SE455600B - PROCEDURE FOR DETECTING VEXVIRUS AND ITS APPLICATION FOR DETECTING ROOTSOTVIRUS AND POTATISVIRUS - Google Patents
PROCEDURE FOR DETECTING VEXVIRUS AND ITS APPLICATION FOR DETECTING ROOTSOTVIRUS AND POTATISVIRUSInfo
- Publication number
- SE455600B SE455600B SE8605095A SE8605095A SE455600B SE 455600 B SE455600 B SE 455600B SE 8605095 A SE8605095 A SE 8605095A SE 8605095 A SE8605095 A SE 8605095A SE 455600 B SE455600 B SE 455600B
- Authority
- SE
- Sweden
- Prior art keywords
- virus
- detecting
- biotin
- rna
- viral rna
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/70—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving virus or bacteriophage
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/58—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances
- G01N33/581—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances with enzyme label (including co-enzymes, co-factors, enzyme inhibitors or substrates)
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Hematology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Virology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Pathology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Description
455 600 5 10 15 20 25 30 35 NUVARANDE METODIK Screening för virusresistens i ett förädlings- program innebär vanligtvis en mätning av virusproduk- tionen efter en testinfektion. Detta betyder att tusen- tals plantor skall testas för virusförekomst pà rela- tivt kort tid. Den vanligaste metoden tills för nâgra år sedan har helt enkelt varit att visuellt bedöma plantorna för karakteristiska symptom från en virus- infektion. Nackdelarna med denna form av urval är att ett ringa virusinnehàll inte ger synliga symptom samtidigt som det krävs ett tränat öga för att göra en någorlunda tillförlitlig bedömning. 455 600 5 10 15 20 25 30 35 CURRENT METHODOLOGY Screening for virus resistance in a breeding programs usually involve a measurement of virus after a test infection. This means that thousands seedlings should be tested for the presence of virus in relatively short time. The most common method until for some years ago has simply been to visually assess the plants for characteristic symptoms of a viral infection. The disadvantages of this form of selection are that a low virus content does not cause visible symptoms while it takes a trained eye to do a reasonably reliable assessment.
Eftersom angrepp av t ex rödsotvirus i vallgräs inte ger några som helst synliga symptom är det svårt att uppskatta förekomsten och skadan av detta virus.Because infestation of, for example, rubella virus in grass does not give any visible symptoms it is difficult to estimate the presence and damage of this virus.
Resistensförädling mot rödsotvirus i vallgräsen måste därför baseras på en laboratoriemetod. En sådan metod, som fått allt större användning inom växtvirusdiag- nostiken, är den s k ELISA-tekniken. Denna serologiska metod baserar sig på antigeniciteten i virusprotein- höljet så att viruspartiklarna detekteras genom att 'antikroppar reagerar med virusprotein. ELISA-tekniken är den gängse metoden för detektion av växtvirus och används rutinmässigt pà Svalöf AB inom potatisprogrammet för såväl kontrollen av utsäde som resistensförädling.Resistance breeding against rubella virus in grassland must therefore based on a laboratory method. Such a method, which has become increasingly used in plant virus diagnostics nostiken, is the so-called ELISA technology. This serological method is based on the antigenicity of the viral protein the envelope so that the virus particles are detected by 'antibodies react with viral protein. ELISA technology is the common method for detecting plant viruses and is routinely used at Svalöf AB within the potato program for both the control of seed and resistance breeding.
Metoden har många fördelar, då den är enkel att utföra, är snabb och relativt känslig, kan användas i stor skala samt kräver ingen dyrbar utrustning. Dessvärre har ELISA-testet även sina begränsningar, då metoden är osäker vid låg frekvens av virus. Svårigheten med detta test för t ex rödsotvirus är att få en ren virus- .preparation för produktion av antikroppar, eftersom viruset förekommer endast i låg frekvens.The method has many advantages, as it is easy to perform, is fast and relatively sensitive, can be used in large scale and requires no expensive equipment. Unfortunately The ELISA test also has its limitations, then the method is insecure at low frequency of viruses. The difficulty with this test for eg rubella virus is to get a pure virus .preparation for the production of antibodies, since the virus occurs only in low frequency.
