RU2519031C1 - Жидкие препаративные формы для длительно действующего конъюгата g-csf - Google Patents
Жидкие препаративные формы для длительно действующего конъюгата g-csf Download PDFInfo
- Publication number
- RU2519031C1 RU2519031C1 RU2012135524/15A RU2012135524A RU2519031C1 RU 2519031 C1 RU2519031 C1 RU 2519031C1 RU 2012135524/15 A RU2012135524/15 A RU 2012135524/15A RU 2012135524 A RU2012135524 A RU 2012135524A RU 2519031 C1 RU2519031 C1 RU 2519031C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- csf
- liquid formulation
- long
- concentration
- acting
- Prior art date
Links
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/08—Solutions
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
- A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
- A61K38/193—Colony stimulating factors [CSF]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/08—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
- A61K47/12—Carboxylic acids; Salts or anhydrides thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/26—Carbohydrates, e.g. sugar alcohols, amino sugars, nucleic acids, mono-, di- or oligo-saccharides; Derivatives thereof, e.g. polysorbates, sorbitan fatty acid esters or glycyrrhizin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
- A61K47/42—Proteins; Polypeptides; Degradation products thereof; Derivatives thereof, e.g. albumin, gelatin or zein
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
- A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
- A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
- A61K47/6811—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being a protein or peptide, e.g. transferrin or bleomycin
- A61K47/6813—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being a protein or peptide, e.g. transferrin or bleomycin the drug being a peptidic cytokine, e.g. an interleukin or interferon
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
- A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/20—Pills, tablets, discs, rods
- A61K9/28—Dragees; Coated pills or tablets, e.g. with film or compression coating
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
- C07K14/53—Colony-stimulating factor [CSF]
- C07K14/535—Granulocyte CSF; Granulocyte-macrophage CSF
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Zoology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Inorganic Chemistry (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
Abstract
Изобретение относится к медицине и касается жидкой препаративной формы длительно действующего конъюгата фактора, стимулирующего колонии гранулоцитов (G-CSF), содержащей терапевтически эффективное количество длительно действующего конъюгата фактора, стимулирующего колонии гранулоцитов, в котором G-CSF ковалентно связан с фрагментом Fc иммуноглобулина посредством непептидного полимера, и лишенный альбумина стабилизатор, содержащий буфер и манит. Изобретение обеспечивает возможность длительно действующим конъюгатам G-CSF, которые имеют улучшенную длительность действия и стабильность in vivo, оставаться стабильными при хранении в течение длительного периода времени. 23 з.п. ф-лы, 1 ил., 16 табл., 8 пр.
Description
Область техники, к которой относится изобретение
Настоящее изобретение относится к жидкой препаративной форме для обеспечения стабильности при длительном хранении длительно действующего конъюгата G-CSF, в котором G-CSF, непептидный полимер и фрагмент иммуноглобулина Fc ковалентно связаны и который проявляет увеличенную продолжительность действия по сравнению с диким типом.
Предшествующий уровень техники
Фактор, стимулирующий колонии гранулоцитов (G-CSF), представляет собой цитокин, который стимулирует стволовые клетки костного мозга и лейкоциты для индукции их дифференциации и пролиферации. Он представляет собой гликопротеин с молекулярной массой в диапазоне от 18000 до 19000 Да с pI 6,1 (5,5-6,1 в зависимости от степени гликозилирования (Nomura et al., EMBO J. 5(5): 871-876, 1986).
Технология рекомбинантной ДНК выявила молекулярные и генетические свойства G-CSF (Clark и Kamen, Science, 236:1229-1237, 1987). Со времени клонирования гена человеческого G-CSF из библиотек кДНК, сконструированных мРНК, выделенных из клеточных линий CHU-2 и карциномы мочевого пузыря человека 5637 (Nagata et al., Nature, 319: 415-418, 1986; Nagata et al., EMBO J., 5(3): 575-581, 1986; Souza et al., Science, 232: 61-65, 1986), технология рекомбинантной РНК обеспечила возможность получения G-CSF из клеток млекопитающих и прокариоцитов. Кроме того, заявители обнаружили, что модифицированный hG-CSF, который отличается от дикого типа тем, что, по меньшей мере, один аминокислотный остаток, в частности цистеиновый остаток в положении 17, замещенный другим аминокислотным остатком, может в большом масштабе секретироваться на его N-конце в периплазму в форме, свободной от метиониновых остатков (патент Кореи № 10-356140).
Поскольку полипептиды имеют тенденцию легко денатурироваться вследствие их низкой стабильности, разрушаться протеолитическими ферментами в крови и легко проходить через почки или печень, то белковые лекарственные препараты, включая полипептиды в качестве фармацевтически эффективных компонентов, должны часто вводиться пациентам для поддержания желательного уровня концентраций и титров в крови. Однако данное частое введение белковых лекарственных препаратов, в частности, путем инъекции вызывает у пациентов боль.
Для разрешения указанных проблем было приложено много усилий для повышения стабильности в сыворотке крови белковых лекарственных средств и поддержания высоких уровней лекарственных средств в крови в течение продолжительного периода времени и, таким образом, максимизации фармацевтической эффективности лекарственных средств. Для применения в препаративных формах длительного действия белковые лекарственные средства должны составляться для наличия высокой стабильности и иметь свои титры, поддерживаемые на достаточно высоких уровнях без вызова иммунных ответов у пациентов.
Для стабилизации белков и предотвращения ферментного разрушения и расщепления почками полимер, имеющий высокую растворимость, такой как полиэтиленгликоль (PEG), обычно использовали для модификации поверхности белкового лекарственного средства. Путем связывания с определенными или различными областями белка-мишени, PEG стабилизирует белок и предотвращает гидролиз, не вызывая тяжелых побочных эффектов (Sada et al., J. Fermentation Bioengineering 71:137-139, 1991). Однако несмотря на способность увеличивать стабильность белка пегилирование имеет такие проблемы, как значительное снижение титров физиологически активных белков. Кроме того, уменьшается выход с увеличением молекулярной массы PEG вследствие сниженной реактивности белков.
Альтернативным способом повышения стабильности in vivo физиологически активных белков является связывание гена физиологически активного белка с геном, кодирующим белок, имеющий высокую стабильность в сыворотке крови, технологией генетической рекомбинации и культивированием клеток, трансфицированных рекомбинантным геном, для получения слитого белка. Например, слитый белок может быть получен конъюгацией альбумина, белка, который, как известно, наиболее эффективен при повышении стабильности белка, или его фрагмента с представляющим интерес физиологически активным белком путем генетической рекомбинации (Публикации PCT №№ WO 93/15199 и WO 93/15200, Публикация Европейского патента № 413622).
Другим способом является применение иммуноглобулина. Как описано в патенте США № 5045312, человеческий гормон роста конъюгируется с бычьим сывороточным альбумином или мышиным иммуноглобулином путем применения поперечно сшивающего агента. Конъюгаты имеют повышенную стабильность по сравнению с немодифицированным гормоном роста. Карбодиимид или глутаральдегид используется в качестве поперечно сшивающего агента. Однако неспецифическое связывание с пептидами, такими как поперечно сшивающие агенты с низкой молекулярной массой, не обеспечивают возможности образования однородных конъюгатов и являются даже токсичными in vivo. Кроме того, в патенте показано усиление активности только благодаря химическому связыванию с гормоном роста. Способ по патенту не может гарантировать усиление активности различным видам полипептидных лекарственных средств, так что в патенте не распознаются даже факторы, связанные со стабильностью белков, такие как длительность, период полувыведения из крови и т.д.
Недавно была предложена лекарственная препаративная форма, которая представляет собой длительно действующую белковую лекарственную препаративную форму и с улучшенной длительностью действия in vivo и стабильностью. Для применения в длительно действующей лекарственной препаративной форме белковый конъюгат получают ковалентным связыванием физиологически активного полипептида, неполипептидного полимера и фрагмента Fc иммуноглобулина (патенты Кореи № 10-0567902 и 10-0725315).
В данном способе G-CSF может использоваться в качестве физиологически активного для получения длительно действующего конъюгата G-CSF. Для применения длительно действующих конъюгатов в лекарственных продуктах необходимо поддерживать их фармацевтическую эффективность in vivo, в то же время ограничивая физико-химические изменения, такие как вызванную светом, теплом или добавками дегенерацию, агрегацию, абсорбцию или гидролиз во время хранения и транспортировки. Длительно действующие конъюгаты G-CSF труднее стабилизировать, чем сам полипептид G-CSF, потому что они увеличены в объеме и молекулярной массе.
В целом, белки имеют очень короткий период полураспада, и при воздействии неподходящих температур, границ раздела воды-воздуха, высоких уровней давления, физического/механического стресса, органических растворителей, микробного заражения и т.д. они подвергаются такой дегенерации, как агрегация мономеров, осаждение агрегацией и адсорбция на поверхность контейнеров. При дегенерации белки теряют свои физико-химические свойства и физиологическую активность. После дегенерации белки почти не могут восстановить свои первоначальные свойства, потому что дегенерация является необратимой. В частности, в случае белков, которые вводятся в следовых количествах, составляющих сотни микрограмм на инъекцию, таких как G-CSF, когда они теряют стабильность и, таким образом, абсорбируются на поверхность контейнера, это приводит к относительно большой степени повреждения. Кроме того, абсорбированные белки легко агрегируются во время процесса дегенерации, и дегенерированные белки при введении в организм действуют в качестве антигенов в отличие от белков, синтезированных in vivo. Таким образом, белки должны вводиться в стабильной форме. Было проведено много исследований для предотвращения дегенерации белков в растворах (John Geigert, J. Parenteral Sci. Tech., 43(5): 220-224, 1989; David Wong, Pharm. Tech., 34-48, 1997; Wei Wang., Int. J. Pharm., 185: 129-188, 1999; Willem Norde, Adv. Colloid Interface Sci., 25: 267-340, 1986; Michelle et. Al., Int. J. Pharm. 120: 179-188, 1995).
