TW202045543A - 抗ｔｒｅｍ２抗體及其使用方法 - Google Patents
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Abstract
在一個態樣中，提供了特異性結合到人類骨髓細胞表現觸發性受體2 (TREM2)蛋白之抗體。在一些實施例中，該抗體降低可溶性TREM2 (sTREM2)之水準。在一些實施例中，該抗體增強TREM2活性。
Description
骨髓細胞表現觸發性受體2 (TREM2)為在小神經膠質細胞上表現且據信在調控吞噬作用、細胞存活、及促炎性細胞因子產生方面起作用的跨膜受體。TREM2之突變已在神經退化性疾病中得到鑑別，該等神經退化性疾病包括阿茲海默氏病、Nasu-Hakola病、帕金森氏病、肌萎縮側索硬化症、及額顳葉型癡呆。另外，在患有阿茲海默氏病或額顳葉型癡呆且具有TREM2突變之患者的腦脊髓液中已報道可溶性TREM2 (sTREM2)的經改變水準。
需要調節TREM2活性或sTREM2水準之治療劑。
在第一態樣中，提供了特異性結合到人類骨髓細胞表現觸發性受體2 (TREM2)之經分離抗體或其抗原結合片段。在一些實施例中，特異性結合到TREM2之抗體或其抗原結合片段包含：
(a) CDR-H1序列，其包含序列GFSIEDFYIH (SEQ ID NO:29)；
(b) CDR-H2序列，其包含序列W-I-D-P-E-β6
-G-β8
-S-K-Y-A-P-K-F-Q-G (SEQ ID NO:47)，其中β6
為N或Q且β8
為D或E；
(c) CDR-H3序列，其包含序列HADHGNYGSTMDY (SEQ ID NO:31)；
(d) CDR-L1序列，其包含序列HASQHINVWLS (SEQ ID NO:32)；
(e) CDR-L2序列，其包含序列KASNLHT (SEQ ID NO:33)；及
(f) CDR-L3序列，其包含序列QQGQTYPRT (SEQ ID NO:34)。
在一些實施例中，CDR-H2序列選自SEQ ID NO:30、39、41及43。
在一些實施例中，該抗體或抗原結合片段包含：
(a) 包含胺基酸序列SEQ ID NO:29之CDR-H1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:30之CDR-H2、包含胺基酸序列SEQ ID NO:31之CDR-H3、包含胺基酸序列SEQ ID NO:32之CDR-L1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:33之CDR-L2及包含胺基酸序列SEQ ID NO:34之CDR-L3；或
(b) 包含胺基酸序列SEQ ID NO:29之CDR-H1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:39之CDR-H2、包含胺基酸序列SEQ ID NO:31之CDR-H3、包含胺基酸序列SEQ ID NO:32之CDR-L1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:33之CDR-L2及包含胺基酸序列SEQ ID NO:34之CDR-L3；或
(c) 包含胺基酸序列SEQ ID NO:29之CDR-H1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:41之CDR-H2、包含胺基酸序列SEQ ID NO:31之CDR-H3、包含胺基酸序列SEQ ID NO:32之CDR-L1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:33之CDR-L2及包含胺基酸序列SEQ ID NO:34之CDR-L3；或
(d) 包含胺基酸序列SEQ ID NO:29之CDR-H1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:43之CDR-H2、包含胺基酸序列SEQ ID NO:31之CDR-H3、包含胺基酸序列SEQ ID NO:32之CDR-L1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:33之CDR-L2及包含胺基酸序列SEQ ID NO:34之CDR-L3。
在一些實施例中，抗體或抗原結合片段包含與SEQ ID NO:27、35、37、38、40、42、44、45及46中之任一者具有至少85%序列一致性的VH
序列。在一些實施例中，VH
序列與SEQ ID NO:27具有至少90%序列一致性。在一些實施例中，VH
序列與SEQ ID NO:27具有至少95%序列一致性。在一些實施例中，VH
序列包含SEQ ID NO:27。在一些實施例中，VH
序列與SEQ ID NO:42具有至少90%序列一致性。在一些實施例中，VH
序列與SEQ ID NO:42具有至少95%序列一致性。在一些實施例中，VH
序列包含SEQ ID NO:42。在一些實施例中，VH
序列與SEQ ID NO:45具有至少90%序列一致性。在一些實施例中，VH
序列與SEQ ID NO:45具有至少95%序列一致性。在一些實施例中，VH
序列包含SEQ ID NO:45。
在一些實施例中，抗體或抗原結合片段包含與SEQ ID NO:28或SEQ ID NO:36具有至少85%序列一致性的VL
序列。在一些實施例中，VL
序列與SEQ ID NO:28具有至少90%序列一致性。在一些實施例中，VL
序列與SEQ ID NO:28具有至少95%序列一致性。在一些實施例中，VL
序列包含SEQ ID NO:28。在一些實施例中，VL
序列與SEQ ID NO:36具有至少90%序列一致性。在一些實施例中，VL
序列與SEQ ID NO:36具有至少95%序列一致性。在一些實施例中，VL
序列包含SEQ ID NO:36。
在一些實施例中，抗體或抗原結合片段包含：
(a) 包含SEQ ID NO:27之VH
序列及包含SEQ ID NO:28之VL
；或
(b) 包含SEQ ID NO:35之VH
序列及包含SEQ ID NO:36之VL
；或
(c) 包含SEQ ID NO:37之VH
序列及包含SEQ ID NO:36之VL
；或
(d) 包含SEQ ID NO:38之VH
序列及包含SEQ ID NO:36之VL
；或
(e) 包含SEQ ID NO:40之VH
序列及包含SEQ ID NO:36之VL
；或
(f) 包含SEQ ID NO:42之VH
序列及包含SEQ ID NO:36之VL
；或
(g) 包含SEQ ID NO:44之VH
序列及包含SEQ ID NO:36之VL
；或
(h) 包含SEQ ID NO:45之VH
序列及包含SEQ ID NO:36之VL
；或
(i) 包含SEQ ID NO:46之VH
序列及包含SEQ ID NO:36之VL
。
在一些實施例中，特異性結合到TREM2之抗體或其抗原結合片段包含：
(a) CDR-H1序列，其包含序列G-F-T-F-T-α6
-F-Y-M-S (SEQ ID NO:48)，其中α6
為D或N；
(b) CDR-H2序列，其包含序列V-I-R-N-β5
-β6
-N-β8
-Y-T-β11
-β12
-Y-N-P-S-V-K-G (SEQ ID NO:49)，其中β5
為K或R；β6
為A或P；β8
為G或A；β11
為A或T；且β12
為G或D；
(c) CDR-H3序列，其包含序列γ1
-R-L-γ4
-Y-G-F-D-Y (SEQ ID NO:50)，其中γ1
為A或T；且γ4
為T或S；
(d) CDR-L1序列，其包含序列Q-S-S-K-S-L-L-H-S-δ10
-G-K-T-Y-L-N (SEQ ID NO:51)，其中δ10
為N或T；
(e) CDR-L2序列，其包含序列WMSTRAS (SEQ ID NO:8)；及
(f) CDR-L3序列，其包含序列Q-Q-F-L-E-ϕ6
-P-F-T (SEQ ID NO:52)，其中ϕ6
為Y或F。
在一些實施例中，CDR-H1序列選自SEQ ID NO:4及12中之任一者。在一些實施例中，CDR-H2序列選自SEQ ID NO:5、13及25中之任一者。在一些實施例中，CDR-H3序列選自SEQ ID NO:6、14及17中之任一者。在一些實施例中，CDR-L1序列選自SEQ ID NO:7及23中之任一者。在一些實施例中，CDR-L3序列選自SEQ ID NO:9及18中之任一者。
在一些實施例中，抗體或抗原結合片段包含：
(a) 包含胺基酸序列SEQ ID NO:4之CDR-H1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:5之CDR-H2、包含胺基酸序列SEQ ID NO:17之CDR-H3、包含胺基酸序列SEQ ID NO:7之CDR-L1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:8之CDR-L2及包含胺基酸序列SEQ ID NO:18之CDR-L3；或
(b) 包含胺基酸序列SEQ ID NO:4之CDR-H1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:5之CDR-H2、包含胺基酸序列SEQ ID NO:17之CDR-H3、包含胺基酸序列SEQ ID NO:23之CDR-L1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:8之CDR-L2及包含胺基酸序列SEQ ID NO:18之CDR-L3；或
(c) 包含胺基酸序列SEQ ID NO:4之CDR-H1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:25之CDR-H2、包含胺基酸序列SEQ ID NO:17之CDR-H3、包含胺基酸序列SEQ ID NO:7之CDR-L1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:8之CDR-L2及包含胺基酸序列SEQ ID NO:18之CDR-L3；或
(d) 包含胺基酸序列SEQ ID NO:4之CDR-H1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:25之CDR-H2、包含胺基酸序列SEQ ID NO:17之CDR-H3、包含胺基酸序列SEQ ID NO:23之CDR-L1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:8之CDR-L2及包含胺基酸序列SEQ ID NO:18之CDR-L3；或
(e) 包含胺基酸序列SEQ ID NO:4之CDR-H1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:5之CDR-H2、包含胺基酸序列SEQ ID NO:6之CDR-H3、包含胺基酸序列SEQ ID NO:7之CDR-L1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:8之CDR-L2及包含胺基酸序列SEQ ID NO:9之CDR-L3；或
(f) 包含胺基酸序列SEQ ID NO:12之CDR-H1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:13之CDR-H2、包含胺基酸序列SEQ ID NO:14之CDR-H3、包含胺基酸序列SEQ ID NO:7之CDR-L1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:8之CDR-L2及包含胺基酸序列SEQ ID NO:9之CDR-L3；或
(g) 包含胺基酸序列SEQ ID NO:4之CDR-H1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:25之CDR-H2、包含胺基酸序列SEQ ID NO:17之CDR-H3、包含胺基酸序列SEQ ID NO:7之CDR-L1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:8之CDR-L2及包含胺基酸序列SEQ ID NO:9之CDR-L3。
在一些實施例中，抗體或抗原結合片段包含與SEQ ID NO:2、10、15、19、21、24、26及79中之任一者具有至少85%序列一致性的VH
序列。在一些實施例中，VH
序列與SEQ ID NO:15具有至少90%序列一致性。在一些實施例中，VH
序列與SEQ ID NO:15具有至少95%序列一致性。在一些實施例中，VH
序列包含SEQ ID NO:15。在一些實施例中，VH
序列與SEQ ID NO:24具有至少90%序列一致性。在一些實施例中，VH
序列與SEQ ID NO:24具有至少95%序列一致性。在一些實施例中，VH
序列包含SEQ ID NO:24。在一些實施例中，VH
序列與SEQ ID NO:79具有至少90%序列一致性。在一些實施例中，VH
序列與SEQ ID NO:79具有至少95%序列一致性。在一些實施例中，VH
序列包含SEQ ID NO:79。
在一些實施例中，抗體或抗原結合片段包含與SEQ ID NO:3、11、16、20、22及68中之任一者具有至少85%序列一致性的VL
序列。在一些實施例中，VL
序列與SEQ ID NO:16具有至少90%序列一致性。在一些實施例中，VL
序列與SEQ ID NO:16具有至少95%序列一致性。在一些實施例中，VL
序列包含SEQ ID NO:16。在一些實施例中，VL
序列與SEQ ID NO:22具有至少90%序列一致性。在一些實施例中，VL
序列與SEQ ID NO:22具有至少95%序列一致性。在一些實施例中，VL
序列包含SEQ ID NO:22。在一些實施例中，VL
序列與SEQ ID NO:68具有至少90%序列一致性。在一些實施例中，VL
序列與SEQ ID NO:68具有至少95%序列一致性。在一些實施例中，VL
序列包含SEQ ID NO:68。
在一些實施例中，抗體或抗原結合片段包含：
(a) 包含SEQ ID NO:15之VH
序列及包含SEQ ID NO:16之VL
；或
(b) 包含SEQ ID NO:19之VH
序列及包含SEQ ID NO:20之VL
；或
(c) 包含SEQ ID NO:21之VH
序列及包含SEQ ID NO:20之VL
；或
(d) 包含SEQ ID NO:19之VH
序列及包含SEQ ID NO:22之VL
；或
(e) 包含SEQ ID NO:79之VH
序列及包含SEQ ID NO:22之VL
；或
(f) 包含SEQ ID NO:24之VH
序列及包含SEQ ID NO:20之VL
；或
(g) 包含SEQ ID NO:26之VH
序列及包含SEQ ID NO:20之VL
；或
(h) 包含SEQ ID NO:24之VH
序列及包含SEQ ID NO:22之VL
；或
(i) 包含SEQ ID NO:26之VH
序列及包含SEQ ID NO:22之VL
；或
(j) 包含SEQ ID NO:2之VH
序列及包含SEQ ID NO:3之VL
；或
(k) 包含SEQ ID NO:10之VH
序列及包含SEQ ID NO:11之VL
；或
(l) 包含SEQ ID NO:24之VH
序列及包含SEQ ID NO:68之VL
。
在一些實施例中，特異性結合到TREM2之抗體或其抗原結合片段包含：
(a) CDR-H1序列，其包含SEQ ID NO:4、12及29中任一者之胺基酸序列；
(b) CDR-H2序列，其包含SEQ ID NO:5、13、25、30、39、41及43中任一者之胺基酸序列；
(c) CDR-H3序列，其包含SEQ ID NO:6、14、17及31中任一者之胺基酸序列；
(d) CDR-L1序列，其包含SEQ ID NO:7、23及32中任一者之胺基酸序列；
(e) CDR-L2序列，其包含SEQ ID NO:8及33中任一者之胺基酸序列；及
(f) CDR-L3序列，其包含SEQ ID NO:9、18及34中任一者之胺基酸序列。
在一些實施例中，抗體或抗原結合片段包含：
(a) 包含胺基酸序列SEQ ID NO:4之CDR-H1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:5之CDR-H2、包含胺基酸序列SEQ ID NO:6之CDR-H3、包含胺基酸序列SEQ ID NO:7之CDR-L1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:8之CDR-L2及包含胺基酸序列SEQ ID NO:9之CDR-L3；或
(b) 包含胺基酸序列SEQ ID NO:4之CDR-H1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:5之CDR-H2、包含胺基酸序列SEQ ID NO:17之CDR-H3、包含胺基酸序列SEQ ID NO:7之CDR-L1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:8之CDR-L2及包含胺基酸序列SEQ ID NO:18之CDR-L3；或
(c) 包含胺基酸序列SEQ ID NO:4之CDR-H1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:5之CDR-H2、包含胺基酸序列SEQ ID NO:17之CDR-H3、包含胺基酸序列SEQ ID NO:23之CDR-L1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:8之CDR-L2及包含胺基酸序列SEQ ID NO:18之CDR-L3；或
(d) 包含胺基酸序列SEQ ID NO:4之CDR-H1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:25之CDR-H2、包含胺基酸序列SEQ ID NO:17之CDR-H3、包含胺基酸序列SEQ ID NO:7之CDR-L1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:8之CDR-L2及包含胺基酸序列SEQ ID NO:18之CDR-L3；或
(e) 包含胺基酸序列SEQ ID NO:4之CDR-H1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:25之CDR-H2、包含胺基酸序列SEQ ID NO:17之CDR-H3、包含胺基酸序列SEQ ID NO:23之CDR-L1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:8之CDR-L2及包含胺基酸序列SEQ ID NO:18之CDR-L3；或
(f) 包含胺基酸序列SEQ ID NO:12之CDR-H1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:13之CDR-H2、包含胺基酸序列SEQ ID NO:14之CDR-H3、包含胺基酸序列SEQ ID NO:7之CDR-L1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:8之CDR-L2及包含胺基酸序列SEQ ID NO:9之CDR-L3；
(g) 包含胺基酸序列SEQ ID NO:29之CDR-H1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:30之CDR-H2、包含胺基酸序列SEQ ID NO:31之CDR-H3、包含胺基酸序列SEQ ID NO:32之CDR-L1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:33之CDR-L2及包含胺基酸序列SEQ ID NO:34之CDR-L3；或
(h) 包含胺基酸序列SEQ ID NO:29之CDR-H1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:39之CDR-H2、包含胺基酸序列SEQ ID NO:31之CDR-H3、包含胺基酸序列SEQ ID NO:32之CDR-L1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:33之CDR-L2及包含胺基酸序列SEQ ID NO:34之CDR-L3；或
(i) 包含胺基酸序列SEQ ID NO:29之CDR-H1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:41之CDR-H2、包含胺基酸序列SEQ ID NO:31之CDR-H3、包含胺基酸序列SEQ ID NO:32之CDR-L1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:33之CDR-L2及包含胺基酸序列SEQ ID NO:34之CDR-L3；或
(j) 包含胺基酸序列SEQ ID NO:29之CDR-H1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:43之CDR-H2、包含胺基酸序列SEQ ID NO:31之CDR-H3、包含胺基酸序列SEQ ID NO:32之CDR-L1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:33之CDR-L2及包含胺基酸序列SEQ ID NO:34之CDR-L3；或
(k) 包含胺基酸序列SEQ ID NO:4之CDR-H1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:25之CDR-H2、包含胺基酸序列SEQ ID NO:17之CDR-H3、包含胺基酸序列SEQ ID NO:7之CDR-L1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:8之CDR-L2及包含胺基酸序列SEQ ID NO:9之CDR-L3。
在一些實施例中，抗體或抗原結合片段包含與SEQ ID NO:2、10、15、19、21、24、26、27、35、37、38、40、42、44、45、46及79中之任一者具有至少85%序列一致性的重鏈可變區。在一些實施例中，抗體或抗原結合片段包含與SEQ ID NO:3、11、16、20、22、28、36及68中之任一者具有至少85%序列一致性的重鏈可變區。
在一些實施例中，抗體或抗原結合片段包含：
(a) 與SEQ ID NO:2具有至少85%序列一致性之VH
序列及與SEQ ID NO:3具有至少85%序列一致性之VL
序列；或
(b) 與SEQ ID NO:10具有至少85%序列一致性之VH
序列及與SEQ ID NO:11具有至少85%序列一致性之VL
序列；或
(c) 與SEQ ID NO:15具有至少85%序列一致性之VH
序列及與SEQ ID NO:16具有至少85%序列一致性之VL
序列；或
(d) 與SEQ ID NO:19具有至少85%序列一致性之VH
序列及與SEQ ID NO:20具有至少85%序列一致性之VL
序列；或
(e) 與SEQ ID NO:21具有至少85%序列一致性之VH
序列及與SEQ ID NO:20具有至少85%序列一致性之VL
序列；或
(f) 與SEQ ID NO:19具有至少85%序列一致性之VH
序列及與SEQ ID NO:22具有至少85%序列一致性之VL
序列；或
(g) 與SEQ ID NO:79具有至少85%序列一致性之VH
序列及與SEQ ID NO:22具有至少85%序列一致性之VL
序列；或
(h) 與SEQ ID NO:24具有至少85%序列一致性之VH
序列及與SEQ ID NO:20具有至少85%序列一致性之VL
序列；或
(i) 與SEQ ID NO:26具有至少85%序列一致性之VH
序列及與SEQ ID NO:20具有至少85%序列一致性之VL
序列；或
(j) 與SEQ ID NO:24具有至少85%序列一致性之VH
序列及與SEQ ID NO:22具有至少85%序列一致性之VL
序列；或
(k) 與SEQ ID NO:26具有至少85%序列一致性之VH
序列及與SEQ ID NO:22具有至少85%序列一致性之VL
序列；或
(l) 與SEQ ID NO:27具有至少85%序列一致性之VH
序列及與SEQ ID NO:28具有至少85%序列一致性之VL
序列；或
(m) 與SEQ ID NO:35具有至少85%序列一致性之VH
序列及與SEQ ID NO:36具有至少85%序列一致性之VL
序列；或
(n) 與SEQ ID NO:37具有至少85%序列一致性之VH
序列及與SEQ ID NO:36具有至少85%序列一致性之VL
序列；或
(o) 與SEQ ID NO:38具有至少85%序列一致性之VH
序列及與SEQ ID NO:36具有至少85%序列一致性之VL
序列；或
(p) 與SEQ ID NO:40具有至少85%序列一致性之VH
序列及與SEQ ID NO:36具有至少85%序列一致性之VL
序列；或
(q) 與SEQ ID NO:42具有至少85%序列一致性之VH
序列及與SEQ ID NO:36具有至少85%序列一致性之VL
序列；或
(r) 與SEQ ID NO:44具有至少85%序列一致性之VH
序列及與SEQ ID NO:36具有至少85%序列一致性之VL
序列；或
(s) 與SEQ ID NO:45具有至少85%序列一致性之VH
序列及與SEQ ID NO:36具有至少85%序列一致性之VL
序列；或
(t) 與SEQ ID NO:46具有至少85%序列一致性之VH
序列及與SEQ ID NO:36具有至少85%序列一致性之VL
序列；或
(u) 與SEQ ID NO:24具有至少85%序列一致性之VH
序列及與SEQ ID NO:68具有至少85%序列一致性之VL
序列。
在一些實施例中，特異性結合到TREM2之抗體或其抗原結合片段所識別之抗原決定基與由選自由以下組成之群的抗體純系識別之抗原決定基相同或基本上相同：純系CL0020306、純系CL0020188、純系CL0020188-1、純系CL0020188-2、純系CL0020188-3、純系CL0020188-4、純系CL0020188-5、純系CL0020188-6、純系CL0020188-7、純系CL0020188-8、純系CL0020307、純系CL0020123、純系CL0020123-1、純系CL0020123-2、純系CL0020123-3、純系CL0020123-4、純系CL0020123-5、純系CL0020123-6、純系CL0020123-7及純系CL0020123-8。
在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段所識別之抗原決定基與由選自由以下組成之群的抗體純系識別之抗原決定基相同或基本上相同：純系CL0020123、純系CL0020123-1、純系CL0020123-2、純系CL0020123-3、純系CL0020123-4、純系CL0020123-5、純系CL0020123-6、純系CL0020123-7及純系CL0020123-8。在具體實施例中，抗體或抗原結合片段識別SEQ ID NO:1中之以下抗原決定基中之一或多者：(i)胺基酸殘基55-63 (GEKGPCQRV (SEQ ID NO:70))，(ii)胺基酸96-107 (TLRNLQPHDAGL (SEQ ID NO:71))，及(iii)胺基酸殘基126-129 (VEVL (SEQ ID NO:72))。在另一個態樣中，本揭露提供一種特異性結合到人類TREM2之經分離抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段識別包含SEQ ID NO:1中之以下抗原決定基中之一或多者或由其組成之抗原決定基：(i)胺基酸殘基55-63 (GEKGPCQRV (SEQ ID NO:70))，(ii)胺基酸96-107 (TLRNLQPHDAGL (SEQ ID NO:71))，及(iii)胺基酸殘基126-129 (VEVL (SEQ ID NO:72))。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段所識別之抗原決定基與由選自由以下組成之群的抗體純系識別之抗原決定基相同或基本上相同：純系CL0020188、純系CL0020188-1、純系CL0020188-2、純系CL0020188-3、純系CL0020188-4、純系CL0020188-5、純系CL0020188-6、純系CL0020188-7、純系CL0020188-8、純系CL0020307及純系CL0020306。在具體實施例中，抗體或抗原結合片段識別SEQ ID NO:1中之胺基酸殘基143-149 (FPGESES (SEQ ID NO:69))。在另一個態樣中，本揭露提供一種特異性結合到人類TREM2之經分離抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段識別包含SEQ ID NO:1中之胺基酸殘基143-149 (FPGESES (SEQ ID NO:69))或由其組成之抗原決定基。
在一些實施例中，如本文所揭示之抗體或抗原結合片段降低可溶性TREM2蛋白(sTREM2)之水準。在一些實施例中，如本文所揭示之抗體或抗原結合片段與參考抗體相比以更好效能結合健康人類CSF或獼猴CSF中之可溶性TREM2蛋白(sTREM2)。在一些實施例中，參考抗體由選自由以下組成之群之序列組合表示：SEQ ID NO:73及74；SEQ ID NO:75及76；及SEQ ID NO:77及78。在一些實施例中，基本上如實例11中所述進行功效檢定。在一些實施例中，如本文所揭示之抗體或抗原結合片段增強了TREM2活性。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段增強吞噬作用或增強骨髓細胞、小神經膠質細胞或巨噬細胞之遷移、分化、功能、或存活。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段增強小神經膠質細胞功能而未增加神經炎症。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段增強了Syk磷酸化。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段在TREM2配體存在下增強Syk磷酸化。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段表現出與獼猴TREM2蛋白之交叉反應性。
在一些實施例中，如本文所揭示之抗體或抗原結合片段為單株抗體。在一些實施例中，如本文所揭示之抗體或抗原結合片段為嵌合抗體。在一些實施例中，如本文所揭示之抗體或抗原結合片段為人源化抗體。在一些實施例中，如本文所揭示之抗體或抗原結合片段為完全人類抗體。在一些實施例中，如本文所揭示之抗體或抗原結合片段為Fab、F(ab’)2
、scFv、或二價scFv。
在另一態樣中，本揭露提供抗體或其抗原結合片段，其與如本文所揭示之經分離抗TREM2抗體競爭結合到人類TREM2蛋白。
在另一態樣中，本揭露提供醫藥組成物，其包含特異性結合到TREM2之如本文所揭示的抗體或抗原結合片段及醫藥學上可接受之載劑。
在另一態樣中，本揭露提供套組，其包含：特異性結合到TREM2之如本文所揭示的抗體或抗原結合片段或包含抗TREM2抗體或抗原結合片段之醫藥組成物；及其使用說明書。
在另一態樣中，本揭露提供治療受試者之神經退化性疾病的方法。在一些實施例中，該方法包含向該受試者投與如本文所揭示之抗TREM2抗體或抗原結合片段或包含如本文所揭示之抗TREM2抗體或抗原結合片段之醫藥組成物。
在一些實施例中，神經退化性疾病選自由以下組成之群：阿茲海默氏病、原發性年齡相關tau蛋白病、進行性核上性麻痺(PSP)、額顳葉型癡呆、額顳葉型癡呆伴與染色體17相關之帕金森症、嗜銀顆粒性癡呆、肌萎縮側索硬化症、肌萎縮側索硬化症/關島型帕金森氏症-癡呆綜合症(ALS-PDC)、皮質基底核退化症、慢性創傷性腦病、庫賈氏病(Creutzfeldt-Jakob disease)、拳擊員癡呆、具有鈣化之擴散性神經原纖維纏結、唐氏症候群、家族性英國型癡呆、家族性丹麥型癡呆、格施謝三氏症(Gerstmann-Straussler-Scheinker disease)、球狀神經膠tau蛋白病、瓜達洛普帕金森氏病伴癡呆(Guadeloupean parkinsonism with dementia)、瓜達洛普PSP、哈-斯二氏病(Hallevorden-Spatz disease)、遺傳性彌漫性腦白質病伴癡呆(HDLS)、杭丁頓氏病、包涵體肌炎、多系統萎縮症、肌強直性營養不良、Nasu-Hakola病、神經原纖維纏結佔優性癡呆、C型尼-皮二氏病(Niemann-Pick disease type C)、蒼白球-腦橋-黑質變性(pallido-ponto-nigral degeneration)、帕金森氏病、皮克氏病(Pick’s disease)、腦炎後帕金森氏症、朊病毒蛋白大腦澱粉樣血管病、進行性皮層下神經膠瘤病、亞急性硬化性全腦炎、及僅纏結性癡呆。
在又另一態樣中，本揭露提供降低患有神經退化性疾病之受試者之sTREM2水準的方法。在一些實施例中，該方法包含向該受試者投與如本文所揭示之抗TREM2抗體或抗原結合片段或包含如本文所揭示之抗TREM2抗體或抗原結合片段之醫藥組成物。
在又另一態樣中，本揭露提供增強患有神經退化性疾病之受試者之TREM2活性的方法。在一些實施例中，該方法包含向該受試者投與如本文所揭示之抗TREM2抗體或抗原結合片段或包含如本文所揭示之抗TREM2抗體或抗原結合片段之醫藥組成物。
相關申請案之交叉引用
本申請案主張2019年2月20日申請之美國臨時申請案第62/808,141號之優先權，該申請案之揭露內容據此出於所有目的以全文引用的方式併入。
I. 介紹
TREM2為在小神經膠質細胞、樹突狀細胞、巨噬細胞、及蝕骨細胞之細胞表面上表現之跨膜受體。不局限於特定理論，據信在配體結合後，TREM2與跨膜轉接蛋白、DNAX活化蛋白12 (DAP12)形成信號傳導複合物，其進而藉由蛋白激酶SRC進行酪胺酸磷酸化。據信經活化TREM2/DAP12信號傳導複合物藉由募集及磷酸化激酶諸如Syk激酶介導細胞內信號傳導。TREM2/DAP12信號傳導調節細胞諸如小神經膠質細胞及巨噬細胞之活性諸如吞噬作用、細胞生長及存活、促炎症性細胞介素分泌、及遷移。TREM2經歷經調控膜內蛋白水解，其中膜相關全長TREM2藉由金屬蛋白酶ADAM10裂解成自細胞上脫落之sTREM2部分及藉由γ分泌酶進一步降解之經膜保留C端片段。在患有阿茲海默氏病或額顳葉型癡呆且具有TREM2突變之患者中已報道sTREM2之經改變水準。另外，TREM2突變與功能改變諸如吞噬作用受損及小神經膠質細胞功能減小相關。
如以下實例部分詳述，已生成特異性結合到人類TREM2且調節TREM2/DAP12信號傳導複合物之一或多種下游功能的抗體。因此，在一個態樣中，本揭露提供抗TREM2抗體及其抗原結合片段。因此，在一個態樣中，本揭露提供抗TREM2抗體及其抗原結合部分。
在一些實施例中，抗TREM2抗體增強TREM2活性，例如增強吞噬作用或增強髓細胞、小神經膠質細胞或巨噬細胞之分化、功能、或存活。因此，在另一態樣中，提供了增強例如患有神經退化性疾病之受試者之TREM2活性的方法。
在一些實施例中，抗TREM2抗體減少sTREM2脫落。因此，在另一態樣中，提供了減少例如患有神經退化性疾病之受試者之sTREM2水準的方法。
II. 定義
如本文所用，除非內容另外明確說明，否則單數形式「一個/種(a/an)」、及「該/該等(the)」包括複數指示物。因此，例如，提及「一種抗體」視情況包括兩種或更多種此類分子之組合，及其類似者。
如本文所用，用語「約」及「大約」當用於修飾以數值或範圍指定之量時指示該數值以及熟悉此項技藝者已知之與該值的合理偏差例如± 20%、± 10%、或± 5%係處於所述值之預期含義內。
如本文所用，用語「TREM2蛋白」係指由基因TREM2
編碼之骨髓細胞表現觸發性受體2。如本文所用，「TREM2蛋白」係指任何脊椎動物之天然(亦即
，野生型) TREM2蛋白，該脊椎動物諸如但不限於人類人類、非人靈長類動物(例如，
石蟹獼猴)、齧齒動物(例如，
小鼠、大鼠)、及其他哺乳動物。在一些實施例中，TREM2蛋白為具有UniprotKB登錄號Q9NZC2 (SEQ ID NO:1)中鑑別之序列的人類TREM2蛋白。
如本文所用，用語「抗TREM2抗體」係指特異性結合到TREM2蛋白(例如，
人類TREM2)之抗體。
如本文所用，用語「抗體」係指具有經由其可變區特異性結合到抗原之免疫球蛋白折疊之蛋白質。該用語包括完整多株抗體、完整單株抗體、單鏈抗體、多特異性抗體諸如雙特異性抗體、單特異性抗體、單價抗體、嵌合抗體、人源化抗體、及人類抗體。如本文所用，用語「抗體」亦包括經由其可變區保留結合特異性之抗體片段，包括但不限於Fab、F(ab’)2
、Fv、scFv、及二價scFv。抗體可含有經分類為κ或λ之輕鏈。抗體可含有經分類為γ、μ、α、δ或ε之重鏈，其又分別定義免疫球蛋白類別IgG、IgM、IgA、IgD及IgE。
示範性免疫球蛋白(抗體)結構單元包括四聚體。每個四聚體主要由兩對相同的多肽鏈組成，每一對具有一個「輕鏈」(約25 kD)及一個「重鏈」(約50-70 kD)。各鏈之N末端界定主要負責抗原識別的具有約100個至110個或110個以上胺基酸之可變區。用語「可變輕鏈」(VL)及「可變重鏈」(VH)分別係指此等輕鏈及重鏈。
用語「可變區」或「可變域」係指抗體重鏈或輕鏈中來源於種系可變(V)基因、多樣性(D)基因、或連接(J)基因(而非來源於恆定(Cμ及Cδ)基因區段)且賦予抗體結合到抗原之特異性的域。通常，抗體可變區包含四個保守性「構架」區，其穿插有三個高變「互補決定區」。
用語「互補決定區」或「CDR」係指各鏈中之三個高變區，其中斷經輕鏈及重鏈可變區建立之四個構架區。CDR主要負責抗體與抗原之抗原決定基的結合。各鏈之CDR通常稱為CDR1、CDR2、及CDR3，其自N端開始依次編號，且通常亦由特定CDR所位於的鏈鑑別。因此，VH
CDR3或CDR-H3位於存在該CDR之抗體之重鏈的可變區，而VL
CDR1或CDR-L1為來自存在該CDR之抗體之輕鏈之可變區的CDR1。
不同輕鏈或重鏈之「構架區」或「FR」在物種內為相對保守的。抗體之構架區為組成型輕鏈及重鏈之經組合框架區，其用於在三維空間內定位且比對CDR。構架序列可獲自包括生殖系抗體基因序列之公共DNA資料庫或已公佈參考。舉例而言，人類重鏈及輕鏈可變區基因之種系DNA序列可見於人類及小鼠序列之「VBASE2」生殖系可變基因序列。
CDR及構架區之胺基酸序列可使用此項技術中之各種熟知定義來確定，例如
Kabat、Chothia、國際ImMunoGeneTics資料庫(IMGT)、AbM、及已觀測抗原接觸(observed antigen contacts) (「Contact」)。在一些實施例中，CDR根據Contact定義來確定。參見
MacCallum等人 , J. Mol. Biol.
