TW202126334A - 從生物活性化合物的內化共軛物選擇性釋出藥物 - Google Patents

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Abstract

本發明係關於生物活性化合物之共軛物，其中此類共軛物包含含有三肽之胺基酸的序列，該三肽使得由腫瘤組織勻漿選擇性裂解以便釋放游離藥物及/或與來自相同物種之正常組織勻漿相比改良進入該腫瘤組織之生物分佈，其中該正常組織為與向有需要之人類個體投與治療有效量之比較共軛物相關之有害事件的位點，該比較共軛物之胺基酸序列為已知可由組織蛋白酶B選擇性裂解之二肽。

Description

從生物活性化合物的內化共軛物選擇性釋出藥物
本發明係關於生物活性化合物之共軛物。
本發明係關於配體藥物共軛物(LDC)化合物及其組合物，包括抗體藥物共軛物(ADC)，與非目標細胞相比其對目標細胞具有改良之選擇性。
傳統配體藥物共軛物藉由結合目標部分且接著藉由所結合之共軛物的內化進入細胞而對目標細胞展現生物活性，該等目標細胞展示由共軛物之配體單元識別的目標部分。相較於非目標細胞對目標細胞之選擇性主要由傳統配體藥物共軛物達成，因為與非目標正常細胞相比，目標部分以更大豐度存在於目標細胞上，非目標正常細胞為不欲被共軛物施加作用的細胞。當所結合之化合物(其在游離形式中為細胞毒性的)之條件性釋放將受細胞內蛋白酶影響時，所結合之共軛物之內化隨後為共軛物之肽系連接子單元的酶促加工。
藉由優化對咸信在癌細胞中上調之特定溶酶體蛋白酶之選擇性來實現減少細胞毒性化合物自傳統二肽系配體藥物共軛物提前釋放，否則此將引起不希望的副作用。由於負責傳統配體藥物共軛物之細胞內加工的蛋白酶為所有細胞共同擁有的，故儘管目標癌細胞及非目標正常細胞內加工蛋白酶的細胞內活性水準不同，但對目標細胞的選擇性係主要歸因於欲受到共軛物作用之細胞上之目標部分的豐度更大。然而，該方法未將所釋放的細胞毒性化合物在腫瘤與正常組織之間可能的暴露差異考慮在內，此目前由本發明之配體藥物共軛物利用。
因此，經設計要受到腫瘤組織之癌細胞中上調之細胞內蛋白酶之選擇性作用的傳統配體藥物共軛物之二肽序列仍能夠受到限制於正常組織內之蛋白酶的作用。在免疫特異性或非特異性攝入此等細胞中之後，此類作用可發生在正常組織之微環境內或正常組織之細胞內，分別導致中靶或脫靶毒性。對於高細胞毒性化合物之靶向遞送而言，彼等毒性為更急需解決之問題。因此，咸信與傳統二肽系配體藥物共軛物相比，提供對正常組織之更低暴露，且因此使暴露於由其釋放之細胞毒性化合物減少，同時維持由此等傳統共軛物提供之功效的具有改良之肽序列的配體藥物共軛物將改良對療法之耐受性。
進一步咸信與傳統二肽系配體藥物共軛物由正常組織及腫瘤組織蛋白分解相比，相較於由正常組織蛋白分解更傾向於由腫瘤組織蛋白分解之具有改良之肽序列的配體藥物共軛物將亦減少暴露於所釋放之細胞毒性化合物，此將促成改良之對療法之耐受性。使用組織勻漿確定彼等蛋白分解差異將捕獲由此等組織之微環境驅動及/或在細胞內化之後產生的彼等差異。
為提供此項技術中該問題之解決方案，本文揭示具有肽系連接子單元之配體藥物共軛物，該等肽系連接子單元之序列使得與正常組織之細胞暴露於游離細胞毒素相比，腫瘤組織之靶細胞更具選擇性地暴露於由共軛物釋放之細胞毒性化合物，使得對共軛物之耐受性得以改良，同時保留傳統二肽系共軛物在治療哺乳動物個體之癌症的功效。該暴露差異可因與傳統二肽系共軛物之蛋白分解相比，相較於正常組織內之蛋白分解，腫瘤組織內對具有賦予選擇性之肽序列之配體藥物共軛物之蛋白分解的選擇性更大而引起。因為改變肽序列亦可影響共軛物化合物之生理化學特性，故可因向腫瘤組織及非正常組織中之生物分佈得以改良及/或分佈至此等組織中後的處置得以改良(分別優先保留腫瘤組織中之共軛物化合物及/或優先自正常組織消除共軛物化合物)而發生更大的暴露。彼等生物分佈效應甚至可能超過優先蛋白分解變為主導因素，此在活體內可能難以觀測。
因此，具有使所釋放之游離細胞毒性化合物增進暴露於腫瘤組織(相較於正常組織)之肽序列的共軛物化合物應因該肽序列總體上在正常組織或其細胞內相較於腫瘤者較不易發生蛋白分解且/或由於併有相較於正常組織有利於腫瘤組織之彼等肽序列的共軛物化合物的改良之藥物動力學特性而展現降低之不欲的毒性。
因此，本發明之配體藥物共軛物對目標細胞相較於非目標正常細胞而言具有兩個層面之選擇性：(1)選擇性進入目標細胞以及(2)與腫瘤組織相比，正常組織較少暴露於共軛物化合物。由該第二層面之選擇性，正常組織毒性降低預期使得與習知靶向療法相關之有害事件減少。
本發明之一個原理實施態樣提供一種由式1表示之配體藥物共軛物組合物：
Figure 02_image001
或其鹽，特定而言醫藥學上可接受之鹽，其中 L為配體單元； LU為連接子單元；且 D’表示式-LU-D'之各藥物連接子部分中的1至藥物單元(D)；且 下標p為1至12、1至10或1至8之數字或為約4或約8， 其中配體單元屬於抗體或抗體之抗原結合片段，其能夠選擇性結合腫瘤組織之抗原以便隨後以游離細胞毒性化合物之形式釋放該藥物單元， 其中組合物之配體藥物共軛物化合物中之每一者中式-LU-D’之藥物連接子部分具有式1A 之結構：
Figure 02_image003
或其鹽，特定而言醫藥學上可接受之鹽， 其中波形線指示共價連接至L； D為細胞毒性化合物之藥物單元； LB 為配體共價結合部分； A為第一視情況存在之延伸體單元； 下標a為0或1，分別指示A不存在或存在； B為視情況存在之分枝單元； 下標b為0或1，分別指示B不存在或存在； LO 為二級連接子部分，其中該二級連接子具有下式；
Figure 02_image005
其中毗鄰Y之波形線指示LO 共價連接至藥物單元之位點且毗鄰A’之波形線指示共價連接至藥物連接子部分之其餘部分的位點； A’為第二視情況存在之延伸體單元，其在不存在B之情況下變為A之亞單元， 下標a’為0或1，分別指示A’不存在或存在， W為肽可裂解單元，其中肽可裂解單元為至多12(例如，3-12或3-10)個胺基酸之連續序列，其中序列包含一種賦予選擇性之三肽，該賦予選擇性之三肽使得與由肽可裂解單元之肽序列為二肽-纈胺酸-瓜胺酸-或-纈胺酸-丙胺酸-的比較配體-藥物共軛物組合物之配體藥物共軛物化合物所釋放的細胞毒性化合物相比，對腫瘤組織相較於正常組織暴露於由該組合物之配體藥物共軛物化合物所釋放之游離細胞毒性化合物之選擇性得以改良； 其中腫瘤及正常組織屬於囓齒動物物種且其中式1組合物提供該改良之暴露選擇性，該改良之暴露選擇性由以下各項證實： 當以與先前針對比較配體-藥物共軛物共軛物組合物所確定相同之有效量及劑量時程投與時，保留在比較配體-藥物共軛物共軛物組合物之腫瘤異種移植模型中的功效，以及 與兩種共軛物組合物之配體單元由非結合抗體置換的比較配體-藥物共軛物組合物之等效(例如相同)投與相比，當以與腫瘤異種移植模型中相同之有效量及劑量時程向不帶腫瘤之囓齒動物投與時，顯示由組合物之配體藥物共軛物化合物釋放的游離細胞毒性化合物之血漿濃度降低，及/或組織中正常細胞之維持， 其中對與不帶腫瘤之囓齒動物之組織中的正常細胞類型相同之人類組織中之細胞的細胞毒性至少部分在被投與治療有效量之比較共軛物組合物之人類個體中引起有害事件； Y為自降解性間隔子單元；且 下標y為0、1或2，分別指示Y不存在或存在1或2個； 下標q為在1至4範圍內之整數， 限制條件為當下標b為0時下標q為1，且當下標b為1時下標q為2、3或4；且 其中組合物之配體藥物共軛物化合物具有式1 之結構，其中下標p由下標p’置換，其中下標p’為1至12、1至10或1至8之整數或為4或8。
一相關原理實施態樣提供一種式I 藥物連接子化合物：
Figure 02_image007
或其鹽，特定而言其醫藥學上可接受之鹽，其中LU'能夠提供L與式1 之LU之間的共價鍵，且因此有時稱為連接子單元前驅體；且D'表示1至4個藥物單元，其中藥物連接子化合物進一步由式IA 之結構定義：
Figure 02_image009
其中LB '能夠轉化為式1A 之LB ，由此形成連接式1 之L的共價鍵，且因此有時指配體共價結合前驅體部分，且式IA 之其餘可變基團如關於式1A 所定義。
在一些實施態樣中，本文提供一種由式1 表示之配體藥物共軛物組合物：
Figure 02_image011
或其醫藥學上可接受之鹽，其中 L為配體單元； LU為連接子單元； D'表示式-LU-D'之各藥物連接子部分中的1至4個藥物單元(D)；且 下標p為1至12、1至10或1至8之數字或為約4或約8， 其中配體單元來自抗體或抗體之抗原結合片段，其能夠選擇性結合腫瘤組織之抗原以便隨後以游離藥物形式釋放藥物單元， 其中組合物之配體藥物共軛物化合物中之每一者中式-LU-D’之藥物連接子部分具有式1A 之結構：
Figure 02_image013
或其鹽，特定而言醫藥學上可接受之鹽， 其中波形線指示共價連接至L； D為藥物單元； LB 為配體共價結合部分； A為第一視情況存在之延伸體單元； 下標a為0或1，分別指示A不存在或存在； B為視情況存在之分枝單元； 下標b為0或1，分別指示B不存在或存在； LO 為二級連接子部分，其中該二級連接子具有下式；
Figure 02_image015
其中毗鄰Y之波形線指示LO 共價連接至藥物單元之位點且毗鄰A’之波形線指示共價連接至藥物連接子部分之其餘部分的位點； A’為第二視情況存在之延伸體單元，其在不存在B之情況下變為A之亞單元， 下標a’為0或1，分別指示A’不存在或存在； W為肽可裂解單元，其中肽可裂解單元包含具有序列-P3-P2-P1-之三肽，其中P1、P2及P3各自為胺基酸，其中： 胺基酸P1、P2或P3中之第一者為帶負電荷的； 胺基酸P1、P2或P3中之第二者具有疏水性不大於白胺酸之脂族側鏈；且 胺基酸P1、P2或P3中之第三者具有低於白胺酸之疏水性， 其中胺基酸P1、P2或P3中之該第一者對應於P1、P2或P3中之任一者，胺基酸P1、P2或P3中之該第二者對應於兩個剩餘胺基酸P1、P2或P3中之一者，且胺基酸P1、P2或P3中之該第三者對應於最後一個剩餘胺基酸P1、P2或P3， 限制條件為-P3-P2-P1-不為-Glu-Val-Cit-或 -Asp-Val-Cit-； Y為自降解性間隔子單元； 下標y為0、1或2，分別指示Y不存在或存在1或2個；且 下標q為在1至4範圍內之整數， 限制條件為當下標b為0時下標q為1，且當下標b為1時下標q為2、3或4；且 其中組合物之配體藥物共軛物化合物具有式1 之結構，其中下標p由下標p'置換，其中下標p'獨立地為1至12、1至10或1至8之整數或為4或8。
在一些實施態樣中，本文提供式1之配體藥物共軛物組合物，其中配體藥物共軛物組合物中之配體藥物共軛物化合物主要具有式1H之藥物連接子部分：
Figure 02_image017
或其醫藥學上可接受之鹽，且視情況具有少數配體藥物共軛物化合物，其中此類化合物中之每一者中的藥物連接子部分中之一或多者在水解形式中具有其琥珀醯亞胺環，且其中 HE為水解增強單元； A'當存在時為所指示之第一延伸體單元(A)之亞單元；下標a'為0或1，指示A'不存在或存在；且 波形線指示共價結合至配體單元之硫原子之位點。
在可與前述實施態樣中之任一者組合的一些實施態樣中，本文提供配體藥物共軛物組合物，其中HE為-(C=O)。
在可與前述實施態樣中之任一者組合的一些實施態樣中，本文提供配體藥物共軛物組合物，其中 -Yy -D具有以下結構：
Figure 02_image019
其中-N(Ry )D’表示D，其中D'為D之其餘部分； 波形線指示共價連接至P1之位點； 虛線指示視情況存在之Ry 與D'之環化； Ry 在未與D’環化之情況下為視情況經取代之C1 -C6 烷基，或當與D’環化時為視情況經取代之C1 -C6 伸烷基； 各Q獨立地選自由以下組成之群：-C1 -C8 烷基、 -O-(C1 -C8 烷基)、鹵素、硝基及氰基；且 下標m為0、1或2。
在可與前述實施態樣中之任一者組合的一些實施態樣中，本文提供配體藥物共軛物組合物，其中D為細胞毒性藥物，其中細胞毒性藥物為含二級胺之奧裡斯他汀化合物，其中二級胺之氮原子是共價連接至藥物連接子部分之位點，且含二級胺之奧裡斯他汀化合物具有式DF/E-3 之結構：
Figure 02_image021
其中劍形符指示共價連接提供胺基甲酸酯官能基之氮原子之位點； R10 及R11 中之一者為氫且另一者為甲基； R13 為異丙基或-CH2 -CH(CH3 )2 ；且 R19B 為-CH(CH3 )-CH(OH)-Ph、 -CH(CO2 H)-CH(OH)-CH3 、-CH(CO2 H)-CH2 Ph、 -CH(CH2 Ph)-2-噻唑基、-CH(CH2 Ph)-2-吡啶基、 -CH(CH2 -p-Cl-Ph)、-CH(CO2 Me)-CH2 Ph、 -CH(CO2 Me)-CH2 CH2 SCH3 、 -CH(CH2 CH2 SCH3 )C(=O)NH-喹啉-3-基、 -CH(CH2 Ph)C(=O)NH-p-Cl-Ph，或 R19B 具有
Figure 02_image023
之結構，其中波形線指示共價連接至奧裡斯他汀化合物之其餘部分。
在可與前述實施態樣中之任一者組合的一些實施態樣中，本文提供配體藥物共軛物組合物，其中含二級胺之奧裡斯他汀化合物為單甲基奧裡斯他汀E(MMAE)或單甲基奧裡斯他汀F(MMAF)。
在可與前述實施態樣中之任一者組合的一些實施態樣中，本文提供配體藥物共軛物組合物，其中下標q為1且配體藥物共軛物組合物中之配體藥物共軛物化合物主要具有式1H-MMAE之藥物連接子部分：
Figure 02_image025
或其醫藥學上可接受之鹽，且視情況具有少數配體藥物共軛物化合物，其中此類化合物中之每一者中的藥物連接子部分中之一或多者在水解形式中具有其琥珀醯亞胺環，且其中： 下標a'為0，且A'不存在；且 波形線指示共價結合至配體單元之硫原子之位點。
在可與前述實施態樣中之任一者組合的一些實施態樣中，本文提供配體藥物共軛物組合物，其中肽可裂解單元為具有序列-P3-P2-P1-之三肽，其中P1、P2及P3各自為胺基酸，其中：三肽之P3胺基酸呈D-胺基酸組態；P2及P1胺基酸中之一者具有疏水性低於白胺酸之脂族側鏈；且P2及P1胺基酸中之另一者為帶負電荷的。在一些實施態樣中，P3胺基酸為D-Leu或D-Ala。在一些實施態樣中，P2或P1胺基酸中之一者具有疏水性不大於纈胺酸之脂族側鏈，且P2或P1胺基酸中之另一者在血漿生理pH值下為帶負電荷的。在一些實施態樣中，P2胺基酸具有疏水性不大於纈胺酸之脂族側鏈，且P1胺基酸在血漿生理pH值下為帶負電荷的。在一些實施態樣中，-P2-P1-為 -Ala-Glu-或-Ala-Asp-。在一些實施態樣中，-P3-P2-P1-為-D-Leu-Ala-Asp-、-D-Leu-Ala-Glu-、-D-Ala-Ala-Asp-或 -D-Ala-Ala-Glu-。在一些實施態樣中，P3胺基酸為D-Leu或D-Ala，P2胺基酸為Ala、Glu或Asp，且P1胺基酸為Ala、Glu或Asp。
在一些實施態樣中，本文提供配體藥物共軛物組合物，其中化合物具有以下結構：
Figure 02_image027
或其醫藥學上可接受之鹽， 其中L為配體單元，且下標p'為1至24之整數。
在可與前述實施態樣中之任一者組合的一些實施態樣中，本文提供配體藥物共軛物組合物，其中L為完整抗體或其抗原結合片段之抗體配體單元。在一些實施態樣中，完整抗體或其片段能夠選擇性結合癌細胞抗原。在一些實施態樣中，完整抗體為嵌合抗體、人類化抗體或人類抗體，其中抗體能夠選擇性結合癌細胞抗原或抗體為非結合對照抗體，由此確定非結合對照共軛物組合物。
在可與前述實施態樣中之任一者組合的一些實施態樣中，本文提供配體藥物共軛物組合物，其中下標p在約2至約12或約2至約10或約2至約8範圍內，特定而言下標p為約2、約4或約8。
在可與前述實施態樣中之任一者組合的一些實施態樣中，本文提供醫藥學上可接受之調配物，其中調配物包含有效量之配體藥物共軛物組合物或等效量之本文所描述之非結合對照共軛物及至少一種醫藥學上可接受之賦形劑。在一些實施態樣中，該至少一種醫藥學上可接受之賦形劑為提供液體調配物之液體載劑，其中液體調配物適合於冷凍乾燥或向有需要之個體投與。在一些實施態樣中，調配物為由冷凍乾燥產生之固體或本文所描述之液體調配物，其中固體調配物之至少一種賦形劑為冷凍乾燥保護劑。
在一些實施態樣中，本文提供一種式IA 之藥物連接子化合物：
Figure 02_image029
或其鹽，其中 D為藥物單元； LB ’為配體共價結合前驅體部分； A為第一視情況存在之延伸體單元； 下標a為0或1，分別指示A不存在或存在； B為視情況存在之分枝單元； 下標b為0或1，分別指示B不存在或存在； LO 為二級連接子部分，其中該二級連接子具有下式；
Figure 02_image031
其中毗鄰Y之波形線指示LO 共價連接至藥物單元之位點且毗鄰A'之波形線指示共價連接至藥物連接子化合物之其餘部分的位點； A'為第二視情況存在之延伸體單元，其在不存在B之情況下變為A之亞單元； 下標a’為0或1，分別指示A’不存在或存在； W為肽可裂解單元，其中肽可裂解單元包含具有序列-P3-P2-P1-之三肽，其中P1、P2及P3各自為胺基酸，其中： 胺基酸P1、P2或P3中之第一者為帶負電荷的； 胺基酸P1、P2或P3中之第二者具有疏水性不大於白胺酸之脂族側鏈；且 胺基酸P1、P2或P3中之第三者具有低於白胺酸之疏水性， 其中胺基酸P1、P2或P3中之該第一者對應於P1、P2或P3中之任一者，胺基酸P1、P2或P3中之該第二者對應於兩個剩餘胺基酸P1、P2或P3中之一者，且胺基酸P1、P2或P3中之該第三者對應於最後一個剩餘胺基酸P1、P2或P3， 限制條件為-P3-P2-P1-不為-Glu-Val-Cit-或 -Asp-Val-Cit-； Y為自降解性間隔子單元； 下標y為0、1或2，分別指示Y不存在或存在1或2個；且 下標q為在1至4範圍內之整數， 限制條件為當下標b為0時下標q為1，且當下標b為1時下標q為2、3或4。
在一些實施態樣中，本文提供式IA 之藥物連接子化合物，其中藥物連接子化合物具有式IH之結構：
Figure 02_image033
或其鹽，其中： HE為水解增強單元；且 A'當存在時為所指示之第一延伸體單元(A)之亞單元；下標a'為0或1，指示A'不存在或存在。
在可與前述實施態樣中之任一者組合的一些實施態樣中，本文提供藥物連接子化合物，其中HE為 -(C=O)。
在可與前述實施態樣中之任一者組合的一些實施態樣中，本文提供藥物連接子化合物，其中-Yy -D具有以下結構：
Figure 02_image035
其中-N(Ry )D’表示D，其中D'為D之其餘部分； 波形線指示共價連接至P1之位點； 虛線指示視情況存在之Ry 與D'之環化； Ry 在未與D’環化之情況下為視情況經取代之C1 -C6 烷基，或當與D’環化時為視情況經取代之C1 -C6 伸烷基； 各Q獨立地選自由以下組成之群：-C1 -C8 烷基、 -O-(C1 -C8 烷基)、鹵素、硝基及氰基；且 下標m為0、1或2。
在可與前述實施態樣中之任一者組合的一些實施態樣中，本文提供藥物連接子化合物，其中D為細胞毒性藥物，其中細胞毒性藥物為含二級胺之奧裡斯他汀化合物，其中二級胺之氮原子為共價連接至藥物連接子部分之位點，且含二級胺之奧裡斯他汀化合物具有式DF/E-3 之結構：
Figure 02_image037
其中劍形符指示共價連接提供胺基甲酸酯官能基之氮原子之位點； R10 及R11 中之一者為氫且另一者為甲基； R13 為異丙基或-CH2 -CH(CH3 )2 ；且 R19B 為-CH(CH3 )-CH(OH)-Ph、 -CH(CO2 H)-CH(OH)-CH3 、-CH(CO2 H)-CH2 Ph、 -CH(CH2 Ph)-2-噻唑基、-CH(CH2 Ph)-2-吡啶基、 -CH(CH2 -p-Cl-Ph)、-CH(CO2 Me)-CH2 Ph、 -CH(CO2 Me)-CH2 CH2 SCH3 、 -CH(CH2 CH2 SCH3 )C(=O)NH-喹啉-3-基、 -CH(CH2 Ph)C(=O)NH-p-Cl-Ph，或 R19B 具有
Figure 02_image039
之結構，其中波形線指示共價連接至奧裡斯他汀化合物之其餘部分。
在可與前述實施態樣中之任一者組合的一些實施態樣中，本文提供藥物連接子化合物，其中含二級胺之奧裡斯他汀化合物為單甲基奧裡斯他汀E(MMAE)或單甲基奧裡斯他汀F(MMAF)。
在可與前述實施態樣中之任一者組合的一些實施態樣中，本文提供藥物連接子化合物，其中藥物連接子化合物具有式IH-MMAE之結構：
Figure 02_image041
或其鹽，其中 下標a'為0，且A'不存在。
在可與前述實施態樣中之任一者組合的一些實施態樣中，本文提供藥物連接子化合物，其中肽可裂解單元為具有序列-P3-P2-P1-之三肽，其中P1、P2及P3各自為胺基酸，其中：該三肽之P3胺基酸呈D-胺基酸組態；P2及P1胺基酸中之一者具有疏水性低於白胺酸之脂族側鏈；且P2及P1胺基酸中之另一者為帶負電荷的。在一些實施態樣中，P3胺基酸為D-Leu或D-Ala。在一些實施態樣中，P2或P1胺基酸中之一者具有疏水性不大於纈胺酸之脂族側鏈，且P2或P1胺基酸中之另一者在血漿生理pH值下為帶負電荷的。在一些實施態樣中，P2胺基酸具有疏水性不大於纈胺酸之脂族側鏈，且P1胺基酸在血漿生理pH值下為帶負電荷的。在一些實施態樣中，-P2-P1-為-Ala-Glu-或 -Ala-Asp-。在一些實施態樣中，-P3-P2-P1-為 -D-Leu-Ala-Asp-、-D-Leu-Ala-Glu-、-D-Ala-Ala-Asp-或 -D-Ala-Ala-Glu-。在一些實施態樣中，P3胺基酸為D-Leu或D-Ala，P2胺基酸為Ala、Glu或Asp，且P1胺基酸為Ala、Glu或Asp。
在一些實施態樣中，本文提供藥物連接子化合物，其中藥物連接子化合物具有以下結構：
Figure 02_image043
或其鹽。
在一些實施態樣中，本文提供一種式IA-L 之連接子化合物：
Figure 02_image045
或其鹽，其中 RG為反應性基團； LB ’為配體共價結合前驅體部分； A為第一視情況存在之延伸體單元； 下標a為0或1，分別指示A不存在或存在； B為視情況存在之分枝單元； 下標b為0或1，分別指示B不存在或存在； LO 為二級連接子部分，其中該二級連接子具有下式；
Figure 02_image047
其中毗鄰Y之波形線指示LO 共價連接至藥物單元之位點且毗鄰A'之波形線指示共價連接至藥物連接子化合物之其餘部分的位點； A’為第二視情況存在之延伸體單元，其在不存在B之情況下變為A之亞單元； 下標a’為0或1，分別指示A’不存在或存在； W為肽可裂解單元，其中肽可裂解單元包含具有序列-P3-P2-P1-之三肽，其中P1、P2及P3各自為胺基酸，其中： 胺基酸P1、P2或P3中之第一者為帶負電荷的； 胺基酸P1、P2或P3中之第二者具有疏水性不大於白胺酸之脂族側鏈；且 胺基酸P1、P2或P3中之第三者具有低於白胺酸之疏水性， 其中胺基酸P1、P2或P3中之該第一者對應於P1、P2或P3中之任一者，胺基酸P1、P2或P3中之該第二者對應於兩個剩餘胺基酸P1、P2或P3中之一者，且胺基酸P1、P2或P3中之該第三者對應於最後一個剩餘胺基酸P1、P2或P3， 限制條件為-P3-P2-P1-不為-Glu-Val-Cit-或 -Asp-Val-Cit-； Y為自降解性間隔子單元； 下標y為0、1或2，分別指示Y不存在或存在1或2個；且 下標q為在1至4範圍內之整數， 限制條件為當下標b為0時下標q為1，且當下標b為1時下標q為2、3或4。
在一些實施態樣中，本文提供連接子化合物，其中肽可裂解單元為具有序列-P3-P2-P1-之三肽，其中P1、P2及P3各自為胺基酸，其中：該三肽之P3胺基酸呈D-胺基酸組態；P2及P1胺基酸中之一者具有疏水性低於白胺酸之脂族側鏈；且P2及P1胺基酸中之另一者為帶負電荷的。
在一些實施態樣中，本文提供連接子化合物，其中連接子化合物具有式IA-L-3 之結構：
Figure 02_image049
或其鹽。
在一些實施態樣中，本文提供一種連接子化合物，其中連接子化合物具有以下結構：
Figure 02_image051
Figure 02_image053
或其鹽。
以下「實施方式」及「申請專利範圍」中更詳細描述本發明之彼等及其他實施態樣。
相關申請案之交叉參考
本申請案主張於2019年9月19日申請之美國臨時申請案第62/902,888號的優先權，其內容以全文引用之方式併入本文中。 概要
本發明係部分基於以下意外發現：腫瘤組織中之蛋白酶活性與非目標正常組織有足夠差異，以對由具有用於有條件釋放所結合之細胞毒性化合物的蛋白酶可活化肽序列之配體藥物共軛物靶向的癌細胞提供額外選擇性。當本文所揭示之蛋白酶可裂解肽序列被併入配體藥物共軛物化合物之肽可裂解連接子單元時，該差異被彼等序列利用。咸信具有該特性之序列在一些情況下會提供生物分佈及/或對於蛋白分解以釋放游離細胞毒性化合物的敏感性在與正常組織相比下有利於腫瘤組織的共軛物化合物。 1. 定義
除非另外說明或上下文暗示，否則本文所用之術語具有下文定義之含義。除非以其他方式為禁忌的或例如藉由包括互相排斥之元素或選擇進行暗示，否則在彼等定義中及本說明書通篇中，術語「一個」及「一種」意謂一或多個(一或多種)且術語「或」在上下文容許之情況下意謂及/或。因此，除非上下文另外明確指示，否則如本說明書及所附申請專利範圍中所呈現，單數形式「一」及「該」包括複數指示物。
在本發明之不同位置，例如在任何所揭示之實施態樣中或申請專利範圍中，提及「包含」一或多個指定組分、元素或步驟之化合物、組合物或方法。發明實施態樣亦特定而言包括為彼等指定組分、元素或步驟或由彼等指定組分、元素或步驟組成或基本上由其組成之彼等化合物、組合物、組合物或方法。術語「包含(comprised of)」可與術語「包含(comprising)」互換使用且作為等效術語進行陳述。舉例而言，所揭示之「包含」一組分或步驟之組合物、裝置、製品或方法為開放性的，且其包括另一組分或步驟或被理解為在彼等組合物或方法上加上另一組分或步驟。然而，彼等術語不涵蓋未列舉之將破壞所揭示之組合物、裝置、製品或方法用於其預期目的之功能性的元素。類似地，所揭示之「由一組分或步驟組成」之組合物、裝置、製品或方法為封閉性的，且其將不包括可感知量之另一組分或另一步驟或被理解為在彼等組合物或方法上具有可感知量之另一組分或另一步驟。此外，術語「基本上由……組成」容許包括未列舉之對所揭示之組合物、裝置、製品或方法如本文進一步確定用於其預期目的之功能性沒有實質影響的元素。本文所用之章節標題僅用於組織目的，而不應被視為限制所描述之主題。除非另外指出，否則採用質譜分析、NMR、HPLC、蛋白質化學、生物化學、重組DNA技術及藥理學之習知方法。
除非另外說明或上下文暗示，否則「約」在本文中作為術語與數值或值範圍結合用於描述化合物或組合物之特定特性，表明該值或值範圍可在一般熟習此項技術者認為合理之程度上產生偏差，同時仍描述特定特性。合理偏差包括在用於量測、測定或導出特定特性之儀器的準確性或精確性內的彼等偏差。特定而言，術語「約」在用於此背景中時表明該數值或數值範圍可在仍描述特定特性之同時變化達所敍述之值或值範圍的10%、9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%、1%、0.9%、0.8%、0.7%、0.6%、0.5%、0.4%、0.3%、0.2%、0.1%或0.01%，典型地達10%至0.5%，更典型地達5%至1%。
就表示如本文中進一步定義之配體藥物共軛物組合物中藥物連接子部分之平均數目的下標p而言，術語「約」反映對於由如藉由粒徑篩析、HIC層析或HPLC-MS之標準方法所確定之該組合物內配體藥物共軛物化合物之分佈確定該值而言此項技術中接受之不確定性。
除非另外說明或上下文暗示，否則如本文所用，「基本上保留(Essentially retains/essentially retaining )」及類似術語係指化合物或組合物或其部分之特性、特徵、功能或活性尚未可偵測地改變或在測定相關結構之化合物或組合物或部分之該活性、特徵或特性的實驗誤差內。
除非另外說明或上下文暗示，否則如本文所用，「實質上保留(Substantially retains/substantially retaining)」及類似術語係指化合物或組合物或其部分之物理特性或特徵的量測值可在統計學上不同於相關結構之另一化合物或組合物或部分之相同物理特性的測定，但在適合用於評估該活性或特性之生物檢驗系統中在生物活性或藥理學特性中此類差異不轉化為統計顯著性或有意義的差異(亦即，生物活性或特性得以保留或基本上保留)。因此，關於化合物或組合物之物理特性或特徵對明確地與該物理特性或特徵相關之生理化學或藥理學特性或生物活性之影響形成片語「實質上保留」。
除非另外說明或上下文暗示，否則如本文所用，「可忽視地」、「可忽略」及類似術語為雜質的量低於藉由HPLC分析定量之水準。視上下文而定，彼等術語可置換地意謂在量測值或結果之間未觀測到統計顯著性差異或在用於獲得彼等值之儀器的實驗誤差以內。實驗測定之參數之值的可忽略差異不暗示雜質之特徵為該參數以可忽略量存在。
除非另外說明或上下文暗示，否則如本文所用，「主要含有」、「主要具有」及類似術語係指混合物之主要組分。當混合物具有兩種組分時，則主要組分表示超過混合物之50重量%。在三種或更多種組分之混合物情況下，主要組分為以最大量存在於混合物中之組分且可能表示或可能不表示大部分之混合物質量。
除非另外說明或上下文暗示，否則在「拉電子基團」作為術語用於本文中時，係指誘導性地及/或透過共振吸引電子密度遠離與其鍵結之原子的官能基或陰電性原子(無論哪個為更主要的，亦即，官能基或原子可透過共振為推電子的，但在誘導性方面可總體上為拉電子)，且傾向於使陰離子或富電子部分穩定。拉電子效應典型地以誘導方式傳輸(不過呈減弱之形式)至已藉由拉電子基團(EWG)成為缺電子之連接至所鍵結之原子的其他原子，因此降低更遠處之反應中心的電子密度。
拉電子基團(EWG)典型地選自由以下組成之群：-C(=O)R’、-CN、-NO2 、-CX3 、-X、-C(=O)OR’、 -C(=O)NH2 、-C(=O)N(R’)Rop 、-C(=O)R’、-C(=O)X、 -S(=O)2 Rop 、-S(=O)2 OR’、-SO3 H2 、-S(=O)2 NH2 、 -S(=O)2 N(R’)Rop 、-PO3 H2 、-P(=O)(OR’)(ORop )2 、-NO、 -NH2 、-N(R’)(Rop )、-N(Rop )3 + 及其鹽，其中X為-F、-Br、 -Cl或-I，Rop 在每次出現時獨立地選自先前針對視情況存在之取代基所描述的分組且R’為-H或Rop ，其中Rop 如先前所定義。在一些態樣中，各Rop 獨立地為C1 -C12 烷基、C1 -C8 烷基、C1 -C6 烷基或C1 -C4 烷基，或獨立地選自由C1 -C6 烷基及視情況經取代之苯基組成之群，且R'為氫。視取代及某些缺電子雜芳基(例如吡啶基)而定，EWG亦可為芳基(例如苯基)或雜芳基。因此，在一些態樣中，「拉電子基團」進一步涵蓋缺電子之C5 -C24 雜芳基及經拉電子取代基取代之C6 -C24 芳基。更典型地，拉電子基團獨立地選自由以下組成之群：-C(=O)R’、-CN、-NO2 、-CX3 及-X，其中X為鹵素，典型地來自由-F及-Cl組成之群且R'為H、C1 -C6 烷基或C1 -C4 烷基。視取代基而定，視情況經取代之烷基部分亦可為拉電子基團且因此在此類情況下此等態樣將由用於拉電子基團之術語涵蓋。
除非另外說明或上下文暗示，否則在「推電子基團」作為術語用於本文中時，係指誘導性地及/或透過共振增加與其鍵結之原子之電子密度的官能基或陽電性原子(無論哪個為更主要的，亦即，官能基或原子在誘導性方面可為拉電子的，但透過共振可總體上為推電子的)，且傾向於使陽離子或電子不良系統穩定。推電子效應典型地透過共振傳輸至已藉由推電子基團(EDG)變得富含電子之連接至所鍵結之原子的其他原子，因此增加更遠處之反應中心之電子密度。典型地，推電子基團選自由以下組成之群：-OH、-OR’、-NH2 、-NHR’及N(R')2 ，其中各R'獨立地選自C1 -C12 烷基，典型地為C1 -C6 烷基。視取代基而定，C6 -C24 芳基、C5 -C24 雜芳基或不飽和C1 -C12 烷基部分亦可為推電子基團，且在一些態樣中，此類部分由用於推電子基團之術語涵蓋。
除非另外說明或上下文暗示，否則在「化合物」作為術語用於本文中時，係指且涵蓋由結構命名或表示之化合物本身及其鹽形式(無論是否明確陳述)，除非上下文講明此類鹽形式要排除在外。化合物鹽包括兩性離子鹽形式及具有有機相對離子或無機相對離子之酸加成及鹼加成鹽形式以及涉及兩個或更多個相對離子之鹽形式，該兩個或更多個相對離子可相同或不同。在一些態樣中，鹽形式為化合物之醫藥學上可接受之鹽形式。術語「化合物」進一步涵蓋化合物之溶劑合物形式，其中溶劑為與化合物非共價締合或當化合物之羰基發生水合作用以形成孿(gem)-二醇時與化合物共價可逆締合。溶劑合物形式包括化合物本身及其鹽形式之彼等溶劑合物形式且包括半溶劑合物、單溶劑合物、雙溶劑合物，包括水合物；且當化合物可與兩個或更多個溶劑分子締合時，該兩個或更多個溶劑分子可相同或不同。在一些情況下，本發明之化合物將包括明確提及以上形式(例如鹽及溶劑合物)中之一或多者，此不暗示化合物之任何固態形式；然而，此提及僅用於強調，且不應視為排除如上文所指明之任何其他形式。此外，當未明確提及化合物或配體藥物共軛物組合物之鹽及/或溶劑合物形式時，該省略不應視為排除該化合物或共軛物之鹽及/或溶劑合物形式，除非上下文講明此類鹽及/或溶劑合物形式要排除在外。
除非另外說明或上下文暗示，否則在「光學異構體」作為術語用於本文中時，係指相關化合物與參考化合物相比兩者具有相同原子連接性，但在結構上因一或多個對掌性中心呈相反立體化學組態而不同。
除非另外說明或上下文暗示，否則在「部分」作為術語用於本文中時，意謂分子或化合物之指定區段、片段或官能基。化學部分有時指示為嵌入或附加至(亦即，取代基或可變基團)分子、化合物或化學式中之化學實體。
除非另外指明或上下文暗示，對於本文藉由給定範圍之碳原子所描述之任何取代基或部分，所指定之範圍意謂描述任何個別數目之碳原子。因此，提及例如「視情況經取代之C1 -C4 烷基」或「視情況經取代之C2 -C6 烯基」特定而言分別意謂存在如本文所定義之視情況經取代之1、2、3或4碳烷基部分，或存在如本文所定義之視情況經取代之2、3、4、5或6碳烯基部分。所有此類數字標號明確地旨在揭示所有個別碳原子基團；且因此「視情況經取代之C1 -C4 烷基」包括甲基、乙基、3-碳烷基及4-碳烷基，包括所有其位置異構體，無論經取代抑或未經取代。因此，當烷基部分經取代時，數字標號係指未經取代之基礎部分且不旨在包括未直接連接至基礎部分之可能存在於該基礎部分之取代基中的碳原子。對於藉由給定範圍之碳原子指明之如本文所定義之酯、碳酸酯、胺基甲酸酯及尿素，所指定之範圍包括個別官能基之羰基碳。因此，C1 酯係指甲酸酯且C2 酯係指乙酸酯。
本文所描述之有機取代基、部分及基團且對於本文所描述之其他任何其他部分，通常將排除不穩定部分，除非其中此類不穩定部分為可用於製備用於本文所描述之一種或多種用途的具有充足化學穩定性之化合物的暫時物質。藉由本文所提供之定義的操作使得取代基、部分或基團具有五價碳之彼等取代基、部分或基團特定而言被排除在外。
除非另外說明或上下文暗示，否則在「烷基」作為術語單獨或作為另一術語之一部分用於本文中時，係指甲基或連續碳原子之集合，該等連續碳原子中之一者為單價的，其中碳原子中之一或多者為飽和的(亦即，包含一或多個sp3 碳)且以正構(normal)、二級、三級或環狀排列(亦即，以線性、分枝鏈、環狀排列或其一些組合)共價鍵聯在一起。當連續飽和碳原子呈環狀排列時，此類烷基部分在一些態樣中稱為如本文進一步定義之碳環基。
當提及作為烷基取代基之烷基部分或基團時，與馬庫西結構或另一有機部分締合之該烷基取代基為甲基或透過該烷基取代基之sp3 碳共價連接至該結構或部分的該連續碳原子鏈。因此，如本文所用，烷基取代基含有至少一個飽和部分且亦可經環烷基或芳族或雜芳族部分或基團取代或由烯基或炔基部分取代，從而產生不飽和烷基。因此，視情況經取代之烷基取代基可另外含有一個、兩個、三個或更多個獨立地選擇之雙鍵及/或三鍵或可經烯基或炔基部分或其一些組合取代以確定不飽和烷基取代基且可經包括適當如本文所描述之視情況存在之取代基的其他部分取代。飽和烷基中之碳原子數目可改變且典型地為1-50、1-30或1-20，且更典型地為1-8或1-6，且在不飽和烷基部分或基團中典型地在3-50、3-30或3-20之間變化，且更典型地在3-8之間變化。
飽和烷基部分含有飽和非環碳原子(亦即，非環sp3 碳)且不含sp2 或sp碳原子，但可經如本文所描述之視情況存在之取代基取代，限制條件為此類取代並非透過視情況存在之取代基的sp3 、sp2 或sp碳原子進行，因為此將在碳原子數目方面影響經如此取代之基礎烷基部分之身分，除了當視情況存在之取代基為如本文所定義之鹼性單元時。除非另外指出或上下文暗示，否則術語「烷基」將指示飽和非環狀烴基，其中該烴基具有所指示數目之共價鍵聯飽和碳原子，使得諸如「C1 -C6 烷基」或「C1-C6烷基」之術語意謂含有1個飽和碳原子(亦即，為甲基)或2、3、4、5或6個連續非環狀飽和碳原子的烷基部分或基團且「C1 -C8 烷基」係指具有1個飽和碳原子或2、3、4、5、6、7或8個連續飽和非環狀碳原子的烷基部分或基團。典型地，飽和烷基為在連續碳鏈中不含sp2 或sp碳原子之C1 -C6 或C1 -C4 烷基部分，其中後者有時稱為低碳烷基，且在一些態樣中，當未指示碳原子數目時，將指具有1至8個連續非環sp3 碳原子之在連續碳鏈中不含sp2 或sp碳原子之飽和C1 -C8 烷基部分。在其他態樣中，當一定範圍之連續碳原子定義術語「烷基」但未將其指定為飽和或不飽和時，則該術語涵蓋具有指定範圍之飽和烷基及範圍下限增加兩個碳原子之不飽和烷基。舉例而言，不限於飽和烷基之術語「C1 -C8 烷基」包括飽和C1 -C8 烷基及C3 -C8 不飽和烷基。
當指定飽和烷基取代基、部分或基團時，物質包括由自母體烷移除氫原子衍生而來者(亦即，烷基部分為單價)且可包括甲基、乙基、1-丙基(正丙基)、2-丙基(異丙基，-CH(CH3 )2 )、1-丁基(正丁基)、2-甲基-1-丙基(異丁基，-CH2 CH(CH3 )2 )、2-丁基(第二丁基， -CH(CH3 )CH2 CH3 )、2-甲基-2-丙基(第三丁基，-C(CH3 )3 )、戊基、異戊基、第二戊基及其他線性及分枝鏈烷基部分。
除非另外說明或上下文暗示，否則在「伸烷基」作為術語單獨或作為另一術語之一部分用於本文中時，係指經取代或未經取代之飽和、分枝鏈或直鏈烴雙基，其中碳原子中之一或多者為飽和的(亦即，包含一或多個sp3 碳)，其具有在1至50或1至30，典型地1至20或1至12個碳原子，更典型地1至8、1或6或1至4個碳原子範圍內之所陳述碳原子數目，且具有藉由自母體烷之相同或兩個不同飽和(亦即，sp3 )碳原子移除兩個氫原子衍生而來的兩個基團中心(亦即，為二價)。在一些態樣中，伸烷基部分為如本文所描述之烷基，其中氫原子已自另一其飽和碳或自烷基之基團碳移除以形成雙基。在其他態樣中，伸烷基部分為由自母體烷基部分之飽和碳原子移除氫原子衍生而來之二價部分或進一步被由自母體烷基部分之飽和碳原子移除氫原子衍生而來之二價部分所涵蓋且藉由以下各項例示(但不限於)：亞甲基(-CH2 -)、1,2-伸乙基(-CH2 CH2 -)、1,3-伸丙基(-CH2 CH2 CH2 -)、1,4-伸丁基(-CH2 CH2 CH2 CH2 -)及類似雙基。典型地，伸烷基為僅含有sp3 碳之分枝鏈或直鏈烴(亦即，儘管為基團碳原子但完全飽和的)，且在一些態樣中，為未經取代的。在其他態樣中，伸烷基含有呈一或多個雙鍵及/或三鍵官能基形式之不飽和內部位點，典型地1或2個此類官能基，更典型地為1個，使得不飽和伸烷基部分之末端碳原子為單價sp3 碳原子。在其他態樣中，如本文關於視情況存在之取代基所定義，伸烷基在飽和伸烷基部分之飽和碳原子或不飽和伸烷基部分之飽和及/或不飽和碳原子處經1至4(典型地1至3或1或2)個取代基取代，排除當所得經取代之伸烷基相對於未經取代之伸烷基將因連續非芳族碳原子之數目而不同時的烷基、芳基烷基、烯基、炔基及任何其他部分，除了當視情況存在之取代基為如本文所定義之鹼性單元時。
除非另外說明或上下文暗示，否則在「碳環基(carbocyclyl)」作為術語單獨或作為另一術語之一部分用於本文中時，係指單環、雙環或三環系統之基團，其中形成環系統之各個原子(亦即，骨架原子)為碳原子，且其中環狀環系統之各環中的此等碳原子中之一或多者為飽和的(亦即，包含一或多個sp3 碳)。因此，碳環基為飽和碳之環狀排列，但亦可含有不飽和碳原子，且因此其碳環可為飽和或部分不飽和的或可與芳族部分稠合，其中與環烷基及芳族環稠合之點為碳環基部分之相鄰不飽和碳及芳族部分之相鄰芳族碳原子。
除非另外指明，否則碳環基可經關於烷基、烯基、炔基、芳基、芳基烷基、烷基芳基及類似基團所描述之部分取代(亦即視情況經取代)或可經另一環烷基部分取代。環烷基部分、基團或取代基包括環丙基、環戊基、環己基、金剛烷基或環狀環系統中僅具有碳原子之其他環狀部分。
當碳環基用作馬庫西基團(亦即，取代基)時，碳環基透過參與碳環基部分之碳環系統的碳原子連接至其所締合之馬庫西結構式或另一有機部分，限制條件為碳不為芳族碳。當包含碳環基取代基之烯部分之不飽和碳原子連接至與其締合之馬庫西結構式時，該碳環基有時稱為環烯基取代基。碳環基取代基中之碳原子數目藉由其碳環系統之骨架原子的總數目來定義。除非另外指明，否則該數目可改變且典型地在3至50、1-30或1-20及更典型地3-8或3-6範圍內，例如C3 -C8 碳環基意謂含有3、4、5、6、7或8個碳環碳原子之碳環基取代基、部分或基團，且C3 -C6 碳環基意謂含有3、4、5或6個碳環碳原子之碳環基取代基、部分或基團。碳環基可藉由自母體環烷或環烯之環原子移除一個氫原子衍生而來。代表性C3 -C8 碳環基包括但不限於環丙基、環丁基、環戊基、環戊二烯基、環己基、環己烯基、1,3-環己二烯基、1,4-環己二烯基、環庚基、1,3-環庚二烯基、1,3,5-環庚三烯基、環辛基及環辛二烯基。
因此，碳環基取代基、部分或基團典型地在其碳環系統中具有3、4、5、6、7、8個碳原子且可含有環外或環內雙鍵或環內三鍵或兩者之組合，其中環內雙鍵或三鍵或兩者之組合不形成4n+2個電子之環狀共軛系統。雙環系統可共同擁有兩個碳原子且三環系統可共同擁有總共3或4個碳原子。在一些態樣中，碳環基為C3 -C8 或C3 -C6 碳環基，其可經一或多個、1至4個(典型地1至3個或1或2個)本文關於烷基、烯基、炔基、芳基、芳基烷基及烷基芳基所描述之部分及/或經其他部分(包括如本文關於視情況存在之取代基所定義之取代基)取代(亦即視情況經取代)，且在一些態樣中未經取代。在其他態樣中，環烷基部分、基團或取代基為選自由環丙基、環戊基及環己基組成之群的C3 -C6 環烷基，或為C3 -C8 環烷基，其涵蓋該群且進一步涵蓋在環狀環系統中具有不超過8個碳原子之其他環狀部分。當未指示碳原子數目時，碳環基部分、基團或取代基在其碳環環系統中具有3至8個碳原子。
除非另外說明或上下文暗示，否則在「碳環基(carbocyclo)」作為術語單獨或作為另一術語之一部分用於本文中時，係指如上文所定義之視情況經取代之碳環基，其中其環烷基環系統之另一氫原子已移除(亦即，其為二價)，且為C3 -C50 或C3 -C30 碳環基，典型地C3 -C20 或C3 -C12 碳環基，更典型地C3 -C8 或C3 -C6 碳環基，且在一些態樣中為未經取代或視情況經取代之C3 、C5 或C6 碳環基。當未指示碳原子數目時，碳環基部分、基團或取代基在其碳環環系統中具有3至8個碳原子。
在一些態樣中，該另一氫原子自環烷基之單價碳原子移除以提供二價碳原子，其在一些情況下為將烷基部分與該碳環碳原子隔開之螺碳原子。在此類情況中，螺碳原子歸因於隔開之烷基部分及碳環基環系統之碳原子計數，碳環基被指示為併入烷基部分。在彼等態樣中，碳環基部分、基團或取代基為呈螺環系統形式之C3 -C6 碳環基且選自由以下組成之群：環丙-1,1-二基、環丁基-1,1-二基、環戊-1,1-二基及環己-1,1-二基，或為C3 -C8 碳環基，其涵蓋該群且進一步由在環狀環系統中具有不超過8個碳原子之其他二價環狀部分涵蓋。碳環基可為飽和或不飽和碳環基，及/或可未經取代或以與關於碳環基部分所描述相同之方式經取代。若不飽和，則碳環基部分之一個或兩個單價碳原子可為來自相同或不同雙鍵官能基之sp2 碳原子或兩個單價碳原子可為相鄰或不相鄰之sp3 碳原子。
除非另外說明或上下文暗示，否則在「烯基」作為術語單獨或作為另一術語之一部分用於本文中時，係指包含一或多個雙鍵官能基(例如-CH=CH-部分)或1、2、3、4、5或6或更多，典型地1、2或3個此類官能基，更典型地一個此類官能基之有機部分、取代基或基團，且在一些態樣中可經諸如苯基之芳基部分或基團取代(亦即，視情況經取代)，或可含有非芳族鍵聯之正構、二級、三級或環狀碳原子(亦即，線性、分枝鏈、環狀或其任何組合)作為基礎部分之一部分，除非烯基取代基、部分或基團為乙烯基部分(例如-CH=CH2 部分)。具有多個雙鍵之烯基部分、基團或取代基可具有連續(亦即，1,3-丁二烯基部分)或在存在一或多個中間飽和碳原子之情況下不連續排列之雙鍵或其組合，限制條件為雙鍵之環狀連續排列不形成4n+2個電子之環狀共軛系統(亦即，不為芳族的)。
烯基部分、基團或取代基含有至少一個sp2 碳原子，其中該碳原子為二價的且雙鍵鍵結至與其締合之另一有機部分或馬庫西結構，或含有彼此結合之至少兩個sp2 碳原子，其中sp2 碳原子中之一者為單價的且單鍵鍵結至與其締合之另一有機部分或馬庫西結構。典型地，當烯基用作馬庫西基團(亦即，為取代基)時，烯基透過烯基部分之烯官能基之sp2 碳單鍵鍵結至與其締合之馬庫西結構式或另一有機部分。在一些態樣中，當指定烯基部分時，其種類涵蓋對應於本文所描述之視情況經取代之烷基或碳環基、基團部分或取代基中之任一者者，其具有一或多個內雙鍵，其中其sp2 碳原子為單價的且單價部分由自母體烯化合物之sp2 碳移除氫原子衍生而來。此類單價部分藉由以下各項例示(但不限於)：乙烯基(-CH=CH2 )、烯丙基、1-甲基乙烯基、丁烯基、異丁烯基、3-甲基-2-丁烯基、1-戊烯基、環戊烯基、1-甲基-環戊烯基、1-己烯基、3-己烯基及環己烯基。在一些態樣中，術語烯基涵蓋彼等及/或其他線性、環狀及分枝鏈烯基，所有含碳部分含有至少一個雙鍵官能基，其中sp2 碳原子中之一者為單價的。
烯基部分中之碳原子數目藉由將其定義為烯基取代基之烯官能基之sp2 碳原子數目以及附加至此等sp2 碳中之每一者之連續非芳族碳原子之總數目來確定，不包括使烯基部分為可變基團之其他部分或馬庫西結構之任何碳原子以及來自烯基部分之任何視情況存在之取代基的碳原子。當雙鍵官能基雙鍵鍵結至馬庫西結構(例如=CH2 )時，該數目在1至50或1至30，典型地1至20或1至12，更典型地1至8、1至6或1至4個碳原子範圍內，或當雙鍵官能基單鍵鍵結至馬庫西結構(例如-CH=CH2 )時，該數目在2至50，典型地2至30、2至20或2至12，更典型地2至8、2至6或2至4個碳原子範圍內。舉例而言，C2 -C8 烯基或C2-C8烯基意謂含有2、3、4、5、6、7或8個碳原子之烯基部分，其中至少兩個為彼此結合之sp2 碳原子且此等碳原子中之一者為單價的，且C2 -C6 烯基或C2-C6烯基意謂含有2、3、4、5或6個碳原子之烯基部分，其中至少兩個為彼此結合之sp2 碳且此等碳原子中之一者為單價的。在一些態樣中，烯基取代基或基團為僅具有彼此結合之兩個sp2 碳且此等碳原子中之一者為單價的C2 -C6 或C2 -C4 烯基部分，且在其他態樣中，該烯基部分未經取代或經1至4個或更多個，典型地1至3個，更典型地1或2個如本文所揭示之獨立選擇之部分取代，該等獨立選擇之部分包括如本文關於視情況存在之取代基所定義之取代基，排除當經取代之烯基相對於未經取代之烯基將因連續非芳族碳原子之數目而不同時的烷基、芳基烷基、雜芳基烷基、烯基、炔基及任何其他部分，其中取代可在烯基部分之連續sp2 碳及sp3 碳原子(若有)中之任一者處進行。典型地，烯基取代基為僅具有彼此結合之兩個sp2 碳的C2 -C6 或C2 -C4 烯基部分。當未指示碳原子數目時，烯基部分具有2至8個碳原子。
除非另外說明或上下文暗示，否則在「伸烯基」作為術語單獨或作為另一術語之一部分用於本文中時，係指具有所陳述數目之碳原子的包含如先前關於烯基所描述之一或多個雙鍵部分的有機部分、取代基或基團，且具有藉由自烯官能基之相同或兩個不同sp2 碳原子移除兩個氫原子或自母體烯中之兩個單獨烯官能基移除兩個氫原子衍生而來的兩個基團中心。在一些態樣中，伸烯基部分為如本文所描述之烯基基團之伸烯基部分，其中氫原子已自烯基之雙鍵官能基之相同或不同sp2 碳原子移除或自來自不同雙鍵部分之sp2 碳移除以提供雙基。典型地，伸烯基部分涵蓋含有-C=C-或-C=C-X1 -C=C-結構之雙基，其中X1 不存在或為如本文所定義之視情況經取代之飽和伸烷基，其典型地為C1 -C6 伸烷基，其更典型地未經取代。伸烯基部分中之碳原子數目藉由其將其定義為伸烯基部分之烯官能基之sp2 碳原子數目及附加至其sp2 碳中之每一者的連續非芳族碳原子之總數目來確定，不包括烯基部分以可變基團形式存在之其他部分或馬庫西結構之任何碳原子。除非另外指明，否則該數目在2至50或2至30，典型地2至20或2至12，更典型地2至8、2至6或2至4個碳原子範圍內。舉例而言，C2 -C8 伸烯基或C2-C8伸烯基意謂含有2、3、4、5、6、7或8個碳原子之伸烯基部分，該等碳原子中至少兩個為彼此結合之sp2 碳且其中一者為二價或兩者為單價，且C2 -C6 伸烯基或C2-C6伸烯基意謂含有2、3、4、5或6個碳原子之烯基部分，該等碳原子中至少兩個為彼此結合之sp2 碳，其中至少兩個為sp2 碳且其中一者為二價或兩者為單價。在一些態樣中，伸烯基部分為具有彼此結合之兩個sp2 碳的C2 -C6 或C2 -C4 伸烯基，其中兩個sp2 碳原子為單價，且在一些態樣中未經取代。當未指示碳原子數目時，伸烯基部分具有2至8個碳原子且未經取代或以與關於烯基部分所描述相同之方式經取代。
除非另外說明或上下文暗示，否則在「炔基」作為術語單獨或作為另一術語之一部分用於本文中時，係指包含一或多個三鍵官能基(例如-C≡C-部分)或1、2、3、4、5或6個或更多個，典型地1、2或3個此類官能基，更典型地一個此類官能基之有機部分、取代基或基團，且在一些態樣中可經諸如苯基之芳基部分或由烯基部分或鍵聯之正構、二級、三級或環狀碳原子(亦即，線性、分枝鏈、環狀或其任何組合)取代(亦即，視情況經取代)，除非炔基取代基、部分或基團為-C≡CH)。具有多個三鍵之炔基部分、基團或取代基可具有連續或在存在一或多個中間飽和或不飽和碳原子情況下不連續排列之三鍵或其組合，限制條件為三鍵之環狀、連續排列不形成4n+2個電子之環狀共軛系統(亦即，不為芳族的)。
炔基部分、基團或取代基含有至少兩個sp碳原子，其中碳原子彼此結合且其中sp碳原子中之一者單鍵鍵結至與其締合之另一有機部分或馬庫西結構。當炔基用作馬庫西基團(亦即，為取代基)時，炔基透過末端炔官能基之三鍵碳(亦即，sp碳)單鍵鍵結至與其締合之馬庫西結構式或另一有機部分。在一些態樣中，當指定炔基部分、基團或取代基時，其種類涵蓋本文所描述之視情況經取代之烷基或碳環基、基團部分或取代基中之任一者，其具有一或多個內三鍵及由自母體炔化合物之sp碳移除氫原子衍生而來之單價部分。此類單價部分藉由以下各項例示(但不限於)：-C≡CH及-C≡C-CH3 及-C≡C-Ph。
炔基取代基中之碳原子數目藉由將其定義為炔基取代基之烯官能基之sp碳原子數目及附加至此等sp碳中之每一者的連續非芳族碳原子之總數目來確定，不包括使烯基部分為可變基團之其他部分或馬庫西結構之任何碳原子。當三鍵官能基單鍵鍵結至馬庫西結構(例如-CH≡CH)時，該數目可在2至50，典型地2至30、2至20或2至12，更典型地2至8、2至6或2至4個碳原子範圍內改變。舉例而言，C2 -C8 炔基或C2-C8炔基意謂含有2、3、4、5、6、7或8個碳原子之炔基部分，其中至少兩個為彼此結合之sp碳原子且此等碳原子中之一者為單價的，且C2 -C6 炔基或C2-C6炔基意謂含有2、3、4、5或6個碳原子之炔基部分，其中至少兩個為彼此結合之sp碳且此等碳原子中之一者為單價的。在一些態樣中，炔基取代基或基團為具有彼此結合之兩個sp碳且此等碳原子中之一者為單價的C2 -C6 或C2 -C4 炔基部分，且在其他態樣中該炔基部分未經取代。當未指示碳原子數目時，炔基部分、基團或取代基具有2至8個碳原子。炔基部分可以與關於烯基部分所描述相同之方式經取代或未經取代，除了不容許在單價sp碳處進行取代。
除非另外說明或上下文暗示，否則在「芳基」作為術語單獨或作為另一術語之一部分用於本文中時，係指具有不含環雜原子之芳族或稠合芳族環系統的有機部分、取代基或基團，其包含1、2、3或4至6個芳族環或由其組成，該等芳族環中之每一者獨立地視情況經取代，典型地由1至3個芳族環、更典型地1或2個芳族環組成，該等芳族環中之每一者獨立地視情況經取代，其中該等環僅由參與4n+2個電子(休克耳定則(Hückel rule))，典型地6、10或14個電子之環共軛系統的碳原子構成，其中一些可另外參與與雜原子之環外共軛(交叉共軛，例如醌)。芳基取代基、部分或基團典型地由六、八、十個或更多個至24個連續芳族碳原子形成從而包括C6 -C24 芳基，且在一些態樣中為C6 -C20 或C6 -C12 芳基。芳基取代基、部分或基團視情況經取代且在一些態樣中未經取代或經1、2、3個或更多個，典型地1或2個如本文關於本文所描述之烷基、烯基、炔基或其他部分所定義之獨立選擇之取代基(包括另一芳基或雜芳基以形成聯芳基)及如本文所定義之其他視情況存在之取代基取代。在其他態樣中，芳基為C6 -C10 芳基，諸如苯基及萘基及菲基。因為中性芳基部分中之芳族性需要偶數之電子，應瞭解該部分之給定範圍將不涵蓋具有奇數之芳族碳者。當芳基用作馬庫西基團(亦即，取代基)時，該芳基透過芳基之芳族碳連接至與其締合之馬庫西結構式或另一有機部分。
