SE445921B - Derivatives of Substance SF-1739, termed SF-1739 HP-C, PREPARED BY CULTIVATION OF STREPTOMYCES GRISEOPLANUS STEM SF-1739 (ATCC 31451) AND COMPOSITION CONTAINING SUBSTANCE - Google Patents

Description

7905693-3 sen SF-1739 HP-C vilken sedermera visat sig ha följande struk- turformel ____O t. 7905693-3 late SF-1739 HP-C which was later found to have the following structural formula ____O t.

O H3C i N-cfl; I N\ .Q Y 0 CN fe OH samt en bakteriehämmande och tumörhämmande komposition vilken som aktiv ingrediens innehåller detta derivat av substansen SF-1739. Detta derivat och utgångssubstanserna för ställningen därav beskrives närmare nedan.O H3C and N-c fl; In N \ .Q Y 0 CN fe OH and a bactericidal and tumor-inhibiting composition which as active ingredient contains this derivative of the substance SF-1739. This derivative and the starting substances for its position are described in more detail below.

I. Substansen SF-1739 HP (1) Fysikalisk-kemiska egenskaper: Denna substans uppvisar ingen bestämd smältpunkt och smälter under mörkfärgning inom ett brett omrâde med början vid ca 150-l80°C. Den uppvisar ett UV-absorptionsspektrum som när- mare framgår av bifogade fig. l i metanol (angivet med hel- dragen linje i fig. 1) med tre absorptionsmaxíma vid 220 nm (Ena - 407). 275 nm (132) och 535 nm (21). i 0.05 N HCl-95% 1cm ' metanol (visat med punktad linje i fig. 1) med två absorp- tionsmaxima vid 265 nm (E%:m = 754) och 410 (16) och i 0.05 N Na0H-95% metanol (visat med en streckad linje i fig. 1) med absorptionsmaxima vid 221 nm (Eäâm = 440). 277 (124). 345 (rygg) och 540 (24). Substansen uppvisar ett IR-absorptions- spektrum (i Nujol) illustrerat i bifogade fig. 2 med karak- teristiska absorptionsband vid 3350. 1655. 1600. 1540. 1355. 1265. 1235. 1180, 1120. 1080. 1020. 1000. 965. 945. 920. 910.I. Substance SF-1739 HP (1) Physicochemical properties: This substance has no specific melting point and melts during dark coloring over a wide range starting at about 150-180 ° C. It has a UV absorption spectrum which can be seen in more detail in the attached Fig. 1 in methanol (indicated by a solid line in Fig. 1) with three absorption maxima at 220 nm (Ena - 407). 275 nm (132) and 535 nm (21). in 0.05 N HCl-95% 1 cm 3 methanol (shown in dotted line in Fig. 1) with two absorption maxima at 265 nm (E%: m = 754) and 410 (16) and in 0.05 N NaOH-95% methanol (shown by a dashed line in Fig. 1) with absorption maxima at 221 nm (Eaâm = 440). 277 (124). 345 (back) and 540 (24). The substance exhibits an IR absorption spectrum (in Nujol) illustrated in the attached Fig. 2 with characteristic absorption bands at 3350. 1655. 1600. 1540. 1355. 1265. 1235. 1180, 1120. 1080. 1020. 1000. 965. 945. 920. 910.

B65, 830. 790 och 750 cm_l och ett NHR-spektrum (i D20) illustrerat i bifogade fig. 3. Dess masspektrum visar toppar vid m/e 412, 430. medan molekylvikten uppskattas till att vara ungefär densamma som hos substansen SF-1739. Substansen upp- 7905693-3 visar följande analytiska sammansättning: C 62.19%, H 6.952. N 8,50% och 0 22.362 (genom differens). Den uppvisar en fördel- ningskurva för den optiska rotationen i enlighet med vad som illustreras i fig. 4. ur vilken dess specifika vridningsför- måga [a ]åâ9 + 700 kan beräknas (i 0,05% metanol). Den är en mörkt purpurfärgad substans, som är lättlöslig i vatten och metanol. löslig i aceton och etylacetat och svårlöslig i hexan. Dess RF-värden vid tunnskiktskromatografi på silikagel- skivor är 0.45 vid framkallning med kloroform:metanol (9:1) och 0.23 vid framkallning med n-butanol:metanol:0.l N HC1 (4:2:l). medan motsvarande värden för substansen SF-1739 är 0.76 respektive 0.39. Stabiliteten hos substansen SF-1739 HP är starkt förbättrad i jämförelse med stabiliteten hos ut- gångssubstansen SF-1739 och den är stabil under såväl sura som alkaliska betingelser. Till och med vid förvaring i 5 N HCl vid rumstemperatur över natten förblir den helt stabil. medan utgångssubstansen SF-1739 till största delen omvandlas till substansen SF-1739 HP. Även vid förvaring i 0.1 N Na0H i metanol vid rumstemperatur över natten uppvisar den ingen påtagligt reducerad antibakteriell aktivitet. medan utgångs- substansen SF-1739 blir starkt inaktiverad. (2) Framställning: Denna substans kan framställas ur substansen SF-1739 genom behandling med en syra. Bland syror. som kan användas för denna behandling, må nämnas mineralsyror såsom saltsyra. brom- vätesyra. svavelsyra och liknande och organiska syror såsom trifluorättiksyra. metansulfonsyra. trifluormetansulfonsyra och liknande. Reaktionsparametrarna kan variera alltefter arten och koncentrationen av använd syra och använt lösnings- medel. I fallet med mineralsyra genomföras behandlingen helst under kylning eller vid rumstemperatur under mellan l dag och 1 vecka vid användning av en högre koncentration av 5-10 N eller vid rumstemperatur eller högre under en till flera dagar när en lägre koncentration av högst 5 N användes. Vid förhöjd temperatur av över 80°C tenderar den bildade mängden bipro- dukter ibland att öka något. Behandlingen kan ske ganska 7905693-5 snabbt i vattenlösning medan den går långsammare i med vatten utspädd metanol. Omvandlingen av substansen SF-1739 till substansen SF-1739 HP kan äga rum vid ett pH under 3.B65, 830. 790 and 750 cm-1 and an NHR spectrum (in D20) illustrated in the attached Fig. 3. Its mass spectrum shows peaks at m / e 412, 430. while the molecular weight is estimated to be approximately the same as in the substance SF-1739 . The substance shows the following analytical composition: C 62.19%, H 6.952. N 8.50% and 0 22.362 (by difference). It shows a distribution curve for the optical rotation in accordance with what is illustrated in Fig. 4. from which its specific torsional capacity [a] åâ9 + 700 can be calculated (in 0.05% methanol). It is a dark purple substance, which is readily soluble in water and methanol. soluble in acetone and ethyl acetate and sparingly soluble in hexane. Its RF values for thin layer chromatography on silica gel discs are 0.45 for development with chloroform: methanol (9: 1) and 0.23 for development with n-butanol: methanol: 0.1 N HCl (4: 2: 1). while the corresponding values for the substance SF-1739 are 0.76 and 0.39, respectively. The stability of the substance SF-1739 HP is greatly improved in comparison with the stability of the starting substance SF-1739 and it is stable under both acidic and alkaline conditions. Even when stored in 5 N HCl at room temperature overnight, it remains completely stable. while the starting substance SF-1739 is largely converted to the substance SF-1739 HP. Even when stored in 0.1 N NaOH in methanol at room temperature overnight, it shows no markedly reduced antibacterial activity. while the starting substance SF-1739 is strongly inactivated. (2) Preparation: This substance can be prepared from the substance SF-1739 by treatment with an acid. Among acids. which can be used for this treatment may be mentioned mineral acids such as hydrochloric acid. hydrobromic acid. sulfuric acid and the like and organic acids such as trifluoroacetic acid. methanesulfonic acid. trifluoromethanesulfonic acid and the like. The reaction parameters may vary according to the nature and concentration of the acid used and the solvent used. In the case of mineral acid, the treatment is preferably carried out under cooling or at room temperature for between 1 day and 1 week using a higher concentration of 5-10 N or at room temperature or higher for one to several days when a lower concentration of at most 5 N is used. At elevated temperatures above 80 ° C, the amount of by-products formed sometimes tends to increase slightly. The treatment can take place fairly quickly in aqueous solution while it is slower in water-diluted methanol. The conversion of the substance SF-1739 to the substance SF-1739 HP can take place at a pH below 3.

