SK48893A3 - Using of protrombine fragments - Google Patents

Using of protrombine fragments Download PDF

Info

Publication number
SK48893A3
SK48893A3 SK488-93A SK48893A SK48893A3 SK 48893 A3 SK48893 A3 SK 48893A3 SK 48893 A SK48893 A SK 48893A SK 48893 A3 SK48893 A3 SK 48893A3
Authority
SK
Slovakia
Prior art keywords
thrombin
activity
fragments
prothrombin fragments
meisotrombin
Prior art date
Application number
SK488-93A
Other languages
English (en)
Inventor
Hartmut Lang
Berta Moritz
Original Assignee
Immuno Ag
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Immuno Ag filed Critical Immuno Ag
Publication of SK48893A3 publication Critical patent/SK48893A3/sk

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/56—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving blood clotting factors, e.g. involving thrombin, thromboplastin, fibrinogen
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/86—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving blood coagulating time or factors, or their receptors
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/90—Enzymes; Proenzymes
    • G01N2333/914—Hydrolases (3)
    • G01N2333/948—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
    • G01N2333/974—Thrombin
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
    • Y10S435/81—Packaged device or kit
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
    • Y10S436/807—Apparatus included in process claim, e.g. physical support structures
    • Y10S436/808—Automated or kit
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
    • Y10T436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
    • Y10T436/10—Composition for standardization, calibration, simulation, stabilization, preparation or preservation; processes of use in preparation for chemical testing
    • Y10T436/106664—Blood serum or blood plasma standard or control
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
    • Y10T436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
    • Y10T436/10—Composition for standardization, calibration, simulation, stabilization, preparation or preservation; processes of use in preparation for chemical testing
    • Y10T436/108331—Preservative, buffer, anticoagulant or diluent

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)
  • Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Description

