RU2808048C1 - Method of simulating periodontitis on laboratory animals - Google Patents

Abstract

FIELD: experimental medicine; dentistry.

SUBSTANCE: metal wire ligature is applied in a figure-of-eight pattern to the cervical region of the rat's upper and lower incisors separately. Plaque from a patient with chronic periodontitis is then placed on the cervical region of each maxillary and mandibular incisor between the ligature and the gingival margin of the rat. Then, under the mucous membrane of the gums on the vestibular side, in the area of each incisor of the upper and lower jaw, an injection of a solution of nicotine 0.001 mg/l in physiological solution in a volume of 0.05 ml is injected, and after 10 minutes — a 50% solution of ethyl alcohol in a volume of 0.05 ml, and these injections are carried out daily for 7 days.

EFFECT: method provides the possibility of modeling within a short time (within 7 days), without the use of traumatic elements and obviously stressful conditions for keeping animals.

1 cl, 5 dwg, 1 ex

Description

Изобретение относится к экспериментальной медицине, а именно к стоматологии, и может быть использовано при моделировании пародонтита с целью изучения особенностей патогенеза и клинического течения пародонтита, а также для оценки эффективности новых методов лечения воспалительных заболеваний пародонта. The invention relates to experimental medicine, namely dentistry, and can be used in modeling periodontitis in order to study the characteristics of the pathogenesis and clinical course of periodontitis, as well as to evaluate the effectiveness of new methods of treating inflammatory periodontal diseases.

Пародонтит - инфекционное заболевание, которое приводит к разрушению опорных структур зуба, постепенной потере эпителиального, соединительнотканного прикрепления и костной ткани челюсти, образованию пародонтального и костного карманов, характеризуется выраженным дисбиозом в полости рта. Результаты недавних исследований говорят о том, что распространенность заболеваний пародонта у взрослых людей составляет около 46% (а среди лиц пожилого возраста - до 82%) и рассматривается как одна из наиболее частых причин потери зубов [Nazir М., Al-Ansari A., Al-Khalifa K., Alhareky М., Gaffar В., Almas K. Global Prevalence of periodontal disease and lack of its surveillance. Scientific World Journal. -2020; - 2146160. doi: 10.1155/2020/2146160.]. Все более актуальной становится проблема сочетанных поражений тканей пародонта и пульпы зубов. Такой сложный морфофункциональный симптомокомплекс получил название эндо-пародонтального поражения (ЭПП). К сожалению, на сегодняшний день отсутствуют научно обоснованные алгоритмы комплексного лечения этой патологии. Кроме того, одной из основных проблем остается отсутствие диагностических алгоритмов, позволяющих врачу правильно поставить диагноз. Ряд авторов сегодня предлагают новые методы лечения пародонтита и ЭПП [Румянцев В.А., Федотова Т.А., Заблоцкая М.В., Юсупова Ю.И., Рябиков М.Д., Моисеев Д.А. Новый метод комплексного лечения эндодонто-пародонтальных поражений с помощью наноимпрегнации и купрал-кюретажа. Тверской медицинский журнал. -2017. - №4. С. 4-9. https://www.elibrary.ru/item.asp?id=32389625.]. Однако, исследование эффективности новых способов лечения и препаратов на больных затруднительно и связано с рядом ограничений. В этом случае возникает необходимость в проведении исследований на лабораторных животных. В известных моделях экспериментального пародонтита (аналогах) ключевая роль отводится механической травме тканей пародонта.Periodontitis is an infectious disease that leads to the destruction of the supporting structures of the tooth, the gradual loss of epithelial, connective tissue attachment and bone tissue of the jaw, the formation of periodontal and bone pockets, and is characterized by pronounced dysbiosis in the oral cavity. The results of recent studies indicate that the prevalence of periodontal disease in adults is about 46% (and among the elderly - up to 82%) and is considered one of the most common causes of tooth loss [Nazir M., Al-Ansari A., Al-Khalifa K., Alhareky M., Gaffar V., Almas K. Global Prevalence of periodontal disease and lack of its surveillance. Scientific World Journal. -2020; - 2146160. doi: 10.1155/2020/2146160.]. The problem of combined lesions of periodontal tissue and dental pulp is becoming increasingly urgent. This complex morphofunctional symptom complex is called endo-periodontal lesion (EPD). Unfortunately, today there are no scientifically based algorithms for the complex treatment of this pathology. In addition, one of the main problems remains the lack of diagnostic algorithms that allow the doctor to make a correct diagnosis. A number of authors today offer new methods for the treatment of periodontitis and EPP [Rumyantsev V.A., Fedotova T.A., Zablotskaya M.V., Yusupova Yu.I., Ryabikov M.D., Moiseev D.A. A new method of complex treatment of endodontic-periodontal lesions using nanoimpregnation and cupral curettage. Tver Medical Journal. -2017. - No. 4. pp. 4-9. https://www.elibrary.ru/item.asp?id=32389625.]. However, studying the effectiveness of new treatments and drugs on patients is difficult and is associated with a number of limitations. In this case, there is a need to conduct research on laboratory animals. In known models of experimental periodontitis (analogues), a key role is given to mechanical trauma of periodontal tissue.

