RU2335506C2 - Пептидные аналоги gh-rh с антагонистическим действием, способ снижения уровня gh, способ снижения уровня igf-i и igf-ii, применение для ингибирования роста раковых клеток, фармакологически приемлемая композиция (варианты) - Google Patents
Пептидные аналоги gh-rh с антагонистическим действием, способ снижения уровня gh, способ снижения уровня igf-i и igf-ii, применение для ингибирования роста раковых клеток, фармакологически приемлемая композиция (варианты) Download PDFInfo
- Publication number
- RU2335506C2 RU2335506C2 RU2006106701/04A RU2006106701A RU2335506C2 RU 2335506 C2 RU2335506 C2 RU 2335506C2 RU 2006106701/04 A RU2006106701/04 A RU 2006106701/04A RU 2006106701 A RU2006106701 A RU 2006106701A RU 2335506 C2 RU2335506 C2 RU 2335506C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- boc
- arg
- tyr
- har
- peptide
- Prior art date
Links
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 title claims abstract description 67
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 title claims abstract description 32
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims abstract description 31
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims description 708
- 230000009471 action Effects 0.000 title description 6
- 230000017066 negative regulation of growth Effects 0.000 title 1
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 46
- ODKSFYDXXFIFQN-SCSAIBSYSA-N D-arginine Chemical compound OC(=O)[C@H](N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-SCSAIBSYSA-N 0.000 claims description 837
- -1 Arg Chemical compound 0.000 claims description 358
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 claims description 275
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N L-arginine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims description 129
- 108090000723 Insulin-Like Growth Factor I Proteins 0.000 claims description 37
- 102000004218 Insulin-Like Growth Factor I Human genes 0.000 claims description 37
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 29
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 claims description 26
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 claims description 26
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 claims description 16
- 102000048143 Insulin-Like Growth Factor II Human genes 0.000 claims description 15
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims description 15
- 108090001117 Insulin-Like Growth Factor II Proteins 0.000 claims description 14
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 claims description 14
- VZQHRKZCAZCACO-PYJNHQTQSA-N (2s)-2-[[(2s)-2-[2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-amino-5-(diaminomethylideneamino)pentanoyl]amino]propanoyl]amino]prop-2-enoylamino]-3-methylbutanoyl]amino]propanoic acid Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)C(=C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CCCNC(N)=N VZQHRKZCAZCACO-PYJNHQTQSA-N 0.000 claims description 12
- 102000005789 Vascular Endothelial Growth Factors Human genes 0.000 claims description 12
- 108010019530 Vascular Endothelial Growth Factors Proteins 0.000 claims description 12
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 claims description 10
- 108010031794 IGF Type 1 Receptor Proteins 0.000 claims description 9
- 102100039688 Insulin-like growth factor 1 receptor Human genes 0.000 claims description 9
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 claims description 9
- CSHFHJNMIMPJST-HOTGVXAUSA-N methyl (2s)-2-[[(2s)-2-[[2-[(2-aminoacetyl)amino]acetyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoate Chemical compound NCC(=O)NCC(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)OC)CC1=CC=CC=C1 CSHFHJNMIMPJST-HOTGVXAUSA-N 0.000 claims description 9
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 claims description 8
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 8
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 claims description 7
- HNDVDQJCIGZPNO-RXMQYKEDSA-N D-histidine Chemical compound OC(=O)[C@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-RXMQYKEDSA-N 0.000 claims description 6
- KDXKERNSBIXSRK-RXMQYKEDSA-N D-lysine Chemical compound NCCCC[C@@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-RXMQYKEDSA-N 0.000 claims description 6
- 101800002712 p27 Proteins 0.000 claims description 6
- JPOKAKNGULMYHZ-UILVTTEASA-N (2s)-6-amino-2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-6-amino-2-[[(2s)-2-[[(2s)-6-amino-2-[[(2s)-6-amino-2-[[(2s)-2-amino-5-(diaminomethylideneamino)pentanoyl]amino]hexanoyl]amino]hexanoyl]amino]-3-(4-hydroxyphenyl)propanoyl]amino]hexanoyl]amino]-3-(4-hydroxyp Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(N)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N)C1=CC=C(O)C=C1 JPOKAKNGULMYHZ-UILVTTEASA-N 0.000 claims description 5
- AHLPHDHHMVZTML-SCSAIBSYSA-N D-Ornithine Chemical compound NCCC[C@@H](N)C(O)=O AHLPHDHHMVZTML-SCSAIBSYSA-N 0.000 claims description 5
- QNAYBMKLOCPYGJ-UWTATZPHSA-N D-alanine Chemical compound C[C@@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-UWTATZPHSA-N 0.000 claims description 5
- 102100020948 Growth hormone receptor Human genes 0.000 claims description 5
- 101710099093 Growth hormone receptor Proteins 0.000 claims description 5
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 claims description 5
- 239000005556 hormone Substances 0.000 claims description 5
- 108010009779 peptide 32 Proteins 0.000 claims description 5
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 claims description 3
- 229910052794 bromium Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 229910052801 chlorine Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 229910052731 fluorine Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 229910052740 iodine Inorganic materials 0.000 claims description 3
- DCXYFEDJOCDNAF-UWTATZPHSA-N D-Asparagine Chemical compound OC(=O)[C@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UWTATZPHSA-N 0.000 claims description 2
- COLNVLDHVKWLRT-MRVPVSSYSA-N D-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-MRVPVSSYSA-N 0.000 claims description 2
- CKUAXEQHGKSLHN-UHFFFAOYSA-N [C].[N] Chemical compound [C].[N] CKUAXEQHGKSLHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims description 2
- 208000000587 small cell lung carcinoma Diseases 0.000 claims 2
- OECHUGCITYQGCY-YUMQZZPRSA-N (2s)-5-amino-2-[[(2s)-2,5-diaminopentanoyl]amino]pentanoic acid Chemical compound NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN OECHUGCITYQGCY-YUMQZZPRSA-N 0.000 claims 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 abstract description 167
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 94
- 108010051696 Growth Hormone Proteins 0.000 abstract description 56
- 102000018997 Growth Hormone Human genes 0.000 abstract description 55
- 239000000122 growth hormone Substances 0.000 abstract description 55
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 17
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 abstract description 6
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 abstract description 6
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 abstract description 6
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 5
- 230000003993 interaction Effects 0.000 abstract description 2
- MDXGYYOJGPFFJL-QMMMGPOBSA-N N(alpha)-t-butoxycarbonyl-L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)OC(C)(C)C MDXGYYOJGPFFJL-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 370
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 353
- LRQKBLKVPFOOQJ-YFKPBYRVSA-N L-norleucine Chemical compound CCCC[C@H]([NH3+])C([O-])=O LRQKBLKVPFOOQJ-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 324
- QWCKQJZIFLGMSD-UHFFFAOYSA-N alpha-aminobutyric acid Chemical compound CCC(N)C(O)=O QWCKQJZIFLGMSD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 315
- WBIIPXYJAMICNU-CQSZACIVSA-N (2r)-5-[amino-[(4-methylphenyl)sulfonylamino]methylidene]azaniumyl-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]pentanoate Chemical compound CC1=CC=C(S(=O)(=O)NC(N)=NCCC[C@@H](NC(=O)OC(C)(C)C)C(O)=O)C=C1 WBIIPXYJAMICNU-CQSZACIVSA-N 0.000 description 195
- VVNYDCGZZSTUBC-LURJTMIESA-N (2s)-5-amino-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]-5-oxopentanoic acid Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(N)=O VVNYDCGZZSTUBC-LURJTMIESA-N 0.000 description 194
- NLPQIWFEEKQBBN-NSHDSACASA-N (2s)-4-cyclohexyloxy-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(=O)OC1CCCCC1 NLPQIWFEEKQBBN-NSHDSACASA-N 0.000 description 190
- QVHJQCGUWFKTSE-YFKPBYRVSA-N (2s)-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]propanoic acid Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)OC(C)(C)C QVHJQCGUWFKTSE-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 186
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 170
- WBIIPXYJAMICNU-AWEZNQCLSA-N (2s)-5-[amino-[(4-methylphenyl)sulfonylamino]methylidene]azaniumyl-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]pentanoate Chemical compound CC1=CC=C(S(=O)(=O)NC(N)=NCCC[C@H](NC(=O)OC(C)(C)C)C(O)=O)C=C1 WBIIPXYJAMICNU-AWEZNQCLSA-N 0.000 description 163
- QJCNLJWUIOIMMF-YUMQZZPRSA-N (2s,3s)-3-methyl-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]pentanoic acid Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)OC(C)(C)C QJCNLJWUIOIMMF-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 155
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 143
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 143
- UYWMYJQSTUVRHR-SFHVURJKSA-N (2s)-3-[4-[(2-bromophenyl)methoxycarbonyloxy]phenyl]-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]propanoic acid Chemical compound C1=CC(C[C@H](NC(=O)OC(C)(C)C)C(O)=O)=CC=C1OC(=O)OCC1=CC=CC=C1Br UYWMYJQSTUVRHR-SFHVURJKSA-N 0.000 description 130
- 101710142969 Somatoliberin Proteins 0.000 description 113
- 239000000095 Growth Hormone-Releasing Hormone Substances 0.000 description 112
- 102100022831 Somatoliberin Human genes 0.000 description 112
- DMBKPDOAQVGTST-LBPRGKRZSA-N (2s)-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]-3-phenylmethoxypropanoic acid Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)N[C@H](C(O)=O)COCC1=CC=CC=C1 DMBKPDOAQVGTST-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 95
- CTXPLTPDOISPTE-YPMHNXCESA-N (2s,3r)-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]-3-phenylmethoxybutanoic acid Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)N[C@H](C(O)=O)[C@@H](C)OCC1=CC=CC=C1 CTXPLTPDOISPTE-YPMHNXCESA-N 0.000 description 95
- 230000010933 acylation Effects 0.000 description 93
- 238000005917 acylation reaction Methods 0.000 description 93
- ZIOCIQJXEKFHJO-QMMMGPOBSA-N (2s)-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]hexanoic acid Chemical compound CCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)OC(C)(C)C ZIOCIQJXEKFHJO-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 92
- SZXBQTSZISFIAO-ZETCQYMHSA-N (2s)-3-methyl-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]butanoic acid Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)OC(C)(C)C SZXBQTSZISFIAO-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 87
- PNFVIPIQXAIUAY-LURJTMIESA-N (2s)-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]butanoic acid Chemical compound CC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)OC(C)(C)C PNFVIPIQXAIUAY-LURJTMIESA-N 0.000 description 84
- IEAOAWZLUGOPJX-INIZCTEOSA-N (2s)-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]-3-[1-(phenylmethoxymethyl)imidazol-4-yl]propanoic acid Chemical compound C1=NC(C[C@H](NC(=O)OC(C)(C)C)C(O)=O)=CN1COCC1=CC=CC=C1 IEAOAWZLUGOPJX-INIZCTEOSA-N 0.000 description 83
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 72
- FYYSQDHBALBGHX-YFKPBYRVSA-N N(alpha)-t-butoxycarbonyl-L-asparagine Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(N)=O FYYSQDHBALBGHX-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 62
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 46
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 39
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 34
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 32
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 25
- KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N Fluorane Chemical compound F KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 23
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N dichloromethane Natural products ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 23
- NCLAAKQIHUIOIV-ZDUSSCGKSA-N (2s)-3-(4-ethoxyphenyl)-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]propanoic acid Chemical compound CCOC1=CC=C(C[C@H](NC(=O)OC(C)(C)C)C(O)=O)C=C1 NCLAAKQIHUIOIV-ZDUSSCGKSA-N 0.000 description 22
- 238000006482 condensation reaction Methods 0.000 description 22
- WWZKQHOCKIZLMA-UHFFFAOYSA-N octanoic acid Chemical compound CCCCCCCC(O)=O WWZKQHOCKIZLMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 22
- SLWWWZWJISHVOU-LBPRGKRZSA-N (2s)-3-(4-methoxyphenyl)-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]propanoic acid Chemical compound COC1=CC=C(C[C@H](NC(=O)OC(C)(C)C)C(O)=O)C=C1 SLWWWZWJISHVOU-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 21
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 21
- 229920001367 Merrifield resin Polymers 0.000 description 21
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 21
- HBAHZZVIEFRTEY-UHFFFAOYSA-N 2-heptylcyclohex-2-en-1-one Chemical compound CCCCCCCC1=CCCCC1=O HBAHZZVIEFRTEY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 20
- 229910000040 hydrogen fluoride Inorganic materials 0.000 description 20
- 230000003042 antagnostic effect Effects 0.000 description 19
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 17
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 16
- CMJCWQISQGNHHI-ZETCQYMHSA-N (2s)-5-(carbamoylamino)-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]pentanoic acid Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCNC(N)=O CMJCWQISQGNHHI-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 15
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 15
- JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N N,N-Diisopropylethylamine (DIPEA) Chemical compound CCN(C(C)C)C(C)C JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 14
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 14
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 14
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 13
- 230000003305 autocrine Effects 0.000 description 13
- 230000005494 condensation Effects 0.000 description 12
- 238000010511 deprotection reaction Methods 0.000 description 12
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 12
- 125000003088 (fluoren-9-ylmethoxy)carbonyl group Chemical group 0.000 description 11
- FUOOLUPWFVMBKG-UHFFFAOYSA-N 2-Aminoisobutyric acid Chemical compound CC(C)(N)C(O)=O FUOOLUPWFVMBKG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 238000009833 condensation Methods 0.000 description 11
- 230000003076 paracrine Effects 0.000 description 11
- 230000001817 pituitary effect Effects 0.000 description 11
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 11
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N trifluoroacetic acid Substances OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 10
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 108010073929 Vascular Endothelial Growth Factor A Proteins 0.000 description 10
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 10
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 10
- 238000002330 electrospray ionisation mass spectrometry Methods 0.000 description 10
- 230000002124 endocrine Effects 0.000 description 10
- RLSSMJSEOOYNOY-UHFFFAOYSA-N m-cresol Chemical compound CC1=CC=CC(O)=C1 RLSSMJSEOOYNOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 10
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 9
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 9
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 9
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 9
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 9
- 206010062767 Hypophysitis Diseases 0.000 description 8
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 8
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 8
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 8
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 8
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 8
- WLJVXDMOQOGPHL-UHFFFAOYSA-N phenylacetic acid Chemical compound OC(=O)CC1=CC=CC=C1 WLJVXDMOQOGPHL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 210000003635 pituitary gland Anatomy 0.000 description 8
- 238000011894 semi-preparative HPLC Methods 0.000 description 8
- NHXLMOGPVYXJNR-ATOGVRKGSA-N somatostatin Chemical group C([C@H]1C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@@H](CC=2C3=CC=CC=C3NC=2)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@H](C(=O)N1)[C@@H](C)O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)N)C(O)=O)=O)[C@H](O)C)C1=CC=CC=C1 NHXLMOGPVYXJNR-ATOGVRKGSA-N 0.000 description 8
- TUNFSRHWOTWDNC-UHFFFAOYSA-N tetradecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCC(O)=O TUNFSRHWOTWDNC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 7
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 7
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 7
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 7
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 7
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 7
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 7
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 7
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 7
- 239000000047 product Substances 0.000 description 7
- 210000002307 prostate Anatomy 0.000 description 7
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 7
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 7
- 206010000599 Acromegaly Diseases 0.000 description 6
- QUSNBJAOOMFDIB-UHFFFAOYSA-N Ethylamine Chemical compound CCN QUSNBJAOOMFDIB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 6
- NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N Piperidine Chemical compound C1CCNCC1 NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 6
- MQYQOVYIJOLTNX-UHFFFAOYSA-N dichloromethane;n,n-dimethylformamide Chemical compound ClCCl.CN(C)C=O MQYQOVYIJOLTNX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 6
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 6
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 6
- FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N ninhydrin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C(O)(O)C(=O)C2=C1 FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 6
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 6
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 6
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 6
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 6
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 6
- UDTXUDHDIVNHCL-AENUQYPBSA-N (2s)-2-[[(2s)-4-amino-2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-1-[(2s)-6-amino-2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-amino-4-methylpentanoyl]amino]-4-carboxybutanoyl]amino]-4-carboxybutanoyl]amino]-4-carboxybutanoyl]amino]-4-methylpe Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O UDTXUDHDIVNHCL-AENUQYPBSA-N 0.000 description 5
- DAZBILQQVFBVPE-XKKUQSFHSA-N (2s)-4-amino-2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-1-[(2s)-4-amino-2-[[2-[[(2r)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-1-[(2s)-6-amino-2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-[[(2s,3r)-2-amino-3-hydroxybutanoyl]amino]-4-methylsulfanylbutanoyl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)pentanoyl]amino]hexan Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N1[C@H](C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O)CCC1 DAZBILQQVFBVPE-XKKUQSFHSA-N 0.000 description 5
- MUSGYEMSJUFFHT-UWABRSFTSA-N 2-[(4R,7S,10S,13S,19S,22S,25S,28S,31S,34R)-34-[[(2S,3S)-2-[[(2R)-2-amino-3-(4-hydroxyphenyl)propanoyl]amino]-3-methylpentanoyl]amino]-4-[[(2S,3S)-1-amino-3-methyl-1-oxopentan-2-yl]-methylcarbamoyl]-25-(3-amino-3-oxopropyl)-7-(3-carbamimidamidopropyl)-10-(1H-imidazol-5-ylmethyl)-19-(1H-indol-3-ylmethyl)-13,17-dimethyl-28-[(1-methylindol-3-yl)methyl]-6,9,12,15,18,21,24,27,30,33-decaoxo-31-propan-2-yl-1,2-dithia-5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-decazacyclopentatriacont-22-yl]acetic acid Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](NC(=O)[C@H](N)Cc1ccc(O)cc1)C(=O)N[C@H]1CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](Cc2cnc[nH]2)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)CN(C)C(=O)[C@H](Cc2c[nH]c3ccccc23)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](Cc2cn(C)c3ccccc23)NC(=O)[C@@H](NC1=O)C(C)C)C(=O)N(C)[C@@H]([C@@H](C)CC)C(N)=O MUSGYEMSJUFFHT-UWABRSFTSA-N 0.000 description 5
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 5
- 125000001433 C-terminal amino-acid group Chemical group 0.000 description 5
- 230000001270 agonistic effect Effects 0.000 description 5
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 5
- 125000000031 ethylamino group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])N([H])[*] 0.000 description 5
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 5
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 5
- 108010056777 interleukin-2 (59-72) Proteins 0.000 description 5
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 5
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 5
- 108010011990 peptide 74 Proteins 0.000 description 5
- YYCZLGUOLIWZAW-GVETXGJZSA-N peptide 75 Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)C(C)C)C1=CC=CC=C1 YYCZLGUOLIWZAW-GVETXGJZSA-N 0.000 description 5
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 5
- 229940075620 somatostatin analogue Drugs 0.000 description 5
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 5
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 5
- BVAUMRCGVHUWOZ-ZETCQYMHSA-N (2s)-2-(cyclohexylazaniumyl)propanoate Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC1CCCCC1 BVAUMRCGVHUWOZ-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 4
- XMIIGOLPHOKFCH-UHFFFAOYSA-N 3-phenylpropionic acid Chemical compound OC(=O)CCC1=CC=CC=C1 XMIIGOLPHOKFCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108050007372 Fibroblast Growth Factor Proteins 0.000 description 4
- 102000018233 Fibroblast Growth Factor Human genes 0.000 description 4
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 4
- 230000001028 anti-proliverative effect Effects 0.000 description 4
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 4
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 4
- GHVNFZFCNZKVNT-UHFFFAOYSA-N decanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCC(O)=O GHVNFZFCNZKVNT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 4
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 4
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 4
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 4
- 210000004696 endometrium Anatomy 0.000 description 4
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 4
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 4
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 4
- 229940126864 fibroblast growth factor Drugs 0.000 description 4
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 4
- IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-N hexadecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N hydroxybenzotriazole Substances O=C1C=CC=C2NNN=C12 NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 4
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 4
- 238000010829 isocratic elution Methods 0.000 description 4
- 125000005647 linker group Chemical group 0.000 description 4
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 4
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 description 4
- 239000003094 microcapsule Substances 0.000 description 4
- 108010026901 peptide 106 Proteins 0.000 description 4
- 239000003279 phenylacetic acid Substances 0.000 description 4
- 229960003424 phenylacetic acid Drugs 0.000 description 4
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 4
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 4
- 125000000999 tert-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 4
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N Acetic anhydride Chemical compound CC(=O)OC(C)=O WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 208000018084 Bone neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 208000007342 Diabetic Nephropathies Diseases 0.000 description 3
- 206010012689 Diabetic retinopathy Diseases 0.000 description 3
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 3
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 3
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 230000021736 acetylation Effects 0.000 description 3
- 238000006640 acetylation reaction Methods 0.000 description 3
- 150000007513 acids Chemical group 0.000 description 3
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 3
- 230000001588 bifunctional effect Effects 0.000 description 3
- 229920002988 biodegradable polymer Polymers 0.000 description 3
- 239000004621 biodegradable polymer Substances 0.000 description 3
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 3
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 3
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 3
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 3
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 3
- 208000033679 diabetic kidney disease Diseases 0.000 description 3
- POULHZVOKOAJMA-UHFFFAOYSA-N dodecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCC(O)=O POULHZVOKOAJMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 3
- 210000003016 hypothalamus Anatomy 0.000 description 3
- 239000007943 implant Substances 0.000 description 3
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 3
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 3
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 3
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 3
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 3
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 3
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 3
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 3
- 125000001151 peptidyl group Chemical group 0.000 description 3
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 3
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 3
- 201000001514 prostate carcinoma Diseases 0.000 description 3
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 3
- 230000002685 pulmonary effect Effects 0.000 description 3
- 239000003488 releasing hormone Substances 0.000 description 3
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 3
- URKWHOVNPHQQTM-HNNXBMFYSA-N (2s)-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]-3-naphthalen-2-ylpropanoic acid Chemical compound C1=CC=CC2=CC(C[C@H](NC(=O)OC(C)(C)C)C(O)=O)=CC=C21 URKWHOVNPHQQTM-HNNXBMFYSA-N 0.000 description 2
- GTVVZTAFGPQSPC-QMMMGPOBSA-N (2s)-2-azaniumyl-3-(4-nitrophenyl)propanoate Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 GTVVZTAFGPQSPC-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 2
- HIQJNYPOWPXYIC-KRWDZBQOSA-N (2s)-3-(4-benzoylphenyl)-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]propanoic acid Chemical compound C1=CC(C[C@H](NC(=O)OC(C)(C)C)C(O)=O)=CC=C1C(=O)C1=CC=CC=C1 HIQJNYPOWPXYIC-KRWDZBQOSA-N 0.000 description 2
- MSZQAQJBXGTSHP-NSHDSACASA-N (2s)-3-cyclohexyl-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]propanoic acid Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1CCCCC1 MSZQAQJBXGTSHP-NSHDSACASA-N 0.000 description 2
- BNIFSVVAHBLNTN-XKKUQSFHSA-N (2s)-4-amino-2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-1-[(2s)-4-amino-2-[[2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-1-[(2s)-6-amino-2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-[[(2s,3r)-2-amino-3-hydroxybutanoyl]amino]-4-methylsulfanylbutanoyl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)pentanoyl]amino]hexan Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N1[C@H](C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O)CCC1 BNIFSVVAHBLNTN-XKKUQSFHSA-N 0.000 description 2
- BDNKZNFMNDZQMI-UHFFFAOYSA-N 1,3-diisopropylcarbodiimide Chemical compound CC(C)N=C=NC(C)C BDNKZNFMNDZQMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GOLXRNDWAUTYKT-UHFFFAOYSA-N 3-(1H-indol-3-yl)propanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(CCC(=O)O)=CNC2=C1 GOLXRNDWAUTYKT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CMUHFUGDYMFHEI-QMMMGPOBSA-N 4-amino-L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(N)C=C1 CMUHFUGDYMFHEI-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 2
- JLLYLQLDYORLBB-UHFFFAOYSA-N 5-bromo-n-methylthiophene-2-sulfonamide Chemical group CNS(=O)(=O)C1=CC=C(Br)S1 JLLYLQLDYORLBB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RWQUWTMOHXGTNN-UHFFFAOYSA-N 9-n,10-n-bis(4-butylphenyl)-9-n,10-n-bis(4-methylphenyl)phenanthrene-9,10-diamine Chemical compound C1=CC(CCCC)=CC=C1N(C=1C2=CC=CC=C2C2=CC=CC=C2C=1N(C=1C=CC(C)=CC=1)C=1C=CC(CCCC)=CC=1)C1=CC=C(C)C=C1 RWQUWTMOHXGTNN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QYPPJABKJHAVHS-UHFFFAOYSA-N Agmatine Natural products NCCCCNC(N)=N QYPPJABKJHAVHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N Argon Chemical compound [Ar] XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 2
- 206010004446 Benign prostatic hyperplasia Diseases 0.000 description 2
- 201000004569 Blindness Diseases 0.000 description 2
- 206010005949 Bone cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000003174 Brain Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 2
- MTCFGRXMJLQNBG-UWTATZPHSA-N D-Serine Chemical compound OC[C@@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UWTATZPHSA-N 0.000 description 2
- 206010014759 Endometrial neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 108700012941 GNRH1 Proteins 0.000 description 2
- 239000000579 Gonadotropin-Releasing Hormone Substances 0.000 description 2
- 208000008839 Kidney Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 2
- 244000137850 Marrubium vulgare Species 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 2
- VIHYIVKEECZGOU-UHFFFAOYSA-N N-acetylimidazole Chemical compound CC(=O)N1C=CN=C1 VIHYIVKEECZGOU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RHGKLRLOHDJJDR-UHFFFAOYSA-N Ndelta-carbamoyl-DL-ornithine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=O RHGKLRLOHDJJDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 description 2
- 206010061535 Ovarian neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 208000004403 Prostatic Hyperplasia Diseases 0.000 description 2
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000005718 Stomach Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- 108010009583 Transforming Growth Factors Proteins 0.000 description 2
- 102000009618 Transforming Growth Factors Human genes 0.000 description 2
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000012088 Vasoactive Intestinal Peptide Receptors Human genes 0.000 description 2
- 108010075974 Vasoactive Intestinal Peptide Receptors Proteins 0.000 description 2
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 2
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 2
- 102000030621 adenylate cyclase Human genes 0.000 description 2
- 108060000200 adenylate cyclase Proteins 0.000 description 2
- QYPPJABKJHAVHS-UHFFFAOYSA-P agmatinium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCCC[NH3+] QYPPJABKJHAVHS-UHFFFAOYSA-P 0.000 description 2
- 239000000556 agonist Substances 0.000 description 2
- 150000003862 amino acid derivatives Chemical class 0.000 description 2
- 238000007098 aminolysis reaction Methods 0.000 description 2
- 125000004202 aminomethyl group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])* 0.000 description 2
- 239000003098 androgen Substances 0.000 description 2
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 2
- 239000004305 biphenyl Substances 0.000 description 2
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 2
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 2
- 150000001991 dicarboxylic acids Chemical class 0.000 description 2
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 2
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 2
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 2
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 2
- 238000011010 flushing procedure Methods 0.000 description 2
- 230000006870 function Effects 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- ZRALSGWEFCBTJO-UHFFFAOYSA-N guanidine group Chemical group NC(=N)N ZRALSGWEFCBTJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 2
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 2
- 108010012038 peptide 78 Proteins 0.000 description 2
- 229940125863 peptide 78 Drugs 0.000 description 2
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 2
- 239000011698 potassium fluoride Substances 0.000 description 2
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 2
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 210000000664 rectum Anatomy 0.000 description 2
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 2
- UQDJGEHQDNVPGU-UHFFFAOYSA-N serine phosphoethanolamine Chemical compound [NH3+]CCOP([O-])(=O)OCC([NH3+])C([O-])=O UQDJGEHQDNVPGU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 2
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 2
- 201000000498 stomach carcinoma Diseases 0.000 description 2
- HQHCYKULIHKCEB-UHFFFAOYSA-N tetradecanedioic acid Chemical compound OC(=O)CCCCCCCCCCCCC(O)=O HQHCYKULIHKCEB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N trans-butenedioic acid Natural products OC(=O)C=CC(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QVHJQCGUWFKTSE-RXMQYKEDSA-N (2r)-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]propanoic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](C)NC(=O)OC(C)(C)C QVHJQCGUWFKTSE-RXMQYKEDSA-N 0.000 description 1
- IYKLZBIWFXPUCS-VIFPVBQESA-N (2s)-2-(naphthalen-1-ylamino)propanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(N[C@@H](C)C(O)=O)=CC=CC2=C1 IYKLZBIWFXPUCS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- CNMAQBJBWQQZFZ-LURJTMIESA-N (2s)-2-(pyridin-2-ylamino)propanoic acid Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC1=CC=CC=N1 CNMAQBJBWQQZFZ-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- FYMNTAQFDTZISY-QMMMGPOBSA-N (2s)-2-amino-3-[4-(diaminomethylideneamino)phenyl]propanoic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(N=C(N)N)C=C1 FYMNTAQFDTZISY-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- WAMWSIDTKSNDCU-ZETCQYMHSA-N (2s)-2-azaniumyl-2-cyclohexylacetate Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)C1CCCCC1 WAMWSIDTKSNDCU-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 1
- IHXHBYFWSOYYTR-ZDUSSCGKSA-N (2s)-3-(1-formylindol-3-yl)-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]propanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)OC(C)(C)C)C(O)=O)=CN(C=O)C2=C1 IHXHBYFWSOYYTR-ZDUSSCGKSA-N 0.000 description 1
