SK287964B6 - Pyrrolidine derivatives as cyclic amp-specific phosphodiesterase inhibitors - Google Patents

Pyrrolidine derivatives as cyclic amp-specific phosphodiesterase inhibitors Download PDF

Info

Publication number
SK287964B6
SK287964B6 SK917-2002A SK9172002A SK287964B6 SK 287964 B6 SK287964 B6 SK 287964B6 SK 9172002 A SK9172002 A SK 9172002A SK 287964 B6 SK287964 B6 SK 287964B6
Authority
SK
Slovakia
Prior art keywords
nmr
mhz
mmol
cdcl
methoxyphenyl
Prior art date
Application number
SK917-2002A
Other languages
English (en)
Other versions
SK9172002A3 (en
Inventor
Timothy J. Martins
Kerry W. Fowler
Joshua Odingo
Edward A. Kesicki
Amy Oliver
Laurence E. Burgess
John J. Gaudino
Zachary S. Jones
Bradley J. Newhouse
Stephen Schlachter
Original Assignee
Icos Corporation
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Icos Corporation filed Critical Icos Corporation
Publication of SK9172002A3 publication Critical patent/SK9172002A3/sk
Publication of SK287964B6 publication Critical patent/SK287964B6/sk

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D207/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D207/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D207/04—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D207/08—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hydrocarbon radicals, substituted by hetero atoms, attached to ring carbon atoms
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/40—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/06—Antiasthmatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/08—Bronchodilators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A61P15/10—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives for impotence
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/06—Antipsoriatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
    • A61P19/10—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease for osteoporosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
    • A61P25/16—Anti-Parkinson drugs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/22—Anxiolytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/24—Antidepressants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/04—Anorexiants; Antiobesity agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P33/00—Antiparasitic agents
    • A61P33/02—Antiprotozoals, e.g. for leishmaniasis, trichomoniasis, toxoplasmosis
    • A61P33/06—Antimalarials
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/08—Antiallergic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/04—Inotropic agents, i.e. stimulants of cardiac contraction; Drugs for heart failure
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings
    • C07D401/04—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings directly linked by a ring-member-to-ring-member bond
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings
    • C07D401/06—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings linked by a carbon chain containing only aliphatic carbon atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings
    • C07D401/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D403/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00
    • C07D403/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings
    • C07D403/04—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings directly linked by a ring-member-to-ring-member bond
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D403/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00
    • C07D403/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings
    • C07D403/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D405/00—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom
    • C07D405/02—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings
    • C07D405/06—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings linked by a carbon chain containing only aliphatic carbon atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D405/00—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom
    • C07D405/02—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings
    • C07D405/12—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D409/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D409/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings
    • C07D409/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D413/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D413/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings
    • C07D413/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D417/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00
    • C07D417/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00 containing two hetero rings
    • C07D417/06—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00 containing two hetero rings linked by a carbon chain containing only aliphatic carbon atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D417/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00
    • C07D417/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00 containing two hetero rings
    • C07D417/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00 containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Psychology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Reproductive Health (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Child & Adolescent Psychology (AREA)
  • Transplantation (AREA)

Abstract

There are described pyrrolidine compounds having the structural formula (II), where the meaning of substituents is disclosed in the description, that are potent and selective inhibitors of cyclic adenosine 3', 5'-monophosphate specific phosphodiesterase (cAMP specific PDE) especially PDE4. Further, there are described pharmaceutical preparations containing these compounds as well as use of the compounds as therapeutic preparations, for example in the treatment of inflammatory diseases and other diseases involving elevated levels of cytokines and proinflammatory mediators. Use of these compounds in the treatment of inflammatory diseases and other diseases involving elevated levels of cytokines, as well as central nervous system (CNS) disorders, also is disclosed.

