PT93943A - Processo para a preparacao de composicoes contendo compostos indole-2-carboxilato para tratamento de perturbacoes do snc - Google Patents

Description

X.

REFERêNCIA CRUZADA PARA PEDIDO DE PATENTE AFIM

Trata-se de um pedido de uma continuação-em-parte do pedido de patente tios E=U = A = No» de Série @7/348=333 apresentado s® sm 5 ds Maio,: 1989 =

Campo dp Invento

Este invento situa-se no âmbito da neurologia clinica s relaciona—ss especííicamente com uma classe de compostos,! composições s métodos teraptutizaments úteis para tratamento de lesSss neuroté-xicas ou de doenças neurodsganeraíivas = Por exemplo,, estes compostos sSa particularmente úteis para d tratamento de lesões neurotóxicas que ss sequem a períodos de hipóxia* anóxia ou isquemia associados ao acidente vascular cerebral* paragem cardíaca ou asfixia perinstal» Os compostos devem também ser úteis como anti-convulsivantes e para o tratamento da epilepsia.

Fundamentos do Invento

Ao contrário de outros tecidos que podem sobreviver a períodos prolongados de hipóxia,, o tecido cerebral á particular-mente sensível à privação de oxigénio ou energia. Podem ocorrer lesões permanentes dos neurónios durante períodos curtos de hipóxia,: anóxia ou isquêmia» é sabido que a lesão nsurotóxica pode ser causada ou acelerada por cartas amino ácidos excitató-rios CEAA) que ss encontram naturalmente no sitema nervoso central CSRC>„ 0 glutamato (Glu) é um amino ácido endógeno que foi caracterisado como sendo um transmissor sxcitaiório rápido no cérebro dos mamíferos» 0 glutamato à também conhecida como sendo uma neurotoxina poderosa capas de matar neurónios ao SNC em certas situações patológicas que acompanham o acidente vascular cerebral e a paragem cardíaca* As concentrações normais de glutamato slo mantidas no interior do tecido cerebral por meio de sistemas transportadores que consomem energia» Em situações de baixa energia que ocorrem durante situações de hipaglieéfliiar, hipóxia ou isquémia, as células podem libertar glutamato. Nessas condições de baixa energia a célula não ê capaz de absorver o glutamato de novo para o interior da célula» A libertação inicial de glutamato estimula posterior libertação de glutamato que resulta numa acumulação extracslular de glutamato e numa cascata (série) de lesões neurotóxieas» verificou-se que a sensibilidade dos neurónios centrais à hipóxia e á isquémia pode ser reduzida quer por meio de bloque-amento da transmissão sináptica quer pelo anatgonismcs especifico dos receptores póssinapticos do' glutamato Ever S» M» Rothfíian and J» W» Oiney? !SGIuiamate and the Pathophysiology of Hypoxia Ischemic Brain Damage5n (“Slutamato s a Fisiopatologia da Hipóxia - Lesão Cerebral isquâmica 3 51) finnals of Heuroloqy» vol» 19, No» 2 (1936)3» 0 glutamato é caractsrizado como ura aqonista de amplo espectro apresentando actividade nos três sitios neuronais receptores de smino ácidos excitatórios» Estes sitios receptores slo denominados de acordo com os a??sino ácidos que os excitam se1ectivaraentes norasadamenies Kainate (KA)» W-raet i1-D-aspartato (NHDA ou Niifi) e quisqualato (QUIS)»

Cs neurónios que possuem receptores EAA nas suas superfícies dendriticas ou somáticas são vitimas de degenerescência excitotóxica aguda quando estes receptores são excessivaments activados pelo glutamato» Assim» agentes que bloqueiam ou antagonizam sslectivamente a acção do glutamato nos receptores sinápti-cos EAA dos neurónios centrais podem evitar a lesão neurotóxica associada k. hipóxia» anoxia5 ou isquémia causada pelo acidente vascular csrsbraly paragem cardíaca ou asfixia >perinatal» é sabido que a glicina potência as respostas mediadas pelo receptor NfiBA» Foi também observada uma intsracçlo alostéri-ca da glicina através tís um sitio de reconhecimento da glicina inssnsivsl à estricnina que se pensa fazer parte do cosiiplsxo receptor NMDA-canal iónico EJ» W. Johnson et al, Mafcure (Lonrfon). 529-531 (1937)3= Por exemplo, o composto 2~carboxi-4-hidro~ xiquinolina (também conhecido como ácido kirmrênico) ê um conhecido antagonista de NHDA e a sua actividade antagonista de NHDA pode ser invertida peia presença de glicina E8» B. Watson et al, Neurosei» Res» Comm» , 2, No» 3, 169-174 (1988)3» Verificou-se também que o composto ácido 7-clorofsinursnico è um antagonista ds MliDA cujo efeito de bloqueio pode ser invertido pela glicina EI« fi = Kemp et al, Proc= Nat I, ficad » Sei „ LISA, 65 6547-6550 (1988)3 = Um excesso de glicina pede provocar excitação neuronal e levar a uma superactivaçlo dos receptores NHDA que tem sido associada a perturbações de caracter convulsivo e a doenças neurodegenerati-vas EA» C» Foster et al, Naturs» 539= 377-378 (1989)3»

Os compostos derivados do indolecarboxilato sSo conhecidos» For exemplo,! o ácido 2~carboxi-3-indc?leacético foi preparado a partir ds um precursor da hidrazena ErL Passerini et al = B&zz, Chim» Ital.. 69= 658-664 (1939)3= Ds um modo semelhante» os compostos ácido 2-carboKÍ-5-cloro~3-indoleacético s ácido etil 2-etoxicarbonil~3-indolsacéticQ foram preparados a partir de precursores da hidrazona KV = v = Feofilaktov et ai, ZHUR» Obshchei Khim» , 23= 644-656 (1953)3. Também, o composto ácido 2~carboxi~3~ -intíolspropiónico foi preparado a partir do precursor da hidrazo-na LL» K.ai.b et al, Chem» Ber» = 59B„ Í8ò0-187© (1926)3= Os compostos ácido 2-carboxi-3-indolebutírico e o seu éster, 2-carboxi~3~ -indolebutirato de siilo, foram preparados ds um modo semelhante a partir de precursores da hidrazena ER» W» Jackson et al, J» Am, Uhein = Soc» =, 0979—3035 (Ι930)ρ Hs H =.· F= Manske et al,, Can = J = Chsm» , 33,; 620-621 (1960)3 = vsrificGu'-5s qus alguns compostos indoIscarhoKilato t@m utilidade no campo da agricultura* Por exemplo,, a patente sspa-nhola IMo = 195 = 444 descreva α ácido 2-etoKicarbonil-3“indo].aac:éti-" co de atilo com possuindo actividade fitohormonai* Os compostos ácida 5~brofflo-2”carbo>{i-3-inda 1 eacé tiea§ ácida 5-meti 1-2-carbaKi-—3—indolescético e ácido 7™cIoro~-2-carboKÍ-~3~indolsacético foram descritos como apresentando actividáde semelhante à da auxina 110 == L, Hoffmann et al,, J_». Bioí Chem», 196= 437-441 (1952)3 =

Verificou-se que outros compostos indoiecarfooxilata e derivados apresentam actividade farmacológica» Por exemplo, a Patente da Reino Unida Na» 1 = 1.53 = 954 descreve ácidos N-carbo·-n i1/sulfoni1-3-indoii1acéticos como apresentando actividade anti-inflamatória e anti~pirética= A Patente dos Países Baixos No= 69--02641 descreve compostos de écido N-carhoxialqui1~3~1ηαο·~ Isacético como agentes anti-inflamatórios e anti-piréfcicas»

Certos compostos indale-2-carboxilato sem substituição na átomo de azoto iridole são conhecidos como possuindo actividade farmacológica. Por exemplo,, a Patente Japonesa No. 69-8562 descreve compostos de ácido indoxilcarhoxilica tendo um átomo de azoto não substituído como agentes anti-inflamatórios» A patente Austríaca No» 352=768 descreve compostos de ácido 2-íalcoxicartao™ nil)-3-indolealcanoico tendo um átomo de azoto não substituído como agentes anti-piráticos»

MiORmO .BREVE......DOS DESENHOS A Fig= 1 é um gráfico apresentando a actividade de um composto do invento no bloqueio dos efeitos da estimulação pela glicins no oocito Xenosus A Fig» 2 é um gráfico apresentando a actividade de um composto do invento no bloqueio doe efeitos da estimulação pela glicina no corte 'do hipocampo epiléptico» A Fig» 3 é um gráfico apresentando o bloqueio dos efeitos induzidos pelo agonista sobre cSMP por um composto do inventoe

MssrÍ£lo.jÍD^nvsr)to 0 tratamento de u.m mamífero sofrendo de ou suscsptivsl a uma doença neurodegenerativa ou a uma lesão nsurotóxica â proporcionado pela administração ao mamífero de uma quantidade tsraptuticamente eficaz de um ou mais compostos seleccionados de entre uma classe de compostos s derivados indole-2-carbOKilato definidos pela Fórmula 1¾

(I) em qus R” é selsccionado de entre hidrido5 alquilo a aralquilop em que cada um de entre a R/ ê selsccionado indspendsntsments a partir de hidrido5 halos nitíroKi,, alquilop haloalquilo, alcDKi:s hidroalquxlDj cicloalquilo5 cicloalquilalquilo» aralquilo., alcoxialquilo;, ciano. alquiltioy sulfinilo= sulfonila5 sulfinilalquilDg sulfonilalquilo, amino, monoslquilamino, dial--· quilamino9 acilo, scíIokí , amido, ariloKi, aralconi, aralcoKial·-quilo., arilo a 0 11 9 -(CH2)n-CR9,

Q em que K' è ssisccionado de entre hidritío, balo, nxoroKi, alquila, alcoííig cicioalquilo, cicloalquilaiquí lo» cicloalqui laxi, arilo, ariloKi, aralquilo, acalquiloKi, amino, monoalquilamino e dialquilafflina, em que n é um número sslsccionado de entre zsra a seis? em que X é seleccionade de entre hidrido, halo, amino, fnonoa1qu i1amino, dialquilamino e 0R'"V em que R*v á saleccionsdo de entre hidrido, alquilo, cicioalquilo, cicloalquilalquilo, araiquilo e arilo* em que Y é seleccionado de entre hidrido, alquilo, hidroKi, halo, cicioalquilo, alcoxi, arilo e 0

em que R** à selsccionado ds entre hidrido, hidroni, alquilo,. alcoKi, cicioalquilo, cicloalquilalquilo, cicloalquiΙακχ, arilo, ariloxi, aralquiia, aralquiloni, amino, monoalquilamino s disl-quilamino5 sm qua m é um número saleccionsdo de entre zero a seisp e em que qualquer um dos suhstituintes anteriores X, Y e R~ •í ·ΐ a R“'tendo uma posiçlo substituível é substituído com um radical selsccionado ds entre alquilo, halo, hidroxi, alcoxi, amino, nonoalqui lamino, dialquilamino, · monoaralqui lamino. diaraiquilamxno, haldalquilo, aralquílo e arilos ou um seu sal ou éster farmactuticamente aceitável.

