RU2111651C1 - Искусственное семя и способ его получения - Google Patents
Искусственное семя и способ его получения Download PDFInfo
- Publication number
- RU2111651C1 RU2111651C1 RU95119845A RU95119845A RU2111651C1 RU 2111651 C1 RU2111651 C1 RU 2111651C1 RU 95119845 A RU95119845 A RU 95119845A RU 95119845 A RU95119845 A RU 95119845A RU 2111651 C1 RU2111651 C1 RU 2111651C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- meristematic tissue
- base
- seed
- substrate
- tissue
- Prior art date
Links
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
- A01H4/00—Plant reproduction by tissue culture techniques ; Tissue culture techniques therefor
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Botany (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Pretreatment Of Seeds And Plants (AREA)
- Materials For Medical Uses (AREA)
- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
- Laminated Bodies (AREA)
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
- Prostheses (AREA)
- Diaphragms For Electromechanical Transducers (AREA)
- Developing Agents For Electrophotography (AREA)
- Fertilizers (AREA)
- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
- Treatments For Attaching Organic Compounds To Fibrous Goods (AREA)
- Chemical Or Physical Treatment Of Fibers (AREA)
Abstract
Искусственное семя предназначено для получения искусственных посевов с высокой степенью прорастания. Искусственное семя включает сухую или высушиваемую меристематическую ткань, твердую основу и защитную оболочку вокруг основы. Основа имеет углубление для размещения меристематической ткани объемом, обеспечивающим контакт ее с окружающим воздухом. Защитная оболочка частично покрывает основу, сохраняя контакт меристематической ткани с воздухом. Получают искусственное семя, размещая меристематическую ткань 1 внутри углубления 2 в твердой основе 3, окруженной наружным клепочным слоем 4. Между основой 2 и пленочным слоем 4 находится слой защитной оболочки 5, причем оба слоя 4, 5 не покрывают верхнюю часть основы 3, представляющей цилиндрический участок целлюлозного фильтра. Меристематическую ткань обезвоживают до или после помещения ее на основу. 2 с. и 12 з.п. ф-лы, 2 ил., 3 табл.
Description
Изобретение относится к искусственному семени, включающему меристематическую ткань, твердую основу и защитную оболочку, а также к способу его получения.
Известно, что в последние годы все более и более проявляется интерес к меристематическим тканям, позволяющим потребителю иметь в распоряжении искусственные посевы, которые имеют общие сходные и особые генетические, хорошо описанные, утонченные, фальсифицированные, определенные и идентифицированные характеристики с целью получения вполне определенных разновидностей растений.
Известно искусственное семя, включающее сухую или высушиваемую меристематическую ткань, твердую основу и защитную оболочку, размещенную вокруг основы (заявка WO 92/10087, кл. A 01 H 4/00, 1992).
Известен также способ получения искусственного семени, заключающийся в размещении меристематической ткани внутри твердой основы и покрытии основы защитной оболочкой (заявка WO 92/10087, кл. A 01 H 4/00, 1992).
Однако известные искусственные семена и способ их получения не дают удовлетворительной степени прорастания.
Техническим результатом настоящих изобретений является получение таких искусственных семян, которые позволяют получить искусственные посевы с высокой степенью прорастания.
Это достигается благодаря тому, что искусственное семя, включающее сухую или высушиваемую меристематическую ткань, твердую основу и защитную оболочку, размещенную вокруг основы, имеет в основе углубление для размещения меристематической ткани объемом, обеспечивающим контакт меристематической ткани с окружающим воздухом, при этом защитная оболочка частично покрывает основу, сохраняя контакт меристематической ткани с воздухом.
Предпочтительные варианты искусственного семени раскрыты в зависимых пунктах 2 - 11.
Такие искусственные семена получают путем размещения меристематической ткани внутри твердой основы и покрытия основы защитной оболочкой, причем в твердой основе предварительно делают углубление, в котором затем фиксируют меристематическую ткань так, чтобы она была окружена воздушной средой, при этом используют основу сухую или высушиваемую, способную абсорбировать питательную среду и не препятствовать прорастанию, а защитную оболочку наносят на основу частично, сохраняя контакт меристематической ткани с воздухом.
Предпочтительные варианты осуществления способа раскрыты в зависимых пунктах 13 и 14.
Под "меристематической тканью" в настоящем изобретении понимают любую растительную ткань или совокупность растительных клеток, способную, когда она находится в подходящих условиях, развиваться вплоть до образования целого растения или части целого растения. Под это выражение подпадает любой род растительных тканей, особенно соматическая ткань, соматический зародыш, зиготная ткань, проросток, адвентивная почка, побеги, примордий стебля (в английском варианте известный под названием "shoot primordium"), аналоги протокорма (в английском варианте известные под названием " protocorn like Body"), ткань, известная в английском варианте под названием "germ spot" ("зеленый побен"), зародышевые клетки и природные семена (в английском варианте известные под названием "germ line" /зародышевая линия/), молодые растения.