除非另外說明或上下文暗示，否則在「雜環基(heterocyclyl)」作為術語單獨或作為另一術語之一部分用於本文中時，係指碳環系統內一或多個但並非所有骨架碳原子與其連接之氫原子由獨立選擇之雜原子或雜原子部分置換的碳環基，該等雜原子或雜原子部分在容許之情況下視情況經取代，包括但不限於N/NH、O、S、Se、B、Si及P，其中兩個或更多個，典型地2個雜原子或雜原子部分可彼此相鄰或由相同環系統內之一或多個碳原子，典型地由1至3個碳原子隔開。彼等雜原子或雜原子部分典型地為N/NH、O及S。雜環基典型地含有單價骨架碳原子或單價雜原子或雜原子部分，且具有總共一至十個，典型地總共1至5個，或更典型地總共1至3個或1或2個雜原子及/或雜原子部分，限制條件為並非雜環基中之雜環中之任一者中的所有骨架原子均為雜原子及/或雜原子部分(亦即各環中至少一個碳原子未經置換，且該等環中之一者中至少一個已經置換)，其中該(等)環中在允許時視情況經取代之各雜原子或雜原子部分係獨立地選自由N/NH、O及S組成之群，限制條件為任一環不含兩個相鄰之O或S原子。例示性雜環基及雜芳基統稱為雜環，由Paquette, Leo A.; 「Principles of Modern Heterocyclic Chemistry」(W. A. Benjamin, New York, 1968)，尤其第1章、第3章、第4章、第6章、第7章及第9章；「The Chemistry of Heterocyclic Compounds, A series of Monographs」(John Wiley & Sons, New York, 1950年至今)，尤其第13卷、第14卷、第16卷、第19卷及第28卷；及J. Am. Chem. Soc. 1960, 82:5545-5473，尤其5566-5573)提供。
當雜環基用作馬庫西基團(亦即，取代基)時，雜環基之飽和或部分不飽和雜環透過該雜環之碳原子或雜原子連接至與其締合之馬庫西結構或其他部分，其中此類連接不產生該碳原子或雜原子之不穩定或不允許之形式氧化態。該情形中之雜環基為單價部分，其中將其定義為雜環基之雜環系統之雜環為非芳族的，但可與碳環、芳基或雜芳基環稠合且包括苯基-(亦即，苯并)稠合雜環部分。
雜環基為C3 -C50 或C3 -C30 碳環基，典型地C3 -C20 或C3 -C12 碳環基，更典型地C3 -C8 或C3 -C6 碳環基，其中其環烷基環系統之1、2或3個或更多個但並非所有其碳與其連接之氫(典型地1、2、3或4個，更典型地1或2個)一起經置換，經在允許時視情況經取代之獨立地選自由N/NH、O及S組成之群的雜原子或雜原子部分置換，且因此為C3 -C50 或C3 -C30 雜環基，典型地C3 -C20 或C3 -C12 雜環基，更典型地C3 -C6 或C5 -C6 雜環基，其中下標指示雜環基之雜環系統之骨架原子(包括其碳原子及雜原子)的總數目。在一些態樣中，雜環基含有視情況經取代之0至2個N、0至2個O或0至1個S骨架雜原子或其一些組合，限制條件為該等雜原子中之至少一者存在於雜環基之雜環系統中。雜環基可為飽和或部分不飽和及/或未經取代或在骨架碳原子處經側氧基(=O)部分取代(如吡咯啶-2-酮中)及/或在骨架雜原子處經一個或兩個側氧基部分取代以便含有氧化雜原子，如例如但不限於-N(=O)、-S(=O)-或-S(=O)2 -。完全飽和或部分不飽和雜環基可經烷基、(雜)芳基、(雜)芳基烷基、烯基、炔基或如本文所描述之其他部分(包括如本文所定義之視情況存在之取代基或此類取代基中之2者、3者或更多者(典型地1者或2者)之組合)取代或進一步經取代。在某些態樣中，雜環基選自由以下組成之群：吡咯啶基、哌啶基、嗎啉基及哌嗪基。
除非另外說明或上下文暗示，否則在「雜環基(heterocyclo)」作為術語單獨或作為另一術語之一部分用於本文中時，係指如上文所定義之雜環基部分、基團或取代基，其中來自其單價碳原子之氫原子、來自不同骨架原子(碳或氮原子，若存在後者)之氫原子或在允許時來自骨架氮原子之電子被移除或來自不已為單價之氮環原子之電子被移除及經鍵置換(亦即，其為二價)。在一些態樣中，經置換之第二氫為母體雜環基之單價碳原子之氫，因此形成螺碳原子，其在一些情況下可將烷基部分與該碳環碳原子隔開。在此類情況中，螺碳原子歸因於隔開之烷基部分之碳原子計數，雜環基被指示為併入烷基部分。
除非另外說明或上下文暗示，否則在「雜芳基」作為術語單獨或作為另一術語之一部分用於本文中時，係指如本文所定義之芳基部分、基團或取代基，其中芳基之芳族環系統之一或多個但並非所有芳族碳由雜原子置換。雜芳基典型地在雜芳基環系統之環中含有總共一至四個骨架雜原子，限制條件為並非雜芳基之任一環系統中之骨架原子全部為雜原子，該等雜原子在允許時視情況經取代，且具有0至3個N、1至3個N或0至3個N骨架雜原子，典型地0至1個O及/或0至1個S骨架雜原子，限制條件為存在至少一個骨架雜原子。雜芳基可為單環、雙環或多環。多環雜芳基為典型地C5 -C50 或C5 -C30 雜芳基，更典型地C5 -C20 或C5 -C12 雜芳基，雙環雜芳基為典型地C5 -C10 雜芳基，且單環雜芳基為典型地C5 -C6 雜芳基，其中下標指示雜芳基之芳族環系統之骨架原子(包括其碳原子及雜原子)的總數目。在一些態樣中，雜芳基為雙環芳基部分，其中芳族環之碳原子中之一者1者、2者、3者、4者或更多者，典型地1者、2者或3者及其連接之母體雙環芳基部分之氫原子由獨立選擇之雜原子或雜原子部分置換；或為單環芳基部分，其中芳族環之碳原子中之一者1者、2者、3者或更多者，典型地1者或2者及其連接之母體單環芳基部分之氫原子由獨立選擇之雜原子或雜原子部分置換，其中雜原子或雜原子部分在允許時視情況經取代，包括N/NH、O及S，限制條件為並非母體芳基部分中之任一芳族環系統之骨架原子全部由雜原子置換且更典型地由氧(-O-)、硫(-S-)氮(=N-)或-NR-置換，使得氮雜原子視情況經取代，其中R為-H、氮保護基或視情況經取代之C1 -C20 烷基或為視情況經取代之C6 -C24 芳基或C5 -C24 雜芳基以形成雜聯芳基。在其他態樣中，芳族環之碳原子中之1者、2者或3者及其連接之母體芳基部分之氫原子由以保留環狀共軛系統之方式經另一有機部分取代之氮置換。在其他態樣中，母體芳基部分之芳族碳基團經芳族氮基團置換。在彼等態樣中之任一者中，氮、硫或氧雜原子透過與環系統中之相鄰原子pi鍵結或透過雜原子上之孤電子對參與共軛系統。在其他態樣中，雜芳基具有如本文所定義之雜環基之結構，其中其環系統已經芳族化。
典型地，雜芳基為單環的，其在一些態樣中具有5員或6員雜芳族環系統。5員雜芳基為在其雜芳族環系統內含有1至4個芳族碳原子及必需數目之芳族雜原子的單環C5 雜芳基。6員雜芳基為在其雜芳族環系統內含有1至5個芳族碳原子及必需數目之芳族雜原子的單環C6 雜芳基。5員雜芳基具有四個、三個、兩個或一個芳族雜原子，且6員雜芳基包括具有五個、四個、三個、兩個或一個芳族雜原子之雜芳基。
C5 雜芳基亦稱為5員雜芳基，為由自骨架芳族碳移除氫原子或自骨架芳族雜原子移除電子(在允許時，自母體芳族雜環化合物)衍生而來的單價部分，其在一些態樣為選自由以下組成之群：吡咯、呋喃、噻吩、噁唑、異噁唑、噻唑、異噻唑、咪唑、吡唑、***及四唑。在其他態樣中，母體雜環選自由以下組成之群：噻唑、咪唑、噁唑及***且典型地為噻唑或噁唑，更典型地為噻唑。
C6 雜芳基為6員的，為由自芳族碳移除氫原子或自芳族雜原子移除電子(在允許時，自母體芳族雜環化合物)衍生而來的單價部分，其在某些態樣為選自由以下組成之群：吡啶、噠嗪、嘧啶及三嗪。雜芳基可經烷基、(雜)芳基烷基、烯基或炔基取代或進一步取代，或經芳基或另一雜芳基取代或進一步取代以形成聯芳基，或經如本文所描述之其他部分(包括如本文所定義之視情況存在之取代基或此類取代基中之2者、3者或更多者(典型地1者或2者)之組合)取代或進一步取代。
在「芳基烷基」或「雜芳基烷基」作為術語單獨或作為另一術語之一部分用於本文中時，係指鍵結至烷基部分之芳基或雜芳基部分，亦即，(芳基)-烷基-，其中烷基及芳基如上文所描述。典型地，芳基烷基為(C6 -C24 芳基)-C1 -C12 烷基-部分、基團或取代基，且雜芳基烷基為(C5 -C24 雜芳基)-C1 -C12 烷基-部分、基團或取代基。當(雜)芳基烷基用作馬庫西基團(亦即，取代基)時，(雜)芳基烷基之烷基部分透過其烷基部分之sp3 碳連接至與其締合之馬庫西結構式。在一些態樣中，芳基烷基為(C6 -C24 芳基)-C1 -C12 烷基-或(C6 -C20 芳基)-C1 -C20 烷基-，典型地為(C6 -C12 芳基)-C1 -C12 烷基-或(C6 -C10 芳基)-C1 -C12 烷基-，更典型地為(C6 -C10 芳基)-C1 -C6 烷基-，其藉由以下各項例示(但不限於)：C6 H5 -CH2 -、C6 H5 -CH(CH3 )CH2 -及 C6 H5 -CH2 -CH(CH2 CH2 CH3 )-。(雜)芳基烷基可未經取代或以與關於(雜)芳基及/或烷基部分所描述相同之方式經取代。
除非另外說明或上下文暗示，否則在「伸芳基」或「伸雜芳基」作為術語單獨或作為另一術語之一部分用於本文中時，為在另一有機部分內形成兩個共價鍵(亦即，其為二價)之芳族或雜芳族雙基部分，因此該等鍵呈鄰位、間位或對位組態。伸芳基及一些伸雜芳基包括藉由自如本文所定義之母體芳基或雜芳基部分、基團或取代基移除氫原子形成之二價物質。其他伸雜芳基為已自母體芳族雜環之兩個不同芳族碳原子移除氫原子以形成雙基物質或自芳族碳原子或雜原子移除氫原子且自來自母體芳族雜環之不同芳族雜原子移除另一氫原子或電子以形成雙基物質的二價物質，其中一個芳族碳原子及一個芳族雜原子為單價或兩個不同芳族雜原子各自為單價。伸雜芳基進一步包括那些其中雜原子及/或雜原子部分置換母體伸芳基之一或多個但並非所有芳族碳原子者。
在剩餘位置處視情況經取代之非限制性例示性伸芳基為1,2-伸苯基(phenyl-1,2-ene)、1,3-伸苯基(phenyl-1,3-ene)及1,4-伸苯基(phenyl-1,4-ene)，如以下結構中所示：
Figure 02_image055
。
除非另外說明或上下文暗示，否則在「雜烷基」作為術語單獨或與另一術語組合用於本文中時，係指視情況經取代之直鏈或分枝鏈烴，其完全飽和或所含不飽和度為1至3且具有1至12個碳原子及選自由O、N/NH、Si及S組成之群的在允許時視情況經取代之1至6個雜原子(典型地1至5個雜原子，更典型地一個或兩個雜原子或雜原子部分)，且包括獨立地視情況氧化為N-氧化物、亞碸或碸之各氮及硫原子，或其中氮原子中之一或多者視情況經取代或四級銨化。雜原子或雜原子部分O、N/NH、S及/或Si可放置於雜烷基之任何內部位置或雜烷基之視情況經取代之烷基的末端位置。在一些態樣中，雜烷基完全飽和或所含不飽和度為1且含有1至6個碳原子及1至2個雜原子，而在其他態樣中該雜烷基未經取代。非限制性實例為 -CH2 -CH2 -O-CH3 、-CH2 -CH2 -NH-CH3 、 -CH2 -CH2 -N(CH3 )-CH3 、-CH2 -S-CH2 -CH3 、 -CH2 -CH2 -S(O)-CH3 、-NH-CH2 -CH2 -NH-C(O)-CH2 -CH3 、 -CH2 -CH2 -S(O)2 -CH3 、-CH=CH-O-CH3 、-Si(CH3 )3 、 -CH2 -CH=N-O-CH3 及-CH=CH-N(CH3 )-CH3 。至多兩個雜原子可為連續的，如藉由-CH2 -NH-OCH3 及-CH2 -O-Si(CH3 )3 所例示。
雜烷基典型地藉由其連續雜原子及非芳族碳原子之數目來表示，其包括連接至雜原子之彼等連續碳原子，除非另外指示(例如如關於胺基烷基所描述)或根據上下文為其他。因此，-CH2 -CH2 -O-CH3 及 -CH2 -CH2 -S(O)-CH3 均為C4 -雜烷基且-CH2 -CH=N-O-CH3 及 -CH=CH-N(CH3 )2 均為C5 雜烷基。雜烷基可未經取代或在其雜原子或具有本文所描述之部分中之任一者(包括如本文所定義之視情況存在之取代基)的雜原子組分處及/或在具有1至4個或更多個，典型地1至3個或1或2個如本文所描述之獨立選擇之部分(包括如本文所定義之視情況存在之取代基)的其烷基組分處經取代(亦即，視情況經取代)，排除當經取代之烯基相對於未經取代之胺基烷基將因連續非芳族碳原子之數目而不同時的烷基、(雜)芳基烷基、烯基、炔基、另一雜烷基或任何其他部分。
如本文所定義之胺基烷基為例示性雜烷基，其中烷基部分之除其單價碳原子外的末端碳原子由胺基置換。當被指示為與馬庫西結構或其他有機部分締合之取代基時，烷基部分之單價碳原子連接至要與其締合之另一有機部分，該單價碳原子典型地為與該連接至胺基之碳原子不同的碳原子。胺基烷基在以計數進行指示方面藉由僅指示其伸烷基部分之連續碳原子數目而不同於其他雜烷基。
除非另外說明或上下文暗示，否則在「伸雜烷基」作為術語單獨或與另一術語組合用於本文中時，意謂藉由自母體雜烷基移除氫原子或雜原子電子以提供二價部分由雜烷基(如上文所論述)衍生而來之二價基團，其藉由-CH2 -CH2 -S-CH2 -CH2 -及-CH2 -S-CH2 -CH2 -NH-CH2 -例示(但不限於此)。對於伸雜烷基，其雜原子可為內部的或可佔據其視情況經取代之伸烷基鏈之任一端或兩端，使得此等雜原子中之一者或兩者為單價。除非有所指示或上下文暗示，否則當伸雜烷基為連接子單元之組分時，連接子單元內該組分之兩種取向均為容許的。除非另有指示或根據上下文為其他，否則伸雜烷基典型地藉由其連續雜原子及非芳族碳原子之數目來表示，其包括連接至雜原子之彼等連續碳原子。伸烷基二胺為伸雜烷基，其中伸烷基之兩個單價碳原子由胺基置換，使得其氮原子中之每一者為單價且在以計數指示方面藉由僅指示其伸烷基部分之連續碳原子數目而不同於其他伸雜烷基。
除非另外說明或上下文暗示，否則在「胺基烷基」作為術語單獨或與另一術語組合用於本文中時，係指具有鹼性氮之部分、基團或取代基，其鹼性氮鍵結至如上文所定義之伸烷基部分之一個基團末端以提供鹼性氮未進一步經取代之一級胺或提供鹼性胺進一步經一個或兩個獨立選擇之視情況經取代之C1 -C12 烷基部分(分別如上文所描述)取代之二級或三級胺。在一些態樣中，視情況經取代之烷基為C1 -C8 烷基或C1 -C6 烷基且在其他態樣中該烷基未經取代。在其他態樣中，鹼性氮與其取代基一起定出含有鹼性氮作為骨架原子之視情況經取代之C3 -C8 雜環基，典型地呈視情況經取代之含氮C3 -C6 或C5 -C6 雜環基的形式。當胺基烷基用作馬庫西結構之可變基團時，胺基烷基之伸烷基部分透過該部分之sp3 碳連接至與其締合之馬庫西結構式，其在一些態樣中為上述伸烷基之另一基團末端。胺基烷基典型地藉由其伸烷基部分之連續碳原子數目來表示。因此，C1 胺基烷基藉由-CH2 NH2 、-CH2 NHCH3 及 -CH2 N(CH3 )2 例示但不限於此且C2 胺基烷基藉由 -CH2 CH2 NH2 、-CH2 CH2 NHCH3 及-CH2 CH2 N(CH3 )2 例示但不限於此。
除非另外說明或上下文暗示，否則如本文所用，「視情況經取代之烷基」、「視情況經取代之烯基」、「視情況經取代之炔基」、「視情況經取代之芳基烷基」、「視情況經取代之雜環」、「視情況經取代之芳基」、「視情況經取代之雜芳基」、「視情況經取代之雜芳基烷基」及類似術語係指如本文所定義或揭示之烷基、烯基、炔基、芳基烷基、雜環、芳基、雜芳基、雜芳基烷基或其他取代基、部分或基團，其中該取代基、部分或基團之氫原子已視情況經不同部分或基團置換，或其中包含彼等取代基、部分或基團中之一者的脂環族碳鏈因該鏈之碳原子經不同部分或基團置換而間斷。在一些態樣中，烯官能基置換烷基取代基之兩個連續sp3 碳原子，限制條件為烷基部分之基團碳未經置換，使得視情況經取代之烷基變為不飽和烷基取代基。
置換前述取代基、部分或基團中之任一者中之氫的視情況存在之取代基獨立地選自由以下組成之群：C6 -C24 芳基、C5 -C24 雜芳基、羥基、C1 -C20 烷氧基、C6 -C24 芳氧基、氰基、鹵素、硝基、C1 -C20 氟烷氧基及胺基(其涵蓋-NH2 及單取代、雙取代及三取代胺基)及其經保護衍生物，或選自由以下組成之群：-X、-OR’、-SR’、-NH2 、 -N(R’)(Rop )、-N(Rop )3 、=NR’ 、-CX3 、-CN、-NO2 、 -NR’C(=O)H、-NR’C(=O)Rop 、-NR’ C(=O)Rop 、-C(=O)R’、-C(=O)NH2 、-C(=O)N(R’)Rop 、-S(=O)2 Rop 、-S(=O)2 NH2 、-S(=O)2 N(R’)Rop 、-S(=O)2 NH2 、-S(=O)2 N(R’)Rop 、 -S(=O)2 OR’、-S(=O)Rop 、-OP(=O)(OR’)(ORop )、-OP(OH)3 、-P(=O)(OR’)(ORop )、-PO3 H2 、-C(=O)R’、-C(=S)Rop 、 -CO2 R’ 、-C(=S)ORop 、-C(=O)SR’ 、-C(=S)SR’ 、-C(=S)NH2 、-C(=S)N(R’)(Rop )2 、-C(=NR’ )NH2 、-C(=NR’ )N(R’)Rop 及其鹽，其中各X獨立地選自由鹵素組成之群：-F、-Cl、 -Br及-I；且其中各Rop 獨立地選自由以下組成之群：C1 -C20 烷基、C2 -C20 烯基、C2 -C20 炔基、C6 -C24 芳基、C3 -C24 雜環基、C5 -C24 雜芳基、保護基及前藥部分，或兩個Rop 與其所連接之雜原子一起定出C3 -C24 雜環基；且R'為氫或Rop ，其中Rop 選自由以下組成之群：C1 -C20 烷基、C6 -C24 芳基、C3 -C24 雜環基、C5 -C24 雜芳基及保護基。
典型地，存在之視情況存在之取代基選自由以下組成之群：-X、-OH、-ORop 、-SH、-SRop 、-NH2 、 -NH(Rop )、-NR’(Rop )2 、-N(Rop )3 、=NH、=NRop 、-CX3 、 -CN、-NO2 、-NR’C(=O)H、NR’C(=O)Rop 、-CO2 H、 -C(=O)H、-C(=O)Rop 、-C(=O)NH2 、-C(=O)NR’Rop 、 -S(=O)2 Rop 、-S(=O)2 NH2 、-S(=O)2 N(R’)Rop 、-S(=O)2 NH2 、-S(=O)2 N(R’)(Rop )、-S(=O)2 OR’、-S(=O)Rop 、-C(=S)Rop 、-C(=S)NH2 、-C(=S)N(R’)Rop 、-C(=NR’)N(Rop )2 及其鹽，其中各X獨立地選自由-F及-Cl組成之群，其中Rop 典型地選自由以下組成之群：C1 -C6 烷基、C6 -C10 芳基、C3 -C10 雜環基、C5 -C10 雜芳基及保護基；且R'獨立地選自典型地由以下組成之群：氫、C1 -C6 烷基、C6 -C10 芳基、C3 -C10 雜環基、C5 -C10 雜芳基及保護基(獨立地選自Rop )。
更典型地，存在之視情況存在之取代基選自由以下組成之群：-X、-Rop 、-OH、-ORop 、-NH2 、 -NH(Rop )、-N(Rop )2 、-N(Rop )3 、-CX3 、-NO2 、-NHC(=O)H、-NHC(=O)Rop 、-C(=O)NH2 、-C(=O)NHRop 、 -C(=O)N(Rop )2 、-CO2 H、-CO2 Rop 、-C(=O)H、-C(=O)Rop 、-C(=O)NH2 、-C(=O)NH(Rop )、-C(=O)N(Rop )2 、 -C(=NR’)NH2 、-C(=NR’)NH(Rop )、-C(=NR’)N(Rop )2 、保護基及其鹽，其中各X為-F，其中Rop 獨立地選自由以下組成之群：C1 -C6 烷基、C6 -C10 芳基、C5 -C10 雜芳基及保護基；且R'選自由以下組成之群：氫、C1 -C6 烷基及保護基(獨立地選自Rop )。
在一些態樣中，存在之視情況存在之烷基取代基選自由以下組成之群：-NH2 、-NH(Rop )、-N(Rop )2 、 -N(Rop )3 、-C(=NR’ )NH2 、-C(=NR’ )NH(Rop )及 -C(=NR’ )N(Rop )2 ，其中R'及Rop 如以上關於R'或Rop 基團中之任一者所定義。在彼等態樣中之一些中，R'及/或Rop 取代基與其所連接之氮原子一起提供鹼性單元(BU)之鹼性官能基，如當Rop 獨立地選自由氫及C1 -C6 烷基組成之群時。如上文所描述之伸烷基、碳環基(carbocyclyl)、碳環基(carbocyclo)、芳基、伸芳基、雜烷基、伸雜烷基、雜環基(heterocyclyl)、雜環基(heterocyclo)、雜芳基及伸雜芳基經類似取代或未經取代，例外者(若有)描述於此等部分之定義中。
其他視情況存在之取代基置換烷基或伸烷基部分、基團或取代基之非環碳鏈中的碳原子以提供C3 -C12 雜烷基或C3 -C12 伸雜烷基，且出於該目的典型地選自由以下組成之群：-O-、-C(=O)-、-C(=O)O-、-S-、-S(=O)-、 -S(=O)2 -、-NH-、-NHC(=O)-、-C(=O)NH-、S(=O)2 NH-、 -NHS(=O)2 -、-OC(=O)NH-及-NHC(=O)O，該等基團視情況經取代，其中-NH-為藉由使其氫原子由來自先前關於 -NH-視情況存在之取代基所描述之群的獨立選擇之取代基替換而視情況經取代之雜原子部分。
除非另外說明或上下文暗示，否則在「視情況經取代之雜原子」作為術語單獨或與另一術語組合用於本文中時，係指官能基或其他有機部分內之雜原子或雜原子部分，其中雜原子未進一步經取代或經具有單價碳原子之上述部分(包括但不限於烷基、環烷基、烯基、芳基、雜環基、雜芳基、雜烷基及(雜)芳基烷基-)中之任一者取代或藉由具有一個或兩個=O取代基之取代而氧化。在一些態樣中，「視情況經取代之雜原子」係指未經取代或其中氫原子由上述取代基中之任一者置換的芳族或非芳族 -NH-部分。在其他態樣中，「視情況經取代之雜原子」係指雜芳基之芳族骨架氮原子，其中該雜原子之電子由上述取代基中之任一者置換。為涵蓋彼等兩類態樣，氮雜原子有時稱為視情況經取代之N/NH。
因此，在一些態樣中，存在之氮原子之視情況存在之取代基選自由以下組成之群：C1 -C20 烷基、C2 -C20 烯基、C2 -C20 炔基、C6 -C24 芳基、C5 -C24 雜芳基、(C6 -C24 芳基)-C1 -C20 烷基-及(C5 -C24 雜芳基)-C1 -C20 烷基-，該等基團如本文所定義之彼等術語視情況經取代。在其他態樣中，存在之氮原子之視情況存在之取代基獨立地選自由以下組成之群：C1 -C12 烷基、C2 -C12 烯基、C2 -C12 炔基、C6 -C24 芳基、C5 -C24 雜芳基、(C6 -C24 芳基)-C1 -C12 烷基-及(C5 -C24 雜芳基)-C1 -C12 烷基-(視情況經取代)，選自由以下組成之群：C1 -C8 烷基、C2 -C8 烯基、C2 -C8 炔基、C6 -C10 芳基、C5 -C10 雜芳基、(C6 -C10 芳基)-C1 -C8 烷基-及(C5 -C10 雜芳基)-C1 -C8 烷基，或選自由以下組成之群：C1 -C6 烷基、C2 -C6 烯基、C2 -C6 炔基、C6 -C10 芳基、C5 -C10 雜芳基、(C6 -C10 芳基)-C1 -C6 烷基-及(C5 -C10 雜芳基)-C1 -C6 烷基-。
當視情況經取代之氮原子為肽可裂解單元共價連接至自降解性間隔子單元之PAB或PAB型部分的點(有時指定為J)時，該氮原子之視情況存在之取代基(當存在時)限於具有與其連接之單價sp3 碳原子的取代基，此與未經取代之氮原子相比不會不利地影響氮原子在其在可裂解單元裂解後推電子能力恢復後的推電子能力，以便允許發生自降解從而以游離藥物形式釋放藥物單元。
除非另外說明或上下文暗示，否則在「O-鍵聯部分」作為術語單獨或與另一術語組合用於本文中時，係指直接透過O-鍵聯部分之氧原子連接至與其締合之馬庫西結構或另一有機部分的部分、基團或取代基。單價O-鍵聯部分具有透過單價氧進行之該連接且典型地為-OH、 -OC(=O)Rb (醯氧基)，其中Rb 為-H、視情況經取代之飽和C1 -C20 烷基、視情況經取代之不飽和C1 -C20 烷基、視情況經取代之C3 -C20 環烷基(其中環烷基部分為飽和或部分不飽和的)、視情況經取代之C3 -C20 烯基、視情況經取代之C2 -C20 炔基、視情況經取代之C6 -C24 芳基、視情況經取代之C5 -C24 雜芳基或視情況經取代之C3 -C24 雜環基，或Rb 為視情況經取代之C1 -C12 烷基、視情況經取代之C3 -C12 環烷基、視情況經取代之C3 -C12 烯基或視情況經取代之C2 -C12 炔基，且其中單價O-鍵聯部分進一步涵蓋醚基，其為視情況經取代之C1 -C12 烷氧基(亦即，C1 -C12 脂族醚)部分，其中烷基部分為飽和或不飽和的。
在其他態樣中，單價O-鍵聯部分為選自由以下組成之群的單價部分：視情況經取代之苯氧基、視情況經取代之C1 -C8 烷氧基(亦即，C1 -C8 脂族醚)及-OC(=O)Rb ，其中Rb 為視情況經取代之C1 -C8 烷基，其典型地為飽和的或為視情況經取代之不飽和C3 -C8 烷基。
在其他態樣中，O-鍵聯部分為選自由以下組成之群的單價部分：-OH及視情況經取代之飽和C1 -C6 烷基醚、不飽和C3 -C6 烷基醚及-OC(=O)Rb ，其中Rb 典型地為視情況經取代之C1 -C6 飽和烷基、C3 -C6 不飽和烷基、C3 -C6 環烷基、C2 -C6 烯基或苯基，或選自排除-OH及/或苯基之該群，或Rb 為選自由以下組成之群的單價部分：視情況經取代之C1 -C6 飽和烷基、C3 -C6 不飽和烷基及C2 -C6 烯基，或單價O-鍵聯部分為選自由以下組成之群的未經取代之O-鍵聯取代基：飽和C1 -C6 烷基醚、不飽和C3 -C6 烷基醚及 -OC(=O)Rb ，其中Rb 為未經取代之飽和C1 -C6 烷基或未經取代之不飽和C3 -C6 烷基。
其他例示性O-鍵聯取代基由如本文所揭示之關於胺基甲酸酯、醚及碳酸酯之定義提供，其中胺基甲酸酯、醚或碳酸酯官能基之單價氧原子鍵結至與其締合之馬庫西結構或其他有機部分。
在其他態樣中，碳之O-鍵聯部分為二價且涵蓋=O及-X-(CH2 )n -Y-，其中X及Y獨立地為S及O且下標n為2或3，以形成具有與X及Y兩者連接之碳的螺環系統。
除非另外說明或上下文暗示，否則在「鹵素」作為術語單獨或與另一術語組合用於本文中時，係指氟、氯、溴或碘且典型地為-F或-Cl。
除非另外說明或上下文暗示，否則「保護基」作為術語單獨或與另一術語組合用於本文中時，係指防止所鍵聯之原子或官能基參與不想要之反應或實質上降低所鍵聯之原子或官能基參與不想要之反應的能力的部分。用於原子或官能基之典型保護基於Greene (1999), 「Protective groups in organic synthesis, 第3版」, Wiley Interscience中給出。用於諸如氧、硫及氮之雜原子的保護基有時用於使其與親電化合物之不想要之反應減至最少或得以避免。其他時間，保護基用於降低或消除未受保護之雜原子之親核性及/或鹼性。受保護之氧的非限制性實例由-ORPR 給出，其中RPR 為羥基之保護基，其中羥基典型地以酯(例如乙酸酯、丙酸酯或苯甲酸酯)形式受到保護。用於羥基之其他保護基避免其干擾有機金屬試劑或其他高鹼性試劑之親核性，為此目的羥基典型地以醚形式受保護，該醚包括但不限於烷基醚或雜環基醚(例如甲基醚或四氫哌喃基醚)、烷氧基甲基醚(例如甲氧基甲基醚或乙氧基甲基醚)、視情況經取代之芳基醚及矽基醚(例如三甲基矽基(TMS)、三乙基矽基(TES)、第三丁基二苯基矽基(TBDPS)、第三丁基二甲基矽基(TBS/TBDMS)、三異丙基矽基(TIPS)及[2-(三甲基矽基)乙氧基]-甲基矽基(SEM))。氮保護基包括如-NHRPR 或-N(RPR )2 中用於一級或二級胺之彼等氮保護基，其中RPR 中之至少一者為氮原子保護基或兩個RPR 一起定出氮原子保護基。
保護基在其能夠防止或實質上避免不想要之副反應及/或防止或實質上避免保護基在分子中別處實現所需化學轉化所需之反應條件下及在新形成之分子的純化(當需要時)期間過早丟失時為適合用於保護的，且可在不會不利地影響該新形成之分子的結構或立體化學完整性之條件下移除。在一些態樣中，適合之保護基為先前關於保護官能基所描述之彼等保護基。在其他態樣中，適合之保護基為用於肽偶合反應中之保護基。舉例而言，適合用於非環或環狀鹼性單元之鹼性氮原子之保護基為酸不穩定性胺基甲酸酯保護基，諸如第三丁氧基羰基(BOC)。
除非另外說明或上下文暗示，否則在「酯」作為術語單獨或與另一術語組合用於本文中時，係指具有用於定義酯官能基之-C(=O)-O-結構之取代基、部分或基團，其中該結構之羰基碳原子不直接連接至另一雜原子，但直接連接至氫或與其締合之有機部分之另一碳原子，且其中該單價氧原子係在不同碳原子處連接至相同有機部分以提供內酯或係連接至馬庫西結構或某個其他有機部分。典型地，酯除酯官能基之外亦包含含有1至50個碳原子，典型地1至20個碳原子或更典型地1至8、1至6或1至4個碳原子及0至10個獨立選擇之雜原子(例如O、S、N、P、Si，但通常為O、S及N)，典型地0至2個雜原子之有機部分或由其組成，其中該有機部分鍵結至-C(=O)-O-結構(亦即，透過酯官能基)，以便提供具有如式：有機部分-C(=O)-O-或-C(=O)-O-有機部分的結構。
當酯為與其締合之馬庫西結構或其他有機部分之取代基或可變基團時，該取代基透過酯官能基之單價氧原子鍵結至該結構或其他有機部分，使得其為單價O-鍵聯取代基，其有時稱為醯氧基。在此類情況中，連接至酯官能基之羰基碳的有機部分典型地為C1 -C20 烷基、C2 -C20 烯基、C2 -C20 炔基、C6 -C24 芳基、C5 -C24 雜芳基、C3 -C24 雜環基或為此等基團中之任一者之經取代衍生基(例如具有1、2、3或4個取代基者)，更典型地為C1 -C12 烷基、C2 -C12 烯基、C2 -C12 炔基、C6 -C10 芳基、C5 -C10 雜芳基、C3 -C10 雜環基或此等基團中之任一者之經取代衍生基(例如具有1、2或3個取代基者)，或為C1 -C8 烷基、C2 -C8 烯基、C2 -C8 炔基或苯基或此等基團中之任一者之經取代衍生基(例如具有1或2個取代基者)，其中各獨立選擇之取代基如本文關於視情況存在之烷基取代基所定義，或為未經取代之C1 -C6 烷基或未經取代之C2 -C6 烯基。
例示性酯為例如但不限於乙酸酯、丙酸酯、異丙酸酯、異丁酸酯、丁酸酯、戊酸酯、異戊酸酯、己酸酯(caproate)、異己酸酯、己酸酯(hexanoate)、庚酸酯、辛酸酯、苯基乙酸酯及苯甲酸酯或具有-OC(=O)Rb 之結構，其中Rb 如關於醯氧基O-鍵聯取代基所定義且典型地選自由以下組成之群：甲基、乙基、丙基、異丙基、2-甲基-丙-1-基、2,2-二甲基-丙-1-基、丙-2-烯-1-基及乙烯基。
除非另外說明或上下文暗示，否則在「醚」作為術語單獨或與另一術語組合用於本文中時，係指包含1、2、3、4個或更多個(典型地1或2個)未鍵結至羰基部分之-O-(亦即，氧基)部分的有機部分、基團或取代基，其中沒有兩個-O-部分彼此直接相鄰(亦即，直接連接)。典型地，醚含有-O-有機部分之結構式，其中有機部分如關於鍵結至酯官能基之有機部分所描述或如本文關於視情況經取代之烷基所描述。當將醚敍述為與其締合之馬庫西結構或其他有機部分之取代基或可變基團時，醚官能基之氧連接至與其締合之馬庫西結構式且有時命名為「烷氧基」，其為例示性O-鍵聯取代基。在一些態樣中，醚O-鍵聯取代基為C1 -C20 烷氧基或C1 -C12 烷氧基，其視情況經1、2、3或4個(典型地為1、2或3個)取代基取代，且在其他態樣中為C1 -C8 烷氧基或C1 -C6 烷氧基，其視情況經1或2個取代基取代，其中各獨立選擇之取代基如本文關於視情況存在之烷基取代基所定義，且在其他態樣中醚O-鍵聯取代基為未經取代之飽和或不飽和C1 -C4 烷氧基，諸如但不限於甲氧基、乙氧基、丙氧基、異丙氧基、丁氧基及烯丙基氧基(亦即，-OCH2 CH=CH2 )。
除非另外說明或上下文暗示，否則在「醯胺」作為術語單獨或與另一術語組合用於本文中時，係指具有含有R-C(=O)N(Rc )-或-C(=O)N(Rc )2 結構之視情況經取代之官能基的部分，沒有其他雜原子直接連接至羰基碳，且其中各Rc 獨立地為氫、保護基或獨立選擇之有機部分，且R為氫或有機部分，其中獨立地選自Rc 之有機部分如本文關於鍵結至酯官能基之有機部分所描述或如本文關於視情況經取代之烷基所描述。當將醯胺敍述為與其締合之馬庫西結構或其他有機部分之取代基或可變基團時，醯胺官能基之醯胺氮原子或羰基碳原子鍵結至該結構或其他有機部分。醯胺典型地藉由使酸鹵化物(諸如酸氯化物)與含有一級或二級胺之分子縮合來製備。或者，使用肽合成之此項技術領域中熟知之醯胺偶合反應，其在一些態樣中透過含羧酸分子之活化酯來進行。透過肽偶合法進行之醯胺鍵之例示性製備提供於Benoiton (2006) 「Chemistry of peptide synthesis」, CRC Press；Bodansky (1988) 「Peptide synthesis: A practical textbook」Springer-Verlag；Frinkin, M.等人「Peptide Synthesis」Ann. Rev. Biochem. (1974) 43: 419-443中。用於製備活化羧酸之試劑提供於Han等人「Recent development of peptide coupling agents in organic synthesis」Tet . (2004) 60: 2447-2476中。
因此，在一些態樣中，醯胺藉由在存在偶合劑之情況下使羧酸與胺反應來製備。如本文所用，「在存在偶合劑之情況下」包括使羧酸與偶合劑接觸，由此使酸轉化為其活化衍生物，諸如活化酯或混合酐，進行或不進行所得酸活化衍生物之分離，隨後或同時使所得活化衍生物與胺接觸。在一些情況下，活化衍生物係原位製備。在其他情況下，可將活化衍生物分離出來以移除任何不希望之雜質。
除非另外說明或上下文暗示，否則在「碳酸酯」作為術語單獨或與另一術語組合用於本文中時，意謂含有具有定義碳酸酯官能基之結構-O-C(=O)-O-之官能基的取代基、部分或基團。典型地，如本文所用之碳酸酯基包含鍵結至-O-C(=O)-O-結構之有機部分，其中該有機部分如本文關於鍵結至酯官能基之有機部分所描述，例如有機部分-O-C(=O)-O-。當將碳酸酯敍述為與其締合之馬庫西結構或其他有機部分之取代基或可變基團時，碳酸酯官能基之單價氧原子中之一者連接至該結構或有機部分且另一者如先前關於鍵結至酯官能基之有機部分所描述鍵結至另一有機部分之碳原子或如本文關於視情況經取代之烷基所描述。在此類情況下，碳酸酯為例示性O-鍵聯取代基。
除非另外說明或上下文暗示，否則在「胺基甲酸酯」作為術語單獨或與另一術語組合用於本文中時，意謂含有由-O-C(=O)N(Rc )-或-O-C(=O)N(Rc )2 或 -O-C(=O)NH(視情況經取代之烷基)-或-O-C(=O)N(視情況經取代之烷基)2 表示之視情況經取代之胺基甲酸酯官能基結構的取代基、部分或基團，其中獨立選擇之視情況經取代烷基為例示性胺基甲酸酯官能基取代基，且典型地為視情況經取代之C1 -C12 烷基或C1 -C8 烷基，更典型地為視情況經取代之C1 -C6 烷基或C1 -C4烷基，其中各Rc 獨立地經選擇，其中獨立選擇之Rc 為氫、保護基或有機部分，其中有機部分如本文關於鍵結至酯官能基之有機部分所描述或如本文關於視情況經取代之烷基所描述。典型地，胺基甲酸酯基另外包含獨立地選自Rc 之有機部分，其中有機部分如本文關於透過-O-C(=O)-N(Rc )-結構鍵結鍵結至酯官能基之有機部分所描述，其中所得結構具有如式：有機部分 -O-C(=O)-N(Rc )-或-O-C(=O)-N(Rc )-有機部分。當將胺基甲酸酯敍述為與其締合之馬庫西結構或其他有機部分之取代基或可變基團時，胺基甲酸酯官能基之單價氧(O-鍵聯)或氮(N-鍵聯)連接至與其締合之馬庫西結構式。胺基甲酸酯取代基之鍵聯在提及此取代基之上下文中明確陳述(N-鍵聯或O-鍵聯)或暗示。本文所描述之O-鍵聯胺基甲酸酯為例示性單價O-鍵聯取代基。
除非另外說明或上下文暗示，否則在「配體藥物共軛物」作為術語用於本文中時，係指包含併有或在結構上對應於靶向劑之配體單元(L)及併有或在結構上對應於游離藥物之藥物單元(D)的構築體，其中L與D透過連接子單元(LU)彼此鍵結，其中配體藥物共軛物能夠選擇性結合目標細胞的目標部分。術語配體藥物共軛物(LDC)在一個態樣中指結合至各配體單元之奧裡斯他汀藥物單元之數目及/或配體單元上與藥物單元結合之位置相同或在某種程度上不同的複數種個別共軛物化合物(亦即，組合物)。在一些態樣中，該術語係指具有基本上相同之配體單元及相同之藥物單元及連接子單元的共軛物化合物之集合(亦即，群體或複數)，其在一些態樣中具有連接至各抗體殘基之奧裡斯他汀藥物連接子部分之可變加載及/或分佈(如例如當在複數種此類化合物中任何兩種配體藥物共軛物化合物之藥物單元之數目相同但其連接至配體單元之位點之位置不同時)。在彼等情況下，配體藥物共軛物藉由共軛物化合物之平均藥物加載來描述。
配體藥物共軛物組合物中每一配體單元之藥物單元的平均數目為配體藥物共軛物化合物之群體的平均數目，有時藉由下標p來指定，其在一些態樣中反映主要因結合至配體單元之藥物單元數目及/或因在配體單元上與其結合之位置而不同之此等化合物的分佈。
本發明之單獨或在配體藥物共軛物組合物內之配體藥物共軛物化合物典型地由式1 之結構表示：
Figure 02_image057
或其鹽，其在一些態樣中為醫藥學上可接受之鹽，其中L為配體單元；LU為連接子單元；下標p’為在1至24範圍內之整數；且D’表示1至4個藥物單元。在一些態樣中，配體單元併有或在結構上對應於抗體或其抗原結合片段，由此定出抗體配體單元。在彼等態樣中，抗體配體單元能夠選擇性結合目標細胞之抗原，以便隨後釋放游離藥物，其中在一個態樣中目標抗原為由抗體配體單元選擇性識別之癌細胞抗原，且能夠在該結合後與所結合之ADC化合物一起內化至該癌細胞中以在該內化之後起始游離藥物之細胞內釋放。在彼等態樣中之任一者中，配體藥物共軛物化合物中之各藥物連接子部分具有式1A 之結構：
Figure 02_image059
或其鹽，其在一些態樣中為醫藥學上可接受之鹽，其中各藥物連接子部分中之D為藥物單元；波形線指示共價結合至L；LB 為配體共價結合部分；A為第一視情況存在之延伸體單元；下標a為0或1，分別指示A不存在或存在；B為視情況存在之分枝單元；下標b為0或1，分別指示B不存在或存在；LO 為二級連接子部分；D為藥物單元，其中藥物單元之結構對應於游離藥物；且下標q為在1至4範圍內之整數， 其中包含配體藥物共軛物化合物之分佈或集合的配體藥物共軛物組合物由式1 之結構表示，其中下標p'由下標p置換，其中下標p為在約2至約24範圍內之數字。
除非另外說明或上下文暗示，否則在「配體單元」作為術語用於本文中時，係指配體藥物共軛物組合物或化合物之靶向部分，其能夠選擇性結合其同源目標部分且併有或對應於靶向劑之結構。配體單元(L)包括但不限於來自受體配體、細胞表面抗原之抗體及轉運體受質之配體單元。在一些態樣中，與正常細胞相比之下，要由配體藥物共軛物組合物之共軛物化合物結合之受體、抗原或轉運體以更大豐度存在於異常細胞上，以便實現所需耐受性改良或降低與投與呈非結合形式之藥物相關之一或多種有害事件的潛在發生率或嚴重程度。在其他態樣中，與遠離異常細胞位點之正常細胞相比之下，要結合配體藥物共軛物化合物之配體單元的受體、抗原或轉運體以更大豐度存在於在異常細胞附近之正常細胞上，以便選擇性地使附近的異常細胞暴露於游離藥物。包括抗體配體單元之配體單元之各種態樣由本發明之實施態樣進一步描述。
除非另外說明或上下文暗示，否則如本文所用之「靶向劑」係指能夠選擇性結合目標部分且當作為配體單元併入配體藥物共軛物時實質上保留該能力的藥劑。因此，配體藥物共軛物之配體單元之結構對應於靶向劑，使得配體單元為共軛物之靶向部分。在一些態樣中，靶向劑為選擇性結合可及抗原之抗體或其片段，可及抗原為異常細胞之特徵或與正常細胞相比以較高拷貝數存在或為周圍環境所特有之可及抗原，在該周圍環境中在此等細胞中在一定程度上發現與投與游離藥物相比實現改良之耐受性。在其他態樣中，靶向劑為受體配體，該受體配體選擇性結合作為異常細胞之特徵或以更大豐度存在於異常細胞上之可及受體，或選擇性結合異常細胞周圍之環境所特有之名義上正常的細胞上之可及受體。典型地，靶向劑為如本文所定義之抗體，其選擇性結合異常哺乳動物細胞之目標部分，更典型地為異常人類細胞之目標部分。
如本文所定義之「目標部分」為要由靶向劑或配體藥物共軛物之靶向部分選擇性識別的部分，該靶向部分為併有或在結構上對應於靶向劑之配體藥物共軛物之配體單元。在一些態樣中，目標部分存在於異常細胞上、內或附近且與正常細胞或遠離異常細胞位點之正常細胞之環境相比典型地以更大豐度或拷貝數存在於此等細胞上，以便相對於投與游離藥物提供改良之耐受性或降低由該投與引起之一或多種有害事件之可能性。在一些態樣中，目標部分為由抗體選擇性結合可及之抗原，抗體為例示性靶向劑，其併入或在結構上對應於抗體藥物共軛物組合物或其化合物中之抗體配體單元。在其他態樣中，靶向部分為細胞外可及之細胞膜受體之配體的靶向部分，其在一些態樣中在同源靶向部分由配體藥物共軛物化合物之配體單元結合後內化，其中配體單元併有或在結構上對應於受體配體，且在其他態樣中，受體能夠在其結合細胞表面受體之後被動或促進性運輸配體藥物共軛物化合物。在一些態樣中，目標部分存在於異常哺乳動物細胞上或作為此類異常細胞之環境之特徵的哺乳動物細胞上。在彼等態樣中之一些中，目標部分為異常哺乳動物細胞之抗原，更典型地為異常人類細胞之目標部分。
除非另外說明或上下文暗示，否則在「目標細胞」作為術語用於本文中時，為設計配體藥物共軛物以進行相互作用從而抑制異常細胞之增殖或其他不想要之活性的預定細胞。在一些態樣中，目標細胞為過度增殖之細胞或過度活化之免疫細胞，其為例示性異常細胞。典型地，彼等異常細胞為哺乳動物細胞且更典型地為人類細胞。在其他態樣中，目標細胞在異常細胞附近，使得配體藥物共軛物對附近細胞之作用對異常細胞具有預定效果。舉例而言，附近細胞可為上皮細胞，其為腫瘤之異常血管結構之特徵。由配體藥物共軛物化合物靶向彼等血管細胞將對此等細胞具有細胞毒性或細胞抑制效應，此咸信使得營養物遞送至腫瘤之附近異常細胞受到抑制。此類抑制間接地對異常細胞具有細胞毒性或細胞抑制效應且亦可藉由在附近異常細胞附近釋放其藥物有效負荷(drug payload)而對此等細胞具有直接細胞毒性或細胞抑制效應。
除非另外說明或上下文暗示，否則在「抗體藥物共軛物」作為術語用於本文中時為式1 之配體藥物共軛物之子集，且因此係指包含併有或對應於抗體或其抗原結合片段之抗體配體單元(L)及併有或在結構上對應於生物活性化合物之藥物單元(D)(常常稱為游離藥物)的構築體，其中L與D透過連接子單元(LU)彼此鍵結，其中抗體藥物共軛物能夠透過其靶向抗體配體單元選擇性結合目標細胞的目標抗原，目標抗原在一些態樣中為異常細胞(諸如癌細胞)之抗原。
在一個態樣中，術語抗體藥物共軛物(ADC)係指結合至各抗體配體單元之藥物單元之數目及/或抗體配體單元上與藥物單元結合之位置相同或在某種程度上不同的複數種個別共軛物化合物(亦即，組合物)。在一些態樣中，該術語係指具有相同藥物-連接子部分及抗體配體單元之共軛物化合物之分佈或集合(亦即，群體或複數)，從而允許突變胺基酸變異及在由細胞培養製備抗體期間出現之如本文所描述之不同糖基化模式，其在一些態樣中具有連接至各抗體殘基之藥物連接子部分的可變加載及/或分佈(如例如當複數種此類化合物中任何兩種抗體藥物共軛物化合物之藥物單元之數目相同但其藥物連接子部分連接至靶向抗體配體單元之位點的位置不同時)。在彼等情況下，抗體藥物共軛物藉由共軛物化合物之平均藥物加載來描述。
具有其中連接子單元不分枝之完整藥物連接子部分的抗體藥物共軛物組合物中每一抗體配體單元或其抗原結合片段之藥物單元的平均數目為抗體藥物共軛物化合物之群體的平均數目，且在一些態樣中反映主要因結合至抗體配體單元之藥物單元之數目及/或因其位置而不同的此等化合物之分佈。當連接子單元為分枝時，則平均數目反映抗體藥物共軛物化合物之群體的藥物連接子部分之分佈。在任一情形中，p為在約2至約24或約2至約20範圍內之數字且典型地為約2、約4或約10或約8。在其他情形中，p表示共價鍵結至抗體藥物共軛物化合物群體內抗體藥物共軛物之單一抗體配體單元的藥物單元之數目，其中在一些態樣中該群體之化合物主要因藥物單元或藥物連接子部分之數目及/或位置而不同。在該情形中，p被指定為p'且為在1至24或1至20，典型地1至12或1至10且更典型地1至8範圍內之整數。在其他態樣中，抗體靶向劑之基本上所有可獲得之反應性官能基形成連接藥物連接子部分之共價鍵，以提供連接至最大數目之藥物連接子部分的抗體配體單元，使得抗體藥物共軛物組合物之p值與組合物之抗體藥物共軛物化合物中之每一者的p'值中之每一者相同或幾乎相同，使得如使用適當層析法(諸如電泳、HIC、逆相HPLC或粒徑篩析層析)所偵測，僅存在微小量之具有較低p'值之抗體藥物共軛物化合物(即使有的話)。
在一些態樣中，在由結合反應製備時每一抗體配體單元之藥物單元或藥物連接子部分之平均數目藉由如上文所描述之習知層析手段結合質譜分析偵測來表徵。在其他態樣中，確定就p'值而言之共軛物化合物之定量分佈。在彼等情況下，自具有其他藥物單元或藥物連接子部分加載之彼等抗體藥物共軛物化合物分離、純化及表徵p'為來自抗體藥物共軛物組合物之某一值的均質抗體藥物共軛物化合物可藉由諸如上述層析法之手段達成。
除非另外說明或上下文暗示，否則「藥物連接子化合物」作為術語用於本文中時，係指具有共價連接至連接子單元前驅體(LU')之藥物單元的化合物，其中LU'包含LB '，LB '有時稱為配體共價結合前驅體(LB ')部分，因為該部分含有反應性或可活化官能基，其中該反應性官能基或可活化官能基在活化之後能夠與靶向劑反應，以在配體共價結合部分(LB )與配體單元之間形成共價鍵，因此提供式1 之配體藥物共軛物化合物的式 1A 之藥物連接子部分，特定而言為連接併有或在結構上對應於抗體之抗體配體單元之共價鍵。
本發明之藥物連接子化合物典型地具有式I 之通式：
Figure 02_image061
或其鹽，其在一些態樣中為醫藥學上可接受之鹽，其中LU’為LU前驅體；且D’表示1至4個藥物單元，其中藥物連接子化合物進一步由式IA 之結構定義：
Figure 02_image063
其中LB '包含反應性或可活化官能基且其餘可變基團如關於式1A 所定義。
除非另外說明或上下文暗示，否則在「細胞毒性劑」作為術語用於本文中時，為能夠在活體外或活體內誘導細胞死亡或抑制細胞增殖或持續存活之化合物，該等細胞典型地為異常哺乳動物細胞。主要藉由抑制異常細胞增殖而非藉由直接殺死細胞來發揮治療作用之細胞抑制劑由細胞毒性劑之定義涵蓋。在一些態樣中，細胞毒性劑為使得藥物單元自抗體藥物共軛物釋放之游離藥物。
除非另外說明或上下文暗示，否則在「藥物單元」作為片語用於本文中時，係指共價連接至配體藥物共軛物(LDC)之藥物連接子部分中的連接子單元(LU)或共價連接至藥物連接子化合物之連接子單元前驅體(LU')，且可以游離藥物形式自藥物連接子部分或藥物連接子化合物釋放之藥物殘基。游離藥物可直接併入藥物單元中，或游離藥物之組分可共價連接至LU或LU’或其中間物隨後進一步詳細製作以完成藥物單元之結構。如本文中單獨或與另一術語結合使用(諸如「藥物單元」)之術語「藥物」不旨在暗示化合物經政府機構批准、可由政府機構批准或意欲由政府機構批准用於醫學或獸醫學治療。
在一些態樣中，併入藥物單元中之游離藥物為細胞毒性化合物，典型地為具有二級脂族胺作為結合處置之細胞毒性化合物，且包括如本文所定義之奧裡斯他汀化合物。
除非另外說明或上下文暗示，否則如本文所用之「奧裡斯他汀藥物」、「奧裡斯他汀化合物」及類似術語係指具有細胞毒性、細胞抑制或消炎活性之肽系微管蛋白斷裂劑，其包含海兔脯胺酸(dolaproline)及海兔異白胺酸(dolaisoleucine)殘基或與其相關之胺基酸殘基。
一些例示性奧裡斯他汀具有DE 或DF 之結構：
Figure 02_image065
其中Z為-O-、-S-或-N(R19 )-，且其中R10 -R21 如關於奧裡斯他汀藥物單元之實施態樣中所定義且所指示之氮原子(†)為二級胺(例如R10 、R11 中之一者為氫且另一者為-CH3 )之氮原子。在彼等態樣中，奧裡斯他汀透過包含該氮原子之胺基甲酸酯官能基併入藥物單元中。該胺基甲酸酯官能基為例示性第二間隔子單元(Y')且能夠經歷自降解，其進而連接至PAB或PAB型間隔子單元(Y)，使得本文所描述之藥物連接子部分中之任一者中的下標y為2。
其他例示性奧裡斯他汀包括但不限於AE、AFP、AEB、AEVB、MMAF及MMAE及進一步描述於本發明之實施態樣中的彼等奧裡斯他汀。奧裡斯他汀之合成及結構描述於美國專利申請公開案第2003-0083263號、第2005-0238649號第2005-0009751號、第2009-0111756號及第2011-0020343號；國際專利公開案第WO 04/010957號、國際專利公開案第WO 02/088172號以及美國專利第7,659,241號及第8,343,928號中。其中所揭示之其結構及其合成方法特定而言以引用之方式併入本文中。
除非另外說明或上下文暗示，否則在「其鹽」作為片語用於本文中時，係指化合物(例如藥物、藥物連接子化合物或LDC化合物)之鹽形式。化合物之鹽形式屬於一或多種內鹽形式及/或涉及包括另一分子，諸如乙酸根離子、琥珀酸根離子或其他相對離子。化合物之鹽形式中的相對離子典型地為使母體化合物上之電荷穩定的有機或無機部分。化合物之鹽形式在其結構中具有一個或超過一個帶電荷之原子。在多個帶電荷之原子為鹽形式之一部分的情況下，存在多個相對離子及/或多個帶電荷之相對離子。因此，化合物之鹽形式典型地具有一或多個對應於該化合物之非鹽形式者的帶電荷原子及一或多個相對離子。在一些態樣中，化合物之非鹽形式含有至少一個胺基或其他鹼性部分，且因此在存在酸之情況下，獲得具有鹼性部分之酸加成鹽。在其他態樣中，化合物之非鹽形式含有至少一個羧酸基團或其他酸性部分，且因此在存在鹼之情況下，獲得羧酸根或其他陰離子部分。
化合物鹽形式中之例示性相對陰離子及相對陽離子包括但不限於硫酸根、三氟乙酸根、檸檬酸根、乙酸根、草酸根、氯離子、溴離子、碘離子、硝酸根、硫酸氫根、磷酸根、酸式磷酸根、異菸酸根、乳酸根、水楊酸根、酸式檸檬酸根、酒石酸根、油酸根、單寧酸根、泛酸根、酒石酸氫根、抗壞血酸根、琥珀酸根、順丁烯二酸根、龍膽酸根、反丁烯二酸根、葡萄糖酸根、葡萄糖醛酸根、葡萄糖二酸根、甲酸根、苯甲酸根、麩胺酸根、甲烷磺酸根、乙烷磺酸根、苯磺酸根、對甲苯磺酸根及撲酸根(pamoate，亦即1,1'亞甲基雙-(2-羥基-3-萘甲酸鹽))。
化合物之鹽形式的選擇取決於藥物產品必須展現之特性，包括視預期投與途徑而定在各種pH值下足夠之水溶性、對於處置而言適合之結晶度與流動特性及低吸濕性(亦即，吸水率相較於相對濕度)及藉由在加速條件下測定化學及固態穩定性(亦即，用於測定當儲存在40℃及75%相對濕度下時的降解或固態變化)得到之所需架儲期。
「醫藥學上可接受之鹽」為適合如本文所描述向個體投與之化合物鹽形式且在一些態樣中包括如由P. H. Stahl及C. G. Wermuth編輯,Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection and Use , Weinheim/Zürich: Wiley-VCH/VHCA, 2002描述之相對陽離子或相對陰離子。
除非另外說明或上下文暗示，否則在「抗體」作為術語用於本文中時係以廣義使用，且特定而言涵蓋完整單株抗體、多株抗體、單特異性抗體、多特異性抗體(例如雙特異性抗體)及展現所需生物活性之抗體片段，該所需生物活性需要抗體片段具有必需之供連接至所需數目之藥物-連接子部分的位點數目且能夠特異性且選擇性地結合目標癌細胞抗原。抗體之天然形式為四聚體且典型地由兩對一致之免疫球蛋白鏈組成，每對具有一條輕鏈及一輕重鏈。在每一對中，輕鏈及重鏈可變區(VL及VH)一起主要負責結合抗原。輕鏈及重鏈可變結構域由被三個亦稱為「互補決定區」或「CDR」之高變區隔開之構架區組成。在一些態樣中，恆定區由免疫系統識別且與其相互作用(參見例如Janeway等人, 2001,Immunol. Biology, 第 5 版 , Garland Publishing, New York)以便發揮效應功能(effector function)。抗體包括任何同型(例如IgG、IgE、IgM、IgD及IgA)或其子類(例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1及IgA2)。抗體可由任何適合之物種衍生而來。在一些態樣中，抗體來源於人類或鼠類。此類抗體包括人類抗體、人類化抗體或嵌合抗體。
在一些態樣中，抗體呈還原形式，其中抗體已經歷其鉸鏈二硫鍵之還原。接著，藉由使藉由還原獲得之半胱胺酸硫醇中之一或多者與藥物連接子化合物之適當親電子劑反應從而使得藥物連接子部分共價結合至抗體配體單元或進一步詳細描述之連接子中間物共價鍵結至其最終形式作為藥物連接子部分，抗體併入抗體藥物共軛物作為抗體配體單元。
如本文所用之「單株抗體」係指獲自實質上均質之抗體群體的抗體，亦即，包含該群體之個別抗體為相同的，除了可以微小量存在之可能天然存在之突變及/或糖基化模式差異。單株抗體具高度特異性，從而針對單一抗原位點。修飾語「單株」指示抗體之特徵為獲自實質上均質之抗體群體，且不應被視為需要藉由任何特定方法來產生抗體。
除非另外說明或上下文暗示，否則在「選擇性結合」及「選擇性地結合」作為術語用於本文中時，係指能夠以免疫選擇性及特異性方式與其同源癌細胞抗原結合且不與許多其他抗原結合之抗體、其片段或抗體藥物共軛物之抗體配體單元。典型地，抗體或其抗原結合片段以至少約1×10-7 M且較佳約1×10-8 M至1×10-9 M、1×10-10 M或1×10-11 M之親和力結合其靶向之癌細胞抗原且以比其結合非特異性抗原(例如BSA、酪蛋白)(除對密切相關抗原外)之親和力大至少兩倍之親和力結合該預定抗原，其中當抗體或其抗原結合片段對應於抗體配體單元或作為抗體配體單元併入抗體藥物共軛物時該等親和力實質上保留。
除非另外說明或上下文暗示，否則在「抗原」作為術語用於本文中時，為能夠由未結合之抗體或其抗原結合片段特異性結合或特異性結合至抗體藥物共軛物化合物的部分，該抗體藥物共軛物化合物包含併有或在結構上對應於未結合之抗體的抗體配體單元。在一些態樣中，與遠離異常細胞位點之正常細胞相比，抗原為由異常細胞優先展示之細胞外可及之細胞表面蛋白質、糖蛋白或碳水化合物，特定而言為蛋白質或糖蛋白。在彼等態樣中，細胞表面抗原能夠在由抗體藥物共軛物組合物之共軛物化合物選擇性結合後內化。在內化之後，組合物之抗體藥物共軛物化合物之連接子單元之細胞內加工以游離藥物形式釋放其藥物單元。與對抗體藥物共軛物化合物而言細胞表面可及之過度增殖之細胞相關的抗原包括例如但不限於如本文所描述之癌症特異性抗原。
典型地，抗原與癌症相關。在彼等態樣中之一些中，與未局部化至異常細胞附近之正常細胞相比，抗原由癌細胞優先展示，特定而言，展示抗原之癌細胞為哺乳動物癌細胞。在其他態樣中，癌細胞抗原為由與遠離癌細胞位點之正常細胞相比為癌細胞環境所特有之附近正常細胞優先展示之抗原在細胞外可及的。舉例而言，附近細胞可為上皮細胞，其為腫瘤之異常血管結構之特徵。由抗體藥物共軛物靶向彼等血管細胞將對此等細胞具有細胞毒性或細胞抑制效應，此咸信使得營養物遞送至腫瘤之附近癌細胞受到抑制。此類抑制將間接地對癌細胞具有細胞毒性或細胞抑制效應且亦可能在由抗體藥物共軛物(ADC)化合物免疫選擇性結合之後在以游離藥物形式釋放其藥物單元之後對附近癌細胞具有直接細胞毒性或細胞抑制效應。在彼等態樣中之任一者中，細胞表面抗原能夠內化從而允許游離藥物在其由共軛物釋放至目標細胞中後進行細胞內遞送。