, 262:732-745 (1996)。在一些實施例中，CDR藉由Kabat、Chothia、及/或Contact CDR定義來確定。
用語「抗原結合部分」或「抗原結合片段」在本文中可互換使用且係指抗體之保留經由其可變區特異性結合到抗原(例如
，TREM2蛋白)之能力的一或多種片段。抗原結合片段之實例包括但不限於Fab片段(由VL、VH、CL及CH1域組成之單價片段)、F(ab’)2
片段(在鉸鏈區處包含由二硫橋連接之兩個Fab片段之二價片段)、單鏈Fv (scFv)、經二硫鍵連接之Fv (dsFv)、互補決定區(CDR)、VL
(輕鏈可變區)、及VH
(重鏈可變區)。
用語「抗原決定基」係指抗體之CDR所特異性結合之抗原的區域或區且可包括若干個胺基酸或若干個胺基酸之部分，例如5或6個或更多個，例如20或更多個胺基酸或彼等胺基酸之部分。舉例而言，在靶為蛋白質時，抗原決定基可包含連續胺基酸(例如，
線性抗原決定基)或來自蛋白質之藉由蛋白質折疊而彼此接近的不同部分的胺基酸(例如，
不連續或構象抗原決定基)。在一些實施例中，抗原決定基在一個胺基酸處(例如，在絲胺酸或蘇胺酸殘基處)經磷酸化。
如本文所用，如參考抗TREM2抗體使用之片語「識別抗原決定基」意指抗體CDR與抗原(亦即
，TREM2蛋白)在該抗原決定基或該抗原之含有該抗原決定基的部分處相互作用或特異性結合。
如本文所用，用語「多特異性抗體」係指包含二或更多個不同抗原結合部分之抗體，其中各抗原結合部分包含識別不同抗原之不同可變區，或者抗體之經由其可變區結合到二或更多個不同抗原之片段或部分。如本文所用，用語「雙特異性抗體」係指包含兩個不同抗原結合部分之抗體，其中各抗原結合部分包含識別不同抗原之不同可變區，或者抗體之經由其可變區結合到兩個不同抗原之片段或部分。
「單株抗體」係指由細胞之單一純系或單一細胞株產生且由一級胺基酸序列相同之抗體分子組成或基本上由該等抗體分子組成之抗體。
「多株抗體」係指自異質抗體群體獲得之抗體，其中該群體中之不同抗體結合到抗原之不同抗原決定基。
「嵌合抗體」係指如下抗體分子，其中恆定區或其部分經改變、置換或交換，使得抗原結合位點(亦即
，可變區、CDR、或其部分)連接至具有不同或經改變類別、效應子功能及/或種類之恆定區，或者其中可變區或其部分經具有不同或經改變抗原特異性之可變區(例如CDR及來自不同種類之構架區)改變、置換或交換。在一些實施例中，嵌合抗體為包含來自一個來源或種類(例如
，小鼠)之可變區及來源於第二來源或種類(例如
，人類)之恆定區的單株抗體。用於產生嵌合抗體之方法係此項技術中描述的。
「人源化抗體」為來源於非人類來源(例如鼠類)之嵌合免疫球蛋白，其在CDR外部含有來源於非人類免疫球蛋白之最小序列。一般而言，人源化抗體將包含至少一個(例如
兩個)抗原結合可變區，其中CDR區基本上對應於非人類免疫球蛋白之彼等者且構架區基本上對應於人類免疫球蛋白序列之彼等者。人源化抗體亦可包含免疫球蛋白恆定區(Fc)之至少一部分，通常為人類免疫球蛋白序列。抗體人源化之方法為此項技術中已知的。
「人類抗體」或「完全人類抗體」為具有人類重鏈及輕鏈序列之抗體，該等序列通常來源於人類生殖系基因。在一些實施例中，抗體由人類細胞、由利用人類抗體庫之非人類動物(例如，經遺傳工程化以表現人類抗體序列之基因轉殖小鼠)、或由噬菌體展示平台產生。
術語「特異性結合」係指與分子(例如，抗體或其抗原結合部分)結合到另一個抗原決定基或非靶標化合物(例如，結構不同的抗原)相比，其以更大親和力、更大親合力、及/或更大與樣品中抗原決定基或靶標之持續時間結合到該抗原決定基或靶標。在一些實施例中，特異性結合到抗原決定基或靶標之抗體(或其抗原結合部分)為以比其他抗原決定基或非靶標化合物大至少5倍，例如至少6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、20倍、25倍、50倍、100倍、1,000倍、10,000倍、或更大親和力結合到抗原決定基或靶標之抗體(或其抗原結合部分)。如本文所用，用語「特異性結合」、「特異性結合到」特定抗原決定基或靶標、或對與特定抗原決定基或靶標「有特異性」可藉由例如對其所結合之抗原決定基或靶標具有以下平衡解離常數KD
之分子來表現：10-4
M或更小，例如10-5
M、10-6
M、10-7
M、10-8
M、10-9
M、10-10
M、10-11
M、或10-12
M。技術人員將認識到，特異性結合到來自一種物種之靶標(例如，TREM2蛋白)之抗體亦可特異性結合到該靶標之直系同源物(例如，
TREM2蛋白)。
用語「結合親和力」在本文中用於係指兩個分子之間，例如抗體(或其抗原結合部分)與抗原之間的非共價相互作用之強度。因此，舉例而言，除非上下文另外指明或由上下文能夠清晰，否則該用語可係指抗體(或其抗原結合部分)與抗原之間的1:1相互作用。結合親和力可藉由量測平衡解離常數(KD
)，該平衡解離常數係指解離速率常數(kd
，時間-1
)除以締合速率常數(ka
，時間-1
M-1
)。KD
可藉由例如使用表面電漿子共振(SPR)方法，例如Biacore™系統；動力排阻檢定，諸如KinExA®
；及生物層干涉術(例如
，使用ForteBio®
Octet平台)量測複合物形成動力學及解離來確定。如本文所用，「結合親和力」不僅包括正式結合親和力，諸如反映抗體(或其抗原結合部分)與抗原之間的1:1相互作用之彼等者，而且亦包括表觀親和力，其KD
值經計算且可反映酸結合。
如本文所用，用語「交叉反應」係指抗體結合到除了產生該抗體之抗原以外的抗原之能力。在一些實施例中，交叉反應性係指抗體結合到除了產生該抗體之抗原以外的來自另一物種的抗原之能力。作為非限制性實例，如本文所述且針對人類TREM2肽產生之抗TREM2抗體可以表現出與來自不同物種(例如，猴或小鼠)之TREM2肽或蛋白之交叉反應性。
如參考核酸或蛋白(例如，抗體)所用之用語「經分離」表示該核酸或蛋白基本上不含在自然狀態下與其締合之其他細胞組分。純度及均質性通常使用分析化學技術諸如電泳(例如，聚丙烯醯胺凝膠電泳)或層析(例如，高效液相層析)來確定。在一些實施例中，經分離核酸或蛋白(例如
，抗體)為至少85%純的、至少90%純的、至少95%純的、或至少99%純的。
用語「胺基酸」係指天然存在及合成之胺基酸，以及以與天然存在之胺基酸類似之方式起作用的胺基酸類似物及胺基酸模擬物。天然存在之胺基酸係由遺傳密碼編碼之彼等胺基酸，以及後來經修飾之彼等胺基酸，例如羥基脯胺酸、γ-羧基麩胺酸及O-磷酸絲胺酸。天然存在之α-胺基酸包括但不限於丙胺酸(Ala)、半胱胺酸(Cys)、天冬胺酸(Asp)、麩胺酸(Glu)、***酸(Phe)、甘胺酸(Gly)、組胺酸(His)、異白胺酸(Ile)、精胺酸(Arg)、離胺酸(Lys)、白胺酸(Leu)、甲硫胺酸(Met)、天冬醯胺(Asn)、脯胺酸(Pro)、麩醯胺(Gln)、絲胺酸(Ser)、蘇胺酸(Thr)、纈胺酸(Val)、色胺酸(Trp)、酪胺酸(Tyr)、及其組合。天然存在之α-胺基酸的立體異構物包括但不限於D-丙胺酸(D-Ala)、D-半胱胺酸(D-Cys)、D-天冬胺酸(D-Asp)、D-麩胺酸(D-Glu)、D-***酸(D-Phe)、D-組胺酸(D-His)、D-異白胺酸(D-Ile)、D-精胺酸(D-Arg)、D-離胺酸(D-Lys)、D-白胺酸(D-Leu)、D-甲硫胺酸(D-Met)、D-天冬醯胺(D-Asn)、D-脯胺酸(D-Pro)、D-麩醯胺(D-Gln)、D-絲胺酸(D-Ser)、D-蘇胺酸(D-Thr)、D-纈胺酸(D-Val)、D-色胺酸(D-Trp)、D-酪胺酸(D-Tyr)、及其組合。「胺基酸類似物」係指具有與天然存在之胺基酸相同之基本化學結構(亦即，α碳結合至氫、羧基、胺基及R基團)的化合物，例如，高絲胺酸、正白胺酸、甲硫胺酸亞碸、甲硫胺酸甲基鋶。此等類似物具有經修飾R基團(例如，正白胺酸)或經修飾肽骨架，但是保持與天然存在之胺基酸相同的基本化學結構。「胺基酸模擬物」係指具有不同於胺基酸之一般化學結構之結構，但是以與天然存在之胺基酸類似之方式起作用的化合物。胺基酸在本文中係以其通常已知之三字母符號或以IUPAC-IUB生物化學命名委員會所推薦之單字母符號來提及。
用語「多肽」及「肽」在本文中可互換用於指示單鏈中之胺基酸殘基之聚合物。該等用語適用於一或多個胺基酸殘基為相應天然存在之胺基酸之人工化學模擬物的胺基酸聚合物，以及天然存在之胺基酸聚合物及非天然存在之胺基酸聚合物。胺基酸聚合物可包含完整L-胺基酸、完整D-胺基酸、或L胺基酸及D胺基酸之混合物。
如本文所用，用語「蛋白質」係指多肽或單鏈多肽之二聚物(亦即
，兩個)或多聚物(亦即
，三個或更多個)。蛋白質之單鏈多肽可藉由共價鍵(例如二硫鍵)或非共價相互作用連接。
用語「聚核苷酸」及「核酸」可互換地係指具有任何長度之核苷酸鏈，且包括DNA及RNA。核苷酸可為脫氧核糖核苷酸、核糖核苷酸、經修飾之核苷酸或鹼基、及/或其類似物，或可藉由DNA或RNA聚合酶併入鏈中之任何基質。聚核苷酸可包含經修飾之核苷酸，諸如甲基化核苷酸及其類似物。本文涵蓋之多核苷酸之實例包括單鏈及雙鏈DNA、單鏈及雙鏈RNA，及具有單鏈及雙鏈DNA及RNA之混合物之雜合分子。
用語「保守取代」及「保守突變」係指導致一胺基酸被可經分類為具有類似特徵之另一胺基酸取代的改變。以此方式定義之保守性胺基酸組之類別的實例可包括：「帶電荷/極性組」，包括Glu (麩胺酸或E)、Asp (天冬胺酸或D)、Asn (天冬醯胺或N)、Gln (麩醯胺或Q)、Lys (離胺酸或K)、Arg (精胺酸或R)、及His (組胺酸或H)；「芳族組」，包括Phe (***酸或F)、Tyr (酪胺酸或Y)、Trp (色胺酸或W)、及(組胺酸或H)；及「脂族組」，包括Gly (甘胺酸或G)、Ala (丙胺酸或A)、Val (纈胺酸或V)、Leu (白胺酸或L)、Ile (異白胺酸或I)、Met (甲硫胺酸或M)、Ser (絲胺酸或S)、Thr (蘇胺酸或T)、及Cys (半胱胺酸或C)。在各組內，亦可鑑別亞組。舉例而言，帶電荷或極性胺基酸之組可細分成包括以下之子組：「帶正電荷子組」，包含Lys、Arg及His；「帶負電荷子組」，包含Glu及Asp；及「極性子組」，包含Asn及Gln。在另一個實例中，芳族或環狀組可細分成包括以下之子組：「氮環子組」，包含Pro、His及Trp；及「苯基子組」，包含Phe及Tyr。在另一實例中，脂族組可細分成子組，例如「脂族非極性子組」，包含Val、Leu、Gly、及Ala；及「脂族弱極性子組」，包含Met、Ser、Thr、及Cys。保守突變之類別之實例包括對以上子組內之胺基酸的胺基酸取代，諸如但不限於：以Lys取代Arg或相反，使得可以保持正電荷；以Glu取代Asp或相反，使得可以保持負電荷；以Ser取代Thr或相反，使得可以保持游離-OH；及以Gln取代Asn或相反，使得可以保持游離-NH2
。在一些實施例中，疏水性胺基酸取代天然存在之疏水性胺基酸，例如在活性位點中，以保護疏水性。
在兩種或更多種多肽序列之情形下，用語「一致」或「一致性」百分比係指兩個或更多個序列或子序列當使用序列比較算法或藉由手動比對及目視檢查所量測來比較及比對比較窗口或指定區域之最大一致性時，為相同的或在指定區域內具有指定百分比之相同胺基酸殘基，例如至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、或至少95%或更大百分比。
關於多肽之序列比較，通常一個胺基酸序列充當與候選序列進行比較之參考序列。比對可使用熟悉此項技藝者可用之各種方法進行，例如可視比對或使用可公開獲得之軟體使用已知算法實現最大比對。此類程式包括BLAST程式、ALIGN、ALIGN-2 (Genentech, South San Francisco, Calif.)或Megalign (DNASTAR)。用於比對以實現最大比對之參數可藉由熟悉此項技藝者確定。關於出於此應用目的而進行之多肽序列的序列比較，使用用於以默認參數比對兩種蛋白序列之BLASTP算法標準蛋白BLAST。
如本文所用，用語「受試者」、「個體」、及「患者」係指哺乳動物，包括但不限於人類、非人靈長類動物、齧齒動物(例如，大鼠、小鼠、及豚鼠)、兔子、牛、豬、馬、及其他哺乳動物種類。在一個實施例中，受試者、個體、或患者為人類。
用語「治療(treating/treatment)」及類似用語在本文中通常用於意指獲得所要藥理學及/或生理學作用。「治療(treating/treatment)」可係指成功治療或減輕神經退化性疾病(例如，阿茲海默氏病或本文所述之另一種神經退化性疾病)之標記，包括任何客觀或主觀參數，諸如緩解、緩和、患者存活改善、存活時間或存活率增加、症狀減輕或者使得疾病更為患者所耐受、變性或衰弱速率減慢、或改善患者之身體或心理健康。症狀之治療或減輕可以基於客觀或主觀參數。治療作用可與未接受治療之一個體或一組個體相比較，或者與治療前或治療期間之不同時間點的同一患者相比較。
用語「醫藥學上可接受之賦形劑」係指在生物學上或藥理學上相容以用於人類或動物之非活性藥物成分，諸如但不限於緩衝劑、載劑、或防腐劑。
如本文所用，藥劑(例如，如本文所述之抗體)之「治療量」或「治療有效量」為藥劑的治療、減輕、去除或減少受試者之疾病症狀之嚴重性的量。藥劑(例如，如本文所述之抗體)之「治療量」可改善患者存活、增加存活時間或存活率、減少症狀、使得損傷、疾病、或病狀(例如
，神經退化性疾病)更耐受、減慢變性或衰弱速率、或改善患者身體或心理健康。
用語「投與」係指將藥劑、化合物、或組成物遞送到所要生物作用位點之方法。該等方法包括但不限於局部遞送、非經腸遞送、靜脈內遞送、經皮遞送、肌肉內遞送、鞘內遞送、結腸遞送、直腸遞送、或腹膜內遞送。在一個實施例中，如本文所述之抗體係靜脈內投與。
用語「對照」或「對照值」係指參考值或基線值。適當對照可由熟習此項技術者確定。在一些情況下，對照值可相對於同一受試者或實驗內之基線確定，例如在以抗TREM2抗體治療前所獲得之sTREM2量測值可為同一受試者中sTREM2水準之治療後量測值之對照值。在其他情況下，對照值可相對於對照受試者(例如，
健康對照或疾病對照)或對照受試者群體中之平均值(例如，
健康對照或疾病對照，例如
10、20、50、100、200、500、1000或更多位對照受試者之群體)確定，例如
，在基線下或治療後之受試者sTREM2水準的量測值可與健康對照值相比較。
III. 抗TREM2抗體
在一個態樣中，提供特異性結合到TREM2蛋白之抗體或其抗原結合片段。在一些實施例中，抗體特異性結合到人類TREM2蛋白。在一些實施例中，抗TREM2抗體針對TREM2相對於其他TREM樣受體(例如，
TREM1)具有選擇性。
在一些實施例中，抗TREM2抗體為包含如本文所揭示之一或多個互補決定區(CDR)、重鏈可變區、及/或輕鏈可變區序列之抗體。在一些實施例中，抗TREM2抗體包含如本文所揭示之一或多個CDR、重鏈可變區、及/或輕鏈可變區序列且進一步包含如本文所揭示之一或多種功能特徵，例如增強TREM2活性(例如
，增強吞噬作用或增強細胞諸如骨髓細胞、小神經膠質細胞或巨噬細胞之分化、功能、或存活)之抗體或降低sTREM2水準之抗體。
抗TREM2抗體序列
在一些實施例中，抗TREM2或其抗原結合片段包含來源於本文所述之以下抗TREM2抗體中之任一者的重鏈序列或其部分及/或輕鏈序列或其部分：純系CL0020306、純系CL0020188、純系CL0020307、及純系CL0020123。該等純系之CDR、重鏈可變區、及輕鏈可變區胺基酸序列陳述於非正式序列表中。在一些實施例中，抗TREM2抗體為嵌合抗體。在一些實施例中，抗TREM2抗體係人源化及/或親和力成熟抗體。
在一些實施例中，抗TREM2抗體包含選自由以下組成之群的一或多個CDR：
(a) 與SEQ ID NO:4、12、及29中任一者之胺基酸序列具有至少90%序列一致性或相對於SEQ ID NO:4、12、及29中任一者之胺基酸序列具有多至兩個胺基酸取代之重鏈CDR1 (CDR-H1)序列；
(b) 與SEQ ID NO:5、13、25、30、39、41、及43中任一者之胺基酸序列具有至少90%序列一致性或相對於SEQ ID NO:5、13、25、30、39、41、及43中任一者之胺基酸序列具有多至兩個胺基酸取代之重鏈CDR2 (CDR-H2)序列；
(c) 與SEQ ID NO:6、14、17、及31中任一者之胺基酸序列具有至少90%序列一致性或相對於SEQ ID NO6、14、17、及31中任一者之胺基酸序列具有多至兩個胺基酸取代之重鏈CDR3 (CDR-H3)序列；
(d) 與SEQ ID NO:7、23、及32中任一者之胺基酸序列具有至少90%序列一致性或相對於SEQ ID NO:7、23、及32中任一者之胺基酸序列具有多至兩個胺基酸取代之輕鏈CDR1 (CDR-L1)序列；
(e) 與SEQ ID NO:8及33中任一者之胺基酸序列具有至少90%序列一致性或相對於SEQ ID NO:8及33中任一者之胺基酸序列具有多至兩個胺基酸取代之輕鏈CDR2 (CDR-L2)序列；及
(f) 與SEQ ID NO:9、18、及34中任一者之胺基酸序列具有至少90%序列一致性或相對於SEQ ID NO:9、18、及34中任一者之胺基酸序列具有多至兩個胺基酸取代之輕鏈CDR3 (CDR-L3)序列。
在一些實施例中，抗TREM2抗體包含(a)-(f)中之二、三、四、五、或全部六者。在一些實施例中，抗TREM2抗體包含(a)之CDR-H1、(b)之CDR-H2、及(c)之CDR-H3。在一些實施例中，抗TREM2抗體包含(d)之CDR-L1、(e)之CDR-L2、及(f)之CDR-L3。在一些實施例中，具有多至兩個胺基酸取代之CDR相對於參考序列具有一個胺基酸取代。在一些實施例中，具有多至兩個胺基酸取代之CDR相對於參考序列具有兩個胺基酸取代。在一些實施例中，多至兩個胺基酸取代係保守取代。
在一些實施例中，抗TREM2抗體包含選自由以下組成之群的一或多個CDR：
(a) CDR-H1序列，其包含SEQ ID NO:4、12及29中任一者之胺基酸序列；
(b) CDR-H2序列，其包含SEQ ID NO:5、13、25、30、39、41及43中任一者之胺基酸序列；
(c) CDR-H3序列，其包含SEQ ID NO:6、14、17及31中任一者之胺基酸序列；
(d) CDR-L1序列，其包含SEQ ID NO:7、23及32中任一者之胺基酸序列；
(e) CDR-L2序列，其包含SEQ ID NO:8及33中任一者之胺基酸序列；及
(f) CDR-L3序列，其包含SEQ ID NO:9、18及34中任一者之胺基酸序列。
在一些實施例中，抗TREM2抗體包含(a)-(f)中之二、三、四、五、或全部六者。在一些實施例中，抗TREM2抗體包含(a)之CDR-H1、(b)之CDR-H2、及(c)之CDR-H3。在一些實施例中，抗TREM2抗體包含(d)之CDR-L1、(e)之CDR-L2、及(f)之CDR-L3。
在一些實施例中，抗TREM2抗體包含：
(a) 包含胺基酸序列SEQ ID NO:4之CDR-H1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:5之CDR-H2、包含胺基酸序列SEQ ID NO:6之CDR-H3、包含胺基酸序列SEQ ID NO:7之CDR-L1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:8之CDR-L2及包含胺基酸序列SEQ ID NO:9之CDR-L3；或
(b) 包含胺基酸序列SEQ ID NO:4之CDR-H1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:5之CDR-H2、包含胺基酸序列SEQ ID NO:17之CDR-H3、包含胺基酸序列SEQ ID NO:7之CDR-L1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:8之CDR-L2及包含胺基酸序列SEQ ID NO:18之CDR-L3；或
(c) 包含胺基酸序列SEQ ID NO:4之CDR-H1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:5之CDR-H2、包含胺基酸序列SEQ ID NO:17之CDR-H3、包含胺基酸序列SEQ ID NO:23之CDR-L1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:8之CDR-L2及包含胺基酸序列SEQ ID NO:18之CDR-L3；或
(d) 包含胺基酸序列SEQ ID NO:4之CDR-H1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:25之CDR-H2、包含胺基酸序列SEQ ID NO:17之CDR-H3、包含胺基酸序列SEQ ID NO:7之CDR-L1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:8之CDR-L2及包含胺基酸序列SEQ ID NO:18之CDR-L3；或
(e) 包含胺基酸序列SEQ ID NO:4之CDR-H1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:25之CDR-H2、包含胺基酸序列SEQ ID NO:17之CDR-H3、包含胺基酸序列SEQ ID NO:23之CDR-L1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:8之CDR-L2及包含胺基酸序列SEQ ID NO:18之CDR-L3；或
(f) 包含胺基酸序列SEQ ID NO:12之CDR-H1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:13之CDR-H2、包含胺基酸序列SEQ ID NO:14之CDR-H3、包含胺基酸序列SEQ ID NO:7之CDR-L1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:8之CDR-L2及包含胺基酸序列SEQ ID NO:9之CDR-L3；或
(g) 包含胺基酸序列SEQ ID NO:29之CDR-H1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:30之CDR-H2、包含胺基酸序列SEQ ID NO:31之CDR-H3、包含胺基酸序列SEQ ID NO:32之CDR-L1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:33之CDR-L2及包含胺基酸序列SEQ ID NO:34之CDR-L3；或
(h) 包含胺基酸序列SEQ ID NO:29之CDR-H1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:39之CDR-H2、包含胺基酸序列SEQ ID NO:31之CDR-H3、包含胺基酸序列SEQ ID NO:32之CDR-L1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:33之CDR-L2及包含胺基酸序列SEQ ID NO:34之CDR-L3；或
(i) 包含胺基酸序列SEQ ID NO:29之CDR-H1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:41之CDR-H2、包含胺基酸序列SEQ ID NO:31之CDR-H3、包含胺基酸序列SEQ ID NO:32之CDR-L1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:33之CDR-L2及包含胺基酸序列SEQ ID NO:34之CDR-L3；或
(j) 包含胺基酸序列SEQ ID NO:29之CDR-H1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:43之CDR-H2、包含胺基酸序列SEQ ID NO:31之CDR-H3、包含胺基酸序列SEQ ID NO:32之CDR-L1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:33之CDR-L2及包含胺基酸序列SEQ ID NO:34之CDR-L3。
在一些實施例中，抗TREM2抗體包含含有與SEQ ID NO:2、10、15、19、21、24、26、27、35、37、38、40、42、44、45、46、及79中之任一者具有至少85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、或99%序列一致性之胺基酸序列的重鏈可變區。在一些實施例中，抗TREM2包含含有胺基酸序列SEQ ID NO:2、10、15、19、21、24、26、27、35、37、38、40、42、44、45、46、及79中之任一者的重鏈可變區。
在一些實施例中，抗TREM2抗體包含含有與SEQ ID NO:3、11、16、20、22、28、36、及68中之任一者具有至少85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性之胺基酸序列的輕鏈可變區。在一些實施例中，抗TREM2抗體包含含有胺基酸序列SEQ ID NO:3、11、16、20、22、28、36及68中之任一者的輕鏈可變區。
在一些實施例中，抗TREM2抗體包含：含有與SEQ ID NO:2、10、15、19、21、24、26、27、35、37、38、40、42、44、45、46、及79中之任一者具有至少85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、或99%序列一致性之胺基酸序列的重鏈可變區，及含有與SEQ ID NO:3、11、16、20、22、28、36、及68中任一者具有至少85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、或99%序列一致性之胺基酸序列的輕鏈可變區。在一些實施例中，抗TREM2包含：含有胺基酸序列SEQ ID NO:2、10、15、19、21、24、26、27、35、37、38、40、42、44、45、46、及79中之任一者的重鏈可變區，及含有胺基酸SEQ ID NO:3、11、16、20、22、28、36、及68中之任一者的輕鏈可變區。
在一些實施例中，抗TREM2抗體包含：
(a) 與SEQ ID NO:2具有至少85%序列一致性之VH
序列及與SEQ ID NO:3具有至少85%序列一致性之VL
序列；或
(b) 與SEQ ID NO:10具有至少85%序列一致性之VH
序列及與SEQ ID NO:11具有至少85%序列一致性之VL
序列；或
(c) 與SEQ ID NO:15具有至少85%序列一致性之VH
序列及與SEQ ID NO:16具有至少85%序列一致性之VL
序列；或
(d) 與SEQ ID NO:19具有至少85%序列一致性之VH
序列及與SEQ ID NO:20具有至少85%序列一致性之VL
序列；或
(e) 與SEQ ID NO:21具有至少85%序列一致性之VH
序列及與SEQ ID NO:20具有至少85%序列一致性之VL
序列；或
(f) 與SEQ ID NO:19具有至少85%序列一致性之VH
序列及與SEQ ID NO:22具有至少85%序列一致性之VL
序列；或
(g) 與SEQ ID NO:79具有至少85%序列一致性之VH
序列及與SEQ ID NO:22具有至少85%序列一致性之VL
序列；或
(h) 與SEQ ID NO:24具有至少85%序列一致性之VH
序列及與SEQ ID NO:20具有至少85%序列一致性之VL
序列；或
(i) 與SEQ ID NO:26具有至少85%序列一致性之VH