NY METODIK Majoriteten av växtvirus, ca 75%, innehåller nukleinsyran RNA, som genetiskt material, omsluten av ett proteinhölje. Det är antigeniciteten i detta lv 10 15 20 25 30 35 455 600 3 protein, som utnyttjas i ELISA-testet, men det rep- resenterar enbart lO% av virusgenomets information.NEW METHODOLOGY The majority of plant viruses, about 75%, contain the nucleic acid RNA, as a genetic material, enclosed of a protein shell. That's the antigenicity of this lv 10 15 20 25 30 35 455 600 3 protein, which is used in the ELISA test, but the represents only 10% of the virus genome's information.
Genom att istället analysera virusnukleinsyran direkt kan betydligt tillförlitligare resultat erhållas vid detektion av virus. Detta nya sätt att diagnosticera virus baserar sig pá att komplementära nukleínsyra- strängar hybridiserar med varandra, en grundfunktion inom rekombinant-DNA-tekniken. En sådan metod, nuklein- syrahybridisering medelst “dot-blot", har just de egenskaper, som gör den önskvärd i resistensförädlingen mot virus. Den är mycket känslig och snabb, har stor kapacitet samt är framför allt tillförlitlig. På den engelska växtförädlingsinstitutionen PBI, Cambridge, har en sådan molekylär screeningmetod helt och hållet ersatt ELISA-tekniken för detektion av potatisvirus X (Baulcombe et al 1984).By instead analyzing the viral nucleic acid directly significantly more reliable results can be obtained at detection of viruses. This new way of diagnosing virus is based on complementary nucleic acid strings hybridize with each other, a basic function in recombinant DNA technology. One such method, nuclear acid hybridization by "dot-blot", they have properties, which make it desirable in the resistance breeding against viruses. It is very sensitive and fast, has great capacity and is above all reliable. On it English Plant Breeding Institute PBI, Cambridge, have such a molecular screening method entirely replaced the ELISA technology for the detection of potato viruses X (Baulcombe et al 1984).
Med potatis som modellgröda har på Svalöf AB utvecklats en icke-radioaktiv molekylär hybridiserings- teknik för detektion av potatisvirus Y (PVY), som med vissa modifikationer kan användas för detektion av diverse andra växtvirus t ex rödsotvirus.With potatoes as a model crop at Svalöf AB developed a non-radioactive molecular hybridization potato virus Y (PVY) detection technology, which with some modifications can be used for detection of various other plant viruses such as rubella virus.
- Bruket av nukleinsyrahybridisering för detektion av PVY förutsätter_tillgàng till DNA komplementärt till virus-RNA-genomet. Metodiken med nukleinsyra- hybridisering omfattar därför följande moment: - isolering av virus - isolering av virus-RNA - cDNA-syntes samt molekylär kloning - spot-test Isolering av virus PVY renframställs från infekterade tobaksblad enligt Oxelfelt (pers. commun.). Cellväggarna i bladen bryts ner genom homogenisering i en buffert, som medför att viruspartiklarna inte aggregerar. Såväl reducerande som chelaterande ämnen tillsättes för att förhindra/- reducera polyfenolinverkan resp enzymaktivitet. Orga- neller, ribosomer etc fránskiljes genom centrifugering, 10 15 20 25 30 35 455 600 4 varefter virus koncentreras genom fällning med poly- etylenglykol följt av rening genom ultracentrifugering.The use of nucleic acid hybridization for detection of PVY presupposes_access to DNA complementary to the viral RNA genome. The nucleic acid methodology hybridization therefore includes the following steps: virus isolation - isolation of viral RNA cDNA synthesis and molecular cloning - spot-test Virus isolation PVY is purified from infected tobacco leaves according to Oxelfelt (pers. commun.). The cell walls of the leaves is broken down by homogenization in a buffer, which entails that the virus particles do not aggregate. Both reducing as chelating agents are added to prevent / - reduce polyphenoline action or enzyme activity. Organic nails, ribosomes, etc. are separated by centrifugation, 10 15 20 25 30 35 455 600 4 after which the virus is concentrated by precipitation with poly- ethylene glycol followed by purification by ultracentrifugation.
