CN101644712A - 一种聚凝胺微孔板输血前检测技术 - Google Patents

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车家林
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Abstract

本发明涉及改良手工聚凝胺微孔板输血前检测技术方法，第一改变所用的耗材及配套设施，改用自行设计的微孔板(图1)，不需要试管及离心机；第二，改变聚凝胺试剂的浓度和量。聚凝胺是一种四胺聚合物，可中和红细胞上的负电荷，降低Zeta电位，缩短细胞间距离，在低浓度的情况下，当红细胞间的距离缩短后通过离心可以形成一种可逆性非特异性的红细胞凝聚现象；当聚凝胺浓度升高后，红细胞直接形成非特异性的红细胞凝聚。当重新恢复红细胞表面的负电荷后，红细胞间由于负电荷的排斥，红细胞凝聚现象消失，而真正的由于红细胞抗原抗体引起的凝集，抗原抗体的亲和力不消失。

Description

一种聚凝胺微孔板输血前检测技术
技术领域
本发明涉及输血前检查领域，特别是一种聚凝胺微孔板输血前检测技术。
背景技术
传统的聚凝胺方法是采用试管，经过离心等步骤进行检测，该方法需要配套的离心机等仪器。但是在急诊或者外伤现场，由于患者情况危急，采集标本送检验科进行交叉配血需要一段时间，贻误患者抢救时机。另外在比较偏远的地区及国家，由于资源匮乏，没有离心机等配套设备，开展输血前检查难以保证应有的效果。手工聚凝胺法与其它配血方法比较具有灵敏、准确、操作简便、快速(只需3～5min)等优点。目前广泛应用于临床输血前检查，包括新生儿溶血病、抗体筛选和交叉配血，得到了大家一致好评。目前使用的聚凝胺方法是采用试管，经过离心等步骤进行检测，该方法需要配套的离心机等仪器。但是在东莞地区的调查结果表明，调查的39家医院，只有4家配备有血型血清学专用离心机。大部分医院输血科(血库)都是采用普通离心机进行标本血型检测及交叉配血。采用普通离心机对于精确调整离心时间和离心速度比较困难。血型血清学实验中，离心速度和时间对结果具有重要的意义，是导致假阳性和假阴性结果常见原因之一。东莞属于经济比较发达的地区，医疗资源相对比较充足。对于一些相对比较落后的地区，这种现象可能更加严重。据报道，在一些欠发达的国家和地区，如越南和泰国等地区，离心机非常有限。
采用微孔板聚凝胺法进行输血前检查，可以一次性同时检测大量标本。一方面可以保证所有检测标本的一致性，提高检测的标准化操作；同时可以大大提高检测效率，节约宝贵的时间。目前国内也有采用微孔板进行血型检测及抗体筛选的报告，使用效果很好，但都需要平板离心机等配套设备进行检测。同时也有商业的固相微孔板技术应用于不规则抗体筛选，该技术需要专用的仪器，价格比较昂贵。2007年王福成等使用Poseidon数字血型仪，结合Tecan RSP样本处理***，用于对献血者ABO血型的常规检测，效果较好。但是该方法反应时间为1小时，同时需要使用血型仪进行判读。
发明内容
为了克服现有技术的不足，本发明将传统的聚凝胺方法进一步进行改良，自行设计微孔板，省去了离心机、试管等器材，建立一种比传统的试管聚凝胺方法更加简便、快速的无须离心的微孔板聚凝胺法。
本发明解决其技术问题所采用的技术方案是，它依次包含有如下步骤：
A、以生理盐水配制红细胞悬液；
B、于微孔板中加血浆2滴，红细胞悬液1滴；
C、加低离子介质液(LIM)，用手轻轻晃动微孔板均匀，室温孵育1min(图2)；
D、加2滴0.1~0.15％聚凝胺溶液，混合后静置30s，再用手轻轻晃动微孔板1~2分钟，可见明显的红细胞凝聚(图3)；
E、加入重悬液，轻轻晃动微孔板1分钟左右，观察结果；
F、结果判定：如凝聚散开，则为引起的非特异性凝集，；如凝集不散开，则为抗原抗体结合的特异性反应(图4)。
所述A步骤中以生理盐水配置红细胞的比例为10％-15％；
所述C步骤中计入的低离子介质液为0.2ml。
采用上述方法，本发明一方面利用聚凝胺技术检测灵敏度高、特异性好的优点，同时融合微孔板适合大规模操作、标准化操作的优点，以适用于落后地区以及紧急又没有离心机等配套设备情况下进行输血前检查。
附图说明
图1为本发明微孔板的结构示意图；
图2为本发明红细胞抗原与血清中的抗体反应示意图；
图3为红细胞非特异性聚集示意图；
图4为检测结果示意图。
本发明目的、功能及优点将结合实施例，参照附图做进一步说明。
具体实施方式
参考1-4图，本发明通过改良手工聚凝胺方法，第一改变所用的耗材及配套设施，改用自行设计的微孔板(图1)，不需要试管及离心机；第二，改变聚凝胺试剂的浓度和量。聚凝胺是一种四胺聚合物，可中和红细胞上的负电荷，降低Zeta电位，缩短细胞间距离，在低浓度的情况下，当红细胞间的距离缩短后通过离心可以形成一种可逆性非特异性的红细胞凝聚现象；当聚凝胺浓度升高后，红细胞直接形成非特异性的红细胞凝聚。当重新恢复红细胞表面的负电荷后，红细胞间由于负电荷的排斥，红细胞凝聚现象消失，而真正的由于红细胞抗原抗体引起的凝集，抗原抗体的亲和力不消失。本发明建立的无须离心聚凝胺微孔板输血前检测技术，主要操作如下：A、以生理盐水配制红细胞悬液；B、于微孔板中加血浆2滴，红细胞悬液1滴；C、加低离子介质液(LIM)2ml，用手轻轻晃动微孔板均匀，室温孵育1min(图2)；D、加2滴0.1~0.15％聚凝胺溶液，混合后静置30s，再用手轻轻晃动微孔板1~2分钟，可见明显的红细胞凝聚(图3)；E、加入重悬液，轻轻晃动微孔板1分钟左右，观察结果；F、结果判定：如凝聚散开，则为引起的非特异性凝集，；如凝集不散开，则为抗原抗体结合的特异性反应(图4)。
以上所述仅为本发明的优选实施例，并非因此限制本专利范围，凡是利用本明书及附图内容所作的等效结构或等效流程变换，或直接或间接运用在其他相关的技术领域，均同理包括在本发明的专利保护范围内。