序列及與SEQ ID NO:20具有至少85%序列一致性之VL
序列；或
(j) 與SEQ ID NO:24具有至少85%序列一致性之VH
序列及與SEQ ID NO:22具有至少85%序列一致性之VL
序列；或
(k) 與SEQ ID NO:26具有至少85%序列一致性之VH
序列及與SEQ ID NO:22具有至少85%序列一致性之VL
序列；或
(l) 與SEQ ID NO:27具有至少85%序列一致性之VH
序列及與SEQ ID NO:28具有至少85%序列一致性之VL
序列；或
(m) 與SEQ ID NO:35具有至少85%序列一致性之VH
序列及與SEQ ID NO:36具有至少85%序列一致性之VL
序列；或
(n) 與SEQ ID NO:37具有至少85%序列一致性之VH
序列及與SEQ ID NO:36具有至少85%序列一致性之VL
序列；或
(o) 與SEQ ID NO:38具有至少85%序列一致性之VH
序列及與SEQ ID NO:36具有至少85%序列一致性之VL
序列；或
(p) 與SEQ ID NO:40具有至少85%序列一致性之VH
序列及與SEQ ID NO:36具有至少85%序列一致性之VL
序列；或
(q) 與SEQ ID NO:42具有至少85%序列一致性之VH
序列及與SEQ ID NO:36具有至少85%序列一致性之VL
序列；或
(r) 與SEQ ID NO:44具有至少85%序列一致性之VH
序列及與SEQ ID NO:36具有至少85%序列一致性之VL
序列；或
(s) 與SEQ ID NO:45具有至少85%序列一致性之VH
序列及與SEQ ID NO:36具有至少85%序列一致性之VL
序列；或
(t) 與SEQ ID NO:46具有至少85%序列一致性之VH
序列及與SEQ ID NO:36具有至少85%序列一致性之VL
序列；或
(u) 與SEQ ID NO:24具有至少85%序列一致性之VH
序列及與SEQ ID NO:68具有至少85%序列一致性之VL
序列。
在一些實施例中，抗TREM2抗體包含由本文所揭示之共通序列所涵蓋之一或多個序列。作為非限制性實例，共通序列可藉由比對來自相同(或類似)生殖系之抗體的重鏈或輕鏈序列(例如CDR)來鑑別。在一些實施例中，共通序列可由含有具有相同(或類似)長度且/或具有至少一個高度類似CDR(例如，高度類似CDR3)之序列的抗體生成。在一些實施例中，可比對且比較該等抗體中之此類序列以鑑別保守性胺基酸或基序(亦即
，其中序列之改變可改變蛋白功能)及/或其中序列出現變化之區域(亦即
，其中序列之變化不可能顯著影響蛋白功能)。或者，共通序列可藉由比對結合到相同或類似(例如重疊)抗原決定基之抗體的重鏈或輕鏈序列(例如
CDR)來鑑別以確定保守性胺基酸或基序(亦即
，其中序列之變化可改變蛋白功能)及在序列比對中出現變化之區域(亦即
，其中序列之變化不可能顯著影響蛋白功能)。在一些實施例中，可鑑別抗體之識別與如本文所揭示之抗TREM2抗體相同或類似之抗原決定基的一或多個共通序列。示範性共通序列包括SEQ ID NO:47-52。在共通序列SEQ ID NO:47-52中，大寫字母表示在經比對序列(例如
，經比對CDR序列)中絕對保守之胺基酸殘基，而「X」或希臘字母(例如，
「α」、「β」、「γ」、「δ」、「ε」、或「φ」)表示在經比對序列內並非絕對保守之胺基酸殘基。將瞭解的是，當選擇胺基酸***在由「X」或希臘字母標記之位置時，在一些實施例中，該胺基酸選自經比對序列中之相應位置處可見之彼等胺基酸。純系 CL0020123 及 CL0020123 之變異體
在一些實施例中，抗TREM2抗體或其抗原結合片段包含：
(a) CDR-H1序列，其包含序列GFSIEDFYIH (SEQ ID NO:29)；
(b) CDR-H2序列，其包含序列W-I-D-P-E-β6
-G-β8
-S-K-Y-A-P-K-F-Q-G (SEQ ID NO:47)，其中β6
為N或Q且β8
為D或E；
(c) CDR-H3序列，其包含序列HADHGNYGSTMDY (SEQ ID NO:31)；
(d) CDR-L1序列，其包含序列HASQHINVWLS (SEQ ID NO:32)；
(e) CDR-L2序列，其包含序列KASNLHT (SEQ ID NO:33)；及
(f) CDR-L3序列，其包含序列QQGQTYPRT (SEQ ID NO:34)。
在一些實施例中，抗TREM2抗體包含選自SEQ ID NO:30、39、41和43之CDR-H2序列。
在一些實施例中，抗TREM2抗體包含含有與SEQ ID NO:27、35、37、38、40、42、44、45、及46中之任一者具有至少85%序列一致性(例如，至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性)之胺基酸序列的重鏈可變區。在一些實施例中，抗TREM2抗體包含含有胺基酸序列SEQ ID NO:27、35、37、38、40、42、44、45、及46中之任一者的重鏈可變區。
在一些實施例中，抗TREM2抗體包含含有與SEQ ID NO:28及36中之任一者具有至少85%序列一致性(例如，
至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性)之胺基酸序列的輕鏈可變區。在一些實施例中，抗TREM2抗體包含含有胺基酸序列SEQ ID NO:28及36中之任一者的輕鏈可變區。
在一些實施例中，抗TREM2抗體包含含有胺基酸序列SEQ ID NO:29之CDR-H1序列、含有胺基酸序列SEQ ID NO:30之CDR-H2序列、含有胺基酸序列SEQ ID NO:31之CDR-H3序列、含有胺基酸序列含有胺基酸序列SEQ ID NO:32之CDR-L1序列、含有胺基酸序列SEQ ID NO:33之CDR-L2序列、及含有胺基酸序列SEQ ID NO:34之CDR-L3序列。
在一些實施例中，抗TREM2抗體包含含有與SEQ ID NO:27具有至少85%序列一致性(例如，至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性)之胺基酸序列的重鏈可變區。在一些實施例中，抗TREM2抗體包含含有胺基酸序列SEQ ID NO: 27之重鏈可變區。
在一些實施例中，抗TREM2抗體包含含有與SEQ ID NO:28具有至少85%序列一致性(例如，
至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性)之胺基酸序列的輕鏈可變區。在一些實施例中，抗TREM2抗體包含含有胺基酸序列SEQ ID NO:28之輕鏈可變區。
在一些實施例中，抗TREM2抗體包含含有與SEQ ID NO:27具有至少85%序列一致性(例如，至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性)之胺基酸序列的重鏈可變區，及含有與SEQ ID NO:28具有至少85%序列一致性(例如，至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性)之胺基酸序列的輕鏈可變區。在一些實施例中，抗TREM2抗體包含含有胺基酸序列SEQ ID NO:27之重鏈可變區及含有胺基酸序列SEQ ID NO:28之輕鏈可變區。
在一些實施例中，抗TREM2抗體包含含有分別具有胺基酸SEQ ID NO:29、30、及31之重鏈CDR1-3且與SEQ ID NO:27具有至少85%序列一致性(例如，至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性)之重鏈可變區。在一些實施例中，抗TREM2抗體包含含有分別具有胺基酸序列SEQ ID NO:32、33、及34之輕鏈CDR1-3且與SEQ ID NO:28具有至少85%序列一致性(例如，
至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性)之輕鏈可變區。
在一些實施例中，抗TREM2抗體為與如本文所述之抗體(例如，
包含分別含有胺基酸序列SEQ ID NO:29、30、31、32、33、及34之重鏈CDR1-3及輕鏈CDR1-3之抗體或包含含有胺基酸序列SEQ ID NO:27之重鏈可變區及含有胺基酸序列SEQ ID NO:28之輕鏈可變區之抗體)競爭結合之抗體。
在一些實施例中，抗TREM2抗體包含含有胺基酸序列SEQ ID NO:29之CDR-H1序列、含有胺基酸序列SEQ ID NO:43之CDR-H2序列、含有胺基酸序列SEQ ID NO:31之CDR-H3序列、含有胺基酸序列含有胺基酸序列SEQ ID NO:32之CDR-L1序列、含有胺基酸序列SEQ ID NO:33之CDR-L2序列、及含有胺基酸序列SEQ ID NO:34之CDR-L3序列。
在一些實施例中，抗TREM2抗體包含含有與SEQ ID NO:42具有至少85%序列一致性(例如
，至少90%、95%、或97%序列一致性)之胺基酸序列的重鏈可變區。在一些實施例中，抗TREM2抗體包含含有胺基酸序列SEQ ID NO: 42之重鏈可變區。
在一些實施例中，抗TREM2抗體包含含有與SEQ ID NO:36具有至少85%序列一致性(例如，
至少90%、95%、或97%序列一致性)之胺基酸序列的輕鏈可變區。在一些實施例中，抗TREM2抗體包含含有胺基酸序列SEQ ID NO:36之輕鏈可變區。
在一些實施例中，抗TREM2抗體包含含有與SEQ ID NO:42具有至少85%序列一致性(例如，至少90%、95%、或97%序列一致性)之胺基酸序列的重鏈可變區，及含有與SEQ ID NO:36具有至少85%序列一致性(例如，至少90%、95%、或97%序列一致性)之胺基酸序列的輕鏈可變區。在一些實施例中，抗TREM2抗體包含含有胺基酸序列SEQ ID NO:42之重鏈可變區及含有胺基酸序列SEQ ID NO:36之輕鏈可變區。
在一些實施例中，抗TREM2抗體包含含有分別具有胺基酸SEQ ID NO:29、43、及31之重鏈CDR1-3且與SEQ ID NO:42具有至少85%序列一致性(例如，至少90%、95%、或97%序列一致性)之重鏈可變區。在一些實施例中，抗TREM2抗體包含含有分別具有胺基酸序列SEQ ID NO:32、33、及34之輕鏈CDR1-3且與SEQ ID NO:36具有至少85%序列一致性(例如，
至少90%、95%、或97%序列一致性)之輕鏈可變區。
在一些實施例中，抗TREM2抗體為與如本文所述之抗體(例如，
包含分別含有胺基酸序列SEQ ID NO:29、43、31、32、33、及34之重鏈CDR1-3及輕鏈CDR1-3之抗體或包含含有胺基酸序列SEQ ID NO:42之重鏈可變區及含有胺基酸序列SEQ ID NO:36之輕鏈可變區之抗體)競爭結合之抗體。
在一些實施例中，抗TREM2抗體包含含有胺基酸序列SEQ ID NO:29之CDR-H1序列、含有胺基酸序列SEQ ID NO:41之CDR-H2序列、含有胺基酸序列SEQ ID NO:31之CDR-H3序列、含有胺基酸序列含有胺基酸序列SEQ ID NO:32之CDR-L1序列、含有胺基酸序列SEQ ID NO:33之CDR-L2序列、及含有胺基酸序列SEQ ID NO:34之CDR-L3序列。
在一些實施例中，抗TREM2抗體包含含有與SEQ ID NO:45具有至少85%序列一致性(例如
，至少90%、95%、或97%序列一致性)之胺基酸序列的重鏈可變區。在一些實施例中，抗TREM2抗體包含含有胺基酸序列SEQ ID NO: 45之重鏈可變區。
在一些實施例中，抗TREM2抗體包含含有與SEQ ID NO:36具有至少85%序列一致性(例如，
至少90%、95%、或97%序列一致性)之胺基酸序列的輕鏈可變區。在一些實施例中，抗TREM2抗體包含含有胺基酸序列SEQ ID NO:36之輕鏈可變區。
在一些實施例中，抗TREM2抗體包含含有與SEQ ID NO:45具有至少85%序列一致性(例如，至少90%、95%、或97%序列一致性)之胺基酸序列的重鏈可變區，及含有與SEQ ID NO:36具有至少85%序列一致性(例如，至少90%、95%、或97%序列一致性)之胺基酸序列的輕鏈可變區。在一些實施例中，抗TREM2抗體包含含有胺基酸序列SEQ ID NO:45之重鏈可變區及含有胺基酸序列SEQ ID NO:36之輕鏈可變區。
在一些實施例中，抗TREM2抗體包含含有分別具有胺基酸SEQ ID NO:29、41、及31之重鏈CDR1-3且與SEQ ID NO:45具有至少85%序列一致性(例如，至少90%、95%、或97%序列一致性)之重鏈可變區。在一些實施例中，抗TREM2抗體包含含有分別具有胺基酸序列SEQ ID NO:32、33、及34之輕鏈CDR1-3且與SEQ ID NO:36具有至少85%序列一致性(例如，
至少90%、95%、或97%序列一致性)之輕鏈可變區。
在一些實施例中，抗TREM2抗體為與如本文所述之抗體(例如，
包含分別含有胺基酸序列SEQ ID NO:29、41、31、32、33、及34之重鏈CDR1-3及輕鏈CDR1-3之抗體或包含含有胺基酸序列SEQ ID NO:45之重鏈可變區及含有胺基酸序列SEQ ID NO:36之輕鏈可變區之抗體)競爭結合之抗體。純系 CL0020188 、 CL0020306 、 CL0020307 、及 CL0020188 之變異體
在一些實施例中，抗TREM2抗體或其抗原結合片段包含：
(a) CDR-H1序列，其包含序列G-F-T-F-T-α6
-F-Y-M-S (SEQ ID NO:48)，其中α6
為D或N；
(b) CDR-H2序列，其包含序列V-I-R-N-β5
-β6
-N-β8
-Y-T-β11
-β12
-Y-N-P-S-V-K-G (SEQ ID NO:49)，其中β5
為K或R；β6
為A或P；β8
為G或A；β11
為A或T；且β12
為G或D；
(c) CDR-H3序列，其包含序列γ1
-R-L-γ4
-Y-G-F-D-Y (SEQ ID NO:50)，其中γ1
為A或T；且γ4
為T或S；
(d) CDR-L1序列，其包含序列Q-S-S-K-S-L-L-H-S-δ10
-G-K-T-Y-L-N (SEQ ID NO:51)，其中δ10
為N或T；
(e) CDR-L2序列，其包含序列WMSTRAS (SEQ ID NO:8)；及
(f) CDR-L3序列，其包含序列Q-Q-F-L-E-ϕ6
-P-F-T (SEQ ID NO:52)，其中ϕ6
為Y或F。
在一些實施例中，抗TREM2抗體包含選自SEQ ID NO:4和12之CDR-H1序列。在一些實施例中，抗TREM2抗體包含選自SEQ ID NO:5、13和25之CDR-H2序列。在一些實施例中，抗TREM2抗體包含選自SEQ ID NO:6、14和17之CDR-H3序列。在一些實施例中，抗TREM2抗體包含選自SEQ ID NO:7和23之CDR-L1序列。在一些實施例中，抗TREM2抗體包含選自SEQ ID NO:9和18之CDR-L3。
在一些實施例中，抗TREM2抗體包含含有與SEQ ID No:2、10、15、19、21、24、26、及79中之任一者具有至少85%序列一致性(例如，至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性)之胺基酸序列的重鏈可變區。在一些實施例中，抗TREM2抗體包含含有胺基酸序列SEQ ID NO:2、10、15、19、21、24、26、及79中之任一者的重鏈可變區。
在一些實施例中，抗TREM2抗體包含含有與SEQ ID No:3、11、16、20、22、及68中之任一者具有至少85%序列一致性(例如，
至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性)之胺基酸序列的輕鏈可變區。在一些實施例中，抗TREM2抗體包含含有胺基酸序列SEQ ID NO:3、11、16、20、22、及68中之任一者的輕鏈可變區。純系 CL0020188 及 CL0020188 之變異體
在一些實施例中，抗TREM2抗體包含含有胺基酸序列SEQ ID NO:4之CDR-H1序列、含有胺基酸序列SEQ ID NO:5之CDR-H2序列、含有胺基酸序列SEQ ID NO:17之CDR-H3序列、含有胺基酸序列含有胺基酸序列SEQ ID NO:7之CDR-L1序列、含有胺基酸序列SEQ ID NO:8之CDR-L2序列、及含有胺基酸序列SEQ ID NO:18之CDR-L3序列。
在一些實施例中，抗TREM2抗體包含含有與SEQ ID NO:15具有至少85%序列一致性(例如，至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性)之胺基酸序列的重鏈可變區。在一些實施例中，抗TREM2抗體包含含有胺基酸序列SEQ ID NO: 15之重鏈可變區。
在一些實施例中，抗TREM2抗體包含含有與SEQ ID NO:16具有至少85%序列一致性(例如，
至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性)之胺基酸序列的輕鏈可變區。在一些實施例中，抗TREM2抗體包含含有胺基酸序列SEQ ID NO:16之輕鏈可變區。
在一些實施例中，抗TREM2抗體包含含有與SEQ ID NO:15具有至少85%序列一致性(例如，至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性)之胺基酸序列的重鏈可變區，及含有與SEQ ID NO:16具有至少85%序列一致性(例如，至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性)之胺基酸序列的輕鏈可變區。在一些實施例中，抗TREM2抗體包含含有胺基酸序列SEQ ID NO:15之重鏈可變區及含有胺基酸序列SEQ ID NO:16之輕鏈可變區。
在一些實施例中，抗TREM2抗體包含含有分別具有胺基酸SEQ ID NO:4、5、及17之重鏈CDR1-3且與SEQ ID NO:15具有至少85%序列一致性(例如，至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性)之重鏈可變區。在一些實施例中，抗TREM2抗體包含含有分別具有胺基酸序列SEQ ID NO:7、8、及18之輕鏈CDR1-3且與SEQ ID NO:16具有至少85%序列一致性(例如，
至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性)之輕鏈可變區。
在一些實施例中，抗TREM2抗體為與如本文所述之抗體(例如，
包含分別含有胺基酸序列SEQ ID NO:5、17、7、8、及18之重鏈CDR1-3及輕鏈CDR1-3之抗體或包含含有胺基酸序列SEQ ID NO:15之重鏈可變區及含有胺基酸序列SEQ ID NO:16之輕鏈可變區之抗體)競爭結合之抗體。
在一些實施例中，抗TREM2抗體包含含有胺基酸序列SEQ ID NO:4之CDR-H1序列、含有胺基酸序列SEQ ID NO:5之CDR-H2序列、含有胺基酸序列SEQ ID NO:17之CDR-H3序列、含有胺基酸序列含有胺基酸序列SEQ ID NO:23之CDR-L1序列、含有胺基酸序列SEQ ID NO:8之CDR-L2序列、及含有胺基酸序列SEQ ID NO:18之CDR-L3序列。
在一些實施例中，抗TREM2抗體包含含有與SEQ ID NO:79具有至少85%序列一致性(例如
，至少90%、95%、或97%序列一致性)之胺基酸序列的重鏈可變區。在一些實施例中，抗TREM2抗體包含含有胺基酸序列SEQ ID NO: 79之重鏈可變區。
在一些實施例中，抗TREM2抗體包含含有與SEQ ID NO:22具有至少85%序列一致性(例如，
至少90%、95%、或97%序列一致性)之胺基酸序列的輕鏈可變區。在一些實施例中，抗TREM2抗體包含含有胺基酸序列SEQ ID NO:22之輕鏈可變區。
在一些實施例中，抗TREM2抗體包含含有與SEQ ID NO:79具有至少85%序列一致性(例如，至少90%、95%、或97%序列一致性)之胺基酸序列的重鏈可變區，及含有與SEQ ID NO:22具有至少85%序列一致性(例如，至少90%、95%、或97%序列一致性)之胺基酸序列的輕鏈可變區。在一些實施例中，抗TREM2抗體包含含有胺基酸序列SEQ ID NO:79之重鏈可變區及含有胺基酸序列SEQ ID NO:22之輕鏈可變區。
在一些實施例中，抗TREM2抗體包含含有分別具有胺基酸SEQ ID NO:4、5、及17之重鏈CDR1-3且與SEQ ID NO:79具有至少85%序列一致性(例如，至少90%、95%、或97%序列一致性)之重鏈可變區。在一些實施例中，抗TREM2抗體包含含有分別具有胺基酸序列SEQ ID NO:23、8、及18之輕鏈CDR1-3且與SEQ ID NO:22具有至少85%序列一致性(例如，
至少90%、95%、或97%序列一致性)之輕鏈可變區。
在一些實施例中，抗TREM2抗體為與如本文所述之抗體(例如，
包含分別含有胺基酸序列SEQ ID NO:4、5、17、23、8、及18之重鏈CDR1-3及輕鏈CDR1-3之抗體或包含含有胺基酸序列SEQ ID NO:79之重鏈可變區及含有胺基酸序列SEQ ID NO:22之輕鏈可變區之抗體)競爭結合之抗體。
在一些實施例中，抗TREM2抗體包含含有胺基酸序列SEQ ID NO:4之CDR-H1序列、含有胺基酸序列SEQ ID NO:25之CDR-H2序列、含有胺基酸序列SEQ ID NO:17之CDR-H3序列、含有胺基酸序列含有胺基酸序列SEQ ID NO:23之CDR-L1序列、含有胺基酸序列SEQ ID NO:8之CDR-L2序列、及含有胺基酸序列SEQ ID NO:18之CDR-L3序列。
在一些實施例中，抗TREM2抗體包含含有與SEQ ID NO:24具有至少85%序列一致性(例如
，至少90%、95%、或97%序列一致性)之胺基酸序列的重鏈可變區。在一些實施例中，抗TREM2抗體包含含有胺基酸序列SEQ ID NO: 24之重鏈可變區。
在一些實施例中，抗TREM2抗體包含含有與SEQ ID NO:22具有至少85%序列一致性(例如，
至少90%、95%、或97%序列一致性)之胺基酸序列的輕鏈可變區。在一些實施例中，抗TREM2抗體包含含有胺基酸序列SEQ ID NO:22之輕鏈可變區。
在一些實施例中，抗TREM2抗體包含含有與SEQ ID NO:24具有至少85%序列一致性(例如，至少90%、95%、或97%序列一致性)之胺基酸序列的重鏈可變區，及含有與SEQ ID NO:22具有至少85%序列一致性(例如，至少90%、95%、或97%序列一致性)之胺基酸序列的輕鏈可變區。在一些實施例中，抗TREM2抗體包含含有胺基酸序列SEQ ID NO:24之重鏈可變區及含有胺基酸序列SEQ ID NO:22之輕鏈可變區。
在一些實施例中，抗TREM2抗體包含含有分別具有胺基酸SEQ ID NO:4、25、及17之重鏈CDR1-3且與SEQ ID NO:24具有至少85%序列一致性(例如，至少90%、95%、或97%序列一致性)之重鏈可變區。在一些實施例中，抗TREM2抗體包含含有分別具有胺基酸序列SEQ ID NO:23、8、及18之輕鏈CDR1-3且與SEQ ID NO:22具有至少85%序列一致性(例如，
至少90%、95%、或97%序列一致性)之輕鏈可變區。
在一些實施例中，抗TREM2抗體為與如本文所述之抗體(例如，
包含分別含有胺基酸序列SEQ ID NO:4、25、17、23、8、及18之重鏈CDR1-3及輕鏈CDR1-3之抗體或包含含有胺基酸序列SEQ ID NO:24之重鏈可變區及含有胺基酸序列SEQ ID NO:22之輕鏈可變區之抗體)競爭結合之抗體。
在一些實施例中，抗TREM2抗體包含含有胺基酸序列SEQ ID NO:4之CDR-H1序列、含有胺基酸序列SEQ ID NO:25之CDR-H2序列、含有胺基酸序列SEQ ID NO:17之CDR-H3序列、含有胺基酸序列含有胺基酸序列SEQ ID NO:7之CDR-L1序列、含有胺基酸序列SEQ ID NO:8之CDR-L2序列、及含有胺基酸序列SEQ ID NO:9之CDR-L3序列。
在一些實施例中，抗TREM2抗體包含含有與SEQ ID NO:24具有至少85%序列一致性(例如
，至少90%、95%、或97%序列一致性)之胺基酸序列的重鏈可變區。在一些實施例中，抗TREM2抗體包含含有胺基酸序列SEQ ID NO: 24之重鏈可變區。
在一些實施例中，抗TREM2抗體包含含有與SEQ ID NO:68具有至少85%序列一致性(例如，
至少90%、95%、或97%序列一致性)之胺基酸序列的輕鏈可變區。在一些實施例中，抗TREM2抗體包含含有胺基酸序列SEQ ID NO:68之輕鏈可變區。
在一些實施例中，抗TREM2抗體包含含有與SEQ ID NO:24具有至少85%序列一致性(例如，至少90%、95%、或97%序列一致性)之胺基酸序列的重鏈可變區，及含有與SEQ ID NO:68具有至少85%序列一致性(例如，至少90%、95%、或97%序列一致性)之胺基酸序列的輕鏈可變區。在一些實施例中，抗TREM2抗體包含含有胺基酸序列SEQ ID NO:24之重鏈可變區及含有胺基酸序列SEQ ID NO:68之輕鏈可變區。
在一些實施例中，抗TREM2抗體包含含有分別具有胺基酸SEQ ID NO:4、25、及17之重鏈CDR1-3且與SEQ ID NO:24具有至少85%序列一致性(例如，至少90%、95%、或97%序列一致性)之重鏈可變區。在一些實施例中，抗TREM2抗體包含含有分別具有胺基酸序列SEQ ID NO:7、8、及9之輕鏈CDR1-3且與SEQ ID NO:68具有至少85%序列一致性(例如，
至少90%、95%、或97%序列一致性)之輕鏈可變區。
在一些實施例中，抗TREM2抗體為與如本文所述之抗體(例如，
包含分別含有胺基酸序列SEQ ID NO:4、25、17、7、8、及9之重鏈CDR1-3及輕鏈CDR1-3之抗體或包含含有胺基酸序列SEQ ID NO:24之重鏈可變區及含有胺基酸序列SEQ ID NO:68之輕鏈可變區之抗體)競爭結合之抗體。純系 CL0020306
在一些實施例中，抗TREM2抗體包含含有胺基酸序列SEQ ID NO:4之CDR-H1序列、含有胺基酸序列SEQ ID NO:5之CDR-H2序列、含有胺基酸序列SEQ ID NO:6之CDR-H3序列、含有胺基酸序列含有胺基酸序列SEQ ID NO:7之CDR-L1序列、含有胺基酸序列SEQ ID NO:8之CDR-L2序列、及含有胺基酸序列SEQ ID NO:9之CDR-L3序列。
在一些實施例中，抗TREM2抗體包含含有與SEQ ID NO:2具有至少85%序列一致性(例如，至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性)之胺基酸序列的重鏈可變區。在一些實施例中，抗TREM2抗體包含含有胺基酸序列SEQ ID NO: 2之重鏈可變區。
在一些實施例中，抗TREM2抗體包含含有與SEQ ID NO:3具有至少85%序列一致性(例如，
至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性)之胺基酸序列的輕鏈可變區。在一些實施例中，抗TREM2抗體包含含有胺基酸序列SEQ ID NO:3之輕鏈可變區。
在一些實施例中，抗TREM2抗體包含含有與SEQ ID NO:2具有至少85%序列一致性(例如，至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性)之胺基酸序列的重鏈可變區
