RU2594061C1 - КОМПОЗИЦИЯ, СОДЕРЖАЩАЯ ОЧИЩЕННЫЙ ЭКСТРАКТ, ВЫДЕЛЕННЫЙ ИЗ Pseudolysimachion rotundum var. subintegrum, СОДЕРЖАЩИЙ БОЛЬШОЕ КОЛИЧЕСТВО АКТИВНОГО КОМПОНЕНТА, ИЛИ СОЕДИНЕНИЯ, ВЫДЕЛЕННЫЕ ИЗ НЕГО, В КАЧЕСТВЕ АКТИВНОГО КОМПОНЕНТА, ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ ИЛИ ЛЕЧЕНИЯ ХРОНИЧЕСКОЙ ОБСТРУКТИВНОЙ БОЛЕЗНИ ЛЕГКИХ (ХОБЛ) И ЕЕ ПРИМЕНЕНИЕ - Google Patents
КОМПОЗИЦИЯ, СОДЕРЖАЩАЯ ОЧИЩЕННЫЙ ЭКСТРАКТ, ВЫДЕЛЕННЫЙ ИЗ Pseudolysimachion rotundum var. subintegrum, СОДЕРЖАЩИЙ БОЛЬШОЕ КОЛИЧЕСТВО АКТИВНОГО КОМПОНЕНТА, ИЛИ СОЕДИНЕНИЯ, ВЫДЕЛЕННЫЕ ИЗ НЕГО, В КАЧЕСТВЕ АКТИВНОГО КОМПОНЕНТА, ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ ИЛИ ЛЕЧЕНИЯ ХРОНИЧЕСКОЙ ОБСТРУКТИВНОЙ БОЛЕЗНИ ЛЕГКИХ (ХОБЛ) И ЕЕ ПРИМЕНЕНИЕ Download PDFInfo
- Publication number
- RU2594061C1 RU2594061C1 RU2015138441/15A RU2015138441A RU2594061C1 RU 2594061 C1 RU2594061 C1 RU 2594061C1 RU 2015138441/15 A RU2015138441/15 A RU 2015138441/15A RU 2015138441 A RU2015138441 A RU 2015138441A RU 2594061 C1 RU2594061 C1 RU 2594061C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- extract
- catalpole
- copd
- verprozide
- catalposide
- Prior art date
Links
- 239000000284 extract Substances 0.000 title claims abstract description 166
- 208000006545 Chronic Obstructive Pulmonary Disease Diseases 0.000 title claims abstract description 126
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 title claims abstract description 73
- 235000004775 Veronica rotunda var subintegra Nutrition 0.000 title claims abstract description 9
- 244000288237 Veronica rotunda var. subintegra Species 0.000 title claims abstract description 9
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims description 55
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 title description 3
- UXSACQOOWZMGSE-UHFFFAOYSA-N catalposide Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C2C3(CO)OC3C(OC(=O)C=3C=CC(O)=CC=3)C2C=CO1 UXSACQOOWZMGSE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 83
- LHDWRKICQLTVDL-UHFFFAOYSA-N methyl iridoid glycoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C2C3(CO)OC3C(O)C2C=CO1 LHDWRKICQLTVDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 80
- UXSACQOOWZMGSE-RWORTQBESA-N [(1as,1bs,2s,5ar,6s,6as)-1a-(hydroxymethyl)-2-[(2s,3r,4s,5s,6r)-3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxy-2,5a,6,6a-tetrahydro-1bh-oxireno[5,6]cyclopenta[1,3-c]pyran-6-yl] 4-hydroxybenzoate Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@H]1[C@@H]2[C@@]3(CO)O[C@H]3[C@@H](OC(=O)C=3C=CC(O)=CC=3)[C@@H]2C=CO1 UXSACQOOWZMGSE-RWORTQBESA-N 0.000 claims abstract description 76
- AKNILCMFRRDTEY-UHFFFAOYSA-N picroside II Natural products C1=C(O)C(OC)=CC(C(=O)OC2C3C(C(OC=C3)OC3C(C(O)C(O)C(CO)O3)O)C3(CO)OC32)=C1 AKNILCMFRRDTEY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 76
- AKNILCMFRRDTEY-NUGKWEEESA-N [(1as,1bs,2s,5ar,6s,6as)-1a-(hydroxymethyl)-2-[(2s,3r,4s,5s,6r)-3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxy-2,5a,6,6a-tetrahydro-1bh-oxireno[5,6]cyclopenta[1,3-c]pyran-6-yl] 4-hydroxy-3-methoxybenzoate Chemical compound C1=C(O)C(OC)=CC(C(=O)O[C@H]2[C@H]3[C@H]([C@@H](OC=C3)O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O3)O)[C@@]3(CO)O[C@H]32)=C1 AKNILCMFRRDTEY-NUGKWEEESA-N 0.000 claims abstract description 75
- DBUOUVZMYWYRRI-YWEKDMGLSA-N verproside Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@H]1[C@@H]2[C@@]3(CO)O[C@H]3[C@@H](OC(=O)C=3C=C(O)C(O)=CC=3)[C@@H]2C=CO1 DBUOUVZMYWYRRI-YWEKDMGLSA-N 0.000 claims abstract description 27
- BVBJSLWZAPVJKX-UHFFFAOYSA-N verproside Natural products OCC1OC(OC2OC=CC3C(O)C4OC4(COC(=O)c5ccc(O)c(O)c5)C23)C(O)C(O)C1O BVBJSLWZAPVJKX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 27
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims abstract description 26
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 claims abstract description 17
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims abstract description 15
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims abstract description 15
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims abstract description 11
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims abstract description 7
- 235000013376 functional food Nutrition 0.000 claims abstract description 6
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 84
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 69
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 62
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 51
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 42
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims description 40
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 36
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 35
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 claims description 21
- 238000009826 distribution Methods 0.000 claims description 19
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 claims description 16
- 238000010992 reflux Methods 0.000 claims description 14
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 12
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims description 11
- 238000005227 gel permeation chromatography Methods 0.000 claims description 9
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 claims description 7
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims description 5
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims description 2
- 101100410782 Arabidopsis thaliana PXG1 gene Proteins 0.000 claims 1
- 101150033568 ats1 gene Proteins 0.000 claims 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 54
- DAUAQNGYDSHRET-UHFFFAOYSA-N 3,4-dimethoxybenzoic acid Chemical compound COC1=CC=C(C(O)=O)C=C1OC DAUAQNGYDSHRET-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 30
- GPVDHNVGGIAOQT-UHFFFAOYSA-N Veratric acid Natural products COC1=CC=C(C(O)=O)C(OC)=C1 GPVDHNVGGIAOQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 30
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 19
- DSVKJARKMOAAKJ-UHFFFAOYSA-N isovanillyl catalpol Natural products C1=C(O)C(OC)=CC=C1C(=O)OC1C(C=COC2OC3C(C(O)C(O)C(CO)O3)O)C2C2(CO)OC21 DSVKJARKMOAAKJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 14
- JPLOCWOFCUFHBG-UHFFFAOYSA-N 6-O-Veratroyl-catalpol Natural products C1=C(OC)C(OC)=CC=C1C(=O)OC1C(C=COC2OC3C(C(O)C(O)C(CO)O3)O)C2C2(CO)OC21 JPLOCWOFCUFHBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 12
- JPLOCWOFCUFHBG-PIAIVMLOSA-N [(1as,1bs,2s,5ar,6s,6as)-1a-(hydroxymethyl)-2-[(2s,3r,4s,5s,6r)-3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxy-2,5a,6,6a-tetrahydro-1bh-oxireno[5,6]cyclopenta[1,3-c]pyran-6-yl] 3,4-dimethoxybenzoate Chemical compound C1=C(OC)C(OC)=CC=C1C(=O)O[C@H]1[C@H](C=CO[C@H]2O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O3)O)[C@H]2[C@@]2(CO)O[C@H]21 JPLOCWOFCUFHBG-PIAIVMLOSA-N 0.000 abstract description 12
- ZSVGHBSAINKGKE-UHFFFAOYSA-N pakiside A Natural products COc1ccc(cc1OC)C(=O)OCC23OC2C(O)C4C=COC(OC5OC(CO)C(O)C(O)C5O)C34 ZSVGHBSAINKGKE-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 12
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 abstract description 7
- 101100075174 Arabidopsis thaliana LPAT1 gene Proteins 0.000 abstract 2
- 101100410783 Arabidopsis thaliana PXG2 gene Proteins 0.000 abstract 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 62
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 52
- 240000003161 Veronica rotunda Species 0.000 description 51
- 235000014336 Veronica rotunda Nutrition 0.000 description 51
- 239000000047 product Substances 0.000 description 45
- 235000019504 cigarettes Nutrition 0.000 description 41
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 34
- 229960002586 roflumilast Drugs 0.000 description 32
- MNDBXUUTURYVHR-UHFFFAOYSA-N roflumilast Chemical compound FC(F)OC1=CC=C(C(=O)NC=2C(=CN=CC=2Cl)Cl)C=C1OCC1CC1 MNDBXUUTURYVHR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 31
- -1 verprozide Chemical compound 0.000 description 31
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 30
- MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-[[2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N 0.000 description 29
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 29
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 29
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 29
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 26
- LHDWRKICQLTVDL-PZYDOOQISA-N catalpol Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@H]1[C@@H]2[C@@]3(CO)O[C@H]3[C@@H](O)[C@@H]2C=CO1 LHDWRKICQLTVDL-PZYDOOQISA-N 0.000 description 26
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 24
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 22
- 230000000391 smoking effect Effects 0.000 description 20
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 19
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 19
- 230000005526 G1 to G0 transition Effects 0.000 description 18
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 18
- 208000006673 asthma Diseases 0.000 description 17
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 17
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 17
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 17
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 16
- 235000001497 healthy food Nutrition 0.000 description 16
- 102000016950 Chemokine CXCL1 Human genes 0.000 description 15
- 108010015302 Matrix metalloproteinase-9 Proteins 0.000 description 14
- 102100030412 Matrix metalloproteinase-9 Human genes 0.000 description 14
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 14
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 14
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 14
- 239000000779 smoke Substances 0.000 description 14
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 13
- 101710151803 Mitochondrial intermediate peptidase 2 Proteins 0.000 description 13
- 108010034536 Mucin 5AC Proteins 0.000 description 13
- 102000009616 Mucin 5AC Human genes 0.000 description 13
- 210000004241 Th2 cell Anatomy 0.000 description 13
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 13
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 13
- 108010014419 Chemokine CXCL1 Proteins 0.000 description 12
- 102000019034 Chemokines Human genes 0.000 description 12
- 108010012236 Chemokines Proteins 0.000 description 12
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 description 12
- 102000004388 Interleukin-4 Human genes 0.000 description 12
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 12
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 12
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 11
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 11
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 11
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 11
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 10
- 102000004889 Interleukin-6 Human genes 0.000 description 10
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 10
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 10
- 239000000287 crude extract Substances 0.000 description 10
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 10
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 10
- 229960004078 indacaterol Drugs 0.000 description 10
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 10
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 9
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 9
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 9
- 101000972282 Homo sapiens Mucin-5AC Proteins 0.000 description 9
- 102100022496 Mucin-5AC Human genes 0.000 description 9
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 9
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 9
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 9
- QZZUEBNBZAPZLX-QFIPXVFZSA-N indacaterol Chemical compound N1C(=O)C=CC2=C1C(O)=CC=C2[C@@H](O)CNC1CC(C=C(C(=C2)CC)CC)=C2C1 QZZUEBNBZAPZLX-QFIPXVFZSA-N 0.000 description 9
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 9
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 9
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 9
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 9
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 9
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 9
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 9
- HGINCPLSRVDWNT-UHFFFAOYSA-N Acrolein Chemical compound C=CC=O HGINCPLSRVDWNT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- QIIDATRCGITYRZ-UHFFFAOYSA-N Catalpol Natural products OCC1OC(OC2OC=CC3C(O)C(=C(CO)C23)O)C(O)C(O)C1O QIIDATRCGITYRZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 102000003688 G-Protein-Coupled Receptors Human genes 0.000 description 8
- 108090000045 G-Protein-Coupled Receptors Proteins 0.000 description 8
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 8
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 8
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 8
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 8
- HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L magnesium stearate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 8
- 210000004043 pneumocyte Anatomy 0.000 description 8
- 102000046299 Transforming Growth Factor beta1 Human genes 0.000 description 7
- 101800002279 Transforming growth factor beta-1 Proteins 0.000 description 7
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 7
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 7
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 7
- 238000011161 development Methods 0.000 description 7
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 7
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 7
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 7
- 235000012149 noodles Nutrition 0.000 description 7
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 7
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 7
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 7
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 7
- 238000011160 research Methods 0.000 description 7
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 7
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 7
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 102000003777 Interleukin-1 beta Human genes 0.000 description 6
- 108090000193 Interleukin-1 beta Proteins 0.000 description 6
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 6
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 6
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 6
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 6
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 6
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 6
- 210000003097 mucus Anatomy 0.000 description 6
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 6
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 6
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 6
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 6
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 5
- 238000001644 13C nuclear magnetic resonance spectroscopy Methods 0.000 description 5
- 208000000884 Airway Obstruction Diseases 0.000 description 5
- 206010014561 Emphysema Diseases 0.000 description 5
- 206010061876 Obstruction Diseases 0.000 description 5
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 5
- 239000000556 agonist Substances 0.000 description 5
- 229920001429 chelating resin Polymers 0.000 description 5
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 5
- 108020004445 glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Proteins 0.000 description 5
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 5
- 210000004969 inflammatory cell Anatomy 0.000 description 5
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 5
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 5
- 244000005706 microflora Species 0.000 description 5
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 5
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 5
- 230000034190 positive regulation of NF-kappaB transcription factor activity Effects 0.000 description 5
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 5
- 230000000770 proinflammatory effect Effects 0.000 description 5
- 229920002477 rna polymer Polymers 0.000 description 5
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 5
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 5
- NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 1,2-bis(ethenyl)benzene;1-ethenyl-2-ethylbenzene;styrene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1.CCC1=CC=CC=C1C=C.C=CC1=CC=CC=C1C=C NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000005160 1H NMR spectroscopy Methods 0.000 description 4
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 4
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229920002261 Corn starch Polymers 0.000 description 4
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 4
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 4
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 4
- WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N Haematoxylin Chemical compound C12=CC(O)=C(O)C=C2CC2(O)C1C1=CC=C(O)C(O)=C1OC2 WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 101001018097 Homo sapiens L-selectin Proteins 0.000 description 4
- 102100033467 L-selectin Human genes 0.000 description 4
- 101150031922 MUC5AC gene Proteins 0.000 description 4
- IMNFDUFMRHMDMM-UHFFFAOYSA-N N-Heptane Chemical compound CCCCCCC IMNFDUFMRHMDMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 101710188106 SEC14-like protein 2 Proteins 0.000 description 4
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000001270 agonistic effect Effects 0.000 description 4
- 230000003266 anti-allergic effect Effects 0.000 description 4
- 230000001088 anti-asthma Effects 0.000 description 4
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 4
- 210000000621 bronchi Anatomy 0.000 description 4
- 206010006451 bronchitis Diseases 0.000 description 4
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 4
- 239000003729 cation exchange resin Substances 0.000 description 4
- 230000008859 change Effects 0.000 description 4
- 210000000038 chest Anatomy 0.000 description 4
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 4
- 239000008120 corn starch Substances 0.000 description 4
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 4
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 4
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 4
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 4
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 4
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 4
- 102000006602 glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Human genes 0.000 description 4
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 4
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 4
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 4
- 235000019359 magnesium stearate Nutrition 0.000 description 4
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 4
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 4
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 4
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 4
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 4
- 230000007115 recruitment Effects 0.000 description 4
- 239000000454 talc Substances 0.000 description 4
- 229910052623 talc Inorganic materials 0.000 description 4
- 235000012222 talc Nutrition 0.000 description 4
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 4
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 4
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 4
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 101001027327 Bos taurus Growth-regulated protein homolog alpha Proteins 0.000 description 3
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 3
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 3
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 3
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 3
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 3
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 3
- 208000002200 Respiratory Hypersensitivity Diseases 0.000 description 3
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 3
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 3
- 244000269722 Thea sinensis Species 0.000 description 3
- GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J Trypan blue Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].C1=C(S([O-])(=O)=O)C=C2C=C(S([O-])(=O)=O)C(/N=N/C3=CC=C(C=C3C)C=3C=C(C(=CC=3)\N=N\C=3C(=CC4=CC(=CC(N)=C4C=3O)S([O-])(=O)=O)S([O-])(=O)=O)C)=C(O)C2=C1N GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J 0.000 description 3
- DPXJVFZANSGRMM-UHFFFAOYSA-N acetic acid;2,3,4,5,6-pentahydroxyhexanal;sodium Chemical compound [Na].CC(O)=O.OCC(O)C(O)C(O)C(O)C=O DPXJVFZANSGRMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 3
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 3
- 230000010085 airway hyperresponsiveness Effects 0.000 description 3
- 239000003708 ampul Substances 0.000 description 3
- 238000011861 anti-inflammatory therapy Methods 0.000 description 3
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 3
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 3
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 3
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 3
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 3
- 235000010980 cellulose Nutrition 0.000 description 3
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 3
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 3
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 3
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 3
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 3
- 230000005713 exacerbation Effects 0.000 description 3
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 3
- 235000019634 flavors Nutrition 0.000 description 3
- 239000003205 fragrance Substances 0.000 description 3
- 235000015203 fruit juice Nutrition 0.000 description 3
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 3
- 125000001475 halogen functional group Chemical group 0.000 description 3
- 230000035876 healing Effects 0.000 description 3
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 3
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 3
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 description 3
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 description 3
- 230000028709 inflammatory response Effects 0.000 description 3
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 3
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 3
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 3
- 238000002826 magnetic-activated cell sorting Methods 0.000 description 3
- 125000000956 methoxy group Chemical group [H]C([H])([H])O* 0.000 description 3
- LXCFILQKKLGQFO-UHFFFAOYSA-N methylparaben Chemical compound COC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 LXCFILQKKLGQFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 3
- 235000010755 mineral Nutrition 0.000 description 3
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 3
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 3
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 3
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 3
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 3
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 3
- 235000015927 pasta Nutrition 0.000 description 3
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 3
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 3
- QELSKZZBTMNZEB-UHFFFAOYSA-N propylparaben Chemical compound CCCOC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 QELSKZZBTMNZEB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000002685 pulmonary effect Effects 0.000 description 3
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 3
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 3
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 3
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 3
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 3
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 3
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 3
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 3
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 3
- 150000003722 vitamin derivatives Chemical class 0.000 description 3
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 2
- GHOKWGTUZJEAQD-ZETCQYMHSA-N (D)-(+)-Pantothenic acid Chemical compound OCC(C)(C)[C@@H](O)C(=O)NCCC(O)=O GHOKWGTUZJEAQD-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 2
- GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N (±)-α-Tocopherol Chemical compound OC1=C(C)C(C)=C2OC(CCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1C GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IHPYMWDTONKSCO-UHFFFAOYSA-N 2,2'-piperazine-1,4-diylbisethanesulfonic acid Chemical compound OS(=O)(=O)CCN1CCN(CCS(O)(=O)=O)CC1 IHPYMWDTONKSCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DVLFYONBTKHTER-UHFFFAOYSA-N 3-(N-morpholino)propanesulfonic acid Chemical compound OS(=O)(=O)CCCN1CCOCC1 DVLFYONBTKHTER-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N Ammonium acetate Chemical compound N.CC(O)=O USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000005695 Ammonium acetate Substances 0.000 description 2
- 101100313763 Arabidopsis thaliana TIM22-2 gene Proteins 0.000 description 2
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000005979 Citrus limon Nutrition 0.000 description 2
- 244000131522 Citrus pyriformis Species 0.000 description 2
- 208000000059 Dyspnea Diseases 0.000 description 2
- 206010013975 Dyspnoeas Diseases 0.000 description 2
- 239000004386 Erythritol Substances 0.000 description 2
- UNXHWFMMPAWVPI-UHFFFAOYSA-N Erythritol Natural products OCC(O)C(O)CO UNXHWFMMPAWVPI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010016654 Fibrosis Diseases 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 2
- NTYJJOPFIAHURM-UHFFFAOYSA-N Histamine Chemical compound NCCC1=CN=CN1 NTYJJOPFIAHURM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 2
- 102000013691 Interleukin-17 Human genes 0.000 description 2
- 108050003558 Interleukin-17 Proteins 0.000 description 2
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L Magnesium chloride Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- BAPJBEWLBFYGME-UHFFFAOYSA-N Methyl acrylate Chemical compound COC(=O)C=C BAPJBEWLBFYGME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000015728 Mucins Human genes 0.000 description 2
- 108010063954 Mucins Proteins 0.000 description 2
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 2
- JOCBASBOOFNAJA-UHFFFAOYSA-N N-tris(hydroxymethyl)methyl-2-aminoethanesulfonic acid Chemical compound OCC(CO)(CO)NCCS(O)(=O)=O JOCBASBOOFNAJA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010057466 NF-kappa B Proteins 0.000 description 2
- 102000003945 NF-kappa B Human genes 0.000 description 2
- PVNIIMVLHYAWGP-UHFFFAOYSA-N Niacin Chemical compound OC(=O)C1=CC=CN=C1 PVNIIMVLHYAWGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DFPAKSUCGFBDDF-UHFFFAOYSA-N Nicotinamide Chemical compound NC(=O)C1=CC=CN=C1 DFPAKSUCGFBDDF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000027771 Obstructive airways disease Diseases 0.000 description 2
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 2
- 238000011529 RT qPCR Methods 0.000 description 2
- 239000012506 Sephacryl® Substances 0.000 description 2
- GIIZNNXWQWCKIB-UHFFFAOYSA-N Serevent Chemical compound C1=C(O)C(CO)=CC(C(O)CNCCCCCCOCCCCC=2C=CC=CC=2)=C1 GIIZNNXWQWCKIB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012505 Superdex™ Substances 0.000 description 2
- 244000262907 Veronica longifolia Species 0.000 description 2
- TVXBFESIOXBWNM-UHFFFAOYSA-N Xylitol Natural products OCCC(O)C(O)C(O)CCO TVXBFESIOXBWNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XLOMVQKBTHCTTD-UHFFFAOYSA-N Zinc monoxide Chemical compound [Zn]=O XLOMVQKBTHCTTD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 2
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 2
- 239000003463 adsorbent Substances 0.000 description 2
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 2
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 2
- 238000003915 air pollution Methods 0.000 description 2
- 208000037883 airway inflammation Diseases 0.000 description 2
- NDAUXUAQIAJITI-UHFFFAOYSA-N albuterol Chemical compound CC(C)(C)NCC(O)C1=CC=C(O)C(CO)=C1 NDAUXUAQIAJITI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000010443 alginic acid Nutrition 0.000 description 2
- 229920000615 alginic acid Polymers 0.000 description 2
- 208000026935 allergic disease Diseases 0.000 description 2
- 230000007815 allergy Effects 0.000 description 2
- PNEYBMLMFCGWSK-UHFFFAOYSA-N aluminium oxide Inorganic materials [O-2].[O-2].[O-2].[Al+3].[Al+3] PNEYBMLMFCGWSK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000002821 alveolar epithelial cell Anatomy 0.000 description 2
- 235000019257 ammonium acetate Nutrition 0.000 description 2
- 229940043376 ammonium acetate Drugs 0.000 description 2
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 2
- 239000003957 anion exchange resin Substances 0.000 description 2
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 2
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 2
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 2
- 239000002585 base Substances 0.000 description 2
- 229940124748 beta 2 agonist Drugs 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 2
- 235000013361 beverage Nutrition 0.000 description 2
- OWMVSZAMULFTJU-UHFFFAOYSA-N bis-tris Chemical compound OCCN(CCO)C(CO)(CO)CO OWMVSZAMULFTJU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 2
- 210000003123 bronchiole Anatomy 0.000 description 2
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 2
- 125000002057 carboxymethyl group Chemical group [H]OC(=O)C([H])([H])[*] 0.000 description 2
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 2
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 2
- 235000013351 cheese Nutrition 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 235000019219 chocolate Nutrition 0.000 description 2
- 238000004040 coloring Methods 0.000 description 2
- 238000002485 combustion reaction Methods 0.000 description 2
- 230000034994 death Effects 0.000 description 2
- FFYPMLJYZAEMQB-UHFFFAOYSA-N diethyl pyrocarbonate Chemical compound CCOC(=O)OC(=O)OCC FFYPMLJYZAEMQB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 2
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 2
- 230000002526 effect on cardiovascular system Effects 0.000 description 2
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 2
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 2
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 2
- YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N eosin Chemical compound [Na+].OC(=O)C1=CC=CC=C1C1=C2C=C(Br)C(=O)C(Br)=C2OC2=C(Br)C(O)=C(Br)C=C21 YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000003979 eosinophil Anatomy 0.000 description 2
- 239000003822 epoxy resin Substances 0.000 description 2
- 235000019414 erythritol Nutrition 0.000 description 2
- UNXHWFMMPAWVPI-ZXZARUISSA-N erythritol Chemical compound OC[C@H](O)[C@H](O)CO UNXHWFMMPAWVPI-ZXZARUISSA-N 0.000 description 2
- 229940009714 erythritol Drugs 0.000 description 2
- 230000004761 fibrosis Effects 0.000 description 2
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 2
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 2
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 2
- OVBPIULPVIDEAO-LBPRGKRZSA-N folic acid Chemical compound C=1N=C2NC(N)=NC(=O)C2=NC=1CNC1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 OVBPIULPVIDEAO-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 2
- 235000013373 food additive Nutrition 0.000 description 2
- 239000002778 food additive Substances 0.000 description 2
- 239000008098 formaldehyde solution Substances 0.000 description 2
- 229960002848 formoterol Drugs 0.000 description 2
- BPZSYCZIITTYBL-UHFFFAOYSA-N formoterol Chemical compound C1=CC(OC)=CC=C1CC(C)NCC(O)C1=CC=C(O)C(NC=O)=C1 BPZSYCZIITTYBL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 2
- 235000013402 health food Nutrition 0.000 description 2
- NDJKXXJCMXVBJW-UHFFFAOYSA-N heptadecane Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCC NDJKXXJCMXVBJW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 2
- 229940041476 lactose 100 mg Drugs 0.000 description 2
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 2
- 210000005265 lung cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- HEBKCHPVOIAQTA-UHFFFAOYSA-N meso ribitol Natural products OCC(O)C(O)C(O)CO HEBKCHPVOIAQTA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 2
- PKAHQJNJPDVTDP-UHFFFAOYSA-N methyl cyclopropanecarboxylate Chemical compound COC(=O)C1CC1 PKAHQJNJPDVTDP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000001331 nose Anatomy 0.000 description 2
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 2
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 2
- 239000002674 ointment Substances 0.000 description 2
- 238000001543 one-way ANOVA Methods 0.000 description 2
- 230000036542 oxidative stress Effects 0.000 description 2
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 2
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 description 2
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 2
- 239000006187 pill Substances 0.000 description 2
- 229920001467 poly(styrenesulfonates) Polymers 0.000 description 2
- 229920000647 polyepoxide Polymers 0.000 description 2
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 2
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 2
- 229920002981 polyvinylidene fluoride Polymers 0.000 description 2
- 239000001508 potassium citrate Substances 0.000 description 2
- 229960002635 potassium citrate Drugs 0.000 description 2
- QEEAPRPFLLJWCF-UHFFFAOYSA-K potassium citrate (anhydrous) Chemical compound [K+].[K+].[K+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O QEEAPRPFLLJWCF-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 235000011082 potassium citrates Nutrition 0.000 description 2
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 2
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 2
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 description 2
- 229960003415 propylparaben Drugs 0.000 description 2
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 2
- 230000000241 respiratory effect Effects 0.000 description 2
- 208000023504 respiratory system disease Diseases 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 229960002052 salbutamol Drugs 0.000 description 2
- 229960004017 salmeterol Drugs 0.000 description 2
- 235000015067 sauces Nutrition 0.000 description 2
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 2
- 208000013220 shortness of breath Diseases 0.000 description 2
- 239000007974 sodium acetate buffer Substances 0.000 description 2
- 235000019812 sodium carboxymethyl cellulose Nutrition 0.000 description 2
- 229920001027 sodium carboxymethylcellulose Polymers 0.000 description 2
- 239000012064 sodium phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- 238000000638 solvent extraction Methods 0.000 description 2
- 230000003595 spectral effect Effects 0.000 description 2
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 2
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 description 2
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 2
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 2
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 2
- XOAAWQZATWQOTB-UHFFFAOYSA-N taurine Chemical compound NCCS(O)(=O)=O XOAAWQZATWQOTB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002562 thickening agent Substances 0.000 description 2
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 2
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 description 2
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 description 2
- 235000010447 xylitol Nutrition 0.000 description 2
- 239000000811 xylitol Substances 0.000 description 2
- 229960002675 xylitol Drugs 0.000 description 2
- HEBKCHPVOIAQTA-SCDXWVJYSA-N xylitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO HEBKCHPVOIAQTA-SCDXWVJYSA-N 0.000 description 2
- SNICXCGAKADSCV-JTQLQIEISA-N (-)-Nicotine Chemical compound CN1CCC[C@H]1C1=CC=CN=C1 SNICXCGAKADSCV-JTQLQIEISA-N 0.000 description 1
- RBCOYOYDYNXAFA-UHFFFAOYSA-L (5-hydroxy-4,6-dimethylpyridin-3-yl)methyl phosphate Chemical compound CC1=NC=C(COP([O-])([O-])=O)C(C)=C1O RBCOYOYDYNXAFA-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- LEVVMZZBTOYKSC-UHFFFAOYSA-N 1-amino-4-hydroxybutane-2-sulfonic acid Chemical compound NCC(S(O)(=O)=O)CCO LEVVMZZBTOYKSC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SXGZJKUKBWWHRA-UHFFFAOYSA-N 2-(N-morpholiniumyl)ethanesulfonate Chemical compound [O-]S(=O)(=O)CC[NH+]1CCOCC1 SXGZJKUKBWWHRA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WFIYPADYPQQLNN-UHFFFAOYSA-N 2-[2-(4-bromopyrazol-1-yl)ethyl]isoindole-1,3-dione Chemical compound C1=C(Br)C=NN1CCN1C(=O)C2=CC=CC=C2C1=O WFIYPADYPQQLNN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UAIUNKRWKOVEES-UHFFFAOYSA-N 3,3',5,5'-tetramethylbenzidine Chemical compound CC1=C(N)C(C)=CC(C=2C=C(C)C(N)=C(C)C=2)=C1 UAIUNKRWKOVEES-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MIDXCONKKJTLDX-UHFFFAOYSA-N 3,5-dimethylcyclopentane-1,2-dione Chemical compound CC1CC(C)C(=O)C1=O MIDXCONKKJTLDX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HIQIXEFWDLTDED-UHFFFAOYSA-N 4-hydroxy-1-piperidin-4-ylpyrrolidin-2-one Chemical compound O=C1CC(O)CN1C1CCNCC1 HIQIXEFWDLTDED-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FHVDTGUDJYJELY-UHFFFAOYSA-N 6-{[2-carboxy-4,5-dihydroxy-6-(phosphanyloxy)oxan-3-yl]oxy}-4,5-dihydroxy-3-phosphanyloxane-2-carboxylic acid Chemical compound O1C(C(O)=O)C(P)C(O)C(O)C1OC1C(C(O)=O)OC(OP)C(O)C1O FHVDTGUDJYJELY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000017919 ADRB2 Human genes 0.000 description 1