Лиофилизация применяется в отношении некоторых белковых лекарственных средств для достижения цели стабильности. Однако лиофилизированные продукты неудобны в том, что их необходимо повторно растворять в воде для инъекций для применения. Кроме того, они требуют обширных инвестиций в лиофилизаторы большой емкости, потому что процесс лиофилизации включен в способ их производства. Было предложено «притирание» белков путем применения распылительной сушилки. Однако этот способ является экономически неблагоприятным вследствие низкой производительности. Кроме того, процесс распылительной сушки подвергает белки воздействию высоких температур, таким образом оказывая негативные влияния на стабильность белков.
В качестве альтернативы для преодоления ограничений появились стабилизаторы, которые при добавлении к белкам в растворе могут сдерживать физико-химические изменения белковых лекарственных средств и поддерживать фармацевтическую эффективность in vivo даже после хранения в течение длительного периода времени. Среди них имеются углеводороды, аминокислоты, белки поверхностно-активные вещества (ПАВ), полимеры и соли. Наряду с другими стабилизаторами человеческий сывороточный альбумин широко использовался в качестве стабилизатора для различных белковых лекарственных средств с подтверждением его эффективности (Edward Tarelli et al., Biologicals, 26: 331-346, 1998).
Типичный способ очистки для человеческого сывороточного альбумина включает инактивацию биологических загрязняющих агентов, таких как микоплазма, прионы, бактерии и вирусы, или скрининг или исследование одного или более биологических загрязняющих агентов или патогенов. Однако всегда имеется риск того, что белки подвергаются воздействию биологических загрязняющих агентов, потому что они не полностью удаляются или инактивируются. Например, проводятся скрининговые исследования человеческой крови от доноров для выявления содержания в ней определенных вирусов. Однако этот способ не всегда надежен. В частности, невозможно выявить определенные вирусы, существующие в очень небольшом числе.
Недавно были предложены альтернативы человеческому сывороточному альбумину, включая рекомбинантный альбумин (выложенная публикация патента Кореи № 10-2004-0111351) и не содержащий альбумин G-CSF (патенты Кореи №№ 10-0560697 и 10-0596610).
Хотя при применении стабилизаторов, не содержащих альбумин, могут постепенно инактивироваться другие белки вследствие их химических различий, потому что они подвергаются воздействию различных соотношений и условий во время хранения. Воздействие стабилизатора на срок хранения белков отличатся от одного белка к другому. То есть различные стабилизаторы могут использоваться в различных соотношениях в зависимости от физико-химических свойств представляющих интерес белков.
Кроме того, различные стабилизаторы при одновременном применении могут вызвать обратные эффекты вследствие конкуренции и их неверной обработки. Комбинация различных стабилизаторов также вызывает различные эффекты, потому что они изменяют характеристики или концентрацию белков во время хранения. Поскольку каждый стабилизатор должным образом проявляет свою стабилизирующую активность в определенном диапазоне концентраций, то необходимо прикладывать много усилий для соблюдения предосторожностей при комбинации видов и концентраций различных стабилизаторов.
В частности, что касается длительно действующих конъюгатов G-CSF, которые имеют увеличенную длительность действия и повышенную стабильность, то их молекулярные массы и объемы совершенно отличаются от таковых обычных соединений G-CSF, потому что они составлены из физиологически активного пептида G-CSF и фрагмента Fc иммуноглобулина. Кроме того, стабильность фрагментов Fc иммуноглобулина высоко варьируются в зависимости от pH. Таким образом, обычные стабилизаторы не могут использоваться для G-CSF в чистом виде. Соответственно, для длительно действующих конъюгатов G-CSF требуются стабилизаторы с особыми композициями, отличающимися от композиций для стабилизаторов G-CSF.
При создании настоящего изобретения, интенсивные и тщательные исследования по разработке стабильной жидкой препаративной формы длительно действующих конъюгатов G-CSF, способной сохранять фармацевтическую эффективность в течение длительного срока без вирусной инфекции, привели к получению данных о том, что стабилизатор, содержащий буфер в определенном диапазоне pH и высокую концентрацию маннита, обеспечивает длительно действующим конъюгатам G-CSF повышенную стабильность и обеспечивает возможность образования экономичных и стабильных жидких препаративных форм длительно действующих конъюгатов G-CSF.
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Техническая проблема
Поэтому целью настоящего изобретения является получение жидкой препаративной формы, содержащей длительно действующий конъюгат G-CSF, в котором ковалентно связаны G-CSF, непептидный полимер и фрагмент Fc иммуноглобулина, и лишенный альбумина стабилизатор, содержащий буфер и маннит.
Решение проблемы
В соответствии с одним вариантом его осуществления настоящее изобретение относится к жидкой препаративной форме, содержащей длительно действующий конъюгат G-CSF, в котором ковалентно связаны G-CSF, непептидный полимер и фрагмент Fc иммуноглобулина, и лишенный альбумина стабилизатор, составленный из буфера и маннита.
Используемый в настоящем описании термин «длительно действующий конъюгат G-CSF» предназначен для обозначения белкового конструкта, в котором ковалентно связаны физиологически активный G-CSF, один или более непептидных полимеров и один или более фрагментов Fc иммуноглобулина и который имеет большую длительность действия по сравнению с G-CSF в его натуральной форме.
Используемый в настоящем описании термин «длительно действующий» относится к увеличенной длительности действия по сравнению с длительностью действия натуральной формы. Термин «конъюгат» относится к конструкту, в котором ковалентно связаны G-CSF, непептидный полимер и фрагмент Fc иммуноглобулина.
Для применения в настоящем изобретении G-CSF имеет аминокислотную последовательность человеческого G-CSF или его близкого родственного аналога. G-CSF, используемый в настоящем изобретении, может представлять собой естественно встречающийся белок или рекомбинантный белок. Также G-CSF, используемый в настоящем изобретении, может представлять собой мутантный G-CSF, который был подвергнут вставке, делеции или добавлению аминокислот, при условии что мутация не оказывает значимого влияния на его первоначальную биологическую активность.
Человеческий G-CSF или его аналоги, используемые в настоящем изобретении, могут быть выделены из позвоночных или могут быть химически синтезированы. Альтернативно G-CSF или его аналоги могут быть получены из прокариотов или эукариотов, которые трансформированы геном, кодирующим G-CSF или его аналог, с применением технологии генетической рекомбинации. В этом отношении в качестве клеток-хозяев могут использоваться кишечные бактерии (например, E.coli), дрожжевые клетки (например, S. cerevisiae) или клетки млекопитающих (например, клетки яичников китайских хомячков (CHO), клетки обезьян). В зависимости от клеток-хозяев рекомбинантный G-CSF или его аналоги могут быть гликозилированы углеводородами млекопитающих или эукариотическими углеводородами или агликозилированы. При экспрессии рекомбинантный G-CSF или его аналоги могут содержать первоначальный остаток метионина (положение - 1). Предпочтительно рекомбинантный человеческий G-CSF (HuG-CSF) получают с применением клеток CHO в качестве хозяйских. Рекомбинантный человеческий G-CSF (HuG-CSF), полученный с применением E. coli в качестве клетки-хозяина, подходит для настоящего изобретения. В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения рекомбинантный человеческий G-CSF представляет собой мутантный рекомбинантный человеческий (17Ser-G-CSF), в котором остаток серина располагался в положении 17, вместо цистеина для дикого типа и может быть экспрессирован, как описано в патенте Кореи № 10-356140.
Для применения в настоящем изобретении фрагмент Fc иммуноглобулина имеет аминокислотную последовательность фрагмента Fc человеческого иммуноглобулина или их близких родственных аналогов. Фрагменты Fc могут быть получены из нативных форм, выделенных из животных, включая ков, коз, свиней, мышей, кроликов, хомяков, крыс и морских свинок. Кроме того, фрагмент Fc иммуноглобулина может представлять собой фрагмент Fc, который получен из IgG, IgA, IgD, IgE и IgM или который получен их комбинациями или их гибридами. Предпочтительно он получен из IgG или IgM, которые являются наиболее обильными белками в крови человека, а наиболее предпочтительно, из IgG, который, как известно, увеличивает период полураспада связывающих лиганды белков. В настоящем изобретении фрагмент Fc иммуноглобулина может быть получен из нативного иммуноглобулина путем выделения цельных иммуноглобулинов из организмов людей или животных и их обработки протеолитическим ферментом или они могут представлять собой их рекомбинанты или производные, полученные из трансформированных клеток животных или микроорганизмов. Предпочтителен фрагмент Fc рекомбинантного человеческого иммуноглобулина, продуцируемый трансформантами E. coli.
С другой стороны, IgG делится на подклассы IgG1, IgG2, IgG3 и IgG4, и настоящее изобретение включает их комбинации и гибриды. Предпочтительными являются подклассы IgG2 и IgG4, и наиболее предпочтителен фрагмент Fc IgG4, редко имеющий эффекторные функции, такие как CDC (комплемент-зависимая цитотоксичность). То есть в качестве лекарственного носителя по настоящему изобретению наиболее предпочтительным фрагментом Fc иммуноглобулина является полученный из человеческого IgG4 гликозилированный фрагмент Fc. Фрагмент Fc человеческого происхождения предпочтительнее, чем Fc фрагмент не человеческого происхождения, который может действовать в качестве антигена в организме человека и вызвать нежелательные иммунные реакции, такие как выработка нового антитела против антигена.