較佳可內化抗原為在癌細胞表面表現之彼等可內化抗原，拷貝數為每個細胞10,000或更多、每個細胞20,000或更多或每個細胞40,000或更多。對ADC而言細胞表面可及且可內化之與癌細胞相關之抗原包括霍奇金氏淋巴瘤細胞上表現之抗原，特定而言為里德-斯特恩伯格細胞(Reed-Sternberg cell)(如由Karpas 299細胞所例示)及高惡性淋巴瘤(有時稱為Ki-1淋巴瘤)之某些癌細胞上表現之抗原。其他抗原包括腎細胞腺癌瘤之癌細胞(如由789-O細胞所例示)、B細胞淋巴瘤或白血病(包括非霍奇金氏淋巴瘤、慢性淋巴細胞性白血病(CLL)及急性淋巴細胞性白血病(ALL))之癌細胞(如由CHO細胞所例示)、急性骨髓性白血病(AML)之癌細胞(如由HL-60所例示)以及此等及其他癌細胞上普遍表現之某些轉運體受體。
除非另外說明或上下文暗示，否則「連接子單元」作為術語用於本文中時，係指配體藥物共軛物中***藥物單元與配體單元(L) (如此等術語在本文所定義)之間且共價連接至藥物單元及配體單元(L)的有機部分，或為藥物連接子化合物中共價連接至藥物單元且具有用於與靶向劑相互作用以在L (其併有或在結構上對應於靶向劑)與連接子單元(LU)之間形成共價鍵的反應性官能基或部分的有機部分。由於藥物連接子中之連接子單元能夠形成此類鍵，故其被視為配體藥物共軛物中之連接子單元之前驅體且因此有時指示為LU’。連接子單元包含一級連接子(LR )以及***配體藥物共軛物化合物之藥物連接子部分內之LR 與D之間或藥物連接子化合物之LR 與D之間的二級連接子(LO )，其在後一情況下可表示為LR '以明確表明為配體藥物共軛物中之LR 的前驅體。
除非另外說明或上下文暗示，否則在「一級連接子」作為術語用於本文中時，係指配體藥物共軛物中連接子單元(LU)共價連接至配體單元及LU之其餘部分所需的組分。一級連接子(LR )之一個組分為配體共價結合(LB )部分，其在本文所描述之配體藥物共軛物(LDC)及藥物連接子化合物之一些態樣中提供自穩定(LSS )連接子，由此確定LSS 一級連接子，且在LDC之其他態樣中提供可由LSS 衍生而來之經自穩定(LS )連接子，由此定出LS 一級連接子，如此等術語在本文中進一步所描述。一級連接子視情況含有分枝單元(B)及第一視情況存在之延伸體單元(A)，此取決於式1A中下標a及b之值，限制條件為當LR 為LSS 或LS 一級連接子時A存在。
LDC或藥物連接子化合物中之LSS 一級連接子分別以毗鄰鹼性單元之琥珀醯亞胺(M2 )或馬來醯亞胺(M1 )部分為特徵，而LDC組合物或其化合物中之LS 一級連接子以毗鄰鹼性單元之琥珀酸醯胺(M3 )部分為特徵。本發明之LSS 或LS 一級連接子亦以第一視情況存在之延伸體單元(A)為特徵，該第一視情況存在之延伸體單元(A)存在且包含鍵結至M1 或M2 之馬來醯亞胺或琥珀醯亞胺環系統之醯亞胺氮或M3 之醯胺氮的視情況經取代之C1 -C12 伸烷基部分，其中伸烷基部分在一些態樣中經非環鹼性單元取代且可進一步經視情況存在之取代基取代或在其他態樣中視情況經取代且併有視情況經取代之環狀鹼性單元。
藥物連接子化合物中之LSS 一級連接子之配體共價結合前驅體的馬來醯亞胺(M1 )部分有時以LSS '顯示以明確表明其為配體藥物共軛物中之LSS 的前驅體，其能夠與靶向劑之反應性硫醇官能基之硫原子反應，從而產生配體藥物共軛物之LSS 一級連接子之配體共價結合部分中的硫取代之琥珀醯亞胺部分(M2 )，其中硫取代基為併有或在結構上對應於靶向劑之配體單元。在靶向劑為抗體或其抗原結合片段之態樣中，抗體變得透過衍生自二硫鍵還原之半胱胺酸殘基之硫原子鍵結至M2 或透過基因工程改造引入。因此，抗體或其抗原結合片段作為抗體配體單元共價鍵結至LSS 一級連接子。LSS 一級連接子中M2 之後續水解產生LS 一級連接子，其中M2 轉化為琥珀酸醯胺部分(M3 )。視琥珀醯亞胺環系統之兩個羰基發生水解之相對反應性而定，該連接子部分可以兩種位置異構體(regioisomer)(M3A 及M3B )之混合物存在。
除非另外說明或上下文暗示，否則在「配體共價結合部分」作為術語用於本文中時，係指配體藥物共軛物中使其配體單元(L)與連接子單元之其餘部分相互連接之連接子單元(LU)的部分，且衍生自藥物連接子化合物中連接子單元前驅體(LU')之對應配體共價結合前驅體(LB ')部分與靶向劑(諸如抗體或其抗原結合片段)之間的反應。舉例而言，當LB ’包含馬來醯亞胺部分(M1 )時，該部分與靶向劑之反應性硫醇官能基之反應將LB ’轉化為配體共價結合(LB )部分，使得獲得硫取代之琥珀醯亞胺部分。當靶向劑為抗體或其抗原結合片段時，硫取代基包含抗體配體單元之硫原子，其在一些態樣中由藉由鏈間二硫鍵還原或基因工程改造獲得之半胱胺酸殘基提供。
在另一實例中，當LB '包含活化羧酸官能基時，該官能基與靶向劑之反應性胺基(諸如抗體或其抗原結合片段中之離胺酸殘基的ε胺基)之反應將該官能基轉化為醯胺，其中由該反應產生之醯胺官能基由LB 及所連接之配體單元共用，所連接之配體單元在抗體或抗原結合片段之情況下為抗體配體單元。其他LB 部分及其自含LB '部分之轉化描述於本發明之實施態樣中。在另一實例中，具有反應性胺基之靶向劑為使用雙官能分子衍生的以提供中間物，此在一些情況下產生與LB '部分縮合之反應性硫醇官能基。由於該縮合，因此形成之LB 部分具有可歸因於該雙官能分子及LB '之原子。
「配體共價結合前驅體部分」為藥物連接子化合物之連接子單元或其包含反應性或可活化官能基之中間物的部分，其中在配體藥物共軛物(LDC)(包括抗體藥物共軛物(ADC))之製備期間，反應性官能基或可活化官能基在活化之後能夠共價結合至靶向劑(諸如抗體或其抗原結合片段)，因此配體結合部分前驅體(LB ')部分轉化為配體共價結合(LB )部分。在一些態樣中，LB '部分具有官能基能夠與抗體或其抗原結合片段天然之親核劑或親電子劑反應，或藉由化學轉化或基因工程改造(參見上文)引入抗體或抗原結合片段中以使其轉化為抗體配體單元。在彼等態樣中之一些中，親核劑為抗體或其抗原結合片段之輕鏈或重鏈之N端胺基，或該輕鏈或重鏈之離胺酸殘基之ε胺基。
在其他態樣中，親核劑為藉由基因工程引入抗體或其抗原結合片段之輕鏈或重鏈中或來自抗體或抗原結合片段之鏈間二硫之化學還原之半胱胺酸殘基的巰基。在一些態樣中，親電子劑為藉由抗體或其抗原結合片段之聚醣組分中碳水化合物部分之選擇性氧化引入的醛，或為來自使用基因工程改造之tRNA/tRNA合成酶對引入抗體或其抗原結合片段之輕鏈或重鏈中之非天然胺基酸的酮。用於引入反應性官能基以提供抗體中之結合位點的彼等及其他方法由Behrens及Liu「Methods for site-specific drug conjugation to antibodies」mAB (2014) 6(1): 46-53綜述。
除非另外說明或上下文暗示，否則如本文所用之「二級連接子」、「二級連接子部分」及類似術語係指連接子單元(LU)中之有機部分，其中二級連接子(LO )為使藥物單元與一級連接子(LR )相互連接且含有配體共價結合(LB )部分、第一視情況存在之延伸體單元及/或視情況存在之分枝單元(B)的LU的組分，且在一些態樣中提供配體藥物共軛物(LDC)(諸如抗體藥物共軛物(ADC))或適用於製備共軛物之藥物連接子化合物之自穩定(LSS )一級連接子，或在LSS 水解後提供LDC/ADC化合物之經自穩定(LS )一級連接子。在LR 為LSS 或LS 時之情況下，存在第一視情況存在之延伸體單元。在彼等態樣中，LR 透過來自存在之第一視情況存在之延伸體單元(A)之雜原子或官能基連接至LO 。
配體藥物共軛物化合物或藥物連接子化合物之二級連接子典型地具有以下結構：
Figure 02_image067
當下標b為0時，其中毗鄰A'之波形線指示LO 共價連接至一級連接子之位點；毗鄰Y之波形線指示LO 共價連接至藥物單元之位點；A'為第二視情況存在之間隔子單元，或在一些態樣中為存在之第一視情況存在之延伸體單元之亞單元，下標a'為0或1，分別指示A'不存在或存在；Y為間隔子單元，且下標y為0、1或2，分別指示不存在或存在一個或兩個間隔子單元；且W為肽可裂解單元，其中肽可裂解單元提供與正常組織勻漿中之蛋白酶相比對腫瘤組織勻漿之蛋白酶具有總體更大之選擇性的識別位點，其中腫瘤組織包含目標癌細胞且正常組織包含非目標正常細胞，因此由配體藥物共軛物引起之脫靶細胞毒性至少部分引起常常與向有需要之哺乳動物個體投與治療有效量相關之有害事件。當下標b為0時，A'當存在時變為A之亞單元，在此情況下二級連接子具有-W-Yy -之結構。在彼等態樣中之任一者中，W、Y及D相對於LU/LU'之其餘部分以線性組態排列，如由-W-Yy -D所表示，其中W為肽可裂解單元且下標y為0、1或2。當下標y為1或2時，蛋白酶裂解隨後為連接至W之自降解性間隔子單元之自降解以便釋放D或 Y’-D，若存在第二間隔子單元(Y’)，其分解以完成D作為游離藥物之釋放。
當僅一個藥物單元連接至LU (其中W為肽可裂解單元)時，如所例示連接子單元中鍵結至D之二級連接子(LO )典型地由以下結構表示：
Figure 02_image069
，當下標b為1時或
Figure 02_image071
，歸因於當下標b為0且下標a'為1時，A'a' 被當作第一視情況存在之延伸體單元之亞單元； 其中D為藥物單元且其餘可變基團如本文關於LO 所定義； 且包含該二級連接子之藥物連接子部分或藥物連接子化合物典型地分別具有式1B 及式IB 之結構：
Figure 02_image073
其中LB 為如本文所定義之配體共價結合部分，其為配體藥物共軛物化合物之藥物連接子部分之連接子單元(LU)之一級連接子(LR )的組分；且LB '為如本文所定義之配體共價結合部分，其為藥物連接子化合物中連接子單元(LU')之一級連接子(LR ')之組分，且有時稱為配體共價結合部分前驅體，當藥物連接子化合物用於製備配體藥物共軛物時分別為配體藥物共軛物之LR 、LB 及LU之一級連接子前驅體及連接子單元前驅體；A為第一視情況存在之延伸體單元；下標a為0或1，分別指示A不存在或存在；B為視情況存在之分枝單元，下標b為0或1，分別指示B不存在或存在，其中當下標b為0，下標a為1且下標a'為1時，A'為A之亞單元；下標q在1至4範圍內，其中LB /LB '以及A及B當存在時為LR /LR '之組分，且限制條件為當下標b為1時下標q在2至4範圍內，且當下標b為0時下標q為1；且其餘可變基團如本文關於LO 所定義。
除非另外說明或上下文暗示，否則如本文所用之「馬來醯亞胺部分」係指藥物連接子化合物之一級連接子之組分，其在一些態樣中為自穩定連接子之組分，其中該一級連接子有時表示為LR '或LSS '以明確表明其為配體藥物共軛物中之LR /LSS 的前驅體。馬來醯亞胺部分(M1 )能夠藉由靶向劑(諸如抗體或其抗原結合片段)之反應性硫醇官能基之硫原子參與邁克爾加成(Michael addition)(亦即，1,4-共軛加成)，以提供硫取代之琥珀醯亞胺(M2 )部分，其中硫取代基為配體單元，該配體單元併有如本文關於抗體藥物共軛物組合物或其化合物之抗體配體單元所例示之靶向劑或對應於其結構。藥物連接子化合物之該M1 部分連接至一級連接子之其餘部分，典型地在M1 部分為LSS '之組分時連接至存在之第一視情況存在之延伸體單元(A)或若A與B均不存在，則透過其醯亞胺氮原子連接至二級連接子(LO )。
除了醯亞胺氮原子，M1 部分典型地未經取代，但可在其馬來醯亞胺環系統之環狀雙鍵處為不對稱取代的。此類取代可引起靶向劑之反應性硫醇官能基之硫原子與馬來醯亞胺環系統之受阻更少或更缺電子之雙鍵鍵結碳原子(取決於更主要之貢獻)的位置化學較佳之共軛加成。該共軛加成產生琥珀醯亞胺(M2 )部分，其經配體單元硫取代，不過來自硫醇官能基之硫原子由靶向劑提供。
除非另外說明或上下文暗示，否則如本文所用之「琥珀醯亞胺部分」係指一級連接子中之一種類型之配體共價結合(LB )部分，其又為配體藥物共軛物(諸如抗體藥物共軛物)之連接子單元之組分，且由抗體或其抗原結合片段之反應性硫醇官能基之硫原子與馬來醯亞胺部分(M1 )之馬來醯亞胺環系統的邁克爾加成產生，馬來醯亞胺部分為藥物連接子化合物或其含M1 中間物中的一種類型之配體共價結合前驅體(LB ')部分。因此，琥珀醯亞胺(M2 )部分包含硫取代之琥珀醯亞胺環系統，其醯亞胺氮原子經一級連接子之其餘部分取代，該其餘部分典型地將為存在之第一視情況存在之延伸體單元(A)。在一些態樣中，該氮原子透過包含存在之第一視情況存在之延伸體單元(A)之視情況經取代之C1 -C12 伸烷基部分連接至該單元。當一級連接子為自穩定連接子時，該伸烷基部分將環狀鹼性單元併入存在之第一視情況存在之延伸體單元中或經如別處所描述之非環鹼性單元取代，且以其他方式視情況經取代，且其M2 部分在其可已存在於M1 前驅體上之琥珀醯亞胺環系統處視情況經取代基取代。
因此，在式1B 之藥物連接子部分或式IB 之藥物連接子化合物中，視情況與作為視情況存在之水解增強單元的[HE]組合之A的視情況經取代之C1 -C12 伸烷基部分當下標b為0時直接共價連接至存在之視情況存在之二級連接子(LO )，或當下標b為1時透過-[HE]-B-間接連接至LO 。在下標b為0，下標a為1且下標a'為1之彼等情況下，A由式-A1 [HE]-A2 -表示，其中A1 為A之第一亞單元且包含視情況與HE組合之視情況經取代之C1 -C12 伸烷基部分，且先前指示為LO 之組分的A'變為A2 ，其現為A之第二亞單元。在當下標b為1且下標a為1且下標a'為1時之彼等情況下，A’為二級連接子之組分且A為視情況與[HE]組合之單一單元或視情況包含兩個亞單元，其由-A[HE]-AO -表示，其中AO 為A之視情況存在之亞單元。當AO 存在時，A亦由式 -A1 [HE]-A2 -表示。
當存在於配體藥物共軛物化合物中之自穩定連接子(LSS )中時，硫取代之琥珀醯亞胺(M2 )部分之琥珀醯亞胺環系統之水解(其歸因於附近存在非環或環狀鹼性單元之鹼性官能基而為pH值可控的)在一些情況下歸因於其經硫取代基非對稱取代而提供經自穩定連接子(LS )中之琥珀酸-醯胺(M3 )部分的位置化學異構體。彼等異構體之相對量將至少部分歸因於M2 之兩個羰基碳之反應性的差異，該等差異可至少部分歸因於存在於M1 前驅體中之任何取代基。當LR 具有不含鹼性單元但與由鹼性單元提供之受控水解相比高度可變的M2 部分時亦預期在一定程度上發生水解。
在一些態樣中，M2 之琥珀醯亞胺環系統上不存在彼等視情況存在之取代基，且第一視情況存在之延伸體單元存在且包含視情況經取代之C1 -C12 伸烷基部分，該視情況經取代之C1 -C12 伸烷基部分在其與醯亞胺氮原子之連接位點遠端的位置視情況連接至[HE]，其為視情況存在之水解增強單元。在該態樣中，A為單一單元或進一步包含A'，其為A之視情況存在之亞單元，該視情況存在之亞單元當下標b為0且下標a'為1時存在且連接至亦存在之[HE]，使得A具有-A[HE]-A'-之結構式，或當下標b為1且下標a'為1時，A'為二級連接子之存在之組分，使得A由 -A[HE]-AO -之結構式表示。
除非另外說明或上下文暗示，否則如本文所用之「琥珀酸-醯胺部分」係指配體藥物共軛物(諸如抗體藥物共軛物)內之連接子單元的經自穩定連接子(LS )之組分，且具有琥珀酸醯胺半酸殘基之結構，其中其醯胺氮由LS 之另一組分取代，其中該組分典型地為存在之第一視情況存在之延伸體單元(A)或其亞單元且包含視情況連接至[HE]之C1 -C12 伸烷基部分。當下標b為0且下標a為0或1時A可能的結構由式-A[HE]-A'a' -指示，其中先前與二級連接子相關之A’不存在使得下標a’為0，或當下標a’為1時A’作為A之亞單元存在。當該亞單元存在時，A由式A1 [HE]-A2 -表示，其中A1 為A之第一亞單元，其包含視情況連接至[HE]之視情況經取代之C1 -C12 伸烷基部分，且A2 為A之第二亞單元，先前指示為A’。當下標b為1且下標a為1時A可能的結構由式-A[HE]-AO -指示，其中AO 為A之視情況存在之亞單元(當存在時)。當該亞單元不存在時，A為單一離散單元且當AO 存在時，A由式A1 [HE]-A2 -表示，其中A1 為A之第一亞單元，其包含視情況連接至[HE]之視情況經取代之C1 -C12 伸烷基部分，且先前指示為AO 之A2 為A之第二亞單元。
在一些態樣中，伸烷基部分併有環狀鹼性單元且在其他態樣中經非環鹼性單元取代且在任一態樣中以其他方式視情況經取代，其中琥珀酸醯胺(M3 )部分進一步經L-S-取代，其中L為併有或在結構上對應於靶向劑(諸如抗體或其抗原結合片段)之配體單元(諸如抗體配體單元)，且S為來自該靶向劑、抗體或抗原結合片段之硫原子。M3 部分由自穩定一級連接子中琥珀醯亞胺(M2 )部分之硫取代之琥珀醯亞胺環系統已經歷其羰基-氮鍵中之一者因水解而斷裂引起，此由鹼性單元輔助。
因此，M3 部分具有游離羧酸官能基及氮雜原子連接至一級連接子之其餘部分的醯胺官能基，且視其M2 前驅體之水解位點而定在該羧酸或醯胺官能基之α碳處經L-S-取代。在不受理論約束之情況下，咸信上述水解使得M3 部分在不太可能發生因消除硫取代基而自靶向配體單元(L)之共軛物過早丟失的配體藥物共軛物中提供連接子單元(LU)。
除非另外說明或上下文暗示，否則如本文所用之「自穩定連接子」係指配體藥物共軛物(諸如抗體藥物共軛物)中連接子單元(LU)之具有含M2 組分之一級連接子，或藥物連接子化合物中連接子單元前驅體(LU')之具有含M1 組分之一級連接子，其中該組分可指定為LSS '以表明其為LDC中LSS 之含M2 組分之前驅體。自穩定連接子隨後在受控水解條件下經歷向對應經自穩定連接子(LS )之轉化。LSS 之鹼性單元組分促進該水解，使得包含LSS 之LDC/ADC由於其現包含LS 之連接子單元(LU)而變得對其配體單元過早丟失更具抗性。LSS 一級連接子除其M1 或M2 部分之外進一步包含需要存在之第一視情況存在之延伸體單元(A)，其中A包含視情況與[HE]組合之C1 -C12 伸烷基部分，其中當A在下標b為1時進一步包含存在之視情況存在之亞單元(AO )或A在下標b為0且下標a'為1時進一步包含A'時，該組合有時指定為A1 ，其中在下標b為任一值之情況下，該另外存在之亞單元指定為A2 。當A可以單一離散單元或以兩個離散單元之形式存在時，兩種可能性均由式 -A[HE]-AO -(當下標b為1時)或A[HE]-A'a' (當下標b為0時)表示，其視不存在或存在第二亞單元而定對於任一之下標b值分別變為-A[HE]-或-A1 [HE]-A2 -。在LSS 內之A的任一變化型式中，其伸烷基部分併有環狀鹼性單元或經非環鹼性單元取代且以其他方式視情況經取代。
因此，當藥物連接子化合物之一級連接子為LSS (有時以LSS '顯示以表明其為配體藥物共軛物中之LSS 的前驅體)時，該一級連接子含有需要存在之第一視情況存在之延伸體單元(A)及用於連接靶向劑之馬來醯亞胺(M1 )部分，其在抗體或其抗原結合片段之情況下提供抗體配體單元。在彼等態樣中，LSS 之A之C1 -C12 伸烷基部分連接至M1 之馬來醯亞胺環系統之醯亞胺氮且連接至連接子單元之其餘部分，後者視不存在或存在AO /A'及[HE]而定視情況透過[HE]-AO -B-(當下標b為1時)或[HE]-A'a' -(當下標b為0時)發生。在彼等態樣中之一些中，作為水解增強部分之[HE]由視情況經取代之拉電子雜原子或官能基組成或包含視情況經取代之拉電子雜原子或官能基，其在一些態樣中(除BU之外)可提高LDC/ADC化合物之對應LSS 部分中M2 部分之水解速率。在藥物連接子化合物併入LDC/ADC化合物中之後，LSS 現含有由配體單元進行硫取代之琥珀醯亞胺(M2 )部分(亦即，配體單元連接至其藥物連接子部分已透過靶向劑之反應性硫醇官能基之硫原子與M1 之馬來醯亞胺環系統之邁克爾加成發生)。
在一些態樣中，環化鹼性單元(cBU)在結構上透過與該單元之鹼性氮進行形式環化使得環狀鹼性單元結構併入以視情況經取代之螺C4 -C12 雜環基形式存在的第一視情況存在之延伸體單元而對應於非環鹼性單元。在式1B 之藥物連接子部分或式IB 之藥物連接子化合物中，在此類構築體中，螺碳連接至M1 之馬來醯亞胺醯亞胺氮，且因此連接至M2 中之該氮，且進一步連接至LSS 一級連接子之其餘部分，LSS 一級連接子包含之前描述的視情況透過 -[HE]-AO -或[HE]-Aa' -存在之第一視情況存在之延伸體單元(A)。在彼等態樣中，環狀BU幫助M2 之琥珀醯亞胺部分定性地以類似於非環鹼性單元之方式水解為其由M3 表示之對應開環形式，此亦可由[HE]增強。
在一些態樣中，LSS 一級連接子(其有時以LSS '顯示以明確表明其為式IB 之藥物連接子化合物中的自穩定(LSS )一級連接子之前驅體)之LB '-A-Bb -由通式 M1 -A(BU)-[HE]-AO -B-(當下標b為1時)或 M1 -A(BU)-[HE]-A'a' -(當下標b為0時)表示，其中M1 為馬來醯亞胺部分且A為併有BU或經BU取代且以其他方式視情況經取代且視情況與[HE]組合之C1 -C12 伸烷基，[HE]為視情況存在之水解增強部分，其中該式當A為單一離散單元時變為M1 -A(BU)-[HE]-B-或M1 -A(BU)[HE]-或者當A具有兩個亞單元時變為M1 -A1 (BU)-[HE]-A2 -B-或 M1 -A1 (BU)-[HE]-A2 -，其中A1 及A2 為A之亞單元。
在其他態樣中，式1A 之ADC的式1B 之藥物連接子部分中的LSS 一級連接子由通式 -M2 -A(BU)-[HE]-AO -B-(當下標b為1時)或 -M2 -A(BU)-[HE]-Aa' -(當下標b為0時)表示，其中M2 為琥珀醯亞胺部分，A為存在之第一視情況存在之延伸體單元且包含併有BU或經BU取代且以其他方式視情況經取代且視情況與[HE]組合之C1 -C12 伸烷基，[HE]為視情況存在之水解增強部分，且AO /A'為A之視情況存在之亞單元。當A為單一離散單元時，LSS 由式-M2 -A(BU)-[HE]-B-或 -M2 -A(BU)-[HE]-表示且當A具有兩個亞單元時，LSS 分別由式-M2 -A1 (BU)-[HE]-A2 -或-M2 -A1 (BU)-[HE]-A2 -B- (當下標b為0或1時)表示。
在其他態樣中，式1A 之LDC/ADC的式1B 之藥物連接子部分中的LS 一級連接子由通式 -M3 -A(BU)-[HE]-AO -B-(當下標b為1時)或 -M3 -A(BU)-[HE]-Aa -(當下標b為0時)表示，其中M3 為琥珀醯亞胺酸醯胺部分且A為併有BU或經BU取代且以其他方式視情況經取代且視情況與[HE]組合之C1 -C12 伸烷基，[HE]為視情況存在之水解增強部分，且AO /A'為A之視情況存在之亞單元，其中-A(BU)-[HE]-AO -或-A(BU)-[HE]-Aa' -當A為單一離散單元時變為-A(BU)-[HE]-或當A為兩個亞單元或包含兩個亞單元時變為-A1 (BU)-[HE]-A2 -。
式1 之一些配體藥物共軛物的式1B 之藥物連接子部分內包含LSS 一級連接子之例示性但非限制性-LB -A-結構由以下表示：
Figure 02_image075
其中波形線指示共價連接至配體單元之位點，在下標b為1之上部結構中井字符號(#)指示式1B 中共價連接至分枝單元(B)的位點，或在下標b為0之下部結構中指示連接至存在之視情況存在之二級連接子(LO )之W的位點，且其中虛曲線指示視情況存在之環化，其在BU為環狀鹼性單元時存在或在BU為非環鹼性單元時不存在，其中[HE]為視情況存在之水解增強部分，AO /A'為A之視情況存在之亞單元，下標z為0或在1至6範圍內之整數；各Rd1 獨立地選自由氫及視情況經取代之C1 -C6 烷基組成之群，或兩個Rd1 、與其連接之碳原子及任何中間碳原子定出視情況經取代之C3 -C8 碳環基，且剩餘之Rd1 (若有)獨立地為氫或視情況經取代之C1 -C6 ；且Ra2 當BU為非環鹼性單元時為-H或視情況經取代之C1 -C8 烷基，且當BU為環狀鹼性單元時，Ra2 需要不為-H且與連接BU及Ra2 之碳原子一起定出具有骨架二級或三級鹼性氮原子之視情況經取代之螺C4 -C12 雜環基，使得與其中Ra2 為氫且BU由氫置換之對應共軛物相比非環或環狀BU能夠增加所示琥珀醯亞胺(M2 )部分之水解速率以在適合之pH值下提供琥珀酸醯胺(M3 )部分，且對於環狀鹼性單元，相較於其中Ra2 為氫且BU由氫置換之上述共軛物，實質上保留對應於其中Ra2 為氫且BU為非環BU之LDC/ADC之藥物連接子部分的藥物連接子部分水解速率增加。
有時存在於在配體藥物共軛物組合物之製備中用作中間物的式I 之藥物連接子化合物中的包含LSS '之例示性但非限制性LB '-A-結構由以下表示：
Figure 02_image077
其中BU及其他可變基團如上文關於具有LSS 一級連接子之LDC/ADC的LB -A-結構所定義。當具有包含馬來醯亞胺部分之自穩定連接子前驅體(LSS ')之藥物連接子化合物用於製備LDC/ADC時，該LSS '部分轉化為包含琥珀醯亞胺部分之LSS 一級連接子。在與來自靶向劑(諸如抗體或其抗原結合片段)之反應性硫醇官能基縮合之前，BU之鹼性氮原子典型地經質子化或由酸不穩定性保護基保護。
「經自穩定連接子」為自配體藥物共軛物(諸如抗體藥物共軛物)中自穩定連接子(LSS )的含M2 部分衍生的有機部分，該含M2 部分已在受控條件下經歷水解以便提供經自穩定連接子(LS )之對應M3 部分，其中該LU組分不太可能逆轉提供原始含M2 之LSS 部分的靶向部分與含M1 部分之縮合反應。除M3 部分之外，經自穩定連接子(LS )亦包含存在且併有環狀鹼性單元或經非環鹼性單元取代之第一視情況存在之延伸體單元(A)，其中A共價連接至M3 及LS 一級連接子之其餘部分(亦即，B)或當B不存在時連接至二級連接子(LO )。M3 部分獲自配體藥物共軛物中LSS 之琥珀醯亞胺部分(M2 )之轉化，其中M2 部分具有由靶向劑之反應性硫醇官能基之硫原子與藥物連接子化合物中LSS '部分之M1 的馬來醯亞胺環系統之邁克爾加成產生的硫取代之琥珀醯亞胺環系統，其中該M2 衍生之部分對於消除其硫取代基與M2 中之對應取代基相比具有降低之反應性。在彼等態樣中，M2 衍生之部分具有對應於M2 之琥珀酸-醯胺(M3 )部分之結構，其中M2 已經歷其琥珀醯亞胺環系統之其羰基-氮鍵中之一者的水解，此由BU之鹼性官能基輔助，此係歸因於其因該連接而適當毗鄰。因此，該水解之產物具有羧酸官能基及在醯胺氮原子(其對應於LS 之含M2 之LSS 前驅體中的醯亞胺氮原子)處經取代之醯胺官能基加上其餘部分之一級連接子，其將至少包括存在之視情況存在之延伸體單元。在一些態樣中，鹼性官能基為非環鹼性單元之一級、二級或三級胺或環狀鹼性單元之二級或三級胺。在其他態樣中，BU之鹼性氮為視情況經取代之鹼性官能基之雜原子，如在胍基部分中。在任一態樣中，BU之鹼性官能基對於鹼催化水解之反應性藉由降低鹼性氮原子之質子化狀態而受pH值控制。
因此，經自穩定連接子(LS )典型地具有M3 部分共價結合至存在且併有環狀鹼性單元或經非環鹼性單元取代之第一視情況存在之延伸體單元的結構。在一些態樣中，A為離散單一單元且在其他態樣中具有兩個或更多個亞單元，若存在兩個亞單元則典型地由A1 -A2 表示，且A/A1 視情況與[HE]組合。延伸體單元A又共價鍵結至LS 一級連接子之B或共價鍵結至LO 之W，且其M3 、A、A'a' /B及BU組分以由通式-M3 -A(BU)-[HE]-A'a' -或 M3 -A(BU)-[HE]-AO -B-表示之方式排列，其中下標b分別為0或1。當A為單一離散單元時，LS 由-M3 -A(BU)-[HE]-B-(當下標b為1時)或-M3 -A(BU)-[HE]-表示且當A具有兩個亞單元時LS 由-M3 -A1 (BU)-A2 -或-M3 -A1 (BU)-A2 -B-表示，其中下標b分別為0或1，其中BU表示任一類型之鹼性單元(環狀或非環)。
LDC/ADC之LSS 及LS 一級連接子中的-LB -A-之例示性非限制性結構(其中LB 為M2 或M3 ；且此等結構內之A(BU)/A1 (BU)及[HE]以上文所述之方式排列，其中BU為非環鹼性單元)例如但不限於由以下結構顯示：
Figure 02_image079
Figure 02_image081
其中-CH(CH2 NH2 )C(=O)-部分為A，當A為單一離散單元時使得AO 或A'不存在，或當AO /A'以A2 形式存在時A為A1 -A2 -，且其中A/A1 經BU取代，其中BU為非環鹼性單元(其為-CH2 NH2 )，其具有視情況經質子化之鹼性氮原子，且該部分內之-C(=O)-為存在之視情況存在之水解增強部分[HE]，且其中上部結構中之井號指示共價連接至B且下部結構中之井號指示共價連接至LO 之W。彼等例示性結構分別含有琥珀醯亞胺(M2 )部分或琥珀酸-醯胺(M3 )部分，後者由在LSS 向LS 之轉化中由-CH2 NH2 輔助的M2 之琥珀醯亞胺環水解產生。
LDC/ADC之LSS 及LS 一級連接子中的-LB -A-之例示性非限制性結構(其中LB 為M2 或M3 ；且此等結構內之A(BU)/A1 (BU)、AO /A’及[HE]以上文所述之方式排列，其中BU為環狀鹼性單元)例如但不限於由以下結構顯示：
Figure 02_image083
其中此等-M2 -A(BU)-[HE]-AO /A'a' -及 -M3 -A(BU)-[HE]-AO /A'a' -結構當AO 不存在或下標a'為0使得A以單一離散單元形式存在時變為-M2 -A(BU)-[HE]-及 -M3 -A(BU)-[HE]-或當AO /A'以指示為A2 之A之亞單元形式存在時變為-M2 -A1 (BU)-[HE]-A2 -及-M3 -A1 (BU)-[HE]-A2 -，且其中在任一結構中，BU為呈視情況經質子化之氮雜環丁烷-3,3-二基形式之環狀鹼性單元，其結構為併入A/A1 中之例示性雜環基鹼性單元。該雜環基對應於-A1 (BU)-或 -A(BU)-部分中之非環鹼性單元之胺基烷基，其中非環鹼性單元之鹼性氮已透過Ra2 至少部分在形式上環化回非環鹼性單元所連接之M2 之琥珀醯亞胺氮的α碳原子。
以上-LB -A-結構中之每一者中的波形線指示在靶向劑之反應性硫醇官能基衍生之配體單元的硫原子與結構上對應之藥物連接子化合物或其含M1 中間物中M1 部分之馬來醯亞胺環系統進行邁克爾加成後該硫原子的共價連接位點。上部結構中之井號(#)指示共價連接至B之位點，B為LSS 或LS 一級連接子之其餘部分，且在下部結構中指示共價連接至LO 之W的位點。由於M2 之琥珀醯亞胺環系統是因其硫取代基而發生不對稱取代，故在M2 水解後可產生相對於釋放之羧酸基團位置有所不同的如本文所定義之琥珀酸-醯胺(M3 )部分之位置化學異構體。在以上結構中，毗鄰AO 顯示之羰基官能基例示如本文所定義之水解增強子[HE]。
以上-M3 -A(BU)-[HE]-AO /A'a' -、-M3 -A(BU)-及-M3 -A1 (BU)-[HE]-A2 -部分(其中BU為非環或環狀鹼性單元)表示包含經自穩定連接子(LS )一級連接子之例示性 -LB -A-結構，如此命名係由於與衍生出它們之式 -M2 -A(BU)-[HE]-AO /A'a' -、-M2 -A(BU)-或 -M2 -A1 (BU)-[HE]-A2 -所包含的對應LSS 部分相比，此等結構不太可能消除配體單元之硫取代基且因此引起該靶向部分丟失。在不受理論約束之情況下，咸信增加之穩定性由與M2 相比M3 中之更大構形靈活性引起，此不再將硫取代基限於有利於E2消除之構形。
除非另外說明或上下文暗示，否則如本文所用之「鹼性單元」係指如本文所描述之自穩定連接子(LSS )一級連接子內的有機部分，其藉由BU參與包含M2 部分之LSS 內鹼催化之琥珀醯亞胺環系統水解(亦即，催化水分子添加至琥珀醯亞胺羰基-氮鍵中之一者)向前傳送至對應LS 部分中。在一些態樣中，鹼催化之水解在連接至LSS 之靶向配體單元可耐受的受控條件下起始。在其他態樣中，鹼催化之水解在包含LSS '之藥物連接子化合物與靶向劑接觸後起始，其中靶向劑之反應性硫醇官能基之硫原子的邁克爾加成與藥物連接子化合物之LSS '之M1 部分的水解競爭。在不受理論約束之情況下，以下態樣描述用於設計適合之鹼性單元的各種考慮因素。在一個此類態樣中，針對BU氫鍵結至M2 之羰基之能力對非環鹼性單元之鹼性官能基及其在LSS 中相對於其M2 組分之相對位置進行選擇，此有效增加其親電性且因此增加其對水攻擊之敏感性。在另一此類態樣中，進行彼等選擇使得水分子定向至M2 羰基，水分子之親核性因氫鍵結至BU之鹼性官能基而增加。在第三個此類態樣中，進行彼等選擇，因此在質子化後鹼性氮不因誘導性電子退出而增加琥珀醯亞胺羰基之親電性，誘導性電子退出在一定程度上將促進過早水解，從而需要補償不希望之過量之藥物連接子化合物。在另一此類態樣中，彼等機制效應之一些組合促成對LSS 受控水解為LS 之催化作用。
典型地，可透過以上機制態樣中之任一者起作用之非環鹼性單元包含1個碳原子或2至6個連續碳原子，更典型地包含1個碳原子或2或3個連續碳原子，其中碳原子將非環鹼性單元之鹼性胺基官能基連接至與其連接之LSS 一級連接子之其餘部分。為了使該鹼性胺氮原子位於所需之附近以幫助琥珀醯亞胺(M2 )部分水解為其對應開環琥珀酸醯胺(M3 )部分，非環鹼性單元之帶有胺之碳鏈典型地相對於A連接至M2 之琥珀醯亞胺氮之位點在該部分之C1 -C12 伸烷基之α碳處連接至LSS 之-LB -A-部分之A(且因此連接至其對應M1 -A-結構之馬來醯亞胺氮)。典型地，非環鹼性單元中之該α碳具有(S)立體化學組態或對應於L-胺基酸之α碳之組態。
如先前所描述，呈非環形式之BU或呈環化形式之BU典型地透過以其他方式視情況經取代之C1 -C12 伸烷基部分連接至LSS 之M1 或M2 或LS 之M3 ，其中該部分併有環化鹼性單元或經非環鹼性單元取代且分別鍵結至M1 或M2 之馬來醯亞胺或琥珀醯亞胺氮或M3 之醯胺氮原子。在一些態樣中，併有環狀鹼性單元之以其他方式視情況經取代之C1 -C12 伸烷基部分共價鍵結至[HE]且典型地透過中間之醚、酯、碳酸酯、尿素、二硫化物、醯胺胺基甲酸酯或其他官能基，更典型地透過醚、醯胺或胺基甲酸酯官能基發生。同樣地，呈非環形式之BU典型地透過LB '-A-(其中LB '為M1 )或-LB -A-(其中LB 為M2 或M3 )中之A的以其他方式視情況經取代之C1 -C12 伸烷基部分連接至LSS 之M1 或M2 或LS 之M3 ，其為在C1 -C12 伸烷基部分之連接至M1 或M2 之馬來醯亞胺或琥珀醯亞胺環系統之亞胺型氮原子或M3 之醯胺氮的相同碳處由非環鹼性單元取代，此由M2 之琥珀醯亞胺環系統之水解引起。
在一些態樣中，環狀鹼性單元藉由使非環鹼性單元在形式上環化至獨立地選自A/A1 之以其他方式視情況經取代之C1 -C12 烷基(Ra2 )(其鍵結至與非環鹼性單元相同之α碳)而併有非環BU之結構，因此形成螺環系統，使得環狀鹼性單元併入A/A1 之結構而非如當BU為非環時為A/A1 之取代基。在彼等態樣中，形式環化係對非環鹼性單元之鹼性胺氮進行，因此視兩個α碳取代基中之相對碳鏈長度而定，提供呈視情況經取代之對稱或不對稱螺C4 -C12 雜環基形式之環狀鹼性單元，其中鹼性氮現為鹼性骨架雜原子。為使該環化實質上保留環狀鹼性單元中非環鹼性單元之鹼性特性，非環鹼性單元氮之鹼性氮原子應為一級或二級胺而非三級胺之鹼性氮原子，因為此將在環狀鹼性單元之雜環基中產生四級銨化骨架氮。在非環鹼性單元形式環化至環狀鹼性單元之彼等態樣中，為了實質上保留鹼性氮在LSS 至LS 之轉化中幫助M2 水解為M3 之能力，此等一級連接子中之環狀鹼性單元的所得結構將典型地使其鹼性氮經定位使得鹼性氮原子與螺C4 -C12 雜環基組分之螺碳之間***不超過三個且典型地一個或兩個碳原子。併入A/A1 之環狀鹼性單元以及具有此等環狀鹼性單元作為組分之LSS 及LS 一級連接子由本發明之實施態樣進一步描述。
除非另外說明或上下文暗示，否則如本文所用之「水解-增強部分」係指視情況存在於LSS 一級連接子及其水解產物LS 之LB '-A-或-LB -A-中的第一視情況存在之延伸體單元(A)內的拉電子基團或部分。當作為LDC/ADC之藥物連接子部分中LSS 之A/A1 (其中A/A1 鍵結至M2 部分之醯亞胺氮)的組分存在時，在一些態樣中，水解-增強[HE]部分增加該部分中之琥珀醯亞胺羰基之親電性或對其具有極小之影響，此取決於其因[HE]之拉電子效應而毗鄰該M2 部分的程度，從而促進其轉化為LS 一級連接子之M3 部分。在A/A1 分別併有環狀鹼性單元或非環鹼性單元或經環狀鹼性單元或非環鹼性單元取代之情況下，[HE]對M2 之羰基的藉由誘導而增加水解為M3 之速率的潛在效應及任一類型之BU的上述效應得到調節，使得在自包含式 M1 -A(BU)-[HE]-AO /A'a' -之LB '-A-結構(兩種變化型式由式M1 -A(BU)-及M1 -A1 (BU)-[HE]-A2 -表示，其中A/A1 與[HE]組合)的藥物連接子化合物製備配體藥物共軛物期間，不會在可感知程度上發生M1 之過早水解。反之，BU及[HE]促進水解在控制條件下(如當故意使pH值增加以便降低鹼性單元之質子化狀態時)將配體藥物共軛物化合物之通式 -M2 -A(BU)-[HE]-AO /A'a' -或更特定而言式-M2 -A(BU)-或 -M2 -A1 (BU)-A2 -之-LB -A-結構轉化為其對應式 -M3 -A(BU)-[HE]-AO /A'a' -、-M3 -A(BU)-或 M3 -A1 (BU)-[HE]-A2 -之組合效應使得不需要過度莫耳過量之藥物連接子化合物來補償其M1 部分之水解。因此，靶向劑之反應性硫醇官能基之硫原子與M1 之馬來醯亞胺環系統的提供連接至M2 之琥珀醯亞胺環系統之靶向配體單元的邁克爾加成典型地以有效與M1 水解競爭的速率進行。在不受理論約束之情況下，咸信在低pH值下，如例如當BU之鹼性胺呈TFA鹽形式時，藥物連接子產物中M1 之過早水解比當使用適當緩衝劑使pH值升高至適合於鹼催化時慢得多，且可接受之莫耳過量之藥物連接子化合物可適當補償在完成或接近完成靶向劑之反應性硫醇官能基之硫原子與藥物連接子化合物之M1 部分的邁克爾加成之時間過程期間出現的歸因於過早M1 水解之任何損失。
如先前所論述，由任一類型之鹼性單元引起的羰基水解之增強取決於其官能基之鹼性及該鹼性官能基相對於M1 /M2 羰基之距離。典型地，[HE]為定位於鍵結至M2 或由其衍生之M3 的A/A1 之C1 -C12 伸烷基之末端遠端的羰基部分或其他含羰基官能基，且當B不存在且A為單一離散單元時，亦提供與A2 或與存在之視情況存在之二級連接子的共價連接。除酮外之含羰基官能基包括酯、胺基甲酸酯、碳酸酯及尿素。當[HE]為具有LSS 一級連接子之ADC之藥物連接子部分中的除酮外之含羰基官能基時，該官能基之與A/A1 共享之羰基部分典型地在其如當[HE]為 -C(=O)-X-(其中X為-O-或視情況經取代之-NH-)時與M2 之醯亞胺氮原子之連接位點遠端鍵結至A/A1 之以其他方式視情況經取代之C1 -C12 伸烷基。在一些態樣中，[HE]部分可充分遠離與A/A1 共價鍵結之醯亞胺氮，使得看不到對含M2 部分之琥珀醯亞胺羰基-氮鍵之水解敏感性的可辨別影響或影響微小，但反而是主要由BU驅動。
除非另外說明或上下文暗示，否則如本文所用之「延伸體單元」係指配體藥物共軛物(諸如抗體藥物共軛物)之藥物連接子化合物或藥物連接子部分中連接子單元之一級或二級連接子中視情況存在之有機部分，其將靶向配體單元(L)與視情況存在之二級連接子(當該連接子存在時)物理分離。當連接子單元包含LSS 或LS 一級連接子時，第一視情況存在之延伸體存在，因為其為此等類型之一級連接子提供鹼性單元。當該視情況存在之延伸體單元中由配體單元不存在引起之空間緩解不足以允許有效處理二級連接子以便以游離藥物形式釋放藥物單元時，在任何類型之一級連接子中亦可能需要LR 中存在第一視情況存在之延伸體單元(A)。或者，或除空間緩解之外，亦可包括彼等視情況存在之組分以獲致製備藥物連接子化合物時之合成容易性。在一些態樣中，當下標b為1時，第一或第二視情況存在之延伸體單元(分別為A或A')為單一單元或可含有多個亞單元(如例如當A具有由-A1 -[HE]-A2 -表示之兩個亞單元時)。在其他態樣中，當下標b為0時，典型地，A為一個獨特單元或當下標b為0且下標a'為1時具有兩個獨特亞單元。在其他態樣中，B/A’具有2至4個獨立選擇之獨特亞單元。
在一些態樣中，當LR 為LSS /LS 時，除共價連接至藥物連接子化合物之M1 或LDC/ADC化合物中之藥物連接子部分之M2 /M3 之外，A如在A[HE](AO /A'不存在)或A1 -[HE]-A2 (AO /A'存在)(一般表示為A-[HE]-AO /Aa' -)中視情況透過AO /A'a' 鍵結至分枝單元(B)或存在之視情況存在之二級連接子(LO )之W，其中A/A1 及AO /Aa' 當以A2 存在時亦為LSS /LS 之組分。
在一些態樣中，A或A'或此等延伸體單元中之任一者的亞單元具有式-LP (PEG)-，其中如別處所定義LP 為平行連結單元且PEG為PEG單元。因此，在彼等態樣中之一些中，其中下標b為0且下標a'為1之配體藥物共軛物或藥物連接子化合物之藥物連接子部分中的連接子單元含有式-A1 -[HE]-LP (PEG)-，其中A'為-LP (PEG)-且以A2 存在。在其中下標b為1且AO 作為A2 存在之其他彼等態樣中，配體藥物共軛物或藥物連接子化合物之藥物連接子部分中的連接子單元含有式-A1 -[HE]-LP (PEG)-B-。在其他態樣中，下標b為1且下標a’為1，配體藥物共軛物或藥物連接子化合物含有式-A-[HE]-AO -B-LP (PEG)，其中A’為LP (PEG)。
在一些態樣中，當下標a為1使得第一視情況存在之延伸體單元(A)存在時，該單元典型地具有至少一個碳原子，其中該原子將LB /LB ’連接至[HE]。在彼等態樣中之一些中，其中LB '為藥物連接子化合物之LSS '一級連接子之LB '，該延伸體單元包含C1 -C12 伸烷基部分，該C1 -C12 伸烷基部分經鹼性單元取代或併有鹼性單元且以其他方式視情況經取代且其基團碳原子中之一者連接至馬來醯亞胺氮原子且另一者連接至[HE]，其中[HE]為存在之視情況存在之水解增強部分。在其他態樣中，當LR '不為LSS '，但仍然包含馬來醯亞胺部分或另外一些LB '部分時，LB '連接至視情況存在之第一延伸體單元(A)，其在一些態樣中為視情況經取代之C1 -C12 伸烷基，其視情況與[HE]組合。因此，在其中LR '為LSS '之一些態樣中，第一視情況存在之延伸體單元存在且包含C1 -C12 伸烷基部分、[HE]及視情況存在之亞單元(當下標b為1時為AO 或當下標b為0時為A'a' )，其在LR '為LSS 時全部為LR '之組分，其中A連接至B，B為LR '或W之組分，其為LO 中C1 -C12 伸烷基部分連接至醯亞胺氮原子之位點遠端之組分。在其他態樣中，當下標a為1且A作為單一離散單元存在或具有兩個亞單元時，A具有通式 -A-[HE]-AO /Aa' -，其中AO /A'a' 為A之視情況存在之亞單元，或當AO 作為A之第二亞單元存在且下標b為1時或當下標a'為1且下標b為0使得A'作為A之第二亞單元存在時更特定而言具有式-A1 -[HE]-A2 -。在此類態樣中，AO /A2 或A’/A2 為α-胺基酸、β-胺基酸或其他含胺酸殘基。
除非另外說明或上下文暗示，否則如本文所用之「分枝單元」係指三官能或多官能有機部分，其為連接子單元(LU)之視情況存在之組分。當單一藥物連接子部分中存在多個-LO -D部分時，分枝單元(B)存在於式1A 之LDC/ADC的式1A 之藥物連接子部分之一級連接子中。在具有前述一般式之LDC/ADC中，分枝單元不存在或存在由Bb 之下標b指示，其中下標b分別為0或1。為了併入一級連接子中，分枝單元為至少三官能的。歸因於每個式-LU-D之藥物連接子部分有多個-LO -D部分而具有分枝單元的藥物連接子或LDC/ADC化合物典型地具有含有式-A'a' -W-Yy -之各二級連接子(LO )，其中A'為第二視情況存在之延伸體單元；下標a'為0或1，分別指示A'不存在或存在；W為肽可裂解單元；Y為間隔子單元；且下標y為0、1或2，分別指示間隔子單元不存在或存在一個或兩個。
在一些態樣中，天然或非天然胺基酸殘基或具有官能化側鏈之另一含胺酸化合物之殘基充當三官能分枝單元用於連接兩個-LO -D部分。在彼等態樣中之一些中，B為呈L-組態或D-組態之離胺酸、麩胺酸或天冬胺酸殘基，其中ε-胺基、γ-羧酸或β-羧酸官能基分別與其胺基及羧酸端一起與LU之其餘部分內的B相互連接。用於連接3或4個-LO -D部分之具有更大官能性的分枝單元典型地包含必需數目之三官能亞單元。
除非另外說明或上下文暗示，否則如本文所用之「天然胺基酸」係指除非另外指明或上下文暗示，否則呈L或D-組態之天然存在之胺基酸，即精胺酸、麩醯胺酸、***酸、酪胺酸、色胺酸、離胺酸、甘胺酸、丙胺酸、組胺酸、絲胺酸、脯胺酸、麩胺酸、天冬胺酸、蘇胺酸、半胱胺酸、甲硫胺酸、白胺酸、天冬醯胺、異白胺酸及纈胺酸或其殘基。
除非另外說明或上下文暗示，否則如本文所用之「非天然胺基酸」係指含α-胺基之酸或其殘基，其具有天然胺基酸之骨架結構，但具有不存在於天然胺基酸中的連接至α碳之側鏈基團。
除非另外說明或上下文暗示，否則如本文所用之「非經典胺基酸」係指胺取代基不鍵結至羧酸之α碳且因此不為α-胺基酸的含胺酸化合物。非經典胺基酸包括β-胺基酸，其中亞甲基***天然胺基酸或非天然胺基酸中之羧酸與胺基官能基之間。
除非另外說明或上下文暗示，否則如本文所用之「肽」係指兩個或更多個胺基酸之聚合物，其中一個胺基酸之羧酸基團與肽序列中下一胺基酸之α-胺基形成醯胺鍵。用於製備多肽中之醯胺鍵的方法另外提供於醯胺之定義中。肽可包含呈L-組態或D-組態之天然存在之胺基酸及/或非天然及/或非經典胺基酸。
如本文所定義之「蛋白酶」係指能夠酶促裂解羰基-氮鍵(諸如典型地存在於肽中之醯胺鍵)之蛋白質。蛋白酶歸類為六大類別：絲胺酸蛋白酶、蘇胺酸蛋白酶、半胱胺酸蛋白酶、麩胺酸蛋白酶、天冬胺酸蛋白酶及金屬蛋白酶，如此命名係由於活性位點中之催化殘基主要負責裂解其受質之羰基-氮鍵。蛋白酶之特徵為各種特異性，其依賴於羰基-氮鍵N端及/或C端側之殘基的身分及其各種分佈(細胞內及細胞外)。
調控蛋白酶典型地為細胞內蛋白酶，其為調控細胞活性所需的，細胞活性在異常或其他不希望之細胞中有時變得異常或失調。在一些情況下，當肽可裂解單元係有關具有細胞內優先分佈之蛋白酶時，該蛋白酶為調控蛋白酶，其參與細胞維持或增殖。彼等蛋白酶包括組織蛋白酶。組織蛋白酶包括絲胺酸蛋白酶、組織蛋白酶A、組織蛋白酶G、天冬胺酸蛋白酶組織蛋白酶D、組織蛋白酶E及半胱胺酸蛋白酶、組織蛋白酶B、組織蛋白酶C、組織蛋白酶F、組織蛋白酶H、組織蛋白酶K、組織蛋白酶L1、組織蛋白酶L2、組織蛋白酶O、組織蛋白酶S、組織蛋白酶W及組織蛋白酶Z。
除非另外說明或上下文暗示，否則如本文所用之「肽可裂解單元」係指配體藥物共軛物化合物之藥物連接子部分或藥物連接子化合物之二級連接子內的有機部分，其為蛋白酶提供識別位點且能夠在該蛋白酶之酶促作用後以游離藥物形式酶促釋放其所結合之藥物單元(D)。
用於由蛋白酶裂解之識別位點有時限於由存在於異常細胞(諸如癌細胞)中之蛋白酶識別的或為附近異常細胞之環境所特有但亦可存在於正常細胞內的由配體藥物共軛物靶向之名義上正常之細胞內的彼等位點。對於該目的，肽典型地對循環蛋白酶具抗性以使游離藥物或其前驅體之過早釋放減至最少，否則此可能會引起因全身暴露於該藥物引起之脫靶有害事件。在一些態樣中，肽將具有一或多個D-胺基酸或非天然或非經典胺基酸以便具有該抗性。在彼等態樣中之一些中，序列將包含二肽或三肽，其中P2'位點含有D-胺基酸且P1'位點含有除L-脯胺酸外之20種天然存在之L-胺基酸中之一者。
在彼等態樣中，反應性位點在免疫選擇性結合目標抗原之後更可能進行酶促操作。在彼等態樣中之一些中，目標抗原位於異常細胞上，使得識別位點更可能在配體藥物共軛物化合物細胞內化至目標異常細胞中之後進行酶促操作。因此，與正常細胞相比，彼等異常細胞將以更高拷貝數展示目標抗原從而緩解中靶有害事件。在其他彼等態樣中，目標抗原位於異常細胞之環境內及其所特有的正常細胞上，使得識別位點更可能在配體藥物共軛物化合物細胞內化至此等目標正常細胞中之後進行酶促操作。因此，與遠離癌細胞位點之正常細胞相比，彼等正常細胞將以更高拷貝數展示目標抗原從而緩解中靶有害事件。
在以上態樣中之任一者中，與正常組織勻漿相比，在腫瘤組織勻漿內蛋白酶對識別位點之反應性更大。在一些態樣中，該更大反應性係歸因於與正常組織之正常細胞中的細胞內蛋白酶活性相比腫瘤組織之目標細胞內細胞內蛋白酶活性之量更大，及/或正常組織之間隙中之蛋白酶活性與傳統配體藥物共軛物之肽可裂解單元之該活性相比有所降低。在彼等態樣中，細胞內蛋白酶為調控蛋白酶，且肽可裂解單元之肽鍵除了能夠被腫瘤組織勻漿之蛋白酶(相較於正常組織勻漿中之蛋白酶)選擇性裂解之外，也能夠被細胞內調控蛋白酶(相較於血清蛋白酶)選擇性裂解。
含有肽可裂解單元之二級連接子典型地具有式-A'a' -W-Yy -，其中當下標b為1時，A’為第二視情況存在之間隔子單元；下標a’為0或1，W為肽可裂解單元；Y為視情況存在之間隔子單元；且下標y為0、1或2。當下標b為0且下標a’為1時，A’變為A之亞單元，使得二級連接子具有式-W-Yy -。對於任一式之二級連接子，當下標y為0時，蛋白酶作用於包含肽可裂解單元之肽序列使得D直接釋放，或當下標y為1時產生作為游離藥物之前驅體的式 Y-D之藥物-連接子片段，其中Y典型地經歷自降解性以提供游離藥物，或當下標y為2時產生式Y-Y'-D之第一藥物-連接子片段，其中Y為第一間隔子單元，其經歷自降解性以提供式Y'-D之第二藥物連接子片段，其中Y'為第二間隔子單元，該第二間隔子單元分解以完成D作為游離藥物之釋放。
在一些態樣中，其中二級連接子含有肽可裂解單元之藥物連接子化合物由式IC 之結構表示：
Figure 02_image085
且配體藥物共軛物之對應藥物連接子部分由式1D 或式1E 之結構表示：
Figure 02_image087
其中W為肽可裂解單元，且式IC 之M1 -Aa -Bb -、式1D 之-M2 -Aa -Bb -及式1E 之-M3 -Aa -Bb -為一級連接子，其中M1 為馬來醯亞胺部分；M2 為琥珀醯亞胺部分；M3 為琥珀酸醯胺部分；Y為視情況存在之間隔子單元，使得下標y為0或1，或Yy 為-Y-Y'，使得下標y為2，且Y及Y'分別為第一及第二間隔子單元，且其餘可變基團如關於式IA 之藥物連接子化合物及關於式1A 之藥物連接子部分所定義。本發明之藥物連接子化合物之LSS '一級連接子(其含有M1 部分)及一些LDC/ADC中之藥物連接子部分之LSS 一級連接子(其含有M2 部分)為其中A或其亞單元經鹼性單元取代或併有鹼性單元的彼等式。其他一級連接子為LS 一級連接子，其藉由使琥珀醯亞胺部分水解以提供式1D 之含M3 部分而衍生自以上式1C 之含M2 之LSS 一級連接子。
在以上態樣中之任一者中，特定地由目標細胞所產生或位於目標細胞內的蛋白酶裂解之醯胺鍵連接間隔子單元(Y)或藥物單元(若Y不存在)之胺基。因此，蛋白酶作用於W中之肽序列使得D以游離藥物或其前驅體Yy -D形式釋放，該前驅體自發片段化以提供游離藥物。
除非另外說明或上下文暗示，否則如本文所用之「間隔子單元」係指藥物連接子化合物或配體藥物共軛物之藥物連接子部分之連接子單元內式-A'a' -W-Yy -之二級連接子(LO )中的部分，其中下標y為1或2，指示存在1或2個間隔子單元，其中A'為第二視情況存在之間隔子單元，其在如本文所描述之一些態樣中變為與二級連接子共價連接並作為存在之第一視情況存在之間隔子單元之亞單元的一級連接子的一部分，下標a'為0或1指示A'不存在或存在；Y為間隔子單元且W為式-Pn …[P3]-[P2]-[P1]-或 -Pn …[P3]-[P2]-[P1]-[P-1]-之肽可裂解單元，其中下標n在0至12(例如0-10、3-12或3-10)範圍內，且P1、P2及P3為賦予如本文所描述相較於正常組織勻漿對由腫瘤組織勻漿引起之蛋白酶裂解的選擇性之胺基酸殘基。當下標y為1時，間隔子單元共價鍵結至W及藥物單元(D)，或當下標y為2時共價鍵結至與D共價鍵結之另一此類部分(Y’)。如本發明之實施態樣進一步描述蛋白酶作用於W起始D作為游離藥物之釋放。
如本文所用之「自降解性部分」係指自降解性間隔子單元(Y)內之雙官能部分，其中自降解性部分共價連接至D之雜原子，或Y與D之間共享之官能基(其在允許時視情況經取代)，且亦透過另一視情況經取代之雜原子(J)共價連接至肽可裂解單元，其中J為-NH-或醯胺官能基內適當經取代之氮原子，使得自降解性部分將此等藥物連接子組分併入除非經活化否則通常穩定之三部分分子中。
在P1/P-1與Y之間之肽鍵裂解後，D或第一藥物連接子片段(其為Y'-D)藉由其自降解性間隔子單元之自降解性部分的自毀自發地與該三部分分子分離。在一些態樣中，***Y'-D或D與鍵結至W之Y的視情況經取代之雜原子J之間的自降解性部分間隔子單元之組分具有下式：-C6 -C24 伸芳基-C(R8 )(R9 )-、-C5 -C24 伸雜芳基-C(R8 )(R9 )-、-C6 -C24 伸芳基-C(R8 )=C(R9 )-或-C5 -C24 伸雜芳基-C(R8 )=C(R9 )-，其視情況經取代，其中R8 及R9 如本發明之實施態樣所描述，且典型地為C6 -C10 伸芳基-CH2 -或C5 -C10 伸雜芳基 -CH2 -，其中伸(雜)芳基視情況經取代，其中自降解性部分間隔子單元之組分能夠藉由1,4或1,6-消除經歷片段化以形成亞胺基-醌甲基化物或相關結構，且伴隨在J與W之間的蛋白酶可裂解鍵裂解後D或Y'-D之釋放。在一些態樣中，具有鍵結至J之上述組分的自降解性間隔子單元由以下例示：視情況經取代之對胺基苯甲醇(PAB)部分、鄰胺基苯甲基縮醛或對胺基苯甲基縮醛或電子學上類似於PAB基團之其他芳族化合物(亦即，PAB型)，諸如2-胺基咪唑-5-甲醇衍生物(參見例如Hay等人, 1999,Bioorg. Med. Chem. Lett. 9:2237)或其中對胺基苯甲醇(PAB)部分之苯基由伸雜芳基置換之芳族化合物。
在不受理論約束之情況下，併入連接子單元之自降解性間隔子單元之PAB或PAB型部分之伸芳基或伸雜芳基的芳族碳經J取代，其中J之推電子雜原子連接至W之裂解位點，使得該雜原子之推電子能力減弱(亦即，藉由將自降解性間隔子單元之自降解性部分併入連接子單元中掩蓋其EDG能力)。雜(伸芳基)之另一取代基為苯甲基碳，其連接至D之視情況經取代之雜原子、Y與D之間共享之視情況經取代之官能基或鍵結至藥物單元(D)之第二間隔子單元(Y')，其中苯甲基碳連接至中央伸芳基或伸雜芳基之另一芳族碳原子，其中帶有減弱之推電子雜原子之芳族碳毗鄰該苯甲基碳原子(亦即，1,2-關係)，或自該苯甲基碳原子移除兩個其他位置(亦即，1,4-關係)。官能化EDG雜原子經選擇使得在加工W之裂解位點後，被遮蔽雜原子之推電子能力恢復，因此觸發1,4-消除或1,6-消除以將-D以游離藥物形式自苯甲基取代基排出，或當Y'-D釋放時，Y'之後續自降解性提供游離藥物，從而引發治療作用。例示性自降解性部分及具有彼等自降解性部分之自降解性間隔子單元藉由本發明之實施態樣進行例示。
