RU2057117C1

RU2057117C1 - HOMOLOGS OF 1α-HYDROXYVITAMIN D3 WITH SATURATED SIDE CHAIN, COMPOSITION PROMOTING STIMULATION AND ENHANCEMENT OF HUMAN LEUKEMIA MALIGNANT CELL DIFFERENTIATION, A METHOD OF STIMULATION AND ENHANCEMENT OF HUMAN LEUKEMIA MALIGNANT CELL DIFFERENTIATION

Info

Publication number: RU2057117C1
Application number: SU894742994A
Authority: RU
Inventors: Ф. Делюка Гектор; К. Шноес Генрих; Л. Перлман Кейто
Original assignee: Висконсин Алюмни Рисерч Фаундейшн
Priority date: 1988-04-29
Filing date: 1989-04-18
Publication date: 1996-03-27
Also published as: IE67953B1; IL90065A0; IL90065A; AU629831B2; HU206316B; NL8920392A; WO1989010352A1; HUT52476A; IE891407L; GB2217716A; JPH02504149A; HU894747D0; KR900700448A; JPH0699454B2; EP0374219A1; GB8909573D0; KR940003360B1; FR2630739A1; AU3553389A; IN169818B

Abstract

FIELD: medicine. SUBSTANCE: homologs of 1-1α-hydroxyvitamin D₃ with saturated side chain, composition promoting stimulation and enhancement of human leukemia malignant cell differentiation has homologs of 1-1α-hydroxyvitamin D₃ as an active substance. Method of stimulation and differentiation enhancement of human leukemia malignant cells involves the addition of at least one of homologs of 1-hydroxyvitamin D₃. EFFECT: increased antitumor activity of composition. 7 cl, 3 tbl

Description

Изобретение относится к новым производным витамина D, проявляющим особую активность в стимулировании дифференциации злокачественных и здоровых клеток, конкретно к ненасыщенным в боковой цепи и с удлиненной боковой цепью аналогам 1 α 25-дигидроксивитамину D₃ (1,25-(ОН)₂D₃), проявляющим селективность действия в качестве противоопухолевых средств за счет повышения активности в дифференциации злокачественных клеток и существенно сниженной активности в метаболизме кальция.The invention relates to new derivatives of vitamin D, which are particularly active in stimulating the differentiation of malignant and healthy cells, specifically to unsaturated analogues of 1 α 25-dihydroxyvitamin D ₃ (1,25- (OH) ₂ D ₃ ) in the side chain and with an extended side chain exhibiting selectivity of action as antitumor agents due to increased activity in the differentiation of malignant cells and significantly reduced activity in calcium metabolism.

Активность витаминов D (витамины D₃ или D₂) в регулировании метаболизма кальция и нормального развития и роста костной ткани требует метаболизма основного витамина в определенные гидроксилированные формы. Установлено, что 1 α 25-дигидроксивитамин D₃ (1,25-(ОН)₂D₃)-дигидроксилированный метаболит, образующийся обычно из витамина D₃ в человеке или животном, представляет собой активное вещество, ответственное за стимуляцию переноса кальция в кишечнике и ресорбцию кальция из костей (костная мобилизация) с регулированием в результате общего содержания кальция в организме (такое связанное с кальцием действие метаболитов или аналогов витамина D в последующем будет называться общим термином кальцемическая активность или кальцемическое действие соединений). Некоторые структурные аналоги 1,25-(ОН)₂D₃, такие как 1 α-гидроксивитамин D₃, 1 α-гидроксивитамин D₂, 1 α 25-дигидроксивитамин D₂ или фторзамещенные производные 1,25-(ОН)₂D₃ известны в качестве высокоактивных кальцемических средств, вследствие чего 1,25-(ОН)₂D₃ и его активные аналоги использовались или были предложены к использованию в качестве лекарств для профилактики или лечения различных нарушений метаболизма кальция в костной ткани, таких как почечная остеодистрофия, устойчивые к витамину D рахиты или остеопороз и связанные с ним заболевания.The activity of vitamins D (vitamins D ₃ or D ₂ ) in the regulation of calcium metabolism and the normal development and growth of bone tissue requires the metabolism of the main vitamin in certain hydroxylated forms. It has been established that 1 α 25-dihydroxyvitamin D ₃ (1,25- (OH) ₂ D ₃ ) -dihydroxylated metabolite, usually formed from vitamin D ₃ in humans or animals, is the active substance responsible for stimulating the transfer of calcium in the intestines and resorption of calcium from bones (bone mobilization) as a result of regulation of the total calcium content in the body (such calcium-related action of metabolites or vitamin D analogs will hereinafter be referred to as the common term calcemic activity or calcemic effect of compounds inertia). Some structural analogues of 1,25- (OH) ₂ D ₃ , such as 1 α-hydroxyvitamin D ₃ , 1 α-hydroxyvitamin D ₂ , 1 α 25-dihydroxyvitamin D ₂ or fluoro substituted derivatives 1,25- (OH) ₂ D ₃ are known as highly active calcemic agents, as a result of which 1.25- (OH) ₂ D ₃ and its active analogues have been used or have been proposed as drugs for the prevention or treatment of various disorders of calcium metabolism in bone tissue, such as renal osteodystrophy, resistant to vitamin D rickets or osteoporosis and related diseases .

Недавно обнаружено, что помимо своего хорошо известного кальцемического действия 1,25-(ОН)₂D₃ выполняет также и другие биологические функции. К примеру, было найдено, что 1,25-(ОН)₂ D₃ и близкие его аналоги (1 α -ОН-D₃), 1,25-(ОН)₂D₂, фторзамещенные аналоги и т.д.) способны стимулировать клеточную дифференциацию [1,2] В частности, было найдено, что 1,25-(ОН)₂ и его аналоги замедляют пролиферацию злокачественных клеток в культуре (например, клеток лейкемии человека) и стимулируют их дифференциацию от нормальных макрафагового типа клеток (такой тип активности в дальнейшем будет называться дифференциативной активностью производных витамина D). Вследствие их заметной активности в качестве стимулирующих дифференциацию средств такие производные витамина D потенциально применимы в качестве противораковых средств, их применение для лечения лейкемии человека действительно предлагалось [3] Хотя эти соединения высокоэффективны при дифференциации злокачественных клеток в культуре, тем не менее их столь же сильное кальцемическое действие in vivo ограничивает или препятствует их применению в качестве практических противораковых средств. Таким образом 1,25-(ОН)₂ D₃ и его фторированные производные являются чрезвычайно мощными средствами дифференциации клеток, но они также являются наиболее сильнодействующими соединениями с точки зрения кальцемической активности и в количествах, необходимых in vivo для эффективного использования в качестве противораковых (например, противолейкемических) средств, те же самые соединения могут привести к опасно высокому уровню кальция в крови вследствие присущей им кальцемической активности. Другие известные производные витамина D показывают аналогичную связь между дифференциативной и кальцемической активностями, так что их практическое применение в качестве протираковых средств также ограничено и опасно.It has recently been found that in addition to its well-known calcemic action, 1,25- (OH) ₂ D ₃ also has other biological functions. For example, it was found that 1.25- (OH) ₂ D ₃ and its close analogues (1 α-OH-D ₃ ), 1.25- (OH) ₂ D ₂ , fluorine-substituted analogues, etc.) able to stimulate cell differentiation [1,2] In particular, it was found that 1,25- (OH) ₂ and its analogues slow down the proliferation of malignant cells in culture (eg human leukemia cells) and stimulate their differentiation from normal macrophage type cells ( this type of activity will hereinafter be called the differential activity of derivatives of vitamin D). Due to their marked activity as differentiation stimulating agents, such vitamin D derivatives are potentially applicable as anticancer agents, their use in the treatment of human leukemia has indeed been proposed [3] Although these compounds are highly effective in differentiating malignant cells in culture, nevertheless, they are equally potent calcemic in vivo action limits or hinders their use as practical anti-cancer agents. Thus, 1.25- (OH) ₂ D ₃ and its fluorinated derivatives are extremely potent cell differentiators, but they are also the most potent compounds in terms of calcemic activity and in quantities necessary in vivo for effective use as anti-cancer (e.g. , anti-leukemic) drugs, the same compounds can lead to dangerously high levels of calcium in the blood due to their inherent calcemic activity. Other known derivatives of vitamin D show a similar relationship between differentiating and calcemic activities, so that their practical use as wipes is also limited and dangerous.

Эти наблюдения ясно указали на необходимость исследований и стимулировали такие исследования, связанные с поиском соединений с большей специфичностью и избирательностью действия в качестве противораковых средств, т.е. соединений с улучшенным соотношением дифференциативной/кальцемической активностей. Недавно проведенные работы привели к получению нескольких аналогов витамина D с усиленной дифференциативной активностью. Например, было найдено, что определенные гомологи 1,25-(ОН)₂ D₃, у которых боковая цепь удлинена на один атом углерода (в середине или на конце цепи), проявляют заметно более высокую дифференциативную активность (примерно в 10 раз выше) для клеток лейкемии в культуре по сравнению с самим 1,25-(ОН)₂ D₃ [4-6] Однако эти гомологи все еще остаются чрезвычайно сильными кальцемическими средствами с кальцемической активностью, примерно одинаковой с активностью 1,25-(ОН)₂D₃. Таким образом эти соединения характеризуются улучшенным соотношением дифференциативная/кальцемическая активности, но для них не преодолены затруднения, связанные с нежелательно сильным кальцемическим действием. Были получены и другие родственные витамину D соединения, обладающие дифференциативной активностью [7] но по своему строению они отличны от предлагаемых соединений.These observations clearly indicated the need for research and stimulated such research related to the search for compounds with greater specificity and selectivity of action as anticancer agents, i.e. compounds with an improved ratio of differential / calcemic activity. Recent work has led to the production of several vitamin D analogs with enhanced differential activity. For example, it was found that certain homologues of 1,25- (OH) ₂ D ₃ , in which the side chain is extended by one carbon atom (in the middle or at the end of the chain), exhibit markedly higher differentiative activity (about 10 times higher) for leukemia cells in culture compared with 1.25- (OH) ₂ D _{3 itself} [4-6] However, these homologs are still extremely potent calcemic agents with calcemic activity approximately equal to that of 1.25- (OH) ₂ D ₃ . Thus, these compounds are characterized by an improved differential / calcemic activity ratio, but the difficulties associated with an undesirably strong calcemic effect have not been overcome for them. Other vitamin D-related compounds with differential activity were obtained [7] but in their structure they are different from the proposed compounds.

Обнаружены родственные витамину D соединения, обладающие необходимой и перспективной активностью с точки зрения дифференциации в сравнении с их кальцемической активностью. Такие новые аналоги витамина обладают очень заметной активностью по замедлению пролиферации злокачественных клеток и стимулирования их дифференциации от нормальных моноцитного типа клеток (одинаковая или более высокая, чем у 1,25-(ОН)₂ D₃ активность), но эти соединения менее активны, чем 1,25-(ОН)₂ D₃ с точки зрения их кальцемического действия. Таким образом эти новые соединения обладают неожиданно улучшенным соотношением дифференциативной/кальцемической активностей, вследствие чего эти соединения являются предпочтительными средствами для лечения раковых заболеваний. Обладая высокой активностью по стимулированию дифференциации, но гораздо меньшей активностью в качестве кальцемических средств, данные соединения могут быть введены в организм без чрезмерного повышения уровня кальция в крови, в результате чего основная практическая проблема, связанная с высокой кальцемической активностью, оказывается преодоленной.Compounds related to vitamin D have been found to possess necessary and promising activity from the point of view of differentiation in comparison with their calcemic activity. Such new vitamin analogues have a very noticeable activity in slowing down the proliferation of malignant cells and stimulating their differentiation from normal monocytic cell types (the same or higher than 1.25- (OH) ₂ D ₃ activity), but these compounds are less active than 1,25- (OH) ₂ D ₃ in terms of their calcemic action. Thus, these new compounds have an unexpectedly improved differential / calcemic activity ratio, whereby these compounds are preferred agents for the treatment of cancer. Having high activity to stimulate differentiation, but much less activity as calcemic agents, these compounds can be introduced into the body without an excessive increase in the level of calcium in the blood, as a result of which the main practical problem associated with high calcemic activity is overcome.

Новые соединения с точки зрения их строения характеризуются, как имеющие ненасыщенность в боковой цепи гомологи 1,25-(ОН)₂ D₃ и боковая цепь удлинена внедрением двух или трех метиленовых звеньев в углеродную цепь. Соединения могут быть представлены нижеследующей общей формулой:

Конкретные и предпочтительные примеры таких соединений включают: 24-дигомо-1,25-дигидрокси-22-дегидровитамин D₃, т.е. соединения вышеприведенной формулы, где Х, Y и Z представляют водород и n=3, и 24-тригомо-1,25-дигидрокси-22-дегидровитамин D₃, т.е. соединение вышеприведенной формулы, где Х, Y и Z представляют водород и n=4.From the point of view of their structure, the new compounds are characterized as having homology of 1.25- (OH) ₂ D ₃ having a side chain unsaturation and the side chain is extended by the introduction of two or three methylene units into the carbon chain. Compounds may be represented by the following general formula:

Specific and preferred examples of such compounds include: 24-dihomo-1,25-dihydroxy-22-dehydrovitamin D ₃ , i.e. compounds of the above formula, where X, Y and Z are hydrogen and n = 3 and 24-trigomo-1,25-dihydroxy-22-dehydrovitamin D ₃ , i.e. the compound of the above formula, where X, Y and Z are hydrogen and n = 4.

