PT96265B - Processo para a preparacao de derivados de 3-(n-metil-n-alquil)-amino-2-metoxi-metileno-propan-1-ol - Google Patents

Description

Descrição referente a patente de invenção de SOCIETE DE CONSEILS DE RECHERCHES ET D* APPLICATIONS SCIENTIFIQUES S.C.R.A.S., socieda de anónima francesa, industrial e comercial, com sede em 51/53 rue du Docteur Blanche, 75016 Paris, França, (inventores: Pierre Braquet, Colette Broquet, Bénédicte Vandamme e Paola Principe-Nicolas residentes na França), para PROCESSO PARA A PREPARAÇÃO DE DERIVA DOS DE 5~(N-*KETIL-N-ALQUIL)-AMINO

-2-MET0XI-METILENQ-PR0PAN-l-0L^H.

Descrição

A presente invenção refere-se a um proces so para a preparação de novos derivados fosfolipídicos e, mais particularmente, 1 preparação de novos derivados de

3-(N-metil-N-alquil)-amino-2-metoxi-metileno-propan-l-ol. A presente invenção descreve o processo para a preparação de novos compostos fosfolipídicos de fórmula geral:

CH,

I ³ j—N-R —CH^CH-j —0—A—Y

- 1 I.

em que

- R representa um grupo alquilo possuindo 10 e entre 20 átomos de carbono na cadeia;

- A representa um grupo:

il

-E—0—(CH₉)₉-, i(CH₂)_nG-(CH₂)_n-, -Çj-HH 0 0 n representa um inteiro compreendido entre 2 e 10;

- Y representa os seguintes radicais de amónia quaternária: amónio, alquil-amónio, dialquil-amónio, traialquil-amónio, piridinio, piperidinio, pirrolio ou pirrolidinio, possuindo cada grupo alquilo entre 1 e 6 átomos de carbono.

Esses compostos são particularmente interessantes devido ao facto de possuírem actividade anti-tumor, tendo-se verificado que são muito mais importantes do que compostos afins conhecidos na especialidade tais como, por exemplo, os que se encontram descritos em Synthesis of Thioether Ehosphocholine Analogues” (Eimar BOSIES, Dieter B.J. HERBMAM, Uwe BICKER, Rudi GALL and Wulf EAHIKE - LIEIDS. Vol 22. No. 11, 1987, p. 947-951).

Mais particularmente, a presente invenção descreve o processo para a preparação de compostos de fórmula geral I, consistindo esse processo em fazer reagir, num solvente aprótico e na presença de trietil-amina, a uma temperatura compreendida entre 0 e 80°C e sob uma atmosfera de azoto, o composto de fórmula

r-N-R —OH II.

<S^^SSSSSS5SEa*Er~ ^Λ'“ϋϊ*ί.ΑΜ^“·

em que R possui as significações definidas antes, com um excesso estequiométrico variável entre 10 e 100$ de um composto seleccionado entre 0

Br—(CH₂)_n—0 —Cl ou O=C=-H(CH₂) Br (em que n possui as significações definidas antes) e com um excesso estequiométrico variável entre 30 e 50$ de um composto 2 seleccionado entre uma amina associada com um composto de amónia quaternária anteriormente definido de fórmula Y, designadamente o amoníaco, B-alquil-amina, N,K-dialquil-amina, N ,ΓΓ,Η-trialquil-amina, piridina, piperidina, pirrol ou pirrolidina. Como é evidente, em alguns casos, o reagente Z também pode ser o solvente da reacção. Sendo assim, a definição ”um excesso estequiométrico” carece de sentido.

processo pode ser ilustrado pelo seguinte esquema I de reacção.

Esquema I de reacção

CH,

I ³ r—H—R —ch₂och^ -0H

II,

C1?<q]⁺ Z \z

CHBr(CH₂)_ngCl+Z

K/

CH.

