NO159104B - Fremgangsmaate for fremstilling av rene teichomycin a2 enkeltfaktorer 1, 2, 3, 4, og 5. - Google Patents
Fremgangsmaate for fremstilling av rene teichomycin a2 enkeltfaktorer 1, 2, 3, 4, og 5. Download PDFInfo
- Publication number
- NO159104B NO159104B NO831754A NO831754A NO159104B NO 159104 B NO159104 B NO 159104B NO 831754 A NO831754 A NO 831754A NO 831754 A NO831754 A NO 831754A NO 159104 B NO159104 B NO 159104B
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- nujol
- solution
- teichomycin
- acetonitrile
- factor
- Prior art date
Links
- 108010053950 Teicoplanin Proteins 0.000 title claims description 36
- LCTCUBQFWLTHNS-MDZDMXLPSA-N 61036-64-4 Chemical compound CCCCC\C=C\CCC(=O)NC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC(C(=C1)OC=2C(=CC(=CC=2)C(OC2C(C(O)C(O)C(CO)O2)NC(C)=O)C2C(NC(C3=CC(O)=CC(OC4C(C(O)C(O)C(CO)O4)O)=C3C=3C(O)=CC=C(C=3)C(NC3=O)C(=O)N2)C(=O)OC)=O)Cl)=C(OC=2C(=CC(=CC=2)C(O)C(C(N2)=O)NC(=O)C(N)C=4C=C(O5)C(O)=CC=4)Cl)C=C1C3NC(=O)C2C1=CC(O)=C(C)C5=C1 LCTCUBQFWLTHNS-MDZDMXLPSA-N 0.000 title claims description 26
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 15
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 117
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 105
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 36
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 33
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 30
- UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N Benzene Chemical compound C1=CC=CC=C1 UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 30
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 30
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 30
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 30
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 25
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 25
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 23
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 22
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 22
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 21
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 21
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 20
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 20
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 claims description 20
- 238000000862 absorption spectrum Methods 0.000 claims description 20
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 20
- VZGDMQKNWNREIO-UHFFFAOYSA-N tetrachloromethane Chemical compound ClC(Cl)(Cl)Cl VZGDMQKNWNREIO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 20
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 19
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 18
- OIPPWFOQEKKFEE-UHFFFAOYSA-N orcinol Chemical compound CC1=CC(O)=CC(O)=C1 OIPPWFOQEKKFEE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- 235000019799 monosodium phosphate Nutrition 0.000 claims description 15
- AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M sodium dihydrogen phosphate Chemical compound [Na+].OP(O)([O-])=O AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 15
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 15
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 13
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 claims description 13
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 12
- XNWFRZJHXBZDAG-UHFFFAOYSA-N 2-METHOXYETHANOL Chemical compound COCCO XNWFRZJHXBZDAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- VZTDIZULWFCMLS-UHFFFAOYSA-N ammonium formate Chemical compound [NH4+].[O-]C=O VZTDIZULWFCMLS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims description 11
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 claims description 11
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims description 11
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 claims description 11
- BJNLLBUOHPVGFT-QRZIFLFXSA-N teichomycin Chemical compound CCCCCCCCCC(=O)N[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC(C(=C1)OC=2C(=CC(=CC=2)[C@@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@H]2C(N[C@H](C3=CC(O)=CC(O[C@@H]4[C@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O4)O)=C3C=3C(O)=CC=C(C=3)[C@@H](NC3=O)C(=O)N2)C(O)=O)=O)Cl)=C(OC=2C(=CC(C[C@H](C(N4)=O)NC(=O)[C@H](N)C=5C=C(O6)C(O)=CC=5)=CC=2)Cl)C=C1[C@H]3NC(=O)[C@@H]4C1=CC6=CC(O)=C1 BJNLLBUOHPVGFT-QRZIFLFXSA-N 0.000 claims description 11
- ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N Chlorine atom Chemical compound [Cl] ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 239000000460 chlorine Substances 0.000 claims description 10
- 229910052801 chlorine Inorganic materials 0.000 claims description 10
- 238000000921 elemental analysis Methods 0.000 claims description 10
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 claims description 10
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 claims description 10
- 125000004435 hydrogen atom Chemical class [H]* 0.000 claims description 10
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 claims description 10
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 claims description 10
- GHOXVFYORXUCPY-PKMGYIMSSA-N teicoplanin A2-2 Chemical compound CC(C)CCCCCCC(=O)N[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC(C(=C1)OC=2C(=CC(=CC=2)[C@@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@H]2C(N[C@@H](C3=CC(O)=CC(O[C@@H]4[C@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O4)O)=C3C=3C(O)=CC=C(C=3)[C@@H](NC3=O)C(=O)N2)C(O)=O)=O)Cl)=C(OC=2C(=CC(C[C@H](C(N4)=O)NC(=O)[C@H](N)C=5C=C(O6)C(O)=CC=5)=CC=2)Cl)C=C1[C@H]3NC(=O)[C@@H]4C1=CC6=CC(O)=C1 GHOXVFYORXUCPY-PKMGYIMSSA-N 0.000 claims description 10
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 claims description 9
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims description 9
- BJNLLBUOHPVGFT-PKMGYIMSSA-N teicoplanin A2-3 Chemical compound CCCCCCCCCC(=O)N[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC(C(=C1)OC=2C(=CC(=CC=2)[C@@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@H]2C(N[C@@H](C3=CC(O)=CC(O[C@@H]4[C@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O4)O)=C3C=3C(O)=CC=C(C=3)[C@@H](NC3=O)C(=O)N2)C(O)=O)=O)Cl)=C(OC=2C(=CC(C[C@H](C(N4)=O)NC(=O)[C@H](N)C=5C=C(O6)C(O)=CC=5)=CC=2)Cl)C=C1[C@H]3NC(=O)[C@@H]4C1=CC6=CC(O)=C1 BJNLLBUOHPVGFT-PKMGYIMSSA-N 0.000 claims description 9
- KSPOYQQCANXEDC-WNTLLCOUSA-N teicoplanin A2-4 Chemical compound CCC(C)CCCCCCC(=O)N[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC(C(=C1)OC=2C(=CC(=CC=2)[C@@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@H]2C(N[C@@H](C3=CC(O)=CC(O[C@@H]4[C@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O4)O)=C3C=3C(O)=CC=C(C=3)[C@@H](NC3=O)C(=O)N2)C(O)=O)=O)Cl)=C(OC=2C(=CC(C[C@H](C(N4)=O)NC(=O)[C@H](N)C=5C=C(O6)C(O)=CC=5)=CC=2)Cl)C=C1[C@H]3NC(=O)[C@@H]4C1=CC6=CC(O)=C1 KSPOYQQCANXEDC-WNTLLCOUSA-N 0.000 claims description 8
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 claims description 7
- FHBQKTSCJKPYIO-RLDSMAAISA-N teicoplanin A2-5 Chemical compound CC(C)CCCCCCCC(=O)N[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC(C(=C1)OC=2C(=CC(=CC=2)[C@@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@H]2C(N[C@@H](C3=CC(O)=CC(O[C@@H]4[C@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O4)O)=C3C=3C(O)=CC=C(C=3)[C@@H](NC3=O)C(=O)N2)C(O)=O)=O)Cl)=C(OC=2C(=CC(C[C@H](C(N4)=O)NC(=O)[C@H](N)C=5C=C(O6)C(O)=CC=5)=CC=2)Cl)C=C1[C@H]3NC(=O)[C@@H]4C1=CC6=CC(O)=C1 FHBQKTSCJKPYIO-RLDSMAAISA-N 0.000 claims description 7
- -1 acetronitrile Chemical compound 0.000 claims description 6
- 238000010828 elution Methods 0.000 claims description 6
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 6
- 238000000655 nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 claims description 6
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 claims description 6
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 claims description 5
- 239000003480 eluent Substances 0.000 claims description 4
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 claims description 4
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 claims description 3
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 claims description 3
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 claims description 3
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 claims description 2
- 238000004810 partition chromatography Methods 0.000 claims description 2
- YMWQIYMUNZBOOV-SFRGEMKNSA-N c13587 Chemical compound CCCCC\C=C\CCC(=O)N[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC(C(=C1)OC=2C(=CC(=CC=2)[C@@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@H]2C(N[C@@H](C3=CC(O)=CC(O[C@@H]4[C@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O4)O)=C3C=3C(O)=CC=C(C=3)[C@@H](NC3=O)C(=O)N2)C(O)=O)=O)Cl)=C(OC=2C(=CC(C[C@H](C(N4)=O)NC(=O)[C@H](N)C=5C=C(O6)C(O)=CC=5)=CC=2)Cl)C=C1[C@H]3NC(=O)[C@@H]4C1=CC6=CC(O)=C1 YMWQIYMUNZBOOV-SFRGEMKNSA-N 0.000 claims 2
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 claims 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 claims 1
- YTJSFYQNRXLOIC-UHFFFAOYSA-N octadecylsilane Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC[SiH3] YTJSFYQNRXLOIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 230000001376 precipitating effect Effects 0.000 claims 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 32
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 10
- 229910052784 alkaline earth metal Inorganic materials 0.000 description 8
- SGSMSXWFVXNLOG-UCNABHHISA-N teicoplanin A2-1 Chemical compound CCCCC\C=C/CCC(=O)O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1NC(C(=C1)OC=2C(=CC(=CC=2)[C@@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@H]2C(N[C@@H](C3=CC(O)=CC(O[C@@H]4[C@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O4)O)=C3C=3C(O)=CC=C(C=3)[C@@H](NC3=O)C(=O)N2)C(O)=O)=O)Cl)=C(OC=2C(=CC(C[C@H](C(N4)=O)NC(=O)[C@H](N)C=5C=C(O6)C(O)=CC=5)=CC=2)Cl)C=C1[C@H]3NC(=O)[C@@H]4C1=CC6=CC(O)=C1 SGSMSXWFVXNLOG-UCNABHHISA-N 0.000 description 7
- 238000010265 fast atom bombardment Methods 0.000 description 6
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 6
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 5
- 229960001760 dimethyl sulfoxide Drugs 0.000 description 5
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 5
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 4
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 4
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 3
- 150000003863 ammonium salts Chemical class 0.000 description 3
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 3
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 2
- 230000005526 G1 to G0 transition Effects 0.000 description 2
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 2
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 2
