TW202014196A

TW202014196A - 阿茲海默氏病之治療、預防或改善用組合物、腦神經細胞死亡之抑制用組合物、由澱粉狀蛋白β胜肽誘導之小神經膠質之活性化之抑制用組合物、及由澱粉狀蛋白β胜肽誘導之PGE2、TNF-α或IL-1β產生之抑制用組合物

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Publication number: TW202014196A
Application number: TW108122681A
Authority: TW
Inventors: 不破有沙; 內尾隆正; 川﨑健吾; 室山幸太郎; 室﨑伸二
Original assignee: 日商好侍健康食品股份有限公司
Priority date: 2018-06-29
Filing date: 2019-06-27
Publication date: 2020-04-16
Also published as: CN112351790A; JPWO2020004357A1; WO2020004357A1; CA3105169A1; US20210267914A1; TWI825113B

Abstract

本發明提供一種以源自薑黃之成分作為有效成分之對阿茲海默氏病之治療、預防或改善等有用的組合物。本發明係關於一種阿茲海默氏病之治療用組合物、腦神經細胞死亡之抑制用組合物、由澱粉狀蛋白β胜肽誘導之小神經膠質之活性化之抑制用組合物、或由澱粉狀蛋白β胜肽誘導之PGE2、TNF-α或IL-1β產生之抑制用組合物，該等以藉由選自由水及親水性有機溶劑所組成之群中之至少1種萃取溶劑所獲得之薑黃萃取物、或選自薑黃酮醇A及薑黃酮醇B中之至少一種作為有效成分。

Description

阿茲海默氏病之治療、預防或改善用組合物、腦神經細胞死亡之抑制用組合物、由澱粉狀蛋白β胜肽誘導之小神經膠質之活性化之抑制用組合物、及由澱粉狀蛋白β胜肽誘導之PGE2、TNF-α或IL-1β產生之抑制用組合物

本發明係關於一種阿茲海默氏病之治療、預防或改善用組合物、腦神經細胞死亡之抑制用組合物、由澱粉狀蛋白β胜肽誘導之小神經膠質之活性化之抑制用組合物、或由澱粉狀蛋白β胜肽誘導之PGE2、TNF-α或IL-1β產生之抑制用組合物。

阿茲海默氏病係癡呆症中占50～75%之主要疾病。於阿茲海默氏病患者之腦內，觀察到以澱粉狀蛋白β胜肽作為主成分之老年斑、以Tau蛋白作為主成分之神經原纖維纏結、神經細胞死亡等。阿茲海默氏病呈現以認知機能之降低作為代表之多樣化之症狀，但其發病之機制不明，於治療或預防中之問題較多(非專利文獻1)。

作為阿茲海默氏病之原因物質中之一種的澱粉狀蛋白β胜肽之累積不僅引起神經細胞之細胞死亡，亦因使作為巨噬細胞之一種之小神經膠質活性化而使阿茲海默氏病發展。

若小神經膠質活性化，則產生***素E2(PGE2)。PGE2作用於神經細胞，發揮興奮性毒性而誘導神經細胞死亡(非專利文獻2)。於阿茲海默氏病患者之腦內，PGE2增加，PGE2使澱粉狀蛋白β胜肽進一步增加(非專利文獻3)。因此，認為抑制由小神經膠質所引起之PGE2之產生係對抑制阿茲海默氏病之發展有效。

又，若小神經膠質活性化，則產生腫瘤壞死因子α(TNF-α)、介白素-1β(IL-1β)。TNF-α作用於神經細胞，使誘導細胞死亡之細胞內訊號傳遞路徑活性化，或者促進澱粉狀蛋白β胜肽所誘導之神經細胞死亡。因此，認為抑制由小神經膠質所引起之TNF-α、IL-1β之產生係對抑制阿茲海默氏病之發展有效。於非專利文獻4中揭示有於澱粉狀蛋白β胜肽之存在下活性化之小神經膠質釋出TNF-α等體液因子，該體液因子誘導神經細胞之細胞死亡。

進而，認為阿茲海默氏病之產生、發展與氧化壓力大有關聯。作為其機制，考慮釋出至神經細胞內之澱粉狀蛋白β胜肽累積於線粒體，引起氧化壓力而成為導致細胞死亡之路徑等(非專利文獻5、6)。

另一方面，已知於薑黃中包含多種生理活性物質。例如於專利文獻1中記載有源自薑黃之薑黃油包含複數種甜沒藥烷倍半萜，可用作癲癇等除阿茲海默氏病以外之中樞神經系統之損傷中之抗痙攣劑。

於專利文獻2中記載有將藉由超臨界二氧化碳所獲得之包含類薑黃素之薑黃種萃取物投予至罹患澱粉狀蛋白斑凝集或原纖維生成之受驗體、尤其是罹患阿茲海默氏病之受驗體。

於專利文獻3中記載有薑黃種之根莖及葉之脂溶性萃取物對神經腦血管損傷之治療有效。根據專利文獻3，該神經腦血管損傷係包含阿茲海默氏病之疾病。 [先前技術文獻] [專利文獻]

專利文獻1：日本專利特表2014-518241號公報專利文獻2：日本專利特表2009-530305號公報專利文獻3：日本專利特表2005-516930號公報 [非專利文獻]

非專利文獻1：2010年3月醫療之俯瞰報告書～關於癡呆症(尤其是阿茲海默氏癡呆症)～(https://www.jst.go.jp/crds/report/report05/CRDS-FY2009-WR-09.html) 非專利文獻2：神經化學Vol.55 (No.3), 2016, p42-51 非專利文獻3：實驗醫學 vol.29 No.10(增刊), 2011 ,169(1647)-173(1651) 非專利文獻4：Clin Neurol 2014;54:1119-1121 非專利文獻5：YAKUGAKU ZASSHI 127(8)1199-1205(2007) 非專利文獻6：Journal of Neurochemistry, 2006, 96, 1-13

[發明所欲解決之問題]

本發明之目的在於提供一種以源自薑黃之成分作為有效成分之用於阿茲海默氏病之治療、預防或改善、腦神經細胞死亡之抑制、由澱粉狀蛋白β胜肽誘導之小神經膠質之活性化之抑制、或由澱粉狀蛋白β胜肽誘導之PGE2、TNF-α或IL-1β產生之抑制的組合物。 [解決問題之技術手段]

本發明者等人發現：若於澱粉狀蛋白β胜肽之凝集物之存在下培養巨噬細胞，則促進PGE2、TNF-α及IL-1β之產生，相對於此，於藉由水溶性薑黃萃取物、以及該萃取物中所包含之薑黃酮醇(turmeronol)A及薑黃酮醇B進行處理後之巨噬細胞中，抑制於澱粉狀蛋白β胜肽之凝集物之存在下進行培養時產生PGE2、TNF-α及IL-1β，水溶性薑黃萃取物及薑黃酮醇B具有抑制於澱粉狀蛋白β胜肽之存在下由巨噬細胞之培養上清液誘導作為腦神經細胞之模型細胞之人類神經胚細胞瘤細胞SHSY5Y之細胞死亡的作用，以及水溶性薑黃萃取物具有抑制氧化壓力所誘導之SHSY5Y之細胞死亡之作用，從而完成以下之本發明。

