TW201703795A - 白點症病毒vp31及層黏蛋白受體結合蛋白用於製造預防或治療白點症病毒感染的藥物的用途、及其組成物 - Google Patents

Abstract

本發明揭露白點症病毒VP31及層黏蛋白受體結合蛋白用於製造預防及/或治療白點症病毒感染藥物之用途、及其組成物。該藥物或組成物可包含選自以下之多肽：白點症病毒VP31蛋白與草蝦Laminin受體蛋白、白點症病毒VP31與草蝦Lamin受體蛋白片段，以VP31與草蝦Laminin受體蛋白與其片段分別製備之抗體。本發明之組成物可作為浸泡液、注射劑及飼料添加物。

Description

白點症病毒VP31及層黏蛋白受體結合蛋白用於製造預防或治療白點症病毒感染的藥物的用途、及其組成物

本發明係關於白點症病毒VP31及層黏蛋白受體結合蛋白用於製造預防或治療白點症病毒感染的藥物的用途、及其組成物。

白點症病毒(white spot syndrome virus, WSSV)是一種流行於世界各地，廣泛感染養殖蝦和許多其他甲殼類動物的病毒，嚴重危害全球養蝦產業已有超過十年的時間，造成全球養蝦產業難以計數的嚴重經濟損失，然而截至目前為止並無有效方法可防治，因此開發有效的白點症病毒防治製劑刻不容緩。白點症病毒是一個大型病毒，在分類上歸屬於線極病毒科(Nimaviridae )及白點病毒屬(Whispovirus )，其病毒顆粒由包括四個部分：由外而內主要由外套膜(envelope)、中間層(tegument)以及核鞘(nucleocapsid)包圍其核心– 一個約30萬個鹼基對的雙股去氧核醣核酸(DNA)所構成，並被預測推衍出包含253個的開放譯讀區(open reading frames, ORFs) [美國國家生物技術資訊中心(National Center for Biotechnology Information, NCBI)基因資料庫編號(GenBank accession no.) AF440570]。病毒的結構蛋白在病毒感染宿主細胞的細胞辨識、定位、侵入、組裝和出芽等過程中往往扮演重要的角色，在白點症病毒之病毒顆粒的蛋白組成研究上，藉由蛋白質體學方法探討，目前至少已有58個白點症病毒的結構性蛋白被鑑定出來，其中包含30多個被確認為外套膜蛋白，VP31蛋白即是其中之一。

一般而言，病毒顆粒進入宿主細胞都依循相同的模式：病毒與的結構蛋白與細胞膜上的受體蛋白結合並將病毒的遺傳物質送入宿主細胞內，當病毒與細胞表面受體結合後，病毒通常藉由兩種主要方式進入細胞內：非胞吞作用(non-endocytic)與胞吞作用(endocytic)；非胞吞作用的路徑中，具外套膜的病毒能夠藉由細胞膜受體的調控，利用融合作用方式進入細胞膜內。胞吞作用路徑中，病毒也能夠經由細胞受體調控之胞吞作用進入細胞核內體。可見宿主細胞膜受體對於病毒侵入細胞機制中具有重要之影響。層黏蛋白受體(laminin receptor, Lamr)是一個對細胞具有重要功能的細胞膜受體，也扮演了許多病毒與細菌受體的角色，文獻報導指出，蝦細胞Lamr與蝦類黃頭病毒(Yellow head virus, YHV)及套拉病毒 (Taura syndrome virus, TSV)的感染有具有關聯性，但並無進一步關於其與白點症病毒感染相關性，與其交互作用之白點症病毒蛋白，或有關應用其於治療及/或預防白點症病毒感染之研究報導。

本發明之發明人發現，白點症病毒VP31蛋白即是一個草蝦(Penaeus monodon )的Lamr (PmLamr)的結合蛋白，可應用於治療及/或預防白點症病毒感染。

