RU2778997C1 - Питательная среда для дифференциации парагемолитических вибрионов - Google Patents
Питательная среда для дифференциации парагемолитических вибрионов Download PDFInfo
- Publication number
- RU2778997C1 RU2778997C1 RU2021139727A RU2021139727A RU2778997C1 RU 2778997 C1 RU2778997 C1 RU 2778997C1 RU 2021139727 A RU2021139727 A RU 2021139727A RU 2021139727 A RU2021139727 A RU 2021139727A RU 2778997 C1 RU2778997 C1 RU 2778997C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- medium
- vibrios
- meat
- glucose
- kanagawa
- Prior art date
Links
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 title claims abstract description 20
- 241000607598 Vibrio Species 0.000 title claims abstract description 18
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 title claims description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims abstract description 30
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L sodium carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims abstract description 24
- 210000003743 Erythrocytes Anatomy 0.000 claims abstract description 19
- 230000002255 enzymatic Effects 0.000 claims abstract description 15
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims abstract description 15
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 claims abstract description 14
- FBPFZTCFMRRESA-KAZBKCHUSA-N D-Mannitol Natural products OC[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KAZBKCHUSA-N 0.000 claims abstract description 14
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 claims abstract description 14
- 239000008272 agar Substances 0.000 claims abstract description 14
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 claims abstract description 14
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 claims abstract description 14
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 claims abstract description 14
- 230000002906 microbiologic Effects 0.000 claims abstract description 14
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N D-Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims abstract description 13
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims abstract description 13
- 244000052616 bacterial pathogens Species 0.000 claims abstract description 12
- 239000003324 growth hormone secretagogue Substances 0.000 claims abstract description 12
- 239000001187 sodium carbonate Substances 0.000 claims abstract description 12
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 claims abstract description 12
- ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L Dipotassium phosphate Chemical compound [K+].[K+].OP([O-])([O-])=O ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims abstract description 7
- 229910000396 dipotassium phosphate Inorganic materials 0.000 claims abstract description 7
- 235000019797 dipotassium phosphate Nutrition 0.000 claims abstract description 7
- ALJHHTHBYJROOG-UHFFFAOYSA-N 7-(dimethylamino)phenothiazin-3-one Chemical compound C1=CC(=O)C=C2SC3=CC(N(C)C)=CC=C3N=C21 ALJHHTHBYJROOG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 6
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N β-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 claims abstract description 3
- 230000000813 microbial Effects 0.000 claims abstract 2
- 230000029087 digestion Effects 0.000 claims description 9
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 claims description 7
- 235000010419 agar Nutrition 0.000 claims description 3
- 235000002639 sodium chloride Nutrition 0.000 claims description 2
- 241000606790 Haemophilus Species 0.000 claims 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 claims 1
- 230000001717 pathogenic Effects 0.000 abstract description 15
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 abstract description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 4
- 206010016952 Food poisoning Diseases 0.000 abstract description 3
- 206010040047 Sepsis Diseases 0.000 abstract description 3
- 206010048038 Wound infection Diseases 0.000 abstract description 3
- 230000001580 bacterial Effects 0.000 abstract description 3
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 abstract description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 2
- 101710010368 hmgs-1 Proteins 0.000 abstract 1
- 239000002609 media Substances 0.000 description 48
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 10
- JFTBTTPUYRGXDG-UHFFFAOYSA-N Methyl violet Chemical compound Cl.C1=CC(=NC)C=CC1=C(C=1C=CC(=CC=1)N(C)C)C1=CC=C(N(C)C)C=C1 JFTBTTPUYRGXDG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 7
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 7
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 6
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 6
- 230000002934 lysing Effects 0.000 description 6
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 6
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 6
- 238000009331 sowing Methods 0.000 description 6
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 6
- 241000607265 Vibrio vulnificus Species 0.000 description 5
- 230000035784 germination Effects 0.000 description 5
