TW201722477A - 藉由組合療法治療固態或淋巴腫瘤的方法 - Google Patents

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Abstract

本發明提供治療患有固態或淋巴腫瘤之個體之方法，其包含向腫瘤位點局部投與感染劑及免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)。該等方法可進一步包含向該腫瘤位點局部投與不活化之腫瘤細胞。亦提供用於該等癌症治療方法之組合物及套組。

Description

藉由組合療法治療固態或淋巴腫瘤的方法
本發明係關於用於癌症免疫療法之感染劑與一或多種免疫調節劑之組合之局部投與。
先天及適應性免疫性之人類免疫系統係尚未成功用於抵抗癌症之極為複雜之系統。一種解釋係，由於癌症通常在生命之後段部分發展，因此對抗癌症之免疫反應之發展對於進化過程中適者生存理論並不重要。在所有可能性中，人類免疫系統之不同態樣並非出於意欲殺死被認為是「自身」之細胞之目的而特別設計。即使在廣泛去除原發性腫瘤後，防止由於在手術時已經存在之微小轉移生長而形成轉移或在手術後未完全去除或重新附接之腫瘤細胞或腫瘤幹細胞形成新的轉移仍成問題。本質上，對於癌症之後期階段，手術及/或放射療法僅能照顧宏觀病灶，而大多數患者之癌症會復發並且不適於進一步療法。
最近，FDA已批准兩種針對***癌及黑色素瘤之免疫治療劑。第一藥劑普洛文(Provenge)利用具有***抗原之GM-CSF融合分子以在活體外活化晚期階段癌症患者之單核或抗原呈遞細胞，且能延長該等患者之整體存活。第二藥劑係抗CTLA-4單株抗體，已顯示其可在T效應細胞生 成中產生顯著增強之效應。溶瘤病毒CG0070亦已顯示在一系列六次每週膀胱內處理後在膀胱癌症患者中觸發長期完全反應(參見Burke JM，等人Journal of Urology Dec,188(6)2391-7,2012)。
當前癌症免疫治療方法面臨各種基本挑戰。舉例而言，癌症患者中之腫瘤特異性免疫T淋巴球即使在其存在時，亦通常僅以低頻率全身發生。可能之原因在於常見癌症之腫瘤抗原之抗原性及特異性免疫原性通常較弱，以及經由細胞介素及調節細胞(例如Treg、腫瘤相關巨噬細胞等)存在極大量之阻抑劑活性。另外，發現使用非特異性組份以加強針對特定組份之免疫反應的舊觀念極少成功，此乃因人體針對其自身細胞產生極具特異性之免疫反應的能力天然受限。畢竟，大多數癌細胞之免疫原性不足以與正常細胞不同。源自非特異性免疫組份之該免疫反應即使產生亦將係短命的。
至少出於上文論述之原因，已嘗試使用可用腫瘤抗原及佐劑之活體外及預調配之治療性癌症疫苗達數十年，但沒有大量成功。明確需要具有改良效能之癌症免疫治療方法。
本文中引用之所有出版物、專利、專利申請案及已公開專利申請案之揭示內容的全文皆以引用方式併入本文中。
本申請案提供用於治療個體之固態或淋巴腫瘤之方法、組合物(包括醫藥組合物)及套組，其包含向該腫瘤位點局部投與感染劑及免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)。該等方法、組合物及套組可進一步包含不活化之腫瘤細胞或其用途。向腫瘤位點局部投與治療性組份(例如，感染劑、免疫調節劑及不活化之腫瘤細胞)係本發明之關鍵需求。
不受限於任何理論或假設，本發明部分地基於用於遞送治療性組份及引發免疫反應之「於」腫瘤位點概念，其可用於克服治療固態或抗性淋巴腫瘤中可能不可克服之障礙。根據「於」腫瘤位點概念，治療性組份係「於」腫瘤位點、以正確之有效量、在正確之時間及以正確之順序遞送。治療性組份之有效量、時間及順序各自獨立地可基於腫瘤之特定狀況調節。舉例而言，使用「於」腫瘤位點概念之感染劑、免疫調節劑及視情況不活化之腫瘤細胞之組合之投與可產生適當量之選自感染劑、個體自身之身體反應、及/或視情況所投與活的腫瘤細胞的免疫相關分子(例如GM-CSF)，從而導致耐受性破壞抗原(TBA)之釋放，該等耐受性破壞抗原促使亦「於」腫瘤位點之免疫信號確認(例如CD4及CD8 T細胞之1、2、3個信號)及效應細胞之生成。藉此，據信具有強烈且耐久效應之「完整」特異性癌症免疫療法反應恰好發生「於」腫瘤位點。
不受限於任何理論或假設，據信藉由實時感染過程於腫瘤位點釋放先前未知之腫瘤特異性或選擇性耐受性破壞抗原(TBA)可在此過程中起關鍵作用，此乃因該等抗原僅能在細胞死亡之確切時間及位點釋放。TBA可由衍生自腫瘤或甚至衍生自對腫瘤至關重要之結構(例如基質細胞)的抗原組成，且TBA可能不會由AIRE(胸腺中之自體免疫調節劑基因)先前轉錄。另外，據信TBA之釋放係必須在腫瘤位點捕獲之瞬時現象。
在「於」腫瘤位點概念框架下，另外據信免疫調節劑(例如免疫檢查點抑制劑)及免疫刺激劑之使用可極大地幫助提供與恰好「於」腫瘤位點使用感染劑及不活化之腫瘤細胞之協同效應。端視劑量、投與途徑及其他藥物動力學及藥效學因子而定，免疫調節劑可對身體且特定而言對免疫系統發揮不同效應。本發明中之「於」腫瘤位點概念需要以可調節之劑量及 時間表投與免疫調節劑，而非(例如)以來自轉基因之固定劑量表現。舉例而言，抗CTLA-4拮抗劑抗體之IV投與之增加劑量與免疫阻抑劑細胞(例如Treg)之全身性增加相關。在抗CTLA-4抗體之足夠高之全身含量下，患者僅能在局部腫瘤位點及引流淋巴結中獲得益處，例如CD8/CD4比率增加及IL12及IFN γ上調等，此與顯著免疫相關不良事件及自體免疫病況之惡化(包括不可逆且致命之事件)相關。相反，在本發明中，「於」腫瘤位點投與免疫調節劑(例如抗CTLA-4抗體)，以使「完整」特異性癌症免疫療法反應恰好發生「於」腫瘤位點，包括特異性癌細胞死亡「活」混合物及TBA之釋放(較少正常細胞死亡以混淆系統)、抗原呈遞細胞及免疫細胞之「實時」成熟及遷移、經由免疫調節劑(例如，免疫細胞活化、功能、存活、擴增及記憶中之共刺激因子、抑制性檢查點分子之拮抗劑及激動劑)之免疫信號之確認。上述所有免疫事件皆恰好在腫瘤位點發生，此與僅僅依賴於經由二級淋巴器官之中樞或全身性免疫反應以根除腫瘤細胞之領域的傳統觀點相反。
「於」腫瘤位點概念進一步得到先前之CG0070臨床試驗之未公開結果支持，其顯示在治療過程期間IL6而非任何其他細胞介素之恆定釋放。不受限於任何理論或假設，據信與TGFβ組合之IL6使Treg及其他CD4細胞轉向定向至Th17免疫路徑。若此轉變在癌細胞死亡及抗原呈遞及免疫細胞活化時恰好立刻發生，則Th1路徑將在自體免疫基礎上得以證實，此係效應物T細胞破壞所謂的「自身免疫」癌細胞所必需的。否則，當僅暫時賦予Th1路徑而未釋放IL6並定向至Th17路徑時，癌細胞容易被效應物T細胞「耐受」。由於僅在腫瘤位點觀察到IL6之表現及向Th17路徑之轉變，該等結果進一步證實「於」腫瘤位點療法之重要性。
因此，本申請案之一個態樣提供治療個體(例如，人類個體)之固態或淋巴腫瘤之方法，其包含：a)向該腫瘤位點局部投與有效量之感染劑；及b)向該腫瘤位點局部投與有效量之免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)。在一些實施例中，提供抑制個體(例如，人類個體)之固態或淋巴腫瘤轉移之方法，其包含：a)向該腫瘤位點局部投與有效量之感染劑；及b)向該腫瘤位點局部投與有效量之免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)。
在根據上文所提供方法中之任一者之一些實施例中，感染劑係病毒，包括非溶瘤病毒或溶瘤病毒，例如選自由以下組成之群之病毒：腺病毒、單純疱疹病毒、牛痘病毒、腮腺炎病毒、新城雞瘟病毒、脊髓灰質炎病毒、麻疹病毒、塞尼卡谷病毒(Seneca valley virus)、柯薩奇病毒(coxsackie virus)、裡奧病毒、水疱性口炎病毒、馬拉巴(maraba)及棒狀病毒及小病毒。在一些實施例中，感染劑係細菌，例如卡介苗(Bacillus Calmette-Guerin，BCG)、分枝桿菌細胞壁-DNA複合物(「MCNA」)或單核球增多性李氏菌(Listeria monocytogene)。
在根據上文所提供方法中之任一者之一些實施例中，感染劑係溶瘤病毒。在一些實施例中，溶瘤病毒係溶瘤腺病毒。在一些實施例中，溶瘤病毒優先在癌細胞中複製。在一些實施例中，溶瘤病毒包含病毒載體，該病毒載體包含可操作連接至病毒複製所必需之病毒基因之腫瘤細胞特異性啟動子。在一些實施例中，腫瘤特異性啟動子係E2F-1啟動子。在一些實施例中，腫瘤特異性啟動子係人類E2F-1啟動子。在一些實施例中，E2F-1啟動子包含SEQ ID NO：1中所述之核苷酸序列。在一些實施例中，病毒複製所必需之病毒基因選自由以下組成之群：E1A、E1B及E4。
在根據上文所提供方法中之任一者之一些實施例中，將感染劑及/或 免疫調節劑直接投與至腫瘤中。在一些實施例中，將感染劑直接投與至腫瘤中。在一些實施例中，將免疫調節劑直接投與至腫瘤中。
在根據上文所提供方法中之任一者之一些實施例中，將感染劑及/或免疫調節劑投與至具有腫瘤之組織。在一些實施例中，將感染劑投與至具有腫瘤之組織。在一些實施例中，將免疫調節劑投與至具有腫瘤之組織。
在根據上文所提供方法中之任一者之一些實施例中，依序投與感染劑及免疫調節劑。在一些實施例中，在投與免疫調節劑之前投與感染劑。在一些實施例中，在投與免疫調節劑之後投與感染劑。
在根據上文所提供方法中之任一者之一些實施例中，同時投與感染劑及免疫調節劑。在一些實施例中，在同一組合物中投與感染劑及免疫調節劑。
在根據上文所提供方法中之任一者之一些實施例中，免疫調節劑係選自由以下組成之群之免疫檢查點分子之調節劑：CTLA-4、PD-1、PD-L1、PD-L2、TIM3、B7-H3、B7-H4、LAG-3、KIR及其配體。在一些實施例中，免疫調節劑係CTLA-4之抑制劑，例如抗CTLA-4抗體(例如，伊匹單抗(Ipilimumab))。在一些實施例中，抗CTLA-4抗體選自由以下組成之群：伊匹單抗、曲美木單抗(Tremilimumab)及單鏈抗CTLA-4抗體。在一些實施例中，CTLA-4之抑制劑係特異性識別CTLA-4之經改造之脂質運載蛋白，例如特異性結合至CTLA-4之抗運載蛋白分子。
在根據上文所提供方法中之任一者之一些實施例中，免疫調節劑係免疫刺激劑(例如免疫刺激分子之激動劑)。在一些實施例中，免疫刺激劑係OX40、4-1BB或CD40之活化劑。在一些實施例中，免疫刺激劑係CD40之刺激劑，例如CD40之激動劑抗體。
在根據上文所提供方法中之任一者之一些實施例中，該方法進一步包含向該腫瘤位點局部投與免疫相關分子(例如細胞介素、趨化介素或PRRago(即，病原體識別受體激動劑))。在一些實施例中，免疫相關分子選自由以下組成之群：GM-CSF、IL-2、IL-12、干擾素(例如1型、2型或3型干擾素，例如干擾素γ)、CCL4、CCL19、CCL21、CXCL13、TLR1、TLR2、TLR3、TLR4、TLR5、TLR6、TLR7、TLR8、TLR9、TLR10、RIG-I、MDA5、LGP2及LTαβ。在一些實施例中，免疫相關分子與感染劑分開投與。在一些實施例中，免疫相關分子由感染劑表現，其中感染劑包含編碼免疫相關分子之核酸。在一些實施例中，免疫相關分子選自由以下組成之群：STING(即，干擾素基因之刺激物)活化劑(例如CDN)、PRRago(例如CpG、咪喹莫特(Imiquimod)或聚I：C)、TLR刺激物(例如GS-9620、AED-1419、CYT-003-QbG10、AVE-0675或PF-7909)及RLR(即，Rig-I樣受體)刺激物(例如RIG-I、Mda5或LGP2刺激物)。
在根據上文所提供方法中之任一者之一些實施例中，感染劑係包含病毒載體之病毒，且其中病毒載體包含編碼免疫相關分子(例如細胞介素或趨化介素)之核酸。在一些實施例中，編碼免疫相關分子之核酸可操作連接至病毒啟動子。在一些實施例中，病毒係腺病毒，且病毒啟動子係E3啟動子。在一些實施例中，感染劑係腺病毒血清型5，其中天然腺病毒之內源性E1a啟動子及E3 19kD編碼區經人類E2F-1啟動子及編碼人類GM-CSF之核酸置換。在一些實施例中，感染劑係CG0070。
在根據上文所提供方法中之任一者之一些實施例中，該方法進一步包含在投與感染劑之前向該腫瘤位點局部投與預處理組合物。在一些實施例中，預處理組合物包含轉導增強劑，例如N-十二烷基-β-D-麥芽糖苷 (DDM)。
在根據上文所提供方法中之任一者之一些實施例中，在投與感染劑及免疫調節劑之前，個體(例如，完全或僅在腫瘤位點)經受先前療法。在一些實施例中，先前療法係輻射療法(例如，具有或無化學療法)。在一些實施例中，先前療法包含投與治療劑。在一些實施例中，治療劑係增加參與免疫原性路徑之細胞介素之含量的藥劑。在一些實施例中，治療劑係引起腫瘤之結構組份功能障礙或對其損害的藥劑。在一些實施例中，治療劑選自由以下組成之群：抗VEGF抗體、玻尿酸酶、CCL21及N-十二烷基-β-麥芽糖苷。在一些實施例中，所提供先前療法之劑量不足以根除腫瘤細胞。
在根據上文所提供方法中之任一者之一些實施例中，該方法進一步包含向該腫瘤位點局部投與有效量之不活化之腫瘤細胞。在一些實施例中，不活化之腫瘤細胞係自體的。在一些實施例中，不活化之腫瘤細胞係同種異體的。在一些實施例中，不活化之腫瘤細胞來自腫瘤細胞系。在一些實施例中，藉由輻照使不活化之腫瘤細胞不活化。
在根據上文所提供方法中之任一者之一些實施例中，同時投與感染劑及不活化之腫瘤細胞。在一些實施例中，感染劑及不活化之腫瘤細胞係以單一組合物形式投與。在一些實施例中，在即將投與之前混合感染劑及不活化之腫瘤細胞。
在根據上文所提供方法中之任一者之一些實施例中，固態或淋巴腫瘤係膀胱癌(例如肌肉侵襲性膀胱癌或非肌肉侵襲性膀胱癌)。在一些實施例中，感染劑係膀胱內投與。在一些實施例中，免疫調節劑係膀胱內投與。
在根據上文所提供方法中之任一者之一些實施例中，每週投與感染劑及/或免疫調節劑。
在根據上文所提供方法中之任一者之一些實施例中，個體在腫瘤(例如腫瘤細胞或源自腫瘤之免疫細胞)中具有一或多個選自以下之生物標記之高表現：PD-1、PD-L1及PD-L2。在一些實施例中，個體在腫瘤源成熟樹突細胞中具有一或多個選自以下之生物標記之高表現：CD80、CD83、CD86及HLA-II類抗原。在一些實施例中，個體具有一或多個選自由以下組成之群之生物標記之高表現：CXCL9、CXCL10、CXCL11、CCR7、CCL5、CCL8、SOD2、MT2A、OASL、GBP1、HES4、MTIB、MTIE、MTIG、MTIH、GADD45A、LAMP3及miR-155。
本申請案之另一態樣提供用於治療個體之固態或淋巴腫瘤之套組，其包含：a)感染劑，b)免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)，及c)用於向腫瘤位點局部投與感染劑或免疫調節劑之裝置。在一些實施例中，感染劑係病毒，例如非溶瘤病毒或溶瘤病毒。在一些實施例中，感染劑係優先在癌細胞中複製之溶瘤腺病毒。
在根據上文提供之套組中之任一者之一些實施例中，免疫調節劑係選自由以下組成之群之免疫檢查點分子之調節劑：CTLA-4、PD-1、PD-L1、PD-L2、TIM3、B7-H3、B7-H4、LAG-3、KIR及其配體。在一些實施例中，免疫調節劑係CTLA-4之抑制劑，例如抗CTLA-4抗體(例如，伊匹單抗)。在一些實施例中，抗CTLA-4抗體選自由以下組成之群：伊匹單抗、曲美木單抗及單鏈抗CTLA-4抗體。在一些實施例中，CTLA-4之抑制劑係特異性識別CTLA-4之經改造之脂質運載蛋白，例如特異性結合至CTLA-4之抗運載蛋白分子。
在根據上文提供之套組中之任一者之一些實施例中，免疫調節劑係免疫刺激劑(例如免疫刺激分子之激動劑)。在一些實施例中，免疫刺激劑係OX40、4-1BB或CD40之活化劑。在一些實施例中，免疫刺激劑係CD40之刺激劑，例如CD40之激動劑抗體。
在根據上文提供之套組中之任一者之一些實施例中，感染劑包含編碼免疫相關分子(例如細胞介素或趨化介素)之核酸。在一些實施例中，免疫相關分子選自由以下組成之群：GM-CSF、IL-2、IL12、干擾素(例如1型、2型或3型干擾素，例如干擾素γ)、CCL4、CCL19、CCL21、CXCL13、TLR1、TLR2、TLR3、TLR4、TLR5、TLR6、TLR7、TLR8、TLR9、TLR10、RIG-I、MDA5、LGP2及LTαβ。在一些實施例中，感染劑係包含病毒載體之病毒，且其中病毒載體包含編碼免疫相關分子之核酸。在一些實施例中，編碼免疫相關分子之核酸可操作連接至病毒啟動子。在一些實施例中，病毒係腺病毒，且病毒啟動子係E3啟動子。在一些實施例中，感染劑係腺病毒血清型5，其中天然腺病毒之內源性E1a啟動子及E3 19kD編碼區經人類E2F-1啟動子及編碼人類GM-CSF之核酸置換。在一些實施例中，感染劑係CG0070。
在根據上文提供之套組中之任一者之一些實施例中，套組進一步包含選自由以下組成之群之免疫相關分子：STING活化劑(例如CDN)、PRRago(例如CpG、咪喹莫特或聚I：C)、TLR刺激物(例如GS-9620、AED-1419、CYT-003-QbG10、AVE-0675或PF-7909)及RLR刺激物(例如RIG-I、Mda5或LGP2刺激物)。
在根據上文提供之套組中之任一者之一些實施例中，套組進一步包括包含轉導增強劑之預處理組合物。在一些實施例中，轉導增強劑係N-十 二烷基-β-D-麥芽糖苷(DDM)。
在根據上文提供之套組中之任一者之一些實施例中，套組進一步包含複數個不活化之腫瘤細胞。在一些實施例中，套組進一步包含在投與之前混合感染劑與不活化之腫瘤細胞之說明書。在一些實施例中，用於局部投與之裝置用於同時投與複數個不活化之腫瘤細胞及感染劑。
在根據上文提供之套組中之任一者之一些實施例中，用於局部投與之裝置係用於將感染劑及/或免疫調節劑直接投與至腫瘤中。在一些實施例中，用於局部投與之裝置係用於將感染劑及/或免疫調節劑投與具有腫瘤之組織。
在本申請案之一個態樣中另外提供包含以下之醫藥組合物：a)感染劑，b)免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)，及c)適於將組合物局部投與至腫瘤位點之醫藥上可接受之賦形劑。在一些實施例中，醫藥上可接受之賦形劑係聚合物，例如水凝膠。
在根據上文提供之醫藥組合物中之任一者之一些實施例中，感染劑係病毒，例如非溶瘤病毒或溶瘤病毒。在一些實施例中，感染劑係優先在癌細胞中複製之溶瘤腺病毒。
在根據上文提供之醫藥組合物中之任一者之一些實施例中，免疫調節劑係選自由以下組成之群之免疫檢查點分子之調節劑：CTLA-4、PD-1、PD-L1、PD-L2、TIM3、B7-H3、B7-H4、LAG-3、KIR及其配體。在一些實施例中，免疫調節劑係CTLA-4之抑制劑，例如抗CTLA-4抗體(例如，伊匹單抗)。在一些實施例中，抗CTLA-4抗體選自由以下組成之群：伊匹單抗、曲美木單抗及單鏈抗CTLA-4抗體。在一些實施例中，CTLA-4之抑制劑係特異性識別CTLA-4之經改造之脂質運載蛋白，例如 特異性結合至CTLA-4之抗運載蛋白分子。
在根據上文提供之醫藥組合物中之任一者之一些實施例中，免疫調節劑係免疫刺激劑(例如免疫刺激分子之激動劑)。在一些實施例中，免疫刺激劑係OX40、4-1BB或CD40之活化劑。在一些實施例中，免疫刺激劑係CD40之刺激劑，例如CD40之激動劑抗體。
在根據上文提供之醫藥組合物中之任一者之一些實施例中，感染劑包含編碼免疫相關分子(例如細胞介素或趨化介素)之核酸。在一些實施例中，免疫相關分子選自由以下組成之群：GM-CSF、IL-2、IL12、干擾素(例如1型、2型或3型干擾素，例如干擾素γ)、CCL4、CCL19、CCL21、CXCL13、TLR1、TLR2、TLR3、TLR4、TLR5、TLR6、TLR7、TLR8、TLR9、TLR10、RIG-I、MDA5、LGP2及LTαβ。在一些實施例中，感染劑係包含病毒載體之病毒，且其中病毒載體包含編碼免疫相關分子之核酸。在一些實施例中，編碼免疫相關分子之核酸可操作連接至病毒啟動子。在一些實施例中，病毒係腺病毒，且病毒啟動子係E3啟動子。在一些實施例中，感染劑係腺病毒血清型5，其中天然腺病毒之內源性E1a啟動子及E3 19kD編碼區經人類E2F-1啟動子及編碼人類GM-CSF之核酸置換。在一些實施例中，感染劑係CG0070。
在根據上文提供之醫藥組合物之一些實施例中，醫藥組合物進一步包含選自由以下組成之群之免疫相關分子：STING活化劑(例如CDN)、PRRago(例如CpG、咪喹莫特或聚I：C)、TLR刺激物(例如GS-9620、AED-1419、CYT-003-QbG10、AVE-0675或PF-7909)及RLR刺激物(例如RIG-I、Mda5或LGP2刺激物)。
在根據上文提供之醫藥組合物中之任一者之一些實施例中，醫藥組 合物進一步包括包含轉導增強劑之預處理組合物。在一些實施例中，轉導增強劑係N-十二烷基-β-D-麥芽糖苷(DDM)。
在根據上文提供之醫藥組合物中之任一者之一些實施例中，醫藥組合物進一步包含複數個不活化之腫瘤細胞。在一些實施例中，複數個不活化之腫瘤細胞係自體的。在一些實施例中，複數個不活化之腫瘤細胞係同種異體的。在一些實施例中，複數個不活化之腫瘤細胞來自腫瘤細胞系。在一些實施例中，藉由輻照使複數個不活化之腫瘤細胞不活化。
亦提供本文所述感染劑中之任一者及免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)中之任一者用於治療固態或淋巴癌(例如用於抑制腫瘤轉移)之用途、及本文所述感染劑中之任一者及免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)中之任一者用於製造用於治療固態或淋巴癌(例如用於抑制腫瘤轉移)之藥劑的用途。
自隨後實施方式及隨附申請專利範圍將明瞭本發明之該等及其他態樣及優點。應理解，本文所述各實施例之性質中之一者、一些或全部可組合以形成本發明之其他實施例。
圖1係CG0070及野生型(wt)腺病毒類型5之示意圖。CG0070係基於腺病毒血清型5，但內源性E1a啟動子及E3 19kD編碼區已分別經人類E2F-1啟動子及人類GM-CSF之cDNA編碼區置換。
圖2顯示實例9之活體內研究中之動物組及投藥方案。
圖3係顯示實例9之活體內研究中第23天之每一動物組之所列舉轉移病灶之分佈的散佈圖。水平線對應於平均值。雙尾統計分析係於P=0.05下執行。於P>0.05下認為測試結果不顯著(ns)、於0.01<P<0.05下顯 著(由符號*表示)、於0.001<P<0.01下極顯著(**)、且於P<0.001下極為顯著(***)。
圖4係顯示實例9之活體內研究中第19天之每一動物組之腫瘤體積的盒須圖。盒代表觀察之第25及第75百分位數，線代表觀察之中值，且須代表極端觀察。
圖5係顯示實例10中之活體內研究之投藥時間表的圖。
相關申請案交叉參考
本申請案主張於2015年10月19日提出申請之美國臨時專利申請案第62/243,512號之權益，該專利申請案之內容以全文引用之方式併入本文中。
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本發明提供用於治療個體之固態或淋巴腫瘤(包括抑制腫瘤轉移)之方法及組合物，其係藉由向腫瘤位點局部投與有效量之感染劑(例如溶瘤病毒，視情況表現諸如GM-CSF等細胞介素或與其組合)及有效量之免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合，例如免疫刺激劑及/或免疫檢查點抑制劑)來完成。該等方法及組合物可進一步包含局部投與不活化之腫瘤細胞。可將感染劑及/或免疫調節劑及/或不活化之腫瘤細胞直接投與至腫瘤中。或者，將感染劑及/或免疫調節劑及/或不活化之腫瘤細胞投與至具有腫瘤細 胞之組織。舉例而言，一種適於本文所述方法之實例性腫瘤係膀胱癌，且可膀胱內投與感染劑及/或免疫調節劑。
本發明提供藉由局部(例如腫瘤內)遞送治療性組份(包括感染劑、一或多種免疫調節試劑及活的癌細胞)在人體內生成之活的實時「活體內」癌症疫苗系統。不受限於任何理論或假設，據信該活體內位點上及實時感染系統導致先前未知之耐受性破壞抗原(「TBA」)釋放，其可基本上為瞬時現象。因此，在本文所述之所有三種組份(腫瘤位點處存在或投與至腫瘤位點之感染劑、免疫調節劑及活的癌細胞)存在時，可達成針對固態及淋巴腫瘤之有效適應性免疫療法。
本文所述方法之一個需求係將感染劑、免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)及視情況不活化之腫瘤細胞局部投與至腫瘤位點。局部投與之直接效應係重要的，此乃因若組份未直接提供至腫瘤細胞(例如，在全身投與時)，則該等組份將藉由人體或在人體上產生藥物動力學及藥效學變化。該等變化將提示在成功所需之複雜以及精細之免疫反應之錯誤方向上腫瘤抑制與活化之間之精細平衡。
因此，據信本文所述組合將允許在個體中完全利用溶瘤及免疫原性反應，並增加癌症免疫療法之治療潛力。熟習此項技術者應理解，本文所述之組合治療方法需要一種藥劑或組合物與另一種藥劑結合投與。可獨立地最佳化本文提供之組合療法(例如感染劑、每一免疫調節劑及不活化之腫瘤細胞)中之每一藥劑的劑量、投藥時間表、投與途徑及投與順序，以提供最佳之治療結果。該等方法亦可進一步與預處理組合，例如局部輻射、或細胞介素、趨化介素或其他有益治療劑之局部投與，以增加療法成功之機會。
在一態樣中，提供治療個體之固態或淋巴腫瘤之方法，其包含：a)向該腫瘤位點局部投與有效量之感染劑；及b)向該腫瘤位點局部投與有效量之免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)。在一些實施例中，提供治療個體之固態或淋巴腫瘤之方法，其包含：a)向該腫瘤位點局部投與有效量之感染劑；b)向該腫瘤位點局部投與有效量之免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)；及c)向該腫瘤位點局部投與有效量之不活化之腫瘤細胞。在一些實施例中，提供治療個體之膀胱癌之方法，其包含：a)膀胱內投與有效量之感染劑；及b)膀胱內投與有效量之免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)。
亦提供可用於本文所述方法之組合物(例如醫藥組合物)、套組及製品。在一態樣中，提供用於治療個體之固態或淋巴腫瘤之套組，其包含：a)感染劑，b)免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)，及c)用於向腫瘤位點局部投與感染劑或免疫調節劑之裝置。在一態樣中，提供用於治療個體之固態或淋巴腫瘤之套組，其包含：a)感染劑，b)免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)，c)複數個不活化之腫瘤細胞；及d)用於向腫瘤位點局部投與感染劑、免疫調節劑或複數個不活化之腫瘤細胞之裝置。在另一態樣中，提供包含以下之醫藥組合物：a)感染劑，b)免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)，及c)適於將組合物局部投與至腫瘤位點之醫藥上可接受之賦形劑。在另一態樣中，提供包含以下之醫藥組合物：a)感染劑，b)免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)，c)複數個不活化之腫瘤細胞；及d)適於將組合物局部投與至腫瘤位點之醫藥上可接受之賦形劑。
定義
如本文所用之「治療」(「treatment」或「treating」)係用於獲得有 益或期望結果(包括臨床結果)之方法。出於本發明之目的，有益或期望臨床結果包括(但不限於)以下中之一或多者：緩和由疾病導致之一或多種症狀、減輕疾病之程度、穩定疾病((例如預防或延遲疾病惡化)、預防或延遲疾病擴散(例如轉移)、預防或延遲疾病復發、降低疾病之復發率、延遲或延緩疾病進展、改善疾病狀態、提供疾病之緩解(部分或全部)、減少治療疾病所需之一或多種其他藥劑的劑量、延遲疾病進展、提高生活品質和/或延長生存。「治療」亦涵蓋癌症之病理結果的減少。本發明方法涵蓋治療之該等態樣中之任一或多者。
「輔助設定」係指其中個體具有癌症病史且通常(但不必)對療法有反應之臨床設定，該療法包括(但不限於)手術(例如手術切除術)、放射療法及化學療法。「輔助設定」中之治療或投與係指隨後之治療模式。
「前導性設定」係指其中在初次/確定療法之前實施該方法之臨床設定。本文中之前導性設定亦指與如本發明中所述之治療性組份(例如，感染劑及免疫調節劑；或感染劑、免疫調節劑及不活化之腫瘤細胞)結合以依序方式使用之任何「腫瘤位點製備」治療模態。
如本文所用之「感染劑」係指病毒，包括非溶瘤病毒或溶瘤病毒，包括但不限於腺病毒、單純疱疹病毒、牛痘病毒、腮腺炎病毒、新城雞瘟病毒、脊髓灰質炎病毒、麻疹病毒、塞尼卡谷病毒、柯薩奇病毒、裡奧病毒、水疱性口炎病毒、馬拉巴及棒狀病毒及小病毒。另外，感染劑亦可為細菌，例如卡介苗(BCG)、分枝桿菌細胞壁-DNA複合物(「MCNA」)或單核球增多性李氏菌。
本文所用術語「有效量」係指足以治療指定病症、病況或疾病(例如改善、緩解、減輕及/或延遲其症狀中之一或多者)之化合物或組合物的 量。在提及癌症時，有效量包含足以引起腫瘤收縮及/或減小腫瘤之生長速率(例如抑制腫瘤生長)或預防或延遲癌症中之其他不期望細胞增殖的量。在一些實施例中，有效量係足以延遲癌症發展之量。在一些實施例中，有效量係足以預防或延遲復發之量。在一些實施例中，有效量係足以降低個體之復發率的量。在一些實施例中，有效量係足以抑制個體之腫瘤轉移的量。有效劑量可以一或多次投與來投與。有效量之藥物或組合物可：(i)減少癌細胞之數目；(ii)減小腫瘤大小；(iii)抑制、延緩、在一定程度上減緩並較佳停止癌細胞浸潤至外周器官中；(iv)抑制(即，在一定程度上減緩並較佳停止)腫瘤轉移；(v)抑制腫瘤生長；(vi)預防腫瘤發生及/或復發；(vii)延遲腫瘤發生及/或復發；(viii)降低腫瘤之復發率，及/或(ix)在一定程度上減輕與癌症相關之一或多種症狀。如業內所理解，「有效量」可為一或多個劑量，即，可能需要單一劑量或多個劑量來實現期望治療終點。
「與……結合」或「與……組合」係指除另一治療方式外亦投與一種治療方式，例如在相同治療計劃下向同一個體除投與另一藥劑(例如免疫調節劑及/或不活化之腫瘤細胞)外亦投與本文所述感染劑。因此，「與……結合」或「與……組合」係指在向個體遞送另一治療方式之前、期間或之後投與一種治療方式。
如本文所用術語「同時投與」意指組合療法中之第一療法及第二療法係同時投與。在第一及第二療法係同時投與時，第一及第二療法可包含於同一組合物中(例如，組合物包含第一及第二療法二者)或單獨組合物中(例如，第一療法包含於一種組合物中且第二療法包含於另一組合物中)。
如本文所用術語「依序投與」或「按順序」意指組合療法中之第一 療法及第二療法係以(例如)超過約1分鐘、例如超過以下中之約任一者之時間間隔投與：5、10、15、20、30、40、50、60或更多分鐘。在一些情形下，術語「依序投與」意指組合療法中之第一療法及第二療法係以超過約1天、例如超過以下中之約任一者之時間間隔投與：1天至1週、2週、3週、4週、8週、12週或更多週。可首先投與第一療法或第二療法。第一及第二療法包含於單獨組合物中，其可包含於相同或不同包裝或套組中。
術語「在即將……之前投與」意指第一療法係在投與第二療法之前不超過約15分鐘、例如不超過10、5或1分鐘中之約任一者投與。術語「在……之後立刻投與」意指第一療法係在投與第二療法之後不超過約15分鐘、例如不超過15、10或1分鐘中之約任一者投與。
如本文所用，當闡述化合物作為抑制劑時使用之「特異性」(「specific」或「specificity」)或「選擇性」(「selective」或「selectivity」)意指化合物較佳與特定靶標(例如，蛋白質及酶)而非非靶標相互作用(例如，結合、調節及抑制)。
如本文所用術語「轉導」(「transduction」及「transfection」)包括業內已知使用感染劑(例如病毒)或其他方式以將DNA引入細胞中用於表現所關注蛋白質或分子的所有方法。除病毒或病毒樣試劑外，亦存在基於化學之轉染方法，例如使用磷酸鈣、樹枝狀聚合物、脂質體或陽離子聚合物(例如DEAE-聚葡萄糖或聚乙烯亞胺)之彼等；非化學方法，例如電穿孔、細胞擠壓、聲波穿孔、光學轉染、刺穿感染、原生質體融合、質體或轉位子遞送；基於顆粒之方法，例如使用基因槍、磁轉染或磁鐵輔助轉染、顆粒轟擊；及雜交方法，例如核轉染。
如本文所用術語「腫瘤位點製備」闡述單一治療方式或欲與治療性 組份(例如，感染劑及免疫調節劑；或感染劑、免疫調節劑及不活化之腫瘤細胞)以依序方式結合使用之一種以上治療模態的組合，且其中治療方式或模態係直接或間接地(例如經由IV療法)施用至腫瘤位點(例如癌細胞或含有癌細胞之組織)。用於腫瘤位點製備之實例性治療模態包括(但不限於)投與免疫相關分子、輻照及投與治療劑。本文所述所有腫瘤位點製備皆可包括投與單一分子或藥劑、或一種以上分子及/或藥劑之組合。
應理解，本文所述本發明之實施例包括「由實施例組成」及/或「基本上由實施例組成」。
本文中在提及「約」值或參數時包括(且闡述)針對該值或參數本身之變化。舉例而言，提及「約X」之說明包括「X」之說明。
如本文所用，在提及「並非」值或參數時通常意指且闡述「不同於」值或參數。舉例而言，方法不用於治療X型癌症意指方法用於治療不同於X類型之癌症。
本文所用術語「約X-Y」具有與「約X至約Y」相同之含義。
除非上下文另外明確指示，否則如本文及隨附申請專利範圍中所用之單數形式「一(a、an)」及「該」包括複數個指示物。
治療固態或淋巴腫瘤之方法
本發明提供治療個體(例如人類)之固態或淋巴腫瘤(例如膀胱癌)之方法，其包含：a)向該腫瘤位點局部投與有效量之感染劑；及b)向該腫瘤位點局部投與有效量之免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)。在一些實施例中，提供抑制個體之固態或淋巴腫瘤轉移之方法，其包含：a)向該腫瘤位點局部投與有效量之感染劑；及b)向該腫瘤位點局部投與有效量之免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)。在一些實施例中，感染劑係病毒， 例如選自由以下組成之群之病毒：腺病毒、單純疱疹病毒、牛痘病毒、腮腺炎病毒、新城雞瘟病毒、脊髓灰質炎病毒、麻疹病毒、塞尼卡谷病毒、柯薩奇病毒、裡奧病毒、水疱性口炎病毒、馬拉巴及棒狀病毒及小病毒。在一些實施例中，感染劑係細菌，例如分枝桿菌及其衍生物(例如，卡介苗(「BCG」)、或分枝桿菌細胞壁-DNA複合物(「MCNA」或「MCC」，例如UROCIDINTM))或單核球增多性李氏菌。在一些實施例中，感染劑係野生型感染劑。在一些實施例中，感染劑經遺傳修飾。在一些實施例中，感染劑經減毒(例如經由多次傳代、不活化或遺傳修飾)。在一些實施例中，感染劑僅係可引起感染、發炎或感染樣效應之野生型感染劑的一或多個部分。在一些實施例中，免疫調節劑係免疫檢查點抑制劑。在一些實施例中，免疫調節劑係免疫刺激劑。在一些實施例中，方法包含局部投與免疫調節劑之組合，其包含一或多種免疫檢查點抑制劑及/或一或多種免疫刺激劑(例如至少兩種免疫檢查點抑制劑、至少兩種免疫刺激劑或至少一種免疫檢查點抑制劑及至少一種免疫刺激劑之組合)。在一些實施例中，將感染劑及/或免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)直接投與至腫瘤中。在一些實施例中，將感染劑及/或免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)投與至具有腫瘤之組織。在一些實施例中，將感染劑及免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)二者直接投與至腫瘤中。在一些實施例中，將感染劑及免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)二者投與至具有腫瘤之組織。在一些實施例中，每週投與感染劑。在一些實施例中，每週投與免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)。在一些實施例中，該方法進一步包含藉由局部投與除外之投與途徑投與感染劑及/或免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)。
在本發明中適於用作感染劑之實例性病毒包括(但不限於)腺病毒，例如H101(ONCOCRINE®)、CG-TG-102(Ad5/3-D24-GM-CSF)及CG0070；單純疱疹病毒，例如Talimogene laherparapvec(T-VEC)及HSV-1716(SEPREHVIR®)；裡奧病毒，例如REOLYSIN®；牛痘病毒，例如JX-594；塞尼卡谷病毒，例如NTX-010及SVV-001；新城雞瘟病毒，例如NDV-NS1及GL-ONC1；脊髓灰質炎病毒，例如PVS-RIPO；麻疹病毒，例如MV-NIS；柯薩奇病毒，例如CavatakTM；水疱性口炎病毒；馬拉巴及棒狀病毒；小病毒及腮腺炎病毒。在一些實施例中，病毒係非溶瘤病毒。在一些實施例中，病毒係溶瘤病毒。在一些實施例中，病毒勝任複製。在一些實施例中，病毒優先在腫瘤細胞中複製。
在一些實施例中，提供治療個體之固態或淋巴腫瘤之方法，其包含：a)向該腫瘤位點局部投與有效量之溶瘤病毒(例如溶瘤腺病毒)；及b)向該腫瘤位點局部投與有效量之免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)。在一些實施例中，提供抑制個體之固態或淋巴腫瘤轉移之方法，其包含：a)向該腫瘤位點局部投與有效量之溶瘤病毒(例如溶瘤腺病毒)；及b)向該腫瘤位點局部投與有效量之免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)。在一些實施例中，溶瘤病毒係野生型溶瘤病毒。在一些實施例中，溶瘤病毒經遺傳修飾。在一些實施例中，溶瘤病毒經減毒(例如經由多次傳代、不活化或遺傳修飾)。在一些實施例中，溶瘤病毒勝任複製。在一些實施例中，溶瘤病毒優先在癌細胞中複製。在一些實施例中，免疫調節劑係免疫檢查點抑制劑。在一些實施例中，免疫調節劑係免疫刺激劑。在一些實施例中，方法包含局部投與免疫調節劑之組合，其包含一或多種免疫檢查點抑制劑及/或一或多種免疫刺激劑(例如至少兩種免疫檢查點抑制劑、至少兩種免 疫刺激劑或至少一種免疫檢查點抑制劑及至少一種免疫刺激劑之組合)。在一些實施例中，將溶瘤病毒及/或免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)直接投與至腫瘤中。在一些實施例中，將溶瘤病毒及/或免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)投與至具有腫瘤之組織。在一些實施例中，將溶瘤病毒及免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)二者直接投與至腫瘤中。在一些實施例中，將溶瘤病毒及免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)二者投與至具有腫瘤之組織。在一些實施例中，每週投與溶瘤病毒。在一些實施例中，每週投與免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)。在一些實施例中，該方法進一步包含藉由局部投與除外之投與途徑投與溶瘤病毒及/或免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)。
在一些實施例中，提供治療個體之固態或淋巴腫瘤之方法，其包含：a)向該腫瘤位點局部投與有效量之包含病毒載體之溶瘤病毒(例如溶瘤腺病毒)，該病毒載體包含可操作連接至病毒複製所必需之病毒基因之腫瘤細胞特異性啟動子；及b)向該腫瘤位點局部投與有效量之免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)。在一些實施例中，提供抑制個體之固態或淋巴腫瘤轉移之方法，其包含：a)向該腫瘤位點局部投與有效量之包含病毒載體之溶瘤病毒(例如溶瘤腺病毒)，該病毒載體包含可操作連接至病毒複製所必需之病毒基因之腫瘤細胞特異性啟動子；及b)向該腫瘤位點局部投與有效量之免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)。在一些實施例中，免疫調節劑係免疫檢查點抑制劑。在一些實施例中，免疫調節劑係免疫刺激劑。在一些實施例中，方法包含局部投與免疫調節劑之組合，其包含一或多種免疫檢查點抑制劑及/或一或多種免疫刺激劑(例如至少兩種免疫檢查點抑制劑、至少兩種免疫刺激劑或至少一種免疫檢查點抑制劑及至少一 種免疫刺激劑之組合)。在一些實施例中，腫瘤特異性啟動子係E2F-1啟動子，例如人類E2F-1啟動子或包含SEQ ID NO：1中所述之核苷酸序列之E2F-1啟動子。在一些實施例中，病毒複製所必需之病毒基因選自由以下組成之群：E1A、E1B及E4。在一些實施例中，將溶瘤病毒及/或免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)直接投與至腫瘤中。在一些實施例中，將溶瘤病毒及/或免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)投與至具有腫瘤之組織。在一些實施例中，將溶瘤病毒及免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)二者直接投與至腫瘤中。在一些實施例中，將溶瘤病毒及免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)二者投與至具有腫瘤之組織。在一些實施例中，每週投與溶瘤病毒。在一些實施例中，每週投與免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)。在一些實施例中，該方法進一步包含藉由局部投與除外之投與途徑投與溶瘤病毒及/或免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)。
在一些實施例中，本文所述方法進一步包含向該腫瘤位點局部投與免疫相關分子(例如細胞介素、趨化介素或PRRago(即，病原體識別受體激動劑))。在一些實施例中，免疫相關分子選自由以下組成之群：GM-CSF、IL-2、IL-12、干擾素(例如1型、2型或3型干擾素，例如干擾素γ)、CCL4、CCL19、CCL21、CXCL13、TLR1、TLR2、TLR3、TLR4、TLR5、TLR6、TLR7、TLR8、TLR9、TLR10、RIG-I、MDA5、LGP2及LTαβ。在一些實施例中，免疫相關分子選自由以下組成之群：STING(即，干擾素基因之刺激物)活化劑(例如CDN，即，環狀二核苷酸)、PRRago(例如CpG、咪喹莫特或聚I：C)、TLR刺激物(例如GS-9620、AED-1419、CYT-003-QbG10、AVE-0675或PF-7909)及RLR刺激物(例如RIG-I、Mda5或LGP2刺激物)。在一些實施例中，免疫相關分子 誘導樹突細胞、T細胞、B細胞及/或T濾泡性輔助細胞。在一些實施例中，免疫相關分子與感染劑分開投與(例如，在單獨組合物中或作為同一組合物中之單獨實體)。在一些實施例中，經由轉導將免疫相關分子投與至腫瘤位點。業內已知之實例性轉導方法包括(但不限於)使用磷酸鈣、樹枝狀聚合物、脂質體、陽離子聚合物、電穿孔、細胞擠壓、聲波穿孔、光學轉染、原生質體融合、刺穿感染、流體動力遞送、基因槍、磁轉染、病毒轉染及核轉染。在一些實施例中，免疫相關分子由感染劑表現。舉例而言，感染劑可包含編碼免疫相關分子之核酸，且核酸可在病毒載體中或在單獨載體上。在一些實施例中，感染劑係包含病毒載體之病毒，且其中病毒載體包含編碼免疫相關分子之核酸。在一些實施例中，編碼免疫相關分子之核酸可操作連接至病毒啟動子，例如E1啟動子或E3啟動子。
本發明部分係基於吾人在2005年與2008年之間實施之臨床實驗之未公開結果。不受限於任何理論或假設，據信經特殊設計僅在癌細胞中複製之病毒感染劑CG0070在癌細胞死亡期間在腫瘤位點且「實時」提供「適當量」之GM-CSF。據信，此在癌細胞死亡期間由感染劑「於」腫瘤位點遞送GM-CSF對於抗原呈遞細胞成熟及自此細胞死亡混合物向活化T細胞交叉呈遞目前確立之抗原、新生抗原及耐受性破壞抗原(TBA)係至關重要的。在此治療情境下，腫瘤位點處需要適當量之GM-CSF，此乃因GM-CSF之高劑量將使得免疫系統無焦點，且觸發局部及系統阻抑劑之瞬時增加；而GM-CSF之低劑量將不足以活化發炎過程及相關免疫細胞。據信包括適當量之GM-CSF及位點上「活」癌細胞死亡混合物之腫瘤位點之精細平衡引發對癌細胞具有特異性之適應性免疫反應。因此，據信「於」腫瘤位點遞送之癌症特異性且溶瘤之感染劑以及與適當量之GM-CSF或由感染 劑表現的或在細胞死亡、感染或發炎期間因應任何感染劑由身體防禦分泌之其他適當免疫相關分子之組合係有效癌症免疫療法之理想選擇。
在一些實施例中，免疫相關分子增強個體之免疫反應。免疫相關分子可包括(但不限於)細胞介素、趨化介素、幹細胞生長因子、淋巴毒素、造血因子、群落刺激因子(CSF)、促紅血球生成素、促血小板生成素、腫瘤壞死因子-α(TNF)、TNF-β、顆粒球-群落刺激因子(G-CSF)、顆粒球巨噬細胞-群落刺激因子(GM-CSF)、干擾素-α、干擾素-β、干擾素-γ、干擾素-λ、命名為「S1因子」之幹細胞生長因子、人類生長激素、N-甲二磺醯基人類生長激素、牛生長激素、副甲狀腺激素、甲狀腺素、胰島素、胰島素原、鬆弛素、鬆弛素原、激濾泡素(FSH)、甲狀腺刺激激素(TSH)、黃體促素(LH)、肝生長因子、***素、纖維母細胞生長因子、泌乳素、胎盤生乳素、OB蛋白、穆勒氏(mullerian)-抑制物質、小鼠***相關肽、抑制素、活化素、血管內皮生長因子、整聯蛋白、NGF-β、血小板-生長因子、TGF-α、TGF-β、胰島素樣生長因子-I、胰島素樣生長因子-II、巨噬細胞-CSF(M-CSF)、IL-1、IL-1a、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL-10、IL-11、IL-12、IL-13、IL-14、IL-15、IL-16、IL-17、IL-18、IL-21、IL-25、LIF、FLT-3、血管抑素、凝血酶敏感蛋白、內皮抑素、淋巴毒素、沙利竇邁(thalidomide)、雷利竇邁(lenalidomide)或泊馬竇邁(pomalidomide)。
免疫相關分子可為業內已知之分子模態中之任一者，包括但不限於適配體、mRNA、siRNA、微小RNA、shRNA、肽、抗體、抗運載蛋白、球形核酸、TALEN、鋅指核酸酶、CRISPR/Cas9及小分子。
免疫相關分子可單獨或組合使用。舉例而言，可同時或依序投與任 一數目(例如1、2、3、4、5、6或更多種中之任一者)之免疫相關分子。
因此，例如，在一些實施例中，提供治療個體之固態或淋巴腫瘤之方法，其包含：a)向該腫瘤位點局部投與有效量之包含病毒載體之溶瘤病毒(例如溶瘤腺病毒)，該病毒載體包含可操作連接至病毒複製所必需之病毒基因之腫瘤細胞特異性啟動子及編碼可操作連接至病毒啟動子之免疫相關分子(例如細胞介素或趨化介素)之核酸；及b)向該腫瘤位點局部投與有效量之免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)。在一些實施例中，提供抑制個體之固態或淋巴腫瘤轉移之方法，其包含：a)向該腫瘤位點局部投與有效量之包含病毒載體之溶瘤病毒(例如溶瘤腺病毒)，該病毒載體包含可操作連接至病毒複製所必需之病毒基因之腫瘤細胞特異性啟動子及編碼可操作連接至病毒啟動子之免疫相關分子(例如細胞介素或趨化介素)之核酸；及b)向該腫瘤位點局部投與有效量之免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)。在一些實施例中，免疫調節劑係免疫檢查點抑制劑。在一些實施例中，免疫調節劑係免疫刺激劑。在一些實施例中，方法包含局部投與免疫調節劑之組合，其包含一或多種免疫檢查點抑制劑及/或一或多種免疫刺激劑(例如至少兩種免疫檢查點抑制劑、至少兩種免疫刺激劑或至少一種免疫檢查點抑制劑及至少一種免疫刺激劑之組合)。在一些實施例中，腫瘤特異性啟動子係E2F-1啟動子，例如人類E2F-1啟動子或包含SEQ ID NO：1中所述之核苷酸序列之E2F-1啟動子。在一些實施例中，病毒複製所必需之病毒基因選自由以下組成之群：E1A、E1B及E4。在一些實施例中，可操作連接至編碼免疫相關分子之核酸之病毒啟動子係E3啟動子。在一些實施例中，免疫相關分子係GM-CSF。在一些實施例中，將溶瘤病毒及/或免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)直接投與至腫瘤中。在一些實 施例中，將溶瘤病毒及/或免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)投與至具有腫瘤之組織。在一些實施例中，將溶瘤病毒及免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)二者直接投與至腫瘤中。在一些實施例中，將溶瘤病毒及免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)二者投與至具有腫瘤之組織。在一些實施例中，每週投與溶瘤病毒。在一些實施例中，每週投與免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)。在一些實施例中，該方法進一步包含藉由局部投與除外之投與途徑投與溶瘤病毒及/或免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)。
在一些實施例中，感染劑係腺病毒血清型5。在一些實施例中，天然腺病毒之內源性E1a啟動子及E3 19kD編碼區經人類E2F-1啟動子及編碼人類GM-CSF之核酸置換。在一些實施例中，在E2F-1啟動子之5'***多聚腺苷酸化信號(PA)。在一些實施例中，編碼人類GM-CSF之核酸可操作連接至E3啟動子。在一些實施例中，腺病毒血清型5之載體主鏈進一步包含與野生型腺病毒血清型5基因體相同之E2、E4、晚期蛋白區或反轉末端重複(ITR)。在一些實施例中，感染劑具有如圖1中所示之基因體結構。在一些實施例中，感染劑進行條件複製。在一些實施例中，感染劑優先在癌細胞中複製。在一些實施例中，癌細胞係Rb路徑缺陷性癌細胞。在一些實施例中，感染劑係CG0070。
因此，例如，在一些實施例中，提供治療個體之固態或淋巴腫瘤之方法，其包含：a)向該腫瘤位點局部投與有效量之腺病毒血清型5，其中天然腺病毒之內源性E1a啟動子及E3 19kD編碼區經人類E2F-1啟動子及編碼免疫相關分子(例如細胞介素或趨化介素，例如GM-CSF)之核酸置換；及b)向該腫瘤位點局部投與有效量之免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)。在一些實施例中，提供抑制個體之固態或淋巴腫瘤轉移之方法， 其包含：a)向該腫瘤位點局部投與有效量之腺病毒血清型5，其中天然腺病毒之內源性E1a啟動子及E3 19kD編碼區經人類E2F-1啟動子及編碼免疫相關分子(例如細胞介素或趨化介素，例如GM-CSF)之核酸置換；及b)向該腫瘤位點局部投與有效量之免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)。在一些實施例中，免疫調節劑係免疫檢查點抑制劑。在一些實施例中，免疫調節劑係免疫刺激劑。在一些實施例中，方法包含局部投與免疫調節劑之組合，其包含一或多種免疫檢查點抑制劑及/或一或多種免疫刺激劑(例如至少兩種免疫檢查點抑制劑、至少兩種免疫刺激劑或至少一種免疫檢查點抑制劑及至少一種免疫刺激劑之組合)。在一些實施例中，腫瘤特異性啟動子係人類E2F-1啟動子或包含SEQ ID NO：1中所述之核苷酸序列之E2F-1啟動子。在一些實施例中，將腺病毒及/或免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)直接投與至腫瘤中。在一些實施例中，將腺病毒及/或免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)投與至具有腫瘤之組織。在一些實施例中，將腺病毒及免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)二者直接投與至腫瘤中。在一些實施例中，將腺病毒及免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)二者投與至具有腫瘤之組織。在一些實施例中，每週投與腺病毒。在一些實施例中，每週投與免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)。在一些實施例中，該方法進一步包含藉由局部投與除外之投與途徑投與腺病毒及/或免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)。