Description

Oblasť techniky
Tento vynález sa týka derivátov pyrolidínu, ktoré sú účinnými a selektívnymi inhibítormi cyklickej adenozín 3', 5'-monofosfát špecifickej fosfodiesterázy (cAMP špecifickej PDE) obzvlášť PDE4. Tento vynález sa ďalej týka farmaceutických prípravkov obsahujúcich tieto zlúčeniny, ako aj ich použitia ako terapeutík, napríklad na liečbu zápalových a iných ochorení, pri ktorých sa vyskytuje zvýšená hladina cytokínov a prozapálových mediátorov.
Doterajší stav techniky
Chronický zápal je multifaktoriálna zdravotná komplikácia charakterizovaná aktiváciou viacerých druhov zápalových buniek, najmä buniek z rodu lymfoidných (vrátane lymfocytov T) a z rodu myeloidných (vrátane granulocytov, makrofágov amonocytov). Tieto aktivované bunky produkujú prozápalové mediátory, vrátane cytokínov, ako sú napríklad faktor nekrotizujúci nádory (TNF) a interleukín-1 (1L-1). V súlade s uvedeným by bola preto pri terapeutickej liečbe zápalových ochorení a iných ochorení súvisiacich so zvýšenou hladinou cytokínov užitočná látka, ktorá potláča aktiváciu týchto buniek alebo produkciu prozápalových cytokínov týmito bunkami.
Cyklický adenozínmonofosfát (cAMP) je druhou špecifickou štruktúrou prenášajúcou informácie, ktorá sprostredkováva biologické reakcie buniek na širokú škálu extracelulámych stimulov. Keď sa príslušný agonista (rovnako pôsobiaci činiteľ) naviaže na konkrétne povrchové receptory bunky, aktivuje sa adenylátcykláza, ktorá premení adenozíntrifosfát (ATP) na cAMP. Existuje teória, že agonistom vyvolané pôsobenie cAMP v bunke je sprostredkovávané prevažne pôsobením proteínkináz závislých od cAMP. Intraceluláme pôsobenie cAMP končí buď prenosom nukleotidu k vonkajšej strane bunky, alebo enzymatickým delením prostredníctvom fosfodiesteráz cyklického nukleotidu (PDE), ktoré hydrolyzujú väzbu 3'-fosfodiesteru na 5'-adenozínmonofosfát (5'-AMP). 5'-AMP je neaktívny metabolit. Štruktúry cAMP a 5-AMP sú znázornené neskôr:
cAMP
Zvýšené hladiny cAMP v ľudských myeloidných a lymfoidných bunkách sú spojené s potláčaním aktivácie buniek. Rodina intracelulámych enzýmov PDE preto reguluje hladinu cAMP v bunkách. PDE4 je prevládajúci izotyp PDE v týchto bunkách aje hlavným prispievateľom k degradácii cAMP. V súlade s uvedeným inhibícia pôsobenia PDE by zabránila konverzii cAMP na neaktívny metabolit 5'-AMP a následne udržala vyššiu hladinu cAMP a tým potláčala aktiváciu buniek (pozri Beavo et al., „Cyclic Nucleotide Phosphodiesterases: Structure, Regulation and Drug Action,” Wiley and Sons, Chichester, str. 3-14, (1990), Torphy et al., Drug News and Perspectives, 6, str. 203-214 (1993); Giembycz et al., Clin. Exp. Allergy, 22, str. 337-344 (1992)).
Ukázalo sa, že najmä inhibítory PDE4, ako napríklad rolipram, inhibujú produkciu TNFa a čiastočne inhibujú uvoľňovanie IL-Ιβ monocytmi (pozri Semmler et al., Int. J. Immunopharmacol., 15, str. 409-413, (1993); Molnar-Kimber et al., Mediators of Inflammation, 1, str. 411-417, (1992)). Taktiež sa ukázalo, že inhibítory PDE4 inhibujú produkciu peroxidových radikálov z ľudských polymorfonukleárnych leukocytov (pozri Verghese et al., J. Mol. Celí. Cardiol., 21 (Suppl. 2), Sól (1989); Nielson et al., J. Allergy Immunol., 86, str. 801-808, (1990)), inhibujú uvoľňovanie vazoaktívnych amínov a prostanoidov z ľudských bazofilných leukocytov (pozri Peachell et al., J. Immunol., 148, str. 2503-2510, (1992)); inhibujú respiračné praskliny v eozinofilných leukocytoch (pozri Dent et al., J. Pharmacol., 103, str. 1339-1346, (1991)); a inhibujú aktiváciu ľudských lymfocytov T (pozri Robicsek et al., Biochem. Pharmacol., 42, str. 869-877, (1991)).
K zápalovej aktivácii buniek a nadmernej alebo neregulovanej produkcii cytokínov (napr. TNFa a IL-1 β) dochádza pri alergických, autoimunitných a zápalových ochoreniach a poruchách, ako sú napríklad reumatoidná (atrofická) artritída, osteoartritída, dnavá artritída, spondylitída, tyreoidálna oftalmopatia, Behcetova choroba, sepsa, septický šok, endotoxínový šok, gramnegatívna sepsa, grampozitívna sepsa, syndróm toxického šoku, astma, chronická bronchitída, syndróm respiračnej poruchy dospelých, chronická pulmonálna zápalová choroba, ako napríklad chronická obštrukčná pulmonálna choroba, silikóza, sarkoidóza pľúc, reperfúzne poškodenie srdcového svalu, mozgu a končatín, fibróza, cystická fibróza, hrubnutie jaziev, tvorba jaziev, ateroskleróza, problémy s odmietaním transplantátu, ako sú napríklad reakcia štep versus hostiteľ a odhojenie aloštepu (aloimplantátu), chronická glomerulonefritída, lupus, črevná zápalová choroba, ako napríklad Crohnova choroba a ulcerózna kolitída, proliferatívna lymfocytóza, ako napríklad leukémia a zápalové dermatózy, ako napríklad atopická dermatitída, psoriáza a urtikária.
Medzi ďalšie stavy charakteristické zvýšenou hladinou cytokínov patrí poškodenie mozgu následkom miernej traumy (pozri Dhillon et al., J. Neurotrauma, 12, str. 1035-1043 (1995); Suttorp et al., J. Clin. Invest., 91, str. 1421-1428 (1993)), kardiomyopatie, ako napríklad kongestívne zlyhanie srdca (pozri Bristow et al., Circulation, 97, str. 1340-1341 (1998)), kachexia, sekundárna kachexia pri infekcii alebo malignite, sekundárna kachexia pri syndróme získanej imunitnej nedostatočnosti (AIDS), pri miernejšej forme choroby AIDS (ARS), horúčkovité myalgie spôsobené infekciou, cerebrálna malária, osteoporóza a resorpcia kostí, hrubnutie jaziev, tvorba tkaniva jaziev a pyrexia.
Konkrétne sa zistilo, že TNFa zohráva úlohu v súvislosti so syndrómom získanej imunitnej nedostatočnosti (AIDS). AIDS vzniká z infekcie lymfocytov T vírusom HIV. Hoci vírus HIV taktiež infikuje myeloidné bunky a zachováva sa v nich, ukázalo sa, že TNF reguluje infekciu HIV v lymfocytických bunkách typu T a v monocytických bunkách (pozri Poli et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 87, str. 782-785, (1990)).
Niekoľko vlastností TNFa, ako napríklad stimulácia kolagenáz, stimulácia angiogenézy in vivo, stimulácia resorpcie kostí a schopnosť zvyšovať priľnavosť nádorových buniek k endotelu sú v súlade s úlohou TNF vo vývoji a metastatickom šírení rakoviny u hostiteľa. TNFa bolo nedávno priamo implikované pri podpore rastu a metastázovania nádorových buniek (pozri Orosz et al., J. Exp. Med., 177, str. 1391-1398, (1993)).
PDE4 sa vyznačuje rozsiahlou distribúciou v tkanivách. Existujú minimálne štyri gény pre PDE4, ktorých viacnásobné transkripcie z akéhokoľvek daného génu môžu vyprodukovať niekoľko rôznych proteínov, ktoré zdieľajú rovnaké katalytické pozície. Identita aminokyselín medzi týmito štyrmi možnými katalytickými pozíciami je vyššia ako 85 %. Ich spoločná citlivosť na inhibítory a ich kinetická podobnosť odrážajú funkčný aspekt tejto úrovne identity aminokyselín. Existuje teória, že úloha týchto alternatívne exprimovaných proteínov PDE4 umožňuje mechanizmus, prostredníctvom ktorého bunka môže tieto enzýmy rôzne lokalizovať vnútri bunky a/alebo regulovať katalytickú účinnosť prostredníctvom postranslačných modifikácií. Každý typ danej bunky, ktorý exprimuje enzým PDE4, zvyčajne exprimuje viac ako jeden zo štyroch možných génov kódujúcich tieto proteíny.
Výskumníci prejavili značný záujem o použitie inhibítorov PDE4 ako protizápalových látok. Predchádzajúce dôkazy naznačujú, že inhibícia PDE4 mala priaznivé účinky na rôzne zápalové bunky, ako sú napríklad monocyty, makrofágy, lymfocyty T rodu Th-1 a granulocyty. Syntéza a/alebo uvoľňovanie mnohých prozápalových mediátorov, ako sú napríklad cytokíny, lipidové mediátory, peroxid a biogénne amíny, ako je napríklad histamín, sa v týchto bunkách oslabili pôsobením inhibítorov PDE4. Inhibítory PDE4 taktiež ovplyvňujú aj ďalšie celulárne pôsobenie, vrátane proliferácie lymfocytov T, transmigrácie granulocytov ako reakcie na chemotoxické látky, ako aj integritu endotelových spojení buniek v rámci vaskulatúry.
Boli uverejnené správy o vzorkách, syntéze a skríningu rôznych inhibítorov PDE4. Metylxantíny, ako sú napríklad kofeín a teofylín, boli prvými objavenými inhibítormi PDE, ale tieto zlúčeniny sú neselektívne, čo sa týka inhibície PDE. Liek rolipram, antidepresívum, bol prvý z hlásených špecifických inhibítorov PDE4. Rolipram, s nasledujúcim štruktúrnym vzorcom, má uvádzanú 50%-nú inhibičnú koncentráciu (IC50) okolo 200 nM (nanomólov) v súvislosti s inhibíciou rekombinačného ľudského PDE4.
Rolipram
Výskumníci pokračovali v hľadaní inhibítorov PDE4, ktoré sú selektívnejšie v súvislosti s inhibíciou, ktoré majú nižšie lC5oako rolipram a ktoré by nemali vedľajšie účinky na centrálnu nervovú sústavu (CNS), ako je napríklad dávenie, vracanie a sedatívny účinok, ktoré sprevádzajú podávanie rolipramu. Jedna trieda zlúčenín je uvedená v U.S. Patente 5,665,754 Feldmana et al. Zlúčeniny uvedené v tomto patente sú substituované pyrolidíny, ktoré majú podobnú štruktúru ako rolipram. Jedna konkrétna zlúčenina štruktúrneho vzorca (I) má 1C5O, v súvislosti s ľudským rekombinačným PDE4, okolo 2 nM. Aj keď bolo zaznamenané priaznivé oddelenie emetických vedľajších účinkov od účinnosti lieku, tieto zlúčeniny nepreukázali zníženie nežiaducich účinkov na CNS.
Okrem toho, niekoľko spoločností práve vykonáva klinické pokusy ostatných inhibítorov PDE4. Problémy týkajúce sa účinnosti lieku a nepriaznivých vedľajších účinkov, ako sú napríklad vracanie a poruchy centrálnej nervovej sústavy, však ostali zatiaľ nevyriešené.
Preto by pri liečbe alergických a zápalových ochorení, ako aj ostatných ochorení spojených s nadmernou alebo neregulovanou produkciou cytokínov, ako je napríklad TNF, boli užitočné zlúčeniny, ktoré selektívne inhibujú PDE4 a ktoré znižujú alebo eliminujú nepriaznivé vedľajšie účinky na CNS spojené s predchádzajúcimi inhibítormi PDE4. Selektívne inhibítory PDE4 by okrem toho boli užitočné pri liečbe ochorení, ktoré súvisia so zvýšenou hladinou cAMP alebo pôsobením PDE4 v konkrétnom cieľovom tkanive.
Teraz boli nájdené účinné a selektívne inhibítory PDE4 užitočné pri liečbe ochorení a stavov, pri ktorých môže pomôcť inhibovanie aktivity PDE4. Prezentované inhibítory PDE4 neočakávane redukujú alebo eliminujú nepriaznivé vedľajšie účinky na CNS spojené s predchádzajúcimi inhibítormi PDE4.
Podstata vynálezu
Predmetom vynálezu sú deriváty pyrolidínu, vzorca
kde R1 je vybrané zo skupiny, ktorú tvorí Ci.4, C6-i6 bicyklický, alebo polycyklický uhlovodík, aryl, cykloalkyl, 4-, 5- alebo 6-členný nasýtený heterocyklus, heteroaryl, C,.4 alkylénaryl, Ci.4 alkylén-O-aryl, Ci.4 alkylén-heteroaryl, alkylénHet, C2.4 alkylénaryl-O-aryl, C(.4 alkylénom premostený alkyl, Ct_4 alkyléncykloalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný propargyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alyl a halogéncykloalkyl;
R2 je vybraný zo skupiny, ktorú tvorí metyl alebo halogénom substituovaný metyl,
R3 je vybrané zo skupiny, ktorú tvorí C(=O)OR7, C(=O)R7, NHC(=O)OR7, Ch3 alkylénC(=O)OR8, C,.3alkyIénC(=O)R8, C(=NH)NR8R9, C(=O)C(=O)C(=O)OR8, C,.4alkylén-OR8, aryl, C,.3alkylénaryl, C,_3 alkylénheteroaryl, SO2-heteroaryl, Het a heteroaryl;
R4 je vybrané zo skupiny, ktorú tvorí vodík, Ct.6 alkyl, halogénalkyl, alebo cykloalkyl;
R5 je vybrané zo skupiny, ktorú tvorí vodík, Ci.Ŕ alkyl, alkinyl, halogénalkyl, hydroxyalkyl, cykloalkyl alebo aryl;
R6 je vybrané zo skupiny, ktorú tvorí vodík, C,.6 alkyl a C(=O)R7;
R7 je vybrané zo skupiny, ktorú tvorí C,.6 alkyl, alebo cykloalkyl, z ktorých každý je prípadne substituovaný jedným alebo viacerými substituentmi zo skupiny OC(=O)R8, C(=O)OR8, OR8, NR8R9 alebo SR8;
R8 a R9, rovnaké alebo rôzne, sú vybrané zo skupiny, ktorú tvorí vodík, C,.6 alkyl, cykloalkyl, aryl, heteroaryl, C(=O)Oalkyl, C(=O)Oaryl, C(=O)alkyl, alkyl-SO2, halogénalkylSO2, C(=O)-C(.3 alkylénaryl, C(=O)OCi_4 alkylénaryl, Ct_4 alkylénaryl alebo Het, alebo R8 a R9 spolu tvoria 4-členný až 7-členný kruh;
R10 je vybrané zo skupiny, ktorú tvorí vodík, alkyl, halogénalkyl, alebo cykloalkyl,
R11 je vybrané zo skupiny, ktorú tvorí alkyl, cykloalkyl, trifluórmetyl, aryl, aralkyl a NRSR9; a ich soli a solváty.
Predmetom tohto vynálezu sú tiež farmaceutické prípravky, ktorých podstata spočíva v tom, že obsahujú definovaný derivát pyrolidónu, alebo jeho akékoľvek výhodné uskutočnenie, farmaceutický prijateľný nosič a prípadne druhú protizápalovú terapeutickú látku.
Predmetom tohto vynálezu je rovnako definovaný derivát pyrolidónu, alebo jeho akékoľvek výhodné uskutočnenie, definovaný farmaceutický prípravok, alebo jeho akékoľvek výhodné uskutočnenie na použitie pri terapii, rovnako ako použitie definovaného derivátu pyrolidónu alebo jeho akékoľvek výhodné uskutočnenie, alebo definovaného farmaceutického prípravku, alebo jeho akékoľvek výhodné uskutočnenie na výrobu lieku na liečenie cicavca, ktorý je v stave, že inhibícia cAMP-špecifickej PDE prináša liečebný prospech.
Ďalej sa uvádzajú výhodné uskutočnenia predmetného vynálezu, rovnako ako porovnávacie údaje. Pre úplnosť je opísaný vynález v celej jeho šírke, pričom údaje neurčité a idúce nad rámec vynálezu majú slúžiť iba na dokreslenie predmetného vynálezu.
Vynález sa zameriava najmä na deriváty pyrolidínu, ktoré vyjadruje štruktúrny vzorec (II):
kde R1 je vybrané zo skupiny, ktorú tvorí vodík, nižší alkyl, premostený alkyl (napr. norbornyl), aryl, cykloalkyl (napr. indanyl), 4-, 5- alebo 6-členný nasýtený heterocyklus (napr. 3-tetrahydrofuryl), heteroaryl, C,.4alkylénaryl, C!.4alkylénOaryl, C^^lkylénheteroaryl, C1_4alkylénHet, C2.4alkylénarylOaryl, C^alkylénom premostený alkyl, C,.4alkyléncykloalkyl (napr. cyklopentylmetyl), substituovaný alebo nesubstituovaný propargyl (napr. -CH2C=C-C6H5), substituovaný alebo nesubstituovaný alyl (napr. -CH2CH=CH-C6H5) a halogéncykloalkyl (napr. fluórcyklopentyl);
R2 je vybrané zo skupiny, ktorú tvorí vodík, metyl a halogénom substituovaný metyl, napr. CHF2;
R3 je vybrané zo skupiny, ktorú tvorí C(=O)OR7, C(=O)R7, NHC(=O)OR7, Ci.3alkylénC(=O)OR8, C,.3alkylénC(=O)R8, C(=NH)NR8R9, C(=O)NR8R9, C(=O)-C(=O)NR8R9, C(=O)C(=O)OR8, C^alkylénOR8, aryl, C|.3alkylénaryl, Ci_3alkylénheteroaryl, SO2heteroaryl, Het a heteroaryl;
R4 je vybrané zo skupiny, ktorú tvorí vodík, nižší alkyl, halogénalkyl, cykloalkyl a aryl;
R5 je vybrané zo skupiny, ktorú tvorí vodík, nižší alkyl, alkinyl, halogénalkyl, hydroxyalkyl, cykloalkyl a aryl;
R6 je vybrané zo skupiny, ktorú tvorí vodík, nižší alkyl a C(=O)R7;
R7 je vybrané zo skupiny, ktorú tvorí nižší alkyl, rozvetvený alebo nerozvetvený, C,.4alkylénaryl, cykloalkyl, Het, Ci.4alkyléncykloalkyl, heteroaryl a aryl, každý voliteľne substituovaný jedným alebo viacerými substituentmi zo skupiny OC(=O)R8, C(=O)OR8, OR8, NR8R9 alebo SR8;
R8 a R9, rovnaké alebo rôzne, sú vybrané zo skupiny, ktorú tvorí vodík, nižší alkyl, cykloalkyl, aryl, heteroaryl, C(=O)Oalkyl, C(=O)Oaryl, C(=O)alkyl, alkylSO2, halogénalkylSO2, C(=O)-Ci.3alkylénaryl, C(=O)OC1.4alkylénaryl, Ci_4alkylénaryl a Het, alebo R8 a R9 spolu tvoria 4-členný až 7-členný kruh;
R10 je vybrané zo skupiny, ktorú tvorí vodík, alkyl, halogénalkyl, cykloalkyl, aryl, C(=O)alkyl, C(=O)cykloalkyl, C(=O)aryl, C(=O)Oalkyl, C(=O)Ocykloalkyl, C(=O)aryl, CH2OH, CH2Oalkyl, CHO, CN, NO2aSO2R“;
R11 je vybrané zo skupiny, ktorú tvorí alkyl, cykloalkyl, trifluórmetyl, aryl, aralkyl a NRSR9; a ich soli a solváty (napr. hydráty).
V inom uskutočnení sa tento vynález zameriava na zlúčeniny pyrolidínu, ktoré majú štruktúrny vzorec (Ha):
kde R1 je vybrané zo skupiny, ktorú tvorí vodík, nižší alkyl, premostený alkyl, aryl, cykloalkyl, 4-, 5- alebo 6-členný nasýtený heterocyklus, heteroaryl, Ci.4alkylénaryl, C,.4alkylénOaryl, Ci.4alkylénheteroaryl, C,.4alkylénHet, C2.4alkylénarylOaryl, C!.4alkylénom premostený alkyl, C,.4alkyléncykloalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný propargyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alyl a halogéncykloalkyl;
R2 je vybrané zo skupiny, ktorú tvorí vodík, metyl a halogénom substituovaný metyl;
R3 je vybrané zo skupiny, ktorú tvorí vodík, Ci.4alkylénaryl, C(=O)C1.3alkylénOCi_3alkylénaryl;
R4 je vybrané zo skupiny, ktorú tvorí vodík, nižší alkyl, halogénalkyl, cykloalkyl a aryl;
R5 je vybrané zo skupiny, ktorú tvorí vodík, nižší alkyl, alkinyl, halo-génalkyl, hydroxyalkyl, cykloalkyl a aryl;
R6 je vybrané zo skupiny, ktorú tvorí vodík, nižší alkyl a C(=O)R7;
R7 je vybrané zo skupiny, ktorú tvorí nižší alkyl, rozvetvený alebo nerozvetvený, Ci.4alkylénaryl, cykloalkyl, Het, Ci.4alkyléncykloalkyl, heteroaryl a aryl, každý voliteľne substituovaný jedným alebo viacerými substituentmi zo skupiny OC(=O)R8, C(=O)OR8, OR8, NR8R9 a SR8; a
R8 a R9, sú rovnaké alebo sa líšia, a sú vybrané zo skupiny, ktorú tvorí vodík, nižší alkyl, cykloalkyl, aryl, heteroaryl, C(=O)Oalkyl, C(=O)alkyl, C(=O)-Oaryl, alkylSO2, halogénalkylSO?, C(=O)Ci.3alkylénaryl, C(=O)OCi.4alkylénaryl, Ct_4alkylénaryl a Het, alebo R8 a R9 spolu tvoria 4-členný až 7-členný kruh;
R10 je vybrané zo skupiny, ktorú tvorí vodík, alkyl, halogénalkyl, cykloalkyl, aryl, C(=O)alkyl, C(=O)cykloalkyl, C(=O)aryl, C(=O)Oalkyl, C (=O)Ocykloalkyl, C(=O)aryl, CH2OH, CH2Oalkyl, CHO, CN, NO2aSO2RH;a
R11 je vybrané zo skupiny, ktorú tvorí alkyl, cykloalkyl, trifluórmetyl, aryl, aralkyl a NR8R9; a ich soli a solváty (napr. hydráty).
Tento vynález sa taktiež zameriava na farmaceutické kompozície obsahujúce jednu alebo viacero zlúčenín štruktúrneho vzorca (11), na použitie týchto zlúčenín alebo kompozícií obsahujúcich tieto zlúčeniny pri liečbe chorôb alebo porúch a na spôsoby prípravy zlúčenín a medziproduktov, ktoré sa používajú pri syntéze zlúčenín štruktúrneho vzorca (II).
Tento vynález sa taktiež zameriava na spôsoby (a) ošetrenia cicavcov, ktoré sú v takom stave, kedy je inhibícia PDE4 užitočná, (b) modulácie hladiny cAMP u cicavcov, (c) znižovanie hladiny TNFa u cicavcov, (d) potláčania zápalovej aktivácie buniek u cicavcov a (e) inhibíciu aktivity PDE4 u cicavcov podávaním terapeuticky účinného množstva zlúčeniny štruktúrneho vzorca (11) alebo kompozície obsahujúcej zlúčeninu štruktúrneho vzorca (II).
Podrobný opis preferovaných uskutočnení
Tento vynález sa zameriava na zlúčeniny, ktoré majú štruktúrny vzorec (II):
kde R1 je vybrané zo skupiny, ktorú tvorí vodík, nižší alkyl, premostený alkyl (napr. norbornyl), aryl, cykloalkyl (napr. indanyl), 4-, 5- alebo 6-členný nasýtený heterocyklus (napr. 3-tetrahydrofúryl), heteroaryl, C).4alkylénaryl, Ci.4alkylénOaryl, CMalkylénheteroaryl, Ci.4alkyIénHet, C2.4alkylénarylOaryl, C,.4alkylénom premostený alkyl, Ci.4alkyléncykloalkyl (napr. cyklopentylmetyl), substituovaný alebo nesubstituovaný propargyl (napr. -CH2C=C-C6H5), substituovaný alebo nesubstituovaný aiyl (napr. -CH,CH=CH-C6H5) a halogéncykloalkyl (napr. fluórcyklopentyl);
R2 je vybrané zo skupiny, ktorú tvorí vodík, metyl a halogénom substituovaný metyl, napr. CHF2;
R3 je vybrané zo skupiny, ktorú tvorí C(=O)OR7, C(=O)R7, NHC(=O)OR7, C,.3alkylénC(=O)OR8, Cl.3alkylénC(=O)R8, C(=NH)NR8R9, C(=O)NR8R9, C(=O)-C(=O)NR8R9, C(=O)C(=O)OR8, C,.4alkylénOR8, aryl, C,.3alkylénaryl, CMalkylénheteroaryl, SO,heteroaryl, Het a heteroaryl;
R4 je vybrané zo skupiny, ktorú tvorí vodík, nižší alkyl, halogénalkyl, cykloalkyl a aryl;
R5 je vybrané zo skupiny, ktorú tvorí vodík, nižší alkyl, alkinyl, halogénalkyl, hydroxyalkyl, cykloalkyl a aryl;
R6 je vybrané zo skupiny, ktorú tvorí vodík, nižší alkyl a C(=O)R7;
R7 je vybrané zo skupiny, ktorú tvorí nižší alkyl, rozvetvený alebo nerozvetvený, Ci.4alkylénaryl, cykloalkyl, Het, C1.4alkyléncykloalkyl, heteroaryl a aryl, každý voliteľne substituovaný jedným alebo viacerými substituentmi zo skupiny OC(=O)R8, C(=O)OR8, OR8, NR8R9 alebo SR8;
R8 a R9, sú rovnaké alebo sa líšia, a sú vybrané zo skupiny, ktorú tvorí vodík, nižší alkyl, cykloalkyl, aryl, heteroaryl, C(=O)Oalkyl, C(=O)- Oaryl, C(=O)alkyl, alkylSO2, halogénalkylSO2, C(=O)Ci.3alkylénaryl, C(=O)OC1.4alkylénaryl, C,.4alkylénaryl a Het, alebo R8 a R9 spolu tvoria 4-členný až 7-členný kruh;
R10 je vybrané zo skupiny, ktorú tvorí vodík, alkyl, halogénalkyl, cykloalkyl, aryl, C(=O)alkyl, C(=O)cykloalkyl, C(=O)aryi, C(=O)Oalkyl, C(=O)Ocykloalkyl, C(=O)aryl, CH,OH, CH,Oalkyl, CHO, CN, NO, aSO,R“;
R11 je vybrané zo skupiny, ktorú tvorí alkyl, cykloalkyl, trifluórmetyl, aryl, aralkyl a NR8R9; a ich soli a solváty (napr. hydráty).
V inom uskutočnení sa tento vynález zameriava na zlúčeniny pyrolidínu, ktoré majú štruktúrny vzorec (Ha):
(Ha), kde R1 je vybrané zo skupiny, ktorú tvorí vodík, nižší alkyl, premostený alkyl, aryl, cykloalkyl, 4-, 5- alebo 6-členný nasýtený heterocyklus, heteroaryl, C,.4alkylénaryl, CMalkylénOaryl, CMalkylénheteroaryl, Ci.4alkylénHet, C,.4alkylénarylOaryl, Ci.4alkylénom premostený alkyl, Ci_4alkyléncykloalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný propargyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alyl a halogéncykloalkyl;
R2 je vybrané zo skupiny, ktorú tvorí vodík, metyl a halogénom substituovaný metyl;
R3 je vybrané zo skupiny, ktorú tvorí vodík, C^^lkylénaryl a C(=O)C1.3alkylénOCi_3alkylénaryl;
R4 je vybrané zo skupiny, ktorú tvorí vodík, nižší alkyl, halogénalkyl, cykloalkyl a aryl;
R5 je vybrané zo skupiny, ktorú tvorí vodík, nižší alkyl, alkinyl, halogénalkyl, hydroxyalkyl, cykloalkyl a aryl;
R6 je vybrané zo skupiny, ktorú tvorí vodík, nižší alkyl a C(=O)R7;
R7 je vybrané zo skupiny, ktorú tvorí nižší alkyl, rozvetvený alebo nerozvetvený, C|_4alkylénaryl, cykloalkyl, Het, Ci.4alkyléncykloalkyl, heteroaryl a aryl, každý voliteľne substituovaný jedným alebo viacerými substituentmi z OC(=O)R8, C(=O)OR8, OR8, NR8R9 a SR8; a
R8 a R9, sú rovnaké alebo sa líšia, a sú vybrané zo skupiny, ktorú tvorí vodík, nižší alkyl, cykloalkyl, aryl, heteroaryl, C(=O)Oalkyl, C(=O)alkyl, C(=O)-Oaryl, alkylSO2, halogénalkylSO2, C(=O)Ci_3alkylénaryl, C(=O)OCi.4alkylénaryl, C1.4alkylénaryl a Het, alebo R8 a R9 spolu tvoria 4-členný až 7-členný kruh;
R10 je vybrané zo skupiny, ktorú tvorí vodík, alkyl, halogénalkyl, cykloalkyl, aryl, C(=O)alkyl, C(=O)cykloalkyl, C(=O)aryl, C(=O)Oalkyl, C(=O)Ocykloalkyl, C(=O)aryl, CH2OH, CH2Oalkyl, CHO, CN, NO2, SO2RH;a
R11 je vybrané zo skupiny, ktorú tvorí alkyl, cykloalkyl, trifluórmetyl, aryl, aralkyl a NRSR9; a ich soli a solváty (napr. hydráty).
Výraz „alkyl”, samotný alebo v kombinácii, ako je použitý v tomto texte, je definovaný ako nerozvetvený alebo rozvetvený reťazec nasýtených uhľovodíkových skupín obsahujúcich jeden až 16 atómov uhlíka, buď substituovaných, alebo nesubstituovaných. Výraz „nižší alkyl” je tu definovaný ako alkylová skupina majúca jeden až šesť atómov uhlíka (Ct - C6). Príkladmi nižších alkylových skupín sú, okrem iného, metyl, etyl, n-propyl, izopropyl, izobutyl, terciárny butyl, izopentyl, n-butyl, neopentyl, n-hexyl apod. Výraz „alkinyl” sa vzťahuje na nenasýtenú alkylovú skupinu, ktorá obsahuje trojitú väzbu uhlík-uhlík.
Výraz „premostený alkyl” je tu definovaný ako bicyklická alebo polycyklická uhľovodíková skupina C6 - Ci6, napríklad norbornyl, adamantyl, bicyklo[2.2.2]oktyl, bicyklo[2.2.1]heptyl, bicyklo[3.2.1]oktyl, bicyklo[4.1.0]heptyl, bicyklo[3.1.0]hexyl a dekahydronaftyl, substituovaný alebo nesubstituovaný.
Výraz „cykloalkyl” je tu definovaný ako zahŕňajúci monocyklické alebo spojené polycyklické alifatické uhľovodíkové skupiny C3 - C10. Príkladmi cykloalkylových skupín sú, okrem iného, cyklopropyl, cyklobutyl, cyklohexyl, dekahydronaftalén a cyklopentyl. Výraz „cykloalkyl”, ako je použitý v tomto texte, taktiež zahŕňa cyklické alifatické uhľovodíkové skupiny C3 - C7 prikondenzované k arylovému kruhu. Napríklad indanyl a tetrahydronaftalenyl sú podľa tejto definície cykloalkylové skupiny.
Alkyl, premostený alkyl alebo cykloalkylová skupina môžu byť voliteľne substituované jedným alebo viacerým, zvyčajne jedným až troma, substituentmi, napríklad, nižším alkylom, cykloalkylom, halogénalkylom, napr. CF3-, halogénom, hydroxy, alkoxy, aryl, heteroaryl a Het.
Výraz „alkylén” sa vzťahuje na alkylovú skupinu majúcu substituenta. Napríklad výraz „Ci.3 alkyléncykloalkyl” sa vzťahuje na alkylovú skupinu obsahujúcu jeden až tri atómy uhlíka a substituovanú cykloalkylovou skupinou. Príkladom „Ci.3alkylénarylu” je benzén.
Výraz „halogénalkyl” je tu definovaný ako alkylová skupina substituovaná jedným alebo viacerými halogénovými substituentmi, buď fluórom, chlórom, brómom, jódom alebo ich kombináciami. Podobne, „halogéncykloalkyl” a „halogénaryl” sú definované ako cykloalkylová alebo arylová skupina majúce jeden alebo viac halogénových substituentov.
Výraz „aryl”, samotný alebo v kombinácii, je tu definovaný ako monocyklická alebo polycyklická aromatická skupina, prednostne však monocyklická alebo bicyklická aromatická skupina, napr. fenyl alebo naftyl, ktoré môžu byť nesubstituované alebo substituované, napríklad jedným alebo viacerým substituentmi, ale najmä jedným až troma, vybranými zo skupiny, ktorú tvorí halogén, alkyl, fenyl, substituovaný fenyl, hydroxy, hydroxyalkyl, alkoxy, aryloxy, alkoxyalkyl, halogénalkyl, nitro, amino, alkylamino, acylamino, alkyltio, aíkylsulfinyl a alkylsulfonyl. Príkladmi arylových skupín sú fenyl, naftyl, bifenyl, tetrahydronaftyl, indanyl, 2-chlórfenyl, 3-chlórfenyl, 4-chlórfenyl, 4-fluórfenyl, 2-metylfenyl, 4-metoxyfenyl, 4-trifluórmetylfenyl, 4-nitrofenyl a pod.
Výraz „heteroaryl” je tu definovaný ako monocyklický alebo bicyklický kruhový systém obsahujúci jeden alebo dva aromatické kruhy obsahujúce aspoň jeden atóm dusíka, kyslíka alebo síry, ktorý môže byť nesubstituovaný alebo substituovaný, napríklad jedným alebo viacerými substituentmi, ale najmä jedným až troma substituentmi, ako sú napríklad halogén, alkyl, hydroxy, hydroxyalkyl, alkoxy, alkoxyalkyl, halogénalkyl, aryl, halogénaryl, nitro, amino, alkylamino, acylamino, alkyltio, aíkylsulfinyl a alkylsufonyl. Príkladmi heteroarylových skupín sú tienyl, furyl, pyridyl, oxazolyl, l,2,4-oxadiazol-3-yl, chinolyl, izochinolyl, indolyl, triazolyl, izotiazolyl, izoxazolyl, imidazolyl, benzotiazolyl, pyrazinyl, pyrimidinyl, tiazolyl a tiadiazolyl.
Výrazy „heterocyklus” a „Het” sú definované ako 4-, 5- alebo 6-členný nearomatický kruh majúci jeden alebo viacero heteroatómov, zvyčajne však jeden až tri, vybraných zo skupiny, ktorá obsahuje kyslík, dusík alebo síru prítomné v kruhu a voliteľne substituovaný substituentmi zo skupiny, ktorú tvoria alkyl, halogén, aryl, alkoxy, C,.3alkylénHet, Ci.3alkylénamino, C^alkylénalkylamino a halogénaryl. Nevyčerpávajúcimi príkladmi sú tetrahydrofurán, tetrahydropyrán, piperidín, piperazín, sulfolán, morfolín, 1,3-dioxolán, tetrahydropyrán, dioxán, trimetylénoxid a pod.
Výraz „halogén” alebo „halo” tu definovaný zahŕňa fluór, chlór, bróm a jód.
Výraz „alkoxy” a „aryloxy” sú definované ako -OR, kde R je zodpovedajúco alkyl alebo aryl.
Výraz „alkoxyalkyl” je definovaný ako alkoxylová skupina pripojená k alkylovej skupine.
Výraz „propargyl” je definovaný ako R-C=C-CH2-, kde R je vodík, nižší alkyl, halogénalkyl, cykloalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl, alebo substituovaný alebo nesubstituovaný heteroaryl.
Výraz „alyl” je definovaný ako R-CH=CHCH2-, kde R je vodík, nižší alkyl, halogénalkyl, cykloalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl, alebo substituovaný alebo nesubstituovaný heteroaryl.
Výraz „hydroxy” je definovaný ako -OH.
Výraz „hydroxyalkyl” je definovaný ako hydroxylová skupina pripojená k alkylovej skupine.
Výraz „amino” je definovaný ako -NH2.
Výraz „alkylamino” je definovaný ako -NR2, kde aspoň jedno Rje alkyl a druhé R je alkyl alebo vodík.
Výraz „acylamino” je definovaný ako RC(=O)NH, kde Rje alkyl alebo aryl.
Výraz „nitro” je definovaný ako -NO2.
Výraz „alkyltio” je definovaný ako -SR, kde Rje alkyl.
Výraz „alkylsulfinyl” je definovaný ako R-S(O)2, kde Rje alkyl.
Výraz „alkylsulfonyl” je definovaný ako R-S(O3), kde Rje alkyl.
V preferovaných uskutočneniach je R5 metyl, R7 je metyl alebo benzyl, R2 je metyl alebo difluórmetyl, R4 je vybrané zo skupiny, ktorú tvorí vodík, metyl, trifluórmetyl, cyklopropyl, benzyl a fenyl, a R je vybrané zo skupiny, ktorú tvorí vodík, acetyl a benzoyl. R1 je prednostne vybrané zo skupiny, ktorú tvoria
CHj-CäCCH2H-CsCCHa-
CH, '0'
-CH,OH
CH3 ch2c=cch2 CFj
F'
O-(CH2)3-
ACH2)4-
CH3-CH-CH2-CHI I
CHJ CH3
H(CHj) ,C(CH3) 2C(CH2) 2och3
CH3-CH-(CH2)2ch3
CHj(CHJjCCCHJjCHaCHCHj(CH2)2Z\/CH3 ch2-
R3 je prednostne vybrané zo skupiny, ktorú tvoria
O
II
CH3OCo hoch2c-
hocch2 o
HOC (CH2)
hocch2ch2
/Λ
OH O
CH-C ch2-
,OCH2CCHy
CH(CH3)2 /“λ \_y-N.
^CH3 ch3
o
H2NC(CH3)2C-
CH2OK.
CH j
o h2nch2cHOCCH2C(CH3)2c h2nch2ch2c17
OO
O hoch2chcOH ch3ch tíOAc
O
AcOC(CH3)2C18
HOC(CH3)
J00
CH3NHČČ00
CH3 (CH2) 3CHi nh2
CH3(CH2)3CHI
OAc ch3 (ch2) 3CH
OH
W !-
orť
CH2O(CH2)220
O 0 j|
|| CH3(CH:)3chc1 CH3(CH2)3CHC-
OAc 1 OH
o
0 0 II II H2NCHC-
tBuOCNHCHC- |
1 t9u tBU
0 0 II II 0 0 II li
II II tBuOCNHCjHC- CH2OCH2 A II II tBuOCNHCH2C-
U 0 hoch2chc- NHCOtBu II o
CH-,
HOCHtCHCNH3Cľ +
CH3 /CHCHCNH,
AcSCH2CHSCH
O
II
AcOCH2C o o
II II ch2ocnhch2c ch3so2nhch2 w
!L cf3so2nhch (CH3)2nch2caCH2OCNHCHCch3 h2n« ch3 o
U22
CH
CH, ^CHCH2CHCnh2 ch3 (ch2) 3chc-
och2 ch3 (ch2).3chcnh2
HOC(CH 3,2COÄC
I ch3ch2chchc
Ί n ch3 o
AcO. COAC (ch3)2chch2chc o
OH | OH
CH3CH2CHCHC- I
II a (CH3)2CHCH2CHCch3 o II o
kde Ac je CH3C(=O) a tBu je C(CH3)3.
V naj preferovanej ších uskutočneniach je R1 vybrané zo skupiny, ktorú tvorí cyklopentyl, benzyl, tetrahydrofuryl, indanyl, norbornyl, fenetyl, fenylbutyl, metyléncyklopropyl, metyléntetrahydrofuryl, etyléntienyl,
Ci.4alkyléncyklofenyl, metylénindanyl, Ci.4alkylénfenyl, fenylpropargyl, fenylalyl, 3-(4-chlórfenyl)-(l,2,4-oxadiazol-5-yl)metyl, Cj^alkylénfenoxy, C,.4alkylénbifenyl, C!.4alkyléncyklohexyl, pyranyl, metylénom premostený alkyl, tetrahydronaftyl, dekahydronaftyl a C,.6alkyl, kde R1 je voliteľne substituované jedným alebo viacerými substituentmi zo skupiny fenyl, hydroxy, metoxy, metyl, etyl, trifluórmetyl, fluór, fenoxy, t-butyl, metoxy, cyklopropyl a halogénfenyl; R2 je vybrané zo skupiny, ktorú tvorí metyl a difluórmetyl; R3 je vybrané zo skupiny, ktorú tvorí CO2CH3, C(=O)CH2OH, C(=O)CH(CH3)-OH, C(=O)C(CH3)2OH, C(=O)C(=O)NH2, C(=O)C(=O)OH, C(=O)CH2NH2, C(=O)CH(OH)CH2OH, C(=O)CH(OH)CH2CH2CH3,
C(=O)CHCH2OH nh2
C(=O)CHCH2C6Hs nh2
C(=O)CHCsH5
OH
C(=O,CHCH2C6H5
OH
H-OH
C(=O)-C-OH
Zuiiinim\
R4 je vodík; R5 je metyl; R6 je vodík; a R8 a R9 sú nezávislé vybrané zo skupiny, ktorú tvorí vodík a nižší alkyl alebo tvoria 5-členný alebo 6-členný kruh.
Predložený vynález zahŕňa všetky možné stereoizoméry a geometrické izoméry zlúčenín štruktúrneho vzorca (II) a zahŕňa nielen racemické zlúčeniny, ale aj opticky aktívne izoméry. Ak je zlúčenina štruktúrneho vzorca (II) požadovaná ako jednoduchý enantiomér (optický antipód), je možné ho získať buď štiepením konečného produktu, alebo stereošpecifickou syntézou buď z izomericky čistého východiskového materiálu, alebo použitím pomocného chirálneho činidla, pozri napríklad Z. Ma et. al., Tetrahedron: Asymmetry, 8(6), strany 883-888 (1997). Štiepenie konečného produktu, medziproduktu alebo východiskového materiálu je možné dosiahnuť akoukoľvek vhodnou metódou známou v danej oblasti. Okrem toho, v situáciách, kedy sú možné tautoméry zlúčenín štruktúrneho vzorca (II), tento vynález je zamýšľaný tak, že zahrnuje všetky tautomérne formy zlúčenín. Ako je demonštrované, špecifické stereoizoméry majú výnimočnú schopnosť inhibovať PDE4 bez prejavu nepriaznivých vedľajších účinkov na CNS, ktorými sú zvyčajne sprevádzané inhibítory PDE4.
Konkrétne sa všeobecne uznáva, že biologické systémy môžu mať veľmi citlivé aktivity vzhľadom na absolútnu stereochemickú povahu zlúčenín. (Pozri E.J. Ariens, Medicinal Research Reviews, 6: 451-466 (1986); E.J. Ariens, Medicinal Research Reviews, 7: 367-387 (1987); K.W. Fowler, Handbook of Stereoisomers: Therapeutic Drugs, CRC Press, vydavateľ Donald P. Smith, str. 35-63 (1989); a S.C. Stinson, Chemical and Engineering News, 75:38-70 (1997).)
Napríklad rolipram je stereošpecifický inhibítor PDE4, ktorý obsahuje jedno chirálne centrum. (-)-Enantiomér rolipramu má vyššiu farmakologickú účinnosť ako (+)-enantiomér, ktorý by mohol súvisieť s jeho potenciálnym antidepresívnym pôsobením. Schultz et. al., Naunyn-Schiedeberg’s Árch Pharmacol, 333:23-30 (1986). Okrem toho sa zdá byť metabolizmus rolipramu stereošpecifický s (+)-enantiomérom vykazujúcim rýchlejší čas vymiznutia ako (-)-enantiomér. Krause et. al., Xenobiotica, 18:561-571 (1988). Napokon, nedávne pozorovania naznačili, že (-)-enantiomér rolipramu (R-rolipram) je približne desaťnásobne viac emetický ako (+)-enantiomér (S-rolipram). A. Robichaud et. al., Neuropharmacology, 38:289-297 (1999). Tieto pozorovania nie je jednoduché dať do súladu s rozdielmi pri testoch dispozície zvierat na izoméry rolipramu a schopnosti rolipramu inhibovať enzým PDE4. Zlúčeniny tohto vynálezu môžu mať tri alebo viac chirálnych centier. Ako je uvedené, zlúčeniny špecifickej stereochemickej orientácie majú podobné inhibičné pôsobenie na PDE4 a farmaceutické pôsobenie, ale rozdielnu toxicitu na CNS a rozdielny emetický potenciál.
V súlade s uvedeným majú preferované zlúčeniny tohto vynálezu štruktúrny vzorec (III):
Zlúčeniny, ktoré majú štruktúrny vzorec (III), sú účinné a selektívne inhibítory a nemajú nepriaznivé účinky na CNS ani emetický potenciál, ktorý sa prejavuje pri stereoizoméroch zlúčeniny štruktúrneho vzorca (111).
Zlúčeniny štruktúrneho vzorca (II), ktoré obsahujú kyslé zložky, môžu tvoriť farmaceutický prijateľné soli s vhodnými katiónmi. Medzi vhodné farmaceutický prijateľné katióny patria katióny alkalických kovov (napr. sodíka alebo draslíka) a katióny kovov alkalických zemín (napr. vápnika alebo horčíka). Farmaceutický prijateľné soli zlúčenín štruktúrneho vzorca (11), ktoré obsahujú zásadité centrum, sú adičné soli s kyselinami, vytvorené s farmaceutický prijateľnými kyselinami. Príkladmi sú soli chlorovodíka, bromovodíka, síranu alebo hydrogénsíranu, fosforečnanu alebo hydrogénfosforečenanu, acetátu, benzoanu, sukcinátu, fumaranu, maleínanu, laktátu, citranu, tartrátu, glukónanu, metánsulfonátu, benzénsulfonátu a p-toluénsulfonátu. Vzhľadom na uvedené sa akýkoľvek odkaz na zlúčeniny tohto vynálezu uvedený neskôr má chápať tak, že zahŕňa zlúčeniny štruktúrneho vzorca (II), ako aj ich farmaceutický prijateľné soli a solváty.
Zlúčeniny tohto vynálezu sa môžu terapeuticky podávať ako čisté chemikálie, ale uprednostňuje sa podávanie zlúčenín štruktúrneho vzorca (II) ako farmaceutickej kompozície alebo formulácie. V súlade s uvedeným tento vynález ďalej poskytuje farmaceutické formulácie obsahujúce zlúčeninu štruktúrneho vzorca (II) spolu s jedným alebo viacerými farmaceutický prijateľnými nosičmi a voliteľne aj ďalšie terapeutické a/alebo profylaktické prísady. Nosiče sú „prijateľné” vtedy, ak sú kompatibilné s ostatnými prísadami formulácie a sú neškodné pre príjemcu.
Obzvlášť, selektívny inhibítor PDE4 tohto vynálezu je užitočný buď sám, alebo v kombinácii s druhou protizápalovou terapeutickou látkou, napríklad terapeutickou látkou zacielenou na TNFa, ako sú napríklad ENBREL® alebo REM1CADE®, ktoré sa využívajú pri liečbe reumatoidnej artritídy. Podobne sa pri zvieracích modeloch reumatoidnej artritídy ukázala terapeutická prospešnosť antagonizmu IL-1. Preto sa predpokladá, že antagonizmus IL-1 v kombinácii s inhibíciou PDE4, ktorá oslabuje TNFa, by mal dobré účinky.
Predkladané inhibítory PDE4 sú užitočné pri liečbe celého radu alergických, autoimunitných a zápalových ochorení.
Výraz „liečba” zahŕňa prevenciu, oslabenie, zastavenie alebo zvrátenie postupu zhoršovania stavu alebo symptómov, ktoré sa liečia. Sám osebe preto tento výraz „liečba” zahŕňa liečebné terapeutické a/alebo profylaktické podávanie lieku, ako je vhodné.
Konkrétne zápal je lokalizovaná ochranná reakcia vyvolaná poranením alebo poškodením tkanív, ktorá slúži na zničenie, rozpustenie alebo oddelenie (t.j. izolovanie) tak škodlivého činidla ako aj poškodeného tkaniva. Výraz „zápalové ochorenie”, ktorý sa používa v tomto texte, tu znamená akúkoľvek chorobu, pri ktorej nadmerná alebo neregulovaná zápalová reakcia vedie k neprimeraným zápalovým symptómom, poškodeniu tkaniva hostiteľa alebo strate funkcie tkaniva. Ďalej výraz „autoimunitné ochorenie”, ktorý sa používa v tomto texte, tu znamená akúkoľvek skupinu porúch, pri ktorých je poškodenie tkaniva spojené s humorálnymi alebo bunkami sprostredkovanými reakciami proti zložkám vlastného tela. Výraz „alergické ochorenie”, ktorý sa používa v tomto texte, tu znamená akékoľvek symptómy, poškodenie tkaniva alebo stratu funkcie tkaniva spôsobenú alergiou. Výraz „artritída”, ktorý sa používa v tomto texte, tu znamená ktorékoľvek z veľkej triedy ochorení, ktoré sú charakterizované zápalovými léziami kĺbov, ktoré je možné pripísať rôznym príčinám. Výraz „dermatitída”, ktorý sa používa v tomto texte, tu znamená ktorúkoľvek z veľkej rodiny ochorení kože, ktoré sú charakterizované zápalom kože, ktorý je možné pripísať rôznym príčinám. Výraz „odmietnutie transplantátu, ktorý sa používa v tomto texte, tu znamená akúkoľvek imunitnú reakciu namierenú proti transplantovanému tkanivu (vrátane orgánu alebo bunky (napr. kostná dreň)) charakterizovanú stratou funkcie transplantovaného a okolitého tkaniva, bolesťou, opuchom, leukocytózou a trombocytopéniou.
Tento patent taktiež poskytuje spôsob modulovania hladín cAMP u cicavcov, ako aj spôsob liečenia ochorení charakterizovaných zvýšenými hladinami cytokínov.
Výraz „cytokín“, ktorý sa používa v tomto texte, tu znamená akýkoľvek vylučovaný polypeptid, ktorý ovplyvňuje funkcie ostatných buniek a moduluje interakcie medzi bunkami tak, že vedú k imunitnej alebo zápalovej reakcii. Cytokíny okrem iného zahŕňajú monokíny, lymfokíny a chemokíny bez ohľadu na to, aké bunky ich produkujú. Napríklad o monokínoch sa zvyčajne hovorí, že ich produkujú a vylučujú monocyty, ale aj mnoho iných buniek produkuje monokíny, ako sú napríklad prirodzené killery (zabíjače), fibroblasty, bazofilné bunky, neutrofily, endotelové bunky, mozgové astrocyty, bunky kostnej drene, epidermálne keratinocyty a lymfocyty B. Vo všeobecnosti sa hovorí, že lymfokíny produkujú lymfocytické bunky. Príkladmi cytokínov sú okrem iného interleukín-1 (IL-1), interleukín-6 (IL-6), tumorový nekrotizačný faktor alfa (TNFa) a tumorový nekrotizačný faktor beta(TNFP).
Tento vynález ďalej opisuje spôsob znižovania hladiny TNF u cicavcov, ktorý spočíva v podávaní účinného množstva zlúčeniny štruktúrneho vzorca (II) cicavcom. Výraz „znižovanie hladiny TNF”, ktorý sa používa v tomto texte, tu znamená buď:
a) znižovanie nadmernej in vivo hladiny TNF u cicavcov na normálnu hladinu alebo pod normálnu hladinu inhibíciou in vivo uvoľňovania TNF všetkými bunkami, okrem iného vrátane monocytov alebo makrofágov; alebo
b) vyvolanie regulácie smerom nadol, na translačnej alebo transkripčnej úrovni, nadmernej in vivo hladiny TNF u cicavcov na normálnu hladinu alebo pod normálnu hladinu; alebo
c) vyvolanie regulácie smerom nadol inhibíciou priamej syntézy TNF, ako posttranslačnej udalosti.
Zlúčeniny tohto vynálezu sú okrem toho užitočné pri potláčaní zápalovej aktivácie buniek. Výraz „zápalová aktivácia buniek”, ktorý sa používa v tomto texte, tu znamená vyvolanie proliferatívnej bunkovej reakcie stimulmi (okrem iného vrátane cytokínov, antigénov alebo auto-protilátok), ďalej produkcie rozpustných mediátorov (okrem iného vrátane cytokínov, kyslíkových radikálov, enzýmov, prostanoidov alebo vazoaktívnych amínov), alebo že povrch buniek vykazuje nové mediátory alebo zvýšený počet mediátorov (okrem iného vrátane hlavných antigénov histokompatibility alebo molekúl bunkovej adhézie) pri zápalových bunkách (okrem iného vrátane monocytov, makrofágov, lymfocytov T, lymfocytov B, granulocytov, polymorfonukleárnych leukocytov, mastocytov, bazofilných buniek, eozinofilných leukocytov, dendritických buniek a endotelových buniek). Odborníci v danej oblasti uznajú, že aktivácia jedného alebo určitej kombinácie týchto fenotypov v týchto bunkách môže prispieť k iniciácii, pretrvávaniu alebo zhoršeniu zápalového stavu.
Zlúčeniny tohto vynálezu sú taktiež užitočné pri uvoľňovaní dýchacích ciest, rozširovaní priedušiek a pri prevencii zúženia priedušiek.
Zlúčeniny tohto vynálezu sú preto užitočné pri liečbe takých ochorení, ako sú artritídy (ako napríklad reumatoidná artritída), osteroartritída, dnavá artritída, spondylitída, tyreoidálna oftalmopatia, Behcetova choroba, sepsa, septický šok, endotoxický šok, gramnegatívna sepsa, grampozitívna sepsa, syndróm toxického šoku, astma, chronická bronchitída, alergická nádcha, alergická konjunktivítída, vernálna konjunktivitída, eozinofilný granulóm, syndróm (akútnej) respiračnej poruchy (ARDS) dospelých, chronické pulmonálne zápalové ochorenie (ako napríklad chronické obštrukčné pulmonálne ochorenie), silikóza, sarkoidóza pľúc, reperfúzne poškodenie srdcového svalu, mozgu alebo končatín, poškodenie mozgu alebo miechy následkom miernej traumy, fibróza, vrátane cystickej fibrózy, ďalej hrubnutie jaziev, tvorba jaziev, ateroskleróza, autoimunitné ochorenia, ako je napríklad systémový lupus erytematózus (SLE), problémy s odmietaním transplantátu (napr. reakcia štep versus hostiteľ (GvH) a odhojenie aloštepu (aloimplantátu)), chronická glomerulonefritída, zápalové črevné ochorenia, ako napríklad Crohnova choroba a ulcerózna kolitída, proliferatívne lymfocytické ochorenia, ako sú napríklad leukémie (napr. chronická lymfocytická leukémia; CLL) (pozri Mentz et al., Blood 88, str. 2172-2182 (1996)) a zápalové dermatózy, ako sú napríklad atopická dermatitída, psoriáza alebo urtikária.
Zlúčeniny tohto vynálezu sú taktiež užitočné pri liečbe obezity, samotné alebo v kombinácii s nejakým inhibítorom PDE3 a pri liečbe a prevencii nefropatie pri diabetes typu 2 (pozri Mora et al., New England Journal of Medicine, 342, str. 441 (2000)). Odborníci v danej oblasti inhibítory PDE3 poznajú.
Ďalšími príkladmi takýchto chorôb alebo s nimi súvisiacich stavov sú kardiomyopatie, ako sú napríklad kongestívne zlyhanie srdca, pyrexia, kachexia, sekundárna kachexia pri infekcii alebo malignite, sekundárna kachexia pri syndróme získanej imunitnej nedostatočnosti (AIDS), ARC (miernejšia forma choroby AIDS), cerebrálna malária, osteoporóza a choroby resorpcie kostí a horúčka a bolesť svalov spôsobené infekciou. Zlúčeniny tohto vynálezu sú okrem toho užitočné aj pri liečbe erekčnej dysfúnkcie, najmä vaskulogenickej impotencie (Doherty, Jr. et al. U.S. Patent No. 6,127,363), diabetes insipidus a porúch centrálnej nervovej sústavy, ako sú napríklad depresie a demencia po opakovaných infarktoch.
Zlúčeniny tohto vynálezu nájdu využitie aj mimo rámca, ktorý je bežne známy ako terapeutický. Tieto zlúčeniny môžu napríklad íúngovať aj ako konzervačné prípravky transplantátov orgánov (pozri Pinsky et al., J. Clin. Invest., 92, str. 2994-3002 (1993)).
Selektívne inhibítory PDE4 môžu byť taktiež užitočné pri liečbe erekčnej dysfúnkcie, najmä vaskulogenickej impotencie (Doherty, Jr. et al. U.S. Patent No. 6,127,363), diabetes insipidus (Kidney Int., 37, str. 362 (1990); Kidney Int., 35, str. 494 (1989)) a porúch centrálnej nervovej sústavy, ako je napríklad demencia po opakovaných infarktoch (Nicholson, Psychopharmacology, 101, str. 147 (1990)), depresia (Eckman et al., Curr. Ther. Res., 43, str. 291 (1988)), reakcie na úzkosť a stres (Neuropharmacology, 38, str. 1831 (1991)), cerebrálna ischémia (Eur. J. Pharmacol., 272, str. 107 (1995)), oneskorená dyskinéza (J. Clin. Pharmacol., 16, str. 304 (1976)), Parkinsonova choroba (pozri Neurology, 25, str. 722 (1975); Clin. Exp. Pharmacol, Physiol., 26, str. 421 (1999)), a predmenštruačný syndróm. Čo sa týka depresie, selektívne inhibítory PDE4 vykazujú účinnosť u veľkého množstva živočíšnych modelov depresie, ako je napríklad „behaviorálne zúfalstvo” alebo Porsoltove testy (Eur. J. Pharmacol., 47, str. 379 (1978); Eur. J. Pharmacol., 57, str. 431 (1979); Antidepressants: neurochemical, behavioral and clinical prospectives, Enna, Malic a Richelson, eds., Raven Press, str. 121 (1981)) a „test chvostovej suspenzie” (Psychopharmacology, 85, str. 367 (1985)). Nedávne výsledky výskumu ukazujú, že trvalá in vivo liečba rôznymi antidepresívami zvyšuje expresiu PDE4 pochádzajúcu z mozgu (J. Neuroscience, 19, str. 610 (1999)). Preto je možné použiť selektívny inhibítor PDE4 samostatne alebo spolu s druhou terapeutickou látkou pri liečbe pre štyri hlavné triedy antidepresív: elektrokonvulzívne postupy, inhibítory monoamínovej oxidázy a selektívne inhibítory serotonínu alebo norepinefrínu. Selektívne inhibítory PDE4 môžu byť taktiež užitočné pri aplikáciách, ktoré modulujú bronchodilatačnú aktivitu prostredníctvom priameho pôsobenia na bunky hladkého svalstva priedušiek pri liečbe astmy.
Selektívne inhibítory PDE4, uvedené v tomto vynáleze, sa môžu taktiež použiť na liečbu infertility tak u žien ako aj u mužov. Tieto inhibítory PDE4 zvyšujú hladinu cAMP v zrnitých bunkách a tým podporujú gonadotropné vyvolanie ovulácie a dozretie materskej vaječnej bunky (Tsafriri et al., Dev. Biol., 178, str. 393-402 (1996)). Okrem toho môžu byť tieto inhibítory PDE4 použité pri liečbe neplodných párov s abnormálnymi parametrami semena zvyšovaním mobility spermií bez ovplyvnenia reakcie akrozómu (pozri Fosch etal., Hum. Reprod., 13, str. 1248-1254 (1998)).
Zlúčeniny a farmaceutické kompozície vhodné na použitie v tomto vynáleze zahŕňajú tie, ktorých účinná zložka sa podáva cicavcom v účinnom množstve na dosiahnutie plánovaného účelu. Konkrétnejšie, „terapeuticky účinné množstvo” znamená množstvo postačujúce na zabránenie rozvoja alebo na zmiernenie existujúcich symptómov liečeného subjektu. Určenie účinného množstva tiež nie je problémom pre osoby kvalifikované v danej oblasti, najmä vzhľadom na podrobné informácie uvedené v tejto patentovej prihláške.
Výraz „cicavec”, ktorý sa používa v tomto texte, tu zahŕňa ľudí, mužov aj ženy, domáce zvieratá oboch pohlaví (napr. mačky, psy), hospodárske zvieratá oboch pohlaví (napr. hovädzí dobytok, kone, ošípané) a voľne žijúce živočíchy oboch pohlaví (napr. primáty, mačkovité šelmy, exempláre zo ZOO).
Výraz „terapeuticky účinná dávka” sa týka takého množstva zlúčeniny, ktoré ma za následok dosiahnutie želaného účinku. Toxicitu a terapeutickú pôsobnosť týchto zlúčenín je možné určiť štandardnými farmaceutickými postupmi v bunkových kultúrach alebo na pokusných zvieratách, napr. určenie LD50 (dávka smrteľná pre 50% populácie) a ED50 (dávka terapeuticky účinná pri 50 % populácie). Pomer medzi toxickou dávkou a terapeuticky účinnou dávkou je terapeutický index, ktorý je vyjadrený ako pomer medzi LD50 a ED50. Uprednostňujú sa zlúčeniny, ktoré majú vysoké terapeutické indexy. Údaje získané z takýchto údajov sa môžu použiť pri formulovaní rozsahu dávkovania pre použitie u ľudí. Dávkovanie takýchto zlúčenín prednostne spočíva v rozsahu cirkulujúcich koncentrácií, ktoré zahŕňajú ED50, s nízkou alebo žiadnou toxicitou. Dávkovanie sa v rámci tohto rozsahu môže meniť v závislosti od dávkovania a použitého spôsobu podávania.
O presnom zložení zmesi, spôsobe podávania a dávkovaní môže rozhodnúť lekár vzhľadom na stav pacienta. Veľkosť dávky a interval sa môžu individuálne upraviť tak, aby zabezpečili hladinu účinnej zložky v plazme tak, aby bola dostatočná na udržanie terapeutického účinku.
Odkaz na liečbu sa v tomto dokumente rozširuje aj na profylaxiu, ako aj na liečbu známych chorôb alebo symptómov, čo uznajú najmä odborníci v danej oblasti. Taktiež uznajú, že množstvo zlúčeniny uvedenej v tomto vynáleze potrebné na použitie pri liečbe sa mení podľa povahy zdravotného stavu, ktorý je predmetom liečby, a podľa veku a stavu pacienta, a s konečnou platnosťou ho určuje ošetrujúci lekár alebo veterinár. Vo všeobecnosti však dávky používané na liečbu dospelých sa zvyčajne pohybujú v rozsahu od 0,001 mg/kg do približne 100 mg/kg a deň. Potrebná dávka sa môže zvyčajne podať jednorazovo alebo ako opakované dávky podávané v príslušných intervaloch, napríklad ako dve, tri, štyri alebo viac dávok denne. V praxi lekár určí skutočný režim dávkovania, ktorý je najvhodnejší pre konkrétneho pacienta a dávkovanie sa mení podľa veku, hmotnosti a reakcie konkrétneho pacienta. Uvedené dávkovanie je uvedené len ako príklad priemerného prípadu, ale môžu existovať individuálne prípady, kedy sú potrebné vyššie alebo nižšie dávky a tieto sú predmetom tohto vynálezu.
Prípravky tohto vynálezu sa môžu podávať štandardným spôsobom na liečbu indikovaných chorôb, ako napríklad perorálne, parenterálne, transmukozálne (napr. pod jazyk alebo rozpustením v ústach), lokálne, transdermálne, rektálne, inhaláciou (napr. nosom alebo pľúcami). Parenterálne podávanie okrem iného zahŕňa aj intravenózne, intraarteriálne, intraperitoneálne, subkutánne, intramuskuláme, intratekálne a intraartikulárne podávanie. Parenterálne podávanie môže byť taktiež doprevádzané použitím vysokotlakovej techniky, ako je napríklad POWDERJECT™.
Pri bukálnom (ústnom) podávaní môže byť kompozícia v podobe tabliet alebo pastiliek pripravených bežným spôsobom. Tablety a kapsuly pre perorálne podávanie môžu napríklad obsahovať bežné pomocné látky, ako sú napríklad spojivá (napríklad sirup, akácia, želatína, sorbitol, tragant, mucilág zo škrobu alebo polyvinylpyrolidón), plnivá (napríklad laktóza, cukor, mikrokryštalická celulóza, kukuričný škrob, fosforečnan vápenatý alebo sorbitol), lubrikanty (napríklad horčík, stearan, kyselina steárová, mastenec, polyetyiéngiykol alebo silika), dezintegranty (napríklad zemiakový škrob alebo škrobový glykolát sodný) alebo zvlhčujúce prostriedky (napríklad laurylsulfát sodný).Tablety môžu byť poťahované použitím metód dobre známych v tomto odvetví.
Zlúčeniny tohto vynálezu môžu byť eventuálne použité v tekutých perorálnych prípravkoch, ako sú napríklad vodné alebo olejové suspenzie, roztoky, emulzie, sirupy alebo elixíry. Okrem toho môžu formulácie obsahujúce tieto zlúčeniny existovať ako suché výrobky, ktoré sa pred použitím rozpustia vo vode alebo v inej vhodnej pomocnej látke. Takéto tekuté prípravky môžu obsahovať bežné aditíva, ako sú napríklad suspendujúce prostriedky, ako je sorbitolový sirup, metylcelulóza, glukózový sirup, želatína, hydroxyetylcelulóza, hydroxypropylmetylcelulóza, karboxymetylcelulóza, gél stearanu hlinitého a stužené pokrmové tuky; emulgátory, ako je lecitín, monooleát sorbitolu alebo akácia; bezvodé pomocné látky (ktoré môžu zahŕňať jedlé oleje), ako je napríklad mandľový olej, frakčný kokosový olej, olejové estery, propylénglokol a etylalkohol; a konzervačné látky, ako sú napríklad metyl alebo propyl p-hydroxybenzoan a kyselina sorbová.
Takéto prípravky môžu byť pripravené ako čapíky, obsahujúce napr. bežný supozitórny základ, ako je kakaové maslo alebo ostatné glyceridy. Kompozície na inhalovanie môžu byť bežne pripravené v podobe roztoku, suspenzie alebo emulzie, ktoré sa môžu podávať ako prášok alebo vo forme aerosólu používajúceho bežný propelant, ako je dichlórdifluórmetán alebo trichlórfluórmetán. Typické lokálne a transdermálne zmesi zahŕňajú bežné vodné alebo bezvodé formy, ako sú očné kvapky, krémy, masti, roztoky a pasty, alebo sú v podobe liečivých obväzov, náplastí alebo membrán.
Kompozície tohto vynálezu môžu byť okrem toho pripravené na parenterálne podávanie v podobe injekcií alebo nepretržitých infúzií. Formulácie pre podávanie v podobe injekcií môžu byť vo forme suspenzií, roztokov alebo emulzií v olejovom alebo vodnom prostredí a môžu obsahovať prídavné látky, ako sú napríklad suspendujúce, stabilizujúce a/alebo disperzné látky. Účinná zložka môže byť eventuálne vo forme prášku pred použitím zriedená vhodnou pomocnou látkou (napr. sterilná voda neobsahujúca látky vyvolávajúce horúčku).
Kompozícia podľa tohto vynálezu sa môže taktiež pripraviť ako depotný prípravok. Takéto dlhodobo pôsobiace prípravky sa môžu podávať implantovaním (napríklad podkožné alebo vnútrosvalovo) alebo intramuskulárnou injekciou. V súlade s uvedeným sa zlúčeniny tohto vynálezu môžu formulovať pomocou vhodných polymémych alebo hydrofóbnych materiálov (napr. emulzia v prijateľnom oleji), ionomeničových živíc alebo ako málo rozpustné deriváty (napr. málo rozpustná soľ).
Na veterinárne použitie sa zlúčenina štruktúrneho vzorca (11) alebo jej netoxické soli podáva ako primerane prijateľný prípravok v súlade s bežnou veterinárnou praxou. Veterinárny lekár môže ľahko určiť režim dávkovania a spôsob podávania, ktorý je najvhodnejší pre konkrétne zviera.
Takto tento vynález poskytuje v ďalšom aspekte farmaceutickú kompozíciu, ktorú tvorí zlúčenina vzorca (II) spolu s farmaceutický prijateľným riedidlom alebo nosičom. Tento vynález ďalej opisuje spôsob prípravy farmaceutickej kompozície obsahujúcej zlúčeninu vzorca (11), pričom tento proces zahrnuje zmiešavanie zlúčeniny vzorca (II) s farmaceutický prijateľným riedidlom alebo nosičom.
Príklady uskutočnenia vynálezu
Uvedené sú konkrétne, ale nie všetky možné príklady zlúčenín štruktúrneho vzorca (II), ktorých syntéza bola vykonaná podľa uvedených postupov.
Vo všeobecnosti môžu byť zlúčeniny štruktúrneho vzorca pripravené podľa nasledujúcich syntetických schém. V každej uvedenej schéme sa predpokladá, že v prípade potreby sa môžu použiť ochranné skupiny v súlade so všeobecnými princípmi syntetickej chémie. Tieto ochranné skupiny sa odstránia v posledných krokoch syntézy za zásaditých, kyslých alebo hydrogenolytických podmienok, ktoré sú zrejmé osobám kvalifikovaným v danej oblasti. Využitím vhodnej manipulácie a ochrany všetkých chemických funkčností je možné vykonať syntézu zlúčenín štruktúrneho vzorca (II), ktorá tu nie je výslovne uvedená, použitím metód analogických uvedeným schémam.
Pokiaľ nie je uvedené inak, všetok východiskový materiál bol získaný od komerčných dodávateľov a použitý bez ďalšieho čistenia. Všetky reakcie a chromatografické frakcie boli analyzované pomocou chromotagrafie v tenkej vrstve na 250 mm silikagélových platniach, vizualizované F (jódovými) škvrnami pod
U V (ultrafialovým) žiarením. Produkty a medziprodukty boli čistené prietokovou chromatografiou alebo
HPLC s reverznou fázou.
Zlúčeniny so všeobecným štruktúrnym vzorcom (II) je možné pripraviť napríklad najprv reakciou disubstituovaného benzaldehydu (1) s 2-butanónom, potom podľa znázornenej reakčnej schémy. Odborníci v danej oblasti poznajú a majú k dispozícii aj ďalšie spôsoby syntézy. Rôzne individuálne reakcie a syntetické metódy spomenuté pri uvedených medziproduktoch a príkladoch pozri napríklad Feldman et. al.: U.S. Patent 5,665,754, ktorý je tu zahrnutý odkazom.
CICOCH3
CH3CN
O—CH3
Výsledkom uvedenej reakčnej schémy je zlúčenina (5) štruktúrneho vzorca (II), kde R1 a R2 sú určené 5 východiskovým benzaldehydom, R3 je C(=O)OCH3, R4 je vodík, R5 je metyl, R6 je vodík, R7 je metyl a R10 je vodík. Výsledkom vhodného výberu východiskového materiálu alebo uskutočnenia konverzných reakcií na zlúčenine (5) budú zlúčeniny všeobecného štruktúrneho vzorca (11) majúce ďalšie uvedené R1 prostredníctvom substituentov R7 a R10.
Nasledujúce schémy ilustrujú syntézu rôznych medziproduktov a zlúčenín štruktúrneho vzorca (II). Na10 sledujúce príklady sú uvedené len na ilustráciu a nemali by byť považované za vyčerpávajúce.
V štruktúrach, ktoré sú tu uvedené, pri väzbe, v ktorej chýba substituent, je substituentom metyl, napríklad:
Ak pri atóme uhlíka alebo atóme dusíka nie je pripojený žiadny substituent, predpokladá sa, že atóm uhlíka obsahuje príslušné množstvo atómov vodíka.
Používajú sa tu taktiež skratky, ktoré sú dobre známe všetkým osobám kvalifikovaným v danej oblasti, 5 napr. „Me” pre metyl, „OMs” pre mezylát, „Ph” pre fenyl, „CH2C12” pre metylénchlorid, „NaOH” pre hydroxid sodný, „EtOAc” pre etylacetát, „NH4OH” pre hydroxid amónny, „MeOH” pre metanol, „LiOH” pre hydroxid lítny, „CsCO3” pre uhličitan cézny, „H2” pre plynný vodík, „TFA” pre kyselinu trifluóroctovú, „OAc” pre acetát, „Ac” pre acetyl, „t-Bu” pre terciárny butyl, „sat.” pre nasýtený, „h” pre hodinu, „g” pre gram, „mmol” pre milimól, „ekv.” pre ekvivalent, „M” pre mól, „N” pre normálny.
Všeobecná syntéza pre cyklopentylovú sériu:
MuO •S,H {EM>hP|0)CH(Oh|COje uNirusb.niŕ <*‘C k úplate refluxu iba E-izomér
Oioxén.SO'C
2)|COQkCHiCb lacoreŕ,---OXIaftT o
sk k RT (teplote refluxu)
MeMgé. £1,0 o-C m-
1)0Suq.lAH
THF,-»*C
a)|coeh.0iMo 'Ph
TFA. CHCI, e-c kRT
n-nn pre J krokov pretínané s B0A»Hm triturtcia
Medziprodukt 2 t r* ςρ n?
M-W% pre dva kroky izolované chromatografiou Medziprodukt 38
UanauakFdWHh «0Η, RT ♦ -HM (HFU3 ss* pre hlavný diasfereomér izolovaoé chromatografiou Medziprodukt 3
Maa drtt
35-40% pre polimejSi karbinol
XXrafiou Medziprodukt 39
IV
Všeobecná syntéza pre indanylovú sériu:
Int. 40-42
Medziprodukt 44
Všeobecná syntéza zmenou substituentov R1:
Χ·0θ X*0H x«a
ΣΞ3
Medziprodukt 49
Medziprodukt 50
Medziprodukty 46-48
Zlúčeniny VII a VIII
Medziprodukt 51
Medziprodukt 1
3-Cyklopropylmetoxy-4-metoxybenzaldehyd
Roztok 3-hydroxy-4-metoxybenzaldehydu (400 g; 2,63 mólu) a brómmetylcyklopropánu (426 g; 3,2 mólu) v 1 litri dimetylformamidu (DMF) sa miešal s uhličitanom draselným (K2CO3) (483 g; 3,5 mólu) pri teplote 55 °C počas 3,5-hod. Potom sa pridal 1 liter vody, zmes sa zmrazila a medziprodukt I sa odfiltroval ako biela tuhá látka, (535 g; 99 %), m/z 207 (MH+).
Medziprodukt 2
3-(Indan-2-yloxy)-4-metoxybenzaldehyd
Metóda Mitsunobu-ho
K roztoku 3-hydroxy-4-metoxybenzaldehydu (15,2 g; 100 mmol; 1 ekv.), 2-indanolu (12,1 g; 90 mmol; 0,9 ekv.) a trifenylfosfínu (26,2 g; 100 mmol; 1 ekv.) v suchom THF (300 ml) sa po kvapkách pridal diizopropylazodikarboxylát (DIAC) (19,6 ml; 100 mmol; 1 ekv.). Reakčná zmes sa miešala počas 16 h pri spätnom toku a potom sa ochladila a zriedila s dietyléterom (500 ml). Roztok sa premyl vodou (2 x 150 ml), 1 M NaOH (4x125 ml) a nasýtený chloridom sodným (NaCl) (2 x 100 ml), vysušený síranom sodným (Na2SO4) a skoncentrovaný na sirup, ktorý státím stuhol. Tuhá látka bola suspendovaná v Et2O (350 ml) a po celú noc sa miešala za vzniku malých častíc. Tuhá látka sa vákuovou filtráciou zachytila a rekryštalizovala z etanolu/vody (21,4 g). Éterový filtrát sa skoncentroval a vyčistil flash (bleskovou) chromatografiou (silikagél, stĺpec 7,5x36 cm Biotage KP-Sil, eluovaný 25% EtOAc v heptáne) s dodatočným výťažkom 5 g medziproduktu 2.
‘H NMR (300 MHz, CDC13) δ: 9,36 (s, IH); 7,49-7,44 (m, 2H); 7,25-7,16 (m, 4H); 6,97 (d, J=8,7 Hz, IH); 5,29-5,22 (m, IH); 3,89 (s, IH); 3,45 (dd, J=16,7; 6,6 Hz, 2H); 3,24 (dd, J= 16,7, 3,6 Hz, 2H);
13CNMR(75 MHz, CDC13) δ: 190,9; 155,5; 147,9; 140,4; 130,0; 126,9; 126,8; 124,7; 112,1; 111,0; 78,9; 56,1; 39,7.
Medziprodukt 3
3-(terc-Butoxy)-4-metoxybenzaldehyd
Do miešaného roztoku izovanilínu (30,4 gm; 200 mmol) v CH2C12 (200 ml) pri laboratórnej teplote v dusíkovom prostredí sa pridal (2-aza-l-(terc-butoxy)-3-metylbut-l-enyl)(metyletyl)amín (surový 40 ml; približne 200 mmol) ako alkylačné činidlo. Každé 2 hodiny sa pridával ďalší mólový ekvivalent alkylačného činidla, až kým nebolo pridaných celkom 5 mólových ekvivalentov. Reakčná zmes sa miešala počas ďalších 16 hodín. TLC (chromatografia na tenkých vrstvách) v 3/7 EtOAc/hexáne indikovala, že reakcia bola približne na 80 % ukončená. Zmes sa zriedila v CH2C12 (500 ml) a premyla sa 3M NaOH (4x300 ml) na účely odstránenia izovanilínu. Organické látky sa vysušili pomocou síranu horečnatého (MgSO4), prefiltrovali sa a skoncentrovali vo vákuu na surový hnedý olej, ktorý bol podrobený flash chromatografii v 3/1 hexán/EtOAc a vákuovo vysušený, čím vznikol čistý medziprodukt 3 (22,6 gm; 54 %).
‘HNMR(CDCl3 400 MHz) δ: 9,84 (s, IH); 7,60 (d, IH); 7,55 (s, IH); 7,00 (d, IH); 3,86 (s, 3H); 1,39 (s, 9H).
Medziprodukt 4
Etylester kyseliny (2E)-3-(3-terc-butoxy-4-metoxyfenyl)-2-metylakrylovej
Horner-Emmonsova metóda
Do miešaného roztoku trietyl 2-fosfonopropionátu (25,6 ml; 119,4 mmol) v THF (120 ml) pri 0 °C v dusíkovom prostredí bol po kvapkách injekčnou striekačkou pridaný lítiumhexametyldisilylamid (1M v THF, 114 ml; 114 mmol). Po 30 minútach bol kanyláciou pridaný roztok medziproduktu 3 (22,6 gm; 108 mmol) v THF (40 ml). Po 2 hodinách pri 0°C TLC v 4/1 hexán/EtOAc potvrdil ukončenú reakciu. Reakčná zmes sa čiastočne skoncentrovala na rotačnej odparke a rozdelila sa medzi EtOAc (500 ml) a vodu (500 ml). Organické látky sa premyli pomocou nasýteného NaCl (500 ml), vysušili (MgSO4), prefiltrovali a skoncentrovali vo vákuu. Surový produkt bol podrobený flash chromatografii v 9/1 hexán/EtOAc a po koncentrácii vo vákuu sa získal sa medziprodukt 4 (34,1 gm; 98 %).
‘H NMR (CDCl,, 400 MHz) δ: 7,60 (s, 1H); 7,16 (d, 1H); 7,12 (s, 1H); 6,91 (d, 1H); 3,83 (s, 3H); 2,13 (s, 3H); 1,37 (s, 9H).
Medziprodukt 5
Kyselina (2E)-3-(3-terc-butoxy-A-metoxyfenyl)-2-metylakrylová
Metóda hydrolýzy s hydroxidom lítnym
Do miešaného roztoku medziproduktu 4 (34,1 gm; 116 mmol) v dioxáne (116 ml) pri laboratórnej teplote v dusíkovom prostredí sa pridal roztok LiOH monohydrátu (5,87 gm; 140 mmol) vo vode (116 ml). Reakčná zmes sa na dve hodiny zohriala na teplotu 80 °C a potom sa nechala vychladnúť na laboratórnu teplotu. Reakčná zmes sa potom rozdelila medzi EtOAc (400 ml) a IM kyselinu fosforečnú (H3PO4) (400 ml). Organické látky boli izolované, premyté v H2O (400 ml) a nasýtenom NaCl (400 ml), prefiltrované a skoncentrované vo vákuu za vzniku medziproduktu 5 ako bielej tuhej látky (28,2 gm; 92 %).
*H NMR (CDC13 400 MHz) δ: 7,66(s, 1H); 7,20 (d, 1H); 7,18 (s, 1H); 6,92 (d, 1H); 3,83 (s, 3H); 2,16 (s, 3H); 1,38 (s, 9H).
Medziprodukt 6 (E)^4-(3-BenzyIoxy-4-metoxyfenyl)-3-metylbut-3-en-2-ón
Metóda aldolovej kondenzácie katalyzovanej kyselinou
Roztok bežne dostupného 3-benzyloxy-4-metoxybenzaldehydu (34 g; 0,14 mólu, 1 ekv.) a2-butanónu (50 ml; 0,56 mólu, 4 ekv.) v suchom THF (50 ml) sa ochladil na teplotu —4 °C. Cez dobre miešanú zmes sa počas niekoľkých minút prepúšťal chlorovodík v plynnom stave a reakčná zmes sa zakryla a uskladnila na dobu 16 hodín pri teplote -4 °C. Zmes sa naliala do dobre miešaného roztoku (približne 2 litre) ľadového nasýteného hydrouhličitanu sodného (NaHCO3). V prípade potreby sa pH upravilo pomocou nasýteného NaHCO3 na hodnotu >7 a zmes sa extrahovala pomocou EtOAc (3 x 300 ml). Vrstva EtOAc sa premyla pomocou NaHCO3 (2 x 200 ml), vody (2 x 200 ml) a nasýteného NaCl (2 x 200 ml), vysušila pomocou Na2SO4 a skoncentrovala na sirup. Neupravená zmes sa vyčistila flash chromatografiou (silikagél, stĺpec 7,5x36 cm Biotage KP-Sil, eluovaný 25 % EtOAc v heptáne) za vzniku medziproduktu 6 (29,1 g; 70 %).
'H NMR (300 MHz, CDCl,,) δ: 7,46-7,27 (m, 6H); 7,06-6,91 (m, 3H); 3,93 (s, 3H); 2,41 (s, 3H); 1,92 (d, J=l,l Hz, 3H).
Medziprodukt 7 (E)-4-(Indan-2-yloxy-4-metoxyfenyl)-3-metylbut-3-en-2-ón
Pripravený z medziproduktu 2 pomocou metódy aldolovej kondenzácie katalyzovanej kyselinou uvedenej pri medziprodukte 6.
LRMS (Elektrosprej, pozitívny): Da/e 323,4 (m+1).
Medziprodukt 8 (E)^l—(3-Bróm-4-metoxyfenyl)-3-metylbut-3-en-2-ón
Pripravený z 3-bróm-4-metoxybenzaldehydu pomocou metódy aldolovej kondenzácie katalyzovanej kyselinou uvedenej pri medziprodukte 6.
'H NMR (300 MHz, CDClj,) δ: 7,66 (d, J=2,0 Hz, 1H); 7,36-7,41 (m, 2H); 6,94 (d, J=8,6 Hz, 1H); 3,94 (s, 3H); 2,45 (s, 3H); 2,06 (d, J% 1,1 Hz, 3H).
Medziprodukt 9 (E)-4-(3-Cyklopentyloxy-4-metoxyfenyl)-3-metylbut-3-en-2 ón
Pripravený z medziproduktu 1 pomocou metódy aldolovej kondenzácie katalyzovanej kyselinou uvedenej pri medziprodukte 6.
'H NMR (300 MHz, CDC13>) δ: 7,45 (br s, 1H); 7,05-6,99 (m, 2H); 6,90 (d, J=8,26 Hz, 1H); 7,05-6,99 (m, 2H); 6,90 (d, J=8,26 Hz, 1H); 4,81-4,75, m, 1H); 3,99 (s, 3H); 2,46 (s, 3H); 2,09 (d, J=l, 1 Hz, 3H); 1,98-1,79 (m, 6H); 1,66-1,60 (m, 2H).
Medziprodukt 10
Etyl (2E)-3-(3-cyklopentyloxy-4-metoxyfenyl)-2-metylprop-2-enoát
Pripravený z bežne dostupného 3-cyklopentyloxy-4-metoxybenzaldehydu pomocou Horner-Emmonsovej metódy uvedenej pri medziprodukte 4, čím sa získa hnedá kvapalina (68,4 g; 100 %).
'H NMR (400 MHz, CDC13;) δ: 7,64 (s, 1H); 7,01-6,96 (c, 2H); 6,87 (m, 1H); 4,77 (m, 1H); 4,26 (q, 2H);
3,87 (s, 3H); 2,14 (s, 3H); 1,81-1,96 (c, 6H); 1,59-1,63 (c, 2H); 1,34 (t, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitívny): Da/e 305,3 (m+l).
Medziprodukt 11
Kyselina (2E)-3-(3-cyklopentyloxy-4-metoxyfenyl)-2-metylprop-2-enová
Medziprodukt 10 (68,4 g; 225 mmol) bol hydrolyzovaný pomocou metódy hydrolýzy prostredníctvom
LiOH, ktorá je uvedená pri medziprodukte 5, za vzniku medziproduktu 11 ako oranžovej tuhej látky (55 g; 88 %).
'H NMR (400 MHz, CDCfi ) δ: 7,76 (s, 1H); 7,06-7,00 (c, 2H); 6,89 (m, 1H); 4,78 (m, 1H); 3,88 (s, 3H); 2,17 (s, 3H); 1,97-1,83 (c, 6H); 1,64-1,61 (c, 2H).
LRMS (Elektrosprej, negatívny): Da/e 275,3 (M-l).
Medziprodukt 12 (2E)-3-(3-Cyklopentyloxy-4-metoxyfenyl)-2-metylprop-2-enoylchlorid
Metóda s chloridom kyseliny
Do vychladenej (0 °C) miešanej suspenzie medziproduktu 11 (55 g; 199 mmol) v bezvodom CH2Cfi (400 ml) sa injekčnou striekačkou počas 10 minút pridával roztok oxalyl chloridu v CH2Cfi (109 ml 2,0 M; 218 mmol; 1,1 ekv.) v atmosfére vysušenej chloridom vápenatým. Proces bol sprevádzaný prudkým bublaním. Výsledný tmavý roztok sa miešal počas 15 minút pri teplote 0 °C, potom sa striekačkou pridalo katalytické množstvo DMF (0,3 ml). Vzniknutý roztok sa miešal počas pol hodiny pri 0 °C, kým bublanie prestalo, potom sa nechal zahriať na laboratórnu teplotu a miešal sa počas celej noci (17 hodín). Reakčná zmes sa zriedila s EtOAc (500 ml) a opatrne schladila vodou (250 ml). Po prudkom hodinovom miešaní sa oddelili vrstvy a organická vrstva bola premytá vodou (400 ml) a soľným roztokom (400 ml), potom vysušená (MgSCfi), prefiltrovaná a skoncentrovaná vo vákuu za vzniku medziproduktu 12 vo forme hnedej tuhej látky (57,5 g; 98 %).
'H NMR (400 MHz, CDCfi,) δ: 7,98 (s, 1H); 7,11-7,02 (c, 2H); 6,92 (m, 1H); 4,79 (m, 1H); 3,90 (s, 3H); 2,22 (s, 3H); 2,01-1,82 (c, 6H); 1,68-1,62 (c, 2H).
0^
Medziprodukt 13
Etyl (2E)-3-(3-indan-2-yloxy-4-metoxyfenyl)-2-metylprop-2-enoát
Pripravený z medziproduktu 2 pomocou Horner-Emmonsovej metódy uvedenej pri medziprodukte 4.
‘H NMR (400 MHz, CDCfi,) δ: 7,64 (d, 1H); 7,28-7,17 (m, 4H); 7,06 (dd, 1H); 7,03(d, 1H); 6,90 (d, 1H);
5,20 (c, 1H); 4,28 (q, 2H); 3,85 (s, 3H); 3,39 (dd, 2H); 3,26 (dd, 2H); 2,16 (d, 3H); 1,36 (t, 3H).
Medziprodukt 14
Kyselina (2E)-3-(3-indan-2-yloxy-4-metoxyfenyl)-2-metylprop-2-enová
Pripravená z medziproduktu 13 pomocou metódy hydrolýzy prostredníctvom LiOH, ktorá je uvedená pri medziprodukte 5.
'H NMR (D5 DMSO, 400 MHz) δ: 7,56 (s, 1H); 7,25-7,11 (m, 5H); 7,06 (d, 1H); 6,99 (d, 1H); 5,22 (c, 1H); 3,71 (s, 3H); 3,34 (dd, 2H); 3,03 (d, 2H); 2,06 (s, 3H)
Medziprodukt 15 (2E)-3-(3-Indan-2-yloxy-4-metoxyfenyl)-2-metylprop-2-enoylchlorid
Pripravený z medziproduktu 14 pomocou metódy s chloridom kyseliny uvedenej pri medziprodukte 12.
'H NMR (400 MHz, CDC13,) δ: 3,01 (s, 1H); 7,29-6,93 (m, 7H); 5,23 (c, 1H); 3,89 (s, 3H); 3,42 (dd, 2H);
3,28 (dd, 2H); 2,26 (s, 3H).
Medziprodukt 16
3-[(2E)-3-(3-CyklopentyIoxy-4-metoxyfenyl)-2-metylprop-2-enoxyl](4R)-4-fenyl-l,3-oxazolidin-2-ón Metóda acylácie oxazolidinónu
Do studeného (-78 °C), mechanicky miešaného roztoku R-fenyloxazolidinónu (10,0 g; 61,3 mmol) v suchom tetrahydrofuráne (400 ml) sa v dusíkovom prostredí injekčnou striekačkou pridal roztok n-butyllítia v hexáne (27 ml 2,5 M; 1,1 ekv.). Výsledný roztok sa miešal pri teplote -78 °C počas 0,8-hodiny a potom sa pomocou kanyly pridal roztok medziproduktu 12 (19,9 g; 67,4 mmol; 1,1 ekv.) v THF (100 ml). Po 15 minútovom miešaní pri -78 °C sa reakčná zmes nechala počas 40 minút pomaly ohriať na 0 °C, počas čoho reakčná zmes nadobudla formu hustej suspenzie. Po ďalšom 2,5-hodinovom miešaní pri 0 °C sa reagent ochladil nasýteným chloridom amónnym (NH4C1) (300 ml) a za zníženého tlaku bola odstránená prevažná časť THF. Zvyšok sa extrahoval chloroformom (CHC13) (3x700 ml) a kombinované organické vrstvy sa premyli vodou (300 ml) a soľným roztokom (300 ml), potom sa vysušili (MgSO4), prefiltrovali a skoncentrovali vo vákuu za vzniku približne 33 g svetlooranžovej tuhej látky. Materiál bol suspendovaný v 10 % EtOAc v hexáne (1,2 litra) a počas noci bol prudko miešaný. Výsledný jemný prášok sa zozbieral pomocou Buchnerovho nasávacieho lievika a vysušil sa vo vákuu za vzniku medziproduktu 16 vo forme hnedého prášku (21,8 g; 88 %) 'H NMR (400 MHz, CDC13) δ: 7,41-7,37 (c, 5H); 7,06 (s, 1H); 7,01-6,97 (c, 2H); 6,86 (m, 1H); 5,54 (t, 1H); 4,77-4,73 (c, 2H); 4,29 (t, í H); 3,87 (s, 3H); 2,17 (s, 3H); 1,97-1,82 (c, 6H); 1,62-1,65 (c, 2H).
Medziprodukt 17
3-[(2E)-3-(3-Indan-2-yloxy-A-metoxyfenyl)-2-metylprop-2-enoxyl](4R)-4-fenyl-l,3-oxazolidin-2-ón Pripravený z medziproduktu 15 pomocou metódy acylácie oxazolidinónu uvedenej pri medziprodukte 16. 'H NMR (400 MHz, CDC13) δ: 7,43-7,33 (m, 5H); 7,25-7,16 (m, 4H); 7,07-7,03 (m, 2H); 6,89 (D, 1H);
5,54 (dd, 1H); 5,19 (c, 1H); 4,74 (t, 1H); 4,28 (dd, 1H); 3,84 (s, 3H); 3,38 (dd, 2H); 3,24 (ddd, 2H); 2,19 (d, 3H).
Medziprodukt 18
Etyl (2E)-3-[4-metoxy-3-(fenylmetoxy)fenyl]-2-metylprop-2-enoát
Pripravený z 3-benzyloxy-A-metoxybenzaldehydu pomocou Horner Emmonsovej metódy uvedenej pri medziprodukte 4.
‘H NMR (400 MHz, CDC13) δ: 7,56 (s, 1H); 7,44 (t, 2H); 7,36 (t, 2H); 7,30 (t, 1H); 7,01 (dd, 1H); 6,95 (d, 1H); 6,90 (d, 1H); 5,18 (s, 2H); 4,24 (q, 2H); 3,92 (s, 3H); 1,98 (d, 3H); 1,33 (t, 3H).
Medziprodukt 19
Kyselina (2E)-3-[4-metoxy-3-(fenylmetoxy)fenyl]-2-metylprop-2-énová
Pripravená z medziproduktu 18 pomocou metódy hydrolýzy prostredníctvom LiOH, ktorá je uvedená pri medziprodukte 5 a použitá bez charakterizácie.
Medziprodukt 20 (2E)-3-[4-Metoxy-3-(fenylmetoxy)fenyl]-2-metylprop-2-enoylchlorid
Pripravený z medziproduktu 19 pomocou metódy s chloridom kyseliny uvedenej pri medziprodukte 12.
'H NMR (400 MHz, CDC13) δ: 7,91(s, 1H); 7,47-7,29 (m, 5H); 7,10 (dd, 1H); 7,00 (d, 1H); 6,95 (d, 1H);
5,20 (s, 2H); 3,95 (s, 3H); 2,04 (s, 3H).
Medziprodukt 21
3-{(2E)-3-[4-Metoxy-3-(fenylmetoxy)fenyl]-2-metylprop-2-enoyl}(4R)^l-fenyl-l,3-oxazolidin-2-ón Pripravený z medziproduktu 19 pomocou metódy acylácie oxazolidinónu uvedenej pri medziprodukte 16.
'H NMR (400 MHz, CDC13>) δ: 7,44-7,29 (m, 11H); 7,03-6,89 (m, 3H); 5,52 (dd, 1H); 5,17 (s, 2H); 4,73 (dt, 1H); 4,27 (dd, 1H); 3,91 (s, 3H); 2,00 (s, 3H).
Medziprodukt 22 (2E)-3-[3-(3-terc-Butoxy-^l-metoxyfenyl)-2-metyl-akryoyl]-4-R-fenyloxazolidin-2-ón
Pripravený z medziproduktu 5 (25,7 gm; 97,2 mmol) pomocou metódy acylácie oxazolidinónu uvedenej pri medziprodukte 16 za vzniku medziproduktu 22 vo forme sivobielej tuhej látky (39,8 gm; kvantitatívny výťažok).
'H NMR (CDC13 400 MHz) δ: 7,42-7,33 (m, 5H); 7,16 (d, 1H); 7,02 (s, 1H); 6,87 (d, 1H); 5,55 (dd, 1H); 4,73 (dd, 1H); 4,26 (dd, 1H); 3,81 (s, 3H); 2,16 (s, 3H); 1,38 (s, 9H).
Medziprodukt 23 trans-(±)-l-[l-Benzyl-4-(3-benzyloxy^f-metoxyfenyl)-3-metylpyrolidin-3-yl]etanón
Cyklizácia azometínylidu
Roztok medziproduktu 6 (15 g; 50,6 mmol; 1 ekv.) aN-(metoxymetyl)-N-(trimetysilylmetyl)benzylamín (11,9 g; 50,6 mmol; 1 ekv.) v CH2C12 (85 ml) pri 0 °C sa po kvapkách pridával do roztoku TFA (IM v CH2C12, 5 ml; 5,1 mmol; 0,1 ekv.). Po 30 minútovom miešaní pri 0 °C sa reakčná zmes ďalej miešala pri laboratórnej teplote počas 16 hodín. Do roztoku sa pridal ďalší N-(metoxymetyl)-N-trimetysilylmetyl)benzylamín (6 g; 25,3 mmol; 0,5 ekv.), miešal sa 1 hodinu pri laboratórnej teplote a po tretí raz sa pridal N-(metoxymetyl)-N-(trimetysilylmetyl)benzylamín (6 g; 25,3 mmol; 0,5 ekv.). Reakčná zmes sa skoncentrovala a zvyšok bol rozpustený v EtOAc (500 ml). Roztok bol prepláchnutý s 1 N HCI (2x60 ml s pridaním 10 ml nasýteného NaCl), vodou (250 ml), 1 M NaOH (250 ml), vodou (250 ml), nasýteným NaCl (2 x 100 ml), vysušený pomocou Na2SO4 a skoncentrovaný vo vákuu. Zvyšok sa prečistil flash chromatografiou (silikagél, stĺpec 7,5x36 cm Biotage KP-Sil, eluovaný 5-10 % dietyléterom v dichlórmetáne) za vzniku medziproduktu 23 vo forme svetložltého sirupu (17,4 g; 80 %).
'H NMR (300 MHz, CDC13) δ: 7,44-7,22 (m, 10H); 6,81-6,72 (m, 3H); 5,14 (s, 2H); 3,86 (s, 3H); 3,72-3,67 (m, 2H); 3,58 (d, J= 13,0 Hz, 1H); 3,08 (d, J=9,7 Hz, 1H); 2,99 (dd, J=8,9; 7,8 Hz, 1H); 2,74 (dd, J=9,1, 7,4 Hz, 1H); 2,33 (d, J=9,7 Hz, 1H); 2,15 (s, 3H); 0,68 (s, 3H).
I3C NMR (75 MHz, CDC13) δ: 211,3; 148,4; 147,4; 139,2; 137,2; 132,7; 128,51; 128,50; 128,3; 127,8; 127,4; 127,0; 121,6; 115,5; 111,2; 71,0; 63,8; 60,0; 59,5; 57,9; 56,0; 47,7; 25,6; 20,6.
Medziprodukt 24 trans-(±)-l-{ l-Benzyl-4-[3-(indan-2-yloxy)^t-metoxyfenyl]-3-metylpyrolidin~3-yl}etanón
Pripravený z medziproduktu 7 pomocou metódy cyklizácie azometínu uvedenej pri medziprodukte 23.
'H NMR (300 MHz, CDC13) δ: 7,38-7,16 (m, 9H); 6,88 (br s, IH); 6,78 (br s, 2H); 5,18-5,13 (m, IH);
3,82-3,73 (m, 2H); 3,79 (s, 3H); 3,60 (d, J=13,0 Hz, IH, 3,41-3,17 (m, 4H); 3,14 (d, J=9,7 Hz, IH); 3,05 (t, J=8,3 Hz, IH); 2,84 (t, J=8,3 Hz, IH); 2,44 (d, J=9,7 Hz, IH); 2,24 (s, 3H); 0,86 (s, 3H).
Medziprodukt 25