Длительно действующий конъюгат G-CSF, используемый в настоящем изобретении, получен связыванием вместе G-CSF и фрагмента Fc иммуноглобулина. В этом отношении G-CSF и фрагмент Fc иммуноглобулина может быть поперечно сшит посредством непептидного полимера или может быть сформирован в слитый белок с применением рекомбинантной технологии.
Непептидный полимер для применения при поперечной сшивке может быть выбран из группы, состоящей из биоразлагаемых полимеров, липидных полимеров, хитинов, гиалуроновой кислоты и их комбинаций. Биоразлагаемый полимер может быть выбран из полиэтиленгликоля, сополимеров этиленгликоля и пропиленгликоля, полиоксиэтилированнных полиолов, поливинилового спирта, полисахарида, декстрана, поливинилового этилэфира, PLA (поли(молочной кислоты), PLGA (полимолочной-гликолевой кислоты) и их комбинаций. Наиболее предпочтительным является поли(этиленгликоль) (PEG) с предпочтением, отданным полиэтиленгликолю. Его производные, которые хорошо известны и могут быть легко получены в данной области техники, также включены в объем настоящего изобретения.
Длительно действующие конъюгаты G-CSF, используемые в настоящем изобретении, могут быть получены с применением технологии генетической инженерии, как описано в патенте Кореи № 10-0725315.
Жидкая препаративная форма в соответствии с настоящим изобретением содержит длительно действующий конъюгат G-CSF в терапевтически эффективном количестве. Обычно терапевтически эффективное количество G-CSF составляет примерно 30 мкг на ампулу для однократного применения. Концентрация длительно действующих конъюгатов G-CSF, используемых в настоящем изобретении, составляет порядка от 7 мг/мл до 22 мг/мл и предпочтительно порядка от 11 мг/мл до 22 мг/мл.
Используемый в настоящем описании термин «стабилизатор» предназначен для обозначения вещества, которое обеспечивает возможность безопасного хранения длительно действующего конъюгата G-CSF. Термин «стабилизация» предназначен для обозначения потери активного ингредиента до заданной степени, в целом до 10% в течение определенного периода времени в условиях хранения. Когда G-CSF сохраняет 90% или более его первоначальной активности и предпочтительно 95% или выше его первоначальной активности после хранения при 10°C в течение 2 лет, при 25°C в течение 6 месяцев или при 40°C в течение от одной до двух недель, то это считается, что он является стабильным. Что касается белков, таких как G-CSF, то их стабильность при хранении важна при подавлении потенциального генерирования подобных G-CSF антигенных материалов, а также обеспечении точных вводимых количеств. Во время хранения потеря примерно 10% активности G-CSF может считаться допустимой для введения, пока G-CSF внутри препаративной формы не агрегируется или фрагментируется для образования антигенных материалов.
Стабилизатор, подходящий для применения в настоящем изобретении, содержит забуференный раствор, составленный для придания стабильности длительно действующему конъюгату G-CSF, и маннит.
Кроме того, стабилизатор в соответствии с настоящим изобретением предпочтительно не содержит альбумина. Ввиду того что человеческий сывороточный альбумин, доступный в качестве стабилизатора для белка, получают из крови человека, то существует возможность его заражения патогенными вирусами человеческого происхождения. Желатин или бычий сывороточный альбумин могут быть причиной заболевания или вызвать аллергическую реакцию у некоторых пациентов. Стабилизатор, не содержащий сывороточного альбумина человеческого или животного происхождения или гетерогенных белков, таких как очищенный желатин, в соответствии с настоящим изобретением избавлен от угрозы относительно вирусной инфекции.
Буферный раствор в стабилизаторе играет роль поддержания постоянного pH жидкой препаративной формы для предотвращения колебаний pH, таким образом, стабилизируя длительно действующий конъюгат G-CSF. Буферный раствор, используемый в настоящем изобретении, может содержать фармацевтически приемлемые забуферивающие pH агенты, включая щелочные соли (фосфат натрия или калия, их гидро- и дигидрофосфаты), цитрат натрия/лимонную кислоту, ацетат натрия/уксусную кислоту и их комбинацию. Подходящим для применения в настоящем изобретении является цитратный буфер, фосфатный буфер, тартратный буфер, карбонатный буфер, сукцинатный буфер, лактатный буфер и ацетатный буфер с предпочтением фосфатного буфера и цитратного буфера, причем предпочтительнее цитратный буфер. В цитратном буфере концентрация цитрата находится в диапазоне предпочтительно от 5 до 100 мМ, а предпочтительнее от 10 до 50 мМ. Буфер имеет предпочтительно pH от 4,0 до 8,0, более предпочтительно pH от 5,0 до 7,0 и наиболее предпочтительно pH от 5,0 до 6,0.
В одном варианте осуществления длительно действующий конъюгат G-CSF оценивали в отношении стабильности в соответствии с величинами pH используемого буфера. При pH 5,5 было обнаружено, что буфер с pH 5,5 гарантирует длительно действующему конъюгату G-CSF более высокую стабильность, чем при pH 6,0 (см. таблицы 2 и 4). По этим результатам понятно, что длительно действующий конъюгат G-CSF по настоящему изобретению стабилизируется до различных степеней в зависимости от величин pH буфера и проявляет максимальную стабильность при определенном pH. В частности, было обнаружено, что стабильность длительно действующего конъюгата G-CSF, в котором Fc, стабильный при нейтральном pH, связан с G-CSF, снижается в жидкой препаративной форме, содержащей буфер при низком pH. В Невласте (Neulasta), имеющемся в продаже слитом с PEG лекарственном препарате G-CSF используется ацетатный буфер с pH 4 в качестве стабилизирующего агента. Однако не рекомендуется применение композиции обычного стабилизатора и pH для длительно действующего конъюгата G-CSF не только потому, что длительно действующий конъюгат G-CSF по настоящему изобретению больше и по молекулярной массе, и по объему, чем G-CSF дикого типа, но также потому, что фрагмент Fc иммуноглобулина стабилен в нейтральном диапазоне pH.
Маннит, вид сахарного спирта, используется в стабилизаторе по настоящему изобретению, потому что он действует для повышения стабильности длительно действующего конъюгата G-CSF. Маннит используется предпочтительно в концентрации от 1 до 20% (масс./об.) на основании общего объема жидкой препаративной формы, более предпочтительно в концентрации от 3 до 10% (масс./об.) и наиболее предпочтительно в концентрации от 5 до 7% (масс./об.).
В соответствии с одним вариантом осуществления настоящего изобретения было показано, что когда маннит в присутствии цитратного буфера используется в качестве стабилизатора, то стабильность при хранении длительно действующего конъюгата G-CSF увеличивается больше, чем при применении сорбита (см. таблицу 6). Эти данные показывают специфичность маннита в качестве стабилизатора для длительно действующего конъюгата G-CSF по сравнению с другими стабилизаторами, указывая на то, что в соответствии с подлежащими стабилизации объектами требуются различные стабилизаторы.
Стабилизатор может дополнительно содержать другие сахарные спирты, если они не ухудшают стабилизирующий эффект комбинации маннита и буфера на длительно действующий конъюгат G-CSF.
В другом варианте осуществления настоящего изобретения стабилизатор, используемый в настоящем изобретении, может дополнительно содержать, по меньшей мере, один компонент, выбранный из группы, состоящей из изотонических агентов, многоатомных спиртов, сахаров, неионных ПАВ и натуральных аминокислот в дополнение к буферному раствору и манниту.
Изотонический агент действует не только для поддержания подходящего осмотического давления, когда длительно действующему конъюгату G-CSF в жидкой препаративной форме предоставлена возможность поступить в организм, но для дополнительной стабилизации длительно действующего конъюгата G-CSF в жидкой препаративной форме. Примеры изотонического агента включают растворимые в воде неорганические соли. Среди них имеются хлорид натрия, сульфат натрия, цитрат натрия, хлорид кальция и их комбинация. Наиболее предпочтительным является хлорид натрия.
Предпочтительно концентрация изотонического агента составляет порядка от 5 до 200 мМ. В пределах данного диапазона концентрация изотонического агента может регулироваться в соответствии с видами и количествами содержащихся компонентов, с тем чтобы жидкая препаративная форма была изотонической.
Предпочтительные примеры сахара, который может, кроме того, содержаться для увеличения стабильности при хранении длительно действующего конъюгата G-CSF, включают моносахариды, такие как манноза, глюкоза, фукоза и ксилоза, и полисахариды, такие как лактоза, мальтоза, сахароза, раффиноза и декстран. В жидкой препаративной форме сахар предпочтительно используется в количестве от 1 до 20% (масс./об.) и более предпочтительно используется в количестве от 5 до 20% (масс./об.). Примеры многоатомного спирта, используемого в настоящем изобретении, включают пропиленгликоль, полиэтиленгликоль низкой молекулярной массы, глицерин и полипропиленгликоль низкой молекулярной массы. Они могут использоваться отдельно или в комбинации. И их концентрация в жидкой препаративной форме составляет предпочтительно порядка от 1 до 15% (масс./об.) и более предпочтительно порядка от 5 до 15% (масс./об.)
Что касается неионного ПАВ, то оно снижает поверхностное натяжение белкового раствора для предотвращения адсорбции или агрегации белков на гидрофобных поверхностях, неионные ПАВ на основе полисорбата и неионные ПАВ на основе полоксамера подходят для применения в настоящем изобретении. Они могут использоваться отдельно или в комбинации. Предпочтительны неионные ПАВ на основе полисорбата. Среди них находятся полисорбат 20, полисорбат 40, полисорбат 60 и полисорбат 80 при более предпочтительном полисорбате 80.
