NL8920392A - 1FA-HYDROXYVITAMINE D-HOMOLOGISTS WITH UNSATURATED SIDE CHAIN. - Google Patents

Description

Ια-Hvdroxvvitamine D-homoloaen met onverzadigde ziiketen.Hα-Hvdroxvvitamin D-homoloaen with unsaturated Si chain.

Deze uitvinding werd gedaan in de loop van onderzoek, dat werd gesteund door subsidies of beloningen van het Department of Health and Human Services. De Regering heeft zekere rechten op deze uitvinding.This invention was made in the course of research, which was supported by grants or rewards from the Department of Health and Human Services. The Government has certain rights in this invention.

De uitvinding heeft betrekking op nieuwe vitamine D-verbindingen, die met name aktief zijn bij het opwekken van de differentiatie van kwaadaardige cellen tot normale cellen. Meer in het bijzonder heeft de uitvinding betrekking op aan de zijketen onverzadigde en aan de zijketen verlengde analogen van lot, 25-dihydroxyvitamine D3, (1,25- (OH)2D3), die selectieve werking vertonen als antineoplas-tische middelen vanwege verhoogde werking op differentiatie van kwaadaardige cellen en sterk verminderde werking op calciummetabolisme.The invention relates to new vitamin D compounds which are particularly active in inducing the differentiation of malignant cells into normal cells. More particularly, the invention relates to side chain unsaturated and side chain extended analogs of lot, 25-dihydroxyvitamin D3, (1,25- (OH) 2D3), which exhibit selective activity as antineoplastic agents because of enhanced activity on differentiation of malignant cells and greatly reduced effect on calcium metabolism.

Achtergrond.Background.

De werking van de D-vitaminen (vitaminen D3 of D2) op de regulering van calciummetabolisme en normale beender-groei en -ontwikkeling vereist, naar bekend, metabolisme van het moedervitamine tot bepaalde gehydroxyleerde vormen. Met name is vastgesteld, dat la,25-dihydroxyvitamine D3, (l,25-(OH)2D3), de dihydroxymetaboliet, die normaliter in dier of mens uit vitamine D3 wordt gevormd, de aktieve speciës is, die verantwoordelijk is voor de stimulering van calciumtransport in de darm en calciumresorptie uit been-(beendermobilisatie) en daardoor de algehele bloedcalcium-spiegel van het organisme reguleert. (Deze op calcium betrekking hebbende werkingen van vitamine D-metabolieten of -analogen, zullen in de volgende beschrijving gezamelijk worden aangehaald als de "calcemische aktiviteit" of "calcemische werking" van de verbindingen.) Sommige struk-tuuranalogen van l,25-(OH)2D3, zoals bijvoorbeeld la-hydro- xyvitamine D3, Ια-hydroxyvitamine D2, la,25-dihydroxyvitami-ne D2, of fluorderivaten van l,25-(OH)2D3, zijn ook als sterk aktieve calcemische middelen bekend en als resultaat zijn 1,25-(0H)2D3 en zijn aktieve analogen gebruikt of voorgesteld als geneesmiddelen bij de profilaxis of behandeling van verschillende calciummetabolisme- en beenderstoringen, zoals renale of osteodystrofie, vitamine D-resis-tente rachitis of osteoporose en verwante ziekten.The action of the D vitamins (vitamins D3 or D2) on the regulation of calcium metabolism and normal bone growth and development requires known metabolism of the parent vitamin to certain hydroxylated forms. In particular, it has been determined that 1,25-dihydroxyvitamin D3, (1,25- (OH) 2D3), the dihydroxy metabolite normally formed from vitamin D3 in animals or humans, is the active species responsible for the stimulation of calcium transport in the intestine and calcium absorption from bone (bone mobilization) and thereby regulates the overall blood calcium level of the organism. (These calcium-related actions of vitamin D metabolites or analogs will be collectively referred to in the following description as the "calcemic activity" or "calcemic activity" of the compounds.) Some structure analogs of 1.25- ( OH) 2D3, such as, for example, 1-hydroxy-vitamin D3, α-hydroxyvitamin D2, 1a, 25-dihydroxyvitamin D2, or fluorine derivatives of 1,25- (OH) 2D3, are also known as highly active calcemic agents and as a result 1.25- (0H) 2D3 and active analogues have been used or proposed as drugs in the prophylaxis or treatment of various calcium metabolism and bone disorders, such as renal or osteodystrophy, vitamin D-resistant rickets or osteoporosis and related diseases.

Meer onlangs is ontdekt, dat 1,25-(OH) 2D3, naast zijn boven besproken, welbekende "calcemische werking” ook andere biologische funkties vervult. Zo werd bijvoorbeeld gevonden, dat 1,25-(0H)2D3 en nauwverwante analogen, (la-OH-D3, 1,25—(OH) 2D2, met fluor gesubstitueerde analogen, enzovoort) celdifferentiatie kunnen opwekken [Abe et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 78, 4990 (1981); Honma et al., Proc. Natl. Acad. Sci USA 80* 201 (1983)]. Met name is gebleken, dat l,25-(OH)2D3 en zijn analogen de voortplanting remmen van kwaadaardige cellen, die in cultuur zijn gegroeid (bijvoorbeeld menselijke leukemiecellen) en een differentiatie tot normale cellen van het makrofaagtype opwekken. (Deze werkingstypen zullen in het vervolg gezame-lijk worden aangeduid als dé "differentiatiewerking" van vitamine D-verbindingen.) Vanwege hun opmerkelijke potentie als differentiatie opwekkende middelen, zijn deze vitaminen D-derivaten potentieel geschikt voor antikankermiddelen en hun gebruik voor de behandeling voor menselijke leukemie is inderdaad voorgesteld (Suda et ül., US-A-4.391.802). Zelfs hoewel deze verbindingen zeer effectief zijn bij de differentiatie van kwaadaardige cellen in cultuur, beperkt echter hun even sterke calcemische werking in vivo hun gebruik in de praktijk als antikankermiddelen of sluit dit geheel uit. Aldus zijn l,25-(OH)2D3 en zijn fluorderivaten uitermate potente celdifferentiatiemiddelen, maar zijn ook de potentste verbindingen ten aanzien van calcemische werking en bij de in vivo vereiste spiegels voor effectief gebruik als antikankermiddelen (bijvoorbeeld antileukemi-sche middelen) kunnen deze zelfde verbindingen vanwege hun inherente calcemische werking gevaarlijk verhoogde bloed-calciumspiegels produceren. Andere bekende vitamine D-derivaten vertonen een soortgelijke overeenkomst tussen differentiatiewerking en calcemische werking en hun praktisch gebruik als potentiële antikankermiddelen is dan ook onderhevig aan dezelfde beperkingen en hetzelfde gevaar.More recently, it has been discovered that, in addition to its well-known "calcemic activity", 1,25- (OH) 2D3 also fulfills other biological functions. For example, it has been found that 1,25- (0H) 2D3 and closely related analogues, ( 1a-OH-D3, 1,25- (OH) 2D2, fluorine-substituted analogs, etc.) can induce cell differentiation [Abe et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 78, 4990 (1981); Honma et al. ., Proc. Natl. Acad. Sci USA 80 * 201 (1983)]. In particular, 1,25- (OH) 2D3 and its analogs have been shown to inhibit the propagation of malignant cells grown in culture (e.g., human leukemia cells) and induce a differentiation into normal cells of the macrophage type. (These modes of action will hereinafter be collectively referred to as the "differentiation activity" of vitamin D compounds.) Due to their remarkable potency as differentiation inducers, these vitamins D derivatives potentially suitable for anti-cancer agents and their use for the b Indeed, action for human leukemia has been proposed (Suda et ,l., US-A-4,391,802). However, even though these compounds are very effective in the differentiation of malignant cells in culture, their equally strong calcemic activity in vivo limits or entirely excludes their use in practice as anti-cancer agents. Thus, 1,25- (OH) 2D3 and its fluorine derivatives are extremely potent cell differentiating agents, but also the most potent compounds in terms of calcemic activity and at the levels required in vivo for effective use as anti-cancer agents (e.g. anti-leukemics) may be the same compounds, because of their inherent calcemic action, produce dangerously elevated blood calcium levels. Other known vitamin D derivatives show a similar similarity between differentiation and calcemic activity and their practical use as potential anti-cancer agents is therefore subject to the same limitations and the same hazard.

Deze waarnemingen wezen duidelijk op een behoefte aan en hebben een onderzoek bevorderd naar verbindingen met grotere specificiteit en selectiviteit van werking als antikankermiddelen, dat wil zeggen verbindingen met een verbeterde differentiatie/calcemische werkingsverhouding en recent onderzoek heeft dan ook daadwerkelijk geleid tot de bereiding van verschillende vitamine D-analogen met verhoogde differentiatiewerking. Er werd bijvoorbeeld gevonden, dat sommige l,25-(OH)2D3 homologen, waarin de zijketen is uitgebreid met één koolstof (hetzij binnen de keten, hetzij aan het einde) een opmerkelijk grotere differentiatiewerking (ongeveer 10 maal) op leukemiecellen in cultuur vertonen dan l,25-(OH)2D3 zelf [DeLuca et al·/ US-A-4.717.721; Ostrem and DeLuca, Steroids 49, 73-102 (1988); Ostrem et al., J. Biol, Chem. 262, 14864 (1987)]. Deze homologen zijn echter nog altijd uitermate potente calcemische middelen, die calcemische werkingen vertonen, die ongeveer gelijk zijn aan die van 1,25-(OH) 2D3. Deze verbindingen worden dan ook gekenmerkt door een verbeterde differentiatie/calcemische werkingsverhouding, maar zij overwinnen niet het boven besproken probleem van de ongewenste potente calcemische werking. Er zijn andere met vitamine D verwante verbindingen bereid, waarvan wordt vermeld, dat zij preferentiële differentiatiewerking hebben [zie Ostrem et al·/ supra; Kubodera et al. Chem. Pharm. Buil. 34/ 2286-89 (1986); Ikekawa et al. Chem. Pharm. Buil 35. 4362 (1987)], maar deze zijn struktureel onderscheidenlijk en verschillend van de verbindingen van de onderhavige uitvinding.These observations clearly indicated a need for and have promoted research into compounds with greater specificity and selectivity of action as anti-cancer agents, i.e. compounds with improved differentiation / calcemic activity ratio, and recent research has actually led to the preparation of different vitamins D analogs with increased differentiation activity. For example, it was found that some 1,25- (OH) 2D3 homologs, in which the side chain has been expanded with one carbon (either within the chain or at the end), exhibit markedly greater differentiation activity (approximately 10 times) on leukemia cells in culture then 1,25- (OH) 2D3 itself [DeLuca et al / US-A-4,717,721; Ostrem and DeLuca, Steroids 49, 73-102 (1988); Ostrem et al., J. Biol, Chem. 262, 14864 (1987)]. However, these homologs are still extremely potent calcemic agents, which exhibit calcemic actions approximately equal to those of 1,25- (OH) 2D3. These compounds are therefore characterized by an improved differentiation / calcemic action ratio, but they do not overcome the problem of unwanted potent calcemic action discussed above. Other vitamin D related compounds have been prepared which are reported to have preferential differentiation activity [see Ostrem et al / supra; Kubodera et al. Chem. Pharm. Bump. 34 / 2286-89 (1986); Ikekawa et al. Chem. Pharm. Bull 35, 4362 (1987)], but these are structurally distinct and different from the compounds of the present invention.

Samenvatting van de uitvinding.Summary of the invention.

Er werden nu met vitamine D verwante verbindingen gevonden, die een gewenst en zeer voordelig aktiviteitspa-troon vertonen ten aanzien van hun differentiatierespons versus calcemische respons. Deze nieuwe vitamineanalogen vertonen zeer uitgesproken werking ten aanzien van de remming van de voortplanting van kwaadaardige cellen en het opwekken van hun differentiatie tot normale cellen van het monocyte-type (gelijk aan of groter dan die van 1,25-(OH)2D3, voor zover het een calcemische werking betreft. Aldus vertonen deze nieuwe verbindingen een ingrijpend verbeterde differentiatie/calcemische werkingsverhouding en vanwege deze eigenschap vertegenwoordigen de verbindingen middelen, die de voorkeur verdienen voor de behandeling van neoplastische ziekten. Omdat zij sterk aktief zijn bij het opwekken van differentiatie en veel minder aktief zijn als calcemische middelen, kan men deze verbindingen toedienen zonder overmatig verhoogde bloedcalciumspiegels op te wekken, waardoor een groot praktisch probleem, dat met sterke calcemische werking verbonden is, wordt overwonnen.Vitamin D related compounds have now been found which exhibit a desirable and very beneficial pattern of activity in their differentiation response versus calcemic response. These new vitamin analogues show very pronounced activity in inhibiting malignant cell reproduction and inducing their differentiation into normal cells of the monocyte type (equal to or greater than that of 1,25- (OH) 2D3) for as far as a calcemic action is concerned, thus these new compounds exhibit a dramatically improved differentiation / calcemic action ratio and because of this property the compounds represent preferred agents for the treatment of neoplastic diseases because they are highly active in inducing differentiation and much less active as calcemic agents, one can administer these compounds without generating excessively elevated blood calcium levels, overcoming a major practical problem associated with strong calcemic activity.

De nieuwe verbindingen worden struktureel gekenmerkt als aan de zijketen onverzadigde homologen van 1,25-(OH)2D , waarin de zijketen is verlengd door invoeging van twee of drie methyleeneenheden in de koolstofketen. Zij kunnen dan ook worden voorgesteld met bijgaande algemene struktuurformule I, waarin X, Y en Z, die hetzelfde of verschillend kunnen zijn, zijn gekozen uit de groep, bestaande uit waterstof en een hydroxylbeschermende groep en waarin n de waarde 3 of 4 heeft.The new compounds are structurally characterized as side chain unsaturated homologs of 1,25- (OH) 2D, in which the side chain is extended by inserting two or three methylene units into the carbon chain. They can therefore be represented by the accompanying general structural formula I, wherein X, Y and Z, which may be the same or different, are selected from the group consisting of hydrogen and a hydroxyl protecting group and wherein n has the value 3 or 4.

Bepaalde en voorkeursvoorbeelden van deze verbindingen zijn 24-dihomo-l,25-dihydroxy-22-dehydrovitamine D3, dat wil zeggen de boven genoemde verbinding, waarin X, Y en Z waterstof zijn en n gelijk is aan 3 en 24-trihomo-l,25-dihydroxy-22-dehydr©vitamine D3, dat wil zeggen de verbinding met de formule I, waarin X, Y en Z waterstof zijn en n 4 is.Certain and preferred examples of these compounds are 24-dihomo-1,25-dihydroxy-22-dehydrovitamin D3, i.e. the above-mentioned compound, wherein X, Y and Z are hydrogen and n is 3 and 24-trihomo-1 25-dihydroxy-22-dehydr © vitamin D3, ie the compound of the formula I, wherein X, Y and Z are hydrogen and n is 4.