在一些實施例中，提供治療個體之固態或淋巴腫瘤之方法，其包含：a)向該腫瘤位點局部投與有效量之CG0070；及b)向該腫瘤位點局部投與有效量之免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)。在一些實施例中，提供抑制個體之固態或淋巴腫瘤轉移之方法，其包含：a)向該腫瘤位點局 部投與有效量之CG0070；及b)向該腫瘤位點局部投與有效量之免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)。在一些實施例中，免疫調節劑係免疫檢查點抑制劑。在一些實施例中，免疫調節劑係免疫刺激劑。在一些實施例中，方法包含局部投與免疫調節劑之組合，其包含一或多種免疫檢查點抑制劑及/或一或多種免疫刺激劑(例如至少兩種免疫檢查點抑制劑、至少兩種免疫刺激劑或至少一種免疫檢查點抑制劑及至少一種免疫刺激劑之組合)。在一些實施例中，將CG0070及/或免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)直接投與至腫瘤中。在一些實施例中，將CG0070及/或免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)投與至具有腫瘤之組織。在一些實施例中，將CG0070及免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)二者直接投與至腫瘤中。在一些實施例中，將CG0070及免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)二者投與至具有腫瘤之組織。在一些實施例中，每週投與CG0070。在一些實施例中，每週投與免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)。在一些實施例中，該方法進一步包含藉由局部投與除外之投與途徑投與CG0070及/或免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)。
在一些實施例中，依序投與上文論述之感染劑及免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)，即，在投與免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)之前或之後投與感染劑。在一些實施例中，在投與免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)之前投與感染劑。在一些實施例中，在投與免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)之前不超過以下中之約任一者投與感染劑：15分鐘、30分鐘、1小時、2小時、3小時、4小時、5小時、6小時、12小時或24小時。在一些實施例中，在投與免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)之前大約天或週(例如1天、2天、3天、4天、5天、6天、1週、2週、3週、4週或 更長時間中之約任一者)投與感染劑。在一些實施例中，在投與免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)之後投與感染劑。在一些實施例中，在投與免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)之後不超過中之約任一者投與感染劑：15分鐘、30分鐘、1小時、2小時、3小時、4小時、5小時、6小時、12小時或24小時。在一些實施例中，在投與免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)之後大約天或週(例如1天、2天、3天、4天、5天、6天、1週、2週、3週、4週或更長時間中之約任一者)投與感染劑。在一些實施例中，感染劑及免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)係在一者之後立刻投與另一者(例如，兩次投與之間在5分鐘或更少時間內)。舉例而言，在一些實施例中，在即將投與免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)之前投與感染劑。在一些實施例中，在投與免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)之後立刻投與感染劑。
在一些實施例中，同時投與感染劑及免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)。在一些實施例中，經由單獨組合物同時投與感染劑及免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)。在一些實施例中，以單一組合物形式投與感染劑及免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)。在一些實施例中，在投與組合物之前(例如在即將投與組合物之前，例如在投與組合物之前小於約10、5或1分鐘內)混合感染劑及免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)。在一些實施例中，預製備包含感染劑及免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)之組合物且在投與之前將其儲存至少約1小時、2小時、3小時、4小時、5小時、6小時、12小時、24小時、2天、3天、4天、5天、6天、7天、2週、3週或更長時間。
本文論述之免疫調節劑包括免疫刺激劑及免疫檢查點抑制劑二者。 免疫調節劑可為業內已知之分子模態中之任一者，包括但不限於適配體、mRNA、siRNA、微小RNA、shRNA、肽、抗體、抗運載蛋白、球形核酸、TALEN、鋅指核酸酶、CRISPR/Cas9及小分子。
在一些實施例中，免疫調節劑係免疫刺激劑。在一些實施例中，免疫刺激劑係免疫刺激分子之天然或經改造之配體，包括(例如)OX40之配體(例如，OX40L)、CD-28之配體(例如，CD80、CD86)、ICOS之配體(例如，B7RP1)、4-1BB之配體(例如，4-1BBL、Ultra4-1BBL)、CD27之配體(例如，CD70)、CD40之配體(例如，CD40L)及TCR之配體(例如，MHC I類或II類分子、IMCgp100)。在一些實施例中，免疫刺激劑係選自由以下組成之群之抗體：抗CD28(例如，TGN-1412)、抗OX40(例如，MEDI6469、MEDI-0562)、抗ICOS(例如，MEDI-570)、抗GITR(例如，TRX518、INBRX-110、NOV-120301)、抗41-BB(例如，BMS-663513、PF-05082566)、抗CD27(例如，BION-1402、瓦利路單抗(Varlilumab)及hCD27.15)、抗CD40(例如，CP870,893、BI-655064、BMS-986090、APX005、APX005M)、抗CD3(例如，布利莫單抗、莫羅單抗(muromonab))及抗HVEM。在一些實施例中，抗體係激動性抗體。在一些實施例中，抗體係單株抗體。在一些實施例中，抗體係選自由以下組成之群之抗原結合片段：全長抗體之Fab、Fab’、F(ab’)2、Fv、scFv及其他抗原結合子序列。在一些實施例中，抗體係人類、人類化或嵌合抗體。在一些實施例中，抗體係雙特異性抗體、多特異性抗體、單一結構域抗體、包含抗體部分之融合蛋白、或其任何其他功能變體或衍生物。
在一些實施例中，免疫調節劑係免疫檢查點抑制劑。在一些實施例中，免疫檢查點抑制劑係抑制性免疫檢查點分子之天然或經改造之配體， 包括(例如)CTLA-4之配體(例如，B7.1、B7.2)、TIM3之配體(例如，半乳凝素-9)、A2a受體之配體(例如，腺苷、Regadenoson)、LAG3之配體(例如，MHC I類或MHC II類分子)、BTLA之配體(例如，HVEM、B7-H4)、KIR之配體(例如，MHC I類或MHC II類分子)、PD-1之配體(例如，PD-L1、PD-L2)、IDO之配體(例如，NKTR-218、吲哚西莫(Indoximod)、NLG919)及CD47之配體(例如，SIRP-α受體)。在一些實施例中，免疫檢查點抑制劑係靶向抑制性免疫檢查點蛋白之抗體。在一些實施例中，免疫調節劑係選自由以下組成之群之抗體：抗CTLA-4(例如，伊匹單抗、曲美目單抗、KAHR-102)、抗TIM3(例如，F38-2E2、ENUM005)、抗LAG3(例如，BMS-986016、IMP701、IMP321、C9B7W)、抗KIR(例如，利利單抗(Lirilumab)及IPH2101)、抗PD-1(例如，尼沃魯單抗(Nivolumab)、匹利珠單抗(Pidilizumab)、派姆單抗(Pembrolizumab)、BMS-936559、阿替珠單抗(atezolizumab)、蘭布魯珠單抗(Lambrolizumab)、MK-3475、AMP-224、AMP-514、STI-A1110、TSR-042)、抗PD-L1(例如，KY-1003(EP20120194977)、MCLA-145、RG7446、BMS-936559、MEDI-4736、MSB0010718C、AUR-012、STI-A1010、PCT/US2001/020964、MPDL3280A、AMP-224、達匹珠單抗(Dapirolizumab pegol)(CDP-7657)、MEDI-4920)、抗CD73(例如，AR-42(OSU-HDAC42、HDAC-42、AR42、AR 42、OSU-HDAC 42、OSU-HDAC-42、NSC D736012、HDAC-42、HDAC 42、HDAC42、NSCD736012、NSC-D736012)、MEDI-9447)、抗B7-H3(例如，MGA271、DS-5573a、8H9)、抗CD47(例如，CC-90002、TTI-621、VLST-007)、抗BTLA、抗VISTA、抗A2aR、抗B7-1、抗B7-H4、抗 CD52(例如阿倫單抗(alemtuzumab))、抗IL-10、抗IL-35及抗TGF-β(例如夫蘇木單抗(Fresolumimab))。在一些實施例中，抗體係拮抗性抗體。在一些實施例中，抗體係單株抗體。在一些實施例中，抗體係單株抗體。在一些實施例中，抗體係選自由以下組成之群之抗原結合片段：全長抗體之Fab、Fab’、F(ab’)2、Fv、scFv及其他抗原結合子序列。在一些實施例中，抗體係人類、人類化或嵌合抗體。在一些實施例中，抗體係雙特異性抗體、多特異性抗體、單一結構域抗體、包含抗體部分之融合蛋白、或其任何其他功能變體或衍生物。
在一些實施例中，該方法包含局部投與單一免疫調節劑。在一些實施例中，免疫調節劑係免疫檢查點抑制劑。在一些實施例中，免疫調節劑係免疫刺激劑。
在一些實施例中，該方法包含局部投與至少兩種(例如2、3、4、5、6或更多中之任一者)免疫調節劑。在一些實施例中，全部或部分至少兩種免疫調節劑係在(例如)單一組合物中同時投與。在一些實施例中，全部或部分至少兩種免疫調節劑係依序投與。在一些實施例中，該方法包含局部投與包含免疫檢查點抑制劑及免疫刺激劑之免疫調節劑之組合。在一些實施例中，該方法包含局部投與包含兩種或更多種(例如2、3、4、5、6或更多中之任一者)檢查點抑制劑之免疫調節劑之組合。在一些實施例中，該方法包含局部投與包含兩種或更多種(例如2、3、4、5、6或更多中之任一者)免疫刺激劑之免疫調節劑之組合。在一些實施例中，該方法包含局部投與包含任一數目(例如1、2、3、4、5、6或更多中之任一者)之免疫檢查點抑制劑及任一數目(例如2、3、4、5、6或更多中之任一者)之免疫刺激劑之免疫調節劑之組合。舉例而言，在一些實施例中，該方法包含：a) 向該腫瘤位點局部投與有效量之感染劑(例如病毒，例如溶瘤病毒)；及b)向個體局部投與有效量之第一免疫調節劑(例如免疫檢查點抑制劑)；及c)向該腫瘤位點局部投與有效量之第二免疫調節劑(例如免疫刺激劑)。在一些實施例中，該方法包含投與CTLA-4抑制劑(例如抗CTLA-4抗體(例如伊匹單抗)、或經改造之脂質運載蛋白(例如特異性識別CTLA-4之抗運載蛋白))及CD40激動劑(例如激動性抗CD40抗體，例如APX005M)。在一些實施例中，該方法包含投與CTLA-4抑制劑(例如抗CTLA-4抗體(例如伊匹單抗)、或經改造之脂質運載蛋白(例如特異性識別CTLA-4之抗運載蛋白))及4-1BB激動劑(例如激動性抗4-1BB抗體，例如PF-05082566)。在一些實施例中，該方法包含投與CTLA-4抑制劑(例如抗CTLA-4抗體)及PD-L1抑制劑(例如抗PD-L1抗體)。
在一些實施例中，免疫檢查點抑制劑係CTLA-4之抑制劑。在一些實施例中，CTLA-4之抑制劑係抗CTLA-4抗體。業內已知之抗CTLA-4抗體中之任一者皆可用於本發明中，包括但不限於伊匹單抗、曲美目單抗及KAHR-102。在一些實施例中，抗CTLA-4抗體係YERVOY®(伊匹單抗)。在一些實施例中，抗CTLA-4抗體係單株抗體或多株抗體。在一些實施例中，抗CTLA-4抗體係選自由以下組成之群之抗原結合片段：全長抗CTLA-4抗體之Fab、Fab’、F(ab’)2、Fv、scFv及其他抗原結合子序列。在一些實施例中，抗CTLA-4抗體係人類、人類化或嵌合抗體。在一些實施例中，抗CTLA-4抗體係雙特異性抗體、多特異性抗體、單一結構域抗體、包含抗體部分之融合蛋白、或其任何其他功能變體或衍生物。在一些實施例中，CTLA-4之抑制劑係特異性識別CTLA-4之經改造之脂質運載蛋白(例如特異性結合至CTLA-4之抗運載蛋白分子)。在一些實施例中， CTLA-4之抑制劑係CTLA-4之天然或經改造之配體，例如B7.1或B7.2。
因此，例如，在一些實施例中，提供治療個體(例如人類)之固態或淋巴腫瘤之方法，其包含：a)向該腫瘤位點局部投與有效量之感染劑；及b)向該腫瘤位點局部投與有效量之CTLA-4之抑制劑(例如抗CTLA-4抗體(例如伊匹單抗)、或經改造之脂質運載蛋白(例如特異性識別CTLA-4之抗運載蛋白))。在一些實施例中，提供抑制個體之固態或淋巴腫瘤轉移之方法，其包含：a)向該腫瘤位點局部投與有效量之感染劑；及b)向該腫瘤位點局部投與有效量之CTLA-4之抑制劑(例如抗CTLA-4抗體(例如伊匹單抗)、或經改造之脂質運載蛋白(例如特異性識別CTLA-4之抗運載蛋白))。在一些實施例中，感染劑係非溶瘤病毒。在一些實施例中，感染劑係溶瘤病毒。在一些實施例中，感染劑係野生型感染劑。在一些實施例中，感染劑經遺傳修飾。在一些實施例中，感染劑經減毒(例如經由多次傳代、不活化或遺傳修飾)。在一些實施例中，CTLA-4之抑制劑係抗CTLA-4抗體(例如伊匹單抗)。在一些實施例中，CTLA-4之抑制劑係經改造之脂質運載蛋白，例如特異性識別CTLA-4之抗運載蛋白。在一些實施例中，該方法進一步包含局部投與第二免疫調節劑，例如免疫刺激劑(例如，CD40活化劑或4-1BB活化劑)。在一些實施例中，將感染劑及/或CTLA-4之抑制劑直接投與至腫瘤中。在一些實施例中，將感染劑及/或CTLA-4之抑制劑投與至具有腫瘤之組織。在一些實施例中，將感染劑及CTLA-4之抑制劑二者直接投與至腫瘤中。在一些實施例中，將感染劑及CTLA-4之抑制劑二者投與至具有腫瘤之組織。在一些實施例中，每週投與感染劑。在一些實施例中，每週投與CTLA-4之抑制劑。在一些實施例中，依序投與感染劑及CTLA-4之抑制劑。在一些實施例中，在投與CTLA-4之抑制劑之前 (例如在即將投與之前)投與感染劑。在一些實施例中，在投與CTLA-4之抑制劑之後(例如在投與後立刻)投與感染劑。在一些實施例中，同時投與感染劑及CTLA-4之抑制劑(例如在單一組合物中)。在一些實施例中，該方法進一步包含藉由局部投與除外之投與途徑投與感染劑及/或CTLA-4之抑制劑。
舉例而言，在一些實施例中，提供治療個體之固態或淋巴腫瘤之方法，其包含：a)向該腫瘤位點局部投與有效量之溶瘤病毒(例如溶瘤腺病毒)；及b)向該腫瘤位點局部投與有效量之CTLA-4之抑制劑。在一些實施例中，提供抑制個體之固態或淋巴腫瘤轉移之方法，其包含：a)向該腫瘤位點局部投與有效量之溶瘤病毒(例如溶瘤腺病毒)；及b)向該腫瘤位點局部投與有效量之CTLA-4之抑制劑。在一些實施例中，CTLA-4之抑制劑係抗CTLA-4抗體(例如伊匹單抗)或經改造之脂質運載蛋白(例如特異性識別CTLA-4之抗運載蛋白)。
在一些實施例中，提供治療個體之固態或淋巴腫瘤之方法，其包含：a)向該腫瘤位點局部投與有效量之包含病毒載體之溶瘤病毒(例如溶瘤腺病毒)，該病毒載體包含可操作連接至病毒複製所必需之病毒基因之腫瘤細胞特異性啟動子；及b)向該腫瘤位點局部投與有效量之CTLA-4之抑制劑。在一些實施例中，提供抑制個體之固態或淋巴腫瘤轉移之方法，其包含：a)向該腫瘤位點局部投與有效量之包含病毒載體之溶瘤病毒(例如溶瘤腺病毒)，該病毒載體包含可操作連接至病毒複製所必需之病毒基因之腫瘤細胞特異性啟動子；及b)向該腫瘤位點局部投與有效量之CTLA-4之抑制劑。在一些實施例中，CTLA-4之抑制劑係抗CTLA-4抗體(例如伊匹單抗)或經改造之脂質運載蛋白(例如特異性識別CTLA-4之抗運 載蛋白)。在一些實施例中，腫瘤特異性啟動子係E2F-1啟動子，例如人類E2F-1啟動子或包含SEQ ID NO：1中所述之核苷酸序列之E2F-1啟動子。在一些實施例中，病毒複製所必需之病毒基因選自由以下組成之群：E1A、E1B及E4。
在一些實施例中，提供治療個體之固態或淋巴腫瘤之方法，其包含：a)向該腫瘤位點局部投與有效量之包含病毒載體之溶瘤病毒(例如溶瘤腺病毒)，該病毒載體包含可操作連接至病毒複製所必需之病毒基因之腫瘤細胞特異性啟動子及編碼可操作連接至病毒啟動子之免疫相關分子(例如細胞介素或趨化介素)之核酸；及b)向該腫瘤位點局部投與有效量之CTLA-4之抑制劑。在一些實施例中，提供抑制個體之固態或淋巴腫瘤轉移之方法，其包含：a)向該腫瘤位點局部投與有效量之包含病毒載體之溶瘤病毒(例如溶瘤腺病毒)，該病毒載體包含可操作連接至病毒複製所必需之病毒基因之腫瘤細胞特異性啟動子及編碼可操作連接至病毒啟動子之免疫相關分子(例如細胞介素或趨化介素)之核酸；及b)向該腫瘤位點局部投與有效量之CTLA-4之抑制劑。在一些實施例中，CTLA-4之抑制劑係抗CTLA-4抗體(例如伊匹單抗)或經改造之脂質運載蛋白(例如特異性識別CTLA-4之抗運載蛋白)。在一些實施例中，腫瘤特異性啟動子係E2F-1啟動子，例如人類E2F-1啟動子或包含SEQ ID NO：1中所述之核苷酸序列之E2F-1啟動子。在一些實施例中，病毒複製所必需之病毒基因選自由以下組成之群：E1A、E1B及E4。在一些實施例中，可操作連接至編碼免疫相關分子之核酸之病毒啟動子係E3啟動子。在一些實施例中，免疫相關分子係GM-CSF。
在一些實施例中，提供治療個體之固態或淋巴腫瘤之方法，其包 含：a)向該腫瘤位點局部投與有效量之腺病毒血清型5，其中天然腺病毒之內源性E1a啟動子及E3 19kD編碼區經人類E2F-1啟動子及編碼免疫相關分子(例如細胞介素或趨化介素，例如GM-CSF)之核酸置換；及b)向該腫瘤位點局部投與有效量之CTLA-4之抑制劑。在一些實施例中，提供抑制個體之固態或淋巴腫瘤轉移之方法，其包含：a)向該腫瘤位點局部投與有效量之腺病毒血清型5，其中天然腺病毒之內源性E1a啟動子及E3 19kD編碼區經人類E2F-1啟動子及編碼免疫相關分子(例如細胞介素或趨化介素，例如GM-CSF)之核酸置換；及b)向該腫瘤位點局部投與有效量之CTLA-4之抑制劑。在一些實施例中，CTLA-4之抑制劑係抗CTLA-4抗體(例如伊匹單抗)或經改造之脂質運載蛋白(例如特異性識別CTLA-4之抗運載蛋白)。在一些實施例中，腫瘤特異性啟動子係人類E2F-1啟動子或包含SEQ ID NO：1中所述之核苷酸序列之E2F-1啟動子。
在一些實施例中，提供治療個體之固態或淋巴腫瘤之方法，其包含：a)向該腫瘤位點局部投與有效量之CG0070；及b)向該腫瘤位點局部投與有效量之CTLA-4之抑制劑。在一些實施例中，提供抑制個體之固態或淋巴腫瘤轉移之方法，其包含：a)向該腫瘤位點局部投與有效量之CG0070；及b)向該腫瘤位點局部投與有效量之CTLA-4之抑制劑。在一些實施例中，CTLA-4之抑制劑係抗CTLA-4抗體(例如伊匹單抗)或經改造之脂質運載蛋白(例如特異性識別CTLA-4之抗運載蛋白)。在一些實施例中，CTLA-4之抑制劑係抗CTLA-4抗體(例如伊匹單抗)。在一些實施例中，CTLA-4之抑制劑係經改造之脂質運載蛋白，例如特異性識別CTLA-4之抗運載蛋白。在一些實施例中，將CG0070及/或CTLA-4之抑制劑直接投與至腫瘤中。在一些實施例中，將溶瘤病毒及/或CTLA-4之抑制劑投與 至具有腫瘤之組織。在一些實施例中，將CG0070及CTLA-4之抑制劑二者直接投與至腫瘤中。在一些實施例中，將CG0070及CTLA-4之抑制劑投與至具有腫瘤之組織。在一些實施例中，每週投與CG007。在一些實施例中，每週投與CTLA-4之抑制劑。在一些實施例中，依序投與CG0070及CTLA-4之抑制劑。在一些實施例中，在投與CTLA-4之抑制劑之前(例如在即將投與之前)投與CG0070。在一些實施例中，在投與CTLA-4之抑制劑之後(例如在投與後立刻)投與CG0070。在一些實施例中，同時投與CG0070及CTLA-4之抑制劑(例如在單一組合物中)。在一些實施例中，該方法進一步包含藉由局部投與除外之投與途徑投與CG0070及/或CTLA-4之抑制劑。
在一些實施例中，提供治療個體之固態或淋巴腫瘤(例如抑制腫瘤轉移)之方法，其包含：a)腫瘤內投與有效量之CG0070；及b)腫瘤內投與有效量之CTLA-4之抑制劑(例如抗CTLA-4抗體(例如伊匹單抗)或經改造之脂質運載蛋白(例如特異性識別CTLA-4之抗運載蛋白))，其中CG0070之有效量係每週約1×108至約1×1014個病毒顆粒(vp)(例如每週約1×108至約1×1010、約1×1010至約1×1012或約1×1012至約1×1014個vp中之任一者)，其中CTLA-4之抑制劑之有效量係每週約0.1mg/Kg至約10mg/Kg(例如每週約0.1mg/Kg至約1mg/Kg、約1mg/Kg至約5mg/Kg或約5mg/Kg至約10mg/Kg中之任一者)，且其中在投與CG0070後立刻(例如，在投與後不超過5分鐘)投與CTLA-4之抑制劑。在一些實施例中，CTLA-4之抑制劑係抗CTLA-4抗體(例如伊匹單抗)(例如，YERVOY®)。在一些實施例中，CTLA-4之抑制劑係經改造之脂質運載蛋白，例如特異性識別CTLA-4之抗運載蛋白。在一些實施例中，與CG0070投與組合進一步向 個體腫瘤內投與有效量之DDM作為轉導增強劑。在一些實施例中，藉由注射至具有腫瘤之組織中投與CG0070及CTLA-4之抑制劑。在一些實施例中，藉由直接注射至腫瘤中投與CG0070及CTLA-4之抑制劑。在一些實施例中，投與CG0070達約1至約6週作為一個治療過程。在一些實施例中，每約2個月至約3個月重複治療過程。在一些實施例中，固態或淋巴腫瘤選自由以下組成之群：頭頸癌、乳癌、結腸直腸癌、肝癌、胰臟腺癌、膽囊及膽管癌、卵巢癌、子宮頸癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、腎細胞癌、膀胱癌、***癌、骨癌、間皮瘤、腦癌、軟組織肉瘤、子宮癌、甲狀腺癌、鼻咽癌及黑色素瘤。在一些實施例中，固態或淋巴腫瘤對於先前療法難治。在一些實施例中，該方法進一步包含局部投與第二免疫調節劑，例如免疫刺激劑。在一些實施例中，第二免疫調節劑係CD40活化劑，例如激動劑抗CD40抗體(例如，APX005M)。在一些實施例中，第二免疫調節劑係4-1BB活化劑，例如激動劑抗4-1BB抗體(例如，PF-05082566)。在一些實施例中，第二免疫調節劑係PD-L1抑制劑。在一些實施例中，該方法進一步包含預處理，例如輻射或投與治療劑(例如細胞介素，例如CCL21)。
在一些實施例中，提供治療個體之固態或淋巴腫瘤(例如抑制腫瘤轉移)之方法，其包含：a)腫瘤內投與有效量之CG0070；及b)腫瘤內投與有效量之CTLA-4之抑制劑(例如抗CTLA-4抗體(例如伊匹單抗)或經改造之脂質運載蛋白(例如特異性識別CTLA-4之抗運載蛋白))；及c)腫瘤內投與有效量之CD40活化劑(例如激動性抗CD40抗體)，其中CG0070之有效量係每週約1×108至約1×1014個病毒顆粒(vp)(例如每週5×1010vp、1×1011vp、5×1011vp或1×1012vp中之約任一者)，其中CTLA-4之抑制劑 之有效量係約0.1mg至約100mg(例如不超過每週1mg、3mg、6mg、12mg或24mg中之約任一者)，且其中CD40活化劑之有效量係約0.1mg至約100mg(例如不超過每週1mg、3mg、6mg、12mg或24mg中之約任一者)。在一些實施例中，在投與CG0070後立刻(例如，在投與後不超過5分鐘)投與CTLA-4之抑制劑及CD40活化劑。在一些實施例中，CTLA-4之抑制劑係抗CTLA-4抗體(例如伊匹單抗)(例如，YERVOY®)。在一些實施例中，CTLA-4之抑制劑係經改造之脂質運載蛋白，例如特異性識別CTLA-4之抗運載蛋白。在一些實施例中，CD40活化劑係激動性抗CD40抗體，例如APX005M。在一些實施例中，與CG0070投與組合進一步向個體腫瘤內投與有效量之DDM作為轉導增強劑。在一些實施例中，藉由注射至具有腫瘤之組織中投與CG0070、CTLA-4之抑制劑及CD40活化劑。在一些實施例中，藉由直接注射至腫瘤中投與CG0070、CTLA-4之抑制劑及CD40活化劑。在一些實施例中，投與CG0070達約1至約6週作為一個治療過程。在一些實施例中，每約2個月至約3個月重複治療過程。在一些實施例中，固態或淋巴腫瘤選自由以下組成之群：頭頸癌、乳癌、結腸直腸癌、肝癌、胰臟腺癌、膽囊及膽管癌、卵巢癌、子宮頸癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、腎細胞癌、膀胱癌、***癌、骨癌、間皮瘤、腦癌、軟組織肉瘤、子宮癌、甲狀腺癌、鼻咽癌及黑色素瘤。在一些實施例中，固態或淋巴腫瘤對於先前療法難治。在一些實施例中，該方法進一步包含預處理，例如輻射或投與治療劑(例如細胞介素，例如CCL21)。
在一些實施例中，提供治療個體之固態或淋巴腫瘤(例如抑制腫瘤轉移)之方法，其包含：a)腫瘤內投與有效量之CG0070；及b)腫瘤內投與有效量之CTLA-4之抑制劑(例如抗CTLA-4抗體(例如伊匹單抗)或經改造 之脂質運載蛋白(例如特異性識別CTLA-4之抗運載蛋白))；及c)腫瘤內投與有效量之4-1BB活化劑(例如激動性抗4-1BB抗體)，其中CG0070之有效量係每週約1×108至約1×1014個病毒顆粒(vp)(例如每週5×1010vp、1×1011vp、5×1011vp或1×1012vp中之約任一者)，其中CTLA-4之抑制劑之有效量係約0.1mg至約100mg(例如不超過每週1mg、3mg、6mg、12mg或24mg中之約任一者)，且其中4-1BB活化劑之有效量係約0.1mg至約100mg(例如不超過每週1mg、3mg、6mg、12mg或24mg中之約任一者)。在一些實施例中，在投與CG0070後立刻(例如，在投與後不超過5分鐘)投與CTLA-4之抑制劑及4-1BB活化劑。在一些實施例中，CTLA-4之抑制劑係抗CTLA-4抗體(例如伊匹單抗)(例如，YERVOY®)。在一些實施例中，CTLA-4之抑制劑係經改造之脂質運載蛋白，例如特異性識別CTLA-4之抗運載蛋白。在一些實施例中，4-1BB活化劑係激動性抗4-1BB抗體，例如PF-05082566。在一些實施例中，與CG0070投與組合進一步向個體腫瘤內投與有效量之DDM作為轉導增強劑。在一些實施例中，藉由注射至具有腫瘤之組織中投與CG0070、CTLA-4之抑制劑及41-BB活化劑。在一些實施例中，藉由直接注射至腫瘤中投與CG0070、CTLA-4之抑制劑及41-BB活化劑。在一些實施例中，投與CG0070達約1至約6週作為一個治療過程。在一些實施例中，每約2個月至約3個月重複治療過程。在一些實施例中，固態或淋巴腫瘤選自由以下組成之群：頭頸癌、乳癌、結腸直腸癌、肝癌、胰臟腺癌、膽囊及膽管癌、卵巢癌、子宮頸癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、腎細胞癌、膀胱癌、***癌、骨癌、間皮瘤、腦癌、軟組織肉瘤、子宮癌、甲狀腺癌、鼻咽癌及黑色素瘤。在一些實施例中，固態或淋巴腫瘤對於先前療法難治。在一些實施例 中，該方法進一步包含預處理，例如局部輻射或投與治療劑(例如細胞介素，例如CCL21)。
在一些實施例中，提供治療個體之固態或淋巴腫瘤之方法，其包含：a)腫瘤內投與有效量之CG0070；及b)腫瘤內投與有效量之CTLA-4之抑制劑；及c)腫瘤內投與有效量之PD-L1抑制劑。在一些實施例中，提供抑制個體之固態或淋巴腫瘤轉移之方法，其包含：a)腫瘤內投與有效量之CG0070；及b)腫瘤內投與有效量之CTLA-4之抑制劑；及c)腫瘤內投與有效量之PD-L1抑制劑。在一些實施例中，CG0070之有效量係每週約1×108至約1×1014個病毒顆粒(vp)(例如每週5×1010vp、1×1011vp、5×1011vp或1×1012vp中之約任一者)。在一些實施例中，CTLA-4之抑制劑之有效量係約0.1mg至約100mg(例如不超過每週1mg、3mg、6mg、12mg或24mg中之約任一者)。在一些實施例中，PD-L1抑制劑之有效量係約0.1mg至約100mg(例如不超過每週1mg、3mg、6mg、12mg或24mg中之約任一者)。在一些實施例中，在投與CG0070後立刻(例如，在投與後不超過5分鐘)投與CTLA-4之抑制劑及PD-L1抑制劑。在一些實施例中，CTLA-4之抑制劑係抗CTLA-4抗體(例如伊匹單抗)(例如，YERVOY®)。在一些實施例中，CTLA-4之抑制劑係經改造之脂質運載蛋白，例如特異性識別CTLA-4之抗運載蛋白。在一些實施例中，PD-L1抑制劑係抗PD-L1抗體，例如KY-1003、MCLA-145、RG7446、BMS935559、MPDL3280A、MEDI4736、阿維魯單抗(Avelumab)或STI-A1010。在一些實施例中，藉由注射至具有腫瘤之組織中投與CG0070、CTLA-4之抑制劑及PD-L1抑制劑。在一些實施例中，藉由直接注射至腫瘤中投與CG0070、CTLA-4之抑制劑及PD-L1抑制劑。在一些實施例中， 投與CG0070達約1至約6週作為一個治療過程。在一些實施例中，每約2個月至約3個月重複治療過程。在一些實施例中，固態或淋巴腫瘤選自由以下組成之群：頭頸癌、乳癌、結腸直腸癌、肝癌、胰臟腺癌、膽囊及膽管癌、卵巢癌、子宮頸癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、腎細胞癌、膀胱癌、***癌、骨癌、間皮瘤、腦癌、軟組織肉瘤、子宮癌、甲狀腺癌、鼻咽癌及黑色素瘤。在一些實施例中，固態或淋巴腫瘤對於先前療法難治。在一些實施例中，該方法進一步包含預處理，例如輻射或投與治療劑(例如細胞介素，例如CCL21)。
在一些實施例中，提供治療個體之固態或淋巴腫瘤之方法，其包含：a)使固態或淋巴腫瘤經受局部輻射；隨後b)腫瘤內投與有效量之CG0070；及c)腫瘤內投與有效量之CTLA-4之抑制劑。在一些實施例中，提供抑制個體之固態或淋巴腫瘤轉移之方法，其包含：a)使固態或淋巴腫瘤經受局部輻射；隨後b)腫瘤內投與有效量之CG0070；及c)腫瘤內投與有效量之CTLA-4之抑制劑。在一些實施例中，CG0070之有效量係每週約1×108至約1×1014個病毒顆粒(vp)(例如每週5×1010vp、1×1011vp、5×1011vp或1×1012vp中之約任一者)。在一些實施例中，CTLA-4之抑制劑之有效量係約0.1mg至約100mg(例如不超過每週1mg、3mg、6mg、12mg或24mg中之約任一者)。在一些實施例中，同時投與CTLA-4之抑制劑及CG0070。在一些實施例中，CTLA-4之抑制劑係抗CTLA-4抗體(例如伊匹單抗)(例如，YERVOY®)。在一些實施例中，CTLA-4之抑制劑係經改造之脂質運載蛋白，例如特異性識別CTLA-4之抗運載蛋白。在一些實施例中，藉由注射至具有腫瘤之組織中投與CG0070及CTLA-4之抑制劑。在一些實施例中，藉由直接注射至腫瘤中 投與CG0070及CTLA-4之抑制劑。在一些實施例中，投與CG0070達約1至約6週作為一個治療過程。在一些實施例中，每約2個月至約3個月重複治療過程。在一些實施例中，固態或淋巴腫瘤選自由以下組成之群：頭頸癌、乳癌、結腸直腸癌、肝癌、胰臟腺癌、膽囊及膽管癌、卵巢癌、子宮頸癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、腎細胞癌、膀胱癌、***癌、骨癌、間皮瘤、腦癌、軟組識肉瘤、子宮癌、甲狀腺癌、鼻咽癌及黑色素瘤。在一些實施例中，固態或淋巴腫瘤對於先前療法難治。
在一些實施例中，免疫檢查點抑制劑係PD-1抑制劑。在一些實施例中，PD-1抑制劑係抗PD-1抗體。業內已知之抗PD-1抗體中之任一者皆可用於本發明中，包括但不限於尼沃魯單抗、派姆單抗、匹利珠單抗、BMS-936559、及阿替珠單抗、蘭布魯珠單抗、MK-3475、AMP-224、AMP-514、STI-A1110及TSR-042。在一些實施例中，抗PD-1抗體係單株抗體或多株抗體。在一些實施例中，抗PD-1抗體係選自由以下組成之群之抗原結合片段：全長抗PD-1抗體之Fab、Fab’、F(ab’)2、Fv、scFv及其他抗原結合子序列。在一些實施例中，抗PD-1抗體係人類、人類化或嵌合抗體。在一些實施例中，抗PD-1抗體係雙特異性抗體、多特異性抗體、單一結構域抗體、包含抗體部分之融合蛋白、或其任何其他變體或衍生物。在一些實施例中，PD-1抑制劑係PD-1之天然或經改造之配體，例如PD-L1或PD-L2。在一些實施例中，PD-1抑制劑係PD-1與其配體之間之相互作用之抑制劑，例如PD-1/PD-L1相互作用之抑制劑或PD-1/PD-L2相互作用之抑制劑。在一些實施例中，PD-1抑制劑係PD-1配體之抑制劑，例如PD-L1之抑制劑(例如，抗PD-L1抗體)或PD-L2之抑制劑(例如，抗PD-L2抗體)。PD-1與其配體之間之相互作用之抑制劑中之任一者皆可 用於本發明中，參見(例如)美國專利第US7709214號、第US7432059號、第US7722868號、第US8217149號、第US8383796號及第US9102725號。在一些實施例中，PD-1抑制劑係包含PD-1配體之Fc融合蛋白，例如PD-L2之Fc-融合物(例如，AMP-224)。
因此，例如，在一些實施例中，提供治療個體(例如人類)之固態或淋巴腫瘤(例如抑制腫瘤轉移)之方法，其包含：a)向該腫瘤位點局部投與有效量之感染劑；及b)向該腫瘤位點局部投與有效量之PD-1抑制劑(例如抗PD-1抗體(例如尼沃魯單抗、派姆單抗或匹利珠單抗)或PD-1配體之Fc融合蛋白(例如AMP-224))。在一些實施例中，感染劑係非溶瘤病毒。在一些實施例中，感染劑係溶瘤病毒。在一些實施例中，感染劑係野生型感染劑。在一些實施例中，感染劑經遺傳修飾。在一些實施例中，感染劑經減毒(例如經由多次傳代、不活化或遺傳修飾)。在一些實施例中，PD-1抑制劑係抗PD-1抗體，例如尼沃魯單抗、派姆單抗或匹利珠單抗。在一些實施例中，PD-1抑制劑係PD-1與其配體之間之相互作用之抑制劑，例如PD-1/PD-L1相互作用之抑制劑或PD-1/PD-L2相互作用之抑制劑。在一些實施例中，PD-1抑制劑係包含PD-1配體之Fc融合蛋白，例如PD-L2之Fc-融合物(例如，AMP-224)。在一些實施例中，該方法進一步包含局部投與第二免疫調節劑，例如免疫刺激劑(例如CD40活化劑或4-1BB活化劑)。在一些實施例中，將感染劑及/或PD-1抑制劑直接投與至腫瘤中。在一些實施例中，將感染劑及/或PD-1抑制劑投與至具有腫瘤之組織。在一些實施例中，將感染劑及PD-1抑制劑二者直接投與至腫瘤中。在一些實施例中，將感染劑及PD-1抑制劑二者投與至具有腫瘤之組織。在一些實施例中，每週投與感染劑。在一些實施例中，每週投與PD-1抑制劑。在一些 實施例中，依序投與感染劑及PD-1抑制劑。在一些實施例中，在投與PD-1抑制劑之前(例如在即將投與之前)投與感染劑。在一些實施例中，在投與PD-1抑制劑之後(例如在投與後立刻)投與感染劑。在一些實施例中，同時投與感染劑及PD-1抑制劑(例如在單一組合物中)。在一些實施例中，該方法進一步包含藉由局部投與除外之投與途徑投與感染劑及/或PD-1抑制劑。
舉例而言，在一些實施例中，提供治療個體之固態或淋巴腫瘤(例如抑制腫瘤轉移)之方法，其包含：a)向該腫瘤位點局部投與有效量之溶瘤病毒(例如溶瘤腺病毒)；及b)向該腫瘤位點局部投與有效量之PD-1抑制劑(例如抗PD-1抗體(例如尼沃魯單抗、派姆單抗或匹利珠單抗)或PD-1配體之Fc融合蛋白(例如AMP-224))。
在一些實施例中，提供治療個體之固態或淋巴腫瘤(例如抑制腫瘤轉移)之方法，其包含：a)向該腫瘤位點局部投與有效量之包含病毒載體之溶瘤病毒(例如溶瘤腺病毒)，該病毒載體包含可操作連接至病毒複製所必需之病毒基因之腫瘤細胞特異性啟動子；及b)向該腫瘤位點局部投與有效量之PD-1抑制劑(例如抗PD-1抗體(例如尼沃魯單抗、派姆單抗或匹利珠單抗)或PD-1配體之Fc融合蛋白(例如AMP-224))。在一些實施例中，腫瘤特異性啟動子係E2F-1啟動子，例如人類E2F-1啟動子或包含SEQ ID NO：1中所述之核苷酸序列之E2F-1啟動子。在一些實施例中，病毒複製所必需之病毒基因選自由以下組成之群：E1A、E1B及E4。
在一些實施例中，提供治療個體之固態或淋巴腫瘤(例如抑制腫瘤轉移)之方法，其包含：a)向該腫瘤位點局部投與有效量之包含病毒載體之溶瘤病毒(例如溶瘤腺病毒)，該病毒載體包含可操作連接至病毒複製所必 需之病毒基因之腫瘤細胞特異性啟動子及編碼可操作連接至病毒啟動子之免疫相關分子(例如細胞介素或趨化介素)之核酸；及b)向該腫瘤位點局部投與有效量之PD-1抑制劑(例如抗PD-1抗體(例如尼沃魯單抗、派姆單抗或匹利珠單抗)或PD-1配體之Fc融合蛋白(例如AMP-224))。在一些實施例中，腫瘤特異性啟動子係E2F-1啟動子，例如人類E2F-1啟動子或包含SEQ ID NO：1中所述之核苷酸序列之E2F-1啟動子。在一些實施例中，病毒複製所必需之病毒基因選自由以下組成之群：E1A、E1B及E4。在一些實施例中，可操作連接至編碼免疫相關分子之核酸之病毒啟動子係E3啟動子。在一些實施例中，免疫相關分子係GM-CSF。
在一些實施例中，提供治療個體之固態或淋巴腫瘤(例如抑制腫瘤轉移)之方法，其包含：a)向該腫瘤位點局部投與有效量之腺病毒血清型5，其中天然腺病毒之內源性E1a啟動子及E3 19kD編碼區經人類E2F-1啟動子及編碼免疫相關分子(例如細胞介素或趨化介素，例如GM-CSF)之核酸置換；及b)向該腫瘤位點局部投與有效量之PD-1抑制劑(例如抗PD-1抗體(例如尼沃魯單抗、派姆單抗或匹利珠單抗)或PD-1配體之Fc融合蛋白(例如AMP-224))。在一些實施例中，腫瘤特異性啟動子係人類E2F-1啟動子或包含SEQ ID NO：1中所述之核苷酸序列之E2F-1啟動子。
在一些實施例中，提供治療個體之固態或淋巴腫瘤(例如抑制腫瘤轉移)之方法，其包含：a)向該腫瘤位點局部投與有效量之CG0070；及b)向該腫瘤位點局部投與有效量之PD-1抑制劑(例如抗PD-1抗體(例如尼沃魯單抗、派姆單抗或匹利珠單抗)或PD-1配體之Fc融合蛋白(例如AMP-224))。在一些實施例中，PD-1抑制劑係抗PD-1抗體，例如尼沃魯單抗、派姆單抗或匹利珠單抗。在一些實施例中，PD-1抑制劑係PD-1與其配體 之間之相互作用之抑制劑，例如PD-1/PD-L1相互作用之抑制劑或PD-1/PD-L2相互作用之抑制劑。在一些實施例中，PD-1抑制劑係包含PD-1配體之Fc融合蛋白，例如PD-L2之Fc-融合物(例如，AMP-224)。在一些實施例中，將CG0070及PD-1抑制劑二者直接投與至腫瘤中。在一些實施例中，將溶瘤病毒及/或PD-1抑制劑投與至具有腫瘤之組織。在一些實施例中，將CG0070及PD-1抑制劑二者直接投與至腫瘤中。在一些實施例中，將CG0070及PD-1抑制劑二者投與至具有腫瘤之組織。在一些實施例中，每週投與CG007。在一些實施例中，每週投與PD-1抑制劑。在一些實施例中，依序投與CG0070及PD-1抑制劑。在一些實施例中，在投與PD-1抑制劑之前(例如在即將投與之前)投與CG0070。在一些實施例中，在投與PD-1抑制劑之後(例如在投與後立刻)投與CG0070。在一些實施例中，同時投與CG0070及PD-1抑制劑(例如在單一組合物中)。在一些實施例中，該方法進一步包含藉由局部投與除外之投與途徑投與CG0070及/或PD-1抑制劑。
在一些實施例中，免疫檢查點抑制劑係PD-1配體(例如，PD-L1及/或PD-L2)之抑制劑。在一些實施例中，PD-1配體之抑制劑係抗PD-L1抗體。在一些實施例中，PD-1配體之抑制劑係抗PD-L2抗體。實例性抗PD-L1抗體包括(但不限於)KY-1003、MCLA-145、RG7446(亦稱為阿替珠單抗)、BMS935559(亦稱為MDX-1105)、MPDL3280A、MEDI4736、阿維魯單抗(亦稱為MSB0010718C)及STI-A1010。在一些實施例中，抗PD-L1或抗PD-L2係單株抗體或多株抗體。在一些實施例中，抗PD-1或抗PD-L2抗體係選自由以下組成之群之抗原結合片段：全長抗PD-1或抗PD-L2抗體之Fab、Fab’、F(ab’)2、Fv、scFv及其他抗原結合子序列。在一些 實施例中，抗PD-L1或抗PD-L2抗體係人類、人類化或嵌合抗體。在一些實施例中，抗PD-L1或抗PD-L2抗體係雙特異性抗體、多特異性抗體、單一結構域抗體、包含抗體部分之融合蛋白、或其任何其他變體或衍生物。在一些實施例中，PD-1配體之抑制劑係PD-L1及PD-L2二者之抑制劑(例如，肽、蛋白質或小分子)。PD-L1及PD-L2二者之實例性抑制劑包括(但不限於)AUR-012及AMP-224。在一些實施例中，PD-L1之抑制劑及PD-L2之抑制劑可互換用於本文所述治療方法中之任一者中。
因此，例如，在一些實施例中，提供治療個體(例如人類)之固態或淋巴腫瘤(例如抑制腫瘤轉移)之方法，其包含：a)向該腫瘤位點局部投與有效量之感染劑；及b)向該腫瘤位點局部投與有效量之PD-1配體之抑制劑(例如抗PD-L1或抗PD-L2抗體、或PD-L1及PD-L2二者之抑制劑)。在一些實施例中，感染劑係非溶瘤病毒。在一些實施例中，感染劑係溶瘤病毒。在一些實施例中，感染劑係野生型感染劑。在一些實施例中，感染劑經遺傳修飾。在一些實施例中，感染劑經減毒(例如經由多次傳代、不活化或遺傳修飾)。在一些實施例中，PD-1配體之抑制劑係抗PD-L1抗體，例如KY-1003、MCLA-145、RG7446、BMS935559、MPDL3280A、MEDI4736、阿維魯單抗或STI-A1010。在一些實施例中，PD-1配體之抑制劑係抗PD-L2抗體。在一些實施例中，PD-1配體之抑制劑係PD-L1及PD-L2二者之抑制劑(例如，肽、蛋白質或小分子)，例如AUR-012及AMP-224。在一些實施例中，該方法進一步包含局部投與第二免疫調節劑，例如免疫刺激劑(例如，CD40活化劑或4-1BB活化劑)。在一些實施例中，將感染劑及/或PD-1配體之抑制劑直接投與至腫瘤中。在一些實施例中，將感染劑及/或PD-1配體之抑制劑投與至具有腫瘤之組織。在一些實 施例中，將感染劑及PD-1配體之抑制劑二者直接投與至腫瘤中。在一些實施例中，將感染劑及PD-1配體之抑制劑二者投與至具有腫瘤之組織。在一些實施例中，每週投與感染劑。在一些實施例中，每週投與PD-1配體之抑制劑。在一些實施例中，依序投與感染劑及PD-1配體之抑制劑。在一些實施例中，在投與PD-1配體之抑制劑之前(例如在即將投與之前)投與感染劑。在一些實施例中，在投與PD-1配體之抑制劑之後(例如在投與後立刻)投與感染劑。在一些實施例中，同時投與感染劑及PD-1配體之抑制劑(例如在單一組合物中)。在一些實施例中，該方法進一步包含藉由局部投與除外之投與途徑投與感染劑及/或PD-1配體之抑制劑。
舉例而言，在一些實施例中，提供治療個體之固態或淋巴腫瘤(例如抑制腫瘤轉移)之方法，其包含：a)向該腫瘤位點局部投與有效量之溶瘤病毒(例如溶瘤腺病毒)；及b)向該腫瘤位點局部投與有效量之PD-1配體之抑制劑(例如抗PD-L1或抗PD-L2抗體、或PD-L1及PD-L2二者之抑制劑)。
在一些實施例中，提供治療個體之固態或淋巴腫瘤(例如抑制腫瘤轉移)之方法，其包含：a)向該腫瘤位點局部投與有效量之包含病毒載體之溶瘤病毒(例如溶瘤腺病毒)，該病毒載體包含可操作連接至病毒複製所必需之病毒基因之腫瘤細胞特異性啟動子；及b)向該腫瘤位點局部投與有效量之PD-1配體之抑制劑(例如抗PD-L1或抗PD-L2抗體、或PD-L1及PD-L2二者之抑制劑)。在一些實施例中，腫瘤特異性啟動子係E2F-1啟動子，例如人類E2F-1啟動子或包含SEQ ID NO：1中所述之核苷酸序列之E2F-1啟動子。在一些實施例中，病毒複製所必需之病毒基因選自由以下組成之群：E1A、E1B及E4。
在一些實施例中，提供治療個體之固態或淋巴腫瘤(例如抑制腫瘤轉移)之方法，其包含：a)向該腫瘤位點局部投與有效量之包含病毒載體之溶瘤病毒(例如溶瘤腺病毒)，該病毒載體包含可操作連接至病毒複製所必需之病毒基因之腫瘤細胞特異性啟動子及編碼可操作連接至病毒啟動子之免疫相關分子(例如細胞介素或趨化介素)之核酸；及b)向該腫瘤位點局部投與有效量之PD-1配體之抑制劑(例如抗PD-L1或抗PD-L2抗體、或PD-L1及PD-L2二者之抑制劑)。在一些實施例中，腫瘤特異性啟動子係E2F-1啟動子，例如人類E2F-1啟動子或包含SEQ ID NO：1中所述之核苷酸序列之E2F-1啟動子。在一些實施例中，病毒複製所必需之病毒基因選自由以下組成之群：E1A、E1B及E4。在一些實施例中，可操作連接至編碼免疫相關分子之核酸之病毒啟動子係E3啟動子。在一些實施例中，免疫相關分子係GM-CSF。
在一些實施例中，提供治療個體之固態或淋巴腫瘤(例如抑制腫瘤轉移)之方法，其包含：a)向該腫瘤位點局部投與有效量之腺病毒血清型5，其中天然腺病毒之內源性E1a啟動子及E3 19kD編碼區經人類E2F-1啟動子及編碼免疫相關分子(例如細胞介素或趨化介素，例如GM-CSF)之核酸置換；及b)向該腫瘤位點局部投與有效量之PD-1配體之抑制劑(例如抗PD-L1或抗PD-L2抗體、或PD-L1及PD-L2二者之抑制劑)。在一些實施例中，腫瘤特異性啟動子係人類E2F-1啟動子或包含SEQ ID NO：1中所述之核苷酸序列之E2F-1啟動子。
在一些實施例中，提供治療個體之固態或淋巴腫瘤(例如抑制腫瘤轉移)之方法，其包含：a)向該腫瘤位點局部投與有效量之CG0070；及b)向該腫瘤位點局部投與有效量之PD-1配體之抑制劑(例如抗PD-L1或抗 PD-L2抗體、或PD-L1及PD-L2二者之抑制劑)。在一些實施例中，PD-1配體之抑制劑係抗PD-L1抗體，例如KY-1003、MCLA-145、RG7446、BMS935559、MPDL3280A、MEDI4736、阿維魯單抗或STI-A1010。在一些實施例中，PD-1配體之抑制劑係抗PD-L2抗體。在一些實施例中，PD-1配體之抑制劑係PD-L1及PD-L2二者之抑制劑(例如，肽、蛋白質或小分子)，例如AUR-012及AMP-224。在一些實施例中，將CG0070及/或PD-1配體之抑制劑直接投與至腫瘤中。在一些實施例中，將溶瘤病毒及/或PD-1配體之抑制劑投與至具有腫瘤之組織。在一些實施例中，將CG0070及PD-1配體之抑制劑二者直接投與至腫瘤中。在一些實施例中，將CG0070及PD-1配體之抑制劑二者投與至具有腫瘤之組織。在一些實施例中，每週投與CG007。在一些實施例中，每週投與PD-1配體之抑制劑。在一些實施例中，依序投與CG0070及PD-1配體之抑制劑。在一些實施例中，在投與PD-1配體之抑制劑之前(例如在即將投與之前)投與CG0070。在一些實施例中，在投與PD-1配體之抑制劑之後(例如在投與後立刻)投與CG0070。在一些實施例中，同時投與CG0070及PD-1配體之抑制劑(例如在單一組合物中)。在一些實施例中，該方法進一步包含藉由局部投與除外之投與途徑投與CG0070及/或PD-1配體之抑制劑。
在一些實施例中，免疫刺激劑係CD40之活化劑。在一些實施例中，CD40之活化劑係激動性抗CD40抗體。已知抗CD40抗體中之任一者皆可用於本發明中，包括但不限於CP-870,893、達西珠單抗(亦稱為SGN-40)、ChiLob 7/4、APX005、及APX005M、BI-655064及BMS-986090。在一些實施例中，激動性抗CD40抗體係單株抗體或多株抗體。在一些實施例中，激動性抗CD40抗體係選自由以下組成之群之抗原結合片段：全 長抗CD40抗體之Fab、Fab’、F(ab’)2、Fv、scFv及其他抗原結合子序列。在一些實施例中，激動性抗CD40抗體係人類、人類化或嵌合抗體。在一些實施例中，激動性抗CD40抗體係雙特異性抗體、多特異性抗體、單一結構域抗體、包含抗體部分之融合蛋白、或其任何其他變體或衍生物。在一些實施例中，CD40之活化劑係天然或經改造之CD40配體，例如CD40L。在一些實施例中，CD40之活化劑係CD40與CD40L之間之相互作用之抑制劑。在一些實施例中，CD40之活化劑增加CD40之信號傳導。
因此，例如，在一些實施例中，提供治療個體(例如人類)之固態或淋巴腫瘤(例如抑制腫瘤轉移)之方法，其包含：a)向該腫瘤位點局部投與有效量之感染劑；及b)向該腫瘤位點局部投與有效量之CD40之活化劑(例如激動性抗CD40抗體，例如CP-870,893、達西珠單抗、ChiLob 7/4或APX005M)。在一些實施例中，感染劑係非溶瘤病毒。在一些實施例中，感染劑係溶瘤病毒。在一些實施例中，感染劑係野生型感染劑。在一些實施例中，感染劑經遺傳修飾。在一些實施例中，感染劑經減毒(例如經由多次傳代、不活化或遣傳修飾)。在一些實施例中，CD40之活化劑係激動性抗CD40抗體，例如CP-870,893、達西珠單抗、ChiLob 7/4或APX005M。在一些實施例中，該方法進一步包含局部投與第二免疫調節劑，例如免疫檢查點抑制劑。在一些實施例中，第二免疫調節劑係CTLA-4之抑制劑，例如抗CTLA-4抗體(例如伊匹單抗)或經改造之脂質運載蛋白(例如特異性識別CTLA-4之抗運載蛋白)。在一些實施例中，將感染劑及/或CD40之活化劑直接投與至腫瘤中。在一些實施例中，將感染劑及/或CD40之活化劑投與至具有腫瘤之組織。在一些實施例中，將感染劑及CD40之活化劑二者直接投與至腫瘤中。在一些實施例中，將感染劑及 CD40之活化劑二者投與至具有腫瘤之組織。在一些實施例中，每週投與感染劑。在一些實施例中，每週投與CD40之活化劑。在一些實施例中，依序投與感染劑及CD40之活化劑。在一些實施例中，在投與CD40之活化劑之前(例如在即將投與之前)投與感染劑。在一些實施例中，在投與CD40之活化劑之後(例如在投與後立刻)投與感染劑。在一些實施例中，同時投與感染劑及CD40之活化劑(例如在單一組合物中)。在一些實施例中，該方法進一步包含藉由局部投與除外之投與途徑投與感染劑及/或CD40之活化劑。
舉例而言，在一些實施例中，提供治療個體之固態或淋巴腫瘤之方法，其包含：a)向該腫瘤位點局部投與有效量之溶瘤病毒(例如溶瘤腺病毒)；及b)向該腫瘤位點局部投與有效量之CD40之活化劑(例如激動性抗CD40抗體，例如CP-870,893、達西珠單抗、ChiLob 7/4或APX005M)。
在一些實施例中，提供治療個體之固態或淋巴腫瘤(例如抑制腫瘤轉移)之方法，其包含：a)向該腫瘤位點局部投與有效量之包含病毒載體之溶瘤病毒(例如溶瘤腺病毒)，該病毒載體包含可操作連接至病毒複製所必需之病毒基因之腫瘤細胞特異性啟動子；及b)向該腫瘤位點局部投與有效量之CD40之活化劑(例如激動性抗CD40抗體，例如CP-870,893、達西珠單抗、ChiLob 7/4或APX005M)。在一些實施例中，腫瘤特異性啟動子係E2F-1啟動子，例如人類E2F-1啟動子或包含SEQ ID NO：1中所述之核苷酸序列之E2F-1啟動子。在一些實施例中，病毒複製所必需之病毒基因選自由以下組成之群：E1A、E1B及E4。
在一些實施例中，提供治療個體之固態或淋巴腫瘤(例如抑制腫瘤轉移)之方法，其包含：a)向該腫瘤位點局部投與有效量之包含病毒載體之 溶瘤病毒(例如溶瘤腺病毒)，該病毒載體包含可操作連接至病毒複製所必需之病毒基因之腫瘤細胞特異性啟動子及編碼可操作連接至病毒啟動子之免疫相關分子(例如細胞介素或趨化介素)之核酸；及b)向該腫瘤位點局部投與有效量之CD40之活化劑(例如激動性抗CD40抗體，例如CP-870,893、達西珠單抗、ChiLob 7/4或APX005M)。在一些實施例中，腫瘤特異性啟動子係E2F-1啟動子，例如人類E2F-1啟動子或包含SEQ ID NO：1中所述之核苷酸序列之E2F-1啟動子。在一些實施例中，病毒複製所必需之病毒基因選自由以下組成之群：E1A、E1B及E4。在一些實施例中，可操作連接至編碼免疫相關分子之核酸之病毒啟動子係E3啟動子。在一些實施例中，免疫相關分子係GM-CSF。
在一些實施例中，提供治療個體之固態或淋巴腫瘤(例如抑制腫瘤轉移)之方法，其包含：a)向該腫瘤位點局部投與有效量之腺病毒血清型5，其中天然腺病毒之內源性E1a啟動子及E3 19kD編碼區經人類E2F-1啟動子及編碼免疫相關分子(例如細胞介素或趨化介素，例如GM-CSF)之核酸置換；及b)向該腫瘤位點局部投與有效量之CD40之活化劑(例如激動性抗CD40抗體，例如CP-870,893、達西珠單抗、ChiLob 7/4或APX005M)。在一些實施例中，腫瘤特異性啟動子係人類E2F-1啟動子或包含SEQ ID NO：1中所述之核苷酸序列之E2F-1啟動子。
在一些實施例中，提供治療個體之固態或淋巴腫瘤(例如抑制腫瘤轉移)之方法，其包含：a)向該腫瘤位點局部投與有效量之CG0070；及b)向該腫瘤位點局部投與有效量之CD40之活化劑(例如激動性抗CD40抗體，例如CP-870,893、達西珠單抗、ChiLob 7/4或APX005M)。在一些實施例中，CD40之活化劑係激動性抗CD40抗體，例如CP-870,893、達西 珠單抗、ChiLob 7/4或APX005M。在一些實施例中，將CG0070及/或CD40之活化劑直接投與至腫瘤中。在一些實施例中，將溶瘤病毒及/或CD40之活化劑投與至具有腫瘤之組織。在一些實施例中，將CG0070及CD40之活化劑二者直接投與至腫瘤中。在一些實施例中，將CG0070及CD40之活化劑二者投與至具有腫瘤之組織。在一些實施例中，每週投與CG007。在一些實施例中，每週投與CD40之活化劑。在一些實施例中，依序投與CG0070及CD40之活化劑。在一些實施例中，在投與CD40之活化劑之前(例如在即將投與之前)投與CG0070。在一些實施例中，在投與CD40之活化劑之後(例如在投與後立刻)投與CG0070。在一些實施例中，同時投與CG0070及CD40之活化劑(例如在單一組合物中)。在一些實施例中，該方法進一步包含藉由局部投與除外之投與途徑投與CG0070及/或CD40之活化劑。
