KR940003360B1 - Side chain unsaturated 1 alpha-hydroxyvitamin d homologs - Google Patents

Abstract

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Description

[발명의 명칭][Name of invention]

불포화 측쇄를 갖는 1α-히드록시비타민 D동족체1α-hydroxyvitamin D Homolog with Unsaturated Side Chains

[발명의 상세한 설명]Detailed description of the invention

본 발명은 종양세포를 정상 세포로 분화시키는 것을 유발하는데 있어서 특이적 활성을 갖는 신규 비타민 D화합물에 관한 것이다. 보다 구체적으로, 본 발명은 불포화 측쇄 및 신장된 측쇄를 갖는 1α,25-디히드록시비타민 D₃[1,25-(OH)₂D₃]의 유사체에 관한 것으로서 이것은 종양 세포를 분화시키는데 있어서 증가된 작용을, 칼슘 대사에 있어서 훨씬 감소된 작용을 나타냄으로써 항종양제로서의 선택적인 작용을 갖는다.The present invention relates to novel vitamin D compounds having specific activity in causing differentiation of tumor cells into normal cells. More specifically, the present invention relates to analogs of 1α, 25-dihydroxyvitamin D ₃ [1,25- (OH) ₂ D ₃ ] with unsaturated side chains and extended side chains, which increase in differentiating tumor cells. The selective action as an anti-tumor agent by exhibiting a much reduced action on calcium metabolism.

[발명의 배경][Background of invention]

칼슘 대사 및 정상적인 뼈의 성장 및 발달을 조절하는데 있어서 D비타민군(비타민(D₃또는 D₂))의 활성은 모 비타민의 특성 히드록시화 형태로의 대사를 필요로 하는 것으로 알려졌다. 구체적으로, 동물 또는 사람에 있어서 비타민 D₃로부터 통상적으로 형성된 이히드록시화 대사물질인 1α,25-디히드록시비타민 D₃[1,25-(OH)₂D₃]가 장에서의 칼슘 운반 및 뼈로부터의 칼슘 흡수(뼈의 이동화)를 자극하는데 관여하므로 생물체의 전체 혈중 칼슘 농도를 조절하는 활성 종(species)이라는 것이 입증되었다(비타민 D대사물질 또는 유사체의 칼슘 관련작용을, 이후의 본 명세서에서 총체적으로 화합물의 “칼세믹 활성” 또는 “칼세믹 작용”으로 칭함). 또한, 예를들면, 1α-히드록시비타민 D₃, 1α-히드록시비타민 D₂, 1α,25-디히드록시비타민 D₂또는 1,25-(OH)₂D₃의 플루오로치환 유도체와 같은 1,25-(OH)₂D₃의 특정 구조적 유사체도 고도의 활성을 갖는 칼세믹제로 알려져 왔으며, 그 결과 1,25-(OH)₂D₃및 그의 활성 유사체가 신성골이영양증(腎姓骨異營養症), 비타민 D-내성 구루병 또는 골다공증 및 관련 질병과 같은 다양한 칼슘 대사 및 뼈 질병의 예방 및 치료에 있어서 약품으로 사용되고 권유되어 왔다.The activity of the D-vitamin group (vitamin (D ₃ or D ₂ )) in regulating calcium metabolism and normal bone growth and development is known to require metabolism of the parent vitamin in the characteristic hydroxylated form. Specifically, 1α, 25-dihydroxyvitamin D ₃ [1,25- (OH) ₂ D ₃ ], a dihydroxylated metabolite commonly formed from vitamin D ₃ in animals or humans, transports calcium in the intestine And is involved in stimulating calcium uptake (bone migration) from bone and thus has been demonstrated to be an active species that regulates the total blood calcium concentration in living organisms (see below for the calcium-related action of vitamin D metabolites or analogs). Collectively referred to herein as the “calcemic activity” or “calcemic action” of a compound). Also, for example, 1α- hydroxy-vitamin D _3, 1α- hydroxy-vitamin D _2, 1α, 25- dihydroxy vitamin D ₂ or 1,25- (OH) ₂ D ₃ of the fluoro substituted derivatives, such as Certain structural analogues of 1,25- (OH) ₂ D _{3 have} also been known to be highly active calcemic agents, resulting in 1,25- (OH) ₂ D ₃ and its active analogs. Iii), has been used and recommended as a medicament in the prevention and treatment of various calcium metabolism and bone diseases such as vitamin D-resistant rickets or osteoporosis and related diseases.

보다 최근에는 1,25-(OH)₂D₃가 상기의 잘 알려진 “칼세믹 작용”이외에 다른 생물학적 기능을 나타낸다는 것이 발견되었다. 예를들면, 1,25-(OH)₂D₃및 밀접한 관련 유사체(1α-OH-D₃, 1,25(OH)₂D₂, 플루오로-치환 유사체 등)가 세포 분화를 유발할 수 있는 것으로 밝혀졌다[Abe등, Proc.Natl.Acad.Sci.USA 제78권, 4990페이지(1981년) ; Honma등, Proc.Natl.Acad.Sci.USA 제80권, 201페이지(1983)]. 구체적으로 1,25-(OH)₂D₃및 그의 유사체는 배양중의 종양 세포(즉, 인체 백혈병 세포)의 증식을 억제하고 이들을 정상 대식형 세포로 전환시키는 것으로 밝혀졌다. (이후의 본 명세서에서, 이러한 형태의 작용을 총체적으로 비타민 D 화합물의 “분화 작용”으로 나타냄). 분화 유발제로서 이들의 뛰어난 효능 때문에, 이들 비타민 D 유도체는 잠재적으로는 항암제로 유용하며, 실제로 이들의 인체 백혈병 치료용의 용도가 제안되었다. (Suda등, 미합중국 특허 제4,391,802호). 그러나, 이들 화합물이 배양 중의 종양 세포를 분화시키는데 있어서는 고도의 효능을 나타내지만, 생체 내에서는 이들의 동일하게 높은 칼세믹 작용이 실질적인 항암제로서의 이들의 용도를 제한하거나 또는 방해한다. 따라서 1,25-(OH)₂D₃또는 그의 플루오로화 유도체는 대단히 강력한 화합물이다. 이들 유사한 화합물들은 항암(백혈병 억제)제로서의 용도로 유효하기 위한 생체내 필요 농도에서 이들의 본질적인 칼세믹 작용에 의해 혈중 칼슘 농도를 위험할 정도로 증가시킬 수 있다. 알려진 다른 비타민 D유도체는 분화 작용과 칼세믹 작용 사이의 유사한 대응 관계와 잠재적인 항암제로서의 이들의 실질적인 용도를 나타내므로 동일한 제한 및 위험성을 갖게 된다. 이러한 관찰을 통하여 확실히 항암제로서 더 높은 작용 특이성과 선택성을 가진 화합물 즉, 개선된 분화/칼세믹 작용비를 갖는 화합물에 대한 필요성을 인지하게 되었으며 이러한 연구를 고무하여 최근의 연구에 의해 분화 작용을 증진시킨 몇가지 비타민 D유도체를 제조하기에 이르렀다. 예를 들면, 그의 측쇄가 1개의 탄소 원자에 의해(사슬내 또는 그의 말단에서) 연장된 특정 1,25-(OH)₂D₃동족체는 배양 중인 백혈병 세포에 대해 1,25-(OH)₂D₃그 자체보다 현저하게 높은(약 10배의) 분화 작용을 나타낸다는 것을 발견하였다. [DuLuca등, 미합중국 특허 제4,717,721호 ; Ostrem 및 DeLuca, Steroid 제49권, 73-102페이지(1988년) ; Ostrem등, J. Biol. Chem, 제262권, 14864페이지(1987년)]. 그러나, 이들 동족체는 여전히 1,25-(OH)₂D₃의 칼세믹 작용과 거의 동등한 칼세믹 작용을 나타내는 대단히 강력한 칼세믹제이다. 따라서, 이들 화합물들은 증대된 분화/칼세믹 활성 비율의 특성을 갖지만 이들은 상기 논의한 바람직하지 못한 강력한 칼세믹 작용의 문제를 해결하지는 못한다. 선택적 분화 작용을 갖는 것으로 보고된 다른 비타민 D-관련 화합물이 제조되었으나[Ostrem등, 상기함 ; Kubodera등, Chem.Pharm.Bull.제34권, 2286-2289페이지(1986년) ; Ikekawa등, Chem.Pharm.Bull 제35권, 4362페이지 (1987년)], 이들은 본 발명의 화합물과 구조적으로 별개이며 상이하다.More recently, it has been found that 1,25- (OH) ₂ D ₃ exhibits biological functions other than the well-known “calcemic action” above. For example, 1,25- (OH) ₂ D ₃ and closely related analogues (1α-OH-D ₃ , 1,25 (OH) ₂ D ₂ , fluoro-substituted analogs, etc.) may cause cell differentiation. [Abe et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, Vol. 78, p. 4990 (1981); Honma et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA Vol. 80, p. 201 (1983). Specifically 1,25- (OH) ₂ D ₃ and its analogs have been found to inhibit the proliferation of tumor cells (ie human leukemia cells) in culture and convert them into normal macrophages. (Hereinafter, this form of action is collectively referred to as the “differentiating action” of the vitamin D compound). Because of their excellent efficacy as differentiation inducing agents, these vitamin D derivatives are potentially useful as anticancer agents, and in fact their use for the treatment of human leukemia has been proposed. (Suda et al., US Pat. No. 4,391,802). However, while these compounds show a high potency in differentiating tumor cells in culture, their equally high calcemic action in vivo limits or prevents their use as substantial anticancer agents. Thus 1,25- (OH) ₂ D ₃ or its fluorinated derivatives are very potent compounds. These similar compounds can dangerously increase blood calcium levels by their intrinsic calcemic action at the concentrations necessary in vivo to be effective for use as anticancer (leukemia inhibitor) agents. Other known vitamin D derivatives present similar limitations between differentiation and calcemic action and their practical use as potential anticancer agents and therefore have the same limitations and risks. These observations have clearly recognized the need for compounds with higher specificity and selectivity as anticancer agents, i.e. compounds with improved differentiation / calcemic effect ratios, which encouraged these studies to promote differentiation by recent studies. Several vitamin D derivatives have been produced. For example, certain 1,25- (OH) ₂ D ₃ homologs whose side chains are extended by one carbon atom (in or at the end of the chain) may be described as 1,25- (OH) ₂ for leukemia cells in culture. It was found that D ₃ exhibits a significantly higher (about 10-fold) differentiation activity than itself. DuLuca et al., US Pat. No. 4,717,721; Ostrem and DeLuca, Steroid, Vol. 49, pp. 73-102 (1988); Ostrem et al., J. Biol. Chem, Vol. 262, p. 14864 (1987)]. However, these homologues are still very powerful calcemic agents which exhibit calcemic action which is almost equivalent to the calcemic action of 1,25- (OH) ₂ D ₃ . Thus, these compounds have the property of an enhanced differentiation / calcemic activity ratio but they do not solve the problem of the undesirable powerful calcemic action discussed above. Other vitamin D-related compounds reported to have selective differentiation have been prepared [Ostrem et al., Supra; Kubodera et al., Chem. Pharm. Bull., Vol. 34, pp. 2286-2289 (1986); Ikekawa et al., Chem. Pharm. Bull, Vol. 35, page 4362 (1987), which are structurally separate and different from the compounds of the present invention.

[발명의 요약][Summary of invention]

본 발명자들은 비타민 D-관련 화합물이 이들의 분화 대 칼세믹 반응면에 있어서 바람직하고 매우 유리한 작용 유형을 나타낸다는 것을 발견하였다. 이러한 신규 비타민 유사체는 종양 세포의 증식을 억제하고 이들의 정상 단핵구 형 세포로의 분화를 유발하는 데 있어서 매우 탁월한 활성[1,25-(OH)₂D₃의 활성과 비슷하거나, 그 이상임]을 나타내나 칼세믹 작용에 관한 한 1,25-(OH)₂D₃보다 훨씬 적은 활성을 갖는다. 따라서, 이들 신규 화합물은 극적으로 증대된 분화/칼세믹 활성 비를 나타내며 이러한 특징에 의해, 이 화합물들이 종양 질병의 치료를 위한 바람직한 시약을 대표한다. 분화의 유발에 있어서는 활성이 높고 칼세믹제로서는 활성이 훨씬 낮을 경우, 이들 화합물들을 투여하여도 혈중 칼슘 농도를 과도하게 증가시키지 않으므로 높은 칼세믹 작용과 관련된 주된 실질적인 문제를 극복할 수 있다.We have found that vitamin D-related compounds exhibit a preferred and very advantageous type of action in terms of their differentiation versus calcemic response. These novel vitamin analogs have very good activity [similar to or greater than that of 1,25- (OH) ₂ D ₃ ] in inhibiting the proliferation of tumor cells and inducing their differentiation into normal monocyte-like cells. It has much less activity than 1,25- (OH) ₂ D _{3 as} far as calcemic action is concerned. Thus, these novel compounds exhibit dramatically increased differentiation / calcemic activity ratios and, by this feature, these compounds represent preferred reagents for the treatment of tumor diseases. When the activity is high in the induction of differentiation and much lower in the activity of the calcemic agent, administration of these compounds does not excessively increase the blood calcium concentration, thereby overcoming the main practical problems associated with the high calcemic action.

이들 신규 화합물은 두 개 또는 세 개의 메틸렌 단위를 탄소 사슬에 삽입시킴으로서 측쇄를 신장시킨, 불포화된 측쇄를 갖는 1,25-(OH)₂D₃의 동족체로서의 구조적 특징을 갖는다. 따라서, 이들은 다음의 일반 구조로 나타내진다.These novel compounds have structural features as homologues of 1,25- (OH) ₂ D ₃ with unsaturated side chains, in which side chains are stretched by inserting two or three methylene units into the carbon chain. Therefore, they are represented by the following general structure.

식 중에서, X, Y 및 Z는 서로 동일하거나 또는 상이할 수 있고, 수소 원자 및 히드록시 보호기로 구성되는 군 중에서 선택되고, n은 3 또는 4이다.Wherein X, Y and Z may be the same as or different from each other, are selected from the group consisting of a hydrogen atom and a hydroxy protecting group, and n is 3 or 4.