- 230000002949 hemolytic Effects 0.000 description 5
- 241000607259 Grimontia hollisae Species 0.000 description 4
- 241001672678 Photobacterium damselae subsp. damselae Species 0.000 description 4
- 241000607618 Vibrio harveyi Species 0.000 description 4
- 241000607272 Vibrio parahaemolyticus Species 0.000 description 4
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 3
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 238000005755 formation reaction Methods 0.000 description 3
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 3
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 3
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 3
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 description 2
- 229940041514 Candida albicans extract Drugs 0.000 description 2
- 241000607594 Vibrio alginolyticus Species 0.000 description 2
- 241000607253 Vibrio mimicus Species 0.000 description 2
- 230000000721 bacterilogical Effects 0.000 description 2
- 239000000090 biomarker Substances 0.000 description 2
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 239000001963 growth media Substances 0.000 description 2
- 230000001965 increased Effects 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- BWHMMNNQKKPAPP-UHFFFAOYSA-L potassium carbonate Chemical compound [K+].[K+].[O-]C([O-])=O BWHMMNNQKKPAPP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 2
- 101700016530 ACTPH Proteins 0.000 description 1
- 241000193738 Bacillus anthracis Species 0.000 description 1
- 210000000941 Bile Anatomy 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- NUHCTOLBWMJMLX-UHFFFAOYSA-N Bromothymol blue Chemical compound BrC1=C(O)C(C(C)C)=CC(C2(C3=CC=CC=C3S(=O)(=O)O2)C=2C(=C(Br)C(O)=C(C(C)C)C=2)C)=C1C NUHCTOLBWMJMLX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010006500 Brucellosis Diseases 0.000 description 1
- 206010008631 Cholera Diseases 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N D-sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 206010018910 Haemolysis Diseases 0.000 description 1
- 208000004023 Legionellosis Diseases 0.000 description 1
- 206010035148 Plague Diseases 0.000 description 1
- BHZRJJOHZFYXTO-UHFFFAOYSA-L Potassium sulfite Chemical compound [K+].[K+].[O-]S([O-])=O BHZRJJOHZFYXTO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-GDQSFJPYSA-N Sucrose Natural products O([C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CO)O1)[C@@]1(CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-GDQSFJPYSA-N 0.000 description 1
- 206010045146 Tularaemia Diseases 0.000 description 1
- 241000607296 Vibrio cincinnatiensis Species 0.000 description 1
- 241000607291 Vibrio fluvialis Species 0.000 description 1
- 241001148070 Vibrio furnissii Species 0.000 description 1
- 241000607479 Yersinia pestis Species 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 230000000996 additive Effects 0.000 description 1
- 150000008051 alkyl sulfates Chemical class 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 238000007374 clinical diagnostic method Methods 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 239000006160 differential media Substances 0.000 description 1
- 231100000676 disease causative agent Toxicity 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 229940079593 drugs Drugs 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing Effects 0.000 description 1
- 230000002458 infectious Effects 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 239000002547 new drug Substances 0.000 description 1
- 235000008935 nutritious Nutrition 0.000 description 1
- 244000052769 pathogens Species 0.000 description 1
- 239000001184 potassium carbonate Substances 0.000 description 1
- 229910000027 potassium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019252 potassium sulphite Nutrition 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory Effects 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising Effects 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 239000002352 surface water Substances 0.000 description 1
- 230000002588 toxic Effects 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
Abstract
Предполагаемое изобретение относится к области биотехнологии. Изобретение представляет собой питательную среду, которая может быть использована в лабораторной практике для определения патогенных свойств вибрионов в тесте Канагава при диагностике пищевых токсикоинфекций, раневых инфекций и септицимий бактериальной природы. Сущность предполагаемого изобретения заключается в том, что среда дополнительно включает стимулятор роста гемофильных микробов, глюкозу, натрия карбонат, метиленовый фиолетовый, а питательная основа представляет собой ферментативный перевар мяса при следующих количественных соотношениях компонентов, г/л: ферментативный перевар мяса (ГМФ - бульон) - 20,0±2,0, стимулятор роста гемофильных микробов (СРГМ) - 5,0±0,5, агар микробиологический - 15,0±2,0, глюкоза - 5,0±1,0, маннит - 5,0±1,0, натрия хлорид - 50,0±2,0
натрия карбонат - 1,5±0,2, калия гидрофосфат - 5,0±0,5, метиленовый фиолетовый - 0,002±0,0005, эритроциты отмытые - 50±1,0, при рН 8,0. 6 табл., 6 пр.