自降解性基團之其他實例包括但不限於電子學上類似於PAB基團之芳族化合物，諸如2-胺基咪唑-5-甲醇衍生物(參見例如Hay等人, 1999, Bioorg. Med. Chem. Lett. 9:2237)及鄰胺基苯甲基縮醛或對胺基苯甲基縮醛。可使用在醯胺鍵水解後經歷環化之間隔子，諸如經取代及未經取代之4-胺基丁酸醯胺(參見例如Rodrigues等人, 1995, Chemistry Biology 2:223)、適當經取代之雙環[2.2.1]及雙環[2.2.2]環系統(參見例如Storm等人, 1972, J. Amer. Chem. Soc. 94:5815)及2-胺基苯丙酸醯胺(參見例如Amsberry等人, 1990, J. Org. Chem. 55:5867)。消除在甘胺酸之a位經取代之含胺藥物(參見例如Kingsbury等人, 1984, J. Med. Chem. 27:1447)亦為自降解性基團之實例。在一個實施態樣中，間隔子單元為如WO 2007/011968中所描述之分枝雙(羥甲基)苯乙烯(BHMS)單元，其可用於併入及釋放多種藥物。其他自降解性間隔子描述於WO 2005/082023中。
除非另外說明或上下文暗示，否則如本文所用之「亞甲基胺基甲酸酯單元」係指能夠自降解之有機部分且***配體藥物共軛物或藥物連接子化合物之連接子單元內的第一自降解性間隔子單元與藥物單元之間且因而為例示性第二間隔子單元。
鍵結至藥物單元之亞甲基胺基甲酸酯(MAC)單元由式III表示：
Figure 02_image089
或其醫藥學上可接受之鹽，其中波形線指示亞甲基胺基甲酸酯單元共價連接至第一自降解性間隔子單元(Y)；D為具有併入亞甲基胺基甲酸酯單元中之官能基(例如羥基、硫醇、醯胺或胺官能基)的藥物單元；T*為來自該官能基之雜原子，其包括氧、硫或氮，如視情況經取代之-NH-。在包含MAC單元之連接子單元裂解後，鍵結至作為第二自降解性間隔子單元(Y')之該MAC單元的第一自降解性間隔子單元(Y)經歷片段化以釋放式III之-Y’-D。MAC單元接著自發分解以完成D作為游離藥物之釋放，其假定機制由本發明之實施態樣指示。
如本文所用之「PEG單元」係指包含具有如下式之乙二醇亞單元重複之聚乙二醇部分(PEG)的基團，
Figure 02_image091
。
PEG包括多分散PEG、單分散PEG及離散PEG。多分散PEG為諸多種大小及分子量之非均勻混合物，而單分散PEG典型地自非均勻混合物純化而來且因此提供單一鏈長度及分子量。離散PEG為以逐步方式而不經由聚合過程合成之化合物。離散PEG提供具有確定及指定鏈長度之單一分子。
PEG單元包含至少2個亞單元、至少3個亞單元、至少4個亞單元、至少5個亞單元、至少6個亞單元、至少7個亞單元、至少8個亞單元、至少9個亞單元、至少10個亞單元、至少11個亞單元、至少12個亞單元、至少13個亞單元、至少14個亞單元、至少15個亞單元、至少16個亞單元、至少17個亞單元、至少18個亞單元、至少19個亞單元、至少20個亞單元、至少21個亞單元、至少22個亞單元、至少23個亞單元或至少24個亞單元。一些PEG單元包含多至72個亞單元。
如本文所用之「PEG加帽單元」為將PEG單元之游離及未拴繫末端封端之名義上之非反應性有機部分或官能基且在一些態樣中不為氫。在彼等態樣中，PEG加帽單元為甲氧基、乙氧基或其他C1 -C6 醚，或為-CH2 -CO2 H，或其他適合之部分。因此，醚、-CH2 -CO2 H、 -CH2 CH2 CO2 H或其他適合之有機部分充當PEG單元之末端PEG亞單元的「帽」。
除非另外說明或上下文暗示，否則如本文所用之「平行連結單元」係指藥物連接子化合物或配體藥物共軛物化合物之藥物連接子部分之有機部分，其典型地作為第一或第二延伸體單元之亞單元存在於其連接子單元中，其中平行連結單元(LP )能夠使與其連接之PEG單元以平行取向定向至疏水性的藥物單元(本文中稱為疏水性藥物單元)，以便至少部分降低該藥物單元之疏水性。LP 及相關PEG單元及PEG加帽單元之結構由特定地以引用之方式併入本文中之WO 2015/5057699描述，且在一些態樣中，LP 為三官能α-胺基酸、β-胺基酸或其他三官能含胺酸殘基。
本文所用之「在細胞內裂解」、「細胞內裂解」及類似術語係指目標細胞內配體藥物共軛物等所發生之代謝過程或反應，藉此藥物單元與共軛物之配體單元之間透過其連接子單元進行之共價連接斷裂，從而引起在目標細胞內D作為游離藥物之釋放。如本文所描述，在一些實施態樣中，D最初以藥物單元與一或多個自降解性間隔子之加合物的形式釋放，其自降解性間隔子隨後自發與藥物單元分離從而以游離藥物形式釋放D。
除非另外說明或上下文暗示，否則如本文所用之「血液學惡性腫瘤」係指來源於淋巴或骨髓來源之細胞的血細胞腫瘤，且與術語「液體腫瘤」同義。血液學惡性腫瘤可分類為惰性、中度侵襲性或高度侵襲性的。
除非另外說明或上下文暗示，否則如本文所用之「淋巴瘤」係指通常自淋巴來源之過度增殖之細胞發展之血液學惡性腫瘤。淋巴瘤有時歸類為兩種主要類型：霍奇金淋巴瘤(HL)及非霍奇金淋巴瘤(NHL)。淋巴瘤亦可根據表型、分子或細胞形成標記物根據最類似於癌細胞之正常細胞類型進行歸類。根據該歸類法之淋巴瘤亞型包括但不限於成熟B細胞贅瘤、成熟T細胞及自然殺手(NK)細胞贅瘤、霍奇金淋巴瘤及免疫缺陷相關淋巴增生性病症。淋巴瘤亞型包括前T細胞淋巴母細胞性淋巴瘤(有時稱為淋巴母細胞性白血病，因為骨髓中產生T細胞淋巴母細胞)、濾泡性淋巴瘤、彌漫性大B細胞淋巴瘤、套細胞淋巴瘤、B細胞慢性淋巴細胞性淋巴瘤(有時歸因於外周血受累而稱為白血病)、MALT淋巴瘤、伯基特氏淋巴瘤(Burkitt's lymphoma)、蕈樣真菌病及其多侵襲性變異體賽塞里氏病(Sézary's disease)、未另外規定之外周T細胞淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤之結節性硬化及霍奇金淋巴瘤之混合細胞性亞型。
除非另外說明或上下文暗示，否則如本文所用之「白血病」係指通常自骨髓來源之過度增殖之細胞發展之血液學惡性腫瘤，且包括但不限於急性淋巴母細胞性白血病(ALL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性淋巴細胞性白血病(CLL)、慢性骨髓性白血病(CML)及急性單核細胞性白血病(AMoL)。其他白血病包括毛細胞白血病(HCL)、T細胞淋巴細胞性白血病(T-PLL)、大顆粒淋巴細胞性白血病及成人T細胞白血病。
除非另外說明或上下文暗示，否則如本文所用之「過度增殖之細胞」係指以不希望之細胞增殖或異常高速率或持續狀態之細胞***或與周圍正常組織不相關或不協調之其他細胞活性為特徵之異常細胞。在一些態樣中，過度增殖之細胞為過度增殖之哺乳動物細胞。在其他態樣中，過度增殖之細胞為如本文所定義之受過度刺激之免疫細胞，在刺激中止之後發生其持續狀態之細胞***或活化，該刺激可能最初已引起其細胞***之改變。在其他態樣中，過度增殖之細胞為轉型之正常細胞或癌細胞，且其不受控制及進行狀態之細胞增殖可導致良性、潛在地為惡性的(惡變前的)或明顯為惡性的腫瘤。由轉型之正常細胞或癌細胞引起之過度增殖狀況包括但不限於表徵為癌前期、增生、發育異常、腺瘤、肉瘤、胚細胞瘤、癌瘤、淋巴瘤、白血病或乳頭狀瘤的狀況。癌前期通常定義為展現組織變化且與增加之癌症發展風險相關且有時具有一些但並非全部表徵癌症之分子及表型特性的病變。激素相關或激素敏感性癌前期包括但不限於***上皮內瘤樣病變(PIN)，特定而言高惡性PIN (HGPIN)、非典型性小腺泡增殖(ASAP)、子宮頸發育異常及導管原位癌。增生泛指器官或組織內超出通常所見且可能會引起嚴重器官腫大或形成良性腫瘤或生長之細胞增殖。增生包括但不限於子宮內膜增生(子宮內膜異位)、良性***肥大及導管增生。
除非另外說明或上下文暗示，否則如本文所用之「正常細胞」係指經歷與正常組織之細胞完整性之維持或循環淋巴細胞或血細胞之補充(其為受調控之細胞周轉或因損傷而需要之組織修復所需的)或與由病原體暴露或其他細胞損害引起之受調控之免疫或發炎反應有關的協調細胞***的細胞，其中所引起之細胞***或免疫反應在必需之維持、補充或病原體清除完成後終止。正常細胞包括正常增殖之細胞、正常休眠細胞及正常活化之免疫細胞。正常細胞包括正常休眠細胞，其為呈靜息Go 狀態且尚未受應力或促***原刺激之非癌細胞，或為通常為非活性或尚未由促炎性細胞因子暴露活化之免疫細胞。
除非另外說明或上下文暗示，否則在「異常細胞」作為術語用於本文中時，係指以對外界刺激之不成比例之反應或因不能適當調控其自發細胞內活性(在一些情況下具有突變來源)而變得功能失調的正常細胞。異常細胞包括過度增殖之細胞及受過度刺激之免疫細胞，如此等術語在別處所定義。彼等細胞當存在於有機體中時典型地妨礙以其他方式正常之細胞發揮功能，從而引起對有機體之損害且破壞能力隨時間推移將增加。異常細胞包括癌細胞、過度活化之免疫細胞及其他不想要之有機體細胞。異常細胞亦可指名義上正常之細胞，該等細胞位於外表異常細胞之環境中，但其支持此等其他異常細胞(諸如腫瘤細胞)之增殖及/或存活，使得靶向名義上正常之細胞間接抑制腫瘤細胞之增殖及/或存活。
除非另外說明或上下文暗示，否則如本文所用之「受過度刺激之免疫細胞」係指參與先天性或適應性免疫且以在刺激中止之後出現或在不存在任何外部損害之情況下出現的異常持久增殖或不適當之刺激狀態為特徵的細胞，該刺激可能最初已引起增殖或刺激發生變化。時常地，持久增殖或不適當之刺激狀態產生疾病狀態或疾患之慢性炎症狀態特徵。在一些情況下，可最初已引起增殖或刺激變化之刺激並非可歸因於外部損害，而為內部衍生的，如在自體免疫疾病中。在一些態樣中，受過度刺激之免疫細胞為已透過慢性促炎性細胞因子暴露而過度活化之促炎性免疫細胞。
在本發明之一些態樣中，配體藥物共軛物組合物之配體藥物共軛物化合物結合優先由異常增殖或不適當或持續活化之促炎性免疫細胞展示的抗原。彼等免疫細胞包括傳統活化之巨噬細胞或1型T輔助(Th1)細胞，其產生干擾素-γ(INF-γ)、介白素-2(IL-2)、介白素-10(IL-10)及腫瘤壞死因子-β(TNF-β)，其為參與巨噬細胞及CD8+ T細胞活化之細胞因子。
除非另外說明或上下文暗示，否則「生物可用性」係指向患者投與之給定量之藥物的全身可用性(亦即，血液/血漿水準)。生物可用性為絕對術語，其指示藥物自所投與之劑型到達全身循環之時間(速率)及總量(程度)之量測。
除非另外說明或上下文暗示，否則「個體」係指具有可歸因於異常細胞之過度增殖、炎性或免疫病症或其他病症或傾向於患此類病症且將因投與有效量之配體藥物共軛物而受益的人類、非人類靈長類動物或哺乳動物。個體之非限制性實例包括人類、大鼠、小鼠、豚鼠、猴、豬、山羊、奶牛、馬、狗、貓、鳥及家禽。典型地，個體為人類、非人類靈長類動物、大鼠、小鼠或狗。
除非另外說明或上下文暗示，否則「載劑」係指與化合物一起投與之稀釋劑、佐劑或賦形劑。此類醫藥載劑可為液體，諸如水及油，包括石油、動物、蔬菜或合成來源之油，諸如花生油、大豆油、礦物油、芝麻油。載劑可為鹽水、***膠、明膠、澱粉糊、滑石、角蛋白、膠態二氧化矽、尿素。此外，可使用助劑、穩定劑、增稠劑、潤滑劑及著色劑。在一個實施態樣中，當向個體投與時，化合物或組合物及醫藥學上可接受之載劑為無菌的。水為當靜脈內投與化合物時之例示性載劑。亦可採用鹽水溶液及右旋糖及甘油水溶液作為液體載劑，尤其對於可注射溶液。適合之醫藥載劑亦包括賦形劑，諸如澱粉、葡萄糖、乳糖、蔗糖、明膠、麥芽、稻米、穀粉、白堊、矽膠、硬脂酸鈉、單硬脂酸甘油酯、滑石、氯化鈉、脫脂乳粉、甘油、丙烯、二醇、水及乙醇。本發明組合物(若需要)亦可含有微小量之潤濕劑或乳化劑，或pH緩衝劑。
除非上下文另外指出，否則如本文所用之「鹽形式」係指帶電荷之化合物與相對陽離子及/或相對陰離子離子締合以便形成總體中性之物質。在一些態樣中，透過母體化合物之鹼性或酸性官能基分別與外部酸或鹼的相互作用產生化合物之鹽形式。在其他態樣中，與相對陰離子締合之化合物之帶電荷原子如當氮原子發生四級銨化時在自發解離為中性物質在不改變母體化合物之結構完整性之情況下不能發生的意義上為永久性。因此，化合物之鹽形式可涉及該化合物內經四級銨化之氮原子及/或鹼性官能基之質子化形式及/或該化合物之離子化羧酸，其各自與相對陰離子離子締合。
在一些態樣中，鹽形式可由相同化合物內鹼性官能基與離子化酸性官能基之相互作用產生或涉及包括帶負電荷之分子，諸如乙酸根離子、琥珀酸根離子或其他相對陰離子。因此，呈鹽形式之化合物可在其結構中具有超過一個帶電荷之原子。在母體化合物之多個帶電荷原子為鹽形式之一部分的情況下，該鹽形式可具有多個相對離子，使得化合物之鹽形式可具有一或多個帶電荷之原子及/或一或多個相對離子。相對離子可為使母體化合物上之相反電荷穩定的任何帶電荷之有機或無機部分。
當化合物之鹼性官能基(諸如一級、二級或三級胺或其他鹼性胺官能基)與pKa適合於該鹼性官能基之質子化之有機或無機酸相互作用時，或當化合物之具有適合之pKa 的酸官能基(諸如羧酸)與氫氧化物鹽(諸如NaOH或KOH)或強度適合於該酸官能基之去質子化之有機鹼(諸如三乙胺)相互作用時典型地獲得化合物之質子化鹽形式。在一些態樣中，呈鹽形式之化合物含有至少一個鹼性胺官能基，且因此使用此胺基可形成酸加成鹽，其包括環狀或非環鹼性單元之鹼性胺官能基。在藥物連接子化合物之情形中適合之鹽形式為不過度妨礙靶向劑與藥物連接子化合物之間提供配體藥物共軛物的縮合反應的鹽形式。
除非上下文另外指出，否則如本文所用之「醫藥學上可接受之鹽」係指其中相對離子為向預期個體投與鹽形式可接受的且包括無機及有機相對陽離子及相對陰離子之化合物鹽形式。對於鹼性胺官能基，諸如在環狀或非環鹼性單元中之彼等鹼性胺官能基，例示性醫藥學上可接受之相對陰離子包括但不限於硫酸根、檸檬酸根、乙酸根、草酸根、氯離子、溴離子、碘離子、硝酸根、硫酸氫根、磷酸根、酸式磷酸根、異菸酸根、乳酸根、水楊酸根、酸式檸檬酸根、酒石酸根、油酸根、單寧酸根、泛酸根、酒石酸氫根、抗壞血酸根、琥珀酸根、順丁烯二酸根、甲磺酸根、苯磺酸根、龍膽酸根、反丁烯二酸根、葡萄糖酸根、葡萄糖醛酸根、葡萄糖二酸根、甲酸根、苯甲酸根、麩胺酸根、甲烷磺酸根、乙烷磺酸根、苯磺酸根、對甲苯磺酸根及撲酸根(pamoate，亦即1,1'-亞甲基-雙-(2-羥基-3-萘甲酸鹽))。
典型地，醫藥學上可接受之鹽選自P. H. Stahl及C. G. Wermuth編輯,Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection and Use , Weinheim/Zürich: Wiley-VCH/VHCA, 2002中所描述之彼等醫藥學上可接受之鹽。鹽選擇取決於藥物產品必須展現之特性，包括視預期投與途徑而定在各種pH值下足夠之水溶性、對於處置而言適合之結晶度與流動特性及低吸濕性(亦即，吸水率相較於相對濕度)及藉由在加速條件下如當在冷凍乾燥調配物中時測定化學及固態穩定性(亦即，用於測定當儲存在40℃及75%相對濕度下時的降解或固態變化)得到之所需架儲期。
除非另外說明或上下文暗示，否則「抑制(inhibit/inhibition of)」及類似術語意謂降低可量測之量，或完全阻止不希望之活性或結果。在一些態樣中，不希望之結果或活性與異常細胞有關且包括構成疾病狀態之基礎的過度增殖或受過度刺激或其他失調之細胞活性。配體藥物共軛物對此類失調之細胞活性的抑制典型地在適合之測試系統中如在細胞培養物中(活體外)或在異種移植模型中(活體內)相對於未經處理之細胞(用媒劑(vehicle)處理之假樣品)來測定。典型地，靶向相關異常細胞上不存在或具有低拷貝數之抗原或經基因工程改造以不識別任何已知抗原的配體藥物共軛物用作陰性對照。
除非上下文另外指出，否則「治療(treat/ treatment)」及類似術語係指治療性治療，包括用於預防復發之預防措施，其中目標為抑制或減慢(減少)不希望之生理變化或病症，諸如癌症或來自慢性炎症之組織損傷的發展或擴散。典型地，此類治療性治療之有益或所需臨床益處包括但不限於可偵測或不可偵測之症狀緩和、疾病之程度減輕、疾病之狀態穩定(亦即不惡化)、疾病進展之延遲或減慢、疾病狀態之改善或減緩、及緩解(部分或全部)。「治療」亦可意謂與若不接受處理之預期存活或生活品質相比延長存活或增加生活品質。需要治療者包括已患有該病狀或病症者以及傾向於患該病狀或病症者。
在癌症之情形中，術語「治療」包括以下中之任一者或全部：抑制腫瘤細胞、癌細胞或腫瘤之生長；抑制腫瘤細胞或癌細胞之複製、抑制腫瘤細胞或癌細胞之擴散、減小整體腫瘤負荷或減少癌細胞數目或改善與癌症相關之一種或多種症狀。
除非另外說明或上下文暗示，否則「治療有效量」作為術語用於本文中時係指游離藥物或具有以游離藥物形式釋放之藥物單元之配體藥物共軛物有效治療哺乳動物之疾病或病症的量。在癌症之情況下，治療有效量之游離藥物或配體藥物共軛物可減少癌細胞數目；減小腫瘤尺寸、抑制(亦即，在某種程度上減慢且較佳阻止)癌細胞浸潤至外周器官中、抑制(亦即，在某種程度上減慢且較佳阻止)腫瘤轉移、在某種程度上抑制腫瘤生長及/或在某種程度上紓緩與癌症相關之症狀中之一或多者。在游離藥物或配體藥物共軛物可抑制現有癌細胞生長及/或殺死現有癌細胞之情況下，其可為細胞抑制性或細胞毒性的。對於癌症療法，功效可例如藉由評估疾病進展時間(TTP)從而確定反應率(response rate，RR)及/或總存活率(OS)來量測。
在由受過度刺激之免疫細胞引起之免疫病症之情況下，治療有效量之藥物可減少受過度刺激之免疫細胞數目、降低其刺激程度及/或減少浸潤至以其他方式正常之組織中及/或在某種程度上紓緩與歸因於受過度刺激之免疫細胞之失調免疫系統相關的症狀中之一或多者。對於歸因於受過度刺激之免疫細胞之免疫病症，可例如藉由評估一或多種炎性置換物(包括一或多種細胞因子水準，諸如IL-1β、TNFα、INFγ及MCP-1之水準)或經典被活化巨噬細胞的數量來量測功效。
在本發明之一些態樣中，配體藥物共軛物化合物與目標細胞(亦即，異常細胞，諸如過度增殖之細胞或受過度刺激之免疫細胞)表面之抗原締合，且接著，共軛物化合物在目標細胞內部透過受體介導之胞吞作用被吸收。在進入細胞內部後，共軛物之連接子單元內的一或多個裂解單元裂解，從而以游離藥物形式釋放藥物單元(D)。接著，因此釋放之游離藥物能夠在胞質液內遷移且誘導細胞毒性或細胞抑制活性，或在受過度刺激之免疫細胞之情況下可替代地抑制促炎性信號轉導。在本發明之另一態樣中，藥物單元(D)在目標細胞外部但在目標細胞附近從配體藥物共軛物化合物釋放，使得由該釋放產生之所得游離藥物局部化至所需作用位點且能夠隨後穿透該細胞而非在遠端位點過早釋放。2. 實施態樣
下文描述本發明之各個實施態樣，隨後為適用於本發明方法之組分(例如基團、試劑及步驟)的更詳細論述。關於方法組分之所選實施態樣中之任一者可適用於如本文所描述之本發明之每種態樣或其可與單一態樣有關。在一些態樣中，所選實施態樣可以適合於描述具有疏水性奧裡斯他汀F藥物單元之奧裡斯他汀配體藥物共軛物、藥物連接子化合物或其中間物的任何組合加以組合。2.1 配體藥物共軛物
本發明之配體藥物共軛物(LDC)化合物為具有透過中間連接子單元(LU)連接至配體單元之藥物單元的化合物，其中LU包含肽可裂解單元，與正常組織勻漿相比該肽可裂解單元更易發生由腫瘤組織勻漿蛋白分解裂解以實現以游離藥物形式釋放D，且其典型地具有式1 之結構：
Figure 02_image093
或其鹽，特定而言其醫藥學上可接受之鹽，其中L為配體單元；LU為連接子單元；D'表示1至4個藥物單元，其併有或在結構上對應於式-LU-(D)'之各藥物連接子部分之相同游離藥物；且下標p'為在1至24範圍內之整數，其中配體單元能夠選擇性結合目標異常細胞的抗原，其中目標抗原能夠與所結合之共軛物化合物一起內化以便隨後細胞內釋放游離藥物，其中配體藥物共軛物化合物中之各藥物連接子部分具有式1A 之結構：
Figure 02_image095
或其鹽，特定而言醫藥學上可接受之鹽，其中式1A 之藥物連接子部分之-LB -Aa -Bb -部分一般表示式1 之連接子單元(LU)的一級連接子(LR )。
其中波形線指示共價連接至L；LB 為配體共價結合部分；A為第一視情況存在之延伸體單元；下標a為0或1，分別指示A不存在或存在；B為視情況存在之分枝單元；下標b為0或1，分別指示B不存在或存在；D為藥物單元；且下標q為在1至4範圍內之整數；且LO 為具有以下結構之二級連接子部分：
Figure 02_image097
其中毗鄰A'之波形線指示LO 共價連接至一級連接子之位點；毗鄰Y之波形線指示LO 共價連接至藥物單元之位點；A'為第二視情況存在之間隔子單元，下標a'為0或1，分別指示A'不存在或存在；W為肽可裂解單元，Y為間隔子單元，且y為0、1或2，分別指示不存在或存在1或2個間隔子單元。
配體藥物共軛物組合物包含配體藥物共軛物化合物之分佈或集合且由式1 之結構表示，其中下標p'由下標p置換，其中下標p為在約2至約24範圍內之數字。
傳統配體藥物共軛物亦由式1 表示，但具有包含直接或透過Y間接共價連接至D之二肽的肽可裂解單元(W)，其中二肽經設計對於特定細胞內蛋白酶而言具選擇性，相對於正常細胞在異常細胞中該特定細胞內蛋白酶之活性上調。相比之下，本發明之共軛物係基於以下意外發現，可藉由適當設計之可裂解單元在仍對由自由循環之蛋白酶裂解具抗性的同時將包含異常細胞之組織內之總蛋白酶活性與包含正常細胞之正常組織內的該活性區別開。對於本發明共軛物，該區別藉由併有某些三肽之肽可裂解單元來實現，其中此等肽已藉由本文所描述之將來自包含異常細胞之組織勻漿之蛋白酶活性與正常組織勻漿之蛋白酶活性相比較的篩選方法加以鑑定，其中正常組織已知為當投與治療有效量之傳統配體藥物共軛物時哺乳動物個體所經歷之中靶及/或脫靶有害事件的來源。
因此，在本發明之原理實施態樣中，W為包含三肽之肽可裂解單元，該三肽提供與自由循環之蛋白酶相比由目標異常細胞的一或多種細胞內蛋白酶選擇性作用且亦與正常組織勻漿內之蛋白酶相比由腫瘤組織勻漿內之蛋白酶選擇性作用的識別位點。對於癌症之治療，肽可裂解單元之三肽序列經選擇使得已知為由投與治療有效量之傳統配體藥物共軛物所產生之中靶及/或脫靶有害事件的來源之正常組織之蛋白酶與腫瘤組織之蛋白酶相比不太可能對具有該三肽系可裂解單元之共軛物起作用，以便對靶向癌細胞提供更大選擇性。該選擇係基於與癌症之腫瘤組織勻漿相比正常組織勻漿中之總蛋白酶活性較低。與本發明之改良共軛物相比之下，含有二肽可裂解單元之傳統配體藥物共軛物已經設計要被組織蛋白酶B選擇性作用(組織蛋白酶B為細胞內蛋白酶且其活性在癌細胞中上調)，且主要依賴免疫特異性而選擇性靶向癌細胞而非正常細胞。本發明之改良共軛物藉由與目標癌細胞駐留之腫瘤組織相比不太傾向於發生正常組織內之蛋白酶作用而具有額外水準之選擇性。
在一些實施態樣中，式1A 之藥物連接子部分將具有由式1B 表示之結構：
Figure 02_image099
其中LB 為如本文關於藥物連接子部分或藥物連接子化合物之連接子單元(LU)中的一級連接子(LR )所定義之配體共價結合部分；A及B分別為LR 之第一視情況存在之延伸體單元及視情況存在之分枝單元；下標q在1至4範圍內；且其餘可變基團如本文關於LO 所定義。
在彼等實施態樣中之一些中，W含有直接連接至藥物單元之三肽，使得下標y為0。當下標y為1時，三肽連接至自降解性間隔子單元，使得由蛋白酶引起之裂解提供式Y-D之藥物連接子片段，其中Y經歷自降解以便完成游離藥物之釋放。當下標y為2時，三肽連接至第一自降解性間隔子單元(Y)，使得由蛋白酶所致裂解提供式 Y-Y'-D之第一藥物連接子片段(其中Y'及為第二間隔子單元)且隨後第一間隔子單元自降解以便提供式Y'-D之第二藥物連接子片段，該第二藥物連接子片段分解以完成游離藥物之釋放。
具有式1B 之藥物連接子部分且其中肽可裂解單元(W)之三肽直接連接至藥物單元或中間間隔子單元的例示性配體藥物共軛物化合物具有流程1a之結構，其中P1、P2及P3為三肽序列之胺基酸殘基，且D透過一起表示Yy 之胺基甲酸酯或碳酸酯官能基連接至對胺基苯甲醇殘基，其中下標y為2。在彼等例示性配體藥物共軛物化合物中，毗鄰P1之醯胺鍵之羰基官能基來自三肽序列之C端，其中該醯胺鍵為蛋白酶裂解之位點(由箭頭指示)，且毗鄰P3之醯胺鍵之胺基來自三肽序列之N端。醯胺官能基裂解為P1使得第一藥物連接子片段具有流程1a中所示之結構，其經歷自降解以提供第二藥物連接子片段，該第二藥物連接子片段自發分解並釋放CO2 而按具有羥基或胺基之式 H-T*-D*之游離藥物形式完成D之釋放，其氧原子或氮部分-NH-由T*呈現，其中D*表示游離藥物之其餘部分。
Figure 02_image101
在彼等實施態樣中，在式-LB -A'a' -之一級連接子與作為包含三肽之肽序列之一部分的P3之間可存在指定為P4、P5等之一或多個胺基酸，該三肽賦予相較於由自由循環蛋白酶蛋白分解對細胞內蛋白分解的選擇性及相較於由正常組織勻漿蛋白分解對由腫瘤組織勻漿蛋白分解的選擇性。游離藥物自具有此類延伸之肽序列之配體藥物共軛物釋放的機制類似於流程1a。
在其他實施態樣中，指定為P-1之胺基酸殘基***W之賦予特異性之三肽與D或-Yy -D之間，使得最初在賦予特異性之三肽處由蛋白酶作用釋放之D或藥物連接子片段包含該胺基酸，且因此需要由細胞內肽鏈內切酶進一步加工以允許發生間隔子單元之自降解。對於彼等實施態樣，具有式1B 之藥物連接子部分且其中肽可裂解單元之賦予特異性之三肽不直接連接至藥物單元或中間間隔子單元的例示性配體藥物共軛物化合物具有流程1b中所示之結構。P1與P-1之間之敏感醯胺鍵的蛋白酶裂解(由箭頭指示)提供藥物連接子片段，其中第一自降解性間隔子單元(Y)以胺基酸殘基形式存在，從而在連接至Y之自降解性部分的情況下提供肽鏈內切酶之受質，其為透過胺基甲酸酯或碳酸酯官能基連接至D之對胺基苯甲醇殘基。胺基酸-對胺基苯甲醇殘基及胺基甲酸酯或碳酸酯官能基一起表示Yy ，其中下標y為2。肽鏈內切酶移除P-1之後，如流程1a中發生自降解以釋放作為式H-T*-D*之游離藥物的D。
Figure 02_image103
Figure 02_image105
如前所述，在式-LB -A'a' -之一級連接子與作為包含三肽之肽序列之一部分的P3之間可存在指定為P4、P5等之一或多個胺基酸，該三肽賦予相較於由自由循環蛋白酶蛋白分解對細胞內蛋白分解的選擇性及相較於由正常組織勻漿蛋白分解對由腫瘤組織勻漿蛋白分解的選擇性。雖然流程1b中之P-1在形式上為第一自降解性間隔子單元(Y)之一部分，但出於方便其將與該三肽序列締合，使得W在描述此類肽可裂解單元之SEQ ID中為四肽。本發明之配體藥物共軛物之彼等單元及其他組分進一步論述如下。2.2.1 配體單元
配體藥物共軛物之配體單元(L)為選擇性結合目標部分之共軛物的靶向部分。在一些實施態樣中，配體單元選擇性結合充當目標部分的細胞組分(細胞結合劑)，或結合其他相關目標分子。配體單元起到將配體藥物共軛物之藥物單元靶向及呈現至特定目標細胞群體的作用，該特定目標細胞群體與配體單元相互作用以按游離藥物形式選擇性釋放D。提供配體單元之靶向劑包括但不限於蛋白質、多肽及肽。例示性配體單元包括但不限於由蛋白質、多肽及肽(諸如抗體，例如全長抗體及其抗原結合片段)、干擾素、淋巴因子、激素、生長因子及集落刺激因子提供的彼等配體單元。其他適合之配體單元為來自維生素、營養物運送分子或任何其他細胞結合分子或物質的彼等配體單元。在一些實施態樣中，配體單元來自非抗體蛋白質靶向劑。在其他實施態樣中，配體單元來自蛋白質靶向劑，諸如抗體。較佳靶向劑為較大分子量蛋白質，例如具有至少約80 Kd之分子量的細胞結合劑。
靶向劑與藥物連接子化合物之一級連接子前驅體(LR ')之配體共價結合前驅體(LB ')部分反應，以形成共價連接至式1A 之藥物-連接子部分之一級連接子(LR )之配體共價結合(LB )部分的配體單元。靶向劑具有或經修飾以具有適當連接位點數目以容納必需數目之藥物-連接子部分，其由下標p定義，無論其為天然存在的抑或非天然存在的(例如經工程改造)。舉例而言，對於6至14之下標p之值，靶向劑必須能夠與6至14個藥物-連接子部分形成鍵。連接位點可為天然存在的或工程改造至靶向劑中。靶向劑可經由靶向劑之反應性或可活化雜原子或含雜原子官能基與藥物連接子化合物之連接子單元之LSS 部分形成鍵。可存在於靶向劑上之反應性或可活化雜原子或含雜原子官能基包括硫(在一個實施態樣中，來自靶向劑之硫醇官能基)、C=O(在一個實施態樣中，來自靶向劑之羰基、羧基或羥基)及氮(在一個實施態樣中，來自靶向劑之一級或二級胺基)。彼等雜原子可在靶向劑之天然狀態(例如天然存在之抗體)中存在於靶向劑上，或可經由化學修飾或基因工程改造引入靶向劑。
在一個實施態樣中，靶向劑具有硫醇官能基(例如半胱胺酸殘基之硫醇官能基)且來自靶向劑之配體單元經由該硫醇官能基之硫原子連接至配體藥物共軛物化合物之藥物連接子部分。
在另一實施態樣中，靶向劑具有藥物連接子化合物之連接子單元之LR 的離胺酸殘基，離胺酸殘基可與包括但不限於N -羥基琥珀醯亞胺、五氟苯基及對硝基苯基酯之活化酯反應，且因此在來自配體單元之氮原子與來自藥物連接子化合物之連接子單元之C=O官能基之間產生醯胺鍵。
在另一實施態樣中，靶向劑具有可經化學修飾以引入一或多個硫醇官能基之一或多個離胺酸殘基。來自該靶向劑之配體單元經由引入之硫醇官能基之硫原子連接至連接子單元。可用於修飾離胺酸之試劑包括但不限於S-乙醯基硫基乙酸N-琥珀醯亞胺酯(N-succinimidyl S-acetylthioacetate，SATA)及2-亞胺基硫雜環戊烷鹽酸鹽(特勞特氏試劑(Traut’s Reagent))。
在另一實施態樣中，靶向劑可具有可經化學修飾以具有一或多個硫醇官能基之一或多個碳水化合物基團。來自該靶向劑之配體單元經由引入之硫醇官能基之硫原子連接至連接子單元，或者靶向劑可具有可經氧化以提供醛(-CHO)基之一或多個碳水化合物基團(參見例如Laguzza等人, 1989,J. Med. Chem. 32(3):548-55)。對應醛可接著與具有親核氮之藥物連接子化合物之LSS 部分反應。LR 上可與靶向劑上之羰基反應的其他反應性位點包括但不限於肼及羥胺。用於修飾蛋白質以連接藥物連接子部分之其他方案描述於Coligan等人,Current Protocols in Protein Science , 第2卷, John Wiley & Sons (2002) (以引用之方式併入本文中)中。
在較佳實施態樣中，藥物連接子化合物之LR 之反應性基團為馬來醯亞胺(M1 )部分且L共價連接至LR 是透過靶向劑之硫醇官能基實現，使得透過邁克爾加成形成硫取代之琥珀醯亞胺(M2 )部分。硫醇官能基可在靶向劑之天然狀態(例如天然存在之殘基)中存在於靶向劑上，或可經由化學修飾及/或基因工程改造引入靶向劑中。
對於生物共軛物，已觀測到藥物結合之位點可影響許多參數，包括結合容易性、藥物-連接子穩定性、對所得生物共軛物之生物物理特性之影響及活體外細胞毒性。相對於藥物-連接子穩定性，藥物-連接子結合至配體之位點可影響所結合之藥物-連接子部分經歷消除反應之能力，且對於藥物連接子部分，影響自生物共軛物之配體單元轉移至存在於生物共軛物周圍之替代性反應性硫醇(諸如當在血漿中時為白蛋白、游離半胱胺酸或麩胱甘肽中之反應性硫醇)的能力。此類位點包括例如鏈間二硫以及所選半胱胺酸工程改造位點。除其他位點之外，本文所描述之配體-藥物共軛物可在不太容易發生消除反應之位點(例如根據如Kabat中所闡述之EU索引的位置239)結合硫醇殘基。
在較佳實施態樣中，配體單元(L)屬於抗體或其抗原結合片段，由此定出抗體藥物共軛物(ADC)之抗體配體單元，其中該抗體配體單元能夠選擇性結合癌細胞之目標抗原以便隨後以游離藥物形式釋放D，其中目標抗原能夠在該結合後內化至該癌細胞中以便起始游離藥物之細胞內釋放。
適用抗體包括多株抗體，多株抗體為衍生自經免疫動物之血清的抗體分子之非均質群體。其他適用抗體為單株抗體，單株抗體為針對特定抗原決定位(例如癌細胞抗原、病毒抗原、微生物抗原、蛋白質、肽、碳水化合物、化學品、核酸或其片段)之抗體的均質群體。針對相關抗原之單株抗體(mAb)可藉由使用此項技術中已知之提供在培養物中由連續細胞株進行之抗體分子製備的任何技術來製備。
適用單株抗體包括但不限於人類單株抗體、人類化單株抗體或嵌合人類-小鼠(或其他物種)單株抗體。抗體包括全長抗體及其抗原結合片段。人類單株抗體可藉由此項技術中已知之許多技術中之任一者製備(例如Teng等人, 1983,Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 80:7308-7312；Kozbor等人, 1983,Immunology Today 4:72-79；及Olsson等人, 1982,Meth. Enzymol . 92:3-16)。
抗體可為會免疫特異性結合目標細胞(例如癌細胞抗原、病毒抗原或微生物抗原)之抗體或已結合腫瘤細胞或基質之其他抗體的功能活性片段、衍生物或類似物。在此方面，「功能活性」意味著該片段、衍生物或類似物能夠免疫特異性結合目標細胞。為確定哪些CDR序列結合該抗原，可藉由此項技術中已知之任何結合分析方法(例如BIA核心分析)將含有CDR序列之合成肽用於與抗原之結合分析中(參見例如Kabat等人, 1991,Sequences of Proteins of Immunological Interest , 第五版, National Institute of Health, Bethesda, Md；Kabat E等人, 1980,J. Immunology 125(3):961-969)。
其他適用抗體包括抗體片段，諸如但不限於F(ab’)2 片段、Fab片段、Fv、單鏈抗體、雙抗體、三抗體、四抗體、scFv、scFv-Fv或與抗體具有相同特異性之任何其他分子。
另外，可使用標準重組DNA技術製備之包含人類與非人類部分兩者的重組抗體(諸如嵌合及人類化單株抗體)為適用抗體。嵌合抗體為不同部分衍生自不同動物物種之分子，諸如具有衍生自鼠單株之可變區及人類免疫球蛋白恆定區的彼等分子。(參見例如美國專利第4,816,567號；及美國專利第4,816,397號，其以全文引用之方式併入本文中)。人類化抗體為來自非人類物種且具有來自非人類物種之一或多個互補決定區(CDR)及來自人類免疫球蛋白分子之構架區的抗體分子。(參見例如美國專利第5,585,089號，其以全文引用之方式併入本文中)。此類嵌合及人類化單株抗體可藉由此項技術中已知之重組DNA技術例如使用如以下文獻中所描述之方法產生，該等文獻各自特定地以引用之方式併入本文中：國際公開案第WO 87/02671號；歐洲專利公開案第0 184 187號；歐洲專利公開案第0 171 496號；歐洲專利公開案第0 173 494號；國際公開案第WO 86/01533號；美國專利第4,816,567號；歐洲專利公開案第012 023號；Berter等人,Science (1988) 240:1041-1043；Liu等人,Proc. Natl. Acad. Sci. (USA ) (1987) 84: 3439-3443；Liu等人,J. Immunol . (1987) 139: 3521-3526；Sun等人Proc. Natl. Acad. Sci. (USA ) (1987) 84: 214-218；Nishimura等人Cancer. Res. (1987) 47: 999-1005；Wood等人,Nature (1985) 314:446-449；Shaw等人,J. Natl. Cancer Inst . (1988) 80: 1553-1559；Morrison,Science (1985) 229:1202-1207；Oi等人BioTechniques (1986) 4: 214；美國專利第5,225,539號；Jones等人,Nature (1986) 321: 552-525；Verhoeyan等人, Science (1988) 239: 1534；及Beidler等人,J. Immunol. (1988) 141: 4053-4060。
完全人類抗體為尤其較佳的且可使用基因轉殖小鼠產生，基因轉殖小鼠不能表現內源性免疫球蛋白重鏈及輕鏈基因，但其可表現人類重鏈及輕鏈基因。
抗體包括藉由共價連接任何類型之分子而修飾之類似物及衍生物(若此類共價連接容許抗體保留其抗原結合免疫特異性)。舉例而言但不限於，抗體之衍生物及類似物包括已例如藉由糖基化、乙醯化、聚乙二醇化、磷酸化、醯胺化、藉由已知保護/阻斷基團衍生化、蛋白分解裂解、鍵聯至細胞抗體單元或其他蛋白質等進一步修飾之彼等衍生物及類似物。許多化學修飾中之任一者可藉由已知技術來進行，包括但不限於特異性化學裂解、乙醯化、甲醯化、在存在衣黴素之情況下代謝合成等。另外，類似物或衍生物可含有一或多個非天然胺基酸。
抗體可在與Fc受體相互作用之胺基酸殘基中具有修飾(例如取代、刪除或添加)。特定而言，抗體可在經鑑定參與抗Fc結構域與FcRn受體之間的相互作用之胺基酸殘基中具有修飾(參見例如國際公開案第WO 97/34631號，其以全文引用之方式併入本文中)。
在特定實施態樣中，使用已知用於治療癌症之抗體。在一些實施態樣中，抗體將選擇性結合血液學惡性腫瘤之癌症抗原。2.2.2 一級連接子
在一組實施態樣中，配體藥物共軛物包含式-LR -LO -D之一或多個藥物連接子部分，其中LO 為如本文所描述之-A'a' -W-Yy -，其中LR 為一級連接子，A'為第二視情況存在之延伸體單元，a'為0或1，分別指示A'不存在或存在，Y為間隔子單元，下標y為0、1或2，分別指示間隔子單元不存在或存在1或2個，D為藥物單元，且W為肽可裂解單元，其中肽可裂解單元為至多12 (例如3-12或3-10)個連續胺基酸之序列，其中序列包含與正常組織之勻漿相比更易藉由腫瘤組織之勻漿發生蛋白分解裂解之三肽以便起始D作為游離藥物之釋放，其中因游離藥物在正常組織之細胞內部及/或附近之非意欲釋放所致之對該等細胞之細胞毒性係與由向有需要之個體投與有效量之比較配體藥物共軛物產生的有害事件相關，其中其肽可裂解單元之胺基酸序列為二肽-纈胺酸-瓜胺酸-，及/或其中該三肽使該配體藥物共軛物(相較於比較共軛物)之生物可用性增加，從而不利於對正常組織之生物可用性。在彼等實施態樣中之一些中，-LR -為-LB -Aa -Bb -，其中LB 為配體共價結合部分，A為第一視情況存在之延伸體單元，下標a為0或1，分別指示A不存在或存在，B為視情況存在之分枝單元，且下標b為0或1，分別指示B不存在或存在。
在一些實施態樣中，藥物連接子部分具有以下結構：
Figure 02_image107
或其鹽，特定而言醫藥學上可接受之鹽，其中LR 、A’、a’、Y、y及D保留其先前之含義且P1、P2及P3為胺基酸殘基一起提供對於由腫瘤組織勻漿蛋白分解相較於由正常組織勻漿蛋白分解的選擇性及/或與比較配體藥物共軛物相比提供對腫瘤組織增加之生物可用性而不利於對正常組織者，其中肽可裂解單元之胺基酸序列為二肽-纈胺酸-瓜胺酸-，其中在P1與Y之間的共價鍵處(若下標y為1或2)或P1與D之間的共價鍵處(若下標y為0)發生蛋白分解裂解，且其中腫瘤及正常組織屬於相同物種。
如別處所描述，視下標y之值而定，其他實施態樣含有在P1與Y或D之間的另一胺基酸殘基，其指定為P-1，使得由腫瘤組織勻漿之蛋白分解酶引起的選擇性肽鏈內切酶作用發生在P1與P-1之間的醯胺鍵處，以釋放式-[P-1]-Yy -D之藥物連接子片段。游離藥物自該片段釋放將因蛋白分解酶之肽鏈端切酶作用而發生以移除P-1胺基酸殘基，從而若下標y為0(亦即，Y不存在)則直接提供游離藥物。
在P1與Y或D之間存在另一胺基酸殘基之一些實施態樣中，藥物連接子部分具有以下結構：
Figure 02_image109
或其鹽，特定而言醫藥學上可接受之鹽，其中LR 、A’、a’、Y、y及D保留其先前之含義且P1、P2及P3為胺基酸殘基，其視情況與P-1一起提供相較於由正常組織勻漿蛋白分解對由腫瘤組織勻漿蛋白分解的選擇性，其中蛋白分解裂解發生在P1與P-1之間的共價鍵處以釋放具有[P-1]-Yy -D結構之連接子片段。
在彼等實施態樣中之一些中，當下標y為0時，由P1與P-1胺基酸之間的醯胺鍵之肽鏈內切酶裂解產生的[P-1]-D殘基亦發揮細胞毒性活性。在其他實施態樣中，下標y為1或2，使得用於移除P-1胺基酸殘基之肽鏈端切酶作用提供式-Yy -D之另一藥物連接子片段，其自發片段化以提供游離藥物。
在其他實施態樣中，視下標a'之值而定，在P3與LR 或A'之間為指定為P4、P5…Pn(其中下標n範圍上至12(例如3-12或3-10))之一或多個胺基酸殘基，其在一些實施態樣中是除了該含有P-1胺基酸殘基之肽可裂解單元以外者。在任一情況下，其他P4、P5…Pn 胺基酸殘基係經選擇以不改變提供-Yy -D或-[P-1]-Yy -D片段之裂解位點，但反而是經選擇以賦予配體藥物共軛物所需生理化學及/或藥物動力學特性，諸如改良之溶解度以減少聚集。
在P3之N端存在其他胺基酸殘基或另外在P1與Y或D之間具有P-1的一些實施態樣中，藥物連接子部分具有以下結構：
Figure 02_image111
或其鹽，特定而言醫藥學上可接受之鹽，其中LR 、A’、a’、Y、y及D保留其先前之含義且P-1及P1、P2、P3…Pn 為胺基酸殘基，其中下標n範圍上至12(例如3-12或3-10)且P1、P2及P3視情況與P-1一起提供相較於由正常組織勻漿蛋白分解對由腫瘤組織勻漿蛋白分解的選擇性，其中在P1與Yy -D之間或P1與P-1之間的共價鍵處發生蛋白分解裂解以分別釋放具有Yy -D或[P-1]-Yy -D結構之連接子片段，其中後者隨後經歷肽鏈端切酶裂解以釋放具有Yy -D結構之連接子片段。在兩種情況下，Yy -D連接子片段經歷自發分解以完成D作為游離藥物之釋放。
在當下標b為0時之彼等實施態樣中之任一者中，藥物連接子部分之LR 具有式-LB -Aa -，其中LB 為配體共價結合部分且A為第一視情況存在之延伸體單元。在此類實施態樣中，若a為1且下標a'為1，則A'作為A之亞單元存在且因此被視為一級連接子之組分。
在其中下標b為0且下標a為1之一些較佳實施態樣中，式-LB -A-之LR 為由LSS 之琥珀醯亞胺(M2 )部分之控制水解獲得的自穩定連接子(LSS )部分或經自穩定連接子(LS )部分。配體藥物共軛物組合物或其共軛物化合物之藥物連接子部分之例示性LSS 及LS 一級連接子分別具有由以下結構表示之任一類型之一級連接子：
Figure 02_image113
或其鹽，特定而言醫藥學上可接受之鹽，其中視下標a'之值而定，波形線指示共價連接至A'或W之位點；A'為A之視情況存在之亞單元；[HE]為視情況存在之水解增強單元，其為由A提供之組分；BU為鹼性單元；Ra2 為視情況經取代之C1 -C12 烷基；且虛曲線指示視情況存在之環化，使得在不存在該環化之情況下，BU為具有一級、二級或三級胺官能基作為非環鹼性單元之鹼性官能基的非環鹼性單元，或在存在該環化之情況下，BU為環化鹼性單元，其中Ra2 及BU與連接兩者之碳原子一起定出視情況經取代之螺C3 -C20 雜環基，其含有作為環狀鹼性單元之鹼性官能基之二級或三級胺官能基的骨架鹼性氮原子， 其中非環鹼性單元或環狀鹼性單元之鹼性氮原子視鹼性氮原子之取代程度而定視情況適當受氮保護基保護，或視情況經質子化。
在其中下標b為0且下標a為1之其他較佳實施態樣中，式-LB -A-之一級連接子不含鹼性單元，其藉由以下結構例示：
Figure 02_image115
或其鹽，特定而言醫藥學上可接受之鹽，其中可變基團如先前關於LSS 或LS 一級連接子所描述。
以下為LR 共價連接至LDC之配體單元(L)的代表性L-LR -結構：
Figure 02_image117
及其鹽，特定而言醫藥學上可接受之鹽，以及其中琥珀醯亞胺環系統水解為開環形式之結構，其中所指示(#)之硫原子來自配體單元；且其中波形線指示共價連接至共軛物結構之其餘部分的位點。
以下為其他代表性L-LR -結構：
Figure 02_image119
其中所指示(#)之氮、碳或硫原子來自配體單元；且其中波形線指示共價連接至共軛物結構之其餘部分的位點。
在另一組實施態樣中，適用於製備如前一組實施態樣中所描述之配體藥物共軛物的藥物連接子化合物具有如本文所描述之式LR '-A'a' -W-Yy -D，其中LR '為藥物連接子化合物之一級連接子，當藥物連接子化合物用於製備該共軛物時其轉化為配體藥物共軛物之藥物連接子部分之一級連接子LR ，A'為第二視情況存在之延伸體單元，a'為0或1，分別指示A'不存在或存在，其中當LR '不含分枝單元且下標a'為1時，A'作為A之亞單元被視為作為LR '之組分存在的LR '之一部分，Y為間隔子單元，下標y為0、1或2，分別指示間隔子單元不存在或存在1或2個，D為藥物單元，且W為包含三肽之肽可裂解單元，與正常組織勻漿相比，該三肽更易發生由腫瘤組織勻漿蛋白分解裂解，其中因D作為游離藥物於此等細胞內及/或附近之非意欲釋放所致之對正常組織細胞之細胞毒性係與由投與旨在用於靶向腫瘤組織之癌細胞的配體藥物共軛物而引起的有害事件相關。在彼等實施態樣中之一些中，LR '-為LB '-Aa -Bb -，其中LB '為藥物連接子化合物之一級連接子之配體共價結合部分，有時稱為配體共價結合前驅體部分，因為當藥物連接子化合物用於製備共軛物時，其為配體藥物共軛物之藥物連接子部分之一級連接子(LR )的配體共價結合部分(LB )之前驅體，A為第一視情況存在之延伸體單元，下標a為0或1，分別指示A不存在或存在，B為視情況存在之分枝單元，且下標b為0或1，分別指示B不存在或存在。
在一些實施態樣中，藥物連接子化合物具有以下結構：
Figure 02_image121
或其鹽，特定而言醫藥學上可接受之鹽，其中LR ’、A’、a’、Y、y及D保留其先前之含義且P1、P2及P3為胺基酸殘基一起提供相較於由正常組織勻漿蛋白分解對由腫瘤組織勻漿蛋白分解的選擇性，其中蛋白分解裂解發生在P1與Y之間的共價鍵處(若下標y為1或2)或在P1與D之間的共價鍵處(若下標y為0)。
如別處所描述，視下標y之值而定，其他實施態樣含有P1與Y或D之間的另一胺基酸殘基，其指定為P-1，使得由腫瘤組織勻漿之蛋白分解酶引起的選擇性肽鏈內切酶作用發生在P1與P-1之間的醯胺鍵處，以釋放式 -[P-1]-Yy -D之藥物連接子片段。游離藥物自該片段釋放將因蛋白分解酶之肽鏈端切酶作用而發生以移除P-1胺基酸殘基，從而若下標y為0(亦即，Y不存在)則直接提供游離藥物。
在P1與Y或D之間存在另一胺基酸殘基之一些實施態樣中，藥物連接子化合物具有以下結構：
Figure 02_image123
或其鹽，特定而言醫藥學上可接受之鹽，其中LR ’、A’、a’、Y、y及D保留其先前之含義且P1、P2及P3為胺基酸殘基，其視情況與P-1一起提供相較於由正常組織勻漿蛋白分解對由腫瘤組織勻漿蛋白分解的選擇性，其中在P1與 P-1之間的共價鍵處發生蛋白分解裂解以釋放具有 [P-1]-Yy -D結構之連接子片段。
在彼等實施態樣中之一些中，當下標y為0時，由P1與P-1胺基酸之間的醯胺鍵之肽鏈內切酶裂解產生的[P-1]-D殘基亦發揮細胞毒性活性。在其他實施態樣中，下標y為1或2，使得用於移除P-1胺基酸殘基之肽鏈端切酶作用提供式-Yy -D之另一藥物連接子片段，其自發片段化以提供游離藥物。
在其他實施態樣中，視下標a'之值而定，在P3與LR 或A'之間為指定為P4、P5…Pn(其中下標n範圍上至12(例如3-12或3-10))之一或多個胺基酸殘基，其在一些實施態樣中為除了該含有P-1胺基酸殘基之肽可裂解單元以外者。在任一情況下，其他P4、P5…Pn 胺基酸殘基經如此選擇以不改變提供-Yy -D或-[P-1]-Yy -D片段之裂解位點，但反而是經選擇以賦予配體藥物共軛物所需生理化學及/或藥物動力學特性，諸如改良之溶解度以減少聚集。
在P3之N端存在其他胺基酸殘基或另外在P1與Y或D之間具有P-1的一些實施態樣中，藥物連接子化合物具有以下結構：
Figure 02_image125
或其鹽，特定而言醫藥學上可接受之鹽，其中LR ’、A’、a’、Y、y及D保留其先前之含義且P-1及P1、P2、P3…Pn 為胺基酸殘基，其中下標n範圍上至12(例如3-12或3-10)且P1、P2及P3視情況與P-1一起提供相較於由正常組織勻漿蛋白分解對由腫瘤組織勻漿蛋白分解的選擇性，其中在P1與Yy -D之間或P1與P-1之間的共價鍵處發生蛋白分解裂解以分別釋放具有Yy -D或[P-1]-Yy -D結構之連接子片段，其中後者隨後經歷肽鏈端切酶裂解以釋放具有Yy -D結構之連接子片段。在兩種情況下，Yy -D連接子片段經歷自發分解(亦稱為自降解)以完成D作為游離藥物之釋放。
在彼等實施態樣中之任一者中，當下標b為0時，藥物連接子化合物之LR '具有式-LB '-Aa -，其中LB '為配體共價結合前驅體部分且A為第一視情況存在之延伸體單元。在此類實施態樣中，若下標a為1且下標a’為1，則A'作為A之亞單元存在且因此被視為一級連接子之組分。
在其中下標b為0且下標a為1之一些較佳實施態樣中，藥物連接子化合物之式LB '-A-之LR '為自穩定連接子前驅體(LSS ')部分，如此名稱係由於當藥物連接子化合物用於製備共軛物時其轉化為配體藥物共軛物之自穩定連接子(LSS )部分。藥物連接子化合物之例示性LSS ’一級連接子由以下結構表示：
Figure 02_image127
或其鹽，特定而言醫藥學上可接受之鹽，其中視下標a'之值而定，波形線指示共價連接至A'或W之位點；A'為A之視情況存在之亞單元；[HE]為視情況存在之水解增強單元，其為由A提供之組分；BU為鹼性單元；Ra2 為視情況經取代之C1 -C12 烷基；且虛曲線指示視情況存在之環化，使得在不存在該環化之情況下，BU為具有一級、二級或三級胺官能基作為非環鹼性單元之鹼性官能基的非環鹼性單元，或者在存在該環化之情況下，BU為環化鹼性單元，其中Ra2 及BU與連接兩者之碳原子一起定出視情況經取代之螺C3 -C20 雜環基，其含有作為環狀鹼性單元之鹼性官能基之二級或三級胺官能基的骨架鹼性氮原子，其中非環鹼性單元或環狀鹼性單元之鹼性氮原子視鹼性氮原子之取代程度而定視情況適當受氮保護基保護，或視情況經質子化。
在其中下標b為0且下標a為1之其他較佳實施態樣中，式LB -A-之一級連接子不含鹼性單元，其藉由以下結構例示：
Figure 02_image129
或其鹽，特定而言醫藥學上可接受之鹽，其中可變基團如先前關於LSS 或LS 一級連接子所描述。
以下為藥物連接子化合物之代表性LR ’-結構：
Figure 02_image131
及其鹽，特定而言醫藥學上可接受之鹽，其中波形線指示共價連接至藥物連接子化合物結構之LU’之其餘部分的位點，且其中第二或第三結構中之鹼性氮原子視情況經質子化為酸加成鹽或視情況受保護。當受保護時，保護基較佳為酸不穩定性保護基，諸如BOC。2.2.3 肽可裂解單元
在一些實施態樣中，配體藥物共軛物之肽可裂解單元(W)為含有三肽之肽序列，該三肽直接或透過一個或兩個自降解性間隔子單元間接連接至D，其中三肽由至少一種、較佳由超過一種細胞內蛋白酶識別，其中與在正常細胞中相比，在腫瘤細胞中該至少一種蛋白酶上調，且該至少一種蛋白酶更易發生由包含要由配體藥物共軛物靶向之腫瘤細胞的腫瘤組織勻漿蛋白分解(與正常組織勻漿相比)，在該正常組織勻漿中對正常組織之細胞毒性與由投與比較配體藥物共軛物引起之有害事件相關。在其他實施態樣中，三肽改良共軛物向腫瘤組織中之生物分佈，而對向正常組織中之生物分佈不利，除與由正常組織勻漿蛋白分解相比對由腫瘤組織勻漿蛋白分解的選擇性之外此亦存在於此等實施態樣中之一些中。在彼等實施態樣中之任一者中，正常組織有時為骨髓且所要改善之有害事件為嗜中性白血球減少症。在另一實施態樣中，正常組織為骨髓、肝臟、腎臟、食道、***或角膜組織且所要改善之有害事件為嗜中性白血球減少症。在一些實施態樣中，三肽直接連接至D或透過一個或兩個自降解性間隔子單元間接連接至D。在其他實施態樣中，包含如本文所描述之三肽的肽可裂解單元(W)直接連接至D或經由不為該三肽之一部分的胺基酸透過一個或兩個自降解性間隔子單元間接連接至D。
比較共軛物之肽可裂解單元(W)典型地為二肽，其賦予對特定細胞內蛋白酶之選擇性，相較於自由循環蛋白酶，該特定細胞內蛋白酶在癌細胞中上調，其中該特定蛋白酶能夠裂解該二肽之C端胺基酸與自降解性間隔子單元(Y)之胺基之間的醯胺鍵以起始藥物單元作為游離藥物之釋放。
在一些實施態樣中，與其中肽可裂解單元為賦予對特定細胞內蛋白酶之選擇性之二肽的比較配體藥物共軛物相比，包含如本文所揭示之三肽的配體藥物共軛物顯示改良之耐受性，相較於自由循環蛋白酶，該特定細胞內蛋白酶在癌細胞中上調，其中該特定蛋白酶能夠裂解該二肽之C端胺基酸與自降解性間隔子單元(Y)之胺基之間的醯胺鍵以起始藥物單元作為游離藥物之釋放。在一些實施態樣中，已知該二肽可由組織蛋白酶B選擇性裂解。在一些實施態樣中，比較配體-藥物共軛物中之二肽為-纈胺酸-瓜胺酸-或-纈胺酸-丙胺酸-。在一些實施態樣中，比較配體-藥物共軛物中之該二肽為-纈胺酸-瓜胺酸-。在一些實施態樣中，比較配體-藥物共軛物中之該二肽為-纈胺酸-丙胺酸-。在一些實施態樣中，耐受性(tolerability)係指與配體-藥物共軛物之投與相關之有害事件影響患者堅持療法之劑量或強度之能力或願望所達到的程度。因而，改良之耐受性可藉由降低有害事件之發生率或嚴重程度來實現。
在不受理論約束之情況下，聚集之配體藥物共軛物化合物更可能分佈於正常組織(例如骨髓)中，其中正常組織已知為當投與治療有效量之配體藥物共軛物時哺乳動物個體所經歷之中靶及/或脫靶有害事件的來源。在一些實施態樣中，改良之耐受性由與比較配體藥物共軛物相比包含三肽之配體藥物共軛物之聚集速率降低得到證實。在一些實施態樣中，包含三肽之配體藥物共軛物及比較配體藥物共軛物之聚集速率藉由在大鼠血漿、食蟹猴血漿或人類血漿中以相同濃度將共軛物培育12、24、36、48、60、72、84或96小時之後量測高分子量聚集物之濃度來測定。
在一些實施態樣中，包含三肽之配體藥物共軛物的改良之耐受性由改良之對於與由比較配體藥物共軛物釋放之細胞毒性化合物相比腫瘤組織相較於正常組織暴露於由包含三肽之配體藥物共軛物釋放之游離細胞毒性化合物的選擇性得到證實。在一些實施態樣中，腫瘤組織及正常組織來自囓齒動物物種(例如大鼠或小鼠)或靈長類動物物種(例如食蟹猴或人類)。在一些實施態樣中，當腫瘤組織及正常組織來自不同於人類之物種時，正常組織屬於與人類中相同之組織類型且其中對該組織之細胞的細胞毒性至少部分在投與治療有效量之比較配體藥物共軛物之人類個體中引起有害事件。在一些實施態樣中，正常組織為骨髓、肝臟、腎臟、食道、***或角膜組織。在一些實施態樣中，正常組織為骨髓。
在一些實施態樣中，改良之暴露選擇性由當共軛物以相同劑量投與時由包含三肽之配體藥物共軛物釋放的游離細胞毒性化合物之血漿濃度與比較配體藥物共軛物相比有所降低得到證實。在一些實施態樣中，當以與先前關於比較配體-藥物共軛物所確定相同之有效量及劑量時程投與時，包含三肽之配體藥物共軛物保留腫瘤異種移植模型中之功效(例如與比較配體藥物共軛物相比達成實質上相同之腫瘤體積減小)。