Uma classe preferida de compostos com a Fórmula 1 consiste nos compostos em que R' ê seleccionsdo de entre hidrido,, O _~7 alquilo e aralquilop em que cada um de entre R'“ a H' é seisccxo--nada indspendentemente de entre hidrido,, halo, hidrsxi,, alquilQ5 haloalquilo, alcoxi5 hidrcixialquilo,, cicloalquilo? cicloslquil·-· alquilo, aralquílo, alcoxialquilo g ciano, alquil tios arairso, monoalquilaminos dialquilaraino, acilo., aciloxi* amido, ariloxi? aralcoKi, aralcoxialquilo, arilo s 0 u „ -(CH2)n-CR'

O em que ft' e seleccionsdo de entre hitírido5 halo, hidroxi,, alquilo, alcoxi;, cicloalquiloy cicloslquilalquilo,, cicloalquiloxi 5 arilo,, ariloxi, ara lquilo5 aralquilemi, amimo,, monoalqui lamino e dialquilaininos em que n é um número seleccionado de sntrs xsro a quatros em que X é ssleccionado de entre halo,, amino, monoalquil--aminoj dialquilamino e 0R~V em que RiV é seleccionsdo de sntrs hidritío, alquilo:, cicloalquilo5 cicloaiquilalquilo,, aralquílo e arilDii em que Y é seleccionsdo ds entre hidroxi, halo? alcoxi e 0

_ 1 1 sm que R“ é seleccionsdo de entre hidridos halo, hidroxi« alquilo,, alcoxi, cicloalquiloj cicloaiquilalquilo,, cicloalquiloKi? arilo? ariloKi? aralquilo? araIquiloni? amino? monoalquilamino s dialquilaminQp em que m é um número selscciona™ do de entre sero a quatro§ o em que qualquer um dos subsfciiuinies _ 1 1 1 anteriores X? Y e H" a R"“ tendo uma posição sudstxtuivaI é substituído com um radical seleccionado de entre alquilo? hidro-xi? slcoxi? amino? monoalqui lamina? dialquilamino? monofenilai-quilamino? araiquilo e arilos ou um seu sal ou éster farmaciuti-camante aceitável=

Uma outra classe preferida de compostos com a Fórmula I em que R“ â seleccionado de entre hidrido? alquilo a fenalquilo? ? 3 em que cada um de entre R“ e R“ á independentemente seleccionado de entre hidrido? halo? hidroxi? alquilo? haloalquilo? alcoxi? hidroíiiaIquilo? fenalquilo? amino? mcnoalquilamino? dialquilami- 4 ?' no? s Teni.io? em que cada um de entre R ' a K' e independentemente seleccionado de entre hidrido? halo? hidroxi? alquilo? haloalquilo? alcoxi? hidroMÍalquilo? fenalquilo? fsnoxi? bsnzilcri, fenetiloxi? amino? monoaiquilamino? dialquilamino? aciloxi? fenilo e 0 -(CH2)n-CR9, C5 sm que R' ê seleccionado de entre hidrido? hidroni? alquilo? alctíxi? fenilo? fenoxi? fenalquilo? fenalquiloxi? amino? monoal-quilamino? e dialquilamino em que n é um número seleccionado de ϊ8γο a quatroρ em que X é seleccionado de entre amino? monoal-quxiamino? dialquilamino? e QRiV em que Riv·' é seleccionado de entre hidrido, halo, 'alquila, fenalquilo e fenilop em que Y é selecciDnada de entre hidroni, halo, alconi, e 0

-CRU em que R‘4 é seleccionado de entre hidrido, hidroxí, alquilo, alcoxi, fenilo, fsnoxi; fenalquilo,, f enalquilcjxi, amino, monoal— quilamino e dialquilaminop em que m é um mimero seleccionado de entre cero a seiss e em que qualquer um das su bs i i tu i ntes ante-1 1 1 rxores , V s R“ a R~~ tendo uma posição substituível é substituída com um radical seleccionado de entre alquilo, hidFOKig alcoxi, sraino, monoalquilaraino, dialquilamino, monofenalquilamino, fenalquilo e fenilop ou um seu sal ou éster farmactuticainente aceitável=

Uma classe maia preferida de compostos com a hórmula I em que R‘ é seleccionado de entre hidrido a alquilo inferior? s 2 “ sm que cada um de entre R e R" é seleccionado indepsndentemente de entre hidrido, halo, alquila inferior, beneilo e fenilop sm _B, que cada um de entre κ‘ a R' é seleccionado indeoendentemente de entre hidrido, halo, hidroxi, alquilo inferior, haloalquilo, alcoxi inferior, fsnoxi, bencíloxi, hsncilo, fenilo, s 0 11. (CH2)n -CR5 _o em que H' s seleccionado de entre hidrido, hidroxi, alquilo inferior, alcoxi inferior, fenilo, fenoxi, faenzilo, tasncilaxi. smino* monoa 1 qui 1 amina e dialquilamina* em que n é um número seleccionado de entre zero a dois? em que X é seleccionado de entre amina* mortoal qui lamino* dialquilamino e OR em que é seleccionado de entre hidrido, alquilo inferior* bsnsilo s fenilop em que Y é seleccionado de entre hitíroxi* halo* alcoxi inferior* faenziloxi e 0 -CR11 em que R** ê seleccionado de entre hidrido* hitíroxi* alquilo inferior* alcoxi inferior* fenilo* fenoxi* benzilo* banziloxi, a/nino* monoalquilamino e dialquilaminoi em que .» s um número seleccionado de entre zsro a quatro;; e em que qualquer um dos substituintes anteriores X5 Y & R* a RAa tendo uma posição substituível ê substituído coca um radical salsccicnado de entre alquilo inferior* hidroxi* alcoxi inferior* bsnzilo* amino, monoal qui 1 amino * dialqui lamino* monof ena 1 qui 1 asnino e fenilo? ou um seu sal ou éster farmactuticansnts aceitável=

Uma famá. lia de compostos bastante mais preferida consiste nos compostos com a Fórmula II?

(II) t Μ em qus cada um da entre Rw a R“ á seleccionado indspsndentsmenis da entra hidrido* halo, alquilo inferior* halo alquilo inferior & _ ! έ?< alcoKi inferiorji e em que h* * é seleccionatío de entre hidrido, alquilo inferior,: hensiio a feniloj em que Y é seleccionado de entre hidroxi* aicoxi inferior* benciloxi e 0 11 -CR11 l em que H"' e seieccionaao de entre hidrido* hidroKi* alquilo inferior* alcoxi inferior* amino* monoalquilamino* dialquilamino* monofenalquilamino e feniloii em que m é um ou doisq ou um seu sal farmacwuticaments aceitável *

Uma família de compostos ainda mais preferida consiste nas compostos com a Fórmula IIIs

_/Is em que cada um de entre Rw e Rw é independentemente seleccionado

1 íS de entre hidrido,, fiuoros cloro s bromo? em que R" ‘ © sslsccicsns-·· do d© entre hidrido e alquilo interior? em que R ê seieccionado de entre hidrido e alquilo inferior? ou usa seu sal farsnactutica-msnts aceitáveis

Uma família de compostos o mais preferida consiste em ácido 2---c:arboKi“3-indolsacéticof ácida 2---csrboKÍ--i-metiI“3-intío-· 1«acético? é.c i d o 2 -c a r bo >í i -5—c 1 o r o-3~ i ntíolsac éticos ác i d o 5 -- b r· dm o--2 --· c a r bo κ i ~ 3- i n d o 1 s a c á t i c o s ácida 2~carboxi~5~f luaro-3-indaleacéticoj! 2“CãrboKÍ-é~cloro~3-indoleacetato de etilo? 2-c5rboKÍ---6“'C loro-3-ir5doIeacetamida ? ácido 2-carbQMi-6”Clc>ro-“-3-indo 1 ©acético 3-etilamida? ci-"Cloro-3--(2-"ClorostiI )-2-"indGlscarbaxilata de etilo? o ácido 2.....carboHi-~6-c1oro-3-indol©acético« Especia1ments preferido desta família á o ácido 2~carboKi“-6-cloro~3--indolsacéticOs A frasa "quantidade terap^uticamsnts ©ficas" significa a quantidade de um ou mais compostos com a Fórmula 1 que

proporciona um afeito terapêutico benéfica no tratamento ou mansjafiisnto de uma leslo neurotóxica resultante de uma perturbação do SNC ou ds um acidente traumático ou no tratamento ou manejamanto de uma doença neurodeganerativa» Exemplos de acidentes traumáticos que podem dar origem a lesSo nsurotóKica slc a hipóxia» anaxia s isquémia associadas a asfixia perinatal? paragens cardíaca ou acidente vascular cerebral« No tratamento desses casos relacionados ccm acidentes traumáticos» uma “quantidade terapêuticamente eficaz" de um composto com a Fórmula 1 será uma quantidade antineurotóxica ou antiaxcitcióKica do composto que seja eficaz para reduzir ou evitar essa lesão neurotóxica ao inibir5 por exemplo, que sejam geradas quantidades excessivas de excitotoxina próximo ou ligando-se a receptores do amino ácido excitatério» No caso de tratamento de uma doença neurodegenerati-VS:; a quantidade de uma "quantidade terapiuticamente eficaz" de um composto com a Fórmula I será a quantidade eficaz para reduzir ou evitar a neurodegsnersscfncia derivada de ou causadora ds perturbações do SNC tais como convulsões e epilepsia» A expressão "hidrido" indica um único átomo de hidrogénio <H) que pede estar ligado» por exemplo» a um átomo de oxigénio a fim de formar um grupo hidroxilcs. Quando é usada a expressão "alquilo55,. quer isoladamante quer noutras expressões tais como "haloalquilo”, "aralquilo" e "hidroxialquilo", a expressão "alquilo” abrange radicais lineares ou ramificados tendo de um a cerca ds dez átomos de carbono a não ser que específicaments descrito de outro modo» Os radicais alquilo preferidos são redicsxs "alquilo inferior" tendo de ui?i a cerca de cinco átomos de carbono» A expressão "cicloalquilo" abrange radicais tendo ds três a dez átomos de carbono» tais cama cxclopropilo» ciclobuti-la? clciohsKxlo e ciclaheptila. Um exemplo ds "cicloaiquilalqui-io" é cic1ohexi1metiΙα» A expressão "hsloalquilo” abranoa radicais em que qualquer um ou mais dos átomos ds carbono é

substituído com um ou mais grupos halo, de prefer§ncia seIsccχοή ados ds entre bromo, cloro e flucro» Específicamsnts abrangidas pela sxpressla "haloaiquilo" são os grupos monohaloalquilo, dihaloalquilo s polihaloalquilo. Um grupo monohaloalquilo, por exemplo, pode ter um átomo bromo» cloro ou fluoro no interior da grupo» Os grupos dihaloalquilo e polihaloalquílo podem ser substituídos com dois ou {Beis dos mesmos grupos halo, ou podem ter uma combinação de grupos halo diferentes» Exemplos os um grupo dihaloalquilo são dibromometi1o, diclarometila e bromado-remetilo» Exemplos de um polihaloalquilo são grupos trifluoroms-tilo» 2,2,2—fcrifluoroetilo, perfluoroetila e 2,2,3,3-tetraf1uar o-propilo» A expressão "alcoxi" abrange radicais contendo oxi lineares ou ramificados tendo uma porção alquila da um a cerca ds tíec átomos de carbono, tais como metoxi, etoxi, isopropoxi e hufcoxi. Um exemplo ds "cic loalqui loxi" ê ciclohexiloxi» Um exemplo de “alcoxialquilo" é metoximetilo» Um exemplo de "aralquilaxi“á benziloxi. A expressão "alquiltio" abrange radicais contendo um grupo linear ou ramifiçado, de um a cerca de dez átomos de carbono ligadoís) a um átomo ds enxofre divalente, tal como um grupo metiltio» A expressão "arilo" abrange radicais aromáticos tais como fenilo, naftila s bifenila» A expressão "aralquila*1 abrange radicais alquilo substituídos com arilo tais coroo fcenzilo, difenilmetila, trifenilroetilo, feniletila, fenilbu-tilo e difeniletilo» As expressões "benzilo" s “fenilmetilo" são interpermutáveis» As expressões wariloxi" e "ariltio" indicam respectiyamente radical» tendo os grupos arilo um átomo de oxigénio ou enxofre através do qual o núcleo está ligado ao núcleo, cujos exemplos são fenoxi e feniliio» As expressões "sulfinilo" e “sulfonilo", quando usadas isoladamsnte ou ligadas a outras expressões, indicam respectivamente radicais divalentes >S0 s >S02« As expressões "roonoa1quilamino“ e "dialquilamino" indicam grupos amino que foram substituídos, respec t ivamen te, cora um radical alquilo ou com dois radicais alquilo» As expressões