이들 화합물의 구체적이고 바람직한 예로는 24-디호모-1,25-디히드록시-22-데히드로비타민 D₃(X, Y 및 Z가 수소원자이고 n이 3인 상기 화합물) 및 24-트리호모-1,25-디히드록시-22-데히드로비타민 D₃(X, Y 및 Z가 수소원자이고 n이 4인 상기 화합물)을 들 수 있다.Specific and preferred examples of these compounds include 24-dihomo-1,25-dihydroxy- ₂₂ -dehydrovitamin D ₃ (the above compounds wherein X, Y and Z are hydrogen atoms and n is 3) and 24-trihomo -1,25-dihydroxy- ₂₂ -dehydrovitamin D ₃ (the above compounds wherein X, Y and Z are hydrogen atoms and n is 4).

이들 신규 화합물이 미합중국 특허 제4,717,721호에 나타낸 불포화된 측쇄를 갖는 24-호모-비타민 D화합물과 관련됨이 명백하다. 그러나, 신규 화합물은 특색있는 구조적 및 생물학적 특성을 갖는다. 구조적으로, 구별 가능한 특징은 2개 또는 3개의 메틸렌 단위를 삽입하여 동족체화시킨 불포화된 측쇄이며, 생물학적으로 이 화합물은 칼세믹 작용이 없거나 크게 감소된 매우 강력한 세포 분화제라는 점이다.It is evident that these novel compounds are associated with 24-homo-vitamin D compounds with unsaturated side chains as shown in US Pat. No. 4,717,721. However, new compounds have distinct structural and biological properties. Structurally, the distinguishing feature is the unsaturated side chains homologized by the insertion of two or three methylene units, and biologically the compound is a very potent cell differentiator with no or significantly reduced calcemic action.

[신규 화합물의 제조][Production of New Compound]

본 발명의 신규 화합물의 합성예를 반응식 1,2 및 3에 개략적으로 나타내었다. 반응식 1은 목적하는 1α-히드록시비타민 D-22-알데히드 중간체를 나타내고 이것은 반응식 2에 나타낸 바와 같이, 적절한 알킬페닐술폰 측쇄 단위와 결합시켰을 때 목적하는 비타민 D동족체[예, 각각의 화합물(25) 및 (26)를 제공한다. 반응식 3은 측쇄 커플링에 필요한 알킬페닐술폰 단위의 제조를 설명한다. 반응식으로 나타낸 화학 반응 단계를 위한 실험적인 상세한 과정을 다음의 구체적인 실시예에 나타내었다. 이들 실시예에서 사용된 바와 같이 아라비아 숫자(예, 1, 2, 3 등)로 표시한 화합물들은 이 반응식에서 동일 번호를 부여한 구조를 의미한다.Synthesis examples of the novel compounds of the present invention are shown schematically in Schemes 1,2 and 3. Scheme 1 represents the desired 1α-hydroxyvitamin D-22-aldehyde intermediate, which is the desired vitamin D homolog when combined with the appropriate alkylphenylsulfone side chain unit as shown in Scheme 2 [eg, each compound (25) And (26). Scheme 3 illustrates the preparation of alkylphenylsulfone units required for side chain coupling. The experimental detailed procedure for the chemical reaction step shown in the scheme is shown in the following specific examples. As used in these examples, compounds represented by Arabic numerals (eg, 1, 2, 3, etc.) refer to structures with the same numbers in this scheme.

[일반적인 방법][Common way]

3β-아세톡시-22,23-비스노르 5-콜렌산(1)은 스테랄로이드(Steralods, 뉴헴프세주 월큰 소재)사로부터 구입하였다. 기타 모든 화학약품은 상업적으로 입수가 용이한 출저로부터 구입한 최상품이었다. 용매는 표준 방법에 의해 정제하였다.3β-acetoxy-22,23-bisnor 5-cholic acid (1) was purchased from Stealoids (Walken, NH). All other chemicals were of the highest quality purchased from commercially available sources. The solvent was purified by standard methods.

EM 사이언스(뉴저지주 깁슨타운 소재)사의 UV 지시계를 갖춘 예비 도포된 실리카 겔 시트를 사용하여 박층 크로마토그래피(TLC)를 수행하였다. 용매계는 A[클로로포름-에탄올 18 : 15(v/v)], B[헥산-에틸 아세테이트 1 : 1] 및 C[헥산-에틸 아세테이트 3 : 1]를 사용하였다.Thin layer chromatography (TLC) was performed using a precoated silica gel sheet with UV indicator from EM Sciences, Gibsontown, NJ. The solvent system used was A [chloroform-ethanol 18:15 (v / v)], B [hexane-ethyl acetate 1: 1] and C [hexane-ethyl acetate 3: 1].

고성능 액체 크로마토그라피(HPLC)는 모델 6000A 용매 전달계, 모델 6 UK 유니버설 주입기 및 모델 450의 다양한 파장을 검출할 수 있는 검출기가 장착된 워터스 어소시에트(Waters Associates)사의 액체 크로마토그라피를 사용하여 수행하였다. 조르박스-실(Zorbax-Sil, Phenomenex사 제품) 컬럼(6.2mm×25cm 및 10mm×25cm)을 사용하였다. 용매계는 A(헥산 중의 3% 2-프로판올), B(헥산중의 2% 2-프로판올), C(헥산중의 6% 2-프로판올), (D : 헥산중의 10% 2-프로판올) 및 E(헥산중의 20% 2-프로판올)이었다. 실리카 겔 Sep-Pak(Water Associates) 카트리지를 HPLC 시료의 예비여과용으로 사용하였다.High performance liquid chromatography (HPLC) was performed using Waters Associates liquid chromatography with a Model 6000A solvent delivery system, a Model 6 UK Universal Injector, and a detector capable of detecting various wavelengths of the Model 450. . A Zorbax-Sil (Zorbax-Sil, Phenomenex) column (6.2 mm x 25 cm and 10 mm x 25 cm) was used. The solvent system is A (3% 2-propanol in hexane), B (2% 2-propanol in hexane), C (6% 2-propanol in hexane), (D: 10% 2-propanol in hexane) And E (20% 2-propanol in hexane). Silica gel Sep-Pak (Water Associates) cartridges were used for prefiltration of HPLC samples.

전자 충격 질량 스펙트럼(MS)을 크라토스(Kratos)S-55 데이타 시스템이 장착된 크라토스 MS-50 TC 질량 분광계로 70 eV에서 기록하였다.Electron impact mass spectra (MS) were recorded at 70 eV with a Kratos MS-50 TC mass spectrometer equipped with a Kratos S-55 data system.

자외선(Ⅳ)흡수 스펙트럼을 히다찌 모델 60-100 UV-Vis 분광 광도계로 기록하였다.Ultraviolet (IV) absorption spectra were recorded with a Hitachi Model 60-100 UV-Vis spectrophotometer.

적외선 스펙트럼을 유상 물질의 필름이나 사염화탄소 용액을 사용한 Nicolet MX-1 FT-IR분광계로 기록하였다.Infrared spectra were recorded on a Nicolet MX-1 FT-IR spectrometer using a film of oily material or carbon tetrachloride solution.

양성자 자기 공명 스펙트럼(¹H-NMR)을 내부 기준물로서 테트라메틸실란(TMS)을 함유한 CDCl₃용액 중에서 부루커(Bruker)270,400 또는 500MHz분광계로 기록하였다.Proton magnetic resonance spectra ( ¹ H-NMR) were recorded on a Bruker 270,400 or 500 MHz spectrometer in a CDCl ₃ solution containing tetramethylsilane (TMS) as an internal reference.

[실시예 1]Example 1

보호 C-22-알데히드의 합성 (화합물 18 ; 반응식 1)Synthesis of Protective C-22-aldehyde (Compound 18; Scheme 1)

이 알데히드는 쿠트너 등[Kutner et al, Tet. Letters 제28권, 6129-6132페이지(1987년)]의 일반적인 방법에 의해 제조하였다.This aldehyde is described by Kutner et al, Tet. Letters, Vol. 28, pp. 6129-6132 (1987).

화합물(1) 10g을 메탄올 중의 5% KOH 420ml에 용해시키고 이 용액을 출발 물질이 TLC(용매계 A)에 의해 검출되지 않을 때까지 주위온도에서 15분 동안 교반시켰다.10 g of compound (1) was dissolved in 420 ml of 5% KOH in methanol and the solution was stirred at ambient temperature for 15 minutes until no starting material was detected by TLC (solvent system A).

이 용액에 메탄올 중의 10% 황산 160ml를 교반하면서 적가하고 생성된 현탁액을 메탄올 중의 1% 황산 400ml로 희석시켰다. 이 혼합물을 환류 하에서 48시간 동안 가열하여 에스테르화(TLC, 용매계A)를 완결시켰다.To this solution was added dropwise 160 ml of 10% sulfuric acid in methanol with stirring and the resulting suspension was diluted with 400 ml of 1% sulfuric acid in methanol. The mixture was heated under reflux for 48 hours to complete esterification (TLC, solvent system A).

화합물(2)(상기 에스테르)를 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기층을 5% NaHCO₃및 포화 NaCl로 세척하고 황산 마그네슘으로 건조시켰다. 생성된 화합물(2) 9.0g(88%)을 추가의 정제 없이 다음 단계에 사용하였다.Compound (2) (the ester) was extracted with ethyl acetate. The organic layer was washed with 5% NaHCO ₃ and saturated NaCl and dried over magnesium sulfate. 9.0 g (88%) of the resulting compound (2) was used in the next step without further purification.

무수 디메틸포름아미드(DMF) 135ml 중의 화합물(2) 4.4g(12mmol)의 용액에 이미다졸 3.6g(52.8mmol)에 이어서 tert-부틸디메틸실릴 클로라이드 4.0g(26.4mmol)을 첨가하엿다. 이 용액을 괴상 침전물이 형성될 때까지 실온에서 5분간 교반시키고 이어서 추가로 15분 동안 교반을 계속하였다. 반응 혼합물을 헥산 400ml로 추출하고, 물 및 포화 NaCl 용액으로 세척하고 황산 마그네슘으로 건조시켰다. 용매를 증발하여 TLC 순수 생성물(용매계 B)을 얻었고 이 화합물(3) 5.3g(91%)을 추가의 정제없이 다음 단계에 사용하였다. 분석용 시료는 헥산 중의 2% 에틸 아세테이트를 사용하여 플래쉬 크로마토그라피하여 얻었다.To a solution of 4.4 g (12 mmol) of compound (2) in 135 ml of anhydrous dimethylformamide (DMF) was added 3.6 g (52.8 mmol) of imidazole followed by 4.0 g (26.4 mmol) of tert-butyldimethylsilyl chloride. The solution was stirred for 5 minutes at room temperature until a mass precipitate formed and then stirring was continued for an additional 15 minutes. The reaction mixture was extracted with 400 ml of hexane, washed with water and saturated NaCl solution and dried over magnesium sulfate. The solvent was evaporated to give the TLC pure product (solvent system B) and 5.3 g (91%) of this compound (3) was used in the next step without further purification. Analytical samples were obtained by flash chromatography using 2% ethyl acetate in hexanes.

헥산 20ml중의 화합물(3)(1.0g, 2.1mmol), 디브롬안틴(0.42g, 1.5mmol) 및 무수 중탄산나트륨(0.91g, 10mmol)의 혼합물을 출발물질이 탐지되지 않을 때까지 환류 하의 질소 분위기 중에서 30분동안 가열하였다(TTC, 계 C). 침전물을 여과, 제거하고 용액을 감압하에서 건조시켰다. 잔류물을 무수 THF 5ml 중에 재용해시키고 브롬화 테트라부틸암모늄 0.06g(0.19mmol)을 첨가하고, 이 혼합물을 실온에서 30분동안 질소 분위기 하에서 교반하시켰다. 이어서 불화테트라부틸암모늄(10ml, THF 중의 1M 용액)에 이어서 S-콜리딘 0.7ml를 첨가하고, 이 혼합물을 질소 분위기 하에서 실온에서 1시간 동안 교반 시켰다. 다시 불화 테트라부틸암모늄 용액 5ml를 첨가하고 3시간 동안 계속 교반하였다. 에테르 50ml를 첨가하고 유기층을 물, 차가운 1N HCl, 10% NaHCO₃로 세척한 후에 , 무수 황산마그네슘으로 건조시켰다. 생성물인 화합물(4)를 벤젠 중에 용해시켜 실리카겔 70-230메쉬(30g)로 크로마토그라피하였다. 화합물(4) 0.44(58%)를 헥산 중의 에틸 아세테이트를 사용하여 용출시켰다. 분석용 시료는 HPLC에 의해 얻었다. (계 A, Rv 77ml) :Mixture of compound (3) (1.0 g, 2.1 mmol), dibroanthine (0.42 g, 1.5 mmol) and anhydrous sodium bicarbonate (0.91 g, 10 mmol) in 20 ml of hexane under reflux until no starting material was detected Heated for 30 minutes (TTC, system C). The precipitate was filtered off, and the solution was dried under reduced pressure. The residue was redissolved in 5 ml of dry THF and 0.06 g (0.19 mmol) of tetrabutylammonium bromide were added and the mixture was stirred at room temperature under nitrogen atmosphere for 30 minutes. Tetrabutylammonium fluoride (10 ml, 1M solution in THF) was then added, followed by 0.7 ml of S-collidine, and the mixture was stirred for 1 hour at room temperature under a nitrogen atmosphere. Again 5 ml of tetrabutylammonium fluoride solution was added and stirring continued for 3 hours. 50 ml of ether was added and the organic layer was washed with water, cold 1N HCl, 10% NaHCO ₃ and dried over anhydrous magnesium sulfate. Compound (4) as a product was dissolved in benzene and chromatographed with silica gel 70-230 mesh (30 g). 0.44 (58%) of compound (4) was eluted with ethyl acetate in hexane. Analytical samples were obtained by HPLC. (System A, Rv 77ml):

IR(필름) : 1737, 1604, 1495, 1082, 1030cm^-1; UV(헥산중의 3% 2-프로판올) λ_max262nm(ε7,000), λ_max272nm(ε9,800), λ_max282nm(ε10,500), λ_max293nm(ε6,000) ;¹H NMR(CDCl₃)δ0.54(3H, s, 18-CH₃), 0.94(3H, s, 19-CH₃), 1.22(3H, d, J=6Hz, 2-CH₃), 3.6(1H, m, 3-H), 3.68(3H, s, CO₂CH₃), 5.42(1H, m, 6-H), 5.58(1H, m, 7-H) ; MS m/z(상대강도) 358(61), 340(12), 325(100), 299(68), 271(7), 253(17), 237(26), 211(27), 143(72), 119(35).IR (film): 1737, 1604, 1495, 1082, 1030 cm ^-1 ; UV (3% 2-propanol in hexane) λ _max 262 nm (ε 7,000), λ _max 272 nm (ε 9,800), λ _max 282 nm (ε 10,500), λ _max 293 nm (ε 6,000); ¹ H NMR (CDCl ₃ ) δ0.54 (3H, s, 18-CH ₃ ), 0.94 (3H, s, 19-CH ₃ ), 1.22 (3H, d, J = 6Hz, 2-CH ₃ ), 3.6 (1H, m, 3-H), 3.68 (3H, s, CO ₂ CH ₃ ), 5.42 (1H, m, 6-H), 5.58 (1H, m, 7-H); MS m / z (relative strength) 358 (61), 340 (12), 325 (100), 299 (68), 271 (7), 253 (17), 237 (26), 211 (27), 143 ( 72), 119 (35).