Efter avslutad behandling kan substansen SF-l739 HP lätt utvinnas ur reaktionsblandningen på konventionellt sätt under utnyttjande av ovan angivna fysikalisk-kemiska egenskaper hos substansen SF-1739 HP. Exempelvis kan reaktionsblandningen neutraliseras med en bas, t.ex. natriumvätekarbonat. kalium- karbonat eller liknande. koncentreras till torrhet och åter- stoden extraheras med metanol. varefter extraktet direkt renas genom preparativ tunnskiktskromatografí på silikagel. Alterna- tivt kan. eftersom mindre biprodukter bildas vid denna behand- ling. reaktíonsblandníngen koncentreras. återstoden lösas i metanol och den resulterande lösningen neuâšaliseras och där- efter matas genom en kolonn med “Sephadex RXLH-20". som där- efter kan framkallas med metanol eller en lösningsmedelblanâ~ ning av etylacetat och metanol för att rena den önskade produkten.After completion of the treatment, the substance SF-1739 HP can be easily recovered from the reaction mixture in a conventional manner using the above-mentioned physicochemical properties of the substance SF-1739 HP. For example, the reaction mixture can be neutralized with a base, e.g. sodium bicarbonate. potassium carbonate or the like. concentrate to dryness and the residue is extracted with methanol. after which the extract is directly purified by preparative thin layer chromatography on silica gel. Alternatively can. since smaller by-products are formed during this treatment. the reaction mixture is concentrated. the residue is dissolved in methanol and the resulting solution is neutralized and then fed through a column of "Sephadex RXLH-20", which can then be developed with methanol or a solvent mixture of ethyl acetate and methanol to purify the desired product.

II. Substansen SF-1739 HP-C (1) Fvsikaliskt-kemiska egenskaper: Substansen uppvisar ingen bestämd smältpunkt utan smälter under mörkfärgning inom ett brett temperaturområde med början vid ca 120-l50°C. Den uppvisar ett UV-absorptionsspektrum illustrerat i bifogade fig. 5 i metanol (visat med heldragen linje) med tre absorptionsmaxima vid 222 nm (Eåšm = 400). 273 nm (146) och 540 nm (30) i 0.1 N HCl-90% metanol (visat med punktad linje i fig. 5) med absorptionsmaxima vid 204 nm. 266 nm (E%:m = 174) och 410 nm (22) och i 0.1 N NaOH-90% metanol (visat med streckad linje i fig. 5) med absorptions- maxima vid 222 nm (Eåšm = 422). 275 nm (140) och 550 nm (32). substansen uppvisar ett IR-absorptionsspektrum (i Nujol) illustrerat i bifogade fig. 6 med karakteristiska absorptionsf band vid 3350. 1660. 1535. 1355. 1265. 1235. 1200. 1175. 1140. 1120. 1080. 1060; 1000. 940. 910. 880, 835 och 795 cm_l. en ___..1_...._.__.:._.__...-,... ,_ _ , _ W-G-...qfl-.v-...ï- 7905695-'3 fördelningskurva för den optiska rotationen i enlighet med vad som är visat i bifogade fig. 7 och ett NMR-spektrum (i D20) som illustreras i bifogade fig. 8. Den uppvisar den analytiska sammansättningen C 59.58%. H 6,14%, N 12,632 och 0 2l,65% (genom differens). Den är en mörkt purpurfärgad substans. som är lättlöslig i vatten och metanol, löslig i aceton och etyl- acetat och svårlöslig i hexan. Dess Rf-värden uppmätta vid tunnskiktskromatografi på silikagelplatta ligger vid 0.40 vid framkallning med kloroformzmetanol (9:l) och 0.70 vid fram- kallning med etylacetatzmetanol (3:2) medan motsvarande värden för substansen SF-1739 HP är 0.26 respektive 0.31. Den är stabil i torrt tillstånd och i neutral. sur och alkalisk metanollösning. (2) Framställning av substansen SF-1739 HP-C Substansen SF-1739 HP-C kan framställas ur substansen SF-1739 HP erhållen enligt I. (2) genom omsättning därav med en cyanid. Bland cyanider. som kan användas. må nämnas exempelvis ett alkalimetallsalt. jordalkalimetallsalt. metallaminsalt eller salt av organisk amin (inklusive ammoniak) av cyanväte- syra. såsom natrium-. kalium-, litium-. magnesium- eller ammoniumcyanid och en förening med förmåga att alstra en cyanidjon (CN') sekundärt. såsom cyanbromid med flera.II. The substance SF-1739 HP-C (1) Physico-chemical properties: The substance has no definite melting point but melts during dark coloring over a wide temperature range starting at about 120-150 ° C. It exhibits a UV absorption spectrum illustrated in the attached Fig. 5 in methanol (shown in solid line) with three absorption maxima at 222 nm (Eåšm = 400). 273 nm (146) and 540 nm (30) in 0.1 N HCl-90% methanol (shown in dotted line in Fig. 5) with absorption maxima at 204 nm. 266 nm (E%: m = 174) and 410 nm (22) and in 0.1 N NaOH-90% methanol (shown in broken line in Fig. 5) with absorption maxima at 222 nm (Eašm = 422). 275 nm (140) and 550 nm (32). the substance exhibits an IR absorption spectrum (in Nujol) illustrated in the attached Fig. 6 with characteristic absorption bands at 3350. 1660. 1535. 1355. 1265. 1235. 1200. 1175. 1140. 1120. 1080. 1060; 1000. 940. 910. 880, 835 and 795 cm_l. en ___ .. 1 _...._.__.: ._.__...-, ..., _ _, _ WG -... q fl-. v -... ï- 7905695-'3 distribution curve for the optical rotation according to that shown in the attached Fig. 7 and an NMR spectrum (in D 2 O) illustrated in the attached Fig. 8. It has the analytical composition C 59.58%. H 6.14%, N 12.632 and 0.21, 65% (by difference). It is a dark purple substance. which is readily soluble in water and methanol, soluble in acetone and ethyl acetate and sparingly soluble in hexane. Its Rf values measured by thin layer chromatography on silica gel plate are 0.40 when developed with chloroform-methanol (9: 1) and 0.70 when developed with ethyl acetate-methanol (3: 2) while the corresponding values for the substance SF-1739 HP are 0.26 and 0.31, respectively. It is stable in the dry state and in neutral. acidic and alkaline methanol solution. (2) Preparation of the substance SF-1739 HP-C The substance SF-1739 HP-C can be prepared from the substance SF-1739 HP obtained according to I. (2) by reacting it with a cyanide. Among cyanides. that can be used. may be mentioned, for example, an alkali metal salt. alkaline earth metal salt. metallamine salt or salt of organic amine (including ammonia) of hydrocyanic acid. such as sodium. potassium-, lithium-. magnesium or ammonium cyanide and a compound capable of generating a cyanide ion (CN ') secondarily. such as cyanogen bromide and others.

