JP3308010B2 - Coating-stabilized liposome and method for producing the same - Google Patents
Coating-stabilized liposome and method for producing the sameInfo
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Description
【０００１】[0001]
【産業上の利用分野】本発明はリポソーム膜の表面の安
定性が高い被膜安定化リポソーム及びその製造方法に関
する。The present invention relates to a film-stabilized liposome having high liposome membrane surface stability and a method for producing the same.
【０００２】[0002]
【従来の技術】脂質を水中に分散させたときに形成され
るリポソームは、細胞膜構造のモデルとして極めて近似
度が高く、組織指向性薬物運搬体・人工赤血球・細胞修
復剤及び酵素固定化基剤等の医薬用材料としての積極的
な利用が期待されている。2. Description of the Related Art Liposomes formed when lipids are dispersed in water have a very high degree of approximation as a model of the cell membrane structure, and have tissue-directed drug carriers, artificial erythrocytes, cell repair agents and enzyme-immobilized bases. It is expected to be actively used as a medical material such as.
【０００３】又、医学、薬学の分野のみならず、化粧品
分野においても安定性に問題のある有効成分を患部に選
択的に移行させ、徐放性を持たせる材料として期待され
ている。[0003] Further, in the field of cosmetics as well as the fields of medicine and pharmacy, active ingredients having a problem in stability are expected to be selectively transferred to an affected part to provide sustained release.
【０００４】[0004]
【発明が解決しようとする課題】前述したように、リポ
ソームはこのように極めて広範な利用分野を有するが、
その問題点として膜構造の脆弱性が指摘されている。As mentioned above, liposomes have such an extremely wide field of application,
It has been pointed out that the membrane structure is vulnerable as a problem.
【０００５】即ち、膜形成物質である脂質の化学的また
は物理的変化により膜が破壊され、保持物質の漏れを生
じやすいため目的組織への薬物到達性改善の点において
未だ不十分である。[0005] That is, the membrane is broken by a chemical or physical change of the lipid, which is a film-forming substance, and the retention substance is liable to leak, so that it is still insufficient in terms of improving the drug accessibility to the target tissue.
【０００６】そこで、リポソーム膜の強化法として従
来、膜にスフィンゴミエリンを添加して水素結合性を付
与・強化する方法、トコフェロール等を添加して不飽和
脂質の酸化を防止する方法等が知られているが、いずれ
の方法も十分ではない。Therefore, as a method for enhancing a liposome membrane, a method of adding and enhancing hydrogen bonding by adding sphingomyelin to the membrane and a method of preventing oxidation of unsaturated lipid by adding tocopherol and the like are conventionally known. However, neither method is sufficient.
【０００７】このため、リポソーム膜を安定化し、内部
での薬物保持に優れかつ目的組織への薬物の徐放性を達
成するためのリポソーム膜の安定性の高いリポソーム及
びその製造が要望されている。[0007] Thus, the liposome membrane was stabilized, excellent and liposomes and their preparation highly stable liposome membrane to achieve sustained release of the drug into the target tissue to the drug held inside is desired .
【０００８】[0008]
【課題を解決するための手段】前記の事情に鑑み、本発
明者らはリポソームの持つ欠点を克服すべく研究を重
ね、ＭＰＣの単独重合体またはその共重合体でリポソー
ムの表面を被覆することにより、生理的条件下における
リポソームの機械的強度を向上し、徐放性を持たせたリ
ポソーム膜及びそれを製造することに成功し、本発明を
完成するに至った。SUMMARY OF THE INVENTION In view of the above circumstances, the present inventors have conducted various studies to overcome the drawbacks of liposomes, and have coated the surface of liposomes with a homopolymer of MPC or a copolymer thereof. As a result, the mechanical strength of the liposome under physiological conditions was improved, the liposome membrane having sustained release properties was successfully produced, and the present invention was completed, thereby completing the present invention.
【０００９】かかる知見に基づく本発明に係るリポソー
ムの構成は、リポソーム膜の表面が２‐メタクリロイル
オキシエチルホスホリルコリン（ＭＰＣ）の単独重合体
またはＭＰＣとモノマーとの共重合体によって被覆され
てなることを特徴とする。The structure of the liposome according to the present invention based on such findings is that the surface of the liposome membrane is coated with a homopolymer of 2-methacryloyloxyethyl phosphorylcholine (MPC) or a copolymer of MPC and a monomer. Features.
【００１０】また、一方の本発明に係るリポソームの製
造方法は、リポソーム膜の表面を２‐メタクリロイルオ
キシエチルホスホリルコリン（ＭＰＣ）の単独重合体ま
たはＭＰＣとモノマーとの共重合体、によって被覆する
ことを特徴とする。On the other hand, the method for producing a liposome according to the present invention comprises coating the surface of a liposome membrane with a homopolymer of 2-methacryloyloxyethyl phosphorylcholine (MPC) or a copolymer of MPC and a monomer. Features.
【００１１】以下、本発明の内容を説明する。ここで、
本発明においてリポソームとは、脂質，とりわけリン脂
質のみよりあるいはリン脂質とステロールより構成され
る単層リポソーム及び多重層リポソームであり、リポソ
ームの製造法として従来公知の方法により調整されたも
のを言う。Hereinafter, the contents of the present invention will be described. here,
In the present invention, the liposome is a unilamellar liposome or a multilamellar liposome composed of a lipid, especially a phospholipid alone, or a phospholipid and a sterol, and refers to a liposome prepared by a conventionally known method.
【００１２】リポソームに担持される物質は水溶性物質
及び脂溶性物質のいずれでもよい。ただし、水溶性物質
はリポソームの内腔に、また脂溶性物質はリポソーム膜
にそれぞれ収納される。その他、これらの物質はリポソ
ーム膜表面に化学的及び物理的に吸着されることもあ
り、本発明では上記３通りの場合を併せ『担持』と称す
る。このような物質としてはin vitro,in vivoで不安定
なもの、体内で徐々に放出され、あるいは特定の臓器に
速やかに分布することが所望される薬物以外にもマーカ
ー、あるいはプラスミドやＤＮＡ，ＲＮＡ等、生体内に
投与して有効なものであれば特に制約されることはな
い。The substance carried on the liposome may be either a water-soluble substance or a fat-soluble substance. However, the water-soluble substance is contained in the lumen of the liposome, and the fat-soluble substance is contained in the liposome membrane. In addition, these substances may be chemically and physically adsorbed on the surface of the liposome membrane. In the present invention, the above three cases are collectively referred to as “support”. Such a substance is unstable in vitro or in vivo, is gradually released in the body, or is a marker other than a drug that is desired to be rapidly distributed to a specific organ, or a marker, plasmid, DNA, or RNA. There is no particular limitation as long as it is effective when administered in vivo.
【００１３】次に本発明に係る２‐メタクリロイルオキ
シエチルホスホリルコリン（以下「ＭＰＣ」と略す）
は、単独重合体の場合は分子量が５０００以上であるの
が好ましい。Next, 2-methacryloyloxyethyl phosphorylcholine (hereinafter abbreviated as "MPC") according to the present invention.
Is preferably 5000 or more in the case of a homopolymer.
【００１４】また、共重合体の場合であって、ＭＰＣと
疎水性モノマーとの共重合体の場合は、例えばスチレ
ン、アクリル酸エステル、メタクリル酸エステル等から
選択される一種以上の疎水性モノマーとの共重合物であ
り、その分子量が５０００以上で、ＭＰＣと疎水性モノ
マーとの構成比が１０：９０〜４５：５５であるのが好
ましい。In the case of a copolymer, in the case of a copolymer of MPC and a hydrophobic monomer, for example, one or more hydrophobic monomers selected from styrene, acrylate, methacrylate and the like may be used. It is preferable that the molecular weight of the copolymer is 5000 or more, and the composition ratio of MPC to the hydrophobic monomer is 10:90 to 45:55.
【００１５】また疎水性モノマーの代りとして親水性モ
ノマーを用いたＭＰＣとの共重合体の場合において、非
イオン性の場合は、例えばアクリルアミド、ビニルピロ
リドン、ポリエチレングリコールモノメタクリレート、
２‐メタクリロイルオキシエチルメチルスルホキシド等
から、またイオン性の場合は、例えばアクリル酸、メタ
クリル酸、アクリルアミド‐２‐メチル‐プロパンスル
ホン酸、ｐ‐スチレンスルホン酸、３‐メタクリロイル
オキシプロピルスルホン酸またはそれらの塩類（例えば
Ｎａなど）、Ｎ，Ｎ‐ジメチルアミノエチルメタクリレ
ート、Ｎ，Ｎ‐ジエチルアミノエチルメタクリレート、
ビニルピリジンから選択される一種以上の親水性モノマ
ーとＭＰＣとの共重合物であり、その分子量が５０００
以上で、ＭＰＣと親水性モノマーとの構成比が１０：９
０〜４５：５５であるのが好ましい。In the case of a copolymer with MPC using a hydrophilic monomer instead of a hydrophobic monomer, in the case of a nonionic copolymer, for example, acrylamide, vinylpyrrolidone, polyethylene glycol monomethacrylate,
From 2-methacryloyloxyethylmethylsulfoxide and the like, and when ionic, for example, acrylic acid, methacrylic acid, acrylamido-2-methyl-propanesulfonic acid, p-styrenesulfonic acid, 3-methacryloyloxypropylsulfonic acid or a mixture thereof Salts (eg, Na, etc.), N, N-dimethylaminoethyl methacrylate, N, N-diethylaminoethyl methacrylate,
A copolymer of one or more hydrophilic monomers selected from vinylpyridine and MPC, having a molecular weight of 5000
As described above, the composition ratio between the MPC and the hydrophilic monomer is 10: 9.
It is preferably 0-45: 55.
【００１６】ＭＰＣと疎水性及び親水性モノマーの両方
から一種以上を選択されてなる共重合体では、その分子
量が５０００以上であり、それらの構成比は、ＭＰＣ：
疎水性モノマー：親水性モノマーは１５〜３５：２０〜
６０：２０〜６０であるのが好ましい。A copolymer comprising one or more of MPC and one selected from both hydrophobic and hydrophilic monomers has a molecular weight of 5,000 or more, and their constituent ratio is MPC:
Hydrophobic monomer: hydrophilic monomer is 15-35: 20-
60: 20-60 is preferred.
【００１７】本発明に係るＭＰＣの単独重合体または親
水性・疎水性モノマーとの共重合体の分子量は、分子量
が５０００より未満であるとリポソームへの吸着力が弱
く、一方、５００万を超えると粘度が高くなりすぎるた
め共に好ましくない。又、単独重合体・共重合体それぞ
れの含有量はリポソーム液に対して０．００１〜１０wt
% まで自由に添加できる。If the molecular weight of the homopolymer of MPC or the copolymer with hydrophilic / hydrophobic monomers according to the present invention is less than 5,000, the adsorptivity to liposomes is weak, while the molecular weight exceeds 5,000,000. And the viscosity is too high. The content of each of the homopolymer and the copolymer is 0.001 to 10 wt.
% Can be freely added.
【００１８】ＭＰＣ単独重合体・共重合体をリポソーム
に被覆させるには、リポソームが形成している水溶液に
ＭＰＣ単独重合体またはその共重合体含有水溶液を加え
て攪拌すれば良い。この被覆にあたってはＭＰＣ単独重
合体またはその共重合体のうち一種以上から選択される
ポリマーを組み合わせてもよい。In order to coat the MPC homopolymer / copolymer on the liposome, an aqueous solution containing the MPC homopolymer or its copolymer may be added to the aqueous solution in which the liposome is formed, followed by stirring. In this coating, a polymer selected from one or more of the MPC homopolymer and its copolymer may be combined.
【００１９】[0019]
【実施例】以下に記載する実施例をもって、本発明並び
にリポソームを安定化する本発明の効果をさらに詳細に
説明する。尚、ＭＰＣ単独重合体またはその共重合体の
配合に際しては化粧品や医薬品に通常使用されるグリセ
リン・塩・バッファーなどの水溶性添加物と併用しても
これらの機能には何等問題はない。The present invention and the effect of the present invention for stabilizing liposomes will be described in more detail with reference to the following examples. In addition, when the MPC homopolymer or its copolymer is blended, there is no problem in these functions even if it is used in combination with a water-soluble additive such as glycerin, a salt or a buffer usually used in cosmetics and pharmaceuticals.
【００２０】（実施例１）試料 リポソームに担持される水溶性物質として５（６）‐カ
ルボキシフルオレッセイン（以下ＣＦと略す）を使用し
た。このＣＦは、高濃度において濃度消光により蛍光を
発しない。従って、高濃度（２００mM）のＣＦをリポソ
ーム内水相にトラップすれば、蛍光の増加を測定するこ
とによりＣＦのリポソーム内水相から外水相への漏れを
調べることが出来る。Example 1 5 (6) -carboxyfluorescein (hereinafter abbreviated as CF) was used as a water-soluble substance carried on a sample liposome. This CF does not emit fluorescence due to concentration quenching at a high concentration. Therefore, if a high concentration (200 mM) of CF is trapped in the aqueous phase in the liposome, leakage of CF from the aqueous phase in the liposome to the external aqueous phase can be examined by measuring the increase in fluorescence.
【００２１】次にＣＦを内水相に含むリポソームは以下
のごとく調製した。卵黄レシチン７５mgとコレステロー
ル２５mgとをナス型フラスコ内にクロロホルム５mlと共
に加えて、完全に溶解してからロータリーエバポレータ
ーを用いて減圧下溶媒を完全に除去し、薄膜を作製し
た。これを減圧デシケーター中で一晩乾燥させ、クロロ
ホルムを完全に除去した。次にこのフラスコに攪拌子を
入れて２００mM ＣＦＰＨＯＳＰＨＳＴＥ ＢＵＦＦＥ
ＲＥＤ ＳＡＬＴＳ（以下ＰＢＳと略す）溶液（pH7.
４、ＮａＯＨで調整）１０ml加えてから、vortex mixer
（攪拌子）で薄膜を剥がしてリポソーム膜を形成させ
た。得られたリポソーム液を「ＥＸＴＲＵＤＥＲ」（商
品名、製造元：Ｌｉｐｅｘ Ｂｉｏｍｅｍｂｒａｎｅ
ｓ，Ｉｎｃ．，Ｃａｎａｄａ）で１０回濾過し、粒径平
均１００nmのリポソーム液に調整した。次にこれを「Se
pharose ４Ｂ」（商品名、製造元：Ｐｈａｒｍａｃｉａ
社）カラムでＰＢＳ溶液（PH7.４）を展開溶媒としてゲ
ル濾過を行った。溶媒の滴下速度は0.６６ml/minとし、
ＣＦをリポソーム内水相に担持した多重層及び一枚膜リ
ポソームを含むフラクションを採取した。得られたリポ
ソーム液のリン定量を実施してＰＢＳで0.１wt% になる
ように調整した。Next, liposomes containing CF in the internal aqueous phase were prepared as follows. Egg yolk lecithin (75 mg) and cholesterol (25 mg) were added to an eggplant-shaped flask together with chloroform (5 ml), completely dissolved, and then the solvent was completely removed under reduced pressure using a rotary evaporator to form a thin film. This was dried overnight in a vacuum desiccator to completely remove chloroform. Next, a stirrer was put into the flask, and 200 mM CF PHOSPHSTE BUFFE was added.
RED SALTS (hereinafter abbreviated as PBS) solution (pH 7.
4. Adjust with NaOH) Add 10ml, then vortex mixer
The thin film was peeled off with a stirrer to form a liposome membrane. The obtained liposome solution is called "EXTRUDER" (trade name , manufacturer: Lipex Biomembrane)
s, Inc. , Canada ) for 10 times to prepare a liposome solution having an average particle size of 100 nm. Next, call this "Se
pharose 4B "(trade name , manufacturer: Pharmacia
It was subjected to gel filtration as a developing solvent in PBS (pH 7.4) at company) column. The dropping rate of the solvent was 0.66 ml / min,
Fractions containing a multilayer carrying CF in the aqueous phase in the liposome and monolamellar liposomes were collected. The phosphorus content of the obtained liposome solution was determined and adjusted to 0.1 wt% with PBS.
【００２２】以上のごとく調整されたリポソーム液を検
体試料として、以下に記載する方法によりリポソーム内
水相から流出したＣＦの経時変化を求めた。Using the liposome solution prepared as described above as a test sample, the time-dependent change of CF flowing out from the aqueous phase in the liposome was determined by the method described below.
【００２３】方法 まず0.１wt% リポソーム液１部に対して下記「表
１」及び「化１」〜「化６」に記載の〜に各々示す
0.１wt% ＭＰＣ単独重合体またはその共重合体液１部を
混合攪拌し、リポソーム膜にポリマーを被覆した際のＣ
Ｆの流出を経時的に測定した。尚、対照試料として0.１
wt% リポソーム液１部に対してＰＢＳ溶液１部を混合攪
拌したものを使用した。測定は３７℃で行いＣＦの５２
０nmの蛍光の増加を追跡した（Ｅｘ４７０nm）。尚、リ
ポソーム内水相にトラップされたＣＦの量は３mlの混合
液に１０wt% の「Triton X‐１００」（商品名）水溶液
を１００μｌ加えることによりリポソーム膜を破壊し、
その時のＣＦの５２０nmの蛍光強度の値を測定すること
により求めた。この蛍光強度の値を１００とし、ＣＦの
流出による蛍光強度の増加を％単位で算出した。 Method First, the following Table 1 and Tables 1 to 6 described in Tables 1 and 2 correspond to 1 part of a 0.1 wt% liposome solution.
0.1 wt% of MPC homopolymer or 1 part of its copolymer solution was mixed and stirred to obtain C
The outflow of F was measured over time. In addition, 0.1 as a control sample
A mixture obtained by mixing and stirring 1 part of a PBS solution with 1 part of a wt% liposome solution was used. The measurement was performed at 37 ° C.
The increase in fluorescence at 0 nm was followed (Ex 470 nm). The amount of CF trapped in the aqueous phase in the liposome was determined by adding 100 μl of a 10 wt% aqueous solution of “Triton X-100” (trade name) to 3 ml of the mixture to destroy the liposome membrane.
It was determined by measuring the value of the fluorescence intensity at 520 nm of CF at that time. With the value of the fluorescence intensity taken as 100, the increase in the fluorescence intensity due to the outflow of CF was calculated in%.
【００２４】結果 結果を図１，２，３に示す。図１中、○印線は対照試
料、●印線はＭＰＣ‐St、図２中、●印線は対照試料、
○印線はＰＭＰＣ、△印線はＯＭＰＣ、図３中、●印線
は対照試料、○印線はＰＭＰＣ、▲印線はＡＡ、△印線
はＣＯＯＨをそれぞれ被覆した検体試料についてのもの
である。図１，２，３より、本発明に係るＭＰＣまたは
その共重合体によってリポソーム膜を被覆することによ
り、内容成分の放出を緩徐なるものに制御出来ることが
判明した。 Results The results are shown in FIGS. In FIG. 1, the circles indicate control samples, the circles indicate MPC-St, and in FIG. 2, the circles indicate control samples.
In FIG. 3, the circles indicate the PMPC, the triangles indicate the OMPC, and in FIG. 3, the circles indicate the control samples, the circles indicate the PMPCs, the triangles indicate the AA, and the triangles indicate the samples coated with COOH. is there. From FIGS. 1, 2 and 3, it was found that by coating the liposome membrane with the MPC or the copolymer thereof according to the present invention, the release of the content component can be controlled to be slow.
【００２５】[0025]
【表１】 [Table 1]
【００２６】[0026]
【化１】 Embedded image
【００２７】[0027]
【化２】 Embedded image
【００２８】[0028]
【化３】 Embedded image
【００２９】[0029]
【化４】 Embedded image
【００３０】[0030]
【化５】 Embedded image
【００３１】[0031]
【化６】 Embedded image
【００３２】（実施例２） ・非イオン活性剤に対する安定化試料 実施例１と同様に０．１wt% リポソーム液を調整した。(Example 2) Stabilized sample against nonionic active agent A 0.1 wt% liposome solution was prepared in the same manner as in Example 1.
【００３３】方法 まず0.１wt% リポソーム液1.５mlに対して「表１」
記載の，, 及びの0.１wt% ＭＰＣまたはその共
重合体1.５mlを混合攪拌し、リポソーム膜にポリマーを
被覆した後、非イオン活性剤ＰＯＥ（２５）monosteara
te（以下ＭＹＳと略す）0.２wt% ＰＢＳ溶液（pH7.４に
調整）を１００μｌ加えた際のＣＦの流出を経時的に観
察した。尚、対照試料は実施例１と同様の試料にＭＹＳ
を混合したものを使用した。測定は３０℃で蛍光強度の
増加は実施例１と同様に算出した。 Method First, "Table 1" was applied to 1.5 ml of a 0.1 wt% liposome solution.
After mixing and stirring 1.5 ml of the described,, and 0.1 wt% MPC or a copolymer thereof, and coating the liposome membrane with the polymer, the nonionic surfactant POE (25) monosteara
The outflow of CF when 100 µl of 0.2 wt% te (hereinafter abbreviated as MYS) PBS solution (adjusted to pH 7.4) was added was observed with time. The control sample was the same as that in Example 1 except that MYS was used.
Was used. The measurement was performed at 30 ° C., and the increase in the fluorescence intensity was calculated as in Example 1.
【００３４】結果 結果を図４，５，６に示す。図４中、○印線は対照試
料、●印線はＭＰＣ‐St、図５中、●印線は対照試料、
○印線はＰＭＰＣ、▲印線はＡＡ−Ｎａ、図６中、●印
線は対照試料、○印線はＰＭＰＣ、△印線はＣＯＯＨを
示す。図４，５，６より明らかなように、ＭＰＣまたは
その共重合体で被覆したリポソームの内容成分の放出は
ポリマーで被覆されていないリポソームのものに比べて
抑制されている。これはＭＰＣまたはその共重合体によ
ってリポソーム膜表面を被覆することにより、卵黄レシ
チンを活性剤から保護しているためであることが判明す
る。 Results The results are shown in FIGS. In FIG. 4, the mark ○ is a control sample, the mark ● is MPC-St, and in FIG. 5, the mark ● is a control sample.
In FIG. 6, 印 indicates PMPC, ▲ indicates AA-Na, and in FIG. 6, 対 照 indicates a control sample, ○ indicates PMPC, and △ indicates COOH. As is clear from FIGS. 4, 5, and 6, release of the contents of liposomes coated with MPC or a copolymer thereof is suppressed as compared with liposomes not coated with polymer. This proves that the yolk lecithin is protected from the active agent by coating the liposome membrane surface with MPC or a copolymer thereof.
【００３５】（実施例３） ・血中持続性の悪い医薬品成分の安定化試料 １００mlナス型フラスコ中で卵黄レシチン７５mgとコレ
ステロール２５mgをクロロホルム５mlに溶解した後、ロ
ータリーエバポレーターで減圧下溶媒を完全に除去し、
薄膜を作製した。これを減圧デシケーター中で一晩乾燥
させ、クロロホルムを完全に除去した。次にＰＢＳ水溶
液を５ml加え、実施例１に従って粒径平均１００nmのリ
ポソーム液を調製した。次に、制ガン剤であるアドリア
マイシン（ＡＤＭ）を脂質重量に対して0.２の重量比
（ＡＤＭ／ＬＩＰＩＤＳ＝0.２Ｗ／Ｗ）添加した。この
混液を６０℃水浴中に時々攪拌しながら１５分間放置
し、ＡＤＭを担持したリポソーム膜を形成させた。これ
を「Sepharose ４Ｂ」（商品名）カラムでＰＢＳ溶液
（pH7.４）を展開溶媒としてゲル濾過を行った。溶媒の
滴下速度は0.６６ml/minとし、フリーのＡＤＭフラクシ
ョンを除き、ＡＤＭをリポソーム膜に担持したフラクシ
ョンを採取した。本法により仕込み量の９０％のＡＤＭ
が担持された。[0035] (Example 3) was dissolved egg yolk lecithin 75mg and cholesterol 25mg chloroform 5ml stabilized bad pharmaceutical ingredient persistent blood sample 100ml eggplant type flask, the complete solvent under reduced pressure on a rotary evaporator Remove,
A thin film was prepared. This was dried overnight in a vacuum desiccator to completely remove chloroform. Next, 5 ml of a PBS aqueous solution was added to prepare a liposome solution having an average particle size of 100 nm according to Example 1. Next, adriamycin (ADM) as an anticancer drug was added at a weight ratio of 0.2 to the weight of lipid (ADM / LIPIDS = 0.2 W / W). The mixture was left in a 60 ° C. water bath for 15 minutes with occasional stirring to form a liposome membrane supporting ADM. This was subjected to gel filtration on a “Sepharose 4B” (trade name) column using a PBS solution (pH 7.4) as a developing solvent. The dropping rate of the solvent was 0.66 ml / min, and the free ADM fraction was removed, and the fraction carrying ADM on the liposome membrane was collected. ADM of 90% of charged amount by this method
Was carried.
【００３６】方法 まず担持ＡＤＭリポソーム液１部に対して「表１」記載
の0.１wt% ＰＭＰＣ液１部を混合攪拌し、リポソーム膜
に被覆した。尚、対照試料としてＡＤＭ単体及び上記方
法で得られたＡＤＭ担持リポソーム液の２種を使用し
た。 Method First, 1 part of a ADM liposome solution was mixed with 1 part of a 0.1 wt% PMPC solution described in Table 1 and stirred to coat the liposome membrane. As control samples, ADM alone and ADM-supported liposome solution obtained by the above method were used.
【００３７】・ＡＤＭの血中濃度の経時変化 ＩＣＲ雌性マウス（６週令、３匹／群）に、５mg/kg 相
当のＡＤＭ単体及びＡＤＭリポソーム・ＡＤＭ／ＭＰＣ
リポソームを尾静脈内投与した。任意の時間に0.２ml採
血後、遠心分離（10,000rpm ，３０min ，４℃）して上
清の蛍光測定（Ｅｘ：４７０nm，Ｅｍ：５９０nm）によ
りＡＤＭの定量を行った。Time-dependent changes in blood ADM concentration ICR female mice (6 weeks old, 3 mice / group) were treated with ADM alone and ADM liposomes equivalent to 5 mg / kg and ADM / MPC.
Liposomes were administered via the tail vein. After collecting 0.2 ml of blood at an arbitrary time, ADM was quantified by centrifugation (10,000 rpm, 30 min, 4 ° C.) and fluorescence measurement of the supernatant (Ex: 470 nm, Em: 590 nm).
【００３８】・Ｌ１２１０担癌マウスに対する延命効果 Ｌ１２１０細胞を約２００万個、ＤＢＡ／２マウス（雌
性，６週令，６匹／群）に腹腔内投与し、２４時間後に
５mg/kg 相当のＡＤＭ単体及びＡＤＭリポソーム、ＡＤ
Ｍ／ＭＰＣリポソームを尾静脈内に投与し、生存日数を
観測した。Life prolonging effect on L1210 tumor-bearing mice About 2 million L1210 cells were intraperitoneally administered to DBA / 2 mice (female, 6 weeks old, 6 mice / group), and ADM equivalent to 5 mg / kg 24 hours later. Simple substance and ADM liposome, AD
M / MPC liposomes were administered into the tail vein and the number of days alive was observed.
【００３９】結果 ・ＡＤＭの血中濃度の経時変化 ２０mg/kg に相当するＡＤＭをＡＤＭ単体・ＡＤＭリポ
ソーム・ＡＤＭ／ＭＰＣリポソームとして尾静脈内投与
し、経時的にＡＤＭの血中濃度の推移を測定した。結果
を図７に示す。■はＡＤＭ単体、▲はＡＤＭリポソー
ム、●はＡＤＭ／ＭＰＣリポソームを示す。図７よりＡ
ＤＭリポソームはＡＤＭ単体より高い血中濃度を示した
が、ＡＤＭ／ＭＰＣリポソームはさらにその２．５倍以
上の高濃度を２４hrにわたって維持した。 Results : Time-dependent change in blood concentration of ADM ADM equivalent to 20 mg / kg was administered into the tail vein as ADM alone, ADM liposome, and ADM / MPC liposome, and the change in ADM blood concentration over time was measured. did. FIG. 7 shows the results. ■ indicates ADM alone, ▲ indicates ADM liposome, and ● indicates ADM / MPC liposome. A from FIG.
The DM liposome showed a higher blood concentration than ADM alone, but the ADM / MPC liposome maintained a higher concentration 2.5 times or more over 24 hours.
【００４０】・Ｌ１２１０担癌マウスに対する延命効果 結果を図８に示す。Ｌ１２１０担癌マウスの平均寿命は
１５日であった。ＡＤＭ単体では延命効果はなく、ＡＤ
Ｍリポソームでは若干の延命効果が認められ、ＡＤＭ／
ＭＰＣリポソームでは少なくとも６０日までは１００％
の延命効果が観測された。Life prolonging effect on L1210 tumor-bearing mice The results are shown in FIG. The average lifespan of the L1210 tumor-bearing mouse was 15 days. ADM alone has no life extension effect, AD
The M liposome has a slightly longer life-span effect, and ADM /
100% for MPC liposomes at least up to 60 days
A life extension effect was observed.
【００４１】（実施例４） ・光に対し不安定な化粧品原料に対する安定化Example 4 Stabilization of Cosmetic Raw Materials Unstable to Light
【００４２】試料 ３００mlナス型フラスコ中で卵黄レシチン７５mgとコレ
ステロール２５mgをクロロホルム５mlに溶解した後、ロ
ータリーエバポレーターで減圧下溶媒を完全に除去し、
薄膜を作製した。これを減圧デシケーター中で一晩乾燥
させ、クロロホルムを完全に除去した。次にコウジ酸３
％ＰＢＳ水溶液（pH7.４に調整）１０mlを加え、３０分
間水和させた後vortex mixerで薄膜を剥がしてリポソー
ム膜にコウジ酸を担持したリポソーム膜を形成させた。
得られたリポソーム液を実施例１に従って0.１wt% リポ
ソーム液に調整した。本法により仕込み量の９０％のコ
ウジ酸が担持された。[0042] After the egg yolk lecithin 75mg and cholesterol 25mg in a sample 300ml eggplant type flask was dissolved in chloroform 5 ml, to completely remove the solvent under reduced pressure on a rotary evaporator,
A thin film was prepared. This was dried overnight in a vacuum desiccator to completely remove chloroform. Next, kojic acid 3
After adding 10 ml of an aqueous solution of PBS (adjusted to pH 7.4) and hydrating for 30 minutes, the thin film was peeled off with a vortex mixer to form a liposome membrane carrying kojic acid on the liposome membrane.
The obtained liposome solution was adjusted to 0.1 wt% liposome solution according to Example 1. According to this method, 90% of the charged amount of kojic acid was supported.
【００４３】方法 まず0.１wt% コウジ酸担持リポソーム液１部に対して
「表１」記載の0.１wt%ＰＭＰＣ液１部を混合攪拌し、
リポソーム膜に被覆した。尚、対照試料として上記方法
で得られたリポソーム液１部に対してＰＭＰＣ液１部を
混合攪拌したものを使用した。ＰＭＰＣを被覆したコウ
ジ酸を担持リポソーム液とコウジ酸のリポソーム液の経
時による光安定性（黄変の度合い）を試験した結果を下
記「表２」に示す。黄変の評価は、ガラス容器に入れた
試料の室温条件に放置した際の外観を下記の評価基準で
判定した。 ○：黄変が全く見られない △：わずかに黄変している ×：著しい黄変が生じたThe "Table 1" to the way initially 0.1 wt% kojic acid carrier liposome solution 1 part were mixed by stirring to 0.1 wt% PMPC solution 1 parts according,
Coated on liposome membrane. As a control sample, one obtained by mixing and stirring 1 part of the PMPC solution with 1 part of the liposome solution obtained by the above method was used. The results of testing the photostability (degree of yellowing) with time of the liposome solution carrying kojic acid and the liposome solution of kojic acid coated with PMPC are shown in Table 2 below. In the evaluation of yellowing, the appearance of a sample placed in a glass container when allowed to stand at room temperature was determined according to the following evaluation criteria. ：: No yellowing is observed Δ: Slightly yellowing X: Remarkable yellowing occurs
【００４４】[0044]
【表２】 [Table 2]
【００４５】結果 表２から明らかなように、リポソームにＰＭＰＣを被覆
することによりリポソーム膜から漏出するコウジ酸量が
抑制されるためコウジ酸の光安定性が著しく向上した。 Results As is evident from Table 2, the amount of kojic acid leaking from the liposome membrane was suppressed by coating the liposomes with PMPC, so that the photostability of kojic acid was remarkably improved.
【００４６】[0046]
【発明の効果】以上、実施例と共に述べたように本発明
に係る被膜安定化リポソームはＭＰＣ単独重合体または
その共重合体によって被覆してなるので、生理的条件下
におけるリポソームの徐放性を有すると共に機械的強度
が向上を図ることができる。As described above, the film-stabilized liposome according to the present invention is coated with an MPC homopolymer or a copolymer thereof, so that the liposome can be slowly released under physiological conditions. And the mechanical strength can be improved.
【図１】実施例１の結果を示すグラフである。FIG. 1 is a graph showing the results of Example 1.
【図２】実施例１の結果を示すグラフである。FIG. 2 is a graph showing the results of Example 1.
【図３】実施例１の結果を示すグラフである。FIG. 3 is a graph showing the results of Example 1.
【図４】実施例２の結果を示すグラフである。FIG. 4 is a graph showing the results of Example 2.
【図５】実施例２の結果を示すグラフである。FIG. 5 is a graph showing the results of Example 2.
【図６】実施例２の結果を示すグラフである。FIG. 6 is a graph showing the results of Example 2.
【図７】実施例３の結果を示すグラフである。FIG. 7 is a graph showing the results of Example 3.
【図８】実施例３の結果を示すグラフである。FIG. 8 is a graph showing the results of Example 3.
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 鷺谷 広道 神奈川県横浜市戸塚区柏尾町560 ポー ラ化成工業株式会社 戸塚研究所内 (72)発明者 黒田 秀夫 神奈川県横浜市戸塚区柏尾町560 ポー ラ化成工業株式会社 戸塚研究所内 (72)発明者 中林 宣男 千葉県松戸市小金原５−６−20 (58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名) A61K 9/127,7/00 B01J 13/22 ──────────────────────────────────────────────────続 き Continuing on the front page (72) Hiromichi Sagitani, Inventor Hiromichi Sakura, 560 Kashio-cho, Totsuka-ku, Yokohama-shi, Kanagawa Prefecture Inside the Totsuka Research Laboratories Co., Ltd. (72) Inventor Norio Nakabayashi 5-6-20 Koganehara, Matsudo City, Chiba Prefecture (58) Fields investigated (Int.Cl. 7 , DB name) A61K 9 / 127,7 / 00 B01J 13/22
Claims (6)
ルオキシエチルホスホリルコリン（ＭＰＣ）の単独重合
体またはＭＰＣとモノマーとの共重合体によって被覆さ
れてなることを特徴とする被膜安定化リポソーム。1. A film-stabilized liposome, wherein the surface of a liposome membrane is coated with a homopolymer of 2-methacryloyloxyethyl phosphorylcholine (MPC) or a copolymer of MPC and a monomer.
ルオキシエチルホスホリルコリン（ＭＰＣ）の単独重合
体またはＭＰＣとモノマーとの共重合体によって被覆す
ることを特徴とするリポソームの製造方法。2. A method for producing a liposome, comprising coating the surface of a liposome membrane with a homopolymer of 2-methacryloyloxyethyl phosphorylcholine (MPC) or a copolymer of MPC and a monomer.
ン；アクリル酸エステル及びメタクリル酸エステルから
選択される少なくとも一種以上の疎水性モノマーとＭＰ
Ｃとからなる共重合物であることを特徴とするリポソー
ムの製造方法。3. The copolymer according to claim 2, wherein the copolymer is styrene; at least one hydrophobic monomer selected from acrylates and methacrylates, and MP.
C. A method for producing a liposome, which is a copolymer comprising C.
アミド；ビニルピロリドン；ポリエチレングリコールモ
ノメタクリレート；２‐メタクリロイルオキシエチルメ
チルスルホキシド；アクリル酸；メタクリル酸；アクリ
ルアミド‐２‐メチル‐プロパンスルホン酸；ｐ‐スチ
レンスルホン酸；３‐メタクリロイルオキシプロピルス
ルホン酸；Ｎ，Ｎ‐ジメチルアミノエチルメタクリレー
ト；Ｎ，Ｎ‐ジエチルアミノエチルメタクリレート及び
ビニルピリジンから選択される少なくとも一種以上の親
水性モノマーとＭＰＣとからなる共重合物であることを
特徴とするリポソームの製造方法。4. The method according to claim 2, wherein the copolymer is acrylamide; vinylpyrrolidone; polyethylene glycol monomethacrylate; 2-methacryloyloxyethylmethylsulfoxide; acrylic acid; methacrylic acid; acrylamido-2-methyl-propanesulfonic acid; Styrenesulfonic acid; 3-methacryloyloxypropylsulfonic acid; N, N-dimethylaminoethyl methacrylate; Copolymer comprising MPC with at least one or more hydrophilic monomers selected from N, N-diethylaminoethyl methacrylate and vinylpyridine A method for producing a liposome, characterized in that:
疎水性モノマーと親水性モノマーとからなることを特徴
とするリポソームの製造方法。5. The method for producing a liposome according to claim 2, wherein the copolymer comprises MPC, a hydrophobic monomer and a hydrophilic monomer.
または脂質とステロールより構成されることを特徴とす
るリポソームの製造方法。6. The method for producing a liposome according to claim 2, wherein the liposome membrane is composed of a lipid or a lipid and a sterol.
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