Etylester kyseliny (±)-l -benzyl—4-(3-cyklopentyloxy-4-metoxyfenyl]-3-mety lpyrolidín-3-karboxylovej Pripravený z medziproduktu 10 reakciou cyklizácie azometínylidu uvedenou pri medziprodukte 23 za vzniku jantárového oleja (16,7 g; 61 % výťažok) 'H NMR (300 MHz, CDC13) δ: 7,39-7,23 (m, 5H, aromatický); 6,91 (s, IH, aromatický); 6,78 (m, 2H, aromatický); 4,75 (m, IH); 4,18 (q, 2H, OEt); 3,86 (m, IH); 3,81 (s, 3H, OCH3); 3,75 (d, IH, J=13,2 Hz); 3,62 (d, IH, J=13,2 Hz) 3,20 (d, IH, J=9,5 Hz) 3,01 (m, IH); 2,91 (m, IH); 2,51 (d, IH, J=9,5 Hz); 1,93-1,58 (m, 8H, cyklopentyl); 1,28 (t, 3H, OEt); 0,9 (s, 3H, CH3).
Medziprodukt 26 trans-(±)-l-[l-Benzyl-4-[3-cyklopentyloxy-4-metoxyfenyl]-3-metylpyrolidin-3-yl]etanón Pripravený pomocou metódy uvedenej v patente USA č. 5665754.
Medziprodukt 27 (±)-[l-Benzyl—4-[3-cyklopentyloxy—4-metoxyfenyl]-3-metylpyrolidin-3-yl]metanol 30 Do magneticky miešaného roztoku medziproduktu 25 (9,32 g; 21,3 mmol) v suchom toluéne (10 ml) pri teplote 0 °C sa pridal hydrid diizobutylalumínia (64 ml; 1,0 M v CH2CI?, 63,9 mmol). Zmes sa miešala počas 30 minút pri teplote 0 °C, potom pri laboratórnej teplote ďalšiu hodinu a nakoniec sa zhášala pomocou Me41
OH (20 ml). Potom sa pridal 1,0 N roztok (100 ml) kyseliny chlorovodíkovej (HCI) a zmes sa miešala ďalších 30 minút. Fázy sa oddelili a vodná fáza sa extrahovala pomocou CH3C1 (2 x 20 ml). Organické fázy sa premyli nasýteným roztokom NH4C1, vysušili sa bezvodým Na2SO4, potom sa skoncentrovali za vzniku svetložltej olejovej kvapaliny (8,28 g; 98 % výťažok).
'H NMR (300 MHz, CDC13) δ: 7,31-7,14 (m, 5H, aromatický); 6,78-6,71 (m, 3H, aromatický); 4,76-4,73 (br. m, 1H); 3,79 (s, 3H, OCH3); 3,71-3,55 (m, 3H) 3,47-3,10 (m, 3H) 2,92 (d, 1H, J=9,2 Hz); 2,62 (m, 1H); 3,35-2,33 (m, 2H); 1,89-1,58 (m, 8H, cyklopentyl); 0,52 (s, 3H, CH3).
Medziprodukt 28 (±)-l-BenzyM-[3-cyklopentyloxy-4-metoxyfenyl]-3-metylpyrolidín-3-karboxaldehyd
Roztok oxalylchloridu (4,87 ml; 9,73 mmol) v suchom CH2C12 (20 ml) sa v dusíkovom prostredí ochladil na teplotu -78 °C a počas miešania sa doň pridával roztok dimetylsulfoxidu (DMSO, 1,38 ml; 19,5 mmol) v CH2C12 (5 ml). Pozorovalo sa uvoľňovanie plynu. Po ukončení pridávania sa roztok miešal 5 minút a počas ďalších 10 minút sa pridával roztok medziproduktu 27 (3,5 g; 8,85 mmol) v CH2C12 (10 ml). Zmes sa miešala počas 30 minút, pridal sa trietylamín (Et3N) (6,7 ml; 44,3 mmol) a nechala sa zahriať na laboratórnu teplotu. Do zmesi sa pridala voda a vzniknuté fázy sa separovali. Vodná fáza sa extrahovala pomocou CH2C12 (2 x 50 ml). Kombinované organické fázy sa premyli soľným roztokom, vysušili bezvodým Na2SO4 a potom sa skoncentrovali za vzniku olejového produktu (3,2 g; 92 %).
‘H NMR (300 MHz, CDC13) δ: 9,63 (s, 1H, CHO); 7,34-7,21 (m, 5H, aromatický); 6,78-6,68 (m, 3H, aromatický); 4,73 (br. m, 1H); 3,80 (s, 3H, OCH3); 3,78-3,61 (m, 3H); 3,18-3,11 (m, 2H); 2,86-2,81 (m, 1H); 2,58-2,52 (m, 1H); 2,43-2,34 (m, 2H); 1,87-1,59 (m, 8H, cyklopentyl); 0,74 (s, 3H, CH3).
Medziprodukt 29 (±)-l-[l-Benzyl-4-(3-cyklopentyloxy-4-metoxyfenyl)-3-metylpyrolidín_3-yl]-l-hydroxypropan-2-ón
Do roztoku etylvinyléteru (0,95 ml; 9,91 mmol) v suchom THF (4 ml) pri teplote -78 °C sa pridal 1,7M t-butyllítium v pentáne (5,25 ml; 8,93 mmol) a výsledný roztok bol zahriaty na teplotu 0 °C. Farba roztoku sa zmenila zo žltej na bezfarebnú. Vzniknutý vinylový anión sa potom ochladil na -78 °C a po kvapkách sa pridal roztok medziproduktu 28 (1,95 g; 4,96 mmol) v THF. Vzniknutá zmes sa miešala počas 45 minút, ochladila sa nasýteným NH4C1 (15 ml) a extrahovala pomocou Et2O (3 x 30 ml). Kombinované organické extrakty sa vysušili pomocou Na2SO4 a skoncentrovali. Neupravený produkt sa rozpustil v Et2O a upravil sa s koncentrovanou kyselinou sírovou (H2SO4) v separačnom lieviku za prudkého pretrepávania. Roztok Et2O sa premyl vodou (30 ml), nasýteným roztokom NaHCO3 (30 ml), vysušil pomocou Na2SO4 a skoncentroval. Zvyšok sa prečistil flash chromatografiou (sikagél, 20 % EtOAc-hexány) za vzniku medziproduktu 29 vo forme oranžového oleja. (1,36 g; 62 % výťažok).
‘H NMR (300 MHz, CDC13) δ: 7,34-7,27 (m, 5H, aromatický); 6,77-6,68 (m, 3H, aromatický); 4,75-4,72 (br. m, 1H); 4,13-4,08 (m, 1H); 3,81 (s, 3H, OCH3); 3,79-3,57(m, 3H); 3,26 (m, 1H); 2,99 (d, 1H, J=9,2 Hz); 2,69-2,64 (m, 1H); 2,39 (d, 1H, J=9,2 Hz); 2,25 (s, 3H, OCH3); 1,94-1,59 (m, 8H, cyklopentyl); 0,69 (s, 3H, CH3).
Príklad 1
Metylester kyseliny (±)-4-(3-cyklopentyloxy^t-metoxyfenyl]-3-( 1-hydroxy-1-metyletyl)-3-metylpyrolidín-1 -karboxylovej
Do 3,0 M roztoku metylmagnéziumbromidu (0,6 ml; 1,8 mmol) v Et,0 sa pri 0 °C po kvapkách injekčným čerpadlom pridával roztok medziproduktu 36 (0,65 g; 1,73 mmol) v suchom THF (5 ml). Výsledná zmes sa počas 30 minút miešala pri teplote 0 °C a potom ďalšiu hodinu pri laboratórnej teplote. Reakčná zmes sa potom zhášala nasýteným NH4C1 (15 ml) a extrahovala sa pomocou Et,O (2x10 ml). Kombinované organické extrakty sa vysušili pomocou Na2SO4 a skoncentrovali. Zvyšok sa prečistil flash chromatografiou (sikagél, 20 % EtOAc-hexány, potom 50 %) za vzniku titulnej zlúčeniny príkladu 1 vo forme oranžového oleja. (0,37 g; 55%).
'H NMR (300 MHz, CDC13) δ: 6,83-6,77 (m, 3H, aromatický); 4,75-4,74 (br. m, 1H); 3,83 (s, 3H, OCH3); 3,96-3,50 (m, 4H); 3,73 (s, 3H, OCH3); 3,37-3,25 (m, 1H); 1,96-1,59 (m, 8H, cyklopentyl); 1,22 (s, 3H, CH3); 1,07 (s, 6H, CH3).
Medziprodukt 30
2-[l-Benzyl-4-(S)-(3-cyklopropylmetoxy-4-metoxyfenyl)-3-(S)-metylpyrolidin-3-yl]propán-2-ol
Medziprodukt 33 (0,992 g; 2,52 mmol) sa rozpustil v THF (7,5 ml) a roztok sa ochladil na 0 °C. Pridal sa metylmagnéziumjodid (3,0 M v éteri, 2,52 ml; 7,6 mmol) a reakčná zmes sa miešala počas 1,5-hodiny pri teplote 0 °C. Pridal sa nasýtený NH4C1 a reakčná zmes sa skoncentrovala vo vákuu. Zvyšok sa rozriedil s EtOAc a organická vrstva sa trikrát premyla nasýteným NaHCO3, nasýteným NaCl a potom vysušila pomocou Na2SO4 a skoncentrovala vo vákuu. (0,96 g; 93 %).
‘H ŇMR (CDC13, 400 MHz,) δ: 7,33-7,24 (m, 5H); 6,83-6,77 (m, 3H); 3,86-3,74 (m, 7H); 3,68-3,59 (dd, 2H); 3,32 (dd, 1H); 3,24 (d, 1H); 2,48 (dd, 1H); 2,16 (d, 1H); 1,35-1,28 (m, 1H); 1,21-1,18 (m, 5H); 0,66-0,60 (m, 2H); 0,56 (s, 3H); 0,38-0,33 (m, 2H).
LRMS (Elektrosprej, pozitívny): Da/e 410,5 (m+l).
Medziprodukt 31
2-[4-(S)-(3-Cyklopropylmetoxy-4-metoxyfenyl)-3-(S)-metylpyrolidin-3-yl]propan-2-ol
Medziprodukt 30 (0,96 g; 2,3 mmol) sa rozpustil v metanole (10 ml) a k roztoku sa pridal Pearlmanov katalyzátor (20 % Pd(OH)2 na uhlíku, 200 mg) a amóniummravčan (1,0 g; 15,8 mmol). Roztok bol ohrievaný k 5 spätnému toku počas 6 hodín. Filtráciou sa odstránil katalyzátor a roztok sa skoncentroval vo vákuu. Zvyšok sa rozpustil v EtOAc a trikrát sa premyl vodou, nasýteným NaCl, vysušil sa pomocou Na2SO4 a skoncentroval vo vákuu. (384 mg; 52 %) 'H NMR (CDClj, 400 MHz,) δ: 6,83-6,79 (m, 3H); 3,86-3,80 (m, 5H); 3,75-3,66 (m, 2H); 3,57-3,51 (m, 2H); 3,22-3,17 (m, 1H); 2,78-2,67 (m, 1H); 1,34-1,21 (m, 7H); 0,69 (s, 3H); 0,66-0,60 (m, 2H); 0,37-0,33 (m, 2H).
LRMS (Elektrosprej, pozitívny): Da/e 320,3 (m+1).
Medziprodukt 32
2-Benzyloxy-l-[4-(S)-(3-cyklopropylmetoxy-4_metoxyfenyl)-3-(l-hydroxy-l-metyletyl)-3-(S)- mety 1 py ro I id in-1 -y 1] etanón
Medziprodukt 31 (75 mg; 0,23 mmol) sa rozpustil v CH2C12 (1 ml) a do roztoku sa pridal N,N-diizopropyletylamín (DIEA) (61 μί, 0,35 mmol), potom sa ochladil na 0 °C. Pridal sa benzyloxyacetylchlo20 rid (55,6 μί, 0,23 mmol) a roztok sa miešal pri teplote 0 °C počas 3 hodín. Reakčná zmes sa zriedila s CH2C12 atrikrát premyla s IN HCI, raz s vodou, trikrát so 6 % NaHCO3, potom sa vysušila pomocou Na2SO4 a skoncentrovala sa vo vákuu. Surový produkt (103 mg) bol podrobený chromatografii v EtOAc/hexáne (1 : 1) za vzniku medziproduktu 32 (21 mg; 19 %).
'H NMR (CDC13, 400 MHz,) δ: 7,41-7,27 (m, 5H); 6,85-6,76 (m, 3H); 4,66-4,61 (m, 2H); 4,13-4,07 (m,
2H); 3,94-3,59 (m, 7H); 3,53-3,47 (m, 1H); 3,28-3,22 (m, 1H); 1,34-1,24 (m, 2H); 1,24-1,19 (m, 2H); 1,14-1,11 (m, 2H); 1,07-0,98 (m, 6H); 0,66-0,59 (m, 2H); 0,36-0,31 (m, 2H)
LRMS (Elektrosprej, pozitívny): Da/e 468,3 (m+1).
Príklad 2 l-[4-(S)-(3-Cyklopropylmetoxy-4-metoxyfenyl)-3-(l-hydroxy-l-metyletyl)-3-(S)-metylpyrolidin-l-yl]-2-hydroxyetanón
Medziprodukt 32 (21 mg; 45 pmol) sa rozpustil v etanole (95 %, 2ml) a pridal sa Pearlmanov katalyzátor 35 (20 % Pd(OH)2 na uhlíku, 20 mg). Roztok bol podrobený pôsobeniu H2 pri tlaku 1 atmosféry počas 20 hodín.
Katalyzátor sa odstránil filtráciou a skoncentroval vo vákuu za vzniku titulnej zlúčeniny príkladu 2(15 mg; 88 %).
‘H NMR (CDC13, 400 MHz,) δ: 6,87-6,80 (m, 3H); 4,20-4,09 (m, 2H); 3,89-3,62 (m, 9H); 3,58-3,51 (m, 1H); 3,13-2,87 (m, 2H); 1,35-1,01 (m, 10H); 0,67-0,61 (m, 2H); 0,39-0,33 (2H).
LRMS (Elektrosprej, pozitívny): Da/e 378,4 (m+l).
Medziprodukt 33
-[ 1 -BenzyW4-(S)-(3-cyklopropylmetoxy^l-metoxyfenyl)-3-(S)-metyIpyroIidin-3-yl]etanón
Oxalylchlorid (2,0 M v CH2C12, 1,35 ml, 2,7 mmol) sa pridal do CH2C12 (4 ml) a roztok sa ochladil na teplotu -60 °C. Pomaly sa pridával roztok DMSO (0,36 ml; 5,0 mmol) v CH2Cl2,(l,5 ml). Tento roztok sa miešal počas 5 minút, potom sa do roztoku pridal medziprodukt 66 (1,06 g; 2,7 mmol) rozpustený v CH2C12 (7,5 ml). Reakčná zmes sa miešala pri teplote -60 °C počas 30 minút, potom sa ochladila pomocou Et3N (1,9 ml). Zmes sa nechala zohriať na laboratórnu teplotu, zriedila sa vodou a po niekoľkominútovom prudkom miešaní sa oddelili vrstvy. Organická vrstva sa trikrát premyla s IN HCI, trikrát so 6 % NaHCO3, potom sa vysušila pomocou Na2SO4 a skoncentrovala sa vo vákuu. Získal sa medziprodukt 33 a použil sa bez čistenia (0,992 g; 93 %)
LRMS (Elektrosprej, pozitívny): Da/e 392,4 (m+l).
Medziprodukt 34
Metylester kyseliny trans-(±)-[3-acetyl-4-(3-benzyloxy-4-metoxyfenyl)-3-metyl]pyrolidín-l-karboxylovej
Roztok medziproduktu 23 (17,4 g; 40,5 mmol; 1 ekv.) v acetonitrile (150 ml) sa nechal reagovať s metylchlórmravčanom (15,6, 202,5 mmol; 5 ekv.), potom sa pri spätnom toku miešal počas 1 hodiny. Reakčná zmes sa skoncentrovala a zvyšok sa prečistil flash chromatografiou (silikagél, stĺpec 7,5x36 cm Biotage KPSil, eluovaný s 50-60 % EtOAc v heptáne) za vzniku medziproduktu 34 vo forme bezfarebného sirupu (13,7 g; 85 %).
‘H NMR (400 MHz, CDC13) δ: 7,42-7,27 (m, 5H); 6,82 (d, J=8,8 Hz, 6,69 (br d, J=8,3 Hz, 1H); 6,63 (d, J=l,8 Hz, 1H); 5,15 (s, 2H); 3,88 (s, 3H); 3,84 (dd, J=16,3, 11,0 Hz, 1H); 3,73 (br s, 3H); 3,24/3,12 (2d, J=11,31/11,0 Hz, 1H); 2,09/2,01 (2 s, 3H); 0,84 (s, 3H).
13C NMR (75 MHz, CDC1Q δ: 210,0/209,8; 155,2; 149,0; 147,5; 137,0; 130,5/130,0; 128,5; 127,8; 127,2/127,1; 121,2/121,0; 114,9/114,8; 111,5; 70,9; 58,1/57,2; 55,9; 54,4/54,0; 52,5; 50,2/50,0; 48,4/48,0; 26,3; 17,5
O
Medziprodukt 35
Metylester kyseliny trans-(±)-3-acetyl-4-(3-(indan-2-yloxy)-4-metoxyfenyl]-3-inetylpyrolidín-l-karboxylovej
Pripravený z medziproduktu 24 pomocou metódy používajúcej metylchlórmravčan uvedenej pri medziprodukte 34.
‘H NMR (300 MHz, CDClj) δ: 7,24-7,16 (m, 4H); 6,82 (d, J=8,8 Hz, IH); 6,75-6,72 (m, 2H); 5,18-5,10 (m, IH); 3,91 (t, J=11,2 Hz, IH); 3,80 (s, 3H); 3,77-3,65 (m, 3H); 3,74 (s, 3H); 3,42-3,16 (m, 5H); 2,17 (d, J=6,8 Hz, 3H); 1,04 (s, 3H).
13C NMR (75 MHz, CDC13) δ: 210,1/209,9; 155,3; 149,4; 146,9/146,8; 140,5/140,4; 130,5/130,0; 126,7; 124,7; 121,3/121,1; 116,1/115,8; 111,9; 79,2; 58,2/57,4; 55,9; 54,7/54,2; 52,6; 50,2/50,0; 48,5/48,1; 39,7; 26,6/26,5; 17,8.
Medziprodukt 36
Metylester kyseliny trans-(±)-3-acetyl-4-(3-cyklopentyloxy-^-metoxyfenyl-3-metylpyrolidín-l-karboxylovej
Pripravený pomocou metódy uvedenej v patente USA č. 5665754. Racemická forma medziproduktu 46.
Medziprodukt 37
Metylester kyseliny trans-(±)-[3-acetyl-4-(3-hydroxy-4-metoxyfenyl)-3-metyl]pyrolidín-l-karboxylovej
Roztok medziproduktu 34 (8,7 g; 21,9 mmol) v etanole (50 ml) sa pretrepával v H2 (50 psi) počas 16 hodín za prítomnosti katalyzátora paládia na uhlíku (0,5 g; 10 % Pd/C). Katalyzátor bol odfiltrovaný cez vrstvu kremeliny, za ktorou nasledoval 0,22 pm membránový filter. Filtrát sa skoncentroval vo vákuu za vzniku medziproduktu 37 vo forme číreho sirupu (6,5 g; 97 %).
1H NMR (300 MHz, CDC1,) δ: 6,79 (d, J=8,3 Hz, 1 H); 6,74 (d, J= 1,8 Hz, 1 H); 6,63 (br d, J=8,3 Hz, 1 H); 6,04 (br s, IH); 3,96-3,85 (m, IH); 3,87 (s, 3H); 3,75/3,73 (2s, 3H); 3,74-3,59 (m, 3H); 3,36/3,26 (2d, J=11,2/11,0 Hz, IH); 2,17/2,15 (2s,3H); 1,01 (s, 3H) l3C NMR (75 MHz, CDC13) δ: 210,0/209,8; 155,3; 145,9/145,8; 145,5; 131,2/130,8; 119,9; 114,5; 110,6; 58,1/57,2; 55,8; 54,4/53,9; 52,5; 50,3/50,1; 48,4/48,0; 26,3; 17,6.
Medziprodukt 38
Metylester kyseliny trans-3-acetyl-4-[exo-3-(bicyklo[2.2.1]hept-2-yloxy)-4-metoxyfenyl]-3-metylpyrolidín-1-karboxylovej
Pripravený z medziproduktu 37 a endo-norborneolu pomocou metódy Mitsunobu-ho uvedenej pri medziprodukte 2 (36 % výťažok).
*H NMR (300 MHz, CDC13) δ: 6,80 (d, J=8,2 Hz, 1H); 6,66 (d, J=9,0 Hz, 1H); 6,62 (s, 1H); 4,15-4,08 (m, 1H); 3,95-3,86 (M, 1H); 3,83 (s, 3H); 3,74 (s, 3H); 3,73-3,60 (m, 3H); 3,73/3,28 (2d, J=11,2/10,8 Hz, 1 H); 2,47 (br s, 1 H); 2,32 (brs, 1 H); 2,17/2,15 (2s, 3H); 1,76-1,66 (m, 2H); 1,63-1,45 (m, 3H); 1,28-1,08 (m, 3H); 1,02/1.01 (2s, 3H) 13CNMR(75 MHz, CDC13) δ: 210,5/210,3; 155,7; 149,6; 147,4; 130,8/130,76; 130,3; 120,9/120,7/120,5; 115,6/115,4/115,3/115,2; 112,2; 81,5; 58,6/57,8; 56,4; 54,9/54,6; 52,9; 50,6/50,5; 49,1/49,0/48,7; 41,5; 40,4; 35,8/35,7; 28,8; 26,9/26,8; 24,7/24,6; 18,2.
Medziprodukt 39
Metylester kyseliny trans-[3-acetyl-4-[4-metoxy-3-(l-metyl-3-fenyl-propoxy)fenyl]-3-metylpyrolidín-l-karboxylovej
Pripravený z medziproduktu 37 a 4-fenyl-2-butanolu pomocou metódy Mitsunobu-ho uvedenej pri medziprodukte 2.
‘H NMR (300 MHz, CDC1,) δ: 7,29-7,15 (m, 5H); 6,82 (d, J=8,3 Hz); 6,72-6,63 (m, 2H); 4,33^1,25 (m, 1H); 3,94-3,59 (m, 4H); 3,84 (s, 3H); 3,74 (br s, 3H); 3,36/3,27 (2d, J% 11,2; 3,0/10,9; 3,9 Hz, 1H); 2,88-2,69 (m, 2H); 2,18-2,06 (m, 4H); 1,95-1,82 (m, 1H); 1,33/1,31 (2d, J=2,3/2,3 Hx, 3H); 1,01/0,99 (2s, 3H).
13C NMR (75 MHz, CDC13) δ: 209,9; 155,4; 149,8; 147,1; 141,9; 130,4/129,9; 128,5; 128,4; 125,8; 121,2; 116,9; 111,9; 74,8; 58,1/57,3; 55,9; 54,6/54,3; 52,6; 50,2/50,1; 48,6/48,2; 38,1; 31,8; 26,6; 19,9; 17,7.
Medziprodukt 40
Metylester kyseliny trans-(±)-3-acetyl-4-(4-metoxy-3-fenetyloxyfenyl)-3-metylpyrolidín-l -karboxylovej
Pripravený z medziproduktu 37 a 2-fenyletanolu pomocou metódy Mitsunobu-ho uvedenej pri medziprodukte 2.
'H NMR (300 MHz, CDC13) δ: 7,36-7,23 (m, 5H); 6,82 (d, J=8,2 Hz, 1H); 6,70 (d, J=8,4 Hz, 1H); 6,66 (s, 1H); 4,18 (t, J=7,5 Hz, 2H); 3,92-3,81 (m, 1H); 3,86 (s, 3H); 3,76-3,61 (m, 3H); 3,73 (s, 3H); 3,40/3,27 (2d, J=11,2/10,9 Hz, 1H); 3,15 (t, J=7,5 Hz, 2H); 2,16/2,12 (2s, 3H); 1,00 (s, 3H).
O (
Medziprodukt 41
Metylester kyseliny trans-3-acetyl-4-[4-metoxy-3-(tetrahydrofurán-3-yloxy)fenyl]-3-metylpyrolidín-l-karboxylovej
Pripravený z medziproduktu 37 a 3-hydroxytetrahydrofuránu pomocou metódy Mitsunobu-ho uvedenej pri medziprodukte 2.
'H NMR (300 MHz, CDC13) δ: 6,85-6,63 (m, 3H); 4,92-4,88 (m, 1H); 4,07-3,62 (m, 8H); 3,84 (s, 3H); 3,75 (s, 3H); 3,39/3,29 (2d, J=11,2/10,2 Hz, 1H); 2,19-2,14 (m, 5H); 1,02 (br s, 3H).
13C NMR (75 MHz, CDC13) δ: 210,0/209,9; 155,4; 149,5; 146,5; 130,0; 121,6/121,5; 116,5/116,4/116,3;
Medziprodukt 42 (4R)-3-{[(3S,4S)<l-(3-Cyklopentyloxy<l-metoxyfenyl)-3-metyl-l-benzylpyrolidin-3-yl]karbonyl}-4-fenyl-1,3-oxazolidin-2-ón
Do vychladenej (-4 °C) miešanej suspenzie acyloxazolidinónu (9,30 g; 22,8 mmol) a N-(metoxymetyl>-N-(trimetylsilylmetyl)benzylamínu (11,7 ml; 45,6 mmol; 2 ekv.) vCHC13 (65 ml) sa injekčnou striekačkou v dusíkovom prostredí pridal roztok TFA v CHC13 (4,6 ml 1,0 M; 4,6 mmol; 0,2 ekv.). Výsledná suspenzia sa premiešavala pri teplote 0 °C počas 4 hodín, potom počas noci pri teplote približne 15 °C (vodný kúpeľ). Výsledný mútny roztok sa potom opäť vychladil na -4 °C, injekčnou striekačkou sa pridala ďalšia dávka N-(metoxymetyl)-N-(trimetylsilylmetyl)benzylamínu (5,9 ml; 22,8 mmol; leq) a nechal sa miešať počas ďalších 5 hodín, počas ktorých sa reakčná zmes stala homogénnou. TLC (5 % Et2O v CH2C12) potvrdila, že reakcia bola ukončená. Podstatné množstvo CHC13 sa za zníženého tlaku odstránilo a zvyšok bol zriedený s EtOAc (250 ml) a následne sa premyl IN vodného HCI (2 x 50 ml), 1 N vodného NaOH (50 ml) a soľným roztokom (50 ml). Organická vrstva sa potom vysušila (MgSO4), prefiltrovala a skoncentrovala vo vákuu za vzniku oranžovej polotuhej látky (13,9 g). Prečistením flash chromatografiou na silikagéli (2 % éter v CH2C12) došlo k vzniku základného diastereoméru vo forme bielej peny (8,25 g; 65 %).
Diastereomerická selektivita bola približne 10 : 1 (HPLC).
Ή NMR (400 MHz, CDC13) δ: 7,42-7,21 (c, 10H); 6,95 (s, 1H); 6,81 (s, 2H); 5,55 (dd, 1H); 4,74 (t, 1H); 4,68 (m, 1H); 4,10 (dd, 1H); 3,93 (t, 1H); 3,70 (d, 1H); 3,68 (s, 3H); 3,56 (d, 1H); 3,42 (d, 1H); 2,72 (m, 2H); 2,64 (d, 1H); 2,48 (m, 1H); 1,85-1,78 (c, 2H); 1,75-1,61 (c, 4H); 1,57-1,53 (c, 2H); 0,96 (s, 3H)
LRMS (Elektrosprej, pozitívny): Da/e 555,2 (m+l).
Medziprodukt 43
Kyselina (3S,4S)-l-benzyl-4-(3-cyklopentyloxy-A-metoxyfenyl)-3-metylpyrolidín-3-karboxylová
Suspenzia peroxidu lítneho (0,5 g; 10,8 mmol) v zmesi vody a THF (1 : 1,6 ml) sa pridala do roztoku medziproduktu 42 (3,0 g; 5,4 mmol) v zmesi vody a THF (3 : 1, 30 ml) pri teplote 0 °C v dusíkovom prostredí. Suspenzia sa okamžite rozpustila. Po 1 hodinovom miešaní pri teplote 0 °C sa pridal roztok vodného siričitanu sodného (Na2SO3) (1,5 N, 12 ml) na neutralizáciu prebytočného peroxidu a za zníženého tlaku bol THF odstránený. Zásaditý zvyšok sa extrahoval tromi 30 ml dávkami CH2C12. Vodná fáza bola okyslená na pH 1 vodným roztokom 1,0 N HCI a extrahovaná tromi 30 ml dávkami Et2O. Éterické extrakty sa vysušili (Na2SO4), skoncentrovali za zníženého tlaku a použili bez ďalšieho čistenia.
'H NMR (400 MHz, CDC13) δ: 10,73 (br. s, 1H, COOH); 7,69 (br. s, 2H, aromatický); 7,38-7,36 (m, 3H, aromatický); 6,78 (s, 1H, aromatický); 6,69 (m, 2H, aromatický); 4,71 (br. s, 1H); 4,51-4,48 (m, 2H); 4,24-4,11 (br. s, 2H); 4,08-3,88 (br. s, 1H); 3,76 (s, 3H, OCH3); 3,54 (br. s, 1H); 3,1 (br. s, 1H); 1,83-1,52 (m, 8H, cyklopentyl); 1,05 (br. s, 3H, CH3).
Medziprodukt 44
Metoxymetylamid kyseliny (3S,4S)-l-benzyl-4-(3-cyklopentyloxy-4-metoxyfenyl)-3-metylpyrolidín-3-karboxylovej
Medziprodukt 44 bol pripravený z medziproduktu 43 (2,1 g; 4,98 mmol), l,ľ-karbonyldiimidazolu (0,89 g; 5,47 mmol) a Ν,Ο-dimetylhydroxylamínhydrochloridu (0,73 g; 7,47 mmol) za vzniku medziproduktu 44 (0,9 g; 40 %) vo forme bieleho kryštalického prášku.
'H NMR (300 MHz, CDCI3) δ: 7,4-7,3 (m, 5H, aromatický); 7,06 (d, 1H, J=l,7 Hz, aromatický); 6,89 (dd, 1H, J=8,3 Hz, aromatický); 6,73 (d, 1H, J=8,3 Hz, aromatický); 4,77-4,75 (m, 1H); 4,16-4,06 (m, 1H); 3,81 (s, 3H, OCH,); 3,81-3,71 (m, 2H); 3,60 (s, 3H, OCH,); 3,21 (s, 3H, NCH,); 2,96 (d, 1H, J=9,6 Hz); 2,91 (m, 1H); 2,78 (d, 1H, J=9,6 Hz); 2,77 (m, 1H); 2,04 (s, 3H, CH3); 1,92-1,59 (m, 8H, cyklopentyl); 0,94 (s, 3H, CH3).
Medziprodukt 45 l-[(3S,4S)-l-Benzyl-4-(3-cykIopentyIoxy-4-metoxyfenyl)-3-metylpyrolidin-3-yl]etanón
Roztok medziproduktu 44 (0,17 g; 0,43 mmol) v THF (8 ml) sa ochladil na-78 °C v dusíkovom prostredí sa nechal reagovať s metyllítiom (1,5 M v THF, 0,315 ml; 0,47 mmol). Roztok sa miešal pri teplote -78 °C počas 40 minút, potom sa ochladil studeným nasýteným roztokom vodného NH4C1 (8 ml). Za prudkého mie49 šania sa pridala zmes hexánov a CH2C12 (3 : 1,8 ml). Po ďalšom zriedení pridaním ďalšej dávky zmesi hexánov a CH2C12 (3 : 1, 10 ml) sa pridal soľný roztok (10 ml) a oddelili sa dve vrstvy. Vodná vrstva sa premyla pomocou CH2C12 (8 ml) a kombinované organické extrakty sa premyli soľným roztokom, vysušili (Na2SO4), prefiltrovali a skoncentrovali za zníženého tlaku na olejovitý produkt (154 mg; 89 %).
'H NMR (300 MHz, CDCfi) δ: 7,39-7,24 (m, 5H, aromatický); 6,82-6,70 (m, 3H, aromatický); 4,74 (br. s, 1H); 3,81 (s, 3H, OCH3); 3,78-3,58 (m, 3H); 3,14 (d, J=9,7 Hz); 3,05 (m, 1H); 2,84 (m, 1H); 2,40 (d, 1H, J=9,7 Hz); 2,33 (s, 3H, CH3); 1,92-1,59 (m, 8H, cyklopentyl); 0,83 (s, 3H, CH3).
Medziprodukt 46
Metylester kyseliny (3S,4S)-3-acetyl 4-(3-cyklopentyloxy^4-metoxyfenyl)-3-metylpyrolidín-l-karboxylovej
Do miešaného roztoku medziproduktu 45 (0,154 g; 0,38 mmol) v bezvodom acetonitrile (10 ml) sa pridal metylchlórmravčan (0,146 ml; 1,89 mmol). Roztok sa zohrial na 80 °C a refluxoval sa počas 3 hodín. Roztok sa potom ochladil na laboratórnu teplotu a skoncentroval sa za zníženého tlaku. Prečistením metódou HPLC s reverznou fázou vznikol medziprodukt 46 vo forme oleja (93 mg; 65 %). Špecifická rotácia: [a]25923=+2,5 (c=l,0, EtOH).
’H NMR (300 MHz, CDCfi) δ: 6,8 (d, 1H, J=8,0 Hz, aromatický); 6,66 (d, 1H, J=8,0 Hz, aromatický); 6,66 (s, 1H, aromatický); 4,73 (s, 1H); 3,95-3,64 (m, 4H); 3,83 (s, 3H, OCH3); 3,74 (s, 3H, OCH3); 3,37 a 3,27 (s, 3H, CH3); 2,17 a 2,14 (s, 3H, CH3); 1,92-1,59 (m, 8H, cyklopentyl); 1,03 a 1,02 (s, 3H, CH,).
Medziprodukt 47 (3S,4S)-4-(3-Cyklopentyloxy-4-metoxyfenyl)-3-metyl-l-benzylpyrolidín-3-karbaldehyd
Všeobecná metóda redukcie/oxidácie oxazolidinónu
Do ochladeného (-78 °C) miešaného roztoku medziproduktu 42 (15,09 g; 27 mmol) v toluéne (250 ml) bol injekčnou striekačkou v dusíkovom prostredí pridaný roztok lítiumalumíniumhydridu v tetrahydrofuráne (16,3 ml 1,0 M; 16,3 mmol; 0,6 ekv.). Pozorovalo sa prudké bublanie. Výsledný roztok sa potom miešal počas dvoch hodín pri teplote -78 °C. Po uplynutí tohto času sa chladiaci kúpeľ odstránil. Reakcia sa ochladila postupným pridaním vody (0,62 ml), 15 % vodného NaOH (0,62 ml) a vody (1,9 ml). Výsledná zmes sa nechala ohriať na laboratórnu teplotu, miešala sa počas 30 minút, zriedila pomocou Et2O (500 ml) a vysušila (MgSO4). Filtráciou a koncentráciou vo vákuu vznikol alkohol (prítomné bolo aj malé množstvo aldehydu) vo forme polotuhej látky (14,8 g). Táto látka sa použila okamžite bez ďalšieho čistenia.
Do vychladeného (-78 °C) miešaného roztoku oxalylchloridu v CH2C12 (10,9 ml 2,0 M; 21,8 mmol; 0,8 ekv.) v ďalšom CH2C12 (75 ml) sa injekčnou striekačkou v dusíkovom prostredí pridal DMSO (3,1 ml; 43,5 mmol; 1,6 ekv.). Po dvadsaťminútovom miešaní pri teplote -78 °C sa kanylou pridal roztok surového (neupraveného) alkoholu v CH2C12 (75 ml). Výsledný žltý roztok sa miešal počas 20 minút pri teplote -78 °C, potom sa ohrial na laboratórnu teplotu a miešal sa ďalšiu hodinu. Reakcia sa ukončila pridaním soľného roztoku (150 ml) a extrahovala pomocou CH2C12 (2 x 100 ml). Kombinované organické vrstvy sa vysušili (MgSO4), prefiltrovali a skoncentrovali vo vákuu za vzniku neupraveného aldehydu. Prečistením flash chromatografiou na silikagéli (25 % EtOAc v hexánoch) vznikol aldehyd vo forme číreho bezfarebného oleja (9,8 g; 92 %).
‘H NMR (400 MHz, CDC13) δ: 9,46 (s, IH); 7,37-7,26 (c, 5H); 6,78-6,76 (c, 2H); 6,70 (m, IH); 4,74 (m, IH); 3,82 (s, 3H); 3,70 (m, IH); 3,64-3,62 (c, 2H); 3,18-3,13 (c, 2H); 2,84 (t, IH); 2,41 (d, IH); 1,94-1,83 (c, 6H); 1,63-1,59 (c, 2H); 0,74 (s, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitívny): Da/e 394,3 (m+l).
Medziprodukt 48 (4R)-3-{[(3S,4S)-4-(3-lndán-2-yloxy—4-metoxyfenyl)-3-metyl-l-benzylpyrolidín-3-yl]karbonyl}-4-fenyl-1,3-oxazolidin-2-ón
Pripravený z medziproduktu 17 pomocou metódy cykloadície azometínu uvedenej pri medziprodukte 23. 'H NMR (400 MHz, CDCL) δ: 7,45-7,12 (m, 15H); 6,95 (d, IH); 6,78 (d, IH); 5,54 (dd, IH); 5,17 (c,
IH); 4,69 (t, IH); 4,22 (dd, IH); 4,11 (t, IH); 3,84-3,60 (m, 5H); 3,51 (d, IH); 3,37 (dt, 2H); 3,21 (dd, 2H); 2,90 (d, IH); 2,85 (dd, IH); 2,76 (dd, IH); 1,12 (s, 3H).
Medziprodukt 49 (3S,4S)-4-(3-Indán-2-yloxy—4-metoxy fény l)-3-mety 1-1 -benzylpyrolidín-3-karbaldehyd
Pripravený z medziproduktu 48 pomocou metódy redukcie/oxidácie uvedenej pri medziprodukte 47.
‘H NMR (400 MHz, CDCL) δ: 9,65 (s, IH); 7,36-7,17 (m, 9H); 6,84 (d, IH) 6,79 (d, IH); 6,76 (dd, IH);
5,16 (c, IH); 3,79 (s, 3H); 3,76 (d, IH); 3,68-3,63 (c, IH); 3,40-3,31 (m, 2H); 3,24-3,13 (m, 2H); 2,85 (dd, IH); 2,43 (d, IH); 0,77 (s, 3H).
Medziprodukt 50 (1 R)-l-[(3S,4S)-4-(3-Indán-2-yloxyM-metoxyfenyl)-3-metyl-l-benzylpyrolidin-3-yl]etan-l-ol
Požadovaný, viac polárny diastereomér. Pripravený z medziproduktu 49 pomocou metódy Grignardovej adície uvedenej pri medziprodukte 56.
'H NMR (400 MHz, CDCL) δ: 7,39-7,17 (m, 9H); 6,84-6,77 (m, 3H); 5,17 (c, IH); 3,80 (s, 3H); 3,72-3,57 (m, 4H); 3,38-3,19 (m, 5H); 3,11 (d, IH); 2,57 (t, IH); 2,12 (d, IH); 1,15 (d, 3H); 0,51 (s, 3H).
Medziprodukt 51 (lR)-l-[(3S,4S)-4-(3-Indán-2-yloxy-4-metoxyfenyl)-3-metylpyrolidín-3-yl]etan-l-ol 5 Pripravený z medziproduktu 50 pomocou debenzylačnej metódy uvedenej pri medziprodukte 31.
‘H NMR (400 MHz, CDClj) δ: 7,26-7,16 (m, 4H); 6,81 (s, 3H); 5,19 (c, IH); 3,80 (s, 3H); 3,74-3,68 (m, 2H); 3,44-3,17 (m, 8H); 2,66 (d, IH); 2,51 (brs, IH); 1,18 (d, 3 H); 0,63 (s, 3 H).
Medziprodukt 52 (4R)-3-({[(3S,4S)-4-(4-Metoxy-3(fenylmetoxy)fenyl]-3-metyl-l-benzylpyrolidin-3-yl}karbonyl)-4-fenyl-l,3-oxazolidin-2 ón (hlavný diastereomér)
Pripravený z medziproduktu 21 pomocou metódy cykloadície uvedenej pri medziprodukte 23.
'H NMR (400 MHz, CDC13) δ: 7,49-7,23 (m, 15H); 7,09 (d, IH); 6,94 (dd, IH); 6,80 (d, IH); 5,49 (dd,
IH); 5,17 (s, 2H); 4,66 (t, IH); 4,19 (dd, IH); 4,09 (t, IH); 3,87 (s, 3H); 3,68 (q, 2H); 3,51 (d, IH); 2,85-2,79 (m, 2H); 2,69 (dd, IH); 0,99 (s, 3H).
Medziprodukt 53 (3S,4S)-4-(4-Metoxy-3(fenylmetoxy)fenyl]-3-metyl)_l-benzylpyrolidín-3-karbaldehyd
Pripravený z medziproduktu 52 pomocou metódy redukcie/oxidácie uvedenej pri medziprodukte 47.
‘H NMR (400 MHz, CDC13) δ: 9,56 (s, IH); 7,43-7,22 (m, 10H); 6,79 (d, IH); 6,77 (d, IH); 6,71 (dd,
IH); 5,14 (dd, 2H); 3,86 (s, 3H); 3,71 (d, IH); 3,62 (d, IH); 3,57 (d, IH); 3,13-3,08 (m, 2H); 2,73 (dd, IH); 2,30 (d, lH);0,58(s, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitívny): m/z 416,3 (m+1).
Medziprodukt 54
3-[l-Benzyl-4-S-(3-terc-butoxy—4-metoxyfenyl)-3-S-metylpyrolidín-3-karbonyl]-4-R-fenyloxazolidin-2-ón
Do miešaného roztoku medziproduktu 22 (39,8 gm; 97 mmol) v CHC13 (292 ml) pri 0 °C v dusíkovom prostredí sa pridal N-(metoxymetyl)-N-(trimetylsilylmetyl)benzylamín (49,5 ml; 194 mmol) a následne kyselina TFA (IM v CHC13, 9,7 ml; 9,7 mmol). Suspenzia sa cez noc nechala ohriať na laboratórnu teplotu. TLC v 2/3 EtOAc/hexáne indikovala čiastočnú konverziu východiskového materiálu na produkt s mierne vyšším Rf. Do výsledného roztoku sa pridalo viac N-(metoxymetyl)-N-(trimetylsilylmetyl)benzylamínu (25 ml; 97 mmol), aby sa spotreboval zvyšok východiskového materiálu. Po 3 hodinách pri laboratórnej teplote TLC naznačovala ukončenie reakcie. Roztok sa pomocou rotačnej odparky skoncentroval, potom sa znovu rozpustil v EtOAc (500 ml). Organické látky sa premyli v 2N HCI (2 x 500 ml), IN NaOH (2 x 500 ml) a nasýteným NaCl (1 x 500 ml). Organické látky sa vysušili (MgSO4), prefiltrovali a skoncentrovali vo vákuu za vzniku medziproduktu 54 v približnom pomere diastereomérov 12:1. Chromatografiou na stĺpci 110 mm x 8 s 1/3 EtOAc/hexán vznikol po koncentrácii vo vákuu zo zozbieraných frakcií medziprodukt 54 (40 gm; 76 %) vo forme žltej peny.
H NMR (400 MHz, CDC13) δ: 7,42-7,20, (m, 10H); 7,11 (s, 1H); 7,05 (d, 1H); 6,76 (d, 1H); 5,53 (dd, 1H); 4,65 (dd, 1H); 4,20 (dd, 1H); 4,08 (dd, 1H); 3,77 (s, 3H); 3,65 (dd, 2H); 3,51 (d, 1H); 2,82 (dd, 1H); 2,81 (d, 1H); 2,71 (dd, 1H); 1,34 (s, 9H); 1,06 (s, 3H).
Medziprodukt 55 (3R)-4-[3-(terc-Butoxy)-4-metoxyfenyl)]-3-metyl-l-benzylpyrolidín-3-karbaldehyd
Do miešaného roztoku medziproduktu 54 (21,5 gm; 39,7 mmol) v toluéne (400 ml) pri teplote -78 °C v dusíkovom prostredí sa počas 10 minút injekčnou striekačkou po kvapkách pridával lítiumalumíniumhydrid (IM v THF, 24 ml; 24 mmol). Po 15 minútach TLC v 4/1 CH2CI2/Et2O ukázal úplné spotrebovanie východiskového materiálu a prítomnosť nižšieho Rf materiálu. Injekčnou striekačkou sa opatrne pridal metanol (4 ml) v toluéne (40 ml) pri teplote -78 °C so sprievodným uvoľňovaním plynu. Keď uvoľňovanie plynu prestalo, reakčná zmes sa nechala zahriať na laboratórnu teplotu a potom sa postupne pridala voda (1 ml), 3N NaOH (2 ml) a voda (1 ml). Po desiatich minútach sa reakčná zmes zriedila v Et2O (300 ml) a miešala počas 15 minút. Pridal sa síran horečnatý a zmes sa prefiltrovala cez GF/F filtračný papier s Et2O. Surový produkt sa skoncentroval vo vákuu a podľa ’H NMR sa ukázalo, že bol dosiahnutý približne pomer zmesi 4 : 1 požadovaného aldehydu oproti redukovanému alkoholu. Surový produkt sa rozpustil v CH2C12 (40 ml). Oxalylchlorid (2M v CH2CI2, 11,2 ml; 22,4 mmol) sa oddelene miešal pri teplote -60 °C v dusíkovom prostredí a injekčnou striekačkou sa po kvapkách pridával DMSO (3,1 ml; 44 mmol) v CH2C12 (15 ml). Po piatich minútach sa do roztoku oxalylchloridu/DMSO kanylou pridal roztok zmesi aldehyd/alkohol. Reakčná zmes sa miešala pri teplote -60 °C počas 45 minút, potom sa pridal Et3N (13,8 ml; 100 mmol) a reakčná zmes sa nechala zahriať na laboratórnu teplotu. Roztok sa zriedil CH2C12 do 200 ml a premyl vodou (1 x 200 ml), 2N HCI (2 x 200 ml), nasýteným NaHCO3 (2 x 200 ml) a nasýteným NaCl (1 x 200 ml). Organické vrstvy sa vysušili (MgSO4), prefiltrovali a skoncentrovali vo vákuu za vzniku žltého oleja, ktorý sa rozpustil v zmesi 3/1 hexán/EtOAc. Po rozpustení sa vyzrážal rozštiepený fenyl oxazolidinón a odstránil sa filtráciou. Filtrát sa podrobil chromatografii v 70 mm x 8 stĺpci s 3/1 hexán/EtOAc za vzniku (po koncentrácii frakcií obsahujúcich produkt vo vákuu) čistého medziproduktu 55 vo forme žltého oleja (13,7 g; 90 %).
‘H NMR (400 MHz, CDC13) δ: 9,62 (s, 1H); 7,37-7,22 (m, 5H); 6,92 (s, 1H); 6,84 (d, 1H); 6,79 (d, 1H); 3,79 (s, 3H); 3,71 (dd, 2H); 3,62 (dd, 1H); 3,17 (dd, 1H); 2,80 (dd, 1H); 2,38 (d, 1H); 1,35 (s, 9H); 0,73 (s, 3H).
Medziprodukt 56 (lR)-l-[(3S,4S)-4-(3-Cyklopentyloxy-4-metoxyfenyl)-3-metyl-l-benzylpyrolidin-3-yl]etan-l-ol Metóda Grignardovej adície
Do vychladeného (0 °C) miešaného roztoku medziproduktu 47 (0,96 mg; 2,45 mmol) v suchom Et2O (10 ml) sa injekčnou striekačkou pridal roztok metylmagnéziumjodidu (alebo iného Grignardovho reakčného činidla) v éteri (2,45 ml 3,0 M; 7,35 mmol; 3 ekv.) v dusíkovom prostredí. Po 15 minútovom miešaní pri teplote 0 °C sa reakčná zmes nechala ohriať na laboratórnu teplotu a miešala sa počas 2 hodín. Reakčná zmes sa potom opatrne ochladila nasýteným vodným NH4C1 (40 ml) a extrahovala pomocou EtOAc (3 x 50 ml). Kombinované organické vrstvy sa premyli soľným roztokom, vysušili (Na2SO4), prefiltrovali a skoncentrovali vo vákuu za vzniku 990 mg oranžového oleja. Prečistením flash chromatografiou na silikagéli (CH2C12 k 5 % metanolu v CH2C12) vznikol menejpolárny diastereomér (419 mg; 42 %) a viac polárny diastereomér (375 mg; 37 %) vo forme bezfarebných viskóznych olejov.
Menej polárny diastereomér:
(lS)-l-[(3S,4S)-4-(3-cyklopentyloxy-A— metoxyfenyl)-3-metyl-l-benzylpyrolidin-3-yl]etan-l-ol 'H NMR (400 MHz, CDC13) δ: 7,34-7,28 (c, 5H); 6,79-6,73 (c, 3H); 4,74 (m, 1H); 3,82 (s, 3H); 3,74 (q, 1H); 3,65 (q, 2H); 3,53 (t, 1H); 3,40 (t, 1H); 2,99 (d, 1H); 2,50 (t, 1H); 2,35 (d, 1H); 1,94-1,81 (c, 6H); 1,63-1,59 (c, 2H); 1,10 (d, 3H); 0,52 (s, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitívny): Da/e 410,3 (m+1).
Viac polárny diastereomér:
(lR)-l-[(3S,4S)-4-(3-cyklopentyloxy-4-metoxyfenyl)-3-metyl-l-benzylpyrolidin-3-yl]etan-l-ol ‘H NMR (400 MHz, CDC13) δ: 7,33-7,31, (c, 5H); 6,79-6,72 (c, 3H); 4,74 (m, 1H); 3,82 (s, 3H); 3,69-3,56 (c, 4H); 3,29 (t, 1H); 3,10 (d, 1H); 2,56 (t, 1H); 2,09 (d, 1H); 2,04 (s, 3H); 1,92-1,81 (c, 6H); 1,62-1,59 (c, 2H); 1,13 (d, 3H); 0,47 (s, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitívny): Da/e 410,3 (m+1).
Medziprodukt 57 (lS)-l-{(3S,4S)-4-[4-Metoxy-3-(fenylmetoxy)fenyl]-3-metyl-l-benzylpyrolidin-3-yl}etan-l-oI
Menej polárny diastereomér. Pripravený z medziproduktu 53 pomocou Grignardovej metódy uvedenej pri medziprodukte 56.
'H NMR (400 MHz, CDC13) δ: 7,44-7,22 (m, 10H); 6,80 (d, 1H); 6,75 (dd, 1H); 6,67 (d, 1H); 5,17 (s, 2H); 3,88 (s, 3H); 3,66 (q, 1H); 3,60 (d, 2H); 3,43 (t, 1H); 2,92 (d, 1H); 2,38 (t, 1H); 2,22 (d, 1H); 0,98 (d, 3H); 0,32 (s, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitívny): m/z 432,5 (m+1).
</
Ph'
Medziprodukt 58 (lR.)-l-{(3S,4S)-4-[4-Metoxy-3-(fenyImetoxy)fenyl]-3-metyl-l-benzylpyrolidin-3-yl}etan-l-ol
Viac polárny požadovaný diastereomér. Pripravený z medziproduktu 53 pomocou Grignardovej metódy uvedenej pri medziprodukte 56.
H NMR (400 MHz, CDC13) δ: 7,43-7,21 (m, 10H); 6,79 (d, 1H); 6,75-6,70 (m, 2H); 5,16 (dd, 2H); 3,87 (s, 3H); 3,64-3,49 (m, 4H); 3,23 (t, 1H); 3,06 (d, 1H); 2,46 (t, 1H); 1,99 (d, 1H); 1,07 (d, 3H); 0,28 (s, 3H). LRMS (Elektrosprej, pozitívny): m/z 432,5 (m+1).
Medziprodukt 59 l-R-[l-Benzyl-4-S-(3-terc-butoxy-4-metoxyfenyl)-3-S-metylpyrolidin-3-yl]etanol
Do miešaného roztoku trimetylalumínia (2M v toluéne, 59,4 ml; 119 mmol) sa pri teplote 0 °C v dusíkovom prostredí pridal jodid metylmagnézia (3M v Et2O, 36 ml; 108 mmol). Po 30 minútach sa pri 0° C v dusíkovom prostredí pridal organometalický roztok kanyláciou do roztoku medziproduktu 55 (13,7 gm, 36 mmol) v CH2C12 (360 ml) pri teplote -78 °C. Po úplnom dodaní sa reakčná zmes miešala pri teplote -78 °C počas 6 hodín. Reakčná zmes sa potom ohriala na 0 °C a opatrne sa naliala do ľadovo studeného IM vínanu draselno-sodného (Seignettovej soli) (1500 ml) za prudkého miešania a rozriedila sa s EtOAc (1500 ml). Po 15 minútovom miešaní sa vrstvy oddelili a organické látky sa premyli IM vínanu draselno-sodného (1 x 1000 ml) a nasýteným NaCl (1 xl 000 ml). Organické látky sa vysušili (MgSO4), prefiltrovali a skoncentrovali vo vákuu za vzniku zmesi 2,5 : 1 diastereomérov a približne 10 % zvyšného počiatočného aldehydu stanovené ‘H NMR. Surový produkt sa vyčistil chromatografiou na stĺpci 110 mm x 8 s 3/7/0,4 EtOAc/hexán/MeOH, z ktorej po zozbieraní frakcií obsahujúcich požadovaný nižší Rf diastereomér a skoncentrovaní vo vákuu vznikol medziprodukt 59 (8,1 gm; 57 %) vo forme oranžového oleja.
Ή NMR (CDC13, 400 MHz) δ: 7,34-7,23 (m, 5H); 6,86 (m, 3H); 6,79 (d, 1H); 3,79 (s, 3H); 3,65 (dd, 1H); 3,62 (s, 2H); 3,58 (dd, 1H); 3,29 (dd, 1H); 3,10 (d, 1H); 2,53 (dd, 1H); 2,07 (d, 1H); 1,35 (s, 9H); 1,12 (d, 3H); 0,45 (s, 3H).
Medziprodukt 60
Etylester kyseliny 3-(3-cyklopropylmetoxy^4-metoxyfenyl)-2-metyl-E-akrylovej
Banka s guľatým dnom sa naplnila s THF (850 ml) a trietyl 2-fosfono-propionátom (97,2 g; 0,408 mólu) a výsledná zmes sa ochladila na 0 °C. Potom sa po kvapkách pridal hexametyldisilazid lítny (1,0 M v THF, 489 ml; 0,489 mólu). Zmes sa miešala pri 0 °C počas 30 minút, potom sa pridal roztok medziproduktu 1 (70 g; 0,34 mólu) v THF (100 ml). Po pridaní po kvapkách sa reakčná zmes udržiavala pri teplote 22 °C počas 62 hodín. Reakčná zmes sa potom ochladila nasýteným NaCl a zriedila s EtOAc. Po separácii sa organická vrstva premyla nasýteným NaCl, vysušila pomocou Na2SO4 a skoncentrovala vo vákuu. Zelený olej sa chromatograficky prečistil cez vrstvu SiO2 (650 g) použitím zmesi EtOAc/hexán (1 : 10) ako rozpúšťadlo na vylúhovanie (40,8 g).
‘H NMR (400 MHz, CDC13) δ: 7,67-7,61 (m, 1H); 7,07-7,02 (m, 1H); 6,98-6,95 (m, 1H); 6,92-6,89 (m, 1H); 4,32-4,25 (m, 2H); 3,92 (s, 3H); 3,90-3,85 (m, 2H); 2,15 (s, 3H); 1,38-1,32 (m, 4H); 0,70-0,63 (m, 2H); 0,41-0,37 (m, 2H).
Medziprodukt 61
Kyselina 3-(3-cyklopropylmetoxy-A-metoxyfenyl)-2-metyl-E-akrylová
Medziprodukt 60 (26,9 g; 93 mmol) sa rozpustil v 1,4-dioxáne (95 ml) a pridal sa roztok LiOH monohydrátu (4,6 g; 111 mmol) rozpustený vo vode (95 ml). Výsledný roztok sa zohrieval pri teplote 80 °C počas 3 hodín a potom sa cez noc miešal pri laboratórnej teplote. Reakčná zmes sa naliala do vody (350 ml) a dvakrát extrahovala s Et2O (spolu 500 ml). Vodná vrstva sa zriedila s EtOAc (350 ml) a pH sa upravilo skoncentrovanou H3PO4 (24 ml). Vrstvy sa oddelili. Vrstva EtOAc sa premyla vodou a nasýteným NaCl, vysušila nad MgSO4 a skoncentrovala vo vákuu (20,4 g).
'H NMR (400 MHz, CDC13) δ: 7,77 (s, 1H); 7,11-7,07 (dd, 1H); 7,02-6,98 (d, 1H); 6,93-6,90 (d, 1H); 3,93 (s, 3H); 3,86 (d, 2H); 2,18 (s, 3H); 1,39-1,31 (m, 1H); 0,69-0,63 (m, 2H); 0,39-0,35 (m, 2H).
Medziprodukt 62
3-(3-Cyklopropylmetoxy-^t-metoxyfenyl)-2-metyl-E-akryloylchlorid
Medziprodukt 61 (55,8 g, 0,213 mólu) sa rozpustil v CH2C12 (300 ml) a ochladil na 0 °C pripojenou vysušovacou trubicou. Po pridaní oxalylchloridu (2,0 M v CH2C12, 117 ml; 0,234 mólu) nasledovalo pridanie DMF (1,0 ml). Reakčná zmes sa počas niekoľkých hodín udržiavala na teplote 22 °C. Zmes sa rozriedila CH2C12 a premyla vodou, nasýteným NaCl a potom vysušila pomocou Na2SO4 a skoncentrovala vo vákuu (65,1 g žltej tuhej látky).
'H NMR (400 MHz, CDC13) δ: 7,97 (s, 1H); 7,16-7,11 (dd, 1H); 7,03-7,00 (d, 1H); 6,95-6,91 (dd, 1H); 3,93 (s, 3H); 3,87 (d, 2H); 2,23 (s, 3H); 1,39-1,31 (m, 1H); 0,69-0,64 (m, 2H); 0,40-0,37 (m, 2H).
Medziprodukt 63
3-[3-(3-Cyklopropylmetoxy-4-metoxyfenyl)-2-metyl-E-akryloyl]^l-(R)-fenyloxazolidin-2-ón
4-(R)-Fenyloxazolidín-2-ón (33,0 g; 0,202 mól) sa rozpustil v THF (1 1) a ochladil na -78 °C. Pridal sa n-butyl lítium (2,5 M v hexánoch, 79,5 ml; 0,198 mólu) a výsledná reakčná zmes sa miešala počas 20 minút Roztok medziproduktu 62 (65,1 g; 0,213 mólu) v THF (200 ml) sa pridával po kvapkách počas 15 minút. Reakčná zmes sa miešala pri teplote -78 °C počas 1 hodiny, potom sa pomaly ohriala na 0 °C. Reakčná zmes zhustla vznikom béžových pevných častíc. Zmes sa pri teplote 0 °C neutralizovala nasýteným NH4C1 (600 ml) a vodou (300 ml). Roztok sa rýchlo zohrial na 22 °C a nalial do CHC13 (2400 ml). Po pretrepaní a separácii sa organická vrstva premyla vodou (1 1), nasýteným NaCl (1 1), vysušila pomocou Na2SO4 a skoncentrovala vo vákuu za vzniku bledooranžovej tuhej látky (94,9 g).
'H NMR (400 MHz, CDC13) δ: 7,41-7,32 (m, 5H); 7,07-6,98 (m, 2H); 6,95-6,93 (d, 1H); 6,90-6,86 (d, 1H); 5,55-5,51 (dd, 1H); 4,77-4,71 (dd, 1H); 4,30-4,26 (dd, 1H); 3,91 (s, 3H); 3,85 (d, 2H); 2,17 (s, 3H); 1,38-1,29 (m, 1H); 0,66-0,62 (m, 2H); 0,39-0,34 (m, 2H).
Medziprodukt 64
3-[l-Benzyl-4-(S)-(3-cyklopropylmetoxy-4-metoxyfenyl)-3-(S)-metylpyrolidín-3-karbonyl]^t-(R)-fenyloxazolidin-2-ón
Medziprodukt 63 (94,4 g; 0,21 mólu) sa rozpustil v CHC13 (640 ml) a potom sa ochladil na 0 °C. Pridal sa benzyl metoxymetyltrimetylsilanylmetylamín (95 g; 0,40 mólu) a reakčná zmes sa po kvapkách podrobila chemickému pôsobeniu roztoku TFA (3,08 ml) v CHC13 (40 ml). Reakčná zmes sa počas noci miešala a zohriala na teplotu 22 °C. Pridal sa ďalší benzyl metoxymetyltrimetylsilanylmetylamín (71,2 g; 0,30 mólu) a potom sa zmes premiešavala ďalších 68 hodín. Reakčná zmes sa ochladila nasýteným NH4C1 (600 ml) a separovala sa. Organická vrstva sa dvakrát premyla s IN HCI (500 ml), raz vodou, raz IN NaOH (500 ml), raz vodou, raz 6 % NaHCO3, raz nasýteným NaCl, vysušila sa pomocou Na2SO4 a skoncentrovala vo vákuu. Surový produkt bol podrobený chromatografii na SiO2 (1,2 kg) v dvoch častiach použitím zmesi hexány/EtOAc (2:1) eluent (62,3 g).
‘H NMR (400 MHz, CDC13) δ: 7,44-7,20 (m, 10H); 7,07 (d, 1H); 6,94-6,91 (dd, 1H); 6,78-6,76 (d, 1H); 5,56-5,50 (dd, 1H); 4,69-4,63 (dd, 1H); 4,21-4,16 (dd, 1H); 3,83-3,80 (m, 2H); 3,82 (s, 3H); 3,74-3,70 (d, 1H); 3,64-3,59 (d, 1H); 3,50-3,46 (d, 1H); 2,90-2,86 (d, 1H); 2,83-2,71 (m, 2H); 1,36-1,29 (m, 1H); 0,64-0,60 (m, 2H); 0,38-0,32 (m, 2H).
Medziprodukt 65 l-Benzyl-4-(S)-(3-cyklopropylmetoxy-4-metoxyfenyl)-3-(S)-metylpyrolidín-3-karbaldehyd
Medziprodukt 64 (62,3 g; 0,115 mólu) sa rozpustil v toluéne (1 1) a potom ochladil na-78 °C. Do roztoku sa pomaly pridával lítiumalumíniumhydrid (1,0 M v THF, 69 ml; 69 mmol). Reakčná zmes sa miešala 0,557
-hodiny a potom sa ochladila na teplotu -78 °C pridaním MeOH (13 ml) po kvapkách. Reakčná zmes sa miešala pri teplote -78 °C počas 5 minút, ohriala sa na 0 °C, nasledovalo pridanie vody (2,62 ml), 15 % NaOH (2,62 ml) a vody (7,85 ml). Roztok sa miešal 10 minút, pridal sa Et2O (1,5 1) a výsledná zmes sa v noci miešala pri teplote 22 °C. Pridal sa síran horečnatý a po 15 minútovom miešaní sa roztok prefiltroval cez MgSO4 a skoncentroval vo vákuu. NMR ukázalo, že výsledkami tejto reakcie bola zmes požadovaného aldehydu a primárneho alkoholu (približne 4 : 1). Táto látka sa použila bez ďalšieho čistenia pri uvedenej Swernovej oxidácii. Do CH2C12 (75 ml) sa pridal oxalylchlorid (2,0 M v CH2C12, 25 ml; 50 mmol) a ochladil sa na -60 °C. Po kvapkách sa pridal dimetylsulfoxid (7,1 ml; 100 mmol) ako roztok v CH2C12 (30 ml). Po 5 minútach sa po kvapkách pridal roztok zmesi aldehyd/alkohol (4:1, cca 0,115 mólu, (cca 0,05 mólu alkoholu)) rozpusteného v CH2C12. Zmes sa miešala počas 30 minút, pridal sa Et3N (31 ml, 222 mmol) a roztok sa zohrial na teplotu 22 °C a v noci sa premiešaval. Reakčná zmes sa ochladila vodou a počas 20 minút prudko miešala, potom sa separovala. Vodná vrstva sa premyla CH2C12. Spojené organické vrstvy sa premyli nasýteným NaCl, vysušili pomocou Na2SO4 a skoncentrovali vo vákuu. Medziprodukt 65 sa prečistil filtračnou chromatografiou použitím zmesi hexány/EtOAc (4:1) ako eluentu (42 g).
'H NMR (400 MHz, CDCb) δ: 9,64 (s, 1H); 7,39-7,23 (m, 5H); 6,81-6,71 (m, 3H); 3,83 (s, 3H); 3,83-3,81 (m, 2H); 3,80-3,75 (d, 1H); 3,67-3,61 (m, 2H); 3,19-3,11 (m, 2H); 2,86-2,81 (m, 1H); 2,43-2,40 (m, 1H); 1,38-1,29 (m, 1H); 0,76 (s, 3H); 0,68-0,62 (m, 2H); 0,30-0,37 (m, 2H).
Medziprodukt 66 l-[l-Benzyl-4-(S)-(3-cyklopropylmetoxy^4-metoxyfenyl)-3-(S)-metylpyrolidin-3-yl]etanol
Trimetylalumínium (2,0 M v toluéne, 2,1 ml; 4,2 mmol) sa ochladil na 0 °C a po kvapkách sa pridal jodid metylmagnézia (3,0 M v etyléteri, 1,3 ml; 3,95 mmol). Táto sivá suspenzia sa miešala pri teplote 0 °C počas 30 minút, potom sa kanylou pridala do roztoku medziproduktu 65 (0,5 g; 1,3 mmol) rozpusteného v CH2C12 (6,6 ml), ktorý sa ochladil na -78 °C. Reakčná zmes sa miešala počas 6 hodín pri teplote -78 °C. Zmes sa potom priamo naliala do separačného lievika obsahujúceho Rochelleovu soľ (IM, 150 ml). Zvyšok sa vypláchol do lievika s EtOAc. Zmes sa zriedila s EtOAc a separovala. Organická vrstva bola druhýkrát premytá Rochelleovou soľou a následne nasýteným NaCl, vysušená pomocou MgSO4 a skoncentrovaná vo vákuu. Surový produkt bol zmesou (1:1) dvoch diastereomérických alkoholov a malého množstva aldehydu. Tieto látky sa oddelili chromatografiou na SiO4 s EtOAc/hexány (1 : 1).
Požadovaný viacpolárny karbinol:
'H NMR (400 MHz, CDC13) δ: 7,36-7,30 (m, 3H); 7,28-7,24 (m, 2H); 6,81-6,74 (m, 3H); 3,85 (s, 3H); 3,84-3,79 (m, 2H); 3,71-3,56 (m, 4H); 3,33-3,25 (dd, 1H); 3,12-3,09 (d, 1H); 2,59-2,53 (dd, 1H); 2,16-2,08 (d, 1H); 1,38-1,25 (m, 1H); 1,16 (d, 3H); 0,69-0,61 (m, 2H); 0,49 (s, 3H); 0,39-0,35 (m, 2H).
Medziprodukt 67 (1R)-1-{(3S,4S)N- [3-(Cyklopropylmetoxy)—4-metoxyfenyl]-3-metylpyrolidin-3-yl}etan-l-ol Pripravený z medziproduktu 66 pomocou debenzylačnej metódy uvedenej pri medziprodukte 31.
*H NMR (400 MHz, CDC13) δ: 6,88-6,71 (m, 3H); 3,92-3,56 (c, 11H); 3,14-3,05 (m, 1H); 1,37-1,25 (m,
1H); 1,20 (d, 2H); 0,72 (s, 3H); 0,63 (d, 2H); 0,37 (d, 2H).
LRMS (Elektrosprej, pozitívny): Da/e 306,2 (m+1).
Medziprodukt 68 (lR)-l-[(3S,4S)-4-[3-(Cyklopentyloxy)^l-metoxyfenyl]-3-metylpyrolidin-3-yl]etan-l-ol 5 Pripravený z izoméru 1-(R) karbinolu (viac polárneho diastereoméru) medziproduktu 56 pomocou debenzylačnej metódy uvedenej pri medziprodukte 31.
'H NMR (400 MHz, CDC13) δ; 6,81 (d, 1H); 6,75-6,73 (m, 2H); 4,80 (c, 1H); 3,82 (s, 3H); 3,79-3,68 (m, 5H); 3,61 (t, 1H); 3,10 (d, 1H); 1,96-1,80 (m, 6H); 1,63-1,57 (m, 2H); 1,21 (d, 3H); 0,72 (s, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitívny): Da/e 320,4 (m+l).
Medziprodukt 69 (lS)-l-[(3S,4S)-4-[3-(Cyklopentyloxy)<l—metoxyfenyl]-3-metylpyrolidin-3-yl]etan-l-ol 15 Pripravený z izoméru 1—(S) karbinolu (menej polárneho diastereoméru) medziproduktu 56 pomocou debenzylačnej metódy uvedenej pri medziprodukte 31.
LRMS (Elektrosprej, pozitívny): Da/e 320,4 (m+l).
Medziprodukt 70
5-[4-((lR)-l-Hydroxyetyl) (3S,4S)-4-metylpyrolidin-3-yl]-2-metoxyfenol
Pripravený z medziproduktu 58 pomocou debenzylačnej metódy uvedenej pri medziprodukte 31 (namiesto paládiumacetátu sa použilo 10 % paládium na uhlí).
'H NMR (400 MHz, CDC13) δ: 6,72 (d, 1H); 6,67 (d, 1H); 6,59 (dd, 1H); 3,80 (s, 3H); 3,60 (qd, 1H);
3,29-3,17 (m, 6H); 3,10 (t, 1H); 2,55 (d, 1H); 1,06 (d, 3H); 0,56 (s, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitívny): m/z 252,1 (m+l).
Medziprodukt 71
1-R-[1-Benzyl^t-S—(3-terc-butoxy-4-metoxyfenyl)-3-S-metylpyrolidin-3-yl]-etanol
Do miešaného roztoku trimetylalumínia (2M v toluéne, 59,4 ml; 119 mmol) sa pri 0 °C v dusíkovom prostredí pridal jodid metylmagnézia (3M v Et2O, 36 ml; 108 mmol). Po 30 minútach a pri teplote 0 °C sa organometalický roztok pridal kanylou do roztoku medziproduktu 55 (13,7 gm; 36 mmol) v CH2C12 (360 ml) pri teplote -78 °C v dusíkovom prostredí. Po skončení pridávania sa reakčný roztok miešal pri teplote -78 °C počas 6 hodín. Reakčná zmes sa potom zohriala na 0 °C a opatrne naliala do 1M ľadového vínanu sodnodraselného (1500 ml) za rýchleho miešania a zriedila sa s EtOAc (1500 ml). Po 15 minútovom miešaní sa vrstvy oddelili a organické vrstvy sa premyli IM vínanu sodno-draselného (1 x 1000 ml) a nasýteným NaCl (1 x 1000 ml). Organické vrstvy sa vysušili (MgSO4), prefiltrovali a skoncentrovali vo vákuu za vzniku zmesi 2,5 : 1 diastereomérov a približne 10 % zvyškových východiskových aldehydov podľa *H NMR. Surový produkt bol podrobený chromatografii na stĺpci 110 mm x 8 s 3/7/0,4 EtOAc/hexán/MeOH, z ktorej po zozbieraní frakcií obsahujúcich požadovaný nižší Rf diastereomér a skoncentrovaní vo vákuu vznikol medziprodukt 71 (8,1 gm; 57 %) vo forme oranžového oleja.
‘H NMR (400 MHz, CDCfi) δ: 7,34-7,23 (m, 5H); 6,86 (m, 3H); 6,79 (d, 1H); 3,79 (s, 3H); 3,65 (dd, 1H); 3,62 (s, 2H); 3,58 (dd, 1H); 3,29 (dd, 1H); 3,10 (d, 1H); 2,53 (dd, 1H); 2,07 (d, 1H); 1,35 (s, 9H); 1,12 (d, 3H); 0,45 (s, 3H).
Medziprodukt 72
5-[(4R)-4-((lS)-l-Hydroxyetyl)-4-metyl)-l-benzylpyrolidin-3-yl]-2-metoxyfenol
Do miešaného roztoku medziproduktu 71 (2,3 gm; 5,8 mmol) v CH2C12 (18 ml) pri 0 °C pod vysušovacou trubicou sa pridala kyselina trifluóroctová (2,7 ml; 35 mmol). Odstránil sa chladiaci kúpeľ a reakčná zmes sa nechala zahriať na laboratórnu teplotu, potom sa miešala počas 3,5-hodín. Reakčná zmes sa pomocou rotačnej odparky skoncentrovala, aby sa odstránila prebytočná kyselina trifluóroctová, potom sa opäť rozpustila v CH2C12 (50 ml), potom premyla v 10 % Na2CO3 (2 x 50 ml) a s nasýteným NaCl (1 x 50 ml). Organické vrstvy sa vysušili (MgSO4), prefiltrovali a skoncentrovali vo vákuu za vzniku medziproduktu 72 vo forme bielej peny (1,9 gm; 96 %).
‘H NMR (400 MHz, CDCfi) δ: 7,36-7,20 (m, 5H); 6,82 (s, 1H); 6,77 (d, 1H); 6,66 (d, 1H); 5,57 (s, 1H); 3,83 (s, 3H); 3,70-3,56 (m, 4H); 3,30 (dd, 1H); 3,13 (d, 1H); 2,55 (dd, 1H); 2,04 (d, 1H); 1,12 (d, 3H); 0,45 (s, 3H).
Medziprodukt 73 (lR)-l-{(3R)-4-[3-(terc-Butoxy)-4-metoxyfenyl]-3-metylpyrolidin-3-yl}-etan-l-ol
Pripravený z medziproduktu 71(1 gm; 2,53 mmol) pomocou debenzylačnej metódy uvedenej pri medziprodukte 31 za vzniku 775 mg medziproduktu 73.
'H NMR (400 MHz, CDCfi) δ: 6,92-6,76 (m, 3H); 3,78 (s, 3H); 3,51-3,42 (m, 4H); 3,29 (dd, 1H); 2,77 (d, 1H); 1,35 (s, 9H); 1,17 (d, 3H); 0,62 (s, 3H).
/
Medziprodukt 74
R*=H
Metyl 3-((1 R)-l-hydroxyetyl) (3S,4S)-4-(3-hydroxy-4-metoxyfenyl)-3-metyl-pyrolidínkarboxylát Metóda acylácie sprostredkovanej Hunigovou bázou
Do vychladeného (0 °C) miešaného roztoku medziproduktu 70 (670 mg; 2,67 mmol) a Hunigovej bázy (1,4 ml; 8,0 mmol) v suchom CH2C12 (10 ml), 1,4-dioxáne (5 ml) a MeOH (1 ml) sa v dusíkovom prostredí injekčnou striekačkou pridal metylchlórmravčan (0,41 ml; 5,3 mmol). Výsledný roztok sa miešal pri teplote 0 °C počas 1 hodiny, potom sa rozriedil CH2C12 (90 ml), postupne premyl IN vodného HCI (2 x 20 ml) a soľným roztokom (20 ml), vysušil (Na2SO4), prefiltroval a skoncentroval vo vákuu. Zvyšok (737 mg) sa rozpustil v THF (3 ml) a vode (2 ml), potom sa vystavil pôsobeniu roztoku LiOH (112 mg; 2,67 mmol v 2 ml vody) pri laboratórnej teplote. Po 4 hodinovom miešaní sa reakčná zmes zriedila s EtOAc (100 ml) a následne premyla s IN vodného HCI (2 x 50 ml), nasýteným vodným NaHCO3 (30 ml) a soľným roztokom (30 ml), potom sa vysušila (Na2SO4), prefiltrovala a skoncentrovala vo vákuu. Zvyšok sa prečistil radiálnou chromatografiou (4mm doštička s 3 % MeOH v CH2C12 za vzniku medziproduktu 74 vo forme svetlohnedej peny (250 mg; 30 %).
'H NMR (400 MHz, CDC13, zmes rotamérov) δ: 6,84 (d, IH); 6,78 (d, IH); 6,72 (dd, IH); 5,57 (d, IH); 3,90-3,54 (m, IH); 3,30 (d, 0,5H); 3,20 (d, 0,5H); 1,35 (br d, IH); 1,14 (t, 3H); 0,75 (s, 3H).
LRMS (elektrosprej, negatívny): m/z 308,6 (m-1).
LRMS (elektrosprej, pozitívny): m/z 310,5 (m-1).
Medziprodukt 75
Z medziproduktu 57 pomocou debenzylačnej metódy uvedenej pri medziprodukte 31 a metódy acylácie sprostredkovanej Hunigovou bázou, ktorá je uvedená pri medziprodukte 74.
LRMS (elektrosprej, negatívny): m/z 308,6 (m-1).
LRMS (elektrosprej, pozitívny): m/z 310,5 (m-1).
HOjC
Medziprodukt 76
Kyselina (2R)-2-hydroxyhexánová
Do vychladeného (0 °C) miešaného roztoku D-norleucínu (500 mg; 3,81 mmol) v 10 ml IN vodnej kyseliny sírovej sa po kvapkách pridával dusitan sodný (421 mg; 6,10 mmol) v 3 ml vody počas 20 minút. Reakčná zmes sa potom nechala pomaly zahriať na laboratórnu teplotu počas 16 hodín. Zmes sa potom extrahovala pomocou EtOAc (2 x 25 ml), vysušila (Na2SO4) a skoncentrovala za vzniku 200 mg (40 %) bielej voskovitej tuhej látky.
H NMR (400 MHz, CDC13>) δ: 4,28 (dd, 1H); 1,92-1,81 (m, 1H); 1,76-1,64 (m, 1H); 1,51-1,29 (m, 4H);
0,92 (t, 3H).
LRMS (elektrosprej, negatívny): Da/e 131,1 (m-1).
HOjC
OAc
Medziprodukt 77 (1 R)-1 -(Chlórkarbony l)penty lacetát
Metóda acylácie, hydrolýzy a tvorby chloridu kyseliny
Do vychladeného (0 °C) roztoku medziproduktu 76 (200 mg; 1,51 mmol) a Hunigovej bázy (657 ml; 3,78 mmol) v CH2C12 (6 ml) sa injekčnou striekačkou pridal acetylchlorid (215 μΐ, 3,03 mmol). Výsledná zmes sa počas 16 hodín nechala pomaly ohriať na laboratórnu teplotu. Reakčná zmes sa potom premyla IN HCI (2 x 20 ml), vysušila (Na2SO4) a skoncentrovala za vzniku oranžovohnedého oleja, ktorý, ako ukázalo NMR, bol bis-acylát. Do tejto látky sa pridalo 5 ml zmesi THF:voda v pomere 4 : 1 a zmes sa pri laboratórnej teplote miešala počas 16 hodín, extrahovala pomocou EtOAc, vysušila (Na2SO4) a skoncentrovala za vzniku 186 mg (71 %) oranžového oleja. NMR a hmotnostná spektroskopia potvrdili, že išlo o acetoxy kyselinu. Do tejto látky sa v 5 ml CH2C12 pridal oxalylchlorid (1,07 ml; 2,14 mmol; 2M roztok v CH2C12) a kvapka DMF. Zmes sa miešala pri laboratórnej teplote počas 4 hodín, potom sa za zníženého tlaku skoncentrovala, čím vznikol medziprodukt 77.
‘H NMR (400 MHz, CDC13,) δ: 5,17 (dd, 1H); 2,18 (s, 3H); 2,04-1,86 (m, 2H); 1,50-1,30 (m, 4H); 0,93 (t, 3H).
Cl
OAc
Medziprodukt 78 (Chlórkarbonyl)(4-fluórpentyl)metylacetát
Pripravený z kyseliny 2-(4-fluórfenyl)-2-hydroxyoctovej pomocou metódy acylácie, hydrolýzy a tvorby chloridu kyseliny uvedenej pri medziprodukte 77.
H NMR (400 MHz, CDCfy) δ: 7,48 (q, 2H); 7,14 (t, 2H); 6,06 (s, 1H); 2,21 (s, 3H).
Cľ
OAc
Medziprodukt 79 (Chlórkarbonyl)cyklopropylacetát
Pripravený z kyseliny 1-hydroxycyklopropánkaboxylovej pomocou metódy acylácie, hydrolýzy a tvorby chloridu kyseliny uvedenej pri medziprodukte 77.
H NMR (400 MHz, CDC13>) δ: 2,13 (s, 3H); 1,89-1,84 (m, 2H); 1,46-1,42 (m, 2H).
Cl
ÔAc
Medziprodukt 80 (1 S)-1 -(Chlórkarbonyl)-2-mety Ibutylacetát
Pripravený z kyseliny (2S)-2-hydroxy-3-metylpentánovej pomocou metódy acylácie, hydrolýzy a tvorby chloridu kyseliny uvedenej pri medziprodukte 77.
'H NMR (400 MHz, CDC13,) δ: 5,01 (d, 1H); 2,24-2,17 (m, 1H); 2,17 (s, 3H); 1,57-1,47 (m, 1H); 1,391,28 (m, 1H); 1,03 (d, 3H); 0,94 (t, 3H).
Medziprodukt 81 (1 S)-1 -(Chlórkarbony l)-3-mety lbuty lacetát
Pripravený z kyseliny (2S)-2-hydroxy-4-metylpentánovej pomocou metódy acylácie, hydrolýzy a tvorby chloridu kyseliny uvedenej pri medziprodukte 77.
'H NMR (400 MHz, CDC13,) δ: 5,12 (d, IH); 2,16 (s, 3H); 1,88-1,75 (m, 3H); 0,97 (dd, 6H)
Medziprodukt 82 (1 R)-1 -(Chlórkarbony l)-2-fenyletylacetát
Pripravený z kyseliny (2R)-2-hydroxy-3-fenylpropánovej pomocou metódy acylácie, hydrolýzy a tvorby chloridu kyseliny uvedenej pri medziprodukte 77.
‘H NMR (400 MHz, CDCfi,) δ: 7,38-7,21 (m, 5H); 5,33 (dd, IH); 3,33 (dd, IH); 3,18 (dd, IH); 2,11 (s, 3H)
Medziprodukt 83 (1 S)-1 -(Chlórkarbonyl)-2-feny letylacetát
Pripravený z kyseliny (2S)-2-hydroxy-3-fenylpropánovej pomocou metódy acylácie, hydrolýzy a tvorby chloridu kyseliny uvedenej pri medziprodukte 77.
‘H NMR (400 MHz, CDCfi,) δ: 7,38-7,21 (m, 5H); 5,33 (dd, IH); 3,33 (dd, IH); 3,18 (dd, IH); 2,11 (s, 3H).
Medziprodukt 84 (4-Chlórfenyl)(hydroxyimino)metylamín
Roztok 4-chlórbenzonitrilu (10 g; 0,073 mólu), hydroxylamínhydrochloridu a NaOH (3,5 g; 0,87 mólu) v etanole (300 ml) a vode (80 ml) bol počas 10 hodín refluxovaný a následne za zníženého tlaku skoncentrovaný. Výsledná belavá tuhá látka sa preniesla do zmesi vody/4 : 1 EtOAc:CH2Cl2. Organické vrstvy sa izolovali, raz sa premyli vo vode, vysušili (Na2SO4) a skoncentrovali za vzniku 10,4 g bielej tuhej látky (84 %).
‘H NMR (DMSO-d6,400 MHz) δ: 9,71 (s, IH); 7,66 (d, 2H); 7,41 (d, 2H); 5,85 (br s, 2H).
Medziprodukt 85 [3-(4-Chlórfenyl)-l,2,4-oxadiazol-5-yl]metylacetát
Do ochladeného (0 °C) roztoku medziproduktu 84 (4,5 g, 0,026 mólu) v suchom pyridíne (20 ml) sa po kvapkách počas jednej hodiny pridával acetoxyacetylchlorid (6 ml, 0,056 mólu). Po ukončení pridávania sa zmes zohriala na 90 °C na tri hodiny, potom sa nechala ochladiť na laboratórnu teplotu. Za zníženého tlaku sa odstránil pyridín a výsledná tmavá olejová látka sa preniesla do CH2C12 a prefíltrovala cez GF/F filtračný papier. Filtrát sa premyl soľným roztokom (2 x 100 ml), vysušil (Na2SO4) a skoncentroval. Pri prečistení metódou Biotage (40M zásobník, 20 % EtOAc/hexán) vzniklo 1,93 g medziproduktu 85 vo forme bielej tuhej látky (29 %).
'H NMR (400 MHz, CDC13.) δ: 8,01 (d, 2H); 7,46 (d, 2H); 5,35 (s, 2H); 2,21 (s, 3H).
Medziprodukt 86 [3-(4-Chlórfenyl)-l,2,4-oxadiazol-5-yl]metan-l-ol
Do roztoku medziproduktu 85 (1 g; 3,96 mmol) v MeOH (50 ml) sa pridal vodný K2CO3 (0,56 M, 7 ml; 3,96 mmol) a zmes sa počas dvoch hodín miešala pri laboratórnej teplote. Rozpúšťadlá sa potom za zníženého tlaku odstránili a zvyšok sa preniesol do EtOAc (75 ml), premyl vo vode (2x75 ml), vysušil (Na2SO4) a skoncentroval na 820 mg (98 %) medziproduktu 86 vo forme bielej tuhej látky.
‘H NMR (400 MHz, CDCI3,) δ: 8,02 (d, 2H); 7,47 (d, 2H); 4,97 (s, 2H); 2,52 (br s, 1H).
Medziprodukt 87 [3-(4-Chlórfenyl)-l,2,4-oxadiazol-5-yl]metyl metylsulfonát
Pripravený pomocou metódy mezylácie uvedenej pri medziprodukte 90.
'H NMR (400 MHz, CDC13,) δ: 8,02 (d, 2H); 7,47 (d, 2H); 5,49 (s, 2H); 3,24 (s, 3H).
Medziprodukt 88 [3-(4-Trifluórmetyl)fenyl]prop-2-in-l-ol
Metóda kuplovania pomocou paládiového katalyzátora
Roztok 4-jódbenzotrifluoridu (5 g; 0,018 mólu), propargyl alkoholu (1,07 ml; 0,018 mólu) jodidu medi (I) 20 (17,5 mg; 0,092 mmol) a chloridu bistrifenylfosfínpaládia (11) (129 mg; 0,184 mmol) v 50 ml dietylamínu sa počas niekoľkých hodín miešal pri laboratórnej teplote. Za zníženého tlaku sa potom odstránil dietylamín a zvyšok sa preniesol do CH2C12 (150 ml). Tento sa premyl s IN HCI (3 x 150 ml), vysušil (Na2SO4) a skoncentroval na 3,1 g medziproduktu 88 vo forme hnedooranžového oleja (84 %).
‘H NMR (400 MHz, CDC13,) δ: 7,55 (q, 4H); 4,52 (d, 2H); 1,74 (br s, 1H).
Medziprodukt 89 3-(4-Fluórfenyl)prop-2-in-l-ol
Pripravený pomocou metódy uvedenej pri medziprodukte 88.
‘H NMR (400 MHz, CDC13,) δ: 7,42 (q, 2H); 7,01 (t, 2H); 1,70 (t, 1H).
Medziprodukt 90
3-Fenylprop-2-inyl-metylsulfonát Mezylačná metóda
Do roztoku 3-fenyl-2-propín-l-olu (100 g; 0,757 mólu) a Et3N (158 ml; 1,13 mólu) v 3 litroch suchého CH2C12 ochladeného na 5 °C sa pridávacím lievikom pridal metánsulfonylchlorid (59 ml; 0,757 mólu), pri40 čom sa vnútorná teplota udržiavala okolo 5 °C (pridávanie bolo ukončené približne po 45 minútach). Po jednej hodine pri teplote 5 °C TLC indikovala, že väčšina východiskovej látky bola spotrebovaná. Pridal sa jeden ml metánsulfonylchloridu a reakčná zmes sa miešala pri 5 °C ďalších 30 minút. TLC indikovala úplné spotrebovanie východiskových látok. Zmes sa potom premyla s IN HCI (3 x 250 ml), vysušila (Na2SO4) a skoncentrovala na 113 g medziproduktu 90 vo forme žltej kvapaliny (71 %).
*H NMR (400 MHz, CDC13,) δ: 7,48-7,45 (m, 2H); 7,39-7,34 (m, 3H); 5,09 (s, 2H); 3,16 (s, 3H).
ΌΜ»
Medziprodukt 91
3-(4-Fluórfenyl)prop-2-inyl metylsulfonát
Pripravený z medziproduktu 89 mezylačnou metódou uvedenou pri medziprodukte 90.
‘H NMR (400 MHz, CDClj,) δ: 7,47-7,44 (q, 2H); 7,04 (t, 2H); 5,07 (s, 2H); 3,15 (s, 3H).
Medziprodukt 92
3-[4-(Trifluórmetyl)fenyl]prop-2-inyl metylsulfonát
Pripravený z medziproduktu 88 mezylačnou metódou uvedenou pri medziprodukte 90. 'H NMR (400 MHz, CDC1,,) δ: 7,62-7,56 (m, 4H); 5,09 (s, 2H); 3,16 (s, 3H).
Príklad 3
Príprava štyroch stereoizomérov z redukcie medziproduktu 36. Borohydrid sodíka (2,0 mmol; 0,075 g) sa pridal do medziproduktu 36 (1,3 mmol; 0,50 g) rozpusteného v 10 ml etanolu. Po 1 hodine bola celá reakčná zmes sušená vo vákuu. Výsledný olej sa trikrát extrahoval s EtOAc z vody, potom sa spojené extrakty premyli soľným roztokom a vysušili pomocou MgSO4. Získala sa zmes dvoch racemátov vo forme oleja.
‘H NMR δ: 6,80 (d, 1H); 6,67 (d, 2H); 4,72 (bd, 1H); 3,86-3,95 (bm, 1H);3,83 (s, 3H); 3,64-3,78 (bm, 1H); 3,74 (s, 3H); 3,33 (dd, 1H); 2,16 (d, 3H); 1,79-1,92 (bm, 4H); 1,59-1,63 (bm, 2H); 1,01 (sd, 3H).
Zmes racemátov sa rozpustila v 50 % acetonitrile a 50 % vody pri koncentrácii 50 mg/ml a prečistila sa po častiach na stĺpci C-18 (250 X 10 mm) použitím zmesi gradient voda/acetonitril/0,5 % TFA. Príslušné frakcie sa zozbierali, spojili a vysušili na oleje.
'H NMR pre vedľajší racemát δ: 6,75-6,82 (bm, 3H); 4,75 (bd, 1H); 3,83 (s, 3H); 3,64-3,81 (bm, 1H); 3,74 (s, 3H); 3,54-3,61 (bm, 2H); 3,28 (dd, 1H); 1,81-1,94 (bm, 5H); 1,58-1,65 (bm, 4H); 1,15 (dd, 3H); 0,75 (s, 3H).
'H NMR pre hlavný racemát δ: 6,76-6,83 (bm, 3H); 4,74 (bd, 1H); 3,77-3,89 (bm, 1H); 3,83 (s, 3H); 3,73 (s, 3H); 3,65 (kvin, 1H); 3,25-3,32 (bm, 3H); 1,77-1,96 (bm, 7H); 1,58-1,61 (bm, 2H); 1,13 (d, 3H); 0,92 (s, 3H).
Chirálna separácia alkoholov
Na separáciu štyroch diastereomérov metódou HPLC sú potrebné dva stĺpce. Prvý stĺpec na báze dextrózy (8 x 30 cm) sa použil na separáciu R,R,S izoméru od ostatných izomérov. Desať ml (7,1 mg/ml základného roztoku) surovej zmesi v pufri stĺpca sa zaviedlo do stĺpca a potom eluovalo pri 1 ml/min. izokratickými hexánmi (85 %) a izopropanolom (15 %), pričom sa zbierali požadované frakcie. Zvyšné diastereoméry sa prečistili na odlišnom stĺpci na báze dextrózy (10 x 50 cm). Opäť sa zaviedlo 10 ml (7,1 mg/ml základného roz65 toku), eluovalo pri 1 ml/min. izokratickými hexánmi (95 %) a izopropanolom (5 %). Príslušné frakcie sa zozbierali, spojili a vysušili na oleje.
OH
Príklad 4
R‘=2-indanyl; R3=CO2CH3 metylester kyseliny trans-(±)-3-(l-hydroxyetyl)-4-[3-(indán-2-yloxy)-4-metoxyfenyl]-3-metylpyrolidín-l-karboxylovej (2 karbinol diastereoméry)
Roztok medziproduktu 35 (racemický) (300 mg; 0,71 mmol; 1 ekv.) v etanole (10 ml) sa upravil borohydridom sodíka (54 mg; 1,42 mmol; 2 ekv.). Zmes sa miešala pri laboratórnej teplote počas 10 minút, upravila sa IN HCl (50 ml) a extrahovala s EtOAc (3 x 25 ml). Spojené organické extrakty sa premyli s IN HCl (25 ml), vodou, nasýteným NaHCO3 (25 ml), vodou (25 ml) a soľným roztokom (25 ml), vysušili cez Na2SO4 a skoncentrovali vo vákuu. Časť surového zvyšku sa prečistila metódou HPLC (stĺpec Vydac 20 x 250 mm 08 „proteín a peptid”, 8 min., gradient 50-75 % acetonitrilu vo vode, pričom každé rozpúšťadlo obsahovalo 0,05 % TFA, prietok 20 ml/min.) za vzniku oddelených diastereomérov v pomere 2 : 1 vo forme bezfarebných sirupov (zodpovedajúco 75 a 37 mg v poradí eluovania zo stĺpca).
Izomér 1: ‘H NMR (300 MHz, CDC13,) δ: 7,24-7,15 (m, 4H); 6,83 (br s, 3H); 5,21-5,12 (m, IH); 3,91-3,59 (m, 3H); 3,81 (s, 3H); 3,73 (s, 3H); 3,40-3,18 (m, 7H); 1,14 (d, J=6,3 Hz, 3H); 0,94 (s, 3H).
Izomér 2: ‘H NMR (300 MHz, CDC13,) δ: 7,23-7,15 (m, 4H); 6,85-6,82 (m, 3H); 5,22-5,10 (m, IH); 3,89-3,67 (m, 3H); 3,81 (s, 3H); 3,75 (s, 3H); 3,64-3,52 (m, 2H); 3,40-3,15 (m, 5H); 1,20-1,13 (m, 3H); 0,78 (s, 3 H).
Zlúčeniny príkladov 5 a 6 boli pripravené rovnakým spôsobom ako zlúčenina príkladu 4:
OH
Príklad 5
Rl=2-norbornyl; R3=CO2CH3 metylester kyseliny trans-4-[3-exo-(bicyklo[2.2.1]hept-2-yloxy)-4-metoxyfenyl]-3-(l-hydroxyetyl)-3-metylpyrolidín-1-karboxylovej (2 karbinol diastereoméry)
Medziprodukt 38 bol redukovaný a separovaný uvedenou metódou za vzniku dvoch izomérov:
Izomér 1: ‘H NMR (300 MHz, CDC13,) δ: 6,82-6,72 (m, 3H); 4,15 (br s, IH); 3,88-3,59 (m, 3H); 3,87 (s, 3H); 3,73 (s, 3H); 3,32-3,24 (m, 3H); 2,50-2,47 (m, IH); 2,34-2,28 (m, IH); 1,77-1,50 (m, 5H); 1,21-1,12 (m, 6H); 0,92 (s, 3H).
Izomér 2: ‘H NMR (300 MHz, CDC13,) δ: 6,82-6,72 (m, 3H); 4,19-4,15 (m, IH); 3,85-3,54 (m, 5H); 3,83 (s, 3H); 3,74 (s, 3H); 3,30/3,23 (2d, J=10,4/10,4 Hz, IH); 2,49-2,46 (m, IH); 2,32 (br s, IH); 1,76-1,70 (m, 2H); 1,65-1,44 (m, 3H); 1,21-1,14 (m, 6H); 0,75 (s, 3H).
N
O
O
Príklad 6
R‘=PhCH2CH2CH(CH3); R3=CO2CH3 metylester kyseliny trans-3-(l-hydroxyetyl)-4-[4-metoxy-3-(l-metyl-3-fenylpropoxy)fenyl]-3-metylpyrolidín-1-karboxylovej (2 karbinol diastereoméry)
Medziprodukt 39 bol redukovaný a separovaný uvedenou metódou za vzniku dvoch izomérov:
Izomér 1: ‘H NMR (300 MHz, CDCl·,,) δ: 7,30-7,25 (m 3H); 7,22-7,15 (m, 3H); 6,85-6,69 (m, 3H); 4,34-4,27 (m, 1H); 3,87-3,54 (m, 3H); 3,84 (s, 3H); 3,73/3,72 (2s, 3H); 3,31-3,20 (m, 3H); 2,83-2,75 (m, 2H); 2,18/2,08 (m, 1H); 1,95-1,84 (m, 1H); 1,34/1,31 (2s, 3H); 1,12 (d, J=6,3 Hz, 3 H); 0,89 (brs, 3H).
I3C NMR (75 MHz, CDC13,) δ: 156,0; 150,3; 147,8; 142,2; 131,3/131,1; 128,9; 128,8; 126,2; 121,7; 117,1; 112,5; 77,6; 75,3/75,1; 74,1/74,0; 56,3; 56,2/55,8; 52,9; 52,0/51,5/51,2; 49,9/49,1; 38,5/38,4; 32,2; 20,3; 19,0/18,9; 14,6/14,5.
Izomér 2: *H NMR (300 MHz, CDC13,) δ: 7,29-7,24 (m, 2H); 7,20-7,14 (m, 3H); 6,84-6,69 (m, 3H); 4,35-4,24 (m, 1H); 3,85/3,84 (2s, 3H); 3,83-3,45 (m, 5H); 3,75 (s, 3H); 3,31-3,23 (m, 1H); 2,88-2,76 (m, 2H); 2,21-2,07 (m, 1H); 1,95-1,83 (m, 1H); 1,34/1,32 (2s, 3H); 1,15-1,11 (m, 3H); 0,73 (br s, 3H).
13C NMR (75 MHz, CDC13,) δ: 156,1; 149,9; 147,4; 142,3; 129,5/129,4; 128,9; 128,7; 126,2; 122,1/121,8; 117,9/117,7/117,4; 112,0; 77,6; 75,3/75,0/74,9; 69,4/69,3; 56,3; 53,2; 53,1; 49,5/49,3/49,1/48,6; 46,5/46,0; 38,5/38,4/38,3; 32,1; 20,3; 20,0; 17,7.
Nasledujúce zlúčeniny boli pripravené z chirálneho voľného pyrolidínu medziproduktu 68.
Príklad 7
R‘=C5H9; R3=COCH2OCH2Ph l-[3-(( 1 R)-1 -hydroxyetyl)(3 S,4S)-4-(3-cyklopentyloxy-4-metoxyfenyl)-3-metylpyrolidinyI]-2-(fenylmetoxy)etan-l-ón
Metóda N-acylácie
Do miešaného roztoku medziproduktu 68 (42,6 mg; 0,13 mmol) v 1,4-dioxáne (0,4 ml) sa postupne pridali vodný K2CO3 (0,8 ml 0,65 M; 4 ekv.) a roztok chloridu kyseliny (R3-C1) (21 pL, 0,13 mmol) v 1,4-dioxáne (0,4 ml) pri laboratórnej teplote. Výsledný roztok sa miešal počas 4 hodín pri laboratórnej teplote. Reakčná zmes sa zriedila s EtOAc (30 ml), potom sa postupne premyla vodou (20 ml) a soľným roztokom (20 ml), vysušila (MgSO4), prefíltrovala a skoncentrovala vo vákuu za vzniku zlúčeniny príkladu 7 vo forme mierne hnedej peny (46,5 mg; 99 %).
'H NMR (400 MHz, CDCI3,) δ: zmes rotamérov: 7,40-7,31 (m, 5H); 6,80-6,72 (m, 3H); 4,73 (c, 1H); 4,67 (s, 2H); 4,14 (s, 2H); 3,82 (s, 3H); 3,79-3,45 (m, 5H); 3,22 (d, 1H); 1,92-1,80 (c, 6H); 1,61-1,55 (c, 2H); 1,14 (dd, 3H); 0,73 (d, 3H)
LRMS (elektrosprej, pozitívny): Da/e 468,4 (m+l).
Príklad 8
R'=C5H9; R3=COCH2OH l-[3-((lR)-l-hydroxyetyl)-(3S,4S)-4-(3-cyklopentyloxy-4-metoxyfenyl)-3-metylpyrolidinyl]-2-hydroxyetan-1-ón
Zlúčenina príkladu 7 (35 mg; 75pmol) bola podrobená debenzylačnej procedúre uvedenej pri medziprodukte 31 za vzniku zlúčeniny príkladu 8 (24 mg; 84 %).
‘H NMR (CD3OD, 400 MHz, zmes rotamérov) δ: 6,91-6,82 (m, 3H); 4,83 (c, 1H); 4,22 (c, 1H); 3,87-3,22 (m, 11H); 1,93-1,73 (m, 6H); 1,69-1,59 (m, 2H); 1,11 (dd, 3H); 0,75 (br s, 3H).
LRMS (elektrosprej, pozitívny): Da/e 378,4 (m+l).
Príklad 9
R'=C5H9; R3=COCH2CH2N(H)CO2CH2Ph
N-{3-[3-((lR)-l-hydroxyetyl)(3S,4S)-4-(3-cyklopentyloxy-4-metoxyfenyl)-3-metylpyrolidinyl]-3-oxopropyl} (fenylmetoxy)karboxamid
Zlúčenina bola pripravená z medziproduktu 68 pomocou acylačnej metódy uvedenej pri zlúčenine príkladu 7. Namiesto chloridu kyseliny sa použil p-nitrofenylester N-Cbz-beta-alanínu.
'H NMR (400 MHz, CDC1,, zmes rotamérov) δ: 7,38-7,28 (m, 5H); 6,92-6,83 (m, 3H); 5,06 (c, 2H); 4,86 (s, 2H); 4,84 (c, 1H); 3,81-3,27 (m, 10H); 2,59 (c, 2H); 1,98-1,69 (c, 6H); 1,64-1,57 (c, 2H); 1,09 (d, 3H); 0,73 (d, 3H).
LRMS (elektrosprej, pozitívny): Da/e 525,3 (m+l).
Príklad 10
R'=C5H9; R3=COCH2CH2NH2 l-[3-((lR)-l-hydroxyetyl)(3S,4S)-4-(3-cyklopentyloxy-4-metoxyfenyl)-3-metylpyrolidinyl]-3-aminopropan-1-ón
Zlúčenina bola pripravená zo zlúčeniny príkladu 9 pomocou debenzylačnej metódy uvedenej pri medziprodukte 31.
‘H NMR (CD,OD, 400 MHz, zmes rotamérov) δ: 6,91-6,79 (m, 3H); 4,81 (c, 1H); 3,92-3,29 (m, 11H); 3,01 (br s, 2H); 2,61-2,58 (m, 2H); 1,95-1,73 (m, 6H); 1,68-1,58 (m, 2H); 1,10 (dd, 3H); 0,76 (d, 3H).
LRMS (elektrosprej, pozitívny): Da/e 391,4 (m+l).
Príklad 11 r'=C5H9; R3=COCH2CH2CO2CH2Ph
Fenylmetyl 4-[3-((lR)-l-hydroxyetyl)(3S,4S)-4-(3-cyklopentyloxy-4-metoxyfenyl)-3-metylpyrolidinyl]-4-oxobutanoát
Pripravený z medziproduktu 68 pomocou acylačnej metódy uvedenej pri zlúčenine príkladu 7.
'H NMR (400 MHz, CDC13, zmes rotamérov) δ: 7,41-7,31 (m, 5H); 6,84-6,75 (m, 3H); 5,14 (d, 2H); 4,74 (c, 1H); 3,94-3,44 (m, 8H); 3,27 (d, 1H); 2,80-2,73 (m, 2H); 2,67-2,58 (m, 2H); 1,96-1,81 (m, 6H); 1,68-1,56 (m, 2H); 1,15 (dd, 3H); 0,75 (d, 3H).
LRMS (elektrosprej, pozitívny): Da/e 510,3 (m+l).
Príklad 12
R'=C5H9; R3=COCH2CH2CO2H
Kyselina 4-[3-((lR)-l-hydroxyetyl)(3S,4S)-4-(3-cyklopentyloxy-4-metoxyfenyl)-3-metylpyrolidinyl]-4-oxobutánová
Pripravená zo zlúčeniny príkladu 11 pomocou debenzylačnej metódy uvedenej pri medziprodukte 31.
'H NMR (400 MHz, CDC13, zmes rotamérov) δ: 6,80-6,72, (m, 3H); 4,74 (c, 1H); 3,98-3,54 (m, 10H); 3,40 (d, 1H); 3,24 (d, 1H); 2,69 (c, 2H); 1,95-1,74 (m, 6H); 1,69-1,51 (m, 2H); 1,14 (dd, 3H); 0,74 (d, 3H).
LRMS (elektrosprej, pozitívny): Da/e 420,3 (m+l).
Príklad 13
R‘=C5H9; R3=COCH2N(H)CO2CH2Ph
N-{2-[3-(( 1 R)-1 -hydroxyetyl)(3S,4S)-4-(3-cyklopentyloxy-4-metoxyfenyl)-3-metylpyrolidinyl]-2-oxoetyl}(fenylmetoxy)karboxamid
Pripravený z medziproduktu 68 pomocou acylačnej metódy uvedenej pri zlúčenine príkladu 7. Namiesto chloridu kyseliny sa použil p-nitrofenylester N-Cbz-glycínu.
'H NMR (400 MHz, CDC13, zmes rotamérov) δ: 7,40-7,25 (m, 5H); 6,92-6,81 (m, 3H); 5,1 l(s, 2H); 4,87 (s, 2H); 4,82 (c, 1H); 4,11-3,28 (m, 9H); 1,95-1,70 (m, 6H); 1,65-1,55 (m, 2H); 1,10 (br s, 3H); 0,76 (br s, 3H).
LRMS (elektrosprej, pozitívny): Da/e 511,6 (m+l).
Príklad 14
R'=C5H9; R3=COCH2NH2 l-[3-((lR)-l-hydroxyetyl)(3S,4S)-4-(3-cyklopentyloxy-4-metoxyfenyl)-3-metylpyrolidinyl]-2-aminoetan-l-ón
Pripravený zo zlúčeniny príkladu 13 pomocou debenzylačnej metódy uvedenej pri medziprodukte 31.
'H NMR (CD3OD, 400 MHz, zmes rotamérov) δ: 6,91-6,82 (m, 3H); 4,80 (c, 1H); 3,91-3,28 (m, 11H); 1,90-1,75 (m, 6H); 1,66-1,57 (m, 2H); 1,09 (dd, 3H); 0,74 (d, 3H).
LRMS (elektrosprej, pozitívny): Da/e 377,2 (m+l).
Príklad 15
RI=C5H9; R3=CO-4-metyl-piperazín
3-((1 R)-l-hydroxyetyl)(3S,4S)-4-(3-cyklopentyloxy-4-metoxyfenyl)-3-metylpyrolidinyl-4-metylpiperazinylketón
Medziprodukt 68 (30,2 mg; 94 mmol) sa rozpustil v 1,2-dichlóretáne (400 μΐ) a ochladil na 0 °C, potom sa pridal karbonyldiimidazol (16 mg; 94 pmol). Reakčná zmes sa miešala pri 0 °C počas 1,5 hodiny s následným pridaním 1 -metylpiperazínu (21 μΐ, 180 μηιοί). Roztok sa na 60 hodín zohrial na 80 °C. Po vychladnutí sa reakčná zmes rozriedila CH2CL a trikrát premyla 6 % NaHCO3, vysušila pomocou Na2SO4 a skoncentrovala vo vákuu. Zvyšok bol podrobený chromatografíi na SiO2 s EtOAc (15,5 mg).
‘H NMR (400 MHz, CDC13, zmes rotamérov) δ: 6,83-6,78 (m, 3H); 4,76 (c, 1H); 4,06-3,77 (m, 18H); 3,61 (q, 1H); 3,39 (br s, 1H); 1,93-1,78 (m, 6H); 1,63-1,57 (m, 2H); 1,15 (br s, 3H); 0,81 (br s, 3H).
LRMS (elektrosprej, pozitívny): Da/e 446,4 (m+1).
Príklad 16
R'=C5H9; R3=CO-N-morfolín
3-((lR)-l-hydroxyetyl)(3S,4S)-4-(3-cyklopentyloxy-4-metoxyfenyl)-3-metylpyrolidinyl morfolin-4-yl ketón
Pripravený z medziproduktu 68 použitím morfolínu a karbonyldiimidazolu ako väzbového činidla pomocou metódy uvedenej pri zlúčenine príkladu 15.
‘H NMR (400 MHz, CDC13, zmes rotamérov) δ: 6,84-6,77 (m, 3H); 4,76 (c, 1H); 3,88-3,52 (m, 12H); 3,41 (dd, 1H); 3,38 (dd, 1H); 3,28 (dd, 1H); 3,25 (dd, 1H); 3,10 (d, 1H); 1,95-1,81 (m, 6H); 1,62-1,54 (m, 2H); 1,15 (d, 3H); 0,75 (s, 3H).
LRMS (elektrosprej, pozitívny): Da/e 433,3 (m+1).
Príklad 17
R1=C5H9; R3=COCH20-mentol; izomér (lS)-karbinolu l-[3-((lS)-l-hydroxyetyl)(3S,4S)-4-(3-cyklopentyloxy-4-metoxyfenyl)-3-metylpyrolidinyl]-2-[(2S,lR,5R)-5-metyl-2-(metyletyl)cyklohexyloxy]-etan-l-ón
Pripravený z izoméru S-karbinolu medziproduktu 69 pomocou metódy acylácie sprostredkovanej Hunigovou bázou, ktorá je uvedená pri medziprodukte 69.
'H NMR (400 MHz, CDCL, zmes rotamérov) δ: 6,82-6,75 (m, 3H); 4,74 (c, 1H); 4,19 (dd, 1H); 4,04 (dd, 1H); 3,92-3,76 (m, 5H); 3,47-3,19 (m, 5H); 2,26 (c, 1H); 2,13 (c, 1H); 1,94-1,80 (m, 6H); 1,65-1,53 (m, 4H); 1,51-1,19 (m, 4H); 1,14 (d, 3H); 0,95-0,84 (m, 9H); 0,79 (d, 3H).
LRMS (elektrosprej, pozitívny): Da/e 516,3 (m+1).
Príklad 18
R'=C5H9; R3=CO-4-(2-metyltiazol)
3-((1 R)-l-hydroxyetyl)(3S,4S)-4-(3-cyklopentyloxy-4-metoxyfenyl)-3-metylpyrolidinyl 2-metyl-(l,3-tiazol-4-yl)ketón
Pripravený z medziproduktu 68 pomocou väzbovej metódy EDCI uvedenej pri zlúčenine príkladu 27 z kyseliny 2-metyl-l,3-tiazol-4-karboxylovej.
*H NMR (CD3OD, 400 MHz, zmes rotamérov) δ: 7,98 (dd, 1H); 6,92-6,82 (m, 3H); 4,84 (c, 1H); 4,27 (t, 0,5H); 4,16 (t, 0,5H); 4,08 (t, 0,5H); 3,96 (d, 0,5H); 3,85-3,47 (m, 7H); 2,72 (dd, 3H); 1,88-1,72 (m, 6H); 1,68-1,56 (m, 2H); 1,14 (dd, 1,5H); 1,08 (dd, 1,5H); 0,82 (d, 1,5H); 0,73 (d, 1,5H).
LRMS (elektrosprej, pozitívny): Da/e 445,4 (m+1).
Príklad 19
R‘=C5H9; R3=SO2-3-pyridyl
3-{[3-((lR)-l-hydroxyetyl)(3S,4S)-4-(3-cyklopentyloxy-4-metoxyfenyl)-3-metylpyrolidinyl]sulfonyl}pyridín
Do miešaného roztoku medziproduktu 68 (32 mg; 0,1 mmol) v dioxáne (0,3 ml) sa pri laboratórnej teplote postupne pridal vodný K2CO3 (0,6 ml 0,65 M; 4 ekv.) a roztok R3-sulfonylchloridu (26 mg; 0,12 mmol) v dioxáne (0,3 ml). Výsledný roztok sa premiešaval pri laboratórnej teplote počas 2 hodín. Reakčná zmes sa rozriedila v zmesi 1 : 1 hexány:EtOAc (30 ml) a postupne premyla vodou (20 ml) a soľným roztokom (20 ml), potom sa vysušila (MgSO4), prefiltrovala a skoncentrovala vo vákuu za vzniku zlúčeniny príkladu 19 vo forme svetlooranžovej peny (36 mg; 78 %).
‘H NMR (400 MHz, CDCL, zmes rotamérov) δ: 9,11 (d, 1H, J=2,2 Hz); 8,83 (dd, 1H, J=l,6, 4,8 Hz); 8,17 (ddd, 1H, J=l,5; 2,4; 8,1 Hz); 7,50 (ddd, 1H, J=0,8; 4,9; 8,0 Hz); 6,74 (d, 1H, J=8,5 Hz); 6,68 (d, 1H, J=2,l Hz); 6,62 (dd, 1H, J=2,l, 8,3 Hz); 4,70 (c, 1H); 3,80 (s, 3H); 3,66-3,62 (m, 2H); 3,51-3,43 (m, 3H); 3,24 (d, 1H, J=13,3 Hz); 1,91-1,62 (m, 6H); 1,60-1,55 (m, 2H); 1,08 (d, 3H, J=6,4 Hz); 0,62 (s, 3H).
LRMS (elektrosprej, pozitívny): Da/e 461,2 (m+1).
Príklad 20
R1=2-indanyl; R3= COCH2OCH2Ph
-(3-((1 R)-1 -hydroxyetyl)(3S, 4S)-4-(3-indán-2-yloxy-4-metoxyfenyl)-3-metylpyrolidinyl]-2-(feny lmetoxy)etan-1 -ón
Pripravený z medziproduktu 51 (50 mg; 0,14 mmol) pomocou metódy acylácie sprostredkovanej Hunigovou bázou, ktorá je uvedená pri medziprodukte 74, použitím benzyloxyacetylchloridu (22,5 pl, 0,14 mmol) za vzniku zlúčeniny príkladu 20 vo forme číreho oleja (48 mg; 68 %).
'H NMR (400 MHz, CDClj, zmes rotamérov) δ: 7,41-7,16 (m, 9H); 6,84-6,79 (m, 3H); 5,17 (c, IH); 4,66 (d, 2H); 4,19-4,11 (m, 2H); 3,96 (dd, 0,5H); 3,83-3,54 (m, 7H); 3,47 (d, 0,5H); 3,38-3,29 (m, 2H); 3,24-3,17 (m, 3H); 1,57 (br t, IH); 1,15 (dd, 3H); 0,75 (s, 3H).
LRMS (elektrosprej, pozitívny): Da/e 516,8 (m+l).
Príklad 21
R‘=2-indanyl; R3= COCH2OH
1-(3-((1 R)-1 -hydroxy etyl)(3S,4S)-4-(3-indán-2-yloxy-4-metoxyfenyl)-3-metylpyrolidinyl]-2-hydroxyetan-l-ón
Pripravený zo zlúčeniny príkladu 20 pomocou debenzylačnej metódy uvedenej pri medziprodukte 31.
‘H NMR (CD3OD, 400 MHz, zmes rotamérov) δ: 7,24-7,18 (m, 2H); 7,14-7,12 (m, 2H); 6,92-6,86 (m, 3H); 5,20 (c, IH); 4,27-4,14 (m, 2H); 3,90-3,50 (m, 6H); 3,41 (d, IH); 3,34-3,24 (m, 4H); 3,13-3,08 (m 2H); 1,12 (dd, 3H); 0,77 (br s, 3H).
LRMS (elektrosprej, pozitívny): Da/e 426,5 (m+l).
Príklad 22
R‘=2-indanyl; R3= COCO2CH3 metyl 2-(3-((1 R)-l-hydroxyetyl)(3S,4S)-4-(3-indán-2-yloxy-4-metoxyfenyl)-3-metyIpyrolidinyl]-2-oxoacetát
Pripravený z medziproduktu 51 a metyloxalylchloridu pomocou väzbovej metódy Hunigovej bázy, ktorá je uvedená pri medziprodukte 74.