- DFPYXQYWILNVAU-UHFFFAOYSA-N 1-hydroxybenzotriazole Chemical compound C1=CC=C2N(O)N=NC2=C1.C1=CC=C2N(O)N=NC2=C1 DFPYXQYWILNVAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PRPINYUDVPFIRX-UHFFFAOYSA-N 1-naphthaleneacetic acid Chemical compound C1=CC=C2C(CC(=O)O)=CC=CC2=C1 PRPINYUDVPFIRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005971 1-naphthylacetic acid Substances 0.000 description 1
- NDKDFTQNXLHCGO-UHFFFAOYSA-N 2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)acetic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)NCC(=O)O)C3=CC=CC=C3C2=C1 NDKDFTQNXLHCGO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VRPJIFMKZZEXLR-UHFFFAOYSA-N 2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]acetic acid Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)NCC(O)=O VRPJIFMKZZEXLR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HVIVTTYPGFCAEC-UHFFFAOYSA-N 2-chlorosulfonyl-2-phenoxyacetic acid Chemical compound OC(=O)C(S(Cl)(=O)=O)OC1=CC=CC=C1 HVIVTTYPGFCAEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MFNXWZGIFWJHMI-UHFFFAOYSA-N 2-methyl-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]propanoic acid Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)NC(C)(C)C(O)=O MFNXWZGIFWJHMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001622 2-naphthyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C2C([H])=C(*)C([H])=C([H])C2=C1[H] 0.000 description 1
- 125000003903 2-propenyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])=C([H])[H] 0.000 description 1
- 125000003349 3-pyridyl group Chemical group N1=C([H])C([*])=C([H])C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- FHVDTGUDJYJELY-UHFFFAOYSA-N 6-{[2-carboxy-4,5-dihydroxy-6-(phosphanyloxy)oxan-3-yl]oxy}-4,5-dihydroxy-3-phosphanyloxane-2-carboxylic acid Chemical compound O1C(C(O)=O)C(P)C(O)C(O)C1OC1C(C(O)=O)OC(OP)C(O)C1O FHVDTGUDJYJELY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 206010061692 Benign muscle neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 125000006374 C2-C10 alkenyl group Chemical group 0.000 description 1
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 description 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 208000001333 Colorectal Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- RGHNJXZEOKUKBD-SQOUGZDYSA-M D-gluconate Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C([O-])=O RGHNJXZEOKUKBD-SQOUGZDYSA-M 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-GSVOUGTGSA-N D-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-GSVOUGTGSA-N 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-STHAYSLISA-N D-threonine Chemical compound C[C@H](O)[C@@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-STHAYSLISA-N 0.000 description 1
- FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N Dextrotartaric acid Chemical compound OC(=O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)=O FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N 0.000 description 1
- 208000017701 Endocrine disease Diseases 0.000 description 1
- 201000009273 Endometriosis Diseases 0.000 description 1
- JOYRKODLDBILNP-UHFFFAOYSA-N Ethyl urethane Chemical compound CCOC(N)=O JOYRKODLDBILNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NIGWMJHCCYYCSF-UHFFFAOYSA-N Fenclonine Chemical compound OC(=O)C(N)CC1=CC=C(Cl)C=C1 NIGWMJHCCYYCSF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-N Fumaric acid Chemical compound OC(=O)\C=C\C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-N 0.000 description 1
- 101800001586 Ghrelin Proteins 0.000 description 1
- 102400000442 Ghrelin-28 Human genes 0.000 description 1
- 102000051325 Glucagon Human genes 0.000 description 1
- 108060003199 Glucagon Proteins 0.000 description 1
- 241001622557 Hesperia Species 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-N Hydrogen bromide Chemical compound Br CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010031792 IGF Type 2 Receptor Proteins 0.000 description 1
- 201000009794 Idiopathic Pulmonary Fibrosis Diseases 0.000 description 1
- 206010022489 Insulin Resistance Diseases 0.000 description 1
- 208000005016 Intestinal Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- QUOGESRFPZDMMT-UHFFFAOYSA-N L-Homoarginine Natural products OC(=O)C(N)CCCCNC(N)=N QUOGESRFPZDMMT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AHLPHDHHMVZTML-BYPYZUCNSA-N L-Ornithine Chemical compound NCCC[C@H](N)C(O)=O AHLPHDHHMVZTML-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- QWCKQJZIFLGMSD-VKHMYHEASA-N L-alpha-aminobutyric acid Chemical compound CC[C@H](N)C(O)=O QWCKQJZIFLGMSD-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 150000008575 L-amino acids Chemical class 0.000 description 1
- RHGKLRLOHDJJDR-BYPYZUCNSA-N L-citrulline Chemical compound NC(=O)NCCC[C@H]([NH3+])C([O-])=O RHGKLRLOHDJJDR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- QUOGESRFPZDMMT-YFKPBYRVSA-N L-homoarginine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCCCNC(N)=N QUOGESRFPZDMMT-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 1
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 1
- OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N Malonic acid Chemical compound OC(=O)CC(O)=O OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 1
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 1
- 201000004458 Myoma Diseases 0.000 description 1
- SJRJJKPEHAURKC-UHFFFAOYSA-N N-methylmorpholine Substances CN1CCOCC1 SJRJJKPEHAURKC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010029113 Neovascularisation Diseases 0.000 description 1
- 108091005461 Nucleic proteins Proteins 0.000 description 1
- GEYBMYRBIABFTA-VIFPVBQESA-N O-methyl-L-tyrosine Chemical compound COC1=CC=C(C[C@H](N)C(O)=O)C=C1 GEYBMYRBIABFTA-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- AHLPHDHHMVZTML-UHFFFAOYSA-N Orn-delta-NH2 Natural products NCCCC(N)C(O)=O AHLPHDHHMVZTML-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UTJLXEIPEHZYQJ-UHFFFAOYSA-N Ornithine Natural products OC(=O)C(C)CCCN UTJLXEIPEHZYQJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 208000037273 Pathologic Processes Diseases 0.000 description 1
- 102000002808 Pituitary adenylate cyclase-activating polypeptide Human genes 0.000 description 1
- 108010004684 Pituitary adenylate cyclase-activating polypeptide Proteins 0.000 description 1
- 208000015634 Rectal Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 208000006265 Renal cell carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 206010062237 Renal impairment Diseases 0.000 description 1
- 206010039491 Sarcoma Diseases 0.000 description 1
- 102100037505 Secretin Human genes 0.000 description 1
- 108010086019 Secretin Proteins 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 102000005157 Somatostatin Human genes 0.000 description 1
- 108010056088 Somatostatin Proteins 0.000 description 1
- 108050001286 Somatostatin Receptor Proteins 0.000 description 1
- 102000011096 Somatostatin receptor Human genes 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229920002253 Tannate Polymers 0.000 description 1
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-M Trifluoroacetate Chemical compound [O-]C(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000003875 Wang resin Substances 0.000 description 1
- OURRXQUGYQRVML-AREMUKBSSA-N [4-[(2s)-3-amino-1-(isoquinolin-6-ylamino)-1-oxopropan-2-yl]phenyl]methyl 2,4-dimethylbenzoate Chemical compound CC1=CC(C)=CC=C1C(=O)OCC1=CC=C([C@@H](CN)C(=O)NC=2C=C3C=CN=CC3=CC=2)C=C1 OURRXQUGYQRVML-AREMUKBSSA-N 0.000 description 1
- BLAKAEFIFWAFGH-UHFFFAOYSA-N acetyl acetate;pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1.CC(=O)OC(C)=O BLAKAEFIFWAFGH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000002777 acetyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 1
- YBCVMFKXIKNREZ-UHFFFAOYSA-N acoh acetic acid Chemical compound CC(O)=O.CC(O)=O YBCVMFKXIKNREZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 125000002252 acyl group Chemical group 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 229940072056 alginate Drugs 0.000 description 1
- 235000010443 alginic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229920000615 alginic acid Polymers 0.000 description 1
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 description 1
- 125000000304 alkynyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000000266 alpha-aminoacyl group Chemical group 0.000 description 1
- OBETXYAYXDNJHR-UHFFFAOYSA-N alpha-ethylcaproic acid Natural products CCCCC(CC)C(O)=O OBETXYAYXDNJHR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 1
- 239000004037 angiogenesis inhibitor Substances 0.000 description 1
- 229940121369 angiogenesis inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 150000008064 anhydrides Chemical class 0.000 description 1
- 210000004198 anterior pituitary gland Anatomy 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 229910052786 argon Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000006615 aromatic heterocyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 1
- 229940072107 ascorbate Drugs 0.000 description 1
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 1
- 125000004429 atom Chemical group 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N benzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1 WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001797 benzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 125000001584 benzyloxycarbonyl group Chemical group C(=O)(OCC1=CC=CC=C1)* 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- TVFDJXOCXUVLDH-UHFFFAOYSA-N caesium atom Chemical class [Cs] TVFDJXOCXUVLDH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- 125000002837 carbocyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 235000011089 carbon dioxide Nutrition 0.000 description 1
- OEERIBPGRSLGEK-UHFFFAOYSA-N carbon dioxide;methanol Chemical compound OC.O=C=O OEERIBPGRSLGEK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000001732 carboxylic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 210000000748 cardiovascular system Anatomy 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 229960002173 citrulline Drugs 0.000 description 1
- 235000013477 citrulline Nutrition 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 238000007887 coronary angioplasty Methods 0.000 description 1
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 125000000113 cyclohexyl group Chemical group [H]C1([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 description 1
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 description 1
- DEZRYPDIMOWBDS-UHFFFAOYSA-N dcm dichloromethane Chemical compound ClCCl.ClCCl DEZRYPDIMOWBDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003405 delayed action preparation Substances 0.000 description 1
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 1
- 239000007933 dermal patch Substances 0.000 description 1
- 230000001066 destructive effect Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- LMBWSYZSUOEYSN-UHFFFAOYSA-N diethyldithiocarbamic acid Chemical compound CCN(CC)C(S)=S LMBWSYZSUOEYSN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UXGNZZKBCMGWAZ-UHFFFAOYSA-N dimethylformamide dmf Chemical compound CN(C)C=O.CN(C)C=O UXGNZZKBCMGWAZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 229950004394 ditiocarb Drugs 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 230000002222 downregulating effect Effects 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 238000002651 drug therapy Methods 0.000 description 1
- 230000002526 effect on cardiovascular system Effects 0.000 description 1
- 230000007184 endocrine pathway Effects 0.000 description 1
- 210000000750 endocrine system Anatomy 0.000 description 1
- 208000030172 endocrine system disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 150000004665 fatty acids Chemical group 0.000 description 1
- 239000003517 fume Substances 0.000 description 1
- 239000003629 gastrointestinal hormone Substances 0.000 description 1
- GNKDKYIHGQKHHM-RJKLHVOGSA-N ghrelin Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CN)COC(=O)CCCCCCC)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1N=CNC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 GNKDKYIHGQKHHM-RJKLHVOGSA-N 0.000 description 1
- 208000005017 glioblastoma Diseases 0.000 description 1
- MASNOZXLGMXCHN-ZLPAWPGGSA-N glucagon Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O)C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC=1NC=NC=1)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C1=CC=CC=C1 MASNOZXLGMXCHN-ZLPAWPGGSA-N 0.000 description 1
- 229960004666 glucagon Drugs 0.000 description 1
- 229940050410 gluconate Drugs 0.000 description 1
- 125000000623 heterocyclic group Chemical group 0.000 description 1
- FUZZWVXGSFPDMH-UHFFFAOYSA-N hexanoic acid Chemical compound CCCCCC(O)=O FUZZWVXGSFPDMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- 206010020718 hyperplasia Diseases 0.000 description 1
- 230000002390 hyperplastic effect Effects 0.000 description 1
- 206010020871 hypertrophic cardiomyopathy Diseases 0.000 description 1
- 230000002267 hypothalamic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003290 indole 3-propionic acid Substances 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 208000036971 interstitial lung disease 2 Diseases 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 238000005304 joining Methods 0.000 description 1
- 230000004130 lipolysis Effects 0.000 description 1
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 1
- 230000004807 localization Effects 0.000 description 1
- 230000005923 long-lasting effect Effects 0.000 description 1
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 description 1
- 229940049920 malate Drugs 0.000 description 1
- VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N maleic acid Chemical compound OC(=O)\C=C/C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N 0.000 description 1
- BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N malic acid Chemical compound OC(=O)C(O)CC(O)=O BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000005075 mammary gland Anatomy 0.000 description 1
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 1
- BCVXHSPFUWZLGQ-UHFFFAOYSA-N mecn acetonitrile Chemical compound CC#N.CC#N BCVXHSPFUWZLGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- 230000002297 mitogenic effect Effects 0.000 description 1
- 150000002763 monocarboxylic acids Chemical class 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- 201000006938 muscular dystrophy Diseases 0.000 description 1
- WHQSYGRFZMUQGQ-UHFFFAOYSA-N n,n-dimethylformamide;hydrate Chemical compound O.CN(C)C=O WHQSYGRFZMUQGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000955 neuroendocrine Effects 0.000 description 1
- 125000000449 nitro group Chemical group [O-][N+](*)=O 0.000 description 1
- PSACHCMMPFMFAJ-UHFFFAOYSA-N nmm n-methylmorpholine Chemical compound CN1CCOCC1.CN1CCOCC1 PSACHCMMPFMFAJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000000269 nucleophilic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011580 nude mouse model Methods 0.000 description 1
- 229960003104 ornithine Drugs 0.000 description 1
- 201000008968 osteosarcoma Diseases 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 230000009054 pathological process Effects 0.000 description 1
- 230000001991 pathophysiological effect Effects 0.000 description 1
- 230000000737 periodic effect Effects 0.000 description 1
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003884 phenylalkyl group Chemical group 0.000 description 1
- UYWQUFXKFGHYNT-UHFFFAOYSA-N phenylmethyl ester of formic acid Natural products O=COCC1=CC=CC=C1 UYWQUFXKFGHYNT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000028591 pheochromocytoma Diseases 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 description 1
- 230000035790 physiological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 201000010065 polycystic ovary syndrome Diseases 0.000 description 1
- 239000002952 polymeric resin Substances 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 231100000857 poor renal function Toxicity 0.000 description 1
- 239000005373 porous glass Substances 0.000 description 1
- NROKBHXJSPEDAR-UHFFFAOYSA-M potassium fluoride Chemical compound [F-].[K+] NROKBHXJSPEDAR-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 1
- 230000003693 proliferative and anti-apoptotic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 201000003086 pulmonary systemic sclerosis Diseases 0.000 description 1
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000006340 racemization Effects 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 208000037803 restenosis Diseases 0.000 description 1
- 210000001525 retina Anatomy 0.000 description 1
- 230000000250 revascularization Effects 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 229960002101 secretin Drugs 0.000 description 1
- OWMZNFCDEHGFEP-NFBCVYDUSA-N secretin human Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(N)=O)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC=1NC=NC=1)[C@@H](C)O)C1=CC=CC=C1 OWMZNFCDEHGFEP-NFBCVYDUSA-N 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 229960000553 somatostatin Drugs 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L succinate(2-) Chemical compound [O-]C(=O)CCC([O-])=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 238000001308 synthesis method Methods 0.000 description 1
- 229920003002 synthetic resin Polymers 0.000 description 1
- 125000005931 tert-butyloxycarbonyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(OC(*)=O)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N tfa trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F.OC(=O)C(F)(F)F WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 1
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 1
- 125000002221 trityl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1C([*])(C1=C(C(=C(C(=C1[H])[H])[H])[H])[H])C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- 230000001875 tumorinhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 230000002227 vasoactive effect Effects 0.000 description 1
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 1
- 210000001835 viscera Anatomy 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/575—Hormones
- C07K14/60—Growth hormone-releasing factor [GH-RF], i.e. somatoliberin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
- A61P5/06—Drugs for disorders of the endocrine system of the anterior pituitary hormones, e.g. TSH, ACTH, FSH, LH, PRL, GH
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Zoology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Toxicology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Immunology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
Предлагаются новые типы синтетических антагонистических аналогов hGH-RH(1-29)NH2. Данные аналоги ингибируют взаимодействие эндогенного hGH-RH с гипофизарными рецепторами GH-RH и таким образом препятствуют высвобождению гормона роста. Аналоги также подавляют пролиферацию в раковых тканях человека путем непосредственного воздействия на раковые клетки. Повышенная ингибиторная эффективность новых аналогов, по сравнению с ранее описанными, является следствием замены разных аминокислот. 12 н. и 9 з.п. ф-лы, 15 табл.
Description
Область изобретения
Данное изобретение было сделано отчасти при правительственной поддержке Медицинского исследовательского центра департамента занятости ветеранов. Правительство имеет определенные права на данную заявку (VA №03-084, права переданы 25 июля 2003 г.).
Настоящее изобретение относится к новым синтетическим пептидам, которые ингибируют высвобождение гормона роста из гипофиза млекопитающих и пролиферацию злокачественных опухолей человека путем непосредственного воздействия на раковые клетки, а также к терапевтическим композициям, содержащим указанные новые пептиды.
Предпосылки создания изобретения
Гормон, высвобождающий гормон роста (GH-RH), представляет собой пептид, принадлежащий к секретин/глюкагоновому семейству нейроэндокринных и желудочно-кишечных гормонов, данное семейство также включает в себя вазоактивный интерстициальный пептид (VIP), гипофизарный активирующий аденилатциклазу (РАСАР) и другие. Человеческий пептид GH-RH (hGH-RH) состоит из 44 аминокислотных остатков. Наиболее известным участком продукции GH-RH является гипоталамус, однако обнаружено, что он также синтезируется в разных периферических органах. hGH-RH также продуцируется, иногда в больших количествах, человеческими злокачественными тканями (раковыми) различного происхождения.
GH-RH выполняет разные физиологические и патофизиологические функции. GH-RH гипоталамуса представляет собой эндокринный рилизинг-гормон, который, действуя через специфические рецепторы GH-RH в гипофизе, регулирует секрецию гипофизарного гормона роста (GH). Физиологические функции GH-RH в тканях, отличных от гипофиза, менее ясны. Однако существуют факты, количество которых постоянно возрастает, свидетельствующие о том, что GH-RH выполняет функцию аутокринного/паракринного фактора роста в разных раковых тканях. Описано, что в широком ряде раковых тканей человека, а также в некоторых нормальных периферических органах присутствуют получающиеся в результате сплайсинга вариантные (сплайсинг-вариантные) формы (SV) рецепторов GH-RH, отличные от экспрессирующихся в гипофизе. Опухолевый аутокринный/паракринный GH-RH может оказывать действие через данные рецепторы. Кроме того, мишенями локального GH-RH могут быть рецепторы VIP и другие, еще неидентифицированные рецепторы данного семейства.
Исходя из того, что GH-RH выполняет функцию эндокринного регулятора высвобождения GH, были разработаны новые терапевтические стратегии для лечения различных патологических состояний на основе применения агонистических и антагонистических аналогов GH-RH.
GH представляет собой полипептид, содержащий 191 аминокислоту, который стимулирует продукцию разных факторов роста, например инсулинподобного фактора роста I (IGF-I), и, следовательно, инициирует рост многих тканей (скелетной, соединительной, мышечной и тканей внутренних органов) и стимулирует различные физиологические активности (увеличивает синтез нуклеиновых кислот и белков, и увеличивает липолиз, но снижает секрецию мочевины). Высвобождение гипофизарного GH находится под контролем факторов высвобождения и ингибирования, секретируемых гипоталамусом, причем основными рилизинг-факторами являются GH-RH и грелин, а основным ингибирующим фактором является соматостатин.
GH опосредует ряд заболеваний. Одним из заболеваний, в развитии которых участвует GH, является акромегалия, при которой наблюдаются избыточные уровни GH. Аномальное увеличение костей лица и конечностей, а также сердечно-сосудистые симптомы, наблюдающиеся при данном заболевании, можно лечить путем введения антагониста GH-RH. К заболеваниям, в развитии которых участвует GH, относятся также диабетическая ретинопатия и диабетическая нефропатия. Полагают, что повреждение соответственно сетчатки и почек, имеющее место при данных заболеваниях, происходит в результате повышенной секреции GH и приводит к слепоте или ухудшению функции почек. Данное повреждение можно предотвратить или замедлить путем введения эффективного антагониста GH-RH.
Некоторые исследователи пытались оказывать влияние на протекание данных заболеваний и других состояний, контролируя уровни GH и IGF-I путем применения аналогов соматостатина, ингибитора высвобождения GH. Однако аналоги соматостатина при отдельном введении не снижают в достаточной степени уровни GH или IGF-I. При введении в сочетании с антагонистом GH-RH аналоги соматостатина снижают уровень IGF-I гораздо лучше.
Однако основной областью применения антагонистов GH-RH являются раковые заболевания (см. Schally AV and Varga JL, Trends Endocrinol Metab 10: 383-391,1999; Schally AV et al, Frontiers Neuroendocrinol 22:248-291, 2001; Schally AV and Comaru-Schally AM, in: Kufe DW, Pollock RE, Weichselbaum RR, Bast Jr. RC, Gansler TS, Holland JF, Frei III E, Eds. Cancer Medicine, 6th ed. Hamilton, Ontario: BC. Decker, Inc., 2003, p. 911-926). Антагонисты GH-RH ингибируют пролиферацию злокачественных тканей посредством косвенных эндокринных механизмов, в основе которых лежит ингибирование высвобождения гипофизарного GH, что приводит к уменьшению сывороточных уровней GH и IGF-I, а также путем непосредственного влияния на опухолевую ткань.
GH-RH и опухолевые сплайсинг-вариантные (SV) формы его рецепторов присутствуют в человеческих раковых тканях при раке легких, простаты, молочной железы, яичников, эндометрия, желудка, кишечника, поджелудочной железы, почек и костей (см. Halmos G et al, Proc Natl Acad Sci USA 97: 10555-10560, 2000; Rekasi Z et al, Proc Natl Acad Sci USA 97: 10561-10566, 2000; Schally AV et al, Frontiers Neuroendocrinol 22: 248-291, 2001; Schally AV and Comaru-Schally AM, in: Kufe DW, Pollock RE,Weichselbaum RR, Bast Jr. RC,Gansler TS, Holland JF, Frei III E, Eds. Cancer Medicine, 6th ed. Hamilton, Ontario: BC. Decker, Inc., 2003, p. 911-926). Опухолевый GH-RH, как было показано или как ожидалось, действует как аутокринный фактор роста в этих злокачественных опухолях. Антагонистические аналоги GH-RH могут ингибировать стимулирующую активность GH-RH и оказывать непосредственное антипролиферативное действие на раковые клетки in vitro, и на опухоли in vivo. Непосредственные антипролиферативные эффекты антагонистов GH-RH реализуются через опухолевые рецепторы (связывающие участки). Кроме специфических опухолевых SV рецепторов GH-RH, мишенями антагонистов GH-RH также могут являться рецепторы VIP и другие, еще неидентифицированные рецепторы данного семейства.
Было обнаружено, что, кроме эндокринного ингибирования сывороточного уровня GH и IGF-I, антагонисты GH-RH уменьшают аутокринную и паракринную продукцию некоторых опухолевых факторов роста и/или осуществляют понижающую регуляцию их рецепторов. Данные факторы роста включают в себя IGF-I, IGF-II, GH, фактор роста эндотелия сосудов (VEGF) и фактор роста фибробластов (FGF). Таким образом, разрыв аутокринных/паракринных стимуляторных цепей, в которых участвуют данные факторы роста, вносит вклад в эффективность антагонистов GH-RH как противоопухолевых средств.
IGF-I и IGF-II представляют собой аутокринные/паракринные факторы роста с потенциальным митогенным действием на разные типы рака. IGF-I также является эндокринным фактором роста, и повышенные уровни сывороточного IGF-I считаются эпидемиологическим фактором риска развития рака простаты, рака легкого и рака ободочной и прямой кишки. Достоверно установлено, что IGF-I (соматомедин-C) участвует в развитии рака молочной железы, рака простаты, рака толстой кишки, опухолей костей и других злокачественных заболеваний. Тем не менее, аутокринный/паракринный контроль пролиферации посредством IGF-II также является основным фактором для многих опухолей. IGF-I и IGF-II оказывают пролиферативное и антиапоптотическое действие через общий рецептор IGF-I. Рецепторы IGF-I присутствуют в тканях первичного рака молочной железы, простаты, легких, толстой кишки, мозга, поджелудочной железы и почечно-клеточного рака человека. Обработка некоторых экспериментальных раковых опухолей, таких как раковые опухоли костей, легких, простаты, почек, молочной железы, яичников, кишечника, поджелудочной железы и мозга, антагонистами GH-RH приводит к уменьшению уровней IGF-I и/или IGF-II, сопровождающемуся ингибированием роста опухоли (как описано в Schally AV and Varga JL, Trends Endocrine) Metab 10: 383-391, 1999; Schally AV et al, Frontiers Neuroendocrinol 22: 248-291, 2001; Schally AV and Comaru-Schally AM, in: Kufe DW, Pollock RE,Weichselbaum RR, Bast Jr. RC, Gansler TS, Holland JF, Frei III E, Eds. Cancer Medicine, 6'h ed. Hamilton, Ontario: BC. Decker, Inc., 2003, p. 911-926). В некоторых случаях в результате действия антагонистов GH-RH также уменьшается экспрессия рецепторов IGF-I. Таким образом, разрыв эндокринных и аутокринных/паракринных стимуляторных цепей, зависимых от IGF-I и IGF-II, вносит вклад в противоопухолевое действие антагонистов GH-RH.
Обработка модели рака молочной железы MXT антагонистами GH-RH приводит к ингибированию роста опухоли, уменьшению уровня мРНК GH и концентрации пептида GH в опухоли, а также к ингибированию экспрессии мРНК рецепторов GH (Szepeshazi K et al, Endocrinology 142: 4371-4378, 2001). Показано, что GH действует как фактор роста клеток карциномы мышиной молочной железы MXT, клеток рака молочной железы человека MCF-7 и других опухолевых клеточных линий. Таким образом, ингибиторное действие антагонистов GH-RH на локальные и сывороточные уровни GH вносит вклад в противоопухолевый эффект.
Показано, что антагонисты GH-RH снижают уровень мРНК и концентрацию белка VEGF у моделей с человеческим андроген-чувствительным и андроген-независимым раком простаты (Letsch M et al, Proc Natl Acad Sci USA 100: 1250-1255, 2003; Plonowski A et al, Prostate 52: 173-182, 2002), что обуславливает их противоопухолевое действие, поскольку VEGF играет важную стимуляторную роль в процессах реваскуляризации и роста различных опухолей. Кроме того, было обнаружено, что антагонист GH-RH ингибирует секрецию VEGF и пролиферацию нормальных эндотелиальных клеток мыши, по-видимому, через непосредственное воздействие на данные клетки in vitro (Siejka A et al, Life Sci 72:2473-2479,2003).
Ученые исследовали разные модификации GH-RH, чтобы выявить взаимосвязь структуры GH-RH и его активности в отношении гипофизарных рецепторов с целью разработки синтетических родственных соединений с улучшенными агонистическими или антагонистическими свойствами. Так, ранее было установлено, что фрагмент GH-RH, содержащий остатки 1-29, или GH-RH(1-29), является минимальной последовательностью, необходимой для проявления биологической активности в гипофизе. Данный фрагмент сохраняет 50% или более активности нативного GH-RH. Затем были получены многочисленные синтетические аналоги GH-RH на основе структуры пептида hGH-RH(1-29)NH2. hGH-RH(1-29)NH2 имеет следующую аминокислотную последовательность:
Tyr-Ala-Asp-Ala-Ile5-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr10-Arg-Lys-Val-Leu-Gly15-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg20-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp25-Ile-Met-Ser-Arg29-NH2
Значительное количество патентов и статей, находящихся в открытом доступе, раскрывают аналоги GH-RH, которые действуют на гипофиз либо как агонисты GH-RH (т.е. стимулируют высвобождение GH), либо как антагонисты GH-RH (т.е. ингибируют высвобождение GH). Большинство данных пептидов получают из пептидной последовательности GH-RH(1-29) с использованием конкретных структурных модификаций, которые способствуют усилению агонистических или антагонистических свойств в отношении гипофизарных рецепторов. Однако, за исключением некоторых случаев, неизвестно, как данные аналоги будут влиять на раковые клетки, которые экспрессируют рецепторы GH-RH, отличные от обнаруженных в гипофизе. Только в нескольких опубликованных научных исследованиях были сделаны попытки выявить зависимость активности от структуры и охарактеризовать непосредственное антагонистическое (или агонистическое) действие аналогов GH-RH на раковые клетки и опухоли (см. Rekasi Z et al, Endocrinology 141: 2120-2128, 2000; Halmos G et al, Proc Natl Acad Sci USA 97: 10555-10560, 2000; Rekasi Z et al, Proc Natl Acad Sci USA 97: 10561-10566, 2000; Kiaris H et al, Proc Natl Acad Sci USA 99: 196-200, 2002), и до настоящего времени не существовало выданных патентов, имеющих отношение к данной проблеме. Следовательно, о структурных признаках аналогов GH-RH, необходимых для непосредственного антагонистического действия на опухолевые клетки, известно мало.
Обнаружено, что первый описанный антагонист GH-RH, [Ac-Tyr1, D-Arg2]hGH-RH(1-29)NH2, который в литературе обычно называют "стандартный антагонист", препятствует активации крысиной аденилатциклазы в передней доле гипофиза под действием hGH-RH(1-29)NH2. Тот же пептид блокирует взаимодействие GH-RH с рецепторами в гипофизе и гипоталамусе и ингибирует пульсирующий рост секреции гормонов. Стандартный антагонист также анализировали клинически (Ocampo-Lim B et al, J Clin Endocrinol Metab 81: 4396-4399, 1996; Jaffe CA et al, J Clin Endocrinol Metab 82: 634-637, 1997). Большие дозы данного антагониста (400 мкг/кг) уменьшают ночную секрецию GH у нормальных субъектов и ингибируют ответ на GH-RH. Стандартный антагонист GH-RH также уменьшает уровни GH у пациентов с акромегалией. Однако для клинического применения требуются гораздо более мощные антагонисты GH-RH.
Изобретения, упомянутые ниже, раскрывают аналоги GH-RH с антагонистическими или агонистическими свойствами по отношению к гипофизарным рецепторам GH-RH. Однако не сообщалось, и не исследовалось, могут ли данные аналоги оказывать непосредственное влияние на опухолевые клетки.
Патент США 4659693 раскрывает антагонистические аналоги GH-RH, которые содержат определенные N,N'-диалкил-омега-гуанидино альфа-аминоацильные остатки в положении 2 последовательности GH-RH(1-29).
В опубликованной заявке WO91/16923 описаны более ранние попытки изменить вторичную структуру hGH-RH путем модификации его аминокислотной последовательности. Данные более ранние попытки включают в себя: замену Tyr1, Ala2, Asp3 или Asn8 их D-изомерами; замену Asn8 на L- или D-Ser, D-Arg, Asn, Thr, Gln или D-Lys; замену Ser9 на Ala для увеличения амфифильности участка; и замену Gly15 на Ala или Aib. Если R2 в аналогах представляет собой D-Arg, а R8, R9 и R15 замещены, как указано выше, то аналог обладает антагонистической активностью. Как описано, данные антагонистические пептиды подходят для введения в составе фармацевтических композиций для лечения состояний, связанных с повышенными уровнями GH, например, акромегалии.
Антагонистическая активность аналога hGH-RH "[Ser9-psi[CH2-NH]-Tyr10]hGH-RH(1-29)", описанного в патенте США 5084555, обусловлена псевдопептидной связью (т.е. пептидной связью, восстановленной до [CH2-NH]) между остатками R9 и R10. Однако [Ser9-psi[CH2-NH]-Tyr10]hGH-RH(1-29) имеет более плохие антагонистические свойства, чем стандартный антагонист, [N-Ac-Tyr1, D-Arg2]hGH-RH(1-29)-NH2.
Патент США 5550212, патент США 5942489 и патент США 6057422, принадлежащие тем же авторам, что и настоящая заявка, раскрывают аналоги hGH-RH(1-29)NH2, которые в отношении ингибирования высвобождения GH, вызываемого GH-RH, обладают улучшенными антагонистическими свойствами и пролонгированным действием. Считается, что данные свойства являются следствием замены разных аминокислот и ацилирования ароматическими или неполярными кислотами по N-концу GH-RH(1-29)NH2. Описанные в патенте США 5942489 и патенте США 6057422 свойства антагонистов ингибировать опухоль были продемонстрированы на голых мышах, несущих ксенотрансплантаты экспериментальных моделей рака человека. В патенте США 5550212 и в патенте США 5942489 указано, что R9 всегда представляет собой Ser, тогда как R11 и R20 могут обозначать либо Arg, D-Arg, либо Cit. В патенте США 6057422 R9 может обозначать либо Arg, Har, Lys, Orn, D-Arg, D-Har, D-Lys, D-Orn, Cit, Nle, Tyr(Me), Ser, Ala, либо Aib, тогда как R11 и R20 всегда обозначают Arg.
Краткое описание изобретения
Предлагается новый ряд синтетических аналогов hGH-RH(1-29)NH2 и hGH-RH(1-30)NH2. Данные аналоги ингибируют высвобождение гормона роста из гипофиза млекопитающих, и, кроме того, они ингибируют пролиферацию клеток раковых тканей человека посредством непосредственного воздействия на раковые клетки. Более высокая ингибиторная активность новых аналогов по сравнению с ранее описанными является результатом замены разных аминокислот.
