SU882414A3 - Способ получени антибиотика с-15003 р-4 - Google Patents
Способ получени антибиотика с-15003 р-4 Download PDFInfo
- Publication number
- SU882414A3 SU882414A3 SU782691551A SU2691551A SU882414A3 SU 882414 A3 SU882414 A3 SU 882414A3 SU 782691551 A SU782691551 A SU 782691551A SU 2691551 A SU2691551 A SU 2691551A SU 882414 A3 SU882414 A3 SU 882414A3
- Authority
- SU
- USSR - Soviet Union
- Prior art keywords
- antibiotic
- ethyl acetate
- medium
- added
- leucine
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D498/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms
- C07D498/12—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms in which the condensed system contains three hetero rings
- C07D498/18—Bridged systems
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P17/00—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
- C12P17/18—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms containing at least two hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring system, e.g. rifamycin
- C12P17/188—Heterocyclic compound containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen atoms and oxygen atoms as the only ring heteroatoms
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/365—Nocardia
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
- Y10S435/872—Nocardia
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Virology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
(5) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АНТИБИОТИКА С-15003 Р-
1
Изобретение относитс к микробиологии и касаетс производства антибиотиков .
Предложенный антибиотик новый и способ его получени в патентной и научно-технической литературе не описан .
Целью изобретени вл етс получение антибиотика..
Эта цель достигаетс тем, что штамм
Nocardia sp.NC-15003 ( AJCC-31281, 3FO-13726) выращивают в питательной среде, содержащей источники углерода и азота, с добавлением лейцина или его производных.
Штамм Nocardia sp. NC-15003, продуцирующий антибиотик, был выделен из почвы и других образцов.
Штамм NC-15003 депонирован в исследовательском институте ферментации Agency of Industrial Science and Technol ogy (PERM) под номером 3992, в институте ферментации, Осака (JFO) под номером JFO 13726 и в американской коллекции разновидностей культур (АТСС), Мэриленд, США под номером 31281.
Культурально-морфологические признаки . Вегетативный мицелий растет 6 хорошо, гифы достигают 0,8-1,2 мкм, в диаметре, в некоторых случа х их можно разделить на фрагменты. Воздушный мицелий накладываетс на вегетативный мицелий, часто образует
10 монолиты (50-200X200-1000 мкм), на которых продолжаетс дальнейший рост. Воздушный мицелий представл ет собой волнообразные, пр мые или петлеобразные спирали. Микроскопическое исследование старых культур показывает что лишь в нескольких случа х в цеп х образуютс конидии как клетки, тогда как клеточные суспензии, полученные с поверхностей таких культур
20 содержат много удлиненных эллипсоидальных (0,8-1,2 мкм X ,8-6,8 мкм) и эллипсоидальных (0,8-1,2 х.:1,02 ,0 мкм) телец, похожих на артроспорц
Сахарозо-нитратный агар : рост умеренный , цвет дыни до нтарнорыжевато-коричневого , образует тела похожие на монолиты. Воздушный мицелий скудный, белый. Растворимый hигмeнт отсутствует или бледный желтовато-рыжевато-коричневый, Глицерино-нитратный аГар : субстратный мицелий - рост умеренный, цвета слоновой кости, образует тела похожие на .