在一方面，本發明係提供一種白點症病毒VP31蛋白的用途，可用於製備供治療及/或預防白點症病毒感染之藥物，此種藥物可包含一蛋白以及攜帶此蛋白的載體，上述蛋白可包含白點症病毒VP31蛋白、白點症病毒VP31蛋白的片段蛋白、或由白點症病毒VP31蛋白或其片段蛋白所製備之抗體，此藥物可降低蝦類感染白點症病毒之死亡率。

在另一方面，本發明再提供一種層黏蛋白受體結合蛋白的用途，其可用於製備供治療及/或預防白點症病毒感染之藥物，藥物可包含一蛋白以及攜帶此蛋白的載體，上述蛋白可包含層黏蛋白受體結合蛋白、層黏蛋白受體結合蛋白的片段蛋白、或由層黏蛋白受體結合蛋白或其片段蛋白所製備之抗體，此藥物可降低蝦類感染白點症病毒之死亡率。

在另一方面，本發明再提供一種用於治療及/或預防白點症病毒感染之組成物，其包含以上所述之蛋白以及用於攜帶此蛋白的載體，上述組成物可加入蝦類飼料作為添加物。

本發明之各個具體實例的細節說明如後。本發明之其他特徵將會經由以下各個具體實例中的詳細說明及申請專利範圍而清楚呈現。

無須進一步的闡述，咸相信本發明所屬技術領域中具有通常知識者基於前述說明即可利用本發明至最廣的程度。因此，可以理解以下的說明僅僅是作為例示說明之用，而非以任何方式限制其餘的揭露內容。

為利 貴審查員瞭解本發明之發明特徵、內容與優點及其所能達成之功效，茲將本發明配合附圖，並以實施例之表達形式詳細說明如下，而其中所使用之圖式，其主旨僅為示意及輔助說明書之用，未必為本發明實施後之真實比例與精準配置，故不應就所附之圖式的比例與配置關係解讀、侷限本發明於實際實施上的權利範圍。

本發明證實將白點症病毒VP31重組蛋白投予實驗蝦，可有效降低白點症病毒感染之罹病蝦的死亡率，而相關的如其交互作用蛋白PmLamr蛋白以及上述兩蛋白所衍生之抗體，本發明也證實其間的交互作用關係，因此將上述蛋白與抗體以單獨或組合方式投予蝦體，將可有效預防蝦類感染白點症病毒或降低罹病蝦的死亡率。本發明對於目前在蝦類白點症病毒感染所致疾病無有效預防或治療藥物之困境提供了解決之道，對養蝦產業於此疾病防治上將可提供極大助益。

除非另有指明，所有在此處使用的技術性和科學性術語具有如同本發明所屬技術領域中之通常知識者一般所瞭解的意義。

本文所使用的「一」乙詞，如未特別指明，係指至少一個(一個或一個以上)之數量。

在一方面，本發明提供用於預防及/或治療白點症病毒感染之組成物，其包括選自以下所組成之多肽：白點症病毒VP31蛋白、其片段、衍生之抗體以及載體；以及PmLamr蛋白、其片段、衍生之抗體以及載體。在另一方面，本發明亦提供一種上述各項用於製備供治療及/或預防白點症病毒感染之用途。

本文所使用的「蛋白」或「多肽」可交互使用，是指由胺基酸經由肽鍵連結而成的生物性聚合物。可利用化學合成方式或遺傳工程技術製備特定序列之蛋白或多肽。

本文所使用的「白點症病毒VP31蛋白」是一種白點症病毒之外套膜蛋白，胺基酸序列包括SEQ ID NO:1所示(美國國家生物技術資訊中心蛋白資料庫編號為AAL89264)，對應的核苷酸序列為SEQ ID NO:2 (美國國家生物技術資訊中心基因資料庫編號為AF440570)；「PmLamr蛋白」是一種草蝦細胞之受體蛋白，而胺基酸序列包括SEQ ID NO:3所示，對應的開放譯讀區互補DNA (cDNA)核苷酸序列為SEQ ID NO:4 (美國國家生物技術資訊中心基因資料庫編號為DT044263)。