Данное изобретение в основном относится к пептидам, имеющим формулу:
R1-A0-A1-A2-Asp-Ala-A5-A6-Thr-A8-A9-A10-A11-A12-Val-Leu-A15-A16-Leu-Ser-A19-A20-A21-A22-Leu-Gln-Asp-Ile-A27-A28-A29-A30-R2
где R1 является членом группы, состоящей из a) PhAc, Hca, Dat, IndAc, Ipa, 1-Nac, 2-Nac, 1-Npr, 2-Npr, Ibu; CH3(CH2)nCO или HOOC(CH2)nCO, где n представляет собой целое число от 2 до 20, и b) любой другой линейной, циклической, разветвленной, насыщенной, ненасыщенной или полиненасыщенной алифатической карбоксильной группы, содержащей 6-14 атомов углерода, и любой карбоциклической или гетероциклической ароматической карбоксильной группы, содержащей в гетероциклическом фрагменте 3-8 атомов углерода и до одного атома, выбранного из группы, состоящей из S, N и O,
A0 обозначает Phe, D-Phe, Arg, D-Arg или одинарную связь углерод-азот,
A1 обозначает Tyr или His,
A2 обозначает D-Arg или D-Cit,
A5 обозначает Ile или Val,
A6 обозначает Phe, Tyr, Nal или Phe(Y), где Y = F, Cl, Br или I,
A8 обозначает Asn, D-Asn, Cit, D-Cit, Gln, D-Gln, Ser, D-Ser, Thr, D-Thr, Ala, D-Ala, Abu, D-Abu или Aib,
A9 обозначает His, D-His, Amp, D-Amp, Gup или D-Gup,
A10 обозначает Tyr, Tyr(Et), Tyr(Me); Phe(Y), где Y = H, F, Cl, Br или I; Amp, His, Cha, Chg, Bpa, Dip, Trp, Trp(For), Tpi, 1-Nal, 2-Nal, 3-Pal, 4-Pal, Phe(NH2) или Phe(NO2),
A11 обозначает His, D-His, Arg, D-Arg, Cit, Har, D-Har, Amp, D-Amp, Gup или D-Gup,
A12 обозначает Lys, D-Lys, Orn, D-Orn, Har, D-Har, Cit, D-Cit, Nle или Ala,
A15 обозначает Gly, Ala, Abu, Aib, Nle, Gln, Cit или His,
A16 обозначает Gln или Arg,
A19 обозначает Ala или Abu,
A20 обозначает His, D-His, Arg, D-Arg или Cit,
A21 обозначает Lys, D-Lys, Orn, D-Orn, Cit или D-Cit,
A22 обозначает Leu, Ala или Aib,
A27 обозначает Met, Leu, Nle, Abu или D-Arg,
A28 обозначает Arg, D-Arg, Har, D-Har, Ser, Asn, Asp, Ala, Abu или Cit,
A29 обозначает Arg, D-Arg, Har, D-Har, Cit, D-Cit или Agm,
A30 обозначает Arg, D-Arg, Har, D-Har, Cit, D-Cit, Agm или одинарную связь углерод-азот или углерод-кислород,
R2 обозначает -NH2, -NH-NH2, -NH-OH, -NHR3, -NR3R4, -OH или -OR3, где R3 и R4 обозначают любой из C1-10 алкила, C2-10 алкенила, C2-10 алкинила, C7-16 фенилалкила, -C6H5 или -CH(C6H5)2;
при условии, что если A29 обозначает Agm, то A30 и R2 отсутствуют, и если A30 обозначает Agm, то R2 отсутствует,
и к их фармацевтически приемлемым солям.
К предпочтительным воплощениям относятся пептиды приведенной выше формулы, где один или оба из A11 и A20 отличаются от Arg, D-Arg или Cit.
А именно, к данному семейству в основном относятся следующие пептиды:
[PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Amp9, Tyr(Me)10, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 67
[PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Amp9, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 68
[PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, His9, Tyr(Me)10, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 69
[СН3(СН2)6СО-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Amp9, Tyr(Me)10, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 70
[HOOC(CH2)8CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Amp9, Tyr(Me)10, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 71
[HOOC(CH2)12CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Amp9, Tyr(Me)10, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 72
[PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Amp9, Tyr(Me)10, His11, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 73
[PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Cit8, Amp9, Tyr(Me)10, His11, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 74
[1-Nac-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Cit8, Amp9, Tyr(Me)10, His11, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 75
[CH3(CH2)6CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Cit8, Amp9, Tyr(Me)10, His11, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 76
[HOOC(CH2)12CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Cit8, Amp9, Tyr(Me)10, His11, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 77
[CH3(CH2)6CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Cit8, Amp9, Tyr(Et)10, His11, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 78
[СН3(СН2)6СО-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Cit8, His9, Tyr(Et)10, His11, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 79
[CH3(CH2)6CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Ala8, His9, Tyr(Et)10, His11, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 80
[HOOC(CH2)8CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Ala8, His9, Tyr(Et)10, His11, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 81
[HOOC(CH2)12CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Ala8, His9, Tyr(Et)10, His11, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 82
[CH3(CH2)6CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Ala8, His9, Tyr(Et)10, His11, Abu15, His20, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 86
[CH3(CH2)6CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Ala8, Amp9, Tyr(Et)10, His11, Abu15, His20, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 87
[HOOC(CH2)12CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Ala8, His9, Tyr(Et)10, His11, Abu15, His20, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 88
[HOOC(CH2)12CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Ala8, Amp9, Tyr(Et)10, His11, Abu15, His20, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 89
[1-Nac-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Ala8, His9, Tyr(Et)10, His11, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 91
[CH3(CH2)6CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, His9, Tyr(Et)10, His11, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 92
[CH3(CH2)6CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Ala8, His9, Cit15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 93
[CH3(CH2)6CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Ala8, His9, Tyr(Et)10, His11, His15, His20, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 94
[CH3(CH2)6CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Ala8, His9, Tyr(Et)10, His11, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 95
[CH3(CH2)6CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Ala8, His9, Tyr(Et)10, His11, Orn12, Abu15, His20, Orn21, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 96
[CH3(CH2)6CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Ala8, His9, Tyr(Et)10, His11, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NHEt, пептид 97
[CH3(CH2)8CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Ala8, His9, Tyr(Et)10, His11, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NHEt, пептид 98
[CH3(CH2)10CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Ala8, His9, Tyr(Et)10, His11, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NHEt, пептид 99
[Hca-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Ala8, His9, Tyr(Et)10, His11 Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NHEt, пептид 100
[CH3(CH2)6CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Ala8, His9, Tyr(Et)10, His11, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NHMe, пептид 101
[HOOC(CH2)12CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Ala8, His9, Tyr(Et)10, His11, Orn12, Abu15, His20, Orn21, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 102
[CH3(CH2)6CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Ala8, Amp9, Tyr(Et)10, His11, Orn12, Abu15, His20, Orn21, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 103
[CH3(CH2)6CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Ala8, His9, Dip10, His11, Orn12, Abu15, His20, Orn21, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 104
[CH3(CH2)6CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Ala8, His9, Phe(pNO2)10, His11, Orn12, Abu15, His20, Orn21, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 105
[CH3(CH2)6CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Ala8, His9, Tyr(Et)10, His11, Orn12, Abu15, His20, Orn21, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NHEt, пептид 106
[HOOC(CH2)12CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Ala8, Amp9, Tyr(Et)10, His11, Orn12, Abu15, His20, Orn21, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 107
[HOOC(CH2)12CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Ala8, His9, Dip10, His11, Orn12, Abu15, His20, Orn21, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 108
[НООС(СН2)12СО-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Ala8, His9, Phe(pNO2)10, His11, Orn12, Abu15, His20, Orn21, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 109
[HOOC(CH2)12CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Ala8, His9, Tyr(Et)10, His11, Orn12, Abu15, His20, Orn21, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NHEt, пептид 110
[CH3(CH2)6CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Ala8, Amp9, Dip10, His11, Orn12, Abu15, His20, Orn21, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 111
[CH3(CH2)6CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Ala8, Amp9, Phe(pNO2)10, His11, Orn12, Abu15, His20, Orn21, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 112
[CH3(CH2)6CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Ala8, Amp9, Tyr(Et)10, His11, Orn12, Abu15, His20, Orn21, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NHEt, пептид 113
[CH3(CH2)6CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Ala8, His9, Dip10, His11, Orn12, Abu15, His20, Orn21, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NHEt, пептид 114
[CH3(CH2)6CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Ala8, His9, Phe(pNO2)10, His11, Orn12, Abu15, His20, Orn21, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NHEt, пептид 115
[HOOC(CH2)12CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Ala8, Amp9, Dip10, His11, Orn12, Abu15, His20, Orn21, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 116
[HOOC(CH2)12CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Ala8, Amp9, Phe(pNO2)10, His11, Orn12, Abu15, His20, Orn21, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 117
[CH3(CH2)6CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Ala8, Amp9, Dip10, His11, Orn12, Abu15, His20, Orn21, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NHEt, пептид 118
[CH3(CH2)6CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Ala8, Amp9, Phe(pNO2)10, His11, Orn12, Abu15, His20, Orn21, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NHEt, пептид 119
[HOOC(CH2)12CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Ala8, Amp9, Dip10, His11, Orn12, Abu15, His20, Orn21, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NHEt, пептид 120
[HOOC(CH2)12CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Ala8, Amp9, Phe(pNO2)10, His11, Orn12, Abu15, His20, Orn21, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NHEt, пептид 121
Близкородственные пептиды, которые не описываются вышеприведенной общей структурной формулой, включают:
[CH3(CH2)4CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Arg9, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 2
[HOOC(CH2)4CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Arg9 Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 3
[CH3(CH2)6CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Arg9, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 4
[HOOC(CH2)6CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Arg9, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 5
[CH3(CH2)8CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Arg9, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 6
[HOOC(CH2)8CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Arg9, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 7
[CH3(CH2)10CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Arg9, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 8
[HOOC(CH2)10CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Arg9, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 9
[CH3(CH2)12CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Arg9, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 10
[HOOC(CH2)12CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Arg9, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 11
[CH3(CH2)14CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Arg9, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 12
[HOOC(CH2)14CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Arg9, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 13
[CH3(CH2)6CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Arg9, Abu15, Nle27, Har28, D-Arg29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 14
[PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Arg9, Abu15, Nle27, Har28, D-Arg29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 15
[CH3(CH2)14CO-Phe0, D-Arg2, Phe(pCl)6, Arg9, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 16
[CH3(CH2)14CO-D-Phe0, D-Arg2, Phe(pCl)6, Arg9, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 17
[PhAc-Arg0, D-Arg2, Phe(pCl)6, Arg9, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 18
[PhAc-D-Arg0, D-Arg2, Phe(pCl)6, Arg9, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 19
[PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Cit8, Arg9, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 21
[PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Cit8, Cit9, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 22
[PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Cit8, Arg9, Abu15, Nle27, Har28, D-Arg29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 23
[PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Cit8, Cit9, Abu15, Nle27, Har28, D-Arg29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 24
[HOOC(CH2)12CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Cit8, Cit9, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 25
[PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, D-Ala8, Arg9, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 26
[PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Abu8, Arg9, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 27
[PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Cit9, Abu15, Nle27, Har28, D-Arg29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 28
[PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Arg9, Amp10, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 30
[PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Har9, Amp10, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 31
[PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Arg9, His10, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 32
[PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Arg9, Cha10, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 33
[PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Har9, Tpi10, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 34
[PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Har9, 2-Nal10, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 35
[PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Har9, Dip10, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 36
[PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Har9, Phe(pNH2)10, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 37
[PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Har9, Trp10, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 38
[PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Har9, Phe(pNO2)10, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 39
[PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Har9, 3-Pal10, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 40
[PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Har9, Tyr(Et)10, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 41
[PhAc-His1, D-Arg2, Tyr6, Har9, Bpa10, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 42
[PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Arg9, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 43
[PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Har9, Tyr(Me)10, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NHEt, пептид 44
[PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Har9, Tyr(Me)10, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NHEt, пептид 45
[PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Har9, Tyr(Me)10, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NHEt, пептид 46
[Hca-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Arg9, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NHEt, пептид 47
[PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Arg9, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NHEt, пептид 48
[PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Har9, Tyr(Me)10, Aib15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NHEt, пептид 49
[PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Har9, Tyr(Me)10, Orn12, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NHEt, пептид 50
[Hca-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Har9, Tyr(Me)10, Abu15, Nle27, D-Arg28, Agm29]hGH-RH(1-29), пептид 51
[PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Har9, Tyr(Me)10, Abu15, Nle27, D-Arg28, Agm29]hGH-RH(1-29), пептид 52
[Hca-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Har9, Tyr(Me)10, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29, Har30]hGH-RH(1-30)NH2, пептид 53
[Dat-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Har9, Tyr(Me)10, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29, Har30]hGH-RH(1-30)NH2, пептид 54
[Ipa-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Har9, Tyr(Me)10, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29, Har30]hGH-RH(1-30)NH2, пептид 55
[Hca-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Har9, Tyr(Me)10, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29, Har29]hGH-RH(1-29)NHEt, пептид 56
[Hca-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Hara, Tyr(Me), Abu, Nle27, D-Arg28, D-Arg29, Har]hGH-RH(1-30)NH2, пептид 57
[Hca-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Har9, Tyr(Me)10, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29, D-Arg30]hGH-RH(1-30)NH2, пептид 58
[Hca-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Har9, Tyr(Me)10, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29, Agm30]hGH-RH(1-30), пептид 59
[PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Har9, Tyr(Me)10, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29, Agm30]hGH-RH(1-30), пептид 60
[PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Har9, Tyr(Me)10, His11, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 62
[PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Har9, Tyr(Me)10, Har11, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 63
[PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Har9, Tyr(Me)10, Amp11, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 64
[PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Har9, Tyr(Me)10, Cit11, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 65
[PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Har9, Tyr(Me)10, Abu15, His20, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 84
[PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Har9, Tyr(Me)10, His11, Abu15, His20, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 85
[PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Arg9, Cit15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 90
Отмечено, что в молекуле природного GH-RH аминокислотные остатки 30-44 не существенны для проявления активности, и их идентификация не является критической. Следовательно, добавление некоторых или всех указанных дополнительных аминокислотных остатков к С-концу аналогов hGH-RH(1-29)NH2 и hGH-RH(1-30)NH2 настоящего изобретения не влияет на эффективность данных аналогов как антагонистов GH-RH. Если некоторые или все указанные аминокислоты добавить к С-концу аналогов hGH-RH(1-29)NH2, добавленные аминокислотные остатки могут быть идентичными остаткам 30-44 нативной последовательности hGH-RH или они могут представлять собой их приемлемые эквиваленты.
Способы синтеза
Синтетические пептиды синтезируют подходящим способом, таким как эксклюзивные твердофазные способы, частичные твердофазные способы, способы фрагментной конденсации или классического синтеза в растворе.
При твердофазном синтезе аналогов данного изобретения C-концевой остаток (в данном случае A29 или A30), у которого защищена альфа-аминогруппа (при необходимости, и функциональная группа боковой цепи тоже), соответствующим образом соединяют с инертным твердым носителем (смолой) (или фиксируют на указанном носителе). После завершения данной стадии удаляют защиту с альфа-аминогруппы фиксированного аминокислотного остатка и добавляют следующий аминокислотный остаток, A28 или A29, соответственно, у которого альфа-аминогруппа защищена подходящим образом (как и любая соответствующая функциональная группа боковой цепи), и так далее. N-концевые защитные группы удаляют после добавления каждого остатка, но защитные группы с боковых цепей пока не удаляют. После того, как все желаемые аминокислоты соединяют в подходящей последовательности, пептид отсоединяют от носителя и удаляют все защитные группы с боковых цепей в условиях, минимально деструктивных по отношению к остаткам в последовательности. Затем проводят осторожную очистку и тщательную характеристику продукта синтеза, чтобы подтвердить, что действительно получена желаемая структура.
Особенно предпочтительно, чтобы в процессе стадии конденсации альфа-аминогруппа аминокислот была защищена чувствительной к кислоте или основанию защитной группой. Такие защитные группы должны быть стабильными в условиях образования пептидной связи, и они должны легко удаляться, не вызывая при этом разрушения растущей пептидной цепи и рацемизации содержащихся в ней хиральных центров. Подходящими защитными группами для аминогруппы являются Boc и Fmoc.
Применение в медицине
Антагонистические пептиды hGH-RH, или соли данных пептидов, могут входить в эффективном количестве в состав фармацевтических лекарственных форм, которые вводят людям или животным с целью лечения или диагностики. Данные пептиды можно использовать для снижения уровней GH и для лечения состояний, связанных с избыточными уровнями GH, таких как диабетическая ретинопатия и нефропатия и акромегалия. Также предлагаются способы лечения указанных заболеваний путем введения композиции данного изобретения субъекту, нуждающемуся в таком лечении. Однако основной областью применения антагонистов GH-RH являются раковые заболевания, например рак легких, простаты, молочной железы, яичников, эндометрия, желудка, прямой кишки, поджелудочной железы, почек, костей и мозга человека, при которых присутствуют рецепторы GH-RH, IGF-I/IGF-II или GH, и которые зависят от стимуляции факторами роста, такими как GH-RH, IGF-I, IGF-II, GH или VEGF.
Подробное описание предпочтительных воплощений
A. Сокращенные наименования
Для определения пептидов используют номенклатуру, установленную Комиссией по биохимической номенклатуре IUPAC-IUB, в соответствии с традиционными положениями данной номенклатуры, аминогруппа N-конца находится слева, а карбоксильная группа C-конца находится справа. Термин "природная аминокислота" в данном описании обозначает одну из распространенных L-аминокислот, встречающихся в природных белках: Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Ser, Thr, Lys, Arg, Asp, Asn, Glu, Gln, Cys, Met, Phe, Tyr, Pro, Trp и His. Если остаток природной аминокислоты имеет изомерные формы, то, если не указано иначе, подразумевается L-форма аминокислоты.
В состав антагонистов GH-RH также входят некодируемые аминокислоты, или аналоги аминокислот. (К "некодируемым" относятся аминокислоты, которые не входят в число приблизительно 20 природных аминокислот, встречающихся в природных белках.) Если указанные некодируемые аминокислоты, или аналоги аминокислот, имеют изомерные формы, то, если не указано иначе, подразумевается L-форма аминокислоты.
В данном описании используются следующие сокращения:
Abu | альфа-аминомасляная кислота |
Ac | ацетил |
AcOH | уксусная кислота |
Ac2O | уксусный ангидрид |
Agm | агматин |
Aib | альфа-аминоизомасляная кислота |
All | аллил |
Alloc | аллилоксикарбонил |
Amp | пара-амидинофенилаланин |
Bpa | пара-бензоилфенилаланин |
Boc | трет-бутилоксикарбонил |
Bom | бензилоксиметил |
2BrZ | 2-бромбензилоксикарбонил |
Bzl | бензил |
Cha | циклогексилаланин |
Chg | циклогексилглицин |
cHx | циклогексил |
Cit | цитруллин (2-амино-5-уреидовалерьяновая кислота) |
2ClZ | 2-хлорбензилоксикарбонил |
Dat | дезаминотирозин |
DCM | дихлорметан |
DIC | N,N'-диизопропилкарбодиимид |
DIEA | диизопропилэтиламин |
Dip | (3,3-дифенил)аланин |
DMF | диметилформамид |
Et | этил |
Fm | флуоренилметил |
Fmoc | флуоренилметоксикарбонил |
For | формил |
GH | гормон роста |
GH-RH | гормон, высвобождающий GH |
Gup | пара-гуанидинфенилаланин |
Har | гомоаргинин |
HBTU | 2-(1H-бензотриазол-1-ил)-1,1,3,3-тетраметилурония гексафторфосфат |
Hca | гидроциннамоил |
Hca-OH | гидрокоричная кислота |
hGH-RH | человеческий GH-RH |
HOBt | 1-гидроксибензотриазол |
HPLC | высокоэффективная жидкостная хроматография |
Ibu | изобутирил |
IndAc | индол-3-ацетил |
Ipa | индол-3-пропионил |
MBHA | пара-метилбензгидриламин |
Ме | метил |
МеОН | метанол |
MeCN | ацетонитрил |
Nac | нафтилацетил |
Nal | нафтилаланин |
Nle | норлейцин |
NMM | N-метилморфолин |
Npr | нафтилпропионил |
Orn | орнитин |
Pal | пиридилаланин |
PAM | фенилацетамидометил |
Ph | фенил |
PhAc | фенилацетил |
PhAc-ОН | фенилуксусная кислота |
Phe(pCl) | пара-хлорфенилаланин |
Phe(pNH2) | пара-аминофенилаланин |
Phe(pNO2) | пара-нитрофенилаланин |
rGH-RH | крысиный GH-RH |
RP-HPLC | ВЭЖХ на обращенной фазе |
SPA | пара-сульфонилфеноксиацетил |
TFA | трифторуксусная кислота |
Tos | пара-толуолсульфонил |
Tpi | 1,2,3,4-тетрагидронорхарман-3-карбоновая кислота |
Tyr(Me) | О-метилтирозин |
Tyr(Et) | O-этилтирозин |
Z | бензилоксикарбонил |
B. Аналоги GH-RH
Аналоги hGH-RH настоящего изобретения получали посредством усиления антагонистических эффектов на гипофизарном уровне и/или на опухолевом уровне. Некоторые из этих аналогов, такие как пептид 4, пептид 7, пептид 21, пептид 30, пептид 31, пептид 37, пептид 41, пептид 42, пептид 62, пептид 67 и пептид 69, проявляют высокую эндокринную антагонистическую активность, вызывая высокоэффективное и длительное ингибирование высвобождения GH, стимулированного hGH-RH(1-29)NH2, in vitro и in vivo, и обладают высоким связывающим сродством к гипофизарным рецепторам GH-RH. Некоторые аналоги, такие как пептид 4, пептид 5, пептид 7, пептид 11, пептид 22, пептид 35, пептид 36, пептид 39, пептид 41, пептид 62, пептид 67, пептид 69, пептид 70, пептид 72, пептид 76, пептид 77, пептид 79, пептид 80, пептид 86, пептид 95, пептид 96 и пептид 97, обладают повышенной активностью в отношении ингибирования опухолей и очень высоким связывающим сродством к опухолевым рецепторам GH-RH. Пептиды настоящего изобретения также обладают повышенной химической и метаболической стабильностью.