'H NMR (400 MHz, CDC13, zmes rotamérov) δ: 6,82-6,75 (m, 3H); 4,74 (c, IH); 4,01 (d, IH); 3,98-3,56 (m, 10H); 3,50 (dd, IH); 1,93-1,84 (m, 6H); 1,64-1,56 (m, 2H); 1,45 (dd, 1 H); 1,16 (dd, 3H); 0,79 (s, 1,5 H); 0,75 (s, 1,5H).
LRMS (elektrosprej, pozitívny): Da/e 406,2 (m+l).
Príklad 23
R‘=2-indanyl; R3= COC(CH3)2N(H)CO2CH2Ph
N- {2-[3 -((1 R)-1 -hydroxyetyl)(3 S,4S)-4-(3-indán-2-y loxy-4-metoxyfeny l)-3-mety lpyrolidiny 1] -1,1 -dimety 1-2-oxoetyl}(fenylmetoxy)karboxamid
Väzbová metóda PyBrOP
Do miešaného roztoku bróm-tris-pyrolidínofosfóniumhexafluórfosfátu (PyBrOP, 70 mg; 0,15 mmol), N-karbobenzyloxy-2-metylalanínu (35,5 mg; 0,15 mmol) a Hunigovej bázy (78 μΐ), 0,45 mmol) v suchom dimetylformamide (1 ml) sa pri laboratórnej teplote v dusíkovom prostredí pridal medziprodukt 51 (50 mg; 0,14 mmol). Výsledný roztok sa miešal pri laboratórnej teplote počas 16 hodín a potom sa zohrial na 70 °C počas 5 hodín. Reakčná zmes sa nechala vychladnúť na laboratórnu teplotu a potom sa skoncentrovala vo vákuu. Zvyšok sa prečistil radiálnou chromatografiou (1 mm doštička s 3 % MeOH v CH2C12) za vzniku zlúčeniny príkladu 23 vo forme bielej peny (20 mg; 24 %).
'H NMR (400 MHz, CDCI3, zmes rotamérov) δ: 7,43-7,15 (m, 9H); 6,82-6,62 (m, 3H); 5,64 (br s, 0,5 H); 5,51 (br s, 0,5H); 5,15-5,08 (m, 3H); 3,97-3,15 (m, 13H); 1,58 (br s, 6H); 1,13 (br d, 3H); 0,68 (br s, 3H).
LRMS (elektrosprej, pozitívny): Da/e 604,9 (m+l8).
Príklad 24
R-2-indanyl; R3= COC(CH3)2NH2
1-(3-(( lR)-l-hydroxyetyl)(3S,4S)-4-(3-indán-2-yloxy-4-metoxyfenyl)-3-metylpyrolidinyl]-2-amino-2-metylpropán-1-ón
Pripravený zo zlúčeniny príkladu 23 pomocou debenzylačnej metódy uvedenej pri medziprodukte 31. NMR (CD3OD, 400 MHz, zmes rotamérov) δ: 7,21-7,16 (m, 2H); 7,15-7,12 (m, 2H); 6,94-6,87 (m,
3H); 5,22 (c, 1H); 4,05 (d, 1H); 3,88 (c, 1H); 3,77-3,69 (m, 4H); 3,60-3,52 (c, 2H); 3,40-3,29 (c, 2H); 3,22 (q, 1H); 3,13-3,09 (c, 2H); 1,37 (d, 6H); 1,13 (br s, 3H); 0,80 (s, 3H)
LRMS (elektrosprej, pozitívny): Da/e 453,5 (m+l).
Príklad 25
R'=2-indanyl; R3= CO2CH3
Metyl 3-((lR)-l-hydroxyetyl)(3S,4S)-4-(3-indán-2-yloxy-4-metoxyfenyl)-3-metylpyrolidínkarboxylát
Pripravený z medziproduktu 51 pomocou metódy acylácie sprostredkovanej Hunigovou bázou, ktorá je uvedená pri medziprodukte 74, použitím metylchlórmravčanu.
*H NMR (400 MHz, CDC13, zmes rotamérov) δ: 7,24-7,16 (m, 4H); 6,86-6,82 (m, 3H); 5,18 (c, 1H); 3,85-3,56 (m, 8H); 3,38-3,30 (m, 3H); 3,25-3,19 (m, 3H); 1,51 (d, 0,5H); 1,47 (d, 0,5H); 1,16 (t, 3H); 0,77 (s, 3H).
LRMS (elektrosprej, pozitívny): Da/e 426,5 (m+l), 443,3 (m+l8).
Príklad 26
R*=2-indanyl; R3= COCH2C(CH3)2CO2H kyselina 4-(3-((1 R)-1 -hydroxyetyl)(3S, 4S)-4-(3-indán-2-yloxy-4-metoxyfenyl)-3-metylpyrolidinyl]-2,2-dimetyl-4-oxobutánová
Hrubostenná sklenená trubica so závitovým uzáverom sa naplnila medziproduktom 51 (20 mg; 0,05 mmol) a 2,2-dimetylsukcínanhydridom (25,8 mg; 0,05 mmol). Trubica sa utesnila a potom sa na 30 minút zohriala na 150 °C. Reakčná zmes sa nechala vychladnúť na laboratórnu teplotu za vzniku zlúčeniny príkladu 26 (obsahujúcej približne 15 - 20 % iných regioizomérov) vo forme hnedej tuhej látky (22 mg; 82 %)·
H NMR (CD3OD, 400 MHz, zmes rotamérov) δ: 7,22-7,20 (m, 2H); 7,15-7,12 (m, 2H); 6,96-6,85 (m, 3H); 5,23 (c, 1H); 3,92-3,49 (m, 7H); 3,37-3,28 (m, 4H); 3,13-3,09 (m, 2H); 2,73-2,55 (m, 2H); 1,30 (br s, 6H); 1,12 (t, 3H); 0,76 (d, 3H).
LRMS (elektrosprej, negatívny): Da/e 494,5 (m-1).
Príklad 27
R1=2-indanyl; R3= CO-4-(2-metyltiazol)
3-((lR)-l-hydroxyetyl)(3S,4S)-4-(3-indán-2-yloxy-4-metoxyfenyl)-3-metylpyrolidinyl-2-metyI(l,3-tiazol-4-yl)ketón
Väzbová metóda EDCI
Do miešaného roztoku l-(3-dimetylaminopropyl)-3-etylkarbodiimid hydrochloridu (42,3 mg; 0,214 mmol) v suchom CH2C12 (1 ml) sa pri laboratórnej teplote v dusíkovom prostredí pridala kyselina 2-metyl-l,3-tiazol-4-karboxylová (30,7 mg; 0,214 mmol). Výsledná jasnočervená zmes sa miešala počas 1 hodiny, potom sa naraz pridal medziprodukt 51 (75 mg; 0,204 mmol). Po miešaní pri laboratórnej teplote počas noci sa reakčná zmes skoncentrovala pri zníženom tlaku a zvyšok sa prečistil radiálnou chromatografiou (lmm doštička s 3 % MeOH v CH2C12) za vzniku titulnej zlúčeniny vo forme čírej tenkej vrstvy (21 mg; 20 %).
‘H NMR (400 MHz, CDCI3, zmes rotamérov) δ: 7,91 (s, 0,5H); 7,88 (s, 0,5H); 7,25-7,20 (m, 2H); 7,18-7,16 (m, 2H); 6,90-6,82 (m, 3H); 5,19 (c, 1H); 4,33 (dd, 0,5H); 4,23 (t, 0,5H); 4,15 (d, 0,5H); 4,10 (dd, 0,5H); 3,99 (t, 0,5H); 3,85 (d, 0,5H); 3,81 (s, 3H); 3,77-3,58 (m, 3H); 3,83-3,31 (m, 2H); 3,24-3,20 (m, 2H); 2,74 (s, 1,5H); 2,71 (s, 1,5H); 1,93 (s, 0,5H); 1,61 (d, 0,5H); 1,22 (d, 1,5H); 1,18 (d, 1,5H); 0,86 (s, 1,5H); 0,75 (s, 1,5H).
LRMS (elektrosprej, pozitívny): Da/e 493,6 (m+l).
Príklad 28
Rl=2-indanyl; R3= CO-3-tetrahydrofuranyl
3-((lR)-l-hydroxyetyl)(4S,3R)-4-(3-indán-2-yloxy-4-metoxyfenyl)-3-metylcyklopentyloxolan-2-yl ketón (zmes dvoch diastereomérov pri bode pripojenia tetrahydrofuranylu)
Pripravený z medziproduktu 51 pomocou väzbovej metódy Hunigovej bázy, ktorá je uvedená pri medziprodukte 74, použitím tetrahydrofurán-3-karbonylchloridu.
'H NMR (400 MHz, CDC13, zmes rotamérov) δ: 7,40-7,20 (m, 2H); 7,19-7,16 (m, 2H); 6,86-6,83 (m, 3H); 5,18 (c, 1H); 4,15-4,04 (m, 1H); 3,98-3,15 (m, 13H); 2,31-2,09 (m, 2H); 1,75 (br s, 1H); 1,26 (t, 1,5H); 1,17 (t, 1,5H); 0,80 (d, 1,5H); 0,78 (s, 1,5H).
LRMS (elektrosprej, pozitívny): Da/e 466,3 (m+l).
Príklad 29
R‘=2-indanyl; R3= COCH2N(H)CO2CH2Ph
N-{2-[3-((lR)-l-hydroxyetyl)(3S,4S)-4-(3-indán-2-yloxy-4-metoxyfenyl)-3-metylpyrolidinyl]-2-oxoetyI}(fenylmetoxy)karboxamid
Pripravený z medziproduktu 51 pomocou väzbovej metódy PyBrOP, ktorá je uvedená pri príklade 23, použitím N-benzyloxykarbonylglycínu.
’H NMR (CD3OD, 400 MHz, zmes rotamérov) δ: 7,35-7,20 (m, 9H); 6,91-6,88 (m, 3H); 5,22 (br s, 1H); 5,10 (s, 2H); 4,07-3,09 (m, 15H); 1,13 (t, 3H); 0,78 (s, 3H).
Príklad 30
R'=2-indanyl; R3= COCH2NH2
1-(3-((1 R)- l-hydroxyetyl)(3S,4S)-4-(3-indán-2-yloxy-4-metoxyfenyl)-3-metylpyrolidinyl]-2-aminoetan-l-ón
Pripravený z titulnej zlúčeniny príkladu 29 pomocou debenzylačnej metódy uvedenej pri medziprodukte 31.
'H NMR (400 MHz, CDC13, zmes rotamérov) δ: 7,22-7,19 (m, 2H); 7,18-7,15 (m, 2H); 6,84 (d, 1H); 6,81 (d, 2H); 5,17 (c, 1H); 3,96 (dd, 0,5H); 3,81-3,43 (m, 9H); 3,37-3,30 (m, 1,5H); 3,23-3,13 (m, 2H); 2,99 (br s, 2H); 1,15 (t, 3H); 0,75 (d, 3H).
LRMS (elektrosprej, pozitívny): Da/e 425,5 (m+l).
Príklad 31
Rl=2-indanyl; R3=2-pyridyl (lR)-l-[(3S,4S)-4-(3-indán-2-yloxy-4-metoxyfenyl)-3-metyl-l-(2-pyridyl)pyrolidin-3-yl]etan-l-ol Väzbová metóda s arylbromidom
Do miešanej zmesi medziproduktu 51 (115 mg; 0,31 mmol) a K2CO3 (173 mg; 1,2 mmol) v suchom DMF (2 ml) sa injekčnou striekačkou v dusíkovom prostredí pri laboratórnej teplote pridal 2-brómpyridín (0,12 ml; 1,2 mmol). Výsledná zmes sa zohriala na 90 °C na čas 22 hodín, potom sa nechala vychladiť na laboratórnu teplotu. Reakčná zmes sa zriedila s vodou (60 ml) a extrahovala s EtOAc (3 x 30 ml). Spojené organické extrakty sa premyli soľným roztokom, vysušili (Na2SO4), prefiltrovali a skoncentrovali vo vákuu. Zvyšok sa prečistil flash chromatografiou na silikagéli (100 % EtOAc) za vzniku titulnej zlúčeniny (73,4 mg; 53 %).
*H NMR (400 MHz, CDCL) δ: 8,18 (ddd, 1H); 7,45 (ddd, 1H); 7,26-7,21 (m, 2H); 7,19-7,16 (m, 2H); 6,92-6,88 (m, 2H); 6,83 (d, 1H); 6,54 (ddd, 1H); 6,40 (d, 1H); 5,17 (c, 1H); 3,86-3,78 (m, 5H); 3,70 (d, 1H); 3,67 (d, 1H); 3,38-3,30 (m, 3H).
LRMS (elektrosprej, pozitívny): Da/e 445,4 (m+l).
Príklad 32
Rl=2-indanyl; R3=3-pyridyl (lR)-l-[(3S,4S)-4-(3-indán-2-yloxy-4-metoxyfenyl)-3-metyl-l-(3-pyridyl)pyrolidin-3-yl]etan-l-ol Väzbová metóda katalyzovaná paládiom
Do miešaného roztoku medziproduktu 51 (79,3 mg; 0,22 mmol) a terc-butoxidu sodného (29 mg; 0,31 mmol) v suchom toluéne (3 ml) sa pri laboratórnej teplote v dusíkovom prostredí postupne pridal 3-brómpyridín (22,9 ml; 0,24 mmol), tris(dibenzylidénacetón) dipaládium (0) (3,9 mg; cat.) a (R)-(+)-l,ľ-bi-2-naftol (5,4 mg; cat.). Výsledný roztok sa zohrial na teplotu 80 °C na čas 3 hodín, potom sa nechal ochladiť na laboratórnu teplotu. Zmes sa potom zriedila s EtOAc (40 ml), preprala v soľnom roztoku, vysušila (Na2SO4), prefiltrovala a skoncentrovala vo vákuu. Zvyšok sa prečistil flash chromatografiou na silikagéli (40 % EtOAc v hexánoch) za vzniku titulnej zlúčeniny (72,1 mg; 75 %).
‘H NMR (400 MHz, CDC13) δ: 7,98 (d, 1H); 7,91 (d, 1H); 7,24-7,15 (m, 4H); 7,11 (dd, 1H); 6,90-6,82 (m, 4H); 5,15 (c, 1H); 3,81-3,72 (m, 4H); 3,70-3,62 (m, 4H); 3,35-3,11 (m, 5H); 1,24 (d, 3H); 0,84 (s, 3H).
LRMS (elektrosprej, pozitívny): Da/e 445,3 (m+l).
Príklad 33
Rl=2-indanyl; R3= pyrimidyl (lR)-l-[(3S,4S)-4-(3-indán-2-yloxy-4-metoxyfenyl)-3-metyl-l-pyrimidín)-2-ylpyrolidin-3-yl]etan-l-ol
Pripravený z medziproduktu 51 pomocou väzbovej metódy s arylbromidom, ktorá je uvedená pri zlúčenine príkladu 31.
'H NMR (400 MHz, CDC13) δ: 8,34 (dd, 2H); 7,24-7,18 (m, 2H); 7,16 (dd, 2H); 6,94-6,84 (m, 2H); 6,82 (c, IH); 6,48 (t, IH); 5,16 (c, IH); 4,12-3,75 (m, 7H); 3,64 (br d, IH); 3,52 (d, IH); 3,36 (d, IH); 3,32 (d, IH); 3,24 (t, IH); 3,20 (t, IH); 1,23 (d, 3H); 0,83 (s, 3H).
LRMS (elektrosprej, pozitívny): Da/e 446,4 (m+l).
Príklad 34
R‘=C5H9; R3=2-pyridyl (1 R)-1 -[(3S,4S)-4-(3-cyklopentyloxy-4-metoxyfenyl)-3-metyl-1 -(2-pyridyl)pyrolidin-3-yl]etan-l -ol
Pripravený z medziproduktu 68 pomocou väzbovej metódy s arylbromidom, ktorá je uvedená pri príklade
31.
'H NMR (400 MHz, CDC13) δ: 8,18 (ddd, IH); 7,46 (ddd, IH); 6,89-6,82 (m, 3H); 6,54 (ddd, IH); 6,40 (d, 1H);4,75 (c, IH); 3,92-3,65 (m, 8H); 3,36 (d, IH); 1,94-1,80 (m, 6H); 1,66-1,55 (m, 2H).
LRMS (elektrosprej, pozitívny): Da/e 397,4 (m+l).
Príklad 35
R‘=C5H9; R3=3-pyridyl (lR)-l-[(3S,4S)-4-(3-cyklopentyloxy-4-metoxyfenyl)-3-metyl-l-(3-pyridyl)pyrolidin-3-yl]etan-l-ol
Pripravený z medziproduktu 68 pomocou väzbovej metódy katalyzovanej paládiom, ktorá je uvedená pri príklade 32.
‘H NMR (400 MHz, CDC13) δ: 8,00 (d, IH); 7,93 (d, IH); 7,12 (dd, IH); 6,86-6,78 (m, 4H); 4,73 (c, IH); 3,85-3,59 (m, 8H); 3,12 (d, IH); 1,90-1,79 (m, 6H); 1,60-1,54 (m, 2H); 1,22 (d, 3H); 0,82 (s, 3H).
LRMS (elektrosprej, pozitívny): Da/e 397,2 (m+l).
/
Príklad 36
R‘=(4-PhO)-Ph; R3= CO2CH3 metyl 3-((1 R)-l-hydroxyetyl)(3S,4S)-4-[4-metoxy-3-(4-fenoxyfenoxy)fenyl]-3-metylpyrolidínkarboxylát Metóda éterifikácie kryptandu
Do miešanej suspenzie hydridu sodného (16 mg 60 % disperzie v minerálnom oleji, 0,40 mmol) v suchom anizole (2 ml) sa po častiach pridával medziprodukt 74 (100 mg; 0,32 mmol) počas 5 minút pri laboratórnej teplote v dusíkovom prostredí, pričom sa uvoľňoval vodík. Po 30 minútovom miešaní sa pridal tris[2-(2-metoxyetoxy)etyl]amín (10 ml; 0,03 mmol), chlorid meďnatý (I) (10ml, 0,10 mmol) a 4-bróm-bifenyl éter a výsledná zmes sa spätným prúdením ohrievala počas 20 hodín. Vákuovou destiláciou sa potom odstránil anizol. Zvyšok sa rozpustil v EtOAc (25 ml) a prefiltroval cez papierový filter GF/F. Filtrát sa premyl IN vodného HCI (20 ml), vysušil (Na2SO4), prefiltroval a skoncentroval vo vákuu. Zvyšok sa prečistil radiálnou chromatografiou (2 mm kremíková doštička so zmesou 1 : 1 hexány/EtOAc) za vzniku titulnej zlúčeniny vo forme svetlohnedého oleja (40 mg; 26 %).
'H NMR (400 MHz, CDClj, zmes rotamérov) δ: 7,30 (dd, 2H); 7,09-6,86 (m, 10H); 3,88-3,49 (m, 11H);
3,28 (d, 0,5H); 3,19 (d, 0,5H); 1,93 (br s, 0,5H); 1,83 (br s, 0,5H); 1,12 (dd, 3H); 0,71 (br s, 3H).
LRMS (elektrosprej, pozitívny): Da/e 478,2 (m+l).
Príklad 37
R1=(4-PhO)-Ph; R3= CO2CH3: iný diastereomér karbinolu metyl 3-((1 S)-l-hydroxyetyl)(3S,4S)-4-[4-metoxy-3-(4-fenoxyfenoxy)fenyl]-3-metylpyrolidínkarboxyIát Pripravený z izoméru (lS)-karbinolu medziproduktu 75 pomocou metódy éterifikácie kryptandu, ktorá je uvedená pri príklade 36.
’H NMR (400 MHz, CDC13, zmes rotamérov) δ: 7,32 (t, 2H); 7,07 (dt, 1H); 7,03-6,74 (m, 9H); 3,91-3,55 (m, 9H); 3,55-3,17 (m, 3H); 2,16 (d, 0,5H); 1,38 (br s, 0,5H); 1,12 (d, 3H); 0,85 (s, 3H).
LRMS (elektrosprej, pozitívny): Da/e 478,2 (m+l).
Príklad 38
R‘=(4-Ph)-Ph; R3= CO2CH3 metyl 3-((1 R)-l-hydroxyetyl)(3S,4S)-4-[4-metoxy-3-(4-fenylfenoxy)fenyl]-3-metylpyrolidínkarboxylát Pripravený z medziproduktu 74 pomocou metódy éterifikácie kryptandu, ktorá je uvedená pri príklade 36. 'H NMR (400 MHz, CDC13, zmes rotamérov) δ: 7,55 (d, 2H); 7,51 (d, 2H); 7,42 (t, 2H); 7,31 (t, 1H);
7,05 (dt, 1H); 6,98-6,92 (m, 4H); 3,87-3,54 (m, 11H); 3,29 (d, 0,5H); 3,19 (d, 0,5H); 1,64 (br s, 0,5H); 1,57 (br s, 0,5H); 1,14 (dd, 3H); 0,74 (s, 3H).
LRMS (elektrosprej, pozitívny): Da/e 462,2 (m+l).
Príklad 39
R1=(4-Ph)-Ph; R3= CO2CH3: iný diastereomér karbinolu metyl 3-((lS)-l-hydroxyetyl)(3S,4S)-4-[4-metoxy-3-(4-fenylfenoxy)fenyl]-3-metylpyrolidínkarboxyIát
Pripravený z izoméru (lS)-karbinolu medziproduktu 75 pomocou metódy éterifikácie kryptandu, ktorá je uvedená pri príklade 36.
'H NMR (400 MHz, CDCL, zmes rotamérov) δ: 7,56 (d, 2H); 7,52 (dt, 2H); 7,42 (t, 2H); 7,32 (t, 1H);
7,10-6,94 (m, 5H); 3,93-3,58 (m, 9H); 3,38-3,18 (m, 3H); 1,13 (d, 3H); 0,88 (s, 3H).
LRMS (elektrosprej, pozitívny): Da/e 462,2 (m+l).
Príklad 40
R‘=Ph; R3=CO2CH3 metyl 3-((lR)-l-hydroxyetyl)(3S,4S)-4-(4-metoxy-3-fenoxyfenyl)-3-metylpyrolidínkarboxylát
Pripravený z medziproduktu 74 pomocou metódy éterifikácie kryptandu, ktorá je uvedená pri príklade 36. ‘H NMR (400 MHz, CDC13, zmes rotamérov) δ: 7,32-7,26 (m, 3 H); 7,02 (t, 2H); 6,94-6,88 (m, 3H); 3,85-3,49 (m, 11H); 3,27 (d, 0,5H); 3,18 (d, 0,5H); 1,12 (t, 3H); 0,71 (s, 3H).
LRMS (elektrosprej, pozitívny): Da/e 386,3 (m+l).
Príklad 41
R1=Ph; R3=CO2CH3; iný diastereomér karbinolu metyl 3-((1 S)-l-hydroxyetyl)(3S,4S)-4-[4-metoxy-3-fenoxyfenyl)-3-metylpyrolidínkarboxylát
Pripravený z izoméru (lS)-karbinolu medziproduktu 75 pomocou metódy éterifikácie kryptandu, ktorá je uvedená pri príklade 36.
'H NMR (400 MHz, CDC13, zmes rotamérov) δ: 7,29 (t, 2H); 7,08-6,85 (m, 6H); 3,87-3,52 (m, 9H); 3,34-3,16 (m, 3H); 1,11 (d, 3H); 0,85 (s, 3H).
LRMS (elektrosprej, pozitívny): Da/e 386,3 (m+l).
Príklad 42
R'=4-fluórfenyl; R3=CO2CH3 metyl 3-((lR)-l-hydroxyetyl)(3S,4S)-4-[3-(4-fluórfenoxy)-4-metoxyfenyl]-3-metylpyrolidínkarboxylát Pripravený z medziproduktu 74 pomocou metódy éterifikácie kryptandu, ktorá je uvedená pri príklade 36.
'H NMR (400 MHz, CDC13, zmes rotamérov) δ: 7,05-6,84 (m, 7H); 3,89-3,45 (m, 11H); 3,28 (d, 0,5H); 3,18 (d, 0,5H); 1,13 (t, 3H); 0,71 (br s, 3H).
LRMS (elektrosprej, pozitívny): Da/e 404,4 (m+l).
Príklad 43
R'=CH2C3H5; R3=CO2CH3 metyl 3-((lR)-l-hydroxyetyl)(3S,4S)-4-[3-(cyklopropylmetoxy)-4-metoxyfenyl]-3-metylpyrolidínkarboxylát Metóda éterifikácie s K2CO3
Do miešanej zmesi medziproduktu 74 (50 mg; 0,16 mmol) a práškového K2CO3 (24,6 mg; 0,18 mmol) v suchom DMF (1 ml) sa pri laboratórnej teplote v dusíkovom prostredí injekčnou striekačkou pridal brómmetylcyklopropán (16,5 μΐ, 0,17 mmol). Výsledná zmes sa zohriala na teplotu 65 °C na čas 24 hodín, potom sa nechala ochladiť na laboratórnu teplotu. Reakčná zmes sa potom zriedila s vodou (5 ml) a extrahovala s Et2O (3 x 20 ml). Kombinované organické vrstvy sa vysušili (MgSO4), prefiltrovali a skoncentrovali vo vákuu. Zvyšok sa prečistil radiálnou chromatografiou (1 mm kremíková doštička s 30 % EtOAc v hexánoch) za vzniku titulnej zlúčeniny 43 vo forme číreho oleja (30 mg; 51 %).
‘H NMR (400 MHz, CDC13, zmes rotamérov) δ: 6,84-6,75 (m, 3H); 3,94-3,54 (m, 13H); 3,29 (d, 0,5H); 3,21 (d, 0,5H); 1,72 (br s, 0,5H); 1,65 (br s, 0,5H); 1,30 (c, IH); 1,13 (t, 3H); 0,73 (s, 3H); 0,61 (c, 2H); 0,34 (c, 2H).
LRMS (elektrosprej, pozitívny): Da/e 364,3 (m+l).
Príklad 44
R1=CH2C3H5; R3=CO2CH3; diastereomér metyl 3-((lS)-l-hydroxyetyl)(3S,4S)-4-[3-(cyklopropylmetoxy)-4-metoxyfenyl]-3-metylpyrolidínkarboxylát
Pripravený z izoméru (lS)-karbinolu medziproduktu 75 pomocou metódy éterifikácie s K2CO3, ktorá je uvedená pri príklade 43, použitím brómmetylcyklopropánu.
'H NMR (400 MHz, CDC13, zmes rotamérov) δ: 6,84-6,75 (m, 3H); 3,89-3,58 (m, 11H); 3,33-3,20 (m, 3H); 1,52 (br s, IH); 1,31 (c, IH); 1,11 (d, 3H); 0,89 (s, 3H); 0,62 (m, 2H); 0,33 (m, 2H).
LRMS (elektrosprej, pozitívny): Da/e 364,3 (m+l).
Príklad 45
R‘=2-tiazol; R3=CO2CH3 metyl 3-((1 R)-l-hydroxyetyl)(3S,4S)-4-(4-metoxy-3-(l,3-tiazol-2-yloxy)fenyl)-3-metylpyrolidínkarboxylát
Pripravený z medziproduktu 74 pomocou metódy éterifikácie s K2CO3, ktorá je uvedená pri príklade 43, použitím brómtiazolu.
‘H NMR (400 MHz, CDC13, zmes rotamérov) δ: 7,24-7,12 (m, 3H); 6,96 (d, IH); 6,75 (d, IH); 3,89-3,52 (m, 1 IH); 3,29 (d, 0,5H); 3,20 (d, 0,5H); 1,74 (br s, IH); 1,14 (t, 3H); 0,74 (s, 3H).
LRMS (elektrosprej, pozitívny): Da/e 393,2 (m+l).
Príklad 46
R1=2-tiazol; R3= CO2CH3; diastereomér metyl 3-((1 S)-l-hydroxyetyl)(3S,4S)-4-(4-metoxy-3-(l,3-tiazol-2-yloxy)fenyl)-3-metylpyrolidínkarboxylát
Pripravený z izomérov (lS)-karbinolu medziproduktu 75 pomocou metódy éterifikácie s K2CO3, ktorá je uvedená pri príklade 43.
‘H NMR (400 MHz, CDC13, zmes rotamérov) δ: 7,17 (d, IH); 7,16 (d, IH); 7,11 (dd, IH); 6,97 (d, IH); 6,75 (d, IH); 3,86-3,59 (m, 9H); 3,42-3,19 (m, 3H); 1,52 (br s, IH); 1,14 (d, 3H); 0,87 (s, 3H).
LRMS (elektrosprej, pozitívny): Da/e 393,2 (m+l).
Príklad 47
R1=2-(N-metyl)benzimidazol; R3= CO2CH3 metyl 3-((lR)-l-hydroxyetyI)(3S,4S)-4-(3-benzimidazol-2-yloxy-4-metoxyfenyl)-3-metyl pyrolidínkarboxylát
Pripravený z medziproduktu 74 pomocou metódy éterifikácie s K2CO3, ktorá je uvedená pri príklade 43, s 2-chlór-N-metylbenzimidazolom.
'H NMR (400 MHz, CDC13, zmes rotamérov) δ: 7,50 (d, IH); 7,29-7,10 (m, 5H); 6,95 (d, IH); 3,80-3,66 (m, 13H); 3,57 (t, IH); 3,29 (d, 0,5H); 3,20 (d, 0,5H); 2,04 (br s, IH); 1,13 (t, 3H); 0,77 (s, 3H).
LRMS (elektrosprej, pozitívny): Da/e 440,2 (m+l).
Príklad 48
R1=2-(N-metyl)benzimidazol; R3= CO2CH3: diastereomér metyl 3-((lS)-l-hydroxyetyl)(3S,4S)-4-(3-benzimidazol-2-yloxy-4-metoxyfenyl)-3-metylpyrolidínkarboxylát
Pripravený z izoméru (lS)-karbinolu medziproduktu 75 pomocou metódy éterifikácie s K2CO3, ktorá je uvedená pri príklade 43, použitím 2-chlór-1 -metyl-1 H-benzimidazolu.
'HNMR (400 MHz, CDC13, zmes rotamérov) δ: 7,50 (d, IH); 7,50 (d, IH); 7,30-7,09 (m, 5H); 6,96 (d, IH); 3,87-3,63 (m, 12H); 3,40-3,21 (m, 3H); 1,15 (d, 3H); 0,91 (s, 3H).
LRMS (elektrosprej, pozitívny): Da/e 440,2 (m+l).
Príklad 49
R‘=CH2CH2CH2Ph; R3=CO2CH3 metyl 3-((1 R)-l-hydroxyetyl)(3S,4S)-4-[4-metoxy-3-(3-fenylpropoxy)fenyl]-3-metylpyrolidínkarboxylát
Pripravený z medziproduktu 74 pomocou metódy éterifikácie s K2CO3, ktorá je uvedená pri príklade 43, použitím 3-fenylpropylchloridu.
‘H NMR (400 MHz, CDC13, zmes rotamérov) δ: 7,35-7,17 (m, 5H); 6,85-6,77 (m, 3H); 4,02 (dt, 2H); 3,90-3,52 (m, 11H); 3,30 (d, 0,5H); 3,21 (d, 0,5H); 2,82 (t, 2H); 2,14 (p, 2H); 1,54 (br s, 0,5H); 1,49 (br s, 0,5H); 1,13 (t, 3H); 0,72 (s, 3H).
Príklad 50
Rl=CH2CH2CH2Ph; R3=CO2CH3 iný diastereomér karbinolu metyl 3-((lS)-l-hydroxyetyl)(3S,4S)-4-[4-metoxy-3-(3-fenylpropoxy)fenyl]-3-metyl pyrolidínkarboxylát
Pripravený z izoméru (lS)-karbinolu medziproduktu 75 pomocou metódy éterifikácie s K2CO3, ktorá je uvedená pri príklade 43, použitím izoméru (lS)-karbinolu medziproduktu 75.
‘H NMR (400 MHz, CDC13, zmes rotamérov) δ: 7,33-7,19 (m, 5H); 6,84-6,78 (m, 2H); 6,72 (br s, 1H); 4,01 (t, 2H); 3,90-3,56 (m, 9H); 3,34-3,23 (m, 3H); 2,82 (t, 2H); 2,15 (p, 2H); 1,11 (d, 3H); 0,89 (s, 3H).
Príklad 51
R‘=CH2CH2CH2CH2Ph; R3=CO2CH3 metyl 3-((lR)-l-hydroxyetyl)(3S,4S)-4-[4-metoxy-3-(3-fenylbutoxy)fenyl]-3-metylpyrolidínkarboxylát
Pripravený z medziproduktu 74 pomocou metódy éterifikácie s K2CO3, ktorá je uvedená pri príklade 43, použitím l-chlór-4-fenylbutánu.
'H NMR (400 MHz, CDC13, zmes rotamérov) δ: 7,32-7,15 (m, 5H); 6,84-6,74 (m, 3H); 4,00 (t, 2H); 3,89-3,51 (m, 11H); 3,30 (d, 0,5H); 3,22 (d, 0,5H); 2,69 (t, 2H); 1,90-1,79 (m, 4H); 1,41 (dd, 1H); 1,13 (t, 3H); 0,73 (s, 3H).
Príklad 52
R1=CH2CH2CH2CH2Ph; R3=CO2CH3 iný diastereomér karbinolu metyl 3-((lS)-l-hydroxyetyl)(3S,4S)-4-[4-metoxy-3-(4-fenylbutoxy)fenyl]-3-metylpyrolidínkarboxylát
Pripravený z medziproduktu 74 pomocou metódy éterifikácie s K2CO3, ktorá je uvedená pri príklade 43, použitím 1 -chlór-5-fenylpentánu.
'H NMR (400 MHz, CDC13, zmes rotamérov) δ: 7,32-7,16 (m, 5H); 6,83-6,70 (m, 3H); 3,99 (t, 2H); 3,90-3,58 (m, 9H); 3,34-3,21 (m, 3H); 2,69 (t, 2H); 1,90-1,77 (m, 4H); 1,45 (br s, 1H); 1,12 (d, 3H); 0,90 (s, 3H).
LRMS (elektrosprej, pozitívny): Da/e 442,4 (m+l).
Príklad 53
R1=CH?CH2Ph; R3=CO2CH3 metyl 3-((lR)-l-hydroxyetyl)(3S,4S)-4-[4-metoxy-3-(2-fenyletoxy)fenyl]-3-metylpyrolidínkarboxylát
Pripravený z medziproduktu 74 pomocou metódy éterifikácie s K2CO3, ktorá je uvedená pri príklade 43, použitím 2-fenetylbromidu.
'H NMR (400 MHz, CDC13, zmes rotamérov) δ: 7,39-7,23 (m, 5H); 6,84-6,78 (m, 3H); 4,20 (t, 2H); 3,87-3,52 (m, 11H); 3,30 (d, 0,5H); 3,21 (d, 0,5H); 3,15 (t, 2H); 1,13 (t, 3H); 0,73 (s, 3H).
LRMS (elektrosprej, pozitívny): Da/e 414,3 (m+l).
Príklad 54
R1=CH2CH2Ph; R3= CO2CH3 iný diastereomér karbinolu metyl 3-(( 1 S)-l-hydroxyetyl)(3S,4S)-4-[4-metoxy-3-(2-fenyletoxy)fenyl]-3-metyl pyrolidínkarboxylát
Pripravený z izoméru (lS)-karbinolu medziproduktu 75 pomocou metódy éterifikácie K2CO3, ktorá je uvedená pri príklade 43.
‘H NMR (400 MHz, CDC13, zmes rotamérov) δ: 7,34-7,24 (m, 5H); 6,83 (d, 1H); 6,79 (dd, 1H); 6,73 (br s, 1H); 4,18 (t, 2H); 3,89-3,56 (m, 9H); 3,31-3,20 (m, 3H); 3,15 (t, 2H); 1,11 (d, 3H); 0,89 (s, 3H).
Príklad 55
R*=C5H9; R3=CH2-2-pyridyl (1 R)-l -[(3S,4S)-4-(3-cyklopentyloxy-4-metoxyfenyl)-3-metyl- l-(2-pyridylmetyl)pyrolidin-3-yl]etan-1 -ol Metóda redukčného aminovania
Do miešaného roztoku medziproduktu 68 (32 mg; 0,1 mmol) a pyridín 2-karboxylaldehydu (10 ml; 0,1 pmol) v suchom 1,2-dichlóretáne (0,3 ml) sa pri laboratórnej teplote v dusíkovom prostredí pridal triacetoxyborohydrid sodíka (30 mg; 0,14 mmol). Po 3 hodinovom miešaní sa reakcia ochladila nasýteným vodným NaHCO3 (0,1 ml) a miešala 5 minút. Reakčná zmes sa rozriedila s EtOAc (20 ml), premyla nasýteným vodným NaHCO3 (20 ml) a soľným roztokom (20 ml), potom sa vysušila (MgSO4), prefiltrovala a skoncentrovala vo vákuu za vzniku titulnej zlúčeniny vo forme žltého oleja (40,4 mg; 98 %).
'H NMR (400 MHz, CDC13) δ: 8,54 (ddd, 1H); 7,68 (dt, 1H); 7,43 (d, 1H); 7,18 (ddd, 1H); 6,79-6,73 (m, 3H); 4,75 (c, 1H); 3,89-3,77 (m, 5H), 3,69 (q, 1H); 3,59 (t, 1H); 3,33 (t, 1H); 3,16 (d, 1H); 2,70 (t, 1H); 2,21 (d, 1H); 1,92-1,80 (m, 6H); 1,64-1,57 (m, 2H); 1,14 (d, 3H); 0,50, 3H).
LRMS (elektrosprej, pozitívny): Da/e 411,4 (m+1).
Príklad 56
R*=C5H9; R3=CH,-3-pyridyl (lR)-l-[(3S,4S)-4-(3-cyklopentyloxy-4-metoxyfenyl)-3-metyl-l-(3-pyridylmetyl)pyrolidin-3-yl]etan-l-ol
Pripravený z medziproduktu 68 pomocou metódy redukčného aminovania, ktorá je uvedená pri príklade 55, použitím pyridín-3-karboxaldehydu.
lH NMR (400 MHz, CDC13) δ: 8,54 (d, 1H); 8,51 (dd, 1H); 7,68 (d, 1H); 7,26 (dd, 1H); 6,78-6,71 (m, 3H); 4,74 (c, 1H); 3,86-3,78 (m, 4H); 3,68 (q, 1H); 3,64 (d, 1H); 3,53 (t, 1H); 3,22 (t, 1H); 3,05 (d, 1H); 2,62 (t, 1H); 2,14 (d, 1H); 1,92-1,78 (m, 6H); 1,64-1,56 (m, 2H); 1,12 (d, 3H); 0,50 (s, 3H).
LRMS (elektrosprej, pozitívny): Da/e 411,4 (m+1).
Príklad 57
R‘=C5H9; R3=CH2-4-pyridyl (lR)-l-[(3S,4S)-4-(3-cyklopentyloxy-4-metoxyfenyl)-3-metyl-l(4-pyridylmetyl)pyrolidin-3-yl]etan-l-ol
Pripravený z medziproduktu 68 pomocou metódy redukčného aminovania, ktorá je uvedená pri príklade 55, použitím pyridín-4-karboxaldehydu.
'H NMR (400 MHz, CDC13) δ: 8,54 (d, 2H); 7,27 (d, 2H); 6,79-6,72 (m, 3H); 4,74 (c, 1H); 3,86-3,74 (m, 4H); 3,70 (q, 1H); 3,64 (d, 1H); 3,55 (t, 1H); 3,23 (t, 1H); 3,06 (d, 1H); 2,64 (t, 1H); 2,15 (d, 1H); 1,92-1,80 (m, 6H); 1,65-1,58 (m, 2H); 1,14 (d, 3H); 0,52 (s, 3H).
LRMS (elektrosprej, pozitívny): Da/e 411,4 (m+1).
Príklad 58
R'=C5H9; R3=CH2CH2CO2CH2Ph fenylmetyl 3-[3-(lR)-l-hydroxyetyl)(3S,4S)-4-(3-cykIopentyloxy-4-metoxyfenyl)-3-metylpyrolidinyl]propanoát
Do miešaného roztoku benzylakrylátu (19,4 mg; 0,12 mmol) v suchom DMF (0,1 ml) sa v dusíkovom prostredí pridal medziprodukt 68 (12,8 mg; 0,04 mmol) a práškový K2CO3 (26,5 mg; 0,18 mmol). Vzniknutá zmes sa miešala pri teplote 80 °C počas 16 hodín, potom sa nechala vychladnúť na laboratórnu teplotu. Reakčná zmes sa zriedila s CH2C12 (20 ml), premyla vodou, nasýteným vodným NaHCO3 a soľným roztokom, potom sa vysušila (Na2SO4), prefiltrovala a skoncentrovala vo vákuu. Zvyšok sa prečistil flash chromatografiou (2 : 1 EtOAC:hexány na silikagéli) za vzniku vzorky 58 (11,7 mg; 60 %).
‘H NMR (400 MHz, CDC13) δ: 7,37-7,31 (m, 5H); 6,81-6,72 (m, 3H); 5,14 (q, 2H); 4,76 (c, 1H); 3,87-3,81 (m, 4H); 3,65 (q, 1H); 3,54 (t, 1H); 3,31 (t, 1H); 3,15 (d, 1H); 2,82 (dt, 2H); 2,62-2,54 (m, 3H); 2,08 (d, 1H); 1,91-1,81 (m, 6H); 1,66-1,56 (m, 2H); 1,15 (d, 3H); 0,48 (s, 3H).
LRMS (elektrosprej, pozitívny): Da/e 482,3 (m+l).
Príklad 59
R‘=C5H9; R3=CH2CH2CO2H kyselina 3-[3-((lR)-l-hydroxyetyl)(3S,4S)-4-(3-cyklopentyloxy-4-metoxyfenyl)-3-metylpyrolidinyl]propánová
Pripravená z titulnej zlúčeniny príkladu 58 pomocou debenzylačnej metódy uvedenej pri medziprodukte 31.
‘H NMR (400 MHz, CDClj) δ: 6,82-6,71 (m, 3H); 4,80 (c, 1H); 4,06-3,15 (m, 11H); 2,73 (br s, 2H); 1,91-1,74 (m, 6H); 1,63-1,53 (m, 2H); 1,14 (d, 3H); 0,68 (s, 3H).
Príklad 60
R'=C5H9; R3=CH2CO2CH2Ph fenylmetyl 2-[3-((lR)-l-hydroxyetyl)(3S,4S)-4-(3-cyklopentyloxy-4-metoxyfenyl)-3-metylpyrolidinyl]acetát
Pripravený z medziproduktu 68 použitím väzbovej metódy sprostredkovanej Hunigovou bázou, ktorá je uvedená pri medziprodukte 74, použitím benzylbrómacetátu.
'H NMR (400 MHz, CDClj) δ: 7,41-7,32 (m, 5H); 6,82-6,73 (m, 3H); 5,18 (q, 2H); 4,77 (c, 1H); 3,82 (s, 3H); 3,68 (q, 1H); 3,59 (t, 1H); 3,52 (d, 1H); 3,36-3,30 (m, 2H); 3,24 (d, 1H); 2,88 (t, 1H); 2,31 (d, 1H); 1,93-1,80 (m, 6H); 1,65-1,56 (m, 2H); 1,16 (d, 3H); 0,53 (s, 3H).
LRMS (elektrosprej, pozitívny): Da/e 468,3 (m+l).
Príklad 61
R‘=C5H9; R3=CH2CO2H kyselina 2-[3-((lR)-l-hydroxyetyl)(3S,4S)-4-(3-cyklopentyloxy-4-metoxyfenyl)-3-metylpyrolidinyl]octová
Pripravená z titulnej zlúčeniny príkladu 60 pomocou debenzylačnej metódy uvedenej pri medziprodukte 31.
‘H NMR (400 MHz, CDClj) δ: 6,77-6,68 (m, 3H); 5,56 (br s, 1H); 4,77 (c, 1H); 3,99-3,85 (m, 4H); 3,82-3,59 (m, 7H); 2,88 (brs, 1H); 1,91-1,75 (m, 6H); 1,59-1,51 (m, 2H); 11,1 (d, 3H); 0,67 (s, 3 H).
LRMS (elektrosprej, negatívny): Da/e 376,2 (m-l).
Príklad 62
R‘=C5H9; R3=COCH(OAc)Ph
2-[(3R)-R-((lR)-l-hydroxyetyl)-4-(3-cyklopentyloxy-4-metoxyfenyl)-3-metylpyrolidinyl]-2-oxo-l-fenyletylacetát
Pripravený z medziproduktu 68 (104 mg; 0,33 mmol) a chloridu kyseliny O-acetyl mandľovej (75 pl, 0,33 mmol) pomocou acylačnej metódy uvedenej pri príklade 7 za vzniku titulnej zlúčeniny (149 mg; 100 %).
'H NMR (400 MHz, CDClj) δ: 7,60-7,37 (m, 5H); 6,82-6,70 (m, 3H); 6,08 (m, 1H); 4,76 (m, 1H); 4,05-4,32 (m, 7H); 3,81 (s, 3H); 2,20 (s, 3H); 1,95-1,53 (br m, 5H); 1,13 a 0,51 (dublety, 3H, rotaméry); 0,79 a 0,41 (singlety, 3H, rotaméry).
Príklad 63
R‘=C5H9; R3=COCH(OH)Ph
-[(3R)-3-(( 1 R)-1 -hydroxyetyl)-4-(3-cyklopentyloxy-4-metoxyfenyl)-3-metylpyrolidinyl]-2-hydroxy-2-fenyletan-l-ón
Pripravený z titulnej zlúčeniny príkladu 62 pomocou metódy hydrolýzy prostredníctvom LiOH, ktorá je uvedená pri medziprodukte 5, za vzniku titulnej zlúčeniny príkladu 63 vo forme bielej peny (99 mg; 66 %).
*H NMR (400 MHz, CDClj) δ: 7,41-7,26 (m, 5H); 6,80-6,41 (m, 3H); 5,16-5,07 (m, 1H); 4,75-4,54 (multiplety, 1H, rotaméry a diastereoméry, 4,06-2,80 (m, 7H); 3,81 a 3,79 a 3,78 (singlety, 3H, rotaméry a diastereoméry); 1,95-1,55 (br m, 5H); 1,15 a 1,02 (dublety, 3H, rotaméry); 0,77 a 0,75 a 0,46 a 0,38 (singlety, 3 H, rotaméry a diastereoméry).
LRMS (elektrosprej, pozitívny): Da/e 454,5 (m+1).
Príklad 64
R‘=C5H9; R3=COCH2OCH2Ph l-[3-((lR)-l-hydroxyetyl)(3S,4S)-4-(3-cyklopentyloxy-4-metoxyfenyl)-3-metylpyrolidinyl]-2-(fenylmetoxy)etan-l-ón
Pripravený z medziproduktu 68 (176 mg; 0,574 mmol) pomocou metódy s Hunigovou bázou, ktorá je uvedená pri medziprodukte 74, použitím benzyloxyacetylchloridu (31 μΐ, 0,22 mmol; 2 ekv.) za vzniku číreho, bezfarebného oleja (79 mg; 29 %).
‘H NMR (400 MHz, CDClj zmes rotamérov) δ: 7,38-7,28 (m, 5H); 6,77-6,73 (m, 3H); 4,73-4,71 (m, 1H); 4,65-4,64 (m, 2H); 4,14-3,19 (c, 12H); 2,07-1,56 (m, 8H); 1,16-1,09 (dd, 3H); 0,72 (s, 3H).
Príklad 65
R‘=C5H9; R3=COCH2OH l-[3-((lR)-l-hydroxyetyl)(3S,4S)-4-(3-cyklopentyloxy-4-metoxyfenyl)-3-metylpyrolidinyl]-2-hydroxyetan-1-ón
Pripravený z titulnej zlúčeniny príkladu 64 pomocou debenzylačnej metódy uvedenej pri medziprodukte 31 za vzniku bielej tuhej látky (47 mg; 73 %).
'H NMR (400 MHz, CDClj zmes rotamérov) δ: 6,82-6,76 (m, 3H); 4,75-4,73 (m, 1H); 4,15-3,04 (c, 12H); 1,92-1,61 (m, 9H); 1,27-1,24 (dd, 3H); 0,76 (s, 3H).
LRMS (elektrosprej, pozitívny): Da/e 378,2 (m+1).
Príklad 66
R*=C5H9; R3=(S)-COCH(OAc)CH3
2-[3-((lR)-l-hydroxyetyl)(3S,4S)-4-(3-cyklopentyloxy-4-metoxyfenyl)-3-metylpyrolidinyl](lS)-l-metyl-2-oxoetylacetát
Pripravený z medziproduktu 68 (106 mg; 0,330 mmol) pomocou acylačnej metódy uvedenej pri príklade 7 použitím (S)-(-)-2-acetoxy- propionylchloridu (84 μί, 0,66 mmol; 2 ekv.), za vzniku číreho, bezfarebného oleja, ktorý sa ďalej nečistil.
Príklad 67
R^CsHg; R3=(S)-COCH(OH)CH3 l-[3-((lR)-l-hydroxyetyl)(3S,4S)-4-(3-cyklopentyloxy-4-metoxyfenyl)-3-metylpyrolidinyl](2S)-2-hydroxypropán-1-ón
Surová zlúčenina príkladu 66 bola podrobená deprotekcii pomocou metódy LiOH uvedenej pri medziprodukte 5, za vzniku titulnej zlúčeniny vo forme bielej tuhej látky (22 mg; 17 % pre dva kroky).
'H NMR (400 MHz, CDC13) δ: 6,82-6,76 (m, 3H); 4,75-4,73 (m, 1H); 4,38-4,35 (m, 1H); 3,88-3,55 (c, 9H); 3,39-3,25 (dd, 1H); 1,92-1,58 (m, 9H); 1,41-1,36 (dd, 3H); 1,18-1,14 (dd, 3H); 0,77-0,76 (d, 3H).
LRMS (elektrosprej, pozitívny): Da/e 392,3 (m+1).
Príklad 68
R’=C5H9; R3=CO(CH2CH2)OAc {[3-((lR)-l-hydroxyetyl)(3S,4S)-4-(3-cykIopentyloxy-4-metoxyfenyl)-3-metylpyrolidinyl]karbonyl}cyklopropylacetát
Medziprodukt 68 (97,6 mg; 0,306 mmol) sa acyloval pomocou acylačnej metódy uvedenej pri príklade 7 použitím 2-acetoxy-2-cyklopropán- etanoylchloridu (99 mg; 0,61 mmol; 2 ekv.) za vzniku číreho, bezfarebného oleja (77 mg; 56 %).
'H NMR (400 MHz, CDC13, zmes rotamérov) δ: 6,78-6,71 (m, 3H); 4,72-4,71 (m, 1H); 3,80-3,36 (c, 10H); 2,08 (s, 3H); 1,90-1,50 (ημ 11H); 1,16-1,11 (d, 3H); 0,96 (br s, 1H); 1,18-1,14 (dd, 3H); 0,70 (s, 3H).
Príklad 69
R‘=C5H9; R3=CO(CH2CH2)OH
3-((lR)-l-hydroxyetyi)(3S,4S)-4-(3-cyklopentyloxy-4-metoxyfenyl)-3-metylpyrolidinylhydroxicyklopropylketón
Zlúčenina príkladu 68 (77 mg) sa hydrolyzovala pomocou metódy LiOH uvedenej pri medziprodukte 5, za vzniku titulnej zlúčeniny vo forme bielej tuhej látky (34 mg; 44 % pre dva kroky).
*H NMR (400 MHz, CDCfi zmes rotamérov) δ: 6,80-6,75 (m, 3H); 4,74-3,33 (c, 10H); 2,30 (br s, 1H); 1,93-1,56 (m, 8H); 1,37-0,89 (m, 8H); 0,74-0,72 (d, 3H).
LRMS (elektrosprej, pozitívny): Da/e 404,4 (m+l).
Príklad 70
R‘=C5H9; R3=COCH(OAc)(CH3)CH3
2-[3-((lR)-l-hydroxyetyl)(3S,4S)-4-(3-cyklopentyloxy-4-metoxyfenyl)-3-metylpyrolidinyl]-l,l-dimetyl-2-oxoetylacetát
Medziprodukt 68 (124 mg; 0,389 mmol) sa acyloval pomocou acylačnej metódy uvedenej pri príklade 7 použitím (+)-2-acetoxy-2-metylpropionyl chloridu (11 μΙ, 0,78 mmol; 2 ekv.). Výsledný olej nebol ďalej čistený.
Príklad 71
R-C5H9; R3=COCH(OH)(CH3)CH3
-[3-(( 1 R)-1 -hydroxyetyl)(3S,4S)-4-(3-cyklopentyloxy-4-metoxyfenyl)-3-metylpyrolidinyl]-2-hydroxy-2-mety Ipropan-1-ón
Surový produkt príkladu 70 sa konvertoval pomocou metódy hydrolýzy prostredníctvom LiOH, ktorá je uvedená pri medziprodukte 5, za vzniku titulnej zlúčeniny vo forme bielej tuhej látky (47 mg; 30 %).
‘H NMR (400 MHz, CDCfi zmes rotamérov) δ: 6,79-6,75 (m, 3H); 4,75 (br s, 1H); 4,49 (br s, 1H); 3,91-3,48 (c, 10H); 1,90-1,46 (m, 14H); 1,18-1,14 (dd, 3H); 0,77-0,74 (d, 3H).
LRMS (elektrosprej, pozitívny): Da/e 406,3 (m+l).
Príklad 72
R‘=C5H9; R3=COCO2CH3 metyl 2-[3-((lR)-l-hydroxyetyl)(3S,4S)-4-(3-cyklopentyloxy-4-metoxyfenyl)-3-metylpyrolidinyl]-2-oxoacetát
Medziprodukt 68 (57,5 mg; 0,180 mmol) sa konvertoval pomocou metódy DIEA uvedenej pri medziprodukte 32 použitím metyloxalylchloridu za vzniku titulnej zlúčeniny vo forme číreho, bezfarebného oleja (26,8 mg; 36 %).
‘H NMR (400 MHz, CDCl,) δ: 6,81-6,77 (m, 3H); 4,75-4,74 (m, IH); 4,12-3,45 (c, 13H); 1,91-1,52 (m,
8H); 1,18-1,13 (dd, 3H); 0,78-0,75 (d, 3H).
LRMS (elektrosprej, pozitívny): Da/e 406,4 (m+l).
Príklad 73
R1=C5H9; R3=COCO2H kyselina 2-(3-((1 R)-1 -hydroxyetyl)(3S,4S)-4-(3-cyklopentyloxy-4-metoxyfenyl)-3-metylpyrolidinyl]-2-oxooctová
Zlúčenina príkladu 72 (46,8 mg; 0,116 mmol) sa konvertovala pomocou metódy LiOH uvedenej pri medziprodukte 5, za vzniku zlúčeniny príkladu 73 vo forme čírej, bezfarebnej tenkej vrstvy (34 mg; 76 %).
‘H NMR (400 MHz, CDCl,) δ: 6,82-6,76 (m, 3H); 4,75-4,73 (m, IH); 4,43-3,49 (c, 10H); 1,92-1,58 (m, 8H); 1,19-1,16 (dd, 3H); 0,78-0,76 (d, 3H).
LRMS (elektrosprej, negatívny): Da/e 390,2 (m-l).
Príklad 74
R'=C5H9; R3=COCONH2
2-(3-((1 R)-l-hydroxyetyl)(3S,4S)-4-(3-cyklopentyloxy-4-metoxyfenyl)-3-metylpyrolidinyl]-2-oxoacetamid
Zlúčenina príkladu 72 (7,1 mg; 0,014 mmol) sa rozpustila v THF (0,5 ml), pridal sa NH4OH (0,5 ml), aparatúra sa tesne uzavrela a miešalo sa pri laboratórnej teplote počas 2 hodín. TLC (1:1 EtOAc : hexány) ukázala úplné spotrebovania východiskových látok. Reakčná zmes sa zriedila s EtOAc (20 ml) a organické vrstvy sa premyli soľným roztokom (2x15 ml). Organické vrstvy sa presušili pomocou Na2SO4 a skoncen35 trovali vo vákuu za vzniku číreho, bezfarebného oleja (6,6 mg; 117 %).
‘H NMR (400 MHz, CDC13) δ: 7,36 (br s, IH); 6,82-6,79 (m, 3H); 5,53 (br s, IH); 4,76-4,75 (m, IH);
4,44.3,47 (c, 10H); 1,92-1,58 (m, 8H); 1,18-1,17 (d, 3H); 0,78-0,74 (d, 3H).
LRMS (elektrosprej, negatívny): Da/e 389,1 (m-l).
Príklad 75
R'=PhOCCH2 ; R3=COCONH2
2-{(3S,4S)-3-((R)-l-hydroxyetyl)-4-[4-metoxy-3-(3-fenylprop-2-inyloxy)-fenyl]-3-metylpyrolidin-l-yl}-2-oxoacetamid
Pripravený acyláciou medziproduktu 73 s metyloxalylchloridom pomocou metódy DIEA uvedenej pri 10 medziprodukte 32, odstránením t-butylovej skupiny pomocou metódy uvedenej pri medziprodukte 72, O-alkyláciou s medziproduktom 90 pomocou metódy éterifikácie K2CO3, ktorá je uvedená pri príklade 43 a amidáciou pomocou metódy, ktorá je uvedená pri príklade 74, 'H NMR údaje δ: 7,28-7,42 (m, 5H); 7,08 (sd, IH); 6,83-6,87 (m, 2H); 5,45 (bs, IH); 5,0 (s, 2H); 4,42-4,48 (2d, 0,5H); 4,26 (t, 0,5H); 3,72-4,01 (m, 3,5H); 3,89 (s, 3H); 3,50-3,70 (m, IH); 3,44 (d, 0,5H); 0,9615 -0,99 (dd, 3H); 0,71 (d, 3H).
Príklad 76
R‘=4-CF,PhOCCH2; R3=COCONH2
2-(3S,4S)-3-((R)-l-hydroxyetyl)-4-{4-metoxy-3-[3-(4-trifluórmetylfenyl)prop-2-inyloxy]-fenyl}-3-metylpyrolidin-1 -yl)-2-oxo-acetamid
Pripravený, tak ako je uvedené v prípade príkladu 75, použitím medziproduktu 92 ako O-alkylačného činidla.
'H NMR údaje δ: 7,50-7,61 (m, 4H); 7,04 (s, IH); 6,85-6,91 (m, 2H); 5,69 (bs, IH); 5,00 (s, 2H); 4,42-4,49 (2d, 0,5H); 4,26 (t, 0,5H); 3,69-4,07 (m, 5H); 3,90 (s, 3H); 3,45-3,58 (m, IH); 1,04-1,07 (dd, 3H); 0,73 (d, 3H).
Príklad 77
R‘=4-FPhOCH2CH2CH2; R3=COCONH2
2-[(3S,4S)-4-{3-[3-(4-fluórfenoxy)propoxy]-4-metoxyfenyl}-3-((R)-l-hydroxyetyl)-3-metylpyrolidin-l-yl)-2-oxoacetamid
Pripravený, tak ako je uvedené v prípade príkladu 75, použitím l-(3-chlórpropoxy)-4-fluórbenzénu ako alkylačného činidla.
'H NMR údaje δ: 6,93-6,99 (m, 2H); 6,82-6,88 (m, 5); 5,44 (s, 1H); 4,40 (dd, 0,5H); 4,14-4,22 (m, 5H); 3,83 (s, 3H); 3,69-4,04 (m, 5H); 3,56 (d, 0,5H); 2,28 (kvínt, 2H); 1,16 (dd, 3H); 0,75 (d, 3H).
Príklad 78
R‘=CH2C3H5; R3=COCONH2
2-[(3S,4S)-4-(3-cyklopropylmetoxy-4-metoxyfenyl)-3-((R)-l-hydroxyetyl)-3-metylpyrolidin-l-yl)-2-oxoacetamid
Pripravený, tak ako je uvedené v prípade príkladu 75, použitím cyklopropylmetylbromidu ako alkylačného činidla.
‘H NMR údaje δ: 6,80-6,81 (m, 3H); 5,50 (bs, 1H); 4,40 (2d, 0,5H); 4,23 (t, 0,5H); 3,68-4,05 (m, 7H); 3,84 (s, 3H); 1,40 (t, 1H); 1,17 (sd, 3H); 0,76 (d, 3H); 0,61-0,67 (m, 2H); 0,33-0,38 (m, 2H).
Príklad 79
R‘=2-indanyl; R3=COCONH2
2-{(3S,4S)-3-((R)-l-hydroxyetyl)-4-[3-(indán-2-yloxy)-4-metoxyfenyl]-3-metylpyrolidin-l-yl}-2-oxoacetamid
Pripravený, tak ako je uvedené v prípade príkladu 75, použitím 2-brómindánu ako alkylačného činidla.
‘H NMR údaje δ: 7,16-7,24 (m, 4H); 6,84-6,87 (m, 3H); 5,51 (s, 1H); 5,17-5,20 (m, 1H); 4,42-4,5 (2d,
0,5H); 4,24 (t, 0,5H); 3,60-4,06 (m, 6H); 3,81 (s, 3H); 3,20-3,40 (m, 4H); 1,20 (sd, 3H); 0,78 (d, 3H).
Príklad 80
R'=C5H9; R3=COCONHCH3
2-(3-((1 R)-l-hydroxyetyl)(3S,4S)-4-(3-cyklopentyloxy-4-metoxyfenyl)-3-metylpyrolidinyl]-N-metyl-2-oxoacetamid
Titulná zlúčenina príkladu 72 (17,3 mg; 0,0427 mmol) sa rozpustila v THF (0,8 ml). Pridal sa metylamín (40 % vo vode, 0,5 ml) a aparatúra sa tesne uzavrela a miešala počas 1 hodiny pri laboratórnej teplote. TLC (3 : 1 EtOAc : hexány) indikovala úplné spotrebovanie východiskových látok. Reakčná zmes sa rozriedila s EtOAc (20 ml) a organické vrstvy sa premyli v soľnom roztoku (2x15 ml). Organická vrstva sa vysušila pomocou Na7SO4 a skoncentrovala vo vákuu za vzniku číreho, bezfarebného oleja (16,9 mg; 97 %).
'H NMR(400 MHz, CDC13) δ: 7,59 (br s, 1H); 6,80-6,79 (m, 3H); 4,75-4,73 (m, 1H); 4,47-3,46 (c, 10H); 2,89-2,87 (dd, 3H); 1,91-1,57 (m, 8H); 1,18-1,16 (dd, 3H); 0,76-0,73 (d, 3H).
LRMS (elektrosprej, pozitívny): Da/e 405,1 (m+l).
Príklad 81
R1=C5H9; R3=COCO-piperidín l-[3-((lR)-l-hydroxyetyl)(3S,4S)-4-(3-cyklopentyloxy-4-metoxyfenyl)-3-metylpyrolidinyl]-2-piperidyletán 1,2-dión
Titulná zlúčenina príkladu 72 (25,4 mg; 0,0626 mmol) sa rozpustila v THF (0,8 ml). Pridal sa piperidín (213 μΐ, 2,15 mmol; 34 ekv.) a aparatúra sa tesne uzavrela a zohriala na 53 °C na čas 12 hodín. TLC (100 % EtOAC) indikovala malé množstvo tvorby produktu. Reakčná zmes sa zriedila s EtOAc (20 ml), organické vrstvy sa premyli s 2N HCI (2x15 ml), IN NaOH (15 ml) a soľným roztokom (2x15 ml). Organická vrstva sa vysušila pomocou Na2SO4 a skoncentrovala vo vákuu za vzniku číreho, bezfarebného oleja (1,2 mg; 4 %).
‘H NMR (400 MHz, CDC1,) δ: 6,82-6,76 (m, 3H); 4,75 (m, IH); 4,01-3,27 (c, 14H); 1,89-1,59 (m, 14H); 1,18-1,13 (dd, 3H); 0,78-0,74 (d, 3H).
Príklad 82
R‘=C5H9; R3=COCONHC5H9
2-(3-((1 R)-l-hydroxyetyl)(3S,4S)-4-(3-cyklopentyloxy-4-metoxyfenyl)-3-metylpyrolidinyl]-N-cyklopentyl-2-oxoacetamid
Titulná zlúčenina príkladu 72 (20,9 mg; 0,0515 mmol) sa rozpustila v THF (0,8 ml). Pridal sa cyklopentylamín (211 μΐ, 2,13 mmol; 41 ekv.) a reakčná zmes sa miešala pri laboratórnej teplote počas 42 hodín. Reakčná zmes sa zriedila s EtOAc (20 ml) a organické vrstvy sa premyli s 2N HCI (2x15 ml), IN NaOH (15 ml) a soľným roztokom (2x15 ml). Organická vrstva sa vysušila pomocou Na2SO4 a skoncentrovala vo vákuu. Výsledný olej sa prečistil kremíkovou chromatografiou (100 % EtOAc) za vzniku číreho, bezfarebného oleja (14,0 mg; 59 %).
'H NMR (400 MHz, CDC13) δ: 7,57-7,53 (br s, IH); 6,8-6,78 (m, 3H); 4,76-4,73 (br s, IH); 4,48-3,44 (c, 9H); 2,04-1,48 (m, 18H); 1,18-1,16 (d, 3H); 0,77-0,73 (d, 3H).
LRMS (elektrosprej, negatívny): Da/e 457,2 (m-l).
Príklad 83
R'=C5H9; R3=COCONHCH2Ph
2-(3-((1 R)- l-hydroxyetyl)(3 S, 4S)-4-(3-cyklopentyIoxy-4-metoxyfenyl)-3-metylpyrolidinyl]-2-oxo-N-benzylacetamid
Titulná zlúčenina príkladu 83 bola pripravená metódou príkladu 82 použitím benzylamínu za vzniku číreho, bezfarebného oleja (9,4 mg; 47 %).
‘H NMR (400 MHz, CDC13) δ: 7,96-7,92 (br s, 1H); 7,36-7,25 (m, 3H); 4,75 (br s, 1H); 4,49-4,47 (d, 2H); 4,28-3,46 (c, 9H); 1,93-1,61 (m, 8H); 1,19-1,16 (dd, 3H); 0,78-0,74 (d, 3H).
LRMS (elektrosprej, pozitívny): Da/e 481,4 (m+l).
Príklad 84
R1=C5H9; R3=(R)-COCH(C4H9)NHCO2CH2Ph
N-{(lR)-2-[3-((l R)-1 -hydroxy etyl)(3S,4S)-4-(3-cyklopentyloxy-4-metoxyfenyl)-3-metylpyrolidinyl]-l-butyl-2-oxoetyl}(fenylmetoxy)karboxamid
Medziprodukt 68 (39,5 mg; 0,129 mmol) sa konvertoval použitím DIEA metódy uvedenej pri medziprodukte 32 za vzniku číreho, bezfarebného oleja (59,0 mg; 80 %).
‘H NMR (400 MHz, CDC13 zmes rotamérov) δ: 7,36-7,26 (m, 5H); 6,82-6,71 (m, 3H); 5,71-5,68 (dd, 1H); 5,12-5,06 (m, 2H); 4,73 (m, 1H); 4,49-4,47 (m, 1H); 4,12-2,58 (c, 8H); 2,03-1,25 (m, 16H); 1,16-1,14 (dd, 3H); 0,92-0,84 (m, 3H); 0,73-0,72 (d, 3H).
Príklad 85
R‘=C5H9; R3=(R)-COCH(NH2)C4H9 (2R)-l-[3-((lR)-l-hydroxyetyl)(3S,4S)-4-(3-cyklopentyloxy-4-metoxyfenyl)-3-metyIpyrolidinyl]-2-aminohexan-1-ón
Titulná zlúčenina príkladu 84 (59 mg; 0,10 mmol) sa konvertovala pomocou debenzylačnej metódy uvedenej pri medziprodukte 31 za vzniku zlúčeniny príkladu 85 vo forme bieleho prášku (43 mg; 95 %).
‘H NMR (CD3OD, 400 MHz, zmes rotamérov) δ: 6,90-6,83 (m, 3H); 3,85-3,30 (c, 10H); 2,00-1,37 (m, 14H); 1,14-1,11 (dd, 3H); 1,10-0,92 (dt, 3H); 0,77 (s, 3H).
LRMS (elektrosprej, pozitívny): Da/e 433,5 (m+l).
Príklad 86
R1=C5H9;R3=(R)-COCH(i-Pr)NHCO2CH2Ph
N-{(lR)-2-[3-((lR)-l-hydroxyetyl)(3S,4S)-4-(3-cyklopentyloxy-4-metoxyfenyl)-3-metylpyrolidinyl]-l-(metyletyl)-2-oxoetyl}(fenylmetoxy)-karboxamid
Medziprodukt 68 (43,7 mg; 0,143 mmol) sa acyloval metódou Hunigovej bázy, ktorá je uvedená pri medziprodukte 74, použitím Z-D-Val-Osu (54,6 mg; 0,15 mmol; 1,1 ekv.), za vzniku číreho, bezfarebného oleja (38,9 mg; 49 %).
'H NMR (400 MHz, CDCfi zmes rotamérov) δ: 7,36-7,73 (m, 5H); 6,80-6,71 (m, 3H); 5,62-5,59 (d, 1H); 5,10-5,06 (m, 2H); 5,84-5,72 (m, 1H); 4,12-2,68 (c, 10H); 2,03-1,52 (m, 9H); 1,18-1,14 (dd, 3H); 1,04-0,92 (m, 7H); 0,73-0,70 (d, 3H).
Príklad 87
R‘=C5H9; R3=(R)-COCH(i-Pr)NH2 (2R)-1 -[3-(( 1 R)-1 -hydroxyetyl)(3S,4S)-4-(3-cyklopentyloxy-4-metoxyfenyl)-3-metylpyrolidinyl]-2-amino-3-metylbutan-l-ón
Titulná zlúčenina príkladu 86 (38,9 mg; 0,070mmol) sa konvertovala pomocou debenzylačnej metódy uvedenej pri medziprodukte 31 za vzniku zlúčeniny príkladu 87 vo forme čírej tuhej látky (26 mg; 88 %).
'H NMR (400 MHz, CDCfi) δ: 6,42-6,33 (m, 3H); 4,36 (m, 1H); 3,62-2,80 (c, 10H); 2,81-2,68 (m, 1H); 1,42-1,08 (m, 9H); 0,78-0,65 (m, 9H); 0,24 (s, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitívny): Da/e 419,5 (m+l).
Príklad 88
R1=C5H9; R3=(S)-COCH(OAc)C6H,,
2-[3-(( 1 R)-1 -hydroxyetyl)(3 S,4S)-4-(3-cyklopentyloxy-4-metoxyfenyl)-3-metylpyrolidiny 1]( 1 S)-1 -cyklohexyl-2-oxoetylacetát
Medziprodukt 68 (41,2 mg; 0,129 mmol) sa acyloval pomocou metódy Hunigovej bázy, ktorá je uvedená pri medziprodukte 74, použitím chloridu kyseliny (S)-(+)-acetoxyhexahydromandľovej (625 μΙ, 0,4121 M v CH2C12, 2 ekv.) za vzniku zlúčeniny príkladu 88 vo forme číreho, bezfarebného oleja (40,5 mg; 63 %).
’H NMR (400 MHz, CDCfi, zmes rotamérov) δ: 6,78-6,77 (m, 3H); 4,84-4,72 (m, 2H); 4,12-3,11 (m, 9H); 2,10 (d, 3H); 2,02-1,68 (m, 1 5H); 1,38-0,99 (m, 10H); 0,81-0,74 (d, 3H).
Príklad 89
Ri=C5H9; R3=(S)-COCH(OH)C6Hh l-[3-((lR)-l-hydroxyetyl)(3S,4S)-4-(3-cyklopentyloxy-4-metoxyfenyl)-3-metylpyrolidinyl](2S)-2-cyklohexyl-2-hydroxyetan-l-ón
Titulná zlúčenina príkladu 88 (40,5 mg; 0,0807 mmol) bola konvertovaná pomocou procedúry hydrolýzy prostredníctvom LiOH, ktorá je uvedená pri medziprodukte 5, za vzniku zlúčeniny príkladu 89 vo forme číreho, bezfarebného oleja (26,9 mg; 72 %).
'H NMR (400 MHz, CDC13, zmes rotamérov) δ: 6,80-6,78 (m, 3H); 4,73 (m, 1H); 4,14-4,06 (m, 1H); 3,83-2,99 (c, 9H); 1,91-1,36 (m, 1 7H); 1,35-1,11 (m, 7H); 0,79-0,78 (d, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitívny): Da/e 460,3 (m+1).
Príklad 90
R1=C5H9; R3=(R)-COCH(OAc)C6H„
1-(3-((1 R)- l-hydroxyetyl)(3S,4S)-4-(3-cyklopentyloxy-4-metoxyfenyl)-3-metylpyrolidinyl](2R)-2-cyklohexyl-2-acetoxyetan-l-ón
Medziprodukt 68 (43,1 mg; 0,135 mmol) bol konvertovaný pomocou metódy Hunigovej bázy, ktorá je uvedená pri medziprodukte 74, použitím chloridu kyseliny (R)-(-)-acetoxyhexahydromandľovej (368 μΐ, 0,734 M in CH2C12, 2 ekv.) za vzniku číreho, bezfarebného oleja (59,9 mg; 88 %).
‘H NMR (400 MHz, CDC13, zmes rotamérov) δ: 6,84-6,64 (m, 3H); 4,78-4,76 (m, 2H); 4,12-2,65 (c, 9H); 2,11 (d, 3H); 2,10-1,51 (m, 15H); 1,38-0,98 (m, 10H); 0,73-0,65 (d, 3H).
Príklad 91
R‘=C5H9; R3=(R)-COCH(OH)C6H|, (2R)-1-(3-((1 R)- l-hydroxyetyl)(3S,4S)-4-(3-cyklopentyloxy-4-metoxyfenyl)-3-metylpyrolidinyl]-2-cyklohexyl-2-hydroxyetan-1 -ón
Tiulná zlúčenina príkladu 90 (59,9 mg; 0,119 mmol) bola konvertovaná pomocou metódy hydrolýzy prostredníctvom LiOH, ktorá je uvedená pri medziprodukte 5, za vzniku čírej, bezfarebnej tenkej vrstvy (46,6 mg; 84 %).
'H NMR (400 MHz, CDC13, zmes rotamérov) δ: 6,85-6,74 (m, 3H); 4,79-4,72 (m, 1H); 4,13-4,07 (m, 1H); 3,87-3,01 (c, 9H); 1,96-1,34 (m,.l 7H); 1,34-1,08 (m, 7H); 0,78-0,77 (d, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitívny): Da/e 460,4 (m+1).
Príklad 92
R*=C5H9; R3=(S)-COCH(C4H9)NHCO2CH2Ph
N-{2-[3-((lR)-l-hydroxyetyl)(3S,4S)-4-(3-cyklopentyloxy-4-metoxyfenyl)-3-metylpyrolidinyl]-(lS)-l-butyl-2-oxoetyl}(fenylmetoxy)karboxamid
Medziprodukt 68 (40,6 mg; 0,125 mmol) bol konvertovaný pomocou metódy Hunigovej bázy, ktorá je uvedená pri medziprodukte 74, použitím Z-L-Nle-ONp (53 mg; 0,15 mmol; 1,1 ekv.) za vzniku zlúčeniny príkladu 92 vo forme číreho, bezfarebného oleja (50,4 mg; 71 %).
'H NMR (400 MHz, CDCl3),zmes rotamérov) δ: 7,36-7,25 (m, 5H); 6,80-6,75 (m, 3H); 5,74-5,72 (dd, 1H); 5,10-5,06 (m, 2H); 4,74-4,53 (m, 1H); 4,13 (m, 1H); 4,13-3,35 (c, 8H); 1,95-1,24 (m, 16H); 1,14-1,13 (d, 3H); 0,93-0,87 (m, 3H); 0,74 (s, 3H).
Príklad 93
R'=C5H9; R3=(S)-COCH(C4H9)NH2 l-[3-((lR)-l-hydroxyetyl)(3S,4S)-4-(3-cyklopentyloxy-4-metoxyfenyl)-3-metylpyrolidinyl](2S)-2-aminohexan-l-ón
Titulná zlúčenina príkladu 92 (50,4 mg; 0,0889 mmol) bola podrobená debenzylačnej procedúre uvedenej pri medziprodukte 31 za vzniku zlúčeniny príkladu 93 vo forme bielej tuhej látky (31,7 mg; 82 %).
'H NMR (400 MHz, CDC13, zmes rotamérov) δ: 6,89-6,74 (m, 3H); 4,83-4,75 (m, 1H); 4,40-3,32 (c, 10H); 1,99-1,68 (m, 14H); 1,14-1,12 (m, 3H); 1,04-0,95 (d, 3H); 0,91-0,88 (d, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitívny): Da/e 433,5 (m+1).
Príklad 94
R‘=C5H9; R3=(R)-COCH(OAc)CH2)3CH3 (lR)-2-[3-((lR)-l-hydroxyetyl)(3S,4S)-4-(3-cyklopentyloxy-4-metoxyfenyl)-3-metylpyrolidinyl]-l-butyl-2-xoetylacetát
Pripravený z medziproduktu 68 pomocou väzbovej metódy Hunigovej bázy, ktorá je uvedená pri medziprodukte 74, použitím (lR)-l-(chlórkarbonyl)pentylacetátu.
‘H NMR (400 MHz, CDC13, zmes rotamérov) δ: 6,81 (m, 2H); 6,79-6,69 (m, 3H); 5,10-5,02 (m, 1H); 4,79-4,73 (m, 1H); 4,14-3,18 (c, 9H); 2,14 (d, 3H); 1,94-1,76 (m, 8H); 1,53-1,34 (m, 4H); 1,20 (dd, 2H); 0,96-0,86 (m, 3H); 0,74 (d, 3H).
Príklad 95
R‘=C5H9; R3=(R)-COCH(OH)(CH2)CH3 (2R)-l-[3-((lR)-l-hydroxyetyl)(3S,4S)-4-(3-cyklopentyloxy-4-metoxyfenyl)-3-metylpyrolidinyl]-2-hydroxyexan-l-ón
Titulná zlúčenina príkladu 94 (5 mg; 0,011 mmol) sa hydrolyzovala s LiOH za vzniku zlúčeniny príkladu 95 (2,5 mg; 55 %), vo forme čírej tenkej vrstvy.
'H NMR (metanol-d4, 400 MHz) δ: 6,91-6,80 (m, 3H); 25 4,34-4,28 (m, 1H); 4,04-3,35 (c, 9H); 1,90-1,77 (m, 8H); 1,74-1,62 (m, 2H); 1,55-1,23 (m, 4H); 1,12 (d, 3H); 0,97-0,87 (m, 3H); 0,74 (s, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitívny): Da/e 434,2 (m+1).
Príklad 96
R‘=C5H9; R3=(S)-COCH(NHCBZ)(CH2)Ph
N-{2-[3-((lR)-l-hydroxyetyl)(3S,4S)-4-(3-cyklopentyloxy-4-metoxyfenyl)-3-metylpyrolidinyl]-(lS)-2-oxo-1 -benzylety 1} (fenylmetoxy)karboxamid
Pripravený z medziproduktu 68 pomocou metódy acylácie Hunigovej bázy, ktorá je uvedená pri medziprodukte 74, použitím p-nitrofenylesteruN-CBZ-(S)-fenylalanínu.
‘H NMR (400 MHz, CDC13, zmes rotamérov) δ: 7,41-7,26 (m, 10H); 6,78-6,42 (m, 3H); 5,78-5,74 (m, 1H); 5,14-5,05 (m, 2H); 4,76-4,70 (m, 2H); 3,81 (s, 3H); 3,75-2,66 (c, 10H); 1,94-1,80 (m, 6H); 1,65-1,57 (m, 2H); 1,08-0,99 (dd, 3H); 0,64 a 0,33 (s, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitívny): Da/e 601,2 (m+1).
Príklad 97
R'=C5H9; R3=(S)-COCH(NH2)(CH2)Ph
1-(3-((1 R)- l-hydroxyetyl)(3 S, 4S)-4-(3-cyklopentyloxy-4-metoxyfenyl)-3-metylpyroIidinyl](2S)-2-amino-3-fenylpropan-l-ón
Pripravený z titulnej zlúčeniny príkladu 96 pomocou debenzylačnej metódy uvedenej pri medziprodukte 31.
‘H NMR (metanol-d4, 400 MHz, zmes rotamérov) δ: 7,47-7,31 (m, 5H); 6,88-6,47 (m, 3H); 4,78-4,76 (m, 1H); 4,48-4,44 (m, 1H); 3,80-3,06 (c, 13H); 1,88-1,80 (m, 6H); 1,67-1,64 (m, 2H); 1,02 (d, 3H); 0,75 a 0,34 (s, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitívny): Da/e 467,5 (m+1).
Príklad 98
R‘=C5H9; R3=(R)-COCH(NHCBZ)(CH2)Ph
N-{(lR)-2-[3-((lR)-l-hydroxyetyl)(3S,4S)-4-(3-cyklopentyloxy-4-metoxyfenyl)-3-metylpyrolidinyl]-2-oxo-1 -benzyletyl}(feny lmetoxy)karboxamid
Pripravený z medziproduktu 68 pomocou metódy acylácie Hunigovej bázy, ktorá je uvedená pri medziprodukte 74, použitím p-nitrofenylester N-CBZ-(R)-fenylalanínu.
'H NMR (400 MHz, CDC13, zmes rotamérov) δ: 7,41-7,19 (m, 10H); 6,77-6,46 (m, 3H); 5,70 (d, 1H); 5,14-5,04 (m, 2H); 4,76-4,69 (m, 2H); 3,82 (s, 3H); 3,93-2,99 (c, 6H); 2,53 (d, 1H); 1,93-1,81 (m, 6H); 1,62-1,56 (m, 2H); 1,06 (dd, 3H); 0,67 a 0,28 (s, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitívny): Da/e 602,3 (m+1).
Príklad 99
R'=C5H9; R3=(R)-COCH(NH2)(CH2)Ph (2R)-l-[3-((lR)-l-hydroxyetyl)(3S,4S)-4-(3-cyklopentyloxy-4-metoxyfenyl)-3-metylpyrolidinyl]-2-amino-3-fenylpropan-l-ón
Pripravený z titulnej zlúčeniny príkladu 98 pomocou debenzylačnej metódy uvedenej pri medziprodukte 31.
*H NMR (metanol-d4, 400 MHz, zmes rotamérov) δ: 7,42-7,26 (m, 5H); 6,88-6,65 (m, 3H); 4,80-4,78 (m, 1H); 4,42-4,39 (m, 1H); 3,89-2,42 (c, 13H); 1,89-1,79 (m, 6H); 1,64-1,62 (m, 2H); 0,99 (dd, 3H); 0,69 a 0,21 (s, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitívny): Da/e 457,0 (m+1).
Príklad 100
R‘=CH2C3H5; R3=(R)-COCH(OAc)C4H9
2-{(3S,4S)-3-((lR)-l-hydroxyetyl)-4-[3-(cyklopropylmetoxy)-4-metoxyfenyl]3-metylpyrolidinyl}-2-oxo-l-propyletylacetát
Medziprodukt 67 (46 mg; 0,15 mmol) bol konvertovaný pomocou metódy Hunigovej bázy, ktorá je uvedená pri medziprodukte 74, použitím (±)-2-acetoxypropionylchloridu (29 mg; 0,165 mmol) za vzniku zlúčeniny príkladu 100 (36 mg; 54 %).
'H-NMR (400 MHz, CDC13) δ: 6,86-6,69 (m, 3H); 5,30-5,02 (m, 1H); 4,17-4,00 (m, 1H); 3,82 (s, 3H); 3,82-3,18 (m, 5H); 3,08 a 2,97 (singlety, 2H, rotaméry); 2,13 a 2,11 (singlety, 3H, rotaméry); 1,95-1,23 (m, 5H); 1,20-1,14 (m, 2H); 1,00-0,92 (m, 3H); 0,76 a 0,72 (dubiety, 3H, rotaméry); 0,62 (m, 2H); 0,36 (m, 2H).
Príklad 101
R^CHjCjHs; R3=COCH(OH)C4H9 l-((3S,4S)-3-((lR)-l-hydroxyetyl)-4-[3-(cyklopropylmetoxy)-4-metoxyfenyl]-3-metylpyrolidinyl}-2-hydroxypentan-l-ón
Titulná zlúčenina príkladu 100 (36 mg; 80 (pmol) bola podrobená procedúre hydrolýzy prostredníctvom
LiOH, ktorá je uvedená pri medziprodukte 5, za vzniku zlúčeniny príkladu 101 vo forme čírej tenkej vrstvy (30 mg; 90 %).
‘H-NMR (400 MHz, CDCh) δ: 6,85-6,73 (m, 3H); 4,23 (m, 1H); 4,07-2,98 (m, 6H); 3,83 (s, 3H); 1,71-1,23 (m, 5H); 1,16 (m, 3H); 0,96 (m, 3H); 0,77 (s, 3H); 0,62 (m, 2H); 0,37 (m, 2H).
LRMS (Elektrosprej, pozitívny): Da/e 406,5 (m+l).
Príklad 102
R'=CH2C3H5; R3=(S)-COC(CHj)OCH2Ph l-{(3S,4S)-3-((lR)-l-hydroxyetyl)-4-[3-(cyklopropylmetoxy)-4-metoxyfenyl]-3-metylpyrolidinyl}(2S)-2-(fenylmetoxy)propan-l-ón
Medziprodukt 67 (46 mg; 0,15 mmol) bol konvertovaný pomocou metódy Hunigovej bázy, ktorá je uvedená pri medziprodukte 74, použitím (2S)-2-(fenylmetoxy)propanoylchloridu (59 mg; 0,3 mmol) za vzniku zlúčeniny príkladu 102 (54 mg; 77 %).
’H-NMR (400 MHz, CDC13) δ; 7,40-7,25 (m, 5H); 6,82-6,77 (m, 2H); 6,72 (s, 1H); 4,63 (dd, 1H); 4,49 (dd, 1H); 4,22 (m, 1H); 3,98-3,38 (m, 8H); 3,82 (s, 3H); 3,07 a 2,96 (singlety, 1H, rotaméry); 1,43 (m, 3H); 1,31 (m, 1H); 1,17 a 1,10 (dublety, 3H, rotaméry); 0,72 a 0,70 (singlety, 3H, rotaméry); 0,62 (m, 2H); 0,37 (m, 2H).
Príklad 103
R‘=CH2CjH5; R3=(S)-COC(CHj)OH l-{(3S,4S)-3-((lR)-l-hydroxyetyl)-4-[3-(cyklopropylmetoxy)-4-metoxyfenyl]-3-metylpyrolidinyl}(2S)-2-(hydroxy)propan-1 -ón
Pripravený z titulnej zlúčeniny príkladu 102 (54 mg; 0,12 mmol) pomocou debenzylačnej metódy uvedenej pri medziprodukte 31 za vzniku zlúčeniny príkladu 103 vo forme číreho oleja (45 mg; 100 %).
‘H-NMR (400 MHz, CDClj) δ: 6,84-6,73 (m, 3H); 4,44 (m, 1 H); 4,06-3,16 (m, 8H); 3,82 (s, 3H); 2,99 (d, 35 1H); 1,38 (m, 3H, rotaméry); 1,30 (m, 1H); 1,18 (m, 3H, rotaméry); 0,78 a 0,76 (singlety, 3H, rotaméry);
0,62 (m, 2H); 0,36 (m, 2H).
LRMS (Elektrosprej, pozitívny): Da/e 378,7 (m+l).
Príklad 104
R'=CH2C3H5; R3=(R)-COCH(t-Bu)NHCO2t-Bu
N-((lR)-2-{(3S,4S)-3-((lR)-l-hydroxyetyl)-4-[3-(cyklopropylmetoxy)-4-metoxyfenyl]-3-metylpyrolidinyl}-1 -(terc-butyl)-2-oxoetyl)(terc-butoxy)karboxamid
Medziprodukt 67 (46 mg; 0,15 mmol) bol konvertovaný pomocou väzbovej metódy EDCI, ktorá je uvedená pri príklade 27, použitím Boc-D-t-butylglycínu (35 mg; 0,15 mmol) za vzniku titulnej zlúčeniny vo forme bielej peny (62 mg; 80 %).
‘H-NMR (400 MHz, CDClj) δ: 6,85-6,79 (m, 2H); 6,72-6,64 (m, IH); 4,36-4,00 (m, 3H, rotaméry); 3,83 (s, 3H); 3,79 (d, 2H); 3,67-3,12 (m, 4H, rotaméry); 1,44 a 1,41 (singlety, 9H, rotaméry); 1,32 (m, IH); 1,22-1,16 (m, 3H); 1,06 a 1,01 (singlety, 9H, rotaméry); 1,02 (m, 3H); 0,73 a 0,63 (singlety, 3H, rotaméry); 0,61 (m, 2H); 0,36 (m, 2H).
Príklad 105
R‘=CH2C3H5; R3=(R)-COCH(t-Bu)NH2 (2R)-l-{(3S,4S)-3-((lR)-l-hydroxyetyl)-4-[3-(cyklopropylmetoxy)-4-metoxyfenyl]-3-metylpyrolidinyl}-2-amino-3,3-dimetylbutan-l-ón
Do miešaného roztoku titulnej zlúčeniny príkladu 104 (62 mg; 0,12 mmol) v CH2C12 (1,5 ml) sa pridala kyselina trifluóroctová (77 μΐ, 1 mmol) pri laboratórnej teplote v uzavretej banke (sklenenej nádobe z úzkym hrdlom). Po celonočnom miešaní sa reakčná zmes skoncentrovala vo vákuu za vzniku surového produktu, ktorý obsahoval nečistoty trifluóracetátesteru. Surová látka sa pri laboratórnej teplote rozpustila v 3 : 2 THF : H2O (1,5 ml) a miešala v uzavretej banke za pôsobenia monohydrátu LiOH (42 mg; 1 mmol). Po 1 hodine sa zmes rozdelila medzi EtOAc (15 ml) a vodu (15 ml). Organické vrstvy sa oddelili, vysušili (MgSO4), prefiltrovali a skoncentrovali vo vákuu za vzniku titulnej zlúčeniny vo forme bielej peny (35 mg; 70 %).
‘H-NMR (400 MHz, CDC13) δ: 6,85-6,82 (m, 2H); 6,73-5,73 (m, IH; 4,01-3,30 (m, 9H); 3,83 (s, 3H); 1,13 a 1,12 (dublety, 3H, rotaméry); 1,06 a 1,02 (singlety, 5H, rotaméry); 0,78 a 0,68 (singlety, 3H, rotaméry); 0,063 (m, 2H); 0,37 (m, 2H).
LRMS (Elektrosprej, pozitívny): Da/e 419,4 (m+l).
Príklad 106
R1=H; R3=(R)-COCH(CH2OCH2Ph)N HCO2t-Bu
N-{2-[(3S,4S)-3-((l R)-1 -hydroxyetyl)-4-(3-hydroxy-4-metoxyfenyl)-3-metylpyrolidinyl]( 1 R)-2-oxo-l-[(fenylmetoxy)metyl]etyl}(terc-butoxy)karboxamid
Do miešaného roztoku N-Boc-O-benzyl-D-serínu (2,95 gm; 10 mmol) v THF (50 ml) pri teplote -78 °C v dusíkovom prostredí sa pridal N-metyl morfolín (3,3 ml; 30 mmol), potom nasledoval izobutylchlórmravčan (1,3 ml; 10 mmol). Po 30 minútovom miešaní sa kanylou pridal roztok/suspenzia medziproduktu 70 (2,51 gm; 10 mmol) v THF (50 ml). Reakčná zmes sa miešala počas 2 hodín pri teplote -78 °C, potom sa zohriala na 0 °C na 2 hodiny. Reakčná zmes sa potom čiastočne skoncentrovala na rotačnej odparke na približne 25 ml; a rozdelila medzi EtOAc (250 ml) a 2N HCI (250 ml). Organické vrstvy sa premyli s 2N HCI (2 x 250 ml), nasýteným NaHCO3 (3 x 250 ml) a nasýteným NaCl (1 x 250 ml). Organické vrstvy sa vysušili (MgSO4), prefiltrovali a skoncentrovali vo vákuu za vzniku titulnej zlúčeniny vo forme žltého oleja (4,2 gm; 79 %).
‘H-NMR (400 MHz, CDC13) δ: 7,36-7,21 (m, 5H); 6,81-6,63 (m, 3H); 5,81 (br s, 1H); 5,47 (m, 1H); 4,73 (m, 1H); 4,51 (m, 2H); 4,00-3,40 (m, 83,83H); 3,84 a 3,82 (singlety, 3H, rotaméry); 1,43 a 1,41 (singlety, 9H, rotaméry); 1,13 a 1,06 (dublety, 3H, rotaméry); 0,95 (m, 1H); 0,73 a 0,045 (singlety, 3H, rotaméry).
Príklad 107
Rl=CH2C3H5;R3=(R)-COCH(CH2OCH2Ph)NHC02t-Bu
N-(2-{(3S,4S)-3-((lR)-l-hydroxyetyl)-4-[3-(cykIopropylmetoxy)-4-metoxyfenyl]-3-metylpyrolidinyl}(lS)-2-oxo-1 -[(fény lmetoxy)metyl]etyl)-(terc-butoxy)karboxamid
Do miešaného roztoku titulnej zlúčeniny príkladu 106 (4,2 gm; 7,9 mmol) v DMF (24 ml) sa pri laboratórnej teplote v dusíkovom prostredí pridal práškový K2CO3 (5,45 gm; 39,5 mmol), ďalej sa pridal brómmetylcyklopropán (1,53 ml; 15,8 mmol). Suspenzia sa zohriala na 65 °C na čas 4 hodín, potom sa vystavila pôsobeniu ďalšieho brómmetylcyklopropánu (1,53 ml; 15,8 mmol). Reakčná zmes sa miešala ďalších 16 hodín pri teplote 65 °C, potom sa ochladila na laboratórnu teplotu a rozdelila medzi EtOAc (500 ml) a vodu (500 ml). Organické vrstvy sa premyli vodou (3 x 500 ml) a nasýteným NaCl (1 x 500 ml), vysušili (MgSO4), prefiltrovali a skoncentrovali vo vákuu. Surová látka sa rozdelila na dve dávky a podrobila chromatografii na stĺpci Biotage 40M s pomerom EtOAc/hexán 1/1, čím po zhromaždení a skoncentrovaní vo vákuu látku obsahujúcich frakcií vznikla titulná zlúčenina príkladu 107 (2,11 gm; 46 %). Ako hlavná nečistota bola identifikovaná dialkylovaná látka s vysokým Rf.
'H-NMR (400 MHz, CDC13) δ: 7,36-7,22 (m, 5H); 6,81-6,71 (m, 3H); 5,42 (m, 1H); 4,73 (m, 1H); 4,51 (m, 2H); 4,04-3,44 (m, 10H); 3,83 a 3,81 (singlety, 3H, rotaméry); 1,42 a 1,43 (singlety, 9H, 10 rotaméry); 1,32 (m, 1H); 1,16 a 1,06 (dublety, 3H, rotaméry); 0,76 a 0,45 (singlety, 3H, rotaméry); 0,62 (m, 2H); 0,37 (m, 2H).
Príklad 108
R‘=CH2C3H5; R3=(R)-COCH(CH2OH)NHC02t-Bu
N-(2-{(3S,4S)-3-((lR)-l-hydroxyetyl)-4-[3-(cyklopropylmetoxy)-4-metoxyfenyl]-3-metylpyrolidinyl}(lR)-1 -(hydroxymety l)-2-oxoety l)(terc-butoxy)karboxamid
Zlúčenina príkladu 107 (2,1 gm; 3,6 mmol) bola podrobená debenzylačnej procedúre uvedenej pri medziprodukte 31 za vzniku titulnej zlúčeniny vo forme bielej peny (1,75 gm; 100 %).
'H-NMR (CDCI3/CD3OD, 400 MHz) δ: 6,83-6,71 (m, 3H); 5,70 (br d, IH); 4,55 (m, IH); 4,09-3,38 (m,
10H); 3,83 (s, 3H); 1,44 (s, 9H); 1,33 (m, IH); 1,18 (m, 3H); 0,73 (d, 3H); 0,62 (m, 2H); 0,37 (m, 2H).
Príklad 109
R‘=CH2C3H5; R3=(R)-COCH(CH2OH)NH2 l-{(3S,4S)-((lR)-l-hydroxyetyl)-4-[3-(cyklopropylmetoxy)-4-metoxyfenyl]-3-metylpyrolidinyl}(2R)-2-amino-3-hydroxypropan-1 -ón hydrochlorid
Do miešaného roztoku zlúčeniny príkladu 108 (1,75 gm; 3,6 mmol) v dioxáne (16 ml) sa pri laboratórnej 15 teplote pod sušiacou trubicou pridal 4N HCI v dioxáne (16 ml). Číry roztok sa miešal počas 4 hodín, potom sa skoncentroval vo vákuu za vzniku titulnej zlúčeniny vo forme svetlohnedej peny (1,5 g; 97 %).
‘H-NMR (400 MHz, CDC13) δ: 6,85-6,76 (m, 3H); 4,36 (m, IH); 4,13-3,31 (m, 10H); 3,84 (s, 3H); 1,29 (m, IH); 1,17 a 1,12 (dublety, 3H, rotaméry); 1,77 a 1,75 (singlety, 3H, rotaméry); 0,62 (m, 2H); 0,36 (m, 2H).
LRMS (Elektrosprej, pozitívny): Da/e 393,4 (m+l).
Príklad 110
R‘=CH2C3H5; R3=(R)-COCH(OAc)C6H11
2-(3-((1 R)-l-hydroxyetyl)(3S,4S)-4-[3-(cyklopropylmetoxy)-4-metoxyfenyl]-3-metylpyrolidinyl}(lS)-l-cyklohexyl-2-oxoetylacetát
Medziprodukt 67 (91 mg; 0,6 mmol) bol viazaný pomocou metódy Hunigovej bázy, ktorá je uvedená pri medziprodukte 74, použitím chloridu kyseliny (S)-(+)-acetoxyhexahydromandľovej (100 μΐ, 4,98 M v
CH2CÍ2, 1,7 ekv.) za vzniku titulnej zlúčeniny vo forme číreho, bezfarebného oleja (89 mg; 61 %).
LRMS (Elektrosprej, pozitívny): Da/e 488,6 (m+l).
Príkladlll
R'=CH2C3H5; R3=(S)-COCH(OH)C6H,,
l-{3-((lR)-l-hydroxyetyl)(3S,4S)-4-[3-(cyklopropylmetoxy)-4-metoxyfenyl]-3-metylpyrolidinyl}(2S)-2-cyklohexyl-2-hydroxyetan-l-ón
Zlúčenina príkladu 110 (89 mg; 0,18 mmol) bola podrobená procedúre hydrolýzy prostredníctvom LiOH, ktorá je uvedená pri medziprodukte 5, za vzniku titulnej zlúčeniny vo forme čírej, bezfarebnej tenkej vrstvy (44 mg; 54 %).
'H NMR (400 MHz, CDCl·,) δ: 6,80-6,78 (m, 3H); 3,88-3,52 (c, 10H); 3,34-3,26 (dd, 1H); 2,98 (d, 1H); 2,12 (br s, 1H); 1,77-1,10 (c, 16H); 0,75-0,73 (d, 3H); 0,62-0,59 (m, 2H); 0,34-0,31 (m, 2H).
LRMS (Elektrosprej, pozitívny): Da/e 446,6 (m+1).
Príklad 112
R'=CH2C3H5; R3=(R)-COCH(OAc)C6H, , (lR)-2-{3-((lR)-l-hydroxyetyl)(3S,4S)-4-[3-(cyklopropylmetoxy)-4-metoxyfenyl]-3-metylpyrolidinyl}-l-cyklohexyl-2-oxoetylacetát
Medziprodukt 67 (76 mg; 0,25 mmol) bol viazaný pomocou metódy Hunigovej bázy, ktorá je uvedená pri medziprodukte 74, s chloridom kyseliny (R)-(-)-acetoxyhexahydromandľovej (100 μΐ, 4,16 M v CH2C12, 1,7 ekv.) za vzniku titulnej zlúčeniny vo forme číreho, bezfarebného oleja (75 mg; 62 %).
LRMS (Elektrosprej, pozitívny): Da/e 488,7 (m+1).
Príklad 113
R‘=CH2C3H5; R3=(R)-COCH(OH)C6Hí1 (2R)-l-{3-((lR)-l-hydroxyetyl)(3S,4S)-4-[3-(cyklopropylmetoxy)-4-metoxyfenyl]-3-metylpyrolidinyl}-2-cyklohexyl-2-hydroxyetan-l-ón
Zlúčenina príkladu 112 (75 mg; 0,15 mmol) bola podrobená procedúre hydrolýzy prostredníctvom LiOH, ktorá je uvedená pri medziprodukte 5, za vzniku titulnej zlúčeniny vo forme čírej, bezfarebnej tenkej vrstvy (35 mg; 51 %).
‘H NMR (400 MHz, CDCl·,) δ: 6,81-6,73 (m, 3H); 3,85-3,59 (c, 11H); 2,99-2,98 (d, 1H); 2,03-1,15 (c, 17H); 0,73 (s, 3H); 0,64-0,60 (m, 2H); 0,35-0,32 (m, 2H).
LRMS (Elektrosprej, pozitívny): Da/e 446,5 (m+1).
Príklad 114
R1=CH2C3H5;R3=(R)-COCH(C4H9)NHCO2CH2Ph
N-((lR)-2-{3-((lR)-l-hydroxyetyl)(3S,4S)-4-[3-(cyklopropylmetoxy)-4-metoxyfenyl]-3-metyl-pyrolidinyl}-l-butyl-2-oxoetyl)(fenylmetoxy)karboxamid
Medziprodukt 67 (41 mg; 0,013 mmol) bol viazaný pomocou metódy Hunigovej bázy, ktorá je uvedená pri medziprodukte 74, použitím Z-D-Nle-ONp (57 mg; 0,15 mmol; 1,1 ekv.) za vzniku titulnej zlúčeniny vo forme číreho, bezfarebného oleja (29,9 mg; 40 %).
LRMS (Elektrosprej, pozitívny): Da/e 553,6 (m+1).
Príklad 115
R‘=CH2C3H5; R3=(R)-COCH(C4H9)NH2 (2R)-l-{3-((lR)-l-hydroxyetyl)(3S,4S)-4-[3-(cyklopropylmetoxy)-4-metoxyfenyl]-3-metylpyrolidinyl}-2-aminohexan-l-ón
Zlúčenina príkladu 114 (29,9 mg; 0,054 mmol) sa podrobila debenzylačnej procedúre uvedenej pri me15 dziprodukte 31 za vzniku titulnej zlúčeniny vo forme bieleho prášku (18,8 mg; 83 %).
'H NMR (400 MHz, CDC13) δ: 6,83-6,62 (m, 3H); 4,17-4,08 (m, 2H); 3,85-3,61 (c, 9H); 3,32-3,29 (t, IH); 3,13-3,11 (d, IH); 2,04-1,78 (m, 3H); 1,52-1,21 (c„ 10H); 0,92-0,88 (t, 3H); 0,62-0,58 (m, 5H); 0,34-0,30 (m, 2H).
LRMS (Elektrosprej, pozitívny): Da/e 419,4 (m+1).
Príklad 116
R‘=CH2C3H5; R3=(R)-COCH(i-Pr)NHCO2CH2Ph
N-(( 1 R)-2-{3-(( 1 R)-1 -hydroxyetyl)(3S,4S)-4-[3-(cyklopropylmetoxy)-4-metoxyfenyl]-3-metylpyrolidinyl}-1 -(mety lety l)-2-oxoety l)(feny lmetoxyjkarboxamid
Medziprodukt 67 (41 mg; 0,13 mmol) bol viazaný pomocou metódy Hunigovej bázy uvedenej pri medziprodukte 74 použitím Z-D-Val-OSu (52,2 mg; 0,15 mmol; 1,1 ekv.) za vzniku titulnej zlúčeniny vo forme číreho, bezfarebného oleja (64,8 mg; 89 %).
'H NMR (400 MHz, CDC13) δ: 7,35-7,32 (m, 5H); 6,81-6,69 (m, 3H); 5,65-5,61 (t, 3H); 5,28-5,01 (m,
2H); 4,34-2,78 (m, 10H); 2,08-1,98 (m, IH); 1,31-0,91 (c, 8H); 0,71-0,68 (d, 3H); 0,64-0,59 (m, 2H); 0,38-0,31 (m, 2H).
Príklad 117
R*=CH7C3H5; R3=(R)-COCH(i-Pr)CH,
(2R)-l-{3-((lR)-l-hydroxyetyl)(3S,4S)-4-[3-(cyklopropylmetoxy)-4-metoxyfenyl]-3-metylpyrolidinyl}-2-amino-3-metylbutan-l-ón
Zlúčenina príkladu 116 (64,8 mg; 0,120 mmol) bola podrobená debenzylačnej procedúre uvedenej pri medziprodukte 31 za vzniku titulnej zlúčeniny vo forme čírej tuhej látky (38,9 mg; 80 %).
‘H NMR (400 MHz, CDCl,, zmes rotamérov) δ: 6,77-6,59 (m, 3H); 4,41 (s, 1H); 4,23-4,12 (m, 2H); 3,85-3,60 (c, 9H); 3,24 (s, 1H); 3,15-3,13 (d, 1H); 2,40 (br s, 1H); 1,29-1,14 (m, 11H); 0,62-0,58 (m, 5H); 0,33-0,29 (m, 2H).
LRMS (Elektrosprej, pozitívny): Da/e 405,5 (m+l).
Príklad 118
R1=H; R3=COCH2SAc
1-(3-((1 R)-l-hydroxyetyl)(3S,4S)-4-(3-hydroxy-4-metoxyfenyl)-3-metylpyrolidinyl]-2-acetyltioetan-l-ón Medziprodukt 70 (173 mg; 0,694 mmol) sa rozpustil v dioxáne (2 ml) a 1 M K2CO3 (1 ml) sa pridal po kvapkách. Pridal sa chlorid kyseliny acetoxymerkaptooctovej (100 μΐ, 13,9 M v dioxáne, 2 ekv.) a roztok sa prudko miešal počas 1 hodiny. Roztok sa zriedil s EtOAc (30 ml) a organické vrstvy sa premyli IM K2CO3 (20 ml) a soľným roztokom (20 ml). Organická vrstva sa vysušila pomocou Na2SO4 a skoncentrovala vo vákuu. Výsledný olej bol podrobený chromatografii so stĺpcom kremíka(l : 1 EtOAc : hexány), za vzniku číreho, bezfarebného oleja (34 mg; 13 %).
‘H NMR (400 MHz, CDC13, zmes rotamérov) δ: 6,85-6,82 (m, 3H); 3,92-2,98 (c, 12H); 2,39 (s, 3H); 1,15-1,11 (t, 3H); 0,75-0,73 (d, 3H).
Príklad 119
R‘=CH2C3H5; R3=COCH2SAc
1-(3-((1 R)-l-hydroxyetyl)(3S,4S)-4-[3-(cyklopropylmetoxy)-4-metoxyfenyl]-3-metylpyrolidinyl}-2-acetyltioetan-l-ón
Do banky s bezvodým K2CO3 (52 mg; 0,37 mmol; 4,0 ekv.) sa v dusíkovom prostredí pridal roztok zlúčeniny príkladu 118 (34 mg; 0,093 mmol; 1 ekv.) v bezvodom DMF (1 ml). Injekčnou striekačkou sa do zmesi pridal cyklopropylmetylbromid (40 uL, 0,37 mmol; 4,0 ekv.). Suspenzia sa počas noci miešala pri teplote 65 °C. Reakčná zmes sa ochladila na laboratórnu teplotu, potom sa rozriedila vodou (50 ml). Vodný roztok sa extrahoval s EtOAc (3 x 30 ml) a spojené organické vrstvy sa premyli soľným roztokom (50 ml), potom vysušili pomocou Na2SO4, prefiltrovali a skoncentrovali vo vákuu. Vzniknutý olej sa prečistil preparatívnou TLC tabuľkou (100 % EtOAc), za vzniku číreho, bezfarebného oleja (13,9 mg; 36 %).
‘H NMR (400 MHz, CDC13, zmes rotamérov) δ: 7,10-6,75 (m, 3H); 3,91-3,32 (c, 11H); 2,64-2,61 (m, H); 2,38-2,30 (d, 3H); 1,82-1,50 (br s, 2H); 1,38-1,04 (m, 2H); 0,75 (s, 3H); 0, 58-0,55 (m, 2H); 0,27-0,23 (m, 2H).
Príklad 120
R‘=CH2C3H5; R3=COCH2SH
1-(3-((1 R)-l-hydroxyetyl)(3S,4S)-4-[3-(cyklopropylmetoxy)-4-metoxyfenyl]-3-metylpyrolidinyl}-2-sulfanyletan-l-ón
Zlúčenina príkladu 119 (13,9 mg; 0,0329 mmol) sa podrobila procedúre hydrolýzy prostredníctvom LiOH uvedenej pri medziprodukte 5 za vzniku číreho, bezfarebného oleja (7,2 mg; 58 %).
'H NMR (CD3OH, 400 MHz, zmes rotamérov) δ: 6,86-6,75 (m, 3H); 3,83-3,11 (c, 13H); 2,60-2,56 (d, 2H); 1,39-0,85 (m, 4H); 0,76-0,74 (m, 3H); 0,58-0,56 (m, 2H); 0,35-0,24 (m, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitívny): Da/e 380,5 (m+l).
Príklad 121
R'=CH2C3H5; R3=COCH2NHCO2CH2Ph
N-(2-{3-((lR)-l-hydroxyetyl)(3S,4S)-4-[3-(cyklopropylmetoxy)-4-metoxyfenyl]-3-metylpyrolidinyl}-2-oxoetyl)(fenylmetoxy)karboxamid
Medziprodukt 67 bol acylovaný pomocou metódy Hunigovej bázy, ktorá je uvedená pri medziprodukte 74, použitím N-CBZ-glycín p-nitrofenylesteru za vzniku titulnej zlúčeniny.
'H NMR (400 MHz, CDC13, zmes rotamérov) δ: 7,42-7,28 (m, 5H); 6,83-6,75 (m, 3H); 5,87-5,80 (m, 1H); 5,13 (s, 2H); 4,08-3,15 (c, 13H); 1,39-1,24 (m, 1H); 1,14 (t, 3H); 0,73 (d, 3H); 0,66-0,59 (m, 2H); 0,39-0,31 (m, 2H).
Príklad 122
R'=CH2C3H5; R3=COCH2NH2
1-(3-((1 R)- l-hydroxyetyl)(3S,4S)-4-[3-(cyklopropylmetoxy)-4-metoxyfenyl]-3-metylpyrolidinyl}-2-aminoetán-1-ón
Zlúčenina príkladu 121 bola podrobená debenzylačnej procedúre uvedenej pri medziprodukte 31 za vzniku titulnej zlúčeniny.
‘H NMR (metanol-d4, 400 MHz, zmes rotamérov) δ: 6,94-6,84 (m, 3H); 4,01-3,27 (c, 13H); 1,29-1,18 (m, 3H); 0,79-0,73 (m, 3H); 0,62-0,55 (m, 2H); 0,35-0,29 (m, 2H).
LRMS (Elektrosprej, pozitívny): Da/e 363,2 (m+l).
Príklad 123
R'=CH2C3H5; R3=COCH2NHSO2CH3
1-(3-(( lR)-l-hydroxyetyl)(3S,4S)-4-[3-(cyklopropylmetoxy)-4-metoxyfenyl]-3-metylpyrolidinyl}-2-[(metylsulfonyl)amino]etan-l-ón
Acylácia zlúčeniny príkladu 122 pomocou väzbovej metódy s Hunigovou bázou, ktorá je uvedená pri medziprodukte 74, použitím metánsulfonylchloridu, poskytla titulnú zlúčeninu.
’H NMR (400 MHz, CDC13, zmes rotamérov) δ: 6,86-6,75 (m, 3H); 5,48-5,42 (m, IH); 4,00-3,57 (c, 11H); 3,46 a 3,15 (d a d, 1H);3,OO (s, 3H); 1,67 (dd, IH); 1,36-1,24 (m, IH); 1,16 (t, 3H); 0,76 (d, 3H); 0,66-0,60 (m, 2H); 0,39-0,32 (m, 2H).
LRMS (Elektrosprej, pozitívny): Da/e 441,3 (m+l).
Príklad 124
R‘=CH2C3H5; R3=COCH2NHSO2CF3 l-{3-((lR)-l-hydroxyetyl)(3S,4S)-4-[3-(cyklopropylmetoxy)-4-metoxyfenyl]-3-metylpyrolidinyl}-2-{[(trifluórmetyl)sulfonyl]amino}etan-1 -ón
Sulfonácia zlúčeniny príkladu 122 pomocou väzbovej metódy s Hunigovou bázou uvedenej pri medziprodukte 74, použitím trifluórmetánsulfonylchloridu, poskytla titulnú zlúčeninu.
'H NMR (400 MHz, CDC13, zmes rotamérov) δ: 6,85-6,77 (m, 3H); 4,11-3,10 (c, 13H); 1,15 (t, 3H); 0,76 (d, 3H); 0,66-0,60 (m, 2H); 0,40-0,32 (m, 2H).
LRMS (Elektrosprej, pozitívny): Da/e 495,3 (m+l).
Príklad 125
R‘=CH2C3H5; R3=COCH2NMe2 l-{3-((lR)-l-hydroxyetyl)(3S,4S)-4-[3-(cyklopropylmetoxy)-4-metoxyfenyl]-3-metylpyrolidinyl}-2-(dimety lamino)etan-1 -ón
Väzbová reakcia tuhej fázy EDCI
Reakčná banka s miešacou lopatkou sa naplnila EDC živicou (164 mg; 0,082 mmol; 0.5 mmol/g), NMP (2 ml) a N,N-dimetylglycínom (20 mg; 0,143 mmol). Vzniknutá zmes sa miešala pri laboratórnej teplote počas jednej hodiny. Potom sa pridal medziprodukt 67 a zmes sa ďalej miešala pri laboratórnej teplote počas 20 hodín, potom sa prefíltrovala. Živica sa premyla viacerými dávkami NMP. Všetok prepláchnutý materiál aj filtrát sa zlúčili a vystavili pôsobeniu nízkeho tlaku, aby sa odstránilo rozpúšťadlo. Čistením zvyšku metódou Biotage (cartridge 12S, 5 % MeOH/CH2Cl2/0,l % NH4OH) vzniklo 8 mg (25 %) čírej tenkej vrstvy titulnej zlúčeniny.
'H NMR (400 MHz, CDC13, zmes rotamérov) δ: 6,87-6,72 (m, 3H); 4,07-2,97 (c, 13H); 2,35 (d, 5H); 1,35-1,25 (m, 1 H); 1,17 (t, 3H); 0,74 a 0,64 (s a s, 3H); 0,66-0,60 (m, 2H); 0,37-0,32 (m, 2H).
LRMS (Elektrosprej, pozitívny): Da/e 391,5 (m+l).
Príklad 126
R1=CH2C3H5; R3=(S)-COCH(Me)NHCO2CH2Ph
N-(2-{3-((lR)-l-hydroxyetyl)(3S,4S)-4-[3-(cyklopropylmetoxy)-4-metoxyfenyl]-3-metylpyrolidinyl}(lS)-l-metyl-2-oxoetyl)(fenylmetoxy)karboxamid
Acylácia medziproduktu 57 pomocou metódy tuhej fázy EDCI, ktorá je uvedená pri príklade 125, použitím Z-Ala-ONp, poskytla titulnú zlúčeninu.
'H NMR (400 MHz, CDC13, zmes rotamérov) δ: 7,38-7,25 (m, 5H); 6,84-6,74 (m, 3H); 5,86 (dd 1H);
5,14-5,08 (m, 2H); 4,56 (kvintet, 1H); 3,87-3,32 (c, 11H). 1,43-1,34 (dd, 3H); 1,33-1,24 (m, 1H); 1,13 (d
3H); 0,74 (s, 3H); 0,66-0,59 (m, 2H); 0,37-0,32 (m, 2H).
LRMS (Elektrosprej, pozitívny): Da/e 511,7 (m+l).
Príklad 127
R‘=CH2C3H5; R3=(S)-COCH(CH3)NH2
-(3-((1 R)- l-hydroxyetyl)(3S,4S)-4-[3-(cyklopropylmetoxy)-4-metoxyfenyl]-3-metylpyrolidinyl}(2S)-2-aminopropan-l-ón
Zlúčenina príkladu 126 bola podrobená procedúre uvedenej pri medziprodukte 31, za vzniku titulnej zlú15 čeniny.
‘H NMR (400 MHz, CDC13, zmes rotamérov) δ: 8,44-8,16 (br S, 2H); 6,82-6,56 (m, 3H); 4,53-3,02 (c, 12H); 1,43-1,34 (dd, 3H); 1,33-1,24 (m, 1H); 1,13 (d, 3H); 0,74 (s, 3H); 0,66-0,59 (m, 2H); 0,37-0,32 (m, 2H).
LRMS (Elektrosprej, pozitívny): Da/e 377,3 (m+l).
Príklad 128
R‘=CH2C3H5; R3=(R)-COCH(CH3)NHCO2CH2Ph
N-((lR)-2-{3-((lR)-l-hydroxyetyl)(3S,4S)-4-[3-(cyklopropylmetoxy)-4-metoxyfenyl]-3-metylpyrolidinyl}-l-metyl-2-oxoetyl)(fenylmetoxy)karboxamid
Pripravený z medziproduktu 67 pomocou acylačnej metódy uvedenej pri príklade 7 použitím Z-D-Ala-OSu.
'H NMR (400 MHz, CDC13, zmes rotamérov) δ: 7,40-7,28 (m, 5H); 6,85-6,74 (m, 3H); 5,80 (C 1H); 5,10 30 (d, 2H); 4,57-4,47 (m, 1H); 3,99-3,12 (c, 11H); 1,40-1,24 (m, 4H); 1,14 (d, 3H); 0,73 (s, 3H); 0,66-0,59 (m,
2H); 0,38-0,31 (m, 2H).
LRMS (Elektrosprej, pozitívny): Da/e 511,6 (m+l).
Príklad 129
R1=CH2C3H5; R3=(R)-COCH(CH3)NH2 (2R)-1-(3-((1 R)-l-hydroxyetyl)(3S,4S)-4-[3-(cyklopropylmetoxy)-4-metoxyfenyl]-3-metylpyrolidinyl}-2-aminopropan-1 -ón
100
Pripravený z titulnej zlúčeniny príkladu 128 pomocou debenzylačnej metódy uvedenej pri medziprodukte 31.
'H NMR (400 MHz, CDC13, zmes rotamérov) δ: 8,60-8,27 (br m, 3H); 6,87-6,58 (m, 3H); 4,75-3,10 (c, 12H); 1,74-1,59 (m, 3H); 1,33-1,05 (m, 4H); 0,66-0,55 (m, 5H); 0,35-0,27 (m, 2H).
LRMS (Elektrosprej, pozitívny): Da/e 377,2 (m+l).
Príklad 130
R1=CH,C3H5; R3=(S)-COCH(i-Pr)NHCO,CH2Ph
N -(2-{ 3 -((1 R)-1 -hydroxyety 1)(3 S,4S)-4-[3-(cyclopropy Imetoxy)-4-metoxyfeny 1] -3-metylpyrolidiny 1} (1S)-1-(metyletyl)-2-oxoetyl)(fenylmetoxy)karboxamid
Pripravený z medziproduktu 67 pomocou acylačnej metódy uvedenej pri príklade 7 použitím Z-Val-ONp. 'H NMR (400 MHz, CDC13, zmes rotamérov) δ: 7,42-7,27 (m, 5H); 6,84-6,75 (m, 3H); 5,63 (dd 1H);
5,15-5,02 (m, 2H); 4,40-4.4.07 (dm, 1H); 3,87-3,33 (c, 12H); 2,08-1,95 (m, 1H); 1,34-1,25 (m, 1H); 1,14 (t,
3H); 1,04-0,90 (m, 6H); 0,73 (s, 3H); 0,66-0,59 (m, 2H); 0,38-0,31 (m, 2H).
LRMS (Elektrosprej, pozitívny): Da/e 539,5 (m+l).
Príklad 131
R‘=CH2C3H5; R3=(S)-COCH(i-Pr)NH,
1-(3-(( lR)-l-hydroxyetyl)(3S,4S)-4-[3-(cyklopropylmetoxy)-4-metoxyfenyl]-3-metylpyrolidinyl}(2S)-225 -amino-3-metylbutan-l-ón
Pripravený z titulnej zlúčeniny príkladu 130 metódou debenzylácie uvedenej pri medziprodukte 31.
'H NMR (400 MHz, CDC13, zmes rotamérov) δ: 8,37 (br s, 3H); 6,82-6,63 (m, 3H); 4,24-3,53 (c, 11H);
3,19 (d, 1H); 2,45-2,32 (m, 2H); 1,34-1,04 (m, 10H); 0,64 (s, 3H); 0,63-0,56 (m, 2H); 0,36-0,29 (m, 2H). LRMS (Elektrosprej, pozitívny): Da/e 405,4 (m+l).
Príklad 132
R'=CH2C3H5; R3=(S)-COCH(CH2CH(CH3)CH3)NHCO2CH2Ph 35 N-(2-{3-((lR)-l-hydroxyetyl)(3S,4S)-4-[3-(cyklopropylmetoxy)-4-metoxyfenyl]-3-metylpyrolidinyl}(lS)-l-(2-metylpropyl)-2-oxoetyl)(fenylmetoxy)karboxamid
Pripravený z medziproduktu 67 pomocou metódy acylácie s Hunigovou bázou, ktorá je uvedená pri medziprodukte 74, použitím Z-Leu-ONp.
101 ‘H NMR (400 MHz, CDC13, zmes rotamérov) δ: 7,43-7,26 (m, 5H); 6,84-6,75 (m, 3H); 5,61 (dd IH); 5,16-5,04 (m, 2H); 4,63-4,55 (m, IH); 3,90-3,34 (c, 12H); 1,80-1,68 (m, IH); 1,64-1,40 (m, 2H); 1,36-1,24 (m, IH); 1,14 (d, 3H); 1,05-0,92 (m, 6H) 0,74 (d, 3H); 0,65-0,59 (m, 2H); 0,37-0,32 (m, 2H).
LRMS (Elektrosprej, pozitívny): Da/e 553,7 (m+l).
Príklad 133
R'=CH2C3H5; R3=(S)-COCH(CH2CH(CH3)CH3)NH2 l-{3-((lR)-l-hydroxyetyl)(3S,4S)-4-[3-(cyklopropylmetoxy)-4-metoxyfenyl]-3-metylpyrolidinyl}(2S)-2-amino-4-metylpentan-l-ón
Pripravený z titulnej zlúčeniny príkladu 132 metódou debenzylácie uvedenou pri medziprodukte 31.