Не рекомендуется применение неионного ПАВ в высокой концентрации, потому что, если неионное ПАВ присутствует в высокой концентрации, оно вызывает помехи при УФ-спектрометрии или изоэлектрическом фокусировании, затрудняя точную оценку концентрации или стабильности белка. Таким образом, жидкая препаративная форма по настоящему изобретению может содержать неионное ПАВ предпочтительно в концентрации 0,1% (масс./об.) или менее и более предпочтительно в концентрации от 0,001 до 0,05% (масс./об.).
В отношении стабильности при хранении длительно действующего конъюгата G-CSF полисорбат 20 сравнивали с полисорбатом 80. Было обнаружено, что длительно действующий конъюгат G-CSF увеличивает стабильность в присутствии полисорбата 80 по сравнению с полисорбатом 20 (см. таблицу 8). В Невласте, слитой с PEG лекарственной препаративной формой G-CSF, используется полисорбат 20. Однако жидкая препаративная форма по настоящему изобретению гарантирует длительно действующему конъюгату G-CSF более высокую стабильность при хранении при содержании полисорбата 80, чем полисорбата 20. По представленным данным понятно, что в соответствии с подлежащими стабилизации объектами требуются различные ПАВ.
В одном варианте осуществления настоящего изобретения длительно действующий конъюгат G-CSF сохранялся в более стабильном состоянии в течение периода хранения 4 недель при 40°C в жидкой препаративной форме, содержащей в качестве неионного ПАВ 0,005% (масс./об.) полисорбата 80, чем 0,01% (масс./об.) полисорбата 80 (см. таблицу 10).
Аминокислота, также доступная в качестве стабилизатора для жидкой препаративной формы, действует для привлечения большего числа молекул воды вокруг G-CSF в растворе, так что дополнительно стабилизируются самые наружные молекулы гидрофильных аминокислот G-CSF (Wang, Int. J. Pharm. 185: 129-188, 1999). В этом отношении заряженные аминокислоты могут вызвать электростатическое привлечение G-CSF для содействия агрегации G-CSF. Следовательно, нейтральные аминокислоты, такие как глицин, аланин, лейцин и изолейцин, добавляются в качестве стабилизирующего компонента. В жидкой препаративной форме нейтральная аминокислота используется предпочтительно в концентрации от 0,1 до 10% (масс./об.).
В одном варианте осуществления настоящего изобретения стабилизатор, содержащий маннит в концентрации от 3 до 12% (масс./об.) на основании общего объема жидкой препаративной формы, обеспечивал возможность длительно действующему конъюгату G-CSF, имеющему Fc с большой молекулярной массой, стабильно храниться в течение 4 недель, даже несмотря на то что нейтральные аминокислоты не добавлялись (см. таблицу 12). Соответственно, жидкая препаративная форма для обеспечения высокой стабильности длительно действующим конъюгатам G-CSF может быть получена с применением высокой концентрации маннита, даже когда не добавляются нейтральные аминокислоты. Однако концентрация маннита, превышающая 20% (масс./об.), находится вне верхнего изотонического предела. Таким образом, маннит используется в концентрации от 1 до 20% (масс./об.) в жидкой препаративной форме, предпочтительно в концентрации от 3 до 10% (масс./об.) и более предпочтительно в концентрации от 5 до 7% (масс./об.).
В дополнение к указанным выше компонентам, включающим буфер, изотонический агент, сахарный спирт, нейтральную аминокислоту и неионное ПАВ, жидкая препаративная форма по настоящему изобретению может, кроме того, содержать другие компоненты, известные в данной области техники, пока они не ухудшают эффект настоящего изобретения.
В соответствии с предпочтительным вариантом осуществления настоящего изобретения жидкая препаративная форма не содержит альбумина и может содержать буферный раствор, маннит, изотонический агент и неионное ПАВ.
Более подробно, настоящее изобретение относится к жидкой препаративной форме, которая содержит длительно действующий конъюгат G-CSF и стабилизатор, причем стабилизатор содержит фосфатный или цитратный буфер, маннит, изотонический агент и полисорбат 80, причем изотонический агент выбран из группы, состоящей из хлорида натрия, сульфата натрия, цитрата натрия и их комбинации.
Предпочтительно жидкая препаративная форма содержит раствор фосфатного или цитратного буфера в диапазоне концентрации от 5 до 100 мМ и при pH от 5 до 7, маннит в концентрации от 1 до 20% (масс./об.), изотонический агент в концентрации от 5 до 200 мМ, причем изотонический агент выбран из группы, состоящей из хлорида натрия, сульфата натрия и цитрата натрия, и полисорбат 80 в концентрации от 0,001 до 0,05% (масс./об.). Более предпочтительно жидкая препаративная форма содержит раствор цитратного буфера в диапазоне концентрации от 5 до 100 мМ и pH от 5 до 6, маннит в концентрации от 1 до 10% (масс./об.), хлорид натрия в концентрации от 100 до 200 мМ и полисорбат 80 в концентрации от 0,001 до 0,05% (масс./об.). Более предпочтительно жидкая препаративная форма содержит цитратный буфер (pH 5,2-5,8) в концентрации 20 мМ, маннит в концентрации от 3 до 7% (масс./об.), хлорид натрия в концентрации от 100 до 200 мМ, и полисорбат 80 в концентрации от 0,001 до 0,05% (масс./об.), и в ней не используются нейтральные аминокислоты.
В одном варианте осуществления настоящего изобретения жидкую препаративную форму для длительно действующего конъюгата G-CSF, содержащую буферный раствор Na-цитрата (pH 5,5), 5% (масс./об.) маннита, 150 мМ хлорида натрия и 0,005% (масс./об.) полисорбата 80, сравнивали с известной препаративной формой G-CSF Невласта, Amgen в отношении стабильности при хранении G-CSF. Было обнаружено, что C-GSF более стабилен в жидкой препаративной форме по настоящему изобретению, чем в имеющейся в продаже препаративной форме, содержащей цитрат натрия с pH 4 (см. таблицу 14).
В другом варианте осуществления жидкая препаративная форма для длительно действующих конъюгатов G-CSF, содержащих цитратный буфер с pH 5,5, маннит, хлорид натрия и полисорбат 80 в соответствии с настоящим изобретением, анализировали на стабильность при долгосрочном хранении и обнаружили, что они поддерживают стабильность длительно действующих конъюгатов G-CSF в течение 6 месяцев и гарантируют, по меньшей мере, 96,6% активности даже после 6-месячного хранения в условиях ускоренного анализа (см. таблицу 16).
Из полученных данных понятно, что жидкая препаративная форма, содержащая буфер в диапазоне pH от 5 до 6 и маннит в концентрации от 1 до 20% (масс./об.), может сохранять стабильность длительно действующего конъюгата G-CSF в течение 12 месяцев или более.
Преимущественные эффекты изобретения
Как описано выше, стабилизатор, содержащий буфер и маннит в соответствии с настоящим изобретением, специализирован для длительно действующих конъюгатов G-CSF. Не имея в своем составе человеческого сывороточного альбумина и других потенциальных факторов, вредных для организма, жидкая препаративная форма для длительно действующих конъюгатов G-CSF в соответствии с настоящим изобретением освобождена от угрозы вирусных инфекций и гарантирует превосходную стабильность при хранении длительно действующим конъюгатам G-CSF, в которых связаны G-CSF и фрагмент Fc иммуноглобулина и которые больше по молекулярной массе и имеют более длительное действие, чем натуральные формы G-CSF.
Краткое описание чертежей
Фиг.1 представляет собой график, показывающий стабильность G-CSF в жидких препаративных формах для длительно действующего конъюгата G-CSF, где используются буферы с различными величинами pH, и препаративной формы Невласта со слитым с PEG G-CSF, когда они анализируются с применением SE-HPLC (ВЭЖХ с исключением по размеру) каждую неделю в течение двухнедельного срока хранения при 40°C.
Вариант осуществления изобретения
Настоящее изобретение можно лучше понять посредством следующих примеров, которые изложены для иллюстрации, но не рассматриваются как ограничивающие настоящее изобретение.
Пример 1: Конструирование длительно действующего конъюгата G-CSF
<1-1> Получение фрагмента Fc иммуноглобулина
Фрагмент Fc иммуноглобулина, используемый в настоящем изобретении, представлял собой человеческий агликозилированный Fc-фрагмент IgG4, который может быть экспрессирован из трансформанта E. coli, как раскрыто в патенте Кореи № 725314.
<1-2> Получение рекомбинантного человеческого фактора, стимулирующего колонии гранулоцитов
Рекомбинантный человеческий G-CSF, использованный в данной примере, является мутантным (17Ser-G-CSF), в котором остаток серина располагался в положении 17 вместо цистеина для дикого типа, и мог экспрессироваться из трансформанта E.coli, как раскрыто в патенте Кореи № 356140.
<1-3> Получение длительно действующего конъюгата G-CSF с применением фрагмента Fc иммуноглобулина
Длительно действующий конъюгат G-CSF в данном примере представлял собой конструкт, в котором человеческий фактор, стимулирующий колонии гранулоцитов, и фрагмент Fc иммуноглобулина ковалентно связаны непептидным полимером. Он был получен, как раскрыто в патенте Кореи №№ 725315 и 775343.
Пример 2: Анализ длительно действующих конъюгатов G-CSF в отношении стабильности в соответствии с pH буфера
Для составления жидкой препаративной формы для стабилизации конъюгата G-CSF, полученного в примере 1, исследовали эффект, когда варьирующиеся величины pH буфера оказывают на стабильность длительно действующего конъюгата G-CSF.
Для анализа жидкие препаративные формы для длительно действующего конъюгата G-CSF таблицы 1 получали с композициями стабилизатора, содержащими маннит в качестве стабилизирующего агента, полисорбата 80 в качестве ПАВ и раствор цитрата натрия с pH 5,0, 5,5 или 6,0 в качестве буфера. После их хранения при 40°C в течение двух недель для анализа выполняли эксклюзионную хроматографию. Результаты суммированы ниже в таблице 2. Степень сохранения длительно действующего конъюгата G-CSF по сравнению с ее первоначальной величиной выражали в виде SE-HPLC (%).
