SE459094B - Rena teichomycin a2 singelfaktorer 1, 2, 3, 4 och 5 samt saett foer deras framstaellning samt antibiotisk och farmaceutisk komposition innehaallande desamma - Google Patents
Rena teichomycin a2 singelfaktorer 1, 2, 3, 4 och 5 samt saett foer deras framstaellning samt antibiotisk och farmaceutisk komposition innehaallande desammaInfo
- Publication number
- SE459094B SE459094B SE8303211A SE8303211A SE459094B SE 459094 B SE459094 B SE 459094B SE 8303211 A SE8303211 A SE 8303211A SE 8303211 A SE8303211 A SE 8303211A SE 459094 B SE459094 B SE 459094B
- Authority
- SE
- Sweden
- Prior art keywords
- teichomycin
- nujol
- solution
- acetonitrile
- factor
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P1/00—Preparation of compounds or compositions, not provided for in groups C12P3/00 - C12P39/00, by using microorganisms or enzymes
- C12P1/06—Preparation of compounds or compositions, not provided for in groups C12P3/00 - C12P39/00, by using microorganisms or enzymes by using actinomycetales
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/045—Actinoplanes
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Mycology (AREA)
- Virology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Compounds Of Unknown Constitution (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Fodder In General (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Description
459 094 rade antibiotiska material, vars huvudfaktorer benämnts teichomycin A2 faktor l, teichomycin A2 faktor 2, teichomy- cin A2 faktor 3, teichomycin A2 faktor 4 och teichomycin A2 faktor 5. Man har även funnit att dessa rena singelfaktorer är biologiskt särskiljbara från teichomycin A2 komplex genom att de uppvisar en högre grad av antibiotisk aktivitet mot känsliga mikroorganismer.
De antibiotiska substanserna enligt föreliggande uppfinning framställes utgående från teichomycin A2, som beskrives i det ovan angivna belgiska patentet, genom separation av det antibiotiska komplexet i singelfaktorerna enligt högeffektiva kromatografiska metoder och utvinning av huvudfaktorerna.
Uttrycken "teichomycin A2", “teichomycin A2 komplex" eller "antibiotiskt komplex" som användes i denna beskrivning hän- för sig till blandningen innehâllande de ovan angivna fem samproducerade antibiotiska faktorerna, som exempelvis kan erhållas enligt uppgifterna i det belgiska patentet nr 839 259, vilket häri innefattas som referens, och som där benämnes teichomycin A 2.
Separation av komplexet i de rena singelhuvudfaktorerna kan åstadkommas genom omvänd fasfördelning eller jonbyteskromato- grafi. I det första fallet användes lämpligen inaktiverad silikagel som kolonnpackning och en gradientelution av aceto- nitril/vattenhaltigt amoniumformiat som framkallare, medan i det senare fallet en svag anjonbytare av geltyp lämpligen an- vändes som stationär fas och vattenhaltiga buffertmedel eller blandningar av vattenhaltiga buffertmedel och icke-vattenhal- tiga lösningsmedel som elueringssystem. Speciellt har optimala separationsresultat erhållits genom att en lösning av teicho- mycin A2 löst i en blandning av utspätt vattenhaltigt ammonium- formiat och acetonitril passeras genom en silanerad silikagel- kolonn, och framkallning av kolonnen med en gradientelution i samma lösningsmedelssystem. Goda resultat har även erhållits med användning av dietylaminoetylderivatet.av agaros som statio- när fas och genomförande av separationen genom progressiv elu- 459 094 tion med buffertlösningar eller blandningar av buffertlös- ningar och icke-vattenhaltiga, med vatten blandbara lösnings- medel.
Separationsförfarandet kontrolleras med HPLC (högtrycks- vätskekromatografi). Fraktioner med samma HPLC-profil kombi- neras, om så önskas, renas ytterligare genom preparativ HPLC och avsaltas. Ur dessa lösningar utvinnes därefter enkelfak- torerna genom indunstning av de organiska lösningsmedlen, avdragning av vattnet till en liten volym och tillsats av ett överskott av ett organiskt lösningsmedel, i vilket förening- arna inte är lösliga, för utfällning av de erhållna produk- terna.
Följande specifika exempel ges för att bättre åskådliggöra förfarandet enligt föreliggande uppfinning. Nämnda exempel skall emellertid inte begränsa uppfinningen till de speciella betingelser som anges däri.
Separation av teichomycin A2 faktorerna l,2,3,4 och 5. l0 g teichomycin A2 komplex som erhållits enligt förfarandet beskrivet i det belgiska patentet nr 839 259 upplöses i l li- ter av en 0,2 %ig ammoniumformiat-acetonitril-(9:l)-blandning och justeras till pH 7,5 med l N NaOH. Denna lösning passeras genom en kolonn innehållande S00 g silanerad silikagel 60 (Merck).
Kolonnen elueras därefter med en linjär gradient från 10 % till 20 % acetonitril i en 0,2 %ig ammoniumformiatlösning till en total volym av 10 liter.
Fraktioner av nJ2O ml samlas och kontrolleras med HPLC.
I följande tabell I anges retentionstiderna (tR) för teicho- mycin A2 faktorerna l,2,3,4 och 5 i en representativ HPLC- separation (de operativa betingelserna anges under tabellen): 459 094 4 TABELL I Teichomycin A2 faktor Retentionstid (min-) 1 21,2 2 22,6 3 23,3 4 26,4 3,5-dihydroxitoluen (intern standard) 8,84 Kolonn: 5 p Zorbax ODS (Du Pont) Mobil fas: Linjär gradient från O % B till 50 % B i A i 40 min.
A) 25 mM NaH2PO4/acetonitril (9:l) buffrad till pH 6,0 med 0,1 N NaOH B) 25 mM NaH2PO4/acetonitril (3:7) buffrad till pH 6,0 med 0,1 N NaOH Flöde: 2 ml/min.
Detektor: U.V. fotometer vid 254 nm.
Fraktioner med samma HPLC-profil kombineras och det organiska lösningsmedlet indunstas under reducerat tryck. De kvarvarande vattenlösningarna passeras genom en kolonn innehållande g silanerad silikagel (60) (Merck). Kolonnen tvättas med destillerat vatten för att eliminera ammoniumformiatet och elueras därefter med 50 %ig vattenhaltig acetonitril.
Eluatet koncentreras till en liten volym genom tillsats av butanol för att underlätta indunstningen av vattnet och ut- fälles därefter med en l:l aceton-etyleter-blandning_ Ren teichomycin A2 faktor l (410 mg) och faktor 2 (770 mg) erhål- les enligt det ovan angivna förfarandet.
Teichomycin A2 faktor 3 som en 1:1 blandning med teichomycin A2 faktor 2 renas ytterligare genom HPLC på en halvpreparativ kolonn vid följande operationsbetingelser. 459 094 Kolonn: Whatman Partisil ODS M 9 10/50 Mobil fas: 0,2 %igt amoniumformiat i H20/acetonitril (76:24) Flöde: 4,5 ml/min.
Detektor: U.V. fotometer vid 254 nm Belastning: 20 mg. Även i detta fall övervakas reningen genom kontroll av varje fraktion med HPLC.
Fraktioner innehållande ren teichomycin A2 faktor 2 liksom _ fraktioner innehållande ren teichomycin A2 faktor 3 kombine- ras, avsaltas och utfälles såsom beskrivits ovan. (Utbyte: 510 mg teichomycin A2 faktor 2 och 520 mg teichomycin A2 faktor 3).
