RU2223764C1 - Method for preparing rifampicin liposomal form - Google Patents

Abstract

FIELD: pharmaceutical technology, pharmacy. SUBSTANCE: method involves preparing rifampicin solution along with phospholipids in organic solvent. Then solvent is removed up to preparing thin film that is dispersed in an aqueous medium up to preparing suspension of multilamellar vesicles containing rifampicin. Prepared suspension is homogenized under high pressure or by extruding through filter under pressure up to preparing liposomes with size 0.1-0.5 mcm. As phospholipids a mixture is used that comprises, wt.-%: phospharidylcholine, 70-80; mixture of any other egg yolk, and/or soybean, and/or cattle lipids, the balance. Rifampicin solution along with phospholipids is prepared in the ratio rifampicin : phospholipids = 1 : (3-15). As an organic solvent ethanol is used mainly; as an aqueous medium isotonic sterile NaCl solution is used. Solvent is removed by drying in vacuum at 30-50 C. Homogenization is carried out under pressure (5.6 x 10⁷) (6.1 x 10⁷) Pa. Nuclear filter is used for filtration. Invention provides the enhancement of product activity. EFFECT: improved preparing method. 6 cl, 3 tbl

Description

Изобретение относится к области фармацевтики, а именно к способу получения липосомальной формы рифампицина, применяемой местно (ингаляционно или в заливках) для лечения туберкулеза. The invention relates to the field of pharmaceuticals, and in particular to a method for producing a liposomal form of rifampicin, applied topically (inhalation or in fillings) for the treatment of tuberculosis.

Лечение туберкулеза проводят сочетанной терапией ряда препаратов, подавляющих размножение микобактерий туберкулеза, в число которых входит антибиотик широкого спектра действия рифампицин. Tuberculosis treatment is carried out with combined therapy of a number of drugs that suppress the multiplication of tuberculosis mycobacteria, which include a broad-spectrum antibiotic rifampicin.

Известно, что рифампицин имеет низкую растворимость (1,2 мг/мл). В связи с этим длительное (в течение 2-6 месяцев) введение рифампицина вызывает возникновение большого количества побочных эффектов: нарушение функции печени и почек, отек Квинке, психические расстройства, язву. Rifampicin is known to have low solubility (1.2 mg / ml). In this regard, the long-term (within 2-6 months) administration of rifampicin causes a large number of side effects: impaired liver and kidney function, Quincke's edema, mental disorders, ulcers.

Известно, что включение лекарственных препаратов в липосомы из фосфолипидов является одним из способов снижения их токсичности. It is known that the inclusion of drugs in liposomes from phospholipids is one way to reduce their toxicity.

Известен препарат (RU 2063770, А1), применяемый в виде ингаляций для лечения гнойно-воспалительных заболеваний легких и содержащий рифампицин в липосомальной форме с размером липосом

.Known drug (RU 2063770, A1), used in the form of inhalation for the treatment of purulent-inflammatory lung diseases and containing rifampicin in liposome form with liposome size

.

Этот препарат содержит (на 1 флакон) 8 мг рифампицина, 80 мг гентамицина, 35 мг лецитина и 2,5 мг эктерицида. This preparation contains (per 1 vial) 8 mg of rifampicin, 80 mg of gentamicin, 35 mg of lecithin and 2.5 mg of etericide.

Известен также препарат (CN 1319395), содержащий 1-22% рифампина (синоним названия рифампицин) в липосомальной форме, 1-27% лецитина, 1-18% холестерола и 70-100% дистиллированной воды. Also known is a preparation (CN 1319395) containing 1-22% rifampin (synonymous with rifampicin) in liposome form, 1-27% lecithin, 1-18% cholesterol and 70-100% distilled water.

Однако получение этих препаратов в указанных источниках информации не описано. However, the receipt of these drugs in these sources of information is not described.