- 229940126649 ADRB2 agonist Drugs 0.000 description 1
- 244000215068 Acacia senegal Species 0.000 description 1
- 239000004925 Acrylic resin Substances 0.000 description 1
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 description 1
- 206010067484 Adverse reaction Diseases 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 208000019901 Anxiety disease Diseases 0.000 description 1
- 108010011485 Aspartame Proteins 0.000 description 1
- 102100039705 Beta-2 adrenergic receptor Human genes 0.000 description 1
- 206010006458 Bronchitis chronic Diseases 0.000 description 1
- 238000011740 C57BL/6 mouse Methods 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 240000004160 Capsicum annuum Species 0.000 description 1
- 235000008534 Capsicum annuum var annuum Nutrition 0.000 description 1
- 235000007862 Capsicum baccatum Nutrition 0.000 description 1
- UGFAIRIUMAVXCW-UHFFFAOYSA-N Carbon monoxide Chemical compound [O+]#[C-] UGFAIRIUMAVXCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- GHOKWGTUZJEAQD-UHFFFAOYSA-N Chick antidermatitis factor Natural products OCC(C)(C)C(O)C(=O)NCCC(O)=O GHOKWGTUZJEAQD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 1
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 1
- 102000029816 Collagenase Human genes 0.000 description 1
- 108060005980 Collagenase Proteins 0.000 description 1
- 108020004635 Complementary DNA Proteins 0.000 description 1
- 206010010904 Convulsion Diseases 0.000 description 1
- 206010011224 Cough Diseases 0.000 description 1
- 229920000858 Cyclodextrin Polymers 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- ZZZCUOFIHGPKAK-UHFFFAOYSA-N D-erythro-ascorbic acid Natural products OCC1OC(=O)C(O)=C1O ZZZCUOFIHGPKAK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- 102000007260 Deoxyribonuclease I Human genes 0.000 description 1
- 108010008532 Deoxyribonuclease I Proteins 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 229920001353 Dextrin Polymers 0.000 description 1
- 239000004375 Dextrin Substances 0.000 description 1
- 235000019739 Dicalciumphosphate Nutrition 0.000 description 1
- 235000011511 Diospyros Nutrition 0.000 description 1
- 244000236655 Diospyros kaki Species 0.000 description 1
- 206010061818 Disease progression Diseases 0.000 description 1
- 239000012591 Dulbecco’s Phosphate Buffered Saline Substances 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102100023688 Eotaxin Human genes 0.000 description 1
- 101710139422 Eotaxin Proteins 0.000 description 1
- 108010037362 Extracellular Matrix Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000010834 Extracellular Matrix Proteins Human genes 0.000 description 1
- 235000012571 Ficus glomerata Nutrition 0.000 description 1
- 240000000365 Ficus racemosa Species 0.000 description 1
- 238000012413 Fluorescence activated cell sorting analysis Methods 0.000 description 1
- 229930091371 Fructose Natural products 0.000 description 1
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 description 1
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 1
- 102100031181 Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Human genes 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 239000004378 Glycyrrhizin Substances 0.000 description 1
- 229920000084 Gum arabic Polymers 0.000 description 1
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 1
- 238000010268 HPLC based assay Methods 0.000 description 1
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 101000959437 Homo sapiens Beta-2 adrenergic receptor Proteins 0.000 description 1
- 101000819111 Homo sapiens Trans-acting T-cell-specific transcription factor GATA-3 Proteins 0.000 description 1
- 208000019025 Hypokalemia Diseases 0.000 description 1
- 102000003816 Interleukin-13 Human genes 0.000 description 1
- 108090000176 Interleukin-13 Proteins 0.000 description 1
- 108010002616 Interleukin-5 Proteins 0.000 description 1
- 102000000743 Interleukin-5 Human genes 0.000 description 1
- 108090001007 Interleukin-8 Proteins 0.000 description 1
- 102000004890 Interleukin-8 Human genes 0.000 description 1
- 239000007993 MOPS buffer Substances 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 102000002274 Matrix Metalloproteinases Human genes 0.000 description 1
- 108010000684 Matrix Metalloproteinases Proteins 0.000 description 1
- 244000062730 Melissa officinalis Species 0.000 description 1
- 235000010654 Melissa officinalis Nutrition 0.000 description 1
- 206010054949 Metaplasia Diseases 0.000 description 1
- CERQOIWHTDAKMF-UHFFFAOYSA-M Methacrylate Chemical compound CC(=C)C([O-])=O CERQOIWHTDAKMF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000004909 Moisturizer Substances 0.000 description 1
- OVBPIULPVIDEAO-UHFFFAOYSA-N N-Pteroyl-L-glutaminsaeure Natural products C=1N=C2NC(N)=NC(=O)C2=NC=1CNC1=CC=C(C(=O)NC(CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 OVBPIULPVIDEAO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 244000061176 Nicotiana tabacum Species 0.000 description 1
- 235000002637 Nicotiana tabacum Nutrition 0.000 description 1
- 206010073310 Occupational exposures Diseases 0.000 description 1
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 description 1
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 description 1
- 239000007990 PIPES buffer Substances 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 229920002230 Pectic acid Polymers 0.000 description 1
- 206010035664 Pneumonia Diseases 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 1
- 229940124158 Protease/peptidase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 244000018633 Prunus armeniaca Species 0.000 description 1
- 235000009827 Prunus armeniaca Nutrition 0.000 description 1
- 239000012564 Q sepharose fast flow resin Substances 0.000 description 1
- 238000002123 RNA extraction Methods 0.000 description 1
- 239000012979 RPMI medium Substances 0.000 description 1
- 101100384810 Rattus norvegicus Arcn1 gene Proteins 0.000 description 1
- 101001093925 Rattus norvegicus SEC14-like protein 2 Proteins 0.000 description 1
- 208000021063 Respiratory fume inhalation disease Diseases 0.000 description 1
- AUNGANRZJHBGPY-SCRDCRAPSA-N Riboflavin Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)CN1C=2C=C(C)C(C)=CC=2N=C2C1=NC(=O)NC2=O AUNGANRZJHBGPY-SCRDCRAPSA-N 0.000 description 1
- 229920001800 Shellac Polymers 0.000 description 1
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 235000015125 Sterculia urens Nutrition 0.000 description 1
- 244000228451 Stevia rebaudiana Species 0.000 description 1
- 238000000692 Student's t-test Methods 0.000 description 1
- 208000001871 Tachycardia Diseases 0.000 description 1
- 102100021386 Trans-acting T-cell-specific transcription factor GATA-3 Human genes 0.000 description 1
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 1
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 1
- 208000009729 Ventricular Premature Complexes Diseases 0.000 description 1
- 229930003270 Vitamin B Natural products 0.000 description 1
- 229930003268 Vitamin C Natural products 0.000 description 1
- 229930003427 Vitamin E Natural products 0.000 description 1
- 239000005862 Whey Substances 0.000 description 1
- 102000007544 Whey Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010046377 Whey Proteins Proteins 0.000 description 1
- 210000000683 abdominal cavity Anatomy 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 235000010489 acacia gum Nutrition 0.000 description 1
- 239000000205 acacia gum Substances 0.000 description 1
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 1
- 231100000215 acute (single dose) toxicity testing Toxicity 0.000 description 1
- 231100000403 acute toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000007059 acute toxicity Effects 0.000 description 1
- 239000000853 adhesive Substances 0.000 description 1
- 230000001070 adhesive effect Effects 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 230000001800 adrenalinergic effect Effects 0.000 description 1
- 230000006838 adverse reaction Effects 0.000 description 1
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 1
- 229940072056 alginate Drugs 0.000 description 1
- 239000000783 alginic acid Substances 0.000 description 1
- 229960001126 alginic acid Drugs 0.000 description 1
- 150000004781 alginic acids Chemical class 0.000 description 1
- 229940121363 anti-inflammatory agent Drugs 0.000 description 1
- 239000002260 anti-inflammatory agent Substances 0.000 description 1
- 239000000924 antiasthmatic agent Substances 0.000 description 1
- 229940065524 anticholinergics inhalants for obstructive airway diseases Drugs 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 1
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 1
- 230000036506 anxiety Effects 0.000 description 1
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 1
- 230000006793 arrhythmia Effects 0.000 description 1
- 206010003119 arrhythmia Diseases 0.000 description 1
- 235000019463 artificial additive Nutrition 0.000 description 1
- 239000000605 aspartame Substances 0.000 description 1
- 235000010357 aspartame Nutrition 0.000 description 1
- IAOZJIPTCAWIRG-QWRGUYRKSA-N aspartame Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)OC)CC1=CC=CC=C1 IAOZJIPTCAWIRG-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- 229960003438 aspartame Drugs 0.000 description 1
- 230000006472 autoimmune response Effects 0.000 description 1
- 239000012752 auxiliary agent Substances 0.000 description 1
- 108010030694 avidin-horseradish peroxidase complex Proteins 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 235000015241 bacon Nutrition 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 108010014499 beta-2 Adrenergic Receptors Proteins 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N beta-maltose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 1
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 1
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 1
- 239000007844 bleaching agent Substances 0.000 description 1
- 230000017531 blood circulation Effects 0.000 description 1
- 238000009534 blood test Methods 0.000 description 1
- 235000008429 bread Nutrition 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- 238000005282 brightening Methods 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 235000014121 butter Nutrition 0.000 description 1
- 238000010804 cDNA synthesis Methods 0.000 description 1
- 235000012970 cakes Nutrition 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 229940037769 calcium carbonate 100 mg Drugs 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 239000000378 calcium silicate Substances 0.000 description 1
- 229910052918 calcium silicate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000012241 calcium silicate Nutrition 0.000 description 1
- CJZGTCYPCWQAJB-UHFFFAOYSA-L calcium stearate Chemical compound [Ca+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O CJZGTCYPCWQAJB-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 235000013539 calcium stearate Nutrition 0.000 description 1
- 239000008116 calcium stearate Substances 0.000 description 1
- OYACROKNLOSFPA-UHFFFAOYSA-N calcium;dioxido(oxo)silane Chemical compound [Ca+2].[O-][Si]([O-])=O OYACROKNLOSFPA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 239000001728 capsicum frutescens Substances 0.000 description 1
- 235000013736 caramel Nutrition 0.000 description 1
- 229910002091 carbon monoxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000014171 carbonated beverage Nutrition 0.000 description 1
- 235000012174 carbonated soft drink Nutrition 0.000 description 1
- 238000003763 carbonization Methods 0.000 description 1
- 235000010948 carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000008112 carboxymethyl-cellulose Substances 0.000 description 1
- 238000012754 cardiac puncture Methods 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 230000036755 cellular response Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000007910 chewable tablet Substances 0.000 description 1
- 229940068682 chewable tablet Drugs 0.000 description 1
- 230000001055 chewing effect Effects 0.000 description 1
- 229940112822 chewing gum Drugs 0.000 description 1
- 235000015218 chewing gum Nutrition 0.000 description 1
- RNFNDJAIBTYOQL-UHFFFAOYSA-N chloral hydrate Chemical compound OC(O)C(Cl)(Cl)Cl RNFNDJAIBTYOQL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960002327 chloral hydrate Drugs 0.000 description 1
- 239000000812 cholinergic antagonist Substances 0.000 description 1
- 208000007451 chronic bronchitis Diseases 0.000 description 1
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 1
- 229960002424 collagenase Drugs 0.000 description 1
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 235000008504 concentrate Nutrition 0.000 description 1
- 230000003750 conditioning effect Effects 0.000 description 1
- 235000009508 confectionery Nutrition 0.000 description 1
- 230000036461 convulsion Effects 0.000 description 1
- NKLPQNGYXWVELD-UHFFFAOYSA-M coomassie brilliant blue Chemical compound [Na+].C1=CC(OCC)=CC=C1NC1=CC=C(C(=C2C=CC(C=C2)=[N+](CC)CC=2C=C(C=CC=2)S([O-])(=O)=O)C=2C=CC(=CC=2)N(CC)CC=2C=C(C=CC=2)S([O-])(=O)=O)C=C1 NKLPQNGYXWVELD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 1
- 235000014048 cultured milk product Nutrition 0.000 description 1
- 238000011461 current therapy Methods 0.000 description 1
- 235000021438 curry Nutrition 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 235000013365 dairy product Nutrition 0.000 description 1
- 230000007123 defense Effects 0.000 description 1
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 1
- 235000019425 dextrin Nutrition 0.000 description 1
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 1
- NEFBYIFKOOEVPA-UHFFFAOYSA-K dicalcium phosphate Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O NEFBYIFKOOEVPA-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229910000390 dicalcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 229940038472 dicalcium phosphate Drugs 0.000 description 1
- 235000013367 dietary fats Nutrition 0.000 description 1
- 235000015872 dietary supplement Nutrition 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 150000002009 diols Chemical class 0.000 description 1
- 150000002016 disaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 230000005750 disease progression Effects 0.000 description 1
- PXEDJBXQKAGXNJ-QTNFYWBSSA-L disodium L-glutamate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C(=O)[C@@H](N)CCC([O-])=O PXEDJBXQKAGXNJ-QTNFYWBSSA-L 0.000 description 1
- 235000015071 dressings Nutrition 0.000 description 1
- 235000011869 dried fruits Nutrition 0.000 description 1
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 description 1
- 230000000487 effect on differentiation Effects 0.000 description 1
- 230000002884 effect on inflammation Effects 0.000 description 1
- 239000003792 electrolyte Substances 0.000 description 1
- 239000012156 elution solvent Substances 0.000 description 1
- 239000003974 emollient agent Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 1
- 206010015037 epilepsy Diseases 0.000 description 1
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 description 1
- 238000011067 equilibration Methods 0.000 description 1
- 230000029142 excretion Effects 0.000 description 1
- 210000002744 extracellular matrix Anatomy 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 235000013332 fish product Nutrition 0.000 description 1
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 1
- 239000004088 foaming agent Substances 0.000 description 1
- 229960000304 folic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000019152 folic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000011724 folic acid Substances 0.000 description 1
- 235000003599 food sweetener Nutrition 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 235000010610 frozen noodles Nutrition 0.000 description 1
- 239000000446 fuel Substances 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 1
- WIGCFUFOHFEKBI-UHFFFAOYSA-N gamma-tocopherol Natural products CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCC1CCC2C(C)C(O)C(C)C(C)C2O1 WIGCFUFOHFEKBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000001641 gel filtration chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000007903 gelatin capsule Substances 0.000 description 1
- 238000007804 gelatin zymography Methods 0.000 description 1
- 239000010520 ghee Substances 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 1
- 229960002449 glycine Drugs 0.000 description 1
- LPLVUJXQOOQHMX-UHFFFAOYSA-N glycyrrhetinic acid glycoside Natural products C1CC(C2C(C3(CCC4(C)CCC(C)(CC4C3=CC2=O)C(O)=O)C)(C)CC2)(C)C2C(C)(C)C1OC1OC(C(O)=O)C(O)C(O)C1OC1OC(C(O)=O)C(O)C(O)C1O LPLVUJXQOOQHMX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004949 glycyrrhizic acid Drugs 0.000 description 1
- UYRUBYNTXSDKQT-UHFFFAOYSA-N glycyrrhizic acid Natural products CC1(C)C(CCC2(C)C1CCC3(C)C2C(=O)C=C4C5CC(C)(CCC5(C)CCC34C)C(=O)O)OC6OC(C(O)C(O)C6OC7OC(O)C(O)C(O)C7C(=O)O)C(=O)O UYRUBYNTXSDKQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000019410 glycyrrhizin Nutrition 0.000 description 1
- LPLVUJXQOOQHMX-QWBHMCJMSA-N glycyrrhizinic acid Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O[C@@H]1O[C@@H]1C([C@H]2[C@]([C@@H]3[C@@]([C@@]4(CC[C@@]5(C)CC[C@@](C)(C[C@H]5C4=CC3=O)C(O)=O)C)(C)CC2)(C)CC1)(C)C)C(O)=O)[C@@H]1O[C@H](C(O)=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O LPLVUJXQOOQHMX-QWBHMCJMSA-N 0.000 description 1
- 235000020251 goat milk Nutrition 0.000 description 1
- 210000002175 goblet cell Anatomy 0.000 description 1
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000015220 hamburgers Nutrition 0.000 description 1
- 210000003128 head Anatomy 0.000 description 1
- 230000002489 hematologic effect Effects 0.000 description 1
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 1
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 1
- 238000013537 high throughput screening Methods 0.000 description 1
- 229960001340 histamine Drugs 0.000 description 1
- 210000003630 histaminocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000010562 histological examination Methods 0.000 description 1
- 238000000265 homogenisation Methods 0.000 description 1
- 238000007602 hot air drying Methods 0.000 description 1
- 235000015243 ice cream Nutrition 0.000 description 1
- NBZBKCUXIYYUSX-UHFFFAOYSA-N iminodiacetic acid Chemical compound OC(=O)CNCC(O)=O NBZBKCUXIYYUSX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000003125 immunofluorescent labeling Methods 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 238000010874 in vitro model Methods 0.000 description 1
- 235000019531 indirect food additive Nutrition 0.000 description 1
- 238000003905 indoor air pollution Methods 0.000 description 1
- 208000027866 inflammatory disease Diseases 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000002718 inhibitory effect on inflammation Effects 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 235000008446 instant noodles Nutrition 0.000 description 1
- 238000000185 intracerebroventricular administration Methods 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000007913 intrathecal administration Methods 0.000 description 1
- 229910000358 iron sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- BAUYGSIQEAFULO-UHFFFAOYSA-L iron(2+) sulfate (anhydrous) Chemical compound [Fe+2].[O-]S([O-])(=O)=O BAUYGSIQEAFULO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 230000002427 irreversible effect Effects 0.000 description 1
- 235000008960 ketchup Nutrition 0.000 description 1
- 150000002576 ketones Chemical class 0.000 description 1
- 150000002617 leukotrienes Chemical class 0.000 description 1
- 229940069445 licorice extract Drugs 0.000 description 1
- 239000000865 liniment Substances 0.000 description 1
- 239000006210 lotion Substances 0.000 description 1
- 235000020121 low-fat milk Nutrition 0.000 description 1
- 230000004199 lung function Effects 0.000 description 1
- 239000012139 lysis buffer Substances 0.000 description 1
- ZLNQQNXFFQJAID-UHFFFAOYSA-L magnesium carbonate Chemical compound [Mg+2].[O-]C([O-])=O ZLNQQNXFFQJAID-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000001095 magnesium carbonate Substances 0.000 description 1
- 229910000021 magnesium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000845 maltitol Substances 0.000 description 1
- 235000010449 maltitol Nutrition 0.000 description 1
- VQHSOMBJVWLPSR-WUJBLJFYSA-N maltitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]([C@H](O)CO)O[C@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O VQHSOMBJVWLPSR-WUJBLJFYSA-N 0.000 description 1
- 229940035436 maltitol Drugs 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 235000013310 margarine Nutrition 0.000 description 1
- 239000003264 margarine Substances 0.000 description 1
- 229940126601 medicinal product Drugs 0.000 description 1
- 230000015689 metaplastic ossification Effects 0.000 description 1
- XELZGAJCZANUQH-UHFFFAOYSA-N methyl 1-acetylthieno[3,2-c]pyrazole-5-carboxylate Chemical compound CC(=O)N1N=CC2=C1C=C(C(=O)OC)S2 XELZGAJCZANUQH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920000609 methyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000004292 methyl p-hydroxybenzoate Substances 0.000 description 1
- 235000010270 methyl p-hydroxybenzoate Nutrition 0.000 description 1
- 239000001923 methylcellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010981 methylcellulose Nutrition 0.000 description 1
- 229960002216 methylparaben Drugs 0.000 description 1
- 235000020124 milk-based beverage Nutrition 0.000 description 1
- LRHHPZILMPIMIY-KZOWKLRMSA-N minecoside Natural products COc1ccc(C=CC(=O)O[C@@H]2[C@@H]3O[C@]3(CO)[C@@H]3[C@H]2C=CO[C@H]3O[C@@H]2O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]2O)cc1O LRHHPZILMPIMIY-KZOWKLRMSA-N 0.000 description 1
- 239000002480 mineral oil Substances 0.000 description 1
- 235000010446 mineral oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 description 1
- 239000012046 mixed solvent Substances 0.000 description 1
- 230000001333 moisturizer Effects 0.000 description 1
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 235000019462 natural additive Nutrition 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 239000002547 new drug Substances 0.000 description 1
- 235000005152 nicotinamide Nutrition 0.000 description 1
- 239000011570 nicotinamide Substances 0.000 description 1
- 229960002715 nicotine Drugs 0.000 description 1
- SNICXCGAKADSCV-UHFFFAOYSA-N nicotine Natural products CN1CCCC1C1=CC=CN=C1 SNICXCGAKADSCV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011664 nicotinic acid Substances 0.000 description 1
- 229960003512 nicotinic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000001968 nicotinic acid Nutrition 0.000 description 1
- 231100000989 no adverse effect Toxicity 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 235000021590 normal diet Nutrition 0.000 description 1
- 235000008935 nutritious Nutrition 0.000 description 1
- 231100000675 occupational exposure Toxicity 0.000 description 1
- 229920001542 oligosaccharide Polymers 0.000 description 1
- 150000002482 oligosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 239000006186 oral dosage form Substances 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- 201000008968 osteosarcoma Diseases 0.000 description 1
- 239000003002 pH adjusting agent Substances 0.000 description 1
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 1
- 229940055726 pantothenic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000019161 pantothenic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000011713 pantothenic acid Substances 0.000 description 1
- 239000013618 particulate matter Substances 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 230000001991 pathophysiological effect Effects 0.000 description 1
- LCLHHZYHLXDRQG-ZNKJPWOQSA-N pectic acid Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)O[C@H](C(O)=O)[C@@H]1OC1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](OC2[C@@H]([C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O2)C(O)=O)O)[C@@H](C(O)=O)O1 LCLHHZYHLXDRQG-ZNKJPWOQSA-N 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 229940124531 pharmaceutical excipient Drugs 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- DHRLEVQXOMLTIM-UHFFFAOYSA-N phosphoric acid;trioxomolybdenum Chemical compound O=[Mo](=O)=O.O=[Mo](=O)=O.O=[Mo](=O)=O.O=[Mo](=O)=O.O=[Mo](=O)=O.O=[Mo](=O)=O.O=[Mo](=O)=O.O=[Mo](=O)=O.O=[Mo](=O)=O.O=[Mo](=O)=O.O=[Mo](=O)=O.O=[Mo](=O)=O.OP(O)(O)=O DHRLEVQXOMLTIM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000013550 pizza Nutrition 0.000 description 1
- 238000007747 plating Methods 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 239000010318 polygalacturonic acid Substances 0.000 description 1
- 239000002952 polymeric resin Substances 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 150000004804 polysaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 1
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 1
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 1
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 1
- 235000003784 poor nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 208000024896 potassium deficiency disease Diseases 0.000 description 1
- GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M potassium dihydrogen phosphate Chemical compound [K+].OP(O)([O-])=O GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K potassium phosphate Substances [K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])([O-])=O LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 238000012257 pre-denaturation Methods 0.000 description 1
- 230000002028 premature Effects 0.000 description 1
- 235000014059 processed cheese Nutrition 0.000 description 1
- 235000020991 processed meat Nutrition 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000007425 progressive decline Effects 0.000 description 1
- 239000004405 propyl p-hydroxybenzoate Substances 0.000 description 1
- 235000010232 propyl p-hydroxybenzoate Nutrition 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 210000003456 pulmonary alveoli Anatomy 0.000 description 1
- 230000009325 pulmonary function Effects 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- HELXLJCILKEWJH-NCGAPWICSA-N rebaudioside A Chemical compound O([C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]([C@@H]1O[C@H]1[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)O[C@]12C(=C)C[C@@]3(C1)CC[C@@H]1[C@@](C)(CCC[C@]1([C@@H]3CC2)C)C(=O)O[C@H]1[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O HELXLJCILKEWJH-NCGAPWICSA-N 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 229960000342 retinol acetate Drugs 0.000 description 1
- QGNJRVVDBSJHIZ-QHLGVNSISA-N retinyl acetate Chemical compound CC(=O)OC\C=C(/C)\C=C\C=C(/C)\C=C\C1=C(C)CCCC1(C)C QGNJRVVDBSJHIZ-QHLGVNSISA-N 0.000 description 1
- 235000019173 retinyl acetate Nutrition 0.000 description 1
- 239000011770 retinyl acetate Substances 0.000 description 1
- 238000004366 reverse phase liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 1
- 239000003161 ribonuclease inhibitor Substances 0.000 description 1
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 description 1
- 230000005070 ripening Effects 0.000 description 1
- 235000019204 saccharin Nutrition 0.000 description 1
- CVHZOJJKTDOEJC-UHFFFAOYSA-N saccharin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)NS(=O)(=O)C2=C1 CVHZOJJKTDOEJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940081974 saccharin Drugs 0.000 description 1
- 239000000901 saccharin and its Na,K and Ca salt Substances 0.000 description 1
- 235000013580 sausages Nutrition 0.000 description 1
- HFHDHCJBZVLPGP-UHFFFAOYSA-N schardinger α-dextrin Chemical compound O1C(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(O)C2O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC2C(O)C(O)C1OC2CO HFHDHCJBZVLPGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 239000003352 sequestering agent Substances 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 239000004208 shellac Substances 0.000 description 1
- ZLGIYFNHBLSMPS-ATJNOEHPSA-N shellac Chemical compound OCCCCCC(O)C(O)CCCCCCCC(O)=O.C1C23[C@H](C(O)=O)CCC2[C@](C)(CO)[C@@H]1C(C(O)=O)=C[C@@H]3O ZLGIYFNHBLSMPS-ATJNOEHPSA-N 0.000 description 1
- 229940113147 shellac Drugs 0.000 description 1
- 235000013874 shellac Nutrition 0.000 description 1
- 238000004904 shortening Methods 0.000 description 1
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 1
- 235000020183 skimmed milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000004509 smoke generator Substances 0.000 description 1
- 206010041232 sneezing Diseases 0.000 description 1
- HRZFUMHJMZEROT-UHFFFAOYSA-L sodium disulfite Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S(=O)S([O-])(=O)=O HRZFUMHJMZEROT-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 229940001584 sodium metabisulfite Drugs 0.000 description 1
- 235000010262 sodium metabisulphite Nutrition 0.000 description 1
- 239000007901 soft capsule Substances 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 235000010356 sorbitol Nutrition 0.000 description 1
- 235000013322 soy milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 150000005846 sugar alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 230000002459 sustained effect Effects 0.000 description 1
- 239000003765 sweetening agent Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 229920003002 synthetic resin Polymers 0.000 description 1
- 230000006794 tachycardia Effects 0.000 description 1
- 229960003080 taurine Drugs 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
- 239000000892 thaumatin Substances 0.000 description 1
- 235000010436 thaumatin Nutrition 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- JZRWCGZRTZMZEH-UHFFFAOYSA-N thiamine Chemical compound CC1=C(CCO)SC=[N+]1CC1=CN=C(C)N=C1N JZRWCGZRTZMZEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000019505 tobacco product Nutrition 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 210000003437 trachea Anatomy 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 239000003656 tris buffered saline Substances 0.000 description 1
- 201000008827 tuberculosis Diseases 0.000 description 1
- 238000001771 vacuum deposition Methods 0.000 description 1
- 239000002966 varnish Substances 0.000 description 1
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- MZQXNUBTVLKMLP-QOEJBJAYSA-N verminoside Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@H]1[C@@H]2[C@@]3(CO)O[C@H]3[C@@H](OC(=O)\C=C\C=3C=C(O)C(O)=CC=3)[C@@H]2C=CO1 MZQXNUBTVLKMLP-QOEJBJAYSA-N 0.000 description 1
- SRWGFCAEAIUWSK-UHFFFAOYSA-N verminoside Natural products CC12OC1C(OC(=O)C=Cc3ccc(O)c(O)c3)C4C=COC(OC5OC(CO)C(O)C(O)C5O)C24 SRWGFCAEAIUWSK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000052 vinegar Substances 0.000 description 1
- 235000021419 vinegar Nutrition 0.000 description 1
- 235000019156 vitamin B Nutrition 0.000 description 1
- 239000011720 vitamin B Substances 0.000 description 1
- 235000019154 vitamin C Nutrition 0.000 description 1
- 239000011718 vitamin C Substances 0.000 description 1
- 235000019165 vitamin E Nutrition 0.000 description 1
- 229940046009 vitamin E Drugs 0.000 description 1
- 239000011709 vitamin E Substances 0.000 description 1
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 1
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 1
- 239000011787 zinc oxide Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/185—Acids; Anhydrides, halides or salts thereof, e.g. sulfur acids, imidic, hydrazonic or hydroximic acids
- A61K31/19—Carboxylic acids, e.g. valproic acid
- A61K31/192—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having aromatic groups, e.g. sulindac, 2-aryl-propionic acids, ethacrynic acid
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L29/00—Foods or foodstuffs containing additives; Preparation or treatment thereof
- A23L29/03—Organic compounds
- A23L29/035—Organic compounds containing oxygen as heteroatom
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
- A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
- A23L33/105—Plant extracts, their artificial duplicates or their derivatives
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/185—Acids; Anhydrides, halides or salts thereof, e.g. sulfur acids, imidic, hydrazonic or hydroximic acids
- A61K31/19—Carboxylic acids, e.g. valproic acid
- A61K31/194—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having two or more carboxyl groups, e.g. succinic, maleic or phthalic acid
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
- A61K31/35—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having six-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom
- A61K31/352—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having six-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom condensed with carbocyclic rings, e.g. methantheline
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/7042—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings
- A61K31/7048—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having oxygen as a ring hetero atom, e.g. leucoglucosan, hesperidin, erythromycin, nystatin, digitoxin or digoxin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
- A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
- A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
- A61K36/80—Scrophulariaceae (Figwort family)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2200/00—Function of food ingredients
- A23V2200/30—Foods, ingredients or supplements having a functional effect on health
- A23V2200/314—Foods, ingredients or supplements having a functional effect on health having an effect on lung or respiratory system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
- A61K2236/30—Extraction of the material
- A61K2236/33—Extraction of the material involving extraction with hydrophilic solvents, e.g. lower alcohols, esters or ketones
- A61K2236/331—Extraction of the material involving extraction with hydrophilic solvents, e.g. lower alcohols, esters or ketones using water, e.g. cold water, infusion, tea, steam distillation or decoction
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
- A61K2236/30—Extraction of the material
- A61K2236/33—Extraction of the material involving extraction with hydrophilic solvents, e.g. lower alcohols, esters or ketones
- A61K2236/333—Extraction of the material involving extraction with hydrophilic solvents, e.g. lower alcohols, esters or ketones using mixed solvents, e.g. 70% EtOH
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
- A61K2236/30—Extraction of the material
- A61K2236/39—Complex extraction schemes, e.g. fractionation or repeated extraction steps
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
- A61K2236/50—Methods involving additional extraction steps
- A61K2236/51—Concentration or drying of the extract, e.g. Lyophilisation, freeze-drying or spray-drying
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
- A61K2236/50—Methods involving additional extraction steps
- A61K2236/55—Liquid-liquid separation; Phase separation
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Botany (AREA)
- Mycology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Nutrition Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Alternative & Traditional Medicine (AREA)
- Medical Informatics (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
Abstract
Настоящее изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к композиции для лечения или профилактики хронической обструктивной болезни легких (ХОБЛ). Фармацевтическая композиция, содержащая экстракт Pseudolysimachion rotundum var. subintegrum, очищенный с помощью вторичного фракционирования (АТС2), содержащий верпрозид, вератровую кислоту, каталпозид, пикрозид II, изованиллоил каталпол и 6-О-вератроил каталпол или верпрозид, в определенном количестве, для лечения или профилактики хронической обструктивной болезни легких (ХОБЛ) (варианты). Фармацевтическая композиция содержит комбинацию верпрозида, вератровой кислоты, каталпозида, пикрозида II, изованиллоил каталпол, 6-О-вератроил каталпола, и фармацевтически приемлемые носители или вспомогательные вещества, для лечения или профилактики хронической обструктивной болезни легких (ХОБЛ). Полезный для здоровья функциональный пищевой продукт содержит экстракт Pseudolysimachion rotundum var. subintegrum, очищенный с помощью вторичного фракционирования (АТС2), содержащий верпрозид, вератровую кислоту, каталпозид, пикрозид II, изованиллоил каталпол, 6-О-вератроил каталпол или верпрозид, в качестве активного ингредиента, взятые в определенном количестве, для облегчения или профилактики хронической обструктивной болезни легких (ХОБЛ). Полезный для здоровья функциональный пищевой продукт содержит комбинацию вышеуказанных соединений, в определенном соотношении, для облегчения или профилактики хронической обструктивной болезни легких (ХОБЛ). Вышеописанные средства эффективны для лечения или профилактики хронической обструктивной болезни легких 5 н. и 1 з п. ф-лы, 24 ил., 5 табл., 6 пр.