(1)一種阿茲海默氏病之治療、預防或改善用組合物，其含有藉由選自由水及親水性有機溶劑所組成之群中之至少1種萃取溶劑所獲得之薑黃萃取物作為有效成分。 (2)一種阿茲海默氏病之治療、預防或改善用組合物，其含有薑黃酮醇A及薑黃酮醇B中之至少1種作為有效成分。 (3)如(2)所記載之組合物，其含有包含薑黃酮醇A及薑黃酮醇B中之至少1種之藉由選自由水及親水性有機溶劑所組成之群中之至少1種萃取溶劑所獲得的薑黃萃取物作為有效成分。 (4)一種腦神經細胞死亡之抑制用組合物，其含有藉由選自由水及親水性有機溶劑所組成之群中之至少1種萃取溶劑所獲得之薑黃萃取物作為有效成分。 (5)一種腦神經細胞死亡之抑制用組合物，其含有薑黃酮醇A及薑黃酮醇B中之至少1種作為有效成分。 (6)如(5)所記載之組合物，其含有包含薑黃酮醇A及薑黃酮醇B中之至少1種之藉由選自由水及親水性有機溶劑所組成之群中之至少1種萃取溶劑所獲得的薑黃萃取物作為有效成分。 (7)一種由澱粉狀蛋白β胜肽誘導之小神經膠質之活性化之抑制用組合物，其含有藉由選自由水及親水性有機溶劑所組成之群中之至少1種萃取溶劑所獲得之薑黃萃取物作為有效成分。 (8)一種由澱粉狀蛋白β胜肽誘導之小神經膠質之活性化之抑制用組合物，其含有薑黃酮醇A及薑黃酮醇B中之至少1種作為有效成分。 (9)如(8)所記載之組合物，其含有包含薑黃酮醇A及薑黃酮醇B中之至少1種之藉由選自由水及親水性有機溶劑所組成之群中之至少1種萃取溶劑所獲得的薑黃萃取物作為有效成分。 (10)一種由澱粉狀蛋白β胜肽誘導之PGE2產生之抑制用組合物，其含有藉由選自由水及親水性有機溶劑所組成之群中之至少1種萃取溶劑所獲得之薑黃萃取物作為有效成分。 (11)一種由澱粉狀蛋白β胜肽誘導之PGE2產生之抑制用組合物，其含有薑黃酮醇A及薑黃酮醇B中之至少1種作為有效成分。 (12)如(11)所記載之組合物，其含有包含薑黃酮醇A及薑黃酮醇B中之至少1種之藉由選自由水及親水性有機溶劑所組成之群中之至少1種萃取溶劑所獲得的薑黃萃取物作為有效成分。 (13)一種由澱粉狀蛋白β胜肽誘導之TNF-α產生之抑制用組合物，其含有藉由選自由水及親水性有機溶劑所組成之群中之至少1種萃取溶劑所獲得之薑黃萃取物作為有效成分。 (14)一種由澱粉狀蛋白β胜肽誘導之TNF-α產生之抑制用組合物，其含有薑黃酮醇A及薑黃酮醇B中之至少1種作為有效成分。 (15)如(14)所記載之組合物，其含有包含薑黃酮醇A及薑黃酮醇B中之至少1種之藉由選自由水及親水性有機溶劑所組成之群中之至少1種萃取溶劑所獲得的薑黃萃取物作為有效成分。 (16)一種由澱粉狀蛋白β胜肽誘導之IL-1β產生之抑制用組合物，其含有藉由選自由水及親水性有機溶劑所組成之群中之至少1種萃取溶劑所獲得之薑黃萃取物作為有效成分。 (17)一種由澱粉狀蛋白β胜肽誘導之IL-1β產生之抑制用組合物，其含有薑黃酮醇A及薑黃酮醇B中之至少1種作為有效成分。 (18)如(17)所記載之組合物，其含有包含薑黃酮醇A及薑黃酮醇B中之至少1種之藉由選自由水及親水性有機溶劑所組成之群中之至少1種萃取溶劑所獲得的薑黃萃取物作為有效成分。

(19)如(7)、(8)或(9)所記載之組合物，其中由澱粉狀蛋白β胜肽誘導之小神經膠質之活性化包含因由澱粉狀蛋白β胜肽誘導之小神經膠質所引起之選自PGE2、TNF-α及IL-1β中之一者以上的產生。

(20)一種由澱粉狀蛋白β胜肽誘導之選自PGE2、TNF-α及IL-1β中之一者以上之產生之抑制用組合物，其含有藉由選自由水及親水性有機溶劑所組成之群中之至少1種萃取溶劑所獲得之薑黃萃取物作為有效成分。 (21)一種由澱粉狀蛋白β胜肽誘導之選自PGE2、TNF-α及IL-1β中之一者以上之產生之抑制用組合物，其含有薑黃酮醇A及薑黃酮醇B中之至少1種作為有效成分。 (22)如(21)所記載之組合物，其含有包含薑黃酮醇A及薑黃酮醇B中之至少1種之藉由選自由水及親水性有機溶劑所組成之群中之至少1種萃取溶劑所獲得的薑黃萃取物作為有效成分。

(23)一種藉由選自由水及親水性有機溶劑所組成之群中之至少1種萃取溶劑所獲得之薑黃萃取物之用途，其係用於製造阿茲海默氏病之治療、預防或改善用組合物。 (24)一種薑黃酮醇A及薑黃酮醇B中之至少1種之用途，其係用於製造阿茲海默氏病之治療、預防或改善用組合物。 (25)一種藉由選自由水及親水性有機溶劑所組成之群中之至少1種萃取溶劑所獲得之薑黃萃取物之用途，其係用於製造阿茲海默氏病之治療、預防或改善用醫藥。 (26)一種薑黃酮醇A及薑黃酮醇B中之至少1種之用途，其係用於製造阿茲海默氏病之治療、預防或改善用醫藥。 (27)一種治療、預防或改善阿茲海默氏病之方法，其包括如下操作：將藉由選自由水及親水性有機溶劑所組成之群中之至少1種萃取溶劑所獲得之薑黃萃取物投予至必需阿茲海默氏病之治療、預防或改善之對象；及對於上述對象治療、預防或改善阿茲海默氏病。 (28)一種治療、預防或改善阿茲海默氏病之方法，其包括如下操作：將薑黃酮醇A及薑黃酮醇B中之至少1種投予至必需阿茲海默氏病之治療、預防或改善之對象；及對於上述對象治療、預防或改善阿茲海默氏病。 (29)一種藉由選自由水及親水性有機溶劑所組成之群中之至少1種萃取溶劑所獲得之薑黃萃取物，其係用以對於必需阿茲海默氏病之治療、預防或改善之對象治療、預防或改善阿茲海默氏病。 (30)一種薑黃酮醇A及薑黃酮醇B中之至少1種，其用以對於必需阿茲海默氏病之治療、預防或改善之對象治療、預防或改善阿茲海默氏病。 (31)如(24)所記載之用途、如(26)所記載之用途、如(28)所記載之方法、或如(30)所記載之薑黃酮醇A及薑黃酮醇B中之至少1種，其中上述薑黃酮醇A及薑黃酮醇B中之至少1種係藉由選自由水及親水性有機溶劑所組成之群中之至少1種萃取溶劑所獲得之薑黃萃取物的形態。

(32)一種藉由選自由水及親水性有機溶劑所組成之群中之至少1種萃取溶劑所獲得之薑黃萃取物之用途，其係用於製造腦神經細胞死亡之抑制用組合物。 (33)一種薑黃酮醇A及薑黃酮醇B中之至少1種之用途，其係用於製造腦神經細胞死亡之抑制用組合物。 (34)一種藉由選自由水及親水性有機溶劑所組成之群中之至少1種萃取溶劑所獲得之薑黃萃取物之用途，其係用於製造腦神經細胞死亡之抑制用醫藥。 (35)一種薑黃酮醇A及薑黃酮醇B中之至少1種之用途，其係用於製造腦神經細胞死亡之抑制用醫藥。 (36)一種於活體內或活體外抑制腦神經細胞之細胞死亡之方法，其包括如下操作：於活體內或活體外將藉由選自由水及親水性有機溶劑所組成之群中之至少1種萃取溶劑所獲得之薑黃萃取物投予至腦神經細胞；及抑制上述腦神經細胞之細胞死亡。 (37)一種於活體內或活體外抑制腦神經細胞之細胞死亡之方法，其包括如下操作：於活體內或活體外將薑黃酮醇A及薑黃酮醇B中之至少1種投予至腦神經細胞；及抑制上述腦神經細胞之細胞死亡。 (38)一種藉由選自由水及親水性有機溶劑所組成之群中之至少1種萃取溶劑所獲得之薑黃萃取物，其係用以於活體內或活體外抑制腦神經細胞之細胞死亡。 (39)一種薑黃酮醇A及薑黃酮醇B中之至少1種，其用以於活體內或活體外抑制腦神經細胞之細胞死亡。 (40)如(33)所記載之用途、如(35)所記載之用途、如(37)所記載之方法、或如(39)所記載之薑黃酮醇A及薑黃酮醇B中之至少1種，其中上述薑黃酮醇A及薑黃酮醇B中之至少1種係藉由選自由水及親水性有機溶劑所組成之群中之至少1種萃取溶劑所獲得之薑黃萃取物的形態。