本文所使用「蝦類」或「蝦」主要包括但不限於太平洋白蝦(Litopenaeus vannamei )、草蝦、斑節蝦(P. japonicus )及淡水長臂大蝦(Macrobrachium rosenbergii )等。

根據本發明，白點症病毒VP31蛋白及其交互作用蛋白PmLamr蛋白以及兩者所衍生之抗體可用於治療及/或預防蝦類白點症病毒感染，其意指將白點症病毒VP31蛋白或PmLamr蛋白或兩者所衍生之抗體投予一感染白點症、表現出感染症狀或有感染可能之蝦類，可改變或影響該病毒之感染，達到預防、減輕、緩和、改善或治癒該蝦類受白點症病毒感染或引發症狀傾向之目的。其作用原理為利用白點症病毒VP31蛋白與PmLamr蛋白結合之特性，以重組白點症病毒VP31蛋白競爭白點症病毒與宿主細胞Lamr結合；或以針對白點症病毒VP31所製備之抗體藉其專一地辨識與結合至白點症病毒VP31蛋白，有效結合至白點症病毒病毒顆粒，因之將病毒中和；或以重組PmLamr蛋白結合病毒顆粒之VP31蛋白，而使病毒無法與宿主細胞Lamr結合；又或者以重組PmLamr蛋白為抗原製備之抗體可結合Lamr之特性，與白點症病毒競爭宿主細胞Lamr，以達到預防、減輕、緩和、改善或治癒該蝦類受白點症病毒感染或引發症狀傾向之目的；亦即本發明之白點症病毒VP31蛋白與PmLamr蛋白以及兩者所衍生之抗體，可預防白點症病毒感染以及有效降低白點症病毒已感染病蝦之死亡率，降低養殖過程之風險或減輕損失。

本發明之白點症病毒VP31蛋白與PmLamr蛋白可依化學合成或遺傳工程技術並參酌本文之說明製備而得。

實施本發明所需相關技術，包括聚合酶連鎖反應(polymerase chain reaction, PCR)核酸擴增技術、核酸純化、質體、核酸片段之酵素處理、定序技術及蛋白表現與合成，可參見Molecular Cloning：A Laboratory Manual，第四版，Cold Spring Harbor Laboratory Press，Michael R. Green等人編著，2012，以及Current Protocols in Molecular Biology，Frederick M. Ausubel等人編著，1988，John Wiley & Sons,Inc.。此一領域具通常知識者可依據習知的技術獲得本發明之蛋白分子，詳細方法描述於以下實例中。

在一具體實例中，本發明之組合物包括白點症病毒VP31蛋白或其片段及載體。特定而言，本發明之組成物包括含有SEQ ID NO：1之胺基酸序列的白點症病毒VP31蛋白或其片段蛋白。

本發明之組合物包括抗白點症病毒VP31抗體及載體。特定而言，本發明之組成物包括含有以SEQ ID NO：1之胺基酸序列的白點症病毒VP31蛋白或其片段蛋白所製備之抗體。

本發明之組合物包括與PmLamr蛋白及載體。特定而言，本發明之組成物包括含有以SEQ ID NO：3之胺基酸序列的PmLamr蛋白的片段。

本發明之組合物包括抗PmLamr蛋白抗體及載體。特定而言，本發明之組成物包括含有以SEQ ID NO：3之胺基酸序列的PmLamr蛋白的片段所製備之抗體。

本發明之組合物可依各種常規方法，與適當載體調配而成，例如，將白點症病毒VP31蛋白、PmLamr蛋白或兩蛋白所衍生抗體與磷酸緩衝液均勻混合。

上述所使用的「載體」乙詞意指用以攜帶白點症病毒VP31蛋白、PmLamr蛋白或或兩蛋白所衍生抗體之非活性成分，較佳具生物相容性對欲施用之個體或環境無害，例如，水、生理鹽水、緩衝液、澱粉等。