Description
Область техники
Настоящее изобретение относится к композиции, содержащей очищенный экстракт, выделенный из Pseudolysimachion rotundum var. subintegrum, содержащий большое количество активного компонента, или соединения, выделенные из него, в качестве активного компонента, для профилактики или лечения хронической обструктивной болезни легких (ХОБЛ) и ее применению.
Уровень техники
Как правило, хроническая обструктивная болезнь легких (ХОБЛ) представляет собой одну из болезней легких, вызванную атипичным воспалительным заболеванием легких, приводящим к обструкции дыхательных путей. ХОБЛ приводит к одышке, возникающей в результате затруднения прохождения потока выдыхаемого воздуха, и характеризуется различными симптомами, например, слабо обратимым ограничением прохождения воздуха в дыхательных путях или обструкцией дыхательных путей, прогрессирующим развитием в соответствии со временем от начала заболевания и т.д., отличными от общих симптомов, характерных для астмы, и может быть классифицирована как легочная эмфизема и хронический обструктивный бронхит (Barnes P.J. 20014, Mediators of chronic obstructive pulmonary disease, Pharmacol. Rev. 56:515-548).
Сообщалось, что ХОБЛ может быть одним из факторов риска сердечнососудистой заболеваемости и смертности, и что ХОБЛ была пятой по значимости причиной смерти в мире в 2001 году. Распространенность хронической обструктивной болезни легких по данным Глобальной инициативы по хронической обструктивной болезни легких (GOLD) (отношение ОФВ1 к ФВС менее 0,7) составила 17,2% (у мужчин 25,8%; у женщин 9,6%) среди корейцев старше 45 лет (Dong Soon Kim, Young Sam Kim, Ki-Suck Jung, Jung Hyun Chang, Chae-Man Lim, Jae Ho Lee, Soo-Taek Uh, Jae Jeong Shim и Woo Jin Lew, on behalf of the Kopean Academy of Tuberculosis and Respiratory Diseases, Am J Respir Crit Care Med Vol 172. pp 842-847, 2005; Don D. Sin and S.F. Paul Man, Chronic Obstructive Pulmonary Disease as a Risk Factor for Cardiovascular Morbidity and Mortality, Proc Am Thorac Soc Vol 2. pp 8-11, 2005; A Sonia Buist, Mary Ann McBurnie, William M Vollmer, Suzanne Gillespie, Peter Burney, David M Mannino, Ana M В Menezes, Sean D Sullivan, Todd A Lee, Kevin В Weiss, Robert L Jensen, Guy В Marks, Amund Gulsvik, Ewa Nizankowska-Mogilnicka, International variation in the prevalence of COPD (The BOLD Study): a population-based prevalence study, Lancet, Vol 370; 741-750, September 1, 2007).
У большинства пациентов с ХОБЛ наблюдаются все три патологических механизма (хронический обструктивный бронхит, эмфизема и закупорка слизью), которые вызваны курением, но они могут различаться соотношением между эмфиземой и обструктивным бронхитом. В развитых странах курение сигарет является на сегодняшний день наиболее распространенной причиной ХОБЛ, но есть и другие факторы риска, включая загрязнение воздуха (в частности, загрязнение воздуха внутри помещений в результате сжигания топлива), плохое питание и профессиональное воздействие. ХОБЛ характеризуется увеличением темпов естественного снижения легочной функции с возрастом. Медленно прогрессирующее ограничение скорости воздушного потока приводит к дееспособности и преждевременной смерти, и довольно сильно отличается от переменной обструкции дыхательных путей и симптомов при астме, для которых редко наблюдается прогрессирование степени тяжести.
Сообщалось, что патофизиологическое действие и комплекс симптомов ХОБЛ принципиально отличаются от таковых при астме. Хотя и при ХОБЛ и при астме наблюдается воспаление в дыхательных путях, существуют заметные различия в характере воспалительного процесса - различия в воспалительных клетках, медиаторах, ответе на воспаление, анатомическом распространении и ответе на противовоспалительную терапию, например, (a) касательно воспалительных клеток, тучных клеток, эозинофилов, D4 + клеток (Th2), макрофагов и т.д., они главным образом влияют на возникновение астмы, в то время как на возникновение ХОБЛ главным образом влияют нейтрофилы, CD8+ (Tc) и т.д.; (b) касательно медиаторов воспаления, лейкотриенов B, гистамина, ИЛ-4, ИЛ-5, ИЛ-13, эотаксина, RENTES, окислительного стресса и т.д., они главным образом участвуют в возникновении астмы, в то время как в возникновении ХОБЛ главным образом участвуют ФНО-альфа, ИЛ-8, GRO-альфа и т.д.; (c) касательно воспалительного комплекса симптомов, астма показывает воспалительный комплекс симптомов путем воздействия на весь легочный тракт в раннем возрасте, например, AHR (гиперреактивность дыхательных путей), эпителиальный шеддинг, фиброз, непаренхимальное вовлечение, секреция слизи, относительно обратимая обструкция дыхательных путей, кашель, чихание, одышка и т.д., в отличие от ХОБЛ, которая возникает в результате воздействия на периферические дыхательные пути у взрослых и характеризуется различными симптомами, такими как эпителиальная метаплазия, разрушение паренхимы, относительно необратимая обструкция дыхательных путей, хронический бронхит, эмфизема и т.д. (Barnes PJ (2000b) Mechanisms in COPD: differences from asthma. Chest 117 (Suppl): 10S-14S.; Saetta M, Turato G, Maestrelli P, Mapp CE, and Fabbri LM (2001) Cellular and structural bases of chronic obstructive pulmonary disease. Am. J. Respir. Crit. Care Med. 163:1304-1309).
Гистопатологические исследования ХОБЛ показывают преобладающее участие периферических дыхательных путей (бронхиол) и легочной паренхимы, в то время как астма включает воспаление во всех дыхательных путях, но без вовлечения легочной паренхимы. Присутствует обструкция бронхиол с фиброзом и инфильтрацией макрофагами и Т-лимфоцитами. Присутствует разрушение паренхимы легких, а так же увеличение числа макрофагов и CD8 (цитотоксических) Т-лимфоцитов (Saetta М, Di Stefano A, Turato G, Facchini FM, Corbino L, Mapp CE, Maestrelli P, Ciaccia A, and Fabbri LM (1998) CD8T-lymphocytes in peripheral airways of smokers with chronic obstructive pulmonary disease. Am. J. Respir. Crit. Care Med. 157:822-826.). Бронхиальная биопсия показывает, что у больных с тяжелой ХОБЛ наблюдаются аналогичные изменения с инфильтрацией макрофагами и CD8 клетками и увеличенное число нейтрофилов (Di Stefano A, Capelli A, Lusuardi М, BALBo Р, Vecchio С, Maestrelli Р, Mapp CE, Fabbri LM, Donner CF, and Saetta M (1998) Severity of airflow limitation is associated with severity of airway inflammation in smokers. Am. J. Respir. Crit. Care Med. 158:1277-1285.).
В отличие от астмы, эозинофилы не повышены, исключая период обострения или когда у пациента имеется сопутствующая астма (Fabbri L, Beghe В, Caramori G, Papi A, and Saetta M (1998) Similarities and discrepancies between exacerbations of asthma and chronic obstructive pulmonary disease. Thorax 53:803-808; Fabbri LM, Romagnoli M, Corbetta L, Casoni G, Busljetic K, Turato G, Ligabue G, Ciaccia A, Saetta M, and Papi A (2003) Differences in airway inflammation in patients with fixed airflow obstruction due to asthma or chronic obstructive pulmonary disease. Am. J. Respir. Crit. Care Med. 167:418-424.).
Соответственно, терапевтический подход к лечению хронической обструктивной болезни легких (ХОБЛ) должен отличаться от подхода к лечению астмы, однако существующая в настоящее время терапия направлена на неспецифическое лечение обоих заболеваний. Таким образом, не существует противовоспалительной терапии, специально одобренной для ХОБЛ, и имеющиеся противовоспалительные методы терапии были первоначально разработаны для лечения астмы. Задачи, стоящие перед исследованиями ХОБЛ, разноплановы; необходимо раскрыть механизмы, лежащие в основе сложной и гетерогенной патологии этого заболевания; необходимо подтвердить роль воспаления в прогрессировании заболевания (Hele Dj, Belvisi MG, 2003. Novel therapies for the treatment of inflammatory airway disease, Expert. Opino. Invest. Drug, 12:5-18; J Craig Fox and Mary F Fitzgerald; The role of animal models in the pharmacological evaluation of emerging anti-inflammatory agents for the treatment of COPD, Current Opinion in Pharmacology 2009, 9:231-242).
Постоянно разрабатываются улучшенные методы терапии, используемые для лечения астмы, с применением более длительно действующих агонистов, более безопасных стероидов и комбинаций терапий, и антихолинергические средства обеспечивают облегчение симптомов для ХОБЛ. Стероиды используют для лечения обострений, но до сих пор ни для одного метода лечения не было показано, что он может в значительной степени влиять на прогрессирующее снижение функции легких при ХОБЛ или развитие астмы.
Соответственно, до настоящего времени было проведено много исследований, направленных на разработку новых лекарственных средств, способных обеспечивать эффективное и специфическое лечение ХОБЛ.
Особое внимание авторы настоящего изобретения уделяли разработке активного безопасного и эффективного лекарственного средства, полученного из природных источников, таких как растения, животные и т.д., обладающего сильной ингибирующей активностью на образование воспалительных клеток и, наконец, было обнаружено, что экстракт Pseudolysimachion longifolium проявляет высокую противовоспалительную, противоаллергическую и противоастматическую активность (патент Кореи №10-860080), и различные соединения, выделенные из него, такие как верпрозид (6-O-3,4-дигидроксибензоилкаталпол), пикрозид II (6-O-4-гидрокси-3-метоксибензоилкаталпол), верминозид (6-O-3,4-дигидроксициннамоилкаталпол), 6-O-вератроилкаталпол (6-O-3,4-диметоксибензоилкаталпол), минекозид (6-O-3-гидрокси-4-метоксициннамоилкаталпол), каталпол и т.п., также показали высокую противовоспалительную, противоаллергическую и противоастматическую активность (публикация патента Кореи №10-2006-125499).
Pseudolysimachion rotundum var subintegrum представляет собой многолетнее травянистое растение, распространенное в Корее, Китае, Японии, на острове Сахалин и в России.
На основании предыдущих исследований по противовоспалительной, противоаллергической и противоастматической активности экстракта Pseudolysimachion longifolium, описанного в патенте Кореи №10-860080, авторы настоящего изобретения пытались разработать более эффективный способ получения более активных компонентов и в более высоких количествах, выделенных из экстракта Pseudolysimachion rotundum var subintegrum и проявляющих противовоспалительную, противоаллергическую и противоастматическую активность.
Тем не менее, не сообщалось и не был раскрыт эффективный способ получения более активных компонентов и в более высоких количествах, выделенных из экстракта Pseudolysimachion rotundum var subintegrum, проявляющих более высокую и специфическую активность против ХОБЛ, чем описанные в цитируемой выше литературе, раскрытие которых включено в данное описание с помощью ссылок.
Соответственно, авторы настоящего изобретения разработали новый промышленный способ получения очищенного экстракта, содержащего более высокие количества активных компонентов, таких как производные каталпола, из экстракта Pseudolysimachion rotundum var subintegrum, и очищенный экстракт или соединения, выделенные из него, показали высокую активность против ХОБЛ без агонистического эффекта на бета-2-рецепторы в различных исследованиях in vivo с использованием самцов мышей BALB/c, например, в исследовании ингибирования пролиферации и активности воспалительных иммуноцитов и рекрутинга нейтрофилов в легкие, вызванных заболеванием ХОБЛ; исследовании ингибирования воспроизводства хемокинов, вовлеченных в разрушение пневмоцитов, таких как МИП-2/CXCL-2, ФНО-альфа, KC/CXCL-1 (хемокины Gro-альфа), CXCL-8 и т.д.; эффект снижения высвобождения ИЛ-1 бета, ИЛ-6, ФНО-альфа и экспрессии ММП-9 за счет уменьшения активации NF-каппаВ в исследованиях на животных с применением СПФ (свободных от специфической патогенной микрофлоры) крыс линии Спрег-Доули, а также в исследовании in vitro, например, в исследовании ингибирования экспрессии гена MUC5AC (олигомерного слизь/гель-образующего), индуцирующий эффект на экспрессию ИЛ-4 Th2 клетками в исследовании анализа изменений молекулярной экспрессии и т.д.
Раскрытие изобретения
Техническая задача
Согласно настоящему изобретению предложена фармацевтическая композиция и полезный для здоровья пищевой продукт, содержащие новый очищенный экстракт, содержащий активные компоненты, такие как производные каталпола, из Pseudolysimachion rotundum var subintegrum, или по меньшей мере одно соединение, выбранное из группы, состоящей из вератровой кислоты, верпрозида, каталпозида, пикрозида II, изованиллоил каталпола и 6-O-вератроил каталпола, для лечения и профилактики хронической обструктивной болезни легких (ХОБЛ).
Согласно настоящему изобретению также предложено применение нового очищенного экстракта, содержащего активные компоненты, такие как производные каталпола, из Pseudolysimachion rotundum var subintegrum, или по меньшей мере одно соединение, выбранное из группы, состоящей из вератровой кислоты, верпрозида, каталпозида, пикрозида II, изованиллоил каталпола и 6-O-вератроил каталпола, для лечения и профилактики хронической обструктивной болезни легких (ХОБЛ).
Согласно настоящему изобретению также предложен способ лечения или профилактики хронической обструктивной болезни легких (ХОБЛ) у млекопитающего, включающий введение указанному млекопитающему эффективного количества нового очищенного экстракта, содержащего активные компоненты, такие как производные каталпола, из Pseudolysimachion rotundum var subintegrum, или по меньшей мере одно соединение, выбранное из группы, состоящей из вератровой кислоты, верпрозида, каталпозида, пикрозида II, изованиллоил каталпола и 6-O-вератроил каталпола, совместно с их фармацевтически приемлемым носителем.
Решение задачи
Соответственно, задачей настоящего изобретения является обеспечение фармацевтической композиции или полезного для здоровья функционального пищевого продукта, содержащего новый очищенный экстракт, содержащий активные компоненты, такие как производные каталпола, из Pseudolysimachion rotundum var subintegrum, или по меньшей мере одно соединение, выбранное из группы, состоящей из вератровой кислоты, верпрозида, каталпозида, пикрозида II, изованиллоил каталпола и 6-O-вератроил каталпола, для лечения или профилактики хронической обструктивной болезни легких (ХОБЛ).
В настоящем описании термин "производные каталпола" включает верпрозид, каталпозид, пикрозид II, изованиллоил каталпол и 6-O-вератроил каталпол и т.д.
В настоящем описании термин "Pseudolysimachion rotundum var subintegrum" включает культивированное или выросшее в естественных условиях растение и коммерчески доступное растение, но не ограничивается перечисленным в настоящем документе.
В настоящем описании термин "новый очищенный экстракт" включает (a) очищенный экстракт, фракционированный с помощью бутанола (обозначенный как "ATC1" в дальнейшем) и (b) экстракт, очищенный с помощью вторичного фракционирования (обозначенный как "ATC2" в дальнейшем).
Конкретно, термин "очищенный экстракт, фракционированный с помощью бутанола (ATC1)" характеризуется содержанием 15-50% (масс./масс.) верпрозида, 0,3-10% (масс./масс.) вератровой кислоты, 0,5-10% (масс./масс.) каталпозида, 0,3-10% (масс./масс.) пикрозида II, 0,3-10% (масс./масс.) изованиллоил каталпола и 0,3-10% (масс./масс.) 6-O-вератроил каталпола в расчете на массу общего экстракта (100%) Pseudolysimachion rotundum var subintegrum; предпочтительно 20-25% (масс./масс.) верпрозида, 0,5-5% (масс./масс.) вератровой кислоты, 1-5% (масс./масс.) каталпозида, 0,5-5% (масс./масс.) пикрозида II, 0,5-5% (масс./масс.) изованиллоил каталпола и 1-5% (масс./масс.) 6-O-вератроил каталпола в расчете на массу общего экстракта (100%) Pseudolysimachion rotundum var subintegrum;
и/или характеризуется содержанием 12,3-47% (масс./масс.) производных каталпола в общем экстракте (100%) Pseudolysimachion rotundum var subintegrum, при этом массовое соотношение (масс./масс.) производных каталпола в экстракте является следующим: 15,0-18,0 частей (масс./масс.) верпрозида, 2,10-2,60 частей (масс./масс.) каталпозида, 1 часть (масс./масс.) пикрозида II, 1,00-1,30 частей (масс./масс.) изованиллоил каталпола и 2,00-2,30 частей (масс./масс.) 6-O-вератроил каталпола; предпочтительно 16,0-17,0 частей (масс./масс.) верпрозида, 2,20-2,50 частей (масс./масс.) каталпозида, 1 часть (масс./масс.) пикрозида II, 1,10-1,20 частей (масс./масс.) изованиллоил каталпола и 2,10-2,20 частей (масс./масс.) 6-O-вератроил каталпола; более предпочтительно 16,20-16,99 частей (масс./масс.) верпрозида, 2,40-2,45 частей (масс./масс.) каталпозида, 1 часть (масс./масс.) пикрозида II, 1,10-1,19 частей (масс./масс.) изованиллоил каталпола и 2,10-2,19 частей (масс./масс.) 6-O-вератроил каталпола.
Более конкретно, термин "очищенный экстракт, фракционированный с помощью бутанола (ATC1)" приготовлен по способу, включающему: добавление на первой стадии по меньшей мере одного экстрагирующего растворителя, выбранного из воды, низшего C1-C4 спирта, такого как метанол, этанол, бутанол и т.д. или их смесей, предпочтительно смеси воды и этанола, более предпочтительно 30-80% (масс./масс.) этанола в воде, для высушивания Pseudolysimachion rotundum var subintegrum; осуществление на второй стадии по меньшей мере одного способа экстракции, выбранного из экстракции горячей водой в колбе с обратным холодильником, экстракции холодной водой, ультразвуковой или обычной экстракции, предпочтительно экстракции холодной водой, с последующей экстракцией в колбе с обратным холодильником при температуре в диапазоне от 10 до 100°C, предпочтительно от 20 до 90°C, в течение периода времени от 30 минут до 72 часов, предпочтительно от 6 до 48 часов, более предпочтительно экстракции холодной водой при температуре в диапазоне от 10 до 60°C, предпочтительно от 20 до 50°C, в течение периода времени от 30 минут до 72 часов, предпочтительно от 6 до 48 часов, и затем экстракции в колбе с обратным холодильником при температуре в диапазоне от 40 до 120°C, предпочтительно от 60 до 90°C, в течение периода времени от 30 минут до 72 часов, предпочтительно от 6 до 48 часов, многократно, с получением первичного экстракта; суспендирование на 3 стадии первичного экстракта в примерно 0,5-10 кратном объеме (об./об.), предпочтительно примерно 1-5 кратном объеме (об./об.) воды с получением суспендированного экстракта; и добавление примерно 0,5-20 кратного объема (об./об.), предпочтительно примерно 1-10 кратного объема (об./об.) бутанола, разделение на водный слой и слой бутанола, и отбор слоя бутанола с получением фракционированного с помощью бутанола очищенного экстракта (ATC1), содержащего 15-50% (масс./масс.) верпрозида, 0,3-10% (масс./масс.) вератровой кислоты, 0,5-10% (масс./масс.) каталпозида, 0,3-10% (масс./масс.) пикрозида II, 0,3-10% (масс./масс.) изованиллоил каталпола и 0,3-10% (масс./масс.) 6-O-вератроил каталпола в расчете на массу общего экстракта (100%) Pseudolysimachion rotundum var subintegrum, для лечения и профилактики хронической обструктивной болезни легких (ХОБЛ).
Соответственно, согласно другому варианту реализации настоящего изобретения предложен способ получения очищенного экстракта, фракционированного с помощью бутанола (ATC1), выделенного из Pseudolysimachion rotundum var subintegrum, который включает следующие стадии: добавление на первой стадии по меньшей мере одного экстрагирующего растворителя, выбранного из воды, низшего C1-C4 спирта, такого как метанол, этанол, бутанол и т.д. или их смесей, предпочтительно смеси воды и этанола, более предпочтительно 30-80% (масс./масс.) этанола в воде, для высушивания Pseudolysimachion rotundum var subintegrum; осуществление на второй стадии по меньшей мере одного способа экстракции, выбранного из экстракции горячей водой в колбе с обратным холодильником, экстракции холодной водой, ультразвуковой или обычной экстракции, предпочтительно экстракции холодной водой, с последующей экстракцией в колбе с обратным холодильником при температуре в диапазоне от 10 до 100°C, предпочтительно от 20 до 90°C, в течение периода времени от 30 минут до 72 часов, предпочтительно от 6 до 48 часов, более предпочтительно экстракции холодной водой при температуре в диапазоне от 10 до 60°C, предпочтительно от 20 до 50°C, в течение периода времени от 30 минут до 72 часов, предпочтительно от 6 до 48 часов и затем экстракции в колбе с обратным холодильником при температуре в диапазоне от 40 до 120°C, предпочтительно от 60 до 90°C, в течение периода времени от 30 минут до 72 часов, предпочтительно от 6 до 48 часов, многократно, с получением первичного экстракта; суспендирование на 3 стадии первичного экстракта в примерно 0,5-10 кратном объеме (об./об.), предпочтительно примерно 1-5 кратном объеме (об./об.) воды с получением суспендированного экстракта; и добавление примерно 0,5-20 кратного объема (об./об.) бутанола, предпочтительно примерно 1-10 кратного объема (об./об.) бутанола, разделение на водный слой и слой бутанола, и отбор слоя бутанола с получением фракционированного с помощью бутанола очищенного экстракта (ATC1), содержащего 15-50% (масс./масс.) верпрозида, 0,3-10% (масс./масс.) вератровой кислоты, 0,5-10% (масс./масс.) каталпозида, 0,3-10% (масс./масс.) пикрозида II, 0,3-10% (масс./масс.) изованиллоил каталпола и 0,3-10% (масс./масс.) 6-O-вератроил каталпола в расчете на массу общего экстракта (100%) Pseudolysimachion rotundum var subintegrum, для лечения и профилактики хронической обструктивной болезни легких (ХОБЛ).
