SU1091065A1

SU1091065A1 - Способ определени активности липазы

Info

Publication number: SU1091065A1
Application number: SU813289452A
Authority: SU
Inventors: Анатолий Сергеевич Логинов; Кима Юлиановна Асташенкова; Зинаида Семеновна Исакова
Original assignee: Центральный научно-исследовательский институт гастроэнтерологии
Priority date: 1981-05-21
Filing date: 1981-05-21
Publication date: 1984-05-07

Abstract

СПОСОБ ОПРЕДЕЛКНИЯ АКТИВНОСТИ ЛИПАЗЫ путем добавлени к исследуемой пробе субстрата, инкубации смеси в присутствии индикатора с последующим определением продуктов гидролиза субстрата, отличающийс тем, что, с целью повышени точности и ускорени определени к исследуемой пробе одновременно добавл ют в качестве субстрата О,1 .0,2 мл трибутирина и в качестве индикатора феноловый красный в буферном растворе с рН 8,4-8,5, инкубацию реакционной смеси провод т в течение 30-60 мин, а продукты гидролиза субстрата определ ют колориметрически.

Description

Изобретение относитс к медицине а именно к клинической биохимии. Известен способ определени актив ности липазы, основанный на определе нии в сыворотке крови продуктов гидр лиза субстрата липазы специфическими цветными реакци ми С З .Однако способ трудоемок и требует дорогосто щих реактивов. Известен также способ определени активности липазы путем добавлени к исследуемой пробе субстрата липазы , инкубации смеси и введени в нее индикатора с последующим определением продуктов гидролиза г убстрата С2 Однако метод недостаточно точен, поскольку результат оцениваетс титрометрически субъективно и длителен . Кроме того, способ применим только дл определени активности липазы в сыворотке крови. Цель изобретени - повышение точности и ускорени определени . Указанна цель достигаетс тем, .что согласно способу определени активности липазы путем добавлени к исследуемой пробе субстрата, инкубации смеси в присутствии индикатора с последующим определением продуктов гидролиза субстрата, при котором к исследуемой пробе одновременно добавл ют в качестве субстрата 0,1- 0,2 мл трибутирина и в качестве инди катора феноловый красный в буферном растворе с рН 8,4-8,5, инкубацию реакционной смеси провод т в течение 30-60 мин, а продукты гидролиза субстрата определ ют колориметрически. Способ осуществл ют следующим образом. Берут в орошенную антикоагул нтом микропипетку цельную капилл рную кровь и внос т в изотонический физио логич.еский раствор, центрифугируют. Инкубируют 0,1 мл центрифугата с буфером (рН 8,4-8,5), подкрашенным феноловым красным и с субстратом трибутирином (0,1-0,2 мл). После пре кращени инкубации колориметрируют на фотоэлектроколориметре при зеленом светофильтре против воды. Центрифугат добавл ют в контрольную пробу после инкубации. По изменению цвета реакционной ср ды по сравнению с контролем суд т о количестве липазы. Пример 1. В центрифуражную пробирку внос т 0,2 мл 0 9%-ного ,хлористого натри и 0,2 мл капнлл рной крови, вз той из пальца в микропипетку , окращенную антикоагул нтом. Смесь центрифугируют. В две пробирки (опытную и контрольную ) разливают по 2 мл буфера, подкрашенного индикатором. В каждую из этих пробирок добавл ют по 0,2мл трибутирина. В опытную пробу внос т О,1 мл центрифугата, слабый гемолиз супернатанта практически не вли ет на результаты анализа. Обе пробирки (опыт и контроль) помещают в вод ную баню при на 1 ч. После инкубации пробы охлаждают. В контроль добавл ют 0,1 мл центрифугата. Затем и в опыт, и в контроль приливают по 3 мл заранее охлажденной дистиллированной воды. Обе пробы центрифугируют 5 мин при 2000 об/мин. Надосадочную жидкость осторожно отсасывают в кювету и колориметрируют йротив дистиплированной HjO при 536 нм в кюветах толщиной 10 мм. По разнице экстинкций контрольной и опытной проб рассчитывают-количество липазы в образце крови по формуле: ljei.Ee54-2o K-t.i.5a 100,, ЕКЕ где EJJ - экстинкци опыта-, . Ец - экстинкци контрол , 5 - коэффициент пересчета на 1 мл. трибутирина, 0,2 мл трибутирина ввод т в пробу 0,2-5 1 мл; 20 - коэффициент пересчета на 1 мл крови (расходуетс 0,1 мл центрифугата, содержащего разведенную в 2 раза кровь), поэтому 0,05 мл X X 20 1 мл.. Реактивы 1.Вероналовый буфер рН 8,5: 1,545 г мединала (веронала натри ) раствор ют в 500 мл воды, добавл ют 9 МП 0,1 н. НС1 и 150 мл 0,01%-ного раствора фенолового красного. ДоВоб т рН до 8,5. Объем буфера доливают водой до 1л. (Хранить в холодильнике. Пригоден в течение 1 мес). .Раствор индикатрраг 100 мг фенолового красного раствор ют в 5,7 мл 0,06 H.NaOH,После полного растворени объем индикатора довод т водой до 25 мл. Получшот 0,4%-ный раствор. Из него готов т 0,01%-ньй раствор (9 мл 0,4%-ного индикатора довод т до 200 мл HjO).

310910654

Пример 2. Больной А. Актив-поджелудочной железы и при дальнейность липазы в крови, определ ема шем обследовании у больного обнарупредлагаемым способом, составилажен панкреатит.

с 1 .20 . 100 20 Предлагаемый способ позвол ет проЁf 0,5 5водить точное определение активности

Полученные данные свидетельствуютлипазы в цельной капилл рной крови

о нормальной функции поджелудочнойза 1 ч, малотравматичен, ife требует

железы.дорогосто щих реактивов, что необхоПример 3. Больной В. Актив-димо в клинической практике дл исность липазы составила 75,5 ед, что jgследовани состо ни подаселудочной .

свидетельствовало о нарушении функциижелезы.

Claims

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ ЛИПАЗЫ путем добавления к исследуемой пробе субстрата, инкубации смеси в присутствии индикатора с последующим определением продуктов гидролиза субстрата, отличающийс я тем, что, с целью повышения точности и ускорения определения к исследуемой пробе одновременно добавляют в качестве субстрата 0,1 0,2 мл трибутирина и в качестве индикатора феноловый красный в буферном растворе с pH 8,4-8,5, инкубацию реакционной смеси проводят в течение 30-60 мин, а продукты гидролиза субстрата определяют колориметрически. S v ω с