SU1688818A1 - Штамм гриба АRтнRовотRYS DIGoSpoRa FReS. дл получени препарата против галловых нематод - Google Patents

Description

Изобретение относится к микробиологической' промышленности, в частности к получению биологических средств для борьбы с галловыми нематодами, и представляет собой новый штамм для получения вышеуказанного средства.

Целью изобретения является получение нового штамма нематофагового хищного гриба вида Arthrobotrys oligospora Fres., обладающего более высокой активностью в привлечении и уничтожении галловых нематод и стабильностью.

Штамм гриба Arthrobotrys oligospora Fres. выделен из гючвы березового насаждения в окрестною ях пос.Краснообск Новосибирской обл. и депонирован во Всесоюз ной коллекции микроорганизов Института биохимии и физиологии микроорганизмов АН СССР под номером ВКМ F - 3062 Д.

Штамм имеет следующие культуральноморфологические и физиолого-биохимические признаки. На сусло-arape образует колонии, имеющие белый, ватообразный мицелий, плотность которого по поверхности колонии неравномерна вследствие образования небольших впадин. Обратная сторона колоний коричневого или светлокоричневого цвета.

Конидиеносцы простые, с 1 - 2 узлами на вершине. Конидии размером 27,2 х 15,1 мкм, удлиненно грушевидные, двухклеточные, собраны в головки по шесть и более

1688818 А1 конидий. Ловчие органы в виде петель, колец и их сплетений могут образовываться спонтанно на питательной среде. Присутствие нематод стимулирует массовое образование колец. В табл.1 представлены данные по скорости роста штамма BKMF - 3062 Д на разных средах при температуре 20°С.

Отношение к источникам углерода. Штамм использует различные вещества и субстраты: моносахара (глюкоза, арабиноза), дисахара (лактоза, мальтоза, сахароза), трехатомный спирт (глицерин), многоатомные спирты (маннит, дульцит, инозит, сорбит, рамноза), полисахарозы (крахмал), жиры (растительное масло, рыбий жир, олеиновая кислота). Лучший рост отмечается в присутствии глюкозы, сахарозы, глицерина, крахмала, а также комплексных источников углерода (пивное сусло, меласса).

Отношение к источникам азота. Штамм использует почти все аминокислоты: аланин, валин норлейдин, лейцин, серин, аргинин, лизин, орнитин, аспарагин, глутамин, фенилаланин, гистидин, триптофан, метионин, цистеин. Аланин, аспараг-ин, метионин и триптофан стимулируют наибольший выход биомассы гриба, а норлейцин образование ловчих петель. Штамм способен использовать азот из неорганических источников - азотнокислого и хлористого аммония. Кукурузный экстракт, включающий комплекс азотсодержащих соединений, является наилучшим источником азота для этого гриба. Для выращивания гриба в поверхностной культуре можно использовать сусло-агар, пептонно-кукурузный агар и др. Оптимальная температура для культивирования штамма 25 - 26°С, минимальная 5 - 6°С, максимальная 29 - 30°С.

Штамм BKMF - 3062 Д маркерных признаков не имеет. Хранится штамм на агаризованной среде (ПКА и СА) в пробирках при температуре 4 - 5°С в течение года.. Для контроля за состоянием популяции проводится микроскопический контроль культуры за наличие ловчих приспособлений. Для этого при малом увеличении микроскопа просматривают препараты,полученные путем захвата культуры в разных местах колонии ' микробиологической иглой над пламенем спиртовки.

Для стабилизации свойств штамма 1-2 раза в год проводится моноконидиальный рассев, при котором из отвитых изолятов (не менее 100) производится отбор культур не только с характерными морфологическими признаками, но и с количеством ловушек не менее 10 в поле зрения микроскопа при увеличении 90^х. Штамм характеризуется стабильностью нематофаговых свойств.

Пример 1. Получают препарат против галловых нематод. Исходная культура воспроизводится на дозированном скошенном сусло-агаре (3,5° Бел.) в молочных бутылках в течение 7-10 сут при температуре, оптимальной для используемого штамма. В конце роста культуры выставляют на рассеянный солнечный свет, стимулирующий соотношение, после чего их можно хранить до 6 мес. в холодильнике и периодически использовать в качестве инокулюма для получения маточных культур.

