TW201348707A - 一種輸血前配合試驗之試劑組及其試驗方法 - Google Patents

Abstract

本發明提供一種可以改善傳統手工凝聚胺法檢測靈敏度的檢測方法及試劑組，該試劑組包含一血球清洗液、一低離子介質溶液、一凝聚胺溶液及一再懸浮溶液。本發明所提出的檢測方法與試劑組對不具臨床意義的抗體有較低的偵測靈敏度，但對具臨床意義的抗體有很高的偵測靈敏度，因此可降低後續抗體鑑定的工作量，降低檢測成本，給予病患較安全快速的輸血品質。

Description

一種輸血前配合試驗之試劑組及其試驗方法

本發明係為一種輸血前配合試驗之試劑組及其試驗方法，特別是一種能改善傳統手工凝聚胺法檢測靈敏度的試劑組及其試驗方法。

血型是對血液分類的方法，是一種遺傳的特徵，臨床上所說的血型是指紅血球表面抗原構造的差異。從廣義來說，血型包括紅血球、白血球、血小板、血漿等血液成分不同的抗原系統。人類最早認識的血型系統是ABO血型系統，例如：紅血球上含有A抗原便稱為A型；這是由奧地利維也納大學病理研究所的卡爾．蘭德施泰納(Karl Landsteiner)於1900年發現，健康人的血漿對不同人類個體的紅血球有凝聚作用，因而建立了ABO血型系統。之後，新的血型系統不斷被研究發現，並由1935年成立的國際輸血學會專門負責認定與命名工作。目前獲得承認的30種人類血型系統超過600種抗原，但其中大部分都非常罕見。

血型系統對輸血具有重要意義，以不相容的血型輸血可能導致溶血反應的發生，造成溶血性貧血、腎衰竭、休克以至死亡。對於人類來說，雖然『ABO血型系統』和『Rh血型系統』在國際輸血協會承認的30種血型系統中是最重要的兩種，但是在臨床上並不是僅僅只有這兩種血型系統的不同血型間，才會有輸血不相容的反應發生，故病患必須在輸血之前，先在血庫作一系列檢查來選擇正確安全的血液，才能確保輸血的安全性。

另外，一般在輸血前的有限時間內會執行所謂的交叉配血試 驗，利用受血者血漿與供血者紅血球做配對，以檢測受血者的血漿中是否含有會與供血者的紅血球表面抗原發生表面抗原反應之未知抗體，或利用受血者紅血球與供血者血漿做配對，以檢測受血者的紅血球上是否存在會與供血者血漿中所含有之抗體發生凝集反應之未知表面抗原。因此，綜觀上述所言，所謂的『輸血前配合試驗』，包括有『ABO及Rh血型的鑑定』、『抗體的篩檢或鑑定』及『交叉配血試驗』等三種。

在習知上，亞洲國家一般都採用所謂的『手工凝聚胺法(Manual Polybrene，簡稱MP法)』來執行輸血前配合試驗，其主要採用的凝聚胺(Polybrene)試劑，是一種多價陽離子氨基聚合物，它可以引起正常紅血球的可逆性凝集。在習知的手工凝聚胺法檢驗流程中，首先讓供血者紅血球和受血者血漿在低離子介質(low ionic medium，簡稱LIM)中使抗體與紅血球抗原結合，然後加入凝聚胺使紅血球發生可逆性凝聚，之後經過離心沈澱後，再加入檸檬酸鹽再懸浮溶液(檸檬酸根帶負電荷)中和凝聚胺正電荷，就可恢復紅血球表面的負電荷。此時，若紅血球是因凝聚胺試劑所造成的非特異性凝聚，當加入檸檬酸鹽再懸浮溶液後，紅血球表面會恢復負電荷，紅血球間隨即因互斥力而散開，結果為陰性反應；若紅血球是由於抗原抗體引起的特異性凝集，則不會受檸檬酸鹽再懸浮溶液的影響而散開，結果為陽性反應。