在一具體實例中，本發明之組合物係注射劑型。

本發明之各個具體實例的細節說明如後。本發明之技術特徵將會經由以下各個具體實例中的詳細說明及申請專利範圍而更清楚呈現。

本實例以遺傳工程技術在大腸桿菌表現重組白點症病毒VP31蛋白並純化。簡言之，使用正反引子，分別以白點症病毒基因組DNA以及PmLamininr開放譯讀區cDNA為模板，進行PCR，引子序列如SEQ ID NO：5、6、7、8、9及10。

融合MBP之重組VP31蛋白MBP-VP31之製備：將以引子序列SEQ ID NO：5與SEQ ID NO：6經PCR擴增之產物白點症病毒VP31核酸片段，其包括SEQ ID NO：2之核苷酸序列，利用限制酵素切位BamHI /EcoRI 嵌入帶有麥芽糖結合蛋白(Maltose-Binding Protein, MBP)純化的親和標籤的表現質體pMAL-c5X (NEB)，構築成重組質體pMAL-VP31，經核酸定序確認序列後，並將此重組質體轉形進入大腸桿菌(Escherichia coli) RIL (RBC Bioscience)，以進行蛋白表現生產融合MBP之重組VP31蛋白MBP-VP31：在37 ℃下將菌株預培養於含Ampicillin抗生素之LB培養液12-16小時後再以1：100的比例移入新培養液，培養至菌液濃度達吸光值O.D. 0.4，加入異丙基-硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)誘導表現，再繼續於16 ℃培養。收集濃縮菌液並將菌體破碎後，利用Amylose resin (NEB)親和性管柱層析，獲得純化重組MBP-VP31蛋白，其包括SEQ ID NO：1之胺基酸序列。表現MBP-VP31重組蛋白菌體破碎後之總蛋白以及經Amylose resin (NEB)親和性管柱純化之重組MBP-VP31蛋白，以十二烷基硫酸鈉聚丙烯醯胺凝膠電泳(SDS-PAGE)分析蛋白表現，結果分別如第1圖(表現MBP-VP31菌體破碎後之總蛋白)所示，其中，第1圖之M表蛋白分子量標誌；lane 1為未經IPTG誘導表現之菌體總蛋白，lane 2為經IPTG誘導表現之菌體總蛋白，結果顯示重組MBP-VP31蛋白分子量約為73 kDa，結果合於MBP之42.5 kDa加上VP31之理論分子量30 kDa之預期。