Oblast techniky
Vynález sa týka nového použitia protrombínových fragmentov, najmä meizotrombínu, meizotrombínu(desFl) alebo ich zmesí.
J, (
x.
Doterajší stav techniky
Stanovenie trombínových substrátov aktiváciou pomocou trombínu predstavuje dôležitú metodiku pre charakterizáciu produktov z krvi a plazmy. Napríklad sa stanovia koncentrácie alebo aktivity fibrinogénu, faktora V, faktora VIII alebo proteínu C prostredníctvom aktivácie trombínom štandardným spôsobom v plazmu obsahujúcich vzorkách.
Trombín je 36 kD protein, ktorý hrá ústrednú úlohu v kaskáde krvného zrážania. pretože jeho hlavnou funkciou je premena fibrinogénu na fibríny ktorý vytvára za pomoci poprípade trombinom aktivovaného faktora XIII fibrínovú siet.
Okrem toho trombín aktivuje taktiež krvné faktory ako faktor* V, faktor VIII a protein C a spôsobuje agregáciu trombocytov. Rad iných proteínov, ako fibronektín. trombospondín a apolipoproteín, rožné koJagény, laminín atď. (viď tabuľka 1. Stoč ker. Sem. Thr, lli.-iit 17 (2) str. 114 (1991), môžu byt takisto štlepené trombínomľ Takéto proteíny sú v ďalšom opise označované ako trombínové substráty). · ' áí S?
>;í ' ýl
Ϊ
A a;
k &
/Ír * •'.'.ť 'C .
f' T ’·- ý“· ‘ frŕíWÁ-V· πΗϊ·
Na základe svojho dôležitého postavenia v kaskáde zrážania krvi sa účinnost trombínu in vivo veľmi presne reguluje efektoŕmi alebo inhibítormi aktivity.
Avšak predovšetkým inhibítory sú pri stanovení trombínových substrátov rušivé. pretože inhibítory skresľujú výsledky vo vzorke alebo sa pred stanovením musí pridať oveľa väčšie, prebytkové množstvo trombínu. aby uvedené inhibítory prekryl.
Dôležitým inhibítorom trombínu je napríklad heparín spolu s antitrombinom III- Heparín je obsiahnutý prakticky vo všetkých vzorkách. ak sa odobraná krv bezprostredne po odbere heparinizuje, aby sa zabránilo predčasnému zrážaniu. . t.j. zmieša , sa s heparínom alebo ak pacientovi bol podávaný heparín napr. pre antikoagulačnú terapiu.
Vlastným trombín inhibujúclm činidlom je antitrorabín III. Heparín potencuje účinok antitrombínu III.
U vzoriek krvi alebo plazmy. obsahujúcich heparín. je vždy tiež nebezpečenstvo. že sa získajú skreslené výsledky pri , stanovení koncentrácie trombínu. aktivácie trombínového substrátu alebo kinetiky, pokiaľ tieto neboli nákladnou cestou zbavené , heparínu alebo nebol heparín neutrál izovaný.
Je preto nutný stupeň ďalšieho spracovania. čo je málo' výhodné pre diagnostické spôsoby, ktoré by pre rutinné<
vykonávanie mali byt čo najjednoduchšie. Každý ďalší stupeň spracovania znamená nielen vyššie pracovné náklady. ale je tiež zdrojom chýb pri stanovení.
Trombín sa v krvi tvorí z neaktívneho proteínu. protrombínu, vo viacerých stupňoch. až do zrelého enzýmu. Zrelý enzým je tvorený dvoma reťazcami (Λ- a B- reťazec). ktoré sú vzájomne spojené disulfidovým mostíkom.
Meizotroinbín alebo meizotrorabín(desFl) sú také protrombíriové fragmenty. ktoré vznikajú neúplnou aktiváciou protrombínu na trombín (viď. obr. 1. Doyle a spol.. J. Biol. Chem. 255 (18),
10693 - 10701 (1990). MeizotrombínídesFl) vzniká aktiváciou , protrombínu za neprítomnosti inhibítora trombínu. Vzniká pritom
najprv meizotrombín, ktorý sa po odštiepení fragmentu F1 proteolyticky odbúra na meizotrombín<desFl). Molekulová hmotnosť sa tak redukuje z asi 72 kD na asi 48 kD. Tieto fragmenty sa považujú za nestabilné. pretože autokatalyticky degradujú, napr. meizotrombín sa rýchlo autokatalýzou premení na h - trombín. Meizotrombín a meizotrombín(desFl) môžu byt tiež vyrobené pôsobením ekarínu - hadieho jedu na protrombín.
Pokusy Doyla a spol. ukázali. že hovädzí meizotrombín na; rozdiel od protrombínu vykazuje proteázovú aktivitu, ktorá je v porovnaní s trombínom veľmi malá.
Meizotrombín je síce schopný malou rýchlosťou napr, štiepiť fibrinogén na fibrín alebo aktivovať proteín C, avšak neinhibuje sa heparínom, pretože inhibičný účinok o veľa rádov nižší (Stočker a MUlleŕ, Thrombosis and Haemostasis 65 (6), abstrakt 855 (1991). Ukázalo sa ale tiež. že ľudské protrombínové fragmenty sú podstatne menej stabilné ako napr. hovädzie.
Í
Je ale tiež známe, že niektoré hadie jedy štiepia trombínový substrát. Andersson (Haemostatis 1. 31 - 43 (1972)) opisuje Lhrombin 1 ike actlvity mnohých hadích jedov a vyjadruje ju analogicky k trombínu v' NIH jednotkách/ml. Použitie hadích jedov v rámci diagnostiky s ľudskými proteínmi má však nevýhodu nešpecifických vzájomných pôsóbení (intraspecles-interakcie). Je preto predovšetkým pri vývoji diagnostického spôsobu, pre stanovenie ľudských faktorov snaha použiť len cicavčie proteíny, výhodne ľudské proteíny. Podstatným predpokladom pre spôsob stanovenia je jednoznačná reakcia použitého proteínu.