在一些實施態樣中，當以相同劑量投與共軛物時，與比較配體-藥物共軛物相比，非目標介導之細胞毒性降低或在正常組織中正常細胞之維持證實改良之暴露選擇性。在一些實施態樣中，正常組織為骨髓、肝臟、腎臟、食道、***或角膜組織。在一些實施態樣中，正常組織為骨髓。在一些實施態樣中，非目標介導之細胞毒性降低或正常組織中正常細胞之維持是由骨髓組織學(例如單核細胞之核染色損失減少)得到證實。在一些實施態樣中，非目標介導之細胞毒性降低或正常細胞之維持是由嗜中性白血球及/或網狀紅血球損失減少及/或更快從該損失恢復得到證實。在一些實施態樣中，非目標介導之細胞毒性降低或正常細胞之維持是藉由嗜中性白血球損失減少而證實。在一些實施態樣中，非目標介導之細胞毒性降低或正常細胞之維持是由網狀紅血球損失減少得到證實。在一些實施態樣中，當以與先前關於比較配體-藥物共軛物所確定相同之有效量及劑量時程投與時，包含三肽之配體藥物共軛物保留在腫瘤異種移植模型中的功效。在一些實施態樣中，當比較包含三肽之配體藥物共軛物與比較配體藥物共軛物之間的暴露選擇性時，兩種共軛物之配體單元由非結合抗體置換。
在一些實施態樣中，提供配體-藥物共軛物(例如ADC)，其活性在活體內或活體外與比較配體藥物共軛物(例如含有-val-cit-之二肽ADC)相比較小，但毒性亦顯著較小。在不受理論約束之情況下，配體-藥物共軛物不要求為活性的，因為若其活性較小且毒性較小則治療窗(therapeutic window)將仍會增加。
在較佳實施態樣中，三肽之C端胺基酸之羧酸與自降解性間隔子單元(Y)之胺基之間的醯胺鍵可由至少一種、較佳由超過一種細胞內蛋白酶裂解以起始藥物單元作為游離藥物之釋放。當藥物單元為MMAE之彼等藥物單元時，比較共軛物之藥物連接子部分具有式 mc-val-cit-PABC-MMAE或mp-val-cit-PABC-MMAE，其具有以下結構：
Figure 02_image133
在其他實施態樣中，配體藥物共軛物之肽可裂解單元(W)為包含四肽殘基之肽序列，該四肽殘基直接或透過至少一個自降解性間隔子單元間接連接至D，其中四肽序列-P3-P2-P1-[P-1]-由至少一種、較佳由超過一種細胞內蛋白酶識別，其中與在正常細胞內相比在腫瘤細胞內該至少一種細胞內蛋白酶上調，且對由包含要由配體藥物共軛物靶向之腫瘤細胞的腫瘤組織勻漿蛋白分解相較於由正常組織勻漿蛋白分解更具選擇性，在該正常組織勻漿中對正常組織之細胞毒性與由投與比較配體藥物共軛物引起之有害事件相關。比較共軛物之肽可裂解單元為二肽，其賦予對特定細胞內蛋白酶相較於對自由循環蛋白酶之選擇性。在彼等四肽實施態樣中，選擇性主要歸因於四肽之N端三肽序列。
在其中肽序列包含四肽殘基之較佳實施態樣中，C端胺基酸之羧酸與該四肽序列之剩餘胺基酸殘基之間的醯胺鍵可由至少一種細胞內蛋白酶裂解以藉由首先釋放含胺基酸之連接子片段來起始游離藥物之釋放，該含胺基酸之連接子片段隨後經歷其胺基酸組分之肽鏈端切酶移除以提供第二連接子片段。因此，四肽-P3-P2-P1-[P-1]-中之P1-[P-1]鍵裂解以釋放-[P-1]-Yy -D之藥物連接子片段。第二連接子片段接著經歷已***D與W之四肽之間的間隔子單元之自降解，以完成D作為游離藥物之釋放。
在以上實施態樣中之任一者中，較佳在目標癌細胞內上調之至少一種蛋白酶包括某些組織蛋白酶，諸如組織蛋白酶B。在其他實施態樣中，P1-D、P1-Y-或 P1-[P-1]鍵可由目標癌細胞之非分泌細胞內蛋白酶或此類細胞內蛋白酶之集合以及一或多種細胞外蛋白酶裂解，該一或多種細胞外蛋白酶與腫瘤細胞相關或在腫瘤細胞之組織微環境內上調且在正常細胞之組織微環境中不存在或以降低之水準存在，其中對此等正常細胞之細胞毒性典型地與由投與有效量之比較共軛物引起的有害事件相關，其中該肽可裂解單元為二肽，該二肽賦予對細胞內蛋白酶相較於對自由循環蛋白酶的選擇性。在其他實施態樣中， P1-D、P1-Y-或P1-[P-1]鍵可由目標癌細胞之非分泌細胞內蛋白酶或此類細胞內蛋白酶之集合裂解，且與肽可裂解單元為上述二肽之比較共軛物相比，不太容易發生由與正常組織相關之細胞外蛋白酶蛋白分解。在彼等實施態樣中之一些中，正常組織內之分泌蛋白酶為嗜中性白血球蛋白酶，諸如選自由Neu彈性蛋白酶、組織蛋白酶G及蛋白酶3組成之群的彼等蛋白酶。
在其他較佳實施態樣中，本發明之配體藥物共軛物中之三肽賦予與正常組織勻漿相比對由包含要由配體藥物共軛物靶向之腫瘤細胞的腫瘤組織勻漿蛋白分解的總體選擇性，其中對正常組織之細胞毒性與由投與比較配體藥物共軛物引起的有害事件相關。比較共軛物之藥物連接子部分中的肽可裂解單元(W)為上述二肽，其賦予對在腫瘤組織之癌細胞中上調之特定細胞內蛋白酶相較於對自由循環蛋白酶的選擇性。其他較佳三肽使共軛物向腫瘤組織中之生物分佈增加，而對向正常組織中之生物分佈不利，其中對正常組織之細胞毒性與由投與其中W為賦予對特定細胞內蛋白酶相較於對自由循環蛋白酶之選擇性的二肽之比較配體藥物共軛物引起之有害事件相關。當藥物單元為MMAE之藥物單元時，比較共軛物之藥物連接子部分具有式mc-val-cit-PABC-MMAE或mp-val-cit-PABC-MMAE。
具有含有某些3-殘基胺基酸序列之連接子的配體藥物共軛物經確定具有有利特性，諸如在一或多個正常組織中之毒性降低(其可歸因於差異蛋白分解)及改良之生物物理特性(例如減少之聚集、在清除之前較長之滯留時間)。此等有利特性可在具有含有3-胺基酸序列之連接子的配體藥物共軛物中獲得，其中該3-殘基序列之N端胺基酸為D-胺基酸，且該3-殘基序列之中心及C末端殘基為(以任一順序)帶負電荷(例如在血漿生理pH值下)之胺基酸及極性或具有疏水性不大於白胺酸之脂族側鏈之胺基酸。在一些實施態樣中，三肽含有呈D-胺基酸組態之胺基酸。在一些實施態樣中，三肽含有D-Leu或D-Ala。在一些實施態樣中，三肽含有D-Leu。在一些實施態樣中，三肽含有D-Ala。在一些實施態樣中，三肽含有具有疏水性不大於白胺酸之脂族側鏈的胺基酸。在一些實施態樣中，三肽含有具有疏水性不大於纈胺酸之脂族側鏈的胺基酸。在一些實施態樣中，三肽含有丙胺酸。在一些實施態樣中，三肽含有極性胺基酸。在一些實施態樣中，三肽含有絲胺酸。在一些實施態樣中，三肽含有帶負電荷(例如在血漿生理pH值下)之胺基酸。在一些實施態樣中，三肽含有選自由天冬胺酸及麩胺酸組成之群的胺基酸。在一些實施態樣中，三肽之P3胺基酸呈D-胺基酸組態。在一些實施態樣中，P3胺基酸為D-Leu或D-Ala。在一些實施態樣中，P3胺基酸為D-Leu。在一些實施態樣中，P3胺基酸為D-Ala。在一些實施態樣中，三肽之P2胺基酸具有疏水性不大於白胺酸之脂族側鏈。在一些實施態樣中，P2胺基酸具有疏水性不大於纈胺酸之脂族側鏈。在一些實施態樣中，P2胺基酸為丙胺酸。在一些實施態樣中，三肽之P2胺基酸為極性胺基酸。在一些實施態樣中，P2胺基酸為絲胺酸。在一些實施態樣中，三肽之P2胺基酸為帶負電荷的(例如在血漿生理pH值下)。在一些實施態樣中，P2胺基酸選自由天冬胺酸及麩胺酸組成之群。在一些實施態樣中，三肽之P1胺基酸具有疏水性不大於白胺酸之脂族側鏈。在一些實施態樣中，P1胺基酸具有疏水性不大於纈胺酸之脂族側鏈。在一些實施態樣中，P1胺基酸為丙胺酸。在一些實施態樣中，三肽之P1胺基酸為極性胺基酸。在一些實施態樣中，P1胺基酸為絲胺酸。在一些實施態樣中，三肽之P1胺基酸為帶負電荷的(例如在血漿生理pH值下)。在一些實施態樣中，P1胺基酸選自由天冬胺酸及麩胺酸組成之群。在一些實施態樣中，三肽之P2或P1胺基酸中之一者具有疏水性不大於白胺酸(例如不大於纈胺酸)之脂族側鏈，且P2或P1胺基酸中之另一者為極性胺基酸或帶負電荷的(例如在血漿生理pH值下)。在一些實施態樣中，P2胺基酸具有疏水性不大於白胺酸(例如不大於纈胺酸)之脂族側鏈，且P1胺基酸為極性胺基酸或為帶負電荷的(例如在血漿生理pH值下)。在一些實施態樣中，P1胺基酸具有疏水性不大於白胺酸(例如不大於纈胺酸)之脂族側鏈，且P2胺基酸為極性胺基酸或為帶負電荷的(例如在血漿生理pH值下)。在一些實施態樣中，-P2-P1-為-Ala-Glu-。在一些實施態樣中，-P2-P1-為-Ala-Asp-。在一些實施態樣中，三肽之P3胺基酸呈D-胺基酸組態，P2或P1胺基酸中之一者具有疏水性不大於白胺酸(例如不大於纈胺酸)之脂族側鏈，且P2或P1胺基酸中之另一者為帶負電荷的(例如在血漿生理pH值下)。在一些實施態樣中，P3胺基酸呈D-胺基酸組態，P2胺基酸具有疏水性不大於白胺酸(例如不大於纈胺酸)之脂族側鏈，且P1胺基酸為帶負電荷的(例如在血漿生理pH值下)。在一些實施態樣中，P3胺基酸呈D-胺基酸組態，P1胺基酸具有疏水性不大於白胺酸(例如不大於纈胺酸)之脂族側鏈，且P2胺基酸為帶負電荷的(例如在血漿生理pH值下)。在一些實施態樣中，-P3-P2-P1-選自由以下組成之群： -D-Leu-Ala-Asp-、-D-Leu-Ala-Glu-、-D-Ala-Ala-Asp-及 -D-Ala-Ala-Glu-。
在一些實施態樣中，三肽含有選自由以下組成之群的胺基酸：丙胺酸、瓜胺酸、脯胺酸、異白胺酸、白胺酸及纈胺酸。在一些實施態樣中，三肽含有呈D-胺基酸組態之胺基酸。在一些實施態樣中，三肽含有D-Leu。在一些實施態樣中，三肽含有D-Ala。在一些實施態樣中，三肽含有呈D-胺基酸組態之胺基酸。在另一實施態樣中，三肽含有選自由D-白胺酸及D-丙胺酸組成之群的胺基酸。在另一實施態樣中，三肽含有D-白胺酸。在另一實施態樣中，三肽含有D-丙胺酸。在一些實施態樣中，三肽含有具有含至少一個帶電荷(例如在血漿生理pH值下帶負電荷)取代基或至少一個不帶電荷且具有永久性電偶極矩之取代基之側鏈的胺基酸以及一個或兩個具有疏水性不大於白胺酸之脂族側鏈的其他胺基酸。在一些實施態樣中，三肽含有具有疏水性不大於白胺酸之脂族側鏈的胺基酸，諸如丙胺酸或纈胺酸。在一些實施態樣中，三肽含有具有疏水性不大於纈胺酸之脂族側鏈的胺基酸，諸如丙胺酸。在一些實施態樣中，三肽含有極性胺基酸，諸如天冬胺酸、麩胺酸、天冬醯胺、麩醯胺酸、絲胺酸、蘇胺酸、酪胺酸、瓜胺酸、甲硫胺酸亞碸或γ-羧基-麩胺酸。在一些實施態樣中，三肽含有帶負電荷(例如在血漿生理pH值下)之胺基酸，諸如麩胺酸、天冬胺酸或γ-羧基-麩胺酸。在一些實施態樣中，三肽含有具有含至少一個帶電荷之取代基或至少一個不帶電荷且具有較佳大於-C(O)NH2 之永久性電偶極矩之取代基之側鏈的胺基酸。在一些實施態樣中，三肽含有具有含至少一個帶電荷之取代基或至少一個不帶電荷且具有較佳大於-NH-C(O)NH2 之永久性電偶極矩之取代基之側鏈的胺基酸。在一些實施態樣中，三肽含有選自由以下組成之群的胺基酸：丙胺酸、α-胺基丁酸、α-胺基異丁酸、天冬胺酸、瓜胺酸、γ-羧基-麩胺酸、麩胺酸、麩醯胺酸、甘胺酸、白胺酸、正纈胺酸脯胺酸、異白胺酸、白胺酸、離胺酸、甲硫胺酸亞碸、萘基丙胺酸、O -烯丙基酪胺酸、***酸、炔丙基甘胺酸、2-胺基丁-3-炔酸、脯胺酸、硒代甲硫胺酸、絲胺酸、蘇胺酸及纈胺酸。在一些實施態樣中，三肽含有選自由以下組成之群的胺基酸：丙胺酸、天冬胺酸、瓜胺酸、γ-羧基麩胺酸、麩胺酸、麩醯胺酸、甘胺酸、白胺酸、脯胺酸、異白胺酸、白胺酸、離胺酸、甲硫胺酸亞碸、萘基丙胺酸、O -烯丙基酪胺酸、***酸、脯胺酸、硒代甲硫胺酸、絲胺酸、蘇胺酸及纈胺酸。應瞭解，在本文之任一實施態樣中，胺基酸可為天然或非天然胺基酸。舉例而言，丙胺酸可為D-丙胺酸或L-丙胺酸且白胺酸可為D-白胺酸或L-白胺酸。
在更佳之三肽中，P3胺基酸選自由以下組成之群：丙胺酸、瓜胺酸、脯胺酸、異白胺酸、白胺酸及纈胺酸，其較佳呈D-胺基酸組態，且D-Leu尤佳。在另一實施態樣中，P3胺基酸呈D-胺基酸組態。在另一實施態樣中，三肽中之P3胺基酸選自由以下組成之群：丙胺酸、白胺酸、麩胺酸、離胺酸、O -烯丙基酪胺酸、***酸、脯胺酸及蘇胺酸。在另一實施態樣中，三肽中之P3胺基酸選自由以下組成之群：D-丙胺酸、D-白胺酸、麩胺酸、離胺酸、O -烯丙基酪胺酸、***酸、脯胺酸及蘇胺酸。在另一實施態樣中，三肽中之P3胺基酸為D-白胺酸或D-丙胺酸。在另一實施態樣中，三肽中之P3胺基酸為D-白胺酸。在另一實施態樣中，三肽中之P3胺基酸為D-丙胺酸。
在其他更佳之三肽中，P2胺基酸為具有疏水性不大於白胺酸之脂族側鏈的天然或非天然胺基酸，該疏水性在P3側鏈疏水性較大時以較低者為較佳。在另一實施態樣中，P2胺基酸為具有疏水性不大於纈胺酸之脂族側鏈的天然或非天然胺基酸。在一些實施態樣中，三肽中之P2胺基酸選自由以下組成之群：丙胺酸、纈胺酸、白胺酸及甲硫胺酸。在一些實施態樣中，三肽中之P2胺基酸選自由以下組成之群：丙胺酸、纈胺酸及甲硫胺酸。在一些實施態樣中，三肽中之P2胺基酸為丙胺酸。在彼等較佳三肽中之一些中，P2選自由以下組成之群：Abu、Aib、Ala、Gly、Leu、Nva、Pra、Egl及Val，其中非天然胺基酸具有以下結構：
Figure 02_image135
對於Abu、Ala、Leu、Nva及Pra作為P2胺基酸殘基，該側鏈較佳呈L-組態。在另一實施態樣中，三肽中之P2胺基酸為極性胺基酸。在一些實施態樣中，三肽中之P2胺基酸選自由以下組成之群：天冬胺酸、麩胺酸、天冬醯胺、麩醯胺酸、絲胺酸、蘇胺酸、酪胺酸、瓜胺酸、甲硫胺酸亞碸及γ-羧基-麩胺酸。在另一實施態樣中，三肽中之P2胺基酸為帶負電荷的(例如在血漿生理pH值下)。在一些實施態樣中，三肽中之P2胺基酸選自由以下組成之群：天冬胺酸、麩胺酸及γ-羧基-麩胺酸。在一些實施態樣中，三肽中之P2胺基酸選自由天冬胺酸及麩胺酸組成之群。在一些實施態樣中，三肽中之P2胺基酸為丙胺酸。在一些實施態樣中，三肽中之P2胺基酸為絲胺酸。在一些實施態樣中，三肽中之P2胺基酸選自由以下組成之群：丙胺酸、纈胺酸、白胺酸、甲硫胺酸、天冬胺酸、麩胺酸、天冬醯胺、麩醯胺酸、絲胺酸、蘇胺酸、酪胺酸、瓜胺酸、甲硫胺酸亞碸及γ-羧基-麩胺酸。
在其他更佳之三肽中，P1胺基酸為具有含至少一個帶電荷之取代基或至少一個不帶電荷且具有較佳大於-C(O)NH2 之永久性電偶極矩之取代基之側鏈的天然或非天然胺基酸。在另一實施態樣中，P1胺基酸為具有含至少一個帶電荷之取代基或至少一個不帶電荷且具有較佳大於-NH-C(O)NH2 之永久性電偶極矩之取代基之側鏈的天然或非天然胺基酸。在彼等較佳三肽中之一些中，P1選自由以下組成之群：Glu、Asp、γ-羧基-麩胺酸、離胺酸、甲硫胺酸亞碸(有時指示為Met(O))及磷酸-蘇胺酸，其中側鏈較佳呈L-立體化學組態，其中Glu、Asp、γ-羧基-麩胺酸及Met(O)更佳且Glu尤其較佳。在一些實施態樣中，三肽中之P1胺基酸選自由以下組成之群：丙胺酸、天冬胺酸、瓜胺酸、γ-羧基-麩胺酸、麩胺酸、麩醯胺酸、白胺酸、離胺酸、甲硫胺酸亞碸及硒代甲硫胺酸。在一些實施態樣中，三肽中之P1胺基酸為麩胺酸。在一些實施態樣中，P1胺基酸為具有疏水性不大於白胺酸之脂族側鏈的天然或非天然胺基酸，該疏水性在P3側鏈之疏水性較大時以較低者為較佳。在另一實施態樣中，P1胺基酸為具有疏水性不大於纈胺酸之脂族側鏈的天然或非天然胺基酸。在一些實施態樣中，三肽中之P1胺基酸選自由以下組成之群：丙胺酸、纈胺酸、白胺酸及甲硫胺酸。在一些實施態樣中，三肽中之P1胺基酸選自由以下組成之群：丙胺酸、纈胺酸及甲硫胺酸。在一些實施態樣中，三肽中之P1胺基酸為丙胺酸。在另一實施態樣中，三肽中之P1胺基酸為極性胺基酸。在一些實施態樣中，三肽中之P1胺基酸選自由以下組成之群：天冬胺酸、麩胺酸、天冬醯胺、麩醯胺酸、絲胺酸、蘇胺酸、酪胺酸、瓜胺酸、甲硫胺酸亞碸及γ-羧基-麩胺酸。在另一實施態樣中，三肽中之P1胺基酸為帶負電荷的(例如在血漿生理pH值下)。在一些實施態樣中，三肽中之P1胺基酸選自由以下組成之群：天冬胺酸、麩胺酸及γ-羧基-麩胺酸。在一些實施態樣中，三肽中之P1胺基酸選自由天冬胺酸及麩胺酸組成之群。在一些實施態樣中，三肽中之P1胺基酸為丙胺酸。在一些實施態樣中，三肽中之P1胺基酸為絲胺酸。
在另一實施態樣中，三肽中之P3胺基酸選自由以下組成之群：丙胺酸、白胺酸、麩胺酸、離胺酸、O -烯丙基酪胺酸、***酸、脯胺酸及蘇胺酸，三肽中之P2胺基酸選自由以下組成之群：丙胺酸、纈胺酸、白胺酸、甲硫胺酸、天冬胺酸、麩胺酸、天冬醯胺、麩醯胺酸、絲胺酸、蘇胺酸、酪胺酸、瓜胺酸、甲硫胺酸亞碸及γ-羧基-麩胺酸，且三肽中之P1胺基酸選自由以下組成之群：丙胺酸、天冬胺酸、瓜胺酸、γ-羧基-麩胺酸、麩胺酸、麩醯胺酸、白胺酸、離胺酸、甲硫胺酸亞碸及硒代甲硫胺酸。在另一實施態樣中，三肽中之P3胺基酸選自由以下組成之群：丙胺酸、白胺酸、麩胺酸、離胺酸、O -烯丙基酪胺酸、***酸、脯胺酸及蘇胺酸，三肽中之P2胺基酸選自由以下組成之群：丙胺酸、纈胺酸、白胺酸、甲硫胺酸、天冬胺酸、麩胺酸、天冬醯胺、麩醯胺酸、絲胺酸、蘇胺酸、酪胺酸、瓜胺酸、甲硫胺酸亞碸及γ-羧基-麩胺酸，且三肽中之P1胺基酸選自由天冬胺酸及麩胺酸組成之群。在另一實施態樣中，三肽中之P3胺基酸選自由以下組成之群：丙胺酸、白胺酸、麩胺酸、離胺酸、O -烯丙基酪胺酸、***酸、脯胺酸及蘇胺酸，三肽中之P2胺基酸選自由以下組成之群：丙胺酸、纈胺酸、白胺酸、甲硫胺酸、天冬胺酸、麩胺酸、天冬醯胺、麩醯胺酸、絲胺酸、蘇胺酸、酪胺酸、瓜胺酸、甲硫胺酸亞碸及γ-羧基-麩胺酸，且三肽中之P1胺基酸為丙胺酸。
在另一實施態樣中，三肽中之P3胺基酸選自由以下組成之群：丙胺酸、白胺酸、麩胺酸、離胺酸、O -烯丙基酪胺酸、***酸、脯胺酸及蘇胺酸，三肽中之P2胺基酸選自由天冬胺酸及麩胺酸組成之群，且三肽中之P1胺基酸選自由以下組成之群：丙胺酸、天冬胺酸、瓜胺酸、γ-羧基-麩胺酸、麩胺酸、麩醯胺酸、白胺酸、離胺酸、甲硫胺酸亞碸及硒代甲硫胺酸。在另一實施態樣中，三肽中之P3胺基酸選自由以下組成之群：丙胺酸、白胺酸、麩胺酸、離胺酸、O -烯丙基酪胺酸、***酸、脯胺酸及蘇胺酸，三肽中之P2胺基酸選自由天冬胺酸及麩胺酸組成之群，且三肽中之P1胺基酸選自由天冬胺酸及麩胺酸組成之群。在另一實施態樣中，三肽中之P3胺基酸選自由以下組成之群：丙胺酸、白胺酸、麩胺酸、離胺酸、O -烯丙基酪胺酸、***酸、脯胺酸及蘇胺酸，三肽中之P2胺基酸選自由天冬胺酸及麩胺酸組成之群，且三肽中之P1胺基酸為丙胺酸。
在另一實施態樣中，三肽中之P3胺基酸選自由以下組成之群：丙胺酸、白胺酸、麩胺酸、離胺酸、O -烯丙基酪胺酸、***酸、脯胺酸及蘇胺酸，三肽中之P2胺基酸為丙胺酸，且三肽中之P1胺基酸選自由以下組成之群：丙胺酸、天冬胺酸、瓜胺酸、γ-羧基-麩胺酸、麩胺酸、麩醯胺酸、白胺酸、離胺酸、甲硫胺酸亞碸及硒代甲硫胺酸。在另一實施態樣中，三肽中之P3胺基酸選自由以下組成之群：丙胺酸、白胺酸、麩胺酸、離胺酸、O -烯丙基酪胺酸、***酸、脯胺酸及蘇胺酸，三肽中之P2胺基酸為丙胺酸，且三肽中之P1胺基酸選自由天冬胺酸及麩胺酸組成之群。在另一實施態樣中，三肽中之P3胺基酸選自由以下組成之群：丙胺酸、白胺酸、麩胺酸、離胺酸、O -烯丙基酪胺酸、***酸、脯胺酸及蘇胺酸，三肽中之P2胺基酸為丙胺酸，且三肽中之P1胺基酸為丙胺酸。
在另一實施態樣中，三肽中之P3胺基酸為D-白胺酸或D-丙胺酸，三肽中之P2胺基酸選自由以下組成之群：丙胺酸、纈胺酸、白胺酸、甲硫胺酸、天冬胺酸、麩胺酸、天冬醯胺、麩醯胺酸、絲胺酸、蘇胺酸、酪胺酸、瓜胺酸、甲硫胺酸亞碸及γ-羧基-麩胺酸，且三肽中之P1胺基酸選自由以下組成之群：丙胺酸、天冬胺酸、瓜胺酸、γ-羧基-麩胺酸、麩胺酸、麩醯胺酸、白胺酸、離胺酸、甲硫胺酸亞碸及硒代甲硫胺酸。在另一實施態樣中，三肽中之P3胺基酸為D-白胺酸或D-丙胺酸，三肽中之P2胺基酸選自由以下組成之群：丙胺酸、纈胺酸、白胺酸、甲硫胺酸、天冬胺酸、麩胺酸、天冬醯胺、麩醯胺酸、絲胺酸、蘇胺酸、酪胺酸、瓜胺酸、甲硫胺酸亞碸及γ-羧基-麩胺酸，且三肽中之P1胺基酸選自由天冬胺酸及麩胺酸組成之群。在另一實施態樣中，三肽中之P3胺基酸為D-白胺酸或D-丙胺酸，三肽中之P2胺基酸選自由以下組成之群：丙胺酸、纈胺酸、白胺酸、甲硫胺酸、天冬胺酸、麩胺酸、天冬醯胺、麩醯胺酸、絲胺酸、蘇胺酸、酪胺酸、瓜胺酸、甲硫胺酸亞碸及γ-羧基-麩胺酸，且三肽中之P1胺基酸為丙胺酸。
在另一實施態樣中，三肽中之P3胺基酸為D-白胺酸或D-丙胺酸，三肽中之P2胺基酸選自由天冬胺酸及麩胺酸組成之群，且三肽中之P1胺基酸選自由以下組成之群：丙胺酸、天冬胺酸、瓜胺酸、γ-羧基-麩胺酸、麩胺酸、麩醯胺酸、白胺酸、離胺酸、甲硫胺酸亞碸及硒代甲硫胺酸。在另一實施態樣中，三肽中之P3胺基酸為D-白胺酸或D-丙胺酸，三肽中之P2胺基酸選自由天冬胺酸及麩胺酸組成之群，且三肽中之P1胺基酸選自由天冬胺酸及麩胺酸組成之群。在另一實施態樣中，三肽中之P3胺基酸為D-白胺酸或D-丙胺酸，三肽中之P2胺基酸選自由天冬胺酸及麩胺酸組成之群，且三肽中之P1胺基酸為丙胺酸。
在另一實施態樣中，三肽中之P3胺基酸為D-白胺酸或D-丙胺酸，三肽中之P2胺基酸為丙胺酸，且三肽中之P1胺基酸選自由以下組成之群：丙胺酸、天冬胺酸、瓜胺酸、γ-羧基-麩胺酸、麩胺酸、麩醯胺酸、白胺酸、離胺酸、甲硫胺酸亞碸及硒代甲硫胺酸。在另一實施態樣中，三肽中之P3胺基酸為D-白胺酸或D-丙胺酸，三肽中之P2胺基酸為丙胺酸，且三肽中之P1胺基酸選自由天冬胺酸及麩胺酸組成之群。
在一些實施態樣中，三肽中之P3胺基酸選自由以下組成之群：丙胺酸、D-丙胺酸、D-白胺酸、麩胺酸、L-白胺酸、O -烯丙基酪胺酸、***酸、脯胺酸、蘇胺酸及纈胺酸。
在一些實施態樣中，三肽中之P2胺基酸選自由以下組成之群：α-胺基異丁酸、丙胺酸、D-白胺酸、麩胺酸、麩醯胺酸、甘胺酸、白胺酸、脯胺酸、絲胺酸及纈胺酸。
在一些實施態樣中，三肽中之P1胺基酸選自由以下組成之群：丙胺酸、天冬胺酸、瓜胺酸、γ-羧基-麩胺酸、麩胺酸、麩醯胺酸、白胺酸及離胺酸。
在一些實施態樣中，三肽中之P3胺基酸選自由以下組成之群：丙胺酸、D-丙胺酸、D-白胺酸、麩胺酸、L-白胺酸、O -烯丙基酪胺酸、***酸、脯胺酸、蘇胺酸及纈胺酸，三肽中之P2胺基酸選自由以下組成之群：α-胺基異丁酸、丙胺酸、D-白胺酸、麩胺酸、麩醯胺酸、甘胺酸、白胺酸、脯胺酸、絲胺酸及纈胺酸，且三肽中之P1胺基酸選自由以下組成之群：丙胺酸、天冬胺酸、瓜胺酸、γ-羧基-麩胺酸、麩胺酸、麩醯胺酸、白胺酸及離胺酸，其中-P3-P2-P1-不為-Glu-Val-Cit-或-Asp-Val-Cit-。在本文所提供之變化型式中之任一者的一些實施態樣中， -P3-P2-P1-不為-Glu-Val-Cit-或-Asp-Val-Cit-。
在三肽之一些實施態樣中，P3胺基酸呈D-胺基酸組態，P2或P1胺基酸中之一者具有疏水性不大於白胺酸(例如不大於纈胺酸)之脂族側鏈，且P2或P1胺基酸中之另一者為極性胺基酸或為帶負電荷的(例如在血漿生理pH值下)。在一些實施態樣中，P3胺基酸呈D-胺基酸組態，P2胺基酸具有疏水性不大於白胺酸(例如不大於纈胺酸)之脂族側鏈，且P1胺基酸為極性胺基酸或為帶負電荷的(例如在血漿生理pH值下)。在一些實施態樣中，P3胺基酸呈D-胺基酸組態，P1胺基酸具有疏水性不大於白胺酸(例如不大於纈胺酸)之脂族側鏈，且P2胺基酸為極性胺基酸或帶負電荷(例如在血漿生理pH值下)。在一些實施態樣中，-P3-P2-P1-選自由以下組成之群：-D-Leu-Ala-Asp-、 -D-Leu-Ala-Glu-、-D-Ala-Ala-Asp-及-D-Ala-Ala-Glu-。在一些實施態樣中，-P3-P2-P1-選自由以下組成之群： -D-Leu-Asp-Ala-、-D-Leu-Glu-Ala-、-D-Ala-Asp-Ala-及 -D-Ala-Glu-Ala-。
在其他尤佳實施態樣中，-P2-P1-選自由以下組成之群：-Ala-Glu-、-Leu-Glu-、-Ala-Met(O)-及 -Leu-Met(O)-，且兩個胺基酸之側鏈均呈L-立體化學組態。在一些實施態樣中，-P2-P1-選自由以下組成之群： -Ala-Ala-、-Ala-Asp-、-Ala-Cit-、-Ala-(γ-羧基-麩胺酸)-、-Ala-Glu-、-Ala-Gln-、-Ala-Leu-、-Ala-Lys-、 -Ala-Met(O)-、-Ala-硒代甲硫胺酸-、-D-Leu-Glu-、 -Leu-Glu-、-Glu-Ala-、-Glu-Cit-、-Glu-Leu-、 -Gly-Glu-、-Leu-Cit-、-Leu-Glu-、-Leu-Lys-、 -Leu-Met(O)-、-(萘基丙胺酸)-Lys-、-Pro-Cit-、 -Ser-Asp-、-Ser-Glu-、-Val-Cit-及-Val-Gln-。在一些實施態樣中，-P2-P1-為-Ala-Glu-。在一些實施態樣中， -P2-P1-為-Ala-Asp-。
在一些實施態樣中，-P3-P2-選自由以下組成之群：-Ala-Ser-、-Ala-Ala-、-Leu-Ala-、-Leu-Glu-、 -Leu-Gly-、-Leu-Leu-、Leu-Ser-、-Leu-Val-、-Glu-Ala-、-Glu-Leu-、-Glu-Pro-、-Glu-Val-、-Lys-Leu-、-(O -烯丙基酪胺酸)-Leu-、-(O -烯丙基酪胺酸)-Pro-、-Phe-Ser-、-Pro-Leu-、-Pro-(萘基丙胺酸)-及-Thr-Glu-。在一些實施態樣中，-P3-P2-選自由以下組成之群：-Ala-Ser-、 -D-Ala-Ala-、-D-Leu-Ala-、-D-Leu-Glu-、-D-Leu-Gly-、 -D-Leu-Leu-、D-Leu-Ser-、-D-Leu-Val-、-Glu-Ala-、 -Glu-Leu-、-Glu-Pro-、-Glu-Val-、L-Leu-Ala-、 -Lys-Leu-、-(O -烯丙基酪胺酸)-D-Leu-、-(O -烯丙基酪胺酸)-Pro-、-Phe-Ser-、-Pro-Leu-、-Pro-(萘基丙胺酸)-及 -Thr-Glu-。在一些實施態樣中，-P3-P2-為-D-Leu-Ala-或 -L-Leu-Ala-。在一些實施態樣中，-P3-P2-為 -D-Leu-Ala-。在一些實施態樣中，-P3-P2-為-D-Ala-Ala-。
在一些實施態樣中，-P3-P2-P1-選自由以下組成之群：-Ala-Ser-Asp-、-Ala-Ser-Glu-、 -Ala-Ala-Cit-、-Ala-Ala-Glu-、-Leu-Ala-Ala-、 -Leu-Ala-Asp-、-Leu-Ala-Cit-、-Leu-Ala-(γ-羧基-麩胺酸)-、-Leu-Ala-Glu-、-Leu-Ala-Gln-、-Leu-Ala-Leu-、 -Leu-Ala-Lys-、-Leu-Ala-Met(O)-、-Leu-Ala-(硒代甲硫胺酸)-、-Leu-Glu-Ala-、-Leu-Glu-Cit-、-Leu-Gly-Glu-、 -Leu-Leu-Cit-、-Leu-Leu-Glu-、-Leu-Leu-Lys-、 -Leu-Leu-Met(O)-、Leu-Ser-Glu-、-Leu-Val-Gln-、 -Glu-Ala-Leu-、-Glu-Leu-Cit-、-Glu-Pro-Cit-、 -Lys-Leu-Cit-、-(O -烯丙基酪胺酸)-Leu-Glu-、-(O -烯丙基酪胺酸)-Pro-Cit-、-Phe-Ser-Glu-、-Pro-Leu-Glu-、-Pro-(萘基丙胺酸)-Lys-及-Thr-Glu-Leu-。在一些實施態樣中，-P3-P2-P1-選自由以下組成之群：-Ala-Ser-Asp-、 -Ala-Ser-Glu-、-D-Ala-Ala-Cit-、-D-Ala-Ala-Glu-、 -D-Leu-Ala-Ala-、-D-Leu-Ala-Asp-、-D-Leu-Ala-Cit-、 -D-Leu-Ala-(γ-羧基-麩胺酸)-、-D-Leu-Ala-Glu-、 -D-Leu-Ala-Gln-、-D-Leu-Ala-Leu-、-D-Leu-Ala-Lys-、 -D-Leu-Ala-Met(O)-、-D-Leu-Ala-(硒代甲硫胺酸)-、 -D-Leu-Glu-Ala-、-D-Leu-Glu-Cit-、-D-Leu-Gly-Glu-、 -D-Leu-Leu-Cit-、-D-Leu-Leu-Glu-、-D-Leu-Leu-Lys-、 -D-Leu-Leu-Met(O)-、-D-Leu-Ser-Glu-、 -D-Leu-Val-Gln-、-Glu-Ala-Leu-、-Glu-Leu-Cit-、 -Glu-Pro-Cit-、-L-Leu-Ala-Glu-、-Lys-Leu-Cit-、-(O -烯丙基酪胺酸)-D-Leu-Glu-、-(O -烯丙基酪胺酸)-Pro-Cit-、 -Phe-Ser-Glu-、-Pro-Leu-Glu-、-Pro-(萘基丙胺酸)-Lys-及-Thr-Glu-Leu-。在一些實施態樣中，-P3-P2-P1-選自由以下組成之群：Ala-Cit-Cit-、-Cit-Cit-Cit-、-Cit-Glu-Cit-、-Cit-Glu-Glu-、-D-Leu-Ala-Glu-、-D-Leu-Ala-Lys-、 -D-Leu-Cit-Glu-、-D-Leu-Glu-Lys-、-D-Leu-Leu-Cit-、 -D-Leu-Leu-Glu-、-D-Leu-Leu-Lys-、 -D-Leu-Leu-Met(O)-、-D-Leu-Phe-Glu-、-Glu-Ala-Glu-、 -Glu-Ala-Met(O)-、-Glu-Glu-Cit-、-Leu-(萘基丙胺酸)-Lys-、-Lys-Glu-Met(O)-、-Pro-Ala-Cit-、-Pro-Ala-Glu-、-Pro-Cit-Cit-、-Pro-Cit-Glu-、-Pro-Glu-Ala-、 -Pro-Glu-Cit-、-Pro-Glu-Glu-、-Pro-Glu-Lys-、 -Pro-Lys-Glu-、-Pro-(萘基丙胺酸)-Lys-及-Thr-Cit-Cit-。
應瞭解，配體藥物共軛物之肽可裂解單元(W)為可含有超過三個胺基酸之肽序列。在含有四個或更多個胺基酸之肽序列中，本文所描述之三肽為序列內之任何三個連續胺基酸(亦即，三肽可佔據序列之任何三個相鄰位置)。因此，本文關於P1、P2及P3所描述之實施態樣可適用於對應於肽可裂解單元(W)之三個連續胺基酸的任何位置之胺基酸。舉例而言，若由細胞內蛋白酶識別之三肽定位於位置-P6-P5-P4-，則本文所描述之P3之實施態樣適用於P6，本文所描述之P2之實施態樣適用於P5，且本文所描述之P1之實施態樣適用於P4。在另一實例中，若由細胞內蛋白酶識別之三肽定位於位置-P4-P3-P2-，則本文所描述之P3之實施態樣適用於P4，本文所描述之P2之實施態樣適用於P3，且本文所描述之P1之實施態樣適用於P2。關於其中三肽定位於-P3-P2-P1-以外之位置的肽可裂解單元(W)，進一步瞭解，肽可裂解單元(W)之P1胺基酸為便於例如藉由肽鏈內切酶作用裂解之胺基酸。在一些實施態樣中，P1胺基酸不呈D-組態。在一些實施態樣中，C端胺基酸為γ-羧基-麩胺酸。在其中肽可裂解單元含有四個或更多個胺基酸之一些實施態樣中，該三肽以外之胺基酸不增加肽序列之總疏水性。在一些實施態樣中，當肽可裂解單元還含有該三肽外之胺基酸時，額外的胺基酸不含疏水殘基(例如比白胺酸更疏水之殘基或比纈胺酸更疏水之殘基)。
給定化合物的疏水性(包括不同化合物之相對疏水性)可藉由此項技術中已知之方法透過實驗或透過運算評估。疏水性可例如藉由測定分配係數P來評估，分配係數P可透過實驗測定且以logP表示，或其可透過運算測定且以clogP表示。clogP之值可使用各種類型之市售軟體(諸如ChemDraw或DataWarrior)計算。此等方法可用於評估胺基酸之疏水性或用於評估不同胺基酸之相對疏水性。此等方法亦可用於評估如本文所描述之藥物-連接子化合物之疏水性或用於評估不同藥物-連接子化合物之相對疏水性。
在一些實施態樣中，提供配體-藥物共軛物(例如ADC)，其活性在活體內或活體外與比較配體藥物共軛物(例如含有-val-cit-之二肽ADC)相比為較小，但毒性亦顯著較小。在不受理論約束之情況下，該配體-藥物共軛物不要求相同活性，因為若其活性較小且毒性較小則治療窗將仍會增加。展現此效應之例示性化合物可包括本文中之化合物38及39，且AIB在位置P2。
在其他尤佳實施態樣中，三肽具有以下結構：
Figure 02_image137
或其鹽，特定而言醫藥學上可接受之鹽，其中該三肽N端胺基酸(其在前述藥物連接子化合物及由其衍生之配體藥物共軛物之藥物連接子部分中被指示為P3)之氮原子處之波形線分別指示以醯胺鍵形式共價連接至P4胺基酸殘基(當W包含四肽，其中賦予選擇性之三肽為該四肽之C端組分時)或A'或LR /LR ' (當W由該三肽組成且下標a'為1或0時)之位點，且在該三肽C端胺基酸殘基(其在前述藥物連接子化合物及由其衍生之配體藥物共軛物之藥物連接子部分中被指示為P1)處之波形線為共價連接至P-1殘基(當W包含四肽，其中賦予選擇性之三肽為該四肽之N端組分時)或 -Yy -D(當W由該三肽組成時)之位點；且 其中呈R 立體化學組態之R36 為-CH(CH3 )2 ，R35 為 -CH(CH3 )2 或-CH3 ，且R34 為-CH2 SH、-CH2 CH2 CH2 CH2 NH2 、-CH(OH)CH3 或-CH2 CH2 CO2 H。
在更尤佳藥物連接子部分及藥物連接子化合物中，R36 為呈R 立體化學組態之-CH(CH3 )2 且R34 為 -CH2 CH2 CO2 H。在尤其較佳實施態樣中，R36 為呈R 立體化學組態之-CH(CH3 )2 ；且R35 為-CH3 且R34 為-CH2 CH2 CO2 H，兩者均如所示呈S 立體化學組態。
在一些實施態樣中，正常組織勻漿來自骨髓且腫瘤組織勻漿來自相同物種之異種移植模型之腫瘤，其中與具有val-cit二肽可裂解單元之比較共軛物相比相較於正常組織勻漿對由腫瘤組織勻漿蛋白分解的選擇性更大。在一些實施態樣中，在異種移植模型中，相較於正常組織，肽可裂解單元包含賦予選擇性之三肽之抗體藥物共軛物對腫瘤組織的選擇性更大由實質上保留由投與肽可裂解單元為val-cit之抗體藥物共軛物所獲得的腫瘤生長型態得到證實，且與當對應二肽系非結合對照相比時，在投與對應基於三肽之非結合對照共軛物之情況下對正常骨髓顯示降低之非目標介導之細胞毒性，其中該對正常細胞之細胞毒性引起與以最大耐受劑量投與二肽系ADC相關的有害事件。在一些實施態樣中，正常組織為骨髓、肝臟、腎臟、食道、***或角膜。
在彼等實施態樣中之一些中，由來自如異種移植模型中所用之相同或不同囓齒動物物種之正常組織(例如骨髓、肝臟、腎臟、食道、***或角膜組織)的組織學觀測到降低之非目標介導之細胞毒性，在投與對應於靶向基於三肽之抗體藥物共軛物之非結合對照共軛物後，顯示與投與二肽系非結合對照相比單核細胞之核染色損失有所減少，從而為基於三肽之ADC提供改良之治療窗。在一些實施態樣中，正常組織為骨髓。在一較佳實施態樣中，將小鼠用於異種移植研究中且骨髓來自大鼠，因為大鼠比小鼠對MMAE毒性更敏感。在其他實施態樣中，藉由嗜中性白血球及/或網狀紅血球損失減少及/或自該損失更快恢復顯示耐受性改良。2.2.4 延伸體單元
在以上及以下實施態樣中，配體藥物共軛物之藥物連接子部分內的一級連接子可例示以下之通式： -M2 -A(BU)-[HE]-AO -B-、-M2 -A(BU)-[HE]-A'a' -、 -M2 -A-[HE]-AO -B-、-M2 -A-[HE]-A'a' 、 -M3 -A(BU)-[HE]-AO -B-或-M3 -A(BU)-[HE]-A'a' -，且可用於製備配體藥物共軛物之藥物連接子化合物之一級連接子可例示以下之通式：M1 -A(BU)-[HE]-AO -B- 、M1 -A(BU)-[HE]-A'a' -、M1 -A-[HE]-AO -B-或 M1 -A-[HE]-A'a' -，其中BU為非環或環狀鹼性單元；[HE]當存在時較佳為-C(=O)-，其由存在之第一視情況存在之延伸體單元(A)提供；M2 為琥珀醯亞胺部分；M3 為琥珀酸醯胺部分且M1 為馬來醯亞胺部分，其中A表示單一離散單元或A之第一亞單元，A之第一亞單元有時指示為A1 (當AO 作為A之第二亞單元存在時)，A之第二亞單元有時指示為A2 ，其中A/A2 共價連接至沒有分枝單元(B)之彼等一級連接子中之A'且其中下標a'為1使得A'變為A之亞單元，或共價連接至W (當下標a'為0時)，或共價連接至含有分枝單元之彼等一級連接子中之B。
當AO 或A'存在於任一彼等實施態樣時，第一延伸體單元(A)之該亞單元指示為A2 以表示其為A之亞單元，其中較佳AO /A'在結構上獨立地對應於視情況經取代之含胺酸(例如胺基酸)殘基，其中含胺酸之羧酸端之殘基共價連接至存在B之彼等一級連接子中之B，或若以A2 存在則連接至A'，或連接至其中B及A'不存在之彼等一級連接子中之W，其中該共價連接透過醯胺官能基進行且胺端之殘基共價連接至A之其餘部分。若B存在且AO 不存在，則A為鍵結至B之單一離散單元，且若B不存在且A為單一離散單元，則A透過由A提供之[HE]鍵結至W，其中[HE]為-C(=O)-。
在彼等實施態樣中之一些中，AO /A'具有或包含式-LP (PEG)-，其中LP 為平行連結單元且PEG為PEG單元。在彼等實施態樣中，PEG單元含有總共2至36個伸乙基氧基單體單元且LP 為含胺酸殘基，較佳為胺基酸殘基，其在配體藥物共軛物化合物之藥物連接子部分之LU或藥物連接子化合物之LU'內透過醯胺官能基共價連接。在較佳實施態樣中，PEG單元含有總共4至24個連續伸乙基氧基單體單元。
在其他彼等實施態樣中，AO /A’為具有式3a 、式4a 或式5a 之結構的含胺酸殘基：
Figure 02_image139
其中毗鄰氮原子之波形線指示共價連接至A之其餘部分的位點，且毗鄰羰基碳原子之波形線指示共價連接至B (若B存在)或A’/W(當B不存在時)之位點；下標e及f獨立地為0或1；且 G為氫、-OH、-ORPR 、-CO2 H、-CO2 RPR 或視情況經取代之C1 -C6 烷基，其中視情況存在之取代基當存在時選自由以下組成之群：-OH、-ORPR 、-CO2 H及-CO2 RPR ；且其中RPR 為適合之保護基，或 G為N(RPR )(RPR )或視情況經取代之C1 -C6 烷基，其中視情況存在之取代基當存在時為N(RPR )(RPR )，其中RPR 獨立地為保護基或RPR 一起形成適合之保護基，或 G為-N(R45 )(R46 )或視情況經取代之C1 -C6 烷基，其中視情況存在之取代基當存在時為-N(R45 )(R46 )，其中R45 及R46 中之一者為氫或RPR ，其中RPR 為適合之保護基，且另一者為氫或視情況經取代之C1 -C6 烷基； R38 為氫或視情況經取代之C1 -C6 烷基；且 R39 -R44 獨立地選自由以下組成之群：氫、視情況經取代之C1 -C6 烷基、視情況經取代之C6 -C20 芳基及視情況經取代之C5 -C20 雜芳基，或 R39 、R40 與同兩者連接之碳原子一起確定C3 -C6 碳環基，且R41 -R44 如本文所定義， 或R43 、R44 與同兩者連接之碳原子一起確定C3 -C6 碳環基，且R39 -R42 如本文所定義， 或R40 及R41 ，或R40 及R43 ，或R41 及R43 與同兩者連接之碳原子或雜原子以及***彼等碳原子及/或雜原子之間的原子一起確定C5 -C6 碳環基或C5 -C6 雜環基，且R39 、R44 及R40 -R43 之其餘部分如本文所定義， 或AO /A’為α-胺基或β-胺基酸殘基，其中α-胺基殘基之氮原子共價連接至A之其餘部分，且其羧酸殘基之羰基碳原子共價連接至B(若B存在)或W(當B不存在時)，其中兩種連接較佳透過醯胺官能基進行。2.2.5 間隔子單元
間隔子單元為藥物連接子化合物之二級連接子(LO )或配體藥物共軛物化合物之由以下結構表示的藥物連接子部分中之連接子單元的組分：
Figure 02_image141
其中下標y為1或2，指示存在一或兩個間隔子單元，使得Yy 為Y或-Y-Y’-，其中下標a為0或1，A’為視情況存在之第一延伸體單元，其作為存在(當下標a’為1且在LR /LR ’中不存在分枝單元(B)時)之第一視情況存在之延伸體單元(A)之亞單元變為一級連接子(LR /LR ’)的組分；W為式 -[Pn ]…[P3]-[P2]-[P1]-或[Pn ]…[P3]-[P2]-[P1]-[P-1]-之肽可裂解單元，其中下標n在0至12 (例如0-10、3-12或3-10)範圍內，且Pn ...P3、P2、P1、P-1為胺基酸殘基，其中P1、P2及P3為三肽胺基酸殘基，其如本文所描述賦予相較於正常組織勻漿對腫瘤組織勻漿引起之蛋白酶裂解之選擇性，及/或其改變配體藥物共軛物之生物分佈，使得當與其中肽可裂解單元為二肽val-cit之比較肽的生物分佈相比時，與正常組織相比，肽可裂解單元包含P3-P2-P1三肽之共軛物有利於腫瘤組織。
當W不含P-1殘基時，對LO 之蛋白分解作用釋放式-Y-D(當下標y為1時)或-Y-Y'-D (當下標y為2時)之藥物連接子片段，其中Y為第一間隔子單元，且Y'為第二間隔子單元，隨後彼等片段中之間隔子單元經歷自降解以完成D作為游離藥物之釋放。當W含有P-1殘基時，對LO 之蛋白分解作用釋放式[P-1]-Y-D或[P-1]-Y-Y’-D之第一藥物連接子片段。然而，為方便起見，P-1殘基將與描述此類肽可裂解單元之SEQ ID中的序列相關。接著，完成游離藥物之釋放需要肽鏈端切酶作用以移除[P-1]胺基酸殘基，從而類似於W不含P-1殘基時提供Y-D或-Y-Y'-D作為第二藥物連接子片段。-Y-Y’-D連接子片段接著進行至式Y’-D之第三藥物連接子片段。在任一變異體中，Y-D或Y'-D自發分解以完成D作為游離藥物之釋放。
與肽裂解單元(W)之P1或P-1共價鍵結的自降解性間隔子單元(Y)包含如本文所定義之自降解性部分或由其組成，使得W之酶促加工可活化Y之自降解性部分以使其自毀，因此起始藥物單元作為游離藥物之釋放。在其中下標y為1之彼等態樣中，Y之自降解性部分直接連接至藥物單元之視情況經取代之雜原子。如前所述，當下標y為2時，則Yy 為-Y-Y'-，其中Y為共價連接至肽可裂解單元(W)之第一自降解性間隔子，Y'為第二自降解性間隔子單元，其在一些態樣中為Y與D之間共享的胺基甲酸酯官能基。在其他態樣中，Y'為亞甲基胺基甲酸酯單元。在任一態樣中，Yy 鍵結至藥物單元(D)，使得由肽鏈內切酶對共價連接W與Y之醯胺鍵之作用起始的第一自降解性間隔子單元Y自發自毀或肽鏈端切酶對[P-1]-D之醯胺鍵之作用釋放Y'-D，其接著自發分解以完成D作為游離藥物之釋放。
在一些實施態樣中，Y含有鍵結至-D或-Y'-D之PAB或PAB相關自降解性部分，其中下標y分別為1或2，其具有由遮蔽之推電子基團(EDG)取代之中央伸芳基或伸雜芳基以及透過共享之雜原子或官能基鍵結至D或透過中間第二間隔子單元(Y’)間接鍵結至D的苯甲基碳，其中遮蔽之EDG及苯甲基碳取代基彼此為鄰位或對位(亦即1,2或1,4取代模式)。在彼等實施態樣中，第二間隔子單元(Y’)能夠自降解或自發分解或不存在。
具有PAB或PAB相關自降解性部分之自降解性間隔子單元之例示性結構由以下表示，其中中央伸(雜)芳基具有必要之1,2或1,4取代模式從而允許1,4-片段化或1,6-片段化以便釋放D或[P-1]-D (當下標y為1時)或-Y’-D或-[P-1]-Y’-D(其中下標y為2)，其中Y'能夠自降解或自發分解：
Figure 02_image143
， 其中毗鄰J之波形線指示共價連接至P1 (若賦予選擇性之三肽為直接連接之-Y’-D)或P-1(若賦予選擇性之三肽為透過該胺基酸殘基間接連接之-Y’-D)之位點，且另一波形線指示共價連接至-Y’-D之位點，其中J為在允許時視情況經取代之雜原子(亦即，視情況經取代之-NH-)，Y’為視情況存在之第二間隔子單元，D為藥物單元，其中當Y’不存在時，Y’由來自D之雜原子置換，使得D變為D’，其為藥物單元之其餘部分；且 其中V、Z1 、Z2 、Z3 獨立地為=N或=C(R24 )-，其中各R24 獨立地選自由以下組成之群：氫及視情況經取代之C1 -C12 烷基、視情況經取代之C2 -C12 烯基、視情況經取代之C2 -C12 炔基、視情況經取代之C6 -C20 芳基、視情況經取代之(C6 -C20 芳基)-C1 -C6 烷基-、視情況經取代之C5 -C20 雜芳基及視情況經取代之(C5 -C20 雜芳基)-C1 -C6 烷基-及鹵素以及拉電子基團；R’為氫或視情況經取代之C1 -C12 烷基、視情況經取代之C2 -C12 烯基、視情況經取代之C2 -C12 炔基、視情況經取代之C6 -C20 芳基、視情況經取代之(C6 -C20 芳基)-C1 -C6 烷基-、視情況經取代之C5 -C20 雜芳基或視情況經取代之C5 -C20 雜芳基)-C1 -C6 烷基-或推電子基團；且R8 及R9 獨立地選自由以下組成之群：氫、視情況經取代之C1 -C12 烷基、視情況經取代之C2 -C12 烯基、視情況經取代之C2 -C12 炔基、視情況經取代之C6 -C20 芳基及視情況經取代之C5 -C20 雜芳基，或R8 與R9 兩者與其所連接之碳原子一起確定C3 -C8 碳環基。在較佳實施態樣中，V、Z1 、Z2 中之一或多者或V、Z2 、Z3 中之一或多者為=CH-。在其他較佳實施態樣中，R’為氫或推電子基團，包括C1 -C6 醚，諸如-OCH3 及-OCH2 CH3 ，或R8 、R9 中之一者為氫且另一者為氫或C1 -C4 烷基。在更佳實施態樣中，V、Z1 及Z2 中之兩者或更多者為=CH-，或V、Z2 及Z3 中之兩者或更多者為=CH-。在其他更佳實施態樣中，R8 、R9 及R’各自為氫。
連接J之鍵或P1與P-1之間的醯胺鍵之分子內裂解分別引起Y’-D或-[P-1]-Y’-D之釋放，其中-[P-1]-Y’-D可藉由目標細胞之細胞內蛋白酶的肽鏈端切酶活性轉化為-Y’-D。
在一些較佳實施態樣中，其中下標y為2之 -Yy -D具有如下-Y-Y’-D之結構：
Figure 02_image145
， 其中-N(Ry )D’表示D，其中D’為D之其餘部分，且其中虛線指示視情況存在之Ry 與D之環化，其中Ry 在未與D’環化之情況下為視情況經取代之C1 -C6 烷基，或當與D’環化時為視情況經取代之C1 -C6 伸烷基；-J-在允許時為視情況經取代之雜原子，包括O、S及視情況經取代之-NH-，其中J、包含J之官能基或P-1如相鄰波形線所指示鍵結至三肽之P1，該三肽賦予相較於由自由循環蛋白酶蛋白分解對細胞內蛋白分解之選擇性及相較於由正常組織勻漿蛋白分解對由腫瘤組織勻漿蛋白分解之選擇性及/或相較於向正常組織之生物分佈向腫瘤組織之選擇性生物分佈，其中該鍵之裂解起始D作為含二級胺生物活性化合物自配體藥物共軛物組合物之化合物的釋放，且其中剩餘可變基團如上文所定義。彼等變量經選擇使得由目標細胞內之肽可裂解單元W之加工釋放時，J之反應性與自PAB或PAB型自降解性部分消除之Y'-D或D之pKa以及該消除產生之醌-甲基化物型中間物之穩定性相平衡。
在彼等實施態樣中，***D與間隔子單元Y之PAB或PAB相關自降解性部分的苯甲基碳之間的部分表示-C(R8 )(R9 )-Y’-D中之Y'，使得Y與D之間共享胺基甲酸酯官能基。在此類實施態樣中，間隔子單元Y斷裂且Y'-D排出，隨後失去CO2 以便釋放作為生物活性化合物之D，其具有一級或二級胺，其氮原子鍵結至包含PAB或PAB相關自降解性部分之二級連接子。
在其他較佳實施態樣中，具有結合至-Y’-D或-D之PAB或PAB型部分之-Yy -D具有以下結構：
Figure 02_image147
， 其中毗鄰氮原子之波形線指示共價連接至P-1或W之三肽之點，該三肽賦予相較於自由循環蛋白酶蛋白分解對細胞內蛋白分解之選擇性及相較於由正常組織勻漿蛋白分解對由腫瘤組織勻漿蛋白分解之選擇性，其中該鍵易發生受細胞內蛋白分解，Y'為視情況存在之間隔子單元，其不存在時經D之酚氧原子或硫原子置換，且當存在時為氮原子來自D之胺基甲酸酯官能基；R33 為氫或視情況經取代之C1 -C6 烷基，特定而言為氫或C1 -C4 烷基，較佳為氫、-CH3 或-CH2 CH3 ，更佳為氫。在更佳實施態樣中，V、Z1 及Z2 各自為=CH-且R33 為氫。
在尤其較佳實施態樣中，-Yy -D具有以下結構：
Figure 02_image149
其中-N(Ry )D’具有其先前含義，且波形線指示共價連接至P1；Q為-C1 -C8 烷基、-O-(C1 -C8 烷基)或其他推電子基團、-鹵素、-硝基或-氰基或其他拉電子基團(較佳Q為 -C1 -C8 烷基、-O-(C1 -C8 烷基)、鹵素、硝基或氰基)；且下標m為在0-4範圍內之整數(亦即中央伸芳基沒有其他取代基或有1-4個其他取代基)。在較佳實施態樣中，下標m為0、1或2，且各Q為獨立選擇之推電子基團。
在尤其較佳實施態樣中，-Yy -分別具有以下結構：
Figure 02_image151
其中毗鄰羰基碳原子之波形線指示共價連接至D之氧或硫原子的位點以形成D與Y之間共享碳酸酯或硫代胺基甲酸酯官能基，其中該共享官能基為Y'，或共價連接至二級氮原子以形成D與Y之間共享的胺基甲酸酯，其中該共享官能基為Y’，且毗鄰氮原子之波形線指示共價連接位點為連接P1之羧酸殘基之醯胺鍵。
其中Y為不為PAB或PAB型自降解性間隔子單元之自降解性間隔子單元的通式-Y-Y’-之其他結構說明於以下藥物連接子部分中。
Figure 02_image153
在不受理論約束之情況下，具有三肽肽可裂解單元之配體藥物共軛物及藥物連接子化合物的二級連接子之Y(其中說明Y為PAB自降解性間隔子單元且Y’為胺基甲酸酯官能基)的依序自降解如下所示：
Figure 02_image155
2.2.5 藥物連接子
一般而言，式1A之藥物連接子部分具有以下結構：
Figure 02_image157
其中波形線指示LB 共價連接至配體單元，A為第一視情況存在之延伸體單元；下標a為0或1，指示A不存在或存在，B為視情況存在之分枝單元；下標b為0或1，分別指示B不存在或存在，限制條件為當下標q在2至4範圍內時下標b為1，且 LO 為具有下式之二級連接子：
Figure 02_image159
或其鹽，特定而言醫藥學上可接受之鹽，其中A’為第二視情況存在之延伸體單元，下標a’為0或1，分別指示A’不存在或存在，Y為視情況存在之間隔子單元，下標y為0、1或2，分別指示不存在或存在1或2個間隔子單元，且P1、P2及P3為胺基酸殘基，其一起提供相較於正常組織勻漿蛋白分解對腫瘤組織勻漿蛋白分解之選擇性，及/或一起提供與正常組織相比式1 共軛物向腫瘤組織中之較佳生物分佈，其中由共軛物釋放之游離藥物對正常組織的細胞毒性至少部分引起典型地與投與治療有效量之比較二肽系共軛物有關的有害事件，其中在P1與Y之間的共價鍵處(若下標y為1或2)或在P1與D之間的共價鍵處(若下標y為0)發生蛋白分解裂解，或 LO 為具有下式之二級連接子：
Figure 02_image161
或其鹽，特定而言醫藥學上可接受之鹽，其中A’、a’、Y及y保留其先前含義，且P1、P2及P3為胺基酸殘基，其視情況加上P-1胺基酸一起提供相較於正常組織勻漿蛋白分解對腫瘤組織勻漿蛋白分解之選擇性，及/或一起提供與正常組織相比式1 共軛物向腫瘤組織中之較佳生物分佈，其中由共軛物釋放之游離藥物對正常組織之細胞毒性至少部分引起典型地與投與治療有效量之比較二肽系共軛物有關的有害事件，其中在P1與P-1之間的共價鍵處發生蛋白分解裂解以釋放具有[P-1]-Yy -D結構之連接子片段，或 LO 為具有下式之二級連接子：
Figure 02_image163
或其鹽，特定而言醫藥學上可接受之鹽，其中A’、a’、Y及y保留其先前含義，且P-1及P1、P2、P3…Pn 為胺基酸，其中下標n在0至12(例如0-10、3-12或3-10)範圍內，且P1、P2及P3視情況加上P-1一起提供相較於正常組織勻漿蛋白分解對腫瘤組織勻漿蛋白分解之選擇性，及/或一起提供與正常組織相比由藥物連接子化合物製備之式1 共軛物向腫瘤組織中之較佳生物分佈，其中由共軛物釋放之游離藥物對正常組織之細胞毒性至少部分引起典型地與投與治療有效量之比較二肽系共軛物有關之有害事件，其中在P1與Yy -D之間或在P1與P-1之間的共價鍵處發生蛋白分解裂解，以分別釋放具有Yy -D或[P-1]-Yy -D結構之連接子片段，其中後者隨後經歷肽鏈端切酶裂解以釋放具有Yy -D結構之連接子片段。在兩種情況下，Yy -D連接子片段經歷自發分解以完成D作為游離藥物之釋放。
其他P4、P5…Pn 胺基酸殘基經選擇以便不改變提供-Yy -D或-[P-1]-Yy -D片段之裂解位點，但置換地經選擇以保留配體藥物共軛物之主要由P1、P2及P3胺基酸殘基提供之所需生理化學及/或藥物動力學特性，諸如對正常組織分佈不利之增加之共軛物向腫瘤組織中之生物分佈，或與比較二肽系共軛物相比增強該生理化學及/或藥物動力學特性。
在LO 之彼等實施態樣中的任一者中，若下標q為1，則下標b為0，使得B不存在，且A’變為A之視情況存在之亞單元，且若下標q為2、3或4，則下標b為1，使得B存在，A’如同所示仍為LO 之組分，且A之視情況存在之亞單元指示為AO 。
在一些實施態樣中，除了改良總體選擇性及/或改良與正常組織相比有利於腫瘤相關蛋白酶之生物分佈外，與二肽比較共軛物相比，P1、P2及P3胺基酸殘基亦減少併有包含此等胺基酸之胺基酸序列的共軛物之聚集。在其中藥物單元為MMAE之藥物單元之彼等實施態樣中之一些中，比較共軛物之藥物連接子部分具有式 mc-vc-PABC-MMAE。
在式1A 配體藥物共軛物化合物的含-LSS 及-LS 之藥物連接子部分之較佳實施態樣中，LSS 及LS 部分含有雜環基環狀鹼性單元。下標q為1且具有其中肽可裂解單元為三肽之彼等一級連接子的例示性藥物連接子部分由式1B、式1C及式1D之結構表示：
Figure 02_image165
Figure 02_image167
或其鹽，特定而言醫藥學上可接受之鹽，其中HE為視情況存在之水解增強單元；A’在存在時為第一延伸體單元(A)之亞單元；下標a’為0或1，分別指示A’不存在或存在；下標P為1或2；下標Q在1至6範圍內，較佳下標Q為1或2，更佳下標Q具有與下標P相同之值；且其中Ra3 為-H、視情況經取代之C1 -C6 烷基、視情況經取代之-C1 -C4 伸烷基-(C6 -C10 芳基)或-RPEG1 -O-(CH2 CH2 O)1-36 -RPEG2 ，其中RPEG1 為C1 -C4 伸烷基，RPEG2 為-H或C1 -C4 伸烷基，其中鍵結至Ra3 之鹼性氮原子視情況以鹽形式，較佳以醫藥學上可接受之鹽形式經質子化，或Ra3 為氮保護基，諸如適合之酸不穩定性保護基；波形線指示共價結合至配體單元之硫原子；P1、P2及P3如先前關於肽可裂解單元之實施態樣中的任一者所定義；且剩餘可變基團如關於式1A 之藥物連接子部分之實施態樣中的任一者所描述。
在配體藥物共軛物化合物之式1A 之含-LSS 及-LS 藥物連接子部分之其他較佳實施態樣中，LSS 及LS 部分含有非環環狀鹼性單元。具有其中肽可裂解單元為二肽之彼等一級連接子的例示性藥物連接子部分由式1E、式1F及式1G之結構表示：
Figure 02_image169
Figure 02_image171