'H NMR (metanol-d4, 400 MHz, zmes rotamérov) δ: 6,96-6,86 (m, 3H); 4,33-4,28 (m, IH); 4,03-3,28 (c,
IH); 1,87-1,65 (m, 3H); 1,29-1,18 (m, IH); 1,14-0,96 (m, 9H); 0,76 (d, 3H); 0,61-0,55 (m, 2H); 0,36-0,29 15 (m, 2H).
LRMS (Elektrosprej, pozitívny): Da/e 419,5 (m+l).
Príklad 134
R‘=CH2C3H5; R3=(R)-COCH(CH2CH(CH3)CH3)NHCO2CH2Ph
N-((lR)-2-{3-((lR)-l-hydroxyetyl)(3S,4S)-4-[3-(cyklopropylmetoxy)-4-metoxyfenyl]-3-metylpyrolidinyl}-1 -(2-metylpropyl)-2-oxoetyl)(fenylmetoxy)karboxamid
Pripravený z medziproduktu 67 metódou acylácie Hunigovej bázy uvedenou pri medziprodukte 74 použi25 tím Z-D-Leu-ONp.
*H NMR (400 MHz, CDC13, zmes rotamérov) δ: 7,40-7,28 (m, 5H); 6,85-6,70 (m, 3H); 5,57 (dd IH),
5,14-5,04 (m, 2H); 4,58-4,49 (m, IH); 4,11-3,19 (c, 11H); 1,78-1,66 (m, IH); 1,60-1,22 (m, 3H); l,15(dd, 3H); 1,03-0,85 (m, 6H) 0,72 (d, 3H); 0,65-0,57 (m, 2H); 0,38-0,30 (m, 2H).
LRMS (Elektrosprej, pozitívny): Da/e 553,7 (m+l).
Príklad 135
R1=CH2C3H5; R3=(R)-COCH(CH2CH(CH3)CH3)NH2 (2R)-l-{3-((lR)-l-hydroxyetyl)(3S,4S)-4-[3-(cyclopropylmetoxy)-4-metoxyfenyl]-3-metylpyrolidinyl}-2-amino-4-metylpentan-l-ón
Pripravený z titulnej zlúčeniny príkladu 134 metódou debenzylácie uvedenou pri medziprodukte 31.
'H NMR (metanol-d4, 400 MHz, zmes rotamérov) δ: 6,97-6,91 (m, 2H); 6,88-6,83 (m, IH); 4,29-3,25 (c,
11H); 1,85-1,59 (m, 3H); 1,30-1,19 (m, IH); 1,10 (dd, 3H); 1,06-0,93 (m, 6H); 0,77 (dd, 3H); 0,62-0,55 (m, 40 2H); 0,36-0,29 (m, 2H).
LRMS (Elektrosprej, pozitívny): Da/e 419,5 (m+l).
102
Príklad 136
R‘=CH2C3H5; R3=COCH(C4H9)NHCO2CH2Ph
N-(2-(3-(( 1 R)-l-hydroxyetyl)(3S,4S)-4-[3-(cyklopropylmetoxy)-4-metoxyfenyl]-3-metylpyrolidinyl}(lS)-l-butyl-2-oxoetyl)(fenylmetoxy)karboxamid
Pripravený z medziproduktu 67 metódou acylácie, ktorá je uvedená pri príklade 7, použitím Z-NLeu-ONp.
‘H NMR (400 MHz, CDCfi, zmes rotamérov) δ: 7,40-7,25 (m, 5H); 6,85-6,75 (m, 3H); 5,69 (dd 1H);
5,14-5,05 (m, 2H); 4,56-4,50 (m, 1H); 3,87-3,34 (c, 11 H); 1,80-1,54 (m, 2H); 1,43-1,24 (m, 5H); 1,14 (m, 3H); 0,96-0,85 (m, 3H) 0,74 (s, 3H); 0,65-0,61 (m, 2H); 0,37-0,32 (m, 2H).
LRMS (Elektrosprej, pozitívny): Da/e 553,8 (m+l).
Príklad 137
R‘=CH2C3H5; R3=COCH(C4H9)NH2
1-(3-(( lR)-l-hydroxyetyl)(3S,4S)-4-[3-(cyklopropylmetoxy)-4-metoxyfenyl]-3-metylpyrolidinyl}(2S)-2-aminohexan-l-ón
Pripravený z titulnej zlúčeniny príkladu 136 metódou debenzylácie uvedenou pri medziprodukte 31.
‘H NMR (400 MHz, CDCfi, zmes rotamérov) δ: 6,93-6,85 (m, 3H); 4,33-4,25 (m, 1H); 4,02-3,47 (c, 11H); 1,96-1,79 (m, 2H); 1,51-1,35 (m, 4H); 1,30-1,19 (m, 1H); 1,11 (dd, 3H); 1,03-0,93 (m, 3H) 0,77 (d, 3H); 0,62-0,56 (m, 2H); 0,35-0,30 (m, 2H).
LRMS (Elektrosprej, pozitívny): Da/e 419,5 (m+l).
Príklad 138
R*=CH2C3H5; R3=(R)-COCH(C6H, ,)NH2CO2CH2Ph
N-((lR)-2-(3-((lR)-l-hydroxyetyl)(3S,4S)-4-[3-(cyklopropylmetoxy)-4-metoxyfenyl]-3-metylpyrolidinyl}-(1 R)-cyklohexy 1-2-oxoety l)(fenylmetoxy)karboxamid Väzbová EDCI/HOBT metóda
Reakčná banka s miešacou lopatkou sa naplnila N-karboxybenzyl-D-cyklohexylglycínom (23,8 mg; 0.0819 mmol), suchým CH2C12 (350 ul), EDC1 (15,7 mg; 0.0819 mmol) a hydroxybenzotriazolom (HOBT) (12,5 mg; 0,0819 mmol). Táto zmes sa nechala miešať počas 1 hodiny pri laboratórnej teplote. V jednej dávke sa pridal medziprodukt 67 (25 mg; 0,0819 mmol). Po 48 hodinovom miešaní pri laboratórnej teplote sa reakčná zmes zriedila s CH2C12 (5 ml), premyla s IN HCI (2 x 20 ml), nasýteným roztokom NaHCO3 (1 x 20 ml), vysušila (Na2SO4) a skoncentrovala za vzniku 27 mg (57 %) bielej peny.
‘H NMR (400 MHz, CDCfi, zmes rotamérov) δ: 7,39-7,29 (m, 5H); 6,86-6,78 (m, 2H); 6,75-6,68 (m, 1H); 5,54 (dd, 1H); 4,37-3,25 (c, 12H); 1,81-1,56 (m, 5H); 1,36-0,95 (m, 10H); 0,71 (d, 3H); 0,66-0,59 (m, 2H); 0,39-0,31 (m, 2H).
LRMS (Elektrosprej, pozitívny); Da/e 580,2 (m+l).
Príklad 139
R‘=CH2C3H5; R3=(S)-COCH(C6H, ,)NH2 (2R)-l-(3-((lR)-l-hydroxyetyl)(3S,4S)-4-[3-(cyklopropylmetoxy)-4-metoxyfenyl]-3-metylpyrolidinyl}-2-amino-2-cyklohexyletan-1 -ón
103
Pripravený z titulnej zlúčeniny príkladu 138 pomocou debenzylačnej metódy uvedenej pri medziprodukte 31.
‘H NMR (metanol-d4, 400 MHz, zmes rotamérov) δ: 6,95-6,78 (m, 3H); 4,10-3,20 (c, 12H); 1,96-1,62 (m, 5H); 1,39-1,02 (m, 10H); 0,75 (d, 3H); 0,62-0,51 (m, 2H); 0,35-0,23 (m, 2H).
LRMS (Elektrosprej, pozitívny): Da/e 445,5 (m+l).
Príklad 140
R'=CH2C,H5; R3=(S)-COCH(t-Bu)NHCO2CH2Ph
N-((lR)-2-{3-((lR)-l-hydroxyetyl)((3S,4S)-4-[3-(cyklopropylmetoxy)-4-metoxyfenyl]-3-metylpyrolidinyl}-(1 S)-cyklohexyl-2-oxoetyl)(fenylmetoxy)karboxamid
Pripravený z medziproduktu 67 pomocou väzbovej EDC1/HOBT metódy, ktorá je uvedená pri príklade 138, použitím N-karboxybenzyl-L-t-butylglycínu.
‘H NMR (400 MHz, CDC13, zmes rotamérov) δ: 7,39-7,29 (m, 5H); 6,84-6,76 (m, 3H); 5,59-5,53 (m, 1H); 5,14-5,02 (m, 2H); 4,34 (dd, 1H); 3,87-3,33 (c, 10H); 1,34-1,24 (m, 1H); 1,14 (dd, 3H); 0,74 (d, 5 3H); 0,66-0,59 (m, 2H); 0,39-0,31 (m, 2H).
LRMS (Elektrosprej, pozitívny): Da/e 554,2 (m+l).
Príklad 141
1-(3-(( 1 R)-l-hydroxyetyl)(3S,4S)-4-[3-(cyklopropylmetoxy)-4-metoxyfenyl]-3-metylpyrolidinyl}(2S)-2-am ino-3,3-d i mety lb utan-1-ón
Pripravený z titulnej zlúčeniny príkladu 140 pomocou debenzylačnej metódy uvedenej pri medziprodukte 31.
‘H NMR (metanol-d4,400 MHz, zmes rotamérov) δ: 6,98-6,86 (m, 3H); 4,16-3,33 (c, 12H); 1,29-1,20 (m, 25 1H); 1,15-0,97 (m, 12H); 0,75 (d, 3H); 0,62-0,56 (m, 2H); 0,36-0,30 (m, 2H).
LRMS (Elektrosprej, pozitívny): Da/e 419,5 (m+l).
Príklad 142
1-((3 R)-3-((lR)-l-hydroxyetyl)-4-[3-(terc-butoxy)-4-metoxyfenyl]-3-metylpyrolidinyl}-2-(fenylmetoxy)etan-l-ón
Medziprodukt 73 (775 mg; 2,53 mmol) sa naviazal na benzyloxyacetylchlorid (497 μΐ, 3,16 mmol) pomocou metódy s Hunigovou bázou, ktorá je uvedená pri medziprodukte 74, za vzniku titulnej zlúčeniny vo forme hnedej peny (978 mg; 85 %).
*H NMR (400 MHz, CDC13) δ: 7,41-7,30 (m, 5H); 6,90(m, 2H); 6,81 (d, 1H); 4,64 (dd, 2H); 4,15 (dd, 2H); 3,95 (dd, 1H); 3,80 (s, 3H); 3,62 (dd, 1H); 3,57 (m, 2H); 3,44 (d, 1H); 3,21 (d, 1H); 1,33 (s, 9H); 1,16 a 1,11 (dva dublety, 3H, rotaméry); 0,73 (d, 3H, rotaméry).
104
Príklad 143
R1=H; R3=COCH2OCH2Ph l-[(3R)-3-((lR)-l-hydroxyetyl)-4-(3-hydroxy-4-metoxyfenyl)-3-metylpyrolidinyl]-2-(fenylmetoxy)etan-l-ón
Do miešaného roztoku titulnej zlúčeniny príkladu 142 (750 mg; 1,65 mmol) v CH2C12 (6,6 ml) pri 0 °C pod vysúšacou trubicou sa pridala kyselina trifluóroctová (763 μΙ, 9,9 mmol). Po odstránení chladenia z reakčnej zmesi sa táto nechala ohriať na laboratórnu teplotu a potom sa miešala počas 3,5-hodiny. Reakčná zmes sa skoncentrovala rotačným vyparovaním, aby sa odstránila prebytočná kyselina trifluóroctová, potom sa zriedila s CH2C12 (30 ml) a premyla s 10 % Na2CO3 (2 x 30 ml). Organické vrstvy sa vysušili pomocou (MgSO4), prefiltrovali a skoncentrovali vo vákuu za vzniku titulnej zlúčeniny. Po uskutočnení flash chromatografie v EtOAc, po združení a skoncentrovaní frakcií obsahujúcich produkt, vo vákuu, sa získala titulná zlúčenina vo forme bielej peny (650 mg; 98 %).
'H-NMR (400 MHz, CDC13) δ: 7,42 (m, 5H); 6,83-6,70 (m, 3H); 4,64 (s, 2H); 4,16 (s, 2H); 3,93 (dd, 1H); 3,85 (3, 3H); 3,78 (d, 1H); 3,74 (dd, 2H); 3,67-3,52 (m, 4H); 3,44 (d, 1H); 3,20 (d, 1H); 1,16 a 1,10 (dublety, 3H, rotaméry); 0,73 (s, 3H).
Príklad 144
R1 =CH2C(CH3)(CH2CH2); R3=COCH2OCH2Ph
2-benzyloxy-l-(3-(( 1 R)-1 -hydroxyetyl)-(3S,4S)-4-[4-metoxy-3-( 1 -metylcyklopropylmetoxy)fenyl]-3-metylpyrolidin-1 -yl)etanón
Metóda Mitsunobu-ho v tuhej fáze
Do miešaného roztoku vzorky 143 (40 mg; 0,1 mmol) v THF (1,5 ml) pri laboratórnej teplote v uzavretej kónickej reakčnej nádobke sa pridal PS-trifenyl-fosfm (1,65 mmol/g; 182 mg; 0,3 mmol). Po 5 minútovom pomalom miešaní suspenzie, aby došlo k napučaniu gélu, sa pridal 1-metylcyklopropánmetanol (29 μΐ, 0,3 mmol), reakčná zmes sa ochladila na 0 °C. Suspenzia sa potom podrobila pôsobeniu DIAC (59 μΐ, 0,3 mmol) a reakčná zmes sa zohriala na 65 °C. Po pomalom celonočnom miešaní bola reakčná zmes ochladená na laboratórnu teplotu a prefiltrovaná cez spečený polystyrén s THF (30 ml). Filtrát sa skoncentroval vo vákuu a podrobil prietokovej chromatografii na stĺpci 15 mm x 6 s 1/1/0,1 EtOAc/hexán/metanol a frakcie obsahujúce produkt sa zhromaždili a skoncentrovali vo vákuu za vzniku titulnej zlúčeniny vo forme žltého oleja (40 mg; 86 %).
'H-NMR (400 MHz, CDC13) δ: 7,42-7,25 (m, 5H); 6,83-6,77 (m, 3H); 4,63 (s, 2H); 4,15 (dd, 2H); 3,96-3,20 (m, 6H, rotaméry); 3,81 (s, 3H); 1,74 (m, 1H); 1,24 (s, 3H); 1,17 a 1,10 (dublety, 3H, rotaméry); 0,72 (d, 3H, rotaméry); 0,53 (m, 2H); 0,41 (m, 2H).
Príklad 145
R1=CH2C(CH3)(CH2CH2); R3=COCH2OH l-((3R)-3-((lR)-l-hydroxyetyl)-4-{4-metoxy-3-[(metylcyklopropyl)metoxy]fenyl}-3-metylpyrolidinyl)-2-hydroxyetan-l-ón
Surový produkt zlúčeniny príkladu 144 (40 mg; 0,086 mmol) bol podrobený debenzylačnej procedúre uvedenej pri medziprodukte 31 za vzniku titulnej zlúčeniny vo forme číreho oleja (32,5 mg; 100 %).
'H-NMR (CDC13/CD3OD, 400 MHz) δ: 6,87-6,79 (m, 3H); 3,97-3,18 (m, 7H, rotaméry); 3,83 (s, 3H); 1,23 (s, 3H); 1,14 a 1,11 (dublety, 3H, rotaméry); 0,77 (s, 3H); 0,56 (m, 2H); 0,42 (m, 2H).
LRMS (Elektrosprej, pozitívny): Da/e 378,2 (m+l).
105
Príklad 146
R‘=CH2CH2C3H5; R3=COCH2OCH2Ph
2-benzyloxy-l-[(3S,4S)-4-[3-(2-cyklopropyletoxy)-4-metoxyfenyl]-3-((lR)-l-hydroxyetyl)-3-metylpyrolidin-l-yl]etanón
Zlúčenina príkladu 143 bola podrobená procedúre, ktorá je uvedená pri príklade 144, použitím 2-cyklopropyletenolu (26 mg; 0,3 mmol) za vzniku titulnej zlúčeniny (41 mg; 88 %).
‘H-NMR (400 MHz, CDC13) δ: 7,41-7,25 (m, 5H); 6,82-6,74 (m, 3H); 4,63 (s, 2H); 4,15 (dd, 2H); 4,04 10 (dd, 2H); 3,98-3,20 (m, 5H, rotaméry); 3,81 (s, 3H); 1,82 a 1,79 (m, 1H, rotaméry); 1,72 (dd, 2H); 1,40-1,20 (m, 1H); 1,18 a 1,12 (d, 3H, rotaméry); 0,82 (m, 1H); 0,74 (s, 3H); 0,46 (m, 2H); 0,12 (m, 2H).
Príklad 147
R‘=CH2CH2C3H5; R3=COCH2OH l-{(3R)-3-((lR)-l-hydroxyetyl)-4-[3-(2-cyklopropyletoxy)-4-metoxyfenyl]-3-metylpyrolidinyl}-2-hydroxyetán-1-ón
Zlúčenina príkladu 146 bola podrobená debenzylačnej procedúre uvedenej pri medziprodukte 31 za vzni20 ku titulnej zlúčeniny vo forme číreho oleja (27,4 mg; 82 %).
'H-NMR (CDC13/CD3OD, 400 MHz) δ: 6,91-6,80 (m, 3H); 4,19 (m, 2H); 4,10 (m, 2H); 3,97-3,15 (m, 5H, rotaméry); 3,82 (s, 3H); 1,73 (dd, 2H); 1,25 (m, 1H); 1,14 a 1,12 (dublety, 3H, rotaméry); 0,85 (m, 1H); 0,78 (s, 3H); 0,46 (m, 2H); 0,14 (m, 2H).
LRMS (Elektrosprej, pozitívny): Da/e 378,5 (m+1).
Príklad 148
R‘=CH2CH2C5H9; R3=COCH2OH
1-{(3 R)-3-((l R)-1-hydroxy ety l)-4-[3-(2-cyklopentyletoxy)-4-metoxyfenyl]-3-metylpyrolidinyl}-2-hydroxyetan-l-ón
Pripravený pomocou metódy uvedenej pri príklade 144, použitím zlúčeniny príkladu 143 a 2-cyklopentyletanolu (34 mg; 0,3 mmol) za vzniku titulnej zlúčeniny (41 mg; 100 %).
‘H NMR (400 MHz, CDC13) δ: 7,41-7,25 (m, 5H); 6,82-6,74 (m, 3H); 4,63 (s, 2H); 4,15 (dd, 2H); 3,99 (dd, 2H); 3,98-3,20 (m, 5H, rotaméry); 3,81 (s, 3H); 2,00-1,20 (m, 11H); 1,18 a 1,12 (d, 3H, rotaméry); 0,74 (s, 3 H).
106
Príklad 149 l-[(3S,4S)-4-[3-(2-Cyklopentyletoxy)-4-metoxyfenyl]-3-((lR)-l-hydroxyetyl)-3-metylpyrolidin-l-yl]-2-hydroxyetanón
Zlúčenina príkladu 148 bola podrobená debenzylačnej procedúre uvedenej pri medziprodukte 31 za vzniku produktu vo forme číreho oleja (34,7 mg; 86 %).
'H NMR (CDCI3/CD3OD, 400 MHz) δ: 6,87-6,80 (m, 3H); 4,18 (m, 2H); 4,03 (m, 2H); 3,99-3,11 (m, 5H, rotaméry); 3,84 (s, 3H); 2,01-1,15 (m, 11H); 1,14 a 1,11 (dublety, 3H, rotaméry); 0,77 (s, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitívny): Da/e 406,4 (m+1).
Príklad 150
2-Benzyloxy-l-[4-(S)-[3-(bicyklo[4.1.0]hept-7-yl-metoxy)-4-metoxyfenyl]-3-(S)-(l-(R)-hydroxyetyl)-3metylpyrolidin-l-yl]etanón
Pripravený zo zlúčeniny príkladu 143 reakciou Mitsunobu, ktorá je uvedená pri príklade 144, použitím bicyklo[4.1.0]hept-7-yl-metanolu za vzniku zmesi 80 : 20 cis a trans izomérov (34 % výťažok).
'H NMR (CDClj, 400 MHz) δ: 7,42-7,23 (m, 5H); 6,85-6,72 (m, 3H); 5,06-4,89 (m, 1H); 4,67 (s, 2H); 4,15 (s, 2H); 4,07-3,56 (m, 9H); 2,09-1,56 (m, 8H); 1,36-0,87 (m, 8H); 0,73 (m, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitívny): Da/e 508,6 (m+1).
Príklad 151 l-[4-(S)-[3-(Bicyklo [4.1.0]hept-7-ylmetoxy)-4-metoxyfenyl]-3-(S)-(l-(R)-hy-droxyetyl)-3-metylpyrolidin-1 -y l]-2-hydroxyetanón
Zlúčenina príkladu 150 (15 mg; 30 mmol) sa rozpustila v 95 % etanole (1 ml) a roztok sa podrobil pôsobeniu Pearlmanovho katalyzátora (20 % Pd(OH)2 na uhlíku, 15 mg). Reakčná zmes sa pri 1 atmosfére vodíka (alebo 50 psi) podrobila hydrogenolýze počas 16 hodín. Aby sa odstránil katalyzátor, reakčná zmes sa prefiltrovala a rozpúšťadlo sa odstránilo prúdom dusíka. Výsledná látka sa v prípade potreby prečistila chromatografiou na silikagéli použitím zmesi EtOAc/hexány/metanol (1:1: 0,2). (76 % výťažok).
'H NMR (CDClj, 400 MHz) δ: 6,73-6,66 (m, 3H); 4,04-3,99 (m, 2H); 3,94-3,87 (m, 4H); 3,83-3,20 (m,
7H); 3,15-2,73 (m, 1H); 1,78-1,47 (m, 5H); 1,14-0,69 (10H); 0,63-0,60 (3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitívny): Da/e 418,3 (m+1).
107
Príklad 152
2-Benzyloxy-l-[4-(S)-[3-(bicyklo[3.1.0]hex-6-ylmetoxy)-4-metoxyfenyl]-3-(S)-(l-(R)-hydroxyetyl)-3-metylpyrolidin-l-yl]etanón
Pripravený z titulnej zlúčeniny príkladu 143 metódou Mitsunobu-ho, ktorá je uvedená pri príklade 144, použitím bicyklo[3.1.0]hex-6-yl-metanolu. Výsledná látka bola nedeliteľná zmes izomérov na alkoholovej strane reťazca (32 % výťažok).
‘H NMR (CDClj, 400 MHz) δ: 7,45-7,29 (m, 5H); 6,84-6,72 (m, 3H); 5,02-4,94 (m,lH); 4,66 (s, 2H); 4,16 (s, 2H); 4,08-3,44 (m, 8H); 1,96-1,51 (m, 4H); 1,26 (d, 6H); 1,18-1,08 (dd, 5H); 0,72 (m,3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitívny): Da/e 494,4 (m+l).
Príklad 153 l-[4-(S)-[3-(Bicyklo[3.1.0]hex-6-ylmetoxy)-4-metoxyfenyl]-3-(S)-(l-(R)-hydroxyetyl)-3-metylpyrolidin-l-yl]-2-hydroxyetanón
Pripravený z titulnej zlúčeniny príkladu 152 metódou debenzylácie, ktorá je uvedená pri príklade 151 (90 % výťažok).
‘H NMR (CDjOD, 400 MHz) δ: 6,87-6,79 (m, 3H); 4,97-4,90 (m, 1H); 4,19-4,14 (m, 2H); 3,99-3,36 (m, 7H); 3,30-2,89 (m, 1H); 1,92-1,52 (m, 4H); 1,28 (d, 6H),
1,16-1,06 (m, 6H); 0,77 (m, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitívny): Da/e 404,3(m+l).
Príklad 154
2-Benzyloxy-l-[4-(S)-[3-(4-terc-butylcyklohexyloxy)-4-metoxyfenyl]-3-(S)-(l-(R)-hydroxyetyl)-3-metylpyrolidin-l-yl]etanón
Pripravený metódou Mitsunobu-ho, ktorá je uvedená pri príklade 144, použitím zlúčeniny príkladu 143 a 4-terc-butyl-cyklohexanolu (17 % výťažok).
'H NMR (CDClj, 400 MHz) δ: 7,43-7,28 (m, 5H); 6,85-6,73 (m, 3H); 6,37 (brd s, 1H); 5,02-4,93 (m, 2H); 20 4,67 (s, 2H); 4,13 (m, 2H); 3,89-3,43 (m, 7H),
2,19-1,36 (m, 8H); 1,26 (d, 9H); 1,18-1,08 (dd, 1H); 0,92-0,81 (m, 6H).
LRMS (Elektrosprej, pozitívny): Da/e 538,8 (m+l).
108
Príklad 155 l-[4-(S)-[3-(4-terc-Butylcyklohexyloxy)-4-metoxyfenyl]-3-(S)-(l-(R)-hydroxyetyl)-3-metylpyrolidin-l-yl]-2-hydroxyetanón
Pripravený z titulnej zlúčeniny príkladu 154 pomocou metódy debenzylácie, ktorá je uvedená pri príklade 151 (89 % výťažok).
'H NMR (CD3OD, 400 MHz) δ: 6,82-6,74 (m, 3H); 4,91-4,85 (m, 3H); 3,82-3,78 (m, 4H); 3,76-3,30 (m, 4H); 2,14-1,34 (m, 2H); 1,22-1,18 (m, 10H); 1,08-0,99 (m, 3H); 0,86-0,78 (m, 9H); 0,79-0,75 (m, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitívny): Da/e 448,8(m+l).
Príklad 156
2-Benzyloxy-l-{3-(S)-(l-(R)-hydroxyetyl)-4-(S)-[4-metoxy-3-(4-metylcyklohexyloxy)fenyI]-3-metylpyroliin-l-yl}etanón
Pripravený z titulnej zlúčeniny príkladu 143 pomocou metódy Mitsunobu-ho použitím 4-metylcyklohexanolu (zmes izomérov) (10 % výťažok).
‘H NMR (CDC13, 400 MHz) δ: 7,42-7,28 (m, 5H); 6,83-6,74 (m, 3H); 4,67 (s, 2H); 4,40-4,36 (m, IH); 4,15-4,12 (m, 2H); 3,97-3,44 (m, 8H); 1,98-1,91 (m, 2H); 1,60-0,85 (m, 15H); 0,74-0,71 (d, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitívny): Da/e 496,7 (m+l).
Príklad 157
2-Hydroxy-l-{3-(S)-(l-(R)-hydroxyetyl)-4-(S)-[4-metoxy-3-(4-metylcyklohexyloxy)fenyl]-3-metyi-pyroIidin-l-yl}etanón
Pripravený z titulnej zlúčeniny príkladu 156 pomocou debenzylačnej metódy, ktorá je uvedená pri príklade 151 (kvantitatívny výťažok).
‘H NMR (CD3OD, 400 MHz) δ: 6,87-6,79 (m, 3H); 4,18-4,11 (m, 2H); 3,98-3,70 (m, IH); 3,69-3,36 (m,
10H); 3,09-2,89 (m, IH); 1,99-1,92 (m, IH); 1,61-1,43 (m, 6H); 1,28-1,25 (m, 2H); 1,14-1,10 (m, 3H); 0,97-0,86 (m, 3H); 0,78-0,76 (m, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitívny): Da/e 406,6 (m+l).
109
Príklad 158
2-Benzyloxy-l-[4-(S)-[3-(dekahydronaftalén-2-yloxy)-4-metoxyfenyl]-3-(S)-(l-(R)-hydroxyetyl)-3-metylpyrolidin-l-yl]etanón
Pripravený z titulnej zlúčeniny príkladu 143 pomocou metódy Mitsunobu-ho použitím dekahydronaftalén-2-olu (zmes izomérov) (10 % výťažok).
‘H NMR (CDC13, 400 MHz) δ: 7,42-7,29 (m, 5H); 6,85-6,74 (m, 3H); 5,03-4,95 (m,lH); 4,68 (s, 2H); 3,98-3,45 (m, 7H); 1,90-1,10 (m, 22 H); 0,75-0,72 (m, 3H)
LRMS (Elektrosprej, pozitívny): Da/e 536,7 (m+1).
Príklad 159 l-[4-(S)-[3-(Dekahydronaftalén-2-yloxy)-4-metoxyfenyl]-3-(S)-(l-(R)-hydroxyetyl)-3-metylpyrolidin-l-yl]-2-hydroxyetanón
Pripravený z titilnej zlúčeniny príkladu 158 pomocou debenzylačnej metódy, ktorá je uvedená pri príklade 151 (kvantitatívny výťažok).
'H NMR (CDCb, 400 MHz) δ: 6,85-6,79 (m, 3H); 5,02-4,94 (m, 1H); 4,23-4,12 (m, 2H); 4,03-3,48 (m, 10H); 3,08-2,89 (m, 1H); 1,89-1,80 (m, 2H); 1,78-1,13 (m, 17H); 0,77-0,75 (m, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitívny): Da/e 446,1 (m+1).
Príklad 160
2-Benzyloxy-l-[4-(S)-[3-(bicyklohexyl-4-yloxy)-4-metoxyfenyl]-3-(S)-(l-(R)-hydroxyetyl)-3-metylpyrolidin-l-yl]etanón
Pripravený z titulnej zlúčeniny príkladu 143 pomocou metódy Mitsunobu-ho použitím bicyklohexyl-4-olu (zmes izomérov) (12 % výťažok).
'H NMR (CDCb, 400 MHz) δ: 7,42-7,29 (m, 5H); 6,84-6,74 (m, 3H); 5,03-4,95 (m, 1H); 4,68 (s, 2H); 4,17-4,11 (m, 2H); 3,98-3,45 (m, 7H); 1,90-1,10 (m, 26H); 0,75-0,72 (m, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitívny): Da/e 564,8 (m+1).
110
M«O
Príklad 161 l-[4-(S)-[3-(Bicyklohexyl-4-yloxy)-4-metoxyfenyl]3-(S)-(l-(R)-hydroxyetyl)-3-metylpyrolidin-l-yl]-2-hydroxyetanón
Pripravený z titulnej zlúčeniny príkladu 160 pomocou debenzylačnej metódy, ktorá je uvedená pri príklade 151 (kvantitatívny výťažok).
‘H NMR (CDC13, 400 MHz) δ: 6,85-6,79 (m, 3H); 5,02-4,93 (m, IH); 4,20-4,15 (m, 2H); 4,07-3,47 (m, 8H); 3,07-2,88 (m, IH); 2,17-1,94 (m, 2H); 1,82-0,82 (m, 23H) 0,77-0,74 (brd s, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitívny): Da/e 474,6 (m+l).
Príklad 162
2-Benzyloxy-l-{3-(S)-(l-(R)-hydroxyetyl)-4-(S)-[4-metoxy-3-(-4-trifluórmetylcyklohexyloxy)fenyl]-3-mety lpyrolidin-1 -y 1} etánon
Pripravený z titulnej zlúčeniny príkladu 143 pomocou metódy Mitsunobu-ho použitím 4-trifluórmetylcyklohexanolu (zmes izomérov) (40 % výťažok).
'H NMR (CDClj, 400 MHz) δ: 7,46-7,24 (m, 5H); 6,88-6,77 (m, 3H); 4,72-4,61 (brd s, 2H); 5,03-4,89 (brd m, IH); 4,19-3,18 (m, 10H); 2,26-0,80 (m, 14H); 0,75-0,68 (brd, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitívny); Da/e 550,7 (m+l).
Príklad 163
2-Hydroxy-l-{3-(S)-(l-(R)-hydroxyetyl)-4-(S)-[4-metoxy-3-(4-trifluórmetylcyklohexyloxy)fenyl]-3-metylpyrolidín-1 -y 1} etanón
Pripravený z titulnej zlúčeniny príkladu 162 pomocou debenzylačnej metódy, ktorá je uvedená pri príklade 151 (kvantitatívny výťažok).
'H NMR (CDClj, 400 MHz) δ: 6,85-6,83 (m, 3H); 5,03-4,90 (m, IH); 4,26-4,15 (m, 2H); 4,13-3,95 (m,
2H); 3,89-3,37 (m, 7H); 3,10-2,90 (m, IH); 2,26-2,18 (m, 2H); 2,08-2,01 (m, 3H); 1,55-0,86 (m, 7H); 0,75 (s, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitívny): Da/e 460,3(m+l).
111
ΜβΟ
Príklad 164
2-Benzyloxy-l-{3-(S)-(l-(R)-hydroxyetyl)-4-(S)-[4-metoxy-3-(3-metoxy-3-metylbutoxy)fenyl]-3-metylpyrolidin-l-yl}etanón
Pripravený z titulnej zlúčeniny príkladu 143 pomocou metódy Mitsunobu-ho použitím 3-metoxy-3-metylbutanolu (78 % výťažok).
'H NMR (CDClj, 400 MHz) δ: 7,42-7,29 (m, 5H); 6,85-6,72 (m, 3H); 4,67 (s, 2H); 4,17-4,13 (m, 3H); 3,97-3,45 (m, 9H); 3,23 (d, 4H), 2,07-2,01 (m, 2H); 1,23 (s, 6H); 1,16-1,09 (dd, 4H); 0,72 (d, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitívny): Da/e 500,6 (m+1).
Príklad 165
2-Hydroxy-l-{3-(S)-(l-(R)-hydroxyetyl)-4-(S)-[4-metoxy-3-(3-metoxy-3-metylbutoxy)fenyl]-3-metylpyrolidin-l-yl}etanón
Pripravený z titulnej zlúčeniny príkladu 164 metódou debenzylácie, ktorá je uvedená pri príklade 151 (97 % výťažok).
‘H NMR (CDC13, 400 MHz) δ: 6,83-6,72 (m, 3H); 4,19-4,11 (m, 4H); 4,01-3,79 (m, 1H); 3,83 (s, 3H); 3,72-3,46 (m, 7H); 3,22 (s, 3H); 2,05-1,99 (m, 2H); 1,22 (brd s, 7H); 1,16-1,11 (m, 3H); 0,73 (brd s, 3H).
LRMS-(Elektrosprej, pozitívny): Da/e 410,2 (m+1).
Príklad 166
2-Benzyloxy-l-{3-(S)-(l-(R)-hydroxyetyl)-4-(S)-[4-metoxy-3-(l-fenylcyklopentylmetoxy)fenyl]-3-metylpyrolidin-l-yl}etanón
Pripravený z titulnej zlúčeniny príkladu 143 pomocou metódy Mitsunobu-ho použitím (1fenylcyklopentyl)metanolu (25 % výťažok).
'H NMR (CDC13, 400 MHz) δ: 7,46-7,13 (m, 10H); 6,78-6,37 (m, 3H); 5,01-4,93 (m, 1H); 4,66 (s, 2H); 4,15-4,10 (m, 2H); 3,92-3,41 (m, 7H); 2,24-2,15 (m, 1H); 2,04-1,97 (m, 2H); 1,84-1,70 (m, 4H); 1,26 (d, 6H); 1,13-1,05 (dd, 3H); 0,87-0,85 (m, 1H); 0,65 (2H).
LRMS (Elektrosprej, pozitívny): Da/e 558,5 (m+1).
112
Príklad 167
2-Hydroxy-l-{3-(S)-(l-(R)-hydroxyetyl)-4-(S)-[4-metoxy-3-(l-fenylcyklopentylmetoxy)fenyl]-3-metylpyrolidin-l-yl}etanón
Pripravený z titulnej zlúčeniny príkladu 166 pomocou debenzylačnej metódy, ktorá je uvedená pri príklade 151 (26 % výťažok).
'H NMR (CDClj, 400 MHz) δ: 7,46-7,43 (m, 2H); 7,34-7,27 (m, 2H) 7,23-7,18 (m, IH); 6,81-6,71 (m, 3H); 20 6,53-6,48 (m, IH); 4,15-4,09 (m, 2H); 3,93-3,88 (m, 2H); 3,78-3,46 (m, 7H); 2,25-0,68 (m, 17H).
LRMS (Elektrosprej, pozitívny): Da/e 468,7 (m+1).
Príklad 168
2-Benzyloxy-l-{3-(S)-(l-(R)-hydroxyetyl)-4-(S)-[4-metoxy-3-(l-fenylcyklopropyImetoxy)fenyl]-3-metylpyrolidin-l-yl}etanón
Pripravený z titulnej zlúčeniny príkladu 143 pomocou metódy Mitsunobu-ho použitím (1-fenylcyklopropyljmetanolu (90 % výťažok).
'H NMR (CDClj, 400 MHz) δ: 7,46-7,16 (m, 10H); 6,79-6,72 (m, 2H); 6,64-6,59 (m, IH); 4,66 (s, 2H); 4,14-4,12 (m, 2H); 4,10-4,02 (m, 2H); 3,91-3,42 (m, 9H); 1,28-1,25 (m, IH); 1,14-1,06 (m, 3H); 1,04-0,95 (m, 4H); 0,66 (s, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitívny); Da/e 530,7 (m+1).
Príklad 169
2-Hydroxy-l-{3-(S)-(l-(R)-hydroxyetyl)-4-(S)-[4-metoxy-3-(l-fenylcyklopropylmetoxy)fenyl]-3-metylpyrolidin-l-yl}etanón
Pripravený z titulnej zlúčeniny príkladu 168 pomocou debenzylačnej metódy, ktorá je uvedená pri príklade 151 (44 % výťažok).
‘H NMR (CDClj, 400 MHz) δ: 7,47-7,21 (m, 5H); 6,84-6,60 (m, 3H); 4,15-4,04 (m, 4H); 3,99-3,46 (m, 8H); 3,05-2,99 (m, IH); 2,11-2,04 (m, IH); 1,74-1,59 (m, 2H); 1,29-0,96 (m, 4H); 0,88-0,68 (m, 4H).
LRMS (Elektrosprej, pozitívny): Da/e 440,1 (m+1).
113
Príklad 170
R^CH.CÍCHjCHJÍCHoOCH,); R3=COCH2OCH2Ph
2-benzyloxy-l-[(3S,4S)-4-3-(3-etyloxetán-3-ylmetoxy)-4-metoxyfenyl]-3-((lR)-l-hydroxyetyl)-3-metylpyrolidin-l-yl]etanón
Pripravený z titulnej zlúčeniny príkladu 143 pomocou metódy, ktorá je uvedená pri príklade 144, použitím 3-etyl-3-oxetánmetanolu (34 ml; 0,3 mmol) za vzniku titulnej zlúčeniny príkladu 170 (44 mg; 88 %).
'H NMR (CDC13, 400 MHz) δ: 7,41-7,25 (m, 5H); 6,84-6,80 (m, 3H) 4,64 (s, 2H); 4,58 (dd, 2H); 4,49 (d, 2H); 4,17-4,11 (m, 3H); 3,99 (dd, 2H); 3,98-3,20 (m, 5H, rotaméry); 3,80 (s, 3H); 1,91 (dd, 2H); 1,80 (d, IH); 1,24 (dd, IH); 1,17 a l,13(dublety, 3H, rotaméry); 0,94 (t, 3H); 0,73 (s, 3H).
Príklad 171
R‘=CH2C(CH2CH3)(CH2OCH2); R3=COCH2OH l-((3R)-3-((lR)-l-hydroxyetyl)-4-{3-[(3-etyloxetán-3-yl)metoxy]-4-metoxyfenyl}-3-metylpyrolidinyl)-2-hydroxyetan-l-ón
Zlúčenina príkladu 170 sa upravila pomocou debenzylácie uvedenej pri medziprodukte 31 za vzniku titulnej zlúčeniny vo forme číreho oleja (28,6 mg; 80 %).
'H-NMR (CDC13/CD3OD, 400 MHz) δ: 6,91-6,83 (m, 3H); 4,64 (d, IH); 4,19 (m, 2H); 4,12 (m, IH); 4,00-3,14 (m, 12H); 3,83 (s, 3H); 1,15 (m, 3H); 0,96 (m, 3H); 0,78 (s, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitívny): Da/e 408,5 (m+l).
Príklad 172
R‘=t-Bu; R3=COCH2OAc (2-{3-((lR)-l-hydroxyetyl)(3S,4S)-4-[3-(terc-butoxy)-4-metoxyfenyl]-3-metylpyrolidinyl}-2-oxoetylacetát Pripravený z medziproduktu 73 pomocou väzbovej metódy Hunigovej bázy, ktorá je uvedená pri medziprodukte 74, použitím acetoxyacetylchloridu.
'H NMR (400 MHz, CDC13, zmes rotamérov) δ: 6,94-6,81 (m, 3H); 4,72-4,58 (m, 2H); 3,80 (m, 3H); 3,97-3,17 (m, 6H); 2,19 (s, 3H); 1,33 (d, 9H); 1,15 (t, 3H); 0,76 (d, 3H).
Príklad 173
R'=H; R3=COCH2OAc
2-[3-((lR)-l-hydroxyetyl)(3S,4S)-4-(3-hydroxy-4-metoxyfenyl)-3-metylpyrolidinyl]-2-oxoetylacetát
Zlúčenina príkladu 172 bola upravená deprotekciou metódou TFA uvedenou pri príklade 143 za vzniku titulnej zlúčeniny vo forme bledohnedej peny (173 mg; 80 %).
'H NMR (400 MHz, CDC13, zmes rotamérov) δ: 6,86-6,70 (m, 3H); 5,64 (brs, IH); 4,72-4,62 (m, 2H);
3,88 (m, 3H); 3,95-3,18 (c, 6H); 2,20 (d, 3H); 1,15 (t, 3H); 0,77 (d, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitívny): Da/e 352,2 (m+l).
114
Príklad 174
R=4-Ph-Ph-CH2CH2; R3=C(=O)CH2OCH2Ph
2-benzyloxy-l-[(3S,4S)-4-[3-(2-bifenyl-4-yletoxy)-4-metoxyfenyl]-3-((R)-l-hydroxyetyl)-3-metylpyrolidin-l-yljetanón
Zlúčenina príkladu 143 (60 mg; 0,15 mmol) bola podrobená procedúre Mitsunobu-ho, ktorá je uvedená pri príklade 144, použitím 4-hydroxy-etylbifenylu (90 mg; 0,45 mmol) a použila sa bez ďalšieho prečistenia alebo stanovenia charakteristík (73 mg; 84 %).
Príklad 175
R‘=4-Ph-Ph-CH2CH2; R3=C(=O)CH2OH l-[(3S„4S)-4S)-4-[3-(2-bifenyl-4-yletoxy)-4-metoxyfenyl]-3-((R)-l-hydroxyetyl)-3-metylpyrolidin-l-yl]-2-hydroxyetanón
Zlúčenina príkladu 174 bola podrobená debenzylačnej procedúre uvedenej pri medziprodukte 31 za vzniku titulnej zlúčeniny príkladu 175.
*H NMR (400 MHz, CDC13, zmes rotamérov) δ: 7,58 (br t, 7,4 Hz, 3 H); 7,47-7,27 (m, 6H); 6,86-6,77 (m, 3H); 4,24 (dt, J=3,0; 7,4 Hz, 2H); 4,11 (brt, J=4,l Hz, 2 H); 4,01-3,47 (m, 5,5H, rotaméry); 3,87 (s, 3H); 3,20 (t, J=7,4 Hz, 2H); 3,03 (d, J=9,8 Hz, 0,5 H, rotamér); 1,36/1,32 (2d, J=3,6/3,7 Hz, 1H); 1,16/1,13 (2D, J=6,5/6,4 Hz, 3H); 0,74 (s, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitívny): m/e 490 (m+H)+.
Príklad 176
R'=CH2C=CPh; R3=COCH2OAc
2-{3-((lR)-l-hydroxyetyl)(3S,4S)-4-[4-metoxy-3-(3-fenylprop-2-inyloxy)fenyl]-3-metylpyrolidinyl}-2-oxoetylacetát
Banka s guľatým dnom vybavená miešacou tyčinkou a kondenzátorom sa v dusíkovom prostredí naplnila zlúčeninou príkladu 173 (270 mg; 0,769 mmol), acetónom (5 ml), CsCO3, (376 mg; 1,15 mmol) a medziproduktom 90 (242 mg; 1,15 mmol). Zmes sa podrobila refluxovaniu počas 4 hodín a nechala sa ochladiť na laboratórnu teplotu. Za zníženého tlaku sa odstránil acetón a zvyšok sa preniesol do zmesi EtOAc/voda. Vzniknutá zmes sa extrahovala s EtOAc (2 x 100 ml), vysušila (Na2SO4) a skoncentrovala. Čistenie metódou
115
Biotage (40 M cartridge, 1 : 1 : 0,1 EtOAc : hexán : MeOH) viedlo k vzniku 146 mg titulnej zlúčeniny vo forme bielej peny (41 %).
'H NMR (400 MHz, CDC13, zmes rotamérov) δ: 7,41-7,26 (m, 5H); 7,05 (dd, 1H); 6,85 (d, 2H); 5,05-4,95 (m, 2H); 4,70-4,58 (m, 2H); 3,88 (d, 3H); 3,95-3,13 (c, 6H); 2,19 (s, 3H); 0,97-0,92 (dd, 3H); 0,71 (d, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitívny): Da/e 466,4 (m+l).
Príklad 177
R'=CH2C=C-4-FPh; R3=COCH2OAc
2-(3-((lR)-l-hydroxyetyl)(3S,4S)-4-{3-[3-(4-fluórfenyl)prop-2-inyloxy]-4-metoxyfenyl}-3-metylpyrolidinyl)-2-oxoetylacetát
Pripravený z titulnej zlúčeniny príkladu 173 metódou, ktorá je uvedená pri príklade 176 použitím medziproduktu 91 ako alkylačného činidla.
'H NMR (400 MHz, CDC13, zmes rotamérov) δ: 7,40-7,36 (m, 2H); 7,04-6,97 (m, 3H); 6,86-6,85 (m, 2H); 4,98-4,97 (m, 2H); 4,71-4,59 (m, 2H); 3,88 (d, 3H); 3,96-3,16 (c, 6H); 2,20-2,18 (m, 3H); 1,01 (t, 3H); 0,72 (d, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitívny): Da/e 484,8 (m+l).
Príklad 178
R‘=CH(C2H5)C3H5; R3=COCH2OAc
2-(3-(( 1 R)-l-hydroxyetyl)(3S,4S)-4-[3-(dicyklopropylmetoxy)-4-metoxyfenyl]-3-metylpyrolidinyl}-2-oxoetylacetát
Pripravený z titulnej zlúčeniny príkladu 173 Mitsunobu-ho metódou, ktorá je uvedená pri príklade 144, použitím dicyklopropylkarbinolu.
'H NMR (400 MHz, CDC13, zmes rotamérov) δ: 7,26-6,78 (m, 3H); 4,74-4,60 (m, 2H); 3,96-3,46 (m, 9H); 3,21-3,10 (m, 2H); 2,20 (s, 3H); 1,26 (d, 1H); 1,19-1,11 (m, 4H); 0,75 (d, 3H); 0,55-0,41 (m, 4H); 0,33-0,24 (m, 4H).
LRMS (Elektrosprej, pozitívny): Da/e 446,5 (m+l).
Príklad 179
R1=3-(4-chlórfenyl)( 1,2,4-oxadiazol-5-yl)metyl; R3=COCH2OAc
2-(3-((1 R)-l-hydroxyetyl)(3S,4S)-4-(3-([3-(4-chlórfenyl)(l,2,4-oxadiazol-5-yl)]metoxy}-4-metoxyfenyl)-3-metylpyrolidinyl]-2-oxoetylacetát
Pripravený z titulnej zlúčeniny príkladu 173 metódou CsCO3, ktorá je uvedená pri príklade 176 použitím medziproduktu 87.
‘H NMR (400 MHz, CDC13, zmes rotamérov) δ: 8,02 (d, 2H); 7,46 (d, 2H); 6,95-6,85 (m, 3H); 5,40 (d, 2H); 4,70-4,58 (m, 2H); 3,94 (d, 3H); 3,95-3,12 (c, 6H); 2,19 (s, 3H); 1,04-1,00 (dd, 3H); 0,64 (d, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitívny): Da/e 544,4 (m+l).
/
Príklad 180
R1=CH2C=CPh; R3=COCH2OH
1-(3-((1 R)-l-hydroxyetyl)(3S,4S)-4-[4-metoxy-3-(3-fenylprop-2-inyloxy)fenyl]-3-metylpyrolidinyl}-2-hydroxyetan-l-ón
Pripravený z titulnej zlúčeniny príkladu 176 pomocou metódy hydrolýzy prostredníctvom LiOH, ktorá je uvedená pri medziprodukte 5.
116 ‘H NMR (400 MHz, CDClj, zmes rotamérov) δ: 7,40-7,26 (m, 5H); 7,07-7,06 (m, 1H); 6,85-6,84 (m, 2H); 5,05-4,94 (m, 2H); 3,89 (s, 3H); 4,13-2,99 (c, 8H); 0,98-0,92 (dd, 3H); 0,71 (s, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitívny): Da/e 424,6 (m+l).
Príklad 181
R‘=CH2C=C-4-FPh; R3=COCH2OH
1-(3-((1 R)- l-hydroxyetyl)(3S,4S)-4-{3-[3-(4-fluórfenyl)prop-2-inyloxy]-4-metoxyfenyl}-3-metylpyrolidinyl)-2-hydroxyetan-l-ón
Pripravený z titulnej zlúčeniny príkladu 177 pomocou metódy hydrolýzy prostredníctvom LiOH, ktorá je uvedená pri medziprodukte 5.
‘H NMR (400 MHz, CDC13, zmes rotamérov) δ: 7,39-7,36 (m, 2H); 7,03-6,98 (m, 3H); 6,85 (s, 2H); 5,02-4,93 (m, 2H); 3,89 (s, 3H); 4,15-3,01 (c, 8H); 1,04-0,99 (dd, 3H); 0,72 (s, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitívny): Da/e 442,7 (m+l).
Príklad 182
R‘=C3H5CHC3H5; R3=COCH2OH
1-(3-((1 R)- l-hydroxyetyl)(3S,4S)-4-[3-(dicyklopropylmetoxy)-4-metoxyfenyl]-3-metylpyrolidinyl}-2-hydroxyetan-l-ón
Pripravený z titulnej zlúčeniny príkladu 178 pomocou metódy hydrolýzy prostredníctvom LiOH, ktorá je uvedená pri medziprodukte 5.
'H NMR (400 MHz, CDC13, zmes rotamérov) δ: 6,90-6,78 (m, 3H); 4,17-3,44 (c, 11H); 3,15-3,03 (m, 2H); 1,32-1,20 (m, 1H); 1,19-1,09 (m, 4H); 0,75 (d, 3H); 0,54-0,39 (m, 4H); 0,34-0,23 (m, 4H).
LRMS (Elektrosprej, pozitívny): Da/e 404,5 (m+l).
Príklad 183
Rl=3-(4-chlórfenyl)(l,2,4-oxadiazol-5-yl)metyl; R3=COCH2OH l-[3-((lR)-l-hydroxyetyl)((3S,4S)-4-(3-([3-(4-chlórfenyl)(l,2,4-oxadiazol-5-yl)]metoxy}-4-metoxyfenyl)-3-metylpyrolidinyl]-2-hydroxyetan-1 -ón
Pripravený z titulnej zlúčeniny príkladu 179 pomocou metódy hydrolýzy prostredníctvom LiOH, ktorá je uvedená pri medziprodukte 5.
'H NMR (400 MHz, CDC13, zmes rotamérov) δ: 8,03 (d, 2H); 7,47 (d, 2H); 6,95-6,86 (m, 3H); 5,40 (s, 2H); 3,88 (s, 3H); 4,12-2,98 (c, 8H); 1,05-0,99 (dd, 3H); 0,64 (d, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitívny): Da/e 502,4 (m+l).
Príklad 184
R‘=CH2CH2t-Bu; R3=COCH2OCH2Ph
1-(3-((1 R)-l-hydroxyetyl)(3S,4S)-4-[3-(3,3-dimetylbutoxy)-4-metoxyfenyl]-3-metylpyrolidinyl}-2-(fenylmetoxy)etan-l-ón
Pripravený z titulnej zlúčeniny príkladu 143 metódou Mitsunobu-ho, ktorá je uvedená pri príklade 144, použitím 3,3-dimetyl-l-butanolu.
‘H NMR (400 MHz, CDC13, zmes rotamérov) δ: 7,41-7,31 (m, 5H); 6,80-6,75 (m, 3H); 4,70-4,63 (m, 2H); 4,15-3,21 (c, 13H); 1,80-1,73 (m, 2H); 1,17-1,10 (m, 2H); 0,98 (s, 9H); 0,74 (d, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitívny): Da/e 484,6 (m+l).
Príklad 185
117
R.'=CH2CH2t-Bu; R3=COCH2OH
1-(3-(( lR)-l-hydroxyetyl)(3S,4S)-4-[3-(3,3-dimetylbutoxy)-4-metoxyfenyl]-3-metylpyrolidinyl}-2-hydroxyetán-1-ón
Pripravený z titulnej zlúčeniny príkladu 184 metódou debenzylácie uvedenou pri medziprodukte 31.
'H NMR (400 MHz, CDClj, zmes rotamérov) δ: 6,88-6,71 (m, 3H); 4,38-2,99 (c, 13H); 1,82-1,73 (m, 2H); 1,19-1,08 (m, 3H); 0,97 (s, 9H); 0,80-0,69 (m, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitívny): Da/e 394,4 (m+l).
Príklad 186
R'=CH2C3H5; R3=COCH2OCH2Ph
1-(3-((1 R)-l-hydroxyetyl)(3S,4S)-4-[3-(cyklopropylmetoxy)-4-metoxyfenyl]-3-metylpyrolidinyl}-2-(fenylmetoxy)etan-l-ón
Pripravený z medziproduktu 67 väzobnou metódou Hunigovej bázy, ktorá je uvedená pri medziprodukte 74, použitím benzyloxyacetylchloridu.
'H NMR (400 MHz, CDC13, zmes rotamérov) δ: 7,40-7,29 (m, 5H); 6,82-6,74 (m, 3H); 4,66 (s, 2H),4,15-3,20 (c, 11H); 1,71-1,57 (brs, 1H); 1,35-1,23 (m, 1H); 1,16-1,07 (dd, 3H); 0,71 (s, 3H); 0,62 (d, 2H); 0,34 (d, 2H).
LRMS (Elektrosprej, pozitívny): Da/e 454,6 (m+l).
Príklad 187
R1=CH2C3H5; R3=COCH2OH
1- (3-((1 R)- l-hydroxyetyl)(3S,4S)-4-[3-(cyklopropylmetoxy)-4-metoxyfenyl]-3-metylpyrolidinyl}-2-hydroxyetan-l-ón
Pripravený z titulnej zlúčeniny príkladu 186 metódou debenzylácie uvedenou pri medziprodukte 31.
‘H NMR (metanol-d4, 400 MHz, zmes rotamérov) δ: 6,95-6,84 (m, 3H); 4,31-4,22 (m, 2H); 3,91-3,23 (c, 11H), 1,30-1,19 (m, 5 1H); 0,74 (s, 3H); 0,62-56 (m, 2H); 0,35-0,28 (m, 2H).
LRMS (Elektrosprej, pozitívny): Da/e 364,2 (m+l).
Príklad 188
R‘=CH2C3H5; R3=COCH2NHCO2CH2Ph
N-(2-(3-((lR)-l-hydroxyetyl)(34,4S)-4-[3-(cyklopropylmetoxy)-4-metoxyfenyl]-3-metylpyrolidinyl}-2-oxoetyl)(fenylmetoxy)karboxamid
Pripravený z medziproduktu 67 pomocou acylačnej metódy uvedenej pri príklade 7 použitím Z-Gly-ONp.
*H NMR (400 MHz, CDC13, zmes rotamérov) δ: 7,45-7,30 (m, 5H); 6,85-6,76 (m, 3H); 5,81 (br s, 1H); 5,13 (s, 2H); 4,10-3,43 (c, 12H); 3,17 (d, 1H); 1,68 (br s, 1H); 1,36-1,26 (m, 1H); 1,14 (t, 3H); 0,73 (d, 3H); 0,66-0,60 (m, 2H); 0,38-0,31 (m, 2H).
Príklad 189
R‘=CH2C3H5; R3=COCH2NH2
- {3-(( 1 R)-1 -hydroxyetyl)(3 S,4S)-4-[3-(cyklopropy lmetoxy)-4-metoxyfenyl]-3-mety Ipyrolidiny 1} -2-aminoetan-l-ón
Pripravený z titulnej zlúčeniny príkladu 188 pomocou debenzylačnej metódy uvedenej pri medziprodukte 31.
‘H NMR (metanol-d4, 400 MHz, zmes rotamérov) δ: 6,96-6,81 (m, 3H); 4,00-3,27 (c, 13H); 1,29-1,18 (m, 1H); 1,13-1,07 (m, 3H); 0,75 (m, 3H); 0,62-54 (m, 2H); 0,35-0,28 (m, 2H).
LRMS (Elektrosprej, pozitívny): Da/e 363,2 (m+l).
Príklad 190
R‘=CH2C3H5; R3=COC(CH3)2OCOCH3
2- (3-(( 1 R)-1 -hydroxyetyl)(3S,4S)-4-[3-(cyklopropylmetoxy)-4-metoxyfeny l]-3-metylpyrolidinyl} -1,1 -dimetyl-2-oxoetylacetát
118
Pripravený z medziproduktu 67 pomocou väzbovej metódy Hunigovej bázy, ktorá je uvedená pri medziprodukte 74, použitím 2-acetoxyizobutyryl chloridu.
'H NMR (400 MHz, CDCL, zmes rotamérov) δ: 6,87-6,70 (m, 3H); 3,93-3,32 (c, 11H); 2,08 (d, 3H); 1,81-1,65 (br m, 1H); 1,65-1,53 (m, 6H); 1,35-1,23 (m, 1 H); 1,19-1,11 (t, 3H); 0,68 (d, 3H); 0,65-0,57 (m, 2H); 0,37-0,30 (m, 2H).
Príklad 191
R‘=CH2C3H5; R3=COC(CH3)2OH
1- {3-((lR)-l-hydroxyetyl)(3S,4S)-4-[3-(cyklopropylmetoxy)-4-metoxyfenyl]-3-metylpyrolidinyl}-2-hydroxy-2-metylpropan-1 -ón
Pripravený z titulnej zlúčeniny príkladu 190 pomocou metódy hydrolýzy prostredníctvom LiOH, ktorá je uvedená pri medziprodukte 5.
'H NMR (400 MHz, CDC13, zmes rotamérov) δ: 6,84-6,75 (m, 3H); 4,43 (br s, 1H); 4,01-3,41 (c, 11H); 1,52-1,41 (m, 6H); 1,32-1,17 (m, 1H); 1,16-1,08 (t, 3H); 0,73 (d, 3H); 0,63-0,57 (m, 2H); 0,37-0,29 (m, 2H).
LRMS (Elektrosprej, pozitívny): Da/e 392,5 (m+1).
Príklad 192
R‘=CH2C3H5; R3=(S)-COCH(CH3)OAc
2- {3-((lR)-l-hydroxyetyl)(3S,4S)-4-[3-(cyklopropylmetoxy)-4-metoxyfenyl]-3-metylpyrolidinyl}(lS)-l-metyl-2-oxoetylacetát
Pripravený z medziproduktu 67 pomocou väzbovej metódy Hunigovej bázy, ktorá je uvedená pri medziprodukte 74, použitím (S)-2-acetoxypropionyl chloridu.
'H NMR (400 MHz, CDCL, zmes rotamérov) δ: 6,83-6,76 (m, 3H); 5,25-5,17 (m, 1H); 4,08-3,35 (c, 12H); 2,15-2,09 (m, 3H); 1,50-1,44 (m, 3H); 1,35-1,23 (m, 1H); 1,15 (d, 3H); 0,79-0,71 (m, 3H); 0,65-0,60 (m, 2H); 0,37-0,30 (m, 2H).
Príklad 193
R‘=CH2C3H5; R3=(S)-COCH(CH3)OH
1- {3-((lR)-l-hydroxyetyl)(3S,4S)-4-[3-(cyklopropylmetoxy)-4-metoxyfenyl]-3-metylpyrolidinyl}(2S)-2-hydroxypropan-l-ón
Pripravený z titulnej zlúčeniny príkladu 192 pomocou metódy hydrolýzy prostredníctvom LiOH, ktorá je uvedená pri medziprodukte 5.
'H NMR (400 MHz, CDCL, zmes rotamérov) δ: 6,84-6,73 (m, 3H); 4,39-4,28 (m, 1H); 3,88-3,48 (c, 10H); 3,29 (dd, 1H); 1,40-1,20 (m, 4H); 1,12 (t,3H); 0,73 (d, 3H); 0,64-0,55 (m, 2H); 0,37-0,29 (m,2H).
LRMS (Elektrosprej, pozitívny): Da/e 378,7 (m+1).
Príklad 194
R‘=CH2C3H5; R3=COCH(Ph)OAc
2- {3-((lR)-l-hydroxyetyl)(3S,4S)-4-[3-(cyklopropylmetoxy)-4-metoxyfenyl]-3-metylpyrolidinyl}-2-oxo-1-fenyletylacetát
Pripravený z medziproduktu 67 pomocou väzbovej metódy Hunigovou bázou, ktorá je uvedená pri medziprodukte 74, použitím chloridu kyseliny O-acetylmandľovej.
'H NMR (400 MHz, CDC13, zmes rotamérov a diastereomérov) δ: 7,57-7,35 (m, 5H); 6,84-6,51 (m, 3H); 6,11-6,04 (m, 1H); 4,08-3,05 (c, 11H); 2,21-2,14 (m, 3H); 1,36-1,20 (m, 1H); 1,14-1,06 (dd, 3H); 0,78 a 0,48 (s a d, 3H); 0,67-0,57 (m, 2H); 0,37-0,28 (m, 2H).
LRMS (Elektrosprej, pozitívny): Da/e 482,6 (m+1).
Príklad 195
R'=CH2C3H5; R3=COCH(Ph)OH l-{3-((lR)-l-hydroxyetyl)(3S/4S)-4-[3-(cyklopropylmetoxy)-4-metoxyfenyl]-3-metylpyrolidinyl}-2-hydroxy-2-fenyletan-l-ón
Pripravený z titulnej zlúčeniny príkladu 194 pomocou metódy hydrolýzy prostredníctvom LiOH, ktorá je uvedená pri medziprodukte 5.
‘H NMR (400 MHz, CDC13, zmes rotamérov a diastereomérov) δ: 7,40-7,28 (m, 5H); 6,81-6,42 (m,3H); 5,13-4,61 (m, 1H); 4,07-3,29 (c, 10H); 3,21-2,79 (m, 1H); 1,36-1,20 (m, 1H); 1,15-0,97 (dd, 3H); 0,73 a 0,47 (d a s, 3H); 0,65-0,56 (m, 2H); 0,37-0,28 (m, 2H)
LRMS (Elektrosprej, pozitívny): Da/e 440,2 (m+1).
Príklad 196
R'=CH2C3H5; R3=COCH(4-FPh)OAc
119
2- (3-((1 R)-l-hydroxyetyl)(3S,4S)-4-[3-(cyklopropylmetoxy)-4-metoxyfenyl]-3-metylpyrolidinyl}-l-(4-fluórfenyl)-2-oxoetylacetát
Pripravený z medziproduktu 67 pomocou väzbovej metódy Hunigovou bázou, ktorá je uvedená pri medziprodukte 74, použitím (chlórkarbonyl)(4-fluórfenyl)metylacetátu.
'H NMR (400 MHz, CDC13, zmes rotamérov a diastereomérov) δ: 7,60-7,46 (m, 2H); 7,15-7,03 (m, 2H); 6,85-6,54 (m, 3H); 6,09-5,99 (m, 1H); 4,07-2,87 (c, 11H); 2,19-2,12 (m, 3H); 1,33-1,20 (m, 1H); 1,15-1,03 (dd, 3H); 0,78 a 0,52 (d a d, 3H); 0,65-0,57 (m, 2H); 0,38-0,27 (m, 2H).
LRMS (Elektrosprej, pozitívny): Da/e 501,0 (m+l).
Príklad 197
R1=CH2C3H5; R3=COCH(4-FPh)OH
-(3-((1 R)-l-hydroxyetyl)(3S, 4S)-4-[3-(cyklopropylmetoxy)-4-metoxyfenyl]-3-metylpyrolidinyl}-2 -(4-fluórfenyl)-2-hydroxyetan-l-ón
Pripravený z titulnej zlúčeniny príkladu 196 pomocou metódy hydrolýzy prostredníctvom LiOH, ktorá je uvedená pri medziprodukte 5.
‘H NMR (400 MHz, CDC13, zmes rotamérov a diastereomérov) δ: 7,60-7,25 (m, 2H); 7,12-7,00 (m, 2H); 6,84-6,48 (m, 3H); 5,11-4,59 (m, 1 H); 4,04-2,79 (c, 11H); 1,35-1,23 (m, 1H); 1,15-1,00 (dd, 3H); 0,75 a 0,48 (d a s, 3H); 0,66-0,60 (m, 2H); 0,37-0,30 (m, 2H).
LRMS (Elektrosprej, pozitívny): Da/e 458,2 (m+l).
Príklad 198
R‘=CH2C3H5; R3=COC(CH2CH2)OAc ((3-((1 R)-l-hydroxyetyl)(3S, 4S)-4-[3-(cyklopropylmetoxy)-4-metoxyfenyl]-3-metylpyrolidinyl}karbonyl)cyklopropylacetát
Pripravený z medziproduktu 67 pomocou väzbovej metódy Hunigovou bázou, ktorá je uvedená pri medziprodukte 74, použitím (chlórkarbonyl)cyklopropylacetátu.
'H NMR (400 MHz, CDC13) δ: 6,85-6,72 (m, 3H); 4,06-3,31 (c, 11H); 2,10 (s, 3H); 1,74-1,62 (m, 1H); 1,59-1,47 (m, 1H); 1,35-1,19 (m, 2H); 1,14 (d, 3H); 1,02-0,93 (m, 1H); 0,71 (s, 3H); 0,65-0,59 (m, 2H); 0,37-0,30 (m, 2H).
LRMS (Elektrosprej, pozitívny): Da/e 432,5 (m+l).
Príklad 199
R'=CH2C3H5; R3=COC(CH2CH2)OH
3- ((1 R)-l-hydroxyetyl)(3S,4S)-4-[3-(cyklopropylmetoxy)-4-metoxyfenyl]-3-metylpyrolidinyl hydroxycyklopropylketón
Pripravený z titulnej zlúčeniny príkladu 198 pomocou metódy hydrolýzy prostredníctvom LiOH, ktorá je uvedená pri medziprodukte 5.
‘H NMR (400 MHz, CDC13) δ: 6,88-6,78 (m, 3H); 4,42-3,30 (c, 11H); 1,42-1,22 (m, 3H); 1,16 (d, 3H); 1,11-0,88 (m, 3H); 0,74 (d, 3H); 0,66-0,59 (m, 2H); 0,39-0,31 (m, 2H).
LRMS (Elektrosprej, pozitívny): Da/e 390,5 (m+l).
Príklad 200
R1=CH2C3H5; R3=(S)-COCH(OAc)CH(CH3)CH2CH3
2-(3-((1 R)-l-hydroxyetyl)((3S,4S)-4-[3-(cyklopropylmetoxy)-4-metoxyfenyl]-3-metylpyrolidinyl}(lS)-l-(metylpropyl)-2-oxoetyl acetát
Pripravený z medziproduktu 67 pomocou väzbovej metódy Hunigovou bázou, ktorá je uvedená pri medziprodukte 74, použitím (lS)-l-(chiórkarbonyl)-2-metylbutylacetátu.
'H NMR (400 MHz, CDC13, zmes rotamérov a diastereomérov) δ: 6,85-6,72 (m, 3H); 4,84 (dd, 1H); 3,89-3,31 (c, 11H); 2,12 (d, 3H), 2,09-1,95 (m, 1H); 1,75-1,62 (m, 1H); 1,35-1,19 (m, 2H); 1,15 (t, 3H); 1,000,86 (m, 6H); 0,75 (d, 3H); 0,65-0,56 (m, 2H); 0,37-0,30 (m, 2H).
LRMS (Elektrosprej, pozitívny): Da/e 462,5 (m+l).
Príklad 201
R‘=CH2C3H5; R3=(S)-COCH(OH)CH(CH3)CH2CH3
1-(3-((1 R)-l-hydroxyetyl)(3S,4S)-4-[3-(cyklopropylmetoxy)-4-metoxyfenyl]-3-metylpyrolidinyl}(2S)-2-hydroxy-3 -metylpentan-l-ón
Pripravený z titulnej zlúčeniny príkladu 200 pomocou metódy hydrolýzy prostredníctvom LiOH, ktorá je uvedená pri medziprodukte 5.
120 ‘H NMR (400 MHz, CDC13, zmes rotamérov a diastereomérov) δ: 6,85-6,76 (m, 3H); 4,18-4,11 (m, 1H); 3,94-3,26 (c, 11H); 1,75-1,66 (m, 1H); 1,54-1,19 (m, 4H); 1,15 (dd, 3H); 1,07 (m, 3H); 0,94-0,85 (m, 3H); 0,76 (d, 3H); 0,66-0,60 (m, 2H); 0,38-0,32 (m, 2H).
LRMS (Elektrosprej, pozitívny): Da/e 420,5 (m+1).
Príklad 202
R1=CH2C3H5; R3=(S)-COCH(OAc)CH2CH(CH3)2
2-{3-((lR)-l-hydroxyetyl)(3S,4S)-4-[3-(cyklopropylmetoxy)-4-metoxyfenyl]-3-metylpyrolidinyl} (lS)-l-(2-metylpropyl)-2-oxoetylacetát
Pripravený z medziproduktu 67 pomocou väzbovej metódy Hunigovou bázou, ktorá je uvedená pri medziprodukte 74, použitím (lS)-l-(chlórkarbonyl)-3-metylbutylacetátu.
'H NMR (400 MHz, CDC13, zmes rotamérov) δ: 6,84-6,74 (m, 3H); 5,19-5,10 (m, 1H); 4,15-2,95 (c, 11H); 2,13 (d, 3H); 1,95-1,72 (m, 2H); 1,58-1,39 (m, 2H); 1,34-1,23 (m, 1H); 1,18-1,12 (m, 3H); 1,00-0,88 (m, 6H); 0,75 (d, 3H); 0,68-0,57 (m, 2H); 0,37-0,30 (m, 2H).
LRMS (Elektrosprej, pozitívny): Da/e 462,5 (m+1).
Príklad 203
R1=CH2C3H5; R3=(S)-COCH(OH)CH2CH(CH3),
1- (3-(( lR)-l-hydroxyetyl)(3S,4S)-4-[3-(cyklopropylmetoxy)-4-metoxyfenyl]-3-metylpyrolidinyl}(2S)-2-hydroxy-4-metylpentan-l-ón
Pripravený z titulnej zlúčeniny príkladu 202 pomocou metódy hydrolýzy prostredníctvom LiOH, ktorá je uvedená pri medziprodukte 5.
'H NMR (400 MHz, CDC13, zmes rotamérov) δ: 6,86-6,77 (m, 3H); 4,32-4,25 (m, 1H); 3,88-2,97 (c, 11H); 2,05-1,93 (m, 1H); 1,73-1,21 (m, 5H); 1,14 (dd, 3H); 1,02-0,93 (m, 6H); 0,76 (d, 3H); 0,66-0,60 (m, 2H); 0,38-0,32 (m, 2H).
LRMS (Elektrosprej, pozitívny): Da/e 420,3 (m+1).
Príklad 204
R‘=CH2C3H5;R3=(S)-COCH(OAc)CH2Ph
2- (3-((1 R)- l-hydroxyetyl)(3S,4S)-4-[3-(cyklopropylmetoxy)-4-metoxyfenyl]-3-metylpyrolidinyl} (1 S)-2-oxo-l-benzyletylacetát
Pripravený z medziproduktu 67 pomocou väzbovej metódy Hunigovej bázy použitím (1S)-1-(chlórkarbonyl)-2-fenyletylacetátu.
‘H NMR (400 MHz, CDC13, zmes rotamérov) δ: 7,40-7,26 (m, 5H); 6,82-6,70 a 6,52-6,47 (m a m, 3H); 5,30-5,18 (m, 1H); 3,90-2,79 (c, 13H); 2,11 (d, 3H); 1,35-1,25 (m, 1H); 1,05 (dd, 3H); 0,66 a 0,33 (s a s, 3H); 0,68-0,60 (m, 2H); 0,39-0,32 (m, 2H).
LRMS (Elektrosprej, pozitívny): Da/e 497,0 (m+1).
Príklad 205
R1=CH2C3H5; R3=(S)-COCH(OH)CH2Ph
1-(3-((1 R)-l-hydroxyetyl)(3S,4S)-4-[3-(cyklopropylmetoxy)-4-metoxyfenyl]-3-metylpyrolidinyl}(2S)-2-hy droxy-3 -fény lpropan-l-ón
Pripravený z titulnej zlúčeniny príkladu 204 (20 mg; 0,040 mmol) pomocou metódy hydrolýzy prostredníctvom LiOH, ktorá je uvedená pri medziprodukte 5, za vzniku 14,5 mg (79 %) titulnej zlúčeniny príkladu 205 vo forme bezfarebnej tenkej vrstvy.
'H NMR (400 MHz, CDC13, zmes rotamérov) δ: 7,40-7,26 (m, 5H); 6,82-6,75 a 6,56-6,53 (m a m, 3H); 4,51-4,43 (m, 1H); 3,90-2,70 (c, 13H); 1,35-1,25 (m, 1H); 1,09 (dd, 3H); 0,69 a 0,52 (s a s, 3H); 0,68-0,60 (m, 2H); 0,39-0,32 (m, 2H).
LRMS (Elektrosprej, pozitívny): Da/e 454,3 (m+1).
Príklad 206
R1=CH2C3H5;R3=(S)-COCH(OAc)CH2Ph (lR)-2-(3-((lR)-l-hydroxyetyl)(3S,4S)-4-[3-(cyklopropylmetoxy)-4-metoxyfenyl]-3-metylpyrolidinyl}-2-oxo-l-benzyletyl acetát
Pripravený z medziproduktu 67 pomocou väzbovej metódy Hunigovej bázy, ktorá je uvedená pri medziprodukte 74, použitím (1 R)-l-(chlórkarbonyl)-2-fenyletylacetátu.
'H NMR (400 MHz, CDCb, zmes rotamérov) δ: 7,37-7,22 (m, 5H); 6,82-6,72, 6,64, 6,45 (m, d a dd, 3H); 5,27 a 5,18 (dd, t, 1 H); 3,99-2,56 (c, 13H); 2,12 (s, 3H); 1,34-1,24 (m, 1H); 1,13-1,02 (dd, 3H); 0,68 a 0,34 (s a s, 3H); 0,65-0,58 (m, 2H); 0,37-0,30 (m, 2H).
LRMS (Elektrosprej, pozitívny): Da/e 496,6 (m+1).
121
Príklad 207
R^CH^CsHs; R3=(R)-COCH(OH)CH2Ph ((2R)-l-{3-((lR)-l-hydroxyetyl)(3S,4S)-4-[3-(cyklopropylmetoxy)-4-metoxyfenyl]-3-metylpyrolidinyl}-2-hydroxy-3-fenylpropan-l-ón
Pripravený z titulnej zlúčeniny príkladu 206 metódou peroxidu lítneho uvedenou pri medziprodukte 43.
‘H NMR (400 MHz, CDC13, zmes rotamérov) δ: 7,35-7,18 (m, 5H); 6,84-6,67 (m, 3H); 4,48-4,40 (m,
IH); 4,04-2,70 (c, 13H); 1,34-1,24 (m, IH); 1,08 (dd, 3H); 0,71 a 0,49 (s a s, 3H); 0,65-0,58 (m, 2H); 0,38-0,31 (m, 2H).
LRMS (Elektrosprej, pozitívny): Da/e 454,5 (m+l).
Príklad 208
R*=t-Bu; R3=(S)-COCH(OAc)CH3
2-{3-((lR)-l-hydroxyetyl)(3S,4S)-4-[3-(terc-butoxy)-4-metoxyfenyl]-3-metylpyrolidinyl}(lS)-l-metyl-2-oxoetylacetát
Pripravený z medziproduktu 73 pomocou väzbovej metódy Hunigovou bázou, ktorá je uvedená pri medziprodukte 74, použitím (S)-2-acetoxypropionylchloridu.
'H NMR (400 MHz, CDC13, zmes rotamérov) δ: 6,95-6,81 (m, 3H); 5,24-5,11 (m, IH); 3,80 (m, 3H); 4,08-3,38 (m, 6H); 2,15-2,12 (d, 3H); 1,49-1,46 (dd, 3H); 1,33 (d, 9H); 1,14 (d, 3H); 0,76 (d, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitívny): Da/e 422,4 (m+l).
Príklad 209
R‘=H; R3=(S)-COCH(OAc)CH3
2-[3-((lR)-l-hydroxyetyl)(3S,4S)-4-(3-hydroxy-4-metoxyfenyl)-3-metylpyrolidinyl](lS)-l-metyl-2-oxoetyl-acetát
Pripravený z titulnej zlúčeniny príkladu 208 metódou deprotekcie pomocou TFA, ktorá je uvedená pri príklade 143.
‘H NMR (400 MHz, CDC13, zmes rotamérov) δ: 6,88-6,70 (m, 3H); 5,73-5,69 (br d, IH); 5,25-5,19 (m, IH); 3,88 (d, 3H); 4,06-3,38 (m, 6H); 2,12 (d, 3H); 1,49-1,46 (d, 3H); 1,16-1,14 (dd, 3H); 0,75 (d, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitívny): Da/e 366,3 (m+l).
Príklad 210
R'=CH2OCPh; R3=(S)-COCH(OAc)CH3
2-{3-((lR)-l-hydroxyetyl)(3S,4S)-4-[4-metoxy-3-(3-fenylprop-2-inyloxy)fenyl]-3-metylpyrolidinyl}-(lS)-l-metyl-2-oxoetylacetát
Pripravený z titulnej zlúčeniny príkladu 209 metódou Cs2CO3, ktorá je uvedená pri príklade 176 použitím medziproduktu 90.
*H NMR (400 MHz, CDCh, zmes rotamérov) δ: 7,39-7,26 (m, 5H); 7,05 (d, IH); 6,85 (s, 2H); 5,23-5,17 (m, IH); 5,05-4,95 (m, 2H); 3,86 (s, 3H); 4,07-3,36 (d, 6H); 2,15-2,12 (d, 3H); 1,47-1,40 (t, 3H); 1,36-1,33 (m, IH); 0,99-0,95 (m, 3H); 0,75-0,71 (d, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitívny): Da/e (m+l).
Príklad 211
R‘=CH2OCPh; R3=(S)-COCH(OH)CH3
122
1- (3-((1 R)-l-hydroxyetyl)(3S,4S)-4-[4-metoxy-3-(3-fenylprop-2-inyloxy)fenyl]-3-metylpyrolidinyl}-(2S)-2-hydroxypropan-l-ón
Pripravený z titulnej zlúčeniny príkladu 210 metódou deprotekcie O-acetátu, ktorá je uvedená pri príklade 95.
‘H NMR (400 MHz, CDC13, zmes rotamérov) δ: 7,41-7,26 (m, 5H); 7,07 (d, 1H); 6,86 (s, 2H); 5,05-4,94 (m, 1H); 4,36-4,30 (m, 1H); 3,89 (s, 3H); 3,91-3,48 (c, 5H); 3,28 (dd, 1H); 1,37-1,32 (m, 3H); 0,99-0,92 (dd, 3H); 0,73-0,70 (d, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitívny): Da/e 438,2 (m+l).
Príklad 212
R'=CH2C=C-4-FPh; R3=(S)-COCH(OAc)CH3
2- (3-((lR)-l-hydroxyetyl)(3S,4S)-4-{3-[3-(4-fluórfenyl)prop-2-inyloxy]-4-metoxyfenyl}-3-metyl-pyrolidinyl)-2-oxoetylacetát
Pripravený z titulnej zlúčeniny príkladu 209 metódou Cs2CO3, ktorá je uvedená pri príklade 176, použitím medziproduktu 91.
‘H NMR (400 MHz, CDC13, zmes rotamérov) δ: 7,40-7,36 (m, 2H); 7,03-6,96 (m, 3H); 5,22-5,20 (q, 1H); 4,98-4,96 (m, 2H); 4,07-3,53 (c, 6H); 3,88-3,86 (m, 3H); 2,14-2,11 (d, 3H); 1,47-1,42 (t, 3H); 1,06-1,01 (m, 3H); 0,75-0,72 (d, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitívny): Da/e 498,5 (m+l).
Príklad 213
R1 =CH,C^C-4-FPh; R3=(S)-COCH(OH)CH3
1- (3-((1 R)- l-hydroxyetyl)(3S,4S)-4-{3-[3-(4-fluórfenyl)prop-2-inyloxy]-4-metoxyfenyl}-3-metylpyrolidinyl)(2S)-2-hydroxypropan-l-ón
Pripravený z titulnej zlúčeniny príkladu 212 metódou deprotekcie O-acetátu, ktorá je uvedená pri príklade 95.
‘H NMR (400 MHz, CDC13, zmes rotamérov) δ: 7,40-7,26 (m, 2H); 7,04-6,98 (m, 3H); 6,86 (s, 2H); 5,03-4,97 (m, 2H); 4,40-4,30 (m, 1H); 3,89 (s, 3H); 3,94-3,52 (c, 5H); 3,29 (dd, 1H); 1,39-1,28 (d, 3H); 1,04-1,00 (m, 3H); 0,74-0,72 (d, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitívny): Da/e 456,5 (m+l).
Príklad 214
R1=CH2C=C-4-CF3Ph; R3=(S)-COCH(OAc)CH3
2- [3-((lR)-l-hydroxyetyl)(3S,4S)-4-(4-metoxy-3-{3-[4-(trifluórmetyl)fenyl]prop-2-inyloxy}fenyl)-3-metylpyrolidinyl](lS)-l-metyl-2-oxoetylacetát
Pripravený z titulnej zlúčeniny príkladu 209 metódou Cs2CO3, ktorá je uvedená pri príklade 176, použitím medziproduktu 92.
'H NMR (400 MHz, CDC13, zmes rotamérov) δ: 7,57-7,45 (m, 4H); 7,01 (d, 1H); 6,88-6,83 (m, 2H); 5,22-5,17 (m, 1H); 5,00 (s, 2H); 4,07-3,35 (c, 6H); 3,88 (d, 3H); 2,13-2,11 (d, 3H); 1,47-1,42 (dd, 3H); 1,12 (d, 3H); 0,75-0,71 (d, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitívny): Da/e 548,8 (m+l).
Príklad 215
R‘=CH2C=C-4-CF3Ph; R3=(S)-COCH(OH)CH3
1- [3-((lR)-l-hydroxyetyl)(3S,4S)-4-(4-metoxy-3-{3-[4-(trifluórmetyl)fenyl]prop-2-inyloxy}fenyI)-3-metylpyrolidinyl](2S)-2-hydroxypropan-l-ón
Pripravený z titulnej zlúčeniny príkladu 214 metódou deprotekcie O-acetátu, ktorá je uvedená pri príklade 95.
'H NMR (400 MHz, CDC13, zmes rotamérov) δ: 7,56 (d, 2H); 7,50 (d, 2H); 7,03 (s, 1H); 6,87 (s, 2H); 5,01 (s, 2H); 4,36-4,33 (m, 1H); 3,89 (s, 3H); 3,91-3,49 (c, 5H); 3,30 (dd, 1H); 1,37-1,35 (dd, 3H); 1,04-1,01 (t, 3H); 0,74-0,71 (d, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitívny): Da/e 505,9 (m+l).
Príklad 216
R‘=3-(4-chlórfenyl)(l,2,4-oxadiazol-5-yl)metyl; R3=(S)-COCH(OH)CH3
2- [3-((lR)-l-hydroxyetyl)((3S,4S)-4-(3-{[3-(4-chlórfenyI)(l,2,4-oxadiazol-5-yl)]metoxy}-4-metoxyfenyl)-3-metylpyrolidinyl]( 1 S)-l-metyl-2-oxoetylacetát
Pripravený z titulnej zlúčeniny príkladu 209 metódou Cs2CO3, ktorá je uvedená pri príklade 176, použitím medziproduktu 87.
123 ‘H NMR (400 MHz, CDCI3, zmes rotamérov) δ: 8,01 (d, 2H); 7,46 (d, IH); 6,96-6,85 (m, 3H); 5,45-5,36 (m, 2H); 5,21-5,14 (m, IH); 4,02-3,36 (c, 6H); 3,84 (m, 3H); 2,11 (d, 3H); 1,47-1,42 (m, 3H); 1,04-1,02 (d, 3H); 0,67-0,65 (d, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitívny): Da/e 558,2 (m+l).
Príklad 217
R‘=3-(4-chlórfenyl)(l,2,4-oxadiazol-5-yl)metyl; R3=(S)-COCH(OH)CH3
I-[3-((lR)-l-hydroxyetyl)(3S,4S)-4-(3-{[3-(4-chlórfenyl)(I,2,4-oxadiazol-5-yl)]metoxy}-4-metoxyfenyl)-3-metylpyrolidinyl](2S)-2-hydroxypropan-l-ón
Pripravený z titulnej zlúčeniny príkladu 216 metódou deprotekcie O-acetátu, ktorá je uvedená pri príklade 95.
'H NMR (400 MHz, CDC13, zmes rotamérov) δ: 8,06-8,00 (m, 2H); 7,49-7,45 (m, 2H); 6,97-6,86 (m, 3H); 5,41 (m, 2H); 4,35-4,32 (m, IH); 3,88 (s, 3H); 3,86-3,19 (c, 6H); 1,38-1,32 (m, 3H); 1,05-1,00 (dd, 3H); 0,66-0,63 (d, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitívny): Da/e 516,4 (m+l).
Príklad 218
R‘=2-indanyl; R3=COCH(OAc)4-FPh
2-(3-((1 R)-l-hydroxyetyl)(3S,4S)-4-(3-indán-2-yloxy-4-metoxyfenyl)-3-metylpyrolidinyl]-l-(4-fluórfenyl)-2-oxoetylacetát
Medziprodukt 51 (72,8 mg; 0,198 mmol) sa acyloval pomocou metódy K2CO3, ktorá je uvedená pri príklade 7, použitím chloridu kyseliny 2-acetoxyfluórmandľovej (120 mg; 0,297 mmol; 1,5 ekv.) za vzniku číreho, bezfarebného oleja (84,2 mg; 75 %).
'H NMR (400 MHz, CDC13, zmes rotamérov) δ: 7,53-7,47 (m, 2H); 7,26-7,03 (m, 6H); 6,87-6,59 (m, 25 3H); 6,09-6,04 (m, IH); 5,28-5,01 (m, IH); 4,14-3,03 (c, 13H); 2,16 (s, 3H); 1,27-1,06 (m, 3H); 0,82-0,80 (d, 1,5H); 0,55-0,52 (d, 1,5H).
Príklad 219
R‘=2-indanyl; R3=COCH(OH)4-FPh l-[3-((lR)-l-hydroxyetyl)(3S,4S)-4-(3-indán-2-yloxy-4-metoxyfenyl)-3-metylpyrolidinyl]-2-(4-fluórfenyl)-2-hydroxyetan-l-ón
Zlúčenina príkladu 218 (19 mg; 0,034 mmol; 1 ekv.) bola podrobená procedúre hydrolýzy prostredníctvom LiOH, ktorá je uvedená pri medziprodukte 5, za vzniku bieleho prášku (6,1 mg; 35 %).
'H NMR (400 MHz, CDC13, zmes rotamérov) δ: 6,97-6,80 (c, 7H); 4,19 (m, 2H); 4,13 (t, 2H); 3,82 (s, 3H); 3,72 (s, 3H); 3,83-3,48 (c, 4H); 3,25 (dd, IH); 2,27 (kvintet, 2H); 1,70 (s, IH); 1,56 (br d, IH); 1,13 (t, 3H); 0,73(s, 3H).
124
LRMS (Elektrosprej, pozitívny): Da/e 520,4 (m+l).
Príklad 220
R*=2-indanyl; R3=COCH(OAc)CH3
2-[3-((lR)-l-hydroxyetyl)(3S,4S)-4-(3-indán-2-yloxy-4-metoxyfenyl)-3-metylpyrolidinyl]-l-metyl-2-oxoetylacetát
Medziprodukt 51 (27 mg; 0,074 mmol) bol podrobený procedúre acylácie pomocou K2CO3, ktorá je uve10 dená pri príklade 7, použitím (+)-2-acetoxypropionylchloridu (12,1 μΐ, 0,110 mmol; 1,5 ekv.) za vzniku číreho, bezfarebného oleja (16,7 mg; 47 %).
‘H NMR (400 MHz, CDC13, zmes rotamérov) δ: 7,27-7,17 (m, 4H); 6,85-6,83 (m, 3H); 5,30-5,17 (m, 2H); 4,13-3,19 (c, 9H); 2,14 (s, 3H); 1,72 (br s, 1H); 1,51-1,47 (m, 4H); 1,19-1,17 (d, 3H); 0,82-0,78 (d, 3H).
Príklad 221
R'=2-indanyl; R3=COCH(OH)CH3 l-[3-((lR)-l-hydroxyetyl)(3(3S,4S,4S))-4-(3-indan-2-yloxy-4-metoxyfenyl)-3-metylpyrolidinyl]-2-hydroxy20 propán-1-ón
Zlúčenina príkladu 220 (16,7 mg; 0,0347 mmol; 1 ekv.) sa podrobila procedúre hydrolýzy prostredníctvom LiOH, ktorá je uvedená pri medziprodukte 5, za vzniku bielej látky (4,7 mg; 31 %).
‘H NMR (400 MHz, CDC13, zmes rotamérov) δ: 7,27-7,17 (m, 4H); 6,85-6,84 (m, 3H); 5,19-5,15 (m, 1H); 4,39-4,35 (m, 1H); 3,90-3,18 (c, 14H); 1,57-1,37 (m, 3H); 1,28-1,15 (m, 3H); 0,80-0,78 (d, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitívny): Da/e 440,4 (m+l).
Príklad 222
R‘=2-indanyl;R3=COC(CH3)(OAc)CH3
2-[3-((lR)-l-hydroxyetyl)(3S,4S)-4-(3-indan-2-yloxy-4-metoxyfenyl)-3-metylpyrolidinyl]-l,l-dimetyl-2-oxoetylacetát
Medziprodukt 51 (40 mg; 0,11 mmol) bol podrobený procedúre acylácie pomocou K2CO3, ktorá je uvedená pri príklade 7, použitím 2-acetoxy-2-metylpropionylchloridu (31 μΐ, 0,22 mmol; 2 ekv.) za vzniku číreho, bezfarebného oleja (22 mg; 40 %).
*H NMR (400 MHz, CDCI3, zmes rotamérov) δ: 7,26-7,16 (m, 4H); 6,85-6,77 (m, 3H); 4,17 (m, 1H);
3,95-3,19 (c, 14H); 2,10 (s, 3H); 1,65-1,57 (m, 6H); 1,20-1,17 (m, 3H); 0,73 (s, 3H).
125
Príklad 223
R*=2-indanyl; R3=COC(CH3)(OH)CH3 l-[3-((lR)-l-hydroxyetyl)(3S,4S)-4-(3-indan-2-yloxy-4-metoxyfenyl)-3-metylpyrolidinyl]-2-hydroxy-2-metylpropan-l-ón
Zlúčenina príkladu 222 (22 mg; 0,044 mmol) bola podrobená procedúre hydrolýzy prostredníctvom LiOH, ktorá je uvedená pri medziprodukte 5, za vzniku produktu vo forme bielej tuhej látky (4,3 mg; 22 %).
'H NMR (400 MHz, CDCl,, zmes rotamérov) δ: 7,26-7,17 (m, 4H); 6,83 (m, 3H); 5,18-5,17 (m, 1H); 4,45-4,44 (m, 1H); 3,89-3,19 (c, 14H); 1,53-1,48 (m, 6H); 1,19-1,17 (m, 3H); 0,79-0,78 (d, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitívny): Da/e 454,4 (m+1).
Príklad 224
R'=t-Bu; R3=CO2CH3 metyl (3R)-3-((lR)-l-hydroxyetyl)-4-[3-(terc-butoxy)-4-metoxyfenyl]-3-metylpyrolidínkarboxylát
Medziprodukt 73 (6,5 μΙ, 0.084 mmol) bol podrobený acylácii metódou Hunigovej bázy, ktorá je uvedená pri medziprodukte 74, použitím metylchlórmravčanu za vzniku titulnej zlúčeniny vo forme žltého oleja (19 mg; 94 %).
*H NMR (400 MHz, CDCl,) δ: 6,96 (d, 1H); 6,84 (s, 1H); 6,83 (d, 1H); 3,80 (s, 3H); 3,77-3,58 (m, 4H); 3,06 (d, IH); 1,36 (s, 9H); 1,16 (d, 3H); 0,76 (s, 3H).
Príklad 225
2-Hydroxy-l-((3S,4S)-3-((R)-l-hydroxyetyl)-4-{4-metoxy-3-[2-(tetrahydrofuran-2-yl)etoxy]fenyl}-3-metylpyrolidin-l-yl)etanón
Pripravený z titulnej zlúčeniny príkladu 143 pomocou metódy Mitsunobu-ho, ktorá je uvedená pri príklade 144, použitím 2-tetrahydrofuran-2-yletanolu, nasledovanou metódou debenzylácie uvedenou pri medziprodukte 31.
‘H NMR údaje δ: 6,75-6,87 (m, 3H); 4,16-4,20 (m, 2H); 4,15 (s, 3H); 3,49-4,13 (m, 11H); 3,05 (d, IH); 1,97-2,10 (m, 2H); 1,88-1,96 (t, 2H), 1,56-1,63 (m, 2H); 1,3-1,17 (t, 3H); 0,75 (s, 3H).
126
Príklad 226
2-Hydroxy-l-{(3S,4S)-3-((R)-l-hydroxyetyl)-4-[4-metoxy-3-(tetrahydrofuran-3-ylmetoxy)fenyl]-3-metylpyrolidin-l-yl}etanón
Pripravený z titulnej zlúčeniny príkladu 143 metódou Mitsunobu-ho, ktorá je uvedená pri príklade 144, 5 použitím tetrahydrofuran-3-ylmetanolu, nasledovanou metódou debenzylácie uvedenej pri medziprodukte 31.
‘H NMR údaje δ: 6,79-6,82 (m, 3H); 4,13-4,16 (m, 2H); 3,48-3,98 (m, 1 IH); 3,84 (s, 3H); 3,05 (d, IH); 2,80 (bt; IH); 2,07-2,15 (M, 2H); 1,72-1,79 (m, IH); 1,16 (t, 3H); 0,76 (s, 3H).
Príklad 227
R'=(S)-CH(CH2OCH2CH2); R3=CO2CH3 metyl(3R)-3-((lR)-l-hydroxyetyl)-4-[3-((3S)-oxolan-3-yloxy)-4-metoxyfenyl]-3-metylpyrolidínkarboxylát Pripravený z medziproduktu 74 (146 mg; 0,47 mmol) pomocou metódy Mitsunobu-ho v tuhej fáze, ktorá je uvedená pri príklade 144, použitím (S)-(+)-3-hydroxytetrahydrofuránu (38 μΐ, 0,47 mmol) za vzniku titulnej zlúčeniny vo forme číreho oleja (95 mg; 53 %).
'H-NMR (400 MHz, CDC13) δ: 6,82 (m, 2H); 6,78 (m, IH); 4,95 (m, IH); 4,03-3,20 (m, 10H); 3,82 (s, 3H); 3,66 (s, 3H); 2,17 (m, 2H); 1,17 (t, 3H); 0,73 (s, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitívny): Da/e 379,8 (m+l).
metyl (3R)-3-((lR)-l-hydroxyetyl)-4-[3-((3R)-oxolan-3-yloxy)-4-metoxyfenyl]-3-metylpyrolidínkarboxylát Pripravený z medziproduktu 74 použijúc Mitsunobu-ho reakciu v tuhej fáze zlúčeniny príkladu 144 a (R)(-)-3-hydroxytetrahydrofuránu (46 μΐ, 0,57 mmol) za vzniku titulnej zlúčeniny vo forme číreho oleja (27 mg; 37 %).
'H-NMR (400 MHz, CDC13) δ: 6,82 (m, 2H); 6,78 (m, IH); 4,95 (m, IH); 4,03-3,20 (m, 10H); 3,82 (s, 30 3H); 3,66 (s, 3H); 2,17 (m, 2H); 1,17 (t, 3H); 0,73 (s, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitívny): Da/e 380,3 (m+l).
Príklad 229
R'=CH2CH2O-4-FPh; R3=CO2CH3
Metyl 3 -((1 R)-1 -hydroxyety 1)(3 S,4S)-4- {3-[2-(4-fluórfenoxy)etoxy]-4-metoxyfeny 1} -3 -metylpyrolidínkarboxylát
127
Pripravený pomocou metódy K2CO3 éterifikácie, ktorá je uvedená pri príklade 43, použitím medziproduktu 74 (21,2 mg; 0,0685 mmol; 1 ekv.) a 4-fluórfenoxyetylbromidu (60 mg; 0,27 mmol; 4,0 ekv.), za vzniku číreho, bezfarebného oleja (15,2 mg; 49,7 %).
'H-NMR (400 MHz, CDCfi) δ: 6,99-6,83 (c, 7H); 4,35 (t, 2H); 4,29 (t, 2H); 3,83 (s, 3H); 3,72 (s, 3H); 3,83-3,48 (c, 4H); 3,25 (dd, 1H); 1,64 (s, 1H); 1,42 (br d, 1H); 1,13 (t, 3H); 0,73(s, 3H)
Príklad 230
R*= CH2CH2CH2O-4-FPh; R3=CO2CH3 metyl 3-(( 1 R)-1 -hydroxyety 1)(3 S,4S)-4- {3-[3-(4-fluórfenoxy)propoxy] -4-metoxyfenyl} -3 -metyIpyrolidínkarboxylát
Pripravený z medziproduktu 74 (25,2 mg; 0,0815 mmol; 1 ekv.) pomocou metódy K2CO3 éterifikácie, ktorá je uvedená pri príklade 43, použitím l-(3-chlórpropoxy)-4-fluórbenzénu (62 mg; 0,33 mmol; 4,0 ekv.) za vzniku titulnej zlúčeniny vo forme číreho, bezfarebného oleja (19,0 mg; 50,5 %).
‘H-NMR (400 MHz, CDCfi) δ: 6,97-6,80 (c, 7H); 4,19 (m, 2H); 4,13 (t, 2H); 3,82 (s, 3H); 3,72 (s, 3H); 3,83-3,48 (c, 4H); 3,25 (dd, 1H); 2,27 (kvintet, 2H); 1,70 (s, 1H); 1,56 (br d, 1H); 1,13 (t, 3H); 0,73(s, 3H).
Príklad 231
R‘= CH2C=CH; R3=CO2CH3 metyl 3-((1 R)-l-hydroxyetyl)(3S,4S)-4-(4-metoxy-3-prop-2-inyloxyfenyl)-3-metylpyrolidínkarboxylát
Pripravený z medziproduktu 74 pomocou metódy K2CO3 éterifikácie uvedenej pri príklade 43, použitím propargylbromidu.
'H-NMR (400 MHz, CDCfi) δ: 6,97 (s, 1H); 6,87-6,82 (m, 2H); 4,76 (s, 2H); 3,86 (s, 3H); 3,73 (s, 3H); 3,90-3,55 (m, 5H); 3,27 (dd, 1H); 2,48 (s, 1H); 1,49-1,46 (m, 1H); 1,14 (t, 3H); 0,75 (s, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitívny): Da/e 348,1 (m+l).
Príklad 232
R*= CH2C=CCH3; R3=CO2CH3 metyl 3-(( 1 R)-1 -hydroxyetyl)(3S,4S)-4-(3-but-2-inyloxy-4-metoxyfenyl)-3-metylpyrolidínkarboxylát
Pripravený z medziproduktu 74 pomocou metódy K2CO3 éterifikácie, ktorá je uvedená pri príklade 43, použitím 1 -bróm-2-butínu.
‘H-NMR (400 MHz, CDCfi) δ: 6,96 (s, 1H); 6,85-6,82 (m, 2H); 4,72-4,71 (m, 2H); 3,86 (s, 3H); 3,72 (s, 3H); 3,90-3,55 (m, 5H); 3,27 (dd, 1H); 2,48 (s, 1H); 1,81 (s, 3H); 1,52-1,48 (m, 1H); 1,14 (t, 3H); 0,77 (s,3 H).
LRMS (Elektrosprej, pozitívny): Da/e 362,2 (m+l).
Príklad 233
R‘=CH2C=CPh; R3=CO2CH3 metyl 3-((lR)-l-hydroxyetyl)(3S,4S)-4-[4-metoxy-3-(3-fenylprop-2-inyloxy)fenyl]-3-metylpyrolidínkarboxylát
Pripravený z medziproduktu 74 Mitsunobu-ho reakciou uvedenou pri príklade 144, použitím 3-fenyl-2-propin-l-olu.
'H NMR (400 MHz, CDCfi, zmes rotamérov) δ: 7,41-7,38 (m, 2H); 7,32-7,27 (m, 3H); 7,07 (d, 1H); 6,84 (s, 2H); 5,00-4,94 (m, 2H); 3,88 (s, 3H); 3,72 (s, 3H); 3,80-3,69 (m, 3H); 3,57-3,50 (m, 2H); 3,23 (dd, 1H); 1,35-1,32 (m, 1H); 0,98-0,94 (dd, 3H) 0,70 (d, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitívny): Da/e 424,2 (m+l).
Príklad 234
R‘=CH2C=C-4-FPh; R3=CO2CH3 metyl 3-((1 R)-1-hydroxyetyl) (3S,4S)-4-{3-[3-(4-fluórfenyl)prop-2-inyloxy]-4-metoxyfenyl}-3-metylpyrolidínkarboxylát
128
Pripravený z medziproduktu 74 procedúrou metódou Mitsunobu-ho v tuhej fáze, ktorá je uvedená pri príklade 144, použitím medziproduktu 89.
‘H NMR (400 MHz, CDC13, zmes rotamérov) δ: 7,40-7,36 (m, 2H); 7,04-6,97 (m, 3H); 6,85 (s, 2H); 4,97 (s, 2H); 3,88 (s, 3H); 3,72 (s, 3H); 3,86-3,65 (m, 3H); 3,58-3,48 (m, 2H); 3,24 (dd, 1H); 1,013 (t, 3H); 1,14 (t, 3H); 0,71 (d, 3H).
LRM3 (Elektrosprej, pozitívny): Da/e 442,5 (m+l).
Príklad 235
R*=CH2C=CPh; R3=COCH2SAc l-{3-((lR)-l-hydroxyetyl)(3S,4S)-4-[4-metoxy-3-(3-fenylprop-2-inyloxy)fenyl]-3-metylpyrolidinyl}-2-acetyltioetan-l-ón
Pripravený z titulnej zlúčeniny príkladu 118 (30 mg; 0,082 mmol; 1,0 ekv.) pomocou metódy Cs2CO3, ktorá je uvedená pri príklade 176 použitím fenylpropargylmezylátu (17,4 mg; 0,082 mmol; 1,0 ekv.) za vzniku číreho, bezfarebného oleja (13,2 mg; 33 %).
'H NMR (400 MHz, CDC13, zmes rotamérov) δ: 7,45-6,86 (m, 8H); 4,13-3,49 (c, 12H); 2,31 (s, 3H); 1,60 (s, 1H); 1,28-1,24 (dd, 1H); 1,15-1,08 (dd, 3H); 0,73 (s, 3H)
MeO
Príklad 236
R‘=CH2OCPh; R3=COCH2SH
1-(3-((1 R)-l-hydroxyetyl)(3S,4S)-4-[4-metoxy-3-(3-fenylprop-2-inyloxy)fenyl]-3-metylpyrolidinyl}-2-sulfanyletan-1 -ón
Pripravený z titulnej zlúčeniny príkladu 235 (13,2 mg; 0,0274 mmol) pomocou metódy hydrolýzy prostredníctvom LiOH, ktorá je uvedená pri medziprodukte 5, za vzniku číreho, bezfarebného oleja (10,5 mg; 87 %).
'H NMR (CD3OH, 400 MHz, zmes rotamérov) δ: 7,41-7,20 (m, 5H); 6,91-6,75 (m, 3H); 4,01-3,29 (c, 12H); 3,21 (s, 1H); 1,88 (s, 1H); 1,38-1,21 (m, 1H); 1,07-1,03 (m, 3H); 0,73-0,72 (m, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitívny): Da/e 440,4 (m+l).
Medziprodukt 93 terc-Butyl ester kyseliny (2-[(3S,4S)-3-((R)-l-hydroxyetyl)-4-(3-hydroxy-4-metoxyfenyl)-3-metylpyrolidin-l-yl]-2-oxo-etyl)karbamidovej
Do banky obsahujúcej roztok medziproduktu 70 (67,2 mg; 0,27 mmol) v dioxáne (2,0 ml) sa pridal 1,0 M roztok vodného K.2CO3 (1,0 ml; 1,0 mmol). Do zmesi sa injekčnou striekačkou pridal roztok N-Boc-glycín p-nitrofenylesteru (236 mg; 0,79 mmol) v dioxáne (100 ml). Zmes sa miešala pri laboratórnej teplote počas 30 minút. Reakčná zmes sa zriedila s EtOAc (100 ml), potom sa premyla vodným NaHCO3 (3 x 50 ml) a soľným roztokom (50 ml), vysušila pomocou Na2SO4, prefíltrovala a skoncentrovala vo vákuu za vzniku žltého prášku (43 mg; 84 % výťažok).
129 'H-NMR (CDC13, 300 MHz, zmes rotamérov) δ: 6,88-6,77 (m, 2H, aromatický); 6,75-6,65 (m, IH, aromatický); 5,56 (br, s, IH, NH); 4,07-3,83 (m, 3H); 3,89 (s, 3H, OMe); 3,82-3,68 (m, 2H); 3,67-3,52 (m, 2H); 3,46 (d, IH, J=11,5 Hz); 3,19 (d, IH, J=11,5-Hz); 1,46 (s, 9H); 1,16-1,05 (m, 3H); 0,74 (d, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitívny): Da/e 353,151 (m+1).
Príklad 237
2-Amino-l-((3S,4S)-3-((R)-l-hydroxyetyl)-4-{4-metoxy-3-[3-(4-trifluórmetylfenyl)-prop-2-inyloxy]fenyl}-3 -mety lpyro 1 id in-l-y Ijetanón
Pripravený z medziproduktu 93 metódou CS2CO3, ktorá je uvedená pri príklade 176 pomocou metódy, ktorá je uvedená pri príklade 109 za vzniku látky vo forme jantárového oleja (12,7 mg; 4,1 % výťažok).
’H-NMR (CDCI3, 300 MHz, zmes rotamérov) δ: 7,55-7,4 (m, 4H, aromatický); 7,93 (s, IH, aromatický);
6,85-6,7 (m, 2H, aromatický); 4,96 (s, 2H); 4,38 (br. s, 2H); 4,0-3,4 (m, 7H); 3,83 (d, 3H, OMe); 3,2 (dd, IH); 1,0-0,88 (m, 3H); 0,65 (m, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitívny): Da/e 491,20 (m+1).
Príklad 238
R*=t-Bu; R3=COCO2CHj metyl 2-{3-((lR)-l-hydroxyetyl)(3S,4S)-4-[3-(terc-butoxy)-4-metoxyfenyl]-3-metylpyrolidinyl}-2-oxoacetát Pripravený z medziproduktu 73 pomocou väzbovej metódy Hunigovou bázou, ktorá je uvedená pri medziprodukte 74, použitím metyloxalylchloridu.
'H-NMR (400 MHz, CDCI3, zmes rotamérov) δ: 6,93-6,81 (m, 3H); 4,01-3,44 (c, 12H); 1,32 (s, 9H); 1,16-1,12 (dd, 3H); 0,77-0,74 (d, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitívny): Da/e 394,0 (m+1).
Príklad 239
R'=H; R3=COCO2CH3 metyl 2-[3-((lR)-l-hydroxyetyl)(3S,4S)-4-(3-hydroxy-4-metoxyfenyl)-3-metylpyrolidinyl]-2-oxoacetát Pripravený z titulnej zlúčeniny príkladu 238 metódou deprotekcie pomocou TFA, ktorá je uvedená pri príklade 143.
'H NMR (400 MHz, CDCI3, zmes rotamérov) δ: 6,85-6,70 (m, 3H); 5,60-5,56 (br m, IH); 4,00-3,46 (c, 12H); 1,17-1,13 (dd, 3H); 0,79-0,76 (d a d, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitívny): Da/e 338,1 (m+1).
130
Príklad 240
R'=CH2C=CPh; R3=COCO2CH3 metyl 2-(3-((1 R)-l-hydroxyetyl)(3S,4S)-4-[4-metoxy-3-(3-fenylprop-2-inyloxy)fenyl]-3-metylpyrolidinyl}-2-oxoacetát
Pripravený z titulnej zlúčeniny príkladu 239 metódou Mitsunobu-ho, ktorá je uvedená pri príklade 144, použitím 3-fenyl-2-propin-l -olu.
‘H NMR (400 MHz, CDC13, zmes rotamérov) δ: 7,41-7,26 (m, 5H); 7,07 (s, 1H); 6,86-6,85 (m, 2H); 5,05-4,95 (m, 2H); 4,06-3,43 (c, 12H); 0,98-0,91 (dd, 3H); 0,74-0,71 (d, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitívny): Da/e 452,7 (m+1).
Medziprodukt 94 l-Benzyl-4-(3-cyklopropylmetoxy-4-metoxyfenyl)-3-metyl-3-vinylpyrolidín
Do banky s guľatým dnom vybavenej miešacou tyčinkou a gumenou priehradkou sa v dusíkovom prostredí pridal suchý dietyléter (10 ml) a metyltrifenylfosfóniumbromid (1,38 g; 5,27 mmol). Injekčnou striekačkou sa potom pridalo butyllítium (2,32 ml; 5,80 mmol; 2,5 M v hexáne) za vzniku žltooranžovej suspenzie, ktorá sa miešala pri laboratórnej teplote počas 3 hodín. Potom sa pridal Et2O roztok medziproduktu 65 (2,0 g; 5,27 mmol v 10 ml éteru), čím došlo k okamžitému vymiznutiu farby. Po 2 hodinovom miešaní pri laboratórnej teplote sa reakčná zmes ochladila nasýteným roztokom NH4C1, extrahovala s EtOAc (2 x 50 ml), vysušila (Na2SO4) a skoncentrovala. Stlpcovou chromatografiou (Biotage systém, 40M cartridge, 25 % EtOAc/hexán) sa získalo 850 mg (43 %) oleja oranžovej farby.
'H NMR (400 MHz, CDCf,) δ: 7,42-7,23 (m, 5H); 6,80-6,53 (m, 3H); 6,05 dd, 1H); 4,95 (dd, 1H); 4,87 (dd, 1H); 4,87 (dd, 1H); 3,86-3,79 (m, 5H); 3,71 (dd, 2H); 3,22 (t, 1H); 3,04-2,96 (m, 2H); 2,81 (d, 1H); 2,52 (d, 1H); 1,37-1,26 (m, 1H); 0,77 (s, 3H); 0,66-0,60 (m, 2H); 0,37-0,32 (m, 2H).
Medziprodukt 95
Metylester kyseliny 4-(3-cyklopropylmetoxy-4-metoxyfenyl)-3-metyl-3-vinylpyrolidín-l-karboxylovej
Roztok medziproduktu 94 (480 mg; 1,27 mmol) v 10 ml acetonitrilu sa podrobil pôsobeniu metylchlórmravčanu (491 μΐ, 6,36 mmol) a zmes sa nechala refluxovať počas 6 hodín. Reakčná zmes sa za zníženého tlaku nechala skoncentrovať a zvyšok sa chromatograficky prečistil (Biotage systém, 40s cartridge, 10 % EtOAc/hexán až 20 % EtOAc/hexán) za vzniku 237 mg žltého oleja (54 %).
'H NMR (400 MHz, CDCI3,) δ: 6,81 (d, 1H); 6,72-6,67 (m, 2H); 5,87 (dd, 1H); 5,09 (d, 1H); 4,95 (dd, 1H); 3,85 (s, 3H); 3,84-3,68 (m, 7H); 3,52-3,32 (m, 2H); 3,14 (t, 1H); 1,35-1,25 (m, 1H>; 0,35 (s, 3,4); 0,66-0,60 (m, 2H); 0,37-0,32 (m, 2H).
131
Príklad 241
R'=CH2C3H5; R3=CO2CH3; R4=H; R5=CH2OH; Re=H metylester kyseliny 4-(3-cyklopropylmetoxy-4-metoxyfenyl)-3-(l,2-dihydroxyetyl)-3-metylpyrolidín-l-karboxylovej
Do reakčnej banky s miešacou lopatkou sa dal medziprodukt 95 (46 mg; 0,133 mmol), acetón (250 ul), voda (500 ul) a N-metylmorfolín N-oxid (17,1 mg; 0,146 mmol). Do tejto zmesi sa pridal osmiumtetroxid v t-butanole (50) μΐ, 0,004 mmol; roztok 2,5 wt %). Vzniknutá zmes sa miešala pri laboratórnej teplote počas 24 hodín. Reakčná zmes sa potom zriedila s 10 % vodným roztokom tiosulfátu sodného (5 ml), prefiltrovala cez GF/F filtračný papier. Filtrát sa extrahoval s EtOAc (2x10 ml), vysušil (Na2SO4) a skoncentroval. Čistením pomocou Biotage (12S cartridge, 1 : 1 : 0,1 EtOAc/hexán/MeOH) vzniklo 18 mg vzorky 241 (36 %).
'H-NMR (400 MHz, CDC13,) δ: 6,81 (d, 1H); 3,86 (s, 3H); 3,85-3,36 (c, 15H); 3,23 (dd, 1H); 1,35-1,27 (m, 1H); 0,75 (s, 3H); 0,66-0,59 (m, 2H); 0,38-0,32 (m, 2H).
LRMS (Elektrosprej, pozitívny): Da/e 380,2 (m+1).
Príklad 242
R‘=CH2C3H5; R3=(S)-COCH(CH2OC(CH3)(CH3)O) [4-(S)-(3-cyklopropylmetoxy-4-metoxyfenyl)-3-(S)-(l-(R)-hydroxyetyl)-3-metylpyrolidin-l-yl]-(2,2-dimetyl-[ 1,3]dioxolan-4-(S)-yl)metanón
Medziprodukt 67 sa podrobil acylácii pomocou väzbovej metódy s Hunigovou bázou, ktorá je uvedená pri medziprodukte 74, použitím 2,2-dimetyl-[l, 3]dioxolán-4-(S)-karbonylchloridu za vzniku titulnej zlúčeniny (22 %).
‘H-NMR (CDC13, 400 MHz) δ: 6,83-6,78, m, 4H); 4,71-4,65 (m, 1H); 4,37-4,32 (m, 1H); 4,23-4,15 (m, 1H); 3,95-3,44 (m, 10H); 1,72-1,15 (m, 10H); 0,76 (s, 3H); 0,67-0,62 (m, 2H); 0,38-0,33 (m, 2H).
LRMS (Elektrosprej, pozitívny): Da/e 434,4 (m+1)
Príklad 243
R‘=CH2C3H5; R3=(S)-COCH(OH)CH2OH l-[4-(S)-(3-cyklopropylmetoxy-4-metoxyfenyl)-3-(S)-(l-(R)-hydroxyetyl)-3-metylpyrolidin-l-yl]-2-(S)-3-dihydroxypropan-l-ón
Zlúčenina príkladu 242 (9 mg; 20 pmol) sa rozpustila v roztoku kyseliny octovej a vody (3:1, 0,9 ml). Reakčná zmes sa miešala pri laboratórnej teplote počas 72 hodín. Roztok sa neutralizoval naliatím do roztoku NaHCO3. Roztok sa skoncentroval do sucha a potom sa tuhé látky vyextrahovali pomocou CH2C12. Spojené organické extrakty sa vysušili pomocou Na2SO4 a skoncentrovali vo vákuu (5,1 mg; 62 %).
132
H-NMR (CDClj, 400 MHz) δ: 6,84-6,76 (m, 3H); 4,40-4,37 (m, 1H); 3,89-3,32 (m, 11H); 2,33-1,95 (m,
1H); 1,34-1,12 (m, 7H); 0,89-0,81 (m, 1H); 0,78-0,73 (m, 3H); 0,66-0,61 (m, 2H); 0,37-0,32 (m, 2H). LRMS (Elektrosprej, pozitívny): Da/e 394,0 (m+l).
MeO.
OÁ~,,>OH ^~OH
Príklad 244
R'=2-indanyl; R3=(R)-COCH(OH)CH2OH (R)-2,3-dihydroxy-l-{(3S,4S)-3-((R)-l-hydroxyetyl)-4-[3-(indán-2-ylmetoxy)-4-metoxyfenyl]-3-metylpyrolidin-l-yl}propan-l-ón
Pripravený z medziproduktu 96 pomocou metódy opísanej pri príklade 75 a podrobený deprotekcii ako v príklade 243.
*H-NMR (CDC13, 300 MHz, zmes rotamérov) δ: 7,26-7,16 (m, 4H, aromatický); 6,83-6,82 (br. s, 3H, aromatický); 5,19-5,15 (m, 1H); 4,45-4,32 (m, 1H); 4,10-3,50 (m, 8H); 3,80 (d, 3H, OMe); 3,45-3,12 (m, 5H); 1,27-1,25 (m, 1H); 1,20-1,15 (m, 3H); 0,79-0,77 (m, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitívny): Da/e 470,58 (m+l).
.OH 'OH
Príklad 245
R1 =4-F-Ph-OCH2CH2CH2; R3=(R)-COCH(OH)CH2OH (S)-l-[(3S,4S)-4-{3-[3-(4-fluórfenoxy)propoxy]-4-metoxyfenyl}-3-((R)-l-hydroxyetyl)-3-metylpyrolidin-l-yl]-2,3-dihydroxypropan-l-ón
Pripravený pomocou metódy, ktorá je uvedená pri príklade 243.
‘H-NMR (CDClj, 300 MHz, zmes rotamérov) δ: 6,99-6,92 (m, 2H, aromatický); 6,87-6,79 (m, 5H, aromatický); 4,39 (s, 1H); 4,22-4,12 (m, 4H); 4,0 (d, 1H); 3,89-3,56 (m, 7H); 3,83 (s, 3H, OMe); 3,4-3,3 (dd, 1H); 2,32-2,24 (m, 2H) 1,17-1,12 (m, 3H); 0,7 (d, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitívny): Da/e 492,25 (m+l).
HO'
Medziprodukt 96 l-((R)-2,2-Dimetyl-l,3-dioxolan-4-yl)-l-[(3S,4S)-3-((R)-l-hydroxyetyl)-4-(3-hydroxy-4-metoxyfenyl)-3-metylpyrolidin-l-yl)metanón
Do banky s guľatým dnom vybavenej miešacou tyčinkou a gumenou priehradkou sa v dusíkovom prostredí pridal 5-[4-(l-hydroxyetyl)-4-metylpyrolidin-3-yl)-2-metoxyfenol (2,4 g; 9,55 mmol), suchý CH2C12 (50 ml) a DIEA (3,49 ml; 20,1 mmol). Zmes sa ochladila na 0 °C a injekčnou striekačkou sa po kvapkách pridal (S)-2,2-dimetyl-[l,3]dioxolán-4-karbonylchlorid (3,14 g; 19,1 mmol) v 15 ml CH2C12. Reakčná zmes sa počas 16 hodín nechala postupne zahriať na laboratórnu teplotu. Zmes sa potom zriedila s 50 ml CH2C12, premyla s IN HCI (2 x 50 ml), nasýteným vodným NaHCO3 (1 x 50 ml), vysušila pomocou Na2SO4 a skon133 centrovala na 3,9 g bledohnedej peny. Látka sa sňala pomocou 100 ml CH3OH a ochladila na 0 °C. Pridali sa tri ekvivalenty vodného IN LiOH (29 ml; 29,0 mmol), zmes sa miešala pri teplote 0 °C počas 2 hodín, potom sa počas 2 hodín zohriala na laboratórnu teplotu. Za zníženého tlaku sa reakčná zmes skoncentrovala pri teplote kúpeľa 30 °C, aby sa odstránil CH3OH. Zvyšná vodná látka sa neutralizovala nasýteným NH4C1 na úroveň pH 7 a extrahovala s EtOAc (2 x 100 ml). Extrakty sa vysušili pomocou Na2SO4 a skoncentrovali za vzniku 2,74 g bledohnedej peny (76 %).
'H-NMR (CDC13, 400 MHz, zmes rotamérov) δ: 6,90-6,70 (m, 3H); 5,66 (br, s, IH); 4,68 (t, IH); 4,34 (t, IH); 4,23-4,09 (m, 6H); 3,89 (s, 3H); 3,94-3,42 (m, 5H); 1,49-1,37 (m,6H); 1,17 (d, 3H); 0,76 (s, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitívny): Da/e 378,3 (m-l).
Príklad 246
R'=F3C-Ph-C=CCH2; R3=CO-2,2-dimetyl-l,3-dioxolan-4-yl l-((R)-2,2-dimetyl-l,3-dioxolan-4-yl)-l-(3S,4S)-3-((R)-l-hydroxyetyl)-4-{4-metoxy-3-[3-(4-trifluórmetylfenyl)prop-2-inyloxylfenyl} -3-metylpyrolidin-1 -yljmetanón