Úlohou vynálezu je poskytnúť nové použitie protrombí nových fragmentov. pri vyvarovaní sa inhibítormi vyvolaných zdrojov chýb. Vynález tak musí umožniť jednoduchú a presnú metódu stanovenia trombínových substrátov.
’ ý ,
·. '*·, - ’· ' ;· 'V<
i':'’·-ι·;.'
„„ ·.- t· „ 4
Podstata vynálezu
Podstatou vynálezu je použitie protrombínových fragmentov, výhodne ľudských protromb í nových fragmetov s thrombin like activity, najmä meizotrombínu, meizotrombínuídesFl) alebo ich zmesi. pre diagnostické účely na stanovenie trombínového substrátu.
Zistilo sa. že tieto fragmenty môžu takisto štiepiť substráty, ktoré budú reagovať s trombínom. Thrombin liké activity tu znamená proteázovú aktivitu, ktorá umožní štiepenie trombínových substrátov Ich reakčná kinetika a reakčné parametre, ako pll-optimum a optimum iónovej sily, inhibítory, efektory, a 11. os téri cké vzájomné pôsobenie atď. sa ale nemusia nevyhnutne zhodovať s trombínovými.
Použitie podľa vynálezu má tú výhodu. že thrombin like activity“ menovaných substancií je na základe ich malej aktivity k ani. i trombínu III na rozdiel od trombínovej aktivity necitlivá k heparínu. Diagnostické stanovenie za použitia uvedených plazmových proteínov je tiež nezávislé na obsahu heparínu vo vzorke a je preto vykonateľné jednoduchým spôsobom.
Podľa vynálezu sa stanoví nielen trombínový substrát. ale tiež substancie. ktoré nejako vzájomne pôsobia na trombínové substráty aktivované podľa vynálezu.
Reagensy sa tiež môžu použiť na nepriame stanovenie faktorov kaskády zrážania aktivovanými trombínovými substrátmi. K faktoru VIII môže napríklad byť pridané činidlo a uskutočnená aktlvácia in situ. Tak je možno stanoviť faktor IX a ďalej faktor X.
Vynález sa tiež týka použitia protrombínových fragmentov, výhodne ľudských protrombínových fragmentov. s thrombin like activity, zmes í, k stanovením zvlášť meizotrobínú. meizotrombínuCdesFl) alebo iclí aktivácli trombínových substrátov s nasledujúcim plazmového proteínu, ktorý spolu s aktivovaným
S trombínovým substrátom na seba vzájomne pôsobí priamo alebo nepriamo.
Podľa vynálezu sa meizotrombín alebo meizotrombín(desFl), výhodne ľudský meizotrombín alebo meizotrombínídesFl), používajú jednotlivo alebo ako zmes. Tieto substancie môžu byt štandardným spôsobom nastavené pre použitie, napr. kontrolovaným štiepením, použitím hadích jedov atď.. pričom sa s prekvapením zistilo, že vykazujú stabilitu nutnú pre diagnostiku.
Taktiež génovou technológiou vyrobené proteíny, ktoré na základe svojej štruktúry vykazujú aktivitu podobnú trombínu a.v porovnaní s trombínora majú nižšiu afinitu k antitrômbínu III. sú vhodné pre použitie podľa vynálezu.
Vynález zahrnuje ďalej činidlo. obsahujúce protrombínové fragmenty. výhodne ľudský protrombínový fragment, s “thrombin 1 i ke activity“. najmä meizotrombín. meizotrombínfdesFl ) alebo ich zmesi, pre použitie na diagnostické účely na stanovenie trombínových substrátov a pre aktiváciu trombínových substrátov, s nasledujúcim stanovením plazmového proteínu, ktorý je vo vzájomnom pôsobení s trombínovým substrátom priamym alebo nepriamym spôsobom, napríklad proteínov kaskády zrážania ako faktora XA a faktora Va.
Činidlá. ktoré obsahujú uvedené protrombínové fragmenty či budú používané podľa vynálezu. sú poprípade lyof i 1 izované a obsahujú poprípade ďalší aktivovaný trombínový substrát pre použitie na diagnostické účely.
Vynález môže tiež obsahovať činidlo, ktoré ďalej obsahuje jeden alebo viacej plazmových proteínov. ktoré môžu byť aktivované. Ca+ - ióny a poprípade fosfolipidy, alebo činidlo, ktoré ďalej obsahuje detekčné činidlo.
' ·'1 i
Ďalej je možno vyrobiť testovaciu súpravu, ktorá popri
Λ D --i · -I.
uvedených reagenciách obsahuje ešte detekčné činidlo. *
Testovacia súprava obsahuje najmenej:
*- činidlo. obsahujúce protrombínové fragmenty s thrombin like activity. najmä meizotrombín. meizotrombín(desFl) alebo ich zmesi, alebo
- činidlo. obsahujúce protrombínové fragmenty s thrombin like activity. najmä meizotrombín, meizotrorabínídesFl) alebo ich zmesi, ktoré ďalej obsahuje jeden alebo viacej plazmových proteínov, ktoré môžu byt aktivované a
- detekčné činidlo, a môže výhodne ďalej obsahovaé