Renheten hos PVY kontrolleras genom mätning av absorp- tionsspektrum, medan infektiviteten kontrolleras på tobak med åtföljande ELISA-test.The purity of PVY is checked by measuring the absorbance spectrum, while the infectivity is checked on tobacco with accompanying ELISA test.
Isolering av RNA RNA isoleras från renframställt PVY med gängse fenolextraktion för nukleinsyror enligt modifiering av Clemens (1985). Renheten hos RNA-preparationen kontrolleras dels genom mätning av absorptionen, dels genom agaroselektrofores.Isolation of RNA RNA is isolated from pure PVY with standard phenol extraction for nucleic acids according to modification by Clemens (1985). The purity of the RNA preparation controlled partly by measuring the absorption, partly by agarose electrophoresis.
Molekylär kloning Framställning av komplementärt DNA (CDNA) till PVY-RNA utföres med RNase H-metoden enligt modifiering av Gubler and Hoffman (1983). Fördelen med denna metodik är att längre sammanhängande DNA-sekvenser erhålles samtidigt som hela proceduren äger rum i ett enda provrör; Koncentration och mängd syntetiserat cDNA beräknas genom inmärkning med radioaktivt fosfor (32P). cDNA fogas in i en plasmid, som är lineariserad genom behandling med ett restriktionsenzym. Plasmiden överförs och förökas i E. coli-celler, varefter kolonier med plasmid + CDNA identifieras på selektivt medium. Bakte- rier och därmed också plasmider från dessa kolonier förökas i stor skala, varefter plasmid-DNA isoleras genom ultracentrifugering. Storleken på plasmiden samt det infogade cDNA:t bestäms genom agaroselektro- fores. På detta sätt har vi på Svalöf AB framställt flera PVY-kloner med DNA komplementärt till virus-RNA, vilka kan användas för detektion av PVY medelst nuklein- syrahybridisering.Molecular cloning Preparation of complementary DNA (CDNA) to PVY-RNA is performed by the RNase H method according to modification by Gubler and Hoffman (1983). The advantage of this methodology is that longer contiguous DNA sequences are obtained while the whole procedure takes place in a single test tube; Concentration and amount of synthesized cDNA calculated by labeling with radioactive phosphorus (32P). cDNA is inserted into a plasmid, which is linearized by treatment with a restriction enzyme. The plasmid is transferred and propagated in E. coli cells, after which colonies with plasmid + CDNA is identified on selective medium. Baked and thus also plasmids from these colonies propagated on a large scale, after which plasmid DNA is isolated by ultracentrifugation. The size of the plasmid and the inserted cDNA is determined by agarose electrodes. fores. In this way, we at Svalöf AB have produced several PVY clones with DNA complementary to viral RNA, which can be used for the detection of PVY by nuclear acid hybridization.
Sgot-test Den egentliga detektionen av virusförekomst utförs med ett s k spot-test, varvid virus-RNA från bladsaft binds till ett nitrocellulosamembran, känns igen och hybridiserar med tillsatt komplementärt DNA, som gjorts detekterbart genom inmärkning med antingen radioaktiva In 10 15 20 25 30 35 455 600 5 isotoper eller biotin. Undersökningarna pá Svalöf AB har koncentrerats på att utarbeta en optimal spot- test,-vilken baseras på den icke-radioaktiva detektionen med biotin. Det vanligaste sättet att märka in sitt prov är med 32P, men detta tillvägagångssätt har vissa nackdelar. Eftersom halveringstiden för 32P endast är 14 dagar, mäste man ständigt göra nya inmärkningar.Sgot test The actual detection of virus presence is performed with a so-called spot test, in which viral RNA from leaf juice binds to a nitrocellulose membrane, is recognized and hybridizes with added complementary DNA, which is made detectable by labeling with either radioactive In 10 15 20 25 30 35 455 600 5 isotopes or biotin. The investigations at Svalöf AB has focused on developing an optimal spot- test, which is based on the non-radioactive detection with biotin. The most common way to label theirs samples are with 32P, but this approach has some disadvantages. Because the half-life of 32P only is 14 days, you have to constantly make new remarks.