В частности, известен способ получения модели хронического пародонтита у крыс [RU 2545923 С1, ИХТТ УрО РАН, 10.04.2015], который осуществляют под анестезией путем нанесения острой механической травмы тканей десны. Для этого, под общей анестезией на фоне тиопенталового наркоза, вводят цельнометаллическую иглу длиной 12 мм в десневой край с вестибулярной поверхности правого нижнего зуба с медиального края вплотную вдоль зуба с небольшим усилием для разрыва тканей и внедрения в костную ткань челюсти.In particular, there is a known method for obtaining a model of chronic periodontitis in rats [RU 2545923 C1, IHTT Ural Branch of the Russian Academy of Sciences, April 10, 2015], which is carried out under anesthesia by causing acute mechanical trauma to the gum tissue. To do this, under general anesthesia against the background of thiopental anesthesia, an all-metal needle 12 mm long is inserted into the gingival margin from the vestibular surface of the right lower tooth from the medial edge close along the tooth with little force to rupture the tissue and penetrate into the bone tissue of the jaw.

Недостатком способа является значительная травматизация тканей и стресс для животного. Кроме того, сроки воспроизведения пародонтита составляют 25 суток, что достаточно длительно. Введение иглы производится под общей анестезией на фоне тиопенталового наркоза, что сложно воспроизводимо, учитывая то, что тиопентал натрия относится к списку сильнодействующих веществ (список №1), а оборот его ограничен.The disadvantage of this method is significant tissue trauma and stress for the animal. In addition, the period of reproduction of periodontitis is 25 days, which is quite long. The needle is inserted under general anesthesia against the background of thiopental anesthesia, which is difficult to reproduce, given that sodium thiopental is on the list of potent substances (list No. 1), and its circulation is limited.

Известен также способ получения модели пародонтита [RU 2252009 С2, Буранбаев Р.З., 20.05.2005], при котором создают искусственную зубную бляшку вокруг шейки верхних и нижних резцов при помощи стоматологического цемента, причем зубная бляшка имеет шероховатую поверхность и заходит на 1-1,5 мм под десну. Экспериментальные животные помещаются по 10-11 особей в клетку. В процессе моделирования экспериментальные животные получают кашицеобразную пищу. Болезнь развивается через 20-30 дней от начала воздействия. Эксперимент проводят под эфирным наркозом или внутривенным наркозом тиопенталом натрия.There is also a known method for obtaining a model of periodontitis [RU 2252009 C2, Buranbaev R.Z., May 20, 2005], in which an artificial dental plaque is created around the neck of the upper and lower incisors using dental cement, and the dental plaque has a rough surface and extends to 1- 1.5 mm under the gum. Experimental animals are placed 10-11 individuals per cage. During the modeling process, experimental animals receive mushy food. The disease develops 20-30 days from the start of exposure. The experiment is carried out under ether anesthesia or intravenous anesthesia with sodium thiopental.

Недостатком способа является его длительность: заболевание развивается через 25-30 дней. Кроме того, моделирование пародонтита проводится под внутривенным тиопенталовым наркозом, что сложно воспроизводимо, учитывая то, что тиопентал натрия относится к списку сильнодействующих веществ (список №1), а оборот его ограничен. Кроме того, модель предполагает заведомо стрессовые условия для животных.The disadvantage of this method is its duration: the disease develops after 25-30 days. In addition, modeling of periodontitis is carried out under intravenous thiopental anesthesia, which is difficult to reproduce, given that sodium thiopental is on the list of potent substances (list No. 1), and its circulation is limited. In addition, the model assumes obviously stressful conditions for animals.