Эти новые соединения родственны имеющему ненасыщенность в боковой цепи 24-гомовитамину D₃ [4] Однако новые соединения отличны по своим структурным и биологическим показателям. Различие в строении заключается в наличии ненасыщенной боковой цепи, модифицированной внедрением двух или трех метиленовых звеньев, а с биологической точки зрения соединения характеризуются как очень сильные клеточные дифференциативные средства, не обладающие значительно сниженной кальцемической активностью.These new compounds are related to 24-homovitamin D ₃ having an unsaturation in the side chain [4] However, the new compounds are different in their structural and biological parameters. The difference in structure is the presence of an unsaturated side chain, modified by the introduction of two or three methylene units, and from a biological point of view, the compounds are characterized as very strong cellular differentiators that do not have significantly reduced calcemic activity.

Получение новых соединений. Способы синтеза новых соединений изобретения отражены схемами 1, 2 и 3. На схеме 1 получение промежуточного 1 α-гидроксивитамин D-22-альдегида, который в реакции с поставляющим боковую цепь соответствующим алкилфенилсульфоном (схема способа синтеза 2) образует целевые гомологи витамин D (например, соответственно соединения (25) и (26) Схема 3 иллюстрирует получение алкилфенилсульфонов, необходимых для образования боковой цепи. Экспериментальные подробности осуществления стадий химического процесса, отраженного схемами, приведены в нижеследующих конкретных примерах. Соединения, обозначенные арабскими цифрами (например, соединение 1,2,3 и т.д.) в примерах, относятся к формулам с теми же номерами на схемах. Getting new compounds. Methods of synthesizing the new compounds of the invention are reflected in Schemes 1, 2, and 3. In Scheme 1, the preparation of intermediate 1 α-hydroxyvitamin D-22-aldehyde, which, in reaction with the corresponding side chain alkylphenyl sulfone (synthesis method scheme 2), forms the target homologues of vitamin D (e.g. , respectively, compounds (25) and (26) Scheme 3 illustrates the preparation of alkylphenyl sulfones necessary for the formation of the side chain. their specific examples The compounds indicated by Arabic numerals (for example, compound 1,2,3, etc.) in the examples refer to formulas with the same numbers in the diagrams.

Общие методики. General techniques.

3 β -ацетокси-22,23-биснор-5-холевая кислота (1) получена от Steroids (Уилтон, NH). Все другие химикаты были лучшего качества продажными продуктами. Растворители очищены стандартными методами. 3 β-acetoxy-22,23-bisnor-5-cholic acid (1) was obtained from Steroids (Wilton, NH). All other chemicals were of the best quality selling products. Solvents are cleaned by standard methods.

Тонкослойную хроматографию (ТСХ) осуществляют на предварительно покрытых силикагелем алюминиевых пластинках с УФ-индикацией с помощью ЕМ Science (Гиббстаун, шт. Нью-Йорк). Использованы следующие системы растворителей: А хлороформэтанол (85:15 об/об); В-гексан-этилацетат (1:1) и С-гексан-этилацетат (3:1). Thin layer chromatography (TLC) was carried out on pre-coated silica gel aluminum plates with UV indication using EM Science (Gibbstown, NY). The following solvent systems were used: A chloroform-ethanol (85:15 v / v); B-hexane-ethyl acetate (1: 1) and C-hexane-ethyl acetate (3: 1).

Высокоэффективную жидкостную хроматографию (ВЭЖХ) осуществляют с применением жидкостного хроматографа фирмы Waters Associates, снабженного системой подачи растворителя модели 6000А, универсальным инжектором модели 6VК и детектором с переменной длиной волны модели 450. Используют колонки Зорбакс-Сил (Phenomenex) (6,2 мм х 25 см и 10 мм х 25 см). Системы растворителей: А 3% 2-пропанола в гексане; В 2% 2-пропанола в гексане; С 6% 2-пропанола в гексане; D 10% 2-пропанола в гексане; Е 20% 2-пропанола в гексане. Для предварительного фильтрования образцов ВЭЖХ применяют патроны с силикагелем Сер-Пак (Waters Associates). High performance liquid chromatography (HPLC) is performed using a Waters Associates liquid chromatograph equipped with a Model 6000A solvent supply system, Model 6VK universal injector and Model 450 variable wavelength detector. Phenomenex columns (6.2 mm x 25) are used. cm and 10 mm x 25 cm). Solvent systems: A 3% 2-propanol in hexane; In 2% 2-propanol in hexane; With 6% 2-propanol in hexane; D 10% 2-propanol in hexane; E 20% 2-propanol in hexane. For pre-filtering HPLC samples, Ser-Pak silica gel cartridges (Waters Associates) are used.

Масс-спектры при бомбардировке электронами (МС) записывались при 70 еV на масс-спектрометра Kratos MS-50 ТС, снабженном записывающей системой Kratos DS-55. Electron bombardment mass spectra (MS) were recorded at 70 eV on a Kratos MS-50 TC mass spectrometer equipped with a Kratos DS-55 recording system.

Ультрафиолетовые (УФ) спектры поглощения регистрировались в видимой области на спектрофотометре Hitachi модель 60-100. Ultraviolet (UV) absorption spectra were recorded in the visible region on a Hitachi Model 60-100 spectrophotometer.

Спектры в инфракрасной области регистрировались на спектрометре Nicolet МХ-1 ГТ-1Р с применением пленок маслянистых веществ или растворов в четыреххлористом углероде. Spectra in the infrared were recorded on a Nicolet MX-1 GT-1R spectrometer using films of oily substances or solutions in carbon tetrachloride.

Спектры протонного магнитного резонанса (IH-ЯМР) снимались на приборе Bruker 270 при 400 или 50 МГц в растворах CDCl₃, содержащих в качестве внутреннего стандарта тетраметилсилан (ТМС).Proton magnetic resonance spectra (IH-NMR) were recorded on a Bruker 270 instrument at 400 or 50 MHz in CDCl ₃ solutions containing tetramethylsilane (TMS) as the internal standard.

П р и м е р 1. Синтез защищенного С-22 альдегида (соединение 18, схема 1). PRI me R 1. Synthesis of a protected C-22 aldehyde (compound 18, scheme 1).

Альдегид синтезируют по общей методике Kulner и др. (Tetr. Letters 28, 6129-32, 1987). Соединение (1) (10 г) растворяют в 420 мл 5%-ного КОН в метаноле, и раствор перемешивают 15 мин при комнатной температуре до прекращения обнаруживания исходного соединения с помощью ТСХ (система растворителей А). К полученному раствору по каплям прибавляют 160 мл 10%-ной серной кислоты в метаноле при перемешивании и образовавшуюся суспензию разбавляют 400 мл 1%-ной серной кислотой в метаноле. Смесь кипятят 48 ч для завершения этерификации (ТСХ, система растворителей А). Соединение (2) (сложный эфир) экстрагируют этилацетатом, органическую фазу промывают 5% NaHCO₃, насыщенным NaCl и сушат над сульфатом магния. Полученное соединение (2) (0 г, 88%) используют на следующей стадии без дополнительной очистки.Aldehyde is synthesized according to the general procedure of Kulner et al. (Tetr. Letters 28, 6129-32, 1987). Compound (1) (10 g) was dissolved in 420 ml of 5% KOH in methanol, and the solution was stirred for 15 minutes at room temperature until the starting compound was no longer detected by TLC (solvent system A). 160 ml of 10% sulfuric acid in methanol are added dropwise to the resulting solution with stirring, and the resulting suspension is diluted with 400 ml of 1% sulfuric acid in methanol. The mixture is boiled for 48 hours to complete the esterification (TLC, solvent system A). Compound (2) (ester) was extracted with ethyl acetate, the organic phase was washed with 5% NaHCO ₃ , saturated NaCl and dried over magnesium sulfate. The resulting compound (2) (0 g, 88%) was used in the next step without further purification.

К раствору соединения (2) (4,4 г, 12 ммоля) в 135 мл сухого диметилформамида (ДМФА) добавляют имидазол (3,6 г, 52,8 ммоля), затем трет-бутилдиметилсилилхлорид (4 г, 26,4 ммоля). Раствор перемешивают 5 мин при комнатной температуре до момента образования объемистого осадка, после чего перемешивание продолжают еще 15 мин. Реакционную смесь экстрагируют гексаном (400 мл), промывают водой, насыщенным раствором NaCl и сушат над сульфатом магния. После испарения растворителя получают по данным ТСХ (система растворителей В) продукт (соединение (3), 5,3 г, 91%), использованный на следующей стадии без дополнительной очистки. Аналитический образец получают вытеснительной хроматографией с применением 2% этилацетата в гексане. To a solution of compound (2) (4.4 g, 12 mmol) in 135 ml of dry dimethylformamide (DMF) is added imidazole (3.6 g, 52.8 mmol), then tert-butyldimethylsilyl chloride (4 g, 26.4 mmol) . The solution was stirred for 5 minutes at room temperature until a bulky precipitate formed, after which stirring was continued for another 15 minutes. The reaction mixture was extracted with hexane (400 ml), washed with water, saturated NaCl and dried over magnesium sulfate. After evaporation of the solvent, the product (compound (3), 5.3 g, 91%) was obtained according to TLC (solvent system B), used in the next step without further purification. An analytical sample is obtained by size exclusion chromatography using 2% ethyl acetate in hexane.

Смесь соединения (3) (1 г, 2,1 ммоля) двубромистого олова (0,42 г, 1,5 ммоля) и безводного бикарбоната натрия (0,91 г, 10 ммолей) в 20 мл гексана кипятят 30 мин в атмосфере азота до исчезновения исходного соединения (3) (ТСХ, система растворителей С). Осадок отфильтровывают, а раствор сушат при пониженном давлении. Остаток вновь растворяют в 5 мл безводного ТГФ, добавляют тетрабутиламмонийбромид (0,06 г, 0,19 ммоля), и смесь перемешивают 30 мин при комнатной температуре в атмосфере азота. Затем добавляют раствор тетрабутиламмонийфторида (10 мл, 1 М в ТГФ), затем добавляют 0,7 мл с-коллидина, и смесь перемешивают 1 ч при комнатной температуре в атмосфере азота. Добавляют еще 5 мл раствора тетрабутиламмонийфторида и перемешивание продолжают 3 ч. Добавляют эфир (50 мл), и органическую фазу промывают водой, холодной 1 н, НСl, 10% NaHCO₃ и сушат над безводным сульфатом магния. Полученное соединение (3) (0,44 г, 58%) растворяют в бензоле, хроматографируют на силикагеле (70-230 меш, 30 г) и элюируют с помощью этилацетата в гексане. Аналитический образец получают ВЭЖХ (система А, 77 мл);
ИК (пленка): 1737, 1604, 1495, 1082, 1030 см^-1;
УФ (3% 2-пропанола в гексане) γ_max 262 нм ( ε 7000), γ_max 272 нм ( ε 9800), γ_max 282 нм ( ε 10500), γ_max 293 нм ( ε 6000);
1Н-ЯМР (CICl₃) δ 0,54 (3Н, с, 18-СН₃), 0,94 (3Н, с, 18-СН₃), 0,94 (3Н, с, 19-СН₃), 1,22 (3Н, д, J 6 Гц, 2-СН₃), 3,6 (1Н, м, 3-Н), 3,68 (3Н, с, СО₂СН₃), 5,42 (1Н, м, 6-Н), 5,58 (1Н, м, 7-Н), МС m/3 (относительная интенсивность): 358 (61), 340 (12), 325 (100), 299 (68), 271 (7), 253 (17), 237 (26), 211 (27), 143 (72), 119 (35).A mixture of compound (3) (1 g, 2.1 mmol) of tin dibromide (0.42 g, 1.5 mmol) and anhydrous sodium bicarbonate (0.91 g, 10 mmol) in 20 ml of hexane is boiled for 30 minutes in a nitrogen atmosphere until the disappearance of the starting compound (3) (TLC, solvent system C). The precipitate was filtered off and the solution was dried under reduced pressure. The residue was redissolved in 5 ml of anhydrous THF, tetrabutylammonium bromide (0.06 g, 0.19 mmol) was added, and the mixture was stirred for 30 minutes at room temperature under nitrogen. Then a solution of tetrabutylammonium fluoride (10 ml, 1 M in THF) was added, then 0.7 ml of c-collidine was added, and the mixture was stirred for 1 h at room temperature under nitrogen atmosphere. An additional 5 ml of tetrabutylammonium fluoride solution was added and stirring was continued for 3 hours. Ether (50 ml) was added and the organic phase was washed with water, cold 1 N, HCl, 10% NaHCO ₃ and dried over anhydrous magnesium sulfate. The resulting compound (3) (0.44 g, 58%) was dissolved in benzene, chromatographed on silica gel (70-230 mesh, 30 g) and eluted with ethyl acetate in hexane. An analytical sample was obtained by HPLC (system A, 77 ml);
IR (film): 1737, 1604, 1495, 1082, 1030 cm ^-1 ;
UV (3% 2-propanol in hexane) γ _max 262 nm (ε 7000), γ _max 272 nm (ε 9800), γ _max 282 nm (ε 10500), γ _max 293 nm (ε 6000);
1 H NMR (CICl ₃ ) δ 0.54 (3H, s, 18-CH ₃ ), 0.94 (3H, s, 18-CH ₃ ), 0.94 (3H, s, 19-CH ₃ ), 1.22 (3H, d, J 6 Hz, 2-CH ₃ ), 3.6 (1H, m, 3-H), 3.68 (3H, s, CO ₂ CH ₃ ), 5.42 (1H , m, 6-Н), 5.58 (1Н, m, 7-Н), MS m / 3 (relative intensity): 358 (61), 340 (12), 325 (100), 299 (68), 271 (7), 253 (17), 237 (26), 211 (27), 143 (72), 119 (35).