在一些實施例中，該方法包含投與兩種或更多種(例如2、3、4、5、6或更多中之任一者)感染劑。舉例而言，在一些實施例中，該方法包含：a)向該腫瘤位點局部投與有效量之第一感染劑(例如病毒，例如溶瘤病毒)；及b)向個體局部投與有效量之第二感染劑(例如細菌，例如BCG、MCNA或單核球增多性李氏菌)；及c)向該腫瘤位點局部投與有效量之免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)。
本文所述方法可進一步包含在投與感染劑之前向該腫瘤位點局部投與預處理組合物的步驟。在一些實施例中，預處理組合物包含轉導增強劑，例如N-十二烷基-β-D-麥芽糖苷(DDM)。DDM係包括經單一12碳鏈衍生之麥芽糖之非離子型表面活性劑，且用作溫和清潔劑及增溶劑。其已用作食物添加劑且已知其增強齧齒類動物中之黏膜表面滲透，此可能係由於 其對與GAG及緊密連接處相關聯之膜之效應。
可將預處理組合物直接投與至腫瘤中或投與至具有腫瘤之組織。在一些實施例中，預處理組合物包含轉導增強劑(例如DDM)之溶液。預處理組合物(例如DDM溶液)之適宜濃度包括(但不限於)0.01%、0.05%、0.1%、0.2%、0.3%、0.4%、0.5%、1%、2%、3%、4%或5%中之約任一者之轉導增強劑(例如DDM)。在一些實施例中，預處理組合物包含約0.01%至約0.05%、約0.05%至約0.1%、約0.1%至約0.5%、約0.5%至約1%、約1%至約2%、約2%至約3%、約3%至約4%、約4%至約5%、約0.01%至約1%、約0.05%至約2%、約1%至約5%或約0.1%至約5%中之任一者之轉導增強劑(例如DDM)。
在一些實施例中，在即將投與感染劑之前(例如不超過5分鐘)投與預處理(例如DDM)。在一些實施例中，在投與感染劑之前不超過5分鐘、10分鐘、15分鐘、20分鐘、30分鐘、45分鐘、1小時、90分鐘、2小時、3小時或4小時中之約任一者投與預處理(例如DDM)。在一些實施例中，在投與感染劑之前不超過約2小時投與預處理(例如DDM)。
預處理組合物(例如DDM)之適宜劑量包括(但不限於)以下中之約任一者：0.1mg/kg、0.5mg/kg、1mg/kg、1.5mg/kg、2mg/kg、2.5mg/kg、5mg/kg、10mg/kg、25mg/kg、50mg/kg、100mg/kg、150mg/kg、200mg/kg、250mg/kg、300mg/kg、400mg/kg、500mg/kg、0.1mg/kg至0.5mg/kg、0.5mg/kg至1mg/kg、1mg/kg至2mg/kg、2mg/kg至5mg/kg、5mg/kg至10mg/kg、10mg/kg至25mg/kg、25mg/kg至50mg/kg、50mg/kg至100mg/kg、100mg/kg至150mg/kg、150mg/kg至200mg/kg、200mg/kg至250mg/kg、250mg/kg至500mg/kg或 0.5mg/kg至約5mg/kg。在一些實施例中，預處理組合物之適宜劑量係0.1g、0.2g、0.5g、0.75g、1g、1.5g、2g、2.5g、5g或10g轉導增強劑(例如DDM)中之約任一者。
在投與感染劑及免疫調節劑之前(包括免疫調節劑之組合)，個體(例如，完全或僅在腫瘤位點)經受先前療法。在一些實施例中，先前療法係使用一或多種(例如1、2、3、4、5或更多種)治療模態(包括但不限於輻射療法、投與一或多種免疫相關分子、投與其他治療劑及其組合)之腫瘤位點製備。據信添加其他預處理製備可增加上述方法成功之機會。不受限於任何理論或假設，例如，具有或無淋巴清除效應之局部輻射或化學療法可增加感染過程之機會，且可耗盡腫瘤位點之更敏感Treg，藉此恢復耗盡或耐受之T記憶細胞。類似地，「於」腫瘤位點投與本發明組合之前或同時之腫瘤位點製備可涉及細胞介素、趨化介素、小分子及其他熟知之有益免疫調節劑，例如IL2、IL12、OX40、CD40及4-1BB激動劑。端視需要而定，該等腫瘤位點製備模態可結合或按順序給予。
在一些實施例中，先前療法係輻射療法(例如，具有或無化學療法)。在一些實施例中，輻射療法與化學療法組合。在一些實施例中，先前療法係針對全身之輻射療法。在一些實施例中，先前療法係僅針對腫瘤位點之輻射療法。在一些實施例中，先前療法係針對具有腫瘤之組織之輻射療法。在一些實施例中，先前療法係僅針對選擇用於局部投與感染劑及免疫調節劑之腫瘤位點的輻射療法。在一些實施例中，先前療法係僅針對選擇用於局部投與感染劑及免疫調節劑之具有腫瘤之組織的輻射療法。在一些實施例中，輻射療法之劑量不足以根除腫瘤細胞。舉例而言，輻射療法之適宜劑量係以下中之約任一者：1Gy、5Gy、10Gy、15Gy、20Gy、 25Gy、30Gy、35Gy、40Gy、45Gy、50Gy、55Gy、60Gy、65Gy、70Gy、75Gy、80Gy、90Gy或100Gy。在一些實施例中，輻射療法之劑量係不超過以下中之約任一者：1Gy、5Gy、10Gy、15Gy、20Gy、25Gy、30Gy、35Gy、40Gy、45Gy、50Gy、55Gy、60Gy、65Gy、70Gy、75Gy、80Gy、90Gy或100Gy。在一些實施例中，輻射療法之劑量係以下中之任一者：約1Gy至約5Gy、約5Gy至約10Gy、約10Gy至約15Gy、約15Gy至約20Gy、約20Gy至約25Gy、約25Gy至約30Gy、約30Gy至約35Gy、約5Gy至約15Gy、約10Gy至約20Gy、約20Gy至約30Gy、約30Gy至約40Gy、約40Gy至約50Gy、約50Gy至約60Gy、約60Gy至約70Gy、約70Gy至約80Gy、約80Gy至約100Gy、約10Gy至約30Gy、約20Gy至約40Gy、約1Gy至約25Gy、約25Gy至約50Gy、約30Gy至約60Gy、約60Gy至約80Gy或約10Gy至約60Gy。輻射療法之適宜劑量亦可端視腫瘤之類型、階段及位置而定。
在一些實施例中，以一種以上方式(例如2、3、4、5、6、7、8、9、10、12、15、16、18、20或更多種方式中之約任一者)投與輻射療法。在一些實施例中，在1天、2天、3天、4天、5天、6天、1週、2週、3週、4週、5週、6週、7週或更長時間中之約任一者之過程中投與輻射療法部分。在一些實施例中，在以下中之任一者之過程中投與輻射療法部分：約1天至約5天、約1週至約2週、約2週至約3週、約3週至約4週、約4週至約5週、約5週至約6週、約6週至約7週、約2週至約4週、約4週至約6週或約1週至約6週。在一些實施例中，每天以約兩個部分投與輻射療法。在一些實施例中，輻射療法之每一部分係對於成人每天約1.8Gy至約2Gy(一週 五天)、或對於兒童每天約1.5Gy至約1.8Gy(一週五天)。在一些實施例中，輻射療法之每一部分係以下中之約任一者：1Gy、1.5Gy、2Gy、2.5Gy、5Gy、10Gy、15Gy、20Gy、30Gy、40Gy、50Gy或更多。在一些實施例中，輻射療法之每一部分係以下中之任一者：約1Gy至約1.5Gy、約1.5Gy至約2Gy、約1Gy至約2.5Gy、約2.5Gy至約5Gy、約5Gy至約10Gy、約10Gy至約15Gy、約15Gy至約20Gy、約20Gy至約30Gy、約25Gy至約50Gy、約1Gy至約10Gy或約2Gy至約20Gy。在一些實施例中，以單一部分投與輻射療法。
在一些實施例中，輻射療法旨在淋巴清除，以每天單一劑量部分或在數天至數週內以多個部分。在一些實施例中，淋巴清除輻射療法係作為全身輻照給予。在一些實施例中，淋巴清除僅係給予至局部腫瘤位點或具有腫瘤之組織。在一些實施例中，每天以兩個部分投與淋巴清除輻射療法。在一些實施例中，淋巴清除輻射療法之每一部分係對於成人每天約1Gy至約2Gy(一週五天)、或對於兒童每天約0.5Gy至約1.8Gy(一週五天)。在一些實施例中，輻射療法之每一部分係以下中之約任一者：1Gy、1.5Gy、2Gy、2.5Gy、5Gy、10Gy、15Gy、20Gy、30Gy、40Gy、50Gy或更多。在一些實施例中，輻射療法之每一部分係以下中之任一者：約1Gy至約1.5Gy、約1.5Gy至約2Gy、約1Gy至約2.5Gy、約2.5Gy至約5Gy、約5Gy至約10Gy、約10Gy至約15Gy、約15Gy至約20Gy、約20Gy至約30Gy、約25Gy至約50Gy、約1Gy至約10Gy或約2Gy至約20Gy。在一些實施例中，淋巴清除輻射療法係使用或不使用化學治療劑(例如但不限於環磷醯胺(cyclophosphamide)及氟達拉濱(fludarabine))來投與。
輻射療法之已知方法中之任一者皆可用於本發明中，包括但不限於外線束放射療法(EBRT或XRT)、遠程療法、近程療法、密封源輻射療法、全身放射性同位素療法(RIT)、非密封源輻射療法、術中輻射療法(IORT)、靶向之術中輻射療法(TARGIT)、強度調節輻射療法(IMRT)、體積調節弧療法(VMAT)、顆粒療法及鑽孔機療法。
在一些實施例中，提供治療患有固態或淋巴腫瘤之個體之方法，其包含：(a)局部投與輻射療法；b)向該腫瘤位點局部投與有效量之感染劑(例如溶瘤病毒，例如CG0070)；及c)向個體局部投與有效量之免疫調節劑(包括免疫調節劑(例如免疫檢查點抑制劑及/或免疫刺激劑)之組合)。在一些實施例中，提供抑制個體之固態或淋巴腫瘤轉移之方法，其包含：(a)局部投與輻射療法；b)向該腫瘤位點局部投與有效量之感染劑(例如溶瘤病毒，例如CG0070)；及c)向個體局部投與有效量之免疫調節劑(包括免疫調節劑(例如免疫檢查點抑制劑及/或免疫刺激劑)之組合)。在一些實施例中，在投與感染劑及/或免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)之前投與輻射療法。在一些實施例中，在投與感染劑及免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)之前約1天至約1週(例如，約2天)投與輻射療法。在一些實施例中，直接向固態或淋巴腫瘤投與輻射療法、及/或感染劑及/或免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)。在一些實施例中，向具有固態或淋巴腫瘤之組織投與輻射療法、及/或感染劑及/或免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)。在一些實施例中，免疫調節劑係CTLA-4抑制劑(例如抗CTLA-4抗體(例如伊匹單抗)或經改造之脂質運載蛋白(例如特異性識別CTLA-4之抗運載蛋白))。在一些實施例中，免疫調節劑係CD40激動劑(例如激動性抗CD40抗體，例如CP-870,893、達西珠單抗、ChiLob 7/4或APX005M)。 在一些實施例中，該方法包含局部投與免疫調節劑之組合，其包含CTLA-4抑制劑(例如抗CTLA-4抗體(例如伊匹單抗)或經改造之脂質運載蛋白(例如特異性識別CTLA-4之抗運載蛋白))及CD40激動劑(例如激動性抗CD40抗體，例如CP-870,893、達西珠單抗、ChiLob 7/4或APX005M)。在一些實施例中，輻射療法係以每個腫瘤位點約1Gy至約10Gy(例如約4Gy)之劑量投與。在一些實施例中，輻射療法係以約2個分次劑量每週投與(例如，每日，持續約2天)。在一些實施例中，投與輻射療法不超過約4週。在一些實施例中，每週投與感染劑及免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)達約2週至約8週(例如約6週)。在一些實施例中，另外每兩週投與感染劑及免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)達約1個月至約4個月(例如約2個月)。在一些實施例中，另外每月投與感染劑及免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)作為維持治療。
在一些實施例中，先前療法包含投與治療劑。在一些實施例中，治療劑之劑量足以根除腫瘤細胞。在一些實施例中，治療劑之劑量不足以根除腫瘤細胞。在一些實施例中，治療劑係業內已知之化學治療劑(例如環磷醯胺)之任一者或組合。在一些實施例中，治療劑係業內已知之靶向或阻斷細胞信號傳導路徑之試劑之任一者或組合，例如BRAF抑制劑。在一些實施例中，治療劑係業內已知之細胞療法之任一者或組合，例如TIL細胞、CAR/T細胞及/或TCR/T細胞。在一些實施例中，治療劑係增加參與免疫原性路徑之細胞介素之含量的藥劑。本文所述免疫相關分子中之任一者皆可用作治療劑，包括但不限於細胞介素(例如IL6、IL8及IL18(該等細胞介素可具有促發炎及/或抗發炎作用，或一些可促進新血管形成及腫瘤生長))、趨化介素(例如CCL21，其可藉由增加淋巴結構而促進腫瘤擴 散)、生長因子(例如FLT3L)、熱休克蛋白、小分子激酶抑制劑(例如JAK2抑制劑)、IAP抑制劑、STING活化劑(例如CDN)、PRRago(例如CpG ODN(寡去氧核苷酸)、咪喹莫特或聚I：C)、TLR刺激物(例如GS-9620、AED-1419、CYT-003-QbG10、AVE-0675或PF-7909)及RLR刺激物(例如RIG-I、Mda5或LGP2刺激物)。在一些實施例中，治療劑係引起腫瘤之結構組份功能障礙或對其損害的藥劑。實例性藥劑包括(但不限於)抗VEGF抗體、玻尿酸酶及n-十二烷基-β-麥芽糖苷。在一些實施例中，治療劑誘導免疫細胞，例如樹突細胞、B細胞及T細胞(例如濾泡性T輔助細胞)。
本文所述一或多種治療劑(例如化學治療劑、靶向或阻斷細胞信號傳導路徑之藥劑、細胞介素、趨化介素、細胞療法等)中之任一者可單獨或組合直接或間接投與(例如經由靜脈內投與)至腫瘤位點。
在一些實施例中，治療具有固態或淋巴腫瘤之個體(例如抑制腫瘤轉移)之方法包含：(a)局部投與治療劑(例如CCL21)；b)向該腫瘤位點局部投與有效量之感染劑(例如溶瘤病毒，例如CG0070)；及c)向個體局部投與有效量之免疫調節劑(包括免疫調節劑(例如免疫檢查點抑制劑及/或免疫刺激劑)之組合)。在一些實施例中，治療劑包含趨化介素。在一些實施例中，趨化介素係CCL21。在一些實施例中，CCL21係奈米膠囊。在一些實施例中，在投與感染劑及/或免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)之前投與治療劑。在一些實施例中，在投與感染劑及免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)之前約1天至約1週(例如，約2天)治療劑(例如CCL21)。在一些實施例中，直接向固態或淋巴腫瘤投與治療劑、及/或感染劑及/或免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)。在一些實施例中，向具有固態或淋巴腫瘤 之組織投與治療劑、及/或感染劑及/或免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)。在一些實施例中，免疫調節劑係CTLA-4抑制劑(例如抗CTLA-4抗體(例如伊匹單抗)或經改造之脂質運載蛋白(例如特異性識別CTLA-4之抗運載蛋白))。在一些實施例中，免疫調節劑係CD40激動劑(例如激動性抗CD40抗體，例如CP-870,893、達西珠單抗、ChiLob 7/4或APX005M)。在一些實施例中，該方法包含局部投與免疫調節劑之組合，其包含CTLA-4抑制劑(例如抗CTLA-4抗體(例如伊匹單抗)或經改造之脂質運載蛋白(例如特異性識別CTLA-4之抗運載蛋白))及CD40激動劑(例如激動性抗CD40抗體，例如CP-870,893、達西珠單抗、ChiLob 7/4或APX005M)。在一些實施例中，治療劑(例如CCL21)係以每個腫瘤位點約10μg至約100mg之劑量投與。在一些實施例中，每個腫瘤位點之治療劑(例如CCL21)之劑量取決於腫瘤之大小，例如對於最長尺寸為約5cm或更大之腫瘤為約100μg至約10mg(例如約400μg)、對於最長尺寸為約2cm至約5cm之腫瘤為約50μg至約5mg(例如約200μg)、或對於最長尺寸為約0.5cm至約2cm之腫瘤為約25μg至約2.5mg(例如約100μg)。在一些實施例中，在約2週至約8週(例如約6週)中每週投與治療劑(例如CCL21)、感染劑及免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)。在一些實施例中，在約1個月至約4個月(例如約2個月)中另外每兩週投與治療劑(例如CCL21)、感染劑及免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)。在一些實施例中，另外每月投與治療劑(例如CCL21)、感染劑及免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)作為維持治療。
在一些實施例中，治療具有固態或淋巴腫瘤之個體(例如抑制腫瘤轉移)之方法包含：(a)局部投與治療劑(例如CpG ODN)；b)向該腫瘤位點局部投與有效量之感染劑(例如溶瘤病毒，例如CG0070)；及c)向個體局 部投與有效量之免疫調節劑(包括免疫調節劑(例如免疫檢查點抑制劑及/或免疫刺激劑)之組合)。在一些實施例中，治療劑包含PRRago。在一些實施例中，趨化介素係CpG ODN，例如CpG 7909。在一些實施例中，在投與感染劑及/或免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)之前投與治療劑。在一些實施例中，在投與感染劑及免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)之前約1天至約1週(例如，約2天)治療劑(例如CpG ODN)。在一些實施例中，直接向固態或淋巴腫瘤投與治療劑、及/或感染劑及/或免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)。在一些實施例中，向具有固態或淋巴腫瘤之組織投與治療劑、及/或感染劑及/或免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)。在一些實施例中，免疫調節劑係CTLA-4抑制劑(例如抗CTLA-4抗體(例如伊匹單抗)或經改造之脂質運載蛋白(例如特異性識別CTLA-4之抗運載蛋白))。在一些實施例中，免疫調節劑係OX40激動劑(例如激動性抗OX40抗體，例如MEDI-6469)。在一些實施例中，該方法包含局部投與免疫調節劑之組合，其包含CTLA-4抑制劑(例如抗CTLA-4抗體(例如伊匹單抗)或經改造之脂質運載蛋白(例如特異性識別CTLA-4之抗運載蛋白))及OX40激動劑(例如激動性抗OX40抗體，例如MEDI-6469)。在一些實施例中，治療劑(例如CpG ODN)係以每個腫瘤位點約10μg至約100mg之劑量投與。在一些實施例中，每個腫瘤位點之治療劑(例如CpG ODN)之劑量取決於腫瘤之大小，例如對於最長尺寸為約5cm或更大之腫瘤為約200μg至約20mg(例如約2mg)、對於最長尺寸為約2cm至約5cm之腫瘤為約100μg至約10mg(例如約1mg)、或對於最長尺寸為約0.5cm至約2cm之腫瘤為約50μg至約5mg(例如約500μg)。在一些實施例中，在約2週至約8週(例如約6週)中每週投與治療劑(例如CpG ODN)、感染劑及免疫調節劑(包括免疫 調節劑之組合)。在一些實施例中，在約1個月至約4個月(例如約2個月)中另外每兩週投與治療劑(例如CpG ODN)、感染劑及免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)。在一些實施例中，另外每月投與治療劑(例如CpG ODN)、感染劑及免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)作為維持治療。
感染劑之適宜劑量取決於諸如以下等因素：感染劑之性質、所治療固態或淋巴腫瘤之類型及投與途徑。如本文所用之「顆粒」在與感染劑相關時意指感染劑(例如病毒或細菌)之物理單數單元之集合數目。此數目轉化成或等效於意指感染效價單位(例如噬菌斑形成單位(pfu)或國際單位)之另一數目，藉由如業內已知之感染性分析所測定。在一些實施例中，感染劑係以如下中之約任一者之劑量投與：1×105個顆粒、1×106個顆粒、1×107個顆粒、1×108個顆粒、1×109個顆粒、1×1010個顆粒、2×1010個顆粒、5×1010個顆粒、1×1011個顆粒、2×1011個顆粒、5×1011個顆粒、1×1012個顆粒、2×1012個顆粒、5×1012個顆粒、1×1013個顆粒、2×1013個顆粒、5×1013個顆粒、1×1014個顆粒或1×1015個顆粒。在一些實施例中，感染劑係以如下中之任一者之劑量投與：約1×105個顆粒至約1×106個顆粒、約1×106個顆粒至約1×107個顆粒、約1×107個顆粒至約1×108個顆粒、約1×108個顆粒至約1×109個顆粒、約1×109個顆粒至約1×1010個顆粒、約1×1010個顆粒至約1×1011個顆粒、約1×1011個顆粒至約5×1011個顆粒、約5×1011個顆粒至約1×1012個顆粒、約1×1012個顆粒至約2×1012個顆粒、約2×1012個顆粒至約5×1012個顆粒、約5×1012個顆粒至約1×1013個顆粒、約1×1013個顆粒至約1×1014個顆粒或約1×1014個顆粒至約1×1015個顆粒。
在一些實施例中，每日投與感染劑。在一些實施例中，感染劑係一 週投與至少1次、2次、3次、4次、5次、6次或7次(即，每日)中之約任一者。在一些實施例中，每週投與感染劑。在一些實施例中，感染劑係每週無間斷投與；三週中之兩週每週投與；四週中之三週每週投與；每2週一次；每3週一次；每4週一次；每6週一次；每8週一次、每月或每2至12個月投與。在一些實施例中，每次投與之間之間隔小於以下中之約任一者：6個月、3個月、1個月、20天、15天、12天、10天、9天、8天、7天、6天、5天、4天、3天、2天或1天。在一些實施例中，每次投與之間之間隔超過以下中之約任一者：1個月、2個月、3個月、4個月、5個月、6個月、8個月或12個月。在一些實施例中，投藥時間表中無間斷。在一些實施例中，每次投與之間之間隔不超過約一週。
感染劑之投與可在延長時間段(例如約1個月高達至約7年)內。在一些實施例中，在至少以下中之約任一者之時段內投與感染劑：1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、18、24、30、36、48、60、72或84個月。在一些實施例中，在至少4週或6週之時段內投與感染劑。在一些實施例中，每3個月在4週中每週投與感染劑。在一些實施例中，每3個月在6週中每週投與感染劑。
免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)之適宜劑量取決於諸如以下等因素：免疫調節劑或免疫調節劑之組合之性質、所治療固態或淋巴腫瘤之類型及投與途徑。免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)之實例性劑量包括(但不限於)以下中之約任一者：1mg/m2、5mg/m2、10mg/m2、20mg/m2、50mg/m2、100mg/m2、200mg/m2、300mg/m2、400mg/m2、500mg/m2、750mg/m2、1000mg/m2或更多。在一些實施例中，免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)之劑量包括於以下範圍內之任一者中：約1 至約5mg/m2、約5至約10mg/m2、約10至約20mg/m2、約20至約50mg/m2、約50至約100mg/m2、約100mg/m2至約200mg/m2、約200至約300mg/m2、約300至約400mg/m2、約400至約500mg/m2、約500至約750mg/m2或約750至約1000mg/m2。在一些實施例中，免疫調節劑之劑量係以下中之約任一者：1μg/kg、2μg/kg、5μg/kg、10μg/kg、20μg/kg、50μg/kg、0.1mg/kg、0.2mg/kg、0.3mg/kg、0.4mg/kg、0.5mg/kg、1mg/kg、2mg/kg、5mg/kg、10mg/kg、20mg/kg、50mg/kg、100mg/kg或更多。在一些實施例中，免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)之劑量係以下中之任一者：約1μg/kg至約5μg/kg、約5μg/kg至約10μg/kg、約10μg/kg至約50μg/kg、約50μg/kg至約0.1mg/kg、約0.1mg/kg至約0.2mg/kg、約0.2mg/kg至約0.3mg/kg、約0.3mg/kg至約0.4mg/kg、約0.4mg/kg至約0.5mg/kg、約0.5mg/kg至約1mg/kg、約1mg/kg至約5mg/kg、約5mg/kg至約10mg/kg、約10mg/kg至約20mg/kg、約20mg/kg至約50mg/kg、約50mg/kg至約100mg/kg或約1mg/kg至約100mg/kg。在一些實施例中，免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)之劑量係以下中之約任一者：1μg、10μg、50μg、100μg、500μg、1mg、2mg、4mg、6mg、12mg、18mg、24mg、50mg、100mg、500mg或1000mg。在一些實施例中，免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)之劑量係以下中之任一者：約1μg至約10μg、約10μg至約5010μg、約50μg至約100μg、約100μg至約500μg、約500μg至約1mg、約1mg至約5mg、約5mg至約10mg、約10mg至約25mg、約25mg至約50mg、約50mg至約100mg、約100mg至約500mg、約500mg至約1000mg、約1μg至約1mg、約1mg至約1000mg或約1μg至約1000 mg。在一些實施例中，每個腫瘤位點投與之免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)之劑量係不超過以下中之約任一者：10μg、50μg、100μg、500μg、1mg、2mg、4mg、6mg、12mg、18mg、24mg、50mg或100mg。在一些實施例中，每個腫瘤位點投與之免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)之劑量係以下中之任一者：約10μg至約50μg、約50μg至約100μg、約100μg至約500μg、約100μg至約1mg、約1mg至約2mg、約2mg至約5mg、約5mg至約10mg、約10mg至約15mg、約10mg至約25mg、約25mg至約50mg、約50mg至約100mg、約1mg至約50mg或約100μg至約10mg。在一些實施例中，每個腫瘤位點投與之免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)之劑量係基於腫瘤之大小。
在一些實施例中，每日投與免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)。在一些實施例中，一週至少1次、2次、3次、4次、5次、6次或7次(即，每日)中之約任一者投與免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)。在一些實施例中，每週投與免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)。在一些實施例中，免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)係每週無間斷投與；三週中之兩週每週投與；四週中之三週每週投與；每2週一次；每3週一次；每4週一次；每6週一次；每8週一次、每月或每2至12個月投與。在一些實施例中，每次投與之間之間隔小於以下中之約任一者：6個月、3個月、1個月、20天、15天、12天、10天、9天、8天、7天、6天、5天、4天、3天、2天或1天。在一些實施例中，每次投與之間之間隔超過以下中之約任一者：1個月、2個月、3個月、4個月、5個月、6個月、8個月或12個月。在一些實施例中，投藥時間表中無間斷。在一些實施例中，每次投與之間之間隔不超過約一週。在一些實施例中，免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)係以 與感染劑相同之投藥時間表投與。在一些實施例中，免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)係以與感染劑不同之投藥時間表投與。在一些實施例中，在4週中每週投與感染劑，且在四週中之三週中每週投與免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)。
免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)之投與可在延長時間段(例如約1個月高達至約7年)內。在一些實施例中，在至少以下中之約任一者之時段內投與免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)：1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、18、24、30、36、48、60、72或84個月。在一些實施例中，在至少3週或6週之時段內投與免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)。在一些實施例中，每3個月在四週中之三週中每週投與免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)。在一些實施例中，每3個月在6週中每週投與免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)。
感染劑、免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)、細胞介素及/或預處理組合物之實例性投與途徑包括(但不限於)腫瘤內、膀胱內、肌內、腹膜內、靜脈內、動脈內、顱內、胸膜內、皮下及表皮途徑，或遞送至已知含有該等活的癌細胞之淋巴腺、身體空間、器官或組織中(例如肝內或胰臟內注射)。在一些實施例中，投與係藉由將藥劑直接注射至腫瘤中來實施。在一些實施例中，投與係藉由將藥劑直接注射至靠近腫瘤細胞之位點來實施。具體投與途徑取決於固態或淋巴腫瘤之性質且下文在不同類型之固態或淋巴腫瘤之上下文中進一步論述。
在其中感染劑及/或免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)係腫瘤內投與(例如，腫瘤內注射)之一些實施例中，投與之總體積不超過以下中之約任一者：0.5mL、1mL、1.5mL、2mL、2.5mL、5mL或10mL。在一 些實施例中，每個腫瘤位點之腫瘤內投與(例如腫瘤內注射)之感染劑及/或免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)的體積取決於腫瘤位點之大小。腫瘤大小可量測為腫瘤體積或腫瘤之最長尺寸。舉例而言，對於最長尺寸大於約5cm之腫瘤而言，腫瘤內投與體積係不超過約2mL；對於最長尺寸為約2cm至約5cm之腫瘤而言，腫瘤內投與體積係約1mL；對於最長尺寸為約0.75cm至約2cm之腫瘤而言，腫瘤內投與體積係約0.5mL；且對於最長尺寸小於約0.75cm之腫瘤而言，腫瘤內投與體積係約0.1mL。在一些實施例中，向所有腫瘤位點投與感染劑及/或免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)。在一些實施例中，向1、2、3、4、5、6或更多個腫瘤位點中之約任一者投與感染劑及/或免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)。在一些實施例中，向具有最大大小之腫瘤位點投與感染劑及/或免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)。
在一些實施例中，與免疫調節劑組合之感染劑之量有效抑制個體之腫瘤轉移。在一些實施例中，將轉移抑制至少約10%(包括(例如)至少20%、30%、40%、60%、70%、80%、90%或100%中之約任一者)。在一些實施例中，提供抑制轉移至淋巴結之方法。在一些實施例中，提供抑制轉移至肺之方法。轉移可藉由業內已知之任何方法、例如藉由血液測試、骨掃描、x射線掃描、CT掃描、PET掃描及生檢來評價。
在一些實施例中，與免疫調節劑組合之感染劑之量有效延長個體之存活(例如無疾病存活)。在一些實施例中，存活延長至少約2、3、4、5、6、12或24個月。在一些實施例中，提供延長具有固態或淋巴腫瘤之個體之存活之方法，其包含：(a)向該腫瘤位點局部投與有效量之感染劑(例如CG0070)；及(b)向該腫瘤位點局部投與有效量之免疫調節劑(包括免疫調 節劑之組合)。
在一些實施例中，與免疫調節劑組合之感染劑之量有效引起個體之疾病緩解(部分或完全)。在一些實施例中，提供引起具有固態或淋巴腫瘤之個體之疾病緩解(部分或完全)之方法，其包含：(a)向該腫瘤位點局部投與有效量之感染劑(例如CG0070)；及(b)向該腫瘤位點局部投與有效量之免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)。
在一些實施例中，與免疫調節劑組合之感染劑之量有效改善個體之生活品質。在一些實施例中，提供改善具有固態或淋巴腫瘤之個體之生活品質之方法，其包含：(a)向該腫瘤位點局部投與有效量之感染劑(例如CG0070)；及(b)向該腫瘤位點局部投與有效量之免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)。
在一些實施例中，與免疫調節劑組合之感染劑之量有效抑制固態或淋巴腫瘤之生長或減小其大小。在一些實施例中，固態或淋巴腫瘤之大小減小至少約10%(包括(例如)至少20%、30%、40%、60%、70%、80%、90%或100%中之約任一者)。在一些實施例中，提供抑制個體之固態或淋巴腫瘤生長或減小其大小之方法，其包含：(a)向該腫瘤位點局部投與有效量之感染劑(例如CG0070)；及(b)向該腫瘤位點局部投與有效量之免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)。
本文論述之固態或淋巴腫瘤包括(但不限於)霍奇金氏淋巴瘤(Hodgkin lymphoma)、非霍奇金氏淋巴瘤、肉瘤及癌，例如纖維肉瘤、黏液肉瘤、脂肪肉瘤、軟骨肉瘤、骨原性肉瘤、脊索瘤、血管肉瘤、內皮肉瘤、***肉瘤、***內皮肉瘤、卡波西式肉瘤(Kaposi's sarcoma)、軟組織肉瘤、子宮滑膜肉瘤、間皮瘤、尤文氏肉瘤(Ewing's tumor)、平滑肌肉瘤、橫紋肌肉瘤、結腸癌、胰臟癌、乳癌、卵巢癌、***癌、鱗狀細胞癌、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳頭狀癌、乳頭狀腺癌、囊腺癌、髓樣癌、支氣管癌、腎細胞癌、肝細胞瘤、膽管癌、絨毛膜癌、精原細胞瘤、胚胎性癌、威爾姆氏腫瘤(Wilm's tumor)、子宮頸癌、睪丸腫瘤、肺癌、小細胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、神經膠質瘤、星細胞瘤、髓母細胞瘤、顱咽管瘤、室管膜瘤、松果體瘤、血管母細胞瘤、聽神經瘤、寡樹突神經膠細胞瘤、腦膜瘤、黑色素瘤、神經胚細胞瘤及視網膜母細胞瘤。
在一些實施例中，固態或淋巴腫瘤選自由以下組成之群：頭頸鱗狀細胞癌、乳癌、結腸直腸癌、胰臟腺癌、卵巢癌、非小細胞肺癌、***癌及黑色素瘤。該等方法適於所有階段(根據美國癌症聯合委員會(American Joint Committee on Cancer，AJCC)分階段組，包括I、II、III及IV階段)之固態或淋巴腫瘤。在一些實施例中，固態或淋巴腫瘤係：早期階段癌症、非轉移癌、原發性癌症、晚期癌症、局部晚期癌症、轉移癌、緩解之癌症、輔助設定中之癌症或前導性設定中之癌症。在一些實施例中，固態或淋巴腫瘤係局部可切除、局部不可切除或不可切除。在一些實施例中，固態或淋巴腫瘤係局部可切除或邊緣可切除。在一些實施例中，癌症對於先前療法難治。
在一些實施例中，固態或淋巴腫瘤係頭頸癌。在一些實施例中，頭頸癌係頭頸中之鱗狀細胞癌。在一些實施例中，頭頸癌係下嚥癌、喉癌、唇及口腔癌、具有隱匿性原發性之轉移性鱗狀頸癌、鼻咽癌、口咽癌、鼻旁竇及鼻腔癌或唾液腺癌症。在一些實施例中，頭頸鱗狀細胞癌係早期階段頭頸癌、非轉移性頭頸癌、晚期頭頸癌、局部晚期頭頸癌、轉移性頭頸 癌、緩解之頭頸癌、輔助設定中之頭頸癌或前導性設定中之頭頸癌。在一些實施例中，頭頸癌係在前導性設定中。在一些實施例中，感染劑、免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)及/或預處理組合物之投與係藉由注射至具有頭頸腫瘤之頭頸組織中來實施。在一些實施例中，感染劑、免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)及/或預處理組合物之投與係藉由直接注射至頭頸腫瘤中來實施。在一些實施例中，感染劑、免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)及/或預處理組合物之投與係藉由直接注射至頭頸腫瘤之轉移性位點中來實施。在一些實施例中，感染劑、免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)及/或預處理組合物之投與係藉由注射至靠近頭頸腫瘤之頭頸組織中來實施。
在一些實施例中，固態或淋巴腫瘤係乳癌。在一些實施例中，乳癌係早期階段乳癌、非轉移性乳癌、晚期乳癌、IV階段乳癌、局部晚期乳癌、轉移性乳癌、緩解之乳癌、輔助設定中之乳癌或前導性設定中之乳癌。在一些實施例中，乳癌係在前導性設定中。在一些實施例中，乳癌處於晚期階段。在一些實施例中，乳癌(其可為HER2陽性或HER2陰性)包括(例如)晚期乳癌、IV階段乳癌、局部晚期乳癌及轉移性乳癌。在一些實施例中，乳癌係三陰性乳癌。在一些實施例中，感染劑、免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)及/或預處理組合物之投與係藉由***內注射至具有***腫瘤之***組織中來實施。在一些實施例中，感染劑、免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)及/或預處理組合物之投與係藉由直接***內注射至***腫瘤中來實施。在一些實施例中，感染劑、免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)及/或預處理組合物之投與係藉由直接注射至***腫瘤之轉移位點中來實施。在一些實施例中，感染劑、免疫調節劑(包括免疫調節劑 之組合)及/或預處理組合物之投與係藉由***內注射至靠近***腫瘤之***組織中來實施。
在一些實施例中，癌症係腎細胞癌。在一些實施例中，腎細胞癌係腺癌。在一些實施例中，腎細胞癌係透明細胞腎細胞癌、乳頭狀腎細胞癌(亦稱作易染腎細胞癌)、難染性腎細胞癌、集合管腎細胞癌、顆粒性腎細胞癌、混合顆粒性腎細胞癌、腎血管肌脂瘤或梭形腎細胞癌。在一些實施例中，根據美國癌症聯合委員會(AJCC)分階段組，腎細胞癌處於I、II、III或IV階段中之任一者。在一些實施例中，感染劑、免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)及/或預處理組合物之投與係藉由腎內注射至具有腎腫瘤之腎組織中實施。在一些實施例中，感染劑、免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)及/或預處理組合物之投與係藉由直接腎內注射至腎腫瘤中實施。在一些實施例中，感染劑、免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)及/或預處理組合物之投與係藉由直接注射至腎腫瘤之轉移位點中實施。在一些實施例中，感染劑、免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)及/或預處理組合物之投與係藉由腎內注射至靠近腎腫瘤之腎組織中實施。
在一些實施例中，固態或淋巴腫瘤係***癌。在一些實施例中，***癌係腺癌。在一些實施例中，***癌係肉瘤、神經內分泌腫瘤、小細胞癌、導管癌或淋巴瘤。在一些實施例中，根據Jewett分階段系統，***癌處於四個階段A、B、C或D中之任一者。在一些實施例中，感染劑、免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)及/或預處理組合物之投與係藉由***內注射至具有***腫瘤之***組織中實施。在一些實施例中，感染劑、免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)及/或預處理組合物之投與係藉由直接***內注射至***腫瘤中實施。在一些實施例中，感染劑、 免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)及/或預處理組合物之投與係藉由直接注射至***腫瘤之轉移位點中實施。在一些實施例中，感染劑、免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)及/或預處理組合物之投與係藉由***內注射至靠近***腫瘤之***組織中實施。
在一些實施例中，固態或淋巴腫瘤係肺癌。在一些實施例中，肺癌係非小細胞肺癌(NSCLC)。NSCLC之實例包括(但不限於)大細胞癌、腺癌、神經內分泌肺腫瘤及鱗狀細胞癌。在一些實施例中，感染劑、免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)及/或預處理組合物之投與係藉由肺內注射至具有肺腫瘤之肺組織中來實施。在一些實施例中，肺癌係小細胞肺癌(SCLC)。在一些實施例中，感染劑、免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)及/或預處理組合物之投與係藉由直接肺內注射至肺腫瘤中來實施。在一些實施例中，感染劑、免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)及/或預處理組合物之投與係藉由直接注射至肺腫瘤之轉移位點中來實施。在一些實施例中，感染劑、免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)及/或預處理組合物之投與係藉由肺內注射至靠近肺腫瘤之肺組織中來實施。
在一些實施例中，固態或淋巴腫瘤係黑色素瘤。在一些實施例中，黑色素瘤係淺表擴散性黑色素瘤、惡性小痣性黑色素瘤、結節性黑色素瘤、黏膜黑色素瘤、息肉樣黑色素瘤、促結締組織增生性黑色素瘤、無黑色素之黑色素瘤、軟組織黑色素瘤或肢端小痣性黑色素瘤。在一些實施例中，根據美國癌症聯合委員會(AJCC)分階段組，黑色素瘤處於I、II、III或IV階段中之任一者。在一些實施例中，黑色素瘤係復發的。在一些實施例中，感染劑、免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)及/或預處理組合物之投與係藉由注射至具有黑色素瘤腫瘤之皮膚組織中來實施。在一些實施例 中，感染劑、免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)及/或預處理組合物之投與係藉由直接注射至黑色素瘤腫瘤中來實施。在一些實施例中，感染劑、免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)及/或預處理組合物之投與係藉由直接注射至黑色素瘤腫瘤之轉移位點中來實施。在一些實施例中，感染劑、免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)及/或預處理組合物之投與係藉由注射至靠近黑色素瘤腫瘤之肺組織中來實施。
在一些實施例中，固態或淋巴腫瘤係卵巢癌。在一些實施例中，卵巢癌係上皮卵巢癌。在一些實施例中，卵巢癌係I階段(例如，IA、IB或IC階段)、II階段(例如，HA、HB或IIC階段)、III階段(例如，IIIA、HIB、或HIC階段)或IV階段。在一些實施例中，感染劑、免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)及/或預處理組合物之投與係藉由卵巢內注射至具有卵巢腫瘤之卵巢組織中來實施。在一些實施例中，感染劑、免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)及/或預處理組合物之投與係藉由直接卵巢內注射至卵巢腫瘤中來實施。在一些實施例中，感染劑、免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)及/或預處理組合物之投與係藉由直接注射至卵巢腫瘤之轉移位點中來實施。在一些實施例中，感染劑、免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)及/或預處理組合物之投與係藉由卵巢內注射至靠近卵巢腫瘤之卵巢組織中來實施。
在一些實施例中，根據上述方法中之任一者，固態或淋巴腫瘤係胰臟癌。在一些實施例中，胰臟癌係漿液性囊性贅瘤、黏蛋白囊性贅瘤、胰管內乳頭狀黏液性腫瘤、胰臟腺癌、腺鱗狀癌、鱗狀細胞癌、戒環細胞癌、未分化癌、具有巨細胞之未分化癌、固體假乳頭狀贅瘤、壺腹癌或胰臟神經內分泌腫瘤。在一些實施例中，胰臟癌係胰臟腺癌。在一些實施例 中，感染劑、免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)及/或預處理組合物之投與係藉由胰臟內注射至具有胰臟腫瘤之胰臟組織中來實施。在一些實施例中，感染劑、免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)及/或預處理組合物之投與係藉由直接胰臟內注射至胰臟腫瘤中來實施。在一些實施例中，感染劑、免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)及/或預處理組合物之投與係藉由直接注射至胰臟腫瘤之轉移位點中來實施。在一些實施例中，感染劑、免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)及/或預處理組合物之投與係藉由胰臟內注射至靠近胰臟腫瘤之胰臟組織中來實施。
在一些實施例中，固態或淋巴腫瘤係子宮內膜癌。在一些實施例中，子宮內膜癌係腺癌、癌肉瘤、鱗狀細胞癌、未分化癌、小細胞癌或移行細胞癌。在一些實施例中，感染劑、免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)及/或預處理組合物之投與係藉由子宮內膜內注射至具有子宮內膜腫瘤之子宮內膜組織中來實施。在一些實施例中，感染劑、免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)及/或預處理組合物之投與係藉由直接子宮內膜內注射至子宮內膜腫瘤中來實施。在一些實施例中，感染劑、免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)及/或預處理組合物之投與係藉由直接注射至子宮內膜腫瘤之轉移位點中來實施。在一些實施例中，感染劑、免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)及/或預處理組合物之投與係藉由子宮內膜內注射至靠近子宮內膜腫瘤之子宮內膜組織中來實施。
在一些實施例中，根據上述方法中之任一者，固態或淋巴腫瘤係結腸直腸癌。在一些實施例中，結腸直腸癌係腺癌、胃腸類癌腫瘤、胃腸基質瘤、平滑肌肉瘤、黑色素瘤或鱗狀細胞癌。在一些實施例中，感染劑、免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)及/或預處理組合物之投與係藉由注射 至具有結腸直腸腫瘤之結腸直腸組織中來實施。在一些實施例中，感染劑、免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)及/或預處理組合物之投與係藉由直接注射至結腸直腸腫瘤中來實施。在一些實施例中，感染劑、免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)及/或預處理組合物之投與係藉由直接注射至結腸直腸腫瘤之轉移位點中來實施。在一些實施例中，感染劑、免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)及/或預處理組合物之投與係藉由注射至靠近結腸直腸腫瘤之結腸直腸組織中來實施。
在一些實施例中，根據上述方法中之任一者，固態或淋巴腫瘤係肝細胞癌(HCC)。在一些實施例中，HCC係早期階段HCC、非轉移性HCC、原發性HCC、晚期HCC、局部晚期HCC、轉移性HCC、緩解之HCC或復發之HCC。在一些實施例中，HCC係局部可切除的(即，限制於允許完全手術去除之肝之一部分的腫瘤)、局部不可切除的(即，局部腫瘤可能係不可切除的，此乃因涉及關鍵血管結構或此乃因肝受損)、或不可切除的(即，腫瘤涉及肝之所有葉及/或已經擴散以涉及其他器官(例如肺、淋巴結、骨)。在一些實施例中，根據TNM分類，HCC係I階段腫瘤(無血管浸潤之單一腫瘤)、II階段腫瘤(具有血管浸潤之單一腫瘤或皆不大於5cm之多個腫瘤)、III階段腫瘤(任一者大於5cm之多個腫瘤、或涉及門靜脈或肝靜脈之主要分支的腫瘤)、IV階段腫瘤(直接侵入除膽囊外之毗鄰器官或內臟腹膜穿孔之腫瘤)、N1腫瘤(局部淋巴結轉移)或M1腫瘤(遠端轉移)。在一些實施例中，根據AJCC(美國癌症聯合委員會)分階段準則，HCC係T1、T2、T3或T4階段HCC。在一些實施例中，HCC係肝細胞癌、HCC之纖維板層變體及混合肝細胞膽道癌中之任一者。在一些實施例中，感染劑、免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)及/或預處理組合物之投與係 藉由肝內注射至具有HCC之肝組織中來實施。在一些實施例中，感染劑、免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)及/或預處理組合物之投與係藉由直接肝內注射至HCC中來實施。在一些實施例中，感染劑、免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)及/或預處理組合物之投與係藉由直接注射至HCC之轉移位點中來實施。在一些實施例中，感染劑、免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)及/或預處理組合物之投與係藉由肝內注射至靠近HCC之組織中來實施。
在一些實施例中，根據上述方法中之任一者，固態或淋巴腫瘤係淋巴瘤。在一些實施例中，淋巴瘤係B細胞贅瘤、T細胞贅瘤及/或假定NK-細胞贅瘤。B細胞贅瘤之實例包括(但不限於)前體B細胞贅瘤(例如，前體B-淋巴母細胞性白血病/淋巴瘤)及外周B細胞贅瘤(例如，B細胞慢性淋巴球性白血病/前淋巴球性白血病/小淋巴球性淋巴瘤(小淋巴球性(SL)NHL)、淋巴漿細胞樣淋巴瘤/免疫細胞瘤、套細胞淋巴瘤、濾泡中心淋巴瘤、濾泡性淋巴瘤(例如，細胞學等級：I(小細胞)、II(混合小細胞及大細胞)、III(大細胞)及/或亞型：瀰漫性及主要小細胞類型)、低級/濾泡性非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)、中度級/濾泡性NHL、邊緣區B細胞淋巴瘤(例如，結節外(例如，MALT-型+/-單核球樣B細胞)及/或結節(例如，+/-單核球樣B細胞))、脾邊緣區淋巴瘤(例如，+/-絨毛狀淋巴球)、毛細胞白血病、漿細胞瘤/漿細胞骨髓瘤(例如，骨髓瘤及多發性骨髓瘤)、瀰漫性大B細胞淋巴瘤(例如，原發性縱膈(胸腺)B細胞淋巴瘤)、中度級瀰漫性NHL、柏基特氏淋巴瘤(Burkitt’s lymphoma)、高級B細胞淋巴瘤、柏基特樣、高等級免疫母細胞性NHL、高等級淋巴母細胞性NHL、高等級小無裂細胞NHL、巨大疾病NHL、AIDS相關之淋巴瘤及華氏巨球蛋白血症 (Waldenstrom’s macroglobulinemia))。T細胞及/或假定NK-細胞贅瘤之實例包括(但不限於)前體T細胞贅瘤(前體T-淋巴母細胞淋巴瘤/白血病)及外周T細胞及NK-細胞贅瘤(例如，T細胞慢性淋巴球性白血病/前淋巴球性白血病及大顆粒淋巴球白血病(LGL)(例如，T細胞型及/或NK-細胞型)、皮膚T細胞淋巴瘤(例如，蕈樣真菌病/塞紮裡症候群(Sezary syndrome))、未指定之原發性T細胞淋巴瘤(例如，細胞學類別(例如，中型細胞、混合中等細胞及大細胞)、大細胞、淋巴上皮細胞、亞型肝脾γ δ T細胞淋巴瘤及皮下脂膜炎性T細胞淋巴瘤)、血管免疫母細胞T細胞淋巴瘤(AILD)、血管中心淋巴瘤、腸T細胞淋巴瘤(例如，+/-腸病相關)、成人T細胞淋巴瘤/白血病(ATL)、退行性大細胞淋巴瘤(ALCL)(例如CD30+、T-及裸細胞類型)、退行性大細胞淋巴瘤及霍奇金氏淋巴瘤)。在一些實施例中，淋巴瘤係霍奇金氏病或非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)。舉例而言，霍奇金氏病可為淋巴球佔優勢、結節性硬化型、混合細胞性、淋巴球缺失及/或富含淋巴球。在一些實施例中，感染劑、免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)及/或預處理組合物之投與係藉由淋巴內注射至具有淋巴腫瘤之淋巴結中來實施。在一些實施例中，感染劑、免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)及/或預處理組合物之投與係藉由直接淋巴內注射至淋巴腫瘤中來實施。在一些實施例中，感染劑、免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)及/或預處理組合物之投與係藉由直接注射至淋巴腫瘤之轉移位點中來實施。在一些實施例中，感染劑、免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)及/或預處理組合物之投與係藉由淋巴內注射至靠近淋巴腫瘤之組織中來實施。