монолиты. Воздушный мицелий умеренный, белого цвета. Раст зоримый пигмент отсутствует. Глюкозо-аспарагиновый агар : рос умеренный, цвета календулы до ркожелтого . Воздушный мицелий скудный, белого цвета. Растворимый пигмент рко-желтый Глицериново-аспарагиновый агар : рост умеренный, цвета слоновой кости образует тела, похожие на монолиты. Воздушный мицелий скудный, белый. Растворимый пигмент отсутствует. Крахмальный агар : рост умеренный , цвета светлой слоновой кости до светло-пшеничного, образует тела похожие на монолиты. Воздушный мице ЛИЙ обильный; светлой слоновой кости. Растворимый пигмент отсутствует . Агзр на овс ной нуке : рост умеренный , цвета от светлой слоновой кости до колониального желтого, об разует тела, похожие на ГЮНолиты. Воздушный мицелий скудный, от белог до светло-желтого, Растворимый пигмент отсутствует, Тирозиновый агар : рост умеренный , от светлой слоновой до цвета светло-желтой дыни, образует тела, похожие на монолит. Воздушный мицелий умеренный, от белого до цве та светлой слоновой кости. Раствори мый пигмент цвета верблюда. Физиологические признаки. Температурный интервал роста 12-38 С. Температурный интервал, в котором наблюдаетс хороший воздушный рост, составл ет 20-35 С. Желатин разжижа ет. Крахмал гидролизует. Нитраты восстанавливает. Молоко пептонизирует , но не коагулирует. Казеин рас щепл ет. Меланоидные пигменты на агаре с пептоном и дрожжевым экстрактом не продуцирует, на тирозиновом агаре продуцирует. Тирозин разлагает , Ксантин и гипоксантин не ра лагает. Толерантность к.лиаоциму по ложительна . Толерантность к хлорис тому натрию - 2%. Очень хорошо растет на фруктозе, маннозе, хорошо растет на глюкозе, маннитоле, сахарозе , растворимом крахмале. Усваивает ксилозу, арабинозу, галактозу , рамнозу, трегалозу, раффинозу , мелибиозу, слабо усваивает мальтозу, глицерин, не усваивает i-инозитол, D-сорбитол, лактозу. Лейцин в качестве добавки можно примен ть в форме производного. Примерами производного вл ютс алкильные сложные эфиры С -С, например, метиловый эфир, этиловый эфир лейцина, амиды, такие как амид С -С алкиламиды (например N-метиламид,Nэтиламид ) лейцина, его кетокислоты ( например L-кетоизокапронова кислота ) или их соли например гидрохлориды . Желательно с С-форма лейцина. Применимыми вл ютс также свободна форма лейцина и его производные и смесь производных. Количество добавл емого к среде вещества составл ет 0,0.1 - 1% вес/объем, предпочтительно 0,1-, 0,5. Врем добавлени любое на прот жении продуцировани антибиотика P-, предпочтительно добавл ть в начале стадии культивировани . Среда дл культивировани антибиотика может содержать источники углерода и азота, неорганические вещества, следы питательных веществ. В качестве источников углерода используют глюкозу, лактозу, сахарозу , мальтозу, декстин, крахмал, глицерин , маннитол, сорбитол, жиры и масла (например, масло из бобов,сои, свиное сало , куриный жир). В качестве источников азота используют м сной экстракт, дрожжевой экстракт , сухие дрожжи, соевую муку, жидкость от замоченного зерна, пептонмуку хлопковых сем н, мелассу, мочевину , соли аммони (например сульфат аммони , хлорид аммони , нитрат аммони ) и нитрат солей (например нитрат-натри , нитрат кали ). Среда также может содержать соли натри , кали , кальци , магни -, соли железа, марганца; цинка, кобальта, никел , соли фосфорной кислоты, борной кислоты. Среда может содержать в качестве добавок витамины (например В , Bg никотиновую кислоту, Вц,С, Е), нуклеи новые кислоты (например пурин, пирими, дин и их производные) .
Дл установлени нужного значени рН среды добавл ют неорганические или органические кислоты, щелочи, буферные растворы. В качестве , антивспенивающих веществ добавл ют подход щие количества масел, жиров, поверхностно-активных веществ.
Культивирование провод т в любых стационарных, со встр хиванием, аэробным погружением и других услови х дл выращивани культур. Дл получени высоких выходов предпочтительным вл етс аэробное погружение культуры.
Инкубирование осуществл ют при температуре 20-35 С при начальном рН 5.5-8,5, предпочтительным вл етс интервал 23-30С и рН 6,5-7,5.
82tl 6
Врем инкубировани может быть 8-240 ч.
Получают антибиотик следующим образом .