融合His之重組VP31蛋白(白點症病毒VP31-His)與重組PmLamr蛋白(His-PmLamr)以及其相關抗體製備：分別利用引子序列如SEQ ID NO：7與SEQ ID NO：8以及SEQ ID NO：9與SEQ ID NO：10經PCR擴增之產物白點症病毒VP31核酸片段，其包括SEQ ID NO：2之核苷酸序列，以及PmLamininr開放譯讀區核酸片段，其包括SEQ ID NO：4之核苷酸序列，利用限制酵素切位EcoRI /HindIII 分別嵌入pET28b+質體(Novagen)，分別構築得到重組質體pET28b-VP31以及pET28b-PmLamr，經核酸定序確認序列後，並將此重組質體轉形進入大腸桿菌BL21株(DE3)，將菌株培養於含knnamycin之LB培養液，並經IPTG誘導表現後，使用鎳-次氮基三乙酸金屬親合性管柱(QIAexpressionist^TM )進行蛋白質純化，分別得到融合6重複組胺酸(His)標籤之白點症病毒VP31 (白點症病毒VP31-His) (其為具包括SEQ ID NO：1之胺基酸序列)以及PmLamr重組蛋白(His-PmLamr) (其為具包括SEQ ID NO：3之胺基酸序列)。將純化之白點症病毒VP31-His重組蛋白以及His-PmLamr重組蛋白分別與完全佛蘭氏佐劑(complete Freund's adjuvant)混合後，分別注射於紐西蘭兔，經過適當時間後，再分別取純化之兩重組蛋白與不完全佛蘭氏佐劑(incomplete Freund's adjuvant)混合，追加注射於先前免疫之相對應同一紐西蘭兔，再經適當時間收集血清，製備成多株抗體血清。利用純化之白點症病毒以及蝦組織蛋白經SDS-PAGE分析，再分別以由此製備而得之抗白點症病毒VP31-His及抗His-PmLamr抗體血清，以及山羊抗兔子IgG鏈結HRP抗體(Goat anti-rabbit IgG-HRP antibody) (Santa Cruz Biotechnology)從事西方墨點(Western blot)分析，其結果如第2圖所示，其中，第2圖之A部分係為白點症病毒病毒顆粒結構蛋白經SDS-PAGE後以抗VP31抗體血清辨識，第2圖之B部分係為使用抗PmLamr抗體血清辨識，其中，lane 1係未表現PmLamr-FLAG-His之果蠅細胞株S2細胞總蛋白，lane 2係表現PmLamr-FLAG-His之S2細胞總蛋白，lane 3係未表現His-PmLamr之大腸桿菌總蛋白，lane 4係表現His-PmLamr之大腸桿菌總蛋白，lane 5係蝦鰓組織總蛋白。結果證實兩抗體可分別有效並專一的辨識白點症病毒VP31以及PmLamr蛋白，顯示此一自重組VP31-His蛋白製備之抗體可有效與白點症病毒顆粒結合以中和病毒，而自重組His-PmLamr蛋白製備之抗體也將可有效與白點症病毒顆粒競爭其與蝦細胞之PmLamr之結合而降低病毒細胞之機會。

WSSV VP31與PmLamr之交互作用-蛋白質交互作用沉澱分析(pull down assay)：將純化之重組His-PmLamr分別加入純化重組MBP或純化重組MBP-VP31，並加入一組僅添並加純化重組His-PmLamr為控制組，後各加入Amylose Resin (NEB)進行沉澱(pull-down)。將上述Amylose Resin以SDS-PAGE進行分析並以小鼠抗-His抗體(mouse anti-His antibody) (Millipore)及山羊抗小鼠IgG鏈結HRP抗體(Goat anti-mouse IgG-HRP antibody) (Santa Cruz Biotechnology)進行西方墨點法分析。其結果如第3圖所示，其中，Lane 1係重組 His-PmLamr以Amylose Resin與其結合沈澱，lane 2係共同置入重組His-PmLamr、重組MBP再利用澱粉樹脂(Amylose Resin)與其結合沈澱，lane 3係共同置入重組His-PmLamr、重組MBP-VP31再利用Amylose Resin與其結合沈澱，經SDS-PAGE分析，再以anti-His抗體辨識，箭頭所指為處為重組His-PmLamr 。第3圖結果再次確認WSSV-VP31與PmLamr間之交互作用關係，也驗證此重組蛋白之生物活性。

重組MBP-VP31與白點症病毒之PmLamr結合競爭試驗：將重組His-PmLamr貼附(coating)於96 well dish (CORNING)中，接著加入重組MBP-VP31並以重組MBP為控制組，而後依序加入不同濃度之純化白點症病毒顆粒與之競爭其與重組His-PmLamr間之結合，其結果顯示於第4圖中，重組MBP-VP31與重組His-PmLamr之結合，會受白點症病毒競爭之影響而降低，且其影響呈現劑量相關性，重組His-PmLamr與重組MBP-VP31間的結合隨所加入病毒顆粒溶液的濃度增加而降低，顯示重組MBP-VP31也將可與白點症病毒競爭其與PmLamr之結合而降低病毒的感染。

