SK462001A3 - Compounds, compositions, and methods for stimulating neuronal growth and elongation - Google Patents

Description

Vynález sa týka určitých heterocyklických zlúčenín, spôsobu ich výroby a použitia a farmaceutických prostriedkov na ich báze. Predovšetkým sa týka spôsobov a zlúčenín na stimuláciu neuritového rastu v nervových bunkách, vedúcich k nervovej regenerácii. Konkrétnejšie, prostriedky zahŕňajú zlúčeniny, ktoré inhibujú peptidýl-prolyl lzomerázovú (rotamázovú) enzýmovú aktivitu spojenú s protelnom viažucim FK-506 (FKBP). Spôsoby zahŕňajú ošetrenie nervových buniek prostriedkami zahŕňajúcimi zlúčeninu lnhibujúcu rotamázu. Spôsob podľa vynálezu sa môže použiť na podporu uzdravenia neuronálneho poškodenia spôsobeného chorobou alebo fyzikálnou traumou.

Doterajší stav techniky

Imunofillny sú rodinou rozpustných proteínov, ktoré slúžia ako receptory pre dôležité imunosupresívne liečivá, ako sú cyklosporln A, FK-506 a rapamycín. Imunofllln, ktorý sa teší zvláštnemu záujmu je protein viažuci FK-506 (FKBP). Prehľad úlohy imunoflllnov v nervovom systému uvádza Solomon a kol, Immunophi1ins and the Nervous System, Náture Med, 1 (1). 32-37 (1995).

12-klloDalton protein viažuci FK-506, FKBP12 viaže FK-506 s vysokou afinitou. Taká väzba sa môže priamo merlť pri použití mikroka1or1metrie a rádio-značeného FK-506, napríklad [³H1dihydro-FK-506 (pozri Siekierka a kol.. Náture, 341, 755-57 (1989): a U.S. patent č. 5 696135, Steiner a kol.) a 32-C¹⁴C]-benzoylFK-506 (pozri Harding a kol.. Náture, 341, 758-60 (1989)). Väzbová afinita ďalších zlúčenín pre FKBP sa môže určiť priamo

• ·· • · • ···	• · • · • ·	··· · • ···	·· • · • *	··
·· ··	··	···	··	··

mikrokalorimetriou alebo z kompetitívnych väzbových skúšok pri použití buď tritiovaného alebo ¹⁴C-značeného FK-506, ako opísal Siekierka a kol. alebo Harding a kol.

FKBP12, proteín viažuci FK-506, sa podieľa na radu významných bunkových funkcií. FKBP12 katalyzuje cis-trans izomeráciu peptidyl-prolylových väzieb. Táto peptidyl-prolyl izomérázová enzýmová aktivita je takisto označená ako rotamázová aktivita. Taká aktivita sa ľahko skúša metódami známymi v stave techniky (pozri Fischer a kol. Biochim Biophys. Acta 791, 87 (1984); Fischer a kol., Biomed. Biochim. Acta 43,1101 (1984); a Fischer a kol., Náture 337, 476-478 (1989)). U.S. č. 5192 773 a 5 330 993, Armistead a kol. uvádzajú väzbové afinity FKBP, ktoré boli v súlade s aktivitami mnohých zlúčenín na inhibíciu rotamázy.

FK-506 a zlúčeniny, ktoré viažu FKBP kompetitívne s FKBP stimulujú rast neuritov (axóny) v nervových bunkách (pozri U.S. patent č. 5 696135, Steiner a kol.) Lyons a kol. (Proc. Natl. Acad. Sci, USA, 91, 3191-95 (1994)) uvádzajú, že FK-506 spôsobuje zvýšenie alebo zosilnenie účinnosti faktoru nervového rastu (NGF) stimulovaním neuritového rastu v fenochromocytómovej bunkovej línii potkana. Mechanizmus stimulácie takého neuritového rastu spôsobuje 10 až 100 násobok zvýšenia pôsobenia faktoru nervového rastu.

Sila inhibície peptidyl-prolylovej izomerázovej (rotamázovej) enzýmovej aktivity FKBP pomocou FK-506 a zlúčeninami, ktoré kompetitívne inhibujú väzbu FK-506 k FKPB empiricky koreluje s aktivitou stimulácie neuritového rastu. Vzhľadom na blízku koreláciu medzi inhibíciou rotamázy a neurotropným pôsobením bolo navrhnuté, že rotamáza môže konvertovať proteínový substrát do formy, ktorá podporuje neuronálny rast (pozri U.S. patent č. 5 696135). Napríklad bolo zistené, že FKBP12 tvorí väzbové komplexy s vnútrobunkovými vápnikovými kanálkami - ryanodinový receptor (RyR) a inozitol 1,4,5-trifosfátový receptor (IP₃R) pomáhajú stabilizovať uvoľňovanie

• ·· • · • ···	• · • · • ·	···· • ···	·· · • · ·· • « ·
·· ··	··	···	·· ··

vápnika (Jayaraman a kol., J. Biol. Chem., 267, 9474-9477 (1992); Cameron a kol., Proc. Natl. Acad. Sci, USA, 92, 17841788 (1995)). Ako v prípade RyR, tak v prípade IP₃R bolo ukázané, že FK-506 a rapamycín sú schopné disociovat FKBP12 z týchto receptorov. V obidvoch prípadoch stripovanie FKBP12 vedie k zvýšeniu priepustnosti vápnikovýčh kanálkov a znižuje vnútrobunkovú koncentráciu vápniku. Bolo navrhnuté, že tok vápnika môže byt spojovaný so stimuláciou neuritového rastu.

Ďalej, väzbové komplexy FK-506-FKBP sa viažu na kalcineurin, a inhibujú kalcineurin, cytoplazmickú fosfatázu. Fosfatátová aktivita kalcineurinu je nezbytná pre defosforyláciu a následnú translokáciu do jadra nukleárneho faktoru aktivovaných T-buniek (NF-AT) (pozri Flanagan a kol., Náture, 352, 803-807 (1991)). NF-AT je transkripčný faktor, ktorý iniciuje aktiváciu génu interleukin-2, ktorý zasa sprostredkuje proliferáciu T-buniek; tieto stupne sú dôležité pre aktiváciu imunitnej odozvy. Aktivita inhibície kalcineurinu je v súlade s imunosupresívnou aktivitou FK-506 a príbuzných zlúčenín.

Inhibícia kalcineurinu nie je však v súlade so stimuláciou neuritového rastu. Preto sú zlúčeniny, ktoré sú silné inhibítory rotamázy, ale nie silné inhibítory kalcineurinu žiadané, pretože by mohli byt neurotrofné ale nie imunosupresívne .

Také neurotropné činidlá nájdu použitie pri zvyšovaní neuritového rastu a preto pri podpore neuronáIného rastu a regenerácii rôznych patologických situácií, kde sa má ulahčit neuronálne uzdravenie, vrátane periférneho nervového poškodenia spôsobeného poranením alebo chorobami, ako je diabetes, poškodenie mozgu spojené s mŕtvicou a pri liečbe nervových chorôb spojených s neurodegeneráciou, vrátane Parkinsonovej choroby, Alzheimerovovej choroby a amyotropnej laterálnej sklerózy (ALS). Ďalej, také použitie je výhodne bez sprievodného účinku imunosupresie, pretože dlhodobé používanie ·· ·· · • ··· • · · · • · · ··· ·· ·· ···· • · · • · ··· • · · • · · ·· ··· ·· • · · • · • · · • · imunosupresiv je sprevádzané vedľajšími účinkami, ako je toxickosť obličiek, neurologické deficity a vaskulárna hypertenzia.

Sú známe rôzne inhibítory rotamázovej enzýmovej aktivity, zlúčeniny viažúce FKBP alebo imunomodulačné zlúčeniny. Pozri napríklad U.S patent č. 5192 773, 5 330 993, 5 516 797, 5 612 350, 5 614 547, 5 622 970, 5 654 332, 5 665 774, 5 696135 a 5 721256. Pozri takisto medzinárodné publikácie WO 96/41609,

WO 96/40633 a WO 96/40140.

S ohľadom na rad chorôb, ktoré môžu byť liečené stimuláciou neuritového rastu a relatívne obmedzeného počtu silných známych zlúčenín viažucich FKBP12 a vykazujúcich túto vlastnosť, zostáva potreba pre ďalšie neurotropné zlúčeniny viažúce rotamázu. Také zlúčeniny budú výhodne mať fyzikálne a chemické vlastnosti, ako je biologická dostupnosť, polčas života a účinnosť rozširovania na aktívne miesto. S ohľadom na žiadané vlastnosti sú malé organické molekuly preferované pred proteínmi. Také zlúčeniny budú ďalej vykazovať nedostatok signifikantnej imunosupresívnej aktivity.

Podstata vynálezu

Predmetom predkladaného vynálezu je poskytnutie neurotropných činidiel s malými molekulami. Ďalším predmetom predkladaného vynálezu je poskytnutie zlúčenín, ktoré sa viažu na rotamázu a ktoré sú neimunosupresívne činidlá. Ďalším predmetom predkladaného vynálezu je poskytnutie účinného postupu na prípravu takých zlúčenín a rovnako ich užitočných medziproduktov. Ďalším predmetom predkladaného vynálezu je spôsob (liečenie pacientov majúcich neurologické traumy alebo chorobu ako výsledok alebo spojenie so stavmi, ktoré zahŕňajú (nie však s obmedzením) neuralgiu, muskulárnu dystrofiu, Bellovu parézu, myasténiu gravis, Parkinsonovu chorobu, Alzheimerovu chorobu, násobnú sklerózu, ALS, mŕtvicu a ischémiu spojenú s mŕtvicou,

- 5 neuronálnu parapatiu, ďalšie neuronálne degeneratívne choroby, choroby pohybového nervu vrátane poranenia miechy.

Také účinky môžu byť dosiahnuté činidlami viažucimi rotamázu podlá predkladaného vynálezu, ktoré môžu byť použité na stimuláciu rastu a regeneráciu neurónov. Podanie týchto činidiel jedincom vyžadujúcim terapeutickú stimuláciu neuronálnoho rastu a regeneráciu poskytuje účinné terapie v rôznych patologických situáciách, kde sa má ulahčiť neuronálne uzdravenie, vrátane poškodenia periférneho nervu spôsobeného poranením alebo chorobou, ako je diabetes, poškodenie mozgu spojené s mŕtvicou a na liečbu neurologických chorôb spojených s neurodegeneráciou, zahŕňajúce Parkinsonovu chorobu, Älzheimerovu chorobu a amyotropnú laterálnu sklerózu.

·*.

V jednom všeobecnom rozpraco.vaní činidlá viažuce rotamázu podlá vynálezu zahŕňajú zlúčeniny všeobecného vzorca I-a:

kde R¹ sa zvolí zo súboru, ktorý zahŕňa vodík, substituované a nesubstituované alkylové, alkenylové, arylové, C3-C8 cykloalkylové a C5-C7 cykloalkenylové skupiny a C(R^1:L) (R¹²) (R¹³), pričom alkylové a alkenylové skupiriý sú prípadne substituované ^cl“^c4 ^alkY^lomr ^c2“^c4 alkenylom, C4-C_g cykloalkenylom alebo hydroxy, arylové skupiny sú prípadne substituované halogénom, hydroxylom, N0₂, CF₃, C^-Cg alkylom, C₂-c₆ alkenylom, C₁-C₄ alkyloxy, C₂-C₄ alkenyloxy, benzyloxy, fenoxy, amino alebo fenylom a cykloalkylové a cykloalkenylové skupiny sú prípadne substituované C_x-C₄ alkylom, C₂-C₄ alkenylom, C_x-C₄ alkyloxy alebo hydroxy a R¹¹ a R¹² sú vždy nezávisle nižší alkyl alebo • ·· ·· ···· · ·· · · · · · · • ··· · · ·· · · ··· ·· ·· ··· ··

R¹¹ a R¹² spoločne s atómom, ku ktorému sú viazané tvoria cykloalkyl a R¹³ je H, OH, nižší alkyl, aryl alebo (CH₂)_n-O-W¹, kde n je 0, 1, 2 alebo 3, W¹ je R² alebo C(O)R² a R² je C^-C-j alkyl, prípadne substituovaný jednou alebo dvoma metoxyskupinami;

X sa zvolí zo súboru, ktorý zahŕňa vodík, kyano, Cj-Cj alkyloxy, dimetoxymetyl a kyslík, kde X je kyslík, väzba C-X (tzn. väzba spojujúca X k atómu uhlíka) je dvojná väzba; a

Y sa zvolí zo súboru, ktorý zahŕňa alkyl, alkenyl, a cykloalkyl, kde alkyl, alkenyl a cykloalkylová skupiny môžu byť prípadne substituované v jednej alebo viacerých polohách substituentmi vybranými zo súboru, ktorý zahŕňa substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, aryl, alkoxy, hydroxyalkyl, aryloxy, alkenyloxy, hydroxy, (CH₂)_p-O-W² a (CH₂)_p-N-W², kde p je 0,1 alebo 2 a W² je R³ alebo C(O)R³, kde R³ je alkyl, alkenyl alebo aryl, prípadne substituovaný alkylom, arylom alebo alkoxyskupinou; alebo

X a Y spoločne s heteroatómom dusíka kruhové štruktúry, ku ktorému je Y viazané (ukázané vo vzorci I-a) tvoria 5- až

7-členný nasýtený alebo nenasýtený heterocyklický kruh, prípadne obsahujúci ďalší heteroatóm (tzn. jeden heteroatóm popri zobrazenom atómu dusíka kruhovej štruktúry), vybraného z O a N, pričom 5- až 7- členný nasýtený alebo nenasýtený heterocyklický kruh je prípadne substituovaný jedným alebo viacerými substituentmi vybranými z J, K a L, ktoré sú nezávisle kyslík, C3-C5 cykloalkyl alebo C₁~C₅ alkyl, prípadne substituovaný jedným alebo dvoma substituentmi nezávisle vybranými zo súboru, ktorý zahŕňa C₃-C₅ cykloalkyl, metoxy, metoxyfenyl alebo dimetoxyfenyl alebo J a K spolu tvoria fenylový kruh, prípadne substituovaný jedným alebo viacerými substituentmi vybranými zo súboru, ktorý zahŕňa metoxy, trifluórmetyl, trifluórmetoxy a vhodné substituenty viazané k fenylovému kruhu cez kyslík, dusík, uhlík alebo síru.

• ·· ·· ···· ·· ·· · · · · · · • ··· · · ··· · · ······ ···· • · · · · ·· ··· ·· ·· ··· ··

- 7 V alternatívnom rozpracovaní sa vynález týka zlúčenín všeobecného vzorca I-b

kde R¹ sa zvolí zo súboru, ktorý zahŕňa vodík, substituované a nesubstituované alkylové, alkenylové, arylové, C3-C8 cykloalkylové a C5-C7 cykloalkenylové skupiny a ČÍR¹¹)(R¹²)(R¹³), pričom alkylové a alkenylové skupiny sú prípadne substituované C1-C4 alkylom, C2-C₄ alkenylom, C₄-C₆ cykloalkenylom alebo hydroxy, arylové skupiny sú prípadne substituované halogénom, hydroxylom, N0₂, CF₃, C^-Cg alkylom, C₂-Cg alkenylom, C^-C₄ alkyloxy, C₂-C₄ alkenyloxy, benzyloxy, fenoxy, amino alebo fenylom a cykloalkylové a cykloalkenylové skupiny sú prípadne substituované alkylom, C₂-C₄ alkenylom, Cj-C₄ alkyloxy alebo hydroxy a R¹¹ a R¹² sú vždy nezávisle nižší alkyl alebo R¹·*· a R¹² spoločne s atómom, ku ktorému sú viazané tvoria cykloalkyl a R¹³ je H, OH, nižší alkyl, aryl alebo (CH₂)_n-O-W¹, kde n je 0, 1, 2 alebo 3, W¹ je R² alebo C(O)R² a R² je Cj-Cg alkyl, prípadne substituovaný jednou alebo dvoma metoxyskupinami;

X¹ a X² sa nezávisle zvolia zo súboru, ktorý zahŕňa vodík, kyano, C^-Cg alkyloxy, dimetoxymetyl a kyslík, kde X¹ alebo X² sú kyslík, väzba C-X (tzn. väzba spojujúca X¹ alebo X² k atómu uhlíka) je dvojná väzba (tzn. X¹ alebo X² je =0)? alebo X¹ a X² spolu tvoria valenčnú väzbu; a

Y sa zvolí zo súboru, ktorý zahŕňa alkyl, alkenyl, a cykloalkyl, kde alkyl, alkenyl a cykloalkylové skupiny môžu byť prípadne substituované v jednej alebo viacerých polohách sub8 • » ··· • · ·· ···· • · • ··· • --• · · • · · ·· ··· ·· • · · • · • · · • · ·· · stituentmi vybranými zo súboru, ktorý zahŕňa substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, aryl, alkoxy, hydroxyalkyl, aryloxy, alkenyloxy, hydroxy, (CH₂)_p-O-W² a (CH₂)_p-N-W², kde p je 0, 1 alebo 2 a W² je R³ alebo C(O)R³, kde R³ je alkyl, alkenyl alebo aryl, prípadne substituovaný alkylom, arylom alebo alkoxyskupinou; alebo jedno X¹ a X² v kombinácii s Y spoločne s heteroatómom dusíka kruhovej štruktúry, ku ktorému je Y viazané (ukázané vo vzorci I-b) tvorí 5- až 7-členný nasýtený alebo nenasýtený heterocyklický kruh, prípadne obsahujúci ďalší heteroatóm (tzn. jeden heteroatóm popri zobrazenom atómu dusíka kruhovej štruktúry) , vybraný z O a N, pričom 5- až 7-členný nasýtený alebo nenasýtený heterocyklický kruh je prípadne substituovaný jedným alebo viacerými substituentmi vybranými z J, K a L, ktoré sú nezávisle kyslík, C₃-c₅ cykloalkyl alebo C^-Cg alkyl, prípadne substituovaný jedným alebo dvoma substituentmi nezávisle vybranými zo súboru, ktorý zahŕňa C₃-C₅ cykloalkyl, metoxy, metoxyfenyl alebo dimetoxyfenyl alebo J a K spolu tvoria fenylový kruh, prípadne substituovaný jedným alebo viacerými substituentmi vybranými zo súboru, ktorý zahŕňa metoxy, trifluórmetyl, trifluórmetoxy a vhodné substituenty viazané k fenylovému kruhu cez kyslík, dusík, uhlík alebo síru.

Činidlá inhibujúce rotamázu podlá vynálezu tiež zahŕňajú farmaceutický prijatelné deriváty takých zlúčenín všeobecného vzorca I-a alebo I-b.

Vynález sa ďalej týka spôsobu liečenia pacientov majúcich neurologické traumy alebo chorobu ako výsledok alebo spojenie so stavmi, ktoré zahŕňajú (nie však s obmedzením) neuralgiu, muskulárnu dystrofiu, Bellovu parézu, myasténiu gravis, Parkinsonovu chorobu, Alzheimerovu chorobu, násobnú sklerózu, ALS, mŕtvicu a ischémiu spojenú s mŕtvicou, neuronálnu parapatiu, ďalšie neuronálne degeneratívne choroby, choroby pohybového nervu vrátane poranenia miechy. Vynález ďalej zahŕňa podanie ··· • · · · · • · · · ··· ·· ·· ···· • · • ··· • · · • · ··· ·· • · · • · • · • · ·· · pacientovi v prípade potreby takej liečby, terapeuticky účinného množstva zlúčeniny všeobecného vzorca I-a alebo I-b alebo proliečiva, jej farmaceutický aktívneho metabolitu alebo jej farmaceutický prijatelnej (netoxickej) soli. Také spôsoby ďalej zahŕňajú podanie pacientovi prostriedku, obsahujúceho účinné množstvo zlúčeniny všeobecného vzorca I-a alebo I-b alebo proliečiva, farmaceutický aktívneho metabolitu alebo farmaceutický aktívnej soli v kombinácii s farmaceutický prijatelným nosičom alebo riedidlom alebo terapeuticky účinného množstva neurotropného faktoru vybraného zo súboru, ktorý zahŕňa nervový faktor rastu, inzulínový rastový faktor a jeho aktívne obmedzené deriváty, kyslý a bázický fibroblastový rastový faktor, rastové faktory odvodené od krvných doštičiek, neurotropný faktor odvodený od mozgu, ciliárne neurotropné faktory, neurotropný faktor odvodený od gliálnej bunkovej línie, neurotropin-3 a neurotropin 4/5.

Vynález sa ďalej týka medziproduktov všeobecného vzorca II, III a V, ktoré sú opísané ďalej a ktoré sú užitočné na prípravu zlúčenín modulujúcich FKBP všeobecného vzorca I-a a I-b. Vynález sa ďalej týka spôsobu prípravy zlúčenín pri použití takých medziproduktov.

Ďalšie rysy, objekty a výhody predkladaného vynálezu budú zrejmé z nasledujúceho podrobného opisu vynálezu.