Растения согласно изобретению имеют самую различную природу и включают пищевые культуры, такие как рис, пшеница, ячмень, кукуруза, соя; овощные культуры, такие как сельдерей, петрушка, салат, цветная капуста, морковь, баклажан, томат, лук репчатый, чеснок, имбирь, земляника, дыни, спаржа; пищевые и/или промышленные культуры, такие как рапс, сахарный тростник, сахарная свекла, табак; культуры для лечебной цели, такие как белладона, женьшень; декоративные культуры, такие как хризантемы, гладиолусы, лилии, орхидеи, амариллисы, герани, бегонии, фиалки (les violetts du Cap), цезальпиния; деревья или древовидные или кустарниковые виды, такие как хвойные древесные породы, пальмы, плодовые деревья, виноградная лоза, листопадные деревья и другие.
Меристематическая ткань может быть сухой, дегидратированной (обезвоженной), или в гидратированной форме с влажностью вплоть до 100%.
В качестве материала, служащего основой для меристематических тканей, можно назвать волокнистые материалы (такие, как шерсть, хлопок или стекловата или асбест), пористые материалы, ячеистые (альвеолярные) материалы (такие, как цены из синтетических полимеров /пенопласты/, особенно из простых полиэфиров и полиуретанов). Преимущественно можно назвать песок, глину, вермикулит, стеклянные шарики, хлопок, бумагу, отруби зерновых культур, древесные опилки, шерсть, ацетат целлюлозы и другие производные целлюлозы, причем чаще всего эти материалы должны быть структурированы за счет добавления по крайней мере одного связующего и/или сгустителя. Эта основа, которая обычно придает форму совокупности, может быть любой формы, однако предпочтительно имеет форму, пригодную для промышленного изготовления и легкого обращения с ней потребителя. Она может быть, например, кубической, параллелепипедной, цилиндрической, полуцилиндрической, сферической, однако не исключаются и другие формы. Эта форма такая, что одна из ее сторон может нести или содержать в себе меристематическую ткань; предпочтительно она включает углубление объемом больше такового меристематической ткани, позволяя таким образом этой последней контактировать с объемом воздуха, поставляющим необходимый для прорастания или развития кислород.
Основа может быть сухой, дегидратированной или в гидратированной форме с влажностью вплоть до 100%.
Согласно изобретению меристематическую ткань помещают в основу так, чтобы она полностью не покрывала ее с той целью, чтобы меристематическая ткань всегда находилась в контакте с некоторым объемом воздуха.
Покрытая защитной оболочкой меристематическая ткань согласно изобретению предпочтительно включает, кроме того, вокруг основы по крайней мере один пленочный слой, частично покрывающий ее так, чтобы меристематическая ткань оставалась в контакте с объемом воздуха.
Под пленочным покрытием в смысле настоящего изобретения понимают пленку, в заметной степени не модифицирующую формы основы, очень равномерной толщины, обычно составляющей 1 - 250 мкм, предпочтительно 5 - 100 мкм. Эта пленка образована по существу пленкообразующим веществом, обладающим по своей природе гидрофобными свойствами и/или свойствами непроницаемости для воды и не препятствующим выходу корней.
В качестве пленкообразующего вещества можно назвать синтетические полимеры, природные полимеры, искусственные полимеры, неполимерные пленкообразующие вещества.
В качестве примеров синтетических полимеров, используемых в изобретении, можно назвать виниловые смолы, особенно полиэтилен, полипропилен, полистирол, полиметилметакрилат, поливинилхлорид, поливинилиденфторид, поливинилфторид, поливинилиденхлорид, полихлортрифторэтилен, поли(этиленгликольтерефталат), поливинилацетат, сополимеры этилена со сложными виниловыми эфирами; виниловые полимеры на основе формальдегида или бутиральдегида; сложные полиэфиры, особенно поли(этиленгликольтерефталат); поликарбонаты; полиамиды, особенно поли(П-амино-ундекан-амид) или нейлон-П; простые полиэфиры, особенно полифениленоксид; полихлоропрен, полиизопрен, полиуретан, бутилкаучук; силиконы, особенно органополисилоксановые полимеры.
В качестве примеров природных полимеров можно назвать гуттаперчу, натуральный каучук.
В качестве примера искусственных полимеров можно назвать непроницаемые для воды производные целлюлозы, особенно этилцеллюлозу, ацетат целлюлозы, пропионат целлюлозы, нитроцеллюлозу.
В качестве примера неполимерных пленкообразующих веществ можно назвать жиры и воски, особенно пальмовое масло и масло копры.
Реализация водонепроницаемой пленки снаружи основы меристематической ткани может быть осуществлена различными, само по себе известными способами, предпочтительно путем пульверизации, обмазывания или пропитки. Это нанесение можно осуществлять с помощью растворов, эмульсий или суспензий.
Кроме различных, уже описанных, составляющих меристематические ткани согласно изобретению могут содержать еще другие различные типы добавок или присадок, особенно как агрохимические продукты, такие как инсектициды, фунгициды, бактерициды, удобрения, микроэлементы, питательные вещества, или такие добавки, как наполнители, красители или адгезивы.
Покрытая защитной оболочкой меристематическая ткань согласно изобретению, описанная таким образом, обладает замечательными и улучшенными по сравнению к уровням техники свойствами, а именно хорошей склонностью к обезвоживанию и тем, что она не только обеспечивает выживание растительной ткани, но и может повторно приводить (конверсия) после повторной гидратации к целому растению с замечательным выходом, соответствующим потребностям современного сельского хозяйства.
Изобретение поясняется с помощью фиг. 1 и 2, данных в качестве иллюстрации и не ограничивающих объема охраны изобретения.