Do banky obsahujúcej bezvodý Cs2CO3 (67 mg; 0,206 mmol; 1,1 ekv.) sa v dusíkovom prostredí pridal roztok medziproduktu 96 (71 mg; 0,187 mmol; 1,0 ekv.) v bezvodom acetóne (1 ml). Do zmesi sa injekčnou striekačkou pridal medziprodukt 92 (52,1 mg; 0,187 mmol; 1,0 ekv.). Reakčná zmes sa potom ohriala a pri teplote 65 °C miešala počas 4 hodín. Reakčná zmes sa ochladila na laboratórnu teplotu a zriedila vodou (50 ml). Vodný roztok sa extrahoval s EtOAc (3 x 30 ml) a spojené organické extrakty sa premyli soľným roztokom (50 ml), potom sa vysušili pomocou Na2SO4, prefiltrovali a skoncentrovali vo vákuu za vzniku bielej penivej látky (104 mg).
*H-NMR (CDC13, 300 MHz, zmes rotamérov) δ: 7,5-7,35 (m, 4H, aromatický); 6,96 (d, IH, aromatický);
6.85- 6,75 (m, 2H, aromatický); 4,92 (d, 2H, CH;); 4,65-4,50 (m, IH); 4,35-4,20 (m, IH); 4,15-4,00 (m, IH);
3.85- 3,40(m, 5H); 3,8 (d, 3H, OMe); 3,35-3,30 (dd, IH); 1,45-1,25 (2d, 6H, Me); 1,0-0,9 (m, 3H); 0,63 (d, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitívny): Da/e 562,25 (m+1).
Príklad 247
R1=F,C-Ph-C=CCH2; R3=CO-CH(OH)CH2OH (R)-2,3-dihydroxy-l-((3S,4S)-3-((R)-l-hydroxyetyl)-4-{4-metoxy-3-[3-(4-trifluórmetylfenyl)prop-2-inyloxy] fenyi} -3-metylpyrolidín-l-yl)propan-I-ón
Do reakčnej banky obsahujúcej zlúčeninu príkladu 246 (104 mg; 0,185 mmol) sa pridala kyselina octová (3,0 ml) a voda (1,0 ml). Banka sa potom tesne uzavrela, zohriala na 50 °C a miešala počas 2 hodín. Reakčná zmes sa skoncentrovala vo vákuu vo vákuu a prečistila metódou HPLC s reverznou fázou na 08 stĺpci (Luna 10:, CIS, 250 x lOmm). Gradientovým eluovaním 50 - 100 % aeetonitril-voda (0,05 % TFA) vznikol produkt vo forme jantárového oleja (27,8 mg; 28,5 % výťažok).
‘H-NMR (CDC13, 300 MHz, zmes rotamérov) δ: 7,6-7,45 (m, 4H, aromatický); 7,69 (d, IH, aromatický); 6,9-6,82 (m, 2H, aromatický); 5,0 (m, 2H); 4,4-4,32 (m, IH); 4,1-3,2 (m, 7H); 3,89 (d, 3H, OMe); 1,05 (s, 3H); 0,72 (m, 3H).
LRMS (Elektrosprej, pozitívny): Da/e 522,15 (m+1).
134
Príklad 248
R'=3-tienyl-CH2CH2; R3=COCH2OCH2Ph
2-benzyIoxy-l-{(3S,4S)-3-((R)-l-hydroxyetyl)-4-[4-metoxy-3-(2-tiofen-3-yl-etoxy)fenyl]-3-metylpyrolidin-l-yl}etanón
Pripravený alkyláciou zlúčeniny príkladu 143 pomocou metódy K2CO3, ktorá je uvedená pri príklade 7, použitím 2-(3-tienyl)etylbromidu.
'H-NMR údaje δ: 7,27-7,38 (m, 6H); 7,05-7,07 (m, IH); 7,12-7,13 (m, IH); 6,74-6,84 (m, 3H); 6,05 (s, 2H); 4,15-4,22 (m, 4H); 3,44-3,93 (m, 6,5H); 3,86 (s, 3H); 3,14-3,24 (m, 2,5H); 1,13 (dd, 3H); 0,72 (s, 3H).
Príklad 249
R'=Ph(cyklo-C3H4)CH2; R3=COCH2OH
2-hydroxy-l-{(3S,4S)-3-((R)-l-hydroxyetyl)-4-[4-metoxy-3-((R)-2-fenylcyklopropylmetoxy)fenyl]-3-metylpyrolidin-l-yl}etanón
Pripravený alkyláciou zlúčeniny príkladu 143 pomocou metódy Mitsunobu-ho, ktorá je uvedená pri príklade 144, použitím 2-fenyl-cyklopropanolu a odstránením benzylovej skupiny pomocou debenzylačnej metódy uvedenej pri medziprodukte 31.
'H-NMR údaje δ: 7,17-7,30 (m, 5H); 6,72-6,85 (m, 3H); 4,00-4,14 (m, 2H); 3,49-3,98 (m, 8,5H); 3,86 (s, 3H); 3,05 (d, 0,5H): 2,86-2,93 (m, IH); 2,51-2,60 (m, IH); 2,27-2,34 (m, IH); 1,02-1,05 (dd, 3H); 0,74 (sd, 3H).
Príklad 250
R'=C5H9CH2CH2CH2; R3=COCH2OH l-[(3S,4S)-4-[3-(3-cyklopentylpropoxy)-4-metoxyfenyl]-3-((R)-l-hydroxyetyl)-3-metylpyrolidin-l-yl]-2-hydroxyetanón
Pripravený z titulnej zlúčeniny príkladu 143 pomocou metódy Mitsunobu-ho, ktorá je uvedená pri príklade 144, použitím 3-cyklopentylpropan-l-olu a odstránením benzylovej skupiny pomocou debenzylačnej metódy uvedenej pri medziprodukte 31.
'H-NMR údaje δ: 6,75-6,83 (m, 3H); 4,12-4,15 (m, 2H); 3,96-4,01 (m, 2,5H); 3,86 (s, 3H); 3,79-3,86 (m, IH); 3,59-3,70 (m, 4H); 3,06 (d, 0,5H); 1,75-1,88 (m, 5H), 1,44-1,61 (m, 6H); 1,16 (t, 5H); 0,77 (sd. 3H).
Príklad 251
R'=PhCH2CH2CH2; R3=COCH2OH
2-hydroxy-l-{(3S,4S)-3-((R)-l-hydroxyetyl)-4-[4-metoxy-3-(3-fenylpropoxy)fenyl]-3-metylpyrolidin-l-yl}etanón
135
Pripravený z titulnej zlúčeniny príkladu 143 pomocou metódy K2CO3, ktorá je uvedená pri príklade 7, použitím 3-fenylpropylchloridu a odstránením benzylovej skupiny pomocou debenzylačnej metódy uvedenej pri medziprodukte 31.
‘H-NMR údaje δ: 7,16-7,31 (m, 5H); 6,74-6,85 (m, 3H); 4,13-4,15 (m, 2H); 3,94-4,04 (m, 2H); 3,86 (s, 3H); 3,76-3,83 (m, IH); 3,47-3,70 (m, 4H); 3,04-3,07 (m, 3H); 2,80-2,85 (t, 2H); 2,10-2,20 (kvínt, 2H); 1,14 (t, 3H); 0,74 (s, 3H).
Príklad 252
R‘=l-hydroxyindan-2-yl; R3=COCH2OH
2-hydroxy-l-{(3S,4S)-3-((R)-l-hydroxyetyl)-4-[3-(l-hydroxyindan-2-yloxy)-4-metoxyfenyl]-3-metylpyrolidin-l-yl} etanón
Pripravený z titulnej zlúčeniny príkladu 143 pomocou metódy K2CO3, ktorá je uvedená pri príklade 7, použitím indénoxidu a odstránením benzylovej skupiny pomocou debenzylačnej metódy uvedenej pri medziprodukte 31.
‘H-NMR údaje δ: 7,48-7,51 (m, IH); 7,24-7,32 (m, 3H); 6,85-6,96 (m, 3H); 5,11-5,14 (m, IH); 4,84-4,89 (m, IH); 3,98-4,15 (m, 3H); 3,84-3,86 (m, IH); 3,83 (s, 3H); 3,50-3,78 (m, 4,5H); 3,16-3,32 (m, 2H); 3,06 (d, 0,5H); 1,15-1,20 (m, 3H); 0,77 (s, 3H).
Príklad 253
R‘=4-CH3OPhCH2CH2; R3=COCH2OH
2-hydroxy-l-((3S,4S)-3-((R)-l-hydroxyetyl)-4-{4-metoxy-3-[2-(4-metoxyfenyl)etoxy]fenyl}-3-metylpyrolidin-l-yl)etanón
Pripravený z titulnej zlúčeniny príkladu 143 pomocou metódy K2CO3, ktorá je uvedená pri príklade 7, použitím l-(2-chlóretyl)-4-metoxybenzénu a odstránením benzylovej skupiny pomocou debenzylačnej metódy uvedenej pri medziprodukte 31.
'H-NMR údaje δ: 7,20-7,23 (d, 2H); 6,74-6,88 (m, 25 5H); 4,10-4,18 (m, 4H); 3,72-3,91 (m, 2H); 3,86 (s,3 H); 3,80 (s, 3H); 3,48-3,64 (m, 4H), 3,02-3,11 (m,2H); 1,12-1,17 (m, 3H); 0,74 (s, 3H).
Príklad 254
R1 =CH3(cyklo-C3H4)CH2; R3=COCH2OH
2-hydroxy-l-{(3S,4S)-3-((R)-l-hydroxyetyl)-4-[4-metoxy-3-((R)-2-metylcyklopropylmetoxy)fenyl]-3-metylpyrolidin-l-yl}etánon
Pripravený z titulnej zlúčeniny príkladu 143 pomocou metódy K2CO3, ktorá je uvedená pri príklade 7, použitím l-(2-chlóretyl)-4-metoxybenzénu a odstránením benzylovej skupiny pomocou debenzylačnej metódy uvedenej pri medziprodukte 31.
136 'H-NMR údaje δ: 6,77-6,84 (m, 3H); 4,15-4,18 (m, 2H); 3,78-3,99 (m, 4H); 3,86 (s, 3H); 3,49-3,71 (m, 3,5H); 3,08 (d, 0,5H); 1,14-1,19 (m, 3H); 1,07 (sd, 3H); 0,92-1,03 (m, IH); 0,76-0,77 (m, 4H), 0,50-0,52 (m, 1 H); 0,37-0,41 (m, IH).
Príklad 255 l-(R)-[l-(2-Benzyloxyetyl)-4-(S)-(3-cyklopentyloxy-4-metoxyfenyl)-3-(S)-metylpyrolidin-3-yl]etanol
Medziprodukt 68 (86,4 mg; 0,27 mmol) sa rozpustil v 1,2-dichlóretáne (1 ml) a na roztok pôsobil benzyloxyacetaldehyd (38 pl, 0,27 mmol), nasledoval triacetoxyborohydrid sodíka (81 mg; 0,38 mmol). Reakčná zmes sa pri laboratórnej teplote miešala počas 18 hodín. Pridal sa ďalší triacetoxyborohydrid sodíka (40 mg; 0,19 mmol) a miešanie pokračovalo počas ďalších 8 hodín. Reakčná zmes sa zriedila s 1,0 M NaOH (0,5 ml) a prudko miešala počas 15 minút. Vrstvy sa oddelili, vodná fáza sa premyla s CH2C12 a organické vrstvy sa spojili. Po prepraní v 6 % NaHCO3 sa organické látky vysušili pomocou Na2SO4 a potom skoncentrovali vo vákuu. Surový materiál (129 mg) bol podrobený chromatografii na silikagéli s CHCl3/95 % etanol/konc. NH4OH (170 : 15 : 1) za vzniku titulnej zlúčeniny (27 mg; 22 %).
'H NMR (CDC13, 400 MHz) δ: 7,36-7,25 (m, 5H); 6,81-6,73 (m, 3H); 4,79-4,73 (m, IH); 4,54 (s, IH); 3,82 (s, 3H); 3,71-3,54 (m, 4H); 3,40-3,35 (m, IH); 3,24-3,21 (m, IH); 2,80-2,67 (m, 2H); 2,63-2,56 (m, IH); 2,16-2,09 (m, IH); 1,95-1,88 (m, 8H); 1,65-1,57 (m, 2H); 1,22-1,10 (m, 3H); 0,49 (m, 3H)
LRMS (elektrosprej, pozitívny): 454,5 Da/e (m+l).
Príklad 256 l-(R)-[4-(S)-(3-Cyklopentyloxy-4-metoxyfenyl)-l-(2-hydroxyetyl)-3-(S)-metylpyrolidin-3-yl]-etanol
Zlúčenina príkladu 255 (25 mg; 55 mmol) bola podrobená debenzylačnej procedúre uvedenej pri medziprodukte 31 za vzniku titulnej zlúčeniny príkladu 256 (7,4 mg; 28 %) vo forme soli TFA po prečistení HPLC.
'H NMR (CDC13, 400 MHz) δ: 6,84-6,65 (m, 3H); 5,40-4,90 (brd, 2H); 4,74 (brd, IH); 4,26-3,21 (m, 1 IH); 1,97-1,73 (m, 6H); 1,66-1,56 (m, 3H); 1,33-0,77 (m, 4H); 0,69 (s, 3H).
LRMS (elektrosprej, pozitívny): 364,4 Da/e (m+l).
137
Príklad 257
2-Benzyloxy-l-[4-(S)-(3-cyklopropylmetoxy-4-metoxyfenyl)-3-(S)-hydroxymetyl-3-metylpyrolidin-3-yl]-etanón [4-(S)-(3-Cyklopropylmetoxy-4-metoxyfenyl)-3-(S)-metylpyrolidin-3-yl]metanol (100 mg; 0,34 mmol) sa rozpustil v CH2C12 (1,7 ml) a roztok sa ochladil na 0 °C. Pridal sa DIEA (144 μΐ, 0,82 mmol) a následne benzyloxyacetylchlorid (114 μΙ, 0,72 mmol). Reakčná zmes sa pomaly nechala zohriať na laboratórnu teplotu a miešala počas 18 hodín. Pridala sa voda (0,25 ml) a reagent sa miešal 1,5-hodiny. Pridal sa CH2C12 a zmes sa opäť premyla vodou, dvakrát s IN HCI, raz s vodou, dvakrát so 6 % NaHCO3, potom sa vysušila pomocou Na2SO4 a skoncentrovala vo vákuu. Zvyšok sa rozpustil v THF (1 ml) a ochladil na 0 °C. Pridal sa roztok LiOH vo vode (1,36M, 1 ml; 1,36 mmol) a počas 4 hodín pri teplote 0 °C sa nechal prebiehať proces hydrolýzy. Reakčná zmes sa ochladila nasýteným NH4C1 a koncentráciou vo vákuu sa odstránilo THF. Zvyšok sa opäť nechal suspendovať v CH2C12 a dvakrát premyl so 6 % NaHCO3, vysušil pomocou Na2SO4 a skoncentroval vo vákuu.
‘H NMR (CDC13, 400 MHz) δ; 7,40-7,28 (m, 5H); 6,83-6,79 (m, IH); 6,73-6,66 (m, 2H); 4,66 (s, 2H); 4,16-4,13 (m, 2H); 3,86 (s, 3H); 3,83-3,78 (m, 3H); 3,63-3,26 (brd m, 4H); 3,06-3,00 (m, IH); 2,50-2,45 (brd m, IH); 1,34-1,12 (m, IH); 1,03-0,99 (m, 2H); 0,73 (s, 3H); 0,66-0,61 (m, 2H); 0,36-0,32 (m, 2H).
LRMS (elektrosprej, pozitívny): Da/e 440,3 (m+l).
Medziprodukt 97 [4-(S)-(3-Cyklopropylmetoxy-4-metoxyfenyl)-3-(S)-metylpyrolidin-3-yl]metanol
Medziprodukt 65 (0,99 g; 2,6 mmol) sa rozpustil v etanole (95 %, 10 ml) a na roztok sa nechal pôsobiť Pearlmanov katalyzátor (20 % Pd(OH)2 na uhlíku, 250 mg). Zmes sa pri 1 atmosfére H2 hydrogenizovala počas 16 hodín. Pridal sa ďalší katalyzátor (250 mg) a reakcia prebiehala počas ďalších 24 hodín. Filtráciou sa odstránil katalyzátor a reakčná zmes sa nechala skoncentrovať vo vákuu (0,68 g; 89 %).
‘H NMR (CDC13; 400 MHz) δ: 6,84-6,73 (m, 3H); 3,87-3,83 (m, 4H); 3,59-3,47 (m, 3H); 3,30-3,20 (m, 3H); 2,85 (d, J=10,6, IH); 2,35-2,12 (brd m, IH); 1,35-1,27 (m, IH); 0,64-0,60 (m, 4H); 0,37-0,31 (m, 2H); 0,36-0,32 (m, 2H).
LRMS (elektrosprej, pozitívny): Da/e 377,3 (m+l).
Príklad 258 l-(2-Benzyloxyacetyl)-4-(S)-(3-cyklopropylmetoxy-4-metoxyfenyl)-3-(S)-metylpyrolidín-3-karbaldehyd
Oxalylchlorid (2,0 M v CH2C12, 0,175 ml; 0,35 mmol) sa pridal do CH2C12 (0,52 ml). Vzniknutý roztok sa ochladil na teplotu -60 °C. Po kvapkách sa potom pridal roztok DMSO (47 ml; 0,66 mmol) rozpustený v CH2C12 (0,18 ml). Roztok sa miešal počas 5 minút a titulná zlúčenina príkladu 257 (rozpustená v 1,0 ml CH2C12) sa pridala do Swernovej oxidačnej zmesi. Potom, ako sa reakčná zmes miešala pri teplote - 60 °C počas 30 minút, pridal sa Et3N (0,25 ml) a reakčná zmes sa nechala nahriať na laboratórnu teplotu. Po 30 minútach sa pridala voda a roztok sa prudko miešal počas 15 minút. Vrstvy sa oddelili, vodná fáza sa raz premyla CH2C12. Spojené organické vrstvy sa premyli nasýteným NaCl a vysušili pomocou Na2SO4 a skoncentrovali vo vákuu. Surový produkt sa podrobil chromatografii na SiO2 použitím zmesi EtOAc/hexán (2 : 1), 76 mg; 50 %).
'H NMR (CDC13, 400 MHz) δ: 9,62-9,57 (m, IH); 7,41-7,30 (m, 5H); 6,84-6,78 (m, IH); 6,68-6,56 (m, 2H); 4,68-4,63 (m, 2H); 4,20-4,10 (m, 2H); 4,05-3,32 (m, 5H); 3,87 (s, 3H); 1,57-1,55 (m, 2H); 1,33-1,24 (m, IH); 0,92-0,88 (m, 3H); 0,67-0,60 (m, 2H); 0,37-0,31 (m, 2H).
138
Príklad 259 l-((R)-2,2-Dimetyl-l,3-dioxolan-4-yl)-l-[(3S,4S)-3-((R)-l-hydroxyetyl)-4-(3-hydroxy-4-metoxyfenyl)-3-metylpyrolidin-l-yl]metanón
Do miešanej zmesi medziproduktu 70 (73,5 mg; 0,293 mmol; 1,0 ekv.) v CH2C12 (3 ml) sa pri laboratórnej teplote v dusíkovom prostredí pridal Et3N (65,2 mg; 0,645 mmol) a následne 2,2-dimetyl-l,3-dioxolán-(4R)-karbonylchlorid (53,2 mg; 0,322 mmol). Počas noci sa reakčná zmes miešala pri laboratórnej teplote. Reakčná zmes sa potom naliala do 50 ml EtOAc, premyla soľným roztokom, vysušila s Na2SO4 a skoncentrovala vo vákuu za vzniku penovej látky (94 mg; 85 % výťažok). Surová látka sa hydrolyzovala LiOH použitím medziproduktu 5 za vzniku titulnej zlúčeniny príkladu 259.
'H NMR (CDClj, 300 MHz) δ: 6,97-6,58 (m, 3H, aromatický); 4,68 (t, 1H, J=6,4 Hz); 4,44-4,34 (m, 1H); 4,24-3,95 (m, 1H); 3,94-3,50 (m, 5H); 3,87 (d, 3H, Ome); 3,42 (d, 1H, J=12,4 Hz); 3,35 (d, 1H, J=12,4 Hz); 1,4 (m, 6H); 1,15 (m, 3H); 0,75 (m, 3H).
Príklad 260 l-((R)-2,2-Dimetyl-l,3-dioxolan-4-yl)-l-{(3S,4S)-3-((R)-l-hydroxyetyl)-4-[4-metoxy-3-(3-fenylprop-2-inyloxy)fenyl]-3-metylpyrolidin-1 -yl} metanón
Pripravený z titulnej zlúčeniny príkladu 259 (126 mg; 0,332 mmol; 1,0 ekv.) a medziproduktu 90 (69,8 mg; 0,332 mmol; 1,0 ekv.) metódou, ktorá je uvedená pri príklade 176 za vzniku bielej penovej hmoty (160 mg).
‘H NMR (CDCfi, 300 MHz, zmes rotamérov) δ: 7,42-7,25 (m, 5H, aromatický); 7,08 (d, 1H, aromatický); 6,86 (d, 1H, aromatický); 5,0 (d, 2H, CH2); 4,72-4,60 (m, 1H); 4,45-4,32 (m, 1H); 4,22-4,10 (m, 1H); 3,95-3,70 (m, 3H); 3,89 (s, 3H, OMe); 3,70-3,45 (m, 2H); 3,44-3,29 (m, 1H); 1,5-1,38 (2d, 6H, Me); 1,02-0,75-0,65 (m, 3H); 0,63 (d, 3H).
LRMS (elektrosprej, pozitívny): Da/e 494,55 (m+l).
Príklad 261 (R)-2,3-Dihydroxy-l-{(3S,4S)-3-((R)-l-hydroxyetyl)-4-[4-metoxy-3-(3-fenylprop-2-inyloxy)fenyl]-3-metylpyrolidin-1 -yl} propán-1 -ón
Do reakčnej nádobky obsahujúcej titulnú zlúčeninu príkladu 260 (160 mg; 0,323 mmol) sa pridala kyselina octová (3,0 ml) a voda (1,0 ml). Nádobka sa utesnila, zohriala na 50 °C a nechala miešať počas 2 hodín. Reakčná zmes sa nechala vo vákuu skoncentrovať a prečistiť metódou obrátenej fázy HPLC na 08 stĺpci (Luna 10μ, 08, 250 x 10 mm). Gradientovým eluovaním 50 - 100 % acetonitril-voda (0,05 % TFA) vznikla titulná zlúčenina príkladu 261 vo forme bielej penovej hmoty (52,2 mg; 35,6 % výťažok).
*H NMR (CDCfi, 300 MHz, zmes rotamérov) δ: 7,5-7,21, (m, 5H, aromatický); 7,05 (m, 1H, aromatický); 6,9-6,75 (m, 2H, aromatický); 5,0 (d, 2H); 4,31 (s, 1H); 4,01-3,2 (m, 9H); 3,88 (s, 3H, OMe); 1,01-0,9 (m, 3H); 0,7 (s, 3H).
LRMS (elektrosprej, pozitívny): Da/e 454,20 (m+l).
139
Príklad 262 l-((S)-2,2-Dimetyl-l,3-dioxolan-4-yl)-l-[(3S,4S)-3-((R)-l-hydroxyetyl)-4-[3-hydroxy-4-metoxyfenyl)-3-metylpyrolidin-1 -yl]metanón
Do miešaného roztoku medziproduktu 70 (73,5 mg; 0,293 mmol; 1,0 ekv.) v CH2C12 (3 ml) sa pri laboratórnej teplote v dusíkovom prostredí pridal Et3N (65,2 mg; 0,654 mmol) a nasledovne 2,2-dimetyl-l,3-dioxolán-(4S)-karbonylchlorid (53,2 mg; 0,322 mmol). Počas noci sa reakčná zmes miešala pri laboratórnej teplote, potom sa naliala do 50 ml EtOAc, premyla soľným roztokom, vysušila s Na2SO4 a skoncentrovala vo vákuu za vzniku penovej látky (94 mg; 85 % výťažok). Surová látka sa hydrolyzovala použitím LiOH cez medziprodukt 5 za vzniku vzorky 262.
‘H NMR (CDC13, 300 MHz) δ: 6,93-6,95 (m, 3H, aromatický); 5,68 (s, IH); 4,67 (m, IH); 4,34 (m, IH); 4,21 (m, IH); 3,94-3,40 (m, 5H); 3,89 (s, 3H, OMe); 1,4 (m, 6H); 1,16 (m, 3H); 0,76 (m, 3H).
Príklad 263 l-((S)-2,2-Dimetyl-l,3-dioxolan-4-yl)-l-{(3S,4S)-3-((R)-l-hydroxyetyl)-4-[4-metoxy-3-(3-fenylprop-2-inyloxy)fenyl]-3-metylpyrolidin-l-yl}metanón
Pripravený z titulnej zlúčeniny príkladu 262 (126 mg; 0,332 mmol; 1,0 ekv.) a medziproduktu 90 (69,8 mg; 0,332 mmol; 1,0 ekv.) metódou, ktorá je uvedená pri príklade 176, za vzniku bielej penovej látky (160 mg).
‘H NMR (CDC13, 300 MHz, zmes rotamérov) δ: 7,52-7,15 (m, 5H, aromatický); 7,08 (d, IH, aromatický); 6,86 (d, 2H, aromatický); 5,98 (m, 2H, CH2); 4,64 (m, IH); 4,35-4,32 (m, IH); 4,22-4,10 (m, IH); 3,97-3,36 (m, 5H); 3,89 (s, 3H, OMe); 1,5-1,38 (2d, 6H, Me); 1,02-0,75 (m, 3H); 0,74 (s, 3H).
LRMS (elektrosprej, pozitívny): Da/e 494,55 (m+l).
Príklad 264 (S)-2,3-Dihydroxy-l-{(3S,4S)-3-((R)-l-hydroxyetyl)-4-[4-metoxy-3-(3-fenylprop-2-inyloxy)fenyl]-3-metylpyrolidin-1 -y 1} propán-1 -ón
Do reakčnej nádobky obsahujúcej titulnú zlúčeninu príkladu 263 (160 mg; 0,323 mmol) sa pridala kyselina octová (3,0 ml) a voda (1,0 ml). Nádobka sa utesnila, zohriala na 50 °C a nechala miešať počas 2 hodín. Reakčná zmes sa nechala vo vákuu skoncentrovať a prečistiť metódou obrátenej íäzy HPLC na 08 stĺpci (Luna 10 μ, C18, 250 x 10 mm). Gradientovým eluovaním 50 - 100 % acetonitril-voda (0,05 % TFA) vznikol produkt vo forme bielej penovej hmoty (52,2 mg; 35,6 % výťažok).
‘H NMR (CDC13, 300 MHz, zmes rotamérov) δ: 7,44-7,18 (m, 5H, aromatický); 7,08 (s, IH, aromatický); 6,86 (s, 2H, aromatický); 4,6 (s, 2H, CH2); 4,4-4,3 (m, IH); 4,01-4,62 (m, 7H); 3,89 (s, 3H, OMe); 3,59-3,46 (m, IH); 3,32-3,29 (m, IH); 2,4 (m, IH); 0,95 (m, 3H); 0,72 (d, 3H).
LRMS (elektrosprej, pozitívny): Da/e 454,20 (m+l).
[a]D= 14,6° (c=l,00, EtOH).
140
Príklad 265
R,=t-Bu; R3=(S)-COCH(OAc)CH2Ph
Pripravený z medziproduktu 73 acyláciou esteru kyseliny (S)-l-chlórkarbonyl-2-fenyletyloctovej podľa metódy F. Babudriho et al. Tetrahedron, 8, 2431-2440 (1990).
LRMS (elektrosprej, pozitívny): m/z 498 (m+l).
Príklad 266
R,=H; R3=(S)-COCH(OAc)CH2Ph
Pripravený z titulnej zlúčeniny príkladu 265 metódou TFA, ktorá je uvedená pri príklade 143 za vzniku titulnej zlúčeniny príkladu 266.
LRMS (elektrosprej, pozitívny): m/z 442 (m+l).
Príklad 267
Etylester kyseliny (S)-l-benzyl-2-{(3S,4S)-3-((R)-l-hydroxyetyl)-4-[4-metoxy-3-(3-fenylprop-2-inyloxy)feny l]-3-mety lpyrolidin-1 -y I} -2-oxo-octovej Ri=PhC=CCH?; R3=(S)-COCH(OAc)CH2Ph
Titulná zlúčenina príkladu 266 (88 mg; 0,2 mmol) a medziprodukt 90 (50 mg; 0,24 mmol) sa podrobili procedúre s Cs2CO3, ktorá je uvedená pri príklade 176 a neupravený zvyšok (110 mg) sa použil bez ďalšieho prečisťovania.
141
Príklad 268 (S)-2-Hydroxy-l-{(3S,4S)-3-((R)-l-hydroxyetyl)-4-[4-metoxy-3-(3-fenylprop-2-inyloxy)fenyl]-3-metylpyro1 idin-1 -y 1} -3 -fény Ipropan-1 -ón R,=PhC=CCH2; R3=(S)-COCH(OH)CH2Ph
Titulná zlúčenina príkladu 267 (110 mg surovej, 0,2 mmol teoreticky) sa podrobila procedúre deprotekcie O-acetátu a prečistila sa HPLC (20 x 50 mm YMC CombiPrep 08 stĺpec, 20 ml/min., 10-95 % acetonitril/voda počas 7 minút) za vzniku titulnej zlúčeniny príkladu 268 (38 mg; 75 %).
'H NMR (300 MHz, CDCfi, zmes rotamérov) δ: 7,50-7,16 (m, 10H); 7,10-6,52 (m, 3H); 5,05-4,92 (m, 2H); 4,52-4,36 (m, 1H); 3,88 (s, 3H); 3,87-2,72 (m, 9H); 1,48/1,29 (2d, J=4,3/4,6 Hz, 1H); 0,93/0,88 (2d, J=6,4 Hz, 3H); 0,66/0,51 (2s, 3H).
LRMS (elektrosprej, pozitívny): m/e 514 (m+H)+.
Zlúčeniny štruktúrneho vzorca (II) boli testované na schopnosť inhibovať PDE4. Schopnosť zlúčeniny inhibovať aktivitu PDE4 súvisí s hodnotou IC50 pre túto zlúčeninu, t. j. koncentráciou inhibítora, ktorá je potrebná na 50 % inhibíciu aktivity enzýmu. Hodnota IC50 pre zlúčeninu štruktúrneho vzorca (II) bola určená s použitím rekombinačného ľudského enzýmu PDE4.
Hodnoty IC50 pre in vitro inhibíciu aktivity fosfodiesterázy a výsledné vypočítané hodnoty K, zlúčenín uvedených v príkladoch boli určené meraním inhibície hydrolýzy cAMP ako funkcie koncentrácie testovanej zlúčeniny v rozsahu od 0 do 1 mM. Hodnoty K, zlúčenín testovaných v rámci uvedeného testu sa pohybovali približne od 0,0003 μΜ do 100 μΜ.
Zlúčeniny tohto vynálezu zvyčajne majú hodnotu IC50 pre rekombinačný ľudský enzým PDE4 nižšiu ako približne 50 μΜ a v lepších prípadoch nižšiu ako približne 25 μΜ a v tých najlepších prípadoch nižšiu ako približne 15 μΜ. Zlúčeniny tohto vynálezu zvyčajne majú hodnotu IC50 pre rekombinačný ľudský PDE4 nižšiu ako približne 1 μΜ a často nižšiu ako približne 0,05 μΜ. Na dosiahnutie plných výhod tohto vynálezu má inhibítor PDE4 tohto vynálezu hodnotu IC50 okolo 700 pM (pikomólov) až 15 μΜ.
Hodnoty IC50 pre tieto zlúčeniny boli určené z krivky závislosti od koncentrácie zvyčajne využitím koncentrácií v rozsahu od 0,1 pM do 500 μΜ. Testy pre ostatné enzýmy PDE s použitím štandardnej metodiky, opísanej v príspevku Loughney et al., J. Biol. Chem., 271, str. 796 - 806 (1996), taktiež ukázali, že zlúčeniny tohto vynálezu sú vysoko selektívne pre cAMP špecifický enzým PDE4.
Konkrétne zlúčenina tohto vynálezu, t. j. vzorka 66, má IC50 pre ľudský rekombinačný enzým PDE4B s hodnotou 0,015 μΜ, ale IC50 pre PDE1A má hodnotu 80 μΜ, pre PDE1B 100 μΜ, pre PDE1C 12 μΜ, pre PDE2 450 μΜ, pre PDE3A 40 μΜ, pre PDE5 270 μΜ a pre PDE7 36 μΜ. To ilustruje selektivitu tejto zlúčeniny vzhľadom na inhibíciu PDE4.
Zlúčeniny štruktúrneho vzorca (II) boli taktiež testované na schopnosť redukovať sekréciu TNFa v ľudských periférnych krvných lymfocytoch. Schopnosť redukovať sekréciu TNFa súvisí s hodnotami EC50 (t. j. účinnej koncentrácie zlúčeniny schopnej inhibovať 50 % celkovej sekrécie TNFa).
Inhibícia in situ uvoľňovania TNFa pochádzajúceho zendotoxínom upravených izolovaných periférnych krvných lymfocytov vyjadrená pomocou hodnôt EC50 zlúčenín uvedených v príkladoch sa určila ako funkcia koncentrácie testovanej zlúčeniny v rozsahu od 0 do 100 μΜ. Hodnoty EC50 zlúčenín testovaných v rámci uvedeného testu sa pohybovali približne od 0,0002 μΜ do 20 μΜ.
Zlúčeniny tohto vynálezu zvyčajne majú hodnotu EC50 nižšiu ako približne 50 μΜ a v lepších prípadoch nižšiu ako približne 25 μΜ a v tých najlepších prípadoch nižšiu ako približne 15 μΜ. Zlúčeniny tohto vynálezu zvyčajne majú hodnotu EC50 pre PBL/TNFa nižšiu ako približne 1 μΜ a často nižšiu ako približne 0,05 μΜ. Na dosiahnutie plných výhod tohto vynálezu má inhibítor PDE4 tohto vynálezu hodnotu EC50 okolo 1000 pM (pikomólov) až 20 μΜ.
Produkciu rekombinačných ľudských enzýmov PDE a určenie hodnôt 1C5O a EC50 je možné dosiahnuť metódami dobre známymi v danej oblasti. Neskôr sú uvedené príklady metód.
Expresia ľudských enzýmov PDE
Expresia v bunkách Spodoptera fugiperda (Sf9) nakazených bakulovírusom
142
Boli vytvorené plazmidy prenášajúce bakulovírus buď použitím pBlueBacllI (Invitrogen), alebo pFastBac (BRL-Gibco). Štruktúra všetkých plazmidov sa verifikovala sekvenčným zoradením všetkých vektorových spojení a celkovým sekvenčným zoradením všetkých regiónov generovaných PCR. Plazmid pBB-PDEÍA3/6 obsahoval kompletný otvorený čítací rámec z PDE1A3 (Loughney et al., J. Biol. Chem., 271, str. 796 - 806 (1996)) v pBlueBacllI. Plazmid Hcam3aBB obsahoval kompletný otvorený čítací rámec z PDE1C3 (Loughney et al. (1996)) v pBlueBacllI. Plazmid pBB-PDE3A obsahoval kompletný otvorený čítací rámec z PDE3A (Meacci et al., Proc. Natl. Acad. Sci., USA, 89, str. 3721 - 3725 (1992)) v pBlueBacllI.
Zásoby rekombinačného vírusu boli vyprodukované buď použitím systému MaxBac (Invitrogen), alebo systému FastBac (Gibco-BRL) podľa protokolov výrobcu. V obidvoch prípadoch bola expresia rekombinačných ľudských enzýmov PDE vo výsledných vírusoch podporovaná vírusovým polyédrovým aktivátorom. Pri použití systému MaxBac® bol vírus dvakrát čistený na plak, aby sa zabezpečilo, že preparát nebude kontaminovaný žiadnym divokým typom vírusu (occ+). Proteínová expresia sa vykonala takto: bunky sf9 sa vypestovali pri teplote 27 °C v Graceho hmyzej kultivačnej pôde (Gibco-BRL) doplnenej o 10 % fetálneho hovädzieho séra, 0,33 % TC z kvasníc, 0,33 % hydrolyzátu laktalbumínu, 4,2 mM NaHCO3, 10 pg/ml gentamycínu, 100 jednotiek/ml penicilínu a 10 pg/ml streptomycínu. Exponenciálne sa množiace bunky boli nakazené násobkom približne 2 až 3 vírusových častíc na bunku a inkubované počas 48 hodín. Bunky sa zozbierali centrifugovaním, premyli neobohatenou Graceho kultivačnou pôdou a rýchlo sa zmrazili na uskladnenie.
Expresia v Saccharomyces cerevisiae (kvasinky)
Rekombinačná produkcia ľudských enzýmov PDE1B, PDE2, PDE4A, PDE4B, PDE4C, PDE4D, PDE5 a PDE7 sa vykonala podobne, ako je opísané v príklade 7 U.S. Patent No. 5,702,936, ktorý sa odkazom naň stáva súčasťou tohto patentu, s tým rozdielom, že použitý kvasnicový transformačný vektor, ktorý je odvodený zo základného plazmidu ADH2 opísaného v Price et al., Methods in Enzymology, 185, s. 308 - 318 (1990), zahŕňal kvasnicové ADH2 promočné a terminačné sekvencie a hostiteľom Saccharomyces cerevisiae bol kmeň neobsahujúci proteázu BJ2-54 uložený 31. augusta 1998 v inštitúcii American Type Culture Collection, Manassas, Virginia, pod vstupným číslom ATCC 74465. Transformované hostiteľské bunky boli pestované v médiu 2X SC-leu, pH 6,2, so stopami kovov a vitamínov. Po 24 hodinách sa do konečnej koncentrácie 2X YEP/3 % glycerolu pridal glycerol obsahujúci médium YEP. Približne o 24 hodín neskôr sa bunky zozbierali, premyli a uložili pri teplote -70 °C.
Čistenie kalmodulínu
Kalmodulín použitý na aktiváciu enzýmov PDE1 sa prečistil z hovädzích testes v podstate tak, ako je opísané v Dedman et. al., Methods in Enzymology, 102, str. 1 - 8 (1983) použitím metódy Pharmacia Phenyl-Sepharose®.
Imobilizácia kalmodulínu na agaróze
Kalmodulín sa imobilizoval na géli BioRad AffiGel® 15 podľa pokynov výrobcu.
Príprava ľudskej fosfodiesterázy
Stanovenie aktivity fosfodiesterázy
Aktivita fosfodiesterázy sa pri týchto prípravkoch určila nasledovne: PDE testy využívajúce separačnú techniku na aktívnom uhlí sa vykonali v podstate tak, ako je opísané v Loughney et. al. (1996). Pri tomto teste PDE aktivita konvertuje [32P]cAMP alebo [32P]cGMP na zodpovedajúce [32P]5’-AMP alebo [32P]5’~ GMP úmerne množstvu prítomnej PDE aktivity. [32P]5’-AMP alebo [32P]5’-GMP sa potom kvantitatívne konvertuje na voľný [32P]fosfát a neoznačený adenozín alebo guanozín pôsobením 5’-nukleotidázy z hadieho jedu. Z toho vyplýva, že množstvo uvoľneného [32P]fosfátu je úmerné aktivite enzýmu. Test bol vykonaný pri teplote 30 °C v 100 pl reakčnej zmesi obsahujúcej (konečné koncentrácie) 40mM TRIS HCI (pH 8,0), 1 pM ZnSO4, 5 mM MgCLa 0,1 mg/ml albumínu z hovädzieho séra (BSA). V testoch stanovujúcich PDE1 špecifickú aktivitu inkubačné zmesi ďalej alternatívne zahŕňali použitie 0,1 mM CaCL a 10 pg/ml kalmodulínu. PDE enzým bol prítomný v množstvách, ktorých výťažok bol nižší ako 30 % celkovej hydrolýzy substrátu (lineárne testovacie podmienky). Test sa začal pridaním substrátu (1 mM [32P]cAMP alebo cGMP) a zmes sa inkubovala 12 minút. Potom sa pridalo sedemdesiatpäť (75) pg jedu Crotalus atrox a inkubácia pokračovala ďalšie 3 minúty (spolu 15 minút). Reakcia sa zastavila pridaním 200 pl aktívneho dreveného uhlia (25 mg/ml suspenzie v 0,1 M NaH2PO4, pH 4). Po centrifugovaní (750 x g počas 3 minút), aby sa usadilo drevené uhlie, sa odobrala vzorka supematantu na určenie rádioaktivity v scintilometri a vypočítala sa aktivita PDE.
Analýzy inhibítora sa vykonali podobnou metódou, aká je opísaná v Loughney et al., J. Biol. Chem., 271, str. 796 - 806 (1996), s výnimkou použitia cGMP a cAMP a koncentrácie substrátu boli nižšie ako 32 nM, čo je ďaleko pod Km testovaných enzýmov PDE.
143
Purifikácia PDE 1A3 z buniek SF9
Bunkové pelety (5 g) sa zmiešali s 10 ml lýzového roztoku (50 mM MOPS s pH 7,5, 2 mM ditiotreitolu (DTT), 2 mM benzamidínu HC1, 5 μΜ ZnSO4, 0,1 mM CaCF, 20 μg/ml inhibítorov kalpaínu 1 aII apo 5 pg/ml leupeptínu, pepstatínu a aprotinínu) pri laboratórnej teplote. Bunky sa lýzovali prechodom cez pretlakovú bunku French® (SLM-Aminco®, Spectronic Instruments, Inc., Rochester NY). Výsledný lyzát sa hodinu centrifugoval v Beckmanovej ultracentrifúge použitím rotora typu T180 pri 45000 ot./min. Oddelil sa z neho supematant a prefiltroval cez sa 0,2 pm filter. Tento filtrát sa aplikoval v stĺpci 2,6 x 90 cm obsahujúcom SEPHACRYL® S-300 vyvážený v kolónovom roztoku A (lýzový roztok obsahujúci 100 mM NaCl a 2 mM MgCF). Prietok stĺpca bol nastavený na 1 ml/min. a zachytávali sa 7 ml frakcie. Aktívne frakcie sa zozbierali a boli doplnené 0,16 mg kalmodulínu. Enzým sa aplikoval po celú noc pri prietoku 0,2 ml/min. do stĺpca obsahujúceho imunoafinitu ACC-1 aragózy, ako je opísané v Hansen et al., Methods in Enzymology, 159, str. 453 - 557 (1988). Stĺpec sa premyl 5 objemami kolónového roztoku B (kolónový roztok A bez NaCl) a nasledovalo 5 objemov kolónového roztoku C (kolónový roztok A obsahujúci 250 mM NaCl). Stĺpec sa vylúhoval kolónovým roztokom D (50 mM MOPS s pH 7,5, 1 mM EDTA, 1 mM EGTA, 1 mM DTT, 1 mM benzamidínu HC1, 100 mM NaCl, 20 pg/ml inhibítorov kalpaínu la II apo 5 pg/ml leupeptínu, pepstatínu a aprotinínu) použitím jedného kolónového objemu pri prietoku 0,1 ml/min. zastavením prietoku na 1 hodinu a potom pokračovaním elúcie pri rovnakom prietoku. Zozbierali sa frakcie 0,5 ml. Zhromaždili sa frakcie vykazujúce aktivitu a najprv sa dialyzovali v dialyzačnom roztoku obsahujúcom 25 mM MOPS s pH 7,5, 100 mM NaCl, 10 pM ZnSO4, 1 mM MgCl?, 1 mM DTT a 1 mM benzmidínu HC1. Následne sa vykonala dialýza v roztoku obsahujúcom 50 % glycerolu, po ktorej nasledovalo rýchle zmrazenie vzorky suchým ľadom a uskladnenie pri teplote -70 °C. Výsledné prípravky boli čistoty približne 10 až 15 % podľa SDS-PAGE. Tieto prípravky mali špecifické aktivity okolo 5 až 20 pmol cAMP hydrolyzovaného za minútu na miligram proteínu.
Purifikácia PDE1B z buniek S. cerevisiae
Kvasnicové bunky (50 g) sa rozpustili zmiešaním so 100 ml sklených guľôčok (0,5 mM, premyté kyselinou) a 200 ml roztoku A pri laboratórnej teplote. Roztok A pozostával z 50 mM MOPS s pH 7,5, 1 mM DTT, 2 mM benzamidínu HC1, 0,01 mM ZnSO4, 5 mM MgCl?, 20 pg/ml inhibítorov kalpaínu I a II a po 5 pg/ml leupeptínu, pepstatínu a aprotinínu. Zmes sa ochladila na 4 °C, premiestnila do Bead-Beater® a bunky sa lýzovali rýchlym miešaním v 6 cykloch po 30 sekúnd. Homogenát sa centrifugoval počas 15 minút v Beckmanovej centrifúge J2-21M použitím rotora JA-10 pri 9.000 ot./min. a teplote 4 °C. Oddelil sa z neho supematant a ten sa 45 minút centrifugoval v Beckmanovej ultracentrifúge XL-80 použitím rotora typu TI45 pri 36000 ot./min. a teplote 4 °C. Oddelil sa supematant a PDE1B sa vyzrážal pridaním tuhého síranu amónneho (0,33 g/ml supematantu) pri miešaní v ľadovom kúpeli a udržiavaní pH medzi 7,0 a 7,5. Táto zmes sa potom centrifugovala počas 22 minút v Beckmanovej centrifúge J2 použitím rotora JA-10 pri 9.000 ot./min. (12.000 x g). Supematant sa oddelil a peleta sa rozpustila v 100 ml roztoku B (50 mM MOPS s pH 7,5, 1 mM DTT, 1 mM benzamidínu HC1, 0,01 mM ZnSO4, 2 mM MgCl?, 2 mM CaCl? apo 5 pg/ml leupeptínu, pepstatínu a aprotinínu). Hodnoty pH a vodivosti sa zodpovedajúco upravili na 7,5 a 15 - 20 milisiemens (mS). Tento roztok sa naplnil do 20 ml stĺpca obsahujúceho kalmodulín-aragózu, ktorý bol vyrovnaný 10 kolónovými objemami roztoku B s prietokom 1 ml/min. Prietok stĺpcom sa opakovane aplikoval aspoň 5-krát. Stĺpec bol premytý 5 objemami roztoku B, 5 objemami roztoku B obsahujúceho 250 mM NaCl a opäť 2 objemami roztoku B bez NaCl. Elúcia sa dokončila aplikovaním jedného objemu roztoku C (50 mM MOPS s pH 7,5, 1 mM EDTA, 1 mM EGTA, 1 mM DTT, 1 mM benzamidínu HC1) prietokom 0,33 ml/min., potom zastavením prietoku na 1 hodinu pred dokončením elúcie. Približne 4 ml frakcie sa zozbierali a testovali na aktivitu PDE. Aktívne frakcie sa zhromaždili a koncentrovali na objem 5 ml použitím ultrafialového systému Amicon. Koncentrát sa potom aplikoval v 320 ml stĺpci obsahujúcom Sephacryl® S-300 (1,6 x 150 cm), ktorý sa vyrovnal aspoň 2 objemami roztoku D (25 mM MOPS s pH 7,5, 1 mM DTT, 1 mM benzamidínu HC1, 0,01 mM ZnSO4, 2 mM CaCl2 a 100 mM NaCl). Stĺpec sa vyvíjal prietokom 1 ml/min. (llcm/hod.) a zozbierali sa 5 ml frakcie. Najaktívnejšie frakcie sa zhromaždili a dialyzovali cez noc roztokom D obsahujúcim 50 % glycerolu. Očistený enzým sa zmrazil na suchom ľade a uskladnil pri teplote -70 °C. Výsledné prípravky boli čistoty vyššej ako 90 % podľa SDS-PAGE. Tieto prípravky mali špecifické aktivity okolo 10 až 30 pmol cGMP hydrolyzovaného za minútu na miligram proteínu.
Purifikácia PDE1C3 z buniek Sf9
Bunkové pelety (5 g) sa rozpustili na ľade s 20 ml lýzového roztoku (50 mM MOPS s pH 7,5, 10 pM ZnSO4, 0,1 mM CaCl2, 1 mM DTT, 2 mM benzamidínu HC1 a po 5 pg/ml pepstatínu, leupeptínu a aprotinínu). Bunky sa lýzovali prechodom cez pretlakovú bunku French® (SLM-Aminco®, Spectronic Instruments), pričom sa teploty udržiavali pod 10 °C. Výsledný bunkový homogenát sa 45 minút centrifugoval pri 36000 ot./min. v Beckmanovej ultracentrifúge použitím rotora typu TI45. Oddelil sa z neho supematant a výsledná peleta sa opätovne suspendovala v 40 ml solubilizačného roztoku (lýzový roztok obsahujúci 1 M
144
NaCl, 0,1 M MgCL, 1 mM CaCl2, 20 pg/ml kalmodulínu a 1 % sulfobetaínu SB12 (Z3-12)) ultrazvukovými vibráciami použitím tunera VibraCell s mikrohrotom počas 3 x 30 sekúnd. To sa vykonalo v zmesi rozdrveného ľadu a soli kvôli chladeniu. Po zamiešaní ultrazvukovými vibráciami sa zmes pomaly miešala počas 30 minút pri teplote 4 °C na dokončenie solubilizácie proteínov spojených membránou. Táto zmes sa centrifugovala v Beckmanovej ultracentrifúge použitím rotora typu T145 pri 36000 ot./min. počas 45 minút. Supernatant sa rozpustil v lýzovom roztoku obsahujúcom 10 pg/ml inhibítorov kalpaínu I a II. Vyzrážaný proteín sa centrifugoval počas 20 minút pri 9000 ot./min. v Beckmanovom rotore JA-10. Opätovne oddelený supernatant sa potom podrobil chromatografíi s použitím AP agarózy Mimetic Blue®.
Na spustenie stĺpca obsahujúceho AP agarózy Mimetic Blue® sa najprv živica odtienila aplikáciou 10 lôžkových objemov 1 % polyvinylpyrolidónu (t. j. 40000 MW) na zablokovanie nešpecifický viazaných polôh. Voľne viazaný PVP-40 sa oddelil premytím 10 lôžkovými objemami 2 M NaCl a 10 mM citranu sodného s pH 3,4. Tesne pred pridaním solubilizovanej vzorky PCE1C3 sa stĺpec vyrovnal 5 lôžkovými objemami kolónového roztoku A (50 mM MOPS s pH 7,4, 10 μΜ ZnSO4, 5 mM MgCL, 0,1 mM CaCl2, 1 mM DTT, 2 mM benzamidínu HCI).
Solubilizovaná vzorka sa aplikovala do stĺpca prietokom 2 ml/min. recirkulovaním tak, že celá vzorka sa aplikovala 4 až 5-krát za 12 hodín. Po skončení plnenia sa stĺpec premyl 10 kolónovými objemami kolónového roztoku A, potom 5 kolónovými objemami kolónového roztoku B (kolónový roztok A obsahujúci 20 mM 5’-AMP) a potom 5 kolónovými objemami kolónového roztoku C (50 mM MOPS s pH 7,4, 10 μΜ ZnSO4, 0,1 mM CaCl2, 1 mM DTT, 2 mM benzamidínu HCI). Enzým sa eluoval v troch po sebe nasledujúcich pooloch. Prvý pool pozostával z enzýmu z premývania 5 lôžkovými objemami kolónového roztoku C obsahujúceho 1 mM cAMP. Druhý pool pozostával z enzýmu z premývania 5 lôžkovými objemami kolónového roztoku C obsahujúceho 1 M NaCl. Posledný pool pozostával z enzýmu z premývania 5 lôžkovými objemami kolónového roztoku C obsahujúceho 1 M NaCl a 20 mM cAMP.
Aktívne pooly enzýmu sa zozbierali a odstránil sa z nich cyklický nukleotid prostredníctvom bežnej gélovej filtračnej chromatografie alebo chromatografie na hydroxyapatitových živiciach. Po odstránení cyklických nukleotidov sa enzýmové pooly dialyzovali v dialyzačnom roztoku obsahujúcom 25 mM MOPS s pH 7,4, 10 μΜ ZnSO4, 200 mM NaCl, 1 mM CaCI2, 1 mM DTT, 1 mM benzamidínu HCI, potom nasledovala dialýza cez dialyzačný roztok obsahujúci 50 % glycerolu. Enzým sa rýchlo zmrazil pomocou suchého ľadu a uskladnil pri teplote -70 °C.
Výsledné prípravky boli čistoty vyššej ako 90 % podľa SDS-PAGE. Tieto prípravky mali špecifické aktivity okolo 0,1 až 1,0 pmol cAMP hydrolyzovaného za minútu na miligram proteínu.
Purifikácia PDE2 z buniek S. cerevisiae
Zmrazené kvasnicové bunkové pelety kmeňa YI34 (lOg, uskladnené pri -70 °C) sa rozpustili na ľade v 25 ml lýzového roztoku (50 mM MOPS s pH 7,2, 1 mM EDTA, 1 mM EGTA, 0,1 mM DTT, 0,1 mM 4-(2-amino-etyl)benzénsulfonyl fluoridu (AEBSF), po 1 pg/ml pepstatínu, leupeptínu, aprotinínu, inhibítorov kalpaínu 1 a II a 2 mM benzamidínu). Bunky sa lýzovali troma prechodmi cez pretlakovú bunku French® (SLM-Aminco®, Spectronic Instruments). Lyzát sa potom 60 minút centrifugoval pri 36000 ot./min. v Beckmanovej ultracentrifúge použitím rotora typu 45Ti pri teplote 4 °C. Supematant sa oddelil od sedimentu a nechal dvakrát prejsť cez 15 ml živice Epoxy-cGMP Sepharos® pri teplote 4 °C prietokom približne 0,5 ml/min. Stĺpec sa následne premyl 45 ml premývacieho roztoku 1 (50 mM MOPS s pH 7,2, 0,1 mM EDTA, 0,1 mM DTT). Po tomto premytí sa stĺpec premyl 45 ml premývacieho roztoku 2 (premývací roztok 1 obsahujúci 0,5 M NaCl). Po tomto premytí v soľnom kúpeli sa stĺpec premyl 15 ml premývacieho roztoku 3 (premývací roztok 1 obsahujúci 0,25 M NaCl). Stĺpec sa premiestnil do izbovej teploty a nechal ohriať. Na stĺpec sa aplikovalo približne 25 ml eluovacieho roztoku (premývací roztok obsahujúci 10 mM cGMP, udržiavaný pri laboratórnej teplote) a výtok sa zozbieral v 2 ml frakciách. Malé alikvotné časti z každej z frakcií sa 20-násobne zriedili v PBS obsahujúcom 5 mM MgCl2, aby sa umožnila hydrolýza kompetitívneho ligandu, aby bolo možné detegovať aktivitu PDE2. Aktívne frakcie sa nechali prejsť cez gélový filtračný stĺpec Pharmacia PD-10®, aby sa premiestnil do premývaceho roztoku 3. Tento premiestnený pool sa zriedil na 50 % v/v sterilným 80%-ným glycerolom a uskladnil pri teplote -20 °C. Výsledné prípravky boli čistoty vyššej ako 85 % pri posudzovaní podľa SDS-PAGE s následným farbením proteínu pomocou Coomassie R-250. Tieto prípravky mali špecifické aktivity okolo 150 až 250 pmol cGMP hydrolyzovaného za minútu na miligram proteínu.
Príprava PDE3A z buniek Sf9
Bunky (2 x 1010) sa suspendovali v lýzovom roztoku obsahujúcom 50 mM MOPS s pH 7,5, 2 mM DTT, 2 mM benzamidínu HCI, 5 μΜ ZnSO4, 0,1 mM CaCl2, 20 μg/ml inhibítorov kalpaínu 1 a II a po 5 pg/ml leupeptínu, pepstatínu a aprotinínu. Na zmes sa dvakrát počas 30 sekúnd použili ultrazvukové vibrácie a bunky sa lýzovali v pretlakovej bunke French® (SLM-Aminco®, Spectronic Instruments) pri teplote 4 °C. Lyzát sa cenetrifugoval 100000 x g počas 45 minút. Peleta sa raz premyla v lýzovom roztoku a Dounceovým homo145 genizátorom suspendovala v 46 ml lýzového roztoku. Alikvotné časti sa uskladnili pri teplote -70 °C. Tieto prípravky mali špecifické aktivity okolo 1 až 2 nmol cAMP hydrolyzovaného za minútu na miligram proteíPríprava ľudských enzýmov PDE4A, 4B, 4C, 4D
Príprava PDE4A z buniek S. cerevisiae
Kvasnicové bunky (50 g kvasníc kmeňa YI26 obsahujúce HDUN1.46) sa roztopili pri laboratórnej teplote zmiešaním s 50 ml lýzového roztoku (50 mM MOPS s pH 7,5, 10 μΜ ZnSO4, 2 mM MgCL, 14,2 mM 2-merkaptoetanolu, po 20 pg/ml inhibítorov kalpaínu I a II a 2 mM benzamidínu HC1). Bunky sa lýzovali v pretlakovej bunke French® (SLM-Aminco®, Spectronic Instruments) pri teplote 10 °C. Extrakt sa potom 22 minút centrifugoval v Beckmanovom rotore JA-10 pri 9000 ot./min. a teplote 4 °C. Supernatant sa oddelil a 45 minút sa centrifugoval v Beckmanovom rotore TI45 pri 36000 ot./min. pri teplote 4 °C.
PDE4A sa vyzrážal z vysokorýchlostného supematantu pridaním tuhého síranu amónneho (0,26 g/ml supematantu) pri miešaní v ľadovom kúpeli a udržiavaní pH medzi 7,0 a 7,5. Vyzrážané proteíny obsahujúce PDE4A sa zozbierali centrifugovaním v Beckmanovom rotore JA-10 pri 9000 ot./min. počas 22 minút a pri teplote 4 °C. Precipitát sa opätovne suspendoval v 50 ml roztoku G (50 mM MOPS s pH 7,5, 10 μΜ ZnSO4, 5 mM MgCb, 100 mM NaCl, 14,2 mM 2-merkaptoetanolu, 2 mM benzamidínu HC1, po 5 pg/ml leupeptínu, pepstatínu a aprotinínu a po 20 pg/ml inhibítorov kalpaínu I a II) a prefiltroval cez 0,45 pm filter.
Resuspendovaná vzorka (50 až 100 ml) sa naplnila do 5 x 100 cm stĺpca obsahujúceho Pharmacia SEPHACRYL® S-300 vyrovnaného roztokom G. Aktivita enzýmu sa eluovala pri prietoku 2 ml/min. a potom sa zozbierala pre ďalšiu frakcionáciu.
PDE4A izolovaný gélovou filtračnou chramatografiou sa aplikoval v 1,6 x 20 cm stĺpci obsahujúcom agarózu Sigma Cibacron Blue - typ 300 (10 ml) vyrovnanom roztokom A (50 mM MOPS s pH 7,5, 10 μΜ ZnSO4, 5 mM MgCL, 14,2 mM 2-merkaptoetanolu a 100 mM benzamidínu HC1). Stĺpec sa postupne premyl 50 až 100 ml roztoku A, 20 až 30 ml roztoku A obsahujúceho 20 mM 5’-AMP, 50 až 100 ml roztoku A obsahujúceho 1,5 M NaCl a 10 až 20 ml roztoku C (50 mM TRIS HC1 s pH 8, 10 μΜ ZnSO4, 14,2 mM 2-merkaptoetanolu a 2 mM benzamidínu HC1). Enzým sa eluoval v 20 až 30 ml roztoku C obsahujúcom 20 mM cAMP.
Najaktívnejší enzým PDE sa zozbieral a vyzrážal síranom amónnym (0,33 g/ml enzýmového poolu), aby sa odstránil prebytočný cyklický nukleotid. Vyzrážané proteíny sa opätovne suspendovali v roztoku x (25 mM MOPS s pH 7,5, 5 μΜ ZnSO4, 50 mM NaCl, 1 mM DTT a 1 mM benzamidínu HC1) a odsotili gélovou filtráciou v stĺpci obsahujúcom Pharmacia PD-10® podľa pokynov výrobcu. Enzým sa rýchlo zmrazil v kúpeli zo suchého ľadu a etanolu a uskladnil pri teplote -70 °C.
Výsledné prípravky boli čistoty vyššej ako 80 % podľa SDS-PAGE. Tieto prípravky mali špecifické aktivity okolo 10 až 40 pmol cAMP hydrolyzovaného za minútu na miligram proteínu.
Príprava PDE4B z buniek S. cerevisiae
Kvasnicové bunky (150 g kvasníc kmeňa YI23 obsahujúceho HDUN2.32) sa rozpustili zmiešaním so 100 ml sklených guľôčok (0,5 mM, premyté kyselinou) a 150 ml lýzového roztoku (50 mM MOPS s pH 7,2, 2 mM EDTA, 2 mM EGTA, 1 mM DTT, 2 mM benzamidínu HC1, po 5 pg/ml pepstatínu, leupeptínu, aprotinínu, inhibítorov kalpaínu I a II) pri laboratórnej teplote. Zmes sa ochladila na 4 °C, premiestnila do BeadBeater® a bunky sa lýzovali rýchlym miešaním v 6 cykloch po 30 sekúnd. Homogenát sa centrifugoval počas 22 minút v Beckmanovej centrifúge J2-21M použitím rotora JA-10 pri 9000 ot./min. a teplote 4 °C. Supernatant sa oddelil a centrifugoval v Beckmanovej ultracentrifúge XL-80 použitím rotora typu TI45 pri 36000 ot./min. počas 45 minút a pri teplote 4 °C. Supernatant sa opätovne oddelil a PDE4B sa vyzrážal pridaním tuhého síranu amónneho (0,26 g/ml supematantu) pri miešaní v ľadovom kúpeli a udržiavaní pH medzi 7,0 a 7,5. Táto zmes sa potom centrifúgovala počas 22 minút v Beckmanovej centrifúge J2 použitím rotora JA-10 pri 9000 ot./min. (12000 x g). Supernatant sa oddelil a peleta sa rozpustila v 200 ml roztoku A (50 mM MOPS s pH 7,5, 5 mM MgCl2, 1 mM DTT, 1 mM benzamidínu HC1 a po 5 pg/ml leupeptínu, pepstatínu a aprotinínu). Hodnoty pH a vodivosti sa zodpovedajúco upravili na 7,5 a 15-20 mS.
Resuspendovaná vzorka sa naplnila do 1,6 x 200 cm stĺpca (25 ml) obsahujúceho agarózu Sigma Cibacron Blue - typ 300, ktorý bol vyrovnaný roztokom (pufrom) A. Vzorka sa nechala prejsť stĺpcom 4 až 6-krát v priebehu 12 hodín. Stĺpec bol postupne premytý 125 až 250 ml roztoku A, 125 až 250 ml roztoku A obsahujúceho 1,5 M NaCl a 25 až 50 ml roztoku A. Enzým sa eluoval 50 až 75 ml roztoku E (50 mM TRIS HC1 s pH 8, 2 mM EDTA, 2 mM EGTA, 1 mM DTT, 2 mM benzamidínu HC1 a 20 mM cAMP) a 50 až 75 ml roztoku E obsahujúceho 1 M NaCl. Najaktívnejší enzým PDE sa zozbieral a vyzrážal síranom amónnym (0,4 g/ml enzýmového poolu), aby sa odstránil prebytočný cyklický nukleotid. Vyzrážané proteíny sa resuspendovali v roztoku x (25 mM MOPS s pH 7,5, 5 μΜ ZnSO4, 50 mM NaCl, 1 mM DTT a 1 mM benzamidínu HC1) a odsolili gélovou filtráciou na stĺpci obsahujúcom Pharmacia PD-10® podľa pokynov výrobcu. Enzý146 mový pool sa cez noc dialyzoval cez roztok x obsahujúci 50 % glycerolu. Tento enzým sa rýchlo zmrazil v kúpeli zo suchého ľadu a etanolu a uskladnil pri teplote -70 °C.
Výsledné prípravky boli čistoty vyššej ako 90 % podľa SDS-PAGE. Tieto prípravky mali špecifické aktivity okolo 10 až 50 μιηοΐ cAMP hydrolyzovaného za minútu na miligram proteínu.
Príprava PDE4C z buniek 5. cerevisiae
Kvasnicové bunky (150 g kvasníc kmeňa Y130 obsahujúceho HDUN3.48) sa rozpustili zmiešaním so 100 ml sklených guľôčok (0,5 mM, premyté kyselinou) a 150 ml lýzového roztoku (50 mM MOPS s pH 7,2, 2 mM EDTA, 2 mM EGTA, 1 mM DTT, 2 mM benzamidínu HCI, po 5 pg/ml pepstatínu, leupeptínu, aprotinínu, inhibítorov kalpaínu I a II) pri laboratórnej teplote. Zmes sa ochladila na 4 °C, premiestnila do Bead-Beater® a bunky sa lýzovali rýchlym miešaním v 6 cykloch po 30 sekúnd. Homogenát sa centrifugoval počas 22 minút v Beckmanovej centrifúge J2-21M použitím rotora JA-10 pri 9000 ot./min. a teplote 4 °C. Supernatant sa oddelil a centrifugoval v Beckmanovej ultracentrifúge XL-80 použitím rotora typu TI45 pri 36000 ot./min. počas 45 minút a pri teplote 4 °C.
Supematant sa opätovne oddelil a PDE4C sa vyzrážal pridaním tuhého síranu amónneho (0,26 g/ml supernatantu) pri miešaní v ľadovom kúpeli a udržiavaní pH medzi 7,0 a 7,5. O tridsať minút neskôr sa táto zmes centrifugovala počas 22 minút v Beckmanovej centrifúge J2 použitím rotora JA-10 pri 9000 ot./min. (12000 x g). Supematant sa oddelil a peleta sa rozpustila v 200 ml roztoku A (50 mM MOPS s pH 7,5, 5 mM MgCl2, 1 mM DTT, 2 mM benzamidínu HCI a po 5 pg/ml leupeptínu, pepstatínu a aprotinínu). Hodnoty pH a vodivosti sa zodpovedajúco upravili na 7,5 a 15-20 mS.
Resuspendovaná vzorka sa naplnila do 1,6 x 200 cm stĺpca (25 mljobsahujúceho agarózu Sigma Cibacron Blue - typ 300, ktorý bol vyrovnaný roztokom A. Vzorka sa nechala prejsť stĺpcom 4 až 6-krát v priebehu 12 hodín. Stĺpec bol postupne premytý 125 až 250 ml roztoku A, 125 až 250 ml roztoku A obsahujúceho 1,5 M NaCl a potom 25 až 50 ml roztoku A. Enzým sa eluoval v 50 až 75 ml roztoku E (50 mM TRIS HCI s pH 8, 2 mM EDTA, 2 mM EGTA, 1 mM DTT, 2 mM benzamidínu HCI a 20 mM cAMP) a 50 až 75 ml roztoku E obsahujúceho 1 M NaCl. Najaktívnejší enzým PDE4C sa zozbieral a vyzrážal síranom amónnym (0,4 g/ml enzýmového poolu), aby sa odstránil prebytočný cyklický nukleotid. Vyzrážané proteíny sa resuspendovali v roztoku x (25 mM MOPS s pH 7,2, 5 μΜ ZnSO4, 50 mM NaCl, 1 mM DTT a 1 mM benzamidínu HCI) a odsolili gélovou filtráciou na stĺpci obsahujúcom Pharmacia PD-10® podľa pokynov výrobcu. Enzýmový pool sa cez noc dialyzoval v roztoku x obsahujúcom 50 % glycerolu. Tento enzým sa rýchlo zmrazil v kúpeli zo suchého ľadu a etanolu a uskladnil pri teplote -70 °C.
Výsledné prípravky boli čistoty vyššej ako 80 % podľa SDS-PAGE. Tieto prípravky mali špecifické aktivity okolo 10 až 20 pmol cAMP hydrolyzovaného za minútu na miligram proteínu.
Príprava PDE4D z buniek X cerevisiae
Kvasnicové bunky (100 g kvasníc kmeňa YI29 obsahujúceho HDUN4.il) sa rozpustili zmiešaním so 150 ml sklených guľôčok (0,5 mM, premyté kyselinou) a 150 ml lýzového roztoku (50 mM MOPS s pH 7,2, 10 μΜ ZnSO4, 2 mM MgCU, 14,2 mM 2-merkaptoetanolu, 2 mM benzamidínu HCI, po 5 pg/ml pepstatínu, leupeptínu, aprotinínu, inhibítorov kalpaínu I a II) pri laboratórnej teplote. Zmes sa ochladila na 4 °C, premiestnila do Bead-Beater® a bunky sa lýzovali rýchlym miešaním v 6 cykloch po 30 sekúnd. Homogenát sa centrifugoval počas 22 minút v Beckmanovej centrifúge J2-21M použitím rotora JA-10 pri 9000 ot./min. a teplote 4 °C. Supematant sa oddelil a centrifúgoval v Beckmanovej ultracentrifúge XL-80 použitím rotora typu TI45 pri 36000 ot./min. počas 45 minút a pri teplote 4 °C. Supematant sa opätovne oddelil a PDE4D sa vyzrážal pridaním tuhého síranu amónneho (0,33 g/ml supematantu) pri miešaní v ľadovom kúpeli a udržiavaní pH medzi 7,0 a 7,5. O tridsať minút neskôr sa táto zmes centrifugovala počas 22 minút v Beckmanovej centrifúge J2 použitím rotora JA-10 pri 9000 ot./min. (12000 x g). Supematant sa oddelil a peleta sa rozpustila v 100 ml roztoku A (50 mM MOPS s pH 7,5, 10 μΜ ZnSO4, 5 mM MgCU, 14,2 mM 2-merkaptoetanolu, 100 mM benzamidínu HCI a po 5 pg/ml leupeptínu, pepstatínu a aprotinínu, inhibítorov kalpaínu I a II). Hodnoty pH a vodivosti sa zodpovedajúco upravili na 7,5 a 15-20 mS.
Prietokom 0,67 ml/min. sa resuspendovaná vzorka naplnila do 1,6 x 200 cm stĺpca (10 ml) obsahujúceho agarózu Sigma Cibacron Blue - typ 300, ktorý bol vyrovnaný roztokom A. Stĺpec bol postupne premytý 50 až 100 ml roztoku A, 20 až 30 ml roztoku A obsahujúceho 20 mM 5’-AMP, 50 až 100 ml roztoku A obsahujúceho 1,5 M NaCl a potom 10 až 20 ml roztoku C (50 mM TRIS HCI s pH 8, 10 μΜ ZnSO4, 14,2 mM 2-merkaptoetanolu a 2 mM benzamidínu HCI). Enzým sa eluoval s 20 až 30 ml roztoku C obsahujúcom 20 mM cAMP.
Najaktívnejší enzým PDE4D sa zozbieral a vyzrážal síranom amónnym (0,4 g/ml enzýmového poolu), aby sa odstránil prebytočný cyklický nukleotid. Vyzrážané proteíny sa resuspendovali v roztoku x (25 mM MOPS s pH 7,2, 5 μΜ ZnSO4, 50 mM NaCl, 1 mM DTT a 1 mM benzamidínu HCI) a odsolili gélovou filtráciou na stĺpci obsahujúcom Pharmacia PD-10® podľa pokynov výrobcu. Enzýmový pool sa cez noc dialy147 zoval cez roztok x obsahujúci 50 % glycerolu. Tento enzýmový prípravok sa rýchlo zmrazil v kúpeli zo suchého ľadu a etanolu a uskladnil pri teplote -70 °C.
Výsledné prípravky boli čistoty vyššej ako 80 % podľa SDS-PAGE. Tieto prípravky mali špecifické aktivity okolo 20 až 50 pmol cAMP hydrolyzovaného za minútu na miligram proteínu.
Príprava PDE5 z buniek 5. cerevisiae
Bunkové pelety (29 g) sa rozpustili na ľade s rovnakým objemom lýzového roztoku (25 mM TRIS HCI s pH 8, 5 mM MgCU, 0,25 mM DTT, 1 mM benzamidínu HCI a 10 pM ZnSO4). Bunky sa lýzovali v mikrofluidizéri Microfluidizer® (Microfluidics Corp.) použitím dusíka pri 20000 psi. Lyzát sa centrifugoval a filtroval cez jednorazové 0,45 pm filtre. Filtrát sa aplikoval v 150 ml stĺpci obsahujúcom Q SEPHAROSE® Fast Flow (Pharmacia). Stĺpec sa premyl 1,5 objemom roztoku A (20 mM bis-tris propánu s pH 6,8, 1 mM MgCE, 0,25 mM DTT, 10 pM ZnSO4) a eluoval s krokovým gradientom 125 mM NaCl v roztoku A, po ktorom nasledoval lineárny gradient 125-1000 mM NaCl v roztoku A. Aktívne frakcie z lineárneho gradientu sa aplikovali na 180 ml stĺpec hydroxyapatitu v roztoku B (20 mM bis-tris propánu (pH 6,8), 1 mM MgCE, 0,25 mM DTT, 10 pM ZnSO4 a 250 mM KC1). Po naplnení sa stĺpec premyl 2 objemami roztoku B a eluoval s lineárnym gradientom 0-125 mM fosforečnanu draselného v roztoku B. Aktívne frakcie sa zhromaždili, vyzrážali 60 % síranom amónnym a resuspendovali v roztoku C (20 mM bis-tris propánu s pH 6,8, 125 mM NaCl, 0,5 mM DTT a 10 pM ZnSO4). Tento pool sa aplikoval v 140 ml stĺpci obsahujúcom SEPHACRYL® S-300 HR a eluoval v roztoku C.
Aktívne frakcie sa rozriedili 50 % glycerolom a uskladnili pri teplote -20 °C.
Výsledné prípravky boli čistoty okolo 85 % podľa SDS-PAGE. Tieto prípravky mali špecifické aktivity okolo 3 pmol cGMP hydrolyzovaného za minútu na miligram proteínu.
Príprava PDE7 z buniek S. cerevisiae
Bunkové pelety (126 g) sa rozpustili a suspendovali pri laboratórnej teplote počas približne 30 minút s rovnakým objemom lýzového roztoku (50 mM TRIS HCI s pH 8, 1 mM EDTA, 1 mM DTT, 50 mM NaCl, 2 mM benzamidínu HCI a po 5 pM/ml pepstatínu, leupeptínu a aprotinínu). Bunky sa lýzovali v BeadBeater® pri teplote 0 - 4 °C pomocou sklenených guľôčok (125 ml) v 6-tich 30 sekundových cykloch. Lyzát sa centrifugoval a filtroval cez jednorazové 0,45 pm filtre. Filtrovaný extrakt (178 ml) sa rozdelil do 4 ml alikvotných častí, rýchlo zmrazil suchým ľadom a uskladnil pri teplote -70 °C. Tieto prípravky boli stabilné počas niekoľkých cyklov zmrazovania a roztápania a mali špecifické aktivity približne 50 až 100 pmol cAMP hydrolyzovaného za minútu na miligram proteínu.
Lipopolysacharidom stimulované uvoľňovanie TNFa z ľudských periférnych krvných lymfocytov
Na posúdenie schopnosti zlúčeniny redukovať sekréciu TNFa v ľudských periférnych krvných lymfocytoch (PBL) sa vykonali nasledujúce testy. Predchádzajúce štúdie demonštrovali, že inkubácia ľudských PBL látkami zvyšujúcimi cAMP, ako sú napríklad prostagladín E21, forskolín, 8-bróm-cAMP alebo dibutryl-cAMP inhibuje sekréciu TNFa bunkami pri stimulovaní lipopolysacharidom (LPS; endotoxín). V súlade s uvedeným sa vykonali predbežné experimenty na demonštráciu toho, že selektívne inhibítory PDE4, ako sú rolípram, inhibujú LPS indukovanú sekréciu TNFa z ľudských lymfocytov spôsobom závislým od dávky. Preto sa sekrécia TNFa z ľudských PBL použila ako štandard pre schopnosť zlúčeniny zvýšiť intracelulárnu koncentráciu cAMP a/alebo potláčať aktivitu PDE4 v rámci bunky.
Heparinizovaná krv (približne 30 ml) odobratá od ľudí - dobrovoľníkov sa zmiešala v pomere 1 : 1 s Dulbeccovým modifikovaným fyziologickým roztokom pufrovaným fosfátom. Táto zmes sa zmiešala v pomere 1 : 1 s HISTOPAQUE® a centrifugovala pri 1500 ot./min. a pri laboratórnej teplote bez prerušenia v otočnej výkyvnej nádobe Beckmanovej centrifúgy modelu TJ6. Erytrocyty sa centrifugovali na dno skúmaviek a sérum zostalo na vrchu v skúmavkách. Vrstva obsahujúca lymfocyty sa usadila medzi vrstvami séra a HISTOPAQUE® a oddelila sa ašpiráciou do novej skúmavky. Bunky boli kvantifikované a upravené na 3 x 106 buniek/ml a 100 pl alikvotná časť sa umiestnila do misiek na platni s 96 miskami. Do každej misky zásobníka sa 15 minút pred pridaním bakteriálneho LPS (25 mg/ml) pridali testované zlúčeniny a média RPMI (Gibco/BRL Life Sciences). Zmes sa inkubovala počas 20 hodín pri teplote 37 °C vo zvlhčenej komore. Bunky sa potom separovali centrifugovaním pri 800 ot./min. počas 5 minút pri laboratórnej teplote. Alikvotná časť 180 pl supernatantu sa premiestnila na novú platňu na určenie koncentrácií TNFa. Proteín TNFa sa v kvapalinách bunkového supernatantu meral s použitím komerčne dostupného enzýmom viazaného imunosorbentného testu (ELISA) (súprava imunologického testu CYTOSKRÍN® od firmy Biosource International).
Testy na báze buniek poskytli nasledujúce výsledky pre rôzne zlúčeniny pyrolidínu tohto vynálezu. Hodnoty EC50 (t. j. účinná koncentrácia zlúčeniny schopná inhibovať 50 % celkového množstva TNFa) ilustrujú schopnosť týchto zlúčenín inhibovať LPS stimulované uvoľňovanie TNFa z ľudských PBL.
Uvedená tabuľka ilustruje schopnosť zlúčenín vzorca (II) inhibovať PDE4 aktivitu a uvoľňovanie TNFa in vitro. V nasledujúcej tabuľke sú hodnoty IC50 určené pre ľudský rekombinačný enzým PDE4.
148
Číslo vzorky1' Stereochémia PDE4 IC50 (M x nr9) PBL/TNFa EC50 (M x 10’9)
1 absolútna, ako je znázornená 87,0 1.205,8
2 absolútna, ako je znázornená 260,0 1.900,0
3 relatívna, stereochémia ako je znázornená; racemická 180,0 3.261,7
4 relatívna, stereochémia ako je znázornená; racemická 190,0 3.611,5
5 relatívna, stereochémia ako je znázornená; racemická 75,0 1.551,3
6 relatívna, stereochémia ako je znázornená; racemická 75,0 3.657,5
7 absolútna, ako je znázornená 5.800,0
8 absolútna, ako je znázornená 784,0 909,6
9 absolútna, ako je znázornená 13.000,0
10 absolútna, ako je znázornená 7.900,0
11 absolútna, ako je znázornená 3.700,0
12 absolútna, ako je znázornená 2.600,0
13 absolútna, ako je znázornená 1.000,0 2.339,5
14 absolútna, ako je znázornená 900,0 2.981,5
15 relatívna stereochémia, ako je znázornená; racemická, zmes éterických izomérov 4,3 108,8
16 relatívna stereochémia ako je znázornená; racemická, zmes éterických izomérov 7,3 46,4
17 absolútna, ako je znázornená 2.211,6 3.447,3
18 absolútna, ako je znázornená 1.027,3 5.101,6
19 absolútna, ako je znázornená 1.974,0 1.951,1
20 absolútna, ako je znázornená 536,0 170,0
21 absolútna, ako je znázornená 16,2 278,0
22 absolútna, ako je znázornená 520,4 164,0
23 absolútna, ako je znázornená 1.592,2
24 absolútna, ako je znázornená; zmes éterických izomérov 1,6 40,0
149
Číslo vzorky1’ Stereochémia PDE4 IC50 (M x 10’9) PBL/TNFa EC50 (M x 10’9)
25 absolútna, ako je znázornená; zmes éterických izomérov 2,8 12,2
26 absolútna, ako je znázornená; zmes éterických izomérov 35,0 106,0
27 absolútna, ako je znázornená; zmes éterických izomérov 1,8 36,0
28 absolútna, ako je znázornená 23,0 241,0
29 absolútna, ako je znázornená 4,9 78,0
30 absolútna, ako je znázornená 100,0 440,0
31 absolútna, ako je znázornená 3,6 35,0
32 absolútna, ako je znázornená 1.000,0 801,0
33 absolútna, ako je znázornená 2.100,0
34 absolútna, ako je znázornená 402,6 250,0
35 absolútna, ako je znázornená 35,6 20,3
36 absolútna, ako je znázornená 187,2 1.600,0
37 absolútna, ako je znázornená 0,768 72,0
38 absolútna, ako je znázornená 5,9 36,0
39 absolútna, ako je znázornená 2,7 48,1
40 absolútna, ako je znázornená 98,4 139,1
41 absolútna, ako je znázornená 27,0 266,9
42 absolútna, ako je znázornená 7,5 171,7
43 absolútna, ako je znázornená 12,5 145,8
44 absolútna, ako je znázornená 41,2 238,0
45 absolútna, ako je znázornená 247,6 694,0
46 absolútna, ako je znázornená 1.805,9 13.317,0
47 absolútna, ako je znázornená 2.727,4 20.000,0
48 absolútna, ako je znázornená 89,7 446,0
49 absolútna, ako je znázornená 14,3 26,2
50 absolútna, ako je znázornená 44,8 151,2
51 absolútna, ako je znázornená 44,7 72,6
150
Číslo vzorky» Stereochémia PDE4 IC50 (Mx ÍO’9) PBL/TNFa ECS0 (M x 10’9)
52 absolútna, ako je znázornená 26,7
53 absolútna, ako je znázornená; zmes izomérov tetrahydrofurylu 116,3 112,6
54 absolútna, ako je znázornená; zmes kyseliny 2,2-dimety 1-4oxo-4-pyrolidín-l-yl-maslovej a amidu kyseliny 3,3-dimetyl-4oxo-4-pyrolidín-l-yl-maslovej 464,7
55 absolútna, ako je znázornená 1.842,1
56 absolútna, ako je znázornená 4,0
57 absolútna, ako je znázornená 95,6
58 absolútna, ako je znázornená
59 racemická, relatívna stereochémia ako je znázornená 58,0 170,0
60 racemická, relatívna stereochémia ako je znázornená 74,0 44,0
61 racemická; relatívna stereochémia ako je znázornená 18,3 57,8
62 racemická, relatívna stereochémia ako je znázornená 6,8 10,2
63 racemická, relatívna stereochémia ako je znázornená, racemický zvyšok nonbornylu 51,4 267,4
64 racemická, relatívna stereochémia ako je znázornená, racemický zvyšok nonbornylu 8,5 36,2
65 racemická, relatívna stereochémia ako je znázornená 220,0 181,0
66 úplná stereochémia ako je znázornená 14,0 71,6
67 úplná stereochémia ako je znázornená 514,7 603,3
68 úplná stereochémia ako je znázornená 61,1 169,9
69 absolútna stereochémia ako je znázornená 13,3 57,0
151
Číslo vzorky1' Stereochémia PDE4 1C5O (M x 10'9) PBL/TNFa EC5o (M x 10-9)
70 absolútna stereochémia ako je znázornená; jednoduchý nedefinovaný 1 izomér alkoholu 498,5 547,2
71 absolútna stereochémia ako je znázornená; jednoduchý nedefinovaný 2 izomér alkoholu 1.707,2
72 absolútna, ako je znázornená 2.452,6
73 absolútna, ako je znázornená 9.131,0
74 absolútna, ako je znázornená 352,3 557,3
75 absolútna, ako je znázornená 45,1 121,0
76 absolútna, ako je znázornená 36,6 173,0
77 absolútna, ako je znázornená 188,7 580,0
78 absolútna, ako je znázornená 760,1 1.288,6
79 absolútna, ako je znázornená 1.639,0 2.366,6
80 absolútna, ako je znázornená 300,0 272,4
81 absolútna, ako je znázornená 700,0 624,8
82 absolútna, ako je znázornená 389,8 490,0
83 absolútna, ako je znázornená 172,0 51,0
84 absolútna, ako je znázornená 21,7 40,0
85 absolútna, ako je znázornená 3.576,8
86 absolútna, ako je znázornená 6.077,6
87 absolútna, ako je znázornená 896,6 934,4
88 absolútna, ako je znázornená 953,4 629,5
89 absolútna, ako je znázornená 699,0 860,0
90 absolútna, ako je znázornená 69,4 61,0
91 absolútna, ako je znázornená 150,0 44,0
92 absolútna, ako je znázornená 439,4
93 absolútna, ako je znázornená 33,1 7,8
94 absolútna stereochémia ako je znázornená 238,2 1.800,0
11 Štruktúra každej vzorky je uvedená v prílohe A.
152
Uvedené údaje ukazujú, že prezentované zlúčeniny sú účinnými inhibítormi PDE4, napr. zlúčeniny majú IC5o pre ľudský rekombinačný PDE4 enzým približne od 700 pM do 15 pm. Preferované zlúčeniny majú 1C5O približne 100 nM alebo menej a obzvlášť preferované zlúčeniny majú 1C5O okolo 50 nM alebo menej.
Podobne majú preferované zlúčeniny PBL/TNFa EC50 približne 500 nM alebo menej a prednostne okolo 200 nM alebo menej. Preferovanejšie zlúčeniny majú PBL/TNFa EC50 okolo 100 nM alebo menej.
Zlúčeniny, poskytujúce plné výhody tohto vynálezu, majú IC50 pre ľudský rekombinačný PDE4 okolo 100 nM alebo menej a PBL/TNFa EC50 okolo 500 nM alebo menej. Ešte výhodnejšie zlúčeniny majú IC50 okolo 50 nM alebo menej a PBL/TNFa EC50 okolo 100 nM alebo menej.
Živočíšne modely
Test na inhibíciu hladín TNFa v sére u cicavcov (myš/TNFa ED50 (mg/kg))
Na posúdenie schopnosti zlúčeniny redukovať hladiny TNFa v sére u cicavcov sa použil nasledujúci protokol. Odborníci v danom odbore uznajú, že predchádzajúce štúdie demonštrovali, že inkubácia LPS aktivovaných ľudských monocytov látkami zvyšujúcimi hladinu cAMP, ako sú napríklad PGE2, forskolín a dbcAMP, inhibovala sekréciu TNFa. Zistilo sa, že inhibítory PDE4 ako rolipram, ktoré taktiež zvyšujú hladinu cAMP, taktiež inhibujú sérový TNFa. Zistilo sa, že rolipram taktiež inhibuje sekréciu TNFa z LPS aktivovaných myších makrofágov. V súlade s uvedeným, in vivo účinnosť zlúčeniny redukujúcej PDE4 sa preukázala dávkovaním zlúčeniny a meraním redukcie hladín TNFa v sére pri myšiach, ktorým bol injekciou podaný LPS. Samice myší C3H, s telesnou hmotnosťou 20 - 25 g, nedostali po celú noc jedlo a intraperitoneálne im bola podaná testovaná zlúčenina v príslušnej pomocnej látke 60 minút pred podaním injekcie LPS. Myšiam bolo potom injekčné podaných intraperitoneálne päť pg LPS. Deväťdesiat minút po podaní injekcie s LPS bola myšiam odobratá krv zo srdca. Krv sa nechala cez noc koagulovať pri teplote 4 °C. Vzorky sa centrifugovali počas 10 minút v mikrocentrifúge, sérum sa oddelilo a uložilo pri teplote -20 °C až do analýzy. Následne sa zmerali hladiny TNFa v sére použitím komerčne dostupnej súpravy ELISA (Genzyme) podľa protokolu priloženého k súprave. Percentuálna časť inhibície hladín TNFa v sére danou zlúčeninou sa určila vo vzťahu k hladinám TNFa v sére pri kontrolnej skupine myší, ktorým sa podávala len samotná pomocná látka.
Kombinovaný test uvoľňovania endotoxínom stimulovaného TNFa a lokomotorickej aktivity myší (ED50 (mg/kg))
Účelom tejto štúdie bolo určiť účinnosť inhibítorov PDE4 in vivo u myšieho modelu LPS spolu s určením vedľajších účinkov na centrálnu nervovú sústavu (CNS), ktoré sa prejavujú poklesom spontánnej mobility.
Pokusnými zvieratami boli samice myší Balb/c s priemernou hmotnosťou okolo 20 g. Inhibítory PDE4, pripravené v 30 % Cremophor® EL, im boli podávané intraperitoneálnymi injekciami (i. p.) v dávkach 0,1; 1,0; 10,0 a 100 mg/kg. Jednotlivé objemy dávok (okolo 150 pl) boli upravené na základe skutočných telesných hmotností. O hodinu neskôr každé zviera dostalo injekciu do chvostovej žily obsahujúcu 5 mg/kg LPS v 200 pl konečného objemu. Deväťdesiat minút po podaní LPS sa zvieratám odobrala krv a odobrali sa vzorky séra pred uskladnením pri teplote -70 °C až do vykonania testu.
Na účely určenia účinnosti sa vzorky séra dvojnásobne zriedili a určili sa hladiny TNFa použitím súpravy imunologického testu CYTOSKRIN® (Biosource International). Údaje sa spriemerovali za tri vzorky pre každú testovanú zlúčeninu.
Kvantifikovali sa pohyby na súradnicovej rovine alebo stavanie sa na zadné labky počítaním počtov prejdených „svetelných lúčov” za jednotku času. Pokles počtu prípadov aktivity je priamo úmerný mobilite alebo imobilizácii zvieraťa. Kvantitatívne bodové ohodnotenie dobre korelovalo s vyššie opísanými subjektívnymi meraniami.
Nasledujúca tabuľka sumarizuje výsledky TNFa ED50 (mg/kg) pri myšiach získané uvedeným spôsobom:
153
číslo vzorky ’’ myš/TNFa ED50 (mg/kg) ED50 (mg/kg)3)
29 -- 9,8
31 3 83
61 0,2 >50
62 0,08 >50
66 5 >50
67 >50
68 12 20
69 7 <0,5
3) účinná dávka, v mg/kg, ktorá znižuje spontánnu mobilitu na 50 % kontroly.
Taktiež sa ukázalo, že zlúčeniny vzorca (II) majú menej vedľajších účinkov na centrálny nervový systém v porovnaní s rolipramom a zlúčeninami uvedenými v U.S. patente 5665754 Feldmanna et al. Taktiež sa zistilo, že aktivita centrálneho nervového systému súvisí s absolútnou stereochémiou prezentovaných zlúčenín.
Je známe, že stereoizoméry liečiv môžu mať značne rozdielne biologické pôsobenie, napr. účinnosť liečiva, selektívitu, absorpciu, distribúciu, metabolizmus, realizáciu a profily vedľajších účinkov. V rámci tohto vynálezu sa testovali enantioméry a diastereoméry, ktoré sú reprezentované zlúčeninami (A) - (D) uvedenými v nasledujúcej tabuľke, na účinky in vitro PDE aktivitu, uvoľňovanie LPS/TNFa z ľudských periférnych krvných lymfocytov (PBL), mobilitu myší a emézu (zvracanie) fretiek.
Ako je uvedené v nasledujúcej tabuľke, zlúčeniny (C) a (A) (t. j. vzorky 66 a 69) majú podobnú inhibíciu PDE4 a LPS stimulovaného uvoľňovania TNFa, ale značne rozdielne profily behaviorálneho správania. Zlú15 ceniny (C) a (A), ktoré majú menšiu aktivitu na CNS, sú odvodené z hlavného produktu [3+2] cyklizácie azometín ylidu na chirálny α,β- nenasýtený amid. Z toho vyplýva, že absolútna stereochémia inhibítora PDE4 tohto vynálezu značne prispieva k behaviorálnemu profilu zlúčeniny.
154
príklady zlúčenina PDE4 1C5O (nM) myš/TNFa ED50(mg/kg) vedľajšie účinky na CNS1’
(A) HO cCO^ 1 13,3 7 výrazné
(C) HO,,/ 14,0 5 bez účinkov
(B) HO,, / o σρο 61,1 12 bez účinkov
(D) HO v/ 1 514,7 bez účinkov
Vzorka č. 62 Ηοχ/ 6,8 0,08 slabé až žiadne účinky (pri 50 mg/kg)
Vzorka č. 61 H°Y^ 18,3 0,2 slabé až žiadne účinky (pri 50 mg/kg)
*’ Vedľajšie účinky na CNS sa určili na základe subjektívneho hodnotenia imobility myši po injekčnom podaní zlúčenín i. p. pri dávkach 1, 10 a 100 mg/kg. Hodnotenie mobility (alebo jej nedostatok) sa hodnotili sledovaním týchto znakov: znížené prieskumné správanie sa, nafúknuté držanie tela, ležiaca na zemi, naježe10 ná srsť a podobne. Pri zlúčeninách príkladu 8, 8(C), 8(D) a 8(B) neboli pozorované žiadne zjavné účinky počas 60 minút pozorovania. Ale v prípade podania každej dávky zlúčeniny príkladu 8(A) boli myši postihnuté.
155
Navyše pri najvyššej dávke zlúčeniny príkladu 8(A) myši boli na pokraji smrti a v priebehu 10 minút po aplikácii uhynuli.
Prezentované údaje dokazujú, že zlúčeniny vzorca (II) sú účinnými a selektívnymi inhibítormi PDE4. Ďalším dôležitým prínosom je, že zlúčeniny vzorca (II) taktiež redukovali alebo eliminovali nepriaznivé vedľajšie účinky spojené s predchádzajúcimi inhibítormi PDE4. Zlúčeniny vzorca (II) sa ďalej testovali na emetogenické vlastnosti pri živočíšnych modeloch na ďalšiu ilustráciu účinnosti zlúčenín. Neskôr je uvedený spôsob a výsledky emetogenického testu (testu vyvolania vracania).
Emetické modelovanie pri fretkách po perorálnom a intravenóznom podaní selektívnych inhibítorov PDE4
Táto štúdia sa vykonala na vyšetrenie emetogenických vlastností in vivo inhibítorov PDE4. Fretky sa ukázali ako hodnotný nástroj na zhodnotenie emézy po vystavení účinku testovaných zlúčenín. Predchádzajúce štúdie naznačili, že emetická reakcia fretiek na mnohé inhibítory PDE4 sa dá predpokladať aj u ľudí vystavených účinku rovnakých testovaných zlúčenín. Preto neexistencia a/alebo klesanie emetického potenciálu testovaných zlúčenín pri fretkách predikuje priaznivé neemetické účinky u ľudí. Eméza (vracanie) je komplexná fyziologická reakcia na škodlivé látky, ktoré sa môžu iniciovať periferálne alebo centrálne. Preto sa PDE4 selektívne látky testovali tak pri intravenóznom ako aj pri perorálnom podávaní.
Pokusnými zvieratami boli dospelé, vykastrované samce fretiek s rodokmeňom (druhu Mustela putorius furo, rodu Šable) s hmotnosťou približne od 1 do 1,5 kg. Testy sa vykonali štyrikrát za sebou na zvieratách, na ktorých ešte neboli uskutočnené žiadne testy na inhibítory PDE4. Inhibítory PDE4 sa pripravili v 10 % ricínovom oleji Polyoxyl 35 (CREMOPHOR® EL, ktorý je možné dostať v spoločnosti BASF Corporation, Parsippany, NJ) vo fyziologickom roztoku pufŕovanom fosfátom (PBS) a boli podávané prostredníctvom i. v. injekcií cez dočasný katéter chirurgicky zavedený do pravej externej hrdlovej žily pri prietoku 0,66 ml na kg telesnej hmotnosti. Inhibítory PDE4 na perorálne podávanie boli pripravené v 30 % CREMOPHOR® EL v PBS a podávané zvieratám intubáciou 16-kou dávkovacou ihlou do žalúdka. Zvieratá dostávali inhibítory PDE4 v objeme 1,33 ml na kg telesnej hmotnosti.
Všetky zvieratá nedostali jesť 8 až 12 hodín pred podaním inhibítorov PDE4. Po podaní inhibítora PDE4 sa kvantifikovali emetické a behaviorálne reakcie počas troch hodín po podaní inhibítora. Počas sledovaného intervalu sa kvantifikoval celkový počet emetických reakcií a emetických epizód. Okrem toho sa zaznamenávala latentná doba po prvé zvracanie, trvanie emetických epizód a celkové behaviorálne zmeny, vrátane ataxie (poruchy koordinácie pohybov), profúznej a viskóznej salivácie (výdatného slinenia), tuho zovretá čeľusť, hyperventilácie, spätkovania, skrúšeného držania tela, hyperaktivity, olizovania papule a celkového vzhľadu.
Na komparatívne účely sa testoval emetogenický účinok vzoriek 66 a 69 podávaných intravenózne v dávkach 1,0; 2,5; 5,0 a 10 mg/kg alebo perorálne v dávkach 2,5; 10, 17 a 25 mg/kg. Výsledky sú zhrnuté v nasledujúcej tabuľke:
KOMPARATÍVNE VÝSLEDKY
zlúčenina (A) (vzorka 69) počet emetických prípadov
perorálne (mg/kg) zvracania záchvaty dávenia spolu reagujúce zvieratá
2,5 0 0 0 0/4
10,0 5 27 32 3/4
17,0 7 51 58 3/4
25,0 26 88 114 4/4
intravenózne (mg/kg) zvracania záchvaty dávenia spolu reagujúce zvieratá
1,0 0 0 0 0/4
2,5 0 3 3 3/4
5,0” 0 300 300 2/2
10,0 - - - -
156
KOMPARATÍVNE VÝSLEDKY
zlúčenina (C) (vzorka 66) počet emetických prípadov
perorálne (mg/kg) Zvracania záchvaty dávenia spolu reagujúce zvieratá
2,5 0 0 0 0/4
10,0 8 14 22 2/4
17,0 1 17 18 2/3
25,0 12 61 73 4/4
intravenózne (mg/kg) Zvracania záchvaty dávenia spolu reagujúce zvieratá
1,0 0 0 0 0/4
2,5 0 0 0 0/4
5,0° 0 10 10 2/4
10,0 4 27 31 4/4
*’ Intravenózne sa podali dávky s 5 mg/kg zlúčeniny (A) len dvom fretkám kvôli veľmi prudkým reakciám. Preto sa 10 mg/kg dávka zlúčeniny príkladu 8 (A) neaplikovala intravenózne.
Vo všeobecnosti obidve zlúčeniny (C) a (A) podávané buď perorálne, alebo prostredníctvom intravenóznych injekcií mali jasnú reakciu emetického správania v závislosti od veľkosti dávky. Zlúčenina (A) vyvolala omnoho silnejšiu emetickú reakciu ako zlúčenina (C). To bolo okamžité zrejmé z porovnania reakcií na perorálne podávanie zlúčenín. Napríklad dávka 25 mg/kg telesnej hmotnosti zlúčeniny (A) vyvolala viac epizód napínania na zvracanie a zvracania ako rovnaká perorálna dávka zlúčeniny (C). Okrem toho bol aj počet napínaní na zvracanie a zvracaní v rámci jednej epizódy omnoho vyšší pri zlúčenine (A) ako pri zlúčenine (C) v rámci skupiny s rovnakou dávkou. Podobný trend bol zrejmý aj pri perorálnych dávkach 17 a 11 mg/kg telesnej hmotnosti, kedy zlúčenina (A) mala silnejšie reakcie ako zlúčenina (C). Pri skupinách s najnižšou dávkou obidvoch molekúl sa nepozorovali žiadne zjavné rozdiely. V týchto prípadoch sa prejavovalo mierne olizovanie papule resp. zovretá čeľusť, ale nepozorovali sa žiadne emetické reakcie.
Výsledky perorálneho podávania sa výrazne líšili od intravenózneho podávania. Pri intravenóznej dávke 5 mg/kg telesnej hmotnosti zlúčeniny (A) jedno z pokusných zvierat zahynulo takmer okamžite po podaní dávky (do 5 minút), zatiaľ čo druhé zviera bolo jasne vyčerpané, ale po 3 hodinách sa zotavilo. Vyčerpanie je možné pripísať buď akútnej toxicite, alebo prehnanej farmakologickej reakcii na centrálne vyvolanú emézu. Taktiež sa spozorovalo, že sťažené a problematické dýchanie zvierat s touto dávkou bolo ťažké odlíšiť od chovania pri extrémnom napínaní na zvracanie. Účinky neboli také výrazné pri intravenóznom podávaní zlúčeniny (C), o čom svedčí uvedená tabuľka. Hoci všetky zvieratá mali emetické správanie pri dávke 10 mg/kg telesnej hmotnosti zlúčeniny (C), žiadne z nich nevykazovali vyčerpanosť spojenú s dávkou 5 mg/kg zlúčeniny (A). S výnimkou dávky 5 mg/kg telesnej hmotnosti zlúčeniny (A) sa všetky zvieratá zotavili z liečby a javili sa normálne.
zlúčenina príkladu 101 zlúčenina príkladu 264 zlúčenina príkladu 109 zlúčenina príkladu 268 zlúčenina príkladu 195
pokus
PDE4B IC50 (μΜ) 0,011 0,003 0,02 0,015 0,007
Bunkovo založená EC50 (μΜ) 0,03 0,010 0,03 0,006 0,03
ED50 pre myší LPS (mg/kg) 3 1 5 5 9
inhibícia spontánnej pohyblivosti myši EDS0 (mg/kg) 100 <100 100 100 100
Výsledky zhrnuté v uvedenej tabuľke dokazujú, že zlúčeniny tohto vynálezu sú užitočné pri selektívnej inhibícii aktivity PDE4 u cicavcov bez vykazovania nepriaznivých vedľajších účinkov na CNS a emetických účinkov spojených s predchádzajúcimi inhibítormi PDE4.
Je zrejmé, že je možné vyrobiť viacero modifikácií a variácií tohto vynálezu bez toho, aby sme sa odchýlili od ducha a predmetu tohto vynálezu, a preto je možné uložiť len také obmedzenia, ako sú indikované v priložených patentových nárokoch.
157
PRÍLOHA A
Vzorka č. 1
Vzorka č. 2
Vzorka č. 3
Vzorka č. 4
158
Vzorka č. 5
Vzorka č. 6
Vzorka č. 7
Vzorka č. 8
159
Vzorka č. 9
Vzorka č. 10
Vzorka č. 11
Vzorka č. 12
.O.
160
Vzorka č. 13
Vzorka č. 14
Vzorka č. 15
Vzorka č. 16
161
Vzorka č. 17
Vzorka č. 18
Vzorka č. 19
Vzorka č. 20
CTCT >
162
Vzorka č. 21
Vzorka č. 22
Vzorka č. 23
Vzorka č. 24
163
Vzorka č. 25
Vzorka č. 26
Vzorka č. 27
Vzorka č. 28
HO.
c'
ΟΙ 64
Vzorka č. 29
Vzorka č. 30
Vzorka č. 31
Vzorka č. 32
165
Vzorka č. 33
Vzorka č. 34
Vzorka č. 35
166
Vzorka č. 37
Vzorka č. 38
Vzorka č. 39
Vzorka č. 40 H0
167
Vzorka č. 41
Vzorka č. 42
Vzorka č. 43
Vzorka č. 44
168
Vzorka č. 45
Vzorka č. 46
Vzorka č. 47
Vzorka č. 48
169
Vzorka č. 49
Vzorka č. 50
Vzorka č. 51
Vzorka č. 52
170
Vzorka č. 53
Vzorka č. 54
Vzorka č. 55
Vzorka č. 56
171
Vzorka č. 57
Vzorka č. 58
Vzorka č. 59
Vzorka č. 60
HO,../- '
172
Vzorka č. 61
Vzorka č. 62
Vzorka č. 63
Vzorka č. 64
Vzorka č. 65
173
Vzorka č. 66
Vzorka č. 67
Vzorka č. 68
Vzorka č. 69
174
Vzorka č. 70
Vzorka č. 71
Vzorka č. 72
Vzorka č. 73
175
Vzorka č. 74
Vzorka č. 75
Vzorka č. 76
Vzorka č. 77
176
Vzorka č. 78
Vzorka č. 79
Vzorka č. 80
Vzorka č. 81
177
Vzorka č. 82
Vzorka č. 83
Vzorka č. 84
Vzorka č. 85
178
Vzorka č. 86
Vzorka č. 87
Vzorka č. 88
Vzorka č. 89
179
Vzorka č. 90
Vzorka č. 91
Vzorka č. 92
Vzorka č. 93
180
Vzorka č. 94
181