Pokial to nie je uvedené inak, výrazy použité v predkladanej prihláške majú nasledujúci význam:

Výraz alkyl znamená rozvetvený alebo lineárny uhlovodíkový nasýtený reťazec, obsahujúci l až 10 atómov uhlíka, ktorý je všeobecne reprezentovaný vzorcom kde k je celé číslo 1 až 10. Príklady alkylov zahŕňajú metyl, etyl, n-propyl, izopropyl, n-butyl, izobutyl, terc.-butyl, pentyl, n-pentyl, izopentyl, neopentyl a hexyl a ich jednoduché ali10 ·· ··· • · • · • ·· ·· ···· • · · • · ··· • · · · · • · · ·· ··· ·· • · · • · • · • · ·· · fatické izoméry. Výraz nižší alkyl znamená alkyl obsahujúci 1 až 8 atómov uhlíka (tzn. Cj-Cg alkyl).

Výraz alkenyl znamená nenasýtenú alifatickú skupinu s priamym alebo rozvetveným reťazcom obsahujúcu jednu alebo viac dvojných väzieb a obsahujúcu 2 až 10 atómov uhlíka. Príklady alkenylov zahŕňajú etenyl, 1-propenyl, 2-propenyl, 1-butenyl, 2-butenyl, izobutenyl a rôzne izomérne pentenyly a hexenyly (vrátane cis a trans izomérov).

Výraz alkoxy znamená O-alkyl, kde alkyl má význam definovaný hore. Nižší alkoxy zahŕňa alkoxyskupiny obsahujúcu v alkylovej časti 1 až 4 atómy uhlíka.

Výraz alkenyloxy znamená -O-alkenyl, kde alkenyl je definovaný hore.

Výraz aryl znamená monocyklický alebo polycyklický aromatický kruhový zvyšok, napríklad fenyl, naftyl, furyl, tienyl, pyrolyl, pyridyl, pyridinyl, pyrazolyl, imidazolyl, pyrazinyl, triazinyl, oxadiazolyl, H-tetrazol-5-yl, indolyl, chinolyl, benzofuranyl, benzotiofenyl (tionaftenyl) a podobne. Arylové časti môžu byť prípadne substituované jedným alebo viacerými substituentmi vybranými zo súboru, ktorý zahŕňa halogén (F,

Cl, I, Br), nižší alkyl, -OH, -NO2, -CN, -CO₂H, -O-nižší alkyl, aryl, -0-aryl, aryl-nižší alkyl, -CO₂CH₃, -CONH₂, -OCH₂CONH₂, -NH₂, SO₂NH₂, -OCHF₂, -CF₃, -OCF₃, a podobne. Arylové časti môžu byt tiež substituované dvoma substituentmi tvoriacimi mostík, napríklad -O-(CH₂)_Z-O-, kde z je celé číslo 1 až 3.

Výraz aryl-nižší alkyl znamená nižšiu alkylovú skupinu (ako je uvedená hore), substituovanou arylovou skupinou.

Výraz aryloxy znamená -0-aryl, kde aryl má význam uvedený hore.

·· ·· ·· ··· • 9 9 • · ··· ·· • · • ·· ·· ··· ·· ···

Výraz cykloalkyl znamená monocyklickú alebo polycyklickú karbocyklickú kruhovú štrúkturu, kde každý kruh obsahuje 5 až 7 atómov uhlíka a je nasýtený. Príklady cykloalkylov zahŕňajú cyklopropyl, cyklobutyl, cyklopentyl, cyklohexyl, cykloheptyl a adamantyl. Cykloalkyl môže byt substituovaný jedným alebo viacerými substituentmi, napríklad halogénom, alkylom, -OR alebo -SR, kde R je alkyl alebo aryl.

Výraz cykloalkenyl znamená monocyklickú alebo polycyklickú karbocyklickú kruhovú štruktúru, kde každý kruh obsahuje pät až sedem atómov uhlíka a aspoň jeden kruh je čiastočne nenasýtený alebo má aspoň jednu dvojnú väzbu.

Výraz heterocykl (alebo koreň hetero v odkaze na kruhovú štruktúru) znamená kruhovú štruktúru, obsahujúcu jeden alebo viac heteroatómov (neuhlíkaté atómy kruhu), vybrané z O, N a S. Tak výraz heterocykloalkyl znamená cykloalkyl, v ktorom je aspoň jeden atóm uhlíka nahradený heteroatómom vybraným z O, N a S.

Zlúčeniny inhibujúce rotamázu podlá vynálezu sú predstavované všeobecným vzorcom I-a a I-b, ktoré sú definované hore. Výhodne zlúčeniny inhibujúce rotamázu inhibujú rotamázovú (peptidyl-prolyl izomerázovú) enzýmovú aktivitu FKBP, najmä FKBP12. Ďalej, popri zlúčeninách všeobecného vzorca I-a a I-b inhibujúcich rotamázu, vynález tiež zahŕňa farmaceutický prijateľné deriváty takých zlúčenín, ako sú proliečivá, farmaceutický aktívne metabolity a farmaceutický prijatelné soli alebo solváty.

Vo výhodnom rozpracovaní zlúčenín predstavovaných hore uvedenými vzorcami I-a a I-b, X, X¹ a X² sú vodík alebo kyslík alebo X^ a X² tvoria valenčnú väzbu.

Vo výhodnom rozpracovaní zlúčeniny predstavovanej hore uvedenými vzorcami I-a a I-b je Y alkyl obsahujúci jeden alebo

• ··	··		····		··
• ·	•	•	•	•	•
• ···	•	•	···	•	•
• · · ·· ··	• · ··	•	• ···	• ·	• ··

viac substituentov vybraných zo súboru, ktorý zahŕňa substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, aryl, alkoxy, hydroxyalkyl, arylalkyl, aryloxy, alkenyloxy, hydroxy, (CH₂)_p-O-w² a (CH₂)_p-N-W², kde p je 0,1 alebo 2 a W² je R³ alebo C(O)R³, kde R³ je alkyl, alkenyl alebo aryl, prípadne substituovaný alkylom, arylom alebo alkoxyskupinou. Vo výhodnejšom rozpracovaní Y je:

V ďalšom výhodnom rozpracovaní, X alebo jedno z X¹ a X², a Y spoločne s príslušnými atómami kruhu tvoria substituovaný alebo nesubstituovaný piperidínový alebo piperazínový kruh.

Pre zlúčeniny predstavované hore uvedeným vzorcom I-a, R¹ sa výhodne zvolí z 3,4,5-trimetoxyfenolu? skupiny ;<· j—(CH^ i

(CH₂)_nW kde m je 1 alebo 2 a n je 0,1 alebo 2; a CfR¹¹) (R¹²) (R¹³), kde

R¹¹ a R¹² sa nezávisle zvolí z metylu a etylu a R³ sa zvolí zo

- 13 ·· ··· • · • · • ·· ·· ···· • · · • · ··· • · · • · · ·· ··· ·· • · · * · • · · • · ·· · súboru, ktorý zahŕňa H, OH, nižší alkyl, aryl a (CH₂)_n-O-W¹, kde n je 0, 1, 2 alebo 3. V hore uvedenom vzorci W¹ je R² alebo C(O)R², kde R² je výhodne <^-03 alkyl, prípadne substituovaný jednou alebo viacerými metoxyskupinami.

Osobitne výhodné zlúčeniny predstavované vzorcom I-a sú nasledujúce:

hore uvedeným

Osobitne výhodné zlúčeniny predstavované vzorcom I-b sú nasledujúce:

hore uvedeným

- 14 • ·· · · • ··· • · · • · · ··· ·· ·· ···· • · · • · ··· • · · • · · ·· ··· • · · • · • · · • · ·· ·

Zlúčeniny podlá vynálezu takisto zahŕňajú farmaceutický prijateľné deriváty zlúčenín všeobecného vzorca I-a alebo I-b. Výraz farmaceutický prijatelný derivát označuje proliečivo, farmaceutický aktívny metabolit alebo farmaceutický prijateľnú soľ, ester; soľ takého esteru alebo hydrát zlúčeniny podľa vynálezu. Také zlúčeniny, keď sa podajú pacientovi, sú schopné poskytovať priamo alebo nepriamo zlúčeninu podľa vynálezu alebo jej metabolický zvyšok alebo jej produkt a tým inhibovať aktivitu rotamázy FKBP alebo podporovať alebo rozširovať neuritový rast.

Λ

Zlúčeniny všeobecného vzorca I-a a.I-b sa môžu vo farmaceutických prostriedkoch použiť vo forme farmaceutický prijateľných solí. Také soli sú výhodne odvodené od anorganických alebo organických kyselín a báz. Príklady kyslých solí zahŕňajú acetát, adipát, alginát, aspartát, benzoát, benzénsulfonát, bisulfát, butyrát, citrát, gafrát, gáforsulfonát, cyklopentánpropionát, diglukonát, dodecylsulfonát, etánsulfonát, fumarát,

·· • · ··· • · · • · ·· ·· ···· • · • ··· ··· ·· • · · • · • · • · ·· · glukoheptanoát, glycerofosfát, hemisulfát, heptanoát, hexanoát, hydrochlorid, hydrobromid, hydrojodid, 2-hydroxyetánsulfonát, laktát, maleát, metánsulfonát, 2-naftalénsulfônát, nikotinát, oxalát, pamoát, pektinát, persulfát, 3-fenylpropionát, pikrát, pivalát, propionát, sukcinát, tartarát, tiokyanát, tozylát a undekanoát. Príklady bázických solí zahŕňajú amónne soli, soli alkalického kovu, ako sú sodné a draselné soli, soli kovov alkalických zemín, ako sú vápenaté a horečnaté soli, soli s organickými bázami, ako sú dicyklohexylamínové soli, N-metyl-D-glukózamínová sol a soli s aminokyselinami, ako je arginín a lyzín. Rovnako bázické skupiny obsahujúce dusík môžu byt kvarternizované takými činidlami, ako sú nižšie alkylhalogenidy, ako napríklad metyl, etyl, propyl a butylchloridy, bromidy a jodidy; dialkylsulfáty, ako dimetyl, dietyl, dibutyl a diamylsulfáty; halogenidy s dlhým reťazcom, ako sú decyl, (auryl, myristyl a stearylchloridy, bromidy a jodidy; a arylhalogenidy, ako sú benzyl a fenetylbromidy. Vo vode alebo v oleji rozpustné alebo dispergovatelné produkty môžu byť pripravené z takých solí.

Zlúčeniny podlá vynálezu môžu ďalej byt modifikované zavedením vhodných funkčných skupín na zvýšenie selektívnych biologických vlastností. Také modifikácie, ktoré sú v kompetencii odborníka zahŕňajú tie, ktoré zvyšujú biologické prenikanie do daného biologického systému (napríklad krv, lymfatický systém, centrálny nervový systém), zvyšujú orálnu dostupnosť, zvyšujú rozpustnosť na umožnenie podávania injekciami, upravujú metabolizmus a upravujú rýchlosť vylučovania.

Niektoré zo zlúčenín podlá vynálezu obsahujú jedno alebo viac center asymetrie a môžu tak zvyšovať enantioméry, diastereoméry, rotaméry a iné stereoizomérne formy. Predkladaný vynález je chápaný tak, že zahŕňa všetky možné stereoizoméry a rovnako opticky čisté formy. Opticky aktívne R a S izoméry sa môžu pripraviť pri použití chirálnych syntónov alebo chirálnych činidiel alebo môžu byť rozštiepené pri použití kon16 ·· ·· ···· ·· • · · · · · · ··· e · ··· · · • ·· ·· ··· ·· · venčných techník. Ked zlúčeniny podlá vynálezu obsahujú olefinické dvojné väzby, predpokladá sa, že zahŕňajú ako E tak Z geometrické izoméry. Ďalej predkladaný vynález tiež zahŕňa všetky možné rotaméry, predovšetkým tie, ktoré majú rôznu orientáciu dookola väzby:

Ďalej, chemické zlúčeniny tu uvádzané môžu vykazovať fenomén tautomérie. Zatial čo vzorce uvádzané v opise môžu predstavovať iba jednu z možných tautomérnych foriem, je potrebné vziať do úvahy, že vynález zahŕňa akúkolvek tautomérnu formu, ktorá môže byt generovaná pri použití opísaných postupov alebo známym spôsobom a nie je obmedzená len na tautomérnu formu vyjadrenú vzorcom.

Zlúčeniny všeobecného vzorca I-a sa môžu pripraviť zo zlúčenín všeobecného vzorca III:

Ý (ΙΠ)

Vo všeobecnom vzorci III sa R³¹ zvolí zo súboru, ktorý zahŕňa vodík, a prípadne substituovaný alkyl, alkenyl, aryl, cykloalkyl, cykloalkenyl, skupinu * kde g je 0 alebo 1 a R³⁰ je alkylová alebo arylová skupina, nesubstituovaná alebo substituovaná jedným alebo viacerými ¹¹ 30 ¹¹ ^C(CH₂),.R³⁰ · J-^COCCH^R³⁰

• ··	··	····	·· ·
• ·	•	• ·	• · ··
• ···	•	• ···	• · ·
·· ··	··	···	·· ··

substituentmi nezávisle vybranými zo súboru, ktorý zahŕňa hydroxyl, Cj-Cg alkyl, C₂~Cg alkenyl, C₁-C₄ alkyloxy, C₂-C₄ alkenyloxy, benzyloxy, fenoxy a fenyl, X znamená vodík, kyano, ^Cl“^C2 alkyloxy, dimetoxymetyl alebo kyslík, kde X je kyslík, väzba viažuca X k cyklickému kruhu je dvojná väzba a Y je vodík, alkyl, alkenyl alebo cykloalkylová skupina nesubstituovaná alebo substituovaná jedným alebo viacerými substituentmi nezávisle vybranými zo súboru, ktorý zahŕňa alkyl, aryl, alkoxy, hydroxyalkyl, aryloxy, alkenyloxy a hydroxyskupiny, nesubstituované alebo substituované jedným alebo viacerými substituentmi nezávisle vybranými zo súboru, ktorý zahŕňa hydroxyl, ^C1“^C6 alkyl, ^C2”^C6 alkenyl, C1-C4 alkyloxy, C2-C4 alkenyloxy, benzyloxy, fenoxy a fenyl, (CH2)p-O-W² alebo (CH2)_p-NW², kde p je 0, 1 alebo 2 a W² je R³ alebo C(O)R³, kde R³ je alkyl, alkenyl alebo aryl, nesubstituovaný alebo substituovaný jedným alebo viacerými substituentmi nezávisle vybranými zo súboru, ktorý zahŕňa alkyl, aryl alebo alkoxyskupinu. Alternatívne,

X a Y, spoločne s atómom uhlíka kruhu a dusíkovým heteroatómom, ku ktorému sú viazané, tvoria 5- až 7-členný nasýtený alebo nenasýtený heterocyklický kruh, nesubstituovaný alebo substituovaný jedným alebo viacerými substituentmi J, K a L, ktoré sú nezávisle kyslík, C₃-C₅ cykloalkyl alebo C^-Cg alkyl, prípadne substituovaný jedným alebo dvoma substituentmi nezávisle vybranými zo súboru, ktorý zahŕňa C₃-C₅ cykloalkyl, metoxy, metoxyfenyl alebo dimetoxyfenyl? alebo J a K spolu tvoria fenylový kruh, prípadne substituovaný jedným alebo viacerými substituentmi nezávisle vybranými zo súboru, ktorý zahŕňa metoxy, trifluormetyl, trifluórmetoxy a substituenty viazané k fenylovému kruhu cez kyslík, dusík, uhlík alebo síru a nezávisle vybrané zo súboru, ktorý zahŕňa halogén, hydroxyl,

N0₂, CF₃, C^-Cg alkyl, C₂-Cg alkenyl, C₁~C₄ alkyloxy, C₂-C₄ alkenyloxy, benzyloxy, fenoxy, amino a fenyl.

Vo výhodnom rozpracovaní R³¹ znamená skupinu o

II

COfCHaJqR

- 18 • ·· ·· » • ··· • · · • · · ··· ·· ·· ···· • · • ··· výhodnej š ie benzyloxykarbonyl.

Osobitne výhodné príklady zlúčenín všeobecného vzorca III sú:

kde Z je benzyloxykarbonyl. Ďalšie výhodné príklady zlúčenín všeobecného vzorca III sú:

kde Z je benzyloxykarbonyl. Ďalšia skupina výhodných zlúčenín všeobecného vzorca III je:

kde Z je benzyloxykarbonyl

- 19 ·· ·· ·· ···· • · • ··· ··· ··

Ďalšie výhodné zlúčeniny všeobecného vzorca III sú vybrané z:

kde Z je benzyloxykarbonyl.

Zlúčeniny všeobecného vzorca III zahŕňajú tie zlúčeniny všeobecného vzorca Ill-a, ktoré môžu byt premenené pri redukčných podmienkach na zlúčeniny všeobecného vzorca Ill-b

Vo všeobecnom vzorci Ill-a sa R³² vyberie zo súboru, ktorý zahŕňa prípadne substituovaný alkyl, alkenyl, aryl, cykloalkyl, cykloalkenyl, skupinu ^CtCH^R³⁰ o

II j-_L>CO(CH₂)_qR·

- 20 ·· ·· ···· • · · • · ··· • · · • · · ·· ··· kde q je 0 alebo 1, a R³⁰ je alkyl alebo arylová skupina nesubstituovaná alebo substituovaná jedným alebp viacerými substituentmi nezávisle vybranými zo súboru, ktorý zahŕňa hydroxyl, ^cl”^c6 ^alkyl, ^c2“^c6 alkenyl, alkyloxy, C₂-C₄ alkenyloxy, benzyloxy, fenoxy a fenyl. Vo všeobecnom-vzorci Ill-a a Ill-b X a Y majú význam definovaný vo všeobecnom vzorci I-a. Na získanie zlúčeniny všeobecného vzorca I-a, sa zlúčenina všeobecného vzorca ΙΙΙ-b spojí so zlúčeninou všeobecného vzorca IV:

R¹

O (IV)

Vo všeobecnom vzorci IV má R¹ význam definovaný pri všeobecnom vzorci I-a. .

Zlúčeniny všeobecného vzorca Ill-a sa môžu pripraviť pri použití zlúčenín všeobecného vzorca II:

dD

Vo všeobecnom vzorci II Z znamená ^CO(CH₂)«,R³⁰ kde q je 0 alebo 1 a R³⁰ alkyl alebo arylová skupina nesubstituovaná alebo substituovaná jedným ''alebo viacerými substituentmi nezávisle vybranými zo súboru, ktorý zahŕňa hydroxyl, ^cl“^c6 ^alkyl» ^c2”^c6 ^alkenyl, Cj-C^ alkyloxy, C₂-C₄ alkenyloxy, benzyloxy, fenoxy a fenyl. Výhodne je Z benzyloxykarbonyl.

Zlúčeniny všeobecného vzorca I-b sa môžu pripraviť zo zlúčenín všeobecného vzorca V spôsobmi, ktoré sú analogické spôsobom opísaným hore.

·· ·· ···· ·· • · · · · · · ··· · · ··· · · • ·· ·· ··· ·· ·

Zlúčeniny všeobecného vzorca V zahŕňajú tie zlúčeniny všeobecného vzorca V-a, ktoré môžu byť premenené pri reduk čných podmienkach na zlúčeniny všeobecného vzorca V-b;

Vo všeobecnom vzorci V a V-a a V-b;

R³¹ a R³² majú význam definovaný vo vzorcoch III, Ill-a a Ill-b;

X¹ a X² znamenajú nezávisle vodík, kyano, alkyloxy, dimetoxymetyl alebo =0, alebo X¹ a X² spoločne tvoria valenčnú väzbu; a

Y má význam definovaný pri všeobecných vzorcoch III,

Ill-a a ΙΙΙ-b; alebo jedno X¹ a X² v kombinácii s Y a atómom uhlíka a heteroatornom dusíka kruhovej štruktúry, ku ktorému sú viazané tvoria 5- až 7-členný nasýtený alebo nenasýtený heterocyklický kruh, ktorý je nesubstituovaný alebo substituovaný jedným alebo viacerými substituentmi vybranými z J, K a L, ktoré sú nezávisle kyslík, C₃-C₅ cykloalkyl alebo C^-Cg alkyl, prípadne substituovaný jedným alebo dvoma substituentmi nezávisle vybranými zo súboru, ktorý zahŕňa C₃-C₅ cykloalkyl, metoxy, metoxyfenyl alebo dimetoxyfenyl alebo J a K spolu tvoria fenylový kruh, prípadne substituovaný jedným alebo viacerými substituentmi vybranými zo súboru, ktorý zahŕňa metoxy, trifluórmetyl, trifluórmetoxy a vhodnými substituentmi viazanými k fenylovému kruhu cez kyslík, dusík, uhlík alebo síru, ktoré sú nezávisle vybrané zo súboru, ktorý zahŕňa halogén, hydroxyl, N0₂, CF₃, • ·· ·· ···· ·· ··· ··· ··· é ··· · · ··· · · ^cl“^c6 aifcY¹' ^c2^c6 alkenylf ^ci“^c4 alkyloxy, C₂~C₄ alkenyloxy, benzyloxy, fenoxy, amino a fenyl.