Известен также способ моделирования пародонтита в эксперименте [патент RU 2699497 С2, "Северо-Осетинская государственная медицинская академия", опубл. 05.09.2019]. Острый пародонтит моделировали путем наложения под тиопенталовым наркозом в дозе 10 мг/кг, металлической лигатуры у десневого края нижних резов восьмиобразно, которую фиксировали к гребню альвеолярного отростка шелковой нитью. Со вторых по седьмые сутки, ежедневно, крыс помещают в клетки площадью 0,008 м² на шесть часов, причем с 1 по 7 сутки крысы находятся на высокоуглеводистой диете по Евдокимову без ограничения водного режима. Пародонтит развивается на 7-е сутки. Эксперимент проводили под тиопенталовым наркозом.There is also a known method for modeling periodontitis in an experiment [patent RU 2699497 C2, "North Ossetian State Medical Academy", publ. 09/05/2019]. Acute periodontitis was modeled by applying, under thiopental anesthesia at a dose of 10 mg/kg, a metal ligature at the gingival edge of the lower cuts in a figure of eight, which was fixed to the crest of the alveolar process with a silk thread. From the second to the seventh day, every day, the rats are placed in cages with an area of 0.008 m ² for six hours, and from the 1st to the 7th day the rats are on a high-carbohydrate diet according to Evdokimov without water restriction. Periodontitis develops on the 7th day. The experiment was carried out under thiopental anesthesia.

Недостатком способа является то, что местное воздействие ограничивается только использованием металлической лигатуры и не учитывает инфекционную природу пародонтита. Кроме того, данная модель не учитывает патогенетические механизмы развития пародонтита: расстройства микроциркуляции (ишемия, стаз, повышенная сосудистая проницаемость), нарушения антиоксидантной защиты и другие. Кроме того, модель предполагает заведомо стрессовые условия для животных.The disadvantage of this method is that the local effect is limited only to the use of a metal ligature and does not take into account the infectious nature of periodontitis. In addition, this model does not take into account the pathogenetic mechanisms of periodontitis development: microcirculation disorders (ischemia, stasis, increased vascular permeability), disorders of antioxidant protection, and others. In addition, the model assumes obviously stressful conditions for animals.

Прототипом патентуемого способа является способ, описанный в публ. Светлакова Е.Н., Мандра Ю.В., Полушина Л.Г., Максимова А.Ю., Базарный В.В., Медведева С.Ю. Создание экспериментальной модели пародонтита на лабораторных животных // Международный конгресс «Стоматология Большого Урала» 29 ноября - 1 декабря 2017 года Молодежная научная школа по проблемам фундаментальной стоматологии. Издательский Дом «ТИРАЖ». 2018. С. 107-109]. Для воспроизведения модели пародонтита у крыс применяется комплексное воздействие на ткани пародонта - механическое повреждение (разрыв круговой связки зуба), микробное инфицирование раневой поверхности, нарушение микроциркуляции тканей. Животному выполняется наркоз, разрывается круговая связка зуба при помощи серповидной гладилки и вводятся зубные отложения - зубной налет и зубной камень от пациента, зубы шинируются. Фиксируется развитие пародонтита на 21-35 сутки.The prototype of the patented method is the method described in publ. Svetlakova E.N., Mandra Yu.V., Polushina L.G., Maksimova A.Yu., Bazarny V.V., Medvedeva S.Yu. Creation of an experimental model of periodontitis in laboratory animals // International Congress “Dentistry of the Greater Urals” November 29 - December 1, 2017 Youth scientific school on problems of fundamental dentistry. Publishing House "CIRAZH". 2018. pp. 107-109]. To reproduce the model of periodontitis in rats, a complex effect on periodontal tissue is used - mechanical damage (rupture of the circular ligament of the tooth), microbial infection of the wound surface, and disruption of tissue microcirculation. The animal is given anesthesia, the circular ligament of the tooth is torn using a sickle-shaped trowel and dental deposits are introduced - plaque and tartar from the patient, the teeth are splinted. The development of periodontitis is recorded on days 21-35.