"monoaralquilamino” e "diaralquilamino" indicam grupos amino substituídos,: respectivamente ? com um e dois grupos arai quilo? um sxsmplo desses grupos aralquilo sendo fenalquilo tal como benzilo ou fsr.stilo. A sKprsssio “aciloH quando usada isoladamente? ou com uma expressão tal como aciloxi? indica um radical proporcio-nado pelo resíduo após remoção do hidroxilo ds um ácido orgânico,; sendo exemplos desse radical acstilo e benzoilo»

Pertencem a esta classe ds compostos do invento os sais fcirmacêuticarnente aceitáveis dos compostos com a Fórmula I, incluindo sais ds adiçao de ácido e sais ds adiçao ds base,, A expressão "sais farmacfuticamente aceitáveis" abrange sais habitua1msnte usados para formar sais ds metal alcalino e para formar sais de adição de ácidos livres ou de bases livres» A natureza do sal não ê ds importância crítica? contanto qus seja farmacê'uticamenfce aceitável» Sais ds adição ds ácido apropriados farmacluticaments aceitáveis dos compostos com a Fórmula I podem ser preparados a partir ds um ácido inorgânico ou a partir de um ácido orgânico» Exemplos dessas ácidos inorgânicos são o ácido clorídrico,; bromídrico? iodídrico? nítrico» carbónico,, sulfárico s fosfórico» Ácidos orgânicos apropriados podem ser seleccionados a partir de classes de ácidos orgânicos alifáticos? cicloalifáticos» aromáticos» aralifáticos? heterocíc1icos ? carboxílicos s sul fónicos? por exemplo ácido fórmico? acético» propíónico,, succinxco? glicólico? glucónico? láctico? málico? tartárico» cítrico? ascórbico? glucorónico? malexeo? fumárico? pirúvxco? aspártica? glutâmico? benccico? antranílico? p-hidroxibenzoico? salxciíxco» Temi acético 3 mandélico» embónico ípamoico)? metanos— sulfónico? etanessul fónico? 2-hidroxi-etansssulfónico? pantoiéni-co» Bsnzenessulfónico» toluenessulfónica» sulfanílico, mesílico» ciclohsKi1aminossulfónico? esteárico? algénico? β-hidroKibutírico ? maíónico? aalactárico e galacturónico» Sais de adiçao de base apropriados farmacâuticamente aceitáveis de compostos com a

I cí Fórmula I incluem sais metálicos formados a partir de alumínio,, cálcio, litio, magnésio, potássio, sódio e zinco ou sais orgânicos formados a partir de M,N -dibensiletilenediamina, c1oropro-caina, colina, dietanolamina, etilenediamina, meglumina <N-metil-qíucamins) e procsina, Todos estes sais podem ser preparados por meios convencionais a partir do correspondente composto com a Fórmula ϊ fazendo reagir, por exemplo, o ácido ou base apropriado com o composto com a Fórmula I,

Compostos cοΰΐ a Fórmula geral I podem possuir um ou mais átomos de carbono sssimêtricoCs) sendo assim capazes de existir sob a forma de isómeros ópticos assim como sob a forma de suas misturas racémicas ou nlo racémicas» Os isómeros ópticos podem ser obtidos por separação das misturas racémicas de acordo com processos convencionais, por exemplo por formação os sais dissisrsoisomérícos por tratamento com um ácido ou base éptica— mente activo» Exemplos de ácidos apropriados são ácido tartárico, diaceti1tartèrico, dibenzoiltartárico, ditoluoiltartárico © canforsulfénico s então separação da mistura de diastersoisómercss por cristalização seguida por libertação das bases ópticamente activas a partir deste sais, Um processo diferente para a separação de isómeros ópticos envolve a utilização de coluna do croma-tografia quirai escolhida de modo a maximizar a separação dos snsntiòmeros* Ainda um outro método disponível envolve síntese de moléculas diastereoisoroêricas covalentes fazendo reagir compostos com a Fórmula I com um ácido óptieamanie puro numa forma activada ou com um isocianato épticamsnts puro. Os diastersoisómeros sintetizados pode® ser separados por meios convencionais tais como cromatografia, destilação, cristalização ou sublimação, sendo então hidrolisados a fim de fornecer o composto enantiomé-ricamante pura. Os compostos óaiicsments activos com a Fórmula I podem de um modo semelhante ser obtidos por utilização de materiais de partida ôpticamente activos, Estss isómeros podem

Processo sintéticos Gerais

Processo......Benérico.....I

Cs compostos com as hórmulas í—III podem ser preparadas rfs acordo com os procsssos gerais que ss seguemi

S. 7 sm qus H ' a H' sao tai como taram definidos anteriormsntsp sm que A pode ser uma série de reagentes nitrito tais como nitrito de sódio,; nitrito ds amilo ou nitrito ds isoamilo»

Um dos processos que pode ser usado para sintetizar as produtos do invento começa com anilinas com a estrutura geral 1_ •ã _"? onde H' a H* t'ê'm o valor indicado anteriormente. A anilina é tratada com o reagente nitrito na presença ds uma série de ácidos ds Bronstsd tais como ácido cloridrico? ácido trifluoroacético ou ácido sulfúrico a fim de produzir o sal de diazónio com s estrutura geral 2» A reacção é realizada ds uma melhor maneira misturando os reagentes num solvente tal como água ou misturas tís água s etanal, metanols acetonitrilo ou tetrahidrofurano. A temperatura de reacçSo pode variar entre cerca de -15°C e a temperatura amhisnte,=

_ 2 7 em que ¥? m? e K a R" slo tal como vera* cletimtíos anterior-1 7 mente? em que R-" potíe ser seleccionado tíe entre dinidro, alquilo inferior ou bensilo»

Mo segundo passo do processo? o sal ds diazónio 2 é transformado na Hidrazona 4 por mistura com o 2- aciláster 3 num solvente aquoso·: Solventes aquosos possíveis sao água ou misturas de água e etarsoi ? metanol, acetonitrilo ou tetrahidrofurano,

sm que ;ís Y5 m5 s K a R' sSo tal como foram definidos antsrior- mente? em que B é uma série de ácidos de Bronsted tais como o ácido clorídricoj ácido trifluoroacêtico ou ácido sulfúrico»

Mo terceiro passo da reacçSo9 a hidrazona 4 ê transformada no índole com a estrutura geral 5. Esta conversão é realizada de uma melhor maneira misturando a hidrazona num solvente poético tal como etarso 1, metanol ? ou água com uma série de ácidos ds Bronstad tais cocho ácido doriaricoP ácido trifluoroacétíco ou ácido sulfúrico» A temperatura da reacçlo pode variar entre a temperatura ambiente e a temperatura de refluxo da mistura da. rsacçlo»

om qus V5 s R"" a R' sSo tal como foram arsteriormente definidos? em qus C é usna bass tal como carbonato de potássioP carbonato cie sódios hidróxido de potássio ou hidróxido ds sódio»

No quarto passo do processo? o éster 5 é hidrolisado no ácido carboxiíico 6 misturando o éster com uma base aquosa tal como carbonato de potássio9 carbonato de sódio„ hidróxido da potássio ou hidróxido ds sódio em solvente aquoso» Solventes aquosos possíveis slo água ou misturas de água e etano1, metanol5 scetonitrilo ou tetrahitírofurano»

Processo genérico I1 R5 R4 R7 | H + R3 1 ^—[ Ç ]m —V R2 c R5 R4 VC -—Η R3 [CJm-Y Sj—X II 0 Π // V /"V R7 | H X 0=0 R2 z s 5 em que i;5 X, V s », e HrX a R7 são tal como foram definidos antariorrosnte? em que L á halogénio, tosilafco5 mssilata, brosilato ou 0H,=

Os compostos do invento podem ser preparados por deslocamento do grupo separável L na estrutura geral 8 pelo indols nuclscfílico apropriado com a estrutura geral 7= Bons grupos ssoarâveis são* por exemplo» halogénio, tosilato, mesila™ to5 3 brosilato= A conversão pode ssr real içada de uma melhor maneira misturando os reagentes em solventes práticos ou apréii--cãs tais como stanol» metanol 3 acetonitrilo9 acetonar, ou tetra-hidrofurano na presença de uma hase tal como carbonato de sódio ou de potássio ou hidróxido de sódio ou de potássio» A temperatura da rsacçlD pode variar entre 0°C e s temperatura de refluxo da mistura da reacçao»

Pracssso Genérica 1IX R4

+ b-CH2-COOH 1Δ R4

4 _7 em que L s K ' a κ sSq tai como taram descritos anter iorstent e *

Os compostos do invento podem ser preparados por deslocamento do grupo separável L na estrutura geral 1® pela anilina apropriada 9« Bons grupos separáveis slos por SKsmpla, halogénia» iosilato5 meei1ato? s hrosilato» A conversão pode ser real içada de uma melhor maneira misturando os reagentes em solventes práticos ou apróticos tais como a água? etanol$ metanol ? acetonitriloy acetona ou tetrahidrcríurano na presença de uma base tal coma carbonato de sódio ou de potássio ou hidrónido de sádio ou de potássio„ A temperatura da raacção poda variar entre 0°C e a temperatura de refluxo da mistura aa reacçSo»

Re

R4 'W-COOH X. R7

Ru-OH NH—CH2COOH

R4 r5nA^ COOR14 R6 R7 NH—CH2COOR14 11 4 Ύ em que is e H a. R' sSo 1 Js. que H" ' é seieccionado tal comd a partir foram anteriorssnte descritosp em de alquilo inferior ou benzilo»

No segundo passo do processo» o diácido J.J., é convertido no diéstsr 12 misturando o diácido com um álcool ou fenol apropriado na presença de um ácido» 0 álcool pode ser ssleccionado a partir de uma série de álcoois alquílicos inferiores? álcoois arilalquí licos qíi fsnois tais como metanol? atanol? álcool bsnzílico ou fenol» 0 diácido é tratado com o álcool na presença da uma séria de ácidos de Bronsted tais como ácido clorídrico? ácido trifluoroacético ou ácido sulfúrico a fim de gerar o diéster ca® a estrutura geral 12» A reacção é conseguida de uma melhor maneira misturando os reagentes puros ou num solvente aprético tal como éter? tetrahidrofurano? ou aceianiirilo» A temperatura da rsacção pode variar entre mais ou menos a temperatura ambienta a a temperatura de refIuko da mistura da rsacçcía»

12 12 1 " ,ã 7 em que K“ “ e K' a H' são tai como toram descritos antenormsntej síii qus D pode ser seleccionatío de entre ama série de bases fortes tais como metéKido de sódio? etóKido de sódio, t--butóKido tís potássio5 ou hidrato de sódio.