5 Штамм NC-15003 выращивают в среде 1, содержащей 3% растворимого крахмала, 0,2 хлористого .аммони , 0,05 сульфата магни , Ij09% калий дикислого фосфата, 2,09% дикалий 10 кислого фосфата, 0,001% сульфата железа и добавочные вещества, или в культуральной среде (I, содержащей 5% декстрина, 3% жидкости от замачивани .зерна, 0,1% пептона, 0,5% карбоната 15 кальци и добавочные вещества, и . затем эту среду культивируют. Результаты , полученные дл среды Т, приведены в табл.1, а результаты, полученные дл среды ||, приведены в табл.2.
20
Т а б л и,ц а 1
-че
(Q.) в графе Врем добавлени означает, что вещество добавлено в качестве одного из ингредиентов.
Определение полученных Р-2,Р-3 и Р-4 осуществл ют следующим образом.
Таблица2
Питательный бульон экстагируют равным объемом этилацетата. Слой раствсэрител концентрируют и сушат, затем раствор ют этилацетатом дл получени 1/100 объема исходного бульон Продукты определ ют тонкослойной хром тографией на силикагеле, использу насыщенный водный раствор этилацетатом . Получаемое количество и соотношение компонентов определ ют по величине поглощени на длинноволокновом ТСХ-многоточечном измерительном приборе модели С5-910 на основе интеграл-плотностей каждого п тна на хроматограмме при 25 мм. Отношение компонентов представлено в процентах вес/вес в общих продуктах, Р-2, Р-3, Р-. Как показано в табл. 1 и 2 штамм NC-15003 продуцирует антибиотик Р-А в количестве б5-8А% от общего количества в присутствии специфических добавок, и 25 или меньше в отсутствие таких добавок. Поэтому выделение Р- из питательного бульона вл етс в первом случае более эффективным, чем во втором. Так как P-t, полученный таким способом в ферментационной жидкой среде, вл етс липофильным нейтраль ным веществом, его обычно выдел ют из питательного бульона в соответствии со способами выделени и очистки которые обычно используют дл выделени таких микробных метаболитов, Р-А легко экстрагируетс из питатель ного фильтра несмешивающимис с водой органическими растворител ми, та кими как сложные эфиры жирных кислот например этилацетат и амилацетат, спирты, например бутанол, талоидированные углеводороды, например хлоро форм , кетрны, например метилизобутилкетон . Экстрагирование Р- провод т при рН, близком к нейтральному, и предпочтительно экстрагируют этил ацетатом, рН которого равен 7- Экст ракт промывают водой и концентрирую при пониженном давлении. Затем к ко центрату добавл ют непол рный растворитель , например петролейный эфир или гексан, и выдел ют в виде осадка т сырой продукт, содержащий акти ное соединение. Полученный сырой продукт подвергают при желании обыч ным способам очистки. Так, в качест 8 обычного способа очистки может быть использована адсорбционна хроматографи . Дл этой цели используют один из обычно примен емых адсорбентов, например силикагель, окись алюмини , «макропористые неионные смолы, ад-сорбенты и т.А,. Р- в сыром продукте отдел ют на таком силикагельном хроматографе,например, с помощью петролейного эфира и гексана и . элюирование осуществл ют, добавл такой пол рный растворитель, как этилацетат, ацетон, этанол или метанол , или галоидированНый водород, как дихлорметан или хлороформ с добавкой пол рного растворител , такого как спирт, например метанола или этанола, кетона, например, ацетона или метилэтилкетона, или тому подобных. Таким образом можно элюировать , выделить и получить P-t. Если в качестве средств очистки используют адсорбент как макропористую смолу, то элюирование провод т смесью воды с низшим спиртом, низшим кетоном или сложным эфиром. Например , низшим спиртом может быть метанол, этанол, пропанол или бутанол , низшим кетоном может быть, например ацетон метилэТилкетон, В качестве сложного эфира может быть этилацетат , бутилацетат. Сырой продукт (1 раствор ют в 60 смеси метанол вода и адсорбируют на колонке Dialon НР-1. Колонку промывают 701 смесью метанол-вода. Затем осуществл ют элюирование - смесью метанол-вода . Фракции, содержащие Р-4, собир ют и концентрируют при повышенном давлении. К сухому продукту добавл ют 5-8 объемов этилацетата и полученную смесь оставл ют выстаиватьс , после чего выдел ют кристаллы Р-. Выход антибиотика достигает около б5 или более, при этом легко выдел етс из питательного бульона. Поэтому предлагаемый способ вл етс преимущественным дл промышленного получени Р-4. Физико-химические свойства Рприведены в табл.3.