(41)一種藉由選自由水及親水性有機溶劑所組成之群中之至少1種萃取溶劑所獲得之薑黃萃取物之用途，其係用於製造由澱粉狀蛋白β胜肽誘導之小神經膠質之活性化之抑制用組合物。 (42)一種薑黃酮醇A及薑黃酮醇B中之至少1種之用途，其係用於製造由澱粉狀蛋白β胜肽誘導之小神經膠質之活性化之抑制用組合物。 (43)一種藉由選自由水及親水性有機溶劑所組成之群中之至少1種萃取溶劑所獲得之薑黃萃取物之用途，其係用於製造由澱粉狀蛋白β胜肽誘導之小神經膠質之活性化之抑制用醫藥。 (44)一種薑黃酮醇A及薑黃酮醇B中之至少1種之用途，其係用於製造由澱粉狀蛋白β胜肽誘導之小神經膠質之活性化之抑制用醫藥。 (45)一種於活體內或活體外抑制由澱粉狀蛋白β胜肽誘導之小神經膠質之活性化之方法，其包括如下操作：於活體內或活體外將藉由選自由水及親水性有機溶劑所組成之群中之至少1種萃取溶劑所獲得之薑黃萃取物投予至小神經膠質；及抑制上述小神經膠質之由澱粉狀蛋白β胜肽誘導之活性化。 (46)一種於活體內或活體外抑制由澱粉狀蛋白β胜肽誘導之小神經膠質之活性化之方法，其包括如下操作：於活體內或活體外將薑黃酮醇A及薑黃酮醇B中之至少1種投予至小神經膠質；及抑制上述小神經膠質之由澱粉狀蛋白β胜肽誘導之活性化。 (47)一種藉由選自由水及親水性有機溶劑所組成之群中之至少1種萃取溶劑所獲得之薑黃萃取物，其係用以於活體內或活體外抑制由澱粉狀蛋白β胜肽誘導之小神經膠質之活性化。 (48)一種薑黃酮醇A及薑黃酮醇B中之至少1種，其用以於活體內或活體外抑制由澱粉狀蛋白β胜肽誘導之小神經膠質之活性化。 (49)如(42)所記載之用途、如(44)所記載之用途、如(46)所記載之方法、或如(48)所記載之薑黃酮醇A及薑黃酮醇B中之至少1種，其中上述薑黃酮醇A及薑黃酮醇B中之至少1種係藉由選自由水及親水性有機溶劑所組成之群中之至少1種萃取溶劑所獲得之薑黃萃取物的形態。 (50)如(41)、(42)或(49)所記載之用途、如(43)、(44)或(49)所記載之用途、如(45)、(46)或(49)所記載之方法、或者如(47)、(48)或(49)所記載之薑黃酮醇A及薑黃酮醇B中之至少1種，其中由澱粉狀蛋白β胜肽誘導之小神經膠質之活性化包含因由澱粉狀蛋白β胜肽誘導之小神經膠質所引起之選自PGE2、TNF-α及IL-1β中之一者以上之產生。

(51)一種藉由選自由水及親水性有機溶劑所組成之群中之至少1種萃取溶劑所獲得之薑黃萃取物之用途，其係用於製造由澱粉狀蛋白β胜肽誘導之選自PGE2、TNF-α及IL-1β中之一者以上之產生之抑制用組合物。 (52)一種薑黃酮醇A及薑黃酮醇B中之至少1種之用途，其係用於製造由澱粉狀蛋白β胜肽誘導之選自PGE2、TNF-α及IL-1β中之一者以上之產生之抑制用組合物。 (53)一種藉由選自由水及親水性有機溶劑所組成之群中之至少1種萃取溶劑所獲得之薑黃萃取物之用途，其係用於製造由澱粉狀蛋白β胜肽誘導之選自PGE2、TNF-α及IL-1β中之一者以上之產生之抑制用醫藥。 (54)一種薑黃酮醇A及薑黃酮醇B中之至少1種之用途，其係用於製造由澱粉狀蛋白β胜肽誘導之選自PGE2、TNF-α及IL-1β中之一者以上之產生之抑制用醫藥。 (55)一種抑制由澱粉狀蛋白β胜肽誘導之選自PGE2、TNF-α及IL-1β中之一者以上之產生的方法，其包括如下操作：將藉由選自由水及親水性有機溶劑所組成之群中之至少1種萃取溶劑所獲得之薑黃萃取物投予至需要抑制由澱粉狀蛋白β胜肽誘導之選自PGE2、TNF-α及IL-1β中之一者以上之產生的對象；及對於上述對象抑制由澱粉狀蛋白β胜肽誘導之選自PGE2、TNF-α及IL-1β中之一者以上之產生。 (56)一種抑制由澱粉狀蛋白β胜肽誘導之選自PGE2、TNF-α及IL-1β中之一者以上之產生的方法，其包括如下操作：將薑黃酮醇A及薑黃酮醇B中之至少1種投予至需要抑制由澱粉狀蛋白β胜肽誘導之選自PGE2、TNF-α及IL-1β中之一者以上之產生的對象；及對於上述對象抑制由澱粉狀蛋白β胜肽誘導之選自PGE2、TNF-α及IL-1β中之一者以上之產生。 (57)一種藉由選自由水及親水性有機溶劑所組成之群中之至少1種萃取溶劑所獲得之薑黃萃取物，其係用以對於需要抑制由澱粉狀蛋白β胜肽誘導之選自PGE2、TNF-α及IL-1β中之一者以上之產生的對象抑制由澱粉狀蛋白β胜肽誘導之選自PGE2、TNF-α及IL-1β中之一者以上之產生。 (58)一種薑黃酮醇A及薑黃酮醇B中之至少1種，其用以對於需要抑制由澱粉狀蛋白β胜肽誘導之選自PGE2、TNF-α及IL-1β中之一者以上之產生的對象抑制由澱粉狀蛋白β胜肽誘導之選自PGE2、TNF-α及IL-1β中之一者以上之產生。 (59)如(52)所記載之用途、如(54)所記載之用途、如(56)所記載之方法、或如(58)所記載之薑黃酮醇A及薑黃酮醇B中之至少1種，其中上述薑黃酮醇A及薑黃酮醇B中之至少1種係藉由選自由水及親水性有機溶劑所組成之群中之至少1種萃取溶劑所獲得之薑黃萃取物的形態。

本說明書包含成為本案之優先權之基礎之日本專利申請案號2018-124502號之揭示內容。 [發明之效果]

本發明提供一種用於阿茲海默氏病之治療、預防或改善、腦神經細胞死亡之抑制、由澱粉狀蛋白β胜肽誘導之小神經膠質之活性化之抑制、或由澱粉狀蛋白β胜肽誘導之PGE2、TNF-α或IL-1β產生之抑制的組合物，其以藉由選自由水及親水性有機溶劑所組成之群中之至少1種萃取溶劑所獲得之薑黃萃取物、或薑黃酮醇A及薑黃酮醇B中之至少1種作為有效成分。

＜薑黃萃取物＞於本發明中，薑黃萃取物係指源自薑科薑黃屬之植物之植物原料之藉由萃取溶劑所獲得的萃取物(薑黃萃取物)。薑黃萃取物並不限於藉由利用萃取溶劑之萃取所獲得之溶劑萃取物，亦包含進而利用管柱層析法等對溶劑萃取物進行區分純化而成者。本發明中所使用之薑黃萃取物可為完成萃取操作(於進行區分純化之情形時，亦包含區分純化操作)而成之萃取液、自萃取液中部分去除溶劑所得之濃縮物、或自萃取液去除溶劑所得之乾燥物之形態。溶劑自萃取物之去除可藉由利用加熱及/或減壓等使溶劑揮發而進行。該等加熱、減壓之方法並無特別限定，例如可使用先前公知之方法。