Het blijkt, dat deze nieuwe verbindingen verwant zijn aan de aan de zijketen onverzadigde 24-homo-vitamine D-verbinding, getoond in US-A-4.717.72l. De nieuwe verbindingen hebben echter onderscheidenlijke strukturele en biologische eigenschappen. Struktureel is het onderscheidende aspect een onverzadigde zijketen, die gehomologiseerd is door invoeging van twee of drie methyleeneenheden en biologisch zijn de verbindingen sterk potente celdifferen-tiatiemiddelen, zonder, of met sterk verminderde, calce-mische werking.It appears that these new compounds are related to the side chain unsaturated 24-homo-vitamin D compound shown in US-A-4,717.72l. However, the new compounds have distinct structural and biological properties. Structurally, the distinguishing feature is an unsaturated side chain, which is homologized by the addition of two or three methylene units, and biologically, the compounds are highly potent cell differentiators, with no, or with greatly reduced, calming activity.

Bereiding nieuwe verbindingen.Preparation of new compounds.

De synthese van voorbeelden van de nieuwe verbindingen van de uitvinding is schematisch weergegeven in processchema's 1, 2 en 3. Schema 1 toont de bereiding van het vereiste la-hydroxyvitamine D-22-aldehydetussenprodukt, dat, wanneer gekoppeld aan de passende alkylfenylsulfon zijketeneenheid, als getoond in processchema 2, de gewenste vitamine D-homologen oplevert (bijvoorbeeld respectievelijk verbindingen (25) en (26)). Schema 3 licht de bereiding toe van de alkylfenylsulfoneenheden, die voor zijketenkoppeling nodig zijn. Experimentele details voor de chemische procestrappen, afgebeeld in de schema's, worden gegeven in de specifieke voorbeelden die volgen. Aanduidingen van verbindingen met arabische cijfers (bijvoorbeeld verbinding 1, 2, 3, enzovoort) als gebruikt in deze voorbeelden verwijzen naar de aldus genummerde strukturen in de schema's.The synthesis of examples of the novel compounds of the invention is schematically shown in Process Schemes 1, 2 and 3. Scheme 1 shows the preparation of the required 1a-hydroxyvitamin D-22-aldehyde intermediate which, when coupled to the appropriate alkylphenylsulfone side chain unit, is shown in process scheme 2, yields the desired vitamin D homologs (e.g., compounds (25) and (26), respectively). Scheme 3 illustrates the preparation of the alkylphenylsulfone units required for side chain coupling. Experimental details for the chemical process steps depicted in the schemes are given in the specific examples that follow. Designations of compounds with arabic numerals (e.g., compound 1, 2, 3, etc.) as used in these examples refer to the structures so numbered in the diagrams.

Algemene werkwijzen.General working methods.

3)0-Acetoxy-22,23,-bisnor-5-choleenzuur (1) werd betrokken van Steraloids (Wilton, NH). Alle andere chemicaliën waren van de beste kwaliteit uit in de handel verkrijgbare bronnen. Oplosmiddelen werden volgens standaardmethoden gezuiverd.3) O-Acetoxy-22,23,1-bis-5-cholenic acid (1) was purchased from Steraloids (Wilton, NH). All other chemicals were of the best quality from commercially available sources. Solvents were purified by standard methods.

Dunnelaagchromatografie (TLC) werd uitgevoerd onder gebruik van voorbeklede aluminiumsilicagelplaten met UV-indicator van EM Science (Gibbstown, NJ). Gebruikte oplosmiddelsystemen: A: chloroform-ethanol 85-15 (v/v), B: hexaan-ethylacetaat 1:1 en C: hexaan-ethylacetaat 3:1.Thin layer chromatography (TLC) was performed using pre-coated aluminum silica gel plates with UV indicator from EM Science (Gibbstown, NJ). Solvent systems used: A: chloroform-ethanol 85-15 (v / v), B: hexane-ethyl acetate 1: 1 and C: hexane-ethyl acetate 3: 1.

Hoogwaardige vloeistofchromatografie (HPLC) werd uitgevoerd onder gebruik van een Waters Associates vloeistof chromatograaf, uitgerust met een Model 6000A oplosmiddel lever ingssysteem, een Model 6UK üniversal injector en een Model 450 variabele golflengte detector. Men gebruikte Zorbax-Sil (Phenomenex) kolommen (6,2 mm x 25 cm en 10 mm x 25 cm). Oplosmiddelsystemen: A: 3% 2-propanol in hexaan, B: 2% 2-propanol in hexaan, C: 6% 2-propanol in hexaan, D: 10% 2-propanol in hexaan, E: 20% 2-propanol in hexaan. Voor de voorfiltratie van HPLC-monsters werden silicagel Sep-Pak (Waters Associates) patronen gebruikt.High performance liquid chromatography (HPLC) was performed using a Waters Associates liquid chromatograph equipped with a Model 6000A solvent delivery system, a Model 6UK universal injector and a Model 450 variable wavelength detector. Zorbax-Sil (Phenomenex) columns were used (6.2 mm x 25 cm and 10 mm x 25 cm). Solvent systems: A: 3% 2-propanol in hexane, B: 2% 2-propanol in hexane, C: 6% 2-propanol in hexane, D: 10% 2-propanol in hexane, E: 20% 2-propanol in hexane. Silica gel Sep-Pak (Waters Associates) cartridges were used for the pre-filtration of HPLC samples.

Elektroneninslag massaspectra (MS) werden bij 70 eV geregistreerd met Kratos MS-50 TC Mass Spectrometer uitgerust met Kratos DS-55 Data System.Electron impact mass spectra (MS) were recorded at 70 eV with Kratos MS-50 TC Mass Spectrometer equipped with Kratos DS-55 Data System.

Ultraviolet (UV) absorptiespectra werden geregistreerd met een Hitachi Model 60-100 UV-Vis spectrofotome-ter.Ultraviolet (UV) absorption spectra were recorded with a Hitachi Model 60-100 UV-Vis spectrophotometer.

Infrarood spectra werden geregistreerd op een Nicolet MX-1 FT-IR spectrometer onder gebruik van films van olieachtige stoffen of tetrachloorkoolstofoplossingen.Infrared spectra were recorded on a Nicolet MX-1 FT-IR spectrometer using films of oily substances or carbon tetrachloride solutions.

Protonmagnetische resonantiespectra (1H-NMR) werden genomen met Bruker 270, 400 of 500 MHz spectrometers in CDCl3-oplossingen, die tetramethylsilan (TMS) als interne standaard bevatten.Proton magnetic resonance spectra (1 H-NMR) were taken with Bruker 270, 400 or 500 MHz spectrometers in CDCl3 solutions containing tetramethylsilan (TMS) as an internal standard.

Voorbeeld 1Example 1

Synthese van beschermd C-22-aldehyde. (Verbinding 18, schema 1).Synthesis of protected C-22 aldehyde. (Compound 18, scheme 1).

Dit aldehyde wordt bereid volgens de algemene werkwijze van Kutner et al. (Tet. Letters 28, 6129-32, 1987). Verbinding (1) (10 g) werd opgelost in 420 ml 5% KOH in methanol en de oplossing werd 15 minuten bij heersende temperatuur geroerd, totdat er geen uitgangsstof meer werd waargenomen met TLC (oplosmiddelsysteem A) . Bij deze oplossing werd druppelsgewijze onder roeren 10% zwavelzuur in methanol gevoegd en de resulterende suspensie werd verdund met 400 ml 1% zwavelzuur in methanol. Het mengsel werd 48 uur onder terugvloeiing verwarmd ter volledige verestering (TLC, oplosmiddelsysteem A). Verbinding (2) (de ester) werd met ethylacetaat geëxtraheerd. De organische fase werd gewassen met 5% NaHC03 en verzadigd NaCl en op magnesiumsulfaat gedroogd. Het produkt, verbinding (2_) , (9,0 g, 88%) werd zonder verdere zuivering voor de volgende trap gebruikt.This aldehyde is prepared according to the general procedure of Kutner et al. (Tet. Letters 28, 6129-32, 1987). Compound (1) (10 g) was dissolved in 420 ml of 5% KOH in methanol and the solution was stirred at ambient temperature for 15 minutes, until no starting material was observed by TLC (solvent system A). To this solution, 10% sulfuric acid in methanol was added dropwise with stirring, and the resulting suspension was diluted with 400 ml of 1% sulfuric acid in methanol. The mixture was refluxed for 48 hours to complete esterification (TLC, solvent system A). Compound (2) (the ester) was extracted with ethyl acetate. The organic phase was washed with 5% NaHCO 3 and saturated NaCl and dried over magnesium sulfate. The product, compound (2), (9.0 g, 88%) was used for the next step without further purification.

Bij een oplossing van verbinding (2) (4,4 g, 12 mmol) in 135 ml droog dimethylformamide (DMF) werd imida-zool (3,6 g, 52,8 mmol) gevoegd, gevolgd door tert-butyldi-methylsilylchloride (4,0 g, 26,4 mmol). De oplossing werd 5 minuten bij kamertemperatuur geroerd totdat er een volumineus precipitaat was gevormd en daarna werd het roeren nog 15 minuten voortgezet. Het reactiemengsel werd met hexaan (400 ml) geëxtraheerd, met water en verzadigde NaCl-oplos-sing gewassen en op magnesiumsulfaat gedroogd. Afdamping van het oplosmiddel gaf TLC-zuiver (oplosmiddelsysteem B) produkt, verbinding (3) (5,3 g, 91%), die zonder verdere zuivering voor de volgende trap werd gebruikt. Een analytisch monster werd verkregen door flitschromatografie onder gebruik van 2% ethylacetaat in hexaan.To a solution of compound (2) (4.4 g, 12 mmol) in 135 ml of dry dimethylformamide (DMF) was added imidazole (3.6 g, 52.8 mmol), followed by tert-butyldimethylsilyl chloride ( 4.0 g, 26.4 mmol). The solution was stirred at room temperature for 5 minutes until a bulky precipitate was formed and then stirring was continued for an additional 15 minutes. The reaction mixture was extracted with hexane (400ml), washed with water and saturated NaCl solution and dried over magnesium sulfate. Evaporation of the solvent gave TLC pure (solvent system B) product, compound (3) (5.3 g, 91%), which was used for the next step without further purification. An analytical sample was obtained by flash chromatography using 2% ethyl acetate in hexane.

Een mengsel van verbinding (3) (1,0 g, 2,1 mmol), dibromantine (0,42 g, 1,5 mmol) en watervrij natriumbicarbonaat (0,91 g, 10 mmol) in 20 ml hexaan werd 30 minuten in een stikstofatmosfeer onder terugvloeiing verwarmt totdat er geen uitgangsverbinding (3J meer werd waargenomen (TLC, systeem C). Het precipitaat werd afgefiltreerd en de oplossing werd onder verlaagde druk opgedroogd. Het residu werd heropgelost in 5 ml watervrij THF, er werd tetrabutyl-ammoniumbromide (0,06 g, 0,19 mmol) toegevoegd en het mengsel werd 30 minuten onder stikstof bij kamertemperatuur geroerd. Daarna werd een oplossing van tetrabutylammonium-fluoride (10 ml, 1M in THF) toegevoegd, gevolgd door 0,7 ml s-collidine en het mengsel werd 1 uur bij kamertemperatuur onder stikstof geroerd. Er werd nog 5 ml tetrabutylammo-niumfluorideoplossing toegevoegd en het roeren werd nog 3 uur voortgezet. Er werd ether (50 ml) toegevoegd en de organische fase werd gewasssen met water, koud IN HC1 en 10% NaHC03 en op watervrij magnesiumsulfaat gedroogd. Het produkt, verbinding (4), opgelost in benzeen, werd gechro-matografeerd over silicagel 70-230 mesh (30 g). Verbinding (£), (0,44 g, 58%) werd geëlueerd onder gebruik van ethyl-acetaat in hexaan. Er werd een analytisch monster verkregen door HPLC (systeem A), Ry 77 ml): IR (film) 1737, 1604, 1495, 1082, 1030 cm’1; UV (3% 2-propanol in hexaan) λ πβχ 262 nm (e 7.000), 272 nm (e 9.800), 282 nm (e 10.500), \,aX 293 (e 6.000); 1H NMR (CDClj) δ 0,54 (3H, s, I8-CH3), 0,94 (3H, s, 19-CH3), 1,22 (3H, d, J=6 Hz, 2-CH3) , 3,6 (1H, m, 3-H), 3,68 (3H, S, C02CH3), 5,42 (1H, m, 6-H), 5,58 (1H, m, 7-H); MS m/z (relatieve intensiteit) 358 (61), 340 (12), 325 (100), 299 (68), 271 (7), 253 (17), 237 (26), 211 (27), 143 (72) , 119 (35) .A mixture of compound (3) (1.0g, 2.1mmol), dibromantine (0.42g, 1.5mmol) and anhydrous sodium bicarbonate (0.91g, 10mmol) in 20ml hexane was added for 30 minutes reflux in a nitrogen atmosphere until no starting compound (3J was observed anymore (TLC, system C). The precipitate was filtered off and the solution was dried under reduced pressure. The residue was redissolved in 5 ml anhydrous THF, tetrabutyl ammonium bromide (0.06 g, 0.19 mmol) was added and the mixture was stirred at room temperature under nitrogen for 30 minutes, then a solution of tetrabutyl ammonium fluoride (10 ml, 1M in THF) was added followed by 0.7 ml of collidin and the mixture was stirred at room temperature under nitrogen for 1 hour A further 5 ml of tetrabutyl ammonium fluoride solution was added and stirring was continued for a further 3 hours Ether (50 ml) was added and the organic phase was washed with water, cold IN HCl and 10% NaHCO3 and anhydrous dried magnesium sulfate. The product, compound (4), dissolved in benzene, was chromatographed on 70-230 mesh silica gel (30 g). Compound (β) (0.44 g, 58%) was eluted using ethyl acetate in hexane. An analytical sample was obtained by HPLC (system A), Ry 77 ml): IR (film) 1737, 1604, 1495, 1082, 1030 cm -1; UV (3% 2-propanol in hexane) λ πβχ 262 nm (e 7,000), 272 nm (e 9,800), 282 nm (e 10,500), αX 293 (e 6,000); 1 H NMR (CDCl 3) δ 0.54 (3H, s, 18-CH 3), 0.94 (3H, s, 19-CH 3), 1.22 (3H, d, J = 6 Hz, 2-CH 3), 3.6 (1H, m, 3-H), 3.68 (3H, S, CO2 CH3), 5.42 (1H, m, 6-H), 5.58 (1H, m, 7-H); MS m / z (relative intensity) 358 (61), 340 (12), 325 (100), 299 (68), 271 (7), 253 (17), 237 (26), 211 (27), 143 ( 72), 119 (35).

