、羥基、烷氧基、經取代之烷氧基、苯氧基、經取代之苯氧基、芳氧基、經取代之芳氧基、烷硫基、經取代之烷硫基、苯硫基、經取代之苯硫基、芳硫基、經取代之芳硫基、氰基、異氰基、經取代之異氰基、羰基、經取代之羰基、羧基、經取代之羧基、胺基、經取代之胺基、醯胺基、經取代之醯胺基、磺醯基、經取代之磺醯基、磺酸、磷醯基、經取代之磷醯基、膦醯基、經取代之膦醯基、聚芳基(polyaryl)、經取代之聚芳基、C 3-C 20環、經取代之C 3-C 20環、雜環、經取代之雜環、胺基酸、肽和多肽基。
雜原子(諸如氮)可具有氫取代基及/或符合雜原子價位的本文所述之有機化合物的任何可允許的取代基。應暸解「取代」或「經取代」包括如下隱含條件：此種取代係依照經取代之原子及取代基的經允許之價位，及取代得到穩定的化合物，亦即不會例如藉由重排、結晶或消除而自發地經歷轉變之化合物。
在廣義的態樣中，可允許的取代基包括有機化合物之非環和環狀、支鏈和非支鏈、碳環和雜環、芳族和及非芳族取代基。例示性取代基包括例如那些本文所述者。可允許的取代基對於適當的有機化合物而言可為一或多個且相同或不同。雜原子(諸如氮)可具有氫取代基及/或符合雜原子價位的本文所述之有機化合物的任何可允許的取代基。
在各種實施態樣中，取代基係選自烷氧基、芳氧基、烷基、烯基、炔基、醯胺、胺基、芳基、芳基烷基、胺甲酸酯、羧基、氰基、環烷基、酯、醚、甲醯基、鹵素、鹵烷基、雜芳基、雜環基、羥基、酮、硝基、磷酸酯、硫化物、亞磺醯基、磺醯基、磺酸、磺醯胺和硫酮，各者視需要地經一或多個適合的取代基取代。在一些實施態樣中，取代基係選自烷氧基、芳氧基、烷基、烯基、炔基、醯胺、胺基、芳基、芳基烷基、胺甲酸酯、羧基、環烷基、酯、醚、甲醯基、鹵烷基、雜芳基、雜環基、酮、磷酸酯、硫化物、亞磺醯基、磺醯基、磺酸、磺醯胺和硫酮，其中烷氧基、芳氧基、烷基、烯基、炔基、醯胺、胺基、芳基、芳基烷基、胺甲酸酯、羧基、環烷基、酯、醚、甲醯基、鹵烷基、雜芳基、雜環基、酮、磷酸酯、硫化物、亞磺醯基、磺醯基、磺酸、磺醯胺和硫酮之各者可另外經一或多個適合的取代基取代。
取代基的實例包括但不限於鹵素、疊氮化物、烷基、芳烷基、烯基、炔基、環烷基、羥基、烷氧基、胺基、硝基、氫硫基、亞胺基、醯胺基、膦酸酯、次膦酸酯、羰基、羧基、矽基、醚、烷硫基、磺醯基、磺醯胺基、酮、醛、硫酮、酯、雜環基、-CN、芳基、芳氧基、全鹵烷氧基、芳烷氧基、雜芳基、雜芳氧基、雜芳基烷基、雜芳烷氧基、疊氮基、烷硫基、側氧基、醯基烷基、羧基酯、甲醯胺基、醯氧基、胺基烷基、烷基胺基芳基、烷基芳基、烷基胺基烷基、烷氧基芳基、芳基胺基、芳烷基胺基、烷基磺醯基、甲醯胺基烷基芳基、甲醯胺基芳基、羥烷基、鹵烷基、烷基胺基烷基羧基、胺基甲醯胺基烷基、氰基、烷氧基烷基、全鹵烷基、芳基烷氧基烷基及類似者。在一些實施態樣中，取代基係選自氰基、鹵素、羥基和硝基。
如本文所使用之術語「共聚物」通常係指由二或更多種不同的單體所組成之單一聚合物材料。共聚物可具有任何形式，例如隨機、嵌段或接枝形式。共聚物可具有任何端基，包括封端或酸端基。
術語「多肽」、「肽」及「蛋白質」通常係指胺基酸殘基之聚合物。如本文所使用之術語亦適用於其中一或多種胺基酸為對應的天然生成胺基酸之化學類似物或經修飾之衍生物或為非天然胺基酸之胺基酸聚合物。如本文概括使用之術語「蛋白質」係指藉由肽鍵而彼此連接的胺基酸之聚合物，以形成鏈長度足以產生三級及/或四級結構之多肽。術語「蛋白質」排除定義上的小型肽，小型肽缺乏被視為蛋白質必要的較高級之必需結構。
術語「核酸」、「多核苷酸」及「寡核苷酸」可交換使用且指呈直線或圓形構形及呈單股或雙股形式的去氧核糖核苷酸或核糖核苷酸聚合物。該等術語不應解釋為限制有關的聚合物長度。術語可包含天然核苷酸之已知的類似物，以及在鹼、糖及/或磷酸酯部分(例如硫代磷酸酯主鏈)中經修飾之核苷酸。一般及除非另有其他指定，否則特定核苷酸的類似物具有相同的鹼配對特異性，亦即A的類似物係與T鹼配對。術語「核酸」為本技術之術語，其係指至少兩個鹼-糖-磷酸酯單體單元之鏈。核苷酸為核酸聚合物之單體單元。該術語包括呈信使RNA、反義、質體DNA、質體DNA的一部分或衍生自病毒的基因物質之形式的去氧核糖核酸(DNA)及核糖核酸(RNA)。反義核酸為干擾DNA及/或RNA序列表現的多核苷酸。術語核酸係指至少兩個鹼-糖-磷酸酯組合之鏈。天然核酸具有磷酸酯主鏈。人工核酸可含有其他類型的主鏈，但含有與天然核酸相同的鹼。該術語亦包括PNA (肽核酸)、硫代磷酸酯和天然核酸之磷酸酯主鏈的其他變體。
蛋白質、多肽或核酸之「功能片段」為序列與全長蛋白質、多肽或核酸不相同但保留至少一種如同全長蛋白質、多肽或核酸之功能的蛋白質、多肽或核酸。功能片段可具有比對應的天然分子更多、更少或相同數目的殘基，及/或可含有一或多個胺基酸或核苷酸取代。在本技術中熟知測定核酸功能(例如編碼功能、與另一核酸雜交的能力)之方法。同樣地，亦熟知測定蛋白質功能之方法。例如，多肽之DNA結合功能可例如藉由濾膜結合、電泳移動性位移或免疫沉澱檢定法來測定。DNA切割可以凝膠電泳法檢定。蛋白質與其他蛋白質交互作用的能力可例如藉由共免疫沉澱、雙雜交檢定或互補(例如基因或生化互補)來測定。參見例如Fields等人之(1989) Nature 340:245-246；美國專利第5,585,245號及PCT WO 98/44350。
如本文所使用之術語「連接子」係指可含有雜原子(例如氮、氧、硫等)及可為1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50個原子長度的碳鏈。連接子可經各種取代基取代，包括但不限於氫原子、烷基、烯基、炔基、胺基、烷基胺基、二烷基胺基、三烷基胺基、羥基、烷氧基、鹵素、芳基、雜環、芳族雜環、氰基、醯胺、胺甲醯基、羧酸、酯、硫醚、烷基硫醚、硫醇和脲基。那些熟習本技術領域者將辨識該等基團中之各者可依次經取代。連接子的實例包括但不限於pH-敏感性連接子、蛋白酶可切割的肽連接子、核酸酶敏感性核酸連接子、脂酶敏感性脂質連接子、醣苷酶敏感性碳水化合物連接子、缺氧敏感性連接子、光可切割的連接子、熱不穩定性連接子、酶可切割的連接子(例如酯酶可切割的連接子)、超音波敏感性連接子和X射線可切割的連接子。
術語「醫藥上可接受的鹽」係指可存在於本發明組成物所使用之化合物中的酸基或鹼基之鹽。包括在本發明組成物中的呈鹼本性之化合物能夠與各種無機及有機酸形成各種鹽。可用於製備此等鹼性化合物之醫藥上可接受的酸加成鹽之酸為那些形成無毒性酸加成鹽(亦即含有藥理上可接受的陰離子之鹽)之酸，該等鹽包括但不限於硫酸鹽、檸檬酸鹽、蘋果酸鹽、乙酸鹽、草酸鹽、氯化物、溴化物、碘化物、硝酸鹽、硫酸鹽、硫酸氫鹽、磷酸鹽、酸式磷酸鹽、異菸鹼酸鹽、乙酸鹽、乳酸鹽、水楊酸鹽、檸檬酸鹽、酒石酸鹽、油酸鹽、單寧酸鹽、泛酸鹽、酒石酸氫鹽、抗壞血酸鹽、琥珀酸鹽、順丁烯二酸鹽、龍膽酸鹽、反丁烯二酸鹽、葡萄糖酸鹽、葡萄糖醛酸鹽、葡萄糖二酸鹽、甲酸鹽、苯甲酸鹽、麩胺酸鹽、甲磺酸鹽、乙磺酸鹽、苯磺酸鹽、對甲苯磺酸鹽和雙羥萘酸鹽(亦即1,1'-亞甲基-雙-(2-羥基-3-萘酸鹽)。除了上述酸以外，包括在本發明組成物中的包括胺基部分之化合物可與各種胺基酸形成醫藥上可接受的鹽。包括在本發明組成物中的呈酸本性之化合物能夠與各種藥理上可接受的陽離子形成鹼鹽。此等鹽的實例包括鹼金屬或鹼土金屬鹽，且特別為鈣、鎂、鈉、鋰、鋅、鉀和鐵鹽。
若本文所述之化合物係以酸加成鹽獲得，則游離鹼可藉由鹼化酸鹽溶液而獲得。反之，若產物為游離鹼，則依照自鹼化合物製備酸加成鹽之慣例程序，加成鹽(特別為醫藥上可接受的加成鹽)可藉由將游離鹼溶解在適合的有機溶劑中且以酸處理溶液而製得。那些熟習本技術領域者將辨識使用各種合成方法製備醫藥上可接受的無毒性加成鹽。
醫藥上可接受的鹽可衍生自選自下列之酸：1-羥基-2-萘甲酸、2,2-二氯乙酸、2-羥基乙磺酸、2-側氧戊二酸、4-乙醯胺基苯甲酸、4-胺基水楊酸、乙酸、己二酸、抗壞血酸、天冬胺酸、苯磺酸、苯甲酸、樟腦酸、樟腦-10-磺酸、癸酸(capric acid/decanoic acid)、己酸(caproic acid/hexanoic acid)、辛酸(caprylic acid/octanoic acid)、碳酸、肉桂酸、檸檬酸、環己基胺磺酸(cyclamic acid)、十二烷基硫酸、乙烷-1,2-二磺酸、乙磺酸、甲酸、反丁烯二酸、半乳糖二酸、龍膽酸、葡萄糖甲酸、葡萄糖酸、葡萄醣醛酸、麩胺酸、戊二酸、甘油磷酸、乙醇酸、馬尿酸、氫溴酸、氫氯酸、2-羥乙磺酸、異丁酸、乳酸、乳糖醛酸、月桂酸、順丁烯二酸、蘋果酸、丙二酸、苦杏仁酸、甲磺酸、黏酸、萘-1,5-二磺酸、萘-2-磺酸、菸鹼酸、硝酸、油酸、草酸、棕櫚酸、雙羥萘酸、泛酸、磷酸、丙酸、焦麩胺酸、水楊酸、癸二酸、硬脂酸、琥珀酸、硫酸、酒石酸、硫氰酸、甲苯磺酸、三氟乙酸和十一烯酸。
術語「生物可利用的」係經本技術辨識且係指容許本揭示之形式以其投予量或一部分被其所投予之個體或患者吸收、併入或以其他方式於生理上可用於被其所投予之個體或患者。
應理解下列的實施例意欲例證而非限制本揭示。在閱讀本揭示後，前述說明及實例的各種不違背本揭示之精神及範疇的其他實例及修飾將為熟習本技術領域者所明白，且意欲將所有此等實例或修飾包括在所附之申請專利範圍之範疇內。本文參考之所有公開案及專利特此以彼之全文併入本文以供參考。 實施例 實施例1：共軛體之合成
本揭示之共軛體可使用任何合宜的方法製備。在合理的方法中，共軛體係自彼等個別的組分、靶向部分、在一些例子中的連接子及活性劑部分構築。組分可通過官能基彼此共價鍵結，如本技術中已知，其中此等官能基可存在於組分上或使用一或多個步驟(例如氧化反應、還原反應、切割反應及類似者)引入組分上。可用於使組分一起共價鍵結以生產醫藥共軛體之官能基包括：羥基、氫硫基、胺基及類似者。選擇經修飾之不同組分的特定部分以提供共價連接，實質上不以不利的方式干擾組分對例如活性劑部分的所欲結合活性，修飾不影響標靶結合活性之區域，使得保留充足量的所欲藥物活性。在必要及/或要求的情況下，可使用阻隔基保護組分上的特定部分，如本技術中已知，參見例如Green & Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis (John Wiley & Sons)(1991)。
本揭示之共軛體可藉由將靶向部分視需要地以連接子附著至酬載來合成。熟習本技術領域者可以例行的化學步驟合成該等共軛體。
另一選擇地，共軛體可使用已知的組合方法來生產以得到大量庫藏的潛在共軛體，接著可篩選以鑑定具有藥物動力學輪廓的雙功能分子。另一選擇地，共軛體可使用藥化學及靶向部分與活性劑部分之已知的結構-活性關係來生產。此方法特別提供兩個部分於何處連結至連接子之見解。 共軛體C17至C86
共軛體C17至C86之合成方法的非限制性實例包括於下。 通用程序 如下之方法A： 合成路徑
Figure 02_image177
1.1  2-(氯羰氧基)丙酸(S)-苯甲酯
Figure 02_image179
將醚(40 mL)中的(2S)-2-羥基丙酸苯甲酯(5 g，27.75 mmol)及吡啶(2.19 g，27.75 mmol，2.24 mL)之溶液在30分鐘期間逐滴添加至醚(60 mL)中的碳酸雙(三氯甲基)酯(2.75 g，9.27 mmol)之冰冷卻溶液中，在添加後，將混合物逐漸溫熱至室溫且在室溫下攪拌2天，將所得懸浮液過濾，將濾餅以醚(20 mL x 2)清洗，將合併的過濾物與洗液在真空下濃縮，留下成為澄清油的粗製產物(6.0 g，產率90%)。 LC-MS：(ESI) m/z：252.2 [M+H] +(註：將產物以二甲胺處理以給出2-(二甲基胺甲醯氧基)丙酸(S)-苯甲酯且接著進行LCMS) 1.2  3-(((S)-1-(苯甲氧基)-1-側氧基丙-2-氧基)羰基胺基)-2-氟丙酸
Figure 02_image181
將THF (10 mL)中的(2S)-2-氯羰氧基丙酸苯甲酯(800 mg，3.30 mmol)之溶液逐滴添加至水(10 mL)中的3-胺基-2-氟-丙酸(214 mg，2.00 mmol)及碳酸二鈉(424 mg，4.00 mmol，167.59 uL)之冰冷卻溶液中，將混合物在0℃下攪拌10分鐘，LCMS顯示起始材料幾乎完全轉化。將混合物以水(30 mL)中的NaHSO4 (1 g)之溶液淬滅，在0℃下攪拌5分鐘且以EtOAc (50 mL x 2)萃取，將合併的萃取物經無水Na2SO4乾燥，濃縮且以管柱層析術純化(矽膠，EtOAc/石油醚= 0：1至2：1)，以供給成為無色油的純產物(281 mg，產率45%)。 LC-MS：(ESI) m/z：336.0 [M+Na] +1.3  2-(3-(4-(4-(3-(2,4-二羥基-5-異丙基苯基)-5-(乙基胺甲醯基)-4H-1,2,4-***-4-基)苯甲基)哌𠯤-1-基)-2-氟-3-側氧基丙基胺甲醯氧基)丙酸(2S)-苯甲酯
Figure 02_image183
將DIEA (135.89 mg，1.05 mmol)、5-(2,4-二羥基-5-異丙基-苯基)-N-乙基-4-[4-(哌𠯤-1-基甲基)苯基]-1,2,4-***-3-甲醯胺(114.18 mg，245.79 umol)、酚(66.09 mg，702.25 umol，61.77 uL)添加至DMF (4 mL)中的3-[[(1S)-2-苯甲氧基-1-甲基-2-側氧基-乙氧基]羰基胺基]-2-氟-丙酸(220 mg，702.25 umol)之溶液中，且接著將六氟磷酸三吡咯啶-1-基(***并[4,5-b]吡啶-3-氧基)鏻(256.30 mg，491.58 umol)添加至混合物中且在25℃下攪拌1 hr。將反應混合物以combi-flash純化以得到成為白色固體的產物(160 mg，產率30%)。 LC-MS：(ESI) m/z：782.2 [M+Na] +1.4  (2S)-2-(3-(4-(4-(3-(2,4-二羥基-5-異丙基苯基)-5-(乙基胺甲醯基)-4H-1,2,4-***-4-基)苯甲基)哌𠯤-1-基)-2-氟-3-側氧基丙基胺甲醯氧基)丙酸
Figure 02_image185
將鈀/碳10% (20 mg，157.93 umol)添加至甲醇(15 mL)中的(2S)-2-[[3-[4-[[4-[3-(2,4-二羥基-5-異丙基-苯基)-5-(乙基胺甲醯基)-1,2,4-***-4-基]苯基]甲基]哌𠯤-1-基]-2-氟-3-側氧基-丙基]胺甲醯氧基]丙酸苯甲酯(120 mg，157.93 umol)之溶液中。將混合物在25℃及在H2氛圍下攪拌1 hr。在移除觸媒後，將殘留物在真空下濃縮以得到成為白色固體的產物(100 mg，產率95%)。 LC-MS：(ESI) m/z：670.2 [M+H] +1.5  3-(4-(4-(3-(2,4-二羥基-5-異丙基苯基)-5-(乙基胺甲醯基)-4H-1,2,4-***-4-基)苯甲基)哌𠯤-1-基)-2-氟-3-側氧基丙基胺甲酸(S)-1-(4-(3-甲基-8-(6-甲基吡啶-3-基)-2-側氧基-2,3-二氫咪唑并[4,5-c][1,5]㖠啶-1-基)哌啶-1-基)-1-側氧基丙-2-酯
Figure 02_image187
將酚(28.11 mg，298.64 umol，26.27 uL)、N-乙基-N-異丙基-丙-2-胺(38.60 mg，298.64 umol，52.02 uL)添加至N,N-二甲基甲醯胺(1 mL)及三氯甲烷(25 mL)中的(2S)-2-[[3-[4-[[4-[3-(2,4-二羥基-5-異丙基-苯基)-5-(乙基胺甲醯基)-1,2,4-***-4-基]苯基]甲基]哌𠯤-1-基]-2-氟-3-側氧基-丙基]胺甲醯氧基]丙酸(100 mg，149.32 umol)及3-甲基-8-(6-甲基-3-吡啶基)-1-(4-哌啶基)咪唑并[4,5-c][1,5]㖠啶-2-酮(67.09 mg，179.19 umol)之溶液中，且將反應混合物在25℃下攪拌10 min，接著將六氟磷酸三吡咯啶-1-基(***并[4,5-b]吡啶-3-氧基)鏻(93.42 mg，179.19 umol)添加至混合物中且在26℃下再攪拌2 hr。將反應混合物以Prep-HPLC純化(CF3COOH)以給出成為灰白色固體的純產物(41 mg，產率26%)。 C19 LC-MS：(ESI) m/z：1026.2 [M+H]+ 1H NMR (MeOD, 400 MHz)：δ 9.40-9.28 (m, 1 H), 8.99-8.83 (m, 2 H), 8.54 (d, J = 7.6 Hz, 1 H), 8.40-8.29 (m, 1 H), 7.93-7.80 (m, 1 H), 7.55 (d, J = 6.8 Hz, 2 H), 7.43-7.34 (m, 2 H), 6.64 (d, J = 6.8 Hz, 1 H), 6.44-6.20 (m, 1 H), 6.15 (s, 1 H), 5.53-5.18 (m, 2 H), 4.75-4.60 (m, 3 H), 4.43-4.30 (s, 2 H), 4.28-4.09 (m, 1 H), 4.06-3.70 (m, 3 H), 3.65-3.24 (m, 11 H), 2.98-2.58 (m, 9 H), 2.09-1.90 (m, 2 H), 1.46-1.31 (m, 4 H), 1.10-0.99 (m, 3 H), 0.86-0.73 (m, 7 H)。
一系列的化合物可以方法A純化： C17 LC-MS：(ESI) m/z：359.5[1/3M+H]，538.7[1/2M+H]，1077.3 [M+H]+ 1H NMR (MeOD, 500 MHz)：δ 9.32 (s, 1 H), 8.93 (d, J= 5.0 Hz, 1 H), 8.87-8.75 (m, 1 H), 8.51 (d, J= 9.0 Hz, 1 H), 8.29 (d, J= 9.0 Hz, 1 H), 7.83-7.72 (m, 1 H), 7.52 (d, J= 8.0 Hz, 1 H), 7.45-7.36 (m, 2 H), 6.64 (s, 1 H), 6.17 (s, 1 H), 5.50-5.34 (m, 1 H), 4.72-4.63 (m, 2 H), 4.35-4.27 (m, 2 H), 4.21-4.10 (m, 1 H), 3.90-3.57 (m, 2 H), 3.51 (d, J= 19.0 Hz, 3 H), 3.39-3.23 (m, 4 H), 3.15-3.01 (m, 2 H), 2.98-2.52 (m, 13 H), 2.08-1.90 (m, 2 H), 1.43-1.14 (m, 6 H), 1.11-1.01 (m, 3 H), 0.93 (d, J= 7.0 Hz, 6 H)。 C18 LC-MS：(ESI) m/z：341.5[1/3M+H]，511.7[1/2M+H]，1023.3 [M+H]+ 1H NMR (MeOD, 400 MHz)：δ 9.32 (s, 1 H), 9.07-8.89 (m, 2 H), 8.58 (d, J= 9.6 Hz, 1 H), 8.44 (d, J= 9.2 Hz, 1 H), 8.03-7.93 (m, 1 H), 7.55 (d, J= 8.0 Hz, 1 H), 7.48-7.36 (m, 2 H), 6.65 (d, J= 8.4 Hz, 1 H), 6.48-6.23 (m, 1 H), 6.18 (s, 1 H), 5.45-5.18 (m, 1 H), 4.75-4.64 (m, 2 H), 4.43-4.30 (m, 2 H), 4.28-4.14 (m, 2 H), 4.12-3.62 (m, 3 H), 3.59-3.24 (m, 9 H), 2.98-2.33 (m, 11 H), 2.13-1.95 (m, 2 H), 1.46-1.28 (m, 3 H), 1.24-1.11 (m, 4 H), 1.10-0.99 (m, 3 H), 0.81 (d, J= 6.8 Hz, 6 H)。 C33 LC-MS：(ESI) m/z：362.2[1/3M+H]，542.8[1/2M+H]，1084.3 [M+H]+ 1H NMR (MeOD, 400 MHz)：δ 9.42-9.30 (m, 1 H), 9.11-8.94 (m, 2 H), 8.58 (d, J= 9.2 Hz, 1 H), 8.41 (d, J= 8.0 Hz, 1 H), 8.05-7.89 (m, 1 H), 7.45 (d, J= 8.0 Hz, 2 H), 7.40 (d, J= 8.0 Hz, 2 H), 7.31-7.13 (m, 5 H), 6.48-6.23 (m, 1 H), 6.18 (s, 1 H), 5.45-5.18 (m, 1 H), 4.75-4.64 (m, 2 H), 4.43-4.30 (m, 2 H), 4.28-4.14 (m, 2 H), 4.12-3.62 (m, 3 H), 3.59-3.24 (m, 9 H), 2.98-2.33 (m, 11 H), 2.13-1.95 (m, 2 H), 1.46-1.28 (m, 3 H), 1.24-1.11 (m, 4 H), 1.10-0.99 (m, 3 H), 0.81 (d, J= 6.8 Hz, 6 H)。 C20 LC-MS：(ESI) m/z：336.9[1/3M+H]，504.8[1/2M+H]，1008.2[M+H]+ 1H NMR (MeOD, 500 MHz)：δ 9.36-9.28 (m, 1 H), 8.92 (d, J= 10.0 Hz, 1 H), 8.88-8.80 (m, 1 H), 8.53 (d, J= 9.0 Hz, 1 H), 8.37-8.28 (m, 1 H), 7.87-7.74 (m, 1 H), 7.53 (d, J= 8.0 Hz, 2 H), 7.43-7.34 (m, 2 H), 6.64 (d, J= 4.0 Hz, 1 H), 6.14 (s, 1 H), 5.35 (dd, J= 55.0, 6.5 Hz, 1 H), 4.85-4.78 (m, 2 H), 4.75-4.63 (m, 2 H), 4.42-4.31 (m, 2 H), 4.23-4.14 (m, 1 H), 3.50 (d, J= 15.0 Hz, 3 H), 3.42-3.24 (m, 6 H), 3.20-3.12 (m, 3 H), 2.93-2.75 (m, 2 H), 2.73-2.46 (m, 5 H), 2.08-1.92 (m, 1 H),1.40-1.31 (m, 2 H), 1.10-0.98 (m, 2 H), 0.81 (d, J= 7.0 Hz, 6 H)。 C21 LC-MS：(ESI) m/z：352.9[1/3M+H]，528.8[1/2M+H]，1058.3 [M+H]+ 1H NMR (MeOD, 400 MHz)：δ 9.43-9.28 (m, 1 H), 8.99-8.80 (m, 2 H), 8.53 (d, J= 8.8 Hz, 1 H), 8.33 (d, J= 8.4 Hz, 1 H), 7.88-7.75 (m, 1 H), 7.58 (d, J= 3.6 Hz, 2 H), 7.46-7.27 (m, 5 H), 7.25-7.15 (m, 1 H), 6.73-6.57 (m, 1 H), 6.47-6.23 (m, 1 H), 6.11 (s, 1 H), 5.55-5.35 (m, 1 H), 4.93-4.85 (m, 3 H), 4.75-4.65 (m, 1 H), 4.47-4.15 (m, 3 H), 3.83-3.25 (m, 11 H), 3.20-3.09 (m, 3 H), 2.96-2.41 (m, 8 H), 2.12-1.90 (m, 2 H), 1.54-1.36 (m, 3 H),1.25-1.12 (m, 1 H), 1.10-0.98 (m, 3 H), 0.76 (d, J= 6.4 Hz, 6 H)。 C22 LC-MS：(ESI) m/z：346.2[1/3M+H]，518.7[1/2M+H]，1037.3 [M+H]+ 1H NMR (MeOD, 500 MHz)：δ 9.40-9.21 (m, 1 H), 8.90 (d, J= 14.0 Hz, 1 H), 8.87-8.73 (m, 1 H), 8.51 (d, J= 9.0 Hz, 1 H), 8.36-8.26 (m, 1 H), 7.87-7.70 (m, 1 H), 7.54 (d, J= 7.5 Hz, 1 H), 7.39 (d, J= 8.0 Hz, 1 H), 6.63 (s, 1 H), 6.15 (s, 1 H), 5.45-5.25 (m, 1 H), 4.73-4.64 (m, 2 H), 4.35 (d, J= 6.0 Hz, 2 H), 4.23-4.11 (m, 1 H), 3.49 (d, J= 33.5 Hz, 3 H), 3.38-3.22 (m, 6 H), 3.17-2.98 (m, 5 H), 2.96-2.41 (m, 8 H), 2.09-1.90 (m, 2 H), 1.34 (d, J= 6.5 Hz, 3 H),1.29-1.11 (m, 7 H),1.11-0.99 (m, 3 H), 1.10-0.98 (m, 3 H), 0.78 (d, J= 6.5 Hz, 6 H)。 C23 LC-MS：(ESI) m/z：362.5[1/3M+H]，543.3[1/2M+H]，1086.3 [M+H]+ 1H NMR (MeOD, 500 MHz)：δ 9.35-9.20 (m, 1 H), 8.93-8.80 (m, 1 H), 8.74 (d, J= 8.0 Hz, 1 H), 8.53-8.43 (m, 2 H), 8.28 (d, J= 8.5 Hz, 1 H), 7.91-7.79 (m, 1 H), 7.76-7.69 (m, 1 H), 7.64-7.48 (m, 3 H), 7.43-7.28 (m, 3 H), 6.40 (d, J= 9.0 Hz, 1 H), 6.15 (d, J= 8.5 Hz, 1 H), 5.49-5.27 (m, 1 H), 5.21-5.12 (m, 1 H), 4.72-4.62 (m, 2 H), 4.47-4.15 (m, 2 H), 4.21-4.01 (m, 1 H), 3.56-3.43 (m, 3 H), 3.37-3.24 (m, 2 H), 3.20-3.09 (m, 8 H), 2.96-2.41 (m, 10 H), 2.06-1.90 (m, 2 H), 1.44-1.16 (m, 4 H), 1.11-0.99 (m, 3 H), 0.87-0.72 (m, 7 H)。 