No terceiro passo do processo» o diéster com a estrutura geral 12 é misturado com um solvente inerte como o éter» tetrahidrofurano, ou dioKano» A solução do diéster é adicionada à mistura da base no mesmo solvente inerte» A base pode ser selec-cionada a partir de uma série de bases fortes tais como metéKido de sòtíiOp etó>iido de sódio3 t-bufcóKido de potàssio5 ou hidrata da sódio» A conversão pode ser realizada variando a temperatura entre a temperatura ambiente e a temperatura de refluxo da reacçSo»

Processes Genérico IV

5

H _ 1 ~7 em que C5 Ls mP K5 Y, e K“ a R‘ sSa tal como taram descritos anisriorissníe» os compostos do invento podem ser preparados por deslocamento da grupa separável L na estrutura geral 14 pela indola da estrutura geral 5» Bons grupos separáveis sSo5 por enemplOj halogánio5 tosilatOj, mesilato s brasilata» A conversla pode ser realizada da melhor maneira misturando os reagentes num solvente aprótico tal coroa tstrahidrofurano = acetcnitrilo, éter? ou cloreto de meti leno na presença de uma base tal como carbonato da sódio cu de potássio ou hidróxido de sódio ou ds potássio,: A temperatura da reacçSo pode variar entre a temperatura ambiente e a temperatura ds refluxo da mistura da reacçlo.

Os Exemplos que se seguem Γ-X sâo descrições detalhadas dos métodos de preparação de compostos com a Fórmula I, Estas preparações detalhadas situam—se no Imbito des e servem para sxamplificar5 os Processo Sintéticos gerais descritos anterior-mente que fazem parte do invento. Estes exemplos I—X são apresentados apenas com finalidade ilustrativa s nSo pretendem ser

restritivos do Irabito da inventa. Todas as partos sio em pesa a nao ser que indicado tíe um modo diferente.

Exemplo I

Fenilhirfraasna da ^rggtooiutaratg......da,.._distilo

Anilina <7*2 g>, numa mistura tíe ácido clorídrico concentrado (19 ml) s água (8 ml)* foi arrefecida num banho da gelo © tratada com uma solução de nitrito de sódio <5=3 g) em água (15 ml>* Após a adição* a mistura foi agitada no banho ds gelo até todos os sólidos se terem dissolvido* A solução foi então tratada com uma mistura ds hidróxido ds potássio <17,2 q>* 2-acetoglutarato tíe distilo < 17,7 g>, s gelo <70 g) ? e a mistura resultante foi agitada durante 15 minutos adicionais* A mistura foi acidificada com ácido clorídrico concentrado e extraída com átsr (5 X 1ΞΘ ml)« A solução ds éter foi lavada com ácido clorídrico IN (2 X 12® mi), & agua <12# ml), sendo entio seca sobre sulfato de magnésio* 0 solvente foi removido num evsporadcr rotativo a fim de proporcionar a nidrazona sob a forma de um óleo vermelho* 2~Carbostoxi~5~indoleacstato de atilo A hidrazona crua do Exemplo I foi dissolvida em stanol absoluto <50 ml)? arrefecida num banho de gela, e.tratada com cloreto de hidrogénio gasoso até ficar saturada* A solução foi aquecida até refluxo durante uma hora, arrefecida até è temperatura ambiente, e tratada ientemente com água (5Θ ml>= A mistura

resultante foi extraída com éter (5 X 10@ ml) s as soluçSes de éter combinadas foram lavadas com 5% do bicarbonato de sódio (3 X 2o0 mi) s água <:> X 250 ml)* A soluçlo de éter foi seca sabre sulfate? ds magnésio e o solvente foi. removido num evaoorador rotativo para dar origem ao produto crú sob a forma de um óleo castanha, 0 material crú foi colocado numa coluna do gel de sílica 60 e o produto foi ©luido com 30% cie acetato de ©tilo em hexano» Após remoção do eluente num svaporadar rotaiario» o resultante sólido castanho foi sublimado <85°C @ &«2 mm Hg) para dar origem ao produto safa a forma de um sólido amarelo <p»f» = 75-78°C> , Ácido 2~carboxi-3~indPÍeacético (Composto Mo, 1) 2“Carbaeto;-íi~3~indoleacetato de atilo CS „7 g> em efanol absoluto <10 ml) foi combinado com S0% de hidróxido ds sódio aquoso» A mistura foi aquecida até refluxo num banho de vapor durante 15 minutos» A solução resultante foi. vertida para água (50 ml) e a solução aquosa foi lavada com éter (2 X 30 ml> » A solução aquosa foi tornada acídica pela adição de ácido clorídrico concentrado a arrefecida para efsctuar a cristalisação= 0 sólido branco resultante foi recuperado por filtração a fim de proporcionar o produto» Os dados analíticos são referidas na Quadro í.»

Í2LSSEl2_IV 2:i:£s.r:.fagetοXi-l-metil-S-indoleacetato de.....stllo 2-Cartaaetoxi-3~inaoIsacststo ds etiio (\ g) em acstoni-ΐπίο (5Φ ml) foi combinado com carbonato de potássio (2 q) s sulfato de dimetilo CS538 ml), A mistura foi aquecida atá refluxo durante 2® horas, filtrada quente, e o solvente foi removido no evaporador rotatório» 0 resíduo fci suspenso em éter C150 ml; e a mistura foi lavada com 5% ds ácido clorídrico (3 X 5® ml), 5% de bicarbonato ds sódio (3 X 5© ml) s água <3 X 50 ml>» A solução da

éter foi saca sobra sulfata cia magnésio a o solvente foi rsmcsvido num svaporador rotatório a fim de proporcionar o produto.

Exemplo V 2-Carboetoκ i-5-f1uoro-S-indo1eaceta to da atilo A 4—fluorofanilhidracona ds 2-cetoglutarafco de distilo <45 mmoj.es> foi combinada com 2©% de ácido sulfúrico em etanol absoluto s aquecida até refluxo durante 9 horas» A solução foi arrefecida atè à temperatura ambiente e vertida ε u i dadosamen te para gelo <5® g)„ A mistura aquosa foi sxtraids com cloreto de meiileno (3 X 5© ml> e as camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água <3 X 5© ml>5 5% de bicarbonato de sódio (2 X 5© ml> * s água (1 X 5© ml)» A solução foi seca sobre sulfato de magnésio e α cloreto ds metileno foi removido na svaporador rotatório, 0 resíduo foi destilado num aparelho de Kuaelrohr <140*0 @ ©5©3 mm Hg) a fim de proporcionar um óleo cSr ds laranja o qual solidificou após repouso, Este sólido cor ds laranja foi recristaliçado a partir de uma mistura da acetato ds atilo s hsxano para dar origem ao produto sob a forma de um sólido amarelo <p„f„ = 128-Í3#°C>= epropanoato de etilo 2-IndolecarboKilato de etilo (3 g>3 3-iodopropanoato de stxio (bç4 gj5 carbonato de pctássia <5 g)5 e acstonitrila (5© ml) foram combinados e a mistura foi aquecida até refluxo durante #8 horas» A mistura foi arrefecida s vertida para áqua (5® ml)„ A mistura foi eKtraida com éter <3 X 75 ml) s os s?ítrsctos de éter combinados foram lavados com áqua <3 X 3Θ ml), A camada orgânica foi soca sobre sulfato de sódio e o solvente foi removido num evaporador rotatório, 0 produto diéster foi obtido sob a forma do um óleo incolor.

Exemgle...-Vll H~ <2-Carbo>a-4.-c.lq.rof millal ig.ina Ácido 2“amino-4-clorober»soico e ácido cloroaeético foram combinados e neutralizados por meio da adição cuidadosa de solução de carbonato de potássio i N» A mistura foi aquecida até refluxo s tratada periódicamente com carbonato de potássio íM adicional para manter a mistura ligeiramente básica» 0 refluxo foi mantido até a solução ss manter básica durante psl.o menos 45 minutos após a adiçlo da solução de carbonato de potássio» h mistura foi arrefecida até à temperatura ambiente, filtrada através de carvão, e acidificada com ácido clorídrico 1M« 0 sólido branco resultante foi filtrado s seco sob vácuo durante 48 horas a fim de proporcionar o produto» N--(2~CarbQKÍ-4-clorofenil )qi icinato ds tiimstilo M— (2—Carbo>íi~4—clorofeni 1)g 1 icina (4,5 q) sm metanol 85® ml) foi tratada lentamente com ácido sulfúrico (6 ml), h solução foi aquecida até refluxo durants 2Θ horas» A solução foi lentamente vertida para gelo (50® g) e o sólido resultante foi filtrado, lavado com bicarbonato de sódio aquoso saturada (75 mi), θ seco sob vácuo s fim de proporcionar o produto. êc i m.....P.....c λ s rc-5-h i d r p x ii nd c 1 a-2-çar box iComposto No = 11) N~(2“-CarbOKÍ~4~clorofenil Iglicinato da dimstilo C3S4 g) foi combinado com tetrahidrofurano seco <2® ml) s adicionado gota a gota a uma mistura ds t-butóxido ds potássio <139 g) em tetra-hitírofurano seco <3® ml)» A mistura resultante foi aquecida até refluxo durants 2 horas * arrefecida num banho ds gelo? sendo entSo vertida para gelo <325 g) * A mistura aquosa foi acidificada com ácido acético e o precipitado resultante foi filtrados lavado com égua <50 ml) e seco ao ar. 0 éster de metilo crú <253 g) foi hidrolisado sem purificação posterior para dar origem ao produto crú pele processo indicado no exemplo III. 0 produto foi purificado usando uma coluna permutadora de iSss DEAE Sepharose com um gradiente linear de bicarbonato de sódio ®θ?5 W» As fracções apropriadas foram combinadass a soluçSo foi tornada acidica pela adiçao de ácido clorídrico concentrado e o produto foi extraído para éter <3 X 100 ml)« A solução da éter foi seca sobre sulfato ds magnésio e o éter foi removido num evaporados·- rotatório. 0 resíduo foi dissolvido em acetato de etilo e purificado por cromatografia de placa delgada radial acelerada centrífugamente preparativa em gel de sílica usando acetato de etilo como eluen-te. 0 produto foi obtido sob a forma de um sólido amarelo» Os dados físicos são referidos no Quadro I»

i^emolo X Ácido.......S-hidrOK iene t ilindol e—2—garbo.x £.1. iço {Composto Nd. 12) lndole--2--carbaKÍlato de etllD <5587 g) e® eísnol absoluta (85 ml) fai combinada com carbonata ds potássio <4.3 a) s 37% ds formal dei. do (2 = 6 g> e aquecido até refluxo durante 4 dias. A mistura foi arrefecida até â temperatura ambiente s as solventes foram removidas num evaporador rotatório. 0 resíduo foi dissolvido em água <1ΘΘ ml) s a solução ds água foi lavada com éter (2 X 50 ml). A solução aquosa foi tornada acidica com ácido sulfúrico 3.6 M e a mistura resultante foi SKtraida com cloreto de metileno (2 X 5Θ ml) e éter (2 X 5© ml). As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato ds magnésio e o solvente foi removido num evaporador rotatório. 0 resíduo foi dissolvido em acetona a purificada por cromatagrafia ds placa delgada radial acelerada centrífugamente preparativa em gel de sílica usando iô% ds metanol em cloreto da metilena cama eluente» 0 produto foi obtido sob a forma de um sólido esbranquiçado« Os dados físicos são referidos no Quadro I. 0 Quadro I índica os compostas ca® a Fórmula I que podem ser preparados ds acordo com os processos gerais s específicos descritos anterlormertte, ou que são conhecidos e que podem ser compradas a partir de fontes comerciais.