，及含有與SEQ ID NO:3具有至少85%序列一致性(例如，至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性)之胺基酸序列的輕鏈可變區。在一些實施例中，抗TREM2抗體包含含有胺基酸序列SEQ ID NO:2之重鏈可變區及含有胺基酸序列SEQ ID NO:3之輕鏈可變區。
在一些實施例中，抗TREM2抗體包含含有分別具有胺基酸SEQ ID NO:4、5、及6之重鏈CDR1-3且與SEQ ID NO:2具有至少85%序列一致性(例如，至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性)之重鏈可變區。在一些實施例中，抗TREM2抗體包含含有分別具有胺基酸序列SEQ ID NO:7、8、及9之輕鏈CDR1-3且與SEQ ID NO:3具有至少85%序列一致性(例如，
至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性)之輕鏈可變區。
在一些實施例中，抗TREM2抗體為與如本文所述之抗體(例如，
包含分別含有胺基酸序列SEQ ID NO:4、5、6、7、8、及9之重鏈CDR1-3及輕鏈CDR1-3之抗體或包含含有胺基酸序列SEQ ID NO:2之重鏈可變區及含有胺基酸序列SEQ ID NO:3之輕鏈可變區之抗體)競爭結合之抗體。純系 CL0020307
在一些實施例中，抗TREM2抗體包含含有胺基酸序列SEQ ID NO:12之CDR-H1序列、含有胺基酸序列SEQ ID NO:13之CDR-H2序列、含有胺基酸序列SEQ ID NO:14之CDR-H3序列、含有胺基酸序列含有胺基酸序列SEQ ID NO:7之CDR-L1序列、含有胺基酸序列SEQ ID NO:8之CDR-L2序列、及含有胺基酸序列SEQ ID NO:9之CDR-L3序列。
在一些實施例中，抗TREM2抗體包含含有與SEQ ID NO:10具有至少85%序列一致性(例如，至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性)之胺基酸序列的重鏈可變區。在一些實施例中，抗TREM2抗體包含含有胺基酸序列SEQ ID NO: 10之重鏈可變區。
在一些實施例中，抗TREM2抗體包含含有與SEQ ID NO:11具有至少85%序列一致性(例如，
至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性)之胺基酸序列的輕鏈可變區。在一些實施例中，抗TREM2抗體包含含有胺基酸序列SEQ ID NO:11之輕鏈可變區。
在一些實施例中，抗TREM2抗體包含含有與SEQ ID NO:10具有至少85%序列一致性(例如，至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性)之胺基酸序列的重鏈可變區，及含有與SEQ ID NO:11具有至少85%序列一致性(例如，至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性)之胺基酸序列的輕鏈可變區。在一些實施例中，抗TREM2抗體包含含有胺基酸序列SEQ ID NO:10之重鏈可變區及含有胺基酸序列SEQ ID NO:11之輕鏈可變區。
在一些實施例中，抗TREM2抗體包含含有分別具有胺基酸SEQ ID NO:12、13、及14之重鏈CDR1-3且與SEQ ID NO:10具有至少85%序列一致性(例如，至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性)之重鏈可變區。在一些實施例中，抗TREM2抗體包含含有分別具有胺基酸序列SEQ ID NO:7、8、及9之輕鏈CDR1-3且與SEQ ID NO:11具有至少85%序列一致性(例如，
至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性)之輕鏈可變區。
在一些實施例中，抗TREM2抗體為與如本文所述之抗體(例如，
包含分別含有胺基酸序列SEQ ID NO:12、13、14、7、8、及9之重鏈CDR1-3及輕鏈CDR1-3之抗體或包含含有胺基酸序列SEQ ID NO:10之重鏈可變區及含有胺基酸序列SEQ ID NO:11之輕鏈可變區之抗體)競爭結合之抗體。
抗TREM2抗體之結合特徵
在一些實施例中，如本文所述之特異性結合到TREM2蛋白之抗體結合到細胞(例如，內源性表現
TREM2之原代細胞或細胞株，諸如人類巨噬細胞，或經工程化以表現TREM2之原代細胞或細胞株，例如，如以下實例部分所述)上表現之TREM2。在一些實施例中，特異性結合到如本文所述之TREM2蛋白之抗體結合到經純化或重組TREM2蛋白或其部分或包含TREM2或其部分之嵌合蛋白(例如
，包含TREM2之Fc-融合蛋白或包含TREM2胞外域之Fc-融合蛋白)。
在一些實施例中，特異性結合到人類TREM2蛋白之抗體表現出與另一種類之一或多種其他TREM2蛋白之交叉反應性。在一些實施例中，特異性結合到人類TREM2蛋白之抗體表現出與石蟹獼猴(「cyno」) TREM2蛋白之交叉反應性。在一些實施例中，特異性結合到人類TREM2蛋白之抗體表現出與小鼠TREM2蛋白之交叉反應性。在一些實施例中，抗TREM2抗體表現出與人類TREM2、cyno TREM2、及小鼠TREM2之交叉反應。
用於分析結合親和力、結合動力學、及交叉反應性之方法為此項技術中已知的。該等方法包括但不限於固相結合檢定(例如
，ELISA檢定)、免疫沉澱法、表面電漿子共振(例如
，Biacore™
(GE Healthcare, Piscataway, NJ))、動力排阻檢定(例如
，KinExA®
)、流動式細胞測量術、螢光活化細胞分選(FACS)、生物層干涉術(例如
，Octet™
(FortéBio, Inc., Menlo Park, CA))、及西方墨點分析。在一些實施例中，使用ELISA確定結合親和力及/或交叉反應性。用於進行ELISA檢定之方法為此項技術中已知的，且亦描述於以下實例部分中。在一些實施例中，使用表面電漿子共振(SPR)確定結合親和力、結合動力學、及/或交叉反應性。在一些實施例中，使用動力排阻檢定確定結合親和力、結合動力學、及/或交叉反應性。在一些實施例中，使用生物層干涉術確定結合親和力、結合動力學、及/或交叉反應性。
抗TREM2抗體所識別之抗原決定基
在一些實施例中，抗TREM2抗體識別人類TREM2之抗原決定基與如本文所述之抗體純系識別的抗原決定基相同或基本上相同。如本文所用，如參考由如本文所述之抗體純系所識別之抗原決定基使用，用語」基本上相同「意指抗TREM2抗體識別之抗原決定基與由如本文所述之抗體純系所識別之抗原決定基相同、或在該抗原決定基內、或與該抗原決定基幾乎相同(例如，
與該抗原決定基具有至少90%序列一致性或相對於該抗原決定基具有一個、兩個、或三個胺基酸取代，例如保守性取代)，或與該抗原決定基具有大量重複(例如
，與其具有至少50%、60%、70%、80%、90%、或95%重複)。
在一些實施例中，抗TREM2抗體識別人類TREM2之抗原決定基與選自由以下組成之群之抗體純系識別的抗原決定基相同或基本上相同：純系CL0020306、純系CL0020188、純系CL0020307、及純系CL0020123。
在一些實施例中，抗TREM2抗體結合到人類TREM2之抗原決定基的TREM2柄區。在一些實施例中，抗TREM2抗體識別人類TREM2之抗原決定基，該抗原決定基包含SEQ ID NO:1之殘基129-172或殘基131-169、在該等殘基內、或由該等殘基組成。在一些實施例中，抗TREM2抗體識別人類TREM2之抗原決定基，該抗原決定基包含SEQ ID NO:1之殘基129-148、在該等殘基內、或由該等殘基組成。在一些實施例中，抗TREM2抗體識別人類TREM2之抗原決定基，該抗原決定基包含SEQ ID NO:1之胺基酸殘基143-149、在該等殘基內、或由該等殘基組成。在一些實施例中，抗TREM2抗體為活化TREM2/DAP12信號傳導(例如
，藉由誘導激酶諸如Syk之磷酸化)且結合到人類TREM2之抗原決定基的TREM2柄區內的促效劑。在一些實施例中，抗TREM2抗體結合到人類TREM2之抗原決定基的TREM2柄區且抑制蛋白酶(例如
，ADAM17)對TREM2之裂解。
在一些實施例中，抗TREM2抗體結合到人類TREM2之抗原決定基的TREM2 Ig可變(IgV)域內。在一些實施例中，抗TREM2抗體為活化TREM2/DAP12信號傳導(例如
，藉由誘導激酶諸如Syk之磷酸化)且結合到人類TREM2之抗原決定基的TREM2 IgV域的促效劑。在一些實施例中，抗TREM2抗體結合到人類TREM2之抗原決定基，該抗原決定基包含以下一或多者或由以下一或多者組成：(i) SEQ ID NO:1之胺基酸殘基55-63 (GEKGPCQRV (SEQ ID NO:70))，(ii) SEQ ID NO:1之胺基酸96-107 (TLRNLQPHDAGL (SEQ ID NO:71))，及(iii) SEQ ID NO:1之胺基酸殘基126-129 (VEVL (SEQ ID NO:72))。
抗TREM2抗體之功能特徵
在一些實施例中，抗TREM2抗體(例如
，具有一或多個CDR、重鏈可變區、及/或輕鏈可變區序列之如所揭示的抗體)在如本文所揭示之一或多種TREM2活性方面起作用。舉例而言，在一些實施例中，抗TREM2抗體為調節sTREM2蛋白水準(例如
，自細胞表面脫落入細胞外樣品之sTREM2水準)、調節與TREM2/DAP12信號傳導複合物相互作用之激酶(例如
，Syk激酶)之募集或磷酸化、及/或調節信號傳導複合物下游之一或多種活性(諸如吞噬作用、細胞生長、細胞存活、細胞分化、細胞介素分泌、或細胞遷移)之抗體。在一些實施例中，如本文所揭示之抗TREM2抗體與參考抗體相比以更好效能結合健康人類CSF或獼猴CSF中之可溶性TREM2蛋白(sTREM2)。在一些實施例中，參考抗體由選自由以下組成之群之序列組合表示：SEQ ID NO:73及74；SEQ ID NO:75及76；及SEQ ID NO:77及78。在一些實施例中，基本上如實例11中所述進行功效檢定。
在一些實施例中，抗TREM2抗體增強由配體誘導之一或多種TREM2活性(例如
，本文所述之彼等者)。在一些實施例中，配體係脂質配體。TREM2脂質配體之實例包括但不限於1-棕櫚醯基-2-(5’-側氧基-戊醯基)-sn-甘油-3-磷酸膽鹼(POVPC)、2-花生四烯酸甘油(2-AG)、7-酮基膽固醇(7-KC)、24(S)羥基膽固醇(24OHC)、25(S)羥基膽固醇(25OHC)、27-羥基膽固醇(27OHC)、醯基肉鹼(AC)、烷基醯基甘油磷酸膽鹼(PAF)、α-半乳糖基神經醯胺(KRN7000)、雙(單醯基甘油)磷酸酯(BMP)、心磷脂(CL)、神經醯胺、神經醯胺-1-磷酸酯(C1P)、膽固醇酯(CE)、膽固醇磷酸酯(CP)、二醯基甘油34:1 (DG 34:1)、二醯基甘油38:4 (DG 38:4)、二醯基甘油焦磷酸酯(DGPP)、二氫神經醯胺(DhCer)、二氫神經鞘磷脂(DhSM)、醚磷脂醯膽鹼(PCe)、游離膽固醇(FC)、半乳糖基神經醯胺(GalCer)、半乳糖基神經鞘胺醇(GalSo)、神經節苷脂GM1、神經節苷脂GM3、葡糖基神經節苷脂(GlcSo)、Hank氏平衡鹽溶液(Hank’s Balanced Salt Solution，HBSS)、Kdo2-脂質A (KLA)、乳糖基神經醯胺(LacCer)、溶血體烷基醯基甘油磷酸膽鹼(LPAF)、溶血磷脂酸(LPA)、溶血卵磷脂(LPC)、溶血磷脂醯乙醇胺(LPE)、溶血磷脂醯甘油(LPG)、溶血磷脂醯肌醇(LPI)、溶血神經鞘磷脂(LSM)、溶血磷脂醯絲胺酸(LPS)、N-醯基-磷脂醯乙醇胺(NAPE)、N-醯基-絲胺酸(NSer)、經氧化磷脂醯膽鹼(oxPC)、棕櫚酸-9-羥基-硬脂酸(PAHSA)、磷脂醯乙醇胺(PE)、磷脂醯乙醇(PEtOH)、磷脂酸(PA)、磷脂醯膽鹼(PC)、磷脂醯甘油(PG)、磷脂醯肌醇(PI)、磷脂醯絲胺酸(PS)、鞘胺醇、鞘胺醇-1-磷酸酯(Sa1P)、神經鞘磷脂(SM)、神經鞘胺醇、神經鞘胺醇-1-磷酸酯(So1P)、及硫酸腦苷脂。sTREM2 脫落之調節
在一些實施例中，抗TREM2抗體改變樣品中之sTREM2蛋白水準，例如自細胞表面脫落入細胞外樣品中之sTREM2水準。在一些實施例中，抗TREM2抗體降低sTREM2水準。
在一些實施例中，若經處理樣品中sTREM2之量與對照值相比降低至少10%、至少20%、至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%或更大，則抗TREM2抗體降低sTREM2水準。在一些實施例中，若經處理樣品中sTREM2之量與對照值相比降低至少2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、或更多倍，則抗TREM2抗體降低sTREM2水準。在一些實施例中，對照值為未經處理樣品(例如，
來自尚未用抗TREM2抗體處理之表現TREM2細胞之上清液或來自尚未用抗TREM2抗體治療之受試者之樣品)或用適當非TREM2結合抗體處理之樣品中的sTREM2之量。
在一些實施例中，用包含流體之樣品量測sTREM2脫落，該樣品例如
血液、血漿、血清、尿液、或腦脊髓液。在一些實施例中，樣品為腦脊髓液。在一些實施例中，樣品包含來自細胞培養物之上清液(例如，來自內源性表現TREM2之原代細胞或細胞株諸如人類巨噬細胞或經工程化以表現TREM2之原代細胞或細胞株之上清液，例如，如以下實例部分所述)。
在一些實施例中，樣品中sTREM2之水準使用免疫檢定來量測。免疫檢定為此項技術中已知的且包括但不限於酶免疫檢定(EIA)，諸如酶多因子免疫檢定(EMIA)、酶聯免疫吸附檢定(ELISA)、微粒酶免疫檢定(MEIA)、免疫組織化學(IHC)、免疫細胞化學、毛細管電泳免疫檢定(CEIA)、放射性免疫檢定(RIA)、免疫螢光、化學發光免疫檢定(CL)、及電化學發光免疫檢定(ECL)。在一些實施例中，使用ELISA檢定來量測sTREM2水準。在一些實施例中，使用如以下實例部分所述之ELISA檢定來量測sTREM2水準。激酶募集或磷酸化之調節
在一些實施例中，抗TREM2抗體誘導與TREM2/DAP12信號傳導複合物相互作用之激酶(諸如但不限於Syk、ZAP70、PI3K、Erk、AKT、或GSK3b)的磷酸化。在一些實施例中，抗TREM2抗體誘導與TREM2/DAP12信號傳導複合物相互作用而不阻斷天然TREM2配體之結合之激酶的磷酸化。在一些實施例中，抗TREM2抗體增強與TREM2/DAP12信號傳導複合物相互作用之激酶的由TREM2配體(例如，脂質配體)誘導的磷酸化。在一些實施例中，抗TREM2抗體誘導或增強Syk之磷酸化。在一些實施例中，若經抗TREM2抗體處理之樣品中Syk磷酸化水準與對照值相比增加至少10%、至少20%、至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%或更大，則抗TREM2抗體誘導或增強Syk磷酸化。在一些實施例中，若經抗TREM2抗體處理之樣品中Syk磷酸化水準與對照值相比增加至少2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、或更多倍，則抗TREM2抗體誘導Syk磷酸化。在一些實施例中，對照值為未經處理樣品(例如，
包含尚未用抗TREM2抗體處理之表現TREM2細胞之樣品或來自尚未用抗TREM2抗體治療之受試者之樣品)、或已用TREM2配體而非抗TREM2抗體處理之樣品、或用適當非TREM2結合抗體處理之樣品中的Syk磷酸化水準。
為了偵測及/或量化樣品中之磷酸化(例如，Syk磷酸化)，在一些實施例中，使用免疫檢定。在一些實施例中，免疫檢定為酶免疫檢定(EIA)、酶多因子免疫檢定(EMIA)、酶聯免疫吸附檢定(ELISA)、微粒酶免疫檢定(MEIA)、免疫組織化學(IHC)、免疫細胞化學、毛細管電泳免疫檢定(CEIA)、放射性免疫檢定(RIA)、免疫螢光、化學發光免疫檢定(CL)、或電化學發光免疫檢定(ECL)。在一些實施例中，使用利用放大發光接近均勻檢定(amplified luminescent proximity homogenous assay)(AlphaLISA®, PerkinElmer Inc.)之免疫檢定來偵測及/或量化磷酸化。
在一些實施例中，使用包含一或多種細胞，例如一或多種表現TREM2細胞(例如，內源性表現
TREM2之原代細胞或細胞株，諸如人類巨噬細胞或iPSC源性小神經膠質細胞，或經工程化以表現TREM2之原代細胞或細胞株，例如，如以下實例部分所述)之樣品量測磷酸化。在一些實施例中，樣品包含流體，例如
血液、血漿、血清、尿液、或腦脊髓液。在一些實施例中，樣品包含組織(例如
，肺、腦、腎、脾、神經組織、或骨骼肌)或來自此組織之細胞。在一些實施例中，樣品包含內源性流體、組織、或細胞(例如
，來自人類或非人類受試者)。吞噬作用之調節
在一些實施例中，抗TREM2抗體增強對死細胞碎片、組織碎片、澱粉樣蛋白β粒子、或外來物質之吞噬作用。在一些實施例中，抗TREM2抗體增強吞噬作用而不阻斷天然TREM2配體之結合。在一些實施例中，抗TREM2抗體增強由TREM2配體(例如，脂質配體)誘導之吞噬作用。在一些實施例中，若經抗TREM2抗體處理之樣品中吞噬作用與對照值相比增加至少10%、至少20%、至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%或更大，則抗TREM2抗體增強吞噬作用。在一些實施例中，若經抗TREM2抗體處理之樣品中吞噬作用與對照值相比增加至少2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、或更多倍，則抗TREM2抗體增強吞噬作用。在一些實施例中，對照值為未經處理樣品、已用TREM2配體而非抗TREM2抗體處理之樣品、或用適當非TREM2結合抗體處理之樣品中的吞噬作用水準。
在一些實施例中，使用以經標記受質進行之吞噬作用檢定量測吞噬作用。吞噬作用檢定為此項技術中已知的。在一些實施例中，對包含內源性表現TREM2之細胞，諸如人類巨噬細胞或小神經膠質細胞的樣品進行吞噬作用檢定。在一些實施例中，對包含已經工程化以表現TREM2之細胞的樣品進行吞噬作用檢定。在一些實施例中，使用如以下實例部分所述之人類巨噬細胞吞噬作用檢定來量測吞噬作用。細胞分化、功能、遷移、及存活之調節
在一些實施例中，抗TREM2抗體增強細胞遷移、細胞存活、細胞功能、或細胞分化(例如，
關於骨髓細胞、巨噬細胞、及小神經膠質細胞，包括iPSC源性小神經膠質細胞及疾病相關小神經膠質細胞)。疾病相關小神經膠質細胞及偵測疾病相關小神經膠質細胞之方法描述於Keren-Shaul等人
,Cell
, 2017, 169:1276-1290中。在一些實施例中，抗TREM2抗體增強一或多種細胞類型(例如，
骨髓細胞、巨噬細胞、或小神經膠質細胞)之細胞遷移。在一些實施例中，抗TREM2抗體增強一或多種細胞類型(例如，
骨髓細胞、巨噬細胞、或小神經膠質細胞)之細胞存活。在一些實施例中，抗TREM2抗體增強一或多種細胞類型(例如，
骨髓細胞、巨噬細胞、或小神經膠質細胞)之細胞功能。在一些實施例中，抗TREM2抗體增強一或多種細胞類型(例如，
骨髓細胞、巨噬細胞、或小神經膠質細胞)之細胞分化。在一些實施例中，抗TREM2抗體增強骨髓細胞之遷移、存活、功能、及/或分化。在一些實施例中，抗TREM2抗體增強巨噬細胞之遷移、存活、功能、及/或分化。在一些實施例中，抗TREM2抗體增強小神經膠質細胞之遷移、存活、功能、及/或分化。在一些實施例中，抗TREM2抗體增強小神經膠質細胞活化。在一些實施例中，抗TREM2抗體增強疾病相關小神經膠質細胞之遷移、存活、功能、及/或分化。在一些實施例中，抗TREM2抗體增強細胞遷移、細胞存活、細胞功能、或細胞分化而不阻斷天然TREM2配體之結合。在一些實施例中，抗TREM2抗體增強由TREM2配體(例如，脂質配體)誘導之細胞遷移、細胞存活、細胞功能、或細胞分化。
在一些實施例中，若經抗TREM2抗體處理之樣品中活性(例如，遷移、存活、功能、或分化)水準與對照值相比增加至少10%、至少20%、至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%或更大，則抗TREM2抗體增強吞噬作用細胞遷移、細胞存活、細胞功能、或細胞分化。在一些實施例中，若經抗TREM2抗體處理之樣品中活性(例如，遷移、存活、功能、或分化)水準與對照值相比增加至少2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、或更多倍，則抗TREM2抗體增強細胞遷移、細胞存活、細胞功能、或細胞分化。在一些實施例中，對照值為未經處理樣品(例如，
尚未用抗TREM2抗體處理之樣品)、已用TREM2配體而非抗TREM2抗體處理之樣品、或用適當非TREM2結合抗體處理之樣品中的活性(例如，遷移、存活、功能、或分化)水準。
在一些實施例中，使用趨化性檢定量測細胞遷移。趨化性檢定為此項技術中已知的。在一些實施例中，對包含內源性表現TREM2之細胞，諸如人類巨噬細胞的樣品進行細胞遷移檢定(例如，趨化性檢定)。在一些實施例中，對包含已經工程化以表現TREM2之細胞的樣品進行細胞遷移檢定(例如，趨化性檢定)。在一些實施例中，使用如以下實例部分所述之人類巨噬細胞趨化性檢定來量測細胞遷移。
在一些實施例中，使用細胞活力檢定量測細胞存活。細胞活力檢定為此項技術中已知的。在一些實施例中，對包含內源性表現TREM2之細胞，諸如人類巨噬細胞的樣品進行細胞存活檢定(例如，細胞活力檢定)。在一些實施例中，對包含已經工程化以表現TREM2之細胞的樣品進行細胞存活檢定(例如，細胞活力檢定)。在一些實施例中，使用如以下實例部分所述之人類巨噬細胞活力檢定來量測細胞存活。
在一些實施例中，使用對於細胞而言適當之功能檢定量測細胞功能。舉例而言，在一些實施例中，使用吞噬作用檢定(例如，如以下實例部分所述)評估巨噬細胞功能。
在一些實施例中，藉由評估內源性表現TREM2之細胞分化之能力來量測細胞分化。舉例而言，在一些實施例中，藉由評估巨噬細胞自單核球分化之能力(例如，如以下實例部分所述)來量測細胞分化。
在一些實施例中，活體內量測小神經膠質細胞之活化。在一些實施例中，使用TSPO-PET攝影量測小神經膠質細胞活化。TSPO-PET攝影方法為此項技術中已知的。
在一些實施例中，抗TREM2抗體增強小神經膠質細胞功能，而不增加神經炎症。神經炎症水準可藉由量測細胞介素(例如，
炎症性細胞介素)之水準來確定，該等細胞介素諸如但不限於TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-1ra、TGFβ、IL-15、或IFN-γ。在一些實施例中，使用免疫檢定量測細胞介素水準，該等免疫檢定例如為酶免疫檢定(EIA)、酶多因子免疫檢定(EMIA)、酶聯免疫吸附檢定(ELISA)、微粒酶免疫檢定(MEIA)、免疫組織化學(IHC)、免疫細胞化學、毛細管電泳免疫檢定(CEIA)、放射性免疫檢定(RIA)、免疫螢光、化學發光免疫檢定(CL)、或電化學發光免疫檢定(ECL)。
IV. 抗體之製備
在一些實施例中，抗體藉由以用於誘導抗體反應之抗原或抗原混合物免疫一或多隻動物(例如
，小鼠、兔、或大鼠)來製備。在一些實施例中，投與抗原或抗原混合物以及佐劑(例如
，弗氏佐劑)。在初始免疫後，可投與該抗原或該等抗原之一或多個後續補強注射以提高抗體產生。在免疫後，例如自脾及/或淋巴組織收穫抗原特異性B細胞。為了生成單株抗體，將B細胞與骨髓細胞融合，隨後針對抗原特異性進行篩選。製備抗體之方法亦描述於以下實例部分中。
編碼所關注抗體之重鏈及輕鏈之基因可自細胞選殖，例如，編碼單株抗體之基因可自融合瘤選殖並且用於產生重組單株抗體。編碼單株抗體之重鏈及輕鏈之基因文庫亦可自融合瘤或漿細胞製備。或者，可以使用噬菌體或酵母展示技術來鑑別特異性結合到所選抗原之抗體及Fab片段。抗體亦可製成為雙特異性的，亦即能夠識別兩種不同抗原。抗體亦可為雜結合物，例如兩個共價連接抗體或免疫毒素。
抗體可使用任何數目的表現系統產生，該等表現系統包括原核及真核表現系統。在一些實施例中，表現系統為哺乳動物細胞表型，諸如融合瘤或CHO細胞表現系統。許多此類系統可廣泛獲自商業供應商。在抗體包含VH
及VL
區之實施例中，VH
及VL
區可使用單一載體，例如以雙順反子表現單元或在不同啟動子控制下來表現。在其他實施例中，VH
及VL
區可使用單獨載體表現。如本文所述之VH
或VL
區可視情況在N端包含甲硫胺酸。
在一些實施例中，抗體為嵌合抗體。用於製得嵌合抗體之方法為此項技術中已知的。舉例而言，可製成嵌合抗體，其中來自一種物種諸如小鼠之抗原結合區(重鏈可變區及輕鏈可變區)融合至另一物種諸如人類之效應子區(恆定域)。作為另一個實例，可製成「類別轉換」嵌合抗體，其中抗體之效應子區經不同免疫球蛋白類別或子類別之效應子區取代。
在一些實施例中，抗體為人源化抗體。一般而言，非人類抗體經人源化以便降低其免疫原性。人源化抗體通常包含一或多個非人類(例如，源自小鼠可變區序列)可變區(例如
，CDR)或其部分及可能一些非人類構架區或其部分，且進一步包含一或多個源自人類抗體序列之恆定區。用於使非人類抗體人源化之方法為此項技術中已知的。基因轉殖小鼠或其他生物體諸如其他哺乳動物可用於表現人源化或人類抗體。使抗體人源化之其他方法包括例如可變域表面重整、CDR移植、移植特異性決定殘基(SDR)、引導選擇、及構架改組。
作為人源化之替代方案，可生成完全人類抗體。作為非限制性實例，可產生如下基因轉殖動物(例如小鼠)，它們一旦免疫便能產生人類抗體之完整庫而不產生內源性免疫球蛋白。例如，已描述嵌合及生殖系突變小鼠中抗體重鏈接合區(JH)基因的同型缺失使內源性抗體產生受到完全抑制。將人類生殖系免疫球蛋白基因陣列轉移至該種生殖系突變小鼠中，由此將會導致在抗原激發時產生人類抗體。作為另一個實例，可藉由基於融合瘤之方法，諸如藉由使用用於生成產生人類單株抗體之細胞株的原代人類B細胞來產生人類抗體。
亦可使用噬菌體展示或酵母展示技術來產生人類抗體。在噬菌體展示中，可變重鏈及可變輕鏈基因庫在噬菌體展示載體中經擴增且表現。在一些實施例中，抗體文庫為自人類來源擴增之天然庫。在一些實施例中，抗體文庫為藉由選殖重鏈及輕鏈序列且重組以生成具有不同抗原特異性之較大抗體池來製成之合成文庫。噬菌體通常展示抗體片段(例如，Fab片段或scFv片段)，然後針對其與所關注抗原之結合進行篩選。
在一些實施例中，生成抗體片段(諸如Fab、Fab’、F(ab’)2
、scFv、VH
、或VHH
)。已開發用於產生抗體片段之各種技術。傳統上，該等片段經由蛋白水解消化完整抗體來獲得。然而，此等片段現可直接使用重組宿主細胞產生。例如，抗體片段可自抗體噬菌體文庫分離。或者，可直接自大腸桿菌細胞回收Fab'-SH片段且化學偶合以形成F(ab’)2
片段。根據另一種方法，F(ab')2
片段可直接從重組宿主細胞培養物中單離。用於產生抗體片段之其他技術將為熟悉此項技藝者顯而易知的。
在一些實施例中，抗體或抗體片段經結合至另一分子，例如聚乙二醇(PEG化)或血清白蛋白，以提供經延長之活體外半衰期。
在一些實施例中，提供包含如本文所述之抗TREM2抗體(或其抗原結合片段)的多特異性抗體，例如雙特異性抗體。多特異性抗體爲對至少兩個不同位點具有結合特異性之抗體。在一些實施例中，多特異性抗體(例如，
雙特異性抗體)對TREM2具有結合特異性且對至少一個其他抗原具有結合特異性。在一些實施例中，多特異性抗體(例如
，雙特異性抗體)結合到兩個不同TREM2抗原決定基。在一些實施例中，多特異性抗體(例如，
雙特異性抗體)能夠在細胞表面處誘導TREM2聚集。用於使用共焦FRET顯微術量測受體聚集之例示性方法描述於Wallrabe等人
,Biophys. J.