Маточную культуру выращивают глубинным способом в колбах Эрленмейера на круговых качалках, делающих 220 об/мин, или в ферментерах на жидкой среде следующего состава, г: кукурузный экстракт 0,75; меласса свекловичная 3,0; КН2НО4 0,5; MgSOa · 7FI2O 0,2; NaN03 - 0,5, вода водопроводная 1000 мл, pH среды доводят до 7,0.

Культуральные емкости засевают спорово-мицелиальной суспензией, для получения которой в каждую молочную бутылку с исходной культурой гриба добавляют 100 мл стерильной воды, после чего бутылку энергично встряхивают, а суспензию используют по назначению. Соотношение объемов суспензии и культуральной среды равно 1:10 - 1:20.

Ферментацию маточной культуры осуществляют в течение 3 сут. Выход биомассы по сухому веществу составляет 12 - 15 г/л. Для производства биопрепарата подсолнечную лузгу, помещенную на сетку, промывают струей проточной воды. После ее стекания в течение 2 ч влажность субстрата становится равной 55 - 60%.

Лузгу распределяют по различным емкостям (стеклянные банки объемом 1 - 3 л), заполняя их на 2/3 объема. Банки закрывают ватно-марлевыми пробками и стерилизуют в течение 1 ч при 1 атм. Посев глубинной (маточнои)культуры на подготовленный субстрат проводят стерильно по 10 - 20 мл в банки емкостью 1 л и по 50 мл в трехлитровые банки. Затем банки тщательно встряхивают и помещают в горизонтальное положение в термостат при 25 - 28°С на 10 12 дней. В последние два дня их выставляют на солнечный свет.

Сушат биопрепарат при температуре не более 30°С, хранят его в бумажных мешках при температуре 24 - 18°С в течение .6 мес. Полученный биопрепарат представляет собой субстрат (подсолнечную лузгу), частицы которого покрыты спорами и мицелием гриба. Основой препарата являются конидии и мицелий хищных грибов в виде Arthrobotrys -Cligospora Fres. В 1 кг препарата содержит16':‘38 18 (5 ся не менее 2 - 5x10⁶ жизнеспособных конидий и 98% субстрата. Биопрепарат, изготовленный описанным способом, рекомендуется против галловых нематод, поражающих овощные культуры в защищенном грунте.

П р и м е р 2. Применение препарата в лабораторных условиях. Аттрактивная способность, являющаяся составной частью механизма хищничества нематофаговых грибов, у данного штамма проявляется значительно сильнее, чем у штамма BKMF 2461 Д. В лабораторном эксперименте на аттрактивный и нематофаговый эффект использовали культуры сравниваемых штаммов, выращенные на агаризованной питательной среде (сусло-агар, пептоннокукурузный агар). В чашечки Петри диаметром 30 мм вносили суспензию нематод Panagrellus redivivus G. В центр чашечки помещали высечки культур грибов диаметром 3 мм. При помощи стереоскопического микроскопа проводили наблюдения за перемещением нематод в блок культур гриба и через 2 ч проводили их подсчет (см. табл.2).

В лабораторных условиях гибель нематод у штамма BKMF - 3062 Д наступает быстрее, 100%-ная гибель в указанном эксперименте наблюдалась через 1 сут, а у штамма BKMF - 2461 Д - через 2 сут. Данные электронно-микроскопического исследования свидетельствуют о присутствии мицелия штамма BKMF - 3062 Д в теле нематод уже через 12 ч.

Предлагаемый штамм BKMF - 3062 Д характеризуется большей стабильностью и активностью свойств по сравнению со штаммом BKMF - 2461 Д.

При работе со штаммом BKF - 2471 Д обнаружено появление в колониях секторов и пятен, в то время как морфология колоний предлагаемого штамма с момента выделения из природы при пересевах остается постоянной.

Проведение цитокариологического анализа в процессе онтогенетического развития этих штаммов с помощью окраски НСГимза показало, что базальные клетки конидиеносцев и конидий штамма BKMF - 2461 Д преимущественно многоядерны, а ядра различаются по форме и величине, а между клетками конидиеносцев и гифами мицелия обнаружено наличие анастомозов. D отличие дт этого у штамма BKMF-3062 В преобладает одноядерность базальных клеток конидиеносцев и конидий, не обнаружены анастомозы между клетками конидий и гифами мицелия. Эти данные вскрывают причину нестабильности штамма BKMF - 2461

Д. которая заключается з гетсрпкарион1чно· сти базальных клеток конидиеносцев и конидий.