在一些實施例中，根據上述方法中之任一者，固態或淋巴腫瘤係間皮瘤。在一些實施例中，間皮瘤係胸膜間皮瘤、腹膜間皮瘤、心包間皮瘤 或影響覆蓋其他器官之間皮組織之間皮瘤。在一些實施例中，間皮瘤係良性間皮瘤或惡性間皮瘤。在一些實施例中，間皮瘤係上皮間皮瘤、肉瘤樣間皮瘤、二相性間皮瘤或乳頭狀間皮瘤。在一些實施例中，感染劑、免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)及/或預處理組合物之投與係藉由注射至具有間皮瘤之間皮組織中來實施。在一些實施例中，感染劑、免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)及/或預處理組合物之投與係藉由直接注射至間皮瘤中來實施。在一些實施例中，感染劑、免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)及/或預處理組合物之投與係藉由直接注射至間皮瘤之轉移位點中來實施。在一些實施例中，感染劑、免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)及/或預處理組合物之投與係藉由注射至靠近間皮瘤之間皮組織中來實施。
在一些實施例中，根據上述方法中之任一者，固態或淋巴腫瘤係腦瘤。在一些實施例中，腦瘤係原發性腦瘤或繼發性(或轉移性)腦瘤。在一些實施例中，腦瘤係神經膠質瘤(例如星細胞瘤、寡樹突神經膠細胞瘤、或室管膜瘤)、腦脊髓膜瘤、神經鞘瘤、顱咽管瘤、生殖細胞瘤或松果體區腫瘤。在一些實施例中，感染劑、免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)及/或預處理組合物之投與係藉由注射至具有腦瘤之腦組織中來實施。在一些實施例中，感染劑、免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)及/或預處理組合物之投與係藉由直接注射至腦瘤中來實施。在一些實施例中，感染劑、免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)及/或預處理組合物之投與係藉由直接注射至腦瘤之轉移位點中來實施。在一些實施例中，感染劑、免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)及/或預處理組合物之投與係藉由注射至靠近腦瘤之腦組織中來實施。
在一些實施例中，根據上述方法中之任一者，固態或淋巴腫瘤係膽 囊及膽管腫瘤。在一些實施例中，膽囊及膽管腫瘤係癌、腺癌、膽道癌、乳頭狀腫瘤、小細胞(神經內分泌)癌、腺鱗狀癌或橫紋肌肉瘤。在一些實施例中，膽囊及膽管腫瘤係膽囊癌、肝外膽管癌或肝內膽管癌。在一些實施例中，感染劑、免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)及/或預處理組合物之投與係藉由注射至具有膽囊及膽管腫瘤之膽囊或膽管組織中來實施。在一些實施例中，感染劑、免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)及/或預處理組合物之投與係藉由直接注射至膽囊及膽管腫瘤中來實施。在一些實施例中，感染劑、免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)及/或預處理組合物之投與係藉由直接注射至膽囊及膽管腫瘤之轉移位點中來實施。在一些實施例中，感染劑、免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)及/或預處理組合物之投與係藉由注射至靠近膽囊及膽管腫瘤之膽囊或膽管組織中來實施。
在一些實施例中，根據上述方法中之任一者，固態或淋巴腫瘤係軟組織肉瘤。在一些實施例中，軟組織肉瘤係成人纖維肉瘤、肺泡軟部肉肉瘤、血管肉瘤、明亮細胞肉瘤、促結締組織增生性小圓細胞瘤、上皮樣肉瘤、纖維黏液樣肉瘤、脂肪肉瘤、惡性間葉瘤、惡性周圍神經鞘瘤(例如，神經纖維肉瘤、惡性神經鞘瘤或神經性肉瘤)、黏液性纖維肉瘤、滑膜肉瘤、未分化多形性肉瘤、皮膚纖維肉瘤凸起、纖維瘤病、血管內皮瘤、嬰兒型纖維肉瘤、單發性纖維瘤、彈力纖維瘤、纖維瘤、纖維組織細胞瘤、血管球腫瘤、顆粒細胞腫瘤、血管瘤、蟄伏脂瘤、脂肪瘤、平滑肌瘤、平滑肌瘤、脂胚細胞瘤、***瘤、黏液瘤、神經纖維瘤、神經瘤、PEComa、橫紋肌瘤、神經鞘瘤、腱鞘滑膜巨細胞瘤、梭形細胞腫瘤或軟組織之腫瘤樣病況。在一些實施例中，感染劑、免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)及/或預處理組合物之投與係藉由注射至具有軟組織肉瘤之組 織中來實施。在一些實施例中，感染劑、免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)及/或預處理組合物之投與係藉由直接注射至軟組織肉瘤中來實施。在一些實施例中，感染劑、免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)及/或預處理組合物之投與係藉由直接注射至軟組織肉瘤之轉移位點中來實施。在一些實施例中，感染劑、免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)及/或預處理組合物之投與係藉由注射至靠近軟組織肉瘤之組織中來實施。
在一些實施例中，根據上述方法中之任一者，固態或淋巴腫瘤係子宮腫瘤。在一些實施例中，子宮腫瘤係子宮癌、子宮肉瘤(例如子宮內膜基質肉瘤、未分化肉瘤或子宮平滑肌肉瘤)或子宮癌肉瘤(例如惡性混合型中胚層腫瘤或惡性混合型穆勒氏腫瘤)。在一些實施例中，子宮腫瘤係類纖維瘤腫瘤，例如平滑肌瘤、腺纖維瘤或腺肌瘤。在一些實施例中，感染劑、免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)及/或預處理組合物之投與係藉由子宮內注射至具有子宮腫瘤之子宮組織中來實施。在一些實施例中，感染劑、免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)及/或預處理組合物之投與係藉由直接子宮內注射至子宮腫瘤中來實施。在一些實施例中，感染劑、免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)及/或預處理組合物之投與係藉由直接注射至子宮腫瘤之轉移位點中來實施。在一些實施例中，感染劑、免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)及/或預處理組合物之投與係藉由子宮內注射至靠近子宮腫瘤之子宮組織中來實施。
在一些實施例中，根據上述方法中之任一者，固態或淋巴腫瘤係子宮頸腫瘤。在一些實施例中，子宮頸腫瘤係鱗狀細胞癌、腺癌或腺鱗狀癌。在一些實施例中，感染劑、免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)及/或預處理組合物之投與係藉由子宮頸內注射至具有子宮頸腫瘤之子宮頸組織 中來實施。在一些實施例中，感染劑、免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)及/或預處理組合物之投與係藉由直接子宮頸內注射至子宮頸腫瘤中來實施。在一些實施例中，感染劑、免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)及/或預處理組合物之投與係藉由直接注射至子宮頸腫瘤之轉移位點中來實施。在一些實施例中，感染劑、免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)及/或預處理組合物之投與係藉由子宮頸內注射至靠近子宮頸腫瘤之子宮頸組織中來實施。
在一些實施例中，根據上述方法中之任一者，固態或淋巴腫瘤係甲狀腺腫瘤。在一些實施例中，甲狀腺腫瘤係未分化甲狀腺腫瘤(例如乳頭狀癌、濾泡癌或許特萊氏細胞癌(Hurthle cell carcinoma))、髓質甲狀腺癌、退行性癌、甲狀腺淋巴瘤、甲狀腺肉瘤或副甲狀腺腫瘤。在一些實施例中，感染劑、免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)及/或預處理組合物之投與係藉由注射至具有甲狀腺腫瘤之甲狀腺組織中來實施。在一些實施例中，感染劑、免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)及/或預處理組合物之投與係藉由直接注射至甲狀腺腫瘤中來實施。在一些實施例中，感染劑、免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)及/或預處理組合物之投與係藉由直接注射至甲狀腺腫瘤之轉移位點中來實施。在一些實施例中，感染劑、免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)及/或預處理組合物之投與係藉由注射至靠近甲狀腺腫瘤之甲狀腺組織中來實施。
在一些實施例中，根據上述方法中之任一者，固態或淋巴腫瘤係鼻咽癌。在一些實施例中，鼻咽癌係角化鱗狀細胞癌、非角化分化癌或未分化癌(例如，淋巴上皮瘤)、口腔及口咽腫瘤、鼻腔及鼻旁竇腫瘤或唾液腺腫瘤。在一些實施例中，感染劑、免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)及/ 或預處理組合物之投與係藉由注射至具有鼻咽癌之鼻咽組織中來實施。在一些實施例中，感染劑、免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)及/或預處理組合物之投與係藉由直接注射至鼻咽癌中來實施。在一些實施例中，感染劑、免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)及/或預處理組合物之投與係藉由直接注射至鼻咽癌之轉移位點中來實施。在一些實施例中，感染劑、免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)及/或預處理組合物之投與係藉由注射至靠近鼻咽癌之鼻咽組織中來實施。
在一些實施例中，個體係人類個體。在一些實施例中，針對固態或淋巴腫瘤進行治療之個體被鑑別為患有一或多種本文所述病況。由熟練醫師之如本文所述病況之鑑別在業內常見(例如經由血液檢查、X射線、音聲、CT掃描、PET掃描、PET/CT掃描、MRI掃描、PET/MRI掃描、核醫學放射性同位素掃描、內視鏡檢法、生檢、血管造影、CT-血管造影等)，且亦可因(例如)腫瘤生長、出血、潰瘍、疼痛、擴大之淋巴結、咳嗽、黃疸、腫脹、體重減輕、惡病質、出汗、貧血、副腫瘤現象、血栓形成等由個體或其他人懷疑。在一些實施例中，基於熟習此項技術者所瞭解之多種風險因素及/或診斷方法中之任一或多者(包括但不限於基因剖析、家族史、病歷(例如，相關病況之外觀及病毒感染史)、生活方式或習慣)選擇個體用於本文所述治療方法中之任一者。
在一些實施例中，基於一或多個生物標記(包括但不限於免疫檢查點分子、共刺激分子、細胞介素、趨化介素、其他免疫相關分子及HLA-II類抗原)之表現程度選自個體用於本文所述治療方法中之任一者。在一些實施例中，基於一或多種抑制性免疫檢查點分子(包括但不限於CTLA-4、PD-1、PD-L1、PD-L2、TIM3、B7-H3、B7-H4、LAG-3、KIR、2B4及 其配體)之表現程度(例如，高表現程度)選擇個體用於治療。在一些實施例中，基於一或多種刺激性免疫檢查點分子或共刺激分子(包括但不限於OX40、4-1BB、CD40及其配體)之表現程度(例如，低表現程度)選擇個體用於治療方法。在一些實施例中，基於腫瘤(例如腫瘤內之腫瘤細胞及/或免疫細胞)中之一或多個選自由以下組成之群之生物標記之表現程度(例如，高表現程度)選擇個體用於治療：PD-1、PD-L1及PD-L2。在一些實施例中，基於一或多個選自由以下組成之群之生物標記之表現程度(例如，高表現程度)選擇個體用於治療：腫瘤源成熟樹突細胞中之CD80、CD83、CD86及HLA-II類抗原。在一些實施例中，基於一或多個選自由以下組成之群之生物標記之表現程度(例如，高表現程度)選擇個體用於治療：CXCL9、CXCL10、CXCL11、CCR7、CCL5、CCL8、SOD2、MT2A、OASL、GBP1、HES4、MTIB、MTIE、MTIG、MTIH、GADD45A、LAMP3及miR-155。
在一些實施例中，個體具有一或多種抑制性免疫檢查點分子之高表現。在一些實施例中，個體具有一或多種刺激性免疫檢查點分子及/或共刺激分子之低表現。在一些實施例中，個體在腫瘤(例如腫瘤內之腫瘤細胞及/或免疫細胞)中具有一或多個選自由以下組成之群之生物標記之高表現：PD-1、PD-L1及PD-L2。在一些實施例中，PD-L1及PD-L2可互換用作用於選擇患者之生物標記或用作用於抑制PD-1之配體。在一些實施例中，個體具有一或多個選自由以下組成之群之生物標記之高表現：腫瘤源成熟樹突細胞中之CD80、CD83、CD86及HLA-II類抗原。實例性HLA-II類抗原包括(但不限於)在固態或淋巴腫瘤中表現之腫瘤特異性抗原及腫瘤相關性抗原，例如對於***腫瘤為PSA、對於HCC為α胎兒蛋白、對於 腺癌為CEA。在一些實施例中，個體具有一或多個選自由以下組成之群之生物標記之高表現：CXCL9、CXCL10、CXCL11、CCR7、CCL5、CCL8、SOD2、MT2A、OASL、GBP1、HES4、MTIB、MTIE、MTIG、MTIH、GADD45A、LAMP3及miR-155。在一些實施例中，該方法進一步包含評價個體中之一或多種生物標記之表現程度。在一些實施例中，基於一或多個生物標記之表現程度調節該方法。
可於核酸水準(例如，基因拷貝數、DNA甲基化或染色質重建模水準、mRNA水準)、或蛋白質水準(包括蛋白質之轉譯後修飾水準，例如對應於生物標記之蛋白質之磷酸化水準)下量測生物標記之表現程度。可使用業內已知之方法中之任一者測定表現程度。舉例而言，測定生物標記之mRNA表現程度之適宜方法包括(但不限於)反轉錄聚合酶鏈式反應(RT-PCR)、定量PCR、微陣列及RNA測序。舉例而言，測定生物標記之蛋白質表現程度之適宜方法包括(但不限於)免疫組織化學、西方墨點法及質譜方法。
可使用個體之新鮮或存檔之試樣(包括但不限於固態或淋巴腫瘤組織、毗鄰固態或淋巴腫瘤組織之正常組織、固態或淋巴腫瘤組織遠端之正常組織或末梢血淋巴球)測定生物標記之表現程度。在一些實施例中，試樣係固態或淋巴腫瘤組織。在一些實施例中，試樣係含有腫瘤細胞之生檢，例如腫瘤細胞之細針抽吸。在一些實施例中，在分析之前，將生檢之細胞離心成團塊，固定並包埋於石蠟中。在一些實施例中，在分析之前，急凍生檢之細胞。在一些實施例中，試樣係體液，例如血樣或血漿試樣。在一些實施例中，試樣包含循環轉移癌細胞。在一些實施例中，藉由自血液分選循環腫瘤細胞(CTC)獲得試樣。
在一些實施例中，使用個體之試樣測定個體之特異性細胞群體中之一或多個生物標記的表現程度。在一些實施例中，試樣包含分離自或源自固態或淋巴腫瘤之免疫細胞。生物標記表現測定有關之實例性免疫細胞包括(但不限於)樹突細胞(例如不成熟或成熟樹突細胞)、B細胞、T細胞(例如Th1細胞、Th2細胞、Th17細胞、NK T細胞、Treg細胞等)、天然殺傷(NK)細胞、單核球、巨噬細胞、嗜中性球及其組合。在一些實施例中，試樣包含腫瘤浸潤淋巴球。在一些實施例中，試樣包含腫瘤源成熟樹突細胞。特異性細胞群體可基於細胞群體中之特異性細胞表面分子之表現使用業內已知之方法(例如流式細胞術方法)自試樣(例如腫瘤樣品(例如，腫瘤生檢或切除術)或體液(例如，血樣))分離。
與業內已知之生物標記之標準表現程度(例如，標準化測試中臨床上接受之正常程度)相比或與對照試樣中之生物標記之表現程度相比，生物標記之高或低表現程度測定。在一些實施例中，將個體中生物標記之表現程度與多個對照試樣中生物標記之表現程度進行比較。在一些實施例中，使用多個對照試樣以生成統計，其用於將具有固態或淋巴腫瘤之個體中生物標記之含量進行分類。對照試樣可自與非對照試樣相同來源(例如，個體及組織)及方法獲得。在一些實施例中，對照試樣係自不同個體(例如無固態或淋巴腫瘤之個體；具有良性或未及晚期形式之固態或淋巴腫瘤之個體；及/或共有類似族群、年齡及性別之個體)獲得。在一些實施例中，對照試樣係經測定為適當對照之經培養之組織或細胞。在其中試樣係固態或淋巴腫瘤組織試樣之一些實施例中，對照試樣可為來自同一個體之非癌性試樣。在一些實施例中，使用多個對照試樣(例如來自不同個體)以測定特定組織、器官或細胞群體中之生物標記之含量範圍。在一些實施例中，根 據評分系統(例如基於免疫組織化學之評分系統)，將個體之試樣中之生物標記之表現程度分類為高、中等或低。在一些實施例中，與對照試樣相比，生物標記之高表現係個體之試樣中之生物標記之表現程度之至少以下中之約任一者：1.5倍、2倍、3倍、5倍、10倍、20倍、50倍、100倍、200倍、500倍、1000倍或更多。在一些實施例中，與對照試樣相比，生物標記之低表現係個體之試樣中之生物標記之表現程度之不超過以下中之約任一者：90%、80%、70%、60%、50%、40%、30%、20%、10%、5%、1%、0.1%、0.01%、0.001%或更少。在一些實施例中，(例如)使用統計模型組合兩個或更多個生物標記之表現程度以測定表現評分，用於選擇或推薦個體用於治療。
藉由膀胱內投與治療膀胱癌之方法
本申請案之一個態樣係關於膀胱癌之治療。在此背景下，感染劑及免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)之局部投與可涵蓋一種或兩種組份之膀胱內投與。本文所述方法中之任一者皆可用於抑制膀胱腫瘤生長、抑制膀胱腫瘤轉移、延長具有膀胱癌之個體之存活(例如無疾病存活)、引起具有膀胱癌之個體之疾病緩解、及/或改善具有膀胱癌之個體之生活品質。
在一些實施例中，提供治療個體之膀胱癌之方法，其包含：a)膀胱內投與有效量之感染劑；及b)膀胱內投與有效量之免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)。在一些實施例中，感染劑係病毒，例如選自由以下組成之群之病毒：腺病毒、單純疱疹病毒、牛痘病毒、腮腺炎病毒、新城雞瘟病毒、脊髓灰質炎病毒、麻疹病毒、塞尼卡谷病毒、柯薩奇病毒、裡奧病毒、水疱性口炎病毒、馬拉巴及棒狀病毒及小病毒。在一些實施例中，感染劑係細菌，例如分枝桿菌及其衍生物(例如，卡介苗(「BCG」)、或分 枝桿菌細胞壁-DNA複合物(「MCNA」或「MCC」，例如UROCIDINTM))或單核球增多性李氏菌。在一些實施例中，感染劑係野生型感染劑。在一些實施例中，感染劑經遣傳修飾。在一些實施例中，感染劑經減毒(例如經由多次傳代、不活化或遺傳修飾)。在一些實施例中，免疫調節劑係免疫檢查點抑制劑。在一些實施例中，免疫調節劑係免疫刺激劑。在一些實施例中，方法包含局部投與免疫調節劑之組合，其包含一或多種免疫檢查點抑制劑及/或一或多種免疫刺激劑(例如至少兩種免疫檢查點抑制劑、至少兩種免疫刺激劑或至少一種免疫檢查點抑制劑及至少一種免疫刺激劑之組合)。在一些實施例中，每週投與感染劑。在一些實施例中，每週投與免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)。在一些實施例中，該方法進一步包含藉由膀胱內投與除外之投與途徑投與感染劑及/或免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)。
在一些實施例中，提供治療個體之膀胱癌之方法，其包含：a)膀胱內投與有效量之溶瘤病毒(例如溶瘤腺病毒)；及b)膀胱內投與有效量之免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)。在一些實施例中，溶瘤病毒係野生型溶瘤病毒。在一些實施例中，溶瘤病毒經遺傳修飾。在一些實施例中，溶瘤病毒經減毒(例如經由多次傳代、不活化或遺傳修飾)。在一些實施例中，溶瘤病毒勝任複製。在一些實施例中，溶瘤病毒優先在癌細胞中複製。在一些實施例中，免疫調節劑係免疫檢查點抑制劑。在一些實施例中，免疫調節劑係免疫刺激劑。在一些實施例中，方法包含局部投與免疫調節劑之組合，其包含一或多種免疫檢查點抑制劑及/或一或多種免疫刺激劑(例如至少兩種免疫檢查點抑制劑、至少兩種免疫刺激劑或至少一種免疫檢查點抑制劑及至少一種免疫刺激劑之組合)。在一些實施例中，每 週投與溶瘤病毒。在一些實施例中，每週投與免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)。在一些實施例中，該方法進一步包含藉由膀胱內投與除外之投與途徑投與溶瘤病毒及/或免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)。
在一些實施例中，提供治療個體之膀胱癌之方法，其包含：a)膀胱內投與有效量之包含病毒載體之溶瘤病毒(例如溶瘤腺病毒)，該病毒載體包含可操作連接至病毒複製所必需之病毒基因之腫瘤細胞特異性啟動子；及b)膀胱內投與有效量之免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)。在一些實施例中，免疫調節劑係免疫檢查點抑制劑。在一些實施例中，免疫調節劑係免疫刺激劑。在一些實施例中，方法包含局部投與免疫調節劑之組合，其包含一或多種免疫檢查點抑制劑及/或一或多種免疫刺激劑(例如至少兩種免疫檢查點抑制劑、至少兩種免疫刺激劑或至少一種免疫檢查點抑制劑及至少一種免疫刺激劑之組合)。在一些實施例中，腫瘤特異性啟動子係E2F-1啟動子，例如人類E2F-1啟動子或包含SEQ ID NO：1中所述之核苷酸序列之E2F-1啟動子。在一些實施例中，病毒複製所必需之病毒基因選自由以下組成之群：E1A、E1B及E4。在一些實施例中，每週投與溶瘤病毒。在一些實施例中，每週投與免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)。在一些實施例中，該方法進一步包含藉由膀胱內投與除外之投與途徑投與溶瘤病毒及/或免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)。
在一些實施例中，提供治療個體之膀胱癌之方法，其包含：a)膀胱內投與有效量之包含病毒載體之溶瘤病毒(例如溶瘤腺病毒)，該病毒載體包含可操作連接至病毒複製所必需之病毒基因之腫瘤細胞特異性啟動子及編碼可操作連接至病毒啟動子之細胞介素之核酸；及b)膀胱內投與有效量之免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)。在一些實施例中，免疫調節劑 係免疫檢查點抑制劑。在一些實施例中，免疫調節劑係免疫刺激劑。在一些實施例中，方法包含局部投與免疫調節劑之組合，其包含一或多種免疫檢查點抑制劑及/或一或多種免疫刺激劑(例如至少兩種免疫檢查點抑制劑、至少兩種免疫刺激劑或至少一種免疫檢查點抑制劑及至少一種免疫刺激劑之組合)。在一些實施例中，腫瘤特異性啟動子係E2F-1啟動子，例如人類E2F-1啟動子或包含SEQ ID NO：1中所述之核苷酸序列之E2F-1啟動子。在一些實施例中，病毒複製所必需之病毒基因選自由以下組成之群：E1A、E1B及E4。在一些實施例中，可操作連接至編碼細胞介素之核酸之病毒啟動子係E3啟動子。在一些實施例中，細胞介素係GM-CSF。在一些實施例中，每週投與溶瘤病毒。在一些實施例中，每週投與免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)。在一些實施例中，該方法進一步包含藉由膀胱內投與除外之投與途徑投與溶瘤病毒及/或免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)。
在一些實施例中，提供治療個體之膀胱癌之方法，其包含：a)膀胱內投與有效量之腺病毒血清型5，其中天然腺病毒之內源性E1a啟動子及E3 19kD編碼區經人類E2F-1啟動子及編碼免疫相關分子(例如細胞介素或趨化介素)之核酸置換；及b)膀胱內投與有效量之免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)。在一些實施例中，免疫調節劑係免疫檢查點抑制劑。在一些實施例中，免疫調節劑係免疫刺激劑。在一些實施例中，方法包含局部投與免疫調節劑之組合，其包含一或多種免疫檢查點抑制劑及/或一或多種免疫刺激劑(例如至少兩種免疫檢查點抑制劑、至少兩種免疫刺激劑或至少一種免疫檢查點抑制劑及至少一種免疫刺激劑之組合)。在一些實施例中，腫瘤特異性啟動子係人類E2F-1啟動子或包含SEQ ID NO：1中所述 之核苷酸序列之E2F-1啟動子。在一些實施例中，每週投與腺病毒。在一些實施例中，每週投與免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)。在一些實施例中，該方法進一步包含藉由膀胱內投與除外之投與途徑投與腺病毒及/或免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)。
在一些實施例中，提供治療個體之膀胱癌之方法，其包含：a)膀胱內投與有效量之CG0070；及b)膀胱內投與有效量之免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)。在一些實施例中，免疫調節劑係免疫檢查點抑制劑。在一些實施例中，免疫調節劑係免疫刺激劑。在一些實施例中，方法包含局部投與免疫調節劑之組合，其包含一或多種免疫檢查點抑制劑及/或一或多種免疫刺激劑(例如至少兩種免疫檢查點抑制劑、至少兩種免疫刺激劑或至少一種免疫檢查點抑制劑及至少一種免疫刺激劑之組合)。在一些實施例中，每週投與CG0070。在一些實施例中，每週投與免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)。在一些實施例中，該方法進一步包含藉由膀胱內投與除外之投與途徑投與CG0070及/或免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)。
本文所述方法可用於治療多種膀胱癌病況。在一些實施例中，膀胱癌係低級膀胱癌。在一些實施例中，膀胱癌係高級膀胱癌。在一些實施例中，膀胱癌係肌肉侵襲性(例如，T2、T3或T4)。在一些實施例中，膀胱癌係非侵襲性(例如，Ta、T1 Cis、Cis與Ta及/或T1)。
在一些實施例中，膀胱癌係移行細胞癌或尿路上皮癌(例如轉移性尿路上皮癌)，包括但不限於乳頭狀腫瘤及扁平癌。在一些實施例中，膀胱癌係轉移性尿路上皮癌。在一些實施例中，膀胱癌係膀胱之尿路上皮癌。在一些實施例中，膀胱癌係輸尿管之尿路上皮癌。在一些實施例中，膀胱 癌係尿道之尿路上皮癌。在一些實施例中，膀胱癌係腎盂之尿路上皮癌。
在一些實施例中，膀胱癌係鱗狀細胞癌。在一些實施例中，膀胱癌係非鱗狀細胞癌。在一些實施例中，膀胱癌係腺癌。在一些實施例中，膀胱癌係小細胞癌。
在一些實施例中，膀胱癌係早期階段膀胱癌、非轉移性膀胱癌、非侵襲性膀胱癌、非肌肉侵襲性膀胱癌、原發性膀胱癌、晚期膀胱癌、局部晚期膀胱癌(例如不可切除之局部晚期膀胱癌)、轉移性膀胱癌或緩解之膀胱癌。在一些實施例中，膀胱癌係局部可切除、局部不可切除或不可切除的。在一些實施例中，膀胱癌係對於標準膀胱內輸注(膀胱內)療法難治之高級非肌肉侵襲性癌症。
本文提供之方法可用於治療經診斷患有或懷疑患有膀胱癌之個體(例如，人類)。在一些實施例中，個體經歷腫瘤切除術。在一些實施例中，個體拒絕手術。在一些實施例中，個體係醫學上不可操作的。在一些實施例中，個體處於Ta、Tis、T1、T2、T3a、T3b或T4膀胱癌之臨床階段。在一些實施例中，個體處於Tis、CIS、Ta或T1之臨床階段。
在一些實施例中，個體先前針對膀胱癌進行治療(亦稱為「先前療法」)。在一些實施例中，個體先前經膀胱癌之標準療法治療。在一些實施例中，先前標準療法係利用BCG治療。在一些實施例中，先前標準療法係利用絲裂黴素C治療。在一些實施例中，先前標準療法係利用干擾素(例如干擾素-α)治療。在一些實施例中，個體具有緩解之膀胱癌、進行性膀胱癌或復發之膀胱癌。在一些實施例中，個體對利用其他試劑(例如基於鉑之試劑、BCG、絲裂黴素C及/或干擾素)之膀胱癌治療具有抗性。在一些實施例中，個體最初對利用其他試劑(例如基於鉑之試劑或BCG)之膀胱 癌治療有反應，但在治療後進展。
在一些實施例中，在先前療法(例如先前標準療法，例如利用BCG之治療)之後，個體具有復發之膀胱癌(例如處於Ta、Tis、T1、T2、T3a、T3b或T4之臨床階段之膀胱癌)。舉例而言，個體可最初對利用先前療法之治療有反應，但在停止先前療法後約2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、24、36、48或60個月中之約任一者後發生膀胱癌。
本文所述免疫調節劑(包括免疫刺激劑及免疫檢查點抑制劑)中之任一者皆可用於組合療法中用於膀胱內投與。免疫調節劑可為業內已知之分子模態中之任一者，包括但不限於適配體、mRNA、siRNA、微小RNA、shRNA、肽、抗體、抗運載蛋白、球形核酸、TALEN、鋅指核酸酶、CRISPR/Cas9及小分子。
在一些實施例中，免疫調節劑係免疫刺激劑。在一些實施例中，免疫刺激劑係免疫刺激分子之天然或經改造之配體，包括(例如)OX40之配體(例如，OX40L)、CD-28之配體(例如，CD80、CD86)、ICOS之配體(例如，B7RP1)、4-1BB之配體(例如，4-1BBL、Ultra4-1BBL)、CD27之配體(例如，CD70)、CD40之配體(例如，CD40L)及TCR之配體(例如，MHC I類或II類分子、IMCgp100)。在一些實施例中，免疫刺激劑係選自由以下組成之群之抗體：抗CD28(例如，TGN-1412)、抗OX40(例如，MEDI6469、MEDI-0562)、抗ICOS(例如，MEDI-570)、抗GITR(例如，TRX518、INBRX-110、NOV-120301)、抗41-BB(例如，BMS-663513、PF-05082566)、抗CD27(例如，BION-1402、瓦利路單抗及hCD27.15)、抗CD40(例如，CP870,893、BI-655064、BMS-986090、APX005、APX005M)、抗CD3(例如，布利莫單抗、莫羅單抗)及抗 HVEM。在一些實施例中，抗體係激動性抗體。在一些實施例中，抗體係單株抗體。在一些實施例中，抗體係選自由以下組成之群之抗原結合片段：全長抗體之Fab、Fab’、F(ab’)2、Fv、scFv及其他抗原結合子序列。在一些實施例中，抗體係人類、人類化或嵌合抗體。在一些實施例中，抗體係雙特異性抗體、多特異性抗體、單一結構域抗體、包含抗體部分之融合蛋白、或其任何其他功能變體或衍生物。
在一些實施例中，免疫調節劑係免疫檢查點抑制劑。在一些實施例中，免疫檢查點抑制劑係抑制性免疫檢查點分子之天然或經改造之配體，包括(例如)CTLA-4之配體(例如，B7.1、B7.2)、TIM3之配體(例如，半乳凝素-9)、A2a受體之配體(例如，腺苷、Regadenoson)、LAG3之配體(例如，MHC I類或MHC II類分子)、BTLA之配體(例如，HVEM、B7-H4)、KIR之配體(例如，MHC I類或MHC II類分子)、PD-1之配體(例如，PD-L1、PD-L2)、IDO之配體(例如，NKTR-218、吲哚西莫、NLG919)及CD47之配體(例如，SIRP-α受體)。在一些實施例中，免疫檢查點抑制劑係靶向抑制性免疫檢查點蛋白之抗體。在一些實施例中，免疫調節劑係選自由以下組成之群之抗體：抗CTLA-4(例如，伊匹單抗、曲美目單抗、KAHR-102)、抗TIM3(例如，F38-2E2、ENUM005)、抗LAG3(例如，BMS-986016、IMP701、IMP321、C9B7W)、抗KIR(例如，利利單抗及IPH2101)、抗PD-1(例如，尼沃魯單抗、匹利珠單抗、派姆單抗、BMS-936559、阿替珠單抗、蘭布魯珠單抗、MK-3475、AMP-224、AMP-514、STI-A1110、TSR-042)、抗PD-L1(例如，KY-1003(EP20120194977)、MCLA-145、RG7446、BMS-936559、MEDI-4736、MSB0010718C、AUR-012、STI-A1010、PCT/US2001/020964、 MPDL3280A、AMP-224、達匹珠單抗(CDP-7657)、MEDI-4920)、抗CD73(例如，AR-42(OSU-HDAC42、HDAC-42、AR42、AR 42、OSU-HDAC 42、OSU-HDAC-42、NSC D736012、HDAC-42、HDAC 42、HDAC42、NSCD736012、NSC-D736012)、MEDI-9447)、抗B7-H3(例如，MGA271、DS-5573a、8H9)、抗CD47(例如，CC-90002、TTI-621、VLST-007)、抗BTLA、抗VISTA、抗A2aR、抗B7-1、抗B7-H4、抗CD52(例如阿倫單抗)、抗IL-10、抗IL-35及抗TGF-β(例如夫蘇木單抗)。在一些實施例中，抗體係拮抗性抗體。在一些實施例中，抗體係單株抗體。在一些實施例中，抗體係單株抗體。在一些實施例中，抗體係選自由以下組成之群之抗原結合片段：全長抗體之Fab、Fab’、F(ab’)2、Fv、scFv及其他抗原結合子序列。在一些實施例中，抗體係人類、人類化或嵌合抗體。在一些實施例中，抗體係雙特異性抗體、多特異性抗體、單一結構域抗體、包含抗體部分之融合蛋白、或其任何其他功能變體或衍生物。
在一些實施例中，該方法包含膀胱內投與單一免疫調節劑。在一些實施例中，免疫調節劑係免疫檢查點抑制劑。在一些實施例中，免疫調節劑係免疫刺激劑。
在一些實施例中，該方法包含膀胱內投與至少兩種(例如2、3、4、5、6或更多中之任一者)免疫調節劑。在一些實施例中，全部或部分至少兩種免疫調節劑係在(例如)單一組合物中同時投與。在一些實施例中，全部或部分至少兩種免疫調節劑係依序投與。在一些實施例中，該方法包含膀胱內投與包含免疫檢查點抑制劑及免疫刺激劑之免疫調節劑之組合。在一些實施例中，該方法包含膀胱內投與包含兩種或更多種(例如2、3、4、 5、6或更多中之任一者)檢查點抑制劑之免疫調節劑之組合。在一些實施例中，該方法包含膀胱內投與包含兩種或更多種(例如2、3、4、5、6或更多中之任一者)免疫刺激劑之免疫調節劑之組合。在一些實施例中，該方法包含膀胱內投與包含任一數目(例如1、2、3、4、5、6或更多中之任一者)之免疫檢查點抑制劑及任一數目(例如2、3、4、5、6或更多中之任一者)之免疫刺激劑之免疫調節劑之組合。舉例而言，在一些實施例中，該方法包含：a)向該腫瘤位點膀胱內投與有效量之感染劑(例如病毒，例如溶瘤病毒)；及b)向個體膀胱內投與有效量之第一免疫調節劑(例如免疫檢查點抑制劑)；及c)向該腫瘤位點膀胱內投與有效量之第二免疫調節劑(例如免疫刺激劑)。在一些實施例中，該方法包含膀胱內投與CTLA-4抑制劑(例如抗CTLA-4抗體(例如伊匹單抗)、或經改造之脂質運載蛋白(例如特異性識別CTLA-4之抗運載蛋白))及CD40激動劑(例如激動性抗CD40抗體，例如APX005M)。在一些實施例中，該方法包含膀胱內投與CTLA-4抑制劑(例如抗CTLA-4抗體(例如伊匹單抗)、或經改造之脂質運載蛋白(例如特異性識別CTLA-4之抗運載蛋白))及4-1BB激動劑(例如激動性抗4-1BB抗體，例如PF-05082566)。
因此，例如，在一些實施例中，提供治療個體之膀胱癌之方法，其包含：a)膀胱內投與有效量之感染劑；及b)膀胱內投與有效量之CTLA-4之抑制劑(例如抗CTLA-4抗體(例如伊匹單抗)或經改造之脂質運載蛋白(例如特異性識別CTLA-4之抗運載蛋白))。在一些實施例中，感染劑係非溶瘤病毒。在一些實施例中，感染劑係溶瘤病毒。在一些實施例中，感染劑係野生型感染劑。在一些實施例中，感染劑經遺傳修飾。在一些實施例中，感染劑經減毒(例如經由多次傳代、不活化或遺傳修飾)。在一些實施 例中，CTLA-4之抑制劑係抗CTLA-4抗體(例如伊匹單抗)。在一些實施例中，CTLA-4之抑制劑係經改造之脂質運載蛋白，例如特異性識別CTLA-4之抗運載蛋白。在一些實施例中，該方法進一步包含膀胱內投與第二免疫調節劑，例如免疫刺激劑(例如，CD40活化劑或4-1BB活化劑)。在一些實施例中，每週投與感染劑。在一些實施例中，每週投與CTLA-4之抑制劑。在一些實施例中，依序投與感染劑及CTLA-4之抑制劑。在一些實施例中，在投與CTLA-4之抑制劑之前(例如在即將投與之前)投與感染劑。在一些實施例中，在投與CTLA-4之抑制劑之後(例如在投與後立刻)投與感染劑。在一些實施例中，同時投與感染劑及CTLA-4之抑制劑(例如在單一組合物中)。在一些實施例中，該方法進一步包含藉由膀胱內投與除外之投與途徑投與感染劑及/或CTLA-4之抑制劑。
舉例而言，在一些實施例中，提供治療個體之膀胱癌之方法，其包含：a)膀胱內投與有效量之溶瘤病毒(例如溶瘤腺病毒)；及b)膀胱內投與有效量之CTLA-4之抑制劑(例如抗CTLA-4抗體(例如伊匹單抗)或經改造之脂質運載蛋白(例如特異性識別CTLA-4之抗運載蛋白))。
在一些實施例中，提供治療個體之膀胱癌之方法，其包含：a)膀胱內投與有效量之包含病毒載體之溶瘤病毒(例如溶瘤腺病毒)，該病毒載體包含可操作連接至病毒複製所必需之病毒基因之腫瘤細胞特異性啟動子；及b)膀胱內投與有效量之CTLA-4之抑制劑(例如抗CTLA-4抗體(例如伊匹單抗)或經改造之脂質運載蛋白(例如特異性識別CTLA-4之抗運載蛋白))。在一些實施例中，腫瘤特異性啟動子係E2F-1啟動子，例如人類E2F-1啟動子或包含SEQ ID NO：1中所述之核苷酸序列之E2F-1啟動子。在一些實施例中，病毒複製所必需之病毒基因選自由以下組成之群： E1A、E1B及E4。
在一些實施例中，提供治療個體之膀胱癌之方法，其包含：a)膀胱內投與有效量之包含病毒載體之溶瘤病毒(例如溶瘤腺病毒)，該病毒載體包含可操作連接至病毒複製所必需之病毒基因之腫瘤細胞特異性啟動子及編碼可操作連接至病毒啟動子之免疫相關分子(例如細胞介素或趨化介素)之核酸；及b)膀胱內投與有效量之CTLA-4之抑制劑(例如抗CTLA-4抗體(例如伊匹單抗)或經改造之脂質運載蛋白(例如特異性識別CTLA-4之抗運載蛋白))。在一些實施例中，腫瘤特異性啟動子係E2F-1啟動子，例如人類E2F-1啟動子或包含SEQ ID NO：1中所述之核苷酸序列之E2F-1啟動子。在一些實施例中，病毒複製所必需之病毒基因選自由以下組成之群：E1A、E1B及E4。在一些實施例中，可操作連接至編碼免疫相關分子之核酸之病毒啟動子係E3啟動子。在一些實施例中，免疫相關分子係GM-CSF。
在一些實施例中，提供治療個體之膀胱癌之方法，其包含：a)膀胱內投與有效量之腺病毒血清型5，其中天然腺病毒之內源性E1a啟動子及E3 19kD編碼區經人類E2F-1啟動子及編碼免疫相關分子(例如細胞介素、趨化介素，例如GM-CSF)之核酸置換；及b)膀胱內投與有效量之CTLA-4之抑制劑(例如抗CTLA-4抗體(例如伊匹單抗)或經改造之脂質運載蛋白(例如特異性識別CTLA-4之抗運載蛋白))。在一些實施例中，腫瘤特異性啟動子係人類E2F-1啟動子或包含SEQ ID NO：1中所述之核苷酸序列之E2F-1啟動子。
在一些實施例中，提供治療個體之膀胱癌之方法，其包含：a)膀胱內投與有效量之CG0070；及b)膀胱內投與有效量之CTLA-4之抑制劑(例 如抗CTLA-4抗體(例如伊匹單抗)或經改造之脂質運載蛋白(例如特異性識別CTLA-4之抗運載蛋白))。在一些實施例中，CTLA-4之抑制劑係抗CTLA-4抗體(例如伊匹單抗)。在一些實施例中，CTLA-4之抑制劑係經改造之脂質運載蛋白，例如特異性識別CTLA-4之抗運載蛋白。在一些實施例中，每週投與CG007。在一些實施例中，每週投與CTLA-4之抑制劑。在一些實施例中，依序投與CG0070及CTLA-4之抑制劑。在一些實施例中，在投與CTLA-4之抑制劑之前(例如在即將投與之前)投與CG0070。在一些實施例中，在投與CTLA-4之抑制劑之後(例如在投與後立刻)投與CG0070。在一些實施例中，同時投與CG0070及CTLA-4之抑制劑(例如在單一組合物中)。在一些實施例中，該方法進一步包含藉由膀胱內投與除外之投與途徑投與CG0070及/或CTLA-4之抑制劑。
在一些實施例中，提供治療個體之膀胱癌(例如肌肉侵襲性膀胱癌)之方法，其包含：a)膀胱內投與有效量之CG0070；及b)膀胱內投與有效量之CTLA-4之抑制劑(例如抗CTLA-4抗體(例如伊匹單抗)或經改造之脂質運載蛋白(例如特異性識別CTLA-4之抗運載蛋白))，其中CG0070之有效量係每週約1×1012個病毒顆粒(vp)，其中CTLA-4之抑制劑之有效量係約0.1mg/Kg，但每週每個劑量總共不超過20mg。在一些實施例中，CTLA-4之抑制劑係抗CTLA-4抗體(例如伊匹單抗)(例如，YERVOY®)。在一些實施例中，CTLA-4之抑制劑係經改造之脂質運載蛋白，例如特異性識別CTLA-4之抗運載蛋白。在一些實施例中，該方法進一步包含預處理，該預處理包含在投與CG0070之前(例如在即將投與之前或在投與之前不早於2小時)膀胱內投與有效量之轉導增強劑。在一些實施例中，轉導增強劑係DDM。在一些實施例中，在約四週內投與CG0070。在一些實施例 中，在約三週內、例如在CG0070投與之四週過程之2、3及4週中投與CTLA-4之抑制劑。在一些實施例中，在投與CG0070後立刻(例如，在投與後不超過5分鐘)投與CTLA-4之抑制劑。在一些實施例中，個體進一步接受膀胱切除術或盆腔淋巴結切除術。在一些實施例中，肌肉侵襲性膀胱癌係移行細胞(即尿路)膀胱癌。在一些實施例中，根據美國癌症聯合委員會(AJCC)標準，MIBC係T2-4a、Nx-1、M0階段。
在一些實施例中，提供治療個體之膀胱癌(例如肌肉侵襲性膀胱癌)之方法，其包含：a)膀胱內投與有效量之CG0070；及b)膀胱內投與有效量之CTLA-4之抑制劑(例如抗CTLA-4抗體(例如伊匹單抗)或經改造之脂質運載蛋白(例如特異性識別CTLA-4之抗運載蛋白))，其中CG0070之有效量係每週約1×1012個病毒顆粒(vp)，其中CTLA-4之抑制劑之有效量係約0.2mg/Kg，但每週每個劑量總共不超過20mg。在一些實施例中，CTLA-4之抑制劑係經改造之脂質運載蛋白，例如特異性識別CTLA-4之抗運載蛋白。在一些實施例中，該方法進一步包含預處理，該預處理包含在投與CG0070之前(例如在即將投與之前或在投與之前不早於2小時)膀胱內投與有效量之轉導增強劑。在一些實施例中，轉導增強劑係DDM。在一些實施例中，該方法進一步包含膀胱內投與第二免疫調節劑，例如免疫刺激劑(例如CD40活化劑或4-1BB活化劑)。在一些實施例中，在約四週內投與CG0070。在一些實施例中，在約三週內、例如在CG0070投與之四週過程之2、3及4週中投與CTLA-4之抑制劑。在一些實施例中，在投與CG0070後立刻(例如，在投與後不超過5分鐘)投與CTLA-4之抑制劑。在一些實施例中，個體進一步接受膀胱切除術或盆腔淋巴結切除術。在一些實施例中，肌肉侵襲性膀胱癌係移行細胞(即尿路)膀胱癌。在一些實施例 中，根據美國癌症聯合委員會(AJCC)標準，MIBC係T2-4a、Nx-1、M0階段。
在一些實施例中，提供治療個體之膀胱癌(例如肌肉侵襲性膀胱癌)之方法，其包含：a)膀胱內投與有效量之CG0070；及b)膀胱內投與有效量之CTLA-4之抑制劑(例如抗CTLA-4抗體(例如伊匹單抗)或經改造之脂質運載蛋白(例如特異性識別CTLA-4之抗運載蛋白))，其中CG0070之有效量係每週約1×1012個病毒顆粒(vp)，其中CTLA-4之抑制劑之有效量係約0.3mg/Kg，但每週每個劑量總共不超過20mg。在一些實施例中，CTLA-4之抑制劑係經改造之脂質運載蛋白，例如特異性識別CTLA-4之抗運載蛋白。在一些實施例中，該方法進一步包含預處理，該預處理包含在投與CG0070之前(例如在即將投與之前或在投與之前不早於2小時)膀胱內投與有效量之轉導增強劑。在一些實施例中，轉導增強劑係DDM。在一些實施例中，該方法進一步包含膀胱內投與第二免疫調節劑，例如免疫刺激劑(例如CD40活化劑或4-1BB活化劑)。在一些實施例中，在約四週內投與CG0070。在一些實施例中，在約三週內、例如在CG0070投與之四週過程之2、3及4週中投與CTLA-4之抑制劑。在一些實施例中，在投與CG0070後立刻(例如，在投與後不超過5分鐘)投與CTLA-4之抑制劑。在一些實施例中，個體進一步接受膀胱切除術或盆腔淋巴結切除術。在一些實施例中，肌肉侵襲性膀胱癌係移行細胞(即尿路)膀胱癌。在一些實施例中，根據美國癌症聯合委員會(AJCC)標準，MIBC係T2-4a、Nx-1、M0階段。
在一些實施例中，提供治療個體之膀胱癌之方法，其包含：a)膀胱內投與有效量之感染劑；及b)膀胱內投與有效量之PD-1抑制劑(例如抗 PD-1抗體(例如尼沃魯單抗、派姆單抗或匹利珠單抗)或PD-1配體之Fc融合蛋白(例如AMP-224))。在一些實施例中，感染劑係野生型感染劑。在一些實施例中，感染劑經遺傳修飾。在一些實施例中，感染劑經減毒(例如經由多次傳代、不活化或遺傳修飾)。在一些實施例中，PD-1抑制劑係抗PD-1抗體，例如尼沃魯單抗、派姆單抗或匹利珠單抗。在一些實施例中，PD-1抑制劑係PD-1與其配體之間之相互作用之抑制劑，例如PD-1/PD-L1相互作用之抑制劑或PD-1/PD-L2相互作用之抑制劑。在一些實施例中，PD-1抑制劑係包含PD-1配體之Fc融合蛋白，例如PD-L2之Fc-融合物(例如，AMP-224)。在一些實施例中，該方法進一步包含膀胱內投與第二免疫調節劑，例如免疫刺激劑(例如CD40活化劑或4-1BB活化劑)。在一些實施例中，每週投與感染劑。在一些實施例中，每週投與PD-1抑制劑。在一些實施例中，依序投與感染劑及PD-1抑制劑。在一些實施例中，在投與PD-1抑制劑之前(例如在即將投與之前)投與感染劑。在一些實施例中，在投與PD-1抑制劑之後(例如在投與後立刻)投與感染劑。在一些實施例中，同時投與感染劑及PD-1抑制劑(例如在單一組合物中)。在一些實施例中，該方法進一步包含藉由膀胱內投與除外之投與途徑投與感染劑及/或PD-1抑制劑。
舉例而言，在一些實施例中，提供治療個體之膀胱癌之方法，其包含：a)膀胱內投與有效量之溶瘤病毒(例如溶瘤腺病毒)；及b)膀胱內投與有效量之PD-1抑制劑(例如抗PD-1抗體(例如尼沃魯單抗、派姆單抗或匹利珠單抗)或PD-1配體之Fc融合蛋白(例如AMP-224))。
在一些實施例中，提供治療個體之膀胱癌之方法，其包含：a)膀胱內投與有效量之包含病毒載體之溶瘤病毒(例如溶瘤腺病毒)，該病毒載體 包含可操作連接至病毒複製所必需之病毒基因之腫瘤細胞特異性啟動子；及b)膀胱內投與有效量之PD-1抑制劑(例如抗PD-1抗體(例如尼沃魯單抗、派姆單抗或匹利珠單抗)或PD-1配體之Fc融合蛋白(例如AMP-224))。在一些實施例中，腫瘤特異性啟動子係E2F-1啟動子，例如人類E2F-1啟動子或包含SEQ ID NO：1中所述之核苷酸序列之E2F-1啟動子。在一些實施例中，病毒複製所必需之病毒基因選自由以下組成之群：E1A、E1B及E4。
在一些實施例中，提供治療個體之膀胱癌之方法，其包含：a)膀胱內投與有效量之包含病毒載體之溶瘤病毒(例如溶瘤腺病毒)，該病毒載體包含可操作連接至病毒複製所必需之病毒基因之腫瘤細胞特異性啟動子及編碼可操作連接至病毒啟動子之免疫相關分子(例如細胞介素或趨化介素)之核酸；及b)膀胱內投與有效量之PD-1抑制劑(例如抗PD-1抗體(例如尼沃魯單抗、派姆單抗或匹利珠單抗)或PD-1配體之Fc融合蛋白(例如AMP-224))。在一些實施例中，腫瘤特異性啟動子係E2F-1啟動子，例如人類E2F-1啟動子或包含SEQ ID NO：1中所述之核苷酸序列之E2F-1啟動子。在一些實施例中，病毒複製所必需之病毒基因選自由以下組成之群：E1A、E1B及E4。在一些實施例中，可操作連接至編碼免疫相關分子之核酸之病毒啟動子係E3啟動子。在一些實施例中，免疫相關分子係GM-CSF。
在一些實施例中，提供治療個體之膀胱癌之方法，其包含：a)膀胱內投與有效量之腺病毒血清型5，其中天然腺病毒之內源性E1a啟動子及E3 19kD編碼區經人類E2F-1啟動子及編碼免疫相關分子(例如細胞介素或趨化介素，例如GM-CSF)之核酸置換；及b)膀胱內投與有效量之PD-1抑 制劑(例如抗PD-1抗體(例如尼沃魯單抗、派姆單抗或匹利珠單抗)，或PD-1配體之Fc融合蛋白(例如AMP-224))。在一些實施例中，腫瘤特異性啟動子係人類E2F-1啟動子或包含SEQ ID NO：1中所述之核苷酸序列之E2F-1啟動子。
在一些實施例中，提供治療個體之膀胱癌之方法，其包含：a)膀胱內投與有效量之CG0070；及b)膀胱內投與有效量之PD-1抑制劑(例如抗PD-1抗體(例如尼沃魯單抗、派姆單抗或匹利珠單抗)或PD-1配體之Fc融合蛋白(例如AMP-224))。在一些實施例中，PD-1抑制劑係抗PD-1抗體，例如尼沃魯單抗、派姆單抗或匹利珠單抗。在一些實施例中，PD-1抑制劑係PD-1與其配體之間之相互作用之抑制劑，例如PD-1/PD-L1相互作用之抑制劑或PD-1/PD-L2相互作用之抑制劑。在一些實施例中，PD-1抑制劑係包含PD-1配體之Fc融合蛋白，例如PD-L2之Fc-融合物(例如，AMP-224)。在一些實施例中，每週投與CG007。在一些實施例中，每週投與PD-1抑制劑。在一些實施例中，依序投與CG0070及PD-1抑制劑。在一些實施例中，在投與PD-1抑制劑之前(例如在即將投與之前)投與CG0070。在一些實施例中，在投與PD-1抑制劑之後(例如在投與後立刻)投與CG0070。在一些實施例中，同時投與CG0070及PD-1抑制劑(例如在單一組合物中)。在一些實施例中，該方法進一步包含藉由膀胱內投與除外之投與途徑投與CG0070及/或PD-1抑制劑。
在一些實施例中，提供治療個體(例如人類)之膀胱癌之方法，其包含：a)膀胱內投與有效量之感染劑；及b)膀胱內投與有效量之PD-1配體之抑制劑(例如抗PD-L1或抗PD-L2抗體、或PD-L1及PD-L2二者之抑制劑)。在一些實施例中，感染劑係野生型感染劑。在一些實施例中，感染 劑經遺傳修飾。在一些實施例中，感染劑經減毒(例如經由多次傳代、不活化或遺傳修飾)。在一些實施例中，PD-1配體之抑制劑係抗PD-L1抗體，例如KY-1003、MCLA-145、RG7446、BMS935559、MPDL3280A、MEDI4736、阿維魯單抗或STI-A1010。在一些實施例中，PD-1配體之抑制劑係抗PD-L2抗體。在一些實施例中，PD-1配體之抑制劑係PD-L1及PD-L2二者之抑制劑(例如，肽、蛋白質或小分子)，例如AUR-012及AMP-224。在一些實施例中，該方法進一步包含膀胱內投與第二免疫調節劑，例如免疫刺激劑(例如，CD40活化劑或4-1BB活化劑)。在一些實施例中，每週投與感染劑。在一些實施例中，每週投與PD-1配體之抑制劑。在一些實施例中，依序投與感染劑及PD-1配體之抑制劑。在一些實施例中，在投與PD-1配體之抑制劑之前(例如在即將投與之前)投與感染劑。在一些實施例中，在投與PD-1配體之抑制劑之後(例如在投與後立刻)投與感染劑。在一些實施例中，同時投與感染劑及PD-1配體之抑制劑(例如在單一組合物中)。在一些實施例中，該方法進一步包含藉由膀胱內投與除外之投與途徑投與感染劑及/或PD-1配體之抑制劑。在一些實施例中，PD-L1之抑制劑及PD-L2之抑制劑可互換用於本文所述治療方法中之任一者中。
舉例而言，在一些實施例中，提供治療個體之膀胱癌之方法，其包含：a)膀胱內投與有效量之溶瘤病毒(例如溶瘤腺病毒)；及b)膀胱內投與有效量之PD-1配體之抑制劑(例如抗PD-L1或抗PD-L2抗體、或PD-L1及PD-L2二者之抑制劑)。
在一些實施例中，提供治療個體之膀胱癌之方法，其包含：a)膀胱內投與有效量之包含病毒載體之溶瘤病毒(例如溶瘤腺病毒)，該病毒載體 包含可操作連接至病毒複製所必需之病毒基因之腫瘤細胞特異性啟動子；及b)膀胱內投與有效量之PD-1配體之抑制劑(例如抗PD-L1或抗PD-L2抗體、或PD-L1及PD-L2二者之抑制劑)。在一些實施例中，腫瘤特異性啟動子係E2F-1啟動子，例如人類E2F-1啟動子或包含SEQ ID NO：1中所述之核苷酸序列之E2F-1啟動子。在一些實施例中，病毒複製所必需之病毒基因選自由以下組成之群：E1A、E1B及E4。
在一些實施例中，提供治療個體之膀胱癌之方法，其包含：a)膀胱內投與有效量之包含病毒載體之溶瘤病毒(例如溶瘤腺病毒)，該病毒載體包含可操作連接至病毒複製所必需之病毒基因之腫瘤細胞特異性啟動子及編碼可操作連接至病毒啟動子之免疫相關分子(例如細胞介素或趨化介素)之核酸；及b)膀胱內投與有效量之PD-1配體之抑制劑(例如抗PD-L1或抗PD-L2抗體、或PD-L1及PD-L2二者之抑制劑)。在一些實施例中，腫瘤特異性啟動子係E2F-1啟動子，例如人類E2F-1啟動子或包含SEQ ID NO：1中所述之核苷酸序列之E2F-1啟動子。在一些實施例中，病毒複製所必需之病毒基因選自由以下組成之群：E1A、E1B及E4。在一些實施例中，可操作連接至編碼免疫相關分子之核酸之病毒啟動子係E3啟動子。在一些實施例中，免疫相關分子係GM-CSF。