或其鹽，特定而言醫藥學上可接受之鹽，其中HE為視情況存在之水解增強單元；A’在存在時為第一延伸體單元(A)之亞單元；下標a’為0或1，分別指示A’不存在或存在；下標x為1或2；Ra2 為-H、視情況經取代之C1 -C6 烷基、-CH3 或-CH2 CH3 ；Ra3 在各情況下獨立地為氮保護基、-H或視情況經取代之C1 -C6 烷基，較佳為-H、酸不穩定性保護基、-CH3 或-CH2 CH3 ，或兩個Ra3 與其所連接之氮一起確定氮保護基或氮雜環丁烷基、吡咯啶基或哌啶基雜環基，其中如此確定之鹼性一級、二級或三級胺視情況以鹽形式，較佳醫藥學上可接受之鹽形式經質子化；波形線指示共價結合至配體單元之硫原子；P1、P2及P3如先前關於肽可裂解單元之實施態樣中的任一者所定義，且剩餘可變基團如關於式1A 之藥物連接子部分之實施態樣中的任一者所描述。
在其他較佳實施態樣中，一級連接子不具有鹼性單元。具有其中肽可裂解單元為三肽之彼一級連接子的例示性藥物連接子部分由式1H、式1J及式1K之結構表示：
Figure 02_image173
或其鹽，特定而言醫藥學上可接受之鹽，其中HE為視情況存在之水解增強單元；A’當存在時為第一延伸體單元(A)之亞單元(A2 )；下標a’為0或1，指示A’不存在或存在；波形線指示共價結合至配體單元之硫原子；P1、P2及P3如先前關於肽可裂解單元之實施態樣中的任一者所定義，且剩餘可變基團如關於式1A 之藥物連接子部分之實施態樣中的任一者所描述。
在其中連接子單元中存在雜環基環狀鹼性單元之更佳實施態樣中，配體藥物共軛物組合物中之大多數配體藥物共軛物化合物具有由以下結構表示之藥物連接子部分：
Figure 02_image175
視情況呈鹽形式，特定而言呈醫藥學上可接受之鹽形式，且在其中連接子單元中存在非環狀鹼性單元之更佳實施態樣中，配體藥物共軛物組合物中之大多數配體藥物共軛物化合物具有由以下結構表示之藥物連接子部分：
Figure 02_image177
Figure 02_image179
視情況呈鹽形式，特定而言呈醫藥學上可接受之鹽形式，其中含LSS 及LS 之藥物連接子部分的可變基團如先前關於具有非環或雜環基環狀鹼性單元之藥物連接子部分所描述， 且在其中連接子單元中不存在鹼性單元之其他更佳實施態樣中，配體藥物共軛物組合物中之主要配體藥物共軛物化合物具有由式1H 之結構表示的藥物連接子部分，其中可變基團如先前關於該式之藥物連接子部分所描述。
在前述藥物連接子部分中之任一者中，HE較佳以-C(=O)形式存在，及/或下標y為1或2，分別指示存在一或兩個自降解性間隔子單元。
在尤其較佳實施態樣中，以上藥物連接子部分中之任一者中的-[P3]-[P2]-[P1]三肽為 D-Leu-Leu-Met(O)或D-Leu-Ala-Glu，其中Met(O)為硫原子氧化為亞碸之甲硫胺酸。
在其中連接子單元中存在雜環基環狀鹼性單元之尤其較佳實施態樣中，配體藥物共軛物組合物中之大多數配體藥物共軛物化合物具有由以下結構表示之藥物連接子部分：
Figure 02_image181
及其鹽，特定而言醫藥學上可接受之鹽，其中波形線指示共價連接至配體單元之硫原子；下標a’為0或1，分別指示A不存在或存在，其中A’為如本文關於第二視情況存在之延伸體單元所述的式3a 、4a 或5a 之含胺酸殘基或第一視情況存在之延伸體單元之亞單元，或A’為α-胺基酸或β-胺基酸殘基；且D為具有二級胺基作為連接至藥物連接子部分之連接子單元的位點之細胞毒性藥物。
在其中連接子單元中存在非環鹼性單元之其他尤其較佳實施態樣中，配體藥物共軛物組合物中之大多數配體藥物共軛物化合物具有由以下結構表示之藥物連接子部分：
Figure 02_image183
及其鹽，特定而言醫藥學上可接受之鹽，其中可變基團如先前關於具有環狀鹼性單元之藥物連接子部分所描述。
在其中不存在鹼性單元之其他尤其較佳實施態樣中，配體藥物共軛物組合物中之主要配體藥物共軛物化合物具有由以下結構表示之藥物連接子部分：
Figure 02_image185
， 或其鹽，特定而言醫藥學上可接受之鹽，其中可變基團如先前關於具有環狀鹼性單元之藥物連接子部分所描述。在其中不存在BU之彼等實施態樣中，包含任一主要配體藥物共軛物化合物之配體藥物共軛物組合物視情況進一步包含其中琥珀醯亞胺環呈水解形式之配體藥物共軛物化合物。2.2.6 奧裡斯他汀藥物單元
配體藥物共軛物化合物或藥物連接子化合物之奧裡斯他汀藥物單元透過共軛物或藥物連接子化合物之連接子單元共價連接至具有如下DE 或DF 結構之無奧裡斯他汀藥物之二級胺而併有奧裡斯他汀藥物：
Figure 02_image187
其中劍形符指示共價連接提供胺基甲酸酯官能基之氮原子的位點，其中在將奧裡斯他汀藥物化合物作為-D併入配體藥物共軛物之任一藥物連接子部分或本文所描述之任一藥物連接子化合物中後，該官能基之-OC(=O)-為Y'，使得對於任一類型之化合物下標y均為2；且 R10 及R11 中之一者為氫且另一者為C1 -C8 烷基；R12 為氫、C1 -C8 烷基、C3 -C8 碳環基、C6 -C24 芳基、-X1 -C6 -C24 芳基、-X1 -(C3 -C8 碳環基)、C3 -C8 雜環基或-X1 -(C3 -C8 雜環基)；R13 為氫、C1 -C8 烷基、C3 -C8 碳環基、C6 -C24 芳基、 -X1 -C6 -C24 芳基、-X1 -(C3 -C8 碳環基)、C3 -C8 雜環基及-X1 -(C3 -C8 雜環基)；R14 為氫或甲基，或R13 及R14 與其所連接之碳結合在一起構成螺C3 -C8 碳環；R15 為氫或C1 -C8 烷基；R16 為氫、C1 -C8 烷基、C3 -C8 碳環基、C6 -C24 芳基、-C6 -C24 -X1 -芳基、-X1 -(C3 -C8 碳環基)、C3 -C8 雜環基及-X1 -(C3 -C8 雜環基)；R17 獨立地為氫、-OH、C1 -C8 烷基、C3 -C8 碳環基及O-(C1 -C8 烷基)；R18 為氫或視情況經取代之C1 -C8 烷基；R19 為-C(R19A )2 -C(R19A )2 -C6 -C24 芳基、-C(R19A )2 -C(R19A )2 -(C3 -C8 雜環基)或-C(R19A )2 -C(R19A )2 -(C3 -C8 碳環基)，其中C6 -C24 芳基及C3 -C8 雜環基視情況經取代；R19A 獨立地為氫、視情況經取代之C1 -C8 烷基、-OH或視情況經取代之-O-C1 -C8 烷基；R20 為氫或視情況經取代之C1 -C20 烷基、視情況經取代之C6 -C24 芳基或視情況經取代之C3 -C8 雜環基，或-(R47 O)m -R48 或-(R47 O)m -CH(R49 )2 ；R21 為視情況經取代之-C1 -C8 伸烷基-(C6 -C24 芳基)或視情況經取代之 -C1 -C8 伸烷基-(C5 -C24 雜芳基)或C1 -C8 羥烷基或視情況經取代之C3 -C8 雜環基；Z為O、S、NH或NR46 ；R46 為視情況經取代之C1 -C8 烷基；下標m為在1-1000範圍內之整數；R47 為C2 -C8 烷基；R48 為氫或C1 -C8 烷基；R49 獨立地為-COOH、-(CH2 )n -N(R50 )2 、-(CH2 )n -SO3 H或-(CH2 )n -SO3 -C1 -C8 烷基；R50 獨立地為C1 -C8 烷基或-(CH2 )n -COOH；下標n為在0至6範圍內之整數；且X1 為C1 -C10 伸烷基。
在一些實施態樣中，奧裡斯他汀藥物化合物具有式DE-1 、式DE-2 或式DF-1 之結構：
Figure 02_image189
其中式DE-1 或式DE-2 中之Ar為C6 -C10 芳基或C5 -C10 雜芳基，且在式DF-1 中，Z為-O-或-NH-；R20 為氫或視情況經取代之C1 -C6 烷基、視情況經取代之C6 -C10 芳基或視情況經取代之C5 -C10 雜芳基；且R21 為視情況經取代之C1 -C6 烷基、視情況經取代之-C1 -C6 伸烷基-(C6 -C10 芳基)或視情況經取代之-C1 -C6 伸烷基-(C5 -C10 雜芳基)。
在式DE 、DF 、DE-1 、DE-2 或DF-1 之一些實施態樣中，R10 及R11 中之一者為氫且另一者為甲基。
在式DE-1 或DE-2 之一些實施態樣中，Ar為苯基或2-吡啶基。
在式DF-1 之一些實施態樣中，R21 為X1 -S-R21a 或X1 -Ar，其中X1 為C1 -C6 伸烷基，R21a 為C1 -C4 烷基，且Ar為苯基或C5 -C6 雜芳基，及/或-Z-為-O-，且R20 為C1 -C4 烷基，或Z為-NH-，且R20 為苯基或C5 -C6 雜芳基。
在較佳實施態樣中，奧裡斯他汀藥物化合物具有式DF/E-3 之結構：
Figure 02_image191
其中R10 及R11 中之一者為氫且另一者為甲基；R13 為異丙基或-CH2 -CH(CH3 )2 ；且R19B 為-CH(CH3 )-CH(OH)-Ph、 -CH(CO2 H)-CH(OH)-CH3 、-CH(CO2 H)-CH2 Ph、 -CH(CH2 Ph)-2-噻唑基、-CH(CH2 Ph)-2-吡啶基、 -CH(CH2 -p-Cl-Ph)、-CH(CO2 Me)-CH2 Ph、 -CH(CO2 Me)-CH2 CH2 SCH3 、-CH(CH2 CH2 SCH3 )C(=O)NH-喹啉-3-基、-CH(CH2 Ph)C(=O)NH-p-Cl-Ph，或R19B 具有
Figure 02_image193
之結構，其中波形線指示共價連接至奧裡斯他汀化合物之其餘部分。
在更佳實施態樣中，併入-D中之奧裡斯他汀藥物化合物為單甲基奧裡斯他汀E(MMAE)或單甲基奧裡斯他汀F(MMAF)。
在一些實施態樣中，配體-藥物共軛物組合物由以下結構表示：
Figure 02_image195
及/或
Figure 02_image197
其中下標a為1，使得A存在，其中A為α-胺基酸或β-胺基酸殘基；Ra3 為-H、視情況經取代之C1 -C6 烷基、視情況經取代之-C1 -C4 伸烷基-(C6 -C10 芳基)、 -RPEG1 -O-(CH2 CH2 O)n’ -RPEG2 ，其中RPEG1 為C1 -C4 伸烷基，RPEG2 為-H或C1 -C4 烷基，且下標n’在1至36範圍內，其中與Ra3 鍵結之鹼性氮視情況經質子化；R19B 為 -CH(CH3 )-CH(OH)-Ph、-CH(CO2 H)-CH(OH)-CH3 或 -CH(CO2 H)-CH2 Ph；R34 為異丙基，且R35 為甲基或 -(CH2 )3 NH(C=O)NH2 。
在一些實施態樣中，配體-藥物共軛物組合物由以下結構表示：
Figure 02_image199
及/或
Figure 02_image201
其中下標a為1，使得A存在，其中A為α-胺基酸或β-胺基酸殘基；Ra3 為-H、視情況經取代之C1 -C6 烷基、視情況經取代之-C1 -C4 伸烷基-(C6 -C10 芳基)、-RPEG1 -O-(CH2 CH2 O)n’ -RPEG2 ；RPEG1 為C1 -C4 伸烷基；RPEG2 為-H或C1 -C4 烷基；下標n’在1至36範圍內；且其中與Ra3 鍵結之鹼性氮原子視情況經質子化；R19B 為-CH(CH3 )-CH(OH)-Ph、-CH(CO2 H)-CH(OH)-CH3 或-CH(CO2 H)-CH2 Ph；R34 為異丙基；且R35 為甲基或-(CH2 )3 NH(C=O)NH2 。
在一些實施態樣中，配體藥物共軛物化合物由以下表示：
Figure 02_image203
Figure 02_image205
Figure 02_image207
Figure 02_image209
Figure 02_image211
Figure 02_image213
或其鹽(例如其醫藥學上可接受之鹽)，其中L為配體單元，且下標p’為1至24之整數。應瞭解，在L為抗體時，在上述化學結構中鍵結至L之硫原子S表示抗體之半胱胺酸殘基的側鏈之硫。在一些實施態樣中，下標p’為1至12、1至10或1至8之整數或為4或8。在一些實施態樣中，下標p’為1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23或24。在一些實施態樣中，下標p’為2、4、6或8。在一些實施態樣中，下標p’為2。在一些實施態樣中，下標p’為4。在一些實施態樣中，下標p’為6。在一些實施態樣中，下標p’為8。亦包括含有以上所列之任何配體藥物共軛物化合物的配體藥物共軛物組合物，其中p’經如本文所描述之p置換。2.3 藥物連接子化合物
藥物連接子化合物由式I 之結構表示：
Figure 02_image215
或其鹽，其中LU’為LU前驅體；且D’表示1至4個較佳彼此相同之藥物單元，其中藥物連接子化合物進一步由式IA 之結構定義：
Figure 02_image217
其中LB ’為配體共價結合部分前驅體；A為第一視情況存在之延伸體單元；下標a為0或1，分別指示A不存在或存在，B為視情況存在之分枝單元；下標b為0或1，分別指示B不存在或存在，限制條件為當下標q選自2至4時下標b為1，且 LO 為具有下式之二級連接子：
Figure 02_image219
或其鹽，特定而言醫藥學上可接受之鹽，其中A’為第二視情況存在之延伸體單元，下標a’為0或1，分別指示A’不存在或存在，Y為視情況存在之間隔子單元，下標y為0、1或2，分別指示不存在或存在1或2個間隔子單元，且P1、P2及P3為胺基酸殘基，其一起提供相較於正常組織勻漿蛋白分解對腫瘤組織勻漿蛋白分解之選擇性，及/或一起提供與正常組織相比式由IA 藥物連接子化合物製備之共軛物向腫瘤組織中之較佳生物分佈，其中由共軛物釋放之游離藥物對正常組織之細胞毒性至少部分引起典型地與投與治療有效量之比較二肽系共軛物有關之有害事件，其中在P1與Y之間的共價鍵處(若下標y為1或2)或在P1與D之間的共價鍵處(若下標y為0)發生蛋白分解裂解，或 LO 為具有下式之二級連接子：
Figure 02_image221
或其鹽，特定而言醫藥學上可接受之鹽，其中A’、a’、Y及y保留其先前含義，且P1、P2及P3為胺基酸殘基，其視情況加上P-1胺基酸一起提供相較於正常組織勻漿蛋白分解對腫瘤組織勻漿蛋白分解之選擇性，及/或一起提供與正常組織相比由式IA 藥物連接子化合物製備之共軛物向腫瘤組織中之較佳生物分佈，其中由共軛物釋放之游離藥物對正常組織之細胞毒性至少部分引起典型地與投與治療有效量之比較二肽系共軛物有關之有害事件，其中在P1與 P-1之間的共價鍵處發生蛋白分解裂解，以釋放具有 [P-1]-Yy -D結構之連接子片段，或 LO 為具有下式之二級連接子：
Figure 02_image223
或其鹽，特定而言醫藥學上可接受之鹽，其中A’、a’、Y及y保留其先前含義，且P-1及P1、P2、P3…Pn 為連續胺基酸殘基，其中下標n為提供至多12 (例如3-12或3-10)個此等胺基酸之整數值，且P1、P2及P3視情況與P-1一起提供相較於正常組織勻漿蛋白分解對腫瘤組織勻漿蛋白分解之選擇性，及/或一起提供與正常組織相比由藥物連接子化合物製備之共軛物向腫瘤組織中之較佳生物分佈，其中由共軛物釋放之游離藥物對正常組織之細胞毒性至少部分引起典型地與投與治療有效量之比較二肽系共軛物有關之有害事件，其中在P1與Yy -D之間或在P1與P-1之間的共價鍵處發生蛋白分解裂解，以分別釋放具有Yy -D或[P-1]-Yy -D結構之連接子片段，其中後者隨後經歷肽鏈端切酶裂解以釋放具有Yy -D結構之連接子片段。在兩種情況下，Yy -D連接子片段經歷自發分解以完成D作為游離藥物之釋放。
其他P4、P5…Pn 胺基酸殘基經選擇以便不改變提供-Yy -D或-[P-1]-Yy -D片段之裂解位點，但經選擇以保留由式IA 藥物連接子化合物製備之配體藥物共軛物的所需生理化學及/或藥物動力學特性，其中所需生理化學及/或藥物動力學特性主要由P1、P2及P3胺基酸殘基提供，諸如對正常組織分佈不利之增加之共軛物向腫瘤組織中之生物分佈，或經選擇以與比較二肽系共軛物相比增強彼生理化學及/或藥物動力學特性。
在LO 之彼等實施態樣中的任一者中，若下標q為1，則下標b為0，使得B不存在，且A’變為A之視情況存在之亞單元，且若下標q為2、3或4，則下標b為1，使得B存在，A’如同所示仍為LO 之組分，且A之視情況存在之亞單元則指示為AO 。
藥物連接子化合物尤其適用於製備式1 之配體藥物共軛物，使得LU’為配體藥物共軛物化合物之藥物連接子部分的LU前驅體。
在一些實施態樣中，藥物連接子化合物之LB ’-A-具有或包含以下結構中之一者：
Figure 02_image225
或其鹽，其中LG1 為適合於由靶向劑親核劑進行親核置換之離去基團；LG2 為適合於與靶向劑形成醯胺鍵之離去基團，或為-OH，以提供適合於與靶向劑形成醯胺鍵之可活化羧酸；且波形線指示共價連接至藥物連接子化合物結構之其餘部分的位點。
在其中下標q為1的式IA 藥物連接子化合物之其他實施態樣中，LB ’-A-具有或包含以下結構中之一者：
Figure 02_image227
或其鹽，其中A’為A之視情況存在之第二亞單元，有時若該亞單元存在則指示為A2 ；下標a’為0或1，分別指示A’不存在或存在；與毗鄰A’之波形線指示共價連接至A之另一亞單元或肽可裂解單元的位點；[HE]為視情況存在之水解增強單元，其為由A或其第一亞單元提供之組分；BU為鹼性單元；Ra2 為視情況經取代之C1 -C12 烷基；且虛線曲線指示視情況存在之環化，使得在不存在該環化之情況下，BU為具有一級、二級或三級胺官能基作為非環鹼性單元之鹼性官能基的非環鹼性單元，或在存在該環化之情況下，BU為環化鹼性單元，其中Ra2 及BU與同兩者連接之碳原子一起確定視情況經取代之螺C3 -C20 雜環，其含有二級或三級胺官能基之骨架鹼性碳原子作為環狀鹼性單元之鹼性官能基， 其中非環鹼性單元或環狀鹼性單元之鹼性氮原子視鹼性氮原子之取代程度而定視情況由氮保護基適當地保護，或視情況經質子化
在其中下標q為2、3或4之其他實施態樣中，LB ’-A-包含以下結構中之一者：
Figure 02_image229
或其鹽，其中與AO 相鄰之波形線指示共價連接至B之位點，AO 為A之視情況存在之亞單元，有時若該亞單元存在則指示為A2 ，且剩餘可變基團如關於其中下標q為1之式IA 藥物連接子化合物所定義。
在其中下標q為1之一些較佳實施態樣中，藥物連接子化合物之LB ’-A-具有或包含以下結構中之一者：
Figure 02_image231
或其鹽，特定而言酸加成鹽，其中A’及下標a’如先前所述。彼等LB ’-A-結構為例示性自穩定前驅體部分，其有時指示為LSS ’，因為各自能夠轉化為配體藥物共軛物化合物之LSS 部分。
在其他較佳實施態樣中，藥物連接子化合物之LB ’-A-具有或包含以下結構中之一者：
Figure 02_image233
其中A’及下標a’如先前關於其中下標q為1之式IA 藥物連接子化合物所描述。
在含LSS ’之藥物連接子化合物之較佳實施態樣中，LSS ’部分含有雜環基環狀鹼性單元。具有其中肽可裂解單元為三肽之彼等一級連接子的例示性藥物連接子化合物由式IB 之結構表示：
Figure 02_image235
或其鹽，其中HE為視情況存在之水解增強單元；A’在存在時為第一延伸體單元(A)之亞單元；下標a’為0或1，分別指示A’不存在或存在；下標P為1或2；下標Q範圍為1至6，較佳下標Q為1或2，更佳下標Q具有與下標P相同之值；且其中Ra3 為-H、視情況經取代之C1 -C6 烷基、視情況經取代之-C1 -C4 伸烷基-(C6 -C10 芳基)或 -RPEG1 -O-(CH2 CH2 O)1-36 -RPEG2 ，其中RPEG1 為C1 -C4 伸烷基，RPEG2 為-H或C1 -C4 伸烷基，其中鍵結至Ra3 之鹼性氮原子視情況以鹽形式，較佳以醫藥學上可接受之鹽形式經質子化，或Ra3 為氮保護基，諸如適合之酸不穩定性保護基；P1、P2及P3如先前關於配體藥物共軛物化合物之藥物連接子部分的肽可裂解單元之實施態樣中的任一者所定義；且剩餘可變基團如關於式IA 之藥物連接子化合物所描述。
在式IA 之含LSS ’藥物連接子化合物之其他較佳實施態樣中，LSS ’部分含有非環環狀鹼性單元。具有其中肽可裂解單元為二肽之該一級連接子的例示性藥物連接子化合物由式IE 之結構表示：
Figure 02_image237
或其鹽，其中HE為視情況存在之水解增強單元；A’在存在時為第一延伸體單元(A)之亞單元；下標a’為0或1，分別指示A’不存在或存在；下標x為1或2；Ra2 為氫或-CH3 或-CH2 CH3 ；Ra3 在各情況下獨立地為氫、-CH3 或-CH2 CH3 ，或兩個Ra3 與其所連接之氮一起確定氮雜環丁烷基、吡咯啶基或哌啶基雜環基，其中如此確定之鹼性一級、二級或三級胺視情況以鹽形式，較佳醫藥學上可接受之鹽形式經質子化；P1、P2及P3如先前關於肽可裂解單元之實施態樣中的任一者所定義，且剩餘可變基團如關於式IA 之藥物連接子化合物所描述。
在其他較佳實施態樣中，一級連接子不具有鹼性單元。具有其中肽可裂解單元為三肽之該一級連接子的例示性藥物連接子化合物由式IH 之結構表示：
Figure 02_image239
或其鹽，其中HE為視情況存在之水解增強單元；A’在存在時為第一延伸體單元(A)之亞單元；下標a’為0或1，指示A’不存在或存在；P1、P2及P3如先前關於配體藥物共軛物化合物之藥物連接子部分的肽可裂解單元之實施態樣中的任一者所定義，且剩餘可變基團如關於式IA 藥物連接子化合物之實施態樣中之任一者所描述。
在其中連接子單元中存在雜環基環狀鹼性單元之更佳實施態樣中，藥物連接子化合物由以下結構表示：
Figure 02_image241
視情況呈鹽形式，特定而言呈醫藥學上可接受之鹽形式，且在其中連接子單元中存在非環狀鹼性單元之更佳實施態樣中，藥物連接子化合物由以下結構表示：
Figure 02_image243
視情況呈鹽形式，其中含LSS ’之藥物連接子化合物之可變基團如先前關於具有非環或雜環基環狀鹼性單元之藥物連接子化合物所描述。
在前述藥物連接子部分中之任一者中，HE較佳以-C(=O)形式存在，及/或下標y為1或2，分別指示存在一或兩個自降解性間隔子單元。
在尤其較佳實施態樣中，以上藥物連接子化合物中之任一者中的-[P3]-[P2]-[P1]-三肽為 D-Leu-Leu-Cit、D-Leu-Leu-Lys、D-Leu-Leu-Met(O)、 D-Leu-Ala-Glu或Pro-Ala(Nap)-Lys，其中Met(O)為硫原子氧化為亞碸之甲硫胺酸，Cit為瓜胺酸，且Ala(Nap)為甲基側鏈經萘-1-基取代之丙胺酸。
在其中連接子單元中存在雜環基環狀鹼性單元之尤其較佳實施態樣中，藥物連接子化合物由以下結構表示：
Figure 02_image245
或其鹽，其中下標a’為0或1，分別指示A’不存在或存在，其中A’為如本文關於第二視情況存在之延伸體單元所述的式3a 、4a 或5a 之含胺酸殘基或第一視情況存在之延伸體單元之亞單元，或A’為α-胺基酸或β-胺基酸殘基；且D為具有二級胺基作為連接至藥物連接子部分之連接子單元的位點之細胞毒性藥物。
在其中連接子單元中存在非環狀鹼性單元之其他尤其較佳實施態樣中，藥物連接子化合物由以下結構表示：
Figure 02_image247
或其鹽，其中可變基團如先前關於具有環狀鹼性單元之藥物連接子化合物所描述。
在其中不存在鹼性單元之其他尤其較佳實施態樣中，藥物連接子化合物由以下結構表示：
Figure 02_image249
或其鹽，其中可變基團如先前關於具有環狀鹼性單元之藥物連接子化合物所描述。
在一些實施態樣中，藥物連接子化合物由以下表示：
Figure 02_image251
Figure 02_image253
Figure 02_image255
Figure 02_image257
Figure 02_image259
Figure 02_image261
或其鹽。
在一些實施態樣中，提供由以下結構表示之藥物連接子前驅體化合物：
Figure 02_image263
或其鹽，其中W、Y、下標y及D保留其先前含義，且PG為胺保護基或氫。在一些實施態樣中，胺保護基為Fmoc。
在一些實施態樣中，藥物連接子前驅體化合物由以下結構表示：
Figure 02_image265
或其鹽，其中P-1、P1、P2、P3…Pn 、Y、下標y及D保留其先前含義，且PG為胺保護基或氫。
在一些實施態樣中，藥物連接子前驅體化合物由以下結構表示：
Figure 02_image267
或其鹽，其中P1、P2、P3、R8 、R9 、R33 、V、Y’、Z1 、Z2 及D保留其先前含義，且PG為胺保護基或氫。
在本文所描述之藥物連接子化合物中之任一者中，LB ’-Aa -Bb -A’a’ -部分可由PG置換以形成由以下結構表示之藥物連接子前驅體化合物：
Figure 02_image269
或其鹽，其中P1、P2、P3及D保留其先前含義，且PG為胺保護基或氫。
應瞭解，藥物連接子前驅體可進一步經用於連接至配體(諸如抗體)之延伸體單元修飾。在一些實施態樣中，藥物連接子前驅體可進一步與適合連接至抗體之半胱胺酸殘基的延伸體單元反應。本文描述適合用於連接至抗體之半胱胺酸殘基的延伸體單元，包括包含馬來醯亞胺部分之延伸體單元。在一些實施態樣中，藥物連接子前驅體可進一步與適合連接至抗體之離胺酸殘基的延伸體單元反應。本文描述適合用於連接至抗體之離胺酸殘基的延伸體單元，包括包含NHS酯部分之延伸體單元。在一些實施態樣中，藥物連接子前驅體為藥物連接子化合物之合成中的中間物。
在本文就例如配體藥物共軛物(LDC)化合物、藥物連接子化合物、藥物連接子部分、肽可裂解單元、間隔子單元及藥物單元而言關於W、P-1、P1、P2、P3…Pn 、Y、下標y、R8 、R9 、R33 、V、Y’、Z1 、Z2 及D所描述之實施態樣中之任一者中，該等實施態樣亦適用於本文所描述之藥物連接子前驅體化合物。
在一些實施態樣中，藥物連接子前驅體化合物由以下表示：
Figure 02_image271
Figure 02_image273
Figure 02_image275
Figure 02_image277
Figure 02_image279
Figure 02_image281
或其鹽，其中PG為胺保護基(例如Fmoc)或氫。2.4 連接子化合物
連接子化合物由式IA-L 之結構表示：
Figure 02_image283
或其鹽，其中LB ’、A、下標a、B、下標b、LO 及下標q保留其先前含義，且RG為反應性基團。在一些實施態樣中，反應性基團為4-硝基苯氧基或全氟苯氧基。在一些實施態樣中，反應性基團為4-硝基苯氧基。
在一些實施態樣中，連接子化合物由式IA-L-1 之結構表示：
Figure 02_image285
或其鹽，其中LR ’、A’、下標a’、P1、P2、P3、Y及下標y保留其先前含義，且RG為反應性基團。
在一些實施態樣中，連接子化合物由式IA-L-2 之結構表示：
Figure 02_image287
或其鹽，其中HE、A’、下標a’、P1、P2、P3、Y及下標y保留其先前含義，且RG為反應性基團。
在一些實施態樣中，連接子化合物由式IA-L-3 或式IA-L-4 之結構表示：
Figure 02_image289
或其鹽，其中P1、P2及P3保留其先前含義，且RG為反應性基團。在一些實施態樣中，RG為全氟苯氧基。在一些實施態樣中，RG為4-硝基苯氧基。
在本文就配體藥物共軛物(LDC)化合物、一級連接子、二級連接子、藥物連接子化合物、藥物連接子部分、肽可裂解單元、延伸體單元及間隔子單元而言關於LB ’、A、下標a、B、下標b、LO 、下標q、LR ’、A’、下標a’、P1、P2、P3、Y、下標y及HE所描述之任何實施態樣中，該等實施態樣亦適用於本文所描述之連接子化合物，諸如式IA-L 、式IA-L-1 、式IA-L-2 、式IA-L-3 或式IA-L-4 之化合物。
在本文所描述之藥物連接子化合物中之任一者中，藥物單元(D)可由適合反應性基團(亦即適合於連接至藥物單元(D)之基團)置換以形成連接子化合物，例如由式IA-L 、式IA-L-1 、式IA-L-2 、式IA-L-3 或式IA-L-4 表示之結構。反應性基團為適合使連接子化合物與如本文所描述之奧裡斯他汀藥物化合物(諸如MMAE或MMAF)反應以形成藥物連接子化合物之基團。
在一些實施態樣中，連接子化合物由以下表示：
Figure 02_image291
Figure 02_image293
Figure 02_image295
Figure 02_image297
Figure 02_image299
Figure 02_image301
Figure 02_image303
Figure 02_image305
或其鹽，其中RG為反應性基團。3. 醫藥組合物
本發明提供醫藥組合物，其包含為本文所描述之配體藥物共軛物化合物之集合的LDC組合物，及至少一種醫藥學上可接受之賦形劑，諸如醫藥學上可接受之載劑。醫藥組合物呈允許向患者投與LDC組合物以治療與LDC之配體單元結合之目標部分的表現相關之病症的任何形式。舉例而言，醫藥組合物可呈液體或冷凍乾燥固體形式。較佳之投藥途徑為非經腸。非經腸投與包括皮下注射、靜脈內、肌肉內及胸骨內注射或輸注技術。在較佳實施態樣中，包含LDC組合物之醫藥組合物係以液體溶液形式靜脈內投與。
醫藥組合物經調配以使得在向有需要之患者投與配體藥物共軛物組合物後，配體藥物共軛物化合物為可生物利用的。此類醫藥組合物可呈一或多個劑量單位之形式，其中例如冷凍乾燥固體在添加適合液體載劑後以溶液或懸浮液形式重構時可提供單個劑量單位。
用於製備醫藥組合物之物質較佳以所用之量為無毒的。對於一般熟習此項技術者而言顯而易見的為，醫藥組合物中活性成分之最佳劑量將視多種因素而定。相關因素包括但不限於動物之類型(例如人類)、醫藥組合物之特定形式、投藥方式及所採用之LDC組合物。
在一些實施態樣中，醫藥組合物為液體形式。液體適用於注射遞送。在用於藉由注射投與之醫藥組合物中，包括表面活性劑、防腐劑、濕潤劑、分散劑、懸浮劑、緩衝劑、穩定劑及等滲劑中之一或多者。
液體組合物(無論其為溶液、懸浮液抑或其他類似形式)均包括一或多種選自由以下組成之群的醫藥學上可接受之賦形劑：無菌稀釋劑，諸如注射用水、鹽水溶液(較佳生理鹽水)、林格氏溶液(Ringer’s solution)、等滲氯化鈉、固定油(諸如合成甘油單或二酸甘油酯，其在一些實施態樣中亦充當溶劑或懸浮介質)、聚乙二醇、甘油、環糊精、丙二醇或其他溶劑；抗菌劑，諸如苯甲醇或對羥基苯甲酸甲酯；抗氧化劑，諸如抗壞血酸或亞硫酸氫鈉；螯合劑，諸如乙二胺四乙酸；緩衝劑，諸如胺基酸、乙酸鹽、檸檬酸鹽或磷酸鹽；清潔劑，諸如非離子表面活性劑，多元醇；以及用於調節張力之試劑，諸如氯化鈉或葡萄糖。在較佳實施態樣中，將非經腸組合物封入由玻璃、塑膠或其他材料製成之安瓿、拋棄式注射器或多劑量小瓶中。生理鹽水為例示性佐劑。可注射醫藥組合物較佳為無菌的。
對治療特定病症或疾患有效之共軛物之量將視病症或疾患之性質而定，且可藉由標準臨床技術確定。另外，視情況採用活體外或活體內分析以幫助鑑定最佳劑量範圍。組合物中使用之精確劑量將亦視投藥途徑及疾病或病症之嚴重性而定，且應根據從業者之判斷及各患者之情況來決定。
醫藥組合物包含有效量之LDC組合物，使得將獲得適合向有需要之個體投與的劑量。典型地，該量為醫藥組合物之至少約0.01重量%。
對於靜脈內投與，醫藥組合物包含每公斤動物體重約0.01至約100 mg之LDC組合物。在一較佳實施態樣中，醫藥組合物包含每公斤動物體重約1至約100 mg之LDC組合物。在更佳實施態樣中，投與之量將在每公斤體重約0.1至約25 mg之LDC組合物範圍內。
一般而言，向患者投與之LDC組合物之劑量典型地為每公斤個體體重約0.01 mg至約100 mg。在一些實施態樣中，向患者投與之劑量在每公斤個體體重約0.01 mg至約15 mg之間。在一些實施態樣中，向患者投與之劑量在每公斤個體體重約0.1 mg與約15 mg之間。在一些實施態樣中，向患者投與之劑量在每公斤個體體重約0.1 mg與約20 mg之間。在一些實施態樣中，投與之劑量在每公斤個體體重約0.1 mg至約5 mg或約0.1 mg至約10 mg之間。在一些實施態樣中，投與之劑量在每公斤個體體重約1 mg至約15 mg之間。在一些實施態樣中，投與之劑量在每公斤個體體重約1 mg至約10 mg之間。在一些實施態樣中，投與之劑量在一治療週期內在每公斤個體體重約0.1至4 mg，較佳0.1至3.2 mg，或更佳0.1至2.7 mg之間。
藉由任何便利途徑，例如藉由輸注或大劑量注射、藉由經上皮或黏膜皮膚襯裡(例如口腔黏膜、直腸及腸黏膜)吸收來投與LDC。投藥為全身性的或局部的。各種遞送系統為已知的，例如封裝在脂質體、微粒、微膠囊、膠囊中，且可用於投與化合物。在某些實施態樣中，向患者投與超過一種醫藥組合物。
在一個實施態樣中，根據常規程序將配體藥物共軛物組合物調配成適於向動物，特定而言人類靜脈內投與之醫藥組合物。典型地，用於靜脈內投與之載劑或媒劑為無菌等滲水性緩衝溶液。必要時，組合物亦包括增溶劑。用於靜脈內投與之醫藥組合物視情況包含局部麻醉劑，諸如利多卡因(lignocaine)，以減輕注射部位之疼痛。一般而言，將成分分開供應或以單位劑型混合在一起，例如以於指示活性劑之量的密閉容器中(諸如安瓿或囊袋中)的乾燥冷凍乾燥粉或無水濃縮物之形式。在配體藥物共軛物組合物之醫藥組合物藉由輸注投與時，其較佳用含有無菌醫藥級水或鹽水之輸注瓶分配。在藉由注射投與配體藥物共軛物組合物之醫藥組合物時，可提供一安瓿注射用無菌水或鹽水，使得可在投與之前將成分混合。
醫藥組合物通常經調配為無菌的，實質上等滲的，且完全符合美國食品與藥物管理局(U.S. Food and Drug Administration)之所有良好生產規範(Good Manufacturing Practice，GMP)規定。
本發明之醫藥組合物包含本發明之LDC組合物及至少一種醫藥學上可接受之賦形劑，諸如醫藥學上可接受之載劑。在一些較佳實施態樣中，醫藥組合物中LDC組合物之全部或實質上全部或超過50%之LDC化合物包含經水解之硫取代之琥珀醯亞胺。在一些較佳實施態樣中，超過55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97 %、98%或99%之存在於醫藥組合物中之配體藥物共軛物包含經水解之硫取代之琥珀醯亞胺。4. 過度增殖性疾患之治療
配體-藥物共軛物適用於抑制腫瘤細胞或癌細胞之增殖或引起腫瘤或癌細胞之凋亡。配體-藥物共軛物亦可在多種環境下適用於治療癌症。因此，配體-藥物共軛物用於將藥物遞送至腫瘤細胞或癌細胞。在不受理論約束之情況下，在一個實施態樣中，配體-藥物共軛物化合物之配體單元與細胞表面癌細胞或腫瘤細胞相關之抗原或受體結合或締合，且在結合後，配體-藥物共軛物化合物透過抗原或受體介導之胞吞作用或其他內化機制被吸收(內化)至腫瘤細胞或癌細胞內。在另一實施態樣中，抗原為與腫瘤細胞或癌細胞相關之細胞外基質蛋白。在進入細胞內部後，經由酶促蛋白分解機制，游離藥物在細胞內釋放。在一置換實施態樣中，藥物單元在腫瘤細胞或癌細胞附近自配體-藥物共軛物化合物裂解，且因此釋放之游離藥物隨後穿透細胞。
配體-藥物共軛物化合物提供改良之結合特異性腫瘤或癌症藥物靶向，因此降低藥物之一般毒性。該改良係歸因於與典型地與投與具有二肽系連接子單元之比較共軛物的有害事件相關之正常組織內之裂解相比，對配體藥物共軛物化合物之基於三肽之連接子單元在腫瘤內裂解以實現將游離藥物細胞內或細胞外遞送至腫瘤之癌細胞的選擇性更大，及/或藉由增加配體藥物共軛物化合物對於腫瘤組織之生物可用性(此降低對於正常組織之生物可用性)實現。
在一些實施態樣中，肽系連接子單元亦針對血液中由細胞外蛋白酶引起之酶促作用使配體-藥物共軛物化合物穩定，然而在進入細胞內部後能夠釋放藥物。
在一個實施態樣中，配體單元結合腫瘤細胞或癌細胞。
在另一實施態樣中，配體單元結合腫瘤細胞或癌細胞表面之腫瘤細胞或癌細胞抗原。
在另一實施態樣中，配體單元結合作為與腫瘤細胞或癌細胞締合之細胞外基質蛋白質的腫瘤細胞或癌細胞抗原。
配體單元對特定腫瘤細胞或癌細胞之特異性為確定最有效治療之彼等腫瘤或癌症之重要考慮因素。舉例而言，具有BR96配體單元之配體藥物共軛物可適用於治療抗原陽性癌瘤，包括肺、***、結腸、卵巢及胰腺之抗原陽性癌瘤。具有抗CD30或抗CD70結合配體單元之配體-藥物共軛物可適用於治療血液學惡性腫瘤。
可用配體藥物共軛物治療之其他特定類型之癌症包括但不限於以下實體腫瘤、血源性癌症、急性及慢性白血病及淋巴瘤。
實體腫瘤包括但不限於纖維肉瘤、黏液肉瘤、脂肪肉瘤、軟骨肉瘤、骨原性肉瘤、脊索瘤、血管肉瘤、內皮肉瘤、***肉瘤、***內皮肉瘤、滑膜瘤、間皮瘤、尤因氏瘤(Ewing's tumor)、平滑肌肉瘤、橫紋肌肉瘤、結腸癌、結腸直腸癌、腎癌、胰腺癌、骨癌、乳癌、卵巢癌、***癌、食道癌、胃癌、口腔癌、鼻癌、咽喉癌、鱗狀細胞癌、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳頭狀癌、乳頭狀腺癌、囊腺癌、髓樣癌、支氣管癌、腎細胞癌、肝細胞瘤、膽管癌、絨毛膜癌、精原細胞瘤、胚癌瘤、韋爾姆斯氏腫瘤(Wilms' tumor)、宮頸癌、子宮癌、睾丸癌、小細胞肺癌、膀胱癌、肺癌、上皮癌、神經膠質瘤、多形性膠質母細胞瘤、星形細胞瘤、神經管母細胞瘤、顱咽管瘤、室管膜瘤、松果體瘤、血管母細胞瘤、聽神經瘤、寡樹突神經膠質瘤、腦膜瘤、皮膚癌、黑色素瘤、神經母細胞瘤及視網膜母細胞瘤。
血源性癌包括但不限於急性淋巴母細胞性白血病「ALL」、急性淋巴母細胞性B細胞白血病、急性淋巴母細胞性T細胞白血病、急性髓母細胞性白血病「AML」、急性前髓細胞性白血病「APL」、急性單核細胞性白血病、急性紅白血病性白血病、急性巨核母細胞性白血病、急性髓單核細胞性白血病、急性非淋巴細胞性白血病、急性未分化性白血病、慢性粒細胞性白血病「CML」、慢性淋巴細胞性白血病「CLL」、毛細胞白血病及多發性骨髓瘤。
急性及慢性白血病包括但不限於淋巴母細胞性、骨髓性、淋巴細胞性及骨髓性白血病。
淋巴瘤包括但不限於霍奇金氏病、非霍奇金氏淋巴瘤、多發性骨髓瘤、華登斯特羅姆氏巨球蛋白血症、重鏈病及真性紅細胞增多症。
癌症包括但不限於以過度增殖之細胞為特徵之腫瘤、轉移或其他疾病或病症，為可治療的或在一些實施態樣中其進展因投與LDC組合物而受到抑制。
在其他實施態樣中，提供用於治療癌症之方法，該等方法包括向有需要之患者投與有效量之LDC組合物及化學治療劑。在一個實施態樣中，要用化學治療劑與LDC之組合治療之癌症尚未被認為對化學治療劑而言為難治性的。在另一實施態樣中，要用化學治療劑與ADC之組合治療之癌症對化學治療劑而言為難治性的。LDC組合物可向亦已進行手術作為對癌症之治療的患者投與。
在一些實施態樣中，患者亦接受另一治療，諸如放射療法。在一特定實施態樣中，將配體-藥物共軛物與化學治療劑或與放射療法同時投與。在另一特定實施態樣中，化學治療劑或放射療法在投與配體藥物共軛物之前或之後投與。
化學治療劑常常歷經一系列階段投與。化學治療劑中之任一者或其組合(諸如護理化學治療劑之標準形式)能夠與配體藥物共軛物一起投與，但較佳化學治療劑藉由不同於由配體藥物共軛物化合物釋放之游離藥物之機制實現細胞殺傷作用。
另外，提供用配體-藥物共軛物治療癌症之方法作為化學療法或放射療法之置換方案，其中化學療法或放射療法已經證實或可證實對於所治療之個體而言毒性過大，例如產生不可接受或不能忍受之副作用。所治療之患者可視情況經另一癌症療法(諸如手術、放射療法或化學療法)治療，此取決於哪種治療被發現為可接受或可忍受的。
亦提供如本文詳述之化合物或組合物的用途，其用於製造用於治療本文所描述之任何疾病或病狀(諸如癌症)之藥劑。
亦提供用於醫學療法中之如本文詳述之化合物或組合物。進一步提供用於治療本文所描述之任何疾病或病狀(諸如癌症)的如本文詳述之化合物或組合物。
亦提供如本文詳述之化合物或組合物用於醫學療法之用途。進一步提供如本文詳述之化合物或組合物用於治療本文所描述之任何疾病或病狀(諸如癌症)之用途。
進一步提供一種包含如本文詳述之化合物或組合物的套組。在一些實施態樣中，該套組包含根據本文所提供之方法中之任一者的使用說明書。
在另一態樣中，提供一種製備如本文詳述之化合物或組合物的方法。 列舉之實施態樣
實施態樣 1. 一種配體藥物共軛物組合物，其由式1 表示：
Figure 02_image307
或其鹽，特定而言醫藥學上可接受之鹽，其中 L為配體單元； LU為連接子單元； D'表示式-LU-D'之各藥物連接子部分中的1至4個藥物單元(D)；且 下標p為1至12、1至10或1至8之數字或為約4或約8， 其中該配體單元來自抗體或抗體之抗原結合片段，其能夠選擇性結合腫瘤組織之抗原以便隨後以游離藥物形式釋放藥物單元， 其中組合物之配體藥物共軛物化合物中之每一者中式-LU-D’之藥物連接子部分具有式1A 之結構：
Figure 02_image309
或其鹽，特定而言醫藥學上可接受之鹽， 其中波形線指示共價連接至L； D為藥物單元； LB 為配體共價結合部分； A為第一視情況存在之延伸體單元； 下標a為0或1，分別指示A不存在或存在； B為視情況存在之分枝單元； 下標b為0或1，分別指示B不存在或存在； LO 為二級連接子部分，其中該二級連接子具有下式；
Figure 02_image311
， 其中毗鄰Y之波形線指示LO 共價連接至藥物單元之位點且毗鄰A’之波形線指示共價連接至藥物連接子部分之其餘部分的位點； A’為第二視情況存在之延伸體單元，其在不存在B之情況下變為A之亞單元， 下標a’為0或1，分別指示A’不存在或存在， W為肽可裂解單元，其中該肽可裂解單元為至多12個胺基酸連續序列，其中該序列包含賦予選擇性之三肽，該賦予選擇性之三肽使得與肽可裂解單元之肽序列為二肽-纈胺酸-瓜胺酸-或-纈胺酸-丙胺酸-之比較配體-藥物共軛物組合物之化合物相比，關於相較於正常組織腫瘤組織暴露於由該組合物之配體藥物共軛物化合物釋放之游離細胞毒性化合物的選擇性得以改良； 其中腫瘤及正常組織屬於囓齒動物物種且其中式I組合物提供該改良之暴露選擇性，該改良之暴露選擇性由以下各項證實： 當以先前關於比較共軛物組合物確定之相同有效量及劑量時程投與時，保留在比較共軛物組合物之腫瘤異種移植模型中的功效，及 當以與腫瘤異種移植模型中相同之有效量及劑量時程向不帶腫瘤之囓齒動物投與時，與投與其中兩種共軛物組合物之配體單元由非結合抗體置換之比較共軛物相比，顯示游離藥物之血漿濃度降低，及/或組織中正常細胞之維持， 其中正常組織屬於與人類中相同之組織類型，且其中對該組織之細胞的細胞毒性至少部分在投與治療有效量之比較共軛物組合物之人類個體中引起有害事件； Y為自降解性間隔子單元； 下標y為0、1或2，分別指示Y不存在或存在1或2個；且 下標q為在1至4範圍內之整數， 限制條件為當下標b為0時下標q為1，且當下標b為1時下標q為2、3或4；且 其中組合物之配體藥物共軛物化合物具有式1 之結構，其中下標p由下標p’置換，其中下標p’為1至12、1至10或1至8之整數或為4或8。
實施態樣 2. 如實施態樣1之配體藥物共軛物組合物，其中該異種移植模型為SCID或植入HPAF-II、Ramos SK-MEL-5或SU-DHL-4癌細胞之裸鼠，特定而言為植入HPAF-II癌細胞之裸鼠。
實施態樣 3. 如實施態樣1或2之配體藥物共軛物組合物，其中該正常組織為大鼠骨髓。
實施態樣 4. 如實施態樣1或2之配體藥物共軛物組合物，其中該式I組合物提供該改良之暴露選擇性，此藉由當在相同條件下培育時，均質化腫瘤異種移植組織對該式1組合物之蛋白分解相較於均質化正常組織對比較共軛物之蛋白分解的比率與比較共軛物之該比率相比有所增加而進一步得到證實。
實施態樣 5. 如實施態樣4之配體藥物共軛物組合物，其中該正常組織來自大鼠或人類之骨髓。
實施態樣 6. 如實施態樣1-5中之任一者之配體藥物共軛物組合物，其中該腫瘤異種移植組織係來自植入HPAF-II癌細胞之裸鼠。
實施態樣 7. 如實施態樣1-6中之任一者之配體藥物共軛物組合物，其中各藥物連接子部分具有下式：
Figure 02_image313
或其鹽，特定而言醫藥學上可接受之鹽，其中 LR 為式-LB -Aa -Bb -之一級連接子，限制條件為A’為A之亞單元，使得當下標a及a'各自為1且下標b為0時，A’為LR 之組分；且 各P為肽可裂解單元之連續胺基酸序列之胺基酸殘基且其中下標n具有提供至多12個此等殘基之整數值。
實施態樣 8. 如實施態樣1-6中之任一者之配體藥物共軛物組合物，其中各藥物連接子部分具有下式：
Figure 02_image315
或其鹽，特定而言醫藥學上可接受之鹽， 其中LR 為式-LB -Aa -Bb -之一級連接子，限制條件為A'為A之亞單元，使得當下標a及a'各自為1且下標b為0時，A'為LR 之組分；且 其中各P為肽可裂解單元之連續胺基酸序列之胺基酸殘基。
實施態樣 9. 如實施態樣1-6中之任一者之配體藥物共軛物組合物，其中各藥物連接子部分具有下式：
Figure 02_image317
或其鹽，特定而言醫藥學上可接受之鹽，其中 LR 為式-LB -Aa -Bb -之一級連接子，限制條件為A'為A之亞單元，使得當下標a及a'各自為1且下標b為0時，A'為LR 之組分； 各P為肽可裂解單元之連續胺基酸序列之胺基酸殘基且其中下標n具有提供至多12個此等殘基之整數值；且 P1為具有在生理pH值下帶負電荷之側鏈或不帶正電荷之極性側鏈的L-胺基酸殘基。
實施態樣 10. 如實施態樣1-9中之任一者之配體藥物共軛物組合物，其中P1為選自由以下組成之群的L-胺基酸殘基：麩胺酸、甲硫胺酸-亞碸、天冬胺酸、(S)-3-胺基丙烷-1,1,3-三羧酸及磷酸-蘇胺酸。
實施態樣 11. 如實施態樣1-6中之任一者之配體藥物共軛物組合物，其中各藥物連接子部分具有下式：
Figure 02_image319
或其鹽，特定而言醫藥學上可接受之鹽，其中 LR 為式-LB -Aa -Bb -之一級連接子，限制條件為A’為A之亞單元，使得當下標a及a'各自為1且下標b為0時，A’為LR 之組分；且 各P為肽可裂解單元之連續胺基酸序列之胺基酸殘基。
實施態樣 12. 如實施態樣1-11中之任一者之配體藥物共軛物組合物，其中P2為甘胺酸或L-胺基酸之殘基，其側鏈具有不超過三個連續碳原子。
實施態樣 13. 如實施態樣1-11中之任一者之配體藥物共軛物組合物，其中該P2胺基酸為L-丙胺酸、L-纈胺酸或甘胺酸或非天然胺基酸，其中該非天然胺基酸為Abu、Aib、Ala、Gly、Leu、Nva或Pra，其中Abu、Aib、Nva及Pra具有以下結構：
Figure 02_image321
且其中Abu、Nva及Pra之側鏈呈與L-胺基酸相同之立體化學組態。
實施態樣 14. 如實施態樣1-6中之任一者之配體藥物共軛物組合物，其中各藥物連接子部分具有下式：
Figure 02_image323
或其鹽，特定而言醫藥學上可接受之鹽，其中 LR 為式-LB -Aa -Bb -之一級連接子，限制條件為A'為A之亞單元，使得當下標a及a'各自為1且下標b為0時，A'為LR 之組分；且 P3為肽可裂解單元之連續胺基酸序列之胺基酸殘基。
實施態樣 15. 如實施態樣1-14中之任一者之配體藥物共軛物組合物，其中P3為D-胺基酸，其側鏈在生理pH值下為不帶電荷的。
實施態樣 16. 如實施態樣1-14中之任一者之配體藥物共軛物組合物，其中P3為D-Leu、L-Leu、L-Cit或L-Pro，較佳為D-Leu。
實施態樣 17. 如實施態樣1-9之配體藥物共軛物組合物，其中該賦予選擇性之三肽-[P3]-[P2]-[P1]-為-D-Leu-Ala-Glu-或其鹽，特定而言醫藥學上可接受之鹽。
實施態樣 18. 如實施態樣1-17中之任一者之配體藥物共軛物組合物，其中各配體藥物共軛物化合物之藥物連接子部分中之-LR -具有或包含以下結構中之一者：
Figure 02_image325
， 其中所指示(#)之氮、碳或硫原子來自配體單元；且其中與其相鄰之波形線指示共價連接至配體單元之其餘部分的位點且另一波形線指示共價連接至藥物連接子部分中之一者之其餘部分的位點。
實施態樣 19. 如實施態樣1-17中之任一者之配體藥物共軛物組合物，其中下標q為1且LR 為-LB -A-， 其中各配體藥物共軛物化合物之藥物連接子部分中之-LB -A-主要具有以下結構：
Figure 02_image327
或其鹽，特定而言醫藥學上可接受之鹽，其中 毗鄰A'a' 之波形線指示共價連接至藥物連接子部分中之一者之肽可裂解單元的位點；且另一波形線指示共價連接至配體單元之硫原子的位點； [HE]為水解增強單元； BU為鹼性單元； Ra2 為視情況經取代之C1 -C12 烷基；且 虛曲線指示視情況存在之環化，使得在不存在該環化之情況下，BU為具有一級、二級或三級胺官能基作為非環鹼性單元之鹼性官能基的非環鹼性單元，或在存在該環化之情況下，BU為環化鹼性單元，其中Ra2 及BU與同兩者連接之碳原子一起確定視情況經取代之螺C3 -C20 雜環基，其含有作為環狀鹼性單元之鹼性官能基之二級或三級胺官能基的骨架鹼性氮原子， 其中非環鹼性單元或環狀鹼性單元之鹼性氮原子視鹼性氮原子之取代程度而定視情況適當受氮保護基保護，或視情況經質子化。
實施態樣 20. 如實施態樣19之配體藥物共軛物組合物，其中各配體藥物共軛物化合物之藥物連接子部分中之-LB -A-主要具有以下結構：
Figure 02_image329
或其鹽，特定而言醫藥學上可接受之鹽。
實施態樣 21. 如實施態樣1-20中之任一者之配體藥物共軛物組合物，其中下標q為1且A'作為A之亞單元存在，其中A'包含具有式(3)或式(4)結構之含胺酸殘基：
Figure 02_image331
或其鹽，特定而言醫藥學上可接受之鹽，其中 毗鄰氮原子之波形線指示共價連接至[HE]之位點，其中[HE]為-C(=O)-，且毗鄰羰基碳原子之波形線指示共價連接至A’之其餘部分或肽可裂解單元之N端胺基酸殘基的位點，其中兩種連接均透過醯胺官能基進行； K及L'獨立地為C、N、O或S，限制條件為當K或L'為O或S時，連接K之R41 及R42 、連接K之R38 及G、連接L’之R43 及R44 及連接L’之R39 及R40 不存在，且當K或L'為N時， -L'(R43 )(R44 )之各單元中連接K之R41 或R42 中之一者及連接K之R38 或G中之一者、連接L’之R43 或R44 中之一者以及各單元-L'(R39 )(R40 )中連接L’之R39 或R40 中之一者不存在，且限制條件沒有兩個相鄰L'獨立地選為N、O或S； 其中下標e及f為在0至12範圍內之獨立選擇之整數，且下標g為在1至12範圍內之整數： G為氫、視情況經取代之C1 -C6 烷基、-OH或-CO2 H； R38 為氫或視情況經取代之C1 -C6 烷基； R39 -R44 獨立地選自由以下組成之群：氫、視情況經取代之C1 -C6 烷基及視情況經取代之C5 -C10 (雜)芳基， 或R39 及R40 與同兩者連接之碳原子一起，或R41 及R42 與同兩者連接之K (當K為碳原子時)一起確定C3 -C6 碳環基，且R39 -R44 之其餘部分如本文所定義， 或R43 及R44 與同兩者連接之L' (當L'為碳原子時)一起確定C3 -C6 碳環基，且R39 -R42 如本文所定義， 或R40 及R41 ，或R40 及R43 ，或R41 及R43 與同兩者連接之碳原子或雜原子以及***彼等碳原子及/或雜原子之間的視情況存在之原子一起確定C5 -C6 碳環基或C5 -C6 雜環基，且R39 、R44 及R40 -R43 之其餘部分如本文所定義， 限制條件為當K為O或S時，R41 及R42 不存在，且當K為N時，R41 、R42 中之一者不存在，且當L’為O或S時，R43 及R44 不存在，且當L’為N時，R43 、R44 中之一者不存在，或 A'包含α-胺基、β-胺基或另一含胺酸殘基，其中其胺基氮原子共價連接至HE之羰基碳原子，且其羧酸羰基碳原子共價連接至A'之其餘部分或肽可裂解單元之N端胺基酸，其中兩種共價連接均透過醯胺官能基進行。
實施態樣 22 . 如實施態樣21之配體藥物共軛物組合物，其中A'為具有式3a 、式4a 或式5a 結構之含胺酸殘基：
Figure 02_image333
或其鹽，特定而言醫藥學上可接受之鹽，其中 下標e及f獨立地為0或1；且 R38 -R44 各自為氫； 或A’為α-胺基或β-胺基酸殘基。
實施態樣 23. 如實施態樣1-20中之任一者之配體藥物共軛物組合物，其中下標q為1且A’包含β-胺基酸殘基或-LP (PEG)-， 其中PEG為PEG單元且LP 為具有式LP -1或LP -2結構之平行連結單元：
Figure 02_image335
或 其中-LP (PEG)-或其含PEG亞單元具有式LP -3或式LP -4之結構：
Figure 02_image337
其中下標v為在1至4範圍內之整數； 下標v’為在0至4範圍內之整數； XLP 由天然或非天然胺基酸側鏈提供或選自由以下組成之群：-O-、-NRLP -、-S-、-S(=O)-、-S(=O)2 -、-C(=O)-、-C(=O)N(RLP )-、-N(RLP )C(=O)N(RLP )-及 -N(RLP )C(=NRLP )N(RLP )-或C3 -C8 雜環基； 其中各RLP 獨立地選自由氫及視情況經取代之C1 -C6 烷基組成之群，或兩個RLP 與其所連接之碳原子及其中間原子一起確定C5 -C6 雜環基且任何剩餘之RLP 如先前所定義； Ar為C6 -C10 伸芳基或C5 -C10 伸雜芳基，其中之每一者視情況經取代； 各RE 及RF 獨立地選自由以下組成之群：-H、視情況經取代之C1 -C6 烷基、視情況經取代之C2 -C6 伸烷基、視情況經取代之C6 -C10 伸芳基或視情況經取代之C5 -C10 伸雜芳基， 或RE 及RF 與同兩者連接之碳原子一起確定視情況經取代之螺C3 -C6 碳環基，或來自相鄰碳原子之RE 及RF 與此等原子及任何中間碳原子一起確定視情況經取代之C5 -C6 碳環基，且任何剩餘之RE 及RF 如先前所定義； 其中波形線中之一者指示共價連接PEG單元之點且另外兩個波形線指示共價連接表示配體藥物共軛物組合物之結構內的式LP -1或式LP -2，或 LP 為具有三官能含胺酸殘基之結構的平行連結單元或；且 PEG為PEG單元。
實施態樣 24. 如實施態樣1-20中之任一者之配體藥物共軛物組合物，其中A’包含β-胺基酸殘基或 -LP (PEG)-，其中PEG為PEG單元且LP 為平行連結單元， 其中β-胺基酸殘基具有-NHCH2 CH2 C(=O)-之結構；且 其中-LP (PEG)-具有以下結構：
Figure 02_image339
其中波形線指示藥物連接子部分內共價連接之位點。
實施態樣 25 . 如實施態樣23或24之配體藥物共軛物組合物，其中PEG單元具有以下結構：
Figure 02_image341