Известен способ получения липосомальной формы рифампицина путем детергентного диализа (Грязнова Н. С. и др. Получение липосомальных препаратов различных биологически активных веществ методом детергентного проточного диализа. Журнал Антибиотики и химиотерапия, 1992, т. 37, 7, с. 3-5), заключающийся в том, что готовят пленку из смеси яичного фосфатидилхолина, холестерина, стеариновой кислоты и α-токоферола, взятых в весовых соотношениях 250: 12,5: 5, полученную липидную пленку диспергируют в фосфатном буфере (рН 7,0), содержащем рифампицин и детергент, а затем проводят детергентный диализ на приборе "Liposamate", получая одно- или двухслойные липосомы с диаметром от 35 до 75 нм. A known method for producing the liposomal form of rifampicin by detergent dialysis (N. Gryaznova et al. Obtaining liposome preparations of various biologically active substances by the method of detergent flow dialysis. Journal of Antibiotics and Chemotherapy, 1992, v. 37, 7, pp. 3-5), consisting in the fact that a film is prepared from a mixture of egg phosphatidylcholine, cholesterol, stearic acid and α-tocopherol, taken in weight ratios of 250: 12.5: 5, the resulting lipid film is dispersed in phosphate buffer (pH 7.0) containing rifampicin and detergent, and then detergent dialysis is performed on a Liposamate instrument to produce single or double layer liposomes with diameters from 35 to 75 nm.

Недостатком этого способа является получение липосом с малым содержанием рифампицина (0,1 мг/мл) и соответственно высокое соотношение рифампицин-липид. Кроме того, в препарате возможно наличие остаточных количеств детергента. The disadvantage of this method is the production of liposomes with a low rifampicin content (0.1 mg / ml) and a correspondingly high rifampicin-lipid ratio. In addition, residual amounts of detergent may be present in the preparation.

Известен способ получения липосомальной формы рифампицина (Курунов Ю.Н. и др. Эффективность липосомальной формы рифампицина при лечении экспериментального туберкулеза мышей. Журнал Проблемы туберкулеза, 1992, 1-2, с. 13-15) заключающийся в том, что сначала готовят пленку из смеси фосфатидилхолин : холестерин в молярном соотношении 3:1, затем липидную пленку (100 мг липидов) диспергируют в физиологическом растворе, содержащем 4 мг/мл рифампицина. Механическим встряхиванием получают мультиламелярные везикулы, которые отделяют от свободного рифампицина центрифугированием, с последующим редиспергированием. Включение рифампицина в мультиламелярные везикулы в количествах, превышающих его растворимость, обеспечено в данном способе большим количеством фосфолипидов, что увеличивает стоимость препарата. Кроме того, данный препарат представляет собой эмульсию частиц большого размера (1-3 мкм), которые не проходят в мелкие и средние бронхи. A known method for producing the liposomal form of rifampicin (Kurunov Yu.N. et al. The effectiveness of the liposomal form of rifampicin in the treatment of experimental tuberculosis of mice. Journal of the Problem of Tuberculosis, 1992, 1-2, pp. 13-15) is that a film is prepared from mixtures of phosphatidylcholine: cholesterol in a molar ratio of 3: 1, then the lipid film (100 mg of lipids) is dispersed in physiological saline containing 4 mg / ml rifampicin. Mechanical shaking produces multilamellar vesicles, which are separated from free rifampicin by centrifugation, followed by redispersion. The inclusion of rifampicin in multilamellar vesicles in amounts exceeding its solubility is provided in this method with a large amount of phospholipids, which increases the cost of the drug. In addition, this drug is an emulsion of large particles (1-3 microns) that do not pass into the small and medium bronchi.

Известен способ получения липосомальной формы рифампицина, включающий приготовление раствор рифампицина с фосфолипидами в органическом растворителе, замораживание раствора, его лиофилизацию и диспергирование в водной среде до получения суспензии мультимолярных везикул с заключенными в них рифампицином (заявка WO 93/23016 от 25.11.1993 г.). A known method for producing the liposomal form of rifampicin, comprising preparing a solution of rifampicin with phospholipids in an organic solvent, freezing the solution, lyophilizing and dispersing it in an aqueous medium to obtain a suspension of multimolar vesicles with rifampicin enclosed in them (application WO 93/23016 from 11/25/1993) .