На фиг. 1 представлен способ выполнения покрытой защитной оболочкой меристематической ткани формы, в заметной степени цилиндрической, в которой меристематическая ткань, в данном случае соматический зародыш, расположена внутри углубления 2, сделанного в твердой основе 3, окруженной наружным пленочным слоем 4, и между основой 3 и пленочным слоем 4 находится слой защитной оболочки 5, причем оба слоя 4 и 5 не покрывают верхнюю часть основы; последняя представляет собой цилиндрический участок целлюлозного фильтра.
На фиг. 2 представлен поперечный разрез другого варианта реализации покрытой защитной оболочкой меристематической ткани согласно изобретению сферической формы, имеющей те же составляющие, что и на фиг. 1, если только углубление 2 не выходит наружу.
Предметом изобретения является также способ получения покрытой защитной оболочкой меристематической ткани согласно изобретению, в которой культивируют растительную клеточную суспензию вплоть до зародышевой стадии, порождающей меристематическую ткань, отличающийся тем, что меристематическую ткань фиксируют на твердой, сухой или высушиваемой основе, способной абсорбировать питательную среду и позволяющую ей прорастать так, чтобы основа частично покрывала эту ткань и чтобы меристематическая ткань оставалась в контакте с объемом воздуха.
В первой, само по себе известной стадии получают меристематические ткани само по себе известным способом путем продуцирования массы, например, согласно FMolle и др., Syn - seeds. Ch. 15, с. 257 - 287, путем эмбриогенеза, в случае необходимости осуществляют сбор и созревание на среде, содержащей сахарозу, либо при использовании твердой, подвергшейся застудневанию среды при температуре около 4oC, либо жидкой среды при температуре 20 - 25oC. Если сбор зародышей еще не был осуществлен, то он может быть сделан в этот момент.
Меристематические ткани затем можно подвергать обезвоживанию в камере для обезвоживания (сушильной камере), чтобы получить ткани, имеющие незначительное содержание воды, предпочтительно ниже, 0,40 г на 1 г сухой массы.
Таким образом, полученную меристематическую ткань помещают, фиксируют, в случае необходимости вставляют до или после нанесения пленки и/или покрытия защитной оболочкой на поверхность основы, такой, как указанная выше, предпочтительно в центральной точке или в сделанное в ней углубление так, чтобы вблизи меристематической ткани имелся объем воздуха.
Для того, чтобы обеспечить непроницаемость по отношению к культуральной наружной среде, основу, несущую в случае необходимости меристематическую ткань, предпочтительно покрывают сначала слоем защитной оболочки на основе таких материалов, как глина, предпочтительно со связующим и/или сгустителем, который после высыхания образует тип скорлупы, роль которой состоит в избежании того, чтобы используемые для покрытия пленкой растворенные полимеры не проникали в сердцевину основы, закупоривая таким образом эту последнюю и тормозя, даже ингибируя, развитие прорастания. Затем наносят водный раствор на основе пленкообразующего полимера, который путем высыхания дает пленочный слой.
Для их применения на практике, для посевов или любого культивирования покрытые защитной оболочкой меристематические ткани согласно изобретению, если они находятся в дегидратированием состоянии, можно подвергать повторной прогрессирующей гидратации.
Контроль за способностью к обезвоживанию меристематических тканей также, как таковой количества проростков, позволяет продемонстрировать превосходное качество продуктов согласно изобретению, а именно их превосходную склонность к обезвоживанию и консервацию с сохранением их способностей к прорастанию.
Изобретение можно лучше понять с помощью примеров осуществления изобретения, приведенных в качестве иллюстрации и не ограничивающих объема охраны изобретения.
Пример 1.
Получение соматических зародышей
Растительный материал происходит из мужской стерильной "линии" моркови (клон С 4). Семена, которыми снабжает фирма Tezier, асептически проращивают. Гипокотили разрезают и помещают в среду MS (Murashige, et Skoog) H+ состава, указанного в табл. 1, отличающегося наличием ауксина, 2,4-дихлор-фенокси-уксусной кислоты, для получения каллусов. Каллусы затем помещают в жидкую среду MSH+, чтобы получить недифференцированную клеточную суспензию.
Растительный материал происходит из мужской стерильной "линии" моркови (клон С 4). Семена, которыми снабжает фирма Tezier, асептически проращивают. Гипокотили разрезают и помещают в среду MS (Murashige, et Skoog) H+ состава, указанного в табл. 1, отличающегося наличием ауксина, 2,4-дихлор-фенокси-уксусной кислоты, для получения каллусов. Каллусы затем помещают в жидкую среду MSH+, чтобы получить недифференцированную клеточную суспензию.
Клеточную суспензию культивируют в среде MSH+ в колбах Эрленмейера емкостью 250 мл, содержащих по 100 мл среды. Частичное перемещение суспензии осуществляют все 12 дней путем фильтрации через сито с диаметром отверстий 50 мкм (Scrynel, Suisse). Фракцию, удерживаемую на фильтре, взвешивают и суспендируют в колбах Эрленмейера, по 1 г биомассы на 100 мл среды. Эту стадию можно осуществлять в колбах Эрленмейера емкостью 250 мл, содержащих по 100 мл среды MSH+ (фаза содержащая) или в колбах Эрленмейера емкостью 1 л, содержащих по 500 мл среды (фаза размножения). Суспензию выдерживают в камере для культивирования при 25oC при световом периоде 16 ч дня и 8 ч ночи и при силе света 15 E•м-2•с-1. Ее выдерживают при перемешивании со скоростью 100 оборотов в 1 мин при использовании орбитального смесителя (смеситель Biobloc scientific 74403).