Недостатками прототипа являются длительность воспроизведения модели: максимальные морфологические сдвиги фиксируются на 21-35 сутки; сильная травматизация тканей пародонта путем разрыва круговой связки зуба и введения в рану зубного камня, полученного от пациента, фиксация зубного камня в ране затруднительна. Кроме того, шинирование зубов является методом лечения пародонтита и обеспечивает функциональную стабильность зубочелюстного сегмента, а в прототипе, используется как иммобилизационный стресс, главным образом негативно влияющий на организм животного в целом, и, опосредованно, на состояние тканей пародонта. Это снижает достоверность моделируемого заболевания.The disadvantages of the prototype are the duration of model reproduction: maximum morphological changes are recorded on days 21-35; severe trauma to periodontal tissues by rupturing the circular ligament of the tooth and introducing tartar obtained from the patient into the wound; fixation of tartar in the wound is difficult. In addition, splinting teeth is a method of treating periodontitis and ensures functional stability of the dentoalveolar segment, and in the prototype, it is used as immobilization stress, mainly negatively affecting the animal’s body as a whole, and, indirectly, the condition of periodontal tissues. This reduces the reliability of the disease being modeled.

Настоящее изобретение направлено на решение проблемы сокращения сроков создания модели, снижения травмирующего действия на ткани пародонта, исключения иммобилизационного стресса и приближения условий возникновения пародонтита к таковым у человека, в чем и состоит технический результат изобретения.The present invention is aimed at solving the problem of reducing the time required to create a model, reducing the traumatic effect on periodontal tissue, eliminating immobilization stress and bringing the conditions for the occurrence of periodontitis closer to those in humans, which is the technical result of the invention.

Патентуемый способ моделирования пародонтита на крысах включает комплексное воздействие на ткани пародонта с нарушением микроциркуляции тканей и микробным инфицированием.The patented method for modeling periodontitis in rats includes a complex effect on periodontal tissue with impaired tissue microcirculation and microbial infection.

Отличие состоит в следующем. Проводят восьмиобразное наложение металлической проволочной лигатуры на пришеечную область отдельно верхних и нижних резцов крысы.The difference is this. A metal wire ligature is applied in a figure-of-eight pattern to the cervical region of the rat's upper and lower incisors separately.

после наложения металлической лигатуры на пришеечную область каждого резца верхней и нижней челюсти между лигатурой и краем десны крысы помещают зубной налет от пациента с хроническим пародонтитом, затем под слизистую оболочку десны с вестибулярной стороны, в области каждого резца верхней и нижней челюсти проводят инъекции раствора никотина 0,001 мг/л в физиологическом растворе в объеме 0,05 мл, а спустя 10 минут - 50% раствора этилового спирта в объеме 0,05 мл, причем указанные инъекции проводят ежедневно в течение 7 дней.after applying a metal ligature to the cervical area of each incisor of the upper and lower jaw, between the ligature and the edge of the gum of the rat, plaque from a patient with chronic periodontitis is placed, then under the mucous membrane of the gums from the vestibular side, in the area of each incisor of the upper and lower jaw, injections of a 0.001 nicotine solution are performed mg/l in physiological solution in a volume of 0.05 ml, and after 10 minutes - a 50% solution of ethyl alcohol in a volume of 0.05 ml, and these injections are carried out daily for 7 days.

Таким образом, способ позволяет осуществить моделирование в короткие сроки (7 суток), не предполагает применения травмирующих элементов и заведомо стрессовых условий содержания животных.Thus, the method allows modeling to be carried out in a short time (7 days), does not involve the use of traumatic elements and obviously stressful conditions for keeping animals.

Способ реализуют следующим образом.The method is implemented as follows.

Лабораторным крысам, под наркозом, на пришеечную область верхних и нижних резцов восьмиобразно накладывается проволочная лигатура диаметром 0,3 мм. Края проволоки скручиваются и загибаются, не травмируя слизистую оболочку. Под проволоку с помощью гладилки помещается зубной налет, полученный от пациента с пародонтитом, собранный путем соскабливания с коронковых и пришеечных частей зубов. Под слизистую оболочку десны с вестибулярной стороны, в области исследуемых зубов, проводится инъекция раствора никотина в физиологическом растворе (концентрация никотина 0,001 мг/л) в объеме 0,05 мл, а спустя 10 минут - 50% раствора этилового спирта в объеме 0,05 мл. Инъекции проводятся ежедневно, в течение 7-ми дней. Все крысы размещаются в стандартных клетках группами по два животных, находятся на высокоуглеводной диете по Евдокимову без ограничения водного режима. Все процедуры выполняются под комбинированным внутримышечным наркозом с использованием, например, Золетила-50 (Virbac, Франция): 1 мг/кг и Ксиланита (Нита-Фарм, Россия) 0,05 мл/кг - 0,1 мл/кг. Средняя продолжительность пребывания животного под наркозом - 1 час.In laboratory rats, under anesthesia, a wire ligature with a diameter of 0.3 mm is applied to the cervical region of the upper and lower incisors in an eight-shape pattern. The edges of the wire are twisted and bent without damaging the mucous membrane. Plaque obtained from a patient with periodontitis, collected by scraping from the coronal and cervical parts of the teeth, is placed under the wire using a smoothing iron. Under the mucous membrane of the gums on the vestibular side, in the area of the teeth being examined, an injection of a solution of nicotine in physiological solution (nicotine concentration 0.001 mg/l) in a volume of 0.05 ml is carried out, and after 10 minutes - a 50% solution of ethyl alcohol in a volume of 0.05 ml. Injections are carried out daily for 7 days. All rats are housed in standard cages in groups of two animals and are on a high-carbohydrate diet according to Evdokimov without water restrictions. All procedures are performed under combined intramuscular anesthesia using, for example, Zoletil-50 (Virbac, France): 1 mg/kg and Xylanit (Nita-Pharm, Russia) 0.05 ml/kg - 0.1 ml/kg. The average duration of an animal's stay under anesthesia is 1 hour.