Description
Предполагаемое изобретение относится к области медицинской микробиологии, а именно является питательной средой, которая может быть использована в лабораторной практике для определения патогенных свойств вибрионов в тесте Канагава при диагностике пищевых токсикоинфекций, раневых инфекций и септицимий бактериальной природы.
В тесте Канагава используют среду Вагатцума, которая предназначалась только для определения патогенности V. parahaemolyticus. В настоящее время существует более 11 патогенных видов парагемолитических вибрионов (ПГВ), из которых только часть может быть тестирована на среде Вагатцума. В связи с этим возникла необходимость в создании унифицированной питательной среды для всех видов патогенных ПГВ при использовании в тестировании на наличие гемолитического токсина в тесте Канагава.
Известна питательная среда для выделения и идентификации ПГВ (1) следующего состава: пептон, агар микробиологический, сахароза, бромтимоловый синий с добавлением калия карбоната, калия сульфита, желчи КРС, экстракта дрожжевого сухого и смеси алкилсульфатов, а в качестве идентифицирующей добавки используют натрий хлорид.
Недостатком известной среды является невозможность ее использования для дифференциации среды в тесте Канагава
Наиболее близкой к предлагаемой питательной среде для определения патогенности парагемолитических вибрионов в тесте Канагава является среда Вагатцума (2) состоящая из:
| Пептон ферментативный | 10,0 г |
| Натрия хлорид | 70,0 г |
| Маннит | 10,0 г |
| Калия гидрофосфат | 5,0 г |
| Дрожжевой экстракт | 3,0 г |
| Кристаллический фиолетовы | 0,001 г |
| Агар микробиологический | 15,0 г |
| Эритроциты отмытые | 20,0 |
рН 8,0.
Однако данная среда является импортным препаратом. При этом высокое содержание натрия хлорид - 7% ограничивает прорастание в данной среде ряда патогенных вибрионов -V. mimicus,V. damsela,V. hollisae, V. vulnificus, V. harveyi. Наличие в среде маннита в качестве углеводного компонента ухудшает условия культивирования V. damsela, V. hollisae, V. vulnificus, V. harveyi.
Таким образом, среда Вагатцума не может быть в полной мере использована для идентификации патогенных свойств всей группы ПГВ. В связи с необходимостью стандартизации и унификации бактериологических исследований материала на наличие инфекционных патогенов, повышения эффективности среды и использования отечественных препаратов появилась потребность в новой питательной среде.
Недостатком среды является ее высокая себестоимость, невозможность использования для всех видов патогенных ПГВ - V. parahaemolyticus, V. alginolyticus и в первую очередь - V. damsela, V. vulnificus, V. harveyi, V. hollisae.
Технической задачей предполагаемого изобретения является создание новой дифференциальной питательной среды СГВ для определения патогенности ПГВ путем усиления гемолитической активности в тесте Канагава.
Поставленная задача достигается тем, что в известной питательной среде для дифференциации парагемолитических вибрионов, включающей питательную основу из пептона, агара микробиологического, натрия хлорид, маннит, калий гидрофосфат, эритроциты, отличие заключается в том, что среда дополнительно включает стимулятор роста гемофильных микробов, глюкозу, натрия карбонат, метиленовый фиолетовый, а питательная основа представляет собой ферментативный перевар мяса при следующих количественных соотношениях компонентов, г/л:
Ферментативный перевар мяса (ГМФ - бульон) - 20,0±2,0
Стимулятор роста гемофильных микробов (СРГМ) - 5,0±0,5
Агар микробиологический - 15,0±2,0
| Глюкоза | 5,0±1,0 |
| Маннит | 5,0±1,0 |
| Натрия хлорид | 50,0±2,0 |
| Натрия карбонат | 1,5±0,2 |
| Калия гидрофосфат | 5,0±0,5 |
| Метиленовый фиолетовый | 0,002±0,0005 |
| Эритроциты отмытые | 50±1,0 |
при рН 8,0.
Способ приготовления питательной среды осуществляют по следующей технологии.