För laboratoriepersonalens säkerhet är det dessutom bättre om icke-radioaktivt material kan användas i synnerhet som hybridiseringsmetoden är ämnad för scree- ning-bruk. Den metodik Vi utarbetat grundas därför på inmärkning medelst nick-translation med biotinderi- vat av deoxiribonukleotider istället för 32P.For the safety of laboratory personnel, it is also better if non-radioactive material can be used in in particular as the hybridization method is intended for use. The methodology we have developed is therefore founded on labeling by nick-translation with biotin deoxyribonucleotides instead of 32P.
En liten mängd potatissaft appliceras på nitro- cellulosafilter efter det att bladsaften behandlats med ett proteinnedbrytande enzym. Detta är ett nöd- vändigt moment, då i potatisblad endogent förekommande biotin är bundet till protein (Nikolau et al 1985), som i likhet med nukleinsyror också binder till nitro- cellulosa. Om inte proteinet bryts ner före applicering kommer det endogena biotinet att detekteras, som om det fanns virus.A small amount of potato juice is applied to the nitrous oxide. cellulose filter after the leaf juice has been treated with a protein-degrading enzyme. This is an emergency inverse moment, then in potato leaves endogenously occurring biotin is bound to protein (Nikolau et al 1985), which, like nucleic acids, also bind to nitro- cellulose. Unless the protein is broken down before application the endogenous biotin will be detected, as if there were viruses.
Nitrocellulosafiltret ”bakas” vid hög temperatur i vakuum för bindning av nukleinsyrorna, bl a virus-RNA, varefter man gör en prehybridisering för att minimera bakgrundsstörningar.The nitrocellulose filter is "baked" at a high temperature in vacuo for binding of the nucleic acids, including viral RNA, after which a prehybridization is performed to minimize background disturbances.
Beträffande prehybridiseringen är detta ett nöd- vändigt steg i förfarandet för att minimera bakgrunds- störningar i filtret p g a ospecifik bindning av makro- molekyler. Detta undviks genom att filtret behandlas med en lösning, vars ingredienser har funktionen att reducera eller förhindra en ospecifik bakgrund.With regard to prehybridization, this is a necessary necessary step in the procedure to minimize disturbances in the filter due to non-specific binding of macro- molecules. This is avoided by treating the filter with a solution, the ingredients of which have the function of reduce or prevent a non-specific background.
Härefter vidtar den egentliga nukleinsyrahybri- diseringen (Gatti et al 1984), dä filtret inkuberas med biotinmärkt DNA homologt till PVY-RNA. Ifall ett prov är infekterat med PVY kommer virus-RNA bundet i nitrocellulosafiltret att hybridiseras med en homolog 10 15 20 25 30 35 455 600 6 cDNA-sträng och detekteras genom en enzymatisk reaktion med biotin, vilket resulterar i en färgad produkt klart synlig för ögat. Blåfärgade fläckar på filtret anger sålunda att en hybridisering ägt rum mellan virus-RNA och komplementärt framställt DNA och indikerar därmed en virusinfektion. Där det inte syns någonting har ingen hybridisering skett, och detta betyder ett virusfritt prov.Thereafter, the actual nucleic acid hybrid takes dissection (Gatti et al 1984), when the filter is incubated with biotin-labeled DNA homologous to PVY-RNA. If one Sample is infected with PVY, virus-RNA bound in the nitrocellulose filter to hybridize with a homologue 10 15 20 25 30 35 455 600 6 cDNA strand and is detected by an enzymatic reaction with biotin, resulting in a colored product clearly visible to the eye. Blue spots on the filter thus indicates that a hybridization has taken place between viral RNA and complementary DNA and indicates thus a viral infection. Where nothing is visible no hybridization has taken place, and this means one virus-free sample.