C25 LC-MS：(ESI) m/z：518.8[1/2M+H]，1057.2 [M+Na]+ 1H NMR (MeOD, 400 MHz)：δ 9.46 (d, J= 6.4 Hz, 1 H), 9.06 (d, J= 11.2 Hz, 1 H), 9.01 (d, J= 8.8 Hz, 1 H), 8.66 (d, J= 9.2 Hz, 1 H), 8.47 (d, J= 8.4 Hz, 1 H), 7.96 (d, J= 8.0 Hz, 1 H), 7.69-7.61 (m, 2 H), 7.50 (d, J= 8.4 Hz, 1 H), 7.42 (d, J= 8.0 Hz, 1 H), 6.84-6.70 (m, 1 H), 6.54-6.31 (m, 1 H), 6.25 (s, 1 H), 5.29-5.58 (m, 1 H), 4.79 (t, J= 14.0 Hz, 1 H), 4.48 (s, 2 H), 4.38-4.24 (m, 1 H), 4.17-3.73 (m, 2 H), 3.64 (d, J= 5.6 Hz, 3 H), 3.57-3.34 (m, 4 H), 3.32-3.09 (m, 4 H), 3.08-2.57 (m, 10 H), 2.22-2.03 (m, 2 H), 1.55-1.27 (m, 9 H), 1.20-1.04 (m, 3 H), 1.00-0.87 (m, 6 H)。 C26 LC-MS：(ESI) m/z：349.5[1/3M+H]，523.7[1/2M+H]，1068.3 [M+Na]+ 1H NMR (MeOD, 400 MHz)：δ 9.40-9.23 (m, 1 H), 8.98-8.85 (m, 2 H), 8.53 (d, J= 8.8 Hz, 1 H), 8.32 (d, J= 8.8 Hz, 1 H), 7.92-7.79 (m, 2 H), 6.17 (s, 1 H), 5.60-5.37 (m, 1 H), 4.77-4.66 (m, 3 H), 4.37 (s, 2 H), 4.27-4.13 (m, 1 H), 3.54 (s, 3 H), 3.24-3.22 (m, 5 H), 3.18-2.96 (m, 2 H), 2.95-2.78 (m, 3 H), 2.70 (d, J= 16.4 Hz, 4 H), 2.11-1.94 (m, 2 H), 1.48-1.33 (m, 3 H), 1.08 (t, J= 7.2 Hz, 3 H), 0.88-0.73 (m, 6 H)。 C27 LC-MS：(ESI) m/z：350.3[1/3M+H524.7[1/2M+H]，1049.3 [M+H]+ 1H NMR (MeOD, 500 MHz)：δ 9.32 (s, 1 H), 8.98-8.76 (m, 2 H), 8.53 (d, J= 8.0 Hz, 1 H), 8.33 (d, J= 6.5 Hz, 1 H), 7.94-7.69 (m, 1 H), 7.53 (d, J= 8.0 Hz, 2 H), 7.49-7.34 (m, 2 H), 6.65 (s, 1 H), 6.44-6.20 (m, 1 H), 6.16 (s, 1 H), 5.63-5.23 (m, 1 H), 4.72-4.62 (m, 2 H), 4.42-4.30 (m, 2 H), 4.27-4.06 (m, 2 H), 4.05-3.79 (m, 3 H), 3.61-3.40 (m, 3 H), 3.39-3.24 (m, 3 H), 3.17-3.03 (m, 3 H), 3.03-2.87 (m, 3 H), 2.84-2.61 (m, 8 H), 2.13-1.93 (m, 2 H), 1.90-1.80 (m, 1 H), 1.74-1.53 (m, 2 H), 1.52-1.28 (m, 4 H), 1.13-0.97 (m, 3 H), 0.83 (d, J= 7.0 Hz, 6 H)。 如下之方法B： 合成路徑：
Figure 02_image189
2.1 2(4(羥基甲基)苯基胺甲醯氧基)丙酸(S)-苯甲酯
Figure 02_image191
將DIPEA (516 mg，4 mmole)添加至THF (3ml)中的(4-胺基苯基)甲醇(246 mg，2 mmole)之溶液中，且接著將2-(氯羰氧基)丙酸(S)-苯甲酯(484 mg，2 mmole)添加至0℃下的混合物中。在添加後，將混合物在室溫下攪拌10 min。LCMS顯示起始材料幾乎完全轉化。將混合物以水(30 mL)中的NaHSO4 (1 g)之溶液淬滅，在0℃下攪拌5分鐘且以EtOAc (50 mL x 2)萃取，將合併的萃取物經無水Na2SO4乾燥，濃縮且以管柱層析術純化(矽膠，EtOAc/石油醚= 0：1至1：1)，以供給成為無色油的純產物(430 mg，產率65%)。 LC-MS：(ESI) m/z：330.1 [M+H]+ 2.2 2-(4(((4-硝基苯氧基)羰氧基)甲基)苯基胺甲醯氧基)丙酸(S)苯甲酯
Figure 02_image193
將DIEA (156.67 mg，1.21 mmol)、碳酸雙(4-硝苯基)酯(277.11 mg，910.90 umol)添加至THF (5 mL)中的2-[[4-(羥基甲基)苯基]胺甲醯氧基]丙酸苯甲酯(200 mg，607.26 umol)之溶液中。將混合物在25℃下攪拌2 hr。在移除溶劑後，將殘餘物溶解在EA (30ml)中且以鹽水(10ml*2)清洗，且接著經Na2SO4乾燥，在減壓下濃縮以得到粗製產物(140 mg)，其無需進一步純化而用於下一步驟中。 LC-MS：(ESI) m/z：495.1 [M+H]+ 2.3 4-(4-(3-(2,4-二羥基-5-異丙基苯基)-5-(乙基胺甲醯基)-4H-1,2,4-***-4-基)苯甲基)哌𠯤-1-甲酸4-(((S)-1-(苯甲氧基)-1-側氧基丙-2-氧基)羰基胺基)苯甲酯
Figure 02_image195
將5-(2,4-二羥基-5-異丙基-苯基)-N-乙基-4-[4-(哌𠯤-1-基甲基)苯基]-1,2,4-***-3-甲醯胺(93.95 mg，202.25 umol)、DIEA (52.18 mg，404.49 umol)添加至DMF (4 mL)中的(2S)2-[[4-[(4-硝基苯氧基)羰氧基甲基]苯基]胺甲醯氧基]丙酸苯甲酯(100 mg，202.25 umol)之溶液中。將混合物在25℃下攪拌2 hr。將反應混合物以combi-flash純化以得到產物(130 mg，產率74.8%)。 LC-MS：(ESI) m/z：820.3 [M+H]+ 2.4 (2S)-2-(4-((4-(4-(3-(2,4-二羥基-5-異丙基苯基)-5-(乙基胺甲醯基)-4H-1,2,4-***-4-基)苯甲基)哌𠯤-1-羰氧基)甲基)苯基胺甲醯氧基)丙酸
Figure 02_image197
將鈀/碳，10 wt.% 50%之水(20 mg，134.16 umol)添加至甲醇(10 mL)中的4-[[4-[3-(2,4-二羥基-5-異丙基-苯基)-5-(乙基胺甲醯基)-1,2,4-***-4-基]苯基]甲基]哌𠯤-1-甲酸[4-[[(1S)-2-苯甲氧基-1-甲基-2-側氧基-乙氧基]羰基胺基]苯基]甲酯(110 mg，134.16 umol)之溶液中。將混合物在25℃及H2氛圍下攪拌1 hr。在移除觸媒後，將殘餘物在減壓下濃縮以得到成為白色固體的產物(90 mg，產率91.2%)。 LC-MS：(ESI) m/z：730.3 [M+H]+ 2.5 4-(4-(3-(2,4-二羥基-5-異丙基苯基)-5-(乙基胺甲醯基)-4H-1,2,4-***-4-基)苯甲基)哌𠯤-1-甲酸4-(((S)-1-(4-(3-甲基-8-(6-甲基吡啶-3-基)-2-側氧基-2,3-二氫咪唑并[4,5-c][1,5]㖠啶-1-基)哌啶-1-基)-1-側氧基丙-2-氧基)羰基胺基)苯甲酯
Figure 02_image199
將N-乙基-N-異丙基-丙-2-胺(31.92 mg，246.99 umol，43.02 uL)、酚(23.24 mg，246.99 umol，21.72 uL)添加至N,N-二甲基甲醯胺，ACS，99.8+% (1 mL)及三氯甲烷(25 mL)中的(2S)-2-(4-((4-(4-(3-(2,4-二羥基-5-異丙基苯基)-5-(乙基胺甲醯基)-4H-1,2,4-***-4-基)苯甲基)哌𠯤-1-羰氧基)甲基)苯基胺甲醯氧基)丙酸(90 mg，123.50 umol)及3-甲基-8-(6-甲基-3-吡啶基)-1-(4-哌啶基)咪唑并[4,5-c][1,5]㖠啶-2-酮(55.49 mg，148.20 umol)之溶液中，且將反應混合物在25℃下攪拌10 min，接著將六氟磷酸苯并***-1-氧基(三吡咯啶-1-基)鏻(77.12 mg，148.20 umol)添加至混合物中且在25℃下再攪拌2 hr。反應混合物以Prep-HPLC純化(CF3COOH)，以給出成為白色固體的純產物(49.7 mg，產率37%)。 C24 LC-MS：(ESI) m/z：1086.3 [M+H]+ 1H NMR (MeOD, 400 MHz)：δ 9.41-9.20 (m, 1 H), 9.03-8.90 (m, 2 H), 8.56 (d, J= 8.8 Hz, 1 H), 8.36 (d, J= 8.8 Hz, 1 H), 7.97-7.79 (m, 1 H), 7.52 (d, J= 8.4 Hz, 2 H), 7.39 (d, J= 8.0 Hz, 2 H), 7.33-7.13 (m, 4 H), 6.65 (d, J= 2.0 Hz, 1 H), 6.16 (d, J= 3.2 Hz, 1 H), 5.57-5.38 (m, 1 H), 4.99 (d, J= 21.5 Hz, 2 H), 4.91-4.85 (m, 2 H), 4.78-4.62 (m, 3 H), 4.36-4.19 (m, 3 H), 3.41 (s, 3 H), 3.46-3.27 (m, 2 H), 3.26-3.21 (m, 3 H), 3.20-3.09 (m, 3 H), 2.96-2.79 (m, 3 H), 2.78-2.55 (m, 5 H), 2.13-1.78 (m, 2 H), 1.49-1.35 (m, 3 H), 1.11-0.99 (q, J= 7.2 Hz, 3 H), 0.87-0.72 (m, 6 H)。 如下之方法C： 合成路徑：
Figure 02_image201
3.1 2-((4-硝基苯氧基)羰氧基)丙酸(S)-苯甲酯
Figure 02_image203
將DIEA (7.30 g，56.60 mmol)添加至DCM (50 mL)中的(2S)-2-羥基丙酸苯甲酯(3.4 g，18.87 mmol)之溶液中，且將5 ml DCM中的氯甲酸(4-硝苯基)酯(5.70 g，28.30 mmol)之溶液添加至0℃的混合物中。在添加後，將混合物在25℃下再攪拌16 hr。將此粗製產物以combi-flash純化(PE/EA=9/1)以得到成為無色油的產物(4.2 g，產率64.47%)。 LC-MS：(ESI) m/z：368.0 [M+Na]+ 3.2 4-(4-(3-(2,4-二羥基-5-異丙基苯基)-5-(乙基胺甲醯基)-4H-1,2,4-***-4-基)苯甲基)哌𠯤-1-甲酸(S)-1-(苯甲氧基)-1-側氧基丙-2-酯
Figure 02_image205
將DIEA (94.41 mg，731.88 umol)、(2S)-2-(4-硝基苯氧基)羰氧基丙酸苯甲酯(139.00 mg，402.53 umol)添加至DMF (3 mL)中的5-(2,4-二羥基-5-異丙基-苯基)-N-乙基-4-[4-(哌𠯤-1-基甲基)苯基]-1,2,4-***-3-甲醯胺(170 mg，365.94 umol)之溶液中。將混合物在25℃下攪拌2 hr。將粗製產物以combi-flash純化以得到成為白色固體的產物(160 mg，產率65.19%)。 LC-MS：(ESI) m/z：671.2 [M+H]+ 3.3 (2S)-2-(4-(4-(3-(2,4-二羥基-5-異丙基苯基)-5-(乙基胺甲醯基)-4H-1,2,4-***-4-基)苯甲基)哌𠯤-1-羰氧基)丙酸
Figure 02_image207
將鈀(19.07 mg，179.17 umol)在N2保護下添加至甲醇(10 mL)中的4-[[4-[3-(2,4-二羥基-5-異丙基-苯基)-5-(乙基胺甲醯基)-1,2,4-***-4-基]苯基]甲基]哌啶-1-甲酸[(1S)-2-苯甲氧基-1-甲基-2-側氧基-乙基]酯(120.00 mg，179.17 umol)之溶液中。將混合物在25℃及H2氛圍下攪拌2 hr。在移除固體後，將殘餘物濃縮以得到成為白色固體的產物(75 mg，產率72.1%)。 LC-MS：(ESI) m/z：580.1 [M+H]+ 3.4 4-(4-(3-(2,4-二羥基-5-異丙基苯基)-5-(乙基胺甲醯基)-4H-1,2,4-***-4-基)苯甲基)哌𠯤-1-甲酸(S)-1-(4-(3-甲基-8-(6-甲基吡啶-3-基)-2-側氧基-2,3-二氫咪唑并[4,5-c][1,5]㖠啶-1-基)哌啶-1-基)-1-側氧基丙-2-酯
Figure 02_image209
將酚(19.05 mg，202.38 umol，17.80 uL)、N-乙基-N-異丙基-丙-2-胺(26.16 mg，202.38 umol，35.25 uL)添加至N,N-二甲基甲醯胺(1 mL)及三氯甲烷(25 mL)中的(2S)-2-[3-[4-[[4-[3-(2,4-二羥基-5-異丙基-苯基)-5-(乙基胺甲醯基)-1,2,4-***-4-基]苯基]甲基]哌𠯤-1-羰基]哌啶-1-羰基]氧基丙酸(70 mg，101.19 umol)及3-甲基-8-(6-甲基-3-吡啶基)-1-(4-哌啶基)咪唑并[4,5-c][1,5]㖠啶-2-酮(45.47 mg，121.43 umol)之溶液中，且將反應混合物在25℃下攪拌10 min，接著將六氟磷酸三吡咯啶-1-基(***并[4,5-b]吡啶-3-氧基)鏻(63.31 mg，121.43 umol)添加至混合物中且在25℃下再攪拌2 hr。將反應混合物以Prep-HPLC純化(CF3COOH)以給出成為白色固體的純產物(70.5 mg，64.9%)。 C28 LC-MS：(ESI) m/z：1049.3 [M+H]+ 1H NMR (MeOD, 400 MHz)：δ 10.27-9.95 (m, 1 H), 9.73 (s, 1 H), 9.35 (s, 1 H), 9.09-8.98 (m, 2 H), 8.50 (d, J= 8.4 Hz, 2 H), 8.36 (d, J= 9.2 Hz, 1 H), 7.68-7.37 (m, 4 H), 6.70 (s, 1 H), 6.30 (s, 1 H), 5.57-5.34 (m, 1 H), 4.73-4.58 (m, 2 H), 4.54-4.31 (m, 3 H), 4.30-4.08 (m, 7 H), 3.63-3.45 (m, 4 H), 3.41-3.26 (m, 2 H), 3.25-3.13 (m, 5 H), 3.12-2.88 (m, 2 H), 2.80-2.58 (m, 6 H), 2.08-1.96 (m, 2 H), 1.56 (d, J= 5.6 Hz, 2 H), 1.23 (s, 1 H), 0.97-0.80 (m, 6 H)。
C29係以相同的方法合成。 C29 LC-MS：(ESI) m/z：313.2[1/3M+H]，469.2[1/2M+H]，938.1 [M+H]+ 1H NMR (MeOD, 400 MHz)：δ 9.28 (s, 1 H), 8.88 (s, 1 H), 8.80-8.69 (m, 1 H), 8.54-8.43 (m, 1 H), 8.33-8.20 (m, 1 H), 7.78-7.67 (m, 4 H), 6.53 (s, 1 H), 6.24 (s, 1 H), 5.50-5.28 (m, 1 H), 4.28-3.89 (m, 3 H), 3.72-3.59 (m, 4 H), 3.17-2.99 (m, 12 H), 2.93-2.62 (m, 5 H), 2.63-2.47 (m, 1 H), 2.06-1.86 (m, 2 H), 1.67-1.49 (m, 2 H), 1.21-0.93 (m, 5 H), 0.75 (s, 6 H)。 如下之方法D： 合成路徑：
Figure 02_image211
4.1 (S)-5-(1-(苯甲氧基)-1-側氧基丙-2-氧基)-5-側氧基戊酸
Figure 02_image213
將四氫哌喃-2,6-二酮(227.94 mg，2.00 mmol，161.66 uL)、DIEA (386.57 mg，3.00 mmol)添加至THF (5 mL)中的(2S)-2-羥基丙酸苯甲酯(180 mg，998.89 umol)之溶液中。將混合物在25℃下攪拌16 hr。在移除溶劑後，將殘餘物以combi-flash純化以得到成為油的產物(100 mg，產率34%)。 LC-MS：(ESI) m/z：317.2 [M+Na]+ 4.2 5-(4-(4-(3-(2,4-二羥基-5-異丙基苯基)-5-(乙基胺甲醯基)-4H-1,2,4-***-4-基)苯甲基)哌𠯤-1-基)-5-側氧基戊酸(S)-1-(苯甲氧基)-1-側氧基丙-2-酯
Figure 02_image215
將六氟磷酸[二甲基胺基(***并[4,5-b]吡啶-3-氧基)亞甲基]-二甲基銨(160.85 mg，423.04 umol)、DIEA (109.14 mg，846.08 umol)添加至DMF (3 mL)中的5-[(1S)-2-苯甲氧基-1-甲基-2-側氧基-乙氧基]-5-側氧基-戊酸(83 mg，282.03 umol)之溶液中。將混合物在25℃下攪拌10 min，添加5-(2,4-二羥基-5-異丙基-苯基)-N-乙基-4-[4-(哌𠯤-1-基甲基)苯基]-1,2,4-***-3-甲醯胺(131.02 mg，282.03 umol)且在25℃下再攪拌2 hr。將粗製化合物以combi-flash純化以得到成為白色固體的產物(146 mg，產率69.88%)。 LC-MS：(ESI) m/z：741.2 [M+H]+，763.2 [M+Na]+ 4.3 (2S)-2-(5-(4-(4-(3-(2,4-二羥基-5-異丙基苯基)-5-(乙基胺甲醯基)-4H-1,2,4-***-4-基)苯甲基)哌𠯤-1-基)-5-側氧基戊醯氧基)丙酸
Figure 02_image217
將鈀/碳10% (30 mg，197.07 umol)添加至甲醇(10 mL)中的5-[4-[[4-[3-(2,4-二羥基-5-異丙基-苯基)-5-(乙基胺甲醯基)-1,2,4-***-4-基]苯基]甲基]哌𠯤-1-基]-5-側氧基-戊酸[(1S)-2-苯甲氧基-1-甲基-2-側氧基-乙基]酯(146 mg，197.07 umol)之溶液中，且在25℃及H2氛圍下攪拌1 hr。在移除固體後，將殘餘物在減壓下濃縮以給出成為白色固體的產物(110 mg，產率85.78%)。 LC-MS：(ESI) m/z：651.2 [M+H]+ 4.4 5-(4-(4-(3-(2,4-二羥基-5-異丙基苯基)-5-(乙基胺甲醯基)-4H-1,2,4-***-4-基)苯甲基)哌𠯤-1-基)-5-側氧基戊酸(S)-1-(4-(3-甲基-8-(6-甲基吡啶-3-基)-2-側氧基-2,3-二氫咪唑并[4,5-c][1,5]㖠啶-1-基)哌啶-1-基)-1-側氧基丙-2-酯
Figure 02_image219
將酚(23.14 mg，245.88 umol，21.63 uL)、N-乙基-N-異丙基-丙-2-胺(31.78 mg，245.88 umol，42.83 uL)添加至N,N-二甲基甲醯胺(1 mL)及三氯甲烷(10 mL)中的3-甲基-8-(6-甲基-3-吡啶基)-1-(4-哌啶基)咪唑并[4,5-c][1,5]㖠啶-2-酮(55.24 mg，147.53 umol)及(2S)-2-[5-[4-[[4-[3-(2,4-二羥基-5-異丙基-苯基)-5-(乙基胺甲醯基)-1,2,4-***-4-基]苯基]甲基]哌𠯤-1-基]-5-側氧基-戊醯基]氧基丙酸(80 mg，122.94 umol)之溶液中，且將反應混合物在25℃下攪拌10 min，接著將六氟磷酸苯并***-1-氧基(三吡咯啶-1-基)鏻(76.77 mg，147.53 umol)添加至混合物中且在25℃下再攪拌2 hr。將反應混合物以Prep-HPLC純化(CF3COOH)以給出成為白色固體的純產物(30 mg，產率23.0%)。 C30 LC-MS：(ESI) m/z：1008.2 [M+H]+，1030.3 [M+Na]+ 1H NMR (MeOD, 400 MHz)：δ 9.32 (s, 1 H), 8.93 (d, J= 9.2 Hz, 1 H), 8.86 (t, J= 6.8 Hz, 1 H), 8.53 (d, J= 8.8 Hz, 1 H), 8.37-8.29 (m, 1 H), 7.83 (d, J= 9.2 Hz, 1 H), 7.53 (d, J= 6.8 Hz, 2 H), 7.37 (t, J= 8.0 Hz, 2 H), 6.62 (d, J= 6.4 Hz, 1 H), 6.15 (s, 1 H), 5.45 (dq, J= 32.8 Hz, 6.4 Hz, 1 H), 4.73-4.62 (m, 2 H), 4.35 (d, J= 6.4 Hz, 2 H), 4.35 (d, J= 6.4 Hz, 2 H), 4.16 (d, J= 14.4 Hz, 1 H), 3.51 (d, J= 12.4 Hz, 3 H), 3.40-3.24 (m, 4 H), 3.19-3.05 (m, 3 H), 2.95-2.76 (m, 3 H), 2.56 (s, 4 H), 2.53-2.30 (m, 4 H), 2.11-1.73 (m, 4 H), 1.36 (d, J= 6.4 Hz, 3 H), 1.10-0.97 (m, 3 H), 0.88-0.69 (m, 6 H)。 如下之方法E： 合成路徑：
Figure 02_image221
5.1 5-(4-(4-(3-(2,4-二羥基-5-異丙基苯基)-5-(乙基胺甲醯基)-4H-1,2,4-***-4-基)苯甲基)哌𠯤-1-基)-2-甲基-5-側氧基戊酸
Figure 02_image223
將5-(2,4-二羥基-5-異丙基-苯基)-N-乙基-4-[4-(哌𠯤-1-基甲基)苯基]-1,2,4-***-3-甲醯胺(232.06 mg，499.52 umol)、DIEA (999.03 umol)及六氟磷酸[二甲基胺基(***并[4,5-b]吡啶-3-氧基)亞甲基]-二甲基銨(227.92 mg，599.42 umol)添加至DMF (5 mL)中的2-甲基戊二酸(146 mg，999.03 umol)之溶液中。將混合物在25℃下攪拌1 hr。將反應混合物以combi-flash純化以得到成為白色固體的產物(230 mg，產率38.84%)。 LC-MS：(ESI) m/z：593.3 [M+H]+ 5.2 5-(4-(4-(3-(2,4-雙(三級丁基二甲基矽氧基)-5-異丙基苯基)-5-(乙基胺甲醯基)-4H-1,2,4-***-4-基)苯甲基)哌𠯤-1-基)-2-甲基-5-側氧基戊酸
Figure 02_image225
將TBDSCl (112 mg，0.74 mmol)添加至DMF (1 mL)中的5-(4-(4-(3-(2,4-二羥基-5-異丙基苯基)-5-(乙基胺甲醯基)-4H-1,2,4-***-4-基)苯甲基)哌𠯤-1-基)-2-甲基-5-側氧基戊酸(110 mg，0.185 mmol)、咪唑(102 mg，1.49 mmol)與DMAP (10 mg)之混合物中，將混合物在室溫下攪拌隔夜，LCMS顯示起始材料完全轉化。將MeOH (2 mL)添加至混合物中，將混合物在室溫下攪拌15分鐘，以水(20 mL)稀釋且以DCM (10 mL x 2)萃取，將合併的有機物經無水Na 2SO 4乾燥，濃縮且以管柱層析術純化(矽膠，MeOH/DCM = 0：1至1：20)以供給成為黏油的純產物(130 mg，產率85%)。 LC-MS：(ESI) m/z：821.4 [M+H] +5.3 5-(4-(4-(3-(2,4-雙(三級丁基二甲基矽氧基)-5-異丙基苯基)-5-(乙基胺甲醯基)-4H-1,2,4-***-4-基)苯甲基)哌𠯤-1-基)-2-甲基-5側氧基戊酸(S)-1-(苯甲氧基)-1-側氧基丙-2-酯
Figure 02_image227
將DCM (3 mL)中的5-(4-(4-(3-(2,4-雙(三級丁基二甲基矽氧基)-5-異丙基苯基)-5-(乙基胺甲醯基)-4H-1,2,4-***-4-基)苯甲基)哌𠯤-1-基)-2-甲基-5-側氧基戊酸(150 mg，0.183 mmol)、2-羥基丙酸(S)-苯甲酯(66 mg，0.366 mmol)、DCC (206 mg，1.0 mmol)及DMAP (10 mg)之混合物在室溫下攪拌隔夜，LCMS顯示起始材料完全轉化。將混合物過濾，將過濾物以水(20 mL)稀釋且以DCM (10 mL x 2)萃取，將合併的有機物經無水Na 2SO 4乾燥，濃縮且以管柱層析術純化(矽膠，EtOAc/石油醚= 0：1至2：1)，以供給成為黏油的產物(110 mg，產率61%)。 LC-MS：(ESI) m/z：492.4 [1/2M+H] +5.4 (2S)-2-(5-(4-(4-(3-(2,4-雙(三級丁基二甲基矽氧基)-5-異丙基苯基)-5-(乙基胺甲醯基)-4H-1,2,4-***-4-基)苯甲基)哌𠯤-1-基)-2-甲基-5-側氧基戊醯氧基)丙酸
Figure 02_image229
將鈀/碳，10 wt.%，50%之水 (20 mg，111.86 umol)添加至甲醇(10 mL)中的5-[4-[[4-[3-[2,4-雙[[三級丁基(二甲基)矽基]氧基]-5-異丙基-苯基]-5-(乙基胺甲醯基)-1,2,4-***-4-基]苯基]甲基]哌𠯤-1-基]-2-甲基-5-側氧基-戊酸[(1S)-2-苯甲氧基-1-甲基-2-側氧基-乙基]酯(110 mg，111.86 umol)之溶液中。將所得混合物在25℃及H2氛圍下攪拌1 hr。在移除固體後，將殘餘物在減壓下濃縮以得到成為白色固體的產物(80 mg，產率80.06%)。 LC-MS：(ESI) m/z：894.1 [M+H] +5.5 (2S)-2-(5-(4-(4-(3-(2,4-二羥基-5-異丙基苯基)-5-(乙基胺甲醯基)-4H-1,2,4-***-4-基)苯甲基)哌𠯤-1-基)-2-甲基-5-側氧基戊醯氧基)丙酸