Конкретно, термин "экстракт, очищенный с помощью вторичного фракционирования (ATC2)" содержит 30-60% (масс./масс.) верпрозида, 0,5-10% (масс./масс.) вератровой кислоты, 2-20% (масс./масс.) каталпозида, 1-10% (масс./масс.) пикрозида II, 1-10% (масс./масс.) изованиллоил каталпола и 2-20% (масс./масс.) 6-O-вератроил каталпола в расчете на массу общего экстракта (100%) Pseudolysimachion rotundum var subintegrum; предпочтительно 40-50% (масс./масс.) верпрозида, 1-5% (масс./масс.) вератровой кислоты, 3-10% (масс./масс.) каталпозида, 2-5% (масс./масс.) пикрозида II, 2-8% (масс./масс.) изованиллоил каталпола и 3-8% (масс./масс.) 6-O-вератроил каталпола в расчете на массу общего экстракта (100%) Pseudolysimachion rotundum var subintegrum;
и/или содержит 36,5-91% (масс./масс.) производных каталпола в общем экстракте (100%) Pseudolysimachion rotundum var subintegrum, при этом массовое соотношение (масс./масс.) производных каталпола в экстракте является следующим: 13,0-16,0 частей (масс./масс.) верпрозида, 2,20-2,50 частей (масс./масс.) каталпозида, 1 часть (масс./масс.) пикрозида II, 1,10-1,40 частей (масс./масс.) изованиллоил каталпола и 2,00-2,20 частей (масс./масс.) 6-O-вератроил каталпола; предпочтительно 14,0-15,0 частей (масс./масс.) верпрозида, 2,30-2,45 частей (масс./масс.) каталпозида, 1 часть (масс./масс.) пикрозида II, 1,20-1,35 частей (масс./масс.) изованиллоил каталпола и 2,00-2,10 частей (масс./масс.) 6-O-вератроил каталпола; более предпочтительно 14,0-14,99 частей (масс./масс.) верпрозида, 2,35-2,43 частей (масс./масс.) каталпозида, 1 часть (масс./масс.) пикрозида II, 1,25-1,34 частей (масс./масс.) изованиллоил каталпола и 2,01-2,09 частей (масс./масс.) 6-O-вератроил каталпола.
Более конкретно, термин "экстракт, очищенный с помощью вторичного фракционирования (ATC2)" приготовлен по способу, включающему: добавление на первой стадии по меньшей мере одного экстрагирующего растворителя, выбранного из воды, низшего C1-C4 спирта, такого как метанол, этанол, бутанол и т.д. или их смесей, предпочтительно смеси воды и этанола, более предпочтительно 30-80% (масс./масс.) этанола в воде, для высушивания Pseudolysimachion rotundum var subintegrum; осуществление на второй стадии по меньшей мере одного способа экстракции, выбранного из экстракции горячей водой в колбе с обратным холодильником, экстракции холодной водой, ультразвуковой или обычной экстракции, предпочтительно экстракции холодной водой с последующей экстракцией в колбе с обратным холодильником при температуре в диапазоне от 10 до 100°C, предпочтительно от 20 до 90°C, в течение периода времени от 30 минут до 72 часов, предпочтительно от 6 до 48 часов, более предпочтительно экстракции холодной водой при температуре в диапазоне от 10 до 60°C, предпочтительно от 20 до 50°C, в течение периода времени от 30 минут до 72 часов, предпочтительно от 6 до 48 часов, и затем экстракции в колбе с обратным холодильником при температуре в диапазоне от 40 до 120°C, предпочтительно от 60 до 90°C, в течение периода времени от 30 минут до 72 часов, предпочтительно от 6 до 48 часов, многократно, с получением первичного экстракта; суспендирование на 3 стадии первичного экстракта в примерно 0,5-10 кратном объеме (об./об.) воды, предпочтительно примерно 1-5 кратном объеме (об./об.) воды, с получением суспендированного экстракта; добавление примерно 0,5-20 кратного объема (об./об.), предпочтительно примерно 1-10 кратного объема (об./об.) бутанола, разделение на водный слой и слой бутанола, и отбор слоя бутанола с получением фракционированного с помощью бутанола (ATC1) очищенного экстракта; и осуществление по меньшей мере одного способа очистки очищенного экстракта, фракционированного с помощью бутанола (ATC1), при этом способ очистки выбран из группы, состоящей из обращенно-фазовой распределительной хроматографии, нормально-фазовой распределительной хроматографии, ионообменной хроматографии и гель-хроматографии, с получением экстракта, очищенного с помощью вторичного фракционирования (ATC2), содержащего 30-60% (масс./масс.) верпрозида, 0,5-10% (масс./масс.) вератровой кислоты, 2-20% (масс./масс.) каталпозида, 1-10% (масс./масс.) пикрозида II, 1-10% (масс./масс.) изованиллоил каталпола и 2-20% (масс./масс.) 6-O-вератроил каталпола в расчете на массу общего экстракта (100%) Pseudolysimachion rotundum var subintegrum, для лечения или профилактики хронической обструктивной болезни легких (ХОБЛ).
Соответственно, согласно другому варианту реализации настоящего изобретения предложен способ получения нового экстракта, очищенного с помощью вторичного фракционирования (ATC2), выделенного из Pseudolysimachion rotundum var subintegrum, который включает следующие стадии: добавление на первой стадии по меньшей мере одного экстрагирующего растворителя выбранного из воды, низшего C1-C4 спирта, такого как метанол, этанол, бутанол и т.д. или их смесей, предпочтительно смеси воды и этанола, более предпочтительно 30-80% (масс./масс.) этанола в воде, для высушивания Pseudolysimachion rotundum var subintegrum; осуществление на второй стадии по меньшей мере одного способа экстракции, выбранного из экстракции горячей водой в колбе с обратным холодильником, экстракции холодной водой, ультразвуковой или обычной экстракции, предпочтительно экстракции холодной водой с последующей экстракцией в колбе с обратным холодильником при температуре в диапазоне от 10 до 100°C, предпочтительно от 20 до 90°C, в течение периода времени от 30 минут до 72 часов, предпочтительно от 6 до 48 часов, более предпочтительно экстракции холодной водой при температуре в диапазоне от 10 до 60°C, предпочтительно от 20 до 50°C, в течение периода времени от 30 минут до 72 часов, предпочтительно от 6 до 48 часов, и затем экстракции в колбе с обратным холодильником при температуре в диапазоне от 40 до 120°C, предпочтительно от 60 до 90°C, в течение периода времени от 30 минут до 72 часов, предпочтительно от 6 до 48 часов, многократно, с получением первичного экстракта; суспендирование на 3 стадии первичного экстракта в примерно 0,5-10 кратном объеме (об./об.), предпочтительно примерно 1-5 кратном объеме (об./об.) воды с получением суспендированного экстракта; добавление примерно 0,5-20 кратного объема (об./об.), предпочтительно примерно 1-10 кратного объема (об./об.) бутанола, разделение на водный слой и слой бутанола, отбор слоя бутанола с получением фракционированного с помощью бутанола (ATC1) очищенного экстракта; и осуществление по меньшей мере одного дополнительного способа очистки очищенного экстракта, фракционированного с помощью бутанола (ATC1), при этом способ очистки выбран из группы, состоящей из обращенно-фазовой распределительной хроматографии, нормально-фазовой распределительной хроматографии, ионообменной хроматографии и гель-хроматографии, с получением экстракта, очищенного с помощью вторичного фракционирования (ATC2), содержащего 30-60% (масс./масс.) верпрозида, 0,5-10% (масс./масс.) вератровой кислоты, 2-20% (масс./масс.) каталпозида, 1-10% (масс./масс.) пикрозида II, 1-10% (масс./масс.) изованиллоил каталпола и 2-20% (масс./масс.) 6-O-вератроил каталпола в расчете на массу общего экстракта (100%) Pseudolysimachion rotundum var subintegrum, для лечения или профилактики хронической обструктивной болезни легких (ХОБЛ).
Конкретно, термин "дополнительный способ очистки" выбран из (i) обращенно-фазовой распределительной хроматографии, (ii) нормально-фазовой распределительной хроматографии, (iii) ионообменной хроматографии или (iv) гель-хроматографии, предпочтительно обращенно-фазовой распределительной хроматографии, или любого вида хроматографии с применением любой смолы в качестве неподвижной фазы, которая может удерживать неполярное вещество с элюированием полярного вещества, например, смола сефадекс, такая как сефадекс, сефадекс LH20, сефадекс G-25, сефадекс G-10, сефароза, супердекс, смола метилкрилата, карбоксиметилцеллюлоза, сульфопропилцеллюлоза, карбоксиметил сефадекс, сульфопропил сефадекс, карбоксиметил сефароза, сульфопропил сефароза и т.п.; полимерная смола с обращенной фазой, полученная с применением сополимера стирола-дивинилбензола, такого как полимер X, HP20, PRP-h1 полимер и т.п., или метакрилатная смола-носитель и т.д.; силикагель с нормальной фазой, такой как продукт BPC (хроматография на неподвижной фазе), продукт силикагеля, производимый YMC Co. Ltd, продукт силикагеля, производимый DAISO Co. Ltd, продукт силикагеля, производимый ASAHI Co. Ltd, продукт силикагеля, производимый COSMOSYL Co. Ltd и т.п., продукт ОДС, служащий наполнителем для ВЭЖХ, такой как продукт ОДС, производимый YMC Co. Ltd, продукт ОДС, производимый DAISO Co. Ltd, продукт ОДС, производимый ASAHI Co. Ltd, продукт ОДС, производимый CHEMCO Co. Ltd, продукт ОДС, производимый Merck Co. Ltd, продукт ОДС, производимый COSMOSYL Co. Ltd, продукт ОДС, производимый FUJI Co. Ltd и т.п.
В предпочтительном варианте реализации, в котором применяют (i) обращенно-фазовую распределительную хроматографию в качестве дополнительного способа очистки согласно настоящему изобретению, "неподвижной фазой в вышеописанной обращенно-фазовой распределительной хроматографии" может быть любая неподвижная фаза, такая как вещество с обращенной фазой, которое способно удержать неполярное вещество и при этом элюироваться полярное вещество, предпочтительно неподвижная фаза на основе силикагеля, неподвижная фаза на основе полимера, такого как полистирол и т.д. и т.п., более предпочтительно производные силикагеля C2, C4, C6, C8, C10, C12, 14, C16, C18 и т.п.; или неподвижная фаза на основе полимера, такая как PS-2, Oasis HLB и т.п., и наиболее предпочтительно продукт на основе силикагеля с обращенной фазой (C18(IV)-D), ODS-A/ODS-AQ, производимый YMC Co. Ltd., продукт SP-C-ODS, производимый CHEMCO Co. Ltd., продукт SP-ODS-RPS, производимый DAISO Co. Ltd., продукт 5C18, производимый COSMOSYL Co. Ltd, продукт Хроматорекс (Chromatorex), производимый FUJI Co. Ltd и т.п.
В предпочтительном варианте реализации, в котором в качестве дополнительного способа очистки согласно настоящему изобретению применяют (i) обращенно-фазовую распределительную хроматографию, "подвижной фазой в вышеописанной (i) обращенно-фазовой распределительной хроматографии" может быть по меньшей мере один растворитель, выбранный из воды, ацетонитрила, низшего спирта, такого как метанол, этанол, бутанол и т.д., тетрагидрофуран (ТГФ) или их смесь, предпочтительно вода, низший спирт, такой как метанол, этанол, бутанол и т.д. или их смесь, более предпочтительно смесь растворителя из воды и метанола, наиболее предпочтительно смесь растворителя из воды и метанола с градиентом от 90:10 (об./об.) до 60:40 (об./об.), для элюирования полярного вещества.
В предпочтительном варианте реализации, в котором в качестве дополнительного способа очистки согласно настоящему изобретению применяют (ii) нормально-фазовую распределительную хроматографию, "неподвижной фазой в вышеописанной нормально-фазовой распределительной хроматографии" может быть любая неподвижная фаза, такая как вещество с нормальной фазой, которое может удержать полярное вещество и при этом элюироваться неполярное вещество, предпочтительно силикагель, флюоросил или неподвижная фаза на основе окиси алюминия, неподвижная фаза на основе полимера с функциональной группой CN, диол или NH2 и т.п., более предпочтительно силикагель, флюоросил или неподвижная фаза на основе окиси алюминия и т.д.
В предпочтительном варианте реализации, в котором в качестве дополнительного способа очистки согласно настоящему изобретению применяют (ii) нормально-фазовую распределительную хроматографию, "подвижной фазой в вышеописанной (ii) нормально-фазовой распределительной хроматографии" может быть по меньшей мере один растворитель, выбранный из гексана, гептана, этилацетата, этанола, диэтилового эфира, 2-пропанола или их смеси, предпочтительно гексан, гептан, этилацетат или их смесь, для элюирования неполярного вещества.
В предпочтительном варианте реализации, в котором в качестве дополнительного способа очистки согласно настоящему изобретению применяют (iii) ионообменную хроматографию, "неподвижной фазой в вышеописанной (iii) ионообменной хроматографии" может быть любая высокомолекулярная неподвижная фаза, такая как неподвижная фаза, которая имеет заряженный мостиковый фрагмент, предпочтительно катионообменная смола, анионообменная смола или синтетический адсорбент и т.п., более предпочтительно сильнокислая катионообменная смола, такая как AG 50W-x8, Amberlite IR-120, Dowex 60W-x8, SKIB и т.д., слабокислая катионообменная смола, такая как Amberlite IRA-67, Dowex 3-х4А и т.д., сильно основная катионообменная смола, такая как DIAION SKIB, DIAION PK216, DIAION CR20, DIAION UBK555 (Mitsubishi Chemical Co.), TRILITE SPC 160H, TRILITE SPC 180H, TRILITE SPC 400JH (Samyang Co. Ltd.), AMBERLITE 200C Na, AMBERLITE CG50, AMBERLITE CR1310 Na, AMBERJET 200H, AMBERLYST 131 WET, ALBERLYST 232 WET (ROHM and HAAS Co. Ltd.), Lewatit VP OC 1800, Lewatit VP OC 1812, Lewatit MDS1368 Na, Lewaitit K1221 (Bayer Co. Ltd.), PUROLITE PCR833CA, PUROLITE С145 (Purolite Co. Ltd.), MFG210, MFG 250 (Finex Co. Ltd.) и т.д.; сильно основная анионообменная смола, такая как SA11A, SA20A, SA21A т.д.; или CaptoQ (GE Healthcare Co. Ltd.), или смола, имеющая аналогичное свойство указанной, такая как Toyopearl QEA (Tosoh Co. Ltd.), Q сефароза FF (GE Healthcare Co. Ltd.), Fractogel EMD, Fractogel TMAE, Fractogel HICAP (Merck KGaA Co. Ltd or Darmstadt Co. Ltd.); наиболее предпочтительно, SA21A; адсорбент, такой как SP207, HP20SS, HP20 и т.д., более предпочтительно HP 20.
В предпочтительном варианте реализации, в котором в качестве дополнительного способа очистки согласно настоящему изобретению применяют (iv) гель-хроматографию, "неподвижной фазой в вышеописанной (iv) гель-хроматографии" может быть любая гелевая неподвижная фаза, такая как неподвижная фаза, которая может разделять молекулы образца по размеру, предпочтительно, гель на основе декстрана, такой как сефадекс (например, сефадекс G-25), гель на основе полиакриламида, такой как сефакрил (например, сефакрил S400), гель на основе агарозы, такой как супероза или сефароза (например, сефароза CL-4B) или их комбинации, такие как комбинация супердекса 200 с декстраном (например, Сефадекс™) или сшитый агарозный гель (Супероза™) и т.п., однако, не ограничивается перечисленными. "Подвижной фазой в вышеописанной (iv) гель-хроматографии" может быть буферный раствор, выбранный из группы, состоящей из натрий-ацетатного буфера, натрий-фосфатного буфера, аммоний-ацетатного буфера, MES (2-(N-морфолино)этансульфоновая кислота, Бис-Трис[2-Бис(2-гидроксиэтил)амино-2-(гидроксиметил)-1,3-пропандиол], ADA [N-(2-ацетамидо)иминодиацетат)], PIPES [пиперазин-N,N′-Бис(2-этансульфоновая кислота)], BES [N,N′-Бис(2-гидроксиэтил)-2-аминоэтансульфоновая кислота), MOPS [3-(N-морфолино)пропансульфоновая кислота)], TES (N-Трис(гидроксиметил)метил-2-аминоэтансульфоновая кислота], HEPES [N-2-гидроксиэтил-пиперазин-N′-2-этансульфоновая кислота)], и т.п.; предпочтительно натрий-ацетатный буфер, натрий-фосфатный буфер или аммоний-ацетатный буфер.
В предпочтительном варианте реализации настоящего изобретения может также применяться (v) гель-проникающая хроматография или гель-фильтрационная хроматография в дополнении к (i) обращенно-фазовой распределительной хроматографии, (ii) нормально-фазовой распределительной хроматографии, (iii) ионообменной хроматографии, (iv) гель-хроматографии или их комбинации, в качестве дополнительного способа очистки согласно настоящему описанию.
Согласно настоящему изобретению предложен новый очищенный экстракт, такой как (a) очищенный экстракт, фракционированный с помощью бутанола (обозначенный как "ATC1" в дальнейшем) или (b) экстракт, очищенный с помощью вторичного фракционирования (обозначенный как "ATC2" в дальнейшем), полученный вышеописанными способами получения.
Согласно настоящему изобретению также предложен новый очищенный экстракт, фракционированный с помощью бутанола (ATC1), из экстракта Pseudolysimachion rotundum var subintegrum, полученный вышеописанными способами получения, который содержит 12,3-47% (масс./масс.) производных каталпола в общем экстракте (100%) Pseudolysimachion rotundum var subintegrum, при этом указанные производные каталпозида состоят из 15-50% (масс./масс.) верпрозида, 0,3-10% (масс./масс.) вератровой кислоты, 0,5-10% (масс./масс.) каталпозида, 0,3-10% (масс./масс.) пикрозида II, 0,3-10% (масс./масс.) изованиллоил каталпола и 0,3-10% (масс./масс.) 6-O-вератроил каталпола, предпочтительно 20-25% (масс./масс.) верпрозида, 0,5-5% (масс./масс.) вератровой кислоты, 1-5% (масс./масс.) каталпозида, 0,5-5% (масс./масс.) пикрозида II, 0,5-5% (масс./масс.) изованиллоил каталпола и 1-5% (масс./масс.) 6-O-вератроил каталпола в расчете на массу общего экстракта (100%) Pseudolysimachion rotundum var subintegrum.
Согласно настоящему изобретению также предложен новый очищенный экстракт, фракционированный с помощью бутанола (ATC1), из экстракта Pseudolysimachion rotundum var subintegrum, полученный вышеописанными способами получения, при этом массовое соотношение (масс./масс.) производных каталпозида в экстракте является следующим: 15,0-18,0 частей (масс./масс.) верпрозида, 2,10-2,60 частей (масс./масс.) каталпозида, 1 часть (масс./масс.) пикрозида II, 1,00-1,30 частей (масс./масс.) изованиллоил каталпола и 2,00-2,30 частей (масс./масс.) 6-O-вератроил каталпола, предпочтительно 16,0-17,0 частей (масс./масс.) верпрозида, 2,20-2,50 частей (масс./масс.) каталпозида, 1 часть (масс./масс.) пикрозида II, 1,10-1,20 частей (масс./масс.) изованиллоил каталпола и 2,10-2,20 частей (масс./масс.) 6-O-вератроил каталпола, более предпочтительно 16,20-16,99 частей (масс./масс.) верпрозида, 2,40-2,45 частей (масс./масс.) каталпозида, 1 часть (масс./масс.) пикрозида II, 1,10-1,19 частей (масс./масс.) изованиллоил каталпола и 2,10-2,19 частей (масс./масс.) 6-O-вератроил каталпола.
Согласно настоящему изобретению также предложен новый экстракт, очищенный с помощью вторичного фракционирования (ATC2), из экстракта Pseudolysimachion rotundum var subintegrum, полученный вышеописанными способами получения, который содержит 36,5-91% (масс./масс.) производных каталпола в общем экстракте (100%) Pseudolysimachion rotundum var subintegrum, при этом указанные производные каталпола состоят из 30-60% (масс./масс.) верпрозида, 0,5-10% (масс./масс.) вератровой кислоты, 2-20% (масс./масс.) каталпозида, 1-10% (масс./масс.) пикрозида II, 1-10% (масс./масс.) изованиллоил каталпола и 2-20% (масс./масс.) 6-O-вератроил каталпола в расчете на массу общего экстракта (100%) Pseudolysimachion rotundum var subintegrum, предпочтительно 40-50% (масс./масс.) верпрозида, 1-5% (масс./масс.) вератровой кислоты, 3-10% (масс./масс.) каталпозида, 2-5% (масс./масс.) пикрозида II, 2-8% (масс./масс.) изованиллоил каталпола и 3-8% (масс./масс.) 6-O-вератроил каталпола в расчете на массу общего экстракта (100%) Pseudolysimachion rotundum var subintegrum.
Согласно настоящему изобретению также предложен новый экстракт, очищенный с помощью вторичного фракционирования (ATC2), из экстракта Pseudolysimachion rotundum var subintegrum, полученный вышеописанными способами получения, при этом массовое соотношение (масс./масс.) производных каталпола в экстракте является следующим: 13,0-16,0 частей (масс./масс.) верпрозида, 2,20-2,50 частей (масс./масс.) каталпозида, 1 часть (масс./масс.) пикрозида II, 1,10-1,40 частей (масс./масс.) изованиллоил каталпола и 2,00-2,20 частей (масс./масс.) 6-O-вератроил каталпола, предпочтительно 14,0-15,0 частей (масс./масс.) верпрозида, 2,30-2,45 частей (масс./масс.) каталпозида, 1 часть (масс./масс.) пикрозида II, 1,20-1,35 частей (масс./масс.) изованиллоил каталпола и 2,00-2,10 частей (масс./масс.) 6-O-вератроил каталпола, более предпочтительно 14,50-14,99 частей (масс./масс.) верпрозида, 2,35-2,43 частей (масс./масс.) каталпозида, 1 часть (масс./масс.) пикрозида II, 1,15-1,24 частей (масс./масс.) изованиллоил каталпола и 2,01-2,09 частей (масс./масс.) 6-O-вератроил каталпола.
Термин "очищенный экстракт", раскрытый в настоящем описании, может быть использован в сухой форме, полученной способом испарения в вакууме, способом сублимационной сушки или способом сушки горячим воздухом и т.д.
Термин "профилактика", раскрытый в настоящем описании, включает любое воздействие, направленное на ингибирование или замедление возникновения определенного заболевания или расстройства, раскрытого здесь, с помощью введения композиции настоящего изобретения, термин "лечение", раскрытый в настоящем описании, включает любое воздействие, направленное на облегчение или благоприятное изменение симптомов, связанных с определенным заболеванием или расстройством, раскрытым в настоящем описании, путем введения композиции настоящего изобретения.
Авторы настоящего изобретения обнаружили, что новый промышленный способ получения очищенного экстракта может обеспечить активные компоненты в большем количестве, т.е. от 36,5% до 91,0% (масс./масс.), таких как производные каталпола, из экстракта Pseudolysimachion rotundum var subintegrum, по сравнению с неочищенным экстрактом, полученным обычным способом, раскрытым в известном уровне техники, где содержание производных каталпола составляет только 8,49% (масс./масс.) по данным различных ВЭЖХ анализов; например, очищенный экстракт настоящего изобретения (ATC1) содержит 17,6% (масс./масс.) верпрозида, 0,72% (масс./масс.) вератровой кислоты, 2,62% (масс./масс.) каталпозида, 1,08% (масс./масс.) пикрозида II, 1,26% (масс./масс.) изованиллоил каталпола и 2,36% (масс./масс.) 6-O-вератроил каталпола (см. Пример 2), и очищенный экстракт настоящего изобретения (ATC2) содержит 43,83% (масс./масс.) верпрозида, 1,80% (масс./масс.) вератровой кислоты, 7,07% (масс./масс.) каталпозида, 2,93% (масс./масс.) пикрозида II, 3,85% (масс./масс.) изованиллоил каталпола и 6,15% (масс./масс.) 6-O-вератроил каталпола, в то время как неочищенный экстракт (CX), полученный обычным способом, раскрытым в известном уровне техники, содержит только 5,9% (масс./масс.) верпрозида, 0,21% (масс./масс.) вератровой кислоты, 0,82% (масс./масс.) каталпозида, 0,40% (масс./масс.) пикрозида II, 0,42% (масс./масс.) изованиллоил каталпола и 0,74% (масс./масс.) 6-O-вератроил каталпола в расчете на массу общего экстракта (100%) Pseudolysimachion rotundum var subintegrum; неочищенный экстракт, так же как и очищенный экстракт или выделенные из него соединения показали высокую активность против ХОБЛ без агонистического эффекта на бета-2-рецепторы в различных исследованиях in vivo с использованием самцов BALB/c мышей, например, исследовании ингибирования пролиферации и активности воспалительных иммуноцитов и рекрутинга нейтрофилов в легкие, вызванных заболеванием ХОБЛ; исследовании ингибирования воспроизводства хемокинов, вовлеченных в разрушение пневмоцитов, таких как МИП-2/CXCL-2, ФНО-альфа, KC/CXCL-1 (хемокины Gro-альфа), и CXCL-8 и т.д.; эффект снижения высвобождения ИЛ-1 бета, ИЛ-6, ФНО-альфа и ММП-9 экспрессии с помощью уменьшения активации NF-каппаВ в исследованиях на животных с применением СПФ (свободный от специфической патогенной микрофлоры) крыс линии Спрег-Доули, а также исследовании in vitro, например, исследовании ингибирования экспрессии гена MUC5AC (олигомерного слизь/гель-образующего), индуцирующий эффект на экспрессию ИЛ-4 Th2 клетками в исследовании анализа изменений молекулярной экспрессии и т.д.
Авторы настоящего изобретения обнаружили максимальное массовое отношение между вератровой кислотой, верпрозидом, каталпозидом, пикрозидом II, изованиллоил каталполом и 6-O-вератроил каталполом для лечения и профилактики хронической обструктивной болезни легких (ХОБЛ), т.е. верпрозид (ATC1-68,6%; ATC2-66,8%; расчитанный диапазон содержания на основании общей массы соединений: 45-90% (масс./масс.)), вератровая кислота (ATC1-2,8%; ATC2-2,7%; расчитанный диапазон содержания на основании общей массы соединений: 1,5-4,0% (масс./масс.)), каталпозид (ATC1-10,2%; ATC2-10,8%; расчитанный диапазон содержания на основании общей массе соединений: 7,0-14,0% (масс./масс.)), пикрозид II (ATC1-4,2%; ATC2-4,5%; расчитанный диапазон содержания на основании общей массы соединений: 3,0-6,0% (масс./масс.)), изованиллоил каталпол (ATC1-4,9%; ATC2-5,8%; расчитанный диапазон содержания на основании общей массы соединений: 3,0-8,0% (масс./масс.)) и 6-O-вератроил каталпол (ATC1-9,2%; ATC2-9,4%; рассчитанный диапазон содержания на основании общей массы соединений: 6,0-12,0% (масс./масс.)).
В соответствии с другим аспектом настоящего изобретения, согласно настоящему изобретению предложена фармацевтическая композиция или функциональный полезный для здоровья пищевой продукт, содержащие комбинации соединений в следующем массовом соотношении: 40-93% верпрозида, 1,0-10% вератровой кислоты, 2,0-25% каталпозида, 1,0-15% пикрозида II, 1,0-15% изованиллоил каталпола и 2,0-25% 6-O-вератроил каталпола, предпочтительно 45-90% верпрозида, 1,0-1,0% вератровой кислоты, 3,0-15% каталпозида, 2,0-10% пикрозида II, 2,0-10% изованиллоил каталпола и 2,0-15% 6-O-вератроил каталпола, для лечения или профилактики хронической обструктивной болезни легких (ХОБЛ).
Согласно настоящему изобретению предложена фармацевтическая композиция или функциональный полезный для здоровья пищевой продукт, содержащие комбинации соединений в следующем массовом соотношении: 40-93% верпрозида, 1,0-10% вератровой кислоты, 2,0-25% каталпозида, 1,0-15% пикрозида II, 1,0-15% изованиллоил каталпола и 2,0-25% 6-O-вератроил каталпола, предпочтительно 45-90% верпрозида, 1,0-7,0% вератровой кислоты, 3,0-15% каталпозида, 2,0-10% пикрозида II, 2,0-10% изованиллоил каталпола и 2,0-15% 6-O-вератроил каталпола, и фармацевтически приемлемые носители или вспомогательные вещества, для лечения или профилактики хронической обструктивной болезни легких (ХОБЛ).
В соответствии с другим аспектом настоящего изобретения, согласно настоящему изобретению предложена фармацевтическая композиция или функциональный полезный для здоровья пищевой продукт, содержащие новый очищенный экстракт, содержащий активные компоненты, полученные вышеописанными способами, или по меньшей мере одно соединение, выбранное из группы, состоящей из вератровой кислоты, верпрозида, каталпозида, пикрозида II, изованиллоил каталпола и 6-O-вератроил каталпола, для лечения или профилактики хронической обструктивной болезни легких (ХОБЛ).