然而，傳統手工凝聚胺法的檢測方法與試劑配方對抗體偵測靈敏度太高，通常對於不具有臨床意義的抗體之檢測結果(如：冷型抗體、非特異性抗體...)也為呈現陽性反應，這會加重後續抗體鑑定的工作量，不僅耗費時間，也可能造成病患面臨無適合 血袋可用的窘境，故這對於當病患急需用血時，將產生很大的危險性。因此，發展一種僅對有臨床意義的抗體具有很高的偵測靈敏度，但卻對不具臨床意義的抗體有較低的偵測靈敏度之試劑配方或檢驗方法，實有其必要性。

另外，影響傳統手工凝聚胺法準確度的關鍵在於血漿(或血清)與血球的比例要大於50倍，低於50倍則偵測靈敏度不佳；一般來說，傳統手工凝聚胺試管法的比值約為66.67倍(即100 μL：1.5 μL)。然，上述已提過除了『ABO血型系統』和『Rh血型系統』兩大血型必須確認外，尚還有其他的血型系統也會有產生輸血不相容的反應，因此，若要在進一步的作更詳盡的抗體篩檢或鑑定，就必需要抽取病患更多的血液檢體，這對於一個缺血的病患而言，無疑是雪上加霜。因此，假使檢測時只需微量樣本液體，將其血漿(或血清)與血球的比例提升到遠大於50倍，甚或100倍以上，即可獲得高準確性的檢測結果，對於病患而言無非是一大福音。

未來若能再結合自動化、平行大量檢測之設備與方法，將可節省檢測時間與人力，降低檢測成本，同時又能達到檢驗作業流程標準化之目標。

本發明提供一種用於輸血前配合試驗的試劑組，係可以改善傳統手工凝聚胺法檢測靈敏度，該試劑組包含一血球清洗液、一低離子介質溶液、一凝聚胺溶液及一再懸浮溶液。

上述該試劑組之該血球清洗液，係由Tween^® 20 (polyoxyethylensorbitanmonolaurat)溶液及濃度0.85~0.9%的氯化鈉溶液(Saline)以適當比例混合配製而成，液體體積比例範圍為1：5000~20000，作為溫和的血球表面清洗劑。其主要功用在於清洗去除非紅血球上表面抗原之其他蛋白質等沾黏物質，以避免其干擾檢測上的靈敏度。

上述該試劑組之該低離子介質溶液，係由適量ETDA鈉鹽(Na₂EDTA．2H₂O)先溶於5% Dextrose溶液中，再與濃度7~11%葡萄聚醣溶液(Dextran 40)以適當比例混合配製而成，液體體積比例範圍為7~12：1。其主要功用在於提供一個低離子等張強度的環境，使圍繞在紅血球周圍的Na⁺及Cl^-離子雲之密度降低，而讓抗體能更快速且多量的附著於血球抗原上，以促進抗原抗體的結合反應。

上述該試劑組之該凝聚胺溶液，係由凝聚胺(Polybrene)粉末以濃度0.85~0.9%的氯化鈉溶液配製成濃度0.05~0.5%的凝聚胺原液，再與濃度18~25%的聚乙二醇溶液(polyethylene glycol)溶液以適當比例混合配製而成，液體體積比例範圍為1：0.85~1.2。其主要功用是提供充分的正電荷離子，來中和血球表面的負電荷離子，使血球產生非特異性的可逆性凝集，而更進一步地促進抗原抗體的結合反應。

上述該試劑組之該再懸浮溶液，係由濃度0.2~0.5M的檸檬酸三鈉(trisodium citrate)溶液與濃度5%的Dextrose溶液以適當比例混合而成，液體體積比例範圍為1.3~1.8：1。其主要功用為中和凝聚胺溶液中的正電荷，進而恢復紅血球表面的負電荷。此時，紅血球若是因非特異性而凝集，則會因紅血球表面負電荷的排斥作用，紅血球便隨即散開，結果為陰性反應；若紅血球是由於抗原 抗體所引起的特異性凝集，則將不會受檸檬酸鹽再懸浮溶液的影響而散開，結果為陽性反應。