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000295644 Staphylococcaceae Species 0.000 description 2
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 2
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 2
- 229910052783 alkali metal Inorganic materials 0.000 description 2
- 150000001340 alkali metals Chemical class 0.000 description 2
- 125000005210 alkyl ammonium group Chemical group 0.000 description 2
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 2
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 2
- 239000012062 aqueous buffer Substances 0.000 description 2
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 2
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 2
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 2
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 2
- HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L magnesium stearate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 2
- 210000003800 pharynx Anatomy 0.000 description 2
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 2
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 2
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 description 2
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 2
- 235000010356 sorbitol Nutrition 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 239000000375 suspending agent Substances 0.000 description 2
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 2
- 241000220479 Acacia Species 0.000 description 1
- 241000187842 Actinoplanes teichomyceticus Species 0.000 description 1
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O Ammonium Chemical compound [NH4+] QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- 241000416162 Astragalus gummifer Species 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- 241000192125 Firmicutes Species 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 235000010643 Leucaena leucocephala Nutrition 0.000 description 1
- WHXSMMKQMYFTQS-UHFFFAOYSA-N Lithium Chemical compound [Li] WHXSMMKQMYFTQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 1
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 1
- KEAYESYHFKHZAL-UHFFFAOYSA-N Sodium Chemical class [Na] KEAYESYHFKHZAL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000193996 Streptococcus pyogenes Species 0.000 description 1
- 229920001615 Tragacanth Polymers 0.000 description 1
- MZVQCMJNVPIDEA-UHFFFAOYSA-N [CH2]CN(CC)CC Chemical class [CH2]CN(CC)CC MZVQCMJNVPIDEA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000007059 acute toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000403 acute toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 150000001342 alkaline earth metals Chemical class 0.000 description 1
- 150000001450 anions Chemical class 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000000845 anti-microbial effect Effects 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000003125 aqueous solvent Substances 0.000 description 1
- VVAUMULFPDPRCF-UHFFFAOYSA-N azanium;acetonitrile;formate Chemical compound [NH4+].CC#N.[O-]C=O VVAUMULFPDPRCF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 description 1
- 239000002585 base Substances 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 239000012888 bovine serum Substances 0.000 description 1
- 230000001680 brushing effect Effects 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 230000001332 colony forming effect Effects 0.000 description 1
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 1
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 1
- IJKVHSBPTUYDLN-UHFFFAOYSA-N dihydroxy(oxo)silane Chemical compound O[Si](O)=O IJKVHSBPTUYDLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 239000007884 disintegrant Substances 0.000 description 1
- 239000002270 dispersing agent Substances 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 210000005069 ears Anatomy 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- HWJHWSBFPPPIPD-UHFFFAOYSA-N ethoxyethane;propan-2-one Chemical compound CC(C)=O.CCOCC HWJHWSBFPPPIPD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 1
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 230000035784 germination Effects 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-M hydroxide Chemical compound [OH-] XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 239000006193 liquid solution Substances 0.000 description 1
- 239000006194 liquid suspension Substances 0.000 description 1
- 229910052744 lithium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000006210 lotion Substances 0.000 description 1
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 1
- 159000000003 magnesium salts Chemical class 0.000 description 1
- 235000019359 magnesium stearate Nutrition 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 description 1
- 239000002674 ointment Substances 0.000 description 1
- 238000012856 packing Methods 0.000 description 1
- 239000003973 paint Substances 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 229920005990 polystyrene resin Polymers 0.000 description 1
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 1
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 1
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 1
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 238000009938 salting Methods 0.000 description 1
- 238000005185 salting out Methods 0.000 description 1
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 1
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 1
- 239000000454 talc Substances 0.000 description 1
- 229910052623 talc Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 1
- 239000000196 tragacanth Substances 0.000 description 1
- 235000010487 tragacanth Nutrition 0.000 description 1
- 229940116362 tragacanth Drugs 0.000 description 1
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 238000010267 two-fold dilution method Methods 0.000 description 1
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P1/00—Preparation of compounds or compositions, not provided for in groups C12P3/00 - C12P39/00, by using microorganisms or enzymes
- C12P1/06—Preparation of compounds or compositions, not provided for in groups C12P3/00 - C12P39/00, by using microorganisms or enzymes by using actinomycetales
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/045—Actinoplanes
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Mycology (AREA)
- Virology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Compounds Of Unknown Constitution (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Fodder In General (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Description
Foreliggende oppfinnelse angår en fremgangsmåte for fremstilling av et individuelt antibiotikum valgt fra gruppen bestående av teichomycin A2 faktor 1, teichomycin faktor 2, teichomycin A2 faktor 3, teichomycin A2 faktor 4 og teichomycin A2 faktor 5 i en i alt vesentlig ren form.
Teichomycin A2 er et av flere forskjellige antibiotikum som ,oppnås når man dyrker rasen Actinoplanes Teichomyceticus
nov.sp. ATCC 31121 i et kulturmedium som inneholder assimi-lerbare kilder for karbon, nitrogen og uorganiske salter (se belgisk patent nr. 839.259). Ifølge den fremgangsmåte som er beskrevet i ovennevnte patent innvinner man en antibiotisk blanding inneholdende teichomycin A^, A2 og A^ fra det utskilte fermenteringsmediet ved at man ekstraherer dette med et egnet organisk oppløsningsmiddel som er ubland-bart med vann, og deretter foretar en utfelling fra det ekstraherende oppløsningsmiddel ved hjelp av kjente fremgangsmåter. Teichomycin A2 kan så utskilles fra den antibiotiske blandingen ved hjelp av kolonnekromatografi på
Cr)
Sephadex<w>. Etter at teichomycin A2 er ytterligere renset
ved at det er ført gjennom en sulfonert polystyren harpiks,
kan det så karakteriseres ved en rekke forskjellige kjemiske-fysikalske parametere såsom R^-verdier på forskjellige sett av papir og tynnsjiktkromatografiske systemer hvor forbindelsen opptrer som et virkelig enhetlig produkt.
Man har nå uventet funnet at teichomycin A2 i virkeligheten består av en blanding av flere samfremstilte nærstående antibiotiske forbindelser, og disse hovedfaktorene eir blitt betegnet teichomycin A2 faktor 1, faktor 2, faktor 3, fak-
tor 4 og faktor 5. Man har funnet at disse rene enkeltfaktorene er biologisk skillbare fra teichomycin A2-komplek-
set ved at de har en høyere grad av antibiotisk aktivitet overfor en rekke forskjellige mikroorganismer.
Ifølge foreliggende oppfinnelse er det således tilveie-
bragt en fremgangsmåte for fremstilling av en i alt vesent-
lig ren individuell antibiotisk forbindelse valgt fra gruppen
bestående av Teichomycin A2 faktor 1, Teichomycin A2
faktor, Teichomycin A^ faktor 3, Teichomycin A2 faktor 4
og Teichomycin A2 faktor 5, med de i det nedenstående an-gitte kjemisk-fysikalske egenskaper, og deres farmasøytisk akseptable salter, og denne fremgangsmåten er kjenne-
tegnet ved at man separerer Teichomycin A2 i enkeltfaktorer ved revers fasefordelingskromatografi under anvendelse av en silanert silisiumdioksydgelkolonne og en gradienteluering med acetonitril i fortynnet ammoniumformiat som elueringsmiddel, eller utfører nevnte separering ved ione-bytterkromatografi, og eventuelt omdanner de således oppnådde forbindelser til deres tilsvarende farmasøytisk akseptable salter.
Betegnelsene "Teichomycin A2", "Teichomycin A2-kompleks" eller "antibiotika-kompleks" slik det brukes i foreliggende sammenheng, refererer seg til den blanding som inneholder de ovennevnte fem samproduserte antibiotiske faktorer som kan oppnås f.eks. slik som beskrevet i belgisk patent 839.259, og som der er betegnet Teichomycin A2.
Separasjon av komplekset i de rene enkeltfaktorer kan oppnås ved reversert fasefordeling eller ioneutbytterkromatografi. I førstnevnte tilfeller kan man hensiktsmessig bruke inakti-vert silisiumdioksydgel som kolonnepakking, og som elueringsmiddel kan man bruke en gradienteluering av cicetonitril/ vandig ammoniumformiat, mens man i sistnevnte tilfeller bruker en anionutbytter av en svak geltype som den stasjo-nære fase og vandig buffere eller blandinger av vandige buffere og ikke-vandige oppløsningsmidler som eluerings-systemer. Spesielt oppnår man optimale separasjons-resultater ved å føre en oppløsning av Teichomycin A2 opp-løst i en blanding av fortynnet vandig ammoniumformiat og acetonitril gjennom en silanisert silisiumdioksydgelkolonne og utvikle denne med en gradienteluering i samme oppløsnings-middelsystem. Man oppnår også gode resultater ved å bruke dietylaminoetylderivatet av agarose som den sstasjonære fasen og utføre separasjonen ved en progressiv eluering med bufferoppløsninger eller blandinger av bufferoppløsninger og ikke-vandige, vannblandbare oppløsningsmidler.