Claims (3)

1、一种聚凝胺微孔板输血前检测技术，其特征在于，它依次包含有如下步骤：
A、以生理盐水配制红细胞悬液；
B、于微孔板中加血浆2滴，红细胞悬液1滴；
C、加低离子介质液(LIM)，用手轻轻晃动微孔板均匀，室温孵育1min(图2)；
D、加2滴0.1~0.15％聚凝胺溶液，混合后静置30s，再用手轻轻晃动微孔板1~2分钟，可见明显的红细胞凝聚(图3)；
E、加入重悬液，轻轻晃动微孔板1分钟左右，观察结果；
F、结果判定：如凝聚散开，则为引起的非特异性凝集，；如凝集不散开，则为抗原抗体结合的特异性反应(图4)。
2、根据权利要求1所述的一种聚凝胺微孔板输血前检测技术，其特征在于：所述A步骤中以生理盐水配置红细胞的比例为10％-15％。
3、根据权利要求1所述的一种聚凝胺微孔板输血前检测技术，其特征在于：所述C步骤中计入的低离子介质液为0.2ml。
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CN1614424A (zh) * 2003-11-06 2005-05-11 财团法人台湾基督长老教会马偕纪念社会事业基金会马偕纪念医院 一种输血前血液配合试验的检测方法

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WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication

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