Claims (2)

  1. PATENTOVÉ NÁROKY 1. Deriváty pyrolidínu vzorca:
    kde R1 je vybrané zo skupiny, ktorú tvorí C|.4, C6.l6 bicyklický, alebo polycyklický uhlovodík, aryl, cykloalkyl, 4-, 5- alebo 6-členný nasýtený heterocyklus, heteroaryl, CM alkylénaryl, C,_4 alkylén-O-aryl, C,.4 alkylén-heteroaryl, C,.4 alkylénHet, C2_4 alkylénaryl-O-aryl, C[.4 alkylénom premostený alkyi, CM alkyléncykloalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný propargyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alyl a halogéncykloalkyl;
    R' je vybraný zo skupiny, ktorú tvorí metyl alebo halogénom substituovaný metyl,
    R3 je vybrané zo skupiny, ktorú tvorí C(=O)OR7, C(=O)R7, NHC(=O)OR7, C|., alkylénC(=O)OR8, C,_ .,alkylénC(=O)R8, C(=NH)NRSR9, C(=O)C(=O)C(=O)OR8, C,.4alkylén-OR8, aryl, C^alkylénaryl, C,.3 alkylénheteroaryl, SO2-heteroaryl, Het a heteroaryl;
    R4 je vybrané zo skupiny, ktorú tvorí vodík, C^ alkyi, halogénalkyl, alebo cykloalkyl;
    R5 je vybrané zo skupiny, ktorú tvorí vodík, C|.6 alkyi, alkinyl, halogénalkyl, hydroxyalkyl, cykloalkyl alebo aryl;
    R6 je vybrané zo skupiny, ktorú tvorí vodík, C[.6 alkyi a C(=O)R7;
    R7 je vybrané zo skupiny, ktorú tvorí C|.6 alkyi, alebo cykloalkyl, z ktorých každý je prípadne substituovaný jedným alebo viacerými substituentmi zo skupiny OC(=O)R8, C(=O)OR8, OR8, NR8R9 alebo SR8;
    R8 a R9, rovnaké alebo rôzne, sú vybrané zo skupiny, ktorú tvorí vodík, Ci_6 alkyi, cykloalkyl, aryl, heteroaryl, C(=O)Oalkyl, C(=O)Oaryl, C(=O)alkyl, alkyl-SO2, halogénalkylSO2, C(=O)-Ci., alkylénaryl, C(=O)OCi.4 alkylénaryl, Cm alkylénaryl alebo Het, alebo R8 a R9 spolu tvoria 4-členný až 7-členný kruh;
    R10 je vybrané zo skupiny, ktorú tvorí vodík, alkyi, halogénalkyl, alebo cykloalkyl,
    R11 je vybrané zo skupiny, ktorú tvorí alkyi, cykloalkyl, trifluórmetyl, aryl, aralkyl a NR8R9; ajej soli a solváty.
  2. 2. Zlúčenina podľa nároku 1, ktorá má štruktúru;
SK917-2002A 1999-12-23 2000-11-28 Pyrrolidine derivatives as cyclic amp-specific phosphodiesterase inhibitors SK287964B6 (sk)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US09/471,846 US6258833B1 (en) 1999-12-23 1999-12-23 Cyclic AMP-specific phosphodiesterase inhibitors
PCT/US2000/032401 WO2001047905A1 (en) 1999-12-23 2000-11-28 Pyrrolidine derivatives as cyclic amp-specific phosphodiesterase inhibitors