Med denna icke-radioaktiva hybridiseringsteknik detekteras så små mängder som 2 pg virus-RNA, vilket är den undre detekteringsgränsen med 32P. Genom att ändra inmärkningssättet med biotin är det dock möjligt att sänka detektionsgränsen ytterligare (Forster et al 1985). För att kunna detektera 2 pg virus-RNA med 32P krävs en exponeringstid av flera dagar jämfört med biotininmärkning där svaret erhålles efter endast 1-4 timmar.With this non-radioactive hybridization technique amounts as small as 2 pg of viral RNA are detected, which is the lower detection limit with 32P. By however, it is possible to change the labeling method with biotin to lower the detection limit further (Forster et al 1985). To be able to detect 2 pg of viral RNA with 32P requires an exposure time of several days compared with biotin labeling where the answer is obtained after only 1-4 hours.
Metoden är således mycket känslig och klart över- lägsen ELISA-tekniken för detektion av små koncentra- tioner av virus. Fördelen med detta test i jämförelse med ELISA-metoden är också att man behöver göra virus- isoleringen endast en gång. Med det molekylära testet förökas bakterierna med CDNA vid behov, men med ELISA- -testet måste man göra kontinuerliga virusreningar för framställning av antikroppar. Kapaciteten för hybridiseringstekniken är mycket hög och jämförbar med ELISA-testet, d V s screening av tusentals plantor tar endast ett par dagar. Ytterligare fördelar med det molekyära hybridiseringstestet är den potential detta utgör för en användning på andra grödor än po- tatis. Detta innebär t ex att vi kan undersöka tolerans mot rödsotvirus i vallgräs, vilket tidigare varit omöjligt i avsaknad av laboratoriemetod.The method is thus very sensitive and clearly low ELISA technology for the detection of small concentrations viruses. The advantage of this test in comparison with the ELISA method is also that you need to do virus the insulation only once. With the molecular test the bacteria are propagated with CDNA if necessary, but with ELISA test, you must do continuous virus cleanings for the production of antibodies. The capacity of the hybridization technology is very high and comparable with the ELISA test, ie screening of thousands of plants takes only a couple of days. Additional benefits of the molecular hybridization test is that potential this constitutes a use on crops other than tatis. This means, for example, that we can examine tolerance against rubella virus in grassland, which has been the case before impossible in the absence of laboratory method.
SLUTSATSER Eftersom virusangrepp av skilda slag orsakar stora skördeförluster på grödorna i landet, är det 7 ekonomiskt betydelsefullt att tillförlitliga laboratorie- metoder för detektion av virus utvecklas. Jag anser 0,, 10 15 20 25 455 600 7 att den teknik, som utarbetats på Svalöf AB för stor- skalig detektion av virus medelst icke-radioaktiv nukleinsyrahybridisering har just de egenskaper, som är önskvärda för en sådan laboratoriemetod. Denna hybridiseringsmetodik är sålunda ett av de första exemplen där rekombinant-DNA-teknik med fördel kan användas inom praktisk växtförädling.CONCLUSIONS Because virus attacks of various kinds cause large crop losses on the crops in the country, it is 7 economically significant that reliable laboratory methods for virus detection are being developed. I think 0 ,, 10 15 20 25 455 600 7 that the technology developed at Svalöf AB for large-scale scale detection of virus by non-radioactive Nucleic acid hybridization has exactly the properties that are desirable for such a laboratory method. This hybridization methodology is thus one of the first examples where recombinant DNA technology can advantageously be used in practical plant breeding.
Litteraturförteckning: Baulcombe, D., Flavell, R.B., Boulton, R.E. and Jellis, G.J. 1984. Plant Pathol. 33: 361-370.Bibliography: Baulcombe, D., Flavell, R.B., Boulton, R.E. and Jellis, G.J. 1984. Plant Pathol. 33: 361-370.
Clemens, M.J. 1985. In Viroloqy, A practical approach.Clemens, M.J. 1985. In Viroloqy, A practical approach.