Na ilustráciu výhodných rozpracovaní a rysov podľa vynálezu sú ďalej opísané príklady uskutočnenia.

Nasledujúce protokoly prípravy sa týkajú medziproduktových zlúčenín a finálnych produktov identifikovaných v opise a v schémach prípravy. Príprava rôznych zlúčenín predkladaného vynálezu je opísaná podrobne pri použití nasledujúcich príkladov, ale odborník ľahko pozná, že opísané chemické reakcie sú všeobecne aplikovateľné na prípravu zlúčenín inhibujúcich FKBP podľa vynálezu. Ked odborník pozná, že reakcia použitá na prípravu jednej zlúčeniny nemôže byť aplikovateľná na prípravu určitých zlúčenín podľa vynálezu, ľahko určí, že žiadaná syntéza takých zlúčenín môže byt úspešne realizovaná vhodnými modifikáciami známymi v stave techniky (napríklad vhodným blokovaním interferujúcich alebo chrániacich skupín, substitúciou inými konvenčnými reakčnými zložkami alebo rutinnou modifikáciou reakčných podmienok) alebo ďalšími reakciami tu opísanými (alebo analogickými reakciami k týmto opísaným reakciám). Hoci sú určité chrániace skupiny (skupiny, ktoré blokujú reakcie s jednou alebo viacerými inherentnými funkčnými skupinami) opísané v syntéznych príkladoch opísaných ďalej, odborník môže vybrať ďalšie vhodné chrániace skupiny, v závislosti od funkčných skupín a použitej chémie. Pozri Greene a Wutz, Protective Groups in Chemical Synthesis (2. vyd.), John Wiley &

Sons, NY (1991).

Východiskové materiály použité vo všetkých postupoch prípravy tu opísaných (pokiaľ to nie je uvedené inak) sú známe a dostupné alebo sa môžu ľahko pripraviť zo známych východiskových materiálov, všetky teploty sú uvádzané v stupňoch Celsia a všetky časti a percentá sú hmotnostné. Reakčné zložky boli získané od komerčných dodávateľov, ako je Aldrich Chemical Company alebo Lancaster Synthesis Ltd. Reakčné zložky

··

• · ·· ···· • ·· a rozpúšťadlá boli komerčného stupňa a boli použité tak ako boli získané od dodávateľov, s nasledujúcimi výnimkami: dichlórmetán (CH₂C1₂) sa pred použitím destiloval z hydridu vápnika? tetrahydrofurán (THF) sa destiloval pred použitím z benzofenónu sodného; a metanol sa sušil cez molekulárne sitá 4 Angst.

Rýchla stĺpcová chromatografia sa vykonávala pri použití silikagélu 60 (Merck Art 9385). Spektrá H¹-NMR (300 MHz) sa merali v roztokoch CDCl^ a stanovili sa na zariadení Varian300 pri použití Software Varian UNITYplus300. Chemické posuny sú udávané v častiach na milión (ppm) v smere klesajúceho póla z tetrametylsilánu ako vnútorného štandardu a kopulačné konštanty sú udané v Hertz. Používajú sa nasledujúce skratky: br = široký, s = singlet, d = dublet, t = triplet, q = kvartet, m = multiplet a cm = komplexný multiplet. Infračervené spektrá sa zapisovali na spektrometri Perkin Elmer 1600 séria FTIR a sú udané v hodnotách vlnočtov (cm^-1). Elementárne analýzy boli uskutočnené v Atlantic Microlab. Inc. Norcross, GA. Vysoko rozlišovacie hmotnostné spektroskopie (HRMS) boli vykonávané v Scripps Mass Spectra Laboratory, La Jolla, Ca. Teploty topenia (t.t.) sa stanovili na zariadení MelTemp II a sú nekorigované.

Pokiaí to nie je uvedené inak, reakcie uvedené ďalej sa vykonávajú pri pretlaku s balónom dusíka alebo argónu pri okolitej teplote v bezvodých rozpúšťadlách a v upevnených reakčných nádobách na zavedenie substrátov a reakčných zložiek injekčnou striekačkou. Sklenené potreby boli sušené teplom. Chromatografia v tenkej vrstve (TLC) sa vykonávala na sklom podložených silikagélových platniach 60 F 254 (Analtech, 0,25 mm) a eluovanie sa vykonávalo vhodnými zmesami rozpúšťadiel. Reakcie sa skúšali TLC a posudzovali sa spotrebou východiskových materiálov. Platne sa pozorovali pri požití UV lampy. Pozorovanie mohlo byt takisto uskutočňované pri použití škvŕn ako ninhydrínu, molybdenátu amónneho, jódovej komôrky alebo ·· ···· • · • ··· ·· • · ··· • « • « ·· • · · • · · ·· ··· • · • · ·· ·· panisaldehydovej sprejovej zložky alebo fosfomolybdénovej kyseliny (Aldrich Chemical, 20 % hmotn. v etanole) aktivovanej teplom.

Spracovanie sa zvyčajne vykonáva zdvojnásobením reakčného objemu s reakčným rozpúšťadlom alebo extrakčným rozpúšťadlom a premytím indikovaného vodného roztoku pri použití 25% objemu reakčného roztoku (pokiaí to nie je uvedené inak). Roztoky obsahujúce produkt sa sušia nad bezvodým síranom sodným a nasleduje filtrácia a odparenie rozpúšťadla pri zníženom tlaku na rotačnom odparovači. Rýchla stĺpcová chromatografia (Still a kol., J. Org. Chem. 43:2923 (1978)) sa vykoná pri použití pomeru silikagélu 60 (Merck Art 9385): surovému materiálu v rozsahu 20:1 až 50:1. Hydrogenolýza sa uskutoční za tlaku uvedenom v príkladoch alebo pri okolitom tlaku.

Pri príprave zlúčenín sa môže postupovať podía reakčných schém uvedených ďalej. Tieto schémy zahŕňajú stupne (v rôznom poradí) ochrany (s chrániacou skupinou R³²) koncového dusíka, ktorý bude niesť substituent R¹ vo finálnej zlúčenine všeobecného vzorca I-a alebo I-b, tvorbu [3.3.1] alebo [4.3.1] azamidových jadier a funkcionalizáciu piperazínového alebo 1,4-diazaheptánového kruhu substituentmi X alebo X¹ a X² a Y za vzniku medziproduktových zlúčenín všeobecného vzorca Ill-a alebo V-a:

Také zlúčeniny všeobecného vzorca Ill-a a V-a sa môžu premeniť na zlúčeniny všeobecného vzorca I-a a I-b nasledovne:

) odstránením chrániacej skupiny R³² pri vhodných redukčných podmienkach (tieto podmienky sú všeobecne pre odbor25 ·· ··· ·· ···· • · · • · ··· • · · • · · ·· ··· ·· • · · • · • · · • · ·· · nika zrejmé napríklad na základe podrobností uvedených v príkladoch dalej) na prípravu zlúčenín ΙΙΙ-b a V-b; a

2) kopuláciou zlúčeniny pri ktorej bola odstránená chrániaca skupina všeobecného vzorca ΙΙΙ-b alebo V-b s reakčným činidlom vzorca IV:

_R'Ar^0H

O (IV) kde R¹ má význam uvedený hore, za vhodných kopulačných podmienok (tieto podmienky sú všeobecne pre odborníka zrejmé napríklad na základe podrobností uvedených v príkladoch ďalej); za získania zlúčeniny všeobecného vzorca I-a alebo I-b. Vhodné chrániace skupiny R³² pre dusík sú opísané ďalej alebo sú všeobecne odborníkovi^;'známe (pozri Greene a Wutz, Protective Groups in Chemical Synthesis (2. vyd.);*John Wiley & Sons, NY (1991).

V nasledujúcich prípravách je chrániaca skupina R³² výhodne benzyloxykarbonyl, ale môžu sa použiť aj iné vhodné skupiny chrániace dusík.

Schéma 1

Schéma 1, ktorá je zobrazená ďalej, je užitočná na prípravu zlúčeniny 7 (a ďalších zlúčenín analogickými metódami, ako je uvedené v tabulke 1). V schéme 1 a v príkladoch uvedených ďalej je Z benzyloxykarbonyl. Popri benzyloxykarbonylu sa môžu použiť ďalšie skupiny vhodné ako chrániace skupiny pre koncový dusík (pozri Greene a Wutz).

ry

...X*0 ’ ⁰ ° Dioxán Dioxán > ·.· , 90’C ² 99% výťažok 3 ⁰

Z1

N»3H, _ ^HCI C*^Nj

K5?^H Dioxán eurový ·· ···· • · • ··· • · ·· ··· • · « ··· ··

Príklady uskutočnenia vynálezu l-Benzylester piperidín-l,2,6-trikarboxylovej kyseliny (zlúčenina 1)

HOOC

2,6-Pyridíndikarboxylová kyseliny (25 g, 0,15 mol) sa rozpustí v 2,0M NaÔH (154 ml) a H₂O (30 ml) pri teplote miestnosti, a umiestni do 500ml Parrovej nádoby. Pridá sa ródium na práškovej alumine (5%, 1,87 g) a zmes sa preplachuje argónom 15 minút. Reakčná zmes sa trepe pod 0,3867 MPa vodíka 48 hodín. Suspenzia sa filtruje cez stlačený celit a čistý filtrát sa ochladí na teplotu O’C. K ochladenému filtrátu sa pridá benzylchlórformiát (30,62 g, 0,18 mol) v troch častiach počas 30 minút a roztok sa nechá dosiahnuť teplotu miestnosti a mieša ďalších 5 hodín. Zvyšný benzylchlórformiát sa extrahuje zo zmesi dietyléterom. Vodná vrstva sa okyslí 2N HC1 a extrahuje etylacetátom (EtOAc). EtOAc sa prevedie cez krátku zátku Na₂SO₄ a odparí. Zvyšok sa trituruje s EtOAc (20 ml), a výsledná biela pevná látka sa zoberie filtráciou vo vákuu, premyje EtOAc (3 x 20 ml) a suší na vzduchu a získa sa zlúčenina 1 (38,3 g, 83% výťažok). Rf =0,06 (10% MeOH/CHCl₃)?

¹H NMR: S 1,49 - 1,73 (m, 4H), 1,96 - 2,03 (m, 2H), 4,48 - 4,65 (m, 2H), 5,10 (s, 2H,, 7,26 - 7,35 (m, 5H).

Benzylester 2,4-dioxo-3-oxa-9-aza-bicyklo[ 3.3.1 ]nonan-9karboxylovej kyseliny (zlúčenina 2) ·· • · ·· ··· • · • · ·· ·· ···· • · · • · ··· • · · • · · ·· ···

Benzylester piperidín-l,2,6-trikarboxylovej kyseliny (zlúčenina 1, 19,7 g, 64,11 mmol) sa suspenduje v acetanhydride (80 ml, 848 mmol) v 250ml suchej banke s guíatým dnom. Zmes sa mieša pri teplote 70’C 30 minút, kým nevznikne čistý roztok. Zvyšný acetanhydrid sa odstráni vo vákuu a získa sa zlúčenina 2 (18,5 g, 100 %) ako číry olej. Materiál, ktorý má dostatočne dobrú kvalitu sa použije v ďalšej reakcii bez ďalšieho čistenia. Produkt je citlivý na vodu, preto sa pripraví na okamžité použitie v ďalšom kroku. NMR: δ 1,57-2,01 (cm, 6H), 5,14 (S, 2H), 5,17 (s, 2H), 7,32 - 7,37 (m, 5H).

Benzylester 3-(2-bénzyloxyetyl)-2,4-dioxo-3,9-diaza-bicyklo[3.3.1]nonan-9-karboxylovej kyseliny (zlúčenina 3)

Benzylester 2,4-dioxo-3-oxa-9-aza-bicyklo[3.3.lJnonan-9-karboxylovej kyseliny (zlúčenina 2, 1,02 g, 3,52 mmol) sa rozpustí v dioxáne (5 ml), a zhora sa pridá benzyloxyetylamín

Λ (0,50 g, 3,32 mmol). Zmes sa mieša pri teplote miestnosti 1 hodinu. Potom sa pridá acetanhydrid (0,62 ml, 6,64 mmol) a reakcia sa zahrieva pri spätnom toku 5 hodín. Dioxán sa odparí, a rýchlym chromatografickým čistením zvyšku (20% EtOAC/ hexány) sa získa zlúčenina 3 (1,26 g, 90 %) ako svetložltý olej: Rf (50% EtOAc/hexány): 0,80.

·· ·· ·· • · • ··· • ·· ·· ··· ··

Benzylester 3-(2-benzyloxyetyl)-2-metoxy-4-oxo-3,9-diaza-bicyklo[3.3.1]nonan-9-karboxylovej kyseliny (zlúčenina 4)

Benzylester 3-(2-benzyloxyetyl)-2,4-dioxo-3,9-diaza-bicyklo[3.3.1]nonan-9-karboxylovej kyseliny (zlúčenina 3,

0,46 g, 1,11 mmol) sa rozpustí v metanole (15 ml). Zmes sa ochladí na teplotu O'C a po častiach sa pridá NaBH₄ (0,06 g,

1,66 mmol) zhora. Reakčná zmes sa mieša 10 minút pri teplote 10*C a potom sa pridá 4N HCl v dioxáne na dosiahnutie pH v rozpätí od 1 do 2, a reakčná zmes sa mieša cez noc pri teplote miestnosti. Metanol sa odparí, a zvyšok sa rozpustí v EtOAc a vleje do nasýteného vodného roztoku NaHCO₃, a potom extrahuje EtOAc (3 x 10 ml). Kombinované extrakty sa premyjú solankou (10 ml), prevedú sa cez krátku zátku Na₂SO₄ a rozpúšťadlá sa odparia a získa sa zlúčenina 4 (0,40 g, 85 %, zmes izomérov) ako hustý svetložltý olej, ktorý má dostatočne dobrú kvalitu, aby bol použiteľný v ďalšom kroku bez ďalšieho čistenia Rf (40% EtOAc/hexány): 0,45.

Benzylester 3-(2-benzyloxyetyl)-2-oxo-3-diaza-bicyklo[3.3.1]nonan-9-karboxylovej kyseliny (zlúčenina 5)

0'

Benzylester 3-(2-benzyletoxyetyl)-2-metoxy-4-oxo-3,9-diaza-bicyklo[3.3.1]nonan-9-karboxylovej kyseliny (zlúčenina 4, 0,34 g, 0,76 mmol) sa rozpustí v CH₂C1₂ (5* ml) v 25 ml banke pod argónom. Do reakčnej banky sa po kvapkách pridá BF₃OEt₂ (0,18 ml, 1,52 mmol) (uvoľňujú sa dymy) a potom trietylsilán (0,24 g,1,52 mmol) a roztok sa mieša cez noc. CH₂C1₂ ^sa odparí a zvyšok sa rozpustí v EtOAc a premyje nasýteným NaHC0₃ (2 x 10 ml). Zmes sa extrahuje EtOAc (3 x 10ml). Organická vrstva sa suší nad N₂SO₄ a koncentruje. Čistením zvyšku rýchlou stĺpcovou chromatografiou s 20 % EtOAc/hexány sa získa zlúčenina 5 (0,27 g, 89 %, 1:1 zmes enantiomérov) ako číry olej.

Rf = 0,42 (50% EtOAc/hexány); ¹H NMR (hlavný rotamér): δ 1,62 - 1,72 (m, 6H), 3,25 - 3,50 (m, 2H), 3,68 - 3,90 (m,

5H), 4,49 (S, 2H), 4,75 (s, 1H), 5,14 (s, 2H), 7,26 - 7,34 (m, 1 OH).

3-(2-Benzyloxy-etyl)-3,9-diaza-bÍcyklo[3.3.l]nonan-2-on (zlúčenina 6)

Benzylester 3-(2-benzyloxyetyl)-2-oxo-3,9-diaza-bicyklo[3.3.1]nonan-9-karboxylovej kyseliny (zlúčenina 5, 0,15 g, 0,36 mmol) sa rozpustí v MeOH (5 ml) a pridá sa paládium i* (10%) na aktívnom uhlí (0,03 g). Z bomby sa privádza vodík 1 hodinu. Čierna suspenzia sa potom filtruje cez stlačený celit a metanol sa odstráni vysokovákuovým rotačným odparovačom a získa sa zlúčenina 6 (0,09 g, 90 %) ako hustý olej, ktorý má dostatočne dobrú kvalitu, aby bol použiteľný v ďalšom kroku bez ďalšieho čistenia.

··

·· ···· • · · • · ··· • · · • · · ·· ···

1-[3-(2-Benzyloxyetyl)-2-oxo-3 9-diaza-bicyklo[3.3 -2-(3,4,5-trimetoxyfenyl)-etán-1,2-dion (zlúčenina

l)non-9-yl]7)

3-(2-Benzyletoxyetyl)-3,9-diaza-bicyklo[3.3.1)nonan-2-on (zlúčenina 6, 0,1 g, 0,36 mmol) a 2-oxo-3,4,5-trimetoxyfenyloctová kyselina (34,3 mg,1,43 mmol) sa rozpustí v CH₂C1₂ (5 ml), a roztok sa ochladí na teplbtu 0C. Pridá sa hydrát hydroxybenzyltriazolu (HOBt, 0,06 g, 0,43 mmol), potom hydrochlorid l-(3-dimetylaminopropyl)-3-etylkarbodiimidu (EDO.HCl, 0,08 g, 0,43 mmol) a trietylamín (TEA, 0,06 g, 0,43 mmol). Reakčná zmes sa nechá dosiahnuť teplotu miestnosti a roztok sa mieša 6 hodín. Prchavé látky sa odstránia vysokovákuovým rotačným odparovačom. Zvyšok sa rozpusti v EtOAc a premyje 10% roztokom kyseliny citrónovej (10 ml), a potom vodou (10 ml), nasýteným NaHCO^ (10 ml) a solankou (10 ml). Kombinované organické vrstvy sa sušia nad Na₂SO₄ a koncentrujú. Rýchlym chromátografickým čistením zvyšku (30% EtOAc/hexány) sa získa zlúčenina 7 (0,14 g, 78 %) ako svetložltý olej. Rf (50%, EtOAc/ hexány) = 0,13; IR; 2941, 2870, 1646, 1573, 1499, 1451, 1416, 1323, 1239, 1166, 1127, 1007, 933 cm“¹; ^ΧΗ NMR (hlavný rotamér); δ 1,60 - 2,18 (m, 6H), 3,21 - 3,29 (m, 1H), 3,50 (dd,

1H, J = 37, 12,5), 3,67 - 4,01 (m, 13H), 4,15 (s, 1H), 4,15 (S, 1H), 4,49 (S, 2H), 5,19 (s, 1H), 7,19 (d, 2H, J = 8,7 Hz),

7,26 - 7,37 (m, 5H), HRMS (M⁺H⁺): očakávané 497,2288, pozorované 497,2274.

·· • · ·· · • ··· • · • · ··· ·· ·· ···· • · • ··· ·· • · • · • · • · ·· ·

Schéma 2

Zlúčenina 12 a analógy uvedené v tabuike ľ sa môžu pripraviť všeobecne podlá metódy opísanej v schéme 2. V tejto schéme 2 je benzyloxykarbonyl (napríklad v zlúčeninách 8, 9 a 10). Popri benzyloxykarbonylu môžu byt použité aj iné skupiny vhodné ako chrániace skupiny pre koncový atóm dusíka.

OMe

Benzylester 3-[ 2-(2-metoxyfenyl)etyl ] -2,4-dioxo-3,9-diazabicyklo[3.3,l]nonan-9-karboxylovej kyseliny (zlúčenina 8)

Benzylester 2,4-dioxo-3-oxa-9-aza-bicyklo[3.3.l]nonan-9-karboxylovej kyseliny (zlúčenina 2,1,00 g, 3,45 mmol), ktorý sa pripraví zo zlúčeniny 1, sa rozpustí v dioxáne (1 ml) a zhora sa pridá 2-metoxyfenetylamín (0,50 ml, 3,45 mmol).

• · ·· ···· • ·

Zmes sa mieša pri teplote miestnosti 1 hodinu. Po tomto čase sa pridá acetanhydrid (0,65 ml, 6,9 mmol) a reakčná zmes sa zahrieva pri spätnom toku 5 hodín. Rýchlym chromatografickým čistením zvyšku (20% EtOAc/hexány) sa získa zlúčenina 8 (1,23 g, 90% výťažok) ako číry olej. Rf = 0,75 (50% EtOAc/hexány), 0,66; ·*Ή NMR: S 1,75 - 2,05 (m, 6H) , 2,84 - 2,89 (m, 2H),

3,83 (s, 3H), 4,04 - 4,10 (m, 2H), 4,90 (Široký s, 2H), 5,16 (s, 2H), 6,78 - 6,83 (m, 2H), 7,05 (dd, 1H, J = 7,5, 1,6), 7,13 - 7,20 (m, 1H), 7,33 - 7,41 (m, 5H) .