Figure 02_image231
將氟化四丁基銨(46.83 mg，179.12 umol，51.86 uL)添加至THF (5 mL)中的(2S)-2-[5-[4-[[4-[3-[2,4-雙[[三級丁基(二甲基)矽基]氧基]-5-異丙基-苯基]-5-(乙基胺甲醯基)-1,2,4-***-4-基]苯基]甲基]哌𠯤-1-基]-2-甲基-5-側氧基-戊醯基]氧基丙酸(80 mg，89.56 umol)之溶液中。將混合物在25℃下攪拌1 hr。移除溶劑以得到粗製產物，其無需進一步純化而用於下一步驟中。 LC-MS：(ESI) m/z：333.2 [1/2M+H] +，665.3 [M+H] +5.6 5-(4-(4-(3-(2,4-二羥基-5-甲基苯基)-5-(乙基胺甲醯基)-4H-1,2,4-***-4-基)苯甲基)哌𠯤-1-基)-2-甲基-5-側氧基戊酸(S)-1-(4-(3-甲基-8-(6-甲基吡啶-3-基)-2-側氧基-2,3-二氫咪唑并[4,5-c][1,5]㖠啶-1-基)哌啶-1-基)-1-側氧基丙-2-酯
Figure 02_image233
將N-乙基-N-異丙基-丙-2-胺(38.60 mg，298.64 umol，52.02 uL)、酚(28.11 mg，298.64 umol，26.27 uL)添加至N,N-二甲基甲醯胺，ACS，99.8+% (1 mL)及三氯甲烷(25 mL)中的(2S)-2-[5-[4-[[4-[3-(2,4-二羥基-5-異丙基-苯基)-5-(乙基胺甲醯基)-1,2,4-***-4-基]苯基]甲基]哌𠯤-1-基]-2-甲基-5-側氧基-戊醯基]氧基丙酸(99.26 mg，149.32 umol)及3-甲基-8-(6-甲基-3-吡啶基)-1-(4-哌啶基)咪唑并[4,5-c][1,5]㖠啶-2-酮(67.09 mg，179.19 umol)之溶液中，且將反應混合物在25℃下攪拌10 min，接著將六氟磷酸苯并***-1-氧基(三吡咯啶-1-基)鏻(93.25 mg，179.19 umol)添加至混合物中且在25℃下再攪拌2 hr。將反應混合物以Prep-HPLC純化(CF3COOH)以給出成為白色固體的純產物(10.5 mg，產率6.8%)。 C31 LC-MS：(ESI) m/z：341.3 [1/3M+H]+，511.2 [1/2M+H]+，1022.3 [M+H]+ 1H NMR (MeOD, 400 MHz)：δ 9.27-9.12 (M, 1 H), 8.78 (d, J= 18.8 Hz, 1 H), 8.47-8.29 (m, 2 H), 8.21-8.08 (m, 1 H), 7.47-7.26 (m, 3 H), 7.22-6.99 (m, 2 H), 6.54-6.40 (m, 1 H), 6.20-6.09 (m, 1 H), 5.56-5.33 (m, 1 H), 4.76-4.57 (m, 1 H), 4.24-4.09 (m, 1 H), 4.24-4.09 (m, 1 H), 3.72-3.27 (m, 10 H), 3.17-3.02 (m, 4 H), 2.93-2.64 (m, 3 H), 2.59-2.89 (m, 11 H), 2.09-1.68 (m, 4 H), 1.44-1.29 (m, 3 H), 1.25-0.91 (m, 8 H), 0.78-0.63 (m, 6 H)。 如下之方法F： 合成路徑：
Figure 02_image235
6.1 3-甲醯基苯甲酸(S)-1-(苯甲氧基)-1-側氧基丙-2-酯
Figure 02_image237
將草醯氯(169.09 mg，1.33 mmol，115.81 uL)及DMF (0.01 mL)添加至乙腈(10 mL)中的3-甲醯基苯甲酸(0.2 g，1.33 mmol)之懸浮液中。將反應在25℃下攪拌23 hr。接著將(2S)-2-羥基丙酸苯甲酯(240.06 mg，1.33 mmol)及N-乙基-N-異丙基-丙-2-胺(430.43 mg，3.33 mmol，580.10 uL)添加至25℃的反應中且將反應混合物在25℃下攪拌3 h。將此粗製產物以combi-flash純化(PE/EA=9/1)以得到成為灰白色固體的產物(120 mg，產率28.84%)。 LC-MS：(ESI) m/z：335.1 [M+Na] +6.2 3-((4-(4-(3-(2,4-二羥基-5-異丙基苯基)-5-(乙基胺甲醯基)-4H-1,2,4-***-4-基)苯甲基)哌𠯤-1-基)甲基)苯甲酸(S)-1-(苯甲氧基)-1-側氧基丙-2-酯
Figure 02_image239
將4A (15 mg，480.28 umol)添加至甲醇(3 mL)中的3-甲醯基苯甲酸[(1S)-2-苯甲氧基-1-甲基-2-側氧基-乙基]酯(150 mg，480.28 umol)及5-(2,4-二羥基-5-異丙基-苯基)-N-乙基-4-[4-(哌𠯤-1-基甲基)苯基]-1,2,4-***-3-甲醯胺(223.12 mg，480.28 umol)之懸浮液中。然後將反應在26℃下攪拌12 hr。接著將氰基硼氫化鈉(30.18 mg，480.28 umol)添加至25℃的反應中且將反應混合物在25℃下攪拌1 h。將反應混合物以添加NH4Cl溶液淬滅且以EA(30ml*3)萃取，經Na2SO4乾燥，在真空下濃縮以得到粗製產物。將粗製產物以combi-flash純化以得到成為白色固體的產物(120 mg，32.8%)。 LC-MS：(ESI) m/z：761.7 [M+H] +6.3 3-((4-(4-(3-(2,4-二羥基-5-異丙基苯基)-5-(乙基胺甲醯基)-4H-1,2,4-***-4-基)苯甲基)哌𠯤-1-基)甲基)苯甲酸(S)-1-(苯甲氧基)-1-側氧基丙-2-酯
Figure 02_image241
將鈀(19.07 mg)在N2保護下添加至甲醇(15 mL)中的3-((4-(4-(3-(2,4-二羥基-5-異丙基苯基)-5-(乙基胺甲醯基)-4H-1,2,4-***-4-基)苯甲基)哌𠯤-1-基)甲基)苯甲酸(S)-1-(苯甲氧基)-1-側氧基丙-2-酯(120 mg，179.17 umol)之溶液中。將混合物在25℃及H2氛圍下攪拌1 hr。在移除固體後，將殘餘物濃縮以得到成為白色固體的產物(95 mg，89%)。 LC-MS：(ESI) m/z：671.7 [M+H] +6.4 3-((4-(4-(3-(2,4-二羥基-5-異丙基苯基)-5-(乙基胺甲醯基)-4H-1,2,4-***-4-基)苯甲基)哌𠯤-1-基)甲基)苯甲酸(S)-1-(4-(3-甲基-8-(6-甲基吡啶-3-基)-2-側氧基-2,3-二氫咪唑并[4,5-c][1,5]㖠啶-1-基)哌啶-1-基)-1-側氧基丙-2-酯
Figure 02_image243
將酚(25.26 mg，268.36 umol，23.60 uL)、N-乙基-N-異丙基-丙-2-胺(34.68 mg，268.36 umol，46.74 uL)添加至N,N-二甲基甲醯胺(1 mL)及三氯甲烷(25 mL)中的(2S)-2-[3-[[4-[[4-[3-(2,4-二羥基-5-異丙基-苯基)-5-(乙基胺甲醯基)-1,2,4-***-4-基]苯基]甲基]哌𠯤-1-基]甲基]苯甲醯基]氧基丙酸(90 mg，134.18 umol)及3-甲基-8-(6-甲基-3-吡啶基)-1-(4-哌啶基)咪唑并[4,5-c][1,5]㖠啶-2-酮(60.29 mg，161.01 umol)之溶液中，且將反應混合物在25℃下攪拌10 min，接著將六氟磷酸三吡咯啶-1-基(***并[4,5-b]吡啶-3-氧基)鏻(83.95 mg，161.01 umol)添加至混合物中且在26℃下再攪拌2 hr。將反應混合物以Prep-HPLC純化(CF3COOH)以給出成為白色固體的純產物(9.3 mg，6.4%)。 C32 LC-MS：(ESI) m/z：1050.2 [M+H]+，514.3 [1/2M+H]+ 1H NMR (MeOD, 400 MHz)：δ 9.37-9.25 (M, 1 H), 8.91 (d, J= 4.4 Hz, 1 H), 8.80 (d, J= 6.4 Hz, 1 H), 8.51 (d, J= 7.2 Hz, 1 H), 8.34-8.26 (m, 1 H), 8.09 (d, J= 9.2 Hz, 1 H), 8.02 (d, J= 5.2 Hz, 1 H), 7.81-7.70 (m, 1 H), 7.63 (d, J= 6.0 Hz, 1 H), 7.54-7.47 (m, 1 H), 7.45 (d, J= 6.8 Hz, 2 H), 7.34-7.22 (m, 3 H), 6.59 (s, 1 H), 6.19 (s, 1 H), 5.81-5.64 (m, 1 H), 5.14-4.88 (m, 1 H), 4.33-4.20 (m, 1 H), 4.11-3.98 (m, 2 H), 3.92 (s, 2 H), 3.54 (s, 3 H), 3.43-3.30 (m, 1 H), 3.11-2.75 (m, 11 H), 2.72-2.52 (m, 5 H), 2.14-1.95 (m, 3 H), 1.59-1.47 (m, 4 H), 1.45-1.35 (m, 1 H), 1.30-1.16 (m, 4 H), 1.07 (t, J= 5.6 Hz, 4 H), 0.78 (d, J= 5.6 Hz, 6 H)。 共軛體C1至C16及C48至C77
共軛體C1至C16、C48至C77之合成方法的非限制性實例包括於下。 C48：
Figure 02_image245
2-(4-(苯甲氧基)-2-氟苯基)乙酸甲酯之合成
Figure 02_image247
將(溴甲基)苯(2.79 g，16.29 mmol)添加至DMF (30 mL)中的2-(2-氟-4-羥基苯基)乙酸甲酯(2 g，10.9 mmol)及K2CO3 (4.5 g，32.6 mmol)之混合物中且在室溫下攪拌16 hr。將水(150 ml)添加溶液中且以EA(80 ml)萃取，將有機相在真空中濃縮且以矽膠純化(EA：PE=1：10)以給出油(2.8 g)。產率：94%。LCMS (m/z)：275.1 M+ H+。
2-(4-(苯甲氧基)-2-氟苯基)乙酸之合成
Figure 02_image249
將LiOH (807 mg，33.69 mmol)添加至MeOH (30 mL)中的2-(4-(苯甲氧基)-2-氟苯基)乙酸甲酯(3.08 g，11.23 mmol)之混合物中且在40℃下攪拌16 hr。將溶液以2 N HCl/H2O酸化至PH=4，添加水(150 ml)且過濾以給出(2.9 g)白色固體。產率：99.23%。LCMS (m/z)：283.0 M+ Na+。
2-(4-(苯甲氧基)-2-氟苯基)乙酸三級丁酯之合成
Figure 02_image251
將8%之2-甲基丙-1-烯/DCM (20 mmol)及H2SO4 (0.2 eq)添加至DCM (30 mL)中的2-(4-(苯甲氧基)-2-氟苯基)乙酸(2.25 g，8.65 mmol)之混合物中且在室溫下攪拌48 hr。將水添加至溶液中且以EA (100 ml)萃取，在真空中濃縮且以矽膠純化(EA：PE=1：10)以給出固體(2.5 g)。產率：91.41%。LCMS (m/z)：339.0 M+ H+。
2-(2-氟-4-羥基苯基)乙酸三級丁酯之合成
Figure 02_image253
將Pd/C (0.2 eq)添加至THF( 100 mL)中的2-(4-(苯甲氧基)-2-氟苯基)乙酸(2.5 g，0.411 mmol)之混合物中且在室溫下攪拌16 hr。將溶液過濾，將過濾物在真空中濃縮以給出固體(1.75 g)。產率：97.88%。LCMS (m/z)：249.1 M+ Na+。
2-(2-氟-4-((4-硝基苯氧基)羰氧基)苯基)乙酸三級丁酯
Figure 02_image255
將(溴甲基)苯(4.3 g，14.14 mmol)添加至DMF (30 mL)中的2-(2-氟-4-羥基苯基)乙酸三級丁酯(1.6 g，7.07 mmol)與DIPEA (3.66 g，28.29 mmol)之混合物中且在室溫下攪拌2 hr。將水(100 ml)添加至溶液中且以EA (100 ml)萃取，將有機相在真空中濃縮且以矽膠純化(EA:PE=1:10)以給出油(2.3 g)。產率：83.10%。LCMS (m/z)：413.9 M+ Na+。
4-(3-(5-(2-胺基嘧啶-5-甲醯胺基)-7-甲氧基-2,3-二氫咪唑并[1,2-c]喹唑啉-8-氧基)丙基)哌𠯤-1-甲酸4-(2-三級丁氧基-2-側氧基乙基)-3-氟苯酯
Figure 02_image257
將2-胺基-N-(7-甲氧基-8-(3-(哌𠯤-1-基)丙氧基)-2,3-二氫咪唑并[1,2-c]喹唑啉-5-基)嘧啶-5-甲醯胺(3.09 g，6.44 mmol)添加至DMAC (30 mL)中的2-(2-氟-4-((4-硝基苯氧基)羰氧基)苯基)乙酸三級丁酯(2.4 g，6.13 mmol)、DIPEA (3.96 g，30.66 mmol)之混合物中且在室溫下攪拌2 hr。將水(150 ml)添加至溶液中且過濾以給出固體(4 g)。產率：89.13 %。LCMS (m/z)：732.3 M+ H+。
2-(4-(4-(3-(5-(2-胺基嘧啶-5-甲醯胺基)-7-甲氧基-2,3-二氫咪唑并[1,2-c]喹唑啉-8-氧基)丙基)哌𠯤-1-羰氧基)-2-氟苯基)乙酸
Figure 02_image259
將50%之TFA/DCM (40 mL)中的4-(3-(5-(2-胺基嘧啶-5-甲醯胺基)-7-甲氧基-2,3-二氫咪唑并[1,2-c]喹唑啉-8-氧基)丙基)哌𠯤-1-甲酸4-(2-三級丁氧基-2-側氧基乙基)-3-氟苯酯(3.6 g，4.92 mmol)之混合物在室溫下攪拌2 hr。將溶液在真空中濃縮，將粗製物以RP-Chrom純化(0.1%之TFA MeCN)以給出白色固體(0.74 g)。產率：22.26 %。LCMS (m/z)：676.1 M+ H+。
4-(3-(5-(2-胺基嘧啶-5-甲醯胺基)-7-甲氧基-2,3-二氫咪唑并[1,2-c]喹唑啉-8-氧基)丙基)哌𠯤-1-甲酸4-(2-(4-(4-(3-(2,4-二羥基-5-異丙基苯基)-5-(乙基胺甲醯基)-4H-1,2,4-***-4-基)苯甲基)哌𠯤-1-基)-2-側氧基乙基)-3-氟苯酯
Figure 02_image261
將5-(2,4-二羥基-5-異丙基苯基)-N-乙基-4-(4-(哌𠯤-1-基甲基)苯基)-4H-1,2,4-***-3-甲醯胺(0.875 mg，1.88 mmol)添加至DMAC (20 mL)中的2-(4-(4-(3-(5-(2-胺基嘧啶-5-甲醯胺基)-7-甲氧基-2,3-二氫咪唑并[1,2-c]喹唑啉-8-氧基)丙基)哌𠯤-1-羰氧基)-2-氟苯基)乙酸(1.06 g，1.57 mmol)、DIPEA (1.01 g，7.84 mmol)與HBTU (0.716 g，1.88 mmol)之混合物中且在室溫下攪拌3 hr。將水(100 ml)添加至溶液中且過濾，以RP-Chrom純化(0.1%之FA MeCN)以給出白色固體(0.9 g，FA鹽)。產率：51.12%。LCMS (m/z)：1122.5M+ H+。
1HNMR (400 MHz, DMSO)：δ 13.44 (s, 1H), 11.78 (s, 2H), 9.89 (s, 1H), 9.06 (s, 1H), 8.99 (s, 2H), 8.41 (s, 1H), 7.74-7.69 (m, 3H), 7.45 (d, J=8.0 Hz, 3H), 7.27 (t, J=8.8 Hz, 1H), 7.13-7.09 (dd, J=2 Hz, J=2.4 Hz, 1H), 6.98 (d, J=9.6 Hz, 1H), 7.43 (d, J=9.2 Hz, 1H), 6.70 (s, 1H), 6.39 (m, 1H), 4.52-4.47 (m, 2H), 4.41 (m, 5H), 4.25-4.18 (m, 6H), 4.02 (s, 3H), 3.83 (d, J=7.0 Hz, 2H), 3.66-3.55 (m, 4H), 3.31 (m, 4H), 3.21-3.15 (m, 6H), 2.97-2.90 (m, 2H), 2.37 (s, 4H), 1.05 (t, J=7.2 Hz, 3H), 0.90 (d, J=6.8 Hz, 6H)。 C50
Figure 02_image263
2-(4-羥基苯基)乙酸三級丁酯(Int-3)之合成： 將甲苯(5.0mL)中的2-(4-羥基苯基)乙酸(Int-1)(500 mg，3.29 mmol，1.0 eq)之攪拌溶液在75至80℃下攪拌5至10 min。接著隨後在75至80℃下添加[雙(三級丁氧基)甲基]二甲胺(2.74 g，13.5 mmol，4.10 eq)。將所得反應混合物在75至80℃下攪拌2 h。以TLC監測反應的進展。在完成後，將反應混合物以水淬滅且以乙酸乙酯(2 x 50 mL)萃取及以鹽水溶液(50 mL)清洗，經無水Na 2SO 4乾燥，過濾且在減壓下濃縮以得到粗製化合物。將粗製化合物以快速層析術純化，以石油醚中的0至5%之乙酸乙酯溶析出所欲產物。測定所有的純流份以得到成為淡黃色油的2-(4-羥基苯基)乙酸三級丁酯(Int-3)(360 mg，52%之產率)。
4-(2-((5-(2-胺基嘧啶-5-甲醯胺基)-7-甲氧基-2,3-二氫咪唑并[1,2-c]喹唑啉-8-基)氧基)乙基)哌𠯤-1-甲酸4-(2-(三級丁氧基)-2-側氧基乙基)苯酯(Int-4)之合成： 將DIPEA (310 mg，2.4 mmol，2.5 eq)在室溫下添加至DCM (6 mL)中的2-(4-羥基苯基)乙酸三級丁酯(Int-3)(200 mg，0.960 mmol，1.0 eq)之攪拌溶液中，隨後添加氯甲酸4-硝苯酯(194 mg，0.960 mmol，1.0 eq)。將所得反應在室溫下攪拌2 h。以TLC監測反應的進展。在SM消耗後(以TLC監測)，在室溫下添加DMF (2.0 mL)中的2-胺基-N-{7-甲氧基-8-[2-(哌𠯤-1-基)乙氧基]-2H,3H-咪唑并[1,2-c]喹唑啉-5-基}嘧啶-5-甲醯胺(666 mg，0.966 mmol，1.0 eq)之溶液。將所得反應混合物在室溫下攪拌16 h。以TLC及LCMS監測反應的進展。在SM消耗後，將反應混合物在真空下蒸發，接著以水(100 mL)淬滅，將沉澱之固體攪拌10 min，接著過濾以得到粗製化合物。將粗製化合物在少量的DCM中攪拌，過濾以得到成為白色黏性固體的純化合物Int-4 (250 mg，37%之產率)。
2-(4-((4-(2-((5-(2-胺基嘧啶-5-甲醯胺基)-7-甲氧基-2,3-二氫咪唑并[1,2-c]喹唑啉-8-基)氧基)乙基)哌𠯤-1-羰基)氧基)苯基)乙酸(Int-5)之合成： 將TFA (815 mg，7.15 mmol，20 eq)在室溫下添加至DCM (10 mL)中的4-(2-{[5-(2-胺基嘧啶-5-醯胺基)-7-甲氧基-2H,3H-咪唑并[1,2-c]喹唑啉-8-基]氧基}乙基)哌𠯤-1-甲酸4-[2-(三級丁氧基)-2-側氧基乙基]苯酯(Int-4)(250 mg，0.357 mmol，1.0 eq)之攪拌溶液中。將所得反應混合物在室溫下攪拌6 h。以LCMS監測反應混合物的進展。在完全反應後，在減壓下蒸發反應揮發物以得到粗製化合物。將粗製化合物以二***濕磨且隨後凍乾，以得到成為灰白色固體的2-(4-((4-(2-((5-(2-胺基嘧啶-5-甲醯胺基)-7-甲氧基-2,3-二氫咪唑并[1,2-c]喹唑啉-8-基)氧基)乙基)哌𠯤-1-羰基)氧基)苯基)乙酸Int-5 (240 mg之TFA鹽，定量性)。此粗製物本身無需進一步純化而用於下一步驟中。
1H NMR：(500 MHz, DMSO- d 6 ) δ：13.40 (s, 1H), 8.97 (s, 2H), 7.97 (d, J= 8.0 Hz, 2H),7.53 (s, 2H), 7.41 (d, J= 4.0 Hz, 1H), 7.28 (d, J= 8.0 Hz, 2H) 7.08 (d, J= 8.0Hz, 2H), 4.60 (bs, 2H), 4.46 (bs, 2H), 4.20 (t, J= 8.0 Hz, 2H), 4.01 (s, 3H), 3.38 (s, 9H，與水合併)。LC-MS：644.26 (M + H)。 C51
Figure 02_image265
(Int-3)：2-(4-羥基苯基)乙酸三級丁酯之合成： 將1,1-二-三級丁氧基-N,N-二甲基甲胺(2.74 g，13.50 mmol，4.10 eq)在室溫下添加至甲苯(5.0 mL)中的2-(4-羥基苯基)乙酸(500 mg，3.29 mmol，1.0 eq)之懸浮液中。將所得反應物料經1.5 h緩慢地加熱至75至80℃。以TLC監測反應的進展。將反應以水淬滅且以乙酸乙酯(3 x 150 mL)萃取，將有機層經無水Na 2SO 4乾燥，過濾且在減壓下濃縮以獲得粗製物。將所獲得的粗製物以快速層析術純化，以石油醚溶劑系統中的0至5%之乙酸乙酯溶析出所欲產物。收集所有的純流份且在減壓濃縮以供給成為灰白色固體的2-(4-羥基苯基)乙酸三級丁酯(Int-3)(360 mg，52.60%之產率)。
4-(2-((6-(2-胺基嘧啶-5-甲醯胺基)-8-甲氧基-3,4-二氫-2H-嘧啶并[1,2-c]喹唑啉-9-基)氧基)乙基)哌𠯤-1-甲酸4-(2-(三級丁氧基)-2-側氧基乙基)苯酯(Int-4)之合成： 將DIPEA (248 mg，1.92 mmol，5.0 eq)在室溫下添加至DCM (2.5 mL)中的2-(4-羥基苯基)乙酸三級丁酯(Int-2)(80 mg，0.384 mmol，1.0 eq)之懸浮液中，隨後添加氯甲酸4-硝苯酯(77.40 mg，0.384 mmol，1.0 eq)。將反應混合物在室溫下攪拌2 h，在SM消耗後(以TLC監測)，在室溫下添加在DMF (1.0 mL)中的2-胺基-N-(8-甲氧基-9-(2-(哌𠯤-1-基)乙氧基)-3,4-二氫-2H-嘧啶并[1,2-c]喹唑啉-6-基)嘧啶-5-甲醯胺(TVD-0004617)(184 mg，0.384 mmol，1.eq)之溶液且將反應混合物在室溫下攪拌16 h，以TLC監測反應的進展。在完全反應後，將反應物料以水淬滅且以乙酸乙酯(3 x 50 mL)萃取，將有機層經無水Na 2SO 4乾燥，過濾且在減壓下濃縮以獲得粗製物。將所獲得的粗製物以快速層析術純化，以DCM溶劑系統中的0至5%之甲醇溶析出所欲產物，收集所有的純流份且在減壓濃縮以供給成為灰白色固體的(Int-4) 4-(2-((6-(2-胺基嘧啶-5-甲醯胺基)-8-甲氧基-3,4-二氫-2H-嘧啶并[1,2-c]喹唑啉-9-基)氧基)乙基)哌𠯤-1-甲酸4-(2-(三級丁氧基)-2-側氧基乙基)苯酯(TVD-0004617)(140 mg，51.06%之產率)。
2-(4-((4-(2-((6-(2-胺基嘧啶-5-甲醯胺基)-8-甲氧基-3,4-二氫-2H-嘧啶并[1,2-c]喹唑啉-9-基)氧基)乙基)哌𠯤-1-羰基)氧基)苯基)乙酸(Int-5)之合成： 將TFA (0.45 mL，5.88 mmol，30.0 eq)在室溫下添加至DCM (2.0 mL)中的4-(2-((6-(2-胺基嘧啶-5-甲醯胺基)-8-甲氧基-3,4-二氫-2H-嘧啶并[1,2-c]喹唑啉-9-基)氧基)乙基)哌𠯤-1-甲酸4-(2-(三級丁氧基)-2-側氧基乙基)苯酯(Int-4) (140 mg，0.196 mmol，1.0 eq)之攪拌溶液中。將所得反應混合物在室溫下攪拌隔夜且以TLC及LC-MS監測反應的進展。在完全反應後，在減壓下移除揮發物且與甲苯共蒸餾以得到粗製化合物，接著將其凍乾以供給成為灰白色固體的2-(4-((4-(2-((6-(2-胺基嘧啶-5-甲醯胺基)-8-甲氧基-3,4-二氫-2H-嘧啶并[1,2-c]喹唑啉-9-基)氧基)乙基)哌𠯤-1-羰基)氧基)苯基)乙酸(Int-5)(200 mg之TFA鹽，粗製物)。
4-(2-((6-(2-胺基嘧啶-5-甲醯胺基)-8-甲氧基-3,4-二氫-2H-嘧啶并[1,2-c]喹唑啉-9-基)氧基)乙基)哌𠯤-1-甲酸4-(2-(4-(4-(3-(2,4-二羥基-5-異丙基苯基)-5-(乙基胺甲醯基)-4H-1,2,4-***-4-基)苯甲基)哌𠯤-1-基)-2-側氧基乙基)苯酯(C51)之合成： 將DIPEA (0.202 mL，1.14 mmol，5.0 eq)添加至DMF (1.0 mL)中的2-(4-((4-(2-((6-(2-胺基嘧啶-5-甲醯胺基)-8-甲氧基-3,4-二氫-2H-嘧啶并[1,2-c]喹唑啉-9-基)氧基)乙基)哌𠯤-1-羰基)氧基)苯基)乙酸(Int-4)(150 mg，0.228 mmol，1.0 eq)之攪拌溶液中，隨後添加HOBT (61.60 mg，0.456 mmol，2.0 eq)及EDC.HCl (87.40 mg，0.456 mmol，2.0 eq)且將反應物料在室溫下攪拌5至10 min，且接著添加5-(2,4-二羥基-5-異丙基苯基)-N-乙基-4-(4-(哌𠯤-1-基甲基)苯基)-4H-1,2,4-***-3-甲醯胺(TVD-0003510)(106 mg，0.228 mmol，1.0 eq)且將反應混合物在室溫下攪拌18 h。在SM消耗後，如以TLC所監測，接著將反應以冰水(10 mL)淬滅，攪拌5 min，將所得沉澱物過濾且以水清洗，隨後以二***(5 mL)清洗，在真空下乾燥以供給粗製化合物。將粗製物以Prep HPLC純化且凍乾，以供給成為灰白色固體的4-(2-((6-(2-胺基嘧啶-5-甲醯胺基)-8-甲氧基-3,4-二氫-2H-嘧啶并[1,2-c]喹唑啉-9-基)氧基)乙基)哌𠯤-1-甲酸4-(2-(4-(4-(3-(2,4-二羥基-5-異丙基苯基)-5-(乙基胺甲醯基)-4H-1,2,4-***-4-基)苯甲基)哌𠯤-1-基)-2-側氧基乙基)苯酯(C51)(50.90 mg，20.21%之產率)。
