PT2696687T - Derivados de glp-1 duplamente acilados - Google Patents

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Description

DESCRIÇÃO "DERIVADOS DE GLP-1 DUPLAMENTE ACILADOS"
CAMPO DA INVENÇÃO A presente invenção refere-se a derivados de análogos do Péptido Semelhante a Glucagon 1 (GLP-1), mais em particular a derivados de GLP-1 duplamente acilados, acilados em K27 e noutro resíduo K do péptido, e sua utilização farmacêutica.
ANTECEDENTES
Journal of Medicinal Chemistry (2000), vol. 43, no. 9, pág. 1664-1669 divulga derivados de GLP-1 (7-37) incluindo alguns que são duplamente acilados. WO 98/08871 Al divulga vários derivados de GLP-1 incluindo alguns que são duplamente acilados. Liraglutido, um derivado de GLP-1 mono-acilado para administração uma vez por dia que é comercializado desde 2009 por Novo Nordisk A/S, é também divulgado em WO 98/08871 Al (Exemplo 37). WO 99/43706 Al divulga vários derivados de GLP-1 mono e duplamente acilados incluindo alguns derivados k27'26 e ^27,34 WO 06/097537 A2 divulga vários derivados de GLP-1 incluindo semaglutido (Exemplo 4), um derivado de GLP-1 mono-acilado para administração uma vez por semana que está em desenvolvimento pela Novo Nordisk A/S.
Angewandte Chemie International Edition 2008, vol. 47, pág. 3196-3201 relata a descoberta e caracterização de uma classe de derivados do ácido 4-(p-iodofenil)butirico que apresenta alegadamente uma interação de ligação não covalente estável tanto com albumina do soro de ratinho (MSA) como com albumina do soro humano (HSA).
SUMÁRIO A invenção refere-se a derivados de péptidos GLP-1 tal como definidos nas reivindicações. 0 presente pedido divulga derivados que são acilados numa lisina a substituir o ácido glutâmico nativo na posição 27, bem como noutro resíduo de lisina. As cadeias laterais são porções de ligação a albumina. Compreendem uma porção de prolongamento, de preferência selecionada a partir de diácidos gordos, e ácidos gordos com um grupo fenoxilo distai, todos opcionalmente substituídos. Um grupo carboxilo do ácido gordo ou diácido gordo é acilado, opcionalmente através de um ligador, num resíduo de lisina do péptido GLP-1, de preferência no grupo épsilon-amino deste. 0 péptido GLP-1 pode ser um análogo de GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 1) possuindo um total de até dez diferenças de aminoácidos em comparação com GLP-1 (7-37), por exemplo uma ou mais adições, uma ou mais deleções, e/ou uma ou mais substituições.
Mais em particular, o presente pedido divulga um derivado de um análogo de GLP-1, análogo esse que compreende um primeiro resíduo K numa posição correspondente à posição 27 de GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 1); um segundo resíduo K numa posição correspondente à posição T de GLP-1 (7-37), onde T é um número inteiro no intervalo de 7-37 exceto 18 e 27; e um máximo de dez mudanças de aminoácidos em comparação com GLP-1 (7-37); em que o primeiro resíduo K é designado K27, e o segundo resíduo K é designado KT; derivado esse que compreende duas porções de ligação a albumina ligadas a K27 e KT, respetivamente, através de um ligador, em que cada porção de ligação à albumina compreende uma porção de prolongamento selecionada a partir de HOOC-(0¾) X-C0-* e HOOC-C6H4-O- (CH2) y-CO-*, em que x é um número inteiro no intervalo de 6-16, e y é um número inteiro no intervalo de 3-17, e em que o ligador compreende um elemento ligador de fórmula Quím. 5:
em que k é um número inteiro no intervalo de 1-5, e n é um número inteiro no intervalo de 1-5; ou um sal, amida, ou éster deste farmaceuticamente aceitável. A invenção divulga também tal derivado para utilização como medicamento, em particular para utilização no tratamento e/ou na prevenção de todas as formas de diabetes e doenças relacionadas, tais como distúrbios alimentares, doenças cardiovasculares, doenças gastrointestinais, complicações diabéticas, doença crítica, e/ou síndroma do ovário poliquístico; e/ou para melhoria de parâmetros lipídicos, melhoria da função das células β, e/ou para atraso ou prevenção da progressão de doença diabética. A invenção divulga além disso produtos intermediários na forma de novos análogos de GLP-1, que são relevantes para a preparação de certos derivados da invenção.
Os derivados da invenção são biologicamente ativos. Também, ou alternativamente, possuem um perfil farmacocinético prolongado. Além disso, ou alternativamente, são estáveis contra degradação por enzimas gastrointestinais. Além disso, ou alternativamente, possuem elevada biodisponibilidade oral. Estas propriedades são importantes no desenvolvimento de compostos GLP-1 de geração seguinte para administração subcutânea, intravenosa e/ou, em particular, oral.
DESCRIÇÃO
No que se segue, as letras gregas podem ser representadas pelo seu símbolo ou o correspondente nome escrito, por exemplo: α = alfa; β = beta; ε = épsilon; γ = gama; ω = ómega; etc. Além disso, a letra grega de μ pode ser representada por "u", p. ex. em yL=ul, ou em yM=uM.
Um asterisco (*) numa fórmula química designa i) um ponto de ligação, ii) um radical, e/ou iii) um eletrão não partilhado.
Num primeiro aspeto, a invenção refere-se a um derivado de um análogo de GLP-1, análogo esse que compreende um primeiro resíduo K numa posição correspondente à posição 27 de GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 1); um segundo resíduo K numa posição correspondente à posição T de GLP-1(7-37), onde T é um número inteiro no intervalo de 7-37 exceto 18 e 27; e um máximo de dez mudanças de aminoácidos em comparação com GLP-1 (7-37) ; em que o primeiro resíduo K é designado K27, e o segundo resíduo K é designado KT; derivado esse que 27 compreende duas porções de ligação a albumina ligadas a K e KT, respetivamente, através de um ligador, em que a porção de ligação à albumina compreende uma porção de prolongamento selecionada a partir de Quím. 1 e Quím. 2:
em que x é um número inteiro no intervalo de 6-16, e y é um número inteiro no intervalo de 3-17, e o ligador compreende Quím. 5:
Quím. 5
em que k é um número inteiro no intervalo de 1-5, e n é um número inteiro no intervalo de 1-5; ou um sal, amida, ou éster deste farmaceuticamente aceitável.
Análogos de GLP-1 0 termo "análogo de GLP-1" tal como aqui utilizado refere-se a um péptido, ou um composto, que é uma variante do Péptido Semelhante a Glucagon-1 humano (GLP-1 (7-37)), cuja sequência é incluída na listagem de sequências como SEQ ID NO: 1. 0 péptido possuindo a sequência de SEQ ID NO: 1 pode também ser designado GLP-1 "nativo".
Na listagem de sequências, ao primeiro resíduo de aminoácido de SEQ ID NO: 1 (histidina) é atribuído o no. 1. No entanto, no que se segue - de acordo com a prática estabelecida na técnica - este resíduo de histidina é referido como no. 7, e os resíduos de aminoácidos subsequentes são numerados em conformidade, terminando com glicina no. 37. Portanto, em geral, qualquer referência aqui a um número de resíduo de aminoácido ou um número de posição da sequência de GLP-1 (7-37) é à sequência que começa com His na posição 7 e termina com Gly na posição 37 .
Os análogos de GLP-1 dos derivados da invenção podem ser descritos em referência a i) o número do resíduo de aminoácido no GLP-1 (7-37) nativo que corresponde ao resíduo de aminoácido que é alterado (i.e., uma posição correspondente no GLP-1 nativo), e à ii) alteração real. 0 seguinte são exemplos não limitativos de nomenclatura adequada dos análogos.
Um exemplo não limitativo de um análogo de GLP-1 do derivado da invenção é um análogo que é mudado de modo a compreender um primeiro resíduo de lisina numa posição correspondente à posição 27 de GLP-1 (7-37), e um segundo resíduo de lisina na posição 12. A sequência de aminoácidos deste análogo é de outro modo idêntica à do GLP-1 nativo, e este análogo pode ser designado K12, K27-GLP-1 (7-37) . Esta designação representa a sequência de aminoácidos de GLP-1 nativo onde a fenilalanina na posição 12 foi substituída com lisina, e o ácido glutâmico na posição 27 foi substituído com lisina. 0 análogo de GLP-1 fazendo parte do derivado da invenção compreende um máximo de dez mudanças de aminoácidos em comparação com GLP-1 (7-37) nativo (SEQ ID NO: 1) . Por outras palavras, é um péptido GLP-1 (7-37) no qual os vários resíduos de aminoácidos foram mudados em comparação com GLP-1 (7-37) nativo (SEQ ID NO: 1) . Estas mudanças podem representar, independentemente, uma ou mais substituições, adições, e/ou deleções de aminoácidos. 0 seguinte são exemplos não limitativos de nomenclatura apropriada de análogos.
Por exemplo, o análogo [Aib8,Lys22,Val2 5,Arg2 6,Lys27,His31,Arg34]-GLP-1-(7-37) designa um péptido GLP-1 (7-37) que, quando comparado com GLP-1 nativo, tem as seguintes substituições: Substituição de alanina na posição 8 com Aib (ácido α-aminoisobutírico), de glicina na posição 22 com lisina, de alanina na posição 25 com valina, de lisina na posição 26 com arginina, de ácido glutâmico na posição 27 com lisina, de triptofano na posição 31 com histidina, e de lisina na posição 34 com arginina. Este análogo pode também ser resumidamente designado (8Aib, 22K, 25V, 26R, 27K, 31 H, 34R).
Como outro exemplo, o análogo [Aib8,Lys20,Glu22,Arg26,Lys27,Glu30,Gly34]-GLP-1-(7-34) designa um péptido GLP-1 (7-37), que, quando comparado com GLP-1 nativo, é alterado pela substituição de alanina na posição 8 com Aib, substituição de leucina na posição 20 com lisina, substituição de glicina na posição 22 com ácido glutâmico, substituição de lisina na posição 26 com arginina, substituição de ácido glutâmico na posição 27 com lisina, substituição de alanina na posição 30 com ácido glutâmico, substituição de lisina na posição 34 com glicina, e através de deleção do terminal C de glicina-arginina-glicina na posição 35-36-37. Este análogo pode também ser resumidamente designado (8Aib, 20K, 22E, 26R, 27K, 30E, 34G, des35-37), onde está implícita a referência a GLP-1 (7-37), e "des" representa uma deleção.
Ainda como outro exemplo, um análogo compreendendo Glu38 e Gly39 refere-se a um péptido GLP-1(7-37), que, quando comparado com GLP-1 nativo, compreende uma adição do dipéptido de (ácido glutâmico-glicina) ao terminal C de GLP-1 (7-37). Este análogo pode também, resumidamente, ser referido como compreendendo (38E, 39G), onde está implícita a referência a GLP-1 (7-37) .
Análogos "compreendendo" certas mudanças especificadas podem compreender outras mudanças, quando comparados com SEQ ID NO: 1. Um exemplo, não limitativo, de um análogo compreendendo (38E, 39G) é a parte peptídica de Quím. 51.
Tal como é aparente a partir dos exemplos acima, os resíduos de aminoácidos podem ser identificados pelo seu nome completo, o seu código de uma letra, e/ou o seu código de três letras. Estes três modos são completamente equivalentes.
As expressões "uma posição equivalente a" ou "posição correspondente" podem ser utilizadas para caracterizar o local da alteração numa sequência de GLP-1 (7-37) variante por referência a GLP-1 (7-37) nativo (SEQ ID NO: 1) . Posições equivalentes ou correspondentes, bem como o número de mudanças, são facilmente deduzidas, p. ex. através de simples caligrafia e observação atenta; e/ou pode ser utilizado um programa de alinhamento de proteínas ou péptidos padrão, tal como "align" que é um alinhamento de Needleman-Wunsch. 0 algoritmo é descrito em Needleman, S.B. e Wunsch, C.D., (1970), Journal of Molecular Biology, 48: 443-453, e o programa align por Myers e W. Miller em "Optimal Alignments in Linear Space" CABIOS (computer applications in the biosciences) (1988) 4:11-17. Para o alinhamento, pode ser utilizada a matriz de pontuação por defeito BLOSUM50 e a matriz de identidade por defeito, e a penalidade para o primeiro resíduo numa lacuna pode ser definida a -12, ou de preferência a -10, e as penalidades para resíduos adicionais numa lacuna a -2, ou de preferência a -0,5.
Um exemplo de tal alinhamento é aqui inserido abaixo, em que sequência no. 1 (SEQ_ID_NO_l) é SEQ ID NO: 1, e sequência no. 2 (ANALOGUE) é o análogo (22K, 26R, 27K, 30E, 34G, des35-37) deste: # Sequências_alinhadas: 2 # 1: SEQ_ID_NO_l
# 2: ANÁLOGO # Matriz: EBLOSUM62 # Penalidadelacuna: 0,5 # Penalidadeprolongamento: 0,5 # # Comprimento: 31 # Identidade: 23/31 (80,6%) # Lacunas: 3/31 (9,7%) # Pontuação: 117,0 # SEQ ID NO I 1 HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGRG 31
! i Μ I I I I Μ Μ I M Μ I :: M I M ANALOGUE 1 HAS GT FT S DVS SYLE KQAARKFIEWLVG--- 28
No caso de aminoácidos não naturais tais como Aib serem incluídos na sequência, estes podem, para fins de alinhamento, ser substituídos com X. Se desejado, X pode depois ser manualmente corrigido. 0 termo "péptido", tal como p. ex. utilizado no contexto dos análogos de GLP-1 dos derivados da invenção, refere-se a um composto que compreende uma série de aminoácidos interligados por ligações amida (ou peptídicas).
Os péptidos da invenção compreendem pelo menos cinco aminoácidos constituintes ligados por ligações peptídicas. Em formas de realização particulares, o péptido compreende pelo menos 10, de preferência pelo menos 15, de preferência pelo menos 20, de preferência ainda pelo menos 25, ou de preferência pelo menos 28 aminoácidos.
Em formas de realização particulares, o péptido é constituído por pelo menos cinco aminoácidos constituintes, de preferência constituído por pelo menos 10, pelo menos 15, pelo menos 20, pelo menos 25, ou de preferência constituído por pelo menos 28 aminoácidos.
Em formas de realização particulares adicionais, o péptido é a) constituído por, ou b) consistem em, i) 28, ii) 29, iii) 30, iv) 31, v) 32, ou vi) 33 aminoácidos.
Ainda noutra forma de realização particular, o péptido consiste em aminoácidos interligados através de ligações peptídicas.
Os aminoácidos são moléculas contendo um grupo amina e um grupo ácido carboxílico, e, opcionalmente, um ou mais grupos adicionais, frequentemente referidos como uma cadeia lateral. 0 termo "aminoácido" inclui aminoácidos proteogénicos (codificados pelo código genético, incluindo aminoácidos naturais e aminoácidos padrão), bem como não proteogénicos (não verificados em proteínas, e/ou não codificados no código genético padrão), e aminoácidos sintéticos. Assim, os aminoácidos podem ser selecionados a partir do grupo de aminoácidos proteinogénicos, aminoácidos não proteinogénicos, e/ou aminoácidos sintéticos.
Exemplos não limitativos de aminoácidos que não são codificados pelo código genético são gama-carboxiglutamato, ornitina, e fosfosserina. Exemplos não limitativos de aminoácidos sintéticos são os D-isómeros dos aminoácidos tais como D-alanina e D-leucina, Aib (ácido a-aminoisobutírico), β-alanina, e des-amino-histidina (desH, nome alternativo ácido imidazopropiónico, abreviado Imp).
No que se segue, todos os aminoácidos para os quais o isómero ótico não é referido devem ser entendidos como significando o L-isómero (a menos que especificado em contrário) .
Os derivados e análogos de GLP-1 da invenção têm atividade de GLP-1. Este termo refere-se à capacidade para se ligarem ao recetor de GLP-1 e iniciar uma via de transdução de sinal resultando em ação insulinotrópica ou outros efeitos fisiológicos tal como é conhecido na técnica. Por exemplo, os análogos e derivados da invenção podem ser testados quanto à atividade de GLP-1 utilizando o ensaio descrito no Exemplo 33 aqui. 0 ensaio de ligação ao recetor de GLP-1 aqui descrito no Exemplo 34 também pode ser usado para determinação da atividade de GLP-1 (experiência de baixo HSA) .
Derivados de GLP-1 0 termo "derivado" tal como aqui utilizado no contexto de um péptido GLP-1 ou análogo significa um péptido ou análogo de GLP-1 quimicamente modificado, em que um ou mais substituintes foram ligados covalentemente ao péptido. 0 substituinte também pode ser referido como uma cadeia lateral.
Numa forma de realização particular, a cadeia lateral é capaz de formar agregados não covalentes com albumina, promovendo deste modo a circulação do derivado com a corrente sanguínea, e possuindo também o efeito de prolongar o tempo de ação do derivado, devido ao facto de o agregado do derivado de GLP-1 e albumina ser apenas lentamente desintegrado para libertar o ingrediente farmaceuticamente ativo. Assim, o substituinte, ou cadeia lateral, como um todo é de preferência referido como uma porção de ligação à albumina.
Noutra forma de realização particular, a porção de ligação à albumina compreende uma porção que é particularmente relevante para a ligação à albumina e deste modo o prolongamento, porção que pode ser referida como uma porção de prolongamento. A porção de prolongamento pode estar na, ou próximo da, extremidade oposta da porção de ligação à albumina, relativamente ao seu ponto de união ao péptido.
Ainda noutra forma de realização particular, a porção de ligação à albumina compreende uma porção entre a porção de prolongamento e o ponto de ligação ao péptido, porção essa que pode ser referida como um ligador, porção ligadora, espaçador, ou semelhante. 0 ligador pode ser opcional, e assim nesse caso, a porção de ligação à albumina pode ser idêntica à porção de prolongamento.
Em formas de realização particulares, a porção de ligação à albumina e/ou a porção de prolongamento é lipófila, e/ou tem carga negativa a pH fisiológico (7,4). A porção de ligação à albumina, a porção de prolongamento, ou o ligador pode ser covalentemente ligado a um resíduo de lisina do péptido GLP-1 através de acilação.
Numa forma de realização preferida, um éster ativo da porção de ligação à albumina compreendendo de preferência uma porção de prolongamento e um ligador, é ligado covalentemente a um grupo amino de um resíduo de lisina, de preferência ao grupo épsilon-amino deste, sob formação de uma ligação amida (sendo este processo referido como acilação).
Salvo indicação em contrário, quando se faz referência a uma acilação de um resíduo de lisina, entenda-se que é o grupo épsilon-amino desta.
Um derivado compreendendo duas porções de prolongamento ligadas a um primeiro e um segundo resíduo K (p. ex., a K27 e KT) através de um ligador pode ser referido como um derivado que foi acilado duas vezes, duplamente acilado, ou com dupla acilação nos grupos épsilon-amino do primeiro e segundo resíduos de lisina, p. ex. na posição 27 e T, respetivamente, do péptido GLP-1.
Para os presentes fins, os termos "porção de ligação à albumina", "porção de prolongamento", e "ligador" podem incluir as formas destas moléculas que não reagiram bem como as que reagiram. Se é ou não entendida uma ou outra forma, é claro a partir do contexto em que o termo é utilizado.
Num aspeto, cada porção de prolongamento compreende, ou consiste em, uma porção de prolongamento selecionada independentemente a partir de Quím. 1 e Quim. 2:
Quim. 1: HOOC- (CH2) X-C0-*
Quim. 2: H00C-C6H4-0- (CH2) y-C0-* em que x é um número inteiro no intervalo de 6-16, e y é um número inteiro no intervalo de 3-17.
Numa forma de realização, *-(CH2)x-* refere-se a um alquileno linear ou ramificado, de preferência linear, em que x é um número inteiro no intervalo de 6-16.
Noutra forma de realização, *-(CH2)y-* refere-se a um alquileno linear ou ramificado, de preferência linear, em que y é um número inteiro no intervalo de 3-17. 0 termo "ácido gordo" refere-se a ácidos monocarboxílicos alifáticos possuindo de 4 a 28 átomos de carbono, de preferência não ramificados, e/ou com numeração par, e podem ser saturados ou insaturados. 0 termo "diácido gordo" refere-se a ácidos gordos tal como definidos acima mas com um grupo ácido carboxilico adicional na posição ómega. Assim, diácidos gordos são ácidos dicarboxílicos. A nomenclatura é tal como habitual na técnica, por exemplo nas fórmulas acima *-COOH bem como HOOC-* referem-se a carboxilo; *-C6H4-* a fenileno; *-C0-*, bem como *-0C-*, a carbonilo (0=C<**); C6H5-O-* a fenoxilo. Em formas de realização particulares, os compostos aromáticos, tais como fenoxilo, e os radicais fenileno, podem ser, independentemente, orto, meta, ou para.
Tal como explicado acima, os derivados de GLP-1 da presente invenção são duplamente acilados, i.e. duas porções de ligação a albumina são ligadas covalentemente ao péptido GLP-1.
Numa forma de realização particular, as duas porções de ligação à albumina (i.e. as cadeias laterais inteiras) são semelhantes, de preferência substancialmente idênticas, ou, de maior preferência, idênticos.
Noutra forma de realização particular, as duas porções de prolongamento são semelhantes, de preferência substancialmente idênticas, ou, de maior preferência, idênticos.
Ainda noutra forma de realização particular, os dois ligadores são semelhantes, de preferência substancialmente idênticos, ou, de maior preferência idênticos. 0 termo "substancialmente idêntico" inclui diferenças de identidade que sejam devidas à formação de um ou mais sais, ésteres, e/ou amidas; de preferência à formação de um ou mais sais, ésteres metálicos, e amidas simples; de maior preferência à formação de não mais de dois sais, ésteres metálicos, e/ou amidas simples; ainda de preferência à formação de não mais de um sal, éster metálico, e/ou amida simples; ou ainda de maior preferência à formação de não mais de um sal.
No contexto de compostos químicos tais como porções de ligação à albumina, porções de prolongamento, e ligadores, a semelhança e/ou identidade podem ser determinadas utilizando qualquer programa de computador adequado e/ou algoritmo conhecido na técnica.
Por exemplo, a semelhança de duas porções de prolongamento, dois ligadores, e/ou duas cadeias laterais inteiras pode ser determinada de forma adequada utilizando impressões digitais moleculares. As impressões digitais são um método matemático de representação de uma estrutura química (ver p. ex. "Chemoinformatics: A textbook", Johann Gasteiger and Thomas Engel (Eds), Wiley-VCH Verlag, 2003).
Exemplos de impressões digitais adequadas incluem, sem limitação, impressões digitais UNITY, impressões digitais MDL, e/ou impressões digitais ECFP, tais como impressões digitais ECFP_6 (ECFP significa impressões digitais de conectividade prolongada).
Em formas de realização particulares, as duas porções de prolongamento, os dois ligadores, e/ou as duas cadeias laterais inteiras são representados como a) impressões digitais ECFP_6; b) impressões digitais UNITY; e/ou c) impressões digitais MDL.
Para o cálculo da semelhança das duas impressões digitais é usado, de preferência, o coeficiente de Tanimoto, quer sejam utilizadas a), b), ou c).
Em formas de realização particulares, quer sejam usadas a), b) , ou c), as duas porções de prolongamento, os dois ligadores, e/ou as duas cadeias laterais inteiras, respetivamente, têm uma semelhança de pelo menos 0,5 (50%); de preferência pelo menos 0,6 (60%); de maior preferência pelo menos 0,7 (70%), ou pelo menos 0,8 (80%); ainda de preferência pelo menos 0,9 (90%); ou ainda de maior preferência pelo menos 0,99 (99%), tal como uma semelhança de 1,0 (100%) .
As impressões digitais UNITY podem ser calculadas utilizando o programa SYBYL (disponível em Tripos, 1699 South Hanley Road, St. Louis, MO 63144-2319, EUA). As impressões digitais ECFP_6 e MDL podem ser calculadas utilizando o programa Pipeline Pilot (disponível em
Accelrys Inc., 10188 Telesis Court, Suite 100, San Diego, CA 92121, EUA).
Para mais detalhes, ver por exemplo J. Chem. Inf. Model. 2008, 48, 542-549; J. Chem. Inf. Comput. Sei. 2004, 44, 170-178; J. Med. Chem. 2004, 47, 2743-2749; J. Chem. Inf. Model. 2010, 50, 742-754; bem como "SciTegic Pipeline Pilot Chemistry Collection: Basic Chemistry User Guide", março de 2008, "SciTegic Pipeline Pilot Data Modeling Collection", 2008 - ambos de Accelrys Software Inc., San Diego, EUA, e os guias http://www.tripos . com/tripos_resources/fileroot/pdfs/Unity 111408.pdf, e http://www. tripos . com/data/SYBYL/SYBYL_072505.pdf .
Um exemplo de um cálculo de semelhança é aqui inserido a seguir, em que a cadeia lateral inteira de Quim. 66 foi comparada com um éster metilico deste, viz. o éster mono-metílico da porção ligadora glutamina (Quim 66a):
Quim. 66a:
Utilizando a) impressões digitais ECFP_6, a semelhança é de 0,798; utilizando b) impressões digitais UNITY, a semelhança é de 0,957; e utilizando impressões digitais MDL a semelhança é de 0,905.
No caso de duas cadeias laterais idênticas (porções de ligação a albumina) o derivado pode ser designado simétrico.
Em formas de realização particulares, o coeficiente de semelhança é de pelo menos 0,80, de preferência pelo menos 0,85, de maior preferência pelo menos 0,90, ainda de preferência pelo menos 0,95, ou ainda de maior preferência pelo menos 0,99.
Cada um dos dois ligadores do derivado da invenção pode compreender o seguinte primeiro elemento ligador:
Chem. 5:
em que k é um número inteiro no intervalo de 1-5, e n é um número inteiro no intervalo de 1-5.
Numa forma de realização particular, quando k=l e n=l, este elemento ligador pode ser designado OEG, ou um di-radical de ácido 8-amino-3,6-dioxaoctânico, e/ou pode ser representado pela seguinte fórmula:
Quim. 5a: *-NH- (CH2) 2-0- (CH2) 2-0-CH2-CO-* .
Noutra forma de realização particular, cada ligador do derivado da invenção pode compreender, independentemente, um segundo elemento ligador, de preferência um Di-radical Glu, tal como Quim. 6 e/ou Quim. 7:
Quim. 6:
Quim. 7:
em que o Di-radical Glu pode ser incluído p vezes, onde p é um número inteiro no intervalo de 1-2.
Quím. 6 pode também ser referido como gama-Glu, ou resumidamente gGlu, devido ao facto de ser o grupo gama-carboxilo do aminoácido ácido glutâmico que pode aqui ser usado para ligação a outro elemento ligador, ou ao grupo épsilon-amino da lisina. Tal como explicado acima, o outro elemento ligador pode, por exemplo, ser outro resíduo de Glu, ou uma molécula de OEG. 0 grupo amino de Glu pode por sua vez formar uma ligação amida com o grupo carboxilo da porção de prolongamento, ou com o grupo carboxilo, p. ex., de uma molécula de OEG, se presente, ou com o grupo gama-carboxilo, p. ex., de outro Glu, se presente.
Quím. 7 pode também ser referido como alfa-Glu, ou resumidamente aGlu, ou simplesmente Glu, devido ao facto de ser o grupo alfa-carboxilo do aminoácido ácido glutâmico que pode aqui ser utilizado para ligação a outro elemento ligador, ou ao grupo épsilon-amino de lisina.
As estruturas acima de Quím. 6 e Quím. 7 cobrem a forma L, bem como a forma D de Glu.
Os derivados da invenção podem existir em diferentes formas estereoisoméricas possuindo a mesma fórmula molecular e sequência de átomos ligados, mas diferindo apenas na orientação tridimensional dos seus átomos no espaço. 0 estereoisomerismo dos derivados exemplificados da invenção é indicado na seção experimental, nos nomes bem como nas estruturas, utilizando nomenclatura padrão. Salvo indicação em contrário, a invenção refere-se a todas as formas estereoisoméricas do derivado reivindicado. A concentração no plasma dos derivados de GLP-1 da invenção pode ser determinada utilizando qualquer método adequado. Por exemplo, pode utilizar-se LC-MS (Espectroscopia de Massa de Cromatografia Liquida), ou imunoensaios tais como RIA (RadiolmunoEnsaio) , ELISA (Ensaio Imunossorvente Ligado a Enzima) e LOCI (Imunoensaio de Canais de Luminescência de Oxigénio). Protocolos gerais para ensaios RIA e ELISA adequados encontram-se, p. ex., em WO 09/030738 na pág. 116-118. Um ensaio preferido é o ensaio LOCI aqui descrito no Exemplo 35, 39, e 40.
Sal, amida, ou éster farmaceuticamente aceitável
Os derivados e análogos da invenção podem estar na forma de um sal, amida, ou éster farmaceuticamente aceitável.
Os sais são formados, p. ex., através de uma reação química entre uma base e um ácido, p. ex.: 2 NH3 + H2S04 -> (NH4)2S04 O sal pode ser um sal básico, um sal ácido, ou pode não ser nem um nem outro (ou seja, um sal neutro). Os sais básicos produzem iões de hidróxido e os sais ácidos iões hidrónio em água.
Os sais dos derivados da invenção podem ser formados com catiões ou aniões adicionados que reagem com grupos aniónicos ou catiónicos, respetivamente. Estes grupos podem estar situados na porção peptídica e/ou na cadeia lateral dos derivados da invenção.
Exemplos não limitativos de grupos aniónicos dos derivados da invenção incluem grupos carboxilicos livres na cadeia lateral, se houver, bem como na porção peptídica. A porção peptídica inclui frequentemente um grupo ácido carboxílico livre no terminal C, e pode também incluir grupos carboxilicos livres em resíduos de aminoácidos ácidos internos tais como Asp e Glu.
Exemplos não limitativos de grupos catiónicos na porção peptídica incluem o grupo amino livre no terminal N, se presente, assim como qualquer grupo amino livre de resíduos de aminoácidos básicos internos tais como His, Arg e Lys. 0 éster dos derivados da invenção pode, p. ex., ser formado através da reação de um grupo ácido carboxílico livre com um álcool ou um fenol, o que leva à substituição de pelo menos um grupo hidroxilo por um grupo alcoxilo ou ariloxilo. A formação do éster pode envolver o grupo carboxílico livre no terminal C do péptido, e/ou qualquer grupo carboxílico livre na cadeia lateral. A amida dos derivados da invenção pode, p. ex., ser formada através da reação de um grupo ácido carboxílico livre com uma amina ou uma amina substituída, ou através de reação de um grupo amino livre ou substituído com um ácido carboxílico. A formação de amida pode envolver o grupo carboxílico livre no terminal C do péptido, qualquer grupo carboxílico livre na cadeia lateral, o grupo amino livre no terminal N do péptido e/ou qualquer grupo amino livre ou substituído do péptido no péptido e/ou na cadeia lateral.
Numa forma de realização particular, o péptido ou derivado está na forma de um sal farmaceuticamente aceitável. Noutra forma de realização particular, o derivado está na forma de uma amida farmaceuticamente aceitável, de preferência com um grupo amida no terminal C do péptido. Ainda noutra forma de realização particular, o péptido ou derivado está na forma um éster farmaceuticamente aceitável.
Produtos intermediários
Num segundo aspeto, a invenção divulga produtos intermediários.
Um tipo de produto intermediário toma a forma de um análogo de GLP-1 que compreende as seguintes alterações em comparação com GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 1): (i) 38Q; e/ou (ii) 39G; ou um sal, amida, ou éster deste farmaceuticamente aceitável.
Outro produto intermediário na forma de um análogo de GLP-1 é um análogo compreendendo, de preferência, as seguintes alterações de aminoácidos, em comparação com GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 1): (i) 22E, 26R, 27K, 34R, 37K; (ii) 22E, 26R, 27K, 30E, 34R, 36K, 38E, 39G; (iii) 22E, 26R, 27K, 34R, 36K, de s 3 7; (iv) 22E, 25V, 26R, 27K, 34R, 37K; (v) 8Aib, 20K, 22E, 26R, 27K, 30E, 34G, des35-37; (vi) 26R, 27K, 30E, 34R, 36K, 38E; (vii) 8Aib, 22K, 25V, 26R, 27K, 31 H, 34R; (iix) 8Aib, 22K, 25V, 26R, 27K, 34R, des35-37; (ix) 8Aib, 22K, 25V, 26R, 27K, 34R, des36-37; (x) 26H, 27K, 30E, 34R, 36K, 38E; (xi) 22K, 25V, 26R, 27K, 30E, 34Q; (xii) 25V, 26R, 27K, 30E, 34R, 36K, 38Q; (xiii) 25V, 26R, 27K, 30E, 34Q, 36K, 38E; (xiv) 22K, 26R, 27K, 31 H, 34G, des35-37; (xv) 8Aib, 25V, 26R, 27K, 31 H, 34Q, 37K; (xvi) 25V, 26R, 27K, 31 H, 34Q, 37K; (xvii) 22E, 23E, 25V, 26R, 27K, 31 H, 34Q, 37K; (iixx) 8Aib, 12K, 22E, 26R, 27K, 31 H, 34Q; (ixx) 8Aib, 22K, 26R, 27K, 31 H, 34G, des35-37; (xx) 22E, 26H, 27K, 30E, 34R, 36K, 38E; (xxi) 22E, 24K, 26R, 27K, 31 H, 34G, de s 3 5-3 7; (xxii) 25V, 26R, 27K, 34Q, 36K; (xxiii) 22E, 24K, 25V, 26R, 27K, 31 H, 34R; (xxiv) 22E, 24K, 25V, 26R, 27K, 34G, des35-37; (xxv) 22E, 24K, 25V, 26R, 27K, 34R; (xxvi) 8Aib, 22E, 24K, 25V, 26R, 27K, 31 H, 34Q; ou (xxvii) 8Aib, 22E, 26R, 27K, 30E, 34R, 36K, 38E, 39G; ou um sal, amida, ou éster deste farmaceuticamente aceitável.
Propriedades funcionais
Num primeiro aspeto funcional, os derivados da invenção têm uma boa potência. Além disso, ou alternativamente, num segundo aspeto funcional, têm um perfil farmacocinético prolongado. Para além disso, ou alternativamente, num terceiro aspeto funcional, têm uma biodisponibilidade oral elevada. Adicionalmente, ou alternativamente, num quarto aspeto funcional, as suas propriedades biofísicas são melhoradas.
Atividade biológica (potência)
De acordo com o primeiro aspeto funcional, os derivados da invenção, assim como os péptidos GLP-1 constituintes como tais, são biologicamente ativos ou potentes.
Numa forma de realização particular, a potência e/ou atividade refere-se à potência in vitro, i.e. ao desempenho num ensaio de recetor de GLP-1 funcional, mais em particular à capacidade de estimular a formação de AMPc numa linha celular que expresse o recetor de GLP-1 humano clonado. A estimulação da formação de AMPc num meio contendo o recetor de GLP-1 humano pode ser de preferência determinada utilizando uma linha celular transfetada estável tal como BHK467-12A (tk-tsl3), e/ou utilizando para a determinação de AMPc um ensaio de recetor funcional, p. ex. com base na competição entre AMPc formado endogenamente e AMPc marcado com biotina adicionado exogenamente, em que o AMPc do ensaio é de preferência capturado utilizando um anticorpo específico, e/ou em que um ensaio ainda mais preferido é o Ensaio de AMPc AlphaScreen, ainda de preferência o descrito no Exemplo 33. 0 termo concentração eficaz semi-máxima (EC50) refere-se geralmente à concentração que induz uma resposta a meio caminho entre o limiar e o máximo, por referência à curva de resposta à dose. A EC50 é usada como medida da potência de um composto e representa a concentração onde são observados 50% do seu efeito máximo. A potência in vitro dos derivados da invenção pode ser determinada tal como descrito acima e a EC50 do derivado em questão determinada. Quanto mais baixa for a EC50, melhor será a potência.