Benzylester 2-hydroxy-3-[2-(metoxyfenyl)-etyl)-4-oxo-3,9-diazabicyklo[3.3.1]nonan-9-karboxylovej kyseliny (zlúčenina 9) .OMe

Benzylester 3-[2-(2-metoxyfenyl)-etyl]-2,4-dioxo-3,9-diaza-bicyklo[3.3.l]nonan-9-karboxylovej kyseliny (zlúčenina 8, 0,77 g,1,82 mmol) sa rozpustí v metanole (18 ml). Zmes sa ochladí na teplotu 0^sC, a zhora sa po častiach pridá NaBH^ (0,14 g, 3,64 mmol). Reakčná zmes sa mieša 10 minút a potom sa opatrne reakcia preruší vodou. MeOH sa odstráni pri zníženom tlaku, a zvyšok sa extrahuje EtOAc. Kombinované organické vrstvy sa premyjú 10% kyselinpu citrónovou (5 ml), vodou (5 ml), nasýteným NaHCO-j (5 ml), a solankou (5 ml), a nakoniec sa prevedú cez krátku zátku Na₂S0^. Rozpúšťadlá sa odparia a získa sa zlúčenina 9 (0,65 g, 83%, zmes izomérov) ako číry olej, ktorý má dostatočne dobrú kvalitu, aby bol v ďalšom kroku použitelný bez ďalšieho čistenia. Rf - 0,5 (50% EtOAc/hexány).

Zlúčenina 10 o

OMe

Benzylester 2-hydroxy-3-[2-(2-metoxyfenyl)etyl]-4-oxo-3,9-diazabicyklo[3.3.1]nonan-9-kärboxylovej kyseliny (zlúčenina 9, 0,65 g, 1,52 mmol) sa rozpustí v CH₂C1₂ (1 ml) a ochladí na teplotu 0”C. Pridá sa trifluóroctová kyselina (TFA, 0,59 ml, 7,64 mmol) a reakčná zmes sa mieša pri teplote 23’C cez noc. Rozpúšťadlo sa odstráni pri zníženom tlaku a zvyšok sa rozpusti hr EtOAc (10 ml) a premyje NaHC0₃ (10 ml) a solankou (10 ml). Organická vrstva sa suší nad Na₂SO₄ a koncentruje. Zvyšok sa čistí rýchlou stĺpcovou chromatografiou (40% EtOAc v hexán och) a získa sa zlúčenina 10 (0,54 g, 87 %, jeden diastereomér) ako číry olej. Rf = 0,30 (50% EtOAc/hexány); NMR: δ 1,69 - 2,06 (m, 6H), 2,72 - 3,10 (m, 3H),

3,83 (s, 3H), 4,55 - 5,27 (m, 6H), 6,73 - 6,85 (m, 2H), 7,03 - 7,34 (m, 6H).

Zlúčenina 11

OMe

Adukt 10 (0,26 g, 0,64 mmol) sa rozpustí v MeOH (5 ml), a pridá sa paládium (10%) na aktívnom uhlíku (0,05 g). Vodík sa aplikuje z bomby 1 hodinu. Čierna suspenzia sa potom fil• · ·· • ·· ·· ···· • · · • · ···

truje cez kompaktný Celit a metanol sa odstráni vo vysokovákuovom rotačnom odparovači a získa sa zlúčenina 11 (0,13 g, 76%) ako hustý olej, ktorý má dostatočne dobrú kvalitu, aby bol v dalším kroku použiteľný bez ďalšieho čistenia.

Zlúčenina 12

OMe .OMe

OMe

OMe

Adukt 1:1 (0,13 g, 0,48 mmol) a 2-oxo-3,4,5-trimetoxyfenyloctová kyselina (0,14 g, 0,57 mmol) sa rozpustí v CH₂Cl2 (5 ml), a roztok sa ochladí na teplotu 0 ’C. Pridá sa najskôr HOBt (0,08 g, 0,57 mmol), potom EDC.HC1 (0,11 g, 0,57 mmol) a TEA (0,08 ml, 0,57 mmol). Reakčná zmes sa nechá dosiahnuť teplotu miestnosti a roztok sa mieša 6 hodín. Prchavé látky sa odstránia pri zníženom tlaku, zvyšok sa rozpustí v EtOAc a premyje 10% roztokom kyseliny citrónovej (10 ml), potom vodou (10 ml), nasýteným vodným NaHCO₃ (10 ml) a solankou (10 ml). Kombinované organické vrstvy sa sušia nad Na₂SO₄ a potom koncentrujú. Rýchlym chromatografickým čistením zvyšku (30% EtOAc/hexány) sa získa zlúčenina 12 ako žltý olej (0,19 g, 83 %). Rf = 0,42 (50% EtOAc/hexány); IR: 2941, 2838, 1645, 1584, 1502, 1453, 1329, 1265, 1164, 1128, 1074, 1003, 734 cm¹; ¹H NMR (hlavný rot^jnér): 5 1,89 - 2,19 (m, 6H), 2,70 - 3,20 (m, 2H), 3,52 (s, 3H), 3,68 - 3,90 (m, 9H),

4,56 - 4,67 (m, 2H), 4,94 - 5,01 (m, 1H), 5,21 (s, 1H), 5,75 (s, 1H), 6,23 (d, 1H, J = 7,5), 6,36 - 6,46 (m, 1H), 6,66 (s, 1H), 6,80 (s, 1H), 7,26 - 7,31 (m, 1H); HRMS (M⁺Na⁺): očakávané 517,1951, pozorované 517,1951.

·· • ·· ·· · • ··· • · · · • · · ··· ·· ···· • · • ··· • · · • · ··· ··

Schéma 3

Zlúčeniny ako je zlúčenina 15 dalej a dalšie príbuzné zlúčeniny ako sú uvedené v tabulke 1 sa môžu pripraviť všeobecnou metódou uvedenou v schéme 3, kde Z je vhodná chrániaca skupina pre atóm dusíka, ako je benzyloxykarbonyl.

HOOC'^^'COOH

Z

ACjO w’c ^H,Nw^O

AcjO

Dioxán Dioxán

90’C 13 99% výťažok 216

Hj, 0.1 MPa MeO o . -► 14 -~ ó

Pd/C EOCXCI hod. hobt 15

TEA.CH2CI2 7SV.

Benzylester 2,4-diôxo-3-(4-fenylbutyl)-3,9-diaza-bicyklo[3.3.1]nonan-9-karboxylovej kyseliny (zlúčenina 13)

[3.3.1]Anhydrid 2 (0,54 g, 1,89 mmol, pripravený zo zlúčeniny 1 sa rozpustí v 1 ml dioxánu. Zhora sa pridá 4-fenylΛ butylamín (0,28 g, 1,89 mmol). Zmes sa mieša pri teplote miestnosti 1 hodinu. Potom sa pridá acetanhydrid (0,62 m, 3,78 mmol) a reakčná zmes sa zahrieva pri spätnom toku 5 hodín. Dioxán sa odparí a rýchlym chromátografickým čistením zvyšku (40% EtOAc/hexány) sa získa zlúčenina 13 (0,75 g, 95% výťažok) ako bezfarbý hustý olej. Rf = 0,66 (40% EtOAc/hexány); IR: 2935, 2863, 1710, 1688, 1430, 1341, 1311, 1256,

1126, 1096, 1069, 749, 699 cm¹; ¹H NMR: δ 1,41 - 2,04 (m, 8H), 2,61 (t, 2H, J = 6,9), 3,79 (t, 2H, J = 6,9), 4,96 (s, 2H), 5,14 (s, 2H), 7,14 - 7,37 (m, 10H).

3- (4-Fenylbutyl) -3,9-diaza-bicyklo[3.3. l]nonan-2,4-dion (zlúčenina 14)

Benzylester 2,4-dioxo-3- (4-fenylbutyl) -3,9-diaza-bicyklo[3.3.1]nonan-9-karboxylovej kyseliny (zlúčenina 13, 0,57 g, 1,36 mmol) sa rozpustí v THF (3 ml), a pridá sa 10% paládium na aktívnom uhlí (0,12 g). Z bomby sa privádza vodík 1 hodinu. Čierna suspenzia sa filtruje cez kompaktný Celit a THF sa odstráni vo vysokovákuovom rotačnom odparovači a získa sa zlúčenina 14 (0,36 g, 92 %) ako hustý olej, ktorý má dostatočne dobrú kvalitu, aby bol v ďalšom kroku použitý bez ďalšieho čistenia.

9- [ Oxo- (3,4,5-trimetoxyfenyl) -acetyl ]-3- (4-f enylbutyl )-3,9-diaza-bicyklo[3.3.1]nonan-2,4-dionu (zlúčenina 15)

• · · ·· ···· • · · • · ··· ·· ·· ··

3- (4-Fenylbutyl) -3,9-diaza-bicyklo[ 3.3.1)nonan-2,4-dion (zlúčenina 14, 0,42 g,1,47 mmol) a 2-oxo-3,4,5-trimetoxyfenyloctová kyselina (0,35 g,1,47 mmol) sa rozpustí v CH₂C1₂ (5 ml) a roztok sa ochladí na teplotu 0^eC. Pridá sa najskôr HOBt (0,21 g, 1,54 mmol), potom EDC.HC1 (0,30 g, 1,54 mmol) a TEA (0,15 g, 1,47 mmol). Reakčná zmes sa nechá dosiahnuť teplotu miestnosti a mieša 5 hodín. Prchavé látky sa odstránia vo vysokovákuovom rotačnom odparovači. Zvyšok sa rozpustí v EtOAc a premyje 10% roztokom kyseliny citrónovej (10 ml), potom vodou (10 ml), nasýteným NaHCO₃ (10 ml) a solankou (10 ml). Kombinované organické vrstvy sa sušia nad Na₂SO₄ a koncentrujú. Rýchlou stĺpcovou chromatografiou zvyšku (30% EtOAC/hexány) sa získa zlúčenina 15 ako svetložltá pevná látka (0,25 g, 34 % jeden izomér), t.t. = 101 až 103’C; Rf = 0,32 (50% EtOAc/hexány); IR: 2939, 2866, 1739, 1682, 1651, 1582, 1503, 1454, 1416, 1361, 1337, 1243, 1167, 1126, 1067, 991, 914, 862 cm¹; ¹H NMR (hlavný rotamér): δ 1,56 - 1,64 (m, 5H),1,93 - 2,01 (m, 5H), 2,61—2,66 (m, 2H), 3,80 - 3,85 (m, 2H), 3,95 (s,

9H), 4,51 (široký s, IH), 5,46 (široký s, IH), 7,14 - 7,29 (m, 7H); HRMS (M⁺H⁺): očakávané 509,2288, pozorované 509,2275; Elementárna analýza: vyrátané C (66,13), H (6,34), N (5,51); nájdené C (66,00), H (6,37), N (5,50).

Schéma 4

Schéma 4 je užitočná na prípravu zlúčenín všeobecného vzorca 18 a podobných zlúčenín uvedených v tabuíke 1 (napríklad zmenou arylmetylbromidového činidla použitého v prvom kroku).

• ·· ·· · • ··· • · · · • · · ··· ·· ·· ···· • · · • · ··· • · • · ·· ··· ·· • · · • · • · • · ·· ·

Vo vzorci 18 sú R³, R⁴, R⁵, R⁶ a R⁷ vždy nezávisle H alebo akýkoľvek vhodný substituent viazaný k cyklickému kruhu cez o, N, C alebo S. Z v hore uvedenom vzorci je chrániaca skupina, ako je benzyloxykarbonyl.

Zlúčenina 16 reaguje s arylsubstituovaným brómmetánom v prítomnosti hydridu sodného a DMF za získania zlúčeniny 17. Zlúčenina 17 potom reaguje s kyselinou sírovou 2a získania zlúčeniny všeobecného vzorca 18. Zlúčeniny všeobecného vzorca 18 sa premenia na zlúčeninu všeobecného vzorca 1-a odstránením chrániacej skupiny Z a kopulovaním vzniknutého produktu so zlúčeninou všeobecného vzorca IV.

Schéma 5

COO!

Z'^N'^COOMe T1CI4

N ’C00Me Acetón, HjO (kvánt.)

OMe'

Kopulácia

Rôzne zlúčeniny vzorca 1

O

MeOH

O

- 39 ·· ·· ···· ’ • · · · · ··· · : ···. ·:

• · · · · ·, ·· ·· ··· <

Finálny kopulačný krok s činidlom vzorca IV mení zlúčeninu 31 na žiadanú zlúčeninu vzorca I-a. Táto schéma je osobitne užitočná na prípravu zlúčenín ako sú tie, ktoré sú uvedené v tabulke 1 ďalej.

Schéma 6

Schéma 6 je užitočná na prípravu zlúčeniny 159 a ostatných príbuzných zlúčenín ako je uvedené v tabulke 1.

XX

XX

HOOC N COOK

ACjO

—.

80¾

² UMOM X JL -2«(<2FAncl)

MeOOCN^COOH -i-i . MeOOC' 'OMe z NaOMe/MeOH z

232 233

TiCl,

CHjCIj

-78¾

TMOF/TlOH

85°C.Sh

MeOOC

234

ΟιΟ«·ΝΜΜΟ —► acetón-voda

MeOOC'

233 x>

OH

Vodný NalO, . .

MeOOC^--éter

236

M^OC-O^OMe ÍSJÍí2í_fc HOoďQ^AjMej 237 ² 2 ¹

NH, ^,Me PPTS/ toluén BxjO z

239

80-90¾ Hj'Pd-C

21. ^{< sx,n}

OJto jO. PlO l.«M HCVCioxan ý A o ’d-C °*\_7 2. MKJ ° N-ž

Me0-O-%_H

EOC.HCI

HOBt

CHjCl, iMe

OMe

MeO O EOC.HCI DMA“ CHjCIj

159

1-Benzylester 2-metylester piperidín-1,2,6-trikarboxylovej kyseliny (zlúčenina 232)

Benzylester 2,4-dioxo-3-oxa-9-aza-bicyklo[3.3.1]nonan-9-karboxylovej kyseliny (zlúčenina 2,10 g, 34,51 mmol) sa rozpustí v metanole (50 ml). Reakčná zmes sa mieša pri teplote miestnosti 2 hodiny. MeOH sa odparí a získa sa zlúčenina 232 (10 g, 96 %). Rf - 0,47 (10% MeOH/CH₂Cl₂). Produkt má dostatočne dobrú kvalitu, aby bol v ďalšej reakcii použitelný bez ďalšieho čistenia.

l-Benzylester 2-metylester 6-metoxypiperidín-l,2-dikarboxylovej kyseliny (zlúčenina 233)

·· ···· ·· • · · · · · • · ··· · · • · · · · · • · · · · ·· ··· ·· ·

1-Benzylester 2-metylester 6-metoxypiperidín-l,2-dikarboxylove j kyseliny (zlúčenina 232, 10 g, 31,15 mmol) sa rozpustí v metanole (80 ml). Pridá sa 1 M roztok metoxidu sodného v metanole (20 ml). Konštantný prúd (pri použití platinových elektród) 0,3 A sa aplikuje 1,96 hodiny pri použití celkom 4,17 F/mol. Metanol sa odparí. Rýchlym chromatografickým čistením zvyšku (1:2 EtOAc/hexány) sa získa zlúčenina 233 (9,14 g,

%). Rf = 0,9 (10% MeOH/CH₂Cl₂).

1-Benzylester 2-metylester 6-alylpiperidín-l,2-dikarboxylovej kyseliny (zlúčenina 234)

1-Benzylester 2-metylester 6-metoxypiperidín-l,2-dikarboxylove j kyseliny (zlúčenina 233, 1,04 g, 3,39 mmol) sa rozpustí v CH₂C1₂ (10 ml) a roztok sa ochladí na teplotu -78^eC pri použití kúpela suchý lad-acetón. Po kvapkách sa počas 1 minúty pridá roztok 1 M TiCl₄ v CH₂C1₂ (3,7 ml) a potom alyltrimetylsilán (1,61 ml, 10,14 mmol). Kúpe! sa zmení za vodný a reakčná zmes sa mieša 2 hodiny. Reakčná zmes sa vleje do solanky (50 ml) a extrahuje CHC1₃ (2 x 50 ml). Kombinované organické vrstvy sa premyjú nasýteným roztokom NaHCO₃ (50 ml) a nakoniec sušia nad Na₂SO₄. Rozpúšťadlo sa odparí a zvyšok sa čistí rýchlou chromatografiou (1:5 EtOAc/hexány) a získa sa zlúčenina 234 (0,91 g,

%). Rf = 0,78 (1:2 EtOAc/hexány).

1-Benzylester 2-metylester 6-(2,3-dihydroxypropyl)piperidín-1,2-karboxylovej kyseliny (zlúčenina 235)

1-Benzylester 2-metylester 6-alyl-piperidín-l,2-dikarboxylovej kyseliny (zlúčenina 234, 0,087 g, 0,2 mmol) sa rozpustí v acetóne (2 ml) a vode (0,25 ml). Pridá sa najskôr oxid N-metylmolínu (0,068 g, 0,58 mmol) a potom 2,5% roztok OsO₄ v tBuOH (0,14 ml). Reakčná zmes sa mieša pri teplote miestnosti 14 hodín. Počas miešaní sa pridá pyrosulfát sodný (0,3 g) vo vode (1 ml) a výsledný roztok sa filtruje cez celit a premyje etanolom (10 ml). Rozpúšťadlá sa odstránia a zvyšok sa ·· ··· ·· ···· • · · • ·· ·· ··· čistí rýchlou stĺpcovou chromatografiou (100% EtOAc) a získa sa zlúčenina 235 (0,086 g, 89 %, ako zmes izomérov). Rf =

0,12 a 0,06 (2:1 EtOAc/hexány).

1-Benzylester 2-metylester 6-(2-oxoetyl)piperidín-l,2-dikarboxylovej kyseliny (zlúčenina 236)

1-Benzylester 2-metylester 6-(2,3-dihydroxypropyl)piperidín-1,2-dikarboxylovej kyseliny (zlúčenina 235, 0,614 g,

1,75 mmol) sa rozpustí v Et₂O (20 ml) a ochladí na teplotu 0C. Pridá sa 10% vodný roztok NaI0₄ (4 ml) a reakční zmes sa mieša 1 hodinu. Reakčná zmes sa vleje do solanky (15 ml) a extrahuje Et₂O (3 x 20 ml). Kombinované organické vrstvy sa ďalej premyjú vodným Na₂SO₃ (410 ml), nasýteným roztokom NaHCO₃ (10 ml), solankou (10 ml) a nakoniec sušia nad MgSO₄. Rozpúšťadlá sa odstránia a získa sa zlúčenina 236 (0,53 g,

%). Rf - 0,67 (1:1 EtOAc/hexány). Takto získaný materiál má dostatočne dobrú kvalitu, aby bol v ďalšej reakcii použiteľný bez ďalšieho čistenia.

1-Benzylester 2-metylester 6-(2,2-dimetoxyetyl)piperidín-l,2-dikarboxylovej kyseliny (zlúčenina 237)

1-Benzylester 2-metylester 6-(2-oxoetyl)piperidín-l,2-dikarboxylovej kyseliny (zlúčenina 236, 0,4 g,1,25 mmol), trimetylortoformiát (5 ml) a monohydrát p-toluénsulfónovej kyseliny (0,03 g) sa spoja, a reakčná zmes sa mieša pri teplote miestnosti 12 hodín. Pridá sa vodný NaHCO₃ (25 ml) a reakčná zmes sa extrahuje CHC1₃ (3 x 100 ml). Kombinované organické vrstvy sa sušia nad MgSO^ a koncentrujú. Zvyšok sa čistí rýchlou chromatografiou (1:2 EtOAc/hexány) a získa sa zlúčenina 237 (0,441 g, 96 %). Rf = 0,75 (1:1 EtOAc/hexány).