1H NMR：(400 MHz, DMSO- d 6 )：δ：14.18 (s, 1H), 11.21 (bs, 1H), 10.31 (bs, 1H), 9.70 (s, 1H), 9.01 (bs, 3H), 8.15 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 7.23 (d, J= 12.0 Hz, 2H), 7.08 (d, J= 12.0 Hz, 2H), 6.97 (s, 1H), 6.31 (s, 1H), 4.60 (s, 2H), 4.40 (s, 4H), 4.02 (s, 3H), 3.84-3.34 (m, 24H), 3.21-3.14 (m, 6H), 2.95-2.92 (t, J= 6.8 Hz, 2H), 2.95-2.92 (m, 1H), 1.07-1.03 (t, J= 8.0 Hz, 3H), 0.87 (d, J= 8.0 Hz, 6H)。 LC-MS：1105.02 (M + H)。 C52
Figure 02_image267
4-(3-((5-(2-胺基嘧啶-5-甲醯胺基)-7-甲氧基-2,3-二氫咪唑并[1,2-c]喹唑啉-8-基)氧基)丙基)哌𠯤-1-甲酸2-(2-(三級丁氧基)-2-側氧基乙基)苯酯(Int-2)之合成： 將DIPEA (233 mg，1.80 mmol，2.50 eq)在室溫下添加至DCM (2.0 mL)中的2-(2-羥基苯基)乙酸三級丁酯(Int-1)(150 mg，0.720 mmol，1.0 eq)之懸浮液中，隨後添加氯甲酸4-硝苯酯(145 mg，0.720 mmol，1.0 eq)。將反應混合物在室溫下攪拌2 h，在SM消耗後(以TLC監測)，添加在DMF (1.0 mL)中的2-胺基-N-(7-甲氧基-8-(3-(哌𠯤-1-基)丙氧基)-2,3-二氫咪唑并[1,2-c]喹唑啉-5-基)嘧啶-5-甲醯胺(TVD-0003657)(345 mg，0.720 mmol，1.0 eq)之溶液且在室溫下攪拌16 h。以TLC監測反應的進展。在SM消耗後，將反應混合物以水淬滅且以乙酸乙酯(3 x 50 mL)萃取。將合併的有機層經無水Na 2SO 4乾燥，過濾且在減壓下濃縮以獲得粗製物。將所獲得的粗製物以快速層析術純化，以DCM溶劑系統中的0至5%之甲醇溶析出所欲產物。收集所有的純流份且在減壓濃縮以供給成為灰白色固體的4-(3-((5-(2-胺基嘧啶-5-甲醯胺基)-7-甲氧基-2,3-二氫咪唑并[1,2-c]喹唑啉-8-基)氧基)丙基)哌𠯤-1-甲酸2-(2-(三級丁氧基)-2-側氧基乙基)苯酯(Int-2)(250 mg，48.63%之產率)。
2-{2-[4-(3-{[5-(2-胺基嘧啶-5-醯胺基)-7-甲氧基-2H,3H-咪唑并[1,2-c]喹唑啉-8-基]氧基}丙基)哌𠯤-1-羰氧基]苯基}乙酸(Int-3)之合成： 將TFA (0.73 mL，9.67 mmol，30.0 eq)在室溫下添加至DCM (4.0 mL)中的4-(3-{[5-(2-胺基嘧啶-5-醯胺基)-7-甲氧基-2H,3H-咪唑并[1,2-c]喹唑啉-8-基]氧基}丙基)哌𠯤-1-甲酸2-[2-(三級丁氧基)-2-側氧基乙基]苯酯(Int-2)(230 mg，0.322 mmol，1.0 eq)之攪拌溶液中。將所得反應混合物在室溫下攪拌16 h。以TLC及LC-MS監測反應的進展。在SM消耗後，在減壓下移除所有的揮發物且與甲苯共蒸餾以得到粗製化合物，接著將其凍乾以供給成為灰白色固體的2-{2-[4-(3-{[5-(2-胺基嘧啶-5-醯胺基)-7-甲氧基-2H,3H-咪唑并[1,2-c]喹唑啉-8-基]氧基}丙基)哌𠯤-1-羰氧基]苯基}乙酸(Int-3)(270 mg，定量性)。
4-(3-((5-(2-胺基嘧啶-5-甲醯胺基)-7-甲氧基-2,3-二氫咪唑并[1,2-c]喹唑啉-8-基)氧基)丙基)哌𠯤-1-甲酸2-(2-(4-(4-(3-(2,4-二羥基-5-異丙基苯基)-5-(乙基胺甲醯基)-4H-1,2,4-***-4-基)苯甲基)哌𠯤-1-基)-2-側氧基乙基)苯酯(TVD-0004605)之合成： 將DIPEA (0.36 mL，2.05 mmol，5.0 eq)、HOBt (111 mg，0.821 mmol，2.0 eq)在室溫下添加至DMF (5.0 mL)中的2-{2-[4-(3-{[5-(2-胺基嘧啶-5-醯胺基)-7-甲氧基-2H,3H-咪唑并[1,2-c]喹唑啉-8-基]氧基}丙基)哌𠯤-1-羰氧基]苯基}乙酸(Int-3)(270 mg，0.411 mmol，1.0eq)之攪拌溶液中，隨後添加EDC.HCl (157 mg，0.821 mmol，2.0 eq)且將反應混合物在室溫下攪拌5至10 min，且接著添加5-(2,4-二羥基-5-異丙基苯基)-N-乙基-4-(4-(哌𠯤-1-基甲基)苯基)-4H-1,2,4-***-3-甲醯胺(TVD-0003510)(191 mg，0.411 mmol，1.0 eq)，且接著將反應混合物在室溫下攪拌18 h。在SM消耗後，如TLC所監測，將反應物料以冰水(15 mL)淬滅，攪拌5 min，將所得沉澱物過濾且以水清洗，隨後以二***(5 mL)清洗，在真空下乾燥以供給粗製化合物。將粗製物以Prep HPLC純化 & 凍乾以供給成為灰白色固體的4-(3-((5-(2-胺基嘧啶-5-甲醯胺基)-7-甲氧基-2,3-二氫咪唑并[1,2-c]喹唑啉-8-基)氧基)丙基)哌𠯤-1-甲酸2-(2-(4-(4-(3-(2,4-二羥基-5-異丙基苯基)-5-(乙基胺甲醯基)-4H-1,2,4-***-4-基)苯甲基)哌𠯤-1-基)-2-側氧基乙基)苯酯(C52)(112 mg，27.71%之產率)。
1H-NMR：(400 MHz, DMSO- d 6 ) δ：13.40 (s, 1H), 10.35-10.22 (bs, 2H), 9.75 (s, 1H), 9.02-8.97 (m, 3H), 7.98 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 7.53-7.46 (m, 4H), 7.42-7.38 (m, 3H), 7.34-7.30 (m, 2H), 7.24-7.21 (m, 1H), 7.15 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 6.63 (s, 1H), 6.31 (s, 1H), 4.50-4.45 (m, 2H), 4.34 (bs, 2H), 4.21 (t, J= 8.0 Hz, 4H), 4.00 (s, 3H), 3.74 (s, 4H), 3.63-3.13 (m, 16H), 2.95-2.90 (m, 1H), 2.32-2.29 (m, 2H), 1.04 (t, J= 8.0 Hz, 3H), 0.84 (d, J= 6.8 Hz, 6H)。 LC-MS：1104.93 (M + H)。 C53
Figure 02_image269
(R)-2-胺基-N-(8-(3-(4-(2-(2-胺基-4-氯-7-((4-甲氧基-3,5-二甲基吡啶-2-基)甲基)-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)乙基)哌𠯤-1-基)丙氧基)-7-甲氧基-2,3-二氫咪唑并[1,2-c]喹唑啉-5-基)嘧啶-5-甲醯胺(TVD-0004600)之合成： 將2-胺基-N-{7-甲氧基-8-[3-(哌𠯤-1-基)丙氧基]-2H,3H-咪唑并[1,2-c]喹唑啉-5-基}嘧啶-5-甲醯胺(TVD-0003657)(175.0 mg，0.365 mmol，1.0 eq)在室溫下添加至DMF中的10%之乙酸(4.0 mL)中的2-[(5R)-2-胺基-4-氯-7-[(4-甲氧基-3,5-二甲基吡啶-2-基)甲基]-5H,6H,7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基]乙醛(Int-1)(198 mg，0.547 mmol，1.0 eq)之攪拌溶液中，且將反應混合物在室溫下攪拌2 h。在2 h後，在室溫下添加三乙醯氧基硼氫化鈉(383 mg，1.82 mmol，5.0 eq)。將所得反應混合物在室溫下攪拌12 h。以TLC & LCMS監測反應的進展。在SM消耗後，將反應以水(12 mL)淬滅且以乙酸乙酯(3 x 20 mL)萃取。水層之LCMS及TLC顯示所欲產物。接著將水層凍乾。將粗製化合物以Prep.HPLC純化且凍乾，以供給成為灰白色固體的(R)-2-胺基-N-(8-(3-(4-(2-(2-胺基-4-氯-7-((4-甲氧基-3,5-二甲基吡啶-2-基)甲基)-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)乙基)哌𠯤-1-基)丙氧基)-7-甲氧基-2,3-二氫咪唑并[1,2-c]喹唑啉-5-基)嘧啶-5-甲醯胺(39 mg，12.95%)。
1H-NMR：(400 MHz, DMSO- d 6 ) δ：13.42 (s, 1H), 8.97 (s, 2H), 8.25 (s, 1H), 7.99 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 7.54 (s, 2H), 7.40 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 6.60 (bs, 2H), 4.63 (s, 2H), 4.51-4.47 (m, 2H), 4.31 (t, J= 4.0 Hz, 2H), 4.23-4.18 (m, 2H), 4.03 (s, 3H), 3.80 (s, 3H), 3.64 (t, J= 8.0 Hz, 1H), 3.34-3.24 (m, 4H), 2.95 (m, 10H), 2.24 (s, 3H), 2.20 (s, 3H), 2.12-2.05 (m, 3H), 1.86 (bs, 1H)。 LC-MS：825.08 (M + H)。 C54
Figure 02_image271
4-(2-((5-(2-胺基嘧啶-5-甲醯胺基)-7-甲氧基-2,3-二氫咪唑并[1,2-c]喹唑啉-8-基)氧基)乙基)哌𠯤-1-甲酸三級丁酯(Int-3)之合成： 將K 2CO 3(78 mg，0.566 mmol，2.0 eq)在周圍溫度下添加至DMF (3.0 mL)中的2-胺基-N-{8-羥基-7-甲氧基-2H,3H-咪唑并[1,2-c]喹唑啉-5-基}嘧啶-5-甲醯胺(100 mg，0.238 mmol，1.1 eq)之攪拌溶液中，且將反應混合物在室溫下攪拌10 min。在10 min後，在室溫下添加4-(2-溴乙基)哌𠯤-1-甲酸三級丁酯(99.6 mg，0.340 mmol，1.2 eq)。將所得反應混合物在60℃下攪拌3 h。以TLC及LCMS監測反應的進展。在SM消耗後，將反應混合物以水(10.0 mL)淬滅，將固體過濾且以冰冷水清洗，在減壓下乾燥以供給成為灰白色固體的4-(2-((5-(2-胺基嘧啶-5-甲醯胺基)-7-甲氧基-2,3-二氫咪唑并[1,2-c]喹唑啉-8-基)氧基)乙基)哌𠯤-1-甲酸三級丁酯(Int-3)(130 mg，81.21%)。
2-胺基-N-(7-甲氧基-8-(2-(哌𠯤-1-基)乙氧基)-2,3-二氫咪唑并[1,2-c]喹唑啉-5-基)嘧啶-5-甲醯胺(Int-4)之合成： 將TFA (726 mg，6.36 mmol，30.0 eq)在0℃下添加至DCM (1.5 ml)中的4-(2-((5-(2-胺基嘧啶-5-甲醯胺基)-7-甲氧基-2,3-二氫咪唑并[1,2-c]喹唑啉-8-基)氧基)乙基)哌𠯤-1-甲酸三級丁酯(Int-3)(120 mg，0.212 mmol，1.0 eq.)之溶液中。將所得反應混合物在室溫下攪拌12 h。以TLC及LCMS監測反應的進展。在SM消耗後，在減壓下蒸發所有的揮發物且將殘餘物以DEE (10.0 mL)濕磨，以供給成為灰白色固體的2-胺基-N-(7-甲氧基-8-(2-(哌𠯤-1-基)乙氧基)-2,3-二氫咪唑并[1,2-c]喹唑啉-5-基)嘧啶-5-甲醯胺(Int-4)(150.0 mg，定量產率，TFA鹽)。
(R)-2-胺基-N-(8-(2-(4-(2-(2-胺基-4-氯-7-((4-甲氧基-3,5-二甲基吡啶-2-基)甲基)-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)乙基)哌𠯤-1-基)乙氧基)-7-甲氧基-2,3-二氫咪唑并[1,2-c]喹唑啉-5-基)嘧啶-5-甲醯胺(TVD-0004599)之合成： 將2-胺基-N-{7-甲氧基-8-[2-(哌𠯤-1-基)乙氧基]-2H,3H-咪唑并[1,2-c]喹唑啉-5-基}嘧啶-5-甲醯胺(Int-3)(175.0 mg，0.376 mmol，1.0 eq)在室溫下添加至DMF中的10%之乙酸(4.0 mL)中的2-[(5R)-2-胺基-4-氯-7-[(4-甲氧基-3,5-二甲基吡啶-2-基)甲基]-5H,6H,7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基]乙醛(Int-5)(204 mg，0.564 mmol，1.5 eq)之攪拌溶液中，且將反應混合物在室溫下攪拌2 h。在2 h後，在室溫下添加三乙醯氧基硼氫化鈉(395 mg，1.88 mmol，5.0 eq)。將所得反應混合物在室溫下攪拌12 h。以TLC及LCMS監測反應的進展。在SM消耗後，將反應以水(12 mL)淬滅且以乙酸乙酯(3 x 20 mL)萃取。LCMS及TLC顯示所欲產物係於水層中。接著將水層凍乾。將粗製化合物以Prep.HPLC純化且凍乾，以供給成為灰白色固體的(R)-2-胺基-N-(8-(2-(4-(2-(2-胺基-4-氯-7-((4-甲氧基-3,5-二甲基吡啶-2-基)甲基)-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)乙基)哌𠯤-1-基)乙氧基)-7-甲氧基-2,3-二氫咪唑并[1,2-c]喹唑啉-5-基)嘧啶-5-甲醯胺(19 mg，6.23%)。
1H-NMR：(400 MHz, DMSO- d 6 ) δ：13.42 (s, 1H), 9.46 (bs, 1H), 8.97 (s, 1H), 8.25 (s, 1H), 7.98 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 7.54 (s, 2H), 7.42 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 6.58 (bs, 2H), 4.66 (s, 2H), 4.52-4.47 (m, 2H), 4.40 (bs, 2H), 4.23-4.18 (m, 2H), 4.04 (s, 3H), 3.81 (s, 3H), 3.64 (t, J= 8.0 Hz, 1H), 3.32-2.99 (m, 10H), 2.50 (s, 4H，與DMSO合併), 2.23 (s, 3H), 2.19 (s, 3H), 2.07 (bs, 1H), 1.92 (s, 1H)。 LC-MS：810.96 (M + H)。 C55
Figure 02_image273
2-(2-氟-4-羥基苯基)乙酸三級丁酯(Int-2)之合成： 將1,1-二-三級丁氧基-N,N-二甲基甲胺(1.22 g，6.02 mmol，4.10 eq)在70至80℃下經5 min期間添加至甲苯(8.0 mL)中的2-(2-氟-4-羥基苯基)乙酸(250 mg，1.47 mmol，1.0 eq)之攪拌溶液中，且將所得反應物料在70至80℃下攪拌3 h。以TLC及LCMS監測反應的進展。在SM消耗後，將反應混合物以水淬滅且以乙酸乙酯(3 x 100 mL)萃取，將合併的有機層經無水Na 2SO 4乾燥，過濾且在減壓下濃縮以獲得粗製物。將所獲得的粗製物以combi-flash純化，以石油醚溶劑系統中的0至5%之乙酸乙酯溶析出所欲產物。收集所有的純流份且在減壓濃縮以供給成為淡黃色油的2-(2-氟-4-羥基苯基)乙酸三級丁酯(Int-2)(230 mg，69.18%之產率)。
4-(3-((6-(2-胺基嘧啶-5-甲醯胺基)-8-甲氧基-3,4-二氫-2H-嘧啶并[1,2-c]喹唑啉-9-基)氧基)丙基)哌𠯤-1-甲酸4-(2-(三級丁氧基)-2-側氧基乙基)-3-氟苯酯(Int-3)之合成： 將DIPEA (570 mg，4.42 mmol，5.0 eq)在室溫下添加至DCM (2.5 mL)中的2-(2-氟-4-羥基苯基)乙酸三級丁酯(Int-2)(80 mg，0.384 mmol，1.0 eq)之懸浮液中，隨後添加氯甲酸4-硝苯酯(178 mg，0.884 mmol，1.0 eq)。將反應混合物在室溫下攪拌2 h，在SM消耗後(以TLC監測)，將DMF (1.0 mL)中的2-胺基-N-(8-甲氧基-9-(3-(哌𠯤-1-基)丙氧基)-3,4-二氫-2H-嘧啶并[1,2-c]喹唑啉-6-基)嘧啶-5-甲醯胺(436 mg，0.884 mmol，1. eq)之溶液逐滴添加至反應混合物中，且在室溫下攪拌16 h。以TLC及LCMS監測反應的進度。在SM消耗後，將反應混合物以水淬滅且以乙酸乙酯(3 x 100 mL)萃取。將合併的有機層經無水Na 2SO 4乾燥，過濾且在減壓下濃縮以獲得粗製物。將所獲得的粗製物以快速層析術純化，以DCM溶劑系統中的0至5%之甲醇溶析出所欲產物。收集所有的純流份且在減壓濃縮以供給成為灰白色固體的4-(3-((6-(2-胺基嘧啶-5-甲醯胺基)-8-甲氧基-3,4-二氫-2H-嘧啶并[1,2-c]喹唑啉-9-基)氧基)丙基)哌𠯤-1-甲酸4-(2-(三級丁氧基)-2-側氧基乙基)-3-氟苯酯(Int-3)(290 mg，43.99%之產率)。
2-(4-((4-(3-((6-(2-胺基嘧啶-5-甲醯胺基)-8-甲氧基-3,4-二氫-2H-嘧啶并[1,2-c]喹唑啉-9-基)氧基)丙基)哌𠯤-1-羰基)氧基)-2-氟苯基)乙酸(Int-4)之合成： 將TFA (0.89 mL，11.70 mmol，30.0 eq)在室溫下添加至DCM (4.0 mL)中的4-(3-((6-(2-胺基嘧啶 5-甲醯胺基)-8-甲氧基-3,4-二氫-2H-嘧啶并[1,2-c]喹唑啉-9-基)氧基)丙基)哌𠯤-1-甲酸4-(2-(三級丁氧基)-2-側氧基乙基)-3-氟苯酯(Int-3)(290 mg，0.389 mmol，1.0 eq)之攪拌溶液中。將所得反應混合物在室溫下攪拌16 h且以TLC及LC-MS監測反應的進展。在SM消耗後，在減壓下移除所有的揮發物且與甲苯共蒸餾以得到粗製化合物，接著將其凍乾以供給成為灰白色固體的2-(4-((4-(3-((6-(2-胺基嘧啶-5-甲醯胺基)-8-甲氧基-3,4-二氫-2H-嘧啶并[1,2-c]喹唑啉-9-基)氧基)丙基)哌𠯤-1-羰基)氧基)-2-氟苯基)乙酸(Int-4)(350 mg，TFA鹽，定量產率)。
4-(3-((6-(2-胺基嘧啶-5-甲醯胺基)-8-甲氧基-3,4-二氫-2H-嘧啶并[1,2-c]喹唑啉-9-基)氧基)丙基)哌𠯤-1-甲酸4-(2-(4-(4-(3-(2,4-二羥基-5-異丙基苯基)-5-(乙基胺甲醯基)-4H-1,2,4-***-4-基)苯甲基)哌𠯤-1-基)-2-側氧基乙基)-3-氟苯酯(C55)之合成： 將DIPEA (0.38 mL，2.17 mmol，5.0 eq)、HOBt (118 mg，0.870 mmol，2.0 eq)添加至DMF (2.0 mL)中的2-(4-((4-(3-((6-(2-胺基嘧啶-5-甲醯胺基)-8-甲氧基-3,4-二氫-2H-嘧啶并[1,2-c]喹唑啉-9-基)氧基)丙基)哌𠯤-1-羰基)氧基)-2-氟苯基)乙酸(Int-4)(300 mg，0.435 mmol，1.0 eq)之攪拌溶液中，隨後添加EDC.HCl (167 mg，0.870 mmol，2.0 eq)且將反應物料在室溫下攪拌5至10 min。在10 min後，添加5-(2,4-二羥基-5-異丙基苯基)-N-乙基-4-(4-(哌𠯤-1-基甲基)苯基)-4H-1,2,4-***-3-甲醯胺(TVD-0003510) (202 mg，0.435 mmol，1.0 eq)，且接著將反應混合物在室溫下攪拌18 h。在SM消耗後，如以TLC所監測，接著將反應以冰水(10 mL)淬滅，攪拌5 min，將所得沉澱物過濾且以水清洗，隨後以二***(5 mL)清洗，在真空下乾燥以供給粗製化合物。將粗製物以prep HPLC純化&凍乾以供給成為灰白色固體的4-(3-((6-(2-胺基嘧啶-5-甲醯胺基)-8-甲氧基-3,4-二氫-2H-嘧啶并[1,2-c]喹唑啉-9-基)氧基)丙基)哌𠯤-1-甲酸4-(2-(4-(4-(3-(2,4-二羥基-5-異丙基苯基)-5-(乙基胺甲醯基)-4H-1,2,4-***-4-基)苯甲基)哌𠯤-1-基)-2-側氧基乙基)-3-氟苯酯(C55)(55.5 mg，11.23%之產率)。
1H-NMR：(400 MHz, DMSO- d 6 ) δ：14.16 (s, 1H), 11.44 (s, 1H), 10.95-10.84 (m, 2H), 10.14 (bs, 1H), 9.74 (s, 1H), 9.01 (s, 3H), 8.31 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 7.60-7.55 (m, 4H), 7.42 (d, J=  8.0 Hz, 3H), 7.29-7.24 (m, 1H), 7.11 -7.07 (m, 1H), 6.98(t, J= 4.0 Hz, 1H), 6.68 (s, 1H), 6.33 (s, 1H), 4.40-4.22 (m, 10H), 4.01 (s, 3H), 3.80 (bs, 3H), 3.65-3.50 (m, 6H), 3.21-2.92 (m, 9H), 2.32 (s, 2H), 2.18 (bs, 2H), 1.05 (t, J= 8.0 Hz, 3H), 0.88 (d, J= 8.0 Hz, 6H)。 LC-MS：1135.93 (M + H)。 C58
Figure 02_image275
5-(2,4-二羥基-5-異丙基苯基)-N-乙基-4-(4-((4-(2-羥基乙基)哌𠯤-1-基)甲基)苯基)-4H-1,2,4-***-3-甲醯胺(Int-1)之合成： 將2-溴乙-1-醇(1.34 g，10.8 mmol，10.0 eq)在室溫下添加至無水DMF (5.0 mL)中的5-[2,4-二羥基-5-(丙-2-基)苯基]-N-乙基-4-{4-[(哌𠯤-1-基)甲基]苯基}-4H-1,2,4-***-3-甲醯胺(TVD-0003510)(500 mg，1.08 mmol，1.0 eq)之攪拌溶液中，隨後添加碳酸二鉀(595 mg，4.31 mmol，4.0 eq)。將所得反應混合物在70℃下加熱12 h。以TLC及LCMS監測反應混合物的進展。在SM消耗後，將反應混合物以EtOAc稀釋且以水萃取。將合併的有機層以NaCl清洗且經硫酸鈉乾燥，過濾且濃縮以供給成為灰白色固體的粗製化合物5-(2,4-二羥基-5-異丙基苯基)-N-乙基-4-(4-((4-(2-羥基乙基)哌𠯤-1-基)甲基)苯基)-4H-1,2,4-***-3-甲醯胺(Int-1)(250 mg，45.67%之產率)。粗製化合物無需任何進一步純化而用於下一步驟中。
4-(4-((4-(2-氯乙基)哌𠯤-1-基)甲基)苯基)-5-(2,4-二羥基-5-異丙基苯基)-N-乙基-4H-1,2,4-***-3-甲醯胺(Int-2)之合成： 將SOCl 2(1.17 g，9.83 mmol，10.0 eq)及DMF (7.19 mg，0.098 mmol，0.1 eq)在0℃下添加至DCM (4.0 mL)中的5-(2,4-二羥基-5-異丙基苯基)-N-乙基-4-(4-((4-(2-羥基乙基)哌𠯤-1-基)甲基)苯基)-4H-1,2,4-***-3-甲醯胺(Int-1) (500 mg 0.983 mmol，1.0 eq)之攪拌溶液中。將所得反應混合物在室溫下攪拌18 h。以TLC及LC-MS監測反應的進展。在SM消耗後，蒸發所有的揮發物且使用20%之NaHCO 3及EtOAC (3 X 30 mL)引出。將合併的有機層經Na 2SO4乾燥，過濾且濃縮以供給粗製物。將粗製化合物以PE中的20至40%之丙酮溶析之100至200矽膠篩孔的管柱層析術純化。收集所有的純流份且濃縮以供給成為灰白色固體的4-(4-((4-(2-氯乙基)哌𠯤-1-基)甲基)苯基)-5-(2,4-二羥基-5-異丙基苯基)-N-乙基-4H-1,2,4-***-3-甲醯胺(Int-2)(200 mg，38.6%之產率)。
2-胺基-N-(8-(2-(4-(4-(3-(2,4-二羥基-5-異丙基苯基)-5-(乙基胺甲醯基)-4H-1,2,4-***-4-基)苯甲基)哌𠯤-1-基)乙氧基)-7-甲氧基-2,3-二氫咪唑并[1,2-c]喹唑啉-5-基)嘧啶-5-甲醯胺(TVD-0004567)之合成： 將碳酸二鉀(313 mg，2.26 mmol，4.0 eq)在室溫下添加至無水DMF(5.0 mL)中的2-胺基-N-{8-羥基-7-甲氧基-2H,3H-咪唑并[1,2-c]喹唑啉-5-基}嘧啶-5-甲醯胺(T-1838)(200 mg，0.566 mmol，1.0 eq)之攪拌溶液中。在10 min後，在室溫下添加4-(4-{[4-(2-氯乙基)哌𠯤-1-基]甲基}苯基)-5-[2,4-二羥基-5-(丙-2-基)苯基]-N-乙基-4H-1,2,4-***-3-甲醯胺(Int-2)(298 mg，0.566 mmol，1.0 eq)。將所得反應混合物在50℃下加熱12 h。以TLC及LCMS監測反應混合物的進展。在SM消耗後，將反應混合物以冰水淬滅且以過濾收集所得固體。將粗製物以prep HPLC純化，隨後凍乾以供給成為灰白色固體的2-胺基-N-(8-(2-(4-(4-(3-(2,4-二羥基-5-異丙基苯基)-5-(乙基胺甲醯基)-4H-1,2,4-***-4-基)苯甲基)哌𠯤-1-基)乙氧基)-7-甲氧基-2,3-二氫咪唑并[1,2-c]喹唑啉-5-基)嘧啶-5-甲醯胺(TVD-0004567)(80 mg，16.75%之產率)。