Питательная среда компануется из реагентов отечественного производства: ферментативный перевар мяса (ГМФ - бульон) - производитель ООО НИЦФ г. Санкт-Петербург;
стимулятор роста гемофильных микробов (СРГМ) - СРГМ ФБУН ГНЦ ПМБ П. Оболенск, Московская обл. и т.д.
Вышеуказанные реагенты заливают 950 мл дистиллированной воды и доводят до кипения, расплавляют при тщательном перемешивании, стерилизуют, охлаждают до 45-50°С, вносят эритроциты. Реакция среды 8,0. Готовую среду разливают в чашки Петри.
Методические указания МУК 4.2.2046.06 предусматривают необходимость анализа всех видов патогенных парагемолитических вибрионов -V. parahaemolyticus, V. mimicus, V. hollisae, V. damsela, V. vulnificus, V. harveyi, V.metscnicovii, V. cincinnatiensis, V. fluvialis, V. furnissii, V. alginolyticus (3).
Решение задачи достигают тем, что к известной прописи среды - прототипа содержащий агар, маннит, калия гидрофосфат, добавляют более питательный ферментативный перевар мяса, для активизации гемолитической активности - стимулятор роста гемофильных микробов, глюкозу и менее токсичный ингибитор метиловый фиолетовый, а так же для оптимизации роста всех видов ПГВ - снижают навеску натрия хлорида до 50 г/л. После варки, стерилизации среды, охлаждения до 45-50% вносят 5% отмытых эритроцитов крови человека.
Чувствительность искомой среды в отношении 4 тест-штаммов ПГВ составляла 10-7, показатель прорастания повышался до 30-70%. При этом показатель прорастания этой среды для всех видов патогенных ПГВ составляли от 35 до 80%. Эффективность получения результатов теста Канагава в отношении всех видов патогенных ПГВ бала высокой и стабильной.
Таким образом, состав среды СГВ:
1. Ферментативный перевар мяса (ГМФ - бульон) - 20,0±2,0,
2. Стимулятор роста гемофильных микробов (СРГМ) - 5,0±0,5,
3. Агар микробиологический - 15,0±2,0,
4. Глюкоза - 5,0±1,0,
5. Маннит - 5,0±1,0,
6. Натрия хлорид - 50,0±2,0,
7. Натрия карбонат - 1,5±0,2,
8. Калия гидрофосфат - 5,0±0,5,
9. Метиловый фиолетовый - 0,002±0,0005,
10. Эритроциты отмытые - 50±1,
при рН 8,0.
Контроль среды проводят в соответствии с Методическими указаниями (3, 4) с использованием тест-штаммов: V. parahaemolyticus, а так же V. mimicus,V. damsel,V. vulnificus по основным биологическим показателям для этой группы питательных сред - чувствительность, показатель прорастания, дифференцирующие свойства - размер зоны гемолиза в тесте Канагава.
Питательная среда состоит из сухих компонентов и после регистрации будет выпускаться в виде сухого препарата-изделия медицинского назначения с последующим освоением производства.
Ниже представлены результаты сравнительных испытаний различных комбинаций состава предлагаемой среды (СГВ) как в рамках нормированных показателей, так и за их пределами (примеры 1-5, таблицы 1-5). Также даны результаты проверки дифференцирующих свойств среды СГВ и сред сравнения в отношении представителей всех основных видов патогенных ПГВ.
Пример 1
Для приготовления среды используют вышеуказанные препараты в следующих максимальных концентрациях (г):
1. Ферментативный перевар мяса (ГМФ - бульон) - 22,0,
2. Стимулятор роста гемофильных микробов (СРГМ) - 5,5,
3. Агар микробиологический - 17,0,
4. Глюкоза - 6,0,
5. Маннит - 6,0,
6. Натрия хлорид - 52,0,
7. Натрия карбонат - 1,7,
8. Калия гидрофосфат - 5,5,
9. Метиловый фиолетовый - 0,0025,
10. Эритроциты отмытые – 51,
пПри рН 8,2
Данные реагенты заливают 950 мл дистиллированной воды и доводят до кипения, расплавляют при тщательном перемешивании, стерилизуют, охлаждают до (45-50)°С вносят эритроциты. Реакция среды 8,2. Готовую среду разливают в чашки Петри.