Пример. Лабораторным крысам, под наркозом, на пришеечную область верхних и нижних резцов восьмиобразно накладывали лигатуру из проволоки диаметром 0,3 мм. Края проволоки скручивали и загибали. Под проволоку с помощью гладилки помещали зубной налет, полученный от пациента с хроническим пародонтитом. Под слизистую оболочку десны с вестибулярной стороны, в области передних зубов, проводили инъекции раствора никотина в физиологическом растворе (концентрация никотина 0,001 мг/л) в объеме 0,05 мл, а спустя 10 минут - 50% раствора этилового спирта в объеме 0,05 мл. Инъекции проводили ежедневно, в течение 7-ми дней. Все крысы размещались в стандартных клетках группами по два животных, находились на высокоуглеводной диете по Евдокимову без ограничения водного режима. Все процедуры выполнялись под комбинированным внутримышечным наркозом с использованием Золетила-50 (Virbac, Франция): 1 мг/кг и Ксиланита (Нита-Фарм, Россия) 0,05 мл/кг - 0,1 мл/кг. Средняя продолжительность пребывания животного под наркозом - 1 час. По окончании эксперимента все животные подвергались эвтаназии путем передозировки наркотических средств. Проводили аутопсию с получением сагиттальных срезов толщиной 5 мкм, которые окрашивали гематоксилином и эозином для дальнейшего описательного гистологического анализа.Example. In laboratory rats, under anesthesia, a ligature made of wire with a diameter of 0.3 mm was applied to the cervical area of the upper and lower incisors in an eight-shape pattern. The edges of the wire were twisted and bent. Dental plaque obtained from a patient with chronic periodontitis was placed under the wire using a smoothing iron. Under the mucous membrane of the gums on the vestibular side, in the area of the front teeth, injections were made of a solution of nicotine in physiological solution (nicotine concentration 0.001 mg/l) in a volume of 0.05 ml, and after 10 minutes - a 50% solution of ethyl alcohol in a volume of 0.05 ml. Injections were performed daily for 7 days. All rats were housed in standard cages in groups of two animals and were on a high-carbohydrate diet according to Evdokimov without water restriction. All procedures were performed under combined intramuscular anesthesia using Zoletil-50 (Virbac, France): 1 mg/kg and Xylanit (Nita-Pharm, Russia) 0.05 ml/kg - 0.1 ml/kg. The average duration of an animal's stay under anesthesia is 1 hour. At the end of the experiment, all animals were euthanized by drug overdose. An autopsy was performed to obtain 5-μm-thick sagittal sections, which were stained with hematoxylin and eosin for further descriptive histological analysis.

На вторые сутки от начала эксперимента десна животных приобретала синюшно-розовый оттенок (Фиг. 1), при травмировании иглой в месте инъекции была цианотична, зубодесневая бороздка не зондировалась. На четвертые сутки консистенция десны становилась рыхлой, нижние резцы приобретали подвижность. К 7-м суткам симптомы воспаления нарастали, у животных зондировались пародонтальные карманы глубиной до 4 мм.On the second day from the start of the experiment, the gums of the animals acquired a bluish-pink tint (Fig. 1); when injured by a needle at the injection site, they were cyanotic, and the periodontal sulcus could not be probed. On the fourth day, the consistency of the gums became loose, and the lower incisors acquired mobility. By the 7th day, symptoms of inflammation increased; periodontal pockets up to 4 mm deep were probed in animals.