Reaktionen kan fås att förlöpa snabbt under kylning eller vid rumstemperatur och vara i huvudsak avslutad inom ca 5-30 minuter. Vid förhöjd temperatur över rumstemperatur har ibland biprodukter en benägenhet att bildas. Som lösningsmedel vid reaktionen kan exempelvis användas vatten. någon alkohol. dimetylformamid, en lösningsmedelhlandning av ett med vatten blandbart organiskt lösningsmedel och vatten och liknande.The reaction can be allowed to proceed rapidly during cooling or at room temperature and be substantially complete within about 5-30 minutes. At elevated temperatures above room temperature, by-products sometimes have a tendency to form. Water can be used as solvent in the reaction, for example. any alcohol. dimethylformamide, a solvent mixture of a water-miscible organic solvent and water and the like.

Efter avslutad reaktion kan den önskade produkten lätt utvin- nas och renas på konventionellt sätt under utnyttjande av ovan angivna fysikaliskt-kemiska egenskaper nos vardera substansen.After completion of the reaction, the desired product can be easily recovered and purified in a conventional manner using the above-mentioned physicochemical properties of each substance.

Exempelvis kan reaktionsblandningen koncentreras till torrhet och återstoden extraheras med metanol. varefter extraktet 7905693-5 renas direkt genom preparativ tunnskiktskromatografi på silikagel.For example, the reaction mixture can be concentrated to dryness and the residue extracted with methanol. after which the extract 7905693-5 is purified directly by preparative thin layer chromatography on silica gel.

Alternativt kan. eftersom mindre mängd biprodukter bildas vid varje reaktion, reaktionsblandningen koncentreras och återsto- den lösas i metanol och den resulterande lösningen sedan matas genom en kolonn med "Sephadex LH-20". som därefter kan framkallas med metanol eller en lösningsmedelblandning av etylacetat och metanol för att rena den önskade produkten.Alternatively can. since a smaller amount of by-products is formed in each reaction, the reaction mixture is concentrated and the residue is dissolved in methanol and the resulting solution is then fed through a column of "Sephadex LH-20". which can then be developed with methanol or a solvent mixture of ethyl acetate and methanol to purify the desired product.

För referensändamål lämnas nedan fullständiga uppgifter om stammen SF-1739. som kan användas för frambringande av den som utgångsmaterial använda gulfärgade metaboliten.For reference purposes, complete information on strain SF-1739 is provided below. which can be used to produce the yellow-colored metabolite used as starting material.

Streptomyces griseoplanus stam SF-1739 har deponerats under 'nummer 3002 hos Technical Research Institute of Mícrobial Industry. Agency of Industrial Science & Technology. the Ministry of International Trade and Industry. Japan. och under depositionsnummer 31451 hos American Type Culture Collection (ATCC), USA. De morfologiska egenskaperna hos nämnda stam nummer 3002 är följande: (I) M2r§ele9;= Luftmycel tillväxer ymnigt på vetemjölagar. jästmaltagar och liknande under rik sporbildning. Enkla grenar iakttas men knippeliknande grenar saknas. Lös öppen spiral bildas i toppen av luftmycelet. En specifik konfiguration såsom sclerotia kan ej iakttas. Vid mikroskopisk undersökning visar sig sporytan vårtig och delvis taggig. Sporerna är från elliptiska till kort cylindriska till formen och mellan 0.6 och 0.8 x 0,8-1.2 um stora. Sporkedjor föreligger med i allmänhet 10 sporer eller flera per kedja.Streptomyces griseoplanus strain SF-1739 has been deposited under number 3002 with the Technical Research Institute of Microbial Industry. Agency of Industrial Science & Technology. the Ministry of International Trade and Industry. Japanese. and under Deposit No. 31451 of the American Type Culture Collection (ATCC), USA. The morphological properties of said strain number 3002 are as follows: (I) M2r§ele9; = Aerial mycelium grows abundantly on wheat flour layers. yeast malt and the like during rich spore formation. Simple branches are observed but bundle-like branches are missing. Loose open spiral is formed in the top of the aerial mycelium. A specific configuration such as sclerotia can not be observed. On microscopic examination, the spore surface appears warty and partially prickly. The spores are from elliptical to short cylindrical in shape and between 0.6 and 0.8 x 0.8-1.2 μm large. Spore chains are present with generally 10 spores or more per chain.

(II) Tillväxt på olika medier (iakttagen efter odling vid 2a°c) 7905693-3 Medium Tillväxt och färg Luftmycel Lösligt pigment Sukros~ god. blekt gulgrå grått inget nitratagar G1ukos~ ringa. gräddfärgad svagt ut- inget asparagin- vecklat. agar vitt Glycerol- blekt grå grått inget asparagin- agar Stärkelse- god. blekt gulgrå- grâtt~o1iv- inget agar svagt olívgrå grått Havremjöls- god, blekt gulgrå omfattande. inget agar grått Jäst.malt- god. gråaktigt omfattande. inget agar gulbrun mörkgrått Tyrosin- mörkgrå olivgrått inget agar Näríngs- blekgul-grågul grått inget agar (III) Fysiologiska egenskaper: Temperaturområde för tillväxt: Gelatinförvätskníng: Hydrolys av stärkelse a ø Koagulering av skummjölk Petonisering av skummjölk Malaninbildning (IV) Koltillgodogörandemönster medium vid 28°C) 20-4o°c på jäst-ma1t-agar- medium långsamt vid odling vid 20°C under längre tid än 21 dagar (stark via za°c) positiv positiv (stark vid 28°C och 37°c) positiv (vid 28°C och 37°C) negativ (pâ Pridham-Gottliebs agar- 7905693-3 K D~glukos + D-fruktos + D-xylos + D-mannitol + I-insitol + L-arabinos + ramnos + sukros + raffinos - En summering av ovan angivna egenskaper ger vid handen att stammen SF-1739 tillhör arten Streptomyces. är spiralformad i toppen av luftmycelet och har en vårtig sporyta. Tillväxten på olika medier är grå till grâaktígt gulbrun och luftmycelet är grått. Någon melaninhildning kan ej iakttas och inte heller några lösliga pigment.(II) Growth on different media (observed after culturing at 2a ° c) 7905693-3 Medium Growth and color Aerial mycelium Soluble pigment Sucrose ~ good. pale yellow-gray gray no nitrate agar G1ukos ~ ringa. cream-colored faintly - no asparagus developed. agar white Glycerol- bleached gray gray no asparagine agar Starch- good. pale yellow-gray-gray ~ o1iv- no agar pale olive-gray gray Oatmeal- good, pale yellow-gray extensive. no agar gray Yeast.malt- good. greyishly extensive. no agar yellow-brown dark gray Tyrosine-dark gray olive gray no agar Nutrition-pale yellow-gray-yellow gray no agar (III) Physiological properties: Temperature range for growth: Gelatin pre-liquefaction: Hydrolysis of starch a ø Coagulation of skim milk Petonization of skim milk IV Kolanin 28 C) 20-40 ° C on yeast medium agar medium slowly when grown at 20 ° C for longer than 21 days (strong via za ° c) positive positive (strong at 28 ° C and 37 ° c) positive ( at 28 ° C and 37 ° C) negative (on Pridham-Gottlieb's agar- 7905693-3 KD ~ glucose + D-fructose + D-xylose + D-mannitol + I-insitol + L-arabinose + ramnose + sucrose + raffinose - A summary of the above properties suggests that the strain SF-1739 belongs to the species Streptomyces. Is spirally shaped at the top of the aerial mycelium and has a warty spore surface. The growth on various media is gray to grayish yellow-brown and the aerial mycelium is gray. nor any soluble pigments.