В отличие от предлагаемого штамма BKMF 3062 Д, который обладает природными свойствами активности и стабильности, штамм BKMF -2461 D получен многоступенчатым моноконидиальным отбором и является по сути искусственным штаммом, который сохраняется без изменения 5 лет.

Для успешного применения хищных грибов в качестве продуцентов биопрепарата для борьбы с галловыми нематодами необходимо изучение их свойств не только έ лабораторных условиях, но и в почве, т.е. в условиях практического использования штаммов.

Для изучения поведения предлагаемого штамма и известного в почве использовали метод мембранных камер, суть которого состоит в том, что на миллипоровые фильтры наносится суспензия спор исследуемых штаммов грибов, фильтры закладываются в камеры (из стеклоткани) и помещаются в почву, В динамике (после фиксации и окрашивания фильтров карболовым эритрозином) проводится подсчет на фильтрах ло-. вушек хищных грибов и формирующихся в почве хламидоспор. Данные представлены в табл.З.

Как видно из табл.З, в почве к 14-м сут у штамма BKMF - 3062 Д число ловушек в шесть с лишним раз превышает таковое у штамма BKMF - 2461 Д, а резкое возрастание к концу месяца числа хламидоспор свидетельствует о лучшей адаптации предлагаемого штамма к условиям почвы и приживаемости в ней.

ПримерЗ. Применение препарата в полевых условиях. Эффективность препарата на основе штамма BKMF - 3062 Д была подтверждена в условиях производственного опыта в теплице на растениях огурца сорта Эстафета - 87, Опыт был заложен 18 февраля 1988 г. и продолжался до 29 сентября того же года. Воздушно-сухой препарат на подсолнечной лузге на основе штаммов BKMF - 2461 Д и BKMF - 3062 Д вносили в дозе 50 г на 1 кв.м. Варианты опыта: биопрепарат на основе штамма BKMF - 2461 Д; биопрепарат на основе штамма BKMF 3062 Д; контроль (чистый): контроль (применение нематоцида гетерофоса).

После окончания опыта проведен анализ корневой системы растений на наличие галлов по пятибалльной шкале и проведен подсчет численности нематод в почве. Данные представлены в табл.4 и 5.

Как видно из табл.2 и 3, биопрепарат на основе штамма BKMF-3062 D оказался болееактив1688818 ным в уничтожении нематод. Снижение численности нематод в почве по отношению к чистому контролю составило у биопрепарата на основе штамма BKMF - 2461 Д 59,4%, на основе штамма BKMF - 3062 Д - 86,2%, По отношению к контролю с гетерофосом соответственно 46,5% и 81,9%. Таким образом, предлагаемый штамм превосходит известный на 27 - 35% по способности уничтожать личинок нематод в почве.

Claims (3)

1

(21)4634132/13

(22) 30.06.88

(46)07 11.91. №41

(71)Всесоюзный научно-исследовательский институт охраны природы и заповедного дё- лч Госагропрома СССР, Всесоюзный научно исследовательский институт молекул рной биологии Научно-производственного объединени  Вектор и Всесоюзный научно-исследовательский институт био- мегодов защиты растений ВАСХНИЛ

(72)Т.В.Телл кова. Н.В.Мацкевич. Г.Л.Шатрова и Л.Н.Налепича

(53)632.951 (088.8)

(56) Авторское свидетельство СССР № 1264393, кл. А 01 N 63/00,1983.

(54)ШТАММ ГРИБА ARTHROB OTRYS OLIGOSPORA FRES. ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ ПРЕПАРАТА ПРОТИВ ГАЛЛОВЫХ НЕМАТОД

(57) Изобретение относитс  к микробиологической промышленности, в частности к получению биологических средств дл  борьбы с гзлловыми нематодами, и представл ет собой новый штамм дл  получени  вышеуказанного средства. Целью изобретени   вл етс  получение нового штамма немато- фзгового хищного гриба вида Arthrobotrys oiigocpora Fres., обладающего более высокой активностью в привлечении и уничтожении гзллооых нематод и стабильностью. Использование препарата позвол ет снизить численность нематод в почве на 27 - 35% по сравнению с препаратом, полученным нэ основе известного штамма. 5 табл.