- tromi» í nový substrát.
Voľba detekčnej metódy a tým detekčného činidla sa prirodzené riadi charakterom stanovenej substancie vo vzorke. Napríklad sa bude stanovovať aktivita aktivovaného proteínu C s chromogenným substrátom S 2238 (fa Kabi): môže sa stanoviť doba zrážania alebo sa môžu použiť značené substancie.
Nasledujúcimi príkladmi je vynález ešte viac vysvetlený.
Príklady uskutočnenia vynálezu
1. Výroba meizotrombínu a rozdelenie molekulovej hmotnosti
1.1. Výroba imobi1izovaného ekarínu
Ekarín (fa Pentapharm) sa v koncentrácii 250 j/ml gélu naviaže na BrCNaktivovanú Sepharozu (fy Pharmacia) podľa metódy von Axena a spol. (1967).
1.2. Výroba meizotrombínu ml gélu sa inkubuje so 4 j protrombínu (z plazmy čistenej adsorbciou na DEÄE-Sephadexé a potom ďalším chromatografickým čistením) v 0.02M Na-acetátovom pufri, 0.15 M NaCl. pH 5,2i
G,
-ľ
'k
t fo hodinu pri teplote miestnosti. Potom sa produkt oddelí filtráciou od gélu.
1.3. Rozdelenie molekulovej hmotnosti
Podľa natívnej SDS-PAGE a imunoblottingu (1. protilátka: aňti-E. TI. polyklonálna z králikov: 2. protilátka:
peroxidáza-konjugovaná anti-králičia protilátka z kôz) sa stanoví rozdelenie molekulovej hmotnosti a prevedie sa kvantifikácia,' Produkt vykazuje nasledujúce rozdelenie molekulovej hmotnostiLhromhin 1 ike activity: 67 až 75 kD (31 %). 54 až 50 kD (40 .
Ďalej bolo nájdené- > .100 kD (7 %), 32 až 38 kD (13 *). < 20 kD (9 %').
Odkaz'- Axen R. Porath Ä.R.. Ernback J. S., Náture 214, 1392
- 1404, 1967.
2- Stanovenie fibrinogénu
2.1. Doba zrážania normálnej plazmy , -Ä· ml lyofi 1izovanej normálnej plazmy (odkaz Plazma 100 fa
-·»·!
Iinmuno) sa rozpustí v 1 ml vody s alebo bez prídavku heparínu (0: 0.3: 0,6: 1,0 a 2,0 j/ml). 200 ^<1 plazmy sa inkubuje 2 min.
pri 37 °C. Potom sa zrazenina rozpustí v 200 ^jl roztoku 5,8 NIH - analóg j/ml meizotrombínu. vyrobeného podľa :.1., alebo s 3,3 j/ml alebo 10,0 NIH - j/ml trorabínu (Throitibin Reagent, fa ; Immuno). Doba do tvorby chuchvalca sa merá koagulometrom Schni tger-Gross (f a flmelung). Z tabuľky 1 je zrejmé, že sä doba . ·· ’ zrážania pri použití trombínu predĺži, ak vzorka obsahuje / heparín. zatiaľ čo pôsobenie meizotrombínu je heparínom sotva \ V ovplyvnené. í .'.'ľ t,!': ·Λk,či »
,·1:
‘ti ,4.
Tabuľka .1.
doba zrážania (s) tr ónil;) í n ( NIH - j /m 1)
3.3
16.1
7.0 nie i zo trom b f n (NIH-analóg)
5.8
5.5 obsah
0.3
96.1
15.6 j/ml)
6.1
heparínu vo vzorke (j/ml)
0.6 1.0 2.0
>400 >400 >400
67.4 >400 >400
7.6 8.0 8.6
K.'·.
' !B {(ŕ rŕ:
:ť
2.2. Odberová krivka pre fibrinogén
Lyofi 1izovaná normálna plazma (viď 2.1.) sa rozpustí v 1 ml destilovanej vody s alebo bez prídavku rôznych trombínových inhibítorov (vždy 1 j/ml antitrombínu III. heparínu alebo antitrombíriu Ill/heparínového komplexu (AtheplexR, fa Immuno)) a rozdielne sa riedi 0.1 M fosfátovým pufrom (pH 7.5). Zmieša sa 100 ^il vzorky s 50 ^il toho istého pufra a inkubujú sa 2 min. pri 37 °C. Po prídavku 150 ^»1 roztoku 10,5 NIH-analóg j/ml meizotrombínu (fa Pentapharm) alebo 5 NIH-j/ml trombínu (Thrombin Reagent Fa. Immuno) sa stanoví doba zrážania analogicky ako v 2.1.
r· Pi
• v; {>«·-
doba zrážania s trombínom (s)
prísada inhibítora
vzorka žiadny inhib. Atheplex ATIII heparín
kone. 17.1 >300 >350 >300
1 : 2 21.6 61,6 >350 50.4
1 4 27.6 37,1 101.6 36.1
i -· 8 41,6 38,6 54,6 48,9
doba zrážania s trombínom (s)
prísada inhibítora
žiadny Atheplex ATIII heparín
vzorka inhib.
kone. 15,1 16,0 19.7 25,5
1 : 2 23.6 26.6 28,8 31.6
1 : 4 34.6 36,6 37,1. 39,1
1 = 8 56,1 57,6 54.0 60.6
A
3. Meizotrombín v diagnostiku ako aktivátor kaskády zrážania
Faktor VIII v normálnej plazme (viď. 2.1.) sa aktivuje po prídavku 0,1. 2, 5 alebo 10 j heparínu/ml meizotrombínom (0: 3 alebo 5 j/ml) vyrobeného podľa 1.. a nepriamo stanoví cez faktor Xa a chromogénny substrát. Použije sa preto Test Immunochrom FVIII : CR (IMMUNO AG) podľa návodu výrobcu, pričom sa k činidlu A pridá meizotrombín aGčinídlo B sa použije bez Polybrénu. Tento •t trombín. trombínu test obsahuje meizotrombínu a čím je možné priame porovnanie pre stanovenie aktivovaných faktorov
•zrážania v testovacom systéme- Nasledujúca tabuľka ukazuje. že v prítomnosti meizotrombínu je aktivácia a stanovenie faktora
VIII menej ovplyvňované obsahom heparínu v plazme.
heparín •ι
(j/rol) 0 1 2 5 10
meizotrombín
CNIH-analóg j/ml >
vývoj farby
0 100 99 95.6 80 52.1
3 100 99 97.4 87.8 73.3
5 100 100 98 92.2 80.1