Антибиотик
Формула
Точка плавлени , °С
Удельное вращение
110
Idl
Элементарный анализ
Найдено, %
Элементарный анализ
Рассчитано,%
Ультрафиолетовый спектр поглощени НМ (6)
(в метаноле)
Инфракрасный спектр поглощени КВг, см
ЯМР-спектр частиц на млн, 100 МгГ в СД«з
Масс-спектр (т/е) Растворимость
Цветова реакци
8821411 10
Таблица 3
С-15003 Р-
,196
177-180 Й2 i 10 с 0,522 CHClj)
С 60,65
Н 7,05
N 4,25
С 5,23
С 61 ,05
Н 6,99
N (4,32
о
С1 5,6
233 (29900) ( плечо ) 252(275590;
280(5712)288(5680)
,1730,1670,1580,
,1385,,1255,
ПВО,1150,1100,1080, 1038
1,03 (д) (6Н) 587,, А70, 450
Нерастворим в петролейном эфире, гексане, воде. Умеренно растворим в бензоле, эфире. Растворим в хлороформе, этилацетате, ацетоне, этаноле, метаноле, пиридине , тетрагидрофуране, диметилсульфоксиде
Драгендорф : положительна Бельштейн : положительна
Антибактериологичёска активность По способу бумажных дисков определ ют ингибирующие концентрации штамм выращенного на триптикинозно-соевом агаре (BBL), против микроорганизмов , перечисленных далее. Так, диски фильтровальной бумаги, пропитаные каждый 0,02 (л раствора концентрации 300 мкг/мл , помещают на пластины, инокулированные соответственно микроорганизмами , перечисленными ниже, дл определени минимальной ингибирующей концентрации . Полученные результаты показали , что антибиотики не обладают активностью против следующих микроорганизмов : Escherichla coli, Proteus vulgaris, Proteus mirabllis, Pseudomonas aeruginosa,Staphylococcu ureus, ВасП lus subtil is Bacillus cereus, Klebsiella pneumoniae, Serratia marcescens, Mycobacteriurn avium.
С другой стороны, на агаровых пластинках, содержащих испытываемую среду (3,5 г динатрийфосфата, 0,5 г монокалийфосфата, 5 г дрожжевого экстракта (Difco), 10 г глюкозы, 15 г агара, 1000 мл дистиллированной воды, рН ) было определено ингибирование роста Talaromyces avellaneus. В этом опыте минимальна ингибирующа концентраци составл ет 1-1,5 мкг/мл дл Р-. Далее культивируют в качестве исследуемого организма дикий штамм Tetrahymenpyrlformis w на опытной среде, состощей из 20 г протеоза-пептона (DIfco) 1 г дрожжевого экстракта, 2 г глюкоз 1000 мл дистиллированной воды и 10 мл 1 М фосфатного буфера рН 7,0 jпри в течение kk 48 ч и определ ют методом последовательных разбавлений активность ингибировани роста антибиотиков против этого конкретного микроорганизма. Оказалось, что ингибирование роста наблюдаетс при концентрации 0,5 мкг/мл дл С-15003 Р-.
P-k обладает активностью против следующих микроорганизмов : Faslcladium levieri, Helminthosporiu sigmoideum var, irregulare, Pyricularla oryzae, Cochlicborus miyabeanus, Sclerotinia sclerotiorum Pellicularia sasakii, Trichophyton . rubrum, Rhodotorula rubra и Cryptococcus neoformans.
Антиопухолева активность. Было исследовано терапевтическое действие Р- вводимого внутрибрюшинно в течение 9 последовательных дней, против лейкемии Р388 у мышей (1x10 клеток/животное, трансплантированных внутрибрюшинно)). Результаты показали, что в единицах степени продлени продолжительности жизни эти соединени обладают антиопухолевой активностью пор дка 200 при уровне дозы 0,00625 мг/кг в день.