Изобретение относитс  к микробиологической промышленности, в частности к получению биологических средств дл  борьбы с галловыми нематодами, и представл ет собой новый штамм дл  вышеуказанного средства.

Целью изобретени   вл етс  получение нового штамма нематофагового хищного гриба вида Arthrobotrys oligospora Fras., обладающего более высокой активностью в привлечении и уничтожении галловых нематод и стабильностью.

Штамм гриба Arthrobotrys oligospora Fres. выделен из почвы березового насаждени  в окрестное  х пос.Краснообск Новосибирской обл и депонирован во Всесоюзной коллекции микроорганизоа Института биохимии и физиологии микроорганизмов АН СССР под номером ВКМ F - 3062 Д.

Штамм имеет следующие культурально- морфологические и физиолого-биохимиче- ские признаки. На сусло-агаре образует колонии, имеющие белый, ватообразный мицелий, плотность которого по поверхности колонии неравномерна вследствие образовани  небольших впадин. Обратна  сторона колоний коричневого или светло- коричневого цвета.

Конидиеносцы простые, с 1 - 2 узлами на вершине. Конидии размером 27,2 х 15,1 мкм, удлиненно грушевидные, двухкле- точные, собраны в головки по шесть и более

О 00

00 00

00

конидий. Ловчие органы в виде петель, колец и их сплетений могут образовыватьс  спонтанно на пиичтельной среде. Присутствие нематод стимулирует массовое образование колец. В табл.1 представлены данные по скорости роста штамма BKMF - 3062 Д на разных средах при температуре 20°С.

Отношение к источникам углерода. Штамм испольгуег различные вещества и субстраты: моносахара (глюкоза, арабино- за), дисахара (лактоза, мальтоза, сахароза), трехатомный спирт (глицерин), многоатомные спирты (маннит, дульцит, инозит, сорбит , рамноза), полисахарозы (крахмал), жиры (растительное масло, рыбий жир, оле- инова  кислота). Лучший рост отмечаетс  в присутствии глюкозы, сахарозы, глицерина. крахмала, а также комплексных источников углерода (пивное сусло, меласса).

Отношение к источникам азота. Штамм использует почти все аминокислоты: ала- нин, валин норлейдин, лейцин, серии, аргинин, лизин, орнитин, аспарагин, глута- мин, фени аланин, гистидин, триптофан, метионин, цистеин. Алании, аспараг-ин, ме тионин и триптофан стимулируют наиболь- выход биомассы гриба, а норлейцин - образование ловчих петель. Штамм способен использовать азот из неорганических источников - азотнокислого и хлористого аммони . Кукурузный экстракт, включающий комплекс азотсодержащих соединений ,  вл етс  наилучшим источником азота дл  этого гриба. Дл  выращивани  гриба в поверхностной культуре можно использовать сусло-агар, иептонно-кукурузный агар и др. Оптимальна  температура дл  культивировани  штамма 25 - 26°С, минимальна  5 - 6°С, максимальна  29 - 30°С.

Штамм BKMF - 3062 Д маркерных признаков не имеет. Хранитс  штамм на агари- зованной среде (ПКА и СА) в пробирках при температуре 4 - 5°С в течение года. Дл  контрол  за состо нием попул ции проводитс  микроскопический контроль культуры за наличие ловчих приспособлений. Дл  этого при малом увеличении микроскопа просматривают препараты,полученные путем захвата культуры в разных местах колонии микробиологической иглой над пламенем спиртовки.

Дл  стабилизации свойств штамма 1-2 раза в год проводитс  моноконидиальный рассев, при котором из отвитых изол тов (не менее 100) производитс  отбор культур не только с характерными морфологическими признаками, но и с количеством ловушек не менее 10 в поле зрени  микроскопа при увеличении 90х. Штамм характеризуетс  стабильностью нематофаговых свойств.

Пример 1. Получают препарат против галловых нематод. Исходна  культура воспроизводитс  на дозированном скошенном сусло-агаре (3,5° Бел.) в молочных бутылках

в течение 7-10 сут при температуре, оптимальной дл  используемого штамма. В конце роста культуры выставл ют на рассе нный солнечный свет, стимулирующий соотношение , после чего их можно хранить до

0 6 мес. в холодильнике и периодически использовать в качестве инокулюма дл  получени  маточных культур,

Маточную культуру выращивают глубинным способом в колбах Эрленмейера на

5 круговых качалках, делающих 220 об/мин, или в ферментерах на жидкой среде следующего состава, г: кукурузный экстракт 0,75; меласса свекловична  3,0; КНаНОз 0,5; MgSOd 7Ы20 0,2; NaNOa - 0,5, вода водопроводна  1000 мл, рН среды довод т до

0 7,0.