Таблица 1 | |||||
G-CSF | Буфер | Соль | Стабилизирующий агент | ПАВ | |
1 | 6 мг/мл | 20 мМ цитрата Na, pH 5,0 | 150 мМ NaCl | 5% маннита | 0,01% полисорбата 80 |
2 | 6 мг/мл | 20 мМ цитрата Na, pH 5,5 | 150 мМ NaCl | 5% маннита | 0,01% полисорбата 80 |
3 | 6 мг/мл | 20 мМ цитрата Na, pH 6,0 | 150 мМ NaCl | 5% маннита | 0,01% полисорбата 80 |
Таблица 2 | |||
SE-HPLC (%) | |||
Начало | 1 неделя | 2 неделя | |
1 | 100 | Не анализировалось | Не анализировалось |
2 | 100 | 94,9 | 94,6 |
3 | 100 | 90,6 | 89,8 |
Как очевидно из данных таблицы 2, буфер цитрата натрия при pH 5,0 вызывает осаждение белка в 1-ю неделю, в то время как не были выявлены осадки, когда использовали буфер цитрата натрия при pH 5,5 или 6,0. Было также понятно, что стабильность длительно действующего G-CSF дополнительно увеличивалась в буфере цитрата натрия, имеющем pH 5,5, чем pH 6,0.
Следующий эксперимент выполняли с буферами, имеющими подразделенные величины pH. Жидкие препаративные формы для длительно действующих конъюгатов G-CSF получали с композициями стабилизаторов, представленными ниже в таблице 3, и хранили при 40°C в течение двух недель перед анализом с применением хроматографии с обращенной фазой и эксклюзионной хроматографии (SE-HPLC). Результаты суммированы ниже в таблице 4. Степень сохранения длительно действующего конъюгата G-CSF сравнивали с их первоначальной величиной и выражали в виде SE-HPLC (%).
Таблица 3 | |||||
G-CSF | Буфер | Соль | Стабилизирующий агент | ПАВ | |
1 | 6 мг/мл | 20 мМ цитрата Na, pH 5,5 | 150 мМ NaCl | 5% маннита | 0,005% полисорбата 80 |
2 | 6 мг/мл | 20 мМ цитрата Na, pH 5,2 | 150 мМ NaCl | 5% маннита | 0,005% полисорбата 80 |
3 | 6 мг/мл | 20 мМ цитрата Na, pH 5,8 | 150 мМ NaCl | 5% маннита | 0,005% полисорбата 80 |
Таблица 4 | ||||||
RP-HPLC (%) | SE-HPLC (%) | |||||
Начало | 1 неделя | 2 неделя | Начало | 1 неделя | 2 неделя | |
1 | 100 | 95,5 | 90,4 | 100 | 95,4 | 90,5 |
2 | 100 | 95,8 | 91,9 | 100 | 96,4 | 94,4 |
3 | 100 | 95,7 | 91,8 | 100 | 93,8 | 89,8 |
После хранения в течение двух недель в буферах цитрата натрия с pH от 5,2 до 5,5, как видно в таблице 4, было обнаружено, что длительно действующий G-CSF сохранял примерно 90% или выше первоначальной активности.
Из указанных результатов понятно, что длительно действующие конъюгаты G-CSF в соответствии с настоящим изобретением стабилизируются в значительной степени в зависимости от величин pH используемого буфера при максимальной стабильности в определенном диапазоне pH. В частности, было обнаружено, что стабильность при хранении длительно действующего конъюгата G-CSF, в котором фрагмент Fc, стабильный при нейтральном pH, связан с G-CSF, уменьшена в жидкой препаративной форме, содержащей буфер с низким pH.
Пример 3: Анализ длительно действующих конъюгатов G-CSF в отношении стабильности в соответствии с сахарными спиртами
Сахарные спирты, такие как сорбит и маннит, анализировали в отношении способности стабилизировать длительно действующий конъюгат G-CSF следующим образом.
Получали жидкие препаративные формы для длительно действующих конъюгатов G-CSF с композициями стабилизаторов, которые содержали маннит и сорбит в качестве сахарного спирта, хлорид натрия в качестве изотонического агента и полисорбат в качестве ПАВ, как представлено ниже в таблице 5, и хранили при 40°C в течение четырех недель перед анализом с применением эксклюзионной хроматографии (SE-HPLC). Результаты суммированы ниже в таблице 6. Степень сохранения длительно действующего конъюгата G-CSF сравнивали с первоначальной величиной (площадь в %/первоначальная площадь %) и выражали в виде SE-HPLC (%).
Таблица 5 | |||||
G-CSF | Буфер | Соль | Стабилизирующий агент | ПАВ | |
1 | 3 мг/мл | 20 мМ цитрата Na, pH 6,0 | 100 мМ NaCl | 5% маннита | 0,01% полисорбата 80 |
2 | 3 мг/мл | 20 мМ цитрата Na, pH 6,0 | 100 мМ NaCl | 5% сорбита | 0,01% полисорбата 80 |
Таблица 6 | ||||
SE-HPLC (%) | ||||
Начало | 1 неделя | 2 неделя | 4 неделя | |
1 | 100 | 97,9 | 97,3 | 93,7 |
2 | 100 | 100 | 96,6 | 90,7 |
Как очевидно из данных таблицы 6, применение маннита вместо сорбита в качестве стабилизирующего агента поддерживал большую стабильность длительно действующего конъюгата G-CSF.
Пример 4: Анализ длительно действующих конъюгатов G-CSF в отношении стабильности в соответствии с видом неионного ПАВ
В присутствии буфера цитрата натрия анализировали различные неоионные ПАВ в отношении их способности стабилизировать длительно действующий конъюгат G-CSF следующим образом.
Для анализа сравнивали два неионных ПАВ, полисорбат 80 и полисорбат 20, причем последний содержится в Невласте, имеющейся в продаже жидкой препаративной форме слитого с PEG G-CSF. В должной комбинации использовались другие агенты, включая буфер цитрата натрия с pH 5,5 и маннит, которые, как было показано в примерах 2 и 3, обеспечивают стабильность длительно действующего конъюгата G-CSF. Получали жидкие препаративные формы для длительно действующего конъюгата G-CSF с композициями стабилизаторов, которые содержали различные виды полисорбата, как показано ниже в таблице 7, и хранили при 40°C в течение четырех недель перед анализом с применением эксклюзионной хроматографии (SE-HPLC). Результаты суммированы ниже в таблице 8. Степень сохранения длительно действующего конъюгата G-CSF по сравнению с ее первоначальной величиной была выражена в виде SE-HPLC (%).
Таблица 7 | |||||
G-CSF | Буфер | Соль | Стабилизирующий агент | ПАВ | |
1 | 6 мг/мл | 20 мМ цитрата Na, pH 5,5 | 150 мМ NaCl | 5% маннита | 0,005% полисорбата 20 |
2 | 6 мг/мл | 20 мМ цитрата Na, pH 5,5 | 150 мМ NaCl | 5% сорбита | 0,005% полисорбата 80 |
Таблица 8 | ||||
SE-HPLC (%) | ||||
Начало | 1 неделя | 2 неделя | 4 неделя | |
1 | 100 | 95,6 | 94,6 | 85,0 |
2 | 100 | 95,4 | 95,8 | 92,4 |
В таких же условиях, как показано в таблице 8, полисорбат 80 гарантировал более высокую стабильность при хранении длительно действующего конъюгата G-CSF, чем полисорбат 20. Не были выявлены значимые различия стабильности при хранении длительно действующего конъюгата G-CSF между двумя соединениями до конца двухнедельного хранения при 40°C. Однако на 4-й неделе неионные ПАВ проявляли значимые различия стабильности при хранении, хотя они очень похожи по структуре.
Пример 5: Анализ длительно действующих конъюгатов G-CSF в отношении стабильности в связи с концентрацией неионного ПАВ
В примере 4 полисорбат 80 был по оценке более эффективным в стабилизации длительно действующего конъюгата G-CSF, чем полисорбат 20. В данном примере проводили исследование эффекта концентрации полисорбата 80 на стабильность длительно действующего конъюгата. Для этого получали жидкую препаративную форму длительно действующего конъюгата G-CSF с композицией стабилизатора, представленной ниже в таблице 9, и хранили при 40°С в течение четырех недель перед анализом с применением эксклюзионной хроматографии. Результаты суммированы ниже в таблице 10. Сохранение длительно действующего конъюгата G-CSF по сравнению с первоначальной величиной его содержания была выражена в виде SE-HPLC (%).
Таблица 9 | |||||
G-CSF | Буфер | Соль | Стабилизирующий агент | ПАВ | |
1 | 6 мг/мл | 20 мМ цитрата Na, pH 5,5 | 150 мМ NaCl | 5% маннита | 0,005% полисорбата 80 |
2 | 6 мг/мл | 20 мМ цитрата Na, pH 5,5 | 150 мМ NaCl | 5% маннита | 0,01% полисорбата 80 |
Таблица 10 | ||||
SE-HPLC (%) | ||||
Начало | 1 неделя | 2 неделя | 4 неделя | |
1 | 100 | 95,4 | 95,8 | 92,4 |
2 | 100 | 94,9 | 95,3 | 85,1 |
Как показано в таблице 10, было обнаружено, что в течение четырехнедельного периода хранения при 40°С длительно действующий конъюгат G-CSF был более стабилен в жидкой препаративной форме, содержащей 0,005% полисорбата 80, чем в препаративной форме с 0,01% полисорбата 80.
