RU2011131293A - Способ определения пространственно-временного распределения активности протеолитического фермента в гетерогенной системе, устройство для реализации указанного способа и способ диагностики нарушений системы гемостаза по изменению пространственно-временного распределения активности протеолитического фермента в гетерогенной системе - Google Patents

Способ определения пространственно-временного распределения активности протеолитического фермента в гетерогенной системе, устройство для реализации указанного способа и способ диагностики нарушений системы гемостаза по изменению пространственно-временного распределения активности протеолитического фермента в гетерогенной системе Download PDF

Info

Publication number
RU2011131293A
RU2011131293A RU2011131293/10A RU2011131293A RU2011131293A RU 2011131293 A RU2011131293 A RU 2011131293A RU 2011131293/10 A RU2011131293/10 A RU 2011131293/10A RU 2011131293 A RU2011131293 A RU 2011131293A RU 2011131293 A RU2011131293 A RU 2011131293A
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
sample
proteolytic enzyme
medium
fluorophore
vitro system
Prior art date
Application number
RU2011131293/10A
Other languages
English (en)
Other versions
RU2518247C2 (ru
Inventor
Фазоил Иноятович Атауллаханов
Наталья Михайловна Дашкевич
Михаил Владимирович Ованесов
Василий Иванович Сарбаш
Михаил Александрович Пантелеев
Сергей Сергеевич Карамзин
Андрей Юрьевич Кондратович
Original Assignee
Общество С Ограниченной Ответственностью "Гематологическая Корпорация"
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Общество С Ограниченной Ответственностью "Гематологическая Корпорация" filed Critical Общество С Ограниченной Ответственностью "Гематологическая Корпорация"
Priority to RU2011131293/10A priority Critical patent/RU2518247C2/ru
Priority to PCT/RU2012/000570 priority patent/WO2013015717A2/ru
Priority to US14/234,909 priority patent/US9938563B2/en
Priority to EP12818440.5A priority patent/EP2752495B8/en
Priority to EA201400156A priority patent/EA028341B1/ru
Priority to CA2842594A priority patent/CA2842594C/en
Priority to CN201280045249.3A priority patent/CN103998620A/zh
Priority to JP2014522787A priority patent/JP2014521952A/ja
Publication of RU2011131293A publication Critical patent/RU2011131293A/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2518247C2 publication Critical patent/RU2518247C2/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/56—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving blood clotting factors, e.g. involving thrombin, thromboplastin, fibrinogen
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/34—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase
    • C12Q1/37—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase involving peptidase or proteinase
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
    • G01N21/62—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light
    • G01N21/63—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light optically excited
    • G01N21/64—Fluorescence; Phosphorescence
    • G01N21/6408—Fluorescence; Phosphorescence with measurement of decay time, time resolved fluorescence
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
    • G01N21/62—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light
    • G01N21/63—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light optically excited
    • G01N21/64—Fluorescence; Phosphorescence
    • G01N21/645—Specially adapted constructive features of fluorimeters
    • G01N21/6456—Spatial resolved fluorescence measurements; Imaging
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
    • G01N21/62—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light
    • G01N21/63—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light optically excited
    • G01N21/64—Fluorescence; Phosphorescence
    • G01N21/6428—Measuring fluorescence of fluorescent products of reactions or of fluorochrome labelled reactive substances, e.g. measuring quenching effects, using measuring "optrodes"
    • G01N2021/6439—Measuring fluorescence of fluorescent products of reactions or of fluorochrome labelled reactive substances, e.g. measuring quenching effects, using measuring "optrodes" with indicators, stains, dyes, tags, labels, marks
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/90—Enzymes; Proenzymes
    • G01N2333/914—Hydrolases (3)
    • G01N2333/948—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
    • G01N2333/95—Proteinases, i.e. endopeptidases (3.4.21-3.4.99)
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/90—Enzymes; Proenzymes
    • G01N2333/914—Hydrolases (3)
    • G01N2333/948—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
    • G01N2333/974—Thrombin

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Investigating, Analyzing Materials By Fluorescence Or Luminescence (AREA)
  • Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)