自國立台灣海洋大學水產養殖系生動物實驗中心購得無特定病原 (Specific-Pathogen free, SPF)之白蝦(體重4±1克)作為實驗動物，進行活體病毒攻毒試驗，分析重組MBP-VP31之抗病毒感染效用。將重組MBP-VP31與病毒感染液混合後以肌肉注射方式進行攻毒，每24小時進行記錄，統計死亡率進行分析。結果如第5圖所示，至實驗終點，數據經過配對樣本t測試，施打重組MBP-VP31與病毒混合感染液之組別死亡率低於正控制組且有顯著差異(p＜ 0.05)，此MBP-VP31所致之抗病毒效用會受重His-PmLamr的加入中和而降低。死亡之實驗蝦並經IQ2000^TM WSSV偵測及預防系統(GeneReach Biotechnology Corp.)試劑組確認，均為白點症病毒感染所致。以上結果證實，重組MBP-VP31確有防治白點症病毒感染之功效。

無須進一步的闡述，咸相信本發明所屬技術領域中具有通常知識者基於前述說明即可利用本發明至最廣的程度。因此，可以理解以下的說明僅僅是作為例示說明之用，而非以任何方式限制其餘的揭露內容。此外，所有在此引述的公開文獻在此併入本文作為參考文獻。