Токсичность. В тестовых испытани х на острую токсичность, прове5 денных на мышах в качестве подопытных животных, которые предусматривали внутрибрюшинные инъекции Р-Ц, все исследованные антибиотики продемонстрировали величину ЛД|оо 050,625 мг/кг и ЛДо 0,313 мг/кг.
Антибиотик P-k обладает высокой ингибирующей активностью против грибковых организмов и простейшых и поэтому представл ет ценность в качестве фунгицидного агента или агента против простейших. Кроме того, так как P-k демонстрирует продлевающее продолжительность жизни действие у млекопитающих, у которых 0 есть опухоль (например мышей ) можно также ожидать, что это соединение сможет найти применение в качестве антиопухолевого лекарства.
Как фунгицид или агент против , простейших Р-4 можно использовать дл оценки бактериальной экологии в почве, активном иле, жидкости животных организмов и т.д. Так, если нужно выделить ценные бактерии из обр зцов почвы или если нужно оценить
0 действие бактерий независимо от грибковых или простейших организмов при работе и исследовании активных илистых систем, используемых дл очистки сточных вод,то можно использовать
5 антибиотик дл получени селективного роста бактериальной флоры, сопровождающегос подавлением роста загр зн ющих грибковых или простейших организмов в образце. В этом
0 случае образец добавл ют к жидкой или твердой среде и на 1 мл среды добавл ют 0,1 мл раствора 10100 мкг/мл антибиотика в смеси метанол-вода, после чего образец
5 инкубируют.
Р- можно также использовать в . качестве бактерицидного агента дл борьбы с болезч ми растений, вызванными микроорганизмами, упом нутыми выше. Как случай типичного применен Р- используют в виде 1 -ного метанольного водного раствора, содержа щего 0,5 мкг/мл - 5 мкг/мл антибиот Так, например, Р-4 можно использовать дл контрол за красновато-коричневой листовой гнилью, бластом, гельминтоспориозной п тнистостью листьев и листовым заболеванием рисовых растений. Пример 1. АО мл засе нной культуральной среды (1,0% глюкозы, 2,0% бактотриптона, 1,2% бактодрожжевого экстракта, рН 7,0 ) вылив ют в колбу Эрленмейера объемом 200 мл. После стерилизации в среду 1.нкубируют Nocardia sp. С-15003 (JFO 13726 : АТСС 31281 : FERM 3992 Инокул нт инкубируют при 28°с во вращающемс шейкере (200 об/мин) дл получени засе нной культуры. Эту засе нную культуру трижды промы вают стерилизованной дистиллированной водой и промывные клетки выдел ют до исходного количества стерилизованной дистиллированной водой. 1 мл полученного вещества инокул руют в основную культуральную среду растворимого крахмала, 0,2 хлористого аммони ,0,05 сульфата магни , 0,09% монокалийфосфата, 2,09 дикалийфосфата 0,001% сульфата железа, 0,3% L-лейцина , и основную культуральную среду выдерживают при 28 8 дней во вращающемс шейкере (200 об/мин). Общее количество полученного С-15003 составл ет 12 мкм/м и 80% его составл ет .уР-. П р и м е р 2, Готов т тот же по культуры, что и в примере 1, и 500 мл засе нной культуры выливают в колбу Сакагуши объемом 2000 мл После стерилизации питательной сред среду инокулируют тем же штаммом, что и в примере 1. Инокулированную среду культивируют при А8 ч с вращательно-поступательным движением (110 ход/мин) до получени засе нной культуры. 100 л засе нной культуры ( 2,0% глюкозы, 3,0% растворимого крахмала, 1,0% жидкости замоченного зерна, 1,0% соевой муки , 0,5% полипептона, 0,3% хлористо натри , 0,5% карбоната кальци , рН 7,0} готов т и выливают в 200литровый ферментер из нержавеющей стали. После того как ферментер стерилизуют при 12ГС 20 мин и охла Ц14 дают, в него инокулируют 500 мл засе нной культуры. Содержимое культивируют при 28 С 8 ч при скорости аэрации 100 л/мин, скорости перемешивани 200 об/мин. Питательный бульон (Юл) помещают в 100 литров питательной среды (5% декстрина, 3% жидкости от замачивани зерна, 0,1% пептона, 0,5 Lлейцина , 0,5% карбоната кальци , рН ) в 200-литровом ферментере из нержавеющей стали, ферментацию провод т k дн при при скорости