Een oplossing van verbinding (4) (830 mg, 2,3 mmol) in 350 ml benzeen-ether, 1:4 (v/v) werd onder roeren 40 minuten (4 maal 10 minuten) onder stikstof in een met water gekoelde kwartsdompelput, uitgerust met een stikstof-borrelaar en een Vycorfilter bestraald onder gebruik van een Hanovia 608A36 middeldruk UV-lamp. De reactie werd met HPLC gevolgd onder gebruik van 2% 2-propanol in hexaan bij 265 nm. De oplossing werd onder verlaagde druk opgedroogd, heropgelost in 100 ml absolute ethanol en 3 uur in een stikstofatmosfeer onder terugvloeiing verwarmd. Daarna werd de oplossing geconcentreerd, heropgelost in 1 ml 10% ethylacetaat in hexaan en gechromatografeerd over silicagel 70-230 mesh (30 g). Vitamineester (5) (298 mg, 36%) werd geëlueerd onder gebruik van een mengsel van 15% ethylacetaat in hexaan. Een analytisch monster werd verkregen door HPLC (systeem B, Ry 94 ml): IR (film) 1738 cm'1; UV (EtOH) ^ 264 nrn, 228 nm; 1H NMR (CDCI3) 5, 0,56 (3H, s, 18- CH3), 1,20 (3H, d, J=7 Hz, 21-CH3) , 3,66 (3H, s, C02CH3) , 3,95 (1H, m, 3-H), 4,80 (1H, d, J=l,2 Hz, 19Z-H), 5,05 (1H, d, J=l,2 Hz, 19E-H) , 6,03 (1H, d, J=ll Hz, 7-H), 6,23 (1H, d, J=ll Hz, 6-H) ; MS m/Z (relatieve intensiteit) , M+ 358 (45), 340 (9), 325 (45), 299 (22), 253 (19), 237 (18), 136 (60), 118 (100).A solution of compound (4) (830 mg, 2.3 mmol) in 350 ml of benzene ether, 1: 4 (v / v) was stirred under nitrogen in a water-cooled quartz well for 40 minutes (4 times 10 minutes) with stirring equipped with a nitrogen bubbler and a Vycor filter irradiated using a Hanovia 608A36 medium pressure UV lamp. The reaction was monitored by HPLC using 2% 2-propanol in hexane at 265 nm. The solution was dried under reduced pressure, redissolved in 100 ml of absolute ethanol and heated under reflux for 3 hours in a nitrogen atmosphere. The solution was then concentrated, redissolved in 1 ml of 10% ethyl acetate in hexane and chromatographed on silica gel 70-230 mesh (30 g). Vitamin ester (5) (298 mg, 36%) was eluted using a mixture of 15% ethyl acetate in hexane. An analytical sample was obtained by HPLC (System B, Ry 94 ml): IR (film) 1738 cm -1; UV (EtOH) ^ 264 nrn, 228 nm; 1 H NMR (CDCl 3) 5, 0.56 (3H, s, 18-CH 3), 1.20 (3H, d, J = 7 Hz, 21-CH 3), 3.66 (3H, s, CO2 CH 3), 3 .95 (1H, m, 3-H), 4.80 (1H, d, J = 1.2 Hz, 19Z-H), 5.05 (1H, d, J = 1.2 Hz, 19E-H ), 6.03 (1H, d, J = 11 Hz, 7-H), 6.23 (1H, d, J = 11 Hz, 6-H); MS m / Z (relative intensity), M + 358 (45), 340 (9), 325 (45), 299 (22), 253 (19), 237 (18), 136 (60), 118 (100).

Een oplossing van verbinding (5) (10 mg, 0,028 mmol) in 5 ml droge tolueen werd in een droogijs-acetonbad onder stikstof tot -70eC gekoeld. Bij deze oplossing werd druppelsgewijze onder roeren diisobutylaluminiumhydride (DIBAL-H, 50 μΐ, 25% oplossing in tolueen, 0,088 mmol) gevoegd. Het reactiemengsel werd 10 minuten bij -70 °C geroerd en daarna werd langzaam methanol (2 ml) toegevoegd. Men liet het mengsel tot kamertemperatuur opwarmen, waarna het werd verdund met ethylether en gewassen met 5% HC1, 5% NaHC03, water en verzadigd NaCl en op watervrij magnesium-sulfaat werd gedroogd. Silicagelchromatografie (15% ethyl-acetaat in hexaan) leverde verbinding (6) (4,9 mg, 54%) op met de volgende spectraalgegevens: MS: 328 (M+, 29), 310 (5), 295 (31), 269 (11), 253 (6), 136 (47), 118 (86), 29 (100); 1H-NMR (CDC13) Sl 0,59 (3H, S, 18-CH3) , 1,14 (3H, d, J=7 Hz, 21-CH3), 4,0 (1H, m, 3-H) , 4,81 (1H, d, J=l,2 Hz, 19E-H) , 5,05 (1H, d, J=l,2 Hz, 19Z-H) , 6,05 (1H, d, J=ll Hz, 7-H) , 6,23 (1H, d, J=ll Hz, 6-H) , 9,58 (1H, d, J=3,8 Hz, 22-H).A solution of compound (5) (10 mg, 0.028 mmol) in 5 ml of dry toluene was cooled to -70 ° C in a dry ice acetone bath under nitrogen. Diisobutylaluminum hydride (DIBAL-H, 50 µl, 25% solution in toluene, 0.088 mmol) was added dropwise with stirring to this solution. The reaction mixture was stirred at -70 ° C for 10 minutes and then methanol (2 ml) was slowly added. The mixture was allowed to warm to room temperature, after which it was diluted with ethyl ether and washed with 5% HCl, 5% NaHCO 3, water and saturated NaCl and dried over anhydrous magnesium sulfate. Silica gel chromatography (15% ethyl acetate in hexane) provided compound (6) (4.9 mg, 54%) with the following spectral data: MS: 328 (M +, 29), 310 (5), 295 (31), 269 (11), 253 (6), 136 (47), 118 (86), 29 (100); 1 H-NMR (CDCl 3) Sl 0.59 (3H, S, 18-CH 3), 1.14 (3H, d, J = 7 Hz, 21-CH 3), 4.0 (1H, m, 3-H) , 4.81 (1H, d, J = 1.2 Hz, 19E-H), 5.05 (1H, d, J = 1.2 Hz, 19Z-H), 6.05 (1H, d, J = 11 Hz, 7-H), 6.23 (1H, d, J = 11 Hz, 6-H), 9.58 (1H, d, J = 3.8 Hz, 22-H).

Verdere eluering van de silicagelkolom met 5% 2-propanol in hexaan leverde de C-22-alcohol op, verbinding (7), (2,7 mg, 29%),Further eluting the silica gel column with 5% 2-propanol in hexane gave the C-22 alcohol, compound (7), (2.7 mg, 29%),

Verbinding (5j werd in verbinding (8) omgezet door gebruik van p-tolueensulfonylchloride in pyridine bij 4°C gedurende 20 uur. Verbinding (8j (120 mg, 0,2 mmol) werd, opgelost in 2 ml watervrij dichloormethaan, onder roeren bij 55°C toegevoegd aan een methanoloplossing (15 ml) van watervrij kaliumbicarbonaat (250 mg). Het mengsel werd 24 uur bij 55°C onder stikstof geroerd. Daarna werden de oplosmiddelen onder verlaagde druk verwijderd en werd het residu met ether geëxtraheerd. De organische fase werd met water gewassen en op watervrij magnesiumsulfaat gedroogd. Het produkt, verbinding (9j, werd door silicagelchromatografie gezuiverd onder gebruik van 20% ethylacetaat in hexaan (50 mg. 68%).Compound (5j was reacted in compound (8) using p-toluenesulfonyl chloride in pyridine at 4 ° C for 20 hours. Compound (8j (120mg, 0.2mmol) was dissolved in 2ml anhydrous dichloromethane, stirring at 55 ° C were added to a methanol solution (15 ml) of anhydrous potassium bicarbonate (250 mg) The mixture was stirred under nitrogen at 55 ° C for 24 hours, then the solvents were removed under reduced pressure and the residue was extracted with ether. phase was washed with water and dried over anhydrous magnesium sulfate The product, compound (9j, was purified by silica gel chromatography using 20% ethyl acetate in hexane (50mg, 68%).

Tert-butylhydroperoxyde (112 μΐ, 3,0 M oplossing in tolueen, 0,34 mmol) werd toegevoegd aan een suspensie van seleendioxyde (9 mg, 0,8 mmol) in 2 ml droog methyleen-chloride. Het mengsel werd onder stikstof bij kamertemperatuur geroerd totdat er een heldere oplossing was gevormd. Daarna werd watervrije pyridine (12 μΐ, 0,15 mmol) toegevoegd, gevolgd door verbinding (9) (50 mg), opgelost in 2 ml watervrij dichloormethaan. Het mengsel werd 30 minuten onder stikstof geroerd. Er werd koude 10% natriumbicarbonaat (2 ml) toegevoegd en het mengsel werd met ether geëxtraheerd. De organische fase werd gewassen met koud 10% natriumbicarbonaat en ijswater en op watervrij magnesium-sulfaat gedroogd. Silicagelchromatografie (10-20% ethylace-taat in hexaan) leverde 12,5 mg verbinding (10) op. Het produkt werd daarna onmiddellijk in 0,5 ml ijsazijn opgelost en de oplossing werd 15 minuten onder stikstof onder roeren op 55°C verhit. Het reactiemengsel werd over ijs uitgegoten, met ether geëxtraheerd en met ijskoude verzadigde natriumbicarbonaat gewassen. De gecombineerde ether-extracten werden met water gewassen en op watervrij magne-siumsulfaat gedroogd. Er werden analytische monsters van respectievelijk isomeer (5Z, 7E) en (5E, 7E), (11) en (12) in een verhouding van 2,5:1 verkregen door preparatieve HPLC.Tert-butyl hydroperoxide (112 μl, 3.0 M solution in toluene, 0.34 mmol) was added to a suspension of selenium dioxide (9 mg, 0.8 mmol) in 2 ml of dry methylene chloride. The mixture was stirred at room temperature under nitrogen until a clear solution was formed. Anhydrous pyridine (12 μΐ, 0.15 mmol) was then added, followed by compound (9) (50 mg), dissolved in 2 ml anhydrous dichloromethane. The mixture was stirred under nitrogen for 30 minutes. Cold 10% sodium bicarbonate (2 ml) was added and the mixture was extracted with ether. The organic phase was washed with cold 10% sodium bicarbonate and ice water and dried over anhydrous magnesium sulfate. Silica gel chromatography (10-20% ethyl acetate in hexane) gave 12.5 mg of compound (10). The product was then immediately dissolved in 0.5 ml glacial acetic acid and the solution was heated to 55 ° C under nitrogen with stirring for 15 minutes. The reaction mixture was poured over ice, extracted with ether and washed with ice cold saturated sodium bicarbonate. The combined ether extracts were washed with water and dried over anhydrous magnesium sulfate. Analytical samples of isomer (5Z, 7E) and (5E, 7E), (11) and (12) in a ratio of 2.5: 1 were obtained by preparative HPLC.

Verbinding 11: HPLC, Ry 68 ml; UV (EtOH) 264 nm, Aroïn 227 nm, A264 = 2,07; 1H NMR (CDC13) 5, 0,56 (3H, s, A227 18-CH3), 1,20 (3H, d, J=6,5 Hz, 21-CH3) , 2,04 (3H, s, 3/J- acetyl), 3,66 (3H, s, 22-C02CH3), 4,4 (1H, m, 1-H), 5,2 (1H, m, 3-H), 5,01 (1H, br s, 19E-H) , 5,34 (1H, br S, 19Z-H), 6,01 (1H, d, J=10 Hz, 7-H), 6,33 (1H, d, J=10 Hz, 6-H) ; MS m/z (relatieve intensiteit), 416 (M+, 4), 356 (100), 338 (21), 251 (13), 134 (95).Compound 11: HPLC, Ry 68 ml; UV (EtOH) 264 nm, Ariin 227 nm, A264 = 2.07; 1 H NMR (CDCl 3) 5, 0.56 (3H, s, A227 18-CH 3), 1.20 (3H, d, J = 6.5 Hz, 21-CH 3), 2.04 (3H, s, 3 / J-acetyl), 3.66 (3H, s, 22-CO 2 CH 3), 4.4 (1H, m, 1-H), 5.2 (1H, m, 3-H), 5.01 (1H , br s, 19E-H), 5.34 (1H, br S, 19Z-H), 6.01 (1H, d, J = 10 Hz, 7-H), 6.33 (1H, d, J = 10 Hz, 6-H); MS m / z (relative intensity), 416 (M +, 4), 356 (100), 338 (21), 251 (13), 134 (95).

Verbinding 12: HPLC, Ry 78 ml; UV (EtOH) Xmax 267 nm, 227 nm, A267 « 3,51; 1H NMR (CDC13) 5, 0,56 (3H, s, A227 18-CH3), 1,20 (3H, d, J=6,5 Hz, 21-CH3) , 2,04 (3H, s, 3/8- OAc), 3,66 (3H, S, 22-C02CH3) , 4,5 (1H, m# 1-H) , 5,3 (1H, m, 3-H) , 4,99 (1H, br s, 19E-H) , 5,13 (1H, br s, 19Z-H) , 5,81 (1H, d, J=10 Hz, 7-H), 6,56 (1H, d, J=10 Hz, 6-H) .Compound 12: HPLC, Ry 78 ml; UV (EtOH) Xmax 267 nm, 227 nm, A267 3,5 3.51; 1 H NMR (CDCl 3) 5, 0.56 (3H, s, A227 18-CH 3), 1.20 (3H, d, J = 6.5 Hz, 21-CH 3), 2.04 (3H, s, 3 / 8- OAc), 3.66 (3H, S, 22-CO 2 CH 3), 4.5 (1H, m # 1-H), 5.3 (1H, m, 3-H), 4.99 (1H , br s, 19E-H), 5.13 (1H, br s, 19Z-H), 5.81 (1H, d, J = 10 Hz, 7-H), 6.56 (1H, d, J = 10 Hz, 6-H).

