RU2007143928A

RU2007143928A - Способ получения фармацевтического препарата из культуральной среды дрожжей и фармацевтический препарат на основе альфа-интерферона человека (варианты)

Info

Publication number: RU2007143928A
Application number: RU2007143928/13A
Authority: RU
Inventors: Марина Владимировна Падкина (RU); Марина Владимировна Падкина; Марина Владимировна Доброгорская (RU); Марина Владимировна Доброгорская; Александр Владимирович Карабельский (RU); Александр Владимирович Карабельский; Елена Викторовна Самбук (RU); Елена Викторовна Самбук; Михаил Николаевич Смирнов (RU); Михаил Николаевич Смирнов
Original assignee: Общество с ограниченной ответственностью "Биотех" (RU); Общество с ограниченной ответственностью "Биотех"
Priority date: 2007-11-29
Filing date: 2007-11-29
Publication date: 2009-06-10
Also published as: RU2380405C2

Abstract

1. Способ получения фармацевтического препарата из культуральной среды дрожжей, включающий концентрирование культуральной среды, осаждение целевого белка и его хроматографическую очистку с использованием гель-фильтрации и ионообменной хроматографии, отличающийся тем, что культивируют штамм дрожжей Pichia pastoris, который является продуцентом альфа-16-интерферона человека, а хроматографическую очистку проводят последовательно на Сефакриле HR 100 и диэтиламиноэтил-целлюлозе. ! 2. Способ по п.1, отличающийся тем, что осаждение целевого белка проводят при 60%-ном насыщения сульфата аммония. ! 3. Способ по п.1, отличающийся тем, что гель-фильтрацию на Сефакриле HR 100 проводят с использованием в качестве уравновешивающего и элюирующего раствора 50 мМ аммоний-ацетатного буфера (рН 5,5), содержащего 2 мМ этилендиаминтетрауксусной кислоты и 0,5% Твин-20. ! 4. Способ по п.1, отличающийся тем, что ионообменную хроматографию белков, полученных по п.3, на диэтиламиноэтил-целлюлозе проводят с использованием в качестве уравновешивающего раствора 50 мМ аммоний-ацетатного буфера (рН 7,0), содержащего 2 мМ этилендиаминтетрауксусной кислоты, 0,5% Твин-20, а отмывку примесных белков осуществляют последовательным использованием уравновешивающего буферного раствора и уравновешивающего буферного раствора, содержащего 0,1 М хлористого натрия, элюцию проводят градиентом концентрации хлористого натрия 0,1-1,0 М в 50 мМ аммоний-ацетатном буфере (рН 5,5), содержащем 2 мМ этилендиаминтетрауксусной кислоты, 0,5% Твин-20. ! 5. Фармацевтический препарат на основе альфа-интерферона человека по первому варианту, содержащий этилендиаминтетрауксусную кислоту и солевую буферну

Claims

1. Способ получения фармацевтического препарата из культуральной среды дрожжей, включающий концентрирование культуральной среды, осаждение целевого белка и его хроматографическую очистку с использованием гель-фильтрации и ионообменной хроматографии, отличающийся тем, что культивируют штамм дрожжей Pichia pastoris, который является продуцентом альфа-16-интерферона человека, а хроматографическую очистку проводят последовательно на Сефакриле HR 100 и диэтиламиноэтил-целлюлозе.

2. Способ по п.1, отличающийся тем, что осаждение целевого белка проводят при 60%-ном насыщения сульфата аммония.

3. Способ по п.1, отличающийся тем, что гель-фильтрацию на Сефакриле HR 100 проводят с использованием в качестве уравновешивающего и элюирующего раствора 50 мМ аммоний-ацетатного буфера (рН 5,5), содержащего 2 мМ этилендиаминтетрауксусной кислоты и 0,5% Твин-20.

4. Способ по п.1, отличающийся тем, что ионообменную хроматографию белков, полученных по п.3, на диэтиламиноэтил-целлюлозе проводят с использованием в качестве уравновешивающего раствора 50 мМ аммоний-ацетатного буфера (рН 7,0), содержащего 2 мМ этилендиаминтетрауксусной кислоты, 0,5% Твин-20, а отмывку примесных белков осуществляют последовательным использованием уравновешивающего буферного раствора и уравновешивающего буферного раствора, содержащего 0,1 М хлористого натрия, элюцию проводят градиентом концентрации хлористого натрия 0,1-1,0 М в 50 мМ аммоний-ацетатном буфере (рН 5,5), содержащем 2 мМ этилендиаминтетрауксусной кислоты, 0,5% Твин-20.

5. Фармацевтический препарат на основе альфа-интерферона человека по первому варианту, содержащий этилендиаминтетрауксусную кислоту и солевую буферную систему, отличающийся тем, что он содержит альфа-16-интерферон человека и Твин-20 при следующем соотношении ингредиентов:

Рекомбинантный альфа-16-интерферон человека с активностью 10⁶-10⁷ МЕ/мл 10-100 мкг/мл Этилендиаминтетрауксусная кислота 0,5-1,5 мг/мл Твин-20 0,5-5 мг/мл Буферный раствор рН 5,5 не более 6,0, 10-20 мМ

6. Фармацевтический препарат по п.5, отличающийся тем, что он содержит модифицированный рекомбинантный альфа-16-интерферон человека.

7. Фармацевтический препарат по п.5, отличающийся тем, что он имеет жидкую форму, например, в виде эмульсии, и/или сиропа, и/или капель, и/или липосомной формы.

8. Фармацевтический препарат на основе альфа-интерферона человека по второму варианту, содержащий этилендиаминтетрауксусную кислоту и солевую буферную систему, отличающийся тем, что он содержит альфа-16-интерферон человека и Твин-20 при следующем соотношении ингредиентов до начала лиофильной сушки:

Рекомбинантный альфа-16-интерферон человека с активностью 10⁶-10⁷ МЕ/мл 10-100 мкг/мл Этилендиаминтетрауксусная кислота 0,5-1,5 мг/мл Твин-20 0,5-5 мг/мл

Буферообразующие соли, обеспечивающие рН 5,5 - не более 6,0

и молярность, равную при растворении 10-20 мМ

9. Фармацевтический препарат по п.8, отличающийся тем, что он содержит модифицированный рекомбинантный альфа-16-интерферон человека.

10. Фармацевтический препарат по п.8, отличающийся тем, что препарат имеет сухую лиофилизованную форму как основу лекарственных форм в виде таблетки, и/или капсулы, и/или порошка, и/или гранул, и/или суппозитория.