(Ed. B.W.J. Mahy). IRL Press: 211-230.(Ed. B.W.J. Mahy). IRL Press: 211-230.
Forster, A.C. Mcïnnes, J.L., Skingle, D.C, and Symons, R.H. 1985. Nucl. Acids Res. l3(3): 745-761. 1984. Bio- Gatti, R.A., Concannon, P. and Salser, W- techniques 3: 148-155.Forster, A.C. Mcïnnes, J.L., Skingle, D.C., and Symons, R.H. 1985. Nucl. Acids Res. l3 (3): 745-761. 1984. Bio- Gatti, R.A., Concannon, P. and Salser, W- techniques 3: 148-155.
Gubler, U. and Hoffman, B.J. 1983. Gene 25: 263-269.Gubler, U. and Hoffman, B.J. 1983. Gene 25: 263-269.
Lindsten, K. 1974. Nordisk Jordbruksforskning. 55(3):. 354-356.Lindsten, K. 1974. Nordic Agricultural Research. 55 (3):. 354-356.
Nikolau, B.J., Wurtele, E.S. and Stumpf, P.K. 1985.Nikolau, B.J., Wurtele, E.S. and Stumpf, P.K. 1985.
Anal. Biochem. 149: 448-453.Anal. Biochem. 149: 448-453.
Claims (2)
Priority Applications (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SE8605095A SE455600B (en) | 1986-11-27 | 1986-11-27 | PROCEDURE FOR DETECTING VEXVIRUS AND ITS APPLICATION FOR DETECTING ROOTSOTVIRUS AND POTATISVIRUS |
| PCT/SE1987/000558 WO1988003956A1 (en) | 1986-11-27 | 1987-11-25 | Process for detecting plant virus |
| AU83382/87A AU8338287A (en) | 1986-11-27 | 1987-11-25 | Process for detecting plant virus |
| DK382488A DK382488D0 (en) | 1986-11-27 | 1988-07-08 | METHOD OF DETECTING PLANT VIRUS |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SE8605095A SE455600B (en) | 1986-11-27 | 1986-11-27 | PROCEDURE FOR DETECTING VEXVIRUS AND ITS APPLICATION FOR DETECTING ROOTSOTVIRUS AND POTATISVIRUS |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| SE8605095D0 SE8605095D0 (en) | 1986-11-27 |
| SE8605095L SE8605095L (en) | 1988-05-28 |
| SE455600B true SE455600B (en) | 1988-07-25 |
Family
ID=20366432
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SE8605095A SE455600B (en) | 1986-11-27 | 1986-11-27 | PROCEDURE FOR DETECTING VEXVIRUS AND ITS APPLICATION FOR DETECTING ROOTSOTVIRUS AND POTATISVIRUS |
Country Status (3)
| Country | Link |
|---|---|
| AU (1) | AU8338287A (en) |
| SE (1) | SE455600B (en) |
| WO (1) | WO1988003956A1 (en) |
Families Citing this family (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB8827094D0 (en) * | 1988-11-19 | 1988-12-21 | Scottish Crop Research Inst | Dna sequence encoding coat protein gene of potato leafroll virus |
| IL97295A0 (en) * | 1990-02-27 | 1992-05-25 | Agrilab Biotechnology Ltd | Procedure for the detection of plant pathogens performed under field conditions and a diagnostic kit for its application |
| CN1303422C (en) * | 2004-04-15 | 2007-03-07 | 云南省农业科学院 | PVX Yunnan isolate TAS-ELISA test kit and its preparing method |
| CN1303423C (en) * | 2004-04-15 | 2007-03-07 | 云南省农业科学院 | PVY Yunnan isolate TAS-ELISA test kit and its preparing method |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CA1338856C (en) * | 1983-07-05 | 1997-01-21 | Jannis Stavrianopoulos | In vivo labelling of polynucleotide sequences |
| GB8331071D0 (en) * | 1983-11-22 | 1983-12-29 | Karayiannis P | Assay for dna/rna |
| DE3583640D1 (en) * | 1984-04-05 | 1991-09-05 | Florey Howard Inst | HYBRIDIZATION HISTOCHEMISTRY. |
| EP0189280A3 (en) * | 1985-01-23 | 1987-01-07 | Dekalb-Pfizer Genetics | Qualitative testing for nucleic acid |
-
1986
- 1986-11-27 SE SE8605095A patent/SE455600B/en not_active IP Right Cessation
-
1987
- 1987-11-25 WO PCT/SE1987/000558 patent/WO1988003956A1/en not_active Application Discontinuation
- 1987-11-25 AU AU83382/87A patent/AU8338287A/en not_active Abandoned