Voor bereidingen op grote schaal kunnen isomeren (11) en (12) ook effectief en voordelig worden gescheiden volgens de maleïnezuuranhydrideprocedure, beschreven in US-A-4.554.106.For large scale preparations, isomers (11) and (12) can also be effectively and advantageously separated according to the maleic anhydride procedure described in US-A-4,554,106.

Diisobutylaluminiumhydride (15 μΐ, 1,5 M oplossing tolueen) werd bij -70°C onder stikstof onder roeren toegevoegd aan een oplossing van verbinding (y) (2 mg) in 0,5 ml watervrije tolueen. Het mengsel werd 10 minuten bij -70°C geroerd en er werd langzaam 0,2 ml methanol toegevoegd ter ontleding van het organometaalcomplex. Het mengsel werd tot kamertemperatuur opgewarmd en met ethyl-ether geëxtraheerd. De organische fase werd met water gewassen en op watervrij magnesiumsulfaat gedroogd. Prepa-ratieve HPLC onder gebruik van oplosmiddelsysteem E leverde verbinding (13) en verbinding (14j op. Verbinding (13) gaf de volgende spectraalgegevens: 344 (M+, 22), 326 (13), 311 (2), 285 (4), 269 (4), 152 (29), 134 (100); 1H-NMR (CDC13) , S, 0,59 (3H, S, 18-CH3) , 1,15 (3H, d, J=7 Hz, 21-CH3) , 4,2 (1H, m, 3-H), 4,4 (1H, m, 1-H), 4,99 (1H, d, J=l,2 Hz, 19Z-H), 5,31 (1H, d, J=l,2 Hz, 19E-H), 6,02 (1H, d, J=ll Hz, 7-H), 6,36 (1H, d, J=ll Hz, 6-H), 9,56 (1H, d, J=4 Hz, 22-H).Diisobutylaluminum hydride (15 µl, 1.5 M toluene solution) was added under stirring at -70 ° C to a solution of compound (y) (2 mg) in 0.5 ml anhydrous toluene under nitrogen. The mixture was stirred at -70 ° C for 10 minutes and 0.2 ml of methanol was slowly added to decompose the organometallic complex. The mixture was warmed to room temperature and extracted with ethyl ether. The organic phase was washed with water and dried over anhydrous magnesium sulfate. Preparative HPLC using solvent system E gave compound (13) and compound (14j. Compound (13) gave the following spectral data: 344 (M +, 22), 326 (13), 311 (2), 285 (4) .269 (4), 152 (29), 134 (100); 1 H NMR (CDCl 3), S, 0.59 (3H, S, 18-CH 3), 1.15 (3H, d, J = 7 Hz) , 21-CH3), 4.2 (1H, m, 3-H), 4.4 (1H, m, 1-H), 4.99 (1H, d, J = 1.2 Hz, 19Z-H ), 5.31 (1H, d, J = 1.2 Hz, 19E-H), 6.02 (1H, d, J = 11 Hz, 7-H), 6.36 (1H, d, J = 11 Hz, 6-H), 9.56 (1H, d, J = 4 Hz, 22-H).

Een 0,1 N oplossing van KOH in methanol (10 ml) werd aan een geroerde oplossing van verbinding (11) (100 mg, 0,24 mmol) in ethylether (10 ml) toegevoegd. De resulterende oplossing werd 90 minuten bij kamertemperatuur geroerd totdat er met TLC (oplosmiddelsysteem B) geen uitgangsstof meer werd waargenomen. Verbinding (15) werd gewonnen door standaardextractie (ethylacetaat, verzadigde NaCl, watervrij magnesiumsulfaat) onder verkrijging van kleurloze olie (86,2 mg, 96%).A 0.1 N solution of KOH in methanol (10 ml) was added to a stirred solution of compound (11) (100 mg, 0.24 mmol) in ethyl ether (10 ml). The resulting solution was stirred at room temperature for 90 minutes until no starting material was observed with TLC (solvent system B). Compound (15) was recovered by standard extraction (ethyl acetate, saturated NaCl, anhydrous magnesium sulfate) to give colorless oil (86.2 mg, 96%).

Een mengsel van imidazool (250 mg, 3,6 mmol) en tert-butyldimethylsilylchloride (250 mg, 1,6 mmol) in DMF (2 ml) werd toegevoegd aan een geroerde oplossing van verbinding (15) (86,2 mg, 0,23 mmol) in 4 ml dimethylform-A mixture of imidazole (250mg, 3.6mmol) and tert-butyldimethylsilyl chloride (250mg, 1.6mmol) in DMF (2ml) was added to a stirred solution of compound (15) (86.2mg, 0 , 23 mmol) in 4 ml dimethylform-

amide. Het resulterende homogene mengsel werd 15 minuten bij 55°C geroerd totdat er met TLC (oplosmiddelsysteem B) geen uitgangsstof meer werd waargenomen. Het produkt werd door hexaanextractie van het reactiemengsel gewonnen. Organisch extract werd met pekel gewassen en op watervrij magnesiumsulfaat gedroogd. Hexaanoplossing van het ruwe produkt werd gefiltreerd door silicagel Sep-Pak patroon onder verkrijging van verbinding (16) (136 mg, 98%). IR (film) 2974, 2930, 1736, 1447, 1286, 1258, 1150, 1085 cm'1; UV (hexaan), 264 nm, 227 nm, A264 - 1,91; 1H NMRamide. The resulting homogeneous mixture was stirred at 55 ° C for 15 minutes until no starting material was observed with TLC (solvent system B). The product was collected by hexane extraction from the reaction mixture. Organic extract was washed with brine and dried over anhydrous magnesium sulfate. Hexane solution of the crude product was filtered through silica gel Sep-Pak cartridge to give compound (16) (136 mg, 98%). IR (film) 2974, 2930, 1736, 1447, 1286, 1258, 1150, 1085 cm -1; UV (hexane), 264 nm, 227 nm, A264 - 1.91; 1 H NMR

A227 (CDC13), S, 0,07 [12H, s, Si(CH3)2], 0,55 (3H, s, 18-CH3) , 0,86 [18H, S, C(CH3)3], 1,20 (3H, d, J-6,8 Hz, 21-CH3) , 3,65 (3H, s, 0-CH3), 4,18 (1H, m, 3-H) , 4,36 (1H, m, 1-H) , 4,84 (1H, d, J-1,2 HZ, 19Z-H), 5,16 (1H, d, J=l,2 Hz, 19E-H), 5,96 (1H, d, J=ll,2 Hz, 7-H), 6,19 (1H, d, J=ll,2 Hz, 6-H); MS m/z (intensiteiten genormaliseerd tot m/e 248) 602 (M+, 10), 470 (59), 413 (7), 338 (10), 248 (100).A227 (CDCl3), S, 0.07 [12H, s, Si (CH3) 2], 0.55 (3H, s, 18-CH3), 0.86 [18H, S, C (CH3) 3], 1.20 (3H, d, J-6.8 Hz, 21-CH3), 3.65 (3H, s, 0-CH3), 4.18 (1H, m, 3-H), 4.36 ( 1H, m, 1-H), 4.84 (1H, d, J-1.2 HZ, 19Z-H), 5.16 (1H, d, J = 1.2 Hz, 19E-H), 5 .96 (1H, d, J = 11.2 Hz, 7-H), 6.19 (1H, d, J = 11.2 Hz, 6-H); MS m / z (intensities normalized to m / e 248) 602 (M +, 10), 470 (59), 413 (7), 338 (10), 248 (100).

Lithiumaluminiumhydride (25 mg, 0,65 mmol) werd bij 0°C onder argon toegevoegd aan een geroerde oplossing van verbinding (16) (136,2 mg, 0,23 mmol) in watervrij THF (5 ml). De suspensie werd 15 minuten bij 0°C geroerd en de overmaat lithiumaluminiumhydride werd door druppelsgewijze toevoeging van 10% water in THF ontleed. De suspensie werd met 10 ml THF verdund en het roeren werd nog 15 minuten bij kamertemperatuur voortgezet. Het produkt werd door standaardextractie met ethylacetaat gewonnen. Verbinding (17) werd als een kleurloze olie (118,4 mg) met 91% opbrengst verkregen. IR (film) 3450, 2952, 2886, 1447, 1258, 1105, 1085, 834 cm'1; UV (EtOH) 264 nm, λ mfn 227 nm, A264 = A227 l, 57; 1H NMR (CDC13) δ 0,00 (12H, s, Si-CH3) , 0,53 (3H, s, 18-CH3), 0,85 [18H, s, Si-C(CH3)3], 1,04 (3H, d, J=6,4 Hz, 21-CH3), 3,37 en 3,63 (1H, en 1H, elk m, 22-GHz), 4,17 (1H, m, 3-H), 4,35 (1H, m, 1-H), 4,84 (1H, br S, 19Z-H), 5,16 (1H, br S, 19E-H) , 6,00 (1H, d, J=12,2 Hz, 7-H), 6,21 (1H, d, J=12,2 Hz, 6-H); MS M/z (intensiteiten genormaliseerd tot m/Z 248), 574 (M+, 17), 442 (67), 383 (11), 308 (17), 248 (100).Lithium aluminum hydride (25mg, 0.65mmol) was added at 0 ° C under argon to a stirred solution of compound (16) (136.2mg, 0.23mmol) in anhydrous THF (5ml). The suspension was stirred at 0 ° C for 15 minutes and the excess lithium aluminum hydride was decomposed by dropwise addition of 10% water in THF. The suspension was diluted with 10 ml of THF and stirring was continued for an additional 15 minutes at room temperature. The product was recovered by standard extraction with ethyl acetate. Compound (17) was obtained as a colorless oil (118.4 mg) in 91% yield. IR (film) 3450, 2952, 2886, 1447, 1258, 1105, 1085, 834 cm -1; UV (EtOH) 264 nm, λ mfn 227 nm, A264 = A227 1.57; 1 H NMR (CDCl 3) δ 0.00 (12H, s, Si-CH 3), 0.53 (3H, s, 18-CH 3), 0.85 [18H, s, Si-C (CH 3) 3], 1 .04 (3H, d, J = 6.4 Hz, 21-CH3), 3.37 and 3.63 (1H, and 1H, each m, 22 GHz), 4.17 (1H, m, 3- H), 4.35 (1H, m, 1-H), 4.84 (1H, br S, 19Z-H), 5.16 (1H, br S, 19E-H), 6.00 (1H, d, J = 12.2 Hz, 7-H), 6.21 (1H, d, J = 12.2 Hz, 6-H); MS M / z (intensities normalized to m / Z 248), 574 (M +, 17), 442 (67), 383 (11), 308 (17), 248 (100).

Een oplossing van oxalylchloride (30 μΐ, 0,34 nanol) in 0,5 ml dichloormethaan werd druppelsgewijze onder stikstof bij -60°C toegevoegd aan een geroerde oplossing van DMSO (50 μΐ, 0,7 mmol) in 3 ml dichloormethaan. De resulterende oplossing werd 10 minuten bij -60°C geroerd en een oplossing van verbinding (17) (27 mg, 0,05 mmol) in 1 ml dichloormethaan werd langzaam toegevoegd. Het mengsel werd 30 minuten bij -60 °C geroerd. Daarna werd 0,2 ml triethylamine toegevoegd en werd de oplossing nog 5 minuten geroerd. Het produkt, verbinding (1§) werd met ethylether geëxtraheerd en het organische extract werd gewassen met verzadigde NaCl en op watervrij magnesiumsulfaat gedroogd. Silicagel Sep-Pak filtratie leverde TLC-zuiver produkt op (17 mg, 62%). IR (film) 2954, 2929, 2884, 2857, 1727, 1472, 1375, 1256, 1085, 909, 880, 835 cm*1; NMR (CHC13) δ 0,00 (12H, S, Si-CH3) , 0,60 (3H, S, 18-CH3) , 0,88 [18H, s, Si- C(CH3)3], 1,11 (3H, d, J=6,9 Hz, 21-CH3) , 4,23 (1H, m, 3-H) , 4,43 (1H, m, 1-H) , 4,93 (1H, br S, 19Z-H) , 5,19 (1H, br S, 19E-H) , 6,07 (1H, d, J=10,0 Hz, 7-H) , 6,26 (1H, d, J=10,0 Hz, 6-H) , 9,54 (1H, d, J=3 Hz, 22-H) ; UV (hexaan) λ max 264 nm, λmi-n 227 nm, A264 = 1,9; MS m/z (intensiteiten ten op-A227A solution of oxalyl chloride (30 μΐ, 0.34 nanol) in 0.5 ml dichloromethane was added dropwise under nitrogen at -60 ° C to a stirred solution of DMSO (50 μΐ, 0.7 mmol) in 3 ml dichloromethane. The resulting solution was stirred at -60 ° C for 10 minutes and a solution of compound (17) (27 mg, 0.05 mmol) in 1 ml of dichloromethane was slowly added. The mixture was stirred at -60 ° C for 30 minutes. 0.2 ml of triethylamine was then added and the solution was stirred for an additional 5 minutes. The product, compound (1§) was extracted with ethyl ether and the organic extract was washed with saturated NaCl and dried over anhydrous magnesium sulfate. Silica gel Sep-Pak filtration gave TLC pure product (17 mg, 62%). IR (film) 2954, 2929, 2884, 2857, 1727, 1472, 1375, 1256, 1085, 909, 880, 835 cm * 1; NMR (CHCl 3) δ 0.00 (12H, S, Si-CH 3), 0.60 (3H, S, 18-CH 3), 0.88 [18H, s, Si-C (CH 3) 3], 1, 11 (3H, d, J = 6.9 Hz, 21-CH 3), 4.23 (1H, m, 3-H), 4.43 (1H, m, 1-H), 4.93 (1H, br S, 19Z-H), 5.19 (1H, br S, 19E-H), 6.07 (1H, d, J = 10.0 Hz, 7-H), 6.26 (1H, d, J = 10.0 Hz, 6-H), 9.54 (1H, d, J = 3 Hz, 22-H); UV (hexane) λ max 264 nm, λmi-n 227 nm, A264 = 1.9; MS m / z (intensities at A227

Zichte m/z 248) 572 (M+, 13), 440 (53), 383 (11), 308 (14), 248 (100); exacte massa, berekend voor C34H60O3Si2 572,4081, gevonden 572,4117.Visibility m / z 248) 572 (M +, 13), 440 (53), 383 (11), 308 (14), 248 (100); exact mass, calculated for C34 H60 O3 Si2 572.4081, found 572.4117.