在一些實施例中，提供治療個體之膀胱癌之方法，其包含：a)膀胱內投與有效量之腺病毒血清型5，其中天然腺病毒之內源性E1a啟動子及E3 19kD編碼區經人類E2F-1啟動子及編碼免疫相關分子(例如細胞介素或趨化介素，例如GM-CSF)之核酸置換；及b)膀胱內投與有效量之PD-1配體之抑制劑(例如抗PD-L1或抗PD-L2抗體、或PD-L1及PD-L2二者之抑制劑)。在一些實施例中，腫瘤特異性啟動子係人類E2F-1啟動子或包含SEQ ID NO：1中所述之核苷酸序列之E2F-1啟動子。
在一些實施例中，提供治療個體之膀胱癌之方法，其包含：a)膀胱內投與有效量之CG0070；及b)膀胱內投與有效量之PD-1配體之抑制劑(例如抗PD-L1或抗PD-L2抗體、或PD-L1及PD-L2二者之抑制劑)。在一些實施例中，PD-1配體之抑制劑係抗PD-L1抗體，例如KY-1003、MCLA-145、RG7446、BMS935559、MPDL3280A、MEDI4736、阿維魯單抗或STI-A1010。在一些實施例中，PD-1配體之抑制劑係抗PD-L2抗體。在一些實施例中，PD-1配體之抑制劑係PD-L1及PD-L2二者之抑制劑(例如，肽、蛋白質或小分子)，例如AUR-012及AMP-224。在一些實施例中，每週投與CG007。在一些實施例中，每週投與PD-1配體之抑制劑。在一些實施例中，依序投與CG0070及PD-1配體之抑制劑。在一些實施例中，在投與PD-1配體之抑制劑之前(例如在即將投與之前)投與CG0070。在一些實施例中，在投與PD-1配體之抑制劑之後(例如在投與後立刻)投與CG0070。在一些實施例中，同時投與CG0070及PD-1配體之抑制劑(例如在單一組合物中)。在一些實施例中，該方法進一步包含藉由膀胱內投與除外之投與途徑投與CG0070及/或PD-1配體之抑制劑。
在一些實施例中，提供治療個體之膀胱癌之方法，其包含：a)膀胱內投與有效量之感染劑；及b)膀胱內投與有效量之CD40之活化劑(例如激動性抗CD40抗體，例如CP-870,893、達西珠單抗、ChiLob 7/4或APX005M)。在一些實施例中，感染劑係野生型感染劑。在一些實施例中，感染劑經遺傳修飾。在一些實施例中，感染劑經減毒(例如經由多次傳代、不活化或遺傳修飾)。在一些實施例中，CD40之活化劑係激動性抗CD40抗體，例如CP-870,893、達西珠單抗、ChiLob 7/4或APX005M。 在一些實施例中，該方法進一步包含膀胱內投與第二免疫調節劑，例如免疫檢查點抑制劑(例如CTLA-4之抑制劑，例如抗CTLA-4抗體或特異性結合至CTLA-4之抗運載蛋白)。在一些實施例中，每週投與感染劑。在一些實施例中，每週投與CD40之活化劑。在一些實施例中，依序投與感染劑及CD40之活化劑。在一些實施例中，在投與CD40之活化劑之前(例如在即將投與之前)投與感染劑。在一些實施例中，在投與CD40之活化劑之後(例如在投與後立刻)投與感染劑。在一些實施例中，同時投與感染劑及CD40之活化劑(例如在單一組合物中)。在一些實施例中，該方法進一步包含藉由膀胱內投與除外之投與途徑投與感染劑及/或CD40之活化劑。
舉例而言，在一些實施例中，提供治療個體之膀胱癌之方法，其包含：a)膀胱內投與有效量之溶瘤病毒(例如溶瘤腺病毒)；及b)膀胱內投與有效量之CD40之活化劑(例如激動性抗CD40抗體，例如CP-870,893、達西珠單抗、ChiLob 7/4或APX005M)。
在一些實施例中，提供治療個體之膀胱癌之方法，其包含：a)膀胱內投與有效量之包含病毒載體之溶瘤病毒(例如溶瘤腺病毒)，該病毒載體包含可操作連接至病毒複製所必需之病毒基因之腫瘤細胞特異性啟動子；及b)膀胱內投與有效量之CD40之活化劑(例如激動性抗CD40抗體，例如CP-870,893、達西珠單抗、ChiLob 7/4或APX005M)。在一些實施例中，腫瘤特異性啟動子係E2F-1啟動子，例如人類E2F-1啟動子或包含SEQ ID NO：1中所述之核苷酸序列之E2F-1啟動子。在一些實施例中，病毒複製所必需之病毒基因選自由以下組成之群：E1A、E1B及E4。
在一些實施例中，提供治療個體之膀胱癌之方法，其包含：a)膀胱內投與有效量之包含病毒載體之溶瘤病毒(例如溶瘤腺病毒)，該病毒載體 包含可操作連接至病毒複製所必需之病毒基因之腫瘤細胞特異性啟動子及編碼可操作連接至病毒啟動子之免疫相關分子(例如細胞介素或趨化介素)之核酸；及b)膀胱內投與有效量之CD40之活化劑(例如激動性抗CD40抗體，例如CP-870,893、達西珠單抗、ChiLob 7/4或APX005M)。在一些實施例中，腫瘤特異性啟動子係E2F-1啟動子，例如人類E2F-1啟動子或包含SEQ ID NO：1中所述之核苷酸序列之E2F-1啟動子。在一些實施例中，病毒複製所必需之病毒基因選自由以下組成之群：E1A、E1B及E4。在一些實施例中，可操作連接至編碼免疫相關分子之核酸之病毒啟動子係E3啟動子。在一些實施例中，免疫相關分子係GM-CSF。
在一些實施例中，提供治療個體之膀胱癌之方法，其包含：a)膀胱內投與有效量之腺病毒血清型5，其中天然腺病毒之內源性E1a啟動子及E3 19kD編碼區經人類E2F-1啟動子及編碼免疫相關分子(例如細胞介素或趨化介素，例如GM-CSF)之核酸置換；及b)膀胱內投與有效量之CD40之活化劑(例如激動性抗CD40抗體，例如CP-870,893、達西珠單抗、ChiLob 7/4或APX005M)。在一些實施例中，腫瘤特異性啟動子係人類E2F-1啟動子或包含SEQ ID NO：1中所述之核苷酸序列之E2F-1啟動子。
在一些實施例中，提供治療個體之膀胱癌之方法，其包含：a)膀胱內投與有效量之CG0070；及b)膀胱內投與有效量之CD40之活化劑(例如激動性抗CD40抗體，例如CP-870,893、達西珠單抗、ChiLob 7/4或APX005M)。在一些實施例中，CD40之活化劑係激動性抗CD40抗體，例如CP-870,893、達西珠單抗、ChiLob 7/4或APX005M。在一些實施例中，每週投與CG007。在一些實施例中，每週投與CD40之活化劑。在一些實施例中，依序投與CG0070及CD40之活化劑。在一些實施例中，在投 與CD40之活化劑之前(例如在即將投與之前)投與CG0070。在一些實施例中，在投與CD40之活化劑之後(例如在投與後立刻)投與CG0070。在一些實施例中，同時投與CG0070及CD40之活化劑(例如在單一組合物中)。在一些實施例中，該方法進一步包含藉由膀胱內投與除外之投與途徑投與CG0070及/或CD40之活化劑。
感染劑及/或免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)之膀胱內投與提供相對便利但有效膀胱內腫瘤暴露於感染劑及/或免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)之獨特機會、以及對其他組織之潛在降低毒性。感染劑及免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)之適宜劑量及投藥頻率係在與如針對前述部分中分別感染劑及免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)之局部投與所述之彼等相同之範圍內。
在一些實施例中，藉由滴注以溶液形式經由導管投與感染劑及/或免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)。在一些實施例中，用於膀胱內滴注之溶液之總體積係以下中之約任一者：1mL、10mL、50mL、75mL、100mL、125mL、150mL、200mL、250mL、300mL、400mL或500mL。在一些實施例中，用於膀胱內滴注之溶液之總體積係以下中之任一者：約1mL至約10mL、約10mL至約50mL、約50mL至約75mL、約75mL至約100mL、約100mL至約125mL、約75mL至約125mL、約100mL至約150mL、約150mL至約200mL、約200mL至約300mL、約300mL至約400mL、約400mL至約500mL、約50mL至約500mL、約50mL至約250mL或約100mL至約250mL。
在一些實施例中，感染劑係以約1×108至約1×1015個顆粒(例如約1×1011至約1×1014個顆粒，例如約1×1012個顆粒)之劑量投與。在一些實 施例中，感染劑係以約50至約500mL(例如約100mL)之體積藉由滴注投與。
在一些實施例中，免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)係以約0.1mg/Kg至約100mg/Kg(例如約0.1mg/Kg至約0.3mg/Kg、約0.1mg/Kg至約0.5mg/Kg、約0.5mg/Kg至約1mg/Kg、約1mg/Kg至約10mg/Kg、約10mg/Kg至約50mg/Kg、約50mg/Kg至約100mg/Kg或約1mg/Kg至約100mg/Kg)之劑量投與。在一些實施例中，免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)係以每次投與不超過以下中之約任一者之劑量投與：500mg、400mg、300mg、200mg、100mg、80mg、60mg、40mg、20mg或10mg。在一些實施例中，免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)係以約1mL至約500mL(例如約100mL)之體積藉由滴注投與。
感染劑及/或免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)之溶液在排尿之前可在膀胱中保留特定量之時間，以在膀胱腫瘤細胞中達成均勻分佈或足夠暴露於感染劑及/或免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)。在一些實施例中，溶液在個體之膀胱中保留至少以下中之約任一者：5分鐘、10分鐘、15分鐘、20分鐘、30分鐘、45分鐘、1小時、2小時或更長時間。在一些實施例中，溶液在個體之膀胱中保留以下中之任一者：約5分鐘至約10分鐘、約10分鐘至約15分鐘、約10分鐘至約20分鐘、約20分鐘至約30分鐘、約30分鐘至約45分鐘、約45分鐘至約50分鐘、約50分鐘至約1小時、約5分鐘至約15分鐘、約10分鐘至約30分鐘、約30分鐘至約1小時或約1小時至約2小時。在一些實施例中，感染劑(例如溶瘤病毒，例如CG0070)在個體之膀胱中保留約45分鐘至約50分鐘。在一些實施例中，免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)在膀胱中保留約45分鐘至1小時。在一些實施例 中，藉由包含膀胱內投與有效量之轉導增強劑(例如DDM)之預處理進一步增強感染劑之膀胱內投與之效率。
在一些實施例中，藉由使個體之膀胱之管腔表面與預處理組合物接觸、之後投與感染劑及免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)來實施預處理步驟。舉例而言，預處理組合物可包含約0.01%至約0.5%(例如0.05至約0.2%，例如約0.1%)之轉導增強劑(例如DDM)。在一些實施例中，預處理組合物(例如DDM)之總體積係約10mL至約1000mL(例如約10mL至約100mL、約100mL至約500mL或約500mL至約1000mL)。在一些實施例中，預處理組合物之適宜劑量係0.1g、0.2g、0.5g、0.75g、1g、1.5g、2g、2.5g、5g或10g中之約任一者之轉導增強劑(例如DDM)。在一些實施例中，預處理組合物之有效量係約1g DDM(例如，100mL 0.1% DDM溶液)。
在一些實施例中，在即將投與感染劑之前(例如不超過5分鐘)投與預處理組合物(例如DDM)。在一些實施例中，在投與感染劑之前不超過以下中之約任一者投與預處理組合物(例如DDM)：5分鐘、10分鐘、15分鐘、20分鐘、30分鐘、45分鐘、1小時、90分鐘、2小時、3小時或4小時。在一些實施例中，在投與感染劑之前不超過約2小時投與預處理組合物(例如DDM)。在一些實施例中，預處理組合物(例如DDM溶液)在膀胱中保留至少5分鐘、10分鐘、15分鐘或20分鐘中之約任一者。在一些實施例中，預處理組合物(例如DDM溶液)在膀胱中保留約5分鐘至約10分鐘、約10分鐘至約15分鐘、約12分鐘至約15分鐘、約15分鐘至約20分鐘或約10分鐘至約20分鐘中之任一者。在一些實施例中，預處理組合物(例如DDM溶液)在膀胱中保留約12分鐘至約15分鐘。
在一些實施例中，藉由使個體之膀胱之管腔表面與預處理組合物接觸、之後投與感染劑及免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)來實施預處理步驟。
在一些實施例中，該方法進一步包含洗滌接觸預處理組合物之膀胱之管腔表面。在一些實施例中，該方法進一步包含在膀胱與預處理組合物接觸後在投與感染劑之前洗滌膀胱之管腔表面。
在一些實施例中，預處理步驟包含如「治療固態或淋巴腫瘤之方法」部分中所述之一或多個腫瘤位點製備步驟。
在一些實施例中，預處理包含膀胱內投與有效量之免疫相關分子(例如細胞介素、趨化介素或PRRago)。在一些實施例中，免疫相關分子選自由以下組成之群：GM-CSF、IL-2、IL12、干擾素(例如1型、2型或3型干擾素，例如干擾素γ)、CCL4、CCL19、CCL21、CXCL13、TLR1、TLR2、TLR3、TLR4、TLR5、TLR6、TLR7、TLR8、TLR9、TLR10、RIG-I、MDA5、LGP2、LTαβ、STING活化劑(例如CDN)、PRRago(例如CpG、咪喹莫特或聚I：C)、TLR刺激物(例如GS-9620、AED-1419、CYT-003-QbG10、AVE-0675或PF-7909)及RLR刺激物(例如RIG-I、Mda5或LGP2刺激物)。在一些實施例中，免疫相關分子係以其天然形式直接投與。在一些實施例中，免疫相關分子係以可包括賦形劑或業內已知可延遲其在腫瘤位點內之代謝、釋放及/或衰變之任何化合物的形式投與。在一些實施例中，可將免疫相關分子與一或多種額外免疫相關分子組合。在一些實施例中，組合之兩種或更多種免疫相關分子係以可包括賦形劑或業內已知可影響其在腫瘤位點內之代謝、釋放及/或衰變之任何化合物的形式投與。在一些實施例中，免疫相關分子誘導樹突細胞、T細胞、 B細胞及/或T濾泡性輔助細胞。在一些實施例中，免疫相關分子與感染劑分開投與(例如，在單獨組合物中或作為同一組合物中之單獨實體)。在一些實施例中，經由轉導將免疫相關分子投與至腫瘤位點。業內已知之實例性轉導方法包括(但不限於)使用磷酸鈣、樹枝狀聚合物、脂質體、陽離子聚合物、電穿孔、細胞擠壓、聲波穿孔、光學轉染、原生質體融合、刺穿感染、流體動力遞送、基因槍、磁轉染、病毒轉染及核轉染。在一些實施例中，免疫相關分子由感染劑表現。舉例而言，感染劑可包含編碼免疫相關分子之核酸，且核酸可在病毒載體中或在單獨載體上。在一些實施例中，感染劑係包含病毒載體之病毒，且其中病毒載體包含編碼免疫相關分子之核酸。在一些實施例中，編碼免疫相關分子之核酸可操作連接至病毒啟動子，例如E1啟動子或E3啟動子。
在一些實施例中，預處理步驟包含在投與感染劑及免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)之前向個體之膀胱投與有效量之輻射療法。在一些實施例中，輻射療法與化學療法組合。在一些實施例中，投與輻射療法而不投與化學療法。在一些實施例中，輻射療法包含輻照全身。在一些實施例中，輻射療法係僅輻照腫瘤位點。在一些實施例中，輻射療法係輻照具有腫瘤之組織。在一些實施例中，輻射療法係僅輻照選擇用於局部投與感染劑及免疫調節劑之腫瘤位點。在一些實施例中，輻射療法係僅輻照選擇用於局部投與感染劑及免疫調節劑之具有腫瘤之組織。在一些實施例中，輻射療法之劑量不足以根除腫瘤細胞。舉例而言，輻射療法之適宜劑量係以下中之約任一者：1Gy、5Gy、10Gy、15Gy、20Gy、25Gy、30Gy、35Gy、40Gy、45Gy、50Gy、55Gy、60Gy、65Gy、70Gy、75Gy、80Gy、90Gy或100Gy。在一些實施例中，輻射療法之劑量係不 超過以下中之約任一者：1Gy、5Gy、10Gy、15Gy、20Gy、25Gy、30Gy、35Gy、40Gy、45Gy、50Gy、55Gy、60Gy、65Gy、70Gy、75Gy、80Gy、90Gy或100Gy。在一些實施例中，輻射療法之劑量係以下中之任一者：約1Gy至約5Gy、約5Gy至約10Gy、約10Gy至約15Gy、約15Gy至約20Gy、約20Gy至約25Gy、約25Gy至約30Gy、約30Gy至約35Gy、約5Gy至約15Gy、約10Gy至約20Gy、約20Gy至約30Gy、約30Gy至約40Gy、約40Gy至約50Gy、約50Gy至約60Gy、約60Gy至約70Gy、約70Gy至約80Gy、約80Gy至約100Gy、約10Gy至約30Gy、約20Gy至約40Gy、約1Gy至約25Gy、約25Gy至約50Gy、約30Gy至約60Gy、約60Gy至約80Gy或約10Gy至約60Gy。在一些實施例中，以一種以上方式(例如2、3、4、5、6、7、8、9、10、12、15、16、18、20或更多種方式中之約任一者)投與輻射療法。在一些實施例中，在1天、2天、3天、4天、5天、6天、1週、2週、3週、4週、5週、6週、7週或更長時間中之約任一者之過程中投與輻射療法部分。在一些實施例中，在以下中之任一者之過程中投與輻射療法部分：約1天至約5天、約1週至約2週、約2週至約3週、約3週至約4週、約4週至約5週、約5週至約6週、約6週至約7週、約2週至約4週、約4週至約6週或約1週至約6週。在一些實施例中，每天以約兩個部分投與輻射療法。在一些實施例中，輻射療法之每一部分係對於成人每天約1.8Gy至約2Gy(一週五天)、或對於兒童每天約1.5Gy至約1.8Gy(一週五天)。在一些實施例中，輻射療法之每一部分係以下中之約任一者：1Gy、1.5Gy、2Gy、2.5Gy、5Gy、10Gy、15Gy、20Gy、30Gy、40Gy、50Gy或更多。在一些實施例中，輻射療法之每一部分係以下中之任一者：約1Gy至約 1.5Gy、約1.5Gy至約2Gy、約1Gy至約2.5Gy、約2.5Gy至約5Gy、約5Gy至約10Gy、約10Gy至約15Gy、約15Gy至約20Gy、約20Gy至約30Gy、約25Gy至約50Gy、約1Gy至約10Gy或約2Gy至約20Gy。
在一些實施例中，以單一部分投與輻射療法。在一些實施例中，輻射療法旨在淋巴清除，以每天單一劑量部分或在數天至數週內以多個部分。在一些實施例中，淋巴清除輻射療法係作為全身輻照給予。在一些實施例中，淋巴清除僅係給予至局部腫瘤位點或具有腫瘤之組織。在一些實施例中，每天以兩個部分投與淋巴清除輻射療法。在一些實施例中，淋巴清除輻射療法之每一部分係對於成人每天約1Gy至約2Gy(一週五天)、或對於兒童每天約0.5Gy至約1.8Gy(一週五天)。在一些實施例中，輻射療法之每一部分係以下中之約任一者：1Gy、1.5Gy、2Gy、2.5Gy、5Gy、10Gy、15Gy、20Gy、30Gy、40Gy、50Gy或更多。在一些實施例中，輻射療法之每一部分係以下中之任一者：約1Gy至約1.5Gy、約1.5Gy至約2Gy、約1Gy至約2.5Gy、約2.5Gy至約5Gy、約5Gy至約10Gy、約10Gy至約15Gy、約15Gy至約20Gy、約20Gy至約30Gy、約25Gy至約50Gy、約1Gy至約10Gy或約2Gy至約20Gy。在一些實施例中，淋巴清除輻射療法係使用或不使用化學治療劑(例如但不限於環磷醯胺及氟達拉濱)來投與。
輻射療法之已知方法中之任一者皆可用於本發明中，包括但不限於外線束放射療法(EBRT或XRT)、遠程療法、近程療法、密封源輻射療法、全身放射性同位素療法(RIT)、非密封源輻射療法、術中輻射療法(IORT)、靶向之術中輻射療法(TARGIT)、強度調節輻射療法(IMRT)、體積調節弧療法(VMAT)、顆粒療法及鑽孔機療法。
在一些實施例中，預處理步驟包含在投與感染劑及免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)之前向個體之膀胱之管腔表面直接或間接(例如經由靜脈內途徑)投與有效量之治療劑。在一些實施例中，治療劑係業內已知之化學治療劑(例如環磷醯胺)之任一者或組合。在一些實施例中，治療劑係業內已知之靶向或阻斷細胞信號傳導路徑之試劑之任一者或組合，例如BRAF抑制劑。在一些實施例中，治療劑係業內已知之細胞療法之任一者或組合，例如TIL細胞、CAR/T細胞及/或TCR/T細胞。在一些實施例中，治療劑係增加參與免疫原性路徑之細胞介素之含量的藥劑。本文所述免疫相關分子中之任一者皆可用作治療劑，包括但不限於細胞介素(例如IL6、IL8及IL18(該等細胞介素可具有促發炎及/或抗發炎作用，或一些可促進新血管形成及腫瘤生長))、趨化介素(例如CCL21，其可藉由增加淋巴結構而促進腫瘤擴散)、生長因子(例如FLT3L)、熱休克蛋白、小分子激酶抑制劑(例如JAK2抑制劑)及IAP抑制劑。在一些實施例中，治療劑係引起腫瘤之結構組份功能障礙或對其損害的藥劑。實例性藥劑包括(但不限於)抗VEGF抗體、玻尿酸酶及n-十二烷基-β-麥芽糖苷。在一些實施例中，治療劑誘導免疫細胞，例如樹突細胞、B細胞及T細胞(例如濾泡性T輔助細胞)。
與腫瘤細胞之組合療法
本申請案之一個態樣係關於治療個體(例如人類)之固態或淋巴腫瘤之方法，其包含：a)向該腫瘤位點局部投與有效量之感染劑；b)向該腫瘤位點局部投與有效量之免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)；及c)向該腫瘤位點局部投與有效量之不活化之腫瘤細胞。此至少三種組份組合治療方法可包含上文針對包含感染劑及免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)之組 合療法所述之方法之任一實施例。包含不活化之腫瘤細胞之本發明之組合治療方法相對於涉及類似組份之其他癌症免疫治療方法係有利的，此乃因三種組份(即，感染劑(例如溶瘤病毒，例如溶瘤腺病毒)、免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)及不活化之腫瘤細胞)中之每一者之投與參數(例如劑量、投藥頻率及/或投與途徑)可獨立地經調節以最佳化對個體之療法之效能並最小化毒性。本文所述方法中之任一者皆可用於抑制固態或淋巴腫瘤生長、抑制固態或淋巴腫瘤轉移、延長具有固態或淋巴腫瘤之個體之存活(例如無疾病存活)、引起具有固態或淋巴腫瘤之個體之疾病緩解、及/或改善具有固態或淋巴腫瘤之個體之生命品質。
不受限於任何理論或假設，據信在此三種組份組合療法中，不活化但活的腫瘤細胞(本文中亦稱作「活癌細胞」或「活腫瘤細胞」)之外部來源(無論其來源係自體的或同種異體的)在腫瘤位點投與時可提供額外、但重要之新抗原來源。在此上下文中，外部來源意指該等腫瘤細胞先前已自相同個體或自另一個體移除。細胞可進一步經受活體外培養用於擴增、冷凍保藏、解凍及表徵。據信，不活化之腫瘤細胞之此外部來源有時可不僅刺激T細胞反應，且亦可應答B細胞，且有時觸發與如先前所述感染劑(例如病毒)及免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)協同之大量抗體反應。
因此，在一些實施例中，提供治療個體之固態或淋巴腫瘤之方法，其包含：a)向該腫瘤位點局部投與有效量之感染劑；b)向該腫瘤位點局部投與有效量之免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)；及c)向該腫瘤位點局部投與有效量之不活化之腫瘤細胞。在一些實施例中，感染劑係病毒，例如選自由以下組成之群之病毒：腺病毒、單純疱疹病毒、牛痘病毒、腮腺炎病毒、新城雞瘟病毒、脊髓灰質炎病毒、麻疹病毒、塞尼卡谷病毒、 柯薩奇病毒、裡奧病毒、水疱性口炎病毒、馬拉巴及棒狀病毒及小病毒。在一些實施例中，感染劑係非溶瘤病毒。在一些實施例中，感染劑係溶瘤病毒。在一些實施例中，感染劑係細菌，例如卡介苗(「BCG」)、單核球增多性李氏菌或分枝桿菌細胞壁-DNA複合物(「MCNA」或「MCC」，例如UROCIDINTM)。在一些實施例中，感染劑係野生型感染劑。在一些實施例中，感染劑經遺傳修飾。在一些實施例中，感染劑經減毒(例如經由多次傳代、不活化或遺傳修飾)。在一些實施例中，免疫調節劑係免疫檢查點抑制劑。在一些實施例中，免疫調節劑係選自由以下組成之群之免疫檢查點分子之調節劑：CTLA-4、PD-1、PD-L1、PD-L2、TIM3、B7-H3、B7-H4、LAG-3、KIR及其配體。在一些實施例中，免疫調節劑係免疫刺激劑。在一些實施例中，免疫刺激劑係OX40、4-1BB或CD40之活化劑。在一些實施例中，方法包含局部投與免疫調節劑之組合，其包含一或多種免疫檢查點抑制劑及/或一或多種免疫刺激劑(例如至少兩種免疫檢查點抑制劑、至少兩種免疫刺激劑或至少一種免疫檢查點抑制劑及至少一種免疫刺激劑之組合)。在一些實施例中，不活化之腫瘤細胞係自體的。在一些實施例中，不活化之腫瘤細胞係同種異體的。在一些實施例中，不活化之腫瘤細胞來自腫瘤細胞系。在一些實施例中，藉由輻照使不活化之腫瘤細胞不活化。在一些實施例中，同時投與感染劑及不活化之腫瘤細胞(例如在單一組合物中)。在一些實施例中，在即將投與之前混合感染劑及不活化之腫瘤細胞。在一些實施例中，依序投與感染劑及不活化之腫瘤細胞。在一些實施例中，在投與後立刻在投與位點混合感染劑及不活化之腫瘤細胞。在一些實施例中，將感染劑、免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)及/或不活化之腫瘤細胞投與至具有腫瘤之組織。在一些實施例中，將 感染劑、免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)及/或不活化之腫瘤細胞直接投與至腫瘤中。在一些實施例中，該方法進一步包含藉由局部投與除外之投與途徑投與感染劑及/或免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)及/或不活化之腫瘤細胞。
在一些實施例中，提供治療個體之固態或淋巴腫瘤之方法，其包含：a)向該腫瘤位點局部投與有效量之溶瘤病毒(例如溶瘤腺病毒)；b)向該腫瘤位點局部投與有效量之免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)；及c)向該腫瘤位點局部投與有效量之不活化之腫瘤細胞。在一些實施例中，溶瘤病毒係野生型溶瘤病毒。在一些實施例中，溶瘤病毒經遺傳修飾。在一些實施例中，溶瘤病毒經減毒(例如經由多次傳代、不活化或遺傳修飾)。在一些實施例中，溶瘤病毒勝任複製。在一些實施例中，溶瘤病毒優先在癌細胞中複製。在一些實施例中，免疫調節劑係免疫檢查點抑制劑。在一些實施例中，免疫調節劑係選自由以下組成之群之免疫檢查點分子之調節劑：CTLA-4、PD-1、PD-L1、PD-L2、TIM3、B7-H3、B7-H4、LAG-3、KIR及其配體。在一些實施例中，免疫調節劑係免疫刺激劑。在一些實施例中，免疫刺激劑係OX40、4-1BB或CD40之活化劑。在一些實施例中，方法包含局部投與免疫調節劑之組合，其包含一或多種免疫檢查點抑制劑及/或一或多種免疫刺激劑(例如至少兩種免疫檢查點抑制劑、至少兩種免疫刺激劑或至少一種免疫檢查點抑制劑及至少一種免疫刺激劑之組合)。在一些實施例中，不活化之腫瘤細胞係自體的。在一些實施例中，不活化之腫瘤細胞係同種異體的。在一些實施例中，不活化之腫瘤細胞來自腫瘤細胞系。在一些實施例中，藉由輻照使不活化之腫瘤細胞不活化。在一些實施例中，同時投與溶瘤病毒及不活化之腫瘤細胞(例如在單一組 合物中)。在一些實施例中，在即將投與之前混合溶瘤病毒及不活化之腫瘤細胞。在一些實施例中，依序投與溶瘤病毒及不活化之腫瘤細胞。在一些實施例中，在投與後立刻在投與位點混合溶瘤病毒及不活化之腫瘤細胞。在一些實施例中，將溶瘤病毒、免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)及/或不活化之腫瘤細胞投與至具有腫瘤之組織。在一些實施例中，將溶瘤病毒、免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)及/或不活化之腫瘤細胞直接投與至腫瘤中。在一些實施例中，該方法進一步包含藉由局部投與除外之投與途徑投與溶瘤病毒及/或免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)及/或不活化之腫瘤細胞。
在一些實施例中，提供治療個體之固態或淋巴腫瘤之方法，其包含：a)向該腫瘤位點局部投與有效量之包含病毒載體之溶瘤病毒(例如溶瘤腺病毒)，該病毒載體包含可操作連接至病毒複製所必需之病毒基因之腫瘤細胞特異性啟動子；b)向該腫瘤位點局部投與有效量之免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)；及c)向該腫瘤位點局部投與有效量之不活化之腫瘤細胞。在一些實施例中，免疫調節劑係免疫檢查點抑制劑。在一些實施例中，免疫調節劑係選自由以下組成之群之免疫檢查點分子之調節劑：CTLA-4、PD-1、PD-L1、PD-L2、TIM3、B7-H3、B7-H4、LAG-3、KIR及其配體。在一些實施例中，免疫調節劑係免疫刺激劑。在一些實施例中，免疫刺激劑係OX40、4-1BB或CD40之活化劑。在一些實施例中，方法包含局部投與免疫調節劑之組合，其包含一或多種免疫檢查點抑制劑及/或一或多種免疫刺激劑(例如至少兩種免疫檢查點抑制劑、至少兩種免疫刺激劑或至少一種免疫檢查點抑制劑及至少一種免疫刺激劑之組合)。在一些實施例中，腫瘤特異性啟動子係E2F-1啟動子，例如人類E2F-1啟 動子或包含SEQ ID NO：1中所述之核苷酸序列之E2F-1啟動子。在一些實施例中，病毒複製所必需之病毒基因選自由以下組成之群：E1A、E1B及E4。在一些實施例中，不活化之腫瘤細胞係自體的。在一些實施例中，不活化之腫瘤細胞係同種異體的。在一些實施例中，不活化之腫瘤細胞來自腫瘤細胞系。在一些實施例中，藉由輻照使不活化之腫瘤細胞不活化。在一些實施例中，同時投與溶瘤病毒及不活化之腫瘤細胞(例如在單一組合物中)。在一些實施例中，在即將投與之前混合溶瘤病毒及不活化之腫瘤細胞。在一些實施例中，依序投與溶瘤病毒及不活化之腫瘤細胞。在一些實施例中，在投與後立刻在投與位點混合溶瘤病毒及不活化之腫瘤細胞。在一些實施例中，將溶瘤病毒、免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)及/或不活化之腫瘤細胞投與至具有腫瘤之組織。在一些實施例中，該方法進一步包含藉由局部投與除外之投與途徑投與溶瘤病毒及/或免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)及/或不活化之腫瘤細胞。
在一些實施例中，提供治療個體之固態或淋巴腫瘤之方法，其包含：a)向該腫瘤位點局部投與有效量之包含病毒載體之溶瘤病毒(例如溶瘤腺病毒)，該病毒載體包含可操作連接至病毒複製所必需之病毒基因之腫瘤細胞特異性啟動子及編碼可操作連接至病毒啟動子之免疫相關分子(例如細胞介素或趨化介素)之核酸；b)向該腫瘤位點局部投與有效量之免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)；及c)向該腫瘤位點局部投與有效量之不活化之腫瘤細胞，其中使不活化之腫瘤細胞不活化。在一些實施例中，免疫調節劑係免疫檢查點抑制劑。在一些實施例中，免疫調節劑係選自由以下組成之群之免疫檢查點分子之調節劑：CTLA-4、PD-1、PD-L1、PD-L2、TIM3、B7-H3、B7-H4、LAG-3、KIR及其配體。在一些實施例 中，免疫調節劑係免疫刺激劑。在一些實施例中，免疫刺激劑係OX40、4-1BB或CD40之活化劑。在一些實施例中，方法包含局部投與免疫調節劑之組合，其包含一或多種免疫檢查點抑制劑及/或一或多種免疫刺激劑(例如至少兩種免疫檢查點抑制劑、至少兩種免疫刺激劑或至少一種免疫檢查點抑制劑及至少一種免疫刺激劑之組合)。在一些實施例中，腫瘤特異性啟動子係E2F-1啟動子，例如人類E2F-1啟動子或包含SEQ ID NO：1中所述之核苷酸序列之E2F-1啟動子。在一些實施例中，病毒複製所必需之病毒基因選自由以下組成之群：E1A、E1B及E4。在一些實施例中，可操作連接至編碼免疫相關分子之核酸之病毒啟動子係E3啟動子。在一些實施例中，免疫相關分子係GM-CSF。在一些實施例中，不活化之腫瘤細胞係自體的。在一些實施例中，不活化之腫瘤細胞係同種異體的。在一些實施例中，不活化之腫瘤細胞來自腫瘤細胞系。在一些實施例中，藉由輻照使不活化之腫瘤細胞不活化。在一些實施例中，同時投與溶瘤病毒及不活化之腫瘤細胞(例如在單一組合物中)。在一些實施例中，在即將投與之前混合溶瘤病毒及不活化之腫瘤細胞。在一些實施例中，依序投與溶瘤病毒及不活化之腫瘤細胞。在一些實施例中，在投與後立刻在投與位點混合溶瘤病毒及不活化之腫瘤細胞。在一些實施例中，將溶瘤病毒、免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)及/或不活化之腫瘤細胞投與至具有腫瘤之組織。在一些實施例中，將溶瘤病毒、免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)及/或不活化之腫瘤細胞直接投與至腫瘤中。在一些實施例中，該方法進一步包含藉由局部投與除外之投與途徑投與溶瘤病毒及/或免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)及/或不活化之腫瘤細胞。
在一些實施例中，提供治療個體之固態或淋巴腫瘤之方法，其包 含：a)向該腫瘤位點局部投與有效量之腺病毒血清型5，其中天然腺病毒之內源性E1a啟動子及E3 19kD編碼區經人類E2F-1啟動子及編碼免疫相關分子(例如細胞介素、趨化介素，例如GM-CSF)之核酸置換；b)向該腫瘤位點局部投與有效量之免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)；及c)向該腫瘤位點局部投與有效量之不活化之腫瘤細胞。在一些實施例中，免疫調節劑係免疫檢查點抑制劑。在一些實施例中，免疫調節劑係選自由以下組成之群之免疫檢查點分子之調節劑：CTLA-4、PD-1、PD-L1、PD-L2、TIM3、B7-H3、B7-H4、LAG-3、KIR及其配體。在一些實施例中，免疫調節劑係免疫刺激劑。在一些實施例中，免疫刺激劑係OX40、4-1BB或CD40之活化劑。在一些實施例中，方法包含局部投與免疫調節劑之組合，其包含一或多種免疫檢查點抑制劑及/或一或多種免疫刺激劑(例如至少兩種免疫檢查點抑制劑、至少兩種免疫刺激劑或至少一種免疫檢查點抑制劑及至少一種免疫刺激劑之組合)。在一些實施例中，腫瘤特異性啟動子係人類E2F-1啟動子或包含SEQ ID NO：1中所述之核苷酸序列之E2F-1啟動子。在一些實施例中，病毒複製所必需之病毒基因選自由以下組成之群：E1A、E1B及E4。在一些實施例中，可操作連接至編碼免疫相關分子之核酸之病毒啟動子係E3啟動子。在一些實施例中，不活化之腫瘤細胞係自體的。在一些實施例中，不活化之腫瘤細胞係同種異體的。在一些實施例中，不活化之腫瘤細胞來自腫瘤細胞系。在一些實施例中，藉由輻照使不活化之腫瘤細胞不活化。在一些實施例中，同時投與腺病毒及不活化之腫瘤細胞(例如在單一組合物中)。在一些實施例中，在即將投與之前混合腺病毒及不活化之腫瘤細胞。在一些實施例中，依序投與腺病毒及不活化之腫瘤細胞。在一些實施例中，在投與後立刻在投與位點混合腺病毒及 不活化之腫瘤細胞。在一些實施例中，將腺病毒、免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)及/或不活化之腫瘤細胞投與至具有腫瘤之組織。在一些實施例中，將腺病毒、免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)及/或不活化之腫瘤細胞直接投與至腫瘤中。在一些實施例中，該方法進一步包含藉由局部投與除外之投與途徑投與腺病毒及/或免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)及/或不活化之腫瘤細胞。
在一些實施例中，提供治療個體之固態或淋巴腫瘤之方法，其包含：a)向該腫瘤位點局部投與有效量之CG0070；及b)向該腫瘤位點局部投與有效量之免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)；及c)向該腫瘤位點局部投與有效量之不活化之腫瘤細胞。在一些實施例中，免疫調節劑係免疫檢查點抑制劑。在一些實施例中，免疫調節劑係選自由以下組成之群之免疫檢查點分子之調節劑：CTLA-4、PD-1、PD-L1、PD-L2、TIM3、B7-H3、B7-H4、LAG-3、KIR及其配體。在一些實施例中，免疫調節劑係免疫刺激劑。在一些實施例中，免疫刺激劑係OX40、4-1BB或CD40之活化劑。在一些實施例中，方法包含局部投與免疫調節劑之組合，其包含一或多種免疫檢查點抑制劑及/或一或多種免疫刺激劑(例如至少兩種免疫檢查點抑制劑、至少兩種免疫刺激劑或至少一種免疫檢查點抑制劑及至少一種免疫刺激劑之組合)。在一些實施例中，不活化之腫瘤細胞係自體的。在一些實施例中，不活化之腫瘤細胞係同種異體的。在一些實施例中，不活化之腫瘤細胞來自腫瘤細胞系。在一些實施例中，藉由輻照使不活化之腫瘤細胞不活化。在一些實施例中，同時投與CG0070及不活化之腫瘤細胞(例如在單一組合物中)。在一些實施例中，在即將投與之前混合CG0070及不活化之腫瘤細胞。在一些實施例中，依序投與CG0070及不活化之腫 瘤細胞。在一些實施例中，在投與後立刻在投與位點混合CG0070及不活化之腫瘤細胞。在一些實施例中，將CG0070、免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)及/或不活化之腫瘤細胞投與至具有固態或淋巴腫瘤之組織。在一些實施例中，將CG0070、免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)及/或不活化之腫瘤細胞直接投與至腫瘤中。在一些實施例中，該方法進一步包含藉由局部投與除外之投與途徑投與CG0070及/或免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)及/或不活化之腫瘤細胞。
在一些實施例中，提供治療個體之固態或淋巴腫瘤之方法，其包含：a)腫瘤內投與有效量之CG0070；及b)腫瘤內投與有效量之CTLA-4之抑制劑(例如抗CTLA-4抗體(例如伊匹單抗)或經改造之脂質運載蛋白(例如特異性識別CTLA-4之抗運載蛋白))；c)腫瘤內投與有效量之4-1BB活化劑(例如激動性抗4-1BB抗體，例如PF-05082566)；及d)向腫瘤位點腫瘤內投與有效量之不活化之腫瘤細胞(例如同種異體不活化之腫瘤細胞)，其中CG0070之有效量係每週約1×108至約1×1014個病毒顆粒(vp)(例如以下中之約任一者：每週5×1010vp、1×1011vp、5×1011vp或1×1012vp)，其中CTLA-4之抑制劑之有效量係約0.1mg至約100mg(例如不超過每週1mg、3mg、6mg、12mg或24mg中之約任一者)，其中4-1BB活化劑之有效量係約0.1mg至約100mg(例如不超過每週1mg、3mg、6mg、12mg或24mg中之約任一者)，且其中不活化之腫瘤細胞之有效量係CG0070之有效量之至少約104。在一些實施例中，在投與CG0070及不活化之腫瘤細胞後立刻(例如，在投與後不超過5分鐘)投與CTLA-4之抑制劑及4-1BB活化劑。在一些實施例中，CTLA-4之抑制劑係抗CTLA-4抗體(例如伊匹單抗)(例如，YERVOY®)。在一些實施例中，CTLA-4之抑制 劑係經改造之脂質運載蛋白，例如特異性識別CTLA-4之抗運載蛋白。在一些實施例中，4-1BB活化劑係激動性抗4-1BB抗體，例如PF-05082566。在一些實施例中，與CG0070投與組合進一步向個體腫瘤內投與有效量之DDM作為轉導增強劑。在一些實施例中，藉由輻照使不活化之腫瘤細胞不活化。在一些實施例中，同時投與CG0070及不活化之腫瘤細胞(例如在單一組合物中)。在一些實施例中，在即將投與之前混合CG0070及不活化之腫瘤細胞。在一些實施例中，藉由注射至具有腫瘤之組織中投與CG0070、CTLA-4之抑制劑、41-BB活化劑及不活化之腫瘤細胞。在一些實施例中，藉由直接注射至腫瘤中投與CG0070、CTLA-4之抑制劑、41-BB活化劑及不活化之腫瘤細胞。在一些實施例中，在約1週至約8週(例如約4週或約6週)中每週投與CG0070、CTLA-4之抑制劑、41-BB活化劑及不活化之腫瘤細胞作為一個治療過程。在一些實施例中，每約2個月至約3個月重複治療過程。在一些實施例中，固態或淋巴腫瘤選自由以下組成之群：頭頸癌、乳癌、結腸直腸癌、肝癌、胰臟腺癌、膽囊及膽管癌、卵巢癌、子宮頸癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、腎細胞癌、膀胱癌、***癌、骨癌、間皮瘤、腦癌、軟組織肉瘤、子宮癌、甲狀腺癌、鼻咽癌及黑色素瘤。在一些實施例中，固態或淋巴腫瘤對於先前療法難治。
不活化之腫瘤細胞可自多種來源(包括但不限於自體來源、同種異體來源、腫瘤細胞系及其組合)獲得。通常，不活化之腫瘤細胞屬相同類型，或表現一或多種相同腫瘤抗原及所治療之固態或淋巴腫瘤。在一些實施例中，不活化之腫瘤細胞由腫瘤細胞之單一群體組成。在一些實施例中，不活化之腫瘤細胞包含腫瘤細胞之複數個(例如2、3、4、5、6或更多 個)群體。
在一些實施例中，不活化之腫瘤細胞源自同種異體來源。在一些實施例中，不活化之腫瘤細胞源自具有腫瘤(例如相同類型之固態或淋巴腫瘤)之不同個體。在一些實施例中，所治療個體之不活化之腫瘤細胞及固態或淋巴腫瘤表現至少一種共用腫瘤抗原(例如腫瘤相關抗原及/或腫瘤特異性抗原)。
在一些實施例中，不活化之腫瘤細胞源自與個體之固態或淋巴腫瘤共用相同或類似起源或遺傳輪廓(例如腫瘤抗原表現輪廓)之腫瘤細胞系。在一些實施例中，不活化之腫瘤細胞及具有腫瘤之個體表現至少一種共用腫瘤抗原(例如腫瘤相關抗原及/或腫瘤特異性抗原)。舉例而言，在所治療之固態或淋巴腫瘤係***癌時，***腫瘤細胞系可選自由以下組成之群：DU145、PC-3及LnCaP。
在一些實施例中，不活化之腫瘤細胞源自具有固態或淋巴腫瘤之相同個體。在一些實施例中，不活化之腫瘤細胞源自具有固態或淋巴腫瘤之組織。在一些實施例中，不活化之腫瘤細胞源自固態或淋巴腫瘤(例如，腫瘤生檢或切除之腫瘤)。在一些實施例中，不活化之腫瘤細胞源自個體之固態或淋巴腫瘤之轉移位點。在一些實施例中，不活化之腫瘤細胞在活體內不活化之腫瘤細胞死亡期間提供一或多種細胞、細胞介素、趨化介素及/或抗原性組份，其中取樣一或多種組份並由個體之抗原呈遞細胞(例如樹突細胞)交叉呈遞以針對固態或淋巴腫瘤刺激免疫反應。
在一些實施例中，例如經由具有編碼轉基因之載體之感染劑轉導修飾不活化之腫瘤細胞，例如經遺傳修飾。可由感染劑在活體外或活體內轉導或轉染不活化之腫瘤細胞。在一些實施例中，不活化之腫瘤細胞經修飾 以表現或分泌免疫相關分子。在一些實施例中，免疫相關分子係細胞介素、趨化介素或另一免疫相關分子。在一些實施例中，免疫相關分子選自由以下組成之群：IL-2、IL-12、干擾素(例如1型、2型或3型干擾素，例如干擾素γ)、CCL4、CCL19、CCL21、CXCL13、TLR1、TLR2、TLR3、TLR4、TLR5、TLR6、TLR7、TLR8、TLR9、TLR10、RIG-I、MDA5、LGP2及LTαβ。在一些實施例中，免疫相關分子選自由以下組成之群：STING活化劑(例如CDN)、PRRago(例如CpG、咪喹莫特或聚I：C)、TLR刺激物(例如GS-9620、AED-1419、CYT-003-QbG10、AVE-0675或PF-7909)及RLR刺激物(例如RIG-I、Mda5或LGP2刺激物)。
在一些實施例中，不活化之腫瘤細胞經修飾以表現或分泌一或多種免疫調節劑。在一些實施例中，一或多種免疫調節劑包含免疫刺激劑。在一些實施例中，免疫刺激劑係免疫刺激分子之天然或經改造之配體，包括(例如)OX40之配體(例如，OX40L)、CD-28之配體(例如，CD80、CD86)、ICOS之配體(例如，B7RP1)、4-1BB之配體(例如，4-1BBL、Ultra4-1BBL)、CD27之配體(例如，CD70)、CD40之配體(例如，CD40L)及TCR之配體(例如，MHC I類或II類分子、IMCgp100)。在一些實施例中，免疫刺激劑係選自由以下組成之群之抗體：抗CD28(例如，TGN-1412)、抗OX40(例如，MEDI6469、MEDI-0562)、抗ICOS(例如，MEDI-570)、抗GITR(例如，TRX518、INBRX-110、NOV-120301)、抗41-BB(例如，BMS-663513、PF-05082566)、抗CD27(例如，BION-1402、瓦利路單抗及hCD27.15)、抗CD40(例如，CP870,893、BI-655064、BMS-986090、APX005、APX005M)、抗CD3(例如，布利莫單抗、莫羅單抗)及抗HVEM。在一些實施例中，抗體係激 動性抗體。在一些實施例中，抗體係單株抗體。在一些實施例中，抗體係選自由以下組成之群之抗原結合片段：全長抗體之Fab、Fab’、F(ab’)2、及Fv、scFv或其他抗原結合子序列。在一些實施例中，抗體係人類、人類化或嵌合抗體。在一些實施例中，抗體係雙特異性抗體、多特異性抗體、單一結構域抗體、包含抗體部分之融合蛋白、或其任何其他功能變體或衍生物。
在一些實施例中，一或多種免疫調節劑包含免疫檢查點抑制劑。在一些實施例中，免疫檢查點抑制劑係抑制性免疫檢查點分子之天然或經改造之配體，包括(例如)CTLA-4之配體(例如，B7.1、B7.2)、TIM3之配體(例如，半乳凝素-9)、A2a受體之配體(例如，腺苷、Regadenoson)、LAG3之配體(例如，MHC I類或MHC II類分子)、BTLA之配體(例如，HVEM、B7-H4)、KIR之配體(例如，MHC I類或MHC II類分子)、PD-1之配體(例如，PD-L1、PD-L2)、IDO之配體(例如，NKTR-218、吲哚西莫、NLG919)及CD47之配體(例如，SIRP-α受體)。在一些實施例中，免疫檢查點抑制劑係靶向抑制性免疫檢查點蛋白之抗體。在一些實施例中，免疫調節劑係選自由以下組成之群之抗體：抗CTLA-4(例如，伊匹單抗、曲美目單抗、KAHR-102)、抗TIM3(例如，F38-2E2、ENUM005)、抗LAG3(例如，BMS-986016、IMP701、IMP321、C9B7W)、抗KIR(例如，利利單抗及IPH2101)、抗PD-1(例如，尼沃魯單抗、匹利珠單抗、派姆單抗、BMS-936559、阿替珠單抗、蘭布魯珠單抗、MK-3475、AMP-224、AMP-514、STI-A1110、TSR-042)、抗PD-L1(例如，KY-1003(EP20120194977)、MCLA-145、RG7446、BMS-936559、MEDI-4736、MSB0010718C、AUR-012、STI-A1010、PCT/US2001/020964、 MPDL3280A、AMP-224、達匹珠單抗(CDP-7657)、MEDI-4920)、抗CD73(例如，AR-42(OSU-HDAC42、HDAC-42、AR42、AR 42、OSU-HDAC 42、OSU-HDAC-42、NSC D736012、HDAC-42、HDAC42、HDAC42、NSCD736012、NSC-D736012)、MEDI-9447)、抗B7-H3(例如，MGA271、DS-5573a、8H9)、抗CD47(例如，CC-90002、TTI-621、VLST-007)、抗BTLA、抗VISTA、抗A2aR、抗B7-1、抗B7-H4、抗CD52(例如阿倫單抗)、抗IL-10、抗IL-35及抗TGF-β(例如夫蘇木單抗)。在一些實施例中，抗體係拮抗性抗體。在一些實施例中，抗體係單株抗體。在一些實施例中，抗體係單株抗體。在一些實施例中，抗體係選自由以下組成之群之抗原結合片段：全長抗體之Fab、Fab’、F(ab’)2、及Fv、scFv或其他抗原結合子序列。在一些實施例中，抗體係人類、人類化或嵌合抗體。在一些實施例中，抗體係雙特異性抗體、多特異性抗體、單一結構域抗體、包含抗體部分之融合蛋白、或其任何其他功能變體或衍生物。
在一些實施例中，不活化之腫瘤細胞由組合療法中所用之感染劑轉導及遺傳修飾。
腫瘤細胞可藉由業內已知之方法中之任一者(包括但不限於機械、酶分離方法及其組合)自組織、切除之腫瘤或腫瘤生檢分離。舉例而言，可使用膠原酶、DNA水解酶及玻尿酸酶之混合物以培育腫瘤樣品以獲得不活化之腫瘤細胞。在一些實施例中，分離自體腫瘤細胞之多個批次係在療程期間自個體之固態或淋巴腫瘤或轉移位點獲得。在一些實施例中，在不活化之前冷凍保藏不活化之腫瘤細胞。
由於尤其在轉移位點中之癌細胞係經歷快速複製及頻繁突變之不同 細胞純系之非均相混合物，故有時較佳具有在該等變化發生時可適應該等變化之特異性組份。可自初始手術樣品、生檢或稍後移除轉移性病灶製備自體腫瘤細胞。此方法之優點之一在於可根據患者之反應腫瘤樣品之可用性改變自體腫瘤細胞。舉例而言，原發性腫瘤期中生成之腫瘤-感染劑(例如病毒)活的及活體內疫苗系統可不同於稍後使用來自轉移位點之腫瘤細胞生成者。在一些實施例中，最終目標係根據優勢腫瘤類型適用免疫治療反應，此係在路徑靶向療法或單株抗體定向療法之最近研發中不可發現之優點。
在投與之前使不活化之腫瘤細胞不活化。通常，不活化之腫瘤細胞勝任增殖。可利用業內已知方法中之任一者使腫瘤細胞不活化。在一些實施例中，藉由輻照使不活化之腫瘤細胞不活化。在一些實施例中，在投與患者之前，以約50至約200rad/min或約120至約140rad/min之劑量輻照不活化之腫瘤細胞。在一些實施例中，以2,500rad、5,000rad、10,000rad、15,000rad或20,000rad中之約任一者之總劑量輻照不活化之腫瘤細胞。在一些實施例中，以約10,000至約20,000rad之總劑量輻照不活化之腫瘤細胞。在一些實施例中，以足以抑制實質上100%細胞進一步增殖之總劑量輻照不活化之腫瘤細胞。在其中不活化之腫瘤細胞經遺傳修飾之一些實施例中，輻照之總劑量不足以抑制免疫相關分子(例如GM-CSF)之表現或分泌。在一些實施例中，輻照之總劑量在投與時不足以由感染劑抑制不活化之腫瘤細胞之轉導或遺傳修飾。在一些實施例中，在投與之前冷凍保藏不活化之腫瘤細胞。
藉由(例如)腫瘤內注射腫瘤內投與不活化之腫瘤細胞。用於投與之不活化之腫瘤細胞之適宜劑量取決於固態或淋巴腫瘤之狀態(例如，微環 境、類型、階段等)及個體之其他診斷及風險因素。在一些實施例中，不活化之腫瘤細胞之適宜劑量係1×103、1×104、1×105、2×105、5×105、1×106、2×106、5×106、1×107、5×107或1×108個細胞中之約任一者。在一些實施例中，不活化之腫瘤細胞之適宜劑量係約1×103至約1×104、約1×104至約1×105、約1×105至約2×105、約2×105至約5×105、約5×105至約106、約106至約2×106、約2×106至約5×106、約5×106至約1×107、約1×107至約5×107或約5×107至約1×108個腫瘤細胞中之任一者。在一些實施例中，不活化之腫瘤細胞之劑量計算為細胞/Kg體重。
在一些實施例中，感染劑(例如病毒)對不活化之腫瘤細胞之相對比率係基於感染倍數(MOI)指數，該指數係使用感染劑顆粒數對僅不活化之腫瘤細胞數或對活腫瘤細胞總數(包括不活化之腫瘤細胞及投與位點的估計活腫瘤細胞數)來計算。在一些實施例中，MOI係至少1、2、5、10、50、100、200、500、1000、5000、104、105、106或更大中之約任一者。在一些實施例中，感染劑係以與估計腫瘤位點之體積成正比之量提供。在一些實施例中，不活化之腫瘤細胞係以受以下限制之量提供：自腫瘤生檢、腫瘤切除術、腫瘤細胞培養及業內已知分離腫瘤細胞之其他方法之製劑。在一些實施例中，感染劑以約1×105個顆粒至約1×1014個顆粒(例如，約1×1012個顆粒)提供於組合物中。在一些實施例中，不活化之腫瘤細胞係以約1×103個細胞至約1×108個細胞(例如，約1×105個不活化之腫瘤細胞)提供於組合物中。
在一些實施例中，每日投與不活化之腫瘤細胞。在一些實施例中，不活化之腫瘤細胞係一週投與至少約1次、2次、3次、4次、5次、6次或7次(即每日)中之任一者。在一些實施例中，每週投與不活化之腫瘤細胞。 在一些實施例中，不活化之腫瘤細胞係每兩週投與；每週無間斷；三週中之兩週每週投與；四週中之三週每週投與；每2週一次；每3週一次；每4週一次；每6週一次；每8週一次、每月或每2至12個月投與。在一些實施例中，每次投與之間之間隔小於以下中之約任一者：6個月、3個月、1個月、20天、15天、12天、10天、9天、8天、7天、6天、5天、4天、3天、2天或1天。在一些實施例中，每次投與之間之間隔超過以下中之約任一者：1個月、2個月、3個月、4個月、5個月、6個月、8個月或12個月。在一些實施例中，投藥時間表中無間斷。在一些實施例中，每次投與之間之間隔不超過約一週。在一些實施例中，不活化之腫瘤細胞係以與感染劑相同之投藥時間表投與。在一些實施例中，不活化之腫瘤細胞係以與感染劑不同之投藥時間表投與。
不活化之腫瘤細胞之投與可在延長時間段(例如約1個月高達至約7年)內。在一些實施例中，在至少以下中之約任一者之時段內投與不活化之腫瘤細胞：1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、18、24、30、36、48、60、72或84個月。在一些實施例中，在至少3週或6週之時段內投與不活化之腫瘤細胞。在一些實施例中，每3個月在四週中之三週中每週投與不活化之腫瘤細胞。在一些實施例中，每3個月在6週中每週投與不活化之腫瘤細胞。