벤젠-에틸에테르 1 : 4(v/v) 혼합액 350ml중의 화합물(4) 830mg(2.3mmol)의 용액을 질소 기포 형성기(bubbler) 및 비코르(Vycor) 여과기가 장착된 수냉식 석영 함침 웰 중에서 하노비아(Hanovia) 608A36중간 기압 UV램프를 사용하여 40분(4×10분) 동안 질소 분위기하에서 교반하면서 조사하였다. 반응을 헥산중의 2% 2-프로판을 사용한 HPLC에 의해 265nm에서 조사하였다. 용액을 감압하에서 건조시키고 순수 에탄올 100ml중에 재용해시킨 후, 질소 분위기 하에서 3시간 동안 환류시키면서 가열하였다. 이어서 용액을 농축시키고, 헥산 중의 10% 에틸 아세테이트 1ml중에 용해시킨후 실리카 겔 70-230메쉬(30g)로 크로마토그라피하였다. 비타민 에스테르(5) 298mg(36%)을 헥산 중의 15%에틸 아세테이트 혼합물을 사용하여 용출시켰다. 분석 시료는 HPLC(시스템 B, Rv94ml)에 의해 얻었다.A solution of 830 mg (2.3 mmol) of compound (4) in 350 ml of a benzene-ethyl ether 1: 4 (v / v) mixture was transferred to Hannovia in a water-cooled quartz impregnation well equipped with a nitrogen bubbler and Vycor filter. Irradiation was conducted under a nitrogen atmosphere for 40 minutes (4 × 10 minutes) using a (Hanovia) 608A36 medium pressure UV lamp. The reaction was examined at 265 nm by HPLC using 2% 2-propane in hexanes. The solution was dried under reduced pressure and redissolved in 100 ml of pure ethanol and then heated under reflux for 3 hours under nitrogen atmosphere. The solution was then concentrated, dissolved in 1 ml of 10% ethyl acetate in hexanes and chromatographed with silica gel 70-230 mesh (30 g). 298 mg (36%) of vitamin ester (5) were eluted using a 15% ethyl acetate mixture in hexanes. Analytical samples were obtained by HPLC (System B, Rv 94 ml).

IR(필름) : 1738cm^-1; UV(EtOH) λ_max264nm, λ_min288nm ;¹H NMR(CDCl₃) δ: 0.56(3H, s, 18-CH₃), 1.20(3H, d, J=7Hz, 21-CH₃), 3.66(3H, s, CO₂CH₃), 3.95(1H, m, 3-H), 4.80(1H, d, J=1.2Hz, 19Z-H), 5.05(1H, d, J=1.2Hz, 19E-H), 6.03(1H, d, J=11Hz, 7-H), 6.23(1H, d, J=11Hz, 6-H) ; MS m/z(상대강도), M⁺358(45), 340(9), 325(45), 299(22), 253(19), 237(18), 136(60), 118(100).IR (film): 1738 cm ^-1 ; UV (EtOH) λ _max 264 nm, λ _min 288 nm; ¹ H NMR (CDCl ₃ ) δ: 0.56 (3H, s, 18-CH ₃ ), 1.20 (3H, d, J = 7 Hz, 21-CH ₃ ), 3.66 (3H, s, CO ₂ CH ₃ ), 3.95 (1H, m, 3-H), 4.80 (1H, d, J = 1.2 Hz, 19Z-H), 5.05 (1H, d, J = 1.2 Hz, 19E-H), 6.03 (1H, d, J = 11 Hz, 7-H), 6.23 (1H, d, J = 11 Hz, 6-H); MS m / z (relative strength), M ⁺ 358 (45), 340 (9), 325 (45), 299 (22), 253 (19), 237 (18), 136 (60), 118 (100) .

건조 톨루엔 5ml 화합물(5) 10mg(0.028mmol)의 용액을 건조 얼음-아세톤 욕조 중에서 질소 분위기 하에서 -70℃까지 냉각시켰다. 이 용액에 수소화디이소부틸알루미늄(DIBAL-H, 50㎕, 톨루엔 중의 25%용액, 0.088mmol)을 교반하면서 적가하였다. 이 반응 혼합물을 -70℃에서 10분동안 교반시킨 후, 메탄올 2ml를 서서히 첨가하였다. 혼합물을 실온까지 승온시키고 에틸 에테르로 희석시킨 후에, 5% HCl, 5%NaHCO₃, 물 및 포화 NaCl로 세척하고 무수 황산 마그네슘으로 건조시켰다. 실리카 겔 크로마토그라피(헥산 중의 15% 에틸 아세테이트)를 행하여 다음의 스펙트럼 통계를 나타내는 화합물(6) 4.9mg(54%)을 얻었다.A solution of 10 mg (0.028 mmol) of dry toluene 5 ml Compound (5) was cooled to −70 ° C. under a nitrogen atmosphere in a dry ice-acetone bath. Diisobutylaluminum hydride (DIBAL-H, 50 µl, 25% solution in toluene, 0.088 mmol) was added dropwise to this solution with stirring. The reaction mixture was stirred at −70 ° C. for 10 minutes, then 2 ml of methanol was added slowly. The mixture was warmed to room temperature and diluted with ethyl ether, then washed with 5% HCl, 5% NaHCO ₃ , water and saturated NaCl and dried over anhydrous magnesium sulfate. Silica gel chromatography (15% ethyl acetate in hexane) was carried out to obtain 4.9 mg (54%) of compound (6) showing the following spectral statistics.

MS : 328(M⁺,29), 310(5), 295(31), 269(11), 253(6), 136(47), 118(86), 29(100) ;¹H NMR(CDCl₃) δ : 0.59(3H, s, 180-CH₃), 1.14(3H, d, J=7Hz, 21-CH₃), 4.0(1H, m, 3-H), 4.81(1H, d, J=1.2Hz, 19E-H), 5.05(1H, d, J=1.2Hz, 19Z-H), 6.05(1H, d, J=11Hz, 7-H), 6.23(1H, d, J=11Hz, 6-H), 9.58(1H, d, J=3.8Hz, 22-H).MS: 328 (M ⁺ , 29), 310 (5), 295 (31), 269 (11), 253 (6), 136 (47), 118 (86), 29 (100); ¹ H NMR (CDCl ₃ ) δ: 0.59 (3H, s, 180-CH ₃ ), 1.14 (3H, d, J = 7Hz, 21-CH ₃ ), 4.0 (1H, m, 3-H), 4.81 ( 1H, d, J = 1.2 Hz, 19E-H), 5.05 (1H, d, J = 1.2 Hz, 19Z-H), 6.05 (1H, d, J = 11 Hz, 7-H), 6.23 (1H, d , J = 11 Hz, 6-H), 9.58 (1H, d, J = 3.8 Hz, 22-H).

헥산 중의 5% 2-프로판올로 실리카겔 컬럼에서 추가 용출시켜 C-22-알코올인 화합물(7) 2.7mg(29%)을 얻었다.Further elution on silica gel column with 5% 2-propanol in hexane gave 2.7 mg (29%) of compound (7) which is C-22-alcohol.

화합물(5)를 4℃에서 20시간 동안 피리미딘 중의 염화 p-톨루엔술포닐을 사용하여 화합물(8)로 전환시켰다. 무수 중탄산 칼륨 250mg중의 메탄올 용액(15ml)에 무수 디클로로메탄 2ml중에 용해시킨 화합물(8) 102mg(0.2mmol)을 55℃에서 교반하면서 첨가하였다. 이 혼합물을 질소 분위기하에서 55℃에서 24시간 동안 교반시켰다. 이어서 용매를 감압하에서 제거하고 잔류물을 에테르로 추출하였다. 유기층을 물로 세척하고 무수 황산 마그네슘으로 건조시켰다. 생성물인 화합물(9)를 헥산중의 20%에틸 아세테이트를 사용하여 실리카 겔 크로마토그라피로 정제하였다 (50mg, 68%).Compound (5) was converted to compound (8) using p-toluenesulfonyl chloride in pyrimidine at 4 ° C. for 20 hours. 102 mg (0.2 mmol) of the compound (8) dissolved in 2 ml of anhydrous dichloromethane in methanol solution (15 ml) in 250 mg of anhydrous potassium bicarbonate were added at 55 degreeC, stirring. The mixture was stirred at 55 ° C. for 24 hours under a nitrogen atmosphere. The solvent was then removed under reduced pressure and the residue was extracted with ether. The organic layer was washed with water and dried over anhydrous magnesium sulfate. The product compound (9) was purified by silica gel chromatography using 20% ethyl acetate in hexanes (50 mg, 68%).

tert-부틸 하이드로퍼옥사이드(112㎕, 톨루엔 중의 3.0M 용액, 0.34mmol)을 건조 염화 메틸렌 2ml 중의 이산화 셀레늄 9mg(0.8mmol)의 현탁액에 첨가하였다. 이 혼합물을 실온에서 질소 분위기 하에서 맑은 용액이 형성될 때까지 교반시켰다. 이어서, 무수 피리딘(12㎕1, 0.15mmol)에 이어 무수 디클로로메탄 2ml중에 용해시킨 화합물(9) 50mg을 첨가하였다. 이 혼합물을 질소 분위기하에서 30분동안 교반시켰다. 차가운 10% 중탄산나트륨 2ml를 첨가하고 이 혼합물을 에테르로 추출하였다. 유기층을 차가운 10% 중탄산나트륨, 빙수로 세척한 후에, 무수 황산 마그네슘으로 건조시켰다. 실리카켈 크로마토그라피(헥산 중의 10-20% 에틸 아세테이트)를 수행하여 화합물(10) 12.5mg을 얻었다. 이 생성물을 즉시 빙초산 0.5ml 중에 용해시켜 이 용액을 질소 분위기하에서 교반시키면서 55℃에서 15분 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 얼음에 붓고, 에테르로 추출한 후 빙냉된 포화 중탄산 나트륨으로 세척하였다. 합쳐진 에테르 추출물을 물로 세척하고 건조 황산 마그네슘으로 건조시켰다. 각각 (5Z, 7E) 및 (5E, 7E) 이성질체인 (11) 및 (12)의 분석용시료를 예비 HPLC에 의해 2.5 : 1로 얻었다.tert-butyl hydroperoxide (112 μl, 3.0 M solution in toluene, 0.34 mmol) was added to a suspension of 9 mg (0.8 mmol) of selenium dioxide in 2 ml of dry methylene chloride. The mixture was stirred at room temperature under a nitrogen atmosphere until a clear solution formed. Then, anhydrous pyridine (12 [mu] l1, 0.15 mmol) was added followed by 50 mg of compound (9) dissolved in 2 ml of anhydrous dichloromethane. The mixture was stirred for 30 minutes under a nitrogen atmosphere. 2 ml of cold 10% sodium bicarbonate was added and the mixture was extracted with ether. The organic layer was washed with cold 10% sodium bicarbonate, ice water, and then dried over anhydrous magnesium sulfate. Silicakel chromatography (10-20% ethyl acetate in hexane) was carried out to give 12.5 mg of compound (10). The product was immediately dissolved in 0.5 ml of glacial acetic acid and the solution was heated at 55 ° C. for 15 minutes with stirring under a nitrogen atmosphere. The reaction mixture was poured into ice, extracted with ether and washed with ice-cold saturated sodium bicarbonate. The combined ether extracts were washed with water and dried over dry magnesium sulfate. Analytical samples of (11) and (12), which are the (5Z, 7E) and (5E, 7E) isomers, respectively, were obtained 2.5: 1 by preparative HPLC.

화합물 11 : HPLC, R_v68mL ; UV(EtOH) λ_max264nm, λ_min277nm,

=2.07 ;¹H NMR(CDCl₃)δ, 0.56(3H, s, 18-CH₃), 1.20(3H, d, J=6.5Hz, 21-CH₃), 2.04(3H, s, 3β-아세틸), 3.66(3H, s, 22-CO₂CH₃), 4.4(1H, m, 1-H), 5.2(1H, m, 3-H), 5.01(1H, br s, 19E-H), 5.34(1H, br s, 19Z-H), 6.01(1H, d, J=10Hz, 7-H), 6.33(1H, d, J=10Hz, 6-H) ; MS m/z(상대강도), 416(M⁺, 4), 356(100), 338(21), 251(13), 134(95).Compound 11: HPLC, R _v 68 mL; UV (EtOH) λ _max 264 nm, λ _min 277 nm,

= 2.07; ¹ H NMR (CDCl ₃ ) δ, 0.56 (3H, s, 18-CH ₃ ), 1.20 (3H, d, J = 6.5 Hz, 21-CH ₃ ), 2.04 (3H, s, 3β-acetyl), 3.66 (3H, s, 22-CO ₂ CH ₃ ), 4.4 (1H, m, 1-H), 5.2 (1H, m, 3-H), 5.01 (1H, br s, 19E-H), 5.34 (1H , br s, 19Z-H), 6.01 (1H, d, J = 10 Hz, 7-H), 6.33 (1H, d, J = 10 Hz, 6-H); MS m / z (relative intensity), 416 (M ⁺ , 4), 356 (100), 338 (21), 251 (13), 134 (95).