Um meio adequado tem a seguinte composição (concentrações finais no ensaio): TRIS-HC1 50 mM; HEPES 5 mM; MgCl2 10 mM, 6H20; NaCl 150 mM; Tween a 0,01%; BSA a 0,1%; IBMX 0,5 mM; ATP 1 mM; GTP 1 uM; pH 7,4. A EC50 dos derivados da invenção está a ou abaixo de 3500 pM, de preferência a ou abaixo de 3200. A EC50 pode mesmo estar abaixo de 1200 pM, de preferência abaixo de 1000 pM, de maior preferência abaixo 500 pM, ou ainda de preferência abaixo de 200 pM.
Noutra forma de realização particular do primeiro aspeto funcional, a potência e/ou atividade refere-se à capacidade de ligação ao recetor de GLP-1 a uma baixa concentração de albumina. A ligação ao recetor de GLP-1 a baixa concentração de albumina deve ser tão boa quanto possível, correspondendo a um baixo valor de IC50. Isto pode ser determinado tal como descrito no Exemplo 35. A IC5o (albumina baixa) dos derivados da invenção está a ou abaixo de 500 nM, muitos estão abaixo de 100 nM, ou mesmo abaixo de 10 nM.
Noutra forma de realização particular, os derivados da invenção são potentes in vivo, o que pode ser determinado tal como é conhecido na técnica em qualquer modelo animal adequado, bem como em ensaios clínicos. O ratinho db/db diabético é um exemplo de um modelo animal adequado, e o efeito de redução de glicose no sangue pode ser determinado em tais ratinhos in vivo, p. ex. tal como descrito no Exemplo 36, ou como descrito no Exemplo 43 de W009/030738.
Além disso, ou alternativamente, o efeito na ingestão de alimentos in vivo pode ser determinado em estudos farmacodinâmicos em porcos, p. ex. tal como descrito no Exemplo 38.
Prolongamento - ligação ao recetor/albumina baixa e elevada
De acordo com o segundo aspeto funcional, os derivados da invenção são prolongados.
Ligação ao recetor de GLP-1
Numa forma de realização particular, o prolongamento refere-se à capacidade dos derivados da invenção para se ligarem ao recetor de GLP-1 na presença de uma concentração baixa e elevada de albumina, respetivamente, que pode ser determinada tal como descrito no Exemplo 34.
Em geral, a ligação ao recetor de GLP-1 a baixa concentração de albumina deve ser tão boa quanto possível, correspondendo a um baixo valor de IC5o· Numa forma de realização, albumina baixa refere-se a 0,005% de HSA. Noutra forma de realização, albumina baixa refere-se a 0,001% de HSA. O valor de IC50 a elevada concentração de albumina é uma medida da influência da albumina na ligação do derivado ao recetor de GLP-1. Como é sabido, os derivados de GLP-1 também se ligam a albumina. Este é um efeito geralmente desejável, que prolonga a sua vida útil no plasma. Deste modo, o valor de IC5o a albumina elevada será, em geral, mais elevado que o valor de IC50 a albumina baixa, correspondendo a uma ligação reduzida ao recetor de GLP-1, causada pela ligação da albumina competindo com a ligação ao recetor de GLP-1.
Uma razão elevada (valor de IC50 (albumina elevada)/valor de IC50 (albumina baixa)) pode portanto ser tomada como uma indicação de que o derivado em questão se liga bem à albumina (pode ter uma semivida longa), e também se liga bem per se ao recetor de GLP-1 (o valor de IC50 (albumina elevada) é elevado, e o valor de IC5o (albumina baixa) é baixo) . Por outro lado, a ligação a albumina pode nem sempre ser desejável, ou a ligação à albumina pode tornar-se demasiado forte. Portanto, os intervalos desejáveis para IC50 (albumina baixa) , IC5o (albumina elevada) , e a razão elevada/baixa podem variar de composto para composto, dependendo da utilização pretendida e das circunstâncias em torno de tal utilização, e noutras propriedades do composto de potencial interesse.
Um ensaio adequado para a determinação da ligação ao recetor a elevada e baixa concentração de albumina é aqui divulgado no Exemplo 34. Os compostos da invenção têm uma afinidade muito boa de ligação ao recetor (IC50) na presença de albumina baixa. Em média a IC50 (albumina baixa) dos compostos testados no Exemplo 34 é de 14 nM.
Prolongamento - semivida in vivo em ratos
De acordo com o segundo aspeto funcional, os derivados da invenção são prolongados. Numa forma de realização particular, o prolongamento pode ser determinado de forma adequada como a semivida (1¾) in vivo em ratos após administração i.v.. A semivida no rato é de pelo menos 4 horas, e pode ser tão elevada como de 10 horas ou mais.
Um ensaio adequado para determinação da semivida in vivo em ratos após administração i.v. é aqui divulgado no Exemplo 39.
Prolongamento - semivida in vivo em miniporcos
De acordo com o segundo aspeto funcional, os derivados da invenção são prolongados. Numa forma de realização particular, o prolongamento pode, também ou alternativamente, ser determinado como semivida (1½) in vivo em miniporcos após administração i.v. A semivida é de pelo menos 12 horas, pode ser de pelo menos 24 horas, pelo menos 36 horas, pelo menos 48 horas, ou pelo menos 60 horas, ou mesmo mais elevada.
Um ensaio adequado para determinação da semivida in vivo em miniporcos após administração i.v. é aqui divulgado no Exemplo 37.
Biodisponibilidade oral
De acordo com o terceiro aspeto funcional, os derivados da invenção têm uma elevada biodisponibilidade oral. A biodisponibilidade oral de derivados de GLP-1 comerciais é muito baixa. A biodisponibilidade oral de derivados de GLP-1 em desenvolvimento para administração i.v. ou s.c. é também baixa.
Consequentemente, existe a necessidade na técnica de derivados de GLP-1 com melhor biodisponibilidade oral. Tais derivados podem ser candidatos adequados para administração oral, desde que a sua potência seja em qeral satisfatória, e/ou desde que a sua semivida seja também geralmente satisfatória.
Os presentes inventores identificaram uma nova classe de derivados de GLP-1, os quais têm uma biodisponibilidade oral surpreendentemente elevada e, ao mesmo tempo, uma potência e/ou semivida satisfatórias.
Também, ou alternativamente, estes derivados têm uma biodisponibilidade oral surpreendentemente melhorada, e, ao mesmo tempo, uma elevada afinidade de ligação (isto é, um valor de IC5o baixo) ao recetor de GLP-1 a uma baixa concentração de albumina.
Estas características são importantes com vista a obter uma dose oral diária baixa do ingrediente farmacêutico ativo, o que é desejável por várias razões, incluindo, p. ex., economia de produção, probabilidade de potenciais problemas de segurança, bem como questões de conforto de administração e preocupações ambientais.
Geralmente, o termo biodisponibilidade refere-se à fração de uma dose administrada do ingrediente farmacêutico ativo (IFA) , tal como um derivado da invenção que atinge a circulação sistémica inalterado. Por definição, quando um IFA é administrado por via intravenosa, a sua biodisponibilidade é de 100%. No entanto, quando é administrado por outras vias (tal como por via oral) , a sua biodisponibilidade diminui (devido a degradação e/ou absorção incompleta e metabolismo de primeira passagem). 0 conhecimento sobre a biodisponibilidade é essencial quando se calculam dosagens para vias de administração não intravenosas. A biodisponibilidade oral absoluta compara a biodisponibilidade (estimada como a área sob a curva, ou AUC) do IFA em circulação sistémica após administração oral, com a biodisponibilidade do mesmo IFA após administração intravenosa. É a fração do IFA absorvida através de administração não intravenosa em comparação com a administração intravenosa correspondente do mesmo IFA. A comparação deve ser normalizada para a dose se forem utilizadas doses diferentes; consequentemente, cada AUC é corrigida pela divisão da correspondente dose administrada. É feito um gráfico de concentração plasmática do IFA vs tempo após administração oral e intravenosa. A biodisponibilidade absoluta (F) é a AUC-oral corrigida para a dose dividida pela AUC-intravenosa.
Os derivados da invenção têm uma biodisponibilidade oral absoluta que é superior à de a) liraglutido, e/ou b) semaglutido; de preferência pelo menos 10% mais elevada, de maior preferência pelo menos 20% mais elevada, ainda de preferência pelo menos 30% mais elevada, ou ainda de maior preferência pelo menos 40% mais elevada. Antes de testar a biodisponibilidade oral, os derivados da invenção podem ser adequadamente formulados tal como é conhecido na técnica de formulações orais de compostos insulinotrópicos, p. ex. utilizando qualquer uma ou mais das formulações descritas em WO 2008/145728.
Testes preditivos da biodisponibilidade oral adequados são descritos nos Exemplos 35 e 40. De acordo com estes testes, após injeção direta do derivado de GLP-1 no lúmen intestinal de ratos e/ou após gavagem oral de ratos, é determinada a concentração (exposição) deste no plasma, e é medida a subsequente exposição no plasma do derivado de GLP-1.
Propriedades biofísicas
De acordo com o quarto aspeto funcional, os derivados da invenção têm melhores propriedades biofísicas. Estas propriedades incluem mas não estão limitadas a estabilidade física e solubilidade. Melhores propriedades biofísicas podem ser um resultado de propriedades oligoméricas alteradas. As propriedades biofísicas podem ser medidas utilizando métodos biofísicos padrão de química proteica. As propriedades biofísicas dos derivados da invenção podem ser adequadamente comparadas com as do GLP-1 nativo.
Formas de realização particulares da invenção adicionais são descritas na secção intitulada "formas de realização particulares".
PROCESSOS DE PRODUÇÃO A produção de péptidos semelhantes a GLP-1 (7-37) e análogos de GLP-1 é bem conhecida na técnica. A porção GLP-1 dos derivados da invenção (ou fragmentos destes), tais como K12, K27-GLP-1 (7-37) ou um análogo ou fragmento deste, pode, por exemplo, ser produzida através de síntese peptídica clássica, p. ex., síntese peptídica em fase sólida utilizando química t-Boc ou Fmoc ou outras técnicas bem estabelecidas, ver, p. ex., Greene e Wuts, "Protective Groups in Organic Synthesis", John Wiley &amp; Sons, 1999, Florencio Zaragoza Dõrwald, "Organic Synthesis on solid Phase", Wiley-VCH Verlag GmbH, 2000, e "Fmoc Solid Phase Peptide Synthesis", Editado por W.C. Chan e P.D. White, Oxford University Press, 2000.
Além disso, ou alternativamente, podem ser produzidos através de métodos recombinantes, viz. através de cultura de uma célula hospedeira contendo uma sequência de ADN codificando o análogo e capaz de expressar o péptido num meio nutriente adequado sob condições que permitam a expressão do péptido. Exemplos não limitativos de células hospedeiras adequadas para expressão destes péptidos são: Escherichia coli, Saccharomyces cerevisiae, bem como as linhas celulares BHK ou CHO de mamífero.
Aqueles derivados da invenção que incluem aminoácidos não naturais e/ou um mono ou dipéptido mimético N-terminal ligado covalentemente podem, p. ex., ser produzidos tal como descrito na parte experimental ou, ver, p. ex., Hodgson et al., "The synthesis of peptides and proteins containing non-natural amino acids", Chemical Society Reviews, vol. 33, no. 7 (2004), pág. 422-430; e WO 2009/083549 Al intitulado "Semi-recombinant preparation of GLP-1 analogues".
Exemplos específicos de métodos de preparação de vários derivados da invenção estão incluídos na parte experimental.
COMPOSIÇÕES FARMACÊUTICAS
Composições farmacêuticas compreendendo um derivado da invenção ou um sal, amida, ou éster deste farmaceuticamente aceitável, e um excipiente farmaceuticamente aceitável, podem ser preparadas tal como é conhecido na técnica. 0 termo "excipiente" refere-se amplamente a qualquer componente diferente do ou dos ingredientes terapêuticos ativos. 0 excipiente pode ser uma substância inerte, uma substância inativa e/ou uma substância não medicinalmente ativa. 0 excipiente pode servir para vários fins, p. ex. como transportador, veiculo, diluente, auxiliar de comprimidos e/ou para melhorar a administração e/ou a absorção da substância ativa. A formulação de ingredientes farmaceuticamente ativos com vários excipientes é conhecida na técnica, ver p. ex. "Remington: The Science and Practice of Pharmacy" (p. ex. 19a edição (1995), e qualquer edição posterior).
Exemplos não limitativos de excipientes são: solventes, diluentes, tampões, conservantes, agentes reguladores de tonicidade, agentes quelantes e estabilizantes.
Exemplos de formulações incluem formulações liquidas, i.e. formulações aquosas compreendendo água. Uma formulação liquida pode ser uma solução, ou uma suspensão. Uma formulação aquosa compreende tipicamente pelo menos 50% p/p de água, ou pelo menos 60%, 70%, 80% ou mesmo pelo menos 90% p/p de água.
Alternativamente, uma composição farmacêutica pode ser uma formulação sólida, p. ex. uma composição seca por congelação ou seca por pulverização, a qual pode ser utilizada como tal ou à qual o médico ou o paciente adiciona solventes e/ou diluentes antes da utilização. 0 pH numa formulação aquosa pode ser qualquer um entre pH 3 e pH 10, por exemplo de cerca de 7,0 a cerca de 9,5; ou de cerca de 3,0 a cerca de 7,0.
Uma composição farmacêutica pode compreender um tampão. O tampão pode, p. ex., ser selecionado a partir do grupo consistindo em acetato de sódio, carbonato de sódio, citrato, glicilglicina, histidina, glicina, lisina, arginina, di-hidrogenofosfato de sódio, hidrogenofosfato dissódico, fosfato de sódio e tris(hidroximetil)-aminometano, bicina, tricina, ácido málico, succinato, ácido maleico, ácido fumárico, ácido tartárico, ácido aspártico, e misturas destes.
Uma composição farmacêutica pode compreender um conservante. O conservante pode, p. ex., ser selecionado a partir do grupo consistindo em fenol, o-cresol, m-cresol, p-cresol, p-hidroxibenzoato de metilo, p-hidroxibenzoato de propilo, 2-fenoxietanol, p-hidroxibenzoato de butilo, 2-feniletanol, álcool benzílico, clorobutanol e tiomerosal, bronopol, ácido benzoico, imidureia, cloro-hexidina, desidroacetato de sódio, clorocresol, p-hidroxibenzoato de etilo, cloreto de benzetónio, clorofenesina (3p-clorofenoxipropano-1,2-diol) e misturas destes. O conservante pode estar presente numa concentração de 0,1 mg/mL a 20 mg/mL.
Uma composição farmacêutica pode compreender um agente isotónico. 0 agente isotónico pode, p. ex. ser selecionado a partir do grupo consistindo num sal (p. ex. cloreto de sódio), um açúcar ou álcool de açúcar, um aminoácido (p. ex. glicina, histidina, arginina, lisina, isoleucina, ácido aspártico, triptofano, treonina), um alditol (p. ex. glicerol (glicerina), 1,2-propanodiol (propilenoglicol), 1,3-propanodiol, 1,3-butanodiol) polietilenoglicol (p. ex. PEG400) e misturas destes. Qualquer açúcar tal como mono, di ou polissacáridos ou glucanos solúveis em água, incluindo por exemplo frutose, glicose, manose, sorbose, xilose, maltose, lactose, sacarose, trealose, dextrano, pululano, dextrina, ciclodextrina, alfa e beta-HPCD, amido solúvel, hidroxietil-amido e carboximetilcelulose-Na, pode ser utilizado. 0 álcool de açúcar é definido como um hidrocarboneto C4-C8 possuindo pelo menos um grupo -OH e inclui, por exemplo, manitol, sorbitol, inositol, galactitol, dulcitol, xilitol e arabitol. Numa forma de realização, o aditivo álcool de açúcar é manitol.
Uma composição farmacêutica pode compreender um agente quelante. 0 agente quelante pode, p. ex., ser selecionado a partir de sais do ácido etilenodiaminotetraacético (EDTA), ácido cítrico e ácido aspártico, e misturas destes. Uma composição farmacêutica pode compreender um estabilizante. 0 estabilizante pode, p. ex., ser um ou mais inibidores de oxidação, inibidores de agregação, tensioativos e/ou um ou mais inibidores de proteases. Exemplos não limitativos destes vários tipos de estabilizantes são divulgados a seguir. 0 termo "formação de agregado" refere-se a uma interação física entre as moléculas polipeptídicas resultando na formação de oligómeros, que podem permanecer solúveis ou agregados grandes e visíveis que precipitam a partir da solução. A formação de agregados através de um polipéptido durante o armazenamento de uma composição farmacêutica líquida pode afetar adversamente a atividade biológica desse polipéptido, resultando em perda da eficácia terapêutica da composição farmacêutica. Além disso, a formação de agregados pode causar outros problemas tais como bloqueio de tubagens, membranas ou bombas quando a composição farmacêutica contendo o polipéptido é administrada utilizando um sistema de infusão.
Uma composição farmacêutica pode compreender uma quantidade de uma base de aminoácidos suficiente para diminuir a formação de agregados do polipéptido durante o armazenamento da composição. 0 termo "base de aminoácidos" refere-se a um ou mais aminoácidos (tais como metionina, histidina, imidazol, arginina, lisina, isoleucina, ácido aspártico, triptofano, treonina) ou análogos destes. Pode estar presente qualquer aminoácido na sua forma de base livre ou na sua forma de sal. Pode estar presente qualquer estereoisómero (isto é, L, D, ou uma mistura destes) da base de aminoácidos.
Pode-se adicionar metionina (ou outros aminoácidos sulfúricos ou análogos de aminoácidos) para inibir a oxidação de resíduos de metionina em sulfóxido de metionina quando o polipéptido que atua como agente terapêutico é um polipéptido compreendendo pelo menos um resíduo de metionina suscetível a tal oxidação. Pode utilizar-se qualquer estereoisómero de metionina (L ou D) ou combinações destes.
Uma composição farmacêutica pode compreender um estabilizante selecionado a partir do grupo de polímeros de elevado peso molecular ou compostos de baixo peso molecular. 0 estabilizante pode, p. ex., ser selecionado a partir de polietilenoglicol (p. ex. PEG 3350), álcool polivinílico (PVA), polivinilopirrolidona, carboxi/hidroxicelulose ou derivados desta (p. ex. HPC, HPC-SL, HPC-L e HPMC), ciclodextrinas, substâncias contendo enxofre tais como monotioglicerol, ácido tioglicólico e 2-metiltioetanol, e diferentes sais (p. ex. cloreto de sódio). Uma composição farmacêutica pode compreender agentes estabilizantes adicionais tais como, mas não limitados a, metionina e EDTA, que protegem o polipéptido contra a oxidação da metionina, e um tensioativo não iónico, que protege o polipéptido contra agregação associada a congelação-descongelação ou cisalhamento mecânico.
Uma composição farmacêutica pode compreender um ou mais tensioativos, de preferência um tensioativo, pelo menos um tensioativo, ou dois tensioativos diferentes. O termo "tensioativo" refere-se a quaisquer moléculas ou iões que sejam compostos por uma parte solúvel em água (hidrófila) e uma parte solúvel em gordura (lipófila). O tensioativo pode, p. ex., ser selecionado a partir do grupo consistindo em tensioativos aniónicos, tensioativos catiónicos, tensioativos não iónicos e/ou tensioativos zwitteriónicos.
Uma composição farmacêutica pode compreender um ou mais inibidores de proteases, tais como, p. ex., EDTA (ácido etilenodiaminotetracético) e/ou benzamidina-HCl.
Ingredientes adicionais, opcionais, de uma composição farmacêutica incluem, p. ex., agentes molhantes, emulsionantes, antioxidantes, agentes de volume, iões metálicos, veículos oleosos, proteínas (p. ex., albumina de soro humano, gelatina) e/ou um zwitterião, (p. ex., um aminoácido tal como betaína, taurina, arginina, glicina, lisina e histidina).
Ainda mais, uma composição farmacêutica pode ser formulada tal como é conhecido na técnica de formulações orais de compostos insulinotrópicos, p. ex. utilizando qualquer uma ou mais das formulações descritas em WO 2008/145728.
Uma dose administrada pode conter 0,01 mg - 100 mg do derivado, ou 0,01-50 mg, ou 0,01-20 mg, ou 0,01-10 mg do derivado. O derivado pode ser administrado na forma de uma composição farmacêutica. Pode ser administrado a um doente a necessitar do mesmo em vários locais, por exemplo, em locais tópicos tais como locais da pele ou da mucosa; em locais que contornam a absorção, tais como numa artéria, numa veia ou no coração; e em locais que envolvam absorção, tal como na pele, sob a pele, num músculo ou no abdómen. A via de administração pode ser, por exemplo, lingual; sublingual; bucal; na boca; oral; no estômago; no intestino; nasal; pulmonar, tal como através dos bronquíolos, dos alvéolos, ou uma combinação destas; parentérica; epidérmica; dérmica; transdérmica; conjuntiva; uretal; vaginal; retal; e/ou ocular. Uma composição pode ser uma composição oral, e a via de administração é por via oral.
Uma composição pode ser administrada em várias formas de dosagem, por exemplo como uma solução; uma suspensão; uma emulsão; uma microemulsão; múltiplas emulsões; uma espuma; uma pomada; uma pasta; um gesso; um unguento; um comprimido; um comprimido revestido; uma pastilha elástica; uma lavagem; uma cápsula tal como cápsulas de gelatina dura ou mole; um supositório; uma cápsula rectal; gotas; um gel; uma pulverização; um pó; um aerossol; um inalante; colírio; uma pomada oftálmica; uma lavagem oftálmica; um pessário vaginal; um anel vaginal; um unguento vaginal; uma solução injetável; uma solução de transformação in situ tal como gelificação in situ, fixação, precipitação e cristalização in situ; uma solução de infusão; ou como um implante. Uma composição pode ser um comprimido, opcionalmente revestido, uma cápsula, ou uma pastilha elástica.
Uma composição pode ainda ser composta num veículo de fármacos ou num sistema de administração de fármacos, p. ex. a fim de melhorar a estabilidade, a biodisponibilidade e/ou a solubilidade. Numa forma de realização particular, uma composição pode ser ligada a um tal sistema através de interações covalentes, hidrófobas e/ou eletrostáticas. 0 objetivo desta composição pode ser, p. ex., diminuir efeitos adversos, alcançar cronoterapia e/ou aumentar a adesão do paciente.
Uma composição pode também ser utilizada na formulação de sistemas de distribuição de fármacos de libertação controlada, sustida, prolongada, retardada e/ou lenta. A administração parentérica pode ser realizada através de injeção subcutânea, intramuscular, intraperitoneal ou intravenosa por meio de uma seringa, opcionalmente uma seringa tipo caneta, ou por meio de uma bomba de infusão.
Uma composição pode ser administrada nasalmente na forma de uma solução, uma suspensão ou um pó; ou pode ser administrada por via pulmonar na forma de um pulverizador de liquido ou pó. A administração transdérmica é ainda uma outra opção, p. ex. através de injeção sem agulha, a partir de um penso tal como um penso iontoforético, ou através de uma via transmucosa, p. ex. bucalmente.
Uma composição pode ser uma formulação estabilizada. 0 termo "formulação estabilizada" refere-se a uma formulação com maior estabilidade física e/ou química, preferencialmente ambas. Em geral, uma formulação deve ser estável durante o uso e armazenamento (em conformidade com as condições de uso e armazenamento recomendadas) até a data de validade ser atingida. 0 termo "estabilidade física" refere-se à tendência do polipéptido para formar agregados biologicamente inativos e/ou insolúveis em resultado da exposição a stresse termomecânico e/ou interação com interfaces e superfícies desestabilizadoras (tais como superfícies hidrófobas). A estabilidade física de uma formulação polipeptídica aquosa pode ser avaliada por meio de inspeção visual e/ou através de medições de turbidez após exposição a stresse mecânico/físico (p. ex. agitação) a diferentes temperaturas durante vários períodos de tempo. Alternativamente, a estabilidade física pode ser avaliada utilizando um agente espetroscópico ou sonda do estado conformacional do polipéptido tal como p. ex. sondas de Tioflavina T ou de "zonas hidrófobas". 0 termo "estabilidade química" refere-se a alterações químicas (em particular covalentes) na estrutura polipeptídica levando à formação de produtos de degradação química com potencialmente uma potência biológica reduzida e/ou maior efeito imunogénico em comparação com o polipéptido intacto. A estabilidade química pode ser avaliada medindo a quantidade de produtos de degradação química em vários pontos de tempo após exposição a diferentes condições ambientais, p. ex. através de SEC-HPLC, e/ou RP-HPLC. 0 tratamento com um derivado de acordo com a presente invenção pode também ser combinado com uma ou mais substâncias farmacologicamente ativas adicionais, p. ex. selecionadas a partir de agentes antidiabéticos, agentes antiobesidade, agentes reguladores do apetite, agentes anti-hipertensivos, agentes para o tratamento e/ou a prevenção de complicações resultantes ou associadas a diabetes e agentes para o tratamento e/ou a prevenção de complicações e distúrbios resultantes ou associados a obesidade. Exemplos destas substâncias farmacologicamente ativas são: Insulina, sulfonilureias, biguanidas, meglitinidas, inibidores da glucosidase, antagonistas do glucagon, inibidores de DPP-IV (dipeptidil-peptidase IV) , inibidores de enzimas hepáticas envolvidas na estimulação da gluconeogénese e/ou glicogenólise, moduladores da captação da glicose, compostos modificadores do metabolismo lipídico tais como agentes anti-hiperlipidémicos tais como inibidores de HMG CoA (estatinas), Polipéptidos Inibidores Gástricos (análogos de GIP), compostos que diminuem a ingestão de alimentos, agonistas de RXR e agentes que atuam no canal de potássio dependente de ATP das células β; Colestiramina, colestipol, clofibrato, gemfibrozil, lovastatina, pravastatina, simvastatina, probucol, dextrotiroxina, neteglinida, repaglinida; β-bloqueantes tais como alprenolol, atenolol, timolol, pindolol, propranolol e metoprolol, inibidores de ECA (enzima conversora de angiotensina) tais como benazepril, captopril, enalapril, fosinopril, lisinopril, alatriopril, quinapril e ramipril, bloqueadores de canais de cálcio tais como nifedipina, felodipina, nicardipina, isradipina, nimodipina, diltiazem e verapamil, e a-bloqueantes tais como doxazosina, urapidil, prazosina e terazosina; agonistas de CART (transcrito regulado por anfetaminas e cocaína), antagonistas de NPY (neuropéptido Y) , agonistas de PYY, agonistas do recetor de Y2, agonistas do recetor de Y4, agonistas do recetor de Y2/Y4 misto, agonistas de MC4 (melanocortina 4), antagonistas de orexina, agonistas de TNF (fator de necrose tumoral), agonistas de CRF (fator de libertação da corticotropina) , antagonistas de CRF-BP (proteína de ligação ao fator de libertação da corticotropina), agonistas de urocortina, agonistas de β3, oxintomodulina e análogos, agonistas de MSH (hormona estimulante de melanócitos), antagonistas de MCH (hormona de concentração de melanócitos), agonistas de CCK (colecistocinina), inibidores de reabsorção de serotonina, inibidores de reabsorção de serotonina e noradrenalina, compostos de serotonina e noradrenérgicos mistos, agonistas de 5HT (serotonina), agonistas de bombesina, antagonistas de galanina, hormona do crescimento, compostos de libertação da hormona de crescimento, agonistas de TRH (hormona de libertação da tireotropina), moduladores de UCP 2 ou 3 (proteína de desacoplamento 2 ou 3) , agonistas da leptina, agonistas de DA (bromocriptina, doprexina), inibidores da lipase/amilase, moduladores de RXR (recetor do retinoide X), agonistas de TR β; antagonistas da histamina H3, agonistas ou antagonistas do Polipéptido Inibidor Gástrico (análogos de GIP), gastrina e análogos de gastrina. 0 tratamento com um derivado de acordo com esta invenção pode também ser combinado com uma cirurgia que influencie os níveis de glicose e/ou a homeostasia lipídica tal como introdução de uma banda gástrica ou derivação gástrica.
INDICAÇÕES FARMACÊUTICAS
Num terceiro aspeto, a presente invenção refere-se também a um derivado da invenção, para utilização como medicamento.
Em formas de realização particulares, o derivado da invenção pode também ser usado para os seguintes tratamentos médicos, todos de preferência relacionados de um modo ou de outro com diabetes: (i) prevenção e/ou tratamento de todas as formas de diabetes, tais como hiperglicemia, diabetes tipo 2, tolerância à glicose comprometida, diabetes tipo 1, diabetes não dependente de insulina, DIMJ (diabetes de início na maturidade dos jovens), diabetes gestacional e/ou para redução de HbAlC; (ii) retardamento ou prevenção da progressão de doença diabética, tal como progressão na diabete tipo 2, retardamento da progressão de tolerância à glicose comprometida (IGT) para diabetes tipo 2 que requeira insulina, e/ou retardamento da progressão da diabetes tipo 2 que não requeira insulina para diabetes tipo 2 que requeira insulina; (iii) melhoria da função das células β, tal como diminuição da apoptose de células β, aumento da função das células β e/ou massa de células β, e/ou para restauro da sensibilidade à glicose das células β; (iv) prevenção e/ou tratamento de distúrbios cognitivos; (v) prevenção e/ou tratamento de distúrbios alimentares, tais como obesidade, p. ex. através da diminuição da ingestão de alimentos, redução do peso corporal, supressão do apetite, indução de saciedade; tratamento ou prevenção de distúrbio alimentar compulsivo, bulimia nervosa e/ou obesidade induzida através da administração de um antipsicótico ou um esteroide; redução da motilidade gástrica; e/ou retardamento do esvaziamento gástrico; (vi) prevenção e/ou tratamento de complicações diabéticas, tais como neuropatia, incluindo neuropatia periférica; nefropatia; ou retinopatia; (vii) melhoria dos parâmetros lipídicos, tais como prevenção e/ou tratamento de dislipidemia, diminuição dos lipidos séricos totais; diminuição de HDL; diminuição de LDL pequeno e denso; diminuição de VLDL; diminuição dos triglicéridos; diminuição do colesterol; aumento de HDL; diminuição dos níveis plasmáticos de lipoproteína a (Lp(a)) num humano; inibição da produção de apolipoproteína a (apo(a)) in vitro e/ou in vivo; (iix) prevenção e/ou tratamento de doenças cardiovasculares, tais como síndroma do X; aterosclerose; enfarto do miocárdio; doença cardíaca coronária; acidente vascular cerebral, isquemia cerebral; uma doença cardíaca precoce ou cardiovascular precoce, tal como hipertrofia ventricular esquerda; doença arterial coronária; hipertensão essencial; emergência hipertensiva aguda; cardiomiopatia; insuficiência cardíaca; tolerância ao exercício; insuficiência cardíaca crónica; arritmia; disritmia cardíaca; sincopia; aterosclerose; insuficiência cardíaca crónica ligeira; angina de peito; re-oclusão de bypass cardíaco; claudicação intermitente (aterosclerose obliterante); disfunção diastólica; e/ou disfunção sistólica; (ix) prevenção e/ou tratamento de doenças gastrointestinais, tais como síndroma inflamatória do intestino; síndroma do intestino delgado, ou doença de Crohn; dispepsia; e/ou úlceras gástricas; (x) prevenção e/ou tratamento de doença crítica, tal como tratamento de um paciente crítico, um paciente crítico de doença polinefropática (CIPNP) e/ou um potencial paciente de CIPNP; prevenção de doença crítica ou desenvolvimento de CIPNP; prevenção, tratamento e/ou cura de síndroma de resposta inflamatória sistémica (SIRS) num paciente; e/ou para a prevenção ou redução da probabilidade de um paciente sofrer de bacteriemia, septicemia e/ou choque séptico durante a hospitalização; e/ou (xi) prevenção e/ou tratamento da síndroma do ovário poliquístico (PCOS).
Numa forma de realização particular, a indicação é selecionada a partir do grupo consistindo em (i)-(iii) e (v)-(iix), tais como as indicações (i) , (ii) , e/ou (iii) ; ou a indicação (v), indicação (vi), indicação (vii), e/ou indicação (iix).
Noutra forma de realização particular, a indicação é (i) . Numa outra forma de realização particular, a indicação é (v). Ainda noutra forma de realização particular, a indicação é (iix).
As seguintes indicações são particularmente preferidas: Diabetes tipo 2 e/ou obesidade.