Согласно настоящему изобретению предложена фармацевтическая композиция, содержащая новый очищенный экстракт, содержащий активные компоненты, полученные вышеописанными способами, или по меньшей мере одно соединение, выбранное из группы, состоящей из вератровой кислоты, верпрозида, каталпозида, пикрозида II, изованиллоил каталпола и 6-O-вератроил каталпола, и фармацевтически приемлемые носители или вспомогательные вещества, для лечения или профилактики хронической обструктивной болезни легких (ХОБЛ).
В соответствии с другим аспектом настоящего изобретения, согласно настоящему изобретению предложено также применение нового очищенного экстракта, полученного вышеописанными способами, или по меньшей мере одного соединения, выбранного из группы, состоящей из вератровой кислоты, верпрозида, каталпозида, пикрозида II, изованиллоил каталпола и 6-O-вератроил каталпола, для производства лекарственных средств для применения для лечения или профилактики хронической обструктивной болезни легких (ХОБЛ).
Термин "фармацевтически приемлемые носители или вспомогательные вещества", определенный здесь, включает «фармацевтические добавки, неактивные компоненты, применяемые в составе лекарственных средств. Они включают красители, ароматизаторы, связующие вещества, смягчающие вещества, наполнители, смазывающие вещества, консерванты и вещества многих других классов. Обычные вспомогательные вещества включают кукурузный крахмал, лактозу, тальк, стеарат магния, сахарозу, желатин, стеарат кальция, диоксид кремния, шеллак и лак, которые хорошо известны в данной области (см., домашнюю страницу «Food and Drug Administration»: www.fda.gov или информацию о лекарственных средствах онлайн: www.drugs.com) или ранее вышедших публикациях (например, Rowe, Raymond С et al., Handbook of Pharmaceutical Excipients, Pharmaceutical Press, 7th Edition, 2012).
В соответствии с другим аспектом настоящего изобретения, согласно настоящему изобретению также предложен способ лечения или профилактики хронической обструктивной болезни легких (ХОБЛ) у млекопитающих, причем этот способ включает введение терапевтически эффективного количества нового очищенного экстракта, полученного вышеописанными способами, или по меньшей мере одного соединения, выбранного из группы, состоящей из вератровой кислоты, верпрозида, каталпозида, пикрозида II, изованиллоил каталпола и 6-О-вератроил каталпола, млекопитающему, страдающему хронической обструктивной болезнью легких (ХОБЛ).
В соответствии с другим аспектом настоящего изобретения, согласно настоящему изобретению также предложен способ лечения или профилактики хронической обструктивной болезни легких (ХОБЛ) у млекопитающих, причем этот способ включает введение композиции, содержащей терапевтически эффективное количество нового очищенного экстракта, полученного вышеописанными способами, или по меньшей мере одного соединения, выбранного из группы, состоящей из вератровой кислоты, верпрозида, каталпозида, пикрозида II, изованиллоил каталпола и 6-O-вератроил каталпола, и фармацевтически приемлемые носители или вспомогательные вещества, млекопитающему, страдающему хронической обструктивной болезнью легких (ХОБЛ).
В соответствии с другим аспектом настоящего изобретения, согласно настоящему изобретению также предложен способ лечения или профилактики хронической обструктивной болезни легких (ХОБЛ) у млекопитающих, причем этот способ включает введение терапевтически эффективного количества комбинации соединений в следующем массовом соотношении: 40-93% верпрозида, 1,0-10% вератровой кислоты, 2,0-25% каталпозида, 1,0-15% пикрозида II, 1,0-15% изованиллоил каталпола и 2,0-25% 6-O-вератроил каталпола, предпочтительно 45-90% верпрозида, 1,0-7,0% вератровой кислоты, 3,0-15% каталпозида, 2,0-10% пикрозида II, 2,0-10% изованиллоил каталпола и 2,0-15% 6-O-вератроил каталпола, млекопитающему, страдающему хронической обструктивной болезнью легких (ХОБЛ).
В соответствии с другим аспектом настоящего изобретения, согласно настоящему изобретению также предложен способ лечения или профилактики хронической обструктивной болезни легких (ХОБЛ) у млекопитающих, причем этот способ включает введение композиции, содержащей терапевтически эффективное количество комбинации соединений в следующем массовом соотношении: 40-93% верпрозида, 1,0-10% вератровой кислоты, 2,0-25% каталпозида, 1,0-15% пикрозида II, 1,0-15% изованиллоил каталпола и 2,0-25% 6-O-вератроил каталпола, предпочтительно 45-90% верпрозида, 1,0-7,0% вератровой кислоты, 3,0-15% каталпозида, 2,0-10% пикрозида II, 2,0-10% изованиллоил каталпола и 2,0-15% 6-O-вератроил каталпола, и фармацевтически приемлемые носители или вспомогательные вещества, млекопитающему, страдающему хронической обструктивной болезнью легких (ХОБЛ).
В соответствии с другим аспектом настоящего изобретения, также предложено применение композиции, содержащей новый очищенный экстракт, полученный вышеописанными способами, или по меньшей мере одно соединение, выбранное из группы, состоящей из вератровой кислоты, верпрозида, каталпозида, пикрозида II, изованиллоил каталпола и 6-O-вератроил каталпола, и фармацевтически приемлемые носители или вспомогательные вещества, для производства лекарственных средств, применяемых для лечения или профилактики хронической обструктивной болезни легких (ХОБЛ).
В соответствии с другим аспектом настоящего изобретения, также предложено применение композиции, содержащей комбинации соединений в следующем массовом соотношении: 40-93% верпрозида, 1,0-10% вератровой кислоты, 2,0-25% каталпозида, 1,0-15% пикрозида II, 1,0-15% изованиллоил каталпола и 2,0-25% 6-O-вератроил каталпола, предпочтительно 45-90% верпрозида, 1,0-7,0% вератровой кислоты, 3,0-15% каталпозида, 2,0-10% пикрозида II, 2,0-10% изованиллоил каталпола и 2,0-15% 6-O-вератроил каталпола, и фармацевтически приемлемые носители или вспомогательные вещества, для производства лекарственных средств, применяемых для лечения или профилактики хронической обструктивной болезни легких (ХОБЛ).
Композиция настоящего изобретения для лечения и профилактики хронической обструктивной болезни легких (ХОБЛ) может содержать вышеуказанные экстракты или соединения в количестве 0,1~99%, предпочтительно 0,1~50% в расчете на общую массу композиции.
Композиция согласно настоящему изобретению может быть приготовлена в виде фармацевтической композиции, содержащей фармацевтически приемлемые носители, вспомогательные вещества или разбавители, например, лактозу, декстрозу, сахарозу, сорбит, маннит, ксилит, эритрит, мальтит, крахмалы, гуммиарабик, альгинат, желатин, фосфат кальция, силикат кальция, целлюлозу, метилцеллюлозу, поливинилпирролидон, воду, метилгидроксибензоат, пропилгидроксибензоат, тальк, стеарат магния и минеральное масло. Составы могут дополнительно включать наполнители, агенты, препятствующие агглютинации, смазывающие агенты, смачивающие агенты, ароматизаторы, эмульгаторы, консерванты и т.п. Композиции изобретения могут быть изготовлены так, чтобы обеспечить быстрое, длительное или замедленное высвобождение активного компонента после их введения пациенту с применением любого способа, хорошо известного в данной области.
Например, композиции настоящего изобретения могут быть растворимы в маслах, пропиленгликоле или других растворителях, которые обычно применяют для приготовления инъекционных форм. Подходящие примеры носителей включают физиологический солевой раствор, полиэтиленгликоль, этанол, растительные масла, изопропилмиристат и т.п., но не ограничиваются ими. Для местного применения, экстракт настоящего изобретения можно изготавливать в виде мазей и кремов.
Фармацевтические составы, включающие композицию настоящего изобретения, могут быть приготовлены в любой форме, такой как лекарственная форма для перорального применения (порошок, таблетка, капсула, мягкая капсула, лекарственное средство на водной основе, сироп, эликсиры, пилюли, порошок, саше, гранулы), или препарат для местного применения (крем, мазь, лосьон, гель, бальзам, пластырь, паста, раствор для распрыскивания, аэрозоль и т.п.) или препарат для инъекций (раствор, суспензия, эмульсия).
Композицию настоящего изобретения в фармацевтических лекарственных формах можно применять в виде их фармацевтически приемлемых солей и также можно применять по отдельности или в соответствующей комбинации, а также в комбинации с другими фармацевтически активными соединениями.
Требуемая доза экстракта или соединения настоящего изобретения изменяется в зависимости от состояния и массы субъекта, тяжести состояния, формы лекарственного средства, способа и периода введения, и может быть выбрана специалистом в данной области. Тем не менее, для получения требуемых эффектов, обычно рекомендуют введение количества экстракта настоящего изобретения в интервале от 0,0001 до 1000 мг/кг, предпочтительно от 0,001 до 100 мг/кг массы/день. Дозу можно вводить однократно или разделить на несколько приемов в день.
Фармацевтическую композицию настоящего изобретения можно вводить субъекту, представляющему собой животное, такое как млекопитающие (крыса, мышь, домашние животные или человек) различными путями. Рассматриваются все способы введения, например, можно вводить перорально, ректально или с помощью внутривенной, внутримышечной, подкожной, внутрикожной, интратекальной, эпидуральной или интрацеребровентрикулярной инъекции.
Экстракт настоящего изобретения можно использовать в качестве основного компонента или дополнительного и вспомогательного агента для приготовления различных функциональных полезных для здоровья пищевых продуктов и пищевых продуктов для оздоровления организма.
Соответственно, другой задачей настоящего изобретения является обеспечение функционального полезного для здоровья пищевого продукта, содержащего терапевтически эффективное количество нового очищенного экстракта, содержащего активные компоненты, полученные вышеописанными способами, или по меньшей мере одно соединение, выбранное из группы, состоящей из вератровой кислоты, верпрозида, каталпозида, пикрозида II, изованиллоил каталпола и 6-O-вератроил каталпола, для профилактики или облегчения хронической обструктивной болезни легких (ХОБЛ).
Соответственно, другой задачей настоящего изобретения является обеспечение функционального полезного для здоровья пищевого продукта, содержащего комбинацию соединений в следующем массовом соотношении: 40-93% верпрозида, 1,0-10% вератровой кислоты, 2,0-25% каталпозида, 1,0-15% пикрозида II, 1,0-15% изованиллоил каталпола и 2,0-25% 6-O-вератроил каталпола, предпочтительно 45-90% верпрозида, 1,0-7,0% вератровой кислоты, 3,0-15% каталпозида, 2,0-10% пикрозида II, 2,0-10% изованиллоил каталпола и 2,0-15% 6-O-вератроил каталпола, для профилактики или облегчения хронической обструктивной болезни легких (ХОБЛ).
Термин "функциональный полезный для здоровья пищевой продукт" определен здесь как функциональный пищевой продукт, обладающий повышенной функциональностью, такой как физическая функциональность или физиологическая функциональность за счет добавления экстракта настоящего изобретения в обычное питание, предназначенного для профилактики или улучшения целевого заболевания у человека или млекопитающего.
Другой задачей настоящего изобретения является обеспечение пищевого продукта для оздоровления организма, содержащего терапевтически эффективное количество нового очищенного экстракта, содержащего активные компоненты в достаточном количестве, полученные вышеописанными способами, или по меньшей мере одно соединение, выбранное из группы, состоящей из вератровой кислоты, верпрозида, каталпозида, пикрозида II, изованиллоил каталпола и 6-O-вератроил каталпола, для профилактики или облегчения хронической обструктивной болезни легких (ХОБЛ).
Термин "пищевой продукт для оздоровления организма" определен здесь как пищевой продукт, содержащий экстракт или соединение(я) настоящего изобретения, оказывающий не какой-то специфический желаемый эффект, а общий желаемый эффект в виде добавки в небольшом количестве или в форме порошка, гранулы, капсулы, пилюли, таблетки и т.д. в целом.
Термин "ситологически приемлемая добавка", определенный здесь, включает "любое вещество, предполагаемое применение которого приводит или можно обоснованно ожидать, что приведет, прямо или косвенно, к тому, что добавка будет представлять собой компонент или оказывать иного рода влияние на характеристики любой пищи", и могут быть классифицированы на три группы согласно их происхождению, т.е. (1) химически синтетические добавки, такие как кетоны, глицин, цитрат калия, никотиновая кислота и т.д.; (2) природные добавки, такие как краситель хурмы, экстракт солодки, кристаллическая целлюлоза, гуа дум и т.д.; (3) смешанная добавка, такая как L-глутамат натрия, консерванты, смоляной краситель и т.д., или различные категории согласно их функции в пищевом продукте, например, средство для загущения, средство для ускорения созревания, отбеливающее средство, секвестрант, увлажнитель, средство против слеживания, осветляющее средство, отверждающее средство, эмульгатор, стабилизатор, загуститель, основания и кислоты, пенообразующие вещества, питательные вещества, красящее вещество, вкусовая добавка, подсластитель, консервирующее средство, антиоксидант и т.д., которые хорошо известны в данной области и литературе уровня техники (см., "Codex General Standard for Food Additives" (GSFA, Codex STAN 192-1995) на домашней странице GSFA Online: www.codexalimentarius.net/gsfaonline/index.html).
Если вещество добавляется в пищевой продукт для определенной цели в этом пищевом продукте, то оно упоминается как непосредственно пищевая добавка, а косвенные пищевые добавки представляют собой такие, которые стали частью пищевого продукта в следовых количествах при его упаковке, хранении или других операциях.
Термины "пищевой продукт для оздоровления или функциональный полезный для здоровья пищевой продукт", раскрытые здесь, могут быть включены в пищевые продукты, полезные для здоровья напитки, диетические добавки и т.д., и могут быть подготовлены в виде фармацевтически дозированной формы, такой как порошок, гранула, таблетка, суспензия, эмульсия, сироп, жевательная таблетка, капсула, напиток и т.д; или формы пищевого продукта, например, хлеб, рисовые лепешки, сухие фрукты, конфеты, шоколад, жевательная резинка, мороженое, молоко, например, молоко с низким содержанием жира, лактозо-гидролизованное молоко, козье молоко, обработанное молоко, молочный продукт, такой как кисломолочный продукт, масло сливочное, концентрированное молоко, молочные сливки, топленое масло, натуральный сыр, плавленый сыр, сухое молоко, молочная сыворотка и т.д., обработанный мясной продукт, такой как гамбургер, ветчина, колбаса, бекон и т.д., обработанный яичный продукт, рыбный продукт, такой как рыбный пирог и т.д., макаронные изделия, такие как лапша быстрого приготовления, высушенная лапша, влажная лапша, жареная лапша, не жареная лапша, желатинизированная сухая лапша, приготовленная лапша, замороженная лапша, паста и т.д., чайный продукт, такой как чай в пакетиках, выщелоченный чай и т.д., полезные для здоровья напитки, такие как фруктовые напитки, овощные напитки, газированные безалкогольные напитки, напитки на основе соевого молока, молочные напитки, смешанные напитки и т.д., заправка для пищи, такая как соевый соус, паста из соевых бобов, паста из красного перца, chunjang (своего рода ферментированный соевый продукт, окрашенный карамелью), cheonggukjang (натуральный ферментированный соевый продукт, полученный путем добавления сенной палочки), смешанная паста, уксус, соус, кетчуп, карри, заправка и т.д., маргарин, шортенинг, пицца и т.д., но не ограничиваются ими, для профилактики или облегчения целевого заболевания.
Кроме того, вышеописанный экстракт может быть добавлен к пище или напитку для профилактики и облегчения целевого расстройства. Количество вышеописанного экстракта или соединения(ий) в пищевом продукте или напитке в качестве функционального полезного для здоровья пищевого продукта или пищевого продукта для оздоровления, как правило, может изменяться от примерно 0,01 до 100% (масс./масс.) от общей массы пищевого продукта для композиции функционального полезного для здоровья пищевого продукта. В частности, несмотря на предпочтительное количество экстракта настоящего изобретения в функциональном полезном для здоровья пищевом продукте, пищевом продукте для оздоровления или специальном питательном пищевом продукте может варьироваться в соответствии с предполагаемой целью каждого пищевого продукта, предпочтительно применение экстракта или соединения настоящего изобретения, как правило, в качестве добавки в количестве в диапазоне от примерно 0,01 до 5% в пищевом продукте, таком как лапша или т.п., от 40 до 100% в пищевом продукте для оздоровления в расчете на 100% пищевой композиции.
При условии, что композиция полезного для здоровья напитка настоящего изобретения содержит вышеописанный экстракт или соединение(ия) в качестве основного компонента в указанном соотношении, нет особого ограничения в отношении другого жидкого компонента, при этом другой компонент может быть представлен различной отдушкой или природным углеводом и т.д., таким как в обычном напитке. Примерами вышеупомянутого природного углевода являются моносахарид, такой как глюкоза, фруктоза и т.д.; дисахарид, такой как мальтоза, сахароза и т.д.; обычный сахар, такой как декстрин, циклодекстрин; и сахарный спирт, такой как ксилит, эритрит и т.д. В качестве отдушки, помимо вышеуказанной, можно с пользой применять природную отдушку, такую как тауматин, экстракт стевии, такой как леваудиозид A, глицирризин и др., а также синтетическую отдушку, такую как сахарин, аспартам и др. Количество вышеописанного природного углевода обычно находится в интервале от примерно 1 до 20 г, предпочтительно от 5 до 12 г в расчете на 100 мл композиции полезного для здоровья напитка.
Компоненты, помимо вышеуказанной композиции, представляют собой различные питательные вещества, витамин, минерал или электролит, синтетическую вкусовую добавку, окрашивающую добавку и улучшитель в случае сыра, шоколада и др., пектиновую кислоту и ее соль, альгиновую кислоту и ее соль, органическую кислоту, защитное коллоидное адгезивное вещество, вещество, регулирующее pH, стабилизатор, консервант, глицерин, спирт, вещество, способствующее карбонизации, применяемое в газированном напитке, и др. Компонентами, помимо вышеуказанных компонентов, может быть фруктовый сок для получения природного фруктового сока, напиток с фруктовым соком и овощной напиток, в котором компонент можно применять независимо или в комбинации. Отношение компонентов не является таким важным, но обычно оно находится в интервале примерно от 0 до 20% масс./масс. на 100% масс./масс. композиции настоящего изобретения. Примеры пищевого продукта, пригодного для введения добавки, содержащей вышеуказанный экстракт или соединение, представляют собой различные пищевые продукты, напиток, жевательный продукт, витаминный комплекс, полезный для здоровья пищевой продукт и тому подобное.
Экстракт или соединение(ия) настоящего изобретения нетоксичны и, следовательно, не имеют отрицательного воздействия; они безопасны при применении.
Для специалиста в данной области будет понятно, что различные модификации и варианты могут быть сделаны в композициях, применении и препаратах настоящего изобретения без отступления от сущности или объема изобретения.
Настоящее изобретение более конкретно объясняется следующими примерами. Тем не менее, следует понимать, что эти примеры не ограничивают настоящее изобретение никоим образом.
Полезные эффекты изобретения
Как описано в настоящем изобретении, очищенный экстракт изобретения, содержащий большое количество активных компонентов, таких как производных каталпола из экстракта Pseudolysimachion rotundum var subintegrum, или по меньшей мере одно соединение, выбранное из группы, состоящей из вератровой кислоты, верпрозида, каталпозида, пикрозида II, изованиллоил каталпола и 6-O-вератроил каталпола, показали сильную активность против ХОБЛ без агонистического эффекта на бета-2-рецепторы в различных исследованиям in vivo с использованием самцов BALB/c мышей, например, в исследовании ингибирования пролиферации и активности воспалительных иммуноцитов и рекрутинга нейтрофилов в легкие, вызванных заболеванием ХОБЛ; исследовании ингибирования воспроизводства хемокинов, вовлеченных в разрушение пневмоцитов, таких как МИП-2/CXCL-2, ФНО-альфа, KC/CXCL-1 (хемокины Gro-альфа), CXCL-8 и т.д.; показали эффект снижения высвобождения ИЛ-1 бета, ИЛ-6, ФНО-альфа и ММП-9 экспрессии с помощью уменьшения активации NF-каппаВ в исследованиях на животных с применением СПФ (свободных от патогенной специфической микрофлоры) крыс линии Спрег-Доули, а также в исследовании in vitro, например, в исследовании ингибирования экспрессии гена MUC5AC (олигомерного слизь/гель-образующего), индуцирующий эффект на экспрессию ИЛ-4 Th2 клетками в исследовании анализа изменений молекулярной экспрессии и т.д. Таким образом, он может применяться в качестве терапевтического или функционального полезного для здоровья пищевого продукта для лечения и профилактики хронической обструктивной болезни легких (ХОБЛ).
Описание чертежей
Вышеуказанные и другие задачи, отличительные признаки и другие преимущества настоящего изобретения будут, несомненно, более понятны из следующего подробного описания в сочетании с прилагаемыми чертежами, на которых:
на Фиг. 1 показан результат ВЭЖХ-анализа неочищенного экстракта из Pseudolysimachion rotundum var subintegrum, полученного в сравнительном Примере 1;
на Фиг. 2 показан результат ВЭЖХ-анализа очищенного экстракта (ATC1) настоящего изобретения из Pseudolysimachion rotundum var subintegrum, полученного в Примере 1;
на Фиг. 3 показан результат ВЭЖХ-анализа очищенного экстракта (ATC2) настоящего изобретения из Pseudolysimachion rotundum var subintegrum, полученного в Примере 2;
на Фиг. 4 показан схематический способ создания модели ADRB2 GPCR-экспрессирующей клеточной линии;
на Фиг. 5 показано образование ореола в U2OS клетке, получавшей уже известный ADRB агонист;
на Фиг. 6 показано образование ореола в U2OS клетке, получавшей очищенный экстракт и соединения настоящего изобретения;
на Фиг. 7 показан детализированный результат экспрессии MUC5AC с применением ГСК;
на Фиг. 8 показано изменение экспрессии MUC5AC в А549 клетке, получавшей TGFb1;
на Фиг. 9 показано изменение экспрессии MUC5AC в А549 клетке, которая предварительно получала очищенный экстракт или соединения настоящего изобретения, а затем получала ФНО-альфа;
на Фиг. 10 показано изменение экспрессии MUC5AC в А549 клетке, получавшей акролеин, очищенный экстракт или соединения настоящего изобретения;
на Фиг. 11 показано влияние очищенного экстракта или соединений настоящего изобретения на индукцию дифференцировки Th2 из нативных CD4+ T клеток (CD4+CD62L+);
на Фиг. 12 показано влияние очищенного экстракта или соединений настоящего изобретения на дифференцировку Th2 мыши;
на Фиг. 13 показано влияние очищенного экстракта или соединений настоящего изобретения на экспрессию ИЛ-4, маркера дифференцировки мышиной Th2 клетки;
на Фиг. 14 показано влияние очищенного экстракта или соединений настоящего изобретения на общее количество иммуноцитов, нейтрофилов и уровень T лимфоцитов после ЛПС ингаляции для мыши линии BALB/c и воздействия сигаретного дыма;
на Фиг. 15 показано влияние очищенного экстракта или соединений настоящего изобретения на число CD4+ и CD8+ T клеток в ЖБАЛ (A: общее количество клеток (x105)/ЖБАЛ (мл); B: число нейтрофилов (x104)/ЖБАЛ (мл); C: абсолютное число CD4+ и CD8+ T клеток (x104)/ЖБАЛ (мл), данные, показанные как среднее число клеток ± СЭМ (P<0,05, P<0,01, P<0,001 в сравнении с ЛПС+CS; n=10);
на Фиг. 16 показано влияние очищенного экстракта или соединений настоящего изобретения на уровень CXCL-1, ФНО-альфа, и МИП-2 после ЛПС ингаляции для мыши линии BALB/c и воздействия сигаретного дыма;
на Фиг. 17 показано влияние очищенного экстракта или соединений настоящего изобретения на количество воспалительных клеток;
на Фиг. 18 показано влияние очищенного экстракта или соединений настоящего изобретения на общее количество клеток в ЖБАЛ;
на Фиг. 19 показано влияние очищенного экстракта или соединений настоящего изобретения на ММП-9 активность в легочной ткани;
на Фиг. 20 показано влияние очищенного экстракта или соединений настоящего изобретения на экспрессию провоспалительных белков в легочной ткани;
на Фиг. 21 показано ингибирующее влияние очищенного экстракта настоящего изобретения на воспалительный ответ в клетках легочной ткани с применением гистологического исследования бронхоальвеолярного выделения;
Наилучший вариант осуществления изобретения
Для специалиста в данной области будет понятно, что различные модификации и варианты могут быть сделаны в композициях, применении и препаратах настоящего изобретения без отступления от сущности или объема изобретения.
Настоящее изобретение более конкретно объясняется следующими примерами. Тем не менее, следует понимать, что эти примеры не ограничивают настоящее изобретение никоим образом.
Примеры
Следующие справочные примеры, примеры и экспериментальные примеры предназначены для дополнительной иллюстрации настоящего изобретения, но никак не ограничивают его объем.
Сравнительный пример 1. Получение неочищенного экстракта Pseudolysimachion rotundum var subintegrum
1-1. Получение неочищенного экстракта (ATE)
1 кг сухого Psendolysimachion rotundum var subintegrum (культивировали при 244, Soi-myeon Eumseong-gun Chungcheongbuk-do в Корее согласно GAP) нарезали небольшими кусочками и смешивали с 10 л 40% этанола. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 24 часов и подвергали экстракции в колбе с обратным холодильником при 78°C в течение 12 часов, и трижды собирали фильтрат. Экстракт фильтровали через фильтровальную бумагу для удаления твердых частиц. Собранный фильтрат концентрировали с помощью роторного испарителя (EYELA, N-2100, Япония) при 55~65°C при пониженном давлении и сушили способом сублимационной сушки с получением 202 г сухого неочищенного экстракта (обозначенного как "ACE" в дальнейшем) для применения в качестве сравнительного примера.
1-2. Анализ компонентов
Анализ компонентов проводили с применением ВЭЖХ (Agilent 1260 model, США) согласно условиям в таблице 1, и результаты показаны на фиг. 1.
Как показано на фиг. 1, было подтверждено, что компоненты имеют следующие времена удерживания: при 9,548 мин (верпрозид), 10,817 мин (вератровая кислота), 16,728 мин (каталпозид), 20,346 мин (пикрозид II), 21,853 мин (изованиллоил каталпол) и 30,462 мин (6-0-вератроил каталпол), соответственно.
Содержание каждого компонента (%) в образце рассчитывали на основе данных ВЭЖХ (время удерживания) согласно математической формуле 1.
Математическая формула 1
содержание каждого компонента = концентрация стандарта (мг/мл) / концентрация исследуемого образца (мг/мл) × At/As × чистота стандарта (%),
где "At" обозначает площадь компонента исследуемого образца, и "As" обозначает площадь компонента в стандарте, при условии, что отобранный объем исследуемого образца и стандарта идентичны друг другу.
В результате, подтвердили, что неочищенный экстракт из Pseudolysimachion rotundum var subintegrum содержит только 8,49% (масс./масс.) производных каталпозида, т.е., 5,9% (масс./масс.) верпрозида, 0,21% (масс./масс.) вератровой кислоты, 0,82% (масс./масс.) каталпозида, 0,40% (масс./масс.) пикрозида II, 0,42% (масс./масс.) изованиллоил каталпола и 0,74% (масс./масс.) 6-O-вератроил каталпола, соответственно, как можно видеть в таблице 2.
Пример 1. Получение очищенного экстракта (ACT1) из Pseudolysimachion rotundum var subintegrum
Неочищенный экстракт (ACE) из Pseudolysimachion rotundum var subintegrum получали обычным способом в соответствии со сравнительным примером 1, суспендировали в 2 л дистиллированной воды и к суспензии добавляли 2 л бутанола для разделения на бутанол-растворимую фракцию и водо-растворимую фракцию. Бутанол-растворимую фракцию собирали, концентрировали при пониженном давлении и сушили с получением 82 г очищенного экстракта настоящего изобретения, фракционированного с помощью бутанола (ATC1), применяемого в качестве исследуемого примера.
Анализ компонентов проводили с применением ВЭЖХ (Agilent 1260 model, США) согласно условиям в таблице 1, результаты показаны на фиг. 2.
Как показано на фиг. 2, было подтверждено, что компоненты были обнаружены при следующих значениях: 9,545 мин (верпрозид), 10,821 мин (вератровая кислота), 16,727 мин (каталпозид), 20,345 мин (пикрозид II), 21,853 мин (изованиллоил каталпол) и 30,462 мин (6-O-вератроил каталпол), соответственно.
Содержание каждого компонента (%) в образце рассчитывали на основе данных ВЭЖХ (время удерживания) согласно математической формуле 1.
В результате, было подтверждено, что очищенный экстракт настоящего изобретения, фракционированный с помощью бутанола (ATC1), из Pseudolysimachion rotundum var subintegrum содержит 25,64% (масс./масс.) производных каталпозида, т.е., 17,60% (масс./масс.) верпрозида, 0,72% (масс./масс.) вератровой кислоты, 2,62% (масс./масс.) каталпозида, 1,08% (масс./масс.) пикрозида II, 1,26% (масс./масс.) изованиллоил каталпола и 2,36% (масс./масс.) 6-O-вератроил каталпола, соответственно, как можно видеть в таблице 3.