Fraktioner innehållande faktorerna 4 och 5 i proportionerna l:l (ungefär 500 mg) erhållna från den första kolonnen kombi- neras med en annan pool av fraktioner innehållande en bland- ning av faktorerna 4 och 5 (ungefär 490 mg), erhållna på samma sätt från en andra parallell separation, och separeras genom halvpreparativ HPLC med användning av samma operationsbeting- elser som angivits ovan för reningen av teichomycin A2 fak- tor 3, vilket ger 350 mg teichomycin A2 faktor 4 och 300 mg teichomycin A2 faktor 5. ' Kemisk-fysikaliska kännetecken för de rena singelfaktorerna av teichomycin A2; Teichomycin A2 faktor l är ett vitt amorft pulver, som vid upphettning börjar mörkna vid ungefär 220°C och är fullstän- digt sönderdelat vid 255°C och som har följande kännetecken: a) Det är fritt lösligt i vatten vid pH >7,0 eller vid pH <2 i dimetylformamid, dimetylsulfoxid och propylenglykol; något lösligt i metylcellosolv och glycerol; svårlösligt i metanol och etanol, nästan olösligt i kloroform, bensen, n-hexan, acetonitril, etyleter, aceton, etylacetat, kol- tetraklorid; b) 0) å) e) f) 459 094 har ett ultraviolett absorptionsspektrum som framgår av figur l i de bifogade ritningarna, vilket uppvisar följande absorptionsmaxima: - i 0,1 N saltsyra: R 278 mn (El % max 1 cm = 49'5) - i fosfatbuffert pH 7,4: 278 nm (El % = 50,0) Ämax 1 cm - i 0,1 N natriumhydroxid: Ämax 297 mn (nå :m = 72,1) ett infrarött absorptionsspektrum i nujol, som visas i figur 2 i de bifogade ritningarna, med följande absorp- tionsmaxima: 3700-3100, 2960-2840 (nujol), 1645, 1590, 1510, 1460 (nujol), 1375 (nujol), 1305, 1230, 1180, 1155, 1060, 1025, 970, 890, 845, 815, 720 (nujo1); en elementaranalys, när provet först torkats vid ungefär l40°C under inert atmosfär (%.Aw = 8,5), som indikerar föl- jande ungefärliga procentsammansättning (medeltal): kol 56,70 %; väte 4,90 %; kväve 6,65 %; klor 3,80 %; syre (genom skillnad) 27,95 %; en retentionstid (tR) av 21,2 minuter vid analys genom omvänd fas-HPLC med användning av en 5 p Zorbax ODS-kolonn och eluering med en linjär gradient från 0 % till 50 % lösning B i lösning A i 40 minuter (lösning A: 25 mm NaH2P04/acetonitril (9/1) buffrad vid pH 6,0 med 0,1 N NaoH; lösning B: 25 mM NaH2PO4/acetonitril (3/7) buffrad vid pH 6,0 med 0,1 N Na0H), med en flödeshastighet av 2 ml/min.; (intern standard: 3,5-dihydroxi-toluen tR 8,84 minuter); följande grupper av signaler i 270 MHz IH NMR-spektrum (hela spektrumet visas i figur 3 i de bifogade ritningarna) 9) h) i) 459 094 registrerade i DMSO-dö med tillsats av några droppar D20 (konc. 25 mg/0,5 ml) (TMS som intern standard ¿'= 0,00 ppm): 0,8-1,5 (m); 1,7-2,3 (m); 2,7-4,0 (m); 4,0-4,7 (m), 4,8-5,8 (m); 6,2-8,1 (m); en sur funktion med förmåga att bilda salter; en saltbildningsbar basisk funktion; en molekylvikt av ungefär 1875 bestämd genom mass-spektro- metrisk analys med användning av ett snabbatombombardemang- (FAB) som jonkälla (för en presentation av FAB mass-spek- trometri, se exempelvis M. Barber et al., Nature, ågâ, nr 5830, 270-75 (1981)).
Teichomycin A2 faktor 2 är ett vitt amorft pulver, som börjar mörkna vid upphettning till 2l0°C och är fullständigt sönder- delat vid 2500C och som har följande kännetecken: a) b) Det är fritt lösligt i vatten vid pH )7,0 eller vid pH <2 i dimetylformamid, dimetylsulfoxid och propylenglykol; något lösligt i metylcellosolv och glycerol; svårlösligt i metanol och etanol; nästan olösligt i kloroform, bensen, n-hexan, acetonitril, etyleter, aceton, etylacetat, kol- tetraklorid; har ett ultraviolett absorptionsspektrum som framgår av figur 4 i de bifogade ritningarna, vilket uppvisar följande absorptionsmaxima: - i 0,1 N saltsyra: 278 nm (El % = 48) l cm 7* ITlaX - i fosfatbuffert pH 7,4: 278 nm (så % = 49,0) Ä-mâx Cm - i 0,1 N natriumhydroxid: 297 nm (Eâ % = 70,0) Ä max Cm 459 094 c) ett infrarött absorptionsspektrum i nujol, som visas i figur 5 i de bifogade ritningarna, med följande observer- bara absorptionsmaxima: 3700-3100, 2960-2860 (nujol), 1645, 1590, 1510, 1460 (nujol), 1375 (nujol), 1300, 1260, 1230, 1180, 1150, 1060, 1025, 970, 890, 845, 815, 720 (nujol); d) en elementaranalys, när provet först torkats vid ungefär 140°C under inert atmosfär (%zlw = 9,8), som indikerar följande ungefärliga procentsammansättning (medeltal): kol 56,15 %; väte 5,15 %; kväve 6,30 %; klor 3,90 %; syre (genom skillnad) 28,50 %; e) en retentionstid (tR) av 22,6 minuter vid analys QGHOH omvänd fas-HPLC med användning av en 5 p Zorbax ODS-kolonn och eluering med en linjär gradient från 0 % till 50 % lösning B i lösning A i 40 minuter (lösning A: 25 mM NaH2P04/acetonitril (9/1)'buffrad vid pH 6,0 med 0,1 N NaOH; lösning B: 25 mM NaH2PO4/acetonitril (3/7) buffrad vid pH 6,0 med 0,1 N NaOH), med en flödeshastighet av 2 ml/min.; (intern standard: 3,5-dihydroxi-toluen t R 8,84 minuter); f) följande grupper av signaler i 270 MHa lH NMR-spektrum (hela spektrumet visas i figur 6 i de bifogade ritningarna) registrerade i DMSO-dö med tillsats av några droppar D (konc. 25 mg/0,5 ml) (TMS som intern standard 6 = 0,00 ppm): 0,7-1,5 (m); l,8~2,2 (m); 2,7-4,5 (m); 4,6-5,7 (mh 6,2-8,l (mh g) en sur funktion med förmåga att bilda salter; h) en saltbildningsbar basisk funktion; i) en molekylvikt av ungefär 1877 bestämd genom FAB mass- spektrometri.
Teichomycin A2 faktor 3 är ett vitt amorft pulver, som vid upphettning börjar sönderdelas vid 205°C och är fullständigt a) b) d) e) 459 094 sönderdelat vid 250°C och som har följande kännetecken: Det är fritt lösligt i vatten vid pH >7,0 eller vid pH <2 i dimetylformamid, dimetylsulfoxid och propylenglykol; något lösligt i metylcellosolv och glycerol; svârlösligt i metanol och etanol; nästan olösligt i kloroform, bensen, n-hexan, acetonitril, etyleter, aceton, etylacetat, kol- tetraklorid; har ett ultraviolett absorptionsspektrum som framgår av figur 7 i de bifogade ritningarna, vilket uppvisar följande absorptionsmaxima: - i 0,1 N saltsyra: 278 mn (El så l cm = 49'2) Xmax - i fosfatbuffert pH 7,4: xmax 278 nm (så :m = 50,8) - i 0,1 n natriumhydroxid: 297 mn (El % = 72,7) Ämax l cm ett infrarött absorptionsspektrum i nujol, som visas i figur 8 i de bifogade ritningarna, med följande observer- bara absorptionsmaxima: 3700-3100, 2960-2850 (nujol), l645, 1590, l5l0, 1460 (nujol), 1375 (nujol), 1300, 1230, ll80, ll50, ll20, 1060, l030, 970, 890, 845, 820, 800, 720 (nujol); en elementaranalys, när provet först torkats vid ungefär l40°C under inert atmosfär (%¿Äw = l2,0), som indikerar följande ungefärliga procentsammansättning (medeltal): kol 56,26 %; väte 5,20 %; kväve 6,69 %; klor 3,95 %; syre (genom skillnad) 27,90 %; en retentionstid (tR) av 23,3 minuter vid analys genom omvänd fas-HPLC med användning av en 571 Zorbax ODS-kolonn till 50 % lösning B i lösning A i 40 minuter (lösning A: 25 mM och eluering med en linjär gradient från 0 % 459 094 NaH2PO4/acetonitril (9/l) buffrad vid pH 6,0 med'O,l N NaOH; lösning B: 25 mM NaH2PO4/acetonitril (3/7) buffrad vid pH 6,0 med 0,1 N Na0H), med en flödeshastighet av 2 ml/min.; (intern standard: 3,5-dihydroxi-toluen tR 8,84 minuter); f) följande grupper av signaler i 270 MHz IH NMRfspektrum (hela spektrumet visas i figur 9 i de bifogade ritningarna) registrerade i DMSO-dö med tillsats av några droppar D20 (konc. 25 mg/0,5 ml) (TMS som intern standard Å = 0,00 ppm): 0,7-1,5 (m); 1,8-2,0 (m); 2,7-4,5 (m); 4,6-5,7 (HÛF 612-810 (HÛÉ g) en sur funktion med förmåga att bilda salter; h) en saltbildningsbar basisk funktion; i) en molekylvikt av ungefär 1877 bestämd genom FAB mass- spektrometri.