作為上述植物原料，可列舉：作為薑科薑黃屬之植物的Curcuma longa(薑黃)、Curcuma aromatica(郁金)、Curcuma zedoaria(莪術)、Curcuma phaeocaulis(蓬莪術)、Curcuma kwangsiensis(廣西莪術)、Curcuma wenyujin(溫郁金)及/或Curcuma xanthorrhiza(束骨薑黃)之根莖等，尤佳為Curcuma longa(薑黃)之根莖等。根莖可使用自土中採集者，亦可使用將根莖之適當部位保持原型或切割為適當之尺寸或形狀而成者、或者製成粉碎物之形態者。該等植物原料可為適當乾燥而成者。

作為萃取溶劑，可使用選自由水及親水性有機溶劑所組成之群中之至少1種。作為選自由水及親水性有機溶劑所組成之群中之至少1種萃取溶劑，可為水、親水性有機溶劑、水與親水性有機溶劑之混合溶劑中之任一者。親水性有機溶劑可為複數種親水性有機溶劑之混合溶劑。「水」亦包含熱水。作為熱水，例如可使用95℃以上之熱水。作為親水性有機溶劑，可列舉至少1種醇(亦可為複數種醇之混合溶劑)，作為醇，並無特別限定，較佳為乙醇。使用醇與水之混合溶劑作為萃取溶劑之情形時之混合比並無特別限定，例如以重量比計，較佳為10：90～90：10之範圍，更佳為20：80～50：50之範圍。又，作為萃取溶劑，亦可使用超臨界二氧化碳。

來自植物原料之薑黃萃取物之萃取方法並無特別限定。於本發明中，較佳為使用含有薑黃酮醇A及薑黃酮醇B之藉由上述萃取溶劑所獲得之薑黃萃取物作為薑黃萃取物。

薑黃酮醇A及薑黃酮醇B係分別具有以下之平面結構之化合物。

[化1]

[化2]

＜薑黃酮醇A及薑黃酮醇B＞本發明中所使用之薑黃酮醇A及薑黃酮醇B中之至少1種(以下，有時稱為「活性化合物」)可為源自植物者，亦可為人工合成者。例如光學活性之(+)-薑黃酮醇A可藉由Biosci Biotechnol Biochem. 1993; 57(7): 1137-40中所記載之方法合成。

眾所周知於自薑黃萃取物分離之天然物中，薑黃酮醇A及薑黃酮醇B係2-甲基-2-庚烯-4-酮之部分結構中之6位碳之立體組態為S體。但是，於本發明中，薑黃酮醇A及薑黃酮醇B只要具有上述平面結構即可，上述立體組態可為S體，可為R體，亦可為S體與R體之混合物。

本發明中所使用之活性化合物更佳為源自植物原料者，更佳為源自薑科薑黃屬植物者。薑科薑黃屬植物及其部位之具體例如上所述。可自薑科薑黃屬之植物之根莖等部位獲得活性化合物。

活性化合物可自包含其之植物原料萃取。萃取方法如上所述。活性化合物可為植物萃取物、尤其是藉由選自由水及親水性有機溶劑所組成之群中之至少1種萃取溶劑所獲得之薑黃萃取物的形態。

又，可將自包含活性化合物之植物萃取物使活性化合物高純度化而成之溶出份用於本發明，亦可調配於本發明之組合物中。例如可將包含活性化合物之植物萃取物供於乙酸乙酯/水之液液分配，而使活性化合物高純度化於乙酸乙酯溶出份中。又，亦可將包含活性化合物之植物萃取物或其溶出份供於利用層析法之純化處理，獲得經高純度化之活性化合物。作為層析法，可使用逆相管柱層析法、正相薄層層析法等。

包含活性化合物之植物萃取物或其溶出份亦可為藉由常規方法施以乾燥、粉末化、顆粒化、溶液化等加工者。

＜本發明之組合物＞本發明之組合物之一態樣係關於一種阿茲海默氏病之治療、預防或改善用組合物，其含有上述薑黃萃取物、或薑黃酮醇A及薑黃酮醇B中之至少1種作為有效成分。藉由將本態樣之本發明之組合物投予至人類等對象，可對於上述對象治療、預防或改善阿茲海默氏病。此處，上述各有效成分係以用於阿茲海默氏病之治療、預防或改善之有效量投予。作為投予路徑，較佳為經口投予、經鼻投予、腦內投予或脊椎內投予，更佳為經口或經鼻投予，尤佳為經口投予。本發明之組合物藉由於腦內抑制由經澱粉狀蛋白β胜肽活性化之小神經膠質所引起之PGE2、TNF-α或IL-1β之產生、及與該等物質相關之神經細胞死亡之誘導，可治療、預防或改善阿茲海默氏病。

本發明之組合物之另一態樣係關於一種由澱粉狀蛋白β胜肽誘導之小神經膠質之活性化之抑制用組合物，其含有上述薑黃萃取物、或薑黃酮醇A及薑黃酮醇B中之至少1種作為有效成分。藉由將本態樣之本發明之組合物投予至人類等對象，可對於上述對象抑制由澱粉狀蛋白β胜肽誘導之小神經膠質之活性化。此處，上述各有效成分係以用於抑制由澱粉狀蛋白β胜肽誘導之小神經膠質之活性化之有效量投予。作為投予路徑，較佳為經口投予、經鼻投予、腦內投予或脊椎內投予，更佳為經口或經鼻投予，尤佳為經口投予。推定於阿茲海默氏病患者之腦內，澱粉狀蛋白β胜肽使小神經膠質活性化，經活性化之小神經膠質產生PGE2、TNF-α或IL-1β，而誘導腦神經細胞死亡。根據本發明之組合物，可抑制澱粉狀蛋白β胜肽使小神經膠質活性化。

本發明之組合物之另一態樣係關於一種腦神經細胞死亡之抑制用組合物，其含有上述薑黃萃取物、或薑黃酮醇A及薑黃酮醇B中之至少1種作為有效成分。本發明者等人發現：於澱粉狀蛋白β胜肽之存在下所培養之巨噬細胞之培養上清液誘導作為腦神經細胞或中樞神經細胞之模型細胞之人類神經胚細胞瘤細胞SHSY5Y之細胞死亡，相對於此，預先藉由上述薑黃萃取物或薑黃酮醇B對巨噬細胞進行處理後於澱粉狀蛋白β胜肽之存在下所培養之巨噬細胞之培養上清液抑制誘導人類神經胚細胞瘤細胞SHSY5Y之細胞死亡之作用。又，本發明者等人發現，上述薑黃萃取物具有抑制氧化壓力所誘導之SHSY5Y之細胞死亡之作用。根據該等見解，證實上述薑黃萃取物、或薑黃酮醇A及薑黃酮醇B中之至少1種具有抑制腦神經細胞或中樞神經細胞之由氧化壓力所引起之細胞死亡、或由經澱粉狀蛋白β胜肽活性化之小神經膠質所引起之細胞死亡的作用。藉由將本態樣之本發明之組合物投予至人類等對象，可對於上述對象抑制腦神經細胞或中樞神經細胞之細胞死亡、尤其是與經澱粉狀蛋白β胜肽活性化之小神經膠質所產生之PGE2、TNF-α或IL-1β相關之腦神經細胞或中樞神經細胞之細胞死亡、或與氧化壓力相關之腦神經細胞或中樞神經細胞之細胞死亡。此處，上述各有效成分係以用於抑制腦神經細胞死亡或中樞神經細胞死亡之有效量投予。作為投予路徑，較佳為經口投予、經鼻投予、腦內投予或脊椎內投予，更佳為經口或經鼻投予，尤佳為經口投予。