1H NMR：(400 MHz, DMSO- d 6 ) δ：13.45 (s, 1H), 12.50 (bs, 1H), 10.59 (s, 1H), 9.76 (s, 1H), 9.01-8.97 (m, 3H), 8.19 (d, J= 12.0 Hz, 2H), 7.55 (bs, 2H), 7.46-7.39 (m, 4H), 6.63 (s, 1H), 6.34 (s, 1H), 4.50 (t, J= 8.0 Hz, 4H), 4.21 (t, J= 8.0 Hz, 4H), 4.00 (s, 3H), 3.64-2.91 (m，與水合併, 10H), 1.23 (s, 2H), 1.04 (t, J= 8.0 Hz, 3H), 0.85 (d, J= 8.0 Hz, 6H)。 LC-MS：844.44 (M + H) 共軛體C117、C118、C119
共軛體C117至C119之合成方法的非限制性實例包括於下。 C118
Figure 02_image277
2-(4-(4-(3-(2,4-二羥基-5-異丙基苯基)-5-(乙基胺甲醯基)-4H-1,2,4-***-4-基)苯甲基)哌𠯤-1-基)乙酸三級丁酯(Int-2)之合成： 將TEA (0.022 mL，0.161 mmol，1.0 eq)在室溫下添加至THF (1.0 mL)中的5-(2,4-二羥基-5-異丙基苯基)-N-乙基-4-(4-(哌𠯤-1-基甲基)苯基)-4H-1,2,4-***-3-甲醯胺(TVD-0003510)(75 mg，0.161 mmol，1.0 eq)之懸浮液中，隨後添加2-溴乙酸三級丁酯(Int-1)(31.5 mg，0.161 mmol，1.0 eq)。將反應混合物緩慢地加熱至75至80℃且在相同的溫度下攪拌3 h。以TLC及LC-MS監測反應的進展。在完全反應後，將反應物料以水(1 mL)稀釋且以乙酸乙酯(2 X 5 mL)萃取。將合併的有機層經硫酸鈉乾燥，過濾，在真空下蒸發溶劑以供給粗製物(90 mg)。將粗製化合物以使用100至200篩孔大小的二氧化矽之管柱層析術純化，以DCM中的2至3%之甲醇溶析以供給成為灰白色固體的2-(4-(4-(3-(2,4-二羥基-5-異丙基苯基)-5-(乙基胺甲醯基)-4H-1,2,4-***-4-基)苯甲基)哌𠯤-1-基)乙酸三級丁酯(Int-2)(75 mg，80.2%)。
2-(4-(4-(3-(2,4-二羥基-5-異丙基苯基)-5-(乙基胺甲醯基)-4H-1,2,4-***-4-基)苯甲基)哌𠯤-1-基)乙酸(Int-3)之合成： 將TFA (0.14 mL，1.94 mmol，15.0 eq)在室溫下添加至DCM (1.5 mL)中的2-(4-(4-(3-(2,4-二羥基-5-異丙基苯基)-5-(乙基胺甲醯基)-4H-1,2,4-***-4-基)苯甲基)哌𠯤-1-基)乙酸三級丁酯(Int-2)(75 mg，0.130 mmol，1.0 eq)之攪拌溶液中。將所得反應混合物在室溫下攪拌隔夜。以TLC及LC-MS監測進展。在SM消耗後，在減壓下移除DCM且與甲苯共蒸餾以得到粗製化合物(80 mg之粗製物)。將粗製化合物以二***(2.0 mL)濕磨以供給成為白色固體的(Int-3) 2-(4-(4-(3-(2, 4-二羥基-5-異丙基苯基)-5-(乙基胺甲醯基)-4H-1,2,4-***-4-基)苯甲基)哌𠯤-1-基)乙酸(70 mg，定量性)。此粗製物本身無需進一步純化而用於下一步驟中。
(S)-4-(4-((4-(2-((6-胺基-5-((2-(1-異丙基-1H-1,2,4-***-5-基)-5,6-二氫苯并[f]咪唑并[1,2-d][1,4]氧氮雜環庚烷-9-基)胺基)-6-側氧基己基)胺基)-2-側氧基乙基)哌𠯤-1-基)甲基)苯基)-5-(2,4-二羥基-5-異丙基苯基)-N-乙基-4H-1,2,4-***-3-甲醯胺(C118)之合成： 將DIPEA (0.04 mL，0.0230 mmol，3.0 eq)添加至DMF (0.5 mL)中的2-{4-[(4-{3-[2,4-二羥基-5-(丙-2-基)苯基]-5-(乙基胺甲醯基)-4H-1,2,4-***-4-基}苯基)甲基]哌𠯤-1-基}乙酸(Int-3)(40 mg，0.076 mmol，1.0eq)之攪拌溶液中，隨後添加HATU (43.7 mg，0.115 mmol，1.5 eq)且將反應在室溫下攪拌5至10 min，且接著添加(R)-6-胺基-2-((2-(1-異丙基-1H-1,2,4-***-5-基)-5,6-二氫苯并[f]咪唑并[1,2-d][1,4]氧氮雜環庚烷-9-基)胺基)己醯胺(TVD-0004440)(40.3 mg，0.091 mmol，1.2 eq)且將所得反應混合物在室溫下攪拌18 h。在SM消耗後(以TLC監測)，將反應物料以冰水(1 mL)淬滅，攪拌5 min，將所得沉澱物過濾且以水清洗，隨後以二***(2 mL)清洗，在真空下乾燥以供給粗製化合物。將粗製物以prep HPLC純化 & 凍乾以供給成為灰白色固體的(C118)(S)-4-(4-((4-(2-((6-胺基-5-((2-(1-異丙基-1H-1,2,4-***-5-基)-5,6-二氫苯并[f]咪唑并[1,2-d][1,4]氧氮雜環庚烷-9-基)胺基)-6-側氧基己基)胺基)-2-側氧基乙基)哌𠯤-1-基)甲基)苯基)-5-(2,4-二羥基-5-異丙基苯基)-N-乙基-4H-1,2,4-***-3-甲醯胺(6.0 mg，5.54%)。
1H-NMR：(500 MHz, DMSO-d 6) δ：10.58 (s, 1H), 9.75 (s, 1H), 8.94 (s, 1H), 8.19 (bs, 1H), 8.09 (d, J = 10.0 Hz, 1H), 7.86 (s, 1H), 7.75 (s, 1H), 7.67 (t, J = 10.0 Hz , 1H), 7.40 (bs, 1H), 7.35 (d, J = 10.0 Hz, 2H), 7.28 (d, J = 10.0 Hz, 2H), 7.02 (s, 1H), 6.56 (s, 1H), 6.46 (dd, J = 10.0, 2.0 Hz, 1H) ,6.33 (s, 1H), 6.16- 6.15 (m, 2H), 5.90 (quint, J = 10.0 Hz, 1H), 4.41-4.39 (m, 4H), 3.69-3.68 (m, 1H), 3.47 (s, 2H), 3.31-3.07 (m, 4H), 2.90-2.86 (m, 3H), 2.43 (bs, 8H), 1.67-1.65 (m, 2H), 1.46-1.42 (m, 9H), 1.03 (t, J = 10.0 Hz, 3H), 0.79 (d, J = 10.0 Hz, 6H)。 LC-MS：943.65 (M + H)。 C119
Figure 02_image279
(S)-6-(2-((R)-2-胺基-4-氯-7-((4-甲氧基-3,5-二甲基吡啶-2-基)甲基)-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)乙醯胺基)-2-((2-(1-異丙基-1H-1,2,4-***-5-基)-5,6-二氫苯并[f]咪唑并[1,2-d][1,4]氧氮雜環庚烷-9-基)胺基)己醯胺(C119)之合成： 將DIPEA (23.6 mg，0.182 mmol，4.0 eq)在室溫下添加至溶解在DMF (1.0 mL)中的(R)-2-(2-胺基-4-氯-7-((4-甲氧基-3,5-二甲基吡啶-2-基)甲基)-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)乙酸(TVD-0004473)(25.8 mg，0.068 mmol，1.5 eq)之攪拌溶液中，隨後添加HATU (16.1 mg，0.068 mmol，1.5 eq)。將所得反應混合物在室溫下攪拌20 min。在20 min後，在室溫下添加(S)-6-胺基-2-((2-(1-異丙基-1H-1,2,4-***-5-基)-5,6-二氫苯并[f]咪唑并[1,2-d][1,4]氧氮雜環庚烷-9-基)胺基)己醯胺(TVD-0004473)(20 mg，0.045 mmol，1.0 eq)。以TLC & LCMS監測反應的進展。將所得反應混合物在80℃下攪拌4 h。在SM消耗後，將反應物料以冰水(20 mL)淬滅，將所得沉澱物過濾且以冰水清洗，接著乾燥以供給粗製物。將粗製化合物以prep.HPLC純化，隨後凍乾以供給成為灰白色固體的(TVD-0004527)(S)-6-(2-((R)-2-胺基-4-氯-7-((4-甲氧基-3,5-二甲基吡啶-2-基)甲基)-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)乙醯胺基)-2-((2-(1-異丙基-1H-1,2,4-***-5-基)-5,6-二氫苯并[f]咪唑并[1,2-d][1,4]氧氮雜環庚烷-9-基)胺基)己醯胺(9.64 mg，30.21%)。
1H NMR：(500 MHz, DMSO-d 6) δ：8.35 (bs, 1H), 8.06 (d, J = 5.0 Hz, 2H), 8.03-7.99 (m, 1H), 7.91 (s, 1H), 7.79 (s, 1H), 7.40 (bs, 1H), 7.04 (bs, 1H), 6.63 (bs, 2H), 6.46 (dd, J = 5.0 Hz, 1H), 6.15 (d, J = 5.0 Hz, 2H), 5.85 (quint, J = 5.0 Hz, 1H), 4.70 (bs, 2H), 4.43-4.40 (m, 4H), 4.03 (s, 3H), 3.89-3.55 (m, 2H), 3.55-3.51 (m, 1H), 3.30-3.27 (m, 1H), 3.03-3.01 (bs, 2H), 2.73-2.69 (m, 1H), 2.36 (s, 3H), 2.21 (s, 3H), 1.64 (bs, 2H), 1.47 (d, J = 6.0 Hz, 6H), 1.38 (bs, 4H)。 LC-MS：798.45 (M + H)。 共軛體C39至C47、C87至C116和C120
共軛體C39至C47、C87至C116和C120之合成方法的非限制性實例包括於下。 C90
Figure 02_image281
(R)-2-(4-(2-(2-胺基-4-氯-7-((4-甲氧基-3,5-二甲基吡啶-2-基)甲基)-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)乙基)哌𠯤-1-基)乙酸三級丁酯(Int-2)之合成： 將TEA (30.50 mg，0.301 mmol，1.0 eq)在室溫下添加至THF (5.0 mL)中的(R)-4-氯-7-((4-甲氧基-3,5-二甲基吡啶-2-基)甲基)-5-(2-(哌𠯤-1-基)乙基)-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2-胺(TVD-0004553)(130 mg，0.301 mmol，1.0 eq)之懸浮液中，隨後添加2-溴乙酸三級丁酯(58.70 mg，0.301 mmol，1.0 eq)。將反應混合物在75至80℃下攪拌。以TLC及LC-MS監測反應的進展。在SM消耗後，蒸發揮發物且以乙酸乙酯(80 mL)萃取，以水(30 mL)清洗。將合併的有機層經硫酸鈉乾燥，過濾且在減壓下濃縮以供給粗製化合物。將粗製化合物以快速管柱層析術純化，以DCM中的2至3%之甲醇溶析出所欲產物，以供給成為淺棕色固體的(R)-2-(4-(2-(2-胺基-4-氯-7-((4-甲氧基-3,5-二甲基吡啶-2-基)甲基)-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)乙基)哌𠯤-1-基)乙酸三級丁酯(Int-2)(120 mg，73.01%之產率)。
(R)-2-(4-(2-(2-胺基-4-氯-7-((4-甲氧基-3,5-二甲基吡啶-2-基)甲基)-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)乙基)哌𠯤-1-基)乙酸(Int-3)之合成： 將TFA (0.33 mL，4.39 mmol，20.0 eq)在室溫下添加至DCM (4.0 mL)中的(R)-2-(4-(2-(2-胺基-4-氯-7-((4-甲氧基-3,5-二甲基吡啶-2-基)甲基)-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)乙基)哌𠯤-1-基)乙酸三級丁酯(Int-2)(120 mg，0.220 mmol，1.0 eq)之攪拌溶液中。將所得反應混合物在室溫下攪拌隔夜且以TLC及LC-MS監測。在SM消耗後，在減壓下移除所有的揮發物且與甲苯共蒸餾以得到粗製化合物，接著將其凍乾以供給成為淺棕色固體的(R)-2-(4-(2-(2-胺基-4-氯-7-((4-甲氧基-3,5-二甲基吡啶-2-基)甲基)-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)乙基)哌𠯤-1-基)乙酸(Int-3)(150 mg，定量性)。
(R)-1-(4-(4-(2-胺基-4-(二氟甲基)嘧啶-5-基)-6-嗎啉基-1,3,5-三𠯤-2-基)哌𠯤-1-基)-2-(4-(2-(2-胺基-4-氯-7-((4-甲氧基-3,5-二甲基吡啶-2-基)甲基)-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)乙基)哌𠯤-1-基)乙-1-酮(TVD-0004589)之合成： 將DIPEA (0.19 mL，1.12 mmol，5.0 eq)添加至DMF (1.0 mL)中的(R)-2-(4-(2-(2-胺基-4-氯-7-((4-甲氧基-3,5-二甲基吡啶-2-基)甲基)-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)乙基)哌𠯤-1-基)乙酸(Int-3)(110 mg，0.224 mmol，1.0eq)之攪拌溶液中，隨後添加HOBT (60.70 mg，0.449 mmol，2.0 eq)、EDC.HCl (86.10 mg，0.449 mmol)且將反應在室溫下攪拌5至10 min。在10 min後，添加4-(二氟甲基)-5-(4-嗎啉基-6-(哌𠯤-1-基)-1,3,5-三𠯤-2-基)嘧啶-2-胺(TVD-0004425)(61.80 mg，0.157 mmol，0.70 eq)且接著將反應在室溫下攪拌18 h。在SM消耗後，如以TLC所監測，接著將反應以冰水(5mL)淬滅，攪拌5 min，將所得沉澱物過濾且以水清洗，隨後以二***(5 mL)清洗，在真空下乾燥以供給粗製化合物。將粗製物以prep HPLC純化 & 凍乾以供給成為灰白色固體的(R)-1-(4-(4-(2-胺基-4-(二氟甲基)嘧啶-5-基)-6-嗎啉基-1,3,5-三𠯤-2-基)哌𠯤-1-基)-2-(4-(2-(2-胺基-4-氯-7-((4-甲氧基-3,5-二甲基吡啶-2-基)甲基)-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)乙基)哌𠯤-1-基)乙-1-酮(C90)(62.0 mg，31.91%之產率)。
1H-NMR：(400 MHz, DMSO-d 6) δ：9.11 (s, 1H), 8.29 (s, 1H), 7.63 (t, J = 52.0 Hz, 1H), 7.57 (bs, 2H) 6.65 (bs, 2H), 4.65 (s, 2H), 4.0-3.77 (m, 13H), 3.65 (bs, 6H), 3.54 (bs, 5H), 3.42 (bs, 2H), 3.35-3.32 (m, 2H), 3.27-2.93 (m, 6H), 2.32 (s, 3H), 2.26 (s, 3H), 2.08 (bs, 1H), 1.91 (bs, 1H)。 LC-MS：865.23 (M + H)。 C91
Figure 02_image283
5-[4-(4-{2-[(5S)-2-胺基-4-氯-7-[(4-甲氧基-3,5-二甲基吡啶-2-基)甲基]-5H,6H,7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基]乙基}哌𠯤-1-基)-6-(嗎啉-4-基)-1,3,5-三𠯤-2-基]-4-(二氟甲基)嘧啶-2-胺(TVD-0004583)之合成： 將4-(二氟甲基)-5-(4-嗎啉基-6-(哌𠯤-1-基)-1,3,5-三𠯤-2-基)嘧啶-2-胺(TVD-0004425)(174 mg，0.442 mmol，0.8 eq)及乙酸(3.32 mg，0.0553 mmol，0.1 eq)添加至DCE (5.0 mL)中的(S)-2-(2-胺基-4-氯-7-((4-甲氧基-3,5-二甲基吡啶-2-基)甲基)-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)乙醛(Int-1)(200 mg，0.553 mmol，1.0 eq)之攪拌溶液中，且將反應混合物在室溫下攪拌1 h。在1 h後，添加三乙醯氧基硼氫化鈉(363 mg，1.66 mmol，3.0 eq)且容許所得反應混合物在室溫下攪拌16 h。以TLC及LCMS監測反應的進展。在SM消耗後，將反應混合物以NaHCO 3飽和溶液淬滅且以DCM (3 x 50 mL)萃取。將合併的有機層經硫酸鈉乾燥，過濾且在減壓下濃縮以供給粗製物，將此粗製物以Prep.HPLC純化，隨後凍乾以供給成為灰白色固體的(S)-5-(2-(4-(4-(2-胺基-4-(二氟甲基)嘧啶-5-基)-6-嗎啉基-1,3,5-三𠯤-2-基)哌𠯤-1-基)乙基)-4-氯-7-((4-甲氧基-3,5-二甲基吡啶-2-基)甲基)-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2-胺(TVD-0004583)(91 mg，22.27%)。
1H NMR：( DMSO, 400 MHz) δ：9.79 (bs, 1H), 9.13 (s, 1H), 8.27 (s, 1H), 7.61 (t, J = 52.0 Hz, 1H), 7.60 (bs, 2H, merged with triplet), 6.63 (bs, 2H), 4.76 (bs, 2H), 4.64 (s, 2H), 3.81-3.78 (m, 8H), 3.65 (bs, 5H), 3.65 (bs, 2H), 3.38-3.32 (m, 6H), 3.06-3.04(m, 2H), 2.24 (s, 3H), 2.20 (s, 3H)。 LC-MS：739.26 (M+H) C92
Figure 02_image285
4-(4-(2-胺基-4-(二氟甲基)嘧啶-5-基)-6-嗎啉基-1,3,5-三𠯤-2-基)哌𠯤-1-甲酸4-(2-(三級丁氧基)-2-側氧基乙基)苯酯(Int-2)之合成： 將DIPEA (279 mg，2.16 mmol，3.0 eq)在室溫下添加至DCM (2.0 mL)中的2-(4-羥基苯基)乙酸甲酯(Int-1)(150 mg，0.720 mmol，1.0 eq)之攪拌溶液中，隨後添加氯甲酸4-硝苯酯(160 mg，0.792 mmol，1.1 eq)。將所得反應混合物在室溫下攪拌2 h。在SM消耗後(以TLC確認)，在室溫下添加溶解在DMF (1.0 mL)中的(TVD-0004425)(255 mg，0.648 mmol，0.9 eq)之溶液。將所得反應混合物在室溫下攪拌16 h。以TLC及LCMS監測反應混合物的進展。在完全反應後，將反應混合物以冰水(100 mL)淬滅且以DCM (2 x50 mL)萃取，以鹽水溶液清洗，經無水Na 2SO 4乾燥且在減壓下濃縮以給出粗製化合物。將MTBE (2 mL)添加至粗製化合物中且攪拌20 min，過濾以得到灰白色固體的純4-(4-(2-胺基-4-(二氟甲基)嘧啶-5-基)-6-嗎啉基-1,3,5-三𠯤-2-基)哌𠯤-1-甲酸4-(2-(三級丁氧基)-2-側氧基乙基)苯酯(Int-2)(250 mg，59.2%)。
2-(4-((4-(4-(2-胺基-4-(二氟甲基)嘧啶-5-基)-6-嗎啉基-1,3,5-三𠯤-2-基)哌𠯤-1-羰基)氧基)苯基)乙酸(Int-3)之合成： 將TFA (1.46 g，12.8 mmol，30.0 eq)在0℃下添加至DCM (4.0 mL)中的4-{4-[2-胺基-4-(二氟甲基)嘧啶-5-基]-6-(嗎啉-4-基)-1,3,5-三𠯤-2-基}哌𠯤-1-甲酸4-(2-甲氧基-2-側氧基乙基)苯酯(Int-2)(250 mg，0.4271 mmol，1 eq)之攪拌溶液中。將所得反應混合物在室溫下攪拌6 h。以LCMS監測反應混合物的進展。在完全反應後，在減壓下蒸發反應揮發物以得到粗製化合物。將粗製化合物凍乾以供給灰白色固體的2-(4-((4-(4-(2-胺基-4-(二氟甲基)嘧啶-5-基)-6-嗎啉基-1,3,5-三𠯤-2-基)哌𠯤-1-羰基)氧基)苯基)乙酸(Int-3)(130 mg，53.27%之產率)。此粗製物本身無需純化而用於下一步驟中。
4-(4-(2-胺基-4-(二氟甲基)嘧啶-5-基)-6-嗎啉基-1,3,5-三𠯤-2-基)哌𠯤-1-甲酸(R)-4-(2-(4-(2-(2-胺基-4-氯-7-((4-甲氧基-3,5-二甲基吡啶-2-基)甲基)-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)乙基)哌𠯤-1-基)-2-側氧基乙基)苯酯(TVD-0004566)之合成： 將DIPEA (80.9 mg，0.6 mmol，5.0 eq)在室溫下添加至溶解在DMF (1.0 mL)中的2-[4-(4-{4-[2-胺基-4-(二氟甲基)嘧啶-5-基]-6-(嗎啉-4-基)-1,3,5-三𠯤-2-基}哌𠯤-1-羰氧基)苯基]乙酸(Int-3)(100 mg，0.125 mmol，1.0 eq)之攪拌溶液中，隨後添加EDC.HCl (48 mg，0.25 mmol，2.0 eq)及HOBt (38.1 mg，0.25 mmol，2.0 eq)。將所得反應混合物在室溫下攪拌16 h。以TLC及LCMS監測反應的進展。在反應混合物完成後，將反應混合物以冰水(50 mL)淬滅，攪拌20 min，將沉澱的固體過濾且以冰水(20 mL)清洗，在真空下乾燥以得到固體粗製物150 mg。將粗製化合物以Prep HPLC純化，隨後凍乾以供給灰白色固體的4-(4-(2-胺基-4-(二氟甲基)嘧啶-5-基)-6-嗎啉基-1,3,5-三𠯤-2-基)哌𠯤-1-甲酸(R)-4-(2-(4-(2-(2-胺基-4-氯-7-((4-甲氧基-3,5-二甲基吡啶-2-基)甲基)-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)乙基)哌𠯤-1-基)-2-側氧基乙基)苯酯(TVD-0004566)(52 mg，43.59%之產率)。
1H NMR：(400 MHz, DMSO-d 6) δ 9.80 (bs, 1H), 9.12 (s, 1H), 8.28 (s, 1H), 7.64 (t, J = 52.0 Hz, 1H), 7.58 (bs, 2H), 7.22 (d, J = 12.0 Hz, 2H), 7.10 (d, J = 8.0 Hz, 2H) 6.64 (bs, 2H), 4.64 (s, 2H), 4.43 (bs, 2H), 3.89 (s, 4H), 3.81-3.77 (m, 10H), 3.67-3.62 (m, 6H), 3.52 (bs, 4H), 3.35 (s, 2H), 3.26-3.22 (m, 5H), 2.26 (s, 3H), 2.21 (s, 3H), 2.10 (s, 1H), 2.0 (s, 1H)。 LC-MS：985.27 (M + H)。 C93
Figure 02_image287
(R)-2-(4-(3-(2-胺基-4-氯-7-((4-甲氧基-3,5-二甲基吡啶-2-基)甲基)-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)丙基)哌𠯤-1-基)乙酸三級丁酯(Int-2)之合成： 將TEA (22.70 mg，0.224 mmol，1.0 eq)在室溫下添加至THF (3.0 mL)中的(R)-4-氯-7-((4-甲氧基-3,5-二甲基吡啶-2-基)甲基)-5-(3-(哌𠯤-1-基)丙基)-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2-胺(TVD-0004554)(100 mg，0.224 mmol，1.0 eq)之懸浮液中。在30 min後，在室溫下添加2-溴乙酸三級丁酯(Int-1)(43.70 mg，0.224 mmol，1.0 eq)。將反應混合物攪拌以維持溶劑溫和回流的此等速率攪拌3 h。以TLC及LC-MS監測反應的進展。在SM消耗後，將反應在水(20 mL)中淬滅且以(2 x 50 mL)萃取。將合併的有機層經硫酸鈉乾燥，過濾且在減壓下濃縮以獲得粗製物。將粗製物以combi-flash純化，以DCM中的0至3%之MeOH溶析出所欲產物，收集所有的純流份且在減壓濃縮以供給成為黃色濃稠油的(R)-2-(4-(3-(2-胺基-4-氯-7-((4-甲氧基-3,5-二甲基吡啶-2-基)甲基)-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)丙基)哌𠯤-1-基)乙酸三級丁酯(Int-2)(75 mg，59.72%之產率)。
(R)-2-(4-(3-(2-胺基-4-氯-7-((4-甲氧基-3,5-二甲基吡啶-2-基)甲基)-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)丙基)哌𠯤-1-基)乙酸(Int-3)之合成： 將TFA (0.137 mL，1.79 mmol，20.0 eq)在室溫下添加至DCM (3.0 mL)中的(R)-2-(4-(3-(2-胺基-4-氯-7-((4-甲氧基-3,5-二甲基吡啶-2-基)甲基)-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)丙基)哌𠯤-1-基)乙酸三級丁酯(Int-2)(50 mg，0.089 mmol，1.0 eq)之攪拌溶液中。將所得反應混合物在室溫下攪拌隔夜。以TLC及LC-MS監測反應的進展。在SM消耗後，在減壓下蒸發所有的揮發物且與甲苯共蒸餾以得到所欲產物，接著將其凍乾以供給成為淺黃色濃稠油的(R)-2-(4-(3-(2-胺基-4-氯-7-((4-甲氧基-3,5-二甲基吡啶-2-基)甲基)-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)丙基)哌𠯤-1-基)乙酸(Int-3)(65 mg，TFA鹽，定量性)。