Таким образом, предлагаемая среда обеспечивает более высокую в сравнении с прототипом ростовую активность тест-штаммов при требуемом уровне дифференцирующих свойств вибрионов (обязательное наличие роста на чашках при посеве всех тест-штаммов ПГВ - из 10 м.к. и не менее 30% при посеве 100 м.к., образование зон лизиса вокруг колоний Канагава - положительных ПГВ и отсутствие зон лизиса вокруг Канагава - отрицательного штамма).
Пример 2
Для приготовления среды используют вышеуказанные препараты в средних концентрациях (г):
1. Ферментативный перевар мяса (ГМФ - бульон) - 20,0,
2. Стимулятор роста гемофильных микробов (СРГМ) - 5,0,
3. Агар микробиологический - 15,0,
4. Глюкоза - 5,0,
5. Маннит - 5,0,
6. Натрия хлорид - 50,0,
7. Натрия карбонат - 1,5,
8. Калия гидрофосфат - 5,0,
9. Метиловый фиолетовый - 0,002,
10. Эритроциты отмытые – 50,
при рН 8,2.
Данные реагенты заливают 950 мл дистиллированной воды и доводят до кипения, расплавляют при тщательном перемешивании, стерилизуют, охлаждают до 45-50°С вносят эритроциты. Реакция среды 8,2. Готовую среду разливают в чашки Петри.
Вывод: предлагаемая среда обеспечивает более высокую в сравнении с прототипом ростовую активность тест-штаммов при требуемом уровне дифференцирующих свойств вибрионов (обязательное наличие роста на чашках при посеве всех тест-штаммов ПГВ - из 10 м.к. и не менее 30% при посеве 100 м.к., образование зон лизиса вокруг колоний Канагава - положительных ПГВ и отсутствие зон лизиса вокруг Канагава - отрицательного штамма). Пример 3
Для приготовления среды используют вышеуказанные препараты в минимальных концентрациях (г):
1. Ферментативный перевар мяса (ГМФ - бульон) - 18,0,
2. Стимулятор роста гемофильных микробов (СРГМ) - 4,5,
3. Агар микробиологический - 13,0,
4. Глюкоза - 4,0,
5. Маннит - 4,0,
6. Натрия хлорид - 48,0,
7. Натрия карбонат - 1,3,
8. Калия гидрофосфат - 4,5,
9. Метиловый фиолетовый - 0,0015,
10. Эритроциты отмытые - 49,
при рН 8,0.
Данные реагенты заливают 950 мл дистиллированной воды и доводят до кипения, расплавляют при тщательном перемешивании, стерилизуют, охлаждают до 45-50°С вносят эритроциты. Реакция среды 8,0. Готовую среду разливают в чашки Петри.
Следовательно, предлагаемая среда обеспечивает более высокую в сравнении с прототипом ростовую активность тест-штаммов при требуемом уровне дифференцирующих свойств вибрионов (обязательное наличие роста на чашках при посеве всех тест-штаммов ПГВ - из 10 м.к. и не менее 30% при посеве 100 м.к., образование зон лизиса вокруг колоний Канагава - положительных ПГВ и отсутствие зон лизиса вокруг Канагава - отрицательного штамма).
Пример 4
Для приготовления среды используют вышеуказанные препараты ниже минимальной концентрации (г):
1. Ферментативный перевар мяса (ГМФ - бульон) - 15,0,
2. Стимулятор роста гемофильных микробов (СРГМ) - 4,0,
3. Агар микробиологический - 12,0,
4. Глюкоза - 3,0,
5. Маннит - 3,0,
6. Натрия хлорид - 45,0,
7. Натрия карбонат - 1,2,
8. Калия гидрофосфат - 4,0,
9. Метиловый фиолетовый - 0,001,
10. Эритроциты отмытые – 45,
при рН 8,0.
Данные реагенты заливают 950 мл дистиллированной воды и доводят до кипения, расплавляют при тщательном перемешивании, стерилизуют, охлаждают до 45-50°С вносят эритроциты. Реакция среды 8,0. Готовую среду разливают в чашки Петри.