Культуральные емкости засевают спо- рово-мицелиальной суспензией, дл  получени  которой в каждую молочную бутылку с исходной культурой гриба добавл ют

5 100 мл стерильной воды, после чего бутылку энергично встр хивают, а суспензию используют по назначению. Соотношение объемов суспензии и культуральной среды равно 1:10- 1:20.

0 Ферментацию маточной культуры осуществл ют в течение 3 сут. Выход биомассы по сухому веществу составл ет 12-15 г/л. Дл  производства биопрепарата подсолнечную лузгу, помещенную на сетку, промы5 вают струей проточной воды. После ее стекани  в течение 2 ч влажность субстрата становитс  равной 55 - 60%.

Лузгу распредел ют по различным емкост м (стекл нные банки объемом 1 - 3 л),

0 заполн   их на 2/3 объема. Банки закрывают ватно-марлевыми пробками и стерилизуют в течение 1 ч при 1 атм. Посев глубинной (маточной)культуры на подготовленный субстрат провод т стерильно по 10 - 20 мл в

5 банки емкостью 1 л и по 50 мл в трехлитровые банки. Затем банки тщательно встр хивают и помещают в горизонтальное положение в термостат при 25 - 28°С на 10 - 12 дней. В последние два дн  их выставл ют

0 на солнечный свет.

Сушат биопрепарат при температуре не более 30°С, хран т его в бумажных мешках при температуре 24 - 18°С в течение 6 мес. Полученный биопрепарат представл ет со5 бой субстрат (подсолнечную лузгу), частицы которого покрыты спорами и мицелием гриба . Основой препарата  вл ютс  конидии и мицелий хищных грибов в виде Arthrobotrys oligospora Fres. В 1 кг препарата содержитс  не менее 2 - 5x10 жизнеспособных конидий и 98% субстрата. Биопрепарат, изготовленный описанным способом, рекомендуемс  против галловых нематод, поражакнчих овощные культуры в защищенном грунте.

П р и м е р

2. Применение препарата в лабораторных услови х, Аттрактивна  способность ,  вл юща с  составной частью механизма хищничества нематофаговых грибов, у данного штамма про вл етс  значительно сильнее, чем у штамма BKMF - 2461 Д. В лабораторном эксперименте на аттрактивный и нематофаговый эффект использовали культуры сравниваемых штаммов , выращенные на агаризованной питательной среде (сусло-агао пептонно- кукурузный агар) В чашечки Петри диаметром 30 мм вносили суспензию нематод Panagrelius redivr us G. В центр чашечки помещали высечки культур грибов диаметром 3 мм. При помощи стереоскопического микроскопа проводили наблюдени  за перемещением нематод в блок культур гриба и через 2 ч проводили их подсчет (см. табл.2),

В лабораторных услови х гибель нематод у штамма BKMF - 3062 Д наступает быстрее, 100%-на  гибель в указанном эксперименте наблюдалась через 1 сут, а у штамма BKMF-2 61 Д-через2 сут. Данные электронно-микроскопического исследовани  свидетельствуют о присутствии мицели  штамма BKMF - 3062 Д в теле нематод уже через 12 ч.

Предлагаемый шгамм BKMF - 3062 Д характеризуетс  большей стабильностью и активностью свойств по сравнению со штаммом BKMF - 2461 Д.

При работе со штаммом BKF - 2471 Д обнаружено по вление в колони х секторов и п тен, в то врем  как морфологи  колоний предлагаемого штамма с момента выделени  из природы при пересевах остаетс  посто нной .

Проведение цитокариологического анализа в процессе онтогенетического развити  этих штаммов с помощью окраски НС- Гимза показало, что базальные клетки кони- диеносцев и конидий штамма BKMF - 2461 Д преимущественно много дерны, а  дра различаютс  по форме и величине, а между клетками конидиеносцев и гифами мицели  обнаружено наличие анастомозов. D отличие JDT этого у штамма BKMF - 3062 В преобладает одно дерность базальных клеток конидиеносцев и конидий, не обнаружены анастомозы между клетками конидий и гифами мицели . Эти данные вскрывают причину нестабильности штамма BKMF - 2461

Д. плорач заключаетсп л ютг р ариошч П) сти 6азал1 шх клеток ШНИДИРИОСЦСР и конидий .