本發明之組合物之另一態樣係關於一種由澱粉狀蛋白β胜肽誘導之PGE2、TNF-α或IL-1β之產生之抑制用組合物，其含有上述薑黃萃取物、或薑黃酮醇A及薑黃酮醇B中之至少1種作為有效成分。藉由將本態樣之本發明之組合物投予至人類等對象，可對於上述對象抑制由澱粉狀蛋白β胜肽誘導之PGE2、TNF-α或IL-1β之產生、尤其是由經澱粉狀蛋白β胜肽活性化之小神經膠質所引起之PGE2、TNF-α或IL-1β之產生。此處，上述各有效成分係以用於抑制由澱粉狀蛋白β胜肽誘導之PGE2、TNF-α或IL-1β之產生之有效量投予。作為投予路徑，較佳為經口投予、經鼻投予、腦內投予或脊椎內投予，更佳為經口或經鼻投予，尤佳為經口投予。

本發明之組合物可為醫藥品、飲食品、飼料、食品添加劑、飼料添加劑等各形態之組合物，更佳為醫藥品或飲食品。飲食品亦包含機能性表示食品、特定保健用食品、用於營養補充之補充品等形態者。本發明之組合物較佳為藉由經口或經鼻而攝取或投予之組合物之形態，更佳為藉由經口而攝取或投予之組合物之形態。

關於包含上述薑黃萃取物作為有效成分之實施形態之本發明之組合物中之上述薑黃萃取物的含量，就有效地獲得阿茲海默氏病之治療、預防或改善作用、腦神經細胞死亡之抑制作用、由澱粉狀蛋白β胜肽誘導之小神經膠質之活性化之抑制作用、及由澱粉狀蛋白β胜肽誘導之PGE2、TNF-α或IL-1β產生之抑制作用之方面而言，較佳為以相對於本發明之組合物之1天之攝取或投予量，較佳為相對於對一名人類、尤其是一名成人之1天之攝取或投予量，以薑黃酮醇A計成為80 μg以上且以薑黃酮醇B計成為20 μg以上之方式含有上述薑黃萃取物。此處，「1天之攝取或投予量」係於藉由經口或經鼻、較佳為藉由經口進行攝取或投予之情形時，典型地以本發明之組合物之量計為0.1 g～500 g。本發明之組合物可持續地攝取或投予，亦可於必需時攝取或投予而使用。

包含上述薑黃萃取物作為有效成分之實施形態之本發明之組合物可為上述薑黃萃取物本身，亦可為包含上述薑黃萃取物及至少1種其他成分之組合物。於本發明之組合物包含上述薑黃萃取物及至少1種其他成分之情形時，可為將上述薑黃萃取物與至少1種其他成分進行混合而成之組合物，可為將上述薑黃萃取物與至少1種其他成分藉由適當之方法進行製劑化而成之組合物，亦可為將上述薑黃萃取物與至少1種其他成分進行製劑化而成之組合物進而與其他成分進行混合而成的組合物。

包含薑黃酮醇A及薑黃酮醇B中之至少1種作為有效成分之實施形態之本發明之組合物係以相對於1天之攝取或投予量，較佳為相對於對一名人類、尤其是一名成人之1天之攝取或投予量，以薑黃酮醇A與薑黃酮醇B之合計量計成為100 μg以上的方式，含有選自薑黃酮醇A及薑黃酮醇B中之至少1種。又，包含薑黃酮醇A及薑黃酮醇B中之至少1種作為有效成分之實施形態之本發明之組合物係以相對於1天之攝取或投予量，較佳為相對於對一名人類、尤其是一名成人之1天之攝取或投予量，薑黃酮醇A成為80 μg以上及/或薑黃酮醇B成為20 μg以上的方式，更佳為以薑黃酮醇A成為80 μg以上及薑黃酮醇B成為20 μg以上的方式，含有選自薑黃酮醇A及薑黃酮醇B中之至少1種。根據該等實施形態，可有效地獲得阿茲海默氏病之治療、預防或改善作用、腦神經細胞死亡之抑制作用、由澱粉狀蛋白β胜肽誘導之小神經膠質之活性化之抑制作用、及由澱粉狀蛋白β胜肽誘導之PGE2、TNF-α或IL-1β產生之抑制作用。此處，「1天之攝取或投予量」係於藉由經口或經鼻、較佳為藉由經口進行攝取或投予之情形時，典型地以本發明之組合物之量計為0.1 g～500 g。本發明之組合物可持續地攝取或投予，亦可於必需時攝取或投予而使用。

包含薑黃酮醇A及薑黃酮醇B中之至少1種作為有效成分之實施形態之本發明之組合物可為薑黃酮醇A及薑黃酮醇B中之至少1種化合物本身，亦可為包含上述化合物及至少1種其他成分者。於本發明之組合物包含上述化合物及至少1種其他成分之情形時，可為將上述化合物與至少1種其他成分進行混合而成之組合物，可為將上述化合物與至少1種其他成分藉由適當之方法進行製劑化而成之組合物，亦可為將上述化合物與至少1種其他成分進行製劑化而成之組合物進而與其他成分進行混合而成的組合物。

本發明之組合物之形狀並無特別限定，例如可為液體狀、流動狀、凝膠狀、半固體狀或固體狀等任一形狀。

作為本發明之組合物可包含之至少1種其他成分，並無特別限定，較佳為可例示醫藥品、飲食品、飼料、食品添加劑、飼料添加劑等最終形態中所容許且能夠經口攝取之成分。

作為此種其他成分，例如可列舉：甜味料、酸味料、維生素類、礦物類、增黏劑、乳化劑、抗氧化劑、水等。又，亦可視需要添加色素、香料、保存料、防腐劑、防黴劑、進一步之生理活性物質等。

作為甜味料，可列舉：葡萄糖、果糖、蔗糖、乳糖、麥芽糖、巴拉金糖、海藻糖、木糖等單糖或二糖、異構化糖(葡萄糖果糖液糖、果糖葡萄糖液糖、砂糖混合異構化糖等)、糖醇(赤藻糖醇、木糖醇、乳糖醇、異麥芽糖醇、山梨糖醇、還原飴糖等)、蜂蜜、高甜度甜味料(蔗糖素、乙醯磺胺酸鉀、索馬甜、甜菊、阿斯巴甜等)等。

作為酸味料，有檸檬酸、蘋果酸、葡萄糖酸、酒石酸、乳酸、磷酸、或該等之鹽等，可利用該等中之1種或2種以上。

作為維生素類，可列舉：維生素A、維生素B1、維生素B2、維生素B6、維生素E、菸鹼酸、肌醇等。

作為礦物類，可列舉：鈣、鎂、鋅、鐵等。

作為增黏劑，可列舉：角叉菜膠、結蘭膠、三仙膠、***膠、羅望子膠、瓜爾膠、刺槐豆膠、刺梧桐樹膠、瓊脂、明膠、果膠、大豆多糖類、羧甲基纖維素(CMC)等。

作為乳化劑，可列舉：甘油脂肪酸酯、蔗糖脂肪酸酯、山梨醇酐脂肪酸酯、卵磷脂、植固醇、皂苷等。

作為抗氧化劑，可列舉：維生素C、生育酚(維生素E)、酶改性芸香苷等。上述其他成分可分別以業者於飲食品、醫藥品等組合物中所通常採用之範圍內之量進行適當調配。

將本發明之組合物與至少1種其他成分藉由適當之方法進行製劑化而成之組合物的形態可為粉末、顆粒、膠囊劑、錠劑(包含糖衣錠等包衣錠或多層錠、***崩解劑、咀嚼錠等)等固體組合物之形態，亦可為溶液劑等液體組合物之形態。

＜治療、預防或改善阿茲海默氏病之方法＞本發明之進一步之一態樣係關於一種治療、預防或改善阿茲海默氏病之方法，其包括如下操作：將上述薑黃萃取物、或薑黃酮醇A及薑黃酮醇B中之至少1種投予至必需治療、預防或改善阿茲海默氏病之對象；及對於上述對象治療、預防或改善阿茲海默氏病。