Teichomycin A2 faktor 4 är ett vitt amorft pulver, som vid upphettning börjar mörkna vid ungefär 2lO°C och är fullstän- digt sönderdelat vid 250°C och som har följande kännetecken: e) Det är fritt lösligt i vatten vid pH >7,o eller vid pH <2 i dimetylformamid, dimetylsulfoxid och propylenglykol; något lösligt i metylcellosolv och glycerol; svårlösligt i metanol och etanol, nästan olösligt i kloroform, bensen, n-hexan, acetonitril, etyleter, aceton, etylacetat, kol- tetreklotid; b) har ett ultraviolett absorptionsspektrum som framgår av figur lO i de bifogade ritningarna, vilket uppvisar följande absorptionsmaxima: 'I - i 0,1 N saltsyra: l ft _ Amax 278 nn (El cm - 52,5) c) d) e) f) Q) h) 459 094 ll - i fosfatbuffert pH 7,4: l % _ Ämax 278 nm (El cm ~ 52,5) - i 0,1 N natriumhydroxid: 297 nm (El % = 75,5) Ämax 1 cm ett infrarött absorptionsspektrum i nujol, som visas i figur ll i de bifogade ritningarna, med följande absorp- tionsmaxima: 3700-3100, 2960-2840 (nujol), 1645, 1590, 1510, 1460 (nujol), 1375 (nujol), 1300, 1230, 1175, 1140,_ 1060, 1025, 970, 890, 840, 815, 720 (nujol); en elementaranalys, när provet först torkats vid ungefär 140°C under inert atmosfär (%¿lw = 9,8), som indikerar följande ungefärliga procentsammansättning (medelta1): kol 56,50 %; väte 5,10 %; kväve 6,50 %; klor 3,80 %; syre (genom skillnad) 28,10 %; en retentionstid (tR) av 25,8 minuter vid analys genom omvänd fas-HPLC med användning av en 5 p Zorbax ODS-kolonn och eluering med en linjär gradient från 0 % till 50 % lösning B i lösning A i 40 minuter (lösning A: 25 mM NaH2PO4/acetonitril (9/1) buffrad vid pH 6,0 med 0,1 N Na0H; lösning B: 25 mM NaH2P04/acetonitril (3/7) buffrad vid pH 6,0 med 0,1 N NaOH), med en flödeshastighet av 2 m1/min.; (intern standard: 3,5-dihydroxi-toluen tR 8,84 minuter); en sur funktion med förmåga att bilda salter; en saltbildningsbar basisk funktion; en molekylvikt av ungefär 1891 bestämd genom FAB mass- spektrometri.
Teichomycin A2 faktor 5 är ett vitt amorft pulver, som börjar mörkna vid upphettning till 210°C och är fullständigt sönder- delat vid 250°C och som har följande kännetecken: 459 094 a) b) c) d) e) 12 Det är fritt lösligt i vatten vid pH >7,0 eller vid pH <2 i dimetylformamid, dimetylsulfoxid och propylenglykol; något lösligt i metylcellosolv och glycerol; svårlösligt i metanol och etanol; nästan olösligt i kloroform, bensen n-hexan, acetonitril, etyleter, aceton, etylacetat, kol- tetraklorid; har ett ultraviolett absorptionsspektrum som framgår av figur 12 i de bifogade ritningarna, vilket uppvisar följande absoprtionsmaxima: - i 0,1 N saltsyra: 278 nm (El % = 49,6) Xmax l cm - i fosfatbuffert pH 7,4: 278 nm (El f* = 51,21) Ämax 1 cm - i 0,1 N natriumhydroxid: l % 297 nm (E = 78,8) Xmax 1 cm ett infrarött absorptionsspektrum i nujol, som visas i figur 13 i de bifogade ritningarna, med följande observer- bara absorptionsmaxima: 3700-3100, 2960-2840 (nujol), 1645, 1590, 1510, 1460 (nujol), 1375 (nujol), 1300, 1230, 1175, 1145, 1060, 1025, 970, 890, 840, 815, 720 (nujo1); en elementaranalys, när provet först torkats vid ungefär 14000 under inert atmosfär (% Aw'= 10,1), som indikerar följande ungefärliga procentsammansättning (medeltal): kol 56,60 %; väte 5,05 %; kväve 6,63 %; klor 3,85 %; syre (genom skillnad) 27,87 %; en retentionstid (tR) av 26,4 minuter vid analys genom omvänd fas-HPLC med användning av en 5 p.Zorbax ODS-kolonn och eluering med en linjär gradient från 0 % till 50 % lösning B i lösning A i 40 minuter (lösning A: 25 mM NaH2PO4/acetonitril (9/1) buffrad vid pH 6,0 med 0,1 N NaOH; lösning B: 25 mM NaH2PO4/acetonitril (3/7) buffrad 459 094 l3 vid pH 6,0 med 0,1 N (NaOH), med en flödeshastighet av 2 ml/min.; (intern standard: 3,5-dihydroxi-toluen tR 8,84 minuter); f) en sur funktion med förmåga att bilda salter; g) en saltbildningsbar basisk funktion; h) en molekylvikt av ungefär l89l bestämd genom FAB mass- spektrometri.
Var och en av teichomycin A2 faktorerna l,2,3,4 och 5 inne- håller en sur funktion med förmåga att bilda salter.
Alkalimetallsalterna, de alkaliska jordartsmetallsalterna och de farmaceutiskt godtagbara ammoniumsalterna av teicho- mycin A2 faktorerna l,2,3,4 och 5 representerar en ytter- ligare specifik utföringsform av föreliggande uppfinning.
Representative alkalimetallsalter och alkaliska jordartsmetall- salter innefattar natrium-, kalium-, litium-, kalcium- och magnesiumsalterna. Ammoniumsalterna innefattar ammonium- samt primära, sekundära eller tertiära (Cl-C4)alkylammonium- och hydroxi-(Cl-C4)alkylammoniumsalter.
Alkalimetall- och de alkaliska jordartsmetallsalterna fram- ställes enligt sedvanliga förfaranden som allmänt användes för framställning av metallsalter. Exempelvis upplöses teicho- mycin A2 faktor l,2,3,4 och 5 i den fria sura formen i ett lämpligt lösningsmedel såsom propylenglykol och ungefär den stökiometriska mängden av en lämplig utvald mineralbas sättes gradvis till den erhållna lösningen.
Alkalimetallsaltet eller det alkaliska jordartsmetallsaltet som bildas utvinnes därefter genom utfällning med ett icke- lösningsmedel och filtrering.
Alternativt kan dessa salter framställas i huvudsakligen 459 094 l4 vattenfri form genom lyofilisering; i detta fall filtreras vattenlösningar innehållande de önskade salterna, som erhål- lits genom saltbildning av den fria sura formen med ett lämp- ligt utvalt alkalimetall- eller alkaliskt jordartsmetallkarbo- nat eller -hydroxid i sådan mängd att pH ligger mellan 7 och 8, från eventuellt olösliga substanser och lyofiliseras.
De organiska ammoniumsalterna kan antingen framställas genom tillsats av en lämpligt utvald amin till en lösning av den fria sura formen av teichomycin A2 faktorerna l,2,3,4 och 5 i ett lämpligt lösningsmedel, såsom propylenglykol, och efter- följande indunstning av lösningsmedlet och överskottet av aminreagenset, eller alternativt genom kontakt mellan de två reagensen i en minimal mängd vatten samt utfällning av de erhållna salterna genom tillsats av ett icke-lösningsmedel.