, 2003, 85:559-571。製成多特異性抗體(例如，
雙特異性抗體)之方法包括但不限於在宿主細胞中重組共表現兩對重鏈及輕鏈、「孔中結(knob-into-hole)」工程化、分子內三聚化、及將抗體片段融合至另一抗體之N端或C端，例如串聯可變域。
V. 核酸、載體、及宿主細胞
在一些實施例中，使用重組方法製備如本文所揭示之抗TREM2抗體。因此，在一些態樣中，本揭露提供包含編碼任一種如本文所述之抗TREM2抗體(例如，本文所述之CDR、重鏈可變區、及輕鏈可變區中之任一或多個)之核酸序列的經分離核酸；包含此類核酸之載體；引入該等核酸以用於複製編碼抗體之核酸且/或表現該等抗體之宿主細胞。
在一些實施例中，多核苷酸(例如，經分離多核苷酸)包含編碼如本文所述之抗體或其抗原結合部分(例如，如以上題為「抗TREM2抗體序列」之部分所述)之核苷酸序列。在一些實施例中，多核苷酸包含編碼以下非正式序列表中揭示之一或多個胺基酸序列(例如，
CDR、重鏈、或輕鏈序列)的核苷酸序列。在一些實施例中，多核苷酸包含編碼與以下非正式序列表中所揭示之序列(例如CDR、重鏈、或輕鏈序列)具有至少85%序列一致性(例如
，至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%序列一致性)之胺基酸序列的核苷酸序列。在一些實施例中，如本文所述之多核苷酸可操作連接至異源核酸，例如
異源啟動子。
含有編碼本揭露之抗體之多核苷酸或其片段的適合載體包括選殖載體及表現載體。雖然所選之選殖載體可根據預期使用之宿主細胞而改變，有用選殖載體通常具有自我複製能力，可具有特定限制性內切核酸酶之單一靶標，且/或可攜帶可用於選擇含有該載體之純系的標記物的基因。實例包括質體及細菌病毒，例如
pUC18、pUC19、Bluescript (例如
pBS SK+)及其衍生物、mpl8、mpl9、pBR322、pMB9、ColE1、pCR1、RP4、噬菌体DNA、及穿梭載體諸如pSA3及pAT28。該等及許多其他選殖載體可獲自商業供應商，諸如BioRad、Strategene、及Invitrogen。
表現載體通常為含有本揭露之核酸的可複製多核苷酸構築體。表現載體可在宿主細胞中複製，呈遊離體形式或作為染色體DNA之整體部分。適合表現載體包括但不限於質體、病毒載體、及任何其他載體，該等病毒載體包括腺病毒、腺相關病毒、逆轉錄病毒。
適用於選殖或表現如本文所述之多核苷酸或載體之宿主細胞包括原核或真核細胞。在一些實施例中，宿主細胞為原核細胞。在一些實施例中，宿主細胞為真核細胞，例如
中國倉鼠卵巢(CHO)細胞或淋巴細胞。在一些實施例中，宿主細胞為人類細胞，例如
人類胚胎腎(HEK)細胞。
在另一態樣中，提供製成如本文所述之抗TREM2抗體的方法。在一些實施例中，該方法包含在適用於表現抗體之條件下培養如本文所述之宿主細胞(例如
，表現如本文所述之多核苷酸或載體之宿主細胞)。在一些實施例中，隨後自宿主細胞(或宿主細胞培養基)回收抗體。
VI. 使用抗TREM2抗體之治療方法
在另一態樣中，提供使用如本文所揭示之抗TREM2抗體(例如
，如以上部分III中所述之抗TREM2抗體)之治療方法。在一些實施例中，提供治療神經退化性疾病之方法。在一些實施例中，提供調節一或多種TREM2活性(例如，患有神經退化性疾病之受試者中)之方法。
在一些實施例中，提供治療神經退化性疾病之方法。在一些實施例中，神經退化性疾病選自由以下組成之群：阿茲海默氏病、原發性年齡相關tau蛋白病、進行性核上性麻痺(PSP)、額顳葉型癡呆、額顳葉型癡呆伴與染色體17相關之帕金森症、嗜銀顆粒性癡呆、肌萎縮側索硬化症、肌萎縮側索硬化症/關島型帕金森氏症-癡呆綜合症(ALS-PDC)、皮質基底核退化症、慢性創傷性腦病、庫賈氏病(Creutzfeldt-Jakob disease)、拳擊員癡呆、具有鈣化之擴散性神經原纖維纏結、唐氏症候群、家族性英國型癡呆、家族性丹麥型癡呆、格施謝三氏症(Gerstmann-Straussler-Scheinker disease)、球狀神經膠tau蛋白病、瓜達洛普帕金森氏病伴癡呆(Guadeloupean parkinsonism with dementia)、瓜達洛普PSP、哈-斯二氏病(Hallevorden-Spatz disease)、遺傳性彌漫性腦白質病伴癡呆(HDLS)、杭丁頓氏病、包涵體肌炎、多系統萎縮症、肌強直性營養不良、Nasu-Hakola病、神經原纖維纏結佔優性癡呆、C型尼-皮二氏病(Niemann-Pick disease type C)、蒼白球-腦橋-黑質變性、帕金森氏病、皮克氏病(Pick’s disease)、腦炎後帕金森氏症、朊病毒蛋白大腦澱粉樣血管病、進行性皮層下神經膠瘤病、亞急性硬化性全腦炎、及僅纏結性癡呆。在一些實施例中，神經退化性疾病為阿茲海默氏病。在一些實施例中，神經退化性疾病為Nasu-Hakola病。在一些實施例中，神經退化性疾病為額顳葉型癡呆。在一些實施例中，神經退化性疾病為帕金森氏病。在一些實施例中，該方法包含向該受試者投與特異性結合到人類TREM2蛋白之經分離抗體或其抗原結合片段(例如如本文所述之抗TREM2抗體)或包含如本文所述之抗TREM2抗體的醫藥組成物。
在一些實施例中，如本文所述之抗TREM2抗體(或其抗原結合部分或醫藥組成物)用於治療特徵在於TREM2之突變的神經退化性疾病。在一些實施例中，特徵在於TREM2之突變的神經退化性疾病為阿茲海默氏病，例如
特徵在於TREM2之R47H突變的阿茲海默氏病。
在一些實施例中，提供調節受試者中(例如，患有神經退化性疾病之受試者中)之一或多種TREM2活性之方法。在一些實施例中，該方法包含調節sTREM2水準；調節與TREM2/DAP12信號傳導複合物相互作用之激酶(例如
，Syk激酶)之募集或磷酸化；調節吞噬作用(例如
，對細胞碎片、澱粉樣蛋白β粒子等之吞噬作用)；調節細胞遷移(例如
，骨髓細胞、巨噬細胞、小神經膠質細胞、及疾病相關小神經膠質細胞之遷移)；及/或調節細胞分化(例如，
關於骨髓細胞、巨噬細胞、小神經膠質細胞、及疾病相關小神經膠質細胞)。在一些實施例中，提供增強患有神經退化性疾病之受試者中之一或多種TREM2活性的方法。在一些實施例中，提供降低患有神經退化性疾病之受試者之sTREM2水準的方法。在一些實施例中，調節受試者中之一或多種TREM2活性的方法包含向該受試者投與特異性結合到人類TREM2蛋白之經分離抗體或其抗原結合部分(例如，如本文所述之抗TREM2抗體)或包含如本文所述之抗TREM2抗體的醫藥組成物。
在一些實施例中，欲治療受試者為人類，例如
人類成人或人類兒童。
在一些實施例中，提供減少患有神經退化性疾病之受試者中之斑塊積聚的方法。在一些實施例中，該方法包含向受試者投與如本文所述之抗體或醫藥組成物。在一些實施例中，受試者患有阿茲海默氏病。在一些實施例中，受試者為神經退化性疾病之動物模型(例如
，5XFAD或APP/PS1小鼠模型)。在一些實施例中，斑塊積聚藉由澱粉樣蛋白斑塊攝影及/或Tau攝影，例如
使用正電子發射斷層攝影(PET)掃描來量測。在一些實施例中，投與抗TREM2抗體使斑塊積聚與基線值(例如，在投與抗TREM2抗體前受試者中之斑塊積聚水準)相比減少至少20%、至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、或至少90%。
在一些實施例中，向受試者投與治療有效量或劑量之抗TREM2抗體。可使用每日劑量範圍為約0.01 mg/kg至約500 mg/kg、或約0.1 mg/kg至約200 mg/kg、或約1 mg/kg至約100 mg/kg、或約10 mg/kg至約50 mg/kg。然而，該等劑量可根據若干種因素而變化，該等因素包括所選投與路徑、組成物之調配、患者反應、病狀之嚴重性、受試者體重、及處方醫師之判斷。劑量可隨時間推移按個別患者所要求而增強或減小。在某些情況下，最初向患者給予低劑量，然後增加至患者可耐受之有效劑量。有效量之確定完全在熟習此項技術者之能力範圍內。
如本文所述之抗TREM2抗體之投與路徑可為經口、腹膜內、經皮、皮下、靜脈內、肌肉內、鞘內、吸入、局部、病灶內、直腸、支氣管內、經鼻、經黏膜、腸內、眼部或經耳遞送、或此項技術中已知之任何其他方法。在一些實施例中，抗體係經口、靜脈內或腹膜內投與。
在一些實施例中，向受試者投與抗TREM2抗體(及視情況另一種治療劑)延長時間段，例如達至少30、40、50、60、70、80、90、100、150、200、250、300、350日或更長時間。
VII. 醫藥組成物及套組
在另一個態樣中，提供包含特異性結合到人類TREM2蛋白之抗體之醫藥組成物及套組。在一些實施例中，該等醫藥組成物及套組係用於治療神經退化性疾病。在一些實施例中，醫藥組成物及套組係用於調節(例如
，增強或抑制)一或多種TREM2活性，例如
Syk磷酸化。在一些實施例中，該等醫藥組成物及套組係用於調節(例如
，降低) sTREM2水準。
醫藥組成物
在一些實施例中，提供包含抗TREM2抗體或其抗原結合片段之醫藥組成物。在一些實施例中，抗TREM2抗體為以上部分III中所述之抗體或其抗原結合片段。
在一些實施例中，醫藥組成物包含如本文所述之抗TREM2抗體且進一步包含一或多種醫藥學上可接受之載劑及/或賦形劑。醫藥學上可接受之載劑包括生理上相容且不干擾或以其他方式抑制活性劑活性之任何溶劑、分散介質、或包衣劑。各種醫藥學上可接受之賦形劑為此項技術中熟知的。
在一些實施例中，載劑適用於靜脈內、肌肉內、經口、腹膜內、鞘內、經皮、局部、或皮下投與。醫藥學上可接受之載劑可含有一或多種生理學上可接受之化合物，其例如用於使組成物穩定或增強或減少活性劑之吸收。生理學上可接受之化合物可包括例如碳水化合物，諸如葡萄糖、蔗糖、或葡聚糖；抗氧化劑，諸如抗壞血酸或麩胱甘肽；螯合劑；低分子量蛋白；減小活性劑之清除率或水解之組成物；或賦形劑；或其他穩定劑及/或緩衝劑。其他醫藥學上可接受之載劑及其調配物為此項技術中熟知的。
本文所述之醫藥組成物可以熟悉此項技藝者已知之方式，例如藉助於習知混合、溶解、粒化、糖衣錠製備、乳化、囊封、覆埋或凍乾製程來製造。以下方法及賦形劑僅為示範性的且絕非限制性。
對於經口投與，抗TREM2抗體可藉由將其與此項技術中熟知之醫藥學上可接受之載劑組合來調配。此類載劑允許將該等化合物調配為錠劑、丸劑、糖衣錠、膠囊、乳液、親脂性及親水性懸浮液、液體、凝膠、糖漿、漿料、懸浮液及其類似者，用於所治療之患者經口攝取。經口使用之醫藥製劑可藉由將化合物與固體賦形劑混合物、視情況研磨所得混合物、且需要時在加入合適助劑後加工顆粒混合物來獲得以獲得錠劑或糖衣丸核心。適合賦形劑包括例如填充劑，諸如糖，包括乳糖、蔗糖、甘露醇或山梨糖醇；纖維素製劑，諸如玉米澱粉、小麥澱粉、大米澱粉、馬鈴薯澱粉、明膠、黃芪膠、甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉、及/或聚乙烯基吡咯啶酮(PVP)。需要時，可添加崩解劑，諸如交聯聚乙烯基吡咯啶酮、瓊脂、或海藻酸或其鹽如海藻酸鈉。
抗TREM2抗體可經調配用於藉由注射，例如藉由團式注射或連續輸注進行非經腸投藥。對於注射，可藉由將該或該等化合物溶解、懸浮或乳化於水性或非水性溶劑(諸如植物油或其他類似油、合成脂肪酸甘油酯、高級脂肪酸之酯或丙二醇)中；及必要時連同習知添加劑(諸如增溶劑、等張劑、懸浮劑、乳化劑、穩定劑及防腐劑)一起而將其調配為製劑。在一些實施例中，化合物可於水溶液中，例如
於生理學上相容之緩衝液(諸如漢克斯氏溶液(Hanks’s）、林格氏溶液(Ringer’s solution)或生理食鹽水緩衝液)中調配。用於注射之調配物可在添加防腐劑的情況下以單位劑形，例如在安瓿或多劑量容器中呈現。組成物可採用諸如於油性或水性媒劑中之懸浮液、溶液或乳液之形式，且可含有調配劑，諸如懸浮劑、穩定劑及/或分散劑。
在一些實施例中，抗TREM2抗體經製備用於以持續釋放、受控釋放、延長釋放、定時釋放或延遲釋放調配物，例如以含有活性劑之固體疏水性聚合物之可半滲透基質遞送。各種類型的持續釋放材料已得到確立且為熟習此項技術者熟知。當前延長釋放調配物包括膜包衣錠劑、多微粒或球粒系統、使用親水性或親脂性材料之基質技術及具有成孔賦形劑之基於蠟之錠劑。持續釋放遞送系統可根據其設計在數小時或數日時程內，例如4、6、8、10、12、16、20、24小時或日內釋放該等化合物。通常，持續釋放調配物可使用天然存在或合成聚合物來製備，該等聚合物例如聚合乙烯基吡咯啶酮，諸如聚乙烯基吡咯啶酮(PVP)；羧基乙烯基親水性聚合物；疏水性及/或親水性水膠體，諸如甲基纖維素、乙基纖維素、羥丙基纖維素、及羥丙基甲基纖維素；及羧基聚伸甲基。
通常，用於活體內投與之醫藥組成物係無菌的。滅菌可根據此項技術中已知之方法完成，該等方法例如熱滅菌、蒸汽滅菌、無菌過濾、或輻射。
本揭露之醫藥組成物的劑量及所要藥物濃度可視預期之特定用途而變化。適當劑量或投藥路徑之確定完全在熟悉此項技藝者之技能範圍內。適合劑量亦描述於以上部分VI中。
套組
在一些實施例中，提供包含抗TREM2抗體或其抗原結合片段之套組。在一些實施例中，抗TREM2抗體為以上部分III中所述之抗體或其抗原結合片段。
在一些實施例中，該套組進一步包含一或多種額外治療劑。舉例而言，在一些實施例中，該套組包含如本文所述之抗TREM2抗體且進一步包含用於治療神經退化性疾病例如
阿茲海默氏病之一或多種額外治療劑。在一些實施例中，治療劑為用於治療神經退化性疾病之認知或行為症狀之藥劑(例如，抗抑鬱藥、多巴胺促效劑、或抗精神病藥)。在一些實施例中，治療劑為神經保護劑(例如
，卡比多巴/左旋多巴、抗膽鹼劑、多巴胺激導性劑、單胺氧化酶B (MAO-B)抑制劑、兒茶酚-O-甲基轉移酶(COMT)抑制劑、谷胺酸激導性劑、組蛋白去乙醯酶(HDAC)抑制劑、***素、半胱天冬酶抑制劑、抑黑素、消炎劑、激素(例如
，***或孕酮)、或維生素)。
在一些實施例中，套組包含如本文所述之抗TREM抗體且進一步包含一或多種用於量測sTREM2水準之試劑。在一些實施例中，套組包含如本文所述之抗TREM抗體且進一步包含一或多種用於量測TREM2活性(例如
，用於量測Syk磷酸化)之試劑。
在一些實施例中，套組進一步包含含有用於實踐本文所述之方法之指南(亦即，方案)的說明性材料(例如
，用於使用套組進行如以上部分VI中所述之治療方法的說明書)。雖然說明性材料通常包含書寫或列印材料，但其不限於此類材料。本揭露涵蓋能夠存儲此類說明書且向最終使用者傳達該等說明之任何介質。此類介質包括但不限於電子存儲介質(例如
，磁盤、磁帶、磁匣、晶片)、光學介質(例如
，CD-ROM)等。此類介質可包括提供此類說明性材料之網際網路網站地址。
VIII. 實例
本發明將藉助於特定實例更詳細地加以描述。提供以下實例以僅達成說明性目的，且不欲以任何方式限制本發明。實例 1. 抗 TREM2 抗體之生成及初始表徵 小鼠 Fc 融合之人類 TREM2 ECD 之重組表現及純化
將人類TREM2 (UniProtKB ID - Q9NZC2)之胞外域(殘基19-172)亞選殖到具有來自小鼠IgG κ鏈V-III之分泌信號之pRK載體中，將胺基酸1-20 (UniProtKB ID – P01661)亞選殖在N端區域，且將小鼠Fc標籤亞選殖在具有GGGGS (SEQ ID NO:64)之C端區域的TREM2 ECD與Fc之間。
使用Expi293F™表現系統套組根據製造商說明書將經純化質體轉染到Expi293F™細胞(Thermo Fisher)中。為了抑制經N-連接聚糖之成熟且減少糖基化異質性，在轉染後立即將高甘露糖苷酶I抑制劑幾夫鹼(Sigma)以1 μg/mL濃度添加到培養基中。在6% CO2
加濕氣氛下在125 rpm且37℃回轉式振盪器(Infors HT Multitron)中培育經轉染細胞。在轉染後16小時將ExpiFectamine™ 293轉染增強子1及2添加到細胞中，且在轉染後96小時收穫培養基上清液。向澄清上清液中補充無EDTA蛋白酶抑制劑(Roche)且將其保存於-80℃下。
對於rhTREM2-Fc分離，將澄清培養基上清液裝載在HiTrap MabSelect SuRe蛋白A親和管柱(GE Healthcare Life Sciences)上且以200 mM精胺酸及137 mM琥珀酸鹽緩衝液pH 5.0洗滌。在100 mM QB檸檬酸鹽緩衝液pH 3.0及50 mM NaCl中溶離融合蛋白。恰好在溶離後，將1M Tris-HCl緩衝液pH 8.0添加到蛋白溶液中以中和該pH。藉由尺寸排阻層析法(SEC)在Superdex 200 increase 10/300 GL管柱(GE Healthcare Life Sciences)上分離蛋白聚集物。將SEC流動相緩衝液保持在20 mM Tris-HCl pH 8.0、100 mM NaCl及50 mM精胺酸下，其亦為蛋白保存緩衝液。在AKTA純或AKTA Avant系統(GE Healthcare Life Sciences)上進行全部層析步驟。His- 標記之 TREM2 ECD 之重組表現及純化
將TREM2 (UniProtKB - Q9NZC2)之胞外域(殘基19-172)亞選殖到具有來自小鼠Ig κ鏈V-III之分泌信號之pRK載體中，將胺基酸1-20 (UniProtKB ID – P01661)亞選殖在N端區域，且將6X-His tag (SEQ ID NO:65)亞選殖在C端區域。藉由測序驗證***物且進行maxi製備型質體純化。
使用Expi293F™表現系統套組根據製造商說明書將經純化質體轉染到Expi293F™細胞(Thermo Fisher)中。在6% CO2
加濕氣氛下在125 rpm且37℃回轉式振盪器(Infors HT Multitron)中培育經轉染細胞。在轉染後16小時將ExpiFectamine™ 293轉染增強子1及2添加到細胞中，且在轉染後96小時收穫培養基上清液。
向收穫培養基中補充1M吲哚pH 8.0至10 mM最終濃度且用孔徑為0.4微米之Nalgene™ Rapid-Flow™一次性過濾單元(Thermo Fisher)過濾。將HisPur™ Ni-NTA樹脂(Thermo Fisher)用MQ水洗滌且用裝載緩衝液(20 mM Tris pH 8.0、150 mM NaCl、及10 mM吲哚)平衡。使用重力流動方法進行親和純化。將所收穫培養基裝載到樹脂上且將非特異性結合蛋白用補充50 mM及100 mM吲哚之裝載緩衝液洗滌。將結合的經His標記TREM2胞外域用20 mM Tris pH 8.0、150 mM NaCl、及200 mM吲哚溶離。使用Amicon 10 kDa濃縮機濃縮經溶離蛋白且藉由凝膠過濾層析使用AKTA Avant系統(GE Healthcare Life Sciences)進一步純化該濃縮蛋白。將該蛋白裝載到以1x PBS平衡之HiLoad Superdex 200 16/600 (GE Healthcare Life Sciences)管柱上且用1x PBS作為運行緩衝液溶離及分離。藉由在變性基天然條件下在聚丙烯醯胺(PAGE)凝膠上進行電泳來分析經溶離流份。藉由分析型尺寸排阻層析法及完整蛋白質量測定進一步表徵經溶離流份。使用來自PAGE及分析型表徵之結果來合併高度糖基化蛋白流分且將該對流分等分且保存於-80℃下。抗體之生成
使用標準方案使用rhTREM2-Fc免疫原或表現全長Trem2受體之BWZ細胞免疫齧齒動物(小鼠及大鼠)。貫穿免疫使用不同時間點收集之血清量測效價。使用流動式細胞測量術用rhTREM2-Fc免疫原及表現全長TREM2之活BWZ細胞進行抗原特異性免疫反應之偵測。候選抗體之選擇標準包括齧齒動物抗體產生及與TREM2結合之特異性，如藉由流動式細胞測量術所偵測。自動物免疫組織(包括脾、淋巴結及骨髓)分離抗體分泌細胞。
分析單細胞懸浮液以確定所分泌抗體之結合特性。將抗體分泌細胞裝載到微流體裝置且在奈升體積反應室中分離以便能夠使用螢光及基於明場影像之顯微術檢定偵測所分泌抗體(參見
例如美國專利第9,188,593號)。進行結合檢定，其涉及偵測抗體與抗原塗覆微珠之結合、偵測可溶性經螢光標記抗原與珠粒上固定之抗體之結合、及偵測抗體與細胞表面表現抗原之結合。細胞表面表現抗原包括細胞表面上呈遞之抗原的重組形式及天然形式。
使用影像分析鑑別展示陽性螢光信號之腔室，這指示產生具有所要特性之抗體的單細胞之存在，且回收腔室內容物並在384孔盤中裂解(參見例如
美國專利第10,087,408號)。然後使單細胞裂解物經歷RT-PCR以擴增重鏈及輕鏈可變區序列。然後對所得擴增子進行測序以確定來自所選單細胞之配對重鏈及輕鏈可變區的cDNA序列。手動檢查所得序列且分析以確定序列多樣性及體細胞高突變. 基於篩選資料及序列多樣性選擇序列用於表現。對所選抗體進行測試以證實抗原結合特異性。抗 TREM2 抗體之初級篩選
如下在表現TREM2之HEK 293細胞、野生型iPSC、及TREM2剔除iPSC中進行抗體之初級篩選。1. 在表現 TREM2 之 HEK 細胞中篩選 TREM2 結合
藉由用分別表現野生型人類TREM2及DAP12及單獨DAP12之載體轉染細胞來生成穩定表現人類TREM2/DAP12之HEK 293細胞株。選擇穩定表現純系，且藉由流動式細胞測量術評估細胞表面TREM2表現。使用經APC結合之大鼠抗人類/小鼠TREM2單株抗體(R&D，目錄號MAB17291)來偵測表面TREM2表現。選擇展示最高野生型TREM2表現水準之純系且將其命名為「HEK293-H6」。藉由西方墨點法分析穩定表現DAP12之純系，且將所選純系命名為「HEK293-DAP12#1」。
藉由0.05%胰蛋白酶收穫過表現人類TREM2 (HEK293-H6)之HEK 293及過表現GFP (B5)之HEK 293且在37℃下培育2小時。在培育後，將細胞離心且以FACS緩衝液(PBS + 0.5% BSA)洗滌兩次。將混合細胞以每種細胞株106
/mL之密度重懸於具有人類Trustain FcX溶液(Biolegend，目錄號422302)之FACS緩衝液中。將混合細胞以200,000個細胞/孔接種在96孔圓底盤中且在室溫下培育20分鐘。在培育後，將細胞離心且與約0 – 200 nM劑量效價之抗TREM2抗體一起在冰上培育45分鐘。在培育後，將細胞離心且用FACS緩衝液洗滌三次。然後將細胞與二級抗體(Alexa Fluor 647 AffiniPure F(ab’)2片段山羊抗人類IgG(H+L), Jackson ImmunoResearch Laboratories，目錄號109-606-088，1:800稀釋)一起在冰上培育30分鐘。在培育後，將細胞用FACS緩衝液洗滌三次，將其重懸浮於100 μL FACS緩衝液中，且藉由流動式細胞測量術(BD FACSCanto II, San Jose, CA)分析，對於各樣品獲得30,000個事件。藉由FlowJo軟體計算每種細胞之平均螢光強度且將其用於生成劑量反應結合曲線。
圖 1
示出結合HEK293-H6細胞中之細胞表面受體TREM2之示範性抗體的代表性結果。對 TREM2 依賴性 pSyk 信號傳導之活化的評估
在人類巨噬細胞或HEK293-H6細胞中使用來自Perkin-Elmer之商用AlphaLisa檢定量測TREM2依賴性pSyk信號傳導之活化。
對於涉及使用含有70% DOPC及30% POPS之脂質囊泡的所有實驗，在實驗之兩週內如下製備脂質囊泡：將7 mg DOPC (1,2-二油醯基-sn
-甘油-3-磷酸膽鹼)及3 mg POPS (1-棕櫚醯基-2-油醯基-sn
-甘油-3-磷酸-L-絲胺酸)合併於玻璃小瓶之氯仿中且在N2
氣體流下乾燥1-2小時或直至完全乾燥。將脂質混合物重懸浮於1 mL HBSS (最終脂質濃度為約10 mg/mL)且渦旋2-3分鐘。隨後，使用以一個100-nm孔徑膜構築之Avanti微型擠壓機擠壓脂質懸浮液以形成10 mg/mL小單層囊泡。1. 細胞中抗體之給藥
檢定前一日，將人類巨噬細胞或HEK293-H6細胞分別以100,000個細胞/孔或40,000個細胞/孔接種在塗覆聚-D-離胺酸之96孔盤上。將抗體以300 nM開始稀釋到PBS中且以10點連續稀釋滴定繼續，各點之間有3倍稀釋。對於拮抗劑劑量反應曲線，在抗體/PBS混合物中亦包括1 mg/mL最終濃度之含有70% DOPC及30% POPS之脂質囊泡。使用Biotek 405/406盤洗滌器將細胞用HBSS洗滌3次，之後使用Hamilton Nimbus液體處理器每孔添加50 μL抗體/PBS (具有或不具有囊泡)。然後將盤轉移至37℃培育器達5分鐘。藉由輕擊該盤來去除脂質體/抗體溶液，且使用液體處理器添加含有1 μM PMSF之40 μL裂解緩衝液(Cell Signaling Technologies, CST)。然後將裂解物冷凍在-80℃下或立即以AlphaLisa檢定進行檢定。
製備人類巨噬細胞用於如下檢定。根據RosetteSep人類單核球募集混合方案(Stemcell Technologies, REF#15068)自新鮮血液分離人類單核球。將經分離單核球以洗滌緩衝液(PBS+2% FBS)洗滌且重懸浮於10 mL ACK裂解緩衝液(ThermoFisher Scientific，目錄號A10492)中以裂解紅血細胞。添加二十(20) mL洗滌緩衝液以終止細胞裂解，且將樣品離心且再一次以培養基(RPMI、10% Hyclone FBS、1%丙酮酸鈉、1% Glutamax、1%非必需胺基酸、及1%青黴素-鏈黴素)洗滌。然後在250-mL燒瓶中在培養基中在50 ng/mL人類重組M-CSF (Gibco，目錄號PHC9501)存在下使人類單核球分化成巨噬細胞。在第3日摻入新鮮人類M-CSF且隨後在第5日收穫人類巨噬細胞並用於檢定。2. AlphaLisa 檢定
使用Perkin Elmer pSyk AlphaLisa套組之標準方案檢定細胞裂解物之pSyk。簡言之，將10 μL裂解物/孔轉移至百色不透明384孔Optiplate (Perkin Elmer)。接著，每孔添加5 μL Acceptor Mix (含有受體珠粒之工作溶液)，隨後以鋁箔密封盤且在室溫下培育1小時。隨後，在減少光照條件下向各孔添加5 μL Donor Mix (含有供體珠粒之工作溶液)。再次密封盤且在室溫下培育1小時。最後，在Perkin Elmer EnVision盤讀取器上使用AlphaLisa設置讀取該等盤。
圖 2
示出原代人類巨噬細胞中pSyk信號活化之代表性抗TREM2抗體劑量反應曲線。實心黑色圓圈(●)表示抗TREM2抗體，且空心白色圓圈(º)表示同型對照。各曲線表示獨立實驗之平均值，且EC50
值提供於以下表1中。結果指示抗TREM2抗體能夠活化原代人類巨噬細胞中之TREM2-DAP12 ITAM信號傳導。iPSC 小神經膠質細胞中之脂質體反應檢定
TREM2促效劑抗體及含有磷脂醯絲胺酸之脂質體經由TREM2活化pSyk。為了理解在脂質體存在下抗TREM2抗體對Syk信號傳導之作用，將iPSC小神經膠質細胞用抗TREM2抗體預處理，隨後評定細胞中之脂質體反應。
在檢定前，首先使用可商購獲得之套組(來自StemCell Technologies之STEMdiff Hematopoietic套組)使iPSC分化成造血先驅細胞(HPC)。將HPC轉移至含有原代人類星形細胞之盤中且共培養14-21日。一旦共培養中之浮動細胞主要鑑別為成熟小神經膠質細胞(＞80%)，則將該小神經膠質細胞用於檢定。
在檢定前兩日，將人類iPSC小神經膠質細胞以30,000個細胞/孔接種在塗覆聚-D-離胺酸之96孔盤上。將抗體以100 nM稀釋到含有IMDM、10% Hyclone FBS、及1%青黴素-鏈黴素之培養基中，且向該等細胞給予抗體溶液達24小時或在37℃下達5分鐘。隨後，將細胞用HBSS洗滌一次且然後在37℃下給予1 mg/mL含有70% DOPC及30% POPS之脂質囊泡達5分鐘。藉由輕擊該盤來去除脂質體溶液，且添加30 μL含有1 µM PMSF之裂解緩衝液(Cell Signaling Technologies, CST)。然後將裂解物冷凍在-80℃下或立即以AlphaLisa檢定進行檢定。如上文所述使用Perkin Elmer pSyk AlphaLisa套組之標準方案檢定細胞裂解物之pSyk。
圖 3A 及圖 3B
示出與抗TREM2抗體一起培育、隨後給予脂質囊泡且評定細胞中之脂質體反應之人類iPSC小神經膠質細胞中的pSyk信號活化。白條指示使用PBS代替脂質囊泡作為對照進行之培育。資料指示2-7個獨立實驗之平均值及標準誤差。圖 3A
示出用抗體預處理5分鐘之iPSC小神經膠質細胞的資料，且圖 3B
示出用抗體預處理24小時之iPSC小神經膠質細胞的資料。結果顯示用抗TREM2抗體預處理人類iPSC小神經膠質細胞使得經脂質體引發之磷酸Syk信號與同型對照相比增加，這表明抗TREM2抗體不會干擾、相反會增強細胞中之pSyk信號傳導的脂質活化。人類 TREM2 NFAT 報告基因檢定
如下生成人類TREM2/DAP12表現Jurkat NFAT細胞株。用表現人類TREM2及DAP12之慢病毒載體感染Jurkat NFAT報告基因細胞且在含有10% Hyclone FBS及1%親黴素/鏈黴素之RPMI中培養。在嘌黴素及吉歐黴素存在下選擇穩定表現之純系。藉由流動式細胞測量儀使用生物素化抗TREM2抗體(SEQ ID NO:66及67)評估細胞表面TREM2表現。選擇顯示最高野生型TREM2表現水準之純系且將其命名為hTrem2/NFAT Jurkat報告基因細胞以用於下文所述之檢定。
在檢定前一日，將96孔盤用0-500 nM劑量滴度(45 μL/孔，總計12點)之抗TREM2抗體或同型對照預塗覆，且在4℃下培育隔夜。在隔夜培育後，將預塗覆盤用PBS洗滌兩次且然後裝載200 μL新鮮培養基(具有10% Hyclone FBS及1%親黴素/鏈黴素之RPMI)中之hTrem2/NFAT Jurkat報告基因細胞(106
個細胞/孔)。將盤在37℃下培育24小時，之後向各孔中添加50 μL/孔quantlucia溶液，且良好混合。對於分析，自各孔中移出20 μL溶液且將其轉移至384孔白色盤以用於藉由光度計(Perkin Elmer Envision)量測信號。
圖 4
包括如藉由偵測報告基因螢光素酶所量測之用於活化NFAT的代表性抗TREM2抗體劑量反應曲線且活化之EC50
值提供於以下表1中。圖 4
中之結果顯示相對於同型對照，候選抗TREM2抗體能夠誘導NFAT活化及足夠下游信號傳導以活化轉錄反應。人類巨噬細胞之存活檢定
根據RosetteSep人類單核球募集混合方案(Stemcell Technologies)分離人類單核球。將經分離單核球以洗滌緩衝液(PBS+2% FBS)洗滌且重懸浮於10 mL ACK裂解溶液(ThermoFisher Scientific，目錄號A10492)中以裂解紅血細胞。添加二十(20) mL洗滌緩衝液以終止裂解。將細胞懸浮液離心並用培養基(RPMI 1640 + 10% FBS + 青黴素/鏈黴素)洗滌一次。將細胞以106
個細胞μL/mL之密度重懸浮於培養基中且用於下文所述之存活檢定中。
在檢定前一日，將96孔盤用0-200 nM劑量滴度(45 μL/孔，總計12點)之抗TREM2抗體或同型對照預塗覆，且在4℃下培育隔夜。在隔夜培育後，將預塗覆盤用PBS洗滌兩次且然後在低濃度人類M-CSF (5 ng/mL, Gibco，目錄號PHC9501)存在下裝載人類單核球(105
個細胞/孔)。在37℃下5日後，抽吸培養基，且向各孔中添加100 μL PBS + 100 μL Celltiter-glo培養基(Promega，目錄號G7571)。在培育10分鐘後，將細胞培養基轉移至對於光度計用途相容之多孔盤，且記錄細胞活力之發光。
圖 5
示出在低M-CSF條件下人類巨噬細胞中之細胞存活的代表性抗TREM2抗體劑量反應曲線，且存活之EC50
值提供於以下表1中。結果指示TREM2促效劑抗體具有誘導轉錄反應之足夠受體活化能力以用於在M-CSF條件下調節細胞功能且促進人類巨噬細胞之存活。抗體之 Biacore 動力學量測
使用表面電漿子共振(Biacore™ 8K instrument)來量測抗TREM2抗體對人類及獼猴TREM2 ECD之親和力。使用人類Fab捕獲套組(GE Healthcare Life Sciences，目錄號28958325)在Biacore系列S CM5感測器晶片(GE Healthcare Life Sciences，目錄號29149604)上捕獲抗TREM2抗體。以30 µL/min流速注射重組人類或獼猴TREM2之系列3倍稀釋液。在HBS-EP+運行緩衝液(GE Healthcare Life Sciences，目錄號BR100669)中，監測抗體結合達300秒，隨後監測抗體解離達600+秒。藉由自空白流量池減去RU值來校正結合反應。使用kon
及koff
之同時擬合之1:1 Languir模型進行動力學分析。KD
結合值提供於以下表1中。
表1. 抗體之活體外特徵
NB: 未偵測到結合