Selve separasjonen kontrolleres ved hjelp av høytrykks-væskekromatografi. Fraksjoner med tilsvarende høytrykks-væskekromatografiprofil kombineres, og hvis det er ønskelig, kan de ytterligere renses ved preparativ høytrykksvæske-kromatografi, og deretter avsaltes. Fra disse oppløsninger kan de enkelte faktorer så utvinnes ved å fordampe de organiske oppløsningsmidler, fjerning av vann til et mindre volum og tilsette et overskudd av et organisk oppløsnings-middel hvor forbindelsene ikke er oppløselige, hvorved man får utfelt de fremstilte produkter.
Det følgende spesifikke eksempel er gitt for bedre å illu-strere den foreliggende fremgangsmåte.
Separasjon av Teichomycin A^ faktorene 1, 2, 3, 4 og 5
10 g Teichomycin A2_kompleks fremstilt ved hjelp av den fremgangsmåte som er beskrevet i belgisk patent 839.259
ble oppløst i 1 liter av en 0,2% ammoniumformiat-acetonitril.
(9:1)-blanding og justert til pH 7,5 med IN NaOH. Denne oppløsningen ble ført gjennom en kolonne som inneholdt 500 g silanisert silisiumdioksydgel 60 (Merck).
Kolonnen ble så eluert med en lineær gradient fra 10-20% acetonitril i en 0,2% ammoniumformiatoppløsning i et totalt volum på 10 liter.
Fraksjoner på ca. 20 ml ble oppsamlet og kontrollert ved hjelp av høytrykksvæskekromatografi.
I den følgende tabell I er det angitt oppholdstidene (tR) for Teichomycin A, faktorene 1, 2, 3, 4 og 5 i en répresen-tativ høytrykksvæskekromatografiseparasjon (drifts-betingelsene er angitt under tabellen):
Kolonne: 5n "Zorbax" ODS (Du Pont)
Mobil fase: Lineær gradient fra 0%B til 50%B i A i løpet
av 4 0 minutter.
A) 25 mM NaH2P04Iacetonitril (9:1) bufferet til pH 6,0 med 0,1N NaOH
B) 2 5 mM NaH2P04IAcetonitril (3:7) bufferet
til pH 6,0 med 0,1N NaOH
Strøm: 2 ml/min.
Detektor: U.V. fotometer ved 2 54 nanometer.
Fraksjoner med tilsvarende høytrykksvæskekromatografiprofil ble slått sammen og det organiske oppløsningsmiddel fordam-pet under redusert trykk. De vandige oppløsninger ble ført gjennom en kolonne inneholdende 10 g silanert silisiumdioksydgel (60) (Merck). Kolonnen ble vasket, med destillert vann for å eliminere ammoniumformiatet, hvoretter kolonnen ble eluert med 50% vandig acetonitril.
Eluatet ble konsentrert til et lite volum ved å tilsette butanol som letter fordampingen av vannet, og produktet så utfelt med en blanding av aceton-etyleter (1:1). Ren teichomycin A2 faktor 1 (410 mg) og faktor 2 (770 mg) ble oppnådd ved hjelp av ovennevnte fremgangsmåte.
Teichomycin A2 faktor 3 som en l:l-blanding med teichomycin A2 faktor 2 ble så ytterligere renset ved høytrykksvæske-kromatograf i på en semipreparativ kolonne ved hjelp av følgende driftsbetingelser.
Kolonne: "Whatman Partisil" ODS M 9 10/50
Mobil fase: 0,2% ammoniumformat i r^O/acetonitril
(76:24)
Strøm: 4,5 ml/min.
Detektor: U.V. fotometer ved 254 nm
Belastning: 20 mg
Også i dette tilfellet ble rensingen kontrollert ved at
hver fraksjon ble undersøkt ved høytrykksvæskekromatografi.
Fraksjoner inneholdende ren teichmomycin A2 faktor 2 så
vel som fraksjoner inneholdende ren teichomycin A., faktor 3 ble slått sammen, avsaltet og utfelt som beskrevet tidligere (utbytte 510 mg teichomycin A2 faktor 2 og 520 mg teichomycin A2 faktor 3).
Fraksjoner inneholdende faktorene 4 og 5 i et l:l-forhold (ca. 500 mg) fra første kolonne ble slått sammen med et ytterligere utbytte av fraksjoner inneholdende en blanding av faktorene 4 og 5 (ca. 490 mg) fremstilt på samme måten fra en annen parallell separasjon, og disse ble skilt ved semipreparativ høytrykksvæskekromatografi ved hjelp av samme betingelser som angitt ovenfor for teichomycin A2 faktor 3. Utbyttet var 350 mg teichomycin A2 faktor 4 og 300 mg teichomycin A2 faktor 5.
Kjemisk- fysikalske egenskaper for rene enkeltfaktorer av teichomycin A2
Teichomycin A2 faktor 1 er et hvitt amorft pulver som ved oppvarming begynner å mørkne ved ca. 220°C og er fullstendig dekomponert ved 255°C. Det har følgende egenskaper: a) Det er fritt oppløselige i vann ved pH over 7,0 eller ved pH mindre enn 2, i dimetylformamid, dimetylsulfoksyd
og propylenglykol;
Det er svakt oppløselig i metylcellosolve og glycerol;
Dårlig oppløselig i metanol og etanol, nesten uoppløse-lig i kloroform, benzen,'n-heksan, acetonitril, etyleter, aceton, etylacetat, karbontetraklorid.
b) har et ultrafiolett absorpsjonsspektrum som er angitt på fig. 1 på de vedlagte tegninger, som har følgende
absorpsjonsmaksima:
- i 0,1N saltsyre:
X , 278 nm (e]% = 49,5)
maks lem
- i fosfatpuffer pH 7,4:
X , 278 nm (E*% = 50,0)
maks lem
- i 0,IN natriumhydroksyd:
X , 297 nm (E** = 72,1)
maks lem
c) har et infrarødt absorpsjonsspektrum i nujol som er vist på fig 2 på de medfølgende tegninger, med følgende absorpsjonsmaksima: 3700-3100, 2960-2840 (nujol), 1645, 1590, 1510, 1460 (nujol), 1375 (nujol), 1305, 1230, 1180, 1155, 1060, 1025, 970, 890, 845, 815, 720 (nujol); d) har en elementæranalyse etter at en prøve er blitt tør-ket ved ca. 140°C under en inert atmosfære (% A vann =
8,5) som indikerte følgende omtrentlige prosentvise sammensetning (middel): karbon 56,70%, hydrogen 4,90%, nitrogen 6,65%, klor 3,80%, oksygen (ved forskjell) 27,95%.
e) har en oppholdstid (tD) på 21,2 minutter ved analyse ved en reversert fase høytrykksvæskekromatografi når man
bruker en 5|i "Zorbax" ODS-kolonne og eluerer denne med en lineær gradient fra 0-50% oppløsning av B i oppløs-ning A i løpet av 40 minutter (oppløsning A: 25 mM Nar^PO^/ acetonitril (9/1) bufferet til pH 6,0 med 0,IN NaOH; opp-løsning B: 25 mM NaH2P04/acetonitril (3/7) bufferet til pH 6,0 med 0,1N NaOH), ved en strømhastighet på 2 ml/min.
(indre standard: 3,5-dihydroksy-toluen tR 8,84 minutter).
f) har de følgende grupper av signaler i et 270 MHz "'"H NMR-spektrum (hele spekteret er vist på fig. 3 på de vedlagte
tegninger) registrert i DMSO-dg med tilsetning av et par
dråper D20 (kons. 2 5 mg/0,5 ml) (TMS som indre standard:
6 = 0,00 ppm): 0,8-l,5(m), 1,7-2,3 (m), 2,7-4,0 (m), 4,0-4,7 (m), 4,8-5,8 (m), 6,2-8,1 (m). g) har en syrefunksjon som er i stand til å danne salter; h) har en saltbar basisk funksjon;
i) har en molekylvekt på ca. 1875 slik dette kunne bestemmes
ved en massespektrometrisk analyse, idet man brukte en rask atombombardering (FAB) som ionekilde (for presenta-sjon av FAB-massespektrometri, se f.eks. M. Barber et al. Nature, 293, 5830, 270-275 (1981)).
Teichomycin A2 faktor 2 er et hvitt amorft pulver som begynner å mørkne når det oppvarmes ved ca. 210°C og er fullstendig dekomponert ved 250°C, og som har følgende egenskaper: a) er fritt oppløselig i vann ved pH over 7,0 eller ved pH lavere enn 2 i dimetylformamid, dimetylsulfoksyd og propylenglykol;
svakt oppløselig i metylcellosolve og glycerol;
dårlig oppløselig i metanol og etanol;
nesten uoppløselig i kloroform, benzen, n-heksan, acetonitril, etyleter, aceton, etylacetat og karbontetraklorid. b) har et ultrafiolett absorpsjonsspektrum som er gitt på fig. 4 på de vedlagte tegninger som har følgende absorpsjonsmaksima:
- i 0,1N saltsyre:
X . 278 nm (E^"% = 48)
maks lem
- i fosfatbuffer pH 7,4:
X . 278 nm (E?-% = 49,0)
maks lem
- i 0,1N natriumhydroksyd:
X , 297 nm (e}% = 70,0) maks lem • c) har et infrarødt absorpsjonsspektrum i nujol vist på fig.