FORMAS DE REALIZAÇÃO PARTICULARES 0 seguinte são formas de realização particulares da invenção. 1. Um derivado de um análogo de GLP-1, em que o análogo de GLP-1 compreende um primeiro resíduo K numa posição correspondente à posição 27 de GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 1); um segundo resíduo K numa posição correspondente à posição T de GLP-1 (7-37), onde T é um número inteiro no intervalo de 7-37 exceto 18 e 27; e um máximo de dez mudanças de aminoácidos em comparação com GLP-1 (7-37) ; em que o primeiro resíduo K é designado K27, e o segundo resíduo K é designado KT; derivado esse que compreende uma primeira e uma segunda porções de prolongamento ligadas a K27 e KT, respetivamente, através de um primeiro e um segundo ligador, respetivamente, em que a primeira e a segunda porções de prolongamento são selecionadas a partir de Quím. 1 e Quím. 2:
Quím. 1: HOOC-(CH2) X-C0-*
Quím. 2: H00C-C6H4-0-(CH2) y-C0-* em que x é um número inteiro no intervalo de 6-16, y é um número inteiro no intervalo de 3-17; e o primeiro e segundo ligadores compreendem Quím. 5:
Chem. 5:
em que k é um número inteiro no intervalo de 1-5, e n é um número inteiro no intervalo de 1-5; ou um sal, amida, ou éster deste farmaceuticamente aceitável. 2. 0 derivado da forma de realização 1, em que T é um número inteiro selecionado a partir do intervalo de 7-37 exceto 18 e 27. 3. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização 1-2, em que T é selecionado a partir de qualquer um dos intervalos de 7-17, 19-26, e 28-37. 4. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização 1-3, em que T é selecionado a partir do intervalo de 7-17. 5. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização 1-4, em que Té 12. 6. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização 1-3, em que T é selecionado a partir do intervalo de 19-26. 7. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização 1-3, e 6, em que T é selecionado a partir do grupo consistindo em 20, 22, e 24. 8. O derivado de qualquer uma das formas de realização 1-3, e 6-7, em que T é 20. 9. O derivado de qualquer uma das formas de realização 1-3, e 6-7, em que T é 22 ou 24. 10. O derivado de qualquer uma das formas de realização 1-3, 6-7, e 9, em que T é 22. 11. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização 1-3, 6-7, e 9, em que T é 24. 12. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização 1-3, em que T é selecionado a partir do intervalo de 28-37. 13. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização 1-3, e 12, em que T é selecionado a partir do qrupo consistindo em 36 e 37. 14. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização 1-3, e 12-13, em que Té 36. 15. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização 1-3, e 12, em que T é 37. 16. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização 1- 16. em que a posição correspondente à posição 27 de GLP-1(7-37) (SEQ ID NO: 1) é identificado através de caliqrafia e observação atenta. 17. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização 1- 16, em que a posição correspondente à posição T de GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 1) é identificada através de caliqrafia e observação atenta. 18. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização 1- 17, em que a posição correspondente à posição 27 de GLP-1(7-37) (SEQ ID NO: 1) é identificado através da utilização de um programa de alinhamento de proteínas ou péptidos padrão. 19. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização 1- 18, em que a posição correspondente à posição T de GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 1) é identificada através da utilização de um programa de alinhamento de proteínas ou péptidos padrão. 20. O derivado da forma de realização 19, em que o programa de alinhamento é um alinhamento de Needleman-Wunsch. 21. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização 19- 20, em que é utilizada a matriz de pontuação por defeito e a matriz de identidade por defeito. 22. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização 19- 21, em que a matriz de pontuação é BLOSUM62. 23. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização 19- 22, em que a penalidade para o primeiro resíduo numa lacuna é -10 (menos dez). 24. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização 19- 23, em que as penalidades para resíduos adicionais numa lacuna é -0,5 (menos zero vírgula cinco). 25. O derivado de qualquer uma das formas de realização 1- 24, em que o análogo não compreende quaisquer resíduos K outro além do primeiro e do segundo resíduos K. 26. O derivado de qualquer uma das formas de realização 1- 25, em que a porção de prolongamento é Quím. 1. 27. O derivado de qualquer uma das formas de realização 1- 26, em que x é um número par. 28. O derivado de qualquer uma das formas de realização 1- 27, em que x é 12. 29. O derivado de qualquer uma das formas de realização 1- 28, em que Quím. 1 é representado por Quím. la:
Quím. la:
30. O derivado de qualquer uma das formas de realização 1-25, em que a porção de prolongamento é Quím. 2. 31. O derivado de qualquer uma das formas de realização 1-25, e 30, em que Quím. 2 é representado por Quím. 2a:
Quím. 2a:
32. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização 1-25, e 30-31, em que y é um número par. 33. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização 1-25, e 30-32, em que y é um número inteiro no intervalo de 9-11. 34. O derivado de qualquer uma das formas de realização 1-25, e 30-33, em que y é 9. 35. O derivado de qualquer uma das formas de realização 1-25, e 30-33, em que y é 11. 36. O derivado de qualquer uma das formas de realização 1-25, e 30-35, em que Quim. 2 é representado por Quim. 2b, ou Quim. 2c:
Quim. 2b:
ou
Quim. 2c:
37. O derivado de qualquer uma das formas de realização 1-25, e 30-35, em que Quim. 2 é representado por Quim. 2b. 38. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização 31-35, em que Quim. 2a é representado por Quim. 2b, ou Quim. 2c:
Quim. 2b: ou
Quim. 2c:
39. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização 31-35, e 38, em que Quim. 2a é representado por Quim. 2b. 40. O derivado de qualquer uma das formas de realização 1-39, em que Quim. 5 é um primeiro elemento ligador. 41. O derivado de qualquer uma das formas de realização 1-4 0, em que k é 1. 42. O derivado de qualquer uma das formas de realização 1- 41, em que n é 1. 43. O derivado de qualquer uma das formas de realização 1- 42, em que Quim. 5 é incluído m vezes, em que m é um número inteiro no intervalo de 1-10. 44. O derivado da forma de realização 43, em que m é 2. 45. O derivado de qualquer uma das formas de realização 43-44, em que, quando m não é 1, os elementos Quim. 5 estão interligados através de uma ou mais ligações amida. 46. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização 1-45, em que o ligador compreende ainda um segundo elemento ligador. 47. 0 derivado da forma de realização 46, em que o segundo elemento ligador é um Di—radical Glu. 48. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização 46-47, em que o segundo elemento ligador é selecionado a partir de Quim. 6, e/ou Quim. 7:
Quim. 6: e/ou
Quim. 7:
49. 0 derivado da forma de realização 48, em que o segundo elemento ligador é Quim. 6. 50. O derivado de qualquer uma das formas de realização 46-49, em que o Di-radical Glu é incluído p vezes, em que p é um número inteiro no intervalo de 1-2. 51. O derivado da forma de realização 50, em que p é 1. 52. O derivado da forma de realização 50, em que p é 2. 53. O derivado de qualquer uma das formas de realização 46- 52, em que o Di-radical Glu é um radical de L-Glu. 54. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização 46- 53, em que um ou mais di-radicais Glu e um ou mais elementos Quim. 5 estão interligados através de uma ou mais ligações amida. 55. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização 46- 54, em que o ligador consiste em m vezes Quím. 5 e p vezes o Di-radical Glu. 56. 0 derivado da forma de realização 55, em que (m,p) é (2,2) ou (2,1). 57. 0 derivado da forma de realização 56, em que (m,p) é (2,1) . 58. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização 55- 57, em que os m elementos Quim. 5 e os p di-radicais Glu estão interligados através de ligações amida. 59. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização 1- 58, em que o ligador e a porção de prolongamento estão interligados através de uma ligação amida. 60. O derivado de qualquer uma das formas de realização 1- 59, em que o ligador e o análogo de GLP-1 estão interligados através de uma ligação amida. 61. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização 1- 60, em que o ligador é ligado ao grupo épsilon-amino do primeiro ou do segundo resíduo K. 62. O derivado de qualquer uma das formas de realização 1- 61, em que o ligador tem de 5 a 41 átomos C. 63. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização 1- 62, em que o ligador tem 17 ou 22 átomos C. 64. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização 1- 63, em que o ligador tem 17 átomos C. 65. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização 1-63, em que o ligador tem 22 átomos C. 66. 0 derivado de formas de realização 1-65, em que o ligador tem de 4 a 28 heteroátomos. 67. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização 1- 66, em que o ligador tem 12 ou 16 heteroátomos. 68. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização Ιόν, em que o ligador tem 12 heteroátomos. 69. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização 1- 67, em que o ligador tem 16 heteroátomos. 70. O derivado de qualquer uma das formas de realização 66- 70. em que os heteroátomos são átomos N e/ou O. 71. O derivado de qualquer uma das formas de realização 1- 70, em que o ligador tem de 1 a 7 átomos N. 72. O derivado de qualquer uma das formas de realização 1- 71, em que o ligador tem 3 ou 4 átomos N. 73. O derivado de qualquer uma das formas de realização 1- 72, em que o ligador tem 3 átomos N. 74. O derivado de qualquer uma das formas de realização 1-72, em que o ligador tem 4 átomos N. 75. O derivado de qualquer uma das formas de realização 1- 74, em que o ligador tem de 3 a 21 átomos O. 76. O derivado de qualquer uma das formas de realização 1- 75, em que o ligador tem 9 ou 12 átomos O. 77. O derivado de qualquer uma das formas de realização 1- 76, em que o ligador tem 9 átomos O. 78. O derivado de qualquer uma das formas de realização 1-76, em que o ligador tem 12 átomos O. 79. O derivado de qualquer uma das formas de realização 1-78, em que o ligador consiste em duas vezes Quim. 6 e duas vezes Quim. 5, interligados através de ligações amida e na sequência indicada, estando o ligador ligado na sua extremidade *-NH à extremidade *-CO da porção de prolongamento, e na sua extremidade *-CO ao grupo épsilon-amino de K27 ou KT do análogo de GLP-1. 80. O derivado de qualquer uma das formas de realização 1-78, em que o ligador consiste em duas vezes Quim. 5 e uma vez Quím. 6, interligados através de ligações amida e na sequência indicada, estando o ligador ligado na sua extremidade *-NH à extremidade *-C0 da porção de prolongamento, e na sua extremidade *-C0 livre ao grupo épsilon-amino de K27 ou KT do análogo de GLP-1. 81. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização 1-78, em que o ligador consiste em uma vez Quím. 6 e duas vezes Quím. 5, interligados através de ligações amida e na sequência indicada, estando o ligador ligado na sua extremidade *-NH à extremidade *-C0 da porção de prolongamento, e na sua extremidade *-C0 ao grupo épsilon-amino de K27 ou KT do análogo de GLP-1. 82. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização 1-78, em que o ligador consiste em uma vez Quím. 6, duas vezes Quím. 5, e uma vez Quím. 6, interligados através de ligações amida e na sequência indicada, estando o ligador ligado na sua extremidade *-NH à extremidade *-C0 da porção de prolongamento, e na sua extremidade *-C0 ao grupo épsilon-amino de K27 ou KT do análogo de GLP-1. 83. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização 1- 82, em que as duas porções de prolongamento são substancialmente idênticas. 84. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização 1- 83, em que as duas porções de prolongamento são a) pelo menos 80%, b) pelo menos 85%, c) pelo menos 90%, d) pelo menos 95%, ou e) pelo menos 99% idênticas. 85. O derivado de qualquer uma das formas de realização 1-83, em que as duas porções de prolongamento têm uma semelhança de a) pelo menos 0,5; b) pelo menos 0,6; c) pelo menos 0,7, d) pelo menos 0,8; e) pelo menos 0,9; ou f) pelo menos 0,99. 86. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização 1- 85, em que as duas porções de prolongamento têm uma semelhança de 1,0. 87. O derivado de qualquer uma das formas de realização 1- 86, em que os dois ligadores são substancialmente idênticos. 88. O derivado de qualquer uma das formas de realização 1- 87, em que os dois ligadores têm uma semelhança de pelo menos 0,5. 89. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização 1- 88, em que os dois ligadores têm uma semelhança de a) pelo menos 0,6; b) pelo menos 0,7, c) pelo menos 0,8; d) pelo menos 0,9; ou e) pelo menos 0,99. 90. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização 1- 89, em que os dois ligadores têm uma semelhança de 1,0. 91. O derivado de qualquer uma das formas de realização 1- 90, em que os dois ligadores de albumina, tais como as duas cadeias laterais consistindo na porção de prolongamento e ligador, são substancialmente idênticos. 92. O derivado de qualquer uma das formas de realização 1- 91, em que os dois ligadores de albumina, tais como as duas cadeias laterais consistindo na porção de prolongamento e ligador, são a) pelo menos 80%, b) pelo menos 85%, c) pelo menos 90%, d) pelo menos 95%, ou e) pelo menos 99% idênticos. 93. O derivado de qualquer uma das formas de realização 1- 92, em que os dois ligadores de albumina, tais como as duas cadeias laterais consistindo na porção de prolongamento e ligador, têm uma semelhança de a) pelo menos 0,5; b) pelo menos 0,6; c) pelo menos 0,7, d) pelo menos 0,8; e) pelo menos 0,9; ou f) pelo menos 0,99. 94. O derivado de qualquer uma das formas de realização 1-92, em que os dois ligadores de albumina, tais como as duas cadeias laterais consistindo na porção de prolongamento e ligador, têm uma semelhança de 1,0. 95. O derivado de qualquer uma das formas de realização 83-94, em que as duas estruturas químicas a comparar são representadas por impressões digitais. 96. O derivado da forma de realização 95, em que as impressões digitais são a) impressões digitais ECFP_6; b) impressões digitais UNITY; e/ou c) impressões digitais MDL. 97. O derivado de qualquer uma das formas de realização 95- 96, em que é de preferência utilizado o coeficiente de Tanimoto para o cálculo da semelhança, ou identidade, das duas impressões digitais. 98. O derivado de qualquer uma das formas de realização 1- 97, em que o número de mudanças de aminoácidos em comparação com GLP-l(7-37) (SEQ ID NO: 1) é identificado através de caligrafia e observação atenta. 99. O derivado de qualquer uma das formas de realização 1- 98, em que o número de mudanças de aminoácidos em comparação com GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 1) é identificado através da utilização de um programa de alinhamento de proteínas ou péptidos padrão. 100. O derivado da forma de realização 99, em que o programa de alinhamento é um alinhamento de Needleman-Wunsch. 101. O derivado de qualquer uma das formas de realização 99-100, em que é utilizada a matriz de pontuação por defeito e a matriz de identidade por defeito. 102. O derivado de qualquer uma das formas de realização 99-101, em que a matriz de pontuação é BLOSUM62. 103. O derivado de qualquer uma das formas de realização 99-102, em que a penalidade para o primeiro resíduo numa lacuna é -10 (menos dez). 104. O derivado de qualquer uma das formas de realização 99-103, em que as penalidades para resíduos adicionais numa lacuna é -0,5 (menos zero vírgula cinco). 105. O derivado de qualquer uma das formas de realização 1- 104, em que a ou as mudanças de aminoácidos estão numa ou mais posições correspondendo às seguintes posições em GLP-1(7-37) (SEQ ID NO: 1): 8, 12, 20, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 30, 31, 34, 35, 36, 37, 38, e 39. 106. O derivado de qualquer uma das formas de realização 1- 105, em que o análogo compreende pelo menos uma das seguintes mudanças: Aib8, K12, K20, E22 ou K22, E23, K24, V25, R26 ou H26, K27, E30, H31, G34 ou R34 ou Q34, Des35, K36 ou Des36, K37 ou Des37, E38 ou Q38, e/ou G39. 107. O derivado de qualquer uma das formas de realização 1- 106, em que o segundo resíduo K é K12, e em que o análogo, para além da mudança K27, compreende ainda i) uma mudança selecionada a partir de G34, R34, e Q34, e ii) uma mudança selecionada a partir de R26 e H26. 108. O derivado de qualquer uma das formas de realização 1- 106, em que o segundo resíduo K é K20, e em que o análogo, para além da mudança K27, compreende ainda i) uma mudança selecionada a partir de G34, R34, e Q34, e ii) uma mudança selecionada a partir de R26 e H26. 109. O derivado de qualquer uma das formas de realização 1- 106, em que o segundo resíduo K é K22, e em que o análogo, para além da mudança K27, compreende ainda i) uma mudança selecionada a partir de G34, R34, e Q34, e ii) uma mudança selecionada a partir de R26 e H26. 110. O derivado de qualquer uma das formas de realização 1- 106, em que o segundo resíduo K é K24, e em que o análogo, para além da mudança K27, compreende ainda i) uma mudança selecionada a partir de G34, R34, e Q34, e ii) uma mudança selecionada a partir de R26 e H26. 111. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização 1-106, em que o segundo resíduo K é K36, e em que o análogo, para além da mudança K27, compreende ainda i) uma mudança selecionada a partir de G34, R34, e Q34, e ii) uma mudança selecionada a partir de R26 e H26. 112. O derivado de qualquer uma das formas de realização 1-106, em que o segundo resíduo K é K37, e em que o análogo, para além da mudança K27, compreende ainda i) uma mudança selecionada a partir de G34, R34, e Q34, e ii) uma mudança selecionada a partir de R26 e H26. 113. O derivado de qualquer uma das formas de realização 1- 112, em que o análogo compreende pelo menos uma das seguintes mudanças: Aib8, E22, E23, V25, E30, H31, Des35, Des36, Des37, E38 ou Q38, e/ou G39. 114. O derivado de qualquer uma das formas de realização 1- 113, em que o análogo compreende Aib8. 115. O derivado de qualquer uma das formas de realização 1- 114, em que o análogo compreende E22. 116. O derivado de qualquer uma das formas de realização 1- 115, em que o análogo compreende E23. 117. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização 1- 116, em que o análogo compreende V25. 118. O derivado de qualquer uma das formas de realização 1- 117, em que o análogo compreende E30. 119. O derivado de qualquer uma das formas de realização 1- 118, em que o análogo compreende H31. 120. O derivado de qualquer uma das formas de realização 1- 119, em que o análogo compreende Des37. 121. O derivado da forma de realização 120, em que o análogo compreende Des36. 122. O derivado de qualquer uma das formas de realização 121, em que o análogo compreende Des35. 123. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização 1- o o oo 119, em que o análoqo compreende E ou Q . 124. 0 derivado da forma de realização 123, em que o análogo compreende Q38. 125. 0 derivado da forma de realização 123, em que o 3 8 análogo compreende E . 126. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização o n 123-125, em que o análogo compreende G . 127. 0 derivado da forma de realização 122, que é um derivado de GLP-l(7-34) (aminoácidos 1-28 de SEQ ID NO: 1). 128. 0 derivado da forma de realização 121, que é um derivado de GLP-1(7-35) (aminoácidos 1-29 de SEQ ID NO: 1). 129. 0 derivado da forma de realização 120, que é um derivado de GLP-1(7-36) (aminoácidos 1-30 de SEQ ID NO: 1). 130. O derivado de qualquer uma das formas de realização 1-119, que é um derivado de GLP-1 (7-37) (aminoácidos 1-31 de SEQ ID NO: 1). 131. O derivado de qualquer uma das formas de realização 123-125, que é um derivado de GLP-1 (7-38) (aminoácidos 1-31 de SEQ ID NO: 1, mais um resíduo de aminoácido adicionado no terminal C). 132 O derivado de qualquer uma das formas de realização 126, que é um derivado de GLP-1 (7-39) (aminoácidos 1-31 de SEQ ID NO: 1, mais dois resíduos de aminoácidos adicionados no terminal C). 133. O derivado de qualquer uma das formas de realização 1- 132. em que o análogo tem no máximo nove mudanças de aminoácidos. 134. O derivado de qualquer uma das formas de realização 1- 132, em que o análogo tem no máximo oito mudanças de aminoácidos. 135. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização 1-132, em que o análogo tem no máximo sete mudanças de aminoácidos. 136. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização 1-132, em que o análogo tem no máximo seis mudanças de aminoácidos. 137. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização 1-132, em que o análogo tem no máximo cinco mudanças de aminoácidos. 138. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização 1-132, em que o análogo tem no máximo quatro mudanças de aminoácidos. 139. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização 1-132, em que o análogo tem no máximo três mudanças de aminoácidos. 140. O derivado de qualquer uma das formas de realização 1-132, em que o análogo tem no máximo duas mudanças de aminoácidos. 141. O derivado de qualquer uma das formas de realização 1-132, em que o análogo tem no máximo uma mudança de aminoácido. 142. O derivado de qualquer uma das formas de realização 1-14 0, em que o análogo tem no mínimo uma mudança de aminoácido. 143. O derivado de qualquer uma das formas de realização 1-139, em que o análogo tem no mínimo duas mudanças de aminoácidos. 144. O derivado de qualquer uma das formas de realização 1-138, em que o análogo tem no mínimo três mudanças de aminoácidos. 145. O derivado de qualquer uma das formas de realização 1-137, em que o análogo tem no mínimo quatro mudanças de aminoácidos. 146. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização 1-136, em que o análoqo tem no mínimo cinco mudanças de aminoácidos. 147. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização 1- 135, em que o análogo tem no mínimo seis mudanças de aminoácidos. 148. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização 1- 134, em que o análogo tem no mínimo sete mudanças de aminoácidos. 149. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização 1- 133, em que o análogo tem no mínimo oito mudanças de aminoácidos. 150. O derivado de qualquer uma das formas de realização 1- 132, em que o análogo tem no mínimo nove mudanças de aminoácidos. 151. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização 1-132, em que o análogo tem uma mudança de aminoácido. 152. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização 1-132, em que o análogo tem duas mudanças de aminoácidos. 153. O derivado de qualquer uma das formas de realização 1-132, em que o análogo tem três mudanças de aminoácidos. 154. O derivado de qualquer uma das formas de realização 1-132, em que o análogo tem quatro mudanças de aminoácidos. 155. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização 1-132, em que o análogo tem cinco mudanças de aminoácidos. 156. O derivado de qualquer uma das formas de realização 1-132, em que o análogo tem seis mudanças de aminoácidos. 157. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização 1-132, em que o análogo tem sete mudanças de aminoácidos. 158. O derivado de qualquer uma das formas de realização 1-132, em que o análogo tem oito mudanças de aminoácidos. 159. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização 1-132, em que o análogo tem nove mudanças de aminoácidos. 160. O derivado de qualquer uma das formas de realização 1-132, em que o análogo tem dez mudanças de aminoácidos. 161. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização 1- 160, em que a ou as mudanças são, independentemente, substituições, adições, e/ou deleções. 162. O derivado de qualquer uma das formas de realização 1- 161, em que o análogo compreende um análogo de GLP-1 de Fórmula I: Fórmula I: Xaa7~Xaao-Glu-Gly~Thr-Xaai2-Thr-Ser-Asp-Xaata-Ser-Xaai8-Xaai9~Xaa2o-
Glu-Xaa22_X3323*X9924'X392s*X3326‘fys-Phe-Sl6-Xaa30'Xa33i't eu-Val-Xaaaii-Xaass-Xaase-XaajrXaa^rXaa». em que
Xaa7 é L-histidina, imidazopropionil, a-hidroxi-histidina, D-histidina, desamino-histidina, 2-amino-histidina, β-hidroxi-histidina, homo-histidina, Na-acetil-histidina, Na-formil-histidina, α-fluorometil-histidina, a-metil-histidina, 3-piridilalanina, 2-piridilalanina, ou 4-piridilalanina;
Xaas é Ala, Gly, Vai, Leu, Ile, Thr, Ser, Lys, Aib, ácido (1-aminociclopropil)carboxilico, ácido (1- aminociclobutil)carboxílico, ácido (1- aminociclopentil)carboxilico, ácido (1-aminociclo- hexil)carboxilico, ácido (1-aminociclo-heptil)carboxilico, ou ácido (1-aminociclo-octil)carboxilico;
Xaai2 é Lys ou Phe;
Xaai6 é Vai ou Leu;
Xaais é Ser, Arg, Asn, Gin, ou Glu;
Xaaig é Tyr ou Gin;
Xaa2o é Leu, Lys, ou Met;
Xaa22 é Gly, Glu, Lys, ou Aib;
Xaa23 é Gin, Glu, ou Arg;
Xaa24 é Ala ou Lys;
Xaa25 é Ala ou Vai;
Xaa26 é Vai, His, ou Arg;
Xaa3o é Ala, Glu, ou Arg;
Xaa3i é Trp ou His;
Xaa34 é Glu, Asn, Gly, Gin, ou Arg;
Xaa35 é Gly, Aib, ou está ausente;
Xaa36 é Arg, Gly, Lys, ou está ausente;
Xaa37 é Gly, Ala, Glu, Pro, Lys, Arg, ou está ausente; Xaa38 é Ser, Gly, Ala, Glu, Gin, Pro, Arg, ou está ausente; e
Xaa3g é Gly ou está ausente. 163. 0 derivado da forma de realização 162, em que o análogo é um análogo de GLP-1 de Fórmula I. 164. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização 162-163, em que o péptido de Fórmula I é um análogo de GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 1). 165. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização 162-164, em que se Xaa38 estiver ausente, então Xaa39 também está ausente. 166. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização 162-165, em que se Xaa37 estiver ausente, então Xaa38 e Xaa39 também estão ausentes. 167. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização 162-166, em que se Xaa36 estiver ausente, então Xaa37, Xaa38, e Xaa39 também estão ausentes. 168. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização 162-167, em que, se Xaa35 estiver ausente, então Xaa36, Xaa37, Xaa38, e Xaa39 também estão ausentes. 169. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização 162-168, em que Xaa7 é His; Xaa8 é Ala ou Aib; Xaax2 é Lys ou Phe; Xaax6 é Vai; Xaax8 é Ser; Xaax9 é Tyr; Xaa20 é Leu ou Lys; Xaa22 é Glu, Gly ou Lys; Xaa23 é Gin ou Glu; Xaa24 é Ala ou Lys; Xaa25 é Ala ou Vai; Xaa26 é His ou Arg; Xaa30 é Ala ou Glu; Xaa3i é Trp ou His; Xaa34 é Gly, Gin, ou Arg; Xaa35 é Gly ou está ausente; Xaa36 é Arg, Lys, ou está ausente; Xaa37 é Gly, Lys, ou está ausente; Xaa38 é Glu ou Gin; e Xaa39 é Gly ou está ausente. 170. O derivado de qualquer uma das formas de realização 162-169, em que Xaa7 é His. 171. O derivado de qualquer uma das formas de realização 162-170, em que Xaas é Ala. 172. O derivado de qualquer uma das formas de realização 162-170, em que Xaas é Aib. 173. O derivado de qualquer uma das formas de realização 162-172, em que Xaa42 é Lys. 174. O derivado de qualquer uma das formas de realização 162-172, em que Xaai2 é Phe. 175. O derivado de qualquer uma das formas de realização 162-174, em que Xaa46 é Vai. 176. O derivado de qualquer uma das formas de realização 162-175, em que Xaais é Ser. 177. O derivado de qualquer uma das formas de realização 162-176, em que Xaa49 é Tyr. 178. O derivado de qualquer uma das formas de realização 162-177, em que Xaa2o é Leu. 179. O derivado de qualquer uma das formas de realização 162-177, em que Xaa2o é Lys. 180. O derivado de qualquer uma das formas de realização 162-179, em que Xaa22 é Glu. 181. O derivado de qualquer uma das formas de realização 162-179, em que Xaa22 é Gly. 1821. O derivado de qualquer uma das formas de realização 162-179, em que Xaa22 é Lys. 183. O derivado de qualquer uma das formas de realização 162-182, em que Xaa23 é Gin. 184. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização 162-182, em que Xaa23 é Glu. 185. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização 162-184, em que Xaa24 é Ala. 186. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização 162-184, em que Xaa24 é Lys. 187. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização 162-186, em que Xaa25 é Ala. 188. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização 162-186, em que Xaa25 é Vai. 189. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização 162-188, em que Xaa26 é His. 190. O derivado de qualquer uma das formas de realização 162-188, em que Xaa26 é Arg. 191. O derivado de qualquer uma das formas de realização 162-190, em que Xaa3o é Ala. 192. O derivado de qualquer uma das formas de realização 162-190, em que Xaa3o é Glu. 193. O derivado de qualquer uma das formas de realização 162-192, em que Xaa3i é Trp. 194. O derivado de qualquer uma das formas de realização 162-192, em que Xaa3i é His. 195. O derivado de qualquer uma das formas de realização 162-194, em que Xaa34 é Gly. 196. O derivado de qualquer uma das formas de realização 162-194, em que Xaa34 é Gin. 197. O derivado de qualquer uma das formas de realização 162-194, em que Xaa34 é Arg. 198. O derivado de qualquer uma das formas de realização 162-197, em que Xaa35 é Gly. 199. O derivado de qualquer uma das formas de realização 162-198, em que Xaa35 está ausente. 200. O derivado de qualquer uma das formas de realização 162-199, em que Xaa36 é Arg. 201. O derivado de qualquer uma das formas de realização 162-199, em que Xaa36 é Lys. 202. O derivado de qualquer uma das formas de realização 162-199, em que Xaa36 está ausente. 203. O derivado de qualquer uma das formas de realização 162-202, em que Xaa37 é Gly. 204. O derivado de qualquer uma das formas de realização 162-202, em que Xaa37 é Lys. 205. O derivado de qualquer uma das formas de realização 162-202, em que Xaa37 está ausente. 206. O derivado de qualquer uma das formas de realização 162-205, em que Xaa38 é Glu. 207. O derivado de qualquer uma das formas de realização 162-205, em que Xaa38 é Gin. 208. O derivado de qualquer uma das formas de realização 162-205, em que Xaa38 está ausente. 209. O derivado de qualquer uma das formas de realização 162-208, em que Xaa39 é Gly. 210. O derivado de qualquer uma das formas de realização 162-208, em que Xaa39 está ausente. 211. O derivado de qualquer uma das formas de realização 1- 210, em que o análogo compreende as seguintes alterações de aminoácidos, em comparação com GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 1): (i) 22E, 26R, 27K, 34R, 37K; (ii) 22E, 26R, 27K, 30E, 34R, 36K, 38E, 39G; (iii) 22E, 26R, 27K, 34R, 36K, des37; (iv) 22E, 25V, 26R, 27K, 34R, 37K; (v) 8Aib, 20K, 22E, 26R, 27K, 30E, 34G, des35-37; (vi) 26R, 27K, 30E, 34R, 36K, 38E; (vii) 8Aib, 22K, 25V, 26R, 27K, 31 H, 34R; (iix) 8Aib, 22K, 25V, 26R, 27K, 34R, des35-37; (ix) 8Aib, 22K, 25V, 26R, 27K, 34R, des3 6-37; (x) 26H, 27K, 30E, 34R, 36K, 38E; (xi) 22K, 25V, 26R, 27K, 30E, 34Q; (xii) 25V, 26R, 27K, 30E, 34R, 36K, 38Q; (xiii) 25V, 26R, 27K, 30E, 34Q, 36K, 38E; (xiv) 22K, 26R, 27K, 31 H, 34G, des35-37; (xv) 8Aib, 25V, 26R, 27K, 31 H, 34Q, 37K; (xvi) 25V, 26R, 27K, 31 H, 34Q, 37K; (xvi i) 22E, 23E, 25V, 26R, 27K, 31 H, 34Q, 37K; (iixx) 8Aib, 12K, 22E, 26R, 27K, 31 H, 34Q; (ixx) 8Aib, 22K, 26R, 27K, 31 H, 34G, des35-37; (xx) 22E, 26H, 27K, 30E, 34R, 36K, 38E; (xxi) 22E, 24K, 26R, 27K, 31 H, 34G, des35-37; (xxii) 25V, 26R, 27K, 34Q, 36K; (xxiii) 22E, 24K, 25V, 26R, 27K, 31 H, 34R; (xxiv) 22E, 24K, 25V, 26R, 27K, 34G, des35- 37; (xxv) 22E, 24K, 25V, 26R, 27K, 34R; (xxvi) 8Aib, 22E, 24K, 25V, 26R, 27K, 31 H, 34Q; ou (xxvii) 8Aib, 22E, 26R, 27K, 30E, 34R, 36K, 38E, 39G. 212. 0 derivado da forma de realização 211, em que o análogo tem um conjunto de mudanças de aminoácidos tal como definido em qualquer uma de (i)-(xxvii). 213. Um composto selecionado a partir dos seguintes: Quim. 50, Quim. 51, Quim. 52, Quim. 53, Quím. 54, Quím. 55, Quim. 56, Quim. 57, Quim. 58, Quim. 59, Quím. 60, Quím. 61, Quím. 62, Quím. 63, Quím. 64, Quím. 65, Quím. 66, Quím. 67, Quím. 68, Quím. 69, Quím. 70, Quím. 71, Quím. 72, Quím. 73, Quím. 74, Quím. 75, Quím. 76, Quím. 77, Quím. 78, Quím. 79, Quím. 80, e Quím. 81; ou um sal, amida, ou éster destes farmaceuticamente aceitável. 214. O composto da forma de realização 213 que é um composto de acordo com qualquer uma das formas de realização 1-212. 215. Um composto caracterizado pelo seu nome, e selecionado a partir de uma listagem de cada um dos nomes dos compostos dos Exemplos 1-32 aqui, ou um sal, amida, ou éster deste farmaceuticamente aceitável. 216. 0 composto da forma de realização 215 que é um composto de acordo com qualquer uma das formas de realização 1-214. 217. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização 1-216, que possui atividade de GLP-1. 218. 0 derivado da forma de realização 217, em que a atividade de GLP-1 se refere à capacidade de ativar o recetor de GLP-1 humano. 219. 0 derivado da forma de realização 217, em que a ativação do recetor de GLP-1 humano é medida num ensaio in vitro. 220. O derivado de qualquer uma das formas de realização 217-219, em que a ativação do recetor de GLP-1 humano é medida como a potência de produção de AMPc. 221. O derivado de qualquer uma das formas de realização 217-220, que possui uma potência correspondendo a uma EC5o a) abaixo de 10000 pM, de preferência abaixo de 5000 pM, de maior preferência abaixo de 4000 pM, ou ainda de preferência abaixo de 3000 pM; b) abaixo de 2000 pM, de preferência abaixo de 1500 pM, de maior preferência abaixo de 1200 pM, ainda de preferência abaixo de 1000 pM, ou ainda de maior preferência abaixo de 500 pM; c) abaixo de 400 pM, de preferência abaixo de 300 pM, de maior preferência abaixo de 200 pM, ainda de preferência abaixo de 150 pM, ou ainda de maior preferência abaixo de 100 pM; ou d) abaixo de 80 pM, de preferência abaixo de 60 pM, de maior preferência abaixo de 40 pM, ainda de preferência abaixo de 30 pM, ou ainda de maior preferência abaixo de 20 pM. 222. O derivado de qualquer uma das formas de realização 217-221, em que a potência é determinada como EC50 para a curva de dose-resposta mostrando formação de AMPc dependente da dose num meio contendo o recetor de GLP-1 humano. 223. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização 219-222, em que uma linha celular transfetada estável é tal como BHK467-12A (tk-tsl3). 224. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização 219-223, em que para a determinação de AMPc é realizado um ensaio funcional do recetor. 225. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização 219-224, em que o ensaio se baseia na competição entre o AMPc formado de forma endogenamente e o AMPc marcado com biotina adicionado exogenamente. 226. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização 219-225, em que o AMPc do ensaio é capturado utilizando um anticorpo especifico. 227. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização 219-226, em que o ensaio é o Ensaio de AMPc AlfaScreen. 228. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização 219-227, em que o ensaio é descrito no Exemplo 33. 229. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização 217-228, em que a ativação do recetor de GLP-1 humano é medida como a capacidade de ligação ao recetor na presença de uma baixa concentração de albumina, em que a baixa concentração de albumina é HSA a 0,005%, ou, de preferência, HSA a 0,001%. 230. O derivado de qualquer uma das formas de realização 217-229, para as quais a razão [afinidade de ligação ao recetor de GLP-1 (IC5o) na presença de HSA a 2,0% (albumina elevada), dividida pela afinidade de ligação ao recetor de GLP-1 (IC50) na presença de HSA a 0,001% (albumina baixa)] é: a) pelo menos 1,0, de preferência pelo menos 10, de maior preferência pelo menos 25, ou ainda de preferência pelo menos 50; b) pelo menos 60, de preferência pelo menos 70, de maior preferência pelo menos 80, ainda de preferência pelo menos 90, ou ainda de maior preferência pelo menos 100; c) pelo menos 125, de preferência pelo menos 150, de maior preferência pelo menos 200, ainda de preferência pelo menos 250, ainda de maior preferência pelo menos 400, ou ainda de maior preferência pelo menos 500; ou d) pelo menos 600, de preferência pelo menos 800, de maior preferência pelo menos 900, ou ainda de preferência pelo menos 1000. 231. O derivado de qualquer uma das formas de realização 217-230, para as quais a afinidade de ligação ao recetor de GLP-1 (IC50) na presença de HSA a 0,001% (albumina baixa) é a) abaixo de 1000 nM, de preferência abaixo de 750 nM, de maior preferência abaixo de 500 nM, ou ainda de preferência abaixo de 400 nM; ou b) abaixo de 300 nM, de preferência abaixo de 250 nM, de maior preferência abaixo de 200 nM, ou ainda de preferência abaixo de 100 nM; ou