Раствор соединения (4) (830 мг, 2,3 ммоля) в 350 мл смеси бензол-этиловый эфир (1:4 об/об) облучают при перемешивании 40 мин (4х10 мин) в атмосфере азота в охлаждаемой водой погруженной ячейке, снабженной барботером для азота и викоровым фильтром, с помощью УФ-лампы среднего диаметра На novia 608А36. Ход реакции контролируют с помощью ВЭЖХ с применением 2% 2-пропанола в гексане при 265 нм. Раствор испаряют при пониженном давлении, вновь растворяют в 100 мл абсолютного этанола и кипятят 3 ч в атмосфере азота. Затем раствор концентрируют, вновь растворяют в 1 мл 10% этилацетата в гексане и хроматографируют на силикагеле (70-230 меш, 30 г). Сложный эфир витамина (5) (298 мг, 36%) элюируют смесью 15% этилацетата в гексане. Аналитический образец получают ВЭЖХ (система В, R_v 94 мл);
ИК (пленка): 1738 см^-1;
УФ (ЕtOH): γ_max 264 нм, γ_min 228 нм;
IН-ЯМР (CDCl₃) δ 0,56 (3Н, с, 18-СН₃), 1,2 (3Н, д, J 7 Гц, 21-СН₃), 3,66 (3Н, с, СО₂СН₃), 3,95 (1Н, м, 3-Н), 4,8 (1Н, д, J 1,2 Гц, 19 Z-H), 5,05 (1Н, д, I 1,2 Гц, 19Е-Н), 6,03 (1Н, д, J 11 Гц, 7-Н), 6,23 (1Н, д, J 11 Гц, 6-Н), МС m/з (относительная интенсивность): М⁺ 358 (45), 340 (9), 325 (45), 299 (22), 253 (19), 237 (18), 136 (60), 118 (100).A solution of compound (4) (830 mg, 2.3 mmol) in 350 ml of a benzene-ethyl ether mixture (1: 4 v / v) is irradiated with stirring for 40 min (4x10 min) in a nitrogen atmosphere in a water-cooled immersed cell equipped with a bubbler for nitrogen and a vicor filter, using a medium diameter UV lamp On novia 608A36. The progress of the reaction was monitored by HPLC using 2% 2-propanol in hexane at 265 nm. The solution was evaporated under reduced pressure, redissolved in 100 ml of absolute ethanol and refluxed for 3 hours under nitrogen. Then the solution is concentrated, redissolved in 1 ml of 10% ethyl acetate in hexane and chromatographed on silica gel (70-230 mesh, 30 g). Vitamin Ester (5) (298 mg, 36%) was eluted with a mixture of 15% ethyl acetate in hexane. An analytical sample was obtained by HPLC (system B, R _v 94 ml);
IR (film): 1738 cm ^-1 ;
UV (EtOH): γ _max 264 nm, γ _min 228 nm;
1 H-NMR (CDCl ₃ ) δ 0.56 (3H, s, 18-CH ₃ ), 1.2 (3H, d, J 7 Hz, 21-CH ₃ ), 3.66 (3H, s, CO ₂ CH ₃ ), 3.95 (1H, m, 3-H), 4.8 (1H, d, J 1.2 Hz, 19 ZH), 5.05 (1H, d, I 1.2 Hz, 19E -H), 6.03 (1H, d, J 11 Hz, 7-H), 6.23 (1H, d, J 11 Hz, 6-H), MS m / s (relative intensity): M ⁺ 358 (45), 340 (9), 325 (45), 299 (22), 253 (19), 237 (18), 136 (60), 118 (100).

Раствор соединения (5) (10 мг, 0,028 ммоля) в 5 мл сухого толуола охлаждают в атмосфере азота до -70^оС в бане с сухим льдом в ацетоне. К охлажденному раствору по каплям при перемешивании добавляют диизобутилалюминийгидрид (ДИБАЛ-Н, 50 мкл, 25%-ный раствор в толуоле, 0,088 ммоля), реакционную смесь перемешивают 10 мин при -70^оС, после чего медленно прибавляют метанол (2 мл). Смесь оставляют нагреваться до комнатной температуры, разбавляют этиловым эфиром и промывают 5%-ным НСl, 5%-ным NaHCO₃, водой, насыщенным раствором NaCl и сушат над безводным сульфатом магния. Хроматографией на силикагеле (15% этилацетата в гексане) получают соединение (6) (4,9 мг, 54%) со следующими спектральными характеристиками. МС: 328 (М⁺, 29), 310 (5), 295 (31), 269 (11), 253 (6), 136 (47), 118 (86), 29 (100);
1Н-ЯМР (СDCl₃) δ 0,59 (3Н, с, 18-СН₃), 1,14 (3Н, д. J 7 Гц, 21-СН₃), 4 (1Н, м, 3-Н), 4,81 (1Н, д, J 1,2 Гц, 19Е-Н), 5,05 (1Н, д, J= 1,2 Гц, 19 Z-H), 6,05 (1Н, д, J 11 Гц, 7-Н), 6,23 (1H, д, J=11 Гц, 6-H), 9,58 (1Н, д, J 3,8 Гц, 22-Н).A solution of compound (5) (10 mg, 0.028 mmol) in 5 mL of dry toluene was cooled under nitrogen to -70 ^C in a dry ice in acetone. To the cooled solution was dropwise added with stirring diisobutylaluminum hydride (DIBAL-H, 50 L, 25% solution in toluene, 0.088 mmol) and the reaction mixture was stirred for 10 min at ^-70 ° C, then slowly add methanol (2 mL). The mixture was allowed to warm to room temperature, diluted with ethyl ether and washed with 5% HCl, 5% NaHCO ₃ , water, saturated NaCl and dried over anhydrous magnesium sulfate. Chromatography on silica gel (15% ethyl acetate in hexane) gave compound (6) (4.9 mg, 54%) with the following spectral characteristics. MS: 328 (M ⁺ , 29), 310 (5), 295 (31), 269 (11), 253 (6), 136 (47), 118 (86), 29 (100);
1 H-NMR (CDCl ₃ ) δ 0.59 (3H, s, 18-CH ₃ ), 1.14 (3H, d. J 7 Hz, 21-CH ₃ ), 4 (1H, m, 3-H) 4.81 (1H, d, J 1.2 Hz, 19E-H), 5.05 (1H, d, J = 1.2 Hz, 19 ZH), 6.05 (1H, d, J 11 Hz 7-H), 6.23 (1H, d, J = 11 Hz, 6-H), 9.58 (1H, d, J 3.8 Hz, 22-H).

Дальнейшее элюирование колонки с силикагелем 5% 2-пропанола в гексане приводит к получению С-22-спирт (соединение (7), 2,7 мг, 29%). Further elution of the silica gel column with 5% 2-propanol in hexane affords C-22 alcohol (compound (7), 2.7 mg, 29%).

Соединение (5) превращают в соединение (8) обработкой 20 ч при 4^оС n-толуолсульфонилхлоридом в пиридине. Соединение (8) (102 мг, 0,2 ммоля) растворяют в мл безводного дихлорметана, и полученный раствор при перемешивании и 55^оС прибавляют к метанольному раствору (15 мл) безводного бикарбоната калия (250 мг). Смесь перемешивают 24 ч при 55^оС, после чего растворители удаляют при пониженном давлении, а остаток экстрагируют эфиром. Органическую фазу промывают водой и сушат над безводным сульфатом магния. Полученное соединение (9) (50 мг, 68%) очищают хроматографией на силикагеле с применением 20% этилацетата в гексане.Compound (5) is converted to compound (8) by treatment of 20 hours at 4 ^{° C} n-toluenesulfonyl chloride in pyridine. Compound (8) (102 mg, 0.2 mmol) was dissolved in ml of anhydrous dichloromethane, and the resulting solution under agitation and 55 ^{° C} was added to a methanol solution (15 ml) of anhydrous potassium bicarbonate (250 mg). The mixture was stirred for 24 h at 55 ^C, after which the solvents were removed under reduced pressure and the residue was extracted with ether. The organic phase is washed with water and dried over anhydrous magnesium sulfate. The resulting compound (9) (50 mg, 68%) was purified by silica gel chromatography using 20% ethyl acetate in hexane.

К суспензии двуокиси селена (9 мг, 0,8 ммоля) в 2 мл сухого метиленхлорида добавляют гидроперекись трет-бутила (112 мкл, 3 М раствор в толуоле, 0,34 ммоля), смесь перемешивают при комнатной температуре в азоте до образования прозрачного раствора. Затем добавляют безводный пиридин (12 мкл, 0,15 ммоля) и вслед соединение (9) (50 мг), растворенное в 2 мл безводного дихлорметана. Смесь перемешивают в атмосфере азота 30 мин, добавляют холодный раствор 10% бикарбоната натрия (2 мл) и экстрагируют эфиром. Органическую фазу промывают холодным 10%-ным раствором бикарбоната натрия, ледяной водой и сушат над безводным сульфатом магния. Хроматографией на силикагеле (10-20% этилацетата в гексане) получают 12,5 мг соединения (10), которое тут же растворяют в 0,5 мл ледяной уксусной кислоты, полученный раствор нагревают при перемешивании 15 мин при 55^оС в азоте. Реакционную смесь переносят на лед, экстрагируют эфиром и промывают ледяным насыщенным раствором бикарбоната натрия. Объединенные эфирные экстракты промывают водой и сушат над безводным сульфатом магния. Аналитические образцы (5,7Е) и (5Е, 7E) изомеров соединений (11) (12) соответственно получены препаративной ВЭЖХ в отношении 2,5:1.To a suspension of selenium dioxide (9 mg, 0.8 mmol) in 2 ml of dry methylene chloride, tert-butyl hydroperoxide (112 μl, 3 M solution in toluene, 0.34 mmol) was added, the mixture was stirred at room temperature in nitrogen until a clear solution formed . Anhydrous pyridine (12 μl, 0.15 mmol) is then added, followed by compound (9) (50 mg) dissolved in 2 ml of anhydrous dichloromethane. The mixture was stirred under nitrogen for 30 minutes, a cold solution of 10% sodium bicarbonate (2 ml) was added and extracted with ether. The organic phase is washed with cold 10% sodium bicarbonate solution, ice water and dried over anhydrous magnesium sulfate. Chromatography on silica gel (10-20% ethyl acetate in hexane) gave 12.5 mg of compound (10) which is immediately dissolved in 0.5 ml of glacial acetic acid, the solution was heated with stirring for 15 minutes at 55 ^{° C} in nitrogen. The reaction mixture was transferred to ice, extracted with ether and washed with ice-cold saturated sodium bicarbonate solution. The combined ether extracts were washed with water and dried over anhydrous magnesium sulfate. Analytical samples of (5.7E) and (5E, 7E) isomers of compounds (11) (12), respectively, were obtained by preparative HPLC in a ratio of 2.5: 1.

Соединение 11. ВЭЖХ: R_v 68 мл;
УФ (Е107Н): γ_max 264 нм, γ_min 227 нм, A264 2,07; A 227.Compound 11. HPLC: R _v 68 ml;
UV (E107H): γ _max 264 nm, γ _min 227 nm, A264 2.07; A 227

1Н-ЯМР (СDСl₃) δ 0,56 (3Н, с, 18-СН₃), 1,2 (3Н, д, J 6,5 Гц, 21-СН₃), 2,04 (3Н, с, 3 β-ацетил), 3,66 (3Н, с, 22-СО₂СН₃), 4,4 (1Н, м, 1-Н), 5,2 (1Н, м, 3-Н), 5,01 (1Н, уш.с, 19Е-Н), 5,34 (1Н, уш, с, 19Z-H), 6,01 (1Н, д, J 10 Гц, 7-Н), 6,33 (1Н, д, J 10 Гц, 6-Н); МС m/3 (относительная интенсивность): 416 (М⁺, 4), 356 (100), 338 (21), 251 (13), 134 (95).1 H-NMR (CDCl ₃ ) δ 0.56 (3H, s, 18-CH ₃ ), 1.2 (3H, d, J 6.5 Hz, 21-CH ₃ ), 2.04 (3H, s, 3 β-acetyl), 3.66 (3H, s, 22-CO ₂ CH ₃ ), 4.4 (1H, m, 1-H), 5.2 (1H, m, 3-H), 5, 01 (1H, br.s, 19E-H), 5.34 (1H, br, s, 19Z-H), 6.01 (1H, d, J 10 Hz, 7-H), 6.33 (1H d, J 10 Hz, 6-H); MS m / 3 (relative intensity): 416 (M ⁺ , 4), 356 (100), 338 (21), 251 (13), 134 (95).

Соединение 12. Compound 12.

ВЭЖХ: R_v 78 мл;
УФ (ЕtOH): γ_max 267 нм, γ_min 227 нм, А267 3,51; А227
1Н, ЯМР (СDCl₃) δ 0,56 (3Н, с, 18-СН₃), 1,2 (3Н, д, J 6,5 Гц, 21-СН₃), 2,04 (3Н, с, 3 β-ОАс), 3,66 (3Н, с, 22-СО₂СН₃), 4,5 (1Н, м, 1-Н), 5,3 (1Н, м, 3-Н), 4,99 (1Н, уш, с, 19Е-Н), 5,13 (1Н, уш, с, 19Z-Н), 5,81 (1Н, д, J 10 Гц, 7-Н), 6,56 (1Н, д, J 10 Гц, 6-Н).HPLC: R _v 78 ml;
UV (EtOH): γ _max 267 nm, γ _min 227 nm, A267 3.51; A227
1 H, NMR (CDCl ₃ ) δ 0.56 (3H, s, 18-CH ₃ ), 1.2 (3H, d, J 6.5 Hz, 21-CH ₃ ), 2.04 (3H, s, 3 β-OAc), 3.66 (3H, s, 22-CO ₂ CH ₃ ), 4.5 (1H, m, 1-H), 5.3 (1H, m, 3-H), 4, 99 (1H, br, s, 19E-H), 5.13 (1H, br, s, 19Z-H), 5.81 (1H, d, J 10 Hz, 7-H), 6.56 (1H d, J 10 Hz, 6-H).