Egenskaperna hos stammen SF-1739 liknar mycket egenskaperna hos Streptomyces griseoplanus bland arterna av släktet Streptomyces. Båda överensstämmer helt vad beträffar spiral- form. vårtig sporyta. grått luftmycel och avsaknad av melanin- bildning. I jämförelse med stammen SF-l739 och Streptomyces griseoplanus beskriven i ISP (International Streptomyces Project) (jämför International Journal of Systematic Bacteriology. lg. 124-126, (1968)) skiljer sig den stam. som är återgiven i ISP. från stammen SF-1739 vad beträffar por- tillväxt på stärkelseagar. tillgodogörande av raffinos och avsaknad av tillgodogörande av sukros. L-inositol. D-mannitol och ramnos men den förra påminner mycket om den senare vad beträffar sporytans vårtlika och något taggiga utseende.The characteristics of the strain SF-1739 are very similar to the characteristics of Streptomyces griseoplanus among the species of the genus Streptomyces. Both are completely identical in terms of spiral shape. warty spore surface. gray aerial mycelium and lack of melanin formation. In comparison with the strain SF-1739 and Streptomyces griseoplanus described in ISP (International Streptomyces Project) (compare International Journal of Systematic Bacteriology. Lg. 124-126, (1968)), that strain differs. which is reproduced in the ISP. from strain SF-1739 in terms of pore growth on starch agar. assimilation of raffinose and lack of assimilation of sucrose. L-inositol. D-mannitol and ramnose, but the former is very similar to the latter in terms of the wart-like spore surface and somewhat prickly appearance.

Av det föregående förefaller det rimligt att stammen SF-1739 tillhör arten Streptomyces griseoplanus. eftersom de morfo- logiska egenskaperna stämmer väl överens och andra viktiga egenskaper också överensstämmer väl. Men den förra skiljer sig från den stam. som är angiven i ISP. vad beträffar koltill- godogörandemönster och annat. Därför har stammen SF-1739 7905693-3 benämnts Streptomyces griseoplanus stam SF-1739. Även om framställningen här förklarats huvudsakligen med avseende på stammen SF-1739 är det välkänt att olika egenska- per hos samtliga mikroorganismer tillhörande släktet Strepto- myces ej är otvetydiga utan mikroorganismer av släktet štreptomyces kan lätt varieras naturligt och artíficíellt. Det bör därför framhållas att samtliga stammar med förmåga att alstra de antibiotiska gula metaboliterna som man utgår från och tillhör släktet Streptomyces inkluderande varianter och mutanter. omfattas och kan användas i detta sammanhang.From the foregoing, it seems reasonable that the strain SF-1739 belongs to the species Streptomyces griseoplanus. since the morphological characteristics agree well and other important characteristics also agree well. But the former is different from that tribe. specified in the ISP. as regards carbon supply patterns and other. Therefore, the strain SF-1739 7905693-3 has been named Streptomyces griseoplanus strain SF-1739. Although the presentation is explained here mainly with respect to strain SF-1739, it is well known that different properties of all microorganisms belonging to the genus Streptomyces are not unambiguous, but microorganisms of the genus štreptomyces can be easily varied naturally and artificially. It should therefore be noted that all strains capable of producing the yellow antibiotic metabolites from which they are derived and belong to the genus Streptomyces including variants and mutants. covered and can be used in this context.

Odlingen kan på ett tillfredsställande sätt utföras på samma sätt som vanligen tillämpas när det gäller odling av stammar av släktet Streptomyces. Som odlingsíngredienser kan man använda vilket som helst välkänt näringsmaterial för släktet Streptomyces. Som kolkälla kan exempelvis användas glukos, sukros. stärkelse. glycerol, majssirap. melass. sojabönolja och liknande. Som kvävekälla kan användas sojabönmjöl, vete- groddar. köttextrakt. pepton, torrjäst. majssaft. ammonium- sulfat, natriumnitrat och liknande. Vidare kan vid behov sådana oorganiska salter som kalciumkarbonat. natriumklorid. kaliumklorid. fosfater etc. tillsättes. Även små mängder ämnen. som kan främja stammens tillväxt och påskynda produk- tionen av de antibiotiska gula metaboliterna.The cultivation can be satisfactorily carried out in the same manner as is usually applied to the cultivation of strains of the genus Streptomyces. Any well-known nutrient for the genus Streptomyces can be used as cultivation ingredients. As a carbon source can be used, for example, glucose, sucrose. starch. glycerol, corn syrup. molasses. soybean oil and the like. Soybean meal, wheat germ can be used as a source of nitrogen. meat extract. peptone, dry yeast. corn juice. ammonium sulphate, sodium nitrate and the like. Furthermore, if necessary, such inorganic salts as calcium carbonate. sodium chloride. potassium chloride. phosphates etc. are added. Even small amounts of substances. which can promote the growth of the strain and accelerate the production of the yellow antibiotic metabolites.

Odlingen kan utföras i vätskekultur på det sätt som vanligen tillämpas vid produktion av kända antíbiotiska substanser och helst under vätskenivå. Odlingstemperaturen ligger företrädes- vis inom området 25-35°C. oftast omkring 28°C. Den maxi- mala produktionen kan vanligen uppnås inom 2-6 dagar.The culture can be carried out in liquid culture in the manner commonly used in the production of known antibiotic substances and preferably below the liquid level. The culture temperature is preferably in the range 25-35 ° C. usually around 28 ° C. The maximum production can usually be achieved within 2-6 days.