-W—R	—N—R
-ch2och5	—CH2OCH3
-ol O(GH2)2Y	L°?<CH2V
0'	0 _

—0Η₂00Η₃ *-OCHH(CH₂) Y a

0=C=H(CH₂)_ílBr+Z

K/

CH^ t-4—R

composto de partida de formula II pode ser preparado conforme resumido no esquema II de reacção seguinte e conforme descrito pormenorizadamerite nos exemplos 1 a 9 preparatórios que se seguem em que R representa °12^H25’ ^Cl6^H33 θ ^C18^H37’

EXEMPLOS PREPARATÓRIOS

1. 2-fenil-l,3-dioxano-5,5-dioarhoxilato de dietilo 1

Utilizando um aparelho de Dean-Stark manteve-se ao refluxo durante 3 horas uma mistura de his-(hidroxi-metil)-malonato de dietilo (27 g; 0,12 mol), de benzaldeído recentemente destilado (12,5 ml; 0,12 mol) e de ácido p-tolueno-sulfónico (0,2 g) em 250 ml de tolueno seco, Eliminou-se o tolueno no vácuo e destilou-se o resíduo.

Εθ 170°C (29.5 g, rendimento de 78%)

Peso molecular = 308

IV: 1 740 cm^-1 (C=0)

RÍ®-¹H 60 MHz CD01₅, TMS

7.35 (s, 5H, jó) ·, 5.4 (s, 1H, CH/); 4.8 (d, 2H); 4.2 (m, 6H, 2H + OCHgCH^); 1.2 (m, 6H, OCE^CH^)

2. Ácido 5-etoxi-carhonil-2-fenil-1,3-dioxano

5-carboxílico 2

Adicionou-se 25 g do composto 1 (0,08 mol) a uma solução de 6,6 g de KOH (0,11 mol) em 140 ml de etanol, Após 4 horas à temperatura ambiente evaporou-se o etanol θ tratou-se o resíduo com HC1 IN (125 ml) â temperatura

Esquema II de reacção

H0H_oC hoh₂g

'^CO2^C2^H5 co₂-c₂h₅

Obteve-se 21,6 g de composto 2 (95$).

p.f. 108°C.

Peso molecular = 280

IV (cm^-1): 3400 (OH) j 3100 - 3040 (^)j 1740 (COOBt); 1690 (COOH)j 1100 (C-0-)

MHz; CDCl^, TMS.

S: 7.4 (s, 5H, 0)5.5 (s, 1H, CH^); 4.9 (d, 2H, CH₂)j 4.25 (m, 4H, 2H e OCÍ^CH^) $ 1.3 (t, 3H, 0GH₂CH^)

2-fenil-l, 5-‘dioxano-5-car-boxilato de etilo

Durante 5 horas manteve-se ao refluxo 9,2g (0,053 mol) de cpmposto 2 em 20 ml de piridina seca. Eliminou-se a piridina no vácuo, dissolveu-se o resíduo em CH₂01₂, lavou-se com água e depois com uma solução salina, secou-se e evaporou-se para proporcionar o composto 2 (6,8 g; 88%)

P.f. 69°C.

Peso molecular = 236

IV: 1 740 cm^-1 (0=0)

ΕΜΝ-Λη, 60 MHz, GDCl^, TMS g: 7.4 (s, 5H, /); 5.4 (d, 1H, CHjzí) f 3.8 - 4.8 (m, 6H); 3.2 (m, 1H, H-0—-^C02ET) ; 1.3 (m, 3H, OCHgCH^).

4. 5-hidroxi-metileno-2-fenil-1,5-dioxano 4 A uma mistura de 0,62 g de LiAlH^ (0,016 mol) em éter dietílico absoluto (80 ml) adicionou-se lentamente uma solução de 6,8 g de composto 2 (0,029) mol em 60 ml de éter dietílico absoluto. Agitou-se a mistura durante 4 horas a temperatura ambiente. Depois adicionou-se, ã temperatura de 0°C, acetato de etilo (8 ml), água (4 ml) e NaOH a 15% (4 ml). Decantou-se a camada etérea, secou-se e evaporou-se para proporcionar 5,12 g (92%) de composto 4, com o aspecto de um oleo amarelo. Peso molecular = 194 CGE, rf: 0.5 (CH₂C1₂) sobre alumina.