Пример 5
Для приготовления среды используют вышеуказанные препараты выше максимальной концентрации (г):
1. Ферментативный перевар мяса (ГМФ - бульон) - 25,0,
2. Стимулятор роста гемофильных микробов (СРГМ) - 6,0,
3. Агар микробиологический - 18,0,
4. Глюкоза - 7,0,
5. Маннит - 7,0,
6. Натрия хлорид - 60,0,
7. Натрия карбонат - 2,0,
8. Калия гидрофосфат - 6,0,
9. Метиловый фиолетовый - 0,003,
10. Эритроциты отмытые – 52,
при рН 8,0
Данные реагенты заливают 950 мл дистиллированной воды и доводят до кипения, расплавляют при тщательном перемешивании, стерилизуют, охлаждают до 45-50°С вносят эритроциты. Реакция среды 8,0. Готовую среду разливают в чашки Петри.
Таким образом, представленные данные указывают на высокую эффективность среды СГВ в рамках нормированного показателя состава. Ее чувствительность и показатель прорастания полностью соответствует существующим нормативным требованиям и в отличие от среды сравнения, обеспечивает высокие ростовые свойства и гемолитическую активность всех испытанных тест-штаммов.
Пример 6
Оптимальный вариант искомой среды СГВ прошел испытания в отношении тест-штаммов основных видов патогенных ПГВ. Приготовление и контроль среды проводили с методическими подходами, использованными в вышеописанных примерах. Культуры контрольных штаммов вибрионов готовили по методике идентичной при подготовке тест-штаммов.
Результаты проведенного испытания представлены таблице 6.
Исходя из представленных материалов и по результатам сравнительных испытаний предложенная композиция СГВ соответствует среде прототип Вагацума по ростовым и дифференцирующим показателям в отношении V. parahaemolyticus, и значительно превосходит в отношении других видов ПГВ. Полученные данные позволяют характеризовать новый препарат как дифференциальную среду, соответствующую современным требованиям к средам данного назначения. Особым преимуществом данного препарата можно считать ее эффективность при определении ее гемолитической активности в отношении всех групп ПГВ, что позволяет использовать ее при диагностике различных заболеваний, вызываемых ПГВ. Дополнительным преимуществом можно считать возможность ее изготовления из отечественных компонентов, и за счет этого низкую себестоимость (300-350 руб/л).
Государственная регистрация среды включена в сетевой график внедрения результатов НИР ФКУЗ Ростовского-на-Дону противочумного института Роспотребнадзора.
Источники информации
1. Патент на изобретения №2711914 от 23.01.2020. «Питательная среда для выделения и идентификации парагемолитических вибрионов».
2. Патент на изобретения №2711914 от 23.01.2020. «Питательная среда для выделения и идентификации парагемолитических вибрионов».
3. Методы контроля бактериологических питательных сред МУК 4.2.2316-08, М., - 2008
4. Контроль диагностических питательных сред по биологическим показателям для возбудителя чумы, холеры, сибирской язвы, туляремии, бруцеллеза, легионеллеза МУ 3.3.2.2124-06, М., - 2007.
5. Методы выявления и определения парагемолитических вибрионов в рыбе, не рыбных объектах промысла, продуктах вырабатываемых из них, в воде поверхностных водоемов и других объектах. МУК 4.2.2046-06, М., - 2006.
6. Лабораторная диагностика заболеваний, вызываемых парагемолитическими и другими патогенными для человека вибрионами. МУК 4.2.1793-03, М., - 2003.
7. Приказ №535 от 22 апреля 1985 г «Об унификации микробиологических методов исследований применяемых в клиниках - диагностических лабораториях лечебно-профилактических учреждений».
Claims (4)
- Питательная среда для дифференциации парагемолитических вибрионов, включающая питательную основу, агар микробиологический, натрия хлорид, маннит, калия гидрофосфат эритроциты, отличающаяся тем, что среда дополнительно включает стимулятор роста гемофильных микробов, глюкозу, натрия карбонат, метиленовый фиолетовый, а питательная основа представляет собой ферментативный перевар мяса при следующих количественных соотношениях компонентов, г/л:
-
Ферментативный перевар мяса (ГМФ - бульон) - 20,0±2,0 Стимулятор роста гемофильных микробов (СРГМ) - 5,0±0,5 Агар микробиологический 15,0±2,0 Глюкоза 5,0±1,0 Маннит 5,0±1,0 Натрия хлорид 50,0±2,0 Натрия карбонат 1,5±0,2 Калия гидрофосфат 5,0±0,5 Метиленовый фиолетовый 0,002±0,0005 Эритроциты отмытые 50±1,0 - при рН8,0
- с последующим растворением в 950 мл дистиллированной воды.