Нижеследующие воплощения являются особенно предпочтительными, так как они обладают значительной биологической активностью:
[СН3(СН2)4СО-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Arg9, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 2
[CH3(CH2)6CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Arg9, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 4
[HOOC(CH2)6CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Arg9, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 5
[CH3(CH2)8CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Arg9, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 6
[HOOC(CH2)8CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Arg9, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 7
[HOOC(CH2)12CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Arg9, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 11
[CH3(CH2)6CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Arg9, Abu15, Nle27, Har28, D-Arg29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 14
[PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Arg9, Abu15, Nle27, Har28, D-Arg29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 15
[PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Cit8, Arg9, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 21
[PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Cit8, Cit9, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 22
[PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Abu8, Arg9, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 27
[PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Cit9, Abu15, Nle27, Har28, D-Arg29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 28
[PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Arg9, Amp10, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 30
[PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Har9, Amp10, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 31
[PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Har9, 2-Nal10, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 35
[PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Har9, Dip10, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 36
[PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Har9, Phe(pNH2)10, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 37
[PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Har9, Phe(pNO2)10, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 39
[PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Har9, Tyr(Et)10, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 41
[PhAc-His1, D-Arg2, Tyr6, Har9, Bpa10, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 42
[PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Har9, Tyr(Me)10, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NHEt, пептид 46
[PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Har9, Tyr(Me)10, His11, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 62
[PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Amp9, Tyr(Me)10, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 67
[PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Amp9, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 68
[PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, His9, Tyr(Me)10, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 69
[CH3(CH2)6CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Amp9, Tyr(Me)10, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 70
[HOOC(CH2)8CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Amp9, Tyr(Me)10, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 71
[HOOC(CH2)12CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Amp9, Tyr(Me)10, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 72
[PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Amp9, Tyr(Me)10, His11, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 73
[PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Cit8, Amp9, Tyr(Me)10, His11, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 74
[1-Nac-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Cit8, Amp9, Tyr(Me)10, His11, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 75
[CH3(CH2)6CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Cit8, Amp9, Tyr(Me)10, His11, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 76
[HOOC(CH2)12CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Cit8, Amp9, Tyr(Me)10, His11, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 77
[CH3(CH2)6CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Cit8, Amp9, Tyr(Et)10, His11, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 78
[CH3(CH2)6CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Cit8, His9, Tyr(Et)10, His11, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 79
[CH3(CH2)6CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Ala8, His9, Tyr(Et)10, His11, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 80
[HOOC(CH2)8CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Ala8, His9, Tyr(Et)10, His11, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 81
[HOOC(CH2)12CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Ala8, His9, Tyr(Et)10, His11, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 82
[PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Har9, Tyr(Me)10, Abu15, His20, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 84
[PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Har9, Tyr(Me)10, His11, Abu15, His20, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 85
[CH3(CH2)6CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Ala8, His9, Tyr(Et)10, His11, Abu15, His20, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 86
[CH3(CH2)6CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Ala8, Amp9, Tyr(Et)10, His11, Abu15, His20, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 87
[HOOC(CH2)12CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Ala8, His9, Tyr(Et)10, His11, Abu15, His20, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 88
[HOOC(CH2)12CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Ala8, Amp9, Tyr(Et)10, His11, Abu15, His20, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 89
[PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Arg9, Cit15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 90
[1-Nac-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Ala8, His9, Tyr(Et)10, His11, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 91
[CH3(CH2)6CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, His9, Tyr(Et)10, His11, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 92
[CH3(CH2)6CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Ala8, His9, Cit15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 93
[CH3(CH2)6CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Ala8, His9, Tyr(Et)10, His11, His15, His20, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 94
[CH3(CH2)6CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Ala8, His9, Tyr(Et)10, His11, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 95
[CH3(CH2)6CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Ala8, His9, Tyr(Et)10, His11, Orn12, Abu15, His20, Orn21, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 96
[CH3(CH2)6CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Ala8, His9, Tyr(Et)10, His11, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NHEt, пептид 97
[CH3(CH2)8CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Ala8, His9, Tyr(Et)10, His11, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NHEt, пептид 98
[CH3(CH2)10CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Ala8, His9, Tyr(Et)10, His11, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NHEt, пептид 99
[Hca-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Ala8, His9, Tyr(Et)10, His11, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NHEt, пептид 100
[CH3(CH2)6CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Ala8, His9, Tyr(Et)10, His11, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NHMe, пептид 101
[НООС(СН2)12СО-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Ala8, His9, Tyr(Et)10, His11, Orn12, Abu15, His20, Orn21, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 102
[CH3(CH2)6CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Ala8, Amp9, Tyr(Et)10, His11, Orn12, Abu15, His20, Orn21, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 103
[CH3(CH2)6CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Ala8, His9, Dip10, His11, Orn12, Abu15, His20, Orn21, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 104
[CH3(CH2)6CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Ala8, His9, Phe(pNO2)10, His11, Orn12, Abu15, His20, Orn21, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 105
[CH3(CH2)6CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Ala8, His9, Tyr(Et)10, His11, Orn12, Abu15, His20, Orn21, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 106
[HOOC(CH2)12CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Ala8, Amp9, Tyr(Et)10, His11, Orn12, Abu15, His20, Orn21, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 107
[HOOC(CH2)12CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Ala8, His9, Dip10, His11, Orn12, Abu15, His20, Orn21, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 108
[HOOC(CH2)12CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Ala8, His9, Phe(pNO2)10, His11, Orn12, Abu15, His20, Orn21, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 109
[HOOC(CH2)12CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Ala8, His9, Tyr(Et)10, His11, Orn12, Abu15, His20, Orn21, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NHEt, пептид 110
[CH3(CH2)6CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Ala8, Amp9, Dip10, His11, Orn12, Abu15, His20, Orn21, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 111
[CH3(CH2)6CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Ala8, Amp9, Phe(pNO2)10, His11, Orn12, Abu15, His20, Orn21, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 112
[CH3(CH2)6CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Ala8, Amp9, Tyr(Et)10, His11, Orn12, Abu15, His20, Orn21, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NHEt, пептид 113
[CH3(CH2)6CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Ala8, His9, Dip10, His11, Orn12, Abu15, His20, Orn21, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NHEt, пептид 114
[СН3(СН2)6СО-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Ala8, His9, Phe(pNO2)10, His11, Orn12, Abu15, His20, Orn21, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NHEt, пептид 115
[HOOC(CH2)12CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Ala8, Amp9, Dip10, His11, Orn12, Abu15, His20, Orn21, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 116
[HOOC(CH2)12CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Ala8, Amp9, Phe(pNO2)10, His11, Orn12, Abu15, His20, Orn21, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 117
[CH3(CH2)6CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Ala8, Amp9, Dip10, His11, Orn12, Abu15, His20, Orn21, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NHEt, пептид 118
[CH3(CH2)6CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Ala8, Amp9, Phe(pNO2)10, His11, Orn12, Abu15, His20, Orn21, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NHEt, пептид 119
[HOOC(CH2)12CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Ala8, Amp9, Dip10, His11, Orn12, Abu15, His20, Orn21, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NHEt, пептид 120
[HOOC(CH2)12CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Ala8, Amp9, Phe(pNO2)10, His11, Orn12, Abu15, His20, Orn21, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NHEt, пептид 121
Тридцать наиболее предпочтительных воплощений имеют следующие формулы:
CH3(CH2)6CO-Tyr1-D-Arg2-Asp3-Ala4-Ile-5-Phe(pCl)6-Thr7-Asn8-Arg9-Tyr10-Arg11-Lys12-Val13-Leu14-Abu15-Gln16-Leu17-Ser18-Ala19-Arg20-Lys21-Leu22-Leu23-Gln24-Asp25-Ile26-Nle27-D-Arg28-Har29-NH2, пептид 4
HOOC(CH2)6CO-Tyr1-D-Arg2-Asp3-Ala4-Ile5-Phe(pCl)6-Thr7-Asn8-Arg9-Tyr10-Arg11-Lys12-Var3-Leu14-Abu15-Gln16-Leu17-Ser18-Ala19-Arg20-Lys21-Leu22-Leu23-Gln24-Asp25-Ile26-Nle27-D-Arg28-Har29-NH2, пептид 5
HOOC(CH2)8CO-Tyr1-D-Arg2-Asp3-Ala4-Ile5-Phe(pCl)6-Thr7-Asn8-Arg9-Tyr10-Arg11-Lys12-Val13-Leu14-Abu15-Gln16-Leu17-Ser18-Ala19-Arg20-Lys21-Leu22-Leu23-Gln24-Asp25-Ile26-Nle27-D-Arg28-Har29-NH2, пептид 7
HOOC(CH2)12CO-Tyr1-D-Arg2-Asp3-Ala4-Ile5-Phe(pCl)6-Thr7-Asn8-Arg9-Tyr10-Arg11-Lys12-Val13-Leu14-Abu15-Gln16-Leu17-Ser18-Ala19-Arg20-Lys21-Leu22-Leu23-Gln24-Asp25-Ile26-Nle27-D-Arg28-Har29-NH2, пептид 11
PhAc-Tyr1-D-Arg2-Asp3-Ala4-Ile5-Phe(pCl)6-Thr7-Cit8-Arg9-Tyr10-Arg11-Lys12-Val13-Leu14-Abu15-Gln16-Leu17-Ser18-Ala19-Arg20-Lys21-Leu22-Leu23-Gln24-Asp25-Ile26-Nle27-D-Arg28-Har29-NH2, пептид 21
PhAc-Tyr1-D-Arg2-Asp3-Ala4-Ile5-Phe(pCl)6-Thr7-Cit8-Cit9-Tyr10-Arg11-Lys12-Val13-Leu14-Abu15-Gln16-Leu17-Ser18-Ala19-Arg20-Lys21-Leu22-Leu23-Gln24-Asp25-Ile26-Nle27-D-Arg28-Har29-NH2, пептид 22
PhAc-Tyr1-D-Arg2-Asp3-Ala4-Ile5-Phe(pCl)6-Thr7-Asn8-Arg9-Amp10-Arg11-Lys12-Val13-Leu14-Abu15-Gln16-Leu17-Ser18-Ala19-Arg20-Lys21-Leu22-Leu23-Gln24-Asp25-Ile26-Nle27-D-Arg28-Har29-NH2, пептид 30
PhAc-Tyr1-D-Arg2-Asp3-Ala4-Ile5-Phe(pCl)6-Thr7-Asn8-Har9-Arnp10-Arg11-Lys12-Var3-Leu14-Abu15-Gln16-Leu17-Ser18-Ala19-Arg20-Lys21-Leu22-Leu23-Gln24-Asp25-Ile26-Nle27-D-Arg28-Har29-NH2, пептид 31
PhAc-Tyr1-D-Arg2-Asp3-Ala4-Ile5-Phe(pCl)6-Thr7-Asn8-Har9-2-Nal10-Arg11-Lys12-Val13-Leu14-Abu15-Gln16-Leu17-Ser18-Ala19-Arg20-Lys21-Leu22-Leu23-Gln24-Asp25-Ile26-Nle27-D-Arg28-Har29, пептид 35
PhAc-Tyr1-D-Arg2-Asp3-Ala4-Ile5-Phe(pCl)6-Thr7-Asn8-Har9-Dip10-Arg11-Lys12-Val13-Leu14-Abu15-Gln16-Leu17-Ser18-Ala19-Arg20-Lys21-Leu22-Leu23-Gln24-Asp25-Ile26-Nle27-D-Arg28-Har29-NH2, пептид 36
PhAc-Tyr1-D-Arg2-Asp3-Ala4-Ile5-Phe(pCl)6-Thr7-Asn8-Har9-Phe(pNH2)10-Arg11-Lys12-Var3-Leu14-Abu15-Gln16-Leu17-Ser18-Ala19-Arg20-Lys21-Leu22-Leu23-Gln24-Asp25-Ile26-Nle27-D-Arg28-Har29-NH2, пептид 37
PhAc-Tyr1-D-Arg2-Asp3-Ala4-Ile5-Phe(pCl)6-Thr7-Asn8-Har9-Phe(pNO2)10-Arg11-Lys12-Val13-Leu14-Abu15-Gln16-Leu17-Ser18-Ala19-Arg20-Lys21-Leu22-Leu23-Gln24-Asp25-Ile26-Nle27-D-Arg28-Har29-NH2, пептид 39
PhAc-Tyr1-D-Arg2-Asp3-Ala4-Ile5-Phe(pCl)6-Thr7-Asn8-Har9-Tyr(Et)10-Arg11-Lys12-Val13-Leu14-Abu15-Gln16-Leu17-Ser18-Ala19-Arg20-Lys21-Leu22-Leu23-Gln24-Asp25-Ile26-Nle27-D-Arg28-Har29-NH2, пептид 41
PhAc-His1-D-Arg2-Asp3-Ala4-Ile5-Tyr6-Thr7-Asn8-Har9-Bpa10-Arg11-Lys12-Val13-Leu14-Abu15-Gln16-Leu17-Ser18-Ala19-Arg20-Lys21-Leu22-Leu23-Gln24-Asp25-Ile26-Nle27-D-Arg28-Har29-NH2, пептид 42
PhAc-Tyr1-D-Arg2-Asp3-Ala4-Ile5-Phe(pCl)6-Thr7-Asn8-Har9-Tyr(Me)10-Arg11-Lys12-Val13-Leu14-Abu15-Gln16-Leu17-Ser18-Ala19-Arg20-Lys21-Leu22-Leu23-Gln24-Asp25-Ile26-Nle27-D-Arg28-Har29-NHEt, пептид 46
PhAc-Tyr1-D-Arg2-Asp3-Ala4-Ile5-Phe(pCl)6-Thr7-Asn8-Har9-Tyr(Me)10-His11-Lys12-Val13-Leu14-Abu15-Gln16-Leu17-Ser18-Ala19-Arg20-Lys21-Leu22-Leu23-Gln24-Asp25-Ile26-Nle27-D-Arg28-Har29-NH2, пептид 62
PhAc-Tyr1-D-Arg2-Asp3-Ala4-Ile5-Phe(pCl)6-Thr7-Asn8-Amp9-Tyr(Me)10-Arg11-Lys12-Val13-Leu14-Abu15-Gln16-Leu17-Ser18-Ala19-Arg20-Lys21-Leu22-Leu23-Gln24-Asp25-Ile26-Nle27-D-Arg28-Har29-NH2, пептид 67
PhAc-Tyr1-D-Arg2-Asp3-Ala4-Ile5-Phe(pCl)6-Thr7-Asn8-His9-Tyr(Me)10-Arg11-Lys12-Var3-Leu14-Abu15-Gln16-Leu17-Ser18-Ala19-Arg20-Lys21-Leu22-Leu23-Gln24-Asp25-Ile26-Nle27-D-Arg28-Har29-NH2, пептид 69
CH3(CH2)6CO-Tyr1-D-Arg2-Asp3-Ala4-Ile5-Phe(pCl)6-Thr7-Asn8-Amp9-Tyr(Me)10-Arg11-Lys12-Val13-Leu14-Abu15-Gln16-Leu17-Ser18-Ala19-Arg20-Lys21-Leu22-Leu23-Gln24-Asp25-Ile26-Nle27-D-Arg28-Har29-NH2, пептид 70
HOOC(CH2)12CO-Tyr1-D-Arg2-Asp3-Ala4-Ile5-Phe(pCl)6-Thr7-Asn8-Amp9-Tyr(Me)10-Arg11-Lys12-Val13-Leu14-Abu15-Gln16-Leu17-Ser18-Ala19-Arg20-Lys21-Leu22-Leu23-Gln24-Asp25-Ile26-Nle27-D-Arg28-Har29-NH2, пептид 72
CH3(CH2)6CO-Tyr1-D-Arg2-Asp3-Ala4-Ile5-Phe(pCl)6-Thr7-Cit8-Amp9-Tyr(Me)10-His11-Lys12-Var3-Leu14-Abu15-Gln16-Leu17-Ser18-Ala19-Arg20-Lys21-Leu22-Leu23-Gln24-Asp25-Ile26-Nle27-D-Arg28-Har29-NH2, пептид 76
HOOC(CH2)12CO-Tyr1-D-Arg2-Asp3-Ala4-Ile5-Phe(pCl)6-Thr7-Cit8-Amp9-Tyr(Me)10-His11-Lys12-Val13-Leu14-Abu15-Gln16-Leu17-Ser18-Ala19-Arg2°-Lys21-Leu22-Leu23-Gln24-Asp25-Ile26-Nle27-D-Arg28-Har29-NH2, пептид 77
CH3(CH2)6CO-Tyr1-D-Arg2-Asp3-Ala4-Ile5-Phe(pCl)6-Thr7-Cit8-His9-Tyr(Et)10-His11-Lys12-Val13-Leu14-Abu15-Gln16-Leu17-Ser18-Ala19-Arg20-Lys21-Leu22-Leu23-Gln24-Asp25-Ile26-Nle27-D-Arg28-Har29-NH2, пептид 79
CH3(CH2)6CO-Tyr1-D-Arg2-Asp3-Ala4-Ile5-Phe(pCl)6-Thr7-Ala8-His9-Tyr(Et)10-His11-Lys12-Val13-Leu14-Abu15-Gln16-Leu17-Ser18-Ala19-Arg20-Lys21-Leu22-Leu23-Gln24-Asp25-Ile26-Nle27-D-Arg28-Har29-NH2, пептид 80
HOOC(CH2)12CO-Tyr1-D-Arg2-Asp3-Ala4-Ile5-Phe(pCl)6-Thr7-Ala8-H[S9-Tyr(Et)10-His11-Lys12-Val13-Leu14-Abu15-Gln16-Leu17-Ser18-Ala19-Arg20-Lys21-Leu22-Leu23-Gln24-Asp25-Ile26-Nle27-D-Arg28-Har29-NH2, пептид 82
CH3(CH2)6CO-Tyr1-D-Arg2-Asp3-Ala4-Ile5-Phe(pCl)6-Thr7-Ala8-His9-Tyr(Et)10-His11-Lys12-Val13-Leu14-Abu15-Gln16-Leu17-Ser18-Ala19-His20-Lys21-Leu22-Leu23-Gln24-Asp25-Ile26-Nle27-D-Arg28-Har29-NH2, пептид 86
CH3(CH2)6CO-Tyr1-D-Arg2-Asp3-Ala4-Ile5-Phe(pCl)6-Thr7-Asn8-His9-Tyr(Et)10-His11-Lys12-Val13-Leu14-Abu15-Gln16-Leu17-Ser18-Ala19-Arg20-Lys21-Leu22-Leu23-Gln24-Asp25-Ile26-Nle27-D-Arg28-Har29-NH2, пептид 92
CH3(CH2)6CO-Tyr1-D-Arg2-Asp3-Ala4-Ile5-Phe(pCl)6-Thr7-Ala8-His9-Tyr(Et)10-His11-Orn12-Val13-Leu14-Abu15-Gln16-Leu17-Ser18-Ala19-Arg20-Orn21-Leu22-Leu23-Gln24-Asp25-Ile26-Nle27-D-Arg28-Har29-NH2, пептид 95
CH3(CH2)6CO-Tyr1-D-Arg2-Asp3-Ala4-Ile5-Phe(pCl)6-Thr7-Ala8-His9-Tyr(Et)10-His11-Orn12-Val13-Leu14-Abu15-Gln16-Leu17-Ser18-Ala19-His20-Orn21-Leu22-Leu23-Gln24-Asp25-Ile26-Nle27-D-Arg28-Har29-NH2, пептид 96
CH3(CH2)6CO-Tyr1-D-Arg2-Asp3-Ala4-Ile5-Phe(pCl)6-Thr7-Ala8-His9-Tyr(Et)10-His11-Lys12-Val13-Leu14-Abu15-Gln16-Leu17-Ser18-Ala19-Arg20-Lys21-Leu22-Leu23-Gln24-Asp25-Ile26-Nle27-D-Arg28-Har29-NHEt, пептид 97
В соответствии с общепринятым соглашением для них можно использовать следующие сокращения:
[CH3(CH2)6CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Arg9, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 4
[HOOC(CH2)6CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Arg9, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 5
[HOOC(CH2)8CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Arg9, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 7
[HOOC(CH2)12CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Arg9, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 11
[PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Cit8, Arg9, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 21
[PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Cit8, Cit9, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 22
[PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Arg9, Amp10, Abu15, Nle27 D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 30
[PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Har9, Amp10, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 31
[PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Har9, 2-Nal10, Abu15, Nle27, D-Arg2S, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 35
[PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Har9, Dip10, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 36
[PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Har9, Phe(pNH2)10, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 37
[PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Har9, Phe(pNO2)10, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 39
[PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Har9, Tyr(Et)10, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 41
[PhAc-His1, D-Arg2, Tyr6, Har9, Bpa10, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 42
[PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Har9, Tyr(Me)10, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NHEt, пептид 46
[PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Har9, Tyr(Me)10, His11, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 62
[PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Amp9, Tyr(Me)10, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 67
[PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, His9, Tyr(Me)10, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 69
[CH3(CH2)6CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Amp9, Tyr(Me)10, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 70
[HOOC(CH2)12CO-Tyr1, D-Arg2 Phe(pCl)6, Amp9, Tyr(Me)10, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 72
[CH3(CH2)6CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Cit8, Amp9, Tyr(Me)10, His11, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 76
[HOOC(CH2)12CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Cit8, Amp9, Tyr(Me)10, His11, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 77
[CH3(CH2)6CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Cit8, His9, Tyr(Et)10, His11, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 79
[CH3(CH2)6CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Ala8, His9, Tyr(Et)10, His11, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 80
[HOOC(CH2)12CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Ala8, His9, Tyr(Et)10, His11, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 82
[CH3(CH2)6CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Ala8, His9, Tyr(Et)10, His11, Abu15, His20, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 86
[CH3(CH2)6CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, His9, Tyr(Et)10, His11, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 92
[CH3(CH2)6CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Ala8, His9, Tyr(Et)10, His11, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 95
[CH3(CH2)6CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Ala8, His9, Tyr(Et)10, His11, Orn12, Abu15, His20, Orn21, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 96
[CH3(CH2)6CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Ala8, His9, Tyr(Et)10, His11, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NHEt, пептид 97
С. Способ получения
1. Общее представление о синтезе
Пептиды синтезируют подходящими способами, такими как эксклюзивные твердофазные способы, частичные твердофазные способы, способы фрагментной конденсации или классического синтеза в растворе. Например, способы эксклюзивного твердофазного синтеза описаны в руководстве "Solid Phase Peptide Synthesis", J. M. Stewart and J. D. Young, Pierce Chem. Company, Rockford, Illinois, 1984 (2nd. ed.), и M. Bodanszky, "Principles of Peptide Synthesis", Springer Verlag, 1984. Пептиды - антагонисты hGH-RH предпочтительно получают способом твердофазного синтеза, например, описанным Merrifield, J. Am. Chem. Soc., 85 p. 2149 (1963), хотя можно использовать и другие эквивалентные способы химического синтеза, известные в данной области, как упоминалось ранее.
Для синтеза используют аминокислоты с защищенной альфа-аминогруппой. Для защиты альфа-аминогруппы используют защитные группы уретанового типа (Boc или Fmoc).
В твердофазном синтезе N-альфа-защищенный аминокислотный фрагмент, образующий С-концевую аминоацильную группу конечного пептида, присоединяют к носителю из полимерной смолы путем образования химической связи. После завершения реакции, чтобы обеспечить проведение следующих реакций конденсации, проходящих по аминоконцу, селективно удаляют защиту с альфа-аминогруппы, предпочтительно с использованием 50% TFA в DCM, если для защиты N-альфа-группы используют Boc, или с использованием 20% пиперидина в DMF, если для защиты N-альфа-группы используют Fmoc. Чтобы получить целевую пептидную последовательность, остальные аминокислоты с альфа-аминогруппами, защищенными подобным образом Boc или Fmoc, присоединяют постадийно к свободной аминогруппе предыдущей аминокислоты, привитой на смоле. Поскольку аминокислотные остатки присоединяют к альфа-аминогруппе C-концевого остатка, рост синтетических пептидных аналогов hGH-RH начинается с C-конца и заканчивается на N-конце. После получения целевой последовательности пептид ацилируют по N-концу и удаляют с полимерного носителя.
Каждую защищенную аминокислоту используют в избытке (2,5 или 3 эквивалента), а реакции конденсации обычно проводят в DCM, DMF или их смесях. Степень завершения реакции конденсации отслеживают на каждой стадии с помощью нингидриновой реакции. Если реакция не завершена, повторяют процедуру конденсации, или перед присоединением следующей аминокислоты и до удаления защиты с альфа-аминогруппы проводят кэппирующее ацетилирование непрореагировавших аминогрупп.
Типичные циклы синтеза приведены в таблицах I и II.
Таблица I
Схема типичного синтетического цикла с использованием Boc-стратегии |
||
Стадия | Реагент | Время смешивания (мин) |
1. Удаление защитной группы | 50% TFA в DCM | 5+25 |
промывание DCM | 1 | |
промывание 2-пропанолом | 1 | |
2. Нейтрализация | 5% DIEA в DCM | 1 |
промывание DCM | 1 | |
промывание МеОН | 1 | |
5% DIEA в DCM | 3 | |
промывание МеОН | 1 | |
промывание DCM (3 раза) | 1 | |
3. Конденсация | 3 экв. Boc-аминокислоты в DCM или DMF + 3 экв. DIC или заранее полученного эфира HOBt Boc-аминокислоты | 60 |
промывание МеОН (3 раза) | 1 | |
промывание DCM (3 раза) | 1 | |
4. Ацетилирование (при необходимости) | Ac2O в пиридине (30%) | 10+20 |
промывание МеОН (3 раза) | 1 | |
промывание DCM (3 раза) | 1 |
Таблица II
Схема типичного синтетического цикла с использованием Fmoc-стратегии |
||
Стадия | Реагент | Время смешивания (мин) |
1. Удаление защитной группы | 20% пиперидин в DMF | 5+15 |
промывание DMF (3 раза) | 1 | |
2. Конденсация | 3 экв. Fmoc-аминокислоты в DMF + 3 экв. DIC или + 3 экв. HBTU+3 экв. HOBt + 6 экв. DIEA | 60 |
промывание DMF (3 раза) | 1 | |
4. Ацетилирование (при необходимости) |
3 экв. 1-ацетилимидазола в DMF | 30 |
промывание DMF (3 раза) | 1 |
После завершения синтеза пептид удаляют со смолы с помощью способов, хорошо известных в области пептидной химии.
2. Выбор полимерного носителя
Пептидные антагонисты hGH-RH можно синтезировать на ряде полимерных носителей, например, на смолах MBHA, Merrifield, PAM, Rink amide или Wang. Пептиды также можно синтезировать на аминометильной, MBHA или других смолах, которые были заранее модифицированы с присоединением подходящих линкеров. Примерами таких линкеров являются чувствительная к основаниям 4-гидроксиметилбензойная кислота (HMBA), используемая для присоединения С-концевых карбоксильных групп, или чувствительный к кислотам пара-сульфонилфеноксиацетильный (SPA) линкер, который позволяет присоединять агматин через гуанидиновую группу.
Если посредством Boc-стратегии синтезируют пептиды с амидированным С-концом, то в качестве смолы предпочтительно используют MBHA. Присоединение С-концевой аминокислоты к данной смоле можно проводить стандартным способом конденсации с использованием DIC, описанным в таблице I.
Чтобы получить пептиды с С-концом, модифицированным этиламидом (-NHEt), можно использовать смолу Merrifield или смолу HMBA-MBHA в сочетании с Boc-стратегией. Присоединение С-концевой аминокислоты к смоле Merrifield проводят с использованием фторида калия (KF) или соли цезия при повышенной температуре.
Для синтеза пептидов с Agm на C-конце в качестве носителя предпочтительной является смола MBHA или аминометильная смола. Гуанидиновую группу Boc-Agm присоединяют к полимерному носителю через стабильный, но легко удаляемый линкер, такой как пара-сульфонилфеноксиацетильный (SPA) фрагмент. Альфа-амино-Boc-защищенный Agm взаимодействует с хлорсульфонилфеноксиуксусной кислотой Cl-SO2-C6H4-O-CH2-COOH с получением Boc-Agm-SO2-C6H4-O-CH2-COOH. Данное соединение затем присоединяют к полимерному носителю, например к смоле MBHA, с использованием DIC или HBTU-HOBt-DIEA в качестве активирующего реагента с получением Boc-Agm-SPA-MBHA.
3. Используемые производные аминокислот
Бифункциональные аминокислоты, т.е. аминокислоты, не имеющие функциональных групп на боковых цепях, используются для синтеза преимущественно в виде N-альфа-Boc- или Fmoc-производных. Так, для введения остатка Gly обычно используют Boc-Gly-OH или Fmoc-Gly-OH. К природным бифункциональным аминокислотам относятся Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Phe и Pro, в данном изобретении также используются некоторые хорошо известные некодируемые бифункциональные аминокислоты, такие как Abu, Aib и Nle.
На боковых цепях некоторых аминокислотных остатков, входящих в состав пептидов, присутствуют функциональные группы, способные взаимодействовать с реагентами, используемыми в реакциях конденсации или удаления защитных групп. Чтобы предотвратить нежелательные химические реакции при образовании пептидов, такие боковые функциональные группы, если они присутствуют, защищают подходящими защитными группами. При выборе конкретной боковой защитной группы следует руководствоваться следующими общими правилами: (a) защитная группа предпочтительно должна сохранять защитные свойства и не должна отщепляется в условиях конденсации, (b) защитная группа должна быть стабильной в условиях удаления защиты альфа-аминогруппы на каждой стадии синтеза, (c) боковая защитная группа должна легко удаляться после завершения синтеза требуемой аминокислотной последовательности в условиях, которые не оказывают нежелательного воздействия на пептидную цепь.
Если в синтезе участвуют Boc-аминокислоты, для защиты реакционноспособных боковых функциональных групп можно использовать следующие группы: Tos или нитро (NO2) для Arg и Har; cHx или Fm для Asp и Glu; Bom для His; 2ClZ или Fmoc для Lys и Orn; Bzl для Ser и Thr; For для Trp; и 2BrZ для Tyr. Боковые цепи Asn и Gln не защищают. В случае Fmoc-синтеза для защиты реакционноспособных боковых функциональных групп можно использовать другие подходящие защитные группы, а именно: 2,2,4,6,7-пентаметилдигидробензофуран-5-сульфонил (Pbf) или бис-Boc для Arg и Har; трет-бутил (tBu) для Asp и Glu; Asn и Gln не защищают или защищают тритилом (Trt); Trt для His; Boc или 4-метокситритил (Mmt) для Lys и Orn; tBu или Trt для Ser и Thr; Boc для Trp; и tBu или 2-хлортритил (2ClTrt) для Tyr.
В добавление к указанным выше широко известным кодируемым и некодируемым аминокислотам, некоторые пептиды данного изобретения содержат менее распространенные некодируемые аминокислоты, такие как пара-амидинофенилаланин (Amp); пара-гуанидинофенилаланин (Gup); циклогексилаланин (Cha); 1,2,3,4-тетрагидронорхарман-3-карбоновая кислота (Tpi); (2-нафтил)аланин (2-Nal); (3,3-дифенил)аланин (Dip); пара-аминофенилаланин [Phe(pNH2)]; пара-нитрофенилаланин [Phe(pNO2)]; (3-пиридил)аланин (3-Pal); O-этилтирозин [Tyr(Et)]; и пара-бензоилфенилаланин (Bpa). Данные аминокислотные остатки вводят в состав пептидов путем присоединения подходящих защищенных аминокислотных производных. Можно использовать следующие защищенные аминокислотные производные: Boc-Amp(Alloc)-OH, Boc-Amp-OH, Fmoc-Amp(Alloc)-OH, Fmoc-Amp-OH, Boc-Gup(Tos)-OH, Boc-Gup-OH, Fmoc-Gup(Boc)2-OH, Fmoc-Gup-OH, Boc-Cha-OH, Boc-Tpi-OH, Boc-2-Nal-OH, Boc-Dip-OH, Boc-Phe(pNH-Z)-OH, Boc-Phe(pNO2)-OH, Boc-3-Pal-OH, Boc-Tyr(Et)-OH и Boc-Bpa-OH. Указанные выше защищенные производные некодируемых аминокислот обычно получают от нескольких коммерческих поставщиков, в том числе, Bachem (King of Prussia, PA), Peptides International (Louisville, KY), Novabiochem (San Diego, CA), Advanced ChemTech (Louisville, KY) и RSP Amino Acid Analogues DBA (Worcester, MA).
4. Постадийное присоединение аминокислотных остатков
С применением вышеуказанных полимерных носителей и после фиксации С-концевой аминокислоты или остатка Agm сам пептид получают традиционным способом твердофазного синтеза. Каждую защищенную аминокислоту берут приблизительно в трехкратном молярном избытке по отношению к свободным аминокислотным остаткам, связанным со смолой, и конденсацию проводят в такой среде, как DMF-DCM (1:1), либо в одном DMF или в одном DCM. Подходящие конденсирующие реагенты известны в данной области. В частности, подходящими в качестве конденсирующих реагентов являются N,N'-диизопропилкарбодиимид (DIC) или HBTU, объединенные с HOBt, в присутствии DIEA. Предпочтительно протекание реакции конденсации на каждой стадии синтеза отслеживают с помощью нингидриновой реакции. Если конденсация не завершена, то либо повторяют процедуру конденсации, либо перед удалением защиты с альфа-аминогруппы ацетилируют с помощью кэпирующего реагента связанные со смолой непрореагировавшие аминокислотные остатки. Подходящими кэпирующими реагентами являются 1-ацетилимидазол и Ac2O-пиридин.
Конечное ацилирование N-концевой группы пептида монокарбоновыми кислотами проводят таким же способом, что и предыдущие реакции конденсации, с тем отличием, что вместо аминокислоты используют карбоновую кислоту. Если к N-концу присоединяют дикарбоновые кислоты и желательно, чтобы только одна группа COOH взаимодействовала с аминоконцом пептида (то есть, чтобы образовывались моноамиды данных кислот), для реакции конденсации могут быть использованы ангидриды соответствующих дикарбоновых кислот. Циклические ангидриды многих дикарбоновых кислот имеются в продаже; в других случаях ангидриды данных кислот можно получить заранее путем обработки DIC и затем использовать в реакции конденсации.
5. Отщепление пептида от полимерного носителя и удаление защитных групп с боковых цепей
После завершения синтеза пептид отсоединяют от носителя и удаляют защитные группы с боковых цепей.
Если пептиды с амидированным C-концом (-CONH2) или с C-концевой карбоксильной группой (-COOH) получают с использованием Boc-стратегии на смоле MBHA, Merrifield или PAM, для удаления пептида со смолы используют такой реагент, как жидкий фтористый водород (HF). Данный реагент используют также в случае пептидов, синтезированных на смоле Boc-Agm-SPA-MBHA. В некоторых случаях с помощью жидкого HF также удаляют все оставшиеся боковые защитные группы. Однако, если на пептиде присутствуют боковые защитные группы, устойчивые к обработке HF, для их удаления требуется проведение дополнительных стадий. Так, защитные группы Fm и Fmoc удаляют обработкой 20% раствором пиперидина в DMF, тогда как группы All и Alloc удаляют с использованием катализатора Pd(PPh3)4 и нуклеофильных улавливателей до или после обработки HF.
Соответственно, чтобы отсоединить пептид от смолы и удалить HF-лабильные боковые защитные группы, высушенную смолу с привитым защищенным пептидом обрабатывают смесью, содержащей 1,0 мл м-крезола и 10 мл безводного фтористого водорода на грамм конъюгата пептид-смола, в течение 60-120 минут при 0°C. После удаления фтористого водорода в потоке азота и в вакууме свободные пептиды осаждают эфиром, фильтруют, промывают эфиром и этилацетатом, экстрагируют 50% уксусной кислотой и лиофилизируют.
Если пептиды с этиламидированным C-концом (-NHEt) получают с использованием Boc-стратегии на смоле Merrifield или HMBA-MBHA, вначале защищенные пептиды отсоединяют от смолы путем этиламин (EtNH2)-опосредованного аминолиза. Соответственно, жидкий EtNH2 переносят в охлажденную толстостенную стеклянную колбу, в которой находится высушенный конъюгат пептид-смола. Количество жидкого EtNH2 должно быть достаточным, чтобы покрыть конъюгат пептид-смола. Колбу закрывают и встряхивают с жидким EtNH2 в течение 3,5 часа при комнатной температуре, чтобы обеспечить протекание реакции. После этого колбу охлаждают в бане с сухим льдом, открывают и жидкий EtNH2 отделяют фильтрованием от твердого остатка, который содержит смесь смолы и свободного пептида, причем пептид еще содержит защитные группы. Твердый остаток сушат и обрабатывают HF, как описано выше, чтобы удалить с пептида боковые защитные группы.
6. Очистка
Очистку сырых пептидов можно проводить с помощью способов, хорошо известных в пептидной химии. Например, очистку можно проводить на системе ВЭЖХ MacRabbit (Rainin Instrument Co. Inc., Woburn, MA) с использованием фотометра Knauer UV, регистрирующего устройства Kipp and Zonen BD40 и колонки с обращенной фазой Vydac 218TP510 (10×250 мм, заполненной силикагелем C18, размер пор 300 Å, размер частиц 5 мкм) (The Separations Group Inc., Hesperia, CA). Пептиды с колонки элюируют системой растворителей, состоящей из (A) 0,1% водного раствора TFA и (B) 0,1% TFA в 70% водном растворе MeCN, в режиме линейного градиента (например, 30-55% B в течение 120 минут). Детекцию элюента осуществляют при 220 нм, фракции анализируют способом аналитической ВЭЖХ с использованием жидкостного хроматографа Hewlett-Packard, модель HP-1090, и объединяют так, чтобы достичь максимальной чистоты. Аналитическую ВЭЖХ проводят на колонке с обращенной фазой Vydac 218TP52 (2×250 мм, C18, 300 Å, 5 мкм) с использованием изократического элюирования системой растворителей, состоящей из указанных выше A и B. Пики регистрируют при 220 и 280 нм. Аналитическая ВЭЖХ показывает, что пептиды являются по существу (>95%) чистыми. Молекулярную массу определяют способом масс-спектрометрии с электрораспылением, а ожидаемый аминокислотный состав подтверждают аминокислотным анализом.
D. Фармацевтические композиции и способ введения
Пептиды данного изобретения можно вводить в виде фармацевтически приемлемых нетоксичных солей, таких как кислотно-аддитивные соли. Примерами таких кислотно-аддитивных солей являются гидрохлорид, гидробромид, сульфат, фосфат, фумарат, глюконат, таннат, малеат, ацетат, трифторацетат, бензоат, цитрат, сукцинат, альгинат, памоат, малат, аскорбат, тартарат и др. Особенно предпочтительными антагонистами являются соли с низкой растворимостью, например памоаты и т.п. Их активность сохраняется в течение длительного времени.
Соединения настоящего изобретения можно вводить людям или животным подкожно (п.к.), внутримышечно (в.м.) или внутривенно (в.в.); интраназально или путем легочной ингаляции; посредством чрезкожной доставки; или в виде депо (например, в виде микрокапсул, микрогранул или цилиндрических имплантантов), полученных с использованием подходящего биоразрушаемого полимера (такого как D,L-лактид-согликолид), причем два первых вида депо являются предпочтительными. Другие эквивалентные способы введения также входят в объем данного изобретения, например продолжительное внутривенное вливание, кожные пластыри, инъекции депо, инфузионный насос и средства для замедленного введения, такие как микрокапсулы и т.п. Введение осуществляют в физиологически приемлемом носителе, например в физиологическом растворе, хотя можно использовать и другие носители, известные в данной области.
Пептиды предпочтительно вводят парентерально, внутримышечно, подкожно или внутривенно с использованием фармацевтически приемлемого носителя, такого как изотонический физиологический раствор. Альтернативно, пептиды можно вводить в составе интраназального спрея с использованием подходящего носителя или путем легочной ингаляции. Подходящим способом введения является депо из биоразрушаемого полимера, например поли-D,L-лактид-согликолида, в виде микрокапсул, микрогранул или цилиндрических имплантантов, содержащих диспергированные антагонистические соединения.
Необходимое количество пептида зависит от типа фармацевтической композиции и способа введения. В случае введения людям растворов антагонистов GH-RH путем в.м. или п.к. инъекции, либо в виде интраназального спрея или легочной ингаляции, типичные дозы составляют 2-20 мг/день/пациента и их вводят один раз в день либо разделяют на 2-4 приема в день. Если антагонисты GH-RH вводят людям внутривенно, типичные дозы находятся в интервале от 8 до 80 мкг/кг массы тела/день, их разделяют на 1-4 болюсные инъекции в день или вводят путем непрерывной инфузии. Если антагонисты GH-RH вводят в виде препаратов-депо, например, путем в.м. инъекции памоатов или других малорастворимых солей или путем в.м. или п.к. введения микрокапсул, микрогранул или имплантантов, содержащих антагонистические соединения, диспергированные в биоразрушаемом полимере, типичные дозы составляют 1-10 мг антагониста/день/пациент.