IV: 3430 cm^-1 (OH)

Μ^Η 60 MHz, CDGl^, TMS δ: 7.4 (s, 5H, jzS); 5-3 (d, 1H, CHjá) ? 4.3 - 3.2 (m, 6H) j 2.2 (m, 1H, CH - CH₂0H); 1,3 (1H, OH)

5. 5-metoxi-metileno-2-fenil-l,5-dioxano 5

A uma mistura de HNa (50%: 1,06 g) em 40 ml de THE seco, sob agitação e á temperatura de 0°C, adicionou-se gota a gota uma solução de 5,12 g de composto 4 em 40 ml de THE. Decorridos 30 minutos adicionou-se CH,I (6,6 ml) _e agitou-se a mistura à temperatura de 0°C durante

- 6 6 horas e depois agitou-se durante a noite a temperatura ambiente. Adicionou-se água e extraiu-se a mistura com éter dietílico, lavou-se a camada orgânica com água até se conseguir a neutralidade e depois com uma solução salina, secou-se e evaporou-se. Purificou-se o resíduo em coluna de alumina (eluente CH₂C1₂) para proporcionar 4,8 g de composto £ (86%).

Peso molecular = 208

OOP, rf: 0,86 (CH₂01₂)alumina.

IV (cm^-1): 3100 - 3040 (¢), 1100 (C-0-)

M-¹!!, 60 MHz, CDCl^, TMS é: 7.4 (s, 5H, /); 5.5 (d, 1H, H-0-¢); 4.8 - 3.2 (m,

9H)i 2.3 (m, 1H, CH - CHgOMe).

. 2-metoxi-metileno-1 -0-benzil-propan-1,3~

-diol 6

A uma quantidade de composto 5, (5,4 g; 0,026 mol), sob agitação â temperatura de 0°C, adicionou-se gota a gota uma solução de BH^ em THF (M, 52 ml). Agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante 48 horas e depois temperou-se com água arrefecida para a temperatura de 0°0 e extraiu-se com éter dietílico. Após a eliminação do solvent submeteu-se o produto impuro a cromatografia sobre gel de sílica (eluente CH₂C1₂ e depois CH₂Cl₂/MeOH 99:1) para proporcionar o composto 6. (4 g, 73%) com o aspecto de um óleo viscoso.

Peso molecular = 210

OOP, rf: 0.24 (0H₂Cl₂) alumina

IV (cm^-1): 3450 (OH); 3100 - 3040 (jz$); 1100 (C-0-) £0-¾ 60 MHz, CDCl^» TMS

S: 7.3 (s, 5H, ¢); 4.5 (s, 2H, CH₂/); 3.1 - 3.7 (m, 10 Ξ);

2.1 (m, 1H, CH - CH₂O-); 2.6 (1H, OH) · 5.0.-metil-sulfonil-2-metoxi-metileno-l-O-benzil-propan-1,3-diol 7 A uma solução do composto 6. (4 g; 0,019 mol), numa mistura de 60 ml de éter dietílico seco e de 40 - 7 Λ (Κ rssKizaaiu'-»ml de CHgClg seco adicionou-se gota a gota uma quantidade de ClSOgMe (2,24 ml; 0,029 mol). Agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante 24 horas. Após a extracção com CHgClg lavou-se a camada orgânica com uma solução salina até se obter o valor pH 7 e secou-se. Evaporou-se o solvente e submeteu-se a cromatografia sobre gel de silica (eluente CH₂Cl₂/MeOH 99 il) para proporcionar o composto ]_ (4,6 g; 84%) com o aspecto de um óleo viscoso.

Peso molecular - 288

CCF, rf: 0.7 (CH₂Cl₂/MeOH: 95:5), gel de silica

IV (cm¹): 1350 (S0₂); 1170 (S0₂); 1100 (C-O-C)

EM 60 MHz, CDCl^, TMS ( )

4.35 (d, 2H, CH₂0S0₂); 3.3 - 3.6 (m, 7H); 3.0 (s, 3H, SO₂CH₃); 2.3 (m, 1H, OH - CH₂0).