本發明提供一種可以改進傳統手工凝聚胺法的輸血前配合試驗方法，該試驗方法結合上述的該試劑組，可以使偵測不具臨床意義的抗體之檢測靈敏度降低，但同時對於偵測具臨床意義的抗體之檢測靈敏度提升。

本發明所提供的一種具有高檢測靈敏度的輸血前配合試驗方法及該試劑組，能降低附著在紅血球上的非表面抗原物質的干擾，進而提升對具臨床意義抗體的檢驗精準度與靈敏度，也減少了試劑與檢體的使用量。

本發明所提供的一種具有高檢測靈敏度的輸血前配合試驗方法及該試劑組，可以用來檢測ABO血型及Rh血型的鑑定，此時將使用標準的血漿試劑及待測紅血球檢體，或使用標準的紅血球試劑及待測血漿檢體，方法步驟及試劑組皆與本說明書所揭露者相同。

本發明所提供的一種具有高檢測靈敏度的輸血前配合試驗方法及該試劑組，可以用來檢測待測血漿(或血清)中所含有之抗體，此時使用已知血球表面抗原的紅血球試劑來作檢測，方法步驟及試劑組皆與本說明書所揭露者相同。

本發明所提供的一種具有高檢測靈敏度的輸血前配合試驗方法及該試劑組，可以用來執行受血者及捐血者血液的交叉配血試驗，執行大交叉配血試驗時，使用受血者的血漿(或血清)及捐血者的血球；而執行小交叉配血試驗時，採用受血者的血球及捐血者 的血漿。其方法步驟及試劑組皆與本說明書所揭露者相同。

本發明提供之一種可以改進傳統手工凝聚胺法的輸血前配合試驗方法，該試驗方法可於試驗前事先配製較多量的血球溶液，以因應後續大量檢測之用。尤其是在試驗需要使用標準紅血球試劑之時，如：ABO血型及Rh血型的鑑定，抗體的篩檢或鑑定。

本發明提供之一種具有高檢測靈敏度的輸血前配合試驗方法及該試劑組，將可減少檢測試劑及病患檢體的使用量，故可以用來發展自動化、平行大量檢測之設備與方法，將可節省檢測時間與人力，降低檢測成本，同時又能達到檢驗作業流程標準化之目標。

以下將配合圖式進一步說明本發明的實施方式，下述所列舉的實施例係用以闡明本發明，並非用以限定本發明之範圍，任何熟習此技藝者，在不脫離本發明之精神和範圍內，當可做些許更動與潤飾，因此本發明之保護範圍當視後附之申請專利範圍所界定者為準。