Пример 6: Анализ стабильности длительно действующих конъюгатов в связи с аминокислотой
Применение аминокислоты в качестве стабилизирующего агента анализировали в отношении способности стабилизировать длительно действующие конъюгаты G-CSF. Эксперимент по оценке стабильности при хранении длительно действующих конъюгатов G-CSF выполняли со стабилизаторами, содержащими буфер цитрат натрия (pH 6,0), маннит и нейтральную аминокислоту глицин.
Получали жидкие препаративные формы для длительно действующих конъюгатов G-CSF с композициями стабилизатора, представленными ниже в таблице 11, и хранили при 40°С в течение четырех недель перед анализом с применением эксклюзионной хроматографии. Результаты суммированы ниже в таблице 12. Сохранение длительно действующего конъюгата G-CSF по сравнению с первоначальной величиной его содержания (площадь в %/первоначальную площадь в %) была выражена в виде SE-HPLC (%).
Таблица 11 | |||||
G-CSF | Буфер | Соль | Стабилизирующий агент | ПАВ | |
1 | 10 мг/мл | 20 мМ цитрата Na, pH 6,0 | 100 мМ NaCl | 5% маннита | 0,01% полисорбата 80 |
2 | 10 мг/мл | 20 мМ цитрата Na, pH 6,0 | 100 мМ NaCl | 5% маннита, 10 мМ Глицина | 0,01% полисорбата 80 |
3 | 10 мг/мл | 20 мМ цитрата Na, pH 6,0 | 100 мМ NaCl | 5% сорбита | 0,01% полисорбата 80 |
Таблица 12 | ||||
SE-HPLC (%) | ||||
Начало | 1 неделя | 2 неделя | 4 неделя | |
1 | 100 | 97,9 | 97,3 | 93,7 |
2 | 100 | 98,2 | 97,3 | 93,4 |
3 | 100 | 100 | 96,6 | 90,7 |
Даже в отсутствие нейтральной аминокислоты глицина, как видно в таблице 12, жидкая препаративная форма, содержащая высокую концентрацию (5% (масс./об.)) маннита, гарантировала стабильность при хранении длительно действующего конъюгата на уровне, аналогичном уровню, полученному, когда использовалась нейтральная аминокислота.
Пример 7: Сравнение стабильности при хранении длительно действующих конъюгатов G-CSF относительно жидких препаративных форм
В отношении стабильности при хранении жидкая препаративная форма, которая была получена с композицией стабилизатора, содержащей буфер цитрат натрия (pH 5,5), хлорид натрия, маннит и полисорбат 80, которые все, как было доказано в примерах 2-6, обладают стабилизирующей активностью, сравнивали с имеющейся в продаже жидкой препаративной формой G-CSF Невласта от компании Amgen. Композиции жидкой препаративной формы по настоящему изобретению и Невласта показаны ниже в таблице 13. Пока жидкие препаративные формы для длительно действующего конъюгата G-CSF хранились при 40°C в течение двух недель, их анализировали каждую неделю с применением хроматографии с обращенной фазой и эксклюзионной хроматографии. Результаты суммированы ниже в таблице 14. Степень сохранения длительно действующего конъюгата G-CSF в сравнении с ее первоначальной величиной была выражена в виде RP-HPLC (%) и SE-HPLC (%).
Таблица 13 | |||||
Концентрация | Буфер | Соль | Стабилизирующий агент | ПАВ | |
Невласта | 6 мг/0,6мл | 10 мМ цитрата Na (pH 4,0) | - | 5% сорбита | 0,003% полисорбата 20 |
Длительно действующий конъюгат G-CSF | G-CSF 6 мг/мл | 20 мМ цитрата Na (pH 5,5) | 150 мМ NaCl | 5% маннита | 0,005% полисорбата 80 |
Таблица 14 | ||||||
RP-HPLC (%) | SE-HPLC (%) | |||||
Начало | 1 неделя | 2 неделя | Начало | 1 неделя | 2 неделя | |
Невласта | 100 | 99,7 | 97,7 | 100 | 98,4 | 94,8 |
Длительно действующий конъюгат G-CSF | 100 | 98,5 | 97,5 | 100 | 96,9 | 95,8 |
Как очевидно по данным таблицы 14, после длительного хранения жидкая препаративная форма для длительно действующего конъюгата G-CSF по настоящему изобретению гарантировала стабильность при хранении, эквивалентную или большую, чем стабильность, обеспечиваемая Невластой. По данным результатам понятно, что жидкие препаративные формы по настоящему изобретению способны гарантировать превосходную стабильность при хранении, в частности, длительно действующего конъюгата G-CSF.
Пример 8: Анализ жидких препаративных форм для длительно действующего конъюгата G-CSF в отношение стабильности при длительном хранении и стабильности при ускоренном анализе
Для исследования стабильности при длительном хранении и стабильности при ускоренном анализе жидкая препаративная форма для длительно действующего конъюгата G-CSF, полученная из композиции стабилизатора, содержащей буфер цитрата натрия (pH 5,5), хлорид натрия, маннит и полисорбат 80, которая, как было доказано в примерах 2-6, гарантирует наибольшую стабильность при хранении, хранили при 4°C в течение 12 месяцев и в последующем при 25°C в течение 6 месяцев, в течение которых образцы анализировали в отношении стабильности при хранении. Результаты суммированы ниже в таблицах 15 и 16. В таблицах 15 и 16 степень сохранения длительно действующего конъюгата G-CSF по сравнению с ее первоначальной величиной выражена в виде RP-HPLC (%), SE-HPLC (%), содержания белка (%) и биологической инертной активности (%).
Таблица 15 | |||||||||
Анализ стабильности при длительном хранении (хранение при 4°C) | |||||||||
Срок хранения | Свойства | pH | Тест идентификации | Тест чистоты | Тест содержания белка (%) | Биологическая инертная активность (%) | |||
RP-HPLC | Вестерн блоттинг | SDS-PAGE | RP-HPLC (%) | SE-HPLC (%) | |||||
Начало | Бесцветная прозрачная | 5,5 | Установлен | Подходит | Подходит | 100,0 | 100,0 | 100,0 | 100,0 |
3 месяца | Бесцветная прозрачная | 5,5 | Установлен | Подходит | Подходит | 100,1 | 100,1 | Не оценивался | 120,5 |
6 месяцев | Бесцветная прозрачная | 5,5 | Установлен | Подходит | Подходит | 99,6 | 102,0 | Не оценивался | 102,3 |
9 месяцев | Бесцветная прозрачная | 5,5 | Установлен | Подходит | Подходит | 99,5 | 101,6 | Не оценивался | 86,4 |
12 месяцев | Бесцветная прозрачная | 5,5 | Установлен | Подходит | Подходит | 100,0 | 101,6 | Не оценивался | 81,1 |
Таблица 16 | |||||||||
Ускоренный анализ стабильности (хранение при 25°C) | |||||||||
Срок хранения | Свойства | pH | Тест идентификации | Тест чистоты | Тест содержания белка (%) | Биологическая инертная активность (%) | |||
RP-HPLC | Вестерн блоттинг | SDS-PAGE | RP-HPLC (%) | SE-HPLC (%) | |||||
Начало | Бесцветная прозрачная | 5,5 | Установлен | Подходит | Подходит | 100,0 | 100,0 | 100,0 | 100,0 |
2 месяца | Бесцветная прозрачная | Не оценивался | Установлен | Подходит | Подходит | 100,2 | 99,0 | Не оценивался | 75,0 |
4 месяца | Бесцветная прозрачная | Не оценивался | Установлен | Подходит | Подходит | 98,4 | 100,4 | Не оценивался | 78,0 |
6 месяцев | Бесцветная прозрачная | 5,5 | Установлен | Подходит | Подходит | 96,6 | 99,7 | 100,9 | 81,8 |
Как очевидно из данных таблиц 15 и 16, длительно действующий конъюгат G-CSF сохранял высокую стабильность в течение 6 месяцев в жидкой препаративной форме, содержащей композицию стабилизатора в соответствии с настоящим изобретением, и было обнаружено, что он имеет 92,5% первоначальной активности даже после хранения в течение 6 месяцев в жидкой препаративной форме в условиях ускоренного анализа. Поэтому жидкая препаративная форма для длительно действующего конъюгата G-CSF в соответствии с настоящим изобретением проявляет эффективность в отношении стабильности при хранении.
Хотя предпочтительные варианты осуществления настоящего изобретения были описаны в иллюстративных целях, специалистам в данной области техники понятно, что возможны различные модификации, добавления и замещения без отхода от объема и сущности изобретения, раскрытого в сопровождающей формуле изобретения.
Промышленная применимость
Не содержащая человеческого сывороточного альбумина жидкая препаративная форма для прицельного обеспечения стабильности при хранении длительно действующих конъюгатов G-CSF в соответствии с настоящим изобретением не вызывает угрозы в отношении вирусных инфекций. Она содержит простую композицию, таким образом, имея экономическое преимущество перед другими стабилизаторами или лиофилизированными препаративными формами. Кроме того, ввиду того что она содержит длительно действующий конъюгат G-CSF, который имеет более длительное действие, чем натуральная форма, а также сохраняет активность белка в течение длительного периода времени, жидкая препаративная форма может использоваться в качестве эффективной лекарственной системы.
Claims (24)
1. Жидкая препаративная форма длительно действующего конъюгата фактора, стимулирующего колонии гранулоцитов (G-CSF), содержащая терапевтически эффективное количество длительно действующего конъюгата фактора, стимулирующего колонии гранулоцитов, в котором G-CSF ковалентно связан с фрагментом Fc иммуноглобулина посредством непептидного полимера, и лишенного альбумина стабилизатора, содержащего буфер и маннит.
2. Жидкая препаративная форма по п.1, где концентрация маннита находится в диапазоне от 1 до 20% (масс./об.) на основании общего объема жидкой препаративной формы.