c) abaixo de 50,0 nM, de preferência abaixo de 15,0 nM, de maior preferência abaixo de 10,0 nM, ainda de preferência abaixo de 5,0 nM, ou ainda de maior preferência abaixo de 1,0 nM d) abaixo de 0,80 nM, de preferência abaixo de 0,60 nM, de maior preferência abaixo de 0,40 nM, ainda de preferência abaixo de 0,30 nM, ou ainda de maior preferência abaixo de 0,20 nM. 232. O derivado das formas de realização 217-231, para o qual a afinidade de ligação ao recetor de GLP-1 (IC50) na presença de HSA a 2,0% (albumina elevada) é a) abaixo de 1000 nM, de preferência abaixo de 900 nM, ou de maior preferência abaixo de 800 nM; ou b) abaixo de 500 nM, de preferência abaixo de 400 nM, de maior preferência abaixo de 300 nM, ainda de preferência abaixo de 150 nM, ou ainda de maior preferência abaixo de 50,0 nM. 166. O derivado de qualquer uma das formas de realização 217-232, em que a afinidade de ligação ao recetor de GLP-1 é medida por meio de deslocamento de 125I-GLP-1 do recetor. 233. O derivado de qualquer uma das formas de realização 217-232, em que é utilizado um ensaio de ligação SPA. 234. O derivado de qualquer uma das formas de realização 217-233, em que o recetor de GLP-1 é preparado utilizando uma linha celular transfetada, estável. 235. O derivado de qualquer uma das formas de realização 217-234, em que é utilizada uma linha celular de hamster, de preferência uma linha celular de rim de hamster bebé, tal como BHK tk-tsl3. 236. O derivado de qualquer uma das formas de realização 229-235, em que o valor de IC50 é determinado como a concentração que desloca 50% de I-GLP-1 do recetor. 237. O derivado de qualquer uma das formas de realização 1-236, que possui uma biodisponibilidade oral, de preferência uma biodisponibilidade oral absoluta, que é mais elevada que a do semaglutido. 238. O derivado da forma de realização 237, em que a biodisponibilidade oral é medida in vivo em ratos. 239. O derivado de qualquer uma das formas de realização 237-239, em que biodisponibilidade oral é medida como a exposição no plasma após injeção direta no lúmen intestinal. 240. O derivado de qualquer uma das formas de realização 237-239, para o qual a concentração plasmática (pM) do derivado, determinada 30 minutos após injeção de uma solução do derivado no jejuno do rato, dividida pela concentração (μΜ) da solução injetada (exposição corrigida para a dose a 30 min) é a) pelo menos 39, b) pelo menos 40; c) pelo menos 60; d) pelo menos 80; e) pelo menos 100; f) pelo menos 125; ou g) pelo menos 150. 241. O derivado de qualquer uma das formas de realização 237-240, para o qual a concentração plasmática (pM) do derivado, determinada 30 minutos após injeção de uma solução do derivado no jejuno do rato, dividida pela concentração (μΜ) da solução injetada (exposição corrigida para a dose a 30 min) é a) pelo menos 160, b) pelo menos 180, c) pelo menos 200, ou d) pelo menos 250. 242. O derivado de qualquer uma das formas de realização 237-241, em que o derivado de GLP-1 é testado numa concentração de 1000 uM numa mistura com caprato de sódio a 55 mg/mL. 243. O derivado de qualquer uma das formas de realização 237-242, em que são utilizados ratos Sprague Dawley machos. 244. O derivado de qualquer uma das formas de realização 237-243, em que os ratos têm um peso corporal à chegada de aproximadamente 240 g. 245. O derivado de qualquer uma das formas de realização 237-244, em que os ratos jejuam durante aproximadamente 18 horas antes da experiência. 246. O derivado de qualquer uma das formas de realização 237-245, em que os ratos são levados para anestesia geral após terem jejuado e antes da injeção do derivado no jejuno. 247. O derivado de qualquer uma das formas de realização 237-246, em que o derivado é administrado na parte proximal do jejuno (10 cm distal do duodeno), ou no intestino médio (50 cm proximal do ceco). 248. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização 237-247, em que 100 yL do derivado são injetados no lúmen do jejuno através de um cateter com uma seringa, e subsequentemente são empurrados 200 yL de ar para o lúmen do jejuno com outra seringa, que é então deixada ligada ao cateter para impedir o refluxo para o cateter. 249. O derivado de qualquer uma das formas de realização 237-248, em que as amostras de sangue (200 uL) são colhidas em tubos de EDTA a partir da veia da cauda a intervalos desejados, tais como nos tempos 0, 10, 30, 60, 120 e 240 min, e centrifugadas 5 minutos, 10000 g, a 4 °C em 20 minutos. 250. O derivado de qualquer uma das formas de realização 237-249, em que o plasma (p. ex. 75 ul) é separado, imediatamente congelado, e mantido a -20 °C até ser analisado quanto à concentração plasmática do derivado. 251. O derivado de qualquer uma das formas de realização 237-250, em que é utilizado LOCI (Imunoensaio de Canais de Oxigénio Luminescente) para análise da concentração plasmática do derivado. 252. O derivado de qualquer uma das formas de realização 1- 251, em que o derivado é eficaz a reduzir a glicose sanguínea in vivo em ratinhos db/db. 253. O derivado de qualquer uma das formas de realização 1- 252, em que o derivado é eficaz a reduzir o peso corporal in vivo em ratinhos db/db. 254. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização 252-253, em que os ratinhos db/db são tratados, s.c., com um intervalo de doses adequado do derivado de GLP-1, e a glicose sanguínea e/ou o peso corporal é/são determinada/os a intervalos apropriados. 255. O derivado de qualquer uma das formas de realização 252-254, em que a dose do derivado de GLP-1 é de 0,3 nmol/kg, 1,0 nmol/kg, 3,0 nmol/kg, 10 nmol/kg, 30 nmol/kg, e 100 nmol/kg, em que kg refere-se ao peso corporal dos ratinhos . 256. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização 252-255, em que um grupo de controlo é tratado com veículo, s.c., de preferência o meio em que o derivado de GLP-1 é dissolvido, p. ex. com a seguinte composição: fosfato de sódio 50 mM, cloreto de sódio 145 mM, tween 80 a 0,05%, pH 7,4. 257. O derivado de qualquer uma das formas de realização 252-256, em que é determinada a glicose sanguínea, e/ou os ratinhos são pesados, no tempo -0,5 h (meia hora antes da dosagem (t=0)), e no tempo 1, 2, 4, e 8 h. 258. O derivado de qualquer uma das formas de realização 252-257, em que a concentração de glicose é medida utilizando o método de glicose-oxidase. 259. O derivado de qualquer uma das formas de realização 252-258, em que (i) ED50 (peso corporal (PC)) é calculado como a dose que dá origem a um efeito semimáximo no delta PC (p. ex., diminuição) 8 horas após a administração subcutânea do derivado; e/ou (ii) ED5o (glicose sanguínea (GS)) é calculada como a dose que dá origem ao efeito semimáximo na AUC (Área Sob a Curva) da delta GS (p. ex., diminuição) 8 horas e/ou 24 horas após a administração subcutânea do derivado. 260. O derivado de qualquer uma das formas de realização 252-259, em que existe uma relação de dose-resposta sigmoide, de preferência com uma definição clara da resposta máxima. 261. O derivado de qualquer uma das formas de realização 1-260, que tem um perfil de ação mais prolongado que liraglutido. 262. 0 derivado da forma de realização 261, em que prolongamento significa uma semivida in vivo numa espécie animal relevante. 263. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização 261-262, em que o animal é a) ratinho db/db, b) rato, c) porco, e/ou, d) miniporco. 264. 0 derivado da forma de realização 263, em que o animal é miniporco. 265. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização 261-264, em que o derivado é administrado i) s.c., e/ou, ii) i.V. 266. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização 1-265, em que o derivado é administrado i.v. 267. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização 1-2 66, em que a semivida terminal (¾) após administração i.v. em miniporcos é a) pelo menos 12 horas, de preferência pelo menos 24 horas, de maior preferência pelo menos 36 horas, ainda de preferência pelo menos 48 horas, ou ainda de maior preferência pelo menos 60 horas; b) pelo menos 7 horas, de preferência pelo menos 16 horas, de maior preferência pelo menos 24 horas, ainda de preferência pelo menos 30 horas, ou ainda de maior preferência pelo menos 40 horas; c) pelo menos 50 horas, de preferência pelo menos 60 horas, de maior preferência pelo menos 70 horas, ainda de preferência pelo menos 80 horas, ou ainda de maior preferência pelo menos 90 horas. 268. O derivado de qualquer uma das formas de realização 264-267, em que os miniporcos são miniporcos Gottingen machos. 269. O derivado de qualquer uma das formas de realização 267-268, em que os miniporcos têm 7-14 meses de idade. 270. O derivado de qualquer uma das formas de realização 267-269, em que o peso dos miniporcos é de 16-35 kg. 271. O derivado de qualquer uma das formas de realização 267-270, em que os miniporcos são alojados individualmente, e alimentados uma ou duas vezes por dia, de preferência com dieta SDS para miniporco. 272. O derivado de qualquer uma das formas de realização 267-271, em que o derivado é doseado, i.v., após pelo menos 2 semanas de aclimatização. 273. O derivado de qualquer uma das formas de realização 267-272, em que os animais são colocados a jejum durante aproximadamente 18 h antes da dosagem e durante pelo menos 4 h após a dosagem, e têm acesso ad libitum a água durante todo o período. 274. O derivado de qualquer uma das formas de realização 267-273, em que o derivado de GLP-1 é dissolvido em fosfato de sódio 50 mM, cloreto de sódio 145 mM, tween 80 a 0,05%, pH 7,4 a uma concentração adequada, de preferência de 20-60 nmol/mL. 275. O derivado de qualquer uma das formas de realização 267-275, em que injeções intravenosas do derivado são dadas num volume correspondendo a 1-2 nmol/kg. 276. O derivado de qualquer uma das formas de realização 1-275, que causa uma ingestão reduzida de alimento em porcos. 277. O derivado da forma de realização 27 6, em que a ingestão é reduzida relativamente a um controlo, que é de preferência tratado com veículo, ou não tratado. 278. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização 276-277, em que a ingestão de alimento (0-24 h) é a) 90% ou menos em relação ao controlo tratado com veículo, b) de preferência 80% ou menos, c) de maior preferência 70% ou menos, d) ainda de preferência 60% ou menos, ou e) ainda de maior preferência 50% ou menos. 279. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização 276-278, em que a ingestão de alimento (0-24 h) refere-se às primeiras 24 horas após administração do derivado ou veículo. 280. O derivado de qualquer uma das formas de realização 276-279, em que os porcos são porcos Landrace Yorkshire Duroc (LYD) fêmeas. 281. O derivado de qualquer uma das formas de realização 276-280, em que os porcos têm 3 meses de idade. 282. O derivado de qualquer uma de formas de realização 276-281, em que os porcos têm um peso de 30-35 kg. 283. O derivado de qualquer uma das formas de realização 276-282, em que os animais são alojados num grupo durante 1-2 semanas para aclimatização. 284. O derivado de qualquer uma das formas de realização 276-283, em que durante o período experimental os animais são colocados em pocilgas individuais de segunda-feira de manhã até sexta-feira à tarde para medição da ingestão individual de alimento. 285. O derivado de qualquer uma das formas de realização 276-284, em que os animais são alimentados ad libitum com forragem de porcos (tais como Svinefoder, Antonio). 286. O derivado de qualquer uma das formas de realização 276-285, em que a ingestão de alimento é monitorizada em linha registando o peso da forragem a cada 15 minutos, de preferência utilizando o sistema Mpigwin. 287. O derivado de qualquer uma das formas de realização 276-286, que é doseado a 0,3, 1,0, 3,0, 10, ou 30 nmol/kg. 288. O derivado de qualquer uma das formas de realização 276-287, que é dissolvido num tampão fosfato (fosfato 50 mM, cloreto de sódio 145 mM, tween 80 a 0,05%, pH 8), de preferência a concentrações de 12, 40, 120, 400, ou 1200 nmol/mL. 289. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização 276-288, em que o tampão fosfato serve como veiculo. 290. O derivado de qualquer uma das formas de realização 276-289, em que os animais são doseados com uma dose subcutânea única do derivado, ou veiculo (de preferência com um volume de dose de 0,025 mL/kg), na manhã do dia 1, e a ingestão de alimento é medida durante 4 dias após a dosagem. 291. O derivado de qualquer uma das formas de realização 1- 2 90, que tem uma semivida (1½) in vivo em ratos após administração i.v. de a) pelo menos 4 horas, b) pelo menos 6 horas, c) pelo menos 8 horas, ou d) pelo menos 10 horas. 292. O derivado de qualquer uma das formas de realização 1- 2 91, que tem uma semivida (1½) in vivo em ratos após administração i.v. de a) pelo menos 12 horas, b) pelo menos 15 horas, c) pelo menos 18 horas, ou d) pelo menos 20 horas. 293. O derivado de qualquer uma das formas de realização 1- 2 92, que tem uma semivida (1½) in vivo em ratos após administração i.v. de a) pelo menos 24 horas, b) pelo menos 26 horas, ou c) pelo menos 30 horas. 294. O derivado de qualquer uma das formas de realização 291-294, em que os ratos são ratos Sprague Dawley machos com um peso corporal de aproximadamente 400 g. 294. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização 238-294, para o qual é determinada a AUC da curva de exposição do plasma (i.e., concentração no plasma em pM vs tempo) do tempo 30 a 180 min (i.e., o resultado é indicado em (min χ pM/pmol) ou simplesmente em min/L) corrigida para a dose (i.e., dividida pela dose em pmol de derivado injetado). 295. O derivado da forma de realização 294, em que a AUC da curva de exposição do plasma corrigida para a dose é a) pelo menos 50, de preferência pelo menos 100, ou de maior preferência pelo menos 150 min/L; b) pelo menos 200, de preferência pelo menos 250, de maior preferência pelo menos 300, ou ainda de preferência pelo menos 320 min/L; ou c) pelo menos 1,5 vezes, de preferência pelo menos 2 vezes, de maior preferência pelo menos 3 vezes, ou ainda de preferência pelo menos 4 vezes o valor de AUC correspondente para semaglutido. 296. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização 1-295, em que a biodisponibilidade oral é medida in vivo em ratos, tal como exposto no plasma após gavagem oral. 297. O derivado da forma de realização 296, para o qual a AUC de curva de exposição do plasma (i.e., concentração no plasma em pM vs tempo) do tempo 30 até 180 min corrigida para a dose (i.e., dividida pela dose em pmol de derivado administrado) é determinada (i.e., o resultado pode ser indicado em (min χ pM/pmol) ou simplesmente em min/L). 298. O derivado da forma de realização 297, em que a AUC da curva de exposição do plasma corrigida para a dose é a) pelo menos 10, de preferência pelo menos 20, ou de maior preferência pelo menos 30 min/L; b) pelo menos 40, de preferência pelo menos 50, de maior preferência pelo menos 60, ou ainda de preferência pelo menos 70 min/L; ou c) pelo menos 1,5 vezes, de preferência pelo menos 2
vezes, de maior preferência pelo menos 3 vezes, ou ainda de preferência pelo menos 4 vezes o valor de AUC correspondente para semaglutido. 299. O derivado de qualquer uma das formas de realização 294-298, em que o derivado de GLP-1 é testado numa concentração de cerca de 1000 uM numa solução de 250 mg/mL de N- [ 8-(^-hidroxibenzoil)amino]caprilato de sódio (SNAC) . 300. O derivado de qualquer uma das formas de realização 294-299, em que são utilizados ratos Sprague Dawley machos, de preferência com um peso corporal à chegada de aproximadamente 240 g. 301. O derivado de qualquer uma das formas de realização 294-300, em que os ratos são colocados a jejum durante aproximadamente 18 horas antes da experiência. 302. O derivado de qualquer uma das formas de realização 294-301, em que os ratos estão e são levados para anestesia geral após terem sido colocados em jejum e antes da injeção do derivado no jejuno, ou da gavagem oral, respetivamente. 303. O derivado de qualquer uma das formas de realização 294-302, em que para injeção no lúmen intestinal o derivado é administrado na parte proximal do jejuno (10 cm distai do duodeno) ou no intestino médio (50 cm proximal do ceco), de preferência na parte proximal do jejuno. 304. O derivado de qualquer uma das formas de realização 294-303, em que 100 pL do derivado são injetados no lúmen do jejuno através de um cateter com uma seringa de 1 mL, e subsequentemente são empurrados 200 pL de ar para o lúmen do jejuno com outra seringa, que é então deixada ligada ao cateter para prevenir o refluxo para o cateter. 305. O derivado de qualquer uma das formas de realização 294-304, em que amostras de sangue (200 uL) são colhidas em tubos de EDTA a partir da veia caudal a intervalos desejados, tal como nos tempos 0, 10, 30, 60, 120 e 240 min, e centrifugadas 5 minutos, 10000 g, a 4 °C em 20 minutos. 306. O derivado de qualquer uma das formas de realização 294-305, em que o plasma (p. ex. 75 uL) é separado, imediatamente congelado, e mantido a 20 °C até ser analisado quanto à concentração plasmática do derivado. 307. O derivado de qualquer uma das formas de realização 294-306, em que é utilizado LOCI (Imunoensaio de Canais de Oxigénio Luminescente) para análise da concentração plasmática do derivado. 308. Um produto intermediário na forma de um análogo de GLP-1 que compreende a seguinte mudança em comparação com GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 1): (i) 38Q; e/ou (ii) 39G; ou um sal, amida, ou éster deste farmaceuticamente aceitável. 309. O análogo de GLP-1 de forma de realização 308 que compreende (38E, 39G). 310. Um produto intermediário na forma de um análogo de GLP-1 que compreende as seguintes alterações de aminoácidos, em comparação com GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 1): (i) 22E, 26R, 27K, 34R, 37K; (ii) 22E, 26R, 27K, 30E, 34R, 36K, 38E, 3 9G; (iii) 22E, 26R, 27K, 34R, 36K, des37; (iv) 22E, 25V, 26R, 27K, 34R, 37K; (v) 8Aib, 20K, 22E, 26R, 27K, 30E, 34G, des35-37; (vi) 26R, 27K, 30E, 34R, 36K, 38E; (vii) 8Aib, 22K, 25V, 26R, 27K, 31 H, 34R; (iix) 8Aib, 22K, 25V, 26R, 27K, 34R, des35-37; (ix) 8Aib, 22K, 25V, 26R, 27K, 34R, des3 6-37; (x) 26H, 27K, 30E, 34R, 36K, 38E; (xi) 22K, 25V, 26R, 27K, 30E, 34Q; (xii) 25V, 26R, 27K, 30E, 34R, 36K, 3 8Q; (xiii) 25V, 26R, 27K, 30E, 34Q, 36K, 38E; (xiv) 22K, 26R, 27K, 31 H, 34G, des35-37; (xv) 8Aib, 25V, 26R, 27K, 31 H, 34Q, 37K; (xvi) 25V, 26R, 27K, 31 H, 34Q, 37K; (xvii) 22E, 23E, 25V, 26R, 27K, 31 H, 34Q, 37K; (iixx) 8Aib, 12K, 22E, 26R, 27K, 31 H, 34Q; (ixx) 8Aib, 22K, 26R, 27K, 31 H, 34G, des35-37; (xx) 22E, 26H, 27K, 30E, 34R, 36K, 38E; (xxi) 22E, 24K, 26R, 27K, 31 H, 34G, des35-37; (xxii) 25V, 26R, 27K, 34Q, 36K; (xxiii) 22E, 24K, 25V, 26R, 27K, 31 H, 34R; (xxiv) 22E, 24K, 25V, 26R, 27K, 34G, des35-37; (xxv) 22E, 24K, 25V, 26R, 27K, 34R; (xxvi) 8Aib, 22E, 24K, 25V, 26R, 27K, 31 H, 34Q; ou (xxvii) 8Aib, 22E, 26R, 27K, 30E, 34R, 36K, 38E, 39G; ou um sal, amida, ou éster deste farmaceuticamente aceitável. 311. 0 análogo de GLP da forma de realização 310 que tem um conjunto de mudanças de aminoácidos tal como definido em qualquer uma de (i)-(xxvii). 312. Um derivado de acordo com qualquer uma das formas de realização 1-307, para utilização como medicamento. 313. Um derivado de acordo com qualquer uma das formas de realização 1-307, para utilização no tratamento e/ou na prevenção de todas as formas de diabetes e doenças relacionadas, tais como distúrbios alimentares, doenças cardiovasculares, doenças gastrointestinais, complicações diabéticas, doença critica, e/ou sindroma do ovário poliquístico; e/ou para melhoria dos parâmetros lipidicos, melhoria da função das células β, e/ou para retardamento ou prevenção da progressão de doença diabética. 314. Um método para tratamento ou prevenção de todas as formas de diabetes e doenças relacionadas, tais como distúrbios alimentares, doenças cardiovasculares, doenças gastrointestinais, complicações diabéticas, doença critica, e/ou síndroma do ovário poliquístico; e/ou para melhoria dos parâmetros lipidicos, melhoria da função das células β, e/ou para retardamento ou prevenção da progressão de doença diabética - através de administração de uma quantidade farmaceuticamente ativa de um derivado de acordo com qualquer uma das formas de realização 1-307. 0 seguinte são formas de realização particulares da invenção adicionais: 1. Um derivado de um análogo de GLP-1, análogo esse que compreende um primeiro residuo K numa posição correspondente à posição 27 de GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 1); um segundo residuo K numa posição correspondente à posição T de GLP-1 (7-37), onde T é um número inteiro no intervalo de 7-37 exceto 18 e 27; e um máximo de dez mudanças de aminoácidos em comparação com GLP-1 (7-37); em que o primeiro resíduo K é designado K27, e o segundo resíduo K é designado KT; derivado esse que compreende duas porções de ligação a albumina ligadas a K27 e KT, respetivamente, em que a porção de ligação à albumina compreende uma porção de prolongamento selecionada a partir de Quím. 1 e Quím. 2:
em que x é um número inteiro no intervalo de 6-18, e y é um número inteiro no intervalo de 3-17; com a condição de que quando a porção de prolongamento é Quím. 1, a porção de ligação à albumina compreende ainda um ligador de fórmula Quím. 5:
Quím. 5:
em que k é um número inteiro no intervalo de 1-5, e n é um número inteiro no intervalo de 1-5; ou um sal, amida, ou éster deste farmaceuticamente aceitável. 2. 0 derivado da forma de realização 1, em que o análogo de GLP-1 compreende um primeiro resíduo K numa posição correspondente à posição 27 de GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 1); um segundo resíduo K numa posição correspondente à posição T de GLP-1 (7-37), onde T é um número inteiro no intervalo de 7-37 exceto 18 e 27; e um máximo de dez mudanças de aminoácidos em comparação com GLP-l (7-37) ; em que o primeiro residuo K é designado K , e o segundo residuo K é designado KT; derivado esse que compreende duas porções de ligação a albumina ligadas a K27 e KT, respetivamente, em que a porção de ligação à albumina compreende uma porção de prolongamento de Quim. 2:
Quím. 2: H00C-C6H4-0-(CH2) y-C0-* em que y é um número inteiro no intervalo de 3-17; ou um sal, amida, ou éster deste farmaceuticamente aceitável. 3. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que a porção de ligação à albumina compreende ainda um ligador. 4. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que o ligador compreende i) um Di-radical
Glu; e/ou ii) um ligador de fórmula Quim. 5:
Quim. 5:
em que k é um número inteiro no intervalo de 1-5, e n é um número inteiro no intervalo de 1-5. 5. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que o Di-radical Glu é selecionado a partir de Quím. 6, e/ou Quim. 7:
Quím. 6:
Quím. 7:
de preferência Quim. 6. 6. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que o análogo de GLP-1 compreende um primeiro resíduo K numa posição correspondente à posição 27 de GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 1); um segundo resíduo K numa posição correspondente à posição T de GLP-1 (7-37), onde T é um número inteiro no intervalo de 7-37 exceto 18 e 27; e um máximo de dez mudanças de aminoácidos em comparação com GLP-1 (7-37); em que o primeiro resíduo K é designado K , e o segundo resíduo K é designado KT; derivado esse que compreende duas porções de ligação a albumina ligadas a K27 e KT, respetivamente, em que a porção de ligação à albumina compreende i) uma porção de prolongamento de fórmula Quím. 1:
Quím. 1: HOOC-(CH2) X-C0-* em que x é um número inteiro no intervalo de 6-18; e ii) um ligador de fórmula Quím. 5:
Quím. 5:
em que k é um número inteiro no intervalo de 1-5, e n é um número inteiro no intervalo de 1-5; ou um sal, amida, ou éster deste farmaceuticamente aceitável. 7. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que o análogo de GLP-1 compreende um primeiro resíduo K numa posição correspondente à posição 27 de GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 1); um segundo resíduo K numa posição correspondente à posição T de GLP-1 (7-37) , onde T é um número inteiro no intervalo de 7-37 exceto 18 e 27; e um máximo de dez mudanças de aminoácidos em comparação com GLP-1 (7-37); em que o primeiro resíduo K é designado K , e o segundo resíduo K é designado KT; derivado esse que compreende duas porções de prolongamento ligadas a K27 e KT, respetivamente, através de um ligador, em que a porção de prolongamento é selecionada a partir de Quím. 1 e Quím. 2:
em que x é um número inteiro no intervalo de 6-18, y é um número inteiro no intervalo de 3-17; e o ligador compreende Quím. 5:
Quím. 5:
em que k é um número inteiro no intervalo de 1-5, e n é um número inteiro no intervalo de 1-5; ou um sal, amida, ou éster deste farmaceuticamente aceitável. 8. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que T é um número inteiro selecionado a partir do intervalo de 7-37 exceto 18 e 27. 9. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que T é selecionado a partir de qualquer um dos intervalos de 7-17, 19-26, e 28-37. 10. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que T é selecionado a partir do intervalo de 7-17 . 11. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que T é 12. 12. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que T é selecionado a partir do intervalo de 19-26. 13. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que T é selecionado a partir do grupo consistindo em 20, 22, e 24. 14. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que T é 20. 15. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que T é 22 ou 24. 16. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que T é 22. 17. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que T é 24. 18. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que T é selecionado a partir do intervalo de 28-37. 19. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que T é selecionado a partir do grupo consistindo em 36 e 37. 20. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que T é 36. 21. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que T é 37. 22. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que a posição correspondente à posição 27 de GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 1) é identificado através de caligrafia e observação atenta. 23. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que a posição correspondente à posição T de GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 1) é identificada através de caligrafia e observação atenta. 24. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que a posição correspondente à posição 27 de GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 1) é identificada através da utilização de um programa de alinhamento de proteínas ou péptidos padrão. 25. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que a posição correspondente à posição T de GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 1) é identificada através da utilização de um programa de alinhamento de proteínas ou péptidos padrão. 26. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que o programa de alinhamento é um alinhamento de Needleman-Wunsch. 27. 0 derivado de qualquer uma das formas de realizaçao anteriores, em que e utilizada a matriz de pontuaçao por defeito e a matriz de identidade por defeito. 28. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que a matriz de pontuação é BLOSUM62. 29. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que a penalidade para o primeiro resíduo numa lacuna é -10 (menos dez). 30. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que as penalidades para resíduos adicionais numa lacuna é -0,5 (menos zero vírgula cinco). 31. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que o análogo não compreende quaisquer resíduos K para além do primeiro e do segundo resíduo K. 32. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que a porção de prolongamento é Quím. 1. 33. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que x é um número par. 34. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que x é 12. 35. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que Quím. 1 é representado por Quím. la:
Quím. la:
onde x é tal como definido em qualquer uma das formas de realização anteriores. 36. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que a porção de prolongamento é Quím. 2, de preferência Quím. 2a:
Quím. 2a:
em que y é tal como definido em qualquer uma das formas de realização anteriores. 37. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que y é um número par. 38. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que y é 9. 39. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que Quím. 2 é representado por Quím. 2b, ou Quím. 2c:
Quím. 2b:
Quím. 2c:
de preferência por Quím. 2b; em que y é tal como definido em qualquer uma das formas de realização anteriores. 39a. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que Quím. 2a é representado por Quím. 2b, ou Quím. 2c:
Quím. 2b:
Quím. 2c:
de preferência por Quím. 2b; em que y é tal como definido em qualquer uma das formas de realização anteriores. 40. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, que compreende Quím. 5. 41. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que Quím. 5 é um primeiro elemento ligador. 42. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que k é 1. 43. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que n é 1. 44. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que Quím. 5 é incluído m vezes, em que m é um número inteiro no intervalo de 1-10. 45. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que m é 2. 46. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que, quando m não é 1, os elementos de Quím. 5 estão interligados através de uma ou mais ligações amida. 47. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que o ligador compreende ainda um segundo elemento ligador; de preferência um di-radical Glu; de maior preferência selecionado a partir de Quim. 6, e/ou Quím. 7:
Quim. 6:
Quim. 7:
ainda de preferência Quim. 6. 48. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que o di-radical Glu é incluído p vezes, em que p é um número inteiro no intervalo de 1-2. 49. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que p é 1. 50. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que p é 2. 51. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que o di-radical Glu é um radical de L-Glu. 52. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que o um ou mais di-radicais Glu e o um ou mais elementos de Quím. 5 estão interligados através de uma ou mais ligações amida. 53. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que o ligador consiste em m vezes Quím. 5 e p vezes o di-radical Glu. 54. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que (m,p) é (2,2) ou (2,1), de preferência (2,1) . 55. 0 derivado das formas de realização anteriores, em que os m elementos de Quim. 5 e os p di-radicais Glu estão interligados através de ligações amida. 56. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que o ligador e a porção de prolongamento estão interligados através de uma ligação amida. 57. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que o ligador e o análogo de GLP-1 estão interligados através de uma ligação amida. 58. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que o ligador é ligado ao grupo épsilon- amino do primeiro ou do segundo resíduo K. 59. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que o ligador tem de 5 a 41 átomos C; de preferência 17 ou 22 átomos C. 60. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que o ligador tem 17 átomos C. 61. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que o ligador tem 22 átomos C. 62. O derivado das formas de realização anteriores, em que o ligador tem de 4 a 28 heteroátomos; de preferência 12 ou 16 heteroátomos. 63. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que o ligador tem 12 heteroátomos. 64. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que o ligador tem 16 heteroátomos. 65. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que os heteroátomos são átomos N e/ou O. 66. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que o liqador tem de 1 a V átomos de preferência 3 ou 4 átomos N. 67. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que o liqador tem 3 átomos N. 68. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que o ligador tem 4 átomos N. 69. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que o ligador tem de 3 a 21 átomos 0; de preferência 9 ou 12 átomos 0. 70. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que o ligador tem 9 átomos 0. 71. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que o ligador tem 12 átomos 0. 72. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que o ligador consiste em duas vezes Quim. 6 e duas vezes Quim. 5, interligados através de ligações amida e na sequência indicada, estando o ligador ligado na sua extremidade *-NH à extremidade *-C0 da porção de prolongamento, e na sua extremidade *-C0 ao grupo épsilon-amino de K27 ou KT do análogo de GLP-1. 73. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que o ligador consiste em duas vezes Quim. 5 e uma vez Quim. 6, interligados através de ligações amida e na sequência indicada, estando o ligador ligado na sua extremidade *-NH à extremidade *-C0 da porção de prolongamento, e na sua extremidade *-C0 livre ao grupo épsilon-amino de K27 ou KT do análogo de GLP-1. 74. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que o ligador consiste em uma vez Quim. 6 e duas vezes Quim. 5, interligados através de ligações amida e na sequência indicada, estando o ligador ligado na sua extremidade *-NH à extremidade *-C0 da porção de prolongamento, e na sua extremidade *-C0 ao grupo épsilon-amino de K27 ou KT do análogo de GLP-1. 75. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que o ligador consiste em uma vez Quim. 6, duas vezes Quim. 5, e uma vez Quim. 6, interligados através de ligações amida e na sequência indicada, estando o ligador ligado na sua extremidade *-NH à extremidade *-C0 da porção de prolongamento, e na sua extremidade *-C0 ao grupo épsilon-amino de K27 ou KT do análogo de GLP-1. 76. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que as duas porções de prolongamento são substancialmente idênticas; tais como pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, ou pelo menos 99% idênticas. 77. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que as duas porções de prolongamento têm uma semelhança de pelo menos 0,5; de preferência pelo menos 0,6; de maior preferência pelo menos 0,7, ou pelo menos 0,8; ainda de preferência pelo menos 0,9; ou ainda de maior preferência pelo menos 0,99, tal como uma semelhança de 1,0. 78. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que os dois ligadores têm uma semelhança de pelo menos 0,5; de preferência pelo menos 0,6; de maior preferência pelo menos 0,7, ou pelo menos 0,8; ainda de preferência pelo menos 0,9; ou ainda de maior preferência pelo menos 0,99, tal como uma semelhança de 1,0. 79. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que os dois ligadores de albumina, tais como as duas cadeias laterais consistindo na porção de prolongamento e ligador, são substancialmente idênticos; tal como pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, ou pelo menos 99% idênticos. 80. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que os dois ligadores de albumina, tais como as duas cadeias laterais consistindo na porção de prolongamento e ligador, têm uma semelhança de pelo menos 0,5; de preferência pelo menos 0,6; de maior preferência pelo menos 0,7, ou pelo menos 0,8; ainda de preferência pelo menos 0,9; ou ainda de maior preferência pelo menos 0,99, tal como uma semelhança de 1,0. 81. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que as duas estruturas químicas a comparar são representadas como impressões digitais, tais como a) impressões digitais ECFP_6; b) impressões digitais UNITY; e/ou c) impressões digitais MDL; e em que para cada uma de a) , b) e c) é de preferência usado o coeficiente de Tanimoto para o cálculo da semelhança, ou identidade, das duas impressões digitais. 82. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que o número de mudanças de aminoácidos em comparação com GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 1) é identificado através de caligrafia e observação atenta. 83. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que o número de mudanças de aminoácidos em comparação com GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 1) é identificado através da utilização de um programa de alinhamento de proteínas ou péptidos padrão. 84. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que o programa de alinhamento é um alinhamento de Needleman-Wunsch. 85. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que é utilizada a matriz de pontuação por defeito e a matriz de identidade por defeito. 86. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que a matriz de pontuação é BLOSUM62. 87. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que a penalidade para o primeiro resíduo numa lacuna é -10 (menos dez). 88. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que as penalidades para resíduos adicionais numa lacuna é -0,5 (menos zero vírgula cinco). 89. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que a ou as mudanças de aminoácidos está ou estão numa ou mais posições correspondendo às seguintes posições em GLP-l(7-37) (SEQ ID NO: 1): 8, 12, 20, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 30, 31, 34, 35, 36, 37, 38, e 39. 90. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que o análogo compreende pelo menos uma das seguintes mudanças: Aib ,Κ,Κ,Ε ou K , E , K , V , R26 ou Η26, K27, E30 H31, G34 ou R34 ou Q34, Des35, K36 ou Des36, K37 ou Des37, E38 ou Q38, e/ou G39. 91. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que o segundo resíduo K é K12, e em que o análogo, para além da mudança K27, compreende ainda i) uma mudança selecionada a partir de G34 e Q34, e ii) uma mudança selecionada a partir de R26 e H26. 92. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que o segundo resíduo K é K20, e em que o análogo, para além da mudança K27, compreende ainda i) uma mudança selecionada a partir de G34 e Q34, e ii) uma mudança selecionada a partir de R26 e H26. 93. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que o segundo resíduo K é K22, e em que o análogo, para além da mudança K27, compreende ainda i) uma mudança selecionada a partir de G34 e Q34, e ii) uma mudança selecionada a partir de R26 e H26. 94. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que o segundo resíduo K é K24, e em que o análogo, para além da mudança K27, compreende ainda i) uma mudança selecionada a partir de G34 e Q34, e ii) uma mudança selecionada a partir de R26 e H26. 95. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que o segundo resíduo K é K36, e em que o análogo, para além da mudança K27, compreende ainda i) uma mudança selecionada a partir de G34 e Q34, e ii) uma mudança selecionada a partir de R26 e H26. 96. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que o segundo resíduo K é K37, e em que o análogo, para além da mudança K27, compreende ainda i) uma mudança selecionada a partir de G34 e Q34, e ii) uma mudança selecionada a partir de R26 e H26. 97. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que o análogo compreende pelo menos uma das seguintes mudanças: Aib ,Ε,Ε,ν,Ε,Η, Des , Des , Des37, E38 ou Q38, e/ou G39. 98. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que o análogo compreende Aib8. 99. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que o análogo compreende E22. 100. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que o análogo compreende E23. 101. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que o análogo compreende V25. 102. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que o análogo compreende E30. 103. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que o análogo compreende H31. 104. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que o análogo compreende Des35. 105. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que o análogo compreende Des36. 106. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que o análogo compreende Des37. 107. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que o análogo compreende E38 ou Q38, de preferência Q38, ou de maior preferência E38. 108. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que o análogo compreende G39. 109. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que o análogo compreende Des35, Des36, e Des37. 110. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que o análogo compreende Des36 e Des37. 111. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, que é um derivado de GLP-1 (7-34) (aminoácidos 1-28 de SEQ ID NO: 1). 112. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, que é um derivado de GLP-1(7-35) (aminoácidos 1-29 de SEQ ID NO: 1). 113. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, que é um derivado de GLP-1(7-36) (aminoácidos 1-30 de SEQ ID NO: 1). 114. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, que é um derivado de GLP-1(7-37) (aminoácidos 1-31 de SEQ ID NO: 1). 115. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, que é um derivado de GLP-1(7-38) (aminoácidos 1-31 de SEQ ID NO: 1, mais um resíduo de aminoácido adicionado no terminal C). 116. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, que é um derivado de GLP-1(7-39) (aminoácidos 1-31 de SEQ ID NO: 1, mais dois resíduos de aminoácidos adicionados no terminal C). 117. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que o análogo tem no máximo dez mudanças de aminoácidos. 118. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que o análogo tem no máximo nove mudanças de aminoácidos. 119. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que o análogo tem no máximo oito mudanças de aminoácidos. 120. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que o análogo tem no máximo sete mudanças de aminoácidos. 121. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que o análogo tem no máximo seis mudanças de aminoácidos. 122. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que o análogo tem no máximo cinco mudanças de aminoácidos. 123. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que o análogo tem no máximo quatro mudanças de aminoácidos. 124. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que o análogo tem no máximo três mudanças de aminoácidos. 125. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que o análogo tem no máximo duas mudanças de aminoácidos. 126. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que o análogo tem no máximo uma mudança de aminoácidos. 127. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que o análogo tem no mínimo uma mudança de aminoácidos. 128. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que o analoqo tem no mínimo duas mudanças de aminoácidos. 129. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que o análogo tem no mínimo três mudanças de aminoácidos. 130. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que o análogo tem no mínimo quatro mudanças de aminoácidos. 131. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que o análogo tem no mínimo cinco mudanças de aminoácidos. 132. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que o análogo tem no mínimo seis mudanças de aminoácidos. 133. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que o análogo tem no mínimo sete mudanças de aminoácidos. 134. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que o análogo tem no mínimo oito mudanças de aminoácidos. 135. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que o análogo tem no mínimo nove mudanças de aminoácidos. 136. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que o análogo tem no mínimo dez mudanças de aminoácidos. 137. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que o análogo tem uma mudança de aminoácido. 138. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que o análogo tem duas mudanças de aminoácidos. 139. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que o análogo tem três mudanças de aminoácidos. 140. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que o análogo tem quatro mudanças de aminoácidos. 141. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que o análogo tem cinco mudanças de aminoácidos. 142. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que o análogo tem seis mudanças de aminoácidos. 143. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que o análogo tem sete mudanças de aminoácidos. 144. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que o análogo tem oito mudanças de aminoácidos. 145. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que o análogo tem nove mudanças de aminoácidos. 146. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que o análogo tem dez mudanças de aminoácidos. 147. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que a ou as mudanças são, independentemente, substituições, adições, e/ou deleções. 148. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que o análogo a) compreende um análogo de GLP-1 de Fórmula I; e/ou b) é um análogo de GLP-1 de Fórmula I:
Formula I: Xaa7-Xaa8-Glu-Gly-Thr-Xaai2-Thr-Ser-Asp-Xaai6-Ser-Xaai8-Xaai9-Xaa2o-Glu-Xaa22-Xaa23-Xaa24-Xaa25-Xaa26-Lys-Phe-lle-Xaa30-Xaa3i-Leu-Val-Xaa34-Xaa35-Xaa36-Xaa37-Xaa38-Xaa39, em que
Xaa7 é L-histidina, imidazopropionilo, a-hidroxi-histidina, D-histidina, desamino-histidina, 2-amino-histidina, β-hidroxi-histidina, homo-histidina, Na-acetil-histidina, Na-formil-histidina, α-fluorometil-histidina, a-metil-histidina, 3-piridilalanina, 2-piridilalanina, ou 4-piridilalanina;
Xaas é Ala, Gly, Val, Leu, lie, Thr, Ser, Lys, Aib, ácido (1-aminociclopropil)carboxílico, ácido (1- aminociclobutil)carboxílico, ácido (1- aminociclopentil)carboxílico, ácido (1-aminociclo- hexil)carboxílico, ácido (1-aminociclo-heptil)carboxílico, ou ácido (1-aminociclooctil)carboxílico;
Xaai2 é Lys ou Phe;
Xaai6 é Val ou Leu;
Xaais é Ser, Arg, Asn, Gin, ou Glu;
Xaai9 é Tyr ou Gin;
Xaa2o é Leu, Lys, ou Met;
Xaa22 é Gly, Glu, Lys, ou Aib;
Xaa23 é Gin, Glu, ou Arg;
Xaa24 é Ala ou Lys;
Xaa25 é Ala ou Val;
Xaa26 é Val, His, ou Arg;
Xaâ3o é Ala, Glu, ou Arg;
Xaa3i é Trp ou His;
Xaa34 é Glu, Asn, Gly, Gin, ou Arg;
Xaa35 é Gly, Aib, ou está ausente;
Xaa36 é Arg, Gly, Lys, ou está ausente;
Xaa37 é Gly, Ala, Glu, Pro, Lys, Arg, ou está ausente;
Xaa38 é Ser, Gly, Ala, Glu, Gin, Pro, Arg, ou está ausente; e
Xaa39 é Gly ou está ausente. 149. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores em que o péptido de Fórmula I é um análogo de GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 1). 150. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que, se Xaa38 estiver ausente, então Xaa39 também está ausente. 151. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que, se Xaa37 estiver ausente, então Xaa38 e Xaa39 também estão ausentes. 152. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que, se Xaa36 estiver ausente, então Xaa37, Xaa38, e Xaa39 também estão ausentes. 153. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que, se Xaa35 estiver ausente, então Xaa36, Xaa37, Xaa38, e Xaa3g também estão ausentes. 154. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que Xaa7 é His; Xaas é Ala ou Aib; Xaai2 é Lys ou Phe; Xaaie é Vai; Xaais é Ser; Xaai9 é Tyr; Xaa2o é
Leu ou Lys; Xaa22 é Glu, Gly ou Lys; Xaa23 é Gin ou Glu;
Xaa24 é Ala ou Lys; Xaa25 é Ala ou Vai; Xaa26 é His ou Arg;
Xaa3o é Ala ou Glu; Xaa3i é Trp ou His; Xaa34 é Gly, Gin, ou
Arg; Xaa35 é Gly ou está ausente; Xaa36 é Arg, Lys, ou está ausente; Xaa37 é Gly, Lys, ou está ausente; Xaa38 é Glu ou Gin; e Xaa39 é Gly ou está ausente. 154a. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que Xaa7 é His. 154b. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que Xaas é Ala. 154bl. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que Xaas é Aib. 154c. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que Xaai2 é Lys. 154d. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que Xaai2 é Phe. 154e. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que Xaai6 é Vai. 154f. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que Xaais é Ser. 154g. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que Xaai9 é Tyr. 154h. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que Xaa2o é Leu. 154i. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que Xaa2o é Lys. 154j. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que Xaa22 é Glu. 154k. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que Xaa22 é Gly. 1541. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que Xaa22 é Lys. 154m. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que Xaa23 é Gin. 154n. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que Xaa23 é Glu. 154o. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que Xaa24 é Ala. 154p. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que Xaa24 é Lys. 154q. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que Xaa25 é Ala. 154r. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que Xaa25 é Vai. 154s. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que Xaa26 é His. 154t. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que Xaa26 é Arg. 154u. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que Xaa3o é Ala. 154v. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que Xaa3o é Glu. 154x. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que Xaa3i é Trp. 154y. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que Xaa3i é His. 154z. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que Xaa34 é Gly. 154aa. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que Xaa34 é Gin. 154ab. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que Xaa34 é Arg. 154ac. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que Xaa35 é Gly. 154ad. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que Xaa35 está ausente. 154ae. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que Xaa36 é Arg. 154af. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que Xaa36 é Lys. 154ag. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que Xaa36 está ausente. 154ah. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que Xaa37 é Gly. 154ai. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que Xaa37 é Lys. 154aj. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que Xaa37 está ausente. 154ak. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que Xaa38 é Glu. 154al. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que Xaa38 é Gin. 154am. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que Xaa38 está ausente. 154an. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que Xaa39 é Gly. 154ao. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que Xaa39 está ausente. 155. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que o análogo compreende, de preferência, as seguintes alterações de aminoácidos, em comparação com GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 1): (i) 22E, 26R, 27K, 34R, 37K; (ii) 22E, 26R, 27K, 30E, 34R, 36K, 38E, 39G; (iii) 22E, 26R, 27K, 34R, 36K, des37; (iv) 22E, 25V, 26R, 27K, 34R, 37K; (v) 8Aib, 20K, 22E, 26R, 27K, 30E, 34G, des35-37; (vi) 26R, 27K, 30E, 34R, 36K, 38E; (vii) 8Aib, 22K, 25V, 26R, 27K, 31 H, 34R; (iix) 8Aib, 22K, 25V, 26R, 27K, 34R, des35-37; (ix) 8Aib, 22K, 25V, 26R, 27K, 34R, des36-37; (x) 26H, 27K, 30E, 34R, 36K, 38E; (xi) 22K, 25V, 26R, 27K, 30E, 34Q; (xii) 25V, 26R, 27K, 30E, 34R, 36K, 38Q; (xiii) 25V, 26R, 27K, 30E, 34Q, 36K, 38E; (xiv) 22K, 26R, 27K, 31 H, 34G, des35- 37; (xv) 8Aib, 25V, 26R, 27K, 31 H, 34Q, 37K; (xvi) 25V, 26R, 27K, 31 H, 34Q, 37K; (xvii) 22E, 23E, 25V, 26R, 27K, 31 H, 34Q, 37K; (iixx) 8Aib, 12K, 22E, 26R, 27K, 31 H, 34Q; (ixx) 8Aib, 22K, 26R, 27K, 31 H, 34G, des35-37; (xx) 22E, 26H, 27K, 30E, 34R, 36K, 38E; (xxi) 22E, 24K, 26R, 27K, 31 H, 34G, de s 3 5 - 3 7; (xxii) 25V, 26R, 27K, 34Q, 36K; (xxiii) 22E, 24K, 25V, 26R, 27K, 31 H, 34R; (xxiv) 22E, 24K, 25V, 2 6R, 27K, 34G, des35-37; (xxv) 22E, 24K, 25V, 26R, 27K, 34R; ou (xxvi) 8Aib, 22E, 24K, 25V, 26R, 27K, 31 H, 34Q. 156. Um composto, de preferência de acordo com qualquer uma das formas de realização anteriores, selecionado a partir dos seguintes: Quim. 50, Quim. 51, Quim. 52, Quim. 53, Quim. 54, Quim. 55, Quim. 56, Quim. 57, Quim. 58, Quim. 59,
Quim. 60, Quim. 61, Quim. 62, Quim. 63, Quim. 64, Quim. 65,
Quim. 66, Quim. 67, Quim. 68, Quim. 69, Quim. 70, Quim. 71,
Quim. 72, Quim. 73, Quim. 74, Quim. 75, Quim. 76, Quim. 77,
Quim. 78, e Quim. 79; ou um sal, amida, ou éster deste farmaceuticamente aceitável. 157. Um composto, de preferência de acordo com qualquer uma das formas de realização anteriores, caracterizado pelo seu nome, e selecionado a partir de uma listagem de cada um dos nomes dos compostos dos Exemplos 1-30 aqui, ou um sal, amida, ou éster deste farmaceuticamente aceitável. 158. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, que possui atividade de GLP-1. 159. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que a atividade de GLP-1 refere-se à capacidade de ativar o recetor de GLP-1 humano. 160. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que a ativação do recetor de GLP-1 humano é medida num ensaio in vitro, como a potência de produção de AMPc. 161. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, que tem uma potência correspondendo a uma EC5o a) abaixo de 10000 pM, de preferência ainda abaixo de 5000 pM, de maior preferência abaixo de 4000 pM, ou ainda de preferência abaixo de 3000 pM; b) abaixo de 2000 pM, de preferência abaixo de 1500 pM, de maior preferência abaixo de 1200 pM, ainda de preferência abaixo de 1000 pM, ou ainda de maior preferência abaixo de 500 pM; c) abaixo de 400 pM, de preferência abaixo de 300 pM, de maior preferência abaixo de 200 pM, ainda de preferência abaixo de 150 pM, ou ainda de maior preferência abaixo de 100 pM; ou d) abaixo de 80 pM, de preferência abaixo de 60 pM, de maior preferência abaixo de 40 pM, ainda de preferência abaixo de 30 pM, ou ainda de maior preferência abaixo de 20 pM. 162. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que a potência é determinada como EC50 para a curva de dose-resposta mostrando formação de AMPc dependente da dose num meio contendo o recetor de GLP-1 humano, de preferência utilizando uma linha celular transfetada estável tal como BHK467-12A (tk-tsl3), e/ou utilizando para a determinação de AMPc um ensaio funcional do recetor, p. ex. com base na competição entre o AMPc formado endogenamente e o AMPc marcado com biotina adicionado exogenamente, em que o AMPc do ensaio é de maior preferência capturado utilizando um anticorpo especifico, e/ou em que um ensaio ainda mais preferido é o Ensaio de AMPc AlfaScreen, ainda de maior preferência o descrito no Exemplo 31. 163. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, para o qual a razão [afinidade de ligação ao recetor de GLP-1 (IC50) na presença de HSA a 2,0% (albumina elevada), dividida pela afinidade de ligação ao recetor de GLP-1 (IC5o) na presença de HSA a 0,005% (albumina baixa)] é de: a) pelo menos 1,0, de preferência pelo menos 10, de maior preferência pelo menos 25, ou ainda de preferência pelo menos 50; b) pelo menos 60, de preferência pelo menos 70, de maior preferência pelo menos 80, ainda de preferência pelo menos 90, ou ainda de maior preferência pelo menos 100; c) pelo menos 125, de preferência pelo menos 150, de maior preferência pelo menos 200, ainda de preferência pelo menos 250, ainda de maior preferência pelo menos 400, ou ainda de maior preferência pelo menos 500; ou d) pelo menos 600, de preferência pelo menos 800, de maior preferência pelo menos 900, ou ainda de preferência pelo menos 1000. 164. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, para o qual a afinidade de ligação ao recetor de GLP-1 (IC50) na presença de HSA a 0,005% (albumina baixa) é a) abaixo de 1000 nM, de preferência abaixo de 750 nM, de maior preferência abaixo de 500 nM, ou ainda de preferência abaixo de 100 nM; ou b) abaixo de 50,0 nM, de preferência abaixo de 15,0 nM, de maior preferência abaixo de 10,0 nM, ainda de preferência abaixo de 5,0 nM, ou ainda de maior preferência abaixo de 1,0 nM. 165. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, para o qual a afinidade de ligação ao recetor de GLP-1 (IC50) na presença de HSA a 2,0% (albumina elevada) é a) abaixo de 1100 nM, de preferência abaixo de 1000 nM, de maior preferência abaixo de 900 nM, ou ainda de preferência abaixo de 600 nM; ou b) abaixo de 500 nM, de preferência abaixo de 350 nM, de maior preferência abaixo de 200 nM, ainda de preferência abaixo de 100 nM, ou ainda de maior preferência abaixo de 50,0 nM. 166. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que a afinidade de ligação ao recetor de GLP-1 é medida através do deslocamento de 125I-GLP-1 do recetor, de preferência utilizando um ensaio de ligação SPA. 167. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que o recetor de GLP-1 é preparado utilizando uma linha celular transfetada estável, de preferência uma linha celular de hamster, de maior preferência uma linha celular de rim de hamster bebé, tal como BHK tk-tsl3. 168. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que o valor de IC5o é determinado como a concentração que desloca 50% de 125I-GLP-1 do recetor. 169. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, que tem uma biodisponibilidade oral, de preferência uma biodisponibilidade oral absoluta, que é mais elevada que a de semaglutido. 170. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que a biodisponibilidade oral é medida in vivo em ratos, tal como exposto no plasma após injeção direta no lúmen intestinal. 171. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, para o qual a concentração plasmática (pM) do derivado, determinada 30 minutos após a injeção de uma solução do derivado no jejuno de rato, dividida pela concentração (μΜ) da solução injetada (exposição corrigida para a dose a 30 min) é pelo menos 39, ou pelo menos 40; de preferência pelo menos 60; de maior preferência pelo menos 80; ainda de preferência pelo menos 100; ainda de maior preferência pelo menos 125; ou ainda de maior preferência pelo menos 150. 172. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, para o qual a concentração plasmática (pM) do derivado, determinada 30 minutos após injeção de uma solução do derivado no jejuno de rato, dividida pela concentração (μΜ) da solução injetada (exposição corrigida para a dose a 30 min) é pelo menos 160, de preferência pelo menos 180, de maior preferência pelo menos 200, ou ainda de preferência pelo menos 250. 173. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que o derivado de GLP-1 é testado numa concentração de 1000 uM numa mistura com caprato de sódio a 55 mg/mL. 174. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que são utilizados ratos Sprague Dawley machos, de preferência com um peso corporal à chegada de aproximadamente 240 g. 175. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que os ratos são colocados em jejum durante aproximadamente 18 horas antes da experiência. 176. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que os ratos são levados para anestesia geral após terem sido colocados em jejum e antes da injeção do derivado no jejuno. 177. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que o derivado é administrado na parte proximal do jejuno (10 cm distal do duodeno), ou no intestino médio (50 cm proximal do ceco). 178. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que 100 pL do derivado são injetados no lúmen do jejuno através de um cateter com uma seringa, e subsequentemente são empurrados 200 pL de ar para o lúmen do jejuno com outra seringa, que é então deixada ligada ao cateter para prevenir o refluxo para o cateter. 179. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que são colhidas amostras de sangue (200 uL) para tubos de EDTA a partir da veia caudal a intervalos desejados, tal como nos tempos 0, 10, 30, 60, 120 e 240 min, e centrifuga-se 5 minutos, 10000 g, a 4 °C dentro de 20 minutos. 180. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que o plasma (p. ex. 75 ul) é separado, imediatamente congelado, e mantido a 20 °C até ser analisado quanto à concentração plasmática do derivado. 181. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que é utilizado LOCI (Imunoensaio de Canais de Oxigénio Luminescente) para análise da concentração plasmática do derivado. 182. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que o derivado é eficaz a diminuir a glicose sanguínea in vivo em ratinhos db/db. 183. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que o derivado é eficaz a diminuir o peso corporal in vivo em ratinhos db/db. 184. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que os ratinhos db/db são tratados, s.c., com um intervalo adequado de doses do derivado de GLP-1, e a glicose sanguínea e/ou o peso corporal é/são determinados a intervalos apropriados. 185. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que a dose do derivado de GLP-1 é 0,3 nmol/kg, 1,0 nmol/kg, 3,0 nmol/kg, 10 nmol/kg, 30 nmol/kg, e 100 nmol/kg, em que kg refere-se ao peso corporal do ratinho. 186. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que um grupo de controlo é tratado com veículo, s.c., de preferência o meio em que o derivado de GLP-1 é dissolvido, p. ex. com a seguinte composição: fosfato de sódio 50 mM, cloreto de sódio 145 mM, tween 80 a 0,05%, pH 7,4. 187. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que a glicose sanguínea é determinada, e/ou os ratinhos são pesados, no tempo -^h (meia hora antes da administração da dose (t=0)), e por vezes 1, 2, 4, e 8 h. 188. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que a concentração de glicose é medida utilizando o método de glicose-oxidase. 189. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que (i) a ED50 (peso corporal (PC) ) é calculada como a dose que dá origem a um efeito semimáximo no delta (p. ex., diminuição) PC 8 horas após a administração subcutânea do derivado; e/ou (ii) a ED50 (glicose sanguínea (GS)) é calculada como a dose que dá origem ao efeito semimáximo na AUC (Área Sob a Curva) de delta (p. ex., diminuição) GS 8 horas e/ou 24 horas após a administração subcutânea do derivado. 190. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que existe uma relação dose-resposta sigmoide, de preferência com uma definição clara da resposta máxima. 191. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, que tem um perfil de ação mais prolongado que liraglutido. 192. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que o prolongamento significa a semivida in vivo numa espécie animal relevante, tal como ratinhos db/db, rato, porco, e/ou, de preferência, miniporco; em que o derivado é administrado i) s.c., e/ou, ii) i.v.; de preferência ii) i.v. 193. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que a semivida terminal (1½) apos administração i.v. em miniporcos é a) pelo menos 12 horas, de preferência pelo menos 24 horas, de maior preferência pelo menos 36 horas, ainda de preferência pelo menos 48 horas, ou ainda de maior preferência pelo menos 60 horas; b) pelo menos 7 horas, de preferência pelo menos 16 horas, de maior preferência pelo menos 24 horas, ainda de preferência pelo menos 30 horas, ou ainda de maior preferência pelo menos 40 horas; c) pelo menos 50 horas, de preferência pelo menos 60 horas, de maior preferência pelo menos 70 horas, ainda de preferência pelo menos 80 horas, ou ainda de maior preferência pelo menos 90 horas. 194. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que os miniporcos são miniporcos Gottingen machos. 195. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que os miniporcos têm 7-14 meses de idade, e de preferência pesam 16-35 kg. 196. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que os miniporcos são alojados individualmente, e alimentados uma ou duas vezes por dia, de preferência com dieta SDS de miniporco. 197. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que o derivado é doseado, i.v., após pelo menos 2 semanas de aclimatização. 198. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que os animais são colocados em jejum durante aproximadamente 18 h antes da dosagem e durante pelo menos 4 h após a dosagem, e têm acesso ad libitum a água durante todo o período. 199. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que o derivado de GLP-1 é dissolvido em fosfato de sódio 50 mM, cloreto de sódio 145 mM, tween 80 a 0,05%, pH 7,4 até uma concentração adequada, de preferência 20-60 nmol/mL. 200. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que as injeções intravenosas do derivado são dadas num volume correspondendo a 1-2 nmol/kg. 201. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, que aumenta a secreção de insulina estimulada por glicose em miniporcos. 202. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que os miniporcos são miniporcos Gottingen machos. 203. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que os miniporcos têm 7-14 meses de idade. 204. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que os miniporcos são alojados em pocilgas individuais, e alimentados uma ou duas vezes por dia, de preferência com forragem de miniporcos SDS. 205. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que uma dose única, opcionalmente após um período com escalamento da dose, é dada i.v., ou s.c., na fina pele por trás da orelha. 206. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que os animais são colocados em jejum durante aproximadamente 18 h antes da dosagem. 207. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que é testado um grupo do limiar e vários grupos de dose de derivado correspondendo a 2-6 diferentes níveis de concentração plasmática, em que o grupo de limiar é a) tratado com veículo, ou b) não tratado. 208. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que o nivel de concentração plasmática é de 3000-80000 pM. 209. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que é realizado um teste de tolerância à glicose intravenosa (IVGTT) de 1 ou 2 horas. 210. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que é dada i.v. glicose a 0,3 g/kg durante um período de 30 segundos, e tomadas amostras de sangue em pontos de tempo adequados, tais como os seguintes pontos de tempo (t=0 corresponde ao bolo de glicose) : -10, -5, 0, 2, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120 minutos. 211. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que é determinada a concentração no plasma do derivado, glicose, e insulina. 212. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que a concentração de derivado é medida em t=0 min, e, opcionalmente, no final do teste (t=60 min, ou t=120 min). 213. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que a glicose é analisada utilizando o método de glicose-oxidase. 214. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que a área sob a curva de insulina (AUCinsulina) é calculada e usada como medida de secreção de insulina. 215. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que para pelo menos uma concentração deste, a AUCinsulina é mais elevada que a AUCinsulina do limiar, de preferência pelo menos 110% desta, de maior preferência pelo menos 120% desta, ainda de preferência pelo menos 130% desta ou ainda de maior preferência pelo menos 140% desta. 216. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, que causa uma reduzida ingestão de alimento em porcos relativamente a um controlo (de preferência tratado com veiculo, ou não tratado); opcionalmente a ingestão de alimento (0-24 h) pode ser 90% ou menos em relação ao controlo tratado com veiculo, de preferência 80% ou menos, de maior preferência 70% ou menos, ainda de preferência 60% ou menos, ou ainda de maior preferência 50% ou menos; em que a ingestão de alimento (0-24 h) refere-se às primeiras 24 horas após administração do derivado ou veículo. 217. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que os porcos são porcos Landrace Yorkshire Duroc (LYD) fêmeas. 218. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que os porcos têm 3 meses de idade, e de preferência têm um peso de 30-35 kg. 219. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que os animais são alojados num grupo durante 1-2 semanas para aclimatização. 220. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que durante o período experimental os animais são colocados em pocilgas individuais de segunda-feira de manhã até sexta-feira à tarde para medição da ingestão individual de alimento. 221. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que os animais são alimentados ad libitum com forragem de porcos (tal como Svinefoder, Antonio). 222. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que a ingestão de alimento é monitorizada em linha registando o peso da forragem a cada 15 minutos, de preferência utilizando o sistema Mpigwin. 223. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, que é administrado em doses de 0,3, 1,0, 3,0, 10, ou 30 nmol/kg, de preferência dissolvido num tampão fosfato (fosfato 50 mM, cloreto de sódio 145 mM, tween 80 a 0,05%, pH 8), de maior preferência a concentrações de 12, 40, 120, 400, ou 1200 nmol/mL. 224. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que o tampão fosfato funciona como veiculo. 225. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que é administrada aos animais uma única dose subcutânea do derivado, ou veiculo (de preferência com um volume de dose de 0, 025 mL/kg) , na manhã do dia 1, e a ingestão de alimento é medida durante 4 dias após a dosagem. 226. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, que tem uma semivida (T^) in vivo em ratos após administração i.v. de pelo menos 4 horas, de preferência pelo menos 6 horas, de maior preferência pelo menos 8 horas, ou ainda de preferência pelo menos 10 horas. 227. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, que tem uma semivida (¾) in vivo em ratos após administração i.v. de pelo menos 12 horas, de preferência pelo menos 15 horas, de maior preferência pelo menos 18 horas, ou ainda de preferência pelo menos 20 horas. 228. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, que tem uma semivida (¾) in vivo em ratos após administração i.v. de pelo menos 24 horas, de preferência pelo menos 26 horas, ou de maior preferência pelo menos 30 horas. 229. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que os ratos são ratos Sprague Dawley machos com um peso corporal de aproximadamente 400 g. 230. Um produto intermediário na forma de um análogo de GLP-1 que compreende a seguinte mudança em comparação com GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 1): (i) 38Q; e/ou (ii) 39G; ou um sal, amida, ou éster deste farmaceuticamente aceitável. 231. O análogo de GLP-1 da forma de realização 230 que compreende (38E, 39G). 232. Um produto intermediário na forma de um análogo de GLP-1 que compreende, de preferência, as seguintes alterações de aminoácidos, em comparação com GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 1): (i) 22E, 26R, 27K, 34R, 37K; (ii) 22E, 26R, 27K, 30E, 34R, 36K, 38E, 39G; (iii) 22E, 26R, 27K, 34R, 36K, des37; (iv) 22E, 25V, 26R, 27K, 34R, 37K; (v) 8Aib, 20K, 22E, 26R, 27K, 30E, 34G, des35-37; (vi) 26R, 27K, 30E, 34R, 36K, 38E; (vii) 8Aib, 22K, 25V, 26R, 27K, 31 H, 34R; (iix) 8Aib, 22K, 25V, 26R, 27K, 34R, des35-37; (ix) 8Aib, 22K, 25V, 26R, 27K, 34R, des36-37; (x) 26H, 27K, 30E, 34R, 36K, 38E; (xi) 22K, 25V, 26R, 27K, 30E, 34Q; (xii) 25V, 26R, 27K, 30E, 34R, 36K, 38Q; (xiii) 25V, 26R, 27K, 30E, 34Q, 36K, 38E; (xiv) 22K, 26R, 27K, 31 H, 34G, des35-37; (xv) 8Aib, 25V, 26R, 27K, 31 H, 34Q, 37K; (xvi) 25V, 26R, 27K, 31 H, 34Q, 37K; (xvii) 22E, 23E, 25V, 26R, 27K, 31 H, 34Q, 37K; (iixx) 8Aib, 12K, 22E, 26R, 27K, 31 H, 34Q; (ixx) 8Aib, 22K, 26R, 27K, 31 H, 34G, des35-37; (xx) 22E, 26H, 27K, 30E, 34R, 36K, 38E; (xxi) 22E, 24K, 26R, 27K, 31 H, 34G, des35-37; (xxii) 25V, 26R, 27K, 34Q, 36K; (xxiii) 22E, 24K, 25V, 26R, 27K, 31 H, 34R; (xxiv) 22E, 24K, 25V, 26R, 27K, 34G, de s 3 5-3 7; (xxv) 22E, 24K, 25V, 26R, 27K, 34R; ou (xxvi) 8Aib, 22E, 24K, 25V, 26R, 27K, 31 H, 34Q; ou um sal, amida, ou éster deste farmaceuticamente aceitável. 233. Um derivado de acordo com qualquer uma das formas de realização anteriores, para utilização como medicamento. 234. Um derivado de acordo com qualquer uma das formas de realização anteriores, para utilização no tratamento e/ou na prevenção de todas as formas de diabetes e doenças relacionadas, tal como distúrbios alimentares, doenças cardiovasculares, doenças gastrointestinais, complicações diabéticas, doença critica, e/ou síndroma do ovário poliquístico; e/ou para melhoria dos parâmetros lipídicos, melhoria da função das células β, e/ou para retardamento ou prevenção da progressão da doença diabética. 235. Um método para tratamento ou prevenção de todas as formas de diabetes e doenças relacionadas, tal como distúrbios alimentares, doenças cardiovasculares, doenças gastrointestinais, complicações diabéticas, doença crítica, e/ou síndroma do ovário poliquístico; e/ou para melhoria dos parâmetros lipídicos, melhoria da função das células β, e/ou para retardamento ou prevenção da progressão de doença diabética - através de administração de uma quantidade farmaceuticamente ativa de um derivado de acordo com qualquer uma das formas de realização anteriores. 0 seguinte são ainda outras formas de realização particulares da invenção: 1. Um derivado de um análogo de GLP-1, análogo esse que compreende um primeiro resíduo K numa posição correspondente à posição 27 de GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 1); um segundo resíduo K numa posição correspondente à posição T de GLP-1 (7-37), onde T é um número inteiro no intervalo de 7-37, exceto 18 e 27; e um máximo de dez mudanças de aminoácidos em comparação com GLP-1 (7-37); em que o primeiro resíduo K é designado K27, e o segundo resíduo K é designado KT; derivado esse que compreende duas porções de prolongamento ligadas a K27 e KT, respetivamente, através de um ligador, em que a porção de prolongamento é selecionada a partir de Quím. 1 e Quím. 2:
em que x é um número inteiro no intervalo de 6-18, e y é um número inteiro no intervalo de 3-17; e o ligador compreende Quím. 5:
Quím. 5:
em que k é um número inteiro no intervalo de 1-5, e n é um número inteiro no intervalo de 1-5; ou um sal, amida, ou éster deste farmaceuticamente aceitável. 2. 0 derivado da forma de realização 1, em que o ligador compreende ainda um di-radical Glu selecionado a partir de Quím. 6, e/ou Quím. 7:
Quím. 6:
Quím. 7:
3. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que o ligador é ligado ao grupo épsilon-amino do primeiro ou do segundo resíduo K. 4. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que T é 12, 20, 22, 24, 36, ou 37. 5. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que o análogo não compreende quaisquer resíduos K para além do primeiro e do segundo resíduo K. 6. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que x é 12. 7. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que y é 9. 8. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que k é 1. 9. 0 derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que n é 1. 10. O derivado de qualquer uma das formas de realização anteriores, em que o análogo compreende um análogo de GLP-1 de Fórmula I: Fórmula I:
Xaa7-Xaa0-Glu-Gly-Thr-Xaai2-Thr-Ser-Asp-Xaai6-Ser-Xaai8-Xaai9-Xaa2o-Glu-Xaa22-
Xaa23-Xaa24-Xaa25-Xaa2g-Lys-Phe-lle-Xaa3o-Xaa31-Leu-Val-Xaa34-Xaa35-Xaa3e-Xaa37-Xaa3e-
Xaa39, em que
Xaa7 é L-histidina, imidazopropionilo, α-hidroxi-histidina, D-histidina, desamino-histidina, 2-amino-histidina, β-hidroxi-histidina, homo-histidina, N“-acetil-histidina, Na-formil-histidina, α-fluorometil-histidina, a-metil-histidina, 3-piridilalanina, 2-piridilalanina ou 4-piridilalanina;
Xaa8 é Ala, Gly, Val, Leu, lie, Thr, Ser, Lys, Aib, ácido (1-aminociclopropil)carboxílico, ácido (1-aminociclobutil)carboxílico, ácido (1- aminociclopentil)carboxílico, ácido (1-aminociclo- hexil)carboxílico, ácido (1-aminociclo-heptil)carboxílico, ou ácido (1-aminociclooctil)carboxílico;
Xaai2 é Lys ou Phe;
Xaai6 é Val ou Leu;
Xaais é Ser, Arg, Asn, Gin, ou Glu;
Xaaig é Tyr ou Gin;
Xaa2o é Leu, Lys, ou Met;
Xaa22 é Gly, Glu, Lys, ou Aib;
Xaa23 é Gin, Glu, ou Arg;
Xaa24 é Ala ou Lys;
Xaa25 é Ala ou Val;
Xaa26 é Val, His, ou Arg;
Xaa3o é Ala, Glu, ou Arg;
Xaa3i é Trp ou His;
Xaa34 é Glu, Asn, Gly, Gin, ou Arg;
Xaa35 é Gly, Aib, ou está ausente;
Xaa36 é Arg, Gly, Lys, ou está ausente;
Xaa37 é Gly, Ala, Glu, Pro, Lys, Arg, ou está ausente;
Xaa38 é Ser, Gly, Ala, Glu, Gin, Pro, Arg, ou está ausente; e
Xaa39 é Gly ou está ausente. 11. Um composto de acordo com qualquer uma das formas de realização anteriores, selecionados a partir dos seguintes:
Quím. 50, Quím. 51, Quím. 52, Quím. 53, Quím. 54, Quím. 55, Quím. 56, Quím. 57, Quím. 58, Quím. 59, Quím. 60, Quím. 61, Quím. 62, Quím. 63, Quím. 64, Quím. 65, Quím. 66, Quím. 67, Quím. 68, Quím. 69, Quím. 70, Quím. 71, Quím. 72, Quím. 73, Quím. 74, Quím. 75, Quím. 76, Quím. 77, Quím. 78, e Quím. 79; ou um sal, amida, ou éster deste farmaceuticamente aceitável. 12. Um produto intermediário na forma de um análogo de GLP-1 que compreende a seguinte mudança em comparação com GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 1) : (i) 38Q; e/ou (ii) 39G; ou um sal, amida, ou éster deste farmaceuticamente aceitável. 13. Um derivado de acordo com qualquer uma das formas de realização 1-11, para utilização como medicamento. 14. Um derivado de acordo com qualquer uma das formas de realização 1-11, para utilização no tratamento e/ou na prevenção de todas as formas de diabetes e doenças relacionadas, tal como distúrbios alimentares, doenças cardiovasculares, doenças gastrointestinais, complicações diabéticas, doença crítica, e/ou síndroma do ovário poliquístico; e/ou para melhoria dos parâmetros lipídicos, melhoria da função das células β, e/ou para retardamento ou prevenção da progressão de doença diabética. 15. Um método para tratamento ou prevenção de todas as formas de diabetes e doenças relacionadas, tais como distúrbios alimentares, doenças cardiovasculares, doenças gastrointestinais, complicações diabéticas, doença critica, e/ou síndroma do ovário poliquístico; e/ou para melhoria dos parâmetros lipídicos, melhoria da função das células β, e/ou para retardamento ou prevenção da progressão de doença diabética - através da administração de uma quantidade farmaceuticamente ativa de um derivado de acordo com qualquer uma das formas de realização 1-11.
EXEMPLOS
Esta parte experimental começa com uma lista de abreviaturas, e é seguida por uma secção incluindo métodos gerais para síntese e caracterização de análogos e derivados da invenção. Depois seguem-se vários exemplos que se referem à preparação de derivados específicos de GLP-1, e no final foram incluídos vários exemplos relacionados com a atividade e as propriedades destes análogos e derivados (secção intitulada métodos farmacológicos).
Os exemplos servem para ilustrar a invenção.