E. Терапевтическое применение антагонистов GH-RH
Предполагается, что наиболее важное терапевтическое применение антагонистов GH-RH относится к области онкологии и эндокринологии. Некоторые антагонисты GH-RH действуют преимущественно на уровне гипофиза и обладают усиленными эндокринными эффектами, ингибируя высвобождение GH, вызванное GH-RH, с уменьшением, в конечном счете, сывороточных уровней GH и IGF-I. Другие антагонисты GH-RH действуют преимущественно на опухолевом уровне путем блокирования опухолевых рецепторов GH-RH, уменьшения продукции различных аутокринных/паракринных факторов роста опухоли (таких как IGF-I, IGF-II, GH, VEGF, FGF) и/или понижающей регуляции их рецепторов, и таким образом оказывают сильное ингибирующее действие на рост опухоли. Данные антагонисты также можно использовать в качестве систем-носителей, связанных с радионуклидами, для локализации или лечения опухолей, или конъюгированных с химиотерапевтическими агентами или токсинами. Такие гибридные соединения могут быть интенсивно нацелены на (иметь мишенью) раковые ткани, что можно использовать для диагностики или лечения. Другие антагонисты GH-RH имеют несколько механизмов действия, то есть они действуют через эндокринную систему и в то же время непосредственно воздействуют на опухоли. Так, основные терапевтические показания для применения разных антагонистов GH-RH различаются в зависимости от их предпочтительного механизма действия.
Аналоги GH-RH с антагонистическим действием на гипофиз используют в тех случаях, когда нужно подавлять сывороточные уровни GH и IGF-I. Так, их назначают для лечения эндокринных нарушений, характеризующихся избыточным уровнем продукции GH и IGF-I, а также для лечения раковых заболеваний, при которых происходит экспрессия рецепторов IGF-I, IGF-II или GH, а указанные факторы роста, в свою очередь, стимулируют пролиферацию клеток.
Аналоги соматостатина и антагонисты GH также можно использовать для лечения эндокринных заболеваний, вызываемых GH и IGF-I. Однако антагонисты GH-RH вызывают уникальные терапевтические эффекты, которые невозможно достичь при применении аналогов соматостатина и антагонистов GH. Данные эффекты обусловлены тем, что антагонисты GH-RH имеют несколько механизмов действия, а именно они оказывают непосредственное GH- и IGF-I-независимое действие на опухоли и другие мишени, и кроме этого они ингибируют эндокринный путь GH и IGF-I. Антагонисты GH-RH можно вводить отдельно или в сочетании с аналогами соматостатина, причем данное сочетание позволяет более эффективно снижать уровни GH и IGF-I. К нежелательным побочным эффектам антагонистов GH, которые можно избежать путем введения антагонистов GH-RH, относится увеличение сывороточного уровня GH по обратному механизму.
Одним из заболеваний, вызываемых избыточным количеством гормона роста, является акромегалия, которая проявляется в аномальном увеличении костей лица и конечностей. Антагонисты GH-RH могут облегчать клинические проявления акромегалии, например, увеличение костей лица и конечностей, увеличение сердца и другие структурные и функциональные нарушения сердечно-сосудистой системы. Антагонисты GH-RH также можно использовать для лечения диабетической ретинопатии (основной причины слепоты у диабетиков) и диабетической нефропатии, при которых повреждение глаз и почек, соответственно, вызывается GH. Состояние диабетических пациентов также улучшается при повышении чувствительности к инсулину, которое вызывают антагонисты GH-RH, данный эффект связан со способностью указанных соединений уменьшать уровни GH и IGF-I. Кроме того, поскольку антагонисты GH-RH ингибируют высвобождение GH, их можно использовать для замедления развития мышечной дистрофии.
Лекарственные средства, действие которых направлено против факторов роста, такие как антагонисты GH-RH, также можно использовать для подавления или замедления некоторых клинико-патологических процессов при таких заболеваниях, как идиопатический фиброз легких, системный склероз и гипертрофическая кардиомиопатия, для которых существующие в настоящее время способы лечения являются малоэффективными. Кроме того, показано, что отсутствует лекарственная терапия, эффективно уменьшающая заболеваемость рестенозом после чрескожной транслюминальной коронарной ангиопластики (PTCA), и существует потребность в разработке новых подходов, в том числе, с применением антагонистов GH-RH. Некоторые гинекологические заболевания, такие как миома, эндометриоз и синдром поликистоза яичников, можно лечить антагонистами GH-RH в сочетании с агонистами или антагонистами гормона, высвобождающего лютеинизирующий гормон (LH-RH). Антагонисты GH-RH также можно использовать для лечения доброкачественной гиперплазии простаты (BPH), а также гиперпластических и доброкачественных пролиферативных заболеваний других нормальных органов, в которых присутствуют рецепторы GH-RH.
Однако основной областью применения антагонистов GH-RH являются раковые заболевания. Антагонисты GH-RH, особенно оказывающие мощное непосредственное действие на опухолевом уровне, можно использовать для подавления роста первичных опухолей и их метастаз. Поскольку антипролиферативные эффекты антагонистов GH-RH реализуются посредством нескольких механизмов, данные соединения можно использовать для лечения широкого ряда раковых заболеваний, таких как заболевания, обусловленные аутокринной/паракринной и эндокринной стимуляцией GH-RH, IGF-I, IGF-II, GH, VEGF и FGF.
Антагонисты GH-RH можно использовать для лечения опухолей, которые экспрессируют рецепторы GH-RH, и в которых GH-RH действует как аутокринный/паракринный фактор роста. Такие злокачественные заболевания включают в себя, не ограничиваясь ими, раковые заболевания легких, простаты, молочной железы, яичников, эндометрия, желудка, кишечника, поджелудочной железы, почек, костей, печени, а также глиобластомы, феохромоцитомы, меланомы и лимфомы. Путем блокирования опухолевых рецепторов GH-RH данные антагонисты предотвращают стимулирующее действие GH-RH и в результате ингибируют рост опухоли.
Преимущество антагонистов GH-RH по сравнению с аналогами соматостатина заключается в том, что антагонисты GH-RH можно использовать для подавления опухолей, которые не имеют рецепторов соматостатина, но экспрессируют опухолевые рецепторы GH-RH, таких как остеогенные саркомы человека.
Злокачественные заболевания, при которых экспрессируются рецепторы IGF-I и которые зависят от IGF-I и/или IGF-II как от факторов роста, можно лечить антагонистами GH-RH. Данные злокачественные заболевания включают в себя, в числе прочих, раковые заболевания легких, простаты, молочной железы, яичников, эндометрия, желудка, прямой кишки, поджелудочной железы, почек и печени, саркомы и опухоли мозга. Способность антагонистов GH-RH уменьшать сывороточные уровни IGF-I, ингибировать аутокринную/паракринную продукцию IGF-I и/или IGF-II в опухолевой ткани и осуществлять понижающую регуляцию экспрессии рецептора IGF-I, делает их полезными для лечения рака.
Раковые заболевания молочной железы и другие типы рака, которые зависят от GH как от фактора роста, можно лечить антагонистами GH-RH. Способность антагонистов GH-RH уменьшать сывороточные уровни GH, ингибировать аутокринную продукцию GH и осуществлять понижающую регуляцию экспрессии рецептора GH делает их полезными для лечения некоторых раковых заболеваний молочной железы, а также других типов опухолей.
Антагонисты GH-RH можно использовать в качестве ингибиторов ангиогенеза, поскольку они ингибируют синтез VEGF в опухолевых тканях и нормальных эндотелиальных клетках и оказывают антипролиферативное действие на эндотелиальные клетки. Следовательно, антагонисты GH-RH можно использовать для лечения опухолей, которые сильно зависят от VEGF и неоангиогенеза.
ПРИМЕРЫ
Настоящее изобретение описывается с использованием нижеследующих примеров, которые приводятся только с целью иллюстрации. Если не указано иначе, в примерах используются оптически активные защищенные аминокислоты с L-конфигурацией.
В нижеследующих примерах описываются подходящие твердофазные способы синтеза новых антагонистов GH-RH.
Пример I
CH3(CH2)6CO-Tyr1-D-Arg2-Asp3-Ala4-Ile5-Phe(pCl)6-Thr7-Ala8-His9-Tyr(Et)10-His11-Lys12-Val13-Leu14-Abu15-Gln16-Leu17-Ser18-Ala19-Arg20-Lys21-Leu22-Leu23-Gln24-Asp25-Ile26-Nle27-D-Arg28-Har29-NH2 (пептид 80)
{[CH3(CH2)6CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Ala8, His9, Tyr(Et)10, His11, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2}
Синтез проводят постадийно, используя оборудование для неавтоматизированного твердофазного синтеза пептидов. Коротко говоря, пара-метилбензгидриламиновую (MBHA) смолу (Bachem, King of Prussia, PA) (720 мг, 0,50 ммоль) нейтрализуют 5% DIEA в DCM и промывают по способу, описанному в таблице I. Раствор Boc-Har(NO2)-OH (500 мг, 1,5 ммоль) в DMF-DCM (1:1) встряхивают с нейтрализованной смолой и DIC (235 мкл, 1,5 ммоль) в аппарате для неавтоматизированного твердофазного синтеза пептидов в течение 1 часа. После завершения реакции конденсации, которое подтверждают по отрицательному результату нингидринового теста, проводят удаление защитных групп и нейтрализацию по способам, описанным в таблице I, чтобы удалить защитную группу Boc и подготовить конъюгат пептид-смола для присоединения следующей аминокислоты. Синтез продолжают с постадийным выстраиванием пептидной цепи путем присоединения на смоле очередной защищенной аминокислоты в указанном порядке с получением целевой пептидной последовательности: Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Tyr(Et)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH.
Данные защищенные аминокислотные остатки (обычно получаемые от Bachem) приведены выше в соответствии с общепринятым соглашением. Подходящие защитные группы для функциональных групп боковых цепей конкретных аминокислот указаны в скобках. Группы OH в приведенных выше формулах означают, что карбоксильный конец каждого остатка является свободным.
Защищенные аминокислоты (по 1,5 ммоль каждой) подвергают реакции конденсации с использованием DIC (235 мкл, 1,5 ммоль), за исключением Boc-Asn-OH и Boc-Gln-OH, которые вступают в реакцию конденсации в виде заранее полученных эфиров HOBt. После удаления Nα-Boc-защитной группы с Tyr1, пептид ацилируют в течение ночи октановой кислотой [CH3(CH2)6COOH] (475 мкл, 3 ммоль) с использованием DIC (235 мкл, 1,5 ммоль) в качестве конденсирующего реагента.
Чтобы отсоединить пептид от смолы и удалить защитные группы, 130 мг высушенного конъюгата пептид-смола перемешивают с 0,5 мл м-крезола и 5 мл фтористого водорода (HF) при 0°C в течение 2 часов. После упаривания HF в потоке азота и в вакууме остаток промывают сухим диэтиловым эфиром и этилацетатом. После отсоединения и удаления защитных групп пептид растворяют в 50% уксусной кислоте и отделяют от смолы фильтрацией. После разбавления водой и лиофилизации получают 75 мг неочищенного продукта.
Неочищенный пептид анализируют способом аналитической ВЭЖХ с использованием жидкостного хроматографа Hewlett-Packard, модель HP-1090, и колонки с обращенной фазой Supelco Discovery HS C18 (2,1 мм × 5 см, силикагель C18, размер пор 120 Å, размер частиц 3 мкм) (Supelco, Bellefonte, PA), элюируя в режиме линейного градиента (например, 40-70% B) системой растворителей, содержащей (A) 0,1% водный раствор TFA и (B) 0,1% TFA в 70% водном растворе MeCN. Чтобы очистить пептид способом полупрепаративной ВЭЖХ, 75 мг неочищенного пептида растворяют в AcOH/H2О, перемешивают, фильтруют и наносят на колонку BeckmanUltraprep ODS (21,2 мм × 15 см, силикагель C18, размер пор 300 Å, размер частиц 10 мкм). Пептид с колонки элюируют системой растворителей, описанной выше для режима линейного градиента (например, 40-60% B в течение 120 минут); скорость потока 10 мл/мин. Элюент детектируют при 220 нм и фракции анализируют способом аналитической ВЭЖХ. Фракции с чистотой выше 95% объединяют и лиофилизируют, получая 7,7 мг чистого продукта. Аналитическую ВЭЖХ проводят на описанной выше колонке с обращенной фазой Supelco C18 в режиме изократического элюирования описанной выше системой растворителей со скоростью потока 0,2 мл/мин. Пики регистрируют при 220 и 280 нм. По данным аналитической ВЭЖХ продукт оценивают как по существу (>95%) чистый. Молекулярную массу определяют способом масс-спектрометрии с электрораспылением, а ожидаемый аминокислотный состав подтверждают способом аминокислотного анализа.
Пептид 2, пептид 4, пептид 6, пептид 8, пептид 10, пептид 12, пептид 14, пептид 16, пептид 17, пептид 79, пептид 86, пептид 92, пептид 93, пептид 94, пептид 95, пептид 96, пептид 104 и пептид 105 синтезируют по способу получения пептида 80, за исключением того, что данные пептиды также содержат другие аминокислотные замены и другие ацильные фрагменты на основе жирных кислот на N-конце.
Чтобы синтезировать пептид 2, который имеет химическую структуру [CH3(CH2)4CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Arg9, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO2)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием CH3(CH2)4COOH.
Чтобы синтезировать пептид 4, который имеет химическую структуру [CH3(CH2)6CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Arg9, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO2)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием CH3(CH2)6COOH.
Чтобы синтезировать пептид 6, который имеет химическую структуру [CH3(CH2)8CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Arg9, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO2)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием CH3(CH2)8COOH.
Чтобы синтезировать пептид 8, который имеет химическую структуру [CH3(CH2)10CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Arg9, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO2)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием CH3(CH2)10COOH.
Чтобы синтезировать пептид 10, который имеет химическую структуру [CH3(CH2)12CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Arg9, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO2)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием CH3(CH2)12COOH.
Чтобы синтезировать пептид 12, который имеет химическую структуру [CH3(CH2)14CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Arg9, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO2)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH с последующим ацилированием CH3(CH2)14COOH.
Чтобы синтезировать пептид 14, который имеет химическую структуру [CH3(CH2)6CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Arg9, Abu15, Nle27, Har28, D-Arg29]hGH-RH(1-29)NH2, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Har(NO2)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием CH3(CH2)6COOH.
Чтобы синтезировать пептид 16, который имеет химическую структуру [CH3(CH2)14CO-Phe0, D-Arg2, Phe(pCl)6, Arg9, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO2)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Phe-OH, с последующим ацилированием CH3(CH2)14COOH.
Чтобы синтезировать пептид 17, который имеет химическую структуру [CH3(CH2)14CO-D-Phe0, D-Arg2, Phe(pCl)6, Arg9, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO2)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-D-Phe-OH, с последующим ацилированием CH3(CH2)14COOH.
Чтобы синтезировать пептид 79, который имеет химическую структуру [СН3(СН2)6СО-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Cit8, His9, Tyr(Et)10, His11, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO2)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Tyr(Et)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Cit-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH с последующим ацилированием CH3(CH2)6COOH.
Чтобы синтезировать пептид 86, который имеет химическую структуру [CH3(CH2)6CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Ala8, His9, Tyr(Et)10, His11, Abu15, His20, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO2)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Tyr(Et)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием CH3(CH2)6COOH.
Чтобы синтезировать пептид 92, который имеет химическую структуру [CH3(CH2)6CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, His9, Tyr(Et)10, His11, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO2)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Tyr(Et)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием CH3(CH2)6COOH.
Чтобы синтезировать пептид 93, который имеет химическую структуру [CH3(CH2)6CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Ala8, His9, Cit15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO2)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Cit-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием CH3(CH2)6COOH.
Чтобы синтезировать пептид 94, который имеет химическую структуру [CH3(CH2)6CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Ala8, His9, Tyr(Et)10, His11, His15, His20, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO2)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Tyr(Et)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием CH3(CH2)6COOH.
Чтобы синтезировать пептид 95, который имеет химическую структуру [CH3(CH2)6CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Ala8, His9, Tyr(Et)10, His11, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO2)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2ClZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Tyr(Et)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием CH3(CH2)6COOH.
Чтобы синтезировать пептид 96, который имеет химическую структуру [CH3(CH2)6CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Ala8, His9, Tyr(Et)10, His11, Orn12, Abu15, His20, Orn21, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO2)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2ClZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2ClZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Tyr(Et)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием CH3(CH2)6COOH.
Чтобы синтезировать пептид 104, который имеет химическую структуру [CH3(CH2)6CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Ala8, His9, Dip10, His11, Orn12, Abu15, His20, Orn21, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO2)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2ClZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2ClZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Dip-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием CH3(CH2)6COOH.
Чтобы синтезировать пептид 105, который имеет химическую структуру [CH3(CH2)6CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Ala8, His9, Phe(pNO2)10, His11, Orn12, Abu15, His20, Orn21, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO2)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2ClZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2ClZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Phe(pNO2)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием CH3(CH2)6COOH.
Отщепление под действием HF, удаление защитных групп и последующую очистку способом полупрепаративной ВЭЖХ для пептида 2, пептида 4, пептида 6, пептида 8, пептида 10, пептида 12, пептида 14, пептида 16, пептида 17, пептида 79, пептида 86, пептида 92, пептида 93, пептида 94, пептида 95, пептида 96, пептида 104 и пептида 105 проводят по способу, описанному для пептида 80. По данным аналитической ВЭЖХ очищенные соединения оценивают как по существу (>95%) чистые. Молекулярную массу определяют способом масс-спектрометрии с электрораспылением, а ожидаемый аминокислотный состав подтверждают способом аминокислотного анализа.
Пример II
HOOC(CH2)12CO-Tyr1-D-Arg2-Asp3-Ala4-Ile5-Phe(pCl)6-Thr7-Asn8-Arg9-Tyr10-Arg11-Lys12-Val13-Leu14-Abu15-Gln16-Leu17-Ser18-Ala19-Arg20-Lys21-Leu22-Leu23-Gln24-Asp25-Ile26-Nle27-D-Arg28-Har29-NH2 (пептид 11)
{[HOOC(CH2)12CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Arg9, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2}
Синтез проводят постадийно, используя оборудование для неавтоматизированного твердофазного синтеза пептидов. Коротко говоря, смолу MBHA (Bachem, King of Prussia, PA) (720 мг, 0,50 ммоль) нейтрализуют 5% DIEA в DCM и промывают по способу, описанному в таблице I. Раствор Boc-Har(NO2)-OH (500 мг, 1,5 ммоль) в DMF-DCM (1:1) встряхивают с нейтрализованной смолой и DIC (235 мкл, 1,5 ммоль) в аппарате для неавтоматизированного твердофазного синтеза пептидов в течение 1 часа. После завершения реакции конденсации, которое подтверждают по отрицательному результату нингидринового теста, проводят удаление защитных групп и нейтрализацию по способам, описанным в таблице I, чтобы удалить защитную группу Boc и подготовить конъюгат пептид-смола для присоединения следующей аминокислоты. Синтез продолжают с постадийным выстраиванием пептидной цепи путем присоединения на смоле очередной защищенной аминокислоты в указанном порядке с получением целевой пептидной последовательности: Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH. Защищенные аминокислоты (по 1,5 ммоль каждой) подвергают реакции конденсации с использованием DIC (235 мкл, 1,5 ммоль), за исключением Boc-Asn-OH и Boc-Gln-OH, которые вступают в реакцию конденсации в виде заранее полученных эфиров HOBt.
После удаления Nα-Boc-защитной группы с Tyr1 пептид ацилируют симметричным ангидридом 1,12-додекандикарбоновой кислоты, который получают заранее следующим способом. Для синтеза 0,5 ммоль пептида, 388 мг (1,5 ммоль) 1,12-додекандикарбоновой кислоты [HOOC(CH2)12COOH] растворяют в 5-10 мл DMF-DCM (1: 1), к полученному раствору добавляют 235 мкл (1,5 ммоль) DIC и смесь оставляют стоять при комнатной температуре в течение 30 минут. Затем смесь переносят в сосуд для синтеза, содержащий конъюгат пептид-смола со свободным аминоконцом на Tyr1, и проводят ацилирование в течение ночи.
Чтобы отсоединить пептид от смолы и удалить защитные группы, 274 мг высушенного конъюгата пептид-смола перемешивают с 0,5 мл м-крезола и 5 мл фтористого водорода (HF) при 0°C в течение 2 часов. После упаривания HF в потоке азота и в вакууме остаток промывают сухим диэтиловым эфиром и этилацетатом. После отсоединения и удаления защитных групп пептид растворяют в 50% уксусной кислоте и отделяют от смолы фильтрацией. После разбавления водой и лиофилизации получают 160 мг неочищенного продукта.
Неочищенный пептид анализируют способом аналитической ВЭЖХ с использованием жидкостного хроматографа Hewlett-Packard, модель HP-1090, и колонки с обращенной фазой Supelco Discovery HS C18 (2,1 мм × 5 см, силикагель C18, размер пор 120 Å, размер частиц 3 мкм) (Supelco, Bellefonte, PA), элюируя в режиме линейного градиента (например, 50-80% B) системой растворителей, содержащей (A) 0,1% водный раствор TFA и (B) 0,1% TFA в 70% водном растворе MeCN. Чтобы очистить пептид способом полупрепаративной ВЭЖХ, 160 мг неочищенного пептида растворяют в AcOH/H2О, перемешивают, фильтруют и наносят на колонку Beckman Ultraprep ODS (21,2 мм × 15 см, силикагель C18, размер пор 300 Å, размер частиц 10 мкм). Пептид с колонки элюируют системой растворителей, описанной выше для режима линейного градиента (например, 50-70% B в течение 120 минут); скорость потока 10 мл/мин. Элюент детектируют при 220 нм и фракции анализируют способом аналитической ВЭЖХ. Фракции с чистотой выше 95% объединяют и лиофилизируют, получая 6,0 мг чистого продукта. Аналитическую ВЭЖХ проводят на описанной выше колонке с обращенной фазой Supelco C18 в режиме изократического элюирования описанной выше системой растворителей со скоростью потока 0,2 мл/мин. Пики регистрируют при 220 и 280 нм. По данным аналитической ВЭЖХ продукт оценивают как по существу (>95%) чистый. Молекулярную массу определяют способом масс-спектрометрии с электрораспылением, а ожидаемый аминокислотный состав подтверждают способом аминокислотного анализа.
Пептид 3, пептид 5, пептид 7, пептид 9, пептид 13, пептид 25, пептид 81, пептид 82, пептид 88, пептид 102, пептид 108 и пептид 109 синтезируют по способу, описанному для пептида 11, за исключением того, что данные пептиды также содержат другие аминокислотные замены и другие ацильные фрагменты на основе жирных кислот на N-конце.
Чтобы синтезировать пептид 3, который имеет химическую структуру [HOOC(CH2)4CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Arg9, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO2)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием CH3(CH2)4COOH.
Чтобы синтезировать пептид 5, который имеет химическую структуру [HOOC(CH2)6CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Arg9, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO2)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием CH3(CH2)6COOH.
Чтобы синтезировать пептид 7, который имеет химическую структуру [HOOC(CH2)8CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Arg9, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO2)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием CH3(CH2)8COOH.
Чтобы синтезировать пептид 9, который имеет химическую структуру [HOOC(CH2)10CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Arg9, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO2)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием CH3(CH2)10COOH.
Чтобы синтезировать пептид 13, который имеет химическую структуру [HOOC(CH2)14CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Arg9, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO2)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием CH3(CH2)14COOH.
Чтобы синтезировать пептид 25, который имеет химическую структуру [HOOC(CH2)12CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Cit8, Cit9, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO2)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Cit-OH, Boc-Cit-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием CH3(CH2)12COOH.
Чтобы синтезировать пептид 81, который имеет химическую структуру [HOOC(CH2)8CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Ala8, His9, Tyr(Et)10, His11, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO2)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Tyr(Et)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием CH3(CH2)8COOH.
Чтобы синтезировать пептид 82, который имеет химическую структуру [HOOC(CH2)12CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Ala8, His9, Tyr(Et)10, His11, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO2)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Tyr(Et)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием CH3(CH2)12COOH.
Чтобы синтезировать пептид 88, который имеет химическую структуру [HOOC(CH2)12CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Ala8, His9, Tyr(Et)10, His11, Abu15, His20, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO2)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Tyr(Et)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием CH3(CH2)12COOH.
Чтобы синтезировать пептид 102, который имеет химическую структуру [HOOC(CH2)12CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Ala8, His9, Tyr(Et)10, His11, Orn12, Abu15, His20, Orn21, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO2)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2ClZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2ClZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Tyr(Et)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием CH3(CH2)12COOH.
Чтобы синтезировать пептид 108, который имеет химическую структуру [HOOC(CH2)12CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Ala8, His9, Dip10, His11, Orn12, Abu15, His20, Orn21, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO2)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2ClZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2ClZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Dip-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием CH3(CH2)12COOH.
Чтобы синтезировать пептид 109, который имеет химическую структуру [HOOC(CH2)12CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)5, Ala8, His9, Phe(pNO2)10, His11, Orn12, Abu15, His20, Orn21, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO2)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2ClZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2ClZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Phe(pNO2)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием CH3(CH2)12COOH.
Отщепление под действием HF, удаление защитных групп и последующую очистку способом полупрепаративной ВЭЖХ для пептида 3, пептида 5, пептида 7, пептида 9, пептида 13, пептида 25, пептида 81, пептида 82, пептида 88, пептида 102, пептида 108 и пептида 109 проводят по способу, описанному для пептида 11. По данным аналитической ВЭЖХ очищенные соединения оценивают как по существу (>95%) чистые. Молекулярную массу определяют способом масс-спектрометрии с электрораспылением, а ожидаемый аминокислотный состав подтверждают способом аминокислотного анализа.
Пример III
PhAc-Tyr1-D-Arg2-Asp3-Ala4-Ile5-Phe(pCl)6-Thr7-Asn8-Har9-Tyr(Me)10-His11-Lys12-Val13-Leu14-Abu15-Gln16-Leu17-Ser18-Ala19-Arg20-Lys21-Leu22-Leu23-Gln24-Asp25-Ile26-Nle27-D-Arg28-Har29-NH2 (пептид 62)
{[PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Har9, Tyr(Me)10, His11, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2}
Синтез проводят постадийно, используя оборудование для неавтоматизированного твердофазного синтеза пептидов. Коротко говоря, пара-метилбензгидриламиновую (MBHA) смолу (Bachem, King of Prussia, PA) (720 мг, 0,50 ммоль) нейтрализуют 5% DIEA в DCM и промывают по способу, описанному в таблице I. Раствор Boc-Har(NO2)-OH (500 мг, 1,5 ммоль) в DMF-DCM (1:1) встряхивают с нейтрализованной смолой и DIC (235 мкл, 1,5 ммоль) в аппарате для неавтоматизированного твердофазного синтеза пептидов в течение 1 часа. После завершения реакции конденсации, которое подтверждается отрицательным результатом нингидринового теста, проводят удаление защитных групп и нейтрализацию по способам, описанным в таблице I, чтобы удалить защитную группу Boc и подготовить конъюгат пептид-смола для присоединения следующей аминокислоты. Синтез продолжают с постадийным выстраиванием пептидной цепи путем присоединения на смоле очередной защищенной аминокислоты в указанном порядке с получением целевой пептидной последовательности: Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Tyr(Me)-OH, Boc-Har(NO2)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH. Защищенные аминокислоты (по 1,5 ммоль каждой) подвергают реакции конденсации с использованием DIC (235 мкл, 1,5 ммоль), за исключением Boc-Asn-OH и Boc-Gln-OH, которые вступают в реакцию конденсации в виде заранее полученных эфиров HOBt. После удаления Nα-Boc-защитной группы с Tyr1 пептид ацилируют фенилуксусной кислотой (PhAc-OH) (272 мг, 2 ммоль) с использованием DIC (313 мкл, 2 ммоль).
Чтобы отсоединить пептид от смолы и удалить защитные группы, 286 мг высушенного конъюгата пептид-смола перемешивают с 0,5 мл м-крезола и 5 мл фтористого водорода (HF) при 0°C в течение 2 часов. После упаривания HF в потоке азота и в вакууме остаток промывают сухим диэтиловым эфиром и этилацетатом. После отсоединения и удаления защитных групп пептид растворяют в 50% уксусной кислоте и отделяют от смолы фильтрацией. После разбавления водой и лиофилизации получают 155 мг неочищенного продукта.
Неочищенный пептид анализируют способом аналитической ВЭЖХ с использованием жидкостного хроматографа Hewlett-Packard, модель HP-1090, и колонки с обращенной фазой Supelco Discovery HS C18 (2,1 мм × 5 см, силикагель C18, размер пор 120 Å, размер частиц 3 мкм) (Supelco, Bellefonte, PA), элюируя в режиме линейного градиента (например, 40-70% B) системой растворителей, содержащей (A) 0,1% водный раствор TFA и (B) 0,1% TFA в 70% водном растворе MeCN. Чтобы очистить пептид способом полупрепаративной ВЭЖХ, 155 мг неочищенного пептида растворяют в AcOH/H2О, перемешивают, фильтруют и наносят на колонку Beckman Ultraprep ODS (21,2 мм × 15 см, силикагель C18, размер пор 300 Å, размер частиц 10 мкм). Пептид с колонки элюируют системой растворителей, описанной выше для режима линейного градиента (например, 40-60% B в течение 120 минут); скорость потока 12 мл/мин. Элюент детектируют при 220 нм и фракции анализируют способом аналитической ВЭЖХ. Фракции с чистотой выше 95% объединяют и лиофилизируют, получая 13,3 мг чистого продукта. Аналитическую ВЭЖХ проводят на описанной выше колонке с обращенной фазой Supelco C18 в режиме изократического элюирования описанной выше системой растворителей со скоростью потока 0,2 мл/мин. Пики регистрируют при 220 и 280 нм. По данным аналитической ВЭЖХ продукт оценивают как по существу (>95%) чистый. Молекулярную массу определяют способом масс-спектрометрии с электрораспылением, а ожидаемый аминокислотный состав подтверждают способом аминокислотного анализа.
Пептид 15, пептид 18, пептид 19, пептид 21, пептид 22, пептид 23, пептид 24, пептид 26, пептид 27, пептид 28, пептид 32, пептид 33, пептид 34, пептид 35, пептид 36, пептид 37, пептид 38, пептид 39, пептид 40, пептид 41, пептид 42, пептид 43, пептид 53, пептид 54, пептид 55, пептид 57, пептид 58, пептид 63, пептид 65, пептид 69, пептид 84, пептид 85, пептид 90 и пептид 91 синтезируют по способу получения пептида 62, за исключением того, что данные пептиды также содержат другие аминокислотные замены.
Чтобы синтезировать пептид 15, который имеет химическую структуру [PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Arg9, Abu15, Nle27, Har28, D-Arg29]hGH-RH(1-29)NH2, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Har(NO2)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием PhAc-OH.
Чтобы синтезировать пептид 18, который имеет химическую структуру [PhAc-Arg0, D-Arg2, Phe(pCl)6, Arg9, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO2)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, с последующим ацилированием PhAc-OH.