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CM C0 Ν·

Quadro 1 (Cont.!Composto Elementar Análise Ponto ι έ ç

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CM 00 lf) T- CO 00d "fr CO 05 oo CM O CM LOd 1Λ d <o O O T- r^- "M" 05

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Quadro 1 (Cont.

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Quadro 1 ( Cont. πί1 MP VP u +J tow

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Quadro 1 (Cont.

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I I I CM CU CM 1 1 r—i 1 —. (U 0 <U i—1 0 h in TS i—1 r—1 H U o - β 0 ' Qí -H rs o •H Ό o 0 H β •H β Ρ -H Η o X -ri O O. X -H CM 0 •H CM 0 0 X 2 - H X 2 X Λ O · Ή 0 O · CU 0 P X! N 0 β E 1 rB u o β -H Ό 0 O cg U cB O CU H -H U 2 — 1 υ -η Λ -H x: -η 1 CM 1 H 1 X 1 H ro l Tf -H Tf 0 Tf -H <U X X! X O >H o o O p O O ’ϋ o T3 X! Ό (B XS X! •Η Ό •Η β ri U -Η β υ β U (B O 1 0 iB '(D -H MB 0 MB CM MB 0 0 IO CD K 00 ρ CVJ CVJ CVJ CVI PPo o

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Quadro 1 (Cont

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Quadro 1 (Cont. P d +J c d · ε p <L) O H 0) W eh d d P +J P p 4-1 m w a m oi OJ LO o csi CÕ T-‘ ΙΟ ΤΟ X 2

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Quadro 1 (Cont.

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0 -μ (0 o ο μ α <l> E E O'2 U S LO Tf CO Tf 1^ Tf CO Tf

Quadro 1 (Cont. Φ Ό 0 0 4J ίΦ C CO O 3 CL| Cti Φ « μ ! d Η 0 '(0 υ c d c cy μ ftJ μ d d) • e μ <D 0 H Φ W μ

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Quadro 1 (Cont.

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Ο ο σ> <Ν OJ 09 Ο 00 Μ" t'· CU CD W C0m y- OJ <o (O tooí cõ <6 IO0 12

Ν-m AVALIAÇÃO BXOLõBICft

Ensaios ris Ligação ao Slutamatog A finalidade deste ensaio consiste em determinar a afinidade de ligação de um composto com a Fórmula I para o sitio receptor do N-metil-D-aspartato (NriDA)» Este processo foi reali·-cada como se segues

Foram preparadas membranas plasmáticas sinápticas CSPfi) tal como foi antsriorments descrito Lríonahan» -J = B. and Michsi, ã., "Identification and Characterization of an N~meti1-D-asparta— te-spscific L~EwH3gI utamate Recognition Si te in Synaptic Plasma íismbranes, J = Neurochem»y 485 1699-1703 <1987)3= As SPM foram armazenadas numa concentração de 10-15 mg/ml em sucrose 0,32 li? EDTfi 0,5 mM, MqSO. ImM, Tris/SQ» 5mM, pH 7,4, sob azoto líquido» *V ’ *-£*

A identidade s pureza das fracções subcslularss foram confirmadas tanto pela microscopia electrónica como pelos enzimas marcadores, As concsntraçSes de proteína foram determinadas usando uma modificação do método de Lowry EOhnishi, S=T. and Barr, ã.K., "A Simplifisd rlstbod of Quantitating Proteins Using the Biuret and Phenol Reagenfcs", Anal, Biocbem», 86, 193-197 <1978)3. As SPM foram descongeladas à temperatura ambiente, diluídas vinte vezes com Tris/acetato pH 7,4, incubadas a 37°C durante 3Θ minutos, e centrifugadas a 100=000 g durante 15 minutos» fí diluição, incubação e centrifugação foram repetidas num total de trfs vezes» Este método geral envolveu a atíiçSo de 12;,5 nii do radioligando L-ε‘"H3glutamato á concentração apropriada da composto GO teste e o inicio do ensaio pela adição de SPM arrefecidas p&ia gelo í0P2“®=45 mg)» Os ensaios da ligação foram realizados sfii tubos para centrifugação tíe 1,5 ml com o volume total ajustado para 1,0 ml» As adições dos compostos do teste foram realizadas sm Tris/acetato 50 mf*1, pH 7,4 e as icubaçSes foram realizadas a #„4*0=: 0 tempo de incubação para a ensaio de ligação NSiDA foi de í® minutos« Para terminar a incubação* as amostras foram centri-íugadas durante 15 minutos a 12 = ®θ® g e 4CC num Beckman Micrcifuge 12= 0 produto flutuante foi aspirado e as membranas agrupadas em belas foram dissolvidas num cocktail tie cintilação Beckman Rsady-Protsin s as amostras foram contadas num contador de cintilação liquido Beckman LS 58®® ou 3801 com correcçSes automáticas em relação ao arrefecimento brusco e à eficiência da contagem. A ligação nao especifica foi definida como a ligação residual na presença de MHBA ©?5®n e foi tipicamente 15-25% da ligação total no ensaio de ligação N!1DA = A ligação do radioliçando ao 8PM foi analisada usando transformações de Scatchard and Hill e os valores K. dos compostos foram determinados usando transformações logit-log. Os cálculos e a análise de regressão foram realizados usando padrões desenvolvidos por Lotus 1=2= 3 tal como foi anteriormente descrito CPullaru L-rL “Automated Radioligand Receptor Binding Analysis with Templates for Lotus”» Computer Appln = Biosci = = 3 131 (1987)3= Os resultados das ligações são referidos no Quadro II para exemplas de compostos do invento»

Processo do Ensaio de Ligação à Sllcina

Foram preparadas membranas plasmáticas sinápticas (BPM> a partir do cérebro anterior de rato que foram armazenadas tal como foi anteriormente descrito = Monshsn and J= Michel? J»

Meurochem» g 485 1699-1708 (1987)3= As membranas congeladas foram descongeladas e diluídas !§2® com ®,®4% de triton X-l®® em tris/acetato 5® mli CpH 7 = 4)= A seguir a incubação a 37°C durante 3® minutos!S as SPri foram recolhidas por centrifugação a 95 = ®®Θ X y durante 1b minutos» A bola foi suspensa de nave em tris/acetato 5® mH (pH 7 3 4 5 sen? triton) e homogen içada manual mente cinco vezes:: As membranas foram de novo centrifugadas como foi indicado

anteriormente» A bola foi lavada duas vszes adicionais com tris/scetato 5Θ mn (sem homogenisaçSo) e eentrifuqada* ft tola final foi suspensa de novo com bomogenisaçlo em tris/acetaio 5© mH „

QUADRO II

Composto do K.; sparsnts ίμΗ) Tcsstís No,= NMDA« Sli i 56,0 24,8 2 >100 >100 3 >100 11,7 4 >100 26 5 2 5 >100 17,5 6 >10® 1,3 7 >100 >100 8 >100 >Í00 9 V !«* 1 >100 10 >100 >100 11. >100 >100 12 >100 >100 1.3 >100 >100 14 >100 >100 15 >100 91,Θ 16 >100 >100 17 >100 >100 18 >100 >100 19 >100 >100 20 >1© 21 — >1© — >100 23 >100 11,2 b >30 26 >2© 27 — >20 28 -.......- >20

No processo geral de ensaies de ligação ao raceptor,, adicionou-se CE3FH3 1® ηΐΐ à concentração apropriada dos compostos do teste s o ensaio foi iniciado pela adição de 0*2--·©. 4 mg de SPil arrefecidas pelo gelo, 0 ensaio* que foi real içado em tubos para centrifugação de i *5 ml? foi ajustado para um volume total de 1*Θ ml sendo todas as adições realizadas em tris/acetato 50 MM * pH 7=4 a 4°C. fipés 1© minutos de incubação a 2°C* as amostras foram centriíugadas durante 15 minutos* a 12.000 g (4°C) num Beckman Microfuge 12= 0 produto flutuante foi aspirado e a extremidade do tubo contendo as membranas reunidas asa bola foi separada por corte e agitada em 0*5 ml de solubilicador de tecido Beckman BTB--450 durante um período mínima de 6 horas à temperatura ambiente. 0 cocktail de cintilação Beckman IIP (5 ml) contendo 7 ml/litro de ácido acético foi então adicionado e as amostras foram avaliadas num contador tís cintilação liquida Beckman LS 53Φ© com correcçSes automáticas para arrefecimento brusco a eficiência das contagens. A ligação nSo especifica foi definida como a ligação residual na presença de glicina 0*1 mH a usual.mente apresentou um valor de 25-35% da totalidade da ligação. A ligação de C‘H3glicina a 3PM foi analisada usando transformações de Scatchard and Hill e α K. para outros compostos foi determinado usando análise logit-log. Os cálculos a a análise de regressão foram realizados usando padrões desenvolvidos para Lotus 123 tal como foi anteriormente descrito CPulian st al* íd. 3. Os resultados da ligação são indicados no Quadro II para exemplos dos campastos do inventa. 01ίΑΜ0._11^£οη^2

Composto do NMDA# K. x aparento 29 3® 3:1 34 o o 36 38 39 4© 41 42 43 45 46 47 48 SI s5r--> .J -cl 53 54 55 -------- >3ô --------- 10,0 >100 0,47 -------- 2«=,9 ------- 75 r i -------- >30 --------- 3,9 -.......— >30 ______ -j o ·* ,= i. ® 5 92 ----------- 11,4 --------- >30 ------- 1,56 ............ 7, ® --------- ®,70 0 5 47 -------- 11,4 >10 ------ 13,2 -------- >30 --------- >30 ----- >30 =4\iâo Determinado >30

Ensaios da Protsccao de Tecida ϊ * Oocitos Xenopus

PalyA-í- RMA <mRWA) foi e>?traida do córtex do raio macho adulto usando o método do tiooianato de guanidinio desenvolvido par Han et al CJ «H« Han ai al», Biachemistry , 26, 1617-1625 < 1987)3 e o processo de crosnatografia de celulose digo CdT) de Aviv and Leder CH.Aviv at al π, Proc: - Nat, Acad* Sei»., 69, 1408- -1412 (1972)3„ Porções aliquotas de mRNA (1,0 mg/mi água) foram armazenadas a -2Θ°0η

Ffsneas adultas grávidas Xenopus laevis (Xenopus One,

Ann Ardor, MI ar MASCO, Ffc. Atkinsan, WI) foram anestesiadas com ©,2% (p/v) de Tricaine (éster etílico de ácido 3-amino benzoicop

Sigma) e submetidas a uma ovarectosia parcial,. Os sociias extrai- dos foram entlo preparados e mieroinjectados IM» W„ Kleckner et al. „ 5 Science 241 835-837 (1988)3, Qs aocitas faram tratados durante uma hora numa soluçSo de Barth (NaCl 88,® mM, KCi 1,0 mH,