Benzylester 2-(2,2-dimetoxyetyl)-6-fenetylkarbamoylpiperidín-1-karboxylovej kyseliny (zlúčenina 239) ·· ·· • ··· • · · · · • · · · ··· ·· ·· ···· • · • ··· ··· ·· • · · • · • · · • · e· · l-Benzylester 2-metylester 6- (2,2-dimetoxyetyl)-piperidín-l,2-dikarboxylovej kyseliny (zlúčenina 237, 0,350 g, 0,96 mmol) sa rozpustí v metanole (5 ml) a 2N NaOH (4 ml). Reakčná zmes sa mieša pri teplote miestnosti 8 hodín. Metanol sa odparí a zvyšok sa rozpustí v Et₂O a premyje 5% KHSO₄ (10 ml), solankou (10 ml), suší nad Na₂SO₄ a koncentruje a získa sa zlúčenina 238 (0,335 g, 0,96 mmol), ktorá sa v ďalšej reakcii použije bez ďalšieho čistenia.

l-Benzylester 6-(2,2-dimetoxy-etyl)-piperidín-1,2-dikarboxylovej kyseliny (zlúčenina 238, 0,335 g, 0,96 mmol) a fenetylamín (0,14 g,1,15 mmol) sa rozpustia v CH₂C1₂ (20 ml). Pridá sa najskôr HOBt (0,156 g,1,15 mmol) a potom EDC.HC1 (0,221 g, 1,15 mmol). Reakčná zmes sa mieša pri teplote miestnosti 18 hodín. Pridá sa nasýtený roztok NaHCO₃ (25 ml) a potom sa extrahuje CHC1₃ (2 x 50 ml). Kombinované organické vrstvy sa sušia nad Na₂SO₄ a potom koncentrujú. Rýchlym chromatograf ickým čistením zvyšku (1:1 EtOAc/hexány) sa získa zlúčenina 239 (0,374 g, 86 %). Rf = 0,47 (1:1 EtOAc/hexány).

terc.-Butylester 2-oxo-3-fenetyl-3,10-diaza-bicyklo[4.3.1]dekan-10-karboxylovej kyseliny (zlúčenina 240)

Benzylester 2-(2,2-dimetoxyetyl)-6-fenetylkarbamoylpiperidín-l-karboxylovej kyseliny (zlúčenina 239, 0,297 g, 0,65 mmol) sa rozpustí v toluéne (15 ml) a banka sa ponorí do olejového kúpela s teplotou 80C. Pridá sa piridínium p-toluénsulfonát (0,0120 g, 0,05 mmol) a reakčná zmes sa mieša pri teplote 80’C 2 hodiny. Po tomto čase sa reakčná zmes ochladí a vzniknutá zrazenina sa odstráni filtráciou. Toluén sa odparí a zvyšok sa rozpustí v dioxáne (10 ml). Pridá sa N-terc.-butoxykarbonylanhydrid (0,285 g,1,31 mmol) a 10% paládium na aktívnom uhlí (0,1 g). Z Parrovho zariadení sa privádza vodík a reakčná zmes trepe pri 0,35 MPa 12 hodín. Čierna suspenzia sa potom filtruje cez kompaktný celit a dioxán sa odstráni. Rýchlym chromatografickým čistením zvyšku (1:2 EtOAc/hexány)

sa získa zlúčenina 240 (0,211 g, 90 %). Rf = 0,31 (1:2 EtOAc/hexány).

l-( 2-Oxo-3—f enetyl-3,10-diaza-bicyklo[4.3.1]dec-10-yl) -2-(3,4,5-trimetoxyfenyl)etán-l,2-dion (zlúčenina 159) terc.-Butylester 2-oxo-3-fenetyl-3,10-diaza-bicyklo[4.3.1]dekan-10-karboxylovej kyseliny (zlúčenina 240, 0,204 g, 0,56 mmol) sa rozpustí v 4M HCl v dioxáne (3 ml) a reakčná zmes sa mieša pri teplote miestnosti 1 hodinu. Rozpúšťadlo sa odstráni a zvyšok sa rozpustí v CHC1₃ (50 ml), premyje nasýteným roztokom NaHCO₃, suší nad Na₂SO₄ a koncentruje a získa sa biela pevná látka (0,142 g, 0,55 mmol), ktorá sa rozpustí v CH₂Cl₂ (10 ml). Pridá sa 3,3-dimetyl-2-oxo-pentanoová kyselina (0,131 g, 0,54 mmol), EDC.HCl (0,126 g, 0,66 mmol) a

4-DMAP (0,081 g, 0y66 mmol) a reakčná zmes sa mieša pri teplote miestnosti 18 hodín. Prchavé látky sa odstránia vo vysokovákuovom odparovači a zvyšok sa rozpustí v EtOAc a premyje vodou (10 ml), roztokom 1 N HCl (20 ml), nasýteným NaHCO^ (20 ml) a solankou (20 ml). Kombinované organické vrstvy sa sušia nad Na₂SO₄ a koncentrujú. Rýchlym chromatografickým čistením zvyšku (2:1 EtOAc/hexány) sa získa konečná zlúčenina 159 (0,120 g, 45% výťažok). Rf = 0,4 (2:1 EtOAc/hexány).

Schéma 7

Zlúčenina 162 a podobné zlúčeniny sa môžu pripraviť spôsobom opísaným ďalej.

eocjia

Hon

CH_tC>i

243

242

100^cC1.ih

PPTSnckňo

244

238

182 ·· ·· ··· • · · • · · • ·· ·· ·· ···· • · · • · ··· • · ·

Benzylester 2-(2,2-dimetoxyetyl)-6-(4-fenylbutylkarbamoyl)piperidín-l-karboxylovej kyseliny (zlúčenina 2*42)

Benzylester 6-(2,2-dimetoxyetyl)piperidín-1,2-dikarboxylovej kyseliny (zlúčenina 238,1 g, 2,85 mmol) a 4-fenylbutylamín (0,51 g, 3,42 mmol) sa rozpustí v CH₂C1₂ (60 ml). Pridá sa najskôr HOBt (0,462 g, 3,42 mmol) a potom EDC.HC1 (0,655 g, 3,42 mmol). Reakčná zmes sa mieša pri teplote miestnosti 12 hodín. Pridá sa nasýtený NaHCO₃ (25 ml) a reakčná zmes sa extrahuje CHC1₃ (2 x 50 ml). Kombinované organické extrakty sa sušia nad Na₂SO₄ a potom koncentrujú. Rýchlym chromatografickým čistením zvyšku (1:1 EtOAc/hexány) sa získa zlúčenina 242 (1,294 g, 94 %). Rf = 0,62 (1:1 EtOAc/ hexány).

9H-Fluoren-9-ylmetylester 2-(2,2-dimetoxyetyl)-6-(4-fenylbutylkarbamoyl) piperidín-l-karboxylovej kyseliny (zlúčenina 243)

Benzylester 2-(2,2-dimetoxyetyl)-6-(4-fenylbutykarbamoyl)-piperidín-l-karboxylovej kyseliny (zlúčenina 242, 0,887 g,

1,83 mmol) sa rozpustí v metanole (50 ml). Pridá sa paládium (10%) na aktívnom uhlí (0,09 g). Vodík sa privádza z Parrovho zariadenia a reakčná zmes sa trepe pri 0,35 MPa 15 hodín, čierna suspenzia sa potom filtruje cez kompaktný celit a metanol sa odstráni. Zvyšok sa rozpustí v dioxáne (25 ml). Pridá sa najskôr 9-fluorenylmetylchlórformiát (0,473 g,1,83 mmol) a potom NaHC0₃ (0,307 g, 3,66 mmol) rozpustený vo vode (7 ml). Reakčná zmes sa mieša pri teplote miestnosti 10 hodín, vleje do ladu a 5% roztoku KHSO₄ a potom extrahuje CHC1₃ (2 x 100 ml). Rýchlym chromatografickým čistením zvyšku (1:2 EtOAc/hexány) sa získa zlúčenina 243 (1,050 g, 100 %). Rf = 0,59 (1:1 EtOAc/ hexány).

·· ·· ···· • · • ···

• · • · • · ··· ·· ·

9H-Fluoren-9-ylmetylester 2-oxo-3-(4-fenylbutyl)-3,10-diazabicyklo[4,3,l]dec-4-en-10-karboxylovej kyseliny (zlúčenina 244)

9H-Fluoren-9-ylmetylester 2- (2,2-dimetoxyetyl)-6-(4-fenylbutylkarbamoyl)piperidin-l-karboxylovej kyseliny (zlúčenina 243, 1 g, 1,75 mmol) sa rozpusti v toluéne (25 ml). Pridá sa pyridínium p-toluénsulfonát (0,02 g, 0,08 mmol) a reakčná zmes sa mieša pri teplote 100°C 2 hodiny. Po tomto čase sa reakčná zmes ochladí, toluén sa odparí a zvyšok sa rozpustí v EtOAc (75 ml), premyje nasýteným roztokom NaHCO₃ (25 ml) a suší nad Na₂SO₄. Rýchlym chromátografickým čistením zvyšku (1:2 EtOAc/ hexány) sa získa zlúčenina 244 (0,770 g, 87 %). Rf = 0,5 (1:2 EtOAc/hexány).

1-[2-ΟΧΟ-3-(4-fenylbutyl)-3,10-diaza-bicyklo[4.3.l]dec-4-en-10-yl]-2-(3,4,5-trimetoxyfenyl)etán-l,2-dion (zlúčenina 162)

9H-Fluoren-9-ylmetylester 2-oxo-3-(4-fenylbutyl)-3,10-diaza-bicyklo[4.3.1]dec-4-en-10-karboxylovej kyseliny (zlúčenina 244, 0,740 g, 1,46 mmol) sa rozpustí v metanole (15 ml) a pridá sa roztok 1 N NaOMe v metanole (2,5 ml). Reakčná zmes sa mieša pri teplote miestnosti 2 hodiny. Prchavé látky sa odstránia a produkt sa extrahuje CHC1₃, suší nad Na₂SO₄ a koncentruje na bielu zrazeninu, ktorá sa rozpustí v CHC1₃ (10 ml). Pridá sa 3,3-dimetyl-2-oxo-pentanoová kyseliny (0,141 g, 0,58 mmol), HOBt (0,080 g, 0,58 mmol), EDC.HCl (0,113 g, 0,58 mmol) a TEA (0,082 ml, 0,58 mmol) a reakčná zmes sa mieša pri teplote miestnosti 18 hodín. Prchavé látky sa odstránia pri použití vysokovákuového odparovače a zvyšok sa rozpustí v EtOAc a premyje 10% roztokom kyseliny citrónovej (10 ml) a potom vodou (10 ml), nasýteným NaHCO₃ (10 ml) a solankou (10 ml). Kombinované organické vrstvy sa sušia nad Na₂SO₄ a koncentrujú. Rýchlym chromatografickým čistením zvyšku (1:1 EtOAC/hexány) sa získa zlúčenina 162 (0,122 g, 50%).

Rf (1:1 EtOAc/hexány,: 0,122.

• · ·· ···· • · • ··· • · · • · ··

Biochemické a biologické skúšky

Na určenie aktivity zlúčenín podlá vynálezu sa môže použiť rad skúšok a techník. Aktivita zlúčenín podlá vynálezu pre stimuláciu neuritového rastu je priamo spojená s jeho väzbovou afinitou k FKBP12 a jeho schopnosťou inhibovať rotamázovú aktivitu FKBP12. Za účelom kvantifikovania tejto inhibičnej aktivity sa môžu použit skúšky známe v stave techniky na meranie väzby ligandu a enzýmovej aktivity. Skúšky na stimuláciu neuritového rastu sú opísané ďalej.

Napríklad zlúčeniny môžu byť testované na určenie ich neurotropnej aktivity pri použití metódy, ktorú opísal Lyons a kol., Proc. Natl. Acad. Sci., 91: 3191-3195 (1994). V tejto fenochromocytomovej skúške na potkanoch pre neuritový rast sú potkanie fenochromocytomové bunky PCI2 udržované pri teplote 37’C a 5% CO₂ v Dulbeccovom modifikovanom Eaglovom prostredí obohatenom 10% za tepla inaktivovaným konským sérom a 5% za tepla inaktivovaným fetálnym hovädzím sérom. Bunky sa potom umiestnia v koncentrácii 10^ do jamky s priemerom 35 mm pokrytej kolagénom z potkaních chvostov a náter má plošnú hmotnosť 5 mg/cm². Prostredie sa nahradí DMEM obohateným 2% konským sérom, 1% fetálnym hovädzím sérom, nervovým rastovým faktorom (NFG) a/alebo rôznymi koncentráciami testovaných zlúčenín. Do kontrolných kultúr sa dávkuje NGF bez akejkoľvek testovanej zlúčeniny.

Ďalší spôsob, ktorý sa môže použiť na meranie sily stimulácie neuritového rastu je skúška potkanej dorzálnej koreňovej ganglie. Pri tejto skúške sa oddelí dorzálna koreňová ganglia z 16 dní starých potkaních embryí Sprague-Dawley. Zmyslová ganglia sa potom kultivuje v kolagénom potiahnutých 35 mm Falconových miskách s N-2 prostredím (DMEM/Ham Fi₂,

1:1) pri 37’C v 15% CO₂. Prostredie je obohatené selénom, progesterénom, inzulínom, putrescínom, glukózou, penicilínom a streptomycínom. Ganglia sa potom ošetria s rôznymi koncen·· ···· • · • · ·· ·· ··· • · ··· ·· ·· • · · • · • · · • · ·· · tráciami NGF (0-100 ng/ml) a testovanou zlúčeninou. Zmyslové gangliá sa pozorujú každé dva až tri dni pod fázovým kontrastným mikroskopom a meria sa dĺžky axónu. Pozri Lyons a kol., PNAS, 91: 3191-3195 (1994).

Na meranie aktivity zlúčenín podía vynálezu sa môžu použiť tíalšie vhodné skúšky. Napríklad imunosupresívna aktivita môže byť stanovená meraním inhibície kalcineurinovej fosfatázovej aktivity komplexmi zlúčenín podía vynálezu viazanými k FKBP (Bábine a kol., Bioorg. Med. Chem. Lett., 6, 385-390, 1996). Aktivita fosfopeptidové fosfatázy kalcineurinu sa skúša pri 30’C pri použití kontinuálnej kopulovanej spektrofotometrickej skúšky (Etzkorn a kol., Biochemistry, 32, 2380,

1994) a fosforylovaného 19-mer peptidového substrátu odvodeného z regulačnej podjednotky (Rjj) od cAMP závislej proteínovej kinázy. Skúšobná zmes obsahuje 50 mM MOPS (pH 7,5), 0,1 M NaCl, 6 mM MgCl₂, 0,5 mg/ml hovädzieho séra albumínu, 0,5 mM ditiotreitolu, 1 mM CaCl₂, 1 mM MnCl₂, 20 μΜ fosforylovaného RjX peptidu, 20 nM íudského rekombinantního kalcineurinu, 40 nM kalmodulinu, 10 gg/ml purínovej ribonukleozidovej fosforylázy a 200 μΜ metyltioguanozínu, ako opísal Etzkorn a kol., plus 1 % dimetylsulfoxidu (DMSO) ako korozpúšťadla a 100 μΜ FKBP. Zlúčeniny sú testované na inhibíciu kalcineurinu závislého od FKBP pri ich maximálnej rozpustnosti. Pri týchto podmienkach sa zrejmá inhibičná konštanta pre inhibíciu íudského rekombinantného kalcineurinu pomocou FKBP-FK506 namerí 43 nM.

Väzba zlúčenín na FKBP sa môže meriť priamo pri použití mikrokalorimetrie. Kalorimetrické titrácie sa uskutočnia pri použití zariadenia MCS-ITC (MicroCal Inc., Nortampton, MA). Titrácie sa môžu vykonať nasledovne. Proteínový dialyzát sa odplyňuje 15 minút pri použití zariadenia MicroCal. K spolurozpúšťadlu (typicky DMSO) sa pridá rezervný roztok inhibítoru a odplynený dyalyzát, potom nasleduje krátka sonifikácia za získania finálnych inhibičných roztokov, ktoré sa použijú na titrácie. Finálne inhibičné roztoky sú v koncentráciách v roz• · ··· • ι ·· ···· • · · • · ··· • · · X ··· sahu 10 až 80 μΜ. K spolurozpúštadlu a odplynenému dialyzátu sa pridá dialyzovaný proteín a získajú sa roztoky FKBP12 v koncentráciách v rozsahu 200 až 1600 μΜ. Ako 'náhle sa pripravia obidva roztoky pri použití odplyneného dialyzátu, žiadne dalšie odplynenie roztokov sa nevykonáva. K proteínovým roztokom sa pridá spolurozpúštadlo, aby sa udržovala stála koncentrácia rozpúšťadla počas celého priebehu titrácie. Proteín sa titruje do inhibítoru pri použití 125 μΐ injekčnej striekačky. Titrácie sa vykonajú s ligandom v bunke vzhľadom na nízku rozpustnosť inhibitorov. Typicky sa predbežne injektujú 2 μΐ a potom pätnástimi 8μ1 injekciami pri rôznych injekčných intervaloch. Pre každú titráciu sa uskutoční úplná sada riediacich kontrol. K odplynenému dialyzátu sa pridá príslušný objem spolurozpúšťadla, aby sa získal pufrový spolurozpúšťadlový roztok, ktorý sa použije na získanie rozpúšťacích tepel riedení reakčných zložiek. Po úprave rozpúšťacích tepel riedení sa stanovia titračné výsledky pri použití One Set of Sites Model a ORIGIN Software dodávaných spolu so zariadením.

Bolo zistené, že väzba k FKBP, ako bola nameraná mikrokalorimetriou je v dobrom súlade so silou inhibície rotamázovej reakcie, ktorá sa ľahko skúša spôsobmi známymi v stave techniky (pozri napríklad Fischer a kol., Biochim Biophys.

Acta, 791, 87 (1984); Fischer a kol., Biochemed. Biochem. Acta 43, 1101 (1984); Fischer a kol., Náture 337, 476-478 (1989); Siekierka a kol., Náture, 341, 755-57 (1989); U.S. patent č.

696135 a Harding a kol., Náture, 341, 758-760 (1989)).

Pri skúške inhibície rotamázy sa izomerizácia umelého substrátu N-(sukcinyl-Ala-Ala-Pro-Phe-p-nitroanilidu sleduje spektrofotometricky. Skúška zahŕňa cis formu substrátu, FKBP12, zlúčeninu, ktorá má byť testovaná a chymotrypsín. Chymotripsín je schopný štiepiť p-nitroanilín z trans formy substrátu, nie však z cis formy. Uvoľnenie p-nitroanilínu sa merí spektrofotometricky. Pri použití tejto skúšky sa pridajú rôzne množstvá ·· ···· • · • ··· ·· • : ·: :

• ·· ·· zlúčenín všeobecného vzorca I-a alebo I-b, ktoré inhibujú FKBP rotamázu, k cis N-sukcinyl-alanín-alanín-prolín-fenylalanín-para-nitroanilínu (Bachem, 3132 Kashiwa Street, Torrance, CA 90505) v prítomnosti FKBP12 a chymotrypsínu. Spektrofotometrické merania p-nitroanilinových koncentrácií umožňujúce hodnotenie hodnôt K; sú uvedené v tabuľke 1 ďalej.

Tabuľka 1
Zlúčenina číslo	Molekulárna štruktúra	Pripravená schémou č.	Počet izomérov	Rotamáza Kifu») (úM)
7	<fCH‘ C£f(rA'' O —o H»C	1 •»	2	0,160
12	Q-0'04 O-CH,	2		0,027

-50• ·· ·· ···· ·· · · · · · · · ·· * ··· · ···· · · ·:

• · · · · · ! : j ··· ·· ·· ··· ·· ···

Tabv	sn ;
Zlúčenina čislo	Molekulárna štruktúra	Pripravená schémou č.	Počet izomérov	Rotamáza
32	0	1	2	2,3
33	nŕxn CH,	1	2	0,227
34	JLÍ CH. <AA,° Ό	3	1	0,206
35	O-CH, ^OXf	3 P	1	0,073

··

-51··· • · • » ·· ···· • · · · • · ··· · • · · · · • · · · ·· ··· ··

Tabuľka 1
Zlúčenina číslo	Molekulárna štruktúra	Pripravená schémou č.	Počet izomérov	Rotamäza RifíDO) (|lM)
36	..	3	1	0,445
37	ο-%	3	4	0,222
38	-· 0-°^ s. / 11^^° ΛΛ°	3 1 ·	1	0,298
39	,CH. 0 O—CH, *CM’ \ /** '—•f Ĺ '—O 0 CH,	1	2	0,398

-52·· ··· ·· ···· • · · • · ··· • · · • · · ·· ··· ·· • · ··

Tabul’ka 1
Zlúčenina číslo	| Molekulárna štruktúra	Pripravená schémou č.	Počet izomérov	Rotamáza K;r,„„i íuM)
40		1	2	0,690
41	H,C„ OSr^0'· °ó °	1	2	5,8
42	CUS>	1 .	2	2?
43	CH, 0	1	2	Nl

• ·· • · • ··· • · ·	·· • · • · • · ·	···· • ··· •	·· ·
• · • · • · ·	• ·
·· ··	··	···	• ·	··

Taburka 1

Zlúčenina číslo

Molekulárna štruktúra

Pripravená schémou č.