De gula metaboliter. som sålunda ansamlas i odlíngsbuljongen. är basiska. halvt vattenlösliga substanser. som är extremt instabila och som man ej lyckats isolera och identifiera.The yellow metabolites. which thus accumulates in the culture broth. are alkaline. semi-water-soluble substances. which are extremely unstable and which have not been successfully isolated and identified.

För den föredragna koncentrationen av metaboliten kan man an- vända vilken som helst känd teknik som används för utvinning 7905693-5 LO av en basisk, halvt vattenlöslig naturprodukt inom detta fack~ omrâde. Exempelvis kan en odlingsbuljong filtreras. filtratet göras basískt. mättas med natriumklorid. ammoniumsulfat och liknande och därefter extraheras med ett med vatten icke blandbart organiskt lösningsmedel. t.ex. n-butanol. etyl- acetat. butylacetat eller eter. Fíltratet kan också adsorberas på ett katjonbytarharts. såsom "hmberlite RÉIRC-50".For the preferred concentration of the metabolite, any known technique used for the recovery of a basic, semi-water-soluble natural product in this field can be used. For example, a culture broth can be filtered. the filtrate is made alkaline. saturated with sodium chloride. ammonium sulfate and the like and then extracted with a water-immiscible organic solvent. for example n-butanol. ethyl acetate. butyl acetate or ether. The filtrate can also be adsorbed on a cation exchange resin. such as "hmberlite RÉIRC-50".

"CG-50". “IR-120" eller "Dowex RJSOW". varefter elueringen kan utföras med en syra såsom saltsyra eller svavelsyra för erhållande av metaboliten i koncentrerat tillstånd."CG-50". "IR-120" or "Dowex RJSOW", after which the elution can be carried out with an acid such as hydrochloric acid or sulfuric acid to obtain the metabolite in a concentrated state.

För att erhålla den önskade metaboliten í det mera renade tillståndet kan man använda vilken som helst kombination av ovannämnda extraktionstekniker och alternativt tillämpa ad- sorptíon med ett harts, t.ex. "XAD-2". desorption. rening medelst kolonnkromatografi med “Sephadex<5'G-10". karboxi- metylcellulosa och liknande och/eller tunnskiktstekník med silíkagel.To obtain the desired metabolite in the more purified state, one can use any combination of the above-mentioned extraction techniques and alternatively apply adsorption with a resin, e.g. "XAD-2". desorption. purification by column chromatography with "Sephadex <5'G-10". carboxymethylcellulose and the like and / or thin layer technique with silica gel.

De biologiska aktiviteterna hos derivatet SF-1739 HP-C enligt uppfinningen av substansen SF~l739 återges nedan i jämförelse med derivatet SF-1739 HP.The biological activities of the SF-1739 HP-C derivative according to the invention of the substance SF-1739 are set forth below in comparison with the SF-1739 HP derivative.

I. Antimikrobiell aktivitet Nedanstående tabell 1 anger den minsta inhiberande koncentra- tionen (MIC) av derivatet av substansen SF-1739 enligt uppfin- ningen í jämförelse med derivatet SF-1739 HP.I. Antimicrobial Activity Table 1 below lists the minimum inhibitory concentration (MIC) of the derivative of the substance SF-1739 according to the invention in comparison with the derivative SF-1739 HP.

Tabell H 1 7905693-3 Antimikrobiell aktivitet hos derivat av substansen SF-1739 Mikrob |MIC (/ug/ml) I _ \Substans SF-1739 ÉHP HP-C l Bacillus subtílís f<0.09 0,78 Staphylococcus aureus 209P §<0.09 3,125 Sarcina lutea ,<0.09 <0.l9 Escherichia coli Å 3,125 >100 Escherichía coli K-12R { 3,125 >100 Klebsiella pneumonia E 3,125 50 Pseudomonas aeruginosa } 3.125 >100 Proteus vulgaris 0.39 50 II. Tumörhämmande aktivitet A: Cvtopatogen aktivitet in vitro Nedanstående tabell 2 anger den minsta cytopatogena koncetra- tionen av derivatet enligt uppfinningen av substansen SF~l739.Table H 1 7905693-3 Antimicrobial activity of derivatives of the substance SF-1739 Microbial | MIC (/ ug / ml) I _ \ Substance SF-1739 ÉHP HP-C 1 Bacillus subtilis l 3,125 Sarcina lutea, <0.09 <0.l9 Escherichia coli Å 3,125> 100 Escherichia coli K-12R {3,125> 100 Klebsiella pneumonia E 3,125 50 Pseudomonas aeruginosa} 3.125> 100 Proteus vulgaris 0.39 50 II. Tumor Inhibitory Activity A: Cytopathogenic activity in vitro Table 2 below indicates the minimum cytopathogenic concentration of the derivative according to the invention of the substance SF-1739.

Tabe11_2 Testsuhstans Minsta cytopatogena koncentration ir (/ug/ml) t _J .Tabe11_2 Test residue Minimum cytopathogenic concentration ir (/ ug / ml) t _J.

HeLa S3 f Hep. ”-2 i Sarcoma 180 i 1 * n SF«1739 HP 0.9 1 <0.4 ¿ sF»1739-HP C 0.9 E <0.4 I 0,9 i i I i * Utvärderad efter vävnadsodlínq under 48 timmar. 7905693-5 5-11 B: Karcínostatisk effekt på möss in vívq Hanmöss av stammen CDFl (ca 5 veckor gamla, vägande l9¿lg och varje grupp bestående av 3-5 djur) ympades íntraperítone- alt med P-388 leukemíceller i en dos av 106/0.02 ml/mus.HeLa S3 f Hep. ”-2 in Sarcoma 180 i 1 * n SF« 1739 HP 0.9 1 <0.4 ¿sF »1739-HP C 0.9 E <0.4 I 0.9 i i I i * Evaluated after tissue culture for 48 hours. 7905693-5 5-11 B: Carcinostatic effect on mice in vívq Male mice of the strain CDF1 (approximately 5 weeks old, weighing 19g and each group consisting of 3-5 animals) were inoculated intraperitoneally with P-388 leukemia cells in a single dose. of 106 / 0.02 ml / mouse.

Testsubstansen löstes i vatten vid angiven dos och administre- rades intraperítonealt med 0.2 ml/dag/mus under tre på varand- ra följande dagar räknat 24 timmar från ympningen. Därefter bestämdes den ökade livslängden (ILS). Resultaten är samman- fattade i nedanstånede tabell 3.The test substance was dissolved in water at the indicated dose and administered intraperitoneally at 0.2 ml / day / mouse for three consecutive days 24 hours from inoculation. Thereafter, the increased life expectancy (ILS) was determined. The results are summarized in Table 3 below.