Для получения зародышей после культивирования в течение 12 дней в среде MSH+ клеточную суспензию фильтруют первый раз через сито с диаметром отверстий 100 мкм. Фильтрат снова берут и пропускают через сито с диаметром отверстий 60 мкм. Удерживаемую фильтром фракцию промывают с помощью среды MSH0 состава, указанного в табл. 1 отличающегося тем, что в нем отсутствует ауксин, затем помещают в 45 мл среды MSH0 и центрифугируют в течение 5 мин при 300 g (центрифуга С 312). Затем отбирают надосадочную жидкость и сгустки клеток снова помещают в новые 45 мл MSH0. Таким же образом реализуют два других последовательных центрифугирования. После этого отбирают 1 мл суспензии, образованной осадком клеток, вносят в 10 мл MSH0, центрифугируют в течение 5 мин при 900 g, что позволяет оценить количество ткани в 1 мл суспензии. Клеточный материал затем суспендируют
либо в среде MSH0, в колбах Эрленмейера объемом 1 л, содержащих по 500 мл среды, в орбитальном смесителе, вращающемся со скоростью 100 об. в 1 мин, причем освещение и световой период идентичны предыдущим условиям;
либо в среде MSH0, содержащей 0,02% активного угля (CA) (Merck), в колбах Эрленмейера объемом 500 мл, содержащих по 250 мл среды, в орбитальном смесителе, вращающемся со скоростью 75 об. в 1 мин, в темноте.
либо в среде MSH0, в колбах Эрленмейера объемом 1 л, содержащих по 500 мл среды, в орбитальном смесителе, вращающемся со скоростью 100 об. в 1 мин, причем освещение и световой период идентичны предыдущим условиям;
либо в среде MSH0, содержащей 0,02% активного угля (CA) (Merck), в колбах Эрленмейера объемом 500 мл, содержащих по 250 мл среды, в орбитальном смесителе, вращающемся со скоростью 75 об. в 1 мин, в темноте.
Плотность посева составляет 1 г биомассы на 1 л. Клеточный материал выдерживают в условиях содержания (хранения) суспензии в течение 12 дней, необходимых для получения зародышей.
Сбор зародышей осуществляют спустя 12 дней культивирования в среде MSH0. Суспензию зародышей фильтруют через сито с диаметром отверстий 400 мкм (Scryne). Удерживаемую фильтром фракцию отделяют от фильтра путем промывки с помощью среды MSH0 и помещают в чашку Петри диаметром 9 см (Plastiques Gosselin; France: ref, BP 90). Зародыши, величина которых составляет 500 - 1500 мкм, отбирают пипеткой Пастера при использовании бинокулярной лупы.
Пример 2.
Покрытие защитной оболочкой и пленкой
а). Основы с унитарным объемом около 0,5 см3, образованные кусками фильтра из ацетата целлюлозы, унитарной массы ниже 200 мг, замачивают в смеси для нанесения покрытия, образованной гелеобразующим агентом (Каррагенан типа 1, 0,5%, и CaCl2, 50 ммоль), сгустителем (Натрозол HHR 150: 1,5%) и наполнителем из глины (Argirec B 22 : 20%). Получают 100 мл этого покрытия путем солюбилизации 0,5 г Каррагенана типа 1 в горячей воде, затем добавления к раствору 1,5 г Натрозола HHR 250 и 730 мг CaCl2•2H2O при нагревании и путем добавления к раствору 25 г Argirec при интенсивном перемешивании, достигаемом с помощью смесителя Waring blendor.
а). Основы с унитарным объемом около 0,5 см3, образованные кусками фильтра из ацетата целлюлозы, унитарной массы ниже 200 мг, замачивают в смеси для нанесения покрытия, образованной гелеобразующим агентом (Каррагенан типа 1, 0,5%, и CaCl2, 50 ммоль), сгустителем (Натрозол HHR 150: 1,5%) и наполнителем из глины (Argirec B 22 : 20%). Получают 100 мл этого покрытия путем солюбилизации 0,5 г Каррагенана типа 1 в горячей воде, затем добавления к раствору 1,5 г Натрозола HHR 250 и 730 мг CaCl2•2H2O при нагревании и путем добавления к раствору 25 г Argirec при интенсивном перемешивании, достигаемом с помощью смесителя Waring blendor.
Целлюлозные фильтры затем высушивают.
С помощью пипетки или пинцета вводят по одному зародышу в каждую из полученных защитных оболочек и их поверхность оставляют частично свободной.
б). Готовят композицию, содержащую соответственно 5% желатины, 10% наполнителя из глины (Argirec B 22), 1% сгустителя (Натрозол) в дистиллированной воде или в культуральной среде. Горячий раствор подвергают интенсивному перемешиванию с целью образования пузырьков воздуха, которые стабилизируются наличием сгустителя. Эту композицию наносят на не прилипающую основу путем аэрации в форме капель при температуре, при которой желатина еще не подвергается застудневанию (30 - 35oC). Желатина, охлаждаясь, дает пузырчатую структуру. Таким образом полученную полусферическую структуру перевертывают на ее выпуклую поверхность и на плоскую поверхность полусферы помещают зародыш. В случае необходимости можно, наконец, склеивать вторую полусферу с первой, смачивая поверхности контакта.