Een verbeterde opbrengst aan aldehyde (18J werd verkregen toen de oxydatietrap werd uitgevoerd onder de volgende omstandigheden: een oplossing van 15 μΐ (0,17 mmol) oxalylchloride in 0,75 ml watervrij dichloormethaan werd druppelsgewijze bij -60°C onder een argonatmosfeer toegevoegd aan een geroerde oplossing van 25 μΐ (0,36 mmol) dimethylsulfoxyde in 0,25 ml watervrij dichloormethaan. Nadat het mengsel 10 minuten bij -60 °C was geroerd werd langzaam een oplossing van 20,3 mg (0,035 mmol) alcohol (17) in 0,5 ml watervrij dichloormethaan toegevoegd en flitsgespoeld met nog 0,2 ml watervrij dichloormethaan. Het mengsel werd 30 minuten bij -60°C geroerd en er werd bij -60 °C 0,3 ml (2,15 mmol) triethylamine toegevoegd. Het mengsel werd 5 minuten geroerd en tot 0°C opgewarmd en met ether geëxtraheerd. De etherfase werd met pekel gewassen en gedroogd (MgS04). Silicagel Sep-Pak filtratie leverde (18) op als een kleurloze olie, die werd gezuiverd door HPLC (Zorbax-Sil 9,4 x 25 cm, 10% EtOAc in hexaan) onder verkrijging van het zuivere aldehyde (18) (19 mg, 96%). Er werd slechts een spoor alcohol gewonnen (0,12 mg).An improved yield of aldehyde (18J was obtained when the oxidation step was carried out under the following conditions: a solution of 15 μΐ (0.17 mmol) oxalyl chloride in 0.75 ml of anhydrous dichloromethane was added dropwise at -60 ° C under an argon atmosphere. a stirred solution of 25 μΐ (0.36 mmol) dimethyl sulfoxide in 0.25 ml anhydrous dichloromethane After stirring the mixture at -60 ° C for 10 minutes, a solution of 20.3 mg (0.035 mmol) alcohol (17) was slowly added in 0.5 ml anhydrous dichloromethane and flash rinsed with an additional 0.2 ml anhydrous dichloromethane The mixture was stirred at -60 ° C for 30 minutes and 0.3 ml (2.15 mmol) triethylamine was added at -60 ° C The mixture was stirred for 5 minutes and warmed to 0 ° C and extracted with ether The ether phase was washed with brine and dried (MgSO 4) Silica gel Sep-Pak filtration yielded (18) as a colorless oil which was purified by HPLC (Zorbax-Sil 9.4 x 25 cm, 1 0% EtOAc in hexane) to give the pure aldehyde (18) (19 mg, 96%). Only one trace of alcohol was collected (0.12 mg).

Voorbeeld 2Example 2

Zijketen aanhechting: synthese van 24-dihomo- 1 et. 25 -dihvdr oxv-2 2 -dehvdr ovitamine P3 (Verbinding 25, schema 2).Side chain attachment: synthesis of 24-dihomo-1. 25 -dihvdr oxv-2 2 -dehvdr ovitamin P3 (Compound 25, scheme 2).

fa) Bereiding van hydroxysulfon f19).fa) Preparation of hydroxysulfone f19).

Bij een geroerde oplossing van 31 mg (84 μπιοί) 2-methyl-6-(fenylsulfonyl)-2-(triethylsilyloxy)-hexaan (verbinding 31, schema 3) in 300 μΐ watervrij tetrahydrofu-ran (dat 1,10 fenantroline als indicator bevatte) werd bij -78°C onder argonatmosfeer 13 μΐ (90 μιηοΐ) diisopropylamine gevoegd, gevolgd door 70 ml n-BuLi (1,30 molair in hexaan) (91 μπιοί). De oplossing werd 30 minuten bij -78°c onder argonatmosfeer geroerd en daarna werd 6 mg C-22-aldehyde (verbinding 18) (10 μιηοΐ) in 300 μΐ watervrij tetrahydrofu-ran toegevoegd en werd 1 uur bij -78°C geroerd. Het mengsel werd ontleed door toevoeging van 1 ml verzadigde NH4C1-oplossing, tot 0°C opgewarmd en met ethylacetaat geëxtraheerd. Het ethylacetaat werd met water en pekel gewassen, op watervrij MgS04 gedroogd, gefiltreerd en ingedampt. Preparatieve HPLC (Zorbax-Sil kolom 9,6 x 25 cm, oplosmid-delsysteem: 10% ethylacetaat in hexaan) gaf 0,6 mg niet gereageerd hebbende aldehyde en 6,6 mg hydroxysulfon (19) als een mengsel van epimeren (77% opbrengst).With a stirred solution of 31 mg (84 μπιοί) 2-methyl-6- (phenylsulfonyl) -2- (triethylsilyloxy) -hexane (compound 31, schedule 3) in 300 μΐ anhydrous tetrahydrofuran (containing 1.10 phenanthroline as an indicator ) at -78 ° C under argon atmosphere was added 13 μΐ (90 μιηοΐ) diisopropylamine, followed by 70 ml n-BuLi (1.30 molar in hexane) (91 μπιοί). The solution was stirred at -78 ° C under argon atmosphere for 30 minutes and then 6 mg of C-22 aldehyde (Compound 18) (10 µl) in 300 µl anhydrous tetrahydrofuran was added and stirred at -78 ° C for 1 hour. The mixture was decomposed by adding 1 ml of a saturated NH 4 Cl solution, warmed to 0 ° C and extracted with ethyl acetate. The ethyl acetate was washed with water and brine, dried over anhydrous MgSO 4, filtered and evaporated. Preparative HPLC (Zorbax-Sil column 9.6 x 25 cm, solvent system: 10% ethyl acetate in hexane) gave 0.6 mg of unreacted aldehyde and 6.6 mg of hydroxysulfone (19) as a mixture of epimers (77% yield).

fb) 24-Dihomo-ltt.25-dihvdroxv-22-dehvdro-vitamine D: f25).fb) 24-Dihomo-ltt.25-dihvdroxv-22-dehvdro-vitamin D: f25).

Een verzadigde oplossing van Na2HP04 in methanol (1,0 ml) werd toegevoegd aan een geroerde oplossing van hydroxysulfon (19) (3,3 mg) in 1,0 ml watervrij tetrahydro-furan, gevolgd door poedervormig, watervrij Na2HP04 (160 mg). Het mengsel werd 30 minuten onder argon geroerd en tot 0°C gekoeld. Daarna werd vers 5% natriumamalgaam (circa 400 mg) toegevoegd en werd het mengsel 16 uur bij 5°C geroerd. Het mengsel werd met 5 ml hexaan verdund en het roeren werd 15 minuten voortgezet. De oplosmiddelen werden gedecanteerd en de vaste stof werd gewassen met hexaan (3 maal 5 ml) . Aan de gecombineerde organische oplossing werd ijs en verzadigde NaCl-oplossing toegevoegd. De organische laag werd afgescheiden en door een Sep-Pak patroon in hexaan geleid. HPLC-zuivering gaf 2,0 mg (71%) beschermd Δ22- 24-dihomo-l,25-(OH)2D3 (21), en een kleine hoeveelheid 22-hydroxyprodukt (22) (Zorbax-Sil 9,4 x 25 kolom, 10% EtOAC in hexaan). Beschermde triol (21) (2 mg) werd in 1,0 ml watervrij THF opgelost en aan deze oplossing werd tetrabu-tylammoniumfluoride in THF (50 μΐ) , (1M oplossing) toege voegd. Het mengsel werd 1 uur onder argon bij 50°C geroerd. Daarna werd ether (8 ml) toegevoegd en werd de organische fase gewassen met verzadigd NaCl. Oplosmiddelen werden verwijderd en het residu werd opgelost in 10% 2-propanol in hexaan en gefiltreerd door silica Sep-Pak. HPLC (20% 2-propanol in hexaan Zorbax-sil 9,4 x 25 cm) gaf 0,6 mg gewenst produkt, de dihomoverbinding (25) . UV (EtOH) Xmax 264 nrn, xmin 228 nrn, A264 = 1,87; TH NMR (CDClj) , 0,55 (3H, A228 S, 18-CH3) , 1,00 (3H, d, J=6,6 Hz., 21-CH3) , 1,23 (6H, s, 26,27-CH3) 4,23 (1H, m, 3-H) , 4,43 (1H, m, 1-H) , 5,00 (1H, brs, 19Z-H) , 5,32 (1H, brs, 19E-H) , 5,29 (2H, m, 22H en 23H), 6,01 (1H, d, J=ll,3 Hz, 7-H); MS m/z (relatieve intensiteit) 442 (M+, 15), 424 (23), 406 (33), 391 (7), 287 (11), 285 (10), 269 (27), 251 (23), 152 (33), 134 (100), 116 (6), 59 (20); exacte massa berekend voor C29H46Q3 442,3446, gevonden 442,3441.A saturated solution of Na2HPO4 in methanol (1.0ml) was added to a stirred solution of hydroxysulfone (19) (3.3mg) in 1.0ml anhydrous tetrahydrofuran followed by powdered anhydrous Na2HPO4 (160mg) . The mixture was stirred under argon for 30 minutes and cooled to 0 ° C. Fresh 5% sodium amalgam (about 400 mg) was then added and the mixture was stirred at 5 ° C for 16 hours. The mixture was diluted with 5 ml hexane and stirring was continued for 15 minutes. The solvents were decanted and the solid washed with hexane (3 times 5 ml). Ice and saturated NaCl solution were added to the combined organic solution. The organic layer was separated and passed through a Sep-Pak cartridge in hexane. HPLC purification gave 2.0 mg (71%) of protected Δ22-24-dihomo-1,25- (OH) 2D3 (21), and a small amount of 22-hydroxy product (22) (Zorbax-Sil 9.4 x 25 column, 10% EtOAC in hexane). Protected triol (21) (2 mg) was dissolved in 1.0 ml anhydrous THF and tetrabutyl ammonium fluoride in THF (50 μΐ), (1M solution) was added to this solution. The mixture was stirred at 50 ° C for 1 hour under argon. Ether (8 ml) was then added and the organic phase was washed with saturated NaCl. Solvents were removed and the residue was dissolved in 10% 2-propanol in hexane and filtered through silica Sep-Pak. HPLC (20% 2-propanol in hexane Zorbax-sil 9.4 x 25 cm) gave 0.6 mg of the desired product, the dihomo compound (25). UV (EtOH) Xmax 264 nrn, xmin 228 nrn, A264 = 1.87; TH NMR (CDCl 3), 0.55 (3H, A228 S, 18-CH 3), 1.00 (3H, d, J = 6.6 Hz, 21-CH 3), 1.23 (6H, s, 26 .27-CH3) 4.23 (1H, m, 3-H), 4.43 (1H, m, 1-H), 5.00 (1H, brs, 19Z-H), 5.32 (1H, brs, 19E-H), 5.29 (2H, m, 22H and 23H), 6.01 (1H, d, J = 11.3 Hz, 7-H); MS m / z (relative intensity) 442 (M +, 15), 424 (23), 406 (33), 391 (7), 287 (11), 285 (10), 269 (27), 251 (23), 152 (33), 134 (100), 116 (6), 59 (20); exact mass calculated for C 29 H 46 Q 3 442.3446, found 442.3441.

Voorbeeld 3Example 3

Ziiketenaanhechtincr: synthese van 24-trihomo- 1a.2 5-dihvdroxy—22-dihvdrovitamine D; (Verbinding 26, schema 2) fa) Bereiding van hydroxysulfon (201Side chain attachment: synthesis of 24-trihomo-1a.2 5-dihydroxy-22-dihydrovitamin D; (Compound 26, scheme 2) fa) Preparation of hydroxysulfone (201

Bij een geroerde oplossing van 58 mg (151 jumol) 2-methyl-7 (fenylsulfonyl) -2- (triethylsilyloxy) -heptaan (verbinding 35, schema 3) in 500 μΐ watervrij tetrahydrofu-ran (dat 1,10-fenantroline als indicator bevatte) werd onder argonatmosfeer bij -78°C 23 μΐ (160 μιηοΐ) diisopro-pylamine gevoegd, gevolgd door 106 μΐ n-Buli (1,5 molair in hexaan) (160 μιηοΐ). De oplossing werd 30 minuten bij -78°C onder argonatmosfeer geroerd en daarna werd 7 mg C-22-aldehyde (verbinding 18) (12 μιηοΐ) in 300 μΐ watervrij tetrahydrofuran toegevoegd en 1 uur geroerd. Het mengsel werd bij deze temperatuur ontleed door toevoeging van 1 ml verzadigde NH4Cl-oplossing, tot 0°C opgewarmd en met ethyl-acetaat geëxtraheerd. Het ethylacetaat werd met water en pekel gewassen, op watervrij MgS04 gedroogd, gefiltreerd en ingedampt. Preparatieve HPLC (Zorbax-Sil 9,4 x 25 cm, oplosmiddelsysteem 10% ethylacetaat in hexaan) gaf 0,4 mg niet gereageerd hebbend aldehyde en 7,5 mg hydroxysulfon (20) als een mengsel van epimeren (78%).In a stirred solution of 58 mg (151 µmol) 2-methyl-7 (phenylsulfonyl) -2- (triethylsilyloxy) -heptane (compound 35, scheme 3) in 500 μΐ anhydrous tetrahydrofuran (containing 1,10-phenanthroline as an indicator ) was added under argon atmosphere at -78 ° C 23 μΐ (160 μιηοΐ) diisopropylamine, followed by 106 μΐ n-Buli (1.5 molar in hexane) (160 μιηοΐ). The solution was stirred at -78 ° C under argon atmosphere for 30 minutes and then 7 mg of C-22 aldehyde (compound 18) (12 μηηοΐ) in 300 μl of anhydrous tetrahydrofuran was added and stirred for 1 hour. The mixture was decomposed at this temperature by adding 1 ml of a saturated NH 4 Cl solution, warmed to 0 ° C and extracted with ethyl acetate. The ethyl acetate was washed with water and brine, dried over anhydrous MgSO 4, filtered and evaporated. Preparative HPLC (Zorbax-Sil 9.4 x 25 cm, solvent system 10% ethyl acetate in hexane) gave 0.4 mg of unreacted aldehyde and 7.5 mg of hydroxysulfone (20) as a mixture of epimers (78%).

fb) 24-Trihomo-l.25-dihvdroxy-22-dehvdrovitamine D3_I261fb) 24-Trihomo-l.25-dihvdroxy-22-dehvdrovitamin D3_I261