Недостаток этого способа, в энергоемкости процесса лиофилизации, который проводится на специальном достаточно дорогом оборудовании, что резко увеличивает стоимость полученного продукта, другим недостатком этого способа является то, что в таком препарате размеры липосом колеблются в широких пределах, что делает его нестабильным при хранении. The disadvantage of this method is the energy intensity of the lyophilization process, which is carried out on special rather expensive equipment, which sharply increases the cost of the obtained product, another disadvantage of this method is that the size of liposomes in such a preparation varies widely, which makes it unstable during storage.

Настоящее изобретение направлено на получении препарата с большей эффективностью действия. The present invention is directed to obtaining a drug with greater efficacy.

Достигаемый при этом технический результат заключается в ускорении доступа к очагам поражения и стабильности хранения препарата за счет получении липосом, состоящих из небольших частиц одинакового размера (не более 0,5 мкм), которые быстрее попадают в мелкие сосуды легких и в другие очаги поражения, при этом препарат храниться длительное время без образования осадка, который получается в результате осаждения слипшихся липосом, при этом удалось получить гомогенную и стабильную при хранении эмульсию липосом, содержащих рифампицин в концентрациях, превышающих его растворимость в водной среде. The technical result achieved in this case is to accelerate access to the lesions and storage stability of the drug by obtaining liposomes consisting of small particles of the same size (no more than 0.5 microns), which quickly enter the small vessels of the lungs and other lesions, with this drug is stored for a long time without the formation of sediment, which is obtained by the deposition of adhering liposomes, while it was possible to obtain a homogeneous and stable during storage emulsion of liposomes containing rifampicin at the end tration in excess of its solubility in the aqueous medium.

Указанный технический результат достигается тем, что в способе получения липосомальной формы рифампицина готовят раствор рифампицина с фосфолипидами в органическом растворителе и затем удаляют растворитель до получения пленки, которую диспергируют в водной среде до получения суспензии мультимолярных везикул с заключенным в них рифампицином, затем полученную суспензию гомогенизируют при давлении (5,6-6,1)•10⁷ Па, а раствор рифампицина совместно с фосфолипидами готовят при массовом соотношении рифампицин : фосфолипиды, равном 1:3-15.The specified technical result is achieved by the fact that in the method for producing the liposomal form of rifampicin, a solution of rifampicin with phospholipids in an organic solvent is prepared and then the solvent is removed to obtain a film which is dispersed in an aqueous medium to obtain a suspension of multimolar vesicles with rifampicin enclosed in them, then the resulting suspension is homogenized when pressure (5.6-6.1) • 10 ⁷ Pa, and a rifampicin solution together with phospholipids is prepared at a mass ratio of rifampicin: phospholipids equal to 1: 3-15.

При этом гомогенизацию проводят в гомогенизаторе при высоком давлении или продавливая через фильтр под давлением. In this case, homogenization is carried out in a homogenizer at high pressure or by forcing through a filter under pressure.

Все указанные действия проводят в стерильных условиях. All these steps are carried out under sterile conditions.

В качестве фосфолипидов берут фосфатидилхолин или смесь фосфатидилхолина с любыми фосфолипидами яичного желтка, и/или сои, и/или крупного рогатого скота, взятых в любых сочетаниях и соотношениях. В качестве органического растворителя берут преимущественно этанол. As phospholipids take phosphatidylcholine or a mixture of phosphatidylcholine with any phospholipids of egg yolk, and / or soy, and / or cattle, taken in any combination and ratio. Ethanol is predominantly used as an organic solvent.

Растворитель удаляют высушиванием в вакууме при 30-50^oС.The solvent is removed by drying in vacuum at 30-50 ^o C.

Гомогенизацию проводят с помощью ядерного фильтра. Homogenization is carried out using a nuclear filter.

Ядерный фильтр представляет собой полимерную поликарбонатную пленку с отверстиями размером от 0,1 мкм и выше, которые получаются при бомбардировке пленки ядрами различных элементов. Размер отверстий подбирают так, чтобы при пропускании раствора липосом фильтр пропускал липосомы и задерживал микроорганизмы. A nuclear filter is a polymeric polycarbonate film with openings of a size of 0.1 microns or more, which are obtained by bombarding the film with cores of various elements. The size of the holes is chosen so that when passing a solution of liposomes, the filter passes liposomes and retains microorganisms.

