RU1522494C

RU1522494C - Способ получения инактивированной вакцины гриппа

Info

Publication number: RU1522494C
Authority: RU
Inventors: М.А. Пушкарев; В.В. Петухов; Л.И. Еремеева; Л.В. Инякина; Ф.Н. Нигамов
Original assignee: Научно-производственное объединение "Иммунопрепарат"
Priority date: 1987-06-16
Filing date: 1987-06-16
Publication date: 1994-11-15

Abstract

Изобретение относится к медицинской биотехнологии, в частности к получению вакцины гриппа. Целью изобретения является повышение качества вакцины за счет уменьшения содержания в ней овальбумина. Для этого вирус гриппа концентрируют и очищают поэтапно сначала методом сорбцин-элюции на куриных эритроцитах, при этом объем уменьшается в 10 раз, содержание овальбумина в элюате составляет 40 - 50 мкг/мл. Полученный элюат далее концентрируют и очищают методом ультрафильтрации в сочетании с диафильтрацией на полых волокнах ВПУ-100. Объем уменьшается в 5 раз, концентрация овальбумина после ультрафильтрации составляет 4 - 5 мкг/мл. Полученный концентрированный элюат подвергают ультрацентрифугированию в градиенте плотности сахарозы в режиме рециркуляции при скорости протока 7 - 8 л/ч. В результате получают уменьшенный еще в 30 раз объем концентрата с содержанием овальбумина 0,1 мкг/мл и гемагглютинина 10 - 20 мг/мл.

Description

Изобретение относится к медицинской биотехнологии, в частности к получению вакцин гриппа.

Целью изобретения является повышение качества вакцины за счет уменьшения содержания в ней овальбумина.

С этой целью вируссодержащий материал, частично очищенный и сконцентрированный с помощью сорбции - элюции на куриных эритроцитах, дополнительно очищают и концентрируют методом ультрафильтрации в сочетании с диафильтрацией на полых волокнах ВПУ-100, а ультрацентрифугирование проводят в режиме рециркуляции при скорости протока 7-8 л/ч.

П р и м е р. Вируссодержащую аллантоисную жидкость с титром 1:640 в количестве 450 л добавляют в куриные эритроциты и оставляют на сутки при 4^оС для полной сорбции вируса. Затем надосадочную жидкость сливают, а осадок эритроцитов заливают физиологическим раствором и оставляют на 24 ч при 4^оС. Надосадочную жидкость снова сливают, а осадок 3 раза промывают, добавляя охлажденный физиологический раствор в соотношении 1:1 и центрифугируя при скорости 2500 об/мин.

Затем к осадку отмытых эритроцитов с адсорбированным на них вирусом добавляют физиологический раствор в соотношении 1:10 к объему исходной аллантоисной жидкости и помещают их в водяную баню при 38^оС на 3 ч, после чего взвесь эритроцитов центрифугируют при 2500 об/мин. Надосадочную жидкость, содержащую основную часть вируса, отделяют. Аналогично проводят повторное элюирование. Таким образом получают 50 л элюата с титром 1:5120 и содержанием овальбумина 40 мкг/мл.

Ультрафильтрацию ведут на полых волокнах ВПУ-100. Вход и выход колонки с полыми волокнами подключают к бутыли с элюатом. Таким образом, процесс ведется в режиме рециркуляции. 50 л элюата концентрируют до 5 л и далее ведут диафильтрацию, добавляя физиологический раствор так, чтобы объем элюата оставался постоянно 5 л, объем физиологического раствора на диафильтрацию составляет 50 л. Затем вирус смывают с волокон сначала физиологическим раствором, а затем 0,3 М раствором NaCl. Получают 10 л концентрированного элюата с титром 1:25000 и содержанием овальбумина 4 мкг/мл.

Полученный концентрированный элюат центрифугируют в градиенте плотности сахарозы в проточном роторе ультрацентрифуги SCР60Y "Хитачи" в режиме рециркуляции.

Рециркуляция осуществляется следующим образом. Концентрированный элюат из бутыли поступает на вход проточного ротора SRP 35 СТ ультрацентрифуги SCP60Y "Хитачи", пройдя через ротор, жидкость, содержащая некоторое остаточное количество вируса, снова поступает в ту же бутыль. Процесс продолжается до тех пор пока жидкость, содержащаяся в бутыли, не станет прозрачной. Получают 300 мл концентрата с титром 1:800000 и содержанием овальбумина 0,1 мкг/мл.

Claims

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ИНАКТИВИРОВАННОЙ ВАКЦИНЫ ГРИППА путем сорбции вируса гриппа на куриных эритроцитах из инфицированной им аллантоисной жидкости, двукратной экстракции его физиологическим раствором, проточного центрифугирования в градиенте плотности сахарозы, отделения суспензии, обработки ее эфиром, отбора водной фазы, содержащей целевой продукт, с последующей ее стерилизацией и инактивацией, отличающийся тем, что, с целью повышения качества вакцины за счет уменьшения содержания в ней овальбумина, перед проточным центрифугированием, которое проводят в режиме рециркуляции при скорости протока 7 - 8 л/г в течение 3 ч, экстракт подвергают ультрафильтрации в режиме рециркуляции, затем проводят диафильтрацию на полых волокнах ВПУ-100 общей площадью 10 м² в течение 2 ч при скорости протока жидкости через модуль 6 л/мин, целевой продукт элюируют с мембран 0,3 М раствором хлористого натрия.