화합물 12 : HPLC, R_v78ml ; UV(EtOH) λ_max267nm, λ_min277nm,

=3.51 ;¹H NMR(CDCl₃)δ, 0.56(3H, s, 18-CH₃), 1.20(3H, d, J=6. 5Hz, 21-CH₃), 2.04(3H, s, 3β-OAc), 3.66(3H, s, 22-CO₂CH₃), 4.5(1H, m, 1-H), 5.3(1H, m, 3-H), 4.99(1H, br s, 19E-H), 5.13(1H, br s, 19Z-H), 5.81(1H, d, J=10Hz, 7-H), 6.56(1H, d, J=10Hz, 6-H).Compound 12: HPLC, R _v 78 ml; UV (EtOH) λ _max 267 nm, λ _min 277 nm,

= 3.51; ¹ H NMR (CDCl ₃ ) δ, 0.56 (3H, s, 18-CH ₃ ), 1.20 (3H, d, J = 6.5 Hz, 21-CH ₃ ), 2.04 (3H, s, 3β-OAc), 3.66 (3H, s, 22-CO ₂ CH ₃ ), 4.5 (1H, m, 1-H), 5.3 (1H, m, 3-H), 4.99 (1H, br s, 19E-H), 5.13 ( 1 H, br s, 19 Z-H), 5.81 (1 H, d, J = 10 Hz, 7-H), 6.56 (1 H, d, J = 10 Hz, 6-H).

대규모 제조를 위해, 이성체(11) 및 (12)를 또한 미합중국 특허 제 4,554,106호에 기재된 무수 말레산 방법에 의해서도 효과적으로 유리하게 분리할 수 있다.For large scale production, isomers 11 and 12 can also be advantageously separated effectively by the maleic anhydride method described in US Pat. No. 4,554,106.

수소화 디이소부틸알루미늄(15㎕, 톨루엔 중의 1.5M용액)을 -70℃에서 질소 분위기 하에서 무수 톨루엔 0.5ml중의 화합물(11) 2mg의 용액에 교반하면서 첨가하였다. 이 혼합물을 -70℃에서 10분동안 교반하고 메탄올 0.2ml를 서서히 첨가하여 유기 금속성 착화합물을 분해시켰다. 이 혼합물을 실온까지 승온시키고 에틸 에테르로 추출하였다. 유기층을 물로 세척한 후에 무수 황산마그네슘으로 건조시켰다. 용매계 E를 사용한 예비 HPLC에 의해 화합물(13) 및 화합물(14)를 얻었다. 화합물(13)은 다음의 스펙트럼 데이타를 나타냈다.Hydrogenated diisobutylaluminum (15 μl, 1.5 M solution in toluene) was added to the solution of 2 mg of compound (11) in 0.5 ml of anhydrous toluene at −70 ° C. under nitrogen atmosphere. The mixture was stirred at −70 ° C. for 10 minutes and 0.2 ml of methanol was slowly added to decompose the organometallic complex. The mixture was warmed to room temperature and extracted with ethyl ether. The organic layer was washed with water and dried over anhydrous magnesium sulfate. Compound (13) and compound (14) were obtained by preparative HPLC using solvent system E. Compound (13) showed the following spectral data.

334(M⁺, 22), 326(13), 311(2), 285(4), 269(4), 152(29), 134(100) ;¹H NMR(CDCl₃)δ, 0.59(3H, s, 18-CH₃), 1.15(3H, d, J=7Hz, 21-CH₃), 4.2(1H, m, 3-H), 4.4(1H, m, 1-H), 4.99(1H, d, J=1.2Hz, 19Z-H), 5.31(1H, d, J=1.2Hz, 19E-H), 6.02(1H, d, J=11Hz, 7-H), 6.36(1H, d, J=11Hz, 6-H), 9.56(1H, d, J=4Hz, 22-H).334 (M ⁺ , 22), 326 (13), 311 (2), 285 (4), 269 (4), 152 (29), 134 (100); ¹ H NMR (CDCl ₃ ) δ, 0.59 (3H, s, 18-CH ₃ ), 1.15 (3H, d, J = 7 Hz, 21-CH ₃ ), 4.2 (1H, m, 3-H), 4.4 ( 1H, m, 1-H), 4.99 (1H, d, J = 1.2 Hz, 19Z-H), 5.31 (1H, d, J = 1.2 Hz, 19E-H), 6.02 (1H, d, J = 11 Hz , 7-H), 6.36 (1H, d, J = 11 Hz, 6-H), 9.56 (1H, d, J = 4 Hz, 22-H).

메탄올 10ml중의 0.1N KOH 용액을 에틸 에테르 10ml중의 화합물(11) 100mg(0.24mmol)의 교반된 용액에 첨가하였다. 생성된 용액을 출발 물질이 TLC(용매계B)에 의해 검출되지 않을 때까지 실온에서 90분동안 교반시켰다. 화합물(15)를 표준 추출 방법(에틸 아세테이트, 포화 NaCl, 무수 황산 나트륨)에 의해 단리하여 무색 유상물 86.2mg(96%)를 얻었다.A 0.1 N KOH solution in 10 ml of methanol was added to a stirred solution of 100 mg (0.24 mmol) of compound (11) in 10 ml of ethyl ether. The resulting solution was stirred for 90 minutes at room temperature until no starting material was detected by TLC (solvent system B). Compound (15) was isolated by standard extraction methods (ethyl acetate, saturated NaCl, anhydrous sodium sulfate) to give 86.2 mg (96%) of a colorless oil.

DMF 2ml중의 이미다졸 250mg(3.6mmol) 및 tert-부틸디메틸 클로라이드 250mg(1.6mmol)의 혼합물을 디메틸 포름아미드 4ml중의 화합물(15) 86.2mg(0.23mmol)의 교반된 용액에 첨가하였다. 생성된 균질의 혼합물을 출발 물질이 TLC(용매계 B)에 의해 검출되지 않을 때까지 55℃에서 15분 동안 교반시켰다. 이 생성물을 반응 혼합물의 헥산 추출에 의해 단리하였다. 유기 추출물을 염수로 세척하고 무수 황산 마그네슘으로 건조시켰다. 조 생성물의 헥산 용액을 실리카 겔 Sep-Pak 카트리지를 통해 여과시켜 혼합물(16) 136ml(98%)얻었다.A mixture of 250 mg (3.6 mmol) of imidazole and 250 mg (1.6 mmol) of tert-butyldimethyl chloride in 2 ml of DMF was added to a stirred solution of 86.2 mg (0.23 mmol) of compound (15) in 4 ml of dimethyl formamide. The resulting homogeneous mixture was stirred at 55 ° C. for 15 minutes until no starting material was detected by TLC (solvent system B). This product was isolated by hexane extraction of the reaction mixture. The organic extract was washed with brine and dried over anhydrous magnesium sulfate. The hexane solution of the crude product was filtered through a silica gel Sep-Pak cartridge to give 136 ml (98%) of the mixture (16).

IR(필름) : 2974, 2930, 1736, 1447, 1286, 1258, 1150, 1085cm^-1; UV(헥산) λ_max264nm,λ_min227nm

=1.91 ;¹H NMR(CDCl₃)δ, 0.07[12H, s, Si(CH₃)₂], 0.55(3H, s, 18-CH₃),[18H, s, C(CH₃)₃], 1.20(3H, d, J=6.8Hz, 21-CH₃), 3.65(3H, s, O-CH₃), 4.18(1H, m, 3-H), 4.36(1H, m, 1-H), 4.84(1H, d, J=1.2Hz, 19Z-H), 5.16(1H, d, J=1.2Hz, 19E-H), 5.96(1H, d, J=11.2Hz, 7-H), 6.19(1H, d, J=11.2Hz, 6-H) ; MS m/z(M/e 248까지 표준화시킨 강도)IR (film): 2974, 2930, 1736, 1447, 1286, 1258, 1150, 1085 cm ^-1 ; UV (hexane) λ _max 264nm, λ _min 227nm

= 1.91; ¹ H NMR (CDCl ₃ ) δ, 0.07 [12H, s, Si (CH ₃ ) ₂ ], 0.55 (3H, s, 18-CH ₃ ), [18H, s, C (CH ₃ ) ₃ ], 1.20 ( 3H, d, J = 6.8 Hz, 21-CH ₃ ), 3.65 (3H, s, O-CH ₃ ), 4.18 (1H, m, 3-H), 4.36 (1H, m, 1-H), 4.84 (1H, d, J = 1.2 Hz, 19Z-H), 5.16 (1H, d, J = 1.2 Hz, 19E-H), 5.96 (1H, d, J = 11.2 Hz, 7-H), 6.19 (1H , d, J = 11.2 Hz, 6-H); MS m / z (strength normalized to M / e 248)

602(M⁺,10), 470(59), 413(7), 338(10), 248(100).602 (M ⁺ , 10), 470 (59), 413 (7), 338 (10), 248 (100).

수소화 리튬 알루미늄 25mg(0.65mmol)을 아르곤 하의 0℃에서 무수 THF 5ml중의 화합물(16) 136.2mg(0.23mmol)의 교반된 용액에 첨가하였다. 이 현탁액을 0℃에서 15분 동안 교반시키고 과량의 수소화 리튬 알루미늄을 THF중의 10%물을 적가하여 분해시켰다. 이 현탁액을 THF 10ml로 희석하고, 추가로 15분 동안 실온에서 교반을 계속하였다. 생성물을 에틸 아세테이트를 사용하여 표준 추출에 의해 단리하였다. 무색 유상물로서 화합물(17) 118.4mg을 91% 수율로 얻었다.25 mg (0.65 mmol) of lithium aluminum hydride were added to a stirred solution of 136.2 mg (0.23 mmol) of compound (16) in 5 ml of dry THF at 0 ° C. under argon. The suspension was stirred at 0 ° C. for 15 minutes and excess lithium aluminum hydride was decomposed by dropwise addition of 10% water in THF. This suspension was diluted with 10 ml THF and stirring continued for another 15 minutes at room temperature. The product was isolated by standard extraction using ethyl acetate. 118.4 mg of compound (17) was obtained as a colorless oil in 91% yield.

IR(필름) : 3450, 2952, 2886, 1447, 1258, 1105, 1085, 834cm^-1; UV(EtOH) λ_max264nm, λ_min277nm,

=1.57 ;¹H NMR(CDCl₃)δ, 0.00[12H, s, Si-CH₃), 0.53(3H, s, 18-CH₃), 0.85[18H, s, Si-C(CH₃)₃], 1.04(3H, d, J=6.4Hz, 21-CH₃), 3.37 and 3.63(1H 및 1H, 각각 m,22-CH₂), 4.17(1H, m, 3-H), 4.35(1H, m, 1-H), 4.84(1H, br s, 19Z-H), 5.16(1H, br, s, 19E-H), 6.00(1H, d, J=12.2Hz, 7=H), 6.21(1H, d, J=12.2Hz, 6-H) ; MS m/z(m/z 248까지 표준화시킨 강도), 574(M⁺, 17), 442(67), 383(11), 308(17), 248(100).IR (film): 3450, 2952, 2886, 1447, 1258, 1105, 1085, 834 cm ^-1 ; UV (EtOH) λ _max 264 nm, λ _min 277 nm,

= 1.57; ¹ H NMR (CDCl ₃ ) δ, 0.00 [12H, s, Si-CH ₃ ), 0.53 (3H, s, 18-CH ₃ ), 0.85 [18H, s, Si-C (CH ₃ ) ₃ ], 1.04 (3H, d, J = 6.4 Hz, 21-CH ₃ ), 3.37 and 3.63 (1H and 1H, m, 22-CH ₂ ), 4.17 (1H, m, 3-H), 4.35 (1H, m, 1-H), 4.84 (1 H, br s, 19 Z-H), 5.16 (1 H, br, s, 19 E-H), 6.00 (1 H, d, J = 12.2 Hz, 7 = H), 6.21 (1 H, d, J = 12.2 Hz, 6-H); MS m / z (strength normalized to m / z 248), 574 (M ⁺ , 17), 442 (67), 383 (11), 308 (17), 248 (100).

디클로로메탄 0.5ml 중의 염화 옥살릴 30㎕(0.34mmol)의 용액을 질소 분위기 하의 -60℃에서 디클로로메탄 3ml중의 DMSO(50㎕(0.7mmol))의 교반된 용액에 첨가하였다. 생성된 용액을 -60℃에서 10분 동안 교반하고 디클로로메탄 1ml중의 화합물(17) 27mg(0.05mmol)을 서서히 첨가하였다. 이 혼합물을 -60℃에서 30분동안 교반시켰다. 이어서, 트리에틸아민 0.2ml를 첨가하고 용액을 5분 동안 추가로 교반시켰다. 생성물, 화합물(18)을 에틸 에테르로 추출하고 유기층을 포화 NaCl 용액으로 세척하고 무수 황산 마그네슘으로 건조시켰다. 실리카겔 Sep-Pak 여과에 의해 TLC 순수 생성물 17mg(62%)을 얻었다.A solution of 30 μl (0.34 mmol) of oxalyl chloride in 0.5 ml of dichloromethane was added to a stirred solution of DMSO (50 μl (0.7 mmol)) in 3 ml of dichloromethane at −60 ° C. under a nitrogen atmosphere. The resulting solution was stirred at −60 ° C. for 10 minutes and 27 mg (0.05 mmol) of compound (17) in 1 ml of dichloromethane were slowly added. The mixture was stirred at -60 ° C for 30 minutes. Then 0.2 ml of triethylamine was added and the solution was further stirred for 5 minutes. The product, compound (18), was extracted with ethyl ether and the organic layer was washed with saturated NaCl solution and dried over anhydrous magnesium sulfate. Silicagel Sep-Pak filtration gave 17 mg (62%) of TLC pure product.