ND：未確定實例 2. 人類巨噬細胞中可溶性 TREM2 水準及吞噬作用行為之調節 人類巨噬細胞中可溶性 TREM2 劑量反應檢定
| 抗體 | Biacore hTREM2 KD (nM) | Biacore cyno TREM2 KD (nM) | pSyk 活化( 人類巨噬細胞) EC50 (nM) | pSyk 活化 (HEK293-H6) EC50 (nM) | 細胞結合 ( 人類巨噬細胞) EC50 (nM) | NFAT EC50 (nM)* * 塗覆mAb 之盤 | - 存活 EC50 (nM)* * 塗覆mAb 之盤 |
| CL0020123 | 0.068 | 5.7 | 7 ± 2.7 | 0.3 | 不可計算 | 44.7 ± 30.3 | |
| CL0020188 | 5.2 | 2.0 | 7.7 ± 1.5 | 0.5 | 91.2 ± 47.0 | 2.4 ± 1.3 |
如上文所述生成人類巨噬細胞. 在檢定前一日，將人類巨噬細胞以100,000個細胞/孔接種在塗覆聚-D-離胺酸之96孔盤上。將抗體以人類巨噬細胞培養基(RPMI、10% Hyclone FBS、1%丙酮酸鈉、1% Glutamax、1%非必需胺基酸、及1%青黴素-鏈黴素)稀釋，自300 nM開始且以10點連續稀釋滴定繼續，各點之間有3倍稀釋。向細胞給予該等抗體且培育24小時。在與抗體一起培育之後，將該盤離心以去除碎片，且收集上清液以用於進行可溶性TREM2量測。
如下量測可溶性TREM2。簡言之，在4℃下將MSD小斑點鏈黴素盤(Meso Scale Discovery)用生物素化抗hTREM2單株抗體(R&D Systems)塗覆隔夜。然後在室溫下將盤用3% BSA/TBST封閉1小時。藉由加熱至95℃達5分鐘來以含SDS緩衝液製備樣品及標準物。在封閉後在檢定盤中以3% BSA/TBST 1:10稀釋所製備樣品及標準物。將以3% BSA/TBST稀釋之TREM2-His蛋白用作用於絕對量化之標準物。在室溫下培育兩小時後，用TBST洗滌盤。將初級偵測抗體經磺基標記之山羊抗人類TREM2 (R&D Systems)以3% BSA/TBST稀釋，添加到盤中，且在室溫下培育一小時。在用TBST洗滌後，使用2x MSD讀取緩衝液T顯影MSD盤，隨後使用MSD Sector盤讀取器進行偵測。藉由使用Prism 7.0軟體(Graphpad)擬合標準曲線來將MSD值轉換為sTREM2之絕對量。TREM2脫落之調節表示為來自與測試抗TREM2抗體一起培育之細胞的可溶性TREM2正規化至來自未與特異性抗TREM2抗體一起在培養基中培養之細胞的可溶性TREM2的比率。
圖 6
示出隨著抗TREM2抗體濃度變化之代表性可溶性TREM2水準(sTREM2)。結果指示抗TREM2抗體能夠在處理隔夜後以劑量依賴性方式降低人類巨噬細胞中之sTREM2水準。人類巨噬細胞中之吞噬作用檢定
如上文所述生成人類巨噬細胞. 在檢定前兩日，將人類巨噬細胞以80,000個細胞/孔接種在塗覆聚-D-離胺酸之96孔盤上。將抗體以100 nM稀釋到含有RPMI、10% Hyclone FBS、1%丙酮酸鈉、1% Glutamax、1%非必需胺基酸、及1%青黴素-鏈黴素之培養基中。然後在37℃下向細胞給予抗體溶液達24小時。然後將細胞核及細胞膜染色10分鐘，此後添加5 µg/mL之pHrodo-髓磷脂。然後將細胞在37℃下培育4小時。在高容量共聚焦顯微鏡(Opera Phoenix)上量測每個細胞之pHrodo螢光，且在儀器軟體上量化螢光強度。
藉由使用Safaiyan等人(2016,Nature Neuroscience
19(8):995-998)所述之方法自野生型C57Bl/6小鼠大腦(Jackson Laboratories)中純化髓磷脂來製備pHrodo-髓磷脂。在純化後，將髓磷脂重懸浮於PBS中且使用DC Protein Assay套組2 (BioRad，目錄號5000112)調整至1 mg/mL蛋白濃度。使用微量標記套組(ThermoFisher，目錄號P35363)根據製造商說明書用pHrodo-紅標記髓磷脂. 藉由在10,000 g下達5 min使髓磷脂沉澱、去除上清液、及重複該等步驟3-5次來去除過量標記物。
圖 7
示出人類巨噬細胞中之吞噬作用檢定之代表性結果。藉由在經TREM2處理巨噬細胞之顯微影像中偵測且量化pHrodo螢光且將該等量測值與同型對照之量測值相比較來量測髓磷脂吞噬作用。結果顯示用示範性TREM2促效劑抗體處理之人類巨噬細胞相對於同型對照增加了pHrodo-髓磷脂吞噬作用，這表明抗TREM2抗體可能夠有益地清除細胞中之髓磷脂碎片。實例 3. 血漿之處理 iPSC 小神經膠質細胞中脂質積聚之調節 脂質保存檢定
在檢定之前，首先使用可商購獲得之套組(來自StemCell Technologies之STEMdiff Hematopoietic套組)使iPSC分化成造血先驅細胞(HPC)。將HPC轉移至含有原代人類星形細胞之盤中且共培養14-21日。一旦共培養中之浮動細胞主要鑑別為成熟小神經膠質細胞(＞80%)，則將該小神經膠質細胞用於檢定。
將細胞(iPSC小神經膠質細胞，30,000個細胞/孔)接種到經PDL塗覆之96孔盤之完全血清培養基中。在37℃下24小時後，經純化未標記髓磷脂(50 μg/mL最終濃度，使用Safaiyan等人(2016,Nature Neuroscience
19(8):995-998)中所述之方法自野生型C57Bl/6小鼠大腦(Jackson Laboratories)純化)摻入到各孔中。在37℃下脂質處理24小時後，將抗TREM2抗體或RSV對照摻入到孔中直至最終濃度為100 nM。將細胞在37℃下再培育48-72小時，之後收集細胞或對細胞攝影。對於髓磷脂廓清實驗，在24小時培育時段之後去除髓磷脂，且以含抗體培養基置換以用於後續24-48小時培育。
對於尼羅紅攝影，去除上清液，且在含有1 µM尼羅紅(ThermoFisher，目錄號N1142)及1滴/mL Nucblue (ThermoFisher，目錄號R37605)之活細胞攝影緩衝液(Life Technologies，目錄號A14291DJ)將細胞在37℃下培育30分鐘。在培育時段之後，去除染色溶液，且將細胞固定於4%多聚甲醛中。然後在Opera Phoenix高容量共聚焦攝影機上使用Alexa 568及DAPI照射設置來對細胞攝影。在提供儀器之Harmony軟體上使用斑點發現算法分析液體斑點。圖 8A
包括以媒劑或髓磷脂(50 μg/mL最終濃度)處理24小時、隨後與同型對照或示範性抗TREM2抗體(CL0020123)一起培育72小時之iPSC小神經膠質細胞的代表性顯微術影像。圖 8B
為用於圖 8A
之顯微術影像中之相同抗TREM2抗體的代表性長條圖。藉由每個細胞之總斑點強度來對尼羅紅染色進行量化，且資料展示為相同顯微術樣品之不同領域內的三個技術性重複物的平均值及標準偏差。
對於脂質組學分析，在保持於冰上時將細胞用PBS洗滌一次。將含有1:100內部標準物之70 µL體積的9:1甲醇:水溶液添加到96孔盤之細胞中。在振盪器上在4℃及1200 rpm下將盤攪拌20分鐘且然後在300 x g下離心5分鐘。將50 µL上清液樣品轉移至LCMS小瓶且保持在-80℃下，直至在儀器上分析。
藉由與電噴霧質譜儀(QTRAP 6500+, Sciex, Framingham, MA, USA)耦合之液相層析儀(Shimadzu Nexera X2系統，Shimadzu Scientific Instrument, Columbia, MD, USA)來分析液體水準。對於各分析，在55℃下使用0.25 mL/min流速將5 µL樣品注入BEH C18 1.7 µm, 2.1×100 mm管柱(Waters Corporation, Milford, Massachusetts, USA)。對於正電離模式，流動相A由60:40乙腈/水(v/v)及10 mM甲酸銨+ 0.1%甲酸組成；流動相B由90:10異丙醇/乙腈(v/v)及10 mM甲酸銨+ 0.1%甲酸組成。對於負電離模式，流動相A由60:40乙腈/水(v/v)及10 mM甲酸銨組成；流動相B由90:10異丙醇/乙腈(v/v)及10 mM甲酸銨組成。梯度如下程式化：0.0–8.0 min自45% B至99% B、在99% B下8.0–9.0 min、9.0–9.1 min內至45% B、及在45% B下9.1–10.0 min。採樣以下設置以正或負離子模式進行電噴霧電離：在30下之簾氣；以中值設置之碰撞氣體；在5500 (正模式)或4500 (負模式)下之離子噴霧電壓；在250℃(正模式)或600℃ (負模式)下之溫度；在50下之離子源氣體1；在60下之離子源氣體2。使用Analyst 1.6.3 (Sciex)以多重反應監測模式(MRM)進行資料採集，其採用以下參數：留置時間(ms)及碰撞能量(CE)；在80下之去叢集電位(DP)；在10 (正模式)或-10 (負模式)下之入口電位(EP)；及在12.5 (正模式)或-12.5 (負模式)之碰撞室出口電位(CXP)。使用費內源性內部標準物之混合物量化液體。基於其反應時間及可商購獲得之參考標準物(Avanti Polar Lipids, Birmingham, AL, USA)之MRM特性鑑別液體。
圖 8C 及圖 8D
示出在24小時髓磷脂處理後以示範性抗TREM2抗體處理72小時之iPSC小神經膠質細胞的細胞裂解物中如藉由質譜法偵測之膽固醇酯(CE) (圖8C)及三酸甘油酯(TAG)脂質種類(圖8D)的水準。圖 8E 及圖 8F
示出經歷使用示範性抗TREM2抗體之髓磷脂廓清實驗之iPSC小神經膠質細胞的細胞裂解物中如藉由質譜法偵測之膽固醇酯(CE) (圖8E)及三酸甘油酯(TAG)脂質種類(圖8F)的水準。將圖 8C-8F
中生成之LC/MS資料正規化至CE資料之內部標準物且正規化至TAG資料之各個別脂質種類之髓磷脂+同型對照。
iPSC小神經膠質細胞中之脂質積聚藉由髓磷脂處理誘導，這由中性脂質染色(尼羅紅)增加所反映且藉由用於偵測細胞裂解物中之特定脂質種類的LC/MS反映。圖 8A-8F
中示出之資料總體指示在髓磷脂攻擊後用示範性抗TREM2抗體處理iPSC小神經膠質細胞減少了脂質種類之積聚，如由細胞中之中性脂質染色之減少所指示且由藉由LC/MS量測之CE及TAG脂質種類減少所指示。在24小時至72小時範圍之不同時間點觀測到由抗體處理引起之脂質水準減小。為了消除藉由阻斷脂質攝取引起脂質水準減小之可能性，進行髓磷脂廓清實驗，其中髓磷脂在添加抗TREM2抗體前去除。圖 8F
繪示在抗體處理前具有髓磷脂廓清之iPSC小神經膠質細胞中相對於同型對照，抗TREM2抗體亦減少脂質水準。實例 4. 抗體之功能抗原決定基分區
藉由在TREM2蛋白上之競爭性結合來確定TREM2抗體抗原決定基小區(bin)。在Carterra LSA儀器上在25℃下使用經典夾心抗原決定基分區組態方法進行抗原決定基分區實驗。藉由胺偶合將所有測試抗體固定到HC30M晶片上。然後對測試抗體進行多個循環的夾心競爭結合。各循環由抗原(經His標記TREM2 ECD)注射到固定抗體、隨後分析物抗體注射到固定抗體組成。在各循環結束時，藉由注射含有1.25 M NaCl之低pH緩衝液(pH = 3)再生固定抗體之表面。藉由Carterra軟體評估抗原決定基結合資料以創建競爭矩陣及抗原決定基分區. 結果提供於表2中。
藉由對抗TREM2抗體進行抗原決定基分區來鑑別兩個促效劑小區：(1)柄結合促效劑及(2) IgV域結合促效劑。具有相同小區之抗體證實相同功能，例如
藉由脂質配體(拮抗劑抗體)抑制TREM2-DAP12 pSyk活化、單獨抗體(柄結合促效劑、IgV域結合促效劑)活化pSyk。
表2. 由功能類別標注之抗TREM2抗體小區
實例 5. 抗體與 TREM2 柄肽之結合
| 小區1 | 小區2 |
| 柄促效劑 | IgV 促效劑 |
| CL0020188 | CL0020123 |
評估TREM2抗體與人類及小鼠TREM2柄區肽之結合。測試肽包括：(1)全長柄區(人類TREM2之胺基酸129-172，UniProtKB Q9NZC2；小鼠TREM2之胺基酸131-169，UniProtKB Q99NH8)及(2)含有ADAM10/17裂解位點之截短柄肽(人類/小鼠TREM2之胺基酸149-163)。使用標準夾心ELISA偵測抗體與TREM2柄肽之結合。簡言之，在4℃下將96孔半區域ELISA盤用鏈黴素塗覆隔夜。次日，將以1% BSA/PBS稀釋之生物素化TREM2柄肽添加到該盤中且培育1小時。然後添加以1% BSA/PBS稀釋之抗體且培育1小時。使用以1% BSA/PBS稀釋之抗人類κ-HRP次級抗體(Bethyl Laboratories, Inc.)偵測與肽結合之抗體。藉由與偵測試劑(One-step TMB Ultra, Thermo)反應且由標準分光光度測定法儀器(BioTek®)量測在450 nm下之吸光度(A450)來檢定盤。結果提供於下表3中。資料展示為正規化值(相對於背景之倍數，其中背景=同型對照)。
表3. 抗TREM2抗體與TREM2柄肽之結合
| 同型 | CL0020188 | CL0020123 | |
| 人類TREM2肽結合 (aa 149-163) | 1.0 | 3.0 | 1.2 |
| 人類TREM2肽結合 (aa 129-172) | 1.0 | 51 | 1.2 |
| 小鼠TREM2肽結合 (aa 149-163) | 1.0 | 0.9 | 0.9 |
| 小鼠TREM2肽結合 (aa 131-169) | 1.0 | 33 | 1.0 |
表3示出支持表2中之抗原決定基分區資料之人類及小鼠柄區肽-抗體結合相互作用。基於表3中之資料，某些抗TREM2抗體似乎結合之位點對應於TREM2細胞外柄區之胺基酸129-148。
亦使用螢光極化檢定分析抗TREM2抗體抑制ADAM17對TREM2柄肽之裂解的能力。首先以具有鏈黴素之檢定緩衝液(25 mM Tris pH 7.5、2.5 µM ZnCl2
、0.005% Brij-35)製備TREM2柄肽。然後在室溫下將抗TREM2抗體與TREM2柄肽預培育30分鐘。在預培育時段之後，添加ADAM17 (R&D systems，目錄號930-ADB)且在37℃下與肽一起培育20小時。次日，以檢定緩衝液進一步稀釋樣品且將其轉移至黑色不透光384孔盤。隨後在Perkin Elmer EnVision盤讀取器上量測螢光極化。將與抗TREM2抗體預培育之TREM2柄肽之螢光極化與全長TREM2柄肽及酶對照(具有ADAM17之全長TREM2柄肽)之螢光極化相比較。
TREM2柄結合抗體顯著增強螢光極化，這表明部分抑制由ADAM17 (純系CL0020141、CL0020188、CL0020313、CL0020308)所進行之柄肽裂解。IgV結合抗體CL0020107並未結合TREM2柄區肽且因此在螢光極化檢定中未展示對肽裂解之作用。實例 6. 抗 TREM2 抗體之藥物動力學分析
在小鼠中評估抗TREM2抗體之藥物動力學特徵。C57BL/6J小鼠購自Jackson Laboratory (儲備號000664)，2月齡大，用於7日藥物動力學(PK)研究及靶標接合研究。使用3月齡大之人類Trem2 cDNA KI同型接合小鼠(huTrem2KI/KI
)進行24小時靶標接合研究。下文描述了人類Trem2 cDNA KI小鼠之傳代及繁殖。人類 Trem2 cDNA KI 小鼠模型之生成
如下生成人類TREM2 cDNA KI小鼠(huTrem2KI/KI
)。將人類Trem2 cDNA-pA序列***在小鼠Trem2內源性ATG起始位點。***人類Trem2 cDNA-pA導致小鼠Trem2之外顯子1序列被置換，這允許表現由內源性小鼠啟動子驅動之人類Trem2 cDNA且破壞內源性小鼠Trem2之表現。在C57BL/6遺傳背景下使用同源重組生成huTrem2KI/KI
小鼠。
對於huTrem2KI/KI
靶向載體，長同源臂(LA)在人類Trem2 cDNA-pA序列之5’端上游延長約3.6 kb，且短同源臂(SA)在FRT側接Neo盒之3’下游延長約2.3 kb。長同源臂及短同源臂二者均自C57BL/6 BAC純系(RP23: 358G22)擴增且然後亞選殖到含有胺苄青黴素選擇盒之約2.4kb pSP72 (Promega)主鏈載體中。將hUBS-gb2 FRT側接之新黴素盒恰好***在hTrem2-pA盒下游，從而產生大小約13.6 kb之靶向載體。將十(10) μg靶向載體用限制性酶Not I (New England Biolabs)線性化且隨後藉由電穿孔轉染到FLP C57Bl/6 (B6)胚胎幹細胞(ES)。在以G418抗生素進行選擇後，擴增存活純系以用於PCR分析以鑑別陽性重組ES純系。用於PCR篩選之引子序列(SEQ ID NO:53 = 5’-AGG AAT GTG GGG AGC ACG GAG–3’且SEQ ID NO:54 = 5’- TGC ATC GCA TTG TCT GAG TAG GTG-3’)擴增在3’區外部短同源臂(SA)下游含有來自bghpA元件之區域的2.81-kb片段。將五個純系鑑別為陽性且選擇用於進一步擴增。在ES純系擴增期間藉由Flp轉殖基因去除Neo盒。
首先藉由測序分析表徵自五個陽性純系提取之基因組DNA。擴增1.19-kb產物且藉由引子(SEQ ID NO:55 = 5’- ACC CTA GTC CTG ACT GTT GCT C-3’；SEQ ID NO:56 = 5’- TAT AGG AAC TTC GCG ACA CGG ACA C-3’)進行測序以證實5’基因組/neo盒接頭區及3’ KI盒接頭區。測序結果證實將人類Trem2 cDNA-pA序列引入在所有五個純系中。
藉由南方墨點分析使用靶向短臂及長臂之探針來進一步表徵五個陽性純系。將以Ssp I及Bam HI消化之ES細胞基因組DNA分別與短臂及長臂探針雜交。證實所有五個ES純系在長臂及短臂二者中攜帶校正的同源重組事件。用於擴增短臂探針(658 bp)之引子序列為(SEQ ID NO:57 = 5’- ACA GGA GGG ACC TAC CTT CAG 3’；SEQ ID NO:58 = 5’- GCC TGC CTT TCA GAG ACC TCA GTC -3)。用於擴增長臂探針(681 bp)之引子序列為(SEQ ID NO:59 = 5’- CCT CTC CGG CTG CTC ATC TTA CTC -3’；SEQ ID NO:60 = 5’- GTC TCT CAG CCC TGG CAG AGT TTG -3’)。
然後將所有五個ES細胞純系注入C57BL/6胚胞中。藉由PCR基因分型經由生殖系傳播來證實來自一個純系之幼崽。用於基因分型之引子為(SEQ ID NO:61 = pr1: 5’- CGC CTA CCC TAG TCC TGA CTG TTG -3’、SEQ ID NO:62 = pr2: 5’- AAA GCC TAC AGC ATC CTC ACC TC -3’；及SEQ ID NO:63 = pr3: 5’- GCA TCA TGG GGT TGT AGA TTC CG -3’)。野生型上pr1/pr2之PCR產物為658 bp。KI對偶基因上pr1/pr3之PCR產物為469 bp。抗體給藥及血漿 /CSF 收集
對於PK分析，透過靜脈內(IV)尾靜脈注射向C57BL/6J小鼠給予10 mg/kg抗TREM2抗體或對照IgG (給藥體積為約200 μL/小鼠，各組n = 3)。在給藥後1小時、24小時、4日、及7日收集血液樣品。藉由使用3-mm刺血計(GoldenRod動物刺血計)透過頜下出血收集前三個時間點之血液樣品。在第7日透過心臟穿刺收集最後一個血液樣品. 將血液收集在EDTA管(Sarstedt Microvette 500 K3E，目錄號201341102)中，將其緩慢倒置以混合，且在4℃下離心。將血漿(頂部)層轉移至1.5-mL Eppendorf管且保存在-80℃下，直至分析。
對於24小時靶標接合研究，使用C57BL/6J小鼠測試小鼠替代品抗TREM2抗體，且使用huTrem2KI/KI
小鼠測試人類抗TREM2抗體。透過靜脈內(IV)尾靜脈注射向小鼠給予100 mg/kg抗TREM2抗體或對照IgG (給藥體積為約200 μL/小鼠，各組n = 5)。給藥前24小時收集血液樣品以確定TREM2基線水準。給藥後24小時收集最終血液及CSF樣品。如上文所述製備血漿製劑。為了收集CSF樣品，在顱骨背面做出矢狀解剖，且分離皮下組織及肌肉以暴露大池。使用預拉伸玻璃毛細管來穿刺大池且收集CSF樣品。然後在4℃下離心CSF以去除血液殘餘物，且將CSF上清液轉移至0.5-mL Low Protein LoBind Eppendorf管(Eppendorf，目錄號022431064)，以用於保存在-80℃下，直至分析。活體內抗 TREM2 抗體血漿水準之分析
對於抗TREM2抗體PK分析，使用一般人類抗Fc夾心ELISA量化小鼠血漿中之總抗體濃度。將384孔MaxiSorp盤用1 μg/mL抗huFc馿多株抗體(Jackson Immunoresearch)塗覆隔夜。在與檢定緩衝液(PBST、1% BSA)中1:2,000或1:20,000稀釋之血漿一起培育之後，添加結合至HRP之抗huFc馿抗體(Jackson Immunoresearch)作為偵測試劑。使用3倍稀釋使用五參數邏輯迴歸生成2 nM至2.7 pM之各個別抗體之標準曲線。
圖 9
示出某些抗TREM2抗體之代表性小鼠PK特徵。提供在7日時段內各代表抗體之抗體清除率(CL [mL/day/kg])且將其與正常無效應子同型對照相比較。圖 9
中示出之各抗體表現出相對於同型對照相當的清除率。活體內靶標接合： sTREM2 血漿水準
為了量測可溶性TREM2 (sTREM2)血漿水準，使人類TREM2 cDNA KI小鼠(huTrem2KI/KI
)出血且然後用100 mg/kg測試抗TREM2抗體或同型對照靜脈內處理。給藥後24小時使小鼠出血。自血液樣品獲得血漿且在如下進行之MSD檢定中評估。將MSD SECTOR盤用以PBS稀釋之1 μg/mL捕獲抗體(R+D抗TREM2抗體，目錄號MAB17291-100)塗覆且在4℃下培育隔夜。將樣品孔用未經稀釋MSD封閉劑A封閉1小時。將血漿以含有0.05% Tween-20之Tris緩衝鹽水(TBST)中之25% MSD封閉劑A 1:20稀釋且將其添加到該盤上之各樣品孔中，然後將其在室溫下培育2小時。隨後將偵測抗體(MSD磺基標記之山羊抗人類抗體，目錄號R32AJ-1，1:1000)添加到各樣品孔，且將盤在室溫下培育1小時。使用Biotek盤洗滌器對各樣品孔進行TBST洗滌。添加偵測試劑(MSD讀取緩衝液)且使用MSD Meso Sector S600讀取器量測以獲得sTREM2與抗體結合之結果。
圖 10A 及圖 10B
示出在huTrem2KI/KI
血漿中示範性抗TREM2抗體之總sTREM2水準(圖10A)及經抗體結合sTREM2水準(圖10B)。為了總sTREM2及經結合sTREM2檢定，將資料正規化至給藥前sTREM2基線水準。結果指示總循環sTREM2水準不會顯著影響以抗TREM2抗體處理之小鼠與以該抗體處理24小時後之同型對照相比之變化，這表明總循環sTREM2水準在抗體給藥後的早期時間點未受影響。相比之下，經抗體結合sTREM2水準在以抗TREM2抗體注射之小鼠中相對於同型對照更高。實例 7. 抗 TREM2 抗體之序列最佳化及人源化
對示範性抗TREM2抗體進行序列最佳化及人源化，隨後對結合動力學及結合特異性進行表徵。
藉由在CDR序列內搜索易於化學修飾之殘基(例如
，天冬醯胺脫醯胺化基序(NG)、天冬胺酸異構化基序(DS)、及潛在氧化殘基(色胺酸(W)及甲硫胺酸(M))且以保守性且生殖系殘基進行胺基酸取代以去除此類序列文庫來進行序列最佳化。然後使用Biacore及與HEK293-H6細胞之劑量滴定細胞結合分析抗TREM2抗體之人源化且序列最佳化之變異體的結合動力學(關於代表性方案參見
實例1)。
分析抗體CL0020188之人源化且序列最佳化之變異體之結合特徵的結果提供於表4中。修飾CL0020188 CDR-H2序列(SEQ ID NO:5)及CDR-L1序列(SEQ ID NO:7)中之NG基序，將其移植到人類構架區，且分析。表4提供HEK293-H6細胞中之如藉由Biacore量測之KD
值及如藉由劑量滴定結合檢定所量測之EC50
值。
表4. CL0020188之序列最佳化且人源化之變異體的結合特徵
3m = VH
中之A24G/L45P/V48L
| 純系 | hVH | hVL | KD | EC50 |
| CL0020188-1 | NG /移植物 | NG /移植物 | 2.3 nM | 0.42 nM |
| CL0020188-2 | NG /3m | NG /移植物 | 3.4 nM | 0.26 nM |
| CL0020188-3 | NG /移植物 | TG /移植物 | 6.8 nM | 0.64 nM |
| CL0020188-4 | NG /3m | TG /移植物 | 4.8 nM | 0.44 nM |
| CL0020188-5 | NA /移植物 | NG /移植物 | 5.1 nM | 0.45 nM |
| CL0020188-6 | NA /3m | NG /移植物 | 4.0 nM | 0.31 nM |
| CL0020188-7 | NA /移植物 | TG /移植物 | 10 nM | 0.68 nM |
| CL0020188-8 | NA /3m | TG /移植物 | 7.3 nM | 0.51 nM |
| 親本 | 9.5 nM | 0.44 nM |
如表4所示，CL00201088之人源化且序列最佳化之純系對hTREM2表現出之親和力值類似於親本抗體(KD
= 9.5 nM)，如藉由Biacore所量測。這與表4中所示之HEK293-H6細胞中的細胞結合結果一致。與親本抗體(EC50
= 0.44 nM)相比，人源化且序列最佳化之純系對HEK293-H6細胞中所表現之TREM2表現出相當且亞奈莫爾之親和力。總之，結果指示親本抗體與人源化且序列最佳化變異體之間的相當結合動力學。
分析抗體CL0020123之人源化且序列最佳化之變異體之結合特徵的結果提供於表5中。修飾CL0020123 CDR-H2序列(SEQ ID NO:30)中之NG及DS基序，將其移植到人類構架區，且分析。表5提供HEK293-H6細胞中之如藉由Biacore量測之KD
值及如藉由劑量滴定結合檢定所量測之EC50
值。
表5. CL0020123之序列最佳化且人源化之變異體的結合特徵
1m = VH
中之R71A
2m = VH
中之V67A/R71A
| 純系 | hVH | hVL | KD | EC50 |
| CL0020123-1 | NGDS /2m | Vκ移植物 | 0.14 nM | 0.25 nM |
| CL0020123-2 | NGDS /1m | Vκ移植物 | 0.18 nM | 0.23 nM |
| CL0020123-3 | QGDS /2m | Vκ移植物 | 0.40 nM | 0.24 nM |
| CL0020123-4 | NGES /2m | Vκ移植物 | 0.17 nM | 0.17 nM |
| CL0020123-5 | QGES /2m | Vκ移植物 | 0.44 nM | 0.37 nM |
| CL0020123-6 | QGDS /1m | Vκ移植物 | 0.32 nM | 0.29 nM |
| CL0020123-7 | NGES /1m | Vκ移植物 | 0.15 nM | 0.19 nM |
| CL0020123-8 | QGES /1m | Vκ移植物 | 0.39 nM | 0.38 nM |
| 親本 | 0.10 nM | 0.26 nM |
與親本抗體(KD
= 0.10 nM)相比，人源化且序列最佳化之純系表現出高約4倍之與hTREM2結合之KD
值，如藉由Biacore所量測。另一方面，在HEK293-H6細胞之劑量滴定細胞結合檢定中，人源化且序列最佳化之純系對TREM2表現出相當且亞奈莫爾親和力。實例 8. 序列最佳化、人源化抗 TREM2 抗體之活體外表徵
藉由如實例1及3中所述之活體外方法評估示範性序列最佳化且人源化之抗TREM2抗體(實例7)。評定抗體在表現TREM2之HEK細胞中之TREM2結合、HEK-H6細胞中之TREM2依賴性pSyk信號傳導、促進人類巨噬細胞存活之能力、及調節iPSC小神經膠質細胞中之脂質積聚的能力。圖11至14示出代表性抗TREM2抗體之結果。抗TREM2抗體在使用表現TREM2之HEK293-H6細胞的檢定中表現出良好細胞結合(EC50值為0.34 nM (圖11A)及0.08 nM (圖11B)。抗TREM2抗體亦活化表現TREM2之HEK293-H6細胞中之pSyk磷酸化(圖12A及12B)。另外，抗TREM2抗體誘導巨噬細胞存活，其中對於CL0020188變異體抗體觀測到更好存活活性(圖13)。最後，抗TREM2抗體證實了減少經髓磷脂處理之iPSC小神經膠質細胞中之脂質積聚的能力(圖14A及14B)。實例 9. 序列最佳化、人源化抗 TREM2 抗體之小鼠 PK
在類似於實例6中所述之7日藥物動力學(PK)研究的野生型小鼠中評估某些序列最佳化、人源化抗TREM2抗體(實例7)之藥物動力學特徵。各劑量組含有n=3只小鼠。表6提供示範性序列最佳化且人源化抗TREM2抗體之PK特性(實例7)。
表6. 抗TREM2抗體之小鼠PK特性
實例 10. 序列最佳化、人源化抗 TREM2 抗體之獼猴 PK
| 純系 | 劑量(mg/kg) | C0 (μM) | AUC0-inf (μM*h) | CL (mL/d/kg) |
| CL0020188變異體 | 10 | 1.14 ± 0.05 | 207.78 ± 43.30 | 8.14 ± 1.80 |
| CL0020188變異體 | 50 | 6.48 ± 0.61 | 236.49 ± 2.67 | 34.58 ± 0.39 |
| CL0020123變異體 | 10 | 1.4999 | 223.1 | 13.2 |
| 抗BACE參考物 | 10 | 1.017 | 60.19 | 33.3 |
在天然食蟹獼猴中評估抗TREM2抗體之藥物動力學特徵。經由靜脈內團式注射向2-4歲大(重約2-3 kg)之天然食蟹獼猴注射抗TREM2抗體。投與劑量包括3 mg/kg及25 mg/kg，其中每劑量組n=3只猴。在給藥前及在給藥後10分鐘、30分鐘、1、6、12、及24小時、及3、7、10、14、17、21、24、及28日收集血液樣品(約1 mL)。將樣品冷凍在約5℃下，之後離心以獲得血漿，且將所獲得血漿保持在乾冰上，之後保存在-70℃下，直至分析。如下分析血漿樣品之抗TREM2抗體水準。
對於抗TREM2抗體PK分析，使用一般抗人類_IgG夾心電化學發光免疫檢定(ECLIA)在Meso Scale Discovery (MSD)平台上量化猴血漿中之總抗體濃度。簡言之，將1%基於酪蛋白之PBS封閉緩衝液(Thermo Scientific, MA)添加到MSD GOLD 96孔小斑點經鏈黴素塗覆微量滴定盤(Meso Scale Discovery, MD)且培育約1 h。在盤封閉及洗滌步驟後，將工作溶液中之0.5 µg/mL的生物素化抗人類_IgG山羊抗體(SouthernBiotech, AL)添加到檢定盤中且使其培育1-2 h。在培育及洗滌步驟後，將血漿測試樣品(亦即，
具有抗TREM2人源化抗體之樣品)添加到檢定盤中且將其培育1-2 h。注意測試樣品必須以檢定最小需要稀釋(MRD) 1:100、以0.5%基於酪蛋白之PBS檢定緩衝液(Thermo Scientific, MA)稀釋，從而得到最終1%血漿基質，之後添加到檢定盤中。在捕獲抗TREM2抗體分析物及洗滌步驟之後，將工作溶液中之0.4 µg/mL的次級釕化(SULFO-TAG)抗人類IgG山羊抗體(Meso Scale Discovery, MD)添加到檢定盤中且將其培育約1 h。最後，在培育及洗滌步驟後，將檢定讀取緩衝液(1X MSD Read Buffer T)添加到檢定盤中以生成檢定樣品信號。來自MSD盤讀取器之樣品信號讀數係呈電化學發光(ECL)信號形式且以ECL單位(ECLU)表示。先前所述之所有檢定反應步驟均在周圍溫度下且在盤振盪器上振盪之情況下(在適當時)進行。該檢定具有19.5 – 2500 ng/mL (或在1:100後MRD下為0.195 – 25 ng/mL)之動態校準標準範圍，其8個標準點以1:2連續稀釋，再加上空白血漿樣品。根據使用加權四參數非線性邏輯迴歸擬合之檢定校準標準曲線反向計算血漿樣品濃度。表7提供示範性序列最佳化且人源化抗TREM2抗體之藥物動力學(PK)特性(實例7)。