Såsom tidigare omnämnts, innehåller var och en av teichomycin A2 faktorerna l,2,3,4 och 5 även en basisk funktion med för- måga att bilda salter. Deras farmaceutiskt godtagbara syra- additionssalter, framställda enligt i sig känd teknik, genom kontakt mellan de rena singelfaktorerna och en relativt stark syra, företrädesvis med en mineralsyra, representerar en ytterligare specifik utföringsform av föreliggande uppfinning.
Framställning av teichomycin A2 faktor 2 natriumsalt En vattenlösning av teichomycin A2 faktor 2 (150 mg, 15 ml) överföres till pH 8,0 genom droppvis tillsats av 0,1 N NaOH.
Den erhållna lösningen filtreras, överföres i kammaren av ett frystorkningssystem och fryses. Efter avslutad frysning evaku- eras kammaren till 0,l torr och is sublimeras genom att upp- hettningsplattan överföres till OOC. Förfarandet fortsätter Titrering av en lösning av det så erhållna teichomycin A2 faktor 2 natriumsaltet i 25 ml metylcellosolv/H20 3/l med 0,1 N HCl påvisade närvaron av två titrerbara funktioner kän- netecknade av följande pK: 7,03 och 4,78. till dess att produkten är nästan torr (ungefär l 9 fukt). 459 094 Enligt det ovan beskrivna förfarandet, men utgående från teichomycin A2 faktorerna l,3,4 och 5, erhålles motsvarande natriumsalter. Bestämning av mängden natrium i slutsalterna bekräftar bildningen av ett mononatriumsalt.
Den antibakteriella aktiviteten in vitrg hos teichomycin A2 faktorerna l,2,3,4 och 5, som visade sig vara huvudsakligen aktiva mot gram-positiva bakterier, bestämdes mot kliniska isolat av stafylokocker och streptokocker med användning av en tvåfaldig utspädningsmetod i mikrotitersystem. Penassay buljong (Difco) och Todd-Hewitt buljong (Difco) användes för stafylokocker resp. streptokocker. Nattgamla buljongkulturer kolonibildande späddes så att slutinokulatet var ungefär 103 enheter/ml. Minimal inhiberande koncentration (MIC) avlästes som den lägsta koncentration som inte visade någon synlig tillväxt efter 18-24 timmars inkubetien vid 37°c. ne erhållna resultaten är sammanställda i tabell II nedan: IQ «.o F~0 mO~O «~O P~O F ucfiuoeflømn mzuoououmøuuw “Ko _10 ~.o _10 ...O « mffon wnooouoq. wfiw m0.0 m0.o Üo _20 ÉO v M4: :cm msuuouoa muum mO.o mo.o Éo ~.0 ~.o _ msfiunšfiom msoooooumufim .0 206 35.0 20.0 2.0.0 F 32:.. mäuoußßäw -101-.0 v.o|P.O ïoxvfø .IOÅXO w.O..-o m mflflcownu msuvooo» muum -.O|m0.0 _..0|m0.0 ÜnTmOÅV «\O|mQ.O ~.O..é.O w mflflcoøšucm msouououlnfimuum mo.o..woo.o modèooö mo.o|m~o.o ícnfioö ñoåoå ß 3.6 o msuoouøumwmwnm. m.o«~.o ïoxïo ïolïo ÉT-.o »åäö q mäfieumzämw måaouoïåflum m.o..~.o m.o|~.o .ñoiïo wâwïo wåiïo m m=2šø mqöuouofiämfim m m Hošvïuu w v uouxou N m HOuMnw N N uouvanu w F uouufiøu gsm < :fiuaëøzvqua c :doxšonuflwa 4 cfivhêozoflwh < cflošaøzuflwa. < :,._.u>E0;u«w.~. mflmummü Emqcømuoouxflz Aficimâvql .U.H.2 >.m .HZ N 459 094 HH Qflmmšfi .m :oo ïmäâ wwnonäw Næ :Hoëözoflwu mo: 03? ma: »wfiåuä ïwflumpäfißë 459 094 17 i' De mikrobiologiska effektrelationerna för de individuella fak- torerna l,2,3,4 och 5 bestämdes med agar-diffusionsmetoden med användning av S.aureus ATCC 6538 som bakterietest och teichomycin A2 komplex som standard.
Närmare bestämt upplöses en avpassad mängd teichomycin A2 faktor l, teichomycin A2 faktor 2, teichomycin A2 faktor 3, teichomycin A2 faktor 4, teichomycin A2 faktor 5 och teicho- mycin A2 komplex, använd som standard, i dimetylformamid vid en koncentration av 2000 pg/ml. Dessa lösningar spädes ytter- ligare med användning av fosfatbuffert 0,067 M pH 7,4 kom- pletterad med l % bovinserum för att ge följande koncentra~ tioner: 2,5, 5, l0 och 20 ing/ml.
Filtrerpappersskivor vätes därefter i provlösningarna och placeras vid regelbundna intervall på ytan av agar-plattor ympade med en suspension av testmikroorganismen. Plattorna inkuberas vid 37OC i 18 timmar och därefter mätes diametern av inhibitionszonerna. Erhållna data inmatas i en dator för att beräkna effekten hos de individuella faktorerna i för- hållande till komplexet.
De erhållna resultaten anges nedan. teichomycin A2 faktor 1 841 E/mg teichomycin A2 faktor 2 1086 E/mg 3 teichomycin A2 faktor 3 1131 E/mg teichomycin A2 faktor 4 1066 E/mg teichomycin A2 faktor 5 954 E/mg teichomycin A2 komplex 1000 E/mg Teichomycin A2 faktorerna 2,3,4 och 5 testades även vid expe- rimentella infektioner orsakade av S.pneumoniae och S.pyogenes på möss. Försöken genomfördes i jämförelse med teichomycin A2 komplex. De erhållna resultaten anges i tabell III nedan. 459 094 18 TABELL III Antibakteriell aktivitet ¿g vivo Förening ED5§ (mg/kg/dag) s.c.
S.Eneumoniae L 44 S.EZogenes L 49 teichomycin A2 0,28 (O,22-0,34) 0,15 (0,13-0.18) faktor 2 teichomycin A2 0,27 (O,23-0,325 0,13 (0,l1-0,16) faktor 3 " teiChOmyCin A2 0,12 (0,98-0,14) 0,098-(0,073~O,ll) faktor 4 teichomycin A2 0,13 (0,l0-0,15) 0,10 (0,098-0,13) faktor 5 teicnamycin A2 6,35 (o,2s-o,44) o,1e (-) komplex Den ungefärliga akuta toxiciteten för möss (i.p.) för teicho- mycin A2 faktorerna l,2,3,4 och 5 visas i tabell IV nedan: TABELL IV Akut toxicitet för möss (i.p.) Förening Uhgefärlig LDSO (mg/kg) teichomycín 2 faktor 1 > 1500 < 2000 teichomycin 2 faktor 2 > 1500 < 2000 2 faktor 3 > 1000 < 1500 teichomycin 2 faktor 4 > soo < looo A A teichomycin A A teichomycin A2 faktor 5 > 500 < 1000 459 094 19 Såsom framgår av ovanstående, kan föreningarna enligt före- liggande uppfinning, teichomycin A2 faktor l, teichomycin A2 faktor 2, teichomycin A2 faktor 3, teichomycin A2 faktor 4 och teichomycin A2 faktor 5 effektivt användas som aktiv beståndsdel i antimikrobiella beredningar använda inom human- och veterinärmedicinen för att förhindra och behandla infekti- ösa sjukdomar förorsakade av patogena bakterier, som är käns- liga för de aktiva beståndsdelarna. Vid sådan behandling kan dessa föreningar användas som sådana eller som individuella singelfaktorer eller, med hänsyn till likheten i deras akti- O vitetsmönster, även i form av blandningar av två eller flera av de fem faktorerna i vilka som helst proportioner.