(R)-1-(4-(4-(2-胺基-4-(二氟甲基)嘧啶-5-基)-6-嗎啉基-1,3,5-三𠯤-2-基)哌𠯤-1-基)-2-(4-(3-(2-胺基-4-氯-7-((4-甲氧基-3,5-二甲基吡啶-2-基)甲基)-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)丙基)哌𠯤-1-基)乙-1-酮(TVD-0004561)之合成： 將DIPEA (0.087 mL，0.49 mmol，5.0 eq)添加至DMF (0.5 mL)中的(R)-2-(4-(3-(2-胺基-4-氯-7-((4-甲氧基-3,5-二甲基吡啶-2-基)甲基)-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)丙基)哌𠯤-1-基)乙酸(Int-3)(50 mg，0.099 mmol，1.0eq)之攪拌溶液中，隨後添加HATU (47.10 mg，0.124 mmol，1.25 eq)且將反應在室溫下攪拌5至10 min。在10 min後，添加4-(二氟甲基)-5-(4-嗎啉基-6-(哌𠯤-1-基)-1,3,5-三𠯤-2-基)嘧啶-2-胺(TVD-0004425)(39.0 mg，0.099 mmol，1.0 eq)且在室溫下攪拌18 h。以TLC及LCMS監測反應的進展。在完全反應後，將反應在冰水(5.0 mL)中淬滅，攪拌5 min，將所得沉澱物過濾且以水清洗，隨後以DEE (5.0 mL)清洗，在真空下乾燥以供給粗製化合物。將粗製化合物以prep HPLC純化 & 凍乾以供給成為灰白色固體的(R)-1-(4-(4-(2-胺基-4-(二氟甲基)嘧啶-5-基)-6-嗎啉基-1,3,5-三𠯤-2-基)哌𠯤-1-基)-2-(4-(3-(2-胺基-4-氯-7-((4-甲氧基-3,5-二甲基吡啶-2-基)甲基)-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)丙基)哌𠯤-1-基)乙-1-酮(TVD-0004561) (7.0 mg，8.04%)。
1H-NMR：(400 MHz, DMSO-d 6) δ：9.11 (s, 1H), 8.26 (s, 1H), 7.63 (t, J = 54.0 Hz, 1H), 7.57 (bs, 2H), 6.59 (bs, 2H), 4.63 (s, 2H), 3.96-3.77 (m, 14H), 3.66-3.62 (m, 8H), 3.54 (s, 6H), 3.29-3.03 (m, 6H), 2.24 (s, 3H), 2.20 (s, 3H), 1.76 (bs, 1H), 1.56 (bs, 3H)。 LC-MS：879.26 (M + H)。 C95
Figure 02_image289
(R)-5-(3-(4-(4-(2-胺基-4-(二氟甲基)嘧啶-5-基)-6-嗎啉基-1,3,5-三𠯤-2-基)哌𠯤-1-基)丙基)-4-氯-7-((4-甲氧基-3,5-二甲基吡啶-2-基)甲基)-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2-胺(TVD-0004557)之合成： 將4-(二氟甲基)-5-(4-嗎啉基-6-(哌𠯤-1-基)-1,3,5-三𠯤-2-基)嘧啶-2-胺(TVD-0004425)(94.2 mg，0.239 mmol，1.0 eq)及乙酸(1.44 mg，0.23.9 mmol，0.1 eq)在室溫下添加至1,2-二氯乙烷(2.0 mL)中的(R)-3-(2-胺基-4-氯-7-((4-甲氧基-3,5-二甲基吡啶-2-基)甲基)-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)丙醛(Int-1)(90 mg，0.239 mmol，1.0 eq)之攪拌溶液中。在30 min後，添加三乙醯氧基硼氫化鈉(152 mg，0.718 mmol，3 eq)。將所得反應混合物在室溫下攪拌6 h。以LCMS及TLC監測反應的進展。在SM消耗後，將反應以水淬滅且以過濾收集所得固體。將粗製物以prep.HPLC純化，隨後凍乾以供給成為灰白色固體的(R)-5-(3-(4-(4-(2-胺基-4-(二氟甲基)嘧啶-5-基)-6-嗎啉基-1,3,5-三𠯤-2-基)哌𠯤-1-基)丙基)-4-氯-7-((4-甲氧基-3,5-二甲基吡啶-2-基)甲基)-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2-胺(TVD-0004557) (56.0 mg，31%之產率)。
1H NMR：(500 MHz, DMSO-d 6) δ：9.65 (s, 1H), 9.13 (s, 1H), 8.28 (s, 1H), 7.61 (t, J = 54.0 Hz, 1H), 7.61 (bs, 2H), 6.61 (s, 2H), 4.74 (bs, 2H), 4.65 (s, 2H), 3.82-3.78 (m, 6H), 3.68-3.66 (m, 5H), 3.51 (m, 2H), 3.30-3.21 (m, 4H), 3.16-3.02 (m, 4H), 2.25 (s, 3H), 2.21 (s, 3H), 1.71-1.59 (m, 4H)。 LC-MS：753.42 (M + H)。 C98
Figure 02_image291
(2-(2-羥基乙氧基)乙基)胺甲酸三級丁酯(Int-2)之合成： 將二碳酸二-三級丁酯(3.11 g，14.3 mmol，1.0 eq)添加至DCM (15 mL)中的(2-(2-羥基乙氧基)乙基)胺甲酸三級丁酯(Int-1)(1.50 g，14.3 mmol，1.0 eq)之攪拌溶液中且在室溫下攪拌18 h。以TLC & LCMS監測反應的進展。在SM消耗後，將反應混合物在減壓下濃縮以得到粗製物。將粗製物以combi-flash純化，以石油醚溶劑系統中的0至70%之乙酸乙酯溶析出所欲產物，收集所有的純流份且在減壓濃縮以供給成為無色油的(2-(2-羥基乙氧基)乙基)胺甲酸三級丁酯(Int-2)(1.5 g，51.22%之產率)。
4-(4-(2-胺基-4-(二氟甲基)嘧啶-5-基)-6-嗎啉基-1,3,5-三𠯤-2-基)哌𠯤-1-甲酸2-(2-((三級丁氧基羰基)胺基)乙氧基)乙酯(Int-3)之合成： 將TEA (0.425 mL，3.05 mmol，2.5 eq)在0℃下添加至DCM (4 mL)中的(2-(2-羥基乙氧基)乙基)胺甲酸三級丁酯(Int-2)(250 mg，1.22 mmol，1.0 eq)之攪拌溶液中，隨後添加氯甲酸4-硝苯酯(246 mg，1.22 mmol，1.0 eq)。將所得反應混合物溫熱至室溫且攪拌1 h。以TLC監測中間物形成的進展。在SM消耗後，添加在DMF (4.0 mL)中的4-(二氟甲基)-5-(4-嗎啉基-6-(哌𠯤-1-基)-1,3,5-三𠯤-2-基)嘧啶-2-胺(TVD-0004425)(479 mg，1.22 mmol，1.0 eq)且將所得反應混合物在室溫下攪拌2 h。在SM消耗後，將反應混合物以水(50 mL)稀釋且以乙酸乙酯(3 x 50 mL)萃取。將合併的有機層以冷鹽水(100 mL)清洗。將有機層經硫酸鈉乾燥，過濾且蒸發。將粗製化合物以二***(10.0 mL)濕磨，將所獲得的固體過濾，在真空下完全乾燥以供給成為灰白色固體的4-(4-(2-胺基-4-(二氟甲基)嘧啶-5-基)-6-嗎啉基-1,3,5-三𠯤-2-基)哌𠯤-1-甲酸2-(2-((三級丁氧基羰基)胺基)乙氧基)乙酯(Int-3)(600 mg，78.86%之產率)。
4-(4-(2-胺基-4-(二氟甲基)嘧啶-5-基)-6-嗎啉基-1,3,5-三𠯤-2-基)哌𠯤-1-甲酸2-(2-胺基乙氧基)乙酯(Int-4)之合成： 將TFA (0.092 mL，1.20 mmol，5.0 eq)在0℃下添加至DCM (8.0 mL)中的4-(4-(2-胺基-4-(二氟甲基)嘧啶-5-基)-6-嗎啉基-1,3,5-三𠯤-2-基)哌𠯤-1-甲酸2-(2-((三級丁氧基羰基)胺基)乙氧基)乙酯(Int-3)(150 mg，0.22 mmol，1.0 eq)之攪拌溶液中。將所得反應混合物溫熱至室溫且在相同的溫度下攪拌2 h。以TLC & LCMS監測反應的進展。在SM消耗後，在減壓下濃縮所有的揮發物以供給成為無色濃稠油的粗製物4-(4-(2-胺基-4-(二氟甲基)嘧啶-5-基)-6-嗎啉基-1,3,5-三𠯤-2-基)哌𠯤-1-甲酸2-(2-胺基乙氧基)乙酯(Int-4)(190 mg，成為TFA鹽，定量產率)。粗製化合物無需任何進一步純化而用於下一步驟中。
4-(4-(2-胺基-4-(二氟甲基)嘧啶-5-基)-6-嗎啉基-1,3,5-三𠯤-2-基)哌𠯤-1-甲酸(R)-2-(2-(2-(2-胺基-4-氯-7-((4-甲氧基-3,5-二甲基吡啶-2-基)甲基)-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)乙醯胺基)乙氧基)乙酯(TVD-0004537)之合成： 將DIPEA (0.14 mL，0.793 mmol，3.0 eq)在室溫下添加至DMF (2.0 mL)中的(R)-2-(2-胺基-4-氯-7-((4-甲氧基-3,5-二甲基吡啶-2-基)甲基)-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)乙酸(TVD-0004473)(100 mg，0.265 mmol，1.0 eq)之攪拌溶液中，隨後添加HATU (151 mg，0.397 mmol，1.5 eq)且將反應物料在室溫下攪拌5至10 min，在室溫下添加4-(4-(2-胺基-4-(二氟甲基)嘧啶-5-基)-6-嗎啉基-1,3,5-三𠯤-2-基)哌𠯤-1-甲酸2-(2-胺基乙氧基)乙酯(Int-4)(167 mg，0.318 mmol，1.2 eq)且將反應在室溫下持續攪拌18 h。在SM消耗後，如以TLC & LCMS所監測，將反應混合物在冰水(10 mL)中淬滅且攪拌5 min，將所得沉澱物過濾且以水清洗，隨後以二***(10 mL)清洗，在真空下乾燥以供給粗製化合物。將粗製物以Prep.HPLC純化且凍乾以供給成為灰白色固體的4-(4-(2-胺基-4-(二氟甲基)嘧啶-5-基)-6-嗎啉基-1,3,5-三𠯤-2-基)哌𠯤-1-甲酸(R)-2-(2-(2-(2-胺基-4-氯-7-((4-甲氧基-3,5-二甲基吡啶-2-基)甲基)-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)乙醯胺基)乙氧基)乙酯(C98)(74 mg，31.62%之產率)。
1H-NMR：(400 MHz, DMSO-d 6) δ：9.10 (s, 1H), 8.13 (s, 1H), 7.98 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.62 (t, J = 52.0 Hz, 1H), 7.57 (bs, 2H), 6.40 (s, 2H), 4.54 (s, 2H), 4.11 (d, J = 4.4 Hz, 2H), 3.75-3.56 (m, 16H), 3.44-3.39 (m, 8H), 3.18-3.12 (m, 4H), 2.66 (d, J = 2.8 Hz , 1H), 2.21-2.2 (m, 1H), 2.15 (d, J = 8.0 Hz, 6H)。 LC-MS：884.43 (M + H)。 C101
Figure 02_image293
1-{4-[2-胺基-4-(二氟甲基)嘧啶-5-基]-6-(嗎啉-4-基)-1,3,5-三𠯤-2-基}哌啶-4-酮(Int-1)之合成： 將戴斯-馬丁過碘烷(Dess–Martin periodinane)(312 mg，0.73 mmol，1.5 eq)在0℃下分批添加至DCM (15 mL)中的1-{4-[2-胺基-4-(二氟甲基)嘧啶-5-基]-6-(嗎啉-4-基)-1,3,5-三𠯤-2-基}哌啶-4-醇(TVD-0004426)(200 mg，0.48 mmol，1.0 eq)之溶液中。將所得反應混合物緩慢地溫熱至室溫且在相同的溫度下攪拌18 h。以TLC監測反應的進展。在SM完全轉化後，將反應混合物以水(10 mL)淬滅，以飽和NaHCO 3調整至pH~8且以DCM (3 x 15 mL)萃取。將合併的有機層經硫酸鈉乾燥，過濾且在減壓下濃縮以供給粗製物。將粗製化合物以使用矽膠(100至200網孔)之管柱層析術純化。使用DCM中的5至6%之MeOH溶析出化合物。將所有的純流份混合且濃縮以供給成為淺黃色固體的1-{4-[2-胺基-4-(二氟甲基)嘧啶-5-基]-6-(嗎啉-4-基)-1,3,5-三𠯤-2-基}哌啶-4-酮(Int-1)(200 mg，99%)。
4-(二氟甲基)-5-[4-(嗎啉-4-基)-6-[4-({2-[2-(丙-2-炔-1-氧基)乙氧基]乙基}胺基)哌啶-1-基]-1,3,5-三𠯤-2-基]嘧啶-2-胺(Int-3)之合成： 將3-[2-(2-胺基乙氧基)乙氧基]丙-1-炔(70.5 mg，0.49 mmol，1.0 eq)在0℃下分批添加至DCM (10.0 mL)中的1-{4-[2-胺基-4-(二氟甲基)嘧啶-5-基]-6-(嗎啉-4-基)-1,3,5-三𠯤-2-基}哌啶-4-酮(200 mg，0.49 mmol，1.0 eq)之攪拌溶液中，隨後添加三乙醯氧基硼氫化鈉(114 mg，0.54 mmol，1.1 eq)。容許所得反應混合物於室溫下18 h。在SM消耗後，將反應物料以水(5 mL)淬滅且以DCM (3 x 15 mL)萃取。將合併的有機層經硫酸鈉乾燥，過濾且在減壓下濃縮以供給粗製物，將粗製化合物以使用矽膠(100至200網孔)之管柱層析術純化，以DCM中的2至5%之MeOH溶析出化合物。將所有的純流份混合且濃縮以供給成為淺黃色固體4-(二氟甲基)-5-[4-(嗎啉-4-基)-6-[4-({2-[2-(丙-2-炔-1-氧基)乙氧基]乙基}胺基)哌啶-1-基]-1,3,5-三𠯤-2-基]嘧啶-2-胺(Int-2)(160 mg， 60.93%)。
5-(4-{4-[(2-{2-[(3-{2-胺基-4-氯-7-[(4-甲氧基-3,5-二甲基吡啶-2-基)甲基]-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基}丙-2-炔-1-基)氧基]乙氧基}乙基)胺基]哌啶-1-基}-6-(嗎啉-4-基)-1,3,5-三𠯤-2-基)-4-(二氟甲基)嘧啶-2-胺(C101)之合成： 將TEA (0.085 mL，0.57 mmol，3.0 eq)在室溫下添加至DCM (15 mL)中的4-氯-5-碘-7-[(4-甲氧基-3,5-二甲基吡啶-2-基)甲基]-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2-胺(85 mg，0.19 mmol，1.0 eq)之攪拌溶液中，隨後添加(Int-3) 4-(二氟甲基)-5-[4-(嗎啉-4-基)-6-[4-({2-[2-(丙-2-炔-1-氧基)乙氧基]乙基}胺基)哌啶-1-基]-1,3,5-三𠯤-2-基]嘧啶-2-胺(153 mg，0.28 mmol，1.5 eq)且將反應物料以氬氣脫氣10至20 min，且接著添加CuI (10.9 mg，0.05 mmol，0.3 eq)，隨後添加Pd( PPh 3) 4(11.1 mg，0.009 mmol，0.05 eq)且再脫氣5 min。將所得反應混合物加熱至45℃且攪拌12 h。在SM完全轉化後，將反應混合物通過短的矽藻土床過濾且將過濾物在減壓下濃縮以供給粗製物。將粗製化合物經受prep.HPLC以供給成為灰白色固體的5-(4-{4-[(2-{2-[(3-{2-胺基-4-氯-7-[(4-甲氧基-3,5-二甲基吡啶-2-基)甲基]-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基}丙-2-炔-1-基)氧基]乙氧基}乙基)胺基]哌啶-1-基}-6-(嗎啉-4-基)-1,3,5-三𠯤-2-基)-4-(二氟甲基)嘧啶-2-胺(C101)(74 mg，45.48%)。
1H NMR：(DMSO-d 6, 400 Hz) δ：9.10 (s, 1H), 8.52 (bs, 2H), 8.04 (s, 1H), 7.62 (t, J = 52 Hz, 1H), 7.57 (bs, 2H), 7.39 (s, 1H), 6.74 (bs, 2H), 5.26 (s, 2H), 4.75 (bs, 2H), 4.41 (s, 2H), 3.73-3.58 (m, 18H), 3.18 (bs, 2H), 2.90 (bs, 2H), 2.24 (s, 3H), 2.15-2.07 (m, 5H), 1.45-1.39 (m, 1H)。 LC-MS：849.81 (M + H)。 C102
Figure 02_image295
4-{4-[(4-{3-[2,4-二羥基-5-(丙-2-基)苯基]-5-(乙基胺甲醯基)-4H-1,2,4-***-4-基}苯基)甲基]哌𠯤-1-基}丁酸乙酯(Int-2)之合成： 將NaHCO 3(108 mg，1.29 mmol，3.0 eq)在室溫下添加至DMF (4.5 mL)中的5-[2,4-二羥基-5-(丙-2-基)苯基]-N-乙基-4-{4-[(哌𠯤-1-基)甲基]苯基}-4H-1,2,4-***-3-甲醯胺(200 mg，0.43 mmol，1.0 eq)之攪拌溶液中，隨後添加4-溴丁酸乙酯(126 mg，0.64 mmol，1.5 eq)。將所得反應混合物在室溫下攪拌28 h。以TLC監測反應的進展。在SM消耗後，將反應混合物以水(10 mL)稀釋且以EtOAC (3 x 50 mL)萃取。將合併的有機層經硫酸鈉乾燥，過濾且蒸發以得到粗製物。將粗製化合物以二***(50 mL)濕磨且過濾，以供給成為淺黃色固體的4-{4-[(4-{3-[2,4-二羥基-5-(丙-2-基)苯基]-5-(乙基胺甲醯基)-4H-1,2,4-***-4-基}苯基)甲基]哌𠯤-1-基}丁酸乙酯(Int-2)(200 mg，80.28%)。
4-{4-[(4-{3-[2,4-二羥基-5-(丙-2-基)苯基]-5-(乙基胺甲醯基)-4H-1,2,4-***-4-基}苯基)甲基]哌𠯤-1-基}丁酸(Int-3)之合成： 將LiOH.H 2O (16.0 mg，0.34 mmol，1.0 eq)在室溫下添加至溶劑THF：MeOH：H 2O之混合物(5 mL，3：1：1)中的4-{4-[(4-{3-[2,4-二羥基-5-(丙-2-基)苯基]-5-(乙基胺甲醯基)-4H-1,2,4-***-4-基}苯基)甲基]哌𠯤-1-基}丁酸乙酯(Int-2)(200 mg，0.34 mmol，1.0 eq)之攪拌溶液中。容許所得反應混合物至室溫且攪拌16 h。在SM消耗後，在減壓下蒸發揮發物，接著將反應混合物以水(5.0 mL)稀釋且以水性HCl中和至pH~6，以DCM中的10%之MeOH (16 x 10 mL)萃取。將合併的有機層經硫酸鈉乾燥，過濾且在減壓下濃縮以供給成為淺黃色固體的4-{4-[(4-{3-[2,4-二羥基-5-(丙-2-基)苯基]-5-(乙基胺甲醯基)-4H-1,2,4-***-4-基}苯基)甲基]哌𠯤-1-基}丁酸(Int-3)(90 mg，47.29%)。
4-[4-({4-[4-(4-{4-[2-胺基-4-(二氟甲基)嘧啶-5-基]-6-(嗎啉-4-基)-1,3,5-三𠯤-2-基}哌𠯤-1-基)-4-側氧基丁基]哌𠯤-1-基}甲基)苯基]-5-[2,4-二羥基-5-(丙-2-基)苯基]-N-乙基-4H-1,2,4-***-3-甲醯胺(C102)之合成： 將DIPEA (0.086 mL，0.49 mmol，3.0 eq)在室溫下添加至DMF (3.5 mL)中的4-{4-[(4-{3-[2,4-二羥基-5-(丙-2-基)苯基]-5-(乙基胺甲醯基)-4H-1,2,4-***-4-基}苯基)甲基]哌𠯤-1-基}丁酸(Int-3)(90 mg，0.16 mmol，1.0 eq)之攪拌溶液中，隨後添加HATU (93.2 mg，0.24 mmol，1.5 eq)且攪拌5至10 min。然後在室溫下添加4-(二氟甲基)-5-[4-(嗎啉-4-基)-6-(哌𠯤-1-基)-1,3,5-三𠯤-2-基]嘧啶-2-胺(TVD-0004425)(77.2 mg，0.196 mmol，1.2 eq)。將所得反應物料在室溫下攪拌18 h。以TLC及LCMS監測反應的進展。在SM消耗後，將反應混合物以水(8 mL)稀釋，將所得固體過濾，以二***(8 mL)清洗且在真空下乾燥以得到粗製物。將此粗製物以prep.HPLC純化以供給成為灰白色固體的4-[4-({4-[4-(4-{4-[2-胺基-4-(二氟甲基)嘧啶-5-基]-6-(嗎啉-4-基)-1,3,5-三𠯤-2-基}哌𠯤-1-基)-4-側氧基丁基]哌𠯤-1-基}甲基)苯基]-5-[2,4-二羥基-5-(丙-2-基)苯基]-N-乙基-4H-1,2,4-***-3-甲醯胺(C102)(20 mg，13.21%)。
1H NMR：(400 MHz, DMSO-d 6) δ：9.74 (bs, 1H), 9.11 (s, 1H), 8.97 (bs, 1H), 7.63 (s, 1H), 7.49-7.40 (m, 1H), 7.63 (t, J = 56.0 Hz, 1H), 7.52 (bs, 2H), 7.41 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.33 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 6.60 (s, 1H), 6.33 (s, 1H), 3.88-3.76 (m, 10H), 3.66-3.65 (m, 10H), 3.20-2.90 (m, 10H), 2.47 (s, 2H), 1.89 (bs, 2H), 1.04 (t, J = 8.0 Hz , 3H), 0.82 (d, J = 4.0 Hz, 6H)。 LC-MS：926.96 (M + H)。 C103
Figure 02_image297
4-(4-(4-(2-胺基-4-(二氟甲基)嘧啶-5-基)-6-嗎啉基-1,3,5-三𠯤-2-基)哌𠯤-1-基)丁酸乙酯(Int-2)之合成： 將NaHCO 3(0.085 g，0.1 mol，2.0 eq)在室溫下添加至溶解在DMF (8 mL)中的4-(二氟甲基)-5-(4-嗎啉基-6-(哌𠯤-1-基)-1,3,5-三𠯤-2-基)嘧啶-2-胺(0.2 g，0.05 mol，1.0 eq)及4-溴丁酸乙酯(0.119 g，0.061 mol，1.2 eq)之攪拌溶液中。將所得反應混合物在室溫下攪拌24 h。在SM消耗後，將反應物料以水(40 mL)淬滅且以乙酸乙酯(4 x 10 mL)萃取，將合併的有機層以鹽水清洗，將有機層經Na 2SO 4乾燥，過濾且濃縮以供給成為無色油的粗製物4-(4-(4-(2-胺基-4-(二氟甲基)嘧啶-5-基)-6-嗎啉基-1,3,5-三𠯤-2-基)哌𠯤-1-基)丁酸乙酯(Int-2)(150 mg，58.13%)。
4-(4-(4-(2-胺基-4-(二氟甲基)嘧啶-5-基)-6-嗎啉基-1,3,5-三𠯤-2-基)哌𠯤-1-基)丁酸(Int-3)之合成： 將LiOH.H 2O (0.062 g，0.14 mmol，5.0 eq)在室溫下添加至溶劑THF/H 2O (2：0.5 mL)之混合物中的4-(4-(4-(2-胺基-4-(二氟甲基)嘧啶-5-基)-6-嗎啉基-1,3,5-三𠯤-2-基)哌𠯤-1-基)丁酸乙酯(Int-2)(0.15 g，0.0296 mmol，1.0 eq)之攪拌溶液中。將所得反應混合物在室溫下攪拌16 h。在SM消耗後，在減壓下蒸發揮發物，將粗製反應物料以水(5 mL)稀釋，以1N HCl調整至pH~5至6且以DCM中的10%之甲醇萃取，將合併的有機層經Na 2SO 4乾燥，過濾且濃縮以供給粗製物。將粗製化合物以正己烷濕磨以供給成為灰白色固體的4-(4-(4-(2-胺基-4-(二氟甲基)嘧啶-5-基)-6-嗎啉基-1,3,5-三𠯤-2-基)哌𠯤-1-基)丁酸(Int-3)(130 mg，91.74%)。
4-(4-((4-(4-(4-(4-(2-胺基-4-(二氟甲基)嘧啶-5-基)-6-嗎啉基-1,3,5-三𠯤-2-基)哌𠯤-1-基)丁醯基)哌𠯤-1-基)甲基)苯基)-5-(2,4-二羥基-5-異丙基苯基)-N-乙基-4H-1,2,4-***-3-甲醯胺(C103)之合成： 將DIPEA (0.140 g，0.1 mmol，4.0 eq)在室溫下添加至DMF (2.0 mL)中的4-(4-(4-(2-胺基-4-(二氟甲基)嘧啶-5-基)-6-嗎啉基-1,3,5-三𠯤-2-基)哌𠯤-1-基)丁酸(Int-3)(0.13 g，0.027 mol，1.0 eq)及5-(2,4-二羥基-5-異丙基苯基)-N-乙基-4-(4-(哌𠯤-1-基甲基)苯基)-4H-1,2,4-***-3-甲醯胺(0.189 g，0.04 mol，1.5 eq)之攪拌溶液中，隨後添加HATU (0.155 g，0.04 mmol，1.5 eq)。將所得反應混合物加熱至80℃且攪拌4 h。在起始材料消耗後，將反應物料以冰水(20 mL)淬滅，將所得固體過濾且以冰水清洗，乾燥以供給粗製化合物(200 mg)。將粗製化合物以Prep.HPLC純化且凍乾以供給成為灰白色固體的4-(4-((4-(4-(4-(4-(2-胺基-4-(二氟甲基)嘧啶-5-基)-6-嗎啉基-1,3,5-三𠯤-2-基)哌𠯤-1-基)丁醯基)哌𠯤-1-基)甲基)苯基)-5-(2,4-二羥基-5-異丙基苯基)-N-乙基-4H-1,2,4-***-3-甲醯胺(C103)(91 mg，36.2%)。