Claims (7)

1. Použitie protrombínových fragmentov, najmä ľudských protrombínových fragmentov, s thrombin like activity, zvlášť ineizotrombínu, meizotrombínuCdesFl) alebo ich zmesí, pre diagnostické účely na stanovenie trombínových substrátov.
2. Použitie protrombínových fragmentov. výhodne ľudských protrombínových fragmentov, s thrombin like activity, zvlášť ineizotrombínu, meizotrombínuCdesFl) alebo ich zmesí, na aktiváciu trpmbínových substrátov s nasledujúcim stanovením plazmového proteínu, ktorý spolu s aktivovaným trombínovým substrátom na seba vzájomne pôsobia priamym alebo nepriamym spôsobom.
3. Činidlo, obsahujúce protrombínové fragmenty. výhodne ľudské protrombínové fragmenty, s “thrombin like activity, najmä meizotroinbín, meizotrombínídesFl > alebo ich zmesi. pre použitie podľa nároku 1 alebo 2.
4. Činidlo podľa nároku 3. ktoré ďalej obsahuje jeden alebo viac plazmových próteínov, ktoré môžu byť aktivované, Ca2+ - ióny a poprípade fosfolipidy.
5. Činidlo podľa nároku 3 alebo 4, ktoré ďalej obsahuje detekčné činidlo.
6. Testovacia súprava, obsahujúca aspoň:
- činidlo podľa nároku 3,
- detekčné činidlo.
7. Testovacia súpráíva, obsahujúca aspoň:,
- činidlo podľa nároku 4,
- detekčné činidlo. ,
0. Testovacia súprava podľa nároku 6 alebo 7. ďalej obsahujúca: - trombínový substrát.
SK488-93A 1992-05-15 1993-05-14 Using of protrombine fragments SK48893A3 (en)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
AT0100092A AT397391B (de) 1992-05-15 1992-05-15 Verwendung von prothrombinfragmenten