Abstract

1. Способ определения пространственно-временного распределения активности протеолитического фермента в гетерогенной системе, заключающийся в том, чтообеспечивают систему in-vitro, которая содержит образец исследуемой среды, состоящей из одного из плазмы крови, цельной крови, воды, лимфы, коллоидного раствора, кристаллоидного раствора и геля, и протеолитический фермент или его предшественник, который распределен в образце исследуемой среды,погружают в систему in-vitro флуорогенный субстрат,при взаимодействии протеолитического фермента с флуорогенным субстратом происходит расщепление субстрата с отделением от него флуорофора,облучают образец исследуемой среды в заданные моменты времени возбуждающим излучением для возбуждения свечения флуорофора, образовавшегося в результате расщепления флуорогенного субстрата протеолитическим ферментом,в заданные моменты времени одновременно с облучением регистрируют фотокамерой излучение флуорофора в заданных точках системы in vitro, тем самым определяя пространственное распределение флуорофора,в заданные моменты времени освещают образец исследуемой среды и регистрируют фотокамерой оптические характеристики исследуемого образца, т.е. светорассеяние и светопропускание в заданных точках системы in vitro,из распределения интенсивности флуоресценции флуорофора получают пространственно-временное распределение активности протеолитического фермента путем решения обратной задачи типа «реакция диффузия - конвекция» с учетом степени связывания флуорофора в среде с компонентами среды, причем величину степени связывания флуорофора получают из оптических характеристик о

Claims (64)