Počet izomérov

Rotamáza (μΜ)

3,0

0,58

-54• · ·· · • ··· • · · • · · ··· ·· ·· ···· • · · • · ··· • · · · • · · ·· ··· ·· • · · • · • · · • · ·· ·

Tabuľka 1
Zlúčenina číslo	1 Molekulárna štruktúra	Pripravená schémou č.	Počet izomérov	Rotamáza Kiŕmol GlM)
47	H,{\ O CH,	1 1	2	0,2
	°Vk_cHi
	1 CH,
48	O	2	2	1,6
	^vír^ 0 0 < CM,
49	,CH3 o	2	2	0,08
	( O í^3 ^>Λνο 0 V%.CHj °-CK3	Λ	*

* ·· ·· ···· ·· · · · · • ··· · · ··· ······ · • · · · · · ··· ·· ·· ···

-55·· ·

Tabuľka 1
Zlúčenina číslo	Molekulárna štruktúra	Pripravená schémou č.	Počet izomérov	Rotám áza Kiŕanol í U M)
50	0 ^OM	1	2	0,56
51		1	4	4
53	πγ^Α,υΟ 0	1	4	5
54	0 Ό	Γ	2	6*

• ·· • · • ···	·· • · • ·	»··· • ···	·· • · • ·	•
·· ··	··	···	··

Tabu	ľkal
Zlúčenina číslo	Molekulárna Štruktúra	Pripravená schémou č.	Počet izomérov	Rotamáza Ki/annl ÍUMl
55		Λ n? y** vr* QO CH,	1	2	40% inhibícia @ 2,5 μΜ
56	J	' CH, O u? CH,	1	2	40% inhibícia @ 2,5 μΜ
57	HP-i	1 ».	2	74

··

-57·· ···· ·· • * * * · · • · ··· · · • ·· ·· ··· ·· ·

Tabuľka 1
Zlúčenina číslo	Molekulárna štruktúra	Pripravená schémou č.	Počet izomérov	Rotamáza
58	ď		CH, Αλ* ŕ y en, íôo ΌΗ	1	2	3,0
59	ΌΗ	1	2	3,8
60	ď	d t		1	2	3,0
61		t	CH, CH, ^0	1 ;<·	2	0,79

-58• ·· ·· · • ··· • · · · • · · ··· ·· ·· ···· • · · • · ··· • · · • · · ·· ··· • · · • · • · · • · ·· ·

Tabúľ	ka 1
Zlúčenina čislo	Molekulárna štruktúra	Pripravená schémou č.	Počet izomérov	Rotamáza ^iflDO) (úM)
62	03	1	2	0,16
63	o Ľ CK, Λοο	1	2	V
64	ιι 0 ο k CH,	2	2	0,62
65	HC 0 rľOn 0 ° ^*ÁďCH> °~cn	2 U	2	0,175

··

999 9 4 ·· ···· • · • #··

Tabuľka 1
Zlúčenina číslo	Molekulárna štruktúra	Pripravená schémou č.	Počet izomérov	Roíamáza
66	C&ä 0 0 k CH, '	2	2	16
67	O=Z\—' * /M 1 S! J	2		0,88
68-	CH, CH. ^UX)	1	2	2,5
69	6	1	2	33

• ·· • · • ···	·· • · • ·	···· • ···	·· • · • ·	··
·· ··	··	···	• ·	··

··

-61··· • · • · ·· ·· ···· • · • ··· ·· ···

	Tabuľka 1
Zlúčenina číslo	Molekulárna Štruktúra	Pripravená schémou č.	Počet izomérov	Rotamáza
73 .	Xr Ωγ'Α-'*' x CH,	1 alebo 2	2 *	0,063
74	CH.-CH, Ä T H.C «R o ó	4	do 8	0,111
75	QS% X CH,	1	2	0,79

• ·· ·· ···· ·· ··· ··· · · · • ··· · · ··· · · «·· · · · · · ··· ·· ·· ··· ·· ·

Tabu	iľka 1
Zlúčenina číslo	Molekulárna štruktúra	Pripravená schémou č.	Počet izomérov	Rotamáza
76	.^1 M k	o-“· ’· ΓιΓ'0'“· .ojO 'V CH,	1	2	0,112
77		ύ	>JO	I ··	2	20,5
78		V Ó	f? H»cv .CK, Y<;ch. <Q	1	2	V

• ·· • · • ···	·· • · • ·	···· • ···	·· • · • ·	··
e· ··	··	···	··	··

Tabuľka 1
Zlúčenina čislo	Molekulárna štruktúra	Pripravená schémou č.	Počet izomérov	Rotamáza
79	.ď“· •váj c o V	4 áJebo í Λ	4	0,7
80	X ν'Μ-γ K	1	4	1,8
81	Λ«(* j* O·’* IS	1	2	1,1
82		2 ;<·	2	3

• ·· • · • ···	·· • · 0 ·	0··· • 0··	• 0 • · 0 • ·
·· 00	··	···	00 0

Tabuľka 1
Zlúčenina číslo	Molekulárna štruktúra	Pripravená schémou č.	Počet izomérov	Rotamáza
83		1	2	0,86
84	XOÍ t	1	2	0,134
85	xco	1	2	0,324
86		1		1,3
87	JT w	2 Λ	2	5

··

-65·· e

·· ··· • · • · · ··· ·· ·· ···· • · • ··· • · • · · ·· ··· ·· ·

	Tabuľka 1
Zlúčenina číslo	Molekulárna štruktúra	Pripravená schémou č.	Počet izomérov	Rotamáza KiCaon) ÍUM)
88	P~Oj? CH, \ / ÍL ® ^ΥΥγ° 0 0 Y<ď c«.	2	2	0,217
89	ofiv· Ύ >ch3 o o L ch3	2 «·	.2	V
90	Η£-0	5	2	>50
91	«p-o CC x %	5	2	• 0,22

-66• ·· ·· · • ··· ·· ···· • · · • · ··· ··· ·· ·· ··· ·· ···

			Tabuľka 1	•
Zlúčenina čislo	Molekulárna štruktúra	J Pripravená 1 schémou č.	Počet izomérov	Rotamáza Ki/«nn) fuM)
92		f* θ'0* ch, Ai O’-^Z'XxA /~N S(U> V z t	5	2	0,13
93 -	«r ri) ,° Ŕ fr o-\zkÄ /-o ° \> o	4	4	0,17
94	*S °	° J* o 0	4	4	31,4
95	cŕ	k		1	2	1,2
96	tŕ	'C	Hŕs 0 CH, t/č 0 0	4 Z .·*·	2	1,4

·· ··

-67·· • · · · • e · ··· ·· ·· ···· • · • ··· ·· ··· • · ·· ·

Tabuľka 1
Zlúčenina čislo	Molekulárna štruktúra	Pripravená schémou č.	Počet izomérov	Rotamáza
97 ·	or5*	L·	, o	Wetol		9*
98	cT	z\° **λιΊ	jj-'v o Λ Ju	1	2	0,772
99			Hŕ-ŕS*. H*4^ 0	1	2	3,7
		k	H OhVw JO		•	•
			Í? n	1	2	0,627
100		v	γν* JO
101		*Λιι tí	/~A o jO	1 Λ	2	V

• ·· • · • ···	·· • · • ·	···· • ···	·· • · • ·	• ·
• · ··	··	···	··	• ·

Tabi	ľkal
Zlúčenina [ Molekulárna štruktúra číslo 1	Pripravená schémou č.	Počet izomérov	Rotamáza Ki/mnl ÍUM)
102	xtc/“'	1	2	0,69
103	TjCf·'	1 4	2	1/2
104	hTq ty vi\rí >=o °< N H-f	5	2	.lz4
105	osď«> V'o Vi 0 ty h£ n n / o-kJkA /~N X° °\ 0	5	2	0,35
106	0	5	2	>50

··

-69··· ·· ···· • · · • · ··· • ·· ·· ··· ·· ·

Tabuľka 1
Zlúčenina _číslo	1 Molekulárna štruktúra	Pripravená schémou č.	Počet izomérov	Rotamáza
107	T cQŠp™ 0	5	2	NI
108	ďS/ 0 A° t- CH,	1 M	2	0,061
109 •	U/’r' Vo° Y CH,	1 ;*·	2	0,049

*

• ·· • · • ···	·· • · • ·	···· • ···	·· • · • ·	··
·· ··	··	···	··	··

Tabu	ľka 1
Zlúčenina číslo	Molekulárna štruktúra	Pripravená schémou č.	Počet izomérov	Rotamáza Kjfanp'l (úM)
110	o ry n^o kj V CH*	1	2	0,086
111	ΟνΎ1 'Ylo V	1 • b	2	0,663
112	Osp·''”1 XÍO	1	2	1

• ·· • · • ···	·· • · • ·	···· • ···	·· · • · ·· • e ·
·· ··	··	···	·· ··

Tabu	iľkal
Zlúčenina číslo	Molekulárna štruktúra	Pripravená schémou č.	Počet izomérov	Rotamáza Ki faml ŕuM)
113	0	4	.2	ND
114	**5 o r/T mcj J! 0	• 4	2	ND
115	Sp S, CHj CHj	5 ··	•	>20
116	N 0 OAÄ ΫΌ	5 Λ	2	0,96

-72·· • e · ·· ···· • · · • · «·· • ·· ·· ··· ·· ·

			Tabuľka 1	•	—
Zlúčenina číslo	j Molekulárna štruktúra	Pripravená schémou č.	Počet izomérov	Rotamáza
117	&	^sljóc0'013 νυ	5	2	0,084
118	&	k	Λχ>, o s ín	5	2	1
119	( é		^pď^ď0* Ί° L 0¾ 0¾	5		>40

-7399 · ···· ·· • · · · · · · ··· · · ··· · · ··· ·· ·· ··· ·· ···

Tabuľka 1
Zlúčenina čislo	Molekulárna štruktúra	Pripravená schémou č.	Počet izomérov	Rotamáza
120	° oo	1	2	2,5
121	Yo	5	2	0,78
. 122	n^o CH, Sr^ 0	5	2	0,15
123 «	0	5	2	V

-74·· ···· » · · • · ··· ·· • · • · • · I ···

Tabuľka 1
Zlúčenina číslo	Molekulárna štruktúra	Pripravená schémou č.	Počet izomérov	Rotamáza (μΜ)
124	ďFr 0	5	2	0p8
125	o	4	2	0,85
126	Hŕk 0 . s °Zfl N-' 'o	4	2	5
127	Xv0F' m, ofV»-t 0	4	2	2,6
128	Ύ ° )=\ Ό	4 Λ	2	2

• ·· • · • ···	·· • · • ·	···· • ···	·· • · • ·	··
·· ··	··	···	··	··

	Tabuľka 1
Zlúčenina číslo	Molekulárna štruktúra	Pripravená schémou č.	Počet izomérov	Rotamáza Kiŕlnnt fuM)
129	,ΟΙίί04 F F 0	4	2	0,37
130	F F O. f Y-F F F 0	4	2 .	10
131	W	4	2	NI
132	w ty N N—' 0	4	2	>20
133	v 0	4 »*	2	3,9

-76• ·· ·· ···· ·· ··· ··· ··· • ··· · ···· · · ····· ··· ··· ·· ·· ··· ·· ·

	Tabuľka 1
Zlúčenina číslo	Molekulárna štruktúra	Pripravená schémou č.	Počet izomérov	Rotamáza
134	s v/=ríF 04 0	4	2	10
135	To	5	2	1,4
136	V 0 P	4		2,4
137	CH’ Sn 0 Äs'	4 p		9,7

·· ·· ···· ·· • · · · · · · ··· · ···· · · • ·· ·· ··· ·· ···

-η-

	Tabuľka 1
Zlúčenina Číslo	Molekulárna štruktúra	Pripravená schémou č.	Počet izomérov	Rotamáza Ki ranní ŕuMl
138		1	2	1,3
139	(jť CHj	1 1«	2	0,355
140	f^CK, Vo	5	2	10

-78·· ··· ·· ···· ·· • · · •··· · · ·· ··· ·· ·

• ·· ·· · • ··· • · · · • · · ··· ··

-79·· ···· • · · • · ··· • e · • · · ·· ··· ·· • · · • · • · · • · ·· ·

	Tabu	iľka 1
Zlúčenina číslo	Molekulárna štruktúra	Pripravená schémou č.	Počet izomérov	Rotamáza Ki/aml ítlM)
144	é	S	1° TO	5	2	1,2
145		-	5 «k	2	1,7
146	&	S' F·^ FJ F	bP0'“’ V T F F	4	2	>50
147	o	4 7	2	M

• ·· • · • ···	·· • · • ·	···· • ···	·· • · • ·	•
·· ··	··	···	··

	Tabuľka 1
Zlúčenina číslo	Molekulárna štruktúra	Pripravená schémou č.	Počet izomérov	Rotamáza Ki ranní ŕuMl
348	F F 0	4	2	NI
149	0	4	2	>50
150	αΦΑ- ΛΑ,0 °* ΤΌ	5	2	1/5
151	p-Q Ý «£ P c? s	5 ;<·	2	0,53

-81• ·· ·· · • ··· • · · · • · · ··· ·· ·· ···· • · · • · ··· • · · • · · ·· ··· ·· • · · • · • · · • · ·· ·

	Tabuľka 1
Zlúčenina číslo		Molekulárna Štruktúra	Pripravená schémou č.	Počet izomérov	Rotamäza Kj 6mol ÍUM)
152	ŕ	Q v k	d S“ CO	“^04	5 *	2	2,8
					.CH,	1	2	0,52
153				p				—
					^0
				1 « J 0	OS
			W ,
					fCH,	1	2	0,244
154				0 r ίΙΙ	Y0^
				Ká	/'-o
				J b	C4,
			A	X	CH, r
			U •	'••Y	'^CH,
				0		Λ

-82··· ·· ···· • · • ··· ·· ··· ·· • · · • · ·· ·

Tabu	ľka 1
Zlúčenina číslo	Molekulárna štruktúra	Pripravená schémou č.	Počet izomérov	Rotamáza
155	i/ iÍIÍj cArAf M ÝT/·4	5 4	2	1/2
156	O N Vt/'’4 ^CH,	5 ·»	~~ 2	1,5
157	ZX Äi P )0 °( NIH	5	2	1,6
158	/K °ÝS o 0 KC 1 1 H / <r\z\A fN	5 P	2	0,776

·· • ·

-83·· • I ·· ···· < • · · · • ··· · • · · · ···

	Tabu	ľkíl —
Zlúčenina číslo	Molekulárna štruktúra	Pripravená schémou č.	Počet izomérov	Rotamáza
159		6	1	0,76 .
160	OCH, ζ,ζ--	6 • »	1	0,239
161		6	1	5
162		7 P	1	0,347

··· ···· ··· ··· ·· • · · • · · · • · ·· ·

Tabuľka 1
Zlúčenina číslo	Molekulárna štruktúra	Pripravená schémou č.	Počet izomérov	Rotamáza Kifinol (gM)
163.		6	1	• 0,381
164	A H	6 .	1	3,3
165	b	6 «·		8/

Poznámky: NI = žiadna inhibícia pri tejto testovanej koncentrácii; ND = neurčené

Farmaceutické prostriedky a liečba

Činidlá inhibujúce FKBP podlá vynálezu, ako sú zlúčeniny doložené hore sa môžu použiť na prípravu farmaceutických prostriedkov, ako sú tie, ktoré sú opísané ďalej.

Farmaceutické prostriedky podlá vynálezu zahŕňajú účinné množstvo zlúčeniny stimulujúcej neuritový rast všeobecného vzorca I-a alebo I-b a inertný, farmaceutický prijatelný nosič alebo riedidlo. Farmaceutický prostriedok dalej obsahuje neurotropný faktor. Tieto prostriedky sa pripravia v jednotkových dávkových formách na rôzne cesty podania.

·· ·· • · ·· ··· ··· • · • · ·· ·· ···· • t • ··· • · · • * • · ···

V jednom rozpracovaní sú účinné úrovne nepeptidovej zlúčeniny inhibujúcej rotamázu také, že dôjde k terapeutickému užitku, spočívajúcemu v regulácii FKBP. Výraz účinné úrovne zlúčeniny zahŕňajú úrovne, pri ktorých je FKBP väzba k FKBP12 regulovaná na minimum. Zlúčeniny môžu byť podané vo forme proliečiva, ktoré je všeobecne určené na zvýšenie absorpcie a je štiepené in vivo na formu aktívnej zložky. Účinné úrovne sa môžu tiež dosiahnuť podaním farmaceutický aktívnych metabolitov (produkty metabolických konverzií) zlúčeniny.

Zlúčenina všeobecného vzorca I-a alebo I-b sa podá vo vhodnej dávkovej forme pripravenej kombináciou terapeuticky účinného množstva (tzn. účinného množstva dostatočného na dosiahnutie žiadaného terapeutického účinku cez reguláciu FKBP) zlúčeniny všeobecného vzorca I-a alebo I-b (ako aktívnej zložky) so štandardnými farmaceutickými nosičmi alebo riedidlami podía konvenčných spôsobov. Tieto spôsoby môžu zahŕňať miešanie, granuláciu a lisovanie alebo rozpúšťanie zložiek na získanie žiadaného preparátu.

Použité farmaceutické nosiče sú vo vhodnej forme, napríklad ako pevné látky alebo kvapaliny. Príklady pevných nosičov zahŕňajú laktózu, bielu hlinku, sacharózu, mastenec, želatínu, agar, pektín, akáciu, stearát horečnatý, kyselinu stearovú a podobne. Príklady kvapalných nosičov zahŕňajú sirup, podzemnicový olej, olivový olej, vodu, a podobne. Podobne, nosiče alebo riedidlá môžu obsahovať materiál, ktorý spôsobuje oneskorené uvoíňovanie známe zo stavu techniky, ako je glycerylmonostearát alebo glyceryldiestearát, samotný alebo s voskom, etylcelulózu, hydroxypropylmetylcelulózu, metylmetakrylát alebo podobne.

Môže sa použiť rad farmaceutických foriem. Napríklad keď sa použije pevný nosič, prípravky môžu byt vo forme tabliet, môžu byt umiestnené do tvrdých želatínových kapsúl v práškovej forme alebo vo forme peliet, alebo môžu byt formované do formy • · ·· ··· • · · • · · «·· ·· ·· ·· ···· • ··· • · • · ·· ··· ·· • ί . ·· piluliek alebo pastiliek. Množstvo pevného nosiča sa môže líšiť, výhodne bude od asi 25 mg do asi 1 g. Pokial sa použije kvapalný nosič, prípravok bude výhodne vo forme‘sirupu, emulzie, mäkkej želatínovej kapsuly, injekčného roztoku alebo suspenzie v ampule alebo liekovke alebo nevoďnej kvapalnej suspenzie.

Za účelom získania vo vode rozpustnej dávkovej formy sa môže farmaceutický prijatelná sol zlúčeniny všeobecného vzorca I-a alebo I-b rozpustiť vo vodnom roztoku akejkoľvek organickej alebo anorganickej kyseliny, ako je 0,3 M roztok kyseliny jantárovej alebo výhodnejšie, kyseliny citrónovej. Keď nie je forma rozpustnej soli k dispozícii, zlúčenina všeobecného vzorca I-a alebo I-b sa môže rozpustiť vo vhodnom spolurozpúšťadle alebo kombinácii spolurozpúšťadiel. Príklady vhodných spolurozpúšťadiel zahŕňajú alkohol, propylénglykol, polyetylénglykol 300, polysorbát 80, glycerín a podobne, v rozsahu koncentrácií od o do 60 % celkového objemu. Vo výhodnom rozpracovaní sa aktívna zlúčenina všeobecného vzorca I-a alebo I-b rozpustí v DMSO a zriedenom vodou. Prostriedok tiež môže byť vo forme roztoku solnej formy aktívnej zložky vo vhodnom vodnom vehikule, ako je voda alebo izotonický fyziologický roztok alebo roztok dextrózy.

Je treba vziať do úvahy, že aktuálne výhodné dávky zlúčenín všeobecného vzorca I-a a I-b použité v prostriedkoch podlá vynálezu sa môžu líšiť v závislosti od použitého komplexu, konkrétnej formulácie prostriedku, spôsobu podania a konkrétneho miesta, hostiteľa a choroby, ktorá sa má liečiť. Optimálne dávky pre danú skupinu podmienok môžu byť odborníkom zistené pri použití konvenčných testov na určenie dávky, napríklad s ohľadom na experimentálne údaje tu uvedené. Pre orálne podanie bude obvyklá denná dávka počas liečby od asi 0,001 do asi 1000 mg/kg telesnej hmotnosti a bude vhodne opakovaná. Počiatočné farmakokinetiky pre ľudí môžu byť určené z potkaních modelov, ako opísal Gold a kol., Experimental Neurology, 147: 269-278 (1997).

·· •a ···

··

Farmaceutické prostriedky, obsahujúce aktívne zlúčeniny podlá vynálezu môžu byť pripravené spôsobom,'ktorý je všeobecne známy, ako sú napríklad prostriedky konvenčného miešania, rozpúšťanie, granulácia, výroba dražé, rozmelňovanie, emulgácia, zapuzdrovanie, zachytávanie alebo iyofylizačné postupy. Farmaceutické prostriedky môžu byť formulované konvenčným postupom pri použití jedného alebo viacerých fyziologicky prijatelných nosičov, zahŕňajúcich excipienty a/alebo pomocné prostriedky, ktoré ulahčujú spracovanie aktívnych zlúčenín do farmaceutický použiteľných prostriedkov. Vhodná formulácia je však závislá od cesty podania.

Na orálne podanie môžu byť zlúčeniny formulované lahko kombináciou aktívnych zlúčenín s farmaceutický prijatelnými nosičmi známymi v stave techniky. Také nosiče umožňujú formulovať zlúčeniny podlá vynálezu na podanie pacientovi, ktorý má byt liečený do formy tabliet, piluliek, dražé, kapsúl, kvapalín, gélov, sirupov, kaší, suspenzií apod. Farmaceutické prostriedky na orálne podanie môžu byť získané kombináciou aktívnej zlúčeniny s pevným excipientom, prípadne mletím výslednej zmesi a spracovaním zmesi granúl po pridaní vhodných pomocných látok, keď je to žiadúce, za získania tabliet alebo jadra pre dražé. Vhodné excipienty zahŕňajú napríklad plnivá, ako sú cukry, zahŕňajúce laktózu, sacharózu, manitol alebo sorbitol; a celulózové prostriedky, ako je kukuričný škrob, pšeničný škrob, ryžový škrob, zemiakový škrob, želatínu, tragakantovú gumu, metylcelulózu, hydroxypropylcelulózu, karboxymetylcelulózu sodnú a/alebo polyvinylpyrolidón (PVP). Keď je to žiadúce, môžu sa pridať dezintegračné činidlá, ako je sitovaný polyvinylpyrolidón, agar alebo kyselina algínová alebo jej soli a alginát sodný.