Een verzadigde oplossing van Na2HP04 in ethanol (1,0 ml) werd toegevoegd aan een geroerde oplossing van het hydroxysulfon (20) (7,5 mg) in 1,0 ml watervrij tetrahydrofuran, gevolgd door poedervormig watervrij Na2HP04 (160 mg). Het mengsel werd 30 minuten onder argon geroerd en tot 0°C gekoeld. Daarna werd vers natriumamalgaam 5% (circa 400 mg) toegevoegd en werd het mengsel 16 uur bij 5°C geroerd. Het mengsel werd met 5 ml hexaan verdund en het roeren werd 15 minuten voortgezet. Oplosmiddelen werden gedecanteerd en de vaste stof werd gewassen met hexaan (3x5 ml). De gecombineerde organische fase werd met pekel gewassen, gescheiden, gedroogd en ingedampt. Het residu werd door een Sep-Pak patroon in 10% ethylacetaat in hexaan geleid. HPLC-zuive-ring gaf 2,12 mg beschermd Δ 22-24-trihomo-l, 25-(OH) 2 D3 (23) en 1,33 mg 22-hydroxy produkt (24) (Zorbax-Sil 9,4 x 25 kolom, 10% ethylacetaat in hexaan). Verbinding £3 (2,1 mg) werd in 1,0 ml watervrij tetrahydrofuran opgelost en bij deze oplossing werd 50 μΐ tetrabutylammoniumfluoride in tetrahydrofuran (1M oplossing) toegevoegd. Het mengsel werd 1 uur bij 50°C onder argon geroerd. Daarna werd ether toegevoegd en werd de organische fase met pekel gewassen. De etherfase werd op watervrij MgS04 gedroogd, gefiltreerd en ingedampt. Het residu werd opgelost in 30% 2-propanol in hexaan en door een Sep-Pak geleid. HPLC-zuivering (20%, 2-propanol in hexaan, Zorbax-Sil 9,4 x 25 cm kolom) gaf het gewenste trihomoprodukt, verbinding 2£ (0,8 mg). UV (EtOH) Xraax 264 nm 228, A264 = 1,81; 1H NMR: (CDCl3) 0,56 (3H, s, A228 18-CH3) , 1,00 (3H, d, J=6,6 Hz, 21-CH3) , 1,23 (6H, S, 26,27-CH3), 4,23 (1H, m, 3-H), 4,43 (1H, m, 1-H), 5,00 (1H, brs, 19Z-H) , 5,32 (1H, brs, 19E-H) , 5,29 (2H, m, 22H en 23 H) , 6,01 (1H, d, J=ll,3 Hz, 7-H); MS m/z (relatieve intensi teit) 456 (M+) (11) 438 (50), 420 (30), 402 (8), 287 (10), 269 (23), 251 (23), 152 (35), 134 (100).A saturated solution of Na2HPO4 in ethanol (1.0ml) was added to a stirred solution of the hydroxysulfone (20) (7.5mg) in 1.0ml anhydrous tetrahydrofuran, followed by powdered anhydrous Na2HPO4 (160mg). The mixture was stirred under argon for 30 minutes and cooled to 0 ° C. Fresh sodium amalgam 5% (about 400 mg) was then added and the mixture was stirred at 5 ° C for 16 hours. The mixture was diluted with 5 ml hexane and stirring was continued for 15 minutes. Solvents were decanted and the solid washed with hexane (3x5ml). The combined organic phase was washed with brine, separated, dried and evaporated. The residue was passed through a Sep-Pak cartridge in 10% ethyl acetate in hexane. HPLC purification gave 2.12 mg of protected Δ 22-24-trihomo-1,25- (OH) 2 D3 (23) and 1.33 mg 22-hydroxy product (24) (Zorbax-Sil 9.4 x 25 column, 10% ethyl acetate in hexane). Compound 3 (2.1 mg) was dissolved in 1.0 ml anhydrous tetrahydrofuran and 50 µl of tetrabutylammonium fluoride in tetrahydrofuran (1M solution) was added to this solution. The mixture was stirred at 50 ° C for 1 hour under argon. Ether was then added and the organic phase was washed with brine. The ether phase was dried over anhydrous MgSO 4, filtered and evaporated. The residue was dissolved in 30% 2-propanol in hexane and passed through a Sep-Pak. HPLC purification (20%, 2-propanol in hexane, Zorbax-Sil 9.4 x 25 cm column) gave the desired triho product, compound 2 lb (0.8 mg). UV (EtOH) Xraax 264 nm 228, A264 = 1.81; 1 H NMR: (CDCl3) 0.56 (3H, s, A228 18-CH3), 1.00 (3H, d, J = 6.6 Hz, 21-CH3), 1.23 (6H, S, 26, 27-CH3), 4.23 (1H, m, 3-H), 4.43 (1H, m, 1-H), 5.00 (1H, brs, 19Z-H), 5.32 (1H, brs, 19E-H), 5.29 (2H, m, 22H and 23H), 6.01 (1H, d, J = 11.3 Hz, 7-H); MS m / z (relative intensity) 456 (M +) (11) 438 (50), 420 (30), 402 (8), 287 (10), 269 (23), 251 (23), 152 (35) 134 (100).

Voorbeeld 4Example 4

Synthese van sulfonziiketeneenheden (Schema 3) fa) Bereiding van sulfonziiketenrest (32)Synthesis of sulfonic chain units (Scheme 3) fa) Preparation of sulfonic chain moiety (32)

Een oplossing van 4-chloorvalerylchloride 27 (Aldrich; 3g, 19,2 mmol) in watervrij THF (25 ml) werd druppelsgewijze onder hevig roeren in 30 minuten onder argon bij -10°C toegevoegd aan een oplossing van methylmag-nesiumbromide (12,9 ml 3M oplossing in ether) in 25 ml droog THF. Daarna liet men het reactiemengsel in 2 uur tot kamertemperatuur opwarmen, waarna het met water werd afgeschrikt en met verdund zoutzuur werd geneutraliseerd. Het mengsel werd met ether geëxtraheerd en de gecombineerde organische lagen werden met water gewassen en met natrium- sulfaat gedroogd. Na verwijdering van het oplosmiddel werd het residu in vacuo gedestilleerd onder verkrijging van chlooralcohol 28 als een kleurloze vloeistof (2,1 g, 70%). Chlooralcohol 28_ (1,5 g, 10 mmol) in watervrij dimethyl-formamide (5 ml) werd daarna toegevoegd aan een geroerde oplossing van thiofenol (1,32 g, 12 mmol) en kalium t-butanolaat (1,32 g, 11,3 mmol) ih watervrij dimethylform-amide (25 ml). Het reactiemengsel werd een nacht bij kamertemperatuur geroerd en de oplossing werd verdeeld tussen dichloormethaan en water. De organische laag werd gewassen met waterig natriumcarbonaat en water en op watervrij magnesiumsulfaat gedroogd. Het oplosmiddel werd in vacuo afgedampt en de ruwe olie werd gezuiverd door silicagel flitschromatografie met hexaan-ethylacetaat. Sulfide 29 (2,2 g, 98%) werd als een kleurloze olie verkregen. Sulfide 29^ (1,01 g, 4,5 mmol) werd daarna opgelost in droog dichloormethaan (40 ml) en 3-chloorperbenzoëzuur (2,5 g, 11,6 mmol, Aldrich 80-85%) werd in porties onder roeren en van tijd tot tijd koelen toegevoegd. Het mengsel werd 2 uur geroerd en daarna met 10% natriumbicarbonaat afgeschrikt. De gecombineerde organische extracten werden met waterig natriumsulfiet en pekel gewassen en op magnesiumsulfaat gedroogd. Het oplosmiddel werd in vacuo verwijderd en de ruwe olie werd gezuiverd door silicagelflitschromato-grafie onder gebruik van hexaan-ethylacetaatmengsels onder verkrijging van sulfon _3£ (1,1 g, 97%) als een kleurloze olie. Bij een geroerde oplossing van sulfon (1,3 g, 5,1 mmol) en imidazool (1,5 g, 22,7 mmol) in droog dimethyl-formamide (50 ml) werd triethylsilylchloride (1,15 g, 7,7 mmol) gevoegd. Het reactiemengsel werd 2 uur op kamertemperatuur gehouden en daarna met dichloormethaan verdund. Het mengsel werd met waterige ammoniumchlorideoplossing en water gewassen. De organische lagen werden op natriumsul-faat gedroogd en het oplosmiddel werd in vacuo verwijderd. Het residu werd gezuiverd door silicagelflitschromatogra-fie. Eerst werd hexaethyldisiloxan geëlueerd met hexaan. Het met triethylsilyl beschermde sulfon 31 (1,8 g, 97%) werd geëlueerd met hexaan-ethylacetaat 9:1 als een kleurloze vloeistof: IR (netto): 3045, 2940, 1440, 1360, 1130, 1020 cm'1; 1H NMR (400 MHz, CDC13) δ 0,518 (6H, q, J=6,2 Hz, Si-CH2) , 0,899 (9H, t, J=6,2 HZ, Si-C-CH3) S 0,518 (6H, q, J=6,2 Hz, Si-CH2) , 0,899 (9H, t, J=6,2 Hz, Si-C-CH3) , 1,142 (6H, s, CH3), 1,307-1,462 (4H, m) , 1,655-1,738 (2H, m, H-4), 3,080-3,122 (2H, m, H-2) , 7,567 (2H, t, J=6,8 Hz, H-aryl meta) , 7,648 (1H, t, J-6,8 Hz, H-aryl para), 7,916 (2H, d, J=6,83 Hz, H-aryl ortho) ; MS (EI, 70 eV) : m/z (relatieve, intensiteit) 372 (M+, 2) , 341 (100) , 229 (2) , 227 (18), 173 (24), 103 (22), 75 (459, 55 (33).A solution of 4-chlorovaleryl chloride 27 (Aldrich; 3g, 19.2mmol) in anhydrous THF (25ml) was added dropwise with stirring under argon at -10 ° C for 30 minutes to a solution of methyl magnesium bromide (12, 9 ml 3M solution in ether) in 25 ml dry THF. The reaction mixture was then allowed to warm to room temperature over 2 hours, then quenched with water and neutralized with dilute hydrochloric acid. The mixture was extracted with ether and the combined organic layers were washed with water and dried with sodium sulfate. After removal of the solvent, the residue was distilled in vacuo to give chlorinated alcohol 28 as a colorless liquid (2.1 g, 70%). Chlorine alcohol 28_ (1.5g, 10mmol) in anhydrous dimethylformamide (5ml) was then added to a stirred solution of thiophenol (1.32g, 12mmol) and potassium t-butoxide (1.32g, 11 .3 mmol) in anhydrous dimethylformamide (25 ml). The reaction mixture was stirred at room temperature overnight and the solution was partitioned between dichloromethane and water. The organic layer was washed with aqueous sodium carbonate and water and dried over anhydrous magnesium sulfate. The solvent was evaporated in vacuo and the crude oil was purified by silica gel flash chromatography with hexane-ethyl acetate. Sulfide 29 (2.2 g, 98%) was obtained as a colorless oil. Sulfide 29 ^ (1.01 g, 4.5 mmol) was then dissolved in dry dichloromethane (40 ml) and 3-chloroperbenzoic acid (2.5 g, 11.6 mmol, Aldrich 80-85%) was stirred in portions. and added cooling from time to time. The mixture was stirred for 2 hours and then quenched with 10% sodium bicarbonate. The combined organic extracts were washed with aqueous sodium sulfite and brine and dried over magnesium sulfate. The solvent was removed in vacuo and the crude was purified by silica gel flash chromatography using hexane-ethyl acetate mixtures to give sulfone (1.1 g, 97%) as a colorless oil. To a stirred solution of sulfone (1.3 g, 5.1 mmol) and imidazole (1.5 g, 22.7 mmol) in dry dimethyl formamide (50 ml), triethylsilyl chloride (1.15 g, 7.7 mmol). The reaction mixture was kept at room temperature for 2 hours and then diluted with dichloromethane. The mixture was washed with aqueous ammonium chloride solution and water. The organic layers were dried over sodium sulfate and the solvent was removed in vacuo. The residue was purified by silica gel flash chromatography. First hexaethyldisiloxane was eluted with hexane. The triethylsilyl-protected sulfone 31 (1.8 g, 97%) was eluted with hexane-ethyl acetate 9: 1 as a colorless liquid: IR (net): 3045, 2940, 1440, 1360, 1130, 1020 cm-1; 1 H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 0.518 (6H, q, J = 6.2 Hz, Si-CH2), 0.899 (9H, t, J = 6.2 HZ, Si-C-CH3) S 0.518 (6H , q, J = 6.2 Hz, Si-CH 2), 0.899 (9H, t, J = 6.2 Hz, Si-C-CH 3), 1.142 (6H, s, CH 3), 1.307-1.462 (4H, m), 1.655-1.738 (2H, m, H-4), 3.080-3.122 (2H, m, H-2), 7.567 (2H, t, J = 6.8 Hz, H-aryl meta), 7.648 ( 1H, t, J-6.8 Hz, H-aryl para), 7.916 (2H, d, J = 6.83 Hz, H-aryl ortho); MS (EI, 70 eV): m / z (relative, intensity) 372 (M +, 2), 341 (100), 229 (2), 227 (18), 173 (24), 103 (22), 75 ( 459, 55 (33).

(b) Bereiding van sulfonzinketeneenheid (35^(b) Preparation of sulfone zinc chain unit (35 ^

Een oplossing van 6-broomhexanoylchloride (32) (3,8 g, 2,8 ml, 18 mmol) in watervrij tetrahydrofuran (10 ml) werd druppelsgewijze onder hevig roeren in 15-20 minuten onder argonatmosfeer bij -10°C toegevoegd aan een oplossing van methylmagnesiumbromide (14 ml 3M oplossing in ether) in watervrij tetrahydrofuran (15 ml) . Het mengsel werd 2 uur bij kamertemperatuur geroerd, tot 0°C gekoeld en zorgvuldig ontleed met 1:1 verdund zoutzuur. Het mengsel werd met ether geëxtraheerd en de gecombineerde organische extracten werden met water gewassen, op watervrij magne-siumsulfaat gedroogd en ingedampt onder verkrijging van de broomalcohol (32) als een kleurloze olie (3,6 g) (94%).A solution of 6-bromhexanoyl chloride (32) (3.8 g, 2.8 ml, 18 mmol) in anhydrous tetrahydrofuran (10 ml) was added dropwise with vigorous stirring for 15-20 minutes at -10 ° C under argon atmosphere. solution of methyl magnesium bromide (14 ml 3M solution in ether) in anhydrous tetrahydrofuran (15 ml). The mixture was stirred at room temperature for 2 hours, cooled to 0 ° C and carefully decomposed with 1: 1 dilute hydrochloric acid. The mixture was extracted with ether and the combined organic extracts were washed with water, dried over anhydrous magnesium sulfate and evaporated to give the bromo alcohol (32) as a colorless oil (3.6 g) (94%).