При получении в больших масштабах изомеры (11) и (12) могут быть также успешно и эффективно разделены с использованием малеинового ангидрида по методике (патент США N 4554106). Upon receipt of the large-scale isomers (11) and (12) can also be successfully and effectively separated using maleic anhydride according to the method (US patent N 4554106).

К раствору соединения (11) (2 мг) в 0,5 мл сухого толуола при -70^оС и перемешивании в атмосфере азота прибавляют диизобутилалюминийгидрид (15 мкл, 1,5 М раствор в толуоле), смесь перемешивают 10 мин при -70^оС, после чего для разложения металлоорганического комплекса медленно прибавляют метанол. Смесь нагревают до комнатной температуры и экстрагируют этиловым эфиром. Органическую фазу промывают водой и сушат над безводным сульфатом магния. Препаративной ВЭЖХ (система Е) получают соединения (13) и (14). Для соединения (13) получены следующие спектральные данные. МС:
344 (М⁺, 22), 326 (13), 311 (2), 285 (4), 269 (4), 152 (29) 134 (100);
1Н-ЯМР (СDCl₃) δ 0,59 (3Н, с, 18-СН₃), 1,15 (3Н, д, J 7 Гц, 21-СН₃), 4,2 (1Н, м, 3-Н), 4,4 (1Н, м, 1-Н), 4,99 (1Н, д, J 1,2 Гц, 19-Н), 5,31 (1Н, д, J 1,2 Гц, 19Е-Н), 6,02 (1Н, д, J 11 Гц, 7-Н), 6,36 (1Н, д, J 11 Гц, 6-Н), 9,56 (1Н, д, J 4 Гц, 22-Н).To a solution of compound (11) (2 mg) in 0.5 ml of dry toluene at ^-70 ° C and stirring under nitrogen was added diisobutylaluminum hydride (15 uL, 1.5 M solution in toluene) and the mixture stirred for 10 minutes at ^-70 C, after which methanol is slowly added to decompose the organometallic complex. The mixture was warmed to room temperature and extracted with ethyl ether. The organic phase is washed with water and dried over anhydrous magnesium sulfate. Preparative HPLC (system E) affords compounds (13) and (14). The following spectral data were obtained for compound (13). MS:
344 (M ⁺ , 22), 326 (13), 311 (2), 285 (4), 269 (4), 152 (29) 134 (100);
1 H-NMR (CDCl ₃ ) δ 0.59 (3H, s, 18-CH ₃ ), 1.15 (3H, d, J 7 Hz, 21-CH ₃ ), 4.2 (1H, m, 3- H), 4.4 (1H, m, 1-H), 4.99 (1H, d, J 1.2 Hz, 19-H), 5.31 (1H, d, J 1.2 Hz, 19E -H), 6.02 (1H, d, J 11 Hz, 7-H), 6.36 (1H, d, J 11 Hz, 6-H), 9.56 (1H, d, J 4 Hz, 22-H).

К перемешиваемому раствору соединения (II) (100 мг, 0,24 ммоля) в этиловом эфире (10 мл) добавляют 0,1 н раствор КОН в метаноле (10 мл) и перемешивают 90 мин при комнатной температуре до исчезновения исходного соединения (ТСХ, система растворителей В). Соединение (15) выделено стандартной процедурой экстрагирования (этилацетат, насыщенный раствор NaCl, безводный сульфат магния) в виде бесцветного масла (86,2 мг, 96%). To a stirred solution of compound (II) (100 mg, 0.24 mmol) in ethyl ether (10 ml) was added a 0.1 N solution of KOH in methanol (10 ml) and stirred for 90 minutes at room temperature until the starting compound (TLC, solvent system B). Compound (15) was isolated by a standard extraction procedure (ethyl acetate, saturated NaCl, anhydrous magnesium sulfate) as a colorless oil (86.2 mg, 96%).

Смесь имидазола (250 мг, 3,6 ммоля) и трет-бутилдиметилсилилхлорида (250 мг, 1,6 ммоля) в ДМФА (2 мл) добавляют к перемешиваемому раствору соединения (15) (86,2 мг, 0,23 ммоля), полученную однородную смесь перемешивают 15 мин при 55^оС до исчезновения исходного соединения (ТСХ, система растворителей В). Продукт выделяют экстрагированием реакционной смеси гексаном. Органический экстракт промывают рассолом и сушат над безводным сульфатом магния. Фильтрованием гексанового раствора сырого продукта через патроны с силикагелем Сеп-Пак получают соединения (16) (136 мг, 98%).A mixture of imidazole (250 mg, 3.6 mmol) and tert-butyldimethylsilyl chloride (250 mg, 1.6 mmol) in DMF (2 ml) was added to a stirred solution of compound (15) (86.2 mg, 0.23 mmol), the resulting homogeneous mixture was stirred for 15 min at 55 ° ^C until the starting compound (TLC solvent system B). The product was isolated by extracting the reaction mixture with hexane. The organic extract was washed with brine and dried over anhydrous magnesium sulfate. By filtering a hexane solution of the crude product through Sep-Pak silica gel cartridges, compounds (16) (136 mg, 98%) are obtained.

ИК (пленка): 2974, 2930, 1736, 1447, 1286, 1258, 1150, 1085 см^-1;
УФ (гексан): γ_max 264 нм, γ_min 227 нм, А264 1,91 А227
1Н-ЯМР (СDCl₃) δ 0,07 (12Н, с, Si(CH₃)₂), 0,55 (3Н, с, 18-СН₃), 0,86 (18Н, с, С(СН₃)₃), 1,2 (3Н, д, J 6-8 Гц, 21-СН₃), 3,65 (3Н, с, 0-СН₃), 4,18 1Н, м, 3-Н), 4,36 (1Н, м, 1-Н), 4,84 (1Н, д, J 1,2 Гц, 19Z-H), 5,16 (1Н, д, J 1,2 Гц, 19Е-Н), 5,96 (1Н, д, J 11,2 Гц, 7-Н), 6,19 (1Н, д, J 11,2 Гц, 6-Н); МС m/3 (интенсивности нормализованы к m/e 248): 602 (М⁺, 10), 470 (59), 413 (7), 338 (10), 248 (100).IR (film): 2974, 2930, 1736, 1447, 1286, 1258, 1150, 1085 cm ^-1 ;
UV (hexane): γ _max 264 nm, γ _min 227 nm, A264 1.91 A227
1H-NMR (CDCl ₃ ) δ 0.07 (12H, s, Si (CH ₃ ) ₂ ), 0.55 (3H, s, 18-CH ₃ ), 0.86 (18H, s, C (CH ₃ ) ₃ ), 1.2 (3H, d, J 6-8 Hz, 21-CH ₃ ), 3.65 (3H, s, 0-CH ₃ ), 4.18 1H, m, 3-H), 4.36 (1H, m, 1-H), 4.84 (1H, d, J 1.2 Hz, 19Z-H), 5.16 (1H, d, J 1.2 Hz, 19E-H) 5.96 (1H, d, J 11.2 Hz, 7-H); 6.19 (1H, d, J 11.2 Hz, 6-H); MS m / 3 (intensities normalized to m / e 248): 602 (M ⁺ , 10), 470 (59), 413 (7), 338 (10), 248 (100).

К перемешиваемому раствору соединения (16) (136, 2 мг, 0,23 ммоля) в абсолютном ТГФ (5 мл) в атмосфере аргона при 0^оС прибавляют литийалюминийгидрид (25 мг, 0,65 ммоля), образовавшуюся суспензию перемешивают 15 мин при 0^оС, избыток литийалюминийгидрида разлагают прикапыванием 10% воды в ТГФ. Затем суспензию разбавляют 10 мл ТГФ и перемешивание продолжают еще 15 мин при комнатной температуре. Продукт выделяют обычной экстракцией этилацетатом. Соединение (17) получено с выходом 91% в виде бесцветного масла (118,4 мг).To a stirred solution of Compound (16) (136, 2 mg, 0.23 mmol) in absolute THF (5 mL) under argon at ⁰ ° C was added lithium aluminum hydride (25 mg, 0.65 mmol), the resulting suspension was stirred for 15 min at 0 ^о С, excess lithium aluminum hydride is decomposed by dropping 10% water in THF. Then the suspension is diluted with 10 ml of THF and stirring is continued for another 15 minutes at room temperature. The product was isolated by conventional extraction with ethyl acetate. Compound (17) was obtained in 91% yield as a colorless oil (118.4 mg).

ИК (пленка): 3450, 2952, 2886, 1447, 1258, 1105, 1085, 834 см^-1;
УФ (ЕtOH): γ_max 264 нм, γ_min 227 нм, А 264 1,57; А227
1Н-ЯМР (СDCl₃) δ 0,0 (12Н, с, Si-CH₃), 0,53 (3Н, с, 18-СН₃), 0,85 (18Н, с, Si-C(CH₃)₃), 1,04 (3Н, д, J 6,4 Гц, 21-СН₃), 3,37 и 3,63 (1Н и 1Н, каждая м, 22-СН₂), 4,17 (1Н, м, 3-Н), 4,35 (1Н, м, 1-Н), 4,84 (1Н, уш, с, 19Z-H), 5,16 (1Н, уш, с, 19Е-Н), 6 (1Н, д, J=12,2 Гц), (7-Н), 6,21 (1Н, д, J 12,2 Гц, 6-Н); МС m/3 (интенсивности нормализованы к m/3 248): 574 (М⁺, 17), 442 (67), 383 (11), 308 (17), 248 (100).IR (film): 3450, 2952, 2886, 1447, 1258, 1105, 1085, 834 cm ^-1 ;
UV (EtOH): γ _max 264 nm, γ _min 227 nm, A 264 1.57; A227
1 H-NMR (CDCl ₃ ) δ 0.0 (12H, s, Si-CH ₃ ), 0.53 (3H, s, 18-CH ₃ ), 0.85 (18H, s, Si-C (CH ₃ ) ₃ ), 1.04 (3H, d, J 6.4 Hz, 21-CH ₃ ), 3.37 and 3.63 (1H and 1H, each m, 22-CH ₂ ), 4.17 (1H m, 3-H), 4.35 (1H, m, 1-H), 4.84 (1H, br, s, 19Z-H), 5.16 (1H, br, s, 19E-H) 6 (1H, d, J = 12.2 Hz), (7-H); 6.21 (1H, d, J 12.2 Hz, 6-H); MS m / 3 (intensities normalized to m / 3 248): 574 (M ⁺ , 17), 442 (67), 383 (11), 308 (17), 248 (100).

К перемешиваемому раствору ДМСО (50 мкл, 0,7 ммоля) в 3 мл дихлорметана при -60^оС в атмосфере азота прибавляют по каплям раствор оксалилхлорида (30 мкл, 0,34 ммоля) в 0,5 мл дихлорметана, полученный раствор перемешивают 10 мин при -60^оС, после чего медленно прибавляют раствор соединения (17) (27 мг, 0,05 ммоля) в 1 мл дихлорметана. Реакционную смесь перемешивают 30 мин при -60^оС, добавляют 0,2 мл триэтиламина и перемешивают еще 5 мин. Образовавшееся соединение (18) экстрагируют этиловым эфиром, органический экстракт промывают насыщенным раствором NaCl и сушат над безводным сульфатом магния. Фильтрованием через силикагель Сеп-Пак получают чистый по данным ТСХ продукт (17 мг, 62%).To a stirred solution of DMSO (50 uL, 0.7 mmol) in 3 mL of dichloromethane at ^-60 ° C under nitrogen was added dropwise a solution of oxalyl chloride (30 .mu.l, 0.34 mmol) in 0.5 ml of dichloromethane, the resulting solution was stirred for 10 minutes at ^-60 ° C, was slowly added a solution of compound (17) (27 mg, 0.05 mmol) in 1 mL of dichloromethane. The reaction mixture was stirred for 30 min at ^-60 ° C, was added 0.2 ml of triethylamine and stirred for another 5 minutes. The resulting compound (18) was extracted with ethyl ether, the organic extract was washed with saturated NaCl and dried over anhydrous magnesium sulfate. Filtration through Sep-Pak silica gel gave a pure product according to TLC (17 mg, 62%).

ИК (пленка), 2954, 2929, 2884, 2857, 1727, 1472, 1375, 1256, 1085, 909, 880, 835 см^-1;
ЯМР (СНСl₃) δ 0,0 (12Н, с, Si-CH₃), 0,6 (3Н, с, 18-СН₃), 0,88 (18Н, с Si-C(CH₃)₃), 1,11 (3Н, д, J 6,9 Гц, 21-СН₃), 4,23 (1Н, м, 3-Н), 4,43 (1Н, м, 1-Н), 4,93 (1Н, уш.с, 19Z-H), 5,19 (1Н, уш, с, 19Е-Н), 6,07 (1Н, д, J 10 Гц, 7-Н), 6,26 (1Н, д, J 10 Гц, 6-H), 9,54 (1Н, д, J3Гц, 22-Н);
УФ (гексан): γ_max 264 нм, γ_min 227 нм, А264 1,9, А227.IR (film), 2954, 2929, 2884, 2857, 1727, 1472, 1375, 1256, 1085, 909, 880, 835 cm ^-1 ;
NMR (CHCl ₃ ) δ 0.0 (12H, s, Si-CH ₃ ), 0.6 (3H, s, 18-CH ₃ ), 0.88 (18H, s Si-C (CH ₃ ) ₃ ) , 1.11 (3H, d, J 6.9 Hz, 21-CH ₃ ), 4.23 (1H, m, 3-H), 4.43 (1H, m, 1-H), 4.93 (1H, br.s, 19Z-H), 5.19 (1H, br, s, 19E-H), 6.07 (1H, d, J 10 Hz, 7-H), 6.26 (1H, d, J 10 Hz, 6-H); 9.54 (1H, d, J3Hz, 22-H);
UV (hexane): γ _max 264 nm, γ _min 227 nm, A264 1.9, A227.