MaHCO-, 2,,4 mH, CsCl^ Θ,4ί mM, rlqSO„ 0,82 mH, 10,6 μα/ml ds -= ' ' ··-!· penicilina, 1Θ® pg/ial de estrepiomícina, HEPES 1®,® mM, pH 7,5) contendo 1,5 mg/ml de Protease Neutral (Beohringer Mannheim Biochessicais, Grade II), Os aocitos foram entlo colocados em soluçlo de Barth contendo sucrose 1Θ®5® mri sendo entlo desfolicu-lados com uai fórceps fino. Os oocitos desfoliculadas foram entlo rnicroinjsctados com aproKimadamente 5® ng de mRNA em solução de Barth a lé*~-18*C =

Os oocitos foram submetidos a ensaio 2 dias mals tarde em relaçla & expressão da receptar cerebral por meio de grampo de voltagem de electrodo único (Axoclamp 2A, Ακοή Instruments) de um modo semelhante ao descrita anteriarroente CKleckner st al, Id» 3« As células apresentando potenciais de membrana em repouso estáveis da >~o© íbv forara submetidas a grampos da voltagem até -•6® mV em solução de ringsr para rãs modificada íMaCl !ίώ»9 mH,

4-V !<C1 2,® mm, CaCi.i3S mrl» HbHfcS 10,0 mrl a i-lq adicionado sero, pH 7,,5) que foi subsistida a perfusãc contínua Í5r,® ml/minuto) à temperatura ambiente (22-24°C>« As drogas foram adicionadas ao produto da psrfusão e as correntes internas induzidas por compostos açonistas foram medidas na resposta de pico do estádio estável,, As respostas máximas ao MMDft na presença eis glicina μΗ variaram entre -3,,® e o@»© nA e e tiveram tipicamente um valor de 1® nA» Não se verificou diferença farmacológica entre os aocitos apresentando respostas máximas de amplitude inferior e superior» Os compostos antagonistas foram administrados por perfuslo durante um período mínimo de 3»Θ minutos antes da co-aplicaçlo subsequente de agonista» Os dados são expressos como resposta percentual máxima (média ± S»E»M=>» As respostas semi--máximas (EC,— > e os declives para os dados de resoosta á dose

Os<’!‘ * ‘ forarri determinados a partir dos quadrados menores adaptados à equação ds regressão logística» Os valores Ι0_.Λ para compostos seleccionados para o bloqueio dos efeitos das várias concentrações ds glicina são indicados no Quadro III» hfsítos da Bloqueio da Glicina tt

Composto

Mo = 61i Ο,Ι μΜ Bli 1,® μΜ Bli i0«n 6 0,77±0,12 3,211,1 A 1 4 ” v w ? ^ ? — 31 ---$ ísé±0501 ló,1±1,4 ob .....--« 4 , 5±© 3 5 68-51:13,,5 37 ----$ 3 3 4±ô,9 ..........t -........$ « Nlo Determinado tt Vaiares de (μΜ) para compostos ssleccionados para α bloqueio dos efeitos de várias concentrações de glicina na presença de NMDA 1©Φ μΜ» IΪ » Corta de Hipocampo Epiléptico

Os cortes de hipocampo (450 μ) foram obtidos a partir de ratos albinos machos Spraçua-Dawlsy ΠΘΘ-325 g>„ 0 método ds praparaçlo dc?s cortes foi detalhado em qualquer outra parteEAJL Banong st sL, Brain Res.a 573» 170-174 <1983)3» Os cortes foram armazenados numa câmara interfacial humidificada á temperatura ambiente a banhada em liquido cerebrospinal artificial (AC8F> que continha (em mH)§ MaCl 124,®= KCl 5,0, KH?POa í,®, NaHCCh· 26,4, CbCI.~, 2,®» MgSO^ l;i5 e glucose—D que foi squiX ibracio com ’-?S% de 0,-,00% ds C0o» Quando necessário para estudo» os cortes foram colocados ura de cada vez numa pequena cSimsrs de submersão mantida a 35°C onde foram submetidos a psrfusão continua a 1,0---2,0 ml/miru Soluções recentes atingiram a câmara de registo no espaça ds 20 segundas e o resultado da parfusSo foi

compIetamente alterada na espaça de u® minuta. Onigénio adicional e agitação foram proporcionados por um jacto de ar (95¾ de 0^s5% d® C0„> dirigido para a superfície de AOSF» Foram utilizadas técnicas electrofisiológic&s padrão. Os electrodos de registo exiracalular eram mi era pi. petas de vidro cheias com NaCl 25δ M que foram quebradas até uma resistência de 25θ mfí» Todo o registo foi feito a partir da regilo somática de CAI» Os cortes utilizados nas experiências extracelulares aqui descritas apresentaram um pico de população siníplss após estimulação das fibras colate-rias/comissurais d® Schaffer em AC8F. Os elécirotíos de registo intracelular com resistência de 60-100 MQ foram cheios com KAc 2,5 M» Os dados intracelulares foram colhidos a partir de células que apresentavam um potencial de membrana sm repouso estável superior a -55 mV e que após estimulação desencadearam potenciais da acçta que ultrapassara® o potencial zero mv e que eram de duração inferior a 2 segundos. As fibras colaterais/comissurais da Schaffer foram estimuladas com eléctrodos de estimulação bipolar de tungsténio a uma ta^s de ©5©3 He, O campo EPSP resultante (1ΞΡ8Ρ 3/C-CA1) s o potencial DC fora® amplificados par meio de um amplificador AKoprobe 1 & foram continusmente monitorizados num osciloscópio de armazenagem TektroniK 51IÍA e num registador ds gráfico com um módulo de armazenasnento Bould Waveform» A actividads epileptiforme foi induzida por omissão de iões Mg"1"’' a partir da produto da perfusSo5 o que remove o bloco do reesptor de NiíDA dependente da voltagem mediada por Mg’‘ EB» Ault st al.? ÇL« Phvsiol» - 507, 413-428 (1980) 3 ou pela adição da picrotoKina antagonista de BABA. As dragas foram adicionados ao produto da psrfuslo s o magnésio zero refere-se a soluções que não contêm magnésio adicionado» A amplitude do pico da população primária desencadeado pelo estímulo foi usada para avaliar os efeitos das manipulações experimentais sobre a eficácia da função sináptica.. Ds resultados slo indicados no Quadro IV= fcfeito de d® μΜ de Composto No» h e da 3®θ μΜ da Composto No» -do vs. ©pilepsxa induzida por 0% de ng ' na corte de hipocampo In vitro

Parinetro Composto No» ó % Controlo Composto No % Controla, Amplitude pico população primária 97 82 p 1 Soma amplitude pico população adicional yc-í i rs?sz L Duração erupção 6® 19,2 fietividade espontânea 48

hnsaio sobre Efeito sobre cSrlP

Ratos machos Swiss Hausche ί25~3θ g) foram injectarios intracistarnicamante Ci»c»t») com agcnistas da glicina 1® minutos antes de serem sacrificados por meio de irradiação de microondas convergentes* Os compostos do invento foram injsctadcs intracis-ternicamente 2 minutos antes do aqonista = Para injecçSes intra-ciãisrnais,, todos os agonistas foram dissolvidos am HC1 e diluídos com solução salina isotónica antes do ajustamento do pH para um valor entre h s 7 com NaOH» Os compostos do invento foram dissolvidos em solução salina isoténica e todos os compostos foram administrados num volume ds 5 μΐ. As doses de acionistas foram obtidas fazendo uma série de diluições de uma solução concentrada da droga até as injseções intracisternais de 5 μϊ

resultarem em nSo mais de i®% de mortalidade durante os primeiros 15 minutos após a injseção.,

Extracios do cerebelo em ácido clorídrico foram secos por congelação para ensaio de cBMP com um estojo RIA comerciai <MEM>. As determinações ds proteina (Lowery) e as estatísticas <t-teste de Dunett) foram realizadas tal como foi descrito anteriormente CP. L. Wood et al» 5 Meurochem.- „ 19, 975-982 (1980)3=: Os grupos consistiam em 7-1® ratinhes. Os resultados são referidos no Quadro Vf

QUADRO V

Composto do Teste cBMP Cerebelar (proteína penal/mg ± SE!1) 3,8 ± #,43

3,8 ± 0,96

Solução salina

Ssrina-D Ci## μα)

Composto No» é <b uq)

Ssrina-D (1## μρ>

Composto No» 6 (5 \xq) É também abrangida neste invento uma classe de composições farmacêuticas compreendendo um ou mais compostos com a Fórmula I em associação com um ou mais veículos e/ou dilusntss a/ou adjuvantes farmacfuticamente aceitáveis, nlo tóxicos Ccolec- tivamants aqui referidos como materiais “veiculo") e5 se deseja..... do, outros ingredientes sctivos» Os compostos do presente invento podem ser administrados por qualquer via apropriada, de prefsrfn-cia sob a forma cie uma composição farmacêutica adaptada a essa via, s numa dose eficaz para α tratamento pretendido» Doses terapfuticamente eficazes dos coapostos do presente inventa requeridas para evitar ou travar a evolução da situação patológica sSo rápidamente calculadas por qualquer especialista nesta técnica» Os compostos e composições podem, por exemplo, ser administrados intravascularmsnte, intrapsritonealmenta, subcui®- neaments, intramuscularmente ou topicamente»

Para administração oral, a composição farmacêutica pode apresentar-se sob a forma ds, por exemplo, um comprimido, cápsula, suspensão ou 1iquidcu A ccmíposiçSo farmacêutica é preparada de preferência sob a forma de uma unidade de dosagem contendo uma quantidade terapfutieaments eficas ao ingrediente activo» Exemples dessas unidades ds dosagem são os comprimidos e as cápsulas. Uma dose diária apropriada para uai mamífero pode variar amplamente dependendo da situação do doente, do peso corporal a de outras fsetores» 0 ingrediente activo pode também ser administrado per injecçlo como uma composição em que, por exemplo, solução salina, dextrose ou água podem ser usados como um veículo apropriado. Uma dose diária apropriada varia entra esrea da Θ,Ι a 10Θ my/kg da peso corporal injectada por dia em doses múltiplas dependendo da doença a ser tratada» Uma dose diária preferida varia entre cerca de ia 30 mg/kg do peso corporal» Os compostos indicados para terapêutica profilática serio de preferência administrados numa dose diária geralmente variando entre cerca de mq e cerca de 100 mg por kg do peso corporal por dia» Uma dosagem mais preferida variará entre cerca de 1 mg e cerca de Í00 mg por kg do peso corporal« A mais preferida é uma dose variando entre cerca de 1 e cerca ds 5® mg por kg do peso corporal por dia= Uma dose apropriada poda ser administrada, em múltiplas sufa—doses por dia. Estas su.b—doses podem ser administradas sob a forma tíe unidades ds dosagem, Tipicamente, uma dose ou sub—dose pode conter ds cerca de 1 mg a cerca de 10Φ mg de composto activo por forma de unidade ds dosagem. Uma dosagem mais preferida irá conter da cerca da 2 mg a cerca de 5® mg do composto activo por forma de unidade de dosagem» A mais preferida ê uma forma de dosagem contendo de cerca de 3 mg a cerca de 25 mg do composto activo por dosa unitária, 0 regime de dosagem para o tratamento de uma situação patológica com os compostos e/ou composições dssts inventa é seleccionado de acordo com uma série de factores, incluindo o

tipo* idade3 peso* sexo e situação clínica cio doente* a gravidade da doença* a via de administração* e o composto particular utilizado* podendo assim variar ampla-mente»