表7. 抗TREM2抗體之獼猴PK特性
| 純系 | 劑量(mg/kg) | AUC0-inf (μM*h) | CL (mL/d/kg) |
| CL0020188變異體 | 25 | 899.0 ± 53 | 4.46 ± 0.26 |
| CL0020188變異體 | 3 | 61.2 ± 6.3 | 7.90 ± 0.77 |
CL0020188表現出在不同劑量水準之間的類似低清除率水準及食蟹獼猴之線性藥物動力學特徵。另外，不存在與在食蟹獼猴中投與變異體相關之臨床病理學發現(資料未示出)。實例 11. 抗 TREM2 抗體之比較
藉由Biacore (實例1中所述)量測抗TREM2抗體對人類TREM2及獼猴TREM2之親和力。藉由MSD檢定量測抗TREM2抗體在健康人類志願者CSF樣品(Innovative Research)及健康食蟹獼猴CSF樣品(Worldwide Primates)中之功效。藉由其EC50確定各抗體之功效。簡言之，在室溫下將以捕獲抗體(生物素化山羊抗人類TREM2，R&D Systems，目錄號BAF1828)塗覆之MSD GOLD 96孔小斑點鏈黴素盤(MSD，目錄號L45SA)與以檢定緩衝液(25% (v/v) MSD封閉劑A (MSD，目錄號R93BA-A)、75% (v/v) TBST) 1:3稀釋之生物流體樣品一起培育一個小時。在以TBST沖洗該等孔後，將經磺基標記之抗TREM2抗體以連續稀釋液(在11個點間4x稀釋)添加到該盤之孔中且將其在室溫下培育一小時。將該等孔用TBST稀釋，且將MSD讀取緩衝液(MSD，目錄號R92TC-3)添加到孔中。使用MSD Meso Sector S600裝置量測來自樣品之信號。藉由四參數可變斜率非線性迴歸確定各抗體之EC50值。參考抗體#1及#2對應於WO 2018/195506中所述之4C5及6E7。參考抗體#3對應於WO 2019/028292中所述之AL2p-58。參考抗體#1之可變區由SEQ ID NO:73及74表示。參考抗體#2之可變區由SEQ ID NO:75及76表示。參考抗體#3之可變區由SEQ ID NO:77及78表示。結果提供於表8中。
如表8所示，如本文所揭示之CL0020188及CL0020123變異體相對於參考抗體對人類TREM2具有更強親和力且更有效於結合自健康人類志願者受試者分離之CSF樣品中的sTREM2。CL0020188變異體相對於參考抗體對獼猴TREM2具有更強親和力且更有效於結合自健康食蟹獼猴受試者分離之CSF樣品中的sTREM2。這藉由達成在相同條件下結合給定量之sTREM2的半最大有效濃度(EC50)所需之抗體的相對量來證明。如表8所示，與CL0020188及CL0020123抗體相比，參考抗體#1、#2、及#3達成EC50需要更高相對量。
表8. 抗TREM2抗體之特性的比較
實例 12. 抗 TREM2 抗體之抗原決定基定位
| 抗體 | KD (nM) 人類TREM2 | KD (nM) Cyno TREM2 | EC50，人類CSF中之經結合sTREM2 [nM] | EC50，Cyno CSF中之經結合sTREM2 [nM] |
| CL0020188-4 | 1.4 | 1.5 | 0.29 | 0.28 |
| CL0020188-7 | 3.3 | 2.8 | 0.75 | 0.72 |
| CL0020123-5 | 0.63 | 9.3 | 1.00 | 49.41 |
| CL0020123-7 | 0.08 | 9.4 | 0.54 | 16.88 |
| 參考抗體#1 | 5.9 | 14 | 32.6 | 81.6 |
| 參考抗體#2 | 4.3 | 9.2 | 7.4 | 6.5 |
| 參考抗體#3 | 8.7 | 9.2 | 7.25 | 33.72 |
為了鑑別肽水準下之抗TREM2抗體的抗原決定基，使用氫氘交換(HDX)質譜法。在20℃下將單獨或與抗TREM2抗體混合之重組人類TREM2與氧化氘標記緩衝液(50 mM磷酸鈉、100 mM氯化鈉、pH 7.0)一起培育0、60、600、及3600秒。藉由添加等體積4 M鹽酸胍0.85 M TCEP緩衝液(最終pH 2.5)來淬滅氫/氘交換。然後使經淬滅樣品經歷胃蛋白酶/蛋白酶XIII消化及LC-MS分析。簡言之，將經淬滅樣品注入到保持在20℃下之包裝胃蛋白酶/蛋白酶XIII管柱(2.1 x 30 mm)，且使用包含與Q Exactive™ HF-Hybrid Quadrupole-Orbitrap質譜儀(Thermo Fisher)耦合之Waters Acquity UPLC (Waters Corporation)的UPLC-MS系統分析所得肽。該等肽在保持於-6℃下之50 mm x 1 mm C8管柱上使用16.5分鐘自2%至31%溶劑B之梯度(溶劑B：乙腈中之0.2%甲酸；溶劑A：水中之0.2%甲酸)分離。僅在MS模式下記錄質譜。使用HDX Workbench (Pascal等人 2012.Journal of The American Society for Mass Spectrometry
23:1512-1521)處理原始MS資料。使用氘化肽與其天然形式之間在t0時之平均質量差異計算氘水準。經由使用Mascot軟體(Matrix Science)對人類TREM2序列搜索MS/MS資料進行肽鑑別。前驅物及產物離子之質量容差分別為10 ppm及0.02 Da。
基於HDX質譜法結果，CL0020188及CL0020188之變異體結合至人類TREM2 (SEQ ID NO:1)之胺基酸殘基143-149 (FPGESES (SEQ ID NO:69))，而CL0020123及CL0020123之變異體結合至人類TREM2之(i)胺基酸殘基55-63 (GEKGPCQRV (SEQ ID NO:70))、(ii)胺基酸96-107 (TLRNLQPHDAGL (SEQ ID NO:71))、及(iii)胺基酸殘基126-129 (VEVL (SEQ ID NO:72))。
IX. 非正式序列表
| SEQ ID NO | 序列 | 描述 |
| 1 | MEPLRLLILLFVTELSGAHNTTVFQGVAGQSLQVSCPYDSMKHWGRRKAWCRQLGEKGPCQRVVSTHNLWLLSFLRRWNGSTAITDDTLGGTLTITLRNLQPHDAGLYQCQSLHGSEADTLRKVLVEVLADPLDHRDAGDLWFPGESESFEDAHVEHSISRSLLEGEIPFPPTSILLLLACIFLIKILAASALWAAAWHGQKPGTHPPSELDCGHDPGYQLQTLPGLRDT | 人類TREM2蛋白 |
| 2 | EVKLLDSGGGLVQAGGSLRLSCAGSGFTFTDFYMSWIRQPPGKAPEWLGVIRNKANGYTAGYNPSVKGRFTISRDNTQNILYLQMNTLRAEDTAIYYCARLSYGFDYWGQGVMVTVSS | CL0020306 VH |
| 3 | DIVMTQGALPNPVPSGESASITCQSSKSLLHSNGKTYLNWYLQRPGQSPQLLIYWMSTRASGVSDRFSGSGSGTDFTLKISSVEAEDVGVYYCQQFLEFPFTFGSGTKLEIK | CL0020306 VL |
| 4 | GFTFTDFYMS | CL0020306 CDR-H1；CL0020188及變異體CL0020188-1、CL0020188-2、CL0020188-3、CL0020188-4、CL0020188-5、CL0020188-6、CL0020188-7、及CL0020188-8之CDR-H1 |
| 5 | VIRNKANGYTAGYNPSVKG | CL0020306 CDR-H2；CL0020188及變異體CL0020188-1、CL0020188-2、CL0020188-3、及CL0020188-4之CDR-H2 |
| 6 | ARLSYGFDY | CL0020306 CDR-H3 |
| 7 | QSSKSLLHSNGKTYLN | CL0020306 CDR-L1；CL0020307 CDR-L1；CL0020307-1 CDR-L1； CL0020188及變異體CL0020188-1、CL0020188-2、CL0020188-5、及CL0020188-6之CDR-L1 |
| 8 | WMSTRAS | CL0020306 CDR-L2；CL0020307 CDR-L2； CL0020307-1 CDR-L2； CL0020188及變異體CL0020188-1、CL0020188-2、CL0020188-3、CL0020188-4、CL0020188-5、CL0020188-6、CL0020188-7、及CL0020188-8之CDR-L2 |
| 9 | QQFLEFPFT | CL0020306 CDR-L3；CL0020307 CDR-L3；CL0020307-1 CDR-L3 |
| 10 | EVKLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTNFYMSWIRQPPGRAPEWLGVIRNRPNGYTTDYNPSVKGRFTISRDNTQNILYLQMSTLRADDTAFYYCTRLTYGFDYWGQGVMVTVSS | CL0020307 VH |
| 11 | DIVMTQGALPNPVPSGESASITCQSSKSLLHSNGKTYLNWYLQRPGQSPQLLIYWMSTRASGVSDRFSGSGSGTDFTLKISSVEAEVVGVYYCQQFLEFPFTFGSGTKLEIK | CL0020307 VL |
| 12 | GFTFTNFYMS | CL0020307 CDR-H1 |
| 13 | VIRNRPNGYTTDYNPSVKG | CL0020307 CDR-H2 |
| 14 | TRLTYGFDY | CL0020307 CDR-H3 |
| 15 | EVKLLDSGGGLVQAGGSLRLSCAGSGFTFTDFYMSWIRQPPGKAPEWLGVIRNKANGYTAGYNPSVKGRFTISRDNTQNILYLQMNTLRAEDTAIYYCARLTYGFDYWGQGVMVTVSS | CL0020188 VH |
| 16 | DIVMTQGALPNPVPSGESASITCQSSKSLLHSNGKTYLNWYLQRPGQSPQLLIYWMSTRASGVSDRFSGSGSGTDFTLKISSVEAEDVGVYYCQQFLEYPFTFGSGTKLEIK | CL0020188 VL |
| 17 | ARLTYGFDY | CL0020188及變異體CL0020188-1、CL0020188-2、CL0020188-3、CL0020188-4、CL0020188-5、CL0020188-6、CL0020188-7、及CL0020188-8之CDR-H3 |
| 18 | QQFLEYPFT | CL0020188及變異體CL0020188-1、CL0020188-2、CL0020188-3、CL0020188-4、CL0020188-5、CL0020188-6、CL0020188-7、及CL0020188-8之CDR-L3 |
| 19 | EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTDFYMSWVRQAPGKGLEWVSVIRNKANGYTAGYNPSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARLTYGFDYWGQGTLVTVSS | CL0020188-1 VH； CL0020188-3 VH |
| 20 | DIVMTQTPLSLPVTPGEPASISCQSSKSLLHSNGKTYLNWYLQKPGQSPQLLIYWMSTRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCQQFLEYPFTFGQGTKVEIK | CL0020188-1 VL；CL0020188-2 VL； CL0020188-5 VL； CL0020188-6 VL |
| 21 | EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAGSGFTFTDFYMSWVRQAPGKGLEWVSVIRNKANGYTAGYNPSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARLTYGFDYWGQGTLVTVSS | CL0020188-2 VH |
| 22 | DIVMTQTPLSLPVTPGEPASISCQSSKSLLHSTGKTYLNWYLQKPGQSPQLLIYWMSTRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCQQFLEYPFTFGQGTKVEIK | CL0020188-3 VL； CL0020188-4 VL； CL0020188-7 VL； CL0020188-8 VL |
| 23 | QSSKSLLHSTGKTYLN | 變異體CL0020188-3、CL0020188-4、CL0020188-7、及CL0020188-8之CDR-L1 |
| 24 | EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTDFYMSWVRQAPGKGLEWVSVIRNKANAYTAGYNPSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARLTYGFDYWGQGTLVTVSS | CL0020188-5 VH； CL0020188-7 VH |
| 25 | VIRNKANAYTAGYNPSVKG | 變異體CL0020188-5、CL0020188-6、CL0020188-7、及CL0020188-8之CDR-H2 |
| 26 | EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAGSGFTFTDFYMSWVRQAPGKGPEWLSVIRNKANAYTAGYNPSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARLTYGFDYWGQGTLVTVSS | CL0020188-6 VH； CL0020188-8 VH |
| 27 | EVQLQQSGAELVRSGASVKLSCTASGFSIEDFYIHWVKQRPEQGLEWIGWIDPENGDSKYAPKFQGKATMTADTSSNTAYLHLSSLTSEDTAVYYCHADHGNYGSTMDYWGQGTSVTVSS | CL0020123 VH |
| 28 | DIQMNQSPSSLSASLGDTVTITCHASQHINVWLSWYQQKPGDHPKLLIYKASNLHTGVPSRFSGSGSGTGFTLTISSLQPEDIATYYCQQGQTYPRTFGGGTKLEIK | CL0020123 VL |
| 29 | GFSIEDFYIH | CL0020123及變異體CL0020123-1、CL0020123-2、CL0020123-3、CL0020123-4、CL0020123-5、CL0020123-6、CL0020123-7、及CL0020123-8之CDR-H1 |
| 30 | WIDPENGDSKYAPKFQG | CL0020123及變異體CL0020123-1及CL0020123-2之CDR-H2 |
| 31 | HADHGNYGSTMDY | CL0020123及變異體CL0020123-1、CL0020123-2、CL0020123-3、CL0020123-4、CL0020123-5、CL0020123-6、CL0020123-7、及CL0020123-8之CDR-H3 |
| 32 | HASQHINVWLS | CL0020123及變異體CL0020123-1、CL0020123-2、CL0020123-3、CL0020123-4、CL0020123-5、CL0020123-6、CL0020123-7、及CL0020123-8之CDR-L1 |
| 33 | KASNLHT | CL0020123及變異體CL0020123-1、CL0020123-2、CL0020123-3、CL0020123-4、CL0020123-5、CL0020123-6、CL0020123-7、及CL0020123-8之CDR-L2 |
| 34 | QQGQTYPRT | CL0020123及變異體CL0020123-1、CL0020123-2、CL0020123-3、CL0020123-4、CL0020123-5、CL0020123-6、CL0020123-7、及CL0020123-8之CDR-L3 |
| 35 | QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGFSIEDFYIHWVRQAPGQGLEWMGWIDPENGDSKYAPKFQGRATITADTSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCHADHGNYGSTMDYWGQGTLVTVSS | CL0020123-1 VH |
| 36 | DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCHASQHINVWLSWYQQKPGKAPKLLIYKASNLHTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQGQTYPRTFGQGTKVEIK | CL0020123-1 VL；CL0020123-2 VL；CL0020123-3 VL； CL0020123-4 VL CL0020123-5 VL； CL0020123-6 VL； CL0020123-7 VL； CL0020123-8 VL |
| 37 | QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGFSIEDFYIHWVRQAPGQGLEWMGWIDPENGDSKYAPKFQGRVTITADTSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCHADHGNYGSTMDYWGQGTLVTVSS | CL0020123-2 VH |
| 38 | QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGFSIEDFYIHWVRQAPGQGLEWMGWIDPEQGDSKYAPKFQGRATITADTSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCHADHGNYGSTMDYWGQGTLVTVSS | CL0020123-3 VH |
| 39 | WIDPEQGDSKYAPKFQG | 變異體CL0020123-3及CL0020123-6之CDR-H2 |
| 40 | QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGFSIEDFYIHWVRQAPGQGLEWMGWIDPENGESKYAPKFQGRATITADTSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCHADHGNYGSTMDYWGQGTLVTVSS | CL0020123-4 VH |
| 41 | WIDPENGESKYAPKFQG | 變異體CL0020123-4及CL0020123-7之CDR-H2 |
| 42 | QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGFSIEDFYIHWVRQAPGQGLEWMGWIDPEQGESKYAPKFQGRATITADTSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCHADHGNYGSTMDYWGQGTLVTVSS | CL0020123-5 VH |
| 43 | WIDPEQGESKYAPKFQG | 變異體CL0020123-5及CL0020123-8之CDR-H2 |
| 44 | QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGFSIEDFYIHWVRQAPGQGLEWMGWIDPEQGDSKYAPKFQGRVTITADTSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCHADHGNYGSTMDYWGQGTLVTVSS | CL0020123-6 VH |
| 45 | QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGFSIEDFYIHWVRQAPGQGLEWMGWIDPENGESKYAPKFQGRVTITADTSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCHADHGNYGSTMDYWGQGTLVTVSS | CL0020123-7 VH |
| 46 | QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGFSIEDFYIHWVRQAPGQGLEWMGWIDPEQGESKYAPKFQGRVTITADTSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCHADHGNYGSTMDYWGQGTLVTVSS | CL0020123-8 VH |
| 47 | W-I-D-P-E-β6 -G-β8 -S-K-Y-A-P-K-F-Q-G，其中β6 為N或Q且β8 為D或E | CDR-H2共通序列 |
| 48 | G-F-T-F-T-α6 -F-Y-M-S，其中α6 為D或N | CDR-H1共通序列 |
| 49 | V-I-R-N-β5 -β6 -N-β8 -Y-T-β11 -β12 -Y-N-P-S-V-K-G，其中β5 為K或R；β6 為A或P；β8 為G或A；β11 為A或T；且β12 為G或D | CDR-H2共通序列 |
| 50 | γ1 -R-L-γ4 -Y-G-F-D-Y，其中γ1 為A或T；且γ4 為T或S | CDR-H3共通序列 |
| 51 | Q-S-S-K-S-L-L-H-S-δ10 -G-K-T-Y-L-N，其中δ10 為N或T | CDR-L1共通序列 |
| 52 | Q-Q-F-L-E-ϕ6 -P-F-T，其中ϕ6 為Y或F | CDR-L3共通序列 |
| 53 | AGGAATGTGGGGAGCACGGAG | 引子序列 |
| 54 | TGCATCGCATTGTCTGAGTAGGTG | 引子序列 |
| 55 | ACCCTAGTCCTGACTGTTGCTC | 引子序列 |
| 56 | TATAGGAACTTCGCGACACGGACAC | 引子序列 |
| 57 | ACAGGAGGGACCTACCTTCAG | 引子序列 |
| 58 | GCCTGCCTTTCAGAGACCTCAGTC | 引子序列 |
| 59 | CCTCTCCGGCTGCTCATC TTACTC | 引子序列 |
| 60 | GTCTCTCAGCCCTGGCAGAGTTTG | 引子序列 |
| 61 | CGCCTACCCTAGTCCTGACTGTTG | 引子序列 |
| 62 | AAAGCCTACAGCATCCTCACCTC | 引子序列 |
| 63 | GCATCATGGGGTTGTAGATTCCG | 引子序列 |
| 64 | GGGGS | 連接子序列 |
| 65 | HHHHHH | 6X-His標籤 |
| 66 | QVQLQQPGAELVKPGASVKLSCKASGYTFTSYWMHWVKQSPGRGLEWIGRSDPTTGGTNYNEKFKTKATLTVDKPSSTAYMQLSSLTSDDSAVYYCVRTSGTGDYWGQGTSLTVSSAKTTAPSVYPLAPVCGGTTGSSVT | 抗TREM2抗體RS9.F6之VH |
| 67 | DVVMTQTPLSLPVSLGDQASISCRSSQSLVHNNGNTFLHWYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYFCSQTTHVPPTFGGGTKLEIKRADAAPTVSIFPPSSEQLTSGGASVVCF | 抗TREM2抗體RS9.F6之VL |
| 68 | DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCQSSKSLLHSNGKTYLNWYQQKPGQPPKLLIYWMSTRASGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQFLEFPFTFGQGTKVEIK | CL0020307-1 VL |
| 69 | FPGESES | TREM2抗原決定基 |
| 70 | GEKGPCQRV | TREM2抗原決定基 |
| 71 | TLRNLQPHDAGL | TREM2抗原決定基 |
| 72 | VEVL | TREM2抗原決定基 |
| 73 | DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGISNWLAWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQVGVPLRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQADSFPRNFGQGTKLEIK | 參考抗體#1 VL |
| 74 | EVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGSGHSFTNYWIAWVRQMPGKGLEWMGIIYPGDSDTRYSPSFQGQVTISADKSISTAYLQWSSLKASDTAVYFCARQRTFYYDSSGYFDYWGQGTLVTVSS | 參考抗體#1 VH |
| 75 | DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQNGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYFCQQADSFPRTFGQGTKLEIK | 參考抗體#2 VL |
| 76 | EVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGSGYSFTSYWIAWVRQMPGKGLEWMGIIYPGDSDTRYSPSFQGQVTISADKSISTAYLQWSSLKASDTAMYFCARQRTFYYDSSDYFDYWGQGTLVTVSS | 參考抗體#2 VH |
| 77 | DVVMTQSPDSLAVSLGERATINCRSSQSLVHSNRYTYLHWYQQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCSQSTRVPYTFGQGTKLEIK | 參考抗體#3 VL |
| 78 | QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYAFSSQWMNWVRQAPGQRLEWIGRIYPGGGDTNYAGKFQGRVTITADTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARLLRNQPGESYAMDYWGQGTLVTVSS | 參考抗體#3 VH |
| 79 | EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAGSGFTFTDFYMSWVRQAPGKGPEWLSVIRNKANGYTAGYNPSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARLTYGFDYWGQGTLVTVSS | CL0020188-4 VH |
圖 1
包括表示示範性抗TREM2抗體與表現TREM2之HEK細胞上之表面TREM2的結合的代表性流動式細胞測量術直方圖。
圖 2
包括藉由原代人類巨噬細胞中示範性抗TREM2抗體所進行之pSyk信號活化的代表性劑量反應曲線。實心黑色圓圈(●)表示抗TREM2抗體，且空心白色圓圈(º)表示同型對照。
圖 3A 及圖 3B
包括在用示範性抗TREM2抗體預處理5分鐘(圖3A)或24小時(圖3B)、隨後以脂質囊泡給予且評定細胞中之脂質體反應之後人類iPSC小神經膠質細胞中pSyk信號活化之代表性劑量反應曲線。
圖 4
包括在表現人類TREM2/DAP12之Jurkat NFAT細胞中響應於示範性抗TREM2抗體之刺激而產生的NFAT-螢光素酶報道基因活性的代表性劑量反應曲線。實心黑色圓圈(●)表示抗TREM2抗體，且空心白色圓圈(º)表示同型對照。
圖 5
示出人類巨噬細胞中響應於以示範性抗TREM2抗體進行之處理所得的細胞存活的代表性劑量反應曲線。
圖 6
示出隨著示範性抗TREM2抗體之抗TREM2抗體濃度變化之代表性可溶性TREM2水準(sTREM2)。
圖 7
為指示以示範性抗TREM2抗體處理之人類巨噬細胞中每個細胞之平均pHrodo螢光強度的長條圖。
圖 8A
為在以髓磷脂處理、隨後與示範性抗TREM2抗體或同型對照一起培育之iPSC小神經膠質細胞中脂質積聚之代表性顯微術影像。
圖 8B
為在圖8A中攝影之iPSC小神經膠質細胞之尼羅紅染色(指示脂質積聚)的代表性長條圖。
圖 8C-8F
包括示出在以髓磷脂處理、隨後與示範性抗TREM2抗體一起培育之iPSC小神經膠質細胞中膽固醇酯種類(圖8C及8E)及三酸甘油酯脂質種類(圖8D及8F)之定量水準的長條圖。圖 8E 及 8F
表示在與示範性抗TREM2抗體一起培育前包括髓磷脂廓清(washout)步驟之iPSC小神經膠質細胞的資料。
圖 9
包括示範性抗TREM2抗體之代表性小鼠血漿藥物動力學概況。
圖 10A 及圖 10B
包括示出注射到TREM2 cDNA KI (huTrem2KI/KI
)小鼠中之示範性抗TREM2抗體在小鼠血漿中之總可溶性TREM2 (sTREM2) (圖10A)及經抗體結合TREM2 (圖10B)的變化的長條圖。
圖 11A 及圖 11B
包括示範性人源化及序列經優化抗TREM2抗體在HEK細胞中對人類TREM2之劑量反應結合曲線。
圖 12A 及圖 12B
包括在HEK293-H6細胞中藉由示範性人源化及序列經優化抗TREM2抗體產生之pSyk信號活化之劑量反應曲線。
圖 13
示出人類巨噬細胞中響應於以示範性人源化及序列經優化抗TREM2抗體進行之處理所得的細胞存活的劑量反應曲線。
圖 14A 及 14B
包括iPSC小神經膠質細胞中響應於以示範性人源化及序列經優化抗TREM2抗體進行之處理所得的脂質清除率的劑量反應曲線。
Claims (71)
- 一種特異性結合到人類TREM2之經分離抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含： (a) CDR-H1序列，其包含序列G-F-T-F-T-α6 -F-Y-M-S (SEQ ID NO:48)，其中α6 為D或N； (b) CDR-H2序列，其包含序列V-I-R-N-β5 -β6 -N-β8 -Y-T-β11 -β12 -Y-N-P-S-V-K-G (SEQ ID NO:49)，其中β5 為K或R；β6 為A或P；β8 為G或A；β11 為A或T；且β12 為G或D； (c) CDR-H3序列，其包含序列γ1 -R-L-γ4 -Y-G-F-D-Y (SEQ ID NO:50)，其中γ1 為A或T；且γ4 為T或S； (d) CDR-L1序列，其包含序列Q-S-S-K-S-L-L-H-S-δ10 -G-K-T-Y-L-N (SEQ ID NO:51)，其中δ10 為N或T； (e) CDR-L2序列，其包含序列WMSTRAS (SEQ ID NO:8)；及 (f) CDR-L3序列，其包含序列Q-Q-F-L-E-ϕ6 -P-F-T (SEQ ID NO:52)，其中ϕ6 為Y或F。
- 如請求項1之經分離抗體或抗原結合片段，其中該CDR-H1序列選自SEQ ID NO:4及12中之任一者。
- 如請求項1或2之經分離抗體或抗原結合片段，其中該CDR-H2序列選自SEQ ID NO:5、13、及25中之任一者。