Abreviaturas
As seguintes abreviaturas são usadas no seguinte, por ordem alfabética:
Aib: ácido aminoisobutírico (ácido a- aminoisobutírico) IFA: Ingrediente Farmacêutico Ativo AUC: Área Sob a Curva GS: Glicose Sanguínea BHK Rim de Hamster Bebé PC: Peso Corporal
Boc: t-butiloxicarbonilo BSA: Albumina de soro bovino colidina: 2,4,6-trimetilpiridina DCM: diclorometano
Dde: 1-(4,4-dimetil-2,6-dioxociclo- hexilideno)etilo DIC: diisopropilcarbodiimida DIPEA: diisopropiletilamina DMAP: 4-dimetilaminopiridina DMEM: Meio de Eagle Modificado por Dulbecco (DMEM) EDTA: ácido etilenodiaminotetraacético EGTA: ácido etilenoglicoltetraacético FCS: Soro Fetal de Vitelo
Fmoc: 9-fluorenilmetiloxicarbonilo HATU: (hexafluoro-fosfato de 0-(7-azabenzotriazol- 1-il)-1,1,3,3-tetrametilurónio) HBTU: (hexafluorofosfato de 2-(lH-benzotriazol-1- il-)-1,1,3,3-tetrametilurónio) HEPES: ácido 4-(2-hidroxietil)-1- piperazinaetanossulfónico HFIP 1, 1, 1,3,3,3-hexafluoro-2-propanol ou hexafluoroisopropanol HOAt: l-hidroxi-7-azabenzotriazol HOBt: 1-hidroxibenzotriazol HPLC: Cromatografia Liquida de Elevada Resolução HSA: Albumina de Soro Humano IBMX: 3-isobutil-l-metilxantina
Imp: ácido imidazopropiónico (também referido como des-amino-histidina, DesH) i.v. intravenosamente ivDde: 1-(4,4-dimetil-2,6-dioxociclo-hexilideno)-3- metilbutilo IVGTT: Teste de Tolerância à Glicose Intravenosa LCMS: Espetrometria de Massa por Cromatografia
Liquida LYD: Landrace Yorkshire Duroc
MALDI-MS: Ver MALDI-TOF MS MALDI-TOF MS: Espetroscopia de Massa por
Dessorção/Ionização Laser Assistida por Matriz - Tempo de Voo
MeOH: metanol
Mmt: 4-metoxitritilo
Mtt: 4-metiltritilo NMP: N-metilpirrolidona OBz: éster de benzoilo OEG: ácido 8-amino-3,6-dioxaoctânico
OtBu: éster de terc-butilo PBS: Solução Salina Tamponada com Fosfato PD: Farmacodinâmica
Pen/Estrep : Penicilina/Estreptomicina PK: Farmacocinética RP: Fase Inversa RP-HPLC: Cromatografia Liquida de Elevada Resolução de Fase Inversa TA: Temperatura Ambiente
Rt: Tempo de retenção s.c.: Subcutaneamente DP: Desvio Padrão SEC-HPLC: Cromatografia Liquida de Elevada Resolução de Exclusão de Tamanho EPM: Erro Padrão da Média SPA: Ensaio de Proximidade de Cintilações SPPS: Síntese Peptídica em Fase Sólida tBu: terc-butilo TFA: ácido trifluoroacético TIS: tri-isopropilsilano
Tris: tris(hidroximetil)aminometano ou 2-amino-2- hidroximetil-propano-1,3-diol Trt: trifenilmetilo ou tritilo
Trx: ácido tranexâmico UPLC: Cromatografia Líquida de Ultra Resolução MÉTODOS DE PREPARAÇÃO A. Métodos gerais
Esta secção refere-se a métodos para síntese peptídica em fase sólida (métodos SPPS, incluindo métodos para desproteção de aminoácidos, métodos para clivagem do péptido a partir da resina, e para a sua purificação) , bem como métodos para deteção e caracterização do péptido resultante (métodos LCMS, MALDI, e UPLC). A síntese em fase sólida de péptidos pode, nalguns casos, ser melhorada através da utilização de di-péptidos protegidos na ligação amida do dipéptido com um grupo que pode ser clivado sob condições ácidas tais como, mas não limitadas a, 2-Fmoc-oxi-4-metoxibenzilo, ou 2,4,6-trimetoxibenzilo. Nos casos onde está presente uma serina ou uma treonina no péptido, podem utilizar-se dipéptidos de pseudoprolina (disponíveis a partir, p. ex., Novabiochem, ver também W.R. Sampson (1999), J. Pep. Sei., 5, 403) . Os derivados de aminoácidos protegidos utilizados foram Fmoc-aminoácidos padrão (fornecidos por, p. ex., Anaspec, IRIS, ou Novabiochem). O aminoácido N-terminal foi protegido com Boc no grupo alfa-amino (p. ex. Boc-His(Boc)-OH, ou Boc-His(Trt)-OH para péptidos com His no terminal N). O grupo épsilon-amino das lisinas na sequência foi protegido com Mtt, Mmt, Dde, ivDde ou Boc, dependendo da via de ligação da porção de ligação à albumina e espaçador. A porção de ligação à albumina e/ou o ligador pode ser ligado ao péptido através de acilação do péptido ligado à resina ou através de acilação em solução do péptido não protegido. No caso de ligação da porção de ligação à albumina e/ou do ligador à resina de peptidilo protegido, a ligação pode ser modular utilizando SPPS e blocos de construção adequadamente protegidos tais como, mas não limitados a, Fmoc-Oeg-OH (ácido Fmoc-8-amino-3,6-dioxaoctanoico), Fmoc-Trx-OH (ácido Fmoc-tranexâmico), Fmoc-Glu-OtBu, éster mono-terc-butílico do ácido octadecanodioico, éster mono-terc-butilico do ácido nonadecanodioico, ou éster terc-butilico do ácido 4-(9-carboxinoniloxi)benzoico. 1. Síntese de péptido ligado à resina
Método SPPS B 0 método SPPS B refere-se à síntese de um resina de peptidilo protegido utilizando química de Fmoc num sintetizador de péptidos Liberty baseado em micro-ondas (CEM Corp., North Carolina). Uma resina adequada é uma resina Wang pré-carregada, de carga reduzida, disponível a partir de Novabiochem (p. ex., resina Wang Fmoc-Lys (Mtt) de carga reduzida, 0,35 mmol/g). A desproteção de Fmoc foi com piperidina a 5% em NMP até 70 ou 75 °C. A química de acoplamento foi DIC/HOAt em NMP. Adicionaram-se à resina soluções de aminoácido/HOAt (0,3 M em NMP a um excesso molar de 3-10 vezes) seguido pelo mesmo equivalente molar de DIC (0,75 M em NMP). Por exemplo, foram utilizadas as seguintes quantidades de solução de aminoácido/HOAt 0,3 M por acoplamento para as seguintes reações de escala: Escala/mL, 0,10 mmol/2,5 mL, 0,25 mmol/5 mL, 1 mmol/15 mL. Os tempos e as temperaturas de acoplamento foram geralmente de 5 minutos a até 70 ou 75 °C. Foram utilizados tempos de acoplamento mais longos para reações de maior escala, por exemplo, 10 min. Os aminoácidos histidina foram duplamente acoplados a 50 °C, ou acoplados em quádruplos se o aminoácido anterior estivesse estereoquimicamente impedido (p. ex., Aib). Os aminoácidos arginina foram acoplados à TA durante 25 min e depois aquecidos a 7 0 ou 75 °C durante 5 min. Alguns aminoácidos tais como, mas não limitados a Aib, foram "duplamente acoplados", significando que após o primeiro acoplamento (p. ex. 5 min a 75 °C) , a resina é drenada e são adicionados mais reagentes (aminoácido, HOAt e DIC), e a mistura é novamente aquecida (p. ex. 5 min a 75 °C) . Quando se pretendia uma modificação química de uma cadeia lateral de lisina, a lisina foi incorporada como Lys(Mtt). 0 grupo Mtt foi removido através de lavagem da resina com DCM e suspensão da resina em hexafluoroisopropanol puro (não diluído) durante 20 minutos seguido de lavagem com DCM e NMP. A modificação química da lisina foi realizada quer através de síntese manual (ver método SPPS D) quer através de um ou mais passos automatizados no sintetizador de péptidos Liberty como descrito acima, utilizando blocos de construção protegidos de forma adequada (ver Métodos gerais), opcionalmente incluindo um acoplamento manual.
Método SPPS D
O método SPPS D refere-se à síntese da resina de peptidilo protegido utilizando química de Fmoc manual. Isto foi tipicamente utilizado para a ligação dos ligadores e das cadeias laterais ao esqueleto peptídico. Utilizaram-se as seguintes condições a uma escala de síntese de 0,25 mmol. A química de acoplamento foi DIC/HOAt/colidina em NMP a um excesso molar 4-10 vezes. As condições de acoplamento foram 1-6 h à temperatura ambiente. A desproteção de Fmoc foi realizada com piperidina a 20-25% em NMP (3 χ 20 mL, cada 10 min) seguido de lavagens com NMP (4 χ 20 mL) . A desproteção de Dde ou ivDde foi realizada com hidrazina a 2% em NMP (2 χ 20 mL, cada 10 min) seguido de lavagens com NMP (4 χ 20 mL). A desproteção de Mtt ou Mmt foi realizada com TFA a 2% e TIS a 2-3% em DCM (5 χ 20 mL, cada 10 min) seguido de lavagens com DCM (2 χ 20 mL), MeOH a 10% e DIPEA a 5% em DCM (2 χ 20 mL) e NMP (4 χ 20 mL) , ou através de tratamento com hexafluroisopropanol puro (5 χ 20 mL, cada 10 min) seguido por lavagens tal como acima. A porção de ligação à albumina e/ou o ligador pode ser ligado ao péptido quer através de acilação do péptido ligado à resina quer através de acilação em solução do péptido desprotegido (ver as vias descritas abaixo) . No caso de ligação da porção de ligação à albumina e/ou do ligador à resina de peptidilo protegido, a ligação pode ser modular utilizando SPPS e blocos de construção protegidos de forma adequada (ver Métodos gerais) .
Ligação ao péptido ligado á resina - Via I: Porção de ligação à albumina ou ligador ativado (éster ativo ou anidrido simétrico) tal como éster mono-(2,5-dioxo-pirrolidin-l-ílico) do ácido octadecanodioico (Ebashi et al. EP511600, 4 equivalentes molares relativamente ao péptido ligado à resina) foi dissolvido em NMP (25 mL) , adicionado a resina e agitado de um dia para o outro à temperatura ambiente. A mistura reacional foi filtrada e a resina foi lavada extensivamente com NMP, DCM, 2-propanol, metanol e éter dietilico.
Ligação ao péptido ligado à resina - Via II: A porção de ligação à albumina foi dissolvida em NMP/DCM (1:1, 10 mL) . Os reagentes de ativação tais como HOBt (4 equivalentes molares relativamente à resina) e DIC (4 equivalentes molares relativamente à resina) foram adicionados e a solução foi agitada durante 15 min. A solução foi adicionada à resina e foi adicionado DIPEA (4 equivalentes molares relativamente à resina). A resina foi agitada durante 2 a 24 horas à temperatura ambiente. A resina foi lavada com NMP (2 χ 20 mL), NMP/DCM (1:1, 2 χ 20 mL) e DCM (2 χ 2 0 mL) .
Ligação ao péptido em solução - Via III: A porção de ligação à albumina ou o ligador ativado (éster ativo ou anidrido simétrico) tal como éster mono-(2,5-dioxo-pirrolidin-l-ílico) do ácido octadecanodioico (Ebashi et al. EP511600), 1-1,5 equivalentes molares relativamente ao péptido foi dissolvido num solvente orgânico tal como acetonitrilo, THF, DMF, DMSO ou numa mistura de água/solvente orgânico (1-2 mL) e adicionada a uma solução do péptido em água (10-20 mL) em conjunto com 10 equivalentes molares de DIPEA. No caso de grupos de proteção no resíduo de ligação à albumina tal como terc-butilo, a mistura reacional foi liofilizada de um dia para o outro e o péptido bruto isolado posteriormente desprotegido. No caso de grupos de proteção terc-butilo, a desproteção foi realizada dissolvendo o péptido numa mistura de ácido trifluoroacético, água e tri- isopropilsilano (90:5:5). Após 30 min, a mistura foi evaporada in vacuo e o péptido bruto purificado através de HPLC preparativa tal como descrito posteriormente.
SPPS método E
O método SPPS E refere-se à síntese peptídica através de química Fmoc num Sintetizador de Péptidos em Fase Sólida Prelude de Protein Technologies (Tucson, AZ 85714 EUA). Uma resina adequada é uma resina Wang pré-carregada e de carga reduzida disponível em Novabiochem (p. ex., resina fmoc-Lys(Mtt)-Wang de carga reduzida, 0,35 mmol/g). A desproteção de Fmoc foi com piperidina a 25% em NMP durante 2 χ 10 min. A química do acoplamento foi DIC/HOAt/colidina em NMP. As soluções de aminoácido/HOAt (0,3 M em NMP a um excesso molar de 3-10 vezes) foram adicionadas à resina seguido pelo mesmo equivalente molar de DIC (3 M em NMP) e colidina (3 M em NMP) . Por exemplo, foram utilizadas as seguintes quantidades de solução de aminoácido/HOAt 0,3 M por acoplamento para as seguintes reações de escala: Escala/mL, 0,10 mmol/2,5 mL, 0,25 mmol/5 mL. Os tempos de acoplamento foram geralmente de 60 minutos. Alguns aminoácidos incluindo, mas não se limitando a arginina, Aib ou histidina foram "duplamente acoplados", significando que após o primeiro acoplamento (p. ex. 60 min), a resina é drenada e são adicionados mais reagentes (aminoácido, HOAt, DIC e colidina), e a mistura foi deixada reagir novamente (p. ex. 60 min) . Alguns aminoácidos e derivados de ácidos gordos incluindo mas não se limitando a Fmoc-OEG-OH, Fmoc-Trx-OH, Fmoc-Glu-OtBu, éster mono-terc-butilílico do ácido octadecanodioico, éster mono-terc-butilico do ácido nonadecanodioico, ou éster terc-butilico do ácido 4 — (9 — carboxinoniloxi)benzoico foram acoplados durante um tempo prolongado, por exemplo 6 horas. Quando se pretendia uma modificação química de uma cadeia lateral de lisina, a lisina era incorporada como Lys(Mtt). O grupo Mtt foi removido através de lavagem da resina com DCM e suspensão da resina em hexafluoroisopropanol/DCM (75:25) durante 3 χ 10 minutos seguido por lavagens com DCM, piperidina a 20% e NMP. A modificação química da lisina foi realizada quer através de síntese manual (ver método SPPS D) quer através de um ou mais passos automatizados no sintetizador de péptidos Prelude tal como descrito acima utilizando blocos de construção adequadamente protegidos (ver Métodos gerais). 2. Clivagem do péptido da resina e purificação
Após a síntese, a resina foi lavada com DCM e o péptido foi clivado da resina através de um tratamento de 2-3 horas com TFA/TIS/água (95/2,5/2,5 ou 92,5/5/2,5) seguido de precipitação com éter dietílico. 0 péptido foi dissolvido num solvente adequado (tal como, p. ex., ácido acético a 30%) e purificado através de RP-HPLC padrão numa coluna C18, 5 μΜ, utilizando acetonitrilo/água/TFA. As frações foram analisadas através de uma combinação de métodos UPLC, MAL Dl e LCMS, e as frações apropriadas foram reunidas e liofilizadas.
3. Métodos de deteção e caracterização Métodos LCMS Método LCMS 1 (LCMS1)
Foi utilizado um espectrómetro de massa Agilent Technologies LC/MSD-TOF (G1969A) para identificar a massa da amostra após eluição a partir de um sistema de HPLC, Agilent série 1200. A desconvolução dos espectros de proteínas foi calculada com o suporte lógico de confirmação de proteínas de Agilent.
Eluentes: A: Ácido trifluoroacético a 0,1% em água B: Ácido trifluoroacético a 0,1% em acetonitrilo Coluna: Zorbax 5u, 300SB-C3, 4,8 χ 50 mm Gradiente: acetonitrilo a 25%-95% ao longo de 15 min Método LCMS 2 (LCMS2)
Um espectrómetro de massa Perkin Elmer Sciex API 3000 foi utilizado para identificar a massa da amostra após eluição a partir de um sistema de HPLC Perkin Elmer Série 200.
Eluentes: A: Ácido trifluoroacético a 0,05% em água B: Ácido trifluoroacético 0,05% em acetonitrilo Coluna: Waters Xterra MS C-18 χ 3 mm id 5 ym Gradiente: acetonitrilo a 5%-90% ao longo de 7,5 min a 1,5 mL/min Método LCMS 3 (LCMS3)
Um espectrómetro de massa Waters Micromass ZQ foi utilizado para identificar a massa da amostra após eluição a partir um sistema de HPLC Waters Alliance HT.
Eluentes: A: Ácido trifluoroacético a 0,1% em água B: Ácido trifluoroacético a 0,1% em acetonitrilo Coluna: Phenomenex, Jupiter C4 50 x 4,60 mm id 5 ym Gradiente: B a 10%-90% ao longo de 7,5 min a 1,0 mL/min Método LCMS 4 (LCMS4) O LCMS4 foi realizado numa instalação consistindo no sistema de UPLC Waters Acquity e no espectrómetro de massa LCT Premier XE de Micromass. A bomba de UPLC foi ligada a dois reservatórios eluentes contendo: A: Ácido fórmico a 0,1% em água B: Ácido fórmico a 0,1% em acetonitrilo A análise foi realizada à TA através da injeção de um volume apropriado da amostra (de preferência 2-10 pL) na coluna que foi eluida com um gradiente de A e B. As condições de UPLC, as definições do detetor e as definições do espectrómetro de massa foram:
Coluna: Waters Acquity UPLC BEH, C-18, 1,7 pm, 2,1 mm x 5 0 mm
Gradiente: Acetonitrilo a 5%-95% linear durante 4,0 min (alternativamente 8,0 min) a 0,4 mL/min
Deteção: 214 nm (saida analógica de TUV (detetor
Tunable UV))
Modo de ionização de MS: API-ES
Varrimento: 100-2000 amu (alternativamente 500-2000 amu), passo 0,1 amu
Métodos UPLC e HPLC Método 05 B5 1 UPLC (método 05_B5_1): A análise de RP foi realizada utilizando um sistema de UPLC Waters ajustado com um detetor de dupla banda. Deteções de UV a 214 nm e 254 nm foram recolhidas utilizando um ACQUITY UPLC BEH130, C18, 130 Á, 1,7 pm, coluna de 2,1 mm χ 150 mm, 40 °C. O sistema de UPLC foi ligado a dois reservatórios de eluente contendo: A: Na2S04 0,2 M, H3P04 0,04 M, CH3CN a 10% (pH 3,5) B: CH3CN a 70%, H20 a 30%
Foi utilizado o seguinte gradiente linear: A a 60%, de B a 40% a A a 30%, B a 70% ao longo de 8 minutos a um caudal de 0,40 mL/min. Método 05 B7 1 UPLC (método 05 B7_l): A análise de RP foi realizada utilizando um sistema de UPLC Waters ajustado com um detetor de dupla banda. Deteções de UV a 214 nm e 254 nm foram recolhidas utilizando um ACQUITY UPLC BEH130, C18, 130 Ã, 1,7 pm, coluna de 2,1 mm χ 150 mm, 40 °C. O sistema de UPLC foi ligado a dois reservatórios de eluente contendo: A: Na2S04 0,2 M, H3P04 0, 04 M, CH3CN a 10% (pH 3,5) B: CH3CN a 70%, H20 a 30%
Foi utilizado o seguinte gradiente linear: A a 80%, de B a 20% a A a 40%, B a 60% ao longo de 8 minutos a um caudal de 0,40 mL/min. Método 04 A2 1 UPLC (método 04_A2_1) : A análise de RP foi realizada utilizando um sistema de UPLC Waters ajustado com um detetor de dupla banda. Deteções de UV a 214nm e 254nm foram recolhidas utilizando um ACQUITY UPLC BEH130, C18, 130 À, 1,7 pm, coluna de 2,1 mm χ 150 mm, 40 °C. O sistema de UPLC foi ligado a dois reservatórios de eluente contendo:
A: H20 a 90%, CH3CN a 10%, bicarbonato de amónio 0,25 M B: CH3CN a 70%, H20 a 30%
Foi utilizado o seguinte gradiente linear: A a 90%, de B a 10% a A a 60%, B a 40% ao longo de 16 minutos a um caudal de 0,40 mL/min. Método 04 A3 1 UPLC (método 04_A3_1): A análise de RP foi realizada utilizando um sistema de UPLC Waters ajustado com um detetor de dupla banda. Deteções de UV a 214 nm e 254 nm foram recolhidas utilizando um ACQUITY UPLC BEH130, C18, 130 À, 1,7 μπι, coluna de 2,1 mm χ 150 mm, 40 °C. O sistema de UPLC foi ligado a dois reservatórios de eluente contendo:
A: H20 a 90%, CH3CN a 10%, bicarbonato de amónio 0,25 M B: CH3CN a 70%, H20 a 30%
Foi utilizado o seguinte gradiente linear: A a 75%, de B a 25% a A a 45%, B a 55% ao longo de 16 minutos a um caudal de 0,40 mL/min. Método 04 A4 1 UPLC (método 04_A4_1): A análise de RP foi realizada utilizando um sistema de UPLC Waters ajustado com um detetor de dupla banda. Deteções de UV a 214 nm e 254 nm foram recolhidas utilizando um ACQUITY UPLC BEH130, C18, 130 À, 1,7 μπι, coluna de 2,1 mm χ 150 mm, 40 °C. O sistema de UPLC foi ligado a dois reservatórios de eluente contendo:
A: H20 a 90%, CH3CN a 10%, bicarbonato de amónio 0,25 M B: CH3CN a 70%, H20 a 30%
Foi utilizado o seguinte gradiente linear: A a 65%, de B a 35% a A a 25%, B a 65% ao longo de 16 minutos a um caudal de 0,40 mL/min. Método 08 B2 1 UPLC (método 08_B2_1): A análise de RP foi realizada utilizando um sistema de UPLC Waters ajustado com um detetor de dupla banda. Deteções de UV a 214 nm e 254 nm foram recolhidas utilizando um ACQUITY UPLC BEH130, C18, 130 Ã, 1,7 pm, coluna de 2,1 mm χ 150 mm, 40 °C. O sistema de UPLC foi ligado a dois reservatórios de eluente contendo: A: H20 a 99,95%, TFA a 0,05% B: CH3CN a 99, 95%, TFA a 0,05%
Foi utilizado o seguinte gradiente linear: A a 95%, de B a 5% a A a 40%, B a 60% ao longo de 16 minutos a um caudal de 0,40 mL/min. Método 08 B4 1 UPLC (método 08_B4_1): A análise de RP foi realizada utilizando um sistema de UPLC Waters ajustado com um detetor de dupla banda. Deteções de UV a 214 nm e 254 nm foram colhidas utilizando um ACQUITY UPLC BEH130, C18, 130 À, 1,7 pm, coluna de 2,1 mm χ 150 mm, 40 °C. O sistema de UPLC foi ligado a dois reservatórios de eluente contendo: A: H20 a 99, 95%, TFA a 0,05% B: CH3CN a 99, 95%, TFA a 0,05%
Foi utilizado o seguinte gradiente linear: A a 95%, de B a 5% a A a 95%, B a 5% ao longo de 16 minutos a um caudal de 0,40 mL/min. Método 05 BIO 1 UPLC (Método 05_B10_1) : A análise de RP foi realizada utilizando um sistema de UPLC Waters ajustado com um detetor de dupla banda. Deteções de UV a 214 nm e 254 nm foram recolhidas utilizando um ACQUITY UPLC BEH130, C18, 130 À, 1,7 pm, coluna de 2,1 mm * 150 mm, 40 °C. O sistema de UPLC foi ligado a dois reservatórios de eluente contendo: A: Na2S04 0,2 M, H3P04 0, 04 M, CH3CN a 10% (pH 3,5) B: CH3CN a 70%, H20 a 30%
Foi utilizado o seguinte gradiente linear: A a 40%, de B a 60% a A a 20%, B a 80% ao longo de 8 minutos a um caudal de 0,40 mL/min. Método 01 A4 2 UPLC (Método 01_A4_2): A análise de RP foi realizada utilizando um sistema Waters 600S ajustado com um detetor de matriz de díodos waters 996. Deteções de UV a 214 nm e 254 nm foram recolhidas utilizando uma coluna Symmetry300 C18, 5 pm, 3,9 mm χ 150 mm, 42 °C. O sistema de HPLC foi ligado a três reservatórios de eluente contendo: A: H20 a 100%, B: CH3CN a 100%, C: ácido trifluoroacético a 1% em H20. Foi utilizado o seguinte gradiente linear: A a 90%, de B a 5%, C a 5% a A a 0%, B a 95%, C a 5% ao longo de 15 minutos a um caudal de 1,0 mL/min. Método 09 B2 1 UPLC (Método 09_B2_1): A análise de RP foi realizada utilizando um sistema de UPLC Waters ajustado com um detetor de dupla banda. Deteções de UV a 214 nm e 254 nm foram recolhidas utilizando um ACQUITY UPLC BEH130, C18, 130 À, 1,7 pm, coluna de 2,1 mm χ 150 mm, 40 °C. O sistema de UPLC foi ligado a dois reservatórios de eluente contendo: A: H20 a 99,95%, TFA a 0,05%; B: CH3CN a 99,95%, TFA a 0,05%. Foi utilizado o seguinte gradiente linear: A a 95%, de B a 5% a A a 40%, B a 60% ao longo de 16 minutos a um caudal de 0,40 mL/min. Método 09 B4 1 UPLC (Método 09_B4_1): A análise de RP foi realizada utilizando um sistema de UPLC Waters ajustado com um detetor de dupla banda. Deteções de UV a 214 nm e 254 nm foram recolhidas utilizando um ACQUITY UPLC BEH130, C18, 130 Ã, 1,7 pm, coluna de 2,1 mm χ 150 mm, 40 °C. O sistema de UPLC foi ligado a dois reservatórios de eluente contendo: A: H20 a 99,95%, TFA a 0,05%; B: CH3CN a 99,95%, TFA a 0,05%. Foi utilizado o seguinte gradiente linear: A a 95%, de B a 5% a A a 5%, B a 95% ao longo de 16 minutos a um caudal de 0,40 mL/min. Método 05 B8 1 UPLC (Método 05_B8_1): A análise de RP foi realizada utilizando um sistema de UPLC Waters ajustado com um detetor de dupla banda. Deteções de UV a 214 nm e 254 nm foram recolhidas utilizando um ACQUITY UPLC BEH130, C18,
130 Ã, 1,7 pm, coluna de 2,1 mm χ 150 mm, 40 °C. O sistema de UPLC foi ligado a dois reservatórios de eluente contendo: A: Na2S04 0,2 M, H3P04 0, 04 M, CH3CN a 10% (pH 3,5); B: CH3CN a 70%, H20 a 30%. Foi utilizado o seguinte gradiente linear: A a 50%, de B a 50% a A a 20%, B a 80% ao longo de 8 minutos a um caudal de 0,40 mL/min. Método 10 Bl4 1 UPLC (Método 10_B14_1) : A análise de RP foi realizada utilizando um sistema de UPLC Waters ajustado com um detetor de dupla banda. Deteções de UV a 214 nm e 254 nm foram recolhidas utilizando um ACQUITY UPLC BEH ShieldRPl8, 1,7 gm, coluna de 2,1 mm χ 150 mm, 50 °C. O sistema de UPLC foi ligado a dois reservatórios de eluente contendo: A: H20 a 99,95%, TFA a 0,05%; B: CH3CN a 99,95%, TFA a 0,05%. Foi utilizado o seguinte gradiente linear: A a 70%, de B a 30% a A a 40%, B a 60% ao longo de 12 minutos a um caudal de 0,40 mL/min. Método 04 A6 1 UPLC (Método 04_A6_1): A análise de RP foi realizada utilizando um sistema de UPLC Waters ajustado com um detetor de dupla banda. Deteções de UV a 214 nm e 254 nm foram recolhidas utilizando um ACQUITY UPLC BEH130, C18, 130 À, 1,7 gm, coluna de 2,1 mm χ 150 mm, 40 °C. O sistema de UPLC foi ligado a dois reservatórios de eluente contendo: A: TRIS 10 mM, sulfato de amónio 15 mM, H20 a 80%, 20%, pH 7,3; B: CH3CN a 80%, H20 a 20%. Foi utilizado o seguinte gradiente linear: A a 95%, de B a 5% a A a 10%, B a 90% ao longo de 16 minutos a um caudal de 0,35 mL/min. Método 01 B4 1 HPLC (Método 01_B4_1): A análise de RP foi realizada utilizando um sistema Waters 600S ajustado com um detetor de matriz de diodos waters 996. Deteções de UV foram recolhidas utilizando uma coluna Waters de 3 mm χ 150 mm, 3,5 μιη C-18 Symmetry. A coluna foi aquecida até 42 °C e eluida com um gradiente linear de acetonitrilo a 5-95%, água a 90-0%, e ácido trifluoroacético a 5% (1,0%) em água ao longo de 15 minutos a um caudal de 1 mL/min. Método 04 A7 1 UPLC (Método 04_A7_1): A análise de RP foi realizada utilizando um sistema de UPLC Waters ajustado com um detetor de dupla banda. Deteções de UV a 214 nm e 254 nm foram recolhidas utilizando um ACQUITY UPLC BEH130, C18, 130 À, 1,7 pm, coluna de 2,1 mm χ 150 mm, 40 °C. O sistema de UPLC foi ligado a dois reservatórios de eluente contendo: A: TRIS 10 mM, sulfato de amónio 15 mM, H2O a 80%, 20%, pH 7,3; B: CH3CN a 80%, H20 a 20%. Foi utilizado o seguinte gradiente linear: A a 95%, de B a 5% a A a 40%, B a 60% ao longo de 16 minutos a um caudal de 0,40 mL/min. Método 05 B9 1 UPLC (Método 05_B9_1): A análise de RP foi realizada utilizando um sistema de UPLC Waters ajustado com um detetor de dupla banda. Deteções de UV a 214 nm e 254 nm foram recolhidas utilizando um ACQUITY UPLC BEH130, C18, 130 Ã, 1,7 pm, coluna de 2,1 mm χ 150 mm, 40 °C. O sistema de UPLC foi ligado a dois reservatórios de eluente contendo: A: Na2S04 0,2 Μ, H3PO4 0,04 M, CH3CN A 10% (pH 3,5); B: CH3CN A 70%, H20 A 30%. Foi utilizado o seguinte gradiente linear: A a 70%, de B a 30% a A a 20%, B a 80% ao longo de 8 minutos a um caudal de 0,40 mL/min. Método 10 B12 1 UPLC (Método 10_B12_1) : A análise de RP foi realizada utilizando um sistema de UPLC Waters ajustado com um detetor de dupla banda. Deteções de UV a 214 nm e 254 nm foram recolhidas utilizando um ACQUITY UPLC BEH ShieldRP18, 1,7 gm, coluna de 2,1 mm χ 150 mm, 50 °C. O sistema de UPLC foi ligado a dois reservatórios de eluente contendo: A: H2O a 99, 95%, TFA a 0,05%; B: CH3CN 99, 95%, TFA a 0,05%. Foi utilizado o seguinte gradiente linear: A a 50%, de B a 50% a A a 0%, B a 100% ao longo de 16 minutos a um caudal de 0,40 mL/min. Método 04 A9 1 UPLC (Método 04_A9_1): A análise de RP foi realizada utilizando um sistema de UPLC Waters ajustado com um
detetor de dupla banda. Deteções de UV a 214 nm e 254 nm foram recolhidas utilizando uma coluna ACQUITY UPLC BEH
Shield RP18, C18, 1,7 gm, de 2,1 mm χ 150 mm, 60 °C. O sistema de UPLC foi ligado a dois reservatórios de eluente contendo: A: Na2S04 200 mM + Na2HP04 20 mM + NaH2P04 20 mM em H20 a 90%/CHaCN a 10%, pH 7,2; B: CH3CN a 70%, H20 a 30%. Foi utilizado o seguinte gradiente de passos: A a 90%, de B a 10% a A a 80%, B a 20% ao longo de 3 minutos, A a 80%, de B a 20% a A a 50%, B a 50% ao longo de 17 minutos a um caudal de 0,40 mL/min.
Método MALDI-MS
Os pesos moleculares foram determinados utilizando espectroscopia de massa tempo de voo de dessorção e ionisação laser assistida por matriz, registados num Microflex ou Autoflex (Bruker). Foi utilizada uma matriz de ácido alfa-ciano-4-hidroxicinâmico.