МС m/3 (интенсивности относительно m/3 248): 572 (М⁺, 13), 440 (53), 383 (11), 308 (14), 248 (100); точная молекулярная масса, вычисленная для С₃₄Н₆₀О₃Si₂ 572,4081, найдено 572, 4117.MS m / 3 (intensities relative to m / 3 248): 572 (M ⁺ , 13), 440 (53), 383 (11), 308 (14), 248 (100); Exact molecular weight calculated for C ₃₄ H ₆₀ O ₃ Si ₂ 572.4081, found 572, 4117.

Улучшенные выходы альдегида (18) при проведении стадии окисления в следующих условиях. К перемешиваемому раствору 25 мкл (0,36 ммоля) диметилсульфоксида в 0,25 мл безводного дихлорметана при -60^оС в атмосфере аргона прибавляют по каплям раствор 15 мкл (0,17 ммоля) оксалилхлорида в 0,75 мл безводного дихлорметана и после перемешивания смеси 10 мин при -60^оС медленно прибавляют раствор 20,3 мг (0,035 ммоля) спирта (17) в 0,5 мл безводного дихлорметалла с быстрым ополаскиванием дополнительными 0,2 мл безводного дихлорметана. Смесь перемешивают 30 мин при -60^оС и при той же температуре добавляют 0,3 мл (2,15 ммоля) триэтиламина. Смесь перемешивают еще 5 мин, нагревают до 0^оС и экстрагируют эфиром. Эфирную фазу промывают рассолом и сушат (MgSO₄). Фильтрованием через силикагель Сеп-Пак получают соединение (18) в виде бесцветного масла, которое очищают с помощью ВЭЖХ (Зорбакс-Сил, 9,4х25 см, 10% ЕtОAc в гексане) и получают чистый альдегид (18) (19 мг, 96% ), исходный спирт выделен только в виде следов (0,12 мг).Improved aldehyde yields (18) during the oxidation step under the following conditions. To a stirred solution of 25 .mu.l (0.36 mmol) dimethyl sulfoxide in 0.25 ml anhydrous dichloromethane at ^-60 ° C under argon was added dropwise a solution of 15 .mu.l (0.17 mmol) of oxalyl chloride in 0.75 ml of anhydrous dichloromethane, and after mixing mixture 10 min at ^-60 ° C was slowly added a solution of 20.3 mg (0.035 mmol) of the alcohol (17) in 0.5 ml of anhydrous dihlormetalla with rapid rinsing additional 0.2 ml of anhydrous dichloromethane. The mixture was stirred for 30 min at ^-60 ° C, and at the same temperature 0.3 ml (2.15 mmol) of triethylamine. After stirring for 5 min, warmed ^to 0 ° C and extracted with ether. The ether phase is washed with brine and dried (MgSO ₄ ). Filtration through Sep-Pak silica gel gave compound (18) as a colorless oil, which was purified by HPLC (Zorbax-Force, 9.4x25 cm, 10% EtOAc in hexane) to give pure aldehyde (18) (19 mg, 96% ), the initial alcohol is isolated only in the form of traces (0.12 mg).

П р и м е р 2. Введение боковой цепи. Синтез 24-дигомо-1 α 25-дигидрокси-22-дегидровитамина D₃ (cоединение 25, схема 2).PRI me R 2. The introduction of the side chain. Synthesis of 24-dihomo-1 α 25-dihydroxy-22-dehydrovitamin D ₃ (Compound 25, Scheme 2).

(а) Получение гидроксисульфона (19). (a) Preparation of hydroxysulfone (19).

К перемешиваемому раствору 31 мг (84 мкмоля) 2-метил-6-(фенилсульфонил)-2-(триэтилсилиокси)гексана (соединение 31, схема 3) в 300 мкл безводного тетрагидрофурана (содержит 1,10-фенантролин в качестве индикатора) в атмосфере аргона при -78^оС добавляют 13 мкл (90 мкмоль) диизопропиламина и затем 70 мкл Buli (1,3 М в гексане) (91 мкмоль), перемешивают 30 мин в тех же условиях, затем добавляют 6 мг С-22-альдегида (соединение 18) (10 мкмоль) в 300 мкмл безводного тетрагидрофурана и перемешивают 1 ч при -78^оС. Смесь разлагают добавлением 1 мл насыщенного раствора NH₄Cl, нагревают до 0^оС и экстрагируют этилацетатом. Экстракт промывают водой, рассолом и сушат над MgSO₄, фильтруют и испаряют. Препаративной ВЭЖХ (колонка Зорбакс-Сил, 9,6х25 см, система растворителей 10% этилацетата в гексане) получают 0,6 мг непрореагировавшего альдегида и 6,6 мг гидроксисульфона (19) в виде смеси эпимеров (выход 77%).To a stirred solution of 31 mg (84 μmol) of 2-methyl-6- (phenylsulfonyl) -2- (triethylsilyoxy) hexane (compound 31, Scheme 3) in 300 μl of anhydrous tetrahydrofuran (contains 1,10-phenanthroline as an indicator) in the atmosphere argon at ^-78 ° C was added 13 .mu.l (90 .mu.mol) of diisopropylamine and then 70 .mu.l Buli (1,3 M in hexane) (91 mol), stirred for 30 minutes under the same conditions, and then was added 6 mg of C-22-aldehyde ( compound 18) (10 .mu.mol) in 300 mkml anhydrous tetrahydrofuran and stirred for 1 h at -78 ^C. The mixture was decomposed by the addition of 1 mL of saturated NH ₄ Cl solution, warmed d about 0 ^about With and extracted with ethyl acetate. The extract was washed with water, brine and dried over MgSO ₄ , filtered and evaporated. Preparative HPLC (Zorbax-Force column, 9.6 x 25 cm, 10% ethyl acetate in hexane solvent system) affords 0.6 mg of unreacted aldehyde and 6.6 mg of hydroxy sulfone (19) as a mixture of epimers (77% yield).

(b) 24-дигомо-1, 25-дигидрокси-22-дегидровитамин D₃ (25)
К перемешиваемому раствору гидроксисульфона (19) (3,3 мг) в 1 мл абсолютного тетрагидрофурана добавляют насыщенный раствор Na₂HPO₄ (1 мл) и затем безводный порошкообразный Na₂HPO₄ (160 мг). Смесь перемешивают в атмосфере аргона 30 мин и охлаждают до 0^оС. Затем добавляют свежеприготовленную 5%-ную амальгаму натрия (около 400 мг) и перемешивают 16 ч при 5^оС. Смесь разбавляют 5 мл гексана, и перемешивание продолжают еще 15 мин. Растворители декантируют, твердое вещество промывают гексаном (3х5 мл), к объединенному органическому раствору добавляют лед и насыщенный раствор NaCl, органический слой отделяют и пропускают через патрон с Сеп-Пак в виде гексанового раствора. Очисткой ВЭЖХ получают 2 мг (71%) защищенного Δ²² -24-дигомо-1,25-(ОН)D₃ (21) и небольшое количество 22-гидроксидированного продукта (22) (колонка Зорбакс-Сил, 9,4х25 см, 10% EtOAс в гексане). Защищенный триол (21) (2 мг) растворяют в 1 мл абсолютного ТГФ и к полученному раствору добавляют тетрабутиламмонийфторид (50 мкл 1 М раствор в ТГФ). Смесь перемешивают в атмосфере аргона 1 ч при 50^оС, затем добавляют эфир (8 мл), и органическую фазу промывают насыщенным раствором NaCl. Растворители удаляют, остаток растворяют в 10% 2-пропанола в гексане и фильтруют через окись кремния Сеп-Пак. ВЭЖХ (20% 2-пропанола в гексане, колонка Зорбакс-Сил, 9,4х25 см) получают 0,6 мг целевого дигомопроизводного (25).(b) 24-digomo-1, 25-dihydroxy-22-dehydrovitamin D ₃ (25)
To a stirred solution of hydroxysulfone (19) (3.3 mg) in 1 ml of absolute tetrahydrofuran was added a saturated solution of Na ₂ HPO ₄ (1 ml) and then anhydrous powdery Na ₂ HPO ₄ (160 mg). The mixture was stirred under argon for 30 min and cooled ^to 0 C. Then added a freshly prepared 5% sodium amalgam (400 mg) and stirred for 16 h at 5 ^C. The mixture was diluted with 5 mL hexane and stirring was continued for another 15 min. The solvents are decanted, the solid is washed with hexane (3x5 ml), ice and saturated NaCl are added to the combined organic solution, the organic layer is separated and passed through a Sep-Pak cartridge as a hexane solution. Purification by HPLC yields 2 mg (71%) of protected Δ ²² -24-digomo-1.25- (OH) D ₃ (21) and a small amount of 22-hydroxylated product (22) (Zorbax-Force column, 9.4x25 cm, 10% EtOAc in hexane). Protected triol (21) (2 mg) was dissolved in 1 ml of absolute THF, and tetrabutylammonium fluoride (50 μl of a 1 M solution in THF) was added to the resulting solution. The mixture was stirred under argon for 1 h ^at 50 ° C, followed by addition of ether (8 ml) and the organic phase was washed with a saturated solution of NaCl. The solvents are removed, the residue is dissolved in 10% 2-propanol in hexane and filtered through Sep-Pak silica. HPLC (20% 2-propanol in hexane, Zorbax-Force column, 9.4 x 25 cm) affords 0.6 mg of the desired dihomopropane (25).

УФ (EtOH): γ_max 264 нм, γ_min А228 нм, А264 1,87 А228.UV (EtOH): γ _max 264 nm, γ _min A228 nm, A264 1.87 A228.

1Н-ЯМР (СDCl₃) δ 0,55 (3Н, с, 18-СН₃), 1 (3Н, д, J 6,6 Гц, 21-СН₃), 1,23 (5Н, с, 26, 27-СН₃), 4,23 (1Н, м, 3-Н), 4,43 (1Н, м, 1-Н), 5 (1Н, уш, с, 19Z-H), 5,32 (1Н, уш, с, 19Е-Н), 5,29 (2Н, м, 22-Н и 23-Н), 6,01 (1Н, д, J 11,3 Гц, 7-Н); МС m/3 (относительная интенсивность): 442 (М⁺, 15), 424 (23), 406 (33), 391 (7), 287 (11), 285 (10), 269 (27), 251 (23), 152 (33) 134 (100), 116 (6), 59 (20); точная молекулярная масса, вычисленная для С₂₉Н₄₆О₃ 442, 3446, найдено 442, 3441.1 H-NMR (CDCl ₃ ) δ 0.55 (3H, s, 18-CH ₃ ), 1 (3H, d, J 6.6 Hz, 21-CH ₃ ), 1.23 (5H, s, 26, 27-CH ₃ ), 4.23 (1H, m, 3-H), 4.43 (1H, m, 1-H), 5 (1H, br s, 19Z-H), 5.32 (1H , broad s, 19E-H), 5.29 (2H, m, 22-H and 23-H), 6.01 (1H, d, J 11.3 Hz, 7-H); MS m / 3 (relative intensity): 442 (M ⁺ , 15), 424 (23), 406 (33), 391 (7), 287 (11), 285 (10), 269 (27), 251 (23 ), 152 (33) 134 (100), 116 (6), 59 (20); Exact molecular weight calculated for C ₂₉ H ₄₆ O ₃ 442, 3446, found 442, 3441.

П р и м е р 3. Введение боковой цепи. Синтез 24-тригомо-1 α 25-дигидрокси-22- дегидровитамина D₃.PRI me R 3. The introduction of the side chain. Synthesis of 24-trigomo-1 α 25-dihydroxy-22-dehydrovitamin D ₃ .

Соединение 26 (схема 2). Compound 26 (Scheme 2).

(а) Получение гидроксисульфона (20). (a) Preparation of hydroxysulfone (20).

К перемешиваемому раствору 58 мг (151 мкмоль) 2-метил-7-(фенилсульфонил)-2-(триэтилсилилокси)гептана (соединение 35, схема 3) в 500 мкл абсолютного тетрагидрофурана (содержащего 1,10-фенантролин в качестве индикатора) в атмосфере аргона при -78^оС добавляют 23 мкл (160 мкмоль) диизопропиламина и затем 106 мкл н-BuLi (1,5 М в гексане) (160 мкмоль). Раствор перемешивают в тех же условиях 30 мин, после чего добавляют 7 мг С-22-альдегида (соединение 18) (12 мкмолей) в 300 мкл абсолютного тетрагидрофурана и перемешивают 1 ч. Смесь разлагают при -78^оС добавлением 1 мл насыщенного раствора NH₄Cl, нагревают до 0^оС и экстрагируют этилацетатом. Экстракт промывают водой и рассолом, сушат над безводным MgSO₄, фильтруют и испаряют. Препаративной ВЭЖХ (колонка Зорбакс-Сил, 9,4х25 см, система растворителей 10% этилацетата в гексане) получают 0,4 мг непрореагировавшего альдегида и 7,5 мг гидроксисульфона (20) в виде смеси эпимеров (78%).To a stirred solution of 58 mg (151 μmol) of 2-methyl-7- (phenylsulfonyl) -2- (triethylsilyloxy) heptane (compound 35, Scheme 3) in 500 μl of absolute tetrahydrofuran (containing 1,10-phenanthroline as an indicator) in the atmosphere argon at ^-78 ° C was added 23 .mu.l (160 .mu.mol) of diisopropylamine and then 106 l of n-BuLi (1,5 M in hexane) (160 .mu.mol). The solution was stirred under the same conditions for 30 minutes, after which was added 7 mg of C-22-aldehyde (compound 18) (12 pmol) in 300 .mu.l of absolute tetrahydrofuran and stirred for 1 h. The mixture was decomposed at ^-78 ° C by adding 1 ml of a saturated solution of NH ₄ Cl, warmed to 0 ^{° C} and extracted with ethyl acetate. The extract was washed with water and brine, dried over anhydrous MgSO ₄ , filtered and evaporated. Preparative HPLC (Zorbax-Force column, 9.4 x 25 cm, solvent system 10% ethyl acetate in hexane) gives 0.4 mg of unreacted aldehyde and 7.5 mg of hydroxy sulfone (20) as a mixture of epimers (78%).