其中波形線指示共價連接至LP 之位點； R20 為PEG連接單元，其中PEG連接單元為-C(O)-、 -O-、-S-、-S(O)-、-NH-、-C(O)O-、-C(O)C1 -C10 烷基、 -C(O)C1 -C10 烷基-O-、-C(O)C1 -C10 烷基-CO2 -、-C(O)C1 -C10 烷基-NH-、-C(O)C1 -C10 烷基-S-、-C(O)C1 -C10 烷基-C(O)-NH-、-C(O)C1 -C10 烷基-NH-C(O)-、-C1 -C10 烷基、-C1 -C10 烷基-O-、-C1 -C10 烷基-CO2 -、-C1 -C10 烷基-NH-、-C1 -C10 烷基-S-、-C1 -C10 烷基-C(O)-NH-、-C1 -C10 烷基-NH-C(O)-、 -CH2 CH2 SO2 -C1 -C10 烷基-、-CH2 C(O)-C1-10 烷基-、=N-(O或N)-C1 -C10 烷基-O-、=N-(O或N)-C1 -C10 烷基-NH-、=N-(O或N)-C1 -C10 烷基-CO2 -、=N-(O或N)-C1- C10 烷基-S-、
Figure 02_image343
； R21 為PEG加帽單元；其中PEG加帽單元為-C1 -C10 烷基、-C2 -C10 烷基-CO2 H、-C2 -C10 烷基-OH、-C2 -C10 烷基-NH2 、C2 -C10 烷基-NH(C1 -C3 烷基)或 C2 -C10 烷基-N(C1 -C3 烷基)2 ； R22 為用於將多個PEG亞單元鏈偶合在一起之PEG偶合單元，其中PEG偶合單元為-C1-10 烷基-C(O)-NH-、-C1-10 烷基-NH-C(O)-、-C2-10 烷基-NH-、-C2 -C10 烷基-O-、-C1 -C10 烷基-S-或-C2 -C10 烷基-NH-； 下標n獨立地選自8至72、10至72或12至72； 下標e選自2至5；且 各n'獨立地選自至少6至不超過72，較佳為至少8或至少10至不超過36。
實施態樣 26 . 如實施態樣1-6中之任一者之配體藥物共軛物組合物，其中配體藥物共軛物組合物中之大多數配體藥物共軛物化合物具有由式1C及式1D之結構表示的藥物連接子部分：
Figure 02_image345
或其鹽，特定而言醫藥學上可接受之鹽，其中 HE為水解增強單元； A’當存在時為所指示之第一延伸體單元(A)的亞單元； 下標a'為0或1，分別指示A'不存在或存在； 下標P為1或2；且下標Q在1至6範圍內，較佳下標Q為1或2，更佳下標Q具有與下標P相同之值； Ra3 為-H、視情況經取代之C1 -C6 烷基、視情況經取代之-C1 -C4 伸烷基-(C6 -C10 芳基)或 -RPEG1 -O-(CH2 CH2 O)1-36 -RPEG2 ，其中RPEG1 為C1 -C4 伸烷基且RPEG2 為-H或C1 -C4 伸烷基，其中鍵結至Ra3 之鹼性氮以鹽形式，較佳以醫藥學上可接受之鹽形式視情況經質子化，或 Ra3 為氮保護基，諸如適合之酸不穩定性保護基； 各P為肽可裂解單元之連續胺基酸序列之胺基酸殘基；且 波形線指示共價結合至配體單元之硫原子之位點。
實施態樣 27. 如實施態樣1之配體藥物共軛物組合物，其中配體藥物共軛物組合物中之大多數配體藥物共軛物化合物具有由式1F及式1G之結構表示的藥物連接子部分：
Figure 02_image347
Figure 02_image349
或其鹽，特定而言醫藥學上可接受之鹽，其中 HE為水解增強單元； A’當存在時為所指示之第一延伸體單元(A)的亞單元； 下標a’為0或1，分別指示A’不存在或存在； 下標x為1或2； Ra2 為-H、視情況經取代之C1 -C6 烷基、-CH3 或 -CH2 CH3 ； Ra3 在各情況下獨立地為氮保護基、-H或視情況經取代之C1 -C6 烷基，較佳為-H、酸不穩定性保護基、-CH3 或 -CH2 CH3 ， 或兩個Ra3 與其所連接之氮一起確定氮保護基或氮雜環丁烷基、吡咯啶基或哌啶基雜環基，其中因此確定之鹼性一級、二級或三級胺以鹽形式，較佳以醫藥學上可接受之鹽形式視情況經質子化；且 波形線指示共價結合至配體單元之硫原子之位點。
實施態樣 28. 如實施態樣1之配體藥物共軛物組合物，其中配體藥物共軛物組合物中之配體藥物共軛物化合物主要具有式1H之藥物連接子部分：
Figure 02_image351
或其鹽，特定而言醫藥學上可接受之鹽，且視情況具有少數之配體藥物共軛物化合物，其中此類化合物中之每一者中之藥物連接子部分中之一或多者在水解形式中具有其琥珀醯亞胺環，且其中 HE為水解增強單元； A'當存在時為所指示之第一延伸體單元(A)之亞單元；下標a'為0或1，指示A'不存在或存在；且 波形線指示共價結合至配體單元之硫原子之位點。
實施態樣 29. 如實施態樣26之配體藥物共軛物組合物，其中配體藥物共軛物組合物中之大多數配體藥物共軛物化合物具有由以下結構表示之藥物連接子部分：
Figure 02_image353
Figure 02_image355
或其鹽，特定而言醫藥學上可接受之鹽。
實施態樣 30. 如實施態樣28之配體藥物共軛物組合物，其中配體藥物共軛物組合物中之大多數配體藥物共軛物化合物具有由以下結構表示之藥物連接子部分：
Figure 02_image357
Figure 02_image359
或其鹽，特定而言醫藥學上可接受之鹽。
實施態樣 31. 如實施態樣26-30中之任一者之配體藥物共軛物組合物，其中HE為-C(=O)。
實施態樣 32 . 如實施態樣26-30中之任一者之配體藥物共軛物組合物，其中HE為-C(=O)，下標a’為1且A’具有實施態樣17之式3a 、式4a 或式5a 之結構，或A’為α-胺基酸或β-胺基酸殘基。
實施態樣 33. 如實施態樣26-32中之任一者之配體藥物共軛物組合物，其中-[P3]-[P2]-[P1]-為 D-Leu-Leu-Met(O)、D-Leu-Ala-Glu、L-Leu-Ala-Glu或 D-Leu-Ala-Cit，其中Met(O)為硫原子氧化為亞碸之甲硫胺酸且Cit為瓜胺酸。
實施態樣 34. 如實施態樣1-33中之任一者之配體藥物共軛物組合物，其中-Yy -D具有以下結構：
Figure 02_image361
其中-N(Ry )D’表示D，其中D'為D之其餘部分； 波形線指示共價連接至P1或P-1之位點； 虛線指示視情況存在之Ry 與D之環化； Ry 在未與D’環化之情況下為視情況經取代之C1 -C6 烷基，或當與D’環化時為視情況經取代之C1 -C6 伸烷基； 各Q獨立地為-C1 -C8 烷基、-O-(C1 -C8 烷基)或其他推電子基團、-鹵素、-硝基或-氰基或其他拉電子基團，特定而言各Q獨立地選自由以下組成之群：-C1 -C8 烷基、 -O-(C1 -C8 烷基)、鹵素、硝基及氰基；且 下標m為0、1或2，特定而言下標m為0或1且Q當存在時為推電子基團，較佳下標m為0。
實施態樣 35. 如實施態樣1之配體藥物共軛物組合物，其中組合物之大多數配體藥物共軛物化合物中的主導藥物連接子部分由以下結構表示：
Figure 02_image363
或其鹽，特定而言醫藥學上可接受之鹽，其中 波形線指示共價連接至來自配體單元之硫原子； 下標a'為1，指示A'存在，其中A'為實施態樣22之式3a 、式4a 或式5a 之含胺酸殘基，或α-胺基酸或β-胺基酸殘基，特定而言為-NH-CH2 CH2 -C(=O)-；且 D為具有二級胺基作為連接至藥物連接子部分之位點的細胞毒性藥物。
實施態樣 36. 如實施態樣1之配體藥物共軛物組合物，其中組合物之大多數配體藥物共軛物化合物中的主導藥物連接子部分由以下結構表示：
Figure 02_image365
或其鹽，特定而言醫藥學上可接受之鹽，其中 波形線指示共價連接至來自配體單元之硫原子； 下標a'為1，分別指示A存在，其中A'為實施態樣22之式3a 、式4a 或式5a 之含胺酸殘基，或α-胺基酸或β-胺基酸殘基，特定而言為-NH-CH2 CH2 -C(=O)-；且 D為具有二級胺基作為連接至藥物連接子部分之位點的細胞毒性藥物。
實施態樣 37. 如實施態樣1之配體藥物共軛物組合物，其中組合物之大多數配體藥物共軛物化合物中的主導藥物連接子部分由以下結構表示：
Figure 02_image367
或其鹽，特定而言醫藥學上可接受之鹽，其中 波形線指示共價連接至來自配體單元之硫原子；且 D為具有二級胺基作為連接至藥物連接子部分之位點的細胞毒性藥物。
實施態樣 38 . 如實施態樣1-37中之任一者之配體藥物共軛物組合物，其中下標y’為2，且Yy 為 -Y-Y’-，其中Y為第一自降解性間隔子單元且Y’為具有 -OC(=O)-結構之第二自降解性間隔子單元，且細胞毒性藥物為含二級胺之奧裡斯他汀化合物，其中二級胺之氮原子為透過D與Y'之間共享之胺基甲酸酯官能基共價連接至Y’之羰基碳原子之位點。
實施態樣 39 . 如實施態樣38之配體藥物共軛物組合物，其中含二級胺之奧裡斯他汀化合物具有式DE 或DF 之結構：
Figure 02_image369
其中劍形符指示共價連接提供胺基甲酸酯官能基之氮原子之位點， R10 及R11 中之一者為氫且另一者為C1 -C8 烷基，較佳R10 及R11 中之一者為氫且另一者為甲基； R12 為氫、C1 -C8 烷基、C3 -C8 碳環基、C6 -C24 芳基、 -X1 -C6 -C24 芳基、-X1 -(C3 -C8 碳環基)、C3 -C8 雜環基或-X1 -(C3 -C8 雜環基)； R13 為氫、C1 -C8 烷基、C3 -C8 碳環基、C6 -C24 芳基、 -X1 - C6 -C24 芳基、-X1 -(C3 -C8 碳環基)、C3 -C8 雜環基或 -X1 -(C3 -C8 雜環基)； R14 為氫或甲基，或 R13 及R14 與其所連接之碳一起構成螺C3 -C8 碳環基； R15 為氫或C1 -C8 烷基； R16 為氫、C1 -C8 烷基、C3 -C8 碳環基、C6 -C24 芳基、 -C6 -C24 -X1 -芳基、-X1 -(C3 -C8 碳環基)、C3 -C8 雜環基或 -X1 -(C3 -C8 雜環基)； 各R17 獨立地為氫、-OH、C1 -C8 烷基、C3 -C8 碳環基或O-(C1 -C8 烷基)； R18 為氫或視情況經取代之C1 -C8 烷基； R19 為-C(R19A )2 -C(R19A )2 -C6 -C24 芳基、 -C(R19A )2 -C(R19A )2 -(C3 -C8 雜環基)或-C(R19A )2 -C(R19A )2 -(C3 -C8 碳環基)，其中C6 -C24 芳基及C3 -C8 雜環基視情況經取代； R19A 獨立地為氫、視情況經取代之C1 -C8 烷基、-OH或視情況經取代之-O-C1 -C8 烷基； R20 為氫或視情況經取代之C1 -C20 烷基、C6 -C24 芳基或C3 -C8 雜環基或-(R47 O)m -R48 或-(R47 O)m -CH(R49 )2 ； R21 為視情況經取代之-C1 -C8 伸烷基-(C6 -C24 芳基)或 -C1 -C8 伸烷基-(C5 -C24 雜芳基)或C1 -C8 羥基烷基或視情況經取代之C3 -C8 雜環基； Z為O、S、NH或NR46 ； R46 為視情況經取代之C1 -C8 烷基；下標m為在1-1000範圍內之整數； R47 為C2 -C8 伸烷基；R48 為氫或C1 -C8 烷基； R49 獨立地為-COOH、-(CH2 )n -N(R50 )2 、-(CH2 )n -SO3 H或-(CH2 )n -SO3 -C1 -C8 烷基；且 各R50 獨立地為C1 -C8 烷基或-(CH2 )n -COOH；下標n為在0至6範圍內之整數；且X1 為C1 -C10 伸烷基。
實施態樣 40. 如實施態樣39之配體藥物共軛物組合物，其中含二級胺之奧裡斯他汀化合物具有式DE-1 、式DE-2 或式DF-1 之結構：
Figure 02_image371
其中Ar為C6 -C10 芳基或C5 -C10 雜芳基，較佳Ar為苯基或2-吡啶基； Z為-O-或-NH-；R20 為氫、C1 -C6 烷基、C6 -C10 芳基或C5 -C10 雜芳基，其中C1 -C6 烷基、C6 -C10 芳基及C5 -C10 雜芳基視情況經取代；且R21 為C1 -C6 烷基、-C1 -C6 伸烷基-(C6 -C10 芳基)或-C1 -C6 伸烷基-(C5 -C10 雜芳基)，其各自視情況經取代。
實施態樣 41. 如實施態樣40之配體藥物共軛物組合物，其中含二級胺之奧裡斯他汀化合物具有式DF-1 之結構： 其中R21 為X1 -S-R21a 或X1 -Ar，其中X1 為C1 -C6 伸烷基，R21a 為C1 -C4 烷基且Ar為苯基或C5 -C6 雜芳基；且 -Z-為-O-且R20 為C1 -C4 烷基，或- Z-為-NH-且R20 為苯基或C5 -C6 雜芳基。
實施態樣 42. 如實施態樣40之配體藥物共軛物組合物，其中含二級胺之奧裡斯他汀化合物具有式之結構，在較佳實施態樣中，奧裡斯他汀藥物化合物具有式DF/E-3 之結構：
Figure 02_image373
其中R10 及R11 中之一者為氫且另一者為甲基； R13 為異丙基或-CH2 -CH(CH3 )2 ；且 R19B 為-CH(CH3 )-CH(OH)-Ph、 -CH(CO2 H)-CH(OH)-CH3 、-CH(CO2 H)-CH2 Ph、 -CH(CH2 Ph)-2-噻唑基、-CH(CH2 Ph)-2-吡啶基、 -CH(CH2 -p-Cl-Ph)、-CH(CO2 Me)-CH2 Ph、 -CH(CO2 Me)-CH2 CH2 SCH3 、-CH(CH2 CH2 SCH3 )C(=O)NH-喹啉-3-基、-CH(CH2 Ph)C(=O)NH-p-Cl-Ph，或 R19B 具有
Figure 02_image375
之結構，其中波形線指示共價連接至奧裡斯他汀化合物之其餘部分。
實施態樣 43. 如實施態樣40之配體藥物共軛物組合物，其中含二級胺之奧裡斯他汀化合物為單甲基奧裡斯他汀E(MMAE)或單甲基奧裡斯他汀F(MMAF)。
實施態樣 44 . 如實施態樣1之配體藥物共軛物組合物，其中下標q為1且配體藥物共軛物組合物中之大多數配體藥物共軛物化合物具有由式1C-MMAE及式1D-MMAE之結構表示的藥物連接子部分：
Figure 02_image377
Figure 02_image379
或其鹽，特定而言醫藥學上可接受之鹽，其中 A’當存在時為具有實施態樣22之式3a 、式4a 或式5a 之結構的所指示之第一延伸體單元(A)的亞單元，或α-胺基酸或β-胺基酸殘基，特定而言為-NH-CH2 CH2 -C(=O)-； Ra3 為-H、視情況經取代之C1 -C6 烷基、視情況經取代之-C1 -C4 伸烷基-(C6 -C10 芳基)或 -RPEG1 -O-(CH2 CH2 O)1-36 -RPEG2 ，其中RPEG1 為C1 -C4 伸烷基，RPEG2 為-H或C1 -C4 伸烷基，且其中鍵結至Ra3 之鹼性氮以鹽形式，較佳以醫藥學上可接受之鹽形式視情況經質子化，或 Ra3 為氮保護基，諸如適合之酸不穩定性保護基；且 波形線指示共價結合至配體單元之硫原子之位點。
實施態樣 45. 如實施態樣1之配體藥物共軛物組合物，其中下標q為1且配體藥物共軛物組合物中之大多數配體藥物共軛物化合物具有由式1F-MMAE及式1G-MMAE之結構表示的藥物連接子部分：
Figure 02_image381
Figure 02_image383
或其鹽，特定而言醫藥學上可接受之鹽，其中 A'當存在時為具有實施態樣22之式3a 、式4a 或式5a 之結構的所指示之第一延伸體單元(A)的亞單元，或α-胺基酸或β-胺基酸殘基，特定而言為-NH-CH2 CH2 -C(=O)-； 下標x為1或2； Ra3 在各情況下獨立地為氮保護基、-H或視情況經取代之C1 -C6 烷基，較佳為-H、酸不穩定性保護基、-CH3 或 -CH2 CH3 ， 或兩個Ra3 與其所連接之氮一起確定氮保護基或氮雜環丁烷基、吡咯啶基或哌啶基雜環基，其中因此確定之鹼性一級、二級或三級胺以鹽形式，較佳以醫藥學上可接受之鹽形式視情況經質子化；且 波形線指示共價結合至配體單元之硫原子之位點。
實施態樣 46. 如實施態樣1之配體藥物共軛物組合物，其中下標q為1且配體藥物共軛物組合物中之配體藥物共軛物化合物主要具有式1H-MMAE之藥物連接子部分：
Figure 02_image385
或其鹽，特定而言醫藥學上可接受之鹽，且視情況具有少數之配體藥物共軛物化合物，其中此類化合物中之每一者中的藥物連接子部分中之一或多者在水解形式中具有其琥珀醯亞胺環，且其中 A’當存在時為具有實施態樣22之式3a 、式4a 或式5a 之結構的所指示之第一延伸體單元(A)的亞單元，或α-胺基酸或β-胺基酸殘基，特定而言為-NH-CH2 CH2 -C(=O)-； 下標a’為0或1，指示A’不存在或存在；且 波形線指示共價結合至配體單元之硫原子之位點。
實施態樣 47. 如實施態樣44、45或46之配體藥物共軛物組合物，其中P1為L-Glu或L-Asp，P2為L-Val或L-Ala且P3為L-Leu或D-Leu。
實施態樣 48 . 如實施態樣1之配體藥物共軛物組合物，其中下標q為1且其中組合物之大多數配體藥物共軛物化合物中之主導藥物連接子部分由以下結構表示：
Figure 02_image387
或其鹽，特定而言醫藥學上可接受之鹽，且視情況具有少數之配體藥物共軛物化合物，其中此類化合物中之每一者中的藥物連接子部分中之一或多者在水解形式中具有其琥珀醯亞胺環。
實施態樣 49. 如實施態樣1-48中之任一者之配體藥物共軛物組合物，其中L為完整抗體或其抗原結合片段之抗體配體單元。
實施態樣 50. 如實施態樣49之配體藥物共軛物組合物，其中完整抗體或其片段能夠選擇性結合癌細胞抗原。
實施態樣 51. 如實施態樣49之配體藥物共軛物組合物，其中完整抗體為嵌合抗體、人類化抗體或人類抗體，其中抗體能夠選擇性結合癌細胞抗原或抗體為非結合對照抗體，由此確定非結合對照共軛物組合物。
實施態樣 52. 如實施態樣1-51中之任一者之配體藥物共軛物組合物，其中下標p在約2至約12或約2至約10或約2至約8範圍內，特定而言下標p為約2、約4或約8。
實施態樣 53. 一種醫藥學上可接受之調配物，其中該調配物包含有效量之實施態樣1至36中之任一者的配體藥物共軛物組合物或等效量之非結合對照共軛物及至少一種醫藥學上可接受之賦形劑。
實施態樣 54 . 如實施態樣53之醫藥學上可接受之調配物，其中該至少一種醫藥學上可接受之賦形劑為提供液體調配物之液體載劑，其中該液體調配物適合於冷凍乾燥或向有需要之個體投與且。
實施態樣 55 . 如實施態樣53之醫藥學上可接受之調配物，其中該調配物為由冷凍乾燥形成之固體或實施態樣54之液體調配物，其中該固體調配物之該至少一種賦形劑為冷凍乾燥保護劑。
實施態樣 56 . 一種藥物連接子化合物，其具有式IA ：
Figure 02_image389
或其鹽，其中 D為藥物單元； LB ’為配體共價結合前驅體部分； A為第一視情況存在之延伸體單元； 下標a為0或1，分別指示A不存在或存在； B為視情況存在之分枝單元； 下標b為0或1，分別指示B不存在或存在； LO 為二級連接子部分，其中該二級連接子具有下式；
Figure 02_image391
， 其中毗鄰Y之波形線指示LO 共價連接至藥物單元之位點且毗鄰A'之波形線指示共價連接至藥物連接子化合物之其餘部分的位點； A’為第二視情況存在之延伸體單元，其在不存在B之情況下變為A之亞單元； 下標a’為0或1，分別指示A’不存在或存在； W為肽可裂解單元，其中該肽可裂解單元為多至12個胺基酸之連續序列，其中該序列包含賦予選擇性之三肽，其N端提供與正常組織之勻漿相比由腫瘤組織之勻漿選擇性可裂解以釋放游離藥物之醯胺鍵聯，及/或提供改良之實施態樣1之式1之配體藥物共軛物化合物的腫瘤組織生物可用性，其中藥物連接子化合物變為與比較配體-藥物共軛物相比對正常組織生物可用性不利的共軛物化合物之藥物連接子部分，在該比較配體-藥物共軛物中肽可裂解單元之肽序列為二肽-纈胺酸-瓜胺酸-； 其中腫瘤及正常組織屬於相同物種，且其中當以有效量向有需要之個體投與時與游離藥物自比較配體-藥物共軛物釋放相關之有害事件係歸因於其對正常組織之細胞的毒性。 Y為自降解性間隔子單元； 下標y為0、1或2，分別指示Y不存在或存在1或2個；且 下標q為在1至4範圍內之整數， 限制條件為當下標b為0時下標q為1，且當下標b為1時下標q為2、3或4。
實施態樣 57. 如實施態樣56之藥物連接子化合物，其中該藥物連接子化合物具有下式：
Figure 02_image393
或其鹽，其中 LR ’為式LB ’-Aa -Bb -之一級連接子，限制條件為A’為A之亞單元，使得當下標a及a'各自為1且下標b為0時，A’為LR ’之組分；且 各P為肽可裂解單元之連續胺基酸序列之胺基酸殘基且其中下標n具有提供至多12個此等殘基之整數值， 其中該序列之-[P3]-[P2]-[P1]-為賦予選擇性之三肽。
實施態樣 58. 如實施態樣57之藥物連接子化合物，其中該藥物連接子化合物具有下式：
Figure 02_image395
或其鹽， 其中LR '為式LB '-Aa -Bb -之一級連接子，限制條件為A'為A之亞單元，使得當下標a及a'各自為1且下標b為0時A'為LR '之組分；且 其中各P為肽可裂解單元之連續胺基酸序列之胺基酸殘基，其中該序列之-[P3]-[P2]-[P1]-為賦予選擇性之三肽。
實施態樣 59. 如實施態樣58之藥物連接子化合物，其中該藥物連接子化合物具有下式：
Figure 02_image397
或其鹽，其中P1為具有在生理pH值下帶負電荷之側鏈或不帶正電荷之極性側鏈的L-胺基酸殘基。
實施態樣 60. 如實施態樣56-59中之任一者之藥物連接子化合物，其中P1為選自由以下組成之群的L-胺基酸殘基：麩胺酸、甲硫胺酸-亞碸、天冬胺酸、(S)-3-胺基丙烷-1,1,3-三羧酸及磷酸-蘇胺酸。
實施態樣 61. 如實施態樣56之藥物連接子化合物，其中該藥物連接子化合物具有下式：
Figure 02_image399
或其鹽，特定而言醫藥學上可接受之鹽，其中各P為肽可裂解單元之連續胺基酸序列之胺基酸殘基。
實施態樣 62. 如實施態樣56-61中之任一者之藥物連接子化合物，其中P2為甘胺酸之殘基或L-胺基酸，其側鏈具有不超過三個連續碳原子。
實施態樣 63. 如實施態樣62之藥物連接子化合物，其中該P2胺基酸為L-丙胺酸、L-纈胺酸或甘胺酸或非天然胺基酸，其中該非天然胺基酸為Abu、Aib、Ala、Gly、Leu、Nva或Pra，其具有以下結構：
Figure 02_image401
其中Abu、Nva及Pra之側鏈呈與L-胺基酸相同之立體化學組態。
實施態樣 64. 如實施態樣63之藥物連接子化合物，其中該藥物連接子化合物具有下式：
Figure 02_image403
或其鹽，其中P3為肽可裂解單元之連續胺基酸序列之胺基酸殘基。
實施態樣 65. 如實施態樣56-64中之任一者之藥物連接子化合物，其中P3為D-胺基酸，其側鏈在生理pH值下為不帶電荷的。
實施態樣 66. 如實施態樣56-64中之任一者之藥物連接子化合物，其中P3為D-Leu、L-Leu、L-Cit或L-Pro，較佳為D-Leu。
實施態樣 67. 如實施態樣66之藥物連接子化合物，其中-[P3]-[P2]-[P1]-為-D-Leu-Ala-Glu-或其鹽，特定而言醫藥學上可接受之鹽。
實施態樣 68. 如實施態樣56-67中之任一者之藥物連接子化合物，其中LB ’為能夠與靶向部分之硫醇官能基反應以形成硫取代之琥珀醯亞胺部分的馬來醯亞胺部分。
實施態樣 69. 如實施態樣56-67中之任一者之藥物連接子化合物，其中LB ’-A-具有或包含以下結構中之一者：
Figure 02_image405
或其鹽，其中 LG1 為適合於由靶向劑親核劑進行親核置換之離去基團； LG2 為適合於與靶向劑形成醯胺鍵之離去基團，或為 -OH以提供適合於與靶向劑形成醯胺鍵之可活化羧酸；且 波形線指示共價連接至藥物連接子化合物結構之其餘部分的位點。
實施態樣 70. 如實施態樣69之藥物連接子化合物，其中下標q為1且LB '-A-具有以下結構：
Figure 02_image407
或其鹽，其中 毗鄰A'a' 之波形線指示共價連接至肽可裂解單元之位點； [HE]為視情況存在之水解增強單元，其為由A或其第一亞單元提供之組分； BU為鹼性單元； Ra2 為視情況經取代之C1 -C12 烷基；且 虛曲線指示視情況存在之環化，使得在不存在該環化之情況下，BU為具有一級、二級或三級胺官能基作為非環鹼性單元之鹼性官能基的非環鹼性單元，或在存在該環化之情況下，BU為環化鹼性單元，其中Ra2 及BU與同兩者連接之碳原子一起確定視情況經取代之螺C3 -C20 雜環基，其含有作為環狀鹼性單元之鹼性官能基之二級或三級胺官能基的骨架鹼性氮原子， 其中非環鹼性單元或環狀鹼性單元之鹼性氮原子視鹼性氮原子之取代程度而定視情況適當受氮保護基保護，或以酸加成鹽形式視情況經質子化。
實施態樣 71. 如實施態樣70之藥物連接子化合物，其中LB ’-A-具有以下結構：
Figure 02_image409
或其鹽，特定而言呈酸加成鹽形式，或其中LB ’-A-具有以下結構：
Figure 02_image411
。
實施態樣 72. 如實施態樣56-71中之任一者之藥物連接子化合物，其中下標q為1且A’作為A之亞單元存在，其中A’包含具有式(3)或式(4)之結構的含胺酸殘基：
Figure 02_image413
或其鹽，其中 毗鄰氮原子之波形線指示共價連接至[HE]之位點，其中[HE]為-C(=O)-，且毗鄰羰基碳原子之波形線指示共價連接至A’之其餘部分或肽可裂解單元之N端胺基酸殘基的位點，其中兩種連接均透過醯胺官能基進行； K及L’獨立地為C、N、O或S，限制條件為當K或L’為O或S時，連接K之R41 及R42 或連接L’之R43 及R44 不存在，且當K或L’為N時，連接K之R41 、R42 中之一者或連接L'之R42 、R43 中之一者不存在，且限制條件為沒有兩個相鄰L’獨立地選擇為N、O或S； 其中下標e及f為在0至12範圍內之獨立選擇之整數，且下標g為在1至12範圍內之整數： G為氫、視情況經取代之C1 -C6 烷基、-OH或-CO2 H； R38 為氫或視情況經取代之C1 -C6 烷基； R39 -R44 獨立地選自由以下組成之群：氫、視情況經取代之C1 -C6 烷基及視情況經取代之C5 -C10 (雜)芳基，或 R39 、R40 與同兩者連接之碳原子一起，或R41 、R42 與同兩者連接之K(當K為碳原子時)一起確定C3 -C6 碳環基，且R41 -R44 如本文所定義， 或R43 、R44 與同兩者連接之L'(當L'為碳原子時)一起確定C3 -C6 碳環基，且R39 -R42 如本文所定義， 或R40 及R41 ，或R40 及R43 ，或R41 及R43 與同兩者連接之碳原子或雜原子以及***彼等碳原子及/或雜原子之間的原子一起確定C5 -C6 碳環基或C5 -C6 雜環基，且R39 、R44 及R40 -R43 之其餘部分如本文所定義， 限制條件為當K為O或S時，R41 及R42 不存在，且當K為N時，R41 、R42 中之一者不存在，且當L’為O或S時，R43 及R44 不存在，且當L’為N時，R43 、R44 中之一者不存在，或 A'包含α-胺基、β-胺基或另一含胺酸殘基，其中其胺基氮原子共價連接至HE之羰基碳原子，且其羧酸羰基碳原子共價連接至A'之其餘部分或肽可裂解單元之N端胺基酸，其中兩種共價連接均透過醯胺官能基進行。
實施態樣 73 . 如實施態樣72之藥物連接子化合物，其中A'為具有式3a 、式4a 或式5a 之結構的含胺酸殘基：
Figure 02_image415
或其鹽，其中 下標e及f獨立地為0或1；且 R38 -R44 各自為氫； 或A’為α-胺基或β-胺基酸殘基。
實施態樣 74. 如實施態樣56-71中之任一者之藥物連接子化合物，其中下標q為1且A’包含β-胺基酸殘基或-LP (PEG)-， 其中LP 為具有式LP -1或LP -2結構之平行連結單元：
Figure 02_image417
或 其中-LP (PEG)-或其含PEG亞單元具有式LP -3或式LP -4之結構：
Figure 02_image419
其中下標v為在1至4範圍內之整數； 下標v’為在0至4範圍內之整數； XLP 由天然或非天然胺基酸側鏈提供或選自由以下組成之群：-O-、-NRLP -、-S-、-S(=O)-、-S(=O)2 -、-C(=O)-、-C(=O)N(RLP )-、-N(RLP )C(=O)N(RLP )-及 -N(RLP )C(=NRLP )N(RLP )-或C3 -C8 雜環基； 其中各RLP 獨立地選自由氫及視情況經取代之C1 -C6 烷基組成之群，或兩個RLP 與其所連接之碳原子及其中間原子一起確定C5 -C6 雜環基且任何剩餘之RLP 如先前所定義； Ar為視情況經取代之C6 -C10 伸芳基或C5 -C10 伸雜芳基； 各RE 及RF 獨立地選自由以下組成之群：-H、視情況經取代之C1 -C6 烷基、視情況經取代之C2 -C6 伸烷基、視情況經取代之C6 -C10 伸芳基或視情況經取代之C5 -C10 伸雜芳基， 或RE 及RF 與同兩者連接之碳原子一起確定視情況經取代之螺C3 -C6 碳環基，或來自相鄰碳原子之RE 及RF 與此等原子及任何中間碳原子一起確定視情況經取代之C5 -C6 碳環基，且任何剩餘之RE 及RF 如先前所定義； 其中波形線中之一者指示共價連接PEG單元之點且另外兩個波形線指示共價連接表示藥物連接子化合物之結構內的式LP -1或式LP -2，或 LP 為具有三官能含胺酸殘基之結構的平行連結單元或；且 PEG為PEG單元。
實施態樣 75. 如實施態樣74之藥物連接子化合物，其中A’包含β-胺基酸殘基或-LP (PEG)-， 其中β-胺基酸殘基具有-NHCH2 CH2 C(=O)-之結構；且 其中-LP (PEG)-具有以下結構：
Figure 02_image421
其中波形線指示藥物連接子部分內共價連接之位點。
實施態樣 76 . 如實施態樣74或75之藥物連接子化合物，其中該PEG單元具有以下結構：
Figure 02_image423
其中波形線指示共價連接至LP 之位點； R20 為PEG連接單元，其中PEG連接單元為-C(O)-、 -O-、-S-、-S(O)-、-NH-、-C(O)O-、-C(O)C1 -C10 烷基、 -C(O)C1 -C10 烷基-O-、-C(O)C1 -C10 烷基-CO2 -、-C(O)C1 -C10 烷基-NH-、-C(O)C1 -C10 烷基-S-、-C(O)C1 -C10 烷基-C(O)-NH-、-C(O)C1 -C10 烷基-NH-C(O)-、-C1 -C10 烷基、-C1 -C10 烷基-O-、-C1 -C10 烷基-CO2 -、-C1 -C10 烷基-NH-、-C1 -C10 烷基-S-、-C1 -C10 烷基-C(O)-NH-、-C1 -C10 烷基-NH-C(O)-、 -CH2 CH2 SO2 -C1 -C10 烷基-、-CH2 C(O)-C1-10 烷基-、=N-(O或N)-C1 -C10 烷基-O-、=N-(O或N)-C1 -C10 烷基-NH-、=N-(O或N)-C1 -C10 烷基-CO2 -、=N-(O或N)-C1- C10 烷基-S-、
Figure 02_image425
； R21 為PEG加帽單元；其中PEG加帽單元為-C1 -C10 烷基、-C2 -C10 烷基-CO2 H、-C2 -C10 烷基-OH、-C2 -C10 烷基-NH2 、C2 -C10 烷基-NH(C1 -C3 烷基)或C2 -C10 烷基 -N(C1 -C3 烷基)2 ； R22 為用於將多個PEG亞單元鏈偶合在一起之PEG偶合單元，其中PEG偶合單元為-C1-10 烷基-C(O)-NH-、-C1-10 烷基-NH-C(O)-、-C2-10 烷基-NH-、-C2 -C10 烷基-O-、-C1 -C10 烷基-S-或-C2 -C10 烷基-NH-； 下標n獨立地選自8至72、10至72或12至72； 下標e選自2至5；且 各n'獨立地選自至少6至不超過72，較佳為至少8或至少10至不超過36。
實施態樣 77 . 如實施態樣56之藥物連接子化合物，其中該藥物連接子化合物具有式IC之結構：
Figure 02_image427
或其鹽，其中 HE為水解增強單元； A'當存在時為所指示之第一種延伸體單元(A)的亞單元； 下標a’為0或1，分別指示A’不存在或存在； 下標P為1或2；且下標Q在1至6範圍內，較佳下標Q為1或2，更佳下標Q具有與下標P相同之值； Ra3 為-H、視情況經取代之C1 -C6 烷基、視情況經取代之-C1 -C4 伸烷基-(C6 -C10 芳基)或 -RPEG1 -O-(CH2 CH2 O)1-36 -RPEG2 ，其中RPEG1 為C1 -C4 伸烷基且RPEG2 為-H或C1 -C4 伸烷基，其中鍵結至Ra3 之鹼性氮以鹽形式經質子化，或 Ra3 為適合之氮保護基，較佳為適合之酸不穩定性保護基；且 各P為肽可裂解單元之連續胺基酸序列之胺基酸殘基。
實施態樣 78. 如實施態樣56之藥物連接子化合物，其中該藥物連接子化合物具有式IF之結構：
Figure 02_image429
或其鹽，其中 HE為水解增強單元； A’當存在時為所指示之第一種延伸體單元(A)的亞單元； 下標a’為0或1，分別指示A’不存在或存在； 下標x為1或2； Ra2 為-H、視情況經取代之C1 -C6 烷基、-CH3 或 -CH2 CH3 ； Ra3 在各情況下獨立地為適合之氮保護基、-H或視情況經取代之C1 -C6 烷基，較佳為-H、適合之酸不穩定性保護基、-CH3 或-CH2 CH3 ，限制條件為當兩個Ra3 均不為氮保護基時與兩個Ra3 結合之氮原子以鹽形式經質子化， 或兩個Ra3 與其所連接之氮一起確定氮保護基或氮雜環丁烷基、吡咯啶基或哌啶基雜環基，其中因此確定之鹼性一級、二級或三級胺以鹽形式經質子化。
實施態樣 79. 如實施態樣78之藥物連接子化合物，其中該藥物連接子化合物具有式IH之結構：
Figure 02_image431
或其鹽， HE為水解增強單元；且 A’當存在時為所指示之第一延伸體單元(A)之亞單元；下標a’為0或1，指示A’不存在或存在。
實施態樣 80. 如實施態樣77之藥物連接子化合物，其中該藥物連接子化合物結構為：
Figure 02_image433
或其鹽，其中LSS '之4-員雜環基之氮原子以鹽形式經質子化。
實施態樣 81. 如實施態樣56之藥物連接子化合物，其中該藥物連接子化合物具有以下結構：
Figure 02_image435
或其鹽，其中LSS ’之一級胺以鹽形式經質子化。
實施態樣 82. 如實施態樣77-81中之任一者之藥物連接子化合物，其中HE為-C(=O)。
實施態樣 83 . 如實施態樣77-81中之任一者之藥物連接子化合物，其中HE為-C(=O)，下標a'為1且A'具有實施態樣73之式3a 、式4a 或式5a 之結構，或A'為α-胺基酸或β-胺基酸殘基。
實施態樣 84. 如實施態樣77-83中之任一者之藥物連接子化合物，其中-[P3]-[P2]-[P1]-為 D-Leu-Leu-Cit、D-Leu-Leu-Lys、D-Leu-Leu-Met(O)、 Cit-Ala(Nap)-Thr、D-Leu-Ala-Glu或Pro-Ala(Nap)-Lys，其中Met(O)為硫原子氧化為亞碸之甲硫胺酸且Ala(NAP)為甲基側鏈經萘-1-基取代之丙胺酸。
實施態樣 85. 如實施態樣56-84中之任一者之藥物連接子化合物，其中-Yy -D具有以下結構：
Figure 02_image437
其中-N(Ry )D’表示D，其中D'為D之其餘部分； 波形線指示共價連接至P1或P-1之位點； 虛線指示視情況存在之Ry 與D'之環化； Ry 在未與D’環化之情況下為視情況經取代之C1 -C6 烷基，或當與D’環化時為視情況經取代之C1 -C6 伸烷基； 各Q獨立地為-C1 -C8 烷基、-O-(C1 -C8 烷基)或其他推電子基團、-鹵素、-硝基或-氰基或其他拉電子基團，特定而言各Q獨立地選自由以下組成之群：-C1 -C8 烷基、-O-(C1 -C8 烷基)、鹵素、硝基及氰基；且 下標m為0、1或2，特定而言下標m為0或1且Q當存在時為推電子基團，較佳下標m為0。
實施態樣 86. 如實施態樣56之藥物連接子化合物，其中該藥物連接子化合物具有以下結構：
Figure 02_image439
或其鹽，其中 下標a’為1，指示A’存在，其中A’為實施態樣73之式3a 、式4a 或式5a 之含胺酸殘基，或α-胺基酸或β-胺基酸殘基，特定而言為-NH-CH2 CH2 -C(=O)-；且 D為具有二級胺基作為連接至藥物連接子化合物之連接子單元之位點的細胞毒性藥物， 其中LSS '之雜環基之氮原子以鹽形式經質子化。
實施態樣 87. 如實施態樣56之藥物連接子化合物，其中該藥物連接子化合物具有以下結構：
Figure 02_image441
或其鹽，其中 下標a’為1，指示A’存在，其中A’為實施態樣73之式3a 、式4a 或式5a 之含胺酸殘基，或α-胺基酸或β-胺基酸殘基，特定而言為-NH-CH2 CH2 -C(=O)-；且 D為具有二級胺基作為連接至藥物連接子化合物之連接子單元之位點的細胞毒性藥物， 其中LSS ’之一級胺以鹽形式經質子化。
實施態樣 88. 如實施態樣56之藥物連接子化合物，其中該藥物連接子化合物具有以下結構：
Figure 02_image443
， 或其鹽，其中 D為具有二級胺基作為連接至藥物連接子化合物之連接子單元之位點的細胞毒性藥物。
實施態樣 89 . 如實施態樣56-88中之任一者之藥物連接子化合物，其中下標y'為2，其中-Y-Y'-之Y為第一自降解性間隔子單元且Y'為具有-OC(=O)-結構之第二自降解性間隔子單元且細胞毒性藥物為含二級胺之奧裡斯他汀化合物，其中二級胺之氮原子為透過D與Y'之間共享之胺基甲酸酯官能基共價連接至Y'之羰基碳原子的位點。
實施態樣 90 . 如實施態樣89之藥物連接子化合物，其中該含二級胺之奧裡斯他汀化合物具有式DE 或DF 之結構：
Figure 02_image445
其中劍形符指示共價連接提供胺基甲酸酯官能基之氮原子之位點， R10 及R11 中之一者為氫且另一者為C1 -C8 烷基，較佳R10 及R11 中之一者為氫且另一者為甲基； R12 為氫、C1 -C8 烷基、C3 -C8 碳環基、C6 -C24 芳基、 -X1 -C6 -C24 芳基、-X1 -(C3 -C8 碳環基)、C3 -C8 雜環基或-X1 -(C3 -C8 雜環基)； R13 為氫、C1 -C8 烷基、C3 -C8 碳環基、C6 -C24 芳基、 -X1 -C6 -C24 芳基、-X1 -(C3 -C8 碳環基)、C3 -C8 雜環基及-X1 -(C3 -C8 雜環基)； R14 為氫或甲基，或 R13 及R14 與其所連接之碳一起構成螺C3 -C8 碳環基； R15 為氫或C1 -C8 烷基； R16 為氫、C1 -C8 烷基、C3 -C8 碳環基、C6 -C24 芳基、 -C6 -C24 -X1 -芳基、-X1 -(C3 -C8 碳環基)、C3 -C8 雜環基及-X1 -(C3 -C8 雜環基)； R17 獨立地為氫、-OH、C1 -C8 烷基、C3 -C8 碳環基及O-(C1 -C8 烷基)； R18 為氫或視情況經取代之C1 -C8 烷基； R19 為-C(R19A )2 -C(R19A )2 -C6 -C24 芳基、 -C(R19A )2 -C(R19A )2 -(C3 -C8 雜環基)或-C(R19A )2 -C(R19A )2 -(C3 -C8 碳環基)，其中C6 -C24 芳基及C3 -C8 雜環基視情況經取代； R19A 獨立地為氫、視情況經取代之C1 -C8 烷基、-OH或視情況經取代之-O-C1 -C8 烷基； R20 為氫或視情況經取代之C1 -C20 烷基、C6 -C24 芳基或C3 -C8 雜環基或-(R47 O)m -R48 或-(R47 O)m -CH(R49 )2 ； R21 為視情況經取代之-C1 -C8 伸烷基-(C6 -C24 芳基)或-C1 -C8 伸烷基-(C5 -C24 雜芳基)或C1 -C8 羥基烷基或視情況經取代之C3 -C8 雜環基； Z為O、S、NH或NR46 ； R46 為視情況經取代之C1 -C8 烷基；下標m為在1-1000範圍內之整數； R47 為C2 -C8 烷基；R48 為氫或C1 -C8 烷基； R49 獨立地為-COOH、-(CH2 )n -N(R50 )2 、-(CH2 )n -SO3 H或-(CH2 )n -SO3 -C1 -C8 烷基；且 R50 獨立地為C1 -C8 烷基或-(CH2 )n -COOH；下標n為在0至6範圍內之整數；且X1 為C1 -C10 伸烷基。
實施態樣 91. 如實施態樣90之藥物連接子化合物，其中該含二級胺之奧裡斯他汀化合物具有式DE-1 、式DE-2 或式DF-1 之結構：
Figure 02_image447
其中Ar為C6 -C10 芳基或C5 -C10 雜芳基，較佳Ar為苯基或2-吡啶基； Z為-O-或-NH-；R20 為氫或視情況經取代之C1 -C6 烷基、C6 -C10 芳基或C5 -C10 雜芳基；且R21 為視情況經取代之C1 -C6 烷基、-C1 -C6 伸烷基-(C6 -C10 芳基)或-C1 -C6 伸烷基-(C5 -C10 雜芳基)。
實施態樣 92. 如實施態樣91之藥物連接子化合物，其中該含二級胺之奧裡斯他汀化合物具有式DF-1 之結構： 其中R21 為X1 -S-R21a 或X1 -Ar，其中X1 為C1 -C6 伸烷基，R21a 為C1 -C4 烷基且Ar為苯基或C5 -C6 雜芳基；且 -Z-為-O-且R20 為C1 -C4 烷基，或- Z-為-NH-且R20 為苯基或C5 -C6 雜芳基。
實施態樣 93. 如實施態樣91之藥物連接子化合物，其中該含二級胺之奧裡斯他汀化合物具有式結構，在較佳實施態樣中，奧裡斯他汀藥物化合物具有式DF/E-3 之結構：
Figure 02_image449
其中R10 及R11 中之一者為氫且另一者為甲基； R13 為異丙基或-CH2 -CH(CH3 )2 ；且 R19B 為-CH(CH3 )-CH(OH)-Ph、 -CH(CO2 H)-CH(OH)-CH3 、-CH(CO2 H)-CH2 Ph、 -CH(CH2 Ph)-2-噻唑基、-CH(CH2 Ph)-2-吡啶基、 -CH(CH2 -p-Cl-Ph)、-CH(CO2 Me)-CH2 Ph、 -CH(CO2 Me)-CH2 CH2 SCH3 、-CH(CH2 CH2 SCH3 )C(=O)NH-喹啉-3-基、-CH(CH2 Ph)C(=O)NH-p-Cl-Ph，或 R19B 具有
Figure 02_image451
之結構，其中波形線指示共價連接至奧裡斯他汀化合物之其餘部分。
實施態樣 94. 如實施態樣91之藥物連接子化合物，其中該含二級胺之奧裡斯他汀化合物為單甲基奧裡斯他汀E(MMAE)或單甲基奧裡斯他汀F(MMAF)。
實施態樣 95 . 如實施態樣56之藥物連接子化合物，其中該藥物連接子化合物具有式IC-MMAE之結構：
Figure 02_image453
或其鹽，特定而言醫藥學上可接受之鹽，其中 A'當存在時為具有實施態樣73之式3a 、式4a 或式5a 之結構的所指示之第一延伸體單元(A)的亞單元，或α-胺基酸或β-胺基酸殘基，特定而言為-NH-CH2 CH2 -C(=O)-； Ra3 為-H、視情況經取代之C1 -C6 烷基、視情況經取代之-C1 -C4 伸烷基-(C6 -C10 芳基)或 -RPEG1 -O-(CH2 CH2 O)1-36 -RPEG2 ，其中RPEG1 為C1 -C4 伸烷基，RPEG2 為-H或C1 -C4 伸烷基，且其中鍵結至Ra3 之鹼性氮以鹽形式經質子化，或 Ra3 為適合之氮保護基，較佳為適合之酸不穩定性保護基。
實施態樣 96. 如實施態樣56之藥物連接子化合物，其中該藥物連接子化合物具有式IF-MMAE之結構：
Figure 02_image455
或其鹽，其中 A'當存在時為具有實施態樣73之式3a 、式4a 或式5a 之結構的所指示之第一延伸體單元(A)的亞單元，或α-胺基酸或β-胺基酸殘基，特定而言為-NH-CH2 CH2 -C(=O)-； 下標x為1或2； Ra3 在各情況下獨立地為適合之氮保護基、-H或視情況經取代之C1 -C6 烷基，較佳為-H、適合之酸不穩定性保護基、-CH3 或-CH2 CH3 ，限制條件為當兩個Ra3 均不為氮保護基時與兩個Ra3 結合之氮原子以鹽形式經質子化， 或兩個Ra3 與其所連接之氮一起確定氮保護基或氮雜環丁烷基、吡咯啶基或哌啶基雜環基，其中因此確定之鹼性一級、二級或三級胺以鹽形式經質子化。
實施態樣 97. 如實施態樣56之藥物連接子化合物，其中該藥物連接子化合物具有式IH-MMAE之結構：
Figure 02_image457
或其鹽，其中 A'當存在時為具有實施態樣73之式3a 、式4a 或式5a 之結構的所指示之第一延伸體單元(A)的亞單元，或α-胺基酸或β-胺基酸殘基，特定而言為-NH-CH2 CH2 -C(=O)-； 下標a'為0或1，指示A'不存在或存在。
實施態樣 98. 如實施態樣95、96或97之藥物連接子化合物，其中P1為L-Glu或L-Asp，P2為L-Val或 L-Ala且P3為L-Leu或D-Leu。
實施態樣 99 . 如實施態樣56之藥物連接子化合物，其中該藥物連接子化合物具有以下結構：
Figure 02_image459
Figure 02_image461
或其鹽。 實例
一般資訊 . 所有市售無水溶劑均未進一步純化即使用。用於表徵基於三肽之藥物連接子化合物之UPLC-MS系統由與配備有Acquity UPLC BEH C18，130 Å，1.7 µm，2.1×50 mm逆相管柱或Waters Cortecs UPLC C18，90Å，1.6 µm，2.1×50 mm之Acquity超高效LC連接之Waters SQ質量偵測器組成。酸性移動相(0.1%甲酸)由3%乙腈/97%水至100%乙腈之梯度組成(流速=0.5 mL/min)。UPLC-MS系統2由與配備有Acquity UPLC BEH C18 2.1×50 mm，1.7 µm逆相管柱之Waters Acquity H-Class超高效LC連接之Waters Xevo G2 ToF質譜儀組成。製備型HPLC在帶有Waters 2998光二極體陣列偵測器或Teledyne ISCO ACCQPrep HP150之Waters 2545二元梯度模組上進行。基於三肽之藥物連接子化合物經250 mm適當直徑之C12 Phenomenex Synergi™ 4 µm Max-RP 80 Å，LC管柱純化，用0.1%三氟乙酸之水溶液(溶劑A)及0.1%三氟乙酸之乙腈溶液(溶劑B)溶離。純化方法一般由溶劑A與溶劑B之線性梯度組成，由90%水性溶劑A逐漸增至10%溶劑A。根據管柱要求設置流速，且在220 nm處監測。用Varian Mercury 400MHz光譜儀收集NMR光譜資料。化學位移(δ)相對於TMS以ppm給出。偶合常數(J )以赫茲報導。
活體外細胞毒性 . 基於三肽之抗體藥物共軛物之細胞毒性藉由細胞增殖分析採用Promega Corp. Technical Bulletin TB288；及Mendoza等人, 2002,Cancer Res. 62:5485-5488)中所描述之協定進行量測，其方法特定而言以引用之方式併入本文中。簡言之，將培養基中含有約400個細胞之40 µl細胞培養物之等分試樣沈積於384孔壁不透明板之各孔中。將游離藥物或配體-藥物共軛物之10 µL等分試樣添加至實驗孔中，且培育96 h，接著平衡至室溫持續約30分鐘，隨後添加與存在於各孔中之細胞培養基之體積相等體積之CellTiter-Glo™試劑。內含物在定軌振盪器上混合2分鐘以誘導細胞溶解，且在室溫下將板培育10分鐘以穩定發光信號從而進行記錄。
螢光分析 . 向384孔板中添加腫瘤或正常組織勻漿與檸檬酸鹽緩衝液之混合物(100 mM，pH 4.5；9 µL)，隨後添加螢光標記之文庫化合物(1 µL；溶解於50% MeCN中)。將反應物在37℃下培育，且在6小時之時間內偵測幾次螢光(330 nm激發，450 nm發射)。當不添加勻漿時，藉由用各時間點之螢光值除以背景螢光來確定螢光倍數變化。
結合 . 根據US 2005/0238649之程序，使用適當當量之TCEP將抗體部分還原，該程序特定而言以引用之方式併入本文中。簡言之，將於具有2 mM EDTA之磷酸鹽緩衝鹽水(pH 7.4)中之抗體用2.1當量TCEP處理，且接著在37℃下培育約45分鐘。藉由使還原之抗體與化合物1反應且使用疏水性相互作用層析法測定加載來檢查硫醇/Ab值。
使用US 2005/0238649之方法，使基於三肽之奧裡斯他汀藥物-連接子化合物結合至部分還原之抗體，該方法特定而言以引用之方式併入本文中。簡言之，將於DMSO中之藥物-連接子化合物(50%過量)與額外之DMSO一起添加至於具有EDTA之PBS中之還原抗體中，以使總反應共溶劑為10-20%。在環境溫度下30分鐘之後，將過量QuadraSil MP™添加至混合物中以淬滅所有未反應之馬來醯亞胺基團。接著將所得抗體藥物共軛物純化，且藉由使用Sephadex G25樹脂脫鹽將緩衝液更換為PBS緩衝液，且在-80℃下保持直至進一步使用。在280 nm下測定所得ADC組合物之蛋白質濃度。藉由疏水性相互作用層析法(HIC)確定共軛物之藥物-抗體比(DAR)。
活體內細胞毒性 . 將癌細胞植入小鼠內。在腫瘤達至100 mm3 之體積之後，經由腹膜內注射投與由還原之抗體及基於三肽之藥物連接子化合物製備之ADC。接著每週兩次量測腫瘤大小，直至研究結束。
組織勻漿化 . 將來自小鼠異種移植物之正常組織或腫瘤組織懸浮於緩衝液(50 mM Tris，150 mM KCl，pH 7.0)中，且添加至含有Matrix D溶解珠(mpbio)之試管中。用Precellys™ 24勻漿器將組織勻漿化。將經勻漿化之樣品以1000 xg離心10 min，且收集所得上清液，接著在-80℃下冷凍直至進一步使用。
毒性測定 . 使各基於三肽之藥物連接子化合物與經還原之非結合抗體反應以提供非結合對照ADC，且以不同濃度靜脈內注射至雌性史-道二氏大鼠大鼠(Sprague Dawley rat)中。在給藥後第4或28天使動物安樂死。實例 1 ： 對疊氮基-苯甲醇(Az-PABA)之製備
向圓底燒瓶中添加懸浮於5M HCl(每公克PABA 5 mL)中之對胺基苯甲醇(100 mol%)。將燒瓶冷卻至4℃，隨後逐滴添加NaNO2 水溶液(150 mol%；每公克PABA 20 mL)。接著添加NaN3 ，且使反應物升溫至室溫且培育16 h。將反應物在飽和NaHCO3 中稀釋，且用EtOAc萃取。將萃取物用MgSO4 乾燥且濃縮。將產物用SNAP-KP-Sil Biotage管柱使用EtOAc/己烷梯度(6%-42% EtOAc)純化，產生呈橙色物質狀之標題化合物(90%產率)。1 H-NMR (d6 -DMSO) δ 7.38-7.35 (C=CH, d, 2H), 7.11-7.07 (C=CH, d, 2H), 5.25-5.22 (OH, m, 1H), 4.50-4.46 (CH2, d, 2H)實例 2 ： 對疊氮基-苄基溴之製備。
在氮氣氣氛下，向圓底燒瓶中添加溶解於氯仿中之Az-PABA (100 mol%)。向溶液中逐滴添加PBr3 (120 mol%)。將反應物培育2 h，此時將其用CHCl3 稀釋，且依序用1M HCl及鹽水洗滌。將萃取物用MgSO4 乾燥且濃縮。將產物用SNAP-KP-Sil Biotage管柱使用EtOAc/己烷梯度(6%-42% EtOAc)純化，得到75%產率之標題化合物。實例 3 ： (2-(7-羥基-2-側氧基-2H -苯并哌喃-4-基)乙醯基)甘胺酸甲酯(HO-Coum-Gly-OMe)之製備。
Figure 02_image463
向閃爍小瓶中添加溶解於DMF及DIPEA(350 mol%)中之H-Gly-OMe(300 mol%)。向此小瓶中添加2-(6-羥基-2-側氧基-2H -苯并哌喃-4-基)乙酸(100 mol%)。接著添加DMF直至兩種試劑完全溶解。接著添加HATU(110 mol%)，隨後添加DIPEA (110 mol%)，且將反應物攪拌45 min。彼時，將反應物在EtOAc中稀釋且用200 mM HCl洗滌。將水層用EtOAc反萃取3次。將合併之有機物用鹽水洗滌，用MgSO4 乾燥且濃縮，得到標題化合物，將其自沸騰異丙醇中以80%產率純化。實例 4 ： (2-(7-((4-疊氮基苯甲基)氧基)-2-側氧基-2H -苯并哌喃-4-基)乙醯基)甘胺酸甲酯(Az-PABE-Coum-Gly-OMe)之製備
Figure 02_image465
向圓底燒瓶中添加懸浮於DMF中之HO-Coum-Gly-OMe(300 mol%)、K2 CO3 (150 mol%)及18-冠-6醚(200 mol%)。劇烈攪拌15 min之後，以4個獨立等分試樣緩慢添加根據實例2製備之Az-PAB-Br(100 mol%) 。向所得溶液中添加碘化四丁基銨(15 mol%)，接著將其攪拌16 h。彼時，將反應物稀釋至EtOAc中，且用200 mM HCl及鹽水洗滌。將分離之有機層用MgSO4 乾燥且濃縮，得到呈粗物質形式之標題化合物，其未進一步純化即使用。實例 5 ： (2-(7-((4-疊氮基苯甲基)氧基)-2-側氧基-2H-苯并哌喃-4-基)乙醯基)甘胺酸(Az-PABE-Coum-Gly-OH)之製備
Figure 02_image467
向圓底燒瓶中添加粗Az-PABE-Coum-Gly-OMe(100 mol%)於THF(每500毫克20 mL)中之溶液。向小瓶中添加MeOH(每500毫克6 mL)及H2 O(每500毫克6 mL)。彼時，添加LiOH(200 mol%)，且將反應物攪拌1 h，隨後將反應物用EtOAc稀釋且用200 mM HCl洗滌兩次。將分離之有機層用MgSO4 乾燥且濃縮，得到88%產率之標題化合物。1 H-NMR (d7 -DMF) δ 8.80 (NH, t, 1H), 8.03-8.01 (C=CH, d, 1H), 7.80-7.77 (C=CH, d, 2H), 7.38-7.36 (C=CH, d, 2H), 7.25 (C=CH, s, 1H), 7.24-7.20 (C=CH, d, 1H), 6.58 (C=CH, s, 1H), 5.47 (CH2, s, 2H), 4.14 (CH2, d, 2H), 4.08 (CH2, s, 2H)。實例 6 ： P1-PABE-Coum-Gly-OH之製備，其中P1為Fmoc-Leu-OH、Fmoc-D-Leu-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Met-OH、Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Cit-OH、Fmoc-Nal-OH、Fmoc-Tyr(All)-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Lys(Mtt)-OH、Fmoc-Thr(Trt)-OH、Fmoc-Glu(O-2-PhiPr)-OH，其中Cit為瓜胺酸，且Nal為丙胺酸，其中其甲基側鏈經萘-1-基取代.