аэрации 100 л/мин и скорости перемешивани 150 об/мин. Полное количество полученного C-1S003 составл ет 12 мкг/мл, и Р-Ц С-15003 составл ет около 85%(вес/ве4. ПримерЗ. К95л жидкой питательной среды, полученной в примере 2, добавл ют 50 л ацетона. Полученную смесь перемешивают 30 мин. К полученной смеси добавл ют 2 кг hyflo-supercell и полученную смесь хорошо перемешивают. Полученную смесь отфильтровывают на фильтре под давлением , в результате чего получают 13,5 л фильтрата. К полученному фильтрату добавл ют 50 л воды и 90 л этилацетата, полученную смесь пере мешивают и экстрагируют. Процедуру повтор ют дважды. Полученные слои этилацетата объедин ют и дважды промывают 80-литровыми порци ми воды. К слою добавл ют 1 кг безводного сульфата натри , высушивают и концентрируют до 200 мл. К полученному концентрату добавл ют петролейный эфир, и образовавшийс осадок выдел ют фильтрованием , в результате чего получают 35 г продукта. К полученному таким образом сырому продукту добавл ют 50 мл этилацетата и полученную смесь перемешивают . Нерастворимую часть выдел ют фильтрованием и к фильтрату добавл ют 10 г силикагел . После перемешивани полученной смеси этилацетат отгон ют при пониженном давлении. Остаток помещают в верхнюю часть колонки с силикагелем ( 500 мл). Злюирование . провод т последовательно 500 мл г-гексана , 500 мл смеси и - гексан: этилацетат (3:1) , 2000 мл смеси н-гексан: этилацетат (.1:1) и 2000 мл насыщенного водного раствора этилацетата. При этом элюат собирают в 50-миллилитровые фракции. По 1 мл от каждой фракции концентрируют досуха и к-полученному концентрату добавл ют 0,1 мл этилацетата до получени смеси. Смесь дает п тно на рассто ни 2,5 см от нижнего кра пластины силикагель - стекло и про вл етс окол 17 см растворителем (вода, насыщенна этилацетатом). После про влени провод т определение ультрафиолетовы излучением (2537 А). Активные фракци Rf 0,9 собирают и концентрируют при ПОНИ« АНОМ давлении мл. К этом добавл ют 20 мл петролей ного эфира, ,|Ч| результате чего получают 1,0:8 кристаллов. Сырые кристаллы ращвор ют в 20 мл теплого этилацетата. Ирсле охлаждени выдел ют 920 мг. кристаллов Р-. Температура правлени 178-18(3 С(Р-, 9 вес/вес). При-мер. В 400 мл 501 метан ла раствор ют 20 г сырого продукта, полученного в примере 3. Колонку 2,5 см в диаметре набивают 1000 мл, диайона НР-10 и готов т 3000 мл смеси метанол-вода. Приготовленный таким образом раствор образца пропускают через колонку и промывают , использу 1000 мл 60%-ного метанола и последовательно провод т . градиентное элюирование 7500 мл смеси метанол-вода , 7500 мл смеси метанол - вода. Элюат собирают в 75 мл фракции и каждую фрак цию исследуют тонкослойной хроматогр фией на силикагеле, описанной в примере 3. фракции NN 182-190 собирают и кон центрируют. К полученному концентрату добавл ют 500 мл воды и 1000 мл 16 этилацетата. Прлу. раствор встр хивают в разделительной воронке и водный слой отдел ют, после двухкратного промывани 300 мл воды этилацетатный слой высушивают над безводным сульфатом натри , концентрируют и оставл ют выстаиватьс . В результате получают кристаллы, которые собирают фильтрованием и высушивают . Получают 950 кг P-k. Температура плавлени 177-179 С (Р-, 92 вес/вес). П р и м е р 5. Использу методику примера 1, но вместо L-лейцина примен метиловый сложный эфир лейцина. N-метиламид лейцина, оС - кетой зокаггроновую кислоту или гидрохлорид лейцина , получают тот же результат, а именно получают специфически требуемый Р-. Предложенный способ позвол ет получить новый антибиотик С-15003 Р- Формула изобретени Способ получени антибиотика С-15003 Р-4 отличающийс тем, что штамм Nocardia ар NC-15003 (АТСС-31281, JFO 13726) выращивают в питательной среде, содержащей источники углерода и азота с добавлением лейцина или его производных . Источники информации, прин тые во внимание при экспертизе Предложенный антибиотик новый и способ его получени в патентной и научно-технической литературе не описан .