Ниже приведены данные, согласно которым после 6 мес хранения при температуре +4^oС размеры липосом не изменяются, а перекисное число увеличивается незначительно.Below is the data according to which after 6 months of storage at a temperature of +4 ^o With the size of the liposomes do not change, and the peroxide number increases slightly.

Сущность предлагаемого способа иллюстрируется следующими примерами конкретного осуществления. The essence of the proposed method is illustrated by the following examples of specific implementation.

Пример 1. В спиртовом растворе смеси фосфолипидов сои (2 г/100 мл этанола) растворяют 0,3 г рифампицина. Полученный раствор высушивают в вакууме при температуре не выше 40^oС до получения тонкой пленки. Полученную пленку диспергируют стерильным изотоническим раствором NaCl в течение 4 часов до полного перехода высушенных веществ в водную фазу. Получают однородную эмульсию, представляющую собой мультиламелярные везикулы с размером частиц 2,0-3,0 мкм, которую переносят в реактор гомогенизатора типа "α-Laval" (Швеция) (также можно использовать гомогенизатор "Донор" (Россия), где подвергают обработке при температуре 30^oС и давлении 6,0•10⁷ Па в стерильных условиях.Example 1. In an alcoholic solution of a mixture of soybean phospholipids (2 g / 100 ml of ethanol), 0.3 g of rifampicin is dissolved. The resulting solution was dried in vacuum at a temperature not exceeding 40 ^o C to obtain a thin film. The resulting film is dispersed with a sterile isotonic NaCl solution for 4 hours until the complete transition of the dried substances into the aqueous phase. A homogeneous emulsion is obtained, which is multi-lamellar vesicles with a particle size of 2.0-3.0 μm, which is transferred to the α-Laval homogenizer reactor (Sweden) (the donor homogenizer (Russia) can also be used, where it is processed at a temperature of 30 ^o C and a pressure of 6.0 • 10 ⁷ PA in sterile conditions.

В таблицах 1-2 приведены данные, обосновывающие достаточность выбранной последовательности операций, состава смеси липидов и количественного соотношения липиды : рифампицин для достижения обеспечиваемого изобретением технического результата. Tables 1-2 show the data justifying the sufficiency of the selected sequence of operations, the composition of the lipid mixture and the quantitative ratio of lipids: rifampicin to achieve the technical result provided by the invention.

Как видно из данных, представленных в таблице 1, для получения мультиламелярных везикул, содержащих рифампицин в концентрациях, превышающих его растворимость, необходимо сначала растворить липиды и рифампицин в этаноле и, удалив растворитель, получить пленку, состоящую из липидов и рифампицина, которую далее диспергировать стерильным изотоническим раствором. Иная последовательность смешивания компонентов (диспергирование сухой пленки липидов изотоническим раствором рифампицина или добавление сухого антибиотика к мультиламелярным везикулам фосфолипидов в стерильном изотоническом растворе) не позволяет получить гомогенную эмульсию мультиламелярных везикул даже при концентрациях рифампицина, незначительно превышающих его растворимость. As can be seen from the data presented in table 1, to obtain multilamellar vesicles containing rifampicin in concentrations exceeding its solubility, it is first necessary to dissolve lipids and rifampicin in ethanol and, removing the solvent, obtain a film consisting of lipids and rifampicin, which is then dispersed with sterile isotonic solution. A different sequence of mixing the components (dispersing a dry lipid film with an isotonic rifampicin solution or adding a dry antibiotic to multilamellar phospholipid vesicles in a sterile isotonic solution) does not allow a homogeneous emulsion of multilamellar vesicles even at rifampicin concentrations slightly exceeding its solubility.

Как видно из данных, приведенных в таблице 2, для получения однородной эмульсии мультиламелярных везикул оптимальным является использование смеси фосфолипидов разного происхождения на основе фосфатидилхолина (75%) с небольшой примесью других классов фосфолипидов, в том числе лизокомпонентов. Такой состав позволяет увеличить содержание рифампицина в водной фазе до 15-20 мг/мл, что в 10-17 раз превышает его растворимость в воде (1,2 мг/мл). As can be seen from the data given in table 2, to obtain a homogeneous emulsion of multilamellar vesicles, it is optimal to use a mixture of phospholipids of different origin based on phosphatidylcholine (75%) with a small admixture of other classes of phospholipids, including lysocomponents. This composition allows you to increase the content of rifampicin in the aqueous phase to 15-20 mg / ml, which is 10-17 times higher than its solubility in water (1.2 mg / ml).

Полученные таким образом содержащие рифампицин липосомы сохраняют свои физико-химические характеристики в течение полугода. The liposomes containing rifampicin thus obtained retain their physicochemical characteristics for six months.

В табл.3 приведены данные, согласно которым после 6 мес хранения при температуре +4^oС размеры липосом не изменяются, а перекисное число увеличивается незначительно.Table 3 shows the data according to which after 6 months of storage at a temperature of +4 ^o With the size of the liposomes do not change, and the peroxide number increases slightly.

Таким образом, предлагаемый способ получения липосомальной формы рифампицина позволяет получить в стерильных условиях большие объемы стабильных липосом одинакового размера 0,1-0,5 мкм, содержащих рифампицин в высоких концентрациях. Thus, the proposed method for producing the liposomal form of rifampicin allows to obtain in sterile conditions large volumes of stable liposomes of the same size of 0.1-0.5 microns, containing rifampicin in high concentrations.

При таком способе получения спектр рифампицина не изменяется, а фосфолипиды не окисляются и в силу этого липосомы стабильны при хранении. With this method of obtaining the spectrum of rifampicin does not change, and phospholipids are not oxidized and, therefore, liposomes are stable during storage.

Claims (6)

1. Способ получения липосомальной формы рифампицина, включающий приготовление раствора рифампицина с фосфолипидами в органическом растворителе, удаление растворителя до получения пленки, которую диспергируют в водной среде до получения суспензии мультиламелярных везикул с заключенным в них рифампицином, отличающийся тем, что полученную суспензию гомогенизируют при давлении (5,6-6,1)·10⁷ Па, а раствор рифампицина совместно с фосфолипидами готовят при массовом соотношении рифампицин: фосфолипиды, равном 1:3-15.1. A method of obtaining a liposomal form of rifampicin, comprising preparing a solution of rifampicin with phospholipids in an organic solvent, removing the solvent to obtain a film that is dispersed in an aqueous medium to obtain a suspension of multilamellar vesicles with rifampicin enclosed in them, characterized in that the resulting suspension is homogenized under pressure ( 5.6-6.1) · 10 ⁷ Pa, and a rifampicin solution together with phospholipids is prepared at a mass ratio of rifampicin: phospholipids equal to 1: 3-15. 2. Способ по п.1, отличающийся тем, что все указанные действия проводят в стерильных условиях.2. The method according to claim 1, characterized in that all these actions are carried out under sterile conditions. 3. Способ по п.1, отличающийся тем, что в качестве фосфолипидов берут фосфатидилхолин или смесь фосфатидилхолина с любыми фосфолипидами яичного желтка, и/или сои, и/или крупного рогатого скота, взятых в любых сочетаниях и соотношениях.3. The method according to claim 1, characterized in that phosphatidylcholine or a mixture of phosphatidylcholine with any phospholipids of egg yolk and / or soy and / or cattle, taken in any combination and ratio, are taken as phospholipids. 4. Способ по п.1, отличающийся тем, что в качестве органического растворителя берут преимущественно этанол.4. The method according to claim 1, characterized in that ethanol is mainly taken as an organic solvent. 5. Способ по п.1, отличающийся тем, что растворитель удаляют высушиванием в вакууме при 30-50°C.5. The method according to claim 1, characterized in that the solvent is removed by drying in vacuum at 30-50 ° C. 6. Способ по п.1, отличающийся тем, что гомогенизацию проводят с помощью ядерного фильтра.6. The method according to claim 1, characterized in that the homogenization is carried out using a nuclear filter.

Images