1H NMR：(400 MHz, DMSO-d 6) δ：10.24 (bs, 1H), 9.74 (s, 2H), 9.13 (s, 1H), 9.01 (bs, 1H), 7.75-7.42 (m, 7H), 6.66 (s, 1H), 6.31 (s, 1H), 4.76 (bs, 2H), 4.37-4.01 (m, 2H), 3.78 (bs, 4H), 3.65 (bs, 4H), 3.30 (bs, 6H), 3.21-2.90 (m, 14H), 1.90 (bs, 2H), 1.05 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 0.87 (d, J = 6.8 Hz, 6H)。 LC-MS：926.45 (M + H)。 C104
Figure 02_image299
4-{4-[2-胺基-4-(二氟甲基)嘧啶-5-基]-6-(嗎啉-4-基)-1,3,5-三𠯤-2-基}哌𠯤-1-甲酸4-({[(三級丁氧基)羰基]胺基}甲基)苯酯(Int-2)之合成： 將DIPEA (0.178 mL，1.00 mmol，3.0 eq)在0℃下添加至DCM (4 mL)中的N-[(4-羥基苯基)甲基]胺甲酸三級丁酯(Int-1)(75 mg，0.336 mmol，1.0 eq)之攪拌溶液中，隨後添加氯甲酸4-硝苯酯(67.7 mg，0.336 mmol，1.0 eq)。容許所得反應混合物至室溫且攪拌2 h。以TLC監測中間物形成的進展。在SM消耗後，在室溫下添加在DMF (2.5 mL)中的4-(二氟甲基)-5-[4-(嗎啉-4-基)-6-(哌𠯤-1-基)-1,3,5-三𠯤-2-基]嘧啶-2-胺(132 mg，0.336 mmol，1.0 eq)。將所得反應混合物在室溫下攪拌2 h。在SM消耗後，將反應物料以水(50 mL)稀釋且以乙酸乙酯(2 x 50 mL)萃取。將合併的有機層以飽和鹽水(1 x 50 mL)清洗。將有機層經硫酸鈉乾燥，過濾且蒸發以獲得粗製化合物。將粗製化合物以MTBE (5 mL)濕磨且過濾以供給成為灰白色固體的純4-{4-[2-胺基-4-(二氟甲基)嘧啶-5-基]-6-(嗎啉-4-基)-1,3,5-三𠯤-2-基}哌𠯤-1-甲酸4-({[(三級丁氧基)羰基]胺基}甲基)苯酯(Int-2)(130 mg，62.22%)。
4-{4-[2-胺基-4-(二氟甲基)嘧啶-5-基]-6-(嗎啉-4-基)-1,3,5-三𠯤-2-基}哌𠯤-1-甲酸4-(胺基甲基)苯酯(Int-3)之合成： 將TFA (0.077 mL，1.0 mmol，5.0 eq)在0℃下添加至DCM (5 mL)中的4-{4-[2-胺基-4-(二氟甲基)嘧啶-5-基]-6-(嗎啉-4-基)-1,3,5-三𠯤-2-基}哌𠯤-1-甲酸4-({[(三級丁氧基)羰基]胺基}甲基)苯酯(Int-2)(130 mg，0.20 mmol，1.0 eq)之攪拌溶液中。將所得反應混合物溫熱至室溫且攪拌4 h。以TLC監測反應的進展。在SM消耗後，在減壓下濃縮揮發物以供給粗製物。將粗製化合物以MTBE (5.0 mL)濕磨且過濾以供給成為淺棕色固體的純4-{4-[2-胺基-4-(二氟甲基)嘧啶-5-基]-6-(嗎啉-4-基)-1,3,5-三𠯤-2-基}哌𠯤-1-甲酸4-(胺基甲基)苯酯(Int-3)(100 mg，成為TFA鹽，91.12%之產率)。
4-{4-[2-胺基-4-(二氟甲基)嘧啶-5-基]-6-(嗎啉-4-基)-1,3,5-三𠯤-2-基}哌𠯤-1-甲酸4-({2-[(5S)-2-胺基-4-氯-7-[(4-甲氧基-3,5-二甲基吡啶-2-基)甲基]-5H,6H,7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基]乙醯胺基}甲基)苯酯(C104)之合成： 將DIPEA (0.11 mL，0.63 mmol，3.0 eq)添加至DMF (3.0 mL)中的2-[(5S)-2-胺基-4-氯-7-[(4-甲氧基-3,5-二甲基吡啶-2-基)甲基]-5H,6H,7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基]乙酸(TVD-0004512)(80 mg，0.21 mmol，1.0 eq)之攪拌溶液中，隨後添加HATU (121 mg，0.31 mmol，1.5 eq)且將反應在室溫下攪拌5至10 min。在10 min後，在室溫下添加4-{4-[2-胺基-4-(二氟甲基)嘧啶-5-基]-6-(嗎啉-4-基)-1,3,5-三𠯤-2-基}哌𠯤-1-甲酸4-(胺基甲基)苯酯(138 mg，0.25 mmol，1.2 eq)。將所得反應混合物以冰水(10 mL)淬滅且攪拌5 min，將所得沉澱物過濾且以水清洗，隨後以二***(10 mL)清洗，在真空下乾燥以供給粗製化合物。將粗製物以prep.HPLC純化且凍乾以供給成為灰白色固體的4-{4-[2-胺基-4-(二氟甲基)嘧啶-5-基]-6-(嗎啉-4-基)-1,3,5-三𠯤-2-基}哌𠯤-1-甲酸4-({2-[(5S)-2-胺基-4-氯-7-[(4-甲氧基-3,5-二甲基吡啶-2-基)甲基]-5H,6H,7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基]乙醯胺基}甲基)苯酯(C104)(60 mg，31.4%)。
1H-NMR：(400 MHz, DMSO-d 6) δ：9.12 (s, 1H), 8.58 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 8.37 (s ,1H), 7.64 (t, J = 52.0 Hz, 1H), 7.58 (bs, 2H), 7.17 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.08 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 6.68 (bs, 2H), 4.73-4.65 (m, 2H), 4.34-4.22 (m, 2H), 3.91 (bs, 8H), 3.78 (bs, 4H), 3.75-3.65 (m, 5H), 3.61-3.54 (m, 3H), 3.51-3.37 (m, 1H), 2.77-2.76 (dd, J = 18.4, 3.2 Hz , 1H), 2.51-2.50 (m, 2H, merged with dmso-d 6), 2.31 (s, 3H), 2.23 (s, 3H)。 LC-MS：902.63 (M + H)。 C105
Figure 02_image301
(4-羥基-4-甲基戊基)胺甲酸三級丁酯(Int-2)之合成： 將1M NaOH水溶液(0.546 mL，13.7 mmol，1.6 eq)在0℃下添加至三級丁醇(15 mL)中的5-胺基-2-甲基戊-2-醇(Int-1)(1.0 g，8.53 mmol，1.0 eq)之攪拌溶液中，且經10 min期間逐滴添加在三級丁醇(5.0 mL)中的二碳酸二-三級丁酯(2.79 g，12.8 mmol，1.5 eq)之溶液。將所得反應混合物在室溫下攪拌12 h。以TLC及LCMS監測反應混合物的進展。在SM消耗後，將反應混合物以1M氯化銨溶液(50 mL)稀釋且以1M HCl溶液調整pH (6至7)，接著以EtOAC (2 x 100 mL)萃取，將有機層以鹽水溶液(100 mL)清洗且經硫酸鈉乾燥，蒸發以供給成為棕色液體的粗製物(4-羥基-4-甲基戊基)碳酸三級丁酯(Int-2)(1.2 g，64.7%之產率)。
哌啶-1,4-二甲酸1-苯甲酯4-(5-((三級丁氧基羰基)胺基)-2-甲基戊-2-基)酯(Int-4)之合成： 將N,N'-二環己基甲烷二亞胺(2.18 g，10.6 mmol，2.3 eq)、4-(二甲基胺基)吡啶-1-鎓鹽(1.12 g，0.920 mmol，0.2 eq)在室溫下添加至DCM (40 mL)中的1-[(苯甲氧基)羰基]哌啶-4-甲酸(Int-2)(2.79 g，10.6 mmol，2.3 eq)之攪拌溶液中。將所得反應混合物攪拌20 min，隨後在室溫下添加N-(4-羥基-4-甲基戊基)胺甲酸三級丁酯(1.0 g，4.6 mmol，1.0 eq)。將所得反應混合物在室溫下攪拌14 h。以LCMS監測反應混合物的進展。在反應混合物完成後，將反應混合物以冰水(100 mL)淬滅，以EtOAC (3 x 50 mL)萃取，將有機層以冰水(3 x 100 mL)清洗，經硫酸鈉乾燥，過濾以得到成為淡黃色固體的粗製化合物哌啶-1,4-二甲酸1-苯甲酯4-(5-((三級丁氧基羰基)胺基)-2-甲基戊-2-基)酯(Int-4)(0.82 g，38.52%)。
(4-(4-(4-(2-胺基-4-(二氟甲基)嘧啶-5-基)-6-嗎啉基-1,3,5-三𠯤-2-基)哌𠯤-1-基)-4-側氧基丁酸)(Int-5)之合成： 將10%之Pd/C (0.16 g)在室溫下添加至甲醇(8 mL)中的哌啶-1,4-二甲酸1-苯甲酯4-(5-{[(三級丁氧基)羰基]胺基}-2-甲基戊-2-基)酯(Int-4)(0.8 g，1.73 mmol，1 eq)之溶液中，將50 PSI氫氣經2 h施加至室溫下在帕爾(parr)裝置中的反應混合物中。以TLC監測反應混合物的進展。在完全反應後，將反應混合物在矽藻土床上過濾且以甲醇(2 x 100 mL)清洗，過濾且在減壓下濃縮以供給粗製化合物。將粗製物以使用矽膠100至200網孔之快速層析術純化，以DCM中的5%之MeOH溶析出化合物，測定純流份以得到成為棕色液體的純化合物4-(4-(4-(2-胺基-4-(二氟甲基)嘧啶-5-基)-6-嗎啉基-1,3,5-三𠯤-2-基)哌𠯤-1-基)-4-側氧基丁酸(Int-5)(0.25 g，77%)。
1-(4-(2-(雙(三級丁氧基羰基)胺基)-4-(二氟甲基)嘧啶-5-基)-6-嗎啉基-1,3,5-三𠯤-2-基)哌啶-4-甲酸5-((三級丁氧基羰基)胺基)-2-甲基戊-2-酯(Int-7)之合成： 將K 2CO 3(0.091 g，0.662 mmol，1.2 eq)在0℃下添加至DMF (6 mL)中的N-[(三級丁氧基)羰基]-N-{5-[4-氯-6-(嗎啉-4-基)-1,3,5-三𠯤-2-基]-4-(二氟甲基)嘧啶-2-基}胺甲酸三級丁酯(Int-6)(0.3 g，0.552 mmol，1.0 eq)之攪拌溶液中，隨後添加哌啶-4-甲酸5-{[(三級丁氧基)羰基]胺基}-2-甲基戊-2-酯(Int-5)(0.217 g，0.662 mmol，1.2 eq)。將所得反應混合物溫熱至室溫且在室溫下攪拌16 h。以LCMS監測反應混合物的進展。在SM消耗後，將反應混合物以水(50.0 mL)淬滅且以EtOAC (2 x 100 mL)萃取，將有機層合併，以冰水(2 x 100 mL)清洗，經硫酸鈉乾燥，過濾，在減壓下濃縮以供給粗製物(Int-7)(0.45 g，粗製物)。將粗製化合物以使用矽膠(100至200網孔)之快速層析術純化，以石油醚中的30%之EtOAc溶析出化合物。收集所有的純流份且濃縮以得到成為棕色黏性固體的純1-(4-(2-(雙(三級丁氧基羰基)胺基)-4-(二氟甲基)嘧啶-5-基)-6-嗎啉基-1,3,5-三𠯤-2-基)哌啶-4-甲酸5-((三級丁氧基羰基)胺基)-2-甲基戊-2-酯(Int-7)(0.35 g，75.9%之產率)。
1-(4-(2-胺基-4-(二氟甲基)嘧啶-5-基)-6-嗎啉基-1,3,5-三𠯤-2-基)哌啶-4-甲酸5-胺基-2-甲基戊-2-酯(Int-8)之合成： 將TFA (0.818 g，7.18 mmol，20.0 eq)在0℃下逐滴添加至DCM (3 mL)中的1-[4-(2-{雙[(三級丁氧基)羰基]胺基}-4-(二氟甲基)嘧啶-5-基)-6-(嗎啉-4-基)-1,3,5-三𠯤-2-基]哌啶-4-甲酸5-{[(三級丁氧基)羰基]胺基}-2-甲基戊-2-酯(Int-7)(0.3 g，0.359 mmol，1.0 eq.)之攪拌溶液中。將所得反應混合物在室溫下攪拌16 h，以TLC & LCMS監測反應混合物的進展。在完全反應後，將反應混合物在真空下濃縮以得到成為棕色液體的粗製物1-(4-(2-胺基-4-(二氟甲基)嘧啶-5-基)-6-嗎啉基-1,3,5-三𠯤-2-基)哌啶-4-甲酸5-胺基-2-甲基戊-2-酯(Int-8)(0.31 g，粗製物100%之產率)。
1-(4-(2-胺基-4-(二氟甲基)嘧啶-5-基)-6-嗎啉基-1,3,5-三𠯤-2-基)哌啶-4-甲酸(R)-5-(2-(2-胺基-4-氯-7-((4-甲氧基-3,5-二甲基吡啶-2-基)甲基)-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)乙醯胺基)-2-甲基戊-2-酯(C105)之合成： 將DIPEA (0.248 mL，1.40 mmol，2.5 eq)、HATU (0.319 g，0.84 mmol，1.5 eq)在室溫下添加至DMF (3.0 mL)中的2-[(5R)-2-胺基-4-氯-7-[(4-甲氧基-3,5-二甲基吡啶-2-基)甲基]-5H,6H,7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基]乙酸(Int-8)(0.212 g，0.566 mmol，1 eq)之攪拌溶液中，將反應混合物攪拌20 min且接著在室溫下添加1-{4-[2-胺基-4-(二氟甲基)嘧啶-5-基]-6-(嗎啉-4-基)-1,3,5-三𠯤-2-基}哌啶-4-甲酸5-胺基-2-甲基戊-2-酯(0.300 g，0.56 mmol，1 eq)。將所得反應混合物在室溫下攪拌18 h。以TLC及LCMS監測反應的進展。在完全反應後，將反應以冰水(20 mL)淬滅，沉澱出固體且攪拌10 min，過濾且以水(5 mL)清洗，在真空下完全乾燥以得到粗製產物。將粗製物以prep HPLC純化，隨後凍乾以供給成為灰白色固體的1-(4-(2-胺基-4-(二氟甲基)嘧啶-5-基)-6-嗎啉基-1,3,5-三𠯤-2-基)哌啶-4-甲酸(R)-5-(2-(2-胺基-4-氯-7-((4-甲氧基-3,5-二甲基吡啶-2-基)甲基)-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)乙醯胺基)-2-甲基戊-2-酯(TVD-0004500)(88 mg，17.5%)。 C106
Figure 02_image303
(5-(4-(4-(2-胺基-4-(二氟甲基)嘧啶-5-基)-6-嗎啉基-1,3,5-三𠯤-2-基)哌𠯤-1-基)-5-側氧基戊基)胺甲酸三級丁酯(Int-2)之合成： 將DIPEA ( 98.6 mg，0.763 mmol，2 eq)及HATU ( 217 mg，0.571 mmol，1.5 eq)在室溫下添加至DMF (5 ml)中的5-((三級丁氧基羰基)胺基)戊酸(108 mg，0.496 mmol，1.3 eq)之攪拌溶液中。將反應混合物在室溫下20分鐘，接著添加4-(二氟甲基)-5-(4-嗎啉基-6-(哌𠯤-1-基)-1,3,5-三𠯤-2-基)嘧啶-2-胺(TVD-0004425)(150 mg，0.381 mmol，1 eq)且將反應混合物在室溫下攪拌18 h。以TLC及LCMS監測反應的進展。在完全反應後，將反應混合物以水淬滅且以過濾收集所得固體以供給成為棕色固體的(5-(4-(4-(2-胺基-4-(二氟甲基)嘧啶-5-基)-6-嗎啉基-1,3,5-三𠯤-2-基)哌𠯤-1-基)-5-側氧基戊基)胺甲酸三級丁酯(Int-2)(160 mg，70%)。
5-胺基-1-(4-(4-(2-胺基-4-(二氟甲基)嘧啶-5-基)-6-嗎啉基-1,3,5-三𠯤-2-基)哌𠯤-1-基)戊-1-酮(Int-3)之合成： 將TFA (289 mg，2.53 mmol，10.0 eq)添加至DCM (5 mL)中的(5-(4-(4-(2-胺基-4-(二氟甲基)嘧啶-5-基)-6-嗎啉基-1,3,5-三𠯤-2-基)哌𠯤-1-基)-5-側氧基戊基)胺甲酸三級丁酯(Int-2)(150 mg，0.253 mmol，1.0 eq)之溶液中，且將反應混合物在室溫下攪拌16 h。以TLC及LCMS監測反應的進展。在起始材料消耗後，在減壓下移除揮發物且將粗製物以二***濕磨以供給成為棕色固體的5-胺基-1-(4-(4-(2-胺基-4-(二氟甲基)嘧啶-5-基)-6-嗎啉基-1,3,5-三𠯤-2-基)哌𠯤-1-基)戊-1-酮(Int-3)(130 mg，TFA鹽)。
(R)-N-(5-(4-(4-(2-胺基-4-(二氟甲基)嘧啶-5-基)-6-嗎啉基-1,3,5-三𠯤-2-基)哌𠯤-1-基)-5-側氧基戊基)-2-(2-胺基-4-氯-7-((4-甲氧基-3,5-二甲基吡啶-2-基)甲基)-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)乙醯胺(C106)之合成： 將DIPEA (95.8 mg，0.741 mmol，4.0 eq)及HATU (106 mg，0.278 mmol，1.5 eq)添加至DMF (2 mL)中的(R)-2-(2-胺基-4-氯-7-((4-甲氧基-3,5-二甲基吡啶-2-基)甲基)-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)乙酸(TVD-0004473)(70 mg，0.185 mmol，1.0 eq)之攪拌溶液中。將反應在室溫下攪拌20 min，接著添加5-胺基-1-(4-(4-(2-胺基-4-(二氟甲基)嘧啶-5-基)-6-嗎啉基-1,3,5-三𠯤-2-基)哌𠯤-1-基)戊-1-酮(Int-3)(110 mg，0.222 mmol，1.2 eq)且將反應混合物在80℃下攪拌4 h。以TLC及LCMS監測反應的進展。在起始材料消耗後，將反應以水淬滅且以過濾收集所得固體。將粗製物以prep.HPLC純化，隨後凍乾以供給成為灰白色固體的(R)-N-(5-(4-(4-(2-胺基-4-(二氟甲基)嘧啶-5-基)-6-嗎啉基-1,3,5-三𠯤-2-基)哌𠯤-1-基)-5-側氧基戊基)-2-(2-胺基-4-氯-7-((4-甲氧基-3,5-二甲基吡啶-2-基)甲基)-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)乙醯胺(C106)(80 mg，51%)。 C108
Figure 02_image305
(R)-2-(2-胺基-4-氯-7-((4-甲氧基-3,5-二甲基吡啶-2-基)甲基)-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)乙酸(4-(2-胺基-4-(二氟甲基)嘧啶-5-基)-6-嗎啉基-1,3,5-三𠯤-2-基)哌啶-4-酯(C108)之合成： 將DCC (152 mg，0.735 mmol，1.5 eq)在室溫下添加至DMF (4.0 mL)中的2-[(5R)-2-胺基-4-氯-7-[(4-甲氧基-3,5-二甲基吡啶-2-基)甲基]-5H,6H,7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基]乙酸(TVD-0004473)(278 mg，0.73 mmol，1.5 eq.)之攪拌溶液中，隨後添加DMAP (5.98 mg，0.4 mmol，0.1 eq)。將所得反應混合物攪拌20 min。在20 min後，在室溫下添加1-{4-[2-胺基-4-(二氟甲基)嘧啶-5-基]-6-(嗎啉-4-基)-1,3,5-三𠯤-2-基}哌啶-4-醇(TVD-0004426)(200 mg，0.49 mmol，1.0 eq)。將所得反應混合物在室溫下攪拌72 h。以LCMS及TLC監測反應的進展。在SM消耗後，將反應混合物以冰水(50.0 mL)淬滅，以EtOAC (3 x 50.0 mL)萃取，將合併的有機層以冰水(2 x 100 mL)及鹽水溶液(1 x 100 mL)清洗，經硫酸鈉乾燥，過濾以供給粗製化合物。將粗製物在二***中攪拌30 min，過濾以得到粗製化合物。將粗製化合物以Prep HPLC純化，隨後凍乾以供給成為灰白色固體的化合物(R)-2-(2-胺基-4-氯-7-((4-甲氧基-3,5-二甲基吡啶-2-基)甲基)-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)乙酸(4-(2-胺基-4-(二氟甲基)嘧啶-5-基)-6-嗎啉基-1,3,5-三𠯤-2-基)哌啶-4-酯(C108)(66 mg，17.1%之產率)。
1H NMR：(400 MHz, DMSO-d 6) δ 9.09 (s, 1H), 8.37 (bs, 1H), 7.62 (t, J = 52.0 Hz, 1H), 7.55 (bs, 2H), 6.67 (bs, 2H), 4.95 (s, 1H), 4.70 (s, 2H) 3.90-4.0 (m, 3H), 3.75-3.80 (m, 7H), 3.59-3.64 (m, 8H), 3.30 (dd, J = 8.0, 4.0 Hz, 1H), 2.84-2.89 (m, 1H), 2.68-2.61 (m, 1H), 2.30 (s, 3H), 2.24 (s, 3H), 1.83 (bs, 2H), 1.51(bs, 2H)。 LC-MS：768.29 (M + H)。 C109
Figure 02_image307
(R)-1-(4-(4-(2-胺基-4-(二氟甲基)嘧啶-5-基)-6-嗎啉基-1,3,5-三𠯤-2-基)哌𠯤-1-基)-2-(2-胺基-4-氯-7-((4-甲氧基-3,5-二甲基吡啶-2-基)甲基)-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)乙-1-酮(C109)之合成： 將HATU (140 mg，0.38 mmol，1.5 eq)及DIPEA (130 mg，1.02 mmol，4.0 eq)在室溫下添加至DMF (5.0 mL)中的(R)-2-(2-胺基-4-氯-7-((4-甲氧基-3,5-二甲基吡啶-2-基)甲基)-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)乙酸(TVD-0004473)(144 mg，0.38 mmol，1.5 eq)之攪拌溶液中。將所得反應混合物在室溫下攪拌20 min，接著添加4-(二氟甲基)-5-(4-嗎啉基-6-(哌𠯤-1-基)-1,3,5-三𠯤-2-基)嘧啶-2-胺(C109)(100 mg，0.25 mmol，1.0 eq)且將所得反應混合物在室溫下攪拌16 h。以LCMS及TLC監測反應的進展。在起始材料消耗後，將反應以水淬滅且以過濾收集所得固體。將粗製物以prep.HPLC純化，隨後凍乾以供給成為灰白色固體的(R)-1-(4-(4-(2-胺基-4-(二氟甲基)嘧啶-5-基)-6-嗎啉基-1,3,5-三𠯤-2-基)哌𠯤-1-基)-2-(2-胺基-4-氯-7-((4-甲氧基-3,5-二甲基吡啶-2-基)甲基)-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)乙-1-酮(TVD-0004496)(95 mg，49%)。
1H NMR：(400 MHz, DMSO-d 6) δ：9.10 (s, 1H), 8.41 (s, 1H), 7.63 (t, J = 52.0 Hz, 1H), 7.58 (bs, 2H), 6.70 (bs, 2H), 4.72 (s, 2H), 3.92 (s, 3H), 3.80-3.77 (m, 2H), 3.66-3.58 (m, 10H), 3.54-3.53 (m, 6H), 3.23-3.19 (m, 1H), 2.96-2.91 (m, 1H), 2.77-2.73 (m, 1H), 2.32 (s, 3H), 2.24 (s, 3H)。 LC-MS：753.59 (M + H)。 C112
Figure 02_image309
N-[3-(丙-2-炔-1-氧基)丙基]胺甲酸三級丁酯(Int-3)之合成： 將NaH (47.1 mg，1.96 mmol，1.1 eq)在0℃下分批添加至DMF (4.0 mL)中的丙-2-炔-1-醇(100 mg，1.78 mmol，1.0 eq)之攪拌溶液中。容許反應混合物至RT且攪拌30 min，接著在0℃下分批添加N-(3-溴丙基)胺甲酸三級丁酯(425 mg，1.78 mmol，1.0 eq)。容許所得反應混合物至室溫且在相同的溫度下攪拌4 h。在SM消耗後，將反應混合物以水(5 mL)淬滅且以EtOAC (2 x 10 mL)萃取。將合併的有機層經硫酸鈉乾燥，過濾且在減壓下濃縮以供給粗製化合物。將粗製化合物以使用矽膠(100至200網孔)之管柱層析術純化且以DCM中的0至2%之MeOH溶析出化合物。將所有的純流份混合且濃縮以供給成為淺黃色油的N-[3-(丙-2-炔-1-氧基)丙基]胺甲酸三級丁酯(Int-3)(280 mg，73.6%)。
(3-((3-(2-胺基-4-氯-7-((4-甲氧基-3,5-二甲基吡啶-2-基)甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)丙-2-炔-1-基)氧基)丙基)胺甲酸三級丁酯(Int-4)之合成： 將TEA (0.21 mL，1.55 mmol，3.0 eq)在室溫下添加至DCM (20 mL)中的4-氯-5-碘-7-[(4-甲氧基-3,5-二甲基吡啶-2-基)甲基]-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2-胺(TVD-0004501)(230 mg，0.5 mmol，1.0 eq)之攪拌溶液中，隨後添加N-[3-(丙-2-炔-1-氧基)丙基]胺甲酸三級丁酯(276 mg，1.4 mmol，2.5 eq)且將反應物料以氬氣脫氣20 min，且接著在相同的溫度下添加CuI (29.5 mg，0.15 mmol，0.3 eq)，隨後添加Pd( PPh 3) 4(30 mg，0.025 mmol，0.05 eq)，再脫氣5 min。將所得反應混合物加熱至45 oC且攪拌2 h。在SM消耗後，在減壓下蒸發揮發物以供給粗製化合物。將粗製化合物以使用矽膠(100至200)之管柱層析術純化且以DCM中的1至1.5%之MeOH溶析出化合物。將所有的純流份混合且濃縮以供給成為淺黃色固體的N-{3-[(3-{2-胺基-4-氯-7-[(4-甲氧基-3,5-二甲基吡啶-2-基)甲基]-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基}丙-2-炔-1-基)氧基]丙基}胺甲酸三級丁酯(Int-4)(200 mg，72.92%)。