本態樣之方法中所使用之上述薑黃萃取物、或薑黃酮醇A及薑黃酮醇B中之至少1種，可為本發明之組合物於上文敍述之形態。

作為本態樣之方法中之對象，典型地為人類，但亦可為人類以外之哺乳動物。

於本態樣之方法中，作為投予路徑，較佳為經口投予、經鼻投予、腦內投予或脊椎內投予，更佳為經口或經鼻投予，尤佳為經口投予。

於本態樣之方法中，將上述薑黃萃取物、或薑黃酮醇A及薑黃酮醇B中之至少1種投予至對象之投予量只要為用於阿茲海默氏病之治療、預防或改善之有效量即可，並無特別限定。例如於對象為成人之情形時，較佳為對一名成人，每天較佳為以按薑黃酮醇A與薑黃酮醇B之合計量計成為100 μg以上之方式，更佳為以薑黃酮醇A成為80 μg以上及/或薑黃酮醇B成為20 μg以上之方式，尤佳為以薑黃酮醇A成為80 μg以上及薑黃酮醇B成為20 μg以上之方式投予上述薑黃萃取物、或薑黃酮醇A及薑黃酮醇B中之至少1種。

＜抑制腦神經細胞之細胞死亡之方法＞本發明之進一步之一態樣係關於一種於活體內或活體外抑制腦神經細胞之細胞死亡之方法，其包括如下操作：於活體內或活體外將上述薑黃萃取物、或薑黃酮醇A及薑黃酮醇B中之至少1種投予至腦神經細胞；及抑制上述腦神經細胞之細胞死亡。

本態樣之方法中所使用之上述薑黃萃取物、或薑黃酮醇A及薑黃酮醇B中之至少1種可為本發明之組合物於上文敍述之形態。

本態樣之方法中所使用之腦神經細胞之起源生物典型地為人類，但亦可為人類以外之哺乳動物、例如大鼠、小鼠、牛等。

腦神經細胞可為源自腦神經細胞或中樞神經細胞之細胞株，例如可為人類神經胚細胞瘤細胞SHSY5Y。

於本態樣之方法中，作為於活體外將上述薑黃萃取物、或薑黃酮醇A及薑黃酮醇B中之至少1種投予至腦神經細胞之方法，可列舉於培養腦神經細胞之培養基中添加適當濃度之上述薑黃萃取物、或薑黃酮醇A及薑黃酮醇B中之至少1種的方法。於上述培養基中之添加濃度並無特別限定，於投予上述薑黃萃取物之情形時，較佳為可為10 μg/mL以上，更佳為可為20 μg/mL以上，尤佳為可為50 μg/mL以上，且較佳為可為1,000 μg/mL以下，更佳為可為500 μg/mL以下。於投予薑黃酮醇A及薑黃酮醇B中之至少1種之情形時，薑黃酮醇A及薑黃酮醇B之合計之添加濃度較佳為可為1 μM以上，更佳為可為10 μM以上，尤佳為可為20 μM以上，最佳為可為50 μM以上，且較佳為可為1,000 μM以下，更佳為可為500 μM以下，尤佳為可為200 μM以下。

於本態樣之方法中，作為於活體內將上述薑黃萃取物、或薑黃酮醇A及薑黃酮醇B中之至少1種投予至腦神經細胞之方法，只要為可傳遞至活體內之腦神經細胞之方法，則並無特別限定，例如較佳為經口投予、經鼻投予、腦內投予或脊椎內投予，更佳為經口或經鼻投予，尤佳為經口投予。於投予至活體內之腦神經細胞之情形時，投予量只要為可抑制腦神經細胞之細胞死亡之有效量即可，並無特別限定。例如於投予至成人之情形時，較佳為對一名成人，每天較佳為以按薑黃酮醇A與薑黃酮醇B之合計量計成為100 μg以上之方式，更佳為以薑黃酮醇A成為80 μg以上及/或薑黃酮醇B成為20 μg以上之方式，尤佳為以薑黃酮醇A成為80 μg以上及薑黃酮醇B成為20 μg以上之方式投予上述薑黃萃取物、或薑黃酮醇A及薑黃酮醇B中之至少1種。

於本態樣之方法中，於活體內或活體外將上述薑黃萃取物、或薑黃酮醇A及薑黃酮醇B中之至少1種投予至腦神經細胞後，使上述薑黃萃取物、或薑黃酮醇A及薑黃酮醇B中之至少1種與腦神經細胞之接觸狀態維持適當之時間、例如5小時以上、較佳為12小時以上、更佳為20小時以上、尤佳為24小時以上、且較佳為72小時以下、更佳為48小時以下、尤佳為36小時以下之時間，藉此可抑制上述腦神經細胞之細胞死亡。

＜抑制由澱粉狀蛋白β胜肽誘導之小神經膠質之活性化之方法＞本發明之進一步之一態樣係關於一種於活體內或活體外抑制由澱粉狀蛋白β胜肽誘導之小神經膠質之活性化之方法，其包括如下操作：於活體內或活體外將上述薑黃萃取物、或薑黃酮醇A及薑黃酮醇B中之至少1種投予至小神經膠質；及抑制上述小神經膠質之由澱粉狀蛋白β胜肽誘導之活性化。

本態樣之方法中所使用之小神經膠質之起源生物典型地為人類，但亦可為人類以外之哺乳動物、例如大鼠、小鼠、牛等。

小神經膠質可為具有與小神經膠質同等之機能之細胞，例如可為自單核球分化之巨噬細胞。

於本態樣之方法中，作為於活體外將上述薑黃萃取物、或薑黃酮醇A及薑黃酮醇B中之至少1種投予至小神經膠質之方法，可列舉於培養小神經膠質之培養基中添加適當濃度之上述薑黃萃取物、或薑黃酮醇A及薑黃酮醇B中之至少1種的方法。於上述培養基中之添加濃度並無特別限定，於投予上述薑黃萃取物之情形時，較佳為可為10 μg/mL以上，更佳為可為20 μg/mL以上，尤佳為可為50 μg/mL以上，且較佳為可為1,000 μg/mL以下，更佳為可為500 μg/mL以下。於投予薑黃酮醇A及薑黃酮醇B中之至少1種之情形時，薑黃酮醇A及薑黃酮醇B之合計之添加濃度較佳為可為1 μM以上，更佳為可為10 μM以上，尤佳為可為20 μM以上，最佳為可為50 μM以上，且較佳為可為1,000 μM以下，更佳為可為500 μM以下，尤佳為可為200 μM以下。

於本態樣之方法中，作為於活體內將上述薑黃萃取物、或薑黃酮醇A及薑黃酮醇B中之至少1種投予至小神經膠質之方法，只要為可傳遞至活體內之小神經膠質之方法，則並無特別限定，例如較佳為經口投予、經鼻投予、腦內投予或脊椎內投予，更佳為經口或經鼻投予，尤佳為經口投予。於投予至活體內之小神經膠質之情形時，投予量只要為可抑制小神經膠質之由澱粉狀蛋白β胜肽所誘導之活性化之有效量即可，並無特別限定。例如於投予至成人之情形時，較佳為對一名成人，每天較佳為以按薑黃酮醇A與薑黃酮醇B之合計量計成為100 μg以上之方式，更佳為以薑黃酮醇A成為80 μg以上及/或薑黃酮醇B成為20 μg以上之方式，尤佳為以薑黃酮醇A成為80 μg以上及薑黃酮醇B成為20 μg以上之方式投予上述薑黃萃取物、或薑黃酮醇A及薑黃酮醇B中之至少1種。

於本態樣之方法中，於活體內或活體外將上述薑黃萃取物、或薑黃酮醇A及薑黃酮醇B中之至少1種投予至小神經膠質後，使上述薑黃萃取物、或薑黃酮醇A及薑黃酮醇B中之至少1種與小神經膠質之接觸狀態維持適當之時間、例如5小時以上、較佳為12小時以上、更佳為20小時以上、尤佳為24小時以上、且較佳為72小時以下、更佳為48小時以下、尤佳為36小時以下之時間，藉此可抑制上述小神經膠質之由澱粉狀蛋白β胜肽誘導之活性化。