Método RMN
Os espectros de RMN de protões foram registados utilizando um Brucker Avance DPX 300 (300 MHz) com tetrametilsilano como padrão interno. Os deslocamentos químicos (δ) são dados em ppm e os padrões de desdobramento são designados como se segue: s, singleto; d, dupleto; dd, duplo dupleto; dt, duplo tripleto t, tripleto, tt, triplo tripleto; q, quarteto; quint, quinteto; sext, sexteto; m, multipleto, e br = amplo. B. Sintese de intermediários 1. Sintese de monoésteres de diácidos gordos O refluxo, de um dia para o outro, dos diácidos C12, C14, C16 e C18 com Boc-anidrido, DMAP, e t-butanol em tolueno dá predominantemente o monoéster t-butílico. É obtido após processamento de uma mistura de monoácido, diácido e diéster. A purificação é realizada através de lavagem, filtração em sílica de grumo pequeno e cristalização. B. Sintese dos compostos da invenção
Exemplo 1 Νε27- [2- [2 — [2 — [ [2— [2— [2— [ [ (4S) -4-carboxi-4- [ 10- (4-carboxifenoxi)decanoilamino]butanoil]amino]etoxi]etoxi]acet il] amino] etoxi]etoxi]acetil], ΊΝΓε37— [2 — [2 — [2 — [ [2 — [2 — [2 — [[ (4S)-4-carboxi-4 - [10 - (4- carboxifenoxi)decanoilamino]butanoil]amino]etoxi]etoxi]acet il ] amino ]etoxi]etoxi]acetil] - [Glu22, Arg26, Lys27, Arg34, Lys37 ] -GLP-1-(7-37)-péptido
Quim. 50:
Método de preparação: método SPPS B UPLC (Método 0 9_B2_1) : Rt = 12,4 min UPLC (Método: 04_A3_1): Rt = 8,3 min LCMS4: Rt = 2,0 min, m/z = 1659 (m/3), 1244 (m/4), 996 (m/5)
Exemplo 2 Νε27- [2— [2— [2— [ [2— [2— [2— [ [ (4S) -4-carboxi-4- [ 10 - (4-carboxifenoxi)decanoilamino]butanoil]amino]etoxi]etoxi]acet il] amino] etoxi]etoxi]acetil], Νε36-[2-[2-[2-[[2-[2-[2- [[(4S)-4-carboxi-4-[10 - (4- carboxifenoxi)decanoilamino]butanoil]amino]etoxi]etoxi]acet il]amino]etoxi]etoxi]acetil]- [Glu22, Arg26, Lys27, Glu30, Arg34, Lys36] -GLP-1- (7-37) -peptidil-Glu-Gly
Quim. 51:
Método de preparação: método SPPS B UPLC (Método 09_B2_1): Rt = 13,1 min UPLC (Método 04_A7_1): Rt = 6,3 min LCMS4: Rt = 2,1 min, m/z = 1707 (m/3) , 1280 (m/4), 1025 (m/5)
Exemplo 3 Νε27- [2— [2— [2— [ [2— [2— [2— [ [ (4S) -4-carboxi-4- [ 10- (4-carboxifenoxi)decanoilamino]butanoil]amino]etoxi]etoxi]acet il] amino] etoxi] etoxi] ace til] , Νε36- [2— [2— [2— [ [2— [2— [2 — [[(4S)-4-carboxi-4-[10- (4- carboxifenoxi)decanoilamino]butanoil]amino]etoxi]etoxi]acet il]amino]etoxi]etoxi]acetil]- [Glu22, Arg26, Lys27, Arg34, Lys36] ,des-Gly37-GLP-l - (7-36) -péptido Quim. 52:
Método de preparação: método SPPS B UPLC (Método 09_B2_1): Rt = 13,3 min UPLC (Método 05_B5_1): Rt = 6,5 min LCMS4: Rt = 2,3 min, m/z = 1607 (m/3), 1205 (m/4), 964 (m/5)
Exemplo 4 Νε27- [2- [2 — [2 — [ [2— [2— [2— [ [ (4S) -4-carboxi-4- [ 10- (4-carboxifenoxi)decanoilamino]butanoil]amino]etoxi]etoxi]acet il] amino] etoxi]etoxi]acetil], ΊΝΓε37— [2 — [2 — [2 — [ [2 — [2 — [2 — [[ (4S)-4-carboxi-4 - [10 - (4- carboxifenoxi)decanoilamino]butanoil]amino]etoxi]etoxi]acet il]amino]etoxi]etoxi]acetil]- [Glu22, Val25, Arg26, Lys27, Arg34, Lys37] -GLP-1- (7-37) -péptido
Quím. 53:
Método de preparação: método SPPS B UPLC (Método 0 9_B2_1) : Rt = 13,0 min UPLC (Método 04_A7_1): Rt = 6,9 min LCMS4: Rt = 2,0 min, m/z = 1668 (m/3), 1251 (m/4), 1001 (m/5)
Exemplo 5 Νε20- [2 - [2 — [2 — [ [2 — [2 — [2 — [ [ (4S) -4-carboxi-4- [ 10 - (4-carboxifenoxi)decanoilamino]butanoil]amino]etoxi]etoxi]acet il] amino] etoxi]etoxi]acetil], ΊΝΓε27— [2 — [2 — [2 — [ [2 — [2 — [2 — [[ (4S)-4-carboxi-4 - [10 - (4- carboxifenoxi)decanoilamino]butanoil]amino]etoxi]etoxi]acet il]amino]etoxi]etoxi]acetil]- [Aib8, Lys20, Glu22, Arg26, Lys27, Glu30, Gly34] -GLP-1- (7-34) -péptido
Quím. 54:
Método de preparação: método SPPS B UPLC (Método 08_B4_1): Rt = 9,02 min UPLC (Método 04_A6_1): Rt = 4,61 min LCMS4: Rt = 2,17 min, m/z = 1540 (m/3), 1155 (m/4)
Exemplo 6 Νε27- [2 - [2 — [2 — [ [2 — [2 — [2 — [ [ (4S) -4-carboxi-4- [ 10 - (4-carboxifenoxi)decanoilamino]butanoil]amino]etoxi]etoxi]acet il] amino] etoxi]etoxi]acetil], Νε36-[2-[2-[2-[[2-[2-[2- [[ (4S)-4-carboxi-4 - [10 - (4- carboxifenoxi)decanoilamino]butanoil]amino]etoxi]etoxi]acet il ] amino ]etoxi]etoxi]acetil] - [ Arg26, Lys27, Glu30, Arg34, Lys36] -GLP-1-(7-37)-peptidil-Glu
Quim. 55:
Método de preparação: método SPPS B UPLC (Método 0 9_B2_1) : Rt = 13,0 min UPLC (Método 05_B5_1): Rt = 5,6 min LCMS4: Rt = 2,2 min, m/z = 1664 (m/3), 1248 (m/4), 999 (m/5)
Exemplo 7 Νε22- [2 - [2 — [2 — [ [2 — [2 — [2 — [ [ (4S) -4-carboxi-4- (13-carboxitridecanoilamino)butanoil]amino]etoxi]etoxi]acetil]a mino]etoxi]etoxi]acetil] ,Νε27- [2 - [2 - [2 - [ [2 - [2 - [2 - [ [ (4S) - 4-carboxi-4-(13— carboxitridecanoilamino)butanoil]amino]etoxi]etoxi]acetil]a mino]etoxi]etoxi]acetil]- [Aib8, Lys22, Vai25, Arg26, Lys27,His31, Arg34] -GLP-1- (7-37) -péptido Quim. 56:
Método de preparação: método SPPS B LCMS2: Rt = 4,00 min, m/z = 1599 (m/3), 1199 (m/4) UPLC (Método 08_B4_1): Rt = 7,83 min UPLC (Método 05_B9_1): Rt = 7,45 min
Exemplo 8 Νε22- [2- [2 — [2 — [ [2— [2— [2— [ [ (4S) -4-carboxi-4- (13-carboxitridecanoilamino)butanoil]amino]etoxi]etoxi]acetil]a mino]etoxi]etoxi]acetil] , ΊΝΓε27— [2 — [2 — [2 — [ [2— [2— [2— [ [ (4S) — 4 — carboxi-4-(13— carboxitridecanoilamino)butanoil]amino]etoxi]etoxi]acetil]a mino]etoxi]etoxi]acetil] - [Aib8, Lys22, Vai25, Arg26, Lys27, Arg34 ] -GLP-1-(7-34)-péptido
Quim. 56:
Método de preparação: método SPPS B UPLC (Método 10_B12_1): Rt = 8,92 min LCMS4: Rt = 2,58 min, m/z = 1525 (m/3), 1144 (m/4), 915 (m/5)
Exemplo 9 Νε22- [2 - [2 — [2 — [ [2 — [2 — [2 — [ [ (4S) -4-carboxi-4- (13-carboxitridecanoilamino)butanoil]amino]etoxi]etoxi]acetil]a mino]etoxi]etoxi]acetil] ,Νε27- [2 - [2 - [2 - [ [2 - [2 - [2 - [ [ (4S) - 4-carboxi-4-(13— carboxitridecanoilamino)butanoil]amino]etoxi]etoxi]acetil]a mino]etoxi]etoxi]acetil]- [Aib8,Lys22,Val2 5,Arg2 6,Lys2 7,Arg34]-GLP-1-(7-35)-péptido Quim. 58:
Método de preparação: método SPPS E A massa molecular teórica de 4628 Da foi confirmada através de MALDI-MS UPLC (método 09_B4_1): Rt = 9,29 min UPLC (método 04_A6_1): Rt = 6,49 min
Exemplo 10 Νε27- [2— [2— [2— [ [2— [2— [2— [ [ (4S) -4-carboxi-4- [ 10- (4-carboxifenoxi)decanoilamino]butanoil]amino]etoxi]etoxi]acet il] amino] etoxi] etoxi] acetil] , Νε36- [2 — [2 — [2 — [ [2 — [2 — [2 — [[(4S)-4-carboxi-4-[10- (4- carboxifenoxi)decanoilamino]butanoil]amino]etoxi]etoxi]acet il ] amino] etoxi ] etoxi ] acetil ] - [His26, Lys27, Glu30, Arg34, Lys36] -GLP-1-(7-37)-peptidil-Glu
Quim. 59:
Método de preparação: método SPPS B UPLC (Método 08_B2_1) : Rt = 12,9 min UPLC (Método 05_B5_1) : Rt = 5,5 min LCMS4: Rt = 2,2 min, m/z = 1657 (m/3), 1243 (m/4), 995 (m/5)
Exemplo 11 Νε22- [2 - [2 — [2 — [ [2 — [2 — [2 — [ [ (4S) -4-carboxi-4- (13-carboxitridecanoilamino)butanoil]amino]etoxi]etoxi]acetil]a mino] etoxi] etoxi] acetil] , Νε27- [2 — [2 — [2 — [ [2 — [2 — [2 — [ [ (4S) — 4 — carboxi-4-(13— carboxitridecanoilamino)butanoil]amino]etoxi]etoxi]acetil]a mino]etoxi]etoxi]acetil] - [Lys22,Val25, Arg26, Lys27, Glu30, Gin34 ] -GLP-1-(7-37)-péptido
Quim. 59:
Método de preparação: método SPPS B UPLC (Método 08_B2_1): Rt = 13,5 min LCMS4: Rt = 2,2 min, m/z = 1621 (m/3), 1216 (m/4), 973 (m/5)
Exemplo 12 Να (ΝΕε27_ [2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S) -4-carboxi-4- [10-(4-carboxifenoxi)decanoilamino]butanoil]amino]etoxi]etoxi]acet il] amino] etoxi]etoxi]acetil], Νε36-[2-[2-[2-[[2-[2-[2- [[(4S)-4-carboxi-4-[10 - (4- carboxifenoxi)decanoilamino]butanoil]amino]etoxi]etoxi]acet il]amino]etoxi]etoxi]acetil]- [Vai25, Arg26, Lys27,Glu30, Arg34, Lys36] -GLP-1- (7-37) -peptidil) -Gin
Quim. 61:
Método de preparação: método SPPS B UPLC (Método 09_B4_1): Rt = 8,9 min UPLC (Método 05_B7_1): Rt = 8,8 min LCMS4: Rt = 2,2 min, m/z = 1673 (m/3) , 1255 (m/4), 1004 (m/5)
Exemplo 13 Νε27- [2- [2- [2- [ [2- [2- [2- [ [ (4S) -4-carboxi-4- [ 10- (4-carboxifenoxi)decanoilamino]butanoil]amino]etoxi]etoxi]acet il] amino] etoxi] etoxi] acetil] , Νε36- [2 — [2 — [2 — [ [2 — [2 — [2 — [[(4S)-4-carboxi-4-[10- (4- carboxifenoxi)decanoilamino]butanoil]amino]etoxi]etoxi]acet il]amino]etoxi]etoxi]acetil] - [Vai25, Arg26, Lys27, Glu30, Gin34, Lys36] -GLP-1- (7-37) -peptidil-Glu Quim. 62:
Método de preparação: método SPPS B UPLC (Método 05_B9_1): Rt = 7,9 min UPLC (Método 05_B7_1): Rt = 8,8 min LCMS4: Rt = 2,3 min, m/z = 1663 (m/3), 1248 (m/4), 999 (m/5)
Exemplo 14 Νε22- [ (4S) -4-carboxi-4- [ [2- [2- [2- [ [2- [2- [2- (13-carboxitridecanoilamino)etoxi]etoxi]acetil]amino]etoxi]etox i ] acetil ] amino] butanoil ] , Νε27- [ (4S) -4-carboxi-4 - [ [2 - [2 - [2- [[2-[2-[2- (13- carboxitridecanoilamino)etoxi]etoxi]acetil]amino]etoxi]etox i ] acetil ] amino ] butanoil ] - [Lys22, Arg26, Lys27, His31,Gly34] -GLP-1- (7-34)-péptido
Quim. 63:
Método de preparação: método SPPS B UPLC (Método 08_B4_1): Rt = 8,5 min UPLC (Método 05_B7_1): Rt = 8,8 min LCMS4: Rt = 2,1 min, m/z = 1462 (m/3), 1097 (m/4), 878 (m/5)
Exemplo 15 Νε27- [2- [2 — [2 — [ [2— [2— [2— [ [ (4S) -4-carboxi-4- (13-carboxitridecanoilamino)butanoil]amino]etoxi]etoxi]acetil]a mino]etoxi]etoxi]acetil] , ΊΝΓε37— [2 — [2 — [2 — [ [2— [2— [2— [ [ (4S) — 4 — carboxi-4-(13— carboxitridecanoilamino)butanoil]amino]etoxi]etoxi]acetil]a mino]etoxi]etoxi]acetil]- [Aib8, Vai25, Arg26, Lys27, His3 ' , Gin34, Lys37] -GLP-1- (7-37) -péptido
Quim. 64:
Método de preparação: método SPPS B UPLC (Método 08_B4_1): Rt = 8,3 min UPLC (Método 05_B9_1): Rt = 7,1 min LCMS4: Rt = 2,1 min, m/z = 1589 (m/3), 1192 (m/4), 954 (m/5)
Exemplo 16 Νε27- [2 - [2 — [2 — [ [2 — [2 — [2 — [ [ (4S) -4-carboxi-4- (13-carboxitridecanoilamino)butanoil]amino]etoxi]etoxi]acetil]a mino]etoxi]etoxi]acetil] , ΊΝΓε37— [2 — [2 — [2 — [ [2— [2— [2— [ [ (4S) — 4 — carboxi-4-(13— carboxitridecanoilamino)butanoil]amino]etoxi]etoxi]acetil]a mino]etoxi]etoxi]acetil]- [Vai25, Arg26, Lys27,His31, Gin34, Lys37] -GLP-1- (7-37) -péptido Quim. 65:
Método de preparação: método SPPS B UPLC (Método 08_B4_1) : Rt = 8,1 min LCMS4: Rt = 2,1 min, m/z = 1585 (m/3), 1189 (m/4), 951 (m/5)
Exemplo 17 Νε27- [2 - [2 — [2 — [ [2 — [2 — [2 — [ [ (4S) -4-carboxi-4- (13-carboxitridecanoilamino)butanoil]amino]etoxi]etoxi]acetil]a mino] etoxi] etoxi] acetil] , Νε37- [2 — [2 — [2 — [ [2 — [2 — [2 — [ [ (4S) — 4 — carboxi-4-(13— carboxitridecanoilamino)butanoil]amino]etoxi]etoxi]acetil]a mino]etoxi]etoxi]acetil]- [Glu22, Glu23, Vai25, Arg26, Lys27, His31, Gin34, Lys37] -GLP-1- (7-37) -péptido
Quim. 66:
Método de preparação: método SPPS B UPLC (Método 08 B4 1): Rt = 8,0 min UPLC (Método 05_B9_1): Rt = 6,6 min LCMS4: Rt = 2,1 min, m/z = 1609 (m/3), 1206 (m/4), 966 (m/5)
Exemplo 18 Νε12- [2- [2 — [2 — [ [2— [2— [2— [ [ (4S) -4-carboxi-4- (13-carboxitridecanoilamino)butanoil]amino]etoxi]etoxi]acetil]a mino]etoxi]etoxi]acetil] , ΊΝΓε27— [2 — [2 — [2 — [ [2— [2— [2— [ [ (4S) — 4 — carboxi-4-(13— carboxitridecanoilamino)butanoil]amino]etoxi]etoxi]acetil]a mino]etoxi]etoxi]acetil]- [Aib8, Lys12, Glu22, Arg26, Lys27,His31,Gln34] -GLP-1- (7-37) -péptido Quim. 67:
Método de preparação: método SPPS B UPLC (Método 09_B4_1): Rt = 7,66 min UPLC (Método 04_A6_1): Rt = 4,09 min LCMS4: Rt = 1,83 min, m/z = 1181(m/4), 945 (m/5)
Exemplo 19 Νε22- [2 - [2 — [2 — [ [2 — [2 — [2 — [ [ (4S) -4-carboxi-4- (13-carboxitridecanoilamino)butanoil]amino]etoxi]etoxi]acetil]a mino]etoxi]etoxi]acetil] , ΊΝΓε27— [2 — [2 — [2 — [ [2— [2— [2— [ [ (4S) — 4 — carboxi-4-(13— carboxitridecanoilamino)butanoil]amino]etoxi]etoxi]acetil]a mino] etoxi] etoxi] acetil] - [Aib8, Lys22, Arg26, Lys27, His31, Gly34] -GLP-1-(7-34)-péptido
Quim. 68:
Método de preparação: método SPPS B UPLC (Método 09_B4_1): Rt = 8,37 min UPLC (Método 04_A6_1): Rt = 4,41 min LCMS4: Rt = 2,00 min, m/z = 1466 (m/3), 1100 (m/4)
Exemplo 20 Νε22- [ (4S) -4-carboxi-4- [ [2- [2- [2- [ [2- [2- [2- (13-carboxitridecanoilamino)etoxi]etoxi]acetil]amino]etoxi]etox i ] acetil ] amino ] butanoil ] , Νε27-[ (4S)-4-carboxi-4-[ [2— [2— [2 — [[2-[2-[2- (13- carboxitridecanoilamino)etoxi]etoxi]acetil]amino]etoxi]etox i ] acetil ] amino] butanoil ] - [Lys22, Vai25, Arg26, Lys27, Glu30, Gin34] -GLP-1-(7-37)-péptido
Quim. 69:
Método de preparação: SPPS Método E UPLC (Método 09_B4_1): Rt = 9,00 min UPLC (Método 04_A6_1): Rt = 6,50 min LCMS4: Rt = 2,23 min, m/z = 1215(m/4), 972(m/5)
Exemplo 21 Νε27- [2 - [2 — [2 — [ [2 — [2 — [2 — [ [ (4S) -4-carboxi-4- [ 10 - (4-carboxifenoxi)decanoilamino]butanoil]amino]etoxi]etoxi]acet il] amino] etoxi]etoxi]acetil], Νε36-[2-[2-[2-[[2-[2-[2- [[ (4S)-4-carboxi-4 - [10 - (4- carboxifenoxi)decanoilamino]butanoil]amino]etoxi]etoxi]acet il]amino]etoxi]etoxi]acetil]- [Glu22, His26, Lys27, Glu30, Arg34, Lys36] -GLP-1- (7-37) -peptidil-Glu Quim. 70:
Método de preparação: método SPPS B UPLC (Método 09_B4_1): Rt = 8,4 min UPLC (Método 04_A6_1): Rt = 9,3 min LCMS4: Rt = 2,2 min, m/z = 1681 (m/3), 1261 (m/4), 1009 (m/5)
Exemplo 22 Νε24- [ (4S) -4-carboxi-4- [ [2- [2- [2- [ [2- [2- [2- (13-carboxitridecanoilamino)etoxi]etoxi]acetil]amino]etoxi]etox i ] acetil ] amino] butanoil ] , Νε27- [ (4S) -4-carboxi-4 - [ [2 - [2 - [2- [[2-[2-[2- (13- carboxitridecanoilamino)etoxi]etoxi]acetil]amino]etoxi]etox i] acetil] amino] butanoil] - [Glu22,Lys24, Arg26, Lys27,His31,Gly34] -GLP-1-(7-34)-péptido
Quim. 71:
Método de preparação: método SPPS B UPLC (Método 0 9_B4_1) : Rt = 8,17 min UPLC (Método 04_A6_1): Rt = 4,65 min LCMS4: Rt = 1,98 min, m/z = 1481 (m/3), 1111 (m/4)
Exemplo 23 Νε27- [2 - [2 — [2 — [ [2 — [2 — [2 — [ [ (4S) -4-carboxi-4- [ [ (4S) -4-carboxi-4- [10-(4- carboxifenoxi)decanoilamino]butanoil]amino]butanoil]amino]e toxi]etoxi]acetil] amino] etoxi]etoxi] acetil] , Νε36-[2-[2-[2- [[2-[2-[2-[[ (4S)-4-carboxi-4-[ [ (4S)-4-carboxi-4 - [10 - (4-carboxifenoxi)decanoilamino]butanoil]amino]butanoil]amino]e toxi]etoxi]acetil]amino]etoxi]etoxi]acetil]-[Vai25, Arg26, Lys27,Gln34,Lys36] -GLP-1- (7-37) -péptido
Quim. 72:
Método de preparação: método SPPS B UPLC (Método 08_B4_1 ): Rt = 8,82 min UPLC (Método 05_B5_1): Rt = 6,10 min LCMS4: Rt = 2,37 min, m/z = 1687 (m/3), 1266 (m/4), 1013 (m/5)
Exemplo 24 Νε24- [2 - [2 — [2 — [ [2 — [2 — [2 — [ [ (4S) -4-carboxi-4- (13-carboxitridecanoilamino)butanoil]amino]etoxi]etoxi]acetil]a mino]etoxi]etoxi]acetil] , ΊΝΓε27— [2 — [2 — [2 — [ [2— [2— [2— [ [ (4S) — 4 — carboxi-4-(13— carboxitridecanoilamino)butanoil]amino]etoxi]etoxi]acetil]a mino]etoxi]etoxi]acetil]- [Glu22, Lys24, Vai25, Arg26, Lys27, His31, Arg34] -GLP-1- (7-37) -péptido
Quim. 73:
Método de preparação: método SPPS B UPLC (Método 08_B4_1): Rt = 7,52 min UPLC (Método 04_A9_1): Rt = 10,35 min LCMS4: Rt = 1,92 min, m/z = 1613 (m/3), 1210 (m/4), 968 (m/5), 807 (m/6)
Exemplo 25 Νε24- [2 - [2 — [2 — [ [2 — [2 — [2 — [ [ (4S) -4-carboxi-4- [ 10 - (4-carboxifenoxi)decanoilamino]butanoil]amino]etoxi]etoxi]acet il] amino] etoxi]etoxi]acetil], ΊΝΓε27— [2 — [2 — [2 — [ [2 — [2 — [2 — [[ (4S)-4-carboxi-4 - [10 - (4- carboxifenoxi)decanoilamino]butanoil]amino]etoxi]etoxi]acet il]amino]etoxi]etoxi]acetil]- [Glu22, Lys24, Arg26, Lys27, His31, Gly34] -GLP-1- (7-34) -péptido Quim. 74:
Método de preparação: método SPPS B UPLC (Método 08_B4_1): Rt = 8,01 min UPLC (Método 04_A9_1): Rt = 8,00 min LCMS4: Rt = 2,08 min, m/z = 1513 (m/3) , 1135 (m/4), 908 (m/5)
Exemplo 2 6 Νε27- [ (4S) -4-carboxi-4- [ [2- [2- [2- [ [2- [2- [2- [ [ (4R) -4-carboxi-4- [10-(4- carboxifenoxi)decanoilamino]butanoil]amino]etoxi]etoxi]acet il]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]butanoil] , Νε36-[(4S)-4- carboxi-4-[[2 —[2 —[2 —[[2 —[2 —[2 —[[ (4R)-4-carboxi-4-[10-(4-carboxifenoxi)decanoilamino]butanoil]amino]etoxi]etoxi]acet il]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]butanoil]-[Vai25, Arg26, Lys27,Gln34,Lys36] -GLP-1- (7-37) -péptido
Quim. 75:
Método de preparação: método SPPS B UPLC (Método 09_B4_1): Rt = 8,96 min UPLC (Método 05_B5_1): Rt = 6,54 min UPLC (Método 04_A6_1): Rt = 5,69 min LCMS4: m/z: Rt = 3,07 min, m/z = 1687 (m/3), 1266 (m/4), 1013 (m/5)
Exemplo 27 Νε24- [2 - [2 — [2 — [ [2 — [2 — [2 — [ [ (4S) -4-carboxi-4- (13-carboxitridecanoilamino)butanoil]amino]etoxi]etoxi]acetil]a mino] etoxi] etoxi] acetil] , Νε27- [2 — [2 — [2 — [ [2 — [2 — [2 — [ [ (4S) — 4 — carboxi-4-(13— carboxitridecanoilamino)butanoil]amino]etoxi]etoxi]acetil]a mino]etoxi]etoxi]acetil] - [Glu22,Lys24,Val25, Arg26, Lys27, Gly34 ] -GLP-1-(7-34)-péptido
Quim. 76:
Método de preparação: método SPPS B UPLC (Método 09_B4_1): Rt = 9,25 min UPLC (Método 04_A6_1): Rt = 6,01 min LCMS4: Rt = 3,31 min, m/z = 1506 (m/3), 1130 (m/4), 4520 (m/5)
Exemplo 28 Νε24- [2 - [2 — [2 — [ [2 — [2 — [2 — [ [ (4S) -4-carboxi-4- [ 10 - (4-carboxifenoxi)decanoilamino]butanoil]amino]etoxi]etoxi]acet il] amino] etoxi]etoxi]acetil], ΊΝΓε27— [2 — [2 — [2 — [ [2 — [2 — [2 — [[ (4S)-4-carboxi-4 - [10 - (4- carboxifenoxi)decanoilamino]butanoil]amino]etoxi]etoxi]acet il]amino]etoxi]etoxi]acetil]- [Glu22, Lys24, Vai25, Arg26, Lys27, Arg34] -GLP-1- (7-37) -péptido Quim. 77:
Método de preparação: método SPPS B UPLC (Método 08_B4_1): Rt = 8,19 min UPLC (Método 04_A6_1): Rt = 5,24 min LCMS4: Rt = 3,22 min, m/z = 1663 (m/3), 1247 (m/4), 998 (m/5), 832 (m/6)
Exemplo 2 9 Νε24- [2 - [2 — [2 — [ [2 — [2 — [2 — [ [ (4S) -4-carboxi-4- (13-carboxitridecanoilamino)butanoil]amino]etoxi]etoxi]acetil]a mino]etoxi]etoxi]acetil] , ΊΝΓε27— [2 — [2 — [2 — [ [2— [2— [2— [ [ (4S) — 4 — carboxi-4-(13— carboxitridecanoilamino)butanoil]amino]etoxi]etoxi]acetil]a mino]etoxi]etoxi]acetil]- [Aib8, Glu22, Lys24, Vai25, Arg26, Lys27,His31,Gln34] -GLP-1- (7-37) -péptido
Quim. 7 8:
Método de preparação: método SPPS B UPLC (Método 08_B4_1): Rt = 7,79 min UPLC (Método 04_A6_1): Rt = 4,87 min
Exemplo 30 Νε24- [ (4S) -4-carboxi-4- [ [2-[2-[2-[ [2-[2-[2-(13-carboxitridecanoilamino)etoxi]etoxi]acetil]amino]etoxi]etox i ] acetil ] amino ] butanoil ] , Νε27-[ (4S)-4-carboxi-4-[ [2— [2— [2 — [[2-[2-[2- (13- carboxitridecanoilamino)etoxi]etoxi]acetil]amino]etoxi]etox i] acetil] amino] butanoil] - [Glu22,Lys24,Val25, Arg26, Lys27, Gly34] -GLP-1-(7-34)-péptido
Quim. 79:
Método de preparação: método SPPS B UPLC (Método 08_B4_1): Rt = 9,33 min UPLC (Método 04_A6_1): Rt = 6,13 min LCMS4: Rt = 2,98 min, m/z = 1506 (m/3), 1130 (m/4), 904 (m/5)
Exemplo 31 Νε27- [2- [2 — [2 — [ [2— [2— [2— [ [ (4S) -4-carboxi-4- [ 10- (4-carboxifenoxi)decanoilamino]butanoil]amino]etoxi]etoxi]acet il] amino] etoxi]etoxi]acetil], Νε36-[2-[2-[2-[[2-[2-[2- [[ (4S)-4-carboxi-4 - [10 - (4- carboxifenoxi)decanoilamino]butanoil]amino]etoxi]etoxi]acet il]amino]etoxi]etoxi]acetil]- [Aib8, Glu22, Arg26, Lys27, Glu30, Arg34, Lys36] -GLP-1- (7-37 ) -peptidil-Glu-Gly
Quim. 80:
Método de preparação: método SPPS B UPLC (Método 09_B4_1): Rt = 8,58 min UPLC (Método 10 B29 1): Rt = 10,6 min UPLC (Método 04_A6_1): Rt = 4,43 min LCMS4: Rt = 3,72min; m/3: 1712; m/4: 1284; m/5: 1028 Exemplo 32 Νε27- [2- [2 — [2 — [ [2 — [2 — [2 — [ [ (4S) -4-carboxi-4- [12-(4-carboxifenoxi)dodecanoilamino]butanoil]amino]etoxi]etoxi]ac etil] amino] etoxi]etoxi]acetil], Νε36-[2-[2-[2-[[2-[2-[2- [[ (4S)-4-carboxi-4- [12- (4- carboxifenoxi)dodecanoilamino]butanoil]amino]etoxi]etoxi]ac etil]amino]etoxi]etoxi]acetil]- [Glu22, Arg26, Lys27,Glu30, Arg34, Lys36] -GLP-1- (7-37) -peptidil-Glu-Gly
Quim. 81:
Método de preparação: método SPPS B UPLC (Método 09_B4_1): Rt = 9,19 min UPLC (Método 10_B29_1): Rt = 13,73 min UPLC (Método 04_A6_1): Rt = 5,40 min LCMS4: Rt = 2,44 min; m/3: 1726; m/4: 1294; m/5:1036
MÉTODOS FARMACOLÓGICOS
Exemplo 33: Potência in vitro 0 objetivo deste exemplo é testar a atividade, ou potência, dos derivados de GLP-1 in vitro.
As potências dos derivados de GLP-1 dos Exemplos 1-32 foram determinadas tal como descrito abaixo, i.e. como estimulação da formação de AMP cíclico (AMPc) num meio contendo membranas expressando o recetor de GLP-1 humano.
Princípio
Membranas plasmáticas purificadas de uma linha celular transfetada estável, BHK467-12A (tk-tsl3), expressando o recetor de GLP-1 humano foram estimuladas com o análogo de GLP-1 ou derivado em questão, e a potência de produção de AMPc foi medida utilizando o Estojo de Ensaio de AMPc AlfaScreenTM de Perkin Elmer Life Sciences. 0 principio básico do Ensaio AlfaScreen é uma competição entre o AMPc endógeno e o biotina-AMPc adicionado de forma exógena. A captura de AMPc é alcançada através da utilização de um anticorpo especifico conjugado com contas aceitadoras.
Cultura de células e preparação de membranas
Uma linha celular transfetada estável e um clone de expressão elevada foram selecionados para rastreio. As células foram cultivadas a CO2 a 5% em DMEM, FCS a 5%, Pen/Strep a 1% (Penicilina/Estreptomicina) e 0,5 mg/ml do marcador de seleção G418. Células a aproximadamente 80% de confluência foram lavadas 2x com PBS e colhidas com Versene (solução aquosa do sal tetrassódico do ácido etilenodiaminotetraacético), centrifugadas 5 min a 1000 rpm e o sobrenadante removido. Os passos adicionais foram todos realizados em gelo. O sedimento celular foi homogeneizado através de Ultrathurax durante 20-30 s em 10 mL de Tampão 1 (Na-HEPES 20 mM, EDTA 10 mM, pH=7,4), centrifugado durante 15 min a 20000 rpm e o sedimento ressuspenso em 10 mL de Tampão 2 (Na-HEPES 20 mM, EDTA 0,1 mM, pH=7,4). A suspensão foi homogeneizada durante 20-30 s e centrifugada 15 min a 20000 rpm. A suspensão em Tampão 2, homogeneização e centrifugação foram repetidas uma vez e as membranas foram ressuspensas em Tampão 2. A concentração de proteína foi determinada e as membranas armazenadas a -80 °C até à utilização. 0 ensaio foi realizado em placas de 96 poços de fundo plano (Costar cat. N°: 3693) . 0 volume final por poço foi de 50 PL.
Soluções e reagentes
Estojo de Ensaio de AMPc AlfaScreen de Perkin Elmer Life Sciences (N° de cat. 6760625M); contendo contas Aceitadoras Anti-AMPc (10 U/yL), contas Dadoras de Estreptavidina (10 U/yL) e AMPc-Biotinilado (133 U/yL).
Tampão AlfaScreen, pH=7,4: TRIS-HC1 50 mM (Sigma, n° de cat. T3253); HEPES 5 mM (Sigma, n° de cat. H3375); MgCl2 10 mM, 6H2O (Merck, n° de cat. 5833); NaCl 150 mM (Sigma, n° de cat. S9625); Tween a 0,01% (Merck, n° de cat. 822184). O seguinte foi adicionado ao Tampão AlphaScreen antes da utilização (concentrações finais indicadas): BSA (Sigma, n° de cat. A7906): 0,1%; IBMX (Sigma, n° de cat. 15879): 0,5 mM; ATP (Sigma, n° de cat. A7699): 1 mM; GTP (Sigma, n° de cat. G8877) : 1 uM. O padrão de AMPc (fator de diluição no ensaio = 5) : Solução de AMPc: 5 yL de uma reserva de AMPc 5 mM + 4 95 yL de Tampão AlfaScreen.
Foram preparadas séries de diluição adequadas em Tampão AlfaScreen do padrão de AMPc bem como do análogo de GLP-1 ou derivado a testar, p. ex. as seguintes oito concentrações do composto GLP-1: 10“7, 10‘8, 10‘9, 10‘10, 10“ 11, 10”12, 10‘13 e 10”14M, e uma série de, p. ex., 10”6 a 3><10“ 11 de AMPc.
Membrana/contas Aceitadoras
As membranas foram preparadas a partir de células hGLP-1/BHK 467-12A com uma concentração de 6 pg/poço correspondendo a 0,6 mg/mL (a quantidade de membranas usadas por poço pode variar) "Sem membranas": Contas Aceitadoras (15 pg/mL final) em tampão AlphaScreen. "Membranas a 6 pg/poço": membranas + Contas Aceitadoras (15 pg/mL final) em tampão AlphaScreen.
Uma aliquota (10 pL) de "Sem membranas" foi adicionada ao padrão de AMPc (por poço em poços em duplicado) e os controlos positivo e negativo.
Foi adicionada uma aliquota (10 pL) de "membranas a 6 pg/poço" a GLP-1 e análogos (por poço em poços em duplicado ou triplicado).
Controlo Pos.: 10 pL de "sem membranas" + 10 pL de Tampão AlphaScreen.
Controlo Neg.: 10 pL de "sem membranas" + 10 pL de Solução de Reserva de AMPc (50 pM).
Uma vez que as contas são sensíveis à luz direta, qualquer manuseamento foi no escuro (o mais escuro possível) ou em luz verde. Todas as diluições foram feitas em gelo.
Procedimento 1. Fazer o Tampão AlphaScreen. 2. Dissolver e diluir o padrão de GLP-l/Análogos/AMPc em Tampão AlphaScreen. 3. Fazer a Solução de Contas Dadoras misturando contas dadoras de estreptavidina (2 unidades/poço) e AMPc biotinilado (1,2 unidades/poço) e incubar 20-30 min no escuro à temperatura ambiente. 4. Adicionar o AMPc/GLP-l/Análogos à placa: 10 pL por poço. 5. Preparar a solução de membrana/Contas Aceitadoras e adicionar esta às placas: 10 pL por poço. 6. Adicionar as Contas Dadoras: 30 pL por poço. 7. Envolver a placa em folha de alumínio e incubar no agitador durante 3 horas (muito lentamente) à TA. 8. Contagem em AlphaScreen - cada placa é pré-incubada no AlphaScreen durante 3 minutos antes da contagem.
Resultados
Os valores de EC50 [pM] foram calculados utilizando o suporte lógico Graph-Pad Prism (versão 5) e são mostrados na Tabela 1 abaixo. Foi confirmada a potência de todos os derivados in vitro.
Tabela 1: Potência in vitro Composto do Exemplo no. EC50/pM
A potência média in vitro para os compostos testados (EC50 média) foi de 340 pM. A maioria dos derivados tinha uma boa potência in vitro correspondendo a uma EC50 abaixo de 1200 pM.
Para comparação, o composto no. 13 na Tabela 1 de Journal of Medicinal Chemistry (2000), vol. 43, no. 9, pág. 1664-669 (GLP-l(7-37) acilado em K26'34 com bis-C12-diácido) tinha uma potência in vitro correspondendo a uma EC50 de 1200 pM.
Exemplo 34: ligação ao recetor de GLP-1 O objetivo desta experiência é investigar a ligação ao recetor de GLP-1 dos derivados de GLP-1 e como a ligação é potencialmente influenciada pela presença de albumina. Isto é feito numa experiência in vitro tal como descrito abaixo. A afinidade de ligação dos derivados de GLP-1 dos Exemplos 1-32 ao recetor de GLP-1 humano foi medida por meio da sua capacidade para deslocar 125I-GLP-1 do recetor. Para testar a ligação dos derivados a albumina, o ensaio foi realizado com uma concentração baixa de albumina (0,001% correspondente à quantidade residual desta no marcador), bem como com uma concentração elevada de albumina (2,0% adicionada). Uma mudança na afinidade de ligação, IC50, é uma indicação de que o péptido em questão se liga a albumina e, deste modo, uma previsão de um potencial perfil farmacocinético prolongado do péptido em questão em modelos animais.
Condições
Espécie {in vitro): Hamster
Ponto Final Biológico: Ligação ao Recetor Método de Ensaio: SPA Recetor: recetor de GLP-1 Linha Celular: BHK tk-tsl3
Cultura de células e purificação de membranas
Foi selecionada uma linha celular transfetada estável e um clone de expressão elevada para rastreio. As células foram cultivadas em CO2 a 5% em DMEM, FCS a 10%, Pen/Strep a 1% (Penicilina/Estreptomicina) e 1,0 mg/mL do marcador de seleção G418.
As células (aproximadamente 80% de confluência) foram lavadas duas vezes em PBS e colhidas com Versene (solução aquosa do sal tetrassódico de ácido etilenodiaminotetraacético), após o que foram separadas por centrifugação a 1000 rpm durante 5 min. As
células/sedimento celular devem ser mantidas em gelo tanto quanto possível nas etapas subsequentes. O sedimento celular foi homogeneizado com Ultrathurrax durante 20-30 segundos numa quantidade adequada de Tampão 1 (dependendo da quantidade de células, mas p. ex. 10 mL) . O homogenato foi centrifugado a 20000 rpm durante 15 minutos. O sedimento foi ressuspenso (homogeneizado) em 10 mL de Tampão 2 e novamente centrifugado. Este passo foi repetido uma vez mais. O sedimento resultante foi ressuspenso no Tampão 2 e a concentração de proteína foi determinada. As membranas foram armazenadas a menos 80 °C.