(b) 24-тригомо-1,25-дигидрокси-22-дегидровитамин D₃ (26).(b) 24-trigomo-1,25-dihydroxy-22-dehydrovitamin D ₃ (26).

К перемешиваемому раствору гидроксисульфона (20) (7,5 мг) в 1 мл абсолютного тетрагидрофурана добавляют насыщенный раствор Na₂HPO₄ и затем 160 мг безводного Na₂HPO₄ в виде порошка. Смесь перемешивают 30 мин в атмосфере аргона и затем охлаждают до 0^оС. Добавляют свежеприготовленную 5% амальгаму натрия (около 400 мг) и перемешивают 16 ч при 5^оС. Затем смесь разбавляют 5 мл гексана, перемешивание продолжают еще 15 мин. Растворители декантируют, твердый продукт промывают гексаном (3х5 мл), объединенную органическую фазу промывают рассолом, отделяют, сушат и испаряют. Остаток пропускают через патрон Сеп-Пак в смеси 10% этилацетата в гексане. Очисткой с помощью ВЭЖХ получают 2,12 мг защищенного Δ 22-24-тригомо-1,25-(ОН)₂D₃ (23) и 1,33 мг 22-гидроксилированного продукта (24) (колонка Зорбакс-Сил, 9,4х25 см, 10% этилацетата в гексане). Соединение 23 (2,1 мг) растворяют в 1 мл абсолютного тетрагидрофурана и к полученному раствору добавляют 5 мкл тетрабутиламмонийфторида в тетрагидрофуране (1 М раствор). Смесь перемешивают в атмосфере аргона 1 ч при 50^оС, затем добавляют эфир и органическую фазу промывают рассолом. Эфирную фазу сушат над безводным MgSO₄, фильтруют и испаряют. Остаток растворяют в 30% 2-пропанола в гексане и пропускают через Сеп-Пак. Очисткой с помощью ВЭЖХ (колонка Зорбакс-Сил, 9,4х25 см, 20% 2-пропанола в гексане) получают целевое тригомо-производное 26 (0,8 мг),
УФ (ЕtОН): γ_max 264 нм, γ_min 228 нм, А264 1,81; А228
1Н-ЯМР (CDCl₃) δ: 0,56 (3Н, с, 18-СН₃), 1 (3Н, д, J 6,6 Гц, 21-СН₃), 1,23 (6Н, с, 26, 27-СН₃), 4,23 (1Н, м, 3-Н), 4,43 (1Н, м, 1-Н), 5 (1Н, уш, с, 19Z-H), 5,32 (1Н, уш, с, 19Е-Н), 5,29 (2Н, м, 22-Н и 23-Н), 6,01 (1Н, д, J 11,3 Гц, 7-Н); МС m/3 (относительная интенсивность): 456 (М⁺, 11), 438 (50), 420 (30), 402 (8), 287 (10), 269 (23), 251 (23), 152 (35), 134 (100).To a stirred solution of hydroxysulfone (20) (7.5 mg) in 1 ml of absolute tetrahydrofuran was added a saturated solution of Na ₂ HPO ₄ and then 160 mg of anhydrous Na ₂ HPO ₄ in powder form. The mixture was stirred for 30 min under argon and then cooled ^to 0 ° C was added a freshly prepared 5% sodium amalgam (400 mg) and stirred for 16 h at 5 ^C. The mixture was then diluted with 5 ml of hexane, stirring was continued for another 15 min. The solvents are decanted, the solid product is washed with hexane (3x5 ml), the combined organic phase is washed with brine, separated, dried and evaporated. The residue was passed through a Sep-Pak cartridge in a mixture of 10% ethyl acetate in hexane. Purification by HPLC yields 2.12 mg of protected Δ 22-24-trigomo-1.25- (OH) ₂ D ₃ (23) and 1.33 mg of 22-hydroxylated product (24) (Zorbax-Force column 9, 4x25 cm, 10% ethyl acetate in hexane). Compound 23 (2.1 mg) was dissolved in 1 ml of absolute tetrahydrofuran and 5 μl of tetrabutylammonium fluoride in tetrahydrofuran (1 M solution) was added to the resulting solution. The mixture was stirred under argon for 1 h ^at 50 ° C, then ether is added and the organic phase was washed with brine. The ether phase is dried over anhydrous MgSO ₄ , filtered and evaporated. The residue was dissolved in 30% 2-propanol in hexane and passed through Sep-Pak. Purification by HPLC (Zorbax-Force column, 9.4x25 cm, 20% 2-propanol in hexane) gives the desired trigomo derivative 26 (0.8 mg),
UV (EtOH): γ _max 264 nm, γ _min 228 nm, A264 1.81; A228
1 H-NMR (CDCl ₃ ) δ: 0.56 (3H, s, 18-CH ₃ ), 1 (3H, d, J 6.6 Hz, 21-CH ₃ ), 1.23 (6H, s, 26 , 27-CH ₃ ), 4.23 (1H, m, 3-H), 4.43 (1H, m, 1-H), 5 (1H, br s, 19Z-H), 5.32 ( 1H, broad s, 19E-H), 5.29 (2H, m, 22-H and 23-H), 6.01 (1H, d, J 11.3 Hz, 7-H); MS m / 3 (relative intensity): 456 (M ⁺ , 11), 438 (50), 420 (30), 402 (8), 287 (10), 269 (23), 251 (23), 152 (35 ), 134 (100).

П р и м е р 4. Синтез вводимого в виде боковой цепи сульфона (схема 3). PRI me R 4. The synthesis of introduced in the form of a side chain of sulfone (scheme 3).

(а) Получение остатка сульфона боковой цепи. (a) Obtaining a sulfone residue of the side chain.

К раствору метилмагнийбромида (12,9 мл, 3М раствор в эфире) в 25 мл сухого ТГФ при -10^оС и интенсивном перемешивании прибавляют по каплям в течение 30 мин в атмосфере аргона раствор 4-хлорвалерилхлорида 27 (Aldrich 3 г, 19,2 ммоль). Затем реакционную смесь оставляют нагреваться до комнатной температуры (около 2 ч), разлагают водой и нейтрализуют разбавленной соляной кислотой. Смесь экстрагируют эфиром, объединенные органические слои промывают водой и сушат над сульфатом натрия. После удаления растворителя и разгонки остатка в вакууме получают хлорзамещенный спирт 28 в виде бесцветной жидкости (2,1 г, 70%). Хлорзамещенный спирт 28 (1,5 г, 10 ммоль) в безводном диметилформамиде (5 мл) добавляют к перемешиваемому раствору тиофенола (1,32 г, 12 ммоль) и трет-бутоксида калия (1,32 г, 11,3 ммоль) в безводном диметилформамиде (25 мл). Реакционную смесь перемешивают сутки при комнатной температуре, после чего раствор распределяют между дихлорметаном и водой. Органический слой промывают водным карбонатом натрия, водой и сушат над безводным сульфатом магния. Растворитель испаряют в вакууме, а сырое масло очищают вытеснительной хроматографией на силикагеле с элюированием смесью гексан-этилацетат. Получено 2,2 г (98%) сульфида 29 в виде бесцветной жидкости. Сульфид 29 (1,01 г, 4,5 ммоль) растворяют в сухом дихлорметане (40 мл) и к полученному раствору порциями при перемешивании и произвольном охлаждении добавляют 3-хлорнадбензойную кислоту (2,5 г, 11,6 ммоль; Aldrich 80-85%). Реакционную смесь перемешивают 2 ч и затем разлагают 10%-ным раствором бикарбоната натрия. Объединенные органические экстракты промывают водным сульфитом натрия и рассолом и сушат над сульфатом магния. Растворитель удаляют в вакууме и очисткой сырого масла вытеснительной хроматографией с элюированием смесями гексан-этилацетат получают сульфон 30 (1,1 г, 97%) в виде бесцветной жидкости. К перемешиваемому раствору сульфона 30 (1,3 г, 5,1 ммоль) и имидазола (1,5 г, 22,7 ммоль) в сухом диметилформамиде (50 мл) добавляют триэтилсилилхлорид (1,15 г, 7,7 ммоль), после чего смесь выдерживают 2 ч при комнатной температуре и разбавляют дихлорметаном. Смесь промывают водным раствором хлорида аммония и водой, органические слои сушат над сульфатом натрия и испаряют в вакууме. Остаток очищают вытеснительной хроматографией на силикагеле. Первым гексаном вымывается гексаэтилдисилоксан. Триэтилсилилзащищенный сульфон 31 (1,8 г, 97%) элюируется смесью гексан-этилацетат (9:1) в виде бесцветной жидкости.To a solution of methylmagnesium bromide (12.9 mL, 3M solution in ether) in 25 ml of dry THF at ^-10 ° C and vigorous stirring was added dropwise over 30 min under argon, a solution of 4-hlorvalerilhlorida 27 (Aldrich 3 g, 19.2 mmol). Then the reaction mixture was allowed to warm to room temperature (about 2 hours), decomposed with water and neutralized with dilute hydrochloric acid. The mixture was extracted with ether, the combined organic layers were washed with water and dried over sodium sulfate. After removal of the solvent and distillation of the residue in vacuo, chloro-substituted alcohol 28 is obtained as a colorless liquid (2.1 g, 70%). Chlorinated alcohol 28 (1.5 g, 10 mmol) in anhydrous dimethylformamide (5 ml) is added to a stirred solution of thiophenol (1.32 g, 12 mmol) and potassium tert-butoxide (1.32 g, 11.3 mmol) in anhydrous dimethylformamide (25 ml). The reaction mixture was stirred for 24 hours at room temperature, after which the solution was partitioned between dichloromethane and water. The organic layer was washed with aqueous sodium carbonate, water and dried over anhydrous magnesium sulfate. The solvent was evaporated in vacuo, and the crude oil was purified by flash chromatography on silica gel, eluting with hexane-ethyl acetate. Obtained 2.2 g (98%) of sulfide 29 as a colorless liquid. Sulfide 29 (1.01 g, 4.5 mmol) was dissolved in dry dichloromethane (40 ml), and 3-chloroperbenzoic acid (2.5 g, 11.6 mmol; Aldrich 80-) was added portionwise with stirring and arbitrary cooling to the resulting solution. 85%). The reaction mixture was stirred for 2 hours and then decomposed with 10% sodium bicarbonate solution. The combined organic extracts were washed with aqueous sodium sulfite and brine and dried over magnesium sulfate. The solvent was removed in vacuo and purification of the crude oil by size exclusion chromatography, eluting with hexane-ethyl acetate mixtures, gave sulfone 30 (1.1 g, 97%) as a colorless liquid. To a stirred solution of sulfone 30 (1.3 g, 5.1 mmol) and imidazole (1.5 g, 22.7 mmol) in dry dimethylformamide (50 ml) was added triethylsilyl chloride (1.15 g, 7.7 mmol), after which the mixture was kept for 2 hours at room temperature and diluted with dichloromethane. The mixture was washed with an aqueous solution of ammonium chloride and water, the organic layers were dried over sodium sulfate and evaporated in vacuo. The residue was purified by flash chromatography on silica gel. Hexaethyl disiloxane is washed with the first hexane. Triethylsilyl protected sulfone 31 (1.8 g, 97%) was eluted with hexane-ethyl acetate (9: 1) as a colorless liquid.

ИК (чистое вещество): 3045, 2940, 1440, 1360, 1130, 1020 см^-1.IR (pure substance): 3045, 2940, 1440, 1360, 1130, 1020 cm ^-1 .

1Н-ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ 0,518 (6Н, к, J 6,2 Гц, Si-CH₂), 0,899 (9Н, т, 1 6,2 Гц, Si C-CH₃), 1,142 (6Н, с, СН₃), 1,307-1,462 (4Н, м), 1,655-1,738 (2Н, м, 4-Н), 3,08-3,122 (2Н, м, 2-Н), 7,567 (2Н, т, J 6,8 Гц, мета-Н-арил), 7,648 (1Н, т, J 6,8 Гц, пара-Н-арил), 7,916 (2Н, д, J 6,83 Гц, орто-Н-арил); МС (Е1, 70 еV) m/3 (относительная интенсивность) 372 (М⁺, 2), 341 (100), 229 (2), 227 (18), 173 (24), 103 (22), 75 (45), 55 (33).1 H-NMR (400 MHz, CDCl ₃ ) δ 0.518 (6H, q, J 6.2 Hz, Si-CH ₂ ), 0.899 (9H, t, 1 6.2 Hz, Si C-CH ₃ ), 1.142 ( 6H, s, CH ₃ ), 1.307-1.462 (4H, m), 1.655-1.738 (2H, m, 4-H), 3.08-3.122 (2H, m, 2-H), 7.567 (2H, t , J 6.8 Hz, meta-H-aryl), 7.648 (1H, t, J 6.8 Hz, para-H-aryl), 7.916 (2H, d, J 6.83 Hz, ortho-H-aryl ); MS (E1, 70 eV) m / 3 (relative intensity) 372 (M ⁺ , 2), 341 (100), 229 (2), 227 (18), 173 (24), 103 (22), 75 (45 ), 55 (33).