После этого на часть покрытых защитной оболочкой зародышей наносят один или два наружных слоя пленки в форме раствора поливинилхлорида (3,33%), поливинилацетата (3,33%) и бентона SD 1 (3,33%) в тетрагидрофуране. Затем также наносят вторую формулировку, содержащую по 5% каждой из тех же самых составляющих.
Для того, чтобы надежно работать в стерильных условиях, защитную оболочку перед ее фиксацией на основе повергают пропусканию через автоклав, либо до, либо между двумя нанесениями пленок. Эта обработка, кроме того, обеспечивает полную герметизацию защитных оболочек.
Пример 3.
Обезвоживание
Предобработку, придающую зародышам склонность к обезвоживанию, можно осуществлять в агаровой среде. В этом случае зародыши помещают партиями по 25 (штук) на бумажные фильтры (Whatman 1820025, Maidstone, Angleterre) и вносят в чашки Петри диаметром 6 см (Caric: France), содержащие среду Геллера, 0,4 М (состав указан в табл. 1), к которой добавлены 6 г/л Фитагеля (Sygma). Чашки герметически закрывают с помощью пищевой пленки "Scell'o' frais", затем помещают в холодильную камеру на 7 дней при температуре 4oC, в темноте.
Предобработку, придающую зародышам склонность к обезвоживанию, можно осуществлять в агаровой среде. В этом случае зародыши помещают партиями по 25 (штук) на бумажные фильтры (Whatman 1820025, Maidstone, Angleterre) и вносят в чашки Петри диаметром 6 см (Caric: France), содержащие среду Геллера, 0,4 М (состав указан в табл. 1), к которой добавлены 6 г/л Фитагеля (Sygma). Чашки герметически закрывают с помощью пищевой пленки "Scell'o' frais", затем помещают в холодильную камеру на 7 дней при температуре 4oC, в темноте.
Предобработку можно осуществлять в жидкой среде при комнатной температуре. Среда MSH0 эмбриогенной фазы образована жидкой средой He, 0,4 M. Суспензию также перемешивают со скоростью 100 об. в 1 мин при 4oC (4 дня) или при 25oC (3 дня), в темноте.
Зародыши, подвергнутые предобработке, затем помещают в камеры (эксикаторы), где поддерживается относительная влажность 45% за счет перенасыщенного раствора карбоната калия (Merck). Раствор образован смесью из 40 г соли в 16 мл воды. Бумажные фильтры с зародышами помещают в пустые чашки Петри диаметром 6 см. Чашки затем помещают в эксикаторы. Эксикаторы герметизируют с помощью пищевой пленки "Scell'o'frais", затем помещают в темноту в течение изменяемого количества времени (от 15 до 50 дней) при 4oC, чтобы конечное содержание воды в зародышах стало менее 0,40 г на 1 г сухой массы.
Пример 4.
Прорастание
Зародыши проращивают путем перенесения содержащего их бумажного фильтра в среду Геллера, 44 ммоль (состав дан в табл. 1), находящуюся в чашках Петри диаметром 6 см, после извлечения их из предварительной обработки по обезвоживанию или после различных времен обезвоживания. Чашки помещают в камеру для культивирования при 25oC, при световом периоде 16 ч дня и 8 ч ночи и с освещенностью 55 мкЕ•м-2•с-1. Молодые растения, достигшие роста около 1 см, переносят в чашки Планктона (Flow laboratories США), на среду Геллера, 44 ммоль, по 30 молодых растений на чашку.
Зародыши проращивают путем перенесения содержащего их бумажного фильтра в среду Геллера, 44 ммоль (состав дан в табл. 1), находящуюся в чашках Петри диаметром 6 см, после извлечения их из предварительной обработки по обезвоживанию или после различных времен обезвоживания. Чашки помещают в камеру для культивирования при 25oC, при световом периоде 16 ч дня и 8 ч ночи и с освещенностью 55 мкЕ•м-2•с-1. Молодые растения, достигшие роста около 1 см, переносят в чашки Планктона (Flow laboratories США), на среду Геллера, 44 ммоль, по 30 молодых растений на чашку.
Во всех следующих примерах наблюдения проводят при учете следующих параметров.
Степень выживания и прорастания зародышей, помещенных в среду Геллера, 44 ммоль, измеряют спустя несколько дней после их переноса и определяют следующим образом:
степень выживания, число зародышей, показывающих развитие либо на уровне корня, либо на уровне верхушки, соотнесенное к общему числу зародышей;
степень прорастания: число зародышей, показывающих хлорофильную верхушку и корень, соотнесенное к общему числу зародышей.
степень выживания, число зародышей, показывающих развитие либо на уровне корня, либо на уровне верхушки, соотнесенное к общему числу зародышей;
степень прорастания: число зародышей, показывающих хлорофильную верхушку и корень, соотнесенное к общему числу зародышей.
Степень конверсии (превращения) оценивают спустя примерно 2 месяца после стадии метаморфоза в чашках Планктона. Ее определяют - степень конверсии: число зародышей, имеющих первую пару настоящих листьев, соотнесенное к общему числу зародышей.