澱粉狀蛋白β胜肽典型地為源自與小神經膠質相同之生物種之澱粉狀蛋白β胜肽。

「小神經膠質之由澱粉狀蛋白β胜肽誘導之活性化」例如為自由澱粉狀蛋白β胜肽誘導之小神經膠質產生選自PGE2、TNF-α及IL-1β中之一者以上，於本態樣中，可抑制該等物質之產生。

＜抑制由澱粉狀蛋白β胜肽誘導之選自PGE2、TNF-α及IL-1β中之一者以上之產生的方法＞本發明之進一步之一態樣係關於一種抑制由澱粉狀蛋白β胜肽誘導之選自PGE2、TNF-α及IL-1β中之一者以上之產生的方法，其包括如下操作：將上述薑黃萃取物、或薑黃酮醇A及薑黃酮醇B中之至少1種投予至需要抑制由澱粉狀蛋白β胜肽誘導之選自PGE2、TNF-α及IL-1β中之一者以上之產生的對象；及對於上述對象抑制由澱粉狀蛋白β胜肽誘導之選自PGE2、TNF-α及IL-1β中之一者以上之產生。

於本態樣之方法中，將上述薑黃萃取物、或薑黃酮醇A及薑黃酮醇B中之至少1種投予至對象之投予量只要為用以抑制由澱粉狀蛋白β胜肽誘導之選自PGE2、TNF-α及IL-1β中之一者以上之產生的有效量即可，並無特別限定。例如於對象為成人之情形時，較佳為對一名成人，每天較佳為以按薑黃酮醇A與薑黃酮醇B之合計量計成為100 μg以上之方式，更佳為以薑黃酮醇A成為80 μg以上及/或薑黃酮醇B成為20 μg以上之方式，尤佳為以薑黃酮醇A成為80 μg以上及薑黃酮醇B成為20 μg以上之方式投予上述薑黃萃取物、或薑黃酮醇A及薑黃酮醇B中之至少1種。 [實施例]

＜1.實驗1＞ 1.1.薑黃萃取物之製作方法薑黃萃取物係藉由利用水對薑黃(Curcuma longa)之根莖部分進行萃取，將所獲得之萃取液進行減壓加熱乾燥而去除水分而製備。按照下述順序並使用LC/MS(liquid chromatography-mass spectrometry，液相色譜-質譜聯用法)測定薑黃萃取物中之薑黃酮醇A及薑黃酮醇B之量。確認到薑黃萃取物中之薑黃酮醇A之量為189 μg/g，薑黃酮醇B之量為24 μg/g。

1.2.薑黃酮醇A及薑黃酮醇B之分析稱量薑黃萃取物，加入水及乙酸乙酯，進行離心分離而獲得上清液，將所獲得之上清液通過活性碳管柱後，進行氮濃縮，溶解於乙腈中。以所獲得之液體作為測定試樣，供於LC/MS分析。LC/MS分析係於以下之條件下進行。

分析裝置：Thermo Fisher Scientific公司 Orbitrap LCMS(Orbitrap Velos Pro) 流速：0.5 mL/分鐘流動相：乙腈、0.1%甲酸水溶液送液梯度： [表1]

使用管柱：UNISON UK-C18(250 mm×4.6 mm，3 μm) 管柱溫度：30℃

1.3.薑黃酮醇A及薑黃酮醇B之獲取薑黃酮醇A及薑黃酮醇B係購買Nagara Science股份有限公司之市售品，溶解於二甲基亞碸中而用於試驗。

1.4.抑制澱粉狀蛋白β所誘導之巨噬細胞之活性化之作用的評價將人類單核球細胞株THP-1懸浮於RPMI1640(10%FBS(Fetal Bovine Serum，胎牛血清))培養基，以成為8.0×10⁴ 細胞數之方式接種於96孔培養板，並添加100 nM之12-O-十四醯基佛波醇13-乙酸酯(12-O-Tetradecanoylphorbol 13-acetate)(PMA，分化誘導因子)，於5%CO₂ 下培養24小時而使細胞分化為巨噬細胞。其後，更換為包含薑黃萃取物(50、100、200 μg/mL)、薑黃酮醇A(12.5、25、50、100 μM)、薑黃酮醇B(12.5、25、50、100 μM)中之任一者之RPMI1640(10%FBS)培養基，於5%CO₂ 下培養24小時，於各檢體對細胞進行處理。其後，更換為包含25 μM之澱粉狀蛋白β胜肽之凝集物(Aβ)之RPMI1640(2%FBS)培養基，於5%CO₂ 下培養24小時而使細胞活性化。其後，使用ELISA(enzyme linked immunosorbent assay，酵素結合免疫吸附分析)法測定釋出至培養基中之***素E2(PGE2)、腫瘤壞死因子α(TNF-α)、介白素-1β(IL-1β)。

圖1中顯示藉由Aβ之處理，自THP-1細胞分化之巨噬細胞活性化，增加PGE2之產生；以及50～200 μg/mL之薑黃萃取物、12.5～100 μM之薑黃酮醇A、B抑制PGE2之產生增加。於圖2中顯示藉由Aβ之處理，自THP-1細胞分化之巨噬細胞活性化，增加TNF-α之產生；以及50、100 μM之薑黃酮醇A、B抑制TNF-α之產生增加。於圖3中顯示藉由Aβ之處理，自THP-1細胞分化之巨噬細胞活性化，增加IL-1β之產生；且50、100 μM之薑黃酮醇A、B抑制IL-1β之產生增加。

再者，巨噬細胞根據表現之標記物等，可視為與小神經膠質大致相同，於活體外(in vitro)之試驗中用作小神經膠質之替代物(Frontiers in Pharmacology/Neuropharmacology, E. Solito et al, 2012-2|Volume3|Article14、International Journal of Alzheimer's Disease, Volume 2012, Article ID 314185, 11 pages等)。推定於阿茲海默氏病患者中，經Aβ所活性化之小神經膠質產生PGE2、TNF-α、IL-1β等，誘導腦神經細胞死亡。因此，薑黃萃取物、薑黃酮醇A及薑黃酮醇B抑制由經Aβ所活性化之巨噬細胞所引起之PGE2、TNF-α、IL-1β之產生的上述實驗結果證實薑黃萃取物、薑黃酮醇A及薑黃酮醇B於阿茲海默氏病患者中，抑制由經Aβ所活性化之小神經膠質所引起之PGE2、TNF-α、IL-1β之產生、及腦神經細胞死亡之誘導。

＜2.實驗2＞ 2.1.方法將人類單核球細胞株THP-1懸浮於RPMI1640(10%FBS)培養基，以成為8.0×10⁴ 細胞數之方式接種於96孔培養板，並添加100 nM之12-O-十四醯基佛波醇13-乙酸酯(12-O-Tetradecanoylphorbol 13-acetate)(PMA，分化誘導因子)，於5%CO₂ 下培養24小時而使細胞分化為巨噬細胞。其後，更換為與實驗1中所使用者相同之包含薑黃萃取物(100 μg/mL)、薑黃酮醇B(50 μM)(Nagara Science股份有限公司)中之任一者之RPMI1640(10%FBS)培養基，於5%CO₂ 下培養24小時，藉由各濃度之薑黃萃取物或薑黃酮醇B對細胞進行處理。其後，更換為包含25 μM之澱粉狀蛋白β(Aβ)胜肽之凝集物之RPMI1640(2%FBS)培養基，於5%CO₂ 下培養12小時而使巨噬細胞活性化。回收該培養上清液，作為製備培養基。另外，將人類神經胚細胞瘤細胞SHSY5Y懸浮於DMEM(dulbecco's modified eagle medium，杜爾貝科改良伊格爾培養基)(10%FBS)培養基，以成為3×10⁴ 細胞數之方式接種於96孔培養板，並於5%CO₂ 下培養24小時。其後，將人類神經胚細胞瘤細胞之培養基更換為上述製備培養基，於5%CO₂ 下培養48小時，藉由上述製備培養基對細胞進行處理。其後，使用WST-1分析而測定細胞活性。