De broomalcohol (3,4 g, 16 mmol) werd 4,5 uur bij 70°C behandeld met benzeensulfinezuurnatriumzout (3,3 g, 20 mmol) in watervrij dimethylformamide. Het mengsel werd op ijs uitgegoten, met dichloormethaan geëxtraheerd, gewassen met IN HCl, water en 10% NaHC03-oplossing, op watervrij MgS04 gedroogd, gefiltreerd en ingedampt onder verkrijging van het sulfon (34) dat werd gezuiverd door flitschromato-grafie over silicagel en werd geëlueerd met 40-50% ethyl-acetaat in hexaan onder verkrijging van het sulfon, dat iets van de overeenkomstige sulfinezuurester bevatte (4,18 g, 98%) MS, m/z 270 (M+) , 255 (M+-15) , 77, 59.The bromo alcohol (3.4 g, 16 mmol) was treated with benzenesulfinic acid sodium salt (3.3 g, 20 mmol) in anhydrous dimethylformamide at 70 ° C for 4.5 hours. The mixture was poured on ice, extracted with dichloromethane, washed with 1N HCl, water and 10% NaHCO 3 solution, dried over anhydrous MgSO 4, filtered and evaporated to give the sulfone (34) which was purified by flash chromatography on silica gel and was eluted with 40-50% ethyl acetate in hexane to give the sulfone containing some of the corresponding sulfinic acid ester (4.18 g, 98%) MS, m / z 270 (M +), 255 (M + -15) , 77, 59.

Bij een geroerde oplossing van het sulfon (34) (4 g, 14 mmol) en imidazool (3r8 g, 55 mmol) in watervrij dimethylformamide (13 ml) werd triethylsilylchloride (4,6 g, 5,1 ml, 30 mmol) gevoegd. Het reactiemengsel werd 2 uur bij kamertemperatuur geroerd, op ijswater uitgegoten, met ether geëxtraheerd, op watervrij MgS04 gedroogd, gefiltreerd en ingedampt. Het residu werd door flitschromatogra-fie gezuiverd. Eerst werd hexaethyldisiloxan met hexaan geëlueerd. 3% Ethylacetaat in hexaan elueerde de sulfine-zuurester met iets van het sulfon en 10% ethylacetaat in hexaan elueerde het beschermde, zuivere sulfon (35) (3,4 g, 60%). Analyse. Berekend voor CjgH^OjSSi C, 62,45%, H, 9,43%, S 38,34%. Gevonden C, 61,97%, H, 9,45%, S, 8,33% MS, m/z (relatieve intensiteit) 355 (100) (M+-29), 227 (15), 173 (35), 103 (43), 75 (95), 55 (23), NMR (400 MHz, CDC13) , 0,54 (6H, q, J=7 Hz, Si-CH2), 0,94 (9H, t, J=8 Hz, Si-C-CH3), 1,15 (6H, S, CH3), 1,31-1,36 (4H, m) , 3,08-3,12 (2H, m, H=2), 7,57 (2H, t, J=6,8 Hz, H-aryl-meta) , 7,66 (1H, t), H-aryl para), 7,92 (2H, d, J=6,8 Hz, H-aryl ortho).To a stirred solution of the sulfone (34) (4g, 14mmol) and imidazole (3r8g, 55mmol) in anhydrous dimethylformamide (13ml) was added triethylsilyl chloride (4.6g, 5.1ml, 30mmol) . The reaction mixture was stirred at room temperature for 2 hours, poured onto ice water, extracted with ether, dried over anhydrous MgSO 4, filtered and evaporated. The residue was purified by flash chromatography. Hexaethyldisiloxane was first eluted with hexane. 3% Ethyl acetate in hexane eluted the sulfinic acid ester with some of the sulfone and 10% ethyl acetate in hexane eluted the protected pure sulfone (35) (3.4 g, 60%). Analysis. Calcd for C18 H18 OjSSi C, 62.45%, H, 9.43%, S 38.34%. Found C, 61.97%, H, 9.45%, S, 8.33% MS, m / z (relative intensity) 355 (100) (M + -29), 227 (15), 173 (35), 103 (43), 75 (95), 55 (23), NMR (400 MHz, CDCl 3), 0.54 (6H, q, J = 7 Hz, Si-CH 2), 0.94 (9H, t, J = 8 Hz, Si-C-CH 3), 1.15 (6H, S, CH 3), 1.31-1.36 (4H, m), 3.08-3.12 (2H, m, H = 2 ), 7.57 (2H, t, J = 6.8 Hz, H-aryl-meta), 7.66 (1H, t), H-aryl para), 7.92 (2H, d, J = 6 .8 Hz, H-aryl ortho).

Biologische werking.Biological action.

Het nieuwe homoloog (25) werd zowel op differen-tiatiewerking als calcemische werking beproefd onder gebruik van in de techniek gevestigde proefmethoden. De proefmethoden en verkregen resultaten worden in meer detail beschreven in de volgende voorbeelden.The new homolog (25) was tested for both differentiation and calcemic activity using art-based test methods. The test methods and results obtained are described in more detail in the following examples.

Voorbeeld 5Example 5

Meting van differentiatiewerking van dihomover-binding (25) in HL-60 cellen (Tabel 1).Measurement of differentiation activity of dihomover bond (25) in HL-60 cells (Table 1).

Differentiatiegraad van HL-60 cellen (menselijke leukemiecellen) in respons op proefverbindingen werd vastgesteld met drie verschillende proeven: NTB-verminde-ring, fagocytose en esterasewerking. De eerste twee proeven werden uitgevoerd volgens de algemene werkwijze, gegeven door DeLuca et al. in US-A-4.717.721. De derde proef, het meten van niet specifieke esterasewerking als merker voor differentiatie, werd uitgevoerd volgens de methode, gegeven in Sigma Kit No. 90 verkrijgbaar bij Sigma Chemical Corp., St. Louis, MO [zie ook Ostrem et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 84/ 2610-2614 (1987); Ostrem et al., J. Biol. Chem. 262. 14164-13171 (1987)]. Resultaten worden getoond in onderstaande tabel 1. Gegevens worden vermeld als percentage gedifferentieerde cellen, verkregen na behandeling met verschillende concentraties l,25-(OH)2D3 (gebruikt als vergelijkingsstandaard) of vitamine D proefverbinding.Differentiation degree of HL-60 cells (human leukemia cells) in response to test compounds was determined in three different experiments: NTB reduction, phagocytosis and esterase activity. The first two tests were performed according to the general procedure given by DeLuca et al. In US-A-4,717,721. The third test, measuring nonspecific esterase activity as a marker for differentiation, was performed according to the method given in Sigma Kit No. 90 available from Sigma Chemical Corp., St. Louis, MO [see also Ostrem et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 84 / 2610-2614 (1987); Ostrem et al., J. Biol. Chem. 262, 14164-13171 (1987)]. Results are shown in Table 1 below. Data are reported as percent of differentiated cells obtained after treatment with different concentrations of 1,25- (OH) 2D3 (used as comparative standard) or Vitamin D test compound.

Tabel 1Table 1

Vergelijking van differentiatiewerking van 1,25-(OH)2D3 en dihomozijketenverbinding in HL-60 cellen in cultuur.Comparison of differentiation activity of 1.25- (OH) 2D3 and dihomo side chain compound in HL-60 cells in culture.

Voorbeeld 6Example 6

Calcemische werking van dihomoverbindincr f25) faV Werking op intestinaal calciumtransport (Tabel 2).Calcemic effect of dihomo-binding agent f25) faV Effect on intestinal calcium transport (Table 2).

Mannelijke, pas gespeende ratten waren betrokken van de Harlan-Sprague Dawley Company of Madison, Wisconsin, en werden gevoederd met het rachitogene dieet (0,02% Ca, 0,3% P), beschreven door Suda et al. (J. Nutr. 100. 1049-1052, 1970). Zij werden in totaal ad libitum met dit dieet gevoederd. Aan het einde van de derde week werden de dieren verdeeld in groepen van elk zes ratten. Eén groep ontving 7 dagen lang interperitoneaal een dagelijkse injectie van drager (0,1 ml 95% propyleenglycol, 5% ethanol). De overige groepen ontvingen in dezelfde tijd dezelfde hoeveelheid drager, die echter één van de volgende doses bevatte: 12,5 ng of 25 ng of l,25-(OH)2D3 of 125 ng 24-dihomo-la,25-dihydroxy-22-dehydrovitamine D3 (verbinding 25) . 24 Uur na de laatste dosis werden de dieren afgemaakt, werden de darmen verwijderd en werden de duodenaalsegmenten gebruikt voor het meten van intestinaal calciumtransport als beschreven door Halloran en DeLuca (Arch. Biochem. Biophys. 208. 477-486, 1981). Resultaten worden gegeven in onder staande tabel 2.Male, weaned rats were sourced from the Harlan-Sprague Dawley Company of Madison, Wisconsin and fed the rachitogenic diet (0.02% Ca, 0.3% P) described by Suda et al. (J. Nutr 100, 1049-1052, 1970). They were fed this diet in total ad libitum. At the end of the third week, the animals were divided into groups of six rats each. One group received a daily injection of vehicle (0.1 ml 95% propylene glycol, 5% ethanol) interperitoneally for 7 days. The other groups received the same amount of carrier at the same time, however containing one of the following doses: 12.5 ng or 25 ng or 1.25- (OH) 2D3 or 125 ng 24-dihomo-1a, 25-dihydroxy-22 -dehydrovitamin D3 (compound 25). 24 hours after the last dose, the animals were sacrificed, the intestines were removed and the duodenal segments were used to measure intestinal calcium transport as described by Halloran and DeLuca (Arch. Biochem. Biophys. 208, 477-486, 1981). Results are given in Table 2 below.

Tabel 2Table 2

Werking op intestinaal calciumtransport van 1,25-(OH)2D3 en zijketen homoloog in ratten.Effect on intestinal calcium transport of 1.25- (OH) 2D3 and side chain homologous in rats.

(b) Meting van calciumbeendermobilisatie (Tabel 3)(b) Measurement of calcium bone mobilization (Table 3)

Mannelijke, pas gespeende ratten werden betrokken van de Harlan Sprague Dawley Company en vier weken gevoederd met het vitamine D-deficiënte dieet met laag calcium-gehalte (0,02% Ca, 0,3% P), beschreven door Suda et al. (J. Nutr. 100. 1049-1052, 1970). Aan het einde van de derde week werden de dieren verdeeld in groepen van elk zes dieren en ontvingen de aangegeven doses (zie tabel 3) opgelost in 0,1 ml 95% propyleenglycol en 5% ethanol. De controlegroep ontving slechts de oplosmiddeldrager. De andere groepen ontvingen 7 dagen lang elke dag de aangegeven dosis 1,25- (OH) 2D3 of dihomoverbinding (25). Aan het einde van de 7 dagen dosering werd seriumcalcium gemeten door atoomabsorptie. Resultaten van twee dergelijke experimenten worden gegeven in onderstaande tabel 3.Male, weaned rats were purchased from the Harlan Sprague Dawley Company and fed the low calcium vitamin D deficient diet (0.02% Ca, 0.3% P), described by Suda et al., For four weeks. J. Nutr. 100, 1049-1052, 1970). At the end of the third week, the animals were divided into groups of six animals each and the indicated doses (see Table 3) were dissolved in 0.1 ml of 95% propylene glycol and 5% ethanol. The control group received only the solvent carrier. The other groups received the indicated dose of 1,25- (OH) 2D3 or dihomo compound (25) every day for 7 days. At the end of the 7 day dose, serum calcium was measured by atomic absorption. Results of two such experiments are given in Table 3 below.

Tabel 3Table 3

Calciumbeendermobilisatiewerking (serumcalcium-spiegels) van l,25-(OH)2D3 en zijketenhomoloog in ratten.Calcium bone mobilization activity (serum calcium levels) of 1,25- (OH) 2D3 and side chain homolog in rats.

De in tabel 1 gegeven resultaten wijzen er duidelijk op, dat dihomoanaloog _2J5 onderscheidenlijk potenter is dan l,25-(OH)2D3 bij het opwekken van de differentiatie van leukemiecellen tot normale monocytcellen. Zo produceert 1,25-(0H)2D3 bijvoorbeeld bij een concentratie 1 x 10*8 molair 55-61% gedifferentieerde cellen, terwijl verbinding (25) daarentegen bij dezelfde concentratie 78% differentiatie geeft. In aanmerking genomen, dat een concentratie van 1 x 10’7 molair van l,25-(OH)2D3 vereist is voor het verkrijgen van dezelfde differentiatiegraad (ongeveer 90%), als wordt geproduceerd door een concentratie van 5 x 10'8 molair van het dihomoanaloog (circa 92%), kan men de gevolgtrekking maken, dat analoog 25 als diffe-rentiatiemiddel in de orde van 5 x potenter is dan 1,25-(OH)2D3.The results given in Table 1 clearly indicate that dihomo analogue J2J5 is respectively more potent than 1.25- (OH) 2D3 in inducing the differentiation of leukemia cells into normal monocyte cells. For example, at a concentration of 1 x 10 * 8 molar, 1.25- (0H) 2D3 produces 55-61% differentiated cells, while compound (25), at the same concentration, gives 78% differentiation. Considering that a concentration of 1 x 10'7 molar of 1.25- (OH) 2D3 is required to obtain the same degree of differentiation (about 90%) as is produced by a concentration of 5 x 10'8 molar From the di-analog (about 92%), it can be concluded that analog 25 as a differentiator is on the order of 5 times more potent than 1.25- (OH) 2D3.