IR(필름) : 2954, 2929, 2884, 2857, 1727, 1472, 1375, 1256, 1085, 909, 880, 835cm^-1; NMR(CDCl₃)δ, 0.00(12H, s, Si-CH₃), 0.60(3H, s, 18-CH₃), 0.88[18H, d, Si-C(CH₃)₃], 1.11(3H, d, J=6.9Hz, 21-CH₃), 4.23(1H, m, 3-H), 4.43(1H, m, 1-H), 4.93(1H, br s, 19Z-H), 5.19(1H, br s, 19E-H), 6.07(1H, d, J=10.0Hz, 7-H), 6.26(1H, d, J=10.0Hz, 6-H), 9.54(1H, d, J=3Hz, 22-H) ; UV(헥산) λ_max264nm, λ_min277nm,

=1.9 ; MS m/z(m/z에 대한 상대 강도 248) 572(M⁺, 13), 440(53), 383(11), 308(14), 248(100) ;IR (film): 2954, 2929, 2884, 2857, 1727, 1472, 1375, 1256, 1085, 909, 880, 835 cm ⁻¹ ; NMR (CDCl ₃ ) δ, 0.00 (12H, s, Si-CH ₃ ), 0.60 (3H, s, 18-CH ₃ ), 0.88 [18H, d, Si-C (CH ₃ ) ₃ ], 1.11 (3H , d, J = 6.9 Hz, 21-CH ₃ ), 4.23 (1H, m, 3-H), 4.43 (1H, m, 1-H), 4.93 (1H, br s, 19Z-H), 5.19 ( 1H, br s, 19E-H), 6.07 (1H, d, J = 10.0 Hz, 7-H), 6.26 (1H, d, J = 10.0 Hz, 6-H), 9.54 (1H, d, J = 3 Hz, 22-H); UV (hexane) λ _max 264 nm, λ _min 277 nm,

= 1.9; MS m / z (relative intensity 248 against m / z) 572 (M ⁺ , 13), 440 (53), 383 (11), 308 (14), 248 (100);

C₃₄H₆₀O₃Si₂에 대한 질량 분석Mass spectrometry for C ₃₄ H ₆₀ O ₃ Si ₂

이론치 : 572.4081Theoretic: 572.4081

실측치 : 572.4117Found: 572.4117

다음의 조건 하에서 산화단계를 수행했을 때 증가된 수율로 알데히드(18)을 얻었다 ; 무수 디클로로메탄 0.75ml중의 염화 옥살릴 15㎕(0.17mmol)의 용액을 아르곤 분위기 하의-60℃에서 무수 디클로로메탄 0.25ml중의 디메틸 술폭시드 25㎕(0.36mmol)의 교반된 용액을 적가하였다. 이 혼합물을 -60℃에서 10분 동안 교반시킨후에, 무수 디클로로메탄 0.5ml중의 알코올(17) 20.3mg(0.035mmol)의 용액을 서서히 첨가하고, 이 플래쉬를 추가의 무수 디클로로메탄 0.2ml로 세정하였다. 이 혼합물을 -60℃에서 30분간 교반시킨 후에 트리에틸아민 0.3ml(2.15mmol)을 -60℃에서 첨가하였다. 이 혼합물을 5분동안 교반시킨 후에 0℃까지 승온시키고 에테르로 추출하였다. 에테르층을 염수로 세척하고 건조시켰다(MgSO₄). 실리카겔 Sep-Pak 여과에 의해 무색 유상물(18)을 얻고 이것을 HPLC에 의해 정재(Zorbax-Sil 9.4×25cm, 헥산 중의 10% EtOAc)하여 순수 알데히드(18) 19mg(96%)를 얻었다 ; 소량의 알코올만이 회수되었다(0.12mg).The aldehyde 18 was obtained in increased yield when the oxidation step was carried out under the following conditions; A solution of 15 μl (0.17 mmol) of oxalyl chloride in 0.75 mL of anhydrous dichloromethane was added dropwise a stirred solution of 25 μL (0.36 mmol) of dimethyl sulfoxide in 0.25 mL of anhydrous dichloromethane at -60 ° C. under argon atmosphere. After the mixture was stirred at −60 ° C. for 10 minutes, a solution of 20.3 mg (0.035 mmol) of alcohol (17) in 0.5 ml of anhydrous dichloromethane was slowly added and the flash was washed with additional 0.2 ml of anhydrous dichloromethane. . The mixture was stirred at −60 ° C. for 30 minutes before 0.3 ml (2.15 mmol) of triethylamine were added at −60 ° C. The mixture was stirred for 5 minutes, then warmed to 0 ° C. and extracted with ether. The ether layer was washed with brine and dried (MgSO ₄ ). Colorless oil (18) was obtained by silica gel Sep-Pak filtration and purified by HPLC (Zorbax-Sil 9.4 × 25 cm, 10% EtOAc in hexane) to obtain 19 mg (96%) of pure aldehyde (18); Only a small amount of alcohol was recovered (0.12 mg).

[실시예 2]Example 2

측쇄 부착 : 24-디호모-1α,25-디히드록시-22-데하이드로비타민 D₃의 합성(화합물 25, 반응식2)Side chain attachment: Synthesis of 24-dihomo-1α, 25-dihydroxy- ₂₂ -dehydrovitamin D ₃ (Compound 25, Scheme 2)

(a) 히드록시술폰의 제조(19)(a) Preparation of hydroxysulfones (19)

아르곤 분위기 하의 -78℃에서 무수 테트라히드로푸란(지시약으로서, 1,10-페난트롤린을 함유함) 300㎕중의 2-메틸-6-페닐술포닐)-2-(트리에틸실릴옥시)-헥산(화합물 31, 반응식 3) 31mg(84μmol)의 교반된 용액에 디이소프로필아민 13㎕(90μmol)에 이어서 n-BuLi(91μmol)(헥산 중의 1.30M 용액)을 첨가하였다. 이 용액을 아르곤 분위기 하에서 -78℃에서 30분간 교반시킨 후에, 이어서, 무수 테트라히드로푸란 300㎕중의 C-22-알데히드(화합물 18) 6mg(10mmol)을 첨가하고 -78℃에서 1시간 동안 교반시켰다. 이 혼합물을 포화 NH₄Cl용액 1ml을 첨가하여 분해시키고 0℃까지 승온시킨 후, 에틸 아세테이트로 추출하였다. 에틸 아세테이트를 물 및 염수로 세척하고 무수 MgSO₄로 건조시킨 후에 여과 및 증발시켰다. 예비 HPLC(Zorbax-Sil 컬럼 9.6×25cm, 용매계 : 헥산중의 10%에틸 아세테이트)를 행하여 미반응 알데히드 0.6mg과 에피머 혼합물로서 히드록시술폰(19) 6.6mg을 얻었다(수율 77%).2-methyl-6-phenylsulfonyl) -2- (triethylsilyloxy) -hexane in 300 μl of anhydrous tetrahydrofuran (containing 1,10-phenanthroline as indicator) at −78 ° C. under argon atmosphere. (Compound 31, Scheme 3) To 31 mg (84 μmol) of a stirred solution was added 13 μl (90 μmol) of diisopropylamine followed by n-BuLi (91 μmol) (1.30 M solution in hexane). The solution was stirred for 30 minutes at -78 ° C under argon atmosphere, and then 6 mg (10 mmol) of C-22-aldehyde (Compound 18) in 300 µl of anhydrous tetrahydrofuran were added and stirred at -78 ° C for 1 hour. . The mixture was decomposed by adding 1 ml of saturated NH ₄ Cl solution, heated to 0 ° C., and extracted with ethyl acetate. Ethyl acetate was washed with water and brine, dried over anhydrous MgSO ₄ , filtered and evaporated. Preparative HPLC (Zorbax-Sil column 9.6 × 25 cm, solvent system: 10% ethyl acetate in hexane) gave 0.6 mg of unreacted aldehyde and 6.6 mg of hydroxysulfone (19) as epimer mixture (yield 77%) .

(b) 24-디호모-1α,25-디히드록시-22-데히드로-비타민 D₃(25)(b) 24-dihomo-1α, 25-dihydroxy- ₂₂ -dehydro-vitamin D ₃ (25)

메탄올 1.0ml중의 Na₂HPO₄의 포화 용액을 무수 테트라히드로푸란 1.0ml중의 히드록시술폰(19) 3.3mg의 교반된 용액에 이어 무수 분말 Na₂HPO₄160mg에 첨가하였다. 이 혼합물을 아르곤하에서 30분 동안 교반시킨후 0℃까지 냉각시켰다. 이어서 신선한 5% 아말감나트륨 약 400mg을 첨가하고 혼합물을 5℃에서 16시간 동안 교반시켰다. 혼합물을 헥산 5ml로 희석하고 15분 동안 교반을 계속하였다. 용매를 경사하고 고상물을 헥산으로 세척(5ml×3회)하였다. 얼음 및 포화 NaCl 용액을 합쳐진 유기 용액에 첨가하였다. 유기층을 분리하고 헥산 중의 Sep-pak 카트리지를 통과시켰다. HPLC정제(Zorbax-Sil 9.4×25 컬럼, 헥산 중의 10% EtOAc)에 의해 보호된²²-24-디호모-1,25-(OH)₂D₃(21) 2.0mg(71%) 및 22-히드록시화 생성물(22) 소량을 얻었다. 보호된 트리올(21) 2mg을 무수 THF 1.0ml 중에 용해시키고 이 용액에 THF 50㎕중의 불화 테트라부틸암모늄 1M 용액을 첨가하였다. 혼합물을 아르곤 하의 50℃에서 1시간 동안 교반 시켰다. 이어서 에테르 8ml를 첨가하고 유기층을 포화 NaCl로 세척하였다. 용매를 제거한 후에 잔류물을 헥산 중의 10% 2-프로판올 중에 용해시키고 실리카 Sep-Pak를 통해 여과하였다. HPLC(헥산 중의 20% 2-프로판올, Zorbax-Sil 9.4×25cm)에 의해 목적 생성물인 디호모 화합물(25) 0.6mg을 얻었다.A saturated solution of Na ₂ HPO ₄ in 1.0 ml of methanol was added to a stirred solution of 3.3 mg of hydroxysulfone (19) in 1.0 ml of anhydrous tetrahydrofuran followed by 160 mg of dry powder Na ₂ HPO ₄ . The mixture was stirred for 30 minutes under argon and then cooled to 0 ° C. Then about 400 mg of fresh 5% amalgam sodium was added and the mixture was stirred at 5 ° C. for 16 h. The mixture was diluted with 5 ml of hexane and stirring continued for 15 minutes. The solvent was decanted and the solid was washed with hexane (5 ml x 3 times). Ice and saturated NaCl solution were added to the combined organic solution. The organic layer was separated and passed through a Sep-pak cartridge in hexane. HPLC purification (Zorbax-Sil 9.4 × 25 columns, 10% EtOAc in hexanes) of ^di-homo-22 -24- -1,25- (OH), protected by a _{2 D 3 (21) 2.0mg (} 71%) and 22- A small amount of the hydroxylated product (22) was obtained. 2 mg of protected triol (21) was dissolved in 1.0 ml of dry THF and to this solution was added a 1M solution of tetrabutylammonium fluoride in 50 μl THF. The mixture was stirred at 50 ° C. under argon for 1 hour. Then 8 ml of ether was added and the organic layer was washed with saturated NaCl. After removal of the solvent the residue was dissolved in 10% 2-propanol in hexanes and filtered through silica Sep-Pak. HPLC (0.6% 20% 2-propanol in hexane, Zorbax-Sil 9.4 × 25 cm) gave 0.6 mg of the dihomo compound (25) as the desired product.

UV(EtOH) λ_max264nm, λ_min228nm,

=1.87 ;¹H NMR(CDCl₃), 0.55(3H, s, 18-CH₃), 1.00(3H, d, J=6.6Hz, 21-CH₃), 1.23(6H, s, 26, 27-CH₃), 4.23(1H, m, 3-H), 4.43(1H, m, 1-H), 5.00(1H, brs, 19Z-H), 5.32(1H, brs, 19E-H), 5.29(2H, m, 22H 및 23H), 6.01(1H, d, J=11.3Hz, 7-H) ; MS m/z(상대강도) 442(M⁺, 15), 424(23), 406(33), 391(7), 287(11), 285(10), 269(27), 251(23), 152(33), 134(100), 116(6), 59(20) ;UV (EtOH) λ _max 264 nm, λ _min 228 nm,

= 1.87; ¹ H NMR (CDCl ₃ ), 0.55 (3H, s, 18-CH ₃ ), 1.00 (3H, d, J = 6.6 Hz, 21-CH ₃ ), 1.23 (6H, s, 26, 27-CH ₃ ) , 4.23 (1H, m, 3-H), 4.43 (1H, m, 1-H), 5.00 (1H, brs, 19Z-H), 5.32 (1H, brs, 19E-H), 5.29 (2H, m , 22H and 23H), 6.01 (1H, d, J = 11.3 Hz, 7-H); MS m / z (relative strength) 442 (M ⁺ , 15), 424 (23), 406 (33), 391 (7), 287 (11), 285 (10), 269 (27), 251 (23) 152 (33), 134 (100), 116 (6), 59 (20);

C₂₉H₄₆O₃에 대한 질량 분석Mass Spectrometry for C ₂₉ H ₄₆ O ₃

이론치 : 442.3446Theoretic: 442.3446

실측치 : 442.3441Found: 442.3441

[실시예 3]Example 3

측쇄 부착 : 24-트리호모-1α,25-디히드록시-22-데히드로비타민 D₃의 합성(화합물 26, 반응식 2)Side chain attachment: Synthesis of 24-trihomo-1α, 25-dihydroxy-22-dehydrovitamin D ₃ (Compound 26, Scheme 2)

(a) 히드록시술폰의 제조(20)(a) Preparation of hydroxysulfones (20)

아르곤 분위기 하의 -78℃에서 무수테트라히드로푸란(지시약으로 1,10-페난트롤린을 함유함) 500㎕중의 2-메틸-7-(페닐술포닐)-2-(트리에틸실릴옥시)-헵탄(화합물 35, 반응식 3) 58mg(151μmol)의 교반된 용액에 디이소프로필아민 23㎕(160μmol)에 이어서, n-BuLi-(헥산 중의 1.5M용액) 160μM을 첨가하였다. 이 용액을 아르곤 분위기 하에서 -78℃에서 30분 동안 교반한 후에, 이어서, 무수 테트라히드로푸란 300μl 중의 C-22-알데히드(화합물 18) 7mg(12μmol)을 첨가하고 1시간 동안 교반시켰다. 이 혼합물을 포화 NH₄Cl 용액 1ml을 첨가하여 분해시키고, 0℃까지 승온시킨 후에, 에틸 아세테이트로 추출하였다. 에틸 아세테이트를 물 및 염수로 세척하고 무수 MgSO₄로 건조시키고, 여과 및 증발시켰다. 예비 HPLC[Zorbax-Sil 컬럼 9.4×25cm, 용매계 : 헥산 중의 10% 에틸 아세테이트)를 수행하여 미반응 알데히드 0.4mg과 에피머의 혼합물로서 히드록시술폰(20) 7.5mg을 얻었다(수율 78%).2-methyl-7- (phenylsulfonyl) -2- (triethylsilyloxy) -heptane in 500 μl of anhydrous tetrahydrofuran (containing 1,10-phenanthroline as indicator) at −78 ° C. under argon atmosphere. (Compound 35, Scheme 3) To 58 mg (151 μmol) of a stirred solution was added 23 μl of diisopropylamine (160 μmol) followed by 160 μM of n-BuLi- (1.5 M solution in hexane). This solution was stirred for 30 min at -78 ° C under argon atmosphere, then 7 mg (12 μmol) of C-22-aldehyde (Compound 18) in 300 μl of anhydrous tetrahydrofuran were added and stirred for 1 hour. The mixture was decomposed by adding 1 ml of saturated NH ₄ Cl solution, warmed to 0 ° C., and extracted with ethyl acetate. Ethyl acetate was washed with water and brine, dried over anhydrous MgSO ₄ , filtered and evaporated. Preparative HPLC [Zorbax-Sil column 9.4 × 25 cm, solvent system: 10% ethyl acetate in hexanes] was carried out to obtain 7.5 mg of hydroxysulfone (20) as a mixture of 0.4 mg of unreacted aldehyde and epimer (yield 78%) ).