As diversas H,N-(metil-alquil)-aminas, com excepção da H,H-(octadecil-metil)amina (Aldrich) foram obtidas a partir dos correspondentes halogenetos de alquilo e da metil-amina, em conformidade com I.G. Earbening A. G. Pr. 784 599, 22 de Julho de 1935.

⁸· 1-H,K-(metil-alquil)amino-2-metoxi-metilen

3-0-benzil-oxi-propano 8 Lissolveu-se uma quantidade do composto 7 (0,016 mol) em DMSO (15 ml) e adicionou-se a uma solução de N,N-(metil-alquil)amina (0,016 mol) e de Et^H (1,4 ml) em DMSO (60 ml). Agitou-se a mistura à temperatura de 80°C durante 24 horas. Após a eliminação do composto DMSO, sob pressão reduzida, dissolveu-se o resíduo em CH₂C1₂, lavou-se a fase orgânica com água e secou-se. Submeteu-se o produto impuro a cromatografia (eluente OH₂Gl₂/MeOH 98:2) para proporcionar o composto 8.

8a R = ^2^25 (^renúimento de 50% - óleo viscoso)

CCl·¹, rf : 0.16 (CH₂Cl₂/Me0H 95:5)

8b R = C^gH^^ (rendimento de 61% - óleo viscoso)

CGE, rf : 0.18 (CH₂Cl₂/MeOH 95:5)

X

8c R = Ο^θΗ^γ (rendimento de 58% - óleo viscoso)

CCR, rf í 0.18 (0H₂01₂/Me0H 95:5)

IV: 1100 (O-O-) cm^-1

Iffiz, CLCl^, TMS : 7.3 (s, 5H, pí); 4.5 (s, 2H, CHjrf); 3.5 - 5.6 (m, 7H,

CH^

OCH^, 20H₂0) ; 2.15 - 2.4 (m, 7H, CH₂—— H - CHg)

1.8 (m, ÍH, CH - CH₂O); 1.25 simpleto largõ. 2nH, HCH₂(CH₂^

CH~; 0:9 (t, 3H, CH-) il ^J · 5-H,H-(metil-alqu il)amino-2-metoxi-metileno-propan-l-ol 9

Obtido por hidrólise do composto 8 em CHC1_X com Pd/C a 10% (276xl0^Pa (40 Psi), 5 horas à tempe).

(rendimento de 79%) (CH₂Cl₂/MeOH 90:10) ratura de 40°C

I ,1 'I 9a R = θ!2^Η25 TLC rf : 0.36

2b r = c₁₆h (rendimento de 87%) OCR, rf : 0.39 (CH₂Cl₂/MeOH 90:10)

9c R = ^28^37 (rendimento de 85%)

OCR, rf : 0.39 (CH₂Cl₂/MeOH 90:10); peso molecular = 385

IV (cm^-1): 3450 (OH); 1100 (C_O_C)

Μ-^Ή, 60 Bíz, CDCl^, TMS : 5.5 (ÍH, OH); 3-5 - 5-8 (m, 7H, OCH^, 2 CH₂0)

2.7 (m, 7H, NCH^ e CH₂-N-CH₂); 2.2 (m, ÍH, CH-CH₂0); 1.25 simpleto largo, 2nH, HCH^CH^CH^; 0.9 (t, 3H, CH^)

A presente invenção será melhor compreendida após a descrição dos Exemplos que se seguem.

Exemplo 10»

5-H,H-(metil-alquil)amiuo-2-metoxi-meti- 9 -

^e ”^C18^H37 0 leno-propan-l-O-fosfocolina

Alquilo significa um. grupo -6^2^25⁵ ”^Cl6^H33

A = -P 0(CH₂)₂, Ϊ = -E(CH_X)

3^Z3

A uma solução arrefecida (5°C) do composto 9, (7 mmol) e de 3 ml de EEt^ em benzeno seco (20 ml) adicionou-se 2-cloro-2-oxo-l,3,2-dioxafosfolano (2 g, 14 mmol) em 4 ml de CgHg, sob uma corrente de azoto. Agitou-se a mistura a temperatura ambiente durante 8 horas e depois filtrou-se.