Publications (1)

Publication Number Publication Date
SK48893A3 true SK48893A3 (en) 1993-12-08

Family

ID=3504644

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SK488-93A SK48893A3 (en) 1992-05-15 1993-05-14 Using of protrombine fragments

Country Status (14)

Country Link
US (1) US5529905A (sk)
EP (1) EP0570355B1 (sk)
JP (1) JPH0630793A (sk)
AT (2) AT397391B (sk)
CA (1) CA2096076A1 (sk)
CZ (1) CZ88093A3 (sk)
DE (1) DE59309254D1 (sk)
DK (1) DK0570355T3 (sk)
ES (1) ES2126641T3 (sk)
FI (1) FI107409B (sk)
HU (1) HU219457B (sk)
MX (1) MX9302830A (sk)
NO (1) NO308140B1 (sk)
SK (1) SK48893A3 (sk)

Families Citing this family (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE4430204A1 (de) * 1994-08-26 1996-02-29 Behringwerke Ag Arzneimittel, welches als Gegenmittel für Blut-Antikoagulanzien geeignet ist und seine Verwendung
US6165795A (en) * 1998-06-25 2000-12-26 Cardiovascular Diagnostics, Inc. Methods for performing fibrinogen assays using dry chemical reagents containing ecarin and magnetic particles
DE19904674A1 (de) 1999-02-04 2000-08-31 Haemosys Gmbh Verfahren zur Bestimmung der Konzentration von Thrombininhibitoren
JP2003504082A (ja) * 1999-07-09 2003-02-04 コヘージョン テクノロジーズ， インコーポレイテッド エカリンポリペプチド、エカリンをコードするポリヌクレオチド、及びその利用のための方法
US20050221414A1 (en) * 2004-03-31 2005-10-06 Katalin Varadi Kit for measuring the thrombin generation in a sample of a patient's blood or plasma