- 如請求項1至3中任一項之經分離抗體或抗原結合片段，其中該CDR-H3序列選自SEQ ID NO:6、14、及17中之任一者。
- 如請求項1至4中任一項之經分離抗體或抗原結合片段，其中該CDR-L1序列選自SEQ ID NO:7及23中之任一者。
- 如請求項1至5中任一項之經分離抗體或抗原結合片段，其中該CDR-L3序列選自SEQ ID NO:9及18中之任一者。
- 如請求項1至6中任一項之經分離抗體或抗原結合片段，其中該抗體或抗原結合片段包含： (a) 包含胺基酸序列SEQ ID NO:4之CDR-H1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:5之CDR-H2、包含胺基酸序列SEQ ID NO:17之CDR-H3、包含胺基酸序列SEQ ID NO:7之CDR-L1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:8之CDR-L2及包含胺基酸序列SEQ ID NO:18之CDR-L3；或 (b) 包含胺基酸序列SEQ ID NO:4之CDR-H1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:5之CDR-H2、包含胺基酸序列SEQ ID NO:17之CDR-H3、包含胺基酸序列SEQ ID NO:23之CDR-L1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:8之CDR-L2及包含胺基酸序列SEQ ID NO:18之CDR-L3；或 (c) 包含胺基酸序列SEQ ID NO:4之CDR-H1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:25之CDR-H2、包含胺基酸序列SEQ ID NO:17之CDR-H3、包含胺基酸序列SEQ ID NO:7之CDR-L1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:8之CDR-L2及包含胺基酸序列SEQ ID NO:18之CDR-L3；或 (d) 包含胺基酸序列SEQ ID NO:4之CDR-H1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:25之CDR-H2、包含胺基酸序列SEQ ID NO:17之CDR-H3、包含胺基酸序列SEQ ID NO:23之CDR-L1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:8之CDR-L2及包含胺基酸序列SEQ ID NO:18之CDR-L3；或 (e) 包含胺基酸序列SEQ ID NO:4之CDR-H1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:5之CDR-H2、包含胺基酸序列SEQ ID NO:6之CDR-H3、包含胺基酸序列SEQ ID NO:7之CDR-L1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:8之CDR-L2及包含胺基酸序列SEQ ID NO:9之CDR-L3；或 (f) 包含胺基酸序列SEQ ID NO:12之CDR-H1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:13之CDR-H2、包含胺基酸序列SEQ ID NO:14之CDR-H3、包含胺基酸序列SEQ ID NO:7之CDR-L1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:8之CDR-L2及包含胺基酸序列SEQ ID NO:9之CDR-L3；或 (g) 包含胺基酸序列SEQ ID NO:4之CDR-H1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:25之CDR-H2、包含胺基酸序列SEQ ID NO:17之CDR-H3、包含胺基酸序列SEQ ID NO:7之CDR-L1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:8之CDR-L2及包含胺基酸序列SEQ ID NO:9之CDR-L3。
- 如請求項1至7中任一項之經分離抗體或抗原結合片段，其包含與SEQ ID NO:2、10、15、19、21、24、26、及79中之任一者具有至少85%序列一致性的VH 序列。
- 如請求項8之經分離抗體或抗原結合片段，其中該VH 序列與SEQ ID NO:15具有至少90%序列一致性。
- 如請求項9之經分離抗體或抗原結合片段，其中該VH 序列與SEQ ID NO:15具有至少95%序列一致性。
- 如請求項10之經分離抗體或抗原結合片段，其中該VH 序列包含SEQ ID NO:15。
- 如請求項8之經分離抗體或抗原結合片段，其中該VH 序列與SEQ ID NO:24具有至少90%序列一致性。
- 如請求項12之經分離抗體或抗原結合片段，其中該VH 序列與SEQ ID NO:24具有至少95%序列一致性。
- 如請求項13之經分離抗體或抗原結合片段，其中該VH 序列包含SEQ ID NO:24。
- 如請求項8之經分離抗體或抗原結合片段，其中該VH 序列與SEQ ID NO:79具有至少90%序列一致性。
- 如請求項15之經分離抗體或抗原結合片段，其中該VH 序列與SEQ ID NO:79具有至少95%序列一致性。
- 如請求項16之經分離抗體或抗原結合片段，其中該VH 序列包含SEQ ID NO:79。
- 如請求項1至17中任一項之經分離抗體或抗原結合片段，其包含與SEQ ID NO:3、11、16、20、22、及68中之任一者具有至少85%序列一致性的VL 序列。
- 如請求項18之經分離抗體或抗原結合片段，其中該VL 序列與SEQ ID NO:16具有至少90%序列一致性。
- 如請求項19之經分離抗體或抗原結合片段，其中該VL 序列與SEQ ID NO:16具有至少95%序列一致性。
- 如請求項20之經分離抗體或抗原結合片段，其中該VL 序列包含SEQ ID NO:16。
- 如請求項18之經分離抗體或抗原結合片段，其中該VL 序列與SEQ ID NO:22具有至少90%序列一致性。
- 如請求項22之經分離抗體或抗原結合片段，其中該VL 序列與SEQ ID NO:22具有至少95%序列一致性。
- 如請求項23之經分離抗體或抗原結合片段，其中該VL 序列包含SEQ ID NO:22。
- 如請求項18之經分離抗體或抗原結合片段，其中該VL 序列與SEQ ID NO:68具有至少90%序列一致性。
- 如請求項25之經分離抗體或抗原結合片段，其中該VL 序列與SEQ ID NO:68具有至少95%序列一致性。
- 如請求項26之經分離抗體或抗原結合片段，其中該VL 序列包含SEQ ID NO:68。
- 如請求項1至27中任一項之經分離抗體或抗原結合片段，其中該抗體或抗原結合片段包含： (a) 包含SEQ ID NO:15之VH 序列及包含SEQ ID NO:16之VL ；或 (b) 包含SEQ ID NO:19之VH 序列及包含SEQ ID NO:20之VL ；或 (c) 包含SEQ ID NO:21之VH 序列及包含SEQ ID NO:20之VL ；或 (d) 包含SEQ ID NO:19之VH 序列及包含SEQ ID NO:22之VL ；或 (e) 包含SEQ ID NO:79之VH 序列及包含SEQ ID NO:22之VL ；或 (f) 包含SEQ ID NO:24之VH 序列及包含SEQ ID NO:20之VL ；或 (g) 包含SEQ ID NO:26之VH 序列及包含SEQ ID NO:20之VL ；或 (h) 包含SEQ ID NO:24之VH 序列及包含SEQ ID NO:22之VL ；或 (i) 包含SEQ ID NO:26之VH 序列及包含SEQ ID NO:22之VL ；或 (j) 包含SEQ ID NO:2之VH 序列及包含SEQ ID NO:3之VL ；或 (k) 包含SEQ ID NO:10之VH 序列及包含SEQ ID NO:11之VL ；或 (l) 包含SEQ ID NO:24之VH 序列及包含SEQ ID NO:68之VL 。
- 一種特異性結合到人類TREM2之經分離抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含： (a) CDR-H1序列，其包含序列GFSIEDFYIH (SEQ ID NO:29)； (b) CDR-H2序列，其包含序列W-I-D-P-E-β6 -G-β8 -S-K-Y-A-P-K-F-Q-G (SEQ ID NO:47)，其中β6 為N或Q且β8 為D或E； (c) CDR-H3序列，其包含序列HADHGNYGSTMDY (SEQ ID NO:31)； (d) CDR-L1序列，其包含序列HASQHINVWLS (SEQ ID NO:32)； (e) CDR-L2序列，其包含序列KASNLHT (SEQ ID NO:33)；及 (f) CDR-L3序列，其包含序列QQGQTYPRT (SEQ ID NO:34)。
- 如請求項29之經分離抗體或抗原結合片段，其中該CDR-H2序列選自SEQ ID NO:30、39、41、及43。
- 如請求項29或30之經分離抗體或抗原結合片段，其中該抗體或抗原結合片段包含： (a) 包含胺基酸序列SEQ ID NO:29之CDR-H1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:30之CDR-H2、包含胺基酸序列SEQ ID NO:31之CDR-H3、包含胺基酸序列SEQ ID NO:32之CDR-L1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:33之CDR-L2及包含胺基酸序列SEQ ID NO:34之CDR-L3；或 (b) 包含胺基酸序列SEQ ID NO:29之CDR-H1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:39之CDR-H2、包含胺基酸序列SEQ ID NO:31之CDR-H3、包含胺基酸序列SEQ ID NO:32之CDR-L1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:33之CDR-L2及包含胺基酸序列SEQ ID NO:34之CDR-L3；或 (c) 包含胺基酸序列SEQ ID NO:29之CDR-H1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:41之CDR-H2、包含胺基酸序列SEQ ID NO:31之CDR-H3、包含胺基酸序列SEQ ID NO:32之CDR-L1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:33之CDR-L2及包含胺基酸序列SEQ ID NO:34之CDR-L3；或 (d) 包含胺基酸序列SEQ ID NO:29之CDR-H1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:43之CDR-H2、包含胺基酸序列SEQ ID NO:31之CDR-H3、包含胺基酸序列SEQ ID NO:32之CDR-L1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:33之CDR-L2及包含胺基酸序列SEQ ID NO:34之CDR-L3。
- 如請求項29至31中任一項之經分離抗體或抗原結合片段，其包含與SEQ ID NO:27、35、37、38、40、42、44、45、及46中之任一者具有至少85%序列一致性的VH 序列。
- 如請求項32之經分離抗體或抗原結合片段，其中該VH 序列與SEQ ID NO:27具有至少90%序列一致性。
- 如請求項33之經分離抗體或抗原結合片段，其中該VH 序列與SEQ ID NO:27具有至少95%序列一致性。
- 如請求項34之經分離抗體或抗原結合片段，其中該VH 序列包含SEQ ID NO:27。
- 如請求項29至35中任一項之經分離抗體或抗原結合片段，其包含與SEQ ID NO:28或SEQ ID NO:36具有至少85%序列一致性的VL 序列。
- 如請求項36之經分離抗體或抗原結合片段，其中該VL 序列與SEQ ID NO:28具有至少90%序列一致性。
- 如請求項37之經分離抗體或抗原結合片段，其中該VL 序列與SEQ ID NO:28具有至少95%序列一致性。
- 如請求項38之經分離抗體或抗原結合片段，其中該VL 序列包含SEQ ID NO:28。
- 如請求項36之經分離抗體或抗原結合片段，其中該抗體或抗原結合片段包含： (a) 包含SEQ ID NO:27之VH 序列及包含SEQ ID NO:28之VL ；或 (b) 包含SEQ ID NO:35之VH 序列及包含SEQ ID NO:36之VL ；或 (c) 包含SEQ ID NO:37之VH 序列及包含SEQ ID NO:36之VL ；或 (d) 包含SEQ ID NO:38之VH 序列及包含SEQ ID NO:36之VL ；或 (e) 包含SEQ ID NO:40之VH 序列及包含SEQ ID NO:36之VL ；或 (f) 包含SEQ ID NO:42之VH 序列及包含SEQ ID NO:36之VL ；或 (g) 包含SEQ ID NO:44之VH 序列及包含SEQ ID NO:36之VL ；或 (h) 包含SEQ ID NO:45之VH 序列及包含SEQ ID NO:36之VL ；或 (i) 包含SEQ ID NO:46之VH 序列及包含SEQ ID NO:36之VL 。
- 一種特異性結合到人類TREM2之經分離抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含： (a) CDR-H1序列，其包含SEQ ID NO:4、12及29中任一者之胺基酸序列； (b) CDR-H2序列，其包含SEQ ID NO:5、13、25、30、39、41及43中任一者之胺基酸序列； (c) CDR-H3序列，其包含SEQ ID NO:6、14、17及31中任一者之胺基酸序列； (d) CDR-L1序列，其包含SEQ ID NO:7、23及32中任一者之胺基酸序列； (e) CDR-L2序列，其包含SEQ ID NO:8及33中任一者之胺基酸序列；及 (f) CDR-L3序列，其包含SEQ ID NO:9、18及34中任一者之胺基酸序列。
- 如請求項41之經分離抗體或抗原結合片段，其中該抗體或抗原結合片段包含： (a) 包含胺基酸序列SEQ ID NO:4之CDR-H1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:5之CDR-H2、包含胺基酸序列SEQ ID NO:6之CDR-H3、包含胺基酸序列SEQ ID NO:7之CDR-L1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:8之CDR-L2及包含胺基酸序列SEQ ID NO:9之CDR-L3；或 (b) 包含胺基酸序列SEQ ID NO:4之CDR-H1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:5之CDR-H2、包含胺基酸序列SEQ ID NO:17之CDR-H3、包含胺基酸序列SEQ ID NO:7之CDR-L1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:8之CDR-L2及包含胺基酸序列SEQ ID NO:18之CDR-L3；或 (c) 包含胺基酸序列SEQ ID NO:4之CDR-H1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:5之CDR-H2、包含胺基酸序列SEQ ID NO:17之CDR-H3、包含胺基酸序列SEQ ID NO:23之CDR-L1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:8之CDR-L2及包含胺基酸序列SEQ ID NO:18之CDR-L3；或 (d) 包含胺基酸序列SEQ ID NO:4之CDR-H1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:25之CDR-H2、包含胺基酸序列SEQ ID NO:17之CDR-H3、包含胺基酸序列SEQ ID NO:7之CDR-L1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:8之CDR-L2及包含胺基酸序列SEQ ID NO:18之CDR-L3；或 (e) 包含胺基酸序列SEQ ID NO:4之CDR-H1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:25之CDR-H2、包含胺基酸序列SEQ ID NO:17之CDR-H3、包含胺基酸序列SEQ ID NO:23之CDR-L1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:8之CDR-L2及包含胺基酸序列SEQ ID NO:18之CDR-L3；或 (f) 包含胺基酸序列SEQ ID NO:12之CDR-H1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:13之CDR-H2、包含胺基酸序列SEQ ID NO:14之CDR-H3、包含胺基酸序列SEQ ID NO:7之CDR-L1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:8之CDR-L2及包含胺基酸序列SEQ ID NO:9之CDR-L3；或 (g) 包含胺基酸序列SEQ ID NO:29之CDR-H1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:30之CDR-H2、包含胺基酸序列SEQ ID NO:31之CDR-H3、包含胺基酸序列SEQ ID NO:32之CDR-L1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:33之CDR-L2及包含胺基酸序列SEQ ID NO:34之CDR-L3；或 (h) 包含胺基酸序列SEQ ID NO:29之CDR-H1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:39之CDR-H2、包含胺基酸序列SEQ ID NO:31之CDR-H3、包含胺基酸序列SEQ ID NO:32之CDR-L1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:33之CDR-L2及包含胺基酸序列SEQ ID NO:34之CDR-L3；或 (i) 包含胺基酸序列SEQ ID NO:29之CDR-H1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:41之CDR-H2、包含胺基酸序列SEQ ID NO:31之CDR-H3、包含胺基酸序列SEQ ID NO:32之CDR-L1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:33之CDR-L2及包含胺基酸序列SEQ ID NO:34之CDR-L3；或 (j) 包含胺基酸序列SEQ ID NO:29之CDR-H1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:43之CDR-H2、包含胺基酸序列SEQ ID NO:31之CDR-H3、包含胺基酸序列SEQ ID NO:32之CDR-L1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:33之CDR-L2及包含胺基酸序列SEQ ID NO:34之CDR-L3；或 (k) 包含胺基酸序列SEQ ID NO:4之CDR-H1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:25之CDR-H2、包含胺基酸序列SEQ ID NO:17之CDR-H3、包含胺基酸序列SEQ ID NO:7之CDR-L1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:8之CDR-L2及包含胺基酸序列SEQ ID NO:9之CDR-L3。
- 如請求項41或42之經分離抗體或抗原結合片段，其包含與SEQ ID NO:2、10、15、19、21、24、26、27、35、37、38、40、42、44、45、46、及79中之任一者具有至少85%序列一致性的重鏈可變區。
- 如請求項41至43中任一項之經分離抗體或抗原結合片段，其包含與SEQ ID NO:3、11、16、20、22、28、及36中之任一者具有至少85%序列一致性的輕鏈可變區。
- 如請求項41至44中任一項之經分離抗體或抗原結合片段，其中該抗體或抗原結合片段包含： (a) 與SEQ ID NO:2具有至少85%序列一致性之VH 序列及與SEQ ID NO:3具有至少85%序列一致性之VL 序列；或 (b) 與SEQ ID NO:10具有至少85%序列一致性之VH 序列及與SEQ ID NO:11具有至少85%序列一致性之VL 序列；或 (c) 與SEQ ID NO:15具有至少85%序列一致性之VH 序列及與SEQ ID NO:16具有至少85%序列一致性之VL 序列；或 (d) 與SEQ ID NO:19具有至少85%序列一致性之VH 序列及與SEQ ID NO:20具有至少85%序列一致性之VL 序列；或 (e) 與SEQ ID NO:21具有至少85%序列一致性之VH 序列及與SEQ ID NO:20具有至少85%序列一致性之VL 序列；或 (f) 與SEQ ID NO:19具有至少85%序列一致性之VH 序列及與SEQ ID NO:22具有至少85%序列一致性之VL 序列；或 (g) 與SEQ ID NO:79具有至少85%序列一致性之VH 序列及與SEQ ID NO:22具有至少85%序列一致性之VL 序列；或 (h) 與SEQ ID NO:24具有至少85%序列一致性之VH 序列及與SEQ ID NO:20具有至少85%序列一致性之VL 序列；或 (i) 與SEQ ID NO:26具有至少85%序列一致性之VH 序列及與SEQ ID NO:20具有至少85%序列一致性之VL 序列；或 (j) 與SEQ ID NO:24具有至少85%序列一致性之VH 序列及與SEQ ID NO:22具有至少85%序列一致性之VL 序列；或 (k) 與SEQ ID NO:26具有至少85%序列一致性之VH 序列及與SEQ ID NO:22具有至少85%序列一致性之VL 序列；或 (l) 與SEQ ID NO:27具有至少85%序列一致性之VH 序列及與SEQ ID NO:28具有至少85%序列一致性之VL 序列；或 (m) 與SEQ ID NO:35具有至少85%序列一致性之VH 序列及與SEQ ID NO:36具有至少85%序列一致性之VL 序列；或 (n) 與SEQ ID NO:37具有至少85%序列一致性之VH 序列及與SEQ ID NO:36具有至少85%序列一致性之VL 序列；或 (o) 與SEQ ID NO:38具有至少85%序列一致性之VH 序列及與SEQ ID NO:36具有至少85%序列一致性之VL 序列；或 (p) 與SEQ ID NO:40具有至少85%序列一致性之VH 序列及與SEQ ID NO:36具有至少85%序列一致性之VL 序列；或 (q) 與SEQ ID NO:42具有至少85%序列一致性之VH 序列及與SEQ ID NO:36具有至少85%序列一致性之VL 序列；或 (r) 與SEQ ID NO:44具有至少85%序列一致性之VH 序列及與SEQ ID NO:36具有至少85%序列一致性之VL 序列；或 (s) 與SEQ ID NO:45具有至少85%序列一致性之VH 序列及與SEQ ID NO:36具有至少85%序列一致性之VL 序列；或 (t) 與SEQ ID NO:46具有至少85%序列一致性之VH 序列及與SEQ ID NO:36具有至少85%序列一致性之VL 序列；或 (u) 與SEQ ID NO:24具有至少85%序列一致性之VH 序列及與SEQ ID NO:68具有至少85%序列一致性之VL 序列。
- 一種特異性結合到人類骨髓細胞表現觸發性受體2 (TREM2)之經分離抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段所識別之抗原決定基與由選自由以下組成之群的抗體純系識別之抗原決定基相同或基本上相同：純系CL0020306、純系CL0020188、純系CL0020188-1、純系CL0020188-2、純系CL0020188-3、純系CL0020188-4、純系CL0020188-5、純系CL0020188-6、純系CL0020188-7、純系CL0020188-8、純系CL0020307、純系CL0020123、純系CL0020123-1、純系CL0020123-2、純系CL0020123-3、純系CL0020123-4、純系CL0020123-5、純系CL0020123-6、純系CL0020123-7及純系CL0020123-8。
- 如請求項46之經分離抗體或抗原結合片段，其中該抗體或抗原結合片段所識別之抗原決定基與由選自由以下組成之群的抗體純系識別之抗原決定基相同或基本上相同：純系CL0020123、純系CL0020123-1、純系CL0020123-2、純系CL0020123-3、純系CL0020123-4、純系CL0020123-5、純系CL0020123-6、純系CL0020123-7及純系CL0020123-8。
- 如請求項47之經分離抗體或抗原結合片段，其中該抗體或抗原結合片段識別SEQ ID NO:1中之以下項中之一或多者：(i)胺基酸殘基55-63 (GEKGPCQRV (SEQ ID NO:70))，(ii)胺基酸96-107 (TLRNLQPHDAGL (SEQ ID NO:71))，及(iii)胺基酸殘基126-129 (VEVL (SEQ ID NO:72))。
- 如請求項46之經分離抗體或抗原結合片段，其中該抗體或抗原結合片段所識別之抗原決定基與由選自由以下組成之群的抗體純系識別之抗原決定基相同或基本上相同：純系CL0020188、純系CL0020188-1、純系CL0020188-2、純系CL0020188-3、純系CL0020188-4、純系CL0020188-5、純系CL0020188-6、純系CL0020188-7、純系CL0020188-8、純系CL0020307及純系CL0020306。
- 如請求項49之經分離抗體或抗原結合片段，其中該抗體或抗原結合片段識別SEQ ID NO:1中之胺基酸殘基143-149 (FPGESES (SEQ ID NO:69))。
- 一種特異性結合到人類TREM2之經分離抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段識別包含SEQ ID NO:1中之以下項中之一或多者或由其組成之抗原決定基：(i)胺基酸殘基55-63 (GEKGPCQRV (SEQ ID NO:70))，(ii)胺基酸96-107 (TLRNLQPHDAGL (SEQ ID NO:71))，及(iii)胺基酸殘基126-129 (VEVL (SEQ ID NO:72))。
- 一種特異性結合到人類TREM2之經分離抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段識別包含SEQ ID NO:1中之胺基酸殘基143-149 (FPGESES (SEQ ID NO:69))或由其組成之抗原決定基。
- 如請求項1至52中任一項之經分離抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段降低可溶性TREM2蛋白(sTREM2)之水準。
- 如請求項1至53中任一項之經分離抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段增強TREM2活性。
- 如請求項54之經分離抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段增強吞噬作用或增強骨髓細胞、小神經膠質細胞或巨噬細胞之遷移、分化、功能、或存活。
- 如請求項55之經分離抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段增強小神經膠質細胞功能而不增加神經炎症。
- 如請求項54之經分離抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段增強Syk磷酸化。
- 如請求項57之經分離抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段在TREM2配體存在下增強Syk磷酸化。
- 如請求項1至58中任一項之經分離抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段表現出與獼猴TREM2蛋白之交叉反應性。
- 如請求項1至59中任一項之經分離抗體或其抗原結合片段，其中該抗體為單株抗體。
- 如請求項1至59中任一項之經分離抗體或其抗原結合片段，其中該抗體為嵌合抗體。
- 如請求項1至59中任一項之經分離抗體或其抗原結合片段，其中該抗體為人源化抗體。
- 如請求項1至59中任一項之經分離抗體或其抗原結合片段，其中該抗體為完全人類抗體。
- 如請求項1至59中任一項之經分離抗體或其抗原結合片段，其中該抗原結合片段為Fab、F(ab’)2 、scFv、或二價scFv。
- 一種醫藥組成物，其包含如請求項1至64中任一項之經分離抗體或其抗原結合片段及醫藥學上可接受之載劑。
- 一種抗體或其抗原結合片段，其與如請求項1至64中任一項之經分離抗體競爭結合到該人類TREM2蛋白。
- 一種套組，其包含： 如請求項1至64中任一項之經分離抗體或其抗原結合片段或如請求項65之醫藥組成物；及 其使用說明書。
- 一種治療受試者之神經退化性疾病的方法，該方法包含向該受試者投與如請求項1至64中任一項之經分離抗體或其抗原結合片段或如請求項65之醫藥組成物。
- 如請求項68之方法，其中該神經退化性疾病選自由以下組成之群：阿茲海默氏病、原發性年齡相關tau蛋白病、進行性核上性麻痺(PSP)、額顳葉型癡呆、額顳葉型癡呆伴與染色體17相關之帕金森症、嗜銀顆粒性癡呆、肌萎縮側索硬化症、肌萎縮側索硬化症/關島型帕金森氏症-癡呆綜合症(ALS-PDC)、皮質基底核退化症、慢性創傷性腦病、庫賈氏病(Creutzfeldt-Jakob disease)、拳擊員癡呆、具有鈣化之擴散性神經原纖維纏結、唐氏症候群、家族性英國型癡呆、家族性丹麥型癡呆、格施謝三氏症(Gerstmann-Straussler-Scheinker disease)、球狀神經膠tau蛋白病、瓜達洛普帕金森氏病伴癡呆(Guadeloupean parkinsonism with dementia)、瓜達洛普PSP、哈-斯二氏病(Hallevorden-Spatz disease)、遺傳性彌漫性腦白質病伴癡呆(HDLS)、杭丁頓氏病、包涵體肌炎、多系統萎縮症、肌強直性營養不良、Nasu-Hakola病、神經原纖維纏結佔優性癡呆、C型尼-皮二氏病(Niemann-Pick disease type C)、蒼白球-腦橋-黑質變性(pallido-ponto-nigral degeneration)、帕金森氏病、皮克氏病(Pick’s disease)、腦炎後帕金森氏症、朊病毒蛋白大腦澱粉樣血管病、進行性皮層下神經膠瘤病、亞急性硬化性全腦炎、及僅纏結性癡呆。
- 一種降低患有神經退化性疾病之受試者中之sTREM2水準的方法，該方法包含向該受試者投與如請求項1至64中任一項之經分離抗體或其抗原結合片段或如請求項65之醫藥組成物。
- 一種增強患有神經退化性疾病之受試者中之TREM2活性的方法，該方法包含向該受試者投與如請求項1至64中任一項之經分離抗體或其抗原結合片段或如請求項65之醫藥組成物。
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