1. Способ определения пространственно-временного распределения активности протеолитического фермента в гетерогенной системе, заключающийся в том, что
обеспечивают систему in-vitro, которая содержит образец исследуемой среды, состоящей из одного из плазмы крови, цельной крови, воды, лимфы, коллоидного раствора, кристаллоидного раствора и геля, и протеолитический фермент или его предшественник, который распределен в образце исследуемой среды,
погружают в систему in-vitro флуорогенный субстрат,
при взаимодействии протеолитического фермента с флуорогенным субстратом происходит расщепление субстрата с отделением от него флуорофора,
облучают образец исследуемой среды в заданные моменты времени возбуждающим излучением для возбуждения свечения флуорофора, образовавшегося в результате расщепления флуорогенного субстрата протеолитическим ферментом,
в заданные моменты времени одновременно с облучением регистрируют фотокамерой излучение флуорофора в заданных точках системы in vitro, тем самым определяя пространственное распределение флуорофора,
в заданные моменты времени освещают образец исследуемой среды и регистрируют фотокамерой оптические характеристики исследуемого образца, т.е. светорассеяние и светопропускание в заданных точках системы in vitro,
из распределения интенсивности флуоресценции флуорофора получают пространственно-временное распределение активности протеолитического фермента путем решения обратной задачи типа «реакция диффузия - конвекция» с учетом степени связывания флуорофора в среде с компонентами среды, причем величину степени связывания флуорофора получают из оптических характеристик образца.
2. Способ по п.1, в котором в систему in-vitro помещают активирующий агент, который вызывает изменение в пространственно-временном распределении активности протеолитического фермента.
3. Способ по п.2, в котором в качестве активирующего агента используют агент, выбранный из группы, состоящей из тканевого фактора, тканевого активатора плазминогена, клеток, обеспечивающих возможность экспрессии тканевого фактора, образцов тканей организма, стекла или пластика.
4. Способ по п.1, в котором исследуемый протеолитический фермент образуется в исследуемой среде из своего предшественника в результате протекания биохимических процессов.
5. Способ по п.1, в котором исследуемый протеолитический фермент постепенно разрушается в исследуемой среде в результате протекающих в среде биохимических процессов.
6. Способ по п.1, в котором обеспечивают одинаковую температуру по всему объему системы in vitro.
7. Способ по п.1, в котором поддерживают заданное давление в системе in vitro.
8. Способ по п.1, в котором регистрацию светорассеяния образца среды и излучения флуорофора в заданных точках системы in vitro осуществляют посредством конфокальной микроскопии, обеспечивающей перефокусировку оптической системы и системы освещения/облучения в заданные моменты времени.
9. Способ по п.1, в котором визуализируют пространственное распределение флуорофора и образовавшегося сгустка в заданные моменты времени.
10. Способ по п.1, в котором регистрируют светорассеяние от образца среды по методу темного поля.
11. Способ по п.1, в котором регистрируют излучение флуорофора методом флуоресцентной микроскопии.
12. Способ по п.1, в котором субстрат добавляют в виде раствора в образец исследуемой среды.
13. Способ по п.1, в котором наносят субстрат в лиофилизированной форме на стенки системы in-vitro до размещения образца исследуемой среды.
14. Способ по п.1, в котором облучение и регистрацию флоуресценции флуорофора осуществляют с частотой от 1 до 1800 раз в мин.
15. Способ по п.1, в котором облучение осуществляют после установления стабильной температуры в образце.
16. Способ по п.1, в котором используют плазму, выбранную из группы, состоящей из свободной от тромбоцитов плазмы и бедной тромбоцитами плазмы.
17. Способ по п.1, в котором все этапы способа выполняют при термостатировании при температуре около 37°С.
18. Способ по п.1, в котором стабилизируют рН плазмы до диапазона 7,2-7,4.
19. Способ по пп.1-12, в котором
приготавливают смесь, состоящую из исследуемого образца плазмы, ингибитора контактной фазы, хлорида кальция, флуорогенного субстрата к исследуемому фактору свертывания.
20. Способ по п.1, в котором в качестве фактора свертывания определяют тромбин.
21. Способ определения пространственно-временного распределения активности протеолитического фермента в гетерогенной системе, заключающийся в том, что
обеспечивают систему in-vitro, которая содержит образец исследуемой среды, состоящей из одного из плазмы крови, цельной крови, воды, лимфы и геля, и протеолитический фермент или его предшественник, который распределен в образце исследуемой среды,
погружают в систему in-vitro хромогенный субстрат,
при взаимодействии протеолитического фермента с хромогенным субстратом происходит расщепление субстрата с отделением от него хромофора,
в заданные моменты времени регистрируют пространственное изменение цвета среды,
по пространственному изменению цвета в каждой точке среды определяют пространственное распределение хромофора в разных точках системы in vitro,
в заданные моменты времени освещают содержимое кюветы и регистрируют фотокамерой светорассеяние от образовавшегося фибринового сгустка в образце среды в заданных точках системы in vitro,
из распределения интенсивности флуоресценции флуорофора получают пространственно-временное распределение активности протеолитического фермента путем решения обратной задачи типа «реакция диффузия - конвекция» с учетом степени связывания флуорофора в среде с компонентами среды, причем величину степени связывания флуорофора получают из оптических характеристик образца.
22. Способ по п.21, в котором в систему in-vitro помещают активирующий агент, который вызывает изменение в пространственно-временном распределении активности протеолитического фермента.
23. Способ по п.22, в котором в качестве активирующего агента используют агент, выбранный из группы, состоящей из тканевого фактора, тканевого активатора плазминогена, клеток, обеспечивающих возможность экспрессии тканевого фактора, образцов тканей организма, стекла или пластика.