5 på de medfølgende tegninger, med følgende observerbare
absorpsjonsmaksima: 3700-3100, 2960-2860 (nujol), 1645, 1590, 1510, 1460 (nujol), 1375 (nujol), 1300, 1260,
1230, 1180, 1150, 1060, 1025, 970, 890, 845, 815, 720 (nujol).
d) har en elementæranalyse etter at en prøve er blitt tørket ved 140°C under en inert atmosfære (% A vann = 9,8), som
indikerer følgende otmrentlige prosentvise sammensetning (middel): karbon 56,15%, hydrogen 5,15%, nitrogen 6,30%, klor 3,90%, oksygen (ved forskjell) 28,50%.
e) en oppholdstid (tR) på 22,6 minutter ved a:ialyse ved hjelp av reversert fasehøytrykksvæskekromatografL når man bruker en 5\ i "Zorbax" ODS-kolonne og eluerer denne med en lineær gradient fra 0-50% oppløsning B i oppløsning A i 40 minutter (oppløsning A: 25 mM Nar^PO^/acetonitril
(9/1) bufferet til pH 6,0 med 0,IN NaOH
oppløsning B: 25 mM NaH-jPO^/acetonitril (3/7) bufferet til pH 6,0 med 0,IN NaOH) med en gjennomstrømningshastig-het på 2 ml/min. (indre standard: 3,5-dihydroksytoluen tR 8,84 minutter).
f) har følgende grupper av signaler i et 270 MHz "<*>"H NMR-spektrum (hele spekteret er vist på fig. 6 på de vedlagte
tegninger) registrert i DMSO-d^ med tilsetning av et par dråper D20 (kons. 2 5 mg/0,5, ml) (TMS som indre standard 6 = 0,00 ppm): 0,7-1,5 (m); 1,8-2,2 (m); 2,7-4,5 (m);
4,6-5,7 (m); 6,2-8,1 (m).
g) har en syrefunksjon som er i stand til å danne salter.
h) har en saltbar basisk funksjon.
i) har en molekylvekt på ca. 1877 slik dette kunne bestemmes
ved FAB-massespektrometri.
Teichomycin A2 faktor 3 er et hvitt amorft pulver som ved oppvarming begynner å dekomponere ved 205°C og er fullstendig dekomponert ved 250°C, og som har følgende egenskaper : a) Det er fritt oppløselig i vann ved pH over 7,0 eller ved pH lavere enn 2 i dimetylformamid, dimetylsulfoksyd og propylenglykol;
svakt oppløselig i metylcellosolve og glycerol;
dårlig oppløselig i metanol og etanol;
nesten uoppløselig i kloroform, benzen, n-heksan, acetonitril, etyleter, aceton, etylacetat og karbohtetraklorid. b) har et ultrafiolett absorpsjonsspektrum som er gitt på fig. 7 på de vedlagte tegninger, som har følgende absorpsjonsmaksima:
- i 0,IN saltsyre:
X , 278 nm (E?"% = 49,2)
maks lem
- i fosfatbuffer pH 7,4:
X . 278 nm (e}% =50,8)
maks lem
- i 0,1N natriumhydroksyd:
X , 297 nm (e}% = 72,7)
maks lem
c) har et infrarødt absorpsjonsspektrum i nujol som er vist på fig. 8 på de medfølgende tegninger, med følgende observerbare absorpsjonsmaksima: 3700-3100, 2960-2850 (nujol), 1645, 1590, 1510, 1460 (nujol), 1375 (nujol), 1300, 1230, 1180, 1150, 1120, 1060, 1030, 970, 890, 845, 820, 800,
720 (nujol).
d) har en elementæranalyse etter at prøvene er blitt tørket ved ca. 140°C under en inert atmosfære (% A vann = 12,0)
som indikerer følgende omtrentlige prosentvise sammensetning (middel): karbon 56,26%, hydrogen 5,20%, nitrogen 6,69%, klor 3,95%, oksygen (ved forskjell) 27,90%.
e) har en oppholdstid (tR) på 23,3 minutter ved analyse ved en reversert fasehøytrykksvæskekromatografi når man bruker en 5u "Zorbax" ODS-kolonne og eluerer denne med en lineær gradient fra 0-50% oppløsning B i oppløsning A i løpet av 40 minutter (oppløsning A: 25 mM Nar^PO^/ acetonitril (9/1) bufferet til pH 6,0 med 0,1 N NaOH, oppløsning B: 25 mM NaH2P04/acetonitril (3/7) bufferet til pH 6,0 med 0,IN NaOH) og en strømhastighet på 2 ml/ min. (indre standard: 3,5-dihydroksy-toluen tn 8,84 minutter) .
f) har følgende grupper av signaler i et 270 MHz "'"H NMR-spektrum (hele spekteret er vist på fig. 9 på de vedlagte
tegninger) registrert i DMSO-dg med tilsetning av et par dråper D20 (kons. 2 5 mg/0,5 ml) (TMS som indre standard 6= 0,00 ppm): 0,7-1,5 (m): 1,8-2,0 (m), 2,7-4,5 (m) , 4,6-5,7 (m), 6,2-8,0 (m).
g) har en syrefunksjon som er i stand til å danne salter.
h) har en saltbar basisk funksjon.
i) en molekylvekt på ca. 1877 slik dette kunne: bestemmes ved
FAB-massespektrometri.
Teichomycin A2 faktor 4 er et hvitt amorft pulver som ved oppvarming begynner å mørkne ved ca. 210°C og er fullstendig dekomponert ved 2 50°C, og har følgende egenskaper: a) er fritt oppløselig i vann ved pH over 7,0 eller ved pH mindre enn 2 i dimetylformamid, dimetylsulfoksyd og
propylenglykol;
svakt oppløselig i metylcellosolve og glycerol;
dårlig oppløselig i metanol og etanol,
nesten uoppløselig i kloroform, benzen, n-heksan, acetonitril, etyleter, aceton, etylacetat og kårbontetraklorid.
b) har et ultrafiolett absorpsjonsspektrum som er gitt på fig. 10 på de medfølgende tegninger, som har følgende absorp-
sjonsmaksima:
- i 0,1N saltsyre:
1 . 278 nm (e}% = 52,5)
maks lem
- i fosfatbuffer pH 7,4:
\,c 278 nm (E,* = 52,5)
maks lem
- i 0,1N natriumhdyroksyd:
297 nm <E"m = 75'5) c) har et infrarødt absorpsjonsspektrum i nujol som er vist på fig. 11 på de medfølgende tegninger, med følgende absorpsjonsmaksima: 3700-3100, 2960-2840 (nuhol), 1645, 1590, 1510, 1460 (nujol), 1375 (nujol), 1300, 1230, 1175, 1140, 1060, 1025, 970, 890, 840, 815, 720 (nujol), d) har en elementæranalyse etter at en prøve på forhånd er blitt tørket ved ca. 140°C under en inert atmosfære
(% a vann = 9,8) som indikerer følgende omtrentlige prosentvise sammensetning (middel): karbon 56,50%, hydrogen 5,10%, nitrogen 6,50%, klor 3,80%, oksygen (ved forskjell) 28,10%.
e) har en oppholdstid, tR, på 25,8 minutter ved analyse ved hjelp av reversert fasehøytrykksvæskekromatografi når
man bruker en 5\ x "Zorbax" ODS-kolonne og eluerer denne med lineærgradient fra 0-50% oppløsning B i oppløsning A i løpet av 40 minutter (oppløsning A: 25 mM NaH-jPO^/ acetonitril (9/1) bufferet ved pH 6,0 med 0,1N NaOH. oppløsning B: 25 mM NaH-jPO^/acetonitril (3/7) bufferet til pH 6,0 med 0,1N NaOH) og med en strømhastighet på
2 ml/min. (indre standard: 3,5-dihydroksy-toluen, tR
8,84 minutter).
f) har en syrefunksjon som er i stand til å danne salter.
g) en saltbar basisk funksjon.
h) en molekylvekt på 1891 slik denne kunne måles ved FAB-massespektrometri.
Teichomycin A2 faktor 5 er et hvitt amorft pulver som begynner å mørkne når det oppvarmes til 210°C og er fullstendig dekomponert ved 2 50°C, og som har følgende egenskaper: a) Det er fritt oppløselig i vann ved pH over 7,0 eller ved pH lavere enn 2 i dimetylformamid, dimetylsulfoksyd
og propylenglykol;
svakt oppløselig i metylcellosolve og glycerol;
dårlig oppløselig i metanol og etanol, og nesten oppløselig i kloroform, benzen, n-heksan, acetonitril, etyleter, aceton, etylacetat, karbontetraklorid.
b) Det har et ultrafiolett absorpsjonsspektrum som er gitt på fig. 12 på de vedlagte tegninger, som har følgende
absorpsjonsmaksima:
- i 0,1N saltsyre:
x , 278 nm (E^% = 49,6)
maks lem
- i fosfatbuffer pH 7,4:
X , 278 nm (e|% = 51,8)
maks lem
- i 0,IN natriumhydroksyd:
x . 297 nm (E** = 78,8)
maks lem
c) har et infrarødt absorpsjonsspektrum i nujol som er vist på fig. 13 på de medfølgende tegninger, med følgende observerbare absorpsjonsmaksima: 3700-3100, 2960-2840 (nujol), 1645, 1590, 1510, 1460 (nujol), 1375 (nujol), 1300, 1230, 1175, 1145, 1060, 1025, 970, 890, 840, 815, 720 (nujol). d) har en elementæranalyse etter at prøven er blitt tørket ved 140°C under en inert atmosfære (% A vann = 10,1) som indikerer følgende omtrentlige prosentvise sammensetning (middel): karbon 56,60%, hydrogen 5,05%, nitrogen 6,63%, klor 3,85%, oksygen (ved forskjell) 27,87%., e) en oppholdstid (tR) på 26,4 minutter ved analyse ved en reversert høytrykksvæskekromatografi når man bruker en 5 |i "Zorbax" ODS-kolonne og eluerer denne med en lineær gradient fra 0-50% oppløsning B i oppløsning A i løpet av 40 minutter (oppløsning A: 25 mM NaH2P04/acetonitril (9/1) bufferet i pH 6,0 med 0,1N NaOH, oppløsning B: 25 mM NaH2P04 bufferet i pH 6,0 med 0,IN NaOH) ved en
strømhastighet på 2 ml/min. (indre standard: 3,5-dihydroksytoluen, tR, 8,84 minutter).
f) en syrefunksjon som er i stand til å salte.
g) en saltbar basisk funksjon.
h) en molekylvekt på ca. 1891 slik dette kunne bestemmes
ved FAB-massespektrometri.