Пример 2. Получение очищенного экстракта (ACT2) из Pseudolysimachion rotundum var subintegrum
Очищенный экстракт настоящего изобретения, фракционированный с помощью бутанола (ATC1) из Pseudolysimachion rotundum var subintegrum согласно примеру 1, растворяли в 75 мл смешанного растворителя (дистиллированная вода : метанол = 1:0,003) и 75 г раствора наносили на колонку обращенно-фазовой хроматографии (C18(IV)-D-75-120 нм, AGC Si-Tech Co. Ltd., Япония, 450 г), элюировали суспензию с помощью растворителя для элюирования (дистиллированная вода : метанол = 90:10→60:40). 8,4 л элюированного раствора, полученного в исходной элюирующей системе растворителей (дистиллированная вода : метанол = 90:10), собирали и концентрировали при пониженном давлении. 5,6 л элюированного раствора, полученного в конечной элюирующей системе растворителей (дистиллированная вода : метанол = 60:40), собирали, концентрировали при пониженном давлении и сушили с получением 33 г экстракта настоящего изобретения, очищенного с помощью вторичного фракционирования (ATC2), применяемого в качестве исследуемого примера.
Анализ компонентов проводили с применением ВЭЖХ (Agilent 1260 model, США) согласно условиям в таблице 1, результаты показаны на фиг. 3.
Как показано на фиг. 3, было подтверждено, что каждый компонент был обнаружен при следующих значениях: 9,525 мин (верпрозид), 10,818 мин (вератровая кислота), 16,721 мин (каталпозид), 20,346 мин (пикрозид II), 21,857 мин (изованиллоил каталпол) и 30,462 мин (6-O-вератроил каталпол), соответственно.
Содержание каждого компонента (%) в образце рассчитывали на основе данных ВЭЖХ (время удерживания) согласно математической формуле 1.
В результате, было подтверждено, что экстракт настоящего изобретения, очищенный с помощью вторичного фракционирования (ATC2), из Pseudolysimachion rotundum var subintegrum содержит 65,63% (масс./масс.) производных каталпола, т.е., 43,83% (масс./масс.) верпрозида, 1,80% (масс./масс.) вератровой кислоты, 7,07% (масс./масс.) каталпозида, 2,93% (масс./масс.) пикрозида II, 3,85% (масс./масс.) изованиллоил каталпола и 6,15% (масс./масс.) 6-O-вератроил каталпола, соответственно, как можно видеть в таблице 4.
Пример 3. Получение соединений настоящего изобретения из Pseudolysimachion rotundum var subintegrum
Соединения настоящего изобретения, т.е. верпрозид, вератровая кислота, каталпозид, пикрозид II, изованиллоил каталпол и 6-O-вератроил каталпол, имеющие следующие физико-химические свойства, были очищены из экстракта Pseudolysimachion rotundum var subintegrum согласно способу выделения, раскрытому в публикации корейского патента No. 10-2006-125499, и физико-химические свойства каждого соединения были сравнены с данными в уже опубликованной литературе для идентификации каждой химической структуры.
1. Верпрозид (=6-O-(3,4-дигидроксибензоил)каталпол)
1H ЯМР (400 МГц, DMSO-d6) δ: 2.47 (1H, dd, J=8.0, 9.2 Гц, H-9), 2.59 (1H, dddd, J=1.6, 4.0, 8.0, 8.0, H-5), 3.00 (1H, m, H-G4), 3.05 (1H, m, H-G2), 3.14 (1H, m, H-G5), 3.18 (1H, m, H-G3), 3.42, 3.71 (2H, m, H-G6). 3.67 (1H, s, H-7), 3.71, 3.91 (2H, d, J=13.2 Гц, each, H-10), 4.61 (1H, d, J=7.6 Гц, H-G1), 4.94 (1H, dd, J=4.0, 6.0 Гц, H-4), 5.03 (1H, d, J=8.0 Гц, H-6), 5.09 (1H, d, J=9.2 Гц, H-1), 6.41 (1H, dd, J=1.6. 6.0 Гц, H-3), 6.82 (1H, d, J=8.0 Гц, H-5′), 7.35 (1H, dd, J=2.0, 8.0 Гц, H-6′), 7.39 (1H, d, J=2.0 Гц, H-2′).
13C-ЯМР (100 МГц, DMSO-d6) δ: 93.0 (C-1), 141.1 (C-3), 101.8 (C-4), 35.2 (C-5), 79.5 (C-6), 58.2 (C-7), 65.8 (C-8), 41.8 (C-9), 120.0 (C-1′), 116.4 (C-2′), 145.1 (C-3′), 150.8 (C-4′), 115.4 (C-5′), 122.6 (C-6′), 165.6 (C-7′), 97.9 (C-G1), 73.4 (C-G2), 76.4 (C-G3), 70.3 (C-G4), 77.5 (C-G5), 61.4 (C-G6).
2. Пикрозид II (=6-O-(4-гидрокси-3-метоксибензоил)каталпол)
1H-ЯМР (400 МГц, DMSO-d6) δ: 2.47 (1H, dd, J=8.0, 9.6 Гц, H-9), 2.58 (1H, dddd, J=1.2, 6.0, 8.0, 8.4 Гц, H-5), 3.00 (1H, m, H-G4), 3.05 (1H, m, H-G2), 3.14 (1H, m, H-G5), 3.18 (1H, m, H-G3), 3.42, 3.71 (2H, m, H-G6), 3.67 (1H, br s, H-7), 3.72, 3.92 (2H, d, J=13.2, each, H-10), 4.62 (1H, d, J=7.6 Гц, H-G1), 4.99 (1H, dd, J=4.4, 6.0 Гц, H-4), 5.06 (1H, d, J=8.4 Гц, H-6), 5.11 (1H, d, J=9.6 Гц, H-1), 6.42 (1H, dd, J=1.2. 6.0 Гц, H-3), 6.89 (1H, d, J=8.4 Гц, H-5′), 7.46 (1H, d, J=2.0 Гц, H-2′), 7.52 (1H, dd, J=2.0, 8.4 Гц, H-6′), 3.83 (3H, s, 3′-O-CH3).
13C-ЯМР (100 МГц, DMSO-d6) δ: 93.0 (C-1), 141.1 (C-3), 101.8 (C-4), 35.2 (C-5), 79.7 (C-6), 58.2 (C-7), 65.8 (C-8), 41.8 (C-9), 58.5 (C-10), 120.0 (C-1′), 112.7 (C-2′), 147.5 (C-3′), 152.0 (C-4′), 115.3 (C-5′), 123.8 (C-6′), 165.6 (C-7′), 97.9 (C-G1), 73.4 (C-G2), 76.4 (C-G3), 70.3 (C-G4), 77.5 (C-G5), 61.4 (C-G6), 55.7 (3′-OCH3).
3. Каталпозид (=6-O-(4-гидроксибензоил)каталпол)
1H-ЯМР (400 МГц, DMSO-d6) δ: 2.47 (1H, dd, J=8.0, 9.6 Гц, H-9), 2.56 (1H, dddd, J=1.2, 4.0, 8.0, 8.0 Гц, H-5), 3.00 (1H, m, H-G4), 3.05 (1H, m, H-G2), 3.14 (1H, m, H-G5), 3.18 (1H, m, H-G3), 3.43, 3.72 (2H, m, H-G6), 3.69 (1H, br s, H-7), 3.72, 3.92 (2H, d, J=13.2 Гц, each, H-10), 4.62 (1H, d, J=8.0 Гц, H-G1), 4.96 (1H, dd, J=4.0, 6.0 Гц, H-4), 5.05 (1H, dd, J=1,2, 8.0 Гц, H-6), 5.11 (1H, d, J=9.6 Гц, H-1), 6.42 (1H, dd, J=1.2. 6.0 Гц, H-3), 6.86 (2H, d, J=8.0 Гц, H-3′, -5′), 7.85 (2H, d, J=2.0 Гц, H-2′, -6′).
13C-ЯМР (100 МГц, DMSO-d6) δ: 92.9 (C-1), 141.1 (C-3), 101.8 (C-4), 35.1 (C-5), 79.6 (C-6), 58.2 (C-7), 65.8 (C-8), 41.8 (C-9), 119.6 (C-1′), 131.7 (C-2′, 6′), 115.5 (C-3′, 5′), 162.6 (C-4′), 165.5 (C-7′), 97.8 (C-G1), 73.4 (C-G2), 76.4 (C-G3), 70.3 (C-G4), 77.5 (C-G5), 61.4 (C-G6).
4. Изованиллоил каталпол (=6-O-(3-гидрокси-4-метоксибензоил)каталпол)
1H-ЯМР (400 МГц, DMSO-d6) δ: 2.47 (1H, m, H-9), 2.55 (1H, m H-5), 3.00 (1H, m, H-G4), 3.05 (1H, m, H-G2), 3.14 (1H, m, H-G5), 3.18 (1H, m, H-G3), 3.43, 3.70 (2H, m, H-G6), 3.70 (1H, br s, H-7), 3.72, 3.92 (2H, d, J=13.2, each, H-10), 4.62 (1H, d, J=8.0 Гц, H-G1), 4.95 (1H, dd, J=4.4, 6.0 Гц, H-4), 5.06 (1H, d, J=8.0 Гц, H-6), 5.11 (1H, d, J=9.2 Гц, H-1), 6.42 (1H, d, J=6.0 Гц, H-3), 7.04 (1H, d, J=8.4 Гц, H-5′), 7.42 (1H, br s, H-2′), 7.48 (1H, d, J=8.4 Гц, H-6′), 3.84 (3H, s, 4′-O-CH3).
13C-ЯМР (100 МГц, DMSO-d6) δ: 93.0 (C-1), 141.0 (C-3), 101.6 (C-4), 35.2 (C-5), 79.7 (C-6), 58.2 (C-7), 65.8 (C-8), 41.8 (C-9), 58.4 (C-10), 121.7 (C-1′), 115.7 (C-2′), 146.3 (C-3′), 152.1 (C-4′), 111.4 (C-5′), 121.3 (C-6′), 165.3 (C-7′), 97.8 (C-G1), 73.4 (C-G2), 76.4 (C-G3), 70.3 (C-G4), 77.4 (C-G5), 61.4 (C-G6), 55.7 (4′-OCH3).
5. 6-O-вератроил каталпол (=6-O-(3,4-диметоксибензоил)каталпол)
1H-ЯМР (400 МГц, DMSO-d6) δ: 2.47 (1H, dd, J=8.0, 9.6 Гц, H-9), 2.59 (1H, dddd, J=1.6, 4.8, 8.0, 8.0 Гц, H-5), 3.00 (1H, m, H-G4), 3.05 (1H, m, H-G2), 3.14 (1H, m, H-G5), 3.18 (1H, m, H-G3), 3.42, 3.71 (2H, m, H-G6), 3.70 (1H, br s, H-7), 3.72, 3.90 (2H, d, J=13.2 Гц, each, H-10), 4.61 (1H, d, J=7.6 Гц, H-G1), 4.97 (1H, dd, J=4.8, 6.0 Гц, H-4), 5.08 (1H, d, J=8.8 Гц, H-6), 5.10 (1H, d, J=9.6 Гц, H-1), 6.42 (1H, dd, J=1.6. 6.0 Гц, H-3), 7.09 (1H, d, J=8.4 Гц, H-5′), 7.46 (1H, d, J=2.0 Гц, H-2′), 7.64 (1H, dd, J=2.0, 8.4 Гц, H-6′), 3.81, 3.84 (6H, s each, 3′, 4′-OCH3).
13C-ЯМР (100 МГц, DMSO-d6) δ: 92.9 (C-1), 141.1 (C-3), 101.8 (C-4), 35.2 (C-5), 79.9 (C-6), 58.2 (C-7), 65.9 (C-8), 41.8 (C-9), 58.4 (C-10), 121.3 (C-1′), 111.8 (C-2′), 148.5 (C-3′), 153.2 (C-4′), 111.2 (C-5′), 123.5 (C-6′), 165.5 (C-7′), 97.8 (C-G1), 73.4 (C-G2), 76.4 (C-G3), 70.3 (C-G4), 77.5 (C-G5), 61.4 (C-G6), 55.6, 55.7 (3′, 4′-OCH3).
Экспериментальный пример 1. Создание системы клеточного анализа ADBR2 GPCR-таргетирования.
В целях разработки системы клеточного анализа ADBR2 GPCR-таргетирования было выполнено следующее исследование.
1-1. Разработка экспрессирующей клеточной линии ADBR2 GPCR.
ADBR2 (бета-2 адренергический рецептор) GPCR (рецептор, сопряженный с G-белком, Sinco Biological Inc., HF10378-M) клонировали в pIRESpuro вектор (Clontech, Mountain View, CA), трансформировали в U2OS (ATCC, HTB-96, клеточная линия остеосаркомы человека) и поместили в питательную среду, дополненную DEME (HyClone), 10% ФБС (HyClone, SH30071.03) и 1% антибиотиком (Gibco, 15140), для отбора отдельной колонии.
Выбранные стабильные колонии инокулировали в 96-луночные плашки, и исследуемые образцы, т.е. индакатерол (положительный контроль, Zhiyu biotechnology, Китай), через 24 часа после инокуляции обрабатывали ATC2 экстрактом, полученным в примере. Лунку фиксировали раствором формалина в течение 5 мин, промывали стерилизованной водой и подтверждали образование пятна (ореола) с помощью программного обеспечения детектора пятен (ThermoFisher, U.S.A), как показано на фиг. 4.
1-2. Оценка эффективности положительного контроля
Выбранные U2OS клетки, стабильно экспрессирующие ADBR2 GPCR, обрабатывали 10 мкмоль хорошо известных ADBR2 агонистов, т.е. изопретеренол, сальметерол, формотерол, сальбутамол и индакатерол (Zhiyu biotechnology, Китай), и образование пятен после обработки определяли с помощью программного обеспечения детектора пятен на аппарате Cellomics (ThermoFisher, U.S.A).
Как показано на фиг. 5, было подтверждено, что все группы, обработанные хорошо известными ADBR2 агонистами (изопретеренол, сальметерол, формотерол, сальбутамол и индакатерол), особенно индакатеролом, показали явное образование пятен, и бета-2-агонист, такой как индакатерол, образует явное пятно, выступая в качестве ADRB2 агониста (бета-2-рецептора), тогда как ATC2 при 40 мг/мл не образует пятна.
1-3. Оценка эффективности исследуемых образцов
Выбранные U2OS клетки, стабильно экспрессирующие ADBR2 GPCR, обрабатывали 40 мкг/мл ATC2, а также соединениями настоящего изобретения, т.е., 20 мкмоль верпрозида, вератровой кислоты, каталпозида, пикрозида II, изованиллоил каталпола и 6-O-вератровой кислоты, соответственно, и образование пятен после обработки определяли с помощью программного обеспечения детектора пятен на аппарате Cellomics (ThermoFisher, U.S.A).
Как показано на фиг. 6, было подтверждено, что все группы, обработанные ATC2, а также соединениями настоящего изобретения, т.е., 20 мкмоль верпрозида, вератровой кислоты, каталпозида, пикрозида II, изованиллоил каталпола и 6-O-вератроил каталпола, не показывали образование пятен, что означает наличие ADRB2-GFP на рецепторе. Согласно полученному результату, было подтверждено, что АТС экстракт и соединения настоящего изобретения не действуют в качестве ADBR2 агониста.
Соответственно, также было подтверждено, что экстракт и соединения настоящего изобретения, направленные непосредственно на MUC5AC, основную терапевтическую мишень, и предотвращающие экспрессию MUC5AC, могут решить существующие проблемы традиционного способа лечения, такого как лечение бета-2 агонистами, например, адренергические реакции на бета-2 рецептор, такие как гипокалиемия, судороги, тревога, тахикардия, желудочковая экстрасистолия и т.д., и побочные реакции в случае перорального введения, такие как аритмия, эпилепсия и т.д., вызванные нерегулярным изменением концентрации препарата в крови.
Экспериментальный пример 2. Создание системы клеточного анализа муцин 5AC-таргетирования.
Сообщалось, что Mucin5A/C представляет собой важную мишень для разработки средства лечения ХОБЛ (Busse PJ, Zhang TF, Srivastava K, Schofield B, Li XM. 2007. Effect of ageing on pulmonary inflammation, airway hyperresponsiveness and T and B cell responses in antigen-sensitized and -challenged mice. Clinical & Experimental Allergy. 37(9):1392-403., Smirnova MG, Birchall JP, Pearson JP. 2000. TNF-alpha in the regulation of MUC5AC secretion: some aspects of cytokine-induced mucin hypersecretion on the in vitro model. Cytokine, 12:1732-6).
Соответственно, авторы настоящего изобретения разработали новый высокопроизводительный скрининг-тест с помощью введения многопараметрической скриниговой системы, которая может количественно определить экспрессию целевого белка на клеточном уровне у животных, и с целью скрининга средства, ингибирующего экспрессию муцина 5A/C, следующее исследование выполняли путем модификации способа целевого активатора, опубликованного на Cellomics BioApplication.
2-1. Преобразование в цифровую форму экспрессии Mucin 5A/C с помощью ГСК
Клеточную линию А549 (ATCC, CCL-185), эпителиальную клеточную линию, выделенную из пораженной раком ткани легкого человека, высеивали на 96-луночную плашку (5000 клеток/лунка) и через 24 часа после посева обрабатывали 20 нг/мл оФРФ, 100 нг/мл ЭФР, 20 мкмоль ИФР, 5 нг/мл ТФР-бета1, 30 наномоль акролеина, 5 наномоль РМА, 1 мкг/мл ЛПС и 20 нг/мл ИЛ-1-бета. Экспрессию муцина 5A/C преобразовывали в цифровую форму программой целевого активатора на аппарате Cellomics.
Как показано на фиг. 7, исследованиями было подтверждено, что все исследованные вещества, кроме ТФР-бета1, повышали экспрессию муцина 5A/C.
2-2. Преобразование в цифровую форму ингибирующего эффекта ТФР-бета1 на экспрессию муцина 5A/C
Клеточную линию А549 (ATCC, CCL-185) обрабатывали различными концентрациями ТФР-бета1 (PeproTech, #100-21), т.е., 1, 5 и 10 нг/мл ТФР-бета1, и экспрессию муцина 5A/C преобразовывали в цифровую форму программой целевого активатора на аппарате Cellomics.
Как показано на фиг. 8, было подтверждено, что ТФР-бета1 сильнее ингибирует экспрессию муцина 5A/C, чем контрольная среда (GM, DMEM, 10% ФБС, 1% антибиотики).
2-3. Преобразование в цифровую форму ингибирующего эффекта ФНО-альфа на экспрессию муцина 5A/C
Клеточную линию А549 обрабатывали различными концентрациями экстракта ATC2 в течение 2 часов, затем ее обрабатывали в течение 24 часов 20 г/мл ФНО-альфа. Экспрессию муцина 5A/C преобразовывали в цифровую форму программой целевого активатора на аппарате Cellomics.
Как показано на фиг. 9, было подтверждено, что экспрессия муцина 5А/С эффективно ингибируется обработкой ФНО-альфа, что в случае предварительной обработки ATC2 повышает экспрессию MUC5AC дозозависимым образом.
2-4. Эффект ингибирования исследуемых образцов настоящего изобретения на экспрессию муцина 5A/C
Разбавленную DMEM средой, дополненной 5% красным фенолом и ФБС (фетальной бычьей сывороткой), клеточную линию А549 (ATCC, CCL-185) засеивали в 6-луночные плашки (4×105 клеток/лунка) для прилипания к ним в течение ночи, и клеточную линию А549 в течение 1 часа обрабатывали 20 и 40 мкг/мл экстракта ATC2. Клетки обрабатывали 30 нМ акролеина для индукции экспрессии муцина 5A/C. С клеток удаляли среду, промывали раствором ФСБ и гомогенизировали в течение 5 мин с помощью Trizol (Invitrogen, CA, США) для выделения рибонуклеиновых кислот из клеток. Клетки собирали, переносили в центробежный сепаратор, полностью смешивали с хлороформом в течение 15 секунд, оставляли в покое на 3 минуты и центрифугировали в течение 15 минут со скоростью 14000 об/мин Супернатант, содержащий рибонуклеиновую кислоту, перемещали в новую пробирку и перемешивали с изопропиловым спиртом в течение 10 минут. Раствор центрифугировали для удаления супернатанта и добавляли 75% этанол для получения осадка. Осадок центрифугировали в течение 5 минут со скоростью 10000 об/мин и удаляли супернатант. Осажденную рибонуклеиновую кислоту высушивали при комнатной температуре в течение 20 минут. Высушенную рибонуклеиновую кислоту суспендировали в дистиллированной воде, обработанной DEPC (диэтилпилокарбонат, W2004, www.biosesang.com, Корея). После количественной оценки рибонуклеиновой кислоты, комплементарную ДНК синтезировали с применением 1 мкг РНК и набора RT-kit (OmniScript RT-kit, Qiagen, США), а синтетическую кДНК применяли в качестве матрицы. Праймер муцина 5A/C (прямой: 5-CGACAACTACTTCTGCGGTGC-3, обратный: 5-GCACTCATCCTTCCTGTCGTT-3) смешивали с ней, денатурировали в течение 5 минут при 94°C с применением ПЦР смеси (DreamTaq™ PCR Master Mix, Fermentas, США), подвергали взаимодействию в течение 40 циклов, т.е. 30 секунд при 94°C, 30 секунд при 58°C, 45 секунд при 72°C и выполняли ПЦР в течение 5 минут при 72°C для инактивации фермента. GAPDH (глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназа, Bioneer Corporation, www.bioneer.co.kr, Корея) применяли в качестве внутреннего стандарта.
Как показано на фиг. 10, было подтверждено, что экспрессия MUC5A/C была увеличена при помощи обработки акролеином, в то время как экспрессия ингибировалась обработкой экстрактом (ATC2) настоящего изобретения или соединениями настоящего изобретения, такими как верпрозид или 6-O-вератроил каталпол, дозозависимым образом.
Экспериментальный пример 3. Ингибирование дифференциации Th2 клеток у мыши
3-1. Создание дифференцировки Th2 клеток у мыши
aCD4+T-клетки (CD4+CD62L+) выделяли из лимфатических узлов и селезенки C57BL6 мышей с помощью MACS (Miltenyi Biotec, кат. №130-090-976) и собранные CD4+ Т-клетки культивировали на плашках с покрытием анти-CD3 (1 мкг/мл, BD Pharmingen) и анти-CD28 (0,5 мкг/мл, BD Pharmingen).
Дифференцировку Th2 клеток индуцировали RPMI средой, дополненной анти-IFN-гамма и rm ИЛ-4 (Hyclone) и степень дифференцированности была определена с помощью FACS (проточная цитометрия, Becton-Dickinson, FACSCalibur).
Как показано на фиг. 11, было подтверждено, что использовали установленные условия исследования, поскольку степень дифференцировки при данных условиях была определена как 29,6%, аналогично обычно доступным условиям с применением коммерческой среды для индукции дифференцировки Th2 клеток (38%, Merck Milipore, FCIM025162), и дифференцировку Th2 клеток индуцировали на 3 день, после индукции дифференциации с помощью повторного подтверждения индукции маркера экспрессии через RT-ПЦР (S1000 термоциклер, Bio-Rad) эксперимент с применением маркеров дифференциации Th2 (ИЛ-4 и GATA3) для определения экспрессии ими мРНК.
3-2. Влияние на дифференцировку Th2 клеток у мыши
Нативные клетки CD4+ T cells (CD4+CD62L+Miltenyi Biotec, 130-093-227) выделяли из лимфатических узлов и селезенки C57BL6 мыши с помощью MACS (Miltenyi Biotec, кат. №130-090-976) и обрабатывали 5, 10, 20 и 40 мкг/мл ATC2, когда индуцировали дифференцировку клетки в ТЫ клетку. Степень Th2 дифференциации определяли по экспрессии маркера дифференцировки ИЛ-4.
Как показано на фиг. 12, было подтверждено, что степень дифференцировки Th2 в исследуемой группе, обработанной различными концентрациями ATC2, уменьшалась в зависимости от дозы, на 19,2% в случае 5 мгк/мл ATC2, в то время как в контрольной группе на 29,6%. Однако общее количество клеток в исследуемой группе, обработанной 20 и 40 мкг/мл ATC2, было снижено и, следовательно, действительно подтвердили, что менее 10 мкг/мл ATC2 демонстрирует эффективную ингибирующую концентрацию на дифференциацию Th2 без влияния на общее число клеток.
Соответственно, было подтверждено, что менее 10 мкг/мл ATC2 представляет собой подходящую концентрацию для исследования.
3-3. Влияние на спектральные изменения в молекулярной экспрессии, участвующей в дифференцировке Th2 клеток
Нативные CD4+ T клетки (CD4+CD62L+Miltenyi Biotec, 130-093-227) выделяли из лимфатических узлов и селезенки C57BL6 мыши с помощью MACS (Miltenyi Biotec, кат. №130-090-976) и обрабатывали 2,5, 5 и 10 мкг/мл ATC2 в тот момент, когда клетка была индуцирована дифференцироваться в Th2 клетку. Степень Th2 дифференцировки определяли по экспрессии маркера дифференцировки ИЛ-4.
Как показано на фиг. 13, было подтверждено, что только в Th2 клетках индуцируется ИЛ-4 экспрессия по сравнению с нативной клеткой, и экспрессия маркера дифференцировки ИЛ-4 резко снизилась до примерно 60% в группе, получавшей 2,5 мкг/мл ATC2, примерно на 30% в группе, получавшей 5 мкг/мл ATC2, и примерно 5% в группе, получавшей 10 мкг/мл ATC2.
Окислительный стресс, вызванный курением или загрязнением воздуха, приводит к разрушению альвеолярной защиты, увеличению апоптоза и воспалительной реакции, вызывая дисбаланс протеазы/антипротеазы, и усиливая воспаление через механизмы старения и аутоиммунной реакции, что проводит к возникновению заболевания ХОБЛ по прошествии 30-50 лет. ХОБЛ показывает конкретные симптомы, например, обструкция дыхательных каналов и эмфизема или специфическое воспаление в легких, такое как повышенный уровень макрофагов, нейтрофилов, Т-лимфоцитов, CD 8 клеток, хемокинов и т.д.
Настоящее исследование позволило определить эффективную концентрацию исследуемых образцов (ATC2, верпрозид, рофлумиласт) у мышей с индуцированной ХОБЛ с помощью интратрахеального вливания ЛПС и CS.
В результате было подтверждено, что более 15 мг/кг ATC2, 15 мг/кг верпрозида и 15 мг/кг рофлумиласта показали сходную ингибирующую активность на общее количество иммуноцитов, нейтрофилов и Т-лимфоцитов и т.д. в ЖБАЛ. Более 15 мг/кг ATC2, 15 мг/кг верпрозида и 15 мг/кг рофлумиласта, показали сходную ингибирующую активность на воспроизведенный уровень ФНО-альфа, KC/CXCL-1, и МИП-2, медиатор уничтожения легочных альвеол.
Благодаря этим результатам, было подтверждено, что более 15 мг/кг ATC2, 15 мг/кг верпрозида и 15 мг/кг рофлумиласта показали высокую активность против ХОБЛ путем ингибирования пролиферации и активации рекрутинга нейтрофилов в легкие, вызванных возникновением ХОБЛ.
Экспериментальный пример 4. Модель исследования на животном (мышь)
Для определения эффекта против ХОБЛ экстракта или соединений настоящего изобретения на общее число иммуноцитов, нейтрофилов и Т-лимфоцитов и т.д. в ЖБАЛ, и воспроизведенный уровень ФНО-альфа, KC/CXCL-1, и МИП-2, выполняли следующее исследование с применением мышей с индуцированной ХОБЛ.
4-1. Опыт на животном
Свободные от патогенной микрофлоры BALB/c мыши-самцы (примерно 18-20 г), в возрасте 8 недель, которые были серологически отобраны обычным способом для соответствующих возбудителей респираторных заболеваний, были приобретены у ORIENT Co. (www.orient.co.kr, Сеул, Корея) и разводились в условиях свободного доступа к корму и воде в камере для разведения с регулируемой температурой 22±2°C и влажностью 55±15% с 12 часовым циклом чередования света и темноты и акклиматизировались в экспериментальных условиях в течение 1 недели.
4-2. Лекарственное средство и введение
(1) исследуемый образец
4 вида образцов, а именно ATC2 (30 мг/кг), верпрозид (30 мг/кг), индакатерол (30 мг/кг) рофлумиласт (30 мг/кг) растворяли в 0,5% КМЦ (натрий-карбоксиметилцеллюлоза) и применяли в качестве исследуемых образцов.
(2) введение
30 мг/кг каждого ATC2, верпрозида, индакатерола и рофлумиласта смешивали с 100 мкл смеси ЛПС+CS {ЛПС(100 мкг/мл) + стандартный экстракт сигарет (курение сигарет (CS), 4 мг/мл) = 1:1} и вводили перорально мышам, за час до предварительного интратрахеального вливания.