4 A). "Зародыши + защитные оболочки без обезвоживания"
Зародыши получают, как в примере 1 (1а), - в среде MSH0, и защитные оболочки и нанесенные пленки, как в примере 2а.
Зародыши получают, как в примере 1 (1а), - в среде MSH0, и защитные оболочки и нанесенные пленки, как в примере 2а.
4 B). "Обезвоженные зародыши + защитная оболочка"
Зародыши получают, как в примере 1 (в среде MSH0), затем обезвоживают, как в примере 3; защитные оболочки и пленки наносят, как в примере 2;
4 C). "Покрытые защитной оболочкой, обезвоженные зародыши"
Зародыши получают, как в примере 1 (в среде MSH0), затем покрывают защитной оболочкой, как в примере 2а). Покрытые защитной оболочкой зародыши обезвоживают, как в примере 3.
Зародыши получают, как в примере 1 (в среде MSH0), затем обезвоживают, как в примере 3; защитные оболочки и пленки наносят, как в примере 2;
4 C). "Покрытые защитной оболочкой, обезвоженные зародыши"
Зародыши получают, как в примере 1 (в среде MSH0), затем покрывают защитной оболочкой, как в примере 2а). Покрытые защитной оболочкой зародыши обезвоживают, как в примере 3.
Результаты, относящиеся к зародышам, которые получены в примерах 4A) - 4C), представлены в табл. 2 по сравнению с соответствующими степенями выживания, прорастания, конверсии и, в желательном случае, степенями выхода корней через защитную оболочку, по отношению к зародышам без покрытий, культивированным в среде без активного угля, необезвоженным (пример 1) и дегидратированным (пример 2).
Эти результаты ясно показывают, что
1) покрытые защитной оболочкой, необезвоженные (4 A) зародыши обладают отличной степенью выживания и прорастания;
2) покрытые защитной оболочкой зародыши (4 C) имеют отличную степень выживания и прорастания с удовлетворительной степенью конверсии;
3) обезвоженные, затем покрытые защитной оболочкой зародыши (4 B) обладают не только превосходной степенью выживания и прорастания, но и также превосходной степенью конверсии и степенью выхода корней, сравнимой со степенью конверсии, что демонстрирует превосходную способность покрытых защитной оболочкой меристематических тканей согласно изобретению давать всходы.
1) покрытые защитной оболочкой, необезвоженные (4 A) зародыши обладают отличной степенью выживания и прорастания;
2) покрытые защитной оболочкой зародыши (4 C) имеют отличную степень выживания и прорастания с удовлетворительной степенью конверсии;
3) обезвоженные, затем покрытые защитной оболочкой зародыши (4 B) обладают не только превосходной степенью выживания и прорастания, но и также превосходной степенью конверсии и степенью выхода корней, сравнимой со степенью конверсии, что демонстрирует превосходную способность покрытых защитной оболочкой меристематических тканей согласно изобретению давать всходы.
Пример 5.
Опыт по прорастанию при использовании покрытых защитной оболочкой семян
а). Семена цикория (chiroree scarole) [Фирма Clause] проращивают в асептических условиях. Семена дезинфицируют путем выдерживания 2 ч. в растворе гипохлорита кальция с концентрацией 35 г/л, под вакуумом. После трех промывок семена помещают в пробирку, содержащую 10 мл культуральной среды Геллера, 44 ммоль, описанной выше, по одному семени на пробирку, причем семена предварительно покрывают защитной оболочкой или нет.
а). Семена цикория (chiroree scarole) [Фирма Clause] проращивают в асептических условиях. Семена дезинфицируют путем выдерживания 2 ч. в растворе гипохлорита кальция с концентрацией 35 г/л, под вакуумом. После трех промывок семена помещают в пробирку, содержащую 10 мл культуральной среды Геллера, 44 ммоль, описанной выше, по одному семени на пробирку, причем семена предварительно покрывают защитной оболочкой или нет.
б). Семена помещают в защитные оболочки, такие как описанные в примере 2а): после того, как защитная оболочка нанесена, пропитывают с помощью 280 мкл культуральной среды Геллера. Осуществляют два повторения при использовании по 10 семян на обработку и на повторение.
В этих условиях, спустя 17 дней после посева, получают следующие результаты (табл. 3):
NT - контрольные, непокрытые защитной оболочкой семена;
5 - покрытые защитной оболочкой семена.
NT - контрольные, непокрытые защитной оболочкой семена;
5 - покрытые защитной оболочкой семена.
Эти результаты ясно показывают, что покрытые защитной оболочкой семена (5) обладают не только удовлетворительной степенью прорастания, но и также удовлетворительной степенью конверсии по отношению к посеянным растениям, с замечательной степенью выхода корней по отношению к проросшим растениям, что свидетельствует об отличной способности покрытых защитной оболочкой семян согласно изобретению давать всходы.
Claims (14)
1. Искусственное семя, включающее сухую или высушиваемую меристематическую ткань, твердую основу и защитную оболочку, размещенную вокруг основы, отличающееся тем, что в основе выполнено углубление для размещения меристематической ткани объемом, обеспечивающим контакт меристематической ткани с окружающим воздухом, при этом защитная оболочка частично покрывает основу, сохраняя контакт меристематической ткани с воздухом.
2. Семя по п.1, отличающееся тем, что на защитную оболочку дополнительно нанесен частично покрывающий ее слой пленки.