Föreningarna enligt föreliggande uppfinning kan administreras oralt, topiskt eller parenteralt, varvid emellertid parenteral administration särskilt föredrages. Beroende på administra- tionssätt kan dessa föreningar beredas i olika dosformer.
Preparat för oral administration kan vara i form av kapslar, tabletter, flytande lösningar eller suspensioner. Såsom är känt inom tekniken, kan kapslar och tabletter förutom den aktiva beståndsdelen innehålla konventionella excipienter, såsom utspädningsmedel, t.ex. laktos, kalciumfosfat, sorbitol och liknande, smörjmedel, t.ex. magnesiumstearat, talk, poly- etylenglykol, bindemedel, t.ex. polyvinylpyrrolidon, gelatin, sorbitol, dragant, akacia, aromämnen, och godtagbara desinte- grerings- och vätmedel. De flytande beredningarna, i allmän- het i form av vatten- eller oljelösningar eller suspensioner, kan innehålla konventionella additiv såsom suspenderingsmedel.
För topisk användning kan föreningarna enligt föreliggande uppfinning även beredas i lämpliga former för absorption genom huden, de mukösa membranen i näsan och halsen eller de bronkiala vävnaderna, och kan lämpligen ha formen av flytande sprayer eller inhaleringsmedel, pastiller eller hals- penslingsmedel. För medicinering av ögonen eller öronen kan beredningarna tillhandahållas i flytande eller halvflytande form. Topiska applikationer kan beredas i hydrofoba eller hydrofila baser som salvor, krämer, lotioner, penselsubstan- ser eller pulver. 459 094 Kompositioner för injektion kan beredas i form av suspensioner, lösningar eller emulsioner i olje- eller vattenhaltiga vehik- lar och kan innehålla beredningsmedel, såsom suspenderings-, stabiliserings- och/eller dispergeringsmedel. Alternativt kan den aktiva beståndsdelen vara i pulverform för âterbild- ning vid leveranstidpunkten med en lämplig vehikel, såsom sterilt vatten.
Mängden aktiv beståndsdel som skall administreras beror på olika faktorer, såsom storleken och tillståndet hos subjektet_ som skall behandlas, administrationssättet och -frekvensen samt det involverade verksamma medlet.
Teichomycin A2 faktorer l,2,3,4 och 5 är i allmänhet effek- tiva i en dagsdos innefattande mellan ungefär 0,l och ungefär mg aktiv beståndsdel per kg kroppsvikt, eventuellt uppde- lad i två administrationstillfällen per dag. Särskilt önskvärda kompositioner är de som framställes i form av dosenheter inne- hållande ungefär 50 till ungefär 250 mg per enhet.
Representativa exempel på framställningen av farmaceutiska kompositioner är följande: En parenteral lösning framställes med 100 mg teichomycin A2 faktor 2 natriumsalt upplöst i 2 ml sterilt vatten för injektion.
En parenteral lösning framställes med 250 mg teichomycin A2 faktor 3 natriumsalt upplöst i 3 ml sterilt vatten för injektion.
En topisk salva framställes med 200 mg teichomycin A2 faktor 2 600 mg polyetylenglykol 4000 U.S.P. 1,2 g polyetylenglykol 400 U.S.P. 459 094 21 Förutom deras aktivitet som läkemedel kan föreqingarna enligt föreliggande uppfinning användas som tillväxtbefrämjande medel på djur.
För detta ändamål administreras en eller flera av föreningarna enligt uppfinningen oralt i ett lämpligt fodermedel. Den exakta koncentration som användes är den som erfordras för att tillhandahålla den aktiva beståndsdelen i en tillväxt- befrämjande effektiv mängd när normala mängder fodermedel konsumeras.
Tillsatsen av de aktiva föreningarna enligt uppfinningen till djurfodermedel åstadkommas företrädesvis genom framställning av en lämplig foderförblandning innehållande de aktiva före- ningarna i en effektiv mängd och införlivande av förbland- ningen i den kompletta portionen.
Alternativt kan ett intermediärkoncentrat eller fodertillskott innehållande den aktiva beståndsdelen blandas i fodermedlet.
De sätt, på vilka sådana foderförblandningar och kompletta portioner kan framställas och administreras, beskrives i referenslitteraturen (såsom "Applied Animal Nutrition", W.H.
Freedman and Co., S. Francisco, USA, 1969, eller “Livestock Feeds and Feeding", O and B Books, Corvallis, Oregon, USA, 1977) och innefattas häri som referens.
Claims (9)
1. En huvudsakligen ren individuell antibiotisk förening utvald ur gruppen bestående av teichomycin A 2 faktor l, tei- chomycin A, faktor 2, teichomycin A 2 faktor 3, teichomycin 2 faktor 5, respektive identi- fysikaliska kännetecken: A2 faktor 4 och teichomycin A fierad genom följande kemisk- teichomycin A2 faktor 1: ett vitt amorft pulver, som vid upphettning börjar mörkna vid ungefär 22000 och är fullstän- digt Sönderdelat vid 255°c, vilket fll är fritt lösligt i vatten vid pH >7,0 eller vid pH <2 i dimetylformamid, dimetylsulfoxid och propylenglykol; något lösligt i metylcellosolv och glycerol; i metanol och etanol; n-hexan, acetonitril, tetraklorid; svårlösligt nästan olösligt i kloroform, bensen, etyleter, aceton, etylacetat, kol- b) har ett ultraviolett absorptionsspektrum som uppvisar föl- jande absorptionsmaxima: - i 0,1 N saltsyraz Ä l % _ 278 nm (El - 49,5) IfläX Cm - i fosfatbuffert pH 7,4: 1 278 nm (nå % = so,o) mäX Cm - i 0,1 N natriumhydroxid: l % Ãmax 297 nm (El Cm = 72,1) c) ett infrarött absorptionsspektrum i nujol med följande absorptionsmaxima: 3700-3100, 2960-2840 (nujol), 1645, 1590, 1510, 1460 (nujol), 1375 (nujol), 1305, 1230, 1180, 1155, 1060, 1025, 970, 890, 845, 815, 720 (nujol); d) en elementaranalys, när provet först torkats vid ungefär l40°C under inert atmosfär (%¿Sw = 8,5), som indikerar föl- jande ungefärliga procentsammansättning (medeltal): e) f) Q) i) 23 kol 56,70 %; väte 4,90 %; kväve 6,65 %; syre (genom skillnad) 27,95 %; klor 3,80 %; en retentionstid (tR) av 21,2 minuter vid analys genom omvänd fas-HPLC med användning av en 5/1 Zorbax ODS-kolonn och eluering med en linjär gradient från 0 % till 50 % lösning B i lösning A i 40 minuter (lösning A: 25 mM NaH2P04/acetonitril (9/1) buffrad vid pH 6,0 med 0,1 N NaOH; 25 mM NaH2PO4/acetonitril (3/7) buffrad vid pH 6,0 med O,l N Na0H), med en flödeshastighet av lösning B: 2 ml/min.; (intern standard: 3,5-dihydroxi-toluen t R 8,84 minuter); IH NMR-spektrum registrerade i DMSO-dö med tillsats av några droppar D20 (konc. 25 mg/0,5 ml) (TMS som intern standard 6 = 0,00 ppm): 0,8-1,5 (m); 1,7-2,3 (m); 2,7-4,0 (m); 4,0-4,7 (m); 4,8-5,8 (m); 6,2-8,1 (m); följande grupper av signaler i 270 MHz en sur funktion med förmåga att bilda salter; en saltbildningsbar basisk funktion; en molekylvikt av ungefär 1875 bestämd genom FAB mass- spektrometri; teichomycin A2 faktor 2: ett vitt amorft pulver, som börjar mörkna vid upphettning till 2l0°C och är fullständigt sönder- delat vid 25o°c, vilket a) är fritt lösligt i vatten vid pH >7,0 eller vid pH <2 i dimetylformamid, dimetylsulfoxid och propylenglykol; något lösligt i metylcellosolv och glycerol; svårlösligt i metanol och etanol; nästan olösligt i kloroform, bensen, n-hexan, acetonitril, etyleter, aceton, etylacetat, kol- tetraklorid; 459 094 17 b) har ett ultraviolett absorptionsspektrum som uppvisar föl- å) e) jande absorptionsmaxima: - i 0,1 N saltsyraz A 278 nm (så % = 48) lTIäX Cm - i fosfatbuffert pH 7,4: 278 mn (så 6 = 49,0) ÄmâX Cm - i 0,1 N natriumhydroxid: 1 s _ Ämax 