Hver av Teichomycin A2 faktorene 1, 2, 3, 4 og 5 inne-
holder en syrefunksjon som er i stand til å danne salter. Fremstilling av alkalimetall-, jordalkalimetall- og
farmasøytisk akseptable ammoniumsalter av Teichomycin A2, faktorene 1, 2, 3, 4 og 5 omfattes også av foreliggende oppfinnelse.
Representative alkalimetall- og jordalkalimetallsalter innbefatter natrium-, kalium-, litium-, kalsium- og magnesium-salter. Ammoniumsaltene innbefatter ammonium og primære, sekundære og tertiære (C^-C4)alkylammonium og hydroksy-(C-^-C4) alkylammoniumsalter .
Alkali- og jordalkalimetallsaltene fremstilles ved hjelp av vanlige kjente fremgangsmåter som brukes for fremstilling av metallsalter. Som et eksempel kan det angis at Teicho-
mycin A2 faktor 1, 2, 3, 4 og 5 i den frie syreformen,
oppløses i et egnet oppløsningsmiddel såsom propylenglykol, hvoretter oppløsningene gradvis tilsettes en støkiometrisk mengde av en egnet valgt mineralbase.
Alkali- og jordalkalimetallsaltene som dannes, kan så inn-
vinnes ved utfelling med et utfellingsmiddel og fra-
filtrering.
Alternativt kan disse salter fremstilles i en i alt vesentlig vannfri form gjennom lyofilisering. I dette tilfellet vil vandige oppløsninger inneholdende de ønskede salter som er et resultat fra utsaltningen av den frie syreformen med et egnet valgt alkali- eller jordalkalimetallkarbonat eller -hydroksyd i en slik mengde at man oppnår en pH mellom 7 og 8, frafiltreres eventuelle uoppløselige stoffer og så lyofiliseres.
De organiske ammoniumsalter kan fremstilles enten ved at
man tilsetter et passende valgt amin til en oppløsning av den fri syreformen av teichomycin A2 faktorene 1, 2, 3, 4
og 5 i et egnet oppløsningsmiddel såsom propylenglykol. Deretter kan man fordampe oppløsningsmidlet og overskuddet av aminreagensen, eller alternativt kan man kontakte de to reagensene i en minimal mengde vann og så utfelle de fremstilte saltene ved tilsetning av et utfel.Lings-
middel.
Som nevnt ovenfor inneholder hver av teichomycin A2 faktorene 1, 2, 3, 4 og 5 også en basisk funksjon som er i stand til å danne syreaddisjonssalter. Deres farmasøy-
tisk akseptable syreaddisjonssalter kan fremstilles på en i seg selv kjent måte, f.eks. ved at man kontakter de rene enkeltfaktorer med en relativt sterk syre, fortrinnsvis en mineralsyre.
Fremstilling av teichomycin A-, faktor 2 natriumsalt
En vandig oppløsning av teichomycin A2 faktor 2 (150 mg,
15 ml) ble justert til pH 8,0 ved dråpevis tilsetning av 0,1N NaOH. Den fremstilte oppløsning ble filtrert, over-ført til et kammer i et frysetørkingssystem og så frosset. Etter at frysing var fullstendig, ble kammerest evakuert 1
til 0,1 torr og is ble sublimert ved å oppvarme varmeplaten til 0°C. Denne prosessen fortsatte inntil p::oduktet var nesten tørt (ca. 1% fuktighet). En titrering av en oppløs-ning av teichomycin A2 faktor 2 natriumsaltet fremstilt på
denne måten, i 25 ml metylcellosolve/r^O 3/1 med 0,1N HC1,
viste et nærvær av to titrerbare funksjoner karakterisert ved følgende pK: 7,03 og 4,78.
Ved å bruke samme fremgangsmåte som beskrevet ovenfor, men ved å anvende teichomycin A2 faktorene 1, 3, 4 og 5, kan de tilsvarende natriumsalter fremstilles. Bestemmelse av natriummengden i saltene bekrefter dannelsen av et mono-natriumsalt.
Den in vitro antibakterielle aktiviteten for teichomycin A2 faktorene 1, 2, 3, 4 og 5 som viste seg i alt vesentlig
å være aktiv mot gram-positive bakterier, ble bestemt på
kliniske isolater av stafylokokker og streptokokker idet man brukte en togangers fortynningsmetode i et mikro-titreringssystem. Penessay-medium (Difco) og Todd-Hewitt-
medium (Difco) ble brukt for stafylokokki og streptokokki henholdsvis. Kulturer som hadde stått over natten ble fortynnet slik at det endelig inokulum var ca. 10 koloni-dannende enheter/ml. Man avleste den minimalt hemmende konsentrasjon (MIC) som den laveste konsentrasjon hvor man ikke fikk noen synlig vekst etter en 18-24 timers inkubering ved 37°C. De oppnådde resultater er vist i tabell II.
Forholdet mellom de mikrobiologiske egenskaper for de individuelle faktorene 1, 2, 3, 4 og 5 ble bestemt ved agar-diffusjonsmetoden idet man brukte S. aureus ATCC 6538 som spireprøve, og teichomycin A2-kompleks som standard.
Ved prøven ble en passende mengde av teichomycin A2 faktor 1, teichomycin A2 faktor 2, teichomycin A2 faktor 3, teichomycin A2 faktor 4, teichomycin A2 faktor 5 og teichomycin A2-kompleks, som ble brukt som standard, oppløst i dimetylformamid i en konsentrasjon på 2000 ug/ml. Disse oppløsninger ble ytterligere fortynnet, idet man brukte fosfatbuffer 0,067 M pH 7,4 tilsatt 1% storfeserum slik at man fikk de følgende konsentrasjoner: 2,5, 5, 10 og 2 0 |ig/ml.
Filtrerpapirskiver ble så dyppet i prøveoppløsningene og plassert med jevne mellomrom på overflaten av agarplater som var tilført en suspensjon av prøveorganismen. Platene ble så inkubert ved 3 7°C i 18 timer, hvoretter man målte diameteren på inhiberingssonene. De data man oppnådde ble tilført en regnemaskin for å beregne styrken på de individuelle faktorer i forhold til komplekset.
De oppnådde resultater er angitt i det etterfølgende.
Teichomycin A2 faktorene 2, 3, 4 og 5 ble også prøvet i eksperimentelle infeksjoner forårsaket av S. pneumoniae og S. pyogenes i mus. Eksperimentene ble utført i sammen-lingning med teichomycin A2-komplekset. Resultatene er angitt i tabell III.
Den omtrentlige akutte toksisitet i mus (i.p.; for teichomycin A2 faktorene 1, 2, 3, 4 og 5 er vist i tabell IV nedenfor.
Sett på bakgrunn av de ovennevnte resultater kan forbindelsen ifølge foreliggende oppfinnelse, dvs. teichomycin A2 faktor 1, teichomycin A2 faktor 2, teichomycin A2 faktor 3, teichomycin A2 faktor 4, teichomycin A2 faktor 5 kan effektivt brukes som den aktive ingrediens i antimikrobielle preparater som kan brukes for mennesker og dyr for å hindre og for å behandle infeksjonssykdommer som er forårsaket av patogene bakterier, som er følsomme overfor de aktive ingredienser. I slike behandlinger kan nevnte forbindelser brukes som sådanne, eller brukes som enkeltindividuelle faktorer, eller når man tar hensyn til likheten i deres aktivitetsmønster, også i form av blandinger av to eller flere av de nevnte fem faktorer i ethvert mengdeforhold.
Forbindelser fremstilt ifølge oppfinnelsen kan tilføres oralt, topikalt eller parenteralt, men parenteral tilførsel er imidlertid mest foretrukket. Avhengig av tilførsels-veien kan disse forbindelsene opparbeides i forskjellige doseringsformer. Preparater for oral anvendelse kan være i form av kapsler, tabletter, flytende oppløsninger eller suspensjoner. Kapslene og tablettene kan videre i tillegg til den aktive ingrediens inneholde vanlige kjente for-tynningsmidler såsom laktose, kalsiumfosfat, sorbitol og lignende, smøremidler som f.eks. magnesiumstearat, talkum, polyetylenglykol, bindemidler, f.eks. polyvinylpyrrolidon, gelatin, sorbitol, tragant, akacia, smaksstoffer og akseptable nedbrytningsmidler og fuktemidler. De flytende preparatene er vanligvis i form av vandige eller oljeaktige oppløsninger eller suspensjoner, og kan inneholde vanlige kjente additiver, f.eks. suspenderingsmidler. For topisk anvendelse kan forbindelser fremstilt ifølge oppfinnelsen opparbeides i egnet form for en absorpsjon gjennom huden, slimhinnen i nesen eller svelget eller bronkievevet, og kan f.eks. være i form av væskeinhaleringsmidler, svelg-penslingsoppløsninger og lignende. Preparater for anvendelse i øyne og ører kan være en flytende eller halvflytende form. Topiske preparater kan opparbeides i hydrofobe eller hydro-file stoffer i form av salver, kremer, lotioner, malinger eller pulvere.