Publications (2)

Publication Number Publication Date
SK9172002A3 SK9172002A3 (en) 2002-11-06
SK287964B6 true SK287964B6 (sk) 2012-07-03

Family

ID=23873210

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SK917-2002A SK287964B6 (sk) 1999-12-23 2000-11-28 Pyrrolidine derivatives as cyclic amp-specific phosphodiesterase inhibitors

Country Status (29)

Country Link
US (6) US6258833B1 (sk)
EP (1) EP1242400B1 (sk)
JP (1) JP4294903B2 (sk)
KR (1) KR20020063600A (sk)
CN (1) CN1434813A (sk)
AT (1) ATE325108T1 (sk)
AU (1) AU778543B2 (sk)
BG (1) BG65892B1 (sk)
BR (1) BRPI0016693B1 (sk)
CA (1) CA2395193C (sk)
CZ (1) CZ20022188A3 (sk)
DE (1) DE60027769D1 (sk)
EA (1) EA005686B1 (sk)
EE (1) EE05087B1 (sk)
GE (1) GEP20043384B (sk)
HK (1) HK1051359A1 (sk)
HR (1) HRP20020541B1 (sk)
HU (1) HUP0301113A3 (sk)
IL (1) IL150313A0 (sk)
IS (1) IS6436A (sk)
MX (1) MXPA02006212A (sk)
NO (1) NO20023008L (sk)
PL (1) PL202227B1 (sk)
RS (1) RS50841B (sk)
SK (1) SK287964B6 (sk)
TR (1) TR200400702T4 (sk)
UA (1) UA73964C2 (sk)
WO (1) WO2001047905A1 (sk)
ZA (1) ZA200205551B (sk)

Families Citing this family (53)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6455571B1 (en) * 1998-04-23 2002-09-24 Abbott Laboratories Inhibitors of neuraminidases
US6258833B1 (en) * 1999-12-23 2001-07-10 Icos Corporation Cyclic AMP-specific phosphodiesterase inhibitors
US20010049368A1 (en) * 2000-02-29 2001-12-06 Reines Scott A. Method for treating or preventing depression
WO2002002500A1 (en) * 2000-07-03 2002-01-10 Speedel Pharma Ag Preparation of (r)-2-alkyl-3-phenylpropionic acids
US6953774B2 (en) * 2000-08-11 2005-10-11 Applied Research Systems Ars Holding N.V. Methods of inducing ovulation
WO2002047540A2 (en) * 2000-12-15 2002-06-20 The General Hospital Corporation Methods for inhibiting fibrosis
US20040014099A1 (en) * 2001-03-19 2004-01-22 Decode Genetics Ehf. Susceptibility gene for human stroke; methods of treatment
US20030073711A1 (en) * 2001-08-23 2003-04-17 Whitehead Clark M. Methods for treatment of scleroderma
US6479493B1 (en) 2001-08-23 2002-11-12 Cell Pathways, Inc. Methods for treatment of type I diabetes
KR100951218B1 (ko) 2001-10-16 2010-04-05 메모리 파마슈티칼스 코포레이션 신경계 증후군의 치료를 위한 ｐｄｅ-4 억제제로서의4-(4-알콕시-3-히드록시페닐)-2-피롤리돈 유도체
KR101056916B1 (ko) 2001-12-14 2011-08-12 라보라토리스 세로노 에스.에이. 비폴리펩티드 고리에이엠피 레벨 모듈레이터를 이용한 배란유도 방법
MY140561A (en) * 2002-02-20 2009-12-31 Nycomed Gmbh Dosage form containing pde 4 inhibitor as active ingredient
DE10228132A1 (de) * 2002-06-24 2004-01-22 Arzneimittelwerk Dresden Gmbh Amide cyclischer Aminosäuren als PDE 4 Inhibitoren
PL1606261T3 (pl) 2003-03-10 2010-04-30 Astrazeneca Ab Nowy sposób przygotowania roflumilastu
CN1805929A (zh) * 2003-04-16 2006-07-19 记忆药物公司 磷酸二酯酶4抑制剂
AU2004232973A1 (en) * 2003-04-18 2004-11-04 Memory Pharmaceuticals Corporation Pyrazole derivatives as phosphodiesterase 4 inhibitors
WO2005000247A2 (en) * 2003-06-25 2005-01-06 Smithkline Beecham Corporation 4-carboxamido quinoline derivatives for use as nk-2 and nk-3
EP1670476A4 (en) * 2003-09-30 2009-05-27 Merck & Co Inc ANTAGONISTS OF TACHYKININ RECEPTOR BASED ON PHENYL PYRROLIDINE ETHER
US20050201989A1 (en) * 2004-02-19 2005-09-15 St. Camillus Medical, Inc. Compositions and methods for ex vivo preservation of blood vessels for vascular grafts using inhibitors of tumor necrosis factor-alpha
ES2317223T3 (es) * 2004-04-08 2009-04-16 Wyeth Derivados de tioamida como moduladores del receptor de progesterona.
US7432266B2 (en) * 2004-10-15 2008-10-07 Memory Pharmaceuticals Corporation Phosphodiesterase 4 inhibitors
US7585882B2 (en) * 2004-10-20 2009-09-08 Memory Pharmaceuticals Corporation Phosphodiesterase 4 inhibitors
ES2421916T3 (es) * 2005-03-16 2013-09-06 Nycomed Gmbh Forma farmacéutica de sabor enmascarado que contiene roflumilast
CA2620333A1 (en) 2005-08-26 2007-03-01 Braincells, Inc. Neurogenesis by muscarinic receptor modulation
EP2258359A3 (en) 2005-08-26 2011-04-06 Braincells, Inc. Neurogenesis by muscarinic receptor modulation with sabcomelin
EP2377530A3 (en) 2005-10-21 2012-06-20 Braincells, Inc. Modulation of neurogenesis by PDE inhibition
WO2007053596A1 (en) 2005-10-31 2007-05-10 Braincells, Inc. Gaba receptor mediated modulation of neurogenesis
CN101355876B (zh) 2005-11-09 2012-09-05 康宾纳特克斯公司 一种适用于眼部给药的组合物
AU2007223036A1 (en) * 2006-03-08 2007-09-13 Braincells, Inc. Modulation of neurogenesis by nootropic agents
US20100216734A1 (en) * 2006-03-08 2010-08-26 Braincells, Inc. Modulation of neurogenesis by nootropic agents
EP2026813A2 (en) * 2006-05-09 2009-02-25 Braincells, Inc. 5 ht receptor mediated neurogenesis
US20100009983A1 (en) * 2006-05-09 2010-01-14 Braincells, Inc. 5 ht receptor mediated neurogenesis
JP2009536669A (ja) 2006-05-09 2009-10-15 ブレインセルス，インコーポレイティド アンジオテンシン調節による神経新生
KR20090064418A (ko) 2006-09-08 2009-06-18 브레인셀즈 인코퍼레이션 4-아실아미노피리딘 유도체 포함 조합물
CA2663347A1 (en) * 2006-09-19 2008-03-27 Braincells, Inc. Ppar mediated modulation of neurogenesis
US20100184806A1 (en) 2006-09-19 2010-07-22 Braincells, Inc. Modulation of neurogenesis by ppar agents
US20100210633A1 (en) * 2006-10-12 2010-08-19 Epix Delaware, Inc. Carboxamide compounds and their use
DK2176220T3 (da) 2007-08-07 2013-06-10 Takeda Pharmaceutical Pyrrolidin-2-on-derivater som androgenreceptormodulatorer.
JP2011506466A (ja) 2007-12-11 2011-03-03 株式会社サイトパスファインダー カルボキサミド化合物ならびにケモカイン受容体アゴニストとしてのそれらの使用
US20100216805A1 (en) 2009-02-25 2010-08-26 Braincells, Inc. Modulation of neurogenesis using d-cycloserine combinations
CN102603623A (zh) * 2011-12-26 2012-07-25 北京赛林泰医药技术有限公司 制备高纯度罗氟司特的方法
US20150119399A1 (en) 2012-01-10 2015-04-30 President And Fellows Of Harvard College Beta-cell replication promoting compounds and methods of their use
JO3264B1 (ar) * 2013-03-13 2018-09-16 Lilly Co Eli مركبات ازيتيدينيل أوكسي فينيل بيروليدين
ES2733552T3 (es) * 2014-01-24 2019-11-29 Celgene Corp Procedimientos para el tratamiento de la obesidad mediante apremilast
HUE052714T2 (hu) * 2014-05-29 2021-05-28 Mitsubishi Tanabe Pharma Corp Új pirrolidin vegyület és alkalmazás melanokortin receptor agonistaként
WO2016033776A1 (en) * 2014-09-04 2016-03-10 Eli Lilly And Company Crystalline (2s) -3- [ (3s, 4s) -3- [ (1r) -1-hydroxyethyl] -4- (4-methoxy-3- { [1- (5-methylpyridin-2-yl) azetidin-3-yl] oxy} phenyl) -3-methylpyrrolidin-1-yl] -3-oxopropane-1, 2-diol
AR101696A1 (es) 2014-09-12 2017-01-04 Lilly Co Eli Compuestos de azetidiniloxifenilpirrolidina
WO2017072796A1 (en) 2015-10-30 2017-05-04 Council Of Scientific & Industrial Research 2-pyridone based compounds useful as potential phosphodiesterase3a (pde3a)inhibitors and a process for the preparation thereof
JP6392297B2 (ja) * 2015-11-27 2018-09-19 田辺三菱製薬株式会社 医薬組成物
CN111094270B (zh) 2017-09-29 2023-09-22 田边三菱制药株式会社 光学活性吡咯烷化合物及其制造方法
CA3123995C (en) * 2018-12-18 2023-05-23 Wuhan Humanwell Innovative Drug Research and Development Center Limited Company Phenylpyrrolidine compound and use thereof
CN112409333A (zh) * 2019-08-23 2021-02-26 湖北生物医药产业技术研究院有限公司 苯基吡咯烷类化合物
TW202146385A (zh) * 2020-04-29 2021-12-16 大陸商廣東東陽光藥業有限公司 取代的吡咯烷類化合物及其在藥物中的應用

Family Cites Families (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS5821622B2 (ja) * 1973-02-28 1983-05-02 ウェルファイド株式会社 ピロリジンメタノ−ル ノ セイゾウホウ
JPS50108258A (sk) * 1974-02-08 1975-08-26
US5665754A (en) * 1993-09-20 1997-09-09 Glaxo Wellcome Inc. Substituted pyrrolidines
JPH07300455A (ja) * 1994-03-08 1995-11-14 Mitsubishi Chem Corp ３−フェニルピロリジン誘導体
CA2143143A1 (en) * 1994-03-08 1995-09-09 Toshihiko Tanaka 3-phenylpyrrolidine derivatives
US5998428A (en) 1995-05-31 1999-12-07 Smithkline Beecham Corporation Compounds and methods for treating PDE IV-related diseases
US5856103A (en) * 1994-10-07 1999-01-05 Board Of Regents The University Of Texas Method for selectively ranking sequences for antisense targeting
DE19601938A1 (de) * 1996-01-12 1997-07-17 Schering Ag Neue Phosphodiesteraseinhibitoren
ID22781A (id) * 1997-04-04 1999-12-09 Pfizer Prod Inc Turunan-turunan nikotinamida
US6258833B1 (en) * 1999-12-23 2001-07-10 Icos Corporation Cyclic AMP-specific phosphodiesterase inhibitors

Also Published As

Publication number Publication date
MXPA02006212A (es) 2004-02-26
AU2426201A (en) 2001-07-09
EP1242400A1 (en) 2002-09-25
DE60027769D1 (de) 2006-06-08
US6998416B2 (en) 2006-02-14
TR200400702T4 (tr) 2004-06-21
PL355988A1 (en) 2004-05-31
US6258833B1 (en) 2001-07-10
BRPI0016693B1 (pt) 2015-09-01
EA005686B1 (ru) 2005-04-28
HK1051359A1 (zh) 2003-08-01
CA2395193C (en) 2008-06-17
WO2001047905A1 (en) 2001-07-05
IS6436A (is) 2002-06-19
GEP20043384B (en) 2004-05-10
AU778543B2 (en) 2004-12-09
US20040023945A1 (en) 2004-02-05
RS50841B (sr) 2010-08-31
JP4294903B2 (ja) 2009-07-15
YU48002A (sh) 2005-11-28
HRP20020541A2 (en) 2004-08-31
JP2003519135A (ja) 2003-06-17
US6458787B1 (en) 2002-10-01
BG65892B1 (bg) 2010-04-30
NO20023008L (no) 2002-08-20
US7176229B2 (en) 2007-02-13
PL202227B1 (pl) 2009-06-30
BG106860A (bg) 2003-03-31
ATE325108T1 (de) 2006-06-15
EP1242400B1 (en) 2006-05-03
UA73964C2 (uk) 2005-10-17
US20040152754A1 (en) 2004-08-05
NO20023008D0 (no) 2002-06-21
KR20020063600A (ko) 2002-08-03
HRP20020541B1 (en) 2008-06-30
CZ20022188A3 (cs) 2003-03-12
EE05087B1 (et) 2008-10-15
US6716871B2 (en) 2004-04-06
CA2395193A1 (en) 2001-07-05
EE200200351A (et) 2003-10-15
HUP0301113A3 (en) 2011-07-28
US6423710B1 (en) 2002-07-23
US20060074123A1 (en) 2006-04-06
BR0016693A (pt) 2003-03-11
CN1434813A (zh) 2003-08-06
ZA200205551B (en) 2003-07-11
EA200200590A1 (ru) 2002-12-26
HUP0301113A2 (hu) 2003-08-28
IL150313A0 (en) 2002-12-01
SK9172002A3 (en) 2002-11-06

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US6423710B1 (en) Cyclic AMP-specific phosphodiesterase inhibitors
US6500856B2 (en) Cyclic AMP-specific phosphodiesterase inhibitors
US6376489B1 (en) Cyclic AMP-specific phosphodiesterase inhibitors
US6455562B1 (en) Cyclic AMP-specific phosphodiesterase inhibitors
US6680336B2 (en) Cyclic AMP-specific phosphodiesterase inhibitors
US20020044963A1 (en) Cyclic AMP-specific phosphodiesterase inhibitors
ES2239063T3 (es) Inhibidores de la fosfodiesterasa ciclica especifica de amp.

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Patent lapsed due to non-payment of maintenance fees

Effective date: 20120514