! Evaporou-se o filtrado sob pressão reduzido. Dissolveu-se o resíduo em CH^CE (50 ml) e transferiu-se para um reactor. Adicionou-se 30 ml de CH^CE saturado com EMe^ gasoso e aqueceu-se a mistura a temperatura de 65°C durante 24 horas. Evaporou-se o solvente e submeteu-se o resíduo a cromatografia sobre gel de silica (eluente CHCl^/MeOH 90:10; 70:30; 30:70 e depois MeOH) para proporcionar o composto em epígrafe.

10a R = 0χ2^Η25 40%) MH⁺ = 467

COE, rf : 0.25 (CHCl^/MeOH/EH^OH 70:30:7)

10b R = ^ci6^H33 (rendimento de 44%) MH⁺ = 523

CCE, rf : 0.26 (CHCl^/MeOH/EB^OH 70:30:7)

10c R = 6j_8^H37 de 45%) MH⁺ = 551

CCE, rf : 0.26 (CHCly^eOH/EI^OH 70:30:7

IV (cm”¹): 1240 (P=0); 1100 (C-O-C); 1040 (P-0)

RME-¹H, 500 Bíz, CH^OL, TMS

6: 0.85 (t, 3H, CH^); 1.2 /simpleto largo, 2nH, (CH₂) /;

1.45 (m, 2H, ECH₂CH₂) ; 2.0 (m, 1H, CH-CH₂O); 2.15 (s,^, EGH₅) ; 2.3 (m, 4H, CH₂-E-CH₂); 3.15 9H, t (CH^)^ 3.35 (s, 3H, OCH^); 3.4 (d, 2H, CE^-OCH^) ; 3.55 (m, 2H, CHgE);

5.85 (m, 2H, CH₂OP); 4.25 (m, 2H, CH₂OP); 4.25 (m, 2H, poch₂).

Exemplo 11?

Brometo de 5-N,K-(metil-alquil)amino-2·-metoxi-metileno-l-/^^,-(H-piridinio)pentÍl-carbox^-propano

Alquilo significa um grupo “θ2_2^25^, “^Cl6^H55 ^e “^G18^H57

A ₌ -_C—(CH₂)₅, n=5, T =“KZH/'

Gota a gota adicionou-se uma solução do composto 9 (9 mmol) e de tríetil-amina (25 mmol) em 15 ml de tricloro-metano isento de etanol a uma solução de 10 mmol de cloreto de 5-bromo-hexanoilo em 10 ml do mesmo solvente, à temperatura de 0°C e sob uma corrente de azoto. Depois agitou-se a mistura durante aproximadamente 15 horas à temperatura ambiente. Após a evaporação do solvente adicionou-se 50 ml de piridina seca ao resíduo obtido e a seguir agitou-se a mistura ã temperatura de 80°C sob uma corrente de azoto durante 24 horas. Eliminou-se a piridina no vácuo e purificou-se o resíduo por cromatografia em coluna (eluente CHCl^, e depois CHCl^/MeOH 90:10) para proporcionar o composto em epígrafe.

11a R = θ22^25 (^ren-ó.imento de 68%)

11b R = (rendimento de 60%)

11c R = θΐ8®57 (^roⁿdimento de 71%)

IV (cm”¹): 1100 (C-O-C)j 1740 (C=0); 1640 (piridina)

Μ- H, 500 MHz, 0DG1

TMS

6i 0.85 (t, 5H, CH^); 1.2 /simpleto largo, 2nH, (CH₂)n7j

2.2 (s, 5H, ECH₃); 2.55 £7 2H, G(0)CH₂7; 5.55 (s, 5H, OGH^) 5.45 (d, 2H, CH₂-OCH₃)

Exemplo 15:

Brometo de 5-K,E-(metil-alquil)amino-2- 11

-metoxi-metileno-l-/S'^t-(E-piridinio) -pentil-carbamoil-oxi7-propano

Alquilo significa um grupo -C-^H^’ -^C16^H33 ^e “⁶18^H37 + /A ₌ -c—EH(CH₀)j--, n=5, Ί =-E< 0 >

|| 0

Durante 2 dias aqueceu-se à temperatura de 80°C uma mistura de composto 9 (9 mmol), de isocianato de 5-bromo-pentilo (12 mmol) de benzeno e de 30 ml de piridina, sob uma corrente de azoto. Eliminou-se a piridina no vácuo e dissolveu-se o resíduo obtido em CHCl^, lavou-se e secou-se. Evaporou-se o solvente e submeteu-se o resíduo a cromatografia (OHCl^ e depois CHCl^/MeOH; 95:5; 90:10) para proporcionar o composto em epígrafe.

12a R = 02.2^25 (rendimento de 49%)

12b R = (rendimento de 52%)

12c R = θ28^Η37 (^renâ-imento de 62%)

IV (cm¹): 1100 (C-O-C); 1640 (piridina) 1720 (COEH); 3550 (EH)

500 Iffiz, CDCl^j TMS

5: 0.90 (t, 3H, CH^); 1.2 ^/simpleto largo, 2nH, (CH₂)n7;

2.15 (s, 3H, ECH^); 3-25 /t, 2H, C(0)EHCH₂7í 5.35 (s, 3H, OCH^); 3.4 (d, 2H, CH₂-OCH₃); 5.1 (t, 2H, CH₂E); 5.6 (d,

1H, EH)

Exemplo 13;

Brometo de 3-E,E-(metil-alquil)amino-2-metoxi-metileno-1-/^ * -(E-piperidinio) pentil-carbamoil-oxi7propano Alquilo representa um grupo -C^H^, ”^C16^H33 ^{e G}18^H37

A = -0—EH(CH₂)₅-, n=5, Y =-E<^

Preparou-se este composto pelo mesmo pro cesso descrito no Exemplo 12 mas utilizando piperidina em

vez de piridina.

13a R = θΐ2®·2 5 (^ren(3-^imen^⁰ de 49%)

13~b R = (rendimento de 42%)

13c R = (rendimento de 53%)

IV (cm¹): 1100 (C-O-C)j 1720 (CORH); 3350 (RH)

Μ-¹!!, 500 KHz, CDCl^, TMS

6: 0.85 (t, 3H, CHp; 1.2 ^simpleto largo, 2nH, (GH₂)n7; 2.15 (s, 3H, HCH^) J 3.25 ^t, 2H, C(0)RHCH₂7í₊3.25 (s, 3H, OCH^); 3.4 (d, 2H, CH₂-0-CH₃) ; 5 (t, 2H, CHgR) j 5.6 (d, 1H, RH)

Exemplo 14:

Brometo de 3-R>R-(^etil-alquil)amino-2metoxi-metileno-1-/^' (R-pirrolio)-pentil car~bamoil-oxi7propano

Alquilo represente nm grnpo “^C16^H33 θ “^G18^H37 A = -ΟΙ!

RH(CH₂)₅· n=5, Y=-R!

Preparou-se este composto pelo mesmo processo descrito no Exemplo 12 mas utilizando pirrol em vez de piridina.

14a R = 0^2^25 (^ren-dimento de 53%)

14b R = O^g^^ (rendimento de 61%)

14c R = (rendimento de 40%)

IV (cm¹): 1100 C-O-C); 1720 (CORH)j 3350 (RH)

RMR- H, 500 MHz, GDC1

3’

TMS ó: 0.85 (t, 3H, CH^)j 1.2 /simpleto largo, 2nH, (CH₂)n7í 2.2 (s, 3H, RCH₃)j 3.25 ^t, 2H, C(0)RHCH₂7í 3.25 (s, 3H, OCH^)j 3.4 (d, 2Ξ, GH₂-O-CH^) j 5 (t, 2H,. CH^); 5.6 (d, 1H, RH)