TLÖSÅLÃ Test-substans Dos (mg/kg) i ILS (%) SF--l739 HP 2 i 75,0 1 i 43.3 0,5 l 43.3 0.25 É 45.0 1 SF~l739 HP-C _16 70,2 8 53.8 4 113,5 2 61.5 1 59.4 III. 353; toxícítet I nedanstående tabell 4 anges den akuta toxícíteten (LDSO) hos derívatet enligt uppfinningen av substansen SF-1739 vid administrering intravenöst på möss. 7905693-3 in lefzêll.- 4.TLÖSÅLÃ Test substance Dose (mg / kg) in ILS (%) SF - l739 HP 2 i 75.0 1 i 43.3 0.5 l 43.3 0.25 É 45.0 1 SF ~ l739 HP-C _16 70.2 8 53.8 4 113.5 2 61.5 1 59.4 III. 353; toxicity Table 4 below lists the acute toxicity (LDSO) of the derivative of the invention of the substance SF-1739 when administered intravenously to mice. 7905693-3 a cell.- 4.

Substans LDSO (mg/kg) l _ SF-1739 HP 2 SF 1739 HP-C , 20»25 5F~l739 0.45 Vid användning av derivatet av substansen SF-1739 för behand- ling av olika typer av tumörer kan det administreras oralt eller parenteralt i form av ett preparat vanligen uppblandat med en konventionell fast eller flytande. farmaceutískt god- tagbar bärare. Det fasta preparatet för oral administrering kan utgöras av kapslar, tabletter. granulat. plattor och lík~ nande och de topiskt applicerbara preparaten kan utgöras av stolpiller. salvor och liknande. De vätskeformiga preparaten kan utgöras av lösningar, suspensioner. sirap och liknande och appliceras oralt. topiskt eller genom injektion. Sådana prepa- rat kan lätt beredas med användning av konventionella material med hjälp av lämplig välkänd teknik. Mängden aktiv ingrediens i preparaten liksom valet av prepartform kan lätt väljas beroende på typen och allvarlighetsgraden av sjukdomen som skall behandlas. admínistreringssättet. kroppsvikten och åldern på patienten. substansens aktivitet och toxicítet med mefê.Substance LDSO (mg / kg) l-SF-1739 HP 2 SF 1739 HP-C, 20 »25 5F ~ l739 0.45 When using the derivative of the substance SF-1739 for the treatment of various types of tumors, it may be administered orally parenterally in the form of a preparation usually mixed with a conventional solid or liquid. pharmaceutically acceptable carrier. The solid preparation for oral administration may be capsules, tablets. granules. plates and the like and the topically applicable preparations may consist of suppositories. ointments and the like. The liquid preparations can consist of solutions, suspensions. syrups and the like and applied orally. topically or by injection. Such preparations can be readily prepared using conventional materials using suitable well known techniques. The amount of active ingredient in the preparations as well as the choice of prepart form can be easily selected depending on the type and severity of the disease to be treated. the method of administration. body weight and age of the patient. activity and toxicity of the substance with mefê.

När det gäller injicerbara preparat är det önskvärt att för vuxna administrera preparaten subkutant. intramuskulärt eller företrädesvis intravenöst eller intraarteriellt i en daglig dos av 1~100 mg kontinuerligt under flera dagar eller i en dos av 2-200 mg varannan eller var tredje dag. Det kan ibland vara effektivt att när det gäller vissa tumörer injicera preparatet direkt i själva tumören.In the case of injectable preparations, it is desirable for adults to administer the preparations subcutaneously. intramuscularly or preferably intravenously or intraarterially at a daily dose of 1 ~ 100 mg continuously for several days or at a dose of 2-200 mg every two or three days. It can sometimes be effective in the case of certain tumors to inject the preparation directly into the tumor itself.

I fallet med oral administrering är det önskvärt att för vuxna 79Û5693-5 Ifi administrera preparatet i en enda daglig dos av l-500 mg varje dag eller varannan dag.In the case of oral administration, it is desirable for adults to administer the preparation in a single daily dose of 1-500 mg daily or every other day.

I fallet med topisk applicering kan den aktiva ingrediensen anbringas direkt på den angripna eller sjuka delen i form av en blandning med en lämplig bas utgörande 1-20% av den aktiva ingrediensen.In the case of topical application, the active ingredient may be applied directly to the affected or diseased part in the form of a mixture with a suitable base constituting 1-20% of the active ingredient.

Man kan också gå tillväga så att man använder det aktiva deri» vatet ensamt eller i kombination med andra kända tumörhämmande medel och/eller någon immunoaccelerator.It is also possible to proceed with the use of the active derivative alone or in combination with other known antitumor agents and / or some immunoaccelerator.

I det fall derivatet av substansen SF-1739 skall användas som antimikrobiellt medel, isynnerhet som bakteriehämmande medel. kan det också administreras oralt eller parenteralt i form av fasta eller flytande preparat av den typ som vanligen användes för andra kända bakteriehämmande medel eller antibiotika. Som preparat för oral administrering kan användas exempelvis en kapsel. tablett, pulver. granulat. lösning. suspension eller sirap. För topisk applicering kan användas exempelvis ett stolpiller. en salva eller liknande. Som preparat för parente- ral administrering kan användas en injicerbar lösning eller suspension och preparatet kan ges subkutant, intramuskulärt eller intravenöst. Mängden aktiv komponent kan variera beroen- de på typen och allvarlighetsgraden av sjukdomen. kroppsvikten och åldern hos patienten. substansens aktivitet och toxícitet och andra faktorer men den aktiva komponenten kan när det gäller vuxna vanligen användas i en daglig dos av l-500 mg för oral administrering i enkeldosform eller flera uppdelade doser eller i en enkeldos av 1-100 mg för parenteral. t.ex. intra~ muskulâr eller intravenös administrering. Högre eller lägre doser kan väljas och användas av läkaren med speciell hänsyn tagen till sjukdomens allvarlighetsgrad. patientens fysiska tillstånd och eventuella ogynnsamma effekter.In case the derivative of the substance SF-1739 is to be used as antimicrobial agent, in particular as bactericidal agent. it may also be administered orally or parenterally in the form of solid or liquid preparations of the type commonly used for other known antibacterial agents or antibiotics. As a preparation for oral administration, for example, a capsule can be used. tablet, powder. granules. solution. suspension or syrup. For topical application, for example, a suppository can be used. an ointment or the like. An injectable solution or suspension may be used as the preparation for parenteral administration and the preparation may be administered subcutaneously, intramuscularly or intravenously. The amount of active component may vary depending on the type and severity of the disease. the body weight and age of the patient. the activity and toxicity of the substance and other factors, but the active component in adults can usually be used in a daily dose of 1-500 mg for oral administration in single or multiple divided doses or in a single dose of 1-100 mg for parenteral. for example intra-muscular or intravenous administration. Higher or lower doses can be selected and used by the doctor with special regard to the severity of the disease. the patient's physical condition and any adverse effects.

Derivatet enligt uppfinningen av substansen SF-1739 kan administreras antingen ensamt eller i kombination med andra 7905693-5 kända antlmínrobiella medel, såsom olika antibiotika och lik- nande.The derivative according to the invention of the substance SF-1739 can be administered either alone or in combination with other known antiminrobial agents, such as various antibiotics and the like.

Efterföljande exempel avser att belysa uppfinningen mera i detalj.The following examples are intended to illustrate the invention in more detail.