Figure 02_image469
向於無水DCM中膨脹之樹脂(2-氯-三苯甲基氯或林克酸(rink acid)；100 mol%)中添加溶解於無水DCM中之Az-PABE-Coum-Gly-OH(300 mol%)及DIPEA(310 mol%)。混合2 h之後，將溶液排出，且將樹脂用DCM洗滌。向開口圓底燒瓶中添加於DMF中膨脹之Az-PABE-Coum-Gly-O-連接之樹脂，隨後添加PBu3 (250 mol%)及DIPEA(250 mol%)。混合2 h後，將溶液排出，且將樹脂用DMF、DCM及Et2 O洗滌，且在真空下乾燥隔夜。向小瓶中添加溶解於DMF中之Fmoc-P1-OH(600 mol%)及HATU(600 mol%)，隨後添加DIPEA(800 mol%)。將混合物渦旋1 min，且接著添加至於DMF中膨脹之先前合成之PBu3 活化之Az-PABE-Coum-Gly-O-連接之樹脂(對於Fmoc-Lys(Trt)-OH、Fmoc-Thr(Trt)-OH及Fmoc-Glu(O-2-PhiPr)而言為林克酸樹脂，對於所有其他胺基酸而言為2-氯-三苯甲基樹脂)中。混合2 h之後，將溶液排出，且將樹脂用DMF及DCM洗滌。使用於DCM中之0.2% TFA(對於林克酸樹脂)或於DCM中之5% TFA(對於2-氯三苯甲基樹脂)自樹脂裂解Fmoc-P1-PABE-Coum-Gly-OH，且藉由RP-HPLC純化。實例 7 ： 三肽文庫之製備及篩選.
將先前研發之二肽系共軛物設計為可由組織蛋白酶B裂解，該組織蛋白酶B為溶酶體蛋白酶，與相同物種之正常細胞相比其在癌細胞中上調。例示性比較二肽系共軛物具有藥物連接子部分，其中藥物單元為具有以下結構中之一者的MMAE之殘基。
Figure 02_image471
mc-val-cit-PABC-MMAE
Figure 02_image473
mp-val-cit-PABC-MMAE
其中波形線指示共價連接至配體單元之硫原子的位點，且箭頭指示蛋白分解裂解之推測位點。儘管對於組織蛋白酶B更具特異性，但其他溶酶體蛋白酶仍能夠進行該鍵裂解。為發現與正常組織(其中對該組織中正常細胞之不想要之細胞毒性與當有效量之比較共軛物具有所示二肽系藥物連接子部分時的有害事件相關)之蛋白酶相比對癌症組織中上調之蛋白酶更具特異性之肽序列，合成螢光淬滅之含三肽化合物的文庫。該文庫之成員為共軛物藥物連接子部分之模型，其中螢光標籤置換藥物單元，且由以下結構共同表示：
Figure 02_image475
在以上結構中，結合之香豆素部分為非螢光的。在所示醯胺鍵發生蛋白分解裂解後，釋放出游離含香豆素化合物，其現為發螢光的。游離含香豆素化合物之Gly-Gly-D-Lys-Gly部分為構築文庫之方法的人工產物，其隨後在本文中進行描述。疊氮化物藉由疊氮化物與引至配體單元上之適合的炔基部分之偶極環加成而提供用於連接至配體單元之手柄。
使用非芳族疏水性胺基酸Ala、Leu、Pro及D-Leu、帶電荷之胺基酸Glu及Lys、不帶電荷之親水性胺基酸Thr、Met及瓜胺酸以及疏水性芳族胺基酸Phe、Tyr (最初為alloc保護之胺基酸)及Nal(萘基-1-基丙胺酸)構築文庫。因此，文庫含有1,728個不同成員。當Met位於P1位置時，其側鏈之甲硫醚基自發氧化為亞碸，使得P1位置由Met(O)佔據。當Met位於P2或P3位置時，獲得含有Met及Met(O)之三肽的混合物。
根據Hilpert, K等人之「Peptide arrays on cellulose support: SPOT synthesis, a time and cost efficient method for synthesis of large numbers of peptides in a parallel and addressable fashion」,Nature Protocols (2007) 2(6): 1333-1349中之方法進行一項重要修改在纖維素載體上合成文庫成員，該方法特定而言以引用之方式併入本文中。該修飾使用雷射穿孔之纖維素紙，使得各文庫成員之合成使用清晰界定之圓盤進行。SPOT合成之後，藉由多通道移液管將各單獨含有離散文庫成員之圓形區域捅出至微量滴定板之個別孔中。接著將微量滴定板置於氨氣室中，以自纖維素圓盤裂解下含三肽之模型化合物。接著將裂解下之化合物在各自溶解至50%乙腈水溶液中之後轉移至新鮮微量滴定板中。接著藉由量測與腫瘤或正常組織勻漿接觸後文庫之各孔中所見之螢光，且將其除以比較含二肽藥物連接子化合物之腫瘤或正常組織勻漿裂解中所見之螢光來評估與具有二肽val-cit(在藥物連接子化合物文庫中其由-[P1]-[P2]-[P3]-三肽置換)之比較肽系藥物連接子化合物相比，孔之內含物發生腫瘤組織勻漿蛋白分解之敏感性。
可行的假設為，腫瘤組織與正常組織蛋白分解之比率大於由比較藥物連接子化合物所獲得之比例(其指示與含二肽之藥物連接子化合物相比，文庫藥物連接子化合物在腫瘤組織中之裂解更快或在正常組織中之裂解更慢)將轉化為與由相同物種之正常組織勻漿蛋白分解相比對腫瘤組織蛋白分解的選擇性更大，其中具有該化合物作為二肽系藥物連接子部分之比較共軛物對組織正常細胞之細胞毒性引起與向有需要之個體投與有效量之比較共軛物相關之有害事件。熟習此項技術者將瞭解，此類相關性可能並不適用於每個文庫成員，且對於含三肽之藥物連接子化合物所觀察到之蛋白分解增加並非簡單地歸因於三肽為組織蛋白酶B之優越識別位點，而是置換地至少部分歸因於改善之對在腫瘤組織中亦上調之其他蛋白酶的反應性。
使用FMOC化學法製備共價連接至纖維素固體載體之Gly-D-Lys-Gly-Gly部分，其中雷射穿孔之纖維素紙的纖維素羥基首先修飾為甘胺酸酯。接著移除FMOC基團以提供游離胺，其藉由pH敏感指示劑證實。添加下一種胺基酸，且重複該過程。為與96孔微量滴定板相容，雷射穿孔之圓盤的直徑為6 mm，向其中添加1 µL FMOC保護之胺基酸溶液的等分試樣。
接著將根據實例6製備之FMOC-P1-PABE-Coum-Gly-OH連接至NH2 -Gly-Lys-Gly-Gly-殘基之游離胺基。實例6中之反應次序中之關鍵步驟為還原樹脂結合之疊氮化物中間物，此提供亞胺基膦中間物，該中間物對自降解足夠穩定，以便與第一個進入之FMOC-胺基酸進行偶合反應。接著藉由標準FMOC化學法添加P2及P3胺基酸，隨後將脫除保護基之P3殘基的游離胺基醯化，以提供樹脂結合之文庫化合物，使用氨氣室將其自樹脂上裂解下來。在流程1中，RP1 、RP2 及RP3 分別為P1、P2及P3胺基酸殘基之胺基酸側鏈，且X表示將螢光標記之三肽栓系於纖維素固體載體之NH2 -Gly-Gly-D-Lys-Gly-Gly-五肽中之其他胺基酸。 流程1. 螢光標記之文庫化合物之製備
Figure 02_image477
表1A之結果係針對前20個三肽序列，其中腫瘤相較於正常組織勻漿之蛋白分解之正規化螢光比大於2.5。
腫瘤勻漿蛋白分解之正規化螢光值為源自四個小鼠異種移植模型之腫瘤組織勻漿之平均值。此等正規化值之計算描述於下表1A中。
正規化正常組織螢光值來自正常人類骨髓之蛋白分解。選擇人類骨髓作為正常組織，因為其為與向有需要之人類個體投與有效量之具有衍生自藥物連接子化合物mc-val-cit-PABC-MMAE之藥物連接子部分的抗體藥物共軛物有關之有害事件(嗜中性白血球減少症)之部位。 表1A. 三肽文庫成員之螢光比排序
三肽* 正規化正常組織 正規化腫瘤組織 腫瘤/正常
Pro-Ala-Glu 0.78 2.48 3.16
DLeu-Leu-Glu 1.12 3.45 3.09
Pro-Ala-Cit 1.07 3.03 2.84
Pro-Glu-Cit 0.85 2.35 2.77
DLeu-Leu-Cit 1.37 3.70 2.70
Pro-Cit-Glu 0.85 2.27 2.68
Pro-Cit-Cit 0.95 2.54 2.67
Cit-Glu-Cit 1.21 3.16 2.61
Pro-Lys-Glu 0.72 1.88 2.59
DLeu-Leu-Met(O) 0.66 1.70 2.58
Pro-Glu-Glu 0.73 1.87 2.58
Pro-Glu-Lys 0.72 1.85 2.57
Glu-Glu-Cit 1.22 3.14 2.57
DLeu-Phe-Glu 0.89 2.27 2.55
DLeu-Leu-Lys 0.87 2.20 2.54
Glu-Ala-Glu 1.05 2.66 2.53
Ala-Cit-Cit 1.02 2.58 2.53
Thr-Cit-Cit 0.89 2.26 2.53
Cit-Glu-Glu 0.97 2.44 2.53
Cit-Cit-Cit 1.12 2.82 2.52
*縮寫：Cit =瓜胺酸，Met(O)=甲硫胺酸亞碸
正規化螢光值藉由用添加組織勻漿後之最終時間點(275-315 min)之螢光值除以未添加組織勻漿時之螢光值來計算。接著藉由用該值除以該勻漿之平均值而將各勻漿中之各肽之該值正規化。舉例而言，若一種三肽與無勻漿之該肽相比時具有2倍增加，且具有該勻漿情況下之平均增加倍數亦為2倍，則該勻漿中該三肽之正規化值為1。接著，藉由對所測試之所有4種癌症勻漿之各肽之正規化螢光值取平均值來確定表1之正規化腫瘤組織值。此等腫瘤勻漿源自HPAF-II(裸鼠)、Ramos(SCID小鼠)、SK-Mel-5(裸鼠)及SU-DHL-4(SCID小鼠)之異種移植模型。表1之正規化正常組織值係使用勻漿化骨髓以類似方式計算。表1A之腫瘤/正常比係藉由用正規化腫瘤組織值除以正規化正常組織值來確定。
倘若表1A之大部分三肽在P3位置具有非天然胺基酸或脯胺酸，且P2位置更具可變性，則選擇三個僅在P1位置發生變化之三肽序列，以確定最接近自降解性PABC間隔單元之位置將如何改變對自含有彼等三肽序列之藥物連接子化合物衍生之配體藥物共軛物的活體內選擇性。此等三肽為D-Leu-Leu-Cit、D-Leu-Leu-Met(O)及 D-Leu-Leu-Lys。
基於表1A之三肽，進行新穎分類，其展示正常組織勻漿之正規化螢光小於或等於0.7，而螢光比為至少1.5。該類別中前十個三肽示於表1B中。接著選擇表1B之前三個三肽序列D-Leu-Leu-Met(O)、Pro-Nal-Lys及 D-Leu-Ala-Glu，以確定對自含有彼等三肽序列之藥連接子化合物衍生之配體藥物共軛物的活體內選擇性。 表1B. 三肽文庫成員之正常組織蛋白分解傾向之排序
三肽* 正規化正常 正規化腫瘤 腫瘤/正常
D-Leu-Leu-Met(O) 0.66 1.70 2.58
Pro-Nal-Lys 0.65 1.33 2.05
D-Leu-Ala-Glu 0.69 1.30 1.87
Pro-Glu-Ala 0.70 1.28 1.84
Lys-Glu-Met(O) 0.70 1.16 1.66
DLeu-Ala-Lys 0.68 1.16 1.70
Leu-Nal-Lys 0.62 1.13 1.84
DLeu-Cit-Glu 0.64 1.07 1.67
DLeu-Glu-Lys 0.62 1.06 1.71
Glu-Ala-Met(O) 0.65 1.06 1.63
*縮寫：Cit =瓜胺酸，Met(O) =甲硫胺酸亞碸，Nal =萘-1-基丙胺酸。
將選自表1A及1B之5種不同三肽序列併入配體藥物共軛物中，其中配體單元係來自選擇性結合至由人類胰臟腺癌細胞株之細胞優先展示之可內化抗原的抗體，且其在結構上對應於比較共軛物，該比較共軛物具有作為“配體單元”之非結合對照抗體及二肽可裂解單元，其中藥物連接子部分為mc-val-cit-PABC-MMAE。此等配體藥物共軛物之平均藥物加載為4。B 部分 . 藥物連接子化合物之製備。
MMAE為藥物單元且用於製備A部分中所論述之配體藥物共軛物之所選子集的藥物連接子化合物由以下結構表示。
Figure 02_image479
實例 8 ： 樹脂結合之MMAE之製備：
根據流程2A之程序，使用DHP HM官能化樹脂來製備樹脂結合之MMAE。 流程2A. 樹脂結合之MMAE之製備
Figure 02_image481
簡言之，為在樹脂上合成MMAE，將FMOC-降麻黃鹼及對甲苯磺酸吡啶鎓(PPTS)溶解於二氯乙烷中，添加至DHP HM官能化樹脂中，且在70℃下培育8 h。脫除保護基之後，將FMOC-Dap隨後用HATU及DIPEA活化，且接著添加至去甲腎上腺素樹脂材料中。用FMOC-N-MeVal-Val-Dil重複反應次序，在脫除保護基之後得到樹脂結合之MMAE。實例 9 ： 樹脂結合之MMAE之置換製備
樹脂結合之MMAE之置換製備示於流程2B中，以流程2A之樹脂結合之Dap-Nor為起始物質。 流程2B. 逐步將樹脂結合之Dap-Nor加工成MMAE
Figure 02_image483
流程2B之反應次序亦適用於在步驟7中使用經FMOC保護之[14 C]-纈胺酸來製備放射性標記之MMAE。由樹脂結合之MMAE完成藥物連接子化合物示於流程3中。實例 10 ： 基於三肽之MMAE藥物連接子化合物之製備。
根據流程3之程序由樹脂結合之MMAE或根據流程3A之程序由溶液相中之MMAE製備基於三肽之藥物連接子化合物，其中藥物單元衍生自MMAE且具有選自表1A及1B之三肽序列。 流程3. 由樹脂結合之MMAE製備基於三肽之藥物連接子化合物
Figure 02_image485
簡言之，使藉由在5M HCl中使NaN3 與由對胺基苯甲醇與NaNO2 得到之重氮鹽反應製備之Az-PAB-OH與碳酸雙(五氟苯基)酯反應且添加至樹脂上之MMAE中。接著用PPh2 Et將Az-PABC-MMAE之疊氮基還原為亞胺基膦，隨後添加FMOC-P1。脫除保護基之後，接著經由習知FMOC肽化學方法添加胺基酸P2及P3，隨後使活化之酯3-(馬來醯亞胺基)丙酸N-羥基琥珀醯亞胺酯與末端P3胺基酸之脫除保護基之胺反應。使用TFA之DCM溶液自樹脂上裂解之後，將如此獲得之藥物連接子藉由逆相HPLC純化。 流程3A. 溶液相中之基於三肽之藥物連接子化合物之製備
Figure 02_image487
Figure 02_image489
簡言之，將(((9H-茀-9-基)甲氧基)羰基)-D-白胺酸(1.00當量，50.00 g，141 mmol)加入配備有磁力攪拌棒之2L圓底燒瓶(RBF)中。將二氯甲烷(DCM)(500 ml)添加至容器中，且在攪拌下冷卻至0℃，隨後添加乙基碳二亞胺鹽酸鹽(EDC-HCl)(1.30當量，35.26 g，184 mmol)且將N-羥基琥珀醯亞胺(1.20當量，19.54 g，170 mmol)加入反應物中。將反應物在0℃下攪拌30分鐘，接著使其升溫至室溫，且攪拌4小時。反應完成後，將水添加至反應物(500 ml)中，將有機層分離，用鹽水(500 ml)洗滌且分離。將DCM溶液在減壓下蒸發，得到呈白色泡沫狀之(((9H-茀-9-基)甲氧基)羰基)-D-白胺酸2,5-二側氧基吡咯啶-1-基酯(65.00 g，144 mmol，102%產率)。此物質未進一步純化即使用。
在下一步驟中，用磁力攪拌棒將(((9H-茀-9-基)甲氧基)羰基)-D-白胺酸2,5-二側氧基吡咯啶-1-基酯(1.00當量，30.0 g，66.6 mmol)及丙胺酸(1.5當量，8.90 g，99.9mmol)加入1000 ml RBF中。將乙腈(150 ml)及水(300 ml)加入容器中且冷卻至0℃。將亨尼氏鹼(Hunig’s base)一次性加入反應物中(2.0當量，17.2 g，133.2 ml)。將反應物在0℃下攪拌1小時，接著升溫至室溫且攪拌隔夜。完成後，藉由旋轉蒸發將溶劑交換為乙酸乙酯(EtOAc)。藉由添加1M HCl將pH調節至pH=2。將有機層分離且用鹽水洗滌。藉由旋轉蒸發將反應混合物濃縮，得到白色固體(31.29 g)。將固體溶解於配備有磁力攪拌棒之1000 ml RBF中之EtOAc(120 ml)中。藉由經1小時逐滴添加庚烷(600 ml)使固體沈澱。將漿液攪拌隔夜。過濾固體，且用庚烷(300 ml)洗滌，得到精細白色固體。將固體在真空烘箱中於45℃下乾燥隔夜，得到呈白色固體狀之(((9H-茀-9-基)甲氧基)羰基)-D-白胺醯-L-丙胺酸(24.01 g，85%產率)。
將(S)-2-((((9H-茀-9-基)甲氧基)羰基)胺基)-5-(第三丁氧基)-5-側氧基戊酸(50.0 g，1.00當量，117.5 mmol)、(4-胺基苯基)甲醇(21.7 g，1.5當量，176.3 mmol)及HATU(62.9 g，1.4當量，164.5 mmol)加入配備有磁力攪拌棒之2000 ml RBF中。將二甲基甲醯胺(DMF)(250ml)加入容器中且攪拌直至固體溶解。將亨尼氏鹼(21.26 g，1.4當量，164.5 mmol)一次性加入反應物中。將反應物在室溫攪拌2小時。完成後，經30分鐘逐滴添加水(750 ml)。將漿液在室溫下再攪拌1小時。過濾漿液，且用水(500 ml)洗滌，得到橙色固體。將固體重新溶解於DCM(500 ml)中，且用水(500 ml)洗滌。向2000 ml RBF中之此溶液中添加磁力攪拌棒。將二乙胺(25.64 g，3.0當量，350.54 mmol)加入反應物中，且在室溫下攪拌隔夜(反應沈澱隔夜)。完成後，經1小時將庚烷(620 ml)添加至反應物中。將漿液攪拌1小時。過濾漿液且用庚烷(620 ml)洗滌，得到粉紅色固體。將固體在真空烘箱中在45℃下乾燥隔夜，得到呈棕色固體狀之(S)-4-胺基-5-((4-(羥甲基)苯基)胺基)-5-側氧基戊酸第三丁酯(35.2 g，98%產率)。
將(((9H-茀-9-基)甲氧基)羰基)-D-白胺醯基-L-丙胺酸(8.1 g，1.00當量，19.08 mmol)、(S)-4-胺基-5-((4-(羥甲基)苯基)胺基)-5-側氧基戊酸第三丁酯(8.82 g，1.5當量，28.62 mmol)及HATU(10.21 g，1.4當量，26.71 mmol)加入500 ml RBF中。將DMF (80 ml)及亨尼氏鹼加入容器中，且在室溫下攪拌2小時。完成後，經1小時逐滴添加水(160 ml)使反應沈澱，得到黏於攪拌棒上之固體。傾倒出液體，且將固體用水(80 ml)洗滌。將固體在加熱循環下用DCM (80 ml)重新制漿，得到紅色溶液。經30分鐘逐滴添加庚烷(80 ml)使溶液沈澱。過濾固體，得到黃色固體，將其用庚烷(80 ml)洗滌。將固體在真空烘箱中在45℃下乾燥隔夜，得到呈黃色固體狀之與4-胺基苯甲醇連接之經Fmoc保護之三肽D-Leu-Ala-Glu(12 g，88%產率)。
為脫除Fmoc保護，將此三肽(1.00當量，26.8 g，37.49 mmol)加入400 ml EasyMax反應器中。將MeCN (10 V，270 ml)加入容器中，且在25℃下以200 rpm攪拌(紅色溶液)。將二乙胺一次性添加至反應物中(2.0當量，5.48 g，74.98 mmol)。將反應物在室溫下攪拌隔夜，且在完成後，藉由旋轉蒸發將溶劑交換為10 V EtOAc。將漿液加熱至回流，得到紅色溶液。將漿液冷卻至15℃，且攪拌隔夜。過濾漿液且用MTBE (3×10 V，3×270 ml)洗滌，得到淺棕色固體。將固體在真空烘箱中在40℃乾燥，得到呈粉紅色固體狀之(S)-4-((S)-2-((R)-2-胺基-4-甲基戊醯胺基)丙醯胺基)-5-((4-(羥甲基)苯基)胺基)-5-側氧基戊酸第三丁酯(14.47 g，78%產率)。
將(S)-4-((S)-2-((R)-2-胺基-4-甲基戊醯胺基)丙醯胺基)-5-((4-(羥甲基)苯基)胺基)-5-側氧基戊酸第三丁酯(1.00當量，9.51 g，19.31 mmol)及3-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丙酸2,5-二側氧基吡咯啶-1-基酯(1.0當量，5.14 g，19.31 mmol)加入200 ml EasyMax反應器中。將MeCN(10 V，100 ml)添加至反應器中，且在25℃下在200 rpm下攪拌。將亨尼氏鹼(1.0當量，2.50 g，19.31 mmol)一次性添加至反應物中。將反應物在25℃下在200 rpm下攪拌1小時(紅色溶液)。完成後，藉由旋轉蒸發將溶劑交換為10V EtOAc。經30分鐘添加庚烷(10 V，100 ml)使產物沈澱。過濾漿液且用MTBE(2×10 V，2×100 ml)洗滌。將固體在真空烘箱中在40℃下乾燥隔夜，得到呈淺棕色固體狀之(S)-4-((S)-2-((R)-2-(3-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丙醯胺基)-4-甲基戊醯胺基)丙醯胺基)-5-((4-(羥甲基)苯基)胺基)-5-側氧基戊酸第三丁酯(12.38 g，99%產率)。
將(S)-4-((S)-2-((R)-2-(3-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丙醯胺基)-4-甲基戊醯胺基)丙醯胺基)-5-((4-(羥甲基)苯基)胺基)-5-側氧基戊酸第三丁酯(2.7 g，1.00當量，4.19 mmol)及碳酸4-硝基苯酯(2.55 g，2.0當量，8.39 mmol)加入配備有磁力攪拌棒之100 ml RBF中。在室溫下在攪拌下將DMF(2V，5 ml)及2-MeTHF (8V，20 ml)加入反應物中。將亨尼氏鹼加入容器中，且在室溫下攪拌隔夜。完成後，將反應物用10V 2-MeTHF稀釋。將有機層依次用20V 5% LiCl、20V水且接著用10% NaCl洗滌。經15分鐘將有機溶液逐滴添加至10V MTBE/10V庚烷中。在室溫下在攪拌下使漿液老化1小時。過濾漿液，且用5V MTBE/5V庚烷洗滌3次。將固體在真空烘箱中在35℃下乾燥隔夜，得到淡黃色固體(2.06 g，61%產率)。
將對硝基碳酸酯活化之三肽(1當量，10 mg，0.01 mmol)、MMAE(1.1當量，9.7 mg，0.01 mmol)及HOBt(0.15當量，29 μl之10 mg/ml DMA溶液)加入配備有電磁攪拌棒之1 dr小瓶中。加入DMA(10體積，200 μl)，且將反應物在40℃下攪拌。完成後，將反應物冷卻至室溫。逐滴添加水，直至形成非晶形固體。傾倒出溶劑，且將固體重新溶解於10 V DCM中。將有機溶液用20 V HCl(0.5 M)洗滌兩次，真空濃縮，得到經第三丁基保護之化合物5。
將經第三丁基保護之化合物5(1.0 g，1.00當量，0.72 mmol)溶解於10 mL丙腈中。在室溫下將10 mL H3 PO4 緩慢添加至rxn混合物中。將反應混合物攪拌2小時。完成後，添加15 mL水及10 mL丙腈。將有機層分離，且用10 mL丙腈萃取水層。將合併之有機層用30 mL水再洗滌一次。將反應物濃縮，且藉由逆相製備型HPLC純化，得到化合物5 。
根據流程2A、流程3及流程3A之反應次序製備之MMAE及MMAF藥物連接子化合物之UPLC-MS資料示於表2及2A中，其中若干種化合物具有選自表1A及1B之三肽序列。
使用以下所示之UPLC方法(方法A-D)經與Waters Acquity™ UPLC系統連接之Waters單一四偵測器質譜儀進行UPLC-MS，其中溶劑A為0.1%甲酸水溶液，且溶劑B為含0.1%甲酸之乙腈。 方法A：管柱-Waters Acquity UPLC BEH C18，130Å，1.7µm，2.1×50 mm，逆相管柱
Figure 02_image491
方法B：管柱-Waters CORTECS UPLC C18，90Å，1.6 µm，2.1×50 mm，逆相管柱
Figure 02_image493
方法C：管柱-Waters CORTECS UPLC C18，90Å，1.6 µm，2.1×50 mm，逆相管柱
Figure 02_image495
方法D：管柱-Waters Acquity UPLC BEH C18，130Å，1.7µm，2.1×50 mm，逆相管柱
Figure 02_image497
Figure 02_image499
Figure 02_image501
表2之基於三肽之藥物連接子化合物2-36 及38-40 及表2A之化合物42 以及比較二肽系藥物連接子化合物1 、化合物7 及化合物41 之結構如下：
Figure 02_image503
Figure 02_image505
Figure 02_image507
Figure 02_image509
Figure 02_image511
Figure 02_image513
Figure 02_image515
Figure 02_image517
Figure 02_image519
Figure 02_image521
實例 11 ： 基於三肽之MMAF藥物連接子化合物之製備。
MMAF為藥物單元且可用於製備A部分中所論述之配體藥物共軛物之類似子集的藥物連接子化合物由以下結構表示，且根據流程4之反應次序以市售之聚合物結合之L-***酸-2-氯三苯甲酯為起始物質來製備。
Figure 02_image523
流程4. 樹脂結合之MMAF和由其衍生之基於三肽的藥物接頭化合物的製備
Figure 02_image525
Figure 02_image527
在流程3及4中，RP1 、RP2 及RP3 分別為P1、P2及P3胺基酸殘基之側鏈。實例 12. 基於三肽之抗體藥物共軛物之活體外細胞毒性。
根據一般程序，由實例10之所選基於三肽之MMAE藥物-鏈接子化合物及選擇性結合至通常在各種實體腫瘤(包括胰臟腫瘤、頭頸腫瘤、肺腫瘤及食道腫瘤)中上調之上皮抗原(Ag1)之人類化抗體製備具有約4之藥物抗體比(DAR)的抗體藥物共軛物。表3顯示針對胰腺癌細胞株之細胞的IC50 值，其中對於基於三肽之ADC(2-6 )且對於二肽系比較共軛物(1 )(其中-val-cit-置換三肽可裂解單元)而言，Ag1抗原上調。表3a顯示針對HPAFII細胞株之細胞的IC50 值，其中對於基於三肽之ADC(8-10 、 13 、 16-21 、 30 、 31 及38 )且對於二肽系比較共軛物(1 )(其中-val-cit-置換三肽可裂解單元)而言，Ag1抗原上調。表3b顯示針對HPAFII細胞株之細胞的IC50 值，其中對於基於三肽之ADC (7 、 15 、 22-29 、 32-36 、 39 及42 )且對於二肽系比較共軛物(1 及41 )(其中-val-cit-置換三肽可裂解單元)而言，Ag1抗原上調。表3、3a及3b中之斜體值指示在所添加之最大藥物濃度下培育96小時後剩餘之細胞百分比。為方便起見，對於併入表3、3a及3b之ADC中之對應藥物連接子化合物，保留表2及2A之文庫成員之編號。
Figure 02_image529
表3之結果顯示，基於三肽之ADC(2-6 )與比較二肽系ADC(1 )等效，其耐受性藉由用各個所選三肽序列置換其二肽可裂解單元而改良。
Figure 02_image531
表3a之結果顯示，與比較二肽系ADC(1 )相比，若干基於三肽之ADC(例如8 及30 )之細胞毒性更小，但功效類似。表3a之結果亦顯示，與比較二肽系ADC(1 )相比，一些基於三肽之ADC(例如38 )之細胞毒性及功效更小，但對大鼠骨髓之毒性更小，此仍可提供與比較二肽系ADC(1 )相比增加之治療窗。
Figure 02_image533
表3b之結果顯示，與比較ADC(1)相比，一些基於三肽之ADC(例如22 、 24 及 26 )之細胞毒性可能更小，但功效類似。實例 13. 基於三肽之抗體藥物共軛物之活體內癌細胞細胞毒性。
在將實例12之胰腺癌細胞株之細胞植入裸鼠中之異種移植模型中對表3之ADC進行測試。為明確區分功效差異，以與關於二肽系比較共軛物所確定相同之亞治癒劑量(4 mg/Kg)投與各基於三肽之ADC。如圖1A中所見，大多數基於三肽之ADC至少與二肽系比較ADC一樣有效。
在將實例12之HPAFII細胞株之細胞植入裸鼠中之異種移植模型中對表3a之ADC進行測試。為明確區分功效差異，以與關於二肽系比較共軛物所確定相同之亞治癒劑量(3 mg/Kg)投與各基於三肽之ADC。如圖1B及1D中所見，大多數基於三肽之ADC總體上至少與二肽系比較ADC一樣有效。
在將實例12之HPAFII細胞株之細胞植入裸鼠中之異種移植模型中對表3b之ADC進行測試。為明確區分功效差異，以與關於二肽系比較共軛物所確定相同之亞治癒劑量(3 mg/Kg)投與各基於三肽之ADC，除了基於三肽之ADC Ag1-15 與比較二肽系ADC均在6 mg/kg下測試(圖1C)。如圖1C及1D中所見，某些基於三肽之ADC至少與二肽系比較ADC一樣有效。實例 14. 基於三肽之抗體藥物共軛物之活體內骨髓毒性。
已顯示ADC功效至少在用大多數所選三肽序列置換二肽時得以保留，藉由用非結合對照(h00)抗體置換靶向Ag1抗原之抗體探索對正常骨髓組織之活體內細胞毒性差異。接著將各種所得非靶向共軛物以10 mg/Kg向大鼠投與，與假處理之動物相比，在投與後第5天分析其血液中之嗜中性白血球及網狀紅血球計數作為骨髓毒性之代表。如由圖2所見，與二肽系比較共軛物(h00-1 )相比，來自表3、3a及3b之一些基於三肽之h00共軛物顯示改良之嗜中性白血球計數。關於嗜中性白血球計數，與h00-1 相比，基於三肽之非結合共軛物h00-4 及h00-5 顯示類似之該骨髓細胞類型之維持。然而，由類似於表3之靶向ADC之非結合共軛物，僅對應於表3之基於三肽之靶向ADC(Ag1-5 )的D-Leu-Ala-Glu非結合對照共軛物(h00-5 )在所測試之劑量下相對於比較共軛物展示改良之網狀紅血球計數。與h00-1 相比，更多類似於表3a及3b之靶向ADC的非結合共軛物展示改良之中性粒細胞計數維持。圖2與圖3之間的比較似乎表明，網狀紅血球對MMAE非結合共軛物比嗜中性白血球更敏感，此咸信為類似於表3之靶向ADC的其他基於三肽之h00非結合共軛物之間的差異不能彼此區分開來，或在所測試之劑量下不能與h00-1 區分開之原因。與h00-1 相比，更多類似於表3a及3b之靶向ADC的非結合共軛物展示改良之網狀紅血球計數維持。
圖4中所示之骨髓組織病理學與單核細胞之IHC證實與投與二肽系比較物h00-1 相比基於三肽之h00-4 及h00-5 共軛物引起單核骨髓細胞維持，其中投與h00-5 共軛物之結果與假處理幾乎無區別。
圖2及3中包括h00-7 之資料，其中三肽序列為Leu-Ala-Glu。該三肽與h00-5 之三肽相同，除了P3胺基酸之立體化學組態已反轉。h00-5 與h00-7 似乎對骨髓之毒性均小於其他非結合對照ADC，其中就維持更敏感之網狀紅細胞而言，h00-5 更為優越。
圖14顯示投與非靶向ADC(h00-37 及h00-5 )之大鼠之細胞外骨髓區室中的抗體濃度。
圖16顯示以20 mg/kg在大鼠中投與之後在藉由h00-5 及h00-7 給藥之後5天及8天的網狀紅血球消耗。圖17顯示以20 mg/kg在大鼠中投與之後在藉由h00-5 及h00-7 給藥之後5天及8天的嗜中性白血球消耗。
圖18顯示以20 mg/kg在大鼠中投與之後在藉由h00-5 及h00-7 給藥之後5天及8天之骨骼組織學。實例 15. 基於三肽之ADC之活體內代謝
自ADC非特異性釋放游離藥物為一種促成對正常細胞之脫靶毒性之機制。為確定與h00-1 ADC相比h00-4 及h00-5 ADC所觀察到之骨髓維持是否歸因於游離MMAE自基於三肽之ADC釋放減少，藉由HPLC-MS分析來自實例14之毒性研究的血漿的該代謝物。
如圖5A中所示，在整個毒性研究過程中，投與h00-4或h00-5後之游離MMAE濃度保持低於投與h00-1 後所見之游離MMAE濃度，且在該態樣h00-5 共軛物為優異的。此外，圖5B顯示，具有呈D立體化學組態之P3胺基酸的h00-5 共軛物非特異性釋放之MMAE比h00-7 少，該h00-7 與h00-5 相同，除了P3胺基酸呈相反立體化學組態。因此，似乎在P3處具有非天然組態之胺基酸賦予基於三肽之ADC改良之穩定性。
圖15顯示投與非靶向ADC (h00-37 及h00-5) 之大鼠之骨髓細胞中的游離MMAE之量。實例 16. 基於三肽之抗體藥物共軛物之嗜中性白血球彈性蛋白酶分析
向8加載ADC(5 ug)、緩衝液(100 mM tris，75 mM NaCl，pH 7.5；最終濃度)及嗜中性白血球彈性蛋白酶(100 ng)之混合物中添加水至20 uL。將反應物在37℃下培育3 h，且接著立即藉由QToF質譜儀分析。
如圖6A中所示，在活體外藉由嗜中性白血球彈性蛋白酶自非靶向ADC 5之重鏈裂解的藥物之百分比低於關於非靶向ADC 37所見之藥物百分比。此外，圖6A顯示，具有呈D立體化學組態之P3胺基酸的h00-5 共軛物之重鏈由嗜中性白血球彈性蛋白酶裂解之程度顯著低於h00-7 ，該h00-7 與h00-5 相同，除了P3胺基酸呈相反立體化學組態。實際上，未觀察到嗜中性白血球彈性蛋白酶引起之h00-5蛋白分解。因此，似乎在P3處具有非天然組態之胺基酸賦予基於三肽之ADC改良之穩定性。實例 17 . 基於三肽之抗體藥物共軛物之組織蛋白酶B分析
向8加載ADC(5 ug)、緩衝液(50 mM檸檬酸鹽，75 mM NaCL，pH 4.5；最終濃度)、組織蛋白酶B(100 ng)及活化緩衝液(2 mM DTT/1.33 mM EDTA最終濃度)之混合物中添加水至20 uL。將反應物在37℃下培育3 h，且接著立即藉由QToF質譜儀分析。
如圖6B中所示，在活體外藉由組織蛋白酶B自非靶向ADC 5及7之重鏈裂解的藥物之百分比與關於非靶向ADC 37所見之藥物百分比類似，表明D-Leu-Ala-Glu非結合對照共軛物(h00-5 )與Val-Cit非結合對照共軛物(h00-37 )類似地由溶酶體蛋白酶裂解。實例 18. 基於三肽之抗體藥物共軛物之活體外血漿聚集分析
將ADC用Alexa Fluor 488 TFP酯(Molecular Probes)標記、脫鹽、將緩衝液更換為PBS，pH 7.4 (Gibco)，且進行無菌過濾。在-80℃下冷凍之前，藉由UV吸光度確定所得ADC-AF488共軛物之濃度及標記程度。實驗當天，將AF488-ADC在血漿中稀釋且在37℃下培育。在指定時間點，藉由具有螢光偵測之SEC-UPLC對等分試樣進行分析。對所得層析圖進行分析以確定高分子量物質之百分比。
三肽MMAF之聚集似乎低於Val-Cit-MMAF。基於觀察到之與MMAE之相關性，三肽MMAF之毒性將更小。
圖7顯示在大鼠血漿中培育96後非靶向ADC之聚集。
圖8顯示在犬血漿中培育96後非靶向ADC之聚集。
圖9顯示在人血漿中培育96後非靶向ADC之聚集。
圖10顯示在大鼠血漿中培育之後非靶向MMAF ADC(h00-41 及h00-42 )之聚集。
圖11顯示大鼠中由非靶向ADC引起之網狀紅血球消耗與大鼠血漿中96 h培育之後的ADC聚集的相關性。
圖12顯示大鼠中由非靶向ADC引起之網狀紅血球消耗與犬血漿中96 h培育之後的ADC聚集的相關性。
圖13顯示大鼠中由非靶向ADC引起之網狀紅血球消耗與人類血漿中96 h培育之後的ADC聚集的相關性。
在圖19中，其中顯示連接子之cLogP與大鼠血漿中對應h00共軛物之聚集之間的相關性，r=0.715之相關性指示HMW之存在與clogP正相關(亦即，與具有較高clogP之連接子相比，具有較低cLogP值之連接子顯示較少之聚集)。具有低cLogP值之連接子具有低疏水性，其包括具有極性胺基酸之連接子。
在圖20中，其中顯示大鼠中由非靶向ADC引起之網狀紅血球消耗與大鼠血漿中ADC聚集之間的相關性，r=-0.748之相關性指示HMW之存在與網狀紅血球負相關(亦即，HMW%愈高，網狀紅血球之消耗愈高)。
在圖21中，其中顯示大鼠中非靶向ADC引起之網狀紅血球消耗與人血漿中ADC聚集之間的相關性，r=-0.800之相關性指示HMW之存在與網狀紅血球負相關(亦即，HMW%愈高，網狀紅血球之消耗愈高)。
在圖22中，其中顯示大鼠中非靶向ADC引起之網狀紅血球消耗與犬血漿中ADC聚集之間的相關性，r=-0.755之相關性指示HMW之存在與網狀紅血球負相關(亦即，HMW%愈高，網狀紅血球之消耗愈高)。
[圖1A、1B、1C及1D]與亞治癒劑量之靶向相同癌細胞抗原且具有由式mc-val-cit-PABC-MMAE表示之藥物-連接子部分的4-加載ADC相比，以亞治癒劑量用具有不同三肽序列作為肽可裂解單元且藥物-連接子部分由式 mp-P3 -P2 -P1 -PABC-MMAE表示之一系列4-加載ADC處理的異種移植模型中腫瘤體積隨植入後天數的變化。圖1A中之化合物在4 mg/kg下測試。圖1B及圖1D中之化合物在3 mg/kg下測試。圖1C中之化合物在6 mg/kg下測試。 [圖2]與具有由式mc-val-cit-PABC-MMAE或mp-val-cit-PABC-MMAE表示之藥物-連接子部分的4-加載非結合共軛物相比，在以10 mg/kg投與具有不同三肽序列作為肽可裂解單元且藥物-連接子部分由式 mp-P3 -P2 -P1 -PABC-MMAE表示之一系列4-加載非結合對照共軛物的第4天之後的嗜中性白血球計數。 [圖3]與具有由式mc-val-cit-PABC-MMAE或 mp-val-cit-PABC-MMAE表示之藥物-連接子部分的4-加載非結合共軛物相比，自以10 mg/kg向不帶腫瘤之動物投與具有不同三肽序列作為肽可裂解單元且藥物-連接子部分由式mp-P3 -P2 -P1 -PABC-MMAE表示之一系列4-加載非結合共軛物第4天之後大鼠血漿中的網狀紅血球計數。 [圖4]與具有由式mc-val-cit-PABC-MMAE表示之藥物-連接子部分的4-加載非結合共軛物相比，在第4天向不帶腫瘤的動物投與媒劑或10 mg/kg之具有不同三肽序列作為肽可裂解單元且藥物-連接子部分由式 mp-P3 -P2 -P1 -PABC-MMAE表示之4-加載非結合共軛物之後大鼠骨髓之組織病理學。 [圖5A及5B]與具有由式mc-val-cit-PABC-MMAE表示之藥物-連接子部分的4-加載非結合共軛物相比，在向不帶腫瘤之動物投與媒劑及10 mg/kg之具有不同三肽序列作為肽可裂解單元且藥物-連接子部分由式 mp-P3 -P2 -P1 -PABC-MMAE表示之4-加載非結合共軛物之後在各個時間點大鼠血漿中之游離MMAE。 [圖6A及6B]與具有由式mp-val-cit-PABC-MMAE表示之藥物-連接子部分的4-加載非靶向共軛物相比，在活體外由嗜中性白血球彈性蛋白酶(圖6A)或由組織蛋白酶B(圖6B)自具有不同三肽序列作為肽可裂解單元且藥物-連接子部分由式mp-P3 -P2 -P1 -PABC-MMAE表示之4-加載非靶向共軛物的重鏈裂解之藥物的百分比。 [圖7、8及9]在大鼠血漿(圖7)、犬血漿(圖8)或人類血漿(圖9)中進行96 h培育之後，具有不同三肽序列作為肽可裂解單元且藥物-連接子部分由式 mp-P3 -P2 -P1 -PABC-MMAE表示之一系列4-加載非靶向共軛物的聚集。 [圖10]在各個時間點大鼠血漿中非靶向MMAF ADC之聚集。 [圖11]大鼠中由非靶向ADC引起之網狀紅血球消耗與大鼠血漿中96 h培育之後的ADC聚集的相關性。 [圖12]大鼠中由非靶向ADC引起之網狀紅血球消耗與犬血漿中96 h培育之後的ADC聚集的相關性。 [圖13]大鼠中由非靶向ADC引起之網狀紅血球消耗與人類血漿中96 h培育之後的ADC聚集的相關性。 [圖14]投與非靶向ADC之大鼠之細胞外骨髓區室中的抗體濃度。 [圖15]投與非靶向ADC之大鼠之骨髓細胞中的游離MMAE之量。 [圖16]以20 mg/kg在大鼠中投與之後在藉由非靶向三肽ADC給藥之後第5天及第8天的網狀紅血球消耗。 [圖17]以20 mg/kg在大鼠中投與之後在藉由非靶向三肽ADC給藥之後第5天及第8天的嗜中性白血球消耗。 [圖18]以20 mg/kg在大鼠中投與之後在藉由非靶向三肽ADC給藥之後第5天及第8天之骨骼的組織學。 [圖19]連接子之cLogP與大鼠血漿中96 h培育之後對應h00共軛物之聚集(以% HMW =高分子量物質%表示)之間的相關性。 [圖20]大鼠中由非靶向ADC引起之網狀紅血球消耗與大鼠血漿中96 h培育之後的ADC聚集(以% HMW=高分子量物質%表示)之間的相關性。 [圖21]大鼠中由非靶向ADC引起之網狀紅血球消耗與人類血漿中96 h培育之後的ADC聚集(以% HMW=高分子量物質%表示)之間的相關性。 [圖22]大鼠中由非靶向ADC引起之網狀紅血球消耗與犬血漿中96 h培育之後的ADC聚集(以% HMW=高分子量物質%表示)之間的相關性。

Claims (41)

  1. 一種配體藥物共軛物組合物，其由式1 表示：
    Figure 03_image001
    或其醫藥學上可接受之鹽，其中 L為配體單元； LU為連接子單元； D'表示式-LU-D'之各藥物連接子部分中的1至4個藥物單元(D)；且 下標p為1至12、1至10或1至8之數字或為約4或約8， 其中該配體單元來自抗體或抗體之抗原結合片段，其能夠選擇性結合腫瘤組織之抗原以便隨後以游離藥物形式釋放該或該等藥物單元， 其中該組合物之該等配體藥物共軛物化合物中之每一者中式-LU-D'之該藥物連接子部分具有式1A 之結構：
    Figure 03_image003
    或其鹽，特定而言醫藥學上可接受之鹽， 其中波形線指示共價連接至L； D為該藥物單元； LB 為配體共價結合部分； A為第一視情況存在之延伸體單元； 下標a為0或1，分別指示A不存在或存在； B為視情況存在之分枝單元； 下標b為0或1，分別指示B不存在或存在； LO 為二級連接子部分，其中該二級連接子具有下式；
    Figure 03_image005
    其中毗鄰Y之波形線指示LO 共價連接至該藥物單元之位點且毗鄰A'之波形線指示共價連接至該藥物連接子部分之其餘部分的位點； A’為第二視情況存在之延伸體單元，其在不存在B之情況下變為A之亞單元， 下標a’為0或1，分別指示A’不存在或存在， W為肽可裂解單元，其中該肽可裂解單元包含具有序列-P3-P2-P1-之三肽，其中P1、P2及P3各自為胺基酸，其中： 該等胺基酸P1、P2或P3中之第一者為帶負電荷的； 該等胺基酸P1、P2或P3中之第二者具有疏水性不大於白胺酸之脂族側鏈；且 該等胺基酸P1、P2或P3中之第三者具有低於白胺酸之疏水性， 其中該等胺基酸P1、P2或P3中之該第一者對應於P1、P2或P3中之任一者，該等胺基酸P1、P2或P3中之該第二者對應於兩個剩餘胺基酸P1、P2或P3中之一者，且該等胺基酸P1、P2或P3中之該第三者對應於最後一個剩餘胺基酸P1、P2或P3， 限制條件為-P3-P2-P1-不為-Glu-Val-Cit-或 -Asp-Val-Cit-； Y為自降解性間隔子單元； 下標y為0、1或2，分別指示Y不存在或存在1或2個；且 下標q為在1至4範圍內之整數， 限制條件為當下標b為0時下標q為1，且當下標b為1時下標q為2、3或4；且 其中該組合物之該等配體藥物共軛物化合物具有式1 之結構，其中下標p由下標p'置換，其中下標p'為1至12、1至10或1至8之整數或為4或8。
  2. 如請求項1之配體藥物共軛物組合物，其中該配體藥物共軛物組合物中之該等配體藥物共軛物化合物主要具有式1H之藥物連接子部分：
    Figure 03_image007
    或其醫藥學上可接受之鹽，且視情況具有少數配體藥物共軛物化合物，其中此類化合物中之每一者中的該等藥物連接子部分中之一或多者在水解形式中具有其琥珀醯亞胺環，且其中 HE為水解增強單元； A’當存在時為所指示之第一延伸體單元(A)之亞單元；下標a’為0或1，指示A'不存在或存在；且 波形線指示共價結合至該配體單元之硫原子之位點。
  3. 如請求項2之配體藥物共軛物組合物，其中HE為-C(=O)。
  4. 如請求項1-3中任一項之配體藥物共軛物組合物，其中-Yy -D具有以下結構：
    Figure 03_image009
    其中-N(Ry )D’表示D，其中D’為D之其餘部分； 波形線指示共價連接至P1之位點； 虛線指示視情況存在之Ry 與D’之環化； Ry 在未與D’環化之情況下為視情況經取代之C1 -C6 烷基，或當與D’環化時為視情況經取代之C1 -C6 伸烷基； 各Q獨立地選自由以下組成之群：-C1 -C8 烷基、 -O-(C1 -C8 烷基)、鹵素、硝基及氰基；且 下標m為0、1或2。
  5. 如請求項1-4中任一項之配體藥物共軛物組合物，其中D為細胞毒性藥物，其中該細胞毒性藥物為含二級胺之奧裡斯他汀(auristatin)化合物，其中該二級胺之氮原子為共價連接至該藥物連接子部分之位點且該含二級胺之奧裡斯他汀化合物具有式DF/E-3 之結構：
    Figure 03_image011
    其中劍形符指示共價連接提供胺基甲酸酯官能基之氮原子之位點； R10 及R11 中之一者為氫且另一者為甲基； R13 為異丙基或-CH2 -CH(CH3 )2 ；且 R19B 為-CH(CH3 )-CH(OH)-Ph、 -CH(CO2 H)-CH(OH)-CH3 、-CH(CO2 H)-CH2 Ph、 -CH(CH2 Ph)-2-噻唑基、-CH(CH2 Ph)-2-吡啶基、 -CH(CH2 -p-Cl-Ph)、-CH(CO2 Me)-CH2 Ph、 -CH(CO2 Me)-CH2 CH2 SCH3 、-CH(CH2 CH2 SCH3 )C(=O)NH-喹啉-3-基、-CH(CH2 Ph)C(=O)NH-p-Cl-Ph或 R19B 具有
    Figure 03_image013
    之結構，其中波形線指示共價連接至該奧裡斯他汀化合物之其餘部分。
  6. 如請求項5之配體藥物共軛物組合物，其中該含二級胺之奧裡斯他汀化合物為單甲基奧裡斯他汀E (MMAE)或單甲基奧裡斯他汀F(MMAF)。
  7. 如請求項1之配體藥物共軛物組合物，其中下標q為1且該配體藥物共軛物組合物中之該等配體藥物共軛物化合物主要具有式1H-MMAE之藥物連接子部分：
    Figure 03_image015
    或其醫藥學上可接受之鹽，且視情況具有少數配體藥物共軛物化合物，其中此類化合物中之每一者中的該等藥物連接子部分中之一或多者在水解形式中具有其琥珀醯亞胺環，且其中： 下標a’為0，且A’不存在；且 波形線指示共價結合至該配體單元之硫原子之位點。
  8. 如請求項1-7中任一項之配體藥物共軛物組合物，或其醫藥學上可接受之鹽，其中該肽可裂解單元為具有序列-P3-P2-P1-之三肽，其中P1、P2及P3各自為胺基酸，其中： 該三肽之該P3胺基酸呈D-胺基酸組態； 該P2胺基酸及該P1胺基酸中之一者具有疏水性低於白胺酸之脂族側鏈；且 該P2胺基酸及該P1胺基酸中之另一者為帶負電荷的。
  9. 如請求項1-8中任一項之配體藥物共軛物組合物，或其醫藥學上可接受之鹽，其中該P3胺基酸為D-Leu或D-Ala。
  10. 如請求項1-9中任一項之配體藥物共軛物組合物，或其醫藥學上可接受之鹽，其中該P2胺基酸或該P1胺基酸中之一者具有疏水性不大於纈胺酸之脂族側鏈，且該P2胺基酸或該P1胺基酸中之另一者在血漿生理pH值下為帶負電荷的。
  11. 如請求項1-10中任一項之配體藥物共軛物組合物，或其醫藥學上可接受之鹽，其中該P2胺基酸具有疏水性不大於纈胺酸之脂族側鏈，且該P1胺基酸在血漿生理pH值下為帶負電荷的。
  12. 如請求項1-11中任一項之配體藥物共軛物組合物，或其醫藥學上可接受之鹽，其中-P2-P1-為 -Ala-Glu-或-Ala-Asp-。
  13. 如請求項1-12中任一項之配體藥物共軛物組合物，或其醫藥學上可接受之鹽，其中-P3-P2-P1-為 -D-Leu-Ala-Asp-、-D-Leu-Ala-Glu-、-D-Ala-Ala-Asp-或 -D-Ala-Ala-Glu-。
  14. 如請求項1-10中任一項之配體藥物共軛物組合物，或其鹽，特定而言醫藥學上可接受之鹽，其中該P3胺基酸為D-Leu或D-Ala，該P2胺基酸為Ala、Glu或Asp，且該P1胺基酸為Ala、Glu或Asp。
  15. 如請求項1之配體藥物共軛物化合物，其中該化合物具有以下結構：
    Figure 03_image017
    Figure 03_image019
    或其醫藥學上可接受之鹽， 其中L為配體單元，且下標p’為1至24之整數。
  16. 如請求項1-15中任一項之配體藥物共軛物組合物，其中L為完整抗體或其抗原結合片段之抗體配體單元。
  17. 如請求項16之配體藥物共軛物組合物，其中該完整抗體或其片段能夠選擇性結合癌細胞抗原。
  18. 如請求項16之配體藥物共軛物組合物，其中該完整抗體為嵌合抗體、人類化抗體或人類抗體，其中該抗體能夠選擇性結合癌細胞抗原或該抗體為非結合對照抗體，由此定出非結合對照共軛物組合物。
  19. 如請求項1-18中任一項之配體藥物共軛物組合物，其中下標p在約2至約12，或約2至約10，或約2至約8範圍內，特定而言下標p為約2、約4或約8。
  20. 一種醫藥學上可接受之調配物，其中該調配物包含有效量之如請求項1-15中任一項之配體藥物共軛物組合物或等效量之非結合對照共軛物及至少一種醫藥學上可接受之賦形劑。
  21. 如請求項20之醫藥學上可接受之調配物，其中該至少一種醫藥學上可接受之賦形劑為提供液體調配物之液體載劑，其中該液體調配物適合於冷凍乾燥或向有需要之個體投與。
  22. 如請求項20之醫藥學上可接受之調配物，其中該調配物為由冷凍乾燥形成之固體或如請求項21之液體調配物，其中該固體調配物之該至少一種賦形劑為冷凍乾燥保護劑。
  23. 一種藥物連接子化合物，其具有式IA ：
    Figure 03_image021
    或其鹽，其中 D為藥物單元； LB ’為配體共價結合前驅體部分； A為第一視情況存在之延伸體單元； 下標a為0或1，分別指示A不存在或存在； B為視情況存在之分枝單元； 下標b為0或1，分別指示B不存在或存在； LO 為二級連接子部分，其中該二級連接子具有下式；
    Figure 03_image023
    其中毗鄰Y之波形線指示LO 共價連接至該藥物單元之位點且毗鄰A'之波形線指示共價連接至該藥物連接子化合物之其餘部分的位點； A’為第二視情況存在之延伸體單元，其在不存在B之情況下變為A之亞單元； 下標a’為0或1，分別指示A’不存在或存在， W為肽可裂解單元，其中該肽可裂解單元包含具有序列-P3-P2-P1-之三肽，其中P1、P2及P3各自為胺基酸，其中： 該等胺基酸P1、P2或P3中之第一者為帶負電荷的； 該等胺基酸P1、P2或P3中之第二者具有疏水性不大於白胺酸之脂族側鏈；且 該等胺基酸P1、P2或P3中之第三者具有低於白胺酸之疏水性， 其中該等胺基酸P1、P2或P3中之該第一者對應於P1、P2或P3中之任一者，該等胺基酸P1、P2或P3中之該第二者對應於兩個剩餘胺基酸P1、P2或P3中之一者，且該等胺基酸P1、P2或P3中之該第三者對應於最後一個剩餘胺基酸P1、P2或P3， 限制條件為-P3-P2-P1-不為-Glu-Val-Cit-或 -Asp-Val-Cit-； Y為自降解性間隔子單元； 下標y為0、1或2，分別指示Y不存在或存在1或2個；且 下標q為在1至4範圍內之整數， 限制條件為當下標b為0時下標q為1，且當下標b為1時下標q為2、3或4。
  24. 如請求項23之藥物連接子化合物，其中該藥物連接子化合物具有式IH之結構：
    Figure 03_image025
    或其鹽，其中： HE為水解增強單元；且 A’當存在時為所指示之第一延伸體單元(A)之亞單元；下標a’為0或1，指示A'不存在或存在。
  25. 如請求項24之藥物連接子化合物，其中HE為-C(=O)。
  26. 如請求項23-25中任一項之藥物連接子化合物，其中-Yy -D具有以下結構：
    Figure 03_image027
    其中-N(Ry )D’表示D，其中D’為D之其餘部分； 波形線指示共價連接至P1之位點； 虛線指示視情況存在之Ry 與D'之環化； Ry 在未與D’環化之情況下為視情況經取代之C1 -C6 烷基，或當與D’環化時為視情況經取代之C1 -C6 伸烷基； 各Q獨立地選自由以下組成之群：-C1 -C8 烷基、 -O-(C1 -C8 烷基)、鹵素、硝基及氰基；且 下標m為0、1或2。
  27. 如請求項23-26中任一項之藥物連接子化合物，其中D為細胞毒性藥物，其中該細胞毒性藥物為含二級胺之奧裡斯他汀化合物，其中該二級胺之氮原子為共價連接至該藥物連接子部分之位點且該含二級胺之奧裡斯他汀化合物具有式DF/E-3 之結構：
    Figure 03_image029
    其中劍形符指示共價連接提供胺基甲酸酯官能基之氮原子之位點； R10 及R11 中之一者為氫且另一者為甲基； R13 為異丙基或-CH2 -CH(CH3 )2 ；且 R19B 為-CH(CH3 )-CH(OH)-Ph、 -CH(CO2 H)-CH(OH)-CH3 、-CH(CO2 H)-CH2 Ph、 -CH(CH2 Ph)-2-噻唑基、-CH(CH2 Ph)-2-吡啶基、 -CH(CH2 -p-Cl-Ph)、-CH(CO2 Me)-CH2 Ph、 -CH(CO2 Me)-CH2 CH2 SCH3 、-CH(CH2 CH2 SCH3 )C(=O)NH-喹啉-3-基、-CH(CH2 Ph)C(=O)NH-p-Cl-Ph或 R19B 具有
    Figure 03_image031
    之結構，其中波形線指示共價連接至該奧裡斯他汀化合物之其餘部分。
  28. 如請求項27之藥物連接子化合物，其中該含二級胺之奧裡斯他汀化合物為單甲基奧裡斯他汀E (MMAE)或單甲基奧裡斯他汀F(MMAF)。
  29. 如請求項23之藥物連接子化合物，其中該藥物連接子化合物具有式IH-MMAE之結構：
    Figure 03_image033
    或其鹽，其中 下標a’為0，且A’不存在。
  30. 如請求項23-29中任一項之藥物連接子化合物，或其醫藥學上可接受之鹽，其中該肽可裂解單元為具有序列-P3-P2-P1-之三肽，其中P1、P2及P3各自為胺基酸，其中： 該三肽之該P3胺基酸呈D-胺基酸組態； 該P2胺基酸及該P1胺基酸中之一者具有疏水性低於白胺酸之脂族側鏈；且 該P2胺基酸及該P1胺基酸中之另一者為帶負電荷的。
  31. 如請求項23-30中任一項之藥物連接子化合物，其中該P3胺基酸為D-Leu或D-Ala。
  32. 如請求項23-31中任一項之藥物連接子化合物，其中該P2胺基酸或該P1胺基酸中之一者具有疏水性不大於纈胺酸之脂族側鏈，且該P2胺基酸或該P1胺基酸中之另一者在血漿生理pH值下為帶負電荷的。
  33. 如請求項23-32中任一項之藥物連接子化合物，其中該P2胺基酸具有疏水性不大於纈胺酸之脂族側鏈，且該P1胺基酸在血漿生理pH值下為帶負電荷的。
  34. 如請求項23-33中任一項之藥物連接子化合物，其中-P2-P1-為-Ala-Glu-或-Ala-Asp-。
  35. 如請求項23-34中任一項之藥物連接子化合物，其中-P3-P2-P1-為-D-Leu-Ala-Asp-、 -D-Leu-Ala-Glu-、-D-Ala-Ala-Asp-或-D-Ala-Ala-Glu-。
  36. 如請求項23-32中任一項之藥物連接子化合物，其中該P3胺基酸為D-Leu或D-Ala，該P2胺基酸為Ala、Glu或Asp，且該P1胺基酸為Ala、Glu或Asp。
  37. 如請求項23之藥物連接子化合物，其中該藥物連接子化合物具有以下結構：
    Figure 03_image035
    或其鹽。
  38. 一種連接子化合物，其具有式IA-L ：
    Figure 03_image037
    或其鹽，其中 RG為反應性基團； LB ’為配體共價結合前驅體部分； A為第一視情況存在之延伸體單元； 下標a為0或1，分別指示A不存在或存在； B為視情況存在之分枝單元； 下標b為0或1，分別指示B不存在或存在； LO 為二級連接子部分，其中該二級連接子具有下式；
    Figure 03_image039
    其中毗鄰Y之波形線指示LO 共價連接至該藥物單元之位點且毗鄰A'之波形線指示共價連接至該藥物連接子化合物之其餘部分的位點； A’為第二視情況存在之延伸體單元，其在不存在B之情況下變為A之亞單元； 下標a’為0或1，分別指示A’不存在或存在， W為肽可裂解單元，其中該肽可裂解單元包含具有序列-P3-P2-P1-之三肽，其中P1、P2及P3各自為胺基酸，其中： 該等胺基酸P1、P2或P3中之第一者為帶負電荷的； 該等胺基酸P1、P2或P3中之第二者具有疏水性不大於白胺酸之脂族側鏈；且 該等胺基酸P1、P2或P3中之第三者具有低於白胺酸之疏水性， 其中該等胺基酸P1、P2或P3中之該第一者對應於P1、P2或P3中之任一者，該等胺基酸P1、P2或P3中之該第二者對應於兩個剩餘胺基酸P1、P2或P3中之一者，且該等胺基酸P1、P2或P3中之該第三者對應於最後一個剩餘胺基酸P1、P2或P3， 限制條件為-P3-P2-P1-不為-Glu-Val-Cit-或 -Asp-Val-Cit-； Y為自降解性間隔子單元； 下標y為0、1或2，分別指示Y不存在或存在1或2個；且 下標q為在1至4範圍內之整數， 限制條件為當下標b為0時下標q為1，且當下標b為1時下標q為2、3或4。
  39. 如請求項38之連接子化合物，其中該肽可裂解單元為具有序列-P3-P2-P1-之三肽，其中P1、P2及P3各自為胺基酸，其中： 該三肽之該P3胺基酸呈D-胺基酸組態； 該P2胺基酸及該P1胺基酸中之一者具有疏水性低於白胺酸之脂族側鏈；且 該P2胺基酸及該P1胺基酸中之另一者為帶負電荷的。
  40. 如請求項38之連接子化合物，其中該連接子化合物具有式IA-L-3 之結構：
    Figure 03_image041
    或其鹽。
  41. 如請求項38之連接子化合物，其中該連接子化合物具有以下結構：
    Figure 03_image043
    Figure 03_image045
    或其鹽。
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