Jadrá pre dražé sú opatrené vhodnými povlakmi. Na tieto účely sa môžu použiť koncentrované roztoky cukru, ktoré môžu prípadne obsahovať arabskú gumu a polyvinylpyrolidón, karbo·· • · ··* ·· ···· • · ··· polový gél, polyetylénglykol, a/alebo oxid titaničitý, lakové roztoky a vhodné organické rozpúšťadlá alebo zmesi rozpúšťadiel. Na identifikáciu alebo charakterizáciu*rôznych kombinácií dávok aktívnych činidiel sa môžu pridať k dražé alebo k povlakom pre jadrá farbivá alebo pigmenty.

Farmaceutické formy prostriedkov, ktoré sa môžu použiť orálne zahŕňajú posuvne uložené tobolky zhotovené z želatíny a rovnako mäkké, utesnené tobolky zhotovené z želatíny a plastif ikátoru, ako je glycerol alebo sorbitol. Tieto posuvne uložené tobolky môžu obsahovať aktívne zložky v zmesi s plnivami, ako sú škroby a/alebo mazadlá, ako je mastenec alebo stearát horečnatý a prípadne stabilizátory. V mäkkých tobolkách môže byť aktívna zlúčenina rozpustená alebo suspendovaná vo vhodnej kvapaline, ako je olej mastnej kyseliny, kvapalný parafín alebo kvapalné polyetylénglykoly. Ďalej môžu byť pridáné stabilizátory. Všetky formulácie na orálne podanie by mali byť v dávkach vhodných na také podanie. Na bukálne podanie môžu byť prostriedky vo forme tabliet alebo pastiliek pripravené obvyklým spôsobom.

Ako príklad na prípravu orálneho farmaceutického prostriedku podl’a vynálezu sa uvádza: 100 mg zlúčeniny podía vynálezu všeobecného vzorca I-a alebo I-b sa zmieša so 750 mg laktózy a zmes sa vpraví do jednotkovej dávkovej formy, ako sú tvrdé želatínovej kapsuly, ktoré sú vhodné na orálne podanie.

Na podanie inhaláciou sa zlúčeniny podía vynálezu konvenčné dodávajú vo forme aerosolového spreja z nádob pod tlakom alebo rozprašovača, pri použití vhodného hnacieho činidla, napríklad dichlórdifluórmetánu, trichlórfluórmetánu, dichlórtetrafluóretánu, chloridu uhličitého alebo iného vhodného plynu. V prípade aerosólu pod tlakom môže byť dávková jednotka určená pri použití ventilu na dodanie odmeraného množstva. Kapsuly a patróny, napríklad z želatíny na použitie v inhalátore alebo insuflátore môžu byť formulované tak, že ·· ·· • ·

999 • · • · • 9

9· ···· • · • ··· • · • · • · • 9 obsahujú práškovú zmes zlúčeniny a vhodný prášok, ako je laktóza alebo škrob.

Zlúčeniny môžu byt formulované na parenterálne podanie injekciou, napríklad ako bolusová injekcia alebo kontinuálnou infúziou. Formulácia pre injekcie môžu byt vo forme jednotkovej dávkovej formy, napríklad v ampulách alebo v zásobníkoch na viac dávok, za prídavku konzervačného činidla. Prostriedky môžu mat takisto formy suspenzií, roztokov alebo emulzií v oleji alebo vo vodnom vehikule a môžu obsahovať formulačné činidlá, ako sú suspenzačné činidlá, stabilizačné a/alebo dispergačné činidlá.

V prípade injekcií môžu byť činidlá podľa vynálezu formulované vo vodných roztokoch, výhodne vo fyziologicky kompatibilných tlmivých roztokoch, ako je Hankov roztok, Ringerov roztok alebo fyziologický roztok. Na transmukózne podanie sa použijú vhodné penetračné činidlá na prenikanie bariérou a tieto činidlá môžu byť vybrané z činidiel známych v stave techniky.

Farmaceutické formulácie na parenterálne podanie zahŕňajú vodné roztoky aktívnych zlúčenín vo forme, ktorá je rozpustná vo vode. Ďalej sa suspenzie aktívnych zlúčenín môžu pripraviť ako vhodné olejové injekčné suspenzie. Vhodné lipofilné rozpúšťadlá alebo vehikulá na prípravu takých formulácií zahŕňajú oleje odvodené od mastných kyselín, ako je sezamový olej, estery syntetických mastných kyselín, ako etyloleát alebo triglyceridy alebo lipozómy. Vodné injekčné suspenzie môžu obsahovať látky, ktoré zvyšujú viskozitu suspenzie, ako je karboxymetylcelulóza, sorbitol alebo dextrán. Suspenzie môžu prípadne obsahovať vhodné stabilizátory alebo činidlá, ktoré zvyšujú rozpustnosť zlúčenín, aby mohli byť pripravené roztokmi s vysokou koncentrácii.

Parenterálne farmaceutické prostriedky podľa vynálezu vhodné na podanie injekciou sa môžu pripraviť následovne:

·· • · ··· ·· ··· • · · • :···.

··· ·· ···

100 mg zlúčeniny všeobecného vzorca I-a alebo I-b sa zmieša s 10 ml lipofilného rozpúšťadla, ako je olej odvodený od mastnej kyseliny a zmes je včlenená do jednotkovej dávkovej formy vhodnej na podanie injekciou alebo ako emulzia.

Alternatívne môže byť aktívna zložka v práškovej forme na konštitúciu s vhodným vehikulom, napríklad sa môže pred použitím použiť sterilná bezpyrogénna voda. Zlúčeniny môžu byť formulované tiež ako rektálne prostriedky, ako sú čapíky alebo retenčné klystíry, napríklad obsahujúce konvenčný základ pre čapíky, ako je kakaové maslo alebo glyceridy.

Popri formuláciách opísaných hore môžu byť zlúčeniny podľa vynálezu tiež formulované ako depotné prípravky. Také dlho pôsobiace formulácie môžu byť podané implantáciou (napríklad subkutánne alebo intramuskulárne) alebo intramuskulárnou injekciou. Napríklad zlúčeniny môžu byt formulované s vhodnými polymérnymi alebo hydrofóbnymi materiálmi (napríklad ako emulzie v akceptovateľnom oleji) alebo iónomeničovými živicami alebo ako obmedzene rozpustné deriváty, napríklad ako obmedzene rozpustné soli.

Vhodný farmaceutický nosič pre hydrofóbne zlúčeniny podľa vynálezu je spolurozpúšťadlový systém zahŕňajúci alkohol, nepolámu povrchové aktívnu látku s organickým polymérom miašajúcim sa vo vode a vodnú fázu. Spolurozpúšťadlový systém môže byť VPD spolurozpúšťadlový systém (VPD je roztok 3% hmotn./ objem benzylakoholu, 8% hmotn./objem nepolárneho povrchovo aktívneho polysorbátu 80, a 65% hmotn./objem polyetylénglykolu 200, doplnený absolútnym etanolom). VPD spolurozpúšťadlový systém (VPD:5W) sa skladá z VPD zriedeného 1:1 s 5% dextrózou vo vodnom roztoku. Tento spolurozpúšťadlový systém rozpúšťa dobre hydrofóbne zlúčeniny a samotný je pri podaní málo toxický. Prirodzene sa pomery spolurozpúšťadlového systému môžu podstatne líšiť, bez toho aby došlo k narušeniu jeho rozpustnosti a charakteristík toxickosti. Ďalej sa môže ·· ··· takisto líšiť identita zložiek spolurozpúšťadlového systému: napríklad miesto polysorbátu 80 sa môžu použiť tiež iné, nízkotoxické nepoláme povrchovo aktívne činidlá; velkosť frakcie polyetylénglykolu sa môže líšiť? polyetylénglykol môže byť nahradený ďalšími biokompatibiInými polymérmi, napríklad polyvinylpyrolidónom; a dextróza môže byť nahradená inými cukrami alebo polysacharidmi.

Alternatívne sa môžu použiť ďalšie systémy na dodávanie hydrofóbnych farmaceutických zlúčenín. Lipozómy a emulzie sú velmi dobre známe príklady vehikul na dodávanie alebo nosiče pre hydrofóbne liečivá. Rovnako sa môžu použiť určité organické rozpúšťadlá, ako je dimetylsulfoxid, hoci sa vyznačujú vyššou toxickosťou. Ďalej môžu byť zlúčeniny podlá vynálezu dodávané pri použití štandardného systému na oneskorené uvolňovanie, ako sú polopriepustné matrice pevných hydrofilných polymérov obsahujúcich terapeutické činidlá. Rôzne materiály s oneskoreným uvolňovaním sú uvedené v stave techniky. Kapsuly s oneskoreným uvolňovaním môžu, v závislosti od svojej chemickej povahy, uvolňovať zlúčeniny podlá vynálezu počas niekolkých týždňov až 100 dní. V závislosti od chemickej povahy a biologickej stability terapeutickej zložky sa môžu použiť ďalšie stratégie na proteínovú stabilizáciu.

Farmaceutické prostriedky môžu takisto zahŕňať vhodné nosiče alebo excipienty vo vhodnej gélovej alebo pevnej fáze. Príklady takých nosičov alebo excipientov zahŕňajú uhličitan vápenatý, fosforečnan vápenatý, rôzne cukry, škroby, deriváty celulózy, želatínu a polyméry, ako sú polyetylénglykoly.

V stave techniky je identifikovaný rad neurotropných faktorov a v prostriedku podlá vynálezu sa môže použiť ktorýkolvek z týchto faktorov. Výraz neurotropný faktor ako sa tu používa sa týka látok, ktoré sú schopné stimulovať rast alebo proliferáciu nervových tkanív (ale s vylúčením zlúčenín podlá vynálezu inhibujúcich FKBP-rotamázu), napríklad nervový faktor ·· • · ·· ····

• ·· rastu (NGF), inzulínový rastový faktor (IGF-1) a jeho aktívne obmedzené deriváty (gIGF-1), kyslý a bázický fibroblastový rastový faktor (aFGF a bFGF), faktory rastu odvodené od krvných doštičiek, faktory rastu odvodené od mozgu (BDNF), ciliárne neurotropné faktory (CNTF), neurotropný faktor odvodený od gliálnej bunkovej línie (GDNF), neurotropin-3 (NT-3) a neurotropin 4/5 (NT-4/5). Farmaceutické prostriedky môžu zahŕňať ako aktívne zložky popri jednom alebo viacerých činidlách podľa vynálezu jeden alebo viac neurotropných faktorov. Najvýhodnejší neurotropný faktor na použitie v prostriedkoch podľa vynálezu je NGF.

Ďalšie zložky farmaceutický prijateľných prostriedkov podľa vynálezu môžu zahŕňať benzylalkohol alebo ďalšie vhodné konzervačné činidlá, absorpčné promotory za účelom zvýšenia biologickej dostupnosti, fluórované uhľovodíky a/alebo ďalšie solubilizačné alebo dispergačné činidlá.

Farmaceutický prostriedok obsahuje aktívnu zložku(y) v množstve, ktoré je dostatočné na dosiahnutie žiadaného účinku. Konkrétnejšie, farmaceutický prostriedok obsahuje terapeuticky účinné množstvo (tzn. množstvo, ktoré je účinné na prevenciu vývoja alebo zmiernenie existujúcich symptómov choroby alebo stavu sprostredkovaného FKBP) činidla inhibujúceho FKBP podľa vynálezu. Celkové množstvo činidla inhibujúceho FKBP podľa vynálezu a akéhokoľvek prípadného neurotropného faktoru, ktoré môžu byť kombinované s nosičovým materiálom za vzniku jednej dávkovej formy sa bude líšiť v závislosti od liečeného hostiteľa a konkrétnej cesty podania. Výhodne prostriedok podľa vynálezu vždy obsahuje ako činidlo inhibujúce FKBP, tak neurotropný faktor s činidlom inhibujúcim FKBP pôsobiace zosilnenie účinnosti neutropného faktoru a tak zvýšenie neuritového rastu. Množstvo neurotropného faktoru v takých prostriedkoch je výhodne menšie ako množstvo požadované v monoterapii pri použití iba faktoru. Výhodne sú prostriedky formulované tak, že sa pacientovi podá dávka obsahujúca 0,01 až 100 μg/kg telesnej hmôt• ·· ·· · • ··· • · · ·· ···· • · · • · ··· • · · t·· ·· • · ·· ··· • ·· • · · • · • · · · • · · ·· · nosti/deň činidla inhibujúceho FKBP12 a dávka obsahujúca 0,01 až 100 gg/kg telesnej hmotnosti/deň neurotropného faktoru.

Farmaceutické prostriedky podlá vynálezu sa môžu použiť v metóde inhibujúcej aktivitu enzýmu rotamázy proteínu viažuceho FK-506, zahŕňajúcej podanie prostriedku pacientovi. Prostriedok podlá vynálezu sa takisto môže použiť na stimuláciu rastu neuritov v nervových bunkách, na stimuláciu regenerácie nervov alebo na podporu neuronálnej regenerácie. Výhodne prostriedok dalej zahŕňa neurotropný faktor.

I ked je vynález dalej ilustrovaný odkazmi na špecifické a výhodné uskutočnenia, odborník pozná, napríklad bežnými pokusmi a praxou, že je možné vykonať rad modifikácií. Napríklad odborník môže poznať, že môžu byt vykonané rôzne variácie substituentov na zlúčeninách všeobecného vzorca I-a a I-b bez podstatného vplyvu na účinnosť farmaceutických prostriedkov. Tak nie je vynález obmedzený na hore uvedený opis, ale je definovaný pripojenými nárokmi.

Claims (32)

1. PATENTOVÉ NÁROKY

   1. Heterocyklické zlúčenina všeobecného vzorca«Γ

   O

   Y kde R¹ sa zvolí zo súboru, ktorý zahŕňa vodík; arylovú skupinu, nesubst1tuovanú alebo substituovanú jedným alebo viacerými substituentmi vybraným zo súboru, ktorý zahŕňa halogén, hydroxyl, NOz, CF3, Ci-C© alkyl, Cz~Ce alkenyl,

   C1-C4 alkyloxy, Cz-Ca alkenyloxy, benzyloxy, fenoxy, asino alebo fenyl* alkylovú alebo alkenylovú skupinu, nesubst!tuovanú alebo substituovanú jedným alebo viacerými substituentmi nezávisle vybranými zo súboru, ktorý zahŕňa C1-C4 alkyl,

   C2-C4 alkenyl, C4-C6 cykloalkenyl a hydroxy; C3-C8 cykloalkyl alebo Cs-Cy cykloalkenylovú skupinu, nesubst1tuovanú alebo substituovanú jedným alebo viacerými substituentmi nezávisle vybranými zo súboru, ktorý zahŕňa C1-C4 alkyl, C2-C4 alkenyl, C1-C4 alkyloxy a hydroxy; a C(R*‘1(R‘^a)(R¹³), kde R¹¹ a R^ia sú vždy nezávisle niäší alkyl alebo R** a R¹² spoločne s atómom, ku ktorému sú viazané tvoria cykloalkyl a R¹³ je H, OH, nlSšl alkyl, aryl alebo (CHz)n-O-W¹, kde n je 0, 1, 2 alebo 3, H¹ je R³ alebo C(0)R^a a R^a je C1-C3 alkyl, nesubstituovaný alebo substituovaný jednou alebo dvoma metoxyskupinaml;

   X sa zvolí zo súboru, ktorý zahŕňa vodík, kyano, C1-C2 alkyloxy, diaetoxymetyl alebo -0; a

   Y sa zvolí zo súboru, ktorý zahŕňa vodík: alkyl, alkenyl alebo cykloalkylovú skupinu, nesubstituovanú alebo substltuo- 95 ·· ··· • · · • · ·· ···· • · · • · ··· • · · • · · ·· ··· ·· ·· · vanú jedným alebo viacerými substituentmi nezávisle vybranými zo súboru, ktorý zahŕňa alkyl, aryl, alkoxy, hydroxyalkyl, aryloxy, alkenyloxy, hydroxy skupiny, nesubstituovaná alebo substituované jedným alebo viacerými substituentmi nezávisle vybranými zo súboru, ktorý zahŕňa hydroxyl, Cj-Cg alkyl, ^c2“^c6 ^alkenY¹r ^ci“^c4 alkyloxy, C2-C4 alkenyloxy, benzyloxy, fenoxy a fenyl; alebo (CH2)p-O-W² alebo (CH2)p-N-W², kde p je 0, 1 alebo 2 a W² je R³ alebo C(O,R³, kde R³ je alkyl, alkenyl alebo arylová skupina, nesubstituovaná alebo substituovaná jedným alebo viacerými substituentmi nezávisle vybranými zo súboru, ktorý zahŕňa alkyl, aryl a alkoxy; alebo alebo X a Y spoločne s atómom uhlíka kruhu a heteroatómom dusíka kruhovej štruktúry, ku ktorému sú viazané tvoria 5- až

   7-členný nasýtený alebo nenasýtený heterocyklický kruh, nesubstituovaný alebo substituovaný jedným alebo viacerými substituenty vybranými z J, K a L; kde J, K a L znamená substituenty nezávisle vybrané zo súboru, ktorý zahŕňa kyslík, C₃-C₅ cykloalkyl alebo C^-Cg alkylové skupiny, nesubstituovaná alebo substituované jedným alebo viacerými substituentmi nezávisle vybranými zo súboru, ktorý zahŕňa C₃-C₅ cykloalkyl, metoxy, metoxyfenyl alebo dimetoxyfenyl; alebo J a K spolu tvoria fenylový kruh, nesubstituovaný alebo substituovaný jedným alebo viacerými substituentmi, nezávisle vybranými zo súboru, ktorý zahŕňa metoxy, trifluórmetyl, trifluórmetoxy a substituenty viazané k fenylovému kruhu cez kyslík, dusík, uhlík alebo síru a nezávisle vybrané zo súboru, ktorý zahŕňa halogén, hydroxyl, NO₂, CF₃, C-j-Cg alkyl, C₂-C_g alkenyl, Cj-C^ alkyloxy, C₂-C₄ alkenyloxy, benzyloxy, fenoxy, amino a fenyl;

   alebo farmaceutický prijateľný derivát uvedenej zlúčeniny.
2. 2. Zlúčenina alebo jej farmaceutický prijateľný derivát podľa nároku 1, kde R¹ je aryl, nesubstituovaný alebo substituovaný jedným alebo viacerými substituentmi nezávisle vybranými zo súboru, ktorý zahŕňa halogén, hydroxyl, NO₂, CF₃, ·· ···· ·· • · · · · · ··· · · ··· · · : ·.. · · · · :

   ·· ·· ··· ··

   - 96 ^cl^c6 ^alkY¹» ^c2^c6 ^alk^enYl» ^ci“^c4 alkyloxy, C₂-C₄ alkenyloxy, benzyloxy, fenoxy, amino a fenyl.
3. 3. Zlúčenina alebo farmaceutický prijateľný derivát podľa nároku 1, kde R¹ sa zvolí zo skupiny, zahŕňajúci adamantyl, naftyl, indolyl, furyl, tienyl, pyridyla fenyl, kde fenyl má jeden až tri substituenty nezávisle vybrané zo súboru, ktorý zahŕňa halogén, hydroxyl, N02» CF3, C^-Cg alkyl, C2-Cg alkenyl, ^cl”^c4 alkyloxy, C2-C₄ alkenyloxy, benzyloxy, fenoxy, amino a fenyl.
4. 4. Zlúčenina alebo jej farmaceutický prijateľný derivát podľa nároku 3, kde R¹ je 3,4,5-trime toxyf enyl.
5. 5. Zlúčenina alebo jej farmaceutický prijateľný derivát podľa nároku 1, kde R¹ je í

   <CH₂)_nW’ kde m je 1 alebo 2, n je o, l alebo 2 a W¹ je definované v nároku 1.
6. 6. Zlúčenina alebo jej farmaceutický prijateľný derivát podľa nároku 1, kde R¹ je C(R³¹)(R¹²)(R¹³), kde R¹¹ a R¹² spoločne s atómom, ku ktorému sú viazané tvoria cyklopentyl alebo cyklohexyl; a R¹³ je H, OH, nižší alkyl, aryl alebo (CH^h-O-W¹, kde n je 0, 1, 2 alebo 3, W¹ je R² alebo C(O)R², kde R² je Cj-C₃ alkyl, nesubstituovaný alebo substituovaný jednou alebo dvoma metoxyskupinami.
7. 7. Zlúčenina alebo jej farmaceutický derivát podľa nároku 1, kde R¹ sa zvolí zo skupiny, ktorá zahŕňa:

   . ·· ·· ··· ·· ··· ··· · · · • ··· · * * * • : : ·: : : · ’· ’· ··· ·· ·· ···

   - 97 ·· · δ

   (CH₂)_m Ο /-(CH₂)n ,a (CH₂)_m kde m je l alebo 2.
8. 8. Zlúčenina alebo jej farmaceutický prijatelný derivát podlá nároku 1, kde R¹ je C(R¹¹)-(R^:1·²) (R¹³), kde R¹¹ a R¹² sú vždy nezávisle metyl alebo etyl; a R¹³ je H, OH, nižší alkyl, aryl alebo (CH₂)_n,-0-W¹, kde n je 0, 1, 2 alebo 3, W¹ je R² alebo C(O)R², kde R² je alkyl, nesubstituovaný alebo substituovaný jednou alebo dvoma metoxyskupinami.
9. 9. Zlúčenina alebo jej farmaceutický derivát podlá nároku 8, kde R_{sa Z}volí _2O skupiny, ktorá zahŕňa:

   Χ/γγ

   0,0 o ’ Λ ’ »
10. 10. Zlúčenina alebo jej farmaceutický derivát podlá nároku 1, kde Y je alkyl substituovaný s jedným alebo viacerými substituentmi nezávisle vybranými zo skupiny, ktorá zahŕňa alkyl, aryl, alkoxy, hydroxyalkyl, aryloxy, alkenyloxy, hydroxy,

    - 98 ··· · ·· 0··· • · • ··· (CH₂)p-O-W² a (CH₂)p-N-W², kde p je O, 1 alebo 2 a W² je R³ alebo C(O)R³, kde R³ je alkyl, alkenyl, aryl-alkyl alebo arylová skupina, nesubstituovaná alebo substituovaná jedným alebo viacerými substituentmi nezávisle vybranými zo súboru, ktorý zahŕňa alkyl, aryl alebo alkoxy.
11. 11. Zlúčenina alebo jej farmaceutický derivát podlá nároku 10, kde Y sa zvolí zo skupiny, ktorá zahŕňa:
12. 12. Zlúčenina alebo jej farmaceutický prijateľný derivát podlá nároku 1, kde X a Y spoločne s atómom uhlíka kruhu a heteroatómom dusíka ku ktorému sú viazané tvoria substituovaný

    5- až 7-členný nasýtený alebo nenasýtený heterocyklický kruh, prípadne obsahujúci popri uvedenom heteroatómu dusíka ďalší heteroatóm vybraný z kyslíka a dusíka.
13. 13. Zlúčenina alebo jej farmaceutický prijateľný derivát podlá nároku 12, kde uvedený 5 až 7-členný nasýtený alebo nenasýtený heterocyklický kruh je vybraný z piperidínu a piperazínu.
14. 14. Zlúčenina alebo jej farmaceutický prijateľný derivát podlá nároku 1, kde uvedená zlúčenina je vybraná zo skupiny zahŕňajúci:

    • ·· ·· · • ··· • · · · • · · ··· ·· ·· ···· • · · • · ··· • · · • · · ·· ··· ·· • · · • · • · · • · ·· · ·· ····

    - 100 ··· • ·· • 9 • · • · · • 9

    999 • ·

    9 9

    9 9

    9 9

    - 101

    • ·· • · • ··· ·· • · • · ···· • ··· ·· • · • · ·· ·· ·· • e ··· ·· ··

    'a

    - 102 ·· ··· • · • · • ,·· ·· ···· • · · I • · ··· · • · · 9 · • · · · ·· ··· • ·

    CH,

    - 104

    ·-··- — b— 99 · • 9·· 9 9 · 9 9' 9 9 9 9 9 9 9 999 9** 9 999 9 9 99 9 9 9 9 9 9 9 99 9 9 999 ·· 99 999 99 999

    o P¹» í*,

    ;*

    - 105 -

    • Ίϊ*' • · ··· · ·· • · • • · • · · • ··· • • ··· • · ·· ·· ·· ··· ·· ·

    106

    — - — ... . .-· ·· · • ·· • · • · • · ···· • ··« ·· • · • · ·· ··· ·· • · ··· ·· ··

    108 ·« ““· · ·· · • ··· • · · • · · ··· ·· • ···· • · • ··· • ·

    9 · • ··· ·· t

    Ηρ ο ο i'·

    - 110 ’99 ·· ···· ·· ··· ··· ··· • ··· · · ··· · · ··· ·· ·· ··· ·· ···

    II

    CH,

    0¾

    - 112

    • ·· • · • ··· • · · ·· • ••· • ··· • · ·· • • • · • • • • • • • · • • ·· ·· • · ··· ·· •

    - 114

    • ·· • · • ··· ·· • · • · ···· • ··· ·· · • · ·· • · · ·· ·· ·· ··· ·· ··

    ·· ····

    -116 ·· ··· • · • · ·· • · · • · ··· • · · • · · · ·· ·· · • · 99 • · · • · · • · · ·· ··· ··

    - 117 ··· • · • · • ·· ·· ···· • · · • · ··· • · · · /%η,

    - 118 ·· ··· ·· ···· ·· • · · · · • ··· · · σ'⁰*· • ·· ·· ··· ·· ·· ····

    - 119 • · · • · ··· • · · · · • · · ·· ··· ·· • · • · • · • · ·· ··

    - 120 ·· ···· · • · · · · · • · ··· · · • · · · · · ·· ··· ·· ·

    - 121 ·· ··· ·· ···· • · • ··· • · • · ·· ··· ·· • · • · • · • · ·· ··· ο

    122 • · · · • · • · · • · · ···· ·· · ·· • · · • · • · · e · ·· ·
15. 15. Zlúčenina alebo jej farmaceuticky prijateľný derivát podľa nároku 1. kde uvedená zlúčenina je vybraná zo skupiny zahŕňajúcej '
16. 16. Farmaceutický prostriedok, vyznačuj úo i satým, Se obsahuje činidlo inhibujúce rotamázu zahŕňajúce aspoň jednu heterocykllckú zlúčeninu alebo jej farmaceutický vhodný derivát podľa nároku 1 v množstve, ktoré je terapeuticky účinné na zabránenie rozvoju alebo zmiernenie existujúcich symptómov choroby alebo stavu sprostredkovaného FKBP.

    123

    ·· ···· • • ·· • · • ·· ·· • • ·· • • • • • • • • · • • • · • ···· ·· ··· m·· ·· • ·
17. 17. Farmaceutický prostriedok podľa nároku 16, vyzná čujúci sa t ý m, že chorobou alebo stavom je neurologická choroba.
18. 18. Farmaceutický prostriedok podľa nároku 17, vyznačujúci satým, že neurologická porucha je zvolená zo súboru skladajúceho sa z periférnej neuropatle vyvolanej fyzickým poškodením alebo chorobným stavom, fyzickým poškodením mozgu, fyzickým poškodením miechy, mŕtvicou spojenou s poškodením mozgu a neurologických porúch, ktoré majú vzťah k neurodegeneráci i.
19. 19. Farmaceutický prostriedok podľa nároku 17, vyznačujúci sa tým, že neurologická choroba je zvolená zo súboru skladajúceho sa z Parklnsonovej choroby, Alzhelmerovej choroby alebo amyotroflckej laterálnej sklerózy.
20. 20. Farmaceutický prostriedok podľa niektorého z nárokov 16 až 19, vyznačujúci sa tým, že ďalej obsahuje neurotrofný faktor.
21. 21. Použitie heterocyklickej zlúčeniny alebo jej farmaceutický prijateľného derivátu podľa nároku 1 na výrobu liečiva na liečbu neurologických chorôb.
22. 22. Použitie podľa nároku 21, kde neurologická choroba je vybraná zo skupiny skladajúcej sa z periférnej neuropatle vyvolanej fyzickým poškodením alebo chorobným stavom, fyzickým poškodením mozgu, fyzickým poškodením miechy, mŕtvicou spojenou s poškodením mozgu a neurologických porúch, ktoré majú vzťah k neurodegenerácl1.

    123a ·· ···· • · ···· • ·· ·· · · · • · · • · · · • · · ··· ·· ·
23. 23. Použitie podľa nároku 21, kde neurologická choroba je vybraná zo skupiny skladajúcej sa z Parkinsonovej choroby, Alzheimerovej choroby alebo amyotrofickej laterálnej sklerózy.
24. 24. Použitie podľa nároku 21, kde liečivo je kombinované a ďalej zahŕňa neurotrofný faktor zvolený zo súboru skladajúceho sa z nervového rastového faktoru. Inzulínového rastového faktoru a jeho účinných obmedzených derivátov, kyslých a bázických fibroblastových rastových faktorov, rastových faktorov odvodených od krvných doštičiek, neurotrofného faktoru odvodeného z aozgu, cillárnych neurotrofných faktorov, neurotrofného faktoru odvodeného z gliálnej bunkovej línie, neurotroflnu 3 a neurotroflnu 4/5.
25. 25. Spôsob prípravy heterocyklickej zlúčeniny alebo jej farmaceutický prijateľného derivátu podľa nároku 1, vyznačujúci sa tým, zahŕňa

    - 124 • ·· ae · • ··· • · · · • · · • e· ·· ·· ···· • · · • · ··· • · · · • · · ·· ··· ·· ·· · (a) konverziu zlúčeniny všeobecného vzorca Ill-a (m-á) kde >32 sa zvolí zo súboru, ktorý zahŕňa prípadne substituovaný alkyl, alkenyl, aryl, cykloalkyl, cykloalkenyl, skupinu

    J^-C(CH₂)_q s30 >a

    II

    ^.CO(CH₂)qR' kde q je 0 alebo l-’-a R³⁰ je alkylová alebo arylová skupina, nesubstituovaná alebo substituovaná jedným alebo viacerými substituentmi nezávisle vybranými zo súboru, ktorý zahŕňa hydroxyl, Cj-Cg alkyl, C₂-Cg alkenyl, alkyloxy, C₂-C₄ alkenyloxy, benzyloxy, fenoxy a fenyl;

    X znamená vodík; kyano; alkyloxy; dimetoxymetyl;

    alebo kyslík, kde keď X je kyslík, väzba viažuca X k cyklickému kruhu je dvojná väzba a

    Y je vodík; alkyl, alkenyl alebo cykloalkylová skupina nesubstituovaná alebo substituovaná jedným alebo viacerými substituentmi nezávisle vybranými zo súboru, ktorý zahŕňa alkyl, aryl, alkoxy, hydroxyalkyl, aryloxy, alkenyloxy a hydroxyskupiny, nesubstituované alebo substituované jedným ,'ϊ· alebo viacerými substituentmi nezávisle vybranými zo súboru, ktorý zahŕňa hydroxyl, Cj-Cg alkyl, C₂-C₆ alkenyl, C-j-C^ alkyloxy, C₂-C₄ alkenyloxy, benzyloxy, fenoxy a fenyl; alebo (CH₂)_p-0-W² alebo (CH₂)_p-N-W², kde p je 0, 1 alebo 2 a W² je R³ alebo C(O)R³, kde R³ je alkyl, alkenyl alebo arylová skupina, nesubstituovaná alebo substituovaná jedným alebo via- 125 ·· ···· • · • ··· ·· cerými substituentmi nezávisle vybranými zo súboru, ktorý zahŕňa alkyl, aryl alebo alkoxyskupinu;

    alebo X a Y, spoločne s atómom uhlíka kr-uhu a dusíkovým heteroatómom, ku ktorému sú viazané, tvoria 5- až 7-členný nasýtený alebo nenasýtený heterocyklický kruh, nesubstituovaný alebo substituovaný jedným alebo viacerými substituentmi J,

    K a L, kde J, K a L znamená substituenty nezávisle vybrané zo súboru, ktorý zahŕňa kyslík, C₃-C₅ cykloalkyl alebo Cj-Cg alkylové skupiny, nesubstituované alebo substituované jedným alebo viacerými substituentmi nezávisle vybranými zo súboru, ktorý zahŕňa C₃-C₅ cykloalkyl, metoxy, metoxyfenyl alebo dimetoxyfenyl; alebo J a K spolu tvoria fenylový kruh, nesubstituovaný alebo substituovaný jedným alebo viacerými substituentmi, nezávisle vybranými zo súboru, ktorý zahŕňa metoxy, trifluórmetyl, trifluórmetoxy a vhodné substituenty viazané k fenylovému kruhu'cez kyslík, dusík, uhlík alebo síru a nezávisle vybrané zo súboru, ktorý zahŕňa halogén, hydroxyl, N0₂, CF₃, _Cl-C₆ alkyl, C₂-C_g alkenyl, ^Ci^-C4 alkyloxy, C₂~C₄ alkenyloxy, benzyloxy, fenoxy, amino a fenyl;

    pri redukčných podmienkach na zlúčeninu všeobecného vzorca III-b:

    (in-b) kde X a Y majú význam definovaný hore; a

    V (b) kopuláciu uvedenej zlúčeniny III-b so zlúčeninou všeobecného vzorca IV:

    (IV)

    126 ·· ···· • · · · • · • · · • · · ···· ·· · ·· · · · • · · • · · · • · · ··· ·· · kde R¹ sa zvolí zo súboru, ktorý zahŕňa vodíkí arylovú skupinu, nesubstituovaná alebo substituovanú jedným alebo viacerými substituentmi vybranými zo súboru, ktorý zahŕňa halogén, hydroxyl, NOz, CF3, Ci-Ce alkyl, C2-C6 alkenyl,

    C1-C4 alkyloxy, C2-C4 alkenyloxy, benzyloxy, fenoxy, amino alebo fenyl; alkylovú alebo alkenylovú skupinu, nesubstituovanú alebo substituovanú jedným alebo viacerými substituentmi nezávisle vybranými zo súboru, ktorý zahŕňa C1-C4 alkyl, C2-C4 alkenyl, C4-C6 cykloalkenyl a hydroxy; C3-C8 cykloalkyl alebo C5-C7 cykloalkenylovú skupinu, nesubstituovaná alebo substituovanú jedným alebo viacerými substituentmi nezávisle vybranými zo súboru, ktorý zahŕňa C1-C4 alkyl, C2-C4 alkenyl, C1-C4 alkyloxy a hydroxy; a C(R⁴¹)(R¹²)(R¹³), kde R¹¹ a R¹² sú vždy nezávisle nižší alkyl alebo R¹¹ a R¹² spoločne s atómom, ku ktorému sú viazané tvoria cykloalkyl a R¹³ je H, OH, nižší alkyl, aryl alebo <CHzln-O-W¹, kde n je 0, 1, 2 alebo 3, W¹ je R² alebo C(0)R² a R² je C1-C3 alkyl, nesubstituovaný alebo substituovaný jednou alebo dvoma metoxyskuplnaml.
26. 26. Spôsob podľa nároku 25, vyznačujúci sa tým, že zlúčenina vzorca Ill-a je vybraná zo súboru, ktorý zahŕňa kde Z je benzyloxykarbonyl.
27. 27. Spôsob podľa nároku 25, vyznačujúci sa tým, že zlúčenina vzorca Ill-a je vybraná zo súboru, ktorý zahŕňa

    127 kde Z je benzyloxykarbony1.
28. 28. Spôsob podľa nároku 25, vyznačujúci sa týl, že zlúčenina vzorca Ill-a je vybraná zo súboru, ktorý zahŕňa kde Z je benzyloxykarbonyl.
29. 29. Spôsob podľa nároku 25, vyznaôujúci sa tý·, že zlúčenina vzorca Ill-a je vybraná zo súboru, ktorý zahŕňa

    128 ·· • · ···· ···· ·· • · ·· ·· ·· · · · • · · · • · · · · • · · · ··· ··· ·· · kde Z je benzyloxykarbonyl.
30. 30. Spôsob podľa nároku 25, vyznačujúci sa t ý a, Se ďalej zahŕňa konverziu zlúčeniny všeobecného vzorca II r iZ

    N‘

    Λό· kde Z je (Π) ii ^CO(CH₂)qR³⁰ kde q je O alebo 1, a R³⁰ je alkylová alebo arylová skupina nesubstituovaná alebo substituovaná jedným alebo viacerými substituentmi nezávisle vybranými zo skupiny zahŕňajúcej hydroxyl, Ci-Ce alkyl, Cz-Ce alkenyl, C1-C4 alkyloxy, C2-C4 alkenyloxy, benzyloxy, fenoxy, amino a fenyl, na uvedenú zlúčeninu všeobecného vzorca Ill-a.
31. 31. Heterocyklická zlúčenina všeobecného vzorca·*

    O kde R¹ sa zvoli zo súboru, ktorý zahŕňa vodík: arylovú skupinu, nesubst1tuovanú alebo substituovanú jedným alebo viacerými substituentmi vybranými zo súboru, ktorý zahŕňa halogén, hydroxyl, HO2, CF3, Ci-Ce alkyl, Ca-Ce alkenyl.

    C1-C4 alkyloxy, C2-C4 alkenyloxy, benzyloxy, fenoxy, amino alebo fenyl; alkylovú alebo alkenylovú skupinu, nesubstituovanú alebo substituovanú jedným alebo viacerými substituentmi nezávisle vybranými zo súboru, ktorý zahŕňa C1-C4 alkyl, Ca-C4

    - 129 ··· ·· <··· • · • ··· • · · • <

    ·· ··· alkenyl, c₄-c₆ cykloalkenyl a hydroxy? C₃-C_g cykloalkyl alebo C5-C7 cykloalkenylovú skupinu, nesubstituovanú alebo substituovanú jedným alebo viacerými substituentmi nezávisle vybranými zo súboru, ktorý zahŕňa alkyl, C₂~C₄ alkenyl, alkyloxy a hydroxy? a CÍR¹¹) (R¹²) (R¹³), kde R¹¹ a R¹² sú vždy nezávisle nižší alkyl alebo R¹¹ a R¹² spoločne s atómom, ku ktorému sú viazané tvoria cykloalkyl a R¹³ je H, OH, nižší alkyl, aryl alebo (CH₂)_n-O-W¹, kde n je 0, l, 2 alebo 3, W¹ je R² alebo C(O)R² a R² je C^-C-j alkyl, nesubstituovaný alebo substituovaný jednou alebo dvoma metoxyskupinami.

    X¹ a X² sa nezávisle zvolia zo súboru, ktorý zahŕňa vodík, kyano, Cj-Cj alkoxy, dimetoxymetyl alebo =0? alebo X¹ a X² spolu tvoria valenčnú väzbu; a

    Y sa zvolí zo súboru, ktorý zahŕňa vodík? alkyl, alkenyl alebo cykloalkylovú skupinu, nesubstituovanú alebo substituovanú jedným alebo viacerými substituentmi nezávisle vybranými zo súboru, ktorý zahŕňa alkyl, aryl, alkoxy, hydroxyalkyl, aryloxy, alkenyloxy, hydroxy skupiny, nesubstituované alebo substituované jedným alebo viacerými substituentmi nezávisle vybranými zo súboru, ktorý zahŕňa hydroxyl, C^^-Cg alkyl, ^C2”^C6 alkenyl, ^ci^c4 alkyloxy, C2-C4 alkenyloxy, benzyloxy, fenoxy a fenyl; alebo (CH2)p-O-W² alebo (CH2)_p-N-W², kde p je 0, 1 alebo 2 a W² je R³ alebo C(0)R³, kde R³ je alkyl, alkenyl alebo arylová skupina, nesubstituovaná alebo substituovaná jedným alebo viacerými substituentmi nezávisle vybranými zo súboru, ktorý zahŕňa alkyl, aryl a alkoxy? alebo jedno z X¹ a X² v kombinácii s Y tvorí s heteroatómom dusíka kruhovej štruktúry, ku ktorému je Y viazané tvoria 5- až

    7-členný nasýtený alebo nenasýtený heterocyklický kruh, prípadne obsahujúci jeden ďalší heteroatóm vybraný z 0 a N, kde 5- až 7-členný nasýtený alebo nenasýtený heterocyklický kruh je prípadne substituovaný jedným alebo viacerými substituentmi vybranými z J, K a L, kde J, K a L znamená substituenty nezávisle vybrané zo súboru, ktorý zahŕňa kyslík, C₃-C₅ cykloalkyl

    130 ·· ···· ·· alebo C1-C5 alkylové skupiny, prípadne substituované jedným alebo dvoma subst1tuent·1 nezávisle vybranými zo súboru, ktorý zahŕňa C3-C5 cykloalkyl, metoxy, metoxyfenyl alebo dlmetoxyfenyl alebo J a K spolu tvoria fenylový kruh, prípadne substituovaný jedným alebo viacerými substituentm1, nezávisle vybranými zo súboru, ktorý zahŕňa metoxy, trifluórmetyl, trifluórmetoxy a vhodné substituenty viazané k fenylovému kruhu cez kyslík, dusík, uhlík alebo síru alebo farmaceutický prijateľný derivát uvedenej zlúSenlny.
32. 32. ZlúSenina alebo jej farmaceutický prijateľný derivát podľa nároku 31, kde uvedená zlúóenlna je vybraná zo skupiny, ktorá zahŕňa: