RU2138507C1 - Производные тетрациклина - Google Patents

Производные тетрациклина Download PDF

Info

Publication number
RU2138507C1
RU2138507C1 RU94046140A RU94046140A RU2138507C1 RU 2138507 C1 RU2138507 C1 RU 2138507C1 RU 94046140 A RU94046140 A RU 94046140A RU 94046140 A RU94046140 A RU 94046140A RU 2138507 C1 RU2138507 C1 RU 2138507C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
compound
group
hydrogen
hydroxyl
formula
Prior art date
Application number
RU94046140A
Other languages
English (en)
Other versions
RU94046140A (ru
Inventor
Зхенг Хю
Венг Линглинг
Original Assignee
Искра Индастри Ко., Лтд.
Институт Оф Фармаколоджи, Вест Чайна Юниверсити Оф Медикал Сайенсиз
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from CN 93110919 external-priority patent/CN1092779A/zh
Application filed by Искра Индастри Ко., Лтд., Институт Оф Фармаколоджи, Вест Чайна Юниверсити Оф Медикал Сайенсиз filed Critical Искра Индастри Ко., Лтд.
Publication of RU94046140A publication Critical patent/RU94046140A/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2138507C1 publication Critical patent/RU2138507C1/ru

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J41/00—Normal steroids containing one or more nitrogen atoms not belonging to a hetero ring
    • C07J41/0033—Normal steroids containing one or more nitrogen atoms not belonging to a hetero ring not covered by C07J41/0005
    • C07J41/0072—Normal steroids containing one or more nitrogen atoms not belonging to a hetero ring not covered by C07J41/0005 the A ring of the steroid being aromatic
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
    • A61P19/10—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease for osteoporosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/02—Nutrients, e.g. vitamins, minerals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J41/00—Normal steroids containing one or more nitrogen atoms not belonging to a hetero ring
    • C07J41/0005—Normal steroids containing one or more nitrogen atoms not belonging to a hetero ring the nitrogen atom being directly linked to the cyclopenta(a)hydro phenanthrene skeleton
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J41/00—Normal steroids containing one or more nitrogen atoms not belonging to a hetero ring
    • C07J41/0033—Normal steroids containing one or more nitrogen atoms not belonging to a hetero ring not covered by C07J41/0005
    • C07J41/0038—Normal steroids containing one or more nitrogen atoms not belonging to a hetero ring not covered by C07J41/0005 with an androstane skeleton, including 18- or 19-substituted derivatives, 18-nor derivatives and also derivatives where position 17-beta is substituted by a carbon atom not directly bonded to a further carbon atom and not being part of an amide group
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J41/00—Normal steroids containing one or more nitrogen atoms not belonging to a hetero ring
    • C07J41/0033—Normal steroids containing one or more nitrogen atoms not belonging to a hetero ring not covered by C07J41/0005
    • C07J41/005—Normal steroids containing one or more nitrogen atoms not belonging to a hetero ring not covered by C07J41/0005 the 17-beta position being substituted by an uninterrupted chain of only two carbon atoms, e.g. pregnane derivatives
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J41/00—Normal steroids containing one or more nitrogen atoms not belonging to a hetero ring
    • C07J41/0033—Normal steroids containing one or more nitrogen atoms not belonging to a hetero ring not covered by C07J41/0005
    • C07J41/0077—Normal steroids containing one or more nitrogen atoms not belonging to a hetero ring not covered by C07J41/0005 substituted in position 11-beta by a carbon atom, further substituted by a group comprising at least one further carbon atom
    • C07J41/0083—Normal steroids containing one or more nitrogen atoms not belonging to a hetero ring not covered by C07J41/0005 substituted in position 11-beta by a carbon atom, further substituted by a group comprising at least one further carbon atom substituted in position 11-beta by an optionally substituted phenyl group not further condensed with other rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J43/00—Normal steroids having a nitrogen-containing hetero ring spiro-condensed or not condensed with the cyclopenta(a)hydrophenanthrene skeleton
    • C07J43/003—Normal steroids having a nitrogen-containing hetero ring spiro-condensed or not condensed with the cyclopenta(a)hydrophenanthrene skeleton not condensed
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J71/00—Steroids in which the cyclopenta(a)hydrophenanthrene skeleton is condensed with a heterocyclic ring
    • C07J71/0005—Oxygen-containing hetero ring
    • C07J71/0026—Oxygen-containing hetero ring cyclic ketals
    • C07J71/0031—Oxygen-containing hetero ring cyclic ketals at positions 16, 17
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J71/00—Steroids in which the cyclopenta(a)hydrophenanthrene skeleton is condensed with a heterocyclic ring
    • C07J71/0036—Nitrogen-containing hetero ring
    • C07J71/0042—Nitrogen only
    • C07J71/0047—Nitrogen only at position 2(3)

Abstract

Описываются новые производные тетрациклина общей формулы I, где значения R1, R2, R3, R4 указаны в п.1 формулы изобретения. Соединения способны концентрироваться в костной ткани и обладают ингибирующим резорбцию и промотирующим окостенение действием. 7 з.п. ф-лы., 3 ил., 7 табл.

Description

Изобретение относится к соединениям, выполняющим новые функции ингибиторов костной резобции/промоторов остеогенеза.
Нормальная регенерация костей характеризуется равновесием между костной резорбцией и остеогенезом, и в случае преобладания костной резорбции происходит растворение и уменьшение костных компонентов, что ведет к костным заболеваниям, например, остеопорозу. Известно, что половые гормоны, например, экстроген, способны подавлять костную резорбцию, вследствие чего применяются в Европе и Америке для профилактики и лечения остеопороза. Тем не менее, до настоящего времени не подтверждено, что такие гормоны концентрируются в костях, и не следует недооценивать возможность онкогеннеза в результате введения одних только таких гормонов.
С другой стороны, антибиотики тетрациклинового типа обладают способностью концентрироваться в костях, но при этом не способны ни ингибировать костную резорбцию, ни способствовать образованию костного вещества. И только в описании патента США N 4925833 указано, что тетрациклин промотирует синтез костных белков в опытах на клеточном уровне. Хотя синтез костных белков и необходим для остеогенеза, одного только синтеза костных белков мало для остеогенеза.
И до настоящего времени не известны вещества, способные промотировать остеогенез, и которые могут быть использованы в качестве профилактических и лечебных средств при костных заболеваниях.
Соответственно, целью настоящего изобретения является создание средства для лечения костных заболеваний, ингибирующего костную резорбцию и способствующего остеогенезу, предпочтительно синергически, и способного концентрироваться в костях.
Создателями настоящего изобретения проведены разнообразные исследования, направленные на решение вышеуказанных проблем, и в ходе этих исследований было обнаружено, что соединения, полученные ковалентным связыванием антибиотиков тетрациклинового типа и гормонов стероидного типа, например, экстрогена, с применением связующего соединения, промотируют остеогенез, помимо способности ингибировать костную резорбцию, а способны накапливаться в костях, которые являются предметом настоящего изобретения.
Соответственно, в настоящем изобретении предлагаются промоторы остеогенеза/ингибиторы костной резорбции, имеющие общую формулу (I):
X-Y-Z
(где X представляет одновалентную группу следующей формулы (II):
Figure 00000003

(где R1 представляет водород или гидроксил, R2 представляет водород или гидроксил, R3 представляет водород или метил и R4 представляет водород, галоген или диметиламиногруппу);
Y представляет двухвалентную или трехвалентную группу следующих формул (III), (IV) или (V):
Figure 00000004

Figure 00000005

(где n = 0 - 4 и X представляет прямую связь -O- или -NH-);
Z представляет одновалентную группу, образованную удалением водорода или гидроксила из соединения следующей формулы (VI):
Figure 00000006

(где R'1 представляет HO- или O=; R'2 представляет атом водорода или метил; R'3 представляет атом водорода, фенил или замещенный фенил; R'4 представляет метил или этил; R'5 представляет гидроксил, кетогруппу или ацетил; R'6 представляет водород, гидроксил, метил, этинил или пропинил, или R'5 и R'6 совместно образуют группу =O; R'7 представляет водород, гидроксил или =O, или R'6 и R'7 вместе присоединены к кислородам 2,2-диоксипропильной группы и символом
Figure 00000007
обозначена простая или двойная связь), причем присоединение этой группы происходит в 2-положение, 3-положение, 4-положение, 6-положение, 7-положение или 17-положение, или по фенильной группе, присоединенной в 11-положении, связь (1) в формуле (II) и связь (2) в формулах (III) - (V) непосредственно соединены, связь (3) в формулах (III) - (V) и любая связь в вышеуказанных положениях формулы (VI) непосредственно соединены).
В вышеуказанной формуле (II) галоген представлен, например: хлором, фтором, бромом или йодом, предпочтительно хлором.
Краткие пояснения к диаграммам
На фиг. 1 приведена фотография, иллюстрирующая результаты эксперимента N 3.
На фиг. 2 приведена фотография, иллюстрирующая результаты эксперимента N 3.
На фиг. 3 приведена фотография, иллюстрирующая результаты эксперимента N 3.
На фиг. 1-3 приведены результаты одного и того же эксперимента, повторенного трижды.
Предпочтительными примерами одновалентной группы формулы (II), являющейся фрагментом соединения формулы (I) в качестве активного компонента фармацевтического препарата изобретения, включают:
Формулу (II-1):
Одновалентная группа тетрациклина, представленная формулой (II-I) (где (в формуле (II)) R1 - водород, R2 - гидроксил, R3 - метил и R4 - водород):
Figure 00000008

Формулу (II-2):
Одновалентная группа террамицина, представленная формулой (II-2) (где (в формуле (II)) R1 - гидроксил, R2 - гидроксил, R3 - метил и R4 - метил):
Figure 00000009

Формулу (II-3):
Одновалентная группа хлортетрациклина, представленная формулой (II-3) (где (в формуле (II)) R1 - водород, R2 - гидроксил, R3 - метил и R4 - хлор):
Figure 00000010

Формулу (II-4):
Одновалентная группа дезокситетрациклина, представленная формулой (II-4) (где (в формуле (II)) R1 - гидроксил, R2 - водород, R3 - метил и R4 - водород):
Figure 00000011

Формулу (II-5):
Одновалентная группа аминотетрациклина, представленная формулой (II-5) (где (в формуле (II)) R1 - водород, R2 - водород, R3 - водород и R4 - диметиламиногруппа):
Figure 00000012

Предпочтительные примеры одновалентных групп соединения формулы (VI), являющихся фрагментами соединений формулы (I) в качестве активных компонентов фармацевтических препаратов настоящего изобретения, включают следующее.
Формулу (VI-1):
Одновалентная группа эстрона представлена формулой (VI-1) (где (в формуле (VI)) R'5 и R'6 совместно образуют группу =O и R'7 - водород):
Figure 00000013

Формулу (VI-2):
Одновалентная группа эстрадиола представлена формулой (VI-2) (где (в формуле (VI)) R'5 - гидроксил, R'6 - водород и R'7 - водород):
Figure 00000014

Формулу (VI-3):
Одновалентная группа эстроалкинола представлена формулой (VI-3) (где (в формуле (VI)) R'5 - гидроксил, R'6 - этинил и R'7 - водород):
Figure 00000015

Формулу (VI-4):
Одновалентная группа эстриола представлена формулой (VI-4) (где (в формуле (VI)) R'5 - гидроксил, R'6 - водород и R'7 - гидроксил):
Figure 00000016

Соединительная группа в соединениях вышеприведенных формул (VI) - (VI-4) может находиться в 3-положении, 6-положении или 17-положении.
Соединения формулы (VI) могут быть также представлены одновалентными группами, полученными удалением водорода или гидроксильной группы в следующих соединениях:
Figure 00000017

Figure 00000018

Figure 00000019

Figure 00000020

Figure 00000021

Figure 00000022

Figure 00000023

Figure 00000024

Figure 00000025

Соответственно активный компонент фармацевтического препарата настоящего изобретения может быть обозначен следующим шифром; например:
/II-1/-/III/-(3) /V-1/ (цифрой в скобках () указано положение связующей группы в группе формулы /VI-1/. Возможные варианты таких сочетаний представлены таблицей А (см.в конце описания).
Сами соединения, охарактеризованные выше, могут быть получены известными способами. К примеру, связующее соединение формул (III-V) вначале соединяют со стероидным соединением формулы (VI) и полученный продукт присоединения соединяют с соединением тетрациклинового ряда.
Присоединение связующего соединения формул (III) - (V) в 3-положении стероидного соединения формулы (VI) осуществляют, например, согласно следующей схеме реакции:
Figure 00000026

Кроме того, соединение, в котором R'5 - гидроксил и R'6 - водород или этинил, может быть получено, например, следующей реакцией:
Figure 00000027

Для присоединения связующего соединения формул (III) - (V) в 6-положении стероидного соединения формулы (VI) вначале в 6-положение стероидного соединения вводят группу =O, после чего проводят следующую реакцию:
Figure 00000028

Затем к продукту реакции связующего соединения со стероидным соединением может быть присоединено тетрациклиновое соединение путем связывания N-атома связующего соединения с N-атомом амидной группы тетрациклинового соединения с помощью формальдегида.
Фармацевтические препараты настоящего изобретения могут быть приготовлены в дозированной форме для перорального или парентерального введения, например: внутривенным вливанием, чрезкожной инъекцией, внутримышечной инъекцией, внутрибрюшинной инъекцией и т.д. Эффективная ежедневная доза для человека равна 0.2 - 200 мг при пероральном введении и 0.1 - 100 мг при парентеральном введении. Соединения настоящего изобретения характеризуются чрезвычайно низкой токсичностью, и значение ЛД50 соединения I, полученного в примере 1, например, для мышей составляет 143 мг/кг.
Фармацевтические препараты настоящего изобретения могут быть получены в виде обычных форм, определяемых путем введения. В случае перорального введения фармацевтический препарат может иметь вид, например: капсулы, таблетки, гранулы, порошка, жидкого препарата и т.д. Такие формы получают обычным путем. Жидкие препараты могут быть получены, например, растворением или суспендированием активного компонента настоящего изобретения в приемлемой среде, например, водном буферном растворе и т.п. Порошковый препарат может быть приготовлен смешиванием активного компонента с порошкообразным наполнителем таким, как крахмал, например, кукурузный крахмал и/или сахарид, например, лактоза.
Таблетки могут быть получены смешиванием активного компонента с наполнителем, например, вышеуказанным наполнителем и связующим средством, например, крахмальной пастой и прессованием смеси в таблетирующей машине. Гранулы могут быть приготовлены смешиванием активного компонента с наполнителем, связующим средством и т.д., разбавлением смеси с жидкостью, например: водой и/или глицерином, просеиванием полученного продукта через сито с его гранулированием и высушиванием полученных гранул. Капсулы могут быть приготовлены капсулированием вышеописанных порошка или гранул в капсулы соответствующего размера.
Парентеральные дозированные формы могут быть получены растворением или суспендированием активного компонента в физиологическом солевом растворе или буферном солевом, таком, как, например, фосфатный буферный раствор. Парентеральные дозированные формы могут представлять высушенные вымораживанием продукты, которые перед употреблением необходимо растворить или суспендировать, и добавками для сушки вымораживанием могут служить сахарид, например, лактоза или обычные добавки для сушки вымораживанием.
Примеры
Далее приводятся конкретные примеры соединений настоящего изобретения. Однако, объем изобретения в целом не ограничен только этими примерами.
Пример синтеза 1
Синтез 1-1
3-хлорэтокси-17-оксиэстра-1,3,5(10)-триена (соединение 1-1)
К толуольному раствору, полученному смешиванием 27.1 г эстрона, 22.2 г 3-хлорэтокси-17-оксиэстра-1,3,5(10)-триена и небольшого количества триэтиланилинхлорида, добавляют раствор NaOH. После установления pH 10 реакцию продолжают 4 часа и растворитель испаряют. Перекристаллизацией твердого остатка из спирта получают соединение (1-1, R7 = H), выход 79%
Т.пл. 86 - 88oC.
Элементный анализ: C 72.4, H 4.3, Cl 10.71.
Синтез 1-2
N-[17-оксиэстра-1,3,5(10)-триен-3-оксиэтил]-пиперазина (соединение 1-2)
Смесь 7.8 г вышеописанного соединения (1-1), 46.6 г безводного пиперазина и 120 мл диметилформамида (ДМФА) нагревают 5 часов при 80 - 100oC. После удаления ДМФА испарением и перекристаллизации полученного твердого остатка из спирта и ацетона получают белое кристаллическое соединение (VI), выход 85%.
Т.пл. 140 - 142oC.
Элементный анализ: C 75.2, H 9.2, N 7.4.
Синтез 1-3
N-4-[17-оксиэстра-1,3,5(10)-триен-3-оксиэтил] -пиперазин-1- метилтетрациклина (соединение 1-3)
Смесь 3.8 г вышеописанного соединения (1-2), 0.03 г метаформальдегида и 15 мл изопропанола нагревают 2 часа при 40oC. После добавления 3.5 г тетрациклина смесь перемешивают 5 часов. По окончании реакции продукт реакции фильтруют и промывают изопропанолом и этиловом эфиром. В результате получают соединение (1-3) в виде твердого желтого вещества (R1 = R4 = H, R2 = OH, R3 = CH3), выход 95%.
Т.пл. 160oC (разл.).
Элементный анализ: C 67.21, H 7.12, N 6.67.
Figure 00000029

Пример синтеза 2
Синтез 2-1
N-[17 β -Гидроксиэстра-1,3,5(10)-триен-3-оксиэтил]пиперазин (соединение 2-1)
В метиловом спирте растворяют 3.8 г соединения (1-2) примера 1. После добавления 0.5 г боргидрата калия в щелочных условиях реакционную смесь нагревают с перемешиванием 3 часа. Реакционную смесь нейтрализуют кислотой и метиловый спирт испаряют. Перекристаллизацией полученного твердого остатка из спирта получают белые кристаллы (соединение 2-1, R7 = H), выход 91%.
Т.пл. 141 - 142oC.
Элементный анализ: C 75.21, H 9.23, N 7.14.
2-2
Синтез N-4-[17 β -гидроксиэстра-1,3,5(10)-триен-3- оксиэтил]пиперазин-1-метилентетрациклина (соединение 2-2)
Смесь 3.84 г вышеописанного соединения (2-1), 0.03 г метаформальдегида и 20 мл изопропанола нагревают 2 часа при 40oC. После добавления 3.5 г тетрациклина реакционную смесь перемешивают 5 часов. По окончании реакции продукт реакции фильтруют и промывают изопропанолом и этиловым эфиром. В результате получают бледно-желтое твердое вещество (соединение 2-2) (R1 = R4 = H, R2 = OH, R3 = CH3), выход 95%.
Т.пл. 165oC (разл.).
Элементный анализ: C 67.3, H 7.34, N 6.54.
Figure 00000030

Пример синтеза 3
Синтез N-4-[17 β -гидроксиэстра-1,3,5(10)-триен-3-оксиэтил]-1- пиперазин-1-метилен(окситетрациклина) (соединение 3-1)
Смесь 3.8 г соединения примера 2 (2-1), 0.03 г метаформальдегида и 20 мл изопропанола нагревают 2 часа при 40oC. После добавления 3.5 г тетрамицина реакционную смесь перемешивают 5 часов. По окончании реакции и обработки по методике примера 1-3 получают бледно-желтое твердое вещество (соединение 3) (R1 = R2 = OH, R3 = CH3, R4 = H), выход 93%.
Т.пл. 171oC (разл.).
Элементный анализ: C 65.62, H 7.1, N 6.67.
Figure 00000031

Пример синтеза 4
4-1
Синтез бис-N,N-[17-оксиэстра-1,3,5(10)-триен-3-оксиэтил]амина (соединение 4-1)
К смеси 3.6 г мастагенхлорида, 12 г эстрона, 4 г триэтиланилина, воды и толуола добавляют при перемешивании раствор NaOH. После перемешивания смеси 5 часов растворитель испаряют. Перекристаллизацией твердого остатка из спирта получают целевое соединение, выход 72%.
Т.пл. 256 - 259oC.
Элементный анализ: C 78.5, H 8.6, N 2.31.
4-2
Синтез бис-N, N-[17-оксиэстра-1,3,5(10)-триен-3- оксиэтил]аминометилентетрациклина (соединение 4-2)
Смесь 6.1 г вышеописанного соединения (4-1), 0.03 г метаформальдегида и 20 мл изопропанола нагревают 2 часа при 40oC. После добавления 3.5 г тетрациклина реакционную смесь перемешивают 8 часов. По окончании реакции получают бледно-желтое твердое вещество (соединение 4-2) (R1 = R4 = H, R2 = OH, R3 = CH3), выход 68%.
Т.пл. 183oC (разл.).
Элементный анализ: C 71.1, H 7.21, N 3.89.
Строение соединения представлено следующими молекулярными формулами:
Figure 00000032

Figure 00000033

Пример синтеза 5
5-1
Синтез бис-N, N-[17 β -гидроксиэстра-1,3,5(10)-триен-3-оксиэтил]амина (соединение 5-1)
К 6.1 г вышеописанного соединения (4-1) добавляют метиловый спирт и после прибавления в щелочных условиях 0.5 г боргидрата калия реакционную смесь перемешивают 5 часов. Затем реакционную смесь нейтрализуют кислотой и метиловый спирт испаряют. Твердый остаток очищают в растворе ацетона и в растворе спирта. Эстрон-17-кетогруппу в соединении (4-1) восстанавливают в -17 β -гидроксигруппу. С выходом 82% получено белое вещество.
Т.пл. 193 - 197oC.
Элементный анализ: C 78.41, H 8.51, N 2.33.
5-2.
Синтез бис-N, N-[17 β -гидроксиэстра-1,3,5(10)триен-3- оксиэтил]аминометилентетрациклина (соединение 5-2)
Смесь 5.4 г соединения (5-1), описанного выше, 0.03 г метаформальдегида и 20 мл изопропанола перемешивают 2 часа при 40oC. После добавления 3.5 г тетрациклина реакционную смесь перемешивают 8 часов. По окончании реакции получено бледно-желтое твердое вещество (соединение 5-2) (R1 = R4 = H, R2 = OH, R3 = CH3), выделенное в тех же условиях, что и в примере 1-3, выход 94%
Т.пл. 171oC (разл.).
Элементный анализ: C 71.02, H 7.02, N 3.98.
Строение соединения представлено следующей молекулярной формулой:
Figure 00000034

Пример синтеза 6
6-1.
Синтез бис-N, N-[17 β -гидрокси-17 α/ -этинилэстра-1,3,5(10)-триен-3-оксиэтил]амина (соединение 6-1)
В смеси 100 мл тетрагидрофурана и 1 г гидроксида калия растворяют 6.1 г соединения (4-1) примера 4 и через смесь при интенсивном перемешивании при 0oC пропускают газообразный ацетилен до полного завершения реакции. Добавлением кислоты реакционную смесь нейтрализуют до pH 4 и растворитель испаряют. Продукт реакции промывают водой и сушат. Последующей перекристаллизацией из спирта и хлороформа получено белое твердое соединение (6-1), выход 78%.
Т.пл. 201 - 205oC.
Элементный анализ: C 79.21, H 8.58, N 2.18.
Строение соединения соответствует следующей молекулярной формуле:
Figure 00000035

6-2.
Смесь 6.6 г вышеописанного соединения (6-1), и 0.03 г метаформальдегида и 20 мл изопропанола нагревают 2 часа при 60oC. Затем добавляют 3.4 г тетрациклина и реакционную смесь перемешивают 8 часов. По окончании реакции обработкой по методике примера 1-3 с выходом 93% получают бледно-желтое твердое вещество (соединение 6-2), т.е. бис-N,N-[17 β -гидрокси-17 α -этинилэстра-1,3,5(10)триен-3-оксиэтил] аминометилентетрациклин (R1 = R4 = H, R2 = OH, R3 = CH3).
Т.пл. 178oC (разл.).
Элементный анализ: C 72.1, H 7.12, N 3.9.
Строение соединения соответствует следующей молекулярной формуле:
Figure 00000036

Пример синтеза 7
7-1.
Синтез N-[17-оксиэстра-1,3,5(10)-триен-3-оксиэтил] -N-метиламина (соединение 7-1)
К толуольному раствору 2.7 г эстрона, 1 г хлорэтилметиламина и небольшого количества триэтиланилина добавляют раствор гидроксида натрия. После установления pH 10 реакционную смесь выдерживают 4 часа. Затем растворитель испаряют и перекристаллизацией твердого остатка из спирта получают соединение (7-1, R7 = H), выход 71%.
Т.пл. 262 - 266oC.
Элементный анализ: C 75.24, H 9.41, N 4.28.
Figure 00000037

7-2.
Смесь 3.3 г вышеописанного соединения (7-1), 0.03 г метаформальдегида и 20 мл изопропанола нагревают 2 часа при 60oC и затем добавляют 3.5 г тетрациклина. Реакционную смесь перемешивают 8 часов. По окончании реакции обработкой по методике примера 1-3 с выходом 90% получают бледно-желтое твердое вещество (соединение 7-2), т.е. N-[17-оксиэстра-1,3,5(10)-триен-3-оксиэтил] -N-метиламинометилентетрациклин (R1 = R4 = H, R2 = OH, R3 = CH3).
Т.пл. 190oC (разл.).
Элементный анализ: C 68.8, H 7.72, N 3.62.
Строение соединения соответствует следующей молекулярной формуле:
Figure 00000038

Пример синтеза 8
8-1.
Синтез N-[3,17 β -дигидроксиэстра-1,3,5(10)триен-6- аминоэтил]пиперазина (соединение 8-1)
120 мл тетрагидрофурана растворяют 5.2 г соединения (8-0) и к раствору добавляют 3.2 г аминоэтилпиперазина. Реакционную смесь перемешивают 2 часа, ТГФ удаляют испарением и к остатку добавляют 100 метилового спирта и 2.8 г муравьиной кислоты. Перемешивание реакционной смеси продолжают еще 3 часа. Метиловый спирт удаляют испарением и перекристаллизацией из спирта получают соединение 8-1.
Т.пл. 172 - 177oC.
8-2.
Синтез N-4-(3,17 β -дигидроксиэстра-1,3,5(10)-триен-6- аминоэтил)пиперазин-1-метилентетрациклина (соединение 8-2)
Смесь 4.1 г вышеописанного соединения (8-1), 0.03 г метаформальдегида и 20 мл изопропанола нагревают 2 часа при 50oC. После добавления 3.5 г тетрациклина реакционную смесь перемешивают 5 часов. По окончании реакции продукт реакции фильтруют, промывают изопропанолом и этиловым эфиром и после сушки в вакууме с выходом 81.2% получают бледно-желтое твердое вещество (соединение 8-2) с температурой плавления 167oC (разл.).
Figure 00000039

Соединение (8-0) получено следующим образом:
1. Получение 17 β -эстроалкинола
В метиловом спирте растворяют 4 г эстрона и к раствору при 30oC по каплям прибавляют смесь 0.8 г боргидрата калия, 1.76 г гидроксида натрия и 8.8 мл воды. Реакционную смесь выдерживают 2 часа, нейтрализуют до нейтральной реакции разбавленной уксусной кислотой и затем разбавляют водой. Образовавшееся твердое вещество отфильтровывают, промывают водой и сушат. Перекристаллизацией продукта из водного спирта с выходом 97.2% получают белые кристаллы с температурой плавления 173 - 174oC.
2. Получение диацетата 17 β -эстроалкинола
Раствор 10 г 17 β -эстроалкинола в пиритеине смешивают с 35 мл уксусной кислоты. Реакционную смесь перемешивают один час и переносят в ледяную воду с образованием твердого вещества. Образовавшийся осадок фильтруют, сушат и перекристаллизацией продукта реакции из абсолютного спирта с выходом 97% получают белые кристаллы с температурой плавления 126 - 128oC.
3. Получение диацетата 6-карбонил-17 β -эстроалкинола (Соединение (XII))
В бензоле растворяют 5 г диацетата 17 β -эстроалкинола, при охлаждении по каплям прибавляют 0.45 трехокиси хрома и полученную смесь растворяют в 30 мл ледяной уксусной кислоты, 20 мл уксусной кислоты и 30 мл бензола. По окончании реакции смесь перемешивают еще некоторое время и затем переносят в воду. Продукт реакции экстрагируют этиловым эфиром, промывают насыщенным раствором гидрокарбоната натрия и водой, сушат, концентрируют и последующей очисткой на силикагеле получают целевое соединение, выход 40%, температура плавления 173 - 175oC.
Пример синтеза 9
Синтез N-4-[17-оксиэстра-1,3,5(10)-триен-3-оксиэтил] -1-пиперазин-1-метилендоксициклина HCl (соединение 9)
Смесь 2.2 г соединения (1-2), 0.2 г полиформальдегида и 100 мл изопропанола перемешивают 1.5 часа с нагреванием при 60oC, после чего добавляют 3 г гидрохлорида доксициклина. Затем реакционную смесь перемешивают еще 2.5 часа при 60oC. По окончании реакции продукт реакции отфильтровывают, промывают изопропанолом и этиловым эфиром и после сушки получают бледно-желтое вещество (соединение 9) с температурой плавления 172oC (разл.), выход 87%.
Figure 00000040

Пример синтеза 10
Синтез N-4-[17-оксиэстра-1,3,5(10)-триен-3-оксиэтил] пиперазин-1- метилен(окситетрациклина) (соединение 10)
Смесь 0.91 г соединения (1-2), 80 мг полиформальдегида и 50 мл изопропанола нагревают с перемешиванием 2 часа при 60oC. После добавления 1 г террамицина реакционную смесь перемешивают еще 3 часа при 60oC. Продукт реакции отфильтровывают, промывают изопропанолом и этиловым эфиром и после сушки с выходом 89% получают бледно-желтое твердое вещество с температурой плавления 175oC (разл.).
Figure 00000041

Пример синтеза 11
Синтез N-4-[17-гидроксиэстра-1,3,5(10)-триен-3-этоксиэтил]- пиперазин-1-метилентетрациклина (соединение 11)
Смесь 4.1 г N-(17-гидроксиэстрон-1,3,5(10)-триен-3-оксиэтил)пиперазина, 0.5 г полиформальдегида и 50 мл изопропанола нагревают 2 часа при 60oC с перемешиванием. После добавления 4 г тетрациклина реакционную смесь выдерживают 3 часа при 40 - 45oC. Продукт реакции отфильтровывают и промыванием изопропанолом и этиловым эфиром с выходом 68.6% получают бледно-желтое твердое вещество (соединение 11) с температурой плавления 154oC (разл.).
Figure 00000042

Пример синтеза 12
Синтез 17-гидроксиандрост-4-ен-3-оксиэтилметилентетрациклина
Figure 00000043

Смесь 3.3 г 3-аминоэтокси-17-гидроксиандрост-4-ена, 0.3 г метаформальдегида и 40 мл изопропанола нагревают 4 часа при 60oC. После добавления 4.5 г тетрациклина реакционную смесь перемешивают 5 часов. Продукт реакции отфильтровывают и после промывания изопропанолом и этиловым эфиром с выходом 92% получают желтое твердое вещество.
Элементный анализ: C 66.78, H 7.41, N 5.38.
Пример синтеза 13
Синтез 17-гидроксиандрост-4-ен-3-он-6-метилен(оксиэтиламинометилен) тетрациклина
Figure 00000044

Смесь 3.6 г 6-аминоэтоксиметилен-17-гидроксиандрост-4-ен-3-она, 0.3 г метаформальдегида, 4.5 г тетрациклина и 30 мл ацетона перемешивают 24 часа в темноте при комнатной температуре. По окончании реакции продукт реакции отфильтровывают и после промывания ацетоном и этиловым эфиром с выходом 86% получают желтое твердое вещество.
Элементный анализ: C 67.9, H 7.67, N 5.18.
Пример синтеза 14
Синтез 17-гидроксиандростан-3-(оксиэтиламинометилен)тетрациклина
Figure 00000045

Смесь 3.35 г 3-аминоэтокси-17-гидроксиандростана, 0.3 г метаформальдегида, 4.5 г тетрациклина и 30 мл ацетона перемешивают 30 часов в темноте при комнатной температуре. По окончании реакции продукт реакции отфильтровывают и после промывания ацетоном и этиловым эфиром с выходом 85% получают желтое твердое вещество.
Элементный анализ: C 66.61, H 7.69, N 5.4.
Пример синтеза 15
Синтез 17 β -гидрокси-18-метил-19-норандрост-4-ен-3-он-17 α -(бутиниленаминометилен)тетрациклина
Figure 00000046

Смесь 3.7 г 17 α -аминоэтилэтинил-17 β -гидрокси-18-метил-19-норандрост-4-ен-3-она, 0.3 г метаформальдегида и 30 мл изопропанола нагревают 4 часа при 60oC. После добавления 4.5 г тетрациклина реакционную смесь перемешивают 6 часов. По окончании реакции продукт реакции отфильтровывают и после промывания изопропанолом и этиловым эфиром с выходом 85% получают желтое твердое вещество.
Элементный анализ: C 68.51, H 7.11, N 5.17.
Пример синтеза 16
Синтез 16 α , 17 β -дигидроксиэстра-1,3,5(10)-триен-3-(оксиэтиламинометилен)тетрациклина
Figure 00000047

Смесь 3.3 г 3-аминоэтокси-16 α , 17 β/ -дигидроксиэстра-1,3,5(10)-триена, 0.3 г метаформальдегида и 50 мл изопропанола нагревают 2 часа при 80oC и затем охлаждают до 40oC. После добавления 4.5 г тетрациклина реакционную смесь выдерживают 6 часов. По окончании реакции продукт реакции отфильтровывают и после промывания изопропанолом и этиловым эфиром с выходом 85% получают желтое твердое вещество.
Элементный анализ: C 65.48, H 6.82, N 5.13.
Пример синтеза 17
Синтез 18-метил-17-оксиэстра-1,3,5(10)-триен-3-(оксиэтиламинометилен)тетрациклина
Figure 00000048

Смесь 3.3 г 3-аминоэтокси-18-метилэстра-1,3,5(10)-триена, 0.3 г метаформальдегида и 50 мл изопропанола выдерживают 48 часов в темноте при 30oC. По окончании реакции продукт реакции отфильтровывают и после промывания изопропанолом и этиловым эфиром с выходом 82% получают желтое твердое вещество.
Элементный анализ: C 67.45, H 6.86, N 5.27.
Пример синтеза 18
Синтез 17 α -гидроксипрегна-4-ен-20-он-3-(оксиэтиламинометилен) тетрациклина
Figure 00000049

Смесь 3.8 г 3-аминоэтокси-17 α -гидроксипрегн-4-ен-20-она, 0.3 г метаформальдегида и 50 мл изопропанола нагревают 2 часа при 60oC. Реакционную смесь охлаждают до 40oC и добавляют 4.5 г тетрациклина. Затем реакционную смесь выдерживают 5 часов при 60oC. По окончании реакции продукт реакции отфильтровывают и после промывания ацетоном и этиловым эфиром с выходом 87% получают желтое твердое вещество.
Элементный анализ: C 66.52, H 7.37, N 5.01.
Пример синтеза 19
Синтез прегна-5-ен-20-он-3-(оксиэтиламинометилен)тетрациклина
Figure 00000050

Смесь 3.6 г 3-аминоэтоксипрегна-5-ен-20-она, 0.6 г метаформальдегида и 40 мл изопропанола нагревают 2 часа при 80oC. Реакционную смесь охлаждают до 40oC, добавляют 4.5 г тетрациклина и выдерживают 6 часов при 40oC. По окончании реакции продукт реакции отфильтровывают и после промывания изопропанолом и этиловым эфиром с выходом 93% получают твердое вещество.
Элементный анализ: C 67.7, H 7.36, N 5.05.
Пример синтеза 20
17-Гидроксиандрост-1,4-диен-3-(оксиэтиламинометилен)доксициклин
Figure 00000051

Смесь 3.3 г 3-аминоэтокси-17 β -гидроксиандрост-1,4-диена, 0.3 г метаформальдегида и 50 мл изопропанола нагревают 2 часа при 80oC. Реакционную смесь охлаждают до 40oC, добавляют 4.5 г гидрохлорида доксициклина и выдерживают 4 часа. По окончании реакции промыванием продукта реакции изопропанолом и этиловым эфиром с выходом 89% получают желтое твердое вещество.
Элементный анализ: C 67.23, H 7.25, N 5.28.
Пример синтеза 21
Синтез 17 α -метил-17 β -гидроксиандрост-4-ен-3-он-6-(метиленоксиэтиламинометилен)доксициклина
Figure 00000052

Смесь 3.8 г 6-аминоэтоксиметилен-17 α -метил-17 β -гидроксиандрост-4-ен-3-она, 0.3 г метаформальдегида и 25 мл изопропанола нагревают 4 часа при 60oC. Затем реакционную смесь охлаждают до 40oC, добавляют 4.5 г гидрохлорида доксициклина и выдерживают 8 часов. По окончании реакции промыванием продукта реакции изопропанолом и этиловым эфиром с выходом 86% получают желтое твердое вещество.
Элементный анализ: C 63.72, H 7.02, N 5.13.
Пример синтеза 22
Синтез 17 α -метил-17 β -гидроксиандрост-3-он-2-(оксиэтиламинометилен)доксициклина
Figure 00000053

Смесь 3.6 г 2-аминоэтокси-17 α -метил-17 β -гидроксиандростан-3-она, 0.3 г метаформальдегида и 30 мл изопропанола нагревают 2 часа при 60oC, а затем добавляют 4.5 г гидрохлорида доксициклина и реакционную смесь дополнительно выдерживают. По окончании реакции промыванием продукта реакции изопропанолом и этиловым эфиром с выходом 91% получают желтое твердое вещество.
Элементный анализ: C 65.91, H 7.51, N 5.07.
Пример синтеза 23
Синтез 17 α -метил-17
Figure 00000054
-гидрокси-19-норандрост-4-ен-3-он-6-(метиленоксиэтиламино)доксициклина
Figure 00000055

Смесь 3.7 г 6-аминоэтоксиметилен-17 α -метил-17 β -гидрокси-19-норандрост-4-ен-3-она, 0,3 г метаформальдегида и 50 мл ацетона выдерживают 2 часа при 30oC, затем добавляют 4.5 г гидрохлорида доксициклина и реакционную смесь выдерживают еще 30 часов. По окончании реакции продукт реакции фильтруют и промыванием изопропанолом и этиловым эфиром с выходом 87% и получают желтое твердое вещество.
Элементный анализ: C 63.64, H 7.03, N 5.18.
Пример синтеза 24
Синтез 17 α -этинил-17 β -гидроксиандрост-5(10)-ен-3-он-6-(метиленоксиэтиламинометилен)доксициклина
Figure 00000056

Смесь 3.7 г 6-аминоэтоксиметилен-17 α -этинил-17 β -гидроксиандрост-5(10)-ен-3-она, 0.3 г метаформальдегида и 50 мл изопропанола нагревают 2 часа при 60oC, затем добавляют 4.5 г гидрохлорида доксициклина и реакционную смесь нагревают еще 8 часов при 40oC. По окончании реакции продукт реакции фильтруют и промыванием изопропанолом и этиловым эфиром с выходом 87% получают желтое твердое вещество.
Элементный анализ: C 66.81, H 7.06, N 5.01.
Пример синтеза 25
17 α -Пропилен-17 β -гидрокси-11-диметиламинофениландрост- 4,9-диен-3-он-6-(метиленоксиэтиламинометилен)доксициклин
Figure 00000057

Смесь 5 г 6-аминоэтоксиметилен-11-(4'-диметиламинофенил)-17 α -пропилен-17 β -гидроксиандрост-4,9-диен-3-она, 0.3 г метаформальдегида и 40 мл изопропанола нагревают 2 часа при 80oC. После охлаждения реакционной смеси до 40oC добавляют 4.5 г гидрохлорида доксициклина и реакционную смесь выдерживают 6 часов. По окончании реакции продукт реакции фильтруют и после промывания изопропанолом и этиловым эфиром с выходом 90% получают желтое твердое вещество.
Элементный анализ: C 68.76, H 6.88, N 5.72.
Пример синтеза 26
Синтез 16,17-изопропилиден-16,17-диоксиэстра-1,3,5(10)- триен-3-(оксиэтиламинометилен)доксициклина
Figure 00000058

Смесь 3.7 г 16,17-изопропилиден-16,17-диоксиэстра-1,3,5(10)-триен-3-аминоэтилового простого эфира, 0.3 г метаформальдегида и 50 мл изопропанола нагревают 2 часа при 60oC, затем добавляют 4.5 г гидрохлорида доксициклина и реакционную смесь дополнительно выдерживают 8 часов. По окончании реакции продукт реакции фильтруют и после промывания изопропанолом и этиловым эфиром с выходом 95% получают желтое твердое вещество.
Элементный анализ: C 66.71, H 6.9, N 5.18.
Пример синтеза 27
Синтез 3,17-дигидроксиэстра-1,3,5(10)-триен-17-ацетат- 7-(метиленоксиэтиламинометилен)доксициклина
Figure 00000059

Смесь 3.8 г 7-аминоэтилоксиметиленэстра-3,17-диен-17-ацетата, 0.3 г метаформальдегида и 50 мл изопропанола нагревают 4 часа при 60oC, затем добавляют 4.5 г гидрохлорида доксициклина и реакционную смесь дополнительно выдерживают 4 часа. По окончании реакции продукт реакции фильтруют и после промывания изопропанолом с выходом 88% получают желтое твердое вещество.
Элементный анализ: C 65.34, H 6.68, N 4.95.
Пример синтеза 28
Синтез 17-гидроксипрегна-4-ен-20-он-3-(оксиэтиламинометилен)доксициклина
Figure 00000060

Смесь 3.7 г 3-аминоэтокси-17
Figure 00000061
-гидроксипрегна-4-ен-20-она, 0.3 г метаформальдегида и 40 мл изопропанола нагревают 2 часа при 60oC, затем добавляют 4.5 г гидрохлорида доксициклина и реакционную смесь дополнительно выдерживают 4 часа. По окончании реакции продукт реакции фильтруют и после промывания изопропанолом и этиловым эфиром с выходом 92% получают желтое твердое вещество.
Элементный анализ: C 66.41, H 7.4, N 5.14.
Пример синтеза 29
Синтез прегна-4-ен-3,20-дион-6-(метиленоксиэтиламинометилен)доксициклина
Figure 00000062

Смесь 3.9 г 6-аминоэтоксиметиленпрегна-4-ен-3,20-диона, 0.3 г метаформальдегида и 50 мл изопропанола нагревают 3 часа при 60oC, затем добавляют 4.5 г гидрохлорида доксициклина и реакционную смесь дополнительно выдерживают 4 часа. По окончании реакции продукт реакции фильтруют и после промывания изопропанолом и этиловым эфиром с выходом 93% получают желтое твердое вещество.
Элементный анализ: C 67.77, H 7.36, N 4.59.
Пример синтеза 30
Синтез 3,17-дигидроксиэстра-1,3,5(10)-триен-11-(4- феноксиэтиламино)метилендоксициклина \\6
Figure 00000063

Смесь 4 г 11-(4'-аминоэтоксифенил)-3,17-дигидроксиэстра- 1,3,5(10)-триена, 0.3 г метаформальдегида и 50 мл изопропанола нагревают 2 часа при 60oC, затем добавляют 4.5 г гидрохлорида доксициклина и реакционную смесь дополнительно выдерживают 8 часов. По окончании реакции продукт реакции отфильтровывают и после промывания изопропанолом и этиловым эфиром с выходом 89% получают желтое твердое вещество.
Элементный анализ: C 68.13, H 6.69, N 4.73.
Пример синтеза 31
Синтез 17 β -гидрокси-17 α -метиландростано-(3,2-c)пиразол-N-метилентетрациклина
Figure 00000064

Смесь 3.29 г 17 β -гидрокси-17 α - метиландростано(3,2-c)пиразола, 0.3 г метаформальдегида и 30 мл изопропанола нагревают 2 часа при 40oC, добавляют 4.5 г тетрациклина и реакционную смесь перемешивают 6 часов. По окончании реакции продукт реакции отфильтровывают и после промывания изопропанолом и этиловым эфиром с выходом 89% получают желтое твердое вещество.
Элементный анализ: C 67.48, H 7.07, N 7.30.
Опыт 1.
Распределение соединения в организме
В соединение 1-3, полученное в примере синтеза 1-3, вводят радиоактивную метку 3H (0.34 мCi/мг) и соединение инъектируют в вену хвоста мыши в дозе 20 μ Ci/20 г. Мышей в группах по пять мышей в каждой умерщвляют через 1 минуту, 5 минут, 15 минут, 30 минут, 1 час, 4 часа, 6 часов, 24 часа, 48 часов и 72 часа после инъекции и из глазницы каждой мыши отбирают 50 мкл крови. Кроме того, у каждой мыши удаляют сердце, матку, малый кишечник, кости (бедренная кость) и т.д. и 50 мг ткани (50 мкл крови) помещают в пластиковые пробирки для анализа. В пробирку кроме того помещают 0.2 мл перхлорной кислоты, 0.4 мл перекиси водорода и каплю н-октилового спирта и нагревают на водяной бане 45 минут при 75oC. Затем отбирают 0.1 мл этой обработанной жидкости и помещают в колбу для хранения сцинцилляционного раствора, где смешивают с 5 мл 0.5% сцинцилляционного раствора. После того, как раствор становится прозрачным, его для определения cpm в образце и его радиоактивности помещают в FJ 2105 жидкостной сцинцилляционный счетчик. Отдельно определяют dpm 52 образцов, полученных в четырех группах животных (метод внешнего стандарта).
Количество лекарственного средства внутри ткани определяют следующим образом.
Количество лекарственного средства в ткани (cpm/мг) = (cpm образца) + (количество обработанной ткани (мг)).
Количество лекарственного средства в ткани (мкг/мг) = (cpm/мг образца • 6) + (эффективность счетчика (E) • 2.22 • 10 • 0.34 mCi/мг (удельная радиоактивность)).
Получены результаты, представленные в табл. 1-4 (см. в конце описания).
Опыт 2.
Анализ на острую токсичность
(1) Образец
Соединение 1-3 представляет собой бледно-желтый кристаллический порошок, серийный номер соединения 930 113. Раствор соединения в концентрации 50 мг/мл имеет pH 5 и представляет собой прозрачную бледно-желтую жидкость. Жидкость может быть получена в лаборатории исследования остеопороза, кафедра фармации, Уэст Чайна Юниверсити Медикал Сайэнс Скул (УЧЮМСС).
(2) Животные
В экспериментах используются здоровые мыши породы Канминг, первого класса, весом от 18 до 21 г, половина самцов и половина самок. Мыши выращиваются Экспериментальным центром при УЧЮМСС для выращивания животных.
(3) Определение полулетальной дозы (ЛД50)
Подготовлено четыре-пять групп мышей, получающих дозу в равных отношениях (1 : 0.7 - 0.8) в пределах интервала ЛД 0 - 100%, выявленного в предварительных испытаниях. Лекарственное средство для перорального приема готовят суспендированием твердого соединения 1-3 в 1% CMCNa2 с образованием суспензии. Для инъекций растворы лекарственного средства приготовлены методом разбавления с низким удельным весом путем растворения соединения 1-3 в физиологическом солевом растворе и получения растворов с различной концентрацией. Животных подвергают голоданию (но при свободном доступе к воде) и через 20 часов наугад независимо от пола и веса набирают группы по десять мышей. Лекарственное средство дают один раз в день в дозе 0.2 мл/10 г и затем животных осматривают. Мертвых животных подвергают вскрытию и любые патологические изменения отмечают невооруженным глазом.
(4) Результаты испытаний
(a) Определение на мышах максимально терпимой дозы соединения 1-3.
Предварительными испытаниями выявлена максимально терпимая доза, не ведущая к смерти. После того, как 20 мышей (10 самцов и 10 самок) получают одной дозой химическое соединение в максимальной концентрации и в максимально возможном для перорального введения количестве, животных наблюдают в течение 7 дней. В результате никаких нарушений у мышей не отмечено, как не отмечено смертельных случаев. Максимально терпимая доза (МТД) составляет >6 г/кг.
(b) После инъектирования соединения 1-3 в вену хвоста мышей получены результаты, представленные в табл. 4 (см. в конце описания).
(5) Выводы
Максимально терпимая доза (МТД) соединения 1-3 при разовом введении мыши составляет, по меньшей мере, 6 г/кг, и токсичность соединения чрезвычайно мала. Значение ЛД50 при внутривенной инъекции в вену хвоста мыши составляет 143.11 мг/кг. После внутривенной инъекции активность мыши падает, затем мышь начинает прыгать, наблюдаются спазмы. Глазное яблоко выступает из глазницы и белеет, наблюдается недержание мочи и кала. Хотя основная часть отравленных мышей погибает мгновенно, та небольшая часть выживших мышей все равно погибает в течение 24 часов. Мыши, выжившие в течение 24 часов, не погибают и в течение последующих 7 дней. Никакой зависимости смертельных случаев от пола животных не отмечено, как не отмечено никаких патологических изменений после вскрытия при наблюдении невооруженным глазом. Испытания проводились при температуре 17oC.
Опыт 3.
Исследование остеогенеза (1)
В качестве испытуемых клеток применяется инкубационная система первого поколения остеобластов, происходящих из свода черепа крыс Уистер (самки, возраст 6 месяцев). После начала инкубирования в среду один раз в день добавляют образцы лекарственного средства в дозе 10-6 М, 10-8 М или 10-9 М на второй и третий день (период воспроизводства). Или же соединение 1-3 в вышеуказанном количестве добавляют в среду один раз в день в течение 4 дней (период кальцификации), начиная с седьмого дня от начала инкубирования. На четырнадцатый день от начала инкубирования клетки окрашивают по фон Коссу и проводят определение фосфатов. Области костных узлов, окрашенные в коричневый цвет, видны невооруженным глазом, и используются в качестве показателя остеогенеза. Получены результаты, представленные в табл. 5 (см. в конце описания).
На фиг. 1 - 3 показаны результаты, полученные при трехкратном повторении одной и той же вышеприведенной методики. На фотографиях буквой A указано отсутствие лекарственного средства, буква B указывает на добавление соединения в концентрации 10-9 М, буква C - в концентрации 10-8 М и буква D - в концентрации 10-6 М.
Из вышеприведенных результатов очевидно, что соединение настоящего изобретения обладает промотирующим остеогенез действием.
Опыт 4.
Исследование остеогенеза (2)
В качестве испытуемых клеток использована инкубационная система первого поколения клеток костного мозга из бедренной кости крыс Уистер (самки, возраст 6 месяцев), и соединение 1-3 добавляли один раз в день в количестве 10-8 М или 10-6 М к среде на седьмой, девятый и одиннадцатый день от начала инкубирования (период кальцификации). Исследования проводят по методике опыта 3. Полученные результаты приведены в табл. 6 (см. в конце описания).
Как следует из приведенных в таблице результатов, соединение настоящего изобретения обладает промотирующим остеогенез действием.

Claims (8)

1. Производные тетрациклина общей формулы I
X-Y-Z,
где X представляет одновалентную группу общей формулы II
Figure 00000065

где R1 представляет водород или гидроксил;
R2 представляет водород или гидроксил;
R3 представляет метил;
R4 представляет водород;
Y представляет двухвалентную или трехвалентную группу общей формулы III, IV, V или VI
Figure 00000066

где Х' представляет собой простую связь, -O - или NН;
Figure 00000067

Figure 00000068

(2)-(CH2NH)mCH2CH2-W- (3)
где m равно 0 или 1;
W представляет -О-, -ОСН2-, простую связь или -C≡C-; причем, когда m равно 0, W представляет -OCH2-;
Z представляет одновалентную группу, образованную удалением атома водорода или гидроксильной группы в соединении общей формулы VII
Figure 00000069

где
Figure 00000070
представляет НО- или O=;
Figure 00000071
представляет атом водорода или метил;
Figure 00000072
представляет атом водорода, фенил или замещенный фенил;
Figure 00000073
представляет метил или этил;
Figure 00000074
представляет гидроксил, кетогруппу или ацетил;
Figure 00000075
представляет водород, гидроксил, метил, этинил или пропинил или
Figure 00000076
и
Figure 00000077
совместно образуют группу =O;
Figure 00000078
представляет водород, гидроксил, или
Figure 00000079
и
Figure 00000080
вместе соединяются с атомом кислорода 2,2-диоксипропильной группы;
символ
Figure 00000081
обозначает простую или двойную связь,
причем группы формул III - IV присоединяются во 2 положение, 3 положение, 6 положение, 7 положение или 17 положение, или по фенильной группе, присоединенной в II положении группы Z, причем (1) формулы II и (2) формул III - VI связаны непосpeдcтвeннo и (3) группы формул III-VI связаны непосредственно c любой группой формулы VII.
2. Соединение по п. 1, в котором одновалентная группа формулы II является одновалентной группой тетрациклинового соединения, где R1 представляет водород, R2 представляет гидроксил, R3 представляет метил, а R4 представляет водород.
3. Соединение по п. 1, в котором одновалентная группа формулы II является одновалентной группой террамицина, где R1 представляет гидроксил, R2 представляет гидроксил, R3 представляет метил, R4 представляет водород.
4. Соединение по п. 1, в котором одновалентная группа формулы II является одновалентной группой деокситетрациклина, где R1 представляет гидроксил, R2 представляет водород, R3 представляет метил и R4 представляет водород.
5. Соединение по любому из пп.1-4, в котором одновалентная группа формулы VI является одновалентной группой эстрона, где
Figure 00000082
и
Figure 00000083
совместно образуют группу =O и
Figure 00000084
представляет водород.
6. Соединение по любому из пп.1-4, в котором одновалентная группа формулы VI является одновалентной группой эстрадиола, где
Figure 00000085
представляет гидроксил,
Figure 00000086
представляет водород и
Figure 00000087
представляет водород.
7. Соединение по любому из пп. 1-4, в котором одновалентная группа формулы VI является одновалентной группой эстроалкинола, где
Figure 00000088
представляет гидроксил,
Figure 00000089
представляет этинил,
Figure 00000090
представляет водород.
8. Соединение по любому из пп. 1-4, в котором одновалентная группа формулы VI является одновалентной группой эстриола, где
Figure 00000091
представляет гидроксил,
Figure 00000092
представляет водород и
Figure 00000093
представляет гидроксил.
Приоритет по пунктам:
25.03.93 по пп. 1-8;
29.12.93 по пп. 1-8 уточнение признаков.
RU94046140A 1993-03-25 1994-03-25 Производные тетрациклина RU2138507C1 (ru)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN 93110919 CN1092779A (zh) 1993-03-25 1993-03-25 可用作带有***结构的骨靶向药物的化合物
CN93110919.1 1993-03-25
JP35540493 1993-12-29
JP5-355404 1993-12-29
PCT/JP1994/000489 WO1994021667A1 (en) 1993-03-25 1994-03-25 Compound for inhibiting bone resorption and accelerating osteogenesis

Publications (2)

Publication Number Publication Date
RU94046140A RU94046140A (ru) 1997-02-10
RU2138507C1 true RU2138507C1 (ru) 1999-09-27

Family

ID=25743075

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU94046140A RU2138507C1 (ru) 1993-03-25 1994-03-25 Производные тетрациклина

Country Status (6)

Country Link
US (2) US5760214A (ru)
EP (1) EP0643071B1 (ru)
JP (1) JP3377856B2 (ru)
DE (1) DE69426684T2 (ru)
RU (1) RU2138507C1 (ru)
WO (1) WO1994021667A1 (ru)

Families Citing this family (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0688787A4 (en) * 1993-12-29 1996-04-17 Iskra Industry Co Ltd MEDICAL COMPOSITION FOR INHIBITING BONE RESORPTION AND ACCELERATING OSTEOGENESIS
FR2757519B1 (fr) * 1996-12-23 1999-06-11 Hoechst Marion Roussel Inc Steroides substitues en position 11, leur procede de preparation, leur application comme medicament et les compositions pharmaceutiques les renfermant
WO2000066613A1 (en) * 1999-04-30 2000-11-09 Research Corporation Technologies, Inc. Bone targeting agents for osteoporosis
US20030181371A1 (en) * 2001-12-28 2003-09-25 Angiotech Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods of using collajolie
US20040192658A1 (en) * 2002-12-27 2004-09-30 Angiotech International Ag Compositions and methods of using collajolie
US7067504B2 (en) * 2004-01-15 2006-06-27 Warner Chilcott Company, Inc. Di-steroidal prodrugs of ethinyl estradiol
CA2610475C (en) * 2005-07-12 2013-09-17 Warner Chilcott Company, Inc. Derivative prodrugs of ethinyl estradiol
MX2008000412A (es) * 2005-07-12 2008-03-10 Warner Chilcott Co Inc Profarmacos de 3-ester de estradiol.
JP7264569B2 (ja) * 2016-03-03 2023-04-25 クリスタル ファルマ、エセ、ア、ウ １１－メチレンステロイドの製造のための方法および新規な中間体

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US2997471A (en) * 1958-08-18 1961-08-22 Bristol Myers Co Tetracycline derivatives
US4925833A (en) * 1983-12-29 1990-05-15 The Research Foundation Of State University Of New York Use of tetracycline to enhance bone protein synthesis and/or treatment of osteoporosis
GR861167B (en) * 1985-05-02 1986-09-30 Research Corp Bone targeted inhibitors of carbonic anhydrase
DK224589A (da) * 1988-05-09 1989-11-10 Merck & Co Inc Polymalonsyreforbindelse og farmaceutisk praeparat indeholdende en saadan forbindelse
EP0496520A1 (en) * 1991-01-22 1992-07-29 Merck & Co. Inc. Novel bone acting agents
US5183815A (en) * 1991-01-22 1993-02-02 Merck & Co., Inc. Bone acting agents
EP0688787A4 (en) * 1993-12-29 1996-04-17 Iskra Industry Co Ltd MEDICAL COMPOSITION FOR INHIBITING BONE RESORPTION AND ACCELERATING OSTEOGENESIS

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Тринус Ф.П. Фармако-терапевтический справочник. - Киев, Здоровья, 1989, с. 261-263. *

Also Published As

Publication number Publication date
RU94046140A (ru) 1997-02-10
WO1994021667A1 (en) 1994-09-29
US5760214A (en) 1998-06-02
JP3377856B2 (ja) 2003-02-17
EP0643071A4 (en) 1995-10-25
EP0643071B1 (en) 2001-02-14
EP0643071A1 (en) 1995-03-15
DE69426684D1 (de) 2001-03-22
US6028207A (en) 2000-02-22
DE69426684T2 (de) 2001-09-06
JPH07233190A (ja) 1995-09-05

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CA2284750C (en) Steroid sulfamates, method for the production and use thereof
US4260736A (en) Steroid hormone-antitumor derivatives
JP4806508B2 (ja) 前立腺がん、脱毛症又は他の高アンドロゲン症候群の治療又は診断のためのアンドロゲン受容体サプレッサー
CZ113694A3 (en) Derivatives of bile acids process of their preparation and their use as medicaments
RU2138507C1 (ru) Производные тетрациклина
HUT59370A (en) Chelating agents for complex formation with radioactive isotopes, their metal complexes and the use thereof for diagnostic and therapeutic purposes
CZ288762B6 (cs) Deriváty estra -1,3,5,(10)-trienu, způsob jejich přípravy a farmaceutické přípravky je obsahující
WO1999003876A1 (en) Steroid sulfatase inhibitors and methods for making and using the same
US5705495A (en) Sulfamate derivatives of 1,3,5(10)-estratriene derivatives, methods for their production and pharmaceuticals containing these compounds
PL191285B1 (pl) Pochodna testosteronu, (7α,17ß)-7-metylo-17-[(1-okso-undecylo)oksy]estr-4-en-3-on (undekanian MENT), zastosowanie pochodnej, kompozycja farmaceutyczna i zestaw do antykoncepcji
CA2186486A1 (en) An equilin double bond isomer from the acid isomerization of equilin
RU2036929C1 (ru) Эфиры эстрамастина или их фармацевтически приемлемые соли и способ их получения
Klyne et al. The steroids of pregnant mares' urine. 1. A method for the extraction of steroid sulphates and the isolation of allopregn-16-en-3 (β)-ol-20-one sulphate
US3213086A (en) 7-methyl-delta4-androstene compounds
JPH08193050A (ja) ９，１０− ジオキソアントラセン−２− カルボン酸誘導体及び該化合物を含む組成物
CA1175421A (en) TREATMENT OF MALIGNANT TUMORS WITH 2-.beta.-D- RIBOFURANOSYLTHIAZOLE-4-CARBOXAMIDE AND RELATED COMPOUNDS
US5698542A (en) Bone resorption inhibition/osteogenesis promotion pharmaceutical composition
US3818055A (en) 17-(aralkylaminoalkyl)androstan-3b-ols, 5 derivatives thereof, ethers and esters corresponding
US3644330A (en) Derivatives of estradiol-17beta-glucosides
JPS63280095A (ja) １５，１９−ジ置換４−アンドロステン−３，１７−ジオン、その製造法、ならびに該化合物を含有する、エストロゲン生合成抑制作用および妊娠調整作用を有する医薬品
CS276842B6 (en) Pharmaceutical
AboulWafa et al. Synthesis and evaluation for uterotrophic and antiimplantation activities of 2-substituted estradiol derivatives
FI84834B (fi) Foerfarande foer framstaellning av terapeutiskt anvaendbara steroidderivat av androstanserien.
JP3029867B2 (ja) Ｓ―低級脂肪酸グルタチオン誘導体
IL160451A (en) 17 Alpha-hydroxy-14 in cell-steroids that have a hormonal effect