在一些實施例中，每週投與感染劑。在一些實施例中，每週投與免疫調節劑。在一些實施例中，每週投與不活化之腫瘤細胞。
在一些實施例中，每日投與感染劑。在一些實施例中，每日投與免疫調節劑。在一些實施例中，每日投與不活化之腫瘤細胞。
在一些實施例中，感染劑首先在第一治療過程中每日或每週投與多 次(例如1、2、3、4、5、6、7、10或更多次中之任一者)、之後在第二治療過程中每日或每週投與多次(例如1、2、3、4、5、6、7、10或次中之任一者)，及隨後每個月或每幾個(例如2、3、4、5、6或更多個之任一者)月維持治療過程。在一些實施例中，免疫調節劑首先在第一治療過程中每日或每週投與多次(例如1、2、3、4、5、6、7、10或更多次中之任一者)、之後在第二治療過程中每日或每週投與多次(例如1、2、3、4、5、6、7、10或次中之任一者)，及隨後每個月或每幾個(例如2、3、4、5、6或更多個之任一者)月維持治療過程。在一些實施例中，不活化之腫瘤細胞首先在第一治療過程中每日或每週投與多次(例如1、2、3、4、5、6、7、10或更多次中之任一者)、之後在第二治療過程中每日或每週投與多次(例如1、2、3、4、5、6、7、10或次中之任一者)，及隨後每個月或每幾個(例如2、3、4、5、6或更多個之任一者)月維持治療過程。
在一些實施例中，感染劑、免疫調節劑及不活化之細胞係利用上述投藥時間表之任一組合投與。每一治療過程可包含在數天、數週或數月之過程內投與。只要需要，可重複治療過程。
在一些實施例中，依序投與上文論述之感染劑及不活化之腫瘤細胞，即在投與不活化之腫瘤細胞之前或之後投與感染劑之投與。在一些實施例中，在投與不活化之腫瘤細胞之前投與感染劑。在一些實施例中，在投與不活化之腫瘤細胞之前不超過約以下中之任一者投與感染劑：15分鐘、30分鐘、1小時、2小時、3小時、4小時、5小時、6小時、12小時或24小時。在一些實施例中，在投與不活化之腫瘤細胞之前大約天或週(例如約以下中之任一者：1天、2天、3天、4天、5天、6天、1週、2週、3週、4週或更長時間)投與感染劑。在一些實施例中，在投與不活化之腫瘤 細胞之後投與感染劑。在一些實施例中，在投與不活化之腫瘤細胞之後不超過約以下中之任一者投與感染劑：15分鐘、30分鐘、1小時、2小時、3小時、4小時、5小時、6小時、12小時或24小時。在一些實施例中，在投與不活化之腫瘤細胞之後大約天或週(例如約以下中之任一者：1天、2天、3天、4天、5天、6天、1週、2週、3週、4週或更長時間)投與感染劑。在一些實施例中，感染劑及不活化之腫瘤細胞係在一者之後立刻投與另一者(例如，兩次投與之間在5分鐘或更少時間內)。舉例而言，在一些實施例中，在即將投與不活化之腫瘤細胞之前投與感染劑。在一些實施例中，在投與不活化之腫瘤細胞之後立刻投與感染劑。
在一些實施例中，同時投與感染劑及不活化之腫瘤細胞。在一些實施例中，經由單獨組合物同時投與感染劑及不活化之腫瘤細胞。在一些實施例中，感染劑及不活化之腫瘤細胞係以單一組合物形式投與。在一些實施例中，在投與組合物之前(例如在即將投與組合物之前，例如在投與組合物之前小於約10、5或1分鐘內)混合感染劑及不活化之腫瘤細胞。在一些實施例中，預製備包含感染劑及不活化之腫瘤細胞之組合物且在投與之前將其儲存至少1小時、2小時、3小時、4小時、5小時、6小時、12小時、24小時、2天、3天、4天、5天、6天、7天、2週、3週或更長時間中之約任一者。在一些實施例中，完全分開不活化之腫瘤細胞及感染劑直至投與至個體之時刻。在一些實施例中，感染劑及不活化之腫瘤細胞在投與之前無需預培育。
套組及醫藥組合物
在另一態樣中，提供可用於本文所述方法中之任一者之套組、單位劑量及製品。
舉例而言，在一些實施例中，提供用於治療個體之固態或淋巴腫瘤(例如用於抑制腫瘤轉移)之套組，其包含：a)感染劑，b)免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)，及c)用於向腫瘤位點局部投與感染劑及/或免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)之裝置。在一些實施例中，感染劑係病毒，例如溶瘤病毒，例如溶瘤腺病毒。在一些實施例中，感染劑包含編碼免疫相關分子(例如細胞介素或趨化介素)之核酸。在一些實施例中，免疫相關分子選自由以下組成之群：GM-CSF、IL-2、IL12、干擾素(例如1型、2型或3型干擾素，例如干擾素γ)、CCL4、CCL19、CCL21、CXCL13、TLR1、TLR2、TLR3、TLR4、TLR5、TLR6、TLR7、TLR8、TLR9、TLR10、RIG-I、MDA5、LGP2及LTαβ。在一些實施例中，免疫刺激劑係OX40、4-1BB或CD40之活化劑(例如激動劑抗體)。在一些實施例中，免疫調節劑係選自由以下組成之群之免疫檢查點分子之調節劑(例如抗體)：CTLA-4、PD-1、PD-L1、PD-L2、TIM3、B7-H3、B7-H4、LAG-3、KIR及其配體。在一些實施例中，套組包含免疫調節劑之組合，其包含一或多種免疫檢查點抑制劑及/或一或多種免疫刺激劑(例如CTLA-4抑制劑及CD40活化劑之組合、或CTLA-4抑制劑及4-1BB活化劑之組合)。在一些實施例中，套組進一步包含選自由以下組成之群之免疫相關分子：GM-CSF、IL-2、IL12、干擾素(例如1型、2型或3型干擾素，例如干擾素γ)、CCL4、CCL19、CCL21、CXCL13、TLR1、TLR2、TLR3、TLR4、TLR5、TLR6、TLR7、TLR8、TLR9、TLR10、RIG-I、MDA5、LGP2、LTαβ、STING活化劑(例如CDN)、PRRago(例如CpG、咪喹莫特或聚I：C)、TLR刺激物(例如GS-9620、AED-1419、CYT-003-QbG10、AVE-0675或PF-7909)及RLR刺激物(例如RIG-I、Mda5或LGP2 刺激物)。在一些實施例中，套組進一步包括包含轉導增強劑之預處理組合物，例如N-十二烷基-β-D-麥芽糖苷(DDM)。在一些實施例中，套組進一步包含複數個不活化之腫瘤細胞。在一些實施例中，複數個不活化之腫瘤細胞係自體的、同種異體的、來自腫瘤細胞系或其組合。在一些實施例中，藉由輻照使複數個不活化之腫瘤細胞不活化。在一些實施例中，套組進一步包含用於在投與之前混合感染劑及複數個不活化之腫瘤細胞之裝置、材料及/或說明書。在一些實施例中，用於局部投與之裝置用於同時投與複數個不活化之腫瘤細胞及感染劑。在一些實施例中，用於局部投與之裝置用於將感染劑、及/或免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)及/或不活化之腫瘤細胞投與直接至腫瘤中。在一些實施例中，用於局部投與之裝置用於將感染劑、及/或免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)及/或不活化之腫瘤細胞投與至具有腫瘤之組織。在一些實施例中，局部投與係膀胱內投與。在一些實施例中，套組進一步包含用於實施上述方法中之任一者之說明書。
在一些實施例中，提供用於治療個體之固態或淋巴腫瘤(例如用於抑制腫瘤轉移)之套組，其包含：a)複製勝任溶瘤病毒(例如溶瘤腺病毒)，b)免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)，及c)用於向腫瘤位點局部投與用於向腫瘤位點局部投與溶瘤病毒及/或免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)之裝置。在一些實施例中，溶瘤病毒包含可操作連接至病毒複製所必需之基因(例如，E1A、E1B或E4基因)之腫瘤特異性啟動子(例如E2F-1啟動子)。在一些實施例中，溶瘤病毒包含編碼免疫相關分子(例如細胞介素或趨化介素)之核酸。在一些實施例中，編碼免疫相關分子之核酸可操作連接至病毒啟動子，例如E3啟動子。在一些實施例中，免疫刺激劑係 OX40、4-1BB或CD40之活化劑(例如激動劑抗體)。在一些實施例中，免疫調節劑係選自由以下組成之群之免疫檢查點分子之調節劑(例如抗體)：CTLA-4、PD-1、PD-L1、PD-L2、TIM3、B7-H3、B7-H4、LAG-3、KIR及其配體。在一些實施例中，套組包含免疫調節劑之組合，其包含一或多種免疫檢查點抑制劑及/或一或多種免疫刺激劑(例如CTLA-4抑制劑及CD40活化劑之組合、或CTLA-4抑制劑及4-1BB活化劑之組合)。在一些實施例中，套組進一步包括包含轉導增強劑之預處理組合物，例如N-十二烷基-β-D-麥芽糖苷(DDM)。在一些實施例中，複數個不活化之腫瘤細胞係自體的、同種異體的、來自腫瘤細胞系或其組合。在一些實施例中，藉由輻照使複數個不活化之腫瘤細胞不活化。在一些實施例中，套組進一步包含用於在投與之前混合溶瘤病毒及複數個不活化之腫瘤細胞之裝置、材料及/或說明書。在一些實施例中，用於局部投與之裝置用於同時投與複數個不活化之腫瘤細胞及溶瘤病毒。在一些實施例中，用於局部投與之裝置用於將溶瘤病毒、及/或免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)、及/或不活化之腫瘤細胞投與直接至腫瘤中。在一些實施例中，用於局部投與之裝置用於將溶瘤病毒、及/或免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)及/或不活化之腫瘤細胞投與至具有腫瘤之組織。在一些實施例中，局部投與係膀胱內投與。在一些實施例中，套組進一步包含用於實施上述方法中之任一者之說明書。
在一些實施例中，提供用於治療個體之固態或淋巴腫瘤(例如用於抑制腫瘤轉移)之套組，其包含：a)腺病毒血清型5，其中天然腺病毒之內源性E1a啟動子及E3 19kD編碼區經人類E2F-1啟動子及編碼免疫相關分子(例如細胞介素或趨化介素，例如GM-CSF)之核酸置換，b)免疫調節劑 (包括免疫調節劑之組合)，及c)用於向腫瘤位點局部投與用於向腫瘤位點局部投與溶瘤病毒及/或免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)之裝置。在一些實施例中，免疫刺激劑係OX40、4-1BB或CD40之活化劑(例如激動劑抗體)。在一些實施例中，免疫調節劑係選自由以下組成之群之免疫檢查點分子之調節劑(例如抗體)：CTLA-4、PD-1、PD-L1、PD-L2、TIM3、B7-H3、B7-H4、LAG-3、KIR及其配體。在一些實施例中，套組包含免疫調節劑之組合，其包含一或多種免疫檢查點抑制劑及/或一或多種免疫刺激劑(例如CTLA-4抑制劑及CD40活化劑之組合、或CTLA-4抑制劑及4-1BB活化劑之組合)。在一些實施例中，套組進一步包括包含轉導增強劑之預處理組合物，例如N-十二烷基-β-D-麥芽糖苷(DDM)。在一些實施例中，複數個不活化之腫瘤細胞係自體的、同種異體的、來自腫瘤細胞系或其組合。在一些實施例中，藉由輻照使複數個不活化之腫瘤細胞不活化。在一些實施例中，套組進一步包含用於在投與之前混合腺病毒及複數個不活化之腫瘤細胞之裝置、材料及/或說明書。在一些實施例中，用於局部投與之裝置用於同時投與複數個不活化之腫瘤細胞及腺病毒。在一些實施例中，用於局部投與之裝置用於將腺病毒、及/或免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)、及/或不活化之腫瘤細胞投與直接至腫瘤中。在一些實施例中，用於局部投與之裝置用於將腺病毒、及/或免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)及/或不活化之腫瘤細胞投與至具有腫瘤之組織。在一些實施例中，局部投與係膀胱內投與。在一些實施例中，套組進一步包含用於實施上述方法中之任一者之說明書。
在一些實施例中，提供用於治療個體之固態或淋巴腫瘤(例如用於抑制腫瘤轉移)之套組，其包含：a)CG0070，b)免疫調節劑(包括免疫調節 劑之組合)，及c)用於向腫瘤位點局部投與用於向腫瘤位點局部投與溶瘤病毒及/或免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)之裝置。在一些實施例中，免疫刺激劑係OX40、4-1BB或CD40之活化劑(例如激動劑抗體)。在一些實施例中，免疫調節劑係選自由以下組成之群之免疫檢查點分子之調節劑(例如抗體)：CTLA-4、PD-1、PD-L1、PD-L2、TIM3、B7-H3、B7-H4、LAG-3、KIR及其配體。在一些實施例中，套組包含免疫調節劑之組合，其包含一或多種免疫檢查點抑制劑及/或一或多種免疫刺激劑(例如CTLA-4抑制劑及CD40活化劑之組合、或CTLA-4抑制劑及4-1BB活化劑之組合)。在一些實施例中，套組進一步包括包含轉導增強劑之預處理組合物，例如N-十二烷基-β-D-麥芽糖苷(DDM)。在一些實施例中，複數個不活化之腫瘤細胞係自體的、同種異體的、來自腫瘤細胞系或其組合。在一些實施例中，藉由輻照使複數個不活化之腫瘤細胞不活化。在一些實施例中，套組進一步包含用於在投與之前混合CG0070及複數個不活化之腫瘤細胞之裝置、材料及/或說明書。在一些實施例中，用於局部投與之裝置用於同時投與複數個不活化之腫瘤細胞及CG0070。在一些實施例中，用於局部投與之裝置用於將CG0070、及/或免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)及/或不活化之腫瘤細胞投與直接至腫瘤中。在一些實施例中，用於局部投與之裝置用於將CG0070、及/或免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)及/或不活化之腫瘤細胞投與至具有腫瘤之組織。在一些實施例中，局部投與係膀胱內投與。在一些實施例中，套組進一步包含用於實施上述方法中之任一者之說明書。
套組可進一步包含適於治療之個體之選擇之說明。舉例而言，套組可包含基於一或多個生物標記(例如PD-1、PD-L1或PD-L2)之表現之個體 之選擇之說明。在一些實施例中，套組進一步包含用於評價生物標記(例如PD-1、PD-L1或PD-L2)之表現程度之試劑。本發明套組中供應之說明書通常係標記或包裝插頁(例如，套組中包括之紙頁)上之書面說明書，但亦可接受機讀說明書(例如，載於磁性或光學儲存盤上之說明書)。
另外提供腫瘤細胞製備套組，其包含執行腫瘤解離及製備之材料及說明書、酶及/或病毒載體轉導試劑、冷凍保藏小瓶等，以及含有使用說明之包裝插頁。腫瘤細胞製備套組可用於提供不活化之腫瘤細胞，且套組可與用於治療上述固態或淋巴腫瘤之套組中之任一者組合用於實施包含感染劑、免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)及經分離及不活化之腫瘤細胞的組合療法。
與感染劑(例如溶瘤腺病毒，例如CG0070)及免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)之使用有關之說明書通常包括關於用於預期治療之劑量、投藥時間表及投與途徑之資訊。容器可為單位劑量、體包裝(例如，多劑量包裝)或亞單位劑量。舉例而言，可提供含有足夠劑量之如本文揭示之感染劑及免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)以提供個體之有效治療達延長時段(例如一週、8天、9天、10天、11天、12天、13天、2週、3週、4週、6週、8週、3個月、4個月、5個月、7個月、8個月、9個月或更長時間中之任一者)的套組。套組亦可包括感染劑及免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)之多個單位劑量及使用說明書，其以足以儲存並用於藥房(例如動物藥房及複合藥房)之量包裝。
本發明之套組係呈適宜包裝。適宜包裝包括(但不限於)小瓶、瓶、廣口瓶、撓性包裝(例如，密封Mylar或塑膠袋)及諸如此類。套組可視情況提供額外組份，例如緩衝液及解釋性資訊。因此，本申請案亦提供製品， 其包括小瓶(例如密封小瓶)、瓶、廣口瓶、撓性包裝及諸如此類。
該製品可包含容器及位於該容器上或與該容器相連之標記或包裝插頁。適宜容器包含(例如)瓶、小瓶、注射器等。該等容器可自多種材料(例如玻璃或塑膠)形成。通常，容器容納有效治療本文所述疾病或病況之組合物，且可具有無菌存取埠(例如，該容器可為靜脈內溶液袋或具有可由皮下注射針刺穿之塞子的小瓶)。組合物中之至少一種活性劑係a)感染劑；或b)免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)。標記或包裝插頁指示該組合物用於治療個體之特定病況。標記或包裝插頁將進一步包含用於向個體投與組合物之說明書。亦涵蓋包含本文所述組合療法之製品及套組。
包裝插頁係指通常包括於治療產品之商業包裝內之說明書，其含有關於適應症、用法、劑量、投與、禁忌症及/或關於該等治療產品之使用之警告的資訊。在一些實施例中，包裝插頁指示該組合物用於治療固態或淋巴腫瘤(例如膀胱癌、腎細胞癌或黑色素瘤)。
另外，製品可另外包含第二容器，該第二容器包含醫藥上可接受之緩衝液，例如注射用抑菌水(BWFI)、磷酸鹽緩衝鹽水、林格氏溶液(Ringer's solution)及右旋糖溶液。其可進一步包括自商業及使用者角度來看期望之其他材料，包括其他緩衝液、稀釋劑、濾膜、針及注射器。
用於局部投與(例如膀胱內或腫瘤內注射)感染劑、免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)及/或不活化之腫瘤細胞之醫療裝置為業內已知。舉例而言，用於膀胱內遞送之醫療裝置可包括導管，例如Rusch 173430 Foley導管及BARD LUBRI-SIL Foley導管編號70516SI。用於腫瘤內注射之醫療裝置可包括注射器、針或針陣列及複數個出口。腫瘤內注射裝置可尤其經設計以確保感染劑、免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)及/或不活化之 腫瘤細胞在腫瘤位點中均勻分佈。在一些實施例中，腫瘤內注射裝置包含強制空氣噴嘴。
在另一態樣中，提供包含感染劑及免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)之醫藥組合物(例如，混合劑)。舉例而言，在一些實施例中，提供包含以下之醫藥組合物：a)感染劑，b)免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)，及c)適於將組合物局部投與至腫瘤位點之醫藥上可接受之賦形劑。在一些實施例中，感染劑係病毒，例如溶瘤病毒，例如溶瘤腺病毒。在一些實施例中，感染劑包含編碼免疫相關分子(例如細胞介素或趨化介素)之核酸。在一些實施例中，免疫相關分子選自由以下組成之群：GM-CSF、IL-2、IL12、干擾素(例如1型、2型或3型干擾素，例如干擾素γ)、CCL4、CCL19、CCL21、CXCL13、TLR1、TLR2、TLR3、TLR4、TLR5、TLR6、TLR7、TLR8、TLR9、TLR10、RIG-I、MDA5、LGP2及LTαβ。在一些實施例中，醫藥組合物進一步包含選自由以下組成之群之免疫相關分子：GM-CSF、IL-2、IL12、干擾素(例如1型、2型或3型干擾素，例如干擾素γ)、CCL4、CCL19、CCL21、CXCL13、TLR1、TLR2、TLR3、TLR4、TLR5、TLR6、TLR7、TLR8、TLR9、TLR10、RIG-I、MDA5、LGP2、LTαβ、STING活化劑(例如CDN)、PRRago(例如CpG、咪喹莫特或聚I：C)、TLR刺激物(例如GS-9620、AED-1419、CYT-003-QbG10、AVE-0675或PF-7909)及RLR刺激物(例如RIG-I、Mda5或LGP2刺激物)。在一些實施例中，醫藥組合物進一步包括包含轉導增強劑之預處理組合物，例如N-十二烷基-β-D-麥芽糖苷(DDM)。在一些實施例中，醫藥組合物進一步包含複數個不活化之腫瘤細胞。在一些實施例中，複數個不活化之腫瘤細胞係自體的、同種異體的、來自腫瘤細胞 系或其組合。在一些實施例中，藉由輻照使複數個不活化之腫瘤細胞不活化。在一些實施例中，免疫刺激劑係OX40、4-1BB或CD40之活化劑(例如激動劑抗體)。在一些實施例中，免疫調節劑係選自由以下組成之群之免疫檢查點分子之調節劑(例如抗體)：CTLA-4、PD-1、PD-L1、PD-L2、TIM3、B7-H3、B7-H4、LAG-3、KIR及其配體。在一些實施例中，醫藥組合物包含免疫調節劑之組合，其包含一或多種免疫檢查點抑制劑及/或一或多種免疫刺激劑(例如CTLA-4抑制劑及CD40活化劑之組合、或CTLA-4抑制劑及4-1BB活化劑之組合)。在一些實施例中，賦形劑適於將感染劑及/或免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)及/或不活化之腫瘤細胞直接投與至腫瘤中。在一些實施例中，賦形劑適於將感染劑及/或免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)及/或不活化之腫瘤細胞投與至具有腫瘤之組織。在一些實施例中，賦形劑係聚合物，例如水凝膠。在一些實施例中，聚合物(例如，水凝膠)適於延遲感染劑、及/或免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)及/或不活化之腫瘤細胞之釋放。
在一些實施例中，提供包含以下之醫藥組合物：a)複製勝任溶瘤病毒(例如溶瘤腺病毒)，b)免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)，及c)適於將組合物局部投與至腫瘤位點之醫藥上可接受之賦形劑。在一些實施例中，溶瘤病毒包含可操作連接至病毒複製所必需之基因(例如，E1A、E1B或E4基因)之腫瘤特異性啟動子(例如E2F-1啟動子)。在一些實施例中，溶瘤病毒包含編碼免疫相關分子(例如細胞介素或趨化介素)之核酸。在一些實施例中，編碼免疫相關分子之核酸可操作連接至病毒啟動子，例如E3啟動子。在一些實施例中，醫藥組合物進一步包含複數個不活化之腫瘤細胞。在一些實施例中，複數個不活化之腫瘤細胞係自體的、同種異 體的、來自腫瘤細胞系或其組合。在一些實施例中，藉由輻照使複數個不活化之腫瘤細胞不活化。在一些實施例中，免疫刺激劑係OX40、4-1BB或CD40之活化劑(例如激動劑抗體)。在一些實施例中，免疫調節劑係選自由以下組成之群之免疫檢查點分子之調節劑(例如抗體)：CTLA-4、PD-1、PD-L1、PD-L2、TIM3、B7-H3、B7-H4、LAG-3、KIR及其配體。在一些實施例中，醫藥組合物包含免疫調節劑之組合，其包含一或多種免疫檢查點抑制劑及/或一或多種免疫刺激劑(例如CTLA-4抑制劑及CD40活化劑之組合、或CTLA-4抑制劑及4-1BB活化劑之組合)。在一些實施例中，賦形劑適於將溶瘤病毒及/或免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)及/或不活化之腫瘤細胞直接投與至腫瘤中。在一些實施例中，賦形劑適於將溶瘤病毒及/或免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)及/或不活化之腫瘤細胞投與至具有腫瘤之組織。在一些實施例中，賦形劑係聚合物，例如水凝膠。在一些實施例中，聚合物(例如，水凝膠)適於延遲溶瘤病毒、及/或免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)及/或不活化之腫瘤細胞之釋放。
在一些實施例中，提供包含以下之醫藥組合物：a)腺病毒血清型5，其中天然腺病毒之內源性E1a啟動子及E3 19kD編碼區經人類E2F-1啟動子及編碼免疫相關分子(例如細胞介素或趨化介素，例如GM-CSF)之核酸置換；b)免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)，及c)適於將組合物局部投與至腫瘤位點之醫藥上可接受之賦形劑。在一些實施例中，醫藥組合物進一步包含複數個不活化之腫瘤細胞。在一些實施例中，複數個不活化之腫瘤細胞係自體的、同種異體的、來自腫瘤細胞系或其組合。在一些實施例中，藉由輻照使複數個不活化之腫瘤細胞不活化。在一些實施例中，免疫刺激劑係OX40、4-1BB或CD40之活化劑(例如激動劑抗體)。在一些實施 例中，免疫調節劑係選自由以下組成之群之免疫檢查點分子之調節劑(例如抗體)：CTLA-4、PD-1、PD-L1、PD-L2、TIM3、B7-H3、B7-H4、LAG-3、KIR及其配體。在一些實施例中，醫藥組合物包含免疫調節劑之組合，其包含一或多種免疫檢查點抑制劑及/或一或多種免疫刺激劑(例如CTLA-4抑制劑及CD40活化劑之組合、或CTLA-4抑制劑及4-1BB活化劑之組合)。在一些實施例中，賦形劑適於將腺病毒及/或免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)及/或不活化之腫瘤細胞直接投與至腫瘤中。在一些實施例中，賦形劑適於將腺病毒及/或免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)及/或不活化之腫瘤細胞投與至具有腫瘤之組織。在一些實施例中，賦形劑係聚合物，例如水凝膠。在一些實施例中，聚合物(例如，水凝膠)適於延遲腺病毒、及/或免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)及/或不活化之腫瘤細胞之釋放。
在一些實施例中，提供包含以下之醫藥組合物：a)CG0070；b)免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)，及c)適於將組合物局部投與至腫瘤位點之醫藥上可接受之賦形劑。在一些實施例中，醫藥組合物進一步包含複數個不活化之腫瘤細胞。在一些實施例中，複數個不活化之腫瘤細胞係自體的、同種異體的、來自腫瘤細胞系或其組合。在一些實施例中，藉由輻照使複數個不活化之腫瘤細胞不活化。在一些實施例中，免疫刺激劑係OX40、4-1BB或CD40之活化劑(例如激動劑抗體)。在一些實施例中，免疫調節劑係選自由以下組成之群之免疫檢查點分子之調節劑(例如抗體)：CTLA-4、PD-1、PD-L1、PD-L2、TIM3、B7-H3、B7-H4、LAG-3、KIR及其配體。在一些實施例中，醫藥組合物包含免疫調節劑之組合，其包含一或多種免疫檢查點抑制劑及/或一或多種免疫刺激劑(例如CTLA-4 抑制劑及CD40活化劑之組合、或CTLA-4抑制劑及4-1BB活化劑之組合)。在一些實施例中，賦形劑適於將CG0070及/或免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)及/或不活化之腫瘤細胞直接投與至腫瘤中。在一些實施例中，賦形劑適於將CG0070及/或免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)及/或不活化之腫瘤細胞投與至具有腫瘤之組織。在一些實施例中，賦形劑係聚合物，例如水凝膠。在一些實施例中，聚合物(例如，水凝膠)適於延遲CG0070、及/或免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)及/或不活化之腫瘤細胞之釋放。
醫藥組合物可包含任何適宜賦形劑，包括用於藥物遞送之主動或被動賦形劑，例如聚合物及非聚合物系統。在一些實施例中，賦形劑係天然多醣，例如表多醣水凝膠。適於用作醫藥組合物之賦形劑之實例性聚合物包括(但不限於)非生物可降解之聚合物，例如聚矽氧、交聯PVA及EVA；生物可降解之天然聚合物，例如明膠、膠原、端膠原、硬葡聚糖、結蘭膠及瓜爾膠；生物可降解之合成聚合物，例如PLA、PGA、PLGA、聚己內酯、聚對二噁烷、聚磷酸酯、聚酸酐及聚磷腈。可用作賦形劑之其他系統包括具有或無聚合物之微球體及奈米球體，包括「智能(smart)」聚合物系統，其包含pH反應性樹枝狀聚合物，例如聚-醯胺基醯胺(PAMAM)樹枝狀聚合物、聚(伸丙基亞胺)樹枝狀聚合物、聚(L-離胺酸)酯、聚(羥基脯胺酸)、聚(丙基丙烯酸)、聚(甲基丙烯酸)、CARBOPOL®、聚矽胺、EUDRAGIT® S-100、EUDRAGIT® L-100、幾丁聚醣、聚(甲基丙烯酸)(PMMA)、PMAA-PEG共聚物、馬來酸酐(MA)、甲基丙烯酸N,N-二甲基胺基乙基酯(DMAEMA)；溫度反應性聚合物，例如泊洛沙姆(Poloxamer)(PLURONICS®)、普拉司汀(Prolastin)、聚(N-取代之丙烯醯胺)、聚(有 機磷腈)、具有聚(乙二醇)及胺基酸酯之環三磷腈、聚(乙二醇)/聚(乳酸-共-乙醇酸)之嵌段共聚物、聚(乙二醇)(PEG)、聚(丙二醇)(PPG)、PMAA、聚(乙烯醇)(PVA)、各種絲-彈性蛋白樣聚合物、聚(矽胺)、聚(乙烯基甲醚)(PVME)、聚(乙烯基甲基噁唑啶酮)(PVMO)、聚(乙烯基吡咯啶酮)(PVP)、聚(N-乙烯基己內醯胺)、聚(N-乙烯基異丁基醯胺)、聚(乙烯基甲醚)、聚(N-乙烯基己內醯胺)(PVCL)、聚(矽氧基乙二醇)、聚(甲基丙烯酸二甲基胺基乙基酯)、三嵌段共聚物聚(DL-乳酸交酯-共-乙交酯-b-乙二醇-b-DL-乳酸交酯-共-乙交酯)(PLGA-PEG-PLGA)、纖維素衍生物、海藻酸鹽、結蘭膠、木糖葡聚糖；磁場敏感性聚合物，例如聚(N-異丙基丙烯醯胺)(PNIPAAm)；包含鐵磁性材料PNIPAAm-共-丙烯醯胺之水凝膠；電信號敏感性聚合物，例如幾丁聚醣、磺化聚苯乙烯、聚(噻吩)、聚(乙基噁唑啉)；離子型聚合物，例如海藻酸鈉(Ca2+)、幾丁聚醣(Mg2+)；及光敏性聚合物，例如經修飾之聚(丙烯醯胺)。
在一些實施例中，感染劑、免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)及不活化之腫瘤細胞可獨立地或一起調配於醫藥組合物中之聚合物(例如水凝膠)中。該聚合物(例如水凝膠)可使得醫藥組合物之一或多種組份(即感染劑、免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)及不活化之腫瘤細胞中之任一者或組合)能夠延遲釋放。該聚合物(例如水凝膠)調配物中之一或多種組份可延遲該組份在投與位點之釋放至少1分鐘、5分鐘、10分鐘、30分鐘、1小時、2小時、3小時、6小時或更長時間中之任一者。該聚合物(例如水凝膠)可包含適宜材料中之任一者，例如業內已知之天然或合成聚合物。在一些實施例中，該聚合物係生物可降解且生物相容的。
本文所述組合物(例如醫藥組合物)之組份(包括感染劑、免疫調節劑 (包括免疫調節劑之組合)及複數個不活化之腫瘤細胞)可彼此以特定相對比率存在。在一些實施例中，感染劑對不活化之腫瘤細胞之相對比率係基於感染倍數(MOI)指數，其係使用感染劑顆粒之數目對僅不活化之腫瘤細胞之數目或對活腫瘤細胞之總數目(包括不活化之腫瘤細胞及投與位點的活腫瘤細胞之估計數目)計算。在一些實施例中，MOI係至少約1、2、5、10、50、100、200、500、1000、5000、104、105、106或更大中之任一者。在一些實施例中，感染劑係以與估計腫瘤位點之體積成比例之量提供。在一些實施例中，不活化之腫瘤細胞係以受以下限制之量提供：自腫瘤生檢、腫瘤切除、腫瘤細胞培養及業內已知分離腫瘤細胞之其他方法之製備。在一些實施例中，感染劑係以約1×105個顆粒至約1×1014個顆粒(例如約1×1012個顆粒)提供於組合物中。在一些實施例中，不活化之腫瘤細胞係以約1×103個細胞至約1×108個細胞(例如約1×105個不活化之腫瘤細胞)提供於組合物中。在一些實施例中，免疫調節劑(包括免疫調節劑之組合)係以約0.1mg/Kg至約100mg/Kg體重(例如約1mg/Kg體重)提供於組合物中。
在一些實施例中，組合物之總量對於單一局部投與(例如腫瘤內注射或膀胱內投與)之全劑量足夠。在一些實施例中，組合物之總量對於向複數個腫瘤位點中之一者單一局部投與(例如腫瘤內注射)之分開劑量足夠。在一些實施例中，組合物之總量對於多次局部投與(包括向一個腫瘤位點中之單一局部投與(例如腫瘤內注射)與多個腫瘤位點的多次分開劑量投與的組合)足夠。
感染劑
本文所述方法及組合物係關於感染劑，包括但不限於細菌(例如 BCG)及病毒(包括病毒載體，例如溶瘤病毒，例如溶瘤腺病毒)。感染劑可為天然感染劑或經遺傳修飾之感染劑，例如經減毒之感染劑、及/或具有額外有利特徵(例如，在癌細胞中優先複製或編碼免疫相關分子)之感染劑。
在一些實施例中，感染劑係病毒。適用於本發明中之實例性病毒包括(但不限於)腺病毒，例如H101(ONCOCRINE®)、CG-TG-102(Ad5/3-D24-GM-CSF)及CG0070；單純疱疹病毒，例如Talimogene laherparapvec(T-VEC)及HSV-1716(SEPREHVIR®)；裡奧病毒，例如REOLYSIN®；牛痘病毒，例如JX-594；塞尼卡谷病毒，例如NTX-010及SVV-001；新城雞瘟病毒，例如NDV-NS1及GL-ONC1；脊髓灰質炎病毒，例如PVS-RIPO；麻疹病毒，例如MV-NIS；柯薩奇病毒，例如CavatakTM；水疱性口炎病毒；馬拉巴及棒狀病毒；小病毒及腮腺炎病毒。
在一些實施例中，感染劑係細菌，例如分枝桿菌及其衍生物、或單核球增多性李氏菌。實例性分枝桿菌及其衍生物包括(但不限於)卡介苗(「BCG」)及分枝桿菌細胞壁-DNA複合物(「MCNA」或「MCC」，例如UROCIDINTM)。
在一些實施例中，感染劑係野生型感染劑。在一些實施例中，感染劑經遺傳修飾。在一些實施例中，感染劑經減毒(例如經由多次傳代、不活化或遺傳修飾)。在一些實施例中，感染劑僅係可引起感染、發炎或感染樣效應之野生型感染劑的一或多個部分。
在一些實施例中，感染劑係非溶瘤病毒。在一些實施例中，非溶瘤病毒係野生型非溶瘤病毒。在一些實施例中，非溶瘤病毒經遺傳修飾。在 一些實施例中，非溶瘤病毒經減毒(例如經由多次傳代、不活化或遺傳修飾)。在一些實施例中，非溶瘤病毒不複製。在一些實施例中，非溶瘤病毒勝任複製。在一些實施例中，非溶瘤病毒優先在癌細胞中複製。在一些實施例中，非溶瘤病毒包含可操作連接至病毒複製所必需之病毒基因之腫瘤細胞特異性啟動子及包含編碼可操作連接至病毒啟動子之免疫相關分子(例如細胞介素或趨化介素)之核酸之病毒載體。在一些實施例中，免疫相關分子係GM-CSF。
在一些實施例中，感染劑係溶瘤病毒，例如溶瘤腺病毒。在一些實施例中，溶瘤病毒係野生型溶瘤病毒。在一些實施例中，溶瘤病毒經遺傳修飾。在一些實施例中，溶瘤病毒經減毒(例如經由多次傳代、不活化或遺傳修飾)。在一些實施例中，溶瘤病毒勝任複製。在一些實施例中，溶瘤病毒優先在癌細胞中複製。
在一些實施例中，感染劑係包括包含可操作連接至病毒複製所必需之病毒基因之腫瘤細胞特異性啟動子之病毒載體的溶瘤病毒(例如溶瘤腺病毒)。在一些實施例中，腫瘤特異性啟動子係E2F-1啟動子，例如人類E2F-1啟動子或包含如下文所示SEQ ID NO：1中所述之核苷酸序列之E2F-1啟動子。在一些實施例中，病毒複製所必需之病毒基因選自由以下組成之群：E1A、E1B及E4。
SEQ ID NO：1
在一些實施例中，感染劑係包括包含可操作連接至病毒複製所必需之病毒基因之腫瘤細胞特異性啟動子及編碼可操作連接至病毒啟動子之免疫相關分子(例如細胞介素或趨化介素)之核酸之病毒載體的溶瘤病毒(例如溶瘤腺病毒)。在一些實施例中，腫瘤特異性啟動子係E2F-1啟動子，例如人類E2F-1啟動子或包含SEQ ID NO：1中所述之核苷酸序列之E2F-1啟動子。在一些實施例中，病毒複製所必需之病毒基因選自由以下組成之群：E1A、E1B及E4。在一些實施例中，可操作連接至編碼免疫相關分子 之核酸之病毒啟動子係E3啟動子。在一些實施例中，免疫相關分子係GM-CSF。
在一些實施例中，感染劑係腺病毒血清型5，其中天然腺病毒之內源性E1a啟動子及E3 19kD編碼區經人類E2F-1啟動子及編碼免疫相關分子(例如細胞介素或趨化介素，例如GM-CSF)之核酸置換。在一些實施例中，腫瘤特異性啟動子係人類E2F-1啟動子或包含SEQ ID NO：1中所述之核苷酸序列之E2F-1啟動子。
在一些實施例中，感染劑係CG0070，一種具有E1a基因之E2F啟動子及E3基因之GM-CSF表現之腺病毒血清型5。
CG0070係經設計以優先在Rb路徑缺陷性癌細胞中複製並殺死該等細胞之條件性複製溶瘤腺病毒(血清型5)。此載體係由在Rb路徑缺陷性腫瘤細胞中上調之啟動子(例如E2F-1啟動子)轉錄調控。在約85%之所有癌症中，Rb路徑之一或多個基因(例如腫瘤阻抑劑Rb基因)突變。CG0070除其限制繁殖外亦編碼人類細胞介素GM-CSF，其在感染腫瘤細胞中選擇性表現以針對未感染遠端(例如轉移)及局部腫瘤病灶刺激免疫反應。
溶瘤腺病毒載體CG0070之基因體結構示意性示於圖1中。腺病毒早期E1A基因之產物係腺病毒基因體之其他區之足夠表現所必需的。CG0070經改造以在人類E2F-1啟動子控制下表現E1A基因，該人類E2F-1啟動子提供針對E1A基因產物之腫瘤特異性。為防止轉錄通讀活化E1A表現，在E2F-1啟動子之5'***多聚腺苷酸化信號(PA)。CG0070包括除19kD-編碼區外之整個野生型E3區。含E3之溶瘤腺病毒載體與E3缺失之溶瘤腺病毒載體之直接比較顯示含E3之載體在腫瘤擴散及效能中之優勢。代替19kD基因，CG0070攜帶在內源性E3啟動子(E3P)控制下之人類 GM-CSF的cDNA。由於E3啟動子又被E1A活化，故病毒複製及GM-CSF表現二者最終皆在E2F-1啟動子控制下。病毒載體主鏈之其餘部分(包括E2、E4、晚期蛋白質區及反轉末端重複(ITR))，與野生型Ad5基因體相同。
CG0070係在HeLa-S3細胞中製備，並藉由清潔劑溶解自感染之HeLa-S3細胞釋放。藉由層析自溶解物純化CG0070，隨後調配於5%蔗糖、10mM Tris、0.05%聚山梨醇酯-80、1%甘胺酸、1mM氯化鎂(pH 7.8)中。
CG0070以無菌、輕微乳白色、冷凍液體形式於加塞子之玻璃小瓶中供應。在每批次CG0070之分析證書上列出每mL之顆粒濃度(vp/mL)。
CG0070之額外潛在抗腫瘤活性在於其攜帶人類GM-CSF(一種用於產生長效抗腫瘤免疫性之關鍵細胞介素)之cDNA。因此，CG0070係具有藉由兩種機制攻擊腫瘤之潛力的選擇性複製之溶瘤載體：作為複製載體之直接細胞毒性及誘導宿主免疫反應。在以下部分中概述為表徵CG0070之腫瘤選擇性及抗腫瘤活性及安全性而執行之活體外及活體內研究。
免疫調節劑
在一些實施例中，本發明之方法包含投與感染劑與免疫調節劑。
「免疫調節劑」係指在存在時改變、抑制或刺激身體之免疫系統之試劑。免疫調節劑可靶向特異性分子(例如檢查點分子)，或非特異性調節免疫反應。免疫調節劑可包括活化免疫系統之組合物或調配物(例如，佐劑或活化劑)或下調免疫系統之組合物或調配物。佐劑可包括基於鋁之組合物、以及包括細菌或分枝桿菌細胞壁組份之組合物。活化劑可包括活化抗原呈遞細胞以刺激細胞免疫反應之分子。舉例而言，活化劑可為免疫刺 激性肽。活化劑可包括(但不限於)類鐸受體TLR-2、3、4、6、7、8或9之激動劑、顆粒球巨噬細胞群落刺激因子(GM-CSF)；TNF；CD40L；CD28；FLT-3配體；或細胞介素，例如IL-1、IL-2、IL-4、IL-7、IL-12、IL-15或IL-21。活化劑可包括T細胞上之活化受體(包括共刺激受體)之激動劑，例如CD28、OX40、GITR、CD137、CD27、CD40或HVEM之激動劑(例如，激動性抗體)。活化劑亦可包括抑制免疫阻抑劑之活性之化合物(例如免疫阻抑劑IL-10、IL-35、TGF-β、IDO或環磷醯胺之抑制劑)，或抑制免疫檢查點之活性之化合物(例如CTLA-4、PD-1、PD-L1、PD-L2、LAG3、B7-1、B7-H3、B7-H4、BTLA、VISTA、KIR、A2aR或TIM3之拮抗劑(例如，拮抗性抗體))。活化劑亦可包括共刺激分子，例如CD40、CD80或CD86。免疫調節劑亦可包括下調免疫系統之試劑，例如針對IL-12p70之抗體、類鐸受體TLR-2、3、4、5、6、8或9之拮抗劑、或免疫功能之一般阻抑劑(例如環磷醯胺、環孢素A或FK506)。該等試劑(例如，佐劑、活化劑或下調劑)可經組合以達成最佳免疫反應。
本發明中尤其感興趣之免疫調節劑包括免疫刺激劑及免疫檢查點抑制劑。如本文所用術語「免疫檢查點抑制劑」、「檢查點抑制劑」及諸如此類係指抑制免疫系統之控制機制之活性的化合物。免疫系統檢查點或免疫檢查點係免疫系統中通常用於維持自身耐受性或調節生理免疫反應之持續時間及幅度以最小化附帶組織損害之抑制性路徑。檢查點抑制劑可在路徑中藉由刺激刺激性檢查點分子之活性或抑制抑制性檢查點分子之活性來抑制免疫系統檢查點。刺激性檢查點分子係刺激或正性調控免疫系統之分子(例如蛋白質)。抑制性檢查點分子係抑制或負性調控免疫系統之分子(例如蛋白質)。免疫系統檢查點分子包括(但不限於)細胞毒性T-淋巴球抗 原4(CTLA-4)、程式化細胞死亡1蛋白質(PD-1)、程式化細胞死亡1配體1(PD-L1)、程式化細胞死亡1配體2(PD-L2)、淋巴球活化基因3(LAG3)、B7-1、B7-H3、B7-H4、T細胞膜蛋白質3(TIM3)、B-及T-淋巴球減毒劑(BTLA)、含有V-結構域免疫球蛋白(Ig)之T細胞活化阻抑劑(VISTA)、殺傷細胞免疫球蛋白樣受體(KIR)及A2A腺苷受體(A2aR)。因此，檢查點抑制劑包括CTLA-4、PD-1、PD-L1、PD-L2、LAG3、B7-1、B7-H3、B7-H4、BTLA、VISTA、KIR、A2aR或TIM3之拮抗劑。舉例而言，結合至CTLA-4、PD-1、PD-L1、PD-L2、LAG3、B7-1、B7-H3、B7-H4、BTLA、VISTA、KIR、A2aR或TIM3且拮抗其功能之抗體係檢查點抑制劑。此外，抑制免疫系統檢查點之抑制性功能之任何分子(例如，肽、核酸、小分子等)係檢查點抑制劑。
免疫調節劑可為業內已知之分子模態中之任一者，包括但不限於適配體、mRNA、siRNA、微小RNA、shRNA、肽、抗體、抗運載蛋白、球形核酸、TALEN、鋅指核酸酶、CRISPR/Cas9及小分子。
在一些實施例中，免疫調節劑係免疫刺激劑。在一些實施例中，免疫刺激劑係免疫刺激分子之天然或經改造之配體，包括(例如)OX40之配體(例如，OX40L)、CD-28之配體(例如，CD80、CD86)、ICOS之配體(例如，B7RP1)、4-1BB之配體(例如，4-1BBL、Ultra4-1BBL)、CD27之配體(例如，CD70)、CD40之配體(例如，CD40L)及TCR之配體(例如，MHC I類或II類分子、IMCgp100)。在一些實施例中，免疫刺激劑係選自由以下組成之群之抗體：抗CD28(例如，TGN-1412)、抗OX40(例如，MEDI6469、MEDI-0562)、抗ICOS(例如，MEDI-570)、抗GITR(例如，TRX518、INBRX-110、NOV-120301)、抗41-BB(例如，BMS- 663513、PF-05082566)、抗CD27(例如，BION-1402、瓦利路單抗及hCD27.15)、抗CD40(例如，CP870,893、BI-655064、BMS-986090、APX005、APX005M)、抗CD3(例如，布利莫單抗、莫羅單抗)及抗HVEM。在一些實施例中，抗體係激動性抗體。在一些實施例中，抗體係單株抗體。在一些實施例中，抗體係選自由以下組成之群之抗原結合片段：全長抗體之Fab、Fab’、F(ab’)2、Fv、scFv及其他抗原結合子序列。在一些實施例中，抗體係人類、人類化或嵌合抗體。在一些實施例中，抗體係雙特異性抗體、多特異性抗體、單一結構域抗體、包含抗體部分之融合蛋白、或其任何其他功能變體或衍生物。
在一些實施例中，免疫調節劑係免疫檢查點抑制劑。在一些實施例中，免疫檢查點抑制劑係抑制性免疫檢查點分子之天然或經改造之配體，包括(例如)CTLA-4之配體(例如，B7.1、B7.2)、TIM3之配體(例如，半乳凝素-9)、A2a受體之配體(例如，腺苷、Regadenoson)、LAG3之配體(例如，MHC I類或MHC II類分子)、BTLA之配體(例如，HVEM、B7-H4)、KIR之配體(例如，MHC I類或MHC II類分子)、PD-1之配體(例如，PD-L1、PD-L2)、IDO之配體(例如，NKTR-218、吲哚西莫、NLG919)及CD47之配體(例如，SIRP-α受體)。在一些實施例中，免疫檢查點抑制劑係靶向抑制性免疫檢查點蛋白之抗體。在一些實施例中，免疫調節劑係選自由以下組成之群之抗體：抗CTLA-4(例如，伊匹單抗、曲美目單抗、KAHR-102)、抗TIM3(例如，F38-2E2、ENUM005)、抗LAG3(例如，BMS-986016、IMP701、IMP321、C9B7W)、抗KIR(例如，利利單抗及IPH2101)、抗PD-1(例如，尼沃魯單抗、匹利珠單抗、派姆單抗、BMS-936559、阿替珠單抗、蘭布魯珠單抗、MK-3475、 AMP-224、AMP-514、STI-A1110、TSR-042)、抗PD-L1(例如，KY-1003(EP20120194977)、MCLA-145、RG7446、BMS-936559、MEDI-4736、MSB0010718C、AUR-012、STI-A1010、PCT/US2001/020964、MPDL3280A、AMP-224、達匹珠單抗(CDP-7657)、MEDI-4920)、抗CD73(例如，AR-42(OSU-HDAC42、HDAC-42、AR42、AR 42、OSU-HDAC 42、OSU-HDAC-42、NSC D736012、HDAC-42、HDAC42、HDAC42、NSCD736012、NSC-D736012)、MEDI-9447)、抗B7-H3(例如，MGA271、DS-5573a、8H9)、抗CD47(例如，CC-90002、TTI-621、VLST-007)、抗BTLA、抗VISTA、抗A2aR、抗B7-1、抗B7-H4、抗CD52(例如阿倫單抗)、抗IL-10、抗IL-35及抗TGF-β(例如夫蘇木單抗)。在一些實施例中，抗體係拮抗性抗體。在一些實施例中，抗體係單株抗體。在一些實施例中，抗體係單株抗體。在一些實施例中，抗體係選自由以下組成之群之抗原結合片段：全長抗體之Fab、Fab’、F(ab’)2、Fv、scFv及其他抗原結合子序列。在一些實施例中，抗體係人類、人類化或嵌合抗體。在一些實施例中，抗體係雙特異性抗體、多特異性抗體、單一結構域抗體、包含抗體部分之融合蛋白、或其任何其他功能變體或衍生物。
免疫調節劑可單獨或組合使用。舉例而言，任一數目(例如1、2、3、4、5、6或更多中之任一者)之免疫檢查點抑制劑可同時或依序使用，或任一數目(例如2、3、4、5、6或更多中之任一者)之免疫刺激劑可同時或依序使用。或者，與任一數目(例如2、3、4、5、6或更多中之任一者)之免疫刺激劑組合之任一數目(例如1、2、3、4、5、6或更多中之任一者)之免疫檢查點抑制劑可同時或依序使用。免疫調節劑之依序投與可隔開數 小時、數天或數週。兩種或更多種免疫調節劑之投與途徑可相同或不同。舉例而言，一種免疫調節劑可腫瘤內投與，且第二免疫調節劑可靜脈內投與；或兩種免疫調節劑可皆腫瘤內投與。
下文論述實例性免疫檢查點分子及其免疫調節劑。應理解，業內已知之其他適宜免疫檢查點分子及免疫調節劑亦在本申請案之範疇內。
CTLA-4
CTLA-4係在活化之T細胞上被上調之免疫檢查點分子。抗CTLA-4 mAb可阻斷CTLA-4與CD80/86之相互作用並切斷免疫抑制之機制並使得能夠由DC連續刺激T細胞。抗CTLA-4抗體之實例係伊匹單抗(參見美國專利第6,984,720號、第7,452,535號、第7,605,238號、第8,017,114號及第8,142,778號)、曲美木單抗(參見美國專利第6,68,736號、第7,109,003號、第7,132,281號、第7,411,057號、第7,807,797號、第7,824,679號及第8,143,379號)及其他抗CTLA-4抗體(包括單鏈抗體)(例如，參見美國專利第5,811,097號、第6051,227號及第7,229,628號及美國專利公開案第US20110044953號)。
針對CTLA-4之兩種IgG mAb伊匹單抗及曲美目單抗已在臨床試驗中測試用於多種適應症。伊匹單抗由FDA批准用於治療黑色素瘤，例如用於晚期階段黑色素瘤患者。完全處方資訊完全闡述於YERVOY®(Bristol Meyers)之包裝插頁中。YERVOY®(伊匹單抗)以50mg單次使用小瓶出現。
抗運載蛋白係能夠識別並以高親和力結合特異性靶標之經改造蛋白。其係抗體模擬物，但其在結構上與抗體無關。相反，其係源自屬天然結合蛋白之家族之人類脂質運載蛋白。使用抗運載蛋白代替單株抗體，但 係大小為約180個胺基酸且質量為約20kDa之單株抗體之約1/8。抗運載蛋白闡述於美國專利第7,250,297號中。已研發以高親和力及特異性結合CTLA-4之抗運載蛋白，其闡述於(例如)國際專利申請公開案第WO2012072806號中。CTLA-4-結合抗運載蛋白中之任一者皆可用於本申請案中。在一些實施例中，CTLA-4結合抗運載蛋白係PRS-010(Piers AG)。
PD-1
PD-1係調控T細胞活化及耐受之共刺激分子之B7/CD28家族之一部分，且因此，拮抗性抗PD-1抗體可用於克服耐受性。PD-1被定義為B7-4之受體。B7-4在結合至免疫細胞上之抑制性受體時可抑制免疫細胞活化。PD-1/PD-L1路徑之接合引起T細胞效應物功能之抑制、細胞介素分泌及增殖。(Turnis等人，OncoImmunology 1(7)：1172-1174,2012)。高含量之PD-1與耗盡或長期刺激之T細胞相關。此外，增加之PD-1表現與癌症患者之降低存活有關。
用於下調PD-1、B7-4及免疫細胞中之B7-4與PD-1抑制性信號之間之相互作用的藥劑造成免疫反應增強。業內已知之抗PD-1抗體中之任一者皆可用於本發明中，例如參見美國專利第US7101550號、第US5698520號、第US6808710號、第US7029674號、第US7794710號、第US7892540號、第US8008449號、第US8088905號、第US8163503號、第US8168757號、第US8354509號、第US8460927號、第US8609089號、第US8747833號、第US8779105號、第US8900587號、第US8952136號、第US8981063號、第US8993731號、第US9062112號、第US9067999號、第US9073994號、第US9084776號、第US9102728號 及第US7488802號；及美國專利公開案第US20020055139號、第US20140044738號。舉例而言，尼沃魯單抗係針對PD-1之人類mAb，其由FDA批准用於治療不可切除之或轉移性黑色素瘤以及鱗狀非小細胞肺癌。
PD-L1/PD-L2
PD-L1(程式化細胞死亡-配體1)亦稱為分化簇274(CD274)或B7同係物1(B7-H1)。PD-L1用作PD-1之配體以在特定事件(例如懷孕、組織同種異體移植、自體免疫疾病及其他疾病狀態，例如肝炎及癌症)期間抑制免疫系統中起主要作用。PD-1受體/PD-L1配體複合物之形成傳遞抑制性信號，其減少淋巴結的CD8+ T細胞之增殖。
已知抗PD-L1抗體中之任一者皆可用於本發明中，參見(例如)美國專利第US7943743號、第US7722868號、第US8217149號、第US8383796號、第US8552154號及第US9102725號；及美國專利申請公開案第US20140341917號及第US20150203580號；及國際專利申請案第PCT/US2001/020964號。舉例而言，正在臨床研發中之抗PD-L1抗體包括BMS935559(亦稱為MDX-1105)、MPDL3280A、MEDI4736、阿維魯單抗(亦稱為MSB0010718C)、KY-1003、MCLA-145、RG7446(亦稱為阿替珠單抗)及STI-A1010。
PD-L2(程式化細胞死亡1配體2)亦稱為B7-DC。PD-L2用作PD-1之配體。在某些情況下，PD-L2及其抑制劑分別可用作PD-L1及其抑制劑之替代物。
CD40
CD40(分化簇40)係在抗原呈遞細胞上發現之共刺激蛋白且為該等細 胞活化所需。TH細胞上CD40L(CD154)與CD40之結合活化抗原呈遞細胞並誘導多種下游效應以刺激免疫反應。
刺激CD40之活性之試劑可用作免疫刺激劑。已知激動性抗CD40抗體中之任一者皆可用本發明中，參見(例如)美國專利第US5786456號、第US5674492號、第US5182368號、第US5801227號、第US7824683號、第US6843989號、第US7618633號、第US7537763號、第US5677165號、第US5874082號、第US6051228號、第US6312693號、第US6315998號、第US6413514號、第US6838261號、第US6843989號、第US6946129號、第US7063845號、第US7172759號、第US7193064號、第US7288251號、第US7338660號、第US7547438號、第US7563442號、第US7626012號、第US8778345號；及美國專利公開案第US 2003059427號、第US 20020142358號及第US20050136055號；國際專利公開案第WO 02/088186號、第WO 01/56603號、第WO 88/06891號、第WO 94/04570號及第WO05/63289號；Schlossman等人，Leukocyte Typing,1995,1：547-556；及Paulie等人，1984,Cancer Immunol.Immunother.17：165-179。舉例而言，正在臨床研發中之激動性抗CD40抗體包括CP-870,893、達西珠單抗(亦稱為SGN-40)及ChiLob 7/4或APX005M。
OX40
OX40(亦稱為CD134及TNFRSF4)係受體之TNFR-超家族之成員。OX40係在T細胞活化後24至72小時之後表現之共刺激免疫檢查點分子。OX40L與OX40之相互作用將持續T細胞增殖及免疫反應及記憶超出前兩天。在T細胞由抗原啟動期間或之後不久藉由在T細胞表面上由OX40受體 結合劑OX40L或OX40激動劑接合OX40受體來增強針對腫瘤抗原之免疫反應之方法可在CLIVS中用作免疫檢查點抑制劑。