定義

本發明說明書中所記載之「約」係代表該數值之正負百分之五的範圍。

利用本發明之試劑組的輸血前配合試驗方法之流程如圖一所示：

1.如步驟120所示，將適量血球溶液加入到一容器中，該容器為一可以盛裝液體的器皿，例如：試管、微孔盤...等，而該容器的材質可為玻璃、塑膠...等。

2.如步驟122所示，加入適量該血球清洗液於該容器中，並使該容器中的液體混合均勻，以清洗掉該血球上非表面抗原的其他物質。

3.如步驟124所示，將該容器置入於離心機中，以100~1200G的離心力作離心沈澱處理，使該血球沈澱於該容器底部，接著便可去除上清液。

4.依檢測實際情況而定，可重複執行上述步驟122及步驟124，以確保該血球表面雜質去除乾淨，便可提升檢測靈敏度。

5.如步驟126所示，加入適量的氯化鈉溶液(濃度0.85~0.9%)於該容器中，並使該容器中的液體混合均勻，配製出適當濃度2.5~3.0%的血球懸浮液。

6.如步驟128所示，加入適量血漿溶液於該容器中，並使該容器中的液體混合均勻。

7.如步驟130所示，加入適量該低離子介質溶液於該容器中，並使該容器中的液體混合均勻。

8.如步驟132所示，將該容器加溫至35~39℃。

9.如步驟134所示，加入適量的該凝聚胺溶液於容器中，並使該容器中的液體混合均勻。

10.如步驟136所示，將該容器置入於離心機中，以100~1200G 的離心力作離心沈澱處理，使該血球沈澱於該容器底部，接著去除上清液。

11.如步驟138所示，加入適量的該再懸浮溶液，並使該容器中的液體混合均勻。此時，紅血球若是因非特異性而凝集，則會因紅血球表面負電荷的排斥作用，紅血球便隨即散開；若紅血球是由於抗原抗體所引起的特異性凝集，則將不會散開。

12.如步驟140所示，依據血球凝聚或分散的狀況，判讀出血球凝集的價數。

以下係以一實施例舉例說明，以96微孔盤(96-well micro-plate)作為上述之該容器，結合本發明之具有高檢測靈敏度的輸血前配合試驗方法、該試劑組及三組紅血球試劑(台塑生技提供的SI、SII、SIII試劑血球)，來針對429個病患檢體作抗體篩檢的實驗，再輔以傳統手工凝聚胺法、傳統歐美國家標準作業之抗人類球蛋白抗體LIAT法(LISS additive indirect antiglobin test)及歐美國家使用的自動化儀器方法Gel Test法作為比較，驗證本發明在臨床實驗上的準確性，並比較四種檢測方法所需花費的時間，以明確揭露本發明的創新性及進步性。

實施例一

依據本發明提出的該試劑組的成分配比如下：

1.該血球清洗液：由Tween® 20溶液與濃度0.9%的氯化鈉溶液以液體體積比1：10000均勻混合而成。

2.該低離子介質溶液：先將0.05公克的ETDA鈉鹽(Na₂EDTA．2H₂O)溶解在濃度5%的Dextrose溶液90mL中，再與濃度 10%的葡萄聚醣以液體體積比9：1均勻混合而成。

3.該凝聚胺溶液：先將凝聚胺粉末及氯化鈉溶液配製出濃度0.4%的凝聚胺溶液，再與濃度20%的聚乙二醇溶液以液體體積比1：1均勻混合而成。

4.該再懸浮溶液：由莫耳濃度0.4 M的檸檬酸三鈉溶液及濃度5%的Dextrose溶液，以液體體積比3：2均勻混合而成。

接者以本發明所提出的輸血前配合試驗方法所述之步驟，依序執行428個檢體的抗體篩檢實驗，詳細步驟說明如下，並同時參考第一圖：

1.如步驟120所示，將試劑血球溶液12μL加入到96微孔盤的一孔槽中。

2.如步驟122所示，加入300μL該血球清洗液於該孔槽中，並使該孔槽中的液體混合均勻。

3.如步驟124所示，將該試管置入於離心機中，以700G離心力作離心處理，使該血球沈澱於該孔槽底部，接著便可去除上清液。

4.如步驟126所示，加入濃度0.9%的氯化鈉溶液12 μL於該孔槽中，並使該孔槽中的液體混合均勻，配製出濃度2.5%的該血球懸浮液。

5.如步驟128所示，加入50 μL血漿溶液於該孔槽中，並使該孔槽中的液體混合均勻。

6.如步驟130所示，加入150 μL該低離子介質溶液於該孔 槽中，並使該孔槽中的液體混合均勻。

7.如步驟132所示，將該96微孔盤放置到加溫器中，加溫至37℃，10分鐘。

8.如步驟134所示，加入濃度0.4%的該凝聚胺溶液30 μL於該孔槽中，並使該孔槽中的液體混合均勻。

9.如步驟136所示，將該96微孔盤置入於離心機中，以114G離心力作離心處理，使該血球沈澱於該孔槽底部，接著便可去除上清液。

10.如步驟138所示，加入濃度0.4M該再懸浮溶液45 μL於該該孔槽中，並使該孔槽中的液體混合均勻。此時，紅血球若是因非特異性而凝集，則會因紅血球表面負電荷的排斥作用，紅血球便隨即散開；若紅血球是由於抗原抗體所引起的特異性凝集，則將不會散開。