24. Способ по п.21, в котором исследуемый протеолитический фермент образуется в исследуемой среде из своего предшественника в результате протекания биохимических процессов.
25. Способ по п.21, в котором исследуемый протеолитический фермент постепенно разрушается в исследуемой среде в результате протекающих в среде биохимических процессов.
26. Способ по п.21, в котором обеспечивают одинаковую температуру по всему объему системы in vitro.
27. Способ по п.21, в котором поддерживают заданное давление в системе in vitro.
28. Способ по п.21, в котором регистрацию светорассеяния образца среды и пространственное изменение цвета среды в заданных точках системы in vitro осуществляют посредством конфокальной микроскопии, обеспечивающей перефокусировку оптической системы и системы освещения/облучения в заданные моменты времени.
29. Способ по п.21, в котором визуализируют пространственное распределение хромофора и образовавшегося сгустка в заданные моменты времени.
30. Способ по п.21, в котором регистрируют светорассеяние от образца среды по методу темного поля.
31. Способ по п.21, в котором регистрируют изменение цвета хромофора оптическим способом.
32. Способ по п.21, в котором субстрат добавляют в виде раствора в образец исследуемой среды.
33. Способ по п.21, в котором наносят субстрат в лиофилизированной форме на стенки системы in-vitro до размещения образца исследуемой среды.
34. Способ по п.1, в котором облучение и регистрацию изменения цвета хромофора осуществляют с частотой от 1 до 1800 раз в мин.
35. Способ по п.21, в котором облучение осуществляют после установления стабильной температуры в образце.
36. Способ по п.21, в котором используют плазму, выбранную из группы, состоящей из свободной от тромбоцитов плазмы и бедной тромбоцитами плазмы.
37. Способ по п.1, в котором все этапы способа выполняют при термостатировании при температуре около 37°С.
38. Способ по п.1, в котором стабилизируют рН плазмы до диапазона 7,2-7,4.
39. Способ по п.2, в котором
приготавливают смесь, состоящую из исследуемого образца плазмы, ингибитора контактной фазы, хлорида кальция, флуорогенного субстрата к исследуемому фактору свертывания.
40. Способ по п.1, в котором в качестве фактора свертывания определяют тромбин.
41. Способ определения пространственно-временного распределения активности протеолитического фермента в гетерогенной системе, заключающийся в том, что
обеспечивают систему in-vitro, которая содержит образец исследуемой среды, состоящей из одного из плазмы крови, цельной крови, воды, лимфы, геля, и протеолитический фермент или его предшественник, который распределен в образце исследуемой среды,
погружают в систему in-vitro субстрат, который при взаимодействии с протеолитическим ферментом расщепляется с образованием продукта, обладающего хемолюминесценцией,
в заданные моменты времени регистрируют пространственное распределение интенсивности люминисценции в разных точках,
в заданные моменты времени освещают содержимое кюветы и регистрируют фотокамерой светорассеяние от образовавшегося фибринового сгустка в образце среды в заданных точках системы in vitro,
из распределения интенсивности флуоресценции флуорофора получают пространственно-временное распределение активности протеолитического фермента путем решения обратной задачи типа «реакция диффузия - конвекция» с учетом степени связывания флуорофора в среде с компонентами среды, причем величину степени связывания флуорофора получают из оптических характеристик образца.
42. Способ по п.41, в котором в систему in-vitro помещают активирующий агент, который вызывает изменение в пространственно-временном распределении активности протеолитического фермента.
43. Способ по п.42, в котором в качестве активирующего агента используют агент, выбранный из группы, состоящей из тканевого фактора, тканевого активатора плазминогена, клеток, обеспечивающих возможность экспрессии тканевого фактора, образцов тканей организма, стекла или пластика.
44. Способ по п.41, в котором исследуемый протеолитический фермент образуется в исследуемой среде из своего предшественника в результате протекания биохимических процессов.
45. Способ по п.41, в котором исследуемый протеолитический фермент постепенно разрушается в исследуемой среде в результате протекающих в среде биохимических процессов.
46. Способ по п.41, в котором обеспечивают одинаковую температуру по всему объему системы in vitro.
47. Способ по п.41, в котором поддерживают заданное давление в системе in vitro.
48. Способ по п.41, в котором регистрацию светорассеяния образца среды и излучения в заданных точках системы in vitro осуществляют посредством конфокальной микроскопии, обеспечивающей перефокусировку оптической системы и системы освещения/облучения в заданные моменты времени.
49. Способ по п.41, в котором визуализируют пространственное распределение продукта, обладающего хемилюминесценцией, и образовавшегося сгустка в заданные моменты времени.
50. Способ по п.41, в котором регистрируют светорассеяние от образца среды по методу темного поля.
51. Способ по п.41, в котором регистрируют излучение продукта, обладающего хемилюминесценцией, методом флуоресцентной микроскопии.
52. Способ по п.41, в котором субстрат добавляют в виде раствора в образец исследуемой среды.
53. Способ по п.41, в котором наносят субстрат в лиофилизированной форме на стенки системы in-vitro до размещения образца исследуемой среды.
54. Способ по п.41, в котором облучение и регистрацию флоуресценции продукта, обладающего хемилюминесценцией, осуществляют с частотой от 1 до 60 раз в мин.
55. Способ по п.41, в котором облучение осуществляют после установления стабильной температуры в образце.
56. Способ по п.41, в котором используют плазму, выбранную из группы, состоящей из свободной от тромбоцитов плазмы и бедной тромбоцитами плазмы.
57. Способ по п.41, в котором все этапы способа выполняют при термостатировании при температуре около 37°С.