3. Семя по п.1, отличающееся тем, что меристематическая ткань гидратирована.
4. Семя по п.1, отличающееся тем, что твердая основа является сухой.
5. Семя по п.1, отличающееся тем, что твердая основа является высушиваемой или гидратированной.
6. Семя по п.1, отличающееся тем, что твердая основа имеет волокнистую структуру.
7. Семя по пп. 1 и 5, отличающееся тем, что твердой волокнистой основой является целлюлозный фильтр.
8. Семя по п.1, отличающееся тем, что твердая основа содержит связующее.
9. Семя по п.1, отличающееся тем, что твердая основа содержит сгуститель.
10. Семя по п.1, отличающееся тем, что защитная оболочка содержит связующее.
11. Семя по п.1, отличающееся тем, что защитная оболочка содержит сгуститель.
12. Способ получения искусственного семени, заключающийся в размещении меристематической ткани внутри твердой основы и покрытии основы защитной оболочкой, отличающийся тем, что в твердой основе предварительно делают углубление, в котором затем фиксируют меристематическую ткань так, чтобы она была окружена воздушной средой, при этом используют основу сухую или высушиваемую, способную абсорбировать питательную среду и не препятствовать прорастанию, а защитную оболочку наносят на основу частично, сохраняя контакт меристематической ткани с воздухом.
13. Способ по п.12, отличающийся тем, что на защитную оболочку дополнительно наносят частично покрывающий ее слой пленки.
14. Способ по п.13, отличающийся тем, что меристематическую ткань обезвоживают до или после помещения ее на основу.
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
FR9305192 | 1993-04-27 | ||
FR9305192A FR2704555B1 (fr) | 1993-04-27 | 1993-04-27 | Tissus meristematiques enrobes. |
PCT/FR1994/000457 WO1994024847A1 (fr) | 1993-04-27 | 1994-04-22 | Tissus meristematiques enrobes |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU95119845A RU95119845A (ru) | 1998-03-10 |
RU2111651C1 true RU2111651C1 (ru) | 1998-05-27 |
Family
ID=9446653
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU95119845A RU2111651C1 (ru) | 1993-04-27 | 1994-04-22 | Искусственное семя и способ его получения |
Country Status (19)
Country | Link |
---|---|
EP (1) | EP0696163B1 (ru) |
JP (1) | JPH08510640A (ru) |
KR (1) | KR960701585A (ru) |
CN (1) | CN1121682A (ru) |
AT (1) | ATE169176T1 (ru) |
AU (1) | AU691178B2 (ru) |
BR (1) | BR9406138A (ru) |
CA (1) | CA2161437A1 (ru) |
DE (1) | DE69412249T2 (ru) |
DK (1) | DK0696163T3 (ru) |
ES (1) | ES2119195T3 (ru) |
FI (1) | FI955099A0 (ru) |
FR (1) | FR2704555B1 (ru) |
GR (1) | GR3027591T3 (ru) |
HU (1) | HUT74248A (ru) |
IL (1) | IL109378A0 (ru) |
RU (1) | RU2111651C1 (ru) |
WO (1) | WO1994024847A1 (ru) |
ZA (1) | ZA942895B (ru) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2761083C1 (ru) * | 2018-01-12 | 2021-12-03 | Де Грот Эн Слот Б.В. | Семена чеснока (allium sativum), получаемые половым путем |
Families Citing this family (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
NZ272210A (en) | 1995-05-25 | 1997-10-24 | Carter Holt Harvey Ltd | Treatment of somatic embryos to provide viable embryos after storage periods |
US6946295B2 (en) | 1998-06-12 | 2005-09-20 | Cellfor, Inc. | Process for ex vitro sowing and germination of plant somatic embryos |
DE69903734T2 (de) | 1998-06-12 | 2003-07-17 | Silvagen Inc., Vancouver | Verfahren zur herstellung und anschliessender (ex vitro) aussaat und vermehrung von vorgekeimten pflanzlichen somatischen embryos |
US6689609B1 (en) | 1999-04-15 | 2004-02-10 | Cellfor Inc. | Enhancing germination of plant somatic embryos by priming |
US20060064930A1 (en) * | 2004-09-27 | 2006-03-30 | Carlson William C | Manufactured seed having a live end seal coating |
WO2008015736A1 (fr) * | 2006-08-01 | 2008-02-07 | Keiichiro Asaoka | Semence artificielle |
Family Cites Families (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4777762A (en) * | 1986-01-07 | 1988-10-18 | Plant Genetics, Inc. | Desiccated analogs of botanic seed |
JPS62179303A (ja) * | 1986-01-31 | 1987-08-06 | フロイント産業株式会社 | 播種物 |
US4808430A (en) * | 1987-02-27 | 1989-02-28 | Yazaki Corporation | Method of applying gel coating to plant seeds |
US5427593A (en) * | 1990-10-26 | 1995-06-27 | Weyerhaeuser Company | Analogs of botanic seed |