Preparater for injeksjon kan være i form av suspensjoner, oppløsninger eller emulsjoner i oljeholdige eller vandige væsker, og kan inneholde andre tilsetningsstoffer såsom suspenderingsmidler, stabiliserende midler og/eller disper-geringsmidler. Alternativt kan den aktive ingrediens være i form av et pulver for senere rekonstituering på det tids-punkt når preparatet skal brukes, f.eks. ved hjelp av sterilt vann.
Den mengde av den aktive forbindelse som tilføres, vil være avhengig av forskjellige faktorer såsom størrelse på pasi-enten og dennes tilstand, den vei og den frekvens man ønsker å tilføre preparatet samt årsaken til den sykdom man ønsker å behandle.
Teichomycin A^ faktorene 1, 2, 3, 4 og 5 er generelt effek-tive i daglige doser mellom 0,1 og 20 mg aktiv ingrediens pr. kg kroppsvekt, eventuelt oppdelt i to doser pr. døgn. Spesielt ønskelige preparater kan fremstilles i form av doseringsenheter inneholdende 50-250 mg pr. enhet.
Claims (4)
1. Fremgangsmåte for fremstilling av en i alt vesentlig ren individuell antibiotisk forbindelse valgt fra gruppen bestående av Teichomycin A2 faktor 1, Teichomycin A2 faktor 2, Teichomycin A2 faktor 3, Teichomycin A2 faktor 4 og Teichomycin A2 faktor 5, med henholdsvis følgende kjemisk-fysikalske egenskaper : Teichomycin A2 faktor 1: et hvitt amorft pulver som ved oppvarming begynner å mørkne ved ca. 220°C og er fullstendig dekomponert ved 255°C, og som a) er fullstendig oppløselig i vann ved pH større enn 7 eller ved pH mindre enn 2 i dimetylformamid, dimetylsulfoksyd og propylenglykol;
er svakt oppløselig imetylcellosolve og glycerol;
dårlig oppløselig i metanol og etanol og
nesten uoppløselig i kloroform, benzen, n-heksan, acetonitril, etyleter, aceton, etylacetat, karbontetraklorid b) har et ultrafiolett absorpsjonsspektrum som viser følgende absorpsjonsmaksima: - i 0,1N saltsyre: X . 278 nm (E*% = 49,5) maks lem - i fosfatbuffer pH 7,4: x , 278 nm (E^% = 50,0) maks lem - i 0,1N natriumhydroksyd: X , 297 nm (E*% = 72,1) maks lem ' c) har et infrarødt absorpsjonsspektrum i nujol med følgende absorpsjonsmaksima: 3700-3100, 2960-2840 (nujol), 1645, 1590, 1510, 1460 (nujol), 1375 (nujol), 1305, 1230, 1180, 1155, 1060, 1025, 970, 890, 845, 815, 720 (nujol); d) har en elementæranalyse etter at prøven på forhånd er tørket ved ca. 140°C under en inert atmosfære (% A v.~= 8,5), som indikerer følgende omtrentlige prosentvise sammensetning (middel): karbon 56,70%, hydrogen 4,90%, nitrogen 6,65%, klor 3,80%, oksygen (ved forskjell) 27,95%. e) har en oppholdstid, tR, på 21,2 minutter ved analyse ved hjelp av reversert fasehøytrykksvæskekromatografi, idet man bruker en 5u "Zorbax" ODS-kolonne og eluerer denne med en lineær gradient fra 0-50% oppløsning B i oppløsning A i løpet av 40 minutter (oppløsning A: 25 mM NaH2P04/acetonitril (9/1) bufferet til pH 6,0 med 0,1N NaOH, oppløsning B: 25 mM NaH2P04/acetonitril (3/7) bufferet til pH 6,0 med 0,IN NaOH) og med en gjennom-strømningshastighet på 2 ml/min. (indre standard: 3,5-dihydroksy-toluen tR 8,84 minutter). f) har følgende grupper av signaler i 270 MH2: ^"H NMR-spek-trum registrert i DMSO-dg med tilsetning av et par dråper D20 (kons. 2 5 mg/0,5 ml) (TMS som indre standard: i= 0,00 ppm): 0,8-1,5 (m) ; 1,7-2,3 (m) ; 2,7-4,0 (m) ; 4,0-4,7 (m); 4,8-5,8 (m) ; 6,2-8,1 (m). g) har en syrefunksjon som er i stand til å danne salter. h) en saltbar basisk funksjon i) en molekylvekt på ca. 1875 bestemt ved hjelp av FAB-masse
spektrometri;
Teichomycin A2 faktor 2: et hvitt amorft pulver som begynner å mørkne når det oppvarmes til 210°C og er fullstendig dekomponert ved 2 50°C, og som a) er helt oppløselig i vann ved pH større enn 7 eller pH mindre enn 2 i dimetylformamid, dimetylsulfoksyd og propylenglykol;
svakt oppløselig i metylcellosolve og glycerol;
dårlig oppløselig i metanol og etanol og nesten uoppløselig i kloroform, benzen, n-heksan, acetonitril, etyleter, aceton, etylacetat, karbontetraklorid. b) har et ultrafiolett absorpsjonsspektrum som viser følgende absorpsjonsmaksima: - i 0,IN saltsyre: X , 278 nm (E?"% = 48) maks lem - i fosfatbuffer pH 7,4: x , 278 nm (E?"% = 49,0) maks lem - i 0,1N natriumhydroksyd: X , 297 nm (e]% = 70,0) maks lem c) har et infrarødt absorpsjonsspektrum i nujol med følgende observerbare absorpsjonsmaksima: 3700-3100, 2960-2860 (nujol), 1645, 1590, 1510, 1460 (nujol), 1375 (nujol), 1300, 1260, 1230, 1180, 1150,1060, 1025, 970, 890, 845, 815, 720 (nujol). d) har en elementæranalyse etter at prøven er blitt tørket på forhånd ved ca. 140°C under en inert atmosfære
(% Av = 9,8), som indikerer følgende omtrentlige prosentvise sammensetning (middel): karbon 56,15%, hydrogen 5,15%, nitrogen 6,30%, klor 3,90%, oksygen (ved forskjell) 28,50%. e) har en oppholdstid (tR) på 22,6 minutter ved analyse ved hjelp av reversert fasehøytrykksvæskekromatografi når man bruker en 5(a "Zorbax" ODS-kolonne og eluerer denne med lineær gradient fra 0-50% oppløsning av B i oppløs-ning A i løpet av 40 minutter (oppløsning A: 25 mM NaH2P04/acetonitril (9/1) bufferet til pH 6,0 med 0,IN NaOH, oppløsning B: 25 mM NaH2P04/acetonitril (3/7) . bufferet til pH 6,0 med 0,1 NaOH) med en gjennomstrøm-ningshastighet på 2 ml/min. (indre standard: 3,5-dihydroksy-toluen tD 8,84 minutter). f) har følgende grupper av signaler i et 270 MHz "<*>"H NMR-spektrum registrert i DMSO-d^ med tilsetning av et par dråper D20 (kons. 2 5 mg/0,5 ml) (TMS som indre standard
= 0,00 ppm): 0,7-1,5 (m), 1,8-2,2 (m), 2,7-4,5 (m), 4,6-5,7 (m), 6,2-8,1 (m). g) har en syrefunksjon som er i stand til å danne salter. h) en saltbar basisk funksjon. i) en molekylvekt på ca. 1877 bestemt ved hjelp av FAB-
massespektrometri;
Teichomycin A2 faktor 3: et hvitt amorft pulver som ved oppvarming begynner å dekomponere ved 205°C og er fullstendig dekomponert ved 250°C, som: a) er fullstendig oppløselig i vann ved pH større enn 7,0 eller ved pH mindre enn 2 i dimetylformamid, dimetylsulfoksyd og propylenglykol;
svakt oppløselig i metylcellosolve og glycerol;
dårlig oppløselig i metanol og etanol, og nesten uoppløselig i kloroform, benzen, n-heksan, acetonitril, etyleter, aceton, etylacetat, karbontetraklorid. b) har et ultrafiolett absorpsjonsspektrum som viser følgende absorpsjonsmaksima: - i 0,IN saltsyre:
x , 278 nm (E?"% = 49,2)
maks lem - i fosfatbuffer pH 7,4:
x , 278 nm (e}% = 50,8)