Int-5 5-[3-(3-胺基丙氧基)丙-1-炔-1-基]-4-氯-7-[(4-甲氧基-3,5-二甲基吡啶-2-基)甲基]-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2-胺之合成： 將TFA (0.116 mL，1.5 mmol，5.0 eq)在0℃下添加至DCM (5.0 mL)中的N-{3-[(3-{2-胺基-4-氯-7-[(4-甲氧基-3,5-二甲基吡啶-2-基)甲基]-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基}丙-2-炔-1-基)氧基]丙基}胺甲酸三級丁酯(Int-4)(160 mg，0.30 mmol，1.0 eq)之攪拌溶液中。將所得反應混合物溫熱至室溫且在相同的溫度下攪拌2 h。以TLC監測反應的進展，在SM完全轉化後，在減壓下濃縮揮發物以供給粗製物5-[3-(3-胺基丙氧基)丙-1-炔-1-基]-4-氯-7-[(4-甲氧基-3,5-二甲基吡啶-2-基)甲基]-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2-胺(Int-5)(250 mg，成為TFA鹽，定量產率)。
TVD-0004493 1-{4-[2-胺基-4-(二氟甲基)嘧啶-5-基]-6-(嗎啉-4-基)-1,3,5-三𠯤-2-基}-N-{3-[(3-{2-胺基-4-氯-7-[(4-甲氧基-3,5-二甲基吡啶-2-基)甲基]-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基}丙-2-炔-1-基)氧基]丙基}哌啶-4-甲醯胺之合成： 將DIPEA (0.25 mL，1.4 mmol，3.0 eq)及HATU (274 mg，0.74 mmol，1.5 eq)添加至DMF (8 mL)中的1-{4-[2-胺基-4-(二氟甲基)嘧啶-5-基]-6-(嗎啉-4-基)-1,3,5-三𠯤-2-基}哌啶-4-甲酸(C112)(210 mg，0.48 mmol，1.0 eq.)之攪拌溶液中且攪拌10 min。接著添加(Int-5) 5-[3-(3-胺基丙氧基)丙-1-炔-1-基]-4-氯-7-[(4-甲氧基-3,5-二甲基吡啶-2-基)甲基]-7H-吡咯并[2, 3-d]嘧啶-2-胺(248 mg，0.57 mmol，1.2 eq)且在室溫下攪拌18 h。在以TLC監控之SM完全轉化後，將反應混合物以冰水(10 mL)稀釋且以過濾收集所得固體以供給250 mg之粗製物，將粗製產物以prep.HPLC純化以供給成為灰白色固體的C112 (58 mg，14.23%)。
1H NMR：(400 MHz, DMSO-d 6) δ：9.08 (s, 1H), 8.12 (s, 1H), 7.81 (t, J = 4.0 Hz, 1H), 7.62 (t, J = 56.0 Hz, 1H), 7.54 (bs, 2H), 7.41 (s, 1H), 6.75 (bs, 2H), 5.32 (s, 2H), 4.65 (bs, 2H), 4.34 (s, 2H), 3.65- 3.64 (m, 11H), 3.51 (t, J = 12.8 Hz, 2H), 3.09 (dd, J = 12.4, 6.8 Hz, 2H), 2.89 (bs, 2H), 2.42-2.32 (m, 1H), 2.25 (s, 3H), 2.19 (s, 3H), 1.73 (d, J = 12.0 Hz, 2H), 1.67 (d, J = 6.8 Hz, 2H), 1.47 (d, J = 9.2 Hz, 2H)。 LC-MS：847.57 (M + H)。 C114
Figure 02_image311
3-(丙-2-炔-1-氧基)丙-1-醇(Int-2)之合成： 將2-甲基丙-2-醇鉀(3.72 g，32.9 mmol，0.5 eq)在0℃下添加至無水THF (100 mL)中的丙-1,3-二醇(Int-1)(5.0 g，65.1 mmol，1.0 eq)之攪拌溶液中。將反應混合物在相同的溫度下攪拌30 min且接著在室溫下經30 min逐滴添加在無水THF (100 mL)中的3-溴丙-1-炔(3.91 g，32.9 mmol，0.5 eq)。將所得反應混合物在室溫下攪拌12 h。以TLC監測反應混合物的進展。在完全反應後，將反應混合物在真空下濃縮以得到粗製化合物。將粗製化合物以使用100至200網孔矽膠之快速層析術純化。以20至30%之EtOAc/石油醚溶析出化合物。測定所有的純流份且濃縮以得到棕色液體的純3-(丙-2-炔-1-氧基)丙-1-醇(Int-3)(1.3 g，17.4%)。
3-(3-(丙-2-炔-1-氧基)丙氧基)丙酸三級丁酯(Int-3)之合成： 將2-甲基丙-2-醇鉀(0.129 g，1.14 mmol，0.1 eq)在室溫下添加至THF (13 mL)中的3-(丙-2-炔-1-氧基)丙-1-醇(Int-2)(1.3 g，11.4 mmol，1.0 eq)之攪拌溶液中。將反應混合物攪拌20 min，隨後在室溫下逐滴添加丙-2-烯酸三級丁酯(1.9 g，14.8 mmol，1.3 eq)。將所得反應混合物在室溫下攪拌16 h。以TLC & LCMS監測反應混合物的進展。在完全反應後，在真空下移除此反應混合物中的溶劑，接著以水(50 mL)稀釋，以1N HCl中和pH，以EtAOc (2 x 100 mL)萃取，合併有機層，經硫酸鈉乾燥，過濾且接著蒸發以得到粗製化合物(2 g)。將粗製化合物以使用矽膠100至200網孔之快速層析術純化，以20至30%之EtAOc/石油醚溶析出化合物，測定所有的純流份以得到成為棕色液體的純化合物3-(3-(丙-2-炔-1-氧基)丙氧基)丙酸三級丁酯(Int-3)(1.32 g，47.83%之產率)。
3-(3-((3-(2-胺基-4-氯-7-((4-甲氧基-3,5-二甲基吡啶-2-基)甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)丙-2-炔-1-基)氧基)丙氧基)丙酸三級丁酯(Int-4)之合成： 將TEA (0.342 g，3.38 mmol，3.0 eq)及3-[3-(丙-2-炔-1-氧基)丙氧基]丙酸三級丁酯(Int-3)(0.410 g，1.69 mmol，1.5 eq)在室溫下添加至DCM (15 mL)中的4-氯-5-碘-7-[(4-甲氧基-3,5-二甲基吡啶-2-基)甲基]-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2-胺(TVD-0004501)(0.50 g，1.13 mmol，1.0 eq.)之攪拌溶液中。將反應混合物以氬氣脫氣20 min，接著在室溫下添加CuI (0.064 g，0.33 mmol，0.3 eq)及Pd(PPh 3) 4(0.65 g，0.56 mmol，0.05 eq)。將所得反應混合物在45℃下攪拌5 h。以LCMS監測反應混合物的進展。在完全反應後，在減壓下蒸發揮發物以得到粗製化合物(600 mg之粗製物)。將粗製物以反相快速層析術純化，以水中的60%之ACN溶析出化合物，測定純流份，濃縮，隨後凍乾以供給成為棕色液體的純化合物3-(3-((3-(2-胺基-4-氯-7-((4-甲氧基-3,5-二甲基吡啶-2-基)甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)丙-2-炔-1-基)氧基)丙氧基)丙酸三級丁酯(Int-4)(0.260 g，41.37%)。
3-(3-((3-(2-胺基-4-氯-7-((4-甲氧基-3,5-二甲基吡啶-2-基)甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)丙-2-炔-1-基)氧基)丙氧基)丙酸(Int-5)之合成： 將TFA (1.45 g，12.7 mmol，20.0 eq)在0℃下添加至DCM (4 mL)中的3-{3-[(3-{2-胺基-4-氯-7-[(4-甲氧基-3,5-二甲基吡啶-2-基)甲基]-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基}丙-2-炔-1-基)氧基]丙氧基}丙酸三級丁酯(Int-4)(0.25 g，0.448 mmol，1.0 eq)之攪拌溶液中。將所得反應混合物在室溫下攪拌6 h。以TLC監測反應混合物的進展。在完全反應後，在減壓下於0℃下蒸發反應混合物的揮發物以得到成為棕色液體的粗製化合物Int-5 (0.180 g之粗製物)。粗製化合物無需純化而前進至下一步驟中。
1-(4-(4-(2-胺基-4-(二氟甲基)嘧啶-5-基)-6-嗎啉基-1,3,5-三𠯤-2-基)哌𠯤-1-基)-3-(3-((3-(2-胺基-4-氯-7-((4-甲氧基-3,5-二甲基吡啶-2-基)甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)丙-2-炔-1-基)氧基)丙氧基)丙-1-酮(C114)之合成： 將HATU (0.127 g，0.538 mmol，1.5 eq)、DIPEA (0.139 g，1.08 mmol，3.0 eq)在室溫下添加至DMF (5.0 mL)中的3-{3-[(3-{2-胺基-4-氯-7-[(4-甲氧基-3,5-二甲基吡啶-2-基)甲基]-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基}丙-2-炔-1-基)氧基]丙氧基}丙酸(Int-5)(0.180 g，0.359 mmol，1.0 eq)之攪拌溶液中，隨後添加TVD-0004425 (0.141 g，0.359 mmol，1.0 eq)。將所得反應混合物在室溫下攪拌12 h。以LCMS監測反應混合物的進展，在SM消耗後，將反應混合物以冰水(5 mL)淬滅且攪拌30 min，沉澱出固體。將固體過濾且以冰水(2 mL)清洗，在真空下乾燥以供給粗製化合物(350 mg)。將粗製化合物以prep HPLC純化且凍乾以供給灰白色固體的C114 (57 mg，18.2%之產率)。
1H-NMR：(400 MHz, DMSO-d 6) δ：9.10 (s, 1H), 8.03 (s, 1H), 7.62 (t, J = 52.0 Hz, 1H), 7.56 (bs, 2H), 7.37 (s, 1H), 6.72 (bs, 2H), 5.27 (s, 2H), 4.34 (s, 2H), 3.75-3.71 (m, 10H), 3.65-3.51 (m, 12H), 3.44 (t, J = 4.0 HZ, 2H), 2.59 (t, J = 4.0 HZ, 2H), 2.24 (s, 3H), 2.14 (s, 3H), 1.75 (quint, J = 8.0, 4.0 Hz, 2H)。 LC-MS：877.4 (M + H) 實施例2：使用共軛體之試管內研究 HER2降解檢定法：
將BT474 (乳癌)細胞以每一孔平鋪12,000個細胞且在37℃及5%之CO 2下培育20至24小時。在細胞培育後，將化合物在DMSO中重組至5 mM之儲備濃度。接著在DMSO中製備含有10點稀釋的化合物盤。接著將2 uL之該等稀釋液添加至細胞中以達到5 uM至0.0003 uM之最終操作濃度。將化合物及細胞培育16小時。接著移除培養基，將細胞清洗、溶解且以ELISA分析人類總EbB2/Her2含量。 HSP90結合：
共軛體與HSP90之結合係以HSP90α檢定套組研究。設計HSP90α檢定套組，使用螢光偏振鑑定HSP90α抑制劑。檢定法係建基於經螢光標記之格爾德黴素(GM)對經純化之重組HSP90α之結合競爭。HSP90α檢定套組的關鍵為經螢光標記之格爾德黴素。將經螢光標記之格爾德黴素與含有HSP90α酶之樣品培育以引起螢光偏振的變化，其接著可使用螢光讀數器測量。
簡言之，將DMSO中的化合物藉由使用聲波技術(Acoustic Technology)添加至HSP溶液中且培育30 min。添加FITC-GM且培育3小時。接著測量螢光偏振(FP)且計算mP。數據頁包括原始數據(mP信號減去背景)、探針結合% (相對於DMSO對照)及以GraphPad Prism軟體執行之對照化合物的曲線擬合。曲線擬合係在最高濃度的化合物之酶活性低於65%的情況下執行。
Figure 02_image313
測定酬載及共軛體之滲透性：
為了測試酬載及/或共軛體進入細胞的能力，利用使用Caco-2細胞(人類上皮結腸直腸腺癌細胞系)之細胞單層檢定法。
實驗程序：將組織培養燒瓶中生長的Caco-2細胞經胰蛋白酶處理、懸浮於培養基中且將懸浮液施予Millipore 96孔Caco-2盤之孔中。容許細胞經三週生長及分化，每隔2天餵食。將用於頂點至底側(A→B)滲透性之試驗劑添加至頂點(A)端且測定在底側(B)端上的滲透量；將用於底側至頂點(B→A)滲透性之試驗劑添加至B端且測定在A端上的滲透量。
一些共軛體具有低滲透性。
Figure 02_image315
以LS174T腫瘤細胞檢定法之研究：
PI3Ka突變係發生在約15%之30%之乳癌、子宮內膜癌及結腸癌中。將具有PI3Ka突變之LS174T細胞(結腸癌)以每一孔平鋪500個細胞且在37℃及5%之CO 2下培育20至24小時。在細胞培育後，將化合物在DMSO中重組至200 uM之儲備濃度。接著在RPMI +10%之FBS + 0.25%之DMSO中製備含有10點稀釋的化合物盤。接著添加5 uL之稀釋液以達到10 uM至0.0005 uM之最終操作濃度。接著將化合物及細胞培育72小時。接著以PI3K抑制及增生抑制來分析細胞。
Figure 02_image317
實施例3：使用共軛體之活體內研究 LS174t結腸癌模式
在使用LS174t結腸腫瘤異種移植模式的此研究中，測試共軛體之累積及滯留。將共軛體以25 mg/kg、15 mg/kg或7.5 mg/kg經靜脈內給藥。測量在攜有LS174t腫瘤的小鼠之腫瘤及血漿中的24 hr之共軛體累積。
Figure 02_image319
在進一步的研究中，評估不同劑量之化合物C1、C48、C49和C50在LS174T異種移植模式中的功效。腫瘤體積變化顯示於圖3和圖4中。腫瘤生長抑制(TGI)數據顯示於以下表7和表8中。
Figure 02_image321
Figure 02_image323
實施例4：HSP90-PI3K共軛體誘導PI3Ka降解及抑制Akt活化
在此研究中，以西方墨點法測試本揭示之共軛體以測定在化合物治療後於LS 174T細胞中的 PI3Kα (p110α)及pAKT (S473)含量。
在6孔盤中以5種化合物對 LS 174T進行6小時和24小時測試。化合物製備之資訊列於下表中：
Figure 02_image325
接種LS174T細胞且將2 µl之化合物轉移至含有2 ml之培養基的6孔盤。其為總計1000 ×稀釋。將細胞盤與化合物以及媒劑對照物在5%之CO 2，37℃下培育6小時或24小時。接著製備細胞溶解物及進行西方墨點法。
Figure 02_image327
在LS 174T 中的PI3Kα (p110α)及pAKT (S473)含量顯示於圖1和圖2中。所測試的全部五種共軛體皆導致降解。C1引起較慢的降解，但是最高的抑制水平。具有PI3K/mTor雙重抑制劑之C32引起非常快速的降解。在10 mM之最高濃度下，有較低的降解。這與稱為鉤狀效應的PROTAC之顯著特徵一致。
在進一步的活體內研究中，將本揭示之共軛體投予攜有LS174T腫瘤的小鼠且監測PI3K p110α蛋白質之降解。
將攜有LS174T腫瘤的小鼠以45 mg/kg (mpk)或25 mpk之化合物C1或30 mpk之化合物C48 (N = 3)處理。在給藥後 6 小時及自1至7天於每天收集腫瘤。使用稀釋至1X的細胞溶解緩衝液10X (Cell Signaling Technology，9803)處理異種移植腫瘤之溶解物。將蛋白質在NuPAGE 4%至12%之Bis-Tris蛋白質凝膠，1.5 mm，15孔(Thermo Fisher Scientific，NP0336BOX)上以SDS-PAGE分離。將蛋白質自凝膠轉移至使用常規尺寸的iBlot轉移積層(Transfer Stack)硝化纖維素之硝化纖維素膜(Thermo Fisher Scientific，IB301001)。在轉移後，將膜在TBS阻斷緩衝液(LI-COR，927-60001)中阻斷。隨後在4℃下以PI3激酶p110α (C73F8)兔mAb #4249兔mAb #4060 (1：500稀釋)及GAPDH (D4C6R)小鼠mAb #97166 (1：1000稀釋)培育隔夜。在初次培育後，將膜以稀釋至1X之Pierce 20X TBS Tween 20緩衝液(Thermo Fisher Scientific，28360)清洗且在室溫下以下列二級抗體再培育1小時：1：10,000之IRDye 680RD山羊抗兔IgG (LI-COR 926-68071)及1：10,000之IRDye 800CW山羊抗小鼠IgG (LI-COR，926-32210)。接著將膜在LI-COR Odyssey成像系統上成像。將條帶使用LI-COR Odyssey成像軟體以其大小及亮度為基礎量化。
在以化合物C1 (45 mg/kg (mgk)或25 mgk)和C48 (30 mgk)處理後，測量在劑量後直到168小時之PI3Kα蛋白質含量。PI3Kα蛋白質的減少顯示於圖5中。
在進一步的研究中，測量化合物對PI3K降解及細胞增生(LS174T)的效應及在腫瘤中的化合物濃度。將數據顯示於以下表9中。
Figure 02_image329
Figure 02_image331
在又另一研究中，PI3K降解-西方墨點實驗係遵照以下步驟進行：計數人類結腸癌細胞系LS174T且在6孔盤中以每孔使用2 mL稀釋至106個細胞/mL。將細胞與1%之DMSO 或指定濃度的化合物培育6或24 h，或不處理細胞。製備溶解物且藉由以5X裝載緩衝液補充之二金雞鈉酸(bicinchonic acid)(BCA)檢定法測量樣品的總蛋白質定量。接著使用標準的程序運作西方墨點法。所使用之初級抗體為PI3激酶α：CST# 4249，pAkt (S473)：CST# 4060；Akt：CST# 4691；GAPDH：Millipore# MAB374。計算降解濃度(DC50)、PI3K損失%、pAkt抑制%、PI3Ka損失%PD、pAkt抑制%及PI3Ka損失%PD且顯示於以下表10中。以西方墨點法所測量之化合物C1、C50和C48之PI3Ka降解%顯示於圖6中。
Figure 02_image333
[圖1]顯示在接受各種劑量的本揭示之共軛體後6小時的PI3K降解。
[圖2]顯示在接受各種劑量的本揭示之共軛體後24小時的PI3K降解。
[圖3]和[圖4]顯示在接受各種劑量的本揭示之共軛體後在LS174T異種移植模式中的腫瘤體積變化。
[圖5]顯示在以本揭示之共軛體治療後於活體內研究的PI3K降解。
[圖6]顯示以西方墨點法所測量的化合物C1、C50和C48之PI3Ka降解%。

Claims (41)

  1. 一種共軛體，其包含經由連接子與靶向熱休克蛋白90 (HSP90)之部分偶合的活性劑，其中該共軛體抑制細胞中該活性劑之標靶蛋白的活性或功能。
  2. 如請求項1之共軛體，其中該共軛體係通過該標靶蛋白之降解以抑制該標靶蛋白的活性或功能。
  3. 如請求項1或2之共軛體，其中該活性劑為PI3K抑制劑或PI3K/mTor雙重抑制劑。
  4. 如請求項3之共軛體，其中該活性劑包含PQR514、PF-04979064、BAY 80-6946 (柯潘利希布(Copanlisib))、PQR530、歐米帕利希布(Omipalisib) (GSK2126458、GSK458)、PF-04691502、PI-103、BGT226 (NVP-BGT226)、阿匹托利希布(Apitolisib)(GDC-0980、RG7422)、杜維利希布(Duvelisib)(IPI-145、INK1197)、AZD8186、皮拉利希布(Pilaralisib)(XL147)、PIK-93、艾德拉利希布(Idelalisib)(GS-1101)、MLN1117、VS-5584、SB2343、GDC-0941、BM120、NVP-BKM120、布帕利希布(Buparlisib)、AZD8835、XL765 (SAR245409)、GS-9820阿卡利希布(Acalisib)、GSK2636771、AMG-319、IPI-549、哌立福新(Perifosine)、阿哌利希布(Alpelisib)、TGR 1202(RP5264)、PX-866、AMG-319、GDC-0980、GDC-0941、Sanofi XL147、XL499、XL756、XL147、PF-46915032、BKM 120、CAL 263、SF1126、PX-886、KA2237、BEZ235、異喹啉酮或彼之片段/衍生物/類似物。
  5. 如請求項1之共軛體，其中該活性劑為PI3K/mTOR雙重抑制劑。
  6. 如請求項1之共軛體，其中該活性劑包含P1、P2、P3、P4、P5、P6、P7、P8、P9、P10、P11、P12或彼之片段/衍生物/類似物。
  7. 如請求項1之共軛體，其中該靶向HSP90之部分包含加尼特斯皮(Ganetespib)、露米奈斯皮(Luminespib)(AUY-922、NVP-AUY922)、Debio-0932、MPC-3100或歐那利斯皮(Onalespib)(AT-13387)、SNX-2112、17-胺基-格爾德黴素(geldanamycin)氫醌、PU-H71、AT13387及彼之片段/衍生物/類似物。
  8. 如請求項7之共軛體，其中該靶向HSP90之部分包含TM1、TM2、TM3、TM4、TM5、TM6、TM7、TM8、TM10、TM11、TM12或彼之片段/衍生物/類似物。
  9. 如請求項1之共軛體，其中該連接子為不可切割的。
  10. 如請求項1至9中任一項之共軛體，其中該細胞為腫瘤細胞。
  11. 一種共軛體，其包含經由連接子與靶向HSP90之部分偶合的活性劑，其中該活性劑為PI3K抑制劑且其中該PI3K抑制劑為PF-04979064、PQR514、BAY 80-6946 (柯潘利希布)或彼之片段/衍生物/類似物。
  12. 如請求項11之共軛體，其中該靶向HSP90之部分包含加尼特斯皮、露米奈斯皮(AUY-922、NVP-AUY922)、Debio-0932、MPC-3100或歐那利斯皮(AT-13387)、SNX-2112、17-胺基-格爾德黴素氫醌、PU-H71、AT13387或彼之片段/衍生物/類似物。
  13. 如請求項12之共軛體，其中該靶向HSP90之部分包含TM1、TM2、TM3、TM4、TM5、TM6、TM7、TM8、TM10、TM11、TM12或彼之片段/衍生物/類似物。
  14. 如請求項11之共軛體，其中該連接子包含酯基團、二硫化物基團、醯胺基團、醯腙基團、醚基團、胺甲酸酯基團、碳酸酯基團或脲基團。
  15. 如請求項11之共軛體，其中該連接子為可切割的連接子。
  16. 如請求項11之共軛體，其中該連接子為不可切割的連接子。
  17. 如請求項11之共軛體，其中該共軛體具有少於約50,000 Da、少於約40,000 Da、少於約30,000 Da、少於約20,000 Da、少於約15,000 Da、少於約10,000 Da、少於約8,000 Da、少於約5,000 Da、少於約3,000 Da、少於2000 Da、少於1500 Da、少於1000 Da或少於500 Da之分子量。
  18. 如請求項11至17中任一項之共軛體，其中該活性劑包含柯潘利希布或其片段/衍生物/類似物。
  19. 如請求項18之共軛體，其中該活性劑包含P7、P8、P9、P10、P11、P12或彼之片段/衍生物/類似物。
  20. 如請求項18之共軛體，其中該共軛體為C1至C16、C48至C77或彼之醫藥上可接受的鹽。
  21. 如請求項11至17中任一項之共軛體，其中該活性劑包含PF-04979064或其片段/衍生物/類似物。
  22. 如請求項21之共軛體，其中該活性劑包含P4、P5、P6或彼之片段/衍生物/類似物。
  23. 如請求項21之共軛體，其中該共軛體為C17至C38、C78至87或彼之醫藥上可接受的鹽。
  24. 如請求項11至17中任一項之共軛體，其中該活性劑包含PQR530或其片段/衍生物/類似物。
  25. 如請求項21之共軛體，其中該活性劑包含P1、P2、P3或彼之片段/衍生物/類似物。
  26. 如請求項24之共軛體，其中該共軛體為C39至C47、C88至C96、C98至C116、C120或彼之醫藥上可接受的鹽。
  27. 如請求項11至17中任一項之共軛體，其中該活性劑包含GDC-0326或其片段/衍生物/類似物。
  28. 如請求項27之共軛體，其中該共軛體為C117、C118、C119或彼之醫藥上可接受的鹽。
  29. 如請求項1至28中任一項之共軛體，其另包含滲透性調節單元。
  30. 如請求項1至28中任一項之共軛體，其另包含藥物動力學調節單元。
  31. 一種共軛體，其具有選自由下列所組成之群組的結構：C1至C96、C98至C120或彼之醫藥上可接受的鹽。
  32. 一種醫藥組成物，其包含如請求項1至31中任一項之共軛體及至少一種醫藥上可接受的賦形劑。
  33. 一種降解細胞中蛋白質之方法，其包含對該細胞投予治療有效量的如請求項1至31中任一項之共軛體。
  34. 如請求項33之方法，其中該細胞為腫瘤細胞。
  35. 如請求項33之方法，其中該蛋白質亦受抑制。
  36. 如請求項33之方法，其中該蛋白質為PI3K。
  37. 一種減少細胞增生之方法，其包含對該細胞投予治療有效量的如請求項1至31中任一項之共軛體。
  38. 如請求項37之方法，其中該細胞為癌細胞。
  39. 如請求項38之方法，其中該癌細胞為小細胞肺癌細胞、非小細胞肺癌細胞、肉瘤細胞、胰臟癌細胞、乳癌細胞或結腸癌細胞。
  40. 一種治療癌症之方法，其包含投予治療有效量的如請求項32之醫藥組成物。
  41. 如請求項40之方法，其中該癌症為小細胞肺癌細胞、非小細胞肺癌細胞、肉瘤細胞、胰臟癌細胞、乳癌細胞或結腸癌細胞。
TW110131676A 2020-08-26 2021-08-26 結合熱休克蛋白９０（ｈｓｐ９０）之共軛體和彼之調製劑 TW202222311A (zh)

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