Чтобы синтезировать пептид 19, который имеет химическую структуру [PhAc-D-Arg0, D-Arg2, Phe(pCl)6, Arg9, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO2)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, с последующим ацилированием PhAc-OH.
Чтобы синтезировать пептид 21, который имеет химическую структуру [PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Cit8, Arg9, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO2)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Cit-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием PhAc-OH.
Чтобы синтезировать пептид 22, который имеет химическую структуру [PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Cit8, Cit9, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO2)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Cit-OH, Boc-Cit-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием PhAc-OH.
Чтобы синтезировать пептид 23, который имеет химическую структуру [PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Cit8, Arg9, Abu15, Nle27, Har28, D-Arg29]hGH-RH(1-29)NH2, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Har(NO2)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Cit-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием PhAc-OH.
Чтобы синтезировать пептид 24, который имеет химическую структуру [PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Cit8, Cit9, Abu15, Nle27, Har28, D-Arg29]hGH-RH(1-29)NH2, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Har(NO2)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Cit-OH, Boc-Cit-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием PhAc-OH.
Чтобы синтезировать пептид 26, который имеет химическую структуру [PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, D-Ala8, Arg9, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO2)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-D-Ala-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием PhAc-OH.
Чтобы синтезировать пептид 27, который имеет химическую структуру [PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Abu8, Arg9, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO2)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием PhAc-OH.
Чтобы синтезировать пептид 28, который имеет химическую структуру [PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Cit9, Abu15, Nle27, Har28, D-Arg29]hGH-RH(1-29)NH2, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Har(NO2)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Cit-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием PhAc-OH.
Чтобы синтезировать пептид 32, который имеет химическую структуру [PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Arg9, His10, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO2)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием PhAc-OH.
Чтобы синтезировать пептид 33, который имеет химическую структуру [PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Arg9, Cha10, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO2)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Cha-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием PhAc-OH.
Чтобы синтезировать пептид 34, который имеет химическую структуру [PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Har9, Tpi10, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO2)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tpi-OH, Boc-Har(NO2)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием PhAc-OH.
Чтобы синтезировать пептид 35, который имеет химическую структуру [PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Har9, 2-Nal10, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO2)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-2-Nal-OH, Boc-Har(NO2)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием PhAc-OH.
Чтобы синтезировать пептид 36, который имеет химическую структуру [PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Har9, Dip10, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO2)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Dip-OH, Boc-Har(NO2)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием PhAc-OH.
Чтобы синтезировать пептид 37, который имеет химическую структуру [PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Har9, Phe(pNH2)10, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO2)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Phe(pNH-Z)-OH, Boc-Har(NO2)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием PhAc-OH.
Чтобы синтезировать пептид 38, который имеет химическую структуру [PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Har9, Trp10, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO2)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Trp(For)-OH, Boc-Har(NO2)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием PhAc-OH.
Чтобы синтезировать пептид 39, который имеет химическую структуру [PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Har9, Phe(pNO2)10, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO2)-OH Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Phe(pNO2)-OH, Boc-Har(NO2)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием PhAc-OH.
Чтобы синтезировать пептид 40, который имеет химическую структуру [PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Har9, 3-Pal10, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO2)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-3-Pal-OH, Boc-Har(NO2)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием PhAc-OH.
Чтобы синтезировать пептид 41, который имеет химическую структуру [PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Har9, Tyr(Et)10, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO2)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(Et)-OH, Boc-Har(NO2)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием PhAc-OH.
Чтобы синтезировать пептид 42, который имеет химическую структуру [PhAc-His1, D-Arg2, Tyr6, Har9, Bpa10, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO2)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Bpa-OH, Boc-Har(NO2)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-His(Bom)-OH, с последующим ацилированием PhAc-OH.
Чтобы синтезировать пептид 43, который имеет химическую структуру [PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Arg9, Har12, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO2)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Har(NO2)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием PhAc-OH.
Чтобы синтезировать пептид 53, который имеет химическую структуру [Hca-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Har9, Tyr(Me)10, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29, Har30]hGH-RH(1-30)NH2, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO2)-OH, Boc-Har(NO2)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(Me)-OH, Boc-Har(NO2)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием гидрокоричной кислотой (Hca-OH).
Чтобы синтезировать пептид 54, который имеет химическую структуру [Dat-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Har9, Tyr(Me)10, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29, Har30]hGH-RH(1-30)NH2, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO2)-OH, Boc-Har(NO2)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(Me)-OH, Boc-Har(NO2)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием дезаминотирозином (Dat).
Чтобы синтезировать пептид 55, который имеет химическую структуру [Ipa-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Har9, Tyr(Me)10, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29, Har30]hGH-RH(1-30)NH2, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO2)-OH, Boc-Har(NO2)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(Me)-OH, Boc-Har(NO2)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием индол-3-пропионовой кислоты (Ipa-OH).
Чтобы синтезировать пептид 57, который имеет химическую структуру [Hca-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Har9, Tyr(Me)10, Abu15, Nle27, D-Arg28, D-Arg29, Har30]hGH-RH(1-30)NH2, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO2)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(Me)-OH, Boc-Har(NO2)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием Hca-OH.
Чтобы синтезировать пептид 58, который имеет химическую структуру [Hca-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Har9, Tyr(Me)10, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29, D-Arg30]hGH-RH(1-30)NH2, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Har(NO2)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(Me)-OH, Boc-Har(NO2)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием Hca-OH.
Чтобы синтезировать пептид 63, который имеет химическую структуру [PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Har9, Tyr(Me)10, Har11, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har30]hGH-RH(1-29)NH2, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO2)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Har(NO2)-OH, Boc-Tyr(Me)-OH, Boc-Har(NO2)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием PhAc-OH.
Чтобы синтезировать пептид 65, который имеет химическую структуру [PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Har9, Tyr(Me)10, Cit11, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO2)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Cit-OH, Boc-Tyr(Me)-OH, Boc-Har(NO2)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием PhAc-OH.
Чтобы синтезировать пептид 69, который имеет химическую структуру [PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, His9, Tyr(Me)10, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO2)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(Me)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием PhAc-OH.
Чтобы синтезировать пептид 84, который имеет химическую структуру [PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Har9, Tyr(Me)10, Abu15, His20, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO2)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(Me)-OH, Boc-Har(NO2)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием PhAc-OH.
Чтобы синтезировать пептид 85, который имеет химическую структуру [PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Har9, Tyr(Me)10, His11, Abu15, His20, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO2)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Tyr(Me)-OH, Boc-Har(NO2)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием PhAc-OH.
Чтобы синтезировать пептид 90, который имеет химическую структуру [PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Arg9, Cit15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO2)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Cit-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием PhAc-OH.
Чтобы синтезировать пептид 91, который имеет химическую структуру [1-Nac-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Ala8, His9, Tyr(Et)10, His11, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO2)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Tyr(Et)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием 1-нафтилуксусной кислотой (1-Nac-OH).
Отщепление под действием HF, удаление защитных групп и последующую очистку способом полупрепаративной ВЭЖХ для пептида 15, пептида 18, пептида 19, пептида 21, пептида 22, пептида 23, пептида 24, пептида 26, пептида 27, пептида 28, пептида 32, пептида 33, пептида 34, пептида 35, пептида 36, пептида 37, пептида 38, пептида 39, пептида 40, пептида 41, пептида 42, пептида 43, пептида 53, пептида 54, пептида 55, пептида 57, пептида 58, пептида 63, пептида 65, пептида 69, пептида 84, пептида 85, пептида 90 и пептида 91 проводят по способу, описанному для пептида 62. По данным аналитической ВЭЖХ очищенные соединения оценивают как по существу (>95%) чистые. Молекулярную массу определяют способом масс-спектрометрии с электрораспылением, а ожидаемый аминокислотный состав подтверждают способом аминокислотного анализа.
Пример IV
PhAc-Tyr1-D-Arg2-Asp3-Ala4-Ile-5-Phe(pCl)6-Thr7-Asn8-Amp9-Tyr(Me)10-Arg11-Lys12-Var3-Leu14-Abu15-Gln16-Leu17-Ser18-Ala19-Arg20-Lys21-Leu22-Leu23-Gln24-Asp25-Ile26-Nle27-D-Arg28-Har29-NH2 (пептид 67)
{[PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Amp9, Tyr(Me)10, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2}
Синтез проводят постадийно, используя оборудование для неавтоматизированного твердофазного синтеза пептидов. Коротко говоря, пара-метилбензгидриламиновую (MBHA) смолу (Bachem, King of Prussia, PA) (720 мг, 0,50 ммоль) нейтрализуют 5% DIEA в DCM и промывают по способу, описанному в таблице I. Раствор Boc-Har(NO2)-OH (500 мг, 1,5 ммоль) в DMF-DCM (1:1) встряхивают с нейтрализованной смолой и DIC (235 мкл, 1,5 ммоль) в аппарате для неавтоматизированного твердофазного синтеза пептидов в течение 1 часа. После завершения реакции конденсации, которое подтверждают по отрицательному результату нингидринового теста, проводят удаление защитных групп и нейтрализацию по способам, описанным в таблице I, чтобы удалить защитную группу Boc и подготовить конъюгат пептид-смола для присоединения следующей аминокислоты. Синтез продолжают с постадийным выстраиванием пептидной цепи путем присоединения на смоле очередной защищенной аминокислоты в указанном порядке с получением целевой пептидной последовательности: Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(Me)-OH, Boc-Amp(Alloc)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH. Защищенную некодируемую аминокислоту Boc-Amp(Alloc)-OH получают от RSP Amino Acid Analogues, Inc. (Worcester, MA). Защищенные аминокислоты (по 1,5 ммоль каждой) подвергают реакции конденсации с использованием DIC (235 мкл, 1,5 ммоль), за исключением Boc-Amp(Alloc)-OH, Boc-Asn-OH и Boc-Gln-OH, которые подвергают реакции конденсации с использованием 569 мг HBTU + 203 мг HOBt + 522 мкл DIEA (1,5:1,5:3 ммоль). После удаления Nα-Boc-защитной группы с Tyr1, пептид ацилируют фенилуксусной кислотой (PhAc-OH) (272 мг, 2 ммоль) с использованием DIC (313 мкл, 2 ммоль). Полученную пептидильную смолу, пока содержащую все боковые защитные группы, промывают 3 раза DCM, 3 раза МеОН и сушат в высоком вакууме.
Затем конъюгат пептид-смола подвергают Pd(0)-катализируемому удалению защитной группы Alloc с остатка Amp9 пептидной цепи по способу, описанному в каталоге Novabiochem (San Diego, CA) 2002/2003. В пробирке взвешивают порцию пептидильной смолы, 255 мг, которая содержит 0,033 ммоль пептида, после чего пробирку закрывают эластичной мембраной. Пробирку продувают газообразным аргоном (Ar) через иглу, вставленную в мембрану. В другой сухой пробирке взвешивают 116 мг Pd(PPh3)4 (0,1 ммоль или 3 экв. по отношению к группам Alloc, присутствующим на пептидильной смоле), добавляют 4-5 мл смеси CHCl3-AcOH-N-метилморфолин (37:2:1 об./об./об.), катализатор растворяют, барботируя Ar через раствор, и пробирку закрывают эластичной мембраной. С помощью герметичного шприца, продутого газообразным Ar, полученный раствор переносят в пробирку, содержащую смолу, и полученную смесь оставляют стоять в течение 2 часов при периодическом перемешивании. Затем смолу переносят в воронку с фильтром из пористого стекла и промывают последовательно 0,5% раствором DIEA в DMF (чтобы нейтрализовать смолу) и раствором диэтилдитиокарбамата натрия (0,5% мас./мас.) в DMF (чтобы удалить катализатор). После очередного промывания MeOH смолу снова сушат и проводят отщепление пептида под действием HF.
Отщепление пептида со смолы MBHA с одновременным удалением оставшихся защитных групп проводят путем обработки HF, как описано в примерах I-III. Затем проводят обработку и очистку ВЭЖХ по способам, описанным в примерах I-III, получая 11,6 мг чистого пептида 67 (чистота >95% по данным аналитической ВЭЖХ). Молекулярную массу определяют способом масс-спектрометрии с электрораспылением, а ожидаемый аминокислотный состав подтверждают способом аминокислотного анализа.
Пептид 30, пептид 31, пептид 64, пептид 68, пептид 73, пептид 74 и пептид 75 синтезируют по способу, описанному для пептида 67, за исключением того, что данные пептиды также содержат другие замены.
Чтобы синтезировать пептид 30, который имеет химическую структуру [PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Arg9, Amp10, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO2)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Amp(Alloc)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием PhAc-OH.
Чтобы синтезировать пептид 31, который имеет химическую структуру [PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Har9, Amp10, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO2)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Amp(Alloc)-OH, Boc-Har(NO2)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием PhAc-OH.
Чтобы синтезировать пептид 64, который имеет химическую структуру [PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Har9, Tyr(Me)10, Amp11, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO2)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Amp(Alloc)-OH, Boc-Tyr(Me)-OH, Boc-Har(NO2)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием PhAc-OH.
Чтобы синтезировать пептид 68, который имеет химическую структуру [PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Amp9, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO2)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Amp(Alloc)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием PhAc-OH.
Чтобы синтезировать пептид 73, который имеет химическую структуру [PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Amp9, Tyr(Me)10, His11, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO2)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Tyr(Me)-OH, Boc-Amp(Alloc)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием PhAc-OH.
Чтобы синтезировать пептид 74, который имеет химическую структуру [PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Cit8, Amp9, Tyr(Me)10, His11, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO2)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Tyr(Me)-OH, Boc-Amp(Alloc)-OH, Boc-Cit-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием PhAc-OH.
Чтобы синтезировать пептид 75, который имеет химическую структуру [1-Nac-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Cit8, Amp9, Tyr(Me)10, His11, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO2)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Tyr(Me)-OH, Boc-Amp(Alloc)-OH, Boc-Cit-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием (1-Nac-OH).
Отсоединение пептида со смолы, удаление защитных групп и последующую очистку способом полупрепаративной ВЭЖХ для пептида 30, пептида 31, пептида 64, пептида 68, пептида 73, пептида 74 и пептида 75 проводят по способу, описанному для пептида 67. По данным аналитической ВЭЖХ очищенные соединения оценивают как по существу (>95%) чистые. Молекулярную массу определяют способом масс-спектрометрии с электрораспылением, а ожидаемый аминокислотный состав подтверждают способом аминокислотного анализа.
Пример V
PhAc-Tyr1-D-Arg2-Asp3-Ala4-Ile-5-Phe(pCl)6-Thr7-Asn8-Har9-Tyr(Me)10-Arg11-Lys12-Val13-Leu14-Abu15-Gln16-Leu17-Ser18-Ala19-Arg20-Lys21-Leu22-Leu23-Gln24-Asp25-Ile26-Nle27-D-Arg28-Har29-NHEt (пептид 46)
{[PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Har9, Tyr(Me)10, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NHEt}
Синтез проводят постадийно, используя оборудование для неавтоматизированного твердофазного синтеза пептидов. Коротко говоря, смолу Merrifield (Bachem, King of Prussia, PA) (3,0 г, с замещением 0,6 ммоль/г) заранее оставляют набухать в DCM, промывают 3 раза DMF, затем добавляют раствор 2390 мг Boc-Har(Tos)-OH (5,4 ммоль, что соответствует 3-молярному избытку) в 20-30 мл DMF и 314 мг твердого KF (5,4 ммоль, 3-молярный избыток), чтобы загрузить на смолу первую аминокислоту. Смолу встряхивают с вышеуказанной смесью в течение 4 часов при 80°C, после чего фильтруют и промывают следующим образом: 3 раза DMF, 3 раза DMF-вода (1:1) (чтобы удалить KF), 3 раза DMF, 3 раза DCM и 3 раза MeOH. Смолу сушат в вакууме в течение 24 часов до достижения постоянной массы. Масса сухой смолы, нагруженной первой аминокислотой [Boc-Har(Tos)-смола Merrifield], превышает 3,5 г, то есть выход загрузки превышает 70%.
1,5 г конъюгата Boc-Har(Tos)-смола Merrifield (приблизительно 0,5 ммоль) заранее оставляют набухать в DCM и после удаления защитных групп с использованием 50% TFA в DCM и нейтрализации с использованием 5% DIEA в DCM пептидную цепь достраивают постадийно путем присоединения на смоле очередной защищенной аминокислоты в указанном порядке с получением целевой пептидной последовательности: Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(Me)-OH, Boc-Har(Tos)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH. В данном синтезе вместо Boc-Har(NO2)-OH используют Boc-Har(Tos)-OH, поскольку известно, что нитрозащищенная гуанидиновая группа чувствительна к основаниям, например, к этиламину, который применяется в данном синтезе, и при использовании Boc-Har(NO2)-OH может происходить разложение Har с образованием Lys. Защищенные аминокислоты (по 1,5 ммоль каждой) подвергают реакции конденсации с использованием DIC (235 мкл, 1,5 ммоль), за исключением Boc-Asn-OH и Boc-Gln-OH, которые вступают в реакцию конденсации в виде заранее полученных эфиров HOBt. После удаления Nα-Boc-защитной группы с Tyr1 пептид ацилируют фенилуксусной кислотой (PhAc-OH) (272 мг, 2 ммоль) с использованием DIC (313 мкл, 2 ммоль), промывают DCM и МеОН и сушат.
Чтобы отсоединить защищенный пептид от смолы способом аминолиза, опосредованного этиламином (EtNH2), и получить пептид с этиламидной модификацией (-NHEt) по C-концу, 250 мг сухого конъюгата пептид-смола вносят в круглодонную колбу из толстостенного стекла, колбу помещают в баню, охлаждаемую смесью сухой лед-метанол, которая находится в хорошо вентилируемом вытяжном шкафу, и в колбу добавляют жидкий EtNH2 (т.к. = 16,6°C, от Aldrich, поставляется в металлическом цилиндре) в количестве, достаточном для того, чтобы покрыть конъюгат пептид-смола. Колбу закрывают пробкой, нагревают до комнатной температуры (осторожно: давление внутри увеличивается) и встряхивают в течение 3 часов и 30 минут, чтобы обеспечить протекание реакции. Затем колбу снова помещают в охлаждающую баню, открывают и жидкий EtNH2 отфильтровывают от твердого остатка, представляющего собой смесь смолы и свободного пептида, который еще содержит защитные группы. После данной процедуры твердый остаток сушат в вакууме в течение ночи, чтобы удалить остаток EtNH2 и адсорбированную влагу.
Сухой остаток, содержащий отсоединенный защищенный пептид, помещают в аппарат для обработки HF и проводят удаление защитных групп под действием HF путем обработки 5 мл HF при 0°C в течение 2 часов, в присутствии 0,5 мл м-крезола в качестве улавливателя. После упаривания HF в потоке азота и в вакууме остаток промывают сухим диэтиловым эфиром и этилацетатом. Пептид после отсоединения и удаления защитных групп растворяют в 50% уксусной кислоте и отделяют от смолы путем фильтрации. После разбавления водой и лиофилизации обычно получают 90-110 мг неочищенного продукта.
Пептид очищают способом полупрепаративной ВЭЖХ и элюируемые фракции анализируют способом аналитической ВЭЖХ, как описано в примерах I-III. Фракции с чистотой выше 95% объединяют и лиофилизируют, получая 5-10 мг чистого пептида 46. Молекулярную массу определяют способом масс-спектрометрии с электрораспылением, а ожидаемый аминокислотный состав подтверждают способом аминокислотного анализа.
Пептид 45, пептид 47, пептид 48, пептид 49, пептид 50, пептид 56, пептид 97, пептид 98, пептид 99, пептид 100, пептид 101, пептид 106, пептид 110, пептид 113, пептид 114, пептид 115, пептид 118, пептид 119, пептид 120 и пептид 121 синтезируют по способу, описанному для пептида 46, за исключением того, что данные пептиды также содержат другие замены.
Чтобы синтезировать пептид 45, который имеет химическую структуру [Hca-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Har9, Tyr(Me)10, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NHEt, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле Merrifield: Boc-Har(Tos)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(Me)-OH, Boc-Har(Tos)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием Hca-OH.
Чтобы синтезировать пептид 47, который имеет химическую структуру [Hca-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Arg9, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NHEt, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле Merrifield: Boc-Har(Tos)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием Hca-OH.
Чтобы синтезировать пептид 48, который имеет химическую структуру [PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Arg9, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NHEt, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле Merrifield: Boc-Har(Tos)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием PhAc-OH.
Чтобы синтезировать пептид 49, который имеет химическую структуру [PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Har9, Tyr(Me)10, Aib15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NHEt, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле Merrifield: Boc-Har(Tos)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Aib-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-D Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(Me)-OH, Boc-Har(Tos)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием PhAc-OH.
Чтобы синтезировать пептид 50, который имеет химическую структуру [PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Har9, Tyr(Me)10, Orn12, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NHEt, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле Merrifield: Boc-Har(Tos)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(Me)-OH, Boc-Har(Tos)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием PhAc-OH.
Чтобы синтезировать пептид 56, который имеет химическую структуру [Hca-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Har9, Tyr(Me)10, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29, Har30]hGH-RH(1-30)NHEt, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле Merrifield: Boc-Har(Tos)-OH, Boc-Har(Tos)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(Me)-OH, Boc-Har(Tos)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием PhAc-OH.
Чтобы синтезировать пептид 97, который имеет химическую структуру [CH3(CH2)6CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Ala8, His9, Tyr(Et)10, His11, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NHEt, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле Merrifield: Boc-Har(Tos)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Tyr(Et)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием CH3(CH2)6COOH.
Чтобы синтезировать пептид 98, который имеет химическую структуру [CH3(CH2)8CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Ala8, His9, Tyr(Et)10, His11, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NHEt, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле Merrifield: Boc-Har(Tos)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Tyr(Et)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием CH3(CH2)8COOH.
Чтобы синтезировать пептид 99, который имеет химическую структуру [CH3(CH2)10CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Ala8, His9, Tyr(Et)10, His11, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NHEt, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле Merrifield: Boc-Har(Tos)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Tyr(Et)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием CH3(CH2)10COOH.
Чтобы синтезировать пептид 100, который имеет химическую структуру [Hca-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Ala8, His9, Tyr(Et)10, His11, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NHEt, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле Merrifield: Boc-Har(Tos)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Tyr(Et)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием Hca-OH.
Чтобы синтезировать пептид 101, который имеет химическую структуру [CH3(CH2)6CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Ala8, His9, Tyr(Et)10, His11, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NHMe, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле Merrifield: Boc-Har(Tos)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Tyr(Et)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием CH3(CH2)6COOH.
Чтобы синтезировать пептид 106, который имеет химическую структуру [CH3(CH2)6CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Ala8, His9, Tyr(Et)10, His11, Orn12, Abu15, His20, Orn21, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NHEt, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле Merrifield: Boc-Har(Tos)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2ClZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2ClZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Tyr(Et)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием CH3(CH2)6COOH.
Чтобы синтезировать пептид 110, который имеет химическую структуру [HOOC(CH2)12CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Ala8, His9, Tyr(Et)10, His11, Orn12, Abu15, His20, Orn21, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NHEt, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле Merrifield: Boc-Har(Tos)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2ClZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2ClZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Tyr(Et)-OH Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием CH3(CH2)6COOH.
Чтобы синтезировать пептид 113, который имеет химическую структуру [CH3(CH2)6CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Ala8, Amp9, Tyr(Et)10, His11, Orn12, Abu15, His20, Orn21, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NHEt, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле Merrifield: Boc-Har(Tos)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2ClZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2ClZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Tyr(Et)-OH, Boc-Amp-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием CH3(CH2)6COOH.
Чтобы синтезировать пептид 114, который имеет химическую структуру [CH3(CH2)6CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Ala8, His9, Dip10, His11, Orn12, Abu15, His20, Orn21, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NHEt, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле Merrifield: Boc-Har(Tos)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2ClZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2ClZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Dip-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием CH3(CH2)6COOH.
Чтобы синтезировать пептид 115, который имеет химическую структуру [CH3(CH2)6CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Ala8, His9, Phe(pNO2)10, His11, Orn12, Abu15, His20, Orn21, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NHEt, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле Merrifield: Boc-Har(Tos)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2ClZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2ClZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Phe(pNO2)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием CH3(CH2)6COOH.
Чтобы синтезировать пептид 118, который имеет химическую структуру [CH3(CH2)6CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Ala8, Amp9, Dip10, His11, Orn12, Abu15, His20, Orn21, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NHEt, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле Merrifield: Boc-Har(Tos)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2ClZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2ClZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Dip-OH, Boc-Amp-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием CH3(CH2)6COOH.
Чтобы синтезировать пептид 119, который имеет химическую структуру [CH3(CH2)6CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Ala8, Amp9, Phe(pNO2)10, His11, Orn12, Abu15, His20, Orn21, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NHEt, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле Merrifield: Boc-Har(Tos)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2ClZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2ClZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Phe(pNO2)-OH, Boc-Amp-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием CH3(CH2)6COOH.
Чтобы синтезировать пептид 120, который имеет химическую структуру [HOOC(CH2)12CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Ala8, Amp9, Dip10, His11, Orn12, Abu15, His20, Orn21, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NHEt, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле Merrifield: Boc-Har(Tos)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2ClZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2ClZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Dip-OH, Boc-Amp-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием CH3(CH2)12COOH.
Чтобы синтезировать пептид 121, который имеет химическую структуру [HOOC(CH2)12CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Ala8, Amp9, Phe(pNO2)10, His11, Orn12, Abu15, His20, Orn21, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NHEt, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле Merrifield: Boc-Har(Tos)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2ClZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2ClZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Phe(pNO2)-OH, Boc-Amp-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием CH3(CH2)12COOH.
Опосредованное этиламином отсоединение от смолы пептида 45, пептида 47, пептида 48, пептида 49, пептида 50, пептида 56, пептида 97, пептида 98, пептида 99, пептида 100, пептида 106, пептида 110, пептида 113, пептида 114, пептида 115, пептида 118, пептида 119, пептида 120 и пептида 121, а также опосредованное метиламином отсоединение от смолы пептида 101, последующее удаление защитных групп под действием HF и очистку способом полупрепаративной ВЭЖХ проводят по способу, описанному для пептида 46. По данным аналитической ВЭЖХ соединения оценивают как по существу (>95%) чистые. Молекулярную массу определяют способом масс-спектрометрии с электрораспылением, а ожидаемый аминокислотный состав подтверждают способом аминокислотного анализа.
Пример VI
Hca-Tyr1-D-Arg2-Asp3-Ala4-Ile-5-Phe(pCl)6-Thr7-Asns-Har9-Tyr(Me)10-Arg11-Lys12-Val13-Leu14-Abu15-Gln16-Leu17-Ser18-Ala19-Arg20-Lys21-Leu22-Leu23-Gln24-Asp25-Ile26-Nle27-D-Arg28-Har29-Agm30 (пептид 59)
{[Hca-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Har9, Tyr(Me)10, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29, Agm30]hGH-RH(1-30)}
Синтез проводят постадийно, используя оборудование для неавтоматизированного твердофазного синтеза пептидов. В данном синтезе исходным веществом является смола Boc-агматин-NG-сульфонил-феноксиацетил-MBHA (Boc-Agm-SPA-MBHA) с емкостью замещения 0,3 ммоль/г, которая поставляется California Peptide Research, Inc. (Napa, CA). Синтез данной смолы описан в патенте США № 4914189 и в научной литературе (Zarandi M, Serfozo P, Zsigo J, Bokser L, Janaky T, Olsen DB, Bajusz S, Schally AV, Int. J. Peptide Protein Res. 39: 211-217, 1992), указанные публикации включены в данное описание в качестве ссылки. Коротко говоря, смолу Boc-Agm-SPA-MBHA (1,67 г, 0,50 ммоль) заранее оставляют набухать в DCM и затем удаляют защитные группы и проводят нейтрализацию, используя способы, описанные в таблице I, чтобы удалить защитные группы Boc и подготовить конъюгат пептид-смола для присоединения следующей аминокислоты. Продолжают синтез, постадийно выстраивая пептидную цепь путем присоединения на смоле очередной защищенной аминокислоты в указанном порядке с получением целевой пептидной последовательности: Boc-Har(NO2)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(Me)-OH, Boc-Har(NO2)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH. Защищенные аминокислоты (по 1,5 ммоль каждой) подвергают реакции конденсации с использованием DIC (235 мкл, 1,5 ммоль), за исключением Boc-Asn-OH и Boc-Gln-OH, которые вступают в реакцию конденсации в виде заранее полученных эфиров HOBt. После удаления Nα-Boc-защитной группы с Tyr1 пептид ацилируют гидрокоричной кислотой (Hca-OH) (300 мг, 2 ммоль) с использованием DIC (313 мкл, 2 ммоль).
Чтобы отсоединить пептид от смолы и удалить защитные группы, 250 мг высушенного конъюгата пептид-смола перемешивают с 0,5 мл м-крезола и 5 мл фтористого водорода (HF) при 0°C в течение 2 часов. После упаривания HF в потоке азота и в вакууме остаток промывают сухим диэтиловым эфиром и этилацетатом. После отсоединения и удаления защитных групп пептид растворяют в 50% уксусной кислоте и отделяют от смолы фильтрацией. После разбавления водой и лиофилизации обычно получают 100-110 мг неочищенного продукта.
Пептид очищают способом полупрепаративной ВЭЖХ, а элюируемые фракции анализируют способом аналитической ВЭЖХ, как описано в примерах I-III. Фракции с чистотой выше 95% объединяют и лиофилизируют, получая 5-10 мг чистого пептида 59. Молекулярную массу определяют способом масс-спектрометрии с электрораспылением, а ожидаемый аминокислотный состав подтверждают способом аминокислотного анализа.
Пептид 51, пептид 52 и пептид 60 синтезируют по способу, описанному для пептида 59, за исключением того, что данные пептиды также содержат другие замены.
Чтобы синтезировать пептид 51, который имеет химическую структуру [Hca-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Har9, Tyr(Me)10, Abu15, Nle27, D-Arg28, Agm29]hGH-RH(1-29), нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле Boc-Agm-SPA-MBHA: Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(Me)-OH, Boc-Har(NO2)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием Hca-OH.
Чтобы синтезировать пептид 52, который имеет химическую структуру [PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Har9, Tyr(Me)10, Abu15, Nle27, D-Arg28, Agm29]hGH-RH(1-29), нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле Boc-Agm-SPA-MBHA: Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(Me)-OH, Boc-Har(NO2)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием PhAc-OH.
Чтобы синтезировать пептид 60, который имеет химическую структуру [PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Har9, Tyr(Me)10, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29, Agm30]hGH-RH(1-30), нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле Boc-Agm-SPA-MBHA: Boc-Har(NO2)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(Me)-OH, Boc-Har(NO2)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием PhAc-OH.
Отщепление под действием HF, удаление защитных групп и последующую очистку способом полупрепаративной ВЭЖХ для пептида 51, пептида 52 и пептида 60 проводят по способу, описанному для пептида 59. По данным аналитической ВЭЖХ очищенные соединения оценивают как по существу (>95%) чистые. Молекулярную массу определяют способом масс-спектрометрии с электрораспылением, а ожидаемый аминокислотный состав подтверждают способом аминокислотного анализа.