(3) приготовление стандартного экстракта сигарет (курение сигарет; CS)
- тестовый материал: 60 штук стандартных сигарет CM7 (Coresta Monitering Cigarette 7, Heinr Borgwaldt, Германия) и изопропанол, этанол (Merck, Германия), н-гептадекан (Sigma-Aldrich, США) применяли в качестве тестовых материалов, и в эксперименте применяли автоматическую курительную машину (ISO 3308 стандартизированный продукт, автоматическая курительная машина, модель No.: RM20, Heinr Borgwaldt).
4-3. сбор потока дыма, вдыхаемого курильщиком
(1) сбор потока дыма, вдыхаемого курильщиком
Поток дыма стандартных сигарет CM7, вдыхаемого курильщиком (Coresta Monitering Cigarette 7, Heinr Borgwaldt, Германия), собирали согласно способу, раскрытому в KS Н ISO (Международная организация стандартизации) 3402 стандарт (Табак и табачные изделия - Воздух для кондиционирования и испытаний) и корейском руководстве (Determination guideline for the harmful component in Cigarette type smoking desire suppressor, October, 2012, KFDA) и проводили в курительной комнате (температура: 22±2°C, относительная влажность: 60±5%).
Сигареты сжигали согласно способу курения ISO стандарта, т.е. объем дыма (35,0±0,3 мл), интервал курения (60±0,5 сек), время курения (2,00±0,02 сек) и длина окурков (мундштучная бумага + 3 мм, обертка + 3 мм) с применением автоматической курительной машины (ISO 3308 стандартизированный продукт, автоматическая курительная машина, модель No.: RM20/CS, Heinr Borgwaldt, Германия) в соответствии со стандартом ISO3308 (Обычная аналитическая сигарета - Курительная машина - Определения и стандартные условия) и ТРМ (общее количество твердых частиц) собирали из сигарет с применением 92 мм кембриджского фильтра (ISO3308 стандартизированный продукт, RM20, Heinr Borgwaldt, Германия) в соответствии с ISO3308 стандартом (KS Н ISO 3308, 2000).
(2) масса общего количества твердых частиц (TPM)
Массу мундштука, содержащего предварительно сожженный кембриджский фильтр, определяли в соответствии с ISO 3308 стандартом, и затем массу мундштука (RM20/CS, Heinr Borgwaldt, Германия), содержащего собранный кембриджским фильтром сигаретный дым (RM20, Heinr Borgwaldt, Германия) после сгорания, применяли для расчета содержания ТРМ (KS Н ISO 4387, 2000; Сигареты - Определение общего числа твердых частиц и не содержащих никотина с применением обычной аналитической курительной машины) и согласно корейскому руководству (Determination guideline for the harmful component in Cigarette type smoking desire suppressor, October, 2012, KFDA).
В результате, было подтверждено, что содержание TPM в случае, когда стандартная сигарета была сожжена трижды, было определено как 16,0621 мг (19 штук), 15,9135 мг (20 штук), 15,5380 мг/сиг (20 штук), соответственно. Исследуемое общее количество стандартных сигарет было 59 штук, и TPM составило 47,5136 мг.
(3) экстракция TPM сигарет
Кембриджский фильтр, содержащий RPM, выделяли из мундштука и помещали в 100 мл коническую колбу Эрленмейера. К нему добавляли 50 мл изопропанола, тщательно перемешивали, оставляли в покое при комнатной температуре в течение более 8 часов для экстракции. После экстракции раствор фильтровали, концентрировали под вакуумом и переносили в сцинтилляционный флакон (WHEATON, 03-340-25N, США) для концентрирования под азотом.
Содержание TPM сигарет в потоке дыма, вдыхаемого курильщиком, рассчитывали в соответствии со следующей эмпирической формулой 1.
Эмпирическая формула 1
<расчет содержания ТРМ>
где TPM обозначает общее количество твердых частиц;
WFHA обозначает массу мундштука после курения;
WFHB обозначает массу мундштука перед курением;
N обозначает количество выкуренных сигарет (vig.)/Trap.
4-4. тестовая процедура
(1) модель ХОБЛ животных
BALB/c мышей-самцов, в возрасте 8 недель, анестезировали 7% раствором хлоральгидрата, и мышам ингалировали 100 мкл смеси ЛПС+CS {ЛПС(100 мкг/мл) + стандартный экстракт сигарет (курение сигарет (CS), 4 мг/мл) = 1:1} в течение трех недель раз в неделю для подготовки модели ХОБЛ животного. Кратко, 100 мкл смеси ЛПС+CS равномерно ингалировали в нос и рот связанным мышам. Исследуемые группы были разделены на шесть групп, т.е., (i) нормальная группа без обработки (интактная), (ii) контрольная группа, получавшая смесь ЛПС+CS (ХОБЛ-контроль), (iii) исследуемая группа, получавшая ATC2 (30 мг/кг, перорально) за 1 час до получения ЛПС+CS (ХОБЛ-ATC2), (iv) исследуемая группа, получавшая верпрозид (30 мг/кг, перорально) за 1 час до получения ЛПС+CS (ХОБЛ-верпрозид), (v) исследуемая группа, получавшая индакатерол (30 мг/кг, перорально) за 1 час до получения ЛПС+CS (ХОБЛ-индакатерол) и (vi) исследуемая группа, получавшая рофлумиласт (30 мг/кг, перорально) за 1 час до получения ЛПС+CS (ХОБЛ-рофлумиласт). После окончания эксперимента, кровь, ЖБАЛ и пневмоноциты каждой мыши выделяли и собирали для исследования.
(2) выделение МКПК из крови и определение количества клеток
После окончания эксперимента, собирали 800~1000 мкл крови из мышей, которым вводили 40 мкл 30 I.U гепарина (APU8AF, JW Pharmaceutical, Корея) и затем анестезировали диэтиловым эфиром согласно сердечной пункции. 500 мкл собранной крови добавляли к 9,5 мл раствора ACK (A1049201. Invitrogen, США) и оставляли в покое на 5 минут для растворения эритроцитов. Кровь центрифугировали в течение 5 минут со скоростью 1200 об/мин для выделения МКПК (мононуклеарные клетки периферической крови) и окрашивали 0,04% трипановым синим (15250061, Invitrogen, США) для подсчета общего количества клеток число/мл.
(3) выделение ЖБАЛ (БАЛ жидкость) и определение общего количества клеток
После сбора крови, 1 мл свободной от ФБС/DMEM среды, содержащейся в шприце, вводили во трахею умерщвленных мышей, мышей фиксировали жгутом для обеспечения циркуляции крови трижды и выделяли клетки из ЖБАЛ. Кровь выделяли, обрабатывали раствором AK при 37°C в течение 5 минут для растворения эритроцитов, промывали свободной от ФБС/DMEM средой и окрашивали 0,04% трипановым синим для подсчета общего количества клеток.
(4) выделение клеток легких (пневмоцитов) и определение общего количества клеток
Легкие отбирали у мышей, у которых не была выделена ЖБАЛ, и легочную ткань нарезали тонкими слоями. К слоям добавляли 3 мл DMEM среды (LM001-05, Welgene, КОРЕЯ) без фетальной бычьей сыворотки (ФБС), при этом к среде был добавлен 1 мг/мл коллагеназы IV (С5138, Sigma-Aldrich, США). Среду инкубировали во встряхивателе-инкубаторе (KMC480S, VISION SCI, Корея) при 37°C в течение 30 минут, ткань перерабатывали более 4 раз для выделения пневмоцитов. Выделенные пневмоциты промывали средой и пропускали через сито для клеток (352350, FALCON, США) для удаления непереработанных тканей, отличных от клеток, или примесей. Клетки обрабатывали раствором ACK при 37°C в течение 5 минут для растворения эритроцитов, снова промывали средой и окрашивали 0,04% трипановым синим (15250061, Invitrogen, США) для подсчета общего количества клеток.
(5) FACS-анализ
Выделенные МКПК, БАЛ (бронхоальвеолярный лаваж) и пневмоциты доводили до 5×105 клеток и проводили иммунофлуоресцентное окрашивание при 4°C. К ним добавляли PE-анти-CD3e (553064, BD Pharmingen, США), FITC-анти-CD8 (553031, BD Pharmingen, США), PE-анти-CD4 (553047, BD Pharmingen, США), PE-анти-Gr-1 (553128, BD Pharmingen, США), и FITC-анти-нейтрофил (ab55453, Abcam, UK), соответственно, и проводили реакцию во льду в течение 30 минут. После реакции клетки промывали забуференным фосфатом физиологическим солевым раствором более трех раз, и частоту клеток (%) CD3+CD4+ и CD3+CD8+ и Gr-1+нейтрофилов+ определяли с помощью программы Cell Quest (643274, BD Biosciences, США) проточного цитометра (FACSCalibur, Becton, Dickinson, США), и абсолютное общее количество в каждой ткани рассчитывали на основании общего количества клеток.
(6) ИФА
Уровни ИЛ-1β, ИЛ-6, ФНО-альфа, ИЛ-17, МХП-1 и GRO-альфа (BioSource, США) в ЖБАЛ, выделенной из мышей, определяли с помощью иммуноферментного анализа. Соответствующие антитела против ИЛ-1β, ИЛ-6, ФНО-альфа, ИЛ-17, МХП-1 и GRO-альфа разводили буфером для иммобилизации (291195, R&D System, США), наносили на микролунку и оставляли в покое на ночь при 4°C. Каждую лунку трижды промывали отмывочным буферным раствором и добавляли 100 мкл 10-кратно разбавленной сыворотки. Раствор оставляли в покое на 1 час при комнатной температуре, дважды промывали отмывочным буфером (Tween-20, Sigma-Aldrich, США), добавляли 100 мкл конъюгированных Avidin-HRP антител (DY998, R&D System, США), оставляли в покое на 1 час при комнатной температуре и снова промывали. К смеси добавляли 100 мкл субстрата ТМБ (555214, BD, США). Раствор оставляли в покое на 30 минут в тени и добавляли 50 мкл стоп-реагента (DY994, R&D system, США) для определения спектральной поглощательной способности с помощью ELISA при 450 нм (340PC384, Molecular Devices, США).
(7) Определение генной экспрессии мРНК в легочной ткани
(7-1) выделение РНК из легочной ткани
Выделяли легочную ткань мышей и измельчали на куски, добавляли 500 мл RNAzolB (CS-105B, Tel-Test, США) для растворения. К 50 мл хлороформа (CHCl3) добавляли смешанный раствор высокой плотности и снова перемешивали в течение 15 секунд. Раствор оставляли в покое во льду в течение 15 минут, центрифугировали при 13000 об/мин для отделения примерно 200 мл супернатанта, добавляли 200 мл 2-пропанола к равному объему супернатанта. Смесь оставляли в покое во льду в течение 15 минут, снова центрифугировали при 13000 об/мин, промывали 80% EtOH и сушили с помощью вакуумного насоса (ULVAC, США) в течение 3 минут для экстракции РНК. Экстрагированную РНК растворяли в 20 мл дистиллированной воды, обработанной диэтилпирокарбонатом (ДЭПК, IBS-BW1004, Intron, Корея), и инактивировали с помощью нагревательного блока (2050, Lab-Line, Индия) при 75°C для применения в синтезе первой цепи кДНК.
(7-2) полимеразная цепная реакция с обратной транскрипцией
Реакцию обратной транскрипции проводили в соответствии с процедурой, как указано далее: 2 мкг полученной общей РНК подвергали реакции в нагревательном блоке при 37°C в течение 30 минут путем добавления ДНКазы I (10 ед/мл), 2 ед/туба, денатурировали при 75°C в течение 10 минут, добавляли 2,5 мл 10 мМ смеси dNTP (4026, 4027, 4028, 4029, TaKaRA, Япония), 1 мл случайной последовательности гексануклеотидов (25 пмоль/25 мл (11034731001, Roche, Германия), 1 мл ингибитора РНКазы (2313A, TaKaRa, Япония, 20 U/mL) в качестве ингибитора РНК, 1 мл 100 мМ DTT (Р1171, Progmega, США), 4,5 мл 5×RT буфера (М531А, Promega, США) и 250 мМ Трис-HCl (pH 8,3, 375 мМ KCl, 15 мМ MgCl2), снова добавляли 1 мл M-MLV RT (200 ед/мл, M1705, Promega, США) и конечный объем раствора доводили до 20 мл путем добавления дистиллированной воды, обработанной ДЭПК (диэтилпирокарбонат). 20 мл реакционной смеси тщательно перемешивали, центрифугировали при 2000 об/мин в течение 5 секунд, подвергали реакции в нагревательном блоке при 37°C в течение 60 минут для синтеза первой цепи кДНК, оставляли в покое на 5 минут при 95°C для инактивации M-MLV RT и применяли синтезированную кДНК в полимеразной цепной реакции (ПЦР).
(7-3) количественная ОТ-ПЦР в режиме реального времени
Синтезированную кДНК применяли в количественной ПЦР в режиме реального времени (Galli SJ. Allergy, Curr. Biol., 10:R93-95, 2006) с применением системы ПЦР в режиме реального времени Applied Biosystems 7500 (Applied Biosystems, США). CATGTTCCAGTATGACTCCACTCACG (VIC, продукт от Applied Biosystems Co. Ltd.) применяли в качестве зонда для ТФР-β1, MUC5AC, и мышиную глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназу (G3PDH), и Sper-Taqman ПЦР мастер-микс (4369016, ABI) применяли в эксперименте для достижения конечной концентрации в реакции 200 нМ. Количественную ПЦР в режиме реального времени проводили, как указано далее: преденатурация: при 50°C в течение 2 минут, при 94°C в течение 10 минут, и 40 циклов при 95°C в течение 0,15 минут, при 60°C в течение 1 минуты. G3PDH (4351309, ABI, США) применяли в качестве внутреннего стандарта в RME обработанной группе и контрольной группе и RQ (относительное количество) рассчитывали согласно следующей эмпирической формуле 2 (см. Таблицу 5).
[Эмпирическая формула 2]
ЦЕЛЕВАЯ ГРУППА КОЛИЧЕСТВЕННОЙ ПЦР y=x(1+e)n
x - начальное количество, y - выход вещества, n - количество циклов, e - эффективность
(8) Гистопатологическое исследование
Выделенные легкие быстро фиксировали 10% раствором формальдегида (F0161, SAMCHUN, Корея) и нарезали тонкими слоями. Слои промывали проточной водой в течение 8 часов, покрывали эпоксидной смолой, нарезали слоями с помощью микротома (SM2000R, LEICA, Германия), окрашивали гематоксилином и эозином, окрашивали трихромом по Массону для выявления отложений коллагена. Для наблюдений бокаловидных клеток, клетки окрашивали PAS (Шифф-йодной кислотой) и наблюдали с помощью 400x оптического микроскопа (333246, NIKON, Япония).
4-5. статистика
Все результаты, полученные из различных экспериментов, были зафиксированы как среднее ± стандартная ошибка, и проверку значимости определяли по t-критерию Стьюдента. Приведенные выше данные были проанализированы согласно однофакторному дисперсионному анализу для определения статистически значимого отклонения между соответствующей группой для каждой определенной конечной точки, и статистическую значимость между каждой группой определяли согласно непараметрическому критерию Манна-Уитни и критерию множественного сравнения Даннета (IBM SPSS statistics version 19.0 statistic software, Inc, IBM, США). Различия между каждым контролем (ХОБЛ-контроль) были очевидны, и поэтому не показаны на фигурах и таблицах. Результаты (представлены как среднее ± стандартная ошибка среднего) были выражены в виде значений P: <0,05 (∗), <0,01 (∗∗) или <0,001 (∗∗∗) как статистически значимые.
4-6. результат исследования
(1) влияние на общее количество иммуноцитов, нейтрофилов и Т-лимфоцитов в ЖБАЛ
Общее количество иммуноцитов, общее количество клеток нейтрофилов+Gr-1+, и общее число клеток CD4+ и CD8+ T клеток в контрольной группе (ХОБЛ-контроль) было резко увеличено по сравнению с количеством в нормальной группе (нормальная группа линии BALB/c). Общее количество иммуноцитов в исследуемой группе, получавшей более 15 мг/кг ATC2 (5, 10, 15, 30 мг/кг), уменьшилось по сравнению с контрольной группой, и в исследуемой группе, получавшей верпрозид (15 мг/кг) и рофлумиласт (15 мг/кг) (p<0,05) количество иммуноцитов резко снижено по сравнению с контрольной группой (Фиг. 14). Общее количество клеток нейтрофилов+Gr-1 (общее абсолютное количество) в исследуемой группе, получавшей более 15 мг/кг (p<0,001) и 30 мг/кг (p<0,001) ATC2 (5, 10, 15, 30 мг/кг), уменьшилось более чем на 73,2% и 81,9%, соответственно, по сравнению с контрольной группой, и количество клеток в исследуемой группе, получавшей верпрозид (15 мг/кг) (p<0,001) и рофлумиласт (15 мг/кг) (p<0,001) снизилось более чем на 93,9% и 97,5%, соответственно, по сравнению с контрольной группой (Фиг. 14). Общее количество клеток CD4+ T клеток (общее абсолютное количество) в исследуемой группе, получавшей 15 мг/кг (p<0,001) и 30 мг/кг (p<0,001) ATC2 (5, 10, 15, 30 мг/кг), уменьшилось более чем на 47,7% и 19,7%, соответственно, по сравнению с контрольной группой, и в исследуемой группе, получавшей верпрозид (15 мг/кг) (p<0,001) и рофлумиласт (15 мг/кг) (p<0,001), количество клеток было снижено более чем на 32,9% и 73,2%, соответственно, по сравнению с контрольной группой (Фиг. 14c). Общее количество клеток CD8+ T клеток (общее абсолютное количество) в исследуемой группе, получавшей ATC2 (5, 10, 15, 30 мг/кг) и верпрозид (15 мг/кг) существенно не отличались от такового в контрольной группе, в то время как в исследуемой группе, получавшей рофлумиласт (15 мг/кг) (p<0,001), количество клеток было снижено более чем на 67,2% по сравнению с таковым в контрольной группе (Фиг. 14).
В результате, было подтверждено, что группы, получавшие более 15 мг/кг ATC2 (5, 10, 15, 30 мг/кг), верпрозид (15 мг/кг), и рофлумиласт (15 мг/кг), показали более сильное ингибирующее действие на пролиферацию и активацию воспалительных иммуноцитов и нейтрофилов, рекрутируемых в легкие, что проявляется в высокой активности противо ХОБЛ.
(2) Влияние на количество нейтрофилов в ЖБАЛ
Число нейтрофилов, окрашенных по Дифф-Квик в контрольной группе (ХОБЛ-контроль) с применением цитоцентрифуги, в ЖБАЛ мышей резко увеличено примерно в 184 раза по сравнению с таковым в нормальной группе (BALB/c нормальная группа) (Фиг. 15). Как показано на Фиг. 15, число нейтрофилов в группе, получавшей 15 мг/кг (p<0,001) и 30 мг/кг (p<0,001) ATC2 (5, 10, 15, 30 мг/кг) сократилось более чем на 89,1% и 72,4%, соответственно, по сравнению с контрольной группой, и в группах, получавших верпрозид (15 мг/кг) (p<0,001) и рофлумиласт (15 мг/кг) (p<0,001) число клеток сократилось более чем на 94,2% и 99,0%, соответственно, по сравнению с контрольной группой.
В результате, было подтверждено, что группы, получавшие более 15 мг/кг ATC2 (5, 10, 15, 30 мг/кг), верпрозид (15 мг/кг) и рофлумиласт (15 мг/кг), показали сильное ингибирующее действие на пролиферацию нейтрофилов, рекрутируемых в легкие, что проявляется в высокой активности против ХОБЛ.
(3) Влияние на воспроизводство CXCL-1, ФНО-альфа и МИП-2 в ЖБАЛ
Различные хемокины МИП-2/CXCL-2, ФНО-альфа и протеаза и т.д. высвобождаются при вызванном воспалительными макрофагами в легких разрушении альвеолярного слоя, и KC/CXCL-1 (хемокины Gro-α) и CXCL-8 стимулируют нейтрофилы, высвобождают протеазу и таким образом снова разрушают альвеолы, приводя к ХОБЛ (Blidberg K, Palmberg L, Dahlen B, Lantz AS, Larsson K. 2012. Chemokine release by neutrophils in chronic obstructive pulmonary disease. Innate Immun. 18: 503-510).
На Фиг. 16A показано воспроизводство хемокина KC/CXCL-1 (хемокины Gro-α) в ЖБАЛ мышей, определенное способом ИФА, при этом воспроизводство хемокина KC/CXCL-1 (хемокины Gro-α) в контрольной группе было резко увеличено примерно в 5,9 раз по сравнению с таковым в контрольной группе (нормальная группа BALB/c). Воспроизводство хемокина KC/CXCL-1 (хемокины Gro-α) в группе, получавшей 15 мг/кг (p<0,001) и 30 мг/кг (p<0,001) ATC2 (5, 10, 15, 30 мг/кг) сократилось более чем на 46,8% и 83,9%, соответственно, по сравнению с контрольной группой, и в группах, получавших верпрозид (15 мг/кг) (p<0,05) и рофлумиласт (15 мг/кг) (p<0,01) воспроизводство хемокина сократилось более чем на 57,4% и 82,7%, соответственно, по сравнению с контрольной группой. На Фиг. 16B показано воспроизводство ФНО-альфа в ЖБАЛ мышей, определенное способом ИФА, при этом воспроизводство ФНО-альфа в контрольной группе было резко увеличено примерно в 2,8 раза по сравнению с таковым в контрольной группе (нормальная группа BALB/c). Воспроизводство ФНО-альфа в группе, получавшей 15 мг/кг (p<0,05) и 30 мг/кг (p<0,01) ATC2 (5, 10, 15, 30 мг/кг) сократилось более чем на 45,5% и 63,4%, соответственно, по сравнению с контрольной группой, и в группах, получавших верпрозид (15 мг/кг) (p<0,05) и рофлумиласт (15 мг/кг) (p<0,01) сократилось более чем на 42,2% и 65,0%, соответственно, по сравнению с контрольной группой. На Фиг. 16C показано воспроизводство хемокинов МИП-2/CXCL-2 в ЖБАЛ мышей, определенное способом ИФА, при этом воспроизводство хемокинов МИП-2/CXCE-2 в контрольной группе было резко увеличено примерно в 5,2 раза по сравнению с таковым в контрольной группе (нормальная группа BALB/c). Воспроизводство хемокинов МИП-2/CXCL-2 в группе, получавшей 15 мг/кг (p<0,05) и 30 мг/кг (p<0,001) ATC2 (5, 10, 15, 30 мг/кг) сократилось более чем на 48,4% и 86,4%, соответственно, по сравнению с контрольной группой, и в группах, получавших верпрозид (15 мг/кг) (p<0,01) и рофлумиласт (15 мг/кг) (p<0,001), сократилось более чем на 63,0% и 81,9%, соответственно, по сравнению с контрольной группой.
В результате, было подтверждено, что группы, получавшие более 15 мг/кг ATC2 (5, 10, 15, 30 мг/кг), верпрозид (15 мг/кг), рофлумиласт (15 мг/кг), показали более сильное ингибирующее действие на воспроизводство хемокинов МИП-2/CXCL-2, ФНО-альфа, KC/CXCL-1 (хемокины Gro-α) и CXCL-8 и т.д., участвующих в разрушении клеток легких, что проявляется в высокой активности против ХОБЛ.
Экспериментальный пример 5. Модель исследования на животном (крыса)
Для определения эффекта против ХОБЛ экстракта или соединений настоящего изобретения на общее число иммуноцитов, нейтрофилов и т.д. в ЖБАЛ, воспроизведенный уровень цитокинов, таких как ИЛ-1бета, ИЛ-6, ФНО-альфа, активацию ММП-9, экспрессию провоспалительных белков, таких как ММП-9, NF-каппаВ, и воспалительный ответ в легочной ткани, выполняли следующее исследование с применением мышей с индуцированной ХОБЛ.
5-1. Опыт на животном
Свободные от патогенной микрофлоры мыши-самцы Спрег-Доули (примерно 180-200 г), в возрасте 6 недель, которые были обычным образом серологически отобраны для соответствующих возбудителей респираторных заболеваний, были приобретены у ORIENT Co. (www.orient.co.kr, Seoul, Корея) и разводились в условиях свободного доступа к корму (без антибиотиков, Samyang Oil & Feed Corp., Корея) и воде в камере для разведения с регулируемой температурой 22±2°C и влажностью 55±15% с 12 часовым циклом чередования света и темноты и акклиматизировались в экспериментальных условиях в течение 1 недели.
5-2. Лекарственное средство и введение
(1) исследуемый образец
3 вида образцов, а именно ATC2 (30 мг/кг), верпрозид (30 мг/кг), даксас (основной компонент: рофлумиласт, 1 мг/кг) растворяли в ФСБ и применяли в качестве исследуемых образцов.
(2) введение
ATC2, верпрозид, индакатерол, даксас вводили мышам перорально в дозе 4 мг/кг, за час до предварительного интратрахеального вливания.
5-3. Подготовка крысиной ХОБЛ-модели
(1) стандарт сигарет
Эталон сигарет Кентукки 3R4F (Университет Калифорнии, США) применяли в качестве стандарта сигарет для генерирования сигаретного дыма. Сигареты, содержащие 9,4 мг смолы, 11 мг TPM (общее количество твердых частиц) и 12 мг монооксида углерода в одной сигарете, применяли после уравновешивания при температуре 22±2°C и относительной влажности 60±2%, после открытия в течение 48~72 часов.
(2) Процедура
Воздействие сигаретным дымом проводили с применением генератора сигаретного дыма (CH Technology Corp. США). В деталях, через 1 час после перорального введения исследуемых образцов с применением воздействия только на одну часть "голова/нос" (TSE System, Германия) в соответствии со способом "только-нос", сигаретный дым ингалировали каждый час в течение 3 дней. В эксперименте выполняли 8 затяжек (объем 35 мл, продолжительность 2 секунды, интервал 1 раз/мин) на единицу стандартной сигареты. Исследуемые группы были разделены на пять групп, т.е., (i) нормальная группа без обработки (нормальный контроль, NC), (ii) контрольная группа, подвергаемая воздействию сигаретным дымом (ХОБЛ), (iii) исследуемая группа, получавшая даксас (1 мг/кг, перорально) за 1 час до воздействия сигаретного дыма (DA), (iv) исследуемая группа, получавшая ATC2 (30 мг/кг, перорально) за 1 час до воздействия сигаретного дыма (YPL), и (v) исследуемая группа, получавшая верпрозид (30 мг/кг, перорально) за 1 час до воздействия сигаретного дыма (Ver). После окончания эксперимента, кровь, ЖБАЛ и пневмоноциты каждой крысы выделяли и собирали для исследования.
5-4. Выделение ЖБАЛ и определение числа иммуноцитов
После окончания эксперимента крыс анестезировали Zoletil50 (3VX9, Virbac, France, p.o) и выделяли кровь через хвостовые вены. Для выделения ЖБАЛ из легких, бронх правого легкого лигировали наложением шва, а затем проводили трахеотомию. Внутривенный катетер (16 GA, 3S-Cath, Dukwoo, Корея) вводили в бронх, бронх и катетер (16 GA, 3S-Cath, Dukwoo, Корея) фиксировали наложением шва. Устройство для инъекций, содержащее 5 мл ФСБД (фосфатно-солевой буфер Дюльбекко, 14190-250, Invitrogen, США) присоединяли к ним и ФСБД искусственно циркулировали три раза для выделения ЖБАЛ. Правое легкое, лигированное наложением шва, выделяли, фиксировали 10%-ным нейтральным раствором формалина, и остальную легочную ткань сохранили в холодильнике при -70°C. Выделенную ЖБАЛ центрифугировали в течение 15 минут при 1500 об/мин для осаждения клеток и супернатант сохранили в холодильнике при -70°C для анализа цитокинов. Клеточный сгусток суспендировали в ФСБД, и клетки прикрепляли к предметному стеклу с помощью цитоцентрифуги (CS03270047, Hanil, Корея). Выполняли окрашивание по Дифф-Квик (ZS1003, Sysmex, Япония) и наблюдали клетки с помощью оптического микроскопа (DM 1000, Leica, Германия) для подсчета количества иммуноцитов в каждом исследуемом образце.
5-5. анализ цитокинов в ЖБАЛ
Уровни ИЛ-1β, ИЛ-6 и ФНО-альфа (R&D System, США) в ЖБАЛ, выделенной из крыс, определяли с помощью иммуноферментного анализа (ИФА). Анализ каждого цитокина проводили в соответствии с инструкцией изготовителя и определяли спектральную поглощательную способность при 450 нм с помощью ИФА (340PC384, Molecular Devices, США).