LAG-3
使用LAG-3(淋巴球活化基因-3)及以更常見方式使用MHC II類配體或MHC II類樣配體作為疫苗之佐劑以加強抗原特異性免疫反應已在臨床前模型中成功。針對或調節LAG-3基因產物之抗體或試劑可在本發明中有幫助。關於LAG-3相關專利及申請專利範圍之詳情，參見美國專利5773578、引用及參考之專利。
實例
以下實例意欲對本發明僅胃實例性且因此不應視為以任何方式限制本發明。以說明方式而非限制方式提供以下實例及實施方式。
實例1：在具有肌肉侵襲性膀胱癌之患者中膀胱內投與CG0070與CTLA-4抑制劑之組合之I/II期臨床研究
此實例闡述在具有肌肉侵襲性膀胱癌(MIBC)之患者中膀胱內投與CG0070與抗CTLA-4抗體之組合之臨床研究。在本文中選擇肌肉侵襲性膀胱癌作為實例，此乃因CG0070已顯示在膀胱癌中具有活性。此外，所有肌肉侵襲性膀胱癌患者皆需要進行膀胱切除術，由此提供良好腫瘤樣品以製備此疫苗系統所需之腫瘤細胞。另外，儘管使用前導性化學療法，但肌肉侵襲性膀胱癌患者(T3-4)之預後較差。大部分該等患者係60歲以上且極少可經歷化學療法之嚴重副作用。可最小化此患者群體中疾病復發之風險的有效試劑係未滿足之需要。
此臨床研究係在具有移行細胞肌肉侵襲性膀胱癌疾病之患者中膀胱內CG0070與CTLA-4抑制劑之組合作為前導性療法之I/II期、單臂、開放 標籤、介入劑量遞增安全性及效能研究，該等患者經選擇進行根治性膀胱切除術及盆腔淋巴結切除術。研究之主要安全性目標係研究在膀胱切除術之前CG0070及CTLA 4阻斷對於MIBC患者之前導性治療是否係安全且耐受的。研究之主要效能目標係量測在CG0070及CTLA-4抑制劑前導性治療之後之腫瘤PD-L1或PD-1含量變化。次要研究目標包括評估2年無疾病存活(DFS)、2年無進展存活(PFS)、整體存活(OS)、膀胱切除術時之病理完全反應比例(p0比例)、膀胱切除術時之病理分階段降低比例及膀胱切除術時之器官限制疾病比例。
在研究之I期部分中，(例如，3至6個)患者之隊列以4個劑量值中之一者接受膀胱內CG0070及CTLA 4阻斷。第一劑量值僅由CG0070組成。每一患者以4個劑量值中之一者接受每週4次滴注膀胱內CG0070(例如，在每一週之第1天)及自第二週(例如，第8、15及22天)每週3次CTLA-4抑制劑(例如，伊匹單抗)，且CTLA-4抑制劑之投與係在CG0070之後。
劑量遞增遵循經修改之Fibonacci順序，其中劑量增量隨著劑量增加而變小。舉例而言，若隊列中之前三個患者皆不經歷劑量限制性毒性，則將以下一更高劑量值治療另外三個患者。然而，若前三個患者中之一者經歷劑量限制性毒性，則將以相同劑量值治療另外三個患者。劑量遞增繼續，直至3至6個患者之隊列中之至少2個患者經歷劑量限制毒性(即，在該劑量值下33%之患者具有劑量限制性毒性)。用於試驗之下一階段或期之推薦劑量通常被定義為恰好低於該毒性劑量值之劑量值。劑量限制性毒性(DLT)係使用常見不良事件評價準則(CTCAE)版本4定義。DLT定義為自治療之第1週之第1天至第4週之第1天之3級藥物相關之不良事件(AE)，包括需要中斷研究治療超過3個連續週及/或由於免疫相關毒性而永 久性中斷的任何3級或更高級毒性，但不包括腫瘤加劇之3級AE(定義為局部疼痛、刺激、或位於已知或懷疑腫瘤位點之疹)及皮膚(疹、瘙癢)或內分泌系統的3級免疫介導之事件(甲狀腺功能減退、甲狀腺功能亢進、垂體機能減退、腎上腺機能不全、性腺低能症及Cushingoid症候群)，其在投與或未投與類固醇之情況下在3週內恢復至1級或基線。肝免疫毒性定義為天冬胺酸轉胺酶、丙胺酸轉胺酶或總膽紅素之3級或更高級升高。將顯著D-二聚體增加(自基線以至少1μg/mL增加20%)與INR、PT、PTT、血小板或纖維蛋白原之>2級變化之組合持續>7天視為DLT。另外，將與CG0070治療相關之臨床上顯著之血栓形成或出血視為DLT。將由於與研究治療相關之毒性而治療延遲超過21天之患者視為具有治療相同之DLT。出於除治療相關毒性外之原因，替換隊列中治療延遲超過7天或在3次投與之前退出研究之患者。最大耐受劑量(MTD)係在即將產生2 DLT之前之劑量。若最大可行劑量(MTD)未經定義，則無2 DLT投與之最高劑量將為MFD。不允許此研究中患者之劑量降低。然而，若劑量值1中6個患者中之至少2個經歷DLT，則3個患者將入選劑量值1。此外，若劑量值1中6個患者中之至少2個經歷DLT，則3個患者將入選劑量值2。
舉例而言，劑量值I包括以1×1012個病毒顆粒(vp)之劑量在4週內每週一次膀胱內投與單獨CG0070。劑量值II包括：(1)以1×1012個病毒顆粒(vp)之劑量在4週內每週一次膀胱內投與CG0070；及(2)在CG0070滴注及引流後立刻以0.1mg/Kg、但每個劑量總共不超過20mg之劑量在3週中每週膀胱內投與CTLA-4抑制劑(例如，伊匹單抗)，自第2週開始且在第4週結束。劑量值III包括：(1)以1×1012個病毒顆粒(vp)之劑量在4週內每週一次膀胱內投與CG0070；(2)在CG0070滴注及引流後立刻以 0.2mg/Kg、但每個劑量總共不超過20mg之劑量在3週中每週膀胱內投與CTLA-4抑制劑(例如，伊匹單抗)，自第2週開始且在第4週結束。劑量值IV包括：(1)以1×1012個病毒顆粒(vp)之劑量在4週內每週一次膀胱內投與CG0070；及(2)在CG0070滴注及引流後立刻以0.3mg/Kg、但每個劑量總共不超過20mg之劑量在3週中每週膀胱內投與CTLA-4抑制劑(例如，伊匹單抗)，自第2週開始且在第4週結束。
在研究之II期部分中，在4週治療過程中以研究之I期部分中測定之劑量值向每一患者膀胱內投與CG0070與CTLA-4抑制劑之組合。在研究之I期及II期部分二者期間，在投與膀胱內療法之前，評價每一患者之不良事件，且收集試樣(例如血液及尿液試樣)用於實驗室評價。舉例而言，在首次膀胱內投與CG0070之前，自每一患者收集血液及尿液試樣以評價GM-CSF含量、以及CG0070及野生型腺病毒含量。在第2、3及4週投與中之每一者之前，收集患者之試樣用於血液學(例如例如具有差異、化學及凝固之CBC)、血清化學(例如鈉、鉀、氯化物、BUN、肌酸酐、葡萄糖、總蛋白、白蛋白、鈣、總膽紅素、直接膽紅素、鹼性磷酸鹽、LDH、AST、ALT及甲狀腺功能)及尿分析之實驗室評價。在每一CG0070治療之前及在治療期間每小時總共2小時記錄生命徵象(包括血壓、脈搏、呼吸及溫度)以確保患者在臨床上穩定。
CG0070及CTLA-4抑制劑可如下投與。建議患者在治療前4小時內不要喝流體，且應在治療投與前排空其膀胱。在研究當天，每一患者接受經由導管(Rusch 173430 Foley導管及BARD LUBRI-SIL Foley導管編號70516SI)經膀胱內投與之轉導增強劑(DDM)的預處理。預處理包括用100mL生理鹽水進行膀胱內洗滌、之後用75mL 0.1% DDM進行膀胱內 洗滌。然後患者接受膀胱內滴注100mL之0.1% DDM，其在膀胱中保留12-15分鐘，且隨後用100mL鹽水沖洗。若患者不能耐受至少5分鐘之DDM預處理，則對該治療應中斷使用CG0070及CTLA-4抑制劑之進一步治療。若CG0070之膀胱內輸注在DDM預處理後延遲超過2小時，則患者不會接受CG0070，且必須在2天後不久重新排定DDM及CG0070治療。若治療延遲超過2週，則患者必須在再治療前繼續滿足合格性準則。在用DDM預處理後，每一患者經由導管(例如，Rusch 173430 Foley導管及BARD LUBRI-SIL Foley導管編號70516SI)接受100mL濃度為1.0×1010vp/mL之CG0070之單次膀胱內灌注，駐留時間為45至50分鐘。治療必須在任何先前膀胱生檢後至少14天發生。在導管***(創傷性導管***術)期間經歷出血之患者不應使用CG0070治療。當CG0070保持在膀胱中時，患者應自左側向右側重新定位，並且亦應躺在背部及腹部上以使膀胱表面暴露於CG0070最大化。患者位置每10-12分鐘更換一次，總共45至50分鐘。CG0070然後經由導管排放至處理袋中。一旦CG0070溶液自膀胱排出，則將適當劑量之CTLA-4抑制劑(例如，伊匹單抗，例如YERVOY®)(例如，I期研究之劑量值I不包括任何CTLA-4)稀釋至100ml生理鹽水中，並滴注至膀胱中。滴注後，然後撤出尿道導管，且在藉由排尿排空之前要求患者再保持45min至1小時(或儘可能長之時間)。
在研究之II期部分中之6週治療過程後，每一患者接受膀胱切除術。在最後一次膀胱內治療後10至14天(例如約第40天)或一旦任何治療相關毒性已經減退且醫學病況適於手術時，實施膀胱切除術。在膀胱切除術後，自患者獲得腫瘤樣品並在病理實驗室中評價，並實施實驗室評估以確定患者是否對治療有反應。此評價包括對切除之腫瘤之病理學及免疫學評價： (1)腫瘤階段及等級(若存在)；(2)腫瘤免疫參數，例如Treg、CD4、CD8及其他T細胞亞組；(3)藉由免疫組織化學方法檢測腫瘤PD-L1表現狀態；(4)淋巴結侵犯；(5)治療前與治療後之宏觀照片比較。在自膀胱切除術之日期起之第3、6、12、18及24個月(加或減2週)評估每一患者，以監測CG0070之長期反應及毒性、疾病復發或進展及隨後療法及反應。2年後，每年接觸一次患者，以評價與基因療法相關之長期毒性(例如新的惡性病、自體免疫疾病、神經及血液病症等)以及在首次膀胱內CG0070療法後五年存活。使用CG0070治療後或根據目前FDA指南及目前護理標準，追蹤患者高達總共5年。
如下測定研究之主要結果量度。在整個研究期間及在完成研究之後，對患者進行追蹤，以評價AE、SAE及SUSAR，以測定治療之安全性及耐受性。另外，在膀胱切除術時，藉由測定PD-L1及PD-1狀態之變化率來評價治療之效能，該變化率定義為對於至少三次或更多完成之膀胱內滴注介入前後PDL1或PD1陽性的患者的比例差異。
如下測定研究之次要結果量度。在膀胱切除術時，藉由測定在膀胱切除術介入後在原發性腫瘤位點具有病理學完全腫瘤反應之患者的比例(藉由T分階段且針對整個患者組進一步分層)來評價每一T階段之膀胱切除術之病理學完全反應比例(p0比例)。在膀胱切除術時亦測定膀胱切除術時之病理分階段降低比例，其定義為在膀胱切除術介入後在原發性腫瘤位點具有腫瘤分階段或分級之分級下降之患者的比例；及膀胱切除術時器官限制疾病比例，定義為在膀胱切除術中未發現陽性淋巴結之患者的比例。在膀胱切除術後高達2年，追蹤患者以測定2年無疾病存活，定義為自膀胱切除術之日期起至疾病復發早期或死亡(無論什麼原因)之月數；及膀胱切除 術後具有殘存疾病之患者的2年無進展存活，定義為自膀胱切除術之日期起至疾病進展早期或死亡(無論何種原因)之月數。在膀胱切除術後高達5年，追蹤患者以測定整體存活，定義為自膀胱切除術之日期至死亡日期(無論什麼原因)之月數。
另外，在研究過程期間欲評價之探索性結果量度包括(但不限於)患者中之原發性腫瘤位點內之免疫功能之變化，包括評價干預之前及之後之Treg(CD4+CD25+Foxp3+)、CD4、CD8、CD4RO45及CD4ICOShigh等；藉由在干預之前及之後拍攝之照片之原發性腫瘤瘤位點之宏觀變化；系統性絕對淋巴球計數；及系統性細胞介素模式。
患者必須符合所有以下條件才對於研究合格。
1. 18歲或以上；2. 病理診斷之移行細胞(尿路)膀胱癌患者；其中具有治癒意圖之根除性膀胱切除術適於肌肉侵襲性疾病(即，美國癌症聯合委員會(AJCC)T2-4a階段，NX-1，M0)。患者必須能夠在其最近之診斷程序(通常係診斷生檢、膀胱腫瘤經尿道切除術(TURBT)程序或其他診斷掃描(例如CT、MRI及PET程序))之五週內進入研究；3. 組織病理學確認之移行細胞(尿路)癌。具有混合組織學(但具有<50%變體)之尿路腫瘤是合格的；4. 由於可由研究者確認之醫學病況，不適合接受前導性化學療法。(舉例而言，腎損傷可基於計算之肌酐清除率約<60ml/min或聽力損失25dB，該聽力損失係藉由測聽術量測，在至少1個耳中於3個鄰接測試頻率下平均化；或其他顯著心臟功能障礙、血管疾病或慢性阻塞性肺病等)，或者在介紹無前導性化學療法之情況下復發及發病率風險增加的特 定知情同意後拒絕接受前導性化學療法；5. 美國東岸癌症臨床研究合作組織(ECOG)體能狀態2；6. 未懷孕或泌乳；7. 同意研究知情同意書及HIPAA授權以發佈個人健康資訊；8. 基線CBC及肝功能充足，定義如下：a. WBC>3000個細胞/mm3，ANC>1,000個細胞/mm3，血紅素>9g/dL及血小板計數>80,000/mm3；b. 膽紅素、AST及ALT小於2.5x正常值上限；c. 充足之凝血與可接受之PT/INR、PTT及纖維蛋白原(小於1.5的正常值上限或根據機構規格)；d. 絕對淋巴球計數800/μL。
自研究中排除滿足以下排除準則中之任一者之患者：1. 暴露於人類化或人類治療性人類化或人類後之過敏性反應史、對GM-CSF之過敏史、臨床上有意義之過敏反應或任何已知之過敏史或對研究藥物中之任何調配物賦形劑的先前反應史；2. 已知之HIV、HBV或HCV感染；3. 在研究時未在研究方案中指定之化學療法或放射療法之預期使用；4. 任何潛在之醫學病況，在研究者看來，其將使研究藥物之投與對患者有害，會模糊對不良事件或手術切除之解釋；5. 在註冊前28天內對任何研究性臨床試驗進行系統性治療；6. 與其他免疫抑制劑或免疫調節劑(包括任何全身性類固醇(例外：允許吸入或局部施用之類固醇、及急性及慢性標準劑量NSAID)同時 治療。使用糖皮質激素之短療程(即1天)對於防止對用於CT掃描之IV造影之反應係可接受的；7. 研究進入3個月內免疫抑制療法，包括：環孢素、抗胸腺細胞球蛋白或他克莫司(tacrolimus)；8. III或更大階段癌症史，不包括尿路上皮癌。基底或鱗狀細胞皮膚癌必須經充分治療，且受試者在註冊時必須無疾病。具有I或II階段癌症史之患者必須經充分治療且在註冊時已無疾病2年；9. 伴隨的活動性自體免疫疾病(例如類風濕性關節炎、多發性硬化、自體免疫性甲狀腺疾病、眼色素層炎)；10. 進行性或當前的病毒或細菌感染。在置於研究之前，所有感染必須消退且患者必須在無抗生素情況下保持無發熱7天。
實例2：具有難治性可注射之實體腫瘤之患者腫瘤內投與CG0070與CTLA-4抑制劑之組合之I/II期臨床研究
此實例闡述具有難治性可注射之實體腫瘤之患者之CG0070與CTLA-4抑制劑(例如抗CTLA-4單株抗體或阻斷劑)之組合的I/II期臨床研究。此研究係旨在評估具有實體腫瘤(包括皮膚或內臟病灶，例如頭頸鱗狀細胞癌、乳癌、結腸直腸癌、胰臟腺癌、卵巢癌、非小細胞肺癌、***癌及黑色素瘤)之患者中包含腫瘤內投與CG0070及CTLA-4抑制劑之組合療法之安全性及效能的多中心、單臂、開放標籤、介入研究。CG0070投與可包括用轉導劑(例如DDM)預處理。
I期中之臨床研究分成三個階段。在階段1中，在6週中每週(例如，在每一週之第1天)經由腫瘤內注射向每一受試者投與CG0070。(例如，3至6個)患者之隊列接受四個劑量值中之一者之腫瘤內CG0070(例如，使用 DDM預處理)。劑量遞增程序係如實例1中所述，且階段1中測定之MTD/MFD用於階段2之開始。
在I期之階段2中，在6週中每週(例如，在每一週之第1天)經由腫瘤內注射向每一受試者投與CTLA-4抑制劑(例如抗CTLA-4 mAb或阻斷劑，例如伊匹單抗)。(例如，3至6個)患者之隊列接受三個劑量值中之一者之腫瘤內CTLA-4抑制劑。劑量遞增程序係如實例1中所述，且階段1中測定之MTD/MFD用於階段3之開始。
在I期之階段3中，在6週中每週(例如，在每一週之第1天)經由腫瘤內注射向每一受試者投與研究之階段1中測定之劑量之CG0070(例如，使用DDM預處理)與研究之階段2中測定之劑量之CTLA-4抑制劑的組合。(例如，3至6個)患者之隊列先後接受三個劑量值中之一者之腫瘤內CG0070(例如，使用DDM預處理)及CTLA-4抑制劑達6週。劑量遞增程序係如實例1中所述。一旦達到MTD或MFD，患者在首次注射後3個月接受重複之6週治療過程(每週一次持續六週構成一個過程)及隨後每3個月進行過程，直至完全反應、所有可注射之腫瘤消失、確認之疾病進展或對研究治療不耐受，以先發生者為準。在自完全成功入選評估之最後一次干預三個月之時段之後，處於研究之階段1或階段2部分之劑量遞增期的患者可入選重複MTD或MFD過程研究。
此研究有兩個主要結果量度：(1)安全性及耐受性；及(2)效能。自每一階段開始直至每一階段中最後一個受試者入選後3個月評估安全性及耐受性。階段1確定如藉由在具有難治性實體腫瘤之患者中劑量限制毒性(DLT)之發生率評價的CG0070(例如，使用DDM預處理)的安全性及耐受性。階段2確定如藉由在具有難治性實體腫瘤之患者中劑量限制毒性 (DLT)之發生率評價的CTLA-4抑制劑(例如抗CTLA-4 mAb或阻斷劑)的安全性及耐受性。階段3確定如藉由在具有難治性實體腫瘤之患者中劑量限制毒性(DLT)之發生率評價的CG0070(例如，使用DDM預處理)與CTLA-4抑制劑(例如抗CTLA-4 mAb或阻斷劑)之組合的安全性及耐受性。自每一階段開始直至每一階段最後一個受試者入選後24個月評估效能。藉由具有可注射之難治性實體腫瘤之患者中階段1中僅經CG0070(例如，使用DDM預處理)治療、階段2中僅經CTLA-4抑制劑(例如抗CTLA-4 mAb或阻斷劑)治療、及階段3中經CG0070(例如，使用DDM預處理)與CTLA-4抑制劑(例如抗CTLA-4 mAb或阻斷劑)之組合治療的確認之客觀反應率(ORR)評價效能。
此研究之次要結果量度係如下。自每一階段開始直至每一階段最後一個受試者入選後24個月評估安全性次要結果。對於所有三個階段，安全性次要結果量度包括以下事件之發生率：所有不良事件(AE)、3級或更高級AE、需要中斷研究藥物之事件、對腫瘤之局部效應、臨床上顯著之實驗室變化及臨床上顯著之生命徵象變化。自每一階段開始直至每一階段最後一個受試者入選後24個月評估效能次要結果。對於所有三個階段，效能次要結果量度包括最佳總體反應率(BOR)、疾病控制率(DCR)、耐久反應率(DRR)、反應持續時間(DOR)、至反應之時間(TTR)、無進展存活(PFS)、整體存活率(OS)、1年及2年存活率。
基於以下納入準則確定兩種性別之患者對於研究之合格性：1.患者必須具有使用標準療法(手術、化學療法、放射療法或內分泌療法)失敗且不存在治癒性選擇之組織學確認之實體腫瘤，包括但不限於：頭頸鱗狀細胞癌、皮膚鱗狀細胞癌、乳癌、惡性黑色素瘤、結腸直 腸癌、胰臟腺癌、卵巢癌、非小細胞肺癌及***癌；2.患者可能已具有任何種類及數目之先前癌症療法；3.患者必須具有可藉由RECIST方法評估之可量測病灶；4.欲治療之腫瘤塊必須足夠用於注射(即，遠離主要血管結構超過2cm)及藉由RECIST量測；5.患者必須18歲；6.患者之預期壽命必須12週；7.患者必須具有0、1或2之美國東岸癌症臨床研究合作組織(ECOG)體能狀態；8.患者必須有足夠之肝功能，定義如下：a.總膽紅素含量1.5 x正常值上限(ULN)；及b.若存在肝轉移，則AST/ALT含量2.5 x ULN、或5 x ULN；9.患者必須具有足夠腎功能，定義如下：血清肌酸酐1.5 x ULN，或對於肌酸酐>1.5 x ULN之患者肌酸酐清除率(計算值)60mL/min/1.73m2；10.患者必須有足夠骨髓功能，定義如下：a.絕對嗜中性球計數1,200/μL；及b.血小板計數80,000/μL；11.患者必須無已知之出血素質或凝血病變，其將使得腫瘤內注射或生檢不安全；12.有生育潛力之男性及女性必須同意在研究進入之前使用適當避孕措施並且長達六個月； 13.有生育潛力之女性在開始治療前一週內必須進行陰性尿液或血清妊娠測試；及14.患者必須能夠理解並願意簽署書面知情同意書文件。
自研究中排除以下患者：1.在篩選前4週內接受化學療法、免疫療法或放射療法、或因在篩選前超過4週投與之試劑產生之不良事件>1級(脫髪除外)的患者；2.具有顯著腫瘤出血或凝血或出血病症史之患者；3.基於如由放射師確定之明確成像發現，具有可潛在地侵入主要血管結構(例如無名動脈、頸動脈)之靶腫瘤的患者；4.具有1級預先存在之神經異常(CTCAE版本4.0)的患者；5.在研究進入之前30天期間因需要住院評估、治療或程序之緊急病況住院的患者。另外，需要住院評估、治療或程序之緊急病況必須在進入研究之前30天已經消退或在醫學上穩定且不嚴重；6.具有臨床上顯著之人類免疫缺失病毒(HIV)、B型肝炎病毒(HBV)、C型肝炎病毒(HCV)或艾司坦-巴爾病毒(Epstein-Barr virus，EBV)感染之患者。在治療前篩選期間測試患者之HIV；7.(例如)針對類風濕性關節炎接受類固醇或免疫抑制劑之患者；8.同時使用任何其他研究藥劑之患者；9.存在中樞神經系統轉移或有該病史之患者；10.在研究期限內懷孕或哺乳之女性或希望懷孕之女性；11.具有不受控間發病(包括但不限於正在進行或活動性感染、症狀性鬱血性心臟衰竭、不穩定性心絞痛、心律不整或將限制對研究需求之順從性的精神病學疾病/社會情況)之患者。
實例3：具有晚期階段實體腫瘤(例如黑色素瘤)之患者腫瘤內投與CG0070與CTLA-4抑制劑及CD40激動劑之組合之I/II期臨床研究
此實例闡述具有固態或淋巴腫瘤之患者之CG0070與CTLA-4抑制劑(例如抗CTLA-4單株抗體或阻斷劑)及CD40激動劑(例如激動性抗CD40抗體)之組合的I/II期臨床研究。I期研究係具有難治性實體腫瘤之患者之劑量遞增研究。II期研究係旨在評估具有實體腫瘤(例如難治性不可切除、或轉移性III/IV階段惡性黑色素瘤)之患者中重複腫瘤內注射CG0070、CTLA-4抑制劑及CD40激動劑之效能、安全性及耐受性的單臂、開放標籤、介入研究。CG0070投與可包括轉導增強劑，例如DDM。
I期中之臨床研究分成三個階段。階段1係僅腫瘤內注射CG0070之劑量遞增研究。(例如，3至6個)患者之隊列接受以下四個劑量值中之一者之CG0070(例如，具有DDM)之每週腫瘤內注射達4週：5×1010vp、1×1011vp、5×1011vp或1×1012vp。舉例而言，將病毒CG0070在鹽水中之0.1% DDM中重構。每一劑量之總體積係2mL。CG0070溶液之濃度對於最低劑量係約2.5×1010vp/ml且對於最高劑量係約5×1011vp/ml。若患者具有單一病灶(其必須大於2cm)，則將總體積之CG0070溶液注射至病灶中。若存在兩個或更多個病灶，則遵循如表1中所示基於病灶大小之最大注射體積。若最大病灶係至少2cm，則將任何剩餘體積注射至最大病灶中。若最大病灶小於2cm，則將剩餘體積在兩個較大病灶之間分開。所注射病灶之最大數目係3。給予總劑量而與病灶之總數目及大小無關。劑量遞增程序係如實例1中所述，且將MTD/MFD命名為劑量值階段1，其在階段2開始時使用。
I期之階段2係劑量遞增之腫瘤內注射劑量值階段1之CTLA-4抑制劑(例如抗CTLA-4 mAb或阻斷劑，例如伊匹單抗)與CG0070之組合。(例如，3至6個)患者之隊列接受固定劑量之CG0070(例如，具有DDM)與以下三個劑量值中之一者之CTLA-4抑制劑(例如，伊匹單抗)之組合之每週腫瘤內注射達6週：6mg、12mg或18mg。對於每一投與，根據如階段1中所定義之每個病灶之注射體積首先腫瘤內注射CG0070。在每一CG0070注射後立刻投與CTLA-4抑制劑。每一劑量值下之總體積、及基於兩個以上注射病灶之病灶大小之最大注射體積列舉於下表2中。所注射病灶之最大數目係3，且給予CTLA-4抑制劑之總劑量而與病灶之總數目及大小無關。在所注射病灶周圍皮下投與任何剩餘體積之CTLA-4抑制劑。倘若病灶在最後計劃之治療之前完全消退，則可向先前未注射之病灶投與CG0070及CTLA-4抑制劑(例如，伊匹單抗)二者。若所有病灶皆在治療過程結束之前消退，則可在先前病灶處或其周圍之皮下區域中僅注射CTLA-4抑制劑(例如，伊匹單抗)。劑量遞增程序係如實例1中所述，且將MTD/MFD命名為劑量值階段2，其在階段3開始時使用。
I期之階段3係劑量遞增之腫瘤內注射劑量值階段2之CD40激動劑(例如CD40激動性抗體，例如APX005M)與CTLA-4抑制劑(例如抗CTLA-4 mAb或阻斷劑，例如伊匹單抗)及CG0070之組合。(例如，3至6個)患者之隊列接受固定劑量之CG0070(例如，具有DDM)及CTLA-4抑制劑(例如，伊匹單抗)與以下三個劑量值中之一者之CD40激動劑(例如，APX005M)之組合之每週腫瘤內注射達6週：6mg、12mg或18mg。對於每一投與，將劑量值階段2之CG0070及CTLA-4抑制劑(例如，伊匹單抗)調節至2mL並根據如表1中所定義之每個病灶之注射體積進行腫瘤內注射。在每一CG0070/CTLA-4抑制劑注射後立刻投與CD40激動劑(例如，APX005M)。每一劑量值下之總體積、及基於兩個以上注射病灶之病灶大小之最大注射體積列舉於下表2中。所注射病灶之最大數目係3，且給予CD40激動劑(例如，APX005M)之總劑量而與病灶之總數目及大小無關。在所注射病灶周圍皮下投與任何剩餘體積之CD40激動劑(例如，APX005M)。倘若病灶在最後計劃之治療之前完全消退，則可向先前未注射之病灶投與CG0070、CTLA-4抑制劑(例如，伊匹單抗)及CD40激動劑(例如，APX005M)。若所有病灶皆在治療過程結束之前消退，則可在先前病灶處或其周圍之皮下區域中僅注射CD40激動劑(例如，APX005M)。 劑量遞增程序係如實例1中所述，且將MTD/MFD命名為研究劑量，其用於II期中。
對於研究之II期，患者之隊列首先接受I期之階段3中測定之研究劑量之CG0070(例如，具有DDM)、CTLA-4抑制劑(例如，伊匹單抗)及CD-40激動劑(例如，APX005M)之三組份組合的每週一次腫瘤內注射達4週，之後每2週一次腫瘤內注射三組份組合共四次。其後，投與三組份組合之每月腫瘤內注射用於維持治療，直至完全反應、所有可注射之腫瘤消失、確認之疾病進展或對研究治療不耐受，以先發生者為準。處於I期之劑量遞增期(例如，階段1、2或3)之患者可入選II期研究，只要存在自最後劑量起至少四週之休息期即可。對於每一投與，首先向病灶注射GC0070，之後注射CTLA-4抑制劑(例如，伊匹單抗)及CD40激動劑(例如，APX005M)。最大可注射之腫瘤(如藉由PI所測定)係欲注射之第一腫瘤，且注射體積及劑量係根據表3及表4。將任何剩餘體積之藥物注射至下一最大可注射之腫瘤(如藉由PI所測定)中，且注射體積及劑量係根據表3及表4。對於其他剩餘體積重複此程序，直至注射如I期中測定之整個總體積及劑量。在特定注射位點之病灶不再存活時，在該位點省略CG0070注射。然而，即使在病灶消失時，亦向相同位點中投與CTLA-4抑制劑及CD40激動劑注射直至治療過程結束為止。每一患者接受CTLA-4抑制劑及CD40激動劑之最少8次注射。
此研究有兩個主要結果量度：(1)安全性及耐受性；及(2)效能。自每一階段開始直至每一階段或II期中最後一個受試者入選後3個月評估安全性及耐受性。階段1確定如藉由在具有難治性實體腫瘤之患者中劑量限制毒性(DLT)之發生率評價的CG0070(例如，具有DDM)的安全性及耐受性。階段2確定如藉由在具有難治性實體腫瘤之患者中劑量限制毒性(DLT)之發生率評價的CTLA-4抑制劑(例如抗CTLA-4 mAb或阻斷劑，例如伊匹單抗)與CG0070之組合的安全性及耐受性。階段3及II期確定如藉由在具有難治性實體腫瘤之患者中劑量限制毒性(DLT)之發生率評價的CD40激動劑(激動性抗CD40抗體，例如APX005M)與CG0070及CTLA-4抑制劑之組合的安全性及耐受性。自每一階段或II期開始直至每一階段或II期最後一個受試者入選後24個月評估效能。藉由具有可注射之難治性實體腫瘤之患者中階段1中僅經CG0070(例如，具有DDM)治療、階段2中經CG0070及CTLA-4抑制劑(例如抗CTLA-4 mAb或阻斷劑，例如伊匹單抗) 之組合治療、階段3及II期中經CG0070、CTLA-4抑制劑及CD40激動劑(例如激動性抗CD40抗體，例如APX005M))之組合治療的確認之客觀反應率(ORR)評價效能。
此研究之次要結果量度係如下。自每一階段開始直至每一階段或II期最後一個受試者入選後24個月評估安全性次要結果。對於所有三個階段及II期，安全性次要結果量度包括以下事件之發生率：所有不良事件(AE)、3級或更高級AE、需要中斷研究藥物之事件、對腫瘤之局部效應、臨床上顯著之實驗室變化及臨床上顯著之生命徵象變化。自每一階段或II期開始直至每一階段或II期最後一個受試者入選後24個月評價效能次要結果。對於所有三個階段及II期，效能次要結果量度包括最佳總體反應率(BOR)、疾病控制率(DCR)、耐久反應率(DRR)、反應持續時間(DOR)、至反應之時間(TTR)、無進展存活(PFS)、整體存活率(OS)、1年及2年存活率。
基於以下納入準則確定兩種性別之患者對於研究之合格性：1.患者必須具有使用標準療法(手術、化學療法、放射療法或內分泌療法)失敗且不存在治癒性選擇之組織學確認之實體腫瘤，包括但不限於：頭頸鱗狀細胞癌、皮膚鱗狀細胞癌、乳癌、惡性黑色素瘤、結腸直腸癌、胰臟腺癌、卵巢癌、非小細胞肺癌及***癌；2.患者可能已具有任何種類及數目之先前癌症療法；3.患者必須具有可藉由RECIST方法評估之可量測病灶；4.欲治療之腫瘤塊必須可經由皮膚路徑評價且足夠用於注射(即，遠離主要血管結構超過2cm)及藉由RECIST量測；5.患者必須18歲；6.患者之預期壽命必須12週； 7.患者必須具有0、1或2之美國東岸癌症臨床研究合作組織(ECOG)體能狀態；8.患者必須有足夠之肝功能，定義如下：a.總膽紅素含量1.5 x正常值上限(ULN)；及b.若存在肝轉移，則AST/ALT含量2.5 x ULN、或5 x ULN；9.患者必須具有足夠腎功能，定義如下：血清肌酸酐1.5 x ULN，或對於肌酸酐>1.5 x ULN之患者肌酸酐清除率(計算值)60mL/min/1.73m2；10.患者必須有足夠骨髓功能，定義如下：a.絕對嗜中性球計數1,200/μL；及b.血小板計數80,000/μL；11.患者必須無已知之出血素質或凝血病變，其將使得腫瘤內注射或生檢不安全；12.有生育潛力之男性及女性必須同意在研究進入之前使用適當避孕措施並且長達六個月；13.有生育潛力之女性在開始治療前一週內必須進行陰性尿液或血清妊娠測試；及14.患者必須能夠理解並願意簽署書面知情同意書文件。
自研究中排除以下患者：1.在篩選前4週內接受化學療法、免疫療法或放射療法、或因在篩選前超過4週投與之試劑產生之不良事件>1級(脫髪除外)的患者；2.具有顯著腫瘤出血或凝血或出血病症史之患者； 3.基於如由放射師確定之明確成像發現，具有可潛在地侵入主要血管結構(例如無名動脈、頸動脈)之靶腫瘤的患者；4.具有1級預先存在之神經異常(CTCAE版本4.0)的患者；5.在研究進入之前30天期間因需要住院評估、治療或程序之緊急病況住院的患者。另外，需要住院評估、治療或程序之緊急病況必須在進入研究之前30天已經消退或在醫學上穩定且不嚴重；6.具有臨床上顯著之人類免疫缺失病毒(HIV)、B型肝炎病毒(HBV)、C型肝炎病毒(HCV)或艾司坦-巴爾病毒(EBV)感染之患者。在治療前篩選期間測試患者之HIV；7.(例如)針對類風濕性關節炎接受類固醇或免疫抑制劑之患者；8.同時使用任何其他研究藥劑之患者；9.存在中樞神經系統轉移或有該病史之患者；10.在研究期限內懷孕或哺乳之女性或希望懷孕之女性；11.具有不受控間發病(包括但不限於正在進行或活動性感染、症狀性鬱血性心臟衰竭、不穩定性心絞痛、心律不整或將限制對研究需求之順從性的精神病學疾病/社會情況)之患者。
實例4：不活化之腫瘤細胞之製備.
此實例闡述製備可用於與感染劑及免疫調節劑組合局部投與至腫瘤位點(例如藉由腫瘤內注射)之不活化之腫瘤細胞的實例性方法。
腫瘤細胞可來自自體或同種異體來源之腫瘤生檢或切除術。或者，其可自確立之腫瘤細胞系或個別研發之腫瘤細胞系收穫，來自自體或同種異體來源。通常藉由梯度密度離心、塑膠黏附及胰蛋白酶化分離腫瘤細胞。經由多個代擴增分離之腫瘤細胞以為治療提供足夠細胞。在自細胞系 收穫之腫瘤細胞之情形下，將細胞進一步洗滌，過濾並分析用於表徵(例如，腫瘤抗原之表現)、無菌性及存活率。將腫瘤細胞冷凍保藏於細胞庫中，或儲存為等份試樣以備投與。
自手術樣品之腫瘤細胞之製備
對於常用手術樣品，移出一片腫瘤用於病理分類且隨後將主要腫瘤細胞塊放置於具有含健他黴素(gentamycin)之HBSS之管中並儲存於8℃下。在約8-12小時內，將新鮮腫瘤樣品攜帶至實驗室，該等樣品將於該實驗室進一步解離。用解剖刀將腫瘤樣品切成較小片，通常為1cm3。隨後將其於37℃下在酶溶液中培育。最有效之常用酶溶液係膠原酶、DNA水解酶及玻尿酸酶之混合物。培育後，將所得懸浮液經由孔徑為40μm之耐綸篩網過濾。重複該等步驟，直至腫瘤樣品之所有主要部分皆溶解。隨後將所得細胞懸浮液在HBSS中洗滌三次且隨後然後準備冷凍保藏。
腫瘤細胞之冷凍保藏及解凍
隨後將以此方式分離之腫瘤細胞在10%人類血清白蛋白及10% DMSO中冷凍，並在液氮中以107個細胞之等份試樣儲存。細胞冷凍可以在冷凍電腦Kryo 10系列II(Messer-Griesheim)中實施。在計劃投與之當天，將細胞在添加10%人類血清白蛋白之溫培養基中小心地解凍，且隨後在此培養基中洗滌三次。
腫瘤細胞之不活化
在投與之前使用遠隔鈷源利用200Gy使腫瘤細胞之增殖能力不活化。
用於注射至腫瘤位點之不活化之腫瘤細胞之製備
將107個不活化之腫瘤細胞之等份試樣調節至適於腫瘤內注射之體 積。舉例而言，參見實例5。通常，可將不活化之細胞離心並在具有10%白蛋白之37℃培養基中重構至約2mL之體積。
實例5：在具有肝細胞癌之患者中腫瘤內投與CG0070與CTLA-4抑制劑、4-1BB激動劑及不活化之腫瘤細胞之組合的I/II期臨床研究
此實例闡述用以評估用於治療具有難治性可注射之肝腫瘤之患者之包括CG0070、CTLA-4抑制劑、4-1BB激動劑及不活化之腫瘤細胞之組合療法的效能、安全性及耐受性之I/II期、多中心、開放標籤臨床研究。將CG0070、CTLA-4抑制劑、4-1BB激動劑及不活化之腫瘤細胞之組合肝內投與至具有肝細胞癌之患者或具有自***腺癌、結腸直腸腺癌、胃食管癌(腺癌或鱗狀細胞癌)、黑色素瘤、非小細胞肺癌或透明細胞腎細胞癌之肝轉移之患者中具有已知進展之肝腫瘤中。
在此研究中，不活化之腫瘤細胞係來自同種異體來源。CG0070與不活化之腫瘤細胞之組合(下文稱作「VC」或「VC組合」)具有固定組成，其中不活化之腫瘤細胞之數目較CG0070病毒顆粒之數目低約至少4個對數。舉例而言，每次投與每個患者注射約1×108或更低數目之不活化之腫瘤細胞與1×1012vp之劑量之CG0070之組合。CTLA-4抑制劑可為特異性識別CTLA-4之抗運載蛋白。抗運載蛋白可調配於LPGA中。舉例而言，可使用75：25重量比之LPGA調配物中之CTLA-4特異性抗運載蛋白(下文稱作抗運載蛋白/LPGA 75：25)。4-1BB激動劑可為激動性抗4-1BB抗體，例如PF-05082566。
臨床研究之I期分成三個階段。在階段1中，在6週中每週(例如，在每一週之第1天)經由腫瘤內注射向每一患者投與包括CG0070及不活化之腫瘤細胞(例如，不活化之同種異體腫瘤細胞)之VC組合。(例如，3至6個)患 者之隊列接受四個劑量值中之一者之腫瘤內VC。(例如，3至6個)患者之隊列接受以下四個劑量值中之一者之CG0070(例如，具有DDM)之每週腫瘤內注射達四週：5×1010vp之CG0070及5×106個不活化之腫瘤細胞、1×1011vp之CG0070及1×107個不活化之腫瘤細胞、5×1011vp之CG0070及5×107個不活化之腫瘤細胞或1×1012vp之CG0070及1×108個不活化之腫瘤細胞。舉例而言，在即將投與之前將CG0070及不活化之腫瘤細胞以2m之總體積混合於鹽水(例如，具有0.1% DDM)中。若患者具有單一病灶(其必須大於2cm)，則將總體積之VC溶液注射至病灶中。若存在兩個或更多個病灶，則遵循如表1中所示基於病灶大小之最大注射體積。若最大病灶係至少2cm，則將任何剩餘體積注射至最大病灶中。若最大病灶小於2cm，則將剩餘體積在兩個較大病灶之間分開。所注射病灶之最大數目係3。給予總劑量而與病灶之總數目及大小無關。劑量遞增程序係如實例1中所述，且將MTD/MFD命名為劑量值階段1，其在階段2開始時使用。
I期之階段2係劑量遞增之腫瘤內注射劑量值階段1之CTLA-4抑制劑(例如，抗運載蛋白/LPGA 75：25)與VC組合之組合。(例如，3至6個)患者之隊列接受固定劑量之CG0070及以下三個劑量值中之一者之不活化之腫瘤細胞與CTLA-4抑制劑(例如，抗運載蛋白/LPGA 75：25)之組合之每週腫瘤內注射達6週：1.2mg、2.4mg或3.6mg。對於每一投與，根據如階段1中所定義之每個病灶之注射體積首先腫瘤內注射VC組合。在每一VC注射注射後立刻向相同注射位點以根據表5之體積投與CTLA-4抑制劑(例如，抗運載蛋白/LPGA 75：25)。所注射病灶之最大數目係3，且給予CTLA-4抑制劑之總劑量而與病灶之總數目及大小無關。在所注射病灶周 圍皮下投與任何剩餘體積之CTLA-4抑制劑。倘若病灶在最後計劃之治療之前完全消退，則可向先前未注射之病灶投與VC組合及CTLA-4抑制劑(例如，抗運載蛋白/LPGA 75：25)二者。若所有病灶皆在治療過程結束之前消退，則可在先前病灶處或其周圍之皮下區域中僅注射CTLA-4抑制劑(例如，抗運載蛋白/LPGA 75：25)。劑量遞增程序係如實例1中所述，且將MTD/MFD命名為劑量值階段2，其在階段3開始時使用。
I期之階段3係劑量遞增之腫瘤內注射劑量值階段2之4-1BB激動劑(例如4-1BB激動性抗體，例如PF-05082566)與VC組合及CTLA-4抑制劑(例如，抗運載蛋白/LPGA 75：25)之組合。(例如，3至6個)患者之隊列接受固定劑量之VC組合及以下三個劑量值中之一者之CTLA-4抑制劑(例如，抗運載蛋白/LPGA 75：25)與4-1BB激動劑(例如，PF-05082566)之組合之每週腫瘤內注射達6週：6mg、12mg或18mg。對於每一投與，將劑量值階段2之VC組合及CTLA-4抑制劑(例如，抗運載蛋白/LPGA 75：25)調節至2mL並根據如表1中所定義之每個病灶之注射體積進行腫瘤內注射。在每一VC/CTLA-4抑制劑注射後立刻投與4-1BB激動劑(例如，PF-05082566)。每一劑量值下之總體積、及基於兩個以上注射病灶之病灶大小之最大注射體積列舉於下表2中。所注射病灶之最大數目係3，且給予4-1BB激動劑 (例如，PF-05082566)之總劑量而與病灶之總數目及大小無關。在所注射病灶周圍皮下投與任何剩餘體積之4-1BB激動劑(例如，PF-05082566)。倘若病灶在最後計劃之治療之前完全消退，則可向先前未注射之病灶投與VC組合、CTLA-4抑制劑(例如，抗運載蛋白/LPGA 75：25)及4-1BB激動劑(例如，PF-05082566)。若所有病灶皆在治療過程結束之前消退，則可在先前病灶處或其周圍之皮下區域中僅注射4-1BB激動劑(例如，PF-05082566)。劑量遞增程序係如實例1中所述，且將MTD/MFD命名為研究劑量，其用於II期中。
對於研究之II期，患者之隊列首先接受I期之階段3中測定之研究劑量之CG0070(例如，具有DDM)、不活化之腫瘤細胞(例如，不活化之同種異體腫瘤細胞)、CTLA-4抑制劑(例如，抗運載蛋白/LPGA 75：25)及4-1BB激動劑(例如，PF-05082566)之四組份組合的每週一次腫瘤內注射達4週，之後每2週一次腫瘤內注射四組份組合共四次。其後，投與四組份組合之每月腫瘤內注射用於維持治療，直至完全反應、所有可注射之腫瘤消失、確認之疾病進展或對研究治療不耐受，以先發生者為準。處於I期之劑量遞增期(例如，階段1、2或3)之患者可入選II期研究，只要存在自最後劑量起至少四週之休息期即可。對於每一投與，在即將投與之前首先混合GC0070及不活化之腫瘤細胞(例如，同種異體不活化之腫瘤細胞)，注射至病灶位點，之後注射CTLA-4抑制劑(例如，抗運載蛋白/LPGA 75：25)及4-1BB激動劑(例如，PF-05082566)。最大可注射之腫瘤(如藉由PI所測定)係欲注射之第一腫瘤，且注射體積及劑量係根據表3及表4。將任何剩餘體積之藥物注射至下一最大可注射之腫瘤(如藉由PI所測定)中，且注射體積及劑量係根據表3及表4。對於其他剩餘體積重複此程序，直至注射如 I期中測定之整個總體積及劑量。在特定注射位點之病灶不再存活時，在該位點省略VC組合注射。然而，即使在病灶消失時，亦向相同位點中投與CTLA-4抑制劑及4-1BB激動劑注射直至治療過程結束為止。每一患者接受CTLA-4抑制劑及4-1BB激動劑之最少8次注射。
此研究有兩個主要結果量度：(1)安全性及耐受性；及(2)效能。自每一階段或II期開始直至每一階段或II期中最後一個受試者入選後3個月評估安全性及耐受性。階段1確定如藉由在具有難治性肝腫瘤之患者中劑量限制毒性(DLT)之發生率評價的CG0070(例如，具有DDM)與不活化之腫瘤細胞(例如，同種異體不活化之腫瘤細胞)之組合的安全性及耐受性。階段2確定如藉由在具有難治性肝腫瘤之患者中劑量限制毒性(DLT)之發生率評價的CG0070(例如，具有DDM)、不活化之腫瘤細胞(例如，同種異體不活化之腫瘤細胞)及CTLA-4抑制劑(例如，抗運載蛋白/LPGA 75：25)之組合的安全性及耐受性。階段3確定如藉由在具有難治性肝腫瘤之患者中劑量限制毒性(DLT)之發生率評價的CG0070(例如，具有DDM)、不活化之腫瘤細胞(例如，同種異體不活化之腫瘤細胞)、CTLA-4抑制劑(例如，抗運載蛋白/LPGA 75：25)及4-1BB激動劑(例如，PF-05082566)之組合的安全性及耐受性。II期藉由具有難治性肝腫瘤之患者中劑量限制毒性(DLT)之發生率確定CG0070(例如，具有DDM)、不活化之腫瘤細胞(例如，同種異體不活化之腫瘤細胞)、CTLA-4抑制劑(例如，抗運載蛋白/LPGA 75：25)及4-1BB激動劑(例如，PF-05082566)之組合的安全性及耐受性。自II期之每一階段開始直至每一階段最後一個受試者入選後24個月評估效能。藉由具有可注射之難治性肝腫瘤之患者中階段1中CG0070(例如，具有DDM)及不活化之腫瘤細胞(例如，不活化之同種異體腫瘤細胞) 之組合治療、階段2中CG0070(例如，具有DDM)、不活化之腫瘤細胞(例如，不活化之同種異體腫瘤細胞)及CTLA-4抑制劑(例如，抗運載蛋白/LPGA 75：25)之組合治療、及階段3及II期中CG0070(例如，具有DDM)、不活化之腫瘤細胞(例如，不活化之同種異體腫瘤細胞)、CTLA-4抑制劑(例如，抗運載蛋白/LPGA 75：25)及4-1BB激動劑(例如，PF-05082566)之組合治療的確認之客觀反應率(ORR)評價效能。
此研究之次要結果量度係如下。自每一階段或II期開始直至每一階段或II期最後一個受試者入選後24個月評價安全性次要結果。對於所有三個階段及II期，安全性次要結果量度包括以下事件之發生率：所有不良事件(AE)、3級或更高級AE、需要中斷研究藥物之事件、對腫瘤之局部效應、臨床上顯著之實驗室變化及臨床上顯著之生命徵象變化。自每一階段開始直至每一階段或II期最後一個受試者入選後24個月評估效能次要結果。對於所有三個階段及II期，效能次要結果量度包括最佳總體反應率(BOR)、疾病控制率(DCR)、耐久反應率(DRR)、反應持續時間(DOR)、至反應之時間(TTR)、無進展存活(PFS)、整體存活率(OS)、1年及2年存活率。
基於以下納入準則確定兩種性別之患者對於研究之合格性：(1)受試者必須具有組織學確認之具有肝轉移之***腺癌、結腸直腸腺癌、胃食管癌(腺癌或鱗狀細胞癌)、黑色素瘤、非小細胞肺癌或透明細胞腎細胞癌或具有已知疾病進展之肝細胞癌；(2)非肝細胞癌受試者必須已接受至少1次先前護理標準之全身性抗癌療法用於其轉移性疾病；(3)受試者必須具有適於注射之可量測之肝腫瘤；(4)美國東岸癌症臨床研究合作組織體能狀態必須為0或1，且預期壽命應大於5個月或更長。需要足夠血液、腎、肝及凝血功能；(5)Child-Pugh評分必須為A至B7。
自研究中排除以下患者：(1)受試者不得為具有治癒性意圖或計劃全身性抗癌療法之肝手術或肝腫瘤之局部療法的候選者；(2)估計肝腫瘤不得侵入約三分之一以上之肝；(7)在入選之前，實施肝腫瘤定向療法、肝手術、基於抗體之療法或免疫療法不得<28天、化學療法<21天及靶向小分子療法或激素療法<14天；(8)受試者不得具有中樞神經系統轉移或自***腺癌、非小細胞肺癌、透明細胞腎細胞癌或黑色素瘤之經輻照、穩定之腦轉移；(9)受試者不得具有症狀性自體免疫肺炎、腎小球性腎炎、血管炎或其他症狀性自體免疫疾病之病史或證據；(10)受試者不得具有症狀性自體免疫疾病或經免疫抑制；(11)受試者不得具有實體器官移植之病史；(12)對於非肝細胞癌，不得存在急性或慢性B型肝炎病毒或C型肝炎病毒感染；(13)對於肝細胞癌，B型肝炎病毒及C型肝炎病毒病毒負荷必須為不可檢測的，且其最近不得經某些抗病毒藥劑治療；(14)腫瘤不應宏觀血管內侵入主要門靜脈、肝靜脈或大靜脈；(15)受試者不得具有活動性疱疹性皮膚病灶或疱疹性感染之先前併發症(例如，疱疹性角膜炎或腦炎)並且不必需要用抗疱疹性藥物治療；(16)受試者不得要求同時經殺鼠靈(warfarin)治療；(17)具有生育潛力之女性受試者在方案治療期間及至介入之最後劑量後3個月不願使用可接受之有效避孕方法。
實例6：具有難治性非霍奇金氏淋巴瘤、鼻咽癌及黑色素瘤之患者之放射預處理、之後腫瘤內投與CG0070與CTLA-4抑制劑及CD40激動劑之組合之I/II期臨床研究
此研究係旨在評估具有固態或淋巴腫瘤(例如非霍奇金氏淋巴瘤、鼻咽癌或黑色素瘤)之患者中包含輻射預處理、之後腫瘤內投與CG0070、CTLA-4抑制劑及CD40激動劑之組合療法的安全性及效能的多中心、單 臂、開放標籤、介入研究。
輻射預處理係如下實施。在每次投與療法(例如，CG0070、CG0070與CTLA-4抑制劑之組合、或CG0070、CTLA-4抑制劑及CD40激動劑之組合)之前2天，每日向患者之每一治療腫瘤位點投與2Gy之單一劑量之外部輻射達2天。輻射之最大劑量限於每個月一個輻射過程(2Gy達2天)，持續最多4個月。在此最大劑量後，停止所有輻射。在4個月療程中所接受之總輻射應不超過16Gy。
I期中之臨床研究分成三個階段。階段1係CG0070與輻射預處理之組合之腫瘤內注射的劑量遞增研究。(例如，3至6個)患者之隊列接受每週輻射預處理、之後以下四個劑量值中之一者之CG0070(例如，具有DDM)之腫瘤內注射達4週：5×1010vp、1×1011vp、5×1011vp或1×1012vp。舉例而言，將病毒CG0070在鹽水中之0.1% DDM中重構。每一劑量之總體積係2mL。CG0070溶液之濃度對於最低劑量係約2.5×1010vp/ml且對於最高劑量係約5×1011vp/ml。若患者具有單一病灶(其必須大於2cm)，則將總體積之CG0070溶液注射至病灶中。若存在兩個或更多個病灶，則遵循如表1中所示基於病灶大小之最大注射體積。若最大病灶係至少2cm，則將任何剩餘體積注射至最大病灶中。若最大病灶小於2cm，則將剩餘體積在兩個較大病灶之間分開。所注射病灶之最大數目係3。給予總劑量而與病灶之總數目及大小無關。劑量遞增程序係如實例1中所述，且將MTD/MFD命名為劑量值階段1，其在階段2開始時使用。
I期之階段2係劑量遞增之腫瘤內注射劑量值階段1之CTLA-4抑制劑(例如抗CTLA-4 mAb或阻斷劑，例如伊匹單抗)與CG0070及輻射預處理之組合。(例如，3至6個)患者之隊列接受每週輻射預處理、之後腫瘤內注 射固定劑量之CG0070(例如，具有DDM)與以下三個劑量值中之一者之CTLA-4抑制劑(例如，伊匹單抗)之組合達6週：6mg、12mg或18mg。對於每一投與，根據如階段1中所定義之每個病灶之注射體積首先腫瘤內注射CG0070。在每一CG0070注射後立刻投與CTLA-4抑制劑。每一劑量值下之總體積、及基於兩個以上注射病灶之病灶大小之最大注射體積列舉於下表2中。所注射病灶之最大數目係3，且給予CTLA-4抑制劑之總劑量而與病灶之總數目及大小無關。在所注射病灶周圍皮下投與任何剩餘體積之CTLA-4抑制劑。倘若病灶在最後計劃之治療之前完全消退，則可向先前未注射之病灶投與CG0070及CTLA-4抑制劑(例如，伊匹單抗)二者。若所有病灶皆在治療過程結束之前消退，則可在先前病灶處或其周圍之皮下區域中僅注射CTLA-4抑制劑(例如，伊匹單抗)。劑量遞增程序係如實例1中所述，且將MTD/MFD命名為劑量值階段2，其在階段3開始時使用。
I期之階段3係劑量遞增之腫瘤內注射劑量值階段2之CD40激動劑(例如CD40激動性抗體，例如APX005M)與CTLA-4抑制劑(例如抗CTLA-4 mAb或阻斷劑，例如伊匹單抗)、CG0070及輻射預處理之組合。(例如，3至6個)患者之隊列接受每週輻射預處理、之後腫瘤內注射固定劑量之CG0070(例如，具有DDM)及CTLA-4抑制劑(例如，伊匹單抗)與以下三個劑量值中之一者之CD40激動劑(例如，APX005M)之組合達6週：6mg、12mg或18mg。對於每一投與，將劑量值階段2之CG0070及CTLA-4抑制劑(例如，伊匹單抗)調節至2mL並根據如表1中所定義之每個病灶之注射體積進行腫瘤內注射。在每一CG0070/CTLA-4抑制劑注射後立刻投與CD40激動劑(例如，APX005M)。每一劑量值下之總體積、及基於兩個以上注射病灶之病灶大小之最大注射體積列舉於下表2中。所注射病灶之 最大數目係3，且給予CD40激動劑(例如，APX005M)之總劑量而與病灶之總數目及大小無關。在所注射病灶周圍皮下投與任何剩餘體積之CD40激動劑(例如，APX005M)。倘若病灶在最後計劃之治療之前完全消退，則可向先前未注射之病灶投與CG0070、CTLA-4抑制劑(例如，伊匹單抗)及CD40激動劑(例如，APX005M)。若所有病灶皆在治療過程結束之前消退，則可在先前病灶處或其周圍之皮下區域中僅注射CD40激動劑(例如，APX005M)。劑量遞增程序係如實例1中所述，且將MTD/MFD命名為研究劑量，其用於II期中。
對於研究之II期，患者之隊列首先接受每週一次輻射預處理、之後腫瘤內注射I期之階段3中測定之研究劑量之CG0070(例如，具有DDM)、CTLA-4抑制劑(例如，伊匹單抗)及CD-40激動劑(例如，APX005M)之三組份組合達4週，之後每2週一次腫瘤內注射三組份組合共四次。其後，投與三組份組合之每月腫瘤內注射用於維持治療，直至完全反應、所有可注射之腫瘤消失、確認之疾病進展或對研究治療不耐受，以先發生者為準。處於I期之劑量遞增期(例如，階段1、2或3)之患者可入選II期研究，只要存在自最後劑量起至少四週之休息期即可。對於每一投與，首先向病灶注射GC0070，之後注射CTLA-4抑制劑(例如，伊匹單抗)及CD40激動劑(例如，APX005M)。最大可注射之腫瘤(如藉由PI所測定)係欲注射之第一腫瘤，且注射體積及劑量係根據表3及表4。將任何剩餘體積之藥物注射至下一最大可注射之腫瘤(如藉由PI所測定)中，且注射體積及劑量係根據表3及表4。對於其他剩餘體積重複此程序，直至注射如I期中測定之整個總體積及劑量。在特定注射位點之病灶不再存活時，在該位點省略CG0070注射。然而，即使在病灶消失時，亦向相同位點中投與CTLA-4抑制劑及 CD40激動劑注射直至治療過程結束為止。每一患者接受CTLA-4抑制劑及CD40激動劑之最少8次注射。
此研究有兩個主要結果量度：(1)安全性及耐受性；及(2)效能。自每一階段開始直至每一階段或II期中最後一個受試者入選後3個月評估安全性及耐受性。階段1確定如藉由在具有難治性實體或淋巴腫瘤之患者中劑量限制毒性(DLT)之發病率評價的CG0070(例如，具有DDM)與輻射預處理的安全性及耐受性。階段2確定如藉由在具有難治性實體或淋巴腫瘤之患者中劑量限制毒性(DLT)之發生率評價的CTLA-4抑制劑(例如抗CTLA-4 mAb或阻斷劑，例如伊匹單抗)與CG0070及輻射預處理之組合的安全性及耐受性。階段3及II期研究確定如藉由在具有難治性實體或淋巴腫瘤之患者中劑量限制毒性(DLT)之發生率評價的CD40激動劑(激動性抗CD40抗體，例如APX005M)與CG0070及CTLA-4抑制劑與輻射預處理之組合的安全性及耐受性。自每一階段或II期開始直至每一階段或II期最後一個受試者入選後24個月評估效能。藉由具有可注射之難治性實體或淋巴腫瘤之患者中階段1中經CG0070(例如，具有DDM)與輻射預處理治療、階段2中經CG0070及CTLA-4抑制劑(例如抗CTLA-4 mAb或阻斷劑，例如伊匹單抗)與輻射預處理之組合治療、階段3及II期中經CG0070、CTLA-4抑制劑及CD40激動劑(例如激動性抗CD40抗體，例如APX005M))與輻射預處理之組合治療的確認之客觀反應率(ORR)評價效能。
此研究之次要結果量度係如下。自每一階段開始直至每一階段或II期最後一個受試者入選後24個月評估安全性次要結果。對於所有三個階段及II期，安全性次要結果量度包括以下事件之發生率：所有不良事件(AE)、3級或更高級AE、需要中斷研究藥物之事件、對腫瘤之局部效應、臨床上 顯著之實驗室變化及臨床上顯著之生命徵象變化。自每一階段或II期開始直至每一階段或II期最後一個受試者入選後24個月評價效能次要結果。對於所有三個階段及II期，效能次要結果量度包括最佳總體反應率(BOR)、疾病控制率(DCR)、耐久反應率(DRR)、反應持續時間(DOR)、至反應之時間(TTR)、無進展存活(PFS)、整體存活率(OS)、1年及2年存活率。