58. Способ по п.41, в котором стабилизируют рН плазмы до диапазона 7,2-7,4.
59. Способ по п.41, в котором
приготавливают смесь, состоящую из исследуемого образца плазмы, ингибитора контактной фазы, хлорида кальция, флуорогенного субстрата к исследуемому фактору свертывания.
60. Способ по п.1, в котором в качестве фактора свертывания определяют тромбин.
61. Устройство определения пространственно-временного распределения активности протеолитического фермента в гетерогенной системе, содержащее
систему in-vitro, которая содержит кювету для размещения образца исследуемой среды, состоящей из одного из плазмы крови, цельной крови, воды, лимфы и геля, и протеолитического фермента или его предшественника, который распределен в образце исследуемой среды,
активирующее средство для размещения и ввода в кювету активатора процесса, обеспечивающего инициирование изменения пространственно-временного распределения активности протеолитического фермента,
средство для обеспечения одинаковой температуры в системе in vitro,
средство поддержания давления системы in vitro,
средство для облучения образца исследуемой среды в заданные моменты времени возбуждающим излучением для возбуждения свечения флуорофора/ продукта, обладающего хемилюминесценцией,
средство для освещения образца исследуемой среды излучением видимого спектра по методу темного поля,
средство регистрации интенсивности свечения субстрата/светорассеяния от образца в заданных точках образца исследуемой среды в заданные моменты времени, причем интенсивность свечения зависит от активности исследуемого протеолитического фермента,
средство управления средствами облучения/освещения, позволяющий управлять временем включения/выключения, интенсивностью облучения/освещения и синхронизировать между собой работу средств облучения/освещения и средства регистрации,
вычислительное средство для расчета пространственного распределения активности протеолитического фермента во времени,
средство визуализации формирующегося/распадающегося сгустка методом темного поля.
62. Устройство определения пространственно-временного распределения активности протеолитического фермента в гетерогенной системе, содержащее
систему in-vitro, которая содержит кювету для размещения образца исследуемой среды, состоящей из одного из плазмы крови, цельной крови, воды, лимфы и геля, и протеолитического фермента или его предшественника, который распределен в образце исследуемой среды,
активирующее средство для размещения и ввода в кювету активатора процесса, обеспечивающего инициирование изменения пространственно-временного распределения активности протеолитического фермента,
средство для обеспечения одинаковой температуры в системе in vitro,
средство поддержания давления системы in vitro,
средство для облучения образца исследуемой среды в заданные моменты времени возбуждающим излучением для возбуждения изменения цвета хромофора,
средство для освещения образца исследуемой среды излучением видимого спектра по методу темного поля,
средство регистрации интенсивности изменения цвета субстрата/светорассеяния от образца в заданных точках образца исследуемой среды в заданные моменты времени, причем интенсивность изменения цвета зависит от активности исследуемого протеолитического фермента,
средство управления средствами облучения/освещения, позволяющий управлять временем включения/выключения, интенсивностью облучения/освещения и синхронизировать между собой работу средств облучения/освещения и средства регистрации,
вычислительное средство для расчета пространственного распределения активности протеолитического фермента во времени,
средство визуализации формирующегося/распадающегося сгустка методом темного поля.
63. Способ диагностики нарушений системы гемостаза по изменению пространственного временного распределения активности протеолитического фермента (фактора свертывания) в гетерогенной системе, заключающийся в том, что
используют плазму, выбранную из группы, состоящей из свободной от тромбоцитов плазмы и бедной тромбоцитами плазмы,
поддерживают стабильную температуру плазмы с точностью 1°С градус в диапазоне температур 25-45°С,
стабилизируют рН плазмы до диапазона 7,2-7,4,
приготавливают смесь, состоящую из исследуемого образца плазмы, ингибитора контактной фазы, водного раствора хлорида кальция, флуорогенного субстрата для исследуемого фактора свертывания,
помещают приготовленную смесь в измерительную кювету, которую помещают в устройство для исследования,
погружают в кювету средство, служащее активатором свертывания,
определяют пространственное распределение протелитического фермента (фактора свертывания) в заданные моменты времени путем флуорометрического анализа, для чего
облучают кювету УФ излучением, и
регистрируют интенсивность свечения флуорогенного субстрата в каждой точке исследуемого образца плазмы в заданные моменты времени, причем интенсивность свечения зависит от концентрации исследуемого фактора свертывания,
рассчитывают пространственное распределение концентрации фактора свертывания во времени согласно уравнению, получая пространственно-временной 4D массив данных,
на основе полученного 4D массива находят в каждой точке пространства исследуемого образца скорости изменения активности протеолитических ферментов во времени,
в заданные моменты времени освещают содержимое кюветы и регистрируют фотокамерой светорассеяние от образовавшегося фибринового сгустка в образце среды в заданных точках системы in vitro для визуализации образовавшегося фибринового сгустка методом темного поля.
64. Способ по п.62, в котором в качестве фактора свертывания исследует тромбин, фактор Ха, фактор VПа.
RU2011131293/10A 2011-07-26 2011-07-26 Способ определения пространственно-временного распределения активности протеолитического фермента в гетерогенной системе, устройство для реализации указанного способа и способ диагностики нарушений системы гемостаза по изменению пространственно-временного распределения активности протеолитического фермента в гетерогенной системе RU2518247C2 (ru)