5-6. Определение экспрессии иммуноцитов
(1) желатиновая зимография
Ткани легких крыс гомогенизировали с помощью буфера для лизиса тканей (С3228, Sigma-Aldrich, США), обрабатывали ингибитором протеазы (11836153001, Roche, Германия) и гомогенизировали ткань легких центрифугированием при 12000 об/мин в течение 10 минут для выделения супернатанта. Для количественной оценки применяли реагент белкового анализа (500-0006, Bio-Rad, США). Для определения активности ММП-9, в эксперименте применяли гель-электрофорез с додецил-сульфатом натрия (SDS-ПААГ), содержащим 1% желатина (G9382, Sigma-Aldrich, США). Белок подвергали электрофорезу в дозе 60 мкг/полоска. Гель зимограммы промывали 2,5% Triton Х-100 (0694, Amresco, США) и подвергали реакции в течение 16 часов при 37°C с применением проявляющего буфера (1М Трис-HCl, pH 7.5 с CaCl2, T1503, Sigma-Aldrich, США). После завершения реакции, гель зимограммы окрашивали с помощью кумасси бриллиантовый голубой (0472, Amresco, США) и промывали обесцвечивающим буфером {500 мл метанола (M1447, Samchun, Корея) + 1400 мл дистиллированной воды + 160 мл уксусной кислоты (9151, J.T. Baker)}. Плотность ММП-9 бэнда определяли с помощью Chemidoc (170-8070, Bio-Rad, США) для определения активности ММП-9.
(2) Вестерн-блоттинг
Белок, полученный с помощью гомогенизации, наносили на электрофорез в дозе 30 мкг/полоска и переносили с применением мембраны из поливинилидендифторида (ПВДФ) (IPVH00010, Millipore, США). Мембрану (IPVH00010, Millipore, США) блокировали 5% обезжиренным молоком, а затем подвергали взаимодействию с антителами анти-ММП-9 (ab38898, Abcam, UK), анти-р65 (sc-372, Santa Cruz, США) и анти-p-p65 (sc-33039, Santa Cruz, США). После завершения реакции мембрану промывали TBST (Трис-буферизированный солевой раствор, содержащий 0,05% Tween-20, HT2008, Biosesang, Корея) и подвергали взаимодействию с подходящим вторичным антителом (sc-358914, Santa Cruz, США) при комнатной температуре в течение 1 часа. Мембрану снова промывали TBST и бэнд верифицировали с помощью набора хемилюминесценции (34095, Thermo, США).
5-7. гистопатологическое исследование
Выделенные легкие быстро фиксировали 10% раствором формальдегида (F0161, SAMCHUN, Корея) и нарезали тонкими слоями. Слои промывали проточной водой в течение 8 часов, покрывали эпоксидной смолой, нарезали слоями с помощью микротома (SM2000R, LEICA, Германия), и окрашивали гематоксилином (MHS-16, Sigma-Aldrich, США) и эозином (HT110-1-32, Sigma-Aldrich, США). Для наблюдения гистопатологических изменений в легочной ткани, клетки наблюдали с помощью 400x оптического микроскопа (DM1000, Leica, Германия).
5-8. статистика
Все результаты, полученные из различных экспериментов, были определены с помощью однофакторного дисперсионного анализа, и статистическую значимость между каждой группой определяли согласно критерию множественного сравнения Даннета для последующего сравнения результатов.
5-9. результат исследования
(1) влияние на общее количество иммуноцитов в ЖБАЛ
В ХОБЛ-индуцированной группе наблюдали характеристический повышенный уровень нейтрофилов. Контрольная группа, получавшая даксас, показала понижение уровня нейтрофилов, однако это не существенно по сравнению с ХОБЛ-индуцированной группой. В то же время группы, получавшие ATC2 и верпрозид, показали существенное понижение уровня нейтрофилов и общего числа иммуноцитов по сравнению с ХОБЛ-индуцированной группой (Фиг. 17A). Снижение наблюдалось в отношении уровня нейтрофилов к общему количеству иммуноцитов. Группа положительного контроля, получавшая даксас, показала аналогичное отношение числа нейтрофилов к числу иммуноцитов в случае подсчета 300 иммуноцитов для ХОБЛ-индуцированной группы, тогда как группы, получавшие ATC2 и верпрозид, показали существенное понижение отношения числа нейтрофилов (Фиг. 17B).
(2) влияние на высвобождение цитокинов в ЖБАЛ
Уровни ИЛ-1β, ИЛ-6 и ФНО-альфа в ЖБАЛ резко выросли у ХОБЛ-индуцированной группы. Контрольная группа, получавшая даксас, не показала значительное понижение уровня цитокинов по сравнению с ХОБЛ-индуцированной группой. В то же время, группы, получавшие ATC2 и верпрозид, показали существенное понижение уровня цитокинов по сравнению с ХОБЛ-индуцированной группой, у которой уровень резко понизился по сравнению с контрольной группой, получавшей даксас (Фиг. 18).
(3) влияние на активность ММП-9 в легочной ткани
В ХОБЛ-индуцированной группе была значительно повышена активность ММП-9, важного медиатора, участвующего в воспалении и разрушении внеклеточного матрикса. В то же время, группы, получавшие ATC2 и верпрозид, показали значительно пониженную активность ММП-9, уровень которого был схож с уровнем в контрольной группе, получавшей даксас (Фиг. 19).
(4) влияние на экспрессию провоспалительных белков в легочной ткани
В ХОБЛ-индуцированной группе активность провоспалительных белков, таких как ММП-9 и NF-каппаВ, была значительно повышена. Тем не менее, такая повышенная экспрессия провоспалительных белков у ХОБЛ-индуцированной группы значительно понизилась у групп, получавших ATC2 и верпрозид, аналогично контрольной группе, получавшей даксас (Фиг. 20).
(5) влияние на воспаление в легочной ткани
В ХОБЛ-индуцированной группе была показана инфильтрация множества воспалительных клеток в бронхи, периваскулярную ткань и интерстициальную ткань и т.д. Тем не менее, такое повышенное воспаление у ХОБЛ-индуцированной группы значительно снизилось у групп, получавших ATC2 и верпрозид, а также в контрольной группе, получавшей даксас, при этом ингибирующий эффект на воспаление в группах, получавших ATC2 и верпрозид, был более сильным, чем в контрольной группе, получавшей даксас (Фиг. 21).
В результате, было подтверждено, что ATC2 и соединения, выделенные из него, верпрозид и т.п., имеют сильное лечебное действие на ХОБЛ посредством ингибирования высвобождения ИЛ-1β, ИЛ-6 или ФНО-альфа, активации NF-каппаВ и экспрессии ММП-9, основной причины ХОБЛ. Было подтверждено, что такое лечебное действие экстракта или соединений настоящего изобретения аналогично или более сильное, чем у обычно используемого для лечения ХОБЛ вещества (даксас).
Экспериментальный пример 6. Исследование острой токсичности перорального введения у крыс.
Исследование острой токсичности проводили путем введения экстракта и соединений по изобретению крысам СПФ линии Спрег-Доули в возрасте 6 недель.
250 мг/кг, 500 мг/кг, 1000 мг/кг, 5000 мг/кг экстракта и соединений настоящего изобретения перорально вводили каждой группе, состоящей из 2 крыс, и симптомы у крыс наблюдались в течение 14 дней. После введения экстракта или соединений наблюдали все клинические изменения, т.е. смертность, клинические признаки, изменения массы тела, и были проведены исследования крови, такие как гематологическое исследование и гематологическая биохимия. После вскрытия наблюдали аномальные изменения органов брюшной полости и грудной клетки.
Не было показано каких-либо изменений в смертности, клинических признаках, изменений массы тела и обобщенных данных в любой группе или любого пола. Кроме того, была показана токсичность в исследуемой группе, получавшей 5000 мг/кг экстракта или соединений настоящего изобретения.
Соответственно, было подтверждено, что экстракт и соединения настоящего изобретения являются эффективным и безопасным веществом, показывающим LD50 (более 5000 мг/кг) при пероральном введении.
Осуществление изобретения
В дальнейшем описаны способы приготовления лекарственного средства и виды вспомогательных веществ, но настоящее изобретение не ограничивается перечисленным. Далее описаны типичные примеры препаратов.
Препарат в виде инъекции
ATC1 экстракт | 100 мг |
Метабисульфит натрия | 3,0 мг |
Метилпарабен | 0,8 мг |
Пропилпарабен | 0,1 мг |
Дистиллированная вода для инъекций | оптимальное количество |
Препарат в виде инъекции получали растворением активного компонента, установлением pH приблизительно 7,5 и затем ведением всех компонентов в 2 мл ампулу и стерилизацией способом, общепринятым для препаратов в виде инъекции.
Препарат в виде порошка
ATC2 экстракт | 500 мг |
Кукурузный крахмал | 100 мг |
Лактоза | 100 мг |
Тальк | 10 мг |
Препарат в виде порошка получали смешиванием вышеуказанных компонентов и наполнением герметичной упаковки.
Препарат в виде таблетки
Верпрозид | 200 мг |
Кукурузный крахмал | 100 мг |
Лактоза | 100 мг |
Стеарат магния | оптимальное количество |
Препарат в виде таблетки смешиванием вышеуказанных компонентов и формированием таблетки.
Препарат в виде капсулы
Вератровая кислота | 100 мг |
Лактоза | 50 мг |
Кукурузный крахмал | 50 мг |
Тальк | 2 мг |
Стеарат магния | оптимальное количество |
Препарат в виде таблетки, получали смешиванием вышеуказанных компонентов и наполнением желатиновой капсулы способом, общепринятым для желатинового препарата.
Препарат в виде жидкости
Каталпозид | 1000 мг |
Сахар | 20 г |
Полисахарид | 20 г |
Лимонный аромат | 20 г |
Препарат в виде жидкости получали растворением активного компонента и затем введением всех компонентов в 1000 мл ампулу и стерилизацией способом, общепринятым для препаратов в виде жидкости.
Препарат в виде полезного для здоровья пищевого продукта
ATC2 экстракт | 1000 мг |
Витаминная смесь | оптимальное количество |
Витамин A ацетат | 70 г |
Витамин E | 1,0 мг |
Витамин B10 | 0,13 мг |
Витамин B2 | 0,15 мг |
Витамин B6 | 0,5 мг |
Витамин B1 | 0,2 г |
Витамин C | 10 мг |
Биотин | 10 г |
Амид никотиновой кислоты | 1,7 мг |
Фолиевая кислота | 50 г |
Кальций пантотеновая кислота | 0,5 мг |
Смесь минералов | оптимальное количество |
Сульфат железа | 1,75 мг |
Оксид цинка | 0,82 мг |
Карбонат магния | 25,3 мг |
Монокалий фосфат | 15 мг |
Дикальций фосфат | 55 мг |
Калия цитрат | 90 мг |
Кальция карбонат | 100 мг |
Магния хлорид | 24,8 мг |
Вышеуказанные смеси витаминов и минералов можно изменять различными способами. Такие варианты не следует рассматривать как отступление от сущности и объема настоящего изобретения.
Препарат в виде полезного для здоровья напитка
6-O-вератроил каталпол | 1000 мг |
Лимонная кислота | 1000 мг |
Олигосахариды | 100 г |
Концентрат абрикоса | 2 г |
Таурин | 1 г |
Дистиллированная вода | 900 мл |
Препарат в виде полезного для здоровья напитка получали растворением активного компонента, смешиванием, перемешиванием при 85°C в течение 1 часа, фильтрованием и затем введением всех компонентов в 1000 мл ампулу и стерилизацией способом, общепринятым для препарата в виде полезного для здоровья напитка.
Из описанного таким образом изобретения будет понятно, что представленное описание можно изменять несколькими путями. Такие варианты не следует рассматривать как отступление от сущности и объема настоящего изобретения, и все такие модификации, как будет понятно для специалиста в данной области, предназначены для включения в объем следующей далее формулы изобретения.
Промышленная применимость
Как описано в настоящем изобретении, очищенный экстракт настоящего изобретения, содержащий высокие количества активных компонентов, таких как производные каталпола из экстракта Pseudolysimachion rotundum var subintegrum, или по меньшей мере одного соединения, выбранного из группы, состоящей из вератровой кислоты, верпрозида, каталпозида, пикрозида II, изованиллоил каталпола и 6-O-вератроил каталпола, показал высокую активность против ХОБЛ без агонистического эффекта на бета-2-рецепторы в различных исследованиях in vivo с использованием линии BALB/c мышей-самцов, например, исследовании ингибирования пролиферации и активности воспалительных иммуноцитов и рекрутинга нейтрофилов в легкие, вызванных заболеванием ХОБЛ; исследовании ингибирования воспроизводства хемокинов, вовлеченных в разрушение пневмоцитов, таких как МИП-2/CXCL-2, ФНО-альфа, KC/CXCL-1 (хемокины Gro-альфа), CXCL-8 и т.д.; эффект снижения высвобождения ИЛ-1 бета, ИЛ-6, ФНО-альфа и ММП-9 экспрессии путем уменьшения активации NF-каппаВ в исследованиях на животных с применением СПФ (свободный от патогенной микрофлоры) крыс линии Спрег-Доули, а также исследовании in vitro, например, исследовании ингибирования экспрессии гена MUC5AC (олигомерного слизь/гель-образующего), индуцирующий эффект на ИЛ-4 экспрессию Th2 клетками в исследовании анализа изменений молекулярной экспрессии и т.д. Таким образом, его можно использовать в качестве терапевтического средства или функционального полезного для здоровья пищевого продукта для лечения и профилактики хронической обструктивной болезни легких (ХОБЛ).
Claims (6)
1. Фармацевтическая композиция, содержащая экстракт, очищенный с помощью вторичного фракционирования (АТС2), содержащий 30-60% (масс./масс.) верпрозида, 0,5-10% (масс./масс.) вератровой кислоты, 2-20% (масс./масс.) каталпозида, 1-10% (масс./масс.) пикрозида II, 1-10% (масс./масс.) изованиллоил каталпола и 2-20% (масс./масс.) 6-О-вератроил каталпола в расчете на массу общего экстракта (100%) Pseudolysimachion rotundum var. subintegrum, или верпрозид, для лечения или профилактики хронической обструктивной болезни легких (ХОБЛ).
2. Фармацевтическая композиция по п. 1, в которой указанный экстракт, очищенный с помощью вторичного фракционирования (АТС2), получен по способу, включающему: добавление на первой стадии по меньшей мере одного экстрагирующего растворителя, выбранного из воды, метанола, этанола, бутанола или их смесей, с получением сухого Pseudolysimachion rotundum var. subintegrum; осуществление на второй стадии по меньшей мере одного способа экстракции, выбранного из экстракции горячей водой в колбе с обратным холодильником, экстракции холодной водой, многократной ультразвуковой или обычной экстракции с получением первичного экстракта; суспендирование на третьей стадии первичного экстракта в примерно 0,5-10-кратном объеме (об./об.) воды с получением суспендированного экстракта; добавление на третьей стадии примерно 0,5-20-кратного объема (об./об.) бутанола, разделение на водный слой и слой бутанола и отбор слоя бутанола с получением фракционированного с помощью бутанола очищенного экстракта (АТС1); и осуществление по меньшей мере одного способа очистки очищенного экстракта, фракционированного с помощью бутанола (АТС1), при этом способ очистки выбран из группы, состоящей из обращенно-фазовой распределительной хроматографии, нормально-фазовой распределительной хроматографии, ионообменной хроматографии и гель-хроматографии или их комбинации, с получением экстракта, очищенного с помощью вторичного фракционирования (АТС2), содержащего 30-60% (масс./масс.) верпрозида, 0,5-10% (масс./масс.) вератровой кислоты, 2-20% (масс./масс.) каталпозида, 1-10% (масс./масс.) пикрозида II, 1-10% (масс./масс.) изованиллоил каталпола и 2-20% (масс./масс.) 6-О-вератроил каталпола в расчете на массу общего экстракта (100%) Pseudolysimachion rotundum var. subintegrum.
3. Фармацевтическая композиция, содержащая экстракт, очищенный с помощью вторичного фракционирования (АТС2), содержащий 30-60% (масс./масс.) верпрозида, 0,5-10% (масс./масс.) вератровой кислоты, 2-20% (масс./масс.) каталпозида, 1-10% (масс./масс.) пикрозида II, 1-10% (масс/масс.) изованиллоил каталпола и 2-20% (масс./масс.) 6-О-вератроил каталпола в расчете на массу общего экстракта (100%) Pseudolysimachion rotundum var. subintegrum, или верпрозид и фармацевтически приемлемые носители или вспомогательные вещества, для лечения или профилактики хронической обструктивной болезни легких (ХОБЛ).
4. Фармацевтическая композиция, содержащая комбинацию соединений в следующем массовом соотношении: 40-93% верпрозида, 1,0-10% вератровой кислоты, 2,0-25% каталпозида, 1,0-15% пикрозида II, 1,0-15% изованиллоил каталпола и 2,0-25% 6-О-вератроил каталпола, и фармацевтически приемлемые носители или вспомогательные вещества, для лечения или профилактики хронической обструктивной болезни легких (ХОБЛ).
5. Полезный для здоровья функциональный пищевой продукт, содержащий экстракт, очищенный с помощью вторичного фракционирования (АТС2), содержащий 30-60% (масс./масс.) верпрозида, 0,5-10% (масс./масс.) вератровой кислоты, 2-20% (масс./масс.) каталпозида, 1-10% (масс./масс.) пикрозида II, 1-10% (масс./масс.) изованиллоил каталпола и 2-20% (масс./масс.) 6-О-вератроил каталпола в расчете на массу общего экстракта (100%) Pseudolysimachion rotundum var. subintegrum, или верпрозид в качестве активного ингредиента, для облегчения или профилактики хронической обструктивной болезни легких (ХОБЛ).
6. Полезный для здоровья функциональный пищевой продукт, содержащий комбинацию соединений в следующем массовом соотношении: 40-93% верпрозида, 1,0-10% вератровой кислоты, 2,0-25% каталпозида, 1,0-15% пикрозида II, 1,0-15% изованиллоил каталпола и 2,0-25% 6-О-вератроил каталпола, для облегчения или профилактики хронической обструктивной болезни легких (ХОБЛ).
Applications Claiming Priority (5)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
KR20130039458 | 2013-04-10 | ||
KR10-2013-0039458 | 2013-04-10 | ||
KR10-2014-0036245 | 2014-03-27 | ||
KR1020140036245A KR101476095B1 (ko) | 2013-04-10 | 2014-03-27 | 고함량의 카탈폴 유도체를 다량 함유한 산꼬리풀 유래 꼬리풀 신규 정제물 또는 이로부터 분리된 카탈폴 유도체를 유효성분으로 포함하는 만성 폐쇄성 폐질환의 예방 또는 치료용 조성물 |
PCT/KR2014/003080 WO2014168413A1 (en) | 2013-04-10 | 2014-04-09 | The composition comprising a purified extract isolated from pseudolysimachion rotundum var. subintegrum containing abundant amount of active ingredient or the compounds isolated therefrom, as an active ingredient for preventing or treating chronic obstructive pulmonary disease and the use thereof |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2594061C1 true RU2594061C1 (ru) | 2016-08-10 |
Family
ID=51993687
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2015138441/15A RU2594061C1 (ru) | 2013-04-10 | 2014-04-09 | КОМПОЗИЦИЯ, СОДЕРЖАЩАЯ ОЧИЩЕННЫЙ ЭКСТРАКТ, ВЫДЕЛЕННЫЙ ИЗ Pseudolysimachion rotundum var. subintegrum, СОДЕРЖАЩИЙ БОЛЬШОЕ КОЛИЧЕСТВО АКТИВНОГО КОМПОНЕНТА, ИЛИ СОЕДИНЕНИЯ, ВЫДЕЛЕННЫЕ ИЗ НЕГО, В КАЧЕСТВЕ АКТИВНОГО КОМПОНЕНТА, ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ ИЛИ ЛЕЧЕНИЯ ХРОНИЧЕСКОЙ ОБСТРУКТИВНОЙ БОЛЕЗНИ ЛЕГКИХ (ХОБЛ) И ЕЕ ПРИМЕНЕНИЕ |
Country Status (14)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US9655871B2 (ru) |
EP (2) | EP3019182B1 (ru) |
JP (1) | JP5982077B2 (ru) |
KR (1) | KR101476095B1 (ru) |
CN (1) | CN105120880B (ru) |
AU (1) | AU2014251492B2 (ru) |
BR (1) | BR112015025595A2 (ru) |
CA (2) | CA2957180C (ru) |
EC (1) | ECSP15025868A (ru) |
ES (1) | ES2728548T3 (ru) |
MX (1) | MX2015008538A (ru) |
PL (1) | PL3019182T3 (ru) |
RU (1) | RU2594061C1 (ru) |
WO (1) | WO2014168413A1 (ru) |
Families Citing this family (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
KR101476095B1 (ko) | 2013-04-10 | 2014-12-23 | 영진약품공업주식회사 | 고함량의 카탈폴 유도체를 다량 함유한 산꼬리풀 유래 꼬리풀 신규 정제물 또는 이로부터 분리된 카탈폴 유도체를 유효성분으로 포함하는 만성 폐쇄성 폐질환의 예방 또는 치료용 조성물 |
CN115554286A (zh) * | 2022-11-17 | 2023-01-03 | 云南养瑞科技集团有限公司 | 咖啡酸衍生物在制备治疗慢性阻塞性肺病药物中的应用 |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2006129964A1 (en) * | 2005-05-30 | 2006-12-07 | Korea Research Institute Of Bioscience And Biotechnology | Pharmaceutical composition comprising an extract of pseudolysimachion longifolium and the catalpol derivatives isolated therefrom having antiinflammatory, antiallergic and antiasthmatic activity |
Family Cites Families (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN100349590C (zh) * | 2004-07-02 | 2007-11-21 | 罗何生 | 地黄茎叶及其提取物抗哮喘和抗过敏的医药用途 |
KR100860080B1 (ko) | 2005-05-30 | 2008-09-24 | 한국생명공학연구원 | 항염, 항알레르기 및 항천식 활성을 갖는 꼬리풀속 식물추출물을 함유하는 약학조성물 |
KR20060125499A (ko) | 2005-05-30 | 2006-12-06 | 한국생명공학연구원 | 항염, 항알레르기 및 항천식 활성을 갖는 긴산꼬리풀추출물로부터 분리된 카탈폴 유도체를 함유하는 약학조성물 |
KR101476045B1 (ko) * | 2012-12-31 | 2014-12-23 | 영진약품공업주식회사 | 활성성분을 다량 함유한 산꼬리풀 정제 분획물 (atc2), 이의 제조방법 및 이를 유효성분으로 포함하는 염증, 알레르기 및 천식의 예방 또는 치료용 조성물 |
KR101476095B1 (ko) | 2013-04-10 | 2014-12-23 | 영진약품공업주식회사 | 고함량의 카탈폴 유도체를 다량 함유한 산꼬리풀 유래 꼬리풀 신규 정제물 또는 이로부터 분리된 카탈폴 유도체를 유효성분으로 포함하는 만성 폐쇄성 폐질환의 예방 또는 치료용 조성물 |
-
2014
- 2014-03-27 KR KR1020140036245A patent/KR101476095B1/ko active IP Right Grant
- 2014-04-09 AU AU2014251492A patent/AU2014251492B2/en active Active
- 2014-04-09 RU RU2015138441/15A patent/RU2594061C1/ru active
- 2014-04-09 CA CA2957180A patent/CA2957180C/en active Active
- 2014-04-09 CN CN201480020503.3A patent/CN105120880B/zh active Active
- 2014-04-09 BR BR112015025595A patent/BR112015025595A2/pt not_active Application Discontinuation
- 2014-04-09 EP EP14782160.7A patent/EP3019182B1/en active Active
- 2014-04-09 ES ES14782160T patent/ES2728548T3/es active Active
- 2014-04-09 EP EP19162236.4A patent/EP3586859A1/en not_active Withdrawn
- 2014-04-09 WO PCT/KR2014/003080 patent/WO2014168413A1/en active Application Filing
- 2014-04-09 PL PL14782160T patent/PL3019182T3/pl unknown
- 2014-04-09 JP JP2016507885A patent/JP5982077B2/ja active Active
- 2014-04-09 MX MX2015008538A patent/MX2015008538A/es active IP Right Grant
- 2014-04-09 US US14/780,503 patent/US9655871B2/en active Active
- 2014-04-09 CA CA2905356A patent/CA2905356C/en active Active
-
2015
- 2015-06-17 EC ECIEPI201525868A patent/ECSP15025868A/es unknown
-
2016
- 2016-12-19 US US15/384,302 patent/US10172816B2/en active Active
Patent Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2006129964A1 (en) * | 2005-05-30 | 2006-12-07 | Korea Research Institute Of Bioscience And Biotechnology | Pharmaceutical composition comprising an extract of pseudolysimachion longifolium and the catalpol derivatives isolated therefrom having antiinflammatory, antiallergic and antiasthmatic activity |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
OH SR et all. Suppressive effect of verproside isolated from Pseudolysimachion longifolium on airway inflammation in a mouse model of allergic asthma //Int Immunopharmacol., 2006, Jun, 6 (6): 978-86. * |
RAM A et all. Medicinal plants useful for treating chronic obstructive pulmonary disease (COPD): current status and future perspectives //Fitoterapia. 2011 Mar, 82(2): 141-51. EUN JEONG PARK et all. Pharmacokinetics of Verproside after intravenous and oral administration in rats //Arch pharm res vol 32, N 4, 2009, 559-564. * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN105120880B (zh) | 2017-06-13 |
CA2905356A1 (en) | 2014-10-16 |
CA2957180A1 (en) | 2014-10-16 |
EP3019182B1 (en) | 2019-03-13 |
JP5982077B2 (ja) | 2016-08-31 |
EP3586859A1 (en) | 2020-01-01 |
WO2014168413A1 (en) | 2014-10-16 |
BR112015025595A2 (pt) | 2017-07-18 |
ECSP15025868A (es) | 2016-01-29 |
PL3019182T3 (pl) | 2019-09-30 |
AU2014251492A1 (en) | 2015-11-12 |
US9655871B2 (en) | 2017-05-23 |
EP3019182A4 (en) | 2016-09-28 |
US20170266142A1 (en) | 2017-09-21 |
CA2905356C (en) | 2018-05-22 |
AU2014251492B2 (en) | 2018-12-06 |
JP2016516783A (ja) | 2016-06-09 |
CN105120880A (zh) | 2015-12-02 |
EP3019182A1 (en) | 2016-05-18 |
US10172816B2 (en) | 2019-01-08 |
ES2728548T3 (es) | 2019-10-25 |
KR101476095B1 (ko) | 2014-12-23 |
CA2957180C (en) | 2019-10-15 |
KR20140122656A (ko) | 2014-10-20 |
MX2015008538A (es) | 2016-04-15 |
US20160051612A1 (en) | 2016-02-25 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
KR101647029B1 (ko) | 피스타시아 웨인마니폴리아 추출물, 이의 분획물 또는 이로부터 분리된 화합물을 포함하는 만성폐쇄성 폐질환(copd) 예방 또는 치료용 약학적 조성물 | |
KR20140087982A (ko) | 활성성분을 다량 함유한 산꼬리풀 정제 분획물, 이의 제조방법 및 이를 유효성분으로 포함하는 염증, 알레르기 및 천식의 예방 또는 치료용 조성물 | |
US10765655B2 (en) | Composition containing monoacetyldiglyceride compound as active ingredient for preventing or treating chronic obstructive pulmonary disease | |
KR20130107531A (ko) | 백합 추출물을 유효성분으로 함유하는 만성폐쇄성 폐질환 예방 및 치료용 약학적 조성물 | |
RU2594061C1 (ru) | КОМПОЗИЦИЯ, СОДЕРЖАЩАЯ ОЧИЩЕННЫЙ ЭКСТРАКТ, ВЫДЕЛЕННЫЙ ИЗ Pseudolysimachion rotundum var. subintegrum, СОДЕРЖАЩИЙ БОЛЬШОЕ КОЛИЧЕСТВО АКТИВНОГО КОМПОНЕНТА, ИЛИ СОЕДИНЕНИЯ, ВЫДЕЛЕННЫЕ ИЗ НЕГО, В КАЧЕСТВЕ АКТИВНОГО КОМПОНЕНТА, ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ ИЛИ ЛЕЧЕНИЯ ХРОНИЧЕСКОЙ ОБСТРУКТИВНОЙ БОЛЕЗНИ ЛЕГКИХ (ХОБЛ) И ЕЕ ПРИМЕНЕНИЕ | |
AU2016273886B2 (en) | A novel compound (KS 513) isolated from pseudolysimachion rotundum var. subintegrum, the composition comprising the same as an active ingredient for preventing or treating allergy disease, inflammatory disease, asthma or chronic obstructive pulmonary disease and the use thereof | |
KR101787006B1 (ko) | 이리도이드 유도체 화합물을 유효성분으로 함유하는 남성 불임증 예방 및 치료용 조성물 | |
KR102652888B1 (ko) | 시호 추출물을 유효성분으로 함유하는 만성폐쇄성폐질환의 예방, 개선 또는 치료용 조성물 | |
KR101638795B1 (ko) | 산꼬리풀 추출물로부터 분리된 신규 화합물 및 이를 유효성분으로 포함하는 알러지, 염증, 천식 또는 만성 폐쇄성 폐질환의 예방 또는 치료용 조성물 | |
KR20150112150A (ko) | 영릉향 메탄올 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 항암용 조성물 |