Tampão 1: Na-HEPES 20 mM + EDTA 10 mM, pH 7,4 Tampão 2: Na-HEPES 20 mM + EDTA 0,1 mM, pH 7,4
Ensaio de ligação: SPA:
Os compostos de teste, membranas, partículas de SPA e [1251 ] -GLP-1 (7-36) NH2 foram diluídos em tampão de ensaio. 50 pL (microlitros) de HSA (experiência de "albumina elevada" contendo HSA a 2%), ou tampão (experiência de "albumina baixa" contendo HSA a 0,001%), foram adicionados a
Optiplate, e foram adicionados 25 μΐ de compostos de teste. Adicionou-se 5-10 pg de proteína de membrana/amostra (50 pL) correspondendo a 0,1-0,2 mg de proteína/mL (para ser, de preferência, otimizado para cada preparação de membrana) . As partículas de SPA (contas SPA de aglutinina de gérmen de trigo, Perkin Elmer, #RPNQ0001) foram adicionadas numa quantidade de 0,5 mg/poço (50 pL) . A incubação foi iniciada com [125I ]-GLP-1 ]-(7-36) NH2 (concentração final de 0,06 nM correspondendo a 49880 DPM, 25 pL). As placas foram seladas com PlateSealer e incubadas durante 120 minutos a 30 °C enquanto se agitava. As placas foram centrifugadas (1500 rpm, 10 min) e contadas em Topcounter.
Tampão de ensaio: HEPES 50 mM EGTA 5 mM MgCl2 5 mM Tween 20 a 0,005% PH 7,4 HSA foi SIGMA Al653 Cálculos 0 valor de IC5o foi lido a partir da curva como a concentração que desloca 50% de 125I-GLP-1 do recetor, e foi determinada a razão de [ (IC5o/nM) HSA elevada]/[(ICso/nM) HSA baixa].
Geralmente, a ligação ao recetor de GLP-1 a baixa concentração de albumina deve ser tão boa quanto possível, correspondendo a um valor baixo de IC50. O valor de IC50 a uma concentração de albumina elevada é uma medida da influência da albumina na ligação do derivado ao recetor de GLP-1. Tal como é conhecido, os derivados de GLP-1 também se ligam a albumina. Este é um efeito geralmente desejável, que prolonga a sua vida útil no plasma. Por conseguinte, o valor de IC50 em albumina elevada será geralmente superior ao valor de IC50 em albumina baixa, correspondendo a uma ligação reduzida ao recetor de GLP-1, devido à ligação da albumina que compete com a ligação ao recetor de GLP-1.
Uma razão elevada (valor de IC50 (albumina elevada)/valor de IC50 (albumina baixa)) pode, portanto, ser tomada como uma indicação de que o derivado em questão se liga bem a albumina (pode ter uma semivida longa), e também se liga bem per se ao recetor de GLP-1 (o valor de IC5o (albumina elevada) é elevado e o valor de IC50 (albumina baixa) é baixo).
Resultados
Obtiveram-se os seguintes resultados, onde "razão" refere-se a [(IC5o/nM) HSA elevada]/[(IC5o/nM) HSA baixa):
Tabela 2: Afinidade de ligação ao recetor
A razão média foi muito boa (cerca de 300) . A maioria dos derivados teve uma razão acima de 50.
Além disso, no que se refere a IC50 (albumina baixa) , a IC50 média dos compostos testados foi de 14 nM, e a maioria dos derivados ficou abaixo de 15,0 nM.
Finalmente, no que se refere à IC50 (albumina elevada) a maioria dos derivados teve uma IC50 (albumina elevada) abaixo de 900 nM.
Para comparação, o composto no. 13 na Tabela 1 de Journal de Medicinal Chemistry (2000), vol. 43, no. 9, pág. 1664-669 (GLP-1 (7-37) acilado em k26'34 com bis-C12-diácido) teve uma razão de 51,3, uma IC50 (albumina baixa) de 17,7 nM, e uma IC50 (albumina elevada) de 908 nM.
Exemplo 35: Estimativa da biodisponibilidade oral - Injeção intestinal em rato (caprato) O objetivo desta experiência é estimar a biodisponibilidade oral dos derivados de GLP-1.
Para este fim, a exposição no plasma após injeção direta no lúmen intestinal dos derivados de GLP-1 dos Exemplos 2-17 e 19-22 foi estudada in vivo em ratos, tal como descrito a seguir.
Os derivados de GLP-1 foram testados numa concentração de 1000 uM numa solução de 55 mg/mL de caprato de sódio.
Foram obtidos ratos Sprague Dawley machos com um peso corporal à chegada de aproximadamente 240 g de Taconic (Dinamarca) e distribuídos por diferentes tratamentos através de simples randomização, 4 ratos por grupo. Os ratos foram colocados em jejum durante aproximadamente 18 horas antes da experiência e levados para anestesia geral (Hypnorm/Dormicum).
Os derivados de GLP-1 foram administrados no jejuno quer na parte proximal (10 cm distai ao duodeno) quer no intestino médio (50 cm proximal ao ceco). Um cateter PE50, 10 cm de comprimento foi inserido no jejuno, encaminhado pelo menos 1,5 cm para o jejuno e firmado antes da dosagem através de ligadura em torno do intestino e do cateter com sutura 3/0 distai à ponta para evitar vazamento ou deslocamento do cateter. O cateter foi colocado sem seringa e agulha e foram administrados 2 mL de solução salina no abdómen antes de se encerrar a incisão com agrafos de cirurgia.
Foram injetados 100 pL do respetivo derivado de GLP-1 no lúmen do jejuno através do cateter com uma seringa de 1 mL. Subsequentemente, 200 pL de ar foram empurrados para dentro do lúmen do jejuno com outra seringa para "lavar" o cateter. Esta seringa foi deixada ligada ao cateter para evitar refluxo para o cateter.
Amostras de sangue (200 uL) foram recolhidas a intervalos desejados (normalmente aos tempos 0, 10, 30, 60, 120 e 240 min) em tubos de EDTA a partir da veia da cauda e centrifugadas durante 5 minutos, 10000 g, a 4 °C dentro de 20 minutos. O plasma (75 uL) foi separado para tubos Micronic, imediatamente congelado e mantido a -20 °C até ser analisado quanto à concentração no plasma do respetivo derivado de GLP-1 com LOCI (Imunoensaio de Canais de Oxigénio Luminescente), em geral tal como descrito para a determinação de insulina por Poulsen e Jensen em Journal of Biomolecular Screening 2007, vol. 12, pág. 240-247. As contas dadoras foram revestidas com estreptavidina, enquanto as esferas aceitadoras foram conjugadas com um anticorpo monoclonal que reconhece um epitopo médio/C-terminal do péptido. Outro anticorpo monoclonal, especifico para o terminal N, foi biotinilado. Os três reagentes foram combinados com o analito e formaram um imuno-complexo de dois locais. A iluminação do complexo libertou átomos de oxigénio singleto a partir das contas dadoras, que passaram por canais para as contas aceitadoras e desencadearam quimioluminescência que foi medida num leitor de placas Envision. A quantidade de luz foi proporcional à concentração do composto.
Após a amostragem de sangue, os ratos foram sacrificados sob anestesia e o abdómen foi aberto para verificar a colocação correta do cateter.
As concentrações plasmáticas médias (n=4) (pmol/L) foram determinadas em função do tempo. Calculou-se a razão da concentração plasmática (pmol/L) dividida pela concentração da solução de dosagem (pmol/L) para cada tratamento e os resultados para t=30 min (30 minutos após a injeção do composto no jejuno) foram avaliados (exposição corrigida para a dose a 30 min) como uma medida substituta da biodisponibilidade intestinal. Mostrou-se que a exposição corrigida para a dose está significativamente correlacionada com a biodisponibilidade real.
Obtiveram-se os seguintes resultados, onde a exposição corrigida para a dose a 30 min se refere à concentração plasmática 30 minutos após injeção do composto no jejuno (pM)), dividida pela (concentração do composto na solução de dosagem (μΜ)):
Tabela 3: Exposição corrigida para a dose a 30 min
Todos os derivados tiveram uma exposição corrigida para a dose a 30 min de mais de 38.
Para comparação, o composto no. 13 na Tabela 1 de Journal of Medicinal Chemistry (2000), vol. 43, no. 9, pág. 1664-669 (GLP-1 (7-37) acilado em k26'34 com bis-C12-diácido) teve uma exposição corrigida para a dose a 30 min de 38.
Exemplo 36: Efeito na glicose sanguínea e no peso corporal O objetivo do estudo é verificar o efeito dos derivados de GLP-1 na glicose sanguínea (GS) e o peso corporal (PC) num quadro diabético.
Os derivados de GLP-1 são testados num estudo de dose-resposta num modelo de ratinho diabético obeso (ratinhos db/db) tal como descrito a seguir.
Ratinhos db/db (Taconic, Dinamarca), alimentados desde o nascimento com a dieta NIH31 (NIH 31M Roent Diet, comercialmente disponível em Taconic Farms, Inc., EUA, ver www.taconic.com) , são recrutados para o estudo com a idade de 7-9 semanas. Aos ratinhos foi dado acesso livre a comida padrão (p. ex., Altromin 1324, Brogaarden, Gentofte, Dinamarca) e água da torneira e mantiveram-se a 24 °C. Após 1-2 semanas de aclimatização, a glicose no sangue basal é avaliada duas vezes em dois dias consecutivos (isto é, às 9 horas) . Os ratinhos com os valores mais baixos de glicose no sangue foram excluídos das experiências. Com base nos valores médios de glicose sanguínea, os restantes ratinhos são selecionados para mais experiências e distribuídos por 7 grupos (n=6) com níveis de glicose sanguínea correspondentes. Os ratinhos são usados em experiências com uma duração de 48 horas, e até 4 vezes. Após a última experiência os ratinhos são sujeitos a eutanásia.
Os sete grupos recebem tratamento como se segue: 1: Veículo, s.c. 2: Derivado de GLP-1, 0,3 nmol/kg, s.c. 3: Derivado de GLP-1, 1,0 nmol/kg, s.c. 4: Derivado de GLP-1, 3,0 nmol/kg, s.c. 5: Derivado de GLP-1, 10 nmol/kg, s.c. 6: Derivado de GLP-1, 30 nmol/kg, s.c. 7: Derivado de GLP-1, 100 nmol/kg, s.c.
Veículo: fosfato de sódio 50 mM, cloreto de sódio 145 mM, tween 80 a 0,05%, pH 7,4. O derivado de GLP-1 é dissolvido no veículo, até concentrações de 0,05, 0,17, 0,5, 1,7, 5,0 e 17,0 nmol/mL. Aos animais é administrada uma dose s.c. com um volume de dose de 6 mL/kg (i.e. 300 yL por ratinho de 50 g).
No dia de administração da dose, a glicose sanguínea é avaliada no tempo -hh (8.30 horas), após o que os ratinhos são pesados. O derivado de GLP-1 é doseado aproximadamente às 9 horas (tempo 0) . No dia de administração da dose, a glicose sanguínea é avaliada nos tempos 1, 2, 4 e 8 h (10 h, 11 h, 13 h e 17 h). Após a colheita da amostra das 8 h, os ratinhos são pesados.
Nos dias seguintes, a glicose sanguínea é avaliada no tempo 24 e 48 após a dosagem (i.e. às 9 horas no dia 2 e 3) . Em cada dia, os ratinhos são pesados após a colheita de amostras de glicose sanguínea.
Os ratinhos são pesados individualmente numa balança digital.
Amostras para medição da glicose sanguínea são obtidas a partir do capilar da ponta da cauda de ratinhos conscientes. Colheu-se sangue, 10 pL, em capilares heparinizados e transferiu-se para 500 pL de tampão de glicose (solução do sistema EKF, Eppendorf, Alemanha). A concentração de glicose é medida utilizando o método da glicose-oxidase (analisador de glicose Biosen 5040, EKF Diagnostic, GmbH, Barleben, Alemanha). As amostras são mantidas à temperatura ambiente durante até 1 h até à análise. Se a análise tiver de ser adiada, as amostras são mantidas a 4 °C durante um máximo de 24 h. ED5o é a dose que dá origem a um efeito semimáximo em nmol/kg. Este valor é calculado com base na capacidade dos derivados para diminuir o peso corporal, bem como a capacidade de baixar a glicose no sangue, tal como explicado abaixo. A ED50 para o peso corporal é calculada como uma dose que dá origem a um efeito semimáximo no delta PC 8 horas após a administração subcutânea do derivado. Por exemplo, se a diminuição máxima do peso corporal após 8 horas for de 2,0 g, então o peso corporal de ED50 seria a dose em nmol/kg que dá origem a uma diminuição no peso corporal após 8 horas de 1,0 g. Esta dose (peso corporal de ED5o) pode ser lida a partir da curva de dose-resposta. A ED50 para a glicose no sangue é calculada como a dose que dá origem a um efeito de semimáximo na AUC delta BG 8 horas e/ou 24 horas após a administração subcutânea do análogo. O valor de ED5q só pode ser calculado se existir uma relação de dose-resposta sigmoide correta com uma definição clara da resposta máxima. Assim, se este não fosse o caso, o derivado em questão pode ser testado de novo num intervalo de diferentes doses para verificar se é obtida uma relação de dose-resposta sigmoide.
Exemplo 37: Semivida em miniporcos O objetivo deste estudo é determinar o prolongamento in vivo dos derivados de GLP-1 após administração i.v. a miniporcos, i.e. o prolongamento do seu tempo de ação. Isto é feito num estudo farmacocinético (PK), onde é determinada a semivida terminal do derivado em questão. Por semivida terminal entende-se geralmente o período de tempo que leva a reduzir para metade uma certa concentração plasmática, medida após a fase de distribuição inicial.
Obtiveram-se miniporcos Gottingen machos a partir de Ellegaard Gottingen Minipigs (Dalmose, Dinamarca) com idade entre 7-14 meses e peso de aproximadamente 16-35 kg que foram utilizados nos estudos. Os miniporcos foram alojados individualmente e alimentados de forma restrita uma ou duas vezes por dia com dieta SDS para miniporcos (Special Diets Services, Essex, RU) . Após pelo menos duas semanas de aclimatização, dois cateteres venosos centrais permanentes foram implantados na veia cava caudalis ou cranialis em cada animal. Os animais foram deixados recuperar uma semana após a cirurgia e foram então utilizados para estudos farmacocinéticos repetidos com um período de lavagem adeguado entre sucessivas dosagens da doses de derivado de GLP-1.
Os animais foram colocados em jejum durante aproximadamente 18 h antes da dosagem e de 0 a 4 h após a dosagem, mas tiveram acesso ad libitum a água durante todo o período.
Os derivados de GLP-1 foram dissolvidos em fosfato de sódio 50 mM, cloreto de sódio 145 mM, tween 80 a 0,05%, pH 7,4 até uma concentração de geralmente 20-60 nmol/mL. Injeções intravenosas (o volume correspondente a geralmente 1-2 nmol/kg, por exemplo, 0,033 mL/kg) dos compostos foram administradas através de um cateter e foram colhidas amostras de sangue em pontos de tempo predefinidos durante até 13 dias após a dosagem (de preferência através do outro cateter). Foram colhidas amostras de sangue (por exemplo 0,8 mL) em tampão EDTA (8 mM) e depois centrifugadas a 4 °C e 1942 g durante 10 minutos. O plasma foi pipetado em tubos Micronic em gelo seco, e mantido a 20 °C até ser analisado quanto à concentração plasmática do respetivo composto GLP-1 utilizando ELISA ou um ensaio semelhante baseado em anticorpos ou LC-MS. Os perfis individuais de concentração plasmática-tempo foram analisados através de um modelo não compartimentai em Phoenix WinNonLin ver. 6.2. (Pharsight Inc., Mountain View, CA, EUA) e determinaram-se as semividas terminais resultantes (média harmónica).
Resultados 0 derivado do Exemplo 2 foi testado e tinha uma semivida de 87 horas.
Para comparação, o composto n. 13 na Tabela 1 de Journal of Medicinal Chemistry (2000), vol. 43, no. 9, pág. 1664-669 (GLP-1 (7-37) acilado em k26,34 com bis-C12-diácido) teve uma semivida de 5 horas.
Exemplo 38: Efeito na ingestão de alimento 0 objetivo desta experiência foi investigar o efeito de derivados de GLP-1 na ingestão de alimento em porcos. Isto foi feito num estudo de f armacodinâmica (PD) tal como descrito abaixo, no qual a ingestão de alimento foi medida de 1 a 4 dias após a administração de uma dose única do derivado de GLP-1, em comparação com um grupo de controlo tratado com veiculo.
Utilizaram-se porcos Landrace Yorkshire Duroc (LYD) fêmeas, com aproximadamente 3 meses de idade, pesando aproximadamente 30-35 kg (n=3-4 por grupo). Os animais foram alojados num grupo durante aproximadamente 1 semana durante a aclimatização às instalações de animais. Durante o período experimental os animais foram colocados em pocilgas individuais durante pelo menos 2 dias antes da dosagem e durante toda a experiência para medição da ingestão individual de alimento. Os animais foram alimentados ad libitum com forragem de porco (Svinefoder Danish Top) em todos os momentos tanto durante a aclimatização como durante o período experimental. A ingestão de alimento foi monitorizada em linha registando o peso da forragem a cada 15 minutos. O sistema utilizado foi Mpigwin (Ellegaard Systems, Faaborg, Dinamarca).
Os derivados de GLP-1 foram dissolvidos num tampão fosfato (fosfato de sódio 50 mM, cloreto de sódio 145 mM, Tween 80 a 0,05%, pH 7,4) a concentrações de 12, 40, 120, 400 ou 1200 nmol/mL correspondendo a doses de 0,3, 1, 3, 10 ou 30 nmol/kg. O tampão fosfato serve como veiculo. Os animais foram doseados com uma única dose subcutânea do derivado de GLP-1 ou veiculo (volume de dose a 0,025 mL/kg) na manhã do dia 1, e a ingestão de alimento foi medida durante 1-4 dias após administração da dose. No último dia de cada estudo, 1-4 dias após a dosagem, uma amostra de sangue para medição da exposição no plasma do derivado de GLP-1 é retirada a partir do coração em animais anestesiados. Os animais foram depois sujeitos a eutanásia com uma sobredosagem intracardiaca de pentobarbitona. O teor plasmático dos derivados de GLP-1 foi analisado utilizando ELISA ou um ensaio semelhante baseado em anticorpos, ou LC-MS. A ingestão de alimento foi calculada como a ingestão de alimento média ± EPM 24 h em cada um dos dias de experiência. As comparações estatísticas da ingestão de alimento de 24 horas no grupo de veículo versus derivado de GLP-1 foram feitas utilizando medições repetidas de ANOVA bidirecional, seguido do pós-teste de Bonferroni. O composto do Exemplo 10 foi testado numa dose de 3 nmol/kg, e nesta dose não foi observado qualguer efeito na ingestão de alimento. O composto do Exemplo 2 foi testado numa dose de 3 nmol/kg e mostrou uma redução significativa da ingestão de alimento em ambos os dias da experiência (23% no dia 1 e 35% no dia 2).
Exemplo 39: Farmacoclnétlca em rato 0 objetivo deste Exemplo é investigar a semivida in vivo em rato.
Foram realizados estudos de farmacocinética in vivo em ratos com os derivados de GLP-1 dos Exemplos 2, 10, 17-18, e 31, tal como descrito no seguinte. Foi incluído semaglutido para comparação.
Obtiveram-se ratos Sprague Dawley machos com a mesma idade com um peso corporal de aproximadamente 400 g em Taconic (Denmark) os quais foram atribuídos aos tratamentos por randomização simples no peso corporal, aproximadamente 4 ratos por grupo, de modo que todos os animais em cada grupo eram de peso corporal semelhante.
Os derivados de GLP-1 (aproximadamente 6 nmol/mL) foram dissolvidos em fosfato de sódio 50 mM, cloreto de sódio 145 mM, tween 80 a 0,05%, pH 7,4. Injeções intravenosas (1,0 mL/kg) dos compostos foram dadas através de um cateter implantado na veia jugular direita. O sangue foi colhido para amostras a partir da veia sublingual durante 5 dias após a dosagem. As amostras de sangue (200 pL) foram colhidas em tampão EDTA (8 mM) e depois centrifugadas a 4 °C e 10000 g durante 5 minutos. As amostras de plasma foram mantidas a -20 °C até serem analisadas quanto à concentração plasmática do respetivo composto GLP-1.
As concentrações plasmáticas dos compostos GLP-1 foram determinadas utilizando um imunoensaio de Canais de Oxigénio Luminescente (LOCI), geralmente tal como descrito para a determinação de insulina por Poulsen e Jensen em Journal of Biomolecular Screening 2007, vol. 12, pág. 240-247. As contas dadoras foram revestidas com estreptavidina, enquanto as contas aceitadoras foram conjugadas com um anticorpo monoclonal que reconhece um epitopo médio/C-terminal do péptido. Outro anticorpo monoclonal, especifico para o terminal N, foi biotinilado. Os três reagentes foram combinados com o analito e formaram um imunocomplexo de dois locais. A iluminação do complexo libertou átomos de oxigénio singleto a partir das contas dadoras, que passaram por canais para as contas aceitadoras e desencadeou quimioluminescência que foi medida num leitor de placas Envision. A quantidade de luz foi proporcional à concentração do composto.
Os perfis de concentração plasmática-tempo foram analisados utilizando Phoenix WinNonLin ver. 6.2, Pharsight Inc., Mountain View, CA, EUA), e a semivida (T^) calculada utilizando os perfis de concentração plasmática-tempo individuais de cada animal.
Resultados A semivida de semaglutido testada na mesma configuração (mas com n=8) foi de 11 horas.
Tabela 4: Semivida em rato
Os derivados da invenção testados tinham uma semivida que era semelhante ou melhor que a do semaglutido.
Exemplo 40: Estimativa da biodisponibilidade oral - Injeção intestinal e lavagem oral em rato (SMAC) 0 objetivo desta experiência é estimar a biodisponibilidade oral dos derivados de GLP-1 num modelo de rato. Em resumo, uma solução liquida do derivado de GLP-1 em N—[8 —(2 — hidroxibenzoil)amino]caprilato de sódio (SNAC) é administrada através de injeção intestinal (nos intestinos), ou através de gavagem oral (no estômago), e é medida a subsequente exposição no plasma do derivado de GLP-1.
Uma solução de reserva a 250 mg/mL de SNAC foi preparada dissolvendo SNAC (12,5 g) em água de laboratório altamente pura (MilliQ) (50,0 mL). 0 pH é ajustado a cerca de 8,5 com NaOH 1 N (aq).
Preparam-se soluções com cerca de 1000 uM (800-1200 uM) dos derivados de GLP-1 em SNAC a 250 mg/mL dissolvendo a quantidade desejada do respetivo derivado de GLP-1 na solução de reserva de SNAC. A concentração do derivado de GLP-1 foi determinada antes da administração através de um método do estado da técnica, tal como CLND-HPLC (deteção de azoto quimioluminescente para HPLC). São obtidos 32 ratos Sprague Dawley machos com um peso corporal à chegada de aproximadamente 240 g de Taconic (Dinamarca) que são atribuídos aos diferentes tratamentos por randomização simples, 8 ratos por grupo. Todos os ratos são colocados em jejum em grades durante aproximadamente 18 horas antes da experiência.
Para injeção intestinal, no dia da experiência, os ratos foram levados para anestesia geral (Hypnorm/Dormicum) e permaneceram anestesiados durante toda a experiência. Os derivados de GLP-1 dos Exemplos 5-7 são administrados na parte proximal do jejuno (10 cm distai ao duodeno) . Um cateter PE50, de 10 cm de comprimento, é inserido no jejuno, encaminhado pelo menos 1,5 cm para dentro do jejuno e firmado antes da dosagem através de ligadura em torno do intestino. Além disso, o cateter é fornecido com uma sutura 3/0 distai à ponta para evitar vazamento ou deslocamento do cateter. O cateter é colocado sem seringa e agulha e são administrados 2 mL de solução salina no abdómen antes de encerrar a incisão com agrafos de cirurgia.
Injetam-se 100 pL de solução SNAC do respetivo derivado de GLP-1 no lúmen do jejuno através do cateter com uma seringa de 1 mL. Subsequentemente, são empurrados 200 pL de ar para o lúmen do jejuno com outra seringa para "lavar" o cateter. Esta seringa é deixada ligada ao cateter para evitar refluxo para o cateter.
Amostras de sangue (200 uL) são colhidas a intervalos desejados (normalmente nos tempos 0, 30, 60, 120 e 180 min) em tubos de EDTA a partir da veia da cauda.
Para gavagem oral, os animais estão conscientes durante toda a experiência. São administrados diretamente ao estômago 100 pL de solução SNAC dos derivados de GLP-1 através de gavagem oral.
Amostras de sangue (200 uL) são colhidas a intervalos desejados (normalmente nos tempos 0, 30, 60, 120 e 180 min) em tubos de EDTA a partir do plexo sublingual.
Todas as amostras de sangue obtidas são mantidas em gelo e centrifugadas durante 5 minutos, 10000 g, a 4 °C em 20 minutos. O plasma (75 uL) é separado para tubos Micronic, imediatamente congelado e mantido a -20 °C até ser analisado quanto à concentração plasmática do respetivo derivado de GLP-1 com LOCI (Imunoensaio de Canais de Oxigénio Luminescente), em geral tal como descrito para a determinação de insulina por Poulsen e Jensen em Journal of Biomolecular Screening 2007, vol. 12, pág. 240-247. As contas dadoras são revestidas com estreptavidina, enquanto as contas aceitadoras são conjugadas com um anticorpo monoclonal que reconhece um epitopo médio/C-terminal do péptido. Outro anticorpo monoclonal, especifico para o terminal N, é biotinilado. Os três reagentes são combinados com o analito e formam um imunocomplexo de dois locais. A iluminação do complexo libertou átomos de oxigénio singleto a partir das contas dadoras, que passam por canais para as contas aceitadoras e desencadeiam a quimioluminescência que é medida num leitor de placas Envision. A quantidade de luz é proporcional à concentração do composto.
Após a colheita de sangue todos os ratos são sacrificados sob anestesia e o abdómen dos ratos da injeção intestinal é aberto para verificar a correta colocação do cateter.
As concentrações plasmáticas médias (n=8) (pmol/1) são determinadas em função do tempo. A AUC da curva de exposição do plasma (pmol/1) vs tempo, do tempo 30 a 180 (min), é corrigida para a dose, i.e., dividida pela quantidade (dose) do derivado na solução administrada (pmol) . A AUC assim corrigida para a dose da exposição do plasma do tempo 30-180 min (possuindo a unidade de min χ pM/pmol = min/L) é utilizada como uma medida substituta da biodisponibilidade - uma medida para classificar os derivados em relação à sua absorção no modelo de rato.

Claims (14)

  1. REIVINDICAÇÕES
    1. Derivado de um análogo de GLP-1, análogo esse que compreende um primeiro resíduo K numa posição correspondente à posição 27 de GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 1); um segundo resíduo K numa posição correspondente à posição 36 de GLP-1 (7-37); e um máximo de dez mudanças de aminoácidos em comparação com GLP-1 (7-37); em que o primeiro resíduo K é designado K27, e o segundo resíduo K é designado K36; em que o análogo compreende um análogo de GLP-1 de Fórmula I: Fórmula I: Xaa7-Xaa8-Glu-Gly-Thr-Xaai2-Thr-Ser-Asp-Xaai6-Ser-Xaai8-Xaai9-Xaa2o-Glu-Xaa22- Xaa23-Xaa24-Xaa25-Arg-Lys-Phe-lle-Glu-Xaa31-Leu-Val-Xaa34-Gly-Lys-Xaa37-Xaa38-Xaa3g! em que Xaa7 é L-histidina, imidazopropionilo, a-hidroxi-histidina, D-histidina, desamino-histidina, 2-amino-histidina, β-hidroxi-histidina, homo-histidina, Na-acetil-histidina, Να-formil-histidina, α-fluorometil-histidina, a-metil-histidina, 3-piridilalanina, 2-piridilalanina ou 4-piridilalanina; Xaas é Ala, Gly, Vai, Leu, Ile, Thr, Ser, Lys, Aib, ácido (1-aminociclopropil)carboxílico, ácido (1-aminociclobutil)carboxílico, ácido (1- aminociclopentil)carboxílico, ácido (1-aminociclo-hexil)carboxílico, ácido (1-aminociclo- heptil)carboxílico, ou ácido (1- aminociclooctil)carboxílico; Xaai2 é Lys ou Phe; Xaaig é Vai ou Leu; Xaais é Ser, Arg, Asn, Gin, ou Glu; Xaaig é Tyr ou Gin; Xaa2o é Leu, Lys, ou Met; Xaa22 é Gly, Glu, Lys, ou Aib; Xaa23 é Gin, Glu, ou Arg; Xaa24 é Ala ou Lys; Xaa2s é Ala ou Vai; Xaa3i é Trp ou His; Xaa34 é Glu, Asn, Gly, Gin, ou Arg; Xaa37 é Gly, Ala, Glu, Pro, Lys, Arg, ou está ausente; Xaa38 é Ser, Gly, Ala, Glu, Gin, Pro, Arg, ou está ausente; e Xaa39 é Gly ou está ausente; derivado esse que compreende duas porções de prolongamento ligadas a K27 e K36, respetivamente, através de um ligador, em que a porção de prolongamento é selecionada a partir de Quím. 2 e Quím. 1: Quím. 2: H00C-C6H4-0-(CH2)y-CO-* Quím. 1: HOOC-(CH2)x-CO-*, em que x é um número inteiro no intervalo de 6-16, e y é um número inteiro no intervalo de 3-17; e o ligador compreende Quím. 5: Quím. 5:
    em que k é um número inteiro no intervalo de 1-5, e n é um número inteiro no intervalo de 1-5; ou um sal, amida, ou éster deste farmaceuticamente aceitável.
  2. 2. Derivado da reivindicação 1, em que Quim. 5 é incluído m vezes, em que m é um número inteiro no intervalo de 1-10 .
  3. 3. Derivado de qualquer uma das reivindicações anteriores, em que k é 1.
  4. 4. Derivado de qualquer uma das reivindicações anteriores, em que n é 1.
  5. 5. Derivado de qualquer uma das reivindicações anteriores, em que o liqador compreende ainda um di-radical Glu selecionado a partir de Quim. 6, e/ou Quim. 7: Quim. 6
    e/ou Quim. 7
  6. 6. Derivado da reivindicação 5, em que o di-radical Glu é incluído p vezes, em que p é um número inteiro no intervalo de 1-2.
  7. 7. Derivado de qualquer uma das reivindicações anteriores, em que o ligador é ligado ao grupo épsilon-amino do primeiro ou do segundo resíduo K.
  8. 8. Derivado de qualquer uma das reivindicações anteriores, em que x é 12, ou em que Quím. 2 é representado por Quím. 2b:
  9. 9. Derivado de qualquer uma das reivindicações anteriores, em que x é 12, ou y é um número inteiro no intervalo de 9-11.
  10. 10. Derivado de qualquer uma das reivindicações anteriores, em que o análogo de GLP-1 compreende as seguintes alterações de aminoácidos, em comparação com GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 1): (ii) 22E, 26R, 27K, 30E, 34R, 36K, 38E, 39G; (vi) 26R, 27K, 30E, 34R, 36K, 38E; (xii) 25V, 26R, 27K, 30E, 34R, 36K, 38Q; (xiii) 25V, 26R, 27K, 30E, 34Q, 36K, 38E; ou (xxvii) 8Aib, 22E, 26R, 27K, 30E, 34R, 36K, 38E, 39G; ou um sal, amida, ou éster deste farmaceuticamente aceitável.
  11. 11. Derivado da reivindicação 10 que tem um conjunto de mudanças de aminoácidos tal como definido em qualquer uma de (ii), (vi), (xii), (xiii), e (xxvii).
  12. 12. Composto selecionado a partir dos seguintes: Νε27-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[ (4S)-4-carboxi-4 - [10 - (4-carboxifenoxi)decanoilamino]butanoil]amino]etoxi]etoxi ]acetil]amino]etoxi]etoxi]acetil], Νε36-[2-[2-[2-[ [2- [2-[2-[[(4S)-4-carboxi-4- [10-(4- carboxifenoxi)decanoilamino]butanoil]amino]etoxi]etoxi ]acetil]amino]etoxi]etoxi]acetil] - [Glu22,Arg26,Lys2 7,Glu30,Arg34,Lys3 6]-GLP-1-(7 — 37) — peptidil-Glu-Gly, Quim. 51:
    ΊΝΓε27 — [2 — [2 — [2 — [ [2— [2— [2— [ [ (4S) - 4-carboxi-4- [10 - (4-carboxifenoxi)decanoilamino]butanoil]amino]etoxi]etoxi ]acetil]amino]etoxi]etoxi]acetil], Νε36-[2-[2 - [2 - [ [2- [2-[2-[[ (4S)-4-carboxi-4-[10-(4- carboxifenoxi)decanoilamino]butanoil]amino]etoxi]etoxi ]acetil]amino]etoxi]etoxi]acetil]- [Arg2 6,Lys27,Glu30,Arg34,Lys36]-GLP-1-(7-37)-peptidil-Glu, Quim. 55:
    Να(Νε27-[2-[2-[2-[[2—[2—[2—[[ (4S)-4-carboxi-4-[10-(4-carboxifenoxi)decanoilamino]butanoil]amino]etoxi]etoxi ]acetil]amino]etoxi]etoxi]acetil] , Νε36-[2-[2-[2-[[2- [2 - [2 - [ [ (4S)-4-carboxi-4-[10-(4- carboxifenoxi)decanoilamino]butanoil]amino]etoxi]etoxi ]acetil]amino]etoxi]etoxi]acetil]- [Val2 5,Arg2 6,Lys2 7,Glu3 0,Arg34,Lys3 6]-GLP-1-(7-37) -peptidil)-Gin, Quim. 61:
    ΊΝΓε27 — [2 — [2 — [2 — [ [2 — [2 — [2 — [ [ (4S) -4-carboxi-4- [10-(4-carboxifenoxi)decanoilamino]butanoil]amino]etoxi]etoxi ] acetil] amino] etoxi] etoxi] acetil] , ΊΝΓε36— [2 — [2 — [2 — [ [2 — [2 - [2 - [ [ (4S)-4-carboxi-4-[10-(4- carboxifenoxi)decanoilamino]butanoil]amino]etoxi]etoxi ]acetil]amino]etoxi]etoxi]acetil]- [Val2 5,Arg2 6,Lys27,Glu30,Gln34,Lys3 6]-GLP-1-(7-37) -peptidil-Glu, Quim. 62:
    Νε27-[2-[2-[2-[[2—[2—[2—[[(4S)-4-carboxi-4-[10 - (4-carboxifenoxi)decanoilamino]butanoil]amino]etoxi]etoxi ]acetil]amino]etoxi]etoxi]acetil] , Νε36-[2-[2-[2-[[2- [2 - [2 - [ [ (4S)-4-carboxi-4-[10-(4- carboxifenoxi)decanoilamino]butanoil]amino]etoxi]etoxi ]acetil]amino]etoxi]etoxi]acetil]- [Aib8,Glu22,Arg2 6,Lys27,Glu30,Arg34,Lys36]-GLP-1-(7-37)-peptidil-Glu-Gly, Quim. 8 0:
    Νε27-[2-[2-[2-[[2—[2—[2—[[ (4S)-4-carboxi-4-[12-(4-carboxifenoxi)dodecanoilamino]butanoil]amino]etoxi]eto xi]acetil]amino]etoxi]etoxi]acetil], Νε36-[2-[2-[2-[ [2 — [2 — [2 — [ [ (4S)-4-carboxi-4-[12-(4- carboxifenoxi)dodecanoilamino]butanoil]amino]etoxi]eto xi]acetil]amino]etoxi]etoxi]acetil]-[Glu22,Arg2 6,Lys2 7,Glu3 0,Arg34,Lys3 6]-GLP-1-(7-37)-peptidil-Glu-Gly, e Quim. 81:
    ou um sal, amida, ou éster deste farmaceuticamente aceitável.
  13. 13. Derivado de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-12, para utilização como medicamento.
  14. 14. Derivado de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-12, para utilização no tratamento e/ou na prevenção de todas as formas de diabetes e doenças relacionadas, tais como distúrbios alimentares, doenças cardiovasculares, doenças gastrointestinais, complicações diabéticas, doença crítica, e/ou síndroma do ovário poliquístico; e/ou para melhoria dos parâmetros lipídicos, melhoria da função das células β, e/ou para retardamento ou prevenção da progressão de doença diabética.
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