Claims (1)
- Формула изобретенияСпособ получения антибиотика С-15003 Р-4 отличающийся тем, что штамм Nocardia ар NC-15OO3 (АТСС-31281, JFO 13726) выращивают в питательной среде, содержащей источники углерода и азота с добавлением лейцина или его производных .
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP52139384A JPS6010720B2 (ja) | 1977-11-18 | 1977-11-18 | 抗生物質c―15003 p―4の製造法 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
SU882414A3 true SU882414A3 (ru) | 1981-11-15 |
Family
ID=15244048
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
SU782691551A SU882414A3 (ru) | 1977-11-18 | 1978-11-16 | Способ получени антибиотика с-15003 р-4 |
Country Status (13)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US4229533A (ru) |
JP (1) | JPS6010720B2 (ru) |
CH (1) | CH640269A5 (ru) |
DE (1) | DE2849666A1 (ru) |
DK (1) | DK144658C (ru) |
ES (1) | ES475179A1 (ru) |
FR (1) | FR2409306A1 (ru) |
GB (1) | GB2011384B (ru) |
HU (1) | HU179599B (ru) |
IT (1) | IT1160087B (ru) |
NL (1) | NL7811324A (ru) |
PL (1) | PL122365B1 (ru) |
SU (1) | SU882414A3 (ru) |
Families Citing this family (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS55162791A (en) * | 1979-06-05 | 1980-12-18 | Takeda Chem Ind Ltd | Antibiotic c-15003pnd and its preparation |
JPS5645483A (en) * | 1979-09-19 | 1981-04-25 | Takeda Chem Ind Ltd | C-15003phm and its preparation |
JPS56102793A (en) * | 1979-12-28 | 1981-08-17 | Takeda Chem Ind Ltd | Preparation of antibiotic c-15003 p-3 |
GB8712752D0 (en) * | 1987-05-30 | 1987-07-01 | Tioxide Group Plc | Particulate material |
GB8829402D0 (en) * | 1988-12-16 | 1989-02-01 | Tioxide Group Plc | Dispersion |
CN102586153A (zh) * | 2012-03-06 | 2012-07-18 | 福州大学 | 一种高密度培养枯草芽孢杆菌的方法 |
Family Cites Families (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US3902968A (en) * | 1974-04-25 | 1975-09-02 | Merck & Co Inc | Fermentation process |
JPS58876B2 (ja) * | 1975-11-19 | 1983-01-08 | 藤沢薬品工業株式会社 | Fr −1923 ブツシツノ セイゾウホウホウ |
FR2385714A1 (fr) * | 1977-03-31 | 1978-10-27 | Takeda Chemical Industries Ltd | Nouvel antibiotique denomme c-15003, son procede de preparation et son application comme medicament |
US4151042A (en) * | 1977-03-31 | 1979-04-24 | Takeda Chemical Industries, Ltd. | Method for producing maytansinol and its derivatives |
JPS6010718B2 (ja) * | 1977-03-31 | 1985-03-19 | 武田薬品工業株式会社 | メイタンシノ−ル,メイタナシンおよびメイタンシノ−ル・プロピオネ−トの製造法 |
US4162940A (en) * | 1977-03-31 | 1979-07-31 | Takeda Chemical Industries, Ltd. | Method for producing Antibiotic C-15003 by culturing nocardia |
-
1977
- 1977-11-18 JP JP52139384A patent/JPS6010720B2/ja not_active Expired
-
1978
- 1978-11-13 US US05/959,471 patent/US4229533A/en not_active Expired - Lifetime
- 1978-11-14 CH CH1170078A patent/CH640269A5/de not_active IP Right Cessation
- 1978-11-16 NL NL7811324A patent/NL7811324A/xx not_active Application Discontinuation
- 1978-11-16 SU SU782691551A patent/SU882414A3/ru active