Exemplo 15:

Brometo de 3~RR~(metil-alquil)amino-2-metoxi-metileno-l-/<3 * -(R-pirrolidinio) pentil-carbamoil-oxi7propano

Alquilo representa um grupo “Ο^γΗ^ e

~^G18^H37 +/--,

A = -0—RH (CH_O)_K-, n=5, Y =-R<

II ^{2 5 x}—¹

O

Preparou-se este composto pelo mesmo processo descrito no Exemplo 12 mas utilizando pirrolidina em vez de piridina.

15a R = ^2^25 (rendimento de 49%)

ISfe R = ^Gi6^H33 (rendimento de 45%)

15c R = (^ren^^imen·^^{0 de} 56%)

IV(cm^-1): 1100 (C-O-C)j 1720 (CORH)j 3350 (RH)

RMR-^H, 500 MHz, CDCl^, TMS

6í 0.85 (t, 3H, CH^); 1.2 /simpleto largo, 2nH, (CH₂)n7í ^s 2.15 (s, 3H, RCH )j 3.25 β, 2H, C(O)RHCH₂7J₊3.35 (s, 3H,

OOH^) ; 3.4 (d, 2H, CH^O-CH^); 5 (t, 2H, CH₂H) j 5.6 (d, 1H, RH) ί Toxicidade

Determinou-se a toxicidade dos compostos da presente invenção por via oral nos ratinhos utilizando os métodos habituais. Os valores ΰΐ^θ são superiores a 650 mg/kg.

Farmacologia

Determinou-se a capacidade dos compostos da presente invenção para inibirem a proliferação de células tumorais in vitro.

Inibem as HL60 e as células tumorais

A.427 decorridas 24 horas.

HL60 í linha celular leucémica promielocítica

A.427 : linha celular do carcinoma do pulmão

Demonstram um efeito citostático para uma dose de 0,02 mM que não constitui uma dose tóxica no caso dessas duas linhas celulares de tumores humanos. De um modo . geral, verificou-se que a linha celular de carcinoma de pui- 14 -

mão é mais sensível do que a linha celular leucémica promielocítica.

efeito dos compostos da presente invenção sobre a proliferação a longo prazo encontra-se descrito pormenorizadamente a seguir.

Todos os compostos dos exemplos da presen te invenção foram ensaiados e comparados com um dos primeiI ros compostos afins conhecidos como inibidores do crescimento celular neoplásico: o composto l-0-octadecil-2-0-metil-glicero-3-fosfocolina (BT180CH^ ou metoxi PAE; Andreesen, 1988).

Para este estudo utilizou-se uma linha celular de carcinoma do pulmão conhecida por A.427; são células dependentes de fixação.

As células A.427 desenvolveram-se em meio EMEM contendo piruvato de sódio e aminoãcidos não essenciais (Elow Labs), enriquecido com 10% de soro de bovino fe! tal (EBS; G-ibco) : 0 meio de desenvolvimento continha 100 U/ml de penicilina e 100 ug/ml de estreptomicina (Elow Labs)

Lissolveu-se os compostos da presente invenção e o composto de referência ET180CH^ (Bachem; Switzer ! land) numa solução contendo 60% de etanol e 40% de uma so: lução salina tampão de fosfato (PBS; Elow Labs). Efectuou-se uma série de diluições em PBS. A dose testada possuía a concentração de 0,02 mM. 0 tempo de tratamento prolongou-se por 24 horas a temperatura de 37°0.

í Avaliou-se 0 efeito dos compostos da presente invenção sobre a proliferação celular a longo prazo θ sobre a sobrevivência estudando a eficiência de proj tecção e a morfologia das colónias de A.427. Para se desenvolver este estudo, procedeu-se à inoculação de 1 x 10^ células A.427, previamente tratadas com os compostos da presente invenção durante 24 horas, em 25 cm² de uma área de desenvolvimento tecidual em balcóes de cultura.