11.如步驟140所示，依據血球凝聚或分散的狀況，判讀出血球凝集的價數。若是血球凝集現象不明顯時，可更可以進一步的用成像放大裝置，如放大鏡或顯微鏡來觀看，以便於得出更精確的判讀結果。

請參考第二圖，該圖係為本實施例中執行抗體篩檢後之血球凝集反應的影像圖，若有如D孔的凝集反應，則結果為陽性，若無凝集反應如A~C、E、F，則結果為陰性。

在429個檢體的檢測結果中，有175個檢體呈陽性，214個檢體呈陰性，40檢體呈偽陰性，無偽陽性的結果產生。174個呈陽性的抗體結果及40個偽陰性未檢出之抗體，見表三。

在檢測時間方面，使用本發明之檢測方法與試劑組一次可同時檢測32個檢體，從檢測開始至獲得結果約需25分鐘，429個檢體則共需84分鐘。

[比較]-傳統手工凝聚胺法

傳統手工凝聚胺法所需用到之試劑組如下：

1.低離子介質溶液：加入0.2公克ETDA鈉鹽(Na₂EDTA．2H₂O)於濃度5%的Dextrose溶液100mL中均勻混合而成。

2.凝聚胺溶液：0.05%凝聚胺溶液0.5 mL、濃度0.9%的氯化鈉溶液99.5 mL均勻混合而成。

3.再懸浮溶液：莫耳濃度0.2M的檸檬酸三鈉與5%的Dextrose溶液以液體體積比3：2均勻混合而成。

接者以傳統手工凝聚胺法的步驟，依序執行428個檢體的抗體篩檢實驗，詳細步驟說明如下：

1.於一試管中加入血漿100 μL及濃度2.5%的試劑血球溶液50μL，並均勻混合。

2.加入低離子介質溶液600 μL於試管中，均勻混合後，靜置1分鐘。

3.加入濃度0.05%的凝聚胺溶液100 μL於試管中，並均勻混合15秒。

4.將試管置入離心機執行15秒的離心沈澱處理，使血球沈澱 在試管底部，去除上清液。

5.加入再懸浮溶液100μL於試管中，並均勻混合。

6.依據血球凝聚或分散的狀況，於1分鐘內判讀出血球凝集的價數。

以傳統手工凝聚胺法檢測429個檢體的結果中，有215個檢體呈陽性，214個檢體呈陰性，6檢體呈偽陰性，無偽陽性的結果產生。209個呈陽性的抗體結果及6個偽陰性未檢出之抗體，見表三。

在檢測時間方面，一個檢體依照傳統手工凝聚胺試管法的檢測流程，從開始到獲得結果約需3分鐘，故檢測429個檢體共約需321分鐘。

[比較]-傳統歐美國家標準作業之抗人類球蛋白抗體LIAT法

1.於一試管中加入血漿100 μL及濃度2.5%的試劑血球溶液50μL，並均勻混合。

2.加入N-HANCE(LISS additive)100 μL於試管中。

3.於37℃，放置10分鐘，用濃度0.9%的氯化鈉溶液3mL洗滌紅血球3~4次，最後一次需把上清液倒乾。

4.加2滴抗人類球蛋白抗體(AHG)混合，離心觀察有無凝集現象。

5.如無凝集，加入1滴check cells，離心15秒，觀察凝集反應，須有2+以上的反應，表示陰性結果為真正陰性。如果沒有凝集出現，則可能為偽陰性反應，則必須重做步驟。

以傳統歐美國家標準作業之抗人類球蛋白抗體LIAT法來檢測429個檢體的檢測結果中，有114個檢體呈陽性，214個檢體呈陰性，101檢體呈偽陰性，無偽陽性的結果產生。114個呈陽性的抗體結果及101個偽陰性未檢出之抗體，見表三。