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| AU8338287A (en) | 1988-06-16 |
| SE8605095L (en) | 1988-05-28 |
| SE8605095D0 (en) | 1986-11-27 |
| WO1988003956A1 (en) | 1988-06-02 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Payne et al. | Detection and characterization of a distinct bornavirus lineage from healthy Canada geese (Branta canadensis) | |
| Schramm et al. | The latent period after infection with tobacco mosaic virus and virus nucleic acid | |
| CN104846013B (en) | A kind of 55 type adenovirus vector of replication deficient human and its preparation method and application | |
| Waterhouse et al. | Serotype-specific and general luteovirus probes from cloned cDNA sequences of barley yellow dwarf virus | |
| Zhang et al. | Isolation and identification of a viral haemorrhagic septicaemia virus (VHSV) isolate from wild largemouth bass Micropterus salmoides in China | |
| Luigi et al. | Development of quantitative real-time RT-PCR for the detection and quantification of Peach latent mosaic viroid | |
| Chen et al. | LAMP detection of the genetic element ‘Mona’associated with DMI resistance in Monilinia fructicola | |
| CN111363856B (en) | Method for simultaneously detecting four tomato viruses by multiple RT-PCR | |
| CN107400674B (en) | Method for identifying tobacco resistance by using tomato spotted wilf virus NSm gene | |
| Nomura et al. | Biological and serological properties of strains of barley mild mosaic virus | |
| Sakuragi et al. | Minimal region sufficient for genome dimerization in the human immunodeficiency virus type 1 virion and its potential roles in the early stages of viral replication | |
| Lee et al. | Multiplex RT-PCR detection of two orchid viruses with an internal control of plant nad5 mRNA | |
| CN107488732A (en) | Detect triple fluorescent PCR primer group, probe groups, kit and the method for capsicum transgene component | |
| CN110643580B (en) | Betel nut necrotic fusarium leaf spot virus and detection method thereof | |
| CN107974515B (en) | Constant-temperature rapid detection kit for tilapia lake Luo virus | |
| SE455600B (en) | PROCEDURE FOR DETECTING VEXVIRUS AND ITS APPLICATION FOR DETECTING ROOTSOTVIRUS AND POTATISVIRUS | |
| CN113699155A (en) | CuO mutant and application thereof | |
| CN102212620A (en) | Measurement and audit kit for detecting three fish rhabdoviruses | |
| Zana et al. | Metagenomic analysis of bat guano samples revealed the presence of viruses potentially carried by insects, among others by Apis mellifera in Hungary | |
| CN109988858B (en) | Multiple fluorescence PCR gene locus, primer and detection method of transgenic tobacco | |
| CN103451185A (en) | Propylaea Japonica specific COI primers, kit containing primer and detection method thereof | |
| CN111363832A (en) | Primer composition and kit for qPCR quantitative detection of meloidogyne graminicola in paddy field soil and application of primer composition and kit | |
| CN108796128A (en) | A kind of GII.8 types norovirus genome amplification primer and amplification method | |
| CN106868216A (en) | A kind of avian leukosis virus PCR detection primers group and the kit including the detection primer group | |
| Peng et al. | Interspecific Recombination Between Zucchini Tigre Mosaic Virus and Papaya Ringspot Virus Infecting Cucurbits in China |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| NUG | Patent has lapsed |
Ref document number: 8605095-2 Effective date: 19940610 Format of ref document f/p: F |