Priority Applications (8)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2011131293/10A RU2518247C2 (ru) 2011-07-26 2011-07-26 Способ определения пространственно-временного распределения активности протеолитического фермента в гетерогенной системе, устройство для реализации указанного способа и способ диагностики нарушений системы гемостаза по изменению пространственно-временного распределения активности протеолитического фермента в гетерогенной системе
PCT/RU2012/000570 WO2013015717A2 (ru) 2011-07-26 2012-07-16 Способ - определения пространственно-временного распределения активности протеолитического фермента в гетерогенной системе (варианты), устройство для реализации указанного способа и способ диагностики нарушений системы гемостаза по изменению пространственно-временного распределения активности протеолитического фермента в гетерогенной системе
US14/234,909 US9938563B2 (en) 2011-07-26 2012-07-16 Method for determining the spatiotemporal distribution of activity of a proteolytic enzyme in a heterogeneous system (variations), a device for realizing same and a method for diagnosing the defects in the hemostatic system on the basis of a change in the spatiotemporal distribution of activity of a proteolytic enzyme in a heterogeneous system
EP12818440.5A EP2752495B8 (en) 2011-07-26 2012-07-16 Method for determining the activity of a proteolytic enzyme (variants), device for the implementation of same and diagnostic method
EA201400156A EA028341B1 (ru) 2011-07-26 2012-07-16 Способ определения активности протеолитического фермента (варианты), устройство для его реализации и способ диагностики
CA2842594A CA2842594C (en) 2011-07-26 2012-07-16 Method for determining the spatial and temporal distribution of the activity of a proteolytic enzyme in a heterogeneous system (variations), device for realizing same and method for diagnosing defects in the hemostatic system on the basis of a change in the spatial and temporal distribution of the activity of a proteolytic enzyme in a heterogeneous system
CN201280045249.3A CN103998620A (zh) 2011-07-26 2012-07-16 用于确定蛋白水解酶活性的方法(变体)、用于实现该方法的装置以及诊断方法
JP2014522787A JP2014521952A (ja) 2011-07-26 2012-07-16 不均一系（ばらつき）におけるタンパク質分解酵素活性の空間分布および時間分布を求めるための方法、これを実現するための装置、不均一系におけるタンパク質分解酵素活性の空間分布および時間分布の変化をもとに、止血系の欠陥を診断するための方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2011131293/10A RU2518247C2 (ru) 2011-07-26 2011-07-26 Способ определения пространственно-временного распределения активности протеолитического фермента в гетерогенной системе, устройство для реализации указанного способа и способ диагностики нарушений системы гемостаза по изменению пространственно-временного распределения активности протеолитического фермента в гетерогенной системе