В образцах срезов, наблюдалась картина разлитого воспаления (Фиг. 2): фиксировались признаки экссудативного воспаления - лейкоцитарной инфильтрации, макрофагальной реакции в собственной пластинке слизистой и в эпителии, расслоение эпителия на уровне слоя «колючих» клеток (Фиг. 3). Сглажены гребни базальноклеточного слоя. Многослойный плоский ороговевающий сулькулярный эпителий неравномерно истончен, отслоен от эпителия прикрепления. В отдельных образцах наблюдали серозное, гнойное и геморрагическое (эритроцитарная и лейкоцитарная инфильтрация) воспаление в собственной пластинке слизистой (Фиг. 4). Разрастание грануляционной ткани с воспалительной инфильтрацией в ткани десны, фибриноидное набухание соединительной ткани десны, бесструктурные коллагеновые волокна определялись в полученных образцах. Изменение костных структур челюстей также говорило о выраженном пародонтите. В альвеолярных отростках необратимая остеокластическая резорбция костных структур: воспалительный инфильтрат в области вершины альвеолярного отростка, деструкция костной ткани со стороны периоста и эндооста, пазушное рассасывание со стороны эндооста - разрушение костных структур в результате аутолиза (Фиг. 5).In the section samples, a picture of diffuse inflammation was observed (Fig. 2): signs of exudative inflammation were recorded - leukocyte infiltration, macrophage reaction in the lamina propria and in the epithelium, stratification of the epithelium at the level of the layer of “spiny” cells (Fig. 3). The ridges of the basal cell layer are smoothed. The stratified squamous keratinizing sulcular epithelium is unevenly thinned and detached from the attachment epithelium. In some samples, serous, purulent and hemorrhagic (erythrocyte and leukocyte infiltration) inflammation in the lamina propria was observed (Fig. 4). The proliferation of granulation tissue with inflammatory infiltration in the gum tissue, fibrinoid swelling of the connective tissue of the gums, and structureless collagen fibers were determined in the obtained samples. Changes in the bone structures of the jaws also indicated severe periodontitis. In the alveolar processes, irreversible osteoclastic resorption of bone structures: inflammatory infiltrate in the area of the apex of the alveolar process, destruction of bone tissue from the periosteum and endosteum, axillary resorption from the endosteum - destruction of bone structures as a result of autolysis (Fig. 5).

Таким образом, проведенные исследования показали, что патентуемый способ позволяет осуществить моделирование в короткие сроки (за 7 суток), не предполагает применения травмирующих элементов и заведомо стрессовых условий содержания животных.Thus, the studies have shown that the patented method allows modeling to be carried out in a short time (in 7 days), does not involve the use of traumatic elements and obviously stressful conditions for keeping animals.

Claims (1)

Способ моделирования пародонтита на крысах, включающий комплексное воздействие на ткани пародонта с нарушением микроциркуляции тканей и микробным инфицированием, отличающийся тем, что проводят восьмиобразное наложение металлической проволочной лигатуры на пришеечную область отдельно верхних и нижних резцов крысы, после наложения металлической лигатуры на пришеечную область каждого резца верхней и нижней челюсти между лигатурой и краем десны крысы помещают зубной налет от пациента с хроническим пародонтитом, затем под слизистую оболочку десны с вестибулярной стороны, в области каждого резца верхней и нижней челюсти проводят инъекции раствора никотина 0,001 мг/л в физиологическом растворе в объеме 0,05 мл, а спустя 10 минут - 50% раствора этилового спирта в объеме 0,05 мл, причем указанные инъекции проводят ежедневно в течение 7 дней.A method for modeling periodontitis in rats, including a complex effect on periodontal tissue with impaired tissue microcirculation and microbial infection, characterized in that an eight-shaped metal wire ligature is applied to the cervical region of the rat's upper and lower incisors separately, after applying a metal ligature to the cervical region of each upper incisor and the lower jaw, between the ligature and the edge of the rat’s gum, plaque from a patient with chronic periodontitis is placed, then under the mucous membrane of the gums from the vestibular side, in the area of each incisor of the upper and lower jaw, injections of a solution of nicotine 0.001 mg/l in physiological solution in a volume of 0. 05 ml, and after 10 minutes - a 50% solution of ethyl alcohol in a volume of 0.05 ml, and these injections are carried out daily for 7 days.