Ešåfißêlml Framställning av substansen 5F»l739 HQ En lösning av 6 mg SF-1739 hydrokloriden i 3 ml 5 N saltsyra fick stå vid rumstemperatur under l vecka. Lösningen neutrali- serades därefter med fast natriumvätekarbonat och den neutra- líserade lösningen koncentrerades till torrhet vid reducerat tryck. Återstoden löstes i en liten mängd metanol och det olösliga materialet frânfiltrerades och filtratet koncentrera- des. Återstoden placerades på en tunn skiva av silikagel för preparativ tunnskiktskromatografi (2 x 100 x 100 mm). som där- efter framkallades med en lösníngsmedelblandníng av kloroform och metanol (9:l). Ett purpurfärgat band med Rf = 0.45 skars ut från skivan och extraherades med metanol.Ešå fi ßêlml Preparation of the substance 5F »l739 HQ A solution of 6 mg of SF-1739 hydrochloride in 3 ml of 5 N hydrochloric acid was allowed to stand at room temperature for 1 week. The solution was then neutralized with solid sodium bicarbonate and the neutralized solution was concentrated to dryness under reduced pressure. The residue was dissolved in a small amount of methanol and the insoluble matter was filtered off and the filtrate was concentrated. The residue was placed on a thin disk of silica gel for preparative thin layer chromatography (2 x 100 x 100 mm). which was then developed with a solvent mixture of chloroform and methanol (9: 1). A purple band with Rf = 0.45 was cut from the disc and extracted with methanol.

Extraktet koncentrerades till torrhet. Återstoden löstes i en lösningsmedelblandning av metanol och acetcn (2:l) och olös- ligt material frånfiltrerades. Filtratet koncentrerades till torrhet och man erhöll 3.3 mg av substansen SF~l739 HP.The extract was concentrated to dryness. The residue was dissolved in a solvent mixture of methanol and acetone (2: 1) and insoluble material was filtered off. The filtrate was concentrated to dryness to give 3.3 mg of the substance SF ~ 1739 HP.

Biàllßëi Framställning av substansen SF-1739 HP-C Till en lösning av 71 mg av substansen SF-1739 HP i 5 ml vat- ten sattes I44 mg natriumcyanid och den resulterande bland- ningen fick stå vid rumstemperatur under 30 minuter. Därefter koncentrerades den till torrhet vid reducerat tryck under 35°C under tillsats av n-butanol. Återstoden löstes i en liten mängd metanol. olösligt material frânfiltrerades och fíltratet koncentrerades. Återstoden placerades på en skiva av sílikagel för preparativ tunnskiktskromatografi (2 x 100 x 100 mm). som därefter framkallades med en lösningsmedelblandníng 7905693-3 av etylacetat och metanol (322). Ett purpurfärgat band med Rf=O.70 skrapades av och extraherades med metanol. Extraktet koncentrerades till torrhet och återstoden löstes upp i en blandning av metanol och aceton (2:l). varefter olösligt material fränfiltrerades och filtratet koncentrerades till torrhet. varigenom erhålls 35 mg av substansen SF-1739 HP-C ExemQel_§ Framställning av substansen SF-1739 HP-C Till en lösning av 73 mg av substansen SF-1739 HP i 2 ml metanol sattes 72 mg kaliumcyaníd och den resulterande bland- ningen omrördes vid rumstemperatur under 5 minuter. Reaktions- blandningen placerades på en silikagelplatta för preparativ tunnskiktskromatografi (2 x 100 x 100 mm), som därefter fram- kallades med en blandning av etylacetat och metanol (322). Ett purpurfärgat band med Rf=0.70 skrapades av och extraherades med metanol. Extraktet koncentrerades till torrhet. återstoden löstes i en blandning av metanol och aceton (2:l). olösligt material frânfiltrerades och filtratet koncentrerades därefter till torrhet. varigenom erhölls 50 mg av substansen SF-1739 HP-C.Biàllßëi Preparation of the substance SF-1739 HP-C To a solution of 71 mg of the substance SF-1739 HP in 5 ml of water was added I44 mg of sodium cyanide, and the resulting mixture was allowed to stand at room temperature for 30 minutes. Then it was concentrated to dryness under reduced pressure below 35 ° C with the addition of n-butanol. The residue was dissolved in a small amount of methanol. insoluble matter was filtered off and the filtrate was concentrated. The residue was placed on a plate of silica gel for preparative thin layer chromatography (2 x 100 x 100 mm). which was then developed with a solvent mixture of ethyl acetate and methanol (322). A purple band with Rf = 0.70 was scraped off and extracted with methanol. The extract was concentrated to dryness and the residue was dissolved in a mixture of methanol and acetone (2: 1). after which insoluble matter was filtered off and the filtrate was concentrated to dryness. whereby 35 mg of the substance SF-1739 HP-C are obtained. Example Preparation of the substance SF-1739 HP-C To a solution of 73 mg of the substance SF-1739 HP in 2 ml of methanol was added 72 mg of potassium cyanide and the resulting mixture was stirred. at room temperature for 5 minutes. The reaction mixture was placed on a silica gel plate for preparative thin layer chromatography (2 x 100 x 100 mm), which was then developed with a mixture of ethyl acetate and methanol (322). A purple band with Rf = 0.70 was scraped off and extracted with methanol. The extract was concentrated to dryness. the residue was dissolved in a mixture of methanol and acetone (2: 1). insoluble matter was filtered off and the filtrate was then concentrated to dryness. whereby 50 mg of the substance SF-1739 HP-C were obtained.

Framställninq av substansen SF-1739 HP Sporer av Streptomyces griseoplanus stam SF-1739 (depositions- nummer 3002 från Technical Research Institute of Microbial Industry) infördes i 1,6 1 av en vätska hållande l.0% stärkel- se och 3,0% sojabönmjöl (pH 7.0) och vätskemediet skakades vid 28°C under 30 timmar med användning av 16 Sakaguchi-flaskor för frambringande av en odlingskultur.Preparation of the substance SF-1739 HP Spores of Streptomyces griseoplanus strain SF-1739 (Deposit No. 3002 from the Technical Research Institute of Microbial Industry) were introduced into 1.6 l of a liquid containing 1.0% starch and 3.0% soybean meal (pH 7.0) and the liquid medium was shaken at 28 ° C for 30 hours using 16 Sakaguchi flasks to produce a culture culture.

Den sålunda erhållna odlingskulturen ympades på 70 1 av ett vätskemedium bestående av 3.0% stärkelsesirap. 2.0% sojabön- mjöl, l.0% köttextrakt. 1.0% vetegrodd och 0.3% natriumklorid (pH 6,6) och kulturen skakades under lufttillträde vid 28°C under 90 timmar med användning av två fermenteringskärl var- dera rymmande É0 1. 7905695-3 Den odlade buljongen inställdes på pH 3-4 med 6 N saltsyra och tiltrerades med en filtersyra "Hyflo Super Cel". Filtratet (ca 47 1) inställdes på pH 6 med 3 N natriumhydroxid ochgmatades genom en kolonn med ca 4 1 jonbytarharts "Amberlite IRC-50" (H+) för adsorption av antibiotiska metaboliter.The culture culture thus obtained was inoculated on 70 l of a liquid medium consisting of 3.0% starch syrup. 2.0% soybean meal, 1.0% meat extract. 1.0% wheat germ and 0.3% sodium chloride (pH 6.6) and the culture was shaken under air access at 28 ° C for 90 hours using two fermentation vessels each containing É0 1. 7905695-3 The cultured broth was adjusted to pH 3-4 with 6 N hydrochloric acid and filtered with a "Hyflo Super Cel" filter acid. The filtrate (about 47 L) was adjusted to pH 6 with 3 N sodium hydroxide and fed through a column of about 4 L of ion exchange resin "Amberlite IRC-50" (H +) to adsorb antibiotic metabolites.