在檢測時間方面，一個檢體依照LIAT法的檢測流程，從開始到獲得結果約需17分鐘，故檢測429個檢體共約需1819分鐘，即耗時約30.5小時。

[比較]-自動化儀器使用的Gel Test法

Gel Test法的檢測試劑與卡匣採用Sanquin Blood Supply The Netherlands所出產的Cellbind產品，其操作步驟如下：

1.試劑血球溶液以Cellbind LISS溶液稀釋成0.5%備用。

2.將所需的卡片管柱上的錫箔紙撕開。

3.加入濃度0.5%的試劑血球50 μL。

4.加入血漿溶液50 μL混合。

5.於37℃，放置15分鐘。

6.將卡片放入Cellbind離心機，離心10分鐘，判讀結果。

以歐美國家使用自動化儀器的Gel Test法檢測429個檢體的檢測結果中，有128個檢體呈陽性，214個檢體呈陰性，87檢體呈偽陰性，無偽陽性的結果產生。這128個呈陽性的抗體結果及87個偽陰性檢體未檢出之抗體，見表三。

在檢測時間方面，一個檢體依照Gel Test法的檢測流程，從開 始到獲得結果約需30分鐘，故檢測429個檢體共約需270分鐘。

[綜合比較]

表一為上述四種輸血前配合試驗方法的檢測結果之整理。

表二為上述四種輸血前配合試驗方法的檢測效率之比較。

表三為上述四種輸血前配合試驗方法針對各種抗體的檢測結果之整理。

如表三所示，(註1)Cold代表冷型抗體，(註2)I代表非特異性抗體，為不具臨床意義的抗體，經過本發明所提出的檢測方法與試劑組的處理，可以使其檢驗結果呈陰性反應。但在傳統手工凝聚胺法中，其檢測結果為陽性反應。

從本實施例的檢測結果，看出本發明所提出的輸血前配合試驗方法及試劑組具有檢測時間最短，速度最快，且準確度也最高，從表一中的檢測出陽性抗體之數量可看出本發明具有較高的準確度(本發明：Gel Test=153：128)。

從本實施例的檢測結果，看出本發明所提出的輸血前配合試驗方法，其血漿與血球之比例達到166.7倍，即50 μL/(12 μL×2.5%)=166.7倍，即是從傳統手工凝聚胺法所需約850 μL的總液體量，降低至本實施例的250 μL，也能維持檢測的準確性。

122~140‧‧‧流程中的各步驟

第一圖 係為本發明中所提出的輸血前配合試驗方法的流程示意圖。

第二圖 係為於96微孔盤中依據輸本發明提出的血前配合試驗方法的流程，檢驗後的血球凝集反應之影像；圖中A~C、E、F為無凝集反應，D為有凝集反應。

122~140‧‧‧流程中的各步驟

Claims (21)