В отличие от предлагаемого штамма BKMF 3062 Д, который обладает природнм- ми свойствами активности и стабильности, штамм BKMF-2461 D получен многоступенчатым моноконидиэльным отбором и  вл етс  по сути искусственным штаммом, который сохран етс  без изменени  5 лет.

0Дл  успешного применени  хищных

грибов в качестве продуцентов биопрепарата дл  борьбы с галловыми нрматодами необходимо изучение их свойств не только в лабораторных услови х, но и в почве, т.е. в

5 услови х практического использовани  штаммов.

Дл  изучени  поведени  предлагаемого штамма и известного в почве использовали метод мембранных камер, суть которого со0 стоит в том, что на миллипоровые фильтры наноситс  суспензи  спор исследуемых штаммов грибов, фильтры закладываютс  а камеры (из стеклоткани) и помещаютс  в почву, В динамике (после фиксации и

5 окрашивани  фильтров карболовым эритро- зином) проводитс  подсчет на фильтрах ло-. вушек хищных грибов и формирующихс  в почве хламидоспор. Данные представлены в табл.3.

0Как видно из табл.3, в почве к 14-м сут

у штамма BKMF - 3062 Д число ловушек в шесть с лишним раз превышает таковое у штамма BKMF - 2461 Д, а резкое возрастание к концу мес ца числа хламидоспор сви5 детельствует о лучшей адаптации предлагаемого штамма к услови м почвы и приживаемости в ней.

П р и м е р

3. Применение препарата в полевых услови х. Эффективность препара0 та на основе штамма BKMF - 3062 Д была подтверждена в услови х производственного опыта в теплице на растени х огурца сорта Эстафета - 87, Опыт был заложен. 18 феврал  1988 г. и продолжалс  до 29 сент б5 р  того же года. Воздушно-сухой препарат на подсолнечной лузге на основе штаммов BKMF - 2461 Д и BKMF - 3062 Д вносили в дозе 50 г на 1 кв.м. Варианты опыта: биопрепарат на основе штамма BKMF - 2461 Д;

0 биопрепарат на основе штамма BKMF - 3062 Д; контроль (чистый); контроль (применение нематоцида гетерофоса).

После окончани  опыта проведен анализ корневой системы растений на наличие

5 галлов по п тибалльной шкале и проведен подсчет численности нематод в почве. Данные представлены в табл.4 и 5.

Как видно из табл.2 и 3, биопрепарат на основе штамма BKMF-3062 D оказалс  болееактивным в уничтожении нематод. Снижение численности нематод в почве по отношению к чистому контролю составило у биопрепарата на основе штамма BKMF - 2461 Д 59,4%, на основе штамма BKMF - 3062 Д - 86,2%. По отношению к контролю с гетерофосом соответственно 46,5% и 81,9%. Таким образом , предлагаемый штамм превосходит изримечание . СА - сусло-агар (5 Бел); ПКА - пептонно-кукурузный агар, г/л: глюкоза Ю; хлористый натрий 5; углекислый кальций 0,5; кукурузный экстракт 5; пептон 5; агар- агар 2(1; Ч - среда Чапека, г/л: сахароза 30,азотнокислый натрий 2; сернокислый магний 0,5; сернокислое железо 0,01; хлористый калий 0,5; .калий фосфорнокислый одноза- мещенный 1; агар-агар 20.

Таблица2

Штамм

Процент нематод в блоке культур гриба

вестный на 27 - 35% по способности уничтожать личинок нематод в почве.

Формула изобретени  Штамм гриба Arthrobotrys ollgospora Fres.BKMF - 3062 Д дл  получени  препарата против галловых нематод.

Таблица 1

ТаблицаЗ

Биопрепарат на основе штамма BKMF-2461 Д Биопрепарат на основе штамма BKMF-J062 Д Контроль (чистый) Контроль (с гетеро- фосом)

Т а б л и ц с) 4

38,6

3,7 43,1

42,4

Т а б л и ц а 5