(b) 24-트리호모-1α,25-디히드록시-22-디히드로 비타민 D₃(26)(b) 24-trihomo-1α, 25-dihydroxy-22-dihydro vitamin D ₃ (26)

메탄올 1.0ml 중의 Na₂HPO₄의 포화 용액을 무수 테트라히드로푸란 1.0ml중의 히드록시술폰(20) 7.5mg의 교반된 용액에 이어, 무수 분말 Na₂HPO₄160mg에 첨가하였다. 이 혼합물을 아르곤하에서 30분 동안 교반시킨 후에 0℃까지 냉각시켰다. 이어서 신선한 5% 아말감나트륨(약 400mg)을 첨가하고 혼합물을 5℃에서 16시간 동안 교반시켰다. 혼합물을 헥산 5ml로 희석하고 15분 동안 교반을 계속하였다. 용매를 경사하고 고상물을 헥산으로 세척(5ml×3회)하였다. 합쳐진 유기층을 염수로 세척하고, 분리하여, 건조시키고 증발시켰다. 잔류물을 헥산 중의 10% 에틸 아세테이트중의 Sep-Pak 카트리지를 통과시켰다. HPLC정제에 의해 보호된 22-24-트리호모-1,25-(OH)₂D₃(23) 2.12mg 및 22-히드록시화 생성물 (24) 1.33mg을 얻었다. (Zorbax-Sil 9.4×25컬럼, 헥산 중의 10% EtOAc). 화합물(23) 2.1mg을 무수 THF 1.0ml중에 용해시키고 이 용액에 THF중의 불화 테트라부틸암모늄(1M 용액) 50㎕을 첨가하였다. 혼합물을 아르곤 하에서 5℃에서 1시간 동안 교반시켰다. 이어서 에테르를 첨가하고 유기층을 염수로 세척하였다. 에테르층을 무수 MgSO₄로 건조시킨 후 여과 및 증발시켰다. 잔류물을 헥산 중의 30% 2-프로판올 중에 용해시키고 실리카 Scp-Pak를 통과시켰다. HPLC(헥산 중의 20% 2-프로판올, Zorbax-Sil 9.4×25cm 컬럼)에 의해 정제하여 목적 생성물인, 트리호모 화합물(26) 0.8mg을 얻었다.A saturated solution of Na ₂ HPO ₄ in 1.0 ml of methanol was added to a stirred solution of 7.5 mg of hydroxysulfone (20) in 1.0 ml of anhydrous tetrahydrofuran followed by 160 mg of anhydrous powdered Na ₂ HPO ₄ . The mixture was stirred for 30 minutes under argon and then cooled to 0 ° C. Fresh 5% sodium amalgam (about 400 mg) was then added and the mixture was stirred at 5 ° C. for 16 hours. The mixture was diluted with 5 ml of hexane and stirring continued for 15 minutes. The solvent was decanted and the solid was washed with hexane (5 ml x 3 times). The combined organic layers were washed with brine, separated, dried and evaporated. The residue was passed through a Sep-Pak cartridge in 10% ethyl acetate in hexanes. 2.12 mg of 22-24-trihomo-1,25- (OH) ₂ D ₃ (23) and 1.33 mg of 22-hydroxylation product (24) protected by HPLC purification were obtained. (Zorbax-Sil 9.4 × 25 column, 10% EtOAc in hexanes). 2.1 mg of compound (23) was dissolved in 1.0 ml of anhydrous THF, and 50 µl of tetrabutylammonium fluoride (1M solution) in THF was added to this solution. The mixture was stirred at 5 ° C. under argon for 1 hour. Ether was then added and the organic layer was washed with brine. The ether layer was dried over anhydrous MgSO ₄ , filtered and evaporated. The residue was dissolved in 30% 2-propanol in hexanes and passed through silica Scp-Pak. Purification by HPLC (20% 2-propanol in hexane, Zorbax-Sil 9.4 × 25 cm column) gave 0.8 mg of trihomo compound (26) as the desired product.

UV(EtOH) λ_max264nm, λ_min228nm,

=1.81 ;¹H NMR : (CDCl₃) 0.56(3H, s18-CH₃), 1.00(3H, d, J=6.6Hz, 21-CH₃), 1.23(6H, s, 26, 27-CH₃), 4.23(1H, m, 3-H), 4.43(1H, m, 1-H), 5.00(1H, brs, 19Z-H), 5.32(1H, brs, 19E-H), 5.29(2H, m, 22H 및 23H), 6.01(1H, d, J=11.3Hz, 7-H) ; MS m/z (상대강도) 456(M⁺)(11)438(50), 420(30), 402(8), 287(10), 269(23), 251(23), 152(35), 134(100).UV (EtOH) λ _max 264 nm, λ _min 228 nm,

= 1.81; ¹ H NMR: (CDCl ₃ ) 0.56 (3H, s18-CH ₃ ), 1.00 (3H, d, J = 6.6 Hz, 21-CH ₃ ), 1.23 (6H, s, 26, 27-CH ₃ ), 4.23 (1H, m, 3-H), 4.43 (1H, m, 1-H), 5.00 (1H, brs, 19Z-H), 5.32 (1H, brs, 19E-H), 5.29 (2H, m, 22H And 23H), 6.01 (1H, d, J = 11.3 Hz, 7-H); MS m / z (relative strength) 456 (M ⁺ ) (11) 438 (50), 420 (30), 402 (8), 287 (10), 269 (23), 251 (23), 152 (35) , 134 (100).

[실시예 4]Example 4

술폰 측쇄 단위의 합성(반응식 3)Synthesis of sulfone side chain units (Scheme 3)

(a) 술폰 측쇄 잔기(32)의 제조(a) Preparation of sulfone side chain residues (32)

무수 THF 25ml 중의 4-클로로발레릴클로라이드 27 3g(알드리치사 제품 ; 19.2mmol)의 용액을 아르곤 하에서 30분에 걸쳐 격렬하게 교반시키면서 -10℃에서 무수 THT 25ml 중의 브롬화 메틸마그네슘(12.9ml, 에테르 중의 3M 용액) 용액에 적가하였다. 이어서 반응 혼합물을 2시간 내에 실온까지 승온시킨 후 물로 급냉시키고 묽은 염산으로 중화시켰다. 이 혼합물을 에테르로 추출하고 합쳐진 유기층을 물로 세척한 후에 황산 나트륨으로 건조시켰다. 용매를 제거한 후에 잔류물을 진공 중에서 증류시켜 무색 액체로서 클로로-알코올(28) 2.1kg(70%)을 얻었다. 이어서 무수 디메틸포름아미드 5ml 중의 클로로-알코올 28 1.5g(10mmol)을 무수 디메틸포름아미드 25ml 중의 티오페닐 1.32g(12mmol) 및 t-부톡시화 칼륨 1.32g(11.3mmol)의 교반된 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 철야 교반시킨 후에 용액을 디클로로메탄과 물 사이에서 분배시켰다. 유기층을 중탄산 나트륨 수용액, 물로 세척하고 무수 황산 마그네슘으로 건조시켰다.A solution of 3 g of 4-chlorovalerylchloride 27 (from Aldrich; 19.2 mmol) in 25 ml of anhydrous THF over 30 minutes under argon with vigorous stirring at -10 ° C. methyl bromide (12.9 ml, in ether, 25 ml of anhydrous THT) 3M solution) was added dropwise to the solution. The reaction mixture was then warmed up to room temperature in 2 hours, then quenched with water and neutralized with dilute hydrochloric acid. The mixture was extracted with ether and the combined organic layers were washed with water and then dried over sodium sulfate. After removal of the solvent the residue was distilled in vacuo to yield 2.1 kg (70%) of chloro-alcohol (28) as a colorless liquid. Then 1.5 g (10 mmol) of chloro-alcohol 28 in 5 ml of anhydrous dimethylformamide were added to a stirred solution of 1.32 g (12 mmol) of thiophenyl and 1.32 g (11.3 mmol) of t-butoxylated in 25 ml of anhydrous dimethylformamide. The reaction mixture was stirred overnight at room temperature before the solution was partitioned between dichloromethane and water. The organic layer was washed with aqueous sodium bicarbonate solution, water and dried over anhydrous magnesium sulfate.

용매를 진공 중에서 증발시키고 조 유상물을 헥산-에틸 아세테트를 사용한 실리카겔 플래쉬 크로마토그라피에 의해 정제하였다. 술파이드 29 2.2g(98%)을 무색 액체로서 얻었다. 이어서 이 술파이드 29(1.01g, 4.5mmol)을 건조 디클로로메탄 40ml 중에 용해시키고 3-클클로퍼벤조산(2.5g(11.6mmol) ; 알드리치사 제품 80-85%)을 교반시키고 가끔 냉각시키면서 부분적으로 첨가하였다. 반응 혼합물을 2시간 동안 교반시킨후에 10% 중탄산나트륨으로 급냉시켰다. 합쳐진 추출물을 아황산 나트륨 용액 및 염수로 세척하고 황산 마그네슘으로 건조시켰다. 용매를 진공 중에서 제거하고 조 유상물을 헥산-에틸 아세테이트 혼합물을 사용한 실리카겔 플래쉬 크로마토그라피에 의해 정제하여 무색 액체로서 술폰 30 1.1g(97%)을 얻었다. 건조 디메틸포름아미드 50ml중의 술폰 30 1.3g(5.1mmol) 및 이미다졸 1.5g(22.7mmol)의 교반된 용액에 염화 트리에틸실릴 1.15g(77mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 유지시킨 후에 디클로로메탄으로 희석시켰다. 혼합물을 염화 암모늄 수용액 및 물로 세척하였다. 유기층을 황산 나트륨으로 건조시키고 용매를 진공 중에서 제거하였다. 잔류물을 실리카 겔 플래쉬 크로마토그라피에 의해 정제하였다. 먼저 헥사에틸디실록산을 헥산으로 용출시켰다. 무색 액체로서 트리에틸실릴-보호 술폰 31.1.8(97%)를 헥산-에틸 아세테이트 9 : 1 혼합액으로 용출시켰다.The solvent was evaporated in vacuo and the crude oil was purified by silica gel flash chromatography using hexane-ethyl acetate. 2.2 g (98%) of sulfide 29 was obtained as a colorless liquid. This sulfide 29 (1.01 g, 4.5 mmol) was then dissolved in 40 ml of dry dichloromethane and partially added with 3-cloperbenzoic acid (2.5 g (11.6 mmol); 80-85% from Aldrich) with stirring and occasional cooling. It was. The reaction mixture was stirred for 2 hours and then quenched with 10% sodium bicarbonate. The combined extracts were washed with sodium sulfite solution and brine and dried over magnesium sulfate. The solvent was removed in vacuo and the crude oil was purified by silica gel flash chromatography using hexane-ethyl acetate mixture to give 1.1 g (97%) of sulfone 30 as a colorless liquid. To a stirred solution of 1.3 g (5.1 mmol) of sulfone 30 and 1.5 g (22.7 mmol) of imidazole in 50 ml of dry dimethylformamide was added 1.15 g (77 mmol) of triethylsilyl chloride. The reaction mixture was kept at room temperature for 2 hours and then diluted with dichloromethane. The mixture was washed with aqueous ammonium chloride solution and water. The organic layer was dried over sodium sulfate and the solvent was removed in vacuo. The residue was purified by silica gel flash chromatography. First hexaethyldisiloxane was eluted with hexane. Triethylsilyl-protected sulfone 31.1.8 (97%) was eluted with a hexane-ethyl acetate 9: 1 mixture as a colorless liquid.

IR(니트) : 3.45, 2940, 1440, 1360, 1130, 1020cm^-1;¹H NMR(400MHz, CDCl₃) δ0.518(6H, q, J=6.2Hz, Si-CH₂), 0.899(9H, t, J=6.2Hz, Si-C-CH₃) δ 0.518(6H, q, J=6.2Hz, Si-CH₂), 0.899(9H, t, J=6.2Hz, Si-C-CH₃), 1.142(6H, s, CH₃), 1.307-1.462(4H, m), 1.655-1.738(2H, m, H-4), 3.080-3.122(2H, m, H-2), 7.567(2H, t, J=6.8HZ, H-아릴 메타), 7.648(1H, t, J=6.8Hz, H-아릴 파라), 7.916(2H, d, J=6.83Hz, H-아릴 오르토) ; MS(EI, 70eV) : m/z(상대 강도) 372(M⁺, 2), 341(100), 229(2), 227(18), 173(24), 103(22), 75(45), 55(33).IR (knit): 3.45, 2940, 1440, 1360, 1130, 1020 cm ⁻¹ ; ¹ H NMR (400 MHz, CDCl ₃ ) δ 0.518 (6H, q, J = 6.2 Hz, Si-CH ₂ ), 0.899 (9H, t, J = 6.2 Hz, Si-C-CH ₃ ) δ 0.518 (6H , q, J = 6.2 Hz, Si-CH ₂ ), 0.899 (9H, t, J = 6.2 Hz, Si-C-CH ₃ ), 1.142 (6H, s, CH ₃ ), 1.307-1.462 (4H, m ), 1.655-1.738 (2H, m, H-4), 3.080-3.122 (2H, m, H-2), 7.567 (2H, t, J = 6.8HZ, H-aryl meta), 7.648 (1H, t , J = 6.8 Hz, H-aryl para), 7.916 (2H, d, J = 6.83 Hz, H-aryl ortho); MS (EI, 70 eV): m / z (relative strength) 372 (M ⁺ , 2), 341 (100), 229 (2), 227 (18), 173 (24), 103 (22), 75 (45 ), 55 (33).