- 1978-11-16 DE DE19782849666 patent/DE2849666A1/de not_active Withdrawn
- 1978-11-17 FR FR7832576A patent/FR2409306A1/fr active Granted
- 1978-11-17 IT IT29921/78A patent/IT1160087B/it active
- 1978-11-17 PL PL1978211027A patent/PL122365B1/pl unknown
- 1978-11-17 DK DK514478A patent/DK144658C/da not_active IP Right Cessation
- 1978-11-17 HU HU78TA1499A patent/HU179599B/hu unknown
- 1978-11-17 ES ES475179A patent/ES475179A1/es not_active Expired
- 1978-11-20 GB GB7845283A patent/GB2011384B/en not_active Expired
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
US4229533A (en) | 1980-10-21 |
HU179599B (en) | 1982-11-29 |
DK144658C (da) | 1982-11-22 |
CH640269A5 (de) | 1983-12-30 |
FR2409306B1 (ru) | 1981-03-06 |
PL211027A1 (pl) | 1979-07-02 |
IT7829921A0 (it) | 1978-11-17 |
IT1160087B (it) | 1987-03-04 |
GB2011384A (en) | 1979-07-11 |
PL122365B1 (en) | 1982-07-31 |
ES475179A1 (es) | 1979-05-16 |
JPS6010720B2 (ja) | 1985-03-19 |
JPS5473193A (en) | 1979-06-12 |
NL7811324A (nl) | 1979-05-22 |
DE2849666A1 (de) | 1979-05-23 |
GB2011384B (en) | 1982-05-19 |
DK144658B (da) | 1982-05-03 |
DK514478A (da) | 1979-05-19 |
FR2409306A1 (fr) | 1979-06-15 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US4360462A (en) | Process for preparing maytansinol | |
JPS5898091A (ja) | トリエン系抗生物質およびその製法 | |
Hayashi et al. | Cyanocycline A, A new Antibiotic Taxonomy of the Producing organism, Fermentation, Isolation and Characterization | |
SU1036251A3 (ru) | Способ получени антибиотика @ -15003 @ -3 | |
EP0031430B1 (en) | A method for the production of antibiotic c-15003 p-3 | |
CA1054959A (en) | Rifamycins from nocardia mediterranea | |
US4187292A (en) | Antibiotics produced from the microorganism nocardice | |
SU882414A3 (ru) | Способ получени антибиотика с-15003 р-4 | |
ONISHI et al. | A macrocyclic antibiotic m-230b produced by myxococcus xanthus isolation and characterization | |
US4551533A (en) | Antibiotic LL-D42067α | |
US4540517A (en) | Antibiotic TAN-420 | |
US5320955A (en) | 10'desmethoxystreptonigrin production by Streptomyces albus | |
US6121310A (en) | Aflatoxin contamination inhibitor and aflatoxin contamination-inhibiting method | |
US4686308A (en) | Novel physiologically active substance MH435 | |
CA1236785A (en) | ANTIBIOTIC LL-D42067.beta. | |
EP0206138B1 (en) | Anthracycline compounds, a process for their preparation and their use as medicaments | |
EP1001957A1 (en) | Macrolides with antitumor activity | |
US5109133A (en) | Antibiotic trienomycins and their production | |
SU741804A3 (ru) | Способ получени антибиотика | |
CS214749B2 (en) | Means for treating the diseased plants and method of preparation of active substance | |
US4730039A (en) | Leucanicidin | |
JPH0515385A (ja) | 新規な抗生物質アリサマイシンおよびその製法 | |
EP0205981B1 (en) | A novel anti-tumor and antimicrobial compound, its microbiological preparation and its use as medicament | |
US5275938A (en) | Process for producing leucanicidin | |
KR810001056B1 (ko) | 항생물질 c-15003의 제조법 |