FR2670082B1 (fr) * | 1990-12-10 | 1995-03-24 | Rhone Poulenc Agrochimie | Semences artificielles. |
-
1993
- 1993-04-27 FR FR9305192A patent/FR2704555B1/fr not_active Expired - Fee Related
-
1994
- 1994-04-21 IL IL10937894A patent/IL109378A0/xx unknown
- 1994-04-22 BR BR9406138A patent/BR9406138A/pt active Search and Examination
- 1994-04-22 DK DK94915180T patent/DK0696163T3/da active
- 1994-04-22 AT AT94915180T patent/ATE169176T1/de active
- 1994-04-22 CA CA002161437A patent/CA2161437A1/fr not_active Abandoned
- 1994-04-22 RU RU95119845A patent/RU2111651C1/ru active
- 1994-04-22 AU AU66527/94A patent/AU691178B2/en not_active Ceased
- 1994-04-22 HU HU9503066A patent/HUT74248A/hu unknown
- 1994-04-22 WO PCT/FR1994/000457 patent/WO1994024847A1/fr active IP Right Grant
- 1994-04-22 JP JP6523946A patent/JPH08510640A/ja active Pending
- 1994-04-22 ES ES94915180T patent/ES2119195T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1994-04-22 DE DE69412249T patent/DE69412249T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1994-04-22 KR KR1019950704734A patent/KR960701585A/ko not_active Application Discontinuation
- 1994-04-22 EP EP94915180A patent/EP0696163B1/fr not_active Expired - Lifetime
- 1994-04-22 CN CN94191883A patent/CN1121682A/zh active Pending
- 1994-04-26 ZA ZA942895A patent/ZA942895B/xx unknown
-
1995
- 1995-10-26 FI FI955099A patent/FI955099A0/fi unknown
-
1998
- 1998-08-06 GR GR980401036T patent/GR3027591T3/el unknown
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2761083C1 (ru) * | 2018-01-12 | 2021-12-03 | Де Грот Эн Слот Б.В. | Семена чеснока (allium sativum), получаемые половым путем |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
GR3027591T3 (en) | 1998-11-30 |
EP0696163B1 (fr) | 1998-08-05 |
ATE169176T1 (de) | 1998-08-15 |
DE69412249D1 (de) | 1998-09-10 |
CN1121682A (zh) | 1996-05-01 |
DK0696163T3 (da) | 1999-05-03 |
AU691178B2 (en) | 1998-05-14 |
WO1994024847A1 (fr) | 1994-11-10 |
HU9503066D0 (en) | 1995-12-28 |
FR2704555B1 (fr) | 1995-06-09 |
FI955099A (fi) | 1995-10-26 |
JPH08510640A (ja) | 1996-11-12 |
ZA942895B (en) | 1995-01-04 |
FI955099A0 (fi) | 1995-10-26 |
ES2119195T3 (es) | 1998-10-01 |
BR9406138A (pt) | 1996-02-13 |
CA2161437A1 (fr) | 1994-11-10 |
KR960701585A (ko) | 1996-03-28 |
HUT74248A (en) | 1996-11-28 |
IL109378A0 (en) | 1994-07-31 |
DE69412249T2 (de) | 1999-01-21 |
FR2704555A1 (fr) | 1994-11-04 |
AU6652794A (en) | 1994-11-21 |
EP0696163A1 (fr) | 1996-02-14 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP4346112B2 (ja) | 植物保水用坦体 | |
CN104284579A (zh) | 植物人工种子及其制备方法 | |
RU2636168C2 (ru) | Композиция для стимулирующей обмазки корней растений | |
US5382269A (en) | Artificial seeds | |
US20160007590A1 (en) | Seed Growth Enhancer Compositions | |
JP2000515380A (ja) | ヒドロゲル中に埋封された生物学的材料、その埋封方法および人工種子としてのその使用 | |
JPS62275604A (ja) | 植物体再生組織、その製造方法および人工種子 | |
RU2111651C1 (ru) | Искусственное семя и способ его получения | |
Tchoa et al. | Effects of substrates, weight and physiological stage of suckers on massive propagation of plantain (Musa paradisiaca L.) | |
Sakamoto et al. | Delivery systems for tissue culture by encapsulation | |
Micheli et al. | Effects of double encapsulation and coating on synthetic seed conversion in M. 26 apple rootstock | |
WO2020002980A1 (en) | Plant material coating and preparation procedure | |
JP4629866B2 (ja) | 人工種子 | |
CN108934511B (zh) | 基于八角金盘籽油处理剂的多色三角梅嫁接方法 | |
RU2293457C2 (ru) | Посадочный материал, способ его получения (варианты) и способ подготовки посадочного материала к посадке | |
JP7281851B1 (ja) | 植物総体の栽培装置および栽培方法、ならびに栽培装置の製造方法 | |
RU2277315C2 (ru) | Капсула для проращивания и роста семян и способ ее получения | |
EP0766509B1 (fr) | Substrat de culture fibreux a base d'ester de cellulose | |
JPH01218520A (ja) | 植物体再生組織の製造方法 | |
RU2272390C2 (ru) | Капсулированный посадочный материал с регулируемыми свойствами и способ его получения | |
JPH11155308A (ja) | ゲル被覆種子 | |
KR20230035002A (ko) | 식용 양치식물의 포자를 이용한 인공종자 제조방법 및 상기 제조방법으로 제조된 인공종자 | |
RU2269243C1 (ru) | Капсулированный посадочный материал с регулируемыми свойствами и способ его получения | |
Dupuis et al. | Germination of Synthetic Seeds: New Substrates and Phytoprotection for Carrot Somatic Embryo Conversion to Plant | |
JPH0430732A (ja) | バイオ苗の生産方法 |