(b) 술폰 측쇄 단위(35)의 제조(b) Preparation of sulfone side chain unit 35

무수 테트라히드로푸란 10ml 중의 6-브로모헥실 클로라이드(32) 3.8g(2.8ml, 18mmol)의 용액을 아르곤 분위기하에서 15-20분 동안에 걸쳐서 격렬하게 교반하면서 -10℃에서 무수 테트라히드로푸란 15ml 중의 브롬화 메틸마그네슘 14ml(에테르 중의 3M 용액)의 용액에 적가하였다. 이 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반시킨 후에, 0℃까지 냉각시켜 1 : 1 묽은 염산으로 조심스럽게 분해시켰다. 혼합물을 에테르로 추출하고, 합쳐진 유기 층을 물로 세척하고, 무수 황산 마그네슘으로 건조시키고 증발시켜 무색 유상물로서 브로모 알코올(33) 3.6g(94%)을 얻었다. 이 브로모-알코올 3.4g(16mmol)을 70℃에서 4-1/2시간 동안 무수 디메틸포름아미드 중의 벤젠 술핀산 나트륨염 3.3g(20mol)으로 처리하였다. 혼합물을 얼음위에 붓고, 디클로로메탄으로 추출하고 1N HCl, 물, 10% NaHCO₃용액으로 세척한 무수 MgSO₄로 건조시키고 여과 및 증발시켜 술폰(34)를 얻고 이것을 실리카 겔상에서 플래쉬 크로마토그라피하여 정제시킨 후에 헥산 중의 40-50% 에틸 아세테이트로 용출시켜 일부의 대응 술핀산 에스테르 4.18g(98%)을 함유한 술폰을 얻었다.Bromination of a solution of 3.8 g (2.8 ml, 18 mmol) of 6-bromohexyl chloride (32) in 10 ml of anhydrous tetrahydrofuran in 15 ml of anhydrous tetrahydrofuran at -10 ° C. with vigorous stirring under argon atmosphere for 15-20 minutes. To a solution of 14 ml of methylmagnesium (3M solution in ether) was added dropwise. The mixture was stirred at room temperature for 2 hours, then cooled to 0 ° C. and carefully digested with 1: 1 diluted hydrochloric acid. The mixture was extracted with ether, and the combined organic layers were washed with water, dried over anhydrous magnesium sulfate and evaporated to give 3.6 g (94%) of bromo alcohol (33) as a colorless oil. 3.4 g (16 mmol) of this bromo-alcohol were treated with 3.3 g (20 mol) of sodium benzene sulfinate in anhydrous dimethylformamide for 4-1 / 2 hours at 70 ° C. The mixture was poured onto ice, extracted with dichloromethane, dried over anhydrous MgSO ₄ washed with 1N HCl, water, 10% NaHCO ₃ solution, filtered and evaporated to give sulfone (34) which was purified by flash chromatography on silica gel. Then eluted with 40-50% ethyl acetate in hexanes to give a sulfone containing 4.18 g (98%) of some corresponding sulfinic acid ester.

Ms, m/z 270(M⁺), 255(M⁺-15), 77, 59.Ms, m / z 270 (M ⁺ ), 255 (M ⁺ -15), 77, 59.

무수 디메틸포름아미드 13ml 중의 술폰(34) 4g(14mmol) 및 이미다졸 3.8g(55mol)의 교반된 용액에 염화 트리에틸실릴 4.6g(5.1ml, 30mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반시킨 후에 얼음물을 붓고, 에테르로 추출하고, 무수 MgSO₄로 건조시키고, 여과 및 증발시켰다. 잔류물을 플래쉬 크로마토그라피에 의해 정제하였다. 먼저 헥사에틸디실록산을 헥산으로 용출시켰다. 헥산 중의 3% 에틸 아세테이트는 약간의 술폰과 함께 술핀산 에스테르를 용출시키고 헥산 중의 10% 에틸 아세테이트는 보호된 순수 술폰(35) 3.4g(60%)을 용출시켰다.To a stirred solution of 4 g (14 mmol) of sulfone (34) and 3.8 g (55 mol) of imidazole in 13 ml of anhydrous dimethylformamide was added 4.6 g (5.1 ml, 30 mmol) of triethylsilyl chloride. The reaction mixture was stirred at rt for 2 h, then poured into ice water, extracted with ether, dried over anhydrous MgSO ₄ , filtered and evaporated. The residue was purified by flash chromatography. First hexaethyldisiloxane was eluted with hexane. 3% ethyl acetate in hexane eluted the sulfinic acid ester with some sulfone and 10% ethyl acetate in hexane eluted 3.4 g (60%) of protected pure sulfone (35).

C₂₀H₃₆O₃SSi에 대한 원소 분석치Elemental Analysis for C ₂₀ H ₃₆ O ₃ SSi

이론치 : C ; 62.45%, H ; 9.43%, S ; 38.34%Theoretic value: C; 62.45%, H; 9.43%, S; 38.34%

실측치 : C ; 61.97%, H ; 9.45%, S ; 8.33%Found: C; 61.97%, H; 9.45%, S; 8.33%

Ms, m/z(상대강도)Ms, m / z (relative strength)

355(100)(M⁺-29), 277(15), 173(35), 103(43), 75(95), 55(23), NMR(400MHz, CDCl₃), 0.54(6H, q, J=7Hz, Si-CH₂), 0.94(9H, t, J=8Hz, Si-C-CH₃), 1.15(6H, s, CH₃), 1.31-1.36(4H, m), 3.08-3.12(2H, m, H=2), 7.57(2H, t, J=6.8Hz, H-아릴 메타), 7.66(1H, t,), H-아릴 파라), 7.92(2H, d, J=6.8Hz, H-아릴 오르토).355 (100) (M ⁺ -29), 277 (15), 173 (35), 103 (43), 75 (95), 55 (23), NMR (400 MHz, CDCl ₃ ), 0.54 (6H, q, J = 7 Hz, Si-CH ₂ ), 0.94 (9H, t, J = 8 Hz, Si-C-CH ₃ ), 1.15 (6H, s, CH ₃ ), 1.31-1.36 (4H, m), 3.08-3.12 (2H, m, H = 2), 7.57 (2H, t, J = 6.8 Hz, H-aryl meta), 7.66 (1H, t,), H-aryl para), 7.92 (2H, d, J = 6.8 Hz, H-aryl ortho).

생물학적 활성Biological activity

당업계에 공지된 확립된 분석법을 사용하여 신규 동족체(25)의 분화 작용 및 칼세믹 작용 모두에 대하여 시험하였다. 분석 방법 및 얻어진 결과는 다음의 실시예에 보다 상세하게 기재되어 있다.Established assays known in the art were used to test for both differentiation and calcemic action of the novel homolog 25. The analytical method and the results obtained are described in more detail in the following examples.

[실시예 5]Example 5

HL-60세포 내에서의 디호모 화합물(25)의 분화 활성에 대한 측정(표 1)Measurement of the Differentiation Activity of Di Homo Compound (25) in HL-60 Cells (Table 1)

시험 화합물에 대한 HL-60세포(인체 백혈병 세포)의 분화 정도를 3개의 다른 분석법(NBT-환원, 식작용 및 에스테라제 활성)에 의해 확인하였다. 처음의 두 분석법은 델루카 등(DeLuca et al. 미합중국 특허 제4,717,721호)에 의해 제공된 일반적인 방법에 의해 수행하였다. 분화에 대한 표식으로서 비특이적 산에스테라제 활성을 측정하는 세번째 분석은 시그마 케미칼사[Sigma Chemical Corp., 몬타나주 세인트루이스 소재]로 부터 용이하게 입수할 수 있는 시그마 키트 제90번에 주어진 방법에 따라 행하였다[Osterm 등의 Proc. Natl. Acad. Sci. USA 제84권, 제2610페이지-제2614페이지(1987년) ; Osterm 등의 J.Biol. Chem. 제262권, 제14164페이지-제14171페이지(1987년) 참조]. 결과는 다음 표 1에 나타냈다. 데이타는 여러가지 농도의 1,25-(OH)₂D₃(비교 기준으로서 사용됨) 또는 비타민 D 시험 화합물의 처리 결과, 분화된 세포의 비율로서 나타냈다.The degree of differentiation of HL-60 cells (human leukemia cells) for the test compounds was confirmed by three different assays (NBT-reduction, phagocytosis and esterase activity). The first two assays were performed by the general method provided by DeLuca et al. US Pat. No. 4,717,721. A third assay, measuring nonspecific acid esterase activity as a marker for differentiation, was performed according to the method given in Sigma Kit No. 90 which is readily available from Sigma Chemical Corp., St. Louis, Montana. Osc et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 84, 2610-2614 (1987); Osterm et al. J. Biol. Chem. Vol. 262, pp. 1164-14171 (1987)]. The results are shown in Table 1 below. The data is presented as the percentage of differentiated cells as a result of treatment of various concentrations of 1,25- (OH) ₂ D ₃ (used as a comparative reference) or vitamin D test compound.

[표 1]TABLE 1

배양 중인 HL-60세포에 있어서 1,25(OH)₂D₃및 측쇄 디호모 화합물의 분화 활성의 비교Comparison of Differentiation Activity of 1,25 (OH) ₂ D ₃ and Side Chain Di-Homo Compounds in Cultured HL-60 Cells

[실시예 6]Example 6

디호모 화합물(25)의 칼세믹 작용Calcemic Action of Dihomo Compound (25)

(a) 장의 칼슘 수송 작용(표 2)(a) Intestinal calcium transport activity (Table 2)

위스콘신 소재의 할란-스프라그 다울리 캄파니 오브 메디슨(Harlan-Sprague Dawley Company of Madison)으로부터 이유기의 수컷 쥐를 입수하여 수다 등[Suda et al, J. Nutr. 제100권, 제1049페이지-1052페이지, (1970년)]에 의해 기재된 방법에 의해 저칼슘의 구루병발생 사료(칼슘 0.02%, 인 0.3%)를 공급하였다. 이들에 총 4주 동안 이 사료 임의량을 공급하였다. 제3주의 말기에 동물들을 6마리씩 구성된 군으로 나누었다. 한 군은 날마다 기초제(95% 프로필렌 글리콜 0.1ml, 5% 에탄올)를 7일동안 복강내에 주사하였다. 나머지 군들은 동량의 기초제를 동일한 기간에 걸쳐 주사하였으나 다음의 화합물을 다음과 같은 투여량으로 함유시켰다 : 1,25-(OH)₂D₃의 2.5ng 또는 25ng 또는 24-디히모-1α,25-디히드록시-22-데하이드로비타민 D₃(화합물 25)의 125ng. 동물들을 최종 투여한지 24시간 후에 죽이고, 장을 제거한 후 십이지장 절편을 할로란 및 델루카[Halloran and Deluca, Arch, Biochem. Biophys. 제208권, 제477페이지-제486페이지, (1981년)]에 의해 기재된 방법으로 장의 칼슘 수송도를 측정하는데 사용하였다. 결과는 다음의 표 2에 나타냈다.Weaning male rats were obtained from Harlan-Sprague Dawley Company of Madison, Wisconsin, et al. [Suda et al, J. Nutr. Volume 100, pages 1049-1052, (1970)] were fed low calcium rickets feed (0.02% calcium, 0.3% phosphorus). They were fed any amount of this feed for a total of 4 weeks. At the end of the third week, animals were divided into groups of six animals. One group received daily intraperitoneal injection of basic agent (0.1% 95% propylene glycol, 5% ethanol) for 7 days. The remaining groups were injected with the same amount of base over the same period but containing the following compounds in the following dosages: 2.5 ng or 25 ng of 1,25- (OH) ₂ D ₃ , or 24-dihi-1 la, 125 ng of 25-dihydroxy-22-dehydrovitamin D ₃ (compound 25). Animals were killed 24 hours after the last dose, intestinal debridement followed by duodenal sections [Halloran and Deluca, Arch, Biochem. Biophys. Vol. 208, pp. 477-486, (1981)] was used to measure the intestinal calcium transport. The results are shown in Table 2 below.

[표 2]TABLE 2

쥐에 있어서 1,25-(OH)₂D₃및 측쇄 동족체의 장의 칼슘 수송 활성Intestinal Calcium Transport Activity of 1,25- (OH) ₂ D ₃ and Side Chain Homologs in Mice

(b) 뼈의 칼슘 이동화의 측정(표 3)(b) Measurement of calcium mobilization of bone (Table 3)

이유기의 수컷 쥐를 할란 스프라그 다울리 캄파니로 부터 입수하여 수다 등[J. Nutr. 제100권, 제1049페이지-제1052페이지, (1970년)]에 의한 방법으로 저 칼슘(칼슘 0.02%, 인 0.3%) 비타민 D-결핍 사료를 4주 동안 공급하였다. 제3주의 말기에, 동물들은 6마리씩으로 구성된 군으로 나누어 95% 프로필렌 글리콜 및 5% 에탄올 0.1ml 중에 용해된 표 3에 지시된 투여량을 주입하였다. 대조군에는 용매 기초제 만을 주입하였다. 다른 군들은 7일 동안 각각 1,25-(OH)₂D₃또는 디호모 화합물(25)의 지시 투여량을 주입시켰다. 혈청 칼슘을 자동 흡수에 의해 투여한 지 7일의 말기에 측정하였다. 상기 두 시험의 결과를 다음 표 3에 나타내였다.Weaning male rats were obtained from Harlan Sprague Dawley Campani and talked [J. Nutr. Volume 100, pages 1049-1052, (1970) were fed low calcium (0.02% calcium, 0.3% phosphorus) vitamin D-deficient feed for 4 weeks. At the end of week 3, the animals were divided into groups of 6 animals and injected with the doses indicated in Table 3 dissolved in 0.1 ml of 95% propylene glycol and 5% ethanol. Only the solvent base was injected into the control. The other groups were injected with indicated doses of 1,25- (OH) ₂ D ₃ or dihomo compound 25 for 7 days, respectively. Serum calcium was measured at the end of 7 days of administration by automatic absorption. The results of the two tests are shown in Table 3 below.