maks lem - i 0,IN natriumhydroksyd:
X , 297 nm (E^% = 72,7)
maks lem c) har et infrarødt absorpsjonsspektrum i nujol med følgende observerbare absorpsjonsmaksima: 3700-3100, 2960-2850 (nujol), 1645, 1590, 1510, 1460 (nujol), 1375 (nujol), 1300, 1230, 1180, 1150, 1120, 1060, 1030, 970, 890, 845, 820, 800, 720 (nujol). d) har en elementæranalyse etter at prøven som på forhånd var tørket ved 14 0°C under en inert atmosfære (% A v = 12,0) som indikerer følgende omtrentlige prosentvise sammensetning (middel): karbon 56,26%, hydrogen 5,20%, nitrogen 6,69%, klor 3,95%, oksygen (ved forskjell) 27,90%. e) har en oppholdstid (tR) på 23,3 minutter ved analyse ved hjelp av reversert fasehøytrykksvæskekromatografi når man bruker en 5u "Zorbax" ODS-kolonne og eluerer denne med en lineær gradient, fra 0-50% av oppløsning B i oppløsning A i løpet av 40 minutter (oppløsning A: 25 mM NaH2P04/acetonitril (9/1) bufferet ved pH 6,0 med 0,1N NaOH, oppløsning B: 25 mM NaH2P04/acetonitril (3/7) bufferet ved pH 6,0 med 0,1N NaOH) med en gjennom-strømningshastighet på 2 ml/min. (indre standard:' 3.5- dihydroksy-toluen tR 8,84 minutter). f) har følgende grupper av signaler i et 270 MHz ^"H NMR-spektrum registrert i DMSO-dg med tilsetning av et par dråper D.,0 (kons. 2 5 mg/0,5 ml) (TMS som indre standard 6 = 0,00 ppm): 0,7-1,5 (m), 1,8-2,0 (m), 2,7-4,5 (m), 4.6- 5,7 (m), 6,2-8,0 (m). g) har en syrefunksjon som er i stand til å danne salter. h) en saltbar basisk funksjon. i) en molekylvekt på ca. 1877 bestemt ved FAB-massespektro
metri* Teichomycin A2 faktor 4: et hvitt amorft pulver som ved oppvarming begynner å mørkne ved ca. 210°C og er fullstendig dekomponert ved 2 50°C, som a) er fullstendig oppløselig i vann ved pH over 7,0 eller ved pH mindre enn 2 i dimetylformamid, dimetylsulfoksyd og propylenglykol;
svakt oppløselig i metylcellosolve og glycerol;
dårlig oppløselig i metanol og etanol, og
nesten uoppløselig i kloroform', benzen, n-heksan, acetronitril, etyleter, aceton, etylacetat, karbontetraklorid b) har et ultrafiolett absorpsjonsspektrum som har følgende absorpsjonsmaksima: - i 0,1N saltsyre: %aks 278 nm (Elcm = <5>2'5) - i fosfatbuffer pH 7,4: 278 ™ (Eicm = <5>2'5) - i 0,1N natriumhydroksyd: x , 297 nm (E^% = 75,5) Amaks lem c) har et infrarødt absorpsjonsspektrum i nujol med følgende absorpsjonsmaksima: 3700-3100, 2960-2840 (nujol), 1645, 1590, 1510, 1460 (nujol), 1375 (nujol), 1300, 1230, 1175, 1140, 1060, 1025, 970, 890, 840, 815, 720 (nujol); d) har en elementæranalyse etter at prøven på forhånd er tørket ved 140°C under en inert atmosfære (% a v = 9,8) som indikerer følgende omtrentlige prosentvise sammensetning (middel): karbon 56,50%, hydrogen 5,10%, nitrogen 6,50%, klor 3,80%, oksygen (ved forskjell) 28,10%. e) har en oppholdstid (tR) på 25,8 minutter ved. analyse ved hjelp av reversert fasehøytrykksvæskekromatografi når man bruker en 5\ i "Zorbax" ODS-kolonne og elu.erer denne med en linær gradient fra 0-50% av oppløsning B i opp-løsning A i løpet av 40 minutter (oppløsning A: 25 mM NaH2P04/acetonitril (9/1) bufferet til pH 6,0 med 0,1N NaOH, oppløsning B: 25 mM NaH2P04/acetonitril (3/7) bufferet til pH 6,0 med 0,1N NaOH) med en gjennomstrøm-ningshastighet på 2 ml/min. (indre standard:: 3,5-dihydroksy-toluen tR 8,84 minutter). f) har en syrefunksjon som er i stand til å danne salter. g) en saltbar basisk funksjon. h) en molekylvekt på ca. 1891 bestemt ved FAB-massespek
trometri j Teichomycin A~ faktor 5: et hvitt amorft pulver som begynner å mørkne når det oppvarmes til 210°C og er fullstendig dekomponert ved 2 50°C, og som: a) er fullstendig oppløselig i vann ved pH større enn 7,0 eller ved pH mindre enn 2 i dimetylformamid, dimetylsulfoksyd og propylenglykol;
svakt oppløselig i metylcellosolve og glycerol;
dårlig oppløselig i metanol og etanol, og nesten uoppløselig i kloroform, benzen, n-heksan, acetonitril, etyleter, aceton, etylacetat, karbontetraklorid b) har et ultrafiolett absorpsjonsspektrum som viser følgende absorpsjonsmaksima: - i 0,1N saltsyre: X , 278 nm (E^% = 49,6) maks lem ' - i fosfatbuffer pH 7,4: X , 278 nm (e}% = 51,8) maks lem - i 0,1N natriumhydroksyd: X , 297 nm (e}% = 78,8) maks lem c) har et infrarødt absorpsjonsspektrum i nujol med følgende observerbare absorpsjonsmaksima: 3700-3100, 2960-2840 (nujol), 1645, 1590, 1510, 1460 (nujol), 1375 (nujol), 1300, 1230, 1175, 1145, 1060, 1025, 970, 890, 840, 815, 720 (nujol). d) har en elementæranalyse etter at prøven på forhånd er tørket ved ca. 140°C under en inert atmosfære (% Av = 10,1) som indikerer følgende omtrentlige prosentvise sammensetning (middel): karbon' 56,60%, hydrogen 5,05%, nitrogen 6,63%, klor 3,85%, oksygen (ved forskjell) 27,87% e) en oppholdstid tR på 26,4 minutter ved analyse ved hjelp av reversert fasehøytrykksvæskekromatografi idet man bruker en 5(i "Zorbax" ODS-kolonne og eluerer denne med en lineær gradient fra 0-50% av oppløsning B i oppløs-ning A i løpet av 40 minutter (oppløsning A i 2 5 mM NaH2P04/acetonitril (9/1) bufferet til pH 6,0 med 0,IN NaOH, oppløsning B: 25 mM NaH2P04/acetonitril (3/7) bufferet til pH 6,0 med 0,1N NaOH) med en cjennomstrøm-ningshastighet på 2 ml/min. (indre standard: 3,5-dihydroksy-toluen tR 8,84 minutter). f) har en syrefunksjon som er i stand til å danne salter. g) en saltbar basisk funksjon, h) en molekylvekt på ca. 1891 bestemt ved FAB--massespektro
metri,
og deresv..f.armasøytisk akseptable salter, karakterisert ved at man separerer Teichomycin A2 i enkeltfaktorer ved revers fasefordelingskromatografi under anvendelse av en siianert silisiumdioksydgelkolonne og en gradienteluering med acetonitril i fortynnet ammoniumformiat som elueringsmiddel, eller utfører nevnte separering ved ionebytterkroms.tografi,
og eventuelt omdanner de således oppnådde forbindelser til deres tilsvarende farmasøytisk akseptable sa].ter.
2. Fremgangsmåte ifølge krav 1, karakterisert ved at nevnte kolonne elueres med en lineær gradient med fra 10 til 20% acetonitril i en 0,2% ammonium-formiatoppløsning.
3. Fremgangsmåte ifølge krav 1, karakterisert ved at når blandinger av to faktorer utvinnes fra kolonnen, så separeres disse i enkeltfaktorene ved revers fasekolonnekromatografi ved anvendelse av en oktadecyl-silan-kolonne og en blanding av acetonitril og 0,2% vandig ammoniumformiat i et forhold på 24:76 som elueringsmiddel .