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2778997C1 true RU2778997C1 (ru) | 2022-08-29 |
Family
ID=
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2711914C1 (ru) * | 2019-02-14 | 2020-01-23 | Федеральное казенное учреждение здравоохранения "Ростовский-на-Дону ордена Трудового Красного Знамени научно-исследовательский противочумный институт" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека | Питательная среда для выделения и идентификации парагемолитических вибрионов (варианты) и способ её получения (варианты) |
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2711914C1 (ru) * | 2019-02-14 | 2020-01-23 | Федеральное казенное учреждение здравоохранения "Ростовский-на-Дону ордена Трудового Красного Знамени научно-исследовательский противочумный институт" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека | Питательная среда для выделения и идентификации парагемолитических вибрионов (варианты) и способ её получения (варианты) |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| РЫКОВСКАЯ О.А. и др., Разработка комплексного метода оценки вирулентности парагемолитических вибрионов, Клиническая лабораторная диагностика, 2013, N 2, с. 38-41. KAMINSKII D.I., Testing of the liquid enrichment nutrient medium HDS-N for the purpose of Vibrio cholera cultivation and isolation, Biotechnology in Russia 2003, N 4, pp. 67−71. * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN103282513B (zh) | 用于检测靶微生物的制品和方法 | |
| JP2831474B2 (ja) | サルモネラ菌の同定法および培地 | |
| US5702944A (en) | Microbial transport media | |
| CN104105795B (zh) | 检测沙门氏菌属微生物的方法 | |
| EP0254771A2 (en) | Detection of microbes in a sample | |
| JPH05505312A (ja) | サルモネラ属の細菌を検出するための細菌学的分析方法及び培地 | |
| WO2006124600A2 (en) | Chromogenic plating media for the identification of enterobacter sakazakii | |
| Yagupsky et al. | Comparison of BACTEC 9240 Peds Plus medium and isolator 1.5 microbial tube for detection of Brucella melitensis from blood cultures | |
| US7087401B2 (en) | Culture medium and method for detecting thermonuclease-positive staphylococci | |
| CN110129406A (zh) | 一种铜绿假单胞菌显色培养基及利用其快速检测的方法 | |
| CN112961805B (zh) | 一种喹诺酮类药物耐药基因gyrA和parE同时发生突变的鼠伤寒沙门菌及其应用 | |
| US10550437B2 (en) | Clostridium difficile culture medium | |
| RU2778997C1 (ru) | Питательная среда для дифференциации парагемолитических вибрионов | |
| CN102146429A (zh) | 溶藻弧菌选择性鉴别培养基 | |
| Kingston | Selective media in air sampling: a review | |
| CN107287275B (zh) | 培养基、包含其的试剂盒、及其应用 | |
| US5759799A (en) | Marker for revealing contaminants and application method for performing an antibiogram carried out directly on a sample | |
| Magalhães et al. | Traditional methods for isolation of Listeria monocytogenes | |
| CN100345977C (zh) | 一种致奶牛***炎葡萄球菌培养液的配制方法及其用途 | |
| TWI627277B (zh) | Medium, including the set of the group, and its application | |
| Tortorello et al. | Rapid identification of Escherichia coli O157: H7 in bovine feces using the antibody-direct epifluorescent filter technique (Ab-DEFT) | |
| Yagupsky et al. | Clinical evaluation of a novel chromogenic agar dipslide for diagnosis of urinary tract infections | |
| McDivitt et al. | Comparison of Three Media for the Isolation of Exterotoxigenic Micrococci | |
| US5380652A (en) | Device and procedure for identifying pathogenic microorganisms | |
| RU2328526C1 (ru) | Способ выявления микобактерий туберкулеза крупного рогатого скота |