[표 3]TABLE 3

쥐에 있어서, 1,25-(OH)₂D₃및 측쇄 동족체의 뼈칼슘 이동화 작용(혈청 칼슘 농도)Bone calcium migration (serum calcium concentration) of 1,25- (OH) ₂ D ₃ and side chain homologues in rats

표 1에 나타낸 결과는 디호모 유사체25가 백혈병 세포를 정상단핵 세포로 분화시키는데 있어서 1,25-(OH)₂D₃보다 훨씬 강력하다는 것을 명백히 보여준다. 예를 들면 1,25-(OH)₂D₃의 1×10^-8몰 농도에서, 55-61%의 분화 세포를 생성하는 반면, 동일한 농도의 화합물(25)는 78%의 분화를 유발 시킨다. 5×10^-8M 디호모 유사체에 의해 생성된 바(약 92%)와 동일한 분화도(90%)를 유발하는데 1×10^-7M 농도의 1,25-(OH)₂D₃가 필요함을 고려해 볼 때, 이 유사체 25가 분화제로서 1,25-(OH)₂D₃보다 5배 정도 더 강력하다는 결론을 내릴 수 있다.The results shown in Table 1 clearly show that Dihomo analog 25 is much more potent than 1,25- (OH) ₂ D ₃ in differentiating leukemia cells into normal monocytes. For example, at 1 × 10 ⁻⁸ molar concentration of 1,25- (OH) ₂ D ₃ , 55-61% of differentiated cells are produced, while the same concentration of compound (25) causes 78% of differentiation. . It should be noted that 1,25- (OH) ₂ D ₃ at a concentration of 1 × 10 ^-7 M is required to induce the same degree of differentiation (90%) as produced by the 5 × 10 ^-8 M dihomo analogs (about 92%). In consideration, it can be concluded that this analog 25 is about five times more potent than 1,25- (OH) ₂ D ₃ as a differentiating agent.

매우 대조적으로 디호모 화합물은 1,25-(OH)₂D₃에 비하여 매우 낮은 칼세믹 작용을 나타낸다. 이 결론은 표 2 및 3의 결과에 의해 뒷받침 된다. 예를 들면, 표 2에 나타낸 장의 칼슘 수송 분석은 공지된 활성 대사물 1,25-(OH)₂D₃를 12.5 또는 25ng/일의 투여량으로 7일 동안 투여하였을 때 예견한 바와 같이, (대조군에 비하여) 매우 뚜렷한 반응을 나타냄을 제시하고 있다. 그러나 신규 디호모 화합물(25)의 경우에는 반응을 유발하는데 7일 동안 125mg/일의 투여량이 필요하였으며, 이러한 고 농도의 투여량에서조차도 중간정도의 반응을 나타내었고 1,25-(OH)₂D₃의 10배 낮은 투여량에 의해 유발된 반응의 절반보다 약간 켰다. 따라서, 이 분석에 있어서 신규 디호모 유사체는 1,25-(OH)₂D₃보다 적어도 10배가 약한 칼세믹 활성을 갖는다.In contrast, dihomo compounds show very low calcemic action compared to 1,25- (OH) ₂ D ₃ . This conclusion is supported by the results in Tables 2 and 3. For example, the intestinal calcium transport assay shown in Table 2 is predicted when known active metabolite 1,25- (OH) ₂ D ₃ is administered for 7 days at a dose of 12.5 or 25 ng / day, Compared to the control group). However, for the new dihomo compound (25), a dose of 125 mg / day was required for 7 days to induce a response, and even at such high concentrations, a moderate response was obtained and 1,25- (OH) ₂ D Slightly more than half of the responses caused by the 10-fold lower dose of ₃ . Thus, the new dihomo analogs in this assay have calcemic activity that is at least 10-fold weaker than 1,25- (OH) ₂ D ₃ .

동일한 결론을 표 3에 나타낸 뼈의 칼슘 이동화 분석의 결과로부터 추론할 수 있다. 1,25-(OH)₂D₃12.5 및 25ng 각각에 의해 유발된 바와 같은 동일한 정도의 반응을 얻는데는 디호모 유사체(25) 125 및 250ng/일의 투여량(7일동안 투여함)이 필요하다. 또한, 주목할 만한 점은, 디호모 화합물(약 500ng/일)의 투여량을 증가시켜도 다른 조건이 억제된다면 뼈의 칼슘 이동화 반응은 더 이상 증가되지 않는다는 사실이다(표 3 참조). 표 2에 나타낸 두번째 실험에 있어서, 1,25-(OH)₂D₃가 12.5 및 25ng/일의 투여량에서(대조군에 비하여) 매우 중요한 반응을 각각 유발하였으며 디호모 유사체는 125ng/일의 투여량에서 아무런 작용을 나타내지 않았다. 디호모 유사체 25를 1000ng/일까지의 투여량 범위에 걸쳐 시험한 세번째 시험에 있어서, 이 화합물은 어느 투여량 농도에서도 칼슘 이동화 반응을 유발하지 않았으며, 이는 이 물질이 본질적으로 뼈를 소모하여 혈청 칼슘을 생성시키는 작용을 하지 않음을 나타낸다. 따라서 이들 뼈의 이동화 분석은 표 2의 칼슘 수송 데이타와 완전히 일치하여 신규 디호모 유사체25가 그의 칼세믹 작용에 있어서 1,25-(OH)₂D₃보다 수배 덜 강력한 것임을 나타낸다.The same conclusion can be deduced from the results of the calcium mobilization analysis of bone shown in Table 3. To obtain the same degree of response as caused by 1,25- (OH) ₂ D ₃ 12.5 and 25 ng respectively, 125 doses of dihomo analog (25) and 250 ng / day (administered for 7 days) are required. Do. It is also noteworthy that increasing the dose of the dihomo compound (about 500 ng / day) does not increase the calcium mobilization response of the bone any more if other conditions are inhibited (see Table 3). In the second experiment shown in Table 2, 1,25- (OH) ₂ D ₃ elicited a very important response at doses of 12.5 and 25 ng / day (relative to the control), respectively, and the dihomo analogs were administered at 125 ng / day. No action was shown in the dose. In a third test where dihomo analog 25 was tested over a dosage range of up to 1000 ng / day, the compound did not cause a calcium mobilization response at any dose concentration, which essentially consumed bone. No action to produce serum calcium. Thus, the analysis of the migration of these bones is in full agreement with the calcium transport data in Table 2, indicating that the new dihomo analog 25 is several times less potent than 1,25- (OH) ₂ D ₃ in its calcemic action.

본 발명의 트리호모 화합물 26에서 동일한 유형의 활성 양상이 본 발명의 트리호모 화합물 26에서 관찰되었다. 이 물질도 역시 HL-60세포의 분화를 유도함에 있어서는 예견된 활성을 나타내는 반면 쥐의 혈청 칼슘 농도에 있어서는(대조군에 비해) 어떤 중요한 반응도 일으키지 않으므로 또한 매우 우수하고 극적으로 증대된 분화/칼세믹 작용비를 나타낸다.The same type of activity is observed for trihomo compound 26 of the present invention. This substance also shows the predicted activity in inducing differentiation of HL-60 cells, while it does not produce any significant response to rat serum calcium concentrations (relative to the control) and is also very good and dramatically increases the differentiation / calcemic ratio. Indicates.

이러한 형태의 작용 양상은, 물론, 종양 질병의 치료에 있어서 분화제용으로 계획한 바로 그것이다. 목적하던 바람직한 작용인 종양세포의 세포 분화는 매우 뛰어난 반면, 바람직하지 못한 작용인 칼세믹 작용은 극적으로 감소됨으로서 매우 크게 증가된 분화/칼세믹 작용비를 나타낸다. 공지된 1α-히드록시 비타민 D화합물은 백혈병의 치료에 유효한 치료제로 알려져 왔다(수다(Suda)등, 미합중국 특허 제4,391,802호 참조). 본 발명에 인용된 생물분석 데이타에 기초하여, 본 발명의 신규 측쇄 호모 화합물을 종래의 선행 기술에 의한 화합물과 동일한 농도로 투여했을 때 종래의 공지 화합물의 바람직하지 못한 칼세믹 작용이 없거나 또는 1/10 이하로 나타남으로서 치료된 개체에 있어서 혈중 칼슘 농도 증가를 유발하는 문제가 대부분 제거될 수 있음을 결론지을 수 있다. 또한, 표 1에 나타낸 결과에 기초하여, 신규 호모 화합물이 종양 세포 특히, 백혈병 세포에 대해 매우 큰 분화 활성을 나타내므로 이로써, 그 치료적 잇점이 증가될 수 있음을 예견할 수 있다. 따라서, 본 발명의 신규 화합물은 종양 질병의 분화 치료라는 개념의 효과적이고 실제적인 실시 태양을 제시하여 이들의 작용 양상은 이 화합물들이 상기 치료에 대한 바람직한 치료제임을 명백히 제시한다.This form of action is, of course, exactly what is planned for differentiation in the treatment of tumor diseases. The cell differentiation of tumor cells, which is the desired effect, is very good, while the calcemic action, which is an undesirable action, is dramatically reduced, resulting in a significantly increased differentiation / calcemic action ratio. Known 1α-hydroxy vitamin D compounds have been known as effective therapeutic agents for the treatment of leukemia (see Suda et al., US Pat. No. 4,391,802). Based on the bioanalytical data cited herein, there is no undesirable calcemic action of conventional known compounds when the novel side chain homo compounds of the present invention are administered at the same concentration as the compounds according to the prior art. By appearing below 10, it can be concluded that most of the problems causing increased calcium levels in the treated subject can be eliminated. In addition, based on the results shown in Table 1, it can be foreseen that the novel homo compounds exhibit very high differentiation activity against tumor cells, in particular leukemia cells, thereby increasing their therapeutic benefits. Thus, the novel compounds of the present invention present effective and practical embodiments of the concept of the differentiation treatment of tumor diseases so that their mode of action clearly suggests that these compounds are the preferred therapeutic agents for such treatment.

치료의 목적을 위해, 이들 화합물은 무해한 용매 중의 용액으로서, 또는 적합하고 무해한 용매 또는 담체중의 유제, 현탁제 또는 분산제로서, 또는 당업계에 공지된 통상의 방법에 의한 환제, 정제, 캡슐제로서 제형할 수 있다. 이러한 제형은 또한 안정화제, 산화방지제, 결합제, 착색제 또는 유화제 또는 미각 개선제와 같은 기타의 제약상으로 허용되고 비독성인 부형제를 함유할 수 있다.For the purpose of treatment, these compounds are employed as solutions in harmless solvents, as emulsions, suspensions or dispersants in suitable and harmless solvents or carriers, or as pills, tablets, capsules by conventional methods known in the art. It can be formulated. Such formulations may also contain other pharmaceutically acceptable and nontoxic excipients such as stabilizers, antioxidants, binders, colorants or emulsifiers or taste enhancers.

본 화합물은 주사에 의하거나 또는 적합한 살균 용액의 정맥내 주입에 의해 또는 소화관을 경유한 경구투여의 형태로 유리하게 투여된다. 인체 백혈병의 치료를 위해, 본 발명의 호모비타민 D화합물은 백혈병 세포의 대식 세포로의 분화를 유발하는데 있어서 충분한 투여량으로 개체에 투여된다. 적합한 투여량은 일일 0.5㎍ 내지 50㎍까지이며, 투여량은 당업계에 용인되는 바와 같이 환자의 질병의 정도 또는 반응성 또는 상태에 따라 조정(예, 추가로 더욱 증가시킴)될 수 있음은 이해되어야 한다.The compounds are advantageously administered in the form of oral administration by injection or by intravenous infusion of a suitable sterile solution or via the digestive tract. For the treatment of human leukemia, the homovitamin D compounds of the invention are administered to a subject in a sufficient dosage to induce differentiation of leukemia cells into macrophages. Suitable dosages are from 0.5 μg to 50 μg per day, and it is to be understood that the dose may be adjusted (eg, further increased) depending on the extent or reactivity or condition of the patient's disease as is acceptable in the art. do.

Claims (10)

다음 구조식을 갖는 화합물.A compound having the structure

위 식에서, X, Y 및 Z는 서로 동일하거나 또는 상이할 수 있고, 수소 원자 또는 트리에틸실릴기이며, n은 3 또는 4이다.In the above formula, X, Y and Z may be the same or different from each other, a hydrogen atom or a triethylsilyl group, and n is 3 or 4. 제1항에 있어서, X, Y 및 Z가 각각 수소 원자인 화합물.The compound of claim 1 wherein X, Y and Z are each hydrogen atoms. 다음 구조식을 갖는 화합물.A compound having the structure

위 식에서, X, Y 및 Z는 서로 동일하거나 또는 상이할 수 있고, 수소 원자 또는 트리에틸실릴기이며, n은 3 또는 4이다.In the above formula, X, Y and Z may be the same or different from each other, a hydrogen atom or a triethylsilyl group, and n is 3 or 4. 1종 이상의 제1항에 의한 화합물과 제약학상 허용되는 부형제를 함유하는 백혈병 치료용 제약 조성물.A pharmaceutical composition for treating leukemia, comprising at least one compound according to claim 1 and a pharmaceutically acceptable excipient. 제4항에 있어서, 상기 화합물이 24-디호모-1α,25-디히드록시-22-데히드로비타민 D₃인 것을 특징으로 하는 제약 조성물.The pharmaceutical composition of claim 4, wherein the compound is 24-dihomo-1α, 25-dihydroxy-22-dehydrovitamin D ₃ . 제4항에 있어서, 상기 화합물이 24-트리호모-1α,25-디히드록시-22-데히드로비타민 D₃인 것을 특징으로 하는 제약 조성물.The pharmaceutical composition of claim 4, wherein the compound is 24-trihomo-1α, 25-dihydroxy-22-dehydrovitamin D ₃ . 제5항에 있어서, 약 0.5 내지 약 50㎍의 상기 비타민 동족체를 함유하는 것을 특징으로 하는 제약 조성물.6. A pharmaceutical composition according to claim 5 which contains about 0.5 to about 50 μg of said vitamin homologue. 제6항에 있어서, 약 0.5 내지 약 50㎍의 상기 바타민 동족체를 함유하는 것을 특징으로 하는 제약 조성물.The pharmaceutical composition of claim 6, which contains about 0.5 to about 50 μg of the batamine homologue. 제1항에 있어서, 상기 화합물이 24-디호모-1α,25-디히드록시-22-데히드로비타민 D₃인 화합물.The compound of claim 1, wherein the compound is 24-dihomo-1α, 25-dihydroxy-22-dehydrovitamin D ₃ . 제1항에 있어서, 상기 화합물이 24-트리호모-1α,25-디히드록시-22-데히드로비타민 D₃인 화합물.The compound of claim 1, wherein the compound is 24-trihomo-1α, 25-dihydroxy-22-dehydrovitamin D ₃ .

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