4. Fremgangsmåte ifølge krav 1, for fremstilling av Teichomycin A2 faktor 2, karakterisert ved at man oppløser 'Teichomycin A2 kompleks i en blanding av 0,2% ammoniumformiat/acetonitril i et forhold på 9:1, justerer pH-verdien til ca. 7,5 ved tilsetning av NaOH, fører den oppnådde oppløsning gjennom en silanert silisiumdioksydkolonne, utvikler kolonnen i en lineær gradient fra 10 til 20% acetonitril i en 0,2% ammoniumformiatoppløsning, oppsamler frak-sjonene som har de samme høytrykksvæskekromatografi-profilegenskaper som Teichomycin A2 faktor 2, inndamper det organiske oppløsningsmiddelet under redusert trykk, avsalter den vandige tilbakeværende oppløsning ved å føre den gjennom en silanert silisiumdioksydkolonne, vasker kolonnen med vann, eluerer den med en 50% vandig acetonitriloppløsning, konsentrerer eluatet til et lite volum, og utfeller ren Teicomycin A2 faktor 2 derfra ved tilsetning av et utfellingsmiddel.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GB8216590 | 1982-06-08 |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NO831754L NO831754L (no) | 1983-12-09 |
| NO159104B true NO159104B (no) | 1988-08-22 |
| NO159104C NO159104C (no) | 1988-11-30 |
Family
ID=10530888
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NO831754A NO159104C (no) | 1982-06-08 | 1983-05-16 | Fremgangsmaate for fremstilling av rene teichomycin a2 enkeltfaktorer 1, 2, 3, 4, og 5. |
Country Status (32)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4542018A (no) |
| JP (5) | JPS591423A (no) |
| KR (1) | KR900008246B1 (no) |
| AU (1) | AU560966B2 (no) |
| BE (1) | BE896993A (no) |
| BG (1) | BG60529B2 (no) |
| CA (1) | CA1208204A (no) |
| CH (1) | CH657139A5 (no) |
| DE (1) | DE3320342A1 (no) |
| DK (1) | DK159117C (no) |
| ES (2) | ES522941A0 (no) |
| FI (1) | FI73697C (no) |
| FR (1) | FR2528050B1 (no) |
| GB (1) | GB2121401B (no) |
| GR (1) | GR78267B (no) |
| HK (1) | HK55887A (no) |
| HU (1) | HU193538B (no) |
| IE (1) | IE55025B1 (no) |
| IL (1) | IL68819A0 (no) |
| IT (1) | IT1212085B (no) |
| LU (1) | LU84853A1 (no) |
| MY (1) | MY8700002A (no) |
| NL (1) | NL8301980A (no) |
| NO (1) | NO159104C (no) |
| NZ (1) | NZ204480A (no) |
| PH (1) | PH19533A (no) |
| PT (1) | PT76831B (no) |
| SE (1) | SE459094B (no) |
| SG (1) | SG70686G (no) |
| SU (1) | SU1318170A3 (no) |
| UA (1) | UA6025A1 (no) |
| ZA (1) | ZA833607B (no) |
Families Citing this family (25)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB8307847D0 (en) * | 1983-03-22 | 1983-04-27 | Lepetit Spa | Antibiotics l 17054 and l 17046 |
| US4696817A (en) * | 1983-10-11 | 1987-09-29 | The Dow Chemical Company | Extraction of teichomycin A2 from whole culture fermentation broth |
| GB8333624D0 (en) * | 1983-12-16 | 1984-01-25 | Lepetit Spa | Antibiotics l 17054 and l 17392 |
| GB8415092D0 (en) * | 1984-06-13 | 1984-07-18 | Lepetit Spa | Ester derivatives |
| GB8415093D0 (en) * | 1984-06-13 | 1984-07-18 | Lepetit Spa | Antibiotic l 17392 |
| GB8428619D0 (en) * | 1984-11-13 | 1984-12-19 | Lepetit Spa | Derivatives of antibiotic l 17046 |
| GB8512795D0 (en) * | 1985-05-21 | 1985-06-26 | Lepetit Spa | Increasing ratio of components of teicoplanin a2 complex |
| US4694069A (en) * | 1985-09-30 | 1987-09-15 | Smithkline Beckman Corporation | Kibdelosporangium aridum SK&F-AAD-609 |
| JPS61241319A (ja) * | 1986-04-25 | 1986-10-27 | Kanegafuchi Chem Ind Co Ltd | 新規エーテル‐エステルブロツク共重合体を含有する室温硬化性組成物 |
| US4845194A (en) * | 1987-02-27 | 1989-07-04 | Eli Lilly And Company | Glycopeptide recovery process |
| GB8715735D0 (en) * | 1987-07-03 | 1987-08-12 | Lepetit Spa | De-mannosyl teicoplanin derivatives |
| US4996148A (en) * | 1987-07-13 | 1991-02-26 | Eli Lilly And Company | A80407 antibiotics |
| US5213797A (en) * | 1987-07-13 | 1993-05-25 | Eli Lilly And Company | A80407 antibiotics |
| GB8720980D0 (en) * | 1987-09-07 | 1987-10-14 | Lepetit Spa | Derivatives |
| US5194424A (en) * | 1988-12-27 | 1993-03-16 | Gruppo Lepetit Spa | C63 -amide derivatives of 34-de(acetylglucosaminyl)-34-deoxy-teicoplanin and their use as medicaments against bacteria resistant to glycopeptide antibiotics |
| WO1992010516A1 (en) * | 1990-12-05 | 1992-06-25 | Gruppo Lepetit S.P.A. | 38-decarboxy-38-hydroxymethyl derivatives of teicoplanin antibiotics, and a process for preparing them |
| US5606036A (en) * | 1991-03-27 | 1997-02-25 | Gruppo Lepetit Spa | Antibiotic A 40926 ester derivatives |
| CA2250578C (en) | 1996-04-23 | 2003-06-24 | Versicor Inc. | Improved chemical process for preparing amide derivatives of antibiotic a 40926 |
| KR100476818B1 (ko) * | 2002-07-19 | 2005-03-17 | 종근당바이오 주식회사 | 테이코플라닌 에이 투 정제 방법 |
| US20060074014A1 (en) * | 2002-11-18 | 2006-04-06 | Vicuron Pharmaceuticals Inc. | Dalbavancin compositions for treatment of bacterial infections |
| US7119061B2 (en) * | 2002-11-18 | 2006-10-10 | Vicuron Pharmaceuticals, Inc. | Dalbavancin compositions for treatment of bacterial infections |
| MXPA05005338A (es) | 2002-11-18 | 2005-12-14 | Vicuron Pharm Inc | Metodos para administrar dalbavancin para el tratamiento de infecciones bacterianas. |
| EP1806150A1 (en) * | 2006-01-05 | 2007-07-11 | NEED PHARMA S.r.l. | Teicoplanin composition |
| CN102718843B (zh) * | 2012-06-30 | 2014-05-14 | 华北制药集团新药研究开发有限责任公司 | 一种替考拉宁单组份的制备方法 |
| CN114112612A (zh) * | 2021-10-28 | 2022-03-01 | 丽珠集团福州福兴医药有限公司 | 一种替考拉宁i5杂质的分离纯化方法及其应用 |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB1496386A (en) * | 1975-03-05 | 1977-12-30 | Lepetit Spa | Antibiotics |
-
1983
- 1983-05-12 FI FI831660A patent/FI73697C/fi not_active IP Right Cessation
- 1983-05-16 NO NO831754A patent/NO159104C/no not_active IP Right Cessation
- 1983-05-19 ZA ZA833607A patent/ZA833607B/xx unknown
- 1983-05-25 AU AU14968/83A patent/AU560966B2/en not_active Expired
- 1983-05-27 GR GR71483A patent/GR78267B/el unknown
- 1983-05-31 IL IL68819A patent/IL68819A0/xx not_active IP Right Cessation
- 1983-05-31 DK DK245883A patent/DK159117C/da not_active IP Right Cessation
- 1983-06-01 GB GB08315003A patent/GB2121401B/en not_active Expired
- 1983-06-01 PH PH28999A patent/PH19533A/en unknown
- 1983-06-01 ES ES522941A patent/ES522941A0/es active Granted
- 1983-06-02 IT IT8321432A patent/IT1212085B/it active Protection Beyond IP Right Term
- 1983-06-03 NL NL8301980A patent/NL8301980A/nl active Search and Examination
- 1983-06-04 DE DE3320342A patent/DE3320342A1/de active Granted
- 1983-06-07 SE SE8303211A patent/SE459094B/sv not_active IP Right Cessation
- 1983-06-07 CH CH3124/83A patent/CH657139A5/fr not_active IP Right Cessation
- 1983-06-07 BE BE0/210960A patent/BE896993A/fr not_active IP Right Cessation
- 1983-06-07 IE IE1329/83A patent/IE55025B1/en not_active IP Right Cessation
- 1983-06-07 SU SU833604953A patent/SU1318170A3/ru active
- 1983-06-07 NZ NZ204480A patent/NZ204480A/en unknown
- 1983-06-07 HU HU832029A patent/HU193538B/hu unknown
- 1983-06-07 PT PT76831A patent/PT76831B/pt unknown
- 1983-06-07 KR KR1019830002517A patent/KR900008246B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1983-06-07 UA UA3604953A patent/UA6025A1/uk unknown
- 1983-06-07 CA CA000429836A patent/CA1208204A/en not_active Expired
- 1983-06-07 US US06/502,043 patent/US4542018A/en not_active Expired - Lifetime
- 1983-06-08 FR FR8309522A patent/FR2528050B1/fr not_active Expired
- 1983-06-08 LU LU84853A patent/LU84853A1/fr unknown
- 1983-06-08 JP JP58102508A patent/JPS591423A/ja active Granted
-
1984
- 1984-10-15 ES ES536770A patent/ES536770A0/es active Granted
-
1986
- 1986-08-29 SG SG706/86A patent/SG70686G/en unknown
-
1987
- 1987-07-30 HK HK558/87A patent/HK55887A/xx not_active IP Right Cessation
- 1987-12-30 MY MY2/87A patent/MY8700002A/xx unknown
-
1989
- 1989-10-24 JP JP1276997A patent/JPH02291278A/ja active Granted
- 1989-10-24 JP JP1276999A patent/JPH02288888A/ja active Granted
- 1989-10-24 JP JP1276998A patent/JPH02288887A/ja active Granted
- 1989-10-24 JP JP1277000A patent/JPH02291279A/ja active Granted
-
1994
- 1994-02-24 BG BG98541A patent/BG60529B2/bg unknown
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| NO159104B (no) | Fremgangsmaate for fremstilling av rene teichomycin a2 enkeltfaktorer 1, 2, 3, 4, og 5. | |
| CA1058104A (en) | Antibiotic thienamycin from streptomyces cattleya | |
| JP2554350B2 (ja) | グリコペプチド抗生物質 | |
| US4141986A (en) | Antibiotics 890A2 and 890A5 | |
| US4006060A (en) | Thienamycin production | |
| RU2026302C1 (ru) | Способ получения n-алкилпроизводных антибиотиков или их фармацевтически приемлемых солей | |
| NO751074L (no) | ||
| JPS63139192A (ja) | 抗腫瘍性抗生物質の製造法 | |
| CH626628A5 (en) | Process for the preparation of an antibiotic | |
| US4656288A (en) | Antibiotics, their production and use | |
| US4304867A (en) | Culture of Streptomyces cattleya | |
| US4264736A (en) | Antibiotic 890A10 | |
| US4039660A (en) | Antibiotic y-g19z d3 and the production thereof | |
| US4081548A (en) | Antibiotics | |
| US4264735A (en) | Method of producing antibiotic 890A9 | |
| Cassidy et al. | Method of producing antibiotic 890A 9 | |
| DE3403125A1 (de) | Antibiotikum luzopeptin e(pfeil abwaerts)2(pfeil abwaerts), verfahren zu dessen herstellung und diese verbindung enthaltendes, pharmazeutisches mittel | |
| Cassidy et al. | Antibiotic 890A 10 | |
| NO130362B (no) | ||
| HU181434B (en) | Process for preparing the biologically active | |
| JPS59210897A (ja) | β−ラクタム化合物の製造法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MK1K | Patent expired |
Free format text: EXPIRED IN MAY 2003 |