Publications (2)

Publication Number Publication Date
RU2011131293A true RU2011131293A (ru) 2013-02-10
RU2518247C2 RU2518247C2 (ru) 2014-06-10

Family

ID=47601696

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2011131293/10A RU2518247C2 (ru) 2011-07-26 2011-07-26 Способ определения пространственно-временного распределения активности протеолитического фермента в гетерогенной системе, устройство для реализации указанного способа и способ диагностики нарушений системы гемостаза по изменению пространственно-временного распределения активности протеолитического фермента в гетерогенной системе

Country Status (8)

Country Link
US (1) US9938563B2 (ru)
EP (1) EP2752495B8 (ru)
JP (1) JP2014521952A (ru)
CN (1) CN103998620A (ru)
CA (1) CA2842594C (ru)
EA (1) EA028341B1 (ru)
RU (1) RU2518247C2 (ru)
WO (1) WO2013015717A2 (ru)

Families Citing this family (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105738378A (zh) * 2016-02-23 2016-07-06 上海航天动力科技工程有限公司 一种多功能自显像着色渗透剂及其应用
ES2857686T3 (es) * 2016-11-30 2021-09-29 Obschestvo S Ogranichennoy Otvetstvennostyu Hemacore Labs Dispositivo para monitorizar la dinámica espacial y temporal de trombina
RU2657294C1 (ru) * 2016-12-15 2018-06-13 Государственное бюджетное учреждение здравоохранения Московской области "Московский областной научно-исследовательский клинический институт им. М.Ф. Владимирского" (ГБУЗ МО МОНИКИ им. М.Ф. Владимирского) Устройство для количественной оценки флюоресценции и оптических свойств тканей in vivo
JP7273631B2 (ja) * 2019-06-26 2023-05-15 株式会社日立製作所 検体性状識別装置、検体性状識別方法及び検体搬送システム
US20240044921A1 (en) * 2020-12-28 2024-02-08 Fujimori Kogyo Co., Ltd. Method for evaluating blood coagulation performance, and method for inspecting risk of thrombosis
CN114465969B (zh) * 2021-12-23 2023-07-04 珠海格力电器股份有限公司 通讯消息组的管理方法、装置、设备和存储介质

Family Cites Families (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE3516579A1 (de) * 1984-11-19 1986-05-22 Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim Gerinnungstest auf teststreifen
EP0608235B2 (en) * 1991-11-13 2005-05-04 T.A.C. Thrombosis and Coagulation Aktiebolag Method for the diagnosis of blood coagulation disorders
US5339830A (en) 1992-01-21 1994-08-23 Blake Joseph W Iii Blood coagulation test system
DK1159448T3 (da) * 1999-03-04 2004-08-09 Synapse Bv Bestemmelse af biologisk aktive former af proteolytiske enzymer
WO2003023360A2 (en) * 2001-09-10 2003-03-20 Meso Scale Technologies, Llc Methods and apparatus for conducting multiple measurements on a sample
CA2484554C (en) * 2002-05-01 2012-12-04 Synapse B.V. Diagnostic test for determining the concentration of transient proteolytic activity in composite biological media
EP1717588A1 (en) * 2005-04-29 2006-11-02 Synapse B.V. Measuring thrombin activity in whole blood
US8138308B2 (en) * 2005-12-27 2012-03-20 Mcmaster University Modified peptide substrate
US8133696B2 (en) * 2006-06-06 2012-03-13 Thrombinoscope B.V. Method for determining thrombin activity
JP5145426B2 (ja) * 2007-11-02 2013-02-20 メドプラスト ソシエテ アノニム 空間的な線維素凝塊形成を監視するための方法及び装置
EP2088435B1 (en) * 2008-02-07 2011-07-13 Synapse B.V. Time-course measurement of enzymatic activity corrected for impacts of disturbances relating to the reaction of the enzyme with a substrate
RU2395812C2 (ru) 2008-11-14 2010-07-27 Общество с ограниченной ответственностью "Медицинские инновации" Устройство для исследования пространственного свертывания крови и ее компонентов