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4496653A (en) * 1980-10-09 1985-01-29 Boehringer Mannheim Gmbh Process for the determination of antithrombin-BM
NL8902406A (nl) * 1989-09-27 1991-04-16 Hendrik Coenraad Hemker Prof D Werkwijze voor het bepalen van de endogene trombinepotentiaal van plasma, en bloed alsmede een bij deze werkwijze te gebruiken kit.
EP0442843B1 (de) * 1990-02-14 1998-09-09 Pentapharm A.G. Inhibitoren zur antikoagulierenden Vorbehandung von Blutproben
EP0509086B1 (en) * 1990-11-05 1995-04-12 Dade Produktions AG A method to determine the concentration of anticoagulants

Also Published As

Publication number Publication date
AT397391B (de) 1994-03-25
HU219457B (hu) 2001-04-28
FI932194A (fi) 1993-11-16
FI932194A0 (fi) 1993-05-14
DE59309254D1 (de) 1999-02-11
FI107409B (fi) 2001-07-31
HUT64698A (en) 1994-02-28
CA2096076A1 (en) 1993-11-16
NO308140B1 (no) 2000-07-31
NO931772L (no) 1993-11-16
CZ88093A3 (en) 1993-12-15
JPH0630793A (ja) 1994-02-08
ATE175243T1 (de) 1999-01-15
ES2126641T3 (es) 1999-04-01
EP0570355B1 (de) 1998-12-30
HU9301316D0 (en) 1993-09-28
DK0570355T3 (da) 1999-08-30
NO931772D0 (no) 1993-05-14
MX9302830A (es) 1994-05-31
EP0570355A1 (de) 1993-11-18
ATA100092A (de) 1993-08-15
US5529905A (en) 1996-06-25

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP0420332B1 (en) Method for determining the endogenous thrombin potential of plasma and blood, and also a kit for use in said method
Mertens et al. The role of factor VIII in the activation of human blood coagulation factor X by activated factor IX
Larrieu et al. Comparative effects of fibrinogen degradation fragments D and E on coagulation
Kumar et al. Anti-coagulant activity of a metalloprotease: further characterization from the Indian cobra (Naja naja) venom
AU705596B2 (en) Method for specifically detecting a coagulation factor V which has an increased stability toward activated protein C in the activated state
AU694931B2 (en) A method for detecting disturbances of the protein C/protein S system
Ofosu et al. The inhibition of the anticoagulant activity of heparin by platelets, brain phospholipids, and tissue factor
Mesters et al. A novel exosite in the light chain of human activated protein C essential for interaction with blood coagulation factor Va
Jesty The kinetics of inhibition of thrombin by antithrombin in the presence of components of the hemostatic system
SK48893A3 (en) Using of protrombine fragments
Rabiet et al. Thrombin Metz: Characterization of the dysfunctional thrombin derived from a variant of human prothrombin
Weinstein et al. Species specificity of the fibrinolytic effects of activated protein C
Walker et al. The molecular mechanisms of heparin action: III. The anticoagulant properties of polyanetholesulfonate
Walker et al. The molecular mechanisms of heparin action: II. Separation of functionally different heparins by affinity chromatography
US5476771A (en) Test for quantitative thrombin time
CA2065370C (en) Factor viii:ca chromogenic assay
AU705561B2 (en) Calibrator for use in test methods for detecting a defective coagulation factor V
HU216866B (hu) Eljárás és reagens fibrinogén meghatározására
Kandall et al. Determinants of Prothrombinase Activity and Modification of Prothrombin Conversion by Thrombin‐Treated Factor V
CA2137342A1 (en) Test for quantitative thrombin time
AU729843B2 (en) Method for the functional detection of disorders in the protein C system
Wagenvoord et al. Development of a sensitive and rapid chromogenic factor IX assay for clinical use
Muntean et al. Factor VIII influences binding of factor IX and factor X to intact human platelets
JP2677546B2 (ja) Ｖｉｉｉ因子フラグメントのコンプレックスの凝固活性剤
Busch Factors influencing human thrombin generation during fibrin glue manufacturing