Пример VII
CH3(CH2)6CO-Tyr1-D-Arg2-Asp3-Ala4-Ile-5-Phe(pCl)6-Thr7-Asn8-Amp9-Tyr(lvle)10-Arg11-Lys12-Var13-Leu14-Abu15-Gln16-Leu17-Ser18-Ala19-Arg20-Lys21-Leu22-Leu23-Gln24-Asp25-Ile26-Nle27-D-Arg28-Har29-NH2 (пептид 70)
{[CH3(CH2)6CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Amp9, Tyr(Me)10, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2}
Все стадии синтеза перед присоединением N-концевого ацильного фрагмента к конъюгату пептид-смола проводят по способам, описанным в примере IV. После удаления Nα-Boc-защитной группы с остатка Tyr1 пептид (0,5 ммоль) ацилируют в течение ночи октановой кислотой [CH3(CH2)6COOH] (475 мкл, 3 ммоль) с использованием DIC (235 мкл, 1,5 ммоль) в качестве конденсирующего агента. Полученную пептидильную смолу, пока еще содержащую боковые защитные группы, промывают 3 раза DCM, 3 раза MeOH и сушат в высоком вакууме.
Затем конъюгат пептид-смола подвергают Pd(0)-катализируемому удалению защитной группы Alloc с остатка Amp9 пептидной цепи по способу, описанному в примере IV. Затем конъюгат пептид-смола промывают MeOH, сушат и проводят отщепление пептида под действием HF.
Отщепление пептида со смолы MBHA с одновременным удалением оставшихся защитных групп проводят путем обработки HF, как описано в примерах I-III. Затем проводят обработку и очистку ВЭЖХ по способам, описанным в примерах I-III. После HF-обработки 300 мг сухой пептидильной смолы получают 192 мг неочищенного лиофилизированного пептида, который очищают способом ВЭЖХ и получают 17,1 мг чистого пептида 70 (чистота >95% по данным аналитической ВЭЖХ). Молекулярную массу определяют способом масс-спектрометрии с электрораспылением, а ожидаемый аминокислотный состав подтверждают способом аминокислотного анализа.
Пептид 76, пептид 78, пептид 87, пептид 103, пептид 111 и пептид 112 синтезируют по способу, описанному для пептида 70, за исключением того, что данные пептиды также содержат другие замены.
Чтобы синтезировать пептид 76, который имеет химическую структуру [CH3(CH2)6CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Cit8, Amp9, Tyr(Me)10, His11, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO2)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Tyr(Me)-OH, Boc-Amp(Alloc)-OH, Boc-Cit-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием CH3(CH2)6COOH.
Чтобы синтезировать пептид 78, который имеет химическую структуру [CH3(CH2)6CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Cit8, Amp9, Tyr(Et)10, His11, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO2)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Tyr(Et)-OH, Boc-Amp(Alloc)-OH, Boc-Cit-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием CH3(CH2)6COOH.
Чтобы синтезировать пептид 87, который имеет химическую структуру [CH3(CH2)6CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Ala8, Amp9, Tyr(Et)10, His11, Abu15, His20, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO2)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Tyr(Et)-OH, Boc-Amp(Alloc)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием CH3(CH2)6COOH.
Чтобы синтезировать пептид 103, который имеет химическую структуру [CH3(CH2)6CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Ala8, Amp9, Tyr(Et)10, His11, Orn12, Abu15, His20, Orn21, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO2)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2ClZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2ClZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Tyr(Et)-OH, Boc-Amp(Alloc)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием CH3(CH2)6COOH.
Чтобы синтезировать пептид 111, который имеет химическую структуру [CH3(CH2)6CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Ala8, Amp9, Dip10, His11, Orn12, Abu15, His20, Orn21, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO2)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2ClZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2ClZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Dip-OH, Boc-Amp(Alloc)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием CH3(CH2)6COOH.
Чтобы синтезировать пептид 112, который имеет химическую структуру [CH3(CH2)6CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Ala8, Amp9, Phe(pNO2)10, His11, Orn12, Abu15, His20, Orn21, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO2)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2ClZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2ClZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Phe(pNO2)-OH, Boc-Amp(Alloc)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием CH3(CH2)6COOH.
Отсоединение от смолы, удаление защитных групп и последующую очистку способом полупрепаративной ВЭЖХ для пептида 76, пептида 78, пептида 87, пептида 103, пептида 111 и пептида 112 проводят по способу, описанному для пептида 70. По данным аналитической ВЭЖХ очищенные соединения оценивают как по существу (>95%) чистые. Молекулярную массу определяют способом масс-спектрометрии с электрораспылением, а ожидаемый аминокислотный состав подтверждают способом аминокислотного анализа.
Пример VIII
HOOC(CH2)12CO-Tyr1-D-Arg2-Asp3-Ala4-Ile-5-Phe(pCl)6-Thr7-Asn8-Amp9-Tyr(Me)10-Arg11-Lys12-Val13-Leu14-Abu15-Gln16-Leu17-Ser18-Ala19-Arg20-Lys21-Leu22-Leu23-Gln24-Asp25-Ile26-Nle27-D-Arg28-Har29-NH2 (пептид 72)
{[COOH(CH2)12CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Amp9, Tyr(Me)10, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2}
Все стадии синтеза перед присоединением N-концевого ацильного фрагмента к конъюгату пептид-смола проводят по способам, описанным в примере IV. После удаления Nα-Boc-защитной группы с остатка Tyr1 пептид (0,5 ммоль) ацилируют симметричным ангидридом 1,12-додекандикарбоновой кислоты, который получают заранее следующим способом. Для синтеза 0,5 ммоль пептида, 388 мг (1,5 ммоль) 1,12-додекандикарбоновой кислоты [HOOC(CH2)12COOH] растворяют в 5-10 мл смеси DMF-DCM (1:1), к полученному раствору добавляют 235 мкл (1,5 ммоль) DIC, и смесь оставляют стоять при комнатной температуре в течение 30 минут. Затем смесь переносят в сосуд для синтеза, содержащий конъюгат пептид-смола со свободным аминоконцом на Tyr1, и проводят ацилирование в течение ночи. Полученную пептидильную смолу, пока еще содержащую боковые защитные группы, промывают 3 раза DCM, 3 раза MeOH и сушат в высоком вакууме.
Затем конъюгат пептид-смола подвергают Pd(0)-катализируемому удалению защитной группы Alloc с остатка Amp9 пептидной цепи по способу, описанному в примере IV. Затем конъюгат пептид-смола промывают MeOH, сушат и проводят отщепление пептида под действием HF.
Отщепление пептида со смолы MBHA с одновременным удалением оставшихся защитных групп проводят путем обработки HF, как описано в примерах I-III. Затем проводят обработку и очистку ВЭЖХ по способам, описанным в примерах I-III. После HF-обработки 150 мг сухой пептидильной смолы получают 82 мг неочищенного лиофилизированного пептида, который очищают способом ВЭЖХ и получают 2,5 мг чистого пептида 72 (чистота >95% по данным аналитической ВЭЖХ). Молекулярную массу определяют способом масс-спектрометрии с электрораспылением, а ожидаемый аминокислотный состав подтверждают способом аминокислотного анализа.
Пептид 71, пептид 77, пептид 89, пептид 107, пептид 116 и пептид 117, синтезируют по способу, описанному для пептида 72, за исключением того, что данные пептиды также содержат другие замены.
Чтобы синтезировать пептид 71, который имеет химическую структуру [HOOC(CH2)8CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Amp9, Tyr(Me)10, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO2)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(Me)-OH, Boc-Amp(Alloc)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием CH3(CH2)8COOH.
Чтобы синтезировать пептид 77, который имеет химическую структуру [HOOC(CH2)12CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Cit8, Amp9, Tyr(Me)10, His11, Abu15, Nle27, D-Arg28 Har29]hGH-RH(1-29)NH2, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO2)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Tyr(Me)-OH, Boc-Amp(Alloc)-OH, Boc-Cit-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием CH3(CH2)12COOH.
Чтобы синтезировать пептид 89, который имеет химическую структуру [HOOC(CH2)12CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Ala8, Amp9, Tyr(Et)10, His11, Abu15, His20, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO2)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Tyr(Et)-OH, Boc-Amp(Alloc)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием CH3(CH2)12COOH.
Чтобы синтезировать пептид 107, который имеет химическую структуру [HOOC(CH2)12CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Ala8, Amp9, Tyr(Et)10, His11, Orn12, Abu15, His20, Orn21, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO2)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2ClZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2ClZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Tyr(Et)-OH, Boc-Amp(Alloc)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием CH3(CH2)12COOH.
Чтобы синтезировать пептид 116, который имеет химическую структуру [HOOC(CH2)12CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Ala8, Amp9, Dip10, His11, Orn12, Abu15, His20, Orn21, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO2)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2ClZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2ClZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Dip-OH, Boc-Amp(Alloc)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием CH3(CH2)12COOH.
Чтобы синтезировать пептид 117, который имеет химическую структуру [HOOC(CH2)12CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Ala8, Amp9, Phe(pNO2)10, His11, Orn12, Abu15, His20, Orn21, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, нижеследующие защищенные аминокислоты соединяют в указанном порядке на смоле MBHA: Boc-Har(NO2)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2ClZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2ClZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Phe(pNO2)-OH, Boc-Amp(Alloc)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCl)-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, с последующим ацилированием CH3(CH2)12COOH.
Отсоединение от смолы, удаление защитных групп и последующую очистку способом полупрепаративной ВЭЖХ для пептида 71, пептида 77, пептида 89, пептида 107, пептида 116 и пептида 117 проводят по способу, описанному для пептида 72. По данным аналитической ВЭЖХ очищенные соединения оценивают как по существу (>95%) чистые. Молекулярную массу определяют способом масс-спектрометрии с электрораспылением, а ожидаемый аминокислотный состав подтверждают способом аминокислотного анализа.
Пример IX
Водный раствор для внутримышечных инъекций
[PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Amp9, Tyr(Me)10, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2
(пептид 67) | 500 мг |
Желатин неантигенный | 5,0 мг |
Вода для инъекций q.s. | до 100 мл |
Желатин и антагонист GH-RH, пептид 67, растворяют в воде для инъекций, после чего раствор фильтруют в стерильных условиях.
Пример X
Композиция для внутримышечных инъекций длительного действия (гель на кунжутном масле)
[CH3(CH2)6CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Ala8, His9, Tyr(Et)10, His11, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2
(пептид 80) | 10,0 мг |
Моностеарат алюминия USP | 20,0 мг |
Кунжутное масло q.s. | до 1,0 мл |
Моностеарат алюминия объединяют с кунжутным маслом и нагревают при 125°C при перемешивании до получения прозрачного желтого раствора. Полученную смесь стерилизуют автоклавированием и оставляют охлаждаться. Затем в асептических условиях добавляют антагонист GH-RH, пептид 80, и гомогенизируют. Особенно предпочтительны низкорастворимые соли, например, памоаты и т.п. Они обеспечивают активность в течение длительного периода времени.
Пример XI
Биоразрушаемые полимерные микрокапсулы для внутримышечных (в.м.) инъекций длительного действия
Микрокапсулы содержат:
25/75 гликолид/лактидного сополимера (характеристическая вязкость 0,5) - 99%,
[СН3(СН2)6СО-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Ala8, His9, Tyr(Et)10, His11, Orn12, Abu15, His20, Orn21, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2 (пептид 96) - 1%.
25 мг вышеуказанных микрокапсул суспендируют в 1,0 мл среды, имеющей следующий состав:
Декстроза | 5,0% |
CMC натрия | 0,5% |
Бензиловый спирт | 0,9% |
Твин 80 | 0,1% |
Очищенная вода, q.s. | 100% |
Пример XII
Эндокринный и онкологический анализ биологической активности
Анализируют способность пептидов настоящего изобретения ингибировать высвобождение GH, вызываемое hGH-RH(1-29)NH2 in vitro и in vivo. Также измеряют связывающее сродство соединений к опухолевым рецепторам GH-RH. Противоопухолевую активность пептидов и ингибирующее действие пептидов на уровень сывороточного IGF-I и на систему опухолевого IGF оценивают на различных моделях рака in vivo.
Система с суперфузией клеток гипофиза крысы
Аналоги анализируют in vitro по описанному ранее способу (S. Vigh and A. V Schally, Peptides 5: 241-347, 1984) с модификациями (Z. Rekasi and A. V. Schally, P. N. A. S. 90: 2146-2149, 1993).
Коротко говоря, клетки предварительно инкубируют с разными концентрациями пептидов в течение 9 минут (3 мл). Сразу после инкубации вводят 1 нМ hGH-RH(1-29)NH2 в течение 3 минут (1 мл) [ответ 0 минут]. Чтобы определить длительность антагонистического действия аналога, 1 нМ hGH-RH(1-29)NH2 вводят спустя 30, 60, 90 и 120 минут в течение 3 минут [ответ через 30, 60, 90, 120 минут]. Оценивают фактические цельночисленные значения GH-ответов. GH-ответы сравнивают и выражают в виде процентов от первоначального GH-ответа, индуцированного 1 нМ GH-RH(1-29)NH2. Действие новых антагонистов сравнивают с действием "стандартного антагониста" [Ac-Tyr1, D-Arg2]hGH-RH(1-29)NH2.
Радиоиммунологический анализ (RIA) GH, IGF-I и IGF-II
Уровни крысиного GH в аликвотах неразбавленных и разбавленных суперфузионных образцов измеряют с помощью радиоиммунологического анализа способом двойных антител с использованием веществ, поставляемых National Hormone and Pituitary Program, Baltimore, Maryland. Результаты RIA анализируют с помощью компьютерной программы, разработанной в институте авторов данного изобретения V. Csernus and A. V. Schally. in Neuroendocrine Research Methods, Harwood Academic (Greenstein, B. D. ed., London, pp. 71-109,1991), данная публикация включена в настоящее описание в качестве ссылки.
Чтобы определить уровни GH и IGF-I в сыворотке, а также концентрации IGF-I и IGF-II в цитозольных фракциях опухолей, собирают образцы крови и образцы опухолей и обрабатывают их по способу, описанному в литературе (Braczkowski R, Schally AV, Plonowski A, Varga JL, Groot K, Krupa M, Armatis P, Cancer 95: 1735-1745, 2002), данная публикация включена в настоящее описание в качестве ссылки. Коротко говоря, образцы крови центрифугируют, чтобы отделить сыворотку, а опухоли гомогенизируют и центрифугируют, чтобы отделить цитозольную фракцию. Затем измеряют уровень GH в сыворотке способом RIA с использованием двойных антител. Перед измерением способом RIA IGF-I и IGF-II экстрагируют из сыворотки и цитозольных фракций способом кислотно-этанольной криопреципитации, который позволяет устранить большую часть белков, связывающих IGF и мешающих при проведении RIA. Концентрацию IGF-I измеряют способом RIA, используя IGF-I в качестве стандарта и козьи антитела против IGF-I (и то и другое поставляется DSL Inc., Webster, TX). Концентрацию IGF-II измеряют способом RIA, используя человеческий рекомбинантный IGF-II (Bachem) в качестве стандарта и моноклональные антитела против IGF-II (Amano International Enzyme, Troy, VA).
Во всех анализах RIA вариации в пределах одного анализа составляют менее 15%, а вариации среди разных анализов не превышают 10%.
Анализ связывания опухолевого рецептора GH-RH
С помощью лигандного конкурентного анализа с использованием 125I-меченного антагониста GH-RH JV-1-42 определяют связывающее сродство аналогов GH-RH к изоформам рецептора GH-RH, присутствующим в мембранных фракциях опухолей простаты человека PC-3. Используемые способы подробно описаны в литературе (Halmos G, Schally AV, Varga JL, Plonowski A, Rekasi Z, Czompoly T, Proc Natl Acad Sci USA 97: 10555-10560, 2000; Halmos G, Schally AV, Czompoly T, Krupa M, Varga JL, Rekasi Z, J Clin Endocrinol Metab 87:4707-4714, 2002), указанные публикации включены в данное описание в качестве ссылки. Коротко говоря, меченные радиоактивным йодом производные JV-1-42 получают с использованием хлорамина-T. Для получения неочищенных мембран используют опухоли PC-3, выращенные как ксенотрансплантаты у голых мышей are. Мембранные гомогенаты PC-3 инкубируют с [125I]JV-1-42 и увеличивающимися концентрациями (от 10-12 до 10-6 M) нерадиоактивных пептидов-антагонистов в качестве конкурирующих соединений. Осадок отделяют центрифугированием и радиоактивность считают в гамма-счетчике. Полученное сродство связывания оценивают по Ki (константа диссоциации комплекса ингибитор-рецептор) и определяют с помощью компьютерных программ Ligand PC и McPherson Munson and Rodbard (P. J. Munson and D. Rodbard, Anal. Biochem. 107: 220-239, 1980). Относительное сродство (R.A.), определенное путем сравнения с пептидами отнесения, такими как JV-1-36 или JV-1-38, рассчитывают как отношение Ki пептида отнесения к Ki анализируемого антагониста GH-RH.
Результаты суперфузионных анализов
Результаты анализа антагонистической активности in vitro на системе с суперфузией клеток гипофиза крысы приведены в таблице III. Как видно из полученных данных, произведенные в молекуле замены приводят к усилению и продлению ингибиторного действия на высвобождение GH, вызванное GH-RH in vitro, по сравнению со стандартным антагонистом.
Таблица III
Ингибирование высвобождения GH на системе с суперфузией клеток гипофиза крысы |
||||||
Антагонист | Доза (нМ) | GH-ответ (% от контроля) | ||||
0 мин | 30 мин | 60 мин | 90 мин | 120 мин | ||
Стандартный антагонист | 100 | 38 | 98 | 81 | ||
JV-1-36* | 30 | 36 | 21 | 25 | 29 | 29 |
10 | 80 | 42 | 60 | 64 | 85 | |
JV-1-38* | 30 | 59 | 32 | 28 | 34 | 31 |
Пептид 2 | 30 | 18 | 13 | 18 | 25 | 51 |
Пептид 3 | 30 | 52 | 61 | 56 | 70 | 149 |
Пептид 4 | 30 | 5 | 0 | 12 | 8 | 18 |
Пептид 5 | 30 | 22 | 20 | 23 | 27 | 27 |
Пептид 6 | 30 | 56 | 22 | 12 | 15 | 19 |
Пептид 7 | 30 | 23 | 13 | 11 | 14 | 14 |
Пептид 8 | 30 | 37 | 31 | 48 | 44 | 40 |
Пептид 9 | 30 | 47 | 43 | 66 | 63 | 58 |
Пептид 10 | 30 | 60 | 30 | 36 | 37 | 44 |
Пептид 11 | 30 | 14 | 24 | 29 | 34 | 32 |
Пептид 12 | 30 | 35 | 30 | 35 | 51 | 43 |
Пептид 13 | 30 | 87 | 77 | 76 | 71 | 73 |
Пептид 15 | 30 | 28 | 13 | 11 | 36 | 21 |
Пептид 16 | 30 | 40 | 62 | 78 | 73 | 61 |
Пептид 17 | 30 | 29 | 51 | 68 | 73 | 61 |
Пептид 18 | 30 | 21 | 71 | 61 | 75 | 63 |
Пептид 19 | 30 | 62 | 64 | 66 | 82 | 74 |
Пептид 21 | 30 | 0 | 13 | 33 | 43 | 37 |
Пептид 22 | 30 | 22 | 26 | 27 | 45 | Н.О. |
Пептид 23 | 30 | 55 | 40 | 41 | 47 | 41 |
Пептид 24 | 30 | 56 | 13 | 18 | 34 | 60 |
Пептид 26 | 30 | 20 | 43 | 66 | 48 | 44 |
Пептид 27 | 30 | 19 | 15 | 23 | 23 | 61 |
Пептид 28 | 30 | 68 | 7 | 8 | 20 | 34 |
Пептид 30 | 30 | 18 | 11 | 7 | 7 | 8 |
Пептид 30 | 10 | 60 | 24 | 34 | 32 | 53 |
Пептид 31 | 30 | 7 | 1 | 2 | 4 | 3 |
Пептид 31 | 10 | 57 | 31 | 37 | 36 | 37 |
Пептид 32 | 30 | 28 | 43 | 69 | 76 | Н.О. |
Пептид 33 | 30 | 97 | 89 | 78 | 97 | 82 |
Пептид 35 | 30 | 91 | 57 | 80 | 66 | 72 |
Пептид 36 | 30 | 104 | 90 | 112 | 97 | 120 |
Пептид 37 | 30 | 33 | 12 | 15 | 15 | 19 |
Пептид 39 | 30 | 63 | 54 | 36 | 37 | 36 |
Пептид 40 | 30 | 42 | 29 | 26 | 36 | 30 |
Пептид 41 | 30 | 47 | 16 | 14 | 15 | 16 |
Пептид 42 | 30 | 52 | 7 | 9 | 8 | 13 |
Пептид 43 | 30 | 82 | 74 | 102 | 72 | 51 |
Пептид 45 | 30 | 91 | 100 | 100 | 100 | 99 |
Пептид 45 | 30 | 100 | 100 | 100 | Н.О. | Н.О. |
Пептид 46 | 30 | 91 | 28 | 31 | 56 | 30 |
Пептид 48 | 30 | 22 | 21 | 44 | 44 | 47 |
Пептид 49 | 30 | 83 | 76 | 90 | 87 | 120 |
Пептид 50 | 30 | 57 | 65 | 69 | 74 | 67 |
Пептид 51 | 30 | 64 | 36 | 31 | Н.О. | Н.О. |
Пептид 51 | 30 | 52 | 43 | 57 | 56 | 58 |
Пептид 51 | 30 | 87 | 35 | 46 | 51 | 61 |
Пептид 52 | 30 | 86 | 13 | 45 | 26 | 55 |
Пептид 53 | 30 | 43 | 42 | 40 | 36 | 46 |
Пептид 55 | 30 | 93 | 63 | 96 | 61 | 93 |
Пептид 56 | 30 | 76 | 83 | 92 | 80 | 68 |
Пептид 58 | 30 | 78 | 53 | 56 | 47 | Н.О. |
Пептид 58 | 30 | 94 | 53 | 57 | 64 | 64 |
Пептид 58 | 30 | 64 | 41 | 59 | 50 | 69 |
Пептид 59 | 30 | 72 | 49 | 46 | 38 | Н.О. |
Пептид 59 | 30 | 61 | 50 | 48 | 47 | Н.О. |
Пептид 59 | 30 | 93 | 43 | 60 | 57 | 76 |
Пептид 59 | 30 | 47 | 27 | 37 | 44 | 47 |
Пептид 60 | 30 | 73 | 27 | 34 | 56 | 42 |
Пептид 60 | 30 | 87 | 29 | 65 | 36 | 63 |
Пептид 62 | 30 | 20 | 16 | 14 | 21 | 21 |
Пептид 63 | 30 | 53 | 47 | 49 | 51 | Н.О. |
Пептид 64 | 30 | 59 | 54 | 70 | 50 | 56 |
Пептид 65 | 30 | 67 | 80 | 89 | 97 | 79 |
Пептид 67 | 30 | 28 | 15 | 18 | 20 | 23 |
Пептид 68 | 30 | 37 | 22 | 33 | 29 | 33 |
Пептид 69 | 30 | 9 | 12 | 18 | 18 | 25 |
* - соединения отнесения, описанные в патенте США 6057422 |
Результаты анализа связывания опухолевого рецептора GH-RH
Как видно из таблицы IV и таблицы V, соответственно, производимые в молекулах замены вызывают значительное увеличение сродства связывания с изоформами рецептора GH-RH, присутствующими на мембранах опухолей PC-3, по сравнению со сродством связывания соединений отнесения.
Таблица IV
Относительное сродство (R.A.) антагонистов GH-RH к мембранным рецепторам раковых тканей простаты человека PC-3 |
|
Пептиды | R.A. |
JV-1-36* | 1 |
Пептид 11 | 1,3 |
Пептид 6 | 0,6 |
Пептид 7 | 12 |
Пептид 4 | 53 |
Пептид 5 | 4 |
Пептид 22 | 10 |
Пептид 43 | 0,09 |
* - соединения отнесения, описанные в патенте США 6057422 |
Таблица V
Относительное сродство (R.A.) антагонистов GH-RH к мембранным рецепторам раковых тканей простаты человека PC-3 |
|
Пептиды | R.A. |
JV-1-38* | 1 |
Пептид 31 | 0,2 |
Пептид 36 | 11 |
Пептид 41 | 5 |
Пептид 42 | 0,6 |
Пептид 62 | 62 |
Пептид 67 | 71 |
Пептид 69 | 59 |
* - соединения отнесения, описанные в патенте США 6057422 |
Влияние антагонистов GH-RH на ксенотрансплантаты рака
простаты человека PC-3 у голых мышей
Эксперимент 1
Самцам голых мышей с обоих боков имплантируют п.к. кусочки ткани, размером 3 мм3, гормон-независимого рака простаты человека PC-3. Когда опухоли достигают объема приблизительно 50 мм3, мышей разделяют на 5 экспериментальных групп по 7-8 животных в каждой и в течение 28 дней один раз в день им вводят следующие соединения: 1. Контроль (среда); 2. JV-1-38 (10 мкг/день п.к.); 3. Пептид 31 (10 мкг/день п.к.); 4. Пептид 67 (10 мкг/день п.к.); 5. Пептид 62 (10 мкг/день п.к.). Объемы опухолей измеряют два раза в неделю. Эксперимент заканчивают на 29 день, умерщвляя мышей под анестезией изофлураном. Полученные опухоли промывают, взвешивают и быстро замораживают до следующих анализов. Артериальную кровь собирают из брюшной аорты и разделяют для измерения IGF-I способом RIA. Статистический анализ результатов измерения проводят с помощью двустороннего t-теста; данные представлены как среднее значение ± S.E.
Эксперимент 2
Эксперимент 2 проводят так же, как и эксперимент 1, с тем отличием, что эксперимент 2 начинают, когда объем опухолей PC-3 достигнет приблизительно 30 мм3. В данный момент животных разделяют на 8 групп по 8 животных в каждой, и в течение 28 дней один раз в день им вводят следующие соединения: 1. Контроль (среда); 2. JV-1-38 (10 мкг/день п.к.); 3. Пептид 46 (5 мкг/день п.к.); 4. Пептид 77 (5 мкг/день п.к.); 5. Пептид 76 (5 мкг/день п.к.); 6. Пептид 70 (5 мкг/день п.к.); 7. Пептид 79 (5 мкг/день п.к.); 8. Пептид 80 (5 мкг/день п.к.). Остальные процедуры в эксперименте 2 проводят так же, как и в эксперименте 1.
Эксперимент 3
Самцам голых мышей с обоих боков имплантируют п.к. кусочки ткани, размером 3 мм3, гормон-независимого рака простаты человека PC-3. Когда опухоли достигают объема приблизительно 65 мм3, мышей разделяют на 7 экспериментальных групп по 8-9 животных в каждой и в течение 28 дней один раз в день им вводят следующие соединения: 1. Контроль (среда); 2. JV-1-38 (10 мкг/день п.к.); 3. Пептид 35 (10 мкг/день п.к.); 4. Пептид 36 (10 мкг/день п.к.); 5. Пептид 37 (10 мкг/день п.к.); 6. Пептид 39 (10 мкг/день п.к.); 7. Пептид 41 (10 мкг/день п.к.). Объемы опухолей измеряют два раза в неделю. Эксперимент заканчивают на 28 день, умерщвляя мышей под анестезией изофлураном. Полученные опухоли промывают, взвешивают и быстро замораживают до следующих анализов. Артериальную кровь собирают из брюшной аорты и разделяют для измерения IGF-I способом RIA. Статистический анализ результатов измерения проводят с помощью ANOVA и затем теста Фишера; данные представлены как среднее значение ± S.E.
Эксперимент 4
Эксперимент 4 проводят так же, как и эксперимент 3, но со следующим отличием. Когда объем опухолей PC-3 достигнет приблизительно 55 мм3, мышей разделяют на 5 экспериментальных групп по 8-9 животных в каждой, и в течение 28 дней один раз в день им вводят следующие соединения:: 1. Контроль (среда); 2. Пептид 80 (5 мкг/день п.к.); 3. Пептид 86 (5 мкг/день п.к.); 4. Пептид 95 (5 мкг/день п.к.); 5. Пептид 96 (5 мкг/день п.к.). Остальные процедуры в эксперименте 4 проводят так же, как и в эксперименте 3.
Результаты
Эксперимент 1
Из анализируемых антагонистов GH-RH пептид 67 и пептид 62 сильнее ингибируют рост опухолей PC-3, чем пептид отнесения JV-1-38, описанный в патенте США 6057422 (таблица VI). Пептиды настоящего изобретения также эффективнее подавляют уровни IGF-I в сыворотке и уровни IGF-II в опухолях по сравнению с JV-1-38 (таблица VII).
Таблица VI
Эксперимент 1: Влияние антагонистов GH-RH на ксенотрансплантаты рака простаты человека PC-3 у голых мышей |
||||
Группа | Объем опухоли (мм3) | Масса опухоли (мг) (% ингибирования) | Время удвоения объема опухоли (дни) | |
Начальный | Конечный (% ингибирования) | |||
Контроль | 50,0±7,86 | 501±111 | 378±84,0 | 8,97±0,71 |
JV-1-38 | 49,2±8,37 | 291±80,4 (42%) |
239±58,0 (37%) |
12,3±1,04* |
Пептид 31 | 49,1±12,5 | 363±92,8 (28%) |
237±53,3 (37%) |
14,0±2,69 |
Пептид 67 | 46,8±8,11 | 200±39,5* (60%) | 150±22,1* (60%) |
17,0±3,51* |
Пептид 62 | 56,1±18,2 | 215±50,4 (57%) |
199±51,7 (47%) |
18,4±4,96* |
*p<0,05 при сравнении с контролем. |
Таблица VII
Эксперимент 1: Влияние антагонистов GH-RH на уровень IGF-I в сыворотке и на концентрацию IGF-II в опухоли голых мышей, несущих ксенотрансплантаты рака простаты человека PC-3 |
||
Группа | Сывороточный IGF-I (нг/мл) (% ингибирования) | Опухолевый IGF-II (пг/мг белка) (% ингибирования) |
Контроль | 149±10,4 | 219±64,7 |
JV-1-38 | 147±8,49 (1%) |
208±43,3 (5%) |
Пептид 31 | 133±16,7 (11%) |
130±56,0 (41%) |
Пептид 67 | 128±10,6 (14%) |
139±69,2 (37%) |
Пептид 62 | 141±8,86 (5%) |
Н.И. |
Н.И. - не исследовали |
Эксперимент 2
Пептид 46, пептид 77, пептид 76, пептид 70, пептид 79 и пептид 80 настоящего изобретения, используемые в дозе 5 мкг/день, уменьшают объем и массу опухоли рака PC-3 на 20-64%, и увеличивают время удвоения объема опухоли до 101% по сравнению с контрольным значением (таблица VIII). Эффекты пептида 77, пептида 70, пептида 79 и пептида 80 были статистически значимыми по одному или нескольким из указанных опухолевых параметров. Напротив, пептид отнесения JV-1-38, описанный в патенте США 6057422, не уменьшает объем опухоли, а только вызывает легкое и незначительное ингибирование, порядка 10%, массы опухолей PC-3 при использовании в двойной дозе, 10 мкг/день (таблица VIII). Кроме того, пептид 70, пептид 79 и пептид 80 настоящего изобретения снижают уровень IGF-I в сыворотке на 31-42%, а пептид JV-1-38 не оказывает влияния на данный параметр (таблица IX).