Also Published As

Publication number Publication date
EP2752495A2 (en) 2014-07-09
US9938563B2 (en) 2018-04-10
EA201400156A1 (ru) 2014-08-29
JP2014521952A (ja) 2014-08-28
WO2013015717A8 (ru) 2014-02-20
CN103998620A (zh) 2014-08-20
EP2752495B1 (en) 2020-03-25
EA028341B1 (ru) 2017-11-30
CA2842594C (en) 2020-01-07
WO2013015717A3 (ru) 2013-04-11
RU2518247C2 (ru) 2014-06-10
WO2013015717A2 (ru) 2013-01-31
CA2842594A1 (en) 2013-01-31
US20140227726A1 (en) 2014-08-14
EP2752495A4 (en) 2015-04-15
EP2752495B8 (en) 2020-04-29

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RU2011131293A (ru) Способ определения пространственно-временного распределения активности протеолитического фермента в гетерогенной системе, устройство для реализации указанного способа и способ диагностики нарушений системы гемостаза по изменению пространственно-временного распределения активности протеолитического фермента в гетерогенной системе
JP2634219B2 (ja) 乾燥化学試薬及び常磁性粒子を使用する、正確、迅速かつ簡単な凝固アッセイ実施方法
Uchikawa et al. The effect of carbonic anhydrase on the kinetics and equilibrium of the oxygen isotope exchange in the CO2–H2O system: Implications for δ18O vital effects in biogenic carbonates
US8535282B2 (en) Wound healing sensor techniques
Hemker Handbook of synthetic substrates
US20040197905A1 (en) Methods and devices for monitoring cellular metabolism in microfluidic cell-retaining chambers
CN106066325B (zh) 一种检测碱性磷酸酶的方法
JP2015528911A (ja) 低容積の凝固検定
US8133696B2 (en) Method for determining thrombin activity
JP2015521738A5 (ru)
CA2879601C (en) Device for monitoring spatial coagulation of blood and of components thereof
CN114578068A (zh) 血液受试体的凝固能力的评价方法、以及用于在该方法中使用的试剂、试剂盒及装置
CN109438326A (zh) 一种用于检测羧酸酯酶的荧光探针及其制备方法与专用检测试剂盒
JP2010508036A (ja) 細胞を含む複合性の生物学的媒体において一過性のプロテイン分解活性の濃度を測定するための方法
AR071034A1 (es) Uso de la catepsina c en el diagnostico de susceptibilidad al dolor y para el tratamiento del dolor
RU123166U1 (ru) Устройство мониторинга постранственного свертывания крови и ее компонентов
JPH10295362A (ja) 細胞培養容器
EP3239713A1 (en) Method for analyzing blood specimen, reagent and reagent kit for analyzing blood specimen, and blood specimen analyzer
Crosby et al. Critical Evaluation of the interaction of special proteins with human stratum corneum via terahertz scanning reflectometry and spectrometry
RU2786591C2 (ru) Способ определения показателей коагуляции плазмы крови - активности тромбина, времени рекальцификации плазмы и толерантности плазмы к гепарину
Ma et al. A novel ratiometric MALDI-MS quantitation strategy for alkaline phosphatase activity with a homogeneous reaction and a tunable dynamic range
EA037013B1 (ru) Устройство мониторинга пространственно-временной динамики тромбина
Cappellano Detecting a Heterogenous Sample of Pigmented Melanoma Cell Lines Using Photoacoustic Flow Cytometry
Rosario Effects of apoptotic inhibitor addition to cell viability prolongation of suspended bench-scale CHO culture and analysis of raman spectra in off-line bioreactor samples
Ruettger et al. Microplate Assay For Cathepsin Detection in Viable Cells Using Derivatives of 4‐Methoxy‐β‐Naphthylamide

Legal Events

Date Code Title Description
HZ9A Changing address for correspondence with an applicant
PD4A Correction of name of patent owner
QB4A Licence on use of patent

Free format text: LICENCE FORMERLY AGREED ON 20190806

Effective date: 20190806