(b) Получение используемого в качестве боковой цепи сульфона (35). (b) Preparation of sulfone used as side chain (35).

К раствору метилмагнийбромида (14 мл 3 М раствора в эфире) в абсолютном тетрагидрофуране при -10^оС и интенсивном перемешивании в атмосфере аргона в течение 15-20 мин прибавляют раствор 6-бромгексаноилхлорида (32) (3,8 г, 2,8 мл, 18 ммоль) в абсолютном тетрагидрофуране (10 мл). Смесь перемешивают 2 ч при комнатной температуре, охлаждают до 0^оС и осторожно разлагают разбавленной (1:1) соляной кислотой. Смесь экстрагируют эфиром, объединенные органические слои промывают водой, сушат над безводным сульфатом магния и после испарения получают бромзамещенный спирт (33) в виде бесцветного масла (3,6 г, 94%).To a solution of methylmagnesium bromide (14 ml of a 3 M solution in ether) in absolute tetrahydrofuran at ^-10 ° C with vigorous stirring under argon for 15-20 min, a solution of 6-bromgeksanoilhlorida (32) (3.8 g, 2.8 ml , 18 mmol) in absolute tetrahydrofuran (10 ml). The mixture was stirred for 2 hours at room temperature, cooled ^to 0 ° C and carefully decomposed with dilute (1: 1) hydrochloric acid. The mixture was extracted with ether, the combined organic layers were washed with water, dried over anhydrous magnesium sulfate and, after evaporation, the brominated alcohol (33) was obtained as a colorless oil (3.6 g, 94%).

Бромзамещенный спирт (3,4 г, 16 ммоль) обрабатывают в течение 4,5 ч при 70^оС натриевой солью бензолсульфиновой кислоты (3,3 г, 20 ммоль) в абсолютном диметилформамиде. Затем смесь переносят на лед, экстрагируют дихлорметаном, промывают 1 н НСl, водой 10%-ным раствором NaHCO₃, cушат над безводным MgSO₄, фильтруют и после испарения получают сульфон (34), который очищают вытеснительной хроматографией на силикагеле с элюированием 40-50% этилацетата в гексане, получают сульфон с примесью соответствующего сульфинатного эфира (4,18 г, 98%). МС m/3 270 (М⁺), 255 (М⁺ -15), 77, 59.Bromo alcohol (3.4 g, 16 mmol) was treated for 4.5 h at 70 ° ^C the sodium salt of benzenesulfinic acid (3.3 g, 20 mmol) in absolute dimethylformamide. The mixture was then transferred to ice, extracted with dichloromethane, washed with 1 N HCl, water with a 10% solution of NaHCO ₃ , dried over anhydrous MgSO ₄ , filtered, and after evaporation, sulfone (34) was obtained, which was purified by flash chromatography on silica gel eluting with 40-50 % ethyl acetate in hexane, a sulfone is obtained with an admixture of the corresponding sulfinate ester (4.18 g, 98%). MS m / 3 270 (M ⁺ ), 255 (M ⁺ -15), 77, 59.

К перемешиваемому раствору сульфона (34) (4 г, 14 ммоль) и имидазола (3,8 г, 55 ммоль) в безводном диметилформамиде (13 мл) прибавляют триэтилсилилхлорид (4,6 г, 5,1 мл, 30 ммоль), реакционную смесь перемешивают 2 ч при комнатной температуре, переносят в ледяную воду, экстрагируют эфиром, сушат над безводным MgSО₄, фильтруют и испаряют. Остаток очищают вытеснительной хроматографией. Первым гексаном элюируется гексаэтилдисилоксан, 3% этилацетата в гексане элюируются сульфинатный эфир с примесью сульфона и 10% этилацетата в гексане элюируется чистый защищенный сульфон (35) (3,4 г, 60% ).To a stirred solution of sulfone (34) (4 g, 14 mmol) and imidazole (3.8 g, 55 mmol) in anhydrous dimethylformamide (13 ml) was added triethylsilyl chloride (4.6 g, 5.1 ml, 30 mmol), reaction the mixture is stirred for 2 hours at room temperature, transferred to ice water, extracted with ether, dried over anhydrous MgSO ₄ , filtered and evaporated. The residue was purified by size exclusion chromatography. Hexaethyl disiloxane elutes with the first hexane, 3% ethyl acetate in hexane elutes an sulfate ether mixed with sulfone, and 10% ethyl acetate in hexane elutes pure protected sulfone (35) (3.4 g, 60%).

Анализ. Analysis.

Вычислено для С₂₀Н₃₆О₃SSi:
С 62,45 Н 9,43 S 38,34
Найдено, С 61,97 Н 9,45 S 38,34
МС m/3 (относительная интенсивность): 355 (100) (М⁺-29), 227 (15), 173 (35), 103 (43), 75 (95), 55 (23).Calculated for C ₂₀ H ₃₆ O ₃ SSi:
C 62.45 H 9.43 S 38.34
Found, C 61.97 H 9.45 S 38.34
MS m / 3 (relative intensity): 355 (100) (M ⁺ -29), 227 (15), 173 (35), 103 (43), 75 (95), 55 (23).

ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ 0,54 (6Н, к, J7 Гц, Si-CH₂), 0,94 (9Н, т, J 8 Гц, Si-C-CH₃), 1,15 (6Н, с, СН₃), 1,31-1,36 (4Н, м), 3,08-3,12 (2Н, м, 2-Н), 7,57 (2Н, т, J 6,8 Гц, мета-Н-арил), 7,66 (1Н, т. пара-Н-арил), 7,92 (2Н, д, J 6,8 Гц, орто-Н-арил).NMR (400 MHz, CDCl ₃ ) δ 0.54 (6H, q, J7 Hz, Si-CH ₂ ), 0.94 (9H, t, J 8 Hz, Si-C-CH ₃ ), 1.15 ( 6H, s, CH ₃ ), 1.31-1.36 (4H, m), 3.08-3.12 (2H, m, 2-H), 7.57 (2H, t, J 6.8 Hz, meta-H-aryl), 7.66 (1H, t. Para-H-aryl), 7.92 (2H, d, J 6.8 Hz, ortho-H-aryl).

Биологическая активность. Biological activity.

Новый гомолог (25) испытан на дифференциативную и кальцемическую активности с использованием апробированных известных методик. Методики проведения испытаний и полученные результаты более подробно описываются в нижеследующих примерах. The new homologue (25) was tested for differentiating and calcemic activity using approved known methods. Testing procedures and the results obtained are described in more detail in the following examples.

П р и м е р 5. Определение дифференциативной активности дигомо-производного (25) по отношению к клеткам ЛЧ-60 (Таблица 1). PRI me R 5. Determination of the differential activity of the dihomo derivative (25) in relation to cells LF-60 (Table 1).

Степень дифференциации клеток лейкемии человека 60 (ЛЧ-60) под действием испытуемых соединений определялась тремя независимыми способами, а именно: NBT-восстановление, фагоцитоз и активность эстеразы. Первые два испытания осуществлены по методикам [4] Третье испытание с определением неспецифической активности кислотной эстеразы в качестве мерила дифференциации проводят по методике, прилагаемой к тест-набору 90 фирмы Сигма (Sigma Chemical Corp. Сан-Луис, МО) (Оstrem и др. Proc. Nate, Acad, Sci. VSA 84, 2610-2614 (1987); Ostrem и др. I.Biol.Chem. 262, 14164-14171 (1987). Полученные результаты приведены в табл. 1. Данные представлены как процент дифференциации клеток в результате обработки 1,25-(ОН)₂D₃ (использован для сравнения в качестве стандарта) в различных концентрациях или испытуемым производным витамина D).The degree of differentiation of human leukemia cells 60 (LF-60) under the action of the test compounds was determined by three independent methods, namely: NBT recovery, phagocytosis and esterase activity. The first two tests were carried out according to the methods [4] The third test, which determined the non-specific activity of acid esterase as a measure of differentiation, was carried out according to the method attached to Sigma Chemical Corp. San Luis, MO, Ostrem et al. Proc Nate, Acad, Sci. VSA 84, 2610-2614 (1987); Ostrem et al. I. Biol. Chem. 262, 14164-14171 (1987). The results are shown in Table 1. Data are presented as percent differentiation of cells. as a result of processing 1.25- (OH) ₂ D ₃ (used for comparison as a standard) at various concentrations or by the test subject Vitamin D alone).

При этом отмечается назкая кальцемическая активность. At the same time, a slight calcemic activity is noted.

П р и м е р 6. Кальцемическая активность дигомо-производного (25). PRI me R 6. Calcemic activity of a dihomo derivative (25).

(а) Активность по переносу кальция в кишечнике. (Таблица 2)
Отнятых от сосков самцов крыс, полученных от компании Харлан-Спраг Доули из Медисона, шт. Висконсин, кормят рахитогенной пищей с низким содержанием кальция (0,02 мас. Са, 0,3 мас. Р), описанной Suda и др. (J.Nutr. 100, 1049-1052, 1970). Крысы получают такое в общей сложности 4 недели произвольно. В конце третьей недели зверьков разделяют на группы по 6 крыс в каждой группе. Одна из групп получала ежедневно инъекции носителя (0,1 мл 0,95% пропиленгликоля и 5% этанола) внутрибрюшинно в течение того же периода времени, но с добавкой одной из следующих доз: 12,5 нг или 25 нг 1,25-(ОН)₂D₃ или 24-дигомо-1 α 25-дигидрокси-22-дегидровитамина (соединение 25). Зверьков умерщвляют через 24 ч после введения последней дозы, кишечник извлекают и дуоденальные сегменты используют для определения переноса кальция в кишечнике по методике Halloran, DeLuca (Arch. Biochem. Biophys. 208, 477-486, 1981). Полученные результаты приведены табл. 2.(a) Intestinal calcium transport activity. (Table 2)
Male rats weaned from nipples obtained from Harlan-Sprag Dowley of Madison, pc. Wisconsin is fed a low calcium, ricketogenic food (0.02 wt. Ca, 0.3 wt. P) described by Suda et al. (J. Nutr. 100, 1049-1052, 1970). Rats receive this for a total of 4 weeks at random. At the end of the third week, the animals are divided into groups of 6 rats in each group. One of the groups received daily injections of the carrier (0.1 ml of 0.95% propylene glycol and 5% ethanol) intraperitoneally for the same period of time, but with the addition of one of the following doses: 12.5 ng or 25 ng 1.25- ( OH) ₂ D ₃ or 24-dihomo-1 α 25-dihydroxy-22-dehydrovitamin (compound 25). The animals are sacrificed 24 hours after the last dose, the intestines are removed and the duodenal segments are used to determine the transfer of calcium in the intestines according to the method of Halloran, DeLuca (Arch. Biochem. Biophys. 208, 477-486, 1981). The results are shown in table. 2.

(b) Определение костной мобилизации кальция (табл. 3). (b) Determination of bone calcium mobilization (Table 3).

Самцов крыс, отнятых от сосков и полученных от компании Харлан-Спраг Доули, кормят пищевой с низким содержанием кальция (0,02 мас. Са, 0,3 мас. Р) и дефицитом витамина D, описанной Suda и др. (I.Nutr 100, 1049-1052, 1970) в течение 4 недель. В конце третьей недели зверьков делят на группы по 6 крыс в каждой, каждая группа получает определенные дозировки (табл. 3), растворенные в 0,1 мл 85% пропиленгликоля и 5% этанола. Контрольная группа получает только применяемый в качестве растворителя носитель. Другие группы получают указанные дозировки 1,25-(ОН)₂D₃ или дигомо-производного (25) ежедневно в течение 7 дней. В конце 7-ми дневного периода введения соединений по атомному поглощению определяют содержание кальция в сыворотке крови. Результаты двух таких экспериментов приведены в табл. 3.Male rats weaned from nipples and obtained from Harlan-Sprag Dowley are fed a low-calcium food (0.02 wt. Ca, 0.3 wt. P) and vitamin D deficiency described by Suda et al. (I.Nutr 100, 1049-1052, 1970) for 4 weeks. At the end of the third week, the animals are divided into groups of 6 rats each, each group receiving specific dosages (Table 3) dissolved in 0.1 ml of 85% propylene glycol and 5% ethanol. The control group receives only the vehicle used as a solvent. Other groups receive the indicated dosages of 1.25- (OH) ₂ D ₃ or the dihomo derivative (25) daily for 7 days. At the end of the 7-day period of administration of compounds by atomic absorption determine the content of calcium in serum. The results of two such experiments are given in table. 3.

Представленные в табл. 1 данные показывают, что дигомо-аналог 25 явно более активен по сравнению с 1,25-(ОН)₂D₃ в стимулировании дифференциации клеток лейкемии от нормальных моноцитовых клеток. Например, при концентрации 1х10^-8 молярной 1,25-(ОН)₂D₃ создает дифференциацию клеток в 55-61% а соединение (25) при той же концентрации создает дифференциацию в 78% С учетом того, что концентрация 1х10^-7 молярной для 1,25-(ОН)₂D₃ необходимо для достижения той же степени дифференциации (примерно 90%), которая достигается при концентрации дигомо-аналога в 5х10^-8 (примерно 92%), можно сделать вывод о том, что аналог (25) примерно в 5 раз более активен, чем 1,25-(ОН)₂D₃ в качестве дифференциативного средства.Presented in the table. 1 data show that the dihomo analogue 25 is clearly more active than 1.25- (OH) ₂ D ₃ in stimulating the differentiation of leukemia cells from normal monocyte cells. For example, at a concentration of 1x10 ^-8 molar 1.25- (OH) ₂ D ₃ creates a differentiation of cells in 55-61% and compound (25) at the same concentration creates a differentiation in 78%, given the concentration of 1x10 ^-7 molar for 1.25- (OH) ₂ D ₃ it is necessary to achieve the same degree of differentiation (approximately 90%), which is achieved when the concentration of the dihomo analog in 5x10 ^-8 (approximately 92%), we can conclude that the analog ( 25) about 5 times more active than 1.25- (OH) ₂ D ₃ as a differentiating agent.