Таблица VIII
Эксперимент 2: Влияние антагонистов GH-RH на ксенотрансплантаты рака простаты человека PC-3 у голых мышей |
||||
Группа | Объем опухоли (мм3) | Масса опухоли (мг) (% ингибирования) |
Время удвоения объема опухоли (дни) | |
Начальный | Конечный (% ингибирования) |
|||
Контроль | 28,4±4,2 | 351±84,9 | 283±72,1 | 8,3±0,7 |
JV-1-38 | 29,3±3,8 | 351±72,9 (0%) |
254±52,0 (10%) |
8,7±0,7 |
Пептид 46 | 26,6±2,7 | 246±93,7 (30%) |
188±66,1 (34%) |
11,2±1,3 |
Пептид 77 | 27,2±3,2 | 192±44,1 (45%) |
138±34,3 (51%) |
10,7±0,8* |
Пептид 76 | 26,8±3,4 | 232±30,8 (34%) |
226±48,3 (20%) |
9,4±0,6 |
Пептид 70 | 26,5±3,7 | 199±40,4*# (43%) |
119±25,3*# (58%) |
12,6±2,5 |
Пептид 79 | 29,1±4,3 | 139±49,4*# (60%) |
153±54,5 (46%) |
13,6±1,8*# |
Пептид 80 | 24,8±2,2 | 128±38,9*# (64%) |
137±46,1* (52%) |
16,7±4,3*# |
*p<0,05 при сравнении с контролем, #p<0,05 при сравнении с JV-1-38. |
Таблица IX
Эксперимент 2: Влияние антагонистов GH-RH на уровень IGF-I в сыворотке голых мышей, несущих ксенотрансплантаты рака простаты человека PC-3 |
||
Группа | Сывороточный IGF-I (нг/мл) | (% ингибирования) |
Контроль | 262±18,1 | |
JV-1-38 | 293±28,0 | 0% |
Пептид 46 | 288±17,9 | 0% |
Пептид 77 | 276±16,8 | 0% |
Пептид 76 | 260±29,7 | 1% |
Пептид 70 | 175±12,9*** | 33% |
Пептид 79 | 181±19,8** | 31% |
Пептид 80 | 152±7,83*** | 42% |
**p<0,01 при сравнении с контролем, ***p<0,001 при сравнении с контролем. |
Эксперимент 3
Все анализируемые пептиды значительно ингибируют рост опухолей PC-3 в дозе 10 мкг/день. Пептид 35, пептид 36 и пептид 39 обладают более мощным противоопухолевым действием, чем пептид отнесения JV-1-38 (таблица X).
Таблица X
Эксперимент 3: Влияние антагонистов GH-RH на ксенотрансплантаты рака простаты человека PC-3 у голых мышей |
||||
Группа | Объем опухоли (мм3) | Масса опухоли (мг) (% ингибирования) |
Время удвоения объема опухоли (дни) | |
Начальный | Конечный (% ингибирования) | |||
Контроль | 71,1±10,5 | 678±172 | 700±152 | 10,6±0,96 |
JV-1-38 | 68,3±8,08 | 276±48,7** (66%) |
386±62,9* (45%) |
18,2±1,84 |
Пептид 35 | 65,7±11,3 | 261±52,9** (68%) |
286±58,9* (59%) |
17,0±2,32 |
Пептид 36 | 68,0±11,7 | 214±72,6** (76%) |
361±89,6* (48%) |
18,7±3,83 |
Пептид 37 | 60,0±13,0 | 323±68,0* (57%) |
440±104 (37%) |
12,7±2,03 |
Пептид 39 | 66,7±11,2 | 271±109** (66%) |
247±55,4* (65%) |
19,6±2,10 |
Пептид 41 | 66,7±12,5 | 341±107* (54%) |
579±188 (17%) |
28,2±9,85 |
*p<0,05 при сравнении с контролем, **p<0,01 при сравнении с контролем. |
Эксперимент 4
Все четыре пептида, вводимые в дозе 5 мкг/день, значительно ингибируют рост опухолей PC-3 у голых мышей. В данном эксперименте самым сильным противоопухолевым действием обладает пептид 96 (таблица XI). Во всех группах, обрабатываемых антагонистами, также снижаются сывороточные уровни IGF-I, причем эффекты, оказываемые пептидом 86 и пептидом 96, являются статистически значимыми (таблица XII).
Таблица XI
Эксперимент 4: Влияние антагонистов GH-RH на ксенотрансплантаты рака простаты человека PC-3 у голых мышей |
||||
Группа | Объем опухоли (мм3) | Масса опухоли (мг) (% ингибирования) |
Время удвоения объема опухоли (дни) | |
Начальный | Конечный (% ингибирования) |
|||
Контроль | 56,3±10,8 | 1137±351 | 1451±343 | 7,3±0,52 |
Пептид 80 | 53,2±10,1 | 398±68,7* 68% |
752±150* 48% |
10,7±1,28* |
Пептид 86 | 56,1±8,67 | 397±71,8* 68% |
643±94,9** 56% |
12,1±1,40** |
Пептид 95 | 60,9±12,2 | 393±79,8* 69% |
666±131* 54% |
12,5±1,80* |
Пептид 96 | 56,2±13,3 | 301±65,2** 77% |
489±114** 66% |
11,0±0,87** |
*p<0,05 при сравнении с контролем, **p<0,01 при сравнении с контролем. |
Таблица XII
Эксперимент 4: Влияние антагонистов GH-RH на уровень IGF-I в сыворотке голых мышей, несущих ксенотрансплантаты рака простаты человека PC-3 |
||
Группа | Сывороточный IGF-I (нг/мл) | (% ингибирования) |
Контроль | 165±10,2 | |
Пептид 80 | 136±15,3 | 18% |
Пептид 86 | 118±8,94* | 28% |
Пептид 95 | 127±17,5 | 23% |
Пептид 96 | 114±15,5* | 31% |
*p<0,05 при сравнении с контролем |
Влияние антагонистов GH-RH на ксенотрансплантаты рака толстой кишки человека HT-29 у голых мышей
Ткани рака толстой кишки человека HT-29 трансплантируют п.к. самцам голых мышей. Через 19 дней после трансплантации мышей разделяют на две группы по 10 животных в каждой и начинают обработку. Мышам опытной группы в течение 62 дней один раз в день подкожно водят пептид 67 в дозе 10 мкг/день, а мышам контрольной группы вводят среду. Регулярно измеряют размеры опухолей и рассчитывают их объем. В конце эксперимента мышей умерщвляют и измеряют массу опухолей.
Результаты
Обработка пептидом 67 в течение 62 дней вызывает значительное уменьшение объема, на 56,3%, и массы, на 53,9%, опухолей HT-29 у голых мышей по сравнению с контрольной группой (таблица XIII).
Таблица XIII
Влияние антагониста GH-RH, пептида 67, на ксенотрансплантаты рака толстой кишки человека HT-29 у голых мышей |
||
Группа | Конечный объем опухоли (мм3) | Масса опухоли (мг) |
Контроль | 2792±643 | 3112±543 |
Пептид 67 | 1218±320* | 1434±405* |
*p<0,05 при сравнении с контролем |
Влияние антагонистов GH-RH на ксенотрансплантаты мелкоклеточной карциномы легких (SCLC) человека DMS-153 у голых мышей
Самцам голых мышей имплантируют п.к. кусочки ткани SCLC человека DMS-153, размером 3 мм3. Когда опухоли достигают объема приблизительно 100 мм3, мышей разделяют на 3 экспериментальные группы по 6-8 животных в каждой и вводят им в течение 6 недель следующие соединения: группа 1 (контроль), среда; группа 2, пептид 67 (10 мкг/день п.к.); группа 3, пептид 31 (10 мкг/день п.к.). Объем опухолей измеряют два раза в неделю. В конце эксперимента мышей анестезируют изофлураном, умерщвляют путем декапитации, собирают артериальную кровь для измерения уровня IGF-I в сыворотке и взвешивают удаленные опухоли. Данные представлены как среднее значение ± S.E. Данные обрабатывают с помощью анализа ANOVA и теста Стьюдента-Ньюмана-Кейлса (Student-Newman-Keuls).
Результаты
У животных, которые получают любой антагонист GH-RH, пептид 67 или пептид 31, масса опухолей значительно уменьшается по сравнению с контролем (таблица XIV). В группе, которая получает пептид 67, также значительно уменьшается объем опухолей. Кроме того, оба антагониста значительно уменьшают сывороточные уровни IGF-I по сравнению с уровнями у контрольных животных (таблица XIV). Подобным образом, оба антагониста ингибируют экспрессию мРНК IGF-II, причем в контрольной группе уровень экспрессии составляет 100±1,5%, в группе, получающей пептид 67 - 78,0±44,3%, и в группе, получающей пептид 31 - 42,7±18,5%. Ингибиторное действие пептида 31 на экспрессию мРНК IGF-II является статистически значимым (p<0,01 при сравнении с контролем).
Таблица XIV
Влияние антагонистов GH-RH на ксенотрансплантаты SCLC человека DMS-153 у голых мышей и на сывороточные уровни IGF-I |
||||
Группа | Масса опухоли (мг) (% ингибирования) |
Объем опухоли (мм3) | Сывороточный IGF-I (нг/мл) (% ингибирования) |
|
Начальный | Конечный (% ингибирования) | |||
Контроль | 2,31±0,25 | 112±13 | 3641±431 | 169,0±9,9 |
Пептид 67 | 1,60±0,19* (31%) |
132±24 | 2650±30* (28%) |
117,9±17,2* (30%) |
Пептид 31 | 1,58±0,11* (32%) |
138±20 | 3329±180 (10%) |
118,4±12,5* (30%) |
*p<0,05 при сравнении с контролем. |
Влияние антагонистов GH-RH на ксенотрансплантаты SCLC человека H-69 у голых мышей
Самцам голых мышей имплантируют п.к. кусочки ткани SCLC человека H-69, размером 3 мм3. Когда опухоли достигают объема приблизительно 80 мм3, мышей разделяют на 4 экспериментальные группы по 7-8 животных в каждой и вводят им в течение 4 недель следующие соединения: группа 1 (контроль), среда; группа 2, пептид 67 (10 мкг/день п.к.); группа 3, пептид 31 (10 мкг/день п.к.); группа 4, пептид 72 (10 мкг/день п.к.). Объем опухолей измеряют два раза в неделю. В конце эксперимента мышей анестезируют изофлураном, умерщвляют путем декапитации и взвешивают удаленные опухоли. Данные представлены как среднее значение ± S.E. Данные обрабатывают с помощью анализа ANOVA и теста Стьюдента-Ньюмана-Кейлса (Student-Newman-Keuls).
Результаты
Все антагонисты GH-RH при введении один раз в день в дозе 10 мкг/день существенно подавляют рост опухолей H-69 у голых мышей. Среди анализируемых соединений самым мощным антипролиферативным действием обладает пептид 72 (таблица XV).
Таблица XV
Влияние антагонистов GH-RH на ксенотрансплантаты SCLC человека H-69 у голых мышей |
||
Группа | Объем опухоли (мм3) | |
Начальный | Конечный (% ингибирования) | |
Контроль | 81±13 | 2350±189 |
Пептид 67 | 82±10 | 501±35* (76%) |
Пептид 31 | 80±6 | 832±23* (67%) |
Пептид 72 | 81±9 | 308±23* (90%) |
*p<0,0001 при сравнении с контролем |
Claims (21)
1. Пептид, выбранный из группы соединений, имеющих формулу:
R1-A0-A1-A2-Asp-Ala-A5-A6-Thr-A8-A9-A10-A11-A12-Val-Leu-A15-A16-Leu-Ser-A19-A20-A21-A22-Leu-Gln-Asp-Ile-A27-A28-A29-A30-R2,
где R1 является членом группы, состоящей из PhAc, Нса, Dat, Ipa, 1-Nac, СН3(СН2)nСО или HOOC(CH2)nCO, где n представляет собой целое число от 2 до 12,
А0 обозначает Phe, D-Phe, Arg, D-Arg или одинарную связь углерод-азот,
А1 обозначает Tyr или His,
А2 обозначает D-Arg,
А5 обозначает Ile или Val,
А6 обозначает Phe, Tyr или Phe(Y), где Y=F, Cl, Br или I,
А8 обозначает Asn, D-Asn, Cit, D-Cit, Ala, D-Ala, Abu, D-Abu или Aib,
А9 обозначает His, D-His, Amp, или D-Amp,
А10 обозначает Tyr, Tyr(Et), Tyr(Me); Amp, His, Cha, Chg, Bpa, Dip, Trp, Trp(For), Tpi, 1-Nal, 2-Nal, 3-Pal, 4-Pal, Phe(NH2) или Phe(NO2),
А11 обозначает His, D-His, Arg, D-Arg, Cit, Har, D-Har, Amp, D-Amp, Gup или D-Gup,
А12 обозначает Lys, D-Lys, Orn, D-Orn, Наг или D-Har,
А15 обозначает Abu, Aib, Cit или His,
А16 обозначает Gln,
А19 обозначает Ala или Abu,
А20 обозначает His, D-His, Arg или D-Arg,
А21 обозначает Lys, D-Lys, Orn или D-Orn,
А22 обозначает Leu, Ala или Aib,
А27 обозначает Leu, Nle или Abu,
А28 обозначает Arg, D-Arg, Har или D-Har,
А29 обозначает Arg, D-Arg, Наг или D-Har,
А30 обозначает Arg, D-Arg, Har, D-Har, Agm или одинарную связь углерод-азот или углерод-кислород,
R2 обозначает -NH2, -NHR3, где R3 обозначает C1-6алкил,
а также его фармацевтически приемлемые соли.
2. Соединение по п.1, где один из А11 и А20 или оба А11 и А20 отличаются от Arg, D-Arg или Cit.
3. Соединение по п.1, выбранное из группы, состоящей из:
[PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Amp9, Tyr(Me)10, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 67
[PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Amp9, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 68
[PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, His9, Tyr(Me)10, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 69
[CH3(CH2)6CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Amp9, Tyr(Me)10, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 70
[HOOC(CH2)12CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Amp9, Tyr(Me)10, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 72
[CH3(CH2)6CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Cit8, Amp9, Tyr(Me)10, His11, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 76
[HOOC(CH2)12CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Cit8, Amp9, Tyr(Me)10, His11, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 77
[CH3(CH2)6CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Ala8, His9, Tyr(Et)10, His11, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 80
[CH3(CH2)6CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Ala8, His9, Tyr(Et)10, His11, Abu15, His20, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 86
[CH3(CH2)6CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Ala8, His9, Tyr(Et)10, His11, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 95
[CH3(CH2)6CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Ala8, His9, Tyr(Et)10, His11, Orn12, Abu15, His20, Orn21, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 96.
4. Соединение по п.3, выбранное из группы, состоящей из:
[PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Amp9, Tyr(Me)10, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 67
[PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, His9, Tyr(Me)10, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 69
[CH3(CH2)6CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Amp9, Tyr(Me)10, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 70
[HOOC(CH2)12CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Amp9, Tyr(Me)10, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 72
[CH3(CH2)6CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Cit8, Amp9, Tyr(Me)10, His11, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 76
[HOOC(CH2)12CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Cit8, Amp9, Tyr(Me)10, His11, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 77
[CH3(CH2)6CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Ala8, His9, Tyr(Et)10, His11, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 80
[CH3(CH2)6CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Ala8, His9, Tyr(Et)10, His11, Abu15, His20, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 86
[CH3(CH2)6CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Ala8, His9, Tyr(Et)10, His11, Orn12, Abu15, Orn21, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 95
[СН3(СН2)6СО-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Ala8, His9, Tyr(Et)10, His11, Orn12, Abu15, His20, Orn21, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 96.
5. Соединение, выбранное из группы, состоящей из:
[CH3(CH2)4CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Arg9, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 2
[HOOC(CH2)4CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Arg9, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 3
[CH3(CH2)6CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Arg9, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 4
[HOOC(CH2)6CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Arg9, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 5
[CH3(CH2)8CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Arg9, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 6
[HOOC(CH2)8CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Arg9, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 7
[CH3(CH2)10CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Arg9, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 8
[HOOC(CH2)10CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Arg9, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 9
[CH3(CH2)12CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Arg9, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 10
[HOOC(CH2)12CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Arg9, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 11
[CH3(CH2)14CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Arg9, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 12
[HOOC(CH2)14CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Arg9, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 13
[PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Arg9, Abu15, Nle27, Har28, D-Arg29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 15
[CH3(CH2)14CO-Phe0, D-Arg2, Phe(pCl)6, Arg9, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 16
[CH3(CH2)14CO-D-Phe0, D-Arg2 Phe(pCl)6, Arg9, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 17
[PhAc-Arg0, D-Arg2, Phe(pCl)6, Arg9, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 18
[PhAc-D-Arg0, D-Arg2, Phe(pCl)6, Arg9, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 19
[PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Cit8, Arg9, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 21
[PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Cit8, Cit9, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 22
[PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Cit8, Arg9, Abu15, Nle27, Har28, D-Arg29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 23
[PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Cit8, Cit9, Abu15, Nle27, Har28, D-Arg29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 24
[PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, D-Ala8, Arg9, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 26
[PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Abu8, Arg9, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 27
[PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Cit9, Abu15, Nle27, Har28, D-Arg29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 28
[PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Arg9, Amp10, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 30
[PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Har9, Amp10, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 31
[PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Arg9, His10, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 32
[PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Arg9, Cha10, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 33
[PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Har9, 2-Nal10, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 35
[PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Har9, Dip10, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 36
[PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Har9, Phe(pNH2)10, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 37
[PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Har9, Phe(pNO2)10, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 39
[PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Har9, 3-Pal10, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 40
[PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Har9, Tyr(Et)10, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 41
[PhAc-His1, D-Arg2, Tyr6, Har9, Bpa10, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 42
[PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Arg9, Har12, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 43
[Hca-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Har9, Tyr(Me)10, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NHEt, пептид 45
[PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Har9, Tyr(Me)10, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1 -29)NHEt, пептид 46
[PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Arg9, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NHEt, пептид 48
[PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Har9, Tyr(Me)10, Aib15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NHEt, пептид 49
[PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Har9, Tyr(Me)10, Orn12, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NHEt, пептид 50
[Hca-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Har9, Tyr(Me)10, Abu15, Nle27, D-Arg28, Agm29]hGH-RH(1-29), пептид 51
[PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Har9, Tyr(Me)10, Abu15, Nle27, D-Arg28, Agm29]hGH-RH(1-29), пептид 52
[Hca-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Har9, Tyr(Me)10, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29, Har30]hGH-RH(1-30)NH2, пептид 53
[Ipa-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Har9, Tyr(Me)10, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29, Har30]hGH-RH(1-30)NH2, пептид 55
[Hca-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Har9, Tyr(Me)10, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29, Har30]hGH-RH(1-30)NHEt, пептид 56
[Hca-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Har9, Tyr(Me)10, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29, D-Arg30]hGH-RH(1-30)NH2, пептид 58
[Hca-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Har9, Tyr(Me)10, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29, Agm30]hGH-RH(1-30), пептид 59
[PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Har9, Tyr(Me)10, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29, Agm30]hGH-RH(1-30), пептид 60
[PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Har9, Tyr(Me)10, His11, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 62
[PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Har9, Tyr(Me)10, Har11, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 63
[PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Har9, Tyr(Me)10, Amp11, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 64
[PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Har9, Tyr(Me)10, Cit11, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 65
[PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Har9, Tyr(Me)10, His11, Abu15, His20, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 85.
6. Пептид по п.5, выбранный из группы, состоящей из:
[СН3(CH2)6CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Arg9, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 4
[HOOC(CH2)6CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Arg9, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 5
[HOOC(CH2)8CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Arg9, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 7
[HOOC(CH2)12CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Arg9, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 11
[PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Cit8, Cit9, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 22
[PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Har9, 2-Nal10, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 35
[PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Har9, Dip10, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 36
[PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Har9, Phe(pNO2)10, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 39
[PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Har9, Tyr(Et)10, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 41
[PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Har9, Tyr(Me)10, His11, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 62.
7. Пептид по п.5, выбранный из группы, состоящей из: [CH3(CH2)6CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Arg9, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 4
[HOOC(CH2)8CO-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Arg9, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 7
[PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Cit8, Arg9, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 21
[PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Arg9, Amp10, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 30
[PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Har9, Amp10, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 31
[PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Har9, Phe(pNH2)10, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 37
[PhAc-Tyr1 D-Arg2, Phe(pCl)6, Har9, Tyr(Et)10, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 41
[PhAc-His1, D-Arg2, Tyr6, Har9, Bpa10, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 42
[PhAc-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCl)6, Har9, Tyr(Me)10, His11, Abu15, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, пептид 62.
8. Способ снижения уровня GH в организме млекопитающего и человека путем введения эффективного для снижения количества соединения по п.1 или 5.
9. Способ по п.8, где млекопитающее и человек страдают от рака, клетки которого несут рецепторы IGF-I или GH.
10. Способ снижения уровня IGF-I в сыворотке или IGF-II в опухолевой ткани гормон-независимого рака простаты путем введения в организм млекопитающего и человека эффективного для снижения количества соединения по п.1 или 5.
11. Способ снижения уровней VEGF в опухолевой ткани млекопитающего и человека, страдающих от рака, путем введения указанному млекопитающему и человеку эффективного для супрессии количества соединения по п.1 или 5.
12. Способ снижения уровней IGF-I в сыворотке путем введения в организм эффективного для снижения количества соединения по п.1 или 5.
13. Способ по п.12, где уровень IGF-I является уровнем в сыворотке и млекопитающее и человек страдают от рака, клетки которого несут рецепторы IGF-I.
14. Способ лечения пациента, страдающего от рака, клетки которого несут рецепторы GH-RH, путем введения указанному пациенту количества соединения по п.1 или 5, эффективного для блокирования указанных рецепторов GH-RH.
15. Фармакологически приемлемая композиция для снижения уровней GH в организме млекопитающего и человека, которая содержит эффективное количество соединения по п.1 или 5 и фармакологически приемлемый носитель.
16. Фармакологически приемлемая композиция по п.15, где млекопитающее и человек страдают от рака, клетки которого несут рецепторы IGF-I или GH.
17. Фармакологически приемлемая композиция для снижения уровня IGF-I в сыворотке или уровня IGF-II в клетках гормон-независимого рака простаты у млекопитающего и человека или для снижения уровня IGF-I в сыворотке у млекопитающего и человека, страдающих мелкоклеточной карциномой легкого, которая содержит эффективное количество соединения по п.1 или 5 и фармакологически приемлемый носитель.
18. Фармакологически приемлемая композиция для снижения уровней VEGF в опухолевой ткани млекопитающего и человека, страдающих от рака, которая содержит эффективное количество соединения по п.1 или 5 и фармакологически приемлемый носитель.
19. Фармакологически приемлемая композиция для снижения уровня IGF-I в сыворотке у млекопитающего и человека, страдающих от гормон-независимого рака простаты или от мелкоклеточной карциномы легкого, которая содержит эффективное количество соединения по п.1 или 5 и фармакологически приемлемый носитель.
20. Фармакологически приемлемая композиция по п.19, где млекопитающее и человек страдают от рака, клетки которого несут рецепторы IGF-I.
21. Фармакологически приемлемая композиция для блокирования рецепторов GH-RH клеток гормон-независимого рака простаты в организме млекопитающего и человека, которая содержит эффективное количество соединения по п.1 или 5 и фармакологически приемлемый носитель.
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US49270603P | 2003-08-05 | 2003-08-05 | |
US60/492,706 | 2003-08-05 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2006106701A RU2006106701A (ru) | 2007-09-20 |
RU2335506C2 true RU2335506C2 (ru) | 2008-10-10 |
Family
ID=34193144
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2006106701/04A RU2335506C2 (ru) | 2003-08-05 | 2004-07-26 | Пептидные аналоги gh-rh с антагонистическим действием, способ снижения уровня gh, способ снижения уровня igf-i и igf-ii, применение для ингибирования роста раковых клеток, фармакологически приемлемая композиция (варианты) |
Country Status (19)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US7452865B2 (ru) |
EP (1) | EP1651662A4 (ru) |
JP (1) | JP2007526900A (ru) |
KR (1) | KR20060088875A (ru) |
CN (1) | CN1871020A (ru) |
AR (1) | AR049149A1 (ru) |
AU (1) | AU2004265280A1 (ru) |
BR (1) | BRPI0413257A (ru) |
CA (1) | CA2534436A1 (ru) |
IL (1) | IL173201A0 (ru) |
MX (1) | MXPA06001369A (ru) |
NO (1) | NO20061060L (ru) |
PL (1) | PL380437A1 (ru) |
RS (1) | RS20060086A (ru) |
RU (1) | RU2335506C2 (ru) |
SG (1) | SG136958A1 (ru) |
TW (1) | TW200517400A (ru) |
WO (1) | WO2005016953A2 (ru) |
ZA (1) | ZA200600966B (ru) |
Families Citing this family (16)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2009108364A2 (en) * | 2008-02-27 | 2009-09-03 | Ipsen Pharma S.A.S. | Antagonistic analogues of ghrh |
US8691942B2 (en) | 2008-03-28 | 2014-04-08 | University Of Miami | N- and C- terminal substituted antagonistic analogs of GH-RH |
EP2288374B1 (en) * | 2008-03-28 | 2017-02-01 | The University of Miami | Novel n-and c-terminal substituted antagonistic analogs of human gh-rh |
AU2009259033B2 (en) * | 2008-06-12 | 2013-11-07 | Ipsen Bioinnovation Limited | Suppression of neuroendocrine diseases |
US8796216B2 (en) | 2008-06-12 | 2014-08-05 | Syntaxin Limited | Suppression of neuroendocrine diseases |
JP5799397B2 (ja) | 2008-06-12 | 2015-10-28 | イプセン・バイオイノベーション・リミテッドIpsen Bioinnovation Limited | 癌の抑制 |
US8227421B2 (en) * | 2009-09-17 | 2012-07-24 | University Of Miami | Fluorinated GHRH antagonists |
WO2011153491A2 (en) | 2010-06-03 | 2011-12-08 | University Of Miami | Agonists of growth hormone releasing hormone as effectors for survival and proliferation of pancreatic islets |
JP6113144B2 (ja) | 2011-04-21 | 2017-04-12 | セラテクノロジーズ・インコーポレーテッド | 成長ホルモン放出因子(grf)類似体およびその使用 |
US9079974B2 (en) * | 2011-12-21 | 2015-07-14 | The University Of Miami | GH-RH analogs with potent agonistic effects |
EP2866894A4 (en) * | 2012-06-27 | 2016-03-16 | Univ Miami | COMPOSITION AND METHOD FOR THE TREATMENT OF MORBUS ALZHEIMER |
EP2935317B1 (en) | 2012-12-21 | 2019-03-27 | University of Miami | Ghrh agonists for islet cell transplantation and function and the treatment of diabetes |
WO2014100809A2 (en) | 2012-12-21 | 2014-06-26 | University Of Miami | Ghrh agonists for the treatment of ischemic disorders |
EP3920961A4 (en) | 2019-02-08 | 2022-12-14 | United States Government as represented by the Department of Veterans Affairs | GROWTH HORMONE RELEASING HORMONE ANTAGONISTS AND THEIR USES |
WO2021222129A1 (en) | 2020-04-27 | 2021-11-04 | The University Of Miami | Method of treating an inflammatory disorder |
CN114195881B (zh) * | 2021-12-16 | 2022-09-16 | 浙江湃肽生物股份有限公司 | 一种制备醋酸舍莫瑞林的方法 |
Family Cites Families (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5942489A (en) * | 1996-05-03 | 1999-08-24 | The Administrators Of The Tulane Educational Fund | HGH-RH(1-29)NH2 analogues having antagonistic activity |
US6057422A (en) * | 1998-11-25 | 2000-05-02 | The Administrators Of The Tulane Educational Fund | Antagonistic analogs of GH-RH inhibiting IGF-I and -II |
-
2004
- 2004-07-23 TW TW093121985A patent/TW200517400A/zh unknown
- 2004-07-26 BR BRPI0413257-2A patent/BRPI0413257A/pt not_active IP Right Cessation
- 2004-07-26 WO PCT/US2004/024183 patent/WO2005016953A2/en active Application Filing
- 2004-07-26 AU AU2004265280A patent/AU2004265280A1/en not_active Abandoned
- 2004-07-26 MX MXPA06001369A patent/MXPA06001369A/es unknown
- 2004-07-26 PL PL380437A patent/PL380437A1/pl unknown
- 2004-07-26 SG SG200716961-8A patent/SG136958A1/en unknown
- 2004-07-26 RU RU2006106701/04A patent/RU2335506C2/ru not_active IP Right Cessation
- 2004-07-26 US US10/566,776 patent/US7452865B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2004-07-26 RS YUP-2006/0086A patent/RS20060086A/sr unknown
- 2004-07-26 CN CNA2004800222868A patent/CN1871020A/zh active Pending
- 2004-07-26 KR KR1020067002465A patent/KR20060088875A/ko active IP Right Grant
- 2004-07-26 EP EP04757325A patent/EP1651662A4/en not_active Withdrawn
- 2004-07-26 CA CA002534436A patent/CA2534436A1/en not_active Abandoned
- 2004-07-26 JP JP2006522602A patent/JP2007526900A/ja active Pending
- 2004-08-03 AR ARP040102755A patent/AR049149A1/es unknown
-
2006
- 2006-01-17 IL IL173201A patent/IL173201A0/en unknown
- 2006-02-02 ZA ZA200600966A patent/ZA200600966B/en unknown
- 2006-03-03 NO NO20061060A patent/NO20061060L/no not_active Application Discontinuation
Non-Patent Citations (1)
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
AU2004265280A1 (en) | 2005-02-24 |
IL173201A0 (en) | 2006-06-11 |
TW200517400A (en) | 2005-06-01 |
CN1871020A (zh) | 2006-11-29 |
JP2007526900A (ja) | 2007-09-20 |
RS20060086A (en) | 2008-08-07 |
US20070042950A1 (en) | 2007-02-22 |
EP1651662A2 (en) | 2006-05-03 |
ZA200600966B (en) | 2007-05-30 |
NO20061060L (no) | 2006-05-03 |
EP1651662A4 (en) | 2009-07-01 |
KR20060088875A (ko) | 2006-08-07 |
MXPA06001369A (es) | 2007-02-19 |
WO2005016953A2 (en) | 2005-02-24 |
PL380437A1 (pl) | 2007-01-22 |
US7452865B2 (en) | 2008-11-18 |
RU2006106701A (ru) | 2007-09-20 |
BRPI0413257A (pt) | 2006-10-03 |
CA2534436A1 (en) | 2005-02-24 |
SG136958A1 (en) | 2007-11-29 |
WO2005016953A3 (en) | 2006-02-09 |
AR049149A1 (es) | 2006-07-05 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US8227421B2 (en) | Fluorinated GHRH antagonists | |
RU2335506C2 (ru) | Пептидные аналоги gh-rh с антагонистическим действием, способ снижения уровня gh, способ снижения уровня igf-i и igf-ii, применение для ингибирования роста раковых клеток, фармакологически приемлемая композиция (варианты) | |
US8227405B2 (en) | Fluorinated GHRH antagonists | |
US7026281B1 (en) | Antagonistic analogs of GH-RH inhibiting IGF-I and -II | |
JPH09506616A (ja) | 拮抗活性を有するhGH−RH(1−29)NH▲下2▼の類似体 | |
US20160166652A1 (en) | Novel n- and c-terminal substituted antagonistic analogs of gh-rh |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20090727 |