297 nm (El Cm _ 70,0) ett infrarött absorptionsspektrum i nujol med följande observerbara absorptionsmaxima: 3700-3100, 2960-2860 (nujol), 1645, 1590, 1510, 1460 (nujol), 1375 (nujol), 1300, 1260, 1230, 1180, 1150, 1060, 1025, 970, 890, 845, 815, 720 (nujol); en elementaranalys, när provet först torkats vid ungefär 140°C under inert atmosfär (%¿lw = 9,8), som indikerar följande ungefärliga procentsammansättning (medeltal): kol 56,15 %; väte 5,15 %; kväve 6,30 %; klor 3,90 %; syre (genom skillnad) 28,50 %; en retentionstid (tR) av 22,6 minuter vid analys genOm omvänd fas-HPLC med användning av en 5 P.Zorbax ODS-kolonn och eluering med en linjär gradient från 0 % till 50 % lösning B i lösning A i 40 minuter (lösning A: 25 mM NaH2PO4/acetonitril (9/1) buffrad vid pH 6,0 med 0,1 N Na0H; lösning B: 25 mM NaH2PO4/acetonitril (3/7) buffrad vid pH 6,0 med 0,1 N NaOH), med en flödeshastighet av 2 ml/min.; (intern standard: 3,5~dihydroxi-toluen t R 8,84 minuter); följande grupper av signaler i 270 MHz IH NMR spektrum registrerade i DMSO-d6 med tillsats av några droppar D (konc. 25 mg/0,5 ml) 20 (TMS som intern standard ¿'= L, 459 094 0,00 ppm): 0,7-1,5 (m); 1,8-2,2 (m); 2,7-4,5 (m); 4,6-5,7 (111): 6,2-8,l (111): g) en sur funktion med förmåga att bilda salter; h) en saltbildningsbar basisk funktion; i) en molekylvikt av ungefär 1877 bestämd genom FAB mass- spektrometri; teichomycin A2 faktor 3: ett vitt amorft pulver, som vid upphettning börjar sönderdelas vid 205°C och är fullständigt sönderdelat vid 250°C, vilket a) är fritt lösligt i vatten vid pH >7,0 eller vid pH <2 i dimetylformamid, dimetylsulfoxid och propylenglykol; något lösligt i metylcellosolv och glycerol; svårlösligt i metanol och etanol; nästan olösligt i kloroform, bensen, n-hexan, acetonitril, etyleter, aceton, etylacetat, kol- tetraklorid; b) har ett ultraviolett absorptionsspektrum som uppvisar föl- jande absorptionsmaxima: - i 0,l N saltsyra: l % l x27s mn (sl Cm ma = 49,2) - i fosfatbuffert pH 7,4: 278 nm (El 96 = 50,8) hmax l cm - i 0,1 N natriumhydroxid: Ämax 297 nm (må :m = 72,7) c) ett infrarött absorptionsspektrum i nujol med följande observerbara absorptionsmaxima: 3700-3100, 2960-2850 (nujol), 1645, 1590, l5l0, 1460 (nujol), 1375 (nujol), 1300, 1230, ll80, ll50, ll20, 1060, 1030, 970, 890, 845, 820, 800, 720 (nujol); 459 094 ie d) en elementaranalys, när provet först torkats vid ungefär l40°C under inert atmosfär (%.Aw = l2,0), som indikerar följande ungefärliga procentsammansättning (medeltal): kol 56,26 %; väte 5,20 %; kväve 6,69 %; klor 3,95 %; syre (genom skillnad) 27,90 %; e) en retentionstid (tR) av 23,3 minuter vid analys genom omvänd fas-HPLC med använding av en 5/u Zorbax ODS-kolonn och eluering med en linjär gradient från 0 % till S0 % lösning B i lösning A i 40 minuter (lösning A: 25 mM NaH2PO4/acetonitril (9/l) buffrad vid pH 6,0 med 0,1 N NaOH; lösning B: 25 mM NaH2PO4/acetonitril (3/7) buffrad vid pH 6,0 med 0,1 N NaOH), med en flödeshastighet av 2 ml/min.; (intern standard: 3,5-dihydroxi-toluen tR 8,84 minuter); f) följande grupper av signaler i 270 MHz 1 H NMR-spektrum registrerade i DMSO- de med tillsats av några droppa D20 (konc. 25 mg/0,5 ml) (TMS som intern standard 5 = 0,00 ppm): 0,7-1,5 (m); 1,8-2,0 (m); 2,7-4,5 (m); 4,5-5,7 (m); 6,2-8,0 (m); g) en sur funktion med förmåga att bilda salter; h) en saltbildningsbar basisk funktion; i) en molekylvikt av ungefär 1877 bestämd genom FAB mass- spektrometri; teichomycin A2 faktor 4: ett vitt amorft pulver, som vid upphettning börjar mörkna vid ungefär 2l0°C och är fullstän- digt sönderaeiat vid 250%, vilket a) är fritt lösligt i vatten vid pH >7,0 eller vid pH (2 i dimetylformamid, dimetylsulfoxid och propylenglykol; något lösligt i metylcellosolv och glycerol; svårlösligt b) c) e) 459 094 29 i metanol och etanol, nästan olösligt i kloroform, bensen, n-hexan, acetonitril, etyleter, aceton, etylacetat, kol- tetraklorid; har ett ultraviolett absorptionsspektrum som uppvisar föl- jande absorptionsmaxima: - i 0,1 N saltsyra: 1 % Amax 278 nm (El Cm = 52,5) - i fosfatbuffert pH 7,4: 1 % Ämax 278 mn (El om = 52,5) - i 0,1 N natriumhydroxid: 1 % _ 297 nm (E - 75,5) hmax 1 cm ett infrarött absorptionsspektrum i nujol med följande absorptionsmaxima: 3700-3100, 2960-2840 (nujol), 1645, 1590, 1510, 1460 (nujol), 1375 (nujol), 1300, 1230, 1175, 1140, 1060, 1025, 970, 890, 840, 815, 720 (nujol); en elementaranalys, när provet först torkats vid ungefär 140°C under inert atmosfär (%¿kw = 9,8), som indikerar följande ungefärliga procentsammansättning (mede1tal): kol 56,50 %; väte 5,10 %; kväve 6,50 %; klor 3,80 %; syre (genom skillnad) 28,10 %; 4 en retentionstid (tR) av 25,8 minuter vid analys genom omvänd fas-HPLC med användning av en 5 N Zorbax ODS-kolonn och eluering med en linjär gradient från 0 % till 50 % lösning B i lösning A i 40 minuter (lösning A: 25 mM NaH2PO¿/acetonitril (9/1) buffrad vid pH 6,0 med 0,1 N NaOH; lösning B: 25 mM NaH2PO4/acetonitril (3/7) buffrad vid pH 6,0 med 0,1 N NaOH), med en flödeshastighet av 3,5-dihydroxi-toluen t 2 ml/min.; (intern standard: R 8,84 minuter); 459 094 2.3 f) en sur funktion med förmåga att bilda salter; g) en saltbildningsbar basisk funktion; h) en molekylvikt av ungefär 1891 bestämd genom FAB mass- spektrometri; teichomycin A2 faktor 5: ett vitt amorft pulver, som börjar mörkan vid upphettning till 210°C och är fullständigt sönder- dela: vid 2so°c, vilket a) är fritt lösligt i vatten vid pH >7,0 eller vid pH <2 i dimetylformamid, dimetylsulfoxid och propylenglykol; något lösligt i metylcellosolv och glycerol; svårlösligt i metanol och etanol; nästan olösligt i kloroform, n-hexan, acetonitril, etyleter, aceton, tetraklorid; bensen, etylacetat, kol- b) har ett ultraviolett absorptionsspektrum som uppvisar föl- jande absorptionsmaxima: - i 0,1 N saltsyraz l % _ Amax 278 mn (El Cm - 49,6) - i fosfatbuffert pH 7,4: Ä 278 nm (så % = 51,8) [REX C111 - i 0,1 N natriumhydroxid: 1 % _ 297 nm (El cm _ 78,8) ÄmâX ett infrarött absorptionsspektrum i nujol med följande observerbara absorptionsmaxima: 3700-3100, 2960-2840 (nujol), 1645, 1590, 1510, 1460 (nujol), 1375 (nujol), 1300, 1230, 1175, 1145, 1060, 1025, 970, 890, 840, 815, 720 (nujol); d) en elementaranalys, när provet först torkats vid ungefär l40°C under inert atmosfär (%¿§w = 10,1), som indikerar följande ungefärliga procentsammansättning (medeltal): e) f) .Ps U1 H3 CD QD .Cs 2/'7 kol 56,60 %; väte 5,05 %; kväve 6,63 %; syra (genom skillnad) 27,87 %; klor 3,85 %; en retentionstid (tR) av 26,4 minuter vid analys genom omvänd fas-HPLC med användning av en 5 p.Zorbax ODS-kolonn och eluering med en linjär gradient från 0 % till 50 % lösning B i lösning A i 40 minuter (lösning A: 25 mM NaH2PO4/acetonitril (9/l) buffrad vid pH 6,0 med 0,1 N NaoH; lösning B: 25 mM NaH2PO4/acetonitril (3/7) buffrad _ vid pH 6,0 med 0,1 N NaOH), med en flödeshastighet av 2 ml/min.; (intern standard: 3,5-dihydroxi-toluen t R 8,84 minuter); en sur funktion med förmåga att bilda salter; en saltbildningsbar basisk funktion; en molekylvikt av ungefär 1891 bestämd genom FAB mass- spektrometri; och deras farmaceutiskt godtagbara salter.