In scherp contrast vertoont de dihomoverbinding zeer geringe calcemische werking vergeleken bij 1,25-(OH)2D3. Deze gevolgtrekking wordt gesteund door de resultaten van tabellen 2 en 3. De proef op intestinaal calcium-transport, weergegeven door tabel 2, laat bijvoorbeeld zien, dat de bekende aktieve metaboliet, l,25-(OH)2D3, naar verwachting zeer uitgesproken respons (vergeleken bij de controle) uitlokt bij toediening in doses van 12,5 of 25 ng/dag gedurende 7 dagen. In het geval van de nieuwe dihomoverbinding (25) zijn echter doses van 125 ng/dag gedurende 7 dagen nodig voor het uitlokken van een respons en zelfs bij dergelijke hoge doseringen is de respons matig en wel slechts iets meer dan de helft als door l,25-(OH)2D3 wordt opgewekt bij een tienvoudig lagere dosis. Bij deze proef is het nieuwe dihomoanaloog dan ook tenminste 10 maal minder aktief dan 1,25-(OH)2D3.In sharp contrast, the dihomo compound exhibits very low calcemic activity compared to 1.25- (OH) 2D3. This conclusion is supported by the results of Tables 2 and 3. The intestinal calcium transport assay, shown by Table 2, shows, for example, that the known active metabolite, 1,25- (OH) 2D3, is expected to have a very pronounced response. (compared to control) provoked when administered at doses of 12.5 or 25 ng / day for 7 days. However, in the case of the new dihomo compound (25), doses of 125 ng / day for 7 days are required to elicit a response, and even at such high doses, the response is moderate, only slightly more than half as by 1, 25- (OH) 2D3 is generated at a tenfold lower dose. In this test, the new diho analog is therefore at least 10 times less active than 1.25- (OH) 2D3.

Dezelfde gevolgtrekking kan worden gemaakt uit de resultaten van de beendercalciummobilisatieproef, getoond in tabel 3. Hier zijn doses van 125 en 250 ng/dag (toegediend gedurende 7 dagen) van het dihomoanaloog (25) nodig voor het verkrijgen van dezelfde mate van respons als wordt geproduceerd door respectievelijk 12,5 en 25 ng 1,25-(OH)2D3. Opmerkelijk is ook het feit, dat een verdere toeneming in de dosis van de dihomoverbinding (tot 500 ng/dag) de beendercalciummobilisatierespons niet verder opvoert, maar, ten hoogste onderdrukt (zie tabel 3). Bij een tweede experiment — ook getabelleerd in tabel 3 — waarbij l,25-(OH)2D3 weer een zeer betekenisvolle respons uitlokte (vergeleken bij controle) bij doses van 12,5 en 25 ng/dag, vertoonde het dihomoanaloog geen werking bij een dosis van 125 ng/dag. Bij een derde experiment, waarbij het dihomoanaloog (25) werd beproefd over een dosistraject tot 1000 ng/dag, lokte de verbinding bij geen enkel dosispeil calciummobilisatierespons uit, wat erop wees, dat de stof nagenoeg geen invloed heeft op het opvoeren van ceriumcal-cium ten koste van been. Deze beendermobilisatieproef is dan ook in volledige overeenstemming met de calciumtrans-portgegevens van tabel 2 en laat duidelijk zien, dat het nieuwe dihomoanaloog 25 in calcemische werking vele malen minder potent is dan l,25-(OH)2D3.The same conclusion can be drawn from the results of the Bone Calcium Mobilization Test shown in Table 3. Here doses of 125 and 250 ng / day (administered over 7 days) of the dihydro analog (25) are required to obtain the same degree of response as is produced by 12.5 and 25 ng of 1.25- (OH) 2D3, respectively. It is also noteworthy that a further increase in the dose of the dihomo compound (up to 500 ng / day) does not further increase, but suppress at the most the bone calcium mobilization response (see Table 3). In a second experiment - also tabulated in Table 3 - in which 1,25- (OH) 2D3 again elicited a very meaningful response (compared to control) at doses of 12.5 and 25 ng / day, the dihomo analog showed no activity at a dose of 125 ng / day. In a third experiment, in which the dihydro analog (25) was tested over a dose range up to 1000 ng / day, the compound did not elicit a calcium mobilization response at any dose level, indicating that the substance has virtually no effect on boosting cerium calcium at the expense of bone. Therefore, this bone mobilization assay is in full agreement with the calcium transport data of Table 2 and clearly shows that the new dihydro analog 25 in calcemic action is many times less potent than 1.25- (OH) 2D3.

Hetzelfde aktiviteitspatroon wordt waargenomen voor de trihomoverbinding 26 van de uitvinding. Ook deze stof vertoont een zeer gunstige en ingrijpend verhoogde differentiatie/calcemische werkingsverhouding door uitgesproken aktiviteit te vertonen bij het opwekken van HL-60 celdifferentiatie zonder respons van betekenis uit te lokken (vergeleken bij de controle) op cerumcalciumspiegels bij ratten.The same activity pattern is observed for the trihomo compound 26 of the invention. This substance, too, exhibits a very favorable and dramatically increased differentiation / calcemic activity ratio by exhibiting pronounced activity in inducing HL-60 cell differentiation without eliciting a significant response (compared to the control) to cerum calcium levels in rats.

Dit type aktiviteitspatroon is natuurlijk juist wat gewenst is voor een verbinding, bedoeld voor gebruik als differentiatiemiddel bij de behandeling van neoplas-tische ziekten. De gewenste werking, de celdifferentiatie van kwaadaardige cellen, is sterk uitgesproken, terwijl de ongewenste werking, de calcemische werking, ingrijpend is verminderd, wat dus een zeer sterk opgevoerde differen-tiatie/calcemische werkingsverhouding geeft. Bekende la-hydroxyvitamine D-verbindingen zijn effectieve therapeutische middelen gebleken voor de behandeling van leukemi-sche ziekten (Suda et al., US-A-4.39l.802). Gebaseerd op de daarin gegeven bioproefgegevens, kan men de gevolgtrekking maken, dat de nieuwe zijketenhomoverbindingen van de uitvinding, bij toediening in hetzelfde dosispeil als de bekende verbindingen, geen of minder dan eentiende van de ongewenste calcemische werking van de bekende verbindingen zullen vertonen, waardoor het probleem van het opwekken van uitermate verhoogde bloedcalciumspiegels bij de behandelde patiënten grotendeels is verdwenen. Voorts kan men op basis van de in tabel l vermelde gegevens verwachten, dat de nieuwe homoverbindingen, een zeer sterke differentiatie-werking vertonen tegen kwaadaardige cellen, vooral leuke-miecellen, wat dus hun therapeutisch nut verder vergroot. Zodoende vertegenwoordigen de nieuwe verbindingen van de uitvinding een effectieve praktische toepassing van het concept van differentiatietherapie van kwaadaardige ziekten en hun aktiviteitspatronen doen duidelijk vermoeden, dat zij therapeutische middelen zijn, die bij dergelijke behandeling de voorkeur verdienen.This type of activity pattern is, of course, just what is desired for a compound intended for use as a differentiator in the treatment of neoplastic diseases. The desired action, the cell differentiation of malignant cells, is strongly pronounced, while the undesired action, the calcemic action, is drastically reduced, thus giving a very strongly increased differentiation / calcemic action ratio. Known 1a-hydroxyvitamin D compounds have been shown to be effective therapeutic agents for the treatment of leukemic diseases (Suda et al., US-A-4,391,802). Based on the bioproof data provided therein, it can be concluded that the novel side chain homo compounds of the invention, when administered at the same dose level as the known compounds, will exhibit none or less than one-tenth of the undesired calcemic activity of the known compounds. problem of inducing extremely elevated blood calcium levels in the treated patients has largely disappeared. Furthermore, based on the data listed in Table 1, it can be expected that the new gay compounds exhibit a very strong differentiation activity against malignant cells, especially leukemia cells, thus further enhancing their therapeutic utility. Thus, the novel compounds of the invention represent an effective practical application of the concept of differentiation therapy from malignant diseases and their activity patterns clearly suggest that they are the preferred therapeutic agents in such treatment.

Ter behandeling kan men deze verbindingen verwerken als oplossingen in onschadelijke oplosmiddelen, of als emulsies, suspensies of dispersies in geschikte en onschadelijke oplosmiddelen of dragers, of als pillen, tabletten of capsules, volgens de in de techniek gebruikelijke methoden. Dergelijke samenstellingen kunnen ook andere farmaceutisch aanvaardbare en niet toxische excipiënten bevatten, zoals stabilisatoren, antioxydanten, bindmiddelen, kleurstoffen, of emulgatoren of smaakmodificatoren.For treatment, these compounds can be processed as solutions in harmless solvents, or as emulsions, suspensions or dispersions in suitable and harmless solvents or carriers, or as pills, tablets or capsules, according to the methods customary in the art. Such compositions may also contain other pharmaceutically acceptable and non-toxic excipients, such as stabilizers, antioxidants, binders, dyes, or emulsifiers or flavor modifiers.

De verbindingen worden voordelig toegediend door injectie of door intraveneus infuus van geschikte steriele oplossingen, of in de vorm van orale doses via het spijsverteringskanaal. Ter behandeling van menselijke leukemie worden de homovitamine D-verbindingen van de uitvinding aan patiënten toegediend in doses, die voor het opwekken van de differentiatie van leukemische cellen tot macrofagen voldoende zijn. Geschikte doseerhoeveelheden zijn 0,5 μg tot 50 μg per dag, met dien verstande, dat de doses kunnen worden afgesteld (dat wil zeggen nog verder kunnen worden verhoogd) op de ernst van de ziekte of de respons of de toestand van de patiënt, zoals in de techniek welbekend is.The compounds are advantageously administered by injection or by intravenous infusion of suitable sterile solutions, or in the form of oral doses through the digestive tract. For the treatment of human leukemia, the homovitamine D compounds of the invention are administered to patients in doses sufficient to induce the differentiation of leukemic cells into macrophages. Suitable dosage amounts are 0.5 µg to 50 µg per day, provided that the doses can be adjusted (i.e. increased further) according to the severity of the disease or the patient's response or condition, such as is well known in the art.

Claims (14)

1. Verbindingen met bijgaande struktuurformule I, waarin X, Y en Z, die hetzelfde of verschillend kunnen zijn, zijn gekozen uit de groep, bestaande uit waterstof en een hydroxylbeschermende groep en n 3 of 4 is.1. Compounds of the accompanying structural formula I, wherein X, Y and Z, which may be the same or different, are selected from the group consisting of hydrogen and a hydroxyl protecting group and n is 3 or 4. 2. Verbindingen volgens conclusie 1, waarin X, Y en Z elk waterstof zijn. 3. 24-Dihomo-la,25-dihydroxy-22-dehydrovitamine D3* 4. 24-Trihomo-la,25-dihydroxy-2 2-dehydrovitamine D3.Compounds according to claim 1, wherein X, Y and Z are each hydrogen. 3. 24-Dihomo-1a, 25-dihydroxy-22-dehydrovitamin D3 * 4. 24-Trihomo-1a, 25-dihydroxy-2 2-dehydrovitamin D3. 5. Verbindingen met de struktuurformule II, waarin X, Y en Z, die hetzelfde of verschillend kunnen zijn, zijn gekozen uit de groep, bestaande uit waterstof en een hydroxylbeschermende groep en n 3 of 4 is.5. Compounds of structural formula II, wherein X, Y and Z, which may be the same or different, are selected from the group consisting of hydrogen and a hydroxyl protecting group and n is 3 or 4. 6. Farmaceutisch preparaat, dat tenminste één verbinding volgens conclusie 1 bevat naast farmaceutisch aanvaardbare excipiënten.A pharmaceutical composition containing at least one compound according to claim 1 in addition to pharmaceutically acceptable excipients. 7. Farmaceutisch preparaat volgens conclusie 6, dat 24-dihomo-la,25-dihydroxy-22-dehydrovitamine D3 bevat.The pharmaceutical composition according to claim 6, which contains 24-dihomo-1a, 25-dihydroxy-22-dehydrovitamin D3. 8. Farmaceutisch preparaat volgens conclusie 6, dat 24-trihomo-la,25-dihydroxy-22-dehydrovitamine D3 bevat.The pharmaceutical composition according to claim 6, which contains 24-trihomo-1a, 25-dihydroxy-22-dehydrovitamin D3. 9. Farmaceutisch preparaat volgens conclusie 7, dat het vitaminehomoloog bevat in een hoeveelheid van ongeveer 0,5 vg tot ongeveer 50 pq*The pharmaceutical composition according to claim 7, which contains the vitamin homolog in an amount from about 0.5 µg to about 50 µg * 10. Farmaceutisch preparaat volgens conclusie 8, dat het vitaminehomoloog bevat in een hoeveelheid van ongeveer 0,5 tot ongeveer 50 /xg.The pharmaceutical composition according to claim 8, which contains the vitamin homolog in an amount from about 0.5 to about 50 µg. 11. Werkwijze voor het opwekken en opvoeren van celdifferentiatie in kwaadaardige cellen, waarbij men deze cellen blootstelt aan tenminste één la-hydroxyvitamine D-homoloog volgens conclusie 1.A method of inducing and enhancing cell differentiation in malignant cells, exposing these cells to at least one 1α-hydroxyvitamin D homolog according to claim 1. 12. Werkwijze volgens conclusie 11, waarbij het la-hydroxyvitamine D-homoloog 24-dihomo-la,25-dihydroxy-22-dehydrovitamine D3 is.The method of claim 11, wherein the 1a-hydroxyvitamin D homolog is 24-dihomo-1a, 25-dihydroxy-22-dehydrovitamin D3. 13. Werkwijze volgens conclusie 11, waarbij het la-hydroxyvitamine D-homoloog 24-trihomo-la,25-dihydroxy- 22-dehydrovitamine D3 is.The method of claim 11, wherein the 1a-hydroxyvitamin D-homolog is 24-trihomo-1a, 25-dihydroxy-22-dehydrovitamin D3. 14. Werkwijze voor het behandelen van neoplas-tische ziekten, waarbij men aan een patiënt met een neo-plastische ziekten een effectieve dosis toedient van een Ια-hydroxyvitamine D-homoloog volgens conclusie 1.A method of treating neoplastic diseases, wherein an effective dose of an alpha-hydroxyvitamin D homolog according to claim 1 is administered to a patient with a neoplastic disease. 15. Werkwijze volgens conclusie 14, waarbij het toegediende Ια-hydroxyvitamine D-homoloog 24-dihomo-la,25-dihydroxy-22-dehydrovitamine D3 is.The method of claim 14, wherein the administered α-hydroxyvitamin D homolog is 24-dihomo-1a, 25-dihydroxy-22-dehydrovitamin D3. 16. Werkwijze volgens conclusie 14, waarbij het toegediende Ια-hydroxyvitamine D-homoloog 24-trihomo-la,25-dihydroxy-22-dehydrovitamine D3 is.The method of claim 14, wherein the administered α-hydroxyvitamin D homolog is 24-trihomo-1a, 25-dihydroxy-22-dehydrovitamin D3.