Kolonnen tväftades noggrant med vatten och eluerades med 0.2 N saltsyra. Aktiv fraktion om ca 4,5 1 mättades med natrium- klorid, inställdes på pH 8.0 med natríumhydroxid och extra- herades därefter två gånger med vardera 1 1 etylacetat under kylning. Etylacetatextraktet extraherades ånyo med 200 ml 0.05 N saltsyra. Den resulterande vattenlösningen (pH 2.0) koncentrerades till torrhet vid reducerat tryck under bildning av 1.68 g antibíotiska metaboliter som ett rått pulver. Detta pulver löstes i 20 ml 5 N saltsyra. som fick stå vid rums~ temperatur under 1 vecka och därefter koncentrerades till torrhet vid reducerat tryck. Återstoden löstes i 20 ml metanol och den resulterande gulröda lösningen neutraliserades med fast natriumvätekarbonat tills den blev purpurfärgad. Olösligt material frånfiltrerades, filtratet koncentrerades och åter- stoden placerades därefter på 7 silikagelplattor för prepara- tív tunnskiktskromatografi (2 x 100 x 100 mm). som därefter framkallades med en blandning av etylacetat och metanol (3:2).The column was washed thoroughly with water and eluted with 0.2 N hydrochloric acid. Active fraction of about 4.5 l was saturated with sodium chloride, adjusted to pH 8.0 with sodium hydroxide and then extracted twice with 1 l each of ethyl acetate under cooling. The ethyl acetate extract was again extracted with 200 ml of 0.05 N hydrochloric acid. The resulting aqueous solution (pH 2.0) was concentrated to dryness under reduced pressure to give 1.68 g of antibiotic metabolites as a crude powder. This powder was dissolved in 20 ml of 5 N hydrochloric acid. which was allowed to stand at room temperature for 1 week and then concentrated to dryness under reduced pressure. The residue was dissolved in 20 ml of methanol and the resulting yellow-red solution was neutralized with solid sodium bicarbonate until it turned purple. Insoluble material was filtered off, the filtrate was concentrated and the residue was then placed on 7 silica gel plates for preparative thin layer chromatography (2 x 100 x 100 mm). which was then developed with a mixture of ethyl acetate and methanol (3: 2).

Från de första silíkagelplattorna skrapades purpurfärgade band av med Rf 0.31 och extraherades med metanol. Extraktet koncentrerades till torrhet. återstoden löstes i en liten mängd metanol och placerades på två silíkagelplattor för preparativ tunnskíktskromatografi (2 X 100 x 100 mm). som där~ efter framkallades med en blandning av kloroform och metanol (9:l). Purpurfärgade band med Rf 0,26 skrapades av och extra- herades med metanol. Extraktet koncentrerades till torrhet. återstoden löstes i en blandning av metanol och aceton (2:1), olösligt material frånfiltrerades och fíltratet koncentrerades till torrhet, varigenom erhölls 99 mg av substansen SF~1739 HP.From the first silica gel plates, purple bands were scraped off with Rf 0.31 and extracted with methanol. The extract was concentrated to dryness. the residue was dissolved in a small amount of methanol and placed on two silica gel plates for preparative thin layer chromatography (2 X 100 x 100 mm). which was then developed with a mixture of chloroform and methanol (9: 1). Purple bands with Rf 0.26 were scraped off and extracted with methanol. The extract was concentrated to dryness. the residue was dissolved in a mixture of methanol and acetone (2: 1), insoluble matter was filtered off and the filtrate was concentrated to dryness to give 99 mg of the substance SF ~ 1739 HP.

Claims (1)

1. 7905695~31. 7905695 ~ 3 1. n a per: H) (2) (3) (4) (5) (6) SGI! /3 Patentkgag En substans här benämnd SF-1739 HP-C, k ä n n e t e c k - d .av att den uppvisar följande fysikalisk~kemiska egenska- Mörkt purpurfärgad substans UV-absorptionsspektrum enligt bifogade fig. 5 IR-absorptionsspektrum enligt bifogade íig. 6 med karaktefl ristiska absorptionsband vid 3350, 1660, 1600, 1535, 1355, 1265, 1235, 1200, 1175, 1140, 1120, 1080, 1060, 1000, 940, 910, aso, 835 och 795 cm” Spridningskurva för optisk rotation enligt bifogade fig. 7 NMR-spektrum enligt bifogade fig. 6 Elementaranalys: Funnet: C 59,58%, H 6,14%, N 12,63%, O 21,65% (genom differens) Löslighet. Lättlöslig i vatten och metanol, löslig i aceton och etylacetat och svårlöslig i hexan Kromatografi. Vid tunnskiktskromatografi på silikagel Rf-värden 0,40 (kloroformzmetanol 9:1) och 0,70 (etylacetat: metanol 3:2) och framställbar genom odling av Streptomyces griseoplanus stam SF-1739 (ATCC 31451). Antibakteriell eller tumörhämmande komposition, k ä n n e ~ c k n a d av att den som aktiv ingrediens innehåller substan- SF-1739 HP-C enligt krav 1 och en farmaceutískt godtagbar bärare. __,__-V.... _ _... ._ _ ._ --...__, .- -,. -_ . ..._....-....__ _.1. n a per: H) (2) (3) (4) (5) (6) SGI! A substance here designated SF-1739 HP-C, characterized in that it exhibits the following physicochemical properties. Dark purple substance UV absorption spectrum according to the accompanying Fig. 5 IR absorption spectrum according to the appended figure. 6 with characteristic absorption bands at 3350, 1660, 1600, 1535, 1355, 1265, 1235, 1200, 1175, 1140, 1120, 1080, 1060, 1000, 940, 910, aso, 835 and 795 cm "Scattering curve for optical rotation according to attached Fig. 7 NMR spectrum according to attached Fig. 6 Elemental analysis: Found: C 59.58%, H 6.14%, N 12.63%, O 21.65% (by difference) Solubility. Easily soluble in water and methanol, soluble in acetone and ethyl acetate and sparingly soluble in hexane Chromatography. By thin layer chromatography on silica gel Rf values 0.40 (chloroform-methanol 9: 1) and 0.70 (ethyl acetate: methanol 3: 2) and obtainable by culturing Streptomyces griseoplanus strain SF-1739 (ATCC 31451). Antibacterial or tumor inhibitory composition, characterized in that it contains as active ingredient the substance SF-1739 HP-C according to claim 1 and a pharmaceutically acceptable carrier. __, __- V .... _ _... ._ _ ._ --...__, .- - ,. -_. ..._....-....__ _.