2. En huvudsakligen ren individuell antibiotisk förening utvald ur gruppen bestående av teichomycin A2 faktor 1, teichomycin A2 faktor 2 och teichomycin A2 faktor 3, identi- fierade genom de kännetecken som anges i patentkravet 1, och deras alkalimetallsalter, alkaliska jordartsmetallsalter och farmaceutiskt godtagbara ammoniumsalter.
3. En huvudsakligen ren individuell antibiotisk förening enligt patentkravet l eller 2 utvald ur gruppen bestående av teichomycin A2 faktor 2 och dess farmaceutískt godtagbara salter.
4. Sätt att framställa en förening enligt patentkravet 1, k ä n n e t e c k n a t därav, att man separerar teicho- mycin A2 i singelfaktorerna genom omvänd fasfördelning eller 459 094 bo jonbyteskromatografi och eventuellt överför de erhållna före- ningarna i motsvarande farmaceutiskt godtagbara salter enligt i och för sig kända metoder.
5. Sätt enligt patentkravet 4, k ä n n e t e C k n a t därav, att separationen åstadkommes genom kolonnkromatografi med användning av en silanerad silikagelkolonn och gradient- elution av acetonitril i utspätt vattenhaltigt ammonium- formiat som framkallare.
6. Sätt enligt patentkravet 5, k ä n n e t e c k n a t därav, att kolonnen framkallas i en linjär gradient från l0 till 20 % acetonitril i en 0,2 %ig ammoniumformiatlösning.
7. Sätt enligt patentkravet 6, ytterligare k ä n n e - t e c k n a t därav, att när blandningar av två faktorer utvinnes från kolonnen, separeras de i singelfaktorerna genom omvänd faskolonnkromatografi med användning av en oktadecylsilankolonn och en blandning av acetonitril vattenhaltigt ammoniumformiat 24:76 som framkallare.
8. Sätt enligt patentkravet 6 för framställning av teicho- mycin A2 faktor 2, k ä n n e t e c k n a t därav, att man upplöser teichomycin A 2 komplex i en 0,2 % ammoniumformiat/ acetonitril 9/l-blandning, justerar pH till ungefär 7,5 genom tillsats av Na0H, passerar den erhållna lösningen genom en silanerad silikagelkolonn, framkallar kolonnen i en linjär gradient från l0 till 20 % acetonitril i en 0,2 % ammonium- formiatlösning, samlar de fraktioner som har samma HPLC profil- karaktäristika av teichomycin A2 faktor 2, avdunstar det orga- niska lösningsmedlet under reducerat tryck, avsaltar den kvarvarande vattenlösningen genom att passera den genom en silanerad silikagelkolonn, tvättar kolonnen med vatten, elue- rar den med 50 %ig vattenhaltig acetonitril, koncentrerar eluatet till en liten volym och utfäller ren teichomycin A 2 faktor 2 därur genom tillsats av ett icke-lösningsmedel. .Ru (11 \O C) \O Jär- å!
9. Sätt enligt patentkravet 4, k ä n n e t e c k n a t därav, att separationen âstadkommes genom kolonnkromatografi med användning av dietylaminoetylderivatet av agaros som stationär fas och buffertlösningar eller blandningar av buf- fertlösningar och icke-vattenhaltiga, med vatten blandbara lösningsmedel som eluenter. lO. Antibiotisk komposition innehållande två, tre, fyra eller alla fem singelfaktorer enligt patentkravet l i vilka som helst proportioner. ll. Farmaceutisk komposition för antibakteriell användning innehållande en förening enligt patentkravet l som aktiv beståndsdel.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GB8216590 | 1982-06-08 |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| SE8303211D0 SE8303211D0 (sv) | 1983-06-07 |
| SE8303211L SE8303211L (sv) | 1983-12-09 |
| SE459094B true SE459094B (sv) | 1989-06-05 |
Family
ID=10530888
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SE8303211A SE459094B (sv) | 1982-06-08 | 1983-06-07 | Rena teichomycin a2 singelfaktorer 1, 2, 3, 4 och 5 samt saett foer deras framstaellning samt antibiotisk och farmaceutisk komposition innehaallande desamma |
Country Status (32)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4542018A (sv) |
| JP (5) | JPS591423A (sv) |
| KR (1) | KR900008246B1 (sv) |
| AU (1) | AU560966B2 (sv) |
| BE (1) | BE896993A (sv) |
| BG (1) | BG60529B2 (sv) |
| CA (1) | CA1208204A (sv) |
| CH (1) | CH657139A5 (sv) |
| DE (1) | DE3320342A1 (sv) |
| DK (1) | DK159117C (sv) |
| ES (2) | ES522941A0 (sv) |
| FI (1) | FI73697C (sv) |
| FR (1) | FR2528050B1 (sv) |
| GB (1) | GB2121401B (sv) |
| GR (1) | GR78267B (sv) |
| HK (1) | HK55887A (sv) |
| HU (1) | HU193538B (sv) |
| IE (1) | IE55025B1 (sv) |
| IL (1) | IL68819A0 (sv) |
| IT (1) | IT1212085B (sv) |
| LU (1) | LU84853A1 (sv) |
| MY (1) | MY8700002A (sv) |
| NL (1) | NL8301980A (sv) |
| NO (1) | NO159104C (sv) |
| NZ (1) | NZ204480A (sv) |
| PH (1) | PH19533A (sv) |
| PT (1) | PT76831B (sv) |
| SE (1) | SE459094B (sv) |
| SG (1) | SG70686G (sv) |
| SU (1) | SU1318170A3 (sv) |
| UA (1) | UA6025A1 (sv) |
| ZA (1) | ZA833607B (sv) |
Families Citing this family (25)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB8307847D0 (en) * | 1983-03-22 | 1983-04-27 | Lepetit Spa | Antibiotics l 17054 and l 17046 |
| US4696817A (en) * | 1983-10-11 | 1987-09-29 | The Dow Chemical Company | Extraction of teichomycin A2 from whole culture fermentation broth |
| GB8333624D0 (en) * | 1983-12-16 | 1984-01-25 | Lepetit Spa | Antibiotics l 17054 and l 17392 |
| GB8415092D0 (en) * | 1984-06-13 | 1984-07-18 | Lepetit Spa | Ester derivatives |
| GB8415093D0 (en) * | 1984-06-13 | 1984-07-18 | Lepetit Spa | Antibiotic l 17392 |
| GB8428619D0 (en) * | 1984-11-13 | 1984-12-19 | Lepetit Spa | Derivatives of antibiotic l 17046 |
| GB8512795D0 (en) * | 1985-05-21 | 1985-06-26 | Lepetit Spa | Increasing ratio of components of teicoplanin a2 complex |
| US4694069A (en) * | 1985-09-30 | 1987-09-15 | Smithkline Beckman Corporation | Kibdelosporangium aridum SK&F-AAD-609 |
| JPS61241319A (ja) * | 1986-04-25 | 1986-10-27 | Kanegafuchi Chem Ind Co Ltd | 新規エーテル‐エステルブロツク共重合体を含有する室温硬化性組成物 |