WST-1分析包括如下操作：將WST-1(2-(4-吲哚苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-磺苯基)-2H-四唑鎓、單鈉鹽；同仁化學研究所製造)添加於包含細胞之各孔，於二氧化碳培養器內培養特定時間，藉由活細胞之線粒體之脫氫酶自WST-1生成水溶性甲臢，測定所生成之甲臢濃度。所生成之甲臢濃度係細胞活性之指標。甲臢濃度係藉由微盤讀取器，利用測定波長450 nm之吸光度進行測定(參照波長630 nm)。

對照試驗之順序如下所述。將自THP-1分化之上述巨噬細胞於不包含薑黃萃取物及薑黃酮醇B之RPMI1640(10%FBS)培養基中於5%CO₂ 下培養24小時，其後，更換為包含25 μM之澱粉狀蛋白β(Aβ)胜肽之凝集物之RPMI1640(2%FBS)培養基(Aβ+)、或不包含上述凝集物之RPMI1640(2%FBS)培養基(Aβ-)，於5%CO₂ 下培養12小時，回收該培養上清液。將所回收之培養上清液用於人類神經胚細胞瘤細胞之處理，以代替上述製備培養基。

2.2.結果將結果示於圖4。縱軸係獲得分析之結果之吸光度，表示細胞活性。

於對照試驗(Aβ+)中，若於上述巨噬細胞中添加澱粉狀蛋白β胜肽，培養一定時間後，回收該培養上清液並添加至SHSY5Y，則誘導細胞死亡。另一方面，於不使用澱粉狀蛋白β胜肽之對照試驗(Aβ-)中，不誘導細胞死亡。根據該情況，推測於添加有澱粉狀蛋白β胜肽之培養基中所培養之巨噬細胞將體液因子釋出至培養上清液，該體液因子誘導腦神經細胞之細胞死亡。

相對於此，於藉由薑黃萃取物或薑黃酮醇B預先處理過之巨噬細胞中，澱粉狀蛋白β胜肽之存在下之培養上清液誘導腦神經細胞之細胞死亡之作用與對照試驗(Aβ+)相比有所抑制。該情況顯示薑黃萃取物及薑黃酮醇B抑制於澱粉狀蛋白β胜肽之存在下由巨噬細胞所引起之上述體液因子之釋出。

＜3.實驗3＞ 3.1.方法已知若藉由過氧化氫H₂ O₂ 對腦神經細胞進行處理，則產生氧化壓力，發生細胞死亡。於以下之實驗中，確認到實驗1中所製備之薑黃萃取物抑制由氧化壓力所引起之腦神經細胞之細胞死亡的作用。

將人類神經胚細胞瘤細胞SHSY5Y懸浮於DMEM(10%FBS)培養基，以成為3×10⁴ 細胞數之方式接種於96孔培養板，並於5%CO₂ 下培養24小時。其後，更換為包含實驗1中所記載之薑黃萃取物(25、50、100、200 μg/mL)之DMEM(FBS Free)培養基，於5%CO₂ 下培養24小時，藉由各濃度之薑黃萃取物對細胞進行處理。其後，更換為包含60 μM之H₂ O₂ 之DMEM(FBS Free)培養基，於5%CO₂ 下培養24小時而刺激細胞。其後，與實驗2同樣地使用WST-1分析而測定細胞活性。

於對照試驗(H₂ O₂ +)中，使用不包含薑黃萃取物之DMEM(FBS Free)培養基以代替上述包含特定濃度之薑黃萃取物之DMEM(FBS Free)培養基，除此以外，進行與上述相同之操作。於對照試驗(H₂ O₂ -)中，使用不包含薑黃萃取物之DMEM(FBS Free)培養基以代替上述包含特定濃度之薑黃萃取物之DMEM(FBS Free)培養基，且使用不包含H₂ O₂ 之DMEM(FBS Free)培養基以代替上述包含60 μM之H₂ O₂ 之DMEM(FBS Free)培養基，除此以外，進行與上述相同之操作。

3.2.結果將結果示於圖5。縱軸係獲得分析之結果之吸光度，表示細胞活性。誤差條表示標準偏差。對對照(H₂ O₂ +)進行學生T檢定，確認有意義差。**：p＜0.01，*：p＜0.05。

該結果顯示人類神經胚細胞瘤細胞SHSY5Y由氧化壓力所引起之細胞死亡藉由實驗1中所製備之薑黃萃取物得到抑制。

本說明書中所引用之所有刊物、專利及專利申請案係直接藉由引用而併入至本說明書中。

圖1中顯示自THP-1細胞分化之巨噬細胞藉由澱粉狀蛋白β胜肽凝集物之處理而活性化，增加PGE2之產生，以及50～200 μg/mL之薑黃萃取物及12.5～100 μM之薑黃酮醇A、薑黃酮醇B抑制PGE2之產生增加。圖2中顯示自THP-1細胞分化之巨噬細胞藉由澱粉狀蛋白β胜肽凝集物之處理而活性化，增加TNF-α之產生，以及50、100 μM抑制TNF-α之產生增加。圖3中顯示自THP-1細胞分化之巨噬細胞藉由澱粉狀蛋白β胜肽凝集物之處理而活性化，增加IL-1β之產生，以及50、100 μM抑制IL-1β之產生增加。圖4之結果顯示自THP-1細胞分化之巨噬細胞於含有澱粉狀蛋白β胜肽凝集物之培養基中之培養上清液誘導神經細胞死亡，相對於此，於藉由薑黃水萃取物或薑黃酮醇B預先處理過之巨噬細胞中，抑制含有澱粉狀蛋白β胜肽凝集物之培養基之培養上清液誘導人類神經胚細胞瘤細胞SHSY5Y之細胞死亡的作用。圖5之結果顯示藉由薑黃水萃取物抑制人類神經胚細胞瘤細胞SHSY5Y之由氧化壓力所引起之細胞死亡。

Claims

一種阿茲海默氏病之治療、預防或改善用組合物，其含有藉由選自由水及親水性有機溶劑所組成之群中之至少1種萃取溶劑所獲得之薑黃萃取物作為有效成分。
一種阿茲海默氏病之治療、預防或改善用組合物，其含有薑黃酮醇A及薑黃酮醇B中之至少1種作為有效成分。
一種腦神經細胞死亡之抑制用組合物，其含有藉由選自由水及親水性有機溶劑所組成之群中之至少1種萃取溶劑所獲得之薑黃萃取物作為有效成分。
一種腦神經細胞死亡之抑制用組合物，其含有薑黃酮醇A及薑黃酮醇B中之至少1種作為有效成分。
一種由澱粉狀蛋白β胜肽誘導之小神經膠質之活性化之抑制用組合物，其含有藉由選自由水及親水性有機溶劑所組成之群中之至少1種萃取溶劑所獲得之薑黃萃取物作為有效成分。
一種由澱粉狀蛋白β胜肽誘導之小神經膠質之活性化之抑制用組合物，其含有薑黃酮醇A及薑黃酮醇B中之至少1種作為有效成分。
一種由澱粉狀蛋白β胜肽誘導之PGE2產生之抑制用組合物，其含有藉由選自由水及親水性有機溶劑所組成之群中之至少1種萃取溶劑所獲得之薑黃萃取物作為有效成分。
一種由澱粉狀蛋白β胜肽誘導之PGE2產生之抑制用組合物，其含有薑黃酮醇A及薑黃酮醇B中之至少1種作為有效成分。
一種由澱粉狀蛋白β胜肽誘導之TNF-α產生之抑制用組合物，其含有藉由選自由水及親水性有機溶劑所組成之群中之至少1種萃取溶劑所獲得之薑黃萃取物作為有效成分。
一種由澱粉狀蛋白β胜肽誘導之TNF-α產生之抑制用組合物，其含有薑黃酮醇A及薑黃酮醇B中之至少1種作為有效成分。
一種由澱粉狀蛋白β胜肽誘導之IL-1β產生之抑制用組合物，其含有藉由選自由水及親水性有機溶劑所組成之群中之至少1種萃取溶劑所獲得之薑黃萃取物作為有效成分。
一種由澱粉狀蛋白β胜肽誘導之IL-1β產生之抑制用組合物，其含有薑黃酮醇A及薑黃酮醇B中之至少1種作為有效成分。