Para fins terapêuticos* os compostos deste invento são habitua1mente combinados com um ou mais adjuvantes apropriados para a via de administração indicada» Se administrados per os» os compostos podem ser misturados com lactose* sucross, amido em pé* ésteres celulósicos de ácidos alcanoicos, ésteres alquil celulósicos* talco* ácido esteárico* estearato de magnésio* óxido de magnésio * sais de sódio s de cálcio de ácidos fosfórico s sulfú-rico* gelatina* goma acácia* alginato de sódio, polivinilpirroli-dona, e/ou álcool polivinílico* sendo então prensados em comprimidos ou encapsulados para conveniente administração. Essas cápsulas ou comprimidos-podem conter uma formulação de libertação controlada que pode ser proporcionada numa dispersão do composto activo em celulose hidro^ipropilmetílica» As formulações para administração parentérica podem apresentar—se sob a forma de soluções ou suspensões para injseção estéreis isatânicas aquosas ou não aquosas. Estas soluções e suspensões podem ser preparadas a partir de pés ou grânulos estéreis tendo um ou mais dos veículos ou diluentes mencionados para utilização nas formulações para administração oral» Os compostos podem ser dissolvidos sm água* polietileneo gliccl, propilene glicol* etanol* éleo de milho* óleo de semente ds algodão, óleo de amendoim, óleo de sésamo * álcool benzilico* cloreto de sódics* e/ou vários tampões» Outros adjuvantes e modos de administração são bem s amplamente conhecidos na técnica farmacêutica»

Embora este invento tenha sido descrito no que se refere a spresentaçSes específicas* os detalhes destas apresentações não devem constituir limitações» Podem ser feitos vários equivalentes* alterações e modificações sem afastamento do

espirito e âmbito deste inysnto5 s dev® ser compreendido que essas apresentações equivalentes fasem parte deste invento»

Claims (2)

1. iã»— Processo para a preparação de uma composição farmacêutica caracterizado por se misturar uma quantidade tsraptu-ticamente eficaz de um composto antineurotósílco e um veiculo ou diluents íarroscfuticamsnte aceitável5 sendo o referido composto anfcineurotóKieo seleccionado a partir de uma família de compostos coro a fórmula

   RJ I ε κ" m Y em que R" è seleccionado de entre hidrido? alquilo s âralquilog em que cada um de entre R~ a k' à seleccionado independentemente a partir de hidrogénio? halo? hidroxi? alquilo? haloalquilo, aicoxi? hidroalquilo? cicioalquilo? ciclcalquilalquilo? aralqui-lo? alcoxiaiquilo? ciano? slquiitio? sulfinilo? sulfortilo? sulfinilalquíIo? sulfonilalquilo? amino? monoalquilamino? dial- quilamino? acilo? aciloxi? amido? ariloxi? ara1comi? aralcoxial-quilo? arilo e 9 9 II CR -(CH2)n- cs em que R' é seleccionado de entre hidrogénio, halo, hidroxx, alquilo, alcaxi, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, cicloalquil-oxi, arilo, sriloxi, aralquilo, aralquiloxi, amino, monoalquil-amino ε dialquilamino, em que n é um número seleccionado de entre zero a seisp em que X é seleccionado de entre hidrogénio, halo, _ ? .¾ aiBino, monoalqux lamxno, dxaiqux iamxno e UK"" em que K“' e ssiec-cionado ds entre hidrogénio., alquilo, cicloalquila, cicloslqui 1···-alquilo, aralquilo e arilo? em que Y ê seleccionado de entre hidrogénio, alquila, hidraxi, halo, cicloalquilo, alcoxi, arilo e 0 CR1,1 em que R*·1 é seleccionado de entre hidrogénio, hidroxi, alquilo, alcoxi, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, cieloalquiloxi, arilo, ariloxi, aralquilo, aralqui loxi , amino, manoalquilamino e dial — quilsmino? em que m à um número seleccionado de entre zero a i sexs? e em que qualquer um dos substituintes anteriores X, Y e R* a R"’"" tendo uma posição substituível é substituído com um radical seleccionado ds entra alquilo, halo, hidroxi, alcoxi, amino, monoalquilamino, dialquilamino, menearaIquilamino, diaralquilami— no, haloalquilo, aralquilo e arilo? ou um seu sal ou éster farmacSuticamente aceitável 5 sendo a quantidade ds ingrediente activo tal que forneça uma gama ds dosagem ds cerca de 0,1 até cerca de 1&Θ mg» por quilograma de peso corporal por dia* 2ã«- Processo de acordo com a Reivindicação 1 earacts--· rizado por R1 ser seleccíonado de entre hidrogénio5 alquilo e aralquilo? por cada um de entre H~ a R' ser seleccíonado independente-mente da entre hidrogénio5 halo5 hidroxi, alquila;i haloalqui-lo, alcoKi s hidroKialquilOs cicloalquilc* cicloalquilalquilo, aralquiloj alcoxialquiIa5 ciano, alquiltia, ami.no, moncsalqui 1-aminoj dialquilaminoy acilo;; aciloKi* amido* ariloKi, sralcoxí, araIcoKialquilo5 arilo e 0 II, (CH2)„-CR? em que R' é seleccíonado de entre hidrogénio3 halo* hiúroni^ alquile:; alcoxi, cieloalquilo, cicloalquilalquilo3 cic loalqui--· Icud-.i ariloj ariloxi 3 aralquilos aralquiloKig amino5 mcnoaiquil-smirto e dialquilamínoíi em que n é um número seleccíonado de entre zero a quatros em que X é seleccíonado de entre haÍo;= aminD=: Ί s"i Ί =¾ monoaxquilaminog dial qui lamino s OR""’ em que R~’'‘ é seleccíonado de entre hidrogénio? sIquilo? cieloalquilo, cicloalquilalquilo* araiquilo e arilo? em que Y é seleccíonado de entre hidroKi 5 halo3 alcoxi a 0 -CR 11 / ϊ 1 em que R““ ê seleccíonado de entre hidrogénio, halo, hídroxi, alquilo, alcaxi, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, cicloalqui-loxi, ariloy ariloxi, aralquiloj aralquiloKi? asino, monoalquil-amind e dialquilamino? em que m é um número seleccíonado,de entre

   zara a quatros a am que qualquer um dos substltuintas anteriores 1 '1 1 X5 Y e R” a R tendo uma posição suostituivei S substituído coai um radical seleccionado de entre alquilo, hidroxi, alcoxismino3 manoa 1qui X amino, dialquilamino, monofenilalquilamino, aralquilo e arilos ou um seu sal ou éster farmacêuticamente aceitávelu 31=" Processo de acordo com a Reivindicação 2 caracte- rizado por R“' ser seleccionado de entre hidrogénio,, alquilo a _2 -1 Ysnalquilo; em que cada um de entre K e K" ser mdependentemente selsccionado de entre hidrogénio, halo» hidroni, alquilo, haloal-· quilo5 aicoKi, hidroKialquilo, fenalquilo, amino, monoalqui1ami-no3 dialquxlamino9 e tenilof por cada um as entre R ' a i-T ser independentemente seleccionado de entre hidrogénio, halo, hidro— ri5 alquilo5 haloalquila, alcoai, hidroxialquilo, fenalquilo, fenoKi5 benziloxi, fenetiloKi, amino, monoalquilamino, dialquil-aminoj aciloxi, feniio e 0 », (CH2)„-CR, em que H e seleccionado de entre hidrogénio, hidroni, alquilo, alcoKij fsnilo, fenoxi, fenalquilo, fenalquiloxi, amino, monoal..... quilaminos e dialquilamino em que n ê um número seleccionado ds zero a quatros em que X ê seleccionado de entre amino, monoal-· qui lamino, dialquilamino, e 0RiS!? em que Rlw é seleccionado de entre hidrido, halo, alquilo, fenalquilo e feniio? sm que Y é seleccionado de entra hidroxi, halo, alcoxi, e ο II -CR π / 11 Sm qua R “ e seleccionado de entre hxtiroganio, hxdroKx, alquiiD, alcoKij fenilo, fenoKi, fen&lquilo, fenalquiloxi, amino, monoal- quilamino e dialquilamino? em que m é um número sslsccionado de entre zero a seis? e em que qualquer um dos suhstituintes ante- 1 1 1 rxorss, 3í, Y a R~ a H" tendo uma posxçao substx tuivsi & substituído com um radical seleccionado as entre alquilo, hidroxi, alcoxi, aminOji n<onoalquilamino5 dialquilamino, monofenalquilami-no, fenalquilo s fenilo? ou um seu sal ou éster f armac‘iuticamente aceitável* 4®«- Processo de acordo com a Reivindicação 3 carscts- risada por R“ ser seleccionado de sntre hidrogénio e alquilo 2 ^ interior? s por cada um de entra R a H~ ssr seisccxonado mde-pentísntemente de sntre hidrogéniohalo5 alquilo inferior, _ύ. _ ·? Psncxl.cs s fenilo? por cada uns de entre H’ a H' ser seleccionado iridspentíentemente ds sntre hidrogénio* halo, hiarDKig alquilo inferior, haloalquilo, alcoxi inferior, fenoKÍ3 benciloKi, benzilo, fenilo, e substituivel é substituído com um radical seleccionado de entre alquilo inferior, hidroxi, alcoxi inferior, benzilo, amimo* monoalquilamino* dialquilamino, monofsnalquilami-hq e fenilo? ou um seu sal ou éster farmactuticamante aceitável* 51*-· Processo de acordo com a Reivindicação 4 caracts-rizado por o referido composto antineurotóxico ter a fórmula

   nr. ^ em que cada um ds entre Rw a R'~' á selsccionado independent ementa ds antrs hidrogénio, halo, alquilo infsricjr, halo alquilo infe-· rxor s aicoxi mtarxors e am qus H~~ s ssíeccionatía ds antrs hidrogénio, alquilo inferior * benzila e feniloij em que Y é selsccionado ds entra hidroKi, alconi inferior, benzíloKi s 0 I, -(CH2)„-CRS , o em que w e seleccxonaao de entre hidrogénio, hidroKi, alquilo inferior, alcosi inferior, fenilo, f eno>; i , benzi la, benzi Iok i , amino, monoalquilamino e dialquilamino, em que n é um número selecionado de entre zero a doiss ea= qus K é selsccionado ds 1 ?Vê 1 Λ* entre amino, monoalquilaoiino, dialquilami.no e OR'^ em qus R"^ é selsccionado de entre hidrogénio, alquilo inferior, benzilo e feniiop em que Y é sslsccionado de entre hidroKi, halo, alcoKi infsricsr, bensiloKi e 11 ο II -CR r sffi que R~" è seleccionado de entre hidrogénio* hidroxi* alquilo inferior, alcoKi inferior* fenilo, fenoKi* bensilo* benzi lo;<i5 amido* monoalquilamino e dialquilamino^ em que m è um número seleccionado de entre zero a quatro?! e em que qualquer um dos 1 1 1 suostztuzntes anteriores* X, Y e R~ a R tendo uma poaxçSio 0 11 -CR1/1 1 1 sm que H'~ é seleccionatío de entre hidrogénio* hidroKi * alquilo inferior* alcoKi inferior* aroi.no* roonoalquilamino* dialquilamino* monofenaiquilamino e fenilo? em que m é um ou doiss ou um seu sal farmaCtufcicamente aceitável, àâ,— Processo cie acordo coro a Reivindicacao 5 caracts™ rizado por α referido composto antineurotó>iico ter a fórmula