| US4845194A (en) * | 1987-02-27 | 1989-07-04 | Eli Lilly And Company | Glycopeptide recovery process |
| GB8715735D0 (en) * | 1987-07-03 | 1987-08-12 | Lepetit Spa | De-mannosyl teicoplanin derivatives |
| US4996148A (en) * | 1987-07-13 | 1991-02-26 | Eli Lilly And Company | A80407 antibiotics |
| US5213797A (en) * | 1987-07-13 | 1993-05-25 | Eli Lilly And Company | A80407 antibiotics |
| GB8720980D0 (en) * | 1987-09-07 | 1987-10-14 | Lepetit Spa | Derivatives |
| US5194424A (en) * | 1988-12-27 | 1993-03-16 | Gruppo Lepetit Spa | C63 -amide derivatives of 34-de(acetylglucosaminyl)-34-deoxy-teicoplanin and their use as medicaments against bacteria resistant to glycopeptide antibiotics |
| WO1992010516A1 (en) * | 1990-12-05 | 1992-06-25 | Gruppo Lepetit S.P.A. | 38-decarboxy-38-hydroxymethyl derivatives of teicoplanin antibiotics, and a process for preparing them |
| US5606036A (en) * | 1991-03-27 | 1997-02-25 | Gruppo Lepetit Spa | Antibiotic A 40926 ester derivatives |
| CA2250578C (en) | 1996-04-23 | 2003-06-24 | Versicor Inc. | Improved chemical process for preparing amide derivatives of antibiotic a 40926 |
| KR100476818B1 (ko) * | 2002-07-19 | 2005-03-17 | 종근당바이오 주식회사 | 테이코플라닌 에이 투 정제 방법 |
| US20060074014A1 (en) * | 2002-11-18 | 2006-04-06 | Vicuron Pharmaceuticals Inc. | Dalbavancin compositions for treatment of bacterial infections |
| US7119061B2 (en) * | 2002-11-18 | 2006-10-10 | Vicuron Pharmaceuticals, Inc. | Dalbavancin compositions for treatment of bacterial infections |
| MXPA05005338A (es) | 2002-11-18 | 2005-12-14 | Vicuron Pharm Inc | Metodos para administrar dalbavancin para el tratamiento de infecciones bacterianas. |
| EP1806150A1 (en) * | 2006-01-05 | 2007-07-11 | NEED PHARMA S.r.l. | Teicoplanin composition |
| CN102718843B (zh) * | 2012-06-30 | 2014-05-14 | 华北制药集团新药研究开发有限责任公司 | 一种替考拉宁单组份的制备方法 |
| CN114112612A (zh) * | 2021-10-28 | 2022-03-01 | 丽珠集团福州福兴医药有限公司 | 一种替考拉宁i5杂质的分离纯化方法及其应用 |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB1496386A (en) * | 1975-03-05 | 1977-12-30 | Lepetit Spa | Antibiotics |
-
1983
- 1983-05-12 FI FI831660A patent/FI73697C/sv not_active IP Right Cessation
- 1983-05-16 NO NO831754A patent/NO159104C/no not_active IP Right Cessation
- 1983-05-19 ZA ZA833607A patent/ZA833607B/xx unknown
- 1983-05-25 AU AU14968/83A patent/AU560966B2/en not_active Expired
- 1983-05-27 GR GR71483A patent/GR78267B/el unknown
- 1983-05-31 IL IL68819A patent/IL68819A0/xx not_active IP Right Cessation
- 1983-05-31 DK DK245883A patent/DK159117C/da not_active IP Right Cessation
- 1983-06-01 GB GB08315003A patent/GB2121401B/en not_active Expired
- 1983-06-01 PH PH28999A patent/PH19533A/en unknown
- 1983-06-01 ES ES522941A patent/ES522941A0/es active Granted
- 1983-06-02 IT IT8321432A patent/IT1212085B/it active Protection Beyond IP Right Term
- 1983-06-03 NL NL8301980A patent/NL8301980A/nl active Search and Examination
- 1983-06-04 DE DE3320342A patent/DE3320342A1/de active Granted
- 1983-06-07 SE SE8303211A patent/SE459094B/sv not_active IP Right Cessation
- 1983-06-07 CH CH3124/83A patent/CH657139A5/fr not_active IP Right Cessation
- 1983-06-07 BE BE0/210960A patent/BE896993A/fr not_active IP Right Cessation
- 1983-06-07 IE IE1329/83A patent/IE55025B1/en not_active IP Right Cessation
- 1983-06-07 SU SU833604953A patent/SU1318170A3/ru active
- 1983-06-07 NZ NZ204480A patent/NZ204480A/en unknown
- 1983-06-07 HU HU832029A patent/HU193538B/hu unknown
- 1983-06-07 PT PT76831A patent/PT76831B/pt unknown
- 1983-06-07 KR KR1019830002517A patent/KR900008246B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1983-06-07 UA UA3604953A patent/UA6025A1/uk unknown
- 1983-06-07 CA CA000429836A patent/CA1208204A/en not_active Expired
- 1983-06-07 US US06/502,043 patent/US4542018A/en not_active Expired - Lifetime
- 1983-06-08 FR FR8309522A patent/FR2528050B1/fr not_active Expired
- 1983-06-08 LU LU84853A patent/LU84853A1/fr unknown
- 1983-06-08 JP JP58102508A patent/JPS591423A/ja active Granted
-
1984
- 1984-10-15 ES ES536770A patent/ES536770A0/es active Granted
-
1986
- 1986-08-29 SG SG706/86A patent/SG70686G/en unknown
-
1987
- 1987-07-30 HK HK558/87A patent/HK55887A/xx not_active IP Right Cessation
- 1987-12-30 MY MY2/87A patent/MY8700002A/xx unknown
-
1989
- 1989-10-24 JP JP1276997A patent/JPH02291278A/ja active Granted
- 1989-10-24 JP JP1276999A patent/JPH02288888A/ja active Granted
- 1989-10-24 JP JP1276998A patent/JPH02288887A/ja active Granted
- 1989-10-24 JP JP1277000A patent/JPH02291279A/ja active Granted
-
1994
- 1994-02-24 BG BG98541A patent/BG60529B2/bg unknown
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| SE459094B (sv) | Rena teichomycin a2 singelfaktorer 1, 2, 3, 4 och 5 samt saett foer deras framstaellning samt antibiotisk och farmaceutisk komposition innehaallande desamma | |
| CA1238041A (en) | Pure preparation of antibiotic l 17054 and process for preparing it | |
| KR920001691B1 (ko) | 항생물질 l17392(데글루코테이코플라닌) 및 그 염을 제조하는 방법 | |
| JP2997510B2 (ja) | 抗生物質ｇｅ２２７０因子ａ▲下１▼、ａ▲下２▼、ａ▲下３▼およびｈ | |
| EP0182851A1 (en) | PRIMYCIN COMPONENTS AND METHOD FOR SEPARATING THE ANTIBIOTIC COMPLEX. | |
| HU181721B (en) | Process for preparing antibiotics c-19393sdown 2 and c-1939hdown 2 | |
| Pessina et al. | Effect of fluoroqmnolones on the in-vitro proliferation of myeloid precursor cells | |
| US3372090A (en) | Streptonigrin antibiotics and process for their production | |
| EP0124343A1 (en) | Actaplanin antibiotics | |
| US4264736A (en) | Antibiotic 890A10 | |
| Cassidy et al. | Antibiotic 890A 10 | |
| JPH03197489A (ja) | 抗生物質ｔａｎ―１１７１およびその製造法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| NAL | Patent in force |
Ref document number: 8303211-0 Format of ref document f/p: F |
|
| NUG | Patent has lapsed |