3. Жидкая препаративная форма по п.1, где буфер выбран из группы, состоящей из цитратного, фосфатного, тартратного, карбонатного, сукцинатного, лактатного и ацетатного буферов.
4. Жидкая препаративная форма по п.1, где концентрация буфера находится в диапазоне концентрации от 5 до 100 мМ.
5. Жидкая препаративная форма по п.1, где рН буфера находится в диапазоне от 4 до 8.
6. Жидкая препаративная форма по п.1, где не содержащий альбумина стабилизатор дополнительно содержит ингредиент, выбранный из группы, состоящей из изотонического агента, многоатомного спирта, сахара, неионного ПАВ, нейтральной аминокислоты и их комбинации.
7. Жидкая препаративная форма по п.6, где изотонический агент представляет собой соль, выбранную из группы, состоящей из хлорида натрия, сульфата натрия, цитрата натрия и их комбинации.
8. Жидкая препаративная форма по п.6, где концентрация изотонического агента находится в диапазоне от 5 до 200 мМ.
9. Жидкая препаративная форма по п.6, где неионное ПАВ представляет собой неионное ПАВ на основе полисорбата или на основе полоксамера.
10. Жидкая препаративная форма по п.9, где неионное ПАВ на основе полисорбата выбрано из группы, состоящей из полисорбата 20, полисорбата 40, полисорбата 60 и полисорбата 80.
11. Жидкая препаративная форма по п.6, где концентрация неионного ПАВ находится в диапазоне концентрации от 0,001 до 0,05% (масс./об.) на основании общего объема жидкой препаративной формы.
12. Жидкая препаративная форма по п.6, где нейтральная аминокислота выбрана из группы, состоящей из глицина, аланина, лейцина, изолейцина и их комбинации.
13. Жидкая препаративная форма по п.6, где концентрация нейтральной аминокислоты находится в диапазоне от 0,1 до 10% (масс./об.) в жидкой препаративной форме.
14. Жидкая препаративная форма по п.1, где не содержащий альбумина стабилизатор содержит цитратный буфер в диапазоне pH от 5 до 8 и в концентрации от 5 до 100 мМ, маннит в концентрации от 1 до 20% (масс./об.), хлорид натрия в концентрации от 5 до 200 мМ и полисорбат 80 в концентрации от 0,001 до 0,05% (масс./об.).
15. Жидкая препаративная форма по п.1, где G-CSF представляет собой мутантный белок G-CSF, модифицированный из G-CSF дикого типа замещением, делецией или вставкой аминокислоты или аминокислот.
16. Жидкая препаративная форма по п.15, где G-CSF представляет собой мутантный G-CSF (17Ser-G-CSF), в котором остаток серина расположен в положении 17 вместо цистеинового остатка для G-CSF дикого типа.
17. Жидкая препаративная форма по п.1, где концентрация G-CSF находится в диапазоне от 3 до 22 мг/мл.
18. Жидкая препаративная форма по п.1, где фрагмент Fс иммуноглобулина выбран из группы, состоящей из IgG, IgA, IgD, IgE, IgM и их комбинации.
19. Жидкая препаративная форма по п.18, где фрагмент Fc иммуноглобулина представляет собой гибридный фрагмент, составленный из доменов различного происхождения из группы, состоящей из IgG, IgA, IgD, IgE и IgM.
20. Жидкая препаративная форма по п.18, где фрагмент Fc иммуноглобулина представлен в форме димера или мультимера одноцепочечных иммуноглобулинов, составленных из доменов одинакового происхождения.
21. Жидкая препаративная форма по п.18, где фрагмент Fc иммуноглобулина представляет собой Fc-фрагмент IgG4.
22. Жидкая препаративная форма по п.21, где фрагмент Fc иммуноглобулина представляет собой человеческий агликозилированный Fc-фрагмент IgG4.
23. Жидкая препаративная форма по п.1, где непептидный полимер выбран из группы, состоящей из группы биоразлагаемого полимера, липидного полимера, хитина, гиалуроновой кислоты и их комбинации.
24. Жидкая препаративная форма по п.23, где биоразлагаемый полимер выбран из группы, состоящей из полиэтиленгликоля, полипропиленгликоля, сополимера этиленгликоля и пропиленгликоля, полиоксиэтилированных полиолов, поливинилового спирта, полисахаридов, декстрана, поливинилового этилэфира, PLA (полимолочной кислоты) и PLGA (полимолочной-гликолевой кислоты).
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
KR20100004839 | 2010-01-19 | ||
KR10-2010-0004839 | 2010-01-19 | ||
PCT/KR2011/000369 WO2011090305A2 (en) | 2010-01-19 | 2011-01-18 | Liquid formulations for long-acting g-csf conjugate |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2519031C1 true RU2519031C1 (ru) | 2014-06-10 |
Family
ID=44307381
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2012135524/15A RU2519031C1 (ru) | 2010-01-19 | 2011-01-18 | Жидкие препаративные формы для длительно действующего конъюгата g-csf |
Country Status (17)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US9867777B2 (ru) |
EP (1) | EP2525787B1 (ru) |
JP (2) | JP5657698B2 (ru) |
KR (1) | KR101340710B1 (ru) |
CN (2) | CN102740840A (ru) |
AR (1) | AR080427A1 (ru) |
AU (1) | AU2011207915B2 (ru) |
BR (1) | BR112012017979B1 (ru) |
CA (1) | CA2787648C (ru) |
ES (1) | ES2654102T3 (ru) |
HK (1) | HK1246190A1 (ru) |
HU (1) | HUE034398T2 (ru) |
MX (1) | MX340463B (ru) |
PT (1) | PT2525787T (ru) |
RU (1) | RU2519031C1 (ru) |
TW (1) | TWI409082B (ru) |
WO (1) | WO2011090305A2 (ru) |
Families Citing this family (22)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2519031C1 (ru) | 2010-01-19 | 2014-06-10 | Ханми Сайенс Ко., Лтд. | Жидкие препаративные формы для длительно действующего конъюгата g-csf |
AR083006A1 (es) * | 2010-09-23 | 2013-01-23 | Lilly Co Eli | Formulaciones para el factor estimulante de colonias de granulocitos (g-csf) bovino y variantes de las mismas |
KR101303388B1 (ko) * | 2010-10-26 | 2013-09-03 | 한미사이언스 주식회사 | 지속형 인터페론 알파 결합체의 액상 제제 |
CA2813411C (en) * | 2010-11-05 | 2016-08-02 | Rinat Neuroscience Corporation | Engineered polypeptide conjugates and methods for making thereof using transglutaminase |
KR20130049671A (ko) | 2011-11-04 | 2013-05-14 | 한미사이언스 주식회사 | 생리활성 폴리펩타이드 결합체 제조 방법 |
AR090281A1 (es) | 2012-03-08 | 2014-10-29 | Hanmi Science Co Ltd | Proceso mejorado para la preparacion de un complejo polipeptidico fisiologicamente activo |
AR092862A1 (es) * | 2012-07-25 | 2015-05-06 | Hanmi Pharm Ind Co Ltd | Formulacion liquida de insulina de accion prolongada y un peptido insulinotropico y metodo de preparacion |
DK2945745T3 (da) * | 2013-01-19 | 2022-04-25 | Fluicell Ab | Fremgangsmåder til fremstilling, ændring, fjernelse og anvendelse af væskemembraner |
JP6294868B2 (ja) * | 2013-03-12 | 2018-03-14 | 大日本住友製薬株式会社 | 液体水性組成物 |
JP6521959B2 (ja) | 2013-07-31 | 2019-05-29 | ライナット ニューロサイエンス コーポレイション | 操作されたポリペプチドコンジュゲート |
MY192248A (en) * | 2014-03-31 | 2022-08-10 | Hanmi Pharm Ind Co Ltd | Method for improving solubility of protein and peptide by using immunoglobulin fc fragment linkage |
KR20190072663A (ko) | 2014-04-25 | 2019-06-25 | 리나트 뉴로사이언스 코프. | 약물이 고도로 로딩된 항체-약물 접합체 |
CN107949307B (zh) | 2015-09-14 | 2020-09-01 | 大王制纸株式会社 | 纸管和使用该纸管的卷状片材 |
CN105311625A (zh) * | 2015-11-23 | 2016-02-10 | 哈药集团生物工程有限公司 | 一种含有重组人粒细胞刺激因子的药物组合物 |
CN107446044B (zh) * | 2016-05-30 | 2021-04-30 | 越海百奥药业(绍兴)有限公司 | 一种纯化抗体的方法及所用缓冲液 |
WO2019075053A1 (en) * | 2017-10-11 | 2019-04-18 | Elanco Us Inc. | PORCINE G-CSF VARIANTS AND USES THEREOF |
EP3773468A2 (en) * | 2018-05-04 | 2021-02-17 | Ilkogen Ilaç Sanayi ve Ticaret A.S. | Stable hybrid fc fusion g-csf formulation |
ES2943312T3 (es) | 2019-02-13 | 2023-06-12 | Ilkogen Ilac Sanayi Ve Ticaret A S | Un G-CSF de acción prolongada para prevenir la neutropenia o reducir la duración de la neutropenia |
DK3744319T3 (da) * | 2019-05-28 | 2023-01-16 | Ilkogen Ilac Sanayi Ve Ticaret A S | Stabil lyofiliseret formulering til hybrid fc-fusioneret g-csf |