Напротив, дигомо-производное проявляет очень низкую кальцемическую активность по сравнению с 1,25-(ОН)₂D₃. Этот вывод подтверждается данными, приведенными в табл. 2 и 3. Данные по переносу кальция в кишечнике, представленные в табл. 2, показывают, например, что известный своей активностью метаболит 1,25-(ОН)₂D₃ вызывает очень значительную реакцию (по сравнению с контролем) при введении в дозировках 12,5 или 25 нг/день в течение 7 дней. Однако, в случае нового дигомо-производного (25) необходима дозировка в 125 нг/день в течение 7, чтобы вызвать реакцию, но даже при таких высоких дозировках реакция умерена и составляет примерно половину от реакции, вызванной 1,25-(ОН)₂D₃ при дозировке в 10 раз выше. Таким образом, согласно данному испытанию новое дигомо-производное по меньшей мере в 10 раз менее активен, чем 1,25-(ОН)₂.In contrast, the dihomo derivative exhibits very low calcemic activity compared to 1.25- (OH) ₂ D ₃ . This conclusion is confirmed by the data given in table. 2 and 3. Data on the transfer of calcium in the intestine, presented in table. 2 show, for example, that the metabolite 1.25- (OH) ₂ D ₃ , known for its activity, causes a very significant reaction (compared to the control) when administered in doses of 12.5 or 25 ng / day for 7 days. However, in the case of the new dihomo derivative (25), a dosage of 125 ng / day for 7 is necessary in order to induce a reaction, but even at such high dosages, the reaction is moderate and approximately half of the reaction caused by 1.25- (OH) ₂ D ₃ at a dosage 10 times higher. Thus, according to this test, the new dihomo derivative is at least 10 times less active than 1.25- (OH) ₂ .

Тот же вывод можно сделать на основании результатов по костной мобилизации кальция, приведенных в табл. 3. В этом случае дозировки в 125 и 250 нг/день (вводимые в течение 7 дней) дигомо-аналога (25) необходимы для достижения той же степени реакции, что и создаваемые 1,25-(ОН)₂D₃ соответственно в дозировках 12,5 и 25 нг. Примечателен и тот факт, что повышение дозировки дигомо-производного (до 500 нг/день) не вызывает дальнейшего роста, но даже несколько уменьшает реакцию по костной мобилизации кальция (табл. 3). Во втором опыте, отраженном в табл. 3, 1,25-(ОН)₂D₃ вновь вызывает очень значительную реакцию (в сравнении с контролем) в дозировках 12,5 и 15 нг/день при отсутствии активности со стороны дигомо-аналога в дозировке 125 нг/день. В третьем опыте, в котором дигомо-аналог испытывался в интервале дозировок вплоть до 1000 нг/день, соединение не вызывает никакой реакции по костной мобилизации кальция при любых дозировках, что указывает на отсутствие активности у соединения по повышению содержания кальция в сыворотке крови за счет костной ткани. Таким образом, результаты по костной мобилизации находятся в полном соответствии с данными по переносу кальция, приведенными в табл. 2, которые ясно показывают, что новый дигомо-аналог 25 во много раз менее активен, чем 1,25-(ОН)₂D₃ по своему кальцемическому действию.The same conclusion can be drawn based on the results on bone mobilization of calcium, are given in table. 3. In this case, dosages of 125 and 250 ng / day (administered over 7 days) of the dihomo analogue (25) are necessary to achieve the same degree of reaction as the created 1.25- (OH) ₂ D _3, respectively, in dosages 12.5 and 25 ng. It is also noteworthy that increasing the dosage of the dihomo derivative (up to 500 ng / day) does not cause further growth, but even slightly reduces the response to bone mobilization of calcium (Table 3). In the second experiment, reflected in the table. 3, 1.25- (OH) ₂ D ₃ again causes a very significant reaction (in comparison with the control) at doses of 12.5 and 15 ng / day in the absence of activity from the digomo analogue at a dosage of 125 ng / day. In the third experiment, in which the dihomo analog was tested in the dosage range up to 1000 ng / day, the compound does not cause any bone mobilization of calcium at any dosage, indicating a lack of activity in the compound to increase serum calcium due to bone tissue. Thus, the results of bone mobilization are in complete accordance with the data on calcium transfer given in table. 2, which clearly show that the new dihomo analogue 25 is many times less active than 1.25- (OH) ₂ D ₃ in its calcemic effect.

Тот же характер проявления активности наблюдается и для тригомо-производного (26) предлагаемого изобретения. Это соединение обладает в высшей степени благоприятным и неожиданно повышенным отношением дифференциативная (кальцемическая активности за счет проявления заметной активности в стимулировании дифференциации клеток ЛЧ-60 без заметной реакции (в сравнении с контролем) по повышению содержания кальция в крови крыс. The same pattern of manifestation of activity is observed for the trigomo derivative (26) of the present invention. This compound has a highly favorable and unexpectedly increased differential ratio (calcemic activity due to the manifestation of a noticeable activity in stimulating differentiation of LF-60 cells without a noticeable reaction (in comparison with the control) to increase the calcium content in rat blood.

Такой тип проявления активности это то, что требуется для соединения, предназначенного для применения в качестве дифференциативного средства для лечения раковых заболеваний. Целевая активность, т.е. клеточная дифференциация злокачественных клеток, ярко выражена, в то время как нежелательная активность, а именно кальцемическое действие, неожиданно понижено, в результате чего достигается очень значительно повышенное отношение дифференциативная кальцемическая активности. Известное соединение 1 α -гидрокси- витамины D эффективно в качестве терапевтического средства для лечения лейкемических заболеваний (патент США N 4391802). На основе приведенных данных биологических испытаний можно сделать вывод, что новые гомо-производные предлагаемого изобретения при их введении в тех же дозировках, что и соединений прототипа, будут оказывать от ложного отсутствия до менее, чем в одной десятой части нежелательного кальцемического действия, характерного для соединений прототипа, и тем самым снимают проблемы, связанные с возникновением чрезмерно высоких концентраций кальция в крови подвергаемых лечению субъектов. Таким образом, предлагаемые соединения являются эффективным практическим воплощением концепции дифференциативной терапии раковых заболеваний, и характер проявления активности со стороны этих соединений однозначно предполагает, что они окажутся предпочтительными терапевтическими средствами при таком лечении. This type of manifestation of activity is what is required for a compound intended for use as a differentiating agent for the treatment of cancer. Target activity, i.e. the cellular differentiation of malignant cells is pronounced, while the undesirable activity, namely the calcemic effect, is unexpectedly reduced, as a result of which a very significantly increased differential calcemic activity is achieved. The known compound 1 α-hydroxy-vitamins D is effective as a therapeutic agent for the treatment of leukemic diseases (US Pat. No. 4,391,802). Based on the data from biological tests, we can conclude that the new homo-derivatives of the invention, when introduced in the same dosages as the compounds of the prototype, will have from a false absence to less than one tenth of the undesirable calcemic effect characteristic of compounds prototype, and thereby remove the problems associated with the occurrence of excessively high concentrations of calcium in the blood of the treated subjects. Thus, the proposed compounds are an effective practical embodiment of the concept of differential therapy of cancer, and the nature of the activity on the part of these compounds clearly suggests that they will be the preferred therapeutic agents for such treatment.

Для лечебных целей предлагаемые соединения могут быть приготовлены в виде растворов в приемлемом растворителе или в виде эмульсий, суспензий или дисперсий в приемлемых или неядовитых растворителях или носителях, или в виде пилюль, таблеток или капсул известными стандартными способами. Такие составы могут также включать другие фармацевтически приемлемые и неядовитые наполнители, такие как стабилизаторы, антиокислители, связующие средства, красители, эмульгаторы и вкусовые добавки. Предложенная композиция содержит в качестве активного начала гомолог 1-гидроксивитамина D в количестве 0,5-50 мкг. For therapeutic purposes, the proposed compounds can be prepared in the form of solutions in an acceptable solvent or in the form of emulsions, suspensions or dispersions in acceptable or non-toxic solvents or carriers, or in the form of pills, tablets or capsules by known standard methods. Such formulations may also include other pharmaceutically acceptable and non-toxic excipients, such as stabilizers, antioxidants, binders, colorants, emulsifiers and flavoring agents. The proposed composition contains as an active principle a homologue of 1-hydroxyvitamin D in an amount of 0.5-50 μg.

Соединения предпочтительно вводятся в виде инъекций или внутривенным вливанием приемлемых стерильных растворов, или в виде пероральных доз через пищеварительный тракт. При лечении лейкемии человека производные гомовитамина вводятся больным в дозировках, достаточных для стимулирования дифференциации лейкемических клеток от макрофагов. The compounds are preferably administered by injection or by intravenous infusion of acceptable sterile solutions, or as oral doses through the digestive tract. In the treatment of human leukemia, homovitamin derivatives are administered to patients in dosages sufficient to stimulate the differentiation of leukemic cells from macrophages.

Мягкая желатиновая капсула содержит: 0,25 мл три-лауринтриглицерида, 5 мкг 24-дигомо-1,25-дигидрокси-22-дегидровитами- на D₃.The soft gelatin capsule contains: 0.25 ml of tri-lauritriglyceride, 5 μg of 24-dihomo-1,25-dihydroxy-22-dehydrovitamin D ₃ .

Жидкая композиция для орального введения содержит 1 мл пропиленгликоля; 100 мкг 24-тригомо-1,25-дигидрокси-22-дегидровитамина D₃; 10 мкг альфа-токоферола.The liquid composition for oral administration contains 1 ml of propylene glycol; 100 μg of 24-trigomo-1,25-dihydroxy-22-dehydrovitamin D ₃ ; 10 μg alpha tocopherol.

Композиция для нанесения на кожу содержит: 1 г пальмового масла; 20 мкг 24-дигомо-1,25-дигидрокси-22-дегидровитамина D₃.The composition for applying to the skin contains: 1 g of palm oil; 20 μg of 24-dihomo-1,25-dihydroxy-22-dehydrovitamin D ₃ .

Claims

Гомологи 1α - гидроксивитамина D₃ с ненасыщенной боковой целью общей формулы

где n = 3 или 4,
обладающие стимулирующим и усиливающим дифференциацию злокачественных клеток лейкемии человека действием.Homologs 1α - hydroxyvitamin D ₃ with an unsaturated lateral target of the General formula

where n = 3 or 4,
possessing a stimulating and enhancing differentiation of malignant cells of human leukemia action.

2. Гомологи 22-гидрокси-23-фенилсульфонил витамина D₃ общей формулы

где X, Y, Z - одинаковые или различные, водород или три(низший алкил)силильная группа;
n = 3 или 4,
в качестве промежуточных продуктов для получения гомологов 1α - гидроксивитамина D₃.2. Homologs of 22-hydroxy-23-phenylsulfonyl vitamin D _{3 of the} General formula

where X, Y, Z are the same or different, hydrogen or three (lower alkyl) silyl group;
n = 3 or 4,
as intermediates for the preparation of homologues of 1α - hydroxyvitamin D ₃ .

3. Композиция, способствующая стимуляции и усилению дифференциации злокачественных клеток лейкемии человека, содержащая активное вещество и фармацевтическими приемлемый наполнитель, отличающаяся тем, что в качестве активного вещества оно содержит гомологи 1α - гидроксивитамина D₃, 24-дигомо- 1α, 25-дигидрокси-22-дегидровитамин D₃, 24-тригомо-1α, 25-дигидрокси-22-дегидровитамин D₃ в количестве 0,5 - 30 мкг.3. A composition that stimulates and enhances the differentiation of human leukemia malignant cells, containing the active substance and pharmaceutically acceptable excipient, characterized in that as the active substance it contains homologues of 1α - hydroxyvitamin D ₃ , 24-digomo-1α, 25-dihydroxy-22 -dehydrovitamin D ₃ , 24-trigomo-1α, 25-dihydroxy-22-dehydrovitamin D ₃ in an amount of 0.5 - 30 μg.

4. Способ стимуляции и усиления дифференциации злокачественных клеток лейкемии человека, включающий введение производных витамина D₃, отличающийся тем, что используют по меньшей мере один из гомологов 1α-гидроксивитамина D₃ общей формулы

где n = 3, 4.4. A method of stimulating and enhancing the differentiation of malignant cells of human leukemia, including the introduction of derivatives of vitamin D ₃ , characterized in that at least one of the homologues of 1α-hydroxyvitamin D _{3 of the} General formula

where n = 3,4.

5. Способ по п. 4, отличающийся тем, что гомологом является 24-дигомо-1α, 25-дигидрокси-22-дегидровитамин D₃.5. The method according to p. 4, characterized in that the homologue is 24-digomo-1α, 25-dihydroxy-22-dehydrovitamin D ₃ .

Способ по п. 4, отличающийся тем, что гомологом является 24-тригомо-1α, 25-дигидрокси-22-дегидровитамин D₃.The method according to claim 4, characterized in that the homologue is 24-trigomo-1α, 25-dihydroxy-22-dehydrovitamin D ₃ .