無

第1圖係分析重組MBP-VP31蛋白於大腸桿菌表現系統之表現之十二烷基硫酸鈉聚丙烯醯胺凝膠電泳圖。

第2圖係以大腸桿菌表現系統所生產之重組白點症病毒VP31-His及His-PmLamr為抗原所製備之兩抗體血清用於辨識VP31與PmLamr之西方墨點分析圖。

第3圖係確認PmLamr與VP31之交互作用之蛋白質沈澱試驗結果圖。

第4圖係分析重組MBP-VP31與白點症病毒於結合PmLamr的競爭之酵素連結免疫吸附分析結果圖。

第5圖係重組MBP-VP31之抗病毒感染之活體病毒攻毒試驗結果圖。

＜110＞  大葉大學、張雲祥   ＜120＞  預防或治療蝦類白點病毒之組成物   ＜160＞  10 　 ＜210＞  1 ＜211＞  261 ＜212＞  蛋白質 ＜213＞white spot syndrome virus ＜220＞  ＜223＞  白點症病毒外套膜蛋白VP31   ＜400＞  1 MSNGATISDE RLILILDKIV ERRGVSNLSE LLIHPITKHI NELLKNTVRH GDRVYMKDAE        60 LDVRSRLEDI KKDCVLKAIE KQGIDVRQII TDYLAKRKLT QNLVHWYRPP ISCTDIDEKI       120 QQETGQVGRC SVATYNLRIG GDDGEFTRYD FSIPLGDFKI TAKLFRSIND EDVDAVILVS       180 RSDVVNDVLS FEAFNRTGER VVIFFNVIVE GKSKDIDIVC KSRYKHTHIL NGESATYAVK       240 RIKRGDTRDD ILFAITAFKE E                                                 261 ＜210＞  2 ＜211＞  786 ＜212＞  DNA ＜213＞white spot syndrome virus ＜220＞  ＜223＞  白點症病毒外套膜VP31基因   ＜400＞ 2 atgtctaatg gcgcaactat aagcgatgag aggttgatcc tcatccttga taaaattgta        60 gaaagacgtg gtgtttctaa tctatctgaa ttgttgatac accccataac caaacacata       120 aacgaattgt tgaagaacac tgtaagacat ggagacagag tttacatgaa ggatgcagaa       180 ctggatgtga gatctcgcct agaagacata aaaaaggatt gtgttttaaa ggcaattgaa       240 aaacaaggaa tagatgttag acaaataata actgattact tggctaaacg aaaactaacg       300 caaaatcttg tacattggta tcggccccca atatcttgca cagatataga cgaaaaaatt       360 caacaagaaa ctggtcaagt agggcggtgt agtgttgcta cgtacaattt gagaattggt       420 ggtgacgatg gagaatttac aaggtacgat ttctccattc ccttgggaga ttttaaaata       480 acggcaaaat tgtttcgttc cataaatgat gaggatgtag atgcagtgat tcttgtgtct       540 cgtagtgacg tagttaatga cgtgctaagc tttgaagcat ttaatcgaac aggagaacgc       600 gtagtcatat tctttaatgt gattgttgaa gggaagagta aagatattga tattgtatgt       660 aaatctagat ataaacacac ccatatacta aacggagaat ctgcaacata cgctgttaaa       720 cgtataaaaa gaggcgatac aagggacgat atattgtttg caatcactgc ttttaaggag       780 gagtaa                                                                  786    ＜210＞  3 ＜211＞  318 ＜212＞  蛋白質 ＜213＞Penaeus monodon ＜220＞  ＜223＞  層黏蛋白受體結合蛋白   ＜400＞3 MSGGLSVMAL EENDVTRFLA ASTHLGSSNM NFQMEQYVFK RRQDGVHIIH LRKTYEKILL        60 AARAIAAIEN PADVYTISSR PMGQRAVLKF ARYTGATPIA GRFTPGAFTN QIQAAFREPR       120 LLVVTDPISD RQPITEASYV SIPVIAFCNT DSPLRYVDIA IPCNNRSPHS IGLMWWMLAR       180 EVLRLRGTIS RNLPWETDVM PDLFFYRDAE EQEKEEAAKA EAAKAEAEAA KVETPAAENW       240 GADMNDPDAV AAAAGAGAAA PVAAATAAAA APVAAAAAVA AAPAATVDDW GQTGDDWAAA       300 PVTGTGDDWG GAADXSNW                                                     318   ＜210＞  4 ＜211＞  957 ＜212＞  DNA ＜213＞  人工合成   ＜220＞  ＜223＞  層黏蛋白受體結合蛋白cDNA   ＜400＞ 4 atgtcgggag gattaagtgt tatggctttg gaagagaatg atgtgacgcg gttcctggcc        60 gcgtccactc atctcggatc cagcaacatg aacttccaaa tggaacaata cgtttttaag       120 cgccgccagg atggtgtgca catcattcat ctgcgcaaga catatgagaa gatcttgctg       180 gctgcccgtg ccattgctgc cattgagaac ccagcagatg tttacaccat ctcttcccgc       240 cccatgggcc agcgtgctgt gctgaagttt gcccgttata ctggtgcaac ccccattgca       300 ggccgcttca ccccaggagc cttcaccaat cagattcagg ctgctttccg tgagcctcgt       360 ctccttgtgg taactgatcc catctcagac aggcagccaa ttactgaggc ttcctatgtc       420 agcattcctg tcattgcttt ctgcaatact gactccccac ttcgctatgt tgacattgcc       480 attccttgca acaataggag cccccactcc attggtctga tgtggtggat gttggcccgt       540 gaggttcttc gtctgcgtgg aaccatctcc cgcaacctgc catgggagac agatgtcatg       600 cctgatctgt tcttctacag ggatgctgaa gagcaagaga aggaagaagc tgccaaggct       660 gaggccgcca aggctgaggc agaggctgcc aaggtcgaga ctcccgccgc cgagaactgg       720 ggcgctgaca tgaatgatcc cgatgccgta gctgctgctg ccggtgctgg ggctgctgct       780 cctgtggccg ccgctactgc tgctgctgct gcccccgtgg ctgctgctgc tgctgttgct       840 gctgcaccag ccgctactgt tgatgactgg ggtcagactg gtgatgattg ggctgctgca       900 ccagttactg gaactggtga tgactgggga ggcgcagctg atggntccaa ctggtaa          957   ＜210＞  5 ＜211＞  31 ＜212＞  DNA ＜213＞  人工合成   ＜220＞  ＜223＞  VP31正向引子   ＜400＞ 5 ccggaattct atgaatgaga gcttacagct g                                       31   ＜210＞  6 ＜211＞  27 ＜212＞  DNA ＜213＞  人工合成   ＜220＞  ＜223＞  VP31反向引子   ＜400＞ 6 tccccgcggc gcacgggaag taacgct                                            27   ＜210＞  7 ＜211＞  31 ＜212＞  DNA ＜213＞  人工合成   ＜220＞  ＜223＞  PmLamr正向引子   ＜400＞ 7 ccggaattcg atgtcgggag gattaagtgt t                                       31   ＜210＞  8 ＜211＞  30 ＜212＞  DNA ＜213＞  人工合成   ＜220＞  ＜223＞  PmLamr反向引子   ＜400＞   8 cccaagcttc cagttgganc catcagctgc                                         30   ＜210＞  9 ＜211＞  31 ＜212＞  DNA ＜213＞  人工合成   ＜220＞  ＜223＞  VP31正向引子 ＜400＞   9 ccggaattcg atgtctaatg gcgcaactat a                                       31   ＜210＞  10 ＜211＞  30 ＜212＞  DNA ＜213＞  人工合成   ＜220＞  ＜223＞  VP31反向引子   ＜400＞   10 cccaagcttt tactcctcct taaaagcagt                                         30