US11267858B2 (en) | 2019-05-31 | 2022-03-08 | Spectrum Pharmaceuticals, Inc. | Methods of treatment using G-CSF protein complex |
US11684655B2 (en) | 2019-05-31 | 2023-06-27 | Spectrum Pharmaceuticals, Inc. | Methods of treating neutorpenia using G-CSF protein complex |
KR102375269B1 (ko) * | 2021-01-27 | 2022-03-17 | 한미약품 주식회사 | 단백질 액상 제제 및 이의 제조방법 |
Family Cites Families (32)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
KR910005624B1 (ko) | 1985-09-17 | 1991-08-01 | 쥬우가이 세이야꾸 가부시끼가이샤 | 인체 과립성 백혈구의 콜로니 자극 인자 활성을 갖는 당단백질의 제조방법 |
IE63992B1 (en) | 1985-09-17 | 1995-06-28 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | Human granulocyte colony stimulating factor |
GR871067B (en) | 1986-07-18 | 1987-11-19 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | Process for producing stable pharmaceutical preparation containing granulocyte colony stimulating factor |
NO176799C (no) | 1986-12-23 | 1995-05-31 | Kyowa Hakko Kogyo Kk | DNA som koder for et polypeptid, rekombinant plasmid som koder for og kan uttrykke et polypeptid og fremgangsmåte for fremstilling av dette polypeptid |
FR2650598B1 (fr) | 1989-08-03 | 1994-06-03 | Rhone Poulenc Sante | Derives de l'albumine a fonction therapeutique |
NZ236819A (en) | 1990-02-03 | 1993-07-27 | Max Planck Gesellschaft | Enzymatic cleavage of fusion proteins; fusion proteins; recombinant dna and pharmaceutical compositions |
GB9107846D0 (en) | 1990-04-30 | 1991-05-29 | Ici Plc | Polypeptides |
FR2686901A1 (fr) | 1992-01-31 | 1993-08-06 | Rhone Poulenc Rorer Sa | Nouveaux polypeptides antithrombotiques, leur preparation et compositions pharmaceutiques les contenant. |
FR2686899B1 (fr) | 1992-01-31 | 1995-09-01 | Rhone Poulenc Rorer Sa | Nouveaux polypeptides biologiquement actifs, leur preparation et compositions pharmaceutiques les contenant. |
DE4242919A1 (de) | 1992-12-18 | 1994-06-23 | Boehringer Mannheim Gmbh | Verfahren zur Herstellung von lagerstabilen wässrigen pharmazeutischen Zubereitungen von G-CSF |
EP0626448A3 (de) | 1993-05-26 | 1998-01-14 | BOEHRINGER INGELHEIM INTERNATIONAL GmbH | Verfahren zur Herstellung und Reinigung von alpha-Interferon |
US6476198B1 (en) | 1993-07-13 | 2002-11-05 | The Scripps Research Institute | Multispecific and multivalent antigen-binding polypeptide molecules |
NZ295673A (en) | 1994-11-01 | 1999-03-29 | Wels Wilfried | Nucleic acid transfer system using recombinant multi-domain proteins each domain having a different function |
EP0859843A1 (en) | 1995-10-05 | 1998-08-26 | G.D. Searle & Co. | Novel g-csf receptor agonists |
US5723125A (en) | 1995-12-28 | 1998-03-03 | Tanox Biosystems, Inc. | Hybrid with interferon-alpha and an immunoglobulin Fc linked through a non-immunogenic peptide |
KR19990009888A (ko) * | 1997-07-12 | 1999-02-05 | 성재갑 | 콜로니 자극 인자의 안정한 용액 제형 |
JP4454571B2 (ja) | 1998-03-06 | 2010-04-21 | 中外製薬株式会社 | 蛋白非添加製剤 |
EP1952820A3 (en) * | 1998-03-06 | 2012-06-20 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Protein-free G-CSF formulations |
KR100356140B1 (ko) | 1999-07-08 | 2002-10-19 | 한미약품공업 주식회사 | 인간 과립구 콜로니 자극인자 변이체 및 이의 생산 방법 |
US20030104996A1 (en) | 2001-08-30 | 2003-06-05 | Tiansheng Li | L-methionine as a stabilizer for NESP/EPO in HSA-free formulations |
GB0202633D0 (en) | 2002-02-05 | 2002-03-20 | Delta Biotechnology Ltd | Stabilization of protein preparations |
US20050176108A1 (en) * | 2003-03-13 | 2005-08-11 | Young-Min Kim | Physiologically active polypeptide conjugate having prolonged in vivo half-life |
KR100560697B1 (ko) | 2003-08-06 | 2006-03-16 | 씨제이 주식회사 | 알부민을 함유하지 않는 에리스로포이에틴 제제 |
ATE522548T1 (de) | 2003-11-13 | 2011-09-15 | Hanmi Holdings Co Ltd | Verfahren zur massenproduktion der konstanten region von immunglobulin |
WO2006097944A2 (en) | 2005-03-17 | 2006-09-21 | Zenotech Laboratories Limited | Process for the purification of recombinant granulocyte-colony stimulating factor |
KR20060108040A (ko) * | 2005-04-12 | 2006-10-17 | 주식회사 엘지생명과학 | 인 과립구 콜로니 자극인자 용액 제형 |
DE102005033250A1 (de) | 2005-07-15 | 2007-01-18 | Bioceuticals Arzneimittel Ag | Verfahren zur Reinigung von G-CSF |
EA201070121A1 (ru) * | 2007-07-10 | 2010-06-30 | Эли Лилли Энд Компани | Лекарственная форма, содержащая слитый белок glp-1-fc |
ES2476915T3 (es) | 2007-08-27 | 2014-07-15 | Ratiopharm Gmbh | Formulación líquida de conjugado de G-CSF |
CN101657434B (zh) | 2008-03-10 | 2013-11-06 | Dic株式会社 | 以铁络合物为催化剂的聚合物的制造方法 |
RU2519031C1 (ru) | 2010-01-19 | 2014-06-10 | Ханми Сайенс Ко., Лтд. | Жидкие препаративные формы для длительно действующего конъюгата g-csf |
KR101831300B1 (ko) | 2010-10-29 | 2018-02-23 | 한미사이언스 주식회사 | 재조합 대장균으로부터 인간 과립구 콜로니 자극인자를 정제하는 방법 |
-
2011
- 2011-01-18 RU RU2012135524/15A patent/RU2519031C1/ru active
- 2011-01-18 JP JP2012549939A patent/JP5657698B2/ja active Active
- 2011-01-18 HU HUE11734854A patent/HUE034398T2/en unknown
- 2011-01-18 BR BR112012017979-9A patent/BR112012017979B1/pt active IP Right Grant
- 2011-01-18 US US13/574,039 patent/US9867777B2/en active Active
- 2011-01-18 CN CN2011800064309A patent/CN102740840A/zh active Pending
- 2011-01-18 KR KR1020110005161A patent/KR101340710B1/ko active Protection Beyond IP Right Term
- 2011-01-18 AU AU2011207915A patent/AU2011207915B2/en active Active
- 2011-01-18 WO PCT/KR2011/000369 patent/WO2011090305A2/en active Application Filing
- 2011-01-18 TW TW100101720A patent/TWI409082B/zh active
- 2011-01-18 CN CN201710115711.7A patent/CN107412737A/zh active Pending
- 2011-01-18 EP EP11734854.0A patent/EP2525787B1/en active Active
- 2011-01-18 MX MX2012008454A patent/MX340463B/es active IP Right Grant
- 2011-01-18 PT PT117348540T patent/PT2525787T/pt unknown
- 2011-01-18 ES ES11734854.0T patent/ES2654102T3/es active Active
- 2011-01-18 CA CA2787648A patent/CA2787648C/en active Active
- 2011-01-19 AR ARP110100184A patent/AR080427A1/es not_active Application Discontinuation
-
2014
- 2014-08-22 JP JP2014169208A patent/JP2014224151A/ja active Pending
-
2018
- 2018-05-04 HK HK18105764.3A patent/HK1246190A1/zh unknown
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
TW201129387A (en) | 2011-09-01 |
TWI409082B (zh) | 2013-09-21 |
JP2013517324A (ja) | 2013-05-16 |
JP2014224151A (ja) | 2014-12-04 |
AR080427A1 (es) | 2012-04-11 |
WO2011090305A2 (en) | 2011-07-28 |
BR112012017979B1 (pt) | 2021-10-13 |
EP2525787A2 (en) | 2012-11-28 |
JP5657698B2 (ja) | 2015-01-21 |
ES2654102T3 (es) | 2018-02-12 |
BR112012017979A2 (pt) | 2016-05-03 |
CA2787648C (en) | 2014-10-07 |
CA2787648A1 (en) | 2011-07-28 |
HUE034398T2 (en) | 2018-02-28 |
US20120294829A1 (en) | 2012-11-22 |
CN102740840A (zh) | 2012-10-17 |
KR20110085917A (ko) | 2011-07-27 |
MX2012008454A (es) | 2012-11-06 |
KR101340710B1 (ko) | 2013-12-12 |
CN107412737A (zh) | 2017-12-01 |
EP2525787A4 (en) | 2014-07-02 |
PT2525787T (pt) | 2017-12-18 |
EP2525787B1 (en) | 2017-03-15 |
MX340463B (es) | 2016-07-06 |
US9867777B2 (en) | 2018-01-16 |
WO2011090305A3 (en) | 2011-11-10 |
AU2011207915B2 (en) | 2013-07-11 |
HK1246190A1 (zh) | 2018-09-07 |
AU2011207915A1 (en) | 2012-08-23 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
RU2519031C1 (ru) | Жидкие препаративные формы для длительно действующего конъюгата g-csf | |
EP2593084B1 (en) | A liquid formulation of long-acting human growth hormone conjugate | |
RU2682720C2 (ru) | Жидкие составы для конъюгата эритропоэтина длительного действия | |
TWI494120B (zh) | 長效α-型干擾素接合物之液體調配物 | |
RU2683823C2 (ru) | Препарат гормона роста человека длительного типа |