   Εζ /. sm que cada um de entre Rw e R" é seleccionadc independer»temente as entre hidrogénio* fluoro, cloro e bromo? em que é salec--· 1 V cionado de entre hidrogénio e alquilo inferior? em que R"'1' é ssleccionado de entre hidrogénio a alquilo inferior? ou um seu sal f armacêuticafnente aceitável. 7ã.~ Processo de acordo com a Reivindicação 5 caracte- rizado par o referido composto antineuroténica ser seleccionado de entra ácida 2-carboxi~3-indaIacética? áci d o 2~carboKi-1-metil-3— indolacético? ácido 2-carboxi“5”Cloro-3”indalacético? ácido 5-bromo-2-carboKi-3-indDlacático| ácido 2-carboxi-5-f 1 uoro-3--·índo 1 acético 2-carboKi-è-c1oro-2-indolacetato de stilo? 2-carboxi-6-cIoro~3—indoleacstamida? ácido 2-carboKi-6-cloro-3“indolsacético 3-etilamida? 6—cloro-3—í'2—cloroetiI)—2—indolecarbosilato de atilo? e ácido 2-carboκi-6-c1oro-3-indoleacético» 31 = - Processo de acorda coai a Reivindicação 7 carscts·-risado por o referido composto antineurotóKico ser ácido 2-carbo-Ki-6-c1oro-3-indo1eacático» ?i»~ Método para o tratamento de um mamífero atingido por ou suscsptivei a uma doença neurodegenerativa ou a uma lesão neurotóKica? caracterizado por compreender a administração ao mamífero de uma quantidade terapfuticamente eficaz.-= por exemplo de 0=,1 a 1ΦΘ mg por kg de peso corporal s de preferencia de 1 a 3Φ mg por kg de peso corporal numa dose diária quando administrada por injecçSo, de um composto com a fórmula

   em que RJ' é seleccionado de entre hidrogénio, alquilo e arslqui™ '7 _o iop em que cada um de entre R" a H' ê seleccionado independente™ mente de entre hidrogénios halo, hidroxij alquilo3 haloalquiloe alcQKi,, hidroKialquilDj cí.cloalquilo3 cicloalquilalquilo, arai™ quilo, alcoKialquilcjj ciano= alquiltio» sulfinilo, sulfonilo.·, sulfinilalquilo, sulfonilalquilo, ami.no, snonoalquilamino3 diai-quilaminos acilo? aciloxi? amido5 ariloxij aralco>;i= aralcoxial-quilo, arilo e

   - (CH 2) n’ am que R* é seleccionado de entre hidrogénio, naio, hidroKi, alquilo, alcoxi, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, cic: loalqui--Χακί, arilpp ariloni, aralquilo, aralquiloxi, amino, monoalqui 1-smino e tíialquilamino, sm que n é um número sslsccicnado de entre zero a seisp sm que X è seleccionado de entre hidrogénio, halo, 1 C'l *? Ç'l amino, monoa1qui1amino, diaIquilamino e OR*^ e«n que R“v é seleccionado de entre.hidrogénio, alquilo, cicloalquilo, cicloalquil-alquilo, araiquilo e arilo; em que Y é seleccionado de entre hidrogénio, alquilo, hidroxi, halo, cicloalquilo, alcoxi, arilo s 0 -CR 11 /

   diaralquilarainoj halos,Iquilo, araiquilo s arilop ou um ssu sal ou éster farmactuticamente aceitável, Í0ã»- Método de acordo com a Reivindicação 9 caracte-riaado por R1 ser seleccionado de entre hidrogénio, alquile s ara1qui1og por cada um de entre R*" a R' ser seleccionado indepen-dentemente de entre hidrogénio, halo,, hidroxi, alquilo,, haioalqui-lor, alcoKi,, hidr ok ialqui1o, cicloalquilo, cicloalquilalquí lo, aralquilo, alcoxialquilo, ciano,, alquiltio, assino, monoalquilami-· no, dialquilamino, acilo, aciloxi, amido, arilOKi, aralcoi-ci, aralccsxialquilo, arilo e 0 II, -(CH2)„-CR , €3 em que H~ & seleccionado de entre hidrogénio, halo, hidroKi, alquilo, alco>a.5 cicloalquilo, cicioalquilalquilo, ciclaalqui™ 1 o;<i , arilo, ariloxi, aralquilo, aralquilOKi , assino, monoalquil — ami.no a dialquilamino, em que n é um número seleccionado de entre tero a quatros em que X é seleccionado de entre halo, amino, monoalquilamino, dialquilamino e OR*"* em que &lK* é seleccionado ds entre hidrogénio, alquila, cicloslquilo, cicioalquilalquilo,, araiquilo e arilop em que Y é seleccionado d© entre hidroKi, halo, alcali e 0 II -CR11, entre hidrogénio halo. em que R~ “ é se 1 eccãonado de entre hidrogénio halo, niflrosi 5 alquilo, alcoKig cic: loalquilo, cicioalquilalquilo, cicloalquilo™ ni;, arilo,, ariloKi, aralquilo, aralquiloKi, amino, monoalquilami— nc e dialquiϊάιηΐηορ em que ns é um número seieccionado de entre ísrc a quatros e em que qualquer um de entre os substituintss snteriores X, Y e R“ & RA* tendo uma posição substituível é substituído com um radical seieccionado de entre alquilo,, hidroKi , alcoKi, amino,, monoalquilamino, dialquilamino, monofenil-alquilamino, aralquilo e arilop ou um seu sal ou éster farmactu-ticamente aceitável» ilã,,-· Hétodo de acordo com a Reivindicação 1® csracts-risatío por R" ser seieccionado de entre hidrogénio, alquilo e fenalquilop por cada um R" e R" ser seieccionado de entre hidrogénio, halo,, hidroKi, alquilo, haloaíquilo, ak:oxi5 hidrarialquilos fenalquilo, amino, monoaiquilaminD, dialquilsmino _ É. _ 7 s feni.ios em que cada um de entre K ‘ a K* ser independentement® seieccionado de entre hidrogénio, halo, hidroxi, alquilo, haloal-quilo,, alcoKi, hidronialquilo, fenalquilo, fenoKi, bensiloííi, fsnatxloxi, amino, monaalquilafflina,, dialquilamino, aciloxi, fanilo s 0 CR9 , _ o saí que K' è seieccionado de entre hidrogénio,; hidroKi, alquilo, alcoKi, fenilo, fenoxi, fenalquilo,, fenalquiioxi3 amino, monoal — quilamino e dialquilamino, em que π é um número seieccionado de entre tero e quatroj em que X é seieccionado de entre ami.no,, monoalqui lamino, dialqui lamino e 0Rxíií em que Rx~ é seieccionado

   eis entre hidrogénio, halo, alquila» fenalquilo e fenilo-3 em que Y é seleccionado de entre hidroKi, halo, alcoxi e 0 1 i ain que h~ ~ & seieccxonado de entre hxdrogénxc, hxaroKX, alquilo, alcoxi, fenilo, fenaxi, fenalquila, fenalcaxi sminoP monoalquil-- amino e dialquilamino? em que m é um número seleccionado de entre zero a ssisi e em que qualquer um dos substituintss anteriores x? 1 _ 1 1 Y e R“ a Y..... tendo uma posição substituível ê substituído com um radical seleccionado de entre alquilo, hidroxí, slcoxi, amino, monoaiquilamino, dialquilamino, monofena1qui1amino, fenalquilo e fenilo? ou um seu sal ou éster far roactlu ticamente aceitável« i2:âs- nètotío ds acordo com a Reivindicação ii caracte-rizsdo por R‘ ser seleccionado de entre hidrogénio e alquilo inferior? e em que cada um de entre R*" e R'"’ ser seleccionado independentemente de entre hidrogénio, halo, alquilo inferior, benzila e fenilo? em que cada um de entre R"v a R' ser selecciona-do independentemente de entre hidrogénio, halo, hidroKX, alquile inferior, haioalquilo, alcaMi inferior, fenoni, benziloxi, benzilo, fenilo, e 0 (CH2)n-CR’ .. O sm que R' é seleccionado de entre hidrogénio, hidroKi, alquilo xnferiar, alcoxi inferior, fenilo, fenoKi, benzilo, benziloxí,

   amino* monoaiquilaminq s dialquilamino* em que n é um número seleccionado de entre zera a doisp em que X é seleccionado de _ 1 0 1 íS entre amino* monoalcfuilamxno* dialquilamino e uR*’"' em que Ti""' è seleccionado de entre hidrogénio* alquilo inferior* benzilo e fenilGji em que Y ê seleccionado ds entre hidroxi* halo* alcoxi inferior* benziíqkx e 0 \1 CR u i em que Fr" é seleccionado de entre hidrogénio hidroni* alquilo inferior* alcoxi inferior* fenilo* fenoxi* bsnzilo* hensiloxiP amino* roonoa 1 qui 1 amino e dialquilamino* em que m è um número seleccionado de entre zero a quatroj e em que qualquer um das _ ·? _ 1 1 suostxtuxntes anteriores X* Y e K* a H“" tendo uma posição substituível é substituído com um radical seleccionado de entre alquilo inferior* hidroxi* alcoxi inferior* benzi lo, amino* monoaIquilamino* dialquilamino* monofena1qui1amino e fenilop ou um seu sal ou. éster farmaciuticamente aceitável* 131*” Método de acordo com a reivindicação 12 caracts-rizado por o referido composto ter a fórmula

   H 0 s=t' À em que cada um de entre R"s e Rw ê seieccionado indspendsnismsnis de entre hidrogénio, halo* alquilo inferior;, halo alquila infs- _ i rior s sicaxi inferior? e em que K”' é selsccionado de entre hidrogénio, alquilo inferior, benzi Io s fenilo? em que Y é seieccionado de entre hidras-d., alcaKx inferior» benxiloKi s mm ! 1 que H~~ é seieccionado de entre hidrogénio, nitíroKi, alquilo inferior, alcoxi inferior, amino, monoalquilamino, dialquilamino, monofena1quilamino e fenilo? em que m é um ou dois? ou um seu sal farmacfuticamente aceitável= i4sk·--- Método de acordo com a reivindicação 13 carscts-rizado por α referido compcmia ter a fórmula

   em que cada um de entre Rw e k‘ ' é seieccionado independentements •5 /¾ de entre hidrogénio, fluaro, cloro e bromo? em que RAV*' é selec- *1 cionado de entre hidrogénio e alquilo inferior? em que R4··*· ê seieccionado de entre hidrogénio e alquilo inferior? ou um seu sal farmactuticamente aceitável» 15âMétodo de acordo com a reivindicação 13 caracts-rxzado oor o referido composta ser seieccionado de entre

   ácido 2-carboKi—3~i-ndclacéticaij ác á. d o
2. 2 ”C a r bo κ i --1 - me t i 1 -~3·-- i π d o 1 ac é t i c o ? ácido 5~brcffia~2~carboKi-3-inda1acético5 ácido 2“CsrbOKi"5~fluoro-3-indoJ.eacéticos 2“-c:arbo>?i---*“Cloro-"3-indoleacetato da stiiop 2“carboKi~6~cloro~3~indoleacétSffiida| ácido 2“"carbo;'?i~6-clorQ-3-indolsacético 3-atilamidas ô~cloro“-3~C2~cloroetil )~2“indolscarboKi!ato de etilos e ácido 2-csrhoKÍ~6~cloro-3—indaleacéticc> = lóâ»·- Método de acordo com a reivindicação lo caracte™ ricado por α referido composta ser ácido 2-carboí{i-6~cloro~3~inda-leacético» Lisboa,: 2 de Maio de 19V®

   J. PEREIRA DA C R U 2 Agsnís Oficial da Prcpriedade Industrial *UA VICTOR CCfíDSN, 10-A, 1.· 1200 L!€BOA