1. 一種用於輸血前配合試驗的試劑組，該試劑組包含一血球清洗液、一低離子介質溶液、一凝聚胺溶液、及一再懸浮溶液。
2. 如申請專利範圍第1項所述之試劑組，其中該血球清洗液係由Tween^® 20溶液及濃度0.85~0.9%的氯化鈉溶液以一適當比例配製而成。
3. 如申請專利範圍第2項所述之試劑組，其中該Tween^® 20溶液及濃度0.85~0.9%的氯化鈉溶液是以液體體積比1：5000~20000均勻混合而成。
4. 如申請專利範圍第1項所述之試劑組，其中該低離子介質溶液係由EDTA鈉鹽、Dextrose溶液及葡萄聚醣以一適當比例配製而成。
5. 如申請專利範圍第1或4項所述之試劑組，其中該低離子介質溶液係由0.05~0.2公克的ETDA鈉鹽先溶解於濃度5%的Dextrose溶液中，再與濃度7~11%的葡萄聚醣以液體體積比7~12：1均勻混合而成。
6. 如申請專利範圍第1項所述之試劑組，其中該凝聚胺溶液係由凝聚胺粉末、氯化鈉溶液及聚乙二醇溶液以一適當比例配製而成。
7. 如申請專利範圍第1或6項所述之試劑組，其中該凝聚胺溶液係由該凝聚胺粉末先溶解於0.85~0.9%氯化鈉溶液中，配製出濃度0.05~0.5%的凝聚胺溶液，再與濃度18~25%的聚乙二醇溶液以液體體積比1：0.85~1.2均勻混合而成。
8. 如申請專利範圍第1項所述之試劑組，其中該再懸浮溶液係由檸檬酸三鈉溶液與Dextrose溶液以一適當比例配製而成。
9. 如申請專利範圍第1或8項所述之試劑組，其中該再懸浮溶液，係由莫耳濃度0.2~0.5M的檸檬酸三鈉溶液及濃度5%的Dextrose溶液，以液體體積比1.3~1.8：1均勻混合而成。
10. 如申請專利範圍第1~4、6及8項中任一項所述之試劑組，係用於輸血前配合試驗，係為ABO血型鑑定、Rh血型鑑定、抗體篩檢與鑑定或交叉配血試驗。
11. 如申請專利範圍第10項所述之試劑組，其中該輸血前配合試驗於檢測時的血漿(或血清)及血球之體積量，比例超過100倍以上。
12. 一種使用如申請專利範圍第1項所述之試劑組的輸血前配合試驗方法，包含以下步驟：(a)將適量血球溶液加入到一可盛裝液體的容器中；(b)加入適量血球清洗液於該容器中，並使該容器中的液體混合均勻；(c)將該容器置入於離心機中作一離心沈澱處理，使該血球沈澱於該容器底部，接著便可去除上清液；(d)加入適量的氯化鈉溶液於該容器中，並使該容器中的液體混合均勻，配製出適當濃度的血球懸浮液；(e)加入適量血漿溶液於容器中，並使該容器中的液體混合均勻；(f)加入適量低離子介質溶液於該容器中，並使該容器中的液體混合均勻；(g)將該容器加溫到一適當溫度； (h)加入適量且濃度適當的凝聚胺溶液於該容器中，並使該容器中的液體混合均勻；(i)將該容器置入於離心機中作離心處理，使該血球沈澱於該容器底部，接著便可去除上清液；(j)加入適量的再懸浮溶液，並使該容器中的液體混合均勻；及(k)依據血球凝聚或分散的狀況，判讀出血球凝集的價數。
13. 如申請專利範圍第12項所述之輸血前配合試驗方法，其中該可盛裝液體的容器為一試管或一微孔盤。
14. 如申請專利範圍第12或13項所述之輸血前配合試驗方法，其中該可盛裝液體的容器之材質為玻璃、陶瓷、塑膠或橡膠。
15. 如申請專利範圍第12項所述之輸血前配合試驗方法，其中步驟(g)之該適當溫度為35~39℃。
16. 如申請專利範圍第12項所述之輸血前配合試驗方法，其中步驟(c)之該離心沈澱處理係以100~1200G的離心力來作離心沈澱處理。
17. 如申請專利範圍第12項所述之輸血前配合試驗方法，其中步驟(k)於判讀血球凝集的價數時，可進一步的使用一放大成像裝置觀看。
18. 如申請專利範圍第17項所述之輸血前配合試驗方法，其中該放大成像裝置，係為一放大鏡或一顯微鏡。
19. 如申請專利範圍第12項所述之輸血前配合試驗方法，係用於ABO血型鑑定、Rh血型鑑定、抗體篩檢與鑑定或交叉配血試驗。
20. 如申請專利範圍第12項所述之輸血前配合試驗方法，其中該檢測時的血漿(或血清)及血球之體積量，比例超過100倍以上。
21. 如申請專利範圍第12項所述之輸血前配合試驗方法，其中該步驟(a)至步驟(d)可於試驗前先行製備，以因應後續大量檢測之用。