基於以下納入準則確定兩種性別之患者對於研究之合格性：(1)患者必須18歲；(2)患者必須能夠理解並願意簽署書面知情同意書文件；(3)患者必須具有組織學確認之惡性病(即I期：組織學確認之黑色素瘤、或轉移性鼻咽癌；II期：組織學確認之黑色素瘤、非霍奇金氏淋巴瘤或轉移性鼻咽癌)；(4)患者必須已使用至少一種全身性療法失敗或不耐受至少一種先前全身性治療；(5)患者必須具有至少兩個大小可藉由經修改之世界衛生組織(mWHO)/Cheson準則評估之病灶；兩個病灶中之一者必須適於生檢(核心或細針抽吸物)及腫瘤內注射高達5ml(直徑>=10mm)；(6)具有無症狀腦轉移之患者係合格的；(若可能，應避免全身性類固醇，或受試者應對於最低臨床上有效之劑量穩定)；(7)患者必須具有0、1或2之美國東岸癌症臨床研究合作組織(ECOG)體能狀態；(8)患者之預期壽命不得小於16週；(9)患者必須在起始研究之6週內具有基線(篩選/基線)放射照相影像，(例如，具有欲由主治醫師測定之具體成像測試之腦、胸、腹部、骨盆及骨掃描)；(10)患者必須具有以下實驗室結果：白血球(WBC)>=2000/uL(約2×10^9/L)；絕對嗜中性球計數>=1000/uL(約0.5×10^9/L)；血小板計數>=75×10^3/uL(約75×10^9/L)；血紅素>=9g/dL(可經輸血)；肌酸酐=<2.0 x正常值上限(ULN)；對於無肝轉移之受試者，天冬胺酸轉胺酶(AST)/丙胺酸轉胺酶(ALT)=<2.5 x ULN，=<肝轉移之個體之5倍；及膽紅素=<2.0 x ULN(患有吉伯特氏症候群(Gilbert's syndrome)之受試者除外，其必須具有小於3.0mg/dL之總膽紅素)；(11)患者不得具有人類免疫缺失病毒(HIV)、B型肝炎或C型肝炎之活動性或慢性感染；(12)具有生育潛力之女性(WOCBP)必須在整個研究期間且在研究產品之最後劑量之後持續高達26週以使懷孕風險最小化之方式使用適當避孕方法以避免懷孕；及(13)具有生育潛力之男性必須在整個研究期間(且在研究產品之最後劑量之後持續高達26週)以使懷孕風險最小化之方式使用適當避孕方法以避免受孕。
自研究排除以下患者：(1)具有任何其他惡性病之患者，該患者無疾病少於5年，經充分治療及治癒之基礎或鱗狀細胞皮膚癌、表淺性膀胱癌或子宮頸之原位癌除外；(2)具有顯著腫瘤出血、或凝血或出血病症之病史之患者；(3)自此研究排除具有發炎性腸病(包括潰瘍性結腸炎及克羅恩氏病(Crohn's disease))之病史之患者，亦排除具有症狀性疾病(例如，類風濕性關節炎、全身性進行性硬化症[硬皮症]、全身性紅斑狼瘡、自體免疫性血管炎[例如，韋格納氏肉芽腫病(Wegener's Granulomatosis)])；認為自體免疫起源之動作神經病(例如，格林-巴利症候群(Guillain-Barre Syndrome)及重症肌無力)之病史的患者；(4)具有任何潛在醫學或精神病學病況之患者，在研究者之觀點下，其將使得介入藥物之投與有害或使不良事件(AE)(例如與頻繁腹瀉相關之病況)之解釋模糊；(5)由心臟學會診認為不適合手術之具有潛在心臟病況之患者；(6)利用以下中之任一者之同時治療之患者：介白素-2(IL 2)、干擾素或其他非研究免疫療法方案；細胞毒性化學療法；免疫抑制劑；其他研究療法；或長期使用全身性皮質類固醇(先前IL-2或干擾素之AE之病史不會阻止受試者進入當前研究)； (7)接受任何研究試劑之患者；(8)接受免疫抑制劑之患者(除非需要治療潛在AE)；及(9)有生育潛力之女性(WOCBP)，在其整個研究時段中及在停止研究藥物後持續至少8週，其不願意或不能夠使用可接受之避孕方法以避免懷孕；在基線時具有陽性懷孕測試，或懷孕或哺乳。
實例7：具有難治性實體腫瘤之患者之腫瘤內CCL21預處理、之後腫瘤內投與CG0070與CTLA-4抑制劑及CD40激動劑之組合之I/II期臨床研究
此研究係旨在評估具有難治性實體腫瘤之患者中包含腫瘤內CCL21預處理、之後腫瘤內投與CG0070、CTLA-4抑制劑及CD40激動劑之組合療法之安全性及效能的多中心、單臂、開放標籤、介入研究。
腫瘤內CCL21預處理係如下實施。在每次投與療法(例如，CG0070、CG0070與CTLA-4抑制劑之組合、或CG0070、CTLA-4抑制劑及CD40激動劑之組合)之前2天，以約200μg/mL之劑量向每一靶向腫瘤位點中投與腫瘤內CCL21奈米膠囊。對於最長尺寸超過5cm之腫瘤，腫瘤內CCL21奈米膠囊之劑量係約2mL；對於最長尺寸為2cm至5cm之腫瘤係約1mL；且對於最長尺寸為0.5cm至2cm之腫瘤係約0.5mL。腫瘤內CCL21奈米膠囊係在研究之I期中在6週中每週投與，或在研究之II期中在4週中每週投與，之後每2週一次再進行4個循環。其後，每個月一次腫瘤內投與CCL21奈米膠囊直至疾病進展或發生毒性事件。
I期中之臨床研究分成三個階段。階段1係CG0070與腫瘤內CCL21奈米膠囊預處理組合之腫瘤內注射的劑量遞增研究。(例如，3至6個)患者之隊列接受每週腫瘤內CCL21奈米膠囊預處理、之後以下四個劑量值中之一者之CG0070(例如，具有DDM)之腫瘤內注射達4週：5×1010vp、1×1011vp、5×1011vp或1×1012vp。舉例而言，將病毒CG0070在鹽水中 之0.1% DDM中重構。每一劑量之總體積係2mL。CG0070溶液之濃度對於最低劑量係約2.5×1010vp/ml且對於最高劑量係約5×1011vp/ml。若患者具有單一病灶(其必須大於2cm)，則將總體積之CG0070溶液注射至病灶中。若存在兩個或更多個病灶，則遵循如表1中所示基於病灶大小之最大注射體積。若最大病灶係至少2cm，則將任何剩餘體積注射至最大病灶中。若最大病灶小於2cm，則將剩餘體積在兩個較大病灶之間分開。所注射病灶之最大數目係3。給予總劑量而與病灶之總數目及大小無關。劑量遞增程序係如實例1中所述，且將MTD/MFD命名為劑量值階段1，其在階段2開始時使用。
I期之階段2係劑量遞增之腫瘤內注射劑量值階段1之CTLA-4抑制劑(例如抗CTLA-4 mAb或阻斷劑，例如伊匹單抗)與CG0070及腫瘤內CCL21奈米膠囊預處理之組合。(例如，3至6個)患者之隊列接受每週腫瘤內CCL21奈米膠囊預處理、之後腫瘤內注射固定劑量之CG0070(例如，具有DDM)與以下三個劑量值中之一者之CTLA-4抑制劑(例如，伊匹單抗)之組合達6週：6mg、12mg或18mg。對於每一投與，根據如階段1中所定義之每個病灶之注射體積首先腫瘤內注射CG0070。在每一CG0070注射後立刻投與CTLA-4抑制劑。每一劑量值下之總體積、及基於兩個以上注射病灶之病灶大小之最大注射體積列舉於下表2中。所注射病灶之最大數目係3，且給予CTLA-4抑制劑之總劑量而與病灶之總數目及大小無關。在所注射病灶周圍皮下投與任何剩餘體積之CTLA-4抑制劑。倘若病灶在最後計劃之治療之前完全消退，則可向先前未注射之病灶投與CG0070及CTLA-4抑制劑(例如，伊匹單抗)二者。若所有病灶皆在治療過程結束之前消退，則可在先前病灶處或其周圍之皮下區域中僅注射CTLA-4抑制劑 (例如，伊匹單抗)。劑量遞增程序係如實例1中所述，且將MTD/MFD命名為劑量值階段2，其在階段3開始時使用。
I期之階段3係劑量遞增之腫瘤內注射劑量值階段2之CD40激動劑(例如CD40激動性抗體，例如APX005M)與CTLA-4抑制劑(例如抗CTLA-4 mAb或阻斷劑，例如伊匹單抗)、CG0070及腫瘤內CCL21奈米膠囊預處理之組合。(例如，3至6個)患者之隊列接受每週腫瘤內CCL21奈米膠囊預處理、之後腫瘤內注射固定劑量之CG0070(例如，具有DDM)及CTLA-4抑制劑(例如，伊匹單抗)與以下三個劑量值中之一者之CD40激動劑(例如，APX005M)之組合達6週：6mg、12mg或18mg。對於每一投與，將劑量值階段2之CG0070及CTLA-4抑制劑(例如，伊匹單抗)調節至2mL並根據如表1中所定義之每個病灶之注射體積進行腫瘤內注射。在每一CG0070/CTLA-4抑制劑注射後立刻投與CD40激動劑(例如，APX005M)。每一劑量值下之總體積、及基於兩個以上注射病灶之病灶大小之最大注射體積列舉於下表2中。所注射病灶之最大數目係3，且給予CD40激動劑(例如，APX005M)之總劑量而與病灶之總數目及大小無關。在所注射病灶周圍皮下投與任何剩餘體積之CD40激動劑(例如，APX005M)。倘若病灶在最後計劃之治療之前完全消退，則可向先前未注射之病灶投與CG0070、CTLA-4抑制劑(例如，伊匹單抗)及CD40激動劑(例如，APX005M)。若所有病灶皆在治療過程結束之前消退，則可在先前病灶處或其周圍之皮下區域中僅注射CD40激動劑(例如，APX005M)。劑量遞增程序係如實例1中所述，且將MTD/MFD命名為研究劑量，其用於II期中。
對於研究之II期，患者之隊列首先接受每週一次腫瘤內CCL21奈米膠 囊預處理、之後腫瘤內注射I期之階段3中測定之研究劑量之CG0070(例如，具有DDM)、CTLA-4抑制劑(例如，伊匹單抗)及CD-40激動劑(例如，APX005M)之三組份組合達4週，之後每2週一次腫瘤內注射三組份組合共四次。其後，投與三組份組合之每月腫瘤內注射用於維持治療，直至完全反應、所有可注射之腫瘤消失、確認之疾病進展或對研究治療不耐受，以先發生者為準。處於I期之劑量遞增期(例如，階段1、2或3)之患者可入選II期研究，只要存在自最後劑量起至少四週之休息期即可。對於每一投與，首先向病灶注射GC0070，之後注射CTLA-4抑制劑(例如，伊匹單抗)及CD40激動劑(例如，APX005M)。最大可注射之腫瘤(如藉由PI所測定)係欲注射之第一腫瘤，且注射體積及劑量係根據表3及表4。將任何剩餘體積之藥物注射至下一最大可注射之腫瘤(如藉由PI所測定)中，且注射體積及劑量係根據表3及表4。對於其他剩餘體積重複此程序，直至注射如I期中測定之整個總體積及劑量。在特定注射位點之病灶不再存活時，在該位點省略CG0070注射。然而，即使在病灶消失時，亦向相同位點中投與CTLA-4抑制劑及CD40激動劑注射直至治療過程結束為止。每一患者接受CTLA-4抑制劑及CD40激動劑之最少8次注射。
此研究有兩個主要結果量度：(1)安全性及耐受性；及(2)效能。自每一階段開始直至每一階段或II期中最後一個受試者入選後3個月評估安全性及耐受性。階段1確定如藉由在具有難治性實體或淋巴腫瘤之患者中劑量限制毒性(DLT)之發病率評價的CG0070(例如，具有DDM)與腫瘤內CCL21預處理的安全性及耐受性。階段2確定如藉由在具有難治性實體或淋巴腫瘤之患者中劑量限制毒性(DLT)之發生率評價的CTLA-4抑制劑(例如抗CTLA-4 mAb或阻斷劑，例如伊匹單抗)與CG0070及腫瘤內CCL21預 處理之組合的安全性及耐受性。階段3及II期研究確定如藉由在具有難治性實體或淋巴腫瘤之患者中劑量限制毒性(DLT)之發生率評價的CD40激動劑(激動性抗CD40抗體，例如APX005M)與CG0070及CTLA-4抑制劑與腫瘤內CCL21預處理之組合的安全性及耐受性。自每一階段或II期開始直至每一階段或II期最後一個受試者入選後24個月評估效能。藉由具有可注射之難治性實體或淋巴腫瘤之患者中階段1中經CG0070(例如，具有DDM)與腫瘤內CCL21預處理治療、階段2中經CG0070及CTLA-4抑制劑(例如抗CTLA-4 mAb或阻斷劑，例如伊匹單抗)與腫瘤內CCL21預處理之組合治療、階段3及II期中經CG0070、CTLA-4抑制劑及CD40激動劑(例如激動性抗CD40抗體，例如APX005M))與腫瘤內CCL21預處理之組合治療的確認之客觀反應率(ORR)評價效能。
此研究之次要結果量度係如下。自每一階段開始直至每一階段或II期最後一個受試者入選後24個月評估安全性次要結果。對於所有三個階段及II期，安全性次要結果量度包括以下事件之發生率：所有不良事件(AE)、3級或更高級AE、需要中斷研究藥物之事件、對腫瘤之局部效應、臨床上顯著之實驗室變化及臨床上顯著之生命徵象變化。自每一階段或II期開始直至每一階段或II期最後一個受試者入選後24個月評價效能次要結果。對於所有三個階段及II期，效能次要結果量度包括最佳總體反應率(BOR)、疾病控制率(DCR)、耐久反應率(DRR)、反應持續時間(DOR)、至反應之時間(TTR)、無進展存活(PFS)、整體存活率(OS)、1年及2年存活率。
基於以下納入準則確定兩種性別之患者對於研究之合格性：(1)患者必須具有使用標準療法(手術、化學療法、放射療法或內分泌療法)失敗且不存在治癒性選擇之組織學確認之實體腫瘤，包括但不限於：頭頸鱗狀細 胞癌、皮膚鱗狀細胞癌、乳癌、惡性黑色素瘤、結腸直腸癌、胰臟腺癌、卵巢癌、非小細胞肺癌及***癌；(2)患者可能已具有任何種類及數目之先前癌症療法；(3)患者必須具有可藉由RECIST方法評估之可量測病灶；(4)欲治療之腫瘤塊必須足夠用於注射(即，遠離主要血管結構超過2cm)及藉由RECIST量測；(5)患者必須18歲；(6)患者之預期壽命必須12週；(7)患者必須具有0、1或2之美國東岸癌症臨床研究合作組織(ECOG)體能狀態；(8)患者必須有足夠之肝功能，定義如下：總膽紅素含量1.5 x正常值上限(ULN)；及若存在肝轉移，則AST/ALT含量2.5 x ULN、或5 x ULN；(9)患者必須具有足夠腎功能，定義如下：血清肌酸酐1.5 x ULN，或對於肌酸酐>1.5 x ULN之患者肌酸酐清除率(計算值)60mL/min/1.73m2；(10)患者必須有足夠骨髓功能，定義如下：絕對嗜中性球計數1,200/μL；及血小板計數80,000/μL；(11)患者必須無已知之出血素質或凝血病變，其將使得腫瘤內注射或生檢不安全；(12)有生育潛力之男性及女性必須同意在研究進入之前使用適當避孕措施並且長達六個月；(13)有生育潛力之女性在開始治療前一週內必須進行陰性尿液或血清妊娠測試；及(14)患者必須能夠理解並願意簽署書面知情同意書文件。
自研究中排除以下患者：(1)在篩選前4週內接受化學療法、免疫療法或放射療法、或因在篩選前超過4週投與之試劑產生之不良事件>1級(脫髪除外)的患者；(2)具有顯著腫瘤出血或凝血或出血病症史之患者；基於如由放射師確定之明確成像發現，具有可潛在地侵入主要血管結構(例如無名動脈、頸動脈)之靶腫瘤的患者；(3)具有1級預先存在之神經異常(CTCAE版本4.0)的患者；(4)在研究進入之前30天期間因需要住 院評估、治療或程序之緊急病況住院的患者。另外，需要住院評估、治療或程序之緊急病況必須在進入研究之前30天已經消退或在醫學上穩定且不嚴重；(5)具有臨床上顯著之人類免疫缺失病毒(HIV)、B型肝炎病毒(HBV)、C型肝炎病毒(HCV)或艾司坦-巴爾病毒(EBV)感染之患者。在治療前篩選期間測試患者之HIV；(6)(例如)針對類風濕性關節炎接受類固醇或免疫抑制劑之患者；(7)同時使用任何其他研究藥劑之患者；(8)存在中樞神經系統轉移或有該病史之患者；(9)在研究期限內懷孕或哺乳之女性或希望懷孕之女性；(10)具有不受控間發病(包括但不限於正在進行或活動性感染、症狀性鬱血性心臟衰竭、不穩定性心絞痛、心律不整或將限制對研究需求之順從性的精神病學疾病/社會情況)之患者。
實例8：具有難治性實體腫瘤之患者之腫瘤內CpG預處理、之後腫瘤內投與CG0070與CTLA-4抑制劑及OX40激動劑之組合之I/II期臨床研究
此研究係旨在評估具有難治性實體腫瘤之患者中包含腫瘤內CpG預處理、之後腫瘤內投與CG0070與CTLA-4抑制劑及OX40激動劑之組合之組合療法之安全性及效能的多中心、單臂、開放標籤、介入研究。
腫瘤內CpG預處理係如下實施。在每次投與療法(例如，CG0070、CG0070與CTLA-4抑制劑之組合、或CG0070、CTLA-4抑制劑及OX40激動劑之組合)之前2天，以約1mg/mL之劑量向每一靶向腫瘤位點中投與腫瘤內CpG(例如CpG 7909)。對於最長尺寸超過5cm之腫瘤，腫瘤內CpG之注射體積係約2mL；對於最長尺寸為2cm至5cm之腫瘤係約1mL；且對於最長尺寸為0.5cm至2cm之腫瘤係約0.5mL。腫瘤內CpG係在研究之I期中在6週中每週投與，或在研究之II期中在4週中每週投與，之後每2週一次再進行4個循環。其後，每個月一次腫瘤內投與CpG直至疾病進展或 發生毒性事件。
I期中之臨床研究分成三個階段。階段1係CG0070與腫瘤內CpG(例如，CpG 7909)預處理組合之腫瘤內注射的劑量遞增研究。(例如，3至6個)患者之隊列接受每週腫瘤內CpG(例如，CpG 7909)預處理、之後腫瘤內注射以下四個劑量值中之一者之CG0070(例如，具有DDM)達4週：5×1010vp、1×1011vp、5×1011vp或1×1012vp。舉例而言，將病毒CG0070在鹽水中之0.1% DDM中重構。每一劑量之總體積係2mL。CG0070溶液之濃度對於最低劑量係約2.5×1010vp/ml且對於最高劑量係約5×1011vp/ml。若患者具有單一病灶(其必須大於2cm)，則將總體積之CG0070溶液注射至病灶中。若存在兩個或更多個病灶，則遵循如表1中所示基於病灶大小之最大注射體積。若最大病灶係至少2cm，則將任何剩餘體積注射至最大病灶中。若最大病灶小於2cm，則將剩餘體積在兩個較大病灶之間分開。所注射病灶之最大數目係3。給予總劑量而與病灶之總數目及大小無關。劑量遞增程序係如實例1中所述，且將MTD/MFD命名為劑量值階段1，其在階段2開始時使用。
I期之階段2係劑量遞增之腫瘤內注射劑量值階段1之CTLA-4抑制劑(例如抗CTLA-4 mAb或阻斷劑，例如伊匹單抗)與CG0070及腫瘤內CpG預處理之組合。(例如，3至6個)患者之隊列接受每週腫瘤內CpG(例如，CpG 7909)預處理、之後腫瘤內注射固定劑量之CG0070(例如，具有DDM)與以下三個劑量值中之一者之CTLA-4抑制劑(例如，伊匹單抗)之組合達6週：6mg、12mg或18mg。對於每一投與，根據如階段1中所定義之每個病灶之注射體積首先腫瘤內注射CG0070。在每一CG0070注射後立刻投與CTLA-4抑制劑。每一劑量值下之總體積、及基於兩個以上注射病 灶之病灶大小之最大注射體積列舉於下表2中。所注射病灶之最大數目係3，且給予CTLA-4抑制劑之總劑量而與病灶之總數目及大小無關。在所注射病灶周圍皮下投與任何剩餘體積之CTLA-4抑制劑。倘若病灶在最後計劃之治療之前完全消退，則可向先前未注射之病灶投與CG0070及CTLA-4抑制劑(例如，伊匹單抗)二者。若所有病灶皆在治療過程結束之前消退，則可在先前病灶處或其周圍之皮下區域中僅注射CTLA-4抑制劑(例如，伊匹單抗)。劑量遞增程序係如實例1中所述，且將MTD/MFD命名為劑量值階段2，其在階段3開始時使用。
I期之階段3係劑量遞增之腫瘤內注射劑量值階段2之OX40激動劑(例如OX40激動性抗體，例如MEDI-6469)與CTLA-4抑制劑(例如抗CTLA-4 mAb或阻斷劑，例如伊匹單抗)、CG0070及腫瘤內CpG(例如，CpG7909)預處理之組合。(例如，3至6個)患者之隊列接受每週腫瘤內CpG預處理、之後腫瘤內注射固定劑量之CG0070(例如，具有DDM)及CTLA-4抑制劑(例如，伊匹單抗)與以下三個劑量值中之一者之OX40激動劑(例如，MEDI-6469)之組合達6週：6mg、12mg或18mg。對於每一投與，將劑量值階段2之CG0070及CTLA-4抑制劑(例如，伊匹單抗)調節至2mL並根據如表1中所定義之每個病灶之注射體積進行腫瘤內注射。在每一CG0070/CTLA-4抑制劑注射後立刻投與OX40激動劑(例如，MEDI-6469)。每一劑量值下之總體積、及基於兩個以上注射病灶之病灶大小之最大注射體積列舉於下表2中。所注射病灶之最大數目係3，且給予OX40激動劑(例如，MEDI-6469)之總劑量而與病灶之總數目及大小無關。在所注射病灶周圍皮下投與任何剩餘體積之OX40激動劑(例如，MEDI-6469)。倘若病灶在最後計劃之治療之前完全消退，則可向先前未注射之 病灶投與CG0070、CTLA-4抑制劑(例如，伊匹單抗)及OX40激動劑(例如，MEDI-6469)。若所有病灶皆在治療過程結束之前消退，則可在先前病灶處或其周圍之皮下區域中僅注射OX40激動劑(例如，MEDI-6469)。劑量遞增程序係如實例1中所述，且將MTD/MFD命名為研究劑量，其用於II期中。
對於研究之II期，患者之隊列首先接受每週一次腫瘤內CpG預處理、之後腫瘤內注射I期之階段3中測定之研究劑量之CG0070(例如，具有DDM)、CTLA-4抑制劑(例如，伊匹單抗)及OX-40激動劑(例如，MEDI-6469)之三組份組合達4週，之後每2週一次腫瘤內注射三組份組合共四次。其後，投與三組份組合之每月腫瘤內注射用於維持治療，直至完全反應、所有可注射之腫瘤消失、確認之疾病進展或對研究治療不耐受，以先發生者為準。處於I期之劑量遞增期(例如，階段1、2或3)之患者可入選II期研究，只要存在自最後劑量起至少四週之休息期即可。對於每一投與，首先向病灶注射GC0070，之後注射CTLA-4抑制劑(例如，伊匹單抗)及OX-40激動劑(例如，MEDI-6469)。最大可注射之腫瘤(如藉由PI所測定)係欲注射之第一腫瘤，且注射體積及劑量係根據表3及表4。將任何剩餘體積之藥物注射至下一最大可注射之腫瘤(如藉由PI所測定)中，且注射體積及劑量係根據表3及表4。對於其他剩餘體積重複此程序，直至注射如I期中測定之整個總體積及劑量。在特定注射位點之病灶不再存活時，在該位點省略CG0070注射。然而，即使在病灶消失時，亦向相同位點中投與CTLA-4抑制劑及OX-40激動劑(例如，MEDI-6469)注射直至治療過程結束為止。每一患者接受CTLA-4抑制劑及OX-40激動劑(例如，MEDI-6469)之最少8次注射。
此研究有兩個主要結果量度：(1)安全性及耐受性；及(2)效能。自每一階段開始直至每一階段或II期中最後一個受試者入選後3個月評估安全性及耐受性。階段1確定如藉由在具有難治性實體或淋巴腫瘤之患者中劑量限制毒性(DLT)之發病率評價的CG0070(例如，具有DDM)與腫瘤內CpG預處理的安全性及耐受性。階段2確定如藉由在具有難治性實體或淋巴腫瘤之患者中劑量限制毒性(DLT)之發生率評價的CTLA-4抑制劑(例如抗CTLA-4 mAb或阻斷劑，例如伊匹單抗)與CG0070及腫瘤內CpG預處理之組合的安全性及耐受性。階段3及II期研究確定如藉由在具有難治性實體或淋巴腫瘤之患者中劑量限制毒性(DLT)之發生率評價的OX40激動劑(激動性抗OX40抗體，例如MEDI-6469)與CG0070及CTLA-4抑制劑與腫瘤內CpG預處理之組合的安全性及耐受性。自每一階段或II期開始直至每一階段或II期最後一個受試者入選後24個月評估效能。藉由具有可注射之難治性實體或淋巴腫瘤之患者中階段1中經CG0070(例如，具有DDM)與腫瘤內CpG預處理治療、階段2中經CG0070及CTLA-4抑制劑(例如抗CTLA-4 mAb或阻斷劑，例如伊匹單抗)與腫瘤內CpG預處理之組合治療、階段3及II期中經CG0070、CTLA-4抑制劑及OX40激動劑(例如激動性抗OX40抗體，例如MEDI-6469))與腫瘤內CpG預處理之組合治療的確認之客觀反應率(ORR)評價效能。
此研究之次要結果量度係如下。自每一階段開始直至每一階段或II期最後一個受試者入選後24個月評估安全性次要結果。對於所有三個階段及II期，安全性次要結果量度包括以下事件之發生率：所有不良事件(AE)、3級或更高級AE、需要中斷研究藥物之事件、對腫瘤之局部效應、臨床上顯著之實驗室變化及臨床上顯著之生命徵象變化。自每一階段或II期開始 直至每一階段或II期最後一個受試者入選後24個月評價效能次要結果。對於所有三個階段及II期，效能次要結果量度包括最佳總體反應率(BOR)、疾病控制率(DCR)、耐久反應率(DRR)、反應持續時間(DOR)、至反應之時間(TTR)、無進展存活(PFS)、整體存活率(OS)、1年及2年存活率。
基於以下納入準則確定兩種性別之患者對於研究之合格性：(1)患者必須具有使用標準療法(手術、化學療法、放射療法或內分泌療法)失敗且不存在治癒性選擇之組織學確認之實體腫瘤，包括但不限於：頭頸鱗狀細胞癌、皮膚鱗狀細胞癌、乳癌、惡性黑色素瘤、結腸直腸癌、胰臟腺癌、卵巢癌、非小細胞肺癌及***癌；(2)患者可能已具有任何種類及數目之先前癌症療法；(3)患者必須具有可藉由RECIST方法評估之可量測病灶；(4)欲治療之腫瘤塊必須足夠用於注射(即，遠離主要血管結構超過2cm)及藉由RECIST量測；(5)患者必須18歲；(6)患者之預期壽命必須12週；(7)患者必須具有0、1或2之美國東岸癌症臨床研究合作組織(ECOG)體能狀態；(8)患者必須有足夠之肝功能，定義如下：總膽紅素含量1.5 x正常值上限(ULN)；及若存在肝轉移，則AST/ALT含量2.5 x ULN、或5x ULN；(9)患者必須具有足夠腎功能，定義如下：血清肌酸酐1.5 x ULN，或對於肌酸酐>1.5 x ULN之患者肌酸酐清除率(計算值)60mL/min/1.73m2；；(10)患者必須有足夠骨髓功能，定義如下：絕對嗜中性球計數1,200/μL；及血小板計數80,000/μL；(11)患者必須無已知之出血素質或凝血病變，其將使得腫瘤內注射或生檢不安全；(12)有生育潛力之男性及女性必須同意在研究進入之前使用適當避孕措施並且長達六個月；(13)有生育潛力之女性在開始治療前一週內必須進行陰性尿液或血清妊娠測試；及(14)患者必須能夠理解並願意簽署書 面知情同意書文件。
自研究中排除以下患者：(1)在篩選前4週內接受化學療法、免疫療法或放射療法、或因在篩選前超過4週投與之試劑產生之不良事件>1級(脫髪除外)的患者；(2)具有顯著腫瘤出血或凝血或出血病症史之患者；基於如由放射師確定之明確成像發現，具有可潛在地侵入主要血管結構(例如無名動脈、頸動脈)之靶腫瘤的患者；(3)具有1級預先存在之神經異常(CTCAE版本4.0)的患者；(4)在研究進入之前30天期間因需要住院評估、治療或程序之緊急病況住院的患者。另外，需要住院評估、治療或程序之緊急病況必須在進入研究之前30天已經消退或在醫學上穩定且不嚴重；(5)具有臨床上顯著之人類免疫缺失病毒(HIV)、B型肝炎病毒(HBV)、C型肝炎病毒(HCV)或艾司坦-巴爾病毒(EBV)感染之患者。在治療前篩選期間測試患者之HIV；(6)(例如)針對類風濕性關節炎接受類固醇或免疫抑制劑之患者；(7)同時使用任何其他研究藥劑之患者；(8)存在中樞神經系統轉移或有該病史之患者；(9)在研究期限內懷孕或哺乳之女性或希望懷孕之女性；(10)具有不受控間發病(包括但不限於正在進行或活動性感染、症狀性鬱血性心臟衰竭、不穩定性心絞痛、心律不整或將限制對研究需求之順從性的精神病學疾病/社會情況)之患者。
實例9：鱗狀細胞肺癌小鼠同種異體移植模型中Ar20-1004與抗CTLA-4抗體及/或抗PD-L1抗體之組合之腫瘤內投與之活體內研究.
此實例闡述KLN 205鼠類鱗狀細胞肺癌小鼠同種異體移植模型中單獨投與或與抗CTLA-4抗體9H10及/或抗PD-L1抗體WBP315組合投與溶瘤腺病毒Ar20-1004之效能的活體內研究。藉由監測腫瘤生長及轉移評價效能。Ar20-1004係具有除表現小鼠GM-CSF外與CG0070相同之構築體的 條件複製溶瘤腺病毒(CG0070表現人類GM-CSF)。由於腫瘤選擇性E2F-1啟動子之存在，Ar20-1004在具有Rb-路徑缺陷之腫瘤細胞中選擇性複製並選擇性殺死該等腫瘤細胞。細胞死亡事件及表現之GM-CSF可刺激針對遠端未感染轉移之免疫反應。Ar20-1004已闡述於以引用方式併入本文中之US2008/0118470中。
材料及方法
Ar20-1004(1.2×10^12vp/mL)及抗PD-L1(WBP315)(5.6mg/mL)係於Cold Genesys Inc.製備並在使用之前儲存於-80℃下。分別以6.15mg/mL及9.55mg/mL原液形式供應之抗CTLA-4 9H10及倉鼠多株IgG係購自BioX cell(West Lebanon,NH)。所有投用溶液皆係每天新鮮製備且在投用之前將溶液組合用於整組動物。將抗PD-L1(WBP315)、抗CTLA-49H10及倉鼠IgG同型各自稀釋於PBS中以產生1mg/mL之投用溶液。
將KLN 205腫瘤細胞接種在雌性DBA/2小鼠之右側腹及左側腹中。在植入右側後4天，在左側上植入腫瘤。當右側腹中之腫瘤達到99-102mm3之組平均體積時，在具有確立之皮下KLN 205腫瘤之8組小鼠(n=10)中在第1天(D)開始治療。所有試劑在第1天、第4天、第7天及第10天腫瘤內投與至右側腹腫瘤。以1×1010pfu/動物投與Ar20-1004。各自以20μg/動物投與抗CTLA-4、倉鼠多株IgG及抗PD-L1。對照動物未經處理。動物組及投用方案概述於圖2中。
每週兩次在兩腹上量測腫瘤。研究終點定義為對照組右側腹中之平均腫瘤體積為1000mm3或35天，以先到者為準。當對照組達到腫瘤體積終點時，在第23天結束研究。治療結果係基於腫瘤生長抑制百分比(%TGI)，定義為在第19天經治療小鼠及對照小鼠之中值腫瘤體積(MTV) (雙側腫瘤體積之總和)之差異百分比。使用Mann-Whitney U測試分析結果，且在P<0.05時認為具有統計學顯著性。
亦藉由對第23天(即研究之最後一天)之肺轉移病灶進行計數來分析結果。在終點使用異氟醚麻醉處死動物，並實施屍檢以鑑別轉移。藉由將右肺之上、中、下及後腔靜脈瓣中計數之病灶數目與在左肺中計數之病灶數目相加來獲得總計數。抑制百分比定義為指定對照組之轉移病灶之數目與藥物治療組之轉移病灶之數目之間的差，表示為指定對照之轉移病灶之數目的百分比。
抑制%=[1-(藥物治療之病灶數/對照病灶數)]×100。
使用Kruskal-Wallis測試分析結果，且在P<0.05時認為具有統計學顯著性。藉由體重(BW)量測及頻繁觀察治療相關(TR)副作用之臨床體徵來評價治療耐受性。
結果
此研究表徵在KLN 205鼠類鱗狀細胞肺癌同種異體移植模型中由Ar20-1004誘導之抗腫瘤反應。當Ar20-1004與抗CTLA-4及/或抗PD-L1組合投與時，亦評估反應。直至第23天每週兩次量測腫瘤，並在第D19實施TGI分析。在第23天對肺轉移病灶進行計數。所有治療均耐受良好。
當在雌性DBA/2小鼠中之KLN 205鼠類鱗狀細胞肺癌模型中腫瘤內投與時，單獨或組合之Ar20-1004、抗CTLA-4及抗PD-L1不顯示顯著之腫瘤生長抑制(圖4)。Ar20-1004、抗CTLA-4及抗PD-L1單一療法分別將轉移抑制71%、60%及66%，但與未經處理組相比，該等結果在統計上不顯著。類似地，Ar20-1004與抗CTLA-4之組合、或抗CTLA-4及抗PD-L1之雙重療法(無Ar20-1004)分別將轉移抑制69%及74%，其在統計上不顯 著。
值得注意的是，包括Ar20-1004及抗PD-L1之組合療法引起轉移計數之顯著84%抑制，且包括Ar20-1004、抗PD-L1及抗CTLA-4之三重組合療法引起轉移病灶之顯著94%抑制(圖3)。
實例10：4T1同源小鼠模型中腫瘤內投與Ar20-1004與腫瘤內抗CTLA-49H10及/或局部輻照之組合之活體內研究.
此實例闡述評估4T1同源小鼠模型中原發性腫瘤位點之由單獨或與CTLA-4-阻斷及/或輻照之組合之Ar20-1004誘導之抗腫瘤免疫反應以及對轉移之治療影響的活體內研究。
4T1係Rb-路徑缺陷性小鼠乳癌細胞系。作為預備步驟，藉由4T1細胞存活率及毒性(即，GM-CSF產生)分析評價Ar20-1004(一種具有小鼠特異性GM-CSF序列之人類腺病毒(Ad5)衍生物)之抗腫瘤效應。在相同活體外分析中使用LNCap純系FGC(ATCC® CRL-1740TM)人類細胞系作為陽性對照。分別以10、100及1000之MOI用Ar20-1004感染癌細胞之一式三份孔達24小時。在感染後24小時、72小時及120小時經由MTT分析評價細胞存活率。在感染後24小時、72小時及120小時收集細胞上清液，並藉由ELISA測試總GM-CSF蛋白。
在活體內研究中，向8-12週齡之雌性BALB/c小鼠之第4腹股溝***脂肪墊中正位注射104個4T1腫瘤細胞。在腫瘤達到50-100mm3之平均大小時，實施成對匹配，且將小鼠隨機化成如表1中所示之治療組以開始治療。投用方案係如圖5中所示。在投與Ar20-1004(治療方案1)及視情況抗CTLA-4抗體9H10(BioXell)或Syrian倉鼠IgG2同型對照(BioXell，治療方案2)之第1劑量之前1天給予5Gy之輻照。利用如表6中所列舉之治療方 案1及2以3天間隔治療小鼠4次。每次將所有藥劑至一個注射器中用於單一劑量腫瘤內投與。總劑量體積不超過50μl/劑量/小鼠。
研究具有兩個主要終點：(1)腫瘤生長抑制(TGI)；及(2)轉移計數。亦檢查動物之治療對正常行為的任何效應，例如移動性、食物及水消耗之視覺估計、體重增加/減少(體重在第一週之工作日量測，且隨後在隨機化 後每週兩次量測)、眼/毛髮墊及任何其他異常效應。報告任何不良反應或死亡。
為監測腫瘤生長，使用測徑器量測原發性腫瘤之體積。對單次觀察到>30%體重減輕或連續三次量測到>25%體重減輕之個別動物實施安樂死。平均體重減輕>20%或>10%死亡率之任何組停止投藥，但該組未實施安樂死且允許恢復。在具有>20%體重減輕之組中，對達到個體體重減輕終點之個體實施安樂死。若組治療相關之體重減輕恢復至原始重量之10%內，則可以更低劑量或更低頻率之投藥時間表重新開始投藥。
為測定轉移計數，將來自觀察組之2-3只動物在第12天開始每兩天安樂死。在具有最小支氣管下自每只小鼠移出動物之肺，且使用印度墨對肺表面上之腫瘤病灶進行染色並計數。當在觀察組中觀察到每個肺組50-100個轉移病灶時，達到轉移計數終點，且將所有小鼠安樂死並對其肺轉移病灶進行計數。在評價所有動物之轉移時，亦基於在研究之最後一天進行的腫瘤體積量測來計算%TGI。亦在終止時對所有動物實施全身驗屍以藉由在注射位點、局部淋巴結、肺、肝、腎、脾及腦印度墨染色來鑑別任何轉移。
實例性實施例
實施例1. 在一些實施例中，提供治療個體之固態或淋巴腫瘤之方法，其包含：a)向該腫瘤位點局部投與有效量之感染劑；及b)向該腫瘤位點局部投與有效量之免疫調節劑。
實施例2. 在實施例1之一些其他實施例中，該感染劑係病毒。
實施例3. 在實施例2之一些其他實施例中，該病毒選自由以下組成之群：腺病毒、單純疱疹病毒、牛痘病毒、腮腺炎病毒、新城雞瘟病毒、脊 髓灰質炎病毒、麻疹病毒、塞尼卡谷病毒、柯薩奇病毒、裡奧病毒、水疱性口炎病毒、馬拉巴及棒狀病毒及小病毒。
實施例4. 在實施例2或實施例3之一些其他實施例中，該病毒係非溶瘤病毒。
實施例5. 在實施例2或實施例3之一些其他實施例中，該病毒係溶瘤病毒。
實施例6. 在實施例5之一些其他實施例中，該溶瘤病毒係溶瘤腺病毒。
實施例7. 在實施例5或實施例6之一些其他實施例中，該溶瘤病毒優先在癌細胞中複製。
實施例8. 在實施例7之一些其他實施例中，該溶瘤病毒包括包含可操作連接至該病毒複製所必需之病毒基因之腫瘤細胞特異性啟動子的病毒載體。
實施例9. 在實施例8之一些其他實施例中，該腫瘤特異性啟動子係E2F-1啟動子。
實施例10. 在實施例9之一些其他實施例中，該腫瘤特異性啟動子係人類E2F-1啟動子。
實施例11. 在實施例9或實施例10之一些其他實施例中，該E2F-1啟動子包含SEQ ID NO：1中所述之核苷酸序列。
實施例12. 在實施例8至11中任一者之一些其他實施例中，該病毒複製所必需之該病毒基因選自由以下組成之群：E1A、E1B及E4。
實施例13. 在實施例1之一些其他實施例中，該感染劑係細菌。
實施例14. 在實施例13之一些其他實施例中，該細菌係卡介苗 (BCG)、分枝桿菌細胞壁-DNA複合物(「MCNA」)或單核球增多性李氏菌。
實施例15. 在實施例1至14中任一者之一些其他實施例中，將該感染劑直接投與至該腫瘤中。
實施例16. 在實施例1至14中任一者之一些其他實施例中，將該感染劑投與至具有該腫瘤之組織中。
實施例17. 在實施例1至16中任一者之一些其他實施例中，將該免疫調節劑直接投與至該腫瘤中。
實施例18. 在實施例1至16中任一者之一些其他實施例中，將該免疫調節劑投與至具有該腫瘤之組織。
實施例19. 在實施例1至18中任一者之一些其他實施例中，依序投與該感染劑及該免疫調節劑。
實施例20. 在實施例19之一些其他實施例中，在投與該免疫調節劑之前投與該感染劑。
實施例21. 在實施例19之一些其他實施例中，在投與該免疫調節劑後投與該感染劑。
實施例22. 在實施例1至18中任一者之一些其他實施例中，同時投與該感染劑及該免疫調節劑。
實施例23. 在實施例22之一些其他實施例中，在同一組合物中投與該感染劑及該免疫調節劑。
實施例24. 在實施例1至23中任一者之一些其他實施例中，該免疫調節劑係選自由以下組成之群之免疫檢查點分子之調節劑：CTLA-4、PD-1、PD-L1、PD-L2、TIM3、B7-H3、B7-H4、LAG-3、KIR及其配體。
實施例25. 在實施例24之一些其他實施例中，該免疫調節劑係CTLA-4之抑制劑。
實施例26. 在實施例25之一些其他實施例中，該CTLA-4之抑制劑係抗CTLA-4抗體。
實施例27. 在實施例26之一些其他實施例中，抗CTLA-4抗體選自由以下組成之群：伊匹單抗、曲美木單抗及單鏈抗CTLA-4抗體。
實施例28. 在實施例27之一些其他實施例中，該抗CTLA-4抗體係伊匹單抗。
實施例29. 在實施例25之一些其他實施例中，該CTLA-4之抑制劑係特異性識別CTLA-4之經改造之脂質運載蛋白。
實施例30. 在實施例29之一些其他實施例中，該經改造之脂質運載蛋白係特異性結合至CTLA-4之抗運載蛋白分子。
實施例31. 在實施例1至23中任一者之一些其他實施例中，該免疫調節劑係免疫刺激劑。
實施例32. 在實施例31之一些其他實施例中，該免疫刺激劑係OX40、4-1BB或CD40之活化劑。
實施例33. 在實施例32之一些其他實施例中，該免疫刺激劑係CD40之刺激劑。
實施例34. 在實施例33之一些其他實施例中，該免疫調節劑係CD40之激動劑抗體。
實施例35. 在實施例1至34中任一者之一些其他實施例中，該方法進一步包含向該腫瘤位點局部投與免疫相關分子。
實施例36. 在實施例35之一些其他實施例中，該免疫相關分子選自由 以下組成之群：GM-CSF、IL-2、IL-12、干擾素、CCL4、CCL19、CCL21、CXCL13、TLR1、TLR2、TLR3、TLR4、TLR5、TLR6、TLR7、TLR8、TLR9、TLR10、RIG-I、MDA5、LGP2及LTαβ。
實施例37. 在實施例35之一些其他實施例中，該免疫相關分子選自由以下組成之群：STING活化劑、PRRago、TLR刺激物及RLR刺激物。
實施例38. 在實施例35至37中任一者之一些其他實施例中，該免疫相關分子與該感染劑分開投與。
實施例39. 在實施例35或實施例36之一些其他實施例中，該免疫相關分子係由該感染劑表現，其中該感染劑包含編碼該免疫相關分子之核酸。
實施例40. 在實施例39之一些其他實施例中，該感染劑係包含病毒載體之病毒，且其中該病毒載體包含編碼該免疫相關分子之該核酸。
實施例41. 在實施例40之一些其他實施例中，編碼該免疫相關分子之該核酸可操作連接至病毒啟動子。
實施例42. 在實施例41之一些其他實施例中，該病毒係腺病毒，且該病毒啟動子係E3啟動子。
實施例43. 在實施例1至42中任一者之一些其他實施例中，該感染劑係腺病毒血清型5，其中天然腺病毒之內源性E1a啟動子及E3 19kD編碼區經人類E2F-1啟動子及編碼人類GM-CSF之核酸置換。
實施例44. 在實施例43之一些其他實施例中，該感染劑係CG0070。
實施例45. 在實施例1至44中任一者之一些其他實施例中，該方法進一步包含在投與該感染劑之前向該腫瘤位點局部投與預處理組合物。
實施例46. 在實施例45之一些其他實施例中，該預處理組合物包含轉導增強劑。
實施例47. 在實施例46之一些其他實施例中，該轉導增強劑係N-十二烷基-β-D-麥芽糖苷(DDM)。
實施例48. 在實施例1至47中任一者之一些其他實施例中，在投與該感染劑及該免疫調節劑之前，該個體經受先前療法。
實施例49. 在實施例48之一些其他實施例中，該先前療法係輻射療法。
實施例50. 在實施例49之一些其他實施例中，該先前療法包含投與治療劑。
實施例51. 在實施例50之一些其他實施例中，該治療劑係增加參與免疫原性路徑之細胞介素之含量的藥劑。
實施例52. 在實施例50之一些其他實施例中，該治療劑係引起腫瘤之結構組份功能障礙或對其損害的藥劑。
實施例53. 在實施例52之一些其他實施例中，該治療劑選自由以下組成之群：抗VEGF抗體、玻尿酸酶、CCL21及N-十二烷基-β-麥芽糖苷。
實施例54. 在實施例48至53中任一者之一些其他實施例中，該先前療法係以不足以根除該等腫瘤細胞之劑量提供。
實施例55. 在實施例1至54中任一者之一些其他實施例中，該方法進一步包含向該腫瘤位點局部投與有效量之不活化之腫瘤細胞。
實施例56. 在實施例55之一些其他實施例中，該等不活化之腫瘤細胞係自體的。
實施例57. 在實施例55之一些其他實施例中，該等不活化之腫瘤細胞係同種異體的。
實施例58. 在實施例55之一些其他實施例中，該等不活化之腫瘤細胞 係來自腫瘤細胞系。
實施例59. 在實施例55至58中任一者之一些其他實施例中，藉由輻照使該等不活化之腫瘤細胞不活化。
實施例60. 在實施例55至59中任一者之一些其他實施例中，同時投與該感染劑及該不活化之腫瘤細胞。
實施例61. 在實施例60之一些其他實施例中，該感染劑及該等不活化之腫瘤細胞係以單一組合物形式投與。
實施例62. 在實施例60或實施例61之一些其他實施例中，在即將該投與之前混合該感染劑及該等不活化之腫瘤細胞。
實施例63. 在實施例1至62中任一者之一些其他實施例中，該固態或淋巴腫瘤係膀胱癌。
實施例64. 在實施例63之一些其他實施例中，該感染劑係膀胱內投與。
實施例65. 在實施例63或實施例64之一些其他實施例中，該免疫調節劑係膀胱內投與。
實施例66. 在實施例63至65中任一者之一些其他實施例中，該膀胱癌係肌肉侵襲性膀胱癌。
實施例67. 在實施例63至65中任一者之一些其他實施例中，該膀胱癌係非肌肉侵襲性膀胱癌。
實施例68. 在實施例1至67中任一者之一些其他實施例中，每週投與該感染劑。
實施例69. 在實施例1至68中任一者之一些其他實施例中，每週投與該免疫調節劑。
實施例70. 在實施例1至69中任一者之一些其他實施例中，該個體在該腫瘤中具有一或多個選自以下之生物標記之高表現：PD-1、PD-L1及PD-L2。
實施例71. 在實施例1至70中任一者之一些其他實施例中，該個體在腫瘤源成熟樹突細胞中具有一或多個選自以下之生物標記之高表現：CD80、CD83、CD86及HLA-II類抗原。
實施例72. 在實施例1至71中任一者之一些其他實施例中，該個體具有一或多個選自由以下組成之群之生物標記之高表現：CXCL9、CXCL10、CXCL11、CCR7、CCL5、CCL8、SOD2、MT2A、OASL、GBP1、HES4、MTIB、MTIE、MTIG、MTIH、GADD45A、LAMP3及miR-155。
實施例73. 在實施例1至72中任一者之一些其他實施例中，該個體係人類個體。
實施例74. 在一些實施例中，提供治療個體之固態或淋巴腫瘤之套組，其包含：a)感染劑，b)免疫調節劑，及c)用於向腫瘤位點局部投與該感染劑或免疫調節劑之裝置。
實施例75. 在實施例74之一些其他實施例中，該感染劑係病毒。
實施例76. 在實施例75之一些其他實施例中，該病毒係優先在癌細胞中複製之溶瘤腺病毒。
實施例77. 在實施例75之一些其他實施例中，該病毒係非溶瘤病毒。
實施例78. 在實施例74至77中任一者之一些其他實施例中，該免疫調節劑係選自由以下組成之群之免疫檢查點分子之調節劑：CTLA-4、PD-1、PD-L1、PD-L2、TIM3、B7-H3、B7-H4、LAG-3、KIR及其配體。
實施例79. 在實施例78之一些其他實施例中，該免疫調節劑係CTLA-4之抑制劑。
實施例80. 在實施例79之一些其他實施例中，該CTLA-4之抑制劑係抗CTLA-4抗體。
實施例81. 在實施例80之一些其他實施例中，該抗CTLA-4抗體係伊匹單抗。
實施例82. 在實施例79之一些其他實施例中，該CTLA-4之抑制劑係特異性識別CTLA-4之經改造之脂質運載蛋白。
實施例83. 在實施例82之一些其他實施例中，該經改造之脂質運載蛋白係特異性結合至CTLA-4之抗運載蛋白分子。
實施例84. 在實施例74至83中任一者之一些其他實施例中，該免疫調節劑係免疫刺激劑。
實施例85. 在實施例84之一些其他實施例中，該免疫刺激劑係OX40、4-1BB或CD40之活化劑。
實施例86. 在實施例85之一些其他實施例中，該免疫刺激劑係CD40之激動劑。
實施例87. 在實施例86之一些其他實施例中，該免疫調節劑係CD40之激動劑抗體。
實施例88. 在實施例74至87中任一者之一些其他實施例中，該感染劑包含編碼免疫相關分子之核酸。
實施例89. 在實施例88之一些其他實施例中，該免疫相關分子選自由以下組成之群：GM-CSF、IL-2、IL12、干擾素、CCL4、CCL19、CCL21、CXCL13、TLR1、TLR2、TLR3、TLR4、TLR5、TLR6、 TLR7、TLR8、TLR9、TLR10、RIG-I、MDA5、LGP2及LTαβ。
實施例90. 在實施例88或實施例89之一些其他實施例中，該感染劑係包含病毒載體之病毒，且其中該病毒載體包含編碼該免疫相關分子之該核酸。
實施例91. 在實施例90之一些其他實施例中，編碼該免疫相關分子之該核酸可操作連接至病毒啟動子。
實施例92. 在實施例91之一些其他實施例中，該病毒係腺病毒，且該病毒啟動子係E3啟動子。
實施例93. 在實施例74至92中任一者之一些其他實施例中，該感染劑係腺病毒血清型5，其中天然腺病毒之內源性E1a啟動子及E3 19kD編碼區經人類E2F-1啟動子及編碼人類GM-CSF之核酸置換。
實施例94. 在實施例93之一些其他實施例中，該感染劑係CG0070。
實施例95. 在實施例74至94中任一者之一些其他實施例中，該套組進一步包括包含轉導增強劑之預處理組合物。
實施例96. 在實施例95之一些其他實施例中，該轉導增強劑係N-十二烷基-β-D-麥芽糖苷(DDM)。
實施例97. 在實施例74至96中任一者之一些其他實施例中，該套組進一步包含選自由以下組成之群之免疫相關分子：GM-CSF、IL-2、IL12、干擾素、CCL4、CCL19、CCL21、CXCL13、TLR1、TLR2、TLR3、TLR4、TLR5、TLR6、TLR7、TLR8、TLR9、TLR10、RIG-I、MDA5、LGP2、LTαβ、STING活化劑、PRRago、TLR刺激物及RLR刺激物。
實施例98. 在實施例74至97中任一者之一些其他實施例中，該套組進 一步包含複數個不活化之腫瘤細胞。
實施例99. 在實施例98之一些其他實施例中，該套組進一步包含在投與之前混合該感染劑及該等不活化之腫瘤細胞之說明書。
實施例100. 在實施例98或實施例99之一些其他實施例中，用於局部投與之該裝置用於同時投與該複數個不活化之腫瘤細胞及該感染劑。
實施例101. 在實施例74至100中任一者之一些其他實施例中，用於局部投與之該裝置係用於將該感染劑或該免疫調節劑直接投與至該腫瘤中。
實施例102. 在實施例74至101中任一者之一些其他實施例中，用於局部投與之該裝置係用於將該感染劑或該免疫調節劑投與至具有該腫瘤之組織。
實施例103. 在一些實施例中，提供包含以下之醫藥組合物：a)感染劑，b)免疫調節劑，及c)適於將該組合物局部投與至腫瘤位點之醫藥上可接受之賦形劑。
實施例104. 在實施例103之一些其他實施例中，該醫藥上可接受之賦形劑係聚合物。
實施例105. 在實施例104之一些其他實施例中，該聚合物係水凝膠。
實施例106. 在實施例103至105中任一者之一些其他實施例中，該感染劑係病毒。
實施例107. 在實施例106之一些其他實施例中，該病毒係優先在癌細胞中複製之溶瘤腺病毒。
實施例108. 在實施例107之一些其他實施例中，病毒係非溶瘤病毒。
實施例109. 在實施例103至108中任一者之一些其他實施例中，該免 疫調節劑係選自由以下組成之群之免疫檢查點分子之調節劑：CTLA-4、PD-1、PD-L1、PD-L2、TIM3、B7-H3、B7-H4、LAG-3、KIR及其配體。
實施例110. 在實施例109之一些其他實施例中，該免疫調節劑係CTLA-4之抑制劑。
實施例111. 在實施例110之一些其他實施例中，該CTLA-4之抑制劑係抗CTLA-4抗體。
實施例112. 在實施例111之一些其他實施例中，該抗CTLA-4抗體係伊匹單抗。
實施例113. 在實施例110之一些其他實施例中，該CTLA-4之抑制劑係特異性識別CTLA-4之經改造之脂質運載蛋白。
實施例114. 在實施例113之一些其他實施例中，該經改造之脂質運載蛋白係特異性結合至CTLA-4之抗運載蛋白分子。
實施例115. 在實施例103至114中任一者之一些其他實施例中，該免疫調節劑係免疫刺激劑。
實施例116. 在實施例115之一些其他實施例中，該免疫刺激劑係OX40、4-1BB或CD40之活化劑。
實施例117. 在實施例116之一些其他實施例中，該免疫刺激劑係CD40之刺激劑。
實施例118. 在實施例117之一些其他實施例中，該免疫調節劑係CD40之激動劑抗體。
實施例119. 在實施例103至118中任一者之一些其他實施例中，該感染劑包含編碼免疫相關分子之核酸。
實施例120. 在實施例119之一些其他實施例中，該免疫相關分子選自由以下組成之群：GM-CSF、IL-2、IL12、干擾素、CCL4、CCL19、CCL21、CXCL13、TLR1、TLR2、TLR3、TLR4、TLR5、TLR6、TLR7、TLR8、TLR9、TLR10、RIG-I、MDA5、LGP2及LTαβ。
實施例121. 在實施例119或實施例120之一些其他實施例中，該感染劑係包含病毒載體之病毒，且該病毒載體包含編碼該免疫相關分子之核酸。
實施例122. 在實施例121之一些其他實施例中，編碼該免疫相關分子之該核酸可操作連接至病毒啟動子。
實施例123. 在實施例122之一些其他實施例中，該病毒係腺病毒，且該病毒啟動子係E3啟動子。
實施例124. 在實施例103至123中任一者之一些其他實施例中，該感染劑係腺病毒血清型5，其中天然腺病毒之內源性E1a啟動子及E3 19kD編碼區經人類E2F-1啟動子及編碼人類GM-CSF之核酸置換。
實施例125. 在實施例124之一些其他實施例中，該感染劑係CG0070。
實施例126. 在實施例103至125中任一者之一些其他實施例中，該醫藥組合物進一步包括包含轉導增強劑之預處理組合物。
實施例127. 在實施例126之一些其他實施例中，該轉導增強劑係N-十二烷基-β-D-麥芽糖苷(DDM)。
實施例128. 在實施例103至127中任一者之一些其他實施例中，該醫藥組合物進一步包含選自由以下組成之群之免疫相關分子：GM-CSF、IL-2、IL12、干擾素、CCL4、CCL19、CCL21、CXCL13、TLR1、 TLR2、TLR3、TLR4、TLR5、TLR6、TLR7、TLR8、TLR9、TLR10、RIG-I、MDA5、LGP2、LTαβ、STING活化劑、PRRago、TLR刺激物及RLR刺激物。
實施例129. 在實施例103至128中任一者之一些其他實施例中，該醫藥組合物進一步包含複數個不活化之腫瘤細胞。
實施例130. 在實施例129之一些其他實施例中，該複數個不活化之腫瘤細胞係自體的。
實施例131. 在實施例129之一些其他實施例中，該複數個不活化之腫瘤細胞係同種異體的。
實施例132. 在實施例129之一些其他實施例中，該複數個不活化之腫瘤細胞係來自腫瘤細胞系。
實施例133. 在實施例129至132中任一者之一些其他實施例中，藉由輻照使該複數個不活化之腫瘤細胞不活化。
<110> 美商卡德通用工程公司
<120> 藉由組合療法治療固態或淋巴腫瘤的方法
<130> 744442000141
<140> 還未指定
<141> Concurrently Herewith
<150> US 62/243,512
<151> 2015-10-19
<160> 1
<170> FastSEQ for Windows Version 4.0
<210> 1
<211> 1519
<212> DNA
<213> 智人
<400> 1

Claims (20)

  1. 一種感染劑及免疫調節劑之用途，其用於製造用於治療個體之固態或淋巴腫瘤之藥劑，其中該感染劑及該免疫調節劑各適於局部投與至腫瘤位點。
  2. 如請求項1之用途，其中該感染劑係病毒。
  3. 如請求項1之用途，其中該感染劑係細菌。
  4. 如請求項1之用途，將該感染劑直接投與至該腫瘤中。
  5. 如請求項1之用途，將該感染劑投與至具有該腫瘤之組織。
  6. 如請求項1之用途，其中依序投與該感染劑及該免疫調節劑。
  7. 如請求項1之用途，其中同時投與該感染劑及該免疫調節劑。
  8. 如請求項1之用途，其中該免疫調節劑係選自由以下組成之群之免疫檢查點分子之調節劑：CTLA-4、PD-1、PD-L1、PD-L2、TIM3、B7-H3、B7-H4、LAG-3、KIR及其配體。
  9. 如請求項1之用途，其中該免疫調節劑係免疫刺激劑。
  10. 如請求項9之用途，其中該免疫刺激劑係OX40、4-1BB或CD40之活化劑。
  11. 如請求項1之用途，其中該等藥劑進一步包含適於局部投與至該腫瘤位點之免疫相關分子。
  12. 如請求項11之用途，其中該免疫相關分子選自由以下組成之群：GM-CSF、IL-2、IL-12、干擾素、CCL4、CCL19、CCL21、CXCL13、TLR1、TLR2、TLR3、TLR4、TLR5、TLR6、TLR7、TLR8、TLR9、TLR10、RIG-I、MDA5、LGP2、LTαβ、STING活化劑、PRRago、TLR刺激物及RLR刺激物。
  13. 如請求項11之用途，其中該免疫相關分子與該感染劑分開投與。
  14. 如請求項11之用途，其中該免疫相關分子係由該感染劑表現，其中該感染劑包含編碼該免疫相關分子之核酸。
  15. 如請求項14之用途，其中該感染劑係CG0070。
  16. 如請求項1之用途，其中該個體在投與該感染劑及該免疫調節劑之前經先前療法。
  17. 如請求項16之用途，其中該先前療法係輻射療法。
  18. 如請求項1之用途，其中該等藥劑進一步包含有效量之適於局部投與至該腫瘤位點之不活化之腫瘤細胞。
  19. 一種用於治療個體之固態或淋巴腫瘤之套組，其包含：a)感染劑，b)免疫調節劑，及c)用於將該感染劑或免疫調節劑局部投與至腫瘤位點之裝置。
  20. 一種醫藥組合物，其包含：a)感染劑，b)免疫調節劑，及c)適於將該組合物局部投與至腫瘤位點之醫藥上可接受之賦形劑。
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