Claims (10)

1. 一種白點症病毒VP31蛋白用於製備供治療及/或預防白點症病毒感染之藥物的用途，其中該藥物係包含一蛋白以及攜帶該蛋白的一載體，該蛋白係包含該白點症病毒VP31蛋白、該白點症病毒VP31蛋白的片段蛋白、或由該白點症病毒VP31蛋白或其片段蛋白所製備之抗體。
2. 如申請專利範圍第1項所述之用途，其中該白點症病毒VP31蛋白係包含SEQ ID NO：1之胺基酸序列。
3. 如申請專利範圍第1項所述之用途，其中該藥物係降低蝦類感染白點症病毒之死亡率。
4. 一種層黏蛋白受體結合蛋白用於製備供治療及/或預防白點症病毒感染之藥物的用途，其中該藥物係包含一蛋白以及攜帶該蛋白的一載體，該蛋白係包含該層黏蛋白受體結合蛋白、該層黏蛋白受體結合蛋白的片段蛋白、或由該層黏蛋白受體結合蛋白或其片段蛋白所製備之抗體。
5. 如申請專利範圍第4項所述之用途，其中該層黏蛋白受體結合蛋白係包含SEQ ID NO：3之胺基酸序列。
6. 如申請專利範圍第4項所述之用途，其中該藥物係降低蝦類感染白點症病毒之死亡率。
7. 一種用於治療及/或預防白點症病毒感染之組成物，其包含一蛋白以及用於攜帶該蛋白的一載體，其中該蛋白係包含一白點症病毒VP31蛋白或其片段蛋白、一層黏蛋白受體結合蛋白(PmLamr)或其片段蛋白、由該白點症病毒VP31蛋白或其片段蛋白所製備衍生之抗體、或由該層黏蛋白受體結合蛋白或其片段蛋白所製備衍生之抗體。
8. 如申請專利範圍第7項所述之組成物，其中該載體係包含水、生理鹽水、緩衝液或澱粉。
9. 如申請專利範圍第7項所述之組成物，其中該白點症病毒VP31蛋白係包含SEQ ID NO：1之胺基酸序列，該層黏蛋白受體結合蛋白係包含SEQ ID NO：3之胺基酸序列。
10. 一種蝦類飼料添加物，係包含如申請專利範圍第7項至第9項中任一項所述之組成物。