Estas culturas celulares foram depois incubadas á temperatura de 27°C durante 15 dias. Decorrido esse tempo de incubação procedeu-se à lavagem das culturas sss*'*

celulares duas vezes com IBS, efectuou-se a fixação com etanol a 70$ durante 30 minutos e colorou-se durante o mesmo período de tempo com Giemsa a 10$ (Sigma Chemicals).

Os resultados expressos como ”eficiência de protecção relativa (E.P.)” calculam-se de acõrdo com a expressão seguinte;

Número de colónias formadas E.P. =_________x 100

Número de células protegidas e encontram-se resumidos no quadro que se segue.

Verificou-se que as colónias formadas após o tratamento com compostos da presente invenção tinham perdido o seu perfil regular, possuiam menor reactividade ã coloração G-iemsa e que, de um modo geral, as suas dimensões eram inferiores as das colónias não tratadas.

COMPOSTOS	E.P. ($)
Controlo	100+2.2
ΕΤ180ΘΗ3	33.4+1.5
EX 10-a	27.1+2·6
EX 10-b	21.4+1.8
EX 10-c	14.2+0.9
EX 11-a	23.2+2.4
EX 11-b	18.5+2.1
EX 12-a	25.6+3.1

| C01P0S TOS	E.P. ($)
EX 12-b	20·2+2·3
EX 13-b	19.1+3.6
EX 13-c	17.6+2.7
EX 14-a	22.7+3.1
EX 14-b	27.3+3.3
EX 14-c	18.6+2.7
EX 15-b	21.7+3.3
EX 15-c	26.4+2.6

I

I

Os símbolos estatísticos referem-se a comparação entre cada exemplo tomando como referência ET180CH^. Os diversos símbolos NS, , e significam que o resultado é, respectivamente, não significativo, significativo, muito significativo e altamente significativo.

• Posologia * Em terapia humana os compostos da presente

É^ã.T.t^^r^wi^t^SíiJS^HSS/iTEísiíxKitasç—

invenção são administrados preferencialmente por via I.V..

A posologia habitual varia entre 2,5 e 5 mg/dm por dia, três a seis dias por mês, em perfusão lenta.

Claims (1)

1. Processo para a preparação de derivados de 3-(N-metil-N-alqu.il)-amino-2-metoxi-metileno-propan-l-ol de fórmula geral I • CH,

   -NR

   -CH^OCH^ l_0—-A-Y I na qual

   R representa uma cadeia alquílica de 10 a 200 de átomos de carbono;

   A representa 0

   -P—0 (CH„L·-, -C l_ ² li o

   (CHJ-, -Ç—NH2 η η (0H₂)_n

   0 0 0 sendo n um número inteiro entre 2 e 10;

   Y represente os seguintes derivados de amonio quaternário: amónio, alquil-amónio, di-alquil-amónio, tri-alquil-amónio, piridinio, piperidinio, pirrolio ou pirrolidinio, possuindo cada grupo alquílico entre 1 e 6 átomos de carbono;

   caracterizado por se fazer reagir, num solvente aprótico, na presença de tri-etil-amina, a uma temperatura compreendida entre 0 e 80°C e sob circulação de azoto, o composto

   CH-N·

   I—ch₂och₅ Mjh na qual R é como anteriormente definido.

   num excesso estequiométrico de 10 a 100$ de um composto se— leccionando entre

   Cl - Ρ

   Ό—

   Br - (GH₂)_n

   C - Cl ou 0 = C = H(CH_O) Br II ^{2 n} (sendo n como anteriormente definido), e num excesso estequiométrico de 30 a 50$ de um composto Z, seleccionando entre amima associada ao amónio quaternário anteriormente definido da fórmula geral Y, nomeadamente j amónio, N-alquil-amina, ΐΓ,Β-di-alquil-amina, Η,Η,Β-trial! quilamina, piridina, piperidina, pirrol ou pirazolidina.

   A requerente reivindica a prioridade do pedido